NO177308B - Analogifremgangsmåte ved fremstilling av anti-tumorforbindelser - Google Patents
Analogifremgangsmåte ved fremstilling av anti-tumorforbindelser Download PDFInfo
- Publication number
- NO177308B NO177308B NO932192A NO932192A NO177308B NO 177308 B NO177308 B NO 177308B NO 932192 A NO932192 A NO 932192A NO 932192 A NO932192 A NO 932192A NO 177308 B NO177308 B NO 177308B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- acetonitrile
- disulfide
- acetyl
- added
- compounds
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 23
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 title abstract description 12
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000003972 antineoplastic antibiotic Substances 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- YWHLKYXPLRWGSE-UHFFFAOYSA-N Dimethyl trisulfide Chemical compound CSSSC YWHLKYXPLRWGSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical group [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical class SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001589 carboacyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical group II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 claims description 2
- 125000006832 (C1-C10) alkylene group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 abstract description 10
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 17
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 15
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 13
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- -1 hydroxy, amino, carboxy Chemical group 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 5
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N ammonium dihydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].OP(O)([O-])=O LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910000387 ammonium dihydrogen phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Substances ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019837 monoammonium phosphate Nutrition 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 230000000684 melanotic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KMVPXBDOWDXXEN-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenylhydrazine Chemical compound NNC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 KMVPXBDOWDXXEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(1-aminoethyl)oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol;(2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(aminomethyl)oxan-2-yl]o Chemical compound OS(O)(=O)=O.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@@H](CN)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@H](O2)C(C)N)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N 0.000 description 1
- 125000004191 (C1-C6) alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 3-mercaptopropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCS DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000008342 Leukemia P388 Diseases 0.000 description 1
- 241000187722 Micromonospora echinospora Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- OFLXLNCGODUUOT-UHFFFAOYSA-N acetohydrazide Chemical compound C\C(O)=N\N OFLXLNCGODUUOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 238000002814 agar dilution Methods 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004446 heteroarylalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004001 thioalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
- A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Engine Equipment That Uses Special Cycles (AREA)
- Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
- Lubricants (AREA)
- Treating Waste Gases (AREA)
Description
Oppfinnelsen angår en analogifremgangsmåte ved fremstilling av et terapeutisk aktivt substituert disulfid med formelen Q-Sp-SS-W fra en forbindelse med formelen CH3-SSS-W som er et N-acylderivat av et antitumor-antibiotikum betegnet som LL-E33288a1-I, a2~ Br, a2- X, Øi- Br, Øx-I, Ti-Br, "Yi-I, S^ I, hvor
W er
Rx er R2 er R3 er H; RA er
R5 er CH3, C2H5 eller (CH3)2CH; X er et jod- eller bromatom; R'5 er alkanoyl,
Sp er en rettkjedet eller forgrenet ( C^ C^)-alknylengruppe;
Q er hydrogen eller
hvor n er 0 eller 1, eller
Disse disulfidforbindelsene er effektive midler mot svulster eller tumordannelser. Figur 1 Det ultrafiolette spektret av antitumorantibiotikumet betegnet som N-acetyl LL-E33288'y1<i.>
Figur 2 Det infrarøde spektret av antitumoranti-
biotikumet betegnet som N-acetyl LL-E33288'Y1<I.>
Figur 3 Det protonmagnetiske resonansspektret av antitumor
antibiotikumet betegnet som N-acetyl LL-E33288'Y1<I. >Figur 4 Det karbon-13 kjernemagnetiske resonansspektret av antitumorantibiotikumet betegnet som N-acetyl LL-E33288T1<1>.
Gruppen av antibakterielle og antitumormidler kollektivt betegnet LL-E33288-komplekset, er beskrevet og patentsøkt i EPO-publikasjonsnummer 0182152A3 publisert 28. mai 1986, og er brukt for å fremstille de disvovelantitumormidler som er enkelte av utgangsforbindelsene for de målrettede formene av antitumormidler ifølge foreliggende oppfinnelsen.
Nevnte EPO-publikasjon nr. 0182152A3 beskriver LL-E33288-komplekset, og dets komponenter, nemlig, LL-E33288a1<Br>, LL-E33288a1<I>, LL-E33288a2<Br>, LL-E33288a2<I>, LL-E33288)81<Br>,
LL-E33288/3!<1>, LL-E33288-Yi<Br>, LL-E33288-Y1<1> og LL-E332885!<1>, samt fremgangsmåter for fremstilling ved hjelp av en aerob fermen-tering hvor man bruker en ny rase av Micromonospora echinospora ssp calichensis eller naturlig eller kunstig fremstilte mutanter av denne rasen. EPO-publikasjonsnr. 0182152A3 beskriver også visse foreslåtte strukturer for enkelte av de ovennevnte komponenter. Disse foreslåtte strukturer er angitt i tabell 1.
Ytterligere forbindelser i LL-E33288-komplekset er beskrevet og patentsøkt i EPO-publikasjon nr. 027485A2 publisert 3. august 1988, og kan på lignende måte brukes for fremstilling av disulfidderivatene og målrettede former av antitumormidler fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse.
De sistnevnte strukturer er angitt i tabell 2.
En annen gruppe av LL-E33288-komplekset av antitumorantibiotika er beskrevet i US-patent 5.079.233, og som også kan brukes for fremstilling av ytterligere målrettede former av antitumormidler. Denne søknaden beskriver N-acylderivater av flere forbindelser av LL-E3 3 288-komplekset som er blitt fremstilt på kjemisk måte. De foreslåtte strukturer er på lignende måte gjengitt i tabell 2.
R = hydrogen eller en grenet eller ugrenet alkyl(Ci-C^)- eller alkylentCi-Cxg) -gruppe, en aryl- eller heteroarylgruppe eller en alkyl (Ci-Cg) - eller heteroaryl-alkyl (Ci-Ca)gruppe, alle eventuelt substituert med én eller flere hydroksy-, amino-, karboksy-, halogen-, lavere (Cj-Ca)alkoksy- eller lavere (Ci-Cg) tioalkoksygruppe.
All informasjon hva angår BBM-1675, FR-900405, FR-900406, PD 114759, PD 115028, CL-1577A, CL-1577B, CL-1577D, CL-1577E og CL-1724 som forefinnes i de ovennevnte referanser inngår her som referanse. De fullstendige strukturene for espera-miciner Alf A2 og Alb (BBM-1675-komplekset) og deres N-acetyl-derivater er angitt og inngår i tabellene 1 og 2. De fysiske egenskapene for andre av de ovennevnte antitumor-antibiotika indikerer at de alle er identiske eller meget like i struktur til esperamicinene, og at alle inneholder en metyltritio-funksjonell gruppe.
Som det fremgår av de strukturer som er angitt ovenfor, inneholder N-acylderivatene alf a2, filt ylr 6, LL-E33288-komplekset, samt deres N-acylmotstykker en metyltritiogruppe i sin struktur.
Man har nå oppdaget at reaksjonen med ethvert av de ovennevnte angitte antibiotika med et usubstituert eller substituert alkyl- eller arylmerkaptan resulterer i en eliminering av metylpertiolatanionet fra trisulfidgruppen, noe som resulterer i dannelsen av et stabilt disulfid (skjema I) nedenfor. Andre forbindelser hvor nevnte transformasjon virker er beskrevet i EPO publikasjon nr. 0313874A2 publisert
3. mai 1989. Forbindelsene i tabellene 1 og 2 kan ifølge oppfinnelsen omdannes med tiolholdige organiske molekyler til de innled-ningsvis nevnte forbindelser, ved at man omsetter et metyl-trisulfidantitumorantibiotikum valgt fra gruppen som er nevnt ovenfor, med et tilsvarende substituert merkaptan i acetonitril eller en kombinasjon av acetonitril og tetrahydrofuran eller acetonitril og dimetylformamid ved en temperatur mellom -20"C og +40°C i et tidsrom fra 1 time til 6 døgn, fortrinns-vis i nærvær av én ekvivalent av en tertiær aminbase eller en blanding av én ekvivalent av en tertiær aminbase og én ekvivalent av en organisk karboksylsyre.
Omdannelsen av de forbindelser som er angitt i tabellene 1 og 2 til en rekke disulfider kan oppnås ved hjelp av en rekke forskjellige tiolholdige organiske molekyler, hvorved man får fremstilt de nye antitumor og antibakterielle midler. Videre er produktene fra selve reaksjonene også lett å trans-formere ytterligere med nyinnførte sidekjeder, slik at man får fremstilt enda flere nye forbindelser med biologiske akti-viteter.
Så lenge som produktet fra skjema 1 inneholder minst én funksjonell gruppe som kan omdannes til eller som er direkte reaktiv med en målsøkende enhet (Tu), så kan man fremstille målsøkende former av antitumorantibiotika fra de ovennevnte patenter og søknader, som beskrevet i norsk patentsøknad 90.1655.
Forbindelsene fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse som er betegnet som Q-Sp-SS-W, er aktive også som antibakterielle midler. Deres in vitro antibakterielle aktivitet kan bestemmes mot gram-positive og gram-negative bakterier ved standard agar fortynningsmetoden. Mueller-Hinton agar inneholdende to-dobbelt avtagende konsentrasjoner av anti-biotikumet som skal prøves helles over i petriskåler. Agaroverflåtene blir så inokulert med fra 1 til 5 x 10<4 >kolonidannende enheter av bakteriene ved hjelp av en Steers repliserende anordning. Den laveste konsentrasjonen av forbindelsen som hemmer veksten av en bakterierase etter ca. 18 timers inkubering ved ca. 36°C, blir angitt som den minimalt hemmende konsentrasjonen (MIC) for den prøvede rasen eller bakterien.
De disulfidforbindelser som er beskrevet ovenfor er også aktive antitumormidler.
Visse in vivo prøvingssystemer og protokoller er utviklet av the National Cancer Institute for prøving av forbindelser for å bestemme deres egnethet som antineoplastiske midler. Disse er blitt rapportert i "Cancer Chemotherapy Reports", Part III, Vol. 3, No. 2 (1972), Geran, et. al. Disse protokoller er etter hvert blitt etablert som standardiserte prøver som vanligvis følges for prøving av antitumormidler.
Av disse systemer så er spesielt lymfocytisk leukemi P388, melanotisk melanoma B16, L1210 leukemi og kolon 26 adenokarsinoma spesielt betydelige i foreliggende oppfinnelse. Disse neoplasmer brukes for prøving over for transplanterbare svulster i mus. Vanligvis så vil en betydelig ant i tumor aktivitet vist i disse prøver og protokoller som en prosentvis økning i midlere overlevelsestid for behandlede dyr (T) i forhold til kontrolldyrene (C) være en indikasjon på lignende resultater i human leukemi og faste svulster.
Lvmfocytisk leukemi P388 prøve
De dyr som ble brukt var BDFX hunnmus. Det var 5 eller 6 mus i hver prøvegruppe. Svulsttransplanteringen ble utført ved intraperitoneal injeksjon av 0,5 ml fortynnet ascitisk væske inneholdende 1 x 10<6> celler av lymfocytisk leukemi P388 på dag 0. Prøveforbindelsene ble tilført intraperitonealt i et volum på 0,5 ml i steril, pyrogenfri saltoppløsning på dag 1, 5 og 9 (i forhold til tumorinokulasjonen) i de angitte doser. Musene ble veid og overlevende individer ble notert på regelmessig basis i 30 dager. Den midlere overlevelsestiden og forholdet mellom overlevelsestid for behandlede (T)/kontroll (C) dyrene ble beregnet. Verdier på T/C større enn lik 125 anses å reflektere en betydelig antitumor-aktivitet. Resultatene er angitt i tabell 3.
Melanotisk melanoma B16 prøve
De dyr som brukes kan være BDF1 hunnmus. Det er 5 eller 6 mus pr. prøvegruppe. En én grams prosjon av en melanotisk melanoma B16 svulst ble homogenisert i 10 ml kald balansert saltoppløsning og en 0,5 ml porsjon av homogenatet ble implantert intraperitonealt i hver prøvemus. Prøveforbind-elsene ble tilført intraperitonealt på dag 1 til og med 9 (i forhold til svulstinokuleringen) ved de angitte doser. Musene ble veid og antall overlevende ble notert på regelmessig basis i 60 døgn. Man beregnet så den midlere overlevelsestiden og forholdet overlevelsestid for behandlede (T)/kontroll (C) dyrene. En verdi på T/C på større eller lik 125 anses å være indikasjon på en betydelig antisvulst-aktivitet.
Fremgangsmåter ifølge foreliggende oppfinnelse ble brukt for å fremstillie monoklonale antistoffkonjugater fra forbin-
delsene i tabellene 1 og 2 og betegnet som
og disse gir god immunoreaktivitet med målcellelinjer som vist ved de følgende in vitro prøver:
Målceller
Alle målceller ble holdt i RPMI 1640 media supplert med 5% kalvefosterserum (FCS), ITS (Collaborative Research, Cat# 40351) , streptomycin (50 /xg/ml) , penicillin (50 enheter/ml) , gentamycinsulfat (50 /xg/ml) og glutamin (0,03%). Cellene ble holdt i en fuktig 5% C02 inkubator ved 37°C.
I. Immunoreaktivitetsprover
Fremgangsmåte I - Elisa
Passende målceller ble høstet, telt og suspendert i Dulbeccos fosfatbufret saltoppløsning (DPBS) ved en optimal konsentrasjon for de monoklonale antistoffer (MoAb) som skulle prøves. 0,1 ml av cellene ble utporsjonert i hver brønn i en steril vevskulturpolystren 96-brønnsplate. Platene ble sentrifugert i 5 min. ved 1.000 omdreininger pr. min., hvoretter supernatanten ble tatt vekk. Platene ble lufttørket over natten og kan lagres ved 4°C i opp til 3 måneder.
Ikke-spesifikke bindingsposisjoner ble blokkert ved å tilsette 200 /xl 1% gelatin i DPBS pr. brønn og inkubere platen 1 time ved 37°C i en fuktig inkubator. (Alle etterfølgende inkuberinger ble utført under tilsvarende betingelser). Platene ble vasket én gang med 250 /il 0,05% TWEEN-20 i DPBS (vaskeoppløsning) idet man brukte et automatisert ELISA-vaskesystem fra Dynatech (Ultrawash II). De prøver som skulle undersøkes, ble fortynnet til en sluttkonsentrasjon på 3 /xg/ml MoAb-ekvivalenter i 0,1% gelatin-DPBS. Seks ytterligere 3-parallelle seriefortynninger ble fremstilt fra hver 3 /xg/ml prøve og 100 /xl ble tilsatt passende brønner i 3 paralleller. Bunnraden av brønner mottok bare 100 /xl 0,1% gelatin som bakgrunn. Platene ble inkubert i 45 min. og så vasket tre ganger. Alkalifosfatasekonjugert affinitetsrenset geit-anti-musimmunoglobuliner (Cappel Cat# 8611-0231) ble fortynnet 1:125 i 0,1% gelatin og 100 /xl ble tilsatt hver brønn. Platene ble inkubert i 45 min. og så vasket tre ganger. 200 /xl p-nitrofenylfosfatsubstratoppløsning (se nedenfor) ble tilsatt hver brønn. Etter 45 min. ved romtemperatur ble reaksjonen stoppet ved å tilsette 50 /xl 3M NaOH. Absorpsjonen, av innholdet i hver brønn ble avlest ved 405 nm i et automatisert spektrofotometer fra Dynatech (EIA Autoreader # EL-310) .
Substratdietanolaminbuffer ( 10%)
97 ml dietanolamin
800 ml vann
0,2 g NaN3
100 mg MgCl2 6H20
Reagensene ble oppløst ved kontinuerlig røring og IM HC1 ble tilsatt inntil pH er 9,8. Det totale volum ble fortynnet til 1 liter med vann og filtersterilisert i et 0,2 /x filter. Bufferen ble lagret i mørket ved 4°C. Umiddelbart før bruk ble p_-nitrofenylfosfat (Sigma, Cat# 104-40) oppløst i 10% dietanolaminbufferen (må være ved romtemperatur) slik at man fikk en sluttkonsentrasjon på 1 mg/ml.
Beregning av 0. D. verdier
Den prosentvise binding i hver prøve ble beregnet ved følgende ligning:
A = midlere O.D. for selve prøven
B = midlere O.D. for bakgrunnen
C = midlere O.D. for 3 /xg/ml umanipulert MoAb-kontroll
Prosentvis binding ble avsatt på en ikke-logaritmisk skala på et semi-logaritmisk diagram og MoAB-konsentrasjonen ble avsatt på den logaritmiske skalaen. BD50 (d.v.s. den dosen av antistoffet som er nødvendig for å gi 50% binding) for hver prøve ble avlest fra diagrammet, hvoretter man beregnet mengden av bibehold av immunoreaktiviteten ved følgende ligning:
Fremgangsmåte 2 - Indirekte RIA
Passende mengder av målceller i 0,2 ml 10% FCS media ble utporsjonert i 4 ml polystyrenrør. De prøver som skulle undersøkes ble fortynnet til en konsentrasjon av 2 /xg/ml MoAb-ekvivalenter i 10% FCS-media. Fem tre-gangers seriefortynninger ble fremstilt fra hver 2 iig/ml prøve og 0,2 ml ble tilsatt hvert rør i to paralleller. Bakgrunnsprøvene mottok bare celler og media. Cellene ble inkubert ved 4°C i 1 time og så vasket 2 ganger (alle RIA-vaskinger ble utført med et volum på 3 ml) med 2% FCS-media. 0,05 ml sau F(ab')2 anti-mus IgG
[<125>I] (DuPont, Cat# NEX 162-0142) inneholdende ca. 500.000 CPM ble tilsatt hvert rør; hvoretter cellene ble inkubert i ytterligere 1 time ved 4°C, vasket én gang med 2% FCS og to ganger med PBS. 0,5 ml PBS ble tilsatt hvert rør, cellene ble sentrifugert, overført til rene rør og telt 1 min. i en Packard Gamma 500.
% binding ved hver verdi ble bestemt og avsatt som beskrevet ovenfor for nevnte ELISA-ligning, bortsett fra at CPM ble innsatt istedenfor O.D. enheter og C = midlere CPM for 1/ig/ml umanipulert MoAb-kontroll. Den prosentvise beholdte immunoreaktiviteten for hver prøve ble beregnet som beskrevet tidligere.
Fremgangsmåte 3 - Direkte RIA
Passende mengder av målceller i 1 ml 10% FCS-media ble utporsjonert i 4 ml polystyrenprøverør, sentrifugert og supernatanten ble kastet. De prøver som skulle undersøkes, ble fortynnet til konsentrasjoner på 200 ug/ml MoAb-ekvivalenter i 10% FCS-media. Fem ytterligere fem-parallells seriefortynninger ble fremstilt fra hver 200 iig/ml prøve, og 0,05 ml ble tilsatt hvert rør i to paralleller. 0,05 ml 125I-MoAb ble tilsatt hvert rør (optimal mengde ble individuelt bestemt for hvert MoAb og porsjon). Positive kontrollprøver inneholdt celler, media og <1>25I-MoA<b.><B>akgrunnsprøvene inneholdt ikke-spesifikke celler, media og <125>I-MoAb. Cellene ble inkubert 1 time ved 4°C, vasket én gang med 2% FCS-media, to ganger med PBS, overført og telt som beskrevet tidligere.
Den prosentvise <125>I-MoAb bindingshemmingen for hver prøve ble beregnet ut fra følgende formel:
A = midlere CPM for prøven
B = midlere CPM for bakgrunn
C = midlere CPM for positiv kontroll
Diagram og prosentvis beholdt immunoreaktivitet for hver prøve ble beregnet som beskrevet tidligere, bortsett fra at BD50 i virkeligheten er BID50 (Dose av MoAb som er nødvendig for å gi 50% hemming for bindingen av 125I-MoAb) .
Noter
1) Rørene ble alltid kraftig sentrifugert umiddelbart etter tilsetningen av hver reagens i nevnte RIA. 2) En intern kontrollprøve som tilsvarte 50% av den umani-pulerte MoAb-kontrollen ble innsatt i hvert sett av prøver for å bekrefte hvorvidt fremgangsmåten var kvantitativ med hensyn til å forutsi konjugatets
tilbakeholdelse av immunoreaktivitet.
Resultatene av disse prøvene er angitt nedenfor i tabell 4.
De monoklonale antistoffkonjugater fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse er aktive som anticancermidler. De prøver som er beskrevet nedenfor for å bedømme in vitro cytotoksisitet, viser den dramatiske preferanse for konjugatene i målcellelinjene i motsetning til ikke-målsøkende celler, og gir et mål for anvendelsen av de målsøkende former av forbindelser sammenlignet med deres ikke-målsøkende motparter.
Cytotoks i s itetsprøver
In vitro
De prøver som skulle undersøkes ble fortynnet til en konsentrasjon på 0,2 eller 0,02 /xg/ml pr. ekvivalenter av utgangsforbindelsene (startkonsentrasjonen er avhengig av den cellelinjen som skal undersøkes og styrken på utgangsforbindelsen). Tre eller fire ytterligere fem-gangers for-tynninger ble fremstilt fra den opprinnelige prøvefortynningen og 0,2 ml ble tilsatt sterile 15 ml polystyrenrør. Minst ett lignende konjugat bestående av utgangsforbindelsen og et irrelevant MoAb ble inkludert i hver prøve for å bestemme spesifisiteten på det relevante konjugatet. IO<5> passende målceller i 0,2 ml 10% FCS media ble utporsjonert i rørene og sentrifugert. I tillegg til dette utførte man en identisk prøve ved å bruke irrelevante celler som mål for ytterligere å bekrefte spesifisiteten på det relevante konjugatet. MoAb-kontrollene mottok bare ekvivalente mengder MoAb og positive kontrollprøver mottok bare 10% FCS-media.
Cellene ble inkubert ved 37°C i 7 min. og så vasket 4 ganger med 8ml 2% FCS-media. 0,1 ml 10% FCS ble tilsatt hvert rør, cellene ble sentrifugert og det ble tatt ut 0,2 ml fra hver brønn og overført til en steril 96-brønns polystyrens-vevskulturplate.
Platene ble dyrket i 2 døgn i en fuktig 37°C inkubator med 5% C02. Halvparten av media ble fjernet og erstattet med friskt media inneholdende 2 /tCi/ml <3>H thymidin (DuPont, NEN, Cat# NET-027). Inkubering ble fortsatt i 24 timer, cellene
ble frosset, tint og høstet ved hjelp av en PHD-celleinn-høstningsmaskin (Cambridge Technology, Inc.). Hver prøve ble telt i 1 min. i en Beckman LS 5800 scintillasjonsteller på
kanal 1.
Prosentvis hemming ble avsatt på en ikke-logaritmisk skala på et semi-loggdiagram mens konsentrasjonen av utgangsforbindelsen ble avsatt på loggskalaen. IC50 (konsentrasjon av utgangsforbindelsen som er nødvendig for å gi 50% hemming) for hver prøve ble avledet fra diagrammet, og man beregnet mengden av bibehold av cytotoksisitet ved hjelp av følgende ligning:
Resultatene fra prøven med hensyn til in vitro cytotoksisitet er angitt i tabell 5.
Det følgende prøvesystem ble brukt for å måle in vivo-aktiviteten av konjugatet ifølge foreliggende oppfinnelse.
In vivo-prøver for antisvulstaktivitet for de medisinske-monoklonale antistoffkonjugatene ble utført ved å bruke humane tumorxenografer hos athymiske (nakne) mus.
Burkitt lymphoma (Raji) og myeloma (HS Sultan) celler ble innhøstet fra dyrkningskolber og inokulert subkutunøst (> 80 x 10<6> Raji celler eller 40 x 10<6> HS Sultan celler) i prøvemus. Faste svulster, ovarie carcinoma (CA73, Ovcar-3), bryst-carcinoma (MX-1) og koloncarcinoma (LS174T) ble oppdyrket i athymiske mus, tatt ut, skåret opp i 2 mm<3> fragmenter og implantert subkutunøst hos prøvemus (5-8 fragmenter pr. mus).
Medisinsk aktive forbindelser, monoklonale antistoffer og de medisinske-monoklonale antistoffkonjugatene ble tilført intraperitonealt én gang hvert 3. døgn totalt 3 eller 5 injek-sjoner som startet på dag 2, 3, 4, 6, 7 eller 8. dag etter svulstimplanteringen. Svulstmålinger (lengden og bredden av svulsten) ble utført ved hjelp av et Fowler ultra CAL II elektronisk caliperapparat hvert 7. døgn i fra 4 til 6 uker etter tumorimplanteringen. Svulstmassen i mg ble beregnet ut fra følgende formel:
Svulstveksthemming ble beregnet for hver prøvegruppe med hensyn til prosent av en kontroll [midlere mg av behandlet (T) delt med midlere mg på kontroll (C) x 100]. En T/C-verdi < 42% i gruppene med > 65% overlevende dyr ble ansett for å være nødvendig å kunne angi aktivitet.
Resultatene av denne prøven er angitt i tabell 6.
Oppfinnelsen vil nå bli ytterligere beskrevet i forbindelse med de følgende ikke-begrensende eksempler.
Eksempel 1
3- merkaptopropionsyredisulfid av
LL- E33288V
En oppløsning av 90 mg LL-E3 3288'Y1:: i 90 ml acetonitril ble tilsatt 10,6 mg 3-merkaptopropionsyre i 1 ml acetonitril. Oppløsningen ble sentrifugert og lagret ved -20°C i 6 døgn. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum, og resten ble kromatografert over 10 ml silisiumdioksydgel i metylenklorid. Kolonnen ble utviklet med 50 ml metylenklorid, 50 ml 4% metanol i metylenklorid og til slutt 100 ml 8% metanol i metylenklorid. Fordampning av den siste fraksjonen ga en rest som ble oppløst i etylacetat ved hjelp av litt aceton og som deretter dråpevis ble tilsatt et overskudd av heksan. Bunnfallet ble oppsamlet og tørket, noe som ga 39 mg av det forønskede produktet (FABMS, M+H 1394).
De følgende syre-disulfid-derivater av N-acyl-LL-E33288 seriene er eksempler på N-acyl-derivater fremstilt ifølge fremgangsmåten i dette eksempel: 3-merkaptopropionsyre-disulf id av N-acetyl-LL-33288'y1<I >3-merkaptosmørsyre-disulfid av N-acetyl-LL-E33288'y1<I >3-merkaptoisovalerionsyre-disulfid av N-acetyl-LL-E33288'Y1<I >p-merkaptodihydrokanelsyre-disulfid av N-acetyl-LL-E33288'Y1<I.>
Eksempel 2
N- hydroksvsucc inimidy1- 3- merkaptopropionatdisulfid
av LL- E33288V
En oppløsning av 5 mg av 3-merkaptopropionsyredisulfid-analogen av LL-E33288'y1<I> fra EPO-publikasjonen i 0,5 ml tetrahydrofuran, ble tilsatt 0,45 mg N-hydroksysuccinimid i 0,1 ml tetrahydrofuran, og deretter tilsatt 1,8 mg dicyklo-heksylkarbodiimid i 0,2 ml tetrahydrofuran. Reaksjons-blandingen ble rørt ved romtemperatur i 4 timer og reaksjonen stoppet med stort overskudd av heksan. Det faste produktet ble frafiltrert og oppløst i etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket tre ganger med saltoppløsning, tørket med magnesiumsulfat og fordampet til 5 mg av det forønskede produktet som et blekt brunt pulver som ble brukt videre uten ytterligere rensning. Tilbakeholdelsestid på reversert fase C18 HPLC: 15 min. med 40% acetonitril/0,1 M vandig ammonium-acetat (utgangsmateriale: 6,0 min.)
De følgende N-hydroksysuksinimidyl-disulfid-derivater fra N-acyl-LL-E33288-seriene er eksempler på N-acylderivater fremstilt ifølge fremgangsmåten i dette eksempel: N-hydroksysuksinimidyl-3-merkaptopropionsyre-disulfid av
N-acetyl-LL-E3 32 8 8"Y ^ /
N-hydroksysuksinimidyl-3-merkaptosmørsyre-disulfid av N-acety 1-LL-E 3 3 2 8 8T i1,
N-hydroksysuksinimidyl-3-merkaptoisovalerionsyre-disulfid av N-acetyl -LL-E3 3 2 8 8"Y ^,
N-hydroksysuksinimidyl-p-merkaptodihydrokanelsyre-disulfid av N-acetyl-LL-E33288'Y1<I.>
Eksempel 3
3- merkaptopropionylhydraziddisulfid av
N- acetvl LL- E33288V
10 mg N-acetyl LL-E33288'Y1<I> i 10 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 1,5 ekviv. 3-merkaptopropionylhydrazid i 85 /il acetonitril. Man tilsatte én ekvivalent trietylamin. Blandingen ble rørt ved 0°C i 2 timer og oppløsningsmidlet fordampet. Resten ble krornatografert på silisiumdioksydgel med en 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. FABMS, m/z=1450 (M+H); tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC:2,5 min. med 50% acetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenfosfat (N-acetyl LL-E33288'Y1<I>:6,6 min. i det samme systemet.
Eksempel 4
3- merka<p>toisovaler<y>lhvdraziddisulfid
av N- acetvl LL- E33288- Y,1
20 mg N-acetyll LL-E33288,y1<I> i 15 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 3 ekvivalenter 3-merkaptosiovalerylhydrazid i 6,2 ml acetonitril. Én ekvivalent trietylamin ble så tilsatt. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 2 timer og oppløs-ningsmidlet fordampet. Resten ble krornatografert på silisiumdioksydgel med en 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. Tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC:2,5 min. med 50% acetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenfosfat (N-acetyl LL-E33288t1<i>: 6,6 min. i det samme systemet).
Eksempel 5
3- merkaptobutvrvlhydraziddisulfid
av N- acetyl LL- E33288- Y!1
10 mg N-acetyl LL-E33288'Yi<I> i 7,5 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 3 ekvivalenter 3-merkaptobutyrylhydrazid i 5 ml acetonitril. Én ekvivalent trietylamin ble så tilsatt. Reaksjonsblåndingen ble rørt ved romtemperatur i 10 timer og oppløsningsmidlet fordampet. Resten ble krornatografert på silisiumdioksydgel med en 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. Tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC:7,3 min. med 43% aetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenfosfat (N-acetyl LL-E33288'Y1<1>:5,6 min. i det samme systemet).
Eksempel 6
p- merkaptodihvdrocinnamvlhydraziddisulf id
av N- acetvl LL- E33288' Y1I
10 mg N-acetyl LL-E33288-Y!<1> i 7,5 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 3,0 ekvivalenter p-merkaptodihydrocinnamyl-hydrazid i 2,0 ml acetonitril. Én ekvivalent trietylamin ble så tilsatt. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 2 timer og oppløsningsmidlet fordampet. Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. Tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC:7,3 min. med 43% acetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenfosfat (N-acetyl LL-E33288ir1<I>:5,6 min. i det samme systemet).
Eksempel 7
Ikke- spesifikk koniugering til proteiner Hydroksysuccinimidesteren beskrevet i eksempel 3 ble kovalent knyttet til antistoffer under svakt alkaliske betingelser. Det er i det etterfølgende beskrevet en generell fremgangsmåte som ble brukt for å fremstille de antistoffkonjugater som er angitt i tabell 7. Antistoff ved en konsentrasjon på 3-5 mg/ml i fosfatbuffer inneholdende 0,1M natriumklorid, pH 7,5, ble omsatt med 5-20 gangers molart overskudd av produktet fra eksempel 3 under røring ved romtemperatur i fra 1-4 timer. Det konjugerte proteinet ble avsaltet kromatografisk og samlet protein ble skilt fra monomerisk materiale ved hjelp av gelfiltrering HPLC. Mono-meriske fraksjoner ble slått sammen og konsentrert.
Eksempel 8
Fremstilling av posisionsspesifikke koniuaater
Den fremgangsmåte som ble brukt for å knytte hydrazid-derivatene av de aktive forbindelser til oksyderte antistoffer, er beskrevet i T.J. McKearn, et al, i U.S. patent nr. 4,671,958; Fremgangsmåten er blitt anvendt for å fremstille antistoffkonjugater fra produktene fra eksemplene 4 til 15 med de spesifikke modifikasjoner som er beskrevet nedenfor. Produktene fra disse reaksjonene og deres egenskaper er angitt i tabell 7.
(A) Antistoffoksydasjon Antistoff ved en konsentrasjon på fra 5 til 10 mg/ml ble dialysert over natten mot 200 gangers
større volum av 50mM natriumacetatbuffer, pH 5,5 inneholdende 0,1M natriumklorid (buffer A). Etter dialysen ble MoAb oksydert med 15mM til 200 mM perjodsyre i 0,2M natriumacetat. Oksydasjonen ble utført i mørket under røring ved 4°C i 45 min., hvoretter det oksyderte MoAb ble avsaltet i en Sephadex G-25 kolonne med > 5 sjikt. Graden av oksydasjon ble bedømt ved en reaksjon med p_-nitrofenylhydrazin og ved å sammenligne absorpsjonen av proteinet ved 280 mm i forhold til absorpsjonen av p_-nitrofenylhydrazin ve<i 395 10111 • (B) Koniu<g>erin<g> av det aktive hydrazid Det oksyderte MoAb ble omsatt med fra 10 til 200 gangers molart overskudd av det
aktive hydrazidet. Hydrazidene ble oppløst i dimetylformamid og tilsatt den vandige oppløsningen av MoAb. For å unngå en utfelling av sistnevnte justerte man sluttvolumet på dimetyl-formamidet slik at ikke dette oversteg 10% av det totale volum. Man lot reaksjonen skje i 3 timer ved romtemperatur under røring. For å unngå tverrbinding av uomsatte aldehyder
og en etterfølgende aggregering, tilsatte man et blokkerings-middel, dvs. acetylhydrazid i 100 gangers molart overskudd 3 timer etter at man hadde tilsatt det aktive hydrazidet. For å stabilisere Schiffbasebindingen mellom aldehyd og det aktive hydrazid (et hydrazon), ble produktet vanligvis redusert til et alkylhydrazin ved å tilsette lOmM natriumcyanoborhydrid i en reaksjonstid på 1 time eller mer (total konjugeringstid - 4 timer). Konjugatet ble kromatografisk avsaltet og dialysert i lang tid (minimum 48 timer) over i pH 6,5 fosfatbuffer for lagring og prøving.
Konjugatene ble analysert for nærvær av aggregater ved gelfiltrering HPLC og for innhold av det frie hydrazidet ved reversert fase HPLC. Innholdet av aktivt hydrazid ble bestemt spektroskopisk ved å bruke ekstinksj onskoeffisienter av både antistoffet og det aktive hydrazidet for derved å kunne beregne den molare konsentrasjonen av sistnevnte i konj ugatene.
Hydrazidkoniuaater fremstilt fra produktet fra eksempel 3
Claims (1)
- Analogifremgangsmåte for fremstilling av et terapeutisk aktivt substituert disulfid med formelen Q-Sp-SS-W fra en forbindelse med formelen CH3-SSS-W som er et N-acyldericat av et antitumor-antibiotikum betegnet som LL-E33288a1-I, a2-Br, a2-I/ j9i-Br, Px- T, -Yi-Br, ^-1, Sx- T, hvor W er Rx er R2 er R3 er H; R4 erR5 er CH3, C2H5 eller (CH3)2CH; X er et jod- eller bromatom; R'5 er alkanoyl,Sp er en rettkjedet eller forgrenet (Cj-Cio) -alknylengruppe;Q er hydrogen ellerhvor n er 0 eller 1,karakterisert ved at man omsetter et metyl-trisulfidantitumorantibiotikum valgt fra gruppen som er nevnt ovenfor, med et tilsvarende substituert merkaptan i acetonitril eller en kombinasjon av acetonitril og tetrahydrofuran eller acetonitril og dimetylformamid ved en temperatur mellom -20°C og +40°C i et tidsrom fra 1 time til 6 døgn, fortrinns-vis i nærvær av én ekvivalent av en tertiær aminbase eller en blanding av én ekvivalent av en tertiær aminbase og én ekvivalent av en organisk karboksylsyre.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO932192A NO177308C (no) | 1989-04-14 | 1993-06-14 | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av anti-tumorforbindelser |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US33932389A | 1989-04-14 | 1989-04-14 | |
| US07/339,343 US5053394A (en) | 1988-09-21 | 1989-04-14 | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents |
| NO901655A NO176717C (no) | 1989-04-14 | 1990-04-11 | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målsökende anti-tumorforbindelser |
| NO932192A NO177308C (no) | 1989-04-14 | 1993-06-14 | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av anti-tumorforbindelser |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO932192L NO932192L (no) | 1990-10-15 |
| NO932192D0 NO932192D0 (no) | 1993-06-14 |
| NO177308B true NO177308B (no) | 1995-05-15 |
| NO177308C NO177308C (no) | 1995-08-23 |
Family
ID=26991573
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO901655A NO176717C (no) | 1989-04-14 | 1990-04-11 | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målsökende anti-tumorforbindelser |
| NO932192A NO177308C (no) | 1989-04-14 | 1993-06-14 | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av anti-tumorforbindelser |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO901655A NO176717C (no) | 1989-04-14 | 1990-04-11 | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målsökende anti-tumorforbindelser |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0392384B1 (no) |
| JP (1) | JP2951684B2 (no) |
| CN (2) | CN1046333A (no) |
| AT (1) | ATE163293T1 (no) |
| AU (1) | AU633069B2 (no) |
| CZ (1) | CZ293228B6 (no) |
| DE (1) | DE69032051T2 (no) |
| DK (1) | DK0392384T3 (no) |
| ES (1) | ES2112244T3 (no) |
| FI (1) | FI100105B (no) |
| GR (1) | GR3026177T3 (no) |
| IL (3) | IL115770A (no) |
| NO (2) | NO176717C (no) |
| NZ (1) | NZ233148A (no) |
| PT (1) | PT93716B (no) |
| SK (1) | SK284270B6 (no) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5079233A (en) * | 1987-01-30 | 1992-01-07 | American Cyanamid Company | N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same |
| EP0342341A3 (en) * | 1988-05-17 | 1991-07-24 | American Cyanamid Company | Process for producing antitumor antibiotic ll-e33288gamma2 |
| GB9120467D0 (en) * | 1991-09-26 | 1991-11-06 | Celltech Ltd | Anti-hmfg antibodies and process for their production |
| US6015562A (en) * | 1992-09-22 | 2000-01-18 | American Cyanamid Company | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents |
| US5773001A (en) * | 1994-06-03 | 1998-06-30 | American Cyanamid Company | Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis |
| US5712374A (en) * | 1995-06-07 | 1998-01-27 | American Cyanamid Company | Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
| US5714586A (en) * | 1995-06-07 | 1998-02-03 | American Cyanamid Company | Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
| US6441163B1 (en) * | 2001-05-31 | 2002-08-27 | Immunogen, Inc. | Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents |
| DK3066074T3 (da) * | 2013-11-04 | 2020-02-10 | Pfizer | Mellemprodukter og fremgangsmåder til syntetisering af calicheamicin-derivater |
| MA45326A (fr) | 2015-10-20 | 2018-08-29 | Genentech Inc | Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation |
| JP6917049B2 (ja) * | 2017-02-22 | 2021-08-11 | 公立大学法人大阪 | 特定のサルファイド化合物に結合する抗体及びその使用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1215212A3 (en) * | 1987-01-30 | 2003-05-21 | Wyeth Holdings Corporation | Dihydro derivatives of LL-E33288 antibiotics |
| ATE112172T1 (de) * | 1987-10-30 | 1994-10-15 | American Cyanamid Co | Targetformer von antitumor-methyltrithioagenzien. |
-
1990
- 1990-03-13 IL IL11577090A patent/IL115770A/xx active IP Right Grant
- 1990-03-13 IL IL9373390A patent/IL93733A/en not_active IP Right Cessation
- 1990-03-30 NZ NZ233148A patent/NZ233148A/en unknown
- 1990-04-06 ES ES90106631T patent/ES2112244T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-06 DK DK90106631.6T patent/DK0392384T3/da active
- 1990-04-06 DE DE69032051T patent/DE69032051T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-06 EP EP90106631A patent/EP0392384B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-06 AT AT90106631T patent/ATE163293T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-04-10 PT PT93716A patent/PT93716B/pt not_active IP Right Cessation
- 1990-04-11 NO NO901655A patent/NO176717C/no not_active IP Right Cessation
- 1990-04-12 AU AU53241/90A patent/AU633069B2/en not_active Expired
- 1990-04-12 FI FI901866A patent/FI100105B/fi active IP Right Grant
- 1990-04-12 JP JP2095245A patent/JP2951684B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-13 CZ CZ19901884A patent/CZ293228B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-04-13 SK SK1884-90A patent/SK284270B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1990-04-14 CN CN90102101A patent/CN1046333A/zh active Pending
-
1993
- 1993-06-14 NO NO932192A patent/NO177308C/no not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-03-04 CN CN94102679A patent/CN1109041C/zh not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-10-25 IL IL11577095A patent/IL115770A0/xx unknown
-
1998
- 1998-02-19 GR GR970403101T patent/GR3026177T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5053394A (en) | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents | |
| US5770701A (en) | Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents | |
| US5770710A (en) | Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methlytrithio group | |
| SK281179B6 (sk) | N-acylderiváty antibiotík ll-e33288, spôsoby ich prípravy a ich použitie na výrobu liečiv | |
| NO177308B (no) | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av anti-tumorforbindelser | |
| DK147304B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af (-) daunosaminyl-4-demethoxydaunomycinon som en blanding af (7s : 9r) og (7r : 9r) alfa-anomere | |
| FI95204B (fi) | Menetelmä metyylitritioyhdisteiden kohdennettujen johdannaisten valmistamiseksi | |
| KR930006995B1 (ko) | Bu-3608 항생제의 세린 동족체 | |
| Refsnes et al. | Modeccin—a plant toxin inhibiting protein synthesis | |
| NZ229964A (en) | N-alkyl derivatives of antibiotic bu-3608 and pharmaceutical compositions | |
| NO163574B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av antitumor-antibiotika (ll-e33288 kompleks) ved fermentering av micromonospora echnospora ssp. calichensis nrrl 15839 og nrrl 15975. | |
| KR0159767B1 (ko) | 메틸-트리티오기를 갖는 화합물로 부터 제조된 항종양항균 물질인 치환 디설파이드, 그의 목적 형태및 그의 제조 방법 | |
| CN114957346B (zh) | 一种抗体偶联剂及其制备方法与应用 | |
| JPS61145145A (ja) | アントラサイクリン誘導体およびそれらの微生物学的製法 | |
| CA1341315C (en) | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents | |
| CN115364238A (zh) | 一种阿特珠单抗-mmad结合物及其制备方法与应用 | |
| Vaughan | Studies on pigmentation during growth of Serratia marcescens | |
| JPS6140296A (ja) | 生理活性物質の製造法 | |
| PL110865B1 (en) | Process for the preparation of novel 2-desoxystreptamine aminoglycosides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |