NO176717B - Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målsökende anti-tumorforbindelser - Google Patents
Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målsökende anti-tumorforbindelser Download PDFInfo
- Publication number
- NO176717B NO176717B NO901655A NO901655A NO176717B NO 176717 B NO176717 B NO 176717B NO 901655 A NO901655 A NO 901655A NO 901655 A NO901655 A NO 901655A NO 176717 B NO176717 B NO 176717B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- formula
- compound
- defined previously
- acetonitrile
- previously
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 80
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 title abstract description 15
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 153
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 35
- -1 propionic acid hydroxysuccinimide esters Chemical class 0.000 claims description 33
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 21
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 14
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 12
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000011630 iodine Substances 0.000 claims description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 9
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- 239000003972 antineoplastic antibiotic Substances 0.000 claims description 7
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 claims description 7
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims description 7
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 5
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- OFLXLNCGODUUOT-UHFFFAOYSA-N acetohydrazide Chemical compound C\C(O)=N\N OFLXLNCGODUUOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 4
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 claims description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 4
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 claims description 4
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims description 4
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 claims description 3
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 3
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical group [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 claims description 2
- 239000012304 carboxyl activating agent Substances 0.000 claims description 2
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical group II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 claims 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 abstract description 13
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 abstract description 10
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 abstract description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 57
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- 239000000047 product Substances 0.000 description 33
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 22
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 20
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 18
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 18
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 18
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 16
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 15
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 13
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 13
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 13
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 11
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N ammonium dihydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].OP(O)([O-])=O LFVGISIMTYGQHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229910000387 ammonium dihydrogen phosphate Inorganic materials 0.000 description 10
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 10
- 235000019837 monoammonium phosphate Nutrition 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 9
- DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 3-mercaptopropanoic acid Chemical class OC(=O)CCS DKIDEFUBRARXTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 8
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 7
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 6
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 6
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 5
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 5
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 5
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 4
- KOUKXHPPRFNWPP-UHFFFAOYSA-N pyrazine-2,5-dicarboxylic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)C1=CN=C(C(O)=O)C=N1 KOUKXHPPRFNWPP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 3
- 239000002585 base Substances 0.000 description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 230000000684 melanotic effect Effects 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M sodium iodide Chemical compound [Na+].[I-] FVAUCKIRQBBSSJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GJCVIQQPJSJYSY-UHFFFAOYSA-N 2-tert-butylsulfanylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)SC(C)(C)C GJCVIQQPJSJYSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YQWPHBFLHAJVCG-UHFFFAOYSA-N 3-(4-sulfanylphenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(S)C=C1 YQWPHBFLHAJVCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YYPNJNDODFVZLE-UHFFFAOYSA-N 3-methylbut-2-enoic acid Chemical compound CC(C)=CC(O)=O YYPNJNDODFVZLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KMVPXBDOWDXXEN-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenylhydrazine Chemical compound NNC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 KMVPXBDOWDXXEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical group ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000030570 cellular localization Effects 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- WYVSLWNGZYMTPN-ZDUSSCGKSA-N ethyl (2r)-2-[[2-[(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)amino]acetyl]amino]-3-sulfanylpropanoate Chemical compound CC1=CC(=O)OC2=CC(NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)OCC)=CC=C21 WYVSLWNGZYMTPN-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 2
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- CZDYFANOONBAPE-UHFFFAOYSA-N (2,4-dicyclohexylimidazol-1-yl)-imidazol-1-ylmethanone Chemical compound C1(CCCCC1)C=1N=C(N(C(=O)N2C=NC=C2)C=1)C1CCCCC1 CZDYFANOONBAPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(1-aminoethyl)oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol;(2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(aminomethyl)oxan-2-yl]o Chemical compound OS(O)(=O)=O.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@@H](CN)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@H](O2)C(C)N)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N 0.000 description 1
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 1
- MWIXENPCUPDSOS-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanehydrazide Chemical compound NNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MWIXENPCUPDSOS-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 1
- UEEYUKBCSWYSIQ-NSHDSACASA-N CC1=CC(OC2=CC(=CC=C12)NCC(=O)N(N)C([C@@H](N)CS)=O)=O Chemical compound CC1=CC(OC2=CC(=CC=C12)NCC(=O)N(N)C([C@@H](N)CS)=O)=O UEEYUKBCSWYSIQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N Carbon-13 Chemical compound [13C] OKTJSMMVPCPJKN-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N Deuterium Chemical compound [2H] YZCKVEUIGOORGS-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N Isobutene Chemical group CC(C)=C VQTUBCCKSQIDNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187722 Micromonospora echinospora Species 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 238000002814 agar dilution Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 1
- OQNGCCWBHLEQFN-UHFFFAOYSA-N chloroform;hexane Chemical compound ClC(Cl)Cl.CCCCCC OQNGCCWBHLEQFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N coumarin 120 Chemical compound C1=C(N)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C GLNDAGDHSLMOKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDHQCZJRKDOVOX-NSCUHMNNSA-N crotonic acid Chemical compound C\C=C\C(O)=O LDHQCZJRKDOVOX-NSCUHMNNSA-N 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005782 double-strand break Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 238000010931 ester hydrolysis Methods 0.000 description 1
- YVKSGVDJQXLXDV-BYPYZUCNSA-N ethyl (2r)-2-amino-3-sulfanylpropanoate Chemical compound CCOC(=O)[C@@H](N)CS YVKSGVDJQXLXDV-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N ethyl bromoacetate Chemical compound CCOC(=O)CBr PQJJJMRNHATNKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004446 heteroarylalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRWIZMBXBAOCCF-UHFFFAOYSA-N hydrazinecarbothioamide Chemical compound NNC(N)=S BRWIZMBXBAOCCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007857 hydrazones Chemical class 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- BRMYZIKAHFEUFJ-UHFFFAOYSA-L mercury diacetate Chemical compound CC(=O)O[Hg]OC(C)=O BRMYZIKAHFEUFJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- LGZXYFMMLRYXLK-UHFFFAOYSA-N mercury(2+);sulfide Chemical compound [S-2].[Hg+2] LGZXYFMMLRYXLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDTLDBDUBGAEDT-UHFFFAOYSA-N methyl 3-sulfanylpropanoate Chemical compound COC(=O)CCS LDTLDBDUBGAEDT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 150000005599 propionic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- DUIOPKIIICUYRZ-UHFFFAOYSA-N semicarbazide Chemical compound NNC(N)=O DUIOPKIIICUYRZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000009518 sodium iodide Nutrition 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 125000004001 thioalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- LDHQCZJRKDOVOX-UHFFFAOYSA-N trans-crotonic acid Natural products CC=CC(O)=O LDHQCZJRKDOVOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
- A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
- A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
- A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
- A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Engine Equipment That Uses Special Cycles (AREA)
- Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
- Lubricants (AREA)
- Treating Waste Gases (AREA)
Description
Oppfinnelsen angår en analogifremgangsmåte for fremstilling av målsøkende derivater med formelen
hvor Tu er et mono- eller polyklonalt antistoff, dets fragmenter, dets kjemisk eller genetisk manipulerte motstykker eller vekstfaktorer eller steroider; Y er en amino- eller karboksyholdig sidekjede-gruppe; n varierer fra 1-100,
m fra 1-15,
ut fra forbindelser med formel CH3SSS-W, hvor CH3SSS-W er et N-acylderivat av et antitumor-antibiotikum LL-E33288a-I, a2-Br, az- l, /?i-Br, /?!-!, 7i-Br, ^-I, 5 X-I, hvor
R5 er CH3, C2H5 eller (CH3)2CH;
X er et jod- eller bromatom;
R5' er alkarioyl;
R8 er OH, R9 er H, eller R8 og R9 kan sammen være en karbo-nylgruppe, og
Sp er en rettkjedet eller forgrenet (Ci-C^)alkylengruppe. Figur 1 Det ultrafiolette spektret av antitumorantibio
tikumet betegnet som N-acetyl LL-E33288<S1<I>. Figur 2 Det infrarøde spektret av antitumorantibiotikumet
betegnet som N-acetyl LL-E332886V.
Figur 3 Det protonmagnetiske resonansspektret av antitumor
antibiotikumet betegnet som N-acetyl LL-E33 288S!1. Figur 4 Det karbon-13 kjernemagnetiske resonansspektret av antitumorantibiotikumet betegnet som N-acetyl LL-E332886V. Figur 5 Det ultrafiolette spektret av antitumoranti
biotikumet betegnet som jod LL-E33288 pseudoaglykon. Figur 6 Det infrarøde spektret av antitumorantibiotikumet
betegnet som jod LL-E33288 pseudoaglykon.
Figur 7 Det protonmagnetiske resonansspektret av antitumorantibiotikumet betegnet som jod LL-E3 3 288 pseudoaglykon. Figur 8 Det karbon-13 magnetiske resonansspektret av antitumor antibiotikumet betegnet som jod LL-E3 3288 pseudoaglykon.
Gruppen av antibakterielle og antitumormidler kollektivt betegnet LL-E33288-komplekset, er beskrevet og patentsøkt i EPO-publikasjonsnummer 0182152A3 publisert 28. mai 1986, og er brukt for å fremstille de disvovelantitumormidler som er enkelte av utgangsforbindelsene for de målrettede formene av antitumormidler ifølge foreliggende oppfinnelsen.
Nevnte EPO-publikasjon nr. 0182152A3 beskriver LL-E33288-komplekset, og dets komponenter, nemlig, LL-E33288a1<Br>, LL-E33288Q:!<1>, LL-E3 3288a2Br, LL-E33288a2<I>, LL-E33288a3<Br>,
LL-E3 3288a3I, LL-E33288aA<Br>, LL-E3 3 288/?!111, LL-E33288JS!<1>, LL-E33288£2<Br>, LL-E33288/32<1>, LL-E33288"Yi<Br>, LL-E33288-Y1<1> °g LI> E332880"!<1>, samt fremgangsmåter for fremstilling ved hjelp av en aerob fermentering hvor man bruker en ny rase av Micromonospora echinospora ssp calichensis eller naturlig eller kunstig fremstilte mutanter av denne rasen. EPO-publikasj onsnr. 0182152A3 beskriver også visse foreslåtte strukturer for enkelte av de ovennevnte komponenter. Disse foreslåtte strukturer er angitt i tabell 1. Tabell 1; Foreslått struktur for CH3-SSS-W isolert fra naturlige kilder (hvor W er substituenten knyttet til CH3-SSS-angitt nedenfor)
Ytterligere forbindelser i LL-E33288-komplekset er beskrevet og patentsøkt i EPO-publikasjon nr. 027485A2 publisert 3. august 1988, og kan på lignende måte brukes for fremstilling av disulfidderivatene og målrettede former av antitumormidler ifølge foreliggende oppfinnelse. Nevnte søknad beskriver LL-E33288brom- og jod-pseudoaglykonene av seriene og som er blitt fremstilt på kjemisk måte. Søknaden beskriver også dihydroderivatene som er tilgjengelig fra alle de ovennevnte antitumorantibiotika gjennom en natriumborhydrid-reduksjon av ketonet ved Cn til en hydroksylgruppe. De sistnevnte strukturer er angitt i tabell 2.
En annen gruppe av LL-E33 288-komplekset av antitumorantibiotika kan brukes for fremstilling av ytterligere målrettede former av antitumormidler ifølge foreliggende oppfinnelse. Disse er N-acylderivater av flere forbindelser av LL-E3 3288-komplekset som er blitt fremstilt på kjemisk måte. De foreslåtte strukturer er på lignende måte gjengitt i tabell 2. Tabell 2: Foreslåtte strukturer for CH3-SSS-W avledet ved kjemisk manipulerling av forbindelsene i tabell 1 (hvor W er substituenten knyttet til CH3-SSS- nedenfor)
R = hydrogen eller en grenet eller ugrenet alkyl (C!-C18; - enex alkylen(C1-C18)-gruppe, en aryl- eller heteroarylgruppe eller en alkyl (C^Cg) - eller heteroaryl-alkyl (Cx-C8) gruppe, alle eventuelt substituert med én eller flere hydroksy-,
amino-, karboksy-, halogen-, lavere (Cx-C3)alkoksy- eller lavere (Ci-Cg) tioalkoksygruppe.
Reaksjonen med ethvert av de ovennevnte angitte antibiotika med et usubstituert eller substituert alkyl- eller arylmerkaptan resulterer i en eliminering av metylpertiolat-anionet fra trisulfidgruppen, noe som resulterer i dannelsen av et stabilt disulfid (skjema I) nedenfor. Andre forbindelser hvor nevnte transformasjon virker er beskrevet i EPO publikasjon nr. 0313874A2 publisert 3. mai 1989.
Forbindelsene i tabellene 1 og 2 kan omdannes med tiolholdige organiske molekyler_ifølge skjema I, hvorved man får fremstilt nye forbindelser som kan brukes som antibakterielle midler og midler mot kreft som sådan, og hvor W, R, Rlr R2, R3, R,, R5, R5, R6, R7, R8, R9, R2<»>, R3', R4' , R5', Arx, Ar2 og X er som definert ovenfor i tabeller 1 og 2, Sp er som forut definert.
Forbindelsene som er innledningsvis definert fremstilles ifølge foreliggende oppfinnelse ved at man omsetter CH3SSS-W med en forbindelse med formelen Q-Sp-SH, hvor Sp er som definert ovenfor; og
Q er hydrogen eller
hvor n er 0 eller 1,
i acetonitril eller en kombinasjon av acetonitril o tetrahydrofuran eller acetonitril og dimetylformamid ved en temperatur mellom -20°C og +40°C i et tidsrom fra 1 time til 6
døgn, fortrinnsvis i nærvær av én ekvivalent av en tertiær aminbase eller en blanding av én ekvivalent av en tertiær aminbase og én ekvivalent av en organisk karboksylsyre,
hvoretter man isolerer mellomproduktet med formelen Q-Sp-SS-W, hvor Q, Sp og W er som definert ovenfor, og
hvoretter man omsetter forbindelsen med sistnevnte formel hvor Sp, Q og W er som definert tidligere, med et molekyl med formelen: Tu-(Y)n,
hvor Tu, Y og n er som forut definert, i en vandig buffer ved pH mellom 6,5 og 9 ved en temperatur fra 4°C til 4 0°C, enten direkte eller i nærvær av et vannoppløselig karbodiimid, hvorved man får fremstilt forbindelsen
hvor Tu, Sp, W, n og Y er som definert tidligere, m er fra 1-15 og Z er dannet ved en kovalent reaksjon mellom gruppene Q og Y og er -CONH-, -NH-,
-N=CH- eller -C02-, eller
man omsetter forbindelsen med formel Q-Sp-SS-W, hvori Sp og W er som definert tidligere, og Q er en karboksylsyre-gruppe, med 4-nitrofenol i nærvær av et karboksylaktiverende middel såsom et karbodiimid, hvorved man får fremstilt en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W hvor Sp og W er som definert tidligere, og Q er
som videre omsettes med et molekyl med formel Tu-(Y)n,
hvor Tu og n er som definert tidligere, og Y er en sidekjedeaminogruppe, i en vandig bufret oppløsning ved en pH mellom 6,5 og 9 og ved en temperatur mellom 4°C og 40°C, hvorved man får fremstilt forbindelser med følgende formel:
hvor Tu, Sp, Y og n er som definert tidligere, m er fra 1-15 og Z er dannet ved en kovalent reaksjon mellom Q og Y og er definert som -CONH-, eller omsetter en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W, hvor Sp og W er som definert tidligere, og Q er -CONHNH2, med salt-petersyre i vandig acetonitril for derved å få fremstilt en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W, hvor Sp og W er som definert tidligere, og Q er -CON3, med en forbindelse med formelen Tu-(Y)n, hvor Tu, Y og n er som definert tidligere, hvorved man får fremstilt en forbindelse med følgende formel
hvor Tu, Z, Sp, W, m, Y og n er som definert tidligere;
eller
omsetter en forbindelse med formel Q-Sp-SS-W hvor Sp og W er som definert tidligere, og Q er en hydroksygruppe, med et alfa-halogeneddiksyreanhydrid for derved å få fremstilt en forbindelse hvor Q er a-halogenacetyloksy, hvoretter man omsetter a-halogenacetyloksy-Sp-SS-W-forbindelsen, med et molekyl med formelen Tu-(Y)n hvor Tu er som definert tidligere, Y er en sidekjedetiol av et protein eller en amidoalkyltiogruppe innført på et amin av Tu ved at man bruker reagenser som 3-(2-ditiopyridyl)propionsyrehydroksysuccinimidester fulgt av en reduksjon med en middel såsom ditiotreitol, eller en amidoalkyltiogruppe innført på et amin av Tu ved å bruke 2-iminotiolan, og n er fra 1-10 under vandig bufrete betingelser ved en pH mellom 4,5 og 7 og ved en temperatur mellom 4°C og 40°C, hvorved man får fremstilt en forbindelse med formelen:
hvor Tu, Sp, W og n er som definert tidligere, og Z er dannet ved en kovalent reaksjon mellom gruppene Q og Y, og Z er
og n er fra 1 til 10;
eller
omsetter en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W, hvor Sp og W er som definert tidligere, og Q er -CONHNH2, med et molekyl med formelen Tu-(Y)n, hvor Tu er som definert tidligere, Y er et aldehyd fremstilt fra karbohydratrester på Tu ved oksydasjon i nærvær av et alkalijordmetallperjodat, i en vandig buffer ved en pH mellom 4,0 og 6,5 og en temperatur fra 4°C til 40°C, og n er fra 1 til 20, hvorved man får fremstilt en forbindelse med følgende formel:
hvor Tu, Sp, W, Y og n er som definert tidligere, og Z er dannet ved en kovalent reaksjon mellom Q og Y, og er -ON=CH-, -N=CH-, -C0NHN=CH-, -NHCONHN=CH- eller -NHCSNHN=CH- og m er fra 1 til 15, eller behandler forbindelsen med følgende formel :
hvor Tu, Z, Sp, W, Y, n og m er som definert ovenfor, med acetylhydrazin eller tyrosinhydrazin i en vandig buffer ved en pH mellom 4,0 og 6,5 og en temperatur fra 4°C til 40°C, hvorved man får fremstilt en forbindelse med formelen:
hvor Tu, Z, Sp, W, n og m er som definert tidligere, og Y er
-CH=NNHCOCH3 eller
og
omsetter denne forbindelsen med natriumcyanoborhydrid eller natriumborhydrid i en vandig buffer ved pH mellom 4,0 og 6,5 og en temperatur fra 4°C til 4 0°C, hvorved man får fremstilt en forbindelse med formelen:
hvor Tu, Sp, W, m og n er som definert ovenfor, og Z er -NH-CH2-, -CONHNHCH2-, -NHCONHNHCH2- eller -NHCSNHNHCH2- og Y er
-CH2NHNHCOCH3 eller
De kan brukes som antitumor og antibakterielle midler, og er brukbare for å bedømme nye typer av anticancer-aktivitet på et cellulært nivå. De naturlig avledede antibiotika beskrevet i ovennevnte søknader og patenter inneholder ikke tilstrekkelig sterke kromoforiske enheter slik at deres intracellulære lokalisering ikke kan angis tilfredsstillende. Når de naturlige tritiometylderivatene reageres med tiolholdige molekyler som ytterligere inneholder en kromoforisk enhet som absorberer eller sender ut lys i området i det elektromagnetiske spektrum som ikke skjermes eller skjules av de cellulære kromoforer, så får man tilveiebrakt meget fordelaktige biokjemiske redskaper for å undersøke brudd i dobbelttrådet DNA, foruten at man kan utvikle og påvise en cellulær lokalisering av denne type forbindelser. Videre vil en innføring av radiomarkører ved denne reaksjonen ligge innenfor foreliggende oppfinnelse. Når f.eks. E-33288a1-I reageres med 7-(2-tioetylamino)-4-metyl-kumarin, så får man et derivat som fluorescerer intenst ved bestråling med ultrafiolett lys, noe som gjør at man lett kan lokalisere forbindelsen inne i de enkelte celler.
I denne utførelsen av oppfinnelsen blir forbindelsene fra
tabellene 1 og 2 omdannet med tiolholdige organiske molekyler ifølge skjema I, slik at man får fremstilt nye forbindelser 'som dessuten er brukbare som molekylære prober, og hvor W, R,
^1 / ^2 1 ^3 / ^4 i R- Sr R- 6r ^7 / ^8 / ^9/ ^2 ' / ^3 ' / ^4 ' / ^5 ' f ' ^r2 °9 X er som definert i tabellene 1 og 2, Sp er som forut definert, hvilke forbindelser inneholder en <3>H, <1>4C, 35S eller <32>P radiomarkør som del av sin struktur.
Man har også oppdaget at ved forskyvningen eller erstat-ningen av metyltritioenheten i forbindelsene som er angitt i
tabellene 1 og 2 og som er angitt i skjema I, kan det innføres en avstandsskapende gruppe Sp, og valget av denne gjør det mulig å innføre målsøkende enheter i disulfidderivat-forbindelsene. Innføring av målsøkende grupper i andre disulfidderivater er beskrevet i EPO-publikasjon nr. 0313873A1 publisert 3. mai 1989.
Så lenge som produktet fra skjema 1 inneholder minst én funksjonell gruppe som kan omdannes til eller som er direkte reaktiv med en målsøkende enhet (Tu), så kan man fremstille målsøkende former av antitumorantibiotika fra de ovennevnte patenter og søknader, noe som er vist i skjema II nedenfor:
hvor Q, Sp og W er som definert tidligere, Tu er et mono-eller polyklonalt antistoff, dets fragmenter, dets kjemisk eller genetisk manipulerte motparter eller vekstfaktorer eller steroider; Y er en sidekjedeamino, karboksy eller tiolgruppe av et protein, et aldehyd avledet fra karbohydratrester eller en amidoalkyltiogruppe; n er et tall fra 1 til 100; Z er fremstilt ved en kovalent reaksjon av gruppene Q og Y direkte eller etter en etterfølgende reduksjon, og Z og m er som forut definert.
Som et eksempel og med referanse til skjema II ovenfor, så kan 3-merkaptopropionsyrederivatet av N-acetyl E-33288'Y1:i: (Q=C02H, Sp=-CH2CH2-) når det omdannes til sitt aktiverte hydroksysuccinimidform (Q=C02Su, Sp=-CH2-CH2-) brukes for å reagere med enkelte av e-amiogruppene i lysinrestene (f.eks. hvor Tu=monoklonalt antistoff, Y=-NH2 hvor n=50-100 fra tilgjengelige lysinrester) ved en pH mellom 7,0 og 9,5 i vandige bufrete oppløsninger ved temperaturer mellom 4 og 40°C, hvorved man får fremstilt målsøkende former av nevnte antibiotika festet til vilkårlige posisjoner langs proteinkjeden (Tu=monoklonalt antistoff, Z=-NHCO-, Sp=-CH2CH2-, m=l-10). Bare en fraksjon av de tilgjengelige lysinrestene blir substituert på denne måten, ettersom en sterkere substitusjon vanligvis ikke er forenelig med en bevaring av antistoff-immunoreaktiviteten. De samme vilkårlig-substituerte immuno-konjugater kan også fremstilles fra 3-merkapto-propionsyrederivatet ved å bruke andre karboksylgruppe-aktiverende midler, såsom en rekke karbodiimider, eller det tilsvarende acylazid. Alternativt reagerer et 3-merkapto-propionyl-hydrazidderivat av N-acetyl LL-E33288S!<1> (Q=H2NNHCO-, Sp=-CH2CH2-) , når det reageres med et perjodat-oksydert antistoff (Tu=monoklonalt antistoff, Y=-CHO, n=l-15) slik det er beskrevet i U.S. patent nr. 4.671,958, med en pH mellom 4 og 7 i en bufret vandig oppløsning ved mellom 4°C og 4 0°C, bare med aldehydfunksjonaliteten (fremstilt ved spalting av vic-diolene i karbohydratrestene plassert på Fc-resten av antistoffene), hvorved man får fremstilt monoklonale antistoffkonjugater som inneholder den medisinsk viktige og virksomme forbindelsen substituert på spesifikke posisjoner langs proteinkjeden (Tu=monoklonalt antistoff, Z=-CH=NNHCO-, Sp=-CH2CH2-, og m=5-10). For å blokkere ureagerte aldehydgrupper på antistoffet og derved unngå en tverrbinding, så vel som stabilisere de hydrolytisk labile Schiffs basebindingene, så er det foretrukket (dog ikke kritisk) å reagere sistnevnte konjugat først med en forbindelse såsom acetylhydrazid eller tyrosinhydrazid, og deretter utføre en reduksjon med natriumcyanoborhydrid eller natriumborhydrid for å produsere stabiliserte komplekser fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse (Tu=monoklonalt antistoff, Z=-CH2NHNHCO-, Sp=-CH2CH2-, m=5-10) . Andre aldehyd-reaktive grupper som en del av komplekset kan anvendes innenfor foreliggende oppfinnelse slik at man derved kan fremstille produkter ifølge skjema II. Slike funksjonelle grupper er fortrinnsvis, men ikke begrenset til de som reagerer med aldehyder under sure vandige betingelser. Reaktiviteten på proteinlysinene under basiske betingelser er vanligvis tilstrekkelig til at deres aminer konkurrerer med produktene fremstilt som angitt i skjema II, for tilgjengelige aldehydgrupper i det monoklonale antistoffet. Alternative aldehyd-reaktive grupper er f.eks. semikarbazidet, tiosemi-karbazidet og de O-substituerte hydroksylaminfunksjonali-tetene.
Sammensetningen av målsøkende former av de forbindelser som er angitt i tabellene 1 og 2, er ikke begrenset til den sekvens som er angitt i skjema II. Den målsøkende enheten (Tu) kan først modifiseres slik at den inneholder en tiolgruppe, og kan deretter reageres med forbindelser som angitt i
tabellene 1 og 2 i overensstemmelse med skjema III nedenfor:
hvor Tu, Y, Q, Sp, W, n og m er som definert tidligere, og P er et hydrogenatom eller 2-(pyridyltio), under den forut-setning, at når Y er en tiol avledet av en kjedeaminosyrerest av Tu, så er Z-Sp til sammen en kovalent binding.
Som et eksempel og med henvisning til skjema III ovenfor, kan et monoklonalt antistoff reageres med 3-(2-ditiopyridyl)-propionsyrehydroksysuccinimidester for derved å modifisere proteinet gjennom lysinrester (Tu=monoklonalt antistoff, Y=NH2, n=50-100, Q=-C02Su, Sp=-CH2-CH2-, P=2-pyridyltio) . Etter reduksjon, f.eks. med ditiotreitol, får man fremstilt et mellomprodukt (Tu=monoklonalt antistoff, Z=-NHCO-, Sp=-CH2CH2-, m=l til 15) som kan reageres med forbindelser fra tabellene 1 og 2, hvorved man får fremstilt de foreliggende immuno-konjugater. På lignende måte kan 2-iminotiolan reageres med et monoklonalt antistoff for å innføre tiolgrupper på overflaten av proteinet direkte, uten at man trenger å ha et reduksjonstrinn (Tu=monoklonalt antistoff, Z=-NHCO-, Sp= -(CH2)3-, m=l til 15), hvoretter dette mellomproduktet kan reageres med forbindelser fra tabellene 1 og 2 som tidligere. Alternativt kan sulfhydrylgruppene inne i strukturen i de monoklonale antistoffer gi en dimerisk form som cysteinrester, brukes direkte for å delta i reaksjonen som angitt i skjema III. Slike sulfhydrylgrupper vil tradisjonelt bli eksponert ved en kombinasjon av enzymatisk nedbrytning og reduksjon av naturlig forekommende monoklonale antistoffer (Tu=Fab' frag-ment, Z-Sp=binding, Y=SH), men man kan på lignende måte bruke genetisk endrede forbindelser av monoklonale antistoffer som inneholder uparede cysteinrester.
En foretrukken utførelse av målsøkende derivater fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse, er et protein-konjugat med følgende formel:
fremstilt fra gruppen av antitumorantibiotika betegnet LLE33288 (CH3SSS-W), som innbefatter følgende reaksjoner: erstatning av ditiometylgruppen med en forbindelse med formel Q-Sp-SH, hvor Sp er rette eller grenete divalente (C2-C10) radikaler, hvorved man får fremstilt et mellomprodukt med generell formel Q-Sp-SS-W, hvor Q, Sp og W er som definert tidligere, hvoretter sistnevnte forbindelse reageres med et molekyl med formel Tu-(Y)n, hvor Tu er et monoklonalt antistoff som viser preferensiell reaktivitet med et humant tumor-forbundet antigen, Y er en side-kjedeaminogruppe på antistoffet eller et aldehyd fremstilt ved å oksydere karbohydratgruppene på antistoffet, og n er et tall fra 1 til 100, hvorved man får fremstilt en forbindelse med følgende formel:
hvor Tu, Y, Sp, W og n er som definert tidligere, og Z er dannet ved en kovalent reaksjon mellom gruppene Q og Y direkte
eller etter en reduksjon, og Z er -CONH-, -CONHN=CH-,
-CONHNHCH2-, eller
og m er 1 til 15.
En rekke forskjellige monoklonale antistoffer (MoAbs) kan brukes som eksempler på målsøkende enheter i nevnte metyltri-tioanticancerforbindelsene. MoAbs Lym 1 og Lym 2 gjenkjenner forskjellige antigener i modne B-lymfocytter og deres produkt nemlig lymphomas. Fremstilling og karakterisering av disse MoAbs er beskrevet av A.L. Epstein, et. al. "Cancer Research" 47, 830 (1987). MoAb B72.3 søker seg primært til cancer-svulster i brystet og kolon, men er også reaktiv med svulster i pankreas, eggledere og lungen. Antistoffet er blitt beskrevet av T.L. Klug, et. al., "Int. J. Cancer" 38., 661
(1986). MoAb CT-M-01, som primært gjenkjenner brystsvulster er beskrevet i EPO søknad 86 401482.4 innsendt 3. juli 1986 og MAC-68 er fremstilt ved en sub-klon av hybridomet som produ-serer CT-M-01, og gjenkjenner svulster i både bryst og kolon. Mellomprodukter for de foreliggende forbindelser kan også brukes i forbindelse med konjugater med disse antistoffer, noe som er beskrevet i den eksperimentelle delen. Det skal imidlertid understrekes at foreliggende patent ikke er begrenset til de forannevnte antistoffer. Foreliggende fremgangsmåte er tilstrekkelig generell til at den kan anvendes på alle typer antistoffer uansett deres type eller isotype, enten de er enzymatisk avledede fragmenter eller kjemisk manipulerte eller stabiliserte fragmenter, så vel som deres respektive chimeriske og humaniserte motparter. Videre er de målsøkende enheter heller ikke bare begrenset til monoklonale antistoffer. Andre proteiner så vel som mindre molekyler for hvilke det eksisterer reseptorer i det forønskede målvevet, ligger innenfor den foreliggende oppfinnelse.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse som er betegnet som Q-Sp-SS-W er aktive også som antibakterielle midler. Deres in vitro antibakterielle aktivitet kan bestemmes mot gram-positive og gram-negative bakterier ved standard agar fortynningsmetoden. Mueller-Hinton agar inneholdende to-dobbelt avtagende konsentrasjoner av antibiotikumet som skal prøves helles over i petriskåler. Agaroverflåtene blir så inokulert med fra 1 til 5 x IO<* >kolonidannende enheter av bakteriene ved hjelp av en Steers repliserende anordning. Den laveste konsentrasjonen av forbindelsen som hemmer veksten av en bakterierase etter ca. 18 timers inkubering ved ca. 3 6°C, blir angitt som den minimalt hemmende konsentrasjonen (MIC) for den prøvede rasen eller bakterien. De disulfidforbindelser som er beskrevet ovenfor er også aktive antitumormidler. Visse in vivo prøvingssystemer og protokoller er utviklet av the National Cancer Institute for prøving av forbindelser for å bestemme deres egnethet som antineoplastiske midler. Disse er blitt rapportert i "Cancer Chemotherapy Reports", Part III, Vol. 3, No. 2 (1972), Geran, et. al. Disse protokoller er etter hvert blitt etablert som standardiserte prøver som vanligvis følges for prøving av antitumormidler. Av disse systemer så er spesielt lymfocytisk leukemi P388, melanotisk melanoma B16, L1210 leukemi og kolon 26 adeno-karsinoma spesielt betydelige i foreliggende oppfinnelse. Disse neoplasmer brukes for prøving over for transplanterbare svulster i mus. Vanligvis så vil en betydelig antitumorakti-vitet vist i disse prøver og protokoller som en prosentvis økning i midlere overlevelsestid for behandlede dyr (T) i forhold til kontroildyrene (C) være en indikasjon på lignende resultater i human leukemi og faste svulster.
Lymfocytisk leukemi P388 prøve
De dyr som ble brukt var BDF-^ hunnmus. Det var 5 eller 6 mus i hver prøvegruppe. Svulsttransplanteringen ble utført ved intraperitoneal injeksjon av 0,5 ml fortynnet ascitisk væske inneholdende 1 x 10<6> celler av lymfocytisk leukemi P388 på dag 0. Prøveforbindelsene ble tilført intraperitonealt i et volum på 0,5 ml i steril, pyrogenfri saltoppløsning på dag 1, 5 og 9 (i forhold til tumorinokulasjonen) i de angitte doser. Musene ble veid og overlevende individer ble notert på regelmessig basis i 3 0 dager. Den midlere overlevelsestiden og forholdet mellom overlevelsestid for behandlede (T)/kontroll (C) dyrene ble beregnet. Verdier på T/C større enn lik 125 anses å reflektere en betydelig antitumor-aktivitet. Resultatene er angitt i tabell 3.
Melanotisk melanoma B16 prøve
De dyr som brukes kan være BDF1 hunnmus. Det er 5 eller 6 mus pr. prøvegruppe. En én grams prosjon av en melanotisk melanoma B16 svulst ble homogenisert i 10 ml kald balansert saltoppløsning og en 0,5 ml porsjon av homogenatet ble implantert intraperitonealt i hver prøvemus. Prøveforbind-elsene ble tilført intraperitonealt på dag 1 til og med 9 (i forhold til svulstinokuleringen) ved de angitte doser. Musene ble veid og antall overlevende ble notert på regelmessig basis i 60 døgn. Man beregnet så den midlere overlevelsestiden og forholdet overlevelsestid for behandlede (T)/kontroll (C) dyrene. En verdi på T/C på større eller lik 125 anses å være indikasjon på en betydelig antisvulstaktivitet.
Fremgangsmåter ifølge foreliggende oppfinnelse ble brukt for å fremstillie monoklonale antistoffkonjugater fra forbindelsene i tabellene 1 og 2 og betegnet som Tu-(Z-SP-SS-W)m
I
(Y)n-»
og disse gir god immunoreaktivitet med målcellelinjer som vist ved de følgende in vitro prøver:
Målceller
Alle målceller ble holdt i RPMI 164 0 media supplert med 5% kalvefosterserum (FCS), ITS (Collaborative Research, Cat# 40351) , streptomycin (50 /zg/ml) , penicillin (50 enheter/ml) , gentamycinsulfat (50 /xg/ml) og glutamin (0,03%). Cellene ble holdt i en fuktig 5% C02 inkubator ved 37°C.
I. Immunoreaktivitetsprøver
Fremgangsmåte I - Elisa
Passende målceller ble høstet, telt og suspendert i Dulbeccos fosfatbufret saltoppløsning (DPBS) ved en optimal konsentrasjon for de monoklonale antistoffer (MoAb) som skulle prøves. 0,1 ml av cellene ble utporsjonert i hver brønn i en steril vevskulturpolystren 96-brønnsplate. Platene ble sentrifugert i 5 min. ved 1.000 omdreininger pr. min., hvoretter supernatanten ble tatt vekk. Platene ble lufttørket over natten og kan lagres ved 4°C i opp til 3 måneder.
Ikke-spesifikke bindingsposisjoner ble blokkert ved å tilsette 200 1% gelatin i DPBS pr. brønn og inkubere platen 1 time ved 37°C i en fuktig inkubator. (Alle etterfølgende inkuberinger ble utført under tilsvarende betingelser). Platene ble vasket én gang med 2 50 /il 0,05% TWEEN-2 0 i DPBS (vaskeoppløsning) idet man brukte et automatisert ELISA-vaskesystem fra Dynatech (Ultrawash II). De prøver som skulle undersøkes, ble fortynnet til en sluttkonsentrasjon på 3 ( xq/ ml MoAb-ekvivalenter i 0,1% gelatin-DPBS. Seks ytterligere 3-parallelle seriefortynninger ble fremstilt fra hver 3 /xg/ml prøve og 100 /il ble tilsatt passende brønner i 3 paralleller. Bunnraden av brønner mottok bare 100 /il 0,1% gelatin som bakgrunn. Platene ble inkubert i 45 min. og så vasket tre ganger. Alkalifosfatasekonjugert affinitetsrenset geit-anti-musimmunoglobuliner (Cappel Cat# 8611-0231) ble fortynnet 1:125 i 0,1% gelatin og 100 /il ble tilsatt hver brønn.
Platene ble inkubert i 45 min. og så vasket tre ganger. 200 /il p-nitrofenylfosfatsubstratoppløsning (se nedenfor) ble tilsatt hver brønn. Etter 4 5 min. ved romtemperatur ble reaksjonen stoppet ved å tilsette 50 /il 3M NaOH. Absorpsjonen av innholdet i hver brønn ble avlest ved 4 05 nm i et automatisert spektrofotometer fra Dynatech (EIA Autoreader # EL-310) .
Substratdietanolaminbuffer ( 10%)
97 ml dietanolamin
800 ml vann
0,2 g NaN3
100 mg MgCl2 6H20
Reagensene ble oppløst ved kontinuerlig røring og IM HCl ble tilsatt inntil pH er 9,8. Det totale volum ble fortynnet til 1 liter med vann og filtersterilisert i et 0,2 /i filter. Bufferen ble lagret i mørket ved 4°C. Umiddelbart før bruk ble p-nitrofenylfosfat (Sigma, Cat# 104-40) oppløst i 10% dietanolaminbufferen (må være ved romtemperatur) slik at man fikk en sluttkonsentrasjon på 1 mg/ml.
Beregning av 0. D. verdier
Den prosentvise binding i hver prøve ble beregnet ved følgende ligning:
A = midlere O.D. for selve prøven
B = midlere O.D. for bakgrunnen
C = midlere O.D. for 3 /ig/ml umanipulert MoAb-kontroll
Prosentvis binding ble avsatt på en ikke-logaritmisk skala på et semi-logaritmisk diagram og MoAB-konsentrasjonen ble avsatt på den logaritmiske skalaen. BD50 (d.v.s. den dosen av antistoffet som er nødvendig for å gi 50% binding) for hver prøve ble avlest fra diagrammet, hvoretter man beregnet mengden av bibehold av immunoreaktiviteten ved følgende ligning:
Fremgangsmåte 2 - Indirekte RIA
Passende mengder av målceller i 0,2 ml 10% FCS media ble utporsjonert i 4 ml polystyrenrør. De prøver som skulle undersøkes ble fortynnet til en konsentrasjon av 2 /ig/ml MoAb-ekvivalenter i 10% FCS-media. Fem tre-gangers seriefortynninger ble fremstilt fra hver 2 /ig/ml prøve og 0,2 ml ble tilsatt hvert rør i to paralleller. Bakgrunnsprøvene mottok bare celler og media. Cellene ble inkubert ved 4°C i 1 time og så vasket 2 ganger (alle RIA-vaskinger ble utført med et volum på 3 ml) med 2% FCS-media. 0,05 ml sau F(ab')2 anti-mus IgG[<1>25I]
(DuPont, Cat# NEX 162-0142) inneholdende ca. 500.000 CPM ble tilsatt hvert rør; hvoretter cellene ble inkubert i ytterligere 1 time ved 4°C, vasket én gang med 2% FCS og to ganger med PBS. 0,5 ml PBS ble tilsatt hvert rør, cellene ble sentrifugert, overført til rene rør og telt 1 min. i en Packard Gamma 500.
% binding ved hver verdi ble bestemt og avsatt som beskrevet ovenfor for nevnte ELISA-ligning, bortsett fra at CPM ble innsatt istedenfor O.D. enheter og C = midlere CPM for 1/ig/ml umanipulert MoAb-kontroll. Den prosentvise beholdte immunoreaktiviteten for hver prøve ble beregnet som beskrevet tidligere.
Fremgangsmåte 3 - Direkte RIA
Passende mengder av målceller i 1 ml 10% FCS-media ble utporsjonert i 4 ml polystyrenprøverør, sentrifugert og supernatanten ble kastet. De prøver som skulle undersøkes, ble fortynnet til konsentrasjoner på 2 00 /ig/ml MoAb-ekvivalenter i 10% FCS-media. Fem ytterligere fem-parallells seriefortynninger ble fremstilt fra hver 200 /ig/ml prøve, og 0,05 ml ble tilsatt hvert rør i to paralleller. 0,05 ml <125>I-MoAb ble tilsatt hvert rør (optimal mengde ble individuelt bestemt for hvert MoAb og porsjon). Positive kontrollprøver inneholdt celler, media og 12<5>I-MoAb. <B>akgrunnsprøvene inneholdt ikke-spesifikke celler, media og <125>I-MoAb. Cellene ble inkubert 1 time ved 4°C, vasket én gang med 2% FCS-media, to ganger med PBS, overført og telt som beskrevet tidligere.
Den prosentvise 125I-MoAb bindingshemmingen for hver prøve ble beregnet ut fra følgende formel:
A = midlere CPM for prøven
B = midlere CPM for bakgrunn
C = midlere CPM for positiv kontroll
Diagram og prosentvis beholdt immunoreaktivitet for hver prøve ble beregnet som beskrevet tidligere, bortsett fra at BD50 i virkeligheten er BID50 (Dose av MoAb som er nødvendig for å gi 50% hemming for bindingen av 125I-MoAb) .
Noter
1) Rørene ble alltid kraftig sentrifugert umiddelbart etter tilsetningen av hver reagens i nevnte RIA. 2) En intern kontrollprøve som tilsvarte 50% av den umani-pulerte MoAb-kontrollen ble innsatt i hvert sett av prøver for å bekrefte hvorvidt fremgangsmåten var kvantitativ med hensyn til å forutsi konjugatets tilbakeholdelse av immunoreaktivitet.
Resultatene av disse prøvene er angitt nedenfor i tabell 4.
De monoklonale antistoffkonjugater fremstilt ifølge foreliggende oppfinnelse er aktive som anticancermidler. De prøver som er beskrevet nedenfor for å bedømme in vitro cytotoksisitet, viser den dramatiske preferanse for konju-gatene i målcellelinjene i motsetning til ikke-målsøkende celler, og gir et mål for anvendeligheten av de målsøkende former av forbindelser sammenlignet med deres ikke-målsøkende motparter.
Cytotoksisitetsprøver
In vitro
De prøver som skulle undersøkes ble fortynnet til en konsentrasjon på 0,2 eller 0,02 /ig/ml pr. ekvivalenter av utgangsforbindelsene (startkonsentrasjonen er avhengig av den cellelinjen som skal undersøkes og styrken på utgangsforbindelsen). Tre eller fire ytterligere fem-gangers fortynn-inger ble fremstilt fra den opprinnelige prøvefortynningen og 0,2 ml ble tilsatt sterile 15 ml polystyrenrør. Minst ett lignende konjugat bestående av utgangsforbindelsen og et irrelevant MoAb ble inkludert i hver prøve for å bestemme spesifisiteten på det relevante konjugatet. 10<5> passende målceller i 0,2 ml 10% FCS media ble utporsjonert i rørene og sentrifugert. I tillegg til dette utførte man en identisk prøve ved å bruke irrelevante celler som mål for ytterligere å bekrefte spesifisiteten på det relevante konjugatet. MoAb-kontrollene mottok bare ekvivalente mengder MoAb og positive kontrollprøver mottok bare 10% FCS-media.
Cellene ble inkubert ved 37°C i 7 min. og så vasket 4 ganger med 8ml 2% FCS-media. 0,1 ml 10% FCS ble tilsatt hvert rør, cellene ble sentrifugert og det ble tatt ut 0,2 ml fra hver brønn og overført til en steril 96-brønns polystyrens-vevskulturplate.
Platene ble dyrket i 2 døgn i en fuktig 37°C inkubator med 5% C02. Halvparten av media ble fjernet og erstattet med friskt media inneholdende 2 juCi/ml <3>H thymidin (DuPont, NEN, Cat# NET-027). Inkubering ble fortsatt i 24 timer, cellene ble frosset, tint og høstet ved hjelp av en PHD-celleinn-høstningsmaskin (Cambridge Technology, Inc.). Hver prøve ble telt i 1 min. i en Beckman LS 5800 scintillasjonsteller på kanal 1.
% veksthemming ble beregnet på følgende måte:
Prosentvis hemming ble avsatt på en ikke-logaritmisk skala på et semi-loggdiagram mens konsentrasjonen av utgangsforbindelsen ble avsatt på loggskalaen. IC50 (konsentrasjon av utgangsforbindelsen som er nødvendig for å gi 50% hemming) for hver prøve ble avledet fra diagrammet, og man beregnet mengden av bibehold av cytotoksisitet ved hjelp av følgende ligning:
Resultatene fra prøven med hensyn til in vitro cytotoksisitet er angitt i tabell 5.
Det følgende prøvesystem ble brukt for å måle in vivo-aktiviteten til konjugatet.
In vivo-prøver for antisvulstaktivitet for de medisinske monoklonale antistoffkonjugatene ble utført ved å bruke humane tumorxenografer hos athymiske (nakne) mus.
Burkitt lymphoma (Raji) og myeloma (HS Sultan) celler ble innhøstet fra dyrkningskolber og inokulert subkutunøst (> 80 x 10<6> Raji celler eller 40 x 10<6> HS Sultan celler) i prøvemus. Faste svulster, ovarie carcinoma (CA73, Ovcar-3), bryst-carcinoma (MX-1) og koloncarcinoma (LS174T) ble oppdyrket i athymiske mus, tatt ut, skåret opp i 2 mm<3> fragmenter og implantert subkutunøst hos prøvemus (5-8 fragmenter pr. mus).
Medisinsk aktive forbindelser, monoklonale antistoffer og de medisinske-monoklonale antistoffkonjugatene ble tilført intraperitonealt én gang hvert 3. døgn totalt 3 eller 5 injek-sjoner som startet på dag 2, 3, 4, 6, 7 eller 8. dag etter svulstimplanteringen. Svulstmålinger (lengden og bredden av svulsten) ble utført ved hjelp av et Fowler ultra CAL II elektronisk caliperapparat hvert 7. døgn i fra 4 til 6 uker etter tumorimplanteringen. Svulstmassen i mg ble beregnet ut fra følgende formel:
Svulstveksthemming ble beregnet for hver prøvegruppe med hensyn til prosent av en kontroll [midlere mg av behandlet (T) delt med midlere mg på kontroll (C) x 100]. En T/C-verdi < 42% i gruppene med > 65% overlevende dyr ble ansett for å være nødvendig å kunne angi aktivitet.
Resultatene av denne prøven er angitt i tabell 6.
Oppfinnelsen vil nå bli ytterligere beskrevet gjennom de følgende eksempler, hvorav 1-15 og 18 vedrører mellomprodukter.
Eksempel 1
3- merkaptopropionsyredisulfid av
LL- E33288- Y,1
En oppløsning av 90 mg LL-E33288'Y1<I> i 90 ml acetonitril ble tilsatt 10,6 mg 3-merkaptopropionsyre i 1 ml acetonitril. Oppløsningen ble sentrifugert og lagret ved -2 0°C i 6 døgn. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum, og resten ble kromatografert over 10 ml silisiumdioksydgel i metylenklorid. Kolonnen ble utviklet med 50 ml metylenklorid, 50 ml 4% metanol i metylenklorid og til slutt 100 ml 8% metanol i metylenklorid. Fordampning av den siste fraksjonen ga en rest som ble oppløst i etylacetat ved hjelp av litt aceton og som deretter dråpevis ble tilsatt et overskudd av heksan. Bunnfallet ble oppsamlet og tørket, noe som ga 39 mg av det forønskede produktet (FABMS, M+H 1394).
Eksempel 2
p_-nitrofenyl 3-merkaptopropionsyredisulfid
av L- E33288- YT1
(A) Fremstilling av p_-nitrofenylesteren av 3-merkaptopropionsyre
Kommersiell 3-merkaptopropionsyre i metylenklorid inneholdende en katalytisk mengde konsentrert svovelsyre ble behandlet med isobutylen i 2 0 min.. Oppløsningen ble så ekstrahert med IN natriumbikarbonatoppløsning, hvoretter metylenkloridopp-løsningen ble tørket ved hjelp av vannfritt magnesiumsulfat. Oppløsningen ble så fordampet til en fargeløs mobil væske som NMR og massespektradata indikerte at var S-t-butylmerkaptopropionsyre, t-butylester.
En porsjon av denne esteren ble kokt under tilbakeløp med 6N saltsyre i dioksan i 2,5 timer. Oppløsningsmidlet ble fordampet, hvoretter etylacetat ble tilsatt og oppløsningen ekstrahert med natriumkarbonat. Natriumkarbonatekstraktet ble behandlet med 6N saltsyre inntil suspensjonens pH var 2,0. Den ble så ekstrahert med etylacetat, ekstraktet tørket over vannfritt magnesiumsulfat og oppløsningsmidlet fordampet, hvorved man fikk en fargeløs væske som ved hjelp av tø NMR og massespektradata viste at var S-t-butylmerkaptopropionsyre.
Denne forbindelsen ble omdannet til p-nitrofenylesteren ved behandling med ekvimolare mengder av p-nitrofenol og dicykloheksylkarbodiimid i tetrahydrofuran i 4 timer. Dicykloheksylureabi-produktet ble fjernet ved filtrering, hvoretter filtratet ble fordampet til en olje, som ble renset ved passasje over nøytral silisiumdioksydgel hvor man brukte et oppløsningsmiddelsystem bestående av heksan:metylenklorid (50:50). Det rene p-nitrofenylesterderivatet var en blek gul, mobil olje.
Den frie merkaptanen ble fremstilt ved hjelp av følgende fremgangsmåte. S-t-butylmerkaptopropionsyre p-nitrofenylesteren ble oppløst i trifluoreddiksyre, hovretter man tilsatte et svakt molart overskudd (10%) av kvikksølvacetat. Blandingen ble rørt i 30 min., hvoretter trifluoreddiksyren ble fordampet, og resten oppløst i dimetylformamid. Denne oppløsning ble så behandlet med hydrogensulfidgass i 15 min., og det svarte kvikksølvsulfidet ble frafiltrert, mens filtratet ble fordampet under redusert trykk for å eliminere opptil 99% av dimetylformamidet. Den resulterende svakt brune mobile væsken ble renset over nøytral silisiumdioksydgel idet man brukte heksan:metylenklorid (50:50). Ved hjelp av <X>H NMR viste det seg at hovedkomponenten var en mindre mengde av t-butylmerkaptoderivatet. Analytisk HPLC over to Perkin-Elmer Pecosphere C18-kolonner i serie [4,6 x 33 mm og 4,6 x 83 mm] hvor man brukte et gradient systemt bestående av 37,5/62,5 til 47,5/52,5 av acetonitril og 0,1M ammoniumacetatbuffer ved pH 6,5 (eddiksyre) i løpet av 12 min., indikerte at produktet inneholdt 88% av p-nitrofenylesteren av 3-merkaptopropionsyre og 10% av den mindre polare s-t-butylmerkaptopropionsyren p_-nitrofenylesteren. Det var også tilstede en mindre mengde av den frie p-nitrofenolen.
(B) Reaksjon av p-nitrofenylesteren av 3-merkaptopropionsyre med LL-E33288-Y!<1>
En 100 mg porsjon av LL-E33288'Y1<I> ble oppløst i 50 ml acetonitril. Oppløsningen ble så tilsatt en oppløsning av 25,7 mg av p-nitrofenylfester av 3-merkaptopropionsyre i 1 ml acetonitril. Reaksjonsblandingen ble hensatt ved -20°C i 48 timer. HPLC viste at reaksjonen da var fullstendig. Oppløsningen ble fordampet til tørrhet, og resten oppløst i fra 4-5 ml etylacetat, idet man brukte ultralydbehandling for å frembringe oppløsningen. Blandingen ble filtrert, og filtratet dråpevis tilsatt 45 ml rørt heksan. Det resulterende svakt gule faste stoffet ble frafiltrert og tørket under redusert trykk, noe som ga 93 mg av p-nitrofenylesteren av propionsyrederivatet av LL-E33288'Y1<I> noe som ble fastslått ved hjelp av <X>H NMR. Ved hjelp av FABMS påviste man [M+H] - ionet ved m/2=1515.
Tilbakeholdelsestiden på C18 reversert vase HPLC:18 min. med 50% acetonitril/0,IM vandig ammoniumaetat
(LL-E332886V:8,0 min., esterhydrolyseproduktet:1,5 min.).
Eksempel 3
N- hydroksysuccinimidvl- 3- merkaptopropionatdisulfid
av LL- E33288- Y,1
En oppløsning av 5 mg av 3-merkaptopropionsyredisulfid-analogen av LL-E332887ir fra EPO-publikasjonen i 0,5 ml tetrahydrofuran, ble tilsatt 0,45 mg N-hydroksysuccinimid i 0,1 ml tetrahydrofuran, og deretter tilsatt 1,8 mg dicykloheksylkarbodiimid i 0,2 ml tetrahydrofuran. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 4 timer og reaksjonen stoppet med stort overskudd av heksan. Det faste produktet ble frafiltrert og oppløst i etylacetat. Den resulterende oppløsningen ble vasket tre ganger med saltoppløsning, tørket med magnesiumsulfat og fordampet til 5 mg av det forønskede produktet som et blekt brunt pulver som ble brukt videre uten ytterligere rensning. Tilbakeholdelsestid på reversert fase C18 HPLC: 15 min. med 40% acetonitril/0,1 M vandig ammoniumacetat (utgangsmateriale: 6,0 min.)
Eksempel 4
3- merkaptoprop ionylhydra z idd isulf id
av LL- E33288- VT1
5,4 ml (3 ekv.) av vannfri hydrazin i 100 ml kokende tetrahydrofuran under argon ble dråpevis tilsatt 9,2 ml (83 mmol) metyl 3-merkaptopropionat i 50 ml tetrahydrofuran i løpet av 2 timer. Oppløsningen ble kokt under tilbakeløp i ytterligere to timer, fordampet, og så fortynnet og fordampet to ganger fra 3 00 ml toluen. Produktet ble påsatt en plugg av silisiumdioksydgel gel med 5% etylacetat/kloroform og eluert
med 20% metanol/kloroform. Det resulterende 3-merkaptopropio-nylhydrazidet var en blek rosa olje som stivnet ved avkjøling, men smeltet ved romtemperatur. 50 mg LL-E33288'Y1<I> i 50 ml acetonitril ved -15°C ble tilsatt 6,6 mg 3-merkaptopropinylhydrazid i 1 ml tetrahydrofuran. Én ekvivalent trietylamin eller én ekvivalent trietylamin og én ekvivalent eddiksyre ble tilsatt. Blandingen ble rørt ved 0°C i 1 time, hvoretter opløsningsmidlet ble fordampet. Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med en 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga 26 mg av det forønskede produktet. FABMS, m/z=14 08 (M+H); tilbakeholdelsestid på reversert fase C18 HPLC: 5,0 min. i 41% acetonitril/0,1 M vandig ammoniumacetat.
Eksempel 5
N- r f( 4- metyl- kumarin- 7- vl) amino] acetylIcystein-h<y>draziddisulfid av LL- E33288' Y1I
En blanding av 1,0 g (5,7 mmol) 4-metyl-7-aminokumarin, 3,0 ml etylbromacetat (5 ekv.), 90 mg (0,1 ekv.) natriumjodid og 30 ml dimetylformamid ble under argon holdt på 80°C i 5 timer. Blandingen ble avkjølt, fortynnet med etyleter, vasket tre ganger med 50% saltoppløsning, tørket med magnesiumsulfat og fordampet til tørrhet. Råproduktet ble oppløst i kloroform inneholdende 1% etylacetat og filtrert gjennom en plugg av silisiumdioksydgel. Omkrystalliseringer fra dietyleter inneholdende spor av klorofrm, ga rent etyl N-[ (4-metyl-kumarin-7-yl)amino]acetat.
1,96 g (7,5 mmol) av ovennenvte ester i 15 ml metanol og 15 ml tetrahydrofuran ble tilsatt 10 ml IN vandig natrium-hydroksyd. Etter 3 0 min. tilsatte man 4 ml 10% vandig saltsyre. De organiske oppløsningsmidler ble fordampet, og det krystallinske produktet ble frafiltrert og vasket med kald etanol og eter. Produktet ble oppløst i 20 ml tetrahydrofuran og 4 ml dimetylformamid. 1,3 g 2,2 ekvivalenter dicyklo-heksylkarbonyldiimidazol ble tilsatt, og blandingen hensatt under røring i 15 min.. Cysteinetylesterhydroklorid (1,6 g, 2,5 ekvivalenter) og 1,2 ml trietylamin ble så tilsatt. Etter ytterligere tre timer ble blandingen fortynnet med etyleter inneholdende 5% metylenklorid, og deretter vasket én gang med 10% vandig saltsyre og to ganger med saltoppløsning. Etter tørking over magnesiumsulfat og fordamping av oppløsnings-midlene, ble råproduktet utkrystallisert ved at det ble oppløst i kloroform inneholdende en mindre mengde etanol og så tilsatt et overskudd av eter. Krystallene ble frafiltrert og tørket, noe som ga rent N-[[(4-metyl-kumarin-7-yl)amino]-acetyl]cysteinetylester.
En blanding av 5 ml kloroform, 20 ml metanol og 0,4 ml hydrazinhydrat ble kokt under tilbakeløp i en argonatmosfære. Oppløsningen ble så tilsatt 550 mg N-[[(4-metyl-kumarin-7-yl)amino]acetyl]cysteinetylester. Etter koking under til-bakeløp i 9 timer, ble blandingen avkjølt og det faste produktet frafiltrert og vasket med kloroform og etyleter. Råproduktet som inneholdt noe tiol og disulfid ble oppløst i dimetylformamid inneholdende ditiotreitol og trietylamin. Etter 3 0 min. ble produktet utfelt med et overskudd av etyleter og frafiltrert. Det ble ytterligere renset ved omkrystallisering fra avgasset acetonitril inneholdende ditiotreitol og spor av trietylamin, noe som ga ren N-[[(4-metyl-kumarin-7-y1)amino]acetyl]cysteinhydraz id. 12 mg LL-E3 3288-Y11 i 12 ml acetonitril ved 0°C ble tilsatt 4 mg N-[[(3-metylkumarin-7-yl)amino]acetyl]cysteinhydrazid i 1,2 ml dimetylformamid. Etter røring over natten ble ytterligere 2 mg av samme hydrazid i 0,6 ml dimetylformamid tilsatt. Blandingen ble rørt i 3 døgn ved 0°C og så filtrert. Acetonitrilen ble fordampet, og den resulterende dimetyl-formamidoppløsningen ble fortynnet med et overskudd av 1:1 heksan/eter. Produktet ble isolert ved filtrering og ytterligere renset ved kromatografi på silisiumdioksydgel med en fra 15-20% gradient av metanol i kloroform, noe som ga 3 mg av det forønskede produktet. Tilbakeholdelsestiden på reversert fase C18 HPLC: 3,5 min. idet man brukte 45% aetonitril/0,1 M vandig ammoniumacetat (LL-E33288<S11:15, 5 min. i samme system). Eksempel 6 3- merkaptopropionylhydraziddisulfid av LL- E33288aJ 10 mg LL-E33288a3<I> i 9 ml acetonitril ved -15°C ble tilsatt 6,6 mg 3-merkaptopropionylhydrazid i 1 ml acetoniril. Én ekvivalent trietylamin eller én ekvivalent trietyleamin og én ekvivalent eddiksyre ble så tilsatt. Blandingen ble rørt ved 0°C i 1 time og oppløsningsmidlet fordampet. Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med en 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet.
FABMS. m/g-1251 (M+H); tilbakeholdelsestid på reversert fase C18 HPLC: 2,1 min. i et system bestående av 4 5% acetonitril/0,1 M vandig ammoniumacetat (LL-E3 3 288a5I: 5,7min. i det samme
systemet).
Eksempel 7
3- merkaptopropionylhvdraz idd isulf id av
N- acetvl LL- E33288- Y]1
10 mg N-acetyl LL-E33288-Y!<1> i 10 ml acetonitril ble ved
-15°C tilsatt 1,5 ekviv. 3-merkaptopropionylhydrazid i 85 /il acetonitril. Man tilsatte én ekvivalent trietylamin. Blandingen ble rørt ved 0°C i 2 timer og oppløsningsmidlet fordampet. Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med en 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. FABMS, m/z=1450 (M+H); tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC: 2,5 min. med 50% acetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenfosfat (N-acetyl LL-E3 3 288'YiI: 6, 6 min. i det samme systemet. Eksempel 8 3- merkaptopropionvlhydraziddisulfid av LL- E33288a?I 10 mg LL-E33288a2<I> i 10 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 1,5 ekv. 3-merkaptopropionylhydrazid i 1 ml acetonitril. Én ekvivalent trietylamin ble så tilsatt. Blandingen ble rørt ved 0°C i 1 time, og oppløsningsmidlet fordampet. Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med en 5-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. FABMS, m/z=1248 (M+H); tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC:2,6 min. med 58% acetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenfosfat (LL-E33288a2<1>:7,5 min. i det samme systemet).
Eksempel 9
3- merkaptopropionylhvdraziddisulfid av
jod LL- E33288 pseudoaglykon
10 mg jod LL-E33288 pseudoaglykon i 9 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 1,5 ekvivalenter 3-merkaptopropionylhydrazid i 1 ml acetonitril. Én ekvivalent trietylamin ble så tilsatt som katalysator. Blandingen ble rørt ved 0°C i 1 time, og oppløsningsmidlet ble fordampet. Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med en 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. FABMS, m/z=1091 (M+H) ;
t.ilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC: 2,8 min. med 50% acetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenfosfat (jod LL-E33288 pseudoaglykon: 7,9 min. i det samme systemet).
Eksempel 10
3- merkaptobutyrvlhydraz iddisulf id
LL- E33288- Y11
17,2 g (0,2 mol) krotonsyre ble tilsatt 18 ml (0,26 mol) tioeddiksyre. Blandingen ble kokt under tilbakeløp og under argon i 6 timer. Overskuddet av tioeddiksyren ble fjernet under vakuum, og den resulterende oljen ble oppløst i 100 ml absolutt etanol inneholdende 2 00 /il konsentrert svovelsyre. Reaksjonsblandingen ble kokt under tilbakeløp i 10 timer og så redusert i volum under vakuum. Heksan ble tilsatt, og den resulterende oppløsningen vasket suksessivt med to porsjoner mettet natriumbikarbonat og én porsjon vann. Oppløsningen ble så tørket over magnesiumsulfat, filtrert og redusert til en olje. Dette råproduktet ble oppløst i 2 50 ml metanol inneholdende 12 ml hydrazin, og blandingen ble så kokt under tilbake-løp i 10 timer under argon. Blandingen ble redusert i volum og rakst destillert ved hjelp av Kugelrohr og produktet utkrystallisert fra en blanding av kloroform-heksan, noe som ga 3-merkaptobutyrylhydra z id. 5 mg LL-E3 32887!1 i 5 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 1,5 ekvivalenter 3-merkaptopropionylhydrazid i 1 ml acetonitril. Én ekvivalent trietylamin ble så tilsatt. Blandingen ble rørt ved 0°C 1 time og oppløsningsmidlet ble fordampet. Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med en 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. FABMS, m/e=1422 (M+H); tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC: 3,5 min. med 43% acetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenfosfat (LL-E33288'Y11:13 , 4 min. i det samme systemet).
Eksempel 11
3- merkaptoisovalervlhydraz iddisulf id
av LL- E33288- y1I
10 g (0,1 mol) 3,3-dimetylakrylsyre ble tilsatt 9 ml (0,13 mol) tioeddiksyre. Blandingen ble oppvarmet under tilbakeløp under argonatmosfære i 6 timer. Overskuddet av tioeddiksyre ble fjernet under vakuum, og den gjenværende oljen ble oppløst i 100 ml absolutt etanol inneholdende 200 /il konsentrert svovelsyre. Reaksjonsblandingen ble kokt under tilbakeløp i 34 timer før man tilsatte 16 ml hydrazin. Blandingen ble så kokt under tilbakeløp i ytterligere 24 timer i argonatmosfære. Blandingen ble så redusert i volum og oppløst i en blanding av saltoppløsning og mettet natriumbikarbonat. Produktet ble ekstrahert flere ganger med klorform. De samlede kloroformekstrakter ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert og redusert til en olje. Denne oljen ble renset ved utblåsningskromatografi med en metanol-kloroformgradient og så utkrystallisert fra kloroform og heksan, noe som ga 3-merkaptoisovalérylhydrazid. 15 mg LL-E33288-Y!<1> i 5 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 1,5 ekvivalenter 3-merkaptoisovalerylhydrazid i 100 fj, l acetoniril. Én ekvivalent trietylamin ble tilsatt som katalysator. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 3 timer og oppløsningsmidlet fordampet. Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med en 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. FABMS, m/z=1436 (M+H); tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC:3,9 min. med 4 3% acetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenfosfat (LL-E33288'Y11:13 , 4 min. i det samme systemet).
Eksempel 12
p- merkaptodihvdrocinnamylhydraziddisulfid
av LL- E33288- Y!1
500 mg (2,75 mmol) p-merkaptodihydrokanelsyre ble tilsatt 15 ml metanol inneholdende én dråpe konsentrert svovelsyre. Blandingen ble kokt under tilbakeløp i 5 timer og så avkjølt til romtemepratur. 1,5 ml hydrazin ble tilsatt, og blandingen kokt under tilbakeløp under argon i 2 timer og så rørt i 10 timer ved romtemperatur. 200 mg ditiotreitol ble tilsatt for å redusere eventuelt tilstedeværende disulfid, og blandingen ble så avkjølt til -15°C. De resulterende krystaller ble frafiltrert, vasket med en blanding av eter og metanol og så tørket i en vakuumovn (50°/5 mikron/10 timer),
noe som ga p-merkaptodihydrocinnamylhydrazid.
25 mg LL-E33288-Y<1> i 25 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 1,5 ekvivalenter p-merkaptodihydrocinnamylhydrazid i 1 ml acetonitril. Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med en 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. FABAMS, m/z=1484 (M+H); tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC:5,4 min. med 43% aetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenfosfat (LL-E33288-T!<1>: 13,4 min. i det samme systemet).
Eksempel 13
3- merkaptoisovalerylhydraziddisulfid
av N- acetyl LL- E33288- V!1
20 mg N-acetyll LL-E33288-Y!<1> i 15 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 3 ekvivalenter 3-merkaptosiovalerylhydrazid i 6,2 ml acetonitril. Én ekvivalent trietylamin ble så tilsatt. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 2 timer og oppløs-ningsmidlet fordampet. Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med en 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. Tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC:2,5 min. med 50% acetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenfosfat (N-acetyl LL-E3 3 288'Y1I: 6,6 min. i det samme systemet).
Eksempel 14
3- merkaptobutyrylhvdraz iddisulf id
av N- acetvl LL- E33288- Y!1
10 mg N-acetyl LL-E33288-Y!<1> i 7,5 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 3 ekvivalenter 3-merkaptobutyrylhydrazid i 5 ml acetonitril. Én ekvivalent trietylamin ble så tilsatt. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 10 timer og oppløsningsmidlet fordampet. Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med en 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. Tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC:7,3 min. med 43% aetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenf osfat (N-acetyl LL-E33288'Y1I: 5 , 6 min. i det samme systemet).
Eksempel 15
p- merkaptodihvdrocinnamvlhydraziddisulfid
av N- acetvl LL- E33288- YT1
10 mg N-acetyl LL-E3 3288'YiI i 7,5 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 3,0 ekvivalenter p-merkaptodihydrocinnamylhydrazid i 2,0 ml acetonitril. Én ekvivalent trietylamin ble så tilsatt. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 2 timer og oppløsningsmidlet fordampet. Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med 10-15% metanol-i-kloroformgradient, noe som ga det forønskede produktet. Tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC:7,3 min. med 43% acetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenfosfat (N-acetyl LL-E33288'Y11: 5, 6 min. i det samme systemet).
Eksempel 16
Ikke- spesifikk koniuqering til proteiner Hydroksysuccinimidesteren beskrevet i eksempel 3 ble kovalent knyttet til antistoffer under svakt alkaliske betingelser. Det er i det etterfølgende beskrevet en generell fremgangsmåte som ble brukt for å fremstille de antistoffkonjugater som er angitt i tabell 7. Antistoff ved en konsentrasjon på 3-5 mg/ml i fosfatbuffer inneholdende 0,1M natriumklorid, pH 7,5, ble omsatt med 5-20 gangers molart overskudd av produktet fra eksempel 3 under røring ved romtemperatur i fra 1-4 timer. Det konjugerte proteinet ble avsaltet kromatografisk og samlet protein ble skilt fra monomerisk materiale ved hjelp av gelfiltrering HPLC. Mono-meriske fraksjoner ble slått sammen og konsentrert.
Eksempel 17
Fremstilling av posisionsspesifikke konjugater
Den fremgangsmåte som ble brukt for å knytte hydrazid-derivatene av de aktive forbindelser til oksyderte antistoffer, er beskrevet i T.J. McKearn, et al, i U.S. patent nr. 4,671,958. Fremgangsmåten er blitt anvendt for å fremstille antistoffkonjugater fra produktene fra eksemplene 4 til 15 med de spesifikke modifikasjoner som er beskrevet nedenfor. Produktene fra disse reaksjonene og deres egenskaper er angitt i tabell 7.
(A) Antistoffoksydasion Antistoff ved en konsentrasjon på fra 5 til 10 mg/ml ble dialysert over natten mot 2 00 gangers
større volum av 50mM natriumacetatbuffer, pH 5,5 inneholdende 0,1M natriumklorid (buffer A). Etter dialysen ble MoAb oksydert med 15mM til 2 00 mM perjodsyre i 0,2M natriumacetat. Oksydasjonen ble utført i mørket under røring ved 4°C i 45 min., hvoretter det oksyderte MoAb ble avsaltet i en Sephadex G-2 5 kolonne med > 5 sjikt. Graden av oksydasjon ble bedømt ved en reaksjon med p-nitrofenylhydrazin og ved å sammenligne absorpsjonen av proteinet ved 280 mm i forhold til absorpsjonen av p-nitrofenylhydrazin ved 395 mm. (B) Konjugering av det aktive hydrazid Det oksyderte MoAb ble omsatt med fra 10 til 200 gangers molart overskudd av det
aktive hydrazidet. Hydrazidene ble oppløst i dimetylformamid og tilsatt den vandige oppløsningen av MoAb. For å unngå en utfelling av sistnevnte justerte man sluttvolumet på dimetylformamidet slik at ikke dette oversteg 10% av det totale volum. Man lot reaksjonen skje i 3 timer ved romtemperatur under røring. For å unngå tverrbinding av uomsatte aldehyder og en etterfølgende aggregering, tilsatte man et blokkeringsmiddel, dvs. acetylhydrazid i 100 gangers molart overskudd 3 timer etter at man hadde tilsatt det aktive hydrazidet. For å stabilisere Schiffbasebindingen mellom aldehyd og det aktive hydrazid (et hydrazon), ble produktet vanligvis redusert til et alkylhydrazin ved å tilsette lOmM natriumcyanoborhydrid i en reaksjonstid på 1 time eller mer (total konjugeringstid - 4 timer). Konjugatet ble
kromatografisk avsaltet og dialysert i lang tid (minimum 48 timer) over i pH 6,5 fosfatbuffer for lagring og prøving.
Konjugatene ble analysert for nærvær av aggregater ved gelfiltrering HPLC og for innhold av det frie hydrazidet ved reversert fase HPLC. Innholdet av aktivt hydrazid ble bestemt spektroskopisk ved å bruke ekstinksjonskoeffisienter av både antistoffet og det aktive hydrazidet for derved å kunne beregne den molare konsentrasjonen av sistnevnte i konjugatene.
500 mg (2,75 mmol) p-merkaptodihydrokanelsyre ble tilsatt 15 ml metanol inneholdende én dråpe konsentrert svovelsyre. Reaksjonsblandingen ble kokt under 5 timer og så avkjølt til romtemperatur. 1,5 ml hydrazin ble tilsatt, og blandingen kokt under tilbakeløp i 2 timer under argon og så rørt i 10 timer ved romtemperatur. 2 00 mg ditiotreitol ble tilsatt for å redusere eventuelt tilstedeværende disulfider, hvoretter reaksjonsblandingen ble avkjølt til -15°C. De utfelte krystaller ble frafiltrert, vasket med en blanding av eter og metanol og så tørket i vakuum (50°C/5 mikron/10 timer), noe som ga p-merkaptodihydrocinnamylhydrazid. 25 mg LL-E33288C!<1> i 25 ml acetonitril ble ved -15°C tilsatt 1,5 ekvivalenter p-merkaptodihydrocinnamylhydrazid i
1 ml acetonitril. Reaksjonsblandingen ble rørt ved 0°C i
10 timer, hvoretter oppløsningsmidlet ble fordampet- Resten ble kromatografert på silisiumdioksydgel med 10-15% metanol-i-klorof ormgradient , noe som ga det forønskede produktet.
FABMS, m/z = 1484 (M+H); tilbakeholdelsestid på C18 reversert fase HPLC:5,4 min. med 45% acetonitril/0,05 M vandig ammoniumdihydrogenf osfat (LL-E33288'YiI: 13 , 4 min. i det samme systemet).
Claims (1)
- Analogifremgangsmåte for fremstilling av målsøkende derivater med formelen Tu-(Z-Sp-SS-W)m I (Y)n-mhvor Tu er et mono- eller polyklonalt antistoff, dets fragmenter, dets kjemisk eller genetisk manipulerte motstykker eller vekstfaktorer eller steroider; Y er en amino- eller karboksyholdig sidekjede-gruppe; n varierer fra 1-100, m fra 1-15, ut. fra forbindelser med formel CH3SSS-W, hvor CH3SSS-W er et N-acylderivat av et antitumor-antibiotikum LL-E33288a-I, a2-Br, ot2-I, Øi-Br, jSi-I, "Yi-Br, "Yi-I, ^-I, hvor R5 er CH3/ C2H5 eller (CH3)2CH; X er et jod- eller bromatom; R5' er alkanoyl; R8 er OH, R, er H, eller R8 og R9 kan sammen være en karbo-nylgruppe, Sp er en rettkjedet eller forgrenet (Ci-C^)alkylengruppe, karakterisert ved at man omsetter CH3SSS-W med en forbindelse med formelen Q-Sp-SH, hvor Sp er som definert ovenfor; og Q er hydrogen eller hvor n er 0 eller 1, i acetonitril eller en kombinasjon av acetonitril og tetrahydrofuran eller acetonitril og dimetylformamid ved en temperatur mellom -20°C og +40°C i et tidsrom fra 1 time til 6 døgn, fortrinnsvis i nærvær av én ekvivalent av en tertiær aminbase eller en blanding av én ekvivalent av en tertiær aminbase og én ekvivalent av en organisk karboksylsyre, hvoretter man isolerer mellomproduktet med formelen Q-Sp-SS-W, hvor Q, Sp og W er som definert ovenfor, og hvoretter man omsetter forbindelsen med sistnevnte formel hvor Sp, Q og W er som definert tidligere, med et molekyl med formelen: Tu-(Y)n, hvor Tu, Y og n er som forut definert, i en vandig buffer ved pH mellom 6,5 og 9 ved en temperatur fra 4°C til 40°C, enten direkte eller i nærvær av et vannoppløselig karbodiimid, hvorved man får fremstilt forbindelsen hvor Tu, Sp, W, n og Y er som definert tidligere, m er fra 1-15 og Z er dannet ved en kovalent reaksjon mellom gruppene Q og Y og er -CONH-, -NH-, -N=CH- eller -C02-, eller man omsetter forbindelsen med formel Q-Sp-SS-W, hvori Sp og W er som definert tidligere, og Q er en karboksylsyre-gruppe, med 4-nitrofenyl i nærvær av et karboksylaktiverende middel såsom, et karbodiimid, hvorved man får fremstilt en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W hvor Sp og W er som definert tidligere, og Q er som videre omsettes med et molekyl med formel Tu-(Y)n, hvor Tu og n er som definert tidligere, og Y er en sidekjedeaminogruppe, i en vandig bufret oppløsning ved en pH mellom 6,5 og 9 og ved en temperatur mellom 4°C og 40°C, hvorved man får fremstilt forbindelser med følgende formel: hvor Tu, Sp, Y og n er som definert tidligere, m er fra 1-15 og Z er dannet ved en kovalent reaksjon mellom Q og Y og er definert som -CONH-, eller omsetter en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W, hvor Sp og W er som definert tidligere, og Q er -CONHNH2, med salt-petersyre i vandig acetonitril for derved å få fremstilt en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W, hvor Sp og W er som definert tidligere, og Q er -CON3, med en forbindelse med formelen Tu-(Y)n, hvor Tu, Y og n er som definert tidligere, hvorved man får fremstilt en forbindelse med følgende formel hvor Tu, Z, Sp, W, m, Y og n er som definert tidligere; eller omsetter en forbindelse med formel Q-Sp-SS-W hvor Sp og W er som definert tidligere, og Q er en hydroksygruppe, med et alfa-halogeneddiksyreanhydrid for derved å få fremstilt en forbindelse hvor Q er a-halogenacetyloksy, hvoretter man omsetter a-halogenacetyloksy-Sp-SS-W-forbindelsen, med et molekyl med formelen Tu-(Y)n hvor Tu er som definert tidligere, Y er en sidekjedetiol av et protein eller en amidoalkyltiogruppe innført på et amin av Tu ved at man bruker reagenser som 3-(2-ditiopyridyl)propionsyrehydroksysuccinimidester fulgt av en reduksjon med en middel såsom ditiotreitol, eller en amidoalkyltiogruppe innført på et amin av Tu ved å bruke 2-iminotiolan, og n er fra 1-10 under vandig bufrete betingelser ved en pH mellom 4,5 og 7 og ved en temperatur mellom 4°C og 4 0°C, hvorved man får fremstilt en forbindelse med formelen: hvor Tu, Sp, W og n er som definert tidligere, og Z er dannet ved en kovalent reaksjon mellom gruppene Q og Y, og Z er og n er fra 1 til 10; eller omsetter en forbindelse med formelen Q-Sp-SS-W, hvor Sp og W er som definert tidligere, og Q er -CONHNH2, med et molekyl med formelen Tu-(Y)n, hvor Tu er som definert tidligere, Y er et aldehyd fremstilt fra karbohydratrester på Tu ved oksydasjon i nærvær av et alkalijordmetallperjodat, i en vandig buffer ved en pH mellom 4,0 og 6,5 og en temperatur fra 4°C til 40°C, og n er fra 1 til 20, hvorved man får fremstilt en forbindelse med følgende formel: hvor Tu, Sp, W, Y og n er som definert tidligere, og Z er dannet ved en kovalent reaksjon mellom Q og Y, og er -0N=CH-, -N=CH-, -C0NHN=CH-, -NHCONHN=CH- eller -NHCSNHN=CH- og m er fra 1 til 15, eller behandler forbindelsen med følgende formel : hvor Tu, Z, Sp, W, Y, n og m er som definert ovenfor, med acetylhydrazin eller tyrosinhydrazin i en vandig buffer ved en pH mellom 4,0 og 6,5 og en temperatur fra 4°C til 40°C, hvorved man får fremstilt en forbindelse med formelen: hvor Tu, Z, Sp, W, n og m er som definert tidligere, og Y er -CH=NNHCOCH3 eller og omsetter denne forbindelsen med natriumcyanoborhydrid eller natriumborhydrid i en vandig buffer ved pH mellom 4,0 og 6,5 og en temperatur fra 4°C til 4 0°C, hvorved man får fremstilt en forbindelse med formelen: Tu-(Z-Sp-SS-W)m I hvor Tu, Sp, W, m og n er som definert ovenfor, og Z er -NH-CH2-, -CONHNHCH2-, -NHCONHNHCH2- eller -NHCSNHNHCH2- og Y er -CH2NHNHCOCH3 eller
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO932192A NO177308C (no) | 1989-04-14 | 1993-06-14 | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av anti-tumorforbindelser |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US33932389A | 1989-04-14 | 1989-04-14 | |
| US07/339,343 US5053394A (en) | 1988-09-21 | 1989-04-14 | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO901655D0 NO901655D0 (no) | 1990-04-11 |
| NO901655L NO901655L (no) | 1990-10-15 |
| NO176717B true NO176717B (no) | 1995-02-06 |
| NO176717C NO176717C (no) | 1995-05-16 |
Family
ID=26991573
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO901655A NO176717C (no) | 1989-04-14 | 1990-04-11 | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målsökende anti-tumorforbindelser |
| NO932192A NO177308C (no) | 1989-04-14 | 1993-06-14 | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av anti-tumorforbindelser |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO932192A NO177308C (no) | 1989-04-14 | 1993-06-14 | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av anti-tumorforbindelser |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0392384B1 (no) |
| JP (1) | JP2951684B2 (no) |
| CN (2) | CN1046333A (no) |
| AT (1) | ATE163293T1 (no) |
| AU (1) | AU633069B2 (no) |
| CZ (1) | CZ293228B6 (no) |
| DE (1) | DE69032051T2 (no) |
| DK (1) | DK0392384T3 (no) |
| ES (1) | ES2112244T3 (no) |
| FI (1) | FI100105B (no) |
| GR (1) | GR3026177T3 (no) |
| IL (3) | IL115770A (no) |
| NO (2) | NO176717C (no) |
| NZ (1) | NZ233148A (no) |
| PT (1) | PT93716B (no) |
| SK (1) | SK284270B6 (no) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5079233A (en) * | 1987-01-30 | 1992-01-07 | American Cyanamid Company | N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same |
| EP0342341A3 (en) * | 1988-05-17 | 1991-07-24 | American Cyanamid Company | Process for producing antitumor antibiotic ll-e33288gamma2 |
| GB9120467D0 (en) * | 1991-09-26 | 1991-11-06 | Celltech Ltd | Anti-hmfg antibodies and process for their production |
| US6015562A (en) * | 1992-09-22 | 2000-01-18 | American Cyanamid Company | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents |
| US5773001A (en) * | 1994-06-03 | 1998-06-30 | American Cyanamid Company | Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis |
| US5712374A (en) * | 1995-06-07 | 1998-01-27 | American Cyanamid Company | Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
| US5714586A (en) * | 1995-06-07 | 1998-02-03 | American Cyanamid Company | Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates |
| US6441163B1 (en) * | 2001-05-31 | 2002-08-27 | Immunogen, Inc. | Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents |
| DK3066074T3 (da) * | 2013-11-04 | 2020-02-10 | Pfizer | Mellemprodukter og fremgangsmåder til syntetisering af calicheamicin-derivater |
| MA45326A (fr) | 2015-10-20 | 2018-08-29 | Genentech Inc | Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation |
| JP6917049B2 (ja) * | 2017-02-22 | 2021-08-11 | 公立大学法人大阪 | 特定のサルファイド化合物に結合する抗体及びその使用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1215212A3 (en) * | 1987-01-30 | 2003-05-21 | Wyeth Holdings Corporation | Dihydro derivatives of LL-E33288 antibiotics |
| ATE112172T1 (de) * | 1987-10-30 | 1994-10-15 | American Cyanamid Co | Targetformer von antitumor-methyltrithioagenzien. |
-
1990
- 1990-03-13 IL IL11577090A patent/IL115770A/xx active IP Right Grant
- 1990-03-13 IL IL9373390A patent/IL93733A/en not_active IP Right Cessation
- 1990-03-30 NZ NZ233148A patent/NZ233148A/en unknown
- 1990-04-06 ES ES90106631T patent/ES2112244T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-06 DK DK90106631.6T patent/DK0392384T3/da active
- 1990-04-06 DE DE69032051T patent/DE69032051T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-06 EP EP90106631A patent/EP0392384B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-06 AT AT90106631T patent/ATE163293T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-04-10 PT PT93716A patent/PT93716B/pt not_active IP Right Cessation
- 1990-04-11 NO NO901655A patent/NO176717C/no not_active IP Right Cessation
- 1990-04-12 AU AU53241/90A patent/AU633069B2/en not_active Expired
- 1990-04-12 FI FI901866A patent/FI100105B/fi active IP Right Grant
- 1990-04-12 JP JP2095245A patent/JP2951684B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-04-13 CZ CZ19901884A patent/CZ293228B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1990-04-13 SK SK1884-90A patent/SK284270B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1990-04-14 CN CN90102101A patent/CN1046333A/zh active Pending
-
1993
- 1993-06-14 NO NO932192A patent/NO177308C/no not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-03-04 CN CN94102679A patent/CN1109041C/zh not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-10-25 IL IL11577095A patent/IL115770A0/xx unknown
-
1998
- 1998-02-19 GR GR970403101T patent/GR3026177T3/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5053394A (en) | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents | |
| US5770701A (en) | Process for preparing targeted forms of methyltrithio antitumor agents | |
| US5770710A (en) | Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methlytrithio group | |
| EP0428534B1 (en) | Coupling agents and sterically hindered disulfide linked conjugates prepared therefrom | |
| ES2744226T3 (es) | Conjugados de proteína-agente activo y método para preparar los mismos | |
| EP0313873B1 (en) | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents | |
| PL135800B1 (en) | Method of obtaining a product of coupling a chain of castor oil with human antimelanotic antibody | |
| IL118565A (en) | Method for preparing conjugate / subject conjugate of monomeric calicamycin | |
| NO176717B (no) | Analogifremgangsmåte ved fremstilling av målsökende anti-tumorforbindelser | |
| EP4279089A1 (en) | Disaccharide linker, disaccharide-small molecule drug conjugate and sugar chain fixed-point antibody-drug conjugate, and preparation method therefor and use thereof | |
| CA1314245C (en) | Process for the preparation of conjugates in which a monovalent carboxylic ionophore is associated by means of a covalent bond with a macromolecule, which are useful as immunotoxin potentiators | |
| KR0159767B1 (ko) | 메틸-트리티오기를 갖는 화합물로 부터 제조된 항종양항균 물질인 치환 디설파이드, 그의 목적 형태및 그의 제조 방법 | |
| CA1341315C (en) | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents | |
| CA2014459C (en) | Targeted forms of methyltrithio antitumor agents |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MK1K | Patent expired |