DK147304B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af (-) daunosaminyl-4-demethoxydaunomycinon som en blanding af (7s : 9r) og (7r : 9r) alfa-anomere - Google Patents

Description

147304

Opfindelsen angår en analogi'fremgangsmåde til fremstilling af (-) daunosaminyl-4-demethoxydaunomycinon som en blanding af (7S : 9S) og (7R : 9R) £?C-anomere (som er analoge til daunomycin, beskrevet i GB patentbeskrivelse nr.l 003 383), hvilke analoge har en modificeret ring D og den almene formel:

O °H

C0CH3

''OH

0 OH | Æ*

NHZ

2 147304

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen, som er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del anførte, omfatter kondensation af 2,3,6-trideoxy-3-triflour-acetaraido-4-triflouracetoxy-<pd-L-lyxopyranosylchlorid med en anthracyclinon med den i kravets kendetegnende del angivne formel i et vandfrit opløsningsmiddel i nærværelse af mercurioxid og/eller bromid og molecularsigte for at give et beskyttet derivat, som ved behandling med methanol og derefter med base f.eks. natriumhydroxid omdannes til den ønskede forbindelse. Det racemi-ske 4-demethoxydaunomycinon giver de to hidtil ukendte forbindelser: (-) dauno-saminyl(-)4-demethoxy-daunomycinon (OC+βanomere) og (-) daunosaminyl (+)4-de-methoxy-daunomycinon (<X.+(b anomere), som kan adskilles ved de sædvanlige metoder.

Det må forstås, at hver forbindelse, som har anthracyclinonkonfiguration ( 7S : 9S ) eller ( 7R : 9R ), er en blanding af cC og^anomere.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen illustreres af følgende eksempel.

EKSEMPEL·.

(-)daunosaminyl(-) -M-demethoxydaunomycinon ( <& + β> anomere) og (-)dåunoss-amJnyl(+).-4-demethoxydaunomycinon ( oC + β anomere).

a) 1,2 g 4“demethoxydaunomycinon-7-methylether ( fremstillet efter C. M. Wong, Canadian Journal ©f Chemestry, 1971» 42» 2712 ) opløses* i 22 ml trifluor-eddikesyre og henstår natten over ved stuetemperatur. Opløsningen inddampes i vacuum. Eemanensen opløses i 50 ml acetone og der tilsættea; 10 ml 5 % vandigt natriumbicarbonat. Efter 30 min. fjernes opløsningsmidlet ved ind-dampning i vacuum og remanensen opløses i chloroform og vaskes med vand. Fordampning af chlorofoimen efterlader en remanens, som kromatograferes på silicagel og giver 0,475 g (i)-4-demethoxydaunomycinon, smp. 152-155°C, enkelt plet ved tyndtlagskromatografi ( silicagel} chloroform : acetone ; 80 : 20; Bf = 0,44 ).

b) 0,3 g af denne forbindelse opløses i 75 ml vandfrit chloroform, og 0,6 g mercurioxid, 0,15 g mercuribromid og 5 δ 5 molecularsigte tilsættes under omrøring. Efter en time tilsættes 0,7 g 2,3,6-trides30xy-3-trifluor-acetamido-4-triflouracefcnxy- oc -L-lyxopyranosylchlorid og suspensionen omrøres ved stuetemperatur i 16 timer. Efter filtrering koncentreres opløsningen 3 147304 i vacuum og remanensen opløses i 200ml methanol og koges med tilbageløbskøling i 15 min. Efter fordampning af opløsningsmidlet kromatograferes remanensen på silicagel. Ved eluering med chloroform : benzen : methanol ; 100 : 20 i 3 , opnås 0,270 g af en blanding af (-)daunosaminyl(-)-4-demethoxy- daunomyoinon og (-)daunosaminyl(+)-4-demethoxydaunomycinon (06 -glycosyl anomere) som N-trifluoracetylderivater ( enkelt plet på silicagelplader; chloroform : acetone } 80 s 20 j Ef = 0,34), og 0,150 g af en blanding af (-)daunosaminyl(- )-4-demethoxydaunomycinon og (—)daunosaminyl(+).-4-demethoxy-daunomycinon ( /6 -glycosyl anomere) som N-trifluo racetyl derivater, c) 0,170 g N-t rif luo rac e tyl de r ivat e r af (—)daunosaminyl(—J-^-demethoxydaunomyci-non og (-)daunosaminyl(+)-4-demethoxydaunomycinon ( oc -glycosyl anomere) opløses i 0,1 N NaOH (15 ml) og henstår 30min. ved stuetemperatur, pH indstille® til 8,6 med HC1 og opløsningen ekstraheres gentagne gange med chloroform. Chloroformopløsningen koncentreres i vacuum og remanensen opløse® i methanol ( 5 ml) og gøres sur ( pH 4,5) med 0,1 N HC1 i methanol og ethyl-ether tilsættes for at bevirke udfældning af hydrochlorider af (-) daunosaminyl (-)-4-demethoxyaaunomycinon og (-)daunosaminyl(+)-4-demethoxydaunomycinon (ée-gly-cosid anomere) (enkelt plet på silicagelplader; dichlormethan: methanol: vand; 100 : 20 : 2 : Rf = 0,16).

I den farmakologiske vurdering som herefter beskrives anvendes for kortheds skyld laboratoriekoden "IMI 22" til at angive (-)dauhoaaminyl(-)-4-demethoxy-daunomycinon som en blanding af ( 7S :9S ) og ( 7H :9E ) oc -anomere.

Symbolerne "R" = Rectus og "S" = Sinister tages fra litteraturen ( i overensstemmelse med nomenclaturen i Cahn, Ingold, Prel og, Experientia, 1956.12-.

81).

4 147304

Virkning af IMI 22 på levedygtighed af EeLa celler.

In vi tro studier "blev udført på HeLa celler dyrket på Eagle medium tilsat 10 io kalvserum. Cellerne blev behandlet med forbindelser som skulle undersøgea 1 forskellige tidsrum. Levedygtigheden af cellerne blev bestemt og der blev udsået 2-300 celler pr. plade. Koloniantallene blev bestemt 6 dage senere. Resultaterne ( Tabel l) viser at IMI 22 er lige så aktiv som adriamycin efter 2 timers behandling, og efter 8 timers behandling er inhiberingen af cellelevedygtigheden højere med IMI 22 end med adriamycin og daunomyein.

Tabel 1 _IR 50 (/*g/ml)_ __2_t__8_b_

Daunomyein 0,095 0,023

Adriamycin ( 0,2 ) 0,039 IMI 22 ( 0,2 ) 0,002

In vitro forsøg er også blevet udført vedrørende dannelsen af foci af Moloney Sarcoma virus (MSV) til sammenligning med adriamycin på museembryo-fibroblast kulturer inficeret og ikke inficeret med MSV . Efter 3 dages behandling blev den procentuelle inhibering i sammenligning med kontrolforsøg vurderet efter celleproliferation i uinficerede kulturer ( oytotoxisk aktivitet) og efter MSV foci dannelse i inficerede kulturer (antiviral aktivitet). Resultaterne ( Tabel 2) viser for IMI 22 mindre antiviral aktivitet og samme cytotoxiske aktivitet som adriamycin.

Tabel 2

Dosis (k^/ml) $ Poci Celler

Adriamycin 0,0250 0 29 0,0125 0 30 0,006 26 53 IMI 22 0,6 0 0 0,1 0 4,6 0,0250 12 38 0,006 54 46 5 147304

In vivo studier af antitumor-aktiviteten af TMI 22 blev udført på nogle musetumorer både i fast og ascitisk form.

1. Ascitiske tumorer.

Aktivitetsforsøg blev udført på Swiss CD1 mus intraperitonealt inoculeret med 1 3E ΙΟ** ascitisk sarcoma 180 celler / dyr. Dyrene blev behandlet en gang intraperitonealt med forskellige koncentrationer af forbindelserne på den efter implantation af tumoren følgende dag. Resultaterne ( Tabel 3) angiver T/C % , d.v.s. middeloverlevelsestiden af behandlede mus / middeloverlevelsesn-tiden af kontroller i 100. Tallene i parentes (LTO) er antal langt idsoverlev. vende efter 60 dage. (l/ΐθ) angiver at af en gruppe på 10 forsøgsdyr forblev én i live efter 60 dage. MI 22 har en bemærkelsesværdig virkning på ascitisk tumorvækst : middeloverlevelsestiden af de behandlede dyr er betydeligt forøget. TMT 22 er aktiv i mindre doser end adriamycin.

Tabel 3

Dosis _jo T/C (LTO)__ “fifAfif/dag Porsøg 1 Forsøg 2__Forsøg 3 IMI 22 0,12 115 (θ/lO) 0,2 146 (0/10) 0 25 188 (1/10) 0,5 181 (0/10) 1 185 (0/10) 107 (o/lo) 223 (l/lO) 1,5 79 (0/10) 2 61 (1/10) 5 38 (0/10)___

Adriamycin 0,1 100 (O/lO) Ϊ*1 146 (1/9) I4I [ϊ/%θ] Ϊ69 (1/9) 2 ca 400 (5/I0) 5 311 (4/10) 225 (1/10) _ 10 _ 193 (0/10) _

Faste tumorer.

Forsøg med aktivitet på faste tumorer blev udført på Swiss CD1 mus subcutant podet med fragment eller neoplastisk væv og intravenøst behandlet i 5 dage begyndende dagen efter tumorimplantationen# På tiende dagen blev alle dyrene dræbt og deres tumorer fjernet og vejet. Resultaterne ( Tabel 4) viser at den højere ikke-toxiske dosis som blev prøvet ( 1 mg/kg) forårsager en inhibering 147304 6 af tumorraksten. på 50 f· Det terapeutiske index (T.l) "beregnet som maximum tolereret dosis (LD 10) / minimum effektiv dosis (Skipper and Schmidt, Cancer Chemotherapy Reports, I962, Γ7, 1 to 128). Minimum effektiv dosis er den dosis som reducerer vægten af tumorerne med 90 fo i sammenligning med kontrollerne. 90 fo reduktion svarer til T/C = 0,10 eller 10 fo . Det terapeutiske index (T,I.) er 3,7 for IMI 22 og 1,8 for adriamycin.

Tabel 4

Dosis tumor vægt fo T/C toxicitet __mg/kg_______

Kontroller___-__3,036_____ IMI 22 0,5 2,295 76 0/10 1 1,550 51 0/10 2 __0,485__16__3/10__

Adriamycin 2,5 1,465 48 O/lO

3.5 0,364_ 12_ 7/10__

Leukæmi.

Aktiviteten af IMI 22 blev prøvet på BDF 1 mus intraperitonealt inoculeret med 1 x 10^ L 1210 leukæmiceller / dyr. Dyrene blev behandlet én gang dagen efter tumorimplantationen. Resultaterne ( Tabel 5) viser at de ikké-toxiske doser som blev prøvet forøgede middeloverlevelsestiden af behandlede grupper anseligt. IMI 22 er aktiv i lavere doser end adriamycin.

Tabel 5 dosis middelover- fo T/C toxiaitet mg/kg levelsestid___

Kontroller__-__8___ IMI 22 0,75 12,5 156 0/10 1.5 13 162 1/10 ___3__7__87__7/10

Adriamycin 2,5 12,5 156 0/10 5 14 175 0/10 __[_10_ 16_ 200_4/10