TR201808733T4 - Kanser tedavisini ve gıda ile ilgili bileşikleri içeren tıp alanlarında amfipatik veya hidrofobik moleküller için taşıyıcı olarak nano-parçacıklar, preparasyon için proses ve bunların kullanımı. - Google Patents

Kanser tedavisini ve gıda ile ilgili bileşikleri içeren tıp alanlarında amfipatik veya hidrofobik moleküller için taşıyıcı olarak nano-parçacıklar, preparasyon için proses ve bunların kullanımı. Download PDF

Info

Publication number
TR201808733T4
TR201808733T4 TR2018/08733T TR201808733T TR201808733T4 TR 201808733 T4 TR201808733 T4 TR 201808733T4 TR 2018/08733 T TR2018/08733 T TR 2018/08733T TR 201808733 T TR201808733 T TR 201808733T TR 201808733 T4 TR201808733 T4 TR 201808733T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
nanoparticles
quillaja
cancer
cholesterol
cells
Prior art date
Application number
TR2018/08733T
Other languages
English (en)
Inventor
Morein Bror
Berenjian Saideh
Hu Kefei
Original Assignee
Mx Adjuvac Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=47143250&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=TR201808733(T4) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Mx Adjuvac Ab filed Critical Mx Adjuvac Ab
Publication of TR201808733T4 publication Critical patent/TR201808733T4/tr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/255—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of sulfoxy acids or sulfur analogues thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/337—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having four-membered rings, e.g. taxol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/59—Compounds containing 9, 10- seco- cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems
    • A61K31/593—9,10-Secocholestane derivatives, e.g. cholecalciferol, i.e. vitamin D3
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/73—Rosaceae (Rose family), e.g. strawberry, chokeberry, blackberry, pear or firethorn
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
    • C12Q1/485—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase involving kinase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
    • C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
    • Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)

Abstract

Mevcut buluş, bir sterol ve Quillaja asidinden ve Quillaja saponinden seçilen Quillaja saponaria Molina'dan türetilen bir bileşen içeren nano-parçacıklar ile ilgilidir, bu nano-parçacıklar bir fosfolipit içermez. Bu ayrıca, nano-parçacıklar içeren bir bileşim ve bunların, özellikle aşılarda, adjuvan olarak, amfipatik veya hidrofobik moleküller için taşıyıcılar olarak ve kanserin tedavisi için ajanlar olarak kullanımı ile de ilgilidir. İlaveten, bu fosfolipitsiz nano-parçacıklar üretmek için bir yöntem, kanserin tedavisi için bir yöntem ve kanser tedavi etme yönteminin uygulanabilirliğini değerlendirmek için bir yöntem ile ilgilidir.

Description

TARIFNAME KANSER TEDAVISINI VE GIDA iLE ILGILI BILESIKLERI IÇEREN TIP ALANLARINDA AMFIPATIK VEYA HIDROFOBIK MOLEKÜLLER içiN TASIYICI OLARAK NANO-PARÇACIKLAR, PREPARASYON IÇIN PROSES VE BUNLARIN KULLANIMI BULUSUN ALT-YAPISI Mevcut bulus, sterol ve Quillaja asidinden ve Quillaja saponinden seçilen Quit/aja saponaria Molina'dan türetilen bir bilesen içeren nano-parçaciklar ile ilgilidir, bu nano- parçaciklar bir esansiyel bilesen olarak bir fosfolipit içermez. Bu ayrica, nano- parçaciklar içeren bir bilesim ve bunun, özellikle asilarda, adjuvan olarak ve kanserin tedavisi için ajanlar olarak, özellikle kanserin tedavisi için ve gida ile ilgili bilesikler için tip alaninda amfipatik veya hidrofobik moleküller için tasiyicilar olarak kullanimi ile de ilgilidir. Ilaveten, bu fosfolipitsiz nano-parçaciklar üretmek için bir yöntem, kanserin tedavisi için bir yöntem ve kanser tedavi etme yönteminin uygulanabilirligini degerlendirmek için ve bunlarin vücut tarafindan alimini arttirmak için suda çözünebilen gida ile ilgili bilesikler yapmak için bir yöntem ile ilgilidir. ÖNCEKI TEKNIK Immün Stimülan Kompleks (ISCOM), Quil/aja saponaria Moli'na agacindan, 6 nm'lik çapi olan hekzagonal halkalar olusturmak için kolesterol ile siki sikiya iliskili olan saponinden olusan bir 40 nm'lik parçaciktir. Üçüncü bilesen, bir lipittir, örn., bir 40 nm'lik küreler olusturmak için halkalari yapistiran fosfatidil kolindir. Bu parçacik, parçaciga katilan spesifik asi antijenleri ile veya ayri bir parçacik içinde asi antijeni ile birlikte-uygulanan bir antijen olmadan bir adjuvan parçacigi olarak kullanilir. ISCOM parçaciklari, Lövgren & Morein tarafindan ve EP O 436 6320`de ayni zamanda ayrica, bunu, örn., yolcu olacak olan molekülleri/bilesikleri entegre etmek amaciyla veya farmakolojik etkiler ve asi etkileri için karsiliksiz etkileri basarmak amaciyla, bir tasiyici/aktarim sistemi olarak veya bir hedefleme cihazi olarak kullanmaya yönelik problemlere de yol açar.
Asilar en çok, yüzey yapilarina karsi hem antikor hem de T hücresi yanitlarini içeren, immün yanitlari arttiran tam mikroorganizmalara veya alt-birimlere dayanir. Alternatif olarak, asi antijenleri, alt-birimlerdir, yani, en siklikla yüzey proteinleridir, ancak ayrica iç/intraselüler proteinlerdir veya hatta hücresel vektörler içinde eksprese edilmekte olan yapisal-olmayan proteinlerdir. Yüzey proteinleri ve karbonhidrat antijenleri siklikla, bunlarin antikor yanitlarina neden olma kapasitesi, ayrica bunlar T-hücresi yanitlarini içeren, bununla birlikte, çogunlukla sitotoksik T-hücresi-olmayan hücre aracili yanitlari da indükledigi için, degerlidir. Antikorlar enfekte eden ajanlarin iç proteinleri ile etkilesime girmediginden ve bundan dolayi enfeksiyon zaman noktasinda immün korumaya aracilik edemeyebileceginden, iç ve yapisal-olmayan proteinler sitotoksik T- hücrelerini içeren T hücresi yanitlarina neden olmak için asi antijenleri olarak kullanilir.
Aksine, T-yardimci hücrelerini ve sitotoksik T-hücrelerini içeren hücre aracili immünite enfekte olmus hücreleri, yani, enfeksiyon zaman noktasindan sonra, öldürebilir. ISCOM teknolojisinin formülasyonlari ve ürünleri erisilebilen antijenlerin, yani, yüzey antijenlerinin ve bundan ve buna karsi asinin hazirlandigi ajanin bozulmasi ile ortaya çikarilan antijenlerin (iç antijenlerin), immünojenisitesini güçlendirmek için kullanilir, rDNA teknikleri ile de üretilebilir ve çogu durumda ayrica Lövgren & Morein2 tarafindan tarif edildigi üzere sentetik olarak da üretilebilir. ISCOM teknolojisi, US sayida patent basvurusunda tarif edilir.
Adjuvanlar genel olarak, asi formülasyonuna dâhil edilen antijenlerin immün yanitlarinin düzeyini ve kalitesini arttirmak için kullanilir. Bununla birlikte, koruyucu asilara iliskili bir karsilanmamis ihtiyacin üstün geldigi ve bu (yeni) immün korumanin asagidakiler tarafindan kaçirildigi çok sayida enfeksiyöz ajan vardir; . Kaçis mutantlari (insan influenza virüsü, tavuklarda korona virüsü (enfeksiyöz bronsit virüsü [IBR]), hepatit C virüsü (HCV) o Antijenik belirleyicileri ortaya çikarmama o Erisilemeyen-gizli (staphyiococcus aureus [SA], streptococcus equi) o Mikroorganizmada diger antijenik belirleyiciler tarafindan immün baskin, insanlarda influenza virüsü, vizonda Aleutian hastaligina neden olan parvovirüsü, insanlarda hepatit C virüsü (HCV) ile örneklendirilir. o Hastaligi alevlendiren immün yanitlari indükleme (parvovirüsü [Aleutian hastaligi] vizon) 0 Bir yeterli bir sekilde kapsayan asi, örn., insanlarda HIV ve Hepatit C, üretmek için bunu zor/çok maliyetli yapan alternatif olarak bunu daha ekonomik yapan çok sayida ila neredeyse sayisiz varyanta sahip olan patojenlerin türleri için amaçlanan asilar, ayrica sus varyantlarinin, örn., çesitli kapsül antijenlerine sahip olan karbonhidrat varyantlarinin (konjugat asilar, örn., Haemophilus influenzae, Meningococus miningitides, Streptococcus pneumonia,Streeptococcus pyogenes, Pneumococcus pneumonie ve ayrica Staphylococcus aureus), ayni sayisindan bir kaç hatta en fazla 23 kadar çok asi bilesenine ihtiyaç duyan çok sayida asinin oldugu da iyi-bilinir. 0 Diger karsilanmamis ihtiyaçlar, çesitli Gram+ koksiler, örn., hayvanlarda Staphylococcus türleri, için üstün gelir, özellikle gevis getirenlerde, S. aureus, atlarda Streptococcus türleri (Str. Equi, Str. Zooepidemicus), sigirlarda (Str. aga/açti', Str. dysgalacti ve Str. Uberis), tarafindan neden olunan, mastite karsi koruyan asilara yönelik bir ihtiyaç vardir o Antijenik sin (FLU) veya tasiyici indüklü epitop baskilama antijeni (CIES). o Çabuk kopyalayan ajanlar, öm., Insan immün yetmezlik virüsü (HIV), asilar tarafindan indüklenenleri Içeren yeni olmak üzere olan varyantlar tarafindan konagin immün koruyucu mekanizmalarindan kaçmayi komplike hâle getirir. o DNA ve RNA asilari çogu durumda adjuvanlardan yoksundur.
Böylelikle, asilarin, örn., epidemiklere ve hatta daha çok pandemiklere yol açan, olmak üzere olan durumlari karsilama ve kaçis mutasyonunun negatif etkilerinden kurtulma ile bir asinin koruyucu degerini koruma veya mutasyon ile kaçis ile immün kaybi telafi etme olasiligini iyilestirme kapasitesini arttirmaya veya enfeksiyon sirasinda mutasyonlardan dolayi olmak üzere olan varyantlara immün korumayi güçlendirmek için karsilanmamis bir ihtiyaç vardir. Bu nedenle ayrica, bunun immün yanitin bir özel patojene karsi koruma için gerekli olan bir immünolojik profile yöneltilmesine uyum saglama esnekligi tasiyan yeni partikülat asi adjuvanlari gerekebilir.
Kanser, cerrahiyi, irradyasyonu içeren çesitli yollarla ve farmasötikler, örn., sitostatik ilaçlar, ile tedavi edilir. Genel olarak sitostatik ilaçlar ile tibbi tedavi, siklikla siddetli yan etkilere neden olan irradyasyon terapisi gibi siddetli yan etkilere neden olur. Böylelikle, hastalar tarafindan iyi tolere edilen bir tibbi tedaviye sahip olmaya yönelik al.,1, kolesterol, fosfatidilkolin ve Quillaja saponin fraksiyonlari ASAP (açil-saponin, QS 21'e veya QHC'ye karsilik gelir) veya DSAP (desaçiI-saponin, QS 7'ye veya QHA'ya karsilik gelir) içeren nano-parçaciklari tarif eder. KGI ve BBE olarak adlandirilan bu Patent Basvurusunda ve Hu et al.,1 kaynaginda tarif edildigi üzere bunlarin benzer orijindeki normal hücreleri öldürmesine kiyasla kanser hücrelerini 30 ila 40 kat daha düsük konsantrasyonlarda öldürdügü tarif edilir. Bu parçaciklar, ISCOM ve ISCOM Matriksi için tarif edilenlere benzer üretim karmasikligina sahiptir.
Burada bunlarin, anti-kanser farmasötiklerini içeren asi/adjuvan ve ilaç aktarim alanlarinda kullanimini içeren su içinde çözünürlük basarilamayacagindan, çogu potansiyel farmasötik gelistirilemeyebilir. Bu tarz potansiyel farmasötikler raftan alindiginda ve su içinde çözünebilir hâle getirildiginde, bunlarin bazilari tibbi pazari zenginlestirecektir.
BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Mevcut bulusun sahipleri, farmasötikler için anti-kanser farmasötik, tasiyici/aktarim parçacigi olarak ve piyasada satilan adjuvan-asi formülasyonlarinin kusurunu telafi edebilen adjuvan olarak kullanilacak olan yeni bir nano-parçacik formuna yönelik bir ihtiyaci tanimlamistir. sentrifügasyon teknikleri kullanilarak, parçaciklari Qui/Iaja bilesenlerinin, kolesterolün ve üçüncü bilesenin, örn., fosfatidil kolinin, deterjan çözünürlestirmesine göre formüle etmek için kompleks prosedürdür. Lövgren & Morein2 tarafindan tarif edildigi üzere bu tekniklerin tümü, üretim prosesi sirasinda materyalin kaybina neden olur.
Dahasi, günümüze kadar gelistirilmis yöntemler bu tarz bilesiklerin su içinde spontan bir sekilde kararli kompleksler (kendi kendine birlesme), örn., hidrofobik etkilesim ile, egilimine izin verdiginden, ISCOM teknolojileri diger hidrofobik veya amfipatik moleküllerin entegrasyonu için kolaylikla uygun degildir.
Mevcut bulus, sterol ve en az bir saponin içeren bir fosfolipitsiz nano-parçacik ile Mevcut bulusun aksine, Iipit içeren parçaciklar, örnegin, lipozomlar, lSCOM, ISCOM MATRIKSI, posintro'lar ve asilarin etkinligini güçlendirmek amaciyla preparasyon, ve adjuvan formülasyonlarini içeren farmasötiklerde ve asi formülasyonlarinda ve kanserin tedavisi için formülasyonlarda kullanim için çesitli Iipozom çesitleri fosfolipitler gibi Iipitler, örn., fosfatidilserin ve fosfatidilkolin, stearilamin, vb., içerir.
Bulusa göre nano-parçaciklar ayrica, bir veya bir kaç bilesik için, örn., kanserin tedavisi için kullanilanlari içeren farmasötikler ve burada ilave maddenin (maddelerin) ilave fonksiyonlar ve komplementer etki modlari sagladigi besin ile ilgili bilesikler için, aktarim sistemleri olarak da kullanilabilir.
Bulusa göre nano-parçaciklarin avantaji, bir patojenin yeni varyantlarini, örn., yukarida tarif edilen olmak üzere olan pandemikleri, kapsamak için adjuvanlar olarak bir genisletilmis uygulamayi içeren önceki teknige ait formülasyonlar için bunlari replasmanlar olarak yeterli göstermesidir.
Mevcut bulus, buharlastirma teknolojisinden dolayi, neredeyse hiç kayip olmadan bir kolay üretim prosesi saglar. Bu, ISCOM'larin veya ISCOM Matriksi'nin üretimi için tarif edildigi üzere tekniklerin kullanimini dislamaz (yukari bakiniz).
Bulusun yönleri bagimsiz istemlerde tarif edilir. Tercih edilen uygulamalar, bagimli istemlerde izah edilir.
Ekli sekillerin kisa açiklamasi Sekil 1A. Elektron mikroskopisi (EM), 1:1:O,5 olan bir molar oranda kolesterol, QHC ve diterpenoid içeren bir nano-parçacigi gösterir. Parçaciklar bulusa göre yaklasik 17-20 nm'lik bir ortalama çapa sahiptir. Bu, Sekil iB'de gösterildigi üzere yaklasik 40 nm'lik bir ISCOM parçacigindan belirgin bir sekilde farklidir.
Diterpenoid olmayan bulusa göre parçaciklar, ayni morfolojiye sahiptir.
Sekil 1B. Elektron mikroskopisi, 1:1:O,5'lik bir molar oranda kolesterol, QHC ve fosfatidilkolin içeren bir lSCOM benzeri parçacigi gösterir. Parçaciklar Örnek 1'de tasarim C'ye göre Örnek 1'de tarif edilene benzer bir teknoloji kullanilarak tarif edildigi sekilde hazirlanir, yaklasik 40 nm'lik bir çapa sahiptir, yani, kullanilarak. Morfoloji ve boyut, Sekil 1A'da gösterildigi üzere bulusa göre bir nano-parçaciginkilerden belirgin bir sekilde farklidir.
Sekil 2. U937 hücreleri üzerinde test edilen her ikisi de QHC içeren G3 ve KGI nano-parçaciklari arasinda kanser hücresi öldürme kapasitesinin karsilastirmasi. GS ve KGI, model tümör hücresi üzerinde neredeyse ayni anti- kanser hücresi öldürme etkisine sahiptir (P=0,8422).
Sekil 3. U937 tümör hücrelerinin IL-8 üretmesini indüklemek için G3'ün KGl ile, her iki parçacigin kanser hücrelerinin kanser hücresi farklilasmasini gösteren sitokin üretmesini indüklemek için benzer kapasiteye sahip oldugunu gösteren karsilastirmasi (P>0,05).
Sekil 4A. Stevia, BBE'ye veya KGl'ya kiyasla en güçlü IL-12B, IL-6 ve IL-1alfa indükleyicisidir.
Sekil 48. GB'e katildiginda, DT normal insan DC'Ierinin sitokin IL-12 geni ekspresyonunu yukari-yönde regüle eder.
Sekil 5. GS parçaciklari, U937 hücrelerinin intra-selüler TK üretimini KGI parçaciklarininkine benzer bir büyüklükte etkiler (her bir formülasyon- saatlik zaman noktalarini gösterir).
Sekil 6. G3'ün, DT katilmis G3'ün (GS-DT) ve partikülat-olmayan QHC'nin HL- 60 AML hücreleri üzerinde okunmus titrasyon egrileri. G3 ve G3-DT formülasyonlari, serbest partikülat-olmayan QHC'ye kiyasla AML hücrelerini daha etkili bir sekilde öldürür.
Sekil 7. G3'ün ve sitarabinin HL-60 AML hücreleri üzerindeki tek basina ve kombinasyon etkileri. GS, sitarabini anlamli bir sekilde güçlendirir.
Sekil 8. GS, daunorobisinin HL-60 AML kanser hücreleri üzerindeki öldürme kapasitesini güçlendirir.
Sekil 9. G3'ün, DT katilmis G3'ün (GS-DT) ve QHC'nin PC-3 prostat kanseri hücreleri üzerindeki titrasyon egrileri.
Sekil 10. G3'ün ve dosetakselin PC-3 prostat kanseri hücreleri üzerindeki tek basina ve kombinasyon etkileri. G3, dosetakselin kanser hücresi öldürme etkisini anlamli bir sekilde güçlendirir.
Sekil 11. G3, kabazitakselin PC-3 prostat kanseri hücreleri üzerindeki öldürme etkisini güçlendirir.
Sekil 12. ACHN böbrek kanseri hücreleri üzerindeki titrasyon egrileri, QHA ile formüle edilmis G3'ün solid kanser hücrelerini öldürmede QHA ile formüle edilmis G3'e kiyasla daha güçlü oldugunu gösterir (P<0,01).
Sekil 13A. Immünizasyon planlamasi iki immünizasyon) Grup 1 (Abisco Kontrol): Influenza 1 ug + ISCOM - 5 ug Grup 2 (GS-Yüksek Doz): Influenza 1 ug + G3 - 5 ug Grup 3 (GS-Orta Doz): Influenza 1 ug + G3 - 2.5 ug Grup 4 (G3-Düsük Doz): Influenza 1 ug + GS - 1 ug Grup 5 (DT ile GS): Influenza 1 ug + GS - 2,5 ug Grup 6 (Adjuvante-edilmemis, Antijen Kontrol): Influenza 1 ug Grup 7 Immünize-edilmemis Kontrol) Degerlendirme Antikor yanitlari için kan. Proliferasyon testini, IL-4'ü, IFN-y'yi içeren hücre- aracili immünite için nekropsi de dalak hücreleri.
Sekil 13B. Fare serumunun 1. immünizasyondan 3 hafta sonra ölçülen HI antikor yaniti.
Sekil 13C. Fare serumunun 2. immünizasyondan 4 hafta sonra ölçülen HI antikor yaniti.
Sekil 13D. Fare dalak hücrelerinin 2. immünizasyondan 4 hafta sonraki sitokin yanitlari.
Sekil 14A. GS/VLX4O formülasyonu (sag kolon), yüksek kanser hücresi (U937) öldürme etkisine sahiptir. Aksine, tek basina VLX40 (sol kolon), G3/VLX4O formülasyonunun yüksek çözünürlügünü gösteren düsük kanser hücresi öldürme etkisine ve VLX40-DMSO formülasyonunun düsük kanser hücresi öldürme etkisine sahiptir.
Sekil 14B. VLX40 DMSO formülasyonu (sol kolon ), çökeltilerde yüksek anti- kanser aktivitesine sahiptir. Aksine, G3-VLX40 (sag kolon) formülasyonunun yetersiz çökeltisi, anti-kanser hücresi aktivitesinin esas olarak su fazina konumlandirildigini gösteren düsük anti-kanser hücresi aktivitesine sahiptir.
Tanimlar Mevcut spesifikasyondaki tüm terimlerin ve sözcüklerin, spesifik olarak aksi gösterilmedikçe, ilgili teknikte bunlara genel olarak verilen anlama sahip oldugu sekilde anlam çikarilmalidir. Anlasilabilir olmasi için, bir kaç terim asagida tanimlanir.
Bir asi formülasyonu, profilaktik olarak kullanilan ve bir veya birden fazla özel hastalik için/bir veya birden fazla özel hastaliga karsi koruyucu immüniteyi iyilestiren/güçlendiren bir farmasötik formülasyondur. Hastalik ile baglantili bir bilesene spesifik bir antijen bulus ile formülasyona dâhil edildiginde veya kanser tedavisi için özel oldugu gibi, antijen kanserde/tümörde bulundugunda, bulusa göre bir terapötik asi, hastaligi kürlemek için kullanilabilir. Bir asi, tedavi edilen süjede bir immün yanit meydana getiren bir "antijen" ve opsiyonel olarak, immün yaniti iyilestirmek için bir asiya eklenen, bir "adjuvan" olarak adlandirilan bir madde içerir.
Bir "antijen" böylelikle, bir asi içindeki aktif spesifik parçadir ve asinin buna immüniteyi iyilestirmeye yardimci oldugu tam mikro-organizma, örnegin, virüs veya bakteri, olabilir.
Bu ayrica, söz konusu mikro-organizmanin bir alt-biriminin bir parçasi, örnegin, bir proteinin bir protein (bir alt-birimi) bir parçasi, patojenik mikroorganizmadan izole edilmis veya rDNA teknigi ile üretilmis veya sentetik olarak üretilmis bundan sonra siklikla peptit olarak adlandirilan bir protein, de olabilir. Bir peptit, bir proteine kiyasla daha az amino aside sahiptir.
Bir "adjuvan", profilaktik veya terapötik asinin antijen parçasina immün yanitin düzeyini veya kalitesini arttiran bir asi bilesenidir.
Bir besin ile ilgili bilesik, vitaminleri, saglik etken maddelerini, tat iyilestirme bilesiklerini içeren besin ile ilgili herhangi bir bilesiktir.
BULUSUN DETAYLI AÇIKLAMASI Mevcut bulus, sterol ve Quillaja asidinden ve Quillaja saponinden seçilen Quillaja saponaria Molina'dan bir bilesen içeren, söz konusu nano-parçaciklarin bir fosfolipit içermemesi ile karakterize edilen, nano-parçaciklar ile ilgilidir.
Inovasyona göre elde edilen parçacik, boyut açisindan ISCOM'Iardan farklilik gösterir, burada bulusa göre parçaciklar 40 nm'nin altinda, ~20 nm civarinda iken, ISCOM'Iar nanometre veya 15-25 nanometre, araliginda bir çapa sahip olabilir. Boyut bir dereceye kadar kolesterol ve Quillaja molekülü disindaki entegre edilmis diger moleküllerin yüküne bagli olacaktir.
Sterol, kolesterol, kolestanol, kaprostanol, fitosteroller, örn., stigmasteroll, sitosterol, mikosteroller, örn., ergosterol, tercihen kolesterol ve D3 vitamini veya bir miselin su içindeki süspansiyonunu içeren suda çözünebilen içindeki reaktif grup ile kovalent bir sekilde reaksiyona girmesi için su içine maruz birakilan herhangi bir hidrofobik bilesik arasindan seçilebilir.
Quillaja saponin veya ayni zamanda Quillaja asidi olarak da adlandirilan bir ortak triterpenoid iskeletine sahip olan bunun fraksiyonlarinin herhangi biri kullanilabilir.
Simdiye adar tarif edilmis 4 Quillaja asidi formu vardir. Quillaja saponinleri, örn., Hu et al.,1, kaynaginda tarif edildigi üzere, bir açil grubu ile, yani, bir açil-saponin (ASAP), veya açil zinciri olmadan, yani, desaçiI-saponin (DSAP), çok sayida seker ile zincirler olusturur. 14 fraksiyonlarindan ve Quil A veya ham Quil A fraksiyonundan seçilebilir.
Saponin, bir ham veya çig veya saponinlerin bir karisimini veya bunun bir yari- saflastirilmis formlarini içeren fraksiyone-edilmemis Quil A ekstrakti, örnegin, Quillaja Powder Extract (Berghausen, USA), Quillaja Ultra Powder QP UF 300, Quillaja Ultra Powder QP UF 1000 veya Vax-Sap (Natural Responses, Chile, üçünün tümü) veya Prodalysa, Santiago, Chile, firmasindan, olabilir. Tek basina veya ile birlestirilmis saflastirilmis saponin C ve B fraksiyonlari kullanilabilir. B ve C fraksiyonlari, WO fraksiyonlari EP , Quillaja Saponaria Molina Spikoside (Isconova AB, Uppsala Science Park, 751 83, Uppsala, Sweden), tarif edilir.
Saponin, hidrofobik saponin olabilir ve örn., Quillaja Saponaria Moli'na'dan saponinlerin triterpenoid aglikonunda 4-pozisy0nunda, yag asitleri içeren saponinlerden, örnegin, Quil A'nin C ve B fraksiyonlarindan ve A ve B fraksiyonlari arasindaki bölgeden fraksiyonlarindan seçilebilir, özellikle fraksiyonlar 17 ve 18 burada uygundur. Tercihen QHA, QHB ve/veya QHC Quillaja saponin fraksiyonu kullanilabilir.
Kolesterol ve Quillaja saponin arasindaki oran, 1:10 ila 10:1 araliginda, tercihen 12 ila 21 araliginda, olabilir.
Bulusa göre nano-parçaciklar ilaveten, bir antijen, bir adjuvan, bir hedefleme molekülü, bir farmasötik bilesik ve bir gida ile ilgili bilesikler arasindan seçilebilen en az bir amfipatik veya bir hidrofobik molekül içerebilir.
Antijen, 0 109 942 EPO-patent basvurusunda tarif edildigi üzere amfipatik veya bir hidrofobik gruplar ile herhangi bir antijen olabilir veya rDNA ekspresyonu ile bir hidrofobik bölgeye sahip hâle getirilebilir ve hücreler tarafindan üretilebilir veya kimyasal olarak sentezlenebilir. Adjuvan, amfipatik veya hidrofobik gruplar ile herhangi bir adjuvan, örnegin, Quillaja saponar/'a Moli'na'dan elde edilenler, olabilir.
Bir veya birden fazla bilesikler, moleküller komplementer fonksiyonlar için, örn., modülatör fonksiyonlar için asilarin kullaniminda veya antijen veya komplementer antijenler olarak veya anti-kanser veya besinsel etkileri içeren farmasötik olarak, G3'e katilabilir. G3 parçaciklarina katilmasi için, moleküller hidrofobik alanlar gerektirir veya G3 parçaciklarina tutturulmus elektrostatiktir. Hidrofobik kisimlara sahip olmayan bilesikler, EP 1800564'te benzer bir parçacik için tarif edildigi üzere GS parçacigina katilmadan önce veya katildiktan sonra bu tarz moleküllere sahip olan molekülere kuple edilebilir.
Herhangi bir adjuvan, bahsedilen adjuvan bilesikleri ile sinirli kalmamak kaydiyla, örnegin, dogal veya sentetik veya yari-sentetik olanlari içeren sentetik Qui'llaja saponini veya bunlarin Quillaja saponaria Mo/ina'dan saponin fraksiyonlari veya türevleri, lipit A veya bunun türevleri veya sentetik versiyonlari, hücre duvari iskeleti, katilabilir. Javier Saints, Prodalysa, Santiago, Chile, tarafindan saglanan bir Diterpenoid (DT) bir adjuvan ve bir besinsel (stevia'dan bir tatlandirma ajani) olarak kullanilabilir.
Diterpenoid (DT) bulusa göre nano-parçaciklara entegre edilmistir, bu 17 nm'lik tipik küçük nano-parçaciklar ile sonuçlanir.
Hücre-baglama bilesenlerini baglayan, gangliyosit GM1 olan kolera toksini reseptörünü ve fuközlanmis kan grubu antijenini içeren, Iipit-içeren reseptörler kullanilabilir. Hücre- baglama bilesenleri ayrica, mukus hedefleme molekülü olarak da islev gösterebilir.
Içeren kompleksler için teknoloji, örn., WO97/30728'de, tarif edilir ve hem anti-kanser tedavisi için hem de asi kullanimi için G3 parçacigina uygulanabilir. Qui'llaja saponaria Molina'nin herhangi bir alt-fragmani tek basina veya çesitli kombinasyonlar hâlinde kullanilabilir.
Arzu edilen komplementer özellikleri, örn., kanser hücresi öldürmenin farkli modunu, örn., hem kanser hücrelerini hedef alan hem de hücre öldürme etkisine sahip olan monoklonal antikorlari, saglamak için molekülleri bulusa ait parçaciga yakalama için hedeflenen hidrofobik kuyruk/bölge ile saglanan reseptörler, bir tasiyiciIi-aktarim opsiyonudur.
Böylelikle, nano-parçaciga entegre edilebilen diger bilesenler, antikorlar veya monoklonal antikorlar için reseptörleri, örnegin, Fc reseptörlerini veya Staphylococcus aureus'un Protein A'sinin DD'sini, içeren anti-kanser ilaçlarini içeren farmasötiklerdir Mevcut bulus ile açiklanan nano-parçaciklarin üretim yöntemi, ISCOM için olana kiyasla daha basittir ve hidrofobik ve amfipatik molekülleri katmak için daha uygundur.
Böylelikle, bulusa ait nano-parçacik anti-kanser tedavisi için asi antijenlerinin, ilaçlarin aktarimi için ayni zamanda herhangi bir ilaç çesidi için uygun bir nano-parçaciktir.
Burada tarif edildigi sekilde üretilen parçacik ayrica, diger molekülleri, örn., ilaçlari veya edildigi üzere, elektrostatik baglama, Iektin baglama, için kullanilacak olan entegre edilmis amfipatik moleküller (Iipitler, örnegin, stearilamin, vb.) ile de takviye edilebilir.
Parçacik ilaveten, kanser hedefleme moleküllerini, örnegin, kanser hücrelerinden yüzey antijenlerini, virüs yüzey antijenlerini ve influenza antijenlerini, de içerebilir.
Mikrobiyal membranlardan yüzey molekülleri, orijinal olarak Morein et al.,3 ve EP 242380'de tarif edildigi üzere hidrofobik etkilesim ile katilabilir. Örn., rDNA teknolojisi ile Bu tarz hedefleme molekülleri virüslerden, mesela, örn., akciger kanserinin formlarini hedef almasi için, respiratuvar yola afiniteye sahip olan influenza ve respiratuvar sinsisyal virüslerinden zarf proteinlerini veya Lycke et al.,4 tarafindan tarif edildigi üzere KGI veya BBE formülasyonlarina katilan kolera toksininin A alt-biriminin A1 parçasi olan CTA1DD'yi içerir. CTA1DD akla uygun sekilde, her biri komplementer etkilere katkida bulunan üç ana bilesenden tasarlanir. CTA1, kolera toksininin A2 ve B alt- birimlerinden ayrilma ile toksik-olmayan hâle dönüstürülen enzimatik olarak aktif alt- birimidir. Staphy/ococcus aureus'tan protein A'dan DD`ye kaynastirildiginda, bu B hücrelerini hedef alir. Daha genel olarak, mono ve poliklonal antikorlar EP 0 109 942 katilabilir.
Bulus ayrica, bir veya birden fazla nano-parçacik içeren bir bilesim ile de ilgilidir.
Bilesim her biri farkli nano-parçaciklara katilmis farkli Qui/Iaja saponin fraksiyonlari içerebilir.
Böylelikle, iki farkli saponin fraksiyonu, bir G3 parçacigi içinde kompleks baglanabilir ve en az iki farkli saponin fraksiyonunun bir digeri (bir digerleri), bir baska (diger) fiziksel olarak farkli Iipit içeren parçaciga (parçaciklara) kompleks baglanir.
Farkli saponinler sirasiyla hidrofilik ve hidrofobik saponinler olabilir. Parçacik, Quil A'nin en azindan C fraksiyonunu veya en azindan B fraksiyonunu veya C ve B fraksiyonu arasindaki en azindan herhangi bir fraksiyonunu ve Quil A'nin en az bir baska fraksiyonunu içerebilir. Böylelikle, bir parçacik yalnizca C fraksiyonunu; C fraksiyonunu ve Quil A'nin en az bir baska fraksiyonunu; C fraksiyonunu ve Quil A'nin bir veya birden fazla fraksiyonunu; Quil A'nin C fraksiyonunu ve A fraksiyonunu; ham Quil A'yi içerebilir. Parçacik ayrica, yalnizca B fraksiyonunu; B fraksiyonunu ve Quil A'nin en az bir baska fraksiyonunu; B fraksiyonunu ve Quil A'nin bir veya birden fazla fraksiyonunu; Quil A'nin B fraksiyonunu ve A fraksiyonunu; ham Quil A'yi da içerebilir.
Fraksiyonlarin yukaridaki kombinasyonlari ayrica, farkli Iipit parçacigi içinde veya ayni Böylelikle, fiziksel olarak farkli parçaciklar içinde hidrofilik ve hidrofobik saponinler içeren Iipit içeren parçaciklarin karisimlari kullanilabilir.
Bir uygulamaya gör, Quil A'nin A fraksiyonu immünomodüle etme aktivite olan en az bir baska adjuvan ile birlikte bir nano-parçaciga entegre edilebilir.
Bir baska uygulamaya göre, en az bir baska adjuvan, serbest formda bulunur veya bir adjuvan bilesiminin preparasyonu Için bir baska ayri nano-parçaciga entegre edilir.
En az bir baska adjuvan, bir saponin, örnegin, bir Quil A saponini, olabilir.
A fraksiyonu, kendi basina kullanildiginda immün yanitlarin ve immünomodüle etme aktivitesinin güçlendirilmesini içeren etkili ve bir sinerjistik etkinin elde edilebildigi dozlarda toksik olabilen bir baska adjuvanin kullanimini kolaylastirabilir.
Bulusa göre bir bilesim, herhangi bir agirlik oraninda Quil A'dan adjuvan A fraksiyonunu ve en az bir baska adjuvani içerebilir. Tercihen, Quil A'dan A fraksiyonu, adjuvanlarin toplam miktarina göre sayildiginda agirlik % 2-99,9, tercihen agirlik %5-90 ve özellikle agirlik %50-90, araligindadir. Örn., AI(OH)3, sivi yag adjuvanlari ve blok polimerleri için, Quil A'nin A fraksiyonunun miktari büyük ölçüde daha düsük olabilir.
Bir tercih edilen ISCOM bilesimi, A fraksiyonlarinin ve A-olmayan Quil A fraksiyonlarinin toplam agirligina göre sayildiginda Quil A'nin A fragmaninin %50- 99,9'unu, Quil A'nin C fragmaninin ve/veya B fraksiyonunun ve/veya diger fraksiyonlarinin veya türevlerinin (bundan sonra A-olmayan Quil A fraksiyonlarinin) fraksiyonlarinin toplam agirligina göre sayildiginda Quil A'nin A fragmaninin %70- 99,9'unu ve A-olmayan Quil A fraksiyonlarinin %0,1-30'unu, tercihen Quil A'nin A fragmaninin %75-99,9'unu ve A-olmayan Quil A fraksiyonlarinin %0,1-25'ini ve özellikle Quil A'nin A fragmaninin %80-99,9'unu ve A-olmayan Quil A fraksiyonlarinin %0,1- 'sini içerir. En çok tercih edilen bilesim A fraksiyonlarinin ve A-olmayan Quil A fraksiyonlarinin toplam agirligina göre sayildiginda Quil A'nin A fragmaninin %91- 99,9'unu ve A-olmayan Quil A fraksiyonlarinin %0,1-9'unu, özellikle A fraksiyonlarinin ve A-olmayan Quil A fraksiyonlarinin toplam agirligina göre sayildiginda A fraksiyonunun %98-99,9'unu ve A-olmayan Quil A fraksiyonlarinin %0,1-2,0'ini içerir.
Nano-parçaciklar ve nano-parçaciklari içeren bir bilesim opsiyonel olarak, ilaveten farmasötik olarak kabul edilebilir tamponlar, diluentler, eksipiyanlar, katki maddeleri, adjuvanlar ve/veya tasiyicilar içeren bir farmasötik bilesim içinde bir farmasötik olarak kullanilabilir.
Uygun farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicilar ve/veya diluentler herhangi bir ve tüm geleneksel çözücüleri, dispersiyon vasatlarini, dolgulari, kati tasiyicilari, sulu çözeltileri, kaplamalari, antibakteriyel ve antifungal ajanlari, izotonik ve emilim geciktirme ajanlarini ve benzerlerini içerir. Farmasötik olarak etkin maddeler için bu tarz vasatlarin ve ajanlarin kullanimi teknikte iyi bilinir ve bu, örnek olarak, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Company, Pennsylvania, and USA kaynaginda, tarif edilir. Herhangi bir geleneksel vasatin veya ajanin etken madde ile uyumlu olmasi disinda, mevcut bulusun farmasötik bilesimlerinde bunlarin kullanimi tasarlanir. Ek etken maddeler de bilesimlere katilabilir.
Bulus ayrica, ilaveten en az bir farmasötik olarak aktif bilesik, örnegin, anti-kanser ilaçlarini, platinyum koordinasyon bilesiklerini, taksan bilesiklerini, kampotesin bilesiklerini, anti-tümör vinka alkaloidlerini, anti-tümör nükleosid türevlerini, nitrojen mustardini veya nitrozoüre alkilleme ajanlarini, anti-tümör antrasiklin türevlerini, trastuzumabi ve anti-tümör podofillotoksin türevlerini, Quillaja saponaria Molina'yi ve bunun alt-fragmanlarini, antikorlar veya monoklonal antikorlar için reseptörleri, örnegin, Fc reseptörlerini Staphy/ococcus aureus'un Protein A'nin DD'sini, kanseri tedavi etmek için ajanlari, örnegin, Sitarabinden, Daunorubisinden, Paklitakselden, Dosetakselden, Kabazitakselden, Torikselden ve Trabektidinden olusan gruptan seçilen ajanlari, içeren bir farmasötik bilesim de içerir, bu aktif bilesim nano-parçaciga entegre edilebilir veya bilesim ile karistirilabilir.
Ilave anti-kanser ajanlari tercihen, platinyum koordinasyon bilesikleri, taksan bilesikleri, kamptotesin bilesikleri, anti-tümör vinka alkaloidleri, anti-tümör nükleosid türevleri, nitrojen mustardi veya nitrozoüre alkilleme ajanlari, anti-tümör antrasiklin türevleri, trastuzumab ve anti-türevleri podofillotoksin türevleri olarak adlandirilanlar arasindan seçilir. herhangi bir tümör hücresi büyümesini inhibe eden platinyum koordinasyon bilesigini göstermesi için kullanilir. Tercih edilen platinyum koordinasyon bilesikleri, sisplatini, karboplatini, kloro (dietilentriamin)-platinyum (Il) klorürü; dikloro (ethilendiamin)- platinyum (II)`yi; diamin (1,1-siklobütandikarboksilat0)-platinyum (Il)'yi (karboplatin); spiroplatini; iproplatini; diamin (2-etilmalonato)-platinyum (ll)'yi; (1 ,2- diaminosiklohekzan) malonatoplatinyum (Il)'yi; (4-karb0ksiftal0) (1 ,2- diaminosiklohekzan) platinyum (ll)'yi; (1,2-diaminosiklohekzan)-(izositrato) platinyum (II)'yi; (1 ,2-diaminosiklohekzan)-cis-(pirüvato) platinyum (Il)'yi ve (1 ,2- diaminosiklohekzan)- oksalato-platinyum (ll)'yi; ormaplatini ve tetraplatini içerir.
Sisplatin, örnegin, su, steril salin veya baska uygun vehikül ile rekonstitüsyon için bir toz olarak, Bristol Myers Squibb Corporation firmasindan Platinol ticari adi altinda, piyasada satilir. Diger platinyum koordinasyon bilesikleri ve bunlarin farmasötik bilesimleri piyasada satilir ve/veya geleneksel teknikler ile hazirlanabilir.
Taksan bilesigi, Bristol Myers Squibb firmasi tarafindan Taxol ticari adi altinda satilanlar olabilir ve dosetaksel Rhone-Poulenc Rorer firmasi tarafindan Taxotere ticari adi altinda piyasada satilir. Her iki bilesik ve diger taksan bilesikleri geleneksel yollarla, bunlara benzer prosesler ile hazirlanabilir. Sanofi Pasteur firmasinda mevcut Carbazitaxel.
Kamptotesin bilesikleri, irinotekani ve topotekani içerir. Irinotekan, örnegin, Rhone- Poulenc Rorer firmasi tarafindan Campto ticari adi altinda, piyasada satilir ve örnegin, 137145 Numarali Avrupa Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Topotekan, örnegin, SmithKline Beecham firmasi tarafindan Hycamtin ticari adi altinda, piyasada satilir ve örnegin, 321122 Numarali Avrupa Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Diger kamptotesin bilesikleri, geleneksel yollarla, örnegin, irinotekan ve topotekan için yukarida tarif edilenlere benzer prosesler ile, hazirlanabilir.
Anti-tümör vinka alkaloidleri, yukarida ifade edilen vinblastini, vinkristini ve vinorelbini içerir. Vinblastin, örnegin, Eli Lilly and C0 firmasi tarafindan Velban ticari adi altinda enjeksiyon için sülfat tuzu olarak, piyasada satilir ve örnegin, 2124023 Numarali Alman Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Vinkristin, örnegin, Eli Lilly and Co firmasi tarafindan Oncovin ticari adi altinda enjeksiyon için sülfat tuzu olarak, piyasada satilir ve örnegin, 2124023 Numarali Alman Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Vinorelbin, örnegin, Glaxo Wellcome firmasi tarafindan Navelbine ticari adi altinda enjeksiyon için tartrat tuzu olarak, piyasada satilir ve örnegin, 4307100 Numarali ABD Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Diger anti-tümör vinka alkaloidleri, geleneksel yollarla, örnegin, vinoblastin, vinkristin ve vinorelbin için yukarida tarif edilenlere benzer Anti-tümör nükleosid türevleri, yukarida ifade edilen 5-fl0r0urasili, gemsitabini ve kapesitabini içerir. 5-Florourasil genis bir sekilde piyasada satilir ve örnegin, 2802005 Numarali ABD ABD Patenti'nde tarif edildigi sekilde, hazirlanabilir. Gemsitabin, örnegin, Eli Lilly firmasi tarafindan Gemzar ticari adi altinda, piyasada satilir ve örnegin, 122707 Numarali Avrupa Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir.
Kapesitabin, örnegin, Hoffman-La Roche firmasi tarafindan Xeloda ticari adi altinda, piyasada satilir ve örnegin, 698611 Numarali Avrupa Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Diger anti-tümör nükleosid türevleri, geleneksel yollarla, örnegin, kapesitabin ve gemsitabin için yukarida tarif edilenlere benzer prosesler ile, hazirlanabilir.
Nitrojen mustard bilesikleri, siklofosfamidi ve klorambusili içerir. Siklofosfamid, örnegin, Bristol-Myers Squibb firmasi tarafindan Cytoxan ticari adi altinda, piyasada satilir ve örnegin, 1235022 Numarali Ingiltere Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Klorambusil, örnegin, Glaxo Welcome firmasi tarafindan Leukeran ticari adi altinda, piyasada satilir ve örnegin, 3046301 Numarali ABD Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Bulusa uygun sekilde kullanim için tercih edilen nitrozoüre bilesikleri, yukarida ifade edilen karmustini ve lomustini içerir. Karmustin, örnegin, Bristol-Myers Squibb firmasi tarafindan BiCNU ticari adi altinda, piyasada satilir ve örnegin, 902015 Numarali Avrupa Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Lomustin, örnegin, Bristol-Myers Squibb firmasi tarafindan CeeNU ticari adi altinda, piyasada satilir ve örnegin, 4377687 Numarali ABD Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer Anti-tümör antrasiklin türevleri, yukarida tarif edilen daunorubisini, doksorubisini ve idarubisini içerir. Daunorubisin, örnegin, Bedford Laboratories firmasi tarafindan Cerubidine ticari adi altinda hidroklorür tuzu olarak, piyasada satilir ve örnegin, 4020270 Numarali ABD Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir.
Doksorubisin, örnegin, Astra firmasi tarafindan hidroklorür tuzu olarak, piyasada satilir ve örnegin, 3803124 Numarali ABD Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. idarubisin, örnegin, Pharmacia & Upjohn firmasi tarafindan hidroklorür tuzu olarak, piyasada satilir ve örnegin, 4046878 Numarali ABD Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Diger anti-tümör antrasiklin türevleri, geleneksel yollarla, örnegin, daunorubisin, doksorubisin ve idarubisin için yukarida tarif edilenlere benzer Trastuzumab, örnegin, Genentech firmasi tarafindan Herceptin ticari adi altinda, piyasada satilir ve 5821337 Numarali ABD Patent Spesifikasyonu'nda veya WO edilebilir.
Anti-tümör anti-tümör podofillotoksin türevleri, etoposidi ve teniposidi içerir. Etoposid, örnegin, Bristol-Myers Squibb firmasi tarafindan VePesid ticari adi altinda, piyasada satilir ve örnegin, 111058 Numarali Avrupa Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Teniposid, örnegin, Bristol- Myers Squibb firmasi tarafindan Vumon ticari adi altinda, piyasada satilir ve örnegin, 93/02094 Numarali PCT Patent Spesifikasyonu'nda tarif edildigi sekilde veya bunlara benzer prosesler ile, hazirlanabilir. Diger anti-tümör podofillotoksin türevleri, geleneksel yollarla, örnegin, etoposid ve teniposid için yukarida tarif edilenlere benzer prosesler ile, hazirlanabilir.
Ham formdaki saponinler veya bunlarin fraksiyonlari, örnegin, yukarida bahsedilenler, anti-kanserli ajanlar olarak, ayrica, serbest formda, yani, Iipit içeren parçaciklara entegre edilmemis hâlde, de kullanilabilir. Bu anti-kanser bilesikleri, Iipit içeren parçaciklar, örnegin, Iipozomlar, iscom ve/veya iscom matriksi ve posintro'lar, ile karistirilabilir, bunlara kuple edilebilir veya bunlara entegre edilebilir.
Bu, bunlar entegre edildiginde hidrofobik oldugunda, uygundur. Hidrofobik olmadiginda, gruplar EP 242380'de tarif edildigi üzere bunlara kuple edilebilir.
Hidrofobik-olmayan bilesikler ve özellikle proteinler veya peptitler hidrofobik gruplari bunlara kuple etme ile hidrofobik hâle getirilebilir.
Hidrofobik-olmayan bilesiklere kuple edilebilen hidrofobik grup, tercihen 1, 2, 3, 4, 5, 6, karbon atomuna sahip olan, düz, dallanmis, doymus veya doymamis alifatik zincirlerdir veya hidrofobik amino asitlerdir veya peptitlerdir veya diger hidrofobik yapilardir, örnegin, steroidlerdir. Hidrofobik yapinin uzunlugu, proteinin boyutuna ve dogasina uyarlanir. Bir örnek olarak, 10-15 amino asidi olan bir peptidin (sap hastaligi virüsünün) uygun sekilde, amino veya karboksi ucu ucunda iki tirozin ile yapildigindan bahsedilebilir. 70.000 daltonluk bir moleküler agirligi olan bir protein, yaklasik 20 hidrofobik amino asit talep eder. Testler ampirik olarak yapilir. Böylelikle, bir kisi özellikle, özel olarak Trp, Ile, Phe, Pro, Tyr, Leu, Val, özel olarak Tyr arasindan seçilen, 1 ila 20 amino asidi, tercihen 1, 2, 3, 4, 5 amino asidi olan peptitleri; kolesterol türevlerini, örnegin, kolin asidi, ursodesoksikolin asidi, kullanir.
Bu hidrofobik gruplarin, hidrofobik-olmayan proteine veya bilesiklere kuple edilebilen bir gruba, örnegin, karboksiI-, amin0-, disüIfIt-, hidroksiI-, sülfohidril- ve karbonil grubuna, örnegin, aldehit gruplarina, baglanmasi gerekir.
Kuple edilebilen hidrofobik gruplar olarak, tercihen metanin, etanin, propanin, bütanin, hekzanin, heptanin, oktanin karboksil, aldehit, amino, hidroksil ve disülfit türevleri ve Cys, Asp, Glu, Lys, tercihen oktanal ve Tyr.Tyr.Tyr-Cys,-Asp veya -Glu içeren peptitler seçilir. Kuple edilebilen bir grup tasiyan hidrofobik gruplarin, hangi maddenin çözünecegine bagli olarak, örnegin, yukarida bahsedilen çözündürme ajanlarinin ve deterjanlarin yardimiyla, su veya hidroklorik asit, asetik asit, hacim olarak %67'lik asetik asit, kostik Iikör, amonyak ile çözünmesi gerekir. Akabinde, pH madde çökelmesi olmadan nötral yöne ayarlanir; burada buna hidrofobik grubun kuple edilecegi proteini denatüre eden bir pH degerinin elde edilmediginden emin olunur. Lipit çözünürlestirmeyi arttirabilir.
Hidrofobik molekül, 10:1 ila 0,1:1 araliginda, tercihen 1:1, olan molar oranda hidrofobik- olmayan bilesige eklenebilir.
Kuplaj molekülü olarak bir karboksil grubu tasiyan hidrofobik gruplar, suda-çözünebilen karbodiimidler veya kompozit anhidritler yoluyla proteine kuple edilebilir. Birinci durumda, karboksil grubu, karbodiimid ile pH 5'te aktive edilir ve bir yüksek fosfat içerigi olan tampon pH 8 içinde çözünmüs protein ile karistirilir. Ikinci durumda, karboksi bilesigi dioksan veya asetonitril içinde Trietilamin varliginda izobütilkloroformat ile reaksiyona sokulur ve elde edilen anhidrit pH 8 ila 9'de proteine eklenir. Karboksil grubunu hidrazin ile, protein içindeki periodat-oksitlenmis seker birimlerindeki aldehitler ve ketonlar ile birlikte hidrazon baglari veren hidrazide dönüstürmek de mümkündür.
Nitröz asitli amino gruplari bir düsük sicaklikta, Tyr, His ve Lys ile azo baglari veren diazonyum tuzlarina dönüstürülebilir. Süksinik anhidritli hidroksil gruplari, karboksil gruplari olarak kuple edilebilen hemisüksinat türevlerine dönüstürülebilir. Aldehit gruplari protein içindeki amino gruplari ile bir Schiff bazi vermesi için reaksiyona sokulabilir. Bir kaç kuplaj grubu ve yöntemi tarif edilir 6' 7' 8.
Alinmis hidrofobik gruplarina sahip olan bu sekilde üretilmis proteinler, peptitler veya bilesikler akabinde, a)'da tarif edildigi üzere, glikosit ile kompleks-baglar olusturur, ancak burada hücre fragmanlarini uzaklastirmak için saflastirma adimlari çikarilabilir. Çevrelenmis hidrofobik gruplara sahip olan hidrofilik proteinler, proteinleri nazik bir sekilde, yani, yaklasik 2,5'Iik bir düsük pH'ta, 3 M'Iik üre ile 70°C'nin üstündeki bir yüksek sicaklikta, denatüre etme yoluyla hidrofobik gruplari erisilebilir yapma ile hidrofobik hâle getirilebilir. Bu tarz proteinler, immünoglobülinler, örnegin, lgG, IgM, lgA, lgD ve IgE, olabilir. immünoglobülinler, antidiyotipik antikorlar olarak kullanilabilir.
Proteinler, (b)'de tarif edildigi sekilde saflastirilmis proteinler olarak elde edilir ve akabinde (a)'da tarif edildigi üzere glikoside kompleks-baglar olusturur, hücre fragmanlarini uzaklastirmak için saflastirma adimlari çikarilmistir.
Hidrofobik veya amfipatik molekül ayrica, fosfolipitlerden, örnegin, gliserol fosfatlarin türevlerinden, örnegin, fosfatidik asitlerin türevlerinden, yani, Iesitinden, sefalinden, spingosin türevlerinden, fosfatidiletanolaminden, fofatidilserinden, fosfatidil kolinden, de seçilebilir.
Bir antijenden, bir adjuvandan, bir hedefleme molekülünden, bir farmasötik bilesikten ve bir nutrimentten seçilebilen, yukarida bahsedilen tüm amfipatik ve hidrofobik moleküller nano-parçaciga entegre edilebilir veya bir bilesim içinde bununla karistirilabilir.
Farmasötik bilesim, örn., gelisim altindaki bir asi ile kombinasyon hâlinde kullanim için, bir mevsimsel influenza virüsü asisi ile kombinasyon hâlinde kullanim için, bir pandemik influenza asisi ile kombinasyon hâlinde kullanim için veya bir acil asisi, örnegin, bir biyolojik silaha karsi bir asi, ile kombinasyon hâlinde kullanim için, bir adjuvan olarak kullanilabilir. Böylelikle, bulus ayrica, yukarida bahsedildigi üzere GS parçaciklari içeren bir farmasötik asi formülasyonu ile de ilgilidir.
Bulus ayrica, bir organizma tarafindan neden olunan veya komplike hâle getirilen bir hastaligi tedavi etmek veya önlemek için, buna ihtiyaci olan bir kisiye yani bir süjeye bulusa göre bir farmasötik asi formülasyonunu uygulamayi içeren, bir yöntem ile de ilaveten, bulus kanserin tedavisi için, buna ihtiyaci olan bir hastaya bulusa göre nano- parçaciklarin veya bir bilesimin bir farmasötik olarak etkili miktarini uygulamayi içeren, bir yöntem ile ilgilidir. Bir uygulamaya göre, söz konusu kanser Iösemidir.
Farmasötik bilesimler, bir steril enjektabl sulu veya oleajinöz süspansiyon formunda olabilir. Bu süspansiyon, yukarida bahsedilmis olan bu uygun dispersiyon veya islatma ajanlari ve süspanse etme ajanlari kullanilarak bilinen teknige göre formüle edilebilir.
Steril enjektabl preparasyon ayrica, bir toksik-olmayan parenteral olarak kabul edilebilir diluent veya çözücü içinde, örnegin, 1,3-bütandiol içinde bir çözelti olarak, bir steril enjektabl çözelti veya süspansiyon da olabilir. Su, Ringer çözeltisi ve izotonik sodyum klorür çözeltisi kullanilabilen kabul edilebilir vehiküller ve çözücüler arasindadir. Buna ek olarak, steril, fikse edilmis sivi yaglar bir çözücü veya süspanse etme vasati olarak geleneksel olarak kullanilir. Bu amaçla, sentetik mono- veya digliseritleri içeren herhangi bir orta-siddette fikse edilmis sivi yag kullanilabilir. Buna ek olarak, yag asitleri, örnegin, oleik asit, enjektabllarin preparasyonunda kullanim alani bulur. Çözeltiler veya süspansiyonlar ayrica, asagidaki adjuvanlarin en az birini de içerebilir: steril diluentler, örnegin, enjeksiyonluk su, salin, fikse edilmis sivi yaglar, polietilen glikoller, gliserol, propilen glikol veya diger sentetik çözücüler, antibakteriyel ajanlar, örnegin, benzil alkol veya metil paraben, antioksidanlar, örnegin, askorbik asit veya sodyum bisülfit, selatlama ajanlari, örnegin, etilen diamin tetraasetik asit, tamponlar, örnegin, asetatlar, sitratlar veya fosfatlar ve tonisitenin ayarlanmasi için ajanlar, örnegin, sodyum klorür veya dekstroz. Parenteral preparasyon ampuller, tek kullanimlik ejektörler veya camdan veya plastikten yapilan çoklu dozaj kanallari içinde çevrelenebilir.
Genel formülün bilesikleri parenteral olarak uygulanabilir. Burada kullanildigi sekliyle, parenteral terimi, subkütan enjeksiyonlari, intravenöz, intramüsküler, infüzyon tekniklerinin intradermal enjeksiyonunu, elektroporasyonu (EP), ignesiz enjeksiyon için - jet enjeksiyonunu, gen tabancasini, biljektörü ayni zamanda oral, aerosol uygulamalari içerir. Oral kullanim için, örn., özel olarak intestinal yolda mukozal immünitenin indüksiyonu için ancak ayni zamanda potansiyel olarak ayrica kanserler için, özellikle B-hücreli Ienfoma için, yararli tedavi etme-hücreleri olan B-hücrelerini hedeflemek için bir özellige sahip olan protein A kaynakli bilesik CTA1 DD Eliasson et al.,9 tarafindan tarif edildigi üzere kullanilabilir.
Genel olarak, bu bulusun Iipit içeren parçaciklari bir farmasötik olarak etkili miktarda uygulanir. Parçaciklarin gerçekten uygulanan miktari tipik olarak, tedavi edilecek olan rahatsizligi, seçilen uygulama yolunu, uygulanan gerçek bilesigi, münferit hastanin yasini, agirligini ve yanitini, hastanin semptomlarinin siddetini ve benzerlerini içeren, ilgili durumlar isiginda, bir hekim tarafindan belirlenecektir.
Bulusa göre nano-parçacik herhangi bir mikroorganizmaya karsi herhangi bir asi içinde bir adjuvan olarak kullanilabilir. Bu herhangi bir hayvan, örnegin, kuslar, memeliler, örnegin, insanlar, evcil hayvanlar, örnegin, kediler, köpekler, koyunlar, keçiler, domuzlar, sigirlar ve atlar, üzerinde kullanilabilir. Bir uygulamaya göre, bulus hayvanlarda streptokoklara ve atlarda influenzaya karsi bir asida adjuvan olarak kullanilir.
Insan kullanimi için dozlar, dâhil edilen diger bilesiklere göre çesitlilik gösterebilir.
Tedavinin süreci bakis açisiyla, doz bir günde < 50 ug ila 1 mg veya daha fazla araliginda olabilir.
Bulus ayrica, bulusa göre kanserin tedavisi için asagidakileri içeren yöntemin bir münferit hastaya uygulanabilirligini degerlendirmek için bir yöntem ile de ilgilidir: o söz konusu hastada kanser hücrelerini 1 ila 7 arasindaki istemlerin herhangi birine göre nano-parçaciklar veya istem 8'e veya 9'a göre bir farmasötik bilesim ile in vitro temas ettirme; . söz konusu nano-parçaciklarin veya farmasötik bilesimin söz konusu kanser hücreleri üzerindeki terapötik etkisinin göstergesi olan en az bir etkiyi ölçme; burada nano-parçaciklar veya farmasötik bilesim söz konusu kanser hücreleri üzerinde terapötik etkinin göstergesi olan bir anlamli etki gösterdiginde, istem 10'a veya 11'e göre yöntem söz konusu münferit hastaya uygulanabilir olarak degerlendirilir.
Terapötik etkinin göstergesi, hücre siklusunda ve replikasyonunda kontrol noktalarindan geçisi tesvik eden siklin bagimli kinazlar (CDK'Ier), siklinler veya diger moleküller (CDK2, CDKG veya Siklin D1) olarak, hücre siklusu regülasyonunda öneme sahip olan genlerin asagi yönde regülasyonu veya timidin kinazinin (TK) asagi-yönde regülasyonu ve ayrica hücre siklusundan çikisi da gösteren lL-8, FOXCt ve HDACS olarak, hücre farklilasmasini kolaylastiran moleküllerin yukari-yönde regülasyonu ile okunabilir. Regülasyon faktörleri örneklerdir ve burada daha fazlasi vardir, yani örnekler sinirlandirmalar ile sonuçlanmaz.
Bulus ayrica fosfolipitsiz nano-parçaciklar üretmek için asagidaki adimlari içeren bir yöntem ile de ilgilidir: a) bir hidrofobik yüzey veya Iipozomlarin bir süspansiyonunu saglama; b) hidrofobik yüzeyi veya Iipozomlarin süspansiyonunu bir organik çözücü veya deterjan içinde monomerler olarak çözünmüs bir sterol, tercihen, kolesterol, çözeltisi ile temas ettirme; c) yüzey üzerinde bir sterol membran olusturan çözücüyü veya deterjani uzaklastirma; d) QuiI/aja saponin misellerinin bir sulu çözeltisini saglama; e) saponin miseller içeren sulu çözeltiyi sterol membrana ekleme, böylece saponinler ve steroller arasinda bir kompleks olusturulur ve sulu çözelti içinde süspanse edilir.
Hidrofobik yüzey, bir kavanoz, varil, bir kaç tabakali yüzeyler, bilyeler, örn., Iateks bilyeler, aglar veya üç boyutlu aglar veya poröz materyal, Içindeki bir yüzey olabilir.Bu ayrica, Iipit membrana (membranlara) entegre edilmis bilesenler ile bir Iipozom da olabilir.
Lipozom, çesitli tekniklere göre ve (örn., Review Liposomes Preparation Methods Mohammad Riaz Faculty of Pharmacy, University of the Punjab, Lahore, Pakistan kaynaginda) tarif edildigi üzere farkli bilesimler ile yapilabilir. Bu ayrica, Iipozom membrana entegre edilmis virüs proteinleri içeren bir virosom olarak da yapilabilir.
Lipozomlar bir sulu çözelti olabilir. Cihazlar, örn., kolonlar içinde dolgulu olabilir.
Saponinler ve steroller nano-parçaciklar için yukarida bahsedilenler olabilir. Çözücü, httpzllen.wikipedia.orq/wiki/Orqanic solvents or deterqent internet sitesinde bulunabildigi üzere herhangi bir çözücü, tercihen kloroform, etanol veya asetonitril, olabilir. Çözünün dogasi, en.wikipedia.org/wiki/organic solvents internet sitesinde tarif edilir. Çözünün seçimi, çözünecek olan molekülün dogasina baglidir. Farkli çözücü tipleri ana olarak polariteye veya polarite-olmamasina göre siniflandirilir. M olmayan çözücüler, örn., hekzandir, kloroformdur ve dietil eterdir. Buharlastirma ile uzaklastirmayi kolaylastiran 35 ila 65°C araliginda kaynama noktalarina sahip olan bu bahsedilenler, buharlastirilabildiginden kullanislidir. Polaraprotik çözücüler, örn., dimetil sülfoksit, asetonitril, siklikla farmasötik moleküllerin çözünürlestirmesi için kullanilir. Bu düsük kaynama noktasina sahip oldugundan, son bahsedilen ile ilgilenilir. Po_lar !M çözücüler ayrica özel olarak, diger çözücüler ile kombinasyon hâlinde de kullanislidir.
Etanol, metanol düsük kaynama noktasina sahiptir ve asetik asit yüksek kaynama noktasina sahiptir. Düsük kaynama noktasi buharlastirma teknigi için özellikle önemlidir. Çözünürlestirme, iki veya daha fazla çözücü ile yapilabilir. Bahsedilen çözücüler örneklerdir ve G3 formülasyonlari olusturmak amaciyla inovasyonda kullanim için hatta belki de daha çok arzu edilen özelliklere sahip olan çok daha fazlasi Kullanilabilenlerin örnekleri, iyonik-olmayan, iyonik, yani, katyonik veya anyonik veya Zwitter-iyonik deterjan, örnegin, Zwittergent veya fazla miktarda kullanilan gallik asit temelli deterjan, olaraktir. Uygun iyonik-olmayan deterjanlarin tipik örnekleri, N- alkanoiI-N-alkiI-glukaminlerdir, alifatik veya aralilfatik asitler ile poliglikol esterleridir ve poliglikol eterlerdir ve alkollerdir. Bunlarin örnekleri, Cn olarak kisaltilan, Örn., alkil grubu ve polioksietilen zinciri arasinda bir fenil halkasi içeren alkil-fenil polioksietilen eterler, Cn phi olarak kisaltilan, Örn., Triton X-100=terCg E96 (polietilen oksidin oktilfenoleteri), açilpolioksietilen esterler: açilpolioksietilen sorbitan esterler, Cn sorbitan olarak kisaltilan, Örn., örn., Tween 20, Tween 80, .beta.-D-alkilglukositler, örn., .beta- D-oktilglukosit, CnH2n+1(OCH2CH2)xOH genel formülüne sahip olan alkilpolioksietilen eterlerdir. Uygun iyonik deterjanlarin tipik örnekleri, gaIIik asit deterjanlaridir, mesela, örn., kolik asit, desoksikolattir, kolattir ve CTAB'dir (setiltriamonyum bromürdür). Hatta konjuge edilmis deterjanlar, mesela, Örn., taurodeoksikolat, glikodeoksikolat ve glikokolat, kullanilabilir. Diger olasi çözündürme ajanlari, Iizolesitindir ve sentetik Diyaliz yöntemi kullanildiginda, deterjanlar çok uzun olmayan süre boyunca diyalize edilebilir olmalidir.
Bazi yüzey aktif maddeler matriks olusumunu büyük ölçüde kolaylastirir. Bunlar, bir polar bas grubu ve bir polar-olmayan alifatik zinciri olan içsel biyolojik membran lipitlerini, örn., fosfatidil kolini (negatif yüklü) ve fosfatidil etanolamini (pozitif yüklü), Bir uygulamaya göre, deterjan, Triton-X-100, Tween-20, Nonidet, NP-40, deoksikolat, MEGA-10 ve oktilglikosit olabilir. MEGA-10 ve oktilglikosit diyaliz ile uzaklastirilabilir.
Digerleri için, bahsedildigi üzere diger teknolojiler, örn., sentrifügasyon yöntemi ve kolon kromatografisi, kullanilabilir. Çözünebilen ajan, düsük kaynama noktasi olan bir organik çözücü kullanilarak buharlastirma ile veya diyaliz ile veya 0 109 942 EPC-patentinde tarif edildigi üzere diyaliz, kromatografi, filtrasyon veya tegetsel akis ile uzaklastirilabilir.
Saponin misellerinin sulu çözeltisi, üreticiden aktarildigi sekilde bir dondurma veya sprey ile kurutulmus tozu ekleme ile elde edilir. Saponin veya saponin fraksiyonu normalde, stok çözeltisi, örn., bu konsantrasyon ile sinirli kalmamak kaydiyla, 10 mg/ml su, olarak tutulur ve CMC'nin, yani, kritik misel konsantrasyonunun, örn., 30 mg/Iitrenin, tam rakam Quillaja ürününe baglidir, üstündeki bir nihai konsantrasyonda Iipit membranini çevreleyen suya eklenir. Saponinler, Quillaja Powder Extract olarak elde edilir ve tam Quillaja ekstraktindan (Berghausen, USA), QuiI/aja Ultra Powder QP UF 300`den, Quillaja Ultra Powder QP UF 1000'den veya Vax-Sap bir fraksiyone- edilmemis Quillaja saponin ürününden, QHA ve QHC fraksiyonlarindan (üçünün tümü Natural Responses, Chile) veya Prodalysa,Santiago, Chile firmasindan elde edilebilir.
Bulus, bir yeni üretim yöntemi kullanir, burada bir hidrofobik yüzeye tutturulmus sterolün bir yapay membrani a-c) adimlarinda üretilir. Bir Quillaja saponin ürününün bir suda çözünebilen miseli ve Quillaja miseli ve yapay membran içindeki bir bilesen arasindaki bir kimyasal (kovalent) baglama, yapay membran bilesenlerini bir inovatif suda çözünebilen nano-partikülat kompleksi, yani, G3, olarak bir suda çözünebilen kompleks hâlinde çikarir. Bu kompleks, su fazi içinde hidrofilik parçalari tutan ve baglayan bir kimyasal (kovalent) baglama ile bir birlikte tutulur ve bilesenler arasindaki hidrofobik etkilesimler kompleksin merkezinde kalir. Membran, bir deterjan veya bir organik çözücü olabilen bir çözünebilen ajan ile bir organik çözeltiden olusturulur.
Yapay membrana katilacak olan hidrofobik ve amfipatik moleküller, adim b)'de sterol ile birlikte organik çözücü veya deterjan ile çözündürülür ve organik çözücünün buharlastirilmasi ile su-fazina transfer edilir. Çözücüye bagli olarak, bu kaynama noktasi suyunkinin altinda oldugunda buharlastirma ile veya diyaliz ile veya ISCOM olusumu için tarif edilen benzer teknikler ile uzaklastirilir. Böylelikle, çözücünün uzaklastirilmasi parçacigin olusumunun bir parçasi degildir, ancak parçaciklarin olusumunun bir parçasi olmayan yapay membranin oluSumu içindir. Yapay membranin olusumunu takiben, burada yapay membrani çevreleyen su oldugu tasarlanir. Bu su fazi içine, su içinde süspanse edilmis (çözünmüs) Quillaja miselleri eklenir ve yapay membran su fazi içinde ekstrakte edilir ve Quillaja miselinin yeni G3-formülasyonuna yeniden-organizasyonu. Bilesim, yapay membranin su içindeki bir partikülat süspansiyonu içine tamamen çözünmesi için kolaylikla ayarlanabilir. Bilesim, bir kovalent baglamanin dâhil edildigi, böylece bir inovatif parçacigin olusturuldugu yapim bakis açisiyla bir miselden farklilik gösterir.
Adimlar f)`de ve g)'de, Quillaja ürününün suda çözünebilen misel formunun, bir su fazi içinde nihai ürünü almak için etkilesime girmesine izin verilir. Bu adimdaki birinci etkilesim, Quillaja miseli ve yapay membran içinde sterol arasindaki bir kovalent baglamadir ve ikinci etkilesim, Quillaja triterpenoid iskeleti ve sterol arasindadir. Uygun orantilar altinda, yapay membran içindeki tüm bilesenler suda çözünebilen Qui/Iaja miseline katilir, bu boyut açisindan 17 nm ila en fazla 40 nm araliginda çesitlilik gösterecek olan bir yeni nano-parçacik olusturur. Lipitler, örn., bir fosfolipit yapay membran içinde bulundugunda, daha büyük bir boyut elde edilir. Örnekler 2, 4, 9, 14, ve 16, DT'yi, busülfani, roskovitini, vivolux 40'i ve D3 vitaminini içeren çesitli Iipofilik molekül çesitlilerinin bulusa göre katildigini gösterir. lscom matriksi, adim b)'de sterol içeren süspansiyona en az bir fosfolipit ekleme yoluyla yeni yöntem ile üretilebilir.
Fosfolipit, gliserol fosfatlarinin türevlerinden, örnegin, fosfatidik asitlerin türevlerinden, atomuna sahip olan spingosin türevlerinden, fosfatidiletanolaminden, fofatidilserinden, fosfatidil kolinden, seçilebilir.
Hidrofobik bilesenler, adim b)'de, yani ayni zamanda lipitleri, sterolleri içeren yapay membrana katilabilir.
Adim d)'de, suda çözünebilen formdaki saponin, yani, misel formu yapay membrani kaplayan su fazina eklenir.
Bulusa ait nano-parçacik, üç bilesen, yani, bir Quillaja saponinini, kolesterol ve üçüncü bilesen, bir fosfolipit, örn., fosfatidil kolin, içeren ISCOM parçacik olusumunun aksine bulusa göre nano-parçacik iki bilesene, yani, bir Quillaja saponinine, kolesterole, dayandigi için, üretmek daha basit ve daha ekonomik oldugundan, ISCOM matriksinin yerini alir. Qui/laja bileseninin (bilesenlerinin) deterjan ile veya bir organik çözücü ile çözündürülmemesi gerekir. Bulusa göre yeni üretim teknigi güçlüdür ve duyarli dengenin üstesinden gelinir. Böylelikle, yeni yöntem, bu güne kadar gelistirilmis olan yöntemler bu tarz bilesiklerin su içinde spontan bir sekilde kararli kompleksler (kendi kendine birlesme) örn., miseller, olusturmasina ve bundan dolayi, örn., hidrofobik etkilesim ile, ISCOM matriks formülasyonuna entegre edilmemis olmasina, yönelik güçlü egilimine izin verdiginden, bir dördüncü, besinci veya daha fazla, yani, baska hidrofobik veya amfipatik molekülün, entegrasyonu için ISCOM matriks teknolojilerine kiyasla daha uygundur. Böylelikle, ISCOM matriks teknolojisi bir genel aktarim sistemi olarak gelistirilmek için dezavantajlara sahiptir, ancak bulus bu tarz dezavantajlara sahip degildir.
Burada bahsedilen tüm yayin burada referans olarak eklenir. Bulus simdi asagidaki sinirlayici-olmayan örnekler ile tarif edilecektir. öRNEKLER Materyaller ve Yöntemler Kimyasallar ve bilesikler Aldrich Sweden AB, Stockholm, Sweden, firmasindan satin alinmistir. Quaillaja saponininin A Fraksiyonu (QHA) ve C Fraksiyonu'nun (QHC) tümü ISCONOVA AB, Uppsala, Sweden, firmasindan satin alinmistir. Diterpenoid (DT), yani, Stevia, Prodalysa Ltda., Chile, firmasindan satin alinmistir. D3 Vitamini, Miva Nutri-molecular Research Limited, Shanghai, China, firmasindan ticari olarak elde edilmistir.
Hücre hatlari Insan makrofaj (Mo) hücre hatti U937 (biyolojik arastirmalarda ve kanser arastirmalarinda bir model hücre hatti olarak siklikla kullanilir) ve insan Akut Miyeloid Lösemi (AML) hücre hatlariHL-GO kültür vasati RPMI-164O içinde büyütülmüstür. Insan içinde kültürlenmistir. Hücrelerin tümü Uppsala Üniversitesi klinik farmakoloji bölümü tarafindan nezaketle saglanmistir. Tüm vasatlar, %10 isi ile inaktive edilmis fetal buzagi serumu (FCS), 2 mM glutamin, 100 ug/ml streptomisin ve 100 lE/ml penisilin (tümü Sigma Aldrich Co, St Louis, M0, USA) ile takviye edilmistir. Tüm hücre hatlari, Insan Dentritik hücreleri (DC 'Ier) Immatür insan DC'Ieri, 3H Biomedical, Uppsala, Sweden, firmasindan satin alinmistir.
In vitro analiz prosedürü plakalar içindeki hücreler, %5 COz içeren nemlendirilmis atmosfer içinde 72 saat boyunca 37°C'de QHC'nin ayni miktarlarini içeren seri seyreltilmis 83'e, KGI'ya ve Quillaja saponin ürünlerine maruz birakilmistir. U937 hücreleri Için, hücrelerin bir kümesi, formülasyonlarin hücre öldürme etkisini ölçmek için florometrik mikro-kültür sitotoksisite analizi (FMCA) için dogrudan kullanilmistir. Hücrelerin diger kümesi için, sitokin lL-8 belirlemesi için 150 uI/kuyucuk süpernatant toplanmistir.
Kanser hücresi öldürme etkisinin ölçülmesi FMCA yöntemi, floresein diasetatin (FDA) aynen plazma membranlari olan hücreler tarafindan floreseine hidrolizinden üretilen flüoresans ölçümüne dayanir. 3 gün boyunca yukarida bahsedilen inkübasyondan sonra, vasat aspirasyonu ile uzaklastirilmistir. PBS ile bir yikamadan sonra, bir fizyolojik tampon (10 ug/ml) içinde çözünmüs 100 pllkuyucuk FDA eklenmistir. Plakalar 45 dakika boyunca inkübe edilmistir ve her bir kuyucuktan üretilen flüoresans bir 96-kuyucuklu tarama florometresi içinde ölçülmüstür. Flüoresans kuyucuk içindeki aynen hücrelerin sayisi ile orantilidir.
Bir basarili analiz için kalite kriterleri. kontrol kuyucuklarinda ortalama kör degerin bes katindan daha fazla olan bir flüoresans sinyalini, kontrol kuyucuklarinda %30'dan daha az olan bir ortalama varyasyon kat sayisini (CV) içermistir.
G3 formülasyonlari ile stimüle edilmis U937 hücreleri için sitokin lL-8 belirlemesi Insan IL-8'inin saptanmasi için ELIZA, üreticinin talimatina göre yürütülmüstür (Human olarak, insan IL-8'inin 50 pl rekonstitüye edilmis standartlari ve süpernatantlar üç kopya halindeki kuyucuklarda her bir kuyucuga eklenmistir ve plakalara bir kaç kere nazikçe vurma ile iyice karistirilmistir. Plakalar akabinde yapiskan plaka kapaklari ile kapatilmistir ve oda sicakliginda (RT, 20-25°C) bir saat boyunca inkübe edilmistir.
Inkübasyondan sonra, plakalar Wash Buffer ile 3 kere yikanmistir ve 50 pI/kuyucuk Biotinylated Antibody Reagent (anti-insan lL-8'i) eklenmistir. Plakalar yeniden yapiskan plaka kapaklari ile kapatilmistir ve RT'de bir saat boyunca inkübe edilmistir. Wash Buffer ile 3 kere yikandiktan sonra, 100 pI/kuyucuk Streptavidin-HRP Solution uygulanmistir. Plakalar yeniden yapiskan plaka kapaklari ile kapatilmistir ve RT'de 30 dakika boyunca inkübe edilmistir. Plakalardaki içerikler dökülmüstür ve plakalar Wash Buffer ile 3 kere yikanmistir. 100 pl TMB Substrate Solution her bir kuyucuga dagitilmistir. Enzimatik renk reaksiyonunun, RT'de 30 dakika boyunca karanlikta gelismesine izin verilmistir. Reaksiyon 100 pI/kuyucuk Stop Solution eklenmesi ile durdurulmustur. Absorbans, 450 nm'de ve 550 nm'de bir ELIZA plaka okuyucu üzerinde okunmustur. Mikro-plakalardaki optik eksiklikler için düzeltmek amaciyla 550 nm degerleri 450 nm degerlerinden çikarilir. Akabinde standart egri üretilmistir ve bilinmeyen örneklerde insan lL-8'Inin miktarini hesaplamak için kullanilmistir. Standart egri, yatay (X) eksende karsilik gelen konsantrasyona (pg/ml) kiyasla dikey (Y) eksende her bir standart konsantrasyon için elde edilen ortalama absorbansi grafik hâline getirme ile olusturulmustur.
G3 formülasyonu ile stimüle edilmis insan monositlerinin sitokin lL-12 geni eksereszonu G3, DT, DT katilmis GS ile muamele edilmis DC'lerin sitokin IL-12 geni ekspresyonu, gen dizilimleri ile hücre kontrolü ile karsilastirilmistir. Özet olara, normal insan monositleri 10 ug/ml 63'e, 100 tig/ml DT'ye ve ayni konsantrasyon ile ayni parçaciklar içinde bu ikisinin kombinasyonuna 6 saat boyunca maruz birakilmistir, akabinde RNA üreticinin manüeline (QIAGEN RNeasy Minikit) göre izole edilmistir. RNA ekspresyon analizi, etiketlenecek olan RNA örneklerini ters transkripsiyon yoluyla cDNA'ya dönüstürme ve çesitli örneklerden kantitatif verileri muamele edilmemis hücreler ile karsilastirma ile "Uppsala Array Platform, Clinical Chemistry and Pharmacology, Uppsala University Hospital Uppsala- Sweden" kurumunda yapilmistir (Ambion WT Expression Kit).
Timigin kinag (TK) aktivitesi TK aktivitesi, Biovica (Uppsala, Sweden) firmasindan elde edilen bir kit ile belirlenmistir. Özet olarak, çesitli zaman noktalarinda KGI veya G3 formülasyonlarina maruz birakildiktan sonra, 0,1-1 x 106 hücre/ml olan bir konsantrasyonda 100 pl hücre süspansiyonu Eppendorf tüplere transfer edilmistir ve 200 g'de 10 dakika boyunca sentrifüj edilmistir. Hücre peleti 100 ul soguk PBS içinde yeniden-süspanse edilmistir ve 2-3 kere dondurulup/çözülmüstür. Bes dakika boyunca maksimum hizda Sentrifügasyondan sonra, akabinde hücreler toplanmistir. Inter-selüler TK aktivitesi üreticinin protokolüne göre ölçülmüstür.
D3 Vitamininin Saptanmasi G3 parçaciklarina katilmis kolekalsiferollü (D3 vitamini) örnekler, bir Üniversite Hastanesi Laboratuvari'nda bir Liaison otomatik aygitinda analiz edilmistir. Analizin (DiaSorin Liaison) 25-HO-D3'ü ölçmek için tasarlanmasina ragmen, bu hidroksillenmemis D3 vitamini ile yaklasik yüzde birlik çapraz-reaktiviteye sahiptir. influenza virüsü suslari ve asisi Bir adjuvante-edilmemis asi olarak insan influenza virüsü A/California /, testlerde ve Ienfositlerin yeniden-stimülasyonunda antijen olarak kullanilmistir. Virüs VERO hücreleri üzerinde kültürlenmistir deoksikolat ile yarilmistir. Bu üretici tarafindan nezaketle saglanmistir. Hasattan sonra, virüsler saflastirilmistir, inaktive edilmistir, yarilmistir ve 30 ug protein/ml olan bir konsantrasyonda yeniden-süspanse edilmistir.
Doz, Sekil 1'de gösterildigi üzere 1 pg virüs antijeni ve adjuvanin çesitli miktarini içermistir.
Asilama Hayvan tesisinde, University Hospital, Karolinska Institute, Stockholm, barindirilan C56816 fareleri boyundan iki kere subkütan olarak immünize edilmistir. Detaylar için bakiniz Örnek 12.
Hemaglütinaszon (HAl testi Sitrat çözeltisi içinde toplanan tavuk eritrositleri (RBC'Ier), 0,01 M fosfat tamponlu salin içeren PBS içinde %O,5'lik bir konsantrasyonda yeniden-süspanse edilmistir. HA testi 4°C'de 1 saat boyunca U-tipi mikro-plakalarda gerçeklestirilmistir.
Hemaglütinasyon inhibisyon (HI) testi Serum örnekleri, tavuk RBC'lerinin %30'luk bir süspansiyonu ile birlikte oda sicakliginda (RT°) 1 saat (sa) boyunca inkübe edilmistir. Emilimden sonra, karisimlar 500 x g'de 10 dk boyunca sentrifüj edilmistir ve süpernatantlar toplanmistir. Nihai serum seyreltmesi 1:5'tir. HI testi, V-tipi mikro-plakalar ve 16 HA-ünite/ 50 pl kullanilarak yürütülmüstür. Serum örnekleri, 25 ul PBS-BSA'nin esit bir miktari kullanilarak 2 kat seyreltilmistir. Seyreltilmis serumlar 25 pl virüs süspansiyonu ile RT°'de 1 sa boyunca inkübe edilmistir, bundan sonra karisimlar 4°C'de 1 sa boyunca inkübe edilmistir. Hemaglütinasyonu %100 Inhibe eden en yüksek serum seyreltmesi örnek için antikor titresi olarak düsünülmüstür.
Lenfositlerin Preparasyonu Dalak-Ienfositleri (splenositler) mümkün oldugu kadar aseptik bir sekilde elde edilmistir. immünize edilmis ve immünize edilmemis farelerden kan alinmistir ve bunlar yeniden- asilamadan 3 hafta sonra servikal dislokasyon ile kurban edilmistir. Dalaklar uzaklastirilmistir ve bunan sonra dikkatli bir sekilde didilmistir, bir steril paslanmaz çelik elekten geçirilmistir ve bir pipet kullanilarak Tricine içeren EMEM ile durulanmistir.
Hücreler Tricine içeren EMEM kullanilarak iki kere yikanmistir, ile 500 x g'de sentrifügasyon anlamina gelir. Akabinde, peletler %1 fetal buzagi serumu (FCS), 10 ug (kültür vasati) ile takviye edilmis F-DMEM vasati içinde yeniden-süspanse edilmistir.
Hücre viabilitesi Tripan mavisi boya dislama testi ile analiz edilmistir.
Enzime bagli immüno-nokta analizi (ELISPOT) Sitokin salgilayan splenositlerin sayimi INF-v, IL-2 veya lL-4 için ticari ELISPOT-kitleri kullanilarak yürütülmüstür. Kitler Mabtech, Stockholm, Sweden, firmasindan satin alinmistir. ELISPOT plakalari Mabtech tarafindan tavsiye edilen talimatlar izlenerek kullanilmistir.
Her bir sitokin için, her bir 100 pl kültür vasati için 2 x 'IO5 olan bir konsantrasyondaki splenositler, 8 farkli kuyucuk içine pipetlenmistir. Dört kopya influenza virüsü antijeninin 4,5 ug hemaglütinini içeren 50 pl kültür vasati almistir. Kalan dört kuyucuk, yalnizca 100 ul kültür vasati almistir. Plakalar nemlendirilmis kutular içinde 37°C'de 18 sa boyunca inkübe edilmistir, bundan sonra hücreler atilmistir ve kuyucuklar yikanmistir.
Noktalar Mabtech tarafindan tarif edilen prosedür izlenerek gelistirilmistir. Kisaca, plakalar RT°'de 2 sa boyunca 100 pl biyotinlenmis monoklonal antikorlar (MoAb) anti lFN-y, lL-2 veya IL-4 ile inkübe edilmistir. Akabinde, plakalar dikkatli bir sekilde durulanmistir ve bundan sonra RT°'de 1 sa boyunca HRPO konjuge edilmis Strepavidin ile inkübe edilmistir. Bir baska yikama siklusundan sonra, plakalar RT°'de yaklasik olarak 15 dk boyunca veya ayri nokta ortaya çikana kadar substrat ile inkübe edilmistir. Plakalar musluk suyu ile yikama reaksiyonlari durdurmustur. Son olarak, plakalarin kurumasina izin verilmistir ve bundan sonra noktalarin sayisi bir ELISPOT sayici kullanilarak sayilmistir.
Doz-yanit verileri hesaplanmis SI degerleri ve GraphPadPrism4 yazilim programi (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA) kullanilarak analiz edilmistir. Veriler ortalama degerler ± SE olarak sunulmustur. Bir kaç ortalama arasindaki istatistiksel çikarimlar, GraphPadPrism programinda, grup ortalamalarinin test sonrasi Tukey çoklu karsilastirmasi ile tek-yönlü ANOVA ile ve iki ortalamanin karsilastirmasi için Student t- testi ile gerçeklestirilmistir.
----------------------------- Kisim l. Formülasyon ve Karakterizasyon-Örnek 1 Bu Örnekte, G3 nano-parçaciklarinin formülasyonu tarif edilir. Deneysel düzenek adim 2'de, A ve B, (asagiya bakiniz), Qui/Iaja saponininin QHC fraksiyonuna (ISCONOVA kesfedilmistir. C'de, bir fosfolipit eklemenin etkisi parçacik formülasyonu açisindan kesfedilmistir.
Deneysel düzenek Adim 1'de, deterjan veya organik çözelti içinde bir çözündürülmeyi gerektiren bir yapay kolesterol membrani olusturulur. Bu deneyde, 100 mg/ml'lik bir stok çözeltisi üretmek için kolesterol (C8667, Sigma-Aldrich Sweden AB, Stockholm, Sweden) için çözücü olarak kloroform (288306, Sigma-Aldrich Sweden AB, Stockholm, Sweden) kullandik.
Bir Eppendorf tüp içine, stok çözeltisinden 50 pl kloroform içinde seyreltilmis 2 ul kolesterol eklenmistir, bunu takiben 1/2 ml su kolesterol çözeltisinin üstüne tabaka hâline getirilmistir. Kloroform bir igneli bir enjektör ile olusturulan bir hava akimi ile buharlastirilmistir. Bir görünür kolesterol tabakasi tüpün duvarinda görülmüstür. 1/2 ml su 1 ml taze su ile degistirilmistir ve 10 pl of QHC stok çözeltisi (su içinde 100 mg/ml) suya eklenmistir, bunu 37°C'de gece boyu inkübasyon izlemistir. Membran duvardan kaybolmustur ve bir berrak sulu çözelti görülür. 0 A. Iki pl kolesterol stok çözeltisi ve adim 1'de tarif edildigi sekilde islenmistir ve adim 2'deki 10 pl QHC, 1:1'Iik bir molar oran veren, bu GS formülasyonunu üretmek için kullanilmistir 0 B. Bir baska molar oran de, yani, 1 mol QHC'ye kiyasla 2 mol kolesterol, kullanilmistir. Diger durumda, deney A için olan ile aynidir o C. 1 mol kolesterol ve 1 mol fosfatidilkolin (P-5763, Sigma-Aldrich Sweden AB, Stockholm, Sweden, firmasindadir) olan bir oran adim 1'deki membrani olusturmak için kullanilmistir. Adim 2'de, iki mol QHC kullanilmistir.
Bulgular 1. A. Buharlastirmadan sonra, bir tek düze boyuta sahip olan bir 17 nm'lik parçacik elde edilmistir, elektron mikroskobu (EM) ile, bakiniz, Sekil 1A, ve gradyan sentrifügasyon ile karakterize edilmistir. G3 süspansiyonu bir berrak çözelti olarak görsellestirilmistir. 2. B. Buharlastirmadan sonra, bir hafif bir sekilde daha genis boyut araligindaki parçaciklar, yaklasik 17 nm'lik bir ortalama çap ile EM'de gözlenmistir (gösterilmemistir), yani 17 nm'lik parçaciklar ayrica 2 mol kolesterol ve 1 mol Quillaja saponin araligi içinde de olusturulmustur. 3. C. Ürün, yaklasik 40 nm'lik bir çapi olan ISCOM parçaciklarininkine benzer morfolojiye sahiptir (Sekil 18). Böylelikle, morfoloji, fosfatidilkolin olmayan G3 bulusuna göre nano-parçaciklarinkinden fosfatidilkolinin dâhil edilmesi ile tamamen farklidir. Ayrica, bulusa göre nano-parçaciklarin Lövgren & Morein1 tarafindan talep edildigi üzere ISCOM formülasyonu için esansiyel olan fosfatidilkolini içeren fosfolipitlerin entegrasyonu için mükemmel bir temel oldugu sonucuna da ulasilabilir.
Sonuç ve tartisma 1 kolesterol ila 1 Quillaja olan molar oran ile, küçük (17 nm) nano-parçacik olusturulur.
Kolesterolün orani daha yüksek oldukça, yani, 1 Quillaja'ya karsi 2 kolesterol veya daha yüksek molar oran, daha büyük parçaciklar görülür. Adim 1'de diger Iipofilik bilesenlerin dâhil edilmesi ile, parçacigin boyutunun çesitlilik gösterecegi, yani, parçacigin yüklemesinin boyutu etkiledigi, bildirilmelidir. Bu durumda, boyutun araligi 17 ila 40 nm araliginda kaydedilmistir, ancak, bu araligin sinirlandirmasi degildir.
EM'de parçaciklarin agregasyonunun görülmemis olmasi, daha ziyade parçaciklarin birbirinden iyice dagilmis olmasi özellikle önemlidir.
Lipofilik maddeleri suda çözünebilir hâle getirmek için bir esansiyel ve yeni kavram bu iki adimli prosedürdür. Lipit membran, örn., kati hidrofobik destege sahip olmayan, ancak bir su fazi içinde serbest süspansiyon içinde olan, Iipozomlar, olusturmanin çesitli yollari vardir. Ikici adim, membrani birinci vasitasiyla su fazi hâlinde, suda çözünebilen G3 parçacigi hâlinde çikarir.
Bulusa göre nano-parçaciklar olusturmak için prosedürün, örn., ISCOM formülasyonlari (Lövgren & Morein, yukari bakiniz) yapmak için, simdi kullanilan yöntemlere kiyasla güçlü oldugu ve daha basit oldugu bildirilmelidir. Yukaridakilerin tümü, kullanilan buharlastirma ile, burada parçacik formülasyonu için kullanilan materyalin güçlükle herhangi bir kaybi vardir, yani, Qui/laja saponin ifade edilen durumda QHC veya kolesterol ve fosfolipit olmamasi gereklidir, ilaveten üretim maliyetlerini düsürür. Ilginç bir sekilde, bulusa göre nano-parçaciklar ISCOM'Iar olusturmak için bir baz olarak kullanilabilir.
Deterjan çözündürülme için kullanildiginda, deterjanin uzaklastirilmasinin Lövgren & Morein2 tarafindan tarif edildigi üzere, örn., diyaliz, kolon kromatografisi, ultra- sentrifügasyon veya tegetsel akis ile, yapilmasi gerekir, bir hidrofobik yüzeyi olan bilyeler (örn., lateks bilyeler) kullanmak daha pratik olabilir. Böylelikle, iki adimli prosedür, yüke bagli olarak morfoloji açisindan çesitlilik gösterebilen nano-parçaciklari formüle etmek için bir inovatif güçlü yöntemdir.
Dahasi, adim 1'de bir membrani formüle eden bu yöntem, adim 2'de Iipofilik molekülleri suda çözünebilen GS parçacigina katmak için bir genel yöntemdir.
Bu ömek, amfipatik özellikleri olan bir molekülün Örnek 1'de tarif edildigi sekilde teknolojiye göre G3 parçaciklarina katilabilecegini gösterir. G3'ün enjeksiyon yerinde seyreltmeden dolayi uygulamadan sonra ve bunu takiben yerden nakilden sonra parçalanmakta olan bir misel olarak dogal olarak suda çözünebildigi bildirilmelidir.
Bundan dolayi, bu düsük kötü biyoyararlanima sahiptir. Sonuç olarak, GS içinde bir kararli kompleks önemlidir.
Deneysel düzenek Deneysel düzenek, bir hidrofobik molekül diterpenoidin (DT) de Örnek 1 için tarif edildigi üzere kolesterol ile ayni zamanda çözündürülmesi disinda, Örnek 1 için olan ile esas olarak aynidir. Quil A C fraksiyonu (QHC) ve kolesterol ile birlikte DT molekülü Örnek 1'de olan ile ayni iki adimli prosedür kullanilarak G3 parçacigina katilmistir. yani, 1 pl DT (stok çözeltisi olarak %99 etanol içinde 100 tig/ml) Örnek 1'de adim 1 için tarif edilen 1 kolesterol: 0,5 DT olan bir molar oranda çözündürülmüstür. Adim 2'de, QHC Örnek 1'de kolesterol ile 1'e 1'Iik molar oranda eklenmistir.
Bulgular Katilmis DT'Ii G3 parçacigi Sekil 1A'da gösterilen DT olmayan GS parçacigi ile ayni morfolojiye sahiptir. Adim 1'de, adim 2'de kaybolan bir membran tüpün duvarlarinda görsellestirilmistir. Adim 2'den elde edilen sulu çözelti berrak ila hafif derecede opelesan araligindadir ve sediment saptanmamistir.
Misel formundaki amfipatik molekül diterpenoid (DT) kullanilan çözücüler ile basarili bir sekilde parçalanmistir ve adim 2'de bulusa göre nano-parçaciklara katilmistir, bu 17 nm'lik tipik GS nano-parçaciklari ile sonuçlanmistir. Böylelikle, bulusa göre G3 nano- parçaciklarini bir amfipatik moleküller için bir tasiyici/aktarim sistemi olarak kullanma kapasitesi gösterilir. Gerekli konfigürasyonu olan amfipatik moleküller, bireylere uygulandiktan sonra çogunlukla kararsiz olan, siklikla düsük biyoyararlanim ile sonuçlanan miseller olusturur. Örnek 4'te, bu GS-DT parçaciginin biyolojik olarak aktif oldugu gösterilir. Bulusa göre nano-parçaciklarin immün güçlendirme kapasitesini ve aktarim parçaciklari olarak ve hücreler ile, örn., hücrelerin membranlarindaki reseptör vasitasiyla, etkilesim yoluyla biyolojik etkileri güçlendirmek için kullanisliligini ilaveten kanitlamak için Paris Antlasmasi öncelik yili boyunca ilave çalismalar gerçeklestirilecektir. Daha fazla bilgi için, bakiniz, burada referans olarak eklenmis olan Hu et al.,3. Immün güçlendirme ve kanser hücresi öldürme etkilerini içeren komplementer özellikleri olan diger moleküllerin katilmasi ile, potansiyel olarak büyük ölçüde genisletilecektir.
G3'ün kanser hücrelerini öldürme kapasitesi bir Ienfoid tümör hücresini temsil eden U937 modelinde in vitro test edilmistir.
Deneysel düzenek G3 parçaciklari Materyaller ve Yöntemler bölümünde tarif edildigi üzere kolesterol ve QHC arasindaki çesitli agirlik oranlari veya molar oranlar ile formüle edilmistir. Çesitli formülasyonlar inkübe edilmistir ve kanser hücresi öldürme etkisi Materyaller ve Yöntemler bölümünde tarif edildigi üzere FMCA yöntemi ile boyamadan ve okumadan sonra ölçülmüstür.
Bulgular GB parçaciklari, Örn 1'de tarif edildigi ve EM sonuçlarina göre morfolojiden sonuca varildigi üzere (bakiniz, Örn 1 ve Sekil 1A), agirliga göre 5 QHC'ye karsi 1 kolesterol, yani, molariteye göre 1 QHC'ye kiyasla 1 kolesterol, olan oran ile olusturulmustur. G43 parçaciginin U937 kanser hücresini öldürme etkisi, KGI parçaciklari için olan ile ayni büyüklüktedir (Sekil 2), bu aktif bilesen QHC'nin G3 formülasyonuna katildiginda korundugunu gösterir. KGI'nin önceden U937 kanser hücrelerini öldürdügü Bu örnek, amfipatik molekül DT'nin Örnekler 1'de ve 2'de tarif edildigi üzere teknolojiye göre GS parçaciklarina katilabilecegini gösterir.
DT, bir diterpendir, Stevia rebaudiana bertoni'den üretilen bir steviosittirlo. Biz kullandik.
DT, yayimlandigi üzere immünolojik özellikleri içeren çok sayida ilginç tibbi sahip oldugundan”. Bu bilesik ile bir problem, bunun, örn., bir nano-parçacik içinde, bir aktarim sistemini gerektirmesini deneyimledigimiz gibi in vivo düsük biyoyararlanim sahip olmasidir.
DC'nin kanser hücre U937'yi lL-8 üretmesi için indükleme kapasitesi, immünolojik etkiye kesfetmek için, ancak hatta daha da önemlisi bu sitokin ile DC'nin kontrolsüz kanser hücresi proliferasyonunu durdurmak için önemli olan, kanserin farklilasmasina yol açabildigini göstermek için yapilmistir. Dahasi, DT'nin IL-12'yi içeren insan DC sitokinlerini indükleme kapasitesi test edilmistir. Bu testler, DT'nin Quil A için bir önemli komplementer immünolojik etkiye sahip oldugunu ve bundan dolayi bunun G3 parçaciklarina katilmasinin yararli oldugunu vurgulamak için yürütülmüstür. DT, Prodalysa LTDA, Santiago, Chile, tarafindan saglanmistir. Burada Materyaller ve Yöntemler bölümünde tarif edildigi sekilde hazirlanan insan dentritik hücrelerini (DC) kullandik.
Deneysel düzenek U937 hücreleri 100 ug/ml'den baslayarak akabinde 6 adim boyunca 5-katlik seyreltme ile 37°C'de 48 saat boyunca KGI ve G3 formülasyonlari ile inkübe edilmistir. Akabinde, süpernatant toplanmisti ve Materyaller ve Yöntemler bölümünde tarif edildigi üzere "-8 Gen ekspresyonunun ölçümü için, insan DC'Ieri BBE, KGI, Stevia ve BBE veya KGI ile kombinasyonlar hâlinde Stevia (Sekil 4A) ayni zamanda katilmis Stevia ile veya katilmis Stevia olmadan GS (Sekil 48) ile 6 saat boyunca inkübe edilmistir. Muamele edilmis DC'Ierden elde edilen çesitli sitokin genlerinin ekspresyonu, Materyaller ve Yöntemler bölümünde tarif edildigi üzere mRNA dizilim analizi ile yürütülmüstür.
Bulgular GS parçaciklari U937 kanser hücrelerinin, kanser hücresinin bir farklilasma belirteci olan, üretimi KGI tarafindan indüklenen IL-8'in benzer bir düzeyini üretmesini indüklemistir (Sekil 3).
Sekil 4A, DT'nin yüksek, ISCOM benzeri formülasyonlar KGI ve BBE tarafindan indüklenenlere kiyasla daha yüksek, lL-12, IL1ß ve IL-6 düzeylerini indükledigini gösterir.
Katilmis DT'li G3 parçaciklari, yüksek IL-12 düzeyi indüklerken, katilmis DT'si olmayan G3 formülasyonu lL-12'nin saptanabilen düzeyini indüklememistir (Sekil 48).
Tartisma ve sonuç DT, GB için komplementer özelliklere sahiptir. U937 kanser hücrelerinin IL-8 üretmesini indükleme kapasitesi immün güçlendirmeyi gösterebilir. Daha önemlisi, tek basina G3 farklilasabilir ve kanser hücresinin gösterdigimiz üzere KGI gibi proliferasyonu durdurmasina yol açabilir (preparasyondaki el yazmasi saglanacaktir). Tek basina G3 için komplementer etki, DT'nin güçlü bir sekilde IL-12'yi indükledigi gösterilir, bunun lFN-'nin üretimi için özel olarak bir Th1 tipi yanitin indüksiyonu için önemlidir, bu belirli tümörler için anti-kanser etkiye sahiptir. Immünolojik bakis açisiyla, burada immün sistem tarafindan taninan tümör antijenleri oldugunda, IL-12 tümörlerin reddi için önemlidir. lL-12 ayrica, virüs enfeksiyonlarina karsi immün savunma için de önemlidir.
DT'nin uygulamadan sonra bir parçacik formunda bunun kararliligini arttiran ve sonuç olarak G3'ün biyoyararlanimini arttiran bir tasiyici/aktarim parçacigi görevi gören GS içine katildigini kaydetmek özellikle ilginçtir. Tek basina DT'nin su içinde bir misel formunda oldugu bildirilmelidir. Bir bireyin vücuduna uygulanan bir misel olusumu, uygulama yerinde seyreltmeden dolayi parçalanir ve bunu takiben bu yerden nakledildikçe azalir. G3 parçacigi diger kuvvetler tarafindan birlikte tutulur ve örn., enjeksiyondan sonra, parçalanmaz, bu EM çalismalari ile kaydedilmistir (yayimlanmamistir). Bu örnek, GS bulusunun amfipatik moleküller için tasiyici görevi gördügünü vurgular.
GB parçaciklari tarafindan timidin kinaz (TK) aktivitesinin inhibisyonu, kanser hücrelerinin kontrolsüz replikasyonunu önlemek için ve hücreyi bir programlanmis hücre ölümüne, yani, apoptoza, yönlendirmek amaciyla müteakip adimlar için bir esansiyel özelliktir.
G3 parçaciginin inhibe etme için bir mekanizmasini kesfetmek amaciyla, kanser hücresi replikasyonu U937 hücreleri üzerinde TK enzimatik aktivitesinin inhibisyonunu ölçme ile degerlendirilmistir. Kanser hücresi replikasyonunun inhibisyonunu göstermek için TK enzimi aktivitesinin inhibisyonunu kullanmanin yani sira, bu etki modu G3 parçaciklarinin veya anti-kanser tedavisi için kullanilan herhangi bir baska Quillaja formülasyonunun tek basina veya diger anti-kanser formülasyonlari ile kombinasyon hâlinde tümör hastalarini tedavi etmek için yararli olup olmayacagini degerlendirmek için kullanilacaktir. Bu tarz bir test, kisisellestirilmis tip olarak tanimlanan alanda klinik örnekler üzerinde TK etki modunun inhibisyonu kullanilarak anti-kanser ilaçlarinin duyarliligini ölçmek için bir kitte kullanilabilir.
Deneysel düzenek U937 hücreleri ayni miktarlarda GB'e veya KGl'ya maruz birakilmistir. Çesitli zaman noktalarinda, muamele edilmis hücreler toplanmistir ve inter-selüler TK aktiviteleri Materyaller ve Yöntemler bölümünde tarif edildigi sekilde ölçülmüstür.
Bulgular GS parçaciklari inter-selüler TK aktivitelerini KGI tarafindan yapilan ile neredeyse ayni büyüklükte inhibe eder (Sekil 5).
TK aktivitesinin inhibisyonu, kanser hücrelerinin kopyalamayi durdurdugunu gösterir.
Bundan dolayi, TK aktivitesinin hücresel düzeydeki inhibisyonu hasta örneklerinden kanser hücresinin ilaca, yani, G3 parçaciklarina, duyarliligini ölçmek için kullanilabilir, kisisellestirilmis tibbin yolunu açar. Bildigimiz kadariyla, TK aktivitesi kanser hastalarindan serum TK'sinin veya hastalardan baska hastalik endikasyonlarinin saptanmasi için bir spesifik-olmayan test olarak kullanilmaktadir: Hastalardan elde edilen kanser hücreleri üzerinde bunu dogrudan kullanma ile inovasyonumuzdur (%100 özgüllük ile, yani, yalnizca kanser hücreleri kullanilir). Bu, kanser hücresi öldürme özelligi ile birlikte, bunun yanit-vermeyen hastalarda kullanimindan kaçinma ile GS parçaciklarini klinik kullanim için daha uygulanabilir hâle getirir.
Kisim ll. Bir anti-kanser ilaç olarak GS Bu örnek, Gß'ün ve DT'Ii G3'ün (GS-DT) bir partikülat-olmayan formdaki GS içindeki aktif bilesen QHC'ye (QHC) kiyasla solid-olmayan tümörlü insan Akut Miyeloid Lösemi (AML) hücrelerini daha etkili bir sekilde öldürdügünü gösterir.
Deneysel düzenek Örn 1'de ve 2'de tarif edildigi üzere formüle edilen G3 ve G3DT nano-parçaciklari kanser hücresi öldürme etkisi için aktif bilesen HC formu ile karsilastirilmistir. Örnekler 100 ug/ml'den baslayarak 6 adimda 5-kat seri seyreltilmistir ve HL-60 AML hücreleri ile 3 gün boyunca inkübe edilmistir. Akabinde, hücreler FMCA yöntemi ile boyanmistir ve okunmustur.
Bulgular G3 (ICso= kiyasla AML hücrelerinin büyümesini daha etkili bir sekilde inhibe etmistir (Sekil 6).
Sonuçlar ve tartismalar Esas olarak, GS partikülat-olmayan QHC'ninkine kiyasla bir daha güçlü kanser hücresi öldürme etkisine sahiptir. GB parçaciklarina DT katma, G3-DT olusturma, QHC'ye veya DT'siz G3'e kiyasla kanser hücresi öldürme etkisini güçlendirir. Tek basina DT kanser hücresi öldürme etkisine sahip degildir (gösterilmemistir). Partikülat-olmayan QHC, partikülat formlari tarafindan feshedilen lokal reaksiyona neden olur. AML kanser hücrelerini öldürmede G3-DT'nin ilave etkisi ayrica, bir yararli doz düsüsü de gösterecektir.
Sitarabin, Akut Miyeloid Löseminin (AML) tedavisi için kullanilan piyasada satilan bir sitostatik ilaçtir. Bu örnek, G3'ün sitarabinin kanser hücresi öldürme etkisini güçlendirme kapasitesini kesfetmek için düzenlenmistir.
Deneysel düzenek HL-60 AML hücreleri Sekil 7'de gösterildigi üzere önceden-belirlenmis konsantrasyonlarda ayri ayri ve bu ikisinin kombinasyonu hâlinde G3'e ve sitarabine 3 gün boyunca maruz birakilmistir. Akabinde, hücreler FMCA yöntemi ile boyanmistir ve kanser hücresi öldürme etkisi için okunmustur. 3 gün boyunca inkübasyondan sonra, tek basina G3 veya sitarabin sirasiyla hücrelerin anlamli bir sekilde (P<0,01) yaklasik %75'e yükseltilmistir (Sekil 7).
Sonuçlar ve tartismalar G3 parçaciklari sitarabinin HL-60 AML hücreleri üzerindeki öldürme etkisini anlamli bir sekilde güçlendirir. Sitostatik ilaç sitarabin ile muamele, hastalar için rahatsizlik ile yan etkilere neden olur. GB parçaciklari neredeyse toksik-olmadigindan, G3 ve sitarabin ile kombinasyon tedavisi ayrica arttirilmis etkinlik için beklentiye de sahip olacaktir ve sitarabinin dozunu düsürmek ile yan etkiyi de azaltacaktir.
Bu örnek, Gß'ün solid-olmayan tümörlü insan Akut Miyeloid Lösemi (AML) hücreleri üzerinde ticari sitostatik kanser ilaci daunorubisin üzerine eklenmis kanser hücresi öldürme etkisine sahip oldugunu gösterir.
Deneysel düzenek HL-60 AML hücreleri daunorubisinin 1000 nM'dan baslayarak artan konsantrasyonlari ile birlestirilmis Gß'ün bir sabitlenmis konsantrasyonuna (1 uM) maruz birakilmistir ve 3 gün boyunca inkübe edilmistir. Akabinde hücreler FMCA yöntemi ile boyanmistir ve okunmustur.
G3, tek basina daunorubisin ile karsilastirildiginda daunorubisinin kanser hücresi öldürme etkisini anlamli bir sekilde güçlendirir (P<0,0001) (Sekil 8).
Sonuçlar ve tartismalar G3 parçaciklari HL-60 AML hücreleri üzerinde daunorubisinin öldürme etkisini sinerjistik bir sekilde güçlendirir. GS parçaciklari neredeyse toksik-olmadigindan, sitostatik ilaç daunorubisinin dozunun G3 ile bir kombinasyon terapisinde kayda deger ölçüde düsürülebilmesi, böylece daha iyi tedavi etkisi göstermesi, olasidir ve azaltilmis yan etkiden dolayi, tedavi daunorubisine duyarli olan hastada daha uzun periyotlar boyunca devam ettirilir.
Bu örnek, insan prostat kanseri hücreleri PC-3 ile emsallendirilen solid tümörler üzerinde G3'ün ve DT katilmis Gß'ün (GSDT) etkilerini karsilastirmak için tasarlanmistir.
Deneysel düzenek G3 ve G3DT, partikülat-olmayan QHC ile karsilastirilmistir. Örnekler 100 ug/ml'lik konsantrasyondan baslaryarak 6 adimda 5-kat seri olarak seyreltilmistir ve PC-3 prostat kanseri hücreleri ile 3 gün boyunca inkübe edilmistir. Akabinde, hücreler FMCA yöntemi ile boyanmistir ve okunmustur.
Bulgular ayni aktif bilesen QHC (l050=3,388 tig/ml) ile karsilastirildiginda prostat kanseri hücrelerinin büyümesini daha güçlü bir sekilde inhibe etmistir (Sekil 9).
Sonuçlar ve tartismalar Esas olarak, bu örnekte GS PC-3 prostat kanseri hücreleri üzerinde QHC'ninkine benzer bir öldürme etkisine sahiptir. Parçaciga DT'nin katilmasi ile, yani, G3-DT, GB'ün kanser hücresi öldürme etkisi, AML hücreleri ile oldugu gibi, güçlendirilir. Tek basina DT'nin kanser hücresi öldürme etkisine sahip olmadigi bilinir. PC-3 kanser hücrelerini öldürmede burada bunun eklenen etkisi, 83 etkisinin güçlendirilmesini ve ayni zamanda eger varsa, yan etkilerin azaltilmasini gösterir. Partikülat-olmayan formdaki QHC'nin in vitro karsilastirilabilir bir sekilde etili oldugu, ancak iri vivo QHC'nin enjeksiyon yerinde kaldigi, bunun düsük biyoyararlanim ve lokal yan etkiler ile sonuçlandigi bildirilmelidir.
Bu örnek, G3'ün ve bir ticari ilaç dosetakselin PC-3 prostat kanseri hücreleri ile emsallendirilen solid tümörler üzerindeki kombinasyon etkisini gösterir.
Deneysel düzenek PC-3 hücreleri grafikte gösterildigi üzere önceden-belirlenmis konsantrasyonlarda ayri ayri ve kombinasyon hâlinde 63'e ve dosetaksele 3 gün boyunca maruz birakilmistir.
Akabinde, hücreler FMCA yöntemi ile boyanmistir ve kanser hücresi öldürme etkisi için okunmustur.
Tek basina G3'ün veya dosetakselin kanser hücresi öldürme etkisi sirasiyla hücrelerin öldürme orani anlamli bir sekilde (P<0,01) yaklasik %75'e yükseltilmistir (Sekil 10).
Sonuçlar ve tartismalar G3 parçaciklari sitostatik dosetakselin PC-3 kanser hücreleri üzerindeki kanser hücresi öldürme etkisini anlamli bir sekilde güçlendirir, bu G3 parçaciklarinin neredeyse toksik- olmadigi göz önünde bulundurularak, azaltilmis yan etki ile sitostatik ilacin arttirilmis etkinligini ve azaltilmis dozlamini gösterir.
Bu örnek, G3'ün ve bir güncel ve patent güvencesi altinda olan bir sitostatik ticari ilaç kabazitakselin solid tümörlü insan prostat kanseri PC-3 hücreleri üzerindeki kombinasyon etkisini kesfetmek için tasarlanmistir.
Deneysel düzenek PC-3 prostat kanseri hücreleri kabazitakselin 100 pM'dan baslayarak artan konsantrasyonlari ile birlestirilmis G3'ün bir sabitlenmis konsantrasyonuna (1 uM) maruz birakilmistir ve 3 gün boyunca inkübe edilmistir. Akabinde hücreler FMCA yöntemi ile boyanmistir ve okunmustur.
Bulgular Tek basina Kabazitaksel PC-3 kanser hücrelerini, G3 bir |C50=25.54 uM'te öldürmüstür.
G3 ile birlestirilmis Kabazitaksel kanser hücresi öldürme etkisi (ICso :, anlamli olarak (P Sonuçlar ve tartismalar GS parçaciklari kabazitakselin PC-3 prostat kanseri hücreleri üzerindeki öldürme etkisini anlamli olarak ve sinerjistik bir sekilde güçlendirir, bu GS parçaciklarinin neredeyse toksik-olmadigi göz önünde bulundurularak, daha iyi etkinlik, azaltilmis yan etki ve uzatilmis tedavi olasiligi için beklentileri gösterir.
Bu örnek; bu, bu fraksiyon ile formüle edilmis Duecom parçaciklarinin C Fraksiyonu (QHC) ile formüle edilmis Duecom parçaciklarina kiyasla daha güçlü bir öldürme kapasitesine sahip olmasindan önce gözlendiginden, bir baska önemli Quillaja saponin QHA fraksiyonu ile formüle edilmis G3 parçaciklarinin burada ACHN böbrek kanseri hücre hatti ile emsallendirilen solid tümörleri öldürmedeki kapasitesini kesfetmek için tasarlanmistir.
Deneysel düzenek seyreltilmistir ve 37°C'de 3 gün boyunca ACHN renal karsinom hücreleri ile inkübe edilmistir. Hücre sag kalimi FMCA yöntemi ile belirlenmistir.
QHA ile formüle edilmis GS, QHC ile formüle edilmis G3'ünkine kiyasla anlamli olarak Sonuçlar ve tartismalar Bu sonuç, QHA ve QHC ile formüle edilmis Duecom parçaciklari ile önceki gözleme neredeyse özdestir, yani, QHC ile bu formülasyonlar daha fazla solid-olmayan tümör hücresini selektif bir sekilde öldürürken, QHA ile formülasyonlar tercihen, solid-olmayan tümörlere kiyasla daha fazla solid tümörü öldürür. G3 formülasyonlari ile bu tümör tipi spesifik öldürme özelliginden, bir baska kategoride normal hücreleri öldürmekten kaçinmak için Duecom parçaciklari için oldugu gibi yararlanilabilir.
Kisim III. Adjuvan olarak G3 Tam virüse karsi bir adjuvan olarak GS parçaciginin hayvan çalismasi çalismasindan degerlendirilmistir. Parçalanmis ve inaktive edilmis influenza virüsü deneyde model antijen olarak kullanilmistir.
Deneysel düzenek Her bir grup için alti fare, 4 haftalik aralikla iki kere immünize edilmistir, kan örnekleri birinci immünizasyondan 3 hafta sonra ve ikinci immünizasyondan 4 hafta sonra alinmistir (bakiniz, sonraki sayfadaki grafik açiklamasi). Nekropside, yani, ikinci immünizasyondan 4 hafta sonra, dalak hücreleri materyaller ve yöntemler bölümünde tarif edildigi üzere sitokin üretimi için analiz edilmistir. Anlamayi kolaylastirmak için, hayvanlarin gruplandirmasi Sekil 13A'da gösterilir. 0 GB ve ISCOM 1. immünizasyondan sonra HI antikorunun doza bagimli bir sekilde saptanabilen düzeylerini indüklemistir. 2. immünizasyondan sonra, HI antikorunun düzeyi yine G3 adjuvante edilmis formülasyonlar için doza bagimli bir sekilde kayda deger ölçüde artmistir (bir bariz destekleme etkisi). ISCOM.
GB ve DT katilmis G3 adjuvante edilmis formülasyonlar, adjuvante edilmemis ticari asiya kiyasla HI antikorunun kayda deger ölçüde daha yüksek düzeylerini indüklemistir, yani, HI yanitlarinin benzer daha daha yüksek düzeyleri 1. (Sekil 13A) ve 2. (Sekil 13B) immünizasyondan sonra iki zaman noktasinda G3 ve o IFN-y ve IL- 4 yanitlarinin benzer veya hatta daha yüksek düzeyleri, nekropside, 2. immünizasyondan 4 hafta sonra, GB ve ISCOM formülasyonlari ile immünize edilmis hayvanlar arasinda yarik virüs ile in vitro yeniden-stimülasyondan sonra dalak hücrelerinde saptanmistir (Sekil 130).
G3 ve ISCOM formülasyonlari tarafindan indüklenen hem antikor-aracili hem de hücre- aracili immüniteler kantitatif olarak ve kalitatif olarak aynidir, yani, G3 formülasyonlari, yani, GS ve G3DT, adjuvan olarak lSCOM'un yerini alabilir.
Kisim IV. Bir ilaç aktarim sistemi olarak G3 VLX40'in, kanseri tedavi etmek için umut vadeden bir Ilaç oldugu düsünülmüstür.
VLX40 preklinik testlerde hayvanlara uygulama için ve sonuç olarak hastalarda müteakip testler için uygun olacak sekilde formüle edilemediginden, pazar için arastirma durdurulmustur. Bunun nedeni, VLX40'in, vücut tarafindan alinmasi için gerekli olan, su içinde çözünebilir hâle getirilememesidir. Bu deney, GS teknolojisinin problemi çözüp çözemeyecegini ve VLX40'i suda çözünebilir yapip yapamayacagini bulmak için tasarlanmistir.
Deneysel düzenek o VLX40 ilk olarak, 20 mM'Iik bir konsantrasyon (5,8664 mg/ml, tavsiye edilen en yüksek konsantrasyon) üretmek için bir organik çözücü olan DMSo içinde çözünmüstür ve stok çözeltisi olarak belirlenmistir. o 100 pg/ml olan bir konsantrasyondaki VLX40, su içindeki VLX40 için bir kontrol olarak, yani, bir neredeyse suda-çözünmeyen formülasyon olarak, kullanilmistir. . 8,5 pl VLX40 stok çözeltisi, bir yapay Iipit membrani olusturmak için 500 ul su içeren bir Eppendorf tüp içinde 50 pl kloroform ile karistirilmistir (bakiniz, Örnek 1). Ikinci adimda, 10 pl Quil A (stok çözeltisi olarak su içinde 100 mg/ml) eklenmistir ve 37°C'de gece boyu inkübe edilmistir. Bu, G3-VLX4O formülasyonudur, esas olarak Örnek 1'de tarif edilen ile ayni sekilde olusturulur.
VLX40-DMSO kontrol (2) ve G3-VLX40 süspansiyonu/çözeltisi (3) toplanmistir ve yukaridaki ile ayni konsantrasyondan seri olarak seyreltildikten sonra U937-GTB hücreleri üzerinde test edilmistir ve IC50'Ier regresyon egrilerinden hesaplanmistir.
Bulgular Suya eklenen stok çözeltisi (1), önceki deneylerden beklenildigi üzere, bir görünür sedimente veya çökeltiye sebebiyet vermistir. Böylelikle, VLX40 kontrol tüpünden (2) su içinde çözünemez. GS-VLX4O parçaciklarinin (3) formülasyonu, berrak çözeltinin/süspansiyonun elektron mikroskopisi ile konfirme edilmistir. G3-VLX40 formülasyonunu içeren tüpte çökelti yoktur veya yalnizca çok az çökelti vardir. Çesitli formülasyonlar fonksiyon için, yani, U937 hücrelerinin kanser hücresi öldürme etkisi için biyo-analizde, test edilmistir (bakiniz, Materyaller ve Yöntemler).
VLX40/DMSO'nun (2) su fazi (ICso olarak ifade edilen) düsük anti-kanser etkisine sahiptir, bu VLX40/DMSO karisiminin yalnizca çok küçük bir fraksiyonunun su içinde çözündügü anlamina gelir (Sekil 14A).
Aksine, G3-VLX40 parçacik formülasyonunun (3) sulu fazi Sekil 14A'da gösterildigi üzere yüksek anti-kanser hücresi aktivitesine sahiptir.
Sedimente olmus çözünmeyen kisim ayrica, kanser hücresi öldürme etkisi için in vitro test edilmistir. Yüksek kanser hücresi öldürme etkisi, suda-çözünmeyen çökelti içindeki VLX40/DMSO (2) ile kaydedilmistir, G3-VLX40-formülasyonunun az suda-çözünmeyen çökeltisi düsük bir kanser hücresi öldürme etkisine sahiptir (Sekil 148).
Bu deneyler, 3 kere tekrar edilmistir.
Sonuç ve Tartisma Yaklasik 50-100 mikrogram VLX40 1 ml'lik bir su hacmi içinde Quillaja bileseni olarak ölçülen 2 mg G3 ile çözünmüstür. GS parçaciklarinin konsantrasyonunun G3 parçaciklarinin konsantrasyonunu arttirma ile arttirilabilecegi göz önünde bulundurulmalidir, örnegin, 10 mg/ml GS formülasyonu bir berrak çözelti içinde olabilir.
Ayrica, daha büyük miktarlarda VLX40'in katilmasini kolaylastirmak için GB parçaciklarinin bilesimini de degistirebiliriz, Bu örnek, GS parçaciginin, ilaçlar var olan teknolojiler ile suda çözünebilir hâle getirilemediginden, G3 teknolojisi olmadan hastaya ulasamayan klinik kullanim için ilaçlarin formülasyonunu kolaylastirmak için çözülmemis bir talebi doldurdugunu açik bir sekilde gösterir.
Bu örnek, bir ilaç aktarim sistemi olarak, GS parçaciginin, suda-çözünmeyen baska iki anti-kanser ilaci olan busülfana ve roskovitine kolaylikla katildigini, bunlari suda çözünebilir hâle getirdigini, gösterir.
Deneysel düzenek 2 ul kolesterol (kloroform içinde 100 mg/ml) ile birlikte iki pl busülfan (DMSO içinde 50 mg/ml) veya 1 ul roskovitin (kloroform içinde 100 mg/ml), Örnek 1'de adim 1 için tarif edildigi sekildeki yöntem kullanilarak, sirasiyla busülfan veya roskovitin ile lipit membran olusturmak için kullanilmistir. Akabinde, 10 |JI QHC (su içinde 100 mg/ml), QHC: kolesterol: busülfan/roskovitin =1:1:0,5 olan bir molar orani vermesi için Örnek 1'de adim 2 için oldugu sekilde eklenmistir.
Her iki bilesik, yani, busülfan ve roskovitin, için, berrak çözeltiler görsellestirilmistir, yani, sulu faz içinde çözünmeyen ilaçlardan kaynaklanan sediment veya bulaniklik bunlari suda çözünebilen G3 parçaciklarina katma ile elimine edilmistir.
Tartisma Örnek 13'e benzeyen, bu örnek bir kez daha, suda çözünmeyen Iipofilik ilaçlari/molekülleri, bunlari GS parçaciklarina katma ile, suda çözünebilir hâle getirmek için bir genel platform olarak G3'ün kapasitesini gösterir. Anti-kanser ilaç adaylarinin yaklasik %40'inin suda çözünmedigi, bundan dolayi, ticari ürünler hâlinde ilaveten gelistirilemedigi, hesaba katildiginda, bulusumuz durumu siddetli bir sekilde iyilestirebilir.
Bu örnekte, bir Iipofilik vitaminin, yani, D3 vitamininin, bunu suda çözünebilir hâle getirmek amaciyla G3 nano-parçacigina entegre edilip edilemeyecegini kesfettik. Bu kloroform içinde çözünmüstür ve Örnek 1'de tarif edildigi üzere 83 parçacigina katilmistir ve daha fazla detay için bakiniz, Materyaller ve Yöntemler.
Deneysel düzenek G3 parçaciklari, Iipit membrani olusturmak için %50 kolesterol ve %50 D3 vitamini kullanilarak olusturulmustur. Quil A, G3 parçaciklari üretmek için su fazina eklenmistir (detaylar için, lütfen Örnek 1'e basvurunuz). Su içinde %100 Kolesterol ve %100 D3 Vitamini kontroller olarak kullanilmistir. G3 parçaciklarina katilmis D3 vitamini içeren örnekler, Uppsala Üniversite Hastanesi Laboratuvari'nda bir DiaSorin Liaison otomatik aygitinda analiz edilmistir.
Adim 2'de geri-kazanilan sulu faz, bir berrak çözeltidir ve sediment saptanamayabilir.
Quillaja QHC fraksiyonu formülasyonuna kiyasla, yani, 55 nmol/L, fraksiyone- edilmemis quillaja temelli GS-vitamini D3 formülasyonu (950 nmoI/L) içinde daha fazla D3 vitamini saptanmistir. Bir seyreltme deneyinde, D3 vitamininin konsantrasyonu okumada Iineerdir, bu burada parçaciklarin bir homojen süspansiyonunun oldugunu, yani, Sekil 1'de görüldügü üzere diger GB parçaciklari ile uyumlu olarak agregasyon olmadigini, gösterir. Karsilastirildiginda. D3 Vitamininin yalnizca iz miktari D3 vitamini kontrolünde saptanmistir ve kolesterol kontrolü içinde D3 vitamini yoktur.
Sonuç ve Tartisma D3 vitamini, oral veya parenteral yollar ile lipit formunda vücut tarafindan kötü bir sekilde alinan bir esansiyel vitamindir. Böylelikle, bir suda çözünebilen form bunun bu yollar vasitasiyla alimini kolaylastiracaktir. Bu deneyde, DS vitamininin quillaja saponininin QHC fraksiyonunun oldugu gibi fraksiyone-edilmemis ile G3 nano- parçacigina katildigini gösteriyoruz. Önemli olarak, seyreltme deneyinin lineer okumasi, genel olarak GS parçaciklari için elektron mikroskopisi ile ortaya çikarilmis olan, parçaciklarin bir homojen dagilimini gösterir (bakiniz, Sekil 1). Gida için, fraksiyone-edilmemis quillaja saponini, örn., birayi ve ayni zamanda diger gida tiplerini içeren içeceklerde, gayet iyi kabul edilir ve kullanilir. Bundan dolayi, bu vitaminin aktarimi için G3'ün formülasyonu için daha ekonomik alternatif, GB formülasyonu için temel olarak bir fraksiyone-edilmemis quillaja'dir. Bu deneyde, QHC saponin fraksiyonu ile G3 parçaciginda olana kiyasla fraksiyone-edilmemis quillaja saponini ile G3'e daha fazla D3 katilmistir.
REFERANSLAR 1Kefei Hu, Saideh Berenjian, Rolf Larsson, Joachim Gullbo, Peter Nygren, Tanja Lövgren, Bror Morein Nanoparticulate Quillaja saponin induces apoptosis in human Ieukemia cell lines with a high therapeutic index. International Journal 2Lövgren & Morein (2000) ISCOM Technology in Methods in Molecular Medicine, Vol 42: 239-258, Vaccine adjuvants: Preparation Methods and Research Protocols, Edited by D.T.O O'Hagen, Humana Press, Inc., Titawa, 3Morein B, Hu K, Lovgren K and D'Hondt E. New ISCOMs meet unsettled vaccine demands in Vaccine Adjuvants and Delivery Systems, Ed. by Singh M. 4 Lycke, N. From toxin to adjuvant: The rational design of a vaccine adjuvant (2001) Mowat, A.M., Donachie, A.M., Jagewalll, S., Schon, K., Lowenadler, B., Dalsgaard, K., et al. CTA1-DD-immune stimulating complex: a novel, rationally designed combined mucosal vaccine adjuvant effective with nanogram doses of 6Blair AH, Ghose TI. Linkage of cytotoxic agents to immunoglobulins. J 7Ghose TI, Blair AH, Kulkarni PN. Preparation of antibody-Iinked cytotoxic 8 Davis MT, Preston JF. A simple modified carbodiimide method for conjugation of small-molecular-weight compounds to immunoglobulin G with minimal protein 9 Eliasson DG, El Bakkouri K, Schön K, Ramne A, Festjens E, Löwenadler B, Fiers W, Saelens X, Lycke N.CTA1-M2e-DD: a novel mucosal adjuvant A. Esmat Abou-Arab, Azza Abou-Arab and M.Ferial Abu-Salem, Physico- chmical assessment of natural sweeteners steviosides produced from Stevia rebaudiana bertoni, African Journal of Food Science,VoI4 (5) pp 269-281, May 2010. 11 Chaiwat Boonkaewwant, Chaivat Toskulkao, and Molvibha Vongsakul.
Antilnflammatory and Immunomodulatory Activities of Stevioside and Its 13 Kersten, G.F.A., Spiekstra, A., Beuvery, E.C. and Cromelin D.J.A. (1991) On the structure of immune-stimulating saponin Iipid complexes (ISCOMs).

Claims (1)

ISTEMLER . Sterol, tercihen kolesterol ve quillaja asidinden ve quillaja saponinden seçilen Quillaja saponaria Molina'dan bir bilesen içeren kararli nano-parçaciklar olup, özelligi, söz konusu nano-parçaciklarin bir fosfolipit içermemesidir, 15-25 nanometre araliginda bir parçacik çapina sahip olmasi ile karakterize edilmesidir ve burada kolesterol ve quillaja saponin arasindaki oran 1:10 ila 10:1 araligindadir, tercihen 12 ila 2:1 araligindadir. . Istem 1'e göre nano-parçaciklar olup, burada söz konusu quillaja bileseni, bir quillaja saponindir, tercihen quillaja saponin fraksiyonu QHA'dir. QHB'dir ve/veya QHC'dir. . Istem 1'e göre nano-parçaciklar olup, kolesterol ve quillaja saponin fraksiyonu QHC'yi içerir, burada parçaciklar yaklasik 17-20 nm araliginda bir çapa sahiptir ve burada kolesterol ve QHC arasindaki molar oran, yaklasik 1:1'dir. . Önceki istemlerin herhangi birine göre nano-parçaciklar olup, ilaveten en az bir amfipatik veya bir hidrofobik molekül içerir. . Istem 3 veya 4'e göre nano-parçaciklar olup, burada amfipatik veya hidrofobik molekül, bir antijen, bir adjuvan, bir hedefleme molekülü, bir farmasötik bilesik ve bir gida ile ilgili bilesik arasindan seçilen en az bir üyedir. . Istem 5'e göre nano-parçaciklar olup, burada amfipatik veya hidrofobik molekül diterpen DT, VLX40, Busülfan, roskovitin ve D3 vitamini arasindan seçilen en az bir üyedir. . Bir bilesim olup, 1-6 arasindaki istemlerin herhangi birine göre bir veya birden fazla nano-parçacik içerir. . Istem 7'ye göre bilesim olup, burada farkli quillaja saponin fraksiyonlarinin her biri farkli nano-parçaciklara katilir. Bir farmasötik olarak, opsiyonel olarak bir farmasötik bilesim içinde, kullanim için istemler 1-6'dan herhangi birine göre bir nano-parçacik veya istemler 7 ve 8'in herhangi birine göre bir bilesim olup, ilaveten farmasötik olarak kabul edilebilir tamponlar, diluentler. eksipiyanlar, adjuvanlar ve/veya tasiyicilar içerir. istemler 1-6'dan herhangi birine göre bir nano-parçacik veya istemler 7 ve 8'in herhangi birine göre bir bilesim olup, bir adjuvan olarak kullanim içindir. .Istem 10'a göre bir farmasötik adjuvan olup, bir asi ile kombinasyon hâlinde kullanim içindir. istemler 1-6'dan herhangi birine göre bir nano-parçacik veya istemler 7 ve 8'in herhangi birine göre bir bilesim olup, bir anti-kanser ajani olarak kullanim içindir. Fosfolipitsiz nano-parçaciklar üretmek için bir yöntem olup, asagidaki adimlari a) bir hidrofobik yüzey saglama; b) hidrofobik yüzeyi bir organik çözücü veya deterjan içinde monomerler olarak çözünmüs sterolün, tercihen kolesterolün, bir çözeltisi ile temas c) yüzey üzerinde bir sterol membran olusturan çözücüyü veya deterjani uzaklastirma; d) quillaja saponin misellerinin bir sulu çözeltisini saglama; e) saponin miseller içeren sulu çözeltiyi sterol membrana ekleme, böylece saponinler ve steroller arasinda bir kompleks olusturulur ve sulu çözelti içinde süspanse edilir; ve burada kolesterol ve quillaja saponin arasindaki oran, 1:10 ile 1021 araligindadir, tercihen 122 ila 2:1 araligindadir. Istem 12'ye göre bir anti-kanser ajaninin uygulanabilirligini degerlendirmek için yöntem olup, asagidakileri içerir a) bir hastadan elde edilen kanser hücrelerini istemler
1-6'dan herhangi birine göre nano-parçaciklar veya istem 7 veya 8'e göre bir farmasötik bilesim ile in vitro temas ettirme; b) söz konusu nano-parçaciklarin veya farmasötik bilesimin söz konusu kanser hücreleri üzerindeki terapötik etkisinin göstergesi olan en az bir etkiyi ölçme; burada nano-parçaciklar veya farmasötik bilesim söz konusu kanser hücreleri üzerinde bir anlamli etki gösterdiginde, anti-kanser ajani söz konusu münferit hastaya uygulanabilir olarak degerlendirilir.
TR2018/08733T 2011-10-03 2012-10-01 Kanser tedavisini ve gıda ile ilgili bileşikleri içeren tıp alanlarında amfipatik veya hidrofobik moleküller için taşıyıcı olarak nano-parçacıklar, preparasyon için proses ve bunların kullanımı. TR201808733T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161542425P 2011-10-03 2011-10-03

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201808733T4 true TR201808733T4 (tr) 2018-07-23

Family

ID=47143250

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/08733T TR201808733T4 (tr) 2011-10-03 2012-10-01 Kanser tedavisini ve gıda ile ilgili bileşikleri içeren tıp alanlarında amfipatik veya hidrofobik moleküller için taşıyıcı olarak nano-parçacıklar, preparasyon için proses ve bunların kullanımı.

Country Status (17)

Country Link
US (3) US10047116B2 (tr)
EP (3) EP2750683B2 (tr)
JP (1) JP6050822B2 (tr)
KR (1) KR102090740B1 (tr)
CN (1) CN103857403B (tr)
AU (1) AU2012319239B2 (tr)
CA (1) CA2850296C (tr)
DK (2) DK2750683T4 (tr)
ES (1) ES2673957T5 (tr)
HR (1) HRP20180956T1 (tr)
IN (1) IN2014DN03485A (tr)
PL (1) PL2750683T3 (tr)
PT (1) PT2750683T (tr)
RS (1) RS57350B1 (tr)
TR (1) TR201808733T4 (tr)
WO (1) WO2013051994A1 (tr)
ZA (1) ZA201402040B (tr)

Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2673957T5 (es) 2011-10-03 2021-12-15 Croda Int Plc Nanopartículas, procedimiento para la preparación y utilización de las mismas como portadoras de moléculas anfipáticas o hidrofóbicas en el campo de la medicina, incluyendo el tratamiento del cáncer, y compuestos de tipo alimentario
US9950282B2 (en) 2012-03-15 2018-04-24 Flodesign Sonics, Inc. Electronic configuration and control for acoustic standing wave generation
US10704021B2 (en) 2012-03-15 2020-07-07 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic perfusion devices
US9458450B2 (en) 2012-03-15 2016-10-04 Flodesign Sonics, Inc. Acoustophoretic separation technology using multi-dimensional standing waves
US10967298B2 (en) 2012-03-15 2021-04-06 Flodesign Sonics, Inc. Driver and control for variable impedence load
EP2777402A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-17 DSM IP Assets B.V. Solid lipid nanoparticles (I)
AR095962A1 (es) 2013-04-01 2015-11-25 Moreinx Ab Nanopartículas, compuestas de esterol y saponina de quillaja saponaria molina, proceso para preparación y uso de las mismas como portadores para moléculas anfipáticas o hidrófobas en el campo de la medicina incluyendo tratamiento de cáncer y compuestos relacionados con alimentos
WO2015105955A1 (en) 2014-01-08 2015-07-16 Flodesign Sonics, Inc. Acoustophoresis device with dual acoustophoretic chamber
CN104382856B (zh) * 2014-12-04 2017-11-14 中国药科大学 一种去氧鬼臼毒素长循环脂质体冻干制剂
US11021699B2 (en) 2015-04-29 2021-06-01 FioDesign Sonics, Inc. Separation using angled acoustic waves
US11708572B2 (en) 2015-04-29 2023-07-25 Flodesign Sonics, Inc. Acoustic cell separation techniques and processes
US11377651B2 (en) 2016-10-19 2022-07-05 Flodesign Sonics, Inc. Cell therapy processes utilizing acoustophoresis
US11459540B2 (en) 2015-07-28 2022-10-04 Flodesign Sonics, Inc. Expanded bed affinity selection
US11474085B2 (en) 2015-07-28 2022-10-18 Flodesign Sonics, Inc. Expanded bed affinity selection
US11085035B2 (en) 2016-05-03 2021-08-10 Flodesign Sonics, Inc. Therapeutic cell washing, concentration, and separation utilizing acoustophoresis
US11214789B2 (en) 2016-05-03 2022-01-04 Flodesign Sonics, Inc. Concentration and washing of particles with acoustics
CA3041517A1 (en) 2016-10-19 2018-04-26 Flodesign Sonics, Inc. Affinity cell extraction by acoustics
WO2018237109A1 (en) * 2017-06-23 2018-12-27 Yale University NANOMATERIALS HAVING IMPROVED MEDICATION DELIVERY EFFICIENCY
EP3725092A4 (en) 2017-12-14 2021-09-22 FloDesign Sonics, Inc. DRIVE AND CONTROL UNIT FOR ACOUSTIC CONVERTER
EP3669890A1 (en) * 2018-12-18 2020-06-24 Croda International PLC Filamentous nanoparticles having vaccine adjuvant effect

Family Cites Families (69)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2802005A (en) 1957-08-06 S-eluorourace
US3046301A (en) 1959-10-29 1962-07-24 Burroughs Wellcome Co Method of making chlorambucil
US3803124A (en) 1968-04-12 1974-04-09 Farmaceutici It Soc Process for the preparation of adriamycin and adriamycinone and adriamycin derivatives
GB1235022A (en) 1969-06-04 1971-06-09 Laeaeke Ag A new method for the production of cyclophosphamide
DE2124023C3 (de) 1970-05-27 1980-07-10 Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar R.T., Budapest Verfahren zur selektiven Gewinnung von Vinblastin, Vinleurosin und Vincristin oder von deren Sulfaten
US4020270A (en) 1974-05-02 1977-04-26 Societa' Farmaceutici Italia S.P.A. L-lyxohex-1-enopyranose derivative
GB1467383A (en) 1974-06-12 1977-03-16 Farmaceutici Italia Daunomycin analogues
US4307100A (en) 1978-08-24 1981-12-22 Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) Nor bis-indole compounds usable as medicaments
DE2845574A1 (de) 1978-10-19 1980-04-24 Deutsches Krebsforsch Durch heterocyclische ringe oder alkylreste substituierte analoga von ccnu und verfahren zu deren herstellung
SE8205892D0 (sv) 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
EP0111058B1 (en) 1982-11-26 1987-11-04 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Process for producing 4'-demethyl-epipodophyllotoxin-beta-d-ethylidene-glucoside and acyl-derivative thereof
US4526988A (en) 1983-03-10 1985-07-02 Eli Lilly And Company Difluoro antivirals and intermediate therefor
JPS6019790A (ja) 1983-07-14 1985-01-31 Yakult Honsha Co Ltd 新規なカンプトテシン誘導体
SE8405493D0 (sv) 1984-11-01 1984-11-01 Bror Morein Immunogent komplex samt sett for framstellning derav och anvendning derav som immunstimulerande medel
DK166762B1 (da) * 1986-01-14 1993-07-12 Nederlanden Staat Fremgangsmaade til fremstilling af immunogenkomplekser og farmaceutisk sammensaetning indeholdende saadanne komplekser
FR2601675B1 (fr) 1986-07-17 1988-09-23 Rhone Poulenc Sante Derives du taxol, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
FR2601676B1 (fr) 1986-07-17 1988-09-23 Rhone Poulenc Sante Procede de preparation du taxol et du desacetyl-10 taxol
US5004758A (en) 1987-12-01 1991-04-02 Smithkline Beecham Corporation Water soluble camptothecin analogs useful for inhibiting the growth of animal tumor cells
NZ230747A (en) * 1988-09-30 1992-05-26 Bror Morein Immunomodulating matrix comprising a complex of at least one lipid and at least one saponin; certain glycosylated triterpenoid saponins derived from quillaja saponaria molina
JPH0679958B2 (ja) 1988-10-07 1994-10-12 東レ株式会社 糸条の巻取装置
GB8919819D0 (en) 1989-09-01 1989-10-18 Coopers Animal Health Complexes having adjuvant activity
NL9002314A (nl) * 1990-10-23 1992-05-18 Nederlanden Staat Immunogene complexen, in het bijzonder iscoms.
MX9102128A (es) 1990-11-23 1992-07-08 Rhone Poulenc Rorer Sa Derivados de taxano,procedimiento para su preparacion y composicion farmaceutica que los contiene
SE502569C2 (sv) * 1991-05-31 1995-11-13 British Tech Group Användning av en immunologiskt inert matris av en sterol och saponiner som kan bilda sfäriska nanopartiklar med snäv storleksfördelning som läkemedelsbärare, partiklar, komposition samt kit
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
EP1400536A1 (en) 1991-06-14 2004-03-24 Genentech Inc. Method for making humanized antibodies
IT1250692B (it) 1991-07-23 1995-04-21 Procedimento per la preparazione di demetilepipodofillotossina- beta-d-glucosidi.
US5650398A (en) * 1992-07-02 1997-07-22 Cambridge Biotech Corporation Drug delivery enhancement via modified saponins
US5476932A (en) 1994-08-26 1995-12-19 Hoffmann-La Roche Inc. Process for producing N4-acyl-5'-deoxy-5-fluorocytidine derivatives
AUPM873294A0 (en) * 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
US20010053365A1 (en) * 1995-04-25 2001-12-20 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Vaccines
SE9600647D0 (sv) 1996-02-21 1996-02-21 Bror Morein Ny användning
GB9718901D0 (en) * 1997-09-05 1997-11-12 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
GB9719426D0 (en) 1997-09-13 1997-11-12 Johnson Matthey Plc Novel process
GB9817052D0 (en) * 1998-08-05 1998-09-30 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
WO2000021490A1 (de) * 1998-10-14 2000-04-20 Cognis Deutschland Gmbh Verwendung von nanoskaligen sterolen und sterolestern
CA2400842C (en) * 2000-02-23 2013-01-15 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Novel compounds
US7713942B2 (en) * 2001-04-04 2010-05-11 Nordic Vaccine Technology A/S Cage-like microparticle complexes comprising sterols and saponins for delivery of polynucleotides
DK1377320T3 (da) 2001-04-04 2009-02-09 Nordic Vaccine Technology As Polynukleotidbindingskomplekser omfattende steroler og saponiner
EP1401396A4 (en) * 2001-06-15 2009-08-05 Cornerstone Pharmaceuticals PHARMACEUTICAL AND DIAGNOSTIC COMPOSITIONS WITH NANOPARTICLES FOR THE TREATMENT OF TARGET TISSUE AND CELLS
GB0123580D0 (en) * 2001-10-01 2001-11-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
CA2470524A1 (en) * 2001-12-21 2003-07-24 David S. Soane Use of oligomers and polymers for drug solublization, stabilization, and delivery
US6861410B1 (en) * 2002-03-21 2005-03-01 Chiron Corporation Immunological adjuvant compositions
SE0202110D0 (sv) 2002-07-05 2002-07-05 Isconova Ab Iscom preparation and use thereof
AU2003269839B2 (en) 2002-10-02 2006-07-27 Nordic Vaccine A/S Composition for vaccination
SE0301998D0 (sv) 2003-07-07 2003-07-07 Isconova Ab Quil A fraction with low toxicity and use thereof
US20050175623A1 (en) * 2004-02-10 2005-08-11 Zheng-Pin Wang Saponins as anticancer agent
US20080194494A1 (en) * 2005-04-26 2008-08-14 Microbia, Inc. 4-Biarylyl-1-Phenylazetidin-2-One Glucuronide Derivatives for Hypercholesterolemia
KR100641060B1 (ko) * 2005-07-22 2006-11-01 삼성전자주식회사 게이트 구조물의 제조 방법 및 이를 이용하는 반도체장치의 제조 방법
DE102006007903A1 (de) 2005-12-21 2007-07-05 VD-Werkstätten GmbH & Co KG Verfahren für die Herstellung von Möbel-Formteilen
WO2007083643A1 (ja) * 2006-01-18 2007-07-26 National University Corporation Tokyo Medical And Dental University 骨形成促進物質とナノゲルを含有する骨形成用生体材料
ES2630205T3 (es) * 2006-11-20 2017-08-18 Duecom Uso de partículas que contengan lípidos que comprenden saponínas quillaja para el tratamiento del cáncer
CN101848702B (zh) * 2006-12-01 2013-07-17 安特里奥公司 两亲实体纳米粒子
CN101573447A (zh) * 2006-12-29 2009-11-04 赢创德固赛有限责任公司 具有降低的产物抑制作用的甲硫氨酸合酶
US20080311045A1 (en) * 2007-06-06 2008-12-18 Biovaluation & Analysis, Inc. Polymersomes for Use in Acoustically Mediated Intracellular Drug Delivery in vivo
AU2008314647B2 (en) * 2007-10-12 2013-03-21 Massachusetts Institute Of Technology Vaccine nanotechnology
SG185294A1 (en) * 2007-10-12 2012-11-29 Csl Ltd Method of eliciting an immune response against pandemic influenza virus
NZ602945A (en) * 2008-06-27 2014-05-30 Zoetis Llc Novel adjuvant compositions
JP5769624B2 (ja) * 2008-08-28 2015-08-26 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム ワクチン
JP5344558B2 (ja) * 2008-10-31 2013-11-20 国立大学法人 東京医科歯科大学 カチオン性ナノゲルを用いる粘膜ワクチン
MX2012000036A (es) * 2009-06-24 2012-02-28 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacuna.
US9492531B2 (en) * 2009-06-24 2016-11-15 Glaxosmithkline Biologicals Sa Recombinant RSV vaccines
AU2010269148A1 (en) 2009-07-10 2012-01-19 Isconova Ab New composition
US20130302369A1 (en) * 2011-02-04 2013-11-14 Omar Yousif Abdelmagid Immunogenic Bordetella Bronchiseptica Compositions
WO2012155021A1 (en) * 2011-05-11 2012-11-15 Nanovalent Pharmaceuticals, Inc. Enhanced growth inhibition of osteosarcoma by cytotoxic polymerized liposomal nanoparticles targeting the alcam cell surface receptor
ES2673957T5 (es) 2011-10-03 2021-12-15 Croda Int Plc Nanopartículas, procedimiento para la preparación y utilización de las mismas como portadoras de moléculas anfipáticas o hidrofóbicas en el campo de la medicina, incluyendo el tratamiento del cáncer, y compuestos de tipo alimentario
GB201119999D0 (en) * 2011-11-20 2012-01-04 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
AR095962A1 (es) 2013-04-01 2015-11-25 Moreinx Ab Nanopartículas, compuestas de esterol y saponina de quillaja saponaria molina, proceso para preparación y uso de las mismas como portadores para moléculas anfipáticas o hidrófobas en el campo de la medicina incluyendo tratamiento de cáncer y compuestos relacionados con alimentos
US11390483B2 (en) 2017-10-20 2022-07-19 Corelex Shin-Ei Co., Ltd. Log roll manufacturing apparatus

Also Published As

Publication number Publication date
ZA201402040B (en) 2016-01-27
RS57350B1 (sr) 2018-08-31
PL2750683T3 (pl) 2018-10-31
US20170260224A1 (en) 2017-09-14
DK3311827T3 (da) 2023-04-03
US20180327443A1 (en) 2018-11-15
EP2750683B1 (en) 2018-03-21
JP6050822B2 (ja) 2016-12-21
IN2014DN03485A (tr) 2015-06-05
HRP20180956T1 (hr) 2018-08-24
US10487107B2 (en) 2019-11-26
EP3311827B1 (en) 2023-01-04
US10100078B2 (en) 2018-10-16
AU2012319239B2 (en) 2017-04-20
EP3311827A1 (en) 2018-04-25
CN103857403A (zh) 2014-06-11
DK2750683T3 (en) 2018-07-02
WO2013051994A1 (en) 2013-04-11
JP2014530219A (ja) 2014-11-17
CN103857403B (zh) 2019-04-12
CA2850296C (en) 2021-01-12
EP4176871A1 (en) 2023-05-10
US20140234349A1 (en) 2014-08-21
AU2012319239A1 (en) 2014-04-03
US10047116B2 (en) 2018-08-14
ES2673957T3 (es) 2018-06-26
EP2750683A1 (en) 2014-07-09
EP2750683B2 (en) 2021-01-06
PT2750683T (pt) 2018-06-26
DK2750683T4 (da) 2021-04-12
KR20140084113A (ko) 2014-07-04
CA2850296A1 (en) 2013-04-11
ES2673957T5 (es) 2021-12-15
KR102090740B1 (ko) 2020-03-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10487107B2 (en) Nanoparticles, process for preparation and use thereof as carrier for amphipatic and hydrophobic molecules in fields of medicine including cancer treatment and food related compounds
US20180104330A1 (en) Nanoparticles, Composed of Sterol and Saponin From Quillaja Saponaria Molina Process for Preparation and Use Thereof as Carrier for Amphipatic of Hydrophobic Molecules in Fields of Medicine Including Cancer Treatment and Food Related Compounds
Dhakal et al. Biodegradable nanoparticle delivery of inactivated swine influenza virus vaccine provides heterologous cell-mediated immune response in pigs
Dhakal et al. Liposomal nanoparticle-based conserved peptide influenza vaccine and monosodium urate crystal adjuvant elicit protective immune response in pigs
Bernocchi et al. Mechanisms allowing protein delivery in nasal mucosa using NPL nanoparticles
CN101563090A (zh) 包含南美皂皮树皂苷的含脂质颗粒用于治疗癌症的用途
CN103990120B (zh) 抗感染剂及其用途
JP7504887B2 (ja) ワクチンアジュバント効果を有するフィラメント状ナノ粒子
JP7487892B2 (ja) 医薬ベシクル製剤を調製するための方法、ならびに関連する製品および使用
WO2021207635A1 (en) Prussian blue nanoparticles functionalization with latency reversing agents and broadly neutralizing antibodies, and applications thereof
CN117771361A (zh) 一种聚肌苷酸-聚胞苷酸复合物的脂质纳米佐剂及其制备方法与应用
Betbeder et al. Mechanisms allowing protein delivery in nasal mucosa using NPL nanoparticles
Mukherjee et al. One Health Approach and Meta-Analysis for Influenza Prevention