NO166449B - Gonadoliberinderivater. - Google Patents
Gonadoliberinderivater. Download PDFInfo
- Publication number
- NO166449B NO166449B NO845193A NO845193A NO166449B NO 166449 B NO166449 B NO 166449B NO 845193 A NO845193 A NO 845193A NO 845193 A NO845193 A NO 845193A NO 166449 B NO166449 B NO 166449B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- mmol
- trp
- pro
- solution
- peptide
- Prior art date
Links
- 108050000048 Gonadoliberin Proteins 0.000 title claims description 21
- 102000009165 Gonadoliberin Human genes 0.000 title claims description 21
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N glycinamide Chemical compound NCC(N)=O BEBCJVAWIBVWNZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 claims description 4
- 125000001998 leucyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000002436 D-phenylalanyl group Chemical group N[C@@H](C(=O)*)CC1=CC=CC=C1 0.000 claims description 2
- 125000003440 L-leucyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 125000002435 L-phenylalanyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000001939 glutaminyl group Chemical group 0.000 claims 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 91
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 87
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 51
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 46
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 45
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 40
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 37
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 31
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 25
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 25
- 125000000031 ethylamino group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])N([H])[*] 0.000 description 23
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 17
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- QPJSUIGXIBEQAC-UHFFFAOYSA-N n-(2,4-dichloro-5-propan-2-yloxyphenyl)acetamide Chemical compound CC(C)OC1=CC(NC(C)=O)=C(Cl)C=C1Cl QPJSUIGXIBEQAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 13
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 7
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 6
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- -1 alkyl amides Chemical class 0.000 description 6
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 6
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical group CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 5
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 5
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 4
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 4
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 4
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 4
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 4
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 4
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 4
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 4
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical compound CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 4
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100021923 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Human genes 0.000 description 3
- 101710202113 Prolow-density lipoprotein receptor-related protein 1 Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 3
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 2
- AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-5-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KACAMSDOZKVKNP-LURJTMIESA-N (2s)-n-ethylpyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1 KACAMSDOZKVKNP-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008574 D-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 101000857870 Squalus acanthias Gonadoliberin Proteins 0.000 description 2
- 238000005915 ammonolysis reaction Methods 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 239000002178 crystalline material Substances 0.000 description 2
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 2
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007327 hydrogenolysis reaction Methods 0.000 description 2
- DUVCFSAIRDBKIM-FHWLQOOXSA-N methyl (2s)-2-[[(2s)-3-(1h-imidazol-5-yl)-2-[[(2s)-5-oxopyrrolidine-2-carbonyl]amino]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoate Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)OC)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CN=CN1 DUVCFSAIRDBKIM-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N triethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN(CC)CC ILWRPSCZWQJDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HBGPNLPABVUVKZ-POTXQNELSA-N (1r,3as,4s,5ar,5br,7r,7ar,11ar,11br,13as,13br)-4,7-dihydroxy-3a,5a,5b,8,8,11a-hexamethyl-1-prop-1-en-2-yl-2,3,4,5,6,7,7a,10,11,11b,12,13,13a,13b-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]chrysen-9-one Chemical compound C([C@@]12C)CC(=O)C(C)(C)[C@@H]1[C@H](O)C[C@]([C@]1(C)C[C@@H]3O)(C)[C@@H]2CC[C@H]1[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@H]1C(=C)C HBGPNLPABVUVKZ-POTXQNELSA-N 0.000 description 1
- ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N (2s)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- JIMLDJNLXLMGLX-JTQLQIEISA-N (2s)-5-amino-5-oxo-2-(phenylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 JIMLDJNLXLMGLX-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 1,3-dicyclohexylurea Chemical compound C1CCCCC1NC(=O)NC1CCCCC1 ADFXKUOMJKEIND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 1-[6-[4-(5-chloro-6-methyl-1H-indazol-4-yl)-5-methyl-3-(1-methylindazol-5-yl)pyrazol-1-yl]-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl]prop-2-en-1-one Chemical compound ClC=1C(=C2C=NNC2=CC=1C)C=1C(=NN(C=1C)C1CC2(CN(C2)C(C=C)=O)C1)C=1C=C2C=NN(C2=CC=1)C AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFRGGOIBYLYVKM-UHFFFAOYSA-N 15alpha-hydroxylup-20(29)-en-3-one Natural products CC(=C)C1CCC2(C)CC(O)C3(C)C(CCC4C5(C)CCC(=O)C(C)(C)C5CCC34C)C12 PFRGGOIBYLYVKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 3-(2-methoxyethoxy)benzohydrazide Chemical compound COCCOC1=CC=CC(C(=O)NN)=C1 GNFTZDOKVXKIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-n-methylthiophene-2-sulfonamide Chemical compound CNS(=O)(=O)C1=CC=C(Br)S1 JLLYLQLDYORLBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N GnRH Chemical compound C1CCC(C(=O)NCC(N)=O)N1C(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(CO)NC(=O)C(CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)C(CC=1NC=NC=1)NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 NMJREATYWWNIKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000579 Gonadotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- SOKRNBGSNZXYIO-UHFFFAOYSA-N Resinone Natural products CC(=C)C1CCC2(C)C(O)CC3(C)C(CCC4C5(C)CCC(=O)C(C)(C)C5CCC34C)C12 SOKRNBGSNZXYIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical class [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LONQTZORWVBHMK-UHFFFAOYSA-N [N].NN Chemical compound [N].NN LONQTZORWVBHMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- KPGVUOQMOHGHEW-LBPRGKRZSA-N boc-his(dnp)-oh Chemical compound C1=NC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O KPGVUOQMOHGHEW-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 150000004696 coordination complex Chemical class 0.000 description 1
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N diphosphonate Chemical compound O=P(=O)OP(=O)=O YWEUIGNSBFLMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- VFRSADQPWYCXDG-LEUCUCNGSA-N ethyl (2s,5s)-5-methylpyrrolidine-2-carboxylate;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.CCOC(=O)[C@@H]1CC[C@H](C)N1 VFRSADQPWYCXDG-LEUCUCNGSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 description 1
- 229940035638 gonadotropin-releasing hormone Drugs 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XNFNGGQRDXFYMM-PPHPATTJSA-N methyl (2s)-2-amino-3-(1h-indol-3-yl)propanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)OC)=CNC2=C1 XNFNGGQRDXFYMM-PPHPATTJSA-N 0.000 description 1
- JKRHDMPWBFBQDZ-UHFFFAOYSA-N n'-hexylmethanediimine Chemical compound CCCCCCN=C=N JKRHDMPWBFBQDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000069 nitrogen hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N phosphorus pentoxide Inorganic materials O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920003053 polystyrene-divinylbenzene Polymers 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000036299 sexual function Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N sulfuric acid Substances OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/13—Luteinizing hormone-releasing hormone; related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår nye gonadoliberinderivater.
Nærmere bestemt angår oppfinnelsen nye gonadoliberinderivater kjennetegnet ved at de har generell formel (I)
hvori
X er en glycyl- eller en D-fenylalanylgruppe,
X2 betegner en L-leucyl-, L-fenylalanyl- eller L-tryptofylgruppe,
X 7 betegner en glutaminyl- eller en leucylgruppe, og
X. er et glycinamid eller en C^_4-alkylamidgruppe,
forutsatt at hvis X^ betegner en gruppe forskjellig fra glycyl og X? er en tryptofylgruppe, kan X3 ikke være leucyl,
og addisjonssalter dannet med terapeutisk akseptable syrer,
og komplekser derav.
Forkortelsene anvendt i formelen, er identiske med den nomenklatur som er akseptert innen peptidkjemien som er beskrevet i f.eks. J. Biol. Chem. [241, 527 (196G)].
Det er en generell egenskap ved gonadoliberin (andre
navn kjent innen litteraturen: gonadotroptfrigivende hormon,
GnRH, luteiniserende og follikkelstimulerende hormon,
LH/FSH) og dets kjente derivater at de er i stand til å frigi
det luteiniserende hormon (LH) og det follikkelstimulerende hormon (FSH).
Fra tidlig i 80-årene er det blitt kjent fra littera-
turen at gonadoliberin fra visse fisker og fugler avviker strukturelt fra pattedyr [J. A. King og R. P. Millar,
J. Biol. Chem. 2 57, 10722-28 (1982); South African Journal
of Science 78, 124 (1982); N. Sherwood et al., Proe. Nati.
Acad. Sei. 80, 2794-2798 (1983)]. Disse forskjeller finnes
i aminosyrene i 7- og/eller 8-stilling.
Det er også kjent fra litteraturen at de derivater av gonadoliberin som inneholder i 6-stilling visse D-aminosyrer istedenfor glycin, utviser forøket biologisk aktivitet sammenlignet med det naturlige gonadoliberin (J. Sandow et al., Control of Ovulation, Butterworth, London, 1978, s. 49-70).
Det er ennvidere kjent at substitusjon av glycinamid-delen i 10-stilling med amidgrupper med alifatisk carbon-kjede [M. Fujino et al., J. Med. Chem. 16, 1144-1147 (1973)] øker den biologiske aktivitet til et enda høyere nivå.
Foreliggende oppfinnelse angår gonadoliberinderivater som er anvendbare for fiskers, fuglers og pattedyrs naturlige reproduksjonssyklus. Disse derivater er således ikke å betrakte som legemidler, og anvendes ikke som legemidler, men som reproduksjonsstimulerende midler, og kan i så måte sammen-lignes med reproduksjonshindrende midler som p-piller.
Ennvidere angår oppfinnelsen derivater med forøket biologisk aktivitet i forhold til de naturlige.
Oppfinnelsen er basert på den erkjennelse at forandr-ingen av aminosyrer i 7- og 8-stilling i gonadoliberinmole-kylet med andre aminosyrer og visse kombinasjoner av disse forandringer, resulterer i gonadoliberinanaloger som er egnet for påvirkning av reproduksjonssyklusen for fisker, fugler og pattedyr.
Ennvidere er oppfinnelsen basert på den erkjennelse at effektiviteten av gonadoliberinderivater fremstilt ved for-andring av aminosyrene i 7- og 8-stilling/ kan økes ved inn-føring av visse D-aminosyrer i 6-stilling og alkylamid-grupper i 10-stilling istedenfor glycin og glycinamid.
Nonapeptid-C^_^-alkylamidene og decapeptidamidene av generell formel (I)
hvori X1# X0, X^ og X^ har de ovenfor angitte betydninger, og salter og komplekser derav, kan fremstilles som følger: a) ved anvendelse av fast-fase-peptidsyntesen kobles de egnede beskyttede aminosyrer i den krevede rekkefølge til en
fast polymerbærer ved hjelp av carbodiimid eller aktiv ester, og i et gitt tilfelle splittes peptidet lett av fra bæreren ved acidolyse eller aminolyse, og, om ønsket, fjernes de beskyttende grupper for aminosyrene fra peptidet samtidig, før eller etter avsplitting av peptidet fra polymerbæreren, eller
b) det krevede sluttprodukt bygges opp fra de egnede beskyttede aminosyrer ved anvendelse av en riktig kombinasjon
av fragmentkondensasjon og trinnvis syntese, avhengig av den kjemiske karakter av de variable aminosyrekomponenter.
Det er fordelaktig å anvende benzhydrylamin eller Boc-prolinharpiks som fast bærer.
Det er hensiktsmessig å eliminere det beskyttede peptid fra bæreren ved behandling med hydrogenfluorid og/eller ved ethyl-ammonolyse.
I henhold til variant b) er det fordelaktig å frem-stille de nye nona- eller decapeptidderivater ved kondensering av et pentapeptidazid av formel (II)
med et tetra- eller pentapeptid av generell formel (III) eller ved kondensering av et hexapeptidazid av generell formel (IV) med et tri- eller tetrapeptid av generell formel (V) eller ved kondensering av et heptapeptidazid av generell formel (VI) med et di- eller tripeptid av generell formel (VII)
hvori X1# X2, X3 og X4 er som ovenfor angitt.
Om ønsket, kan det erholdte nona- eller decapeptid-amid omdannes til et syresalt ved omsetning med en farma-søytisk egnet syre, eller, om ønsket, kan den frie base fri-gis fra et syresalt med en base, og, om ønsket, kan det erholdte nona- eller decapeptid-amid omdannes til et metall-kompleké.
Gonadoliberinderivatene av formel (I) kan effektivt anvendes på fisk, fugler og pattedyr når de administreres intramuskulært eller subkutant i en dose på 0,lyug til 5 mg.
Hovedfordelen med forbindelsene ifølge oppfinnelsen er at de nye gonadoliberinderivater av generell formel (I) inneholder aminosyrekombinasjoner i 7- og 8-stilling som er karakteristiske for fisker og fugler slik at de derved med fordel kan anvendes for reproduksjonssyklusen også for disse dyrearter. Den fordelaktige og overraskende effekt av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse sammenlignet med forbindelsene i kjent teknikk ligger i det faktum at de kjente gonadoliberinderivater kan anvendes ved reproduksjonssyklusen av enten fugler, pattedyr eller fisk, mens derimot gonadoliberinderivatene ifølge foreliggende oppfinnelse opp-viser en stimulerende effekt på seksualfunksjonene hos alle tre grupper dyr. Ved siden av anvendeligheten av denne egenskap er denne effekt overraskende og ikke-forutsigbar for fagmannen, fordi egenskapene til de kjente forbindelser på forhånd ikke kunne gi fagmannen noen anledning til å for-vente at det kunne fremstilles gonadoliberinderivater som utøver sin reproduksjonspåvirkende effekt på alle de tre ovennevnte grupper dyr.
Ytterligere detaljer ved oppfinnelsen fremgår fra de etterfølgende eksempler.
I eksemplene 1 til 5 fremstilles forbindelsene ved fast-faseteknikken [Merrifield, R. B., J. Am. Chem. Soc. 85, 2149-2151 (1953)] under anvendelse av klormethylert poly-styren-divinylbenzenharpiks når det gjelder peptidalkyl-amider, eller benzhydrylaminharpiks når det gjelder peptid-amider. De individuelle aminosyrer kobles til harpiksen som deres N-a-tert-butyloxycarbonyl- (Boe) derivater under anvendelse av dicyclohexylcarbodiimid (DCC), N,N<1->diisopropyl-carbodiimid (DIC) eller aktiv estermetoden. De reaktive sidekjedegrupper av aminosyren beskyttes, om ønsket, med egnede beskyttende grupper.
Fullføringen av koblingsreaksjonen måles ved ninhydrin-testen [Kaiser, E., Colescott, R. L., Bossinger, C. D. og Cook, P. I., Anal. Biochem. 3_4, 595-598 (1970) ] ■ Hvis testen er positiv, gjentas koblingen. Varigheten av koblingen varierer mellom 1 og 16 timer avhengig av aminosyren.
Avbeskyttelse av peptidet såvel som splitting av peptidet fra harpiksen utføres fortrinnsvis i ett trinn, med væskeformig hydrofluorsyre (HF) [Sakakibara, S.,
Shimonishi, Y., Kishida, Y., Okada, M. og Sugikara, H., Bull. Soc. Japan 40, 2164-2167 (1967)]. Når N<im->dinitro-fenyl-(DNP) beskyttende gruppe anvendes, fjernes denne fra sidekjeden av histidin før HF-splittingen. Den beskyttede peptidharpiks omrøres i dimethylformamid (DMF) inneholdende noen få dråper propylamin. Etter fjerning av løsningsmidlet behandles peptidharpiksen med hydrogenfluorid på vanlig måte. Hvor en forbindelse av peptidalkylamidtype skal fremstilles, separeres peptidet fra harpiksen ved alkyl-ammonolyse etter-fulgt av hydrogenolyse og/eller acidolyse, avhengig av arten av de beskyttende grupper.
Det urene produkt erholdt etter HF-splitting, under-kastes gelfiltrering på en kolonne pakket med Sephadex® G-25 under anvendelse av en eddiksyreløsning som elueringsmiddel.
Ytterligere rensing utføres ved anvendelse av preparativ væskekromatografi med høy ytelse (HPLC) og/eller silicagelkromatografi. Renheten av peptidene testes ved aminosyreanalyse og ved tynnskiktskromatografi (TLC). TLC R^-verdiene bestemmes på kiselgelplater (DC, Alufolien) under anvendelse av følgende løsningsmiddelblandinger: 1. Ethylacetat/pyridin/eddiksyre/vann 30 : 20 : 6 : 11 2. Ethylacetat/pyridin/eddiksyre/vann 60 : 20 : 6 : 11 3. Ethylacetat/pyridin/eddiksyre/vann 120 : 20 : 6 : 11 4. Ethylacetat/pyridin/eddiksyre/vann 240 : 20 : 6 : 11 5. n-butanol/eddiksyre/vann/ethylacetat 1 : 1 : 1 : 1 6. n-butanol/eddiksyre/vann 4 : 1 : 1 7. i-propanol/1 M eddiksyre 2 : 1 8. Ethylacetat/pyrldin/eddiksyre/vann 5 : 5 : 1 : 3 9. n-butanol/eddiksyre/ammoniakk (1 cm<3> NH3 : 4 H20)/vann 6 : 1 : 1 : 2 10. Methyl-ethyl-keton/eddiksyre/vann 120 : 15 : 20
Eksempel 1
6 8
Fremstilling av D- Phe , Gin - gonadoliberin
M: 1243
a) Syntese
1,25 g (1 mmol) benzhydrylaminharpiks.HC1 (0,8 meq/g)
ble svellet i CH2C12 i 2 timer, deretter ble følgende skjema anvendt for kobling av aminosyrerestene:
Gin kobles som dets Boc-Gln-ONP- (p-nitrofenyl) derivat ved aktiv ester-metoden. Når det gjelder Gip, beskyttes ikke a-aminogruppen.
Etter hver syklus (etter trinn 12) taes en aliquot for ninhydrintest, og hvis testen er negativ, startes neste syklus ved trinn 1, og hvis testen er positiv, startes en ny rekobling (trinn 5-12).
Etter endt syntese ble det erholdt 2,28 g Glp-His(Tos)-Trp-Ser(OBzl)-Tyr(OBzl)-D-Phe-Leu-Gln-Pro-Gly-peptid.
AW: 1,05 g (66%) (^^^ peptid: 1577)
b) HF- splitting
2,28 g av det beskyttede peptid ble behandlet med 30 ml
redestillert HF i nærvær av 3 ml anisol og 100 mg dithio-threitol i 60 minutter ved 0°C. HF ble eliminert i vannfri nitrogengasstrøm, harpiksen ble deretter suspendert i absolutt ether og filtrert. Det faste residuum ble vasket med 50% eddiksyre, hvoretter løsningen ble fordampet i vakuum ved 37°C. Det fordampede materiale ble direkte underkastet gelfiltrering (se trinn c) nedenfor).
c) Gelfiltrering
Det urene peptid (erholdt i trinn b)) ble renset på en
kolonne av Sephadex® G-25 (2,5 x 100 cm) i 50% eddiksyre i en strømningshastighet på 15 ml/h. Separasjonen ble overvåket ved UV-absorpsjon ved 280 nm og ved TLC. Fraksjoner (300 - 350 ml) ble oppsamlet og lyofilisert.
Utbytte: 690 mg (55%).
d) Preparativ HPLC
Ytterligere rensing ble utført under anvendelse av en
preparativ HPLC-kolonne (2,5 x 45 cm), omvendt fase, C^g-bundet silicagel LRP-1 (13-24^um) som ble ekvilibrert med en løsning av 25% methanol i 30% eddiksyre. Etter ekvilibrer-ing ble 230 mg av det gelfiltrerte materiale anbrakt på kolonnen. Elueringen ble utført med et lineært gradientsystem av methanol - 30% eddiksyre (25 - 40% methanol) ved en strømningshastighet på 2 ml/min og et trykk på 3,5 x 10^ Pa. Innholdet i fraksjonene ble målt ved 280 nm og overvåket ved TLC. Oppsamling og lyofilisering av produktet ga 133 mg D-Phe 6 , Gin 8-GnRH. Den absolutte mengde må multipliseres med 3 for normalisering til 690 mg gelfiltrert materiale (399 mg, 32%).
R^ = 0,76; Rj = 0,68; R^ = 0,33; R^ = 0,93; R<®> = 0,83. Aminosyreanalyse:
Ser 0,93, Glu 1,96, Pro 0,95, Gly 1,02 Leu 1,00, Tyr 1,01
Phe 1,02, His 0,99.
Smp.: 175 - 178°C; [a]<22> = -68,0° (c = 0,1, 0,1 M AcOH).
Eksempel 2
7 8
Fremstilling av Trp , Gin - gonadoliberin
M: 1226
a) Syntese
2,5 g (1 mmol) av benzhydrylaminharpiks.HCl
(0,4 meq/g) ble svellet i CH2C12 hvoretter 3,62 g Glp-His(DNP)-Trp-Ser(OBzl)-Tyr-Gly-Trp-Gln-Pro-Gly-peptidharpiks ble fremstilt som beskrevet i eksempel la).
AW: 1,12 g (7<6%>) (<M>beskyttet peptid: <1>468).
b) Avbeskyttelse og splitting av peptidet fra harpiksen §Eiittin2_av_DNP-2rup_pen
3,62 g av den beskyttede decapeptidharpiks ble omrørt i 20 ml DMF og 1 ml propylamin i 60 minutter ved romtemperatur, hvoretter den delvis beskyttede peptidharpiks ble filtrert fra, vasket med CI^C^ og ethanol, og til slutt tørket i vakuum.
HF=sp_littin2
Etter fjerning av den DNP-beskyttende gruppe ble peptidet behandlet med HF som beskrevet i eksempel lb). På denne måte ble det erholdt 0,8 g (65%) av urent decapeptid-amid.
c) Gelfiltrering
Gelfiltreringen ble utført som beskrevet i eksempel lc).
Utbytte: 5 20 mg (42%).
d) Preparativ HPLC
Fremgangsmåten ble utført som beskrevet i eksempel ld),
med det unntak at LRP-l-gelen ble ekvilibrert med en løsning av 18% methanol i 30% eddiksyre. Det urene, gelfUtrerte materiale ble eluert fra kolonnen med et lineært gradientsystem av methanol - 30% eddiksyre (18 - 35% methanol). Således ble det erholdt 380 mg (31%) av det rene peptid. = 0,66; R^ = 0,57; R® = 0,78.
Aminosyreanalyse:
Ser 0,93, Glu 1,93, Pro 1,00, Gly 2,04, Tyr 0,98, Trp 1,86, His 1,03.
Eksempel 3
Fremstilling av Trp^, Leu<®>, desGly^- gonadoliberin- ethylamid M: 1198
a) Syntese
Boc-Pro-harpiksen ble først fremstilt i henhold til den
metode som er beskrevet av Merrifield [Merrifield, R. B.,
J. Am. Chem. Soc. 86, 304 (1964)]. 2,0 g (1 mmol) Boc-Pro-harpiks (0,5 meq/g) ble svellet i 2 timer, og deretter ble de egnede aminosyrer koblet til harpiksen den ene etter den andre i henhold til eksempel la). Etter den siste syklus ble det erholdt 3,02 g Glp-His(DNP)-Trp-Ser(OBzl)-Tyr(OBzl)-Gly-Trp-Leu-Pro-nonapeptid-harpiks.
AW: 1,02 g (8<3%>) (M, . <1>486).
^ beskyttet peptid
b) Avbeskyttelse og splitting av peptidet fra harpiksen
Først ble den DNP-beskyttende gruppe fjernet som beskrevet i eksempel 2b). Deretter ble det delvis beskyttede peptid splittet av fra harpiksen som dets ethylamidform [Coy, D. H. et al., Biochemistry 13, 323-326 (1974)]. For dette formål ble peptidharpiksen omrørt med 15 ml kondensert ethylamin ved 0°C i 3 timer. Overskudd av ethylamin ble fjernet i en nitrogengasstrøm. Residuet ble vasket med ethanol og DMF og ble deretter filtrert. Filtratet ble fordampet i vakuum, residuet ble behandlet med ether, og det faste materiale ble filtrert.
Fullstendig avbeskyttelse av peptidet ble utført ved behandling med vannfri HF i henhold til eksempel lb). Utbytte: 710 mg(59%).
c) Gelfiltrering
Nonapeptid-ethylamidet ble ført gjennom en Sephadex<®>
G-25-kolonne i 30% eddiksyre i henhold til eksempel lc). Utbytte: 490 mg (41%).
d) Silicagelkromatografi
Det urene peptid ble renset på en kolonne av "Kieselgel" 60, 2 x 100 cm (230 - 400 mesh) i en 30:20:6:11 blanding av ethylacetat, pyridin, eddiksyre, vann i en strømnings-hastighet på 8 ml/h. 4 ml fraksjoner ble oppsamlet, og elueringen ble overvåket ved TLC. Fraksjonene inneholdende den rene substans, ble fordampet og lyofilisert.
Utbytte: 320 mg (26%)., R<*> = 0,61; R<2> = 0,42; R<®> = 0,75. Aminosyreanalyse: Ser 0,89, Glu 0,96, Pro 0,95, Gly 0,97, Leu 1,00, Tyr 1,02, Trp 1,88, His 1,03.
Eksempel 4
7 8
Fremstilling av Phe , Gin - gonadoliberin
M: 1187
a) Syntese
1,25 g (1 mmol) benzhydrylamin.HCl-harpiks (0,8 meq/g)
ble svellet i CH2C12 i 2 timer, hvorpå 2,9 g Glp-His(Tos)-Trp-Ser-(OBzl)-Tyr(OBzl)-Gly-Phe-Gln-Pro-Gly-peptid-harpiks ble fremstilt som beskrevet i eksempel la).
AW: 1,27 g (83%) (M, . J. JJ: 1521).
beskyttet peptid '
b) HF- splitting
Det beskyttede peptid ble behandlet med vannfri HF i henhold til eksempel lb). Således ble det erholdt 980 mg (82%) av avbeskyttet materiale.
c) Gelfiltrering
Det urene decapeptidamid ble renset på en kolonne av
Sephadex® G-25 i 2 M eddiksyre slik som beskrevet i eksempel lc). Utbytte: 576 mg (49%).
d) Preparativ HPLC
Fremgangsmåten ble utført som beskrevet i eksempel ld),
med det unntak at LRP-l-gelen ble ekvilibrert med en løsning av 10% methanol i 20% eddiksyre. Elueringen ble utført med et lineært gradientsystem av methanol - 20% eddiksyre (10 - 25% methanol, 150 - 150 ml) og ble deretter fortsatt med et 25 - 40% methanol-holdig, lineært gradientsystem (150 - 150 ml av hver). Fraksjoner inneholdende det rene peptid ble oppsamlet og fordampet. Utbytte: 448 mg, (38%). = 0,12, Rj = 0,7, Rj 0,24, R^ 0,87.
Aminosyreanalyse:
Ser 0,87, Glu 2,05, Pro 1,03, Gly 2,13, Tyr 0,92, Phe 1,00, His 0,95, Trp 0,81.
Smp.: 182°C.
Eksempel 5
7 8
Fremstilling av Phe , Leu - gonadoliberin
M: 1172
a) Syntese
0,62 g (0,5 mmol) benzhydrylamin.HCl-harpiks
(0,8 meq/g) ble svellet i CH2C12 i 2 timer hvoretter 1,33 g Glp-His(Tos)-Trp-Ser(OBzl)-Tyr(OBzl)-Gly-Phe-Leu-Pro-Gly-peptid-harpiks ble syntetisert som beskrevet i eksempel la). AW: 695 mg (92%) (Mbeskyttet peptld<:><1>506).
b) HF- splitting
Det beskyttede peptid ble behandlet med HF som beskrevet
i eksempel lb). Det ble således erholdt 510 mg (87%) av det urene decapeptid.
c) Gelfiltrering
Det urene decapeptidamid erholdt i trinn b), ble an-bragt på en kolonne av Sephadex^ G-25 i 2 M eddiksyre og ble renset som beskrevet i eksempel lc). Utbytte: 363 mg (62%).
d) Silicagelkromatografi
Peptidet ble ytterligere renset på en kolonne av
"Kieselgel" 60 (2 x 100 cm) i en 1:1:1:1 blanding av n-butanol, eddiksyre, vann og ethylacetat. Innholdet av fraksjonene ble overvåket ved 280 nm ved TLC. Det ble således erholdt 299 mg (51%) av det rene decapeptidamid.
Rf = 0,55; R^ = 0,39; R^ = 0,62; R^ = 0,73.
Aminosyreanalyse:
Ser 0,91, Glu 0,97, Pro 1,07, Gly 2,12, Leu 1,00, Tyr 1,03, Phe 0,94, His 1,05.
Eksempel 6
6 8 1'
Fremstilling av D- Phe , Gin , desGly ■ adoliberin-ethylamid
M: 1198
a) Boc- His( DNP)- Trp- OMe
M: 623
21,12 g (50 mmol) Boc-His(DNP)-0H ble oppløst i 100 ml
DMF, og løsningen ble avkjølt til 0°C. Deretter ble 10,32 g (50 mmol) DCCI og 7,66 g (50 mmol) N-hydroxy-benztriazol tilsatt under omrøring. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 10 minutter, og det utfelte dicyclohexylurea ble filtrert fra.
12,74 g (50 mmol) H-Trp-OMe.HC1 ble oppløst i 70 ml DMF, og løsningen ble avkjølt til 0°C. 693 ml (50 mmol) triethylamin ble tilsatt, og etter omrøring i 5 minutter ble det utfelte triethylamin-hydroklorid filtrert fra.
De to løsninger ble kombinert og omrørt ved 0°C over natten. Deretter ble det utfelte DCU filtrert fra, og løs-ningen ble fordampet til tørrhet. Det oljeaktige residuum ble oppløst i 500 ml ethylacetat og rystet med tre 100 ml porsjoner iskald 1 M KHS04-løsning, fem 100 ml porsjoner mettet NaHC03-løsning og til slutt med to 100 ml porsjoner 10% NaCl-løsning. Den organiske fase ble tørket over magnesiumsulfat, filtrert og fordampet til tørrhet. Den erholdte oljeaktige substans ble behandlet med petroleumether, filtrert og tørket. Det erholdte krystallinske produkt kan omkrystalliseres fra ethylacetat med petroleumether.
Utbytte: 27,7 g (89%).
Smp.: 119 - 122°C; [a]22 = +14,1° (c = 1, DMF).
4
Rf = 0,62.
b) H- His( DNP)- Trp- OMe. 2HC1
M: 522,5 (fri base); 595 (.2HC1)
24,9 g (40 mmol) Boc-His(DNP)-OMe-dipeptid ble oppløst
i 100 ml methanol, og 100 ml av en 4 n methanolisk saltsyre-løsning ble tilsatt. Blandingen fikk stå i 30 minutter ved romtemperatur mens dipeptid-hydrokloridet krystalliserte. Krystallene ble filtrert fra, vasket med ether og tørket. Utbytte: 21,91 g (92%).
Smp.: 198 - 202°C; [a]<22> = 0,49° (c = 1, DMF).
Rf = 0,46, Rf = 0,18.
c) Glp- His( DNP)- Trp- OMe
M: 634
4,85 g (36,8 mmol) L-pyroglutaminsyre, 7,58 g dicyclo-
hexylcarbodiimid og 5,63 g N-hydroxybenztriazol ble oppløst i 100 ml DMF. Blandingen ble omrørt ved 5 til 10°C i 10 minutter, hvorpå det utfelte DCU ble filtrert fra.
20,84 g (35 mmol) H-His(DNP)-Trp-OMe.2HC1 ble oppløst
i 100 ml dimethylformamid, og 9,72 ml (70 mmol) triethylamin ble tilsatt til løsningen. Etter omrøring i 5 minutter ble det utfelte triethylamin-hydroklorid filtrert fra. De to løsninger ble kombinert og omrørt ved romtemperatur over natten. Deretter ble 90 ml aceton tilsatt til blandingen,
og det utfelte uløselige materiale ble filtrert fra. Fordampning av løsningen ga et oljeaktig materiale som ble triturert med ethylacetat, filtrert og tørket. Det tørre, krystallinske materiale ble vasket med tre 25 ml porsjoner vann og tørket. Produktet kan omkrystalliseres ved oppløsning i varnt ethylacetat og avkjøling. Utbytte: 18,42 g (83,1%). Smp.: 148 - 151°C; [a]<23> = +5,2 (c = 1, DMF).
3 4
Rf = 0,53, Rf = 0,38.
d) Glp- His- Trp- OMe
M: 466
15,84 g (25 mmol) Glp-His(DNP)-Trp-OMe-beskyttet tripeptid ble oppløst i en blanding av 100 ml DMF og 40 ml vann. 4 ml mercaptoethanol ble tilsatt, og pH på løsningen ble justert til 8 med trlethyalmin. Løsningen fikk stå ved romtemperatur i 30 minutter og ble deretter fordampet til tørr-het i vakuum. Det oljeaktige materiale ble triturert med ether, filtrert og tørket. Det erholdte produkt ble oppløst i en liten mengde methanol og omkrystallisert ved tilsetning av ether. De utfelte krystaller ble filtrert fra og tørket. Utbytte: 10,92 g (93,6%). Smp.: 228 - 232°C;
[a]<22> = +4,04° (c = 0,42, DMF).
R2 = 0,30.
e) Glp- His- Trp- N2H3
M: 466,5
9,33 g (20 mmol) Glp-His-Trp-OMe-tripeptid ble oppløst i 250 ml methanol. 20 ml 98% hydrazinhydrat ble tilsatt til løsningen. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 40°C i 3 timer og deretter ved romtemperatur over natten. Det utfelte materiale ble filtrert fra, vasket med kald methanol og tørket. Utbytte: 7,58 g (81,2%).
Smp.: 166 - 169°C; [a]<22> = -22,3 (c = 0,5, DMF).
0,50, R2 = 0,14.
f) Glp- His- Trp- Ser- Tyr- OMe
M: 717
7,0 g (15 mmol) Glp-His-Trp-N2H3 erholdt i trinn e), ble oppløst i 60 ml DMF. Løsningen ble avkjølt til 0°C, og 7,5 ml (45 mmol) 6 n HCl-løsning ble tilsatt under omrøring. Deretter ble 1,035 g (15 mmol) NaN02 dråpevis tilsatt til blandingen som en konsentrert, vandig løsning, og blandingen ble omrørt ved 0°C i ytterligere 15 minutter. En løsning av 4,78 g (15 mmol) H-Ser-Tyr-OMe.HCl i 15 ml DMF ble tilsatt til reaksjonsblandingen. pH ble justert til nøytral verdi med 6,25 ml (45 mmol) triethylamin, og blandingen ble omrørt ved 0 til 4°C over natten. Neste dag ble reaksjonsblandingen fordampet til tørrhet i vakuum, og det oljeaktige produkt ble triturert med ether.
12,1 g (100%) av den ønskede forbindelse inneholdende en liten mengde forurensning, ble erholdt. Dette produkt kan omdannes til hydrazid uten rensing, og det erholdte hydrazid kan lett krystalliseres.
Fysikalske egenskaper for en kontrollprøve omkrystallisert fra methanol/ er som følger: Smp.: 188 - 190°C; [a]<22> = -3,48° (c = 1, DMF);
Rf = 0,58, R2 = 0,26.
g) Glp- His- Trp- Ser- Tyr- N2H3
M: 717
12 g urent, pulverformet Glp-His-Trp-Ser-Tyr-OMe-penta-peptidester ble oppløst i 200 ml methanol, og 10 ml 98% hydrazinhydrat ble tilsatt. Blandingen ble omrørt ved 40°C i 3 timer, ble deretter omrørt ved romtemperatur over natten, hvorpå de utfelte krystaller ble filtrert fra og tørket i en eksikator over konsentrert svovelsyre. Det tørre, krystallinske materiale ble oppløst i 250 ml av en 0,5 n saltsyre-løsning. pH på løsningen ble justert til 8 med mettet natriumcarbonatløsning. Etter henstand ved 0°C i 2 timer ble de utfelte krystaller filtrert, vasket med iskaldt vann og tørket. Utbytte: 6,12 g (56,9%, beregnet for de to trinn). Smp.: 205 - 206°C; [a]<22> = -21,51° (c = 1, DMF).
Rf = 0,39, R2 = 0,14.
Hydrazin-nitrogen: funnet: 3,79%, 3,76%
beregnet: 3,91%.
h) Z- Gln- Pro- NHEt
M: 405
3,242 g prolinethylamid (erholdt fra 22,8 mmol Z-Pro-NHEt ved hydrogenolyse) ble oppløst i 70 ml tetrahydrofuran (THF), hvoretter 5,6 g (20 mmol) Z-Gln-OH og 1,034 g N-hydroxybenztriazol ble tilsatt til løsningen. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til 0°C, og løsningen av 5,34 g (25,9 mmol) dicyclohexylcarbodiimid i THF ble dråpevis tilsatt til reaksjonsblandingen. Omrøringen ble fortsatt i 5 timer ved 0°C og deretter i 20 timer ved romtemperatur. Bunnfallet ble filtrert, vasket med THF, hvorpå filtratet ble fordampet i vakuum og residuet ble oppløst i kloroform. Løsningen ble rystet med tre 35 ml porsjoner av en blanding av NH^OH og vann (1:5), to 20 ml porsjoner vann, tre 35 ml porsjoner 0,1 n HCl-løsning og til slutt med to 20 ml porsjoner vann. Den organiske fase ble tørket over vannfritt natriumsulfat, filtrert, vasket med kloroform og fordampet. Det erholdte oljeaktige residuum ble oppløst i en blanding av 35 ml THF og 50 ml ethylacetat og ble deretter filtrert. Løsningen ble fordampet, og residuet ble triturert med ether. Det erholdte, faste produkt ble filtrert, vasket med ether og tørket i vakuum. Utbytte: 7,68 g (95%).
Rf = 0,73, Rj = 0,45.
i) Z- Leu- Gln- Pro- NHEt
M: 518,6
4,5 g (11 mmol) Z-Gln-Pro-NHEt ble oppløst i 30 ml iseddik, og 55 ml 4 n hydrogenbromid i iseddik ble tilsatt til løsningen. Reaksjonsblandingen ble holdt i 90 minutter
ved romtemperatur, hvorpå 250 ml vannfri ether ble tilsatt til blandingen som ble holdt ved romtemperatur i 60 minutter. Supernatanten ble dekantert fra, 100 ml ether ble tilsatt til residuet, og etter 15 minutter ble dette filtrert og vasket med ether. Det faste residuum ble tørket i vakuum over fos-forpentoxyd og natriumhydroxyd. Utbytte: 4,9 g (hygroskopisk).
3,8 g (11 mmol) "av det erholdte dipeptid-ethylamid.HBr ble suspendert i 150 ml kloroform, og 7 ml triethylamin ble tilsatt til suspensjonen. 6,4 g carbobenzoxy-leucyl-pentaklor-fenylester i 65 ml kloroform ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt over natten ved romtemperatur. Neste dag ble den vasket med 1 n saltsyre, mettet natriumklorid, 2 n ammonium-hydroxyd og gjentatte ganger med mettet natriumklorid-løsning. Kloroformfasen ble tørket over vannfritt natriumsulfat og fordampet i vakuum. Residuet ble triturert med ether, filtrert, vasket med ether og tørket i vakuum.
Utbytte: 4,6 g (81%).
j) H- Leu- Glri- Pro- NHEt. HBr
M: 465,5
Det urene produkt fremstilt i trinn i), ble oppløst i
10 ml iseddik og ble omrørt i 60 minutter ved romtemperatur, hvorpå løsningen ble fortynnet med 100 ml vannfri ether. Bunnfallet ble filtrert og tørket i vakuum. Utbytte: 3,54 g (76%) .
Rf = 0,1, Rf = 0,55, Rf = 0,13, Rf = 0,77.
Aminosyreanalyse:
Glu 1,05, Pro 1,19, Leu 1,00.
k) Boc- D- Phe- Leu- Gln- Pro- NHEt
M: 631,7
2,33 g (5 mmol) H-Leu-Gln-Pro-NHEt.HBr ble oppløst i
5 ml DMF og avkjølt til 0°C, hvorpå 0,7 ml (5 mmol) triethylamin og 2,57 g (5 mmol) tert.-butyloxycarbonyl-D-fenylalanyl-pentaklorfenylester i 10 ml DMF ble tilsatt til løsningen.
pH ble justert til en verdi mellom 7 og 8, hvorpå reaksjonsblandingen ble omrørt i 48 timer ved romtemperatur mens pH-verdien ble justert periodevis til nøytral verdi med triethyl-
amin. Etter fordampning av reaksjonsblandingen ble den gjen-værende substans triturert med ether og filtrert og tørket. Det erholdte, urene produkt ble underkastet en avbeskyttelse uten ytterligere rensing. Utbytte: 2,81 g (89%).
1) H- D- Phe- Leu- Gln- Pro- NHEt. TFA
M: 645,6
1,26 g (2 mmol) Boc-D-Phe-Leu-Gln-Pro-NHEt ble oppløst
i 10 ml trifluoreddiksyre og ble omrørt i 20 minutter ved romtemperatur. Trifluoreddiksyren ble fordampet i vakuum, og residuet ble triturert med ether, filtrert og tørket. Residuet ble underkastet kromatografi på en silicagelkolonne med en 4:1:1 blanding av n-butanol, eddiksyre og vann. De egnede fraksjoner ble oppsamlet og fordampet i vakuum. Residuet ble oppløst i noen få ml vann og deretter lyofilisert. Utbytte: 880 mg (68%).
Rf = 0,25, Rf = 0,35.
Smp.: 142°C; [et]<20> = -66° (c = 0,1, DMF).
m) Glp- His- Trp- Sér- Tyr- D- Phe- Leu- Gln- Pro- NHEt
M: 1199
286 mg (0,4 mmol) av pentapeptid-hydrazidet Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 fremstilt i trinn g), ble oppløst i 10 ml dimethylformamid. Løsningen ble avkjølt til -10°C, hvoretter det under omrøring ble tilsatt 0,27 ml 6 n saltsyre og deretter en konsentrert, vandig løsning av 30,2 mg natriumnitritt dråpevis. Etter 5 minutter ble løsningen av trifluoracetat-saltet av 258 mg (0,4 mmol) av tetrapeptidet H-D-Phe-Leu-Gln-Pro-NHEt fremstilt i 1 ml dimethylformamid med 0,27 ml triethylamin tilsatt ved -10°C. Om nødvendig ble reaksjonsblandingen justert til nøytral pH-vei ^d triethylamin og ble deretter omrørt i 1 time ved e^. peratur på -5°C, i 1 time ved 0°C og i 12 timer ved romtempeiatur.
Dimethylformamidet ble fjernet i vakuum, det oljeaktige residuum ble oppløst i 5 ml 0,2 n eddiksyre, og løsningen ble underkastet kromatografi på en Sephadex^ G-25-kolonne
(2 x 95 cm) med 0,2 n eddiksyre. De egnede fraksjoner ble
oppsamlet og lyofilisert. Utbytte: 298 mg (62%).
R<*> = 0,39, R<2> = 0,13, Rj = 0,48, R^ =0,14.
Aminosyrehydrolyse:
Ser 0,89, Glu 1,98, Pro 0,97, Leu 1,00, Tyr 1,03, Phe 0,99, His 1,01, Trp 0,91.
Eksempel 7
Fremstilling av Trp7, Gin<8>, desGly10- gonadoliberin- ethylamid M: 1220
a) Boc- Gln- Pro- NHEt
M: 370
1,0 g (7 mmol) prolin-ethylamid ble oppløst i 15 ml dimethylformamid, og pH-verdien ble justert til 8 med triethylamin, hvoretter 3,2 g (8,4 mmol) tert.-butyloxycarbonyl-glutaminyl-p-nitrofenylester i 15 ml dimethylformamid ble tilsatt til løsningen. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 4 8 timer ved romtemperatur mens pH-verdien ble justert periodevis til 8 med triethylamin. Etter fordampning av reaksjonsblandingen ble det oljeaktige residuum oppløst i vann, vasket med ether, og den fraskilte, vandige fase ble fordampet i vakuum og tørket. Utbytte: 1,93 g (74,5%).
Rf = 0,76.
b) H- Gln- Pro- NHEt. TFA
M: 270 (fri base) M: 367 (TFA-salt)
1,9 g (7,2 mmol) Boc-Gln-Pro-NHEt ble oppløst i 10 ml trifluoreddiksyre og blé omrørt i 20 minutter ved romtemperatur. Løsningen ble fordampet i vakuum, residuet ble triturert med ether, filtrert og tørket i vakuum. Utbytte: 1,52 g (58%).
Rf = 0,45, Rf 7 = 0,45, R^ = 0,25, R<f0> = 0,30.
Hygroskopisk substans; [a]<20> -34,8° (c = 1, MeOH).
c) Boc- Trp- Gln- Pro- NHEt
M: 557
500 mg (1,85 mmol) H-Gln-Pro-NHEt ble oppløst i 10 ml dimethylformamid. pH-verdien ble justert til 8 med triethylamin, hvoretter 608 mg (2 mmol) tert.-butyloxy-carbonyl-
tryptofan i 10 ml dimethylformamid og 6 20^ul (4 mmol) N,N'-dlisopropyl-carbodiimid ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 48 timer ved romtemperatur og ble deretter fordampet i vakuum. Residuet ble oppløst i ethylacetat og fortynnet med ether. Det utfelte Boc-Trp-Gln-Pro-NHEt ble filtrert, vasket med ether og tørket. Utbytte: 740 mg (72%).
R2 = 0,75, R<3> = 0,38.
d) H- Trp- Gln- Pro- NHEt. TFA
M: 456,5 (fri base) M: 554 (TFA-salt)
700 mg (1,25 mmol) Boc-Trp-Gln-Pro-NHEt ble oppløst i 15 ml av en 1:1 blanding av trifluoreddiksyre og CH2C1 og ble omrørt i 20 minutter ved romtemperatur. Deretter ble løsningen fordampet i vakuum, og residuet ble triturert med ether. Det faste residuum ble filtrert og tørket. Det således erholdte, urene produkt på ca. 500 mg ble renset ved kromatografi på en silicagelkolonne i en 47:20:6:11 blanding av ethylacetat, pyridin, eddiksyre og vann. De egnede fraksjoner 131e oppsamlet, fordampet til tørrhet i vakuum, og residuet ble triturert med ether. Det ble således erholdt 360 mg (52%) av et hvitt pulver.
R<*> = 0,46, R<2> = 0,18.
Smp.: 119 - 123°C; [a]<20> = -4,8° (c = 0,1, 0,1 n HC1).
e) Boc- Gly- Trp- Gln- Pro- NHEt
M: 613,7
350 mg (0,76 mmol) H-Trp-Gln-Pro-NHEt ble oppløst i dimethylformamid og koblet med 104 mg (0,8 mmol) Boc-Gly i henhold til trinn c) i eksempel 7. Således ble det erholdt 375 mg (81%) av en krystallinsk substans.
R<3> = 0,88, Rf = 0,82, Rf = 0,61.
f) H- Gly- Trp- Gln- Pro- NHEt. TFA
M: 609,6
375 mg (0,6 mmol) Boc-Gly-Trp-Gln-Pro-NHEt ble avbeskyttet og renset i henhold til trinn d) i eksempel 7. Det ble således erholdt 285 mg (76,6%) av et hvitt pulver.
R<2> = 0,08, Rf = 0,16, Rf = 0,67, Rf = 0,28.
g) Glp- His- Trp- Ser- Tyr- Gly- Trp- Gln- Pro- NHEt
M: 1216,4
286 mg (0,4 mmol) av pentapeptidhydrazidet Glp-His-Trp-Ser-Tyr-N2H3 ble koblet til 243,8 mg (0,4 mmol) H-Gly-Trp-Gln-Pro-NHet.TFA erholdt i henhold til trinn m) i eksempel 6. Det ble således erholdt 252,9 mg (52%) av en ren forbindelse. R<*> = 0,26, R<5>, = 0,32.
Aminosyreanalyse:
Ser 0,87, Glu 2,02, Pro 0,91, Gly 1,00, Tyr 1,12, His 1,05, Trp 1,80.
Claims (1)
- Gonadoliberinderivater, karakterisert ved at de har generell formel (I)hvori er en glycyl- eller en D-fenylalanylgruppe, X2 betegner en L-leucyl-, L-fenylalanyl- eller L-tryptofylgruppe, X3 betegner en glutaminyl- eller en leucylgruppe, og X. er et glycinamid eller en C^^-alkylamidgruppe, forutsatt at hvis X.^ betegner en gruppe forskjellig fra glycyl og X2 er en tryptofylgruppe, kan X3 ikke være leucyl, og addisjonssalter dannet med terapeutisk akseptable syrer, og komplekser derav.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU445883 | 1983-12-23 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO845193L NO845193L (no) | 1985-06-24 |
| NO166449B true NO166449B (no) | 1991-04-15 |
| NO166449C NO166449C (no) | 1991-07-24 |
Family
ID=10968024
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO845193A NO166449C (no) | 1983-12-23 | 1984-12-21 | Gonadoliberinderivater. |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4647553A (no) |
| JP (1) | JPS60226898A (no) |
| AT (1) | AT394727B (no) |
| AU (1) | AU583803B2 (no) |
| BE (1) | BE901307A (no) |
| CA (1) | CA1268897A (no) |
| CH (1) | CH664968A5 (no) |
| CZ (1) | CZ1021084A3 (no) |
| DD (1) | DD255164A5 (no) |
| DE (1) | DE3446997A1 (no) |
| DK (1) | DK164875C (no) |
| ES (2) | ES8607992A1 (no) |
| FI (1) | FI82255C (no) |
| FR (1) | FR2557114B1 (no) |
| GB (1) | GB2152059B (no) |
| GR (1) | GR82556B (no) |
| IL (1) | IL73902A (no) |
| IT (1) | IT1178775B (no) |
| LU (1) | LU85710A1 (no) |
| NL (1) | NL8403888A (no) |
| NO (1) | NO166449C (no) |
| SE (1) | SE469032B (no) |
| SU (1) | SU1396970A3 (no) |
| ZA (1) | ZA849985B (no) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HU193607B (en) * | 1985-07-18 | 1987-11-30 | Innofinance Altalanos Innovaci | Process for production of sexual products applyable for natural or artificial insemination for mammates |
| HU194913B (en) * | 1986-01-03 | 1988-03-28 | Innofinance Altalanos Innovaci | Process for producing novel gonadoliberin derivatives containing in the sixth position aromatic amino carboxylic acid and medical preparations containing these compounds |
| HU199694B (en) * | 1988-05-10 | 1990-03-28 | Innofinance Altalanos Innovaci | Process for producing citostatic pharmaceutical compositions containing gonadoliberin derivatives |
| CA2257381C (en) * | 1996-06-21 | 2007-08-21 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for producing peptides |
| DE19813849A1 (de) | 1998-03-27 | 1999-09-30 | Degussa | Verfahren zur einstufigen Umsalzung und Aufreinigung von Oligopeptiden |
| US6323179B1 (en) * | 1999-10-15 | 2001-11-27 | Theresa Siler-Khodr | Chicken GNRH analogs and uses thereof in regulation of fertility and pregnancy |
| US6635739B2 (en) * | 1999-10-15 | 2003-10-21 | Theresa Siler-Khodr | Non-mammalian GnRH analogs and uses thereof in regulation of fertility and pregnancy |
| DE10050831A1 (de) * | 2000-10-05 | 2002-05-02 | Veyx Pharma Gmbh | Verfahren zum Zyklusstart bei weiblichen Zuchttieren |
| WO2003016331A2 (en) * | 2001-08-17 | 2003-02-27 | Siler-Khodr Theresa M | Non-mammalian gnrh analogs and uses thereof in regulation of fertility and pregnancy |
| CN114805542A (zh) * | 2022-04-29 | 2022-07-29 | 江苏尤里卡生物科技有限公司 | 一种基于尿液中促性腺激素的纯化方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2211101A1 (de) * | 1972-03-08 | 1973-09-13 | Hoechst Ag | Neues dekapeptid mit hormon-wirkung |
| AT347054B (de) * | 1973-09-29 | 1978-12-11 | Takeda Chemical Industries Ltd | Verfahren zur herstellung von neuen nonapeptidamid-derivaten |
| US4083967A (en) * | 1973-11-01 | 1978-04-11 | Burroughs Wellcome Co. | Nona- and decapeptides |
| DE2617646C2 (de) * | 1976-04-22 | 1986-07-31 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Nonapeptid-amide und Decapeptid-amide mit Gonadoliberin-Wirkung, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese Verbindungen enthaltende pharmazeutische Präparate |
| US4213895A (en) * | 1979-03-26 | 1980-07-22 | American Home Products Corporation | N-[N-[N-[N-[N-(5-Oxo-L-prolyl)-L-histidyl]-L-tryptophyl]-L-seryl]-L-tyrosyl]glycine azide, an intermediate of the releasing agent of luteinizing hormone (LW) and of follicle stimulating hormone (FSH) |
| US4377515A (en) * | 1979-10-01 | 1983-03-22 | Merck & Co., Inc. | Long lasting agonists and antagonists of LH-RH |
| HU185535B (en) * | 1982-05-25 | 1985-02-28 | Mta Koezponti Hivatala | Process for preparing new gonadoliberin derivatives |
| US4443368A (en) * | 1982-11-01 | 1984-04-17 | The Salk Institute For Biological Studies | Peptides affecting gonadal function |
| JPS59501985A (ja) * | 1982-11-01 | 1984-11-29 | ザ・サルク・インステチュ−ト・フォ−・バイオロジカル・スタディ−ズ | 生殖腺機能に影響を及ぼすペプチド類 |
| US4410514A (en) * | 1982-12-06 | 1983-10-18 | The Salk Institute For Biological Studies | GnRH Agonists |
| US4530920A (en) * | 1983-11-07 | 1985-07-23 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Nonapeptide and decapeptide analogs of LHRH, useful as LHRH agonist |
-
1984
- 1984-02-21 IT IT8424183A patent/IT1178775B/it active
- 1984-12-19 BE BE1/11159A patent/BE901307A/fr not_active IP Right Cessation
- 1984-12-20 AT AT0404284A patent/AT394727B/de not_active IP Right Cessation
- 1984-12-20 US US06/684,065 patent/US4647553A/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-12-20 FI FI845051A patent/FI82255C/fi not_active IP Right Cessation
- 1984-12-20 CH CH6073/84A patent/CH664968A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-12-21 ZA ZA849985A patent/ZA849985B/xx unknown
- 1984-12-21 GB GB08432495A patent/GB2152059B/en not_active Expired
- 1984-12-21 AU AU37098/84A patent/AU583803B2/en not_active Ceased
- 1984-12-21 NL NL8403888A patent/NL8403888A/nl not_active Application Discontinuation
- 1984-12-21 IL IL73902A patent/IL73902A/xx unknown
- 1984-12-21 FR FR848419639A patent/FR2557114B1/fr not_active Expired
- 1984-12-21 NO NO845193A patent/NO166449C/no unknown
- 1984-12-21 DD DD84271457A patent/DD255164A5/de not_active IP Right Cessation
- 1984-12-21 CZ CS8410210A patent/CZ1021084A3/cs unknown
- 1984-12-21 JP JP59268720A patent/JPS60226898A/ja active Pending
- 1984-12-21 SU SU843827701A patent/SU1396970A3/ru active
- 1984-12-21 DK DK625084A patent/DK164875C/da active
- 1984-12-21 CA CA000470789A patent/CA1268897A/en not_active Expired - Fee Related
- 1984-12-21 DE DE3446997A patent/DE3446997A1/de active Granted
- 1984-12-21 ES ES538988A patent/ES8607992A1/es not_active Expired
- 1984-12-21 LU LU85710A patent/LU85710A1/fr unknown
- 1984-12-21 GR GR82556A patent/GR82556B/el unknown
- 1984-12-21 SE SE8406554A patent/SE469032B/sv unknown
-
1985
- 1985-12-16 ES ES550009A patent/ES8702439A1/es not_active Expired
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR0144144B1 (ko) | Lhrh 동족체 및 이를 함유하는 약제학적 조성물 | |
| US3853837A (en) | Novel nonapeptide amide analogs of luteinizing hormone releasing factor | |
| US5300492A (en) | LHRH analogs | |
| US4086219A (en) | Nonapeptides and methods for their production | |
| JP2542362B2 (ja) | 新規ハロ低級アルキルグアニジノ置換アミノ酸化合物およびその製法 | |
| HU185535B (en) | Process for preparing new gonadoliberin derivatives | |
| WO1999026964A1 (en) | LIQUID PHASE PROCESS FOR THE PREPARATION OF GnRH PEPTIDES | |
| NO166449B (no) | Gonadoliberinderivater. | |
| EP0082568A2 (en) | Retro-inverso analogues of C-terminal penta and hexapeptides of substance P. | |
| EP0400065A1 (en) | HORMONE RELEASE HORMONE RELEASE HORMONE (LHRH) ANALOGS. | |
| FI85866C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av nya gonadoliberinderivat vilka foermaor frigoera luteniserande eller follikelstimulerande hormon. | |
| US4301066A (en) | Preparation of (D-Trp 6)-LH-RH via the heptapeptide H-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 | |
| US4600705A (en) | Gonadoliberin derivatives containing a β-aspartyl group, a process for the preparation thereof and pharmaceutical preparations containing them | |
| US4416820A (en) | Indole derivatives and a method for production of peptides | |
| HU190207B (en) | Process for production of new gonadoliberine derivatives | |
| US3417072A (en) | Intermediates in the synthesis of secretin | |
| OGAWA et al. | Studies on Peptides. LXIV. Synthesis of the Tritetracontapeptide corresponding to the Entire Amino Acid Sequence of Porcine Gastric Inhibitory Polypeptide (GIP) | |
| Anderson et al. | Peptides—XXII: Syntheses of procine gastrin 1 | |
| HU194280B (en) | Process for producing new gonadoliberin analogues of high effectivity and pharmaceutical compositions containing them | |
| OKAMOTO et al. | Synthesis of the Docosapeptide Corresponding to the Entire Amino Acid Sequence of Dogfish Corticotropin-like Intermediate Lobe Peptide | |
| ABIKO | Syntheses of [Phe (4NO2) 5, Tyr (Me) 8]-and [Tyr (Me) 5, Phe (4NO2) 8]-Bradykinin | |
| TAMINATO | Studies on peptides. 64. Synthesis of the tritetracontapeptide corresponding to the entire amino acid sequence of porcine gastric inhibitory polypeptide (GIP). |