MXPA06003913A - Estabilizacion de formulaciones farmaceuticas de proteina con peptidos pequenos. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a formulaciones farmaceuticas estables de proteina que son estabilizadas usando estabilizadores de peptido seleccionados del grupo consistiendo de Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, Ala-Ala, derivados de los mismos y mezclas de los mismos. Ademas, la presente invencion se refiere a formulaciones farmaceuticas estables comprendiendo eritroproyetina y estabilizadores de peptido seleccionados de dipeptidos, tripeptidos, tetrapeptidos, pentapeptidos, y mezclas de los mismos. Ademas de los estabilizadores de peptido, las formulaciones pueden contener surfactantes.

Description

ESTABI LIZACIÓN DE FORMULACIO ES FARMACÉUTICAS DE PROTEÍNA CON PÉPTIDOS PEQU EÑOS CAM PO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a una form ulación farmacéutica estable comprendiendo una proteína biológicamente activa y un estabilizador de péptido. La invención además se refiere a una formulación farmacéutica comprendiendo eritropoyetina y un estabilizador, en donde el estabilizador es un dipéptido, tripéptido, tetrapéptido, pentapéptido, o mezclas de los mismos. Las formulaciones farmacéuticas estables de la presente invención pueden contener surfactantes, tales como Tween®80.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Con el desarrollo de tecnolog ía de recombinación genética, un número de proteínas se han vuelto disponibles para uso terapéutico. A manera de ejemplo, las proteínas que son actualmente usadas para tratar enfermedades incluyen eritropoyetina, Factor VII I, Factor IX, hemoglobina, insulina, interferones alfa, beta y gamma, factor de crecimiento vascular endotelial, interleukina 2, y muchas otras. Sin embargo, las proteínas pueden perder actividad biológica como un resultado de inestabilidades físicas (ej. desnaturización, formación de agregados, etc.) e inestabilidades qu ím icas, tales como hidrólisis, oxidación, y deamidación . La estabilidad de las proteínas es además influenciada por factores tales como pH , temperatura, tonalidad, y un número de ciclos de congelamiento-descongelamiento Para asegurar estabilidad, las formulaciones de proteína terapéuticas son generalmente sum inistradas ya sea como una proteína lofilizada para ser disuelta justo antes de usar en un diluyente soluble en agua empaquetado por separado, o como una solución de proteína conteniendo aditivos para mejorar la estabilidad. Por ejemplo, aditivos tales como amino ácidos libres (ej. leucina, triptofan, serina, arginina, e histidina) útiles en la formulación de soluciones de proteína han sido propuestas en patentes tales como, ej., AU 722300; US 5,691 ,312; US 6, 120,761 . Algunas formulaciones de proteína actualmente disponibles en el mercado contienen una proteína como, un estabilizador. Por ejemplo, albúmina de suero humano o gelatina purificada se usan para suprimir los cambios físicos y químicos en las soluciones de proteína. Sin embargo, la adición de estas proteínas involucra un proceso complicado para remover la contaminación viral. La liofilización es otro método usado para asegurar la estabilidad; sin embargo, este proceso aumenta los costos de fabricación, e involucra un riesgo incrementado de administración impropia, ya que la proteína liofilizada necesita ser disuelta justo antes de su uso. La Patente de EE.UU. No. 5,705,482 divulga una solución farmacéutica de una hormona de crecimiento humano (hGH) que es estabilizada con el péptido Leu-His-Leu. Una de las proteínas ampliamente usada como un agente terapéutico es la eritropoyetina. La eritropoyetina es una hormona de glicoproteína 34-39kDa que estimula la formación de células de glóbulos rojos. Es producida en el riñon, y una vez producida, circula a la médula ósea en donde estimula la conversión de células precursoras primitivas a proeritroblastos los cuales consecuentemente maduran en células de glóbulos rojos. En el estado normal de salud, la eritropoyetina está presente en concentraciones muy bajas en el plasma, es decir, aproximadamente 0.01 a 0.03 U/ml, pero cuando ocurre hipoxia, es decir, el nivel de oxígeno transportado es reducido, el riñon produce más eritropoyetina. La hipoxia puede ser el resultado de ej., la perdida de grandes cantidades de sangre, destrucción de células de glóbulos rojos por radiación, o por exposición a altitudes muy elevadas. Además, varias formas de anemia causan hipoxia dado que las células de glóbulos rojos son responsables del transporte del oxígeno en el cuerpo. En el estado normal, un nivel incrementado de eritropoyetina estimula la producción de nuevas células de glóbulos rojos aumentando así el nivel de oxígeno y reduciendo o eliminando la condición de hipoxia. En contraste a esta corrección de hipoxia la cual ocurre normalmente, pacientes con falla de riñon crónica ("CRF") tienen una limitada o ninguna producción de eritropoyetina, y por consecuencia, no producen suficientes células de glóbulos rojos. Mientras que la duración de vida normal para las células de glóbulos rojos es de aproximadamente 120 días, tales pacientes comienzan a estar más anémicos con el tiempo. Previo al desarrollo de eritropoyetina recombinante, los pacientes con falla de riñon crónica a menudo tenían que someterse a transfusiones regulares de sangre para mantener un nivel mínimo de células de glóbulos rojos. Existen diversas formas de eritropoyetina actualmente usadas para tratar pacientes - eritropoyetina alfa, beta, omega y delta. La eritropoyetina omega es una proteína recombinada expresada del fragmento Apal de ADN de eritropoyetina genómico humano transformado en células de riñon de hámster bebe (BHK). La eritropoyetina omega y su expresión se describen en ej., Patente de EE.UU. No. 5,688,679. Además la estructura y composición de residuos de carbohidrato en EPO omega ha sido descrita, ej., en Nimtz ef al. (Eur. J. Biochem. , 213:39, 1993) y Tsuda et al., (Eur, J. Biochem., 188:405, 1990). La EPO omega tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 35kDa y está comprendida de múltiples isoformas (ej., por enfoque isoeléctrico, aproximadamente 6-8 isoformas en fracciones ampliamente cortadas y 6 isoformas en fracciones pico), lo cual es un indicativo de diferentes tipos y cantidades de glicosilación, y en particular, diferentes cantidades de sialilación. La EPO omega tiene un contenido oligosacárido O enlazado de menos de un mol por mol de glicoproteína y tiene tres sitios N-glicolisación en los residuos aminoácidos Asn-24, Asn-38, y Asn-83 y un sitio O-glicolisación en el residuo aminoácido Ser-126. Además, a diferencia de la eritropoyetina humana urinaria o eritropoyetina alfa o beta, la EPO omega retiene sustancialmente toda su actividad biológica ¡n vivo incluso después de haber sido sometida a condiciones que conducen a una N-desglicolización sustancial sino es que completa, según lo reportado en Sytkowsky et al. (Biochem.

Biophys. Res. Común. , 1 76(2):698-704, 1 991 ). Aunque están comercialmente disponible las formulaciones EPO son generalmente bien toleradas y estables, bajo condiciones extremas, tales formulaciones pueden ser inestables y experimentar pérdidas de actividad . Estas pérdidas de actividad pueden ser atribuidas a una destrucción de EPO por efectos catalíticos de la superficie de la ampolleta usada para almacenam iento debido a los rastros de metales pesados, oxígeno atmosférico y similares, y también, a una deposición de las moléculas EPO en la pared del recipiente, una desnaturización parcial de los mismos posiblemente tomaría lugar. Considerando el hecho de que solamente unos pocos microgramos están presentes en cada unidad de dosis, las pérdidas debido a la absorción pueden ser considerables, incluso después de un tiempo de almacenamiento corto. Además, las pérdidas de actividad pueden ser aceleradas por factores externos tales como el calor y la luz, o en formulaciones que están libres de productos de sangre humana tales como albúmina, o en formulaciones multidosis las cuales contienen conservadores tal como alcohol bencílico. Por consiguiente, las formulaciones farmacéuticas de proteínas, que exhiben una estabilidad mejorada sin la necesidad de liofilizar una proteína deseada o usar proteínas humanas como estabilizadores es deseable.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En una modalidad, la presente invención se refiere a una formulación farmacéutica de proteína, en donde la formulación comprende una proteína biológicamente activa y un estabilizador de péptido seleccionado del grupo consistiendo de Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, Ala-Ala, derivados de los mismos y mezclas de los mismos, y en donde la formulación está libre de albúmina de suero humano. En otra modalidad, la presente invención se refiere a una formulación estable farmacéutica de proteína, en donde la formulación comprende eritropoyetina y un estabilizador de péptido seleccionado dei grupo consistiendo de dipéptidos, tripéptidos, tetrapéptidos, pentapéptidos, y mezclas de los mismos, en donde la formulación está libre de albúmina de suero humano. En todavía otra modalidad, es proporcionada una composición farmacéutica estable comprendiendo eritropoyetina, un estabilizador de péptido seleccionado del grupo consistiendo de Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, Ala-Ala, derivados de los mismos y mezclas de los mismos, y Tween® 80, en donde la composición está libre de albúmina de suero humano. Otros objetos y características serán en parte aparentes y en parte señalados de aquí en adelante.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra una recuperación EPO (%) después de la incubación por 4 semanas a 25°C y 4 semanas a 40°C sola (B002) o en la presencia de HSA (B001 ) o Tween® 80 (B003) después de 8 semanas de incubación, según lo descrito en el Ejemplo 1 . La figura 2 muestra una recuperación EPO (%) después de la incubación por 4 semanas a 25°C y 4 semanas a 40°C en la presencia de un estabilizador de péptido (B004-B0012) después de 8 semanas de incubación, según lo descrito en el Ejemplo 1 . La figura 3 muestra una recuperación EPO (%) después de la incubación por 4 semanas a 25°C y 4 semanas a 40°C en la presencia de un estabilizador de péptido y Tween® 80 (B013-B021 ) después de 8 semanas de incubación, según lo descrito en el Ejemplo 1 .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓ La presente invención proporciona formulaciones farmacéuticas de proteína estables, en donde la estabilización de tales formulaciones es alcanzada por la utilización de péptidos pequeños. Las formulaciones farmacéuticas de proteína descritas en la presente son preparaciones seguras, las cuales están libres de proteínas externas. Los péptidos pequeños usados como estabilizadores en las formulaciones descritas en la presente son más baratos que los estabilizadores convencionales, y el costo incurrido durante el proceso de fabricación es también más bajo que aquel para un producto liofilizado. Además, al utilizar péptidos pequeños, las formulaciones farmacéuticas de proteína evitan la adición de albúmina de suero humano u otras proteínas humanas o animales tales como la gelatina, la cual puede contener contaminantes virales. Una proteína para la incorporación dentro de una composición descrita en la presente puede ser cualquier proteína que tenga un valor terapéutico en sujetos humanos. Por consiguiente, tales proteínas incluyen, sin limitación, eritropoyetina (EPO), Factor VIII, Factor IX, factor estimulante de colonia de granulocitos (GCSF), factor estimulante de colonia de macrófagos de granulocitos (GMCSF), trombopoyetina, heparina, interferones alfa, beta y gamma, interleukina 2, factor estimulante folicular, factor de crecimiento similar a insulina (IGF), factor de crecimiento de nervios (NGF), factor de necrosis de tumor (TNF), y proteínas de la familia morfogenética de hueso (BMPs). Las BMPs son factores nuevos en el factor beta de crecimiento transformador extendido (superfamilia TGF-ß). Fueron primero identificados por Wozney J. et al. Science (1988) 242: 1528-34, usando técnicas de clonación de genes, siguiendo descripciones tempranas caracterizando la actividad biológica en extractos de hueso desmineralizado (Urist M. Science (1965) 150:893-99). Estos factores están expresados por osteoblastos normales según se diferencian, y ha sido mostrado que estimulan la diferenciación de osteoblastos y formación de nodulo óseo ¡n vitro así como también la formación de hueso in vivo (Harris S. et al. J. Bone iner Res (1994) 9:855-63). Esta última propiedad sugiere una utilidad potencial como agentes terapéuticos en enfermedades que resultan en perdida de hueso. Las proteínas de hueso morfogenéticas (BMPs) incluyen la proteína-1 osteogénica mamífera (OP-1 , también conocida como BMP-7, y el homologo Drosoflla 60A), proteína-2 osteogénica (OP-2, también conocida como B P-8), proteína osteogénica-3 (OP-3, también conocida como BMP-8B), BMP-2 (también conocida como BMP-2A y el homólogo Drosofilía DPP), BMP-3, BMP-4 (también conocida como BMP-2B), BMP-5, B P-6 y su homólogo murina Vgr-1 , BMP-9, BMP- 10, BMP1 1 , BMP-12, GDF-3 (también conocido Vgr2), GDF-8, GDF-9, GDF-10, GDF-1 1 , GDF-12, BMP-13, BMP-14, BMP-15, GDF-5 (también conocido como CDMP-1 ), GDF-6 (también conocido como CDMP-2), y GDF-7 (también conocido como CDMP-3 o BMP-12). Todas las proteínas especificadas anteriormente son bien conocidas en la materia, y su construcción recombinante está bien dentro del conocimiento de un experto en la materia. Además, un artesano experto puede fácilmente determinar cuales proteínas adicionales pueden ser formuladas de acuerdo a la presente invención. En una modalidad, la proteína es seleccionada del grupo consistiendo de eritropoyetina, Factor VIII, Factor IX, factor estimulante de colonia de granulocitos, factor estimulante de colonia de macrófagos de granulocitos, interferón alfa, interferón beta, interferón gamma, ¡nterleukina 2, hormona estimulante folicular, factor de crecimiento similar a la insulina, factor de crecimiento de nervio, BMP-2, BMP-4, BMP-7, y factor de necrosis de tumor. En otra modalidad, la proteína es BMP-7. Las secuencias de ADN codificando proteínas BMP-7 están descritas en, ej. Patente de EE.UU. No. 5, 141 ,905, y métodos para producir proteínas BMP-7 están descritos en, ej. , la Patente de EE.UU. No. 5,366,875. En todavía otra modalidad, la proteína es eritropoyetina. EPO para usar en la composición de la presente invención tiene sustancialmente la misma actividad biológica como aquella de los mamíferos, especialmente, la EPO humana, e incluye EPO que ocurre de manera natural y EPO obtenida por recombinación genética. La EPO de recombinación genética incluye EPO teniendo la misma secuencia de aminoácidos que aquella de EPO que ocurre de manera natural, o EPO con esta secuencia de aminoácido de la cual uno o más de los aminoácidos han sido borrados o en la cual uno o más aminoácidos han sido sustituidos, o a aquella en la cual uno o más aminoácidos han sido agregados, y la cual, sin embargo, retiene la actividad biológica anteriormente mencionada. La EPO en la presente invención puede ser producida por cualquier método, por ejemplo, un método comprendiendo la extracción de orina humana, seguida por la separación y purificación, en varias maneras; y un método involucrando, por ejemplo, la producción en E.Coli, levadura, células de ovario de hámster chino (CHO), o células de riñon de hámster bebe (BHK), seguidas por la extracción, separación y purificación de varias maneras. En una modalidad, la EPO es una EPO recombinante producida en las células CHO. Para producción de EPO en estas células, ver, ej. , Patente de EE.UU. No. 4,703,008. En otra modalidad, la EPO es una EPO recombinante hecha en células BHK. La producción de EPO en células es bien conocida en la materia. Ver, ej., Patente de EE. UU. No. 5,688,679. En todavía otra modalidad, la eritropoyetina es eritropoyetina omega (para la descripción de la EPO omega, ver, ej., Patente de EE. UU. No. 5,688,679 y WO 02/14356). La cantidad de una proteína biológicamente activa en la composición descrita en la presente es la cantidad necesaria para suministrar una cantidad terapéuticamente efectiva de la proteína por unidad de dosis para alcanzar un resultado deseado. Es por eso, que la cantidad puede variar en base a una proteína y un número de otros factores, tales como el tipo de enfermedad a ser tratada, edad del paciente, gravedad de la enfermedad, presencia de otras condiciones, y así sucesivamente. Un experto en la materia puede fácilmente determinar la cantidad apropiada de la proteína a ser incluida en la composición. En una modalidad, cuando la proteína biológicamente activa es eritropoyetina, la concentración de EPO en una formulación farmacéutica es entre aproximadamente 500 lU/ml y aproximadamente 100,000 lU/ml. En otra modalidad, la concentración de EPO es entre aproximadamente 1 ,000 lU/ml y aproximadamente 50,000 lU/ml, y en todavía otra modalidad, es entre aproximadamente 2,000 lU/ml y aproximadamente 20,000 lU/ml. En una modalidad preferida, la concentración de EPO en una formulación farmacéutica, divulgada en la presente es de aproximadamente 10,000 lU/ml. Para indicaciones pediátricas, la EPO puede ser formulada a una concentración de aproximadamente 1 ,000 lU/ml. Para el tratamiento de pacientes, la EPO omega puede ser administrada inicialmente en dosis altas para incrementar los niveles de hemoglobina, y después a dosis menores que sean convenientes para un periodo de mantenimiento, donde una dosis es ajustada para una terapia prolongada y continua. La EPO omega puede ser administrada a pacientes a una dosis de aproximadamente 5 lU/kg a aproximadamente 150 l U/kg una a tres veces por semana, o aproximadamente de 10 lU/kg a aproximadamente 75 lU/kg una a dos veces por semana. En otra practica, la EPO omega es administrada a una dosis de aproximadamente 25 lU/kg a aproximadamente 60 lU/kg, o de aproximadamente de 25 lU/kg a aproximadamente 35 IU/kg dos veces por semana. En todavía otra practica, la EPO omega es administrada a una dosis de aproximadamente 50 IU/kg a aproximadamente 150 IU/kg, o aproximadamente 75 IU/kg a aproximadamente 100 IU/kg una vez por semana. Los estabilizadores de péptido a ser usados en las composiciones descritas en la presente incluyen dipéptidos, tripéptidos, tetrapéptidos, pentapéptidos, y mezclas de los mismos. Péptidos ejemplares de la presente invención incluyen Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, Ala-Ala, derivados de los mismos y mezclas de los mismos; sin embargo, otros péptidos pueden ser usados también. Los péptidos para usar en las formulaciones de proteína pueden ser comprados de un proveedor comercial, si están comercialmente disponibles, o pueden estar sintetizados. Los principios de la síntesis química de fase sólida dé los péptidos son bien conocidos en la materia y pueden ser encontrados en textos generales en el área. Ver, ej., H. Dugas y C. Penney, BIOORGANIC CHEMISTRY, (1981 ) Springer-Verlag, New Cork, pgs. 54-92. Por ejemplo, los péptidos pueden estar sintetizados por la metodología de fase sólida utilizando un sintetizador de péptidos Applied Biosystems 430A (comercialmente disponible de Applied Biosystems, Foster City California) y ciclos de síntesis suministrados por Applied Biosystems. Además, en el diseño de péptidos pequeños a ser usados en las formulaciones descritas en la presente, las sustituciones conservadoras de aminoácidos pueden ser aplicadas. Las sustituciones de aminoácidos en los péptidos de la presente invención pueden estar basados en la similitud relativa de los sustituyentes de cadena lateral de aminoácidos, por ejemplo, su hidrofobicidad, hidrofilicidad, carga, tamaño, etc. Sustituciones ejemplares que toman varias de las características anteriores en consideración para producir cambios de aminoácidos conservadores resultando en cambios silenciosos dentro de los presentes péptidos, etc., pueden ser seleccionados de otros miembros de la clase a la cual el aminoácido que ocurre de manera natural pertenece. Los aminoácidos pueden ser divididos en los cuatro grupos siguientes: (1 ) aminoácidos acídicos; (2) aminoácidos básicos; (3) aminoácidos polares neutrales; y (4) aminoácidos neutrales no polares. Los aminoácidos representativos dentro de estos varios grupos incluyen, pero no están limitados a: (1 ) aminoácidos acídicos (negativamente cargados a un pH fisiológico) tales como el ácido aspártico y el ácido glutámico; (2) aminoácidos básicos (cargados positivamente a un pH fisiológico) tales como arginina, histidina y lisina; (3) aminoácidos neutrales polares neutrales tales como glicina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, y glutamina; y (4) aminoácidos neutrales no polares tales como alanina, leucina, isoleucina, valina, prolina, fenilalanina, triptofan, y metionina. Debería ser notado que los cambios que no son esperados a ser ventajosos pueden también ser útiles si esto resulta en la producción de secuencias funcionales. Por ejemplo, al utilizar el principio de sustituciones de aminoácidos conservadoras, Gly-Ala pueden ser reemplazadas con, ej., Ser-Leu, Thr-Leu, Thr-lle, etc. Un experto en la materia puede determinar fácilmente las secuencias de los péptidos con sustituciones conservadoras de aminoácidos. Ejemplos de residuos de aminoácidos para usar en un péptido pequeño de la invención puede ser seleccionado de cualquiera de los aminoácidos que ocurre de manera natural tales como los aminoácidos proteogénicos L (es decir, los 20 aminoácidos normalmente incorporados dentro de las proteínas) así como también los aminoácidos D y aminoácido no proteogénicos. Los aminoácidos no proteogénicos son generalmente metabolitos o análogos de los aminoácidos proteogénicos. Ejemplos no limitantes de aminoácidos no proteogénicos que ocurre de manera natural incluyen ornitina, taurina, hidroxipolina, hidroxilisina, norleucina, ß-alanina, aminoácido gamma butírico, selenocisteína, fosfoserina, ácido piroglutámico y pirrolisina. El aminoácido puede también ser seleccionado de aminoácidos que no ocurren de manera natural. Los aminoácidos que no ocurren de manera natural incluyen, pero no están limitados a, derivados de aminoácidos y análogos. Ejemplos no limitantes de derivados de aminoácidos incluyen selenometionina, teluro-metionina, y p-aminofenilalanina, aminoácidos fluorinados (ej. , triptofan fluorinado, tirosina y fenilalanina), nitrofenilalanina, nitrobenzoxadiazolil-L-lisina, deoxymetilarginina, y ciclohexilalanina. Los análogos de aminoácidos incluyen compuestos químicamente sintetizados teniendo propiedades conocidas en la materia por ser característicos de aminoácidos, ejemplos de los cuales incluyen, ej., el "análogo" de triptofan b-selenolo[3,2-b]pirrolilalanina y el "análogo" de prolina, tiaprolina (ácido 1 ,3-tiazolidina-4-carboxílico). Derivados de aminoácidos adicionales incluyen sales de aminoácidos, aminoácidos acilados y aminoácidos alfa-keto. En una modalidad, los estabilizadores de péptido pueden contener sales de aminoácidos. A manera de ejemplo, tales sales pueden estar hechas de ácidos inorgánicos tales como los hidrocloruros de aminoácido o ácidos orgánicos tal como acetato amino. Por ejemplo, un péptido conteniendo un hidrocloruro de aminoácido, tal como hidrocloruro de L-histidina o hidrocloruro de L-alanina puede ser usado. Los hidrocloruros de aminoácidos están disponibles comercialmente o pueden ser producidos como es conocido en la materia. Por ejemplo, Gly-His.HCI.H20, Gly-Ala. HCI. H2O, Ala.HCI.H20-Gly, y Ala.HCI.H20-Ala.HCI.H20 son algunos de los ejemplo de estabilizadores de péptido que utilizan sales de aminoácidos. En otra modalidad, los estabilizadores de péptido contienen aminoácidos acilados y/o aminoácidos alfa-keto. Además de los ejemplos descritos anteriormente, un número de péptidos diferentes puede ser creado utilizando los aminoácidos anteriormente descritos. A manera de ejemplo y no de limitación, un dipéptido puede contener un aminoácido L y un aminoácido D, un aminoácido L y una sal de aminoácido, un aminoácido D y un análogo de aminoácido, un aminoácido L y un aminoácido acilado, un aminoácido L y un amino acido alfa-keto, un aminoácido acilado y un aminoácido alfa-keto, dos aminoácidos acilados, dos aminoácidos L, dos sales de aminoácidos, etc. Un experto en la materia puede fácilmente reconocer combinaciones adicionales de aminoácidos no solamente para dipéptidos, sino para otros péptidos pequeños de la invención, también. Las formulaciones farmacéuticas pueden incluir ya sea una sola especie de un péptido (ej., Gly-Gly) o mezclas de péptidos. A manera de ejemplo, las mezclas pueden incluir un dipéptido y un dipéptido (ej., Gly-Gly, Gly-His), un dipéptido y un tripéptido (ej. , Ala-Ala y Gly-Gly-Gly), un tripéptido y un pentapéptido, dos dipéptidos y un tripéptido y así sucesivamente. La concentración de un estabilizador de péptido o mezclas del mismo en una composición farmacéutica estable descrita en la presente es entre aproximadamente 0.01 g/L y aproximadamente 10g/L. En otra modalidad, la concentración del estabilizador de péptido es entre aproximadamente 0.5g/L y aproximadamente 5g/L.

En todavía otra modalidad, la concentración del estabilizador de péptido es aproximadamente 1 g/L. En una modalidad de la presente invención, la composición farmacéutica estable de proteína contiene un surfactante. Mientras no esta unida a una teoría en particular, se cree que la presencia de un surfactante en la solución reduce la adhesión de una proteína biológicamente activa, tal como EPO a las paredes del contenedor, en la cual la formulación se encuentra almacenada. La cantidad de surfactante usado en las formulaciones descritas en la presente varía de aproximadamente 0.0005%p/v a aproximadamente 0.5%p/v. En una modalidad, la cantidad de surfactante, particularmente Tween® 80 es 0.03% p/v. En otra modalidad, el surfactante es conveniente para administración parenteral. Cualquier surfactante que es aceptado farmacéuticamente puede ser incluido en la composición de la invención. Tales surfactantes incluyen, sin limitación, surfactantes no iónicos (ej., ésteres de ácido graso de sorbitan polioxíalquileno, ásteres de ácido graso de sorbitan, ésteres de ácido graso de glicol alquileno, ésteres de ácido graso de polioxíalquileno, ésteres de ácido graso, éteres de acido graso de polioxíalquileno, ácidos grasos C 6-C24, mono-, di- o poli-glicérídos de ácido graso, fenoles de alquilo polioxíalquileno, éteres de fenilo alquilo, copolímeros de bloque de polioxietileno polioxipropileno, óxidos de amina grasa, alcanolamidas de ácido graso, celulosa de alquilo, celulosa de carboxialquilo, derivados de aceite de ricino polioxialquileno), surfactantes aniónicos (ej., sulfatos de alquilo, sulfatos de olefina, sulfatos de éter, sulfatos de monoglicérido, sulfonatos de alquilo, sulfonatos de arilo, sulfonatos de olefina, sulfosuccinatos de alquilo, sulfosuccinatos de arilo, incluyendo sulfato de lauril de sodio, sulfosuccinato de sodio de dioctilo, y sulfonato de sodio de dioctilo), sufactantes catiónicos (ej., sales de benzalconio, alquilaminas de polioxialquileno, alquiiaminas, ésteres de ácido graso de alcanolamina, ésteres de ácido graso de amonio cuaternario, sales de amonio de dialquilo, sales de piridinio de alquilo incluyendo estearilamina, oleato de trietanolamina, cloruro de benzetonio), surfactantes anfotéricos (ej. , ß-aminopropinatos de alquilo, sales de amonio cuaternario de 2-alquilmidazolina) y surfactantes de ión anfotérico. Surfactantes no iónicos para usar en las composiciones de la invención incluyen, pero no están limitados a, monolaurato de sorbitan de polioxietileno (20) (Tween®20), monolaurato de sorbitan de polioxietileno (4) (Tween®21), monopalmitato de sorbitan de polioxietileno (20) (Tween®40), monoestearato de sorbitan de polioxietileno (20) (Tween®60), triestearato de sorbitan de polioxietileno (20) (Tween®65), monooleato de sorbitan de polioxietileno (20) (T een®80 o polisorbato 80), o trioleato de sorbitan de polioxietileno (20) (Tween®85), lauromacrogol 400, estearato de polioxil 40, aceite de ricino hidrogenenado de polioxietileno 10, 50 y 60, monoestearato de glicerol, monooleato de glicerol, polisorbato 40, 60, 65 y 80, éster de ácido graso de sucrosa, laurato de sorbitan, oleato de sorbitan, palmitato de sorbitan, estearato de sorbitan, triestearato de sorbitan, sesquioleato de sorbitan, trioleato de sorbitan, isoestearato de sorbitan, monoestearato de glicol de propileno, monoestearato de polioxietileno, distearato de polioxietileno, monoestearato de glicerilo, éter lauril de polioxietileno, éter cetil de polioxietileno, éter estearil de polioxietileno, éter oleil de polioxietileno, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido oléico, oleato de etilo, miristato de isopropilo, palmitato de sodio, estearato de sodio, oleato de sodio, polietoxietanoles de nonilfenol, tributilfenoxi-polietoxietanol, octilfenoxi- polietoxietanol, polioxietileno glicerol triricinoleato o aceite de ricino polioxil 35 (Cremophor® EL, BASF Corp.), oxiestearato glicerol de polioxietileno (Cremophor® RH 40), aceite de ricino hidrogenado de polietilenglicol 60 (Cremophor® RH 60), Poloxamer®124, Poloxamer® 188, Poioxamer® 237, Poloxamer® 388, Poloxamer® 407, (BASF Wyandotte Corp.), metilcelulosa y celulosa de carboximetilo. Preferiblemente, el surfactante usado es un mono-o tri-lauril de sorbitan de polioxietileno, palmitilo, estearilo, o éster de oleilo tal como monolaurato de sorbitan de polioxietileno (20) (Tween®20), monolaurato de sorbitan de polioxietileno (4) (Tween®21 ), monopalmitato de sorbitan de polioxietileno (20) (Tween®40), monoestearato de sorbitan de polioxietileno (20) (Tween®60), triestearato de sorbitan de polioxietileno (20) (Tween®65), monooleato de sorbitan de polioxietileno (20) (Tween®80 o polisorbato 80), o trioleato de sorbitan de polioxietileno (20) (Tween®85) Opcionalmente, las formulaciones farmacéuticas estables de proteína descritas en la presente pueden incluir conservadores, agentes reguladores, agentes de isotonicidad, y otros componentes convencionales usados en la formulación de composiciones farmacéuticas. En una modalidad, los conservadores útiles en las composiciones de la presente invención son aquellos conservadores compatibles con, ej., eritropoyetina para que las composiciones sean estables. Conservadores particulares contemplados para usar incluyen alcohol bencílico, parabenos, fenol, derivados de fenol, cloruro de benzalconio y mezclas de los mismos. Dependiendo del conservador en particular utilizado, la cantidad de conservador podría variar. Por ejemplo, el alcohol bencílico es utilizado en la cantidad de 0.6-2.0%, preferiblemente en la cantidad de aproximadamente 1 %. En esta concentración, el alcohol bencílico proporciona las capacidades de conservador y de anestésico local sin afectar de manera indebida la estabilidad de la eritropoyetina. En otra modalidad, un agente regulador es usado para mantener el pH de la composición dentro de un rango deseado. Agentes preferidos incluyen varias formas, de sal, ácida o básica de los siguientes aniones: citrato, fosfato, tartrato, succinato, adipato, maleato, lactato, acetato, bicarbonato, piruvato, y carbonato. Sales representativas de estos reguladores los cuales pueden ser usados son las formas de sodio y potasio, siempre y cuando la sal y la cantidad sean compatibles fisiológicamente en una composición inyectable. Mezclas de estos agentes reguladores pueden también ser usadas. Entre estos agentes, los reguladores de citrato y fosfato son deseados. La cantidad de agente regulador útil en las composiciones farmacéuticas depende ampliamente del regulador particular usado y el pH de la solución. Por ejemplo, el citrato es un regulador más eficiente a pH 6 que a pH 7, así que menos citrato puede ser usado en una solución a pH 6 que a pH 7. El rango preferido de pH para las soluciones es aproximadamente 5-8, con aproximadamente 6-7.5 siendo más preferido, y un pH de aproximadamente 7 siendo el más preferido. Arriba de estos valores de pH, la cantidad de reguladores generalmente variará de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 30 mM. La cantidad de regulador de citrato puede variar de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 20 mM. Los mismos conservadores, agentes reguladores, y agentes de isotonicidad pueden ser usados para proteínas diferentes a eritropoyetina; sin embargo, puede ser necesario ajustar el pH o concentraciones de aditivos. Estas modificaciones pueden ser determinadas por la experimentación de rutina. Las composiciones de la presente invención pueden además incluir un agente de ajuste de isotonicidad para volver la solución isotónica y más compatible para inyección. Los agentes preferidos incluyen cloruro de sodio, glicerol, manitol, sucrosa, sorbitol y mezclas de los mismos. El agente más preferido es el cloruro de sodio. La cantidad de agente ajustador de isotonicidad necesaria para volver la solución isotónica varía con el agente particular pero generalmente cae dentro del rango de aproximadamente 0.1 -10%. En una modalidad, las formulaciones farmacéuticas de proteína son preparadas al agregar un estabilizador de péptido o una mezcla de dos o más estabilizadores a una solución salina regulada por fosfato estéril (PBS). El pH de la solución es preferiblemente de aproximadamente 7.2. Si es utilizado un surfactante, ej., Tween® 80, puede ser agregado con el estabilizador de péptido. Siguiendo esto, la solución es mezclada bien, y una proteína biológicamente activa, ej. , EPO es agregada a la solución. Opcionalmente, si agentes adicionales tales como los agentes reguladores o conservadores son usados, pueden ser agregados ya sea previamente a la adición de la proteína o posterior a la adición de la proteína. Las formulaciones farmacéuticas estables de proteína pueden estar contenidas en un contenedor de plástico o vidrio sellado, esterilizado. La preparación de la solución puede ser proporcionada como una dosis prescrita dentro de una ampolleta, frasco o jeringa desechable, o en una forma de dosis múltiple tales como una bolsa o una botella par inyección. En una modalidad, las formulaciones farmacéuticas estables de proteína pueden ser almacenadas a condiciones refrigeradas por al menos 24 meses. Las formulaciones estables de proteína de la presente invención son generalmente administradas por una vía parenteral, ej. , por inyección (intramuscular, intraperitoneal, subcutánea, o intravenosa); sin embargo, las formulaciones pueden ser también administradas por otras vías, tales como percutáneamente, transmucosalmente, o trasnasalmente. Las formulaciones farmacéuticas estables de proteína descritas en la presente pueden ser usadas para tratar cualquier condición para la cual una proteína que está en la formulación es indicada. A manera de ejemplo y no de limitación, cuando la proteína en la formulación es la eritropoyetina, la formulación puede ser usada para tratar cualquier condición en la que la estimulación de proliferación de las células de glóbulos rojos (RBC) es deseada. De esta manera, EPO puede ser usada para tratar anemia, en donde la anemia está asociada con la deficiencia endógena de eritropoyetina, anemia de enfermedad maligna, anemia resultante de un tratamiento de quimioterapia/radiación de una enfermedad maligna, o anemia de enfermedad crónica. Anemias de enfermedad crónica incluyen pero no están limitadas a anemias asociadas con artritis reumatoide, hepatitis, SIDA (especialmente en pacientes tratados con AZT), anemia prematura, anemia asociada con falla de riñon, anemia de talasemia, anemia hemolítica autoinmune, anemia aplástica, y anemia asociada con cirugía (ej. , para incrementar la eritropoyesis en pacientes que se someten a transplante de médula ósea). En otro ejemplo, cuando una proteína es un miembro de la familia de BMP tal como BMP-7, puede ser usada para tratar una gran cantidad de condiciones, que estén caracterizadas por la necesidad de mejorar la formación de hueso. Estas condiciones incluyen, ej., fracturas de huesos, en donde se desea estimular el crecimiento de hueso y apresurar la reparación del hueso. Otras condiciones de deficiencia en los huesos que pueden ser tratadas con la proteína BMP formulada como se describe en la presente incluyen, sin limitación defectos de segmentos de hueso osteolíticos, enfermedad periodontal, enfermedad de hueso metastática, enfermedad de hueso osteolítica, y condiciones en donde la reparación del tejido conectivo sería benéfico, tal como curación o regeneración de defectos de cartílagos o herida. Otras condiciones caracterizadas por la necesidad de crecimiento de hueso incluyen hiperparatiroidismo primario y secundario y osteoporosis (incluyendo osteoporosis relacionada con la edad, osteoporosis asociada con el estado hormonal de post menopausia, osteoporosis por desuso, osteoporosis relacionada con la diabetes, y osteoporosis relacionada con la glucooorticoide). Alternativamente, los miembros de la familia de los BMP según lo formulado en la presente pueden ser usados para modular el metabolismo, la ploriferación y/o diferenciación de células o tejidos normales o aberrantes. Otras características, objetos y ventajas de la presente invención serán aparentes para aquellos expertos en la materia. Las explicaciones e ilustraciones presentadas en la presente están intentadas para dar a conocer a otros expertos en la materia con la invención, sus principios y su aplicación práctica. Aquellos expertos en la materia pueden adaptar y aplicar la invención en sus numerosas formas, como puede ser más conveniente para los requerimientos de un uso en particular. Por consiguiente, las modalidades específicas de la presente Invención son establecidas y no intentadas como exhaustivas o limitantes de la presente invención. Todas las publicaciones y solicitudes de patentes citadas en esta especificación están incorporadas en la presente para referencia como si cada publicación individual o solicitud de patente fuera específicamente e individualmente indicada para ser incorporada para referencia.

ABREVIACIONES Y DEFINICIONES Para facilitar el entendimiento de la invención, un número de términos son definidos posteriormente: "BMP" es una abreviación de proteína morfogenética ósea. "CDMP" es una abreviación de proteína morfogenética derivada de cartílago. "DPP" se refiere a la proteína decaplentaplegéica. "GDF" es una abreviación para el factor de crecimiento y diferenciación. "OP" es una abreviación para proteína osteogénica. "Vgr" es una abreviación para (proteína) vegetal relacionada. "RH" es una abreviación para humedad relativa. "HSA" es una abreviación para albúmina de suero humano.

"AUC" es una abreviación para área bajo la curva. Como es usado en la presente, el término "aminoácido" es usado en su sentido más amplio, e incluye los aminoácidos que ocurren de manera natural así como también los aminoácidos que no ocurren de manera natural, incluyendo análogos y derivados de aminoácidos. Los últimos incluyen moléculas conteniendo una porción de aminoácido. Un experto en la materia, reconocerá, en vista de esta amplia definición, que la referencia en la presente para un aminoácido incluye por ejemplo, aminoácidos L proteogénicos que ocurren de manera natural; aminoácidos D, aminoácidos químicamente modificados tales como los análogos de aminoácidos y derivados; aminoácidos no proteogénicos que ocurren de manera natural, y compuestos sintetizados teniendo propiedades conocidas en la materia por ser características de aminoácidos. Como es usado en la presente, "proteína biológicamente activa" se refiere a la habilidad de una proteína para llevar a cabo sustancialmente la misma función que la forma nativa de la proteína de interés. "Composición" y formulación" son usadas en la presente de manera intercambiable. Como es usado en la presente, "péptido" significa un compuesto que consiste de dos o más aminoácidos que están ligados entre sí por medios de al menos una unión de péptido. "Dipéptido" significa un péptido consistiendo de dos aminoácidos conectados por una unión de péptido, "tripéptido" significa un péptido consistiendo de tres aminoácidos conectados por uniones de péptido, y así sucesivamente. "Péptidos pequeños" para propósitos de la presente invención incluye dipéptidos, tripéptidos, tetrapéptidos, y pentapéptidos. Los términos "estable" y "estabilizado" significan que una composición farmacéutica de la invención ha aumentado la estabilidad de almacenamiento relativa a la misma composición, que no comprende ningún estabilizador de péptido según lo descrito en la presente. La estabilización proporcionada por la presente invención permite una estabilidad aumentada de almacenamiento en forma líquida a 2°-8°C, fácil de administrar sin reconstitución, y habilidad para proporcionar la formulación en jeringas pre llenadas, listas para usar o como preparaciones multidosis si la formulación es compatible con agentes bacteriostáticos. Preferiblemente, las composiciones estables de la invención pueden ser almacenadas bajo condiciones de refrigeración (entre aproximadamente 2o y aproximadamente 8°C) por al menos 6 meses, 12 meses, 18 meses, 24 meses, 30 meses, 36, meses, o más. La frase "terapéuticamente efectiva" está intencionada para calificar la cantidad de una proteína biológicamente activa, la cual alcanzará la meta de mejora en la severidad de la enfermedad y la frecuencia de incidencia con el tratamiento, mientras evita los efectos secundarios adversos típicamente asociados con terapias alternativas. Una "IU" o "unidad internacional" es una medida estandarizada de la cantidad de un efecto biológico especificado de una droga o un material q ue ocurre de manera natural. En particular, una I U para eritropoyetina se refiere a la medición de unidad de un análisis de un ratón in vivo ex-hipóxica policitaémica que es estandarizado usando la Preparación de eritropoyetina de Referencia Internacional de la Organización Mundial de la Salud. La cantidad de material requerido para proporcionar una IU para un material dado variará con la fuente, condición, calidad, pureza, y/o tipo de material. La relación entre l Us y otras unidades tales como las definidas por los análisis radioinmunes, pueden ser más adelante entendida por referencia a Storring ef al. , Brit. J. Haematol., 00:79, 1998. Los siguientes ejemplos ilustran la invención, pero no son para ser tomados como limitantes de los varios aspectos de la invención tan ilustrada.

EJEMPLO 1 El presente estudio fue diseñado para evaluar la estabilidad de la eritropoyetina omega en una solución PBS conteniendo 1 ) péptidos pequeños o 2) péptidos pequeños y Tween®80 como estabilizadores. La estabilidad fue evaluada en comparación con la estabilidad de EPO omega en donde ya sea no se usaron estabilizadores o cuando albúmina de suero humano (HSA) o Tween®80 fueron usados solos como estabilizadores. Los siguientes péptidos pequeños fueron usados en el estudio: Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-H¡s. HCI.H20, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, y Ala- Ala. Todos los péptidos y Tween®80 fueron comprados de Sigma-Aldrich. Los protocolos listados posteriormente fueron aplicados para preparar soluciones que fueron usadas para valorar la estabilidad de almacenamiento de la formulación farmacéutica conteniendo eritropoyetina omega: Para preparar una solución PBS, dentro de una botella de vidrio -agregar agua para inyección (WFI) a aproximadamente 800 g; -agregar 8.18 g de NaCI y 1 .56 g de NaH2P042H20; -agregar WFI con mezclado hasta la masa de solución total formulada, 1006 g; mezclar rápidamente por un mínimo de 15 minutos (toda la sal deberá estar disuelta previamente al final de la mezcla); introducir nitrógeno a la solución; burbujear por 2 minutos; determinar el pH de la. solución y ajustar a 7.20 (rango de 7.10 a 7.30) con 10M NaOH; filtrar la solución a través de una membrana de filtro estéril de 0.22pm dentro del contenedor estéril; y usar la solución filtrada para preparar soluciones formuladas de eritropoyetina. Para hacer una solución de reserva de PBS pH 7.2-péptido (1.25g/L), combinar PBS pH 7.2 (50ml) y un péptido (62.5mg).

Para hacer una solución de reserva de PBS pH 7.2- Tween®80 (0.375g/L), combinar PBS pH 7.2 (1000ml) y Tween®80 (0.375g). Para hacer una solución de reserva de PBS pH 7.2-péptido (1.25g/L)-Tween®80 (0.375g/L), agregar a 50 mi de PBS pH 7.2-Tween®80 (0.375g) solución de reserva un péptido (62.5mg). Para hacer una solución de reserva de EPO (50,000 lU/ml) en PBS pH 7.2, combinar PBS pH 7.2 (75.3ml) y 14.7ml de solución concentrada de EPO (306,000iU/ml). Para hacer una solución de EPO 10,000 lU/ml en PBS pH 7.2, mezclar 16 mi de PBS pH 7.2 y 4 mi de EPO de reserva (50,O00IU/ml). Para hacer una solución de EPO 1 0,000 lU/ml en PBS pH 7.2 - HSA 2.5mg/L, mezclar 16 mi de PBS pH 7.2 de EPO de reserva (50,000IU/ml) y 250µ? HSA (20%p/v). Para hacer una solución de EPO 10,000 lU/ml en PBS pH 7.2,- Tween®80 (0.3g/L), mezclar 16 mi de PBS pH 7.2-Tween®80 solución de reserva y 4ml de EPO de reserva (50,000IU/ml). Para hacer una solución de EPO 10,000 lU/ml en PBS pH 7.2, -péptido (1.0g/L), mezclar 16 mi de PBS pH 7.2-solución de reserva de péptido y 4ml de EPO de reserva (50,000I U/ml). Para hacer una solución de EPO 10,000 lU/ml en PBS pH 7.2, Tween®80 (0.3g/L)-péptido (1.0g/L), mezclar 16 mi de PBS pH 7.2-Tween®80 solución de reserva de péptido y 4ml de EPO de reserva (5O,00OIU/ml).

Todas las soluciones son bien mezcladas para asegurar la homogenización y filtradas a través de un filtro de membrana estéril de 0.22µ?? dentro de contenedores estériles. La tabla 1 describe muestras de EPO usadas en este estudio. Tabla 1 Las muestras fueron inicialmente mantenidas a 25°C/60%RH, y analizadas a la semana 1 ,2,4,6,8, y 10. Después de 4 semanas de almacenamiento, 2 grupos de muestras fueron transferidas a 40°C/60%RH y analizados en las semanas 6 y 8. Esto fue hecho para estresar la solución a una mayor extensión para magnificar cualquier efecto estabilizador potencial. El estudio a 25°C/60%RH fue descontinuado después de 10 semanas.

Las soluciones fueron analizadas por cromatografía de líquido a alta presión (HPLC) usando el módulo de separación WATERS® ALLIANCE 2690 equipado con un horno WATERS y un detector de Absorción dual ? WATERS®. El sistema fue conectado a una columna WATERS® ?4-300?-5µ?? DELTA PACK. Las muestras fueron transferidas dentro de frascos HPLC usando jeringas estériles Monoject KENALL 1 .0ml equipadas con agujas Monoject KENDALL estériles 23G x 1 1/4". El contenido de proteína fue medido como el AUC pico a 280 nm. El área bajo la curva (AUC) fue registrada y usada para calcular la recuperación de proteína basada en la respuesta en el periodo inicial. La recuperación fue calculada como la proporción entre la respuesta en el periodo de interés y a un periodo inicial. Recuperación AUC (%) = 100 x CAuc t C Auc o en donde Recuperación Auc es recuperación basada sobre AUG. CAuc t es contenido de eritropoyetina en el periodo de interés expresado como AUC del valor máximo, y C AUc o es contenido de eritropoyetina en el periodo inicial expresado como AUC del valor máximo. Previo al estudio de iniciación, la ausencia de interferencia entre productos de degradación potencial viniendo de los estabilizadores de péptido y eritropoyetina omega fue investigada. Este fue otro experimento de control diseñado para evaluar si los péptidos pequeños y/o Tween®80 pueden afectar un cálculo apropiado de AUC y % recuperación de EPO. Para dirigir este tema, las soluciones conteniendo péptidos pequeños y no eritropoyetina omega fueron mantenidos por 4 semanas a 25°C/60%RH y 4 semanas a 40°C/60%RH antes de la inyección. Los análisis de los cromatogramas mostraron que no había señal visible en la vecindad de la señal de eritropoyetina omega (20.6 min), indicando que péptidos y/o Tween®80 no afectan los cálculos de AUC y % de recuperación para EPO. La tabla 2 (ver abajo) muestra % de recuperación de EPO cuando se estabilizaron con péptidos pequeños (B004-B012) o péptidos pequeños y Tween®80 (B013-B021 ) a 25°C/60%RH en las semanas 1 , 2, 4, 6, 8, y 10 y a 40°C/60%RH en las semanas 6 y 8. Como puede ser visto en la tabla, exceptuando por las soluciones de control conteniendo solo EPO (B002) o Tween® (B003), casi no se registro degradación en las muestras de prueba almacenadas a 25°C/60%RH por 10 semanas. En las mismas condiciones, no se registro degradación de proteína en EPO con muestra HSA (B001 ). Para las soluciones de control libres de HSA (B002 y B003), una ligera reducción fue registrada con el tiempo. Además, la estabilidad de EPO a 40°C/60%RH fue mejor en las muestras conteniendo un péptido o un péptido y estabilizador Tween® que en las muestras de control libres de HSA mantenidas bajo las mismas condiciones. Además, y como se esperaba, las soluciones EPO mostraron una mejor estabilidad de almacenamiento a 25°C que a 40°C. Los mismos resultados pueden ser vistos como representaciones gráficas en las figuras 1 , 2, y 3.

Tabla 2 * Después de 8 semanas de almacenamiento a 5 , una recuperación de 87% fue encontrada para B008. Este resultado fuera de la tendencia no fue confirmado ya sea en el periodo siguiente o .a 40°C/60%RH, y fue debido a un problema de equipamiento (fallo de suministro de energía). Deberá ser notado que todos los procedimientos anteriormente mencionados pueden ser modificados para un estudio en particular, dependiendo de factores tales como una proteína usada, duración del estudio, etc. Tales modificaciones pueden ser diseñadas por un experto en la materia sin experimentación indebida.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. Una composición farmacéutica estable comprendiendo una cantidad terapéuticamente efectiva de una proteína biológicamente activa y un estabilizador de péptido seleccionado del grupo consistiendo de Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, Ala-Ala, derivados de los mismos y mezclas de los mismos, en donde la composición está libre de albúmina de suero. 2. La composición según la reivindicación 1 , caracterizada porque la proteína biológicamente activa es seleccionada del grupo consistiendo de eritropoyetina, Factor VIII, Factor IX, factor estimulante de colonia de granulocitos, factor estimulante de colonia de macrófagos de granulocitos, interferón alfa, interferón beta, interferón gamma, interleukina 2, hormona estimulante folicular, factor de crecimiento similar a insulina, factor de crecimiento de nervio, BMP-2, BMP-4, BMP-7, y factor de necrosis de tumor. 3. La composición según la reivindicación 2, caracterizada porque la proteína biológicamente activa es de origen recombinante. 4. La composición según la reivindicación 3, caracterizada porque la proteína biológicamente activa es eritropoyetina. 5. La composición según la reivindicación 4, caracterizada porque la eritropoyetina es eritropoyetina omega. 6. La composición según la reivindicación 5, caracterizada porque la concentración de eritropoyetina omega en dicha composición es entre aproximadamente 500 lU/ml y aproximadamente 100,000 lU/ml. 7. La composición según la reivindicación 6, caracterizada porque la concentración de eritropoyetina omega es entre aproximadamente 2,000 lU/ml y aproximadamente 20,000 IU/ml. 8. La composición según la reivindicación 1 , caracterizada porque los derivados comprenden sales de Gly-Gly, Giy-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, y Ala-Ala. 9. La composición según la reivindicación 1 , caracterizada porque la albúmina de suero es albúmina de suero humano. 10. La composición según la reivindicación 1 , caracterizada porque la concentración del estabilizador de péptido en dicha composición es entre aproximadamente 0.01 g/L y aproximadamente 10 g/L. 1 1 . La composición según la reivindicación 10, caracterizada porque la concentración del estabilizador de péptido es entre aproximadamente 0.5 g/L y aproximadamente 5 g/L. 12. La composición según la reivindicación 1 , caracterizada porque la composición además comprende un surfactante. 13. La composición según la reivindicación 12, caracterizada porque el surfactante es un surfactante no iónico, surfactante catiónico, surfactante aniónico, surfactante anfotérico, surfactante de ión anfotérico, o una mezcla de los mismos. 14. La composición según la reivindicación 13, caracterizada porque el surfactante es un éster de ácido graso de sorbitan de polioxialquileno. 15. La composición según la reivindicación 12, caracterizada porque la concentración del surfactante en dicha composición es entre aproximadamente 0.0005% p/v y aproximadamente 0.5% p/v. 16. Una composición farmacéutica estable comprendiendo eritropoyetina y un estabilizador de péptido seleccionado del grupo consistiendo de dipéptidos, tripéptidos, tetrapéptidos, pentapéptidos, y mezclas de los mismos, y en donde la composición está libre de albúmina de suero. 17. La composición según la reivindicación 16, caracterizada porque el estabilizador de péptido es un dipéptido. 18. La composición según la reivindicación 16, caracterizada porque el estabilizador de péptido es un tripéptido. 19. La composición según la reivindicación 16, caracterizada porque el estabilizador de péptido es seleccionado del grupo consistiendo de Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, Ala-Ala, derivados de los mismos, y mezclas de los mismos. 20. La composición según la reivindicación 19, caracterizada porque ios derivados comprenden sales de Gly-Gly, Gly- Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly y Ala-Ala. 21 . La composición según la reivindicación 16, caracterizada porque la concentración del estabilizador de péptido en dicha composición es entre aproximadamente 0.01 g/L y aproximadamente 10 g/L. 22. La composición según la reivindicación 21 , caracterizada porque la concentración del estabilizador de péptido es entre aproximadamente 0.5 g/L y aproximadamente 5 g/L. 23. La composición según la reivindicación 16, caracterizada porque la albúmina de suero es albúmina de suero humano. 24. La composición según la reivindicación 16, caracterizada porque la eritropoyetina es una eritropoyetina recombinante. 25. La composición según la reivindicación 24, caracterizada porque la eritropoyetina recombinante es producida en células BHK. 26. La composición según la reivindicación 24, caracterizada porque la eritropoyetina recombinante es producida en células CHO. 27. La composición según la reivindicación 24, caracterizada porque la eritropoyetina recombinante es eritropoyetina omega. 28. La composición según la - reivindicación 27, caracterizada porque la concentración de eritropoyetina omega en dicha composición es entre aproximadamente 500 lU/ml y aproximadamente 100,000 lU/ml. 29. La composición según la reivindicación 28, caracterizada porque la concentración de eritropoyetina omega es entre aproximadamente 2,000 lU/ml y aproximadamente 20,000 lU/ml. 30. La composición según la reivindicación 16, caracterizada porque la composición además comprende un surfactante. 31 . La composición según la reivindicación 30, caracterizada porque el surfactante es un surfactante no iónico, surfactante catiónico, surfactante aniónico, surfactante anfotérico, surfactante de ión anfotérico, o mezclas de los mismos. 32. La composición según la reivindicación 31 , caracterizada porque el surfactante es un éster de ácido graso de sorbitan de polioxialquiléno. 33. La composición según la reivindicación 30, caracterizada porque la concentración del surfactante en dicha composición es entre aproximadamente 0.0005% p/v y aproximadamente 0.5% p/v. 34. Una composición farmacéutica estable comprendiendo eritropoyetina, un éster de ácido graso de sorbitan de polioxialquiléno, y un estabilizador de péptido seleccionado del grupo consistiendo de Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, Ala-Ala, derivados de los mismos y mezclas de los mismos, caracterizada porque la composición está libre de albúmina de suero. 35. La composición según la reivindicación 34, caracterizada porque la eritropoyetina es eritropoyetina omega. 36. La composición según la reivindicación 34, caracterizada porque la albúmina de suero es albúmina de suero humano.