ES2311861T3 - Estabilizacion de formulaciones farmaceuticas de proteinas con pequeños peptidos. - Google Patents

Abstract

Composición farmacéutica estable que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de eritropoyetina y un estabilizante de péptido seleccionado de entre el grupo consistente en Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly- His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, Ala-Ala, derivados de los mismos y mezclas de los mismos, caracterizada porque la composición está exenta de seroalbúmina.

Description

Estabilización de formulaciones farmacéuticas de proteínas con pequeños péptidos.

Campo de la invención

La invención se refiere a una formulación farmacéutica que comprende eritropoyetina y un estabilizante, siendo el estabilizante un dipéptido, un tripéptido o una mezcla de los mismos. Las formulaciones farmacéuticas estables de la presente invención pueden contener agentes tensioactivos tales como Tween® 80.

Antecedentes de la invención

Con el desarrollo de la tecnología de recombinación genética es posible disponer de cierto número de proteínas para su uso terapéutico. A modo de ejemplo, entre las proteínas que se utilizan acualmente para el tratamiento de enfermedades se incluyen eritropoyetina, Factor VIII, Factor IX, hemoglobina, insulina, interferones alfa, beta y gamma, factor de crecimiento endotelial vascular, interleuquina 2 y muchas otras. Sin embargo, las proteínas pueden perder su actividad biológica como consecuencia de inestabilidades fisiológicas (por ejemplo desnaturalización, formación de agregados, etc.) e inestabilidades químicas, tales como hidrólisis, oxidación y desamidación. La estabilidad de las proteínas se ve influída además por factores tales como el pH, la temperatura, la tonicidad y el número de ciclos de congelación-descongelación.

Para asegurar la estabilidad, formulaciones terapéuticas de proteínas se suministran generalmente o bien como una proteína liofilizada que ha de disolverse justo antes de su uso en un diluyente soluble en agua envasado por separado, o bien como una solución proteica que contiene aditivos de mejora de la estabilidad. Por ejemplo, los aditivos como aminoácidos libres (por ejemplo leucina, triptófano, serina, arginina e histidina) que sirven para formular soluciones proteicas han sido propuestos en patentes tales como, por ejemplo, AU 722300; US 5.691.312; US 6.120.761. Algunas formulaciones de proteínas actualmente disponibles en el mercado contienen una proteína como estabilizante. Por ejemplo, la seroalbúmina humana o la gelatina purificada se utilizan para suprimir cambios químicos y físicos en las soluciones proteicas. Sin embargo, la adición de estas proteínas implica un proceso complicado para eliminar la contaminación viral. La liofilización es otro método empleado para asegurar la estabilidad; sin embargo, este proceso aumenta los costes de fabricación e implica un riesgo incrementado de administración inadecuada, ya que hace falta disolver la proteína liofilizada justo antes de su uso. La patente de Estados Unidos Nº 5.705.482 describe una solución farmacéutica de una hormona de crecimiento humano (hGH) que se estabiliza con el péptido Leu-His-Leu.

Una de las proteínas más ampliamente empleada como agente terapéutico es la eritropoyetina. La eritropoyetina es una hormona glicoproteica de 34-39 kDa que estimula la formación de glóbulos rojos. Se produce en el riñón y, una vez producida, circula hacia la médula ósea, donde estimula la conversión de las células precursoras primitivas en proeritroblastos, los cuales maduran posteriormente como glóbulos rojos. En un estado de salud normal, la eritropoyetina está presente en concentraciones muy bajas en el plasma, esto es de aproximadamente 0,01 a 0,03 U/ml, pero cuando se produce una hipoxia, esto es cuando el nivel de oxígeno en transporte se reduce, el riñón produce más eritropoyetina. La hipoxia puede ser consecuencia de, por ejemplo, una pérdida de gran cantidad de sangre, la destrucción de glóbulos rojos por radiación o por exposición a grandes altitudes. Además, varias formas de anemia provocan hipoxia, ya que los glóbulos rojos son responsables del transporte de oxígeno en el cuerpo. En un estado normal, un nivel incrementado de eritropoyetina estimula la producción de nuevos glóbulos rojos, elevando así el nivel de oxígeno y reduciendo o eliminando la condición hipóxica.

Al contrario de esta corrección de la hipoxia que se produce normalmente, los pacientes con insuficiencia renal crónica ("CRF") han limitado o no producen eritropoyetina y, por consiguiente, no producen suficientes glóbulos rojos. Como la duración normal de los glóbulos rojos es aproximadamente de 120 días, estos pacientes se vuelven cada vez más anémicos con el tiempo. Antes del desarrollo de la eritropoyetina recombinante, a menudo los pacientes con insuficiencia renal crónica tenían que ser sometidos a transfusiones regulares de sangre para mantener un nivel mínimo de glóbulos rojos.

Existen varias formas de eritropoyetina utilizadas actualmente para tratar a los pacientes: eritropoyetina alfa, beta, omega y delta. La eritropoyetina omega es una proteína recombinante expresada a partir del fragmento Apal del ADN genómico humano de la eritropoietina transformada en células renales de hámster bebé (BHK). La eritropoyetina omega y su expresión se describen por ejemplo en la patente de Estados Unidos Nº 5.688.679. Además, la estructura y composición de los residuos carbohidrato en la EPO omega se han descrito, por ejemplo, en Nimtz y col. (Eur. J. Biochem., 213:39, 1993) y Tsuda y col. (Eur. J. Biochem., 188:405, 1990). La EPO omega tiene un peso molecular medio de aproximadamente 35 kDa y se compone de múltiples isoformas (por ejemplo, por enfoque isoeléctrico, aproximadamente 6-8 isoformas en fracciones de corte amplio y 6 isoformas en fracciones pico), lo que es indicativo de distintos tipos y cantidades de glicosilación y, en particular, de distintas cantidades de sililación. La EPO omega tiene un contenido en oligosacáridos O-enlazados inferior a 1 mol por mol de glicoproteína y tiene tres sitios de N-glicosilación en los residuos aminoácidos Asn-24, Asn-38 y Asn-83, así como un sitio de O-glicosilación en el residuo aminoácido Ser-126. Además, a diferencia de la eritropoyetina urinaria humana o de la eritropoyetina alfa o beta, la EPO omega conserva sustancialmente la totalidad de su actividad biológica in vivo, incluso después de haber sido sometida a condiciones que conducen a la N-desglicosilación sustancial, si no completa, tal como se indica en Sytkowski y col, (Biochem. Biophys. Res. Commun., 176(2):298-704, 1991).

Aunque disponibles comercialmente, las formulaciones de EPO son generalmente bien toleradas y estables, bajo condiciones extremas estas formulaciones pueden ser inestables y experimentar pérdidas de actividad. Estas pérdidas de actividad pueden ser atribuidas a una destrucción de la EPO por los efectos catalíticos de la superficie de la ampolla utilizada para el almacenamiento debido a trazas de metales pesados, oxígeno atmosférico y similares, y también a una deposición de las moléculas de EPO en las paredes del recipiente, produciéndose también posiblemente una desnaturalización parcial de las mismas. Considerando el hecho de que sólo están presentes unos pocos microgramos en cada unidad de dosificación, las pérdidas debidas a la adsorción pueden ser considerables, aun después de un corto tiempo de almacenamiento. Además, las pérdidas de actividad pueden verse aceleradas por factores externos como el calor y la luz, o en formulaciones que están exentas de productos de sangre humana tales como la albúmina, o en formulaciones multidosis que contienen conservantes como alcohol bencílico.

En consecuencia, son deseables formulaciones farmacéuticas de proteínas que muestren una estabilidad mejorada sin que sea necesario liofilizar la proteína deseada o utilizar proteínas humanas como estabilizantes.

Sumario de la invención

De acuerdo con la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica estable según la reivindicación 1. Se describe también en la presente solicitud una formulación farmacéutica de proteínas donde la formulación comprende una proteína biológicamente activa y un estabilizante peptídico seleccionado de entre el grupo consistente en Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, Ala-Ala, derivados de los mismos y mezclas de los mismos, y donde la formulación está exenta de seroalbúmina humana.

También se describe una formulación farmacéutica estable de proteínas, donde la formulación comprende eritropoyetina y un estabilizante peptídico seleccionado de entre el grupo consistente en dipéptidos, tripéptidos, tetrapéptidos, pentapéptidos y mezclas de los mismos, estando la formulación exenta de seroalbúmina humana.

También se describe aquí una composición farmacéutica estable que comprende eritropoyetina, un estabilizante peptídico seleccionado de entre el grupo consistente en Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, Ala-Ala, derivados de los mismos y mezclas de los mismos, y Tween® 80, y estando la composición exenta de seroalbúmina humana.

Otros objetos y características siguientes serán en parte aparentes y en parte se señalarán.

Breve descripción de las figuras

Fig. 1: describe la recuperación de EPO (%) después de incubación durante 4 semanas a 25ºC y 4 semanas a 40ºC solo (B002) o en presencia de HSA (B001) o Tween® 80 (B003) después de 8 semanas de incubación, tal como se describe en el Ejemplo1.

Fig. 2: describe la recuperación de EPO (%) después de incubación durante 4 semanas a 25ºC y 4 semanas a 40ºC en presencia de un estabilizante de péptido (B004-B0012) después de 8 semanas de incubación, tal como se describe en el Ejemplo 1.

Fig. 3: describe la recuperación de EPO (%) después de incubación durante 4 semanas a 25ºC y 4 semanas a 40ºC en presencia de un estabilizante de péptido y Tween® 80 (B013-B021) después de 8 semanas de incubación, tal como se describe en el Ejemplo 1.

Descripción detallada de la invención

La presente invención proporciona formulaciones farmacéuticas estables de EPO donde la estabilización de estas formulaciones se consigue mediante la utilización de ciertos péptidos pequeños. Las formulaciones farmacéuticas de proteínas descritas aquí son preparaciones seguras y están exentas de proteínas extrañas. Los pequeños péptidos utilizados como estabilizantes en las formulaciones aquí descritas son más baratos que los estabilizantes convencionales, y el coste incurrido durante el proceso de fabricación es también más bajo que el coste para un producto liofilizado. Además, al utilizar pequeños péptidos, las formulaciones farmacéuticas de proteínas evitan la adición de seroalbúmina humana o de otras proteínas humanas o animales tales como la gelatina, que puede contener contaminantes virales.

Proteínas para su incorporación en la composición aquí descrita pueden ser cualesquiera con valor terapéutico en sujetos humanos. En consecuencia, estas proteínas incluyen, sin limitación, eritropoyetina (EPO), Factor VIII, Factor IX, factor estimulante de colonias de granulocitos (GCSF), factor estimulante de colonias de granulocitos macrófagos (GMCSF), trombopoyetina, heparina, interferones alfa, beta y gamma, interleuquina-2, factor estimulante de folículos, factor de crecimiento análogo a la insulina (IGF), factor de crecimiento nervioso (NGF), factor de necrosis tumoral (TNF) y proteínas de la familia morfogenética ósea (BMP). Las BMPs son nuevos factores en el ampliamente transformante factor de crecimiento beta (superfamilia TGF-\beta). Primero fueron identificados por Wozney J. y col., Science (1988) 242:1528-34, utilizando técnicas de clonación de genes, después de las descripciones anteriores que caracterizaban la actividad biológica en extractos de hueso desmineralizados (Urist M. Science (1965) 150:893-99). Estos factores son expresados por osteoblastos normales ya que diferencian y han demostrado estimular la diferenciación de osteoblastos y la formación de nódulos óseos in vitro, así como la formación ósea in vivo (Harris S. y col., J. Bone Miner Res (1994) 9:855-63). Esta última propiedad sugiere su utilidad potencial como agentes terapéuticos en enfermedades que resultan en pérdidas óseas. Las proteínas morfogenéticas óseas (BMP) incluyen proteína osteogénica 1 de mamíferos (OP-1, también denominada BMP-7, y el homólogo de Drosophila 60A), proteína osteogénica 2 (OP-2, también denominada BMP-8), proteína osteogénica 3 (OP-3, también denominada BMP-8B), BMP-2 (también denominada BMP-2A y el homólogo de Drosophila DPP), BMP-3, BMP-4 (también denominada BMP-2B), BMP-5, BMP-6 y su homólogo murino Vgr-1, BMP-9, BMP-10, BMP-11, BMP-12, GDF-3 (también denominada Vgr2), GDF-8, GDF-9, GDF-10. GDF-11, GDF-12, BMP-13, BMP-14, BMP-15, GDF-5 (también denominada CDMP-1), GDF-6 (también denominada CDMP-2), y GDF-7 (también denominada CDMP-3 o BMP-12).

Todas las proteínas especificadas anteriormente son bien conocidas en la técnica y su construcción recombinante forma parte del conocimiento de un especialista medio en la materia. Además, un especialista puede determinar fácilmente qué proteínas adicionales se pueden formular.

Las composiciones de la invención comprenden eritropoyetina. Aquí se describen también composiciones en las que se puede seleccionar la proteína de entre el grupo consistente en Factor VIII, Factor IX, factor estimulante de colonias de granulocitos, factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos, interferón alfa, interferón beta, interferón gamma, interleuquina-2, hormona estimulante de folículos, factor de crecimiento análogo a la insulina, factor de crecimiento nervioso, BMP-2, BMP-4, BMP-7 y factor de necrosis tumoral. En otra composición, la proteína es BMP-7. Las secuencias de ADN que codifican las proteínas BMP-7 se describen por ejemplo en la patente de Estados Unidos Nº 5.141.905 y métodos para producir las proteínas BMP-7 están descritos por ejemplo en la patente de Estados Unidos Nº 5.366.875.

En las composiciones de la invención, la proteína es eritropoyetina. La EPO a utilizar en la composición de la presente invención tiene sustancialmente la misma actividad biológica que en la EPO de mamíferos, especialmente humana, e incluye EPO natural y EPO obtenida por recombinación genética. La EPO procedente de la recombinación genética incluye una EPO con las mismas secuencias de aminoácidos que en el caso de la EPO natural, o una EPO con esta secuencia de aminoácidos en la que se han suprimido uno o más aminoácidos o en la que se han sustituido uno o más de los aminoácidos o a la que se han añadido uno o más aminoácidos, y que, sin embargo, conserva la actividad biológica anteriormente mencionada. La EPO de la presente invención se puede producir mediante cualquier método, por ejemplo, el método que comprende su extracción de orina humana, seguida de separación y purificación de distintas maneras; y el método que implica, por ejemplo, la producción en E. coli, levadura, células de ovario de hámster chino (CHO) o células de riñón de hámster bebé (BHK), seguida de extracción, separación y purificación de varias maneras. En otra realización, la EPO es una EPO recombinante producida en células CHO. Para la producción de EPO en estas células, véase por ejemplo la patente de Estados Unidos Nº 4.703.008. En otra realización, la EPO es una EPO recombinante elaborada en células de BHK. La producción de EPO en células de BHK es bien conocida en la técnica. Véase por ejemplo la patente de Estados Unidos Nº 5.688.679. Aun en otra realización, la eritropoyetina es eritropoyetina omega (para la descripción de EPO omega, véase por ejemplo la patente de Estados Unidos Nº 5.688.679 y WO 02/14356).

La cantidad de proteína biológicamente activa en la composición aquí descrita es aquella cantidad necesaria para suministrar una cantidad terapéuticamente eficaz de proteína por dosis unitaria para lograr el resultado deseado. Por ello, la cantidad puede variar en base a una proteína y a un diversos otros factores, tales como el tipo de enfermedad que ha de tratarse, la edad del paciente, la gravedad de la enfermedad, la presencia de otras condiciones, etc. Un especialista puede determinar fácilmente la cantidad adecuada de proteína que ha de incluirse en la composición.

En una realización, cuando la proteína biológicamente activa es eritropoyetina, la concentración de EPO en una formulación farmacéutica se sitúa entre aproximadamente 500 IU/ml y aproximadamente 100.000 IU/ml. En otra realización, la concentración de EPO se encuentra entre aproximadamente 1.000 IU/ml y aproximadamente 50.000 IU/ml, y aun en otra realización se sitúa entre aproximadamente 2.000 IU/ml y aproximadamente 20.000 IU/ml. En una realización preferente, la concentración de EPO en una formulación farmacéutica tal como la aquí descrita es de aproximadamente 10.000 IU/ml. Para indicaciones pediátricas, la EPO se puede formular a una concentración de aproximadamente 1.000 IU/ml.

Para tratar a los pacientes, la EPO omega se puede administrar inicialmente a dosis más altas para aumentar los niveles de hemoglobina y, más tarde, en dosis más pequeñas que sean apropiadas para un período de mantenimiento, ajustándose la dosis para una terapia prolongada y continuada. La EPO omega se puede administrar a pacientes a una dosis de aproximadamente 5 IU/kg a aproximadamente 150 IU/kg, de una a tres veces por semana, o de aproximadamente 10 IU/kg a aproximadamente 75 IU/kg, de una a dos veces por semana. En otra puesta en práctica, la EPO omega se administra a una dosis de aproximadamente 25 IU/kg a aproximadamente 60 IU/kg o de aproximadamente 25 IU/kg a aproximadamente 35 IU/kg, dos veces por semana. Aun en otra realización, la EPO omega se administra a una dosis de aproximadamente 50 IU/kg a aproximadamente 150 IU/kg o de aproximadamente 75 IU/kg a aproximadamente 100 IU/kg una vez por semana.

Los estabilizantes de péptidos a utilizar en las composiciones aquí descritas incluyen dipéptidos, tripéptidos, tetrapéptidos, pentapéptidos y mezclas de los mismos. Las composiciones de la presente invención comprenden Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, Ala-Ala, derivados de los mismos y mezclas de los mismos; sin embargo, se pueden utilizar también otros péptidos.

Los péptidos para su utilización en las formulaciones proteicas se pueden comprar a un proveedor comercial, si son comerciales, o se pueden sintetizar. Los principios de la síntesis química en fase sólida de los péptidos son bien conocidos en la técnica y se pueden encontrar en textos generales de esta materia. Véase por ejemplo H. Dugas y C. Penney, BIOORGANIC CHEMISTRY, (1981), Springer-Verlag, New York, páginas 54-92. Por ejemplo, los péptidos se pueden sintetizar mediante metodologías en fase sólida utilizando un sintetizador de péptidos 430A de Applied Biosystems (disponible de Applied Biosystems, Foster City California) y de ciclos de síntesis suministrados por Applied Biosystems.

Además, cuando se diseñan pequeños péptidos para utilizarlos en las formulaciones aquí descritas, se pueden aplicar sustituciones de aminoácidos conservadoras. Las sustituciones de aminoácidos en los péptidos pueden basarse en la similitud relativa de los sustituyentes de cadena lateral de los aminoácidos, por ejemplo, su hidrofobicidad, hidrofilicidad, carga, tamaño, etc. Las sustituciones ejemplares que tienen en cuenta varias características de las anteriores con el fin de producir cambios conservadores de aminoácidos que resultan en cambios silenciosos dentro de los presentes péptidos, etc., se pueden seleccionar a partir de otros miembros de la clase a la que pertenece el aminoácido natural. Los aminoácidos se pueden dividir en los siguientes cuatro grupos: (1) aminoácidos ácidos; (2) aminoácidos básicos; (3) aminoácidos neutros polares; y (4) aminoácidos neutros no polares. Los aminoácidos representativos dentro de estos distintos grupos incluyen, pero no se limitan a: (1) aminoácidos ácidos (cargados negativamente a pH fisiológico) tales como ácido aspártico y ácido glutámico; (2) aminoácidos básicos (cargados positivamente a pH fisiológico) tales como arginina, histidina y lisina; (3) aminoácidos neutros polares tales como glicina, serina, treonina, cisteína, cistina, tirosina, asparagina y glutamina; y (4) aminoácidos neutros no polares tales como alanina, leucina, isoleucina, valina, prolina, fenilalanina, triptófano y metionina. Se debe observar que cambios que no se espera sean ventajosos pueden ser también útiles cuando éstos resultan en la producción de secuencias funcionales. Por ejemplo, utilizando un principio de sustituciones conservadoras de aminoácidos, Gly-Ala puede ser sustituido por ejemplo por Ser-Leu, Thr-Leu. Thr-Ile, etc. Un especialista puede determinar fácilmente las secuencias de péptidos con sustituciones de aminoácidos conservadoras.

Ejemplos de residuos aminoácidos para su utilización en un pequeño péptido pueden seleccionarse de cualquiera de los aminoácidos naturales, tales como aminoácidos-L proteogénicos (es decir, los 20 aminoácidos normalmente incorporados en las proteínas), así como aminoácidos-D y aminoácidos no proteogénicos. Generalmente, los aminoácidos no proteogénicos son metabolitos o análogos de aminoácidos proteogénicos. Ejemplos no limitativos de aminoácidos no proteogénicos naturales incluyen ornitina, taurina, hidroxiprolina, hidroxilisina, norleucina, \beta-alanina, ácido gamma-aminobutírico, selenocisteína, fosfoserina, ácido piroglutámico y pirrolisina. El aminoácido se puede seleccionar también de entre aminoácidos no naturales. Como aminoácidos no naturales se incluyen, pero no se limitan a, derivados y análogos de aminoácidos. Ejemplos no limitativos de derivados de aminoácidos incluyen selenometionina, teluro-metionina y p-aminofenilalanina, aminoácidos fluorados (por ejemplo, triptófano, tirosina y fenilalanina fluorados), nitrofenilalanina, nitrobenzoxadiazolil-L-lisina, desoximetilarginina y ciclohexilalanina. Como análogos de aminoácidos se incluyen compuestos sintetizados químicamente que tienen propiedades conocidas en la técnica por ser características de los aminoácidos, cuyos ejemplos incluyen, por ejemplo, "análogo" de triptófano b-selenolo[3,2-b]pirrolilalanina y el "análogo" de prolina tiaprolina (ácido 1,3-tiazolidin-4-carboxílico). Otros derivados adicionales de aminoácidos incluyen sales de aminoácidos, aminoácidos acilados y alfa-cetoaminoácidos.

Los estabilizantes de péptidos pueden contener sales de aminoácidos. A modo de ejemplo, estas sales pueden estar compuestas por ácidos inorgánicos tales como clorhidratos de aminoácidos o por ácidos orgánicos tal como aminoacetatos. Por ejemplo, se puede utilizar un péptido que contenga un clohidrato de aminoácido, tal como clorhidrato de L-histidina o clorhidrato de L-alanina. Los clorhidratos de aminoácidos están disponibles comercialmente o se pueden obtener según se conoce en la técnica. Por ejemplo, Gly-His\cdotHCl\cdotH_{2}O, Gly-Ala\cdotHCl\cdotH_{2}O, Ala\cdotHCl\cdotH_{2}O-Gly y Ala\cdotHCl\cdotH_{2}O-Ala\cdotHCl\cdotH_{2}O son algunos ejemplos de estabilizantes peptídicos que utilizan sales de aminoácidos. En otra realización, los estabilizantes de péptido contienen aminoácidos acilados y/o alfa-cetoaminoácidos. Además de los ejemplos descritos anteriormente, se pueden obtener distintos péptidos utilizando los aminoácidos descritos más arriba. A modo de ejemplo y no de limitación, un dipéptido puede contener un aminoácido-L y un aminoácido-D, un aminoácido-L y una sal de aminoácido, un aminoácido-D y un análogo de aminoácido, un aminoácido-L y un aminoácido acilado, un aminoácido-L y un alfa-cetoaminoácido, un aminoácido acilado y un alfa-cetoaminoácido, dos aminoácidos acilados, dos aminoácidos-L, dos sales de aminoácidos, etc. El especialista puede reconocer fácilmente otras combinaciones de aminoácidos adicionales no sólo para los dipéptidos, sino también para otros péptidos pequeños de la invención.

Las formulaciones farmacéuticas aquí descritas pueden incluir una sola clase de péptido (por ejemplo, Gly-Gly) o mezclas de péptidos. A modo de ejemplo, las mezclas pueden incluir un dipéptido y un dipéptido (por ejemplo, Gly-Gly, Gly-His), un dipéptido y un tripéptido (por ejemplo, Ala-Ala y Gly-Gly-Gly), un tripéptido y un pentapéptido, dos dipéptidos y un tripéptido, y así sucesivamente.

La concentración de un estabilizante peptídico o mezclas de los mismos en la composición farmacéutica estable aquí descrita se encuentra entre aproximadamente 0,01 g/l y aproximadamente 10 g/l. En otra realización, la concentración de estabilizante peptídico está entre aproximadamente 0,5 g/l y aproximadamente 5 g/l. En aun otra realización, la concentración de estabilizante peptídico es de aproximadamente 1 g/l.

En una realización de la presente invención, la composición proteica farmacéutica estable contiene un agente tensioactivo. Aunque no sin implicar ninguna teoría en particular, se piensa que la presencia de un agente tensioactivo en la solución reduce la adherencia de una proteína biológicamente activa, tal como EPO, a las paredes del recipiente en el que se almacena la formulación. La cantidad de agente tensioactivo utilizada en las formulaciones aquí descritas oscila entre aproximadamente el 0,0005% peso/volumen y aproximadamente el 0,5% peso/volumen. En una realización, la cantidad de agente tensioactivo, en particular Tween® 80, es del 0,03% peso/volumen. En otra realización, el agente tensioactivo es adecuado para la administración parenteral.

Cualquier agente tensioactivo que sea farmacéuticamente aceptable puede incluirse en la composición de la invención. Estos agentes tensioactivos incluyen, sin limitación, agentes tensioactivos no iónicos (por ejemplo, sorbitan polioxialquilen ésteres de ácidos grasos, ésteres de ácidos grasos, polioxialquileno éteres de ácidos grasos, ácido grasos C_{16}-C_{24}, mono-, di- o poli-glicéridos de ácidos grasos, polioxialquilen alquil fenoles, alquil fenil éteres, copolímeros en bloque de polioxietileno-polioxipropileno, óxidos de aminas grasas, alcanolamidas de ácidos grasos, alquilcelulosa, carboxialquilcelulosa, derivados polioxialquileno de aceite de ricino), agentes tensioactivos aniónicos (por ejemplo, sulfatos de alquilo, sulfatos de olefina, éter-sulfatos, sulfatos de monoglicéridos, sulfonatos de alquilo, sulfonatos de arilo, sulfonatos de olefina, sulfosuccinatos de alquilo, sulfosuccinatos de arilo, incluyendo sulfato de lauril-sodio, sulfosuccinato de dioctil-sodio y sulfonato de dioctil-sodio), agentes tensioactivos catiónicos (por ejemplo, sales de benzalconio, polioxialquilen alquilamidas, alquilaminas, alcanolamida ésteres de ácidos grasos, ésteres de aminio cuaternario de ácidos grasos, sales de dialquil-amonio, sales de alquil-piridinio, incluyendo estearilamina, oleato de trietanolamina, cloruro de bencetonio), agentes tensioactivos anfóteros (por ejemplo, \beta-aminopropionatos de alquilo, sales de amonio cuaternario de 2-alquilimidazolina) y agentes tensioactivos zwiteriónicos. Los agentes tensioactivos no iónicos para su uso en las composiciones de la invención incluyen, pero no se limitan a, monolaurato de polioxietileno(20)-sorbitano (Tween® 20), monolaurato de polioxietileno(4)- sorbitano (Tween® 21), monopalmitato de polioxietileno(20)-sorbitano (Tween® 40), monoestearato de polioxietileno(20)-sorbitano de (Tween® 60), triestearato de polioxietileno(20)-sorbitano (Tween® 65), monooleato de polioxietileno(20)- sorbitano (Tween® 80 o polisorbato 80) o trioleato de polioxietileno(20)-sorbitano (Tween® 85), lauromacrogol 400, estearato de polioxil-40, aceite de ricino hidrogenado y polioxietileno 10, 50 y 60, monoestearato de glicerol, monooleato de glicerol, polisorbato 40, 60, 65 y 80, ésteres de ácidos grasos y sacarosa, laurato de sorbitano, oleato de sorbitano, palmitato de sorbitano, estearato de sorbitano, tristearato de sorbitano, sesquioleato de sorbitano, trioleato de sorbitano, isoestearato de sorbitano, monoestearato de propilenglicol, monoestearato de polioxietileno, diestearato de polioxietileno, monoestearato de glicerilo, polioxietilen lauril éter, polioxietilen cetil éter, estearil polioxietilen éter, oleil polioxietilen éter, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido oleico, oleato de etilo, miristato de isopropilo, palmitato de sodio, estearato de sodio, oleato de sodio, nonilfenolpolietoxietanoles, tributilfenoxi-polietoxietanol, octilfenoxi-polietoxietanol, triricinoleato de polioxietilenglicerol o aceite de ricino-polioxil 35 (Cremophor® EL, BASF Corp.), oxiestearato de polioxietilenglicerol (Cremophor® RH 40), aceite de ricino hidrogenado-polietilenoglicol 60 (Cremophor® RH 60), Poloxamer® 124, Poloxamer® 188, Poloxamer® 237, Poloxamer® 388, Poloxamer® 407 (BASF Wyandotte Corp.), metilcelulosa y carboximetilcelulosa. Preferentemente, el agente tensioactivo utilizado es un polioxietilen-sorbitano éster de mono- o tri-laurilo, palmitilo, estearilo u oleilo tal como monolaurato de polioxietilen(20)-sorbitano (Tween® 20), monolaurato de polioxietilen(4)-sorbitano (Tween® 21), monopalmitato de polioxietilen(20)-sorbitano (Tween® 40), monoestearato de polioxietilen(20)-sorbitano (Tween® 60), triestearato de polioxietilen(20)-sorbitano (Tween® 65), monooleato de polioxietilen(20)-sorbitano (Tween® 80 o polisorbato 80) o trioleato de polioxietilen(20)-sorbitano (Tween® 85).

Opcionalmente, las formulaciones farmacéuticas proteicas estables aquí descritas pueden incluir conservantes, agentes tampón, agentes de isotonicidad, y otros componentes convencionales utilizados en la formulación de composiciones farmacéuticas.

En una realización, los conservantes útiles en las composiciones de la presente invención son aquellos compatibles con la eritropoyetina para que las composiciones sean estables. Los conservantes particulares contemplados para su uso incluyen alcohol bencílivo, parabenos, fenol, derivados de fenol, cloruro de benzalconio y mezclas de los mismos. Dependiendo del conservante particular empleado, su cantidad puede variar. Por ejemplo, el alcohol bencílico se utiliza en una cantidad del 0,6-2,0%, preferentemente en una cantidad de aproximadamente un 1%. A esta concentración, el alcohol bencílico proporciona la conservación y la capacidad anestésica local sin afectar indebidamente a la estabilidad de la eritropoyetina.

En otra realización, se utiliza un agente tampón para mantener el pH de la composición dentro de un rango deseado. Los agentes preferentes incluyen varias formas salinas, ácidas o básicas de los siguientes aniones: citrato, fosfato, tartrato, succinato, adipato, maleato, lactato, acetato, bicarbonato, piruvato y carbonato. Las sales representativas de estos tampones que se pueden utilizar son las formas de sodio y potasio, siempre que la sal y la cantidad sean fisiológicamente compatibles. En una composición inyectable, se pueden utilizar también mezclas de estos agentes tampón. Entre estos agentes, son deseables los tampones de citrato y fosfato. La cantidad de agente tampón útil en las composiciones farmacéuticas depende ampliamente del tampón particular empleado y del pH de la solución. Por ejemplo, el citrato es un tampón más eficaz a pH 6 que a pH 7, así que se puede utilizar menos citrato en una solución a pH 6 que a pH 7. El rango de pH preferente para las soluciones es de aproximadamente 5-8, siendo especialmente preferente de 6-7,5 y en particular un pH de aproximadamente 7. Con respecto a estos valores pH, la cantidad de tampón oscilará generalmente entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 30 mM. La cantidad de tampón de citrato puede oscilar entre aproximadamente 1 mM y aproximadamente 20 mM. Se pueden utilizar los mismos conservantes, agentes tampón y agentes de isotonicidad para proteínas diferentes a la eritropoyetina; sin embargo, puede resultar necesario ajustar el pH o las concentraciones de aditivos. Estas modificaciones pueden ser determinadas mediante experimentación de rutina.

Las composiciones de la presente invención pueden incluir además un agente que ajuste la isotonicidad de forma que la solución se convierta en isotónica y más compatible para su inyección. Los agentes preferentes incluyen cloruro de sodio, glicerol, manitol, sacaosa, sorbitol y mezclas de los mismos. El agente especialmente preferente es cloruro de sodio. La cantidad de agente de ajuste de la isotonicidad necesario para que la solución se vuelva isotónica varía con el agente particular, pero está incluido generalmente en un rango de aproximadamente un 0,1-10%.

En una realización, las formulaciones farmacéuticas de proteínas se preparan mediante la adición de un estabilizante peptídico o de una mezcla de dos o más estabilizates a una solución salina estéril tamponada con fosfato (PBS). El pH de la solución preferentemente es 7,2 aproximadamente. Si se utiliza un agente tensioactivo, por ejemplo Tween® 80, se puede añadir con el estabilizante peptídico. Después, se mezcla bien la solución y se añade a la solución la proteína biológicamente activa EPO. Opcionalmente, si se utilizan agentes adicionales tales como agentes tampón o conservantes, se pueden añadir antes de la adición de la proteína o después de la adición de la misma.

Las formulaciones farmacéuticas estables de proteínas pueden estar contenidas en un recipiente de vidrio o plástico sellado, esterilizado. La preparación de la solución puede suministrarse como dosis prescrita en una ampolla, vial o jeringa desechable, o en una forma de dosis múltiples tal como una bolsa o botella para inyección. En una realización, las formulaciones farmacéuticas estables de proteínas se pueden almacenar en condiciones refrigeradas durante 24 meses como mínimo.

En general, las formulaciones estables de proteínas de la presente invención se administran por vía parenteral, por ejemplo por inyección (intramuscular, intraperitoneal, subcutánea o intravenosa); sin embargo, las formulaciones se pueden administrar también por otras vías, tales como percutánea, transmucosa o transnasal.

Las formulaciones farmacéuticas estables de proteínas aquí descritas se pueden utilizar para tratar cualquier condición para la que se indique una proteína que está en la formulación. A modo de ejemplo y no de limitación, cuando la proteína en la formulación es eritropoyetina, se puede utilizar la formulación para tratar cualquier condición en la que se desee la estimulación de la proliferación de glóbulos rojos (RBC). Así, se puede usar la EPO para tratar la anemia, asociándose la anemia a la carencia de eritropoyetina endógena, anemia por enfermedad maligna, anemia que resulte de un tratamiento quimioterapéutico/radiación de una enfermedad maligna, o anemia por una enfermedad crónica. Las anemias por enfermedad crónica incluyen, pero no se limitan a, anemia asociada a artritis reumatoide, hepatitis, SIDA (especialmente en pacientes tratados con AZT), anemia de la prematuridad, anemia asociada a la deficiencia renal, anemia de talasemia, anemia hemolítica autoinmune, anemia aplásica y anemia asociada a la cirugía (por ejemplo, para aumentar la eritropoyesis en pacientes que experimenten un transplante de médula
ósea).

En un ejemplo comparativo, cuando una proteína es un miembro de la familia BMP, tal como BMP-7, se puede utilizar para tratar una plétora de condiciones que se caracterizan por la necesidad de incrementar la formación ósea. Estas condiciones incluyen, por ejemplo, fracturas óseas en las que es deseable estimular el crecimiento del hueso y apresurar su reparación. Otras condiciones de déficit óseo que se pueden tratar con la proteína BMP formulada tal como se describe aquí incluyen, sin limitación, defectos segmentales óseos, enfermedad periodontal, enfermedad metastática ósea, enfermedad del hueso osteolítico y condiciones en las que la reparación del tejido conectivo sería beneficiosa, tal como la curación o regeneración de defectos o lesión del cartílago. Otras condiciones caracterizadas por la necesidad de crecimiento óseo incluyen hiperparatiroidismo primario y secundario y osteoporosis (incluida la osteoporosis relacionada con la edad, osteoporosis asociada al estado hormonal postmenopáusico, osteoporosis por desuso, osteoporosis asociada a la diabetes y osteoporosis relacionada con los glucocorticoides). Alternativamente, los miembros de la familia BMP tal como se formulan aquí se pueden utilizar para modular el metabolismo, para la proliferación y/o diferenciación de células o tejidos normales o aberrantes.

Otras características, objetos y ventajas de la presente invención serán evidentes para los especialistas en la materia. Las explicaciones e ilustraciones presentadas aquí pretenden poner al corriente a otros especialistas en la técnica de la invención, sus principios y su aplicación práctica. Los especialistas en la materia pueden adaptar y aplicar la invención en sus numerosas formas, según se adapten mejor a los requisitos de un uso particular. En consecuencia, las realizaciones específicas de la presente invención tal como se establecen no pretenden ser exhaustivas o limitativas de la presente invención.

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Abreviaturas y definiciones

Para facilitar la comprensión de la invención, se definen a continuación ciertos términos:

"BMP" es una abreviatura de proteína morfogenética ósea.

"CDMP" es una abreviatura de proteína morfogenética derivada de cartílago.

"DPP" significa proteína decapentaplégica.

"GDF" es una abreviatura de factor de crecimiento y diferenciación.

"OP" es una abreviatura de proteína osteogénica.

"Vgr" es una abreviatura de asociado a (proteína) vegetal.

"RH" es una abreviatura de humedad relativa.

"HSA" es una abreviatura de seroalbúmina humana.

"AUC" es una abreviatura de área bajo la curva.

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Tal como se utiliza aquí, el término "aminoácido" se emplea en su sentido más amplio e incluye aminoácidos naturales así como aminoácidos no naturales, incluidos análogos y derivados de aminoácidos. Estos últimos incluyen moléculas que contienen una parte aminoácido. Un especialista en la materia reconocerá, teniendo en cuenta esta amplia definición, que la referencia aquí a un aminoácido incluye, por ejemplo, aminoácidos-L proteogénicos naturales; aminoácidos-D; aminoácidos químicamente modificados, tales como análogos y derivados de aminoácidos; aminoácidos no proteogénicos naturales y compuestos químicamente sintetizados que tienen propiedades conocidas en la técnica por ser características de los aminoácidos.

Tal como se utiliza aquí, "proteína biológicamente activa" se refiere a la capacidad de una proteína para realizar sustancialmente la misma función que la forma nativa de la proteína de interés.

"Composición" y "formulación" se utilizan aquí de forma intercambiable.

Tal como se utiliza aquí, "péptido" significa un compuesto que se compone de dos o más aminoácidos que están enlazados por medio de al menos un enlace peptídico. "Dipéptido" significa un péptido que se compone de dos aminoácidos conectados por un enlace peptídico, "tripéptido" significa un péptido que se compone de tres aminoácidos conectados por enlaces peptídicos, y así sucesivamente. "Pequeños péptidos" para el objeto de la presente invención incluye dipéptidos, tripéptidos, tetrapéptidos y pentapéptidos.

Los términos "estable" y "estabilizado" significan que una composición farmacéutica de la invención ha incrementado la estabilidad de almacenamiento en comparación con la misma composición sin comprender estabilizantes de péptidos tal como se describe aquí. La estabilización proporcionada por la presente invención tiene en cuenta la estabilidad incrementada de almacenamiento en forma líquida a 2º-8ºC, la facilidad de administración sin reconstitución y la capacidad para suministrar la formulación en jeringas prerrellenas listas para el uso o como preparaciones multidosis si la formulación es compatible con agentes bacteriostáticos. Preferentemente, las composiciones estables de la invención se pueden almacenar en condiciones refrigeradas (entre aproximadamente 2º y aproximadamente 8ºC) durante al menos 6 meses, 12 meses, 18 meses, 24 meses, 30 meses, 36 meses o más.

La expresión "terapéuticamente eficaz" pretende calificar la cantidad de proteína biológicamente activa que alcanzará el objetivo de mejora en la gravedad de la enfermedad y la frecuencia de incidencia durante el tratamiento, al mismo tiempo que evita los efectos secundarios adversos típicamente asociados a las terapias alternativas.

Una "IU" o "unidad internacional" es una medida estandardizada de la cantidad de un efecto biológico especificado de un medicamento o de un material natural. En particular, una IU para la eritropoyetina se refiere a la medida unitaria procedente de un ensayo en ratón policitémico ex-hipóxico in vivo que está estandardizado por medio de la Preparación de Referencia Internacional de la Organización Mundial de la Salud de la eritropoietina. La cantidad de material necesario para proporcionar una IU para determinado material variará con la fuente, condición, calidad, pureza y/o tipo de material. La relación entre las IU y otras unidades como las que definen los ensayos radioinmunes, se pueden entender además por referencia a Storring y col., Brit. J. Haematol., 100:79, 1998.

Los siguientes ejemplos ilustran la invención, pero no deben ser tomados como limitativos de los distintos aspectos de la invención así ilustrada.

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Ejemplo 1

El presente estudio se diseñó para evaluar la estabilidad de la eritropoyetina omega en una solución de PBS que contenía 1) pequeños péptidos o 2) pequeños péptidos y Tween® 80, como estabilizantes. Se evaluó la estabilidad en comparación con la estabilidad de la EPO omega cuando no se utilizaban estabilizantes o cuando se utilizaba sola seroalbúmina humana (HSA) o Tween® 80 como estabilizantes. Se emplearon en el estudio los siguientes pequeños péptidos: Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His\cdotHCl\cdotH_{2}O, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly y Ala-Ala. Se compraron todos los péptidos y Tween® 80 a Sigma-Aldrich.

Se aplicaron los protocolos relacionados a continuación para preparar las soluciones que se utilizaron para evaluar la estabilidad de almacenamiento de la formulación farmacéutica que contenía la eritropoyetina omega.

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Para preparar una solución de PBS, en una botella de vidrio:

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añadir agua para inyección (WFI) hasta aproximadamente 800 g;

-

añadir 8,18 g de NaCl y 1,56 g de NaH_{2}PO_{4}\cdot2H_{2}O;

-

añadir WFI con agitación hasta la masa total de la solución formulada, 1.006 g;

-

agitar rápidamente durante un mínimo de 15 minutos (la totalidad de la sal debe estar disuelta antes del final de la mezcla);

-

introducir nitrógeno en la solución; hacer burbujear durante 2 minutos;

-

determinar el pH de la solución y ajustarlo a 7,20 (rango de 7,10 a 7,30) con NaOH 10M;

-

filtrar la solución a través de un filtro de membrana estéril de 0,22 \mum en el recipiente estéril; y

-

utilizar la solución filtrada para preparar soluciones formuladas de eritropoyetina.

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Para elaborar una solución madre de PBS, pH 7,2 - péptido (1,25 g/l), combinar el PBS con pH 7,2 (50 ml) y un péptido (62,5 mg).

Para elaborar una solución madre de PBS, pH 7,2 - Tween® 80 (0,375 g/l), combinar el PBS con pH 7,2 (1.000 ml) y Tween® 80 (0,375 g).

Para elaborar una solución madre de PBS, pH 7,2 - péptido (1,25 g/l) - Tween® 80 (0,375 g/l), añadir a 50 ml de la solución madre de PBS con pH 7,2 - Tween® 80 (0,375 g) un péptido (62,5 mg).

Para elaborar una solución madre de EPO (50.000 IU/ml) en PBS, pH 7,2, combinar el PBS de pH 7,2 (75,3 ml) y 14,7 ml de la solución concentrada de EPO (306.000 IU/ml).

Para elaborar una solución de EPO de 10.000 IU/ml en PBS de pH 7,2, mezclar 16 ml de PBS de pH 7,2 y 4 ml de EPO madre (50.000 IU/ml).

Para elaborar una solución de EPO de 10.000 IU/ml en PBS pH 7,2 - HSA 2,5 mg/l, mezclar 16 ml de PBS de pH 7,2, 4 ml de EPO madre (50.000 IU/ml) y 250 \mul de HSA (20% peso/volumen).

Para elaborar una solución de EPO de 10.000 IU/ml en PBS pH 7,2 - Tween® 80 (0,3 g/l), mezclar la solución madre de 16 ml de PBS de pH 7,2 - Tween® 80 y 4 ml de EPO madre (50.000 IU/ml).

Para elaborar una solución de EPO de 10.000 IU/ml en PBS pH 7,2 - péptido (1,0 g/l), mezclar 16 ml de la solución madre de PBS de pH 7,2 - péptido y 4 ml de EPO madre (50.000 IU/ml).

Para elaborar una solución de EPO de 10.000 IU/ml en PBS pH 7,2 - Tween® 80 (0,3 g/l) - péptido (1,0 g/l), mezclar 16 ml de la solución madre de PBS de pH 7,2 - Tween® 80 - péptido y 4 ml de EPO madre (50.000 IU/ml).

Se mezclan bien todas las soluciones para asegurar la homogeneización y se filtran a través de un filtro de membrana estéril de 0,22 \mum en recipientes estériles.

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(Tabla pasa a página siguiente)

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La Tabla 1 describe las muestras de EPO utilizadas en este estudio.

TABLA 1

1

Inicialmente se mantuvieron las muestras a 25ºC/60% de RH y se analizaron en las semanas 1, 2, 4, 6, 8 y 10. Después de 4 semanas de almacenamiento, se trasladaron 2 lotes de muestras a 40ºC/60% de RH y se analizaron en las semanas 6 y 8. Esto se realizó para someter a esfuerzo la solución en mayor medida con el fin de ampliar todo efecto estabilizador potencial. El estudio a 25ºC/60% de RH se suspendió después de 10 semanas.

Las soluciones se analizaron por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) utilizando el módulo de separación WATERS® ALLIANCE 2690 provisto de un horno WATERS y un detector de Dual \lambda Absorbancia de WATERS®. El sistema se conectó a una columna DELTA-PACK de C4-300\ring{A}-5 \mum de WATERS®. Las muestras se trasladaron a viales de HPLC utilizando jeringas Monoject estériles de 1,0 ml de KENALL provistas de agujas Monoject estériles de 23G x 3,2 cm (1¼'') de KENDALL. Se midió el contenido en proteína como AUC pico a 280 nm.

El Área Bajo la Curva (AUC) se registró y se utilizó para calcular la recuperación de proteína basándose en la respuesta en el período inicial. La recuperación se calculó como relación entre la respuesta en el período de interés y en el período inicial.

Recuperación_{AUC} (%) = 100 x C_{AUC1} / C_{AUC0},

en la que

Recuperación_{AUC} es la recuperación basada en AUC,

C_{AUC1} es el contenido de eritropoyetina en el período de interés expresado como AUC del pico, y

C_{AUC0} es el contenido en eritropoyetina en el período inicial expresado como AUC del pico.

Antes de iniciar el estudio, se investigó la ausencia de interferencias entre los productos de degradación potencial procedentes de los estabilizantes peptídicos y la eritropoyetina omega. Este era otro control del experimento diseñado para evaluar si los pequeños péptidos y/o el Tween® 80 podían afectar al cálculo correcto del AUC y del % de recuperación para la EPO. Para abordar esta cuestión, soluciones que contenían pequeños péptidos y nada de eritropoyetina omega se mantuvieron durante 4 semanas a 25ºC/60% de RH y 4 semanas a 40ºC/60% de RH antes de la inyección. El análisis de los cromatogramas mostró que no se veía ninguna señal cerca de la señal de eritropoyetina omega (20,6 min), indicando que los péptidos y/o el Tween® 80 no afectaban al cálculo del AUC y del % de recuperación para la EPO.

La Tabla 2 (véase a continuación) muestra el % de recuperaciones de EPO cuando está estabilizada con pequeños péptidos (B004-B012) o pequeños péptidos y Tween® 80 (B013-B021) a 25ºC/60% de RH en las semanas 1, 2, 4, 6, 8 y 10 y a 40ºC/60% de RH en las semanas 6 y 8. Como se puede observar a partir de la Tabla, excepto para las soluciones control que contenían EPO sola (B002) o Tween® (B003), no se registró casi ninguna degradación en las muestras de prueba almacenadas a 25ºC/60% de RH durante 10 semanas. En las mismas condiciones, no se registró ninguna degradación de proteína en la EPO con la muestra de HSA (B001). En cuanto a las soluciones control exentas de HSA (B002 y B003), se registró una ligera reducción con el tiempo. Además, la estabilidad de la EPO a 40ºC/60% de RH era mejor en las muestras que contenían un estabilizante de péptido o de péptido y Tween® que en las muestras control exentas de HSA mantenidas en las mismas condiciones. Además, y tal como se esperaba, las soluciones de EPO mostraron mejor estabilidad de almacenamiento a 25ºC que a 40ºC. Se pueden ver los mismos resultados como representaciones gráficas en las Figuras 1, 2 y 3.

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TABLA 2

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2

3

Se debe observar que todos los procedimientos mencionados anteriormente se pueden modificar para un estudio particular, dependiendo de factores tales como la proteína utilizada, duración del estudio, etc. Estas modificaciones pueden ser diseñadas por un especialista sin experimentación excesiva.

Claims (15)

1. Composición farmacéutica estable que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de eritropoyetina y un estabilizante de péptido seleccionado de entre el grupo consistente en Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly, Ala-Ala, derivados de los mismos y mezclas de los mismos, caracterizada porque la composición está exenta de seroalbúmina.

2. Composición según la reivindicación 1, caracterizada porque la eritropoyetina es una eritropoyetina recombinante.

3. Composición según la reivindicación 2, caracterizada porque la eritropoyetina recombinante se produce en células BHK.

4. Composición según la reivindicación 2, caracterizada porque la eritropoyetina recombinante se produce en células CHO.

5. Composición según la reivindicación 2, caracterizada porque la eritropoyetina recombinante es eritropoyetina omega.

6. Composición según la reivindicación 5, caracterizada porque la concentración de eritropoyetina omega en dicha composición se encuentra entre aproximadamente 500 IU/ml y aproximadamente 100.000 IU/ml.

7. Composición según la reivindicación 6, caracterizada porque la concentración de eritropoyetina omega se encuentra entre aproximadamente 2.000 IU/ml y aproximadamente 20.000 IU/ml.

8. Composición según la reivindicación 1, caracterizada porque los derivados comprenden sales de Gly-Gly, Gly-Gly-Gly, Gly-Tyr, Gly-Phe, Gly-His, Gly-Asp, Gly-Ala, Ala-Gly y Ala-Ala.

9. Composición según la reivindicación 1, caracterizada porque la concentración de estabilizante de péptido en dicha composición se encuentra entre aproximadamente 0,01 g/l y aproximadamente 10 g/l.

10. Composición según la reivindicación 9, caracterizada porque la concentración de estabilizante de péptido se encuentra entre aproximadamente 0,5 g/l y aproximadamente 5 g/l.

11. Composición según la reivindicación 1, caracterizada porque la composición comprende además un agente tensioactivo.

12. Composición según la reivindicación 11, caracterizada porque el agente tensioactivo es un agente tensioactivo no iónico, catiónico, aniónico, anfótero, zwiteriónico o una mezcla de los mismos.

13. Composición según la reivindicación 11, caracterizada porque el agente tensioactivo es un sorbitano-polioxialquilen éster de ácido graso.

14. Composición según la reivindicación 11, caracterizada porque la concentración de agente tensioactivo en dicha composición se encuentra entre aproximadamente el 0,0005% peso/volumen y aproximadamente el 0,5% peso/volumen.

15. Composición según la reivindicación 1, caracterizada porque la seroalbúmina es seroalbúmina humana.