ES2326498T3 - Formulacion liquida de g-csf. - Google Patents
Formulacion liquida de g-csf. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2326498T3 ES2326498T3 ES07712399T ES07712399T ES2326498T3 ES 2326498 T3 ES2326498 T3 ES 2326498T3 ES 07712399 T ES07712399 T ES 07712399T ES 07712399 T ES07712399 T ES 07712399T ES 2326498 T3 ES2326498 T3 ES 2326498T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- csf
- formulation
- polysorbate
- formulation according
- acetate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Formulación líquida de G-CSF que contiene G-CSF como sustancia activa, acetato como tampón, polisorbato 20 y/o polisorbato 80 como agente superficiactivo y opcionalmente sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables, donde la formulación presenta un valor pH de entre 4,1 y 4,3.
Description
Formulación líquida de
G-CSF.
La presente invención se refiere a formulaciones
líquidas de G-CSF que son estables en almacenamiento
y a procedimientos para su fabricación. La invención se refiere en
particular a formulaciones líquidas que contienen
G-CSF como sustancia activa, acetato como sustancia
tampón, polisorbato 20 o polisorbato 80 como agente superficiactivo
y opcionalmente sustancias auxiliares farmacéuticamente aceptables,
presentando las formulaciones un valor pH de entre 4,1 y 4,3.
El G-CSF (factor estimulador de
colonias de granulocitos) es un factor de crecimiento que se da de
manera natural y pertenece a la familia de las citoquinas en el
sentido más amplio, y aquí al grupo de los factores estimuladores
de colonias. El G-CSF desempeña un papel decisivo en
la hematopoyesis y promueve la proliferación y diferenciación de
células precursoras hematopoyéticas y la activación de neutrófilos.
Debido a estas propiedades, el G-CSF ha encontrado
aplicación en distintos ámbitos médicos, como p. ej. el de la
reconstitución de las poblaciones celulares normales de la sangre
tras quimioterapia o irradiación, o el de la estimulación de la
respuesta inmune frente a patógenos infecciosos. Así, el
G-CSF se aplica en la clínica principalmente para
combatir tumores y en particular para el tratamiento de la
neutropenia sobrevenida como consecuencia de una quimioterapia, y
encuentra además aplicación también en los trasplantes de médula
ósea y en el tratamiento de enfermedades infecciosas.
La producción recombinante de
G-CSF fue descrita en la literatura de patentes por
primera vez en 1987, en la
WO-A-87/01132. El primer preparado
de G-CSF comercial hecho a base de
G-CSF recombinante fue homologado en Alemania en
1991 y es fabricado y comercializado por la firma Amgen con el
nombre comercial de Neupogen®.
El producto llamado Neupogen® (jeringas
precargadas) consta según la relación de medicamentos de la LISTA
ROJA 2005 de los componentes siguientes: G-CSF en
una concentración de 600 \mug/ml o 960 \mug/ml, acetato sódico,
sorbitol, polisorbato 80 y agua.
En el estado de la técnica también diversos
documentos de patente se ocupan de preparaciones farmacéuticas de
G-CSF. En la EP-A-0
373 679 se describen formulaciones de G-CSF en las
cuales la proteína es estabilizada mediante la presencia de un
ácido, un valor pH ácido y una baja conductividad de la
formulación.
La DE-A-37 23
781 se refiere en general al uso de G-CSF en
combinación con un agente tensoactivo farmacéuticamente tolerable,
un sacárido, una proteína o un compuesto de alto peso molecular
farmacéuticamente tolerable.
En la
WO-A-94/14465 se describe el uso de
maltosa, celobiosa, gentiobiosa, isomaltosa, rafinosa, sacarosa y
otros azúcares para la estabilización de preparaciones con contenido
de G-CSF.
En la
WO-A-94/14466 se dan a conocer
preparaciones con contenido de G-CSF que contienen
una cantidad de agente superficiactivo que es menor que la cantidad
de G-CSF que se usa, y una sustancia tampón.
La WO-A-93/03744
describe formulaciones con contenido de G-CSF que
contienen un agente conservante, con respecto al cual se trata de
clorbutanol, alcohol bencílico o benzalconio.
La EP-A-0 988
861 da a conocer formulaciones con contenido de
G-CSF que como sustancia tampón contienen HEPES, TES
o tricina.
La
WO-A1-2005/042024 da a conocer
preparaciones farmacéuticas de G-CSF con un valor pH
de más de 4,0 que contienen un ácido y están exentas de agentes
superficiactivos.
La finalidad que persigue la presente invención
es la de fabricar una preparación de G-CSF que pueda
ser almacenada en forma líquida por espacio de un prolongado
periodo de tiempo y no precise de aditivos estabilizadores tales
como HSA (HSA = ácido hidroxiesteárico), aminoácidos o conservantes.
Se trata de poder contar de esta manera con una formulación líquida
de G-CSF que sea estable en almacenamiento y evite
en lo posible todo riesgo para la tolerabilidad de la
formulación.
Esta finalidad es alcanzada según la invención
mediante el objeto de la reivindicación 1. Están definidas en las
reivindicaciones dependientes formas de realización preferidas.
Se descubrió que, incluso en ausencia de HSA,
aminoácidos o estabilizadores polímeros, las composiciones líquidas
de G-CSF que contienen acetato como sustancia tampón
y polisorbato 20 y/o polisorbato 80 como agente superficiactivo y
presentan un valor pH de entre 4,1 y 4,4 pueden ser almacenadas en
forma líquida siendo estables por espacio de un prolongado periodo
de tiempo, sin que lleguen a producirse significativas pérdidas
de
estabilidad.
estabilidad.
La invención se refiere con ello a una
formulación líquida acuosa de G-CSF estable en
almacenamiento que además de G-CSF humano
recombinante como sustancia activa comprende acetato como tampón y
polisorbato 20 (monolaurato de polioxietileno sorbitano, también
llamado Tween 20) o polisorbato 80 (monooleato de polioxietileno
sorbitano, también llamado Tween 80) o una mezcla de los mismos como
agente superficiactivo y presenta un valor pH de entre 4,1 y
4,3.
En una forma de realización preferida, en cuanto
al agente superficiactivo se trata de polisorbato 20.
Pero también se descubrió que otros ésteres
alquílicos de polioxietileno sorbitano son asimismo adecuados para
ser usados como detergentes en las formulaciones de la presente
invención.
El agente superficiactivo está habitualmente
contenido en una concentración que está situada dentro de la gama
de valores que va desde un 0,0005% (en peso/volumen) hasta un 0,05%
(en peso/volumen), preferiblemente dentro de la gama de valores que
va desde un 0,001% (en peso/volumen) hasta un 0,01%, con particular
preferencia dentro de la gama de valores que va desde un 0,002% (en
peso/volumen) hasta un 0,008%, y con la máxima preferencia, dentro
de la gama de valores que va desde un 0,004% (en peso/volumen) hasta
un 0,006% (en peso/volumen), estando estos porcentajes referidos al
volumen total de la solución. Por regla general, las formulaciones
según la invención contienen el agente superficiactivo polisorbato
20 y/o 80 en una concentración de un 0,004% (en peso/volumen), un
0,005% (en peso/volumen) o un 0,006% (en peso/volumen).
La concentración de la sustancia tampón acetato
se elige ventajosamente de forma tal que al valor pH de entre 4,1 y
4,3 según la invención se logren tanto el efecto de estabilización
del pH como una suficiente capacidad de tamponamiento, pero se
mantenga también al mismo tiempo al nivel más bajo posible la
concentración iónica y con la misma la conductividad, para evitar
la formación de agregados. El acetato está habitualmente contenido
en una concentración que está situada dentro de la gama de valores
que va desde 0,5 hasta 150 mmoles/l, preferiblemente dentro de la
gama de valores que va desde 1 hasta 100 mmoles/l, con particular
preferencia dentro de la gama de valores que va desde 2 hasta 50
mmoles/l, y con la máxima preferencia dentro de la gama de valores
que está situada entre 5 y 20 mmoles/l. Por regla general, la
concentración de acetato es de 10 mmoles/l.
La sustancia tampón acetato puede ser usada
tanto en forma del ácido libre como en forma de la sal. Se usan como
sales en particular las sales fisiológicamente tolerables, como por
ejemplo las sales alcalinas o amónicas, y preferiblemente la sal
sódica.
El valor pH de la formulación está situado
dentro de la gama de valores de entre 4,1 y 4,3, preferiblemente
entre 4,2 y 4,3, asimismo con particular preferencia entre 4,25 y
4,3, y con la máxima preferencia al nivel de poco más o menos 4,25 o
poco más o menos 4,3.
Si se desea, el valor pH de la composición puede
ser también ajustado con ayuda de otros ácidos o bases al pH que
está situado dentro de la gama de valores que va desde 4,1 hasta
4,3, desde 4,2 hasta 4,3 o desde 4,25 hasta 4,3, o que es de
aproximadamente 4,25 o de aproximadamente 4,3. Son ácidos adecuados
por ejemplo el ácido clorhídrico, el ácido fosfórico, el ácido
cítrico y el fosfato de hidrógeno y sodio o de hidrógeno y potasio.
Son bases adecuadas por ejemplo los miembros del grupo que consta de
hidróxidos alcalinos y alcalinotérreos, carbonatos alcalinos,
acetatos alcalinos, citratos alcalinos y fosfatos dialcalinos de
hidrógeno, como por ejemplo hidróxido sódico, acetato sódico,
carbonato sódico, citrato sódico, fosfato disódico de hidrógeno y
fosfato dipotásico de hidrógeno, así como amoníaco.
El pH se ajusta preferiblemente con NaOH. La
formulación según la invención contiene por consiguiente en una
forma de realización adicionalmente iones de sodio como consecuencia
del ajuste del valor pH con NaOH.
En una forma de realización la formulación
contiene además como aditivo farmacéuticamente aceptable un poliol,
y en particular un alcohol de azúcar, con respecto al cual se trata
con particular preferencia de manitol o sorbitol. Estos aditivos
son particularmente adecuados como agentes isotonificantes, para
hacer que la composición según la invención sea isotónica con la
sangre del paciente.
La concentración de poliol es habitualmente de
hasta de un 10,0% (en peso/volumen), referido al volumen total de
la composición. Preferiblemente, la concentración es de hasta un
8,0% (en peso/volumen), y con particular preferencia es de hasta un
6,0% (en peso/volumen). Con particular preferencia, el sorbitol o el
manitol está contenido en una concentración de un 5,0% (en
peso/volumen).
La concentración de G-CSF
depende de la concentración de sustancia activa que en cada caso de
desee en la jeringa precargada en la que se almacena y finalmente
se aplica la formulación líquida según la invención. El producto
comercial llamado Neupogen® (LISTA ROJA 2005, Nº 51 038) está p. ej.
disponible en las concentraciones siguientes: 300 \mug/0,5 ml,
480 \mug/0,5 ml y 300 \mug/1,0 ml. 10 \mug de proteína
corresponden aproximadamente a 1,0 millón de Unidades
Internacionales (UI). En el caso del producto comercial llamado
Granocyte (LISTA ROJA Nº 51 036) es algo más alta la actividad del
G-CSF recombinante, correspondiendo aquí 10 \mug
de proteína a una actividad de 1,28 millones de UI.
Las típicas concentraciones de
G-CSF están dentro del marco de la presente
invención situadas entre 0,01 y 3,0 mg/ml, preferiblemente entre
0,1 y 2,5 mg/ml, con particular preferencia dentro de la gama de
valores que está situada entre 0,5 y 2,0 mg/ml, y con la máxima
preferencia entre 0,6 y 1,5 mg/ml. Las concentraciones de 0,6 mg/ml
y 0,96 mg/ml representan formas de realización preferidas. La
actividad del G-CSF que usa es por regla general de
aproximadamente 1,0 \pm 0,6 x 10^{8} unidades/mg.
En las soluciones de partida más altamente
concentradas, a las que se llama a menudo solución a granel, también
puede ser más alta la concentración de sustancia activa, pudiendo
dicha concentración ser según cómo de 5 mg/ml y más.
Las composiciones según la invención pueden
contener adicionales estabilizadores y/o sustancias auxiliares y
aditivos habituales y en particular fisiológicamente tolerables.
Puede tratarse a este respecto por ejemplo de adicionales agentes
superficiactivos, agentes isotonificantes, agentes reductores,
antioxidantes, formadores de complejos, codisolventes, diluyentes y
agentes caotrópicos.
Realmente se prefiere que la formulación no
contenga estabilizadores polímeros. Así p. ej. debe prescindirse de
polialquilenglicoles tales como polietilenglicol,
hidroxietilalmidón, dextrano y ciclodextrina, pero también de
proteínas tales como HSA (HSA = albúmina sérica humana) y otras
proteínas plásmicas o gelatina.
Como disolvente se usa preferiblemente agua pura
para inyección. Pero también pueden usarse otros disolventes
habituales y adecuados para preparaciones farmacéuticas. En realidad
preferiblemente se prescinde de disolventes tales como glicerol,
polietilenglicol y propilenglicol.
Asimismo se renuncia al uso de sustancias tampón
tales como tartrato, succinato, HEPES, TES y tricina.
También se prescinde en la medida de lo posible
de los estabilizadores aminoácidos.
En conjunto se prefiere que sea lo menor posible
el número de las distintas sustancias auxiliares en la formulación.
De acuerdo con ello, también se evitan en la medida de lo posible
otros azúcares tales como manitol y sorbitol, y también en cuanto a
las sustancias tampón contenidas en la formulación se trata con
preferencia exclusivamente de acetato.
Los componentes de la formulación pueden
adquirirse a fuentes habituales, como p. ej. la firma Sigma o la
firma Merck.
El G-CSF recombinante puede ser
fabricado y purificado según los protocolos del estado de la
técnica.
En cuanto al G-CSF, se trata de
G-CSF biológicamente activo que está en condiciones
de promover la diferenciación y proliferación de células
precursoras hematopoyéticas y de producir la activación de células
maduras del sistema hematopoyético. La formulación de
G-CSF es con ello adecuada para el tratamiento de
indicaciones en las que es ventajosa la administración de
G-CSF. Se entiende que el concepto de
"G-CSF humano biológicamente activo" también
incluye a los mutantes y las modificaciones de G-CSF
cuya secuencia de aminoácidos está modificada con respecto a la
secuencia de tipo salvaje, pero que presentan una actividad
biológica similar a la del G-CSF de tipo salvaje,
como son p. ej. los que están descritos en los documentos WO
01/87925 y EP 0 456 200. En el sentido de la presente invención son
G-CSF también los conjugados de
G-CSF en los que la proteína está en forma
conjugada p. ej. con polímeros tales como por ejemplo
polialquilenglicoles, en particular con polietilenglicol en forma
del llamado G-CSF polietilenglicolado o
PEG-G-CSF, o con
hidroxialquilalmidones, y en particular con hidroxietilalmidón. El
G-CSF puede estar glicosilado o no glicosilado.
Mientras que la proteína recombinante producida en E. coli
no presenta estructuras carbohidráticas y es expresada con un
residuo de metionina N-terminal, el
G-CSF producido en células eucarióticas, como p. ej.
células CHO (células CHO = células de ovario de hámster chino), está
por regla general glicosilado.
En cuanto al G-CSF que está
contenido en la formulación líquida, se trata preferiblemente de
met-G-CSF humano producido en
células E. coli. Para la expresión en células E. coli
están disponibles comercialmente distintos sistemas de expresión.
Es por ejemplo adecuada la expresión de G-CSF humano
bajo el control de un promotor inducible, como por ejemplo un
promotor inducible por IPTG (IPTG = isopropiltiogalactosa); véanse,
p. ej., Sambrook y Russel, Molecular Cloning - A Laboratory Manual,
3^{a} edición 2001, Coldspring Harbour Laboratory Press,
Coldspring Harbour, NY, Capítulo 15, o los corrientes protocolos de
fabricante, como p. ej. los de Promega o Stratagene.
La fermentación de las células huésped puede ser
asimismo efectuada según protocolos estándar como los que están
descritos en la literatura científica y de patentes, al igual como
la posterior purificación, incluyendo la recolección de los
llamados cuerpos de inclusión que contienen el G-CSF
sobreexpresado en E. coli, la desagregación de estos cuerpos
de inclusión, la solubilización, el replegamiento y la purificación
cromatográfica, para cuyas operaciones se encuentran protocolos
adecuados tanto en la literatura de patentes como en obras de
referencia de la química de las proteínas y en manuales de
laboratorio.
Por ejemplo en la
EP-A-0 719 860 están descritos el
aislamiento y la purificación de G-CSF, incluyendo
la solubilización y el replegamiento. Técnicas generales para la
solubilización y renaturalización de proteínas desnaturalizadas han
sido descritas en los documentos
EP-A-0 512 097,
EP-A-0 364 926,
EP-A-0 219 817 y WO 01/87925 y
pueden además sacarse de la literatura científica y de obras de
referencia de la química de las proteínas.
La proteína replegada es a continuación
purificada mediante métodos cromatográficos, es decir que es
separada de las otras proteínas y demás impurezas que están
presentes tras la solubilización y renaturalización.
De la purificación cromatográfica se ocupa,
entre otros, el ya anteriormente mencionado documento WO 87/01132
A1, en el que fue descrita por primera vez la producción de
G-CSF en células huésped E. coli. Dentro del
marco de la purificación del G-CSF recombinante se
efectúa en la WO 87/01132 A1 en el Ejemplo 7 una cromatografía de
intercambio catiónico usando una columna de
CM-celulosa.
En la EP 0 719 860 A1, a continuación de la
solubilización y oxidación el G-CSF es purificado
mediante Dowex para la eliminación del agente solubilizante,
efectuándose a continuación una cromatografía de intercambio
aniónico y una cromatografía de intercambio catiónico. También en la
EP 0 719 860 A1 se usa para la cromatografía de intercambio
catiónico CM-Sefarosa.
En la WO 03/051922 A1 se describe un
procedimiento de purificación para G-CSF en el que
se efectúa una cromatografía de afinidad metálica, o dicho más
exactamente, una cromatografía en metal inmovilizado (cromatografía
de afinidad por metal inmovilizado, IMAC). A continuación de la
cromatografía de afinidad metálica puede tener lugar en la WO
03/051922 una cromatografía de intercambio catiónico y/o una
filtración en gel.
En la WO 01/04154 A1 está descrito un
procedimiento de purificación de G-CSF en el que se
efectúan primeramente una cromatografía de interacción hidrofóbica
y a continuación de la misma una cromatografía en hidroxiapatita. A
continuación de la cromatografía en hidroxiapatita se efectúa una
cromatografía de intercambio catiónico.
La pureza del G-CSF con el que
se hace la formulación según la invención debería ser de al menos un
95%, preferiblemente de al menos un 97% y con particular
preferencia de al menos un 99%, y con la máxima preferencia de más
de un 99%. La pureza puede ser verificada mediante análisis por HPLC
(HPLC = cromatografía de líquidos de alta resolución). Son aquí
adecuados los análisis por rp-SEC
(rp-SEC = cromatografía de exclusión por tamaño en
fase inversa) y por IEX (IEX = cromatografía de intercambio iónico).
Adecuados materiales y protocolos para la realización de la rpHPLC
(rpHPLC = cromatografía de líquidos de alta resolución en fase
inversa) o de la SEC-HPLC (SEC-HPLC
= cromatografía líquida de exclusión por tamaño de alta resolución)
puede sacarlos el experto en la materia de las informaciones de
producto de ofertantes tales como Vydac (http://www.vydac.com) o
TOSOH Bioscience (http://www.tosohbiosep.de).
Por regla general el G-CSF se
usa con una pureza de más de un 99%, y preferiblemente de más de un
99,5%, en las preparaciones según la invención.
La actividad del G-CSF que se
use no deberá en la medida de lo posible ser de menos de 50.000
UI/\mug, siendo particularmente adecuado un G-CSF
con una actividad de al menos aproximadamente 80.000 UI/\mug, y
siendo sumamente adecuado un G-CSF con una actividad
de aproximadamente 100.000 UI/\mug o más.
La determinación de la producción de
met-G-CSF está también descrita en
Herman et al. (1996) Pharm. Biotechnol. 9:
303-328. El exacto porcentaje de
met-G-CSF se determina mediante
integración de la superficie de pico y conversión mediante el
coeficiente de extinción.
Tras la purificación, el G-CSF
puede ser analizado con respecto a su cantidad y su actividad. Puede
hacerse un análisis cuantitativo mediante un análisis por
SDS-PAGE (SDS-PAGE = electroforesis
en gel de poliacrilamida en presencia de dodecilsulfato sódico) con
subsiguiente coloración con azul brillante Coomassie o mediante una
rpHPLC. Como patrón para los análisis puede usarse un preparado de
G-CSF de los que están a la venta en el mercado.
Adicionalmente puede efectuarse un mapa peptídico o una
espectroscopia de masas. La actividad del G-CSF
purificado puede ser determinada con distintos procedimientos de
ensayo biológico como son por ejemplo los que están descritos en
Shirafuji et al. (1989) Exp. Hematol. 17(2):
116-119; Oh-Eda et al. (1990)
J. Biol. Chem. 265(20): 11432-11435; Stute
et al. (1992) Blood 79(11): 2849-2854
y Oshima et al. (2000) Biochem. Biophys. Res. Commun.
267(3): 924-927.
Todas las cromatografías se efectúan por lo
demás según las recomendaciones y los protocolos de los ofertantes
de las matrices y de las columnas (p. ej. con respecto a la
velocidad de flujo, a los volúmenes de columna a usar para el
lavado y para la elución, a los diámetros y a las alturas de lecho
de las columnas, etc.).
La actividad biológica del G-CSF
recombinante obtenido puede ser determinada mediante un bioensayo y
puede ser comparada con la de un G-CSF estándar de
los que están a la venta en el mercado (Neupogen®). Puede usarse
para ello la línea celular de ratón NFS-60, que
responde al G-CSF. Para ello, esta línea celular es
cultiva en medio RPMI 1640 (firma Bachem, Heidelberg) que contiene
1,5 g/l de bicarbonato sódico, 4,5 g/l de glucosa, Hepes 10 mM y
piruvato sódico 1,0 mM y ha sido suplementado con glutamina 2 mM, un
10% de FCS (FCS = suero bovino fetal),
2-mercaptoetanol 0,05 mM y 60 ng/ml de
G-CSF.
Para el ensayo de la actividad las células se
lavan dos veces con medio sin G-CSF, se siembran en
una concentración de 2 x 10^{4} células por pocillos en placas de
cultivo de 96 pocillos y se incuban por espacio de tres días a 37ºC
y con un 4,5% de CO_{2} con distintas concentraciones del
G-CSF purificado y del estándar. A continuación se
colorean con reactivo XTT y se mide la absorción a 450 nm en un
lector de placas de microtitulación. Es deseable que las células
que fueron tratadas con el G-CSF obtenido crezcan
exactamente tan bien como las células que fueron tratadas con el
estándar (como p. ej. el producto comercial llamado Neupogen®),
puesto que entonces puede partirse de la base de una misma actividad
biológica de ambas muestras de G-CSF.
La fabricación de la formulación se efectúa
asimismo según los métodos habituales del estado de la técnica.
Habitualmente se procede en primer lugar a
disolver en las cantidades adecuadas en el disolvente acuoso, que
es habitualmente agua estéril, los componentes tampón y
tensioactivos y dado el caso las adicionales sustancias auxiliares
farmacéuticamente tolerables. De ser necesario, el valor pH se
ajusta con solución de acetato o con otros ácidos o bases como los
anteriormente mencionados a título de ejemplo. Tras un habitual paso
de esterilización, como por ejemplo un paso de filtración a través
de un filtro estéril, se añade el G-CSF en la
concentración deseada. Pero también es sin más posible poner al
G-CSF en una solución acuosa y ajustar a
continuación el pH al valor deseado con acetato y/o adecuados ácidos
o bases, y preferiblemente con HaOH.
La formulación líquida ya acabada es finalmente
envasada en un envase adecuado en el que se la almacena hasta la
aplicación. En cuanto al envase se trata en particular de jeringas
precargadas, frascos de tapón perforable o ampollas.
Las composiciones según la invención pueden ser
usadas en distintas formas de aplicación. Las formulaciones según
la invención son por ejemplo adecuadas para ser usadas en forma de
soluciones para inyección o infusión, en particular para
administración intravenosa, intramuscular o subcutánea. Las
composiciones pueden ser sin embargo también usadas para la
fabricación de adicionales formas de aplicación, como por ejemplo
transfersomas, liposomas o hidrogeles.
La formulación líquida según la invención no tan
sólo ofrece las ventajas de que prescinde de compuestos
potencialmente inmunógenos y contiene en total el menor número
posible de componentes, sino que además en ninguna fase de la
fabricación exige una liofilización. Gracias a ello se logra por un
lado ahorrar los costes que van ligados a la liofilización, y por
otro lado se evitan los riesgos de problemas mecánicos, p. ej.
cuando no puede reconstituirse completamente o de manera suficiente
el liofilizado.
Por el concepto de "estable en
almacenamiento" se entiende dentro del marco de la presente
invención que tras haber estado la formulación líquida de
G-CSF en almacenamiento durante tres meses a 25ºC el
contenido de moléculas de G-CSF activas sigue
siendo aún de un 80% o más de la concentración de partida. El
contenido restante de actividad de G-CSF es
preferiblemente tras tres meses de almacenamiento a 25ºC aún de al
menos un 85%, más preferiblemente de al menos un 90% y con la
máxima preferencia de al menos un 95% de la actividad inicial. La
actividad del G-CSF puede ser determinada mediante
adicionales ensayos de actividad como los que ya han sido descritos
para el G-CSF en el estado de la técnica.
Por el concepto de "formulación líquida" se
entiende dentro del marco de la presente invención que la
formulación de G-CSF junto con las otras sustancias
contenidas en la formulación no es liofilizada en fase alguna del
proceso de fabricación, o sea que no lo es ni antes ni después de la
mezcla de las sustancias ni durante la misma, y que la formulación
está destinada a la aplicación intravenosa o subcutánea en forma de
solución para inyección o infusión.
En una forma de realización preferida, además de
la sustancia activa G-CSF, de un agente
superficiactivo seleccionado de entre los miembros del grupo que
consta de polisorbato 20, polisorbato 80 o una mezcla de los
mismos, del acetato, del sorbitol, de los iones de sodio y del agua,
la formulación no contiene otros componentes adicionales y presenta
un valor pH de entre 4,2 y 4,3, y en particular de entre 4,25 y 4,3.
Es particularmente preferido el uso de polisorbato 20 como único
agente superficiactivo en la formulación.
\vskip1.000000\baselineskip
Los ejemplos siguientes están destinados a
aclarar la invención sin limitarla.
Se hicieron composiciones con contenido de
G-CSF disolviendo primeramente en agua destilada y
estéril la sustancia tampón de acetato en forma de la sal sódica
junto con polisorbato 20 o polisorbato 80 y sorbitol y ajustando a
continuación el valor pH con NaOH al deseado valor de entre 4,2 y
4,3. Se añadió en la concentración deseada G-CSF
humano recombinante no glicosilado (Filgrastim,
met-G-CSF). La fabricación y el
envasado de la formulación en jeringas precargadas se hicieron
preferiblemente bajo atmósfera de nitrógeno.
Se indican en las tablas siguientes las
formulaciones concretas de las composiciones según la invención
fabricadas y sus valores pH. Se observaron resultados equiparables
al usar polisorbato 80 en lugar de polisorbato 20. Esto mismo es
también válido para el uso de manitol en lugar de sorbitol.
Las formulaciones según la invención se tuvieron
en almacenamiento a distintas temperaturas y por espacio de
distintos periodos de tiempo junto con correspondientes
formulaciones que tenían un valor pH de 4,0, representan el estado
de la técnica y sirvieron de formulaciones comparativas.
Están representados en las figuras adjuntas
algunos datos de los análisis de la estabilidad a largo plazo
(siendo la concentración de G-CSF en cada caso de
0,6 mg/ml). La figura 1 muestra análisis por SEC (SEC =
cromatografía de exclusión por tamaño) y la figura 2 muestra
análisis por IEX (IEX = cromatografía de intercambio iónico), en
cada caso para hasta 6 meses de almacenamiento a 30ºC y 40ºC.
Las formulaciones según la invención arrojaron
en conjunto resultados equiparables a los de la formulación
comparativa, que se diferenciaba de las formulaciones según la
invención sometidas a ensayo únicamente en un valor pH ácido, que
era concretamente un pH de 4,0.
\vskip1.000000\baselineskip
Esta lista de referencias que cita el
solicitante se aporta solamente en calidad de información para el
lector y no forma parte del documento de patente europea. A pesar de
que se ha procedido con gran esmero al compilar las referencias, no
puede excluirse la posibilidad de que se hayan producido errores u
omisiones, y la OEP se exime de toda responsabilidad a este
respecto.
- \bullet WO 8701132 A [0003]
- \bullet EP 0719860 A [0040]
- \bullet EP 0373679 A [0005]
- \bullet EP 0512097 A [0040]
- \bullet DE 3723781 A [0006]
- \bullet EP 0364926 A [0040]
- \bullet WO 9414465 A [0007]
- \bullet EP 0219874 A [0040]
- \bullet WO 9414466 A [0008]
- \bullet WO 8701132 A1 [0042] [0042]
- \bullet WO 9303744 A [0009]
- \bullet EP 0719860 A1 [0043] [0043]
- \bullet EP 0988861 A [0010]
- \bullet WO 03051922 A1 [0044]
- \bullet WO 2005042024 A1 [0011]
- \bullet WO 03051922 A [0044]
- \bullet WO 0187925 A [0037] [0040]
- \bullet WO 0104154 A1 [0045]
\bullet EP 0456200 A [0037]
\bulletSAMBROOK; RUSSEL.
Molecular Cloning - A Laboratory Manual. Coldspring Harbour
Laboratory Press, 2001 [0038]
\bulletHERMAN et al. Pharm.
Biotechnol., 1996, vol. 9, 303-328
[0049]
\bulletSHIRAFUJI et al. Exp.
Hematol., 1989, vol. 17 (2), 116-119
[0050]
\bulletOH-EDA et
al. J. Biol. Chem., 1990, vol. 265 (20),
11432-11435 [0050]
\bulletSTUTE et al. Blood,
1992, vol. 79 (11), 2849-2854 [0050]
\bulletOSHIMA et al. Biochem.
Biophys. Res. Commun., 2000, vol. 267 (3),
924-927 [0050]
Claims (15)
1. Formulación líquida de G-CSF
que contiene G-CSF como sustancia activa, acetato
como tampón, polisorbato 20 y/o polisorbato 80 como agente
superficiactivo y opcionalmente sustancias auxiliares
farmacéuticamente aceptables, donde la formulación presenta un valor
pH de entre 4,1 y 4,3.
2. Formulación líquida según la reivindicación 1
con un valor pH situado dentro de la gama de valores que va desde
4,2 hasta 4,3.
3. Formulación líquida según la reivindicación 1
o 2 con un valor pH de 4,25.
4. Formulación según una de las reivindicaciones
precedentes, donde la concentración de tampón de acetato es de entre
2 y 50 mmoles/l.
5. Formulación según una de las reivindicaciones
precedentes, donde la concentración de tampón de acetato es de 10
mmoles/l.
6. Formulación según una de las reivindicaciones
precedentes, donde la formulación contiene como sustancia auxiliar
farmacéuticamente aceptable sorbitol y/o manitol.
7. Formulación líquida según la reivindicación
6, donde la formulación contiene sorbitol.
8. Formulación según una de las reivindicaciones
precedentes, donde la formulación no contiene conservante
alguno.
9. Formulación según una de las reivindicaciones
precedentes, donde la formulación no contiene aminoácidos.
10. Formulación según una de las
reivindicaciones precedentes, donde la formulación prescinde de
estabilizadores polímeros.
11. Formulación según una de las
reivindicaciones precedentes, donde el pH fue ajustado con NaOH.
12. Formulación según una de las
reivindicaciones precedentes, que contiene iones de sodio.
13. Formulación según una de las
reivindicaciones precedentes, que contiene G-CSF,
polisorbato 20 y/o polisorbato 80, sorbitol, acetato y sodio y
ningún otro componente además de éstos.
14. Formulación según una de las
reivindicaciones 1 a 12, donde en cuanto al agente superficiactivo
se trata exclusivamente de polisorbato 20.
15. Procedimiento de fabricación de una
formulación líquida de G-CSF según una de las
reivindicaciones precedentes, que comprende la mezcla de la proteína
G-CSF con una solución que comprende acetato como
tampón, polisorbato 20 y/o polisorbato 80 como agente
superficiactivo y opcionalmente sustancias auxiliares
farmacéuticamente aceptables.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE102006009437 | 2006-03-01 | ||
| DE102006009437A DE102006009437A1 (de) | 2006-03-01 | 2006-03-01 | G-CSF-Flüssigformulierung |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2326498T3 true ES2326498T3 (es) | 2009-10-13 |
Family
ID=38226349
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES07712399T Active ES2326498T3 (es) | 2006-03-01 | 2007-03-01 | Formulacion liquida de g-csf. |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20090247450A1 (es) |
| EP (2) | EP1988913B1 (es) |
| JP (1) | JP2009528327A (es) |
| AT (1) | ATE429243T1 (es) |
| CA (1) | CA2644461A1 (es) |
| CY (1) | CY1109223T1 (es) |
| DE (4) | DE102006009437A1 (es) |
| DK (1) | DK1988913T3 (es) |
| ES (1) | ES2326498T3 (es) |
| PL (1) | PL1988913T3 (es) |
| PT (1) | PT1988913E (es) |
| RU (1) | RU2445115C2 (es) |
| SI (1) | SI1988913T1 (es) |
| WO (1) | WO2007099145A1 (es) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7157277B2 (en) | 2001-11-28 | 2007-01-02 | Neose Technologies, Inc. | Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII |
| US7214660B2 (en) * | 2001-10-10 | 2007-05-08 | Neose Technologies, Inc. | Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin |
| US7173003B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-02-06 | Neose Technologies, Inc. | Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF |
| ES2420581T3 (es) | 2003-03-14 | 2013-08-26 | Biogenerix Gmbh | Polímeros solubles en agua ramificados y sus conjugados |
| MXPA05010773A (es) | 2003-04-09 | 2005-12-12 | Neose Technologies Inc | Metodos de glicopegilacion y proteinas/peptidos producidos por los metodos. |
| US8791070B2 (en) | 2003-04-09 | 2014-07-29 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated factor IX |
| WO2005012484A2 (en) | 2003-07-25 | 2005-02-10 | Neose Technologies, Inc. | Antibody-toxin conjugates |
| US20080305992A1 (en) | 2003-11-24 | 2008-12-11 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin |
| US8633157B2 (en) | 2003-11-24 | 2014-01-21 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated erythropoietin |
| US20060040856A1 (en) | 2003-12-03 | 2006-02-23 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated factor IX |
| WO2005070138A2 (en) | 2004-01-08 | 2005-08-04 | Neose Technologies, Inc. | O-linked glycosylation of peptides |
| US20080300173A1 (en) | 2004-07-13 | 2008-12-04 | Defrees Shawn | Branched Peg Remodeling and Glycosylation of Glucagon-Like Peptides-1 [Glp-1] |
| EP1799249A2 (en) | 2004-09-10 | 2007-06-27 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated interferon alpha |
| EP1814573B1 (en) | 2004-10-29 | 2016-03-09 | ratiopharm GmbH | Remodeling and glycopegylation of fibroblast growth factor (fgf) |
| JP4951527B2 (ja) | 2005-01-10 | 2012-06-13 | バイオジェネリックス アーゲー | 糖ｐｅｇ化顆粒球コロニー刺激因子 |
| EP2386571B1 (en) | 2005-04-08 | 2016-06-01 | ratiopharm GmbH | Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants |
| EP2975135A1 (en) | 2005-05-25 | 2016-01-20 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated factor IX |
| US20070105755A1 (en) | 2005-10-26 | 2007-05-10 | Neose Technologies, Inc. | One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides |
| US20090048440A1 (en) | 2005-11-03 | 2009-02-19 | Neose Technologies, Inc. | Nucleotide Sugar Purification Using Membranes |
| DE102006009437A1 (de) | 2006-03-01 | 2007-09-13 | Bioceuticals Arzneimittel Ag | G-CSF-Flüssigformulierung |
| EP2049144B8 (en) | 2006-07-21 | 2015-02-18 | ratiopharm GmbH | Glycosylation of peptides via o-linked glycosylation sequences |
| JP2010505874A (ja) | 2006-10-03 | 2010-02-25 | ノヴォ ノルディスク アー／エス | ポリペプチドコンジュゲートの精製方法 |
| EP2144923B1 (en) | 2007-04-03 | 2013-02-13 | BioGeneriX AG | Methods of treatment using glycopegylated g-csf |
| WO2008154639A2 (en) | 2007-06-12 | 2008-12-18 | Neose Technologies, Inc. | Improved process for the production of nucleotide sugars |
| CA2697376C (en) * | 2007-08-27 | 2016-07-19 | Walter Hinderer | Liquid formulation of g-csf |
| EP2197919B1 (en) * | 2007-08-27 | 2014-04-09 | ratiopharm GmbH | Liquid formulation of g-csf conjugate |
| DE102007040932A1 (de) * | 2007-08-27 | 2009-03-05 | Biogenerix Ag | Flüssigformulierung von G-CSF |
| US8207112B2 (en) * | 2007-08-29 | 2012-06-26 | Biogenerix Ag | Liquid formulation of G-CSF conjugate |
| CN101965200B (zh) | 2008-02-27 | 2013-06-19 | 诺沃-诺迪斯克有限公司 | 缀合的因子ⅷ分子 |
| EP2399572A1 (en) | 2010-06-22 | 2011-12-28 | Sandoz AG | Long-term storage of non-glycosylated recombinant human G-CSF |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4810643A (en) | 1985-08-23 | 1989-03-07 | Kirin- Amgen Inc. | Production of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor |
| DE3537708A1 (de) | 1985-10-23 | 1987-04-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur aktivierung von t-pa nach expression in prokaryonten |
| GR871067B (en) | 1986-07-18 | 1987-11-19 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Process for producing stable pharmaceutical preparation containing granulocyte colony stimulating factor |
| EP0719860B1 (en) | 1988-05-13 | 2009-12-16 | Amgen Inc. | Process for isolating and purifying G-CSF |
| DE3835350A1 (de) | 1988-10-17 | 1990-04-19 | Boehringer Mannheim Gmbh | Aktivierung von gentechnologisch hergestellten, in prokaryonten exprimierten antikoerpern |
| US5104651A (en) | 1988-12-16 | 1992-04-14 | Amgen Inc. | Stabilized hydrophobic protein formulations of g-csf |
| DE4014750A1 (de) | 1990-05-08 | 1991-11-14 | Boehringer Mannheim Gmbh | Muteine des granulozyten-stimulierenden faktors (g-csf) |
| FR2669646A1 (fr) | 1990-11-23 | 1992-05-29 | Lorraine Laminage | Procede de traitement d'un effluent aqueux issu d'un procede d'electrozingage, ainsi que procede et installation en comportant application. |
| DE4126983A1 (de) * | 1991-08-15 | 1993-02-18 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur herstellung von humanprotein-enthaltenden, konservierten arzneimitteln fuer infusions- oder injektionszwecke |
| DE4242919A1 (de) * | 1992-12-18 | 1994-06-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Herstellung von lagerstabilen wässrigen pharmazeutischen Zubereitungen von G-CSF |
| DE4242863A1 (de) | 1992-12-18 | 1994-06-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von G-CSF |
| GB9300356D0 (en) * | 1993-01-09 | 1993-03-03 | Tbs Eng Ltd | Apparatus for assembling battery plates |
| ZA966075B (en) * | 1995-07-27 | 1998-01-19 | Genentech Inc | Protein formulation. |
| AU749815B2 (en) * | 1998-03-06 | 2002-07-04 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Protein-free preparations |
| DK0988861T3 (da) * | 1998-08-17 | 2004-04-19 | Pfizer Prod Inc | Stabiliserede proteinpræparater |
| FR2796071B1 (fr) | 1999-07-08 | 2001-09-07 | Hoechst Marion Roussel Inc | Procede de purification de facteur de stimulation de colonies de granulocytes |
| US6555660B2 (en) * | 2000-01-10 | 2003-04-29 | Maxygen Holdings Ltd. | G-CSF conjugates |
| DE60129432T2 (de) | 2000-05-16 | 2008-04-17 | Bolder Biotechnology, Inc., Louisville | Verfahren zur rückfaltung von proteinen mit freien cysteinresten |
| SI21102A (sl) | 2001-12-19 | 2003-06-30 | LEK, tovarna farmacevtskih in kemi�nih izdelkov, d.d. | Postopek za izolacijo biološko aktivnega granulocitne kolonije stimulirajočega dejavnika |
| DE10348550A1 (de) * | 2003-10-20 | 2005-06-16 | Hexal Biotech Forschungsgmbh | Stabile wässrige G-CSF-haltige Zusammensetzungen |
| AU2003283664B2 (en) | 2003-11-04 | 2010-08-19 | Lek Pharmaceuticals D.D. | Stable pharmaceutical composition comprising granulocyte-colony stimulating factor |
| DE102006009437A1 (de) | 2006-03-01 | 2007-09-13 | Bioceuticals Arzneimittel Ag | G-CSF-Flüssigformulierung |
-
2006
- 2006-03-01 DE DE102006009437A patent/DE102006009437A1/de not_active Withdrawn
- 2006-03-01 DE DE202006020194U patent/DE202006020194U1/de not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-03-01 CA CA002644461A patent/CA2644461A1/en not_active Abandoned
- 2007-03-01 SI SI200730046T patent/SI1988913T1/sl unknown
- 2007-03-01 US US12/281,130 patent/US20090247450A1/en not_active Abandoned
- 2007-03-01 EP EP07712399A patent/EP1988913B1/de not_active Revoked
- 2007-03-01 DK DK07712399T patent/DK1988913T3/da active
- 2007-03-01 DE DE502007000649T patent/DE502007000649D1/de active Active
- 2007-03-01 DE DE202007018618U patent/DE202007018618U1/de not_active Expired - Lifetime
- 2007-03-01 AT AT07712399T patent/ATE429243T1/de active
- 2007-03-01 EP EP09158328A patent/EP2098243A1/de not_active Ceased
- 2007-03-01 RU RU2008138646/15A patent/RU2445115C2/ru active
- 2007-03-01 ES ES07712399T patent/ES2326498T3/es active Active
- 2007-03-01 PL PL07712399T patent/PL1988913T3/pl unknown
- 2007-03-01 PT PT07712399T patent/PT1988913E/pt unknown
- 2007-03-01 JP JP2008556785A patent/JP2009528327A/ja active Pending
- 2007-03-01 WO PCT/EP2007/051947 patent/WO2007099145A1/de active Application Filing
-
2009
- 2009-07-17 CY CY20091100762T patent/CY1109223T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2445115C2 (ru) | 2012-03-20 |
| CA2644461A1 (en) | 2007-09-07 |
| CY1109223T1 (el) | 2014-07-02 |
| JP2009528327A (ja) | 2009-08-06 |
| PL1988913T3 (pl) | 2009-09-30 |
| EP2098243A1 (de) | 2009-09-09 |
| DE202007018618U1 (de) | 2008-12-11 |
| EP1988913B1 (de) | 2009-04-22 |
| US20090247450A1 (en) | 2009-10-01 |
| DE202006020194U1 (de) | 2007-12-06 |
| DK1988913T3 (da) | 2009-08-17 |
| PT1988913E (pt) | 2009-07-16 |
| WO2007099145A1 (de) | 2007-09-07 |
| SI1988913T1 (sl) | 2009-10-31 |
| DE502007000649D1 (de) | 2009-06-04 |
| EP1988913A1 (de) | 2008-11-12 |
| RU2008138646A (ru) | 2010-04-10 |
| ATE429243T1 (de) | 2009-05-15 |
| DE102006009437A1 (de) | 2007-09-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2326498T3 (es) | Formulacion liquida de g-csf. | |
| TWI232749B (en) | Preparations stabilized over long time | |
| US7163671B2 (en) | Long-term stabilized formulations | |
| JP4493334B2 (ja) | Ｈｓａ非含有組成物中のｎｅｓｐ／ｅｐｏの安定化剤としてのｌ−メチオニン | |
| ES2224290T3 (es) | Formulaciones liquidas estables de interferon. | |
| US8207112B2 (en) | Liquid formulation of G-CSF conjugate | |
| ES2531464T3 (es) | Factor VIII, factor de von Willebrand o sus complejos con semivida in vivo prolongada | |
| ES2338605T3 (es) | Monoconjugados especificos de sitio de g-csf. | |
| ES2289985T3 (es) | Derivados de eritropoyetina. | |
| JPH08504784A (ja) | Ｇ−ｃｓｆの安定凍結乾燥薬理製剤 | |
| US8580246B2 (en) | Surfactant-free stable pharmaceutical composition comprising granulocyte-colony stimulating factor | |
| ZA200604657B (en) | A pharmaceutical composition comprising an active principle sulphobetaine | |
| EP1930024A2 (en) | G-CSF solution formulations having long-term stability | |
| ES2524454T3 (es) | Formulación líquida de G-CSF | |
| ES2287296T3 (es) | Disoluciones acuosas estables de factor estimulante de colonias de granulocitos y macrofagos. | |
| US10052361B2 (en) | Liquid pharmaceutical composition of conjugated erythropoietin | |
| AU2011268944B2 (en) | Long-term storage of non-glycosylated recombinant human G-CSF | |
| IL224848A (en) | Preparations for the cause encourage bovine granulocyte colony and their variables | |
| KR20060108040A (ko) | 인 과립구 콜로니 자극인자 용액 제형 |