MXPA04011218A - Vacuna combinada mejorada contra mycoplasma hyopneumoniae y virus porcinos. - Google Patents

Vacuna combinada mejorada contra mycoplasma hyopneumoniae y virus porcinos.

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Abstract

La invencion proporciona una vacuna combinada que comprende Mycoplasma hyopneumoniae, y por lo menos un antigeno viral el cual ventajosamente proporciona inmunidad contra una infeccion despues de una sola administracion. La composicion comprende tambien una mezcla adyuvante la cual, en combinacion proporciona inmunidad contra la infeccion por Mycoplasma hyopneumoniae despues de una sola administracion e induce una respuesta inmunologica especifica para la bacteriana de Mycoplasma hyopneumoniae e incluye inmunidad mediada por celulas e inmunidad local (IgA secretora). En una modalidad preferida, la mezcla adyuvante comprende un polimero de acido acrilico, de manera mas preferible Carbopol y una mezcla de un aceite metabolizable tal como uno o mas hidrocarburos de terpeno insaturados, preferiblemente escualeno o escualano, y un copolimero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno tal como Pluronic. La composicion de vacuna opcionalmente puede incluir un conservador, preferiblemente timerosol o EDTA.

Description

VACUNA COMBINADA MEJORADA CONTRA MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE Y VIRUS PORCINOS CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención pertenece a métodos mejorados para inducir inmunidad protectora contra Mycoplasma hyopneumoniae, que específicamente utiliza una bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae, en una cantidad eficaz para inmunizar a un animal receptor contra infección por Mycoplasma hyopneumoniae en una dosis única. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Mycoplasma hyopneumoniae es el agente etiológico de la neumonía micoplásmica porcina. Esta enfermedad es una causa importante de pérdida económica en la industria porcina debido a la ganancia reducida de peso y la poca eficiencia en la alimentación. La enfermedad provoca una tos crónica, una cubierta de pelo áspero, crecimiento retardado y una apariencia desagradable que dura varias semanas. Las lesiones características en las áreas de consolidación de púrpura a gris, particularmente en los lóbulos apical ventral y cardiaco se observan en los animales infectados. Aunque la enfermedad provoca poca mortalidad, los cerdos afectados con frecuencia son susceptibles a infecciones secundarias por patógenos oportunistas lo que resulta en muerte o estrés. Las pérdidas económicas solas se han calculado entre 200 y 250 millones de dólares anualmente.
Ref . ¡159678 El Mycoplasma hyopneumoniae es una bacteria de difícil crecimiento, que crece lentamente la cual carece de una pared celular. Con frecuencia es difícil aislarla del tracto respiratorio debido a la presencia de Mycoplasma hyorhinis, un agente secundario común que también se localiza en el tracto respiratorio. La enfermedad es diseminada por aerosol, generado por toser y por contacto directo con un cerdo portador afectado o convaleciente. El mezclado de animales infectados y animales no infectados resulta en una reinfección temprana y frecuente. La infección con frecuencia se inicia con la infección de los lechones por marranas portadoras en el parto. Debido a las técnicas de administración de lechones, la infección no se vuelve evidente sino hasta en una etapa posterior en la vida. La infección adicional habitualmente se observa después del destete cuando los lechones son reunidos. La enfermedad manifiesta habitualmente se observa en cerdos a las seis semanas de edad o más grandes. Las velocidades de crecimiento y las tasas de conversión de alimento se reducen notablemente en los animales afectados. Los tratamientos que utilizan antibióticos son costosos y requieren uso prolongado. La reinfección constituye también un problema. Las vacunas actualmente son el método más eficaz para evitar infecciones y sus consecuencias. El Fort Dodge Animal Health (FDAH) comercializa bacterina de Mycoplásma hyopneumoniae bajo el nombre SuvaxynMR RespifendMR MH para uso como una vacuna para proteger a cerdos sanos contra los signos clínicos causados por Mycoplásma hyopneumoniae. La vacuna contiene Carbopol como un adyuvante y se recomienda como una vacuna de dos dosis para cerdos de por lo menos una semana de "edad, en donde la segunda dosis se administra dos a tres semanas después de la primera vacunación. No obstante, una vacuna de dos dosis tienen la desventaja obvia de que requiere un segundo manejo de los animales con el fin de proporcionar protección completa contra la enfermedad. Por lo tanto, un objetivo de esta invención es proporcionar una vacuna eficaz contra Mycoplásma hyopneumoniae que induzca inmunidad protectora y que impida la enfermedad causada por este organismo con una administración de una dosis única de vacuna. Otro objetivo de esta invención es proporcionar una composición de vacuna adecuada para uso en cerdos para impedir la infección y enfermedad causada por Mycoplásma hyopneumoniae, y la cual puede ser utilizada combinada con otras bacterinas o toxoides . Un objetivo adicional de la presente invención es proporcionar un método para evitar o disminuir la enfermedad, en donde el organismo causal es Mycoplásma hyopneumoniae mediante la utilización de una formulación adyuvante la cual mejora la inmunogenicidad de bacterina de manera que induce inmunidad protectora después una dosis única de la vacuna. Otros objetivos y características de esta invención se volverán evidentes ante la descripción detallada que se establece en lo siguiente. BREVE DESCRIPCIÓN ~DE" LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con una composición de vacuna para inmunizar a un animal contra infección por Mycoplasma hyopneu oniae que comprende una cantidad inmunizante de una bacterina inactivada de Mycoplasma hyopneumoniae; una mezcla adyuvante que comprende un polímero de ácido acrílico y una mezcla de un aceite metabolizable y un copolímero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno; y un portador farmacéuticamente aceptable, composición de vacuna la cual, después de una sola administración, induce inmunidad protectora contra Mycoplasma hyopneumoniae . En otro aspecto, la presente invención proporciona una composición inmunogénica para inmunizar a un animal contra la infección por Mycoplasma hyopneumoniae, que comprende una bacterina inactivada de Mycoplasma hyopneumoniae con la mezcla adyuvante anterior y un estabilizante, portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. El adyuvante habitualmente está presente en esta composición de vacuna a una concentración final de aproximadamente 1-25%, (v/v) , y de manera preferible aproximadamente 5-12%, (v/v). La composición también puede incluir otros componentes de vacuna, que incluyen bacterinas inactivadas o toxoides purificados, de uno o más patógenos (que incluyen una o más cepas, tipos, serotipos o similares de - tales patógenos) , tales ""como Haemonphilus parasuis, Pasteurella multiocida , Streptococcum suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica , Sal onella choleraesuis, Erysipelothrix rhusiopathiae, leptospira y antigenos virales tales como el virus de la influenza porcina (SIV, por sus siglas en inglés), el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV, por sus siglas en inglés), y el circovirus porcino (PCV, por sus siglas en inglés) , y se pueden administrar por via intramuscular, subcutánea, oral, en aerosol o intranasal. En otras modalidades de la invención, los otros componentes de vacuna incluirán uno o más antígenos que se seleccionan de SIV; Haemonphilus parasuis ; el grupo que consiste de PRRSV y PCV; el grupo que consiste de SIV y Erysipelothrix rhusiopathiae; el grupo que consiste de Pasteurella multiocida y Bordetella bronchiseptica . En otra modalidad adicional de la invención, los otros componentes de vacuna de la invención, cuando se seleccionan de SIV, incluirán la selección de la cepa SIV-H1N1, SIV-H1N2 y la cepa SIV-H3N2. En otro aspecto adicional, la presente invención proporciona un método para proteger a un animal contra la enfermedad causada por Mycoplasma hyopneumoniae al administrar una dosis única de la vacuna anterior, que comprende bacterina inactivada de Mycoplasma hyopneumoniae y la mezcla de adyuvante. En un aspecto adicional * de la' invención, la presente invención proporciona una composición inmunogénica o vacuna para inmunizar a un animal contra infección por Mycoplasma hyopneumoniae, que comprende una bacterina inactivada de Mycoplasma hyopneumoniae combinada con un adyuvante o una mezcla adyuvante, sola o en mezcla, que proporciona una respuesta inmune mediada por células y local (IgA secretora) a la composición o vacuna; otros componentes de vacuna que comprenden por lo menos un antigeno ¦ bacteriano o viral adicional; y un portador farmacéuticamente aceptable, la composición de vacuna, después de una sola administración, induce inmunidad protectora contra Mycoplasma hyopneumoniae. En esta composición o vacuna, los otros componentes de vacuna pueden incluir bacterinas inactivadas, toxoides purificados, uno o más patógenos (que incluyen una o más cepas, tipos, serotipos o similares de tales patógenos), tales como Haemonphilus parasuis, Pasteurella multiocida , Streptococcum suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica , Salmonella choleraesuis, Erysipelothrix rhusiopathiae, leptospira y antigenos virales (que incluyen una o más cepas, tipos, serotipos o similares de tales antigenos virales) tales como el virus de la influenza porcina (SIV) , el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) , y el circovirus porcino (PCV), y se pueden administrar por vía intramuscular, subcutánea, oral, en aerosol o intranasal. En otro aspecto adicional de la invención, la presente invención proporciona una composición de vacuna para inmunizar un animal contra infección por Mycoplasma hyopneumoniae y un patógeno viral, la composición de vacuna comprende una cantidad inmunizante de bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae; una cantidad inmunizante de por lo menos un antígeno viral que se selecciona del grupo que consiste de virus de influenza porcina (SIV) , el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV), y el circovirus porcino (PCV) ; y un sistema adyuvante que comprende un polímero de ácido acrílico, un aceite metabolizable y un copolímero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno en forma de una emulsión aceite en agua; composición de vacuna la cual, después de una sola administración, induce inmunidad protectora contra Mycoplasma hyopneumoniae. En un aspecto adicional de la invención, la presente invención proporciona composiciones de vacuna y métodos para inmunizar a un animal contra infección por Mycoplasma hyopneumoniae y por lo menos un patógeno viral, y opcionalmente patógenos virales o bacterianos adicionales, una o varias composiciones de vacuna y uno o varios métodos los cuales, después de una administración única, inducen inmunidad protectora contra Mycoplasma hyopneumoniae . DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Todas las patentes, solicitudes" de patente y otra literatura mencionada en la presente se incorpora en la presente como referencia en su totalidad. En el caso de inconsistencias, prevalecerá la presente descripción. Como se discute en la presente, una "bacterina" es una cosecha de bacteria la cual se ha inactivado y la cual, en combinación con algunos adyuvantes, puede inducir inmunidad protectora para proteger contra enfermedad o infección cuando se administra a animales. El término "adyuvante" significa una composición constituida de una o más sustancias que mejora la inmunogenicidad y la eficacia de la bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae en una composición de vacuna. Como se utiliza en la especificación y las reivindicaciones, el término MHDCE designa equivalentes de células .de . ADN de Mycoplasma hyopneumoniae. La "cantidad inmunizante" es la cantidad de bacterina la cual proporcionará inmunidad frente a Mycoplasma hyopneumoniae . La "cantidad inmunizante" dependerá de la especie, raza, edad, tamaño, estado de salud y si al animal se le ha administrado previamente una vacuna contra el mismo organismo . La presente invención proporciona una vacuna contra Mycoplasma hyopneumoniae que es adecuada para inmunización con una sola dosis. La vacuna de la presente invención incluye una mezcla adyuvante 'que mejora 'la inmunogenicidad de la bacterina y por lo tanto proporciona la administración única para inducir inmunidad protectora. La vacuna se puede preparar a partir de cultivos recién cosechados y métodos que son estándar en la técnica (véanse, por ejemplo, las patentes de E.U.A. 5,338,543 o 5, 565,205, asi como el ejemplo 2 en este documento). Es decir, el organismo se puede propagar en un medio de cultivo tal como medio completo de PPLO (organismo similar a pleuroneumonia ) [Difco Laboratories]. El crecimiento del organismo se supervisa por técnicas estándar tales como determinación de las unidades cambiadores de color (CCU) y se cosecha cuando se ha obtenido un titulo suficientemente alto. Los concentrados se pueden concentrar adicionalmente o se pueden' liofilizar por métodos convencionales antes de su inclusión en la vacuna para formulación. Se pueden utilizar otros métodos, tales como los descritos en Thomas et al. Agri-Practice, Vol. 7 No. 5, pp. 26-30. La vacuna de la presente invención comprende la bacterina inactivada de Mycoplasma hyopneumoniae combinada con la mezcla de adyuvante y uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. Los portadores adecuados para uso incluyen medios acuosos, por ejemplo solución salina, solución salina amortiguada con fosfato, medio esencial mínimo ( EM) o MEM con amortiguador HEPES. . . ; La mezcla adyuvante para uso" en las composiciones de vacuna de la presente invención mejora la respuesta inmunológica y comprende una mezcla de un polímero de ácido acrílico con una mezcla de aceite metabolizable , por ejemplo un hidrocarburo de terpeno insaturado o un producto de hidrogenación del mismo, preferiblemente escualano (2 , 3, 10, 15, 23-hexametiltetracosano) o escualeno y un copolímero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno . Tal polímero de ácido acrílico puede ser un homopolímero o un copolímero. El polímero de ácido acrílico preferiblemente es un carbómero. Los carbómeros están disponibles comercialmente bajo el nombre comercial Carbopol . Los polímeros de ácido acrílico se describen, por ejemplo, en las patentes de E.U.A. 2,909,462 y 3,790,665, cuyas descripciones se incorporan en la presente como referencia. Los copolímeros de bloque de polioxietileno-polioxipropileno son tensioactivos , preferiblemente tensioactivos líquidos que ayudan en la suspensión de componentes sólidos y líquidos. Los tensioactivos están disponibles comercialmente como polímeros bajo el nombre comercial PluronicMR. El tensioactivo preferido es poloxamer 401 el cual está disponible comercialmente bajo el nombre comercial PluronicMR L121. La mezcla adyuvante estimulante de inmunogenicidad típicamente está presente en composición de vacuna de la invención en cantidades, en v/v de aproximadamente 1% a 25%, de manera- preferible de- aproximadamente "2% a*" 15% y de ma'nera más preferible de aproximadamente 5% a 12%, v/v. La cantidad de mezcla adyuvante utilizada en la proporción de los dos componentes del adyuvante pueden variar en base en la adición de otras bacterinas o toxoides purificados. La mezcla adyuvante generalmente comprende un aceite metabolizable o un polímero de ácido acrílico y un copolímero de bloques de polioxietileno-polioxipropileno formulado como una emulsión en medio acuoso. En esta mezcla adyuvante, el aceite metabolizable y el polímero de ácido acrílico pueden estar presentes en cantidades que varían de aproximadamente 10 a 150 ml/1 y aproximadamente 0.5 a 10 g/1, respectivamente. En una modalidad preferida de la mezcla adyuvante, la mezcla del aceite metabolizable y del componente de copolímero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno es una mezcla de escualeno y Pluronic R L121 (poloxamer 401) el cual puede estar presente en una cantidad de aproximadamente 50 a 100 ml/1 y el polímero de carboximetileno es Carbopol 934P (Carbomer 934P) el cual puede estar presente en una cantidad de aproximadamente 2 ml/1. Típicamente, la mezcla adyuvante contiene aproximadamente una proporción de 1:25 a 1:50 de polímero de ácido acrílico respecto a la mezcla de aceite metabolizable/copolímero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno . ... . Los polímeros- preferidos de* ' ácido acrílico 'son aquellos comercializados por B. F. Goodrich como Carbopol 934 P NF y 941 NF los cuales son polímeros de ácido acrílico reticulado con polialilsacarosa y los cuales tienen la fórmula química (CH2CHOOOH) n . Estos polímeros forman geles acuosos los cuales se formulan adecuadamente con portadores acuosos. Los copolímeros de bloque preferidos de polioxietileno-polioxipropileno son los tensioactivos no iónicos comercializados por BASF como PluronicMR L121, L61, L81 u L101. En la composición de vacuna de la invención dirigida a la combinación de una cantidad inmunizante de una bacterina inactivada de Mycoplasma hyopneumoniae; otros componentes de vacuna seleccionados de antígenos bacterianos o virales; y un portador farmacéuticamente aceptable, composición de vacuna la cual, después de una sola administración induce inmunidad protectora contra Mycoplasma hyopneumoniae , la composición de vacuna comprende además un adyuvante o una mezcla de adyuvantes los cuales, solos o combinados, proporcionan inmunidad mediada por células y local (IgA secretora). Estos adyuvantes o adyuvantes pueden ser seleccionados adicionalmente de adyuvantes tales como saponina, tal como QUILMR A; citocinas tales como IL-12 e IL-18 e inmunidad local (IgA secretora); hidróxido de aluminio, un aceite metabolizable , un copolimero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno y un polímero de ácido acrílico en forma de un aceite en emulsión en agua, copolimero de ácido etilenmaleico; polímero de ácido acrílico con otro adyuvante, DEAE dextrano, adyuvante derivado de pared celular de micobacteria y similares. Los otros componentes de vacuna en esta composición de la invención pueden incluir antígenos bacterianos que incluyen bacterinas inactivadas o toxoides purificados, uno o más patógenos (que incluyen una de una o más cepas, tipos, serotipos o similares de tales patógenos) tales como Haemonphilus parasuis, Pasteurella multiocida , Streptococcum suis, Actínobacillus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica , Salmonella choleraesuis, Erysipelothrix rhusiopathíae, leptospira y antígenos virales (que incluyen una o más cepas, tipos, serotipos o similares de tales patógenos) tales como el virus de la influenza porcina (SIV) , el virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) , y el circovirus porcino (PCV). En otras modalidades de la invención, los otros componentes de vacuna incluirán uno o más antígenos que se seleccionan de SIV; Haemonphilus parasuis ; el grupo que consiste de PRRSV y PCV; el grupo que consiste de SIV y Erysípelothrix rhusiopathiae; el grupo que consiste de Pasteurella multiocida y Bordetella bronchiseptica . En otra modalidad adicional de esta invención, los otros componentes de vacuna de la invención, cuando se seleccionan de SIV, incluirán- la -selección de la cepa "SIV-H1N1, H1N2 y 'la cepa SIV-H3N2. La vacuna de la presente invención se puede administrar por vía intramuscular, subcutánea, intranasal, intraperitoneal u oral, preferiblemente por vía intramuscular o subcutánea . La vacuna de la invención generalmente comprende a Mycoplasma hyopneumoniae inactivado, un aceite metabolizable, un copolimero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno y un polímero de ácido acrílico en forma de un aceite en emulsión en agua. La vacuna preferiblemente contiene el polímero de ácido acrílico en una concentración dentro del intervalo de 0.5 a 10 g/1. La vacuna preferiblemente contiene el aceite metabolizable en una concentración dentro del intervalo de 2 a 6 ml/1. La vacuna preferiblemente contiene el. copolimero de bloque de polioxietileno-propileno en una concentración dentro del intervalo de 1 a 3 ml/1. Para administración de una sola dosis, la vacuna preferiblemente contiene una cantidad de bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae que corresponde a aproximadamente 1 x 108 a 3 x 1011 MHDCE/ml. de manera preferible aproximadamente 1 x 109 a 3 x 109 MHDCE/ml. Se pueden administrar por animal aproximadamente 1 a 5 mi, de manera preferible 2 mi por via intramuscular, subcutánea o intraperitoneal . Se pueden administrar por via oral o intranasal—de l«a-10-ml, de' manera preferible de 2 a 5 mi. Los siguientes ejemplos están diseñados para ilustrar adicionalmente la invención sin limitar su alcance. EJEMPLO 1 BACTERINA DE MYCOPLASMA HYOPNEÜMONIAE PREPARACIÓN DE LA COMPOSICIÓN DE VACUNA DESCRIPCIÓN DE LOS CONCENTRADOS VIRALES. Se puede obtener Mycoplasma hyopneumo iae de cualquiera de muchas fuentes disponibles fácilmente. En una modalidad se puede utilizar Mycoplasma hyopneumoniae cepa P-5722-3. El cultivo se obtiene a partir de C. Armstrong, Purdue University, West Lafayette, Indiana. Después de la recepción del cultivo de Mycoplasma hyopneumoniae, se hace pasar en caldo para Mycoplasma hyopneumoniae siete veces para establecer la semilla maestra. _- . CULTIVO CELULAR. Se hace crecer Mycoplasma hyopneumoniae en un medio que comprende polvo Bacto PPLO, extracto de levadura, glucosa, clorhidrato de L-cisteina, ampicilina, acetato de talio, rojo de fenol, antiespumante, suero porcino estéril normal y agua, durante períodos que varían de 18" a 144 horas. Para inactivación, se agrega etilenimina binaria (BEI) dirigida al cultivo de producción dentro del recipiente de fermentación. Se ajusta el pH a 7.4 y después se cosecha de acuerdo con procedimientos convencionales para proporcionar la bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae . - . . . PREPARACIÓN DE LA COMPOSICIÓN DE VACUNA Composición de los Conservadores y Proporciones Utilizadas . La bacterina cosecha se conserva mediante la adición de timerosal y la sal tetrasódica del ácido etilendiaminatotetraacético (EDTA) en una cantidad máxima de 0.01% y 0.07%, respectivamente. Está presente ampicilina U.S.P. en el medio- de crecimiento a 0.250 g/1. La concentración de ampicilina residual variará en el producto final, dependiendo del volumen de fluidos de cosecha, con la concentración de ampicilina residual en el producto completado que no exceda de 30 pg/ml. ESTANDARIZACIÓN DEL PRODUCTO. El concentrado de Mycoplasma se cuantifica mediante un ensayo fluorométrico de AD . Una mezcla de un aceite metabolizable que comprende uno o más hidrocarburos de terpeno y un copolímero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno, por ejemplo una mezcla de escualeno/Pluronic L121, se prepara al disolver 10 g de cloruro de sodio, 0.25 g de cloruro de potasio, 2.72 de fosfato sódico dibásico, 0.25 de fosfato potásico monobásico, 20 mi de Pluronic L121 (BASF Corporation) , 40 mi de escualeno (Kodak), 3.2 mi de Tween 80 en 900 mi de agua purificada, c.s. hasta 1000 mi. Después de mezclar, los ingredientes se esterilizan en autoclave. La mezcla después se. homogeiniza hasta que se forma una" 'emulsión estable. Se puede agregar formalina hasta una concentración final de 0.2% o se puede agregar timerosal a una concentración final de 1:10,000. ENSAMBLADO DE UNIDADES PARA CONSTITUIR UN SERIAL. Los concentrados satisfactorios de Mycoplasma hyopneumoniae se combinan asépticamente con los adyuvantes, el conservador y el diluyente en un recipiente estéril equipado con un agitador y que se mezcla no menos de 30 minutos.
El pH del serial se ajusta a 7.0 ± 0.2. MHDCE = equivalentes de células de ADN Mycoplasma hyopneumoniae MÉTODO Y TÉCNICA PARA LLENADO Y SELLADO RECIPIENTES FINALES. El producto puede ser filtrado de manera general a través de un elemento de filtro de 200-500 micrómetros estéril y se puede llenar bajo condiciones especificadas en 9 CFR 114.6 en recipientes finales estériles en una habitación diseñada para operaciones de llenado. Los recipientes de vidrio o de plástico se cierran con un tapón de caucho y se sellan por troquelado con sellos de aluminio. Cada dosis de 2.0 mi contiene no menos de 2 x 109 equivalentes de células de ADN de Mycoplasma hyopneumoniae . PRUEBA PARA DETERMINAR POTENCIA. Las muestras de recipiente a granel o finales del producto completado se pueden probar en cuanto a potencia como sigue: Método de ensayo para determinar potencia: Se utilizan ratones hembra ICR, de seis a siete semanas de edad, de un lote a partir de Harían Sprague Da ley u otros proveedores aceptables. Se requieren un mínimo de 20 ratones para inmunización con cada bacterina desconocida y de referencia. Se retienen un mínimo de cinco ratones como controles no inoculados. Las bacterinas de prueba y de referencia se mezclan individualmente perfectamente. Las jeringas desechables estériles, ajustadas con agujas de calibre 25 de 5/8 pulgadas, se utilizan para inocular a los ratones subcutáneamente en la región inguinal con l/10th de una dosis animal hospedador (0.2 mi). Cada grupo de ratones se aloja como una unidad individual y se permite que tenga acceso libre a alimento y agua durante 14 días. Después se anestesia a cada ratón. El ratón anestesiado se coloca sobre su lomo. Utilizando una mano, se mantiene la cabeza abajo y se extiende la pata frontal alejándola del cuerpo. Utilizando un bisturí se realiza una incisión cutánea de" aproximadamente 1 cm de largo entre la pata frontal extendida y el tórax, cortando la arteria braquial. Mediante la utilización de una jeringa de 3.0 mi, sin aguja, se recolecta la sangre la cual se acumula en la incisión. La sangre se descarga en un tubo de prueba etiquetado y se permite que coagule. Los tubos coagulados se centrifugan a 1,000 x g para separar el suero del coágulo. Los sueros individuales se almacenan a -20°C o más frío hasta que se prueban. PRUEBAS SEROLÓGICAS: Se utiliza un procedimiento ELISA para medir la respuesta de anticuerpo de ratones a las bacterinas de referencia o desconocida. El procedimiento de ELISA se lleva a cabo utilizando placas de microtitulación de fondo plano desechable Immulon II de Dynatech o equivalente, y un lector de placas ELISA. REACTIVOS DE PRUEBA Solución salina amortiguada con fosfato-Tween (PBST) (el pH se ajusta a 7.2 a 7.4 con NaOH 5 N o HC1 5 N) .
Cantidad por litro Solución salina amortiguada con glicina (GBS) ajustado a 9.5 a 9.7 con NaOH 5 N o HC1 5 N) .
Control positivo de suero: El control positivo de suero es un acumulado de sueros de ratones vacunados con bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae. Conjugado y Sustrato Se obtiene conjugado marcado con peroxidasa de anticuerpos contra IgG de ratón, purificado por afinidad, de Kirkegaard and Perry Laboratories, Inc. (Catálogo No. 074-1802) . El procedimiento para determinar la dilución óptima de conjugado se detalla a lo siguiente. Se obtiene soluciones de sustrato de peroxidasa (ABTS) de Kiregaard and Perry, Inc.
Titulación del conjugado: Se recubre una placa de fondo plano Immulon II con 100 µ? por pozo de 20 µg por mi de antigeno de célula completa de Mycoplasma hyopneumoniae diluida en GBS 10 mM. La placa se incuba durante no menos de una hora a 37°C±2°C y se transfiere a 2-7°C durante no menos de .18 horas y no más de una semana. Antes de utilizar la placa, se lava tres veces con PBST, con un tiempo de enjuagado de un minuto entre cada lavado y se guarda para que se seque. Se prepara una dilución 1:40 en PBST de suero de control positivo y el suero positivo diluido (100 µ?/????) se agrega a la mitad de los pozos de la placa. Se agrega PBST a la otra mitad de los pozos. La placa se incuba durante una hora a temperatura ambiente, después de lo cual la placa se lava tres veces. El suero conjugado se diluye de manera seriada con PBST al doble, comenzando con una dilución 1:100 y finalizando con una dilución 1:10,240. Se agregan a cuatro pozos 100 µ? de cada dilución de conjugado del suero positivo en cuatro pozos de PBST, y se permite que reaccione durante media hora a temperatura ambiente. Las placas se lavan cuatro veces y se agrega por pozos 100 µ? de solución de sustrato de peroxidasa (abts) . La placa se lee a una longitud de onda doble ajustada a T ? = 450. Se selecciona una dilución de conjugado que proporciona una lectura de 0.850 a 1.050 para suero de control positivo cuando el valor del control PBST se resta del valor del suero de control positivo.
Antigeno de Prueba : El antígeno de Mycoplasma hyopneumoniae es una preparación de célula completa, y se suministra por Fort Dodge Animal Health. La prueba de ELISA se lleva a cabo como sigue: Se utilizan, placas de microtitulación de fondo plano Dynatech Immulon II. Se diluye (reconstituye) un frasco de antigeno de célula completa de Mycoplasma hyopneumoniae liofilizada hasta 10 mi con solución salina amortiguada con glicina (GBS) . La concentración de la proteina de Mycoplasma diluida es de 20 ug/ml. Después se agregan a todos los pozos de la placa 100 µ? (2 ug) de antigeno diluido. La placa se incuba a 37°C ± 2°C durante no menos de una hora y después se transfiere a 2-7 °C por un mínimo de 18 horas y un máximo de una semana. Las placas se lavan tres veces con PBST, se enjugan un minuto entre cada lavada y después se secan tapadas. Los sueros de diluyen 1:40 en PBST. El suero de control positivo se incluirá por cuadruplicado en cada placa. El volumen de muestra por pozo es de 100 µ? . Las muestras de suero de prueba en serie y las muestras de suero de referencia se probarán por duplicado en la misma placa. Las placas se incuban durante una hora a temperatura ambiente y se lavan tres veces con PBST. Se agrega a todos los pozos 100 µ? de conjugado de anticuerpo contra IgG de ratón etiquetado con peroxidasa (Kirkegasard y Perry) en PBST, y los pozos se incuban durante 30 minutos a temperatura ambiente. Las placas se lavan cuatro veces con PBST . Se agrega a todos los pozos 100 µ? de solución de sustrato con peroxidasa (ABTS) y las placas se incuban hasta que un control de suero positivo alcanza una DO405 (450) de 0.850 a 1.050 cuando la máquina se calibra en. blanco- contra los pozos" control de PBST. Las placas se leen y se calibran en blanco contra los pozos de PBST. Para que sea una prueba válida, los sueros de los ratones inoculados con la bacterina de referencia deben producir un valor promedio mínimo de 0.500, y los sueros de los ratones control no vacunados no deben exceder de un valor promedio máximo de 0.100. O bien, la diferencia entre el valor promedio de los sueros de los ratones inoculados con la bacterina de referencia y los sueros de los ratones control no vacunados debe ser mayor que o igual a 0.400. Los valores medios para los vacunados en serie, los vacunados de referencia y los controles se calculan y evalúan como sigue: para que se consideren satisfactorios, la bacterina de prueba debe demostrar un valor de densidad óptima medio promedio igual a o mayor del valor de referencia. 0 bien, utilizando la prueba T de Student de una cola, la bacterina de prueba no debe ser significativamente menor (p< 0.05 de intervalo de confianza) en comparación con la bacterina de referencia. Cualquier valor T calculado igual o mayor de 1.686 indicará una diferencia significativa entre la bacterina de referencia y la de prueba y provocará que se rechace la bacterina de prueba. Cualquier valor T menor de 1.686 indicará una serie satisfactoria. Cualquier bacterina de prueba determinada por la prueba como insatisfactoria por cualquier razón no relacionada con la eficacia del producto se vuelve a probar y la prueba inicial se considera como no válida . EJEMPLO 2 VACUNA DE PRUEBA; La vacuna para prueba se prepara de acuerdo con los procedimientos que se indican en el ejemplo 1, utilizando 5% de una mezcla de un aceite metabolizable que comprende uno o más hidrocarburos de terpeno y un copolimero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno (mezcla Escualano/Pluronic L121) y polímero de ácido acrílico 0.2% (Carbopol) como adyuvante y 2 x 109 equivalentes de célula de ADN de M. hyopneumoniae (MHDCE) por dosis. EJEMPLO 3 Este estudio se diseña para demostrar cuatro meses de duración de inmunidad (DOI) en cerdos inducida por vacunación con una dosis de la vacuna del ejemplo 2 a una edad de tres semanas. Se llevan a cabo dos ensayos en animales separados para este estudio. Todos los cerdos en ambos ensayos son seronegativos (título de anticuerpo <10) en el momento de la vacunación) , lo que indica que los animales son susceptibles a Mycoplasma hyopneumoniae . Todos los cerdos en los grupos control permanecen seronegativos antes de la exposición. Esto indica que la respuesta inmunologica en los cerdos vacunados se debe a la vacuna y no a ninguna exposición ambiental. , . En el primer- ensayo, se' evalúa una vacuna del ejemplo 2 junto con un producto disponible comercialmente, Ingelvac M hyoMR fabricado por Boehringer Ingelheim (BI) mediante un nivel elevado de M. hyopneumoniae virulento (0.4 x 105 organismos) como material de exposición. Se vacunan veintidós (22) cerdos con una edad de 18-21 días con la vacuna del ejemplo 2 por vía intramuscular (IM) y a ocho (8) cerdos con Ingelvac M. hyoMR [serie 271 032] . Veintidós (22) cerdos sirven como controles de exposición y 10 cerdos como controles sin exposición. Los cerdos en los grupos vacunado y control de exposición se exponen con M. hyopneumoniae virulento a los cuatro meses después de la vacunación. Los cerdos vacunados con la vacuna del ejemplo 2 presentaron un promedio de lesiones pulmonares de 15.9% y los cerdos control expuestos presentaron un promedio de lesiones pulmonares de 19.6%. El promedio de lesiones pulmonares en el grupo vacunado por la vacuna del ejemplo 2 es menor que los controles aunque los cerdos habían sido expuestos con una dosis más elevada en comparación con lo recomendado por la Iowa State University (ISU) , no obstante, la diferencia no es significativa (p=0.19). De igual manera, cuando se evalúa el producto comercial, Ingelvac M. hyoMR en el mismo grupo de animales con la misma dosis de exposición, también se observa un nivel similar de lesiones pulmonares (14.6%). Tampoco existe una diferencia significativa entre el grupo vacunado con Ingelvac ?.· hyoMR y el- grupo control (p=0.27) y entre el grupo vacunado con Ingelvac M. hyoMR y el grupo vacunado con la vacuna del ejemplo 2. En el segundo ensayo, se evalúa una vacuna del ejemplo 2 mediante exposición a M. hyopneumoniae virulenta al nivel sugerido por ISU (1.0 x 106 organismos) a los cuatro meses después de la vacunación. Se vacunan veintitrés (23) cerdos con una dosis de la vacuna a una edad de 21 días, 25 cerdos sirven como controles de exposición y 7 cerdos como controles sin exposición. Los cerdos en los grupos control y vacunado expuesto se exponen con M. hyopneumoniae virulento a los cuatro meses después de la vacunación. El grupo control tiene un promedio de lesiones pulmonares de 10.4% y el grupo vacunado tiene un promedio de lesiones pulmonares de 5.5%. No existe una diferencia significativa entre el grupo vacunado y el. grupo control (p=0.031). Esto indica que la vacuna del ejemplo 2 es eficaz en estimular la inmunidad protectora, la cual puede durar por lo menos cuatro meses después de la dosis de vacunación única en cerdos a la edad de tres semanas.
Cuando se combinan y analizan los datos relacionados con la vacuna del ejemplo 2 en los dos ensayos, el promedio de lesiones pulmonares en el grupo vacunado es significativamente menor en comparación con el grupo control. En conclusión, la vacuna del ejemplo 2 induce inmunidad protectora contra la exposición a M. hyopneumoniae viruleno a los cuatro meses después de la vacunación con una sola dosis en cerdos a la edad de tres meses. DATOS EXPERIMENTALES En este estudio se llevaron a cabo dos ensayos separados. En el ensayo uno, se asignan sesenta y siete (67) cerdos y cuatro grupos utilizando el programa de aleatorización Microsoft Excel . Se vacunan veinticuatro (24) cerdos con una dosis de una vacuna preparada de acuerdo con el ejemplo 2, por vía intramuscular (I ) a la edad de 18-21 días. Veinticuatro (24) cerdos sirvieron como controles de exposición 10 cerdos como controles sin exposición. Se vacunaron nueve cerdos por vía IM con el producto comercial, Ingelvac M. hyoMR [serie 271 032, fabricado por Boehringer Ingelheim (BI)], siguiendo las instrucciones de la etiqueta. Cinco, cerdos (dos cerdos vacunados con la vacuna del ejemplo 2, uno con la vacuna BI y dos controles) murieron durante la vacuna en periodo de retención de vacunación debido a razones no relacionadas con la vacuna. Los cerdos restantes en los grupos vacunados y el grupo control expuesto se expusieron a 14 mi de M. hyopneumoniae virulento (1.4 x 106 organismos) a los cuatro meses después de la vacunación. Los cerdos en la totalidad de los cuatro grupos fueron sacrificados 30 días después de la exposición y se clasificaron las lesiones pulmonares para cada cerdo en el ensayo. En un segundo ensayo, se vacunaron veinticinco (25) cerdos por vía IM con una dosis de una vacuna preparada de acuerdo con el ejemplo 2, a una edad de 21 dias. Veinticinco (25) cerdos sirvieron como controles de exposición 10 cerdos como controles sin exposición. Dos cerdos murieron debido a razones no relacionadas con la vacuna y un cerdo se vendió por error durante el periodo de retención de vacunación. Los cerdos restantes en los grupos vacunados y el control expuesto se expusieron con 10 mi de M. hyopneumoniae virulento (1.0 x 106 organismos) a los cuatro meses después de la vacunación. Dos cerdos murieron durante el periodo de observación posterior a la exposición debido a razones no relacionadas con la vacunación/exposición . Los cerdos restantes en la totalidad de los tres grupos fueron sacrificados 30 dias después de la exposición y se calificaron las lesiones pulmonares para cada cerdo en el ensayo. Vacunación: Cada cerdo en los grupos de vacunación se les administró una dosis de 2 mi de las vacunas de prueba IM en el lado del cuello.
Exposición y Necropsia: Un concentrado de exposición virulento de M. hyopneumoniae, un homogeinizado de pulmón congelado (-70°C) preparado por el doctor Eileen Thacker de Iowa State University (ISU) . El concentrado de exposición se confirma que es. puro y que contiene aproximadamente 107 organismos de M. hyopneumoniae por mi. La dosis de exposición recomendada es de 10 mi de un concentrado diluido 1:100 (es decir, 1.0 x 106 organismos). Los cerdos en los grupos vacunados y control de exposición en el primer ensayo se expusieron con 14 mi de concentrado diluido 1:100 (es decir, 1.4 x 106 organismos). Los cerdos en el segundo ensayo se expusieron con 10 mi de un concentrado diluido 1:100 (es decir, 1.0 x 106 organismos), según se recomienda. En el día de la exposición, el homogeinizado se recalentó rápidamente a baño maria y se diluye de acuerdo con las recomendaciones de ISU utilizando un medio de crecimiento estéril para M. hyopneumoniae . Los cerdos fueron sedados con una mezcla de xylazina-cetamina-telazol R que consiste de 50 '.: mg/ml de xilazina, 50 mg/ml de cetamina y 100 mg/ml de telazol. La mezcla anestésica se administra por via IM a 0.02 - 0.04 ml/kg (0.01 - 0.02 ml/libra) de peso corporal. Cada cerdo se le administra una dosis única de 14 mi (primer ensayo) o de 10 mi (segundo ensayo) del material de exposición, intratecalmente . Para asegurarse que la colocación de la aguja es correcta, se extrae aire dentro de la jeringa antes de la administración de la dosis de exposición. Los cerdos control no expuestos y no vacunados se mantienen en habitaciones separadas y sin exposición. A los 30 días después de la "exposición (DPC) se sacrifica a todos los cerdos. Se extirpan los pulmones y se califican las lesiones gruesas de pulmón por una persona sin conocimiento de los grupos de prueba. Recolección de Muestra y Prueba: Se recolectan muestras de sangre de todos los cerdos en el día de la vacunación (0 DPV) a un mes después de la vacunación (1 MPV) , 4 MPV/0 DPC y 30 DPC para determinar anticuerpos en suero contra M. hyopneumoniae detectados por el equipo de ELISA competitivo (elaborado por DAKO Co.) . Las muestras de suero se almacenan a -20°C antes de probarse. Análisis de Datos : Las calificaciones de las lesiones pulmonares se compararon entre grupos vacunados y no vacunados mediante análisis de varianza (ANOVA) . Las calificaciones pulmonares fueron transformadas por arco seno para mejorar la distribución de los residuales. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Serologia: Todos los cerdos en ambos ensayos se probaron para determinar anticuerpos séricos contra M. hyopneumoniae mediante un equipo de ELISA competitivo comercial, utilizando una dilución de suero 1:10 en todas las pruebas. Todos los cerdos con seronegativos (titulo de anticuerpo <10) en el momento de la vacunación, lo que indica que los animales son susceptibles a infección por M. hyopneumoniae . Todos los cerdos en * los grupos control permanecieron seronegativos antes de la exposición. Esto indica que la respuesta inmunológica en los cerdos vacunados se debe a la vacuna y no a exposición ambiental. Todos los cerdos en los grupos vacunados y la mayor parte de los cerdos en los grupos control expuestos (18 de 22 cerdos en el ensayo uno y 15 de 25 en el ensayo dos) se seroconvirtieron a M. hyopneumoniae después de la exposición mientras que todos los animales no expuestos permanecieron seronegativos . Esto implica que la exposición es especifica para M. hyopneumoniae. En la tabla 1 se resume el estado serológico de los animales de prueba. Pruebas de Inmunogenicidad en el primer ensayo : El primer ensayo se llevó a cabo para determinar si la vacuna del ejemplo 2 puede estimular inmunidad fuerte la cual pueda proteger contra un nivel más elevado de exposición en comparación con el recomendado por ISU a los cuatro meses después de la vacunación. Este ensayo también compara una vacuna del ejemplo 2 con Ingelvac M. hyoMR, disponible comercialmente, para determinar su capacidad para estimular la inmunidad protectora a los cuatro meses después de la vacunación. Se expusieron a veintidós cerdos vacunados con FDAH Suvaxyn MH-One y ocho cerdos con un producto registrado, Ingelbac M. hyoMR serie 271,032, con 1.4 x 106 organismos por cerdo del material de exposición *(s"e recomienda por la ISU 1.0 x 106 organismos por cerdo, véase la sección 5.5). Veintidós cerdos sirvieron como controles de exposición y 10 cerdos como controles no expuestos. En la tabla 2 se muestran los porcentajes de lesiones pulmonares. Los cerdos vacunados con la vacuna del ejemplo 2 presentaron un promedio de lesiones pulmonares de 15.9% y los cerdos control expuestos presentaron un promedio de lesiones pulmonares de 19.6%. Las lesiones pulmonares en el grupo vacunado con la vacuna del ejemplo 2 son menores que el control incluso cuando los cerdos se exponen a una dosis más elevada de M. hyopneumoniae . No obstante, la diferencia no es significativa (p=0.19). De igual manera, cuando se evalúa un producto disponible comercialmente, Ingelvac M. hyoMR en el mismo grupo de animales con la misma dosis de exposición, también se ob.tiene un nivel similar de lesiones pulmonares (14.6%) . No hay diferencia significativa entre el grupo vacunado con Ingelvac . hyoMR y el grupo control (p=0.27) y entre el grupo vacunado con Ingelvac M. hyoMR y el grupo vacunado con la vacuna del ejemplo 2 (p=0.88).
Aunque no se registró una reducción numérica significativa en las lesiones en el grupo que recibe la vacuna del ejemplo 2, los datos obtenidos en este ensayo sugiere que la dosis de exposición más elevada (1.4 x 106 organismos) utilizada en este ensayo probablemente es excesiva,- incluso*para la inmunidad de los cerdos estimulados por el producto comercial Ingelvac. Este nivel de exposición probablemente no es apropiado para la evaluación del estudio de vacunación/exposición utilizando tamaños de grupos de 20-25 animales, aunque con tamaños de grupos más grandes es posible que se puede demostrar dicha significancia. Prueba de Inmunogenicidad en el segundo ensayo : Los cerdos en los grupos vacunado y control de exposición en el ensayo dos se evaluaron con la dosis de exposición (1.0 x 106 organismos) recomendada por la ISU a los cuatro meses después de vacunación para demostrar cuatro meses de DOI . En la tabla 3 se muestran los porcentajes de lesión pulmonar. El grupo control tiene un promedio de lesiones pulmonares de 10.4%. El grupo vacunado tiene un promedio de lesiones pulmonares de 5.5%. Existe una diferencia significativa entre los grupos vacunado y el control (p=0.031) . Esto indica que la vacuna del ejemplo 2 es eficaz en estimular la inmunidad protectora, la cual puede durar por lo menos cuatro meses después de una vacunación de dosis única en cerdos a la edad de tres semanas.
Evaluación de los resultados combinados de ambos ensayos : Aunque los dos ensayos son significativamente diferentes, el efecto del ensayo en el grupo no es significativo. La magnitud del efecto del grupo es similar entre ambos ensayos. De esta manera, el efecto del grupo se puede valuar sin considerar' l' ensayo. Dado el análisis del modelo completo que muestra que la interacción entre grupos de ensayo no es significativa, esto fundamenta la noción de que el efecto del grupo es el mismo en ambos ensayos y justifica la combinación de datos de los dos ensayos en un solo análisis. Como tal, cuando los datos relacionados con la vacuna del ejemplo 2 de los dos ensayos se combina y se analiza la variable transformada de arco seno para las lesiones pulmonares con el grupo y el ensayo como las variables independientes (modelo reducido) , el grupo es estadísticamente significativo (p=0.013). TABLA 1: Sumario del estado serológico hacia M. hyopnewnonlae en cerdos control y vacunados Ensayo uno Positivo/negativo (1:10) a Grupo Número de ODPV -1DIPC 30 DPC cerdos Vacuna FDAH 22 0/22 0/22 22/22 Vacuna BI 8 0/8 4/8 8/8 Control expuesto 22 0/22 0/22 18/22 Control sin 10 0/10 0/10 0/10 exposición Ensayo dos Positivo/negativo (1:10) a TABLA 2: Sumario de porcentajes de lesiones pulmonares en el ensayo uno (sobredosis) * * Los cerdos se expusieron con 1.4 x 106 organismos por cerdo (dosis recomendada por ISU, 1.0 x 106 organismos por cerdo) ** Comparación entre el grupo de vacuna FDAH y el grupo control *** Comparación de entre el grupo de vacuna BI y el grupo control **** Comparación entre el grupo de vacuna BI y el grupo de vacuna FDAH TABLA 3 : Sumario de porcentajes de la lesión pulmonar en el ensayo dos (dosis recomendada) * Los cerdos fueron expuestos con la dosis recomendada por ISU (1.0 x 106 organismos por cerdo) ** Comparación entre el grupo de vacuna FDAH y el grupo control EJEMPLO 4 Evaluación de la inmunidad a largo plazo inducida por una composición de vacuna de la invención contra exposición virulenta seis meses después de una administración de una sola dosis Utilizando esencialmente los mismos procedimientos en los ejemplos 1 y 2, y utilizando las cantidades que se indican en lo siguiente, se prepara la vacuna de prueba A.
Vacuna de Prueba A Cantidades por 1,000,000 de dosis (2 mi, cada una) : % vol/vol El pH de la serie se ajusta a 7.0 ± 0.2. MHDCE = equivalentes de células de ADN de Mycoplasma hyopneumoniae SUMARIO En esta evaluación se incluyeron treinta y tres cerdos de 21 días. Se vacunaron 20 cerdos con una dosis de vacuna A por dia intramuscular (IM) a la edad de tres semanas.. Diez cerdos sirvieron como controles no vacunados y tres cerdos como controles ambientales no expuestos. Todos los cerdos fueron seronegativos (titulo de anticuerpos <10) en el momento de vacunación, lo que indica que los animales son susceptibles a M. hyopneumoniae . Todos los cerdos en los grupos control permanecieron seronegativos antes de la exposición. Esto indica que la respuesta inmunológica en los cerdos vacunados se debe a la vacuna y no a una exposición ambiental. Seis meses después de la vacunación, 20 cerdos vacunados y 10 'cerdos control no vacunados se expusieron con M. hyopneumoniae virulenta (1.0 x 106 organismos por cerdo). Tres cerdos sirvieron como controles no expuestos. Los cerdos vacunados presentaron un promedio de calificación de lesiones pulmonares de 3.6% y los cerdos control expuestos presentaron un promedio de calificación de lesiones pulmonares de 14.6%. Las lesiones pulmonares en el grupo vacunado son significativamente menores que en los controles (p=0.0215). Los datos obtenidos por esta evaluación demuestran que la vacuna A de prueba induce la inmunidad protectora a largo plazo contra la exposición a M. hyopneumoniae virulenta seis meses después de una vacunación única. Diseño Experimental Se asignaron treinta y tres cerdos de 21 días de edad en tres grupos (grupo vacunado, grupo control expuesto y grupo control ambiental no expuesto) utilizando el programa de aleatorización Microsoft Excel por carnada. Se vacunaron 20 cerdos con una dosis de vacuna de prueba A intramuscularmente a la edad de tres semanas. Diez cerdos sirvieron como controles expuestos y tres cerdos como controles ambientales no expuestos. Los cerdos en el grupo vacunado y los controles expuestos se expusieron a 10 mi de cultivo virulento de M. hyopneumoniae (1.0 x 106 organismos) a los seis meses después de la vacunación. Tres cerdos no vacunados se utilizaron como controles no expuestos. Los cerdos expuestos y los controles no expuestos se sacrificaron 26 días después de la exposición y se calificaron las lesiones pulmonares para cada cerdo. Cada cerdo en los grupos de vacunación se les administró una dosis de 2 mi de la vacuna de prueba IM en el lado del cuello. Exposición y Necropsia El concentrado de exposición virulento de M. hyopneumoniae, un homogeinizado de pulmón congelado (<-70°C) se preparó por el Dr. Eileen Thacker de Iowa State University (ISU) . El concentrado de exposición se confirma que es puro y contiene aproximadamente 107 organismos M. hyopneumoniae por mi . Los cerdos fueron expuestos con 10 mi de una dilución 1:100 del concentrado (es decir, aproximadamente 1.0 x 106 organismos). - . En el día de exposición, el homogeinizado se recalentó rápidamente en baño maria y se diluye de acuerdo con las recomendaciones de ISU utilizando un medio de crecimiento estéril para M. hyopneumoniae. Los cerdos fueron sedados con una mezcla de xilazina-cetamina-telazolMR que consiste de 50 mg/ml de xilazina, 50 mg/ml de cetamina en 100 mg/ml de telazol. La mezcla anestésica se administra IM a 0.02 - 0.04 ml/kg (0.01 - 0.02 ml/libra) de peso corporal. A cada cerdo se le administra una dosis única de 10 mi del material de exposición (1.0 x 106 organismos) intratraquealmente. Para asegurar que -es- correcta - la colocación de la a'guja, se extrae aire al interior de la jeringa antes de la administración de la dosis de exposición. Los cerdos control no expuestos y no vacunados se mantuvieron en lugares separados y sin exposición. A los 26 días después de la exposición (DPC) todos los cerdos fueron sacrificados. Los pulmones se separaron y las lesiones pulmonares gruesas se calificaron como se describe en el ejemplo 3. Recolección de Muestras y Pruebas Se recolectaron muestras de sangre de todos los cerdos en el día de la vacunación (0 DPV) , a los 35 DPV, -1 DPC y 26 DPC para la determinación de los anticuerpos séricos contra M. hyopneumoniae, detectado por el equipo de ELISA competitivo (elaborado por DAKO Co.). Las muestras de suero se almacenaron a <-20°C antes de probarse. Análisis de Datos Las calificaciones de las lesiones pulmonares se compararon entre vacunados y controles mediante ANOVA de una vía. Las calificaciones de las lesiones pulmonares se transformaron por arco seno para mejorar la distribución de los residuos. Puesto que era cuestionable la suposición de normalidad para las calificaciones de las lesiones pulmonares, tanto las calificaciones de las lesiones pulmonares como las calificaciones de lesiones pulmonares transformadas por arco seno se analizaron por la prueba de suma de calificación de Wilcoxon-. El 'nivel de 'significancia se ajutó en p<0.05. Se utilizaron para propósitos de presentación los resultados de la prueba de suma de calificación de Wilcoxon no paramétricos. RESULTADOS Y DISCUSIÓN Serologia Todos los cerdos se sometieron a prueba para determinar anticuerpos contra M. hyopneu oniae mediante un equipo de ELISA competitivo comercial, utilizando una dilución en suero 1:10 para todas las pruebas. Las muestras con resultados de pruebas sospechosos por las instrucciones del equipo se trataron como positivos en el análisis de datos. Todos los cerdos fueron seronegativos (titulo .de anticuerpo <10) en el momento de vacunación, lo que indica que los animales son susceptibles a M. hyopneumoniae. Todos los cerdos en los grupos control permanecieron seronegativos antes de la exposición. Después de la vacunación, quince de los veinte vacunados (15/20) se volvieron seropositivos a M. hyopneumoniae por lo menos una vez (muestras recolectadas a 35 DPV y -1 DPC) . Esto indica que la respuesta inmunológica en los cerdos vacunados se debe a la vacuna y no a ninguna exposición ambiental. Todos los cerdos vacunados y cuatro de 10 cerdos en el grupo control expuesto se volvieron seropositivos a M. hyopneumoniae después de la exposición mientras que todos los animales no expuestos permanecieron seronegativos . En la tabla 4 se resume el estado serológico de · los -animales de prueba. Calificaciones de la Lesión Pulmonar Veinte cerdos vacunados con la vacuna de prueba A y diez cerdos control no vacunados fueron expuestos a M. hyopneumoniae virulenta (1.0 x 106 organismos por cerdo) a los seis meses después de la vacunación. Tres cerdos sirvieron como controles no expuestos. Ocho de los veinte vacunados (40%) no desarrollaron lesiones pulmonares después de la exposición mientras que en el grupo control únicamente uno de 10 cerdos (10%) no presentó lesión pulmonar. En la tabla 5 se muestran los porcentajes de lesiones pulmonares. Los cerdos vacunados presentan un promedio de calificación de lesión pulmonar de 3.6% y los cerdos control expuestos presentan un promedio de calificación pulmonar de 14.6%. Las lesiones pulmonares en el grupo vacunado fueron significativamente menores que en los controles (p=0.0215).
TABLA 4 : Estado serológico de M. hyopneumoniae de los cerdos en el estudio* * Las muestras de suero se probaron para determinar anticuerpos en suero contra M. hyopneumoniae mediante ELISA utilizando un equipo comercial. Todas las muestras se probaron con una dilución de suero de 1:10. Los resultados se interpretan en base en las instrucciones del equipo. Las muestras sospechosas a 1:10 se consideraron positivas. ** DPV = día posterior a la vacunación *** DPC = día posterior a la exposición TABLA 5: Sumario de las calificaciones de lesiones pulmonares (%) en cerdos expuestos con M. hyopneumoniae y en controles no expuestos Grupo Tratamiento Número % Medio de Desviación CL* 95% CL 95% Valor de cerdos calificaciones estándar inferior superior p** de las lesiones para la para la pulmonares media media 1 Vacuna/ 20 3.6 7.6 0.07 7.19 0.0215 exposición 2 Control/ 10 14.6 20.0 0.33 28.94 exposición 3 Control/sin 3 1.8 1.8 -2.67 6.27 exposición * CL = nivel de confianza ** El valor p es de la comparación de los grupos 1 y 2. Como se puede ver de los datos que se muestran en las tablas 4 y 5, la vacuna de prueba A induce inmunidad protectora contra una exposición a M. hyopneumoniae virulenta durante seis^ meses después de una administración de una sola dosis en cerdos vacunados a la edad de tres semanas. EJEMPLO 5 Se elaboraron vacunas de virus de influenza porcina por métodos bien conocidos en la técnica. Además, también son bien conocidas en la técnica las cepas SIV, tales como H1N1 y H3N2, por ejemplo de lugares como NVSL, Ames, Iowa, USDA y en otras partes. Estas cepas típicamente se pueden propagar, por ejemplo, en una línea de células renales caninas Maidin Darby (MDCK) utilizando, por ejemplo, medio de crecimiento Opti-MemMR, suplementados según sea apropiado, con uno o más de suero bovino fetal, albúmina sérica bovina, lactalbúmina, hidrolizado y bicarbonato de sodio. En un ejemplo, para promover el crecimiento óptimo del virus, el medio de crecimiento para propagación de la cepa H1N1 se suplementará adicionalmente con cantidades apropiadas de caldo de fosfato triptosa, butirato de sodio y tripsina; y el medio de crecimiento para propagación de la cepa H3N2 se suplementará adicionalmente con cantidades apropiadas de tripsina. En la cosecha, los fluidos virales cosechados pueden ser inactivados con formalina. Una composición de vacuna SIV que contiene estas cepas de vacuna típicamente se puede formular como sigue: SIV H1N1 (>400 unidades HA por 1 mi) 20,000 mi SIV H3N2 ( 200 unidades HA por 1 mi) 20,000 mi Carbopol (solución 2%) 5,000 mi Tiomersol (solución 5%) 50 mi MEM o solución salina balanceada 4,950 mi Total 50,000 mi Una vacuna de combinación con SIV de acuerdo con la invención típicamente se puede preparar como sigue: Concentrado de Mycoplasma (> 1 x 1010 MHDCE/ml) 100.000 mi SIV H1N1 (> 5120 unidades HA por 1 mi) >1067 unidades HA/ml 75,000 mi SIV H3N2 (> 2560 unidades HA por 1 ml)>1533 unidades HA/ml 56,000 mi Mezcla de Escualano/Pluronic L121 200,000 mi Carbopol (solución 2%) 100,000 mi Tiomersol (solución 5%) 7,690 mi MEM o solución salina balanceada 611,310 mi Total 1, 000, 000 mi Se utilizaron tres estudios diferentes para demostrar la eficacia de las diversas fracciones en combinación. En cada uno de los estudios se asignaron en los tres grupos de manera aleatoria cerdos de edad apropiada: grupo vacunado, grupo control expuesto para la fracción que se está probando y grupo control ambiental. Los resultados de estos estudios son los siguientes : -SUMARIO DEL ESTUDIO - fracción M. hyo Este ensayo en animales se diseña para demostrar la eficacia de la fracción de M. hyopneumoniae de la vacuna de influenza porcina, H1N1 y H3N2, virus inactivado - bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae de acuerdo con la invención y la carencia de bloqueo de antigeno por las fracciones SIV. Todos los cerdos son seronegativos (titulo de anticuerpo <10) en el momento de vacunación, lo que indican que los animales son susceptibles a M. hyopneumoniae . Todos los cerdos en los grupos control permanecen seronegativos antes de la exposición. Esto indica que la respuesta inmunológica en los cerdos vacunados se debe a la vacuna y no a alguna exposición ambiental. Veintidós (22) cerdos fueron vacunados con la vacuna SIV (vacuna A) a una semana de edad y se volvieron a vacunar con la vacuna MH/SIV (vacuna B) tres semanas después de la primera vacunación. Veintidós (22) cerdos sirvieron como controles de exposición de M. hyopneumoniae y tres cerdos como controles ambientales. Cuatro semanas después de la segunda vacunación, los cerdos en el grupo vacunado y el grupo control expuestos fueron expuestos con M. hyopneumoniae virulenta. Los cerdos fueron sacrificados 28 días después de la exposición y se calificaron las lesiones pulmonares para cada cerdo. Diez y ocho (18) de los 20 cerdos (90%) en el grupo control desarrollaron calificaciones de lesiones pulmonares mayores de 5% mientras que en el grupo vacunado únicamente ocho de los 21 cerdos (38%) calificaron lesiones pulmonares mayores de 5%. El grupo vacunado presentó lesiones pulmonares por medio de 10.2% y los cerdos control expuestos presentaron lesiones pulmonares promedio de 16.9%. Existe una diferencia significativa entre el grupo vacunado y el grupo control (p=0.02) . Esto indica que los cerdos vacunados con la vacuna SIV a una semana de edad y vacunados con la vacuna MH/SIV a las tres semanas de edad desarrollaron inmunidad protectora contra la exposición a M. hyopneumoniae virulenta. Esto también indica que no existe efecto de bloqueo de antigeno y la fracción de M. hyopneumoniae por las fracciones SIV en la vacuna de combinación de MH/SIV. SUMARIO DEL ESTUDIO - Fracción SIV H1N1 Este ensayo en animales se diseña para demostrar la eficacia de la fracción H1N1 del virus de influenza porcino (SIV), de la vacuna de influenza porcina, H1N1 y H3N2, del virus inactivado - y la bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae de la invención.
Todos los cerdos son seronegativos (título de anticuerpo <10) a SIV H1N1 en el momento de vacunación. Todos los controles permanecieron seronegativos antes de la exposición mientras que todos los cerdos vacunados se seroconvirtieron a SIV H1N1. Esto indica que la respuesta inmunológica protectora en los cerdos vacunados, como se demuestra por la exposición, se debe a la vacunación y no a alguna exposición ambiental. Se vacunaron veinticinco (25) cerdos con la vacuna SIV (vacuna A) a una semana de edad y se volvieron a vacunar con la vacuna SIV-MHP (vacuna B) dos semanas después de la primera vacunación. Veinticuatro (24) cerdos sirvieron como controles de exposición y cinco cerdos como controles ambientales . Los cerdos fueron expuestos a las tres semanas después de la segunda vacunación. Se observó a los cerdos para determinar signos clínicos y se registró diariamente la temperatura rectal comenzando dos días antes de la exposición hasta cinco días después de la exposición (DPC) . A los 5 DPC, los cerdos fueron sacrificados y se calificaron las lesiones pulmonares para cada cerdo. Se intentó el aislamiento de virus con hisopos nasales recolectados a los 0 DPC, 3 DPC y 5 DPC y se recolectaron muestras de tejido pulmonar en el momento de la necropsia. No se aisló virus de los hisopos nasales recolectados de los cerdos antes de la exposición (0 DPC) . Se aisló virus de 10 de 24 cerdos en grupo control, en comparación de uno de los 25 vacunados de los hisopos nasales recolectados después de la exposición (3 DPC y 5 DPC) . Existe una diferencia significativa entre el grupo vacunado y el grupo control en la dispersión nasal del virus después de la exposición (p=0.0011). El virus también se aisló de muestras de tejido de pulmón recolectadas en el momento de la necropsia a partir de 14 de 24 cerdos control y uno de 25 cerdos vacunados. Existe una diferencia significativa entre el grupo vacunado y el grupo control (p<0.0001). De manera colectiva, el virus se aisla de 19 de 24 controles (79%) y únicamente de 2 de 25 vacunados (8%) después de la exposición. Además, la exposición a SIV H1N1 también induce una respuesta febril. Aunque la respuesta febril general no es significativa (p=0.07) entre los vacunados y los controles, los controles tienen una elevación de temperatura significativamente superior a los 2 DPC en comparación con los vacunados (p=0.0355). Los signos clínicos inducidos por la exposición fueron muy ligeros y las tasas de incidencia de los signos individuales fueron demasiado bajas de modo que es inapropiado utilizar estos datos para la evaluación de la exposición. El grupo vacunado tiene un promedio de calificación de lesión pulmonar de 6.9% y el grupo control expuesto tiene un promedio de calificación de lesión pulmonar En resumen, la incidencia y frecuencia de dispersión de virus en la cavidad nasal y la prevalencia del virus aislado de tejido de pulmón es significativamente menor en el grupo vacunado en comparación con los controles. Los cerdos vacunados también experimentaron menos respuestas febriles después de la exposición y también presentaron menores lesiones pulmonares en comparación con los cerdos control . Esto indica que los cerdos vacunados estaban protegidos contra la exposición a SIV H1N1. SUMARIO DEL ESTUDIO - fracción SIV H3N2 Este ensayo en animales se diseñó para demostrar la eficacia de la fracción H3N2 del virus de influenza porcino (SIV) de la fracción de la vacuna de influenza porcina, H1N1 y H3N2, de virus inactivados - bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae, de acuerdo con la invención. Todos los cerdos fueron seronegativos (titulo de anticuerpos <10) o presentaron un anticuerpo materno bajo a SIV H3N2 en el día de la primera vacunación (0 DPV1) . El titulo de anticuerpo materno bajo en estos cerdos disminuye a la condición seronegativa al momento de la exposición. Todos los cerdos . en los grupos control permanecieron seronegativos antes de la exposición. Esto indica que la respuesta inmunológica protectora en los cerdos vacunados, como se demuestra por la exposición, se debe a la vacunación y no sólo a la exposición ambiental.
Se vacunaron veintidós (22) cerdos con la vacuna SIV (vacuna A) a una semana de edad y se volvieron a vacunar con la vacuna SIV-MHP (vacuna B) tres semanas después de la primera vacunación. Diez y ocho (18) cerdos sirvieron como controles de exposición y cinco cerdos como controles ambientales. Se observó ' a~'los cerdos para determinar signos clínicos y se registraron las temperaturas rectales desde tres días antes hasta cinco días después de la exposición (DPC) . A los ' 5 DPC, se sacrificó a los cerdos y se calificaron las lesiones pulmonares para cada cerdo. Se intentó aislamiento del virus con hisopos nasales recolectados a los 0 DPC, 3 DPC y 5 DPC así como en muestras de tejido pulmomar. La exposición a SIV H3N2 virulento induce una respuesta febril en los cerdos control. Mientras que 78% de los controles presentaron fiebre, sólo 18% de los vacunados presentaron fiebre. Existe una diferencia significativa de la respuesta febril entre el grupo vacunado y los controles (p=0.0002). Los signos clínicos inducidos por la exposición fueron ligeros y las tasas de incidencia de los signos individuales fueron bajas. Seis cerdos en el grupo control expuesto (33%) presentaron expectoración durante uno a dos días mientras que sólo dos cerdos en el grupo vacunado (9.1%) presentaron expectoración. De manera similar, no existe una diferencia significativa con otros signos clínicos entre el grupo vacunado y los controles. Quince (15) de los 18 cerdos en el grupo control (83%) desarrollaron calificaciones de lesiones pulmonares mayores de 5% mientras que en el grupo vacunado sólo cinco de 22 cerdos (23%) calificaron lesiones pulmonares mayores de 5%. El grupo vacunado presenta una calificación de lesión pulmonar promedio de 4.9% y el grupo control expuesto tiene un promedio de calificación de lesión pulmonar de 23.2%. Existe una diferencia significativa en las calificaciones de lesiones pulmonares entre el grupo vacunado y el grupo control (p=0.0003) . No se aisló virus de los hisopos nasales recolectados de cerdos antes de la exposición (0 DPC) . A partir de los hisopos nasales recolectados a los 3 DPC, se aisló virus de 12 de 18 cerdos en el grupo control (67%) en comparación con 5 de 22 vacunados (23%) . El virus se aisló de hisopos nasales recolectados en 5 DPC en 3 de 18 cerdos en el grupo control, pero no de ninguno de los cerdos vacunados. El virus también se aisló de muestras de tejido de pulmón recolectadas de necropsia (5 DPC) en 5 de 18 cerdos en el grupo control, pero no en ninguno de los cerdos vacunados. Existe una diferencia significativa entre el grupo vacunado y el grupo control en el aislamiento de virus a partir de hisopos nasales después de la exposición (p=0.0035 para un día individual, p=0.0008 para la dispersión del virus a los 3 DPC y a los 5 DPC en combinación) y a partir de tejido de pulmón (p=0.013) .
En resumen, los cerdos vacunados experimentaron una respuesta significativamente menos febril después de la exposición y también presentaron calificaciones de lesiones pulmonares mucho menores en comparación con los cerdos control. Existe una diferencia significativa entre los vacunados y - los controles en la dispersión de virus en la cavidad nasal y la recuperación de virus a partir de muestras de tejido pulmonar. Esto indica que los cerdos vacunados con la vacuna SIV a una semana de edad y reforzados con la vacuna SIV- HP tres semanas después desarrollaron inmunidad protectora contra la exposición SIV H3N2 virulenta. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (19)

  1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones 1. Una composición de vacuna para inmunizar a un animal contra infección por Mycoplasma hyopneumoniae y un patógeno viral, caracterizada porque comprende: una cantidad inmunizante de bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae; una cantidad inmunizante de por lo menos un antigeno viral que se selecciona del grupo que consiste de virus de influenza porcina (SIV) , virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) , y circovirus porcino ( PCV) ; una mezcla adyuvante que comprende un polímero de ácido acrílico y una mezcla de un aceite metabolizable y un copolímero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno; y un portador farmacéuticamente aceptable, en el que la composición de vacuna, después de una administración única, induce inmunidad protectora contra Mycoplasma hyopneumoniae .
  2. 2. La composición de vacuna de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la mezcla adyuvante consiste de un polímero de ácido acrílico y una mezcla de un aceite metabolizable que comprende uno o más hidrocarburos de terpeno y un copolímero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno en una proporción de aproximadamente 1:25 a 1:50 de polímero de ácido acrílico respecto a la mezcla de aceite metabolizable/copolímero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno .
  3. 3. La composición ' de vacuna de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada además porque la mezcla adyuvante comprende aproximadamente 1 a 25%, v/v, de la composición de vacuna.
  4. 4. La composición de vacuna de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque el polímero de ácido acrílico está presente en una concentración final de aproximadamente 1%, v/v, y la mezcla de hidrocarburos de terpeno/copolímero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno está presente en una concentración final de aproximadamente 5% a 10%, v/v.
  5. 5. La composición de vacuna de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada porque la mezcla adyuvante comprende aproximadamente 2%-15% v/v de la composición de vacuna.
  6. 6. La composición de vacuna de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque la mezcla adyuvante comprende aproximadamente 5%-12% v/v de la composición de vacuna.
  7. 7. La composición de vacuna de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el aceite metabolizable es escualano o escualeno.
  8. 8. La composición de vacuna de conformidad con la reivindicación 6 o la reivindicación 7, caracterizada porque el polímero de ácido acrílico es un carbómero.
  9. 9. La composición de vacuna de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque comprende además por lo menos una bacterina de toxoide purificado que se selecciona del grupo que consiste de Hae onphilus parasuis, Pasteurella multiocida , Streptococcum suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica , , Salmonella choleraesuis, Erysipelothrix rhusiopathiae y bacterias leptospíricas .
  10. 10. La composición de vacuna de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque comprende además un antígeno bacteriano o viral que se selecciona de uno o más de los siguientes grupos, SIV; Haemonphilus parasuis; el grupo que consiste de PRRSV y PCV; el grupo que consiste de SIV y Erysipelothrix rhusiopathiae : el grupo que consiste de Pasteurella multiocida y Bordetella bronchiseptica.
  11. 11. Un método para proteger a un animal contra una enfermedad causada por Mycoplasma hyopneumoniae y por lo -menos un antígeno viral caracterizado porque comprende la etapa de administrar al animal una composición de vacuna la cual comprende: una cantidad inmunizante de una bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae; una cantidad inmunizante de por lo menos un antigeno viral que se selecciona del grupo que consiste de virus de influenza porcina (SIV), virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) , y circovirus porcino (PCV); una mezcla adyuvante que comprende un polímero de ácido acrílico y una mezcla de aceite metabolizable y un copolímero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno; y un portador farmacéuticamente aceptable, en el que la composición de vacuna, después de una administración única, induce inmunidad protectora contra la infección por Mycoplasma hyopneumoniae .
  12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la cantidad inmunizante de la bacteria es de aproximadamente 1 x 10B a 3 x 1011 HDCE/ml.
  13. 13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque la cantidad inmunizante de la bacteria es de aproximadamente 1 x 109 a 3 x 109 MHDCE/ml.
  14. 14. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque el modo de administración de la etapa de administración es por vía intramuscular, subcutánea, intraperitoneal , en aerosol, oral o intranasal.
  15. 15. El método de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado porque la mezcla adyuvante consiste de un polímero de ácido acrílico y una mezcla de una aceite metabolizable que comprende uno o más hidrocarburos de terpeno, y un copolimero de bloque de polioxietileno-polioxipropileno presente en una concentración final de aproximadamente 1 a 25%, v/v.
  16. 16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el polímero de ácido acrílico de la mezcla adyuvante es un carbómero.
  17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque el aceite metabolizable de la mezcla adyuvante es un hidrocarburo de terpeno que se selecciona del grupo de escualeno y escualano.
  18. 18. El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 11 a 17, caracterizado porque comprende además administrar de manera conjunta por lo menos una bacterina adicional que se selecciona del grupo que consiste de Haemonphilus parasuis, Pasteurella multiocida , Streptococcum suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica , Sal onella choleraesuis , Erysipelothrix rhusiopathiae y bacterias leptospíricas .
  19. 19. El método de conformidad con las reivindicaciones 11 a 17, para proteger a un animal contra una enfermedad causada por Mycoplasma hyopneumoniae y por lo menos un patógeno viral, y por lo menos un patógeno adicional, caracterizado porque comprende además administrar de manera conjunta por lo menos un antígeno bacteriano o viral adicional que se selecciona de uno o más antigenos bacteriales o virales que se seleccionan de uno o más de los siguientes grupos, SIV; Haemonphilus parasuis; el grupo que consiste de PRRSV y PCV; el grupo que consiste de SIV y Erysipelothrix rhusiopathiae : el grupo que consiste de Pasteurella multiocida y Bordetella bronchiseptica . 20·. Una composición de vacuna para inmunizar a un animal contra la infección por Mycoplasma hyopneumoniae en un patógeno viral, caracterizado porque comprende: una cantidad inmunizante de una bacterina de Mycoplasma hyopneumonia ; una cantidad inmunizante de por lo menos un antigeno bacteriano o viral que se selecciona del grupo que consiste de Haemonphilus parasuis; Pasteurella multiocida, Streptococcum suis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica , Salmonella choleraesuis, Erysipelothrix rhusiopathiae, bacterias leptospiricas , virus de influenza porcina (SIV) , virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) , y circovirus porcino (PCV) ; por lo menos un adyuvante; y un portador farmacéuticamente aceptable, en el que la composición de vacuna, después de la administración única, induce inmunidad protectora contra Mycoplasma hyopneumoniae . 21. La composición de vacuna de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada porque comprende además un antigeno bacteriano o viral que se selecciona de uno o más de los siguientes grupos, SIV; Haemonphilus parasuis; el grupo que consiste de PRRSV y PCV; el grupo que consiste de SIV y Erysipelothrix rhusiopathiae; el grupo que consiste de Pasteurella multiocida y Bordetella bronchiseptica . 22. Una composición de vacuna para inmunizar a un animal contra infección por Mycoplasma hyopneumoniae y un patógeno viral en la que la composición de vacuna está caracterizada porque comprende: una cantidad inmunizante de bacterina de Mycoplasma hyopneumoniae; una cantidad inmunizante de por lo menos un antígeno bacteriano viral que se selecciona del grupo que consiste de virus de influenza porcina (SIV) , virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV) y circovirus porcino (PCV) ; y un sistema adyuvante que comprende un polímero de ácido acrílico, un aceite metabolizable y un copolímero de bloques de polioxietileno-polioxipropileno en forma de un aceite en emulsión acuosa; una composición de vacuna que, después de una administración única induce inmunidad protectora contra Mycoplasma hyopneumoniae .
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Families Citing this family (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
USRE39494E1 (en) * 1992-02-27 2007-02-27 Intervet Inc. Inactivated mycoplasma hyopneumoniae and uses therefor
CA2187535C (en) * 1994-04-11 2011-09-13 Jon B. Korshus Borrelia burgdorferi bacterin
EP0839912A1 (en) * 1996-10-30 1998-05-06 Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
US20040224327A1 (en) * 1996-10-30 2004-11-11 Meulenberg Johanna Jacoba Maria Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof
AU3198200A (en) * 1999-03-08 2000-09-28 Id-Lelystad, Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid B.V. Prrsv vaccines
DK2251419T3 (da) * 1999-04-22 2012-07-02 Us Agriculture Porcint reproduktions- og respirations-syndrom-vaccine baseret på isolat JA-142
MY128159A (en) * 2000-06-30 2007-01-31 Wyeth Corp Methods and composition for oral vaccination
MY129765A (en) 2000-12-19 2007-04-30 Wyeth Corp Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine
US7320793B2 (en) * 2001-01-19 2008-01-22 Cytos Biotechnology Ag Molecular antigen array
TWI238721B (en) * 2003-06-20 2005-09-01 Animal Technology Inst Taiwan Swine enzootic vaccine, its producing method and usage
CA2571452A1 (en) * 2004-06-18 2006-01-26 Regents Of The University Of Minnesota Identifying virally infected and vaccinated organisms
US7632636B2 (en) * 2004-09-21 2009-12-15 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine reproductive and respiratory syndrome isolates and methods of use
US7833707B2 (en) * 2004-12-30 2010-11-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2
UA95602C2 (ru) 2004-12-30 2011-08-25 Берингер Ингельхейм Ветмедика, Инк. Иммуногенная композиция цвс2 и способы приготовления такой композиции
US7700285B1 (en) 2005-12-29 2010-04-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. PCV2 immunogenic compositions and methods of producing such compositions
US8834891B2 (en) * 2005-03-14 2014-09-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis
US20060251827A1 (en) * 2005-05-09 2006-11-09 Applied Materials, Inc. Tandem uv chamber for curing dielectric materials
PT1904631E (pt) 2005-06-24 2012-07-16 Univ Minnesota Vírus srrp, clones infecciosos, os seus mutantes e processos de utilização
US11707520B2 (en) 2005-11-03 2023-07-25 Seqirus UK Limited Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
EP2368572B1 (en) 2005-11-04 2020-03-04 Seqirus UK Limited Adjuvanted vaccines with non-virion antigens prepared from influenza viruses grown in cell culture
EA014028B1 (ru) * 2005-11-04 2010-08-30 Новартис Вэксинс Энд Диагностикс Срл Эмульсии, содержащие свободное поверхностно-активное вещество в водной фазе в качестве адъюванта сплит вакцин против гриппа
KR101436794B1 (ko) 2005-12-29 2014-09-04 베링거잉겔하임베트메디카인코퍼레이티드 다가 ｐｃｖ2 면역원성 조성물 및 이러한 조성물의 제조방법
MX356667B (es) 2005-12-29 2018-06-08 Boehringer Ingelheim Vetmedica Inc Uso de una composicion inmunogenica de pcv2 para reducir los sintomas clinicos en cerdos.
BRPI0710550A2 (pt) * 2006-04-10 2011-08-16 Intervet Int Bv uso de uma dose imunogênica de material imunogênico de mycoplasma hyopneumoniae e uma dose imunogênica de vìrus de prrs atenuado vivo, kit de vacina, e, método para a vacinação de porcos
WO2008073464A2 (en) 2006-12-11 2008-06-19 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Effective method of treatment of porcine circovirus and lawsonia intracellularis infections
DK2094872T4 (da) * 2006-12-15 2020-05-18 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Behandling af anti-PCV2-antistofseropositive svin med PCV2-antigen
EP1941903A1 (en) * 2007-01-03 2008-07-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prophylaxis and treatment of PRDC
EP1958644A1 (en) * 2007-02-13 2008-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prevention and treatment of sub-clinical pcvd
CL2008001806A1 (es) 2007-06-20 2008-09-05 Wyeth Corp Composicion de vacuna en emulsion agua en aceite que comprende un antigeno y un adyuvante en la fase acuosa; y metodo de elaboracion.
US20090017064A1 (en) * 2007-07-10 2009-01-15 Wyeth Methods and Compositions for Immunizing Pigs Against Porcine Circovirus
US7829274B2 (en) 2007-09-04 2010-11-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen
AU2012261741B2 (en) * 2007-11-06 2016-02-25 Zoetis Services Llc Mycoplasma hyopneumoniae avirulent-adjuvanted live vaccine
UA98812C2 (ru) 2007-11-06 2012-06-25 Вайет Ллк Авирулентная активированная живая вакцина mycoplasma hyopneumoniae
CN101932336B (zh) * 2007-12-31 2014-07-09 贝林格尔.英格海姆维特梅迪卡有限公司 有外来氨基酸插入的pcv2 orf2病毒样颗粒
WO2009126356A2 (en) * 2008-01-23 2009-10-15 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Pcv2 mycoplasma hyopneumoniae immunogenic compositions and methods of producing such compositions
WO2009103037A1 (en) * 2008-02-15 2009-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods and compositions for reducing the impact of enteric diseases
US8444989B1 (en) * 2008-04-18 2013-05-21 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh One dose vaccination against mycoplasma infections of pigs
CN101363865B (zh) * 2008-05-26 2013-03-06 北京庄笛浩禾生物医学科技有限公司 一种猪蓝耳病毒胶体金检测试纸条、其制备方法及其应用
CN102119033B (zh) * 2008-06-25 2015-04-08 布拉施生物技术有限责任公司 用于增强促生长素抑制素免疫原性的组合物和方法
US20100003278A1 (en) * 2008-07-03 2010-01-07 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Immunological Compositions Effective for Lessening the Severity or Incidence of PRRSV Signs and Methods of Use Thereof
CN102316895A (zh) * 2008-08-25 2012-01-11 贝林格尔.英格海姆维特梅迪卡有限公司 抗高致病性猪生殖与呼吸综合征(hp prrs)的疫苗
KR101825697B1 (ko) 2009-02-10 2018-02-05 노파르티스 아게 감소된 양의 스쿠알렌을 포함하는 인플루엔자 백신
TWI627281B (zh) 2009-09-02 2018-06-21 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物
CA2793959C (en) 2010-03-25 2019-06-04 Oregon Health & Science University Cmv glycoproteins and recombinant vectors
CA2808285C (en) * 2010-08-27 2016-09-06 Intervet International B.V. Potency test for vaccine formulations
US8546149B2 (en) 2010-08-27 2013-10-01 Intervet Inc. Potency test for vaccine formulations
CN101954079B (zh) * 2010-09-21 2012-11-28 江苏省农业科学院 猪支原体肺炎活疫苗的疫苗佐剂及其制备方法和应用
MY186535A (en) 2011-02-17 2021-07-26 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Novel european prrsv strain
CN103370077B (zh) 2011-02-17 2016-10-26 贝林格尔.英格海姆维特梅迪卡有限公司 猪繁殖与呼吸综合征病毒的商业化规模生产方法
EP2691530B1 (en) 2011-06-10 2018-03-07 Oregon Health & Science University Cmv glycoproteins and recombinant vectors
EP2737059A1 (en) 2011-07-29 2014-06-04 Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH Novel prrs virus inducing type i interferon in susceptible cells
US9187731B2 (en) 2011-07-29 2015-11-17 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh PRRS virus inducing type I interferon in susceptible cells
CN103157100B (zh) * 2011-12-08 2014-09-24 普莱柯生物工程股份有限公司 副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病二联灭活疫苗及其制备方法
US9474692B2 (en) 2012-01-13 2016-10-25 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Kit for the preparation of a vaccinating agent
UA114503C2 (uk) * 2012-04-04 2017-06-26 Зоетіс Сервісіз Ллс Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae
US9120859B2 (en) 2012-04-04 2015-09-01 Zoetis Services Llc Mycoplasma hyopneumoniae vaccine
UA114504C2 (uk) 2012-04-04 2017-06-26 Зоетіс Сервісіз Ллс Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs
PT2938747T (pt) 2012-12-28 2019-08-01 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Método de preparação de uma vacina de micoplasma
UA121097C2 (uk) 2012-12-28 2020-04-10 Бьорінгер Інгельхайм Ветмедіка Гмбх Імуногенна композиція, що містить антигени мікоплазм
CN103908665B (zh) * 2013-01-05 2016-05-25 普莱柯生物工程股份有限公司 一种疫苗组合物及其制备方法和应用
CN103071151B (zh) * 2013-01-17 2014-07-23 江苏省农业科学院 猪支原体肺炎疫苗专用稀释剂及其制备方法
CN103961695B (zh) * 2013-02-06 2016-09-07 普莱柯生物工程股份有限公司 一种预防和治疗猪呼吸道综合征的疫苗组合物及其制备方法和应用
WO2014150822A2 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, compositions, vaccine and methods of use
CN104096222B (zh) * 2013-04-08 2016-09-14 普莱柯生物工程股份有限公司 一种疫苗组合物及其制备方法和应用
WO2014182872A1 (en) * 2013-05-08 2014-11-13 Protatek International, Inc. Vaccine for pcv2 and mycoplasma
CN105579060B (zh) 2013-09-25 2021-03-16 硕腾服务有限责任公司 Pcv2b趋异株疫苗组合物以及使用方法
CA2924228C (en) 2013-10-02 2024-01-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Pcv2 orf2 protein variant and virus like particles composed thereof
CN104248759B (zh) * 2013-11-19 2017-05-10 普莱柯生物工程股份有限公司 一种疫苗组合物及其制备方法和应用
CN104857508B (zh) * 2014-02-21 2018-03-16 普莱柯生物工程股份有限公司 一种疫苗组合物及其制备方法和应用
US10064930B2 (en) * 2015-01-16 2018-09-04 Boehringer-Ingelheim Vermedica, Inc. Immunogenic compositions and methods for pigeon fever
AU2016354532B2 (en) 2015-11-13 2020-08-06 Targan, Inc. Automatic system and method for injecting a substance into an animal
CN111346224B (zh) 2018-12-24 2023-12-08 洛阳赛威生物科技有限公司 一种免疫佐剂组合物及其制备方法和应用
CN112618710B (zh) * 2019-09-24 2023-09-29 华南理工大学 一种植物糖原猪口服接种疫苗纳米佐剂及其制备方法与应用

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3790665A (en) 1968-02-23 1974-02-05 Haver Lockhart Labor Inc Injectable adjuvant,method of preparing same and compositions including such adjuvant
US4606918A (en) 1983-08-22 1986-08-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants
JPH0832637B2 (ja) 1985-02-14 1996-03-29 アクゾ・エヌ・ヴエー 合成免疫原
ES2052685T3 (es) 1987-03-17 1994-07-16 Akzo Nv Metodo para producir un adyuvante libre.
ES2097840T3 (es) * 1987-11-03 1997-04-16 Syntex Inc Adyuvante de vacuna que comprende un tetrapoliol.
ZA906806B (en) * 1989-08-31 1991-06-26 Ici Australia Operations Plants
WO1991018627A1 (en) * 1990-05-29 1991-12-12 Smithkline Beecham Corporation Swine pneumonia vaccine and method for the preparation thereof
US5565205A (en) 1990-08-16 1996-10-15 Solvay Animal Health, Inc. Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof
US5338543A (en) 1992-02-27 1994-08-16 Ambico, Inc. Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine
KR100374434B1 (ko) * 1994-05-10 2003-06-09 와이어쓰 변형된소호흡관련합포체바이러스(brsv)생백신조성물
UA78180C2 (uk) * 1997-10-03 2007-03-15 Меріаль Кільцевий вірус свині типу ii, вакцини та діагностичні реагенти
US6517843B1 (en) * 1999-08-31 2003-02-11 Merial Reduction of porcine circovirus-2 viral load with inactivated PCV-2
US6632439B2 (en) * 1999-09-29 2003-10-14 Novartis Animal Health, Inc. Fusobacterium necrophorum vaccine and method for making such vaccine
US6585981B1 (en) * 2000-07-27 2003-07-01 Regents Of The University Of Minnesota Temperature-sensitive live vaccine for Mycoplasma hyopneumoniae
MY129765A (en) * 2000-12-19 2007-04-30 Wyeth Corp Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine

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Publication number Publication date
US20070134269A1 (en) 2007-06-14
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