MXPA02005334A - Derivados de esteroide de 3-metileno. - Google Patents

Abstract

La invencion se refiere a un derivado de esteroide de 3-metileno que tiene la formula general (1) en donde R1 es H o junto con R3 forma un (-epoxido o R1 se encuentra ausente si existe un enlace doble 5-10 o 4-5; R2 es alquilo (C1-C5) o CF3; R3 es (H, (CH3 o junto con R1 forma un (-epoxido o R3 se encuentra ausente si existe un enlace doble 5-10; R4 es H, alquilo inferior; Y es [H, H] [OH, H], =O, [OH, alquilo inferior], [OH, alquenilo(C2-C5)], [OH, alquinilo(C2-C5)] o alquilideno(C1-C6), mediante lo cual dicho alquilo, alquenilo, alquinilo y alquilideno se halogena opcionalmente; o =NOR5, mediante lo cual R5 es H, alquilo inferior; las lineas punteadas representan un enlace doble opcional, o pro-farmacos de los mismos para el tratamiento de enfermedades artriticas y/o enfermedades autoinmunes.

Description

DERIVADOS DE ESTEROIDE DE 3-METILENO La invención se refiere a nuevos derivados de esteroide de 3-metileno con efectos terapéuticos y a la preparación de preparaciones farmacéuticas que comprenden un esteroide de 3-alquilideno. Los esteroides con substitutos de metiieno en la posición 3 del esqueleto del esteroide y 1 -2 o 4-5 enlaces dobles se conocen y reclaman útiles para uso terapéutico (BE 696,235 y BE 654,772, respectivamente). La indicación médica presumida se debe a acciones anabólicas, estrógenas y progestógenas. Ninguno de estos compuestos ha sobrevivido a las expectaciones de tal uso y no existe esperanza de utilidad como medicinas en otras áreas, aunque muchas enfermedades aún permanecen tratadas de manera no satisfactoria con fármacos actualmente disponibles. Notablemente, las enfermedades del sistema inmune, tales como artritis reumatoide y enfermedades autoinmunes, se encuentran en necesidad de mejores fármacos. Los agentes corticoesteroides son de cierta utilidad para el tratamiento de estas enfermedades, pero se necesitan mejoras con respecto a la eficacia y el número o severidad de los efectos colaterales. Esta invención proporciona derivados de esteroide de 3-metiieno y pro-fármacos de los mismos, cuyos derivados de esteroide tienen la fórmula general 1 : en donde R1 es H o junto con R3 forma un ß-epóxido o R1 se encuentra ausente si existe un 5-10 o 4-5 doble enlace; R2 es alquilo (C1-C5) o CF3; R3 es ßH, ßCH3 o junto con R1 forma un ß-epóxido o R3 se encuentra ausente si existe un enlace doble 5-10; R4 es H, alquilo inferior; Y es [H , H] [OH, H], [OH, alquilo inferior], [OH, alquenilo(C2-Cs)], [OH, alquinilo(C2-C5)] o alquilideno(C?-C6), mediante lo cual dicho alquilo, alquenilo, alquinilo y alquilideno se halógena opcionalmente; o =NORs, mediante lo cual R5 es H, alquilo inferior. Las líneas punteadas representan un enlace doble opcional. De acuerdo con la invención, los compuestos preferidos son aquellos en donde R4 es H e Y es [OH, H], =O, [OH, alquilo inferior], [OH, alquenilo(C2-C3)], [OH, alquinilo(C2-Cs)] o alquilideno(C?-C6), mediante lo cual dicho alquilo, alquenilo, alquinilo y alquilideno pudieran opcionalmente halogenarse. En esta descripción los términos tienen el siguiente significado: Un alquilo inferior es un grupo alquilo ramificado o no ramificado que tiene preferentemente 1 -6 átomos de carbono, como hexilo, isobutilo, butilo terciario, propilo, isopropilo, etilo y metilo. Los más preferidos son grupos alquilo que tienen 1 -3 átomos de carbono. AIquilo(C?-C5) es un grupo alquilo ramificado o no ramificado que tiene 1-5 átomos de carbono, por ejemplo, metilo, etilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, tert-butilo, etc. ; los grupos alquilo preferidos tienen 1 -3 átomos de carbono. Alquenilo(C2-C5) es un grupo alquenilo ramificado o no ramificado que tiene de 2 a 5 átomos de carbono, tales como etenilo, 2-butenilo, etc. Los grupos alquenilo preferidos son los que tienen 2-3 átomos de carbono. Alquinilo(C2-Cs) es un grupo alquinilo ramificado o no ramificado que tiene 2-5 átomos de carbono, tales como etinilo y propinilo, etc. Los grupos alquinilo preferidos son los que tienen 2-3 átomos de carbono. Alquilideno(C?-C5) es un grupo alquilideno ramificado o no ramificado que tiene 1 -5 átomos de carbono, tal como metenilo, butilideno, etc. Los grupos alquilideno preferidos son los que tienen 2-3 átomos de carbono. Halógeno es flúor, cloro, bromo y yodo. Los pro-fármacos son compuestos que se encuentran diseñados para formar un compuesto de la invención en el cuerpo de un recipiente para tratamiento. En general, tales pro-fármacos pueden ser esteres o éteres de la función 17-hidróxilo. Una modalidad preferida de esta invención es un compuesto según se describe con anterioridad, que tiene un enlace doble 5-10. El más preferido es el compuesto (7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregn-5(10)-en-20-in-17-ol. Se excluyen de la invención los compuestos (7a, 17ß)-7a-metil-3-metileno-4-estren-17-ol, (7 , 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregn-4-eno-17-ol, (7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19,21 -dinorpregn-4- eno-17-oI, (7a)-17-queto-7-metil-3-metileno-4-estreno. (7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregn-4-en-20-in-17-ol, 17ß-hidroxi-7a-metil-3-metileno- 17a-propen-2-iI-4-estreno y 17ß-hidroxi-7a-metil-3-metileno-17a-buten-2-il-4-estreno. La discriminación se relaciona con las exposiciones en BE 696,235. Los compuestos epóxidos (R^ y R3 forman juntos ß-O-) de esta invención pueden prepararse mediante oxidación de un compuesto que tiene la fórmula 2 en la cual los símbolos tienen el significado descrito con anterioridad, con ácido metacloroperoxibenzóico Fórmula 2 El grupo 3-metileno en un compuesto de la invención puede obtenerse al llevar a cabo una reacción Wittig mediante el uso de bromuro de metiltrifenilfosfonio y t-butóxido de potasio con esteroides precursores de 3-queto correspondientes, los cuales se caracterizan por la fórmula 3, en donde Y2 es como Y, según se define arriba, excepto que no es =O y los otros símbolos tienen el significado definido con anterioridad.

Fórmula 3 Los compuestos 17-alquilideno de la invención pueden prepararse mediante una reacción Wittig de un derivado 3-quetal del derivado 17-queto de acuerdo a la fórmula 4, en donde los símbolos tienen el significado definido con anterioridad, con un bromuro de alquiltrifenilfosfonio seguido por la hidrólisis de la función 3-quetal. Los compuestos que tienen Y=H, H en la posición 17 (fórmula 2) de la invención, pueden prepararse mediante reducción Wolf-Kishner del elemento 17-queto del compuesto 3-quetal de la fórmula 4, en donde los símbolos tienen el significado definido con anterioridad. Los derivados 17-oxima de la invención pueden prepararse mediante condensación de la función 17-queto (fórmula 4) con derivados de hidroxilamina. El compuesto 16-alquilo de la invención puede prepararse mediante alquilación de la posición 16 del compuesto 17-queto (Y=O, fórmula 4).

Fórmula 4 Los reactivos arriba indicados para la transformación de los compuestos de inicio y sus maneras de reaccionar con los compuestos se conocen en la materia pero aún no se aplican para el grupo de compuestos a prepararse para obtener los compuestos de la invención. Los materiales de inicio pueden obtenerse mediante métodos descritos en la literatura. Una referencia específicamente relevante es Van Vliet ef al. , Red. Trav. Chim. Pays-Bas; EN; 105; 4; 1986; 1 1 1-1 15, cuyo texto se incorpora en esta descripción a manera de referencia. Notablemente, se describe en la misma que los derivados de 17-alquil-3-queto de acuerdo a la fórmula 3, en donde Y2 es [OH, alquilo inferior] y los otros símbolos tienen el significado definido con anterioridad, pueden obtenerse mediante hidrogenación catalítica, por ejemplo, con PtO2/H2, de un compuesto de acuerdo a la fórmula 3, en donde Y2 es [OH, alquenilo] u [OH, alquinilo] y los otros símbolos tienen el significado definido con anterioridad. Los derivados de acuerdo a la fórmula 5 pueden obtenerse mediante purificación a partir de una mezcla de compuestos formados después de la reducción Birch del derivado 4-en-3-ona de acuerdo a la fórmula 6, mediante lo cual, tanto en la fórmula 5 como en la fórmula 6, los símbolos tienen los significados definidos con anterioridad.

Fórmula 5 Fórmula 6 Un derivado de 4-en-3-ona de acuerdo a la fórmula 6, en donde R3 es H y los otros símbolos tienen el significado definido con anterioridad, puede obtenerse a partir de un compuesto de acuerdo a la fórmula 7 mediante isomerización de doble enlace (de acuerdo a los métodos descritos en van Vliet eí al. , 1986).

Fórmula 7 Un derivado de 4-en-3-ona de acuerdo a la fórmula 6, en donde R3 es metilo y los otros símbolos tienen los significados definidos con anterioridad, puede obtenerse de acuerdo a los métodos descritos en Grun ell et al. , Stereoids, Vol. 27, páginas 759-771 , 1976, cuya publicación se incorpora en la presente para referencia. Los métodos adicionales para obtener compuestos de acuerdo a la fórmula 7 como material de inicio pueden prepararse según se describe por van Vliet et al., 1986. El uso de compuestos según se define por la fórmula 1 es para inmunomodulación en mamíferos. Un compuesto de esta invención puede utilizarse en particular para el tratamiento de enfermedades artríticas tales como artritis reumatoide (RA) y enfermedades autoinmunes (AIDs) tales como síndrome de Sjógren y eritematosus de lupus sistémico (SLE). También puede utilizarse profilácticamente para tales enfermedades. Además, un compuesto de acuerdo a esta invención puede utilizarse para la preparación de medicinas que comprenden un compuesto de esta invención como un constituyente activo. La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende el compuesto esteroide de acuerdo a la invención, mezclado con uno o más auxiliares farmacéuticamente aceptables, tales como los descritos en la referencia estándar de Gennaro et al. , Remmington's Pharmaceutical Sciences, (18th ed. , Mack Publishing Company, 1990, ver especialmente Parte 8: Preparaciones Farmacéuticas y su Elaboración). Una mezcla de uno o más de los compuestos esteroides de acuerdo a la invención y uno o más auxiliares farmacéuticamente aceptables puede comprimirse en unidades de dosis sólidas, tales como pildoras, tabletas, o puede procesarse en cápsulas o supositorios. Por medio de un líquido farmacéuticamente aceptable, los compuestos también pueden aplicarse como una preparación de inyección en la forma de una solución, suspensión, emulsión o como un rocío, por ejemplo, rocío nasal. Para la elaboración de unidades de dosis, por ejemplo, tabletas, se contempla el uso de aditivos convencionales tales como materiales de relleno, colorantes, aglutinantes poliméricos y lo similar. En general, puede utilizarse cualquier aditivo farmacéuticamente aceptable que no interfiera con la función de los compuestos activos. Los compuestos esteroides de la invención también pueden incluirse en un implante, un parche, un gel y cualquier otra preparación para liberación prolongada. Los vehículos adecuados con los cuales pueden administrarse las composiciones incluyen lactosa, almidón, derivados de celulosa y lo similar, o mezclas de los mismos utilizados en cantidades adecuadas. En otro aspecto, la invención se refiere al uso del compuesto esteroide de acuerdo con la invención para la elaboración de un medicamento para la modulación del sistema inmune de un mamífero. Más específicamente, la invención se refiere al uso del compuesto esteroide de acuerdo a la invención para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de enfermedades artríticas tales como artritis reumatoide (RA) y enfermedades autoinmunes (AIDs) tales como síndrome de Sjógren y eritematosus de lupus sistémico (SLE). Tales medicamentos también pueden prepararse para uso profiláctico para tales enfermedades. El medicamento se elabora preferentemente adecuado, en particular para el tratamiento de seres humanos, al cumplir con las normas de las autoridades de salud en diversos países. El uso de derivados de esteroide de 3-metileno (7a, 17ß)-7a-metil-3-metiieno-4-estren-17-ol, (7a, 17a)-7-metil-3-meti leño- 19-norpregnr4-eno- 17-ol, (7a, 17a)-7-metil-3-metileno- 19,21 -dinorpregn-4-eno-17-ol, (7a)-17-queto-7-metíl-3-metileno-4-estreno, (7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregn-4-en-20-in-17-ol, 17ß-hidroxi-7a-metil-3-metileno-17a-propen-2-il-4-estreno y 17ß-hidroxi-7a-metil-3-metileno-17a-buten-2-il-4-estreno, se encuentra dentro del ámbito de la presente invención. Además, la invención se refiere al tratamiento de enfermedades artríticas tales como artritis reumatoide (RA) y enfermedades autoinmunes (AIDs) tales como síndrome de Sjógren y eritematosus de lupus sistémico (SLE), que comprende la administración a un paciente de un compuesto como se describió previamente (en una forma de dosis farmacéutica aceptable). Las cantidades de dosis de los presentes esteroides se encontrarán en el rango de desde 0.001 l?asta 100 mg por administración de un sujeto que necesite el tratamiento. En consecuencia, las unidades de dosis para uso práctico de un compuesto de esta invención pueden contener una cantidad de ingrediente activo en el rango de desde 0.001 hasta 100 mg. Las propiedades inmunomoduladoras de un compuesto de esta invención pueden demostrarse y utilizarse en los siguientes procedimientos.

En el procedimiento de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH), el efecto de un compuesto en el desarrollo de una reacción inmune puede observarse en los ratones (detalles en el ejemplo 16). En resumen, el compuesto se administra diariamente y los animales se inmunizan de manera subsecuente con un antígeno en adyuvante. Después de 7 días, los animales se estimulan localmente mediante inyección del antígeno de manera local (la mayoría en el pie) y la medición del subsecuente desarrollo de hinchazón local en respuesta a la deposición del antígeno. El grado de esta hinchazón se relaciona con el desarrollo de una respuesta inmune contra la producción de antígeno. La acción inhibidora de un compuesto de esta invención en el desarrollo de esta hinchazón puede determinarse al comparar el grupo de tratamiento con un grupo tratado con placebo. Como un tratamiento de referencia, puede utilizarse la administración de glucocorticoides. El efecto de un compuesto de esta invención también se examinó en ratones artríticos. En este procedimiento, los ratones se inmunizan con colágeno tipo II, la mayoría proveniente de cartílago bovino, en un adyuvante. Después de tres semanas, se da un refuerzo con el mismo antígeno. Aproximadamente 7-10 días después de la reacción al refuerzo, puede observarse el edema de las articulaciones (especialmente en la mano o patas delanteras). Esta hinchazón se incrementa rápidamente, conduciendo al enrojecimiento, inflamación y distorsión de la función normal. Después de análisis con rayos X, puede observarse la interrupción de la arquitectura de una articulación normal. Después de la examinación histológica de estas articulaciones, puede observarse una severa inflamación que conduce a la interrupción de la arquitectura de un cartílago normal. Puede determinarse el grado de alteraciones observables; además, también puede determinarse el grado de alteraciones histológicas. Además, el efecto de un compuesto en esta invención puede observarse en ratones diabéticos no obesos (NOD). En este procedimiento, los ratones desarrollan de manera espontánea y gradual enfermedades auto-inmunes con síntomas que se asemejan a aquellos de la diabetes mellitus (I DDM) y el síndrome de Sjógren dependientes de insulina humana. El síndrome de Sjógren se caracteriza por el desarrollo de infiltrados en la glándula salival y lagrimal. Especialmente en ratones NOD, la glándula salival se caracteriza por el desarrollo gradual de infiltrados. Un compuesto de esta invención inhibe, mediante dependencia de la dosis, el desarrollo de estos infiltrados en las glándulas sub-mandibulares. La IDDM se caracteriza por el desarrollo de infiltrados en el páncreas, conduciendo a la destrucción de las isletas de Langerhans mediante la producción de insulina. Después de la destrucción gradual de todas estas isletas, ya no se presenta producción de insulina, dando como resultado el desarrollo de IDDM. La invención se ilustra en los siguientes ejemplos.

Ejemplo 1 Preparación de (7 , 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregn-5(10)-en-20-in-17-oi Se agregó bromuro de metiltrifenilfosfonio (26.4 g, 73.9 mmol) a una solución agitada de t-butóxido de potasio (7.9 g, 70.4 mmol) en 130 ml de THF seco bajo una atmósfera de nitrógeno. La suspensión amarilla se agitó durante 45 minutos a temperatura ambiente. Se agregó rápidamente (aproximadamente 30 segundos) una solución de 20 g, 64 mmol de tibolona en 200 ml de THF seco a la suspensión, dando como resultado una reacción ligeramente exotérmica (desde 20°C hasta 33°C). La mezcla de reacción amarilla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente, se vació sobre agua helada (700 ml) y se extrajo con acetato de etilo (700 ml). La capa orgánica se enjuagó con agua (300 ml), se secó (Na2SO4) y se evaporó hasta la sequía para dar 41 .8 g de un aceite amarillo. La cromatografía de columna mediante el uso de tolueno/acetato de etilo 95/5 (% en v/v) como eluyente dio 19.5 g de un aceite incoloro que contiene aproximadamente 90% de (7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregn-5(10)-en-20-in-17-ol y 10% de derivado isomérico ?4. La recristalización (3 veces) mediante el uso de heptano/éter de petróleo como solvente dio el compuesto principal (6.44 g, rendimiento de 32%) como un sólido blanco, mp 91 .6°C.

Ejemplo 2 Preparación de (7 , 17ß)-7-metil-3-metilenoestr-5(10)-en-17-ol Se agregó bromuro de metiltrifenilfosfonio (4.21 g, 1 1.8 mmol) a una solución agitada de t-butóxido de potasio (1 .26 g, 1 1 .2 mmol) en 20 mi de THF seco bajo una atmósfera de nitrógeno. La suspensión amarilla se agitó durante 45 minutos a temperatura ambiente. Se agregó rápidamente una solución de (7a, 17ß)-7-metil-3-queto-estr-5(10)-en-17-ol (3.4 g, 1 1.8 mmol) en 25 ml de THF seco a la suspensión. La mezcla de reacción amarilla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente, se vació sobre agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se enjuagó con agua, se secó (Na2SO4) y se evaporó hasta la sequía para dar 5.3 g del compuesto principal como un aceite amarillo. La cromatografía de columna mediante el uso de tolueno/acetato de etilo 95/5 (% en v/v) como eluyente dio 2.3 g de un aceite incoloro. La cristalización mediante el uso de heptano/éter de petróleo dio (7a, 17ß)-7-metil-3-meti!enoestr-5(10)-en-17-ol (1 .47 g, 44%) como un sólido blanco, mp 11 1 .8°C Ejemplo 3 Preparación de (5ß,7a, 17a)-5, 10-epoxi-7-met¡l-3-metileno-19-norpregn-20-in-17-ol El compuesto (7a, 17 )-7-metil-3-metileno-19-norpregn-5(10)-en-20-in-17-ol (390 mg, 1.26 mmol) obtenido de acuerdo al ejemplo 1 , se agitó en 15 ml de diclorometano seco bajo una atmósfera de nitrógeno. La solución se enfrió hasta 0°C y se agregó ácido meta-cloroperoxibenzóico (1 .26 mmol, 310 mg 70% mcpba). La mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a 0°C, se enjuagó con una solución saturada de tiosulfato de sodio, solución saturada de bicarbonato de sodio y una solución saturada de cloruro de sodio, se secó (Na2SO4) y se evaporó hasta la sequía para dar 450 mg de (5ß,7a, 17a)-5, 10-epoxi-7-metil-3-metileno-19-norpregn-20-in-17-ol crudo. La cromatografía de columna mediante el uso de heptano/acetato de etilo 95/5 (% en v/v) como eluyente, dio el compuesto principal purificado (150 mg, 37%) como espuma.

Ejemplo 4 Preparación de (5ß,7a, 17ß)-5.10-epoxi-7-metil-3-metilenoestran-17-ol El compuesto (7a.17ß)-7-metil-3-metilenoestr-5(10)-en-17-ol (350 mg, 1 .22 mmol) obtenido de acuerdo al ejemplo 2, se agitó en 15 ml de diclorometano seco bajo una atmósfera de nitrógeno. La solución se enfrió hasta 0°C y después se agregó ácido meta-cloroperoxibenzóico (1 .22 mmol, 301 mg 70% mcpba). La mezcla de reacción se agitó durante 75 minutos a 0°C, se enjuagó con una solución saturada de tiosulfato de sodio, solución saturada de bicarbonato de sodio y una solución saturada de cloruro de sodio, se secó (Na2SO4) y se evaporó hasta la sequía para dar 370 mg de (5ß,7a, 17ß)-5, 10-epoxi-7-metil-3-metilenoestran-17-ol crudo. La cromatografía de columna mediante el uso de heptano/acetato de etilo 95/5 (% en v/v) como eluyente, dio el compuesto principal purificado de manera adicional (230 mg, 63%). La cristalización mediante el uso de heptano/acetato de etilo 95/5 (% en v/v) dio el compuesto principal purificado (120 mg, 33%) como un sólido blanco, mp 125°C.

Ejemplo 5 Preparación de (~5a,7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregn-20-en-17-ol Se agregó bromuro de metiltrifenilfosfonio (688 mg, 1 .93 mmol) a una solución agitada de t-butóxido de potasio (196 mg, 1 .75 mmol) en 2 mi de THF seco bajo una atmósfera de nitrógeno. La suspensión amarilla se agitó durante 45 minutos a temperatura ambiente. Se agregó rápidamente una solución de (5a,7a, 17a)-7-metil-3-queto-19-norpregn-20-en-17-ol (220 mg, 0.7 mmol) en 3 ml de THF seco a la suspensión. La mezcla de reacción amarilla se agitó durante 2.5 horas a temperatura ambiente, se vació sobre agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se enjuagó con agua, se secó (Na2SO4) y se evaporó hasta la sequía para dar 500 mg de un aceite. La cromatografía de columna mediante el uso de tolueno/acetato de etilo 95/5 (% en v/v) como eluyente dio 200 mg de (5a,7a, 17a)-7-metil-3-met¡leno-19-norpregn-20-en-17-ol. La cristalización a partir de heptano dio el compuesto principal purificado (120 mg, 55%) como un sólido blanco, mp 105°C.

Ejemplo 6 Preparación de (5a.7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregn-20-in-17-ol Se agregó bromuro de metiltrifenilfosfonio (1 .85 g, 5.18 mmol) a una solución agitada de t-butóxido de potasio (527 mg, 4.7 mmol) en 4 ml de THF seco bajo una atmósfera de nitrógeno. La suspensión amarilla se agitó durante 45 minutos a temperatura ambiente. Se agregó rápidamente una solución de (5a,7a, 17a)-7-metil-3-queto-19-norpregn-20-in-17-ol (590 mg, 1 .88 mmol) en 8 ml de TH F seco a la suspensión. La mezcla de reacción amarilla se agitó durante 2.5 horas a temperatura ambiente, se vació sobre agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se enjuagó con agua, se secó (Na2SO ) y se evaporó hasta la sequía para dar 1 .8 g de un aceite. La cromatografía de columna mediante el uso de tolueno/acetato de etilo 95/5 (% en v/v) como eluyente dio 590 mg de (5a,7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregn-20-in-17-ol crudo. La cristalización a partir de heptano dio el compuesto principal purificado (290 mg, 50%) como un sólido blanco, mp 97°C.

Ejemplo 7 Preparación de (5ß.7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregnan-17-ol Se agregó bromuro de metiltrifenilfosfonio (5.4 g, 15.1 mmol) a una solución agitada de t-butóxido de potasio (1 .62 g, 14.4 mmol) en 27 ml de THF seco bajo una atmósfera de nitrógeno. La suspensión amarilla se agitó durante 40 minutos a temperatura ambiente. Se agregó rápidamente una solución de (5ß,7a, 17a)-7-metil-3-queto-19-norpregnan-17-ol (4.56 g, 14.4 mmol) en 50 ml de THF seco a la suspensión. La mezcla de reacción amarilla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente, se vació sobre agua helada y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se enjuagó con agua y solución salina, se secó (Na2SO4) y se evaporó hasta la sequía para dar 8.2 g de un aceite. La cromatografía de columna mediante el uso de tolueno/acetato de etilo 95/5 (% en v/v) como eluyente dio (5ß,7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregnan-17-ol (3.65 g, 81 %) que se solidificó después de un tiempo, mp 104°C.

Ejemplo 8 Preparación de (7a)-7-metil-3, 17-dimetilenoestr-5(10)eno Se agregó bromuro de metiltrifenilfosfonio (2.2 g, 6 mmol) a una solución agitada de t-butóxido de potasio (680 mg, 6 mmol) en 25 ml de THF seco bajo una atmósfera de nitrógeno. La suspensión amarilla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente. Se agregó rápidamente (aproximadamente 30 segundos) una solución de (7a)-7-metil-3-queto-17-metilenoestr-5(10)eno (850 mg, 3 mmol) en 25 ml de THF seco a la suspensión, dando como resultado una reacción ligeramente exotérmica. La mezcla de reacción amarilla se agitó durante 30 minutos a temperatura ambiente, se vació sobre agua helada (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml). La capa orgánica se enjuagó con agua (50 ml), se secó (Na2SO ) y se evaporó hasta la sequía para dar (7a)-7-metil-3, 17-dimetilenoestr-5(10)eno (680 mg, 80%) como un aceite incoloro. [a]D + 115° (c 0.185 en etanol).

Ejemplo 9 Preparación de (7a, 16a, 17ß)-7, 16-dimetil-3-metileno-17-(1 -propinil)estr-5(10)-en-17-ol Una solución de (7a)-3,3-dimetoxi-7-metilestr-5(10)-en-17-ona (1.5 g, 4.5 mmol) y 1 ,3-dimetil-3,4,5,6-tetrahidro-2(1 H)-pirimidinona (DMPU, 1.2 mL, 9.9 mmol) en 30 mL dest. Se agregó THF en aproximadamente 8 minutos a una solución agitada de bis(trimetilsilil)amida de litio (LiHMDS, 4.96 mL, 1 M en THF) en 15 mL de THF destilado a -40°C bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos a -40°C. Una solución de yodometano (730 µL, 1 1 .7 mmol) en 1 mL dest. Se agregó THF y se agitó durante 1 hora y la temperatura se permitió calentar hasta 0°C. Se agregaron agua y solución saturada de cloruro de amoniaco y se extrajeron con acetato de etilo. La capa orgánica se enjuagó con solución salina, se secó (Na2SO4) y se evaporó hasta la sequía. La cromatografía de columna mediante el uso de heptano/acetato de etilo 95/5 (% en v/v) como eluyente dio (7a, 16a)-3,3-dimetoxi-7, 16-dimetilestr-5(10)-en-17-ona (990 mg, rendimiento 65%). Se burbujeó propino (aproximadamente 4 g, 100 mmol) a través de una solución de n-BuLi (9 mL, 1 .6M en hexano) en 19 mL de THF seco a -70°C para dar una reacción exotérmica (desde — 70°C hasta -30°C). En aproximadamente 5 minutos se agregó una solución de (7a,16a)-3,3-dimetoxi-7, 16-dimetilestr-5(10)-en-17-ona (990 mg, 2.86 mmol) en 10 mL de THF seco a la suspensión blanca bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos y la temperatura se permitió calentar lentamente hasta temperatura ambiente. Se agregaron agua y solución saturada de cloruro de amoniaco y se extrajeron con acetato de etilo. La capa orgánica se enjuagó con solución salina, se secó (Na2SO4) y se evaporó hasta la sequía para dar (7a, 16 , 17ß)-3,3-dimetoxi-7, 16-dimetil-17-(1-propinil)estr-5(10)-en-17-ol. Se agregó una solución de ácido oxálico (72 mg, 0.57 mmol) en 6 mL de agua a la solución de (7a, 16a, 17ß)-3,3-dimetoxi-7, 16-dimet¡l-17-(,1 -propinil)estr-5(10)-en-17-ol (2.86 mmol) en 25 mL de etanol y la mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos a temperatura ambiente. Se agregó una solución saturada de carbonato de hidrógeno de sodio y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se enjuagó con solución salina, se secó (Na SO4) y se evaporó hasta la sequía. . La cromatografía de columna mediante el uso de heptano/acetato de etilo 9/1 (% en v/v) como eluyente dio 7a,(16a-17ß)-7, 16-dimetil-17-hidroxi-17-(1 -propinil)estr-5(10)-en-3-ona (940 mg, rendimiento 97%). Se agregó bromuro de metiltrifenilfosfonio (1 .7 g, 4.7 mmol) a una suspensión de tert-butóxido de potasio (470 mg, 4.2 mmol) en 31 mL de tolueno seco bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó durante 45 minutos a temperatura de reflujo. La mezcla de reacción se enfrió hasta 4°C y se agregó en aproximadamente 10 minutos una solución de (7a, 16a-17ß)-7, 16-dimetil-17-hidroxi-17-(1 -propinil)estr-5(10)-en-3-ona (940 mg, 2.76 mmol) en 39 mL de tolueno seco. La mezcla de reacción se agitó durante 20 minutos a 4°C y se agregó cloruro de sodio diluido y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se enjuagó con solución salina, se secó (Na2SO4) y se evaporó hasta la sequía. La cromatografía de columna mediante el uso de heptano/acetato de etilo 95/5 (% en v/v) como eluyente dio (7a, 16a, 17ß)-7, 16-dimetil-3-metileno-17-(1-propinil)estr-5(10)-en-17-ol (630 mg, rendimiento 67%) como aceite. El producto se liofilizó a partir de dioxano. [a]D + 83° (c 0.15 en etanol).

Ejemplo 10 Síntesis de (7a, 16a.17ß)-16-etil-7-metil-3-metileno-17-(1 -propiníl)estr-5(10)-en-17-ol Este compuesto se preparó de acuerdo a los métodos descritos arriba comenzando a partir de (7a)-3,3-dimetoxi-7-metilestr-5(10)-en-17-ona y etilyoduro, [a]D + 54° (c 0.13 en etanol).

Ejemplo 1 1 Síntesis de (7a, 17ß)-7-metil-3-metileno-17-(1-propinil)estr-5(10)-en-17-ol Este compuesto se preparó de acuerdo a los métodos descritos arriba comenzando a partir de (7a)-3,3-dimetoxi-7-metilestr-5(10)-en-17-ona. [a]D + 80° (c 0.14 en etanol).

Ejemplo 12 Síntesis de (7a.16ß.17ß)-16-etil-7-metil-3-metileno-19-norpregn-5('10)-en-20-in-17-ol Este compuesto se preparó de acuerdo a la síntesis descrita arriba comenzando a partir de (7a)-3,3-dimetoxi-7-metilestr-5(10)-en-17-ona. [ ]D + 94° (c 0.10 en etanol).

Ejemplo 13 Preparación de (7a)-3-metileno-7-metílestr-5(10)-eno Se agregaron hidróxido de potasio (1 .5 g, 27 mmol) y monohidrato de hidracina (3 ml, 62 mmol) a una suspensión de (7a)-3,3-dimetoxi-7-metilestr-5(10)-en-17-ona (1 g, 3 mmol) en 17 mL de dietilenoglicol a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se calentó durante 1 hora a 130°C seguida por 1 hora y 15 minutos a 230°C. Se utilizó una trampa Dean-Stark para retirar el agua y el exceso de hidrazina. La mezcla de reacción se enfrió hasta por debajo de la temperatura ambiente y se agregó agua y se extrajo con acetato de etilo. La capa orgánica se enjuagó con solución salina, se secó (Na2SO4) y se evaporó hasta la sequía para dar el producto crudo (7a)-3,3-dimetoxi-7-metilestr-5(10)-eno, el cual se convirtió en (7a, 16a, 17ß)-7, 16-dimetil-3-metileno-17-(1-propinil)estr-5(1 0)-en-17-ol de acuerdo a los procedimientos arriba descritos, mp 57°C.

Ejemplo 14 Síntesis de O-metiloxima de (7a)-3-metileno-7-metilestr-5(10)-en-17-ona Se agregó (7a)-3,3-dimetoxi-7-metilestr-5(10)-en-17-ona (100 mg, 0.3 mmol) a una solución de metoxilamina, HCl (100 mg, 1 .2 mmol) y acetato de sodio (123 mg, 1.5 mr?ol) en 6 mL de MeOH. La mezcla de reacción se agitó durante 3 días a temperatura ambiente. Se agregaron agua y una solución saturada de carbonato de hidrógeno de sodio y se extrajeron con acetato de etilo. La capa orgánica se enjuagó con solución salina, se secó (Na2SO4) y se evaporó hasta la sequía para dar la O-metiloxima de (7a)-3,3-dimetoxi-7-metilestr-5(10)-en-17-ona cruda, la cual se convirtió en O-metiloxima de (7a)-3-metileno-7-metilestr-5(10)-en-17-ona de acuerdo a los métodos arriba descritos, [a]D + 149° (c 0.1 1 en etanol).

Ejemplo 15 Síntesis de oxima de (7 )-3-metileno-7-metilestr-5(10)-en-17-ona Esta oxima se preparó a partir de (7a)-3,3-dimetoxi-7-metilestr-5(10)-en-17-ona e hidroxilamina. HCl de acuerdo con los métodos arriba descritos, mp 149°C.

Ejemplo 16 Reacción de hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) Se utilizaron grupos de ocho ratones hembra Balb/c (Harían, Zeist, Países Bajos), de aproximadamente 8 semanas de edad al inicio del experimento. Estos ratones se alojaron en jaulas Macrolon, bajo condiciones estándares y se aclimataron durante 3-5 días antes del inicio del experimento. Los grupos recibieron ya sea compuesto o placebo. Se pesaron el día 1 y el último día del tratamiento. Los animales se trataron una vez al día mediante inyección subcutánea (se) en la parte posterior del cuello o mediante dosis oral desde el día 1 hasta el día 1 1 con un compuesto de prueba en una concentración que varía desde 1.2, 3, 4, 6 hasta 12 mg/kg. El volumen de la inyección fue de 0.1 mL de un vehículo para la inyección que consiste en solución salina fisiológica que contiene 0.5% de gelatina y 5% de mannitol. En cada experimento se incluyeron un grupo tratado con placebo (solamente vehículo) y un grupo tratado con 4 mg/kg de dexametasona como compuesto de referencia. El día 2, los animales se inmunizaron con 0.1 ml de una suspensión estable de 3.75 Lf de antígeno Toxoide de Tétanos (TT de RIVM, Zeist, Países Bajos) en 1 mg/ml de bromuro de dioctadecilamoniaco de dimetilo (DDA) de Phase Sep, en dos lugares en el pecho de manera intradérmica. El día 9, los animales se estimularon en el lado ventral de la pata derecha con 0.05 mL de una solución que contiene 50 Lf de TT y 1 mg de AI(OH)3 por mL. La pata izquierda (L) (control) recibió el vehículo con AI(OH)3 solamente. Después de 24 y 48 horas, el grosor de las patas izquierda y derecha (parámetros L y R, respectivamente) se midieron con un densitómetro de calibres en mm y el porcentaje de hinchazón de la pata específica de antígeno se calculó de acuerdo con la fórmula: [(R - L) / L] x 100% Resultados Ejemplo 17 Ratones diabéticos no obesos (NOD) Los ratones NOD utilizados, ya sea alimentados en casa (pares de crianza originalmente obtenidos en Hattori, Boston, EUA, en la generación 58) u obtenidos en Bomholtgárd (Dinamarca) a 6-7 semanas de edad. Solamente se utilizaron ratones hembra para determinar los efectos de compuestos sobre el desarrollo de sialoadenitis espontánea, según se caracteriza por infiltraciones de leucocitos en glándulas sub-mandibulares. Los grupos de 6-8 ratones hembra se alojaron bajo condiciones estándares y se trataron una vez al día (ya sea se. u oralmente) desde la semana 8 hasta 14 o 20 semanas de edad con 0.1 ml de compuesto (concentración 1.2, 4, o 12 mg/kg/día)o placebo (solamente vehículo) o no se trataron. A partir de la semana 12 en adelante, fueron examinadas cada semana respecto a la presencia de glucosa urinaria (prueba Diabur 5000, Boehringer Mannheim). En la semana 8 (grupo de pre-tratamiento) o en la semana 14 o 20, después de respectivamente 6 o 12 semanas de tratamiento, los animales fueron asesinados bajo anestesia; se retiraron los órganos, se les extirpó la grasa y se pesaron. Las glándulas sub-mandibulares se fijaron en sublimato-formol durante 18-24 horas y se transfirieron a alcohol al 70%. Las secciones de tejido se incrustaron en parafina y se tiñeron HE de acuerdo con métodos estándares. La puntuación de secciones de tejido respecto a infiltrados se llevó a cabo de manera microscópica por dos observadores independientes de acuerdo a métodos estándares. La actividad de los compuestos de esta invención puede demostrarse en esta prueba.

Ejemplo 18 Artritis de colágeno Los ratones hembra DBA-U/BOM se adquirieron en Bomholtgárd, Dinamarca. Todos los animales se alojaron bajo condiciones estándares y se aclimataron durante ai menos 7 días. A la edad de 10-12 semanas, todos los animales se inmunizaron de manera intradérmica en la base de la cola con 100 µg de una emulsión de colágeno bovino purificado tipo I I [Cl l] (2 mg/mL en 0.05 de ácido acético), se emulsificaron en volúmenes iguales de Adyuvante Completo de Freund (CFA, que contiene 4 mg/ml de MT H37Ra, Difco Laboratories, Detroit, EUA). A los 21 días después de la inmunización, se administró una inyección de refuerzo de manera intraperitoneal de 100 µg de Cll disuelto en solución salina. El tratamiento se dio una vez al día comenzando el día 1 (día antes de la inmunización) hasta la autopsia el día 44. Los grupos consistentes en 9 a 10 animales se trataron ya sea con el compuesto de prueba (1 .5 mg/kg/día hasta el día 22, a partir de ese día se reduce a 3 veces a la semana) o ciclosporina A (100 mg/kg/día inicialmente, desde el día 4, 20 mg/kg) o dexametasona (2 mg/kg/día) o vehículo (5% de Mulgofen (EL 719, GAF) en solución salina). Se incluyó un grupo de control no tratado. Los ratones se pesaron cada semana y la actividad de artritis clínica (apariencia visual de artritis en articulaciones periféricas) se midió (de acuerdo a métodos estándares) por un observador que no sabía del tratamiento dado, desde el día 19 en adelante cada 2-3 días, hasta la autopsia el día 44. La artritis clínica se calificó en una escala de 0-2 por pata y se expresó como una puntuación acumulativa de artritis por ratón con una puntuación máxima de 8. Al final del experimento, las articulaciones de rodillas y tobillos se aislaron y utilizaron para análisis de rayos X como un marcador para la destrucción ósea, seguida por fijación inmediata en 4% de formaldehído para histología. Las fotografías de rayos X se examinaron cuidadosamente mediante el uso de un estéreo microscopio y la destrucción ósea de las articulaciones se calificó en una escala de 0-5 de acuerdo a métodos estándares/variando desde sin daño hasta destrucción completa. En esta prueba puede demostrarse la actividad de los compuestos de esta invención.

Claims (7)

1. REIVINDICACIONES 1 . Un derivado de esteroide de 3-metileno caracterizado porque tiene la fórmula general 1
2. Fórmula 1 en donde R1 es H o junto con R3 forma un ß-epóxido o R1 se encuentra ausente si existe un 5-10 o 4-5 doble enlace; R2 es alquilo (Ci-Cs) o CF3; R3 es ßH, ßCH3 o junto con R1 forma un ß-epóxido o R3 se encuentra ausente si existe un enlace doble 5-10; R4 es H, alquilo inferior; Y es [H, H], =O, [OH, H], [OH, alquilo inferior], [OH, alquenilo(C2-C5)], [OH, alquinilo(C2-C3)] o alquilidenoíC^Ce), mediante lo cual dicho alquilo, alquenilo, alquinilo y alquilideno se halógena opcionalmente; o =NOR5, mediante lo cual Rd es H, alquilo inferior. las líneas punteadas representan un enlace doble opcional; o pro-fármacos de los mismos, con la condición de que el derivado de esteroide de 3-metileno no es ninguno de la lista (7a, 17ß)-7a-metil-3-metileno-4-estren-17-ol, (7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregn-4-eno-17-ol, (7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19,21 -dinorpregn-4-eno-17-ol, (7a)-17-queto-7-metil-3-metileno-4- estreno, (7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregn-4-en-20-in-17-ol, 17ß-hidroxi-7a-metil-3-metileno-17a-propen-2-il-4-estreno y 17ß-hidroxi-7a-metil-3-metileno-17a-buten-2-il-4-estreno. 2. Un derivado de esteroide de 3-metileno según la reivindicación 1 , caracterizado porque el derivado de esteroide de 3-metileno tiene un enlace doble 5-10 y R1 y R3 se encuentran ausentes.
3. 3. El derivado de esteroide de 3-metileno (7a, 17a)-7-metil-3-metileno-19-norpregn-5(10)-en-20-in-17-ol.
4. 4. Un derivado de esteroide de 3-metileno según cualquiera de las reivindicaciones 1 -3 para utilizarse como un medicamento.
5. 5. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un derivado de esteroide de 3-metileno según cualquiera de las reivindicaciones 1 -3 o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de la misma, en mezcla con un auxiliar farmacéuticamente aceptable.
6. 6. El uso de un derivado de esteroide de 3-metileno caracterizado porque tiene la fórmula general 1 Fórmula 1 en donde R1 es H o junto con R3 forma un ß-epóxido o R1 se encuentra ausente si existe un 5-10 o 4-5 doble enlace; R2 es alquilo (C1-C5) O CF3; R3 es ßH, ßCH3 o junto con R forma un ß-epóxido o R3 se encuentra ausente si existe un enlace doble 5-10; R4 es H, alquilo inferior; Y es [H, H], =O, [OH, H], [OH, alquilo inferior], [OH, alquenilo(C2-C3)], [OH, alquinilo(C -C3)] o alquilideno(d-C6), mediante lo cual dicho alquilo, alquenilo, alquinilo y alquilideno se halógena opcionalmente; o =NOR5, mediante lo cual Rs es H, alquilo inferior. las líneas punteadas representan un enlace doble opcional; o pro-fármacos de los mismos, para la preparación de una medicina para el tratamiento y/o profilaxis de enfermedades artríticas y/o enfermedades autoinmunes.
7. 7. Un método para el tratamiento y/o prevención de enfermedades artríticas y/o enfermedades autoinmunes, caracterizado por la administración de un derivado de esteroide de 3-metileno según la reivindicación 6, a un paciente que necesita de dicho tratamiento o prevención. * / -. ,' 30 - P RESUMEN La invención se refiere a un derivado de esteroide de 3-metileno que tiene la fórmula general (1 ) en donde R1 es H o junto con R3 forma un ß-epóxido o R1 se encuentra ausente si existe un enlace doble 5-10 o 4-5; R2 es alquilo (CÍ-CS) O CF3; R3 es ßH, ßCH3 o junto con R1 forma un ß-epóxido o R3 se encuentra ausente si existe un enlace doble 5-10; R4 es H, alquilo inferior; Y es [H, H] [OH, H], =O, [OH, alquilo inferior], [OH, alquen¡lo(C2-C3)], [OH, alquinilo(C2-C5)] o alquilideno(C?-C6), mediante lo cual dicho alquilo, alquenilo, alquinilo y alquilideno se halógena opcionalmente; o =NOR5, mediante lo cual Rs es H, alquilo inferior; las líneas punteadas representan un enlace doble opcional, o pro-fármacos de los mismos para el tratamiento de enfermedades artríticas y/o enfermedades autoinmunes.