MX2015001766A - Composicion farmaceutica para aumentar el contenido y la disponibilidad de adenosin monofosfato ciclico en un cuerpo y preparacion del mismo. - Google Patents

Abstract

La presente invención describe una composición farmacéutica para aumentar rápidamente un contenido y una disponibilidad de un adenosín monofosfato cíclico (cAMP) en un cuerpo, incluido: ginsenósidos Rg1, Rb1 y Re; un ácido relacionado con el género Glycyrrhiza seleccionado de un grupo que consiste en un ácido glicirrícico, un ácido glicirretínico y una combinación de los mismos; y un adenosín monofosfato cíclico de jujuba (cAMP de jujuba).

Description

COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA PARA AUMENTAR EL CONTENIDO Y LA DISPONIBILIDAD DE ADENOSÍN MONOFOSFATO CÍCLICO EN UN CUERPO Y PREPARACIÓN DEL MISMO Campo de la invención La presente invención se refiere a una composición farmaceutica, concretamente, a un medicamento oral y a un alimento para la salud.

Antecedentes de la invención Earl Wilbur Sutherland Jr., un científico que recibió el Premio Nobel de Fisiología o Medicina en 1971, descubrió un mecanismo de adenosín monofosfato cíclico (cAMP) en células. Edmond H. Fischer y Edwin G. Krebs, los científicos que recibieron el Premio Nobel de Fisiología o Medicina en 1992, descubrieron un mecanismo de cAMP ® PKA (proteína cinasa A, una proteína cinasa dependiente de cAMP) en células. Eric Kandel, un científico que recibió el Premio Nobel de Fisiología o Medicina en 2000, descubrió un mecanismo de cAMP ® PKA CREB (proteína de unión a elemento de respuesta a cAMP) en células. Resulta obvio que existe una relación total y muy significativa entre las funciones relativas de cAMP y la fisiología y medicina humanas. Por ejemplo, desde que Eric Kandel descubrió que el mecanismo de formación de la memoria a corto plazo y de la memoria a largo plazo depende de una vía de señalización “cAMP ® PKA ® CREB” (la segunda vía de transducción de señal de segundo mensajero) en células, por lo que recibió el Premio Nobel, los científicos consideran que estos resultados son claves para la invención de fármacos que mejoren la memoria. Los científicos han tratado continuamente de desarrollar un fármaco que active rápidamente la vía de transducción de señal cAMP PKA CREB en las células del cerebro para mejorar la memoria, mejorar la capacidad de aprendizaje, prevenir y curar enfermedades neurodegenerativas tales como la amnesia, la demencia, la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, etc., y prevenir y curar además otras enfermedades (tales como la depresión) relacionadas con un bajo contenido y una baja disponibilidad de cAMP en los organismos. Sin embargo, no existe ningún medicamento relevante disponible comercialmente con un uso a largo plazo adecuado para los humanos, con pocos efectos secundarios y de alta eficacia, a pesar de que Earl Wilbur Sutherland Jr. recibió el Premio Nobel de Fisiología o Medicina hace más de 30 años.

En la teenología actual, los fármacos antidepresivos comercializados, por ejemplo, los inhibidores selectivos de la recaptación de serotonina (ISRS), los inhibidores de la recaptación de serotonina-norepinefrina (IRSN), y los inhibidores de la recaptación de norepinefrina-dopamina (IRND), etc., inhiben la recaptación de los primeros neurotransmisores mensajeros, tales como la 5-hidroxitriptamina (5-HT), la norepinefrina (NE), la dopamina (DA), etc., en pacientes que padecen de depresión, que tienen una concentración del primer neurotransmisor mensajero inferior al de las personas que no padecen de depresión. Una vez que la concentración del primer neurotransmisor mensajero y su combinación con el receptor se desplaza hacia niveles normales, es posible permitir la producción de un segundo transmisor mensajero para que el cAMP en las celulas de los pacientes se desplace hacia un nivel normal. Sin embargo, la magnitud de los efectos secundarios y los bajos índices de remisión torna indeseables los fármacos contra la depresión. Sin embargo, nunca se ha presentado un informe anunciando que personas sanas estén tomando fármacos contra la depresión durante un largo período de tiempo con el fin de mejorar la memoria.

El Instituto Nacional de Salud Mental (NIMH) de los Institutos Nacionales de la Salud (NIH) de los Estados Unidos desembolsaron 35 millones de dólares y dedicaron 6 años a la investigación sobre el índice de remisión (estudio STAR*D) para 5 tipos representativos de fármacos contra la depresión de tipo ISRS (Celexa®, Zoloft®, Wellbutrin®, Effexor® y Buspar®) con más de 2800 pacientes con depresión. El informe de investigación indicaba que la tasa de remisión para cada medicamento es de tan solo aproximadamente 30%, y requiere un promedio de 6-7 semanas para aliviar los síntomas de la depresión. Además, los fármacos antidepresivos comercializados tienen diferentes niveles de efectos secundarios, tales como un aumento en la tasa de suicidios, dolores de cabeza, aturdimiento, vértigo, insomnio, hipersomnia, tinnitus, sed, apocleisis, aumento del apetito, aumento de peso, aumento de la presión sanguínea, molestias estomacales, náuseas regurgitativas, emesis, dispepsia, diarrea, estreñimiento, dolor en las piernas, exantema, indecisión nerviosa, convulsiones, hiperhidrosis, edema, pérdida de la libido e impotencia, etc. En años recientes, los fármacos antidepresivos, tales como el Prozac®, se han convertido en un grave problema social. En 2004, la Administración de Alimentos y Medicamentos (FDA) de los Estados Unidos solicitó a las compañías farmaceuticas que revisaran las etiquetas de sus productos de modo que indicaran claramente los efectos adversos y las advertencias en las instrucciones de 32 fármacos antidepresivos habituales en el mercado, e indicó a los médicos y a las enfermeras que dichos medicamentos podrían elevar las tasas de suicidios en los niños y adolescentes.

A lo largo de los años, los científicos de la industria farmacéutica de todo el mundo han tratado continuamente de desarrollar un fármaco más seguro y más eficaz con menores efectos secundarios que pueda funcionar directamente en el receptor del neurotransmisor del mensajero primario para aumentar más rápidamente la producción y la disponibilidad de los segundos transmisores mensajeros intracelulares para cAMP, para prevenir y curar las enfermedades relacionadas con un bajo nivel de cAMP intracelular. Rolipram®, un inhibidor de la fosfodiesterasa 4 (PDE4) pertenece a un tipo de fármaco mediado por mecanismos post-receptor, y los resultados experimentales indican asimismo que Rolipram® tiene un efecto antidepresivo significativo porque el cAMP generado en las células será degradado por la PDE4. Es decir, se aumenta la disponibilidad cAMP al inhibir la PDE4. Sin embargo, Roligram® no se administra ampliamente porque Rolipram® puede causar efectos secundarios tales como emesis severa, entre otros.

El inventor desarrolló una composición farmacéutica que se prepara utilizando tres plantas naturales: el ginseng, el regaliz y la jujuba, como materias primas para solventar deficiencias de la téenica anterior. La composición farmacéutica no solamente aumenta el nivel de cAMP en las células, sino que también inhibe la PDE4 al disminuir la degradación de cAMP y aumentar la disponibilidad de cAMP, y aumentar la concentración de los neurotransmisores DA y NE en el cerebro. La composición farmacéutica es muy segura para usar a largo plazo, es adecuada para tratar pacientes con depresión que necesitan tomar medicamentos por un largo período de tiempo, y es adecuada para prevenir y curar enfermedades relacionadas con bajos niveles de cAMP intracelular y con la deficiencia de neurotransmisores DA y NE. Sin embargo, la cantidad eficaz de los componentes que pueden aumentar la generación y la disponibilidad de cAMP pueden ser diferentes en cada lote de plantas naturales porque las diferencias en factores, tales como el período de crecimiento, el lugar de origen, el momento de la cosecha y el modo de presentación, el cambio climático, la temperatura, la pluviosidad, la exposición al sol, etc. Por lo tanto, cuanto más queden definidos los componentes, mayor será la cantidad de componentes activos que puedan controlarse y formularse, de modo que la eficacia y la seguridad de la composición farmacéutica permanezcan inalteradas en cada lote con el fin de mejorar el control de la calidad (es decir, química, fabricación y control (CMC)) de la composición farmacéutica. Además, si pueden determinarse los tipos de ginsenósidos presentes entre los componentes activos, puede ampliarse el intervalo de materias primas adquiridas sin reducir el suministro. Es decir, además de las raíces, tallos y hojas de ginseng, esas partes de otras plantas (tales como Panax notoginseng y Panax quinquefolius) contienen también diversos tipos de ginsenósidos que pueden utilizarse. Por lo tanto, el inventor ha tratado continuamente de dar con los componentes eficaces principales determinados con mayor precisión y sus mecanismos partiendo de resultados de investigación originales en aras de un mayor control de la calidad (es decir, CMC) de la composición farmacéutica y para ampliar las fuentes de las materias primas adquiridas. El inventor ha desarrollado una composición farmacéutica que tiene componentes eficaces principales determinados con mayor precisión que contiene ginsenósidos Rg1 y Rb1 , ácido glicirrícico (o ácido glicirretínico) y cAMP de jujuba, donde la composición farmacéutica es un fármaco mediado por mecanismo postreceptor con múltiples sitios de acción, y los ginsenósidos Rg1 y Rb1 son los principales componentes activos para mejorar la expresión del factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF).

Sin embargo, además de los ginsenósidos Rg1 y Rb1, si las raíces, los tallos y las hojas de las plantas (tales como el ginseng, Panax notoginseng, Panax quinquefolius, etc.) utilizadas para solventar el aporte insuficiente de los ginsenósidos Rg1 y Rb1 para lograr la eficacia de la composición farmacéutica anterior contienen otros tipos de ginsenósidos, se puede aumentar de forma adicional la disponibilidad de los componentes activos principales en las plantas naturales y reducir el coste. Además, la composición farmacéutica anterior incluye ácidos relacionados con las plantas del género Glycyrrhiza que pueden inducir síntomas de emesis si una persona propensa a la emesis toma regaliz. Este problema ha sido corroborado por médicos tradicionales chinos desde la antigüedad.

Es por lo tanto la invención del inventor abordar las limitaciones de la téenica anterior descritas con anterioridad.

Sumario de la invención Para solventar las deficiencias de la teenica anterior, la presente invención describe una composición farmacéutica que incluye ginsenósidos (Rg1, Rb1 y Re), ácido glicirrícico y cAMP de jujuba como componentes activos principales para aumentar rápidamente el contenido y la disponibilidad de cAMP en el cuerpo. Concretamente, la presente invención describe un fármaco oral o un alimento para la salud que puede aumentar además la disponibilidad de los componentes activos principales en las plantas naturales, reducir el coste, mejorar la vía de transducción de señal de cAMP/PKA/CREB al proporcionar una característica estable a dichos productos, y mejorar la expresión de BDNF.

El esquema de la composición farmacéutica en la presente invención es el resultado de los trabajos emprendidos por el inventor. Puesto que la técnica anterior ha demostrado que los ginsenósidos Rg1 y Rb1 pueden aumentar la expresión de BDNF en un organismo, los ginsenósidos Rg1 y Rb1 se pueden utilizar para desarrollar los principales componentes activos de los fármacos relacionados. Sin embargo, los ginsenósidos Rg1 y Rb1 no se pueden sintetizar de forma artificial utilizando la tecnología actual y deben, por lo tanto, ser obtenidos a partir de las raíces, tallos y hojas de plantas naturales tales como el ginseng, Panax notoginseng, Panax quinquefolius, etc. Puesto que existen más de 30 tipos de ginsenósidos, para aumentar de forma adicional la disponibilidad de los componentes activos principales en las plantas naturales y reducir el coste, el inventor incorporó ginsenósido Re con ginsenósidos Rg1 y Rb1 junto con ácido glicirrícico (o ácido glicirretínico) y cAMP de jujuba para formar los principales componentes activos para la preparación de una composición farmacéutica. Tras completar una cantidad sustancial de experimentos, quedó probado que la composición farmacéutica de la presente invención puede aumentar la concentración de cAMP en el hipocampo, mejorar la actividad de PKA, estimular el nivel de fosforilación CREB, e inhibir la actividad de PDE en el hipocampo en ratas normales 8 horas después de administrarles la composición farmacéutica. En un experimento de estrés repetitivo crónico, la concentración de cAMP, la actividad de PKA, la expresión de fosforilación CREB y la expresión de BDNF en los ratones a los que se había administrado la composición farmacéutica eran significativamente mayores que los de los ratones en el grupo de control a los que no se había administrado la composición farmacéutica, y las expresiones de cAMP y PKA en el hipocampo, BDNF en el suero y los neurotransmisores de monoamina (p. ej., 5-HT, NE, DA, etc.) en el hipotálamo de los ratones a los que se había “tratado” eran significativamente mayores que las de los ratones de “control”. Por lo tanto, quedó probado que la composición farmacéutica de la presente invención puede aumentar rápidamente el contenido y la disponibilidad de cAMP en un organismo. Resulta evidentemente probado que la composición farmacéutica de la presente invención tiene una buena eficacia, aumenta la disponibilidad de los componentes activos principales en las plantas naturales y reduce el coste en comparación con la téenica anterior, y que puede llevarse a cabo de forma eficaz el control de la calidad (es decir, CMC). Además, la composición farmacéutica de la presente invención es adecuada para las personas en todo el mundo porque es altamente segura para usar a largo plazo, es adecuada para tratar la depresión de pacientes que necesitan un tratamiento a largo plazo, y previene y trata las enfermedades relacionadas con bajas expresiones de cAMP y BDNF y la insuficiencia de los neurotransmisores DA y NE en el cerebro (p. ej., enfermedades neurodegenerativas tales como amnesia, demencia, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, etc., y enfermedades tales como psoriasis, cáncer, etc., en las que los enfermos tienen una baja expresión de cAMP en sus cuerpos y células). Sin embargo, puesto que la composición farmacéutica incluye un ácido relacionado con el género Glycyrrhiza, puede inducir síntomas de emesis si una persona propensa a la emesis toma regaliz (un problema que ha sido corroborado por la medicina tradicional china desde la antigüedad). Sin embargo, la medicina tradicional china también ha confirmado desde la antigüedad que el jengibre es un excelente alimento antiemético. Por lo tanto, a la composición farmacéutica de la presente invención se añaden de forma adicional polvo de jengibre o su extracto para mejorar las deficiencias de la téenica anterior.

La presente invención describe una composición farmacéutica que aumenta rápidamente el contenido y la disponibilidad de cAMP en un organismo, que se prepara utilizando materias primas que contienen los componentes activos, incluidos ginsenósidos (Rg1 , Rb1 y Re), ácido glicirrícico y cAMP de jujuba, entre otros.

El contenido central de la presente invención es la composición farmacéutica descrita en esta descripción y las reivindicaciones de la presente invención que pueden aumentar rápidamente el contenido y la disponibilidad de cAMP en un organismo. Cuando la presente invención se publique, el experto en la técnica podrá modificar los fármacos anteriores utilizando téenicas habituales, lo cual constituye una labor técnica habitual para el experto en la técnica. Por lo tanto, cualquier sustitución caerá dentro del ámbito de protección de la presente invención.

Los objetivos y ventajas anteriores de la presente invención resultarán más evidentes al experto en la técnica tras revisar las siguientes descripciones detalladas y dibujos anexos.

Breve descripción de los dibujos La Figura 1 es un diagrama de flujo que muestra un método de preparación de una composición farmacéutica de acuerdo con una primera realización preferida de la presente invención.

La Figura 2 es un diagrama de flujo que muestra un método de preparación de una composición farmacéutica de acuerdo con una segunda realización preferida de la presente invención.

La Figura 3 es un diagrama de flujo que muestra un método de preparación de una composición farmacéutica según una tercera realización preferida de la presente invención.

La Figura 4 es un diagrama de flujo que muestra un método de preparación de una composición farmacéutica según una cuarta realización preferida de la presente invención.

La Figura 5 es un diagrama que muestra el nivel de cAMP en el hipocampo de ratas, 8 horas después de administrarles la composición farmacéutica.

La Figura 6 es una foto de electroforésis en gel que muestra la actividad de PKA dependiente de cAMP (calles de izquierda a derecha: Calles 1-4: sol. salina, Calles 5-8: Paroxetina, Calles 9-11: la Realización 1, Calle 12: el control positivo, y Calle 13: el control negativo).

La Figura 7 es un diagrama que muestra la actividad de PKA dependiente de cAMP en el hipocampo de ratas, 8 horas después de haberles administrado la composición farmacéutica.

La Figura 8 es un diagrama que muestra el nivel de p-CREB en el hipocampo de ratas, 8 horas después de haberles administrado la composición farmacéutica.

La Figura 9 muestra el efecto de la Realización 1 en la concentración de cAMP en el hipocampo de ratones con estrés repetitivo.

La Figura 10 muestra el efecto de la Realización 1 en la actividad de PKA en el hipocampo de ratones con estrés crónico.

La Figura 11 muestra el efecto de la Realización 1 en la fosforilación de CREP en el hipocampo de ratones con estrés crónico.

La Figura 12 muestra el efecto de la Realización 1 en el nivel de BDNF en el hipocampo de ratones con estrés crónico.

Descripción detallada de las realizaciones preferidas A continuación se describirá la presente invención de forma más específica con relación a las siguientes realizaciones. Debe observarse que las siguientes descripciones de realizaciones preferidas de esta invención se presentan en la presente memoria con fines ilustrativos y descriptivos únicamente y no deben interpretarse como exhaustivas o limitadas a la forma precisa descrita.

Para lograr el propósito de la presente invención se describen los esquemas téenicos de la presente invención de forma específica como se indica a continuación.

La presente invención describe una composición farmacéutica que aumenta de forma rápida el contenido y la disponibilidad de cAMP en un organismo que se prepara utilizando los principales componentes activos, incluidos los ginsenósidos (Rg1, Rb1 y Re), ácido glicirrícico y adenosín monofosfato cíclico de jujuba (cAMP de jujuba).

Ejemplo 1 : La composición farmacéutica para aumentar rápidamente el contenido y la disponibilidad de cAMP en un organismo de la presente invención se prepara utilizando las materias primas que incluyen ginsenósidos (Rg1, Rb1 y Re), ácido glicirrícico o glicirretínico, y cAMP de jujuba.

Ejemplo 2: La composición farmacéutica para aumentar rápidamente el contenido y la disponibilidad de cAMP en un organismo de la presente invención se prepara utilizando las materias primas incluyendo 2~26 partes en peso de ginsenósidos (Rg1, Rb1 y Re), 3~48 partes en peso de ácido glicirrícico o ácido glicirretínico, y 0,002-0,5 partes en peso de cAMP de jujuba.

Ejemplo 3: La composición farmacéutica de la presente invención se prepara utilizando las materias primas incluyendo 4~13 partes en peso de ginsenósidos (Rg1, Rb1 y Re), 5-16 partes en peso de ácido glicirrícico o ácido glicirretínico, y 0,01-0,1 partes en peso de cAMP de jujuba.

Ejemplo 4: La composición farmacéutica de la presente invención incluye además un extracto acuoso de jengibre Ejemplo 5: La composición farmacéutica de la presente invención puede incluir vehículos o aditivos farmacológicamente aceptables, y puede fabricarse en forma de una dosis farmacéutica oral farmacéuticamente conocida como, por ejemplo, un comprimido, una cápsula, polvo, etc.

Ejemplo 6: La composición farmacéutica de la presente invención puede fabricarse como un suplemento farmacéutico, como alimento para la salud o como suplemento nutritivo para aumentar rápidamente el contenido y disponibilidad de cAMP en un organismo.

Para logar los fines de la presente invención, los métodos de preparación de la composición farmacéutica se describen del siguiente modo.

Método 1 : Los extractos que contienen ginsenósidos (Rg1, Rb1 y Re), ácido glicirrícico (o ácido glicirretínico) y cAMP de jujuba extraídos respectivamente de ginseng, regaliz y jujuba constituyen las materias primas que deben procesarse como composición farmaceutica para aumentar rápidamente el contenido y disponibilidad de cAMP en un organismo en la presente invención. De forma alternativa, se procesan como composición farmacéutica de la presente invención las materias primas preparadas que contienen ginsenósidos (Rg1, Rb1 y Re), ácido glicirrícico (o ácido glicirretínico) y cAMP de jujuba.

Método 2: La composición farmacéutica de la presente invención se fabrica utilizando las materias primas que contienen 2-26 partes en peso de ginsenósidos (Rg1, Rb1 y Re), 3~48 partes en peso de ácido glicirrícico (o ácido glicirretínico), y 0,002-0,5 partes en peso de cAMP de jujuba.

Método 3: La composición farmacéutica de la presente invención se fabrica utilizando las materias primas que contienen 4~13 partes en peso de ginsenósidos (Rg1, Rb1 y Re), 5~16 partes en peso de ácido glicirrícico (o ácido glicirretínico), y 0,01-0,1 partes en peso de cAMP de jujuba.

Método 4: La composición farmacéutica de la presente invención incluye además un extracto acuoso de jengibre Método 5: La composición farmacéutica de la presente invención puede incluir vehículos o aditivos farmacológicamente aceptables, y puede fabricarse en forma de una dosis farmacéutica oral farmacéuticamente conocida como, por ejemplo, un comprimido, cápsula, polvo, etc.

Método 6: El alimento para la salud o suplemento nutritivo para aumentar rápidamente el contenido y disponibilidad de cAMP en un organismo en la presente invención se fabrica utilizando materias primas en conformidad con normas de gestión alimentaria o métodos de producción/normas de fabricación de alimentos para la salud.

La realización preferida La presente invención queda ilustrada de forma adicional del siguiente modo mediante combinación de los dibujos con las realizaciones preferidas.

Realización 1 : Véase la Figura 1, que es un diagrama de flujo que muestra un método de preparación de una composición farmacéutica según una primera realización preferida de la presente invención. En la Figura 1, se trocean 40 kg de ginseng y se someten a continuación a extracción por calor utilizando una solución de etanol al 70%. El extracto de etanol se separa y purifica utilizando cromatografía en columna, y se seca obteniendo 1,42 kg del extracto de ginseng que contiene 270 g de ginsenósido Rg1+Rb1+Re (aproximadamente 48,4 g de Rg1, aproximadamente 176,9 g de Rb1 y aproximadamente 44,7 g de Re) (etapa 101). Además, se trocean 15 kg de regaliz y se macera a continuación a temperatura ambiente durante 12 horas. El regaliz macerado se somete a extracción utilizando decocción y sedimentación con alcohol, se concentra y se seca obteniendo 3,1 kg del extracto de regaliz que contiene 307 g de ácido glicirrícico (etapa 102). Asimismo, se trocean 10 kg de jujuba, se macera en agua a temperatura ambiente, y a continuación se somete a extracción la jujuba macerada utilizando decocción y sedimentación con alcohol para obtener el extracto de jujuba, que posteriormente se absorbe y se separa utilizando resinas macroporosas OU-2 y ME-2 de forma secuencial y se seca. Se obtiene el extracto de jujuba (40 g) que contiene 0,752 g de cAMP de jujuba y que constituye la materia prima para la preparación de la composición farmacéutica de la presente invención (etapa 103). Posteriormente, se pulveriza 144 g del extracto de ginseng, 300 g del extracto de regaliz y 3,6 g del cAMP de jujuba obtenido por el método anterior y se mezcla obteniendo 447,6 g de la composición farmacéutica (que contiene 27,4 g de ginsenósido Rg1+Rb1+Re, 29,7 g de ácido glicirrícico y 0,067 g de cAMP de jujuba) en el Ejemplo 1 en la presente invención (etapa 104).

Realización 2: Véase la Figura 2, que es un diagrama de flujo que muestra un método de preparación de una composición farmacéutica según una segunda realización preferida de la presente invención. En la Figura 2, se pulverizan 120 g del extracto de ginseng (etapa 201 ), 200 g del extracto de regaliz (etapa 202) y 0,5 g del extracto de jujuba (etapa 203) obtenido a partir de la Realización 1 y se mezcla obteniendo 320,5 g de la composición farmacéutica (que contiene 22,8 g de ginsenósido Rg1+Rb1+Re, 19,8 g de ácido glicirrícico y 0,009 g de cAMP de jujuba) del Ejemplo 2 de la presente invención (etapa 204).

Realización 3: Véase la Figura 3, que es un diagrama de flujo que muestra un método de preparación de una composición farmacéutica según una segunda realización preferida de la presente invención. En la Figura 3, se pulverizan 3,6 g del ginsenósido Rg1 preparado Rg1 con 90% de pureza (etapa 301), 3,2 g del ginsenósido Re preparado con 90% de pureza (etapa 302), 15,6 g del ginsenósido Rb1 preparado con 90% de pureza (etapa 303), 26 g de ácido glicirretínico con 96% de pureza (etapa 304) y 10 g del extracto de jujuba obtenido en la Realización 1 (etapa 305) y se mezcla obteniendo 58,4 g de la composición farmacéutica (que contiene 22,4 g de ginsenósido Rg1+Rb1+Re, 26 g de ácido glicirretínico y 0,188 g de cAMP de jujuba) del Ejemplo 3 de la presente invención (etapa 306).

Realización 4: Vease la Figura 4, que es un diagrama de flujo que muestra un método de preparación de una composición farmacéutica según una cuarta realización preferida de la presente invención. En la Figura 4, se mezclan 100 g de la composición farmacéutica del Ejemplo 1 de la presente invención obtenida en la Realización 1 (etapa 401) y 35 g de extracto de jengibre disponible comercialmente (etapa 402) y se mezcla obteniendo 135 g de la composición farmacéutica del Ejemplo 4 de la presente invención (etapa 403).

Experimento 1: Un experimento con animales para estudiar la influencia de la vía de transducción de señal cAMP/PKA/CREB 8 horas después de administrar a ratas normales la composición farmacéutica de la Realización 1. 8 horas después de administrar intragástricamente a ratas normales el fármaco de la Realización 1 , se les extrajo sus hipocampos. Las variaciones en los niveles de cAMP y fosfo-CREB (p-CREB) en los hipocampos se determinaron mediante ensayo por inmunoabsorción asociado a enzimas (ELISA), las variaciones en las actividades del PKA dependiente de cAMP se determinaron mediante ensayo de bioluminiscencia, y las variaciones en las actividades de PDE se determinaron mediante un método de fluorescencia. 8 horas después de administrar la composición farmacéutica de la Realización 1, se observa un mecanismo farmacológico molecular en el que la concentración de cAMP aumenta durante un breve período de tiempo, aumentando con ello la actividad de PKA dependiente de cAMP, estimulando el nivel de fosforilación de CREB e inhibiendo la actividad de PDE en el hipocampo. Los datos experimentales se analizaron estadísticamente y se representaron utilizando el software Origin Pro 7.5. 1. Materiales de ensayo: 1.1 Animales sometidos a ensayo: Se adquirieron setenta (70) ratas SD macho sanas con una masa corporal de 180-200 g a Vital River Laboratories (VRL), Pekín. 1.2 Reactivos: fármaco de control positivo: antidepresivo clorhidrato de Paroxetina (número de lote: 08030078, Zhong Mei Tianjin Smith Kline pharmaceuticals Co. Ltd.); kit de ensayo para AMP cíclico Parameter™, KGE002 (R&D Systems, Inc., EE. UU.); kit de ELISA DuoSet IC para humanos/ratones/ratas fosfo-CREB (S133), DYC2510-2 (R&D Systems, Inc., EE. UU.); kit de análisis para la detección no radioactiva de proteína cinasa dependiente de cAMP PepTag®, V5340 (Promega Corporation, EE. UU.); kit de análisis de fosfodiesterasa PDE-Glo™, V1361 (Promega Corporation, EE. UU.); kit de análisis de proteínas Pierce™ BCA, 23227, (Pierce Biotechnology, EE. UU.); los patrones, como el de cAMP y el de adenosina se adquirieron a los Institutos Nacionales para el Control de Alimentos y Medicamentos de China; las sustancias químicas, tales como NaH2P04, Na2HP04, KH2P04, KCI, NaCI, MgCI2, Tris Base, Tris-HCI, etc., eran los reactivos bioquímicos de grado para cultivo celular y se adquirieron a Sigma, EE. UU,; los reactivos, tales como E-64, aprotinina, leupeptina, pepstatina A, fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF), NaF, ácido etilendiaminotetraacético (EDTA), ácido etileneglicoltetraacético (EGTA), ditiotreitol (DTT), NaV04, pirofosfato sódico, agarosa, glicerol, etc., de un elevado grado de pureza fueron adquiridos a BioBasic Inc., Canadá; acetonitrilo y metanol (grado HPLC, Merck & Co., Inc., Alemania); agua ultrapura (Milli-Q®); y la composición farmacéutica de la Realización 1. 1.3 Materiales de ensayo: Lector de microplacas multimodal FlexStation® 3 (Molecular Devices Corp., EE. UU.); equipo para cromatografía líquida de alta resolución Waters® 600E (incluida la bomba cuaternaria, desgasificador en línea, automuestreador, horno de columna, y detector UV; Waters Corp., EE. UU); centrifugadora refrigerada (Backmen Coulter, Inc., EE. UU.); homogeneizador ultrasónico electrónico (Ultrasound Technology Inc., EE. UU.); equipo de electroforesis (Beijing Liuyi Instrument Factory, China); equipo de análisis de imagen para gel (SYN GENE); congelador a temperaturas ultra bajas (SANYO Electric Co., Ltd., Japón); y pipeta de canal único mLine y pipeta de 8 canales (Biohit, Finlandia). 2. Administración: alimentación adaptativa al cabo de tres días, las ratas se dividieron al azar en tres grupos, y se etiquetaron del siguiente modo: grupo A -sol. salina, grupo B - Paroxetina, y grupo C - Realización 1. Se machacaron pastillas de clorhidrato de paroxetina y se formularon para obtener una suspensión a una concentración específica utilizando agua ultrapura, y la dosis administrada intragástricamente fue de 5 mg/kg por rata. La composición de la Realización 1 se formuló para obtener una solución a una concentración específica utilizando agua ultrapura, y la dosis administrada intragástricamente fue de 50 mg/kg por rata. A las ratas del grupo salino se les administró la solución salina al 0,9% en volúmenes ¡guales. Todas las ratas fueron pesadas y marcadas con ácido pícrico antes de la administración de los fármacos, los cuales se administraron todos tras calentar previamente a 37 °C durante 30 minutos. 3. Extracción tisular: 8 horas despues de administrar a los animales sometidos a ensayo de los grupos A, B y C, las ratas fueron anestesiadas con éter etílico y sacrificadas mediante sangrado por las arterias femorales. Los cerebros fueron recogidos en hielo mediante la retirada de la cabeza, y el hipocampo se cultivó y se dividió cuidadosamente en tres partes. Cada parte fue colocada en un criotubo de 1,5-ml con una tapa de rosca coloreada y previamente etiquetada, se pesó con exactitud, se congeló rápidamente en nitrógeno líquido durante 15 minutos, y se almacenó en el frigorífico a -80 °C para un uso posterior. 4. Determinación de la muestra: 4.1 Determinación del nivel de cAMP en el hipocampo de las ratas: Se descongeló y se lavó la muestra de tejido de hipocampo con una pequeña cantidad de solución salina y a continuación se añadió la solución de lisis celular (en la que la solución salina concentrada se diluyó 5 veces para su uso) proporcionada con el kit en una proporción de 1:20 (peso: volumen (g: mi)). Se homogeneizó la muestra en un homogeneizador ultrasónico electrónico durante 30 segundos, se centrifugó a 10.000 rpm durante 5 minutos a 4 °C. El sobrenadante se colocó en un matraz Eppendorf de 1 ,5-ml coloreado y previamente etiquetado y se almacenó en una caja de hielo para someterla a ensayo. La muestra se determinó utilizando el kit de ensayo para ELISA de AMP cíclico Parameter™ (R&D Systems, Inc., EE. UU). La muestra se descongeló a temperatura ambiente, y se determinó el nivel de cAMP en la muestra mediante ELISA competitiva. El valor de densidad óptica (DO) de la muestra se determinó a 450 nm utilizando el lector de microplacas multimodal, y se calculó el nivel de cAMP en la muestra a través de la curva estándar. 4.2 Determinación de la actividad de PKA dependiente de cAMP en el hipocampo de la rata: La muestra de tejido de hipocampo se descongeló y se lavó con una pequeña cantidad de solución salina y a continuación se añadió el tampón de extracción de PKA (que se preparó según la formulación incluida en el manual del fabricante) en una relación de 1:10 (peso: volumen (g: mi)). La muestra fue homogeneizada en un homogeneizador ultrasónico electrónico durante 30 segundos y centrifugada a 10.000 rpm durante 5 minutos a 4 °C. El sobrenadante fue transferido a un matraz Eppendorf de 1 ,5 -mi coloreado y previamente etiquetado y se almacenó en una caja de hielo para analizarlo. La muestra se determinó usando el ensayo PepTag® para detección no radiactiva del kit de proteína cinasa dependiente de cAMP de Promega Corporation, EE. UU. Siguiendo el manual de instrucciones incluido en el kit, se añadió el reactivo previamente mezclado a tubos para PCR de 8 tubos de 200 -pl y previamente etiquetados y se añadieron 9 ml de cada muestra al tubo correspondiente. El tubo se agitó en vértex, se centrifugó y se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 30 minutos y a continuación se colocó en una máquina de PCR para desactivar la enzima a 98 °C durante 5 minutos. Se determinó conjuntamente un control positivo y un control negativo con las muestras sometidas a ensayo según el manual de instrucciones. Se preparó un gel de agarosa al 0,8%, se inyectaron 10 pl de cada muestra tras la desnaturalización enzimática en el pocilio del gel de agarosa y se sometió a electroforesis a 100 V y 130 mA durante 30 minutos. El tampón de electroforesis era un tampón de 50 mm de Tris-HCI (pH 8,0). Tras la electroforesis, se retiró el gel de agarosa del aparato y se fotografió mediante el analizador de imágenes de gel. Se colocó el gel de agarosa en el analizador de UV, se cortaron los puntos de péptido PepTag A1 y se colocaron en un criotubo de 1 ,5 -mi con una tapa roscada coloreada y previamente etiquetada. El gel de agarosa se calentó a fusión y se añadió agua pura hasta un volumen de 250 mI. La agarosa caliente de 125 mI se transfirió rápidamente a otro matraz Eppendorf de 1 ,5 -mi y previamente etiquetado, se añadieron 75 mI de la solución de solubilización de gel, y se añadieron 50 mI de ácido acético glacial. La mezcla se agitó en vórtex, y se añadieron 200 mI de la mezcla a una placa -microtituladora de 96 pocilios. La agarosa que migra hacia el electrodo positivo en el control negativo fue el blanco. Se llevó a cabo un análisis de fluorescencia sobre un lector de microplacas multimodal a una longitud de onda de excitación de 586 nm y a una longitud de onda de emisión de 592 nm. La intensidad de fluorescencia de la muestra se relaciona con la actividad de PKA. 4.3 Determinación del nivel de p-CREB en el hipocampo de las ratas: Las muestras se determinaron usando el kit de ELISA DuoSet IC para humanos/ratones/ratas fosfo-CREB (S133) de R&D Systems, Inc., EE. UU.

La muestra de tejido de hipocampo se descongeló y se lavó con una pequeña cantidad de solución salina y, a continuación, la solución de homogeneización de tejido (que se preparó según el diluyente IC n.° 6 incluido en el manual del fabricante) se añadió en una proporción de 1:20 (peso: volumen (g: mi)). La mezcla se homogeneizó en un homogeneizador electrónico ultrasónico durante 30 segundos, se centrifugó a 10.000 rpm durante 5 minutos a 4 °C, se transfirió el sobrenadante a un matraz Eppendorf de 1 ,5-ml coloreado y previamente etiquetado y se almacenó en una caja de hielo para someterlo a ensayo. El nivel de p-CREB en la muestra se determinó utilizando ELISA de sándwich siguiendo el manual de instrucciones incluido en el kit. El valor DO de la muestra se determinó a 450 nm utilizando el lector de microplacas multimodal, y el nivel de p-CREB en la muestra se calculó según la curva estándar. 4.4 Determinación del contenido en proteína total en el hipocampo de la rata: Para calcular la cantidad total de proteína p-CREB por miligramo de proteína contenida en la muestra, es fundamental determinar la cantidad de proteína total en la muestra. El sobrenadante, una vez homogeneizado y centrifugado el tejido en la prueba de determinación de p-CREB, se diluyó 25 veces con PBS para formar las muestras de ensayo. Siguiendo el manual de instrucciones del kit de ensayo de proteína BCA Pierce™, se determinó el valor DO de la muestra a 450 nm mediante el lector de microplacas multimodal y utilizando albúmina de suero bovino (ASB) como patrón. La cantidad de proteína total en la muestra se determinó según la curva estándar. 4.5 Determinación de la actividad de PDE: La influencia de la composición farmacéutica de la Realización 1 en la actividad de PDE en el hipocampo de las ratas se determinó mediante análisis de luminiscencia utilizando un kit de ensayo de fosfodiesterasa PDE-Glo™ de Promega Corporation, EE. UU. 4.5.1 Preparación de la solución médica: La composición farmacéutica de la Realización 1 se preparó a las concentraciones de 0,02 mg/ml, 0,05 mg/ml y 1,0 mg/ml. 4.5.2 Preparación de la muestra: Una vez lavada una cantidad específica del tejido de hipocampo con una pequeña cantidad de solución salina, y con el tampón de reacción PDE-Glo™ (Tris-HCI de 40 mm, MgC de 10 mm, y albúmina de suero bovino (ASB) de 0,1 mg/ml suplementado con PMSF de 1 mm, leupetina de 2 mm/ml, se añadió a una proporción de 1:10 (peso: volumen (g: mi)). La mezcla se homogeneizó utilizando un homogeneizador ultrasónico electrónico y se centrifugó a 10.000 rpm durante 5 minutos a 4 °C, y el sobrenadante era la solución enzimática para usar. 4.5.3 Protocolo de análisis de bioluminiscencia: El protocolo se llevó a cabo siguiendo el método proporcionado en el manual de instrucciones. En cuanto a la solución de reacción enzimática, se añadió 1 mI de solución médica a una solución enzimática de 1,5 pl obteniéndose un volumen total de 2,5 mI. La solución de sustrato de 2,5 mI que contenía 2 pmol de cAMP se añadió a 2,5 mI de la mezcla y la mezcla de reacción se mezcló y se hizo reaccionar a 37 °C durante 30 minutos. A continuación, se añadieron 2,5 mI de la solución final que contenía 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX) (un fuerte inhibidor de PDE) y se mezcló. Se añadió una solución de ensayo de 2,5 mI y se mezcló, y la mezcla de reacción se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 20 minutos. Finalmente, se añadieron 10 mI del reactivo luminiscente a la mezcla de reacción, que se hizo reaccionar a continuación a temperatura ambiente durante 10 minutos. Se determinó la bioluminiscencia utilizando el lector de microplacas multimodal. experimentales: el de cAMP en el hipocampo de las ratas: La concentración de cAMP omogeneizado del hipocampo de ratas se determinó mediante ELISA y el nivel de cAMP contenido en el tejido de hipocampo se obtuvo dividiendo el peso de la muestra de tejido medida por la concentración de cAMP, y se da como pmol / g de tejido (con referencia a la Figura 5).

Véase la Figura 5. El nivel de cAMP en el tejido de hipocampo de las ratas en el grupo de la Realización 1 aumentó de forma significativa en comparación con el grupo de solución salina y con el grupo de Paroxetina (* P <0,05, n = 10). 5.2 Actividad de PKA dependiente de cAMP en el hipocampo de las ratas: Tras la reacción enzimática, se separaron las muestras en sus componentes ópticamente activos mediante electroforesis de gel de agarosa, se desarrollaron mediante el analizador de imágenes de gel y se realizó un análisis aproximado.

Véase la Figura 6, el péptido A1 fosforilado tiene una carga negativa y migra hacia el electrodo positivo, mientras que el péptido A1 no fosforilado tiene una carga positiva y migra hacia el electrodo negativo. Estos dos péptidos fueron separados el uno del otro. Una brillantez del punto de péptido A1 fosforilado (que migra hacia el electrodo positivo) más intensa indica que el nivel de fosforilación y la actividad de PKA dependiente de cAMP en la muestra son mayores. En la Figura 6 se muestra que la brillantez del punto en el grupo de la Realización 1 es mayor que las del grupo de solución salina y del grupo de Paroxetina.

Los puntos sobre el gel de agarosa se cortaron y fundieron y se determinó el volumen de gel fundido. La actividad de PKA dependiente de cAMP en el hipocampo de ratas se determinó mediante ensayo de fluorescencia y se presentó como intensidad de fluorescencia (con referencia a la Figura 7).

Véase la Figura 7. 8 horas después de la administración, la actividad de PKA dependiente de cAMP en el hipocampo de las ratas en el grupo de la Realización 1 es significativamente mayor que el del grupo de control blanco y del grupo de Paroxetina (*P <0,05, n = 10). 5.3 Nivel de p-CREB en el hipocampo de las ratas: La concentración de proteína total en el homogeneizado de la muestra de hipocampo de las ratas se determinó utilizando el método BCA para evaluar la cantidad de p-CREB por mg de proteína total. A continuación, se determinó la concentración de p-CREB en el homogeneizado de la muestra de hipocampo de las ratas utilizando el ensayo de ELISA sándwich, y el valor p-CREB (pg) / proteína total (pg) correspondió al nivel de p-CREB en el hipocampo de las ratas (con referencia a los datos de la Figura 8).

Véase la Figura 8.8 horas después de la administración, el nivel de p-CREB en el hipocampo de las ratas en el grupo de la Realización 1 fue significativamente mayor que el del grupo de solución salina y que el grupo de Paroxetina (n = 5.4 Influencia de la composición farmacéutica en la actividad de PDE en el hipocampo de las ratas: La actividad de PDE en el hipocampo de las ratas y la inhibición frente a la actividad de PDE tras la administración in vitro se determinaron mediante el ensayo de bioluminiscencia. La intensidad luminosa se relaciona con la actividad de PDE. En comparación con el grupo de control, la mayor intensidad luminosa indica una mayor actividad de PDE y la menor intensidad luminosa indica que la actividad de PDE estaba inhibida. Los resultados medidos muestran que la composición farmacéutica (0,5 mg/ml) en el grupo de la Realización 1 inhibió de forma significativa la actividad de PDE en el hipocampo de las ratas en comparación con el grupo de control blanco (* P <0,05, n = 4). clusión: (1) 8 horas después de la administración intragástrica a las ratas, en comparación con el grupo de la solución salina y con el grupo de la Paroxetina, el nivel de cAMP en el hipocampo de las ratas en el grupo de la Realización 1 aumentó significativamente, la actividad de PKA dependiente de cAMP era significativamente mayor y el nivel de p-CREB en la misma también había aumentado. (2) Los experimentos demuestran que la composición farmacéutica de la Realización 1 puede desempeñar sus funciones farmacológicas a través de la vía de señalización de segundo mensajero cAMP, y puede iniciar rápidamente la vía cAMP-PKA-CREB (p-CREB) 8 horas despues de la administración (donde la diferencia significativa (*P <0,05) fue mediante comparación con el grupo salino y con el grupo de Paroxetina). (3) 8 horas después de la administración, el fármaco de control positivo, Paroxetina, no puede iniciar la vía cAMP-PKA-CREB (p-CREB). (4) El resultado experimental también indica que la actividad de PDE puede ser inhibida significativamente por una dosis de tamaño medio de la composición farmacéutica en la Realización 1. Puesto que PDE es una enzima desactivada para cAMP, la inhibición de PDE puede producir un aumento del nivel de cAMP en el hipocampo de las ratas.

Experimento 2: Experimento con animales para estudiar la influencia de la vía de transducción de señal cAMP/PKA/CREB y la expresión de BDNF después de administrar a las ratas con estrés crónico la composición farmacéutica de la Realización 1 durante 10 días. 1. El efecto de la composición farmacéutica de la Realización 1 sobre la concentración de cAMP del hipocampo en los ratones con estrés repetitivo (con referencia a la Figura 9): Los resultados de la Figura 9 muestran que la concentración de cAMP en el hipocampo de los ratones a los que se había administrado la composición farmacéutica de la Realización 1 es significativamente superior que la del grupo de control sin administración (*P <0,05). 2. Efecto de la composición farmacéutica de la Realización 1 sobre la actividad de PKA del hipocampo en los ratones con estrés repetitivo (con referencia a la Figura 10): Los resultados de la Figura 10 muestran que la actividad de PKA en el hipocampo de los ratones a los que se había administrado la composición farmacéutica de la Realización 1 es significativamente superior que la del grupo de control sin administración (*P <0,05). 3. El efecto de la composición farmacéutica de la Realización 1 en la fosforilación de CREB del hipocampo en los ratones con estrés repetitivo (con referencia a la Figura U): Los resultados de la Figura 11 muestran que la expresión de la fosforilación de CREB en el hipocampo de los ratones a los que se había administrado la composición farmacéutica de la Realización 1 es significativamente superior que la del grupo de control sin administración. 4. El efecto de la composición farmacéutica de la Realización 1 en la expresión de BDNF del hipocampo en los ratones con estrés repetitivo (con referencia a la Figura 12): Los resultados de la Figura 12 muestran que la expresión de BDNF en el hipocampo de los ratones a los que se había administrado la composición farmacéutica de la Realización 1 es significativamente superior que la del grupo de control sin administración.

Experimento 3: Experimento animal para estudiar la influencia en las expresiones de hipocampo de cAMP y PKA, BDNF en suero, y NE, DA y 5HT de hipotálamo después de administrar a ratas con estrés crónico la composición farmacéutica de la Realización 1 durante 21 días. 1. Efecto de la composición farmacéutica de la Realización 1 en la concentración de cAMP en el hipocampo y en el córtex de ratas con estrés crónico (con referencia a la Tabla 1).

Tabla 1. La expresión de cAMP en el hipocampo y en el córtex de las ratas de cada grupo. 2. Efecto de la composición farmaceutica de la Realización 1 en el nivel de PKA del hipocampo de las ratas con estrés crónico (con referencia a la Tabla 2).

Tabla 2. Nivel de PKA en el hipocampo de las ratas de cada grupo. 3. Efecto de la composición farmacéutica de la Realización 1 en el nivel de BDNF en suero en las ratas con estrés crónico (con referencia a la Tabla 3).

Tabla 3. Nivel de BDNF en suero en las ratas de cada grupo 4. Efecto de la composición farmacéutica de la Realización 1 en la expresión de neurotransmisores monoamina del hipocampo de las ratas con estrés crónico (con referencia a la Tabla 4).

Tabla 4. La expresión de neurotransmisores monoamina en el hipotálamo de las ratas de cada grupo 5. Conclusión La expresión de cAMP y PKA de hipocampo, BDNF en suero, y neurotransmisores monoamina en el hipotálamo (5-HT, NE y DA) en las ratas a las que se había administrado la composición farmacéutica de la Realización 1 son significativamente mayores que las del grupo de control sin administración (*P <0,05).

Experimento 4: Experimento animal para estudiar la termodinámica de efecto antidepresivo de la Realización 1. 1. Experimento de comportamiento animal: El inventor llevó a cabo pruebas para estudiar el comportamiento animal, incluida la prueba en la que se cuelga a los ratones de su rabo, la prueba de natación forzada en ratas, la prueba de natación forzada en ratones, la prueba de lesión del bulbo olfatorio en ratas y otros animales, de acuerdo con el mecanismo pato génico y los síntomas clínicos de la depresión. 1.1 Se administró intragástricamente la composición farmacéutica de la Realización 1 a los ratones con la dosis de 20 mg/kg/d, 40 mg/kg/d y 80 mg/kg/d (la dosis de 15 mg/kg/d, 30 mg/kg/d y 60 mg/kg/d para las ratas) durante una semana para determinar un efecto contra la depresión de la prueba, en el que el grupo de dosis media (40 mg/kg/d para los ratones y 30 mg/kg/d para las ratas) y el grupo de control positivo (Paroxismo) mostraron un tiempo sin movimiento significativamente inferior en el caso de los ratones colgados por el rabo, los ratones a los que se había forzado a nadar y las ratas a las que se había forzado a nadar. Los datos muestran una diferencia estadísticamente significativa en comparación con el grupo de control (P < 0,05). 1.2 Se administró intragástricamente la composición farmacéutica de la Realización 1 a ratas utilizando el modelo de estrés leve impredecible (CUMS) con las dosis de 15 mg/kg/d, 30 mg/kg/d y 60 mg/kg/d durante 21 días consecutivos. Los resultados muestran que, en comparación con el grupo normal, la masa corporal del grupo de ratas del modelo CUMS aumentó lentamente, el consumo de sacarosa disminuyó de forma significativa (P < 0,01), el movimiento horizontal y el movimiento vertical disminuyeron de forma significativa (P < 0,01 ), y el número de errores en pruebas de salto en ratas aumentó de forma significativa (P < 0,01). En comparación con el grupo de control, los aumentos de peso de la dosis baja de la Realización 1 y del grupo positivo (Paroxetina) aumentaron de forma significativa, el consumo de sacarosa en ambos grupos aumentó de forma significativa (P < 0,01), el movimiento horizontal y el movimiento vertical en ambos grupos aumentó de forma significativa (P < 0,01 ), y el número de errores en la prueba de salto en ratas en ambos grupos disminuyó de forma significativa (P < 0,01 para el grupo de dosis baja, y P < 0,01 para el grupo positivo (Paroxetina)). 1.3 Se administró intragástricamente la composición farmacéutica de la Realización 1 a ratas utilizando el modelo de lesión del bulbo olfatorio con las dosis de 15 mg/kg/d, 30 mg/kg/d y 60 mg/kg/d durante 24 días consecutivos. En la prueba de caja de campo abierto, en comparación con el grupo de control, la dosis alta de la Realización 1 mejoró de forma significativa la disminución del movimiento horizontal y del movimiento vertical causado por la lesión del bulbo olfatorio. El control positivo (Paroxetina de 3 mg/kg/d) mejoró también de forma significativa la disminución del movimiento horizontal y del movimiento vertical causado por la lesión del bulbo olfatorio. En la prueba de evitación pasiva, en comparación con el grupo de control, la dosis alta y la dosis media de la Realización 1 mejoró de forma significativa la pérdida de capacidad de estudio y de memoria en ratas ocasionada por la lesión del bulbo olfatorio. 2. El experimento animal sobre el modelo de interacción: El inventor llevó a cabo pruebas de comportamiento, incluidas las pruebas con el modelo de inducción por resetpina (descenso de la temperatura corporal, aquinesia y blefaroptosis) en ratones, el experimento de agitación de la cabeza inducido por serotonina en ratones y otros, según el mecanismo pato génico y los síntomas clínicos de la depresión. 2.1 Se administró intragástricamente la composición farmacéutica de la Realización 1 a ratones con la dosis de 20 mg/kg/d, 40 mg/kg/d y 80 mg/kg/d (la dosis de 15 mg/kg/d, 30 mg/kg/d y 60 mg/kg/d para ratas) durante una semana. La pérdida de temperatura corporal inducida por resetpina, la aquinesia y la blefaroptosis en ratones puede inhibirse de forma significativa mediante la composición farmacéutica de la Realización 1, lo que indica que el efecto contra la depresión experimental de la Realización 1 puede ser relevante para el efecto de los neurotransmisores monoamina. La cantidad de agitación de la cabeza de los ratones a los que se había inyectado serotonina puede aumentarse de forma significativa, lo que indica que el efecto antidepresivo de la Realización 1 puede ser relevante para la inhibición de monoamino oxidasa (MAO). Además, puesto que los resultados experimentales muestran que la composición farmacéutica de la Realización 1 no tiene un efecto significativo en la actividad autoregulatoria de los ratones, la composición farmacéutica de la Realización 1 no tuvo efecto de estimulación sobre el sistema nervioso central. 3. Los resultados experimentales referidos a la termodinámica principal asociada al efecto antidepresivo se resumen del siguiente modo (con referencia a la Tabla 5): 4. Conclusión: La composición farmaceutica de la Realización 1 tiene efectos experimentales significativos frente a la depresión.

Los resultados de los diversos experimentos muestran: (1) 8 horas después de administrar ¡ntragástricamente la composición farmacéutica de la Realización 1 a ratas, en comparación con el grupo de solución salina y el grupo de Paroxetina, el cAMP de hipocampo aumentó de forma significativa, la actividad de PKA fue mejorada de forma significativa (*P <0,05), el nivel de p-CREB aumentó también y la actividad de la PDE4 fue inhibida de forma significativa (*P <0,05). (2) Después de administrar de forma intragástrica la composición farmacéutica de la Realización 1 a ratones con estrés crónico durante 10 días, la disminución del cAMP y PKA de hipocampo causado por estrés repetitivo aumentó de forma significativa para estimular la expresión del BDNF y CREB fosforilada en el hipocampo de los ratones. (3) Después de administrar ¡ntragástricamente la composición farmacéutica de la Realización 1 a ratas con estrés crónico durante 21 días, la disminución de cAMP y PKA de hipocampo causada por estrés repetitivo aumentó de forma significativa para estimular la expresión de neurotransmisores monoamina incluido BDNF en suero, NE y 5-HT de hipotálamo etc., mientras que se produjo una regulación a la baja de GSC. (4) La composición farmacéutica de la Realización 1 tiene efectos experimentales significativos contra la depresión.

A continuación se describen los ámbitos de aplicación de la composición farmacéutica de la presente invención para aumentar rápidamente el contenido y disponibilidad de cAMP in vivo. 1. La composición farmacéutica de la presente invención para aumentar de forma rápida el contenido y la disponibilidad de cAMP in vivo puede incluir aditivos farmacológicamente aceptables. 2. La composición farmacéutica de la presente invención para aumentar rápidamente el contenido y disponibilidad de cAMP in vivo se puede preparar en formas de dosificación conocidas como, por ejemplo, en forma de polvo, cápsula, comprimido, etc. 3. La composición farmacéutica de la presente invención para aumentar de forma rápida el contenido y disponibilidad de cAMP in vivo puede formularse como un fármaco, un alimento para la salud o un nutriente para prevenir y curar enfermedades causadas por la baja disponibilidad y nivel de cAMP en un organismo y en células, mejorar el nivel de BDNF, mejorar la vía de señalización cAMP/PKA/CREB en células, mejorar los niveles de neurotransmisores incluidos DA, NE y 5-HT, y mejorar la memoria.

Hay otras realizaciones descritas del siguiente modo.

Realización 1. En una composición farmacéutica para aumentar un contenido y una disponibilidad de adenosín monofosfato cíclico en un cuerpo, incluido: un primer componente principal que incluye ginsenósidos Rg1, Rb1 y Re; un segundo componente principal que incluye un ácido relacionado con el genero Glycyrrhiza seleccionado de un grupo que consiste en un ácido glicirrícico, un ácido glicirretínico y una combinación de los mismos; y un tercer componente principal que incluye un adenosín monofosfato cíclico de jujuba.

Realización 2. En la composición farmacéutica según la Realización 1, la composición farmacéutica incluye 2-26 partes en peso de los ginsenósidos Rg1 y Rb1, 3-48 partes en peso del ácido relacionado con el género Glycyrrhiza, y 0,002~0,5 partes en peso del adenosín monofosfato cíclico de jujuba.

Realización 3. En la composición farmacéutica según la Realización 1, la composición farmacéutica incluye 4~13 partes en peso de los ginsenósidos Rg1 y Rb1, 5-16 partes en peso del ácido relacionado con el género Glycyrrhiza, y 0,01-0,1 partes en peso del adenosín monofosfato cíclico de jujuba.

Realización 4. En la composición farmacéutica según una de las realizaciones 1-3, la composición farmacéutica incluye un vehículo farmacológicamente aceptable, un aditivo o una combinación de los mismos.

Realización 5. En la composición farmacéutica según una de las realizaciones 1-4, la composición farmacéutica tiene una forma de dosificación seleccionada de un grupo que consiste en un comprimido, una cápsula, un polvo, una pastilla, partículas finas, una solución, una microcápsula, una suspensión, una emulsión, una partícula, una gragea, un cilindro y una dosificación de medicación farmacológica oral.

Realización 6. En la composición farmacéutica según una de las realizaciones 1-5, la composición farmacéutica se fabrica como un fármaco, una medicina para la salud o un nutriente que se utiliza para prevenir y tratar la baja disponibilidad y contenido del cAMP en el cuerpo y en una célula, mejorar la vía de señalización cAMP/PKA/CREB en la célula, mejorar una expresión de BDNF, aumentar el contenido de neurotransmisores DA, NE y 5HT, o mejorar la memoria.

Realización 7. En la composición farmacéutica según una de las realizaciones 1-6, la composición farmacéutica incluye además un cuarto componente principal seleccionado de jengibre, un extracto de jengibre o una combinación de los mismos.

Realización 8. En una composición farmacéutica para aumentar una disponibilidad de adenosín monofosfato cíclico en un cuerpo, incluido: un primer componente principal que incluye ginsenósidos Rg1, Rb1 y Re; un segundo componente principal que incluye un ácido relacionado con el género Glycyrrhiza seleccionado de un grupo que consiste en un ácido glicirrícico, un ácido glicirretínico y una combinación de los mismos; y un tercer componente principal que incluye un adenosín monofosfato cíclico de jujuba.

Realización 9. En un método para preparar una composición farmacéutica para aumentar un contenido de un adenosín monofosfato cíclico en un cuerpo, incluido: proporcionar un primer componente principal, en donde el primer componente principal incluye ginsenósidos Rg1, Rb1 y Re; proporcionar un segundo componente principal, en donde el segundo componente principal incluye un ácido relacionado con el género Glycyrrhiza seleccionado de un grupo que consiste en un ácido glicirrícico, un ácido glicirretínico y una combinación de los mismos; y proporcionar un tercer componente principal, en donde el tercer componente principal incluye un adenosín monofosfato cíclico de jujuba, para fabricar la composición farmacéutica.

Aunque la invención se ha descrito en términos de lo que actualmente se consideran las realizaciones más prácticas y preferidas, debe entenderse que la invención no tiene por qué limitarse a las realizaciones descritas. Por lo tanto, se prevé cubrir diversas modificaciones y configuraciones similares incluidas en el espíritu y ámbito de las reivindicaciones anexas, las cuales se deben interpretar de modo que engloben todas aquellas modificaciones y estructuras similares.

Posibilidades de aplicación industrial 1. La composición farmacéutica de la presente invención para aumentar rápidamente el contenido y disponibilidad de cAMP in vivo puede incluir aditivos farmacológicamente aceptables. 2. La composición farmacéutica de la presente invención para aumentar rápidamente el contenido y disponibilidad de cAMP in vivo puede fabricarse en formas de dosificación conocidas como, por ejemplo, un polvo, cápsula o comprimido. 3. La composición farmacéutica de la presente invención para aumentar de forma rápida el contenido y disponibilidad de cAMP in vivo puede fabricarse como un fármaco, un alimento para la salud o un nutriente que se utiliza para prevenir y curar enfermedades causadas por la baja disponibilidad y contenido del cAMP en un organismo y en células, mejorar una vía de señalización cAMP/PKA/CREB en células, mejorar una expresión de un BDNF, aumentar el contenido de los neurotransmisores DA, NE y 5-HT, o mejorar la memoria.

Claims (7)

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica para aumentar un contenido y una disponibilidad de un adenosín monofosfato cíclico en un cuerpo, que comprende: un primer componente principal que comprende ginsenósidos Rg1, Rb1 y Re; un segundo componente principal que comprende un ácido relacionado con el género Glycyrrhiza seleccionado de un grupo que consiste en un ácido glicirrícico, un ácido glicirretínico y una combinación de los mismos; y un tercer componente principal que comprende un adenosín monofosfato cíclico de jujuba.

2. La composición farmacéutica reivindicada en la reivindicación 1 , en donde la composición farmacéutica comprende 2~26 partes en peso de los ginsenósidos Rg1 y Rb1, 3~48 partes en peso del ácido relacionado con el género Glycyrrhiza, y 0,002~0,5 partes en peso del adenosín monofosfato cíclico de jujuba.

3. La composición farmacéutica reivindicada en la reivindicación 1, en donde la composición farmacéutica comprende 4~13 partes en peso de los ginsenósidos Rg1 y Rb1, 5~16 partes en peso del ácido relacionado con el genero Glycyrrhiza, y 0,01 ~0,1 partes en peso del adenosín monofosfato cíclico de jujuba.

4. La composición farmacéutica reivindicada en la reivindicación 1, en donde la composición farmacéutica comprende un vehículo farmacológicamente aceptable, un aditivo o una combinación de los mismos.

5. La composición farmacéutica reivindicada en la reivindicación 1 , en donde la composición farmacéutica tiene una forma de dosificación seleccionada de un grupo que consiste en un comprimido, una cápsula, un polvo, una pastilla, partículas finas, una solución, una microcápsula, una suspensión, una emulsión, una partícula, una gragea, un cilindro y una dosificación de medicación farmacológica oral.

6. La composición farmacéutica reivindicada en la reivindicación 1, en donde la composición farmacéutica se fabrica como un fármaco, un alimento para la salud o un nutriente que se utiliza para prevenir y tratar la baja disponibilidad y contenido del cAMP en el cuerpo y en una célula, mejorar una vía de señalización de cAMP/PKA/CREB en la célula, mejorar una expresión de un BDNF, aumentar el contenido de neurotransmisores DA, NE y 5HT, o mejorar la memoria.

7. La composición farmacéutica reivindicada en la reivindicación 1 , en donde la composición farmacéutica comprende además un cuarto componente principal seleccionado de un jengibre, un extracto de jengibre o una combinación de los mismos. Una composición farmacéutica para aumentar una disponibilidad de un adenosín monofosfato cíclico en un cuerpo, que comprende: un primer componente principal que comprende ginsenósidos Rg1, Rb1 y Re; un segundo componente principal que comprende un ácido relacionado con el género Glycyrrhiza seleccionado de un grupo que consiste en un ácido glicirrícico, un ácido glicirretínico y una combinación de los mismos; y un tercer componente principal que comprende un adenosín monofosfato cíclico de jujuba. Un método para preparar una composición farmacéutica para aumentar un contenido de un adenosín monofosfato cíclico en un cuerpo, que comprende: proporcionar un primer componente principal, en donde el primer componente principal comprende ginsenósidos Rg1 , Rb1 y Re; proporcionar un segundo componente principal, en donde el segundo componente principal comprende un ácido relacionado con el género Glycyrrhiza seleccionado de un grupo que consiste en un ácido glicirrícico, un ácido glicirretínico y una combinación de los mismos; y proporcionar un tercer componente principal, en donde el tercer componente principal comprende un adenosín monofosfato cíclico de jujuba, para fabricar la composición farmacéutica.