CN101450062A - 多靶标受体后作用机制用于治疗忧郁症的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开以包含人参皂甙(Rg1+Rb1)、甘草酸及大枣cAMP的原料，制成多靶标受体后作用机制用于治疗忧郁症的口服药物或保健食品。实验证明，本发明药物组合物可明显减少小鼠悬尾不动时间和利血平诱导的体温下降；明显改善嗅球毁损所造成的大鼠水平及垂直运动增加及嗅球毁损所造成的大鼠学习及记忆功能减退；同时还可明显改善不可预测性长期应激刺激所造成的饮蔗糖水量减少及体重下降、明显改善不可预测性长期应激刺激所造成的大鼠水平及垂直运动减少及明显增加大鼠大脑皮质中NE及5－HT含量等。实验的结果证实本发明药物组合物与现有技术中用于治疗忧郁症的主流药物帕罗西汀(Paroxetine)相比较，具有显著抗忧郁的功效。

Description

多靶标受体后作用机制用于治疗忧郁症的药物组合物

技术领域

本发明涉及一组以包含人参皂甙Rg1、Rb1及甘草酸及大枣环磷酸腺苷(大枣cyclic adenosine monophosphate，大枣cAMP)的原料，制成多靶标受体后作用机制用于治疗忧郁症的药物，尤其涉及一种功效成份明确、疗效明显、长期服用安全性高、能避免引起强呕吐等副作用的治疗忧郁症的口服药物或保健食品。

背景技术

忧郁症是一种常见的疾病，据统计在一般人口中大约有25％女性在其一生中经历过忧郁症，男性中约有10％左右经历过忧郁症(张春兴著：《现代心理学》)。世界卫生组织(WHO)提供的数据：忧郁症在全世界的发病率约为11％，目前全球约有3.4亿精神忧郁患者，而且这个数字仍成上升趋势，调查发现在今后20年，忧郁症将会上升为全球第二大常见疾病。

现有技术中，抗忧郁药物以百忧解、赛乐特、左洛复等(SSRI、SNRI、NDRI等类的5-HT、NE、DA再摄取抑制剂)为主，其作用机制是通过增加人体神经介质内5羟色胺等成分含量以缓解忧郁症状。

但是，已问市的抗忧郁药物都有不同程度的副作用，例如：增加自杀率、头痛、头晕、晕眩、失眠、嗜睡、耳鸣、口干、厌食、食欲增加、体重上升、血压上升、肠胃不适、反胃、恶心、呕吐、消化不良、腹泻、便秘、下肢痛、皮肤出疹、颤抖、痉挛、多汗、水肿、性欲降低、性无能等。近年来百忧解等抗忧郁药物已成为社会严重关注的问题，美国食品暨药物管理局(Food and Drug Administration，FDA)更于2004年要求药厂将市场上主要的32种抗忧郁药物重新标示其副作用和警告的部分，并对医护人员强调这些药物可能增加儿童及青少年自杀的机率。其中，赛乐特更是早在1996年就被发现存在有安全隐患，自2001年开始已陆续从市场上召回。2004年6月，美国纽约州总检察长指控英国葛兰素史克公司为了获取利润，欺骗性隐瞒了服用赛乐特与“增加青少年自杀倾向及行为的风险”之间有关联的研究报告。在这种背景下，如何研发新一代副作用低又能有明显抗忧郁作用的药物已成为全球医药界所关注的问题。

近年来，国际医药界的科学家们在忧郁症致病机理的研究方面出现了新的突破，发现除了以5-HT、NE、DA的再摄取抑制方式治疗忧郁症之外，更可以采取调节受体后作用机制的方式治疗忧郁症，并且由于受体后作用机制调节类药物罗列普拉(Rolipram)的问世而成为医药界抗忧郁药物的研发热点。罗列普拉是四型磷酸二酯酶(phosphodiesterase 4，PDE4)的抑制剂，临床试验表明其具有明显的抗忧郁作用，但由于服用罗列普拉会出现强烈呕吐，故被迫终止研发，然而罗列普拉却开拓了新一代“受体后作用机制抗抑郁药物”的研发思路。

综上所述，申请人在了解了公知技术中所具有的局限性后，经过悉心研究与探索，并本着锲而不舍的精神，终于发现了本发明的“多靶标受体后作用机制用于治疗抑郁症的药物组合物”，以下为本发明的简要说明。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一组以包含人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸及大枣cAMP的原料，制成多靶标受体后作用机制用于治疗抑郁症的口服药物或保健食品，特别是功效成份明确、疗效明显、长期服用安全性高、不会引起强烈呕吐等副作用的新技术方案。

本发明药物的解决方案是经发明人潜心研究探索的结果，依据现代医学治疗忧郁症的病理及药理学理论，特别是结合受体后作用机制抗忧郁药靶标研究，经过大量的动物实验证明：人参皂甙含有腺苷酸环化酶(adenylate cyclase，AC)刺激腺苷，并含有cAMP磷酸二酯酶(CAPD)的抑制成份；甘草酸(甘草次酸)是cAMP磷酸二酯酶(CAPD)强抑制剂。人参皂甙、甘草酸(甘草次酸)二者配伍，协同作用，可以进一步提高cAMP的利用度和活性，而cAMP的浓度和活性增强，则可增加去甲肾上腺素(norepinephrine，NE)等神经递质的合成与释放，增强脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)的表达，抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴(hypothalamic-pituitary-adrenal axis，HPA轴)的亢进和糖皮质激素的分泌，从而达到显著的抗忧郁功能。另外，大枣cAMP亦可以提高人体cAMP的表达，从而起到抗忧郁作用，将大枣中含量极微(约万分之一)的大枣cAMP提取并纯化成含1％大枣cAMP的大枣提取物来进行抗试验性抑郁作用动物试验的结果显示，具有明显的抗试验性抑郁功能，但仅通过常规的例如用水加温提取而未进一步纯化提高其提取物大枣cAMP浓度的大枣提取物，虽然含有微量的大枣cAMP却不具有明显的抗试验性抑郁功能，为了进一步增强本发明的抗忧郁功效，还可将大枣cAMP、人参皂甙和甘草酸三者配伍。人参、甘草、大枣是几千年以来中医及食补药膳常用的药材和食品，在千百年的食用和临床使用过程中，已充分证明人参、甘草、大枣三者配伍的安全性，发明人研究及实验的结果证明这三种药材若仅以常规使用的煎煮方式提取所得的提取物和目前用于治疗忧郁症的抗忧郁药物相比不具备显著的抗忧郁疗效；但再采取例如上柱层析的纯化方式进一步提高提取物中所含的人参皂甙Rg1、Rb1及大枣cAMP等有效成份的浓度，再加上甘草酸或甘草次酸等原料制成用于治疗忧郁症的药物，经过动物试验证明和目前用于治疗忧郁症的抗忧郁药物相比具有显著的抗忧郁功能；收集三种药材提取及上柱层析纯化得到提取物后剩余的残渣，以高效液相检测后虽然含微量的人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸和大枣cAMP，但是经过动物试验后证明没有显著的抗忧郁功能；而服用人参、甘草及大枣不会发生强烈呕吐等副作用，故发明人提出以人参皂甙Rg1、Rb1及甘草酸和大枣cAMP为原料，制成多靶标受体后作用机制用于治疗忧郁症的口服药物或保健食品，特别是除了例如用水、乙醇等溶剂加温提取之外更进一步纯化提高提取物中人参皂甙Rg1、Rb1及大枣cAMP浓度的原料加上含甘草酸或甘草次酸等原料制成功效成份明确、疗效明显、长期服用安全性高、不会引起强烈呕吐等副作用的新技术方案以改进公知技术中所具有的不足之处。

本发明药物组合物与罗列普拉抗忧郁的药物标的及作用机制比较

 

药物名称	罗列普拉	本发明药物组合物
			药物类型	受体后机制调节抗忧郁药物(化学药物)	受体后机制调节抗忧郁药物(复方植物药)
药物标的	单靶标(CAPD)	多靶标(CAPD、CA、ATP等)
			作用机制	1.启动cAMP依赖的酪氨酸羟化酶，增加NE合成；2.磷酸化突触蛋白，增加NE释放；3.抑制磷酸二酯酶，减少cAMP降解，提高cAMP利用度而发挥作用。	1.启动cAMP依赖的酪氨酸羟化酶，增加NE合成；2.磷酸化突触蛋白，增加NE释放；3.抑制磷酸二酯酶，减少cAMP降解提高cAMP利用度而发挥作用；4.启动AC，增加cAMP的浓度和活性；5.通过提高ATP促使cAMP的生成；6.促进苯丙酸透过血脑屏障，促进NE、DA的合成和下调HPA轴；7.通过直接上调脑细胞中BDNF和NT-3的表达，抗应激反应。
服药反应	会引起强烈呕吐等副作用。	长期服用安全性高、副作用低，且可预防及改善神经退行性疾病及抗衰老。

本发明药物与公知的受体后作用机制的抗忧郁药物罗列普拉不同之处，在于既可以同样的通过多靶标受体后作用机制达到抗忧郁作用，又能避免如服用罗列普拉后所引起的强烈呕吐等副作用。

由于甘草酸在人体内转化为甘草次酸的转化率几乎达到100％，而脂溶性比甘草酸强的甘草次酸能够透过血脑屏障进入脑内，故甘草酸抑制CAPD起到抗忧郁功效是通过体内转化为甘草次酸来进行的，因此，可以用甘草酸或甘草次酸为原料加工制成本发明的药物组合物。

本发明揭露了一种多靶标受体后作用机制用于治疗抑郁症的药物组合物，所述药物组合物是由包括人参皂甙Rg1、Rb1及甘草酸或甘草次酸的原料所制成。

优选地，本发明的药物组合物，是由包括人参皂甙(Rg1+Rb1)合计2～26重量份与甘草酸或甘草次酸3～48重量份的原料所制成。

优选地，本发明的药物组合物，是由包括人参皂甙(Rg1+Rb1)合计4～13重量份与甘草酸或甘草次酸5～16重量份的原料所制成。

根据本发明的另一概念，本发明揭露了一种多靶标受体后作用机制用于治疗抑郁症的药物组合物，所述药物组合物是由包括人参皂甙Rg1、Rb1及甘草酸或甘草次酸及大枣cAMP的原料所制成。

优选地，本发明的药物组合物，是由包括人参皂甙(Rg1+Rb1)合计2～26重量份与甘草酸或甘草次酸3～48重量份及大枣cAMP 0.002～0.5重量份的原料所制成。

优选地，本发明的药物组合物，是由包括人参皂甙(Rg1+Rb1)合计4～13重量份与甘草酸或甘草次酸5～16重量份及大枣cAMP 0.01～0.1重量份的原料所制成。

优选地，本发明的药物组合物可以包括药学上可接受的载体或添加剂，可以制成锭剂、胶囊剂、散剂、片剂、粉剂、溶液剂、微囊剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂等任何药剂学上所公知的口服药物剂型。

优选地，所述的药物组合物可用来制成用于治疗抑郁症的药物、保健食品和营养剂。

本发明的说明书和权利要求中所述的用于治疗忧郁症的口服药物，是实现本发明目的的核心内容，在本发明公开后，本领域的技术人员可以根据中医理论或是相关现代药理学理论，对上述药物进行常规的加减化裁或是用功效作用相同的其它中药有效成分(如远志甙、柴胡甙、甘草香豆素等)替代。这种常规的加减化裁和用作用机理相似或相同的其它CAPD抑制剂、AC启动剂的中药或是相应的有效成分来替代，均属于本领域技术和研究人员的一般性技术活动，故其都在本发明的保护范围之内。

通过参阅附图及详细说明可以更好地了解本发明。

附图概述

图1为制备本发明实施例1药物的方法流程示意图。

图2为制备本发明实施例2药物的方法流程示意图。

图3为制备本发明实施例3药物的方法流程示意图。

图4为制备本发明实施例4药物的方法流程示意图。

图5为制备本发明实施例5药物的方法流程示意图。

图6为制备本发明实施例6药物的方法流程示意图。

本发明的较佳实施方式

以下将结合附图和实施例进一步说明本发明。本发明主要是采用本领域技术人员公知的方法结合本发明的特征制备本发明所述的药物。以下实施例仅仅是为了说明，并非限定本发明。

为了完成本发明的目的，本发明特别提出下列技术方案。

本发明揭露了一种多靶标受体后作用机制用于治疗抑郁症的药物组合物，所述药物组合物由包括人参皂甙Rg1、Rb1及甘草酸或甘草次酸的原料制成。

方案一：

以含有人参皂甙Rg1、Rb1及甘草酸或甘草次酸的原料，加工制成本发明多靶标受体后作用机制用于治疗忧郁症的药物组合物。

方案二：

以含有人参皂甙(Rg1+Rb1)合计2～26重量份与甘草酸或甘草次酸3～48重量份的原料，加工制成本发明的药物组合物。

方案三：

以含有人参皂甙(Rg1+Rb1)合计4～13重量份与甘草酸或甘草次酸5～16重量份的原料，加工制成本发明的药物组合物。

方案四：

以含有人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸或甘草次酸及大枣cAMP等原料，加工制成本发明多靶标受体后作用机制用于治疗忧郁症的药物组合物。

方案五：

以含有人参皂甙(Rg1+Rb1)合计2～26重量份、甘草酸或甘草次酸3～48重量份及大枣cAMP 0.002～0.5重量份的原料，加工制成本发明的药物组合物。

方案六：

以含有人参皂甙(Rg1+Rb1)合计4～13重量份、甘草酸或甘草次酸5～16重量份及大枣cAMP 0.01～0.1重量份的原料，加工制成本发明的药物组合物。

方案七：

本发明的药物组合物可以包括药学上可接受的载体或添加剂，可以制成锭剂、胶囊剂、散剂、片剂、粉剂、溶液剂、微囊剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂等任何药剂学上所公知的口服药物剂型。

方案八：

本发明所述的药物组合物可用来制成用于治疗抑郁症的药物、保健食品和营养剂。

为了完成本发明的目的，特提出以下药物的制作方法。

方法一：

自人参及甘草中提取含有人参皂甙Rg1、Rb1及甘草酸的提取物为原料，或直接采用已制备成的含有人参皂甙Rg1、Rb1及甘草酸或甘草次酸的原料，加工制成本发明多靶标受体后作用机制用于治疗忧郁症的药物组合物。

方法二：

将含有人参皂甙(Rg1+Rb1)合计2～26重量份与甘草酸或甘草次酸3～48重量份的原料，加工制成本发明的药物组合物。

方法三：

将含有人参皂甙(Rg1+Rb1)合计4～13重量份与甘草酸或甘草次酸5～16重量份的原料，加工制成本发明的药物组合物。

方法四：

自人参及甘草及大枣中提取含有人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸及大枣cAMP的提取物为原料，或直接采用已制备成的含有人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸或甘草次酸及大枣cAMP的原料，加工制成本发明多靶标受体后作用机制用于治疗忧郁症的药物组合物。

方法五：

将含有人参皂甙(Rg1+Rb1)合计2～26重量份、甘草酸或甘草次酸3～48重量份及大枣cAMP 0.002～0.5重量份的原料，加工制成本发明的药物组合物。

方法六：

将含有人参皂甙(Rg1+Rb1)合计4～13重量份、甘草酸或甘草次酸5～16重量份及大枣cAMP 0.01～0.1重量份的原料，加工制成本发明的药物组合物。

方法七：

本发明所述的药物组合物可以包括药学上可接受的载体或添加剂，可以制成锭剂、胶囊剂、散剂、片剂、粉剂、溶液剂、微囊剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂等任何药剂学上所公知的口服药物剂型。

方法八：

将本发明所述的原料依保健食品生产制造标准的方法，加工制成本发明用于治疗忧郁症的保健食品。

具体实施例

以下将结合附图和具体实施例进一步说明本发明。

实施例1

请参阅图1，其为制备本发明实施例1药物的方法流程示意图。在图1中，先将20kg的人参破碎后用70％乙醇溶液加温提取，经上柱层析分离纯化、干燥，得含120g人参皂甙(Rg1+Rb1)的人参提取物0.8kg；接着，再将10kg的甘草破碎后常温浸泡12小时，以水提醇沉法提取、浓缩干燥，得含甘草酸200g的甘草提取物2kg；之后，将上述方法得到的人参提取物150g及甘草提取物200g粉碎混合均匀后，得350g(含22.5g人参皂甙Rg1+Rb1及20g甘草酸)本发明方案一的药物组合物。

实施例2

请参阅图2，其为制备本发明实施例2药物的方法流程示意图。在图2中，将已制备成纯度为96％的甘草次酸3.96g及实施例1所得的人参提取物200g粉碎混合均匀后，得203.96g(含30g人参皂甙Rg1+Rb1及3.8g甘草次酸)本发明方案二的药物组合物。

实施例3

请参阅图3，其为制备本发明实施例3药物的方法流程示意图。在图3中，将已制备成的3.4g纯度为90％的人参皂甙Rg1、7.8g纯度为90％的人参皂甙Rb1及36.8g纯度为95％的甘草酸粉碎混合均匀后，得48g(含10g人参皂甙Rg1+Rb1及35g甘草酸)本发明方案三的药物组合物。

实施例4

请参阅图4，其为制备本发明实施例4药物的方法流程示意图。在图4中，将10kg的大枣破碎后加水常温浸泡，再以水提醇沉法提取获得大枣提取液，再用大孔树脂OU-2、ME-2两柱先后连续上柱吸附分离、干燥，得含大枣cAMP 0.3g的大枣提取物30g作为原料供制备本发明药物。

接着，将实施例1得到的人参提取物150g、甘草提取物200g及前述大枣提取物3g粉碎混合均匀后，得353g(含22.5g人参皂甙Rg1+Rb1、20g甘草酸及0.03g大枣cAMP)本发明方案四的药物组合物。

实施例5

请参阅图5，其为制备本发明实施例5药物的方法流程示意图。在图5中，将实施例1得到的人参提取物150g及甘草提取物200g及实施例4得到的大枣提取物0.5g粉碎混合均匀后，得350.5g(含22.5g人参皂甙Rg1+Rb1、20g甘草酸及0.005g大枣cAMP)本发明方案五的药物组合物。

实施例6

请参阅图6，其为制备本发明实施例6药物的方法流程示意图。在图6中，将已制备成的6.8g纯度为90％的人参皂甙Rg1、15.6g纯度为90％的人参皂甙Rb1、26g纯度为96％的甘草次酸及实施例4得到的大枣提取物10g粉碎混合均匀后，得58.4g(含20g人参皂甙Rg1+Rb1、25g甘草次酸及0.1g大枣cAMP)本发明方案六的药物组合物。

实验例一 实施例1对小鼠悬尾实验的影响

1.1 实验动物

ICR小鼠，雄性，体重22.0±2g，二级，北京首都医科大学实验动物科学部提供。

1.2 实验药品

实施例1：北京欧纳尔生物工程技术有限公司提供。

帕罗西汀(赛乐特)：中美天津史克制药有限公司产品。

1.3 实验仪器：秒表。

1.4 剂量设计

实施例1高剂量：80mg/kg/d、中剂量：40mg/kg/d及低剂量：20mg/kg/d。

1.5 实验方法及结果

1.5.1 分组给药

将小鼠随机分组，每组10只：1.实施例1高剂量组(80mg/kg，PO，给药7d)；2.实施例1中剂量组(40mg/kg，PO，给药7d)；3.实施例1低剂量组(20mg/kg，PO，给药7d)；4.帕罗西汀组(3mg/kg，PO，给药7d)；5.生理盐水组(PO)。最后一次给药后1小时进行悬尾实验。

1.5.2 实验方法

将小鼠尾(距尾尖1cm处)用胶布粘在头高出台面5cm的木条上悬吊6分钟，记录后5分钟内小鼠的不动时间。

1.5.3 统计学处理

实验数据用X±SD表示，实验结果用SPSS 11.5统计软件进行方差分析。

1.5.4 实验结果

实验结果请参阅表1。

表1、实施例1对小鼠不动时间的影响

注：与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01

结论：

根据以上实验，可以看出本发明实施例1高、中剂量组和帕罗西汀组均可减少小鼠悬尾后的不动时间，且与生理盐水组(模型组)相比有显著性差异，从而可以推断本发明实施例1具有抗实验性抑郁功能。

实验例2 实施例1对小鼠利血平诱导体温下降的影响

2.1 实验动物

ICR小鼠，雄性，体重22.0±2g，二级，北京首都医科大学实验动物科学部提供。

2.2 实验药品

实施例1：北京欧纳尔生物工程技术有限公司提供。

帕罗西汀(赛乐特)：中美天津史克制药有限公司产品。

利血平：广东邦民制药厂有限公司。

2.3 实验仪器

GM222型电子温度计，秒表。

2.4 剂量设计

实施例1高剂量：80mg/kg/d、中剂量：40mg/kg/d及低剂量：20mg/kg/d。

2.5 实验方法及结果

2.5.1 分组给药

将小鼠随机分组，每组10只：1.实施例1高剂量组(80mg/kg，PO，给药7d)；2.实施例1中剂量组(40mg/kg，PO，给药7d)；3.实施例1低剂量组(20mg/kg，PO，给药7d)；4.帕罗西汀组(3mg/kg，PO，给药7d)；5.生理盐水组(PO)。

2.5.2 实验方法

在第8天给药后1小时测定小鼠肛温，然后经腹腔注射利血平2mg/kg，于注射利血平后4小时再测定小鼠肛温。每次测温时温度计插入小鼠肛门的深度及时间均一致。

2.5.3 统计学处理

实验数据用X±SD表示，实验结果用SPSS 11.5统计软件进行方差分析。

2.5.4 实验结果

实验结果请参阅表2。

表2、实施例1对小鼠利血平诱导体温下降的影响

注：与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01

结论：

根据以上实验，可以看出本发明实施例1高、中、低三个剂量组和帕罗西汀组均可明显减少利血平诱导的体温下降，表明其抗实验性抑郁作用可能与影响单胺递质含量有关，从而可以推断本发明实施例1具有抗实验性抑郁功能。

实验例3 实施例2对小鼠悬尾实验的影响

3.1 实验动物

ICR小鼠，雄性，体重22.0±2g，二级，北京首都医科大学实验动物科学部提供。

3.2 实验药品

实施例2：北京欧纳尔生物工程技术有限公司提供。

帕罗西汀(赛乐特)：中美天津史克制药有限公司产品。

3.3 实验仪器

秒表。

3.4 剂量设计

实施例2高剂量：80mg/kg/d、中剂量：40mg/kg/d及低剂量：20mg/kg/d。

3.5 实验方法及结果

3.5.1 分组给药

将小鼠随机分组，每组10只：1.实施例2高剂量组(80mg/kg，PO，给药7d)；2.实施例2中剂量组(40mg/kg，PO，给药7d)；3.实施例2低剂量组(20mg/kg，PO，给药7d)；4.帕罗西汀组(3mg/kg，PO，给药7d)；5.生理盐水组(PO)。最后一次给药后1小时进行悬尾实验。

3.5.2 实验方法

将小鼠尾(距尾尖1cm处)用胶布粘在头高出台面5cm的木条上悬吊6分钟，记录后5分钟内小鼠的不动时间。

3.5.3 统计学处理

实验数据用X±SD表示，实验结果用SPSS 11.5统计软件进行方差分析。

3.5.4 实验结果

实验结果请参阅表3。

表3、实施例2对小鼠不动时间的影响

注：与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01

结论：

根据以上实验，可以看出本发明实施例2中剂量组和帕罗西汀组均可减少小鼠悬尾后的不动时间，且与生理盐水组(模型组)相比有显著性差异，从而可以推断本发明实施例2具有抗实验性抑郁功能。

实验例4 实施例2对小鼠利血平诱导体温下降的影响

4.1 实验动物

ICR小鼠，雄性，体重22.0±2g，二级，北京首都医科大学实验动物科学部提供。

4.2 实验药品

实施例2：北京欧纳尔生物工程技术有限公司提供。

帕罗西汀(赛乐特)：中美天津史克制药有限公司产品。

利血平：广东邦民制药厂有限公司。

4.3 实验仪器

GM222型电子温度计，秒表。

4.4 剂量设计

实施例2高剂量：80mg/kg/d、中剂量：40mg/kg/d及低剂量：20mg/kg/d。

4.5 实验方法及结果

4.5.1 分组给药

将小鼠随机分组，每组10只：1.实施例2高剂量组(80mg/kg，PO，给药7d)；2.实施例2中剂量组(40mg/kg，PO，给药7d)；3.实施例2低剂量组(20mg/kg，PO，给药7d)；4.帕罗西汀组(3mg/kg，PO，给药7d)；5.生理盐水组(PO)。

4.5.2 实验方法

在第8天给药后1小时测定小鼠肛温，然后经腹腔注射利血平2mg/kg，于注射利血平后4小时再测定小鼠肛温。每次测温时温度计插入小鼠肛门的深度及时间均一致。

4.5.3 统计学处理

实验数据用X±SD表示，实验结果用SPSS 11.5统计软件进行方差分析。

4.5.4 实验结果

实验结果请参阅表4。

表4、实施例2对小鼠利血平诱导体温下降的影响

注：与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01

结论：

根据以上实验，可以看出本发明实施例2中剂量组和帕罗西汀组均可明显减少利血平诱导的体温下降，表明其抗实验性抑郁作用可能与影响单胺递质含量有关，从而可以推断本发明实施例2具有抗实验性抑郁功能。

实验例5 实施例3对小鼠悬尾实验的影响

5.1 实验动物

ICR小鼠，雄性，体重22.0±2g，二级，北京首都医科大学实验动物科学部提供。

5.2 实验药品

实施例3：北京欧纳尔生物工程技术有限公司提供。

帕罗西汀(赛乐特)：中美天津史克制药有限公司产品。

5.3 实验仪器：

秒表。

5.4 剂量设计

实施例3高剂量：80mg/kg/d、中剂量：40mg/kg/d及低剂量：20mg/kg/d。

5.5 实验方法及结果

5.5.1 分组给药

将小鼠随机分组，每组10只：1.实施例3高剂量组(80mg/kg，PO，给药7d)；2.实施例3中剂量组(40mg/kg，PO，给药7d)；3.实施例3低剂量组(20mg/kg，PO，给药7d)；4.帕罗西汀组(3mg/kg，PO，给药7d)；5.生理盐水组(PO)。最后一次给药后1小时进行悬尾实验。

5.5.2 实验方法

将小鼠尾(距尾尖1cm处)用胶布粘在头高出台面5cm的木条上悬吊6分钟，记录后5分钟内小鼠的不动时间。

5.5.3 统计学处理

实验数据用X±SD表示，实验结果用SPSS 11.5统计软件进行方差分析。

5.5.4 实验结果

实验结果请参阅表5。

表5、实施例3对小鼠不动时间的影响

注：与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01

结论：

根据以上实验，可以看出本发明实施例3高、中剂量组和帕罗西汀组均可减少小鼠悬尾后的不动时间，且与生理盐水组(模型组)相比有显著性差异，从而可以推断本发明实施例3具有抗实验性抑郁功能。

实验例6 实施例3对小鼠利血平诱导体温下降的影响

6.1 实验动物

ICR小鼠，雄性，体重22.0±2g，二级，北京首都医科大学实验动物科学部提供。

6.2 实验药品

实施例3：北京欧纳尔生物工程技术有限公司提供。

帕罗西汀(赛乐特)：中美天津史克制药有限公司产品。

利血平：广东邦民制药厂有限公司。

6.3 实验仪器

GM222型电子温度计，秒表。

6.4 剂量设计

实施例3高剂量：80mg/kg/d，中剂量：40mg/kg/d及低剂量：20mg/kg/d。

6.5 实验方法及结果

6.5.1 分组给药

将小鼠随机分组，每组10只：1.实施例3高剂量组(80mg/kg，PO，给药7d)；2.实施例3中剂量组(40mg/kg，PO，给药7d)；3.实施例3低剂量组(20mg/kg，PO，给药7d)；4.帕罗西汀组(3mg/kg，PO，给药7d)；5.生理盐水组(PO)。

6.5.2 实验方法

在第8天给药后1小时测定小鼠肛温，然后经腹腔注射利血平2mg/kg，于注射利血平后4小时再测定小鼠肛温。每次测温时温度计插入小鼠肛门的深度及时间均一致。

6.5.3 统计学处理

实验数据用X±SD表示，实验结果用SPSS 11.5统计软件进行方差分析。

6.5.4 实验结果

实验结果请参阅表6。

表6、实施例3对小鼠利血平诱导体温下降的影响

注：与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01

结论：

根据以上实验，可以看出本发明实施例3高、中、低剂量组和帕罗西汀组均可明显减少利血平诱导的体温下降，表明其抗实验性抑郁作用可能与影响单胺递质含量有关，从而可以推断本发明实施例3具有抗实验性抑郁功能。

实验例7 实施例4对大鼠嗅球损毁实验的影响

7.1 实验动物

嗅球毁损模型：健康Wistar雄性大鼠，二级，体重330±20g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司(合格证编号SCXK(京)2002-0003)。

7.2 试剂与药品

实施例4由欧纳尔生物工程技术有限公司提供(批号：060313)，帕罗西汀为中美天津史克制药有限公司产品(批号：04050011)，以上药物用0.5％羧甲基纤维素纳(CMC-Na)配制后供灌胃使用；注射用青霉素钠为华北制药股份有限公司产品(批号：S0511204)；去甲肾上腺素(NE)及5-羟色胺(5-HT)标准品为Sigma公司产品；其它试剂均为市售。

7.3 仪器

自制开野实验箱，避暗实验箱，大鼠脑立体定位仪，高效液相色谱仪，DFM-96型10管放射免疫γ计数器。

7.4 实验方法

7.4.1 动物分组与给药方法

大鼠随机分6组，假手术组、模型对照组、实施例4高剂量组(60mg/kg/d)、实施例4中剂量组(30mg/kg/d)、实施例4低剂量组(15mg/kg/d)、帕罗西汀组(2mg/kg/d)。受试药与阳性药用0.5％羧甲基纤维素纳(CMC-Na)配制。每天一次灌胃给药。

7.4.2 模型制备方法

大鼠用水合氯醛麻醉，麻醉后从大鼠前囟门前1cm至前囱后1cm正中线处切开，暴露颅骨。在距离前囱前8mm、正中线两侧2mm处分别开骨窗，直径约2mm。用特制电烙铁垂直插入颅内2秒，破坏嗅球，用止血海棉填充骨窗缝合皮肤；术后每4天以腹腔注射(intraperitoneal，IP)给与青霉素钠40,000单位/Kg，并连续给与受试药物24天。

7.5 观测指标

7.5.1 开野实验

开野实验箱由浅蓝色胶合板及铝合金框架构成(1m×1m×0.4m)，箱底划分为25个方格(每个20cm×20cm)，沿四壁为外周格，其余为中央格。将动物放入正中方格中，观察3分钟内动物的跨格次数(三爪以上跨入邻格)和站立次数(两前肢离地1cm以上)。

7.5.2 被动回避实验—避暗法

实验箱内由明、暗两室组成，中间有一个通道供大鼠出入，暗室隔栅与电击仪相联，两室间有一活动隔板。如大鼠进入暗室则遭电击。训练时，将大鼠头背向洞口放入明室中适应5分钟，然后将隔板抽出观察5分钟，记录大鼠首次进入暗室时间(触电潜伏期)，此为学习成绩。24小时后重复测试，抽出隔板并通电5分钟观察大鼠第一次钻入暗室的时间，此为记忆成绩。

7.6 统计学处理

实验数据用X±SD表示，实验结果用SPSS 11.5统计软件进行方差分析。

7.7 实验结果

7.7.1 开野实验结果请参阅表7。

表7、嗅球毁损模型大鼠开野实验结果

注：与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01

7.7.2 避暗实验结果请参阅表8。

表8、嗅球毁损模型大鼠避暗实验结果

注：与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01

结论：

实验例7结果显示：实施例4高剂量组可明显改善嗅球毁损所造成的大鼠水平及垂直运动增加，实施例4中剂量组对嗅球毁损模型大鼠的垂直运动增加也有明显改善作用。另外，实施例4高、中剂量组对嗅球毁损所造成的大鼠学习及记忆功能减退也有明显改善作用。

实验例8 实施例4对大鼠不可预测长期应激实验的影响

8.1 实验动物

不可预测性长期应激模型：健康Wistar雄性大鼠，二级，体重240～270g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司(合格证编号SCXK(京)2002-0003)。

8.2 试剂与药品

实施例4由欧纳尔生物工程技术有限公司提供(批号：060313)，帕罗西汀为中美天津史克制药有限公司产品(批号：04050011)，以上药物用0.5％羧甲基纤维素纳(CMC-Na)配制后供灌胃使用；注射用青霉素钠为华北制药股份有限公司产品(批号：S0511204)；去甲肾上腺素(NE)及5-羟色胺(5-HT)标准品为Sigma公司产品；其它试剂均为市售。

8.3 仪器

自制开野实验箱，避暗实验箱，大鼠脑立体定位仪，高效液相色谱仪，DFM-96型10管放射免疫γ计数器。

8.4 实验方法

8.4.1 动物分组与给药方法

大鼠随机分6组，假手术组、模型对照组、实施例4高剂量组(60mg/kg/d)、实施例4中剂量组(30mg/kg/d)、实施例4低剂量组(15mg/kg/d)、帕罗西汀组(2mg/kg/d)。受试药与阳性药用0.5％羧甲基纤维素纳(CMC-Na)配制。每天一次灌胃给药。

8.4.2 模型制备方法

不可预测性长期应激模型：空白对照组正常饮食饮水，不给任何刺激。其它五组，每笼饲养1只，并接受24天不可预知的应激刺激，包括：3次24小时禁食，3次24小时断水，3次24小时潮湿垫料(鼠盒中加水200ml)，3次通宵照明，3次4℃冷水游泳5分钟，3次45℃烤箱热烘5分钟，3次1分钟夹尾，及3次30分钟高速水平振荡。每天随机给予一种刺激，共刺激24天，每种刺激不得连续给予。每天一次灌胃给药，共24天。

8.5 观测指标

8.5.1 开野实验：同上。

8.5.2 被动回避实验：同上。

8.5.3 大鼠强迫游泳

末次给药后实验分两天进行。第一天预试15分钟，玻璃缸内装25℃温水，水深25cm。24小时后，进行正式实验，给药后1小时，将大鼠放入缸中，观察并记录5分钟不动时间。

8.5.4 体重测试

比较各组动物实验前后体重的增加值。

8.5.5 饮蔗糖水量测试：

比较各种动物蔗糖摄入量。让各组大鼠饮用1％的蔗糖水(定时为1小时)，应激前、应激后3周各测一次饮水量；大鼠在禁食禁水14小时后，将1％的蔗糖水放入笼中代替原来的饮用水。称量记录大鼠饮用蔗糖水1小时前后的瓶重的差值计算每次的蔗糖水饮用量。比较各组每一次测试中糖水摄入量的差异。

8.5.6 高效液相—电化学检测法

测定大鼠大脑皮质中NE及5-HT含量。

8.6 统计学处理

实验数据用X±SD表示，实验结果用SPSS 11.5统计软件进行方差分析。

8.7 实验结果

8.7.1 大鼠饮蔗糖水量结果请参阅表9。

表9、不可预测性长期应激模型大鼠饮蔗糖水量

注：与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01

8.7.2 大鼠体重增量结果请参阅表10。

表10、不可预测性长期应激模型大鼠体重增量

注：与模型组比较^**P<0.01

8.7.3 大鼠强迫游泳实验不动时间结果请参阅表11。

表11、不可预测性长期应激模型大鼠强迫游泳实验不动时间

注：与模型组比较^*P<0.05，^**P<0.01

8.7.4 大鼠开野实验结果请参阅表12。

表12、不可预测性长期应激模型大鼠开野实验结果

注：与模型组比较^*P<0.05，^**P<0.01

8.7.5 大鼠避暗实验结果请参阅表13。

表13、不可预测性长期应激模型大鼠避暗实验结果

注：与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01

8.7.6 大鼠大脑皮质中NE及5-HT含量检测结果请参阅表14。

表14、不可预测性长期应激模型大鼠大脑皮质中NE及5-HT含量

注：与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01

结论：

实验例8结果显示：实施例4中小剂量组可明显改善不可预测性长期应激刺激所造成的饮蔗糖水量减少及体重下降；实施例4高中低剂量组均可明显增加大鼠强迫游泳实验不动时间；实施例4高剂量组可明显改善不可预测性长期应激刺激所造成的大鼠水平及垂直运动减少，实施例4低剂量组对不可预测性长期应激刺激所造成的大鼠垂直运动减少也有明显改善作用；实施例4低剂量组对不可预测性长期应激刺激所造成的大鼠学习能力降低有改善作用；实施例4高中低剂量组均可明显增加大鼠大脑皮质中NE及5-HT含量。

实验例9 实施例5对小鼠悬尾实验的影响

9.1 药品

实施例5由欧纳尔生物工程技术有限公司提供(中试放大产品)；帕罗西汀为中美天津史克制药有限公司产品(批号：05070384)，以上药物用生理盐水配制后供灌胃使用。

9.2 动物

ICR小鼠，雄性，体重20.0±1g，二级，由北京大学医学部实验动物科学部提供，动物质量合格证号SCXK(京)2006-0008。

9.3 仪器

秒表。

9.4 方法

小鼠70只，随机平均分成5组，NS组、帕罗西汀组(3mg/kg/d)、实施例5高剂量组(80mg/kg/d)、实施例5中剂量组(40mg/kg/d)、实施例5低剂量组(20mg/kg/d)。每日灌胃给药一次，于第八天给药后1小时将小鼠尾端(距尾尖1cm处)用胶布粘在置于一敞口箱内的水平支撑物上，使小鼠呈倒悬状态，小鼠头距底面约10cm，悬吊6分钟，记录后5分钟内小鼠的累积不动时间。

9.5 统计学处理

实验数据以X±SD表示，实验结果用SPSS 11.5统计软件进行单因素方差分析。

9.6 结果

小鼠悬尾实验不动时间结果请参阅表15。

表15、实施例5对小鼠悬尾实验累积不动时间的影响

注：与NS组比较^*P<0.05^**P<0.01

结论：

研究结果显示实施例5高、中、低三个剂量组及临床有效的抗抑郁药帕罗西汀均可明显缩短小鼠悬尾累积不动时间，表明实施例5具有一定的抗实验性抑郁作用。

实验例10 实施例5对小鼠强迫游泳实验的影响

10.1 药品

实施例5由欧纳尔生物工程技术有限公司提供(中试放大产品)；帕罗西汀为中美天津史克制药有限公司产品(批号：05070384)，以上药物用生理盐水配制后供灌胃使用。

10.2 动物

ICR小鼠，雄性，体重20.0±1g，二级，由北京大学医学部实验动物科学部提供，动物质量合格证号SCXK(京)2006-0008。

10.3 仪器

秒表。

10.4 方法

小鼠分组及给药如同小鼠悬尾实验。实验各组小鼠于给药1小时后进行实验，实验前及第八天小鼠训练游泳15分钟，24小时后测试，将小鼠分别放入水深10cm、直径14cm的玻璃缸中，水温25℃，观察5分钟记录小鼠在水中的累积不动时间。

10.5 统计学处理

实验数据以X±SD表示，实验结果用SPSS 11.5统计软件进行单因素方差分析。

10.6 结果

小鼠强迫游泳实验结果请参阅表16。

表16、实施例5对小鼠强迫游泳实验的影响

注：与NS组比较^*P<0.05^**P<0.01

结论：

研究结果显示实施例5高、中、低剂量组及临床有效的抗抑郁药帕罗西汀均可明显缩短小鼠强迫游泳累积不动时间，表明实施例5具有一定的抗实验性抑郁作用。

实验例11

将实施例1及实施例4提取后收集所剩的人参残渣9公斤、甘草残渣7公斤与大枣残渣0.9公斤，将其干燥、粉碎、混合均匀后得含极微量的人参皂甙Rg1、Rb1、及甘草酸和大枣cAMP的残渣混合物，进行对小鼠悬尾实验的影响的对照试验。

11.1 实验动物

ICR小鼠，雄性，体重22.0±2g，二级，北京首都医科大学实验动物科学部提供。

11.2 实验药品

残渣混合物：北京欧纳尔生物工程技术有限公司提供。

帕罗西汀(赛乐特)：中美天津史克制药有限公司产品。

11.3 实验仪器

秒表。

11.4 剂量设计

残渣混合物高剂量：160mg/kg/d、中剂量：80mg/kg/d及、低剂量：40mg/kg/d。

11.5 实验方法及结果

11.5.1 分组给药

将小鼠随机分组，每组10只：1.残渣混合物高剂量组(160mg/kg，PO，给药7d)；2.残渣混合物中剂量组(80mg/kg，PO，给药7d)；3.残渣混合物低剂量组(40mg/kg，PO，给药7d)；4.帕罗西汀组(3mg/kg，PO，给药7d)；5.生理盐水组(PO)。最后一次给药后1小时进行悬尾实验。

11.5.2 实验方法

将小鼠尾(距尾尖1cm处)用胶布粘在头高出台面5cm的木条上悬吊6分钟，记录后5分钟内小鼠的不动时间。

11.5.3 统计学处理

实验数据用X±SD表示，实验结果用SPSS 11.5统计软件进行方差分析。

11.5.4 实验结果

实验结果请参阅表17。

表17、残渣混合物对小鼠不动时间的影响

注：与模型组比较^*P<0.05^**P<0.01

结论：

根据以上实验，可以看出残渣混合物高、中、低三个剂量组虽可缩短小鼠悬尾后的不动时间，但与生理盐水组(模型组)相比差异无显著性，从而可以推断该残渣混合物不具有抗实验性抑郁功能。

本发明用于治疗忧郁症的口服药物的应用范围：

1.本发明所述的用于治疗忧郁症的口服药物中，可以含有药物学上可接受的添加剂；

2.本发明所述的用于治疗忧郁症的口服药物可以将其加工制成散剂、胶囊剂、片剂、等各种已知的剂型；以及

3.本发明所述的用于治疗忧郁症的口服药物可以制成用于治疗忧郁症的保健食品。

本领域技术人员可以对本发明做出各种改进，而不脱离如所附权利要求的保护范围。

Claims (19)

1.一种多靶标受体后作用机制用于治疗忧郁症的药物组合物，包括：人参皂甙，其包含Rg1及Rb1；及

甘草酸类，其由选自含甘草酸、甘草次酸及其组合之一的原料制成。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物包括2～26重量份的所述人参皂甙Rg1+Rb1及3～48重量份的所述甘草酸类。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物包括4～13重量份的所述人参皂甙Rg1+Rb1及5～16重量份的所述甘草酸类。

4.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物包括的所述人参皂甙是含人参皂甙Rg1及Rb1的人参提取物；所述甘草酸类是含甘草酸的甘草提取物。

5.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物含有选自药学上可接受的载体、添加剂及其组合之一。

6.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物制成剂型，所述剂型选自锭剂、胶囊剂、散剂、片剂、粉剂、溶液剂、微囊剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂及药剂学上的口服药物剂型之一。

7.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物制成保健食品或营养剂。

8.一种多靶标受体后作用机制用于治疗忧郁症的药物组合物，包括：

人参皂甙，其包含Rg1及Rb1；

甘草酸类，其选自甘草酸、甘草次酸及其组合之一；及

大枣环磷酸腺苷为原料制成。

9.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物包括2～26重量份的所述人参皂甙Rg1+Rb1、3～48重量份的所述甘草酸类及0.002～0.5重量份的所述大枣环磷酸腺苷。

10.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物包括4～13重量份的所述人参皂甙Rg1+Rb1、5～16重量份的所述甘草酸类及0.01～0.1重量份的所述大枣环磷酸腺苷。

11.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物包括的所述人参皂甙是含人参皂甙Rg1及Rb1的人参提取物；所述甘草酸类是含甘草酸的甘草提取物；所述大枣环磷酸腺苷是含大枣环磷酸腺苷的大枣提取物。

12.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述含大枣环磷酸腺苷的原料是下述的第二提取物：先提取大枣获得第一提取物，再纯化所述第一提取物得所述第二提取物，其中所述第二提取物的大枣环磷酸腺苷浓度高于所述第一提取物的大枣环磷酸腺苷浓度。

13.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物含有选自药学上可接受的载体、添加剂及其组合之一。

14.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物制成剂型，所述剂型选自锭剂、胶囊剂、散剂、片剂、粉剂、溶液剂、微囊剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂及药剂学上的口服药物剂型之一。

15.如权利要求8所述的药物组合物，其中所述药物组合物制成保健食品或营养剂。

16.一种多靶标受体后作用机制用于治疗忧郁症的药物组合物的含大枣环磷酸腺苷的原料的制备方法，其包括下列步骤：

(a)提取大枣获得第一提取物；及

(b)纯化所述第一提取物获得第二提取物，

其中所述第二提取物的大枣环磷酸腺苷浓度高于所述第一提取物的大枣环磷酸腺苷浓度。

17.如权利要求16所述的制备方法，其中步骤(b)选用含醛基的大孔树脂上柱吸附分离所述第一提取物中的大枣环磷酸腺苷。

18.如权利要求17所述的制备方法，其中步骤(b)选用含醛基的大孔树脂OU-2上柱吸附分离所述第一提取物中的大枣环磷酸腺苷。

19.如权利要求18所述的制备方法，其中步骤(b)再以大孔树脂ME-2上柱分离所述第一提取物中的大枣环磷酸腺苷。

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