CN101890032A - Rg1、Rb1、甘草酸组方的抗抑郁药物组合物及制法 - Google Patents

Rg1、Rb1、甘草酸组方的抗抑郁药物组合物及制法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一组包括以人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸(甘草次酸)为原料制成的用于治疗抑郁症的药物组合物。本发明同时还公开有关上述药物组合物的制备方法。实验证明，本发明药物组合物可明显减少受试小鼠悬尾和强迫游泳不动时间，可快速激活大鼠海马区CAMP-PKA通路，提升CREB、BDNF的表达，故本发明系受体后作用机制的抗抑郁药物。

Description

Rg1、Rb1、甘草酸组方的抗抑郁药物组合物及制法
技术领域
本发明涉及以人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸(或甘草次酸)为原料制成的用于治疗抑郁症的药物组合物，可将其作为药物、营养剂和保健食品使用。本发明还涉及上述用于治疗抑郁症的药物组合物的制备方法。
背景技术
抑郁症是一种常见的疾病，据统计在一般人口中大约有25％女性在其一生中经历过抑郁症，男性中约有10％左右经历过抑郁症(张春兴著：《现代心理学》)。世界卫生组织(WHO)提供的数据：抑郁症在全世界的发病率约为11％，目前全球约有3.4亿精神忧郁患者，而且这个数字仍成上升趋势，调查发现在今后20年，抑郁症将会上升为全球第二大常见疾病。
现有技术中，抗抑郁药物以百忧解、赛乐特、左洛复等(SSRI、SNRI、NDRI等类的5-HT、NE、DA再摄取抑制剂)为主，其作用机制是通过调节人体内单胺类神经递质(5-HT、NE等)含量以缓解抑郁症状。但是，已问市的抗忧郁药物都有不同程度的副作用，例如：增加自杀率、头痛、头晕、晕眩、失眠、嗜睡、耳鸣、口干、厌食、食欲增加、体重上升、血压上升、肠胃不适、反胃、恶心、呕吐、消化不良、腹泻、便秘、下肢痛、皮肤出疹、颤抖、痉挛、多汗、水肿、性欲降低、性无能等。近年来百忧解等抗忧郁药物已成为社会严重关注的问题，美国食品暨药物管理局(Food and Drug Administration，FDA)更于2004年要求药厂将市场上主要的32种抗抑郁药物重新标示其副作用和警告的部分，并对医护人员强调这些药物可能增加儿童及青少年自杀的机率。其中，赛乐特早在1996年就被发现存在有安全隐患，自2001年开始陆续被从市场上召回。2004年6月，美国纽约州总检察长指控英国葛兰素史克公司为了获取利润，欺骗性隐瞒了服用赛乐特与“增加青少年自杀倾向及行为的风险”之间有关联的研究报告。在这种背景下，如何研发新一代副作用低又能有明显抗忧郁作用的药物已成为全球医药界所关注的问题。
近年来，国际医药界的科学家们在抑郁症致病机理的研究方面出现了新的突破，发现除了以5-HT、NE、DA的再摄取抑制方式治疗忧郁症之外，还可以通过调节受体后治疗抑郁症，而其代表药物罗列普拉(Rolipram)的问世，使受体后作用机制的抗抑郁药物成为医药界研发的热点。罗列普拉是4型磷酸二酯酶(phosphodiesterase 4，PDE4)的抑制剂，临床试验表明其具有明显的抗忧郁作用，但由于服用罗列普拉会出现强烈呕吐，故被迫终止临床试验，然而罗列普拉却开拓了新一代“受体后作用机制抗忧郁药物”的研发思路。
综上所述，申请人在了解了公知技术中所具有的局限性后，经过悉心研究与探索，并本着锲而不舍的精神，终于发现了“以人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸(或甘草次甘草酸)为原料治疗忧郁症的药物组合物及其制法”。
发明内容
为了克服现有抗抑郁药物的不足，发明人结合现代医学和药理学理论对传统中药治疗忧郁症的病机和作用机理进行了研究，并在此基础之上提出本发明，目的在于提供一种以人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸(或甘草次酸)为原料、按优选配比制成的用于治疗抑郁症的药物组合物或保健食品。这种受体后抗抑郁的药物组合物，特点是组方的三种原料人参皂甙Rg1、Rb1和甘草酸(或甘草次酸)均为高纯度的单体提取物(30～98％)，其功效成分明确，作用机理清楚，可以量化，因此，用其制备的药物质量可控，稳定，疗效明显，安全性高，服用方便，且可快速起效。
本发明的另一目的，是提供上述以人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸(或甘草次酸)为原料所制成的用于治疗忧郁症的药物组合物或保健食品的制备方法。
本发明药物的解决方案和组方是经发明人潜心研究探索和筛选的结果，依据现代医学治疗忧郁症的病理及药理学理论，特别是结合受体后作用机制抗忧郁药靶标研究，经过大量的动物实验证明：人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸(或甘草次酸)均为cAMP磷酸二酯酶抑制剂，它们相互配伍，协同作用，可透过血脑屏障，快速激活海马区cAMP-PKA通路，提升CREB和BDNF的表达，故其具有明显的抗抑郁功能。另外，人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸(或甘草次酸)，虽各自都有一定程度的抗抑郁作用，但小鼠悬尾正交实验筛选的结果证明，它们三者优选配比组合物(即本发明的优选药物组合物)的抗抑郁作用要明显强于其中任何一个单体，因此，本发明药物组合物相对于人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸(或甘草次酸)在抗抑郁作用上具有新颖性和创造性。人参、甘草是中医食补药膳常用的药材和食品，在千百年的食用和临床使用中已充分证明人参、甘草二者配伍的安全性、合理性，而从人参、甘草中提取的人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸(或甘草草次酸)三者配伍制成的药物或保健食品，同样副作用小，可以长期服用，用于进行调理性的治疗。
为完成本发明的目的，特提出以下技术方案。
本发明揭露了一组用于治疗抑郁症的药物组合物，所述药物组合物是由包括人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸(或甘草次酸)为原料所制成。
本发明的药物组合物，是由包括1～100重量份人参皂甙Rg1、0.5～100重量份人参皂甙Rb1、0.5～100重量份甘草酸(或甘草次酸)的原料所制成。
优选地，本发明的药物组合物，是由包括10重量份的人参皂甙Rg1、5～10重量份的人参皂甙Rb1、5～10重量份的甘草酸(或甘草次酸)的原料制成。
本发明的药物组合物，人参皂甙Rg1的纯度为30～98％、Rb1的纯度为30～98％、甘草酸(或甘草次酸)的纯度为30～98％。
本发明的药物组合物，人参皂甙Rg1的优选纯度为90％，Rb1的优选纯度为90％，甘草酸(或甘草次酸)的优选纯度为90％。
本发明还揭露了一种用于治疗忧郁症的药物组合物的制备方法：
(a)将1～100重量份人参皂甙Rg1、0.5～100重量份人参皂甙Rb1、0.5～100重量份甘草酸(或甘草次酸)混合粉碎，即得本发明药物组合物。
(b)将1～100重量份人参皂甙Rg1、0.5～100重量份人参皂甙Rb1、0.5～100重量份甘草酸(或甘草次酸)与淀粉、乳糖、微粉硅胶等辅料一起混合粉碎，即得本发明药物组合物。
上述制备方法中三种原料的优选配比，是由包括10重量份的人参皂甙Rg1、5～10重量份的人参皂甙Rb1、5～10重量份的甘草酸(或甘草次酸)的原料制成。
优选地，本发明的药物组合物可以加工制成剂型，该剂型选自锭剂、胶囊剂、散剂、片剂、粉剂、溶液剂、微囊剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂及药剂学上的口服药物剂型之一。
优选地，本发明的药物组合物可以包括药学上可接受的载体或添加剂。
优选地，本发明的药物组合物还可用来制成保健食品和营养剂。
上述的药物组合物是实现本发明目的的核心配方，在本发明公开后，本领域的技术人员可以根据中医理论或是相关现代药理学理论，对上述药物组合物进行常规的加减化裁。这种常规的加减化裁是本领域技术人员的一般性技术活动，只要是在本发明药物组合物的配方基础上所进行的一般性技术加减，均在本发明的保护范围之内。
通过参阅附图及详细说明可以更好地了解本发明。
附图概述
图1制备本发明实施例1、实施例3药物的方法流程示意图
图2制备本发明实施例2药物的方法流程示意图。
图3实施例3小鼠强迫游泳不动时间试验结果图。
图4实施例1给药8h后，大鼠海马组织中Cyclic AMP的含量变化结果图。
图5为实施例1给药8h后，cAMP-Dependent PKA活性实验中典型的凝胶电泳照片。
图6为实施例1给药8h后，大鼠海马组织中cAMP-Dependent PKA活性差异结果图。
图7实施例1给药8h后，大鼠海马组织中p-CREB的含量变化结果图。
图8实施例1对大鼠海马组织中PDE活性的影响结果图。
具体实施例
以下将结合附图和具体实施例进一步说明本发明。
实施例1
按图1制备本发明实施例1药物。按图1的方法流程示意图，直接将已制备成纯度为90％的100g人参皂甙Rg1、纯度为90％的100g人参皂甙Rb1和纯度为90％的100g甘草酸混合粉碎，即得300g本发明药物实施例1。
实施例2
按图2制备本发明实施例1药物。按图2的方法流程示意图，直接将已制备成纯度为92％的100g人参皂甙Rg1、纯度为95％的100g人参皂甙Rb1、纯度为93％的100g甘草酸，与20g淀粉、10g乳糖、10g微粉硅胶一起混合粉碎，制成1000粒胶囊，即得本发明药物实施例2。
实施例3
按图1制备本发明实施例3药物。按图1的方法流程示意图，直接将已制备成纯度95％的100g人参皂甙Rg1、纯度92％的50g人参皂甙Rb1和纯度91％的50g甘草次酸混合粉碎，即得200g本发明药物实施例3。
具体实验例
实验例1
(1)实验名称
人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸各种不同组合抗抑郁作用的筛选研究
(2)实验目的
筛选人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸三种原料抗抑郁的优选配比组合。
(3)实验材料
动物：ICR小鼠，雄性，体重20±1g，由维通利华动物实验中心提供。
药物：受试药物人参皂甙Rg1、Rb1与甘草酸，北京欧纳尔生物工程技术有限公司提供；阳性药物盐酸氟西汀胶囊(百优解)，礼来苏州制药有限公司，批号：A333341-070608，国药准字J20030017，日服用量，20mg/日。
(4)实验器材
JZ型300g张力换能器(高碑店市新航积淀设备有限公司)，Medlab生物信号采集处理系统(南京易美)
(5)实验方法
1、人参皂甙Rg1(A)、Rb1(B)、甘草酸(C)组合的正交设计
采用正交试验的方法，以小鼠悬尾不动时间为指标，对Rg1(A)、Rb1(B)、甘草酸(C)的剂量和组合进行优选。
因素水平表、正交试验表分别如下：
表1  因素水平表
Figure B2009101433377D0000071
表2  L9(34)正交试验表
Figure B2009101433377D0000072
根据因素水平表和正交试验表，给药方案如下表所示：
表3  给药方案表
Figure B2009101433377D0000081
2、分组给药
每组实验将正常小鼠按体重随机分成11个组，每组20只，即给药1-9组、阳性药盐酸氟西汀胶囊(Y组，3.5mg/kg/d)，空白对照组。各组均按0.2ml/10g体重给药，连续给药2天。
3、测试方法
以上各组均连续给药2天，分别于第2天给药后1h进行实验。将小鼠尾端(在距尾尖2cm处)用胶布固定在100g张力换能器的连线上，使其呈倒悬状态，头部离实验台约15cm，每次同时测试2只动物，相互之间用纸板隔开。换能器连接到Medlab生物信号采集处理系统，适应2min后，记录4min之内的结果，将不动状态换算成时间(s)。
4、实验结果
表4  小鼠悬尾实验结果
与空白组比较，*P＜0.05**P＜0.01
表5  L9(34)正交试验表
Figure B2009101433377D0000092
分析结果：
①最佳组合是A1B1C1和A1B2C2，即Rg110mg、Rb110mg、甘草酸10mg和Rg110mg、Rb15mg、甘草酸5mg。
②Rg1的贡献度最大。
③单独的Rg110mg、Rb110mg、甘草酸5mg都有抗实验性抑郁功效，但从筛选实验数据上可看出效果是呈递减的趋势
6、结论：
通过正交实验的比较，提示Rg110mg、Rb110mg甘草酸10mg组合用药(10mg+10mg+10mg)具有显著而稳定的抗抑郁药效，单独的Rg1、Rb1、甘草酸虽然也可抗抑郁，但不如三者组合用药的功效强和稳定(本发明药物组合物实施例1、实施例2即按该优化配比进行组方制备的)。
实验例2  实施例3对小鼠强迫游泳实验的影响
动物：KM小鼠，雄性(20±2g)，购于中国医学科学院实验动物研究所(合格证号SCXK(京)2004-0001)，动物饲养于明暗交替(12h:12h)清洁级动物房中，自由进食饮水。动物在动物房中适应环境3天后开始进行实验。
强迫游泳实验中，实施例3对慢性应激抑郁小鼠的不动时间的影响.
实验结果显示：实施例3可缩短小鼠在强迫游泳试验中的不动时间，且低剂量组显示出更好的趋势，但两个剂量组之间无明显差异。
实验结果表明，实施例3可减少小鼠强迫游泳不动时间，与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01，means±SD，n＝12(见图3)。
实验例3  实施例1对正常小鼠海马内cAMP、PKA、CREB、BDNF的影响
1.实验器材
1.1实验动物：
健康雄性SD大鼠，体重180-200g，70只，购于北京维通利华动物试验中心。
1.2试剂
Parameter Cyclic AMP Assay Kit，KGE002(美国R&D Systems，Inc.)；DuoSet IC Human/Mouse/Rat Phospho-CREB(S133)ELISA Kit，DYC2510-2(美国R&D Systems，Inc.)；
PepTag Assay for Non-Radioactive Detection of cAMP-DependentProtein Kinase Kit，V5340(美国Promega Corporation.)；
PDE-Glo Phosphodiesterase Assay Kit，V1361(美国Promega Corporation.)；
Pierce BCA Protein Assay Kit，23227，(美国Thermo)；
盐酸帕罗西汀(批号：08030078，中美天津史克制药有限公司)；
环磷酸腺苷、腺苷等对照品购自中国药品生物制品检定所；
实施例1由北京欧纳尔生物工程技术有限公司提供；
NaH2PO4、Na2HPO4、KH2PO4、KCl、NaCl、MgCl2、Tris Base、Tris-HCl等试剂均为细胞培养级生化试剂，购自美国Sigma公司；
E-64、APROTININ、LEUPEPTIN、Pepstatin A、PMSF、NaF、EDTA、EGTA、DTT、NaVO4、Sodium pyrophosphate、琼脂糖、甘油等试剂均为高纯级，购自加拿大BioBasic公司；
乙腈、甲醇(色谱纯，德国MERCK公司)；超纯水(MilliQ纯水，本单位自制)。
1.3实验仪器
FlexStation 3多功能微孔板分析仪(美国Molecular DevicesCorporation.)；Waters600E高效液相色谱仪(四元泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱、紫外检测器，美国Waters公司)；
冷冻离心机(美国BECKMAN公司)；
电子超声匀浆器(美国UNTRASOUND TECHNOLOGY公司)；
电泳仪(北京六一仪器厂)；
凝胶成像仪(SYN GENE公司)；
ULTRA LOW超低温冰箱(日本SANYO公司)；
mLine单道移液器、8道移液器(芬兰Biohit公司)。
2.给药
大鼠适应性饲养三天后，随机分为3个组，分别标记为：A生理盐水组、B帕罗西汀组、C实施例1组。盐酸帕罗西汀片碾碎，用超纯水配成一定浓度的混悬液，大鼠灌胃给药剂量为5mg/kg；实施例1取其内容物用水配成一定浓度的溶液，大鼠灌胃给药剂量为30mg/kg；生理盐水组给予等体积的0.9％生理盐水；给药之前所有大鼠称重并用苦味酸标记，所有药物均在37℃下预热30min后给药。
3.取材
A、B、C三组实验动物给药8h后，乙醚麻醉，股动脉放血处死，冰上断头取脑，分取海马组织，精细切割成三份，分别置于预先编号标记的1.5mL彩盖螺口冻存管中，准确称重后迅速投入液氮中速冻15min，再置于-80℃冰箱中保存备用。
4.样本检测
4.1大鼠海马组织中Cyclic AMP含量测定
将海马组织样本解冻，用少量生理盐水冲洗，再按1∶20(g∶mL)的比例加入试剂盒提供的细胞裂解液(将5倍浓缩液稀释后使用)，电子超声匀浆器匀浆30s，4℃下10000rpm冷冻离心5min，取上清液置于预先编号的1.5mL彩色Eppendorf离心管中，置于冰盒内，待测。应用美国R&D Systems公司Parameter Cyclic AMP Assay ELISA试剂盒进行样本检测。将样品恢复至室温，按试剂盒说明书采用竞争性ELISA法测定样品中Cyclic AMP含量。用多孔板分析仪在450nm下测定OD值，根据标准曲线计算出样本中Cyclic AMP含量。
4.2大鼠海马组织中cAMP-Dependent PKA活性测定
将海马组织样本解冻，用少量生理盐水冲洗，再按1∶10(g∶mL)的比例加入PKA extraction buffer(按照试剂盒中配方配制)，电子超声匀浆器匀浆30s，4℃下10000rpm离心5min，取上清液置于预先编号的1.5mL彩色Eppendorf离心管中，置于冰盒内，待测。应用美国Promega公司PepTag Assayfor Non-Radioactive Detection of cAMP-Dependent Protein Kinase试剂盒进行检测分析。在预先编号的200μL PCR八联管中按照试剂盒说明书加入预混的试剂，分别取9μL各样本对号加入各管中，涡旋混匀，离心，室温反应30min，然后置于PCR仪中98℃5min对酶进行灭活。实验中按照说明书要求分别设置正对照与负对照管，随行实验。制备0.8％的琼脂糖凝胶，将酶反应后的样本各取10μL加入凝胶的梳孔中，100V，130mA电泳30min，电泳液为50mM Tris-HCl(pH 8.0)缓冲液。电泳后将琼脂糖凝胶取出，凝胶成像仪照相，然后置于紫外分析仪上，将已磷酸化反应的PepTag A1Peptide斑点切下，分别置于预先编号标记的1.5mL彩盖螺口冻存管中。加热使琼脂糖凝胶融化，用超纯水定容到250μL，迅速取出125μL加入预先编号的1.5mL彩色Eppendorf离心管中，再加入75μL试剂盒提供的溶胶液和50L冰醋酸，涡旋混匀，取200μL加入96孔酶标板中，以负对照管正极方向琼脂糖为空白对照，在多孔板分析仪上进行荧光分析。设定Excitation Wavelength 568nm，Emission Wavelength 592nm。以样本荧光强度表示PKA活性。
4.3大鼠海马组织中p-CREB含量测定
应用美国R&D Systems公司DuoSet IC Human/Mouse/Rat Phospho-CREB(S133)ELISA试剂盒进行样本检测。将海马组织样本解冻，用少量生理盐水冲洗，再按1∶20(g∶mL)的比例加入组织匀浆液(按照试剂盒中IC DELUENT6#配方配制)，电子超声匀浆器匀浆30s，4℃下10000rpm离心5min，取上清液置于预先编号的1.5mL彩色Eppendorf离心管中，置于冰盒内，待测。测定时将样品恢复至室温，按试剂盒说明书采用sandwich ELISA法测定样品中p-CREB含量。用多孔板分析仪在450nm下测定OD值，根据标准曲线计算出样本中p-CREB含量。
4.4大鼠海马组织中总蛋白测定
为了更准确标定样本中每毫克蛋白所含的p-CREB蛋白的量，需要对样本的总蛋白含量进行测定。取p-CREB测定试验中的组织匀浆离心后的上清液，用PBS稀释25倍后，作为测试样本，按照Pierce BCA Protein Assay Kit试剂说明书，用多孔板分析仪在562nm下测定OD值，以牛血清白蛋白(BSA)为标准品，根据标准曲线计算出样本中总蛋白含量。
4.5磷酸二酯酶(PDE)活性测定
使用美国Promega公司生物发光法(Bioluminescent)PDE-GloPhosphodiesterase Assay试剂盒测定实施例1对大鼠脑海马组织中PDE活性的影响。
4.5.1药液配制：
实施例1取内容物配制成0.02mg/mL、0.05mg/mL和1.0mg/mL三个浓度。
4.5.2样品制备：
取一定量的海马组织，少量生理盐水冲洗后，按1∶10(g∶mL)的比例加入PDE-Glo Reaction Buffer(Tris-HCl 40mM，MgCl210mM，BSA 0.1mg/ml，另加入PMSF 1mM，leupetin 2μM/mL，aprotinin 2μM/mL，E-642μM/mL)，电子超声器匀浆，4℃下14000rpm离心30分钟，取上清液作为酶液，备用。
4.5.3生物发光法测定
按照试剂盒说明书提供的方法进行操作，酶反应液部分，加入1μL药液，1.5μL酶液，共2.5μL；加入含有2μmol Cyclic AMP的底物溶液2.5μL，混匀，37℃反应30min，然后加入含有PDE强抑制剂IBMX的反应终止溶液2.5μL，混匀；加入测试溶液2.5μL，混匀，室温反应20min；最后加入发光试剂10μL，室温反应10min后在多功能微孔板分析仪上进行测试。
五、实验结果
1.大鼠海马组织中Cyclic AMP含量
用ELISA法测定了大鼠海马组织匀浆液中Cyclic AMP浓度，除以称量的组织样本重量，得到海马组织中含有的Cyclic AMP的含量，以pmol/g Tissue表示。
实施例1组与生理盐水组和帕罗西汀组比较，大鼠海马组织中Cyclic AMP的含量显著升高，*P＜0.05，n＝10(见图4)。
2.大鼠海马组织中cAMP-Dependent PKA活性
酶反应后，样本进行琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像仪照相，进行粗略分析。
泳道自左至右1-4生理盐水组；5-8帕罗西汀组；9-11实施例1组；12正对照样本；13负对照样本(见图5)。
磷酸化的A1肽带有负电荷，向正极方向移动；未磷酸化的A1肽带有正电荷，向负极方向移动，将二者分开。其中向正极方向移动的已磷酸化的A1肽斑点亮度越高，表明磷酸化水平越高，样本中cAMP-Dependent PKA活性越高。图中可见实施例1组样本正极方向斑点亮度较生理盐水组和帕罗西汀组亮度更高。
切割琼脂糖凝胶斑点，熔胶后定容，以荧光法测定大鼠海马组织中cAMP-Dependent PKA活性，以荧光强度表示
给药8h后，实施例1组与空白对照组和帕罗西汀组比较，大鼠海马组织中cAMP-Dependent PKA活性显著升高，*P＜0.05，n＝10(见图6)。
3.大鼠海马组织中总蛋白含量
用BCA法测定了大鼠海马组织样本匀浆液中总蛋白的浓度，用以标定每μg总蛋白中含有p-CREB的量。结果见表1：
表1  大鼠海马组织样本匀浆液总蛋白浓度(μg/mL)
Figure B2009101433377D0000161
4.大鼠海马组织中p-CREB含量
采用sandwich ELISA法测定了大鼠海马组织样品匀浆液中p-CREB浓度，并以p-CREB(pg)/总蛋白(μg)表示大鼠海马组织中p-CREB含量。
给药8h后，实施例1组与生理盐水组和帕罗西汀组比较，大鼠海马组织中p-CREB的含量升高，统计学无显著性差异，n＝10(见图7)。
5.药物对大鼠海马组织中磷酸二酯酶(PDE)活性影响
用生物发光法测定了海马组织中PDE的活性以及体外给予药物后对PDE活性的抑制作用。以发光强度表示PDE活性，与对照组比较，发光强度较高，说明PDE活性较高；发光强度较低，说明PDE活性被抑制。
与对照组相比，实施例1中剂量组PDE活性受到明显抑制，*P＜0.05，n＝4(见图8)。
六、结论
1.本实验研究表明实施例1中剂量组可显著抑制大鼠海马组织中磷酸二酯酶的活性，由于磷酸二酯酶是Cyclic AMP的灭活酶，其受到抑制后可使大鼠海马组织中Cyclic AMP含量升高。
2.大鼠灌胃给药8小时后，实施例1组与生理盐水组和帕罗西汀组比较，脑海马组织Cyclic AMP含量显著升高；cAMP-Dependent PKA活性显著增强；p-CREB含量也有提高。
3.本实验证实了实施例1可以通过第二信使Cyclic AMP细胞信号转导通路发挥药理作用，并在给药8小时后即可快速激活cAMP-PKA-CREB(p-CREB)通路(与生理盐水组和帕罗西汀组相比有显著差异，*P＜0.05)。
4.同样8小时给药，阳性对照药帕罗西汀不能激活cAMP-PKA-CREB(p-CREB)通路。

Claims (9)

1.一组用于治疗忧郁症的药物组合物，所述药物组合物是由包括人参皂甙Rg1、Rb1、甘草酸(或甘草次酸)为原料所制成。
2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物进一步由包括1～100重量份人参皂甙Rg1、0.5～100重量份人参皂甙Rb1、0.5～100重量份甘草酸(或甘草次酸)的原料所制成。
3.如权利要求1所述的药物组合物，其优选为由包括10重量份的人参皂甙Rg1、5～10重量份的人参皂甙Rb1、5～10重量份的甘草酸(或甘草次酸)的原料制成。
4.如权利要求1所述的药物组合物，人参皂甙Rg1的纯度为30～98％、Rb1的纯度为30～98％、甘草酸(或甘草次酸)的纯度为30～98％。
5.如权利要求4所述的药物组合物，人参皂甙Rg1的优选纯度为90％、Rb1的优选纯度为90％、甘草酸(或甘草次酸)的优选纯度为90％。
6.本发明揭露了一种用于治疗忧郁症的药物组合物的制备方法：
(a)将1～100重量份人参皂甙Rg1、0.5～100重量份人参皂甙Rb1和0.5～100重量份甘草酸(或甘草次酸)混合粉碎，即得本发明药物组合物。
(b)将1～100重量份人参皂甙Rg1、0.5～100重量份人参皂甙Rb1、0.5～100重量份甘草酸(或甘草次酸)与设定量的淀粉、乳糖、微粉硅胶等辅料一起混合粉碎，即得本发明药物组合物。
上述制备方法中三种原料的优选配比，是由包括10重量份的人参皂甙Rg1、5～10重量份的人参皂甙Rb1、5～10重量份的甘草酸(或甘草次酸)的原料制成，它们的纯度为30～98％，其中优选纯度为90％。
7.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物含有选自药学上可接受的载体、添加剂及其组合。
8.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物制成剂型，该剂型选自锭剂、胶囊剂、散剂、片剂、粉剂、溶液剂、微囊剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、滴丸剂、丸剂及药剂学上的口服药物剂型之一。
9.如权利要求1所述的药物组合物，还可将其制成保健食品或营养剂。
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