MX2008012065A - Extractos y metodos que comprenden especies de te verde. - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere a extractos de especies de material de planta de té verde preparados por métodos de extracciones de CO2 supercrítico.

Description

EXTRACTOS Y MÉTODOS QUE COMPRENDEN ESPECIES DE TÉ VERDE CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a extractos de especies de té verde, métodos para prepararlos usando etapas de extracción secuencial, y métodos de tratamiento de los mismos .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El Té se originó en el Sur de China hace aproximadamente 4000 años y es consumido por más de dos tercios de la población mundial. El té tiene un olor atractivo, excelente sabor y efectos que promueven la salud, haciéndolo la bebida más popular en el mundo, después de solamente el agua. Tan adelantado como en 300 A.C, el té se usó por los Chinos como una bebida medicinal. El uso medicinal del té se registró en la Farmacopea China antigua "Ben Cao Gang Mo", escrita durante la dinastía Ming (siglo 16) . La fuente del té es botánica, Camellia sinensis. Literalmente cientos de tés son ahora producidos a partir de las hojas de C. sinensis y son en general, clasificados en tres categorías principales: té verde no fermentado, oolong parcialmente fermentado, y té negro completamente fermentado. La Camellia sinensis, un miembro de la familia Theaceae, es un arbusto siempre verde o árbol que puede crecer a una altura de 30 pies (9.14 mts) . Sin embargo, es usualmente asegurada a una altura de 1-5 pies (0.30-1.52 mts) en cultivo para hojas de té. La planta es en exceso ramificada con hojas oblongas-ovadas , pilosas, verde oscuro, cultivadas y preferencialmente escogidas como brotes jóvenes. Las hojas más viejas son en general, consideradas por ser de calidad inferior. Aunque tanto el té negro como verde se derivan del botánico, Camellia sinensis, es el procesamiento de las hojas lo que la diferencia de los dos tipos de té. En el caso de los tés negros, después que las hojas son escogidas, se permiten marchitarse y después enrollarse. Estas hojas se dejan fermentar, convirtiendo los polifenoles del té (catequinas) en folobafenos y formar anillos aromáticos. La fermentación ocurre como enzimas de hojas, que incluyen oxidato de polifenol, reacciona con los polifenoles del té, particularmente las catequinas [1] . En el caso de producción de té verde, a las hojas jóvenes no se les permite oxidar. Preferentemente, las hojas son cocidas a vapor, lo cual inactiva las enzimas oxidativas, de este modo, preservando las catequinas del té. o Los constituyentes químicos de la hoja del té verde incluyen los polifenoles, metilxant inas , aminoácidos, ácidos orgánicos, carbohidratos, proteínas, lingina, lípidos, clorofila y otros pigmentos, cenizas, y aceites esenciales, véase Tabla 1 [2,3] . De un punto de vista biológico y comercial, los polifenoles y cafeína han sido t radicionalmente considerados por ser de mayor importancia que los otros constituyentes. Sin embargo, otros constituyentes químicos tales como teanina, los aceites esenciales y, los polisacáridos insolubles en etanol-solubles en agua, han sido mostrados recientemente por tener efectos benéficamente biológicamente importantes (véase sumario abajo) .

Tabla 1. Constituyentes químicos principales de hojas té verde Constituyentes químicos % en peso seco Fracción de Aceite Esencial (aceites volátiles 0.1 principalmente ) Polifenoles 39.0 Catequinas 25.0 Catequina (C) (0.2) Epicatequina (EC (2.2) Galato de epicatequina (ECG) (1.9) Galocatequina (GC) (8.7) Galato de epigalocatequina (EGCG) (10.9) Epigalocatequina (EGC) (9.7) Derivados de ácido caféico Rastros Ácido caféico Ácido clorogénico Flavonoles y glicósidos de flavonol 3.0 Quercetina (0.4) Rutina (1.5) caemferol (0.5) Otros ácidos fenólicos (taninos) 12.0 etilxantinas 3.5 Cafeína* 3.3 Teobromina 0.1 Aminoácidos 4.0 Teanina 0.6 Ácido oxálico 0.6 Polisacáridos 13.0 Monosacáridos 4.0 Celulosa 7.0 Proteina 15.0 Ácidos orgánicos 0.5 Lignina 6.0 Lipidos 3.0 Clorofila y otros pigmentos 0.5 Ceniza 5.0 ?Toxicidad El té verde contiene 30-42% de polifenoles por % en peso de masa seca. La mayoría de estos polifenoles los cuales también han sido reportador por tener la actividad biológicamente benéfica más grande, son los flavonoles conocidos como "catequinas". Las catequinas principales incluyen las siguientes: ( - ) -epigalocatequina-3-galato (EGCG) , ( - ) -epigalocatequina (EGC) , (-) -galato de catequina (CG) , y epicatequina (EC) . Las concentraciones más altas están en el orden de EGCG, seguida por EGC, ECG, EC en orden decreciente. Otras catequinas incluyen (+)-galocatequina. (GC) , (-) -galato de galocatequina (GCG) , (-)-galato de catequina (CG) , y (+) -catequina (C) están presentes en cantidades menores. Muchos efectos biológicos benéficos de las catequinas han sido estudiados. Incluyen actividades anti-oxidativas , efectos antimutagénicos , efectos anti-carcinogénicos , inhibición de nitrosación, y acciones inhibidoras de crecimiento de tumor y células inmortalizadas, pero sin efecto en células normales. Sin embargo, otros grupos de constituyentes químicos también exhiben efectos biológicamente benéficos. Por ejemplo, los constituyentes químicos de aceite esencial (EO) , tienen actividad anti-oxidante , actividad anti-asmática, actividad anti-bacteriana, actividad anti-viral, actividad anticancerígena, actividad de mejoramiento inmunológico, actividad hipoglicémica , actividad hipolipidémica , actividad anti-inflamatoria , actividad anti-dermatítica, actividad anti-acné, y actividad anti-aterosclerosis . La teanina (T) tiene reducción de ansiedad y actividad de mejoramiento de humor, actividad de mejoramiento cognitivo, actividad anti-cancerígena , neuroprotectora, contra isquemia cerebral y apoplejía, y actividad de reducción de peso. Además, los polisacáridos del té verde (P), tienen actividad de depuración de radical libre de oxígeno y antioxidante, actividad anti-diabética y actividad de mejoramiento inmunológico. Para resumir brevemente, el valor terapéutico de los constituyentes químicos del té verde, investigación científica reciente y estudios clínicos, han demostrado los siguientes efectos terapéuticos de los varios compuestos químicos, fracciones químicas y productos brutos de extracción de té verde, los cuales incluyen los siguientes: anti-oxidante poderoso, depurador de radicales libres de oxigeno, e inhibición de nitrosación (EO, catequinas-principalmente ECGC & ECG, P, extracto) [4-7]; actividad anti-mutagénica (EO, catequinas, extracto) [7-12] ; actividad anti-carcinogénica sin efecto en células normales (EO, catequinas, T, extracto) [7-13]; protectora de piel (EO, catequinas, P, extracto) [8,10,11,14,15]; enfermedad cardio-vascular (EO, catequinas, extracto) [4-7,16,17]; anti-hiperlipidemia (extracto) [16]; protección cerebral y anti-apoplej ia (EO, catequinas, T, P, extracto) [18,19]; enfermedad anti-periodontal (extracto) [20]; anti-osteoporosis (extracto) [21]; mejoramiento inmune (extracto) [22]; anti-viral, anti-VIH, y anti-bacteriana (EO, catequinas, extracto) [23] ; pérdida de peso y termogénesis (catequinas, cafeína, T, extracto) [23,24]; anti-envej ecimiento (catequinas-ECGC, extracto) [23]; reducción de ansiedad, mejorador del humor, y mejoramiento cognitivo (T, extracto) [25,26]; y anti-diabetes (P, extracto) [27 ] . Aunque el té verde es generalmente seguro y no tóxico a dosis muy altas, un resultado potencial de consumo de bebidas de té verde y productos medicinales es el desarrollo de trastornos relacionados con la cafeína, tales como arritmias cardiacas, trastornos gastrointestinales y toxicidad por cafeína manifestada por síndrome de jitteriness, ansiedad generalizada, insomnio. Sin embargo, el consumo excesivo de cafeína exagera el estrés y la liberación de la hormona relacionada con el estrés. La presión sanguínea puede ser elevada y los riesgos del ataque cardiaco y apoplejía son incrementados cuando se consume cafeína excesiva. En vista de la carencia de la selectividad de comprensión en procesos de extracción actualmente disponibles, los productos de té verde actualmente disponibles son sospechosos con respecto a sus composiciones químicas. De este modo, lo que se necesitan son nuevas y reproducibles composiciones de extracto del té verde, que combinan aceite esencial purificado, catequinas con ECGC alto, teanina, y fracciones constituyentes químicas de polisacáridos con bajas concentraciones de cafeína que pueden ser producidas con cantidades confiables y estandarizadas de estos constituyentes químicos del té verde médicamente benéficos y sinergísticamente actuando fisiológicamente [14,28].

SUMARIO DE LA INVENCIÓN En un aspecto, la presente invención se refiere a un extracto de especies de té verde que comprende, una fracción que tiene un cromatograma de espectrometría de Análisis Directo en Tiempo Real (DART) de cualquiera de las Figuras 6 a 25.

En una modalidad adicional, el extracto comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un aceite esencial, un polifenol, un polisacárido y combinaciones de los mismos. En una modalidad adicional, el aceite esencial se selecciona del grupo que consiste de ácido n-hexadecanoico, ácido tetradecanoico, 9-hexadecanol , 1-undecanol, 1-hexadecanol , alcohol oleiloico, 9-octadecen-l-ol, nonadecanol y combinaciones de los mismos. En una modalidad adicional, el polifenol se selecciona del grupo que consiste de catequinas, flavonoles, glicósidos de flavonol y combinaciones de los mismos. En una modalidad adicional, la catequina se selecciona del grupo que consiste de catequina (C) , epicatequina (EC) , galato de epicatequina (ECG) , galocatequina (GC) , galato de epigalocatequina (EGCG) , epigalocatequina (EGC) , y combinaciones de los mismos. En una modalidad adicional, el flavonol se selecciona del grupo que consiste de quercetina y rutina. En una modalidad adicional, el glicósido de flavonol es caempferol. En una modalidad adicional, el polisacárido se selecciona del grupo que consiste de glucosa, arabinosa, galactosa, ramnosa, xilosa, ácido urónico y combinaciones de los mismos. En una modalidad adicional, las especies de té verde de la presente invención son sustancialmente libres de cafeína, ácido oxálico o taninos.

En una modalidad adicional, la cantidad de aceite esencial es mayor de 2% en peso. En una modalidad adicional, la cantidad de aceite esencial es desde 25% hasta 90% en peso. En una modalidad adicional, la cantidad de aceite esencial es desde 50% hasta 90% en peso. En una modalidad adicional, la cantidad de aceite esencial es de 75% hasta 90% en peso. En una modalidad adicional, la cantidad de polifenol es mayor de 40% en peso. En una modalidad adicional, la cantidad de polifenol es desde 50% hasta 90% en peso. En una modalidad adicional, la cantidad de polifenol es desde 75% hasta 90% en peso. En una modalidad adicional, el polisacárido se mayor de 15% en peso. En una modalidad adicional, la cantidad de polisacárido es mayor de 25% a 90% en peso En una modalidad adicional, la cantidad de polisacárido es mayor de 50% a 90% en peso. En una modalidad adicional, la cantidad de polisacárido es mayor de 75% a 90% en peso. En una modalidad adicional, el extracto de especies de té verde comprende un aceite esencial desde 2% hasta 97% en peso, una catequina desde 15% hasta 98% en peso, una teanina desde 4% hasta 90% en peso, y un polisacárido desde 9% hasta 98% en peso. En otro aspecto, la presente invención se refiere a un alimento o medicamento que comprende, un extracto de especies de té verde de la presente invención. En otro aspecto, la presente invención se refiere a un método para preparar un extracto de especies de té verde que tienen al menos, una característica predeterminada que comprende extraer secuencialmente, un material de planta de especies de té verde para proporcionar una fracción de aceite esencial, una fracción de polifenol, y una fracción de polisacárido mediante a) extraer un material de planta de especies de té verde por extracción de dióxido de carbono súper crítica para proporcionar una fracción de aceite esencial y un primer residuo; b) extraer ya sea un material de planta de especies de té verde o el primer residuo de la etapa a) por extracción alcohólica para proporcionar la fracción de polifenol y un segundo residuo; y c) extraer el segundo residuo de la etapa b) por extracción de agua y precipitar el polisacárido con alcohol para proporcionar la fracción de polisacárido. En una modalidad adicional, el primer residuo de la etapa a) es además descafeinado por extracción de dióxido de carbono supercrítico . En una modalidad adicional, la fracción polifenólica es además purificada por cromatografía adsorbente de afinidad. En una modalidad adicional, la etapa a) comprende: 1) cargar en un recipiente de extracción, material de planta de especies de té verde molidas; 2) agregar dióxido de carbono bajo condiciones supercriticas; 3) contactar el material de planta de especies de té verde y el dióxido de carbono por un tiempo; y 4) colectar una fracción de aceite esencial en un recipiente de colección. En una modalidad adicional, la etapa a) además comprende alterar las proporciones de compuesto químico de aceite esencial, dividiendo la fracción de aceite esencial con un sistema de separación fraccional de dióxido de carbono supercrítico . En una modalidad adicional, condiciones súper críticas comprenden 60 bars hasta 800 bars de presión a 35°C hasta 90°C. En una modalidad adicional, las condiciones supercriticas comprenden 60 bars hasta 500 bars de presión a 40°C hasta 80°C. En una modalidad adicional, el tiempo es 30 minutos hasta 2.5 horas. En una modalidad adicional, el tiempo es 1 hora. En una modalidad adicional, la etapa b) comprende: 1) contactar el material de planta de especies de té verde molidas o el primer residuo de la etapa a) con un solvente alcohólico por un tiempo suficiente para extraer constituyentes químicos de polifenol; 2) pasar una solución acuosa de constituyentes químicos polifenólicos extraídos de la etapa 1) a través de una columna de resina adsorbente de afinidad, en donde los constituyentes polifenólicos son adsorbidos; 3) eluir los compuestos de cafeína a partir del adsorbente de afinidad usando un solvente de elución acídico; y 4) eluir los constituyentes químicos polifenólicos a partir de la resina adsorbente de afinidad usando un solvente de elución hidro-alcohólico . En una modalidad adicional, la solución hidro-alcohólica comprende etanol y agua, en donde la concentración de etanol es 10-95% en peso. En una modalidad adicional, la solución hidro-alcohólica comprende etanol y agua, en donde la concentración es 25% en peso. En una modalidad adicional, la etapa 1) se realizó a 30°C hasta 100°C. En una modalidad adicional, la etapa 1) se realizó a 60°C hasta 100°C. En una modalidad adicional, el tiempo es 1-10 horas. En una modalidad adicional, el tiempo es 1-5 horas. En una modalidad adicional, el tiempo es 2 horas. En una modalidad adicional, la etapa c) comprende: 1) contactar el segundo residuo de la etapa b) con agua por un tiempo suficiente para extraer polisacáridos ; y 2) precipitar los polisacáridos de la solución acuosa por precipitación de alcohol. En una modalidad adicional, el agua está a 70°C hasta 90°C. En una modalidad adicional, el agua está a 80°C hasta 90°C. En una modalidad adicional, el tiempo es 1-5 horas. En una modalidad adicional, el tiempo es 2-4 horas. En una modalidad adicional, el tiempo es 2 horas. En una modalidad adicional, el alcohol es etanol.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un extracto de especies de té verde preparado por los métodos de la presente invención. En otro aspecto, la presente invención se refiere a un extracto de especies de té verde que comprende, pirogalol, teofilina/teobromina a 25 a 35% en peso del pirogalol, ácido shikimico a 0.1 a 5% en peso del pirogalol, ácido cumárico a 0.1 a 5% en peso del pirogalol, y 3-metoxi-l-tirosina a 0.1 a 5% en peso del pirogalol. En otro aspecto, la presente invención se refiere a un extracto de especies de té verde que comprende, teanina, teofilina/teobromina de 20 a 30% en peso de la teanina, catequina/epicatequina de 1 a 10% en peso de la teanina, ácido gálico de 1 a 10% en peso de la teanina, catequina quinona de 0.1 a 5% en peso de la teanina, cinamaldehido de 0.1 a 5% en peso de la teanina, y 3-metoxi-l-tirosina de 1 a 10% en peso de la teanina. En otro aspecto, la presente invención se refiere a un extracto de especies de té verde que comprende, teanina, teofilina/teobromina de 45 a 55% en peso de la teanina, catequina/epicatequina de 1 a 10% en peso de la teanina, ácido carnósico de 0.1 a 5% en peso de la teanina, ácido gálico de 1 a 10% en peso de la teanina, catequina quinona de 0.5 a 5% en peso de la teanina, cinamaldehido de l a 10% en peso de la teanina, ácido metil cinámico de 0.1 a 5% en peso de la teanina, cinamida de 1 a 10% en peso de la teanina, y 3-metoxi-l-tirosina de 1 a 10% en peso de la teanina . En otro aspecto, la presente invención se refiere a un extracto de especies de té verde que comprende, pirogalol, teofilina/teobromina de 1 a 10% en peso del pirogalol, teanina de 0.1 a 5% en peso del pirogalol, catequina/epicatequina de 1 a 10% en peso del pirogalol, caemferol de 5 a 15% en peso del pirogalol, miricitina de 0.1 a 5% en peso del pirogalol, galocatequina quinona de 0.1 a 5% en peso del pirogalol, ácido gálico de 65 a 75% en peso del pirogalol, catequina quinona de 0.5 a 5% en peso del pirogalol, ácido vanílico de 1 a 10% en peso del pirogalol, y 3-metoxi-l-tirosina de 1 a 5% en peso del pirogalol. En otro aspecto, la presente invención se refiere a un extracto de especies de té verde que comprende caemferol, teanina de 1 a 10% en peso del caemferol, catequina/epicatequina de 95 a 105% en peso del caemferol, quercetina de 20 a 30% en peso del caemferol, miricitina de 5 a 15% en peso del caemferol, galocatequina quinona de 5 a 10% en peso del caemferol, ácido gálico de 55 a 65% en peso del caemferol, catequina quinona de 1 a 10% en peso del caemferol, ácido cumérico de 10 a 20% en peso del caemferol, ácido vanílico de 1 a 10% en peso del caemferol, y 3-metoxi-l-tirosina de 15 a 25% en peso del caemferol . En otro aspecto, la presente invención se refiere a un extracto de especies de té verde que comprende pirogalol, teofilina/teobromina de 0.5 a 5% en peso del pirogalol, catequina/epicatequina de 95 a 105% en peso del pirogalol, caemferol de 55 a 65% en peso del pirogalol, quercetina de 20 a 30% en peso del pirogalol, miricitina de 10 a 20% en peso del pirogalol, galocatequina quinona de 20 a 30% en peso del pirogalol, ácido gálico de 50 a 60% en peso del pirogalol, catequina quinona de 15 a 25% en peso del pirogalol, ácido cumárico de 15 a 25% en peso del pirogalol, ácido vanílico de 1 a 10% en peso del pirogalol, y 3-metoxi-l-tirosina de 0.5 a 5% en peso del pirogalol. En otro aspecto, la presente invención se refiere a un extracto de especies de té verde que comprende pirogalol, teofilina/teobromina de 0.5 a 5% en peso del pirogalol, catequina/epicatequina de 95 a 105% en peso del pirogalol, caemferol de 55 a 65% en peso del pirogalol, quercetina de 20 a 30% en peso del pirogalol, miricitina de 10 a 20% en peso del pirogalol, galocatequina quinona de 20 a 30% en peso del pirogalol, ácido gálico de 50 a 60% en peso del pirogalol, catequina quinona de 15 a 25% en peso del pirogalol, ácido cumérico de 15 a 25% en peso del pirogalol, ácido vanílico de 1 a 10% en peso del pirogalol, y 3-metoxi-l-tirosina de 0.5 a 5% en peso del pirogalol.

En otro aspecto, la presente invención se refiere a un extracto de especies de té verde que comprende pirogalol, teanina en peso del pirogalol, catequina/epicatequina de 90 a 100% en peso del pirogalol, caemferol de 65 a 75% en peso del pirogalol, quercetina de 15 a 25% en peso del pirogalol, miricitina de 5 a 15% en peso del pirogalol, galocateqina quinona de 5 a 15% en peso del pirogalol, ácido gálico de 65 a 75% en peso del pirogalol, catequina quinona de 5 a 15% en peso del pirogalol, ácido cumárico de 10 a 20% en peso del pirogalol, ácido vanílico de 1 a 10% en peso del pirogalol, y 3-metoxi-l-tirosina de 1 a 10% en peso del pirogalol. Las extracciones de la presente invención son empleadas en proporcionar efectos fisiológicos y médicos que incluyen, pero no se limitan a, actividad antioxidante, depuración de radicales libres de oxígeno, inhibición de nitrosación, actividad anti-mutagénica (prevención de cáncer) , actividad anti-carcinogénica (terapia de cáncer), protección de piel, anti-envejecimiento, enfermedad anti-cardiovascular , enfermedad y terapia anti-apople ía , protección cerebral, anti-hiperlipidemia, enfermedad anti-periodontal , anti-osteoporosis , mejoramiento inmunológico, anti-viral, actividad anti-VIH y anti-bacteriana , actividad anti-fúngica, actividad anti-viral, control de peso y termogénesis , anti-diabetes , y reducción de ansiedad, mejoramiento de humor y mejoramiento cognitivo. Estas modalidades de la descripción, otras modalidades y sus características y factores, serán aparentes de la descripción, dibujos y reivindicaciones que siguen .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 representa un diagrama esquemático ejemplar de extracción de dióxido de carbono supercrítico de aceite esencial (Etapa 1) y descafeinación de té verde (Etapa 2), de conformidad con la presente invención. La Figura 2 representa un diagrama esquemático ejemplar de extracción de etanol de fracción de constituyentes químicos de catequina de té verde crudo, de conformidad con la presente invención. La Figura 3 representa un diagrama esquemático ejemplar de un proceso de extracción adsorbente de afinidad, de conformidad con la presente invención. La Figura 4 representa un diagrama esquemático ejemplar de extracción de lixiviación de agua para L-teanina y polisacáridos , de conformidad con la presente invención . La Figura 5 representa un diagrama esquemático ejemplar de la purificación de L-teanina y fracciones de polisacárido, de conformidad con la presente invención. La Figura 6 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para fracción de polisacárido de té verde de la etapa 6 de los presentes métodos (modo de ión positivo) . La Figura 7 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para fracción de polisacárido de té verde de la etapa 6 de los presentes métodos (modo de ión negativo) . La Figura 8 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la fracción de polisacárido de té verde de la etapa 6 de los presentes métodos (modo de ión positivo) . La Figura 9 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la fracción de polisacárido de té verde de la etapa 6 de los presentes métodos (modo de ión negativo) . La Figura 10 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la fracción de polisacárido de té verde de la etapa 6 de los presentes métodos (modo de ión positivo) . La Figura 11 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la fracción de polisacárido de té verde de la etapa 6 de los presentes métodos (modo de ión negativo) . La Figura 12 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para el té verde comercialmente disponible (Kai Hua Long Ding) (modo de ión positivo) . La Figura 13 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para el extracto crudo de té verde por 95% de lixiviación de etanol de la etapa 3 de los presentes métodos (modo de ión positivo) . La Figura 14 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la alimentación de ácido fenólico de té verde de la etapa 4 de los presentes métodos por cromatografía en columna usando material de envasado de desorpción XAD 7HP (modo de ión positivo) . La Figura 15 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la fracción F2 purificada de té verde de la etapa 4 de los presentes métodos por cromatografía en columna usando material de envasado de desorpción XAD 7HP (modo de ión positivo) . La Figura 16 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la fracción F3 purificada de té verde de la etapa 4 de los presentes métodos por cromatografía en columna usando material de envasado de desorpción XAD 7HP (modo de ión positivo) . La Figura 17 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la fracción F4 purificada de té verde de la etapa 4 de los presentes métodos por cromatografía en columna usando material de envasado de desorpción XAD 7HP (modo de ión positivo) .

La Figura 18 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la fracción F5 purificada de té verde de la etapa 4 de los presentes métodos por cromatografía en columna usando material de envasado de desorpción XAD 7HP (modo de ión positivo) . La Figura 19 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para el té verde comercialmente disponible (Kai Hua Long Ding) (modo de ión negativo) . La Figura 20 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para extracto crudo de té verde por 95% de lixiviación de etanol de la etapa 3 de los presentes métodos (modo de ión negativo) . La Figura 21 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la alimentación de ácido fenólico de té verde de la etapa 4 de los presentes métodos, por cromatografía en columna usando material de envasado de desorpción XAD 7HP (modo de ión negativo) . La Figura 22 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la fracción F2 purificada de té verde, a partir de la etapa 4 de los presentes métodos, por cromatografía en columna usando material de envasado de desorpción XAD 7HP (modo de ión negativo) . La Figura 23 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la fracción F3 purificada de té verde, a partir de la etapa 4 de los presentes métodos, por cromatografía en columna usando material de envasado de desorpción XAD 7HP (modo de ión negativo) . La Figura 24 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la fracción F4 purificada de té verde, a partir de la etapa 4 de los presentes métodos, por cromatografía en columna usando material de envasado de desorpción XAD 7HP (modo de ión negativo) . La Figura 25 representa el Espectro de Masas AccuTOF-DART para la fracción F5 purificada de té verde, a partir de la etapa 4 de los presentes métodos, por cromatografía en columna usando material de envasado de desorpción XAD 7HP (modo de ión negativo) .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones Los artículos "un" y "uno", son usados en la presente para referirse a uno o más de uno (es decir, al menos a uno) del objeto gramatical del artículo. Por medio del ejemplo, "un elemento" significa un elemento o más de un elemento. Como se usa en la presente, "partes aéreas", se refiere a la parte constituyente de C. sinensis que comprende, hojas y tronco. Como se usa en la presente, "fracción de catequina", comprende los compuestos de catequina solubles en etanol y solubles en agua obtenidos o derivados de té verde, que además comprenden pero no se limitan a, compuestos tales como ECGC, EGC, ECG, EC, GC, GCC, GC y C . Los términos "comprende" y "que comprende", son usados en el sentido abierto, inclusivo, significando que los elementos adicionales pueden ser incluidos. El término "que consiste", es usado para limitar los elementos a aquellos especificados, excepto por las impurezas ordinariamente asociadas a estos. El término "que consiste esencialmente de", es usado para limitar los elementos de aquellos especificados y aquellos que no afectan materialmente las características básicas y nuevas del material o etapas. Como se usa en la presente, el término "descafeinado" , comprende composiciones de extracción verde que tienen una concentración de cafeína menor que aquella encontrada en el material de planta de hoja del té verde. El término "cantidad efectiva" como se usa en la presente, se refiere a la cantidad necesaria para provocar la respuesta biológica deseada. Como se apreciará por aquellos de habilidad ordinaria en esta técnica, la cantidad efectiva de un compuesto o agente bioactivo puede variar dependiendo de tales factores como el punto de vista biológico deseado, el agente bioactivo a ser suministrado, la composición de la matriz de encapsulación, el tejido objetivo, etc. Como se usa en la presente, el término "fracción de aceite esencial" comprende compuestos solubles en lipido, insolubles en agua, obtenidos o derivados de especies de té verde que incluyen, pero no se limitan a, los compuestos químicos clasificados como ácido n-hexadecanoico, ácido tetradecanoico, 9-hexadecanol , E, alcohol oleílico, 1-octadecanol, fitol y dihidroactinidiólido . Como se usa en la presente, "materia prima", se refiere en general, a material de planta puro, que comprende plantas completas solas, o en combinación con o más partes constituyentes de una planta que comprende, hojas, raíces, que incluyen pero no se limitan a, raíces principales, raíces posteriores, y raíces de fibras, troncos, hojas, semillas y flores, en donde la planta o parte constituyente puede comprender material que es puro, secado, cocinado a vapor, calentado o de otro modo sometido a procesamiento físico para facilitar el procesamiento, el cual puede además comprender material que está intacto, cortado, trozado, cortado en cubos, molido, triturado o de otro modo procesado para afectar el tamaño y la integridad física del material de planta. Ocasionalmente, el término "materia prima", puede ser usado para caracterizar un producto de extracción que es usado como fuente de alimentación para procesos de extracción adicionales. Como se usa en la presente, el término "fracción" significa que la extracción comprende un grupo especifico de compuestos químicos caracterizado por ciertas propiedades físicas, químicas o propiedades físicas o químicas . Como se usa en la presente, el término "constituyentes del té verde", debe significar compuestos químicos encontrados en especies de té verde y debe incluir todos los compuestos químicos identificados anteriormente, así como también otros compuestos encontrados en especies de té verde, que incluyen pero no se limitan a los constituyentes químicos de aceite esencial, catequinas, teanina y polisacáridos . Como se usa en la presente, el término "uno o más compuestos", significa que al menos un compuesto, tal como ácido n-hexadecanoico (un constituyente químico de aceite esencial soluble en lípido de té verde) , o ECGC (una catequina soluble en etanol-agua y agua de té verde) , o teanina (un aminoácido soluble en agua de té verde) , o una molécula de polisacárido insoluble en etanol-soluble en agua de té verde está propuesta, o que más de un compuesto, por ejemplo, ácido n-hexadecanoico y ECGC están propuestos. Como es sabido en la técnica, el término "compuesto", no significa una molécula única, sino múltiples o moles de uno o más compuestos. Como se sabe en la técnica, el término "compuesto", significa un constituyente químico específico que posee distintas propiedades físicas y químicas, mientras "compuestos", se refiere a uno o más constituyentes químicos. Como se usa en la presente, el término "fracción de polisacárido" , comprende compuestos de polisacárido insolubles en etanol-solubles en agua, obtenidos o derivados de té verde. Ejemplos no limitantes de polisacáridos incluyen glucosa, arabinosa, galactosa, ramnosa, xilosa, ácido urónico y combinaciones de los mismos . Otros constituyentes químicos de té verde también pueden estar presentes en estas fracciones de extracción. Como se usa en la presente, el término "perfil", se refiere a las relaciones en porcentaje en peso de masa de los compuestos químicos dentro de una fracción de extracción o a las proporciones del porcentaje en peso de masa de cada uno de los tres constituyentes químicos de la fracción de té verde en una composición de extracción final de té verde. Como se usa en la presente, el término fracción o composición "purificada", significa una fracción o composición que comprende un grupo específico de compuestos caracterizados por ciertas propiedades fisico-quimicas o propiedades físicas o químicas que son concentradas a más de 50% de los constituyentes químicos de la fracción o composición. En otras palabras, una fracción o composición purificada comprende menos de 50% de compuestos de constituyentes químicos que no son caracterizados por ciertas propiedades físicas-químicas deseadas o propiedades físicas o químicas que definen la fracción o composición. El término "sinergístico", es reconocido en la técnica y se refiere a dos o más componentes que trabajan en conjunto ya que el efecto total es mayor que la suma de los componentes. Como se usa en la presente, el término "fracción de teanina" comprende teanina soluble en agua, un aminoácido obtenido o derivado del té verde. El término "tratar" es reconocido en la técnica y se refiere a curar, así como también aliviar al menos, un síntoma de cualquier condición o trastorno.

Extracciones La presente invención comprende extracciones de fracciones purificadas y aisladas de aceites esenciales, catequinas, teanina y polisacáridos , a partir de una o más materias primas de té verde. Esta fracción individual puede ser combinada en relaciones específicas (perfiles), para proporcionar combinaciones benéficas y puede proporcionar productos de extracto que no se encuentran en productos de extractos actualmente conocidos. Por ejemplo, una fracción de aceite esencial a partir de una especie, puede ser combinado con una fracción de catequina en la misma o diferentes especies, y tal combinación puede o no puede ser combinada con una fracción de teanina o fracción de polisacárido a partir del mismo o diferente material de materia prima de té verde. Tales extracciones incluyen fracciones que tienen cantidades predeterminadas de al menos, una de las fracciones de aceite esencial, catequina, teanina, o polisacárido. Modalidades comprenden extracciones de té verde que son descafeinadas . Modalidades adicionales comprende extracciones que comprenden perfiles alterados (distribución de relación) , de los constituyentes químicos del té verde con relación a aquellos, encontrados en el material de planta nativa o productos de extracto de té verde actualmente disponibles. Por ejemplo, la concentración de fracción de aceite esencial puede ser incrementada o reducida con relación a las concentraciones de catequina y/o teanina y/o polisacáridos . De manera similar, las catequinas o teanina o polisacáridos, pueden ser incrementados o reducidos con relación a las otras fracciones de constituyente de extracto, para permitir nuevas composiciones de perfil químico constituyente para efectos biológicos específicos. En una modalidad, una extracción de la presente invención puede comprender más de 2% en peso de los constituyentes químicos de aceite esencial. Otra modalidad de tales extracciones comprende una concentración predeterminada de catequina, en donde la concentración de catequina es mayor que aquella encontrada en el material de planta nativa o extractos de especie de té verde convencionales. Por ejemplo, una extracción puede comprender nuevas catequinas de té verde a una concentración mayor de 30% en peso de masa de la extracción. Otra modalidad de tales extracciones puede comprender una concentración de L-teanina mayor de 2% en peso de masa, el cual es mayor que la concentración de L-teanina de té verde natural en el material de planta nativo o productos de extracción actualmente disponibles. La alteración de las relaciones de concentración (perfiles químicos) de los constituyentes benéficos de las especies de té Verde individuales, permite la formulación de productos de extracción únicos o nuevos de especies de té Verde, diseñados para condiciones humanas específicas o dolencias. Por ejemplo, una nueva y poderosa composición de Té verde para actividad anti-oxidante , depuración de radical libre de oxígeno e inhibición de nitrosación, podría tener composiciones de aceite esencial purificado mayor, catequina y polisacáridos y una composición de L-teanina reducida en % en masa que aquella encontrada en el material de planta nativa de Té Verde o productos de extracción conocidos convencionales. Por el contrario, una nueva extracción de Té Verde para prevención de cáncer, podría tener fracciones de catequina y aceite esencial purificado mayores y fracciones reducidas de L-teanina y polisacárido en % en peso de masa que aquella encontrada en el material de planta nativa de Té Verde o productos de extracción conocidos convencionales. Otro ejemplo de un nuevo perfil de extracción de Té Verde para protección cerebral y anti-apoplej ía, podría ser un perfil de extracción con composiciones de aceite esencial purificado mayor, catequina, L-teanina, y polisacárido en % en peso de masa que aquella encontrada en el material de planta de Té Verde nativa o productos de extracción de Té Verde convencionales conocidos. Para actividad antienvejecimiento, puede ser deseable una fracción de catequina alta y fracciones de aceite esencial reducido, teanina y polisacáridos en % en peso de masa que aquella encontrada en el material de planta de té verde nativo o productos de extracción convencionales. Por el contrario, para reducción de ansiedad, mejoramiento de humor y mejoramiento cognitivo, una fracción de teanina purificada mayor y fracciones de aceite esencial reducido, catequina y polisacáridos en % en peso de masa que aquellas encontradas en material de planta de té verde nativo o productos de extracción convencionales, pueden ser el producto de composición óptimo. Una modalidad adicional de la invención son extracciones que comprenden sub-fracciones de los constituyentes químicos de catequina, en donde las catequinas totales son altamente purificadas (por ejemplo, > 95% en peso de masa) y compuestos de concentración de catequina altamente bio-activa específica tal como ECGC, tienen su concentración incrementada con relación a los otros compuestos de catequina ( sub-fracciones perfiladas). Tales nueva y purificadas extracciones de sub-fracciones de catequina, pueden ser usadas solas o en combinación con otras fracciones purificadas de té verde, otros constituyentes químicos botánicos, o compuestos químicos farmacéuticos. Por ejemplo, tales nuevas sub-fracciones de catequina pueden tener beneficio sustancial para la prevención de cáncer y envejecimiento. Los métodos de la presente invención comprenden proporcionar nuevas extracciones de té verde para el tratamiento y prevención de trastornos humanos. Por ejemplo, una nueva extracción de té verde para actividad antioxidante y protección cardiovascular, puede tener una concentración de fracción de catequina incrementada, una concentración incrementada de fracción de aceite esencial, una concentración reducida de teanina y una concentración incrementada de fracción de polisacárido en % en peso, que aquella encontrada en el material de planta nativa de té verde o productos de extracción conocidos convencionales. Una nueva extracción de especies de té verde para prevención de apoplejía y terapia puede tener una fracción incrementada de catequina, fracción de aceite esencial, fracción de teanina y una concentración de fracción de polisacárido, por % en peso, que aquella encontrada en el material de planta de té verde nativo o productos de extracción conocidos convencionales. Otro ejemplos de una nueva extracción de té verde para tratamiento de ansiedad y depresión, comprende una composición que tiene una concentración incrementada de fracción de teanina y una fracción reducida de aceite esencial, y una concentración reducida de catequina, y una fracción reducida de polisacárido que aquella encontrada en el material de planta de té verde nativa o productos de extracción convencional conocidos.

Extracciones Relativas a Té Verde Natural Modalidades comprenden extracciones de té verde y que tienen al menos, uno de una concentración de catequina, teanina o polisacárido que está en una cantidad mayor que aquella encontrada en el material de planta de té verde nativa o productos de extracto de té verde actualmente disponibles. Modalidades también comprenden extracciones en donde una o más de las fracciones, que incluyen aceites esenciales, catequinas, teanina o polisacáridos , se encuentran en una concentración que es mayor que aquella encontrada en material de planta de té verde nativa. Modalidades también comprenden extracciones en donde una o más de las fracciones, que incluyen aceites esenciales, catequinas, teanina o polisacáridos, se encuentran en una concentración que es menor que aquella encontrada en té verde nativo. Cantidades conocidas de las fracciones de constituyente químico bio-activo de té verde (Tabla 1), son usados como un ejemplo de la presente invención. Por ejemplo, extracciones de la presente invención comprenden fracciones en donde la concentración de aceites esenciales es desde 0.001 hasta 200 veces la concentración de material de planta de té verde nativo, y/o composiciones en donde la concentración de catequinas es desde 0.001 hasta 4 veces la concentración del material de plana de té verde nativo, y/o extracciones en donde la concentración de teanina es desde 0.001 hasta 200 veces la concentración en el material de planta de té verde, y/o extracciones en donde la concentración de polisacáridos es desde 0.001 hasta 40 veces la concentración del material de planta de té verde nativo, y/o extracciones en donde la concentración de cafeína es 0.001 hasta 0.99 veces la concentración del material de planta de té verde. Extracciones de la presente invención comprenden fracciones en donde la concentración de aceites esenciales es desde 0.01 hasta 200 veces la concentración de té verde nativo, y/o extracciones en donde la concentración de catequinas es desde 0.01 hasta 4 veces la concentración de té verde nativo, y/o extracciones en donde la concentración de teanina es desde 0.01 hasta 200 la concentración del té verde nativo, y/o extracciones en donde la concentración de polisacáridos es desde 0.01 hasta 40 veces la concentración del material de planta de té verde nativo. Además, extracciones de la presente invención comprenden sub-fracciones de los constituyentes químicos de catequina, que tienen al menos, uno o más de los compuestos químicos presentes en los constituyentes químicos de catequina del material de planta nativo que está en una cantidad menor o menor que aquel encontrado en los constituyentes químicos de catequina de material de planta de té verde nativo. Por ejemplo, el compuesto químico ECGC, puede tener su concentración incrementada en una sub-fracción de catequina a 60% en % en peso de masa de la sub-fracción a partir de su concentración de 50% en % en peso de masa de los constituyentes químicos de catequina totales en el material de planta de té verde nativo. Por el contrario, C puede tener su concentración reducida en una sub-fracción de catequina a <0.1% en % en peso de masa de la sub-fracción a partir de su concentración de 2.2% en % en peso de masa de los constituyentes químicos de catequina totales en el material de planta nativo. Extracciones de la presente invención comprenden extracciones en donde la concentración de compuestos químicos específicos en tales nuevas sub-fracciones de catequina son ya sea incrementadas por aproximadamente 1.1 hasta aproximadamente 2 veces o reducidas por aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 100 veces que la concentración encontrada en los constituyentes químicos de catequina de té verde nativo. Una modalidad adicional de tales extracciones comprende una concentración predeterminada de polisacárido sustancialmente incrementada con relación a aquella encontrada en material de planta seca de especies de té verde natural o productos de extracto de especies de té Verde convencional. Por ejemplo, una extracción puede comprender las fracciones de polisacárido insolubles en etanol- solubles en agua de más de 3% en peso de masa de la extracción. Modalidades también comprenden extracciones en donde una o más de las fracciones que incluyen los compuestos de aceite esencial, las catequinas, L-teanina o los polisacáridos , se encuentran en una concentración que es menor que aquella encontrada en el material de planta de té Verde nativo. Por ejemplo, extracciones de la presente invención que comprenden los aceites esenciales son desde 0.001 hasta 100 veces la concentración del material de planta de té verde nativo, y/o extracciones en donde la concentración de catequinas es desde 0.001 hasta 14 veces la concentración del material de planta de té verde nativo, y/o la concentración de L-teanina es desde 0.001 hasta 100 veces el material de planta de té verde nativo, y/o la concentración de polisacárido es desde 0.001 hasta 80 veces la concentración del material de planta de té verde nativo. En la elaboración de una extracción combinada, desde aproximadamente 0.001 mg hasta aproximadamente 200 mg de una fracción de aceite esencial, pueden ser usados. Adicionalmente, desde aproximadamente 0.001 mg hasta aproximadamente 500 mg de una fracción de catequina purificada pueden ser usados. Además, desde aproximadamente 0.001 mg hasta aproximadamente 500 mg de una fracción purificada de L-teanina pueden ser usados. Finalmente, desde aproximadamente 0.001 mg hasta aproximadamente 500 mg de la fracción de polisacárido insoluble en etanol, soluble en agua, pueden ser usadas.

Pureza de Extracciones Los métodos como se muestran en la presente invención abajo, permiten la purificación (concentración) de una fracción de aceite esencial, una fracción de catequina, sub-fracciones de catequina, una fracción de L-teanina, y una fracción de . polisacárido, así como también descaíeinación de la catequina, L-teanina y fracciones de polisacárido. Una pureza de fracción de aceite esencial tan alta como 89% en peso de masa de los constituyentes químicos deseados, se puede lograr con la cafeína como el principal constituyente de aceite no esencial en la fracción purificada. El SCC02 ha probado ser una excelente medio para descafeinación de la material prima del té verde, removiendo aproximadamente 85% en peso de masa de la cafeína en el material de materia prima. Combinando todas las sub-fracciones del proceso de purificación por cromatografía de la fracción de catequina, se puede obtener una pureza de catequinas totales de 63-68% en peso de masa del extracto combinado con 57-69% de concentración de ECGC (perfil) en peso de masa de las catequinas totales. Combinando sub-fracciones de elución de cromatografía del proceso adsorbente de afinidad seleccionado, se pueden realizar fácilmente sub-fracciones de catequina altamente purificadas que comprenden una pureza de catequina total de 91-99% en peso de masa de la sub-fracción con una concentración de ECGC de 62-70% en peso de masa de las catequinas totales, con un rendimiento razonablemente alto. Si el rendimiento es sacrificado, se pueden obtener sub- fracciones que comprenden niveles aún superiores de la pureza de catequina total y concentración de ECGC . Una fracción de L-teanina purificada que comprende una concentración de L-teanina de 90% en peso de masa de la fracción y una fracción purificada de polisacárido que comprende una concentración de polisacárido mayor de 90% en peso de masa de la fracción con altos rendimientos, también son realizados usando los métodos mostrados en la presente invención. Los ambientes de extracción específicos, velocidades de extracción, solventes y tecnología de extracción usada, depende del perfil constituyente químico de partida del material de fuente y el nivel de purificación deseado en los productos de extracción finales. Métodos específicos como se muestran en la presente invención, pueden ser fácilmente determinados por aquellos expertos en la técnica usando no más que experimentación de rutina típica para ajusfar un proceso para considerar variaciones de muestra en los atributos de los materiales de partida que son procesados a un material de salida que tiene atributos específicos. Por ejemplo, en un lote particular de material de planta de especies de té verde, las concentraciones iniciales de los constituyentes químicos de aceite esencial, cafeína, las catequinas, L-teanina, y los polisacáridos , son determinados usando métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica, como se muestra en la presente invención. Un experto en la técnica puede determinar la cantidad de cambio de la concentración inicial de los constituyentes de catequina, por ejemplo, a las cantidades predeterminadas de constituyentes químicos de catequina para el producto de extracción final usando los métodos de extracción, como se describe en la presente, para alcanzar la concentración deseada en el producto de composición de especies de té verde finales. De manera similar, tales cambios pueden hacerse para el nivel de descaíeinación y para los compuestos de aceite esencial, L-teanina y composiciones de fracción de polisacárido . En general, los métodos y composiciones de la presente invención comprenden métodos para elaborar una composición de especies de Té Verde extraídas que tienen características predeterminadas. Tal composición de especies de Té Verde extraídas pueden comprender una, dos, tres o las cuatro fracciones de extracto concentradas dependiendo del (los) efecto (s) biológicos benéficos deseados para el producto dado. Típicamente, una composición que contiene todas las fracciones de extracto de especies de Té Verde purificadas, es deseada en general, tal como nuevas composiciones que representan los primeros productos de extracción de especies de Té Verde altamente purificados que contienen los cuatro de los constituyentes químicos biológicamente benéficos principales encontrados en el material de planta nativa. Modalidades de la invención comprenden métodos en donde las características predeterminadas comprenden una concentración selectivamente incrementada predeterminada de los compuestos de aceite esencial de las especies de Té Verde, catequinas, L-teanina y polisacáridos en fracciones de extracción separadas. La importancia de tener cuatro de los grupos constituyentes químicos biológicamente benéficos en las composiciones finales, está relacionada con la interacción sinergística de estos compuestos en el mejoramiento de los efectos fisiológicos y médicos de los constituyentes químicos del té verde, sobre aquellos encontrados con compuestos químicos altamente purificados, o grupos de compuestos relacionados.

Métodos de Extracción El material de partida para extracción es un material de planta de una o más de especies de C. sinensis. El material de planta puede ser cualquier porción de la planta, aunque la porción aérea de la planta, la cual incluye hojas, troncos u otra parte de la planta es preferida. Las hojas son el material de partida más preferido . El material de planta de especies de C. sinensis puede someterse a etapas de pre-extracción para proporcionar el material en cualquier forma particular, y cualquier forma que es empleada para extracción, se contempla por la presente invención. El material de hoja de C. sinensis es preferiblemente cocido a vapor para inactivar las enzimas que convierten las catequinas a flobfenos para la producción de té verde. Tales etapas de pre-extracción incluyen, pero no se limitan a, aquellas en donde el material es trozado, picado, desmenuzado, molido, pulverizado, cortado o roto, y el material de partida antes de las etapas de pre-extracción, es secado o material de planta fresca. Una etapa de pre-extracción preferida comprende triturar y/o pulverizar el material de hoja de especies de C. sinensis en un polvo fino. El material de partida o material después de las etapas de pre-extracción, puede ser secado o tener humedad agregada en este. Una vez que el material de planta de té verde está en una forma para extracción, están contemplados los métodos de extracción por la presente invención. · En general, los métodos de la presente invención comprenden en parte, métodos en donde el material de planta de té verde es extraído usando extracción de fluido supercrítico (SFE) con dióxido de carbono como el solvente (SCC02) , que es seguido por una o más etapas de extracción de solvente, tales como, pero no limitadas a, agua, hidroalcohólica, y procesos de extracción absorbente de polímero de afinidad. Otros métodos adicionales contemplados por la presente invención comprenden, extracción de material de planta de té verde usando otros solventes orgánicos, químicos refrigerantes, gases comprimibles, sonificación, extracción líquida a presión, cromatografía actual por contador de alta velocidad, polímeros impresos moleculares y otros métodos de extracción conocidos. Tales técnicas son conocidas por aquellos expertos en la técnica. En un aspecto, las composiciones de la presente invención pueden ser preparadas por un método que comprende las etapas representadas esquemáticamente en las Figuras 1-5. La invención incluye procesos para concentrar (purificar) y perfilar el aceite esencial y otros compuestos solubles lípidos a partir de material de planta de té verde usando tecnología de SCC02. La invención incluye la descaíeinación del material de planta de té verde usando procesamiento de SCC02. La extracción de los constituyentes químicos de aceite esencial y descafeinación del material de planta de té verde con SCC02 como se muestra en la presente invención, elimina el uso de solventes orgánicos tóxicos. El dióxido de carbono es un producto biológico seguro y natural y un ingrediente en muchos alimentos y bebidas.

Aceites esenciales son sustancias aromáticas que son ampliamente usadas en las industrias del perfume, en el sector farmacéutico y en el alimento y nutrición humana. Existen mezclas de más de 200 compuestos, que pueden ser agrupadas básicamente en dos fracciones, una fracción volátil que constituye 90-95% del aceite total y contiene monoterpenos e hidrocarburo de sesquiterpeno y sus derivados oxigenados, junto con aldehidos alifáticos, alcoholes y ásteres, y un residuo no volátil, que constituye desde 5-10% del aceite completo y contiene hidrocarburo, ácido graso, esteróles, carotenoides , ceras, cumarinas, psoralina y flavonoides. El aislamiento, concentración y purificación del aceite esencial, han sido procesos importantes por muchos años, como una consecuencia del uso distribuido de estos compuestos. Los métodos comunes usados hasta ahora son principalmente basados en extracción de solvente y destilación de tronco. El uso de estas técnicas convencionales tiene una desventaja principal (el riesgo de pérdidas de compuestos termolábiles ) y también dos desventajas significantes (la infactibilidad para automatización y el tiempo prolongado requerido para extracción) . Los métodos comerciales usados para concentración con destilación a vacio fraccional y extracción de solvente selectivo y separación cromatográfica . Todos estos métodos tienen desventajas importantes, tales como bajo rendimiento, formación de derivados (propio del tiempo de exposición a temperatura alta) , y la presencia de residuos tóxicos orgánicos en los extractos. La extracción de fluido supercrítico (SFE) ha sido usada recientemente para la extracción de aceites esenciales de plantas en un intento por evitar las desventájas ligadas a la técnica convencional. Su utilidad para extracción es debida a la combinación de propiedades de transferencia de masas ligadas al gas y características de solvatación similares al líquido con coeficientes de difusión mayores que aquellos de los solventes líquidos. El SFE es también una técnica adecuada para mejoramiento de la calidad de aceites esenciales obtenidos por métodos de extracción convencional por medio de fraccionamiento. La cafeína, el alcaloide mayormente consumido en el mundo, se encuentra en alta concentración en algunos productos naturales tales como granos de cacao (0.2%), granos de café (0.9-2.4%) y hojas de té (1.5-2.5%). La cafeína es comúnmente obtenida por extracción usando solventes orgánicos, tales como diclorometano y hexano, los cuales son considerados peligrosos a la salud humana y ambiente. El agua es un excelente pero no selectivo solvente para cafeína. La extracción con agua conduce a disolución y subsecuente pérdida de otros componentes valiosos tales como los polifenoles (catequinas) de té verde . En la presente invención, el dióxido de carbono supercritico ha sido elegido como el proceso principal para el extracto de cafeína (descafeinación de té verde) . Este proceso involucra usar un gas comprimido a alta temperatura como el solvente para remover cafeína. En una escala comercia, el dióxido de carbono es usado para extraer cafeína de granos de café. El C02 supercritico es no contaminante y no tóxico comparado con los solventes orgánicos tradicionalmente usados. Varias patentes han sido publicadas para extracción de cafeína a partir de granos de café con C02 y han sido previamente discutidas. Zosel (Patente Estadounidense 4,247,570), detalla la operación de descafeinación a una escala comercial. El contenido de cafeína en los granos de café, que varía desde 0.7 hasta 3%, se redujo hasta aproximadamente 0.02% de cafeína. El proceso de extracción se condujo de 70-90°C y 160-200 bar (densidad de C02 de 0.4-0.65 g/cc). El dióxido de carbono supercritico es muy selectivo para cafeína, pero la solubilidad de la cafeína es inferior que en el solvente orgánico, el cual resulta en el uso de cantidades grandes de C02 y con ello, un incremento sustancial en tanto costos de operación como fijos. Como se observa con granos de café, el agua puede actuar como un co-solvente valioso que conduce a un rendimiento de extracción sustancialmente mejorado. Un diagrama esquemático de ¦ los métodos de extracción de los constituyentes químicos biológicamente activos del material de planta de té verde se ilustra en las Figuras 1-5. El proceso de extracción es típicamente, pero no limitado a 6 etapas. Para referencia en el texto, cuando el número en negritas X aparece en el texto, los números se refieren a los números en las Figuras 1-5. Los métodos analíticos usados en el proceso de extracción están presentados en la sección de Ej emplificación .

Etapa 1: Extracción de Dióxido de Carbono de Fluido Supercrítico de Aceite Esencial de Té verde Debido a la naturaleza hidrofóbica del aceite esencial, solventes no polares, que incluyen pero no se limitan a SCC02, hexano, éter de petróleo y acetato de etilo, pueden ser usados para este proceso de extracción. Puesto que algunos de los componentes del aceite esencial son volátiles, la destilación por vapor puede también ser usada como un proceso de extracción. Una descripción generalizada de la extracción de los constituyentes químicos de aceite esencial a partir de las hojas de té verde usando SCC02, es diagramada en la Figura 1-Etapa 1. La materia prima [10] es hojas de té cortadas secas (aproximadamente 105 µp?) . El solvente de extracción [210] es dióxido de carbono puro. Puede ser usada agua como un co-solvente. La materia prima es cargada en un recipiente de extracción SFE [20] . Después de pruebas de escape y purga, el proceso comprende C02 licuado que fluye de un recipiente de almacenaje a través de un enfriador a una bomba de C02. El C02 es comprimido a la presión deseada y fluye a través de la materia prima en el recipiente de extracción, en donde la temperatura y presión se mantienen a un nivel deseado. Las presiones para extracción varían desde aproximadamente 60 bar hasta 800 bar y la temperatura varía desde aproximadamente 35°C hasta aproximadamente 90°C. Las extracciones de SCC02 mostradas aquí, son preferiblemente realizadas a presiones de al menos 100 bar y a una temperatura de al menos 35°C, y más preferiblemente, a una presión de aproximadamente 60 bar hasta 300 bar y a una temperatura de aproximadamente 40°C hasta aproximadamente 60°C. El tiempo para extracción para una etapa única de extracción varía desde aproximadamente 30 minutos hasta aproximadamente 2.5 horas, hasta aproximadamente 1 hora. La relación de solvente a alimentación es típicamente aproximadamente 20-60 a 1 para cada una de las extracciones de SCC02. El C02 es reciclado para procesamiento de extracción comercial. Los constituyentes químicos de aceite esencial extraídos, purificados y perfilados [30] , son entonces colectados en un colector o separador, guardados en una botella de vidrio protectora de luz, y almacenados en un refrigerador oscuro a 4°C. El material de materia prima [10] de té verde puede ser extraído en un proceso de etapa (Figura 1, Etapa 1A) , en donde la fracción de aceite esencial de té verde purificada y extraída resultante [30] , es colectada en un colector SFE o sistema SCC02 [20] . Alternativamente, como en un sistema SFE fraccional, el material de materia prima de té verde extraído por SCC02 puede ser segregado en recipientes colectores (separadores), de manera tal que dentro de cada colector existe una composición de constituyente químico de aceite esencial de porcentaje relativo diferente (perfil) en cada una de las sub-fracciones de aceite esencial purificado colectadas. El residuo (restante) [40] , es colectado, guardado y usado para procesamiento adicional, incluye pero no se limita a, descafeinación y procesos para obtener fracciones purificadas de catequinas, teanina y polisacáridos del té verde. Una modalidad de la invención comprende extraer material de materia prima de té verde usando extracción de SCC02 de etapas múltiples a una presión de 60 bar a 800 bar y a una temperatura entre 35°C y 90°C y colectar el material de té verde extraído después de cada etapa. Una segunda modalidad de la invención comprende extraer el material de materia prima de té verde usando la extracción de SCC02 por fraccionamiento a presiones de 60 bar a 800 bar y a una temperatura entre 35°C y 90°C y colectar el material de té verde extraído en recipientes colectores diferentes a condiciones predeterminadas (presión, temperatura y densidad) e intervalos predeterminados (tiempo) . Las composiciones de sub-fracciones de aceite esencial purificado de té verde extraído resultante de cada uno de las extractores de etapas múltiples o en diferentes recipientes colectores (sistema fraccional), se pueden recuperar y usar independientemente o pueden ser combinadas para formar una o más composiciones de aceite esencial de té verde que comprenden una concentración de constituyente químico de aceite esencial predeterminado que es superior o inferior que aquella encontrada en el material de planta nativa. Típicamente, el rendimiento total de la fracción de aceite esencial a partir de té verde usando una extracción de SCC02 máxima de etapa única es aproximadamente 0.4% (> 95% de los constituyentes químicos de aceite esencial) por % en peso que tiene una pureza constituyente químico de aceite esencial mayor de 95% en peso de masa del extracto. Los resultados de tales procesos de extracción se encuentran abajo y en las Tablas 2-4. El procedimiento se puede encontrar en el Ejemplo 1.

Tabla 2. Resultados de Ira. etapa de procesamiento a 40 C y 200 bar Fl = té verde Chino; F4 = té verde Chino; JPGT verde Japonés. Cafeína extraída del alimento = cafeína extractos/cafeína en alimento x 100.

Tabla 3. Composición de extractos de aceite esencial de Té Verde ID Tiempo de Nombre #CAS fórmula Pm Máximo Retención(nm) 8 23.6 4 -etilo -metil-nonano 1632-71-9 C12H26 170 9 23.9 desconocido 1 C10H18O 154 JPGT- 2-metoxi- 1 -( 1 -propenil)-P l 24.9 fenol 97-54-1 Cl OH 1202 164 10 25.3 5-metil- l -heptanol 7212-53-5 C8H180 130 1 1 26.1 3 -butil-ciclohexanona 39178-69-3 C10H18O 154 12 28.2 2 -metil-2 -nonanol 10297-57-1 C10H22O 158 JPGT- 3 -(bromometil )-heptano P2 29.7 18908-66-2 C8H17Br 192 13 29:7 2.3.7-trimetil octano 62106-34-6 C1 1 H24 156 14 30.1 1 -decano 1 1 12-30-1 C10H22O 158 15 31 .5 desconocido 2 154 JPGT- 3-nietil-undecano P3 31.3 1002-43-3 C12H26 170 3.5-bis( l . I-dimetile l)- 16 31.7 fenol 1 138-52-9 C14H220 206 éster etenilico del ácido 17 32.4 ciclohexancarboxílico 4840-76-0 C9H1402 154 18 32.7 salicilato de metilo 1 19-36-8 C8H803 152 19 33.0 dodecano 1 12-40-3 C12H26 170 CGTF2- biciclo(3.1.1 )-heptan-3-ol P5 33.1 27779-29-9 C10H18O 154 20 33.4 benzotiazol 95-16-9 C7H5NS 135 21 34.9 2.2 -dimetil-undecano 17312-64-0 C13H28 184 22 35.3 3-metil-undecano 1001 -43-3 C12H26 170 CGTF2-P6 35.8 2.2-dunetil-undecano 17312-64-0 C13H28 185 23 36.6 2.6-dimet¡l-2-octanol 18479-57-7 C10H22O 158 CGTF2- 2-metil-2-decanol P7 36.6 2/9/3396 C1 1 H240 172 24 37.9 Indol 120-72-9 C8H7N 1 17 25 38.3 Tridecano 629-50-5 C13H28 184 26 38.9 1-undecanol 1 12-42-5 C1 1 H240 172 27 39.3 3.7-dimetil-nonano 17302-32-8 C1 1H24 156 éster 3-hexenílico del ácido 28 39.7 bulanoico 53998-84-8 C10H18O2 170 29 40.4 desconocido 30 41.5 4-Dodecanol 10203-32-4 C12H260 186 5-(2-nietilpropil)- 31 42.2 nonano 62185-53-9 C13H28 184 32 43.2 Dodecano 1 1 12-54-9 C12H240 184 3-(3.3-dimetilbutil)- 33 43.8 ciclohexanol 40564-98-5 C 12H240 184 34 44.6 2 -metil-2 -decanol 3396-09-2 C 1 1 H240 172 C8H10N4 Cafeína 35 45.1 58-08-2 02 194 ID Tiempo de Nombre #CAS fórmula Pm Máximo Retención(nm) 36 46.3 n-butil miristato 110-36-1 C18H3602 284 37 47.0 1-Hexadecanol 36653-82-4 C16H340 242 38 48.2 Nerolidol C15H260 222 39 49.4 1 -Heptadecanol 1454-85-9 C 17H360 256 éster metílico del ácido 40 49.8 hcxadecanoico 1 12-39-0 C17H3402 270 41 50.4 desconocido 4 42 50.7 desconocido 5 43 51.2 desconocido 6 44 52.6 ácido n-liexadecanoico 57-10-3 C16H3202 256 45 53.6 desconocido 7 46 54.7 2-pentadecil-l ,3-dioxoIano 4360-57-0 C18H3602 284 47 55.3 desconocido 8 48 56.1 desconocido 9 49 56.2 5-ciclohexil-dodecano 13151 -85-4 C18H36 252 50 56.9 desconocido 10 51 58.3 desconocido 11 52 60.5 Alcohol oleílico 143-28-2 C18H360 268 53 61.2 (E)-9-octadecen- 1 -ol 506-42-3 C18H360 268 54 62.6 desconocido 12 55 63.3 Nonadecanol 1454-84-8 C19H40O 284 56 64.5 Nonadecano C19H42 268 57 65.2 desconocido 13 58 65.5 desconocido 14 59 66.8 Fitol 150-86-7 C20H40O 296 60 70.4 ácido oleico 1 12-80- 1 C18H3402 282 61 71.0 desconocido 15 62 71.4 2-metil-octndecano 1560-88-9 C19H40O 268 63 74.3 ácido octadecanoico 57-11-4 C18H3602 284 Tabla 4. Distribución de compuestos de aceite esencial de té verde (% de área máxima de GC-EM) de materia prima de té verde diferente ID Máximo CGT F1 CGT F2 CGT F3 CGT F4 JPGT CGTF2-P1 0.18 CGTF2-P2 0.1 1 CGTF2-P3 0.17 1 0.28 0.19 0.22 0.16 2 0.05 0.13 0.1 CGTF2-P4 0.1 3 0.08 4 0.1 0.14 0.24 0.21 0.13 5 0.23 0.8 0.1 0.05 6 0.05 0.05 0.07 0.04 0.03 ID Máximo CGT F1 CGT F2 CGT F3 CGT F4 JPGT 7 0. 1 1 0. 13 0.21 0.04 0.07 8 0.05 0.1 0.06 0.05 9 0. 12 0.21 0.29 0.24 0.05 JPGT-P1 0.1 10 0.05 0.05 1 1 0.16 0.18 0.15 0.06 12 0.03 0.04 0.01 JPGT-P2 0.04 13 0.04 0.07 0.07 14 0.12 0.23 0.34 0.15 0.19 15 0.06 0.21 0.27 0.21 JPGT-P3 0.04 16 0.08 0.06 0.08 17 0.47 0.06 0.14 0.07 0.1 1 18 0.02 19 0.04 0.1 CGTF2-P5 0.13 20 0.04 21 0.03 22 0.04 0.06 0.05 0.05 CGTF2-P6 0.04 23 0.06 0.06 0.05 0.06 CGTF2-P7 0.09 24 0.03 25 0.01 0.48 0.48 0.57 0.28 26 2.28 1.76 0.92 0.42 0.26 27 0.08 0.09 0.08 0.05 0.04 28 0.03 0.04 0.02 29 0.01 0.04 30 0.59 0.04 0.07 0.1 31 0.12 0.51 0.08 0.17 32 0.06 0.06 0.1 33 0.12 0.18 0.08 34 0.1 0.03 35 92.68 35.6 32.53 20.51 57.18 36 0.36 0.84 0.21 0.35 37 0.2 19.03 15.46 21.56 10.95 38 0.06 0.1 0.12 39 0.27 0.18 1.15 0.04 40 0.64 0.07 41 0.11 0.07 42 0.06 43 0.04 44 0.59 5.87 4.15 5.06 1.89 45 0.1 1 0.06 46 0.1 0.08 0.23 0.14 ID Máximo CGT F1 CGT F2 CGT F3 CGT F4 JPGT 47 0.31 0.07 0.1 0.08 0.09 48 0.05 49 0.19 50 0.11 51 0.1 1.65 52 0.12 9.44 13.76 22.56 10.29 53 1.65 3.06 2.93 1.99 54 0.06 0.53 0.1 55 0.28 16.78 14.28 17.99 8.83 56 0.45 57 0.57 58 0.2 0.46 0.46 0.52 0.21 59 0.58 0.58 4.97 1.99 1.25 60 0.36 0.73 0.66 0.23 61 0.2 62 0.11 1.98 0.22 1.56 63 0.98 0.87 0.92 0.53 Un total de 73 compuestos en fracciones de aceite esencial de hoja de té verde se extrajeron usando SCC02 a 40°C y 100-200 bar. No parece importar si la extracción de SCC02 se realiza en ya sea hojas de té verde secas o húmedas, la cafeína es extraída en este proceso. La concentración de cafeína en estas fracciones de aceite esencial varía desde aproximadamente 11-80% en peso de masa de la fracción de aceite esencial. Además de la cafeína, los otros compuestos principales encontrados en la fracción de aceite esencial incluyen alcohol graso saturado, tal como 1-undecanol, 1-hexadecanol, alcohol oleílico y ácido grano y nonadecanol, tal como ácido hexadecanoico . De manera interesante, muy poco en la forma de los compuestos químicos de aceite esencial se encuentra en el té verde Chino Fl . Por el contrario, el té verde Chino F2 , F3 y F4, todos se encontraron por tener más de 50% en peso de masa de alcoholes grasos y ácidos grasos que comprenden las fracciones de extracción de aceite esencial de SCC02. En la fracción de aceite esencial de SCC02 de la materia prima de té verde Japonés, menos de 40% en peso de masa de alcoholes grasos y ácidos grasos comprenden la fracción de extracto.

Etapa 2. Descafeinación de Dióxido de Carbono Supercritico de Té Verde Una descripción generalizada de la descafeinación de los constituyentes químicos de las hojas de té verde usando SCC02, es diagramada en la Figura 1-Etapa 2. La materia prima [10] es hojas de té cortadas secas (aproximadamente 105 µp?) , o el residuo después de la extracción de la fracción de aceite esencial de la Etapa 1, es sumergida en un volumen de lecho de agua destilada. El solvente de extracción [210] es dióxido de carbono puro. Puede ser usada agua como un co-solvente. La materia prima es cargada en un recipiente de extracción SFE [50]. Después de pruebas de escape y purga, el proceso comprende C02 licuado que fluye de un recipiente de almacenaje a través de un enfriador a una bomba de C02. El C02 es comprimido a la presión deseada y fluye a través de la materia prima en el recipiente de extracción, en donde la temperatura y presión se mantienen a un nivel deseado. Las presiones para extracción varían desde aproximadamente 60 bar hasta 800 bar y la temperatura varía desde aproximadamente 35°C hasta aproximadamente 90°C. Las extracciones de SCC02 mostradas aquí, son preferiblemente realizadas a presiones de al menos 200 bar y a una temperatura de al menos 35°C, y más preferiblemente, a una presión de aproximadamente 30 bar hasta 700 bar y a una temperatura de aproximadamente 60°C hasta aproximadamente 80°C. El tiempo para extracción para una etapa única de extracción varía desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 6 horas, hasta aproximadamente 4 horas. La relación de solvente a alimentación es típicamente aproximadamente 240 a 1 para cada una de las extracciones de SCC02. El C02 es reciclado para procesamiento de extracción comercial. Los constituyentes químicos de cafeína extraídos, [70] , son entonces colectados, medidos para determinar el contenido de cafeína y desechados. El residuo (restante) o extracto de té verde descafeinado [60], es colectado, guardado y usado para procesamiento adicional, incluye pero no se limita a, procesamiento para obtener fracciones purificadas de catequinas, teanina y polisacáridos del té verde. Típicamente, el rendimiento total de la cafeína del material de planta de té verde usando una extracción de SCC02 de etapa única es aproximadamente 4.5% (aproximadamente 85% de los constituyentes químicos de cafeína presentes en la materia prima) en % en peso que tiene una pureza de constituyente químico de cafeína de aproximadamente 29% en peso de masa del extracto de cafeína. Tal proceso de descaíeinación reduce el contenido de cafeína en la materia prima de té verde descafeinado por aproximadamente 55-85% en peso de masa del contenido de cafeína en el material de materia prima. En la materia primada de té verde que tiene un bajo contenido de cafeína, 83-85% en peso de masa de la cafeína pueden ser removidos. Para reducir el contenido de cafeína en materia prima de té verde que contiene alta cafeína, se requieren relaciones superiores de solvente/alimentación para descafeinar el material de material prima más de 80% en peso de masa. Los resultados de tales procesos de extracción se encuentran abajo en las Tablas 5 y 6. El procedimiento se puede encontrar en el Ejemplo 2.

Ejemplo 5 . Resultados de rendimiento de extracción de cafeína y total con diferentes co-solventes y materias primas 1. Cafeína extraída del alimento = cafeína en extractos/cafeína en alimento x 100. 2. Los resultados son promediados por tres corridas repetidas (desviación estándar +/- 5%).

Tabla 6 . Mediciones analíticas por CLAR comparativas de los constituyentes químicos en residuos de té verde Fl, F4 y JPGT descafeinados a la materia prima de té verde puro (natural), respectivamente. el rendimiento de L-teanina fue probado en agua El rendimiento de extracción de cafeína incrementó con la adición de co-solvente. La solubilidad de cafeína en mezcla de dióxido de carbono de fluido supercrítico/co-solvente, es 3-5 veces superior que aquella en el dióxido de carbono puro solo (Kopcak 2005) . A partir del punto de vista de extracción de cafeína, 75% de etanol/agua es muy eficiente. Sin embargo, además de 9.3% en peso de masa de cafeína en el extracto de descafeinación, los compuestos químicos de ácido fenólico valiosos a partir de la materia prima, también son extraídos como EGCG al 4%, EGC al 2.6% y 0.9% de ECG en % en peso de masa del extracto de descafeinación . El agua es el mejor co-solvente que etanol para la descafeinación del material de materia prima de hoja de té verde. Usando hojas húmedas de té verde, agua como co-solvente, y una relación S/F de 240, mayor de 80% de la cafeína en la materia prima Fl y la materia prima de té verde Japonesa ( JPGC) , pueden ser removidas (descafeinadas ) sin remover alguno de los ácidos fenólicos valiosos o teanina a partir del material de materia prima. Esto iguala a una reducción del contenido de cafeína a partir de 1.3% en peso de masa en la materia prima Fl hasta 0.18% en el material descafeinado Fl o una reducción del contenido de cafeína de 2.2% en peso de masa en la materia prima de JPGT a 0.36% en el material de té verde descafeinado, una reducción de 6-7 veces en el contenido de cafeína. En el caso de contenido de cafeína alto, 3.3% por peso de masa de materia prima de hoja de té verde F4 , la reducción de la cafeína total fue menos, 1.45% en peso de la materia prima descafeinada F4. Sin embargo, las catequinas y teaninas valiosas fueron preservadas en el material de residuo descaíeinado . De este modo, el residuo descafeinado que retiene los constituyentes químicos de teanina y catequina valiosos, pueden ser entonces usados para procesamiento adicional para obtener fracciones purificadas de catequina, teanina y polisacárido .

De manera interesante, solamente aproximadamente 55% de descaíeinación se observó para materia prima de F4 de contenido de cafeína alto bajo las mismas condiciones de descaíeinación de SFE. La diferencia parece ser causada por ya sea el contenido de cafeína superior o una estructura de matriz diferente de las hojas de té verde F4 o ambas.

Basados en observaciones, las hojas de materia prima de F4 son humedecidas menos por sumergimiento en agua. En otras palabras, el agua tiende a permanecer en la superficie de las hojas en lugar de penetrar en la matriz interna de las hojas F . Por lo tanto, las hojas de té verde F4 , requerirán más agua y/o tiempos de remojo prolongados para lograr más de 80% de descaíeinación, así como también o posiblemente una relación mayor de solvente/alimentación.

Etapa 3: Extracción de etanol de fracción de constituyentes químicos de catequina de té verde crudo En un aspecto, la presente invención comprende extracción y concentración de los constituyentes químicos de catequina bio-activos. Una descripción generalizada de esta etapa es diagramada en la Figura 2-Etapa 3. Este proceso de extracción de Etapa 3 es un proceso de lixiviación de solvente. La materia prima para esta extracción es ya sea la materia prima de té verde de hojas de té verde cortadas [10] o el residuo de ya sea la extracción de SCC02 Etapa 1 de la fracción de aceite esencial [30] o la descafeinación de SCC02 de la Etapa 2 del material de hoja de té verde [60] . El solvente de extracción 220 es etanol al 95%. El solvente de extracción puede ser 10-95% de alcohol acuoso, se prefiere etanol acuoso al 95%. En este método, el material de materia prima de té verde y el solvente de extracción, son cargados en un recipiente de extracción 100 que es calentado y agitado. Pueden ser calentados a 90°C, hasta aproximadamente 80°C, hasta aproximadamente 70°C, hasta aproximadamente 60°C-90°C. La extracción se realiza por aproximadamente 1-10 horas, por aproximadamente 1-4 horas, por aproximadamente 2 horas. El extracto de fluido resultante es centrifugado [110] y filtrado [120] . Lo filtrado (sobrenadante) [300,310], es colectado como producto, medido por volumen y contenido sólido en peso de masa seca, después de la evaporación del solvente. El material de residuo de extracción sólido [130 o 140], es retenido y guardado para procesamiento adicional (véase Etapa 4). La extracción puede ser repetida tantas veces como sea necesario o se desee. Puede ser repetida 2 o más veces, 3 o más veces, 4 o más veces, etc. Cuando más de una etapa se usan para extracción, las fracciones de catequina cruda de cada etapa pueden ser combinadas [320] para producto o retenidas para purificación adicional de la fracción de catequina (véase Etapa 4). Por ejemplo, la Figura 2-Etapa 3, muestra un proceso de dos etapas, en donde la segunda etapa usa los mismos métodos y condiciones. Los resultados se presentan en las Tablas 7 y 8 abajo. El procedimiento se puede encontrar en el Ejemplo 3.

Tabla 7. resultados de extracción de lixiviación de 2 etapa de etanol al 95% de residuo de descafeinación de té verde Fl.

*PA (ácidos fenólicos) = EGC + C + EGCG + ECG Tabla 8. Comparaciones de contenido de constituyentes químicos de productos de extracción de lixiviación de etapa 2 de etanol al 95% a partir de materia prima de té verde (puro) nativo y residuo descafeinado de SFE para Té verde Chino Fl, té verde Chino F4 y té verde Japonés (JPGT) .

*PA = calecniinas (oíales (EGC+C+EGCG+ECG).

Estos resultados demuestran que el proceso de descaíeinación de SFE remueve la cafeína de la materia prima de té verde sin afectar los otros compuestos químicos valiosos en el residuo. Además, la extracción del residuo usando etanol al 95%, preserva la L-teanina y polisacáridos insolubles en etanol-solubles en agua en el residuo que pueden ser usados para procesamiento adicional para fracciones purificadas de polisacárido y tianina.

Finalmente, el proceso de lixiviación de dos etapas incrementa la concentración de las cuatro catequinas principales (PA, Tabla 8), a partir de aproximadamente 7-12% en peso de masa en la materia prima de hoja de té verde nativo hasta aproximadamente 26-39% en peso de masa en el extracto, un incremento de aproximadamente 3.5 veces en pureza. El rendimiento de extracción varia desde 19 hasta 36% en peso de masa, basado en la materia prima de té verde original. La pureza adicional de la fracción constituyente química de catequina, se puede obtener usando un proceso de cromatografía de proceso absorbente de afinidad (véase abajo).

Etapa : Proceso de Extracción Adsorbente por Afinidad Como se muestra en la presente, un extracto de fracción de catequina altamente purificado de té verde, se puede obtener contactando un extracto hidroalcohólico de materia prima de té verde (Etapa 3) con una resina adsorbente de polímero de afinidad de sólido para adsorber las catequinas activas contenidas en el extracto hidroalcohólico sobre el adsorbente de afinidad. Los constituyentes químicos unidos son subsecuentemente eluídos por los métodos mostrados en la presente. Previo a la elución de los constituyentes químicos de la fracción de catequina, el adsorbente de afinidad con los constituyentes químicos deseados adsorbidos en estos, pueden ser separados del resto del extracto en cualquier manera conveniente, preferiblemente, el proceso de contacto con el adsorbente y la separación se efectúa pasando el extracto acuoso a través de una columna de extracción o lecho del material adsorbente. Sin embargo, previo a la elución de los constituyentes químicos de la fracción de catequina, cualquiera de los compuestos de cafeína adsorbidos sobre el adsorbente de afinidad, pueden ser separados de las catequinas usando un solvente específico, que eluirá los compuestos de cafeína pero no eluirá los compuestos de catequina (descaíeinación de las fracciones de catequina purificadas) . Puede ser utilizada una variedad de adsorbentes de afinidad para purificar los constituyentes químicos de catequina del material de planta de té verde, tales como, pero no limitados a "Amberlite XAD-2" (Rohm & Hass) , "Duolite S-30" (Diamond Alkai Co . ) , "SP207" (Mitsubishi Chemical), ADS-5 (Nankai University, Tianjin, China), ADS-17 (Nankai University, Tianjin, China), Dialon HP 20 (Mitsubishi, Japan) , y Amberlite XAD7 HP (Rohm & Hass). Amaberlite XAD 7HP es preferiblemente usado debido a la alta afinidad para los constituyentes químicos de catequina del té verde. Es un polímero acrílico alifático no iónico con tamaño de partícula de 560-710 µ? que deriva sus propiedades adsorptivas de su estructura macroreticular (que contiene tanto una fase polimérica continua como una fase de poro continua) , área de superficie alta, y naturaleza alifática de su superficie. Con esta estructura macroreticular que tiene grupos de éster polimérico, el XAD 7HP puede adsorber los compuestos polares que proporcionan una alta afinidad para ácidos fenólicos ( catequinas ) . Aunque varios eluantes pueden ser empleados para recuperar los constituyentes químicos de catequina a partir del adsorbente, en un aspecto de la presente invención, el eluante comprende alcoholes de bajo peso molecular, que incluyen pero no se limitan a, metanol, etanol o propanol. En un segundo aspecto, el eluante comprende alcohol de bajo peso molecular en una mezcla con agua. En un tercer aspecto, el eluante comprende alcohol en bajo peso molecular, un segundo solvente orgánico y agua. En otro aspecto, el eluante usado para descafeinación de las catequinas adsorbidas sobre el absorbente, comprende un solvente acídico tal como pero no limitado a, H2S04 al 5% en etanol al 10%. De este modo, un proceso de elución de dos etapas se ha designado para purificación de la fracción de constituyente químico de catequina de té verde. La primera etapa es usar una solución acídica para descafeinar los constituyentes químicos adsorbidos sobre la columna tomando ventaja de la propiedad base de la cafeína y la propiedad de ácido de las catequinas. La segunda etapa es usar un eluante de etanol/agua para eluar las catequinas de descafeinación . La materia prima de té verde puede o no puede tener que someterse a uno o más procesos de purificación preliminares, tales como, pero no limitados a, los procesos descritos en la Etapa 1, 2 y 3 antes de contactar el extracto que contiene constituyente químico de catequina acuoso con el material adsorbente de afinidad. Usar procesos adsorbentes de afinidad como se muestra en la presente invención, resulta en fracciones de constituyente químicos de catequina altamente purificados, perfilados y descafeinados , los cuales están normalmente presentes en material de planta natural o en productos de extracción comercialmente disponibles. Por ejemplo, el proceso mostrado en la presente invención, puede resultar en extractos de catequina purificados que contienen constituyentes químicos de catequina totales, en exceso de 95% en peso de masa seca. Una descripción generalizada de la extracción y purificación de la fracción de catequinas a partir de las hojas de té verde usando perlillas de resina adsorbente de afinidad polimérica, es diagramada en la Figura 3-Etapa 4. La materia prima para este proceso de extracción puede ser la materia prima de té verde natural [10], o la solución acuosa que contiene las catequinas de la extracción de lixiviación de etanol al 95% de la Etapa 3 [320] . El peso apropiado de las perlillas de resina adsorbente (12 mg de catequinas por gm de resina adsorbente) , es lavado con 4-5 BV de etanol [220] y agua destilada 4-5 BV [230] antes y después de ser cargada en una columna 410, 420. Las perillas de resina adsorbente limpiadas son envasadas en una columna [430]. La solución acuosa que contiene catequina [320] es entonces cargada sobre la columna [440] a una velocidad de flujo de volumen de 2 a 4 perlillas (BV)/hora. Una vez que la columna es completamente cargada, la columna se lava [450] con agua destilada [230] a una velocidad de flujo de 2-3 BV/horas para remover cualquier impureza a partir de las catequinas adsorbidas. El residuo efluente [500] y residuo de lavado [510], son colectados, medidos para determinar el contenido de masa, contenido de catequina, contenido de cafeína y desechados. La elución de los compuestos de cafeína adsorbidos [460], se realiza en una forma isocrática con H2S04 al 5% en etanol al 10% como una solución de elución [240] a una velocidad de flujo de 2-4 BV/hora. El eluado [520] es colectado, medido para determinar el contenido de masa, contenido de catequina, contenido de cafeína y descargado. Después de esta etapa de descafeinación, la columna es lavada [470] con 8 BV de agua destilada [230] a una velocidad de flujo de 10 BV/hora. El lavado [530] es probado por papel de pH hasta que es neutral, colectado y descargado. La elución de las catequinas adsorbidas [480] se realiza en una forma isocrática con 80% de solución de etanol/agua como una solución de elución [250] a una velocidad de flujo de 2-4 BV/hora y la curva de elución se registra para el extracto eluado [540] . Los volúmenes de elución 480 pueden ser colectados aproximadamente cada 15-30 minutos y estas muestras son analizadas usando CLAR y probadas para determinar contenido de sólidos y pureza. Los resultados se presentan en las Tablas 9-11. El procedimiento se puede encontrar en el Ejemplo 4.

Tabla 9. Resultados analíticos de cromatografía de proceso de columna XAD 7HP de extracto de té verde de lixiviación de etanol al 95% Fl SFE descafeinado Tabla 10. Resultados analíticos de cromatografía de proceso de columna XAD-7HP de extracto de té verde de lixiviación de etanol al 95% Fl SFE descafeinado Muestra Recolección Rend. TP Total EGCG EGC ECG C TeoB Caf CA (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) Carga 26.6 48.8 23.2 15.1 6.1 4.4 1.8 4.5 1.7 F2 0.8 - 1 BV 0.4 60.7 39.4 12.6 5.0 3.6 0.25 4.0 3.3 F3 1 - 1.6 BV 9.2 70.7 48.4 8.7 1 1.5 2.0 3.4 2.0 F4 1.6- 2.3 BV 4.1 61.5 43.8 4.7 1 1.5 1.6 2.6 1.5 F5 2.3 - 2.9BV 1.0 67.9 46.9 3.2 16.2 1.6 1.5 1.7 F6 2.9 - 3.7 BV 0.2 98.9 66.6 3.2 29.1 0.0 2.5 0.0 F2 - F5 0.8 - 2.9 V 14.8 67.7 46.8 7.3 1 1.6 1.9 3.1 1.9 Tabla 11. Resultados analíticos de cromatografía de proceso de columna XAD-7HP de extracto de té verde de lixiviado de etanol descafeinado al 95% JPGT SFE Un solvente de elución acídica ha demostrado tener un excelente proceso para descaíeinación adicional de las catequinas que reducen la concentración de cafeína en los productos finales a menos del 1% hasta tan bajo como 0.2% en peso de masa del extracto. Una fracción purificada de catequinas puede ser obtenida con purificación del > 90% con un rendimiento total de 1.9% de % en peso de masa de la materia prima de té verde original. Además, también puede ser obtenida una sub-fracción en donde la concentración de EGCG se incrementa a > 60% con una pureza de catequina del > 95% sin tomar en cuenta la materia prima de té verde original usada. Un sumario de la pureza de catequina y perfil ECGC en la cromatografía de proceso combinado eluato de Fl, F4 y JPGT se muestra en la Tabla 12.

Tabla 12. Comparación de pureza de catequina y perfil EGCG* en eluatos de cromatografía de proceso combinado (F2-F5 o F6) derivados de lixiviado de etanol al 95% de dos etapas de tres diferentes materias primas de té verde descafeinado SFE *Perfil = % en peso de masa de las cuatro principales catequinas En otros experimentos típicos, la solución de trabajo es la solución acuosa transparente obtenida después de la extracción de lixiviado al 95% de la Etapa 3 de material de materia prima de hoja de té verde original. Para estos experimentos, se extrajo por lixiviado 25 gm del residuo de té Verde crudo usando 250 mi de etanol al 95% a 70°C por dos etapas con 2 horas en cada etapa (relación solvente/alimentación de 20/1) . Las dos soluciones sobrenadantes de esta extracción de dos etapas, se combinan y el solvente de extracción de etanol se remueve usando un evaporador rotatorio. Después de remover etanol (destilación) , algo de la precipitación de sólido originada se remueve usando centrifugación y filtración como se describe en la Etapa 3. Lo sobrenadante se colecta y después se agrega agua destilada a lo sobrenadante concentrado para lograr una concentración final de 16-30 mg/ml. Esta solución acuosa transparente que contiene las catequinas, después se usó para purificación adicional usando métodos de cromatografía de proceso adsorbente de afinidad de la Etapa 4. Los resultados de esta extracción de lixiviado de la Etapa 3 se encuentran en la Tabla 13, en donde el lixiviado de hojas de té verde original o crudo se comparan al lixiviado del residuo descafeinado SFE de la Etapa 2. Se notará que en el caso del material de planta de té verde crudo, se origina una precipitación durante la destilación de etanol que no se observó con el residuo descafeinado SFE. Por lo tanto, la centrifugación y filtración de este precipitado reduce el rendimiento total de 32.8% a 26.9% de % en peso de masa en base al material de material prima original. A pesar que el rendimiento total es mayor que la materia prima de té verde crudo extraída por lixiviado, la pureza de los constituyentes químicos de catequina es similar. Además, la concentración de cafeína es muy alta en el producto de extracción de lixiviado de té verde crudo. Los resultados de tal lixiviado de etanol al 9% de dos etapas se tabulan en la Tabla 13 y 14.

Tabla 13. Comparación de rendimiento y pureza de extractos de lixiviado de etanol al 95% de la Etapa 3 de hojas de té verde crudo Fl (Crudo) a residuo de té verde descafeinado SFE Fl de la Etapa 2 (Res) .

Alirne endto. Pureza en Extractos (%)* Solvente ntació L- Total i ¾ ) TeoB LGC C CA Cal" LGCG fc- G n te a iña Cai+* 95% Crudo 32. X 0. S 10.86 0.46 0.51 5.52 16. 1 3.1 0.12 1.43 Etanol Res í).?5 14.39 iLZl 0.63 i .09 1 .34 3.27 Ó.19 33.7? Crudo 26,9 0,17 15.67 0,89 0,65 742 22,67 4,21 0 1 43,44 Destilación Rendimientos de Extractos (*o,( * Pureza definida como la concentración (% en peso de seca del compuesto en el extracto) . ** TeoB-teobromo; CA-ácido clorogénico; Caf-cafeína ; catequinas .

Tabla 14. Rendimiento y pureza de extractos de lixiviado de etanol al 95% de dos etapas de materia prima de hoja de té verde crudo Fl, F4 y JPGT Rendimiento de extractos í* Alimenta ión ·) TeoB F.GC C CA caf EGCG ! ECG Total PA I I 0.05 4.21 0.24 0.18 1.99 6.09 1 I.I3 I 1 ,67 F4 0. 3.16 " 0.84 0.44 4.72 |i n ¡ 2.94 I9.I JPGT 0.08 2.76 " 0. 1 0.13 3.79 6.24 | 1.17 10.48 Los experimentos de adsorción típicos se llevaron a cabo a temperatura ambiente en un sistema de lote abierto. Se lavaron ~30 g PA XAD7HP con etanol para remover monómeros e impurezas y después se remojaron en agua destilada por 16 horas antes de envasado. Después, los perlillas de resina PA limpias se envasaron en una columna de vidrio 10 mm (ID) x 350 mm (L) . Se cargó 100 mi de una solución acuosa (solución lixiviada des-etanolizada) que tiene una concentración de 16-30 mg/ml en la columna de envasado a una velocidad de flujo de 1.8 ml/min, 2 BV/h. Después de la carga, se usaron 150 mi de agua destilada para lavar la columna a una velocidad de flujo de 10 bV/h. Después, se usaron 200 mi de ácido sulfúrico al 5% en etanol al 10% para eluir (descafeinado) la columna a una velocidad de flujo de 2.2 BV/h. Después de esta elución, se usaron 250 mi de agua destilada para lavar la columna a 10 BV/h hasta que los lavados de la columna alcanzaron un pH de 7. Después, se usaron 100 mi de etanol al 80% para eluir (des-adsorción) la columna a una velocidad de flujo de 2 BV/h. El tiempo de procesamiento total es 300 minutos. Se colectaron las fracciones eluantes secuencialmente . Cada fracción de eluado se someten a ensayo por CLAR y los resultados se muestran en las Tablas 15-17.

Tabla 15. Rendimiento y pureza de las fracciones extraídas de hojas crudas de té verde Fl como materia prima por lixiviado de la Etapa 3 seguido por cromatografía de proceso de la Etapa 4 . * la recuperación se calcula por: peso de ( F2-F5 ) /carga x 100 Tabla 16. Rendimiento y pureza de fracciones de extracto de hoja cruda de té verde F4 como materia prima para lixiviado de la Etapa 3 seguido por cromatografía de proceso de la Etapa 4. * la recuperación se calculó por: peso de (F2-F4 ) /carga x 100 Rendmto TPs FGCG l-GC FCG C 1 TeoB Caf C.A Muestra Colecta Totales ("..) (%) ("..) (%) ("..) ("o) <%) ( ) Carga 50.8 "3? ~~ 8.36 2.2 i Ü " Fl -0.8 BV F2 0.8 1.1 BV 6.0 80.4 54.7 8.2 15.4 2.1 ; ") 7 1.9 F3 1.1 1.8 BV 4.1 93.3 61.3 11.9 17.4 2.5 i 3.4 2.1 F4 1.8 3.0BV 1.0 88.1 9.5 5.6 20.2 2.8 i 1.8 F2-F4 0.8-3.0 BV 11.2 85.8 57.6 9.4 1 .5 2.9 2.9 2.0 Tabla 17. Rendimiento y pureza de las fracciones de extracto de hojas crudas de té verde Japonés como materia prima para lixiviado de la Etapa 3 seguido por cromatografía de proceso de la tapa 4. recuperación se calculó por: peso de (F2-F4/carga 100 En la purificación adsorbente de afinidad de la Etapa 4 de las catequinas de inicio con material de planta de té verde crudo (no descaíeinado ) , 95% de la cafeína puede ser removida usando un solvente de elución acídica mientras se mantiene el enlace de las catequinas al adsorbente. Por ejemplo, es posible para extractos lixiviados crudos descafeinados que contienen aproximadamente 12% de cafeína por % en peso de masa a 0.3% en una fracción de extracto de cromatografía de proceso. La mayor concentración de cafeína en la materia prima, se requiere el gran volumen de eluante de solución acídica para descafeinar las fracciones de extracción. De manera interesante, la elución de las catequinas usando etanol al 80% resulta en un rendimiento mayor del EGCG, ECG y C que EGC por % en peso de masa en las fracciones del extracto. Los rendimientos y pureza mayores se encuentran en las fracciones 0.6 a 2 BV. Las fracciones muy purificadas de pureza de catequina total es aproximadamente 1.7 veces que los extractos de lixiviado crudo. El nivel de pureza de catequina no es mayor que el logrado con la cromatografía de proceso de la Etapa 4 del residuo descafeinado SFE. Sin embargo, los rendimientos totales de la fracción del extracto de mayor que el 11% en peso de masa en base a la materia prima de té verde original se logran con purezas totales de catequina del 71% al 93% dependiendo de la materia prima de té verde. Finalmente, el perfil de distribución química de las cuatro principales catequinas son alterados con un incremento preferencial en el % en peso de masa de EGCG, ECG y C una disminución en EGC. Por ejemplo, EGCG es típicamente mayor que el 65% en peso de masa de las catequinas totales en las fracciones combinadas del extracto y puede ser tan alto como 75% en peso de masa en las sub-fracciones del extracto . En el análisis para ácido oxálico en las fracciones y sub-fracciones de catequina purificada, no debe ser detectado ácido oxálico en cualquiera de estas fracciones o sub-fracciones a pesar de la presencia de ácido oxálico en la materia prima de lixiviado de etanol al 95%. De hecho, el ácido oxálico se encuentra ser tan alto como 6% en peso de masa en las soluciones de materia prima. Sin embargo, los compuestos de ácido oxálico no se adsorben en el adsorbente de afinidad y se encuentran en el efluente .

ETAPA 5. Lixiviado acuoso para Teanina y Polisacáridos . La fracción de extracto de polisacárido de los constituyentes químicos de té verde ha sido definida en la literatura científica como "fracción de extracción insoluble en etanol, soluble en agua". Tanto L-teanina como los polisacáridos, son solubles en agua. Una descripción generalizada de la extracción de teanina y los polisacáridos a partir de extractos de material de planta de té verde usando lixiviación de solvente acuoso es diagramada en la Figura 4-Etapa 5 (Apéndice 1) . La materia prima 140 es el residuo sólido a partir del proceso de lixiviación al 95% de la Etapa 3. Esta materia prima es lixiviada extraída en dos etapas. El solvente es agua destilada 260. En este método, el residuo de extracto de té verde 140 y el solvente de extracción 260, son cargados en un recipiente de extracción 600 y calentados y agitados. Pueden ser calentados a 100°C, hasta aproximadamente 80°C, o hasta aproximadamente 60-80°C. La extracción se realiza por aproximadamente 1 hora, por aproximadamente 2-4 horas, o por aproximadamente 2 horas. Las soluciones de extracto de sobrenadante 700 son centrifugadas 610, filtradas 620 y colectadas. El residuo 630 es retenido y guardado para procesamiento adicional. La extracción puede ser repetida en el residuo tantas veces como sea necesario o se desee. Pueden ser 2 o más veces, 3 o más veces, 4 o más veces, etc. Por ejemplo, la Figura 4-Etapa 5, muestra un proceso de dos etapas, en donde la segunda etapa usa los mismos métodos y condiciones. El residuo final [650] es desechado. Un ejemplo de esta etapa de extracción se encuentra en el Ejemplo 5 y los resultados de medición de masa y análisis de CLAR para contenido de L-teanina se muestran en la Tabla 18.

Tabla 18. Resultados de lixiviación acuosa, purificación de polisacárido y purificación de teanina obtenidos a partir de diferentes materias primas de té verde.

El rendimiento total del proceso de lixiviación del agua fue de 3.6-12.5% en peso de masa del material de alimentación de té verde original. La concentración de L-teanina fue 13.2-18.2% en peso de masa del extracto de lixiviación. Más de 85% de rendimiento en peso de masa de la teanina en el material de alimentación de hoja de té verde original se puede extraer con el proceso de lixiviación de dos etapas. Consistente con la literatura científica (29), los otros constituyentes químicos deberán ser grandemente los polisacáridos . Una etapa adicional 6 se puede usar para la separación de la teanina de los constituyentes químicos de polisacárido .

Etapa 6. Purificación de Fracciones Polisacárido y L-teanina Una descripción generalizada de la extracción y purificación de las fracciones de polisacárido y teanina de los extractos de té verde usando procesos de solvente de agua es representada por diagrama en la figura 5-etapa 6. El material de alimentación es soluciones de sobrenadante de lixiviación de agua [700 + 710] de la extracción de lixiviación de agua de la etapa 5. Las soluciones combinadas se evaporaron [800] para remover 60% del agua. El etanol absoluto solvente [280] luego se agregó a la solución concentrada para hacer una concentración de etanol final a 75%. La solución se dejó reposar y se observó un precipitado grande [810]. La solución se centrifugó [820], decantó [830] y el sobrenadante [910] se colectó para procesamiento y purificación adicionales de la fracción de teanina. El producto precipitado [900] es la fracción de polisacárido purificada que se puede analizar para polisacáridos usando el método colorimétrico usando Dextrano 5,000-410,000 de peso molecular como estándar de referencia. La pureza de la fracción de polisacárido extraída es aproximadamente 23-50% basado en diferentes pesos moleculares de dextrano con un rendimiento total de 1.15% por % en peso de masa del material de alimentación de hoja de té verde nativo original (tabla 18) . La combinación de las diversas purezas equivalentes de dextrano es consistente con una pureza de polisacárido completa de más de 90% en peso de masa de la fracción de polisacárido purificada . La pureza de teanina en la solución de sobrenadante es aproximadamente 31-42%. Para lograr un nivel mayor de pureza de teanina, se requiere procesamiento adicional. La solución sobrenadante [910] se secó. El producto seco se disolvió en agua destilada suficiente [260] para hacer una solución al 10% [850] . A esta solución, 4 volúmenes de etanol absoluto [270] se agregaron y se mezclaron. Esta solución hidroalcohólica se dejó reposar por aproximadamente 1 hora y luego se centrifugó [860] y cualquier precipitado [910] se desechó. El sobrenadante [920] se concentró usando evaporador giratoria al vacio [870] a aproximadamente 60°C para lograr una solución al 80%. Esta solución al 80% se dejó enfriar a temperatura ambiente y luego 4 volúmenes de etanol absoluto [280] se agregaron a la solución la cual se refrigeró [880] a 0°C por 24 horas. Los cristales que se formaron se colectaron y se secaron en vacio [890] a 60°C para producir la fracción de teanina purificada [930] . El rendimiento de la fracción de teanina purificada es aproximadamente 0.51-1.95% por % en peso de masa del material de alimentación de té verde original con una pureza de aproximadamente 90-92% (tabla 18). El procedimiento actual se puede encontrar en el ejemplo 6. El rendimiento del polisacárido de té verde fue 1.2-8.25% en peso de masa basado en el material de alimentación de hoja de té verde original. La pureza de la fracción de polisacárido fue 23-50% basado en diferentes pesos moleculares de dextrano indicando una pureza total de 90% de constituyentes químicos de polisacárido de té verde en la fracción. Basado en un gran número y variedad de procedimientos experimentales, es bastante razonable concluir que 1.2-8.5% de rendimiento en peso de masa es mayor que 90% de los polisacáridos insolubles en etanol, solubles en agua en el material de alimentación de especies de té ver natural. El rendimiento de L-teanina de té verde fue 0.5-2.0% en peso de masa basado en el material de alimentación de té verde original el cual fue aproximadamente 70% de la teanina en el material de alimentación original. Una pureza de teanina de 90% se puede lograr usando estos métodos. Muchos métodos son conocidos en la técnica para remoción de alcohol de la solución. Si se desea mantener el alcohol para recirculación, el alcohol se puede remover de las soluciones, después de la extracción, por destilación bajo presiones atmosféricas normales o reducidas. El alcohol se puede reutilizar. Además, también existen muchos métodos conocidos en la técnica para remoción de agua de soluciones, ya sea soluciones acuosas o soluciones en donde el alcohol fue previamente removido. Tales métodos incluyen, pero no se limitan a, secado por pulverización de las soluciones acuosas sobre un portador adecuado tal como, pero no limitado a, carbonato de magnesio o maltodextrina , o alternativamente, el liquido se puede tomar por secado por congelación o secado en ventana de refracción. En la realización de los métodos de extracción previamente descritos, se encontró que más de 90% de rendimiento en peso de masa de los constituyentes químicos de aceite esencial que tienen más 80% de pureza de los constituyentes químicos de aceite esencial presentes en el material de alimentación de hoja seca original de té verde y especies relacionadas se puede extraer de la fracción de extracto SCC02 de aceite esencial (Etapa 1) . Usando los métodos como se enseña en la etapa 2 (Procesos de Descafeinización de SCC02 ) , el rendimiento total de la cafeína del material de planta de té verde es aproximadamente 4.5% en peso de masa (aproximadamente 85% de los compuestos de cafeína presentes en el material de alimentación de té verde original) que tiene una pureza química de cafeína de aproximadamente 29% en peso de masa del extracto de cafeína. Tal proceso de descafeinización reduce el contenido de cafeína en el material de alimentación de té verde descafeinado por debajo de 0.2% por % en peso de masa del material de té verde descafeinado. Además, usando los métodos como se enseña en la presente invención, 80% de descafeinización del material de alimentación de té verde se puede lograr mientras se mantiene los constituyentes químicos catequina, teanina, y polisacárido valiosos en el material de alimentación el cual se puede usar para procesamiento adicional para obtener fracciones de catequina, teanina, y polisacáridos purificadas . Usando los métodos como se enseña en la etapa 3 de esta invención, una fracción de lixiviación de etanol es lograda con un rendimiento de 19-31% en peso de masa del material de alimentación de especie de té verde original. El rendimiento del constituyente químico catequina es más de 90% en peso de masa de las catequinas presentes en el material de alimentación de té verde original (véase tablas 8 y Al-Apéndice 1) . Además, el proceso de lixiviación de etanol incrementa la concentración (pureza) de las cuatro catequinas principales de 7-12% en peso de masa en el material de alimentación de hoja de té verde nativa estudiado a aproximadamente 25-39% en peso de masa en la fracción de extracto de catequina, un incremento de 3.5 partes en la concentración de catequinas (suma de ECGC, ECG, EGC, y C) . Finalmente, la extracción de lixiviación de etanol conserva los compuestos químicos teanina y polisacárido en el residuo sólido que se puede usar para procesamiento adicional para fracciones de teanina y polisacárido purificadas (etapas 5 y 6) . Usando los métodos como se enseña en la etapa 4 de esta invención (Procesos de Extracción por Adsorbente de Afinidad) , se pueden obtener fracciones de catequina con purezas de más de 90% por % en peso de masa de la fracción de extracción. Es posible extraer 56-86% de las catequinas del 95% de material de alimentación de extracto de lixiviación de etanol. Esto iguala un rendimiento de 50-77% de los constituyentes químicos catequina encontrados en el material de planta de especie de té verde usando ECGC, ECG, EGC y C como las referencias de constituyente químico catequina. Basado en el análisis de CLAR de esta fracción de ácido fenólico usando esta como referencias, la pureza del constituyente químico ácido fenólico es aproximadamente 40% de los productos de extracción de fracción de ácido fenólico. Además, un solvente de elución ácido ha probado ser un proceso excelente para descaíeinización adicional de la fracción de catequina purificada reduciendo la cafeína en los productos de fracción de catequina final a menos de 1% a tan bajo como 0.2% en peso de masa de la fracción de extracto. Además, las sub-fracciones se pueden obtener en donde la concentración de EGCG es incrementada a 65-75% en peso de masa con una pureza de catequina de más de 85% en peso de masa de la sub-fracción de extracto. Los datos soportan la capacidad de la cromatografía de proceso absorbente de afinidad para perfilar las fracciones de extracto de catequina incrementando preferentemente el % de peso de masa de EGCG, ECG, y C y disminuyendo EGC en la fracción de extracto. Usando los métodos como se enseña en la etapa 5 (Proceso de Lixiviación de Agua), un alto rendimiento de constituyentes químicos solubles en agua de aproximadamente 3.6% en peso de masa basado en el material de alimentación de hoja de té verde original. La concentración de L-teanina en este extracto crudo es aproximadamente 17% en peso de masa. Los compuestos solubles en agua remanentes son grandemente polisacáridos lo cual es consistente con los resultados de otros estudios (29) en donde reportaron que la concentración de polisacárido en hojas de té verde fue aproximadamente 2.42% en peso de masa con una pureza de 86.8% usando precipitación con etanol al 60%. Usando los métodos como se enseña en la etapa 6 de esta invención (Procesos de Purificación y Extracción de Polisacárido y L-teanina) , el rendimiento total de los polisacáridos insolubles en etanol, solubles en agua es aproximadamente 1.2% en peso de masa basado en el material de alimentación original. La pureza de la fracción de extracto de polisacárido es aproximadamente 56-76% basado en el método colorimétrico usando diferentes pesos moleculares de dextrano como estándar de referencia. Estos datos son consistentes con una pureza de polisacárido total de más de 95%. Además, usando los métodos como se enseña en la etapa 6, el rendimiento de L-teanina es aproximadamente 0.8% en peso de masa basado en el material de alimentación de hoja de té verde original el cual es más de 55% de la L-teanina presente en el material de alimentación original. Una pureza de teanina de 90% en peso de masa de la fracción de extracto de teanina purificada se puede lograr usando estos métodos.

Alimentos y Medicamentos Como una forma de alimentos de la presente invención, se pueden formar a cualquier forma opcional, por ejemplo, un estado de gránulo, un estado de grano, un estado de pasta, un estado de gel, un estado sólido, o un estado liquido. En estas formas, varios tipos de sustancias convencionalmente conocidas por aquellos expertos en la técnica las cuales se han permitido agregar a alimentos, por ejemplo, un aglutinante, un desintegrante, un espesante, un dispersante, un agente promotor de reabsorción, un agente saborizante, un amortiguador, un tensoactivo, un auxiliar de disolución, un conservador, un emulsionante, un agente de isotonicidad, un estabilizador o un controlador de pH, ect. pueden estar opcionalmente contenidas. Una cantidad del extracto de saúco que se agrega a los alimentos no está específicamente limitada, y por ejemplo, puede ser aproximadamente 10 mg a 5 g, preferiblemente 50 mg a 2 g por día como una cantidad de toma por un adulto que pesa aproximadamente 60 kg . En particular, cuando se utiliza como alimentos para conservación de la salud, alimentos funcionales, etc., es preferido contener el ingrediente efectivo de la presente invención en tal cantidad que los efectos predominantes de la presente invención se muestran suficientemente . Los medicamentos de la presente invención se pueden preparar opcionalmente de acuerdo con los métodos convencionalmente conocidos, por ejemplo, como un agente sólido tal como una tableta, un gránulo, polvo, una cápsula, etc., o como un agente líquido tal como una inyección, etc. A estos medicamentos, se pueden formular cualquiera de los materiales generalmente usados, por ejemplo, tal como un aglutinante, un desintegrante, un espesante, un dispersante, un agente promotor de reabsorción, un agente saborizante, un amortiguador, un tensoactivo, un auxiliar de disolución, un conservador, un emulsionante, un agente de isotonicidad, un estabilizador o un controlador de pH. Una cantidad de administración del ingrediente efectivo (extracto de té verde) en los medicamentos puede variar dependiendo del tipo, forma del agente, edad, peso corporal o síntoma que se aplica de un paciente, y similares, por ejemplo, cuando se administra oralmente, se administra una o varias veces por día para un adulto que pesa aproximadamente 60 kg, y se administra en una cantidad de aproximadamente 10 mg a 5 g, preferiblemente aproximadamente 50 mg a 2 g por día. El ingrediente efectivo puede ser uno o varios componentes del extracto de té verde. Los métodos también comprenden administrar tales extractos más de una vez por día, más de dos veces por días, más de tres veces por día y en un intervalo desde 1 a 15 veces por día. Tal administración puede ser continuamente, como cada día por un período de días, semanas, meses, o años, o puede ocurrir en tiempos específicos para tratar o prevenir condiciones específicas. Por ejemplo, una persona puede ser administrada con extractos de especies de té verde al menos una vez al día por años para mejorar el enfoque mental, cognición, y memoria, o para prevenir y tratar diabetes mellitus tipo 2, para prevenir apoplejía de enfermedad cardiovasculares, o tratar trastornos gastrointestinales, o para tratar trastornos inflamatorios y artritis incluyendo gota, o para tratar el resfriado común, infecciones bacterianas y fúngicas . La descripción anterior incluye el mejor modo actualmente contemplado para realizar la presente invención. Esta descripción se hace para el propósito de ilustrar los principios generales de las invenciones y no se deberá tomar en un sentido limitante. Esta invención adicionalmente se ilustra por los siguientes ejemplos. De lo contrario, se entenderá claramente que se puede recurrir a varias otras modalidades, modificaciones, y equivalentes de la misma, las cuales, después de leer la descripción en la presente, pueden sugerir por si mismas a aquellas personas en la técnica sin apartarse del espíritu de la presente invención. Todos los términos usados en la presente se consideran que son interpretados en su uso normalmente aceptado por aquellos expertos en la técnica. La patente y solicitudes de patente o referencias citadas en la presente son todas incorporadas para referencia en su totalidad.

Ejemplificaclón Materiales Botánica: Cuatro tipos de té verde chino y un tipo de té verde japonés se utilizaron en esta invención. Fl : Se compararon hojas de té verde chino de Nam Wan Tea Co Pte Ltd, Singapur. F2 : Té verde chino de alto grado "Baifu Tea" producido por Jiangsu Province, China. F3 : Té verde chino de alto grado "Kai Hua Long Ding" producido por Zhejing Kai Hua Co . y colectado en la primavera . F4 : Té verde chino de alto grado "Kai Hua Long Ding" producido por Zhejing Kai Hua Co . y colectado en el otoño . JPGT : Té verde japonés de alto grado.

Tabla 19. Componentes activos del Té verde*. Componente activo C (% peso) Fl F2 F3 F4 JPGT aceite volátil (extractos de 1.6 0.3 0.2 0.4 1.1 hexano) Galato de ( - ) -epigalocatequina 3.57 5.87 4.66 8.46 3.11 (EGCG) (-) -Epigalocatequina (EGC) 2.51 1.14 0.86 2.39 2.43 Galato de ( - ) -epicatequina (ECG) 0.68 1.45 1.36 1.95 0.55 (+) -catequina 0.15 0.40 0.31 0.14 0.24 Catequinas totales 6.92 8.85 7.18 12.94 6.33 Cafeína 1.25 2.33 2.36 3.27 2.21 Teobromina 0.02 0.21 0.23 0.32 0.06 Acido clorogénico 0.10 0.58 0.67 0.34 N/A L-teanina 0.67 3.62 3.40 2.42 1.62 Acido tanínico 0.59 0.60 0.51 0.61 0.13 polisacárido 0.5 5.2 8.5 Acido oxálico 0.1 0.5 0.5 1.8 0.3 *Aceite esencial estimado por extracción ultrasónica de 1 g de material de alimentación en hexano por 2 horas; catequinas, cafeína, teobromina, y ácido clorogénico fueron estimados por extracción ultrasónica de 1 g de material de alimentación por 2 horas; L-teanina y ácido oxálico se estimaron por extracción ultrasónica de 1 g de material de alimentación en agua por 2 horas.

SOLVENTES ORGANICOS Acetonitrilo (75-05-8), para CLAR, grado gradiente > 99.9% (GC) (000687); hexano (110-54-3), 95+%, grado espectrofotométrico (248878), etanol, desnaturalizado con 4.8% isopropanol (02853); etanol (64-17-5), absoluto (02883); metanol (67-56-1), 99.93%, grado ACS CLAR (4391993); y agua (7732-18-5), grado CLAR (95304); todos fueron comprados de Sigma-Aldrich Co .

ACIDOS Y BASES Acido fórmico (64-18-6), 50% solución (09676); fenol (108-95-2) (P"3653); ácido sulfúrico (7664-93-9), reactivo ACS, 95-97% (44719); ácido trifluoroacético (76-05-1), 99.8% grado espectrofotométrico (302032), ácido fosfórico (7664-38-2), 85% solución en agua (438081); todos fueron comprados de Sigma-Aldrich Co., fosfato de potasio, monobásico (7778-77-0), >99% pureza (205925000, Lote #: A019842601) se compró de Across Organics Co .

ESTANDARES DE REFERENCIA QUIMICA (+) -Catequina (154-23-4), pureza 95% (03310); (-) -epicatequina (490-46-0), pureza 93.6% (05125); galato de (-) -epicatequina (1257-08-5), pureza 99% (05135); (-)-epigalocatequina (970-74-1), pureza 98.3% (05145); galato de (-) -epigalocatequina (989-51-5), pureza 94% (05151); L-teanina (3086-61-6), pureza 99.0% (20250-001); todos se compraron de Chromadex (www . chromadex . com) . Cafeína (58-0802), pura, anhidra, >99% (27600); teobromina (83-67-0), pureza >99%, (T4500); y ácido clorogénico (327-97-9), mínimo 95% titulación (C3878) se compraron de Sigma-Aldrich Co. Dextrano estándar 5000 (00269), 50,000 (00891) y 410,000 (00895) certificado de acuerdo con DIN, fueron comparados de Fluka Co. Acido oxálico (144-62-7), 98% pureza (194131) se compró de Sigma-Aldrich Co. Las estructuras de estándares se muestran en la tabla 20.

Tabla 20 . Propiedades físicas de los estándares referencia para té verde METODOS Métodos CLAR Análisis de Catequina y alcaloides Sistema cromatográfico : sistema Cromatográfico Liquido de alta resolución LC-10AVP Shimadzu equipado con bomba LC10ADVP con detector de arreglo de foto-diodos SPD-M 10AVP. Los productos de extracción obtenidos fueron medidos en una columna C18 Júpiter de fase inversa (250x4.6 mm D.I., 5 µ, 300 Á) (PHenomenex, Parte #: 00G-4053-E0, serie No: 2217520-3, Lote No: 5243-17) . La fase móvil consistió de A (0.5% (v/v) solución acuosa de ácido fórmico) y B (acetonitrilo) . El gradiente se programó como sigue: dentro de los primeros 6 min, A mantener a 100%, 6-10 min, solvente B incrementó linealmente de 0% a 12%, y 10-35 min, B lineal de 12% a 21%, luego 35-40 min, B lineal .de 21% a 25%, y luego 40-50 min, B lineal a 100%. El volumen de inyección fue 10 µ? y la velocidad de flujo de la fase móvil fue 1 ml/min. La temperatura de columna fue 50 °C. Las soluciones madre de metanol de C (catequina) , EGC (epigalocatequina) , ECG (galato de epicatequina ) , EGCG (galato de epigalocatequina) , cafeína, teobromina, ácido clorogénico se prepararon a concentración de 1 mg/ml. Alícuotas de un mililitro de solución estándar se transfirieron en un matraz volumétrico de 10 mi para producir una solución estándar mezclada. La solución estándar de referencia mezclada luego se diluyó paso por paso para producir una serie de soluciones a concentraciones finales de 0.5, 0.2, 0.1, 0.05, y 0.01 mg/ml, respectivamente. Las curvas estándar se prepararon sobre estas cinco concentraciones y el área de pico se gráfico contra las concentraciones correspondientes usando regresión lineal para generar la curva estándar. Los resultados se resumen en la tabla 21.

Tabla 21. Resultados de análisis CLAR en estándares referencia de té verde a concentración de 0.1 mg/ml metanol .

ID Area = ml+m2x Tiempo de Arca Altura Anchura Tiempo Tiempd Placa retención de de (µ ) (mAu-min) (mAu) (min) teórica1 (min) Inicio Paro (min) (min) MI M2 228 350590 12.56+0.09 Teobiomma 19 0 1.000 391030 47441 0.75 12.32 13.07 4468 (-)-EGC 260560 0.977 13.59±0.05 45490 4260 0.38 13.38 13.76 20431 168 78 137 (')-C 52 641720 0.998 14.10+0.05 80296 10136 0.31 13.92 14.23 33007 10X260 CA 96 0 0.999 14.40+0.04 : 124438 1 340 0.38 14.23 14.61 22941 1 8 28861 Cafeína j ¡¾ 0 0.999 14.79+0.03 : 307500 52704 0.38 14.61 15 241 2 220 139350 (-)-KiCG 89 0 0.998 15. 8+0.04 165353 20787 0.48 ¡ 15 15.48 15977 204 21 440 (-)-EC(i 89 0 0.998 1X.52±0.09 i 284835 21471 1.48 18.05 19.53 2490 220 0.980 L-teanina 773 320873 5.9910.03 1 6406 1 799 0.7 5.74 6.43 1 177 1 28 0.993 Acido oxálico 9 26066 9 3.23+0.02 278335 3041 0.48 3.06 3.54 71 1 1Placas teóricas se calculó por: N=16x(tg/W). tR es tiempo de retención y w es anchura del pico, https://www.mn-net . com/web%5CMN- EB-HPLCKatalog . nsf/WebE/GRUNDLAGEN Análisis de Teanina Los análisis de teanina se realizaron en columna C18 Júpiter de fase inversa (250x4.6 mm D.I., 5 µ, 300 Á) (Phenomenex, Parte #: 00G-4053-E0, serie No.: 2217520-3, Lote No.; 5243-17). La fase móvil fue agua regulada con ácido trifluoroacético a concentración de 0.1%. La velocidad de flujo de la fase móvil fue 1 ml/min. El detector se ajustó a longitud de onda de 203 nm.

Análisis de ácido oxálico Los análisis de ácido oxálico se realizaron en columna C18 Júpiter de fase inversa (250x4.6 mm D.I., 5 µ, 300 Á) (Phenomenex, Parte #: 00G-4053-E0, serie No.: 2217520-3, Lote No.; 5243-17). La fase móvil consistió de A (solución acuosa de KH2P04 (p/v) al 0.5%) y B (acetonitrilo) . La fase móvil de solución acuosa de KH2P04 (p/v) al 0.5% fue preparada disolviendo KH2P04 sólido en agua destilada. Luego se ajustó a pH 2.80 con una solución de 1.0 mol/L de H3P0 . El gradiente se programó como sigue: solvente B incrementó linealmente desde 10% a 40% en 15 minutos y luego disminuye desde 40% a 10% en otros 5 minutos. El volumen de inyección fue 10 µ? y la velocidad de flujo de fase móvil fue 1 ml/min. La temperatura de columna fue 25°C. La longitud de onda detectada fue 262 nm. La concentración diferente de ácido oxálico en agua desde 0.1 mg/ml a 10 mg/ml se analizó. Las curvas estándares se prepararon sobre estas concentraciones y el área pico se gráfico contra las concentraciones correspondientes usando la regresión lineal para generar la curva estándar. Los contenidos de ácido oxálico en la solución de muestra se cuantificaron comparando el área pico en la solución de muestra con aquélla de estándares conocidos.

METODOS CG-EM Se realizaron análisis CD-EM usando un sistema Shimadzu GCMS-QP2010. El sistema incluye una cromatografía de gas de alta resolución, interfaz CD/EM directa, fuente de iones de electroimpacto (El) con control de temperatura independiente, quaderupole mass filter et al. El sistema se controla con solución de CDEM software Ver. 2 para adquisición de datos y análisis post-funcionamiento . La separación se realizó en una columna capilar de sílice fusionada Agilent J& DB-5 (30 m x 0.25 mm i . d . , 0.25 pm de espesor de película) (catálogo: 1225032, serie No: US5285774H) usando el siguiente programa de temperatura. La temperatura inicial fue 60 °C, se mantuvo por 1 min, luego se incrementó a 80°C a velocidad de 3°C/min, se mantuvo por 35 min con tiempo de funcionamiento total de 76 minutos. La temperatura de inyección de muestra fue 220°C y 1 µ? de muestra se inyectó por autoinyector en modo no fraccionado en 1 minuto. El gas portador fue helio y la velocidad de flujo se controló por presión a 40.1 KPa . Bajo tal presión, la velocidad de flujo fue 0.79 ml/min y la velocidad lineal fue 32.5 cm/min. La temperatura de fuente de iones de EM fue 230°C, y la temperatura de interfaz CG/EM fue 230°C. El detector de EM se escaneó entre m/z de 50 y 500 a la velocidad de escaneó de 1000 AMU/segundo. La temperatura de corte de solvente fue 3.5 min.

Análisis de Polisacárido Sistema de espectrómetro: se ha usado en este estudio el espectrofotómetro visible de ultravioleta Shimadzu UV-1700 (190-1100 nm, 1 mm de resolución) . Se ha usado el método colorimétrico (Dubois, M. , Gilíes, K. A., Hamilton, J. K. , Rebers, P.A. and Smith, F., Colorimetric Method for Determination of Sugars and related substances, Analytical chemistry, 1956, 28(3), 350-356) para el análisis de polisacárido . Hacer soluciones de dextrano madre de 0.1 mg/ml (Pm = 5000, 50, 000 y 410,000). Tomar 0.08, 0.16, 0.24, 0.32, 0.40 mi de solución madre y completar un volumen a 0.4 mi con agua destilada. Luego agregar 0.2 mi de solución de fenol al 5% y 1 mi de ácido sulfúrico concentrado. Las mezclas se dejaron reposar por 10 minutos previo a realizar la exploración por UV. La máxima absorbancia se encontró a 488 nm. Luego ajusfar la longitud de onda a 488 nm y medir la absorbancia para cada muestra. Los resultados se muestran en la tabla 22. Las curvas de calibración estándar se obtuvieron para cada una de las soluciones de dextrano como sigue: Dextrano 5000, absorbancia = 0.01919 + 0.027782 C (yg) , R2 = 0.97 (N = 5), Dextrano 50,000, absorbancia = 0.0075714 + 0.032196 C ( g) , R2 = 0.96 (N = 5), y Dextrano 410,000, absorbancia = 0.03481 + 0.036293 C (vq) , R2 = 0.98 (N = 5) .

Tabla 22. Análisis colorimétrico en estándar de dextrano TuIxi Solución de Agua 5o o fenol Acido Abs Abs Abs ( Pm = dextrano ( mi ) destilada ( mi ) sulfúrico (Pm = 5 ) ( Pm = 5K) 4 I 0K) Blanco 0 0.40 0.2 0 0 0 1 1 0.08 0.32 0.2 0.238 0.301 0.335 1 2 0. 16 0.24 0.2 0.462 0.504 0.678 1 3 0.24 0. 16 0.2 0.744 0.752 0.854 1 4 0.32 0.08 0.2 0.907 1.045 1 .247 1 5 0.40 0.00 0.2 1 .098 1 .307 1 .450 1 Análisis DART-EM de extractos de té verde Un espectrómetro de masa JEOL AccuTOF-DART (Jeol USA, Peabody, MA) se utilizó en el análisis espectrométrico de masa de extractos de té verde. Esta tecnología de espectrómetro de masa de Tiempo en Vuelo (TOF) no requiere (o mínima) preparación de muestra y produce masas con exactitudes a 0.00001 unidades de masa. Para el modo de ión positivo (DART+) , el voltaje de aguja se ajustó a 3500V, elemento de calentamiento a 300°C, electrodo 1 a 150V, electrodo 2 a 250V, y flujo de gas helio a 3.69 litros por minutos (LPM) . Para el espectrómetro de masa, se cargaron los siguientes ajustes: orificio 1 ajustado a 20V, voltaje de lente de anillo ajustado a 5V, y orificio 2 ajustado a 5V. El voltaje de picos se ajustó a 1000V para dar polvo de resolución iniciando a aproximadamente 100 m/z. El voltaje de detector de placa de microcanales ( CP) se ajustó a 2550V. Las calibraciones se realizaron internamente con cada muestra usando una solución al 10% de PEG 600 el cual proporcionó marcadores de masa en todo el intervalo de masa requerido 100-1000 unidades de masa. Las muestras de té verde se introdujeron en el plasma de helio DART como polvos usando el extremo cerrado de un tubo capilar de punto de fusión de vidrio de borosilicato . La muestra se colectó como un película delgada en el tubo capilar permitiendo que un área de superficie homogénea sea expuesta al haz de plasma He el cual maximiza el suministro en el TOF. El tubo capilar se mantuvo en el plasma He por aproximadamente 3-5 segundos para análisis. No se observó pirólisis de la muestra durante el análisis. Para el modo de ión negativo (DART-), el DART y AccuTOF-MS se conectaron al modo de ión negativo. El voltaje de aguja fue 3500V, calentando el elemento a 300°C, Electrodo 1 - 150V, Electrodo 2 -250V, y flujo de gas helio 3.69 LPM. Para el espectrómetro de masa, se cargaron lo siguientes ajustes: Orificio 1 ajustó a -20V, voltaje del lente del anillo ajustado a -5V, y orificio 2 ajustado a -5V. Los picos de voltaje se ajustaron a 600V, para lograr la energía de resolución apropiada a intervalos m/z inferiores en el modo de ión negativo. El voltaje MCP se ajustó a 2600V. Las muestras se introdujeron en el DART en la misma manera exacta como en el modo de ión positivo. Las calibraciones se realizaron internamente con cada muestra usando una solución de ácidos carboxílicos perfluorados. Las fórmulas moleculares se confirmaron por la composición elemental y programas de igualación de isótopos provistos con el JEOL AccuTOF DART-MS. Una base de datos de búsqueda de constituyentes de té verde se desarrolló basada en la literatura. Todas las identificaciones químicas (identificadas y no identificadas) en el espectro de masa se asignaron con un mayor nivel de confidencia que el 90%.

Ejemplo 1 Ejemplo de la Etapa 1: Etapa única de extracción de SFE y purificación de aceite esencial de té verde Todas las extracciones de SFE se realizaron en SFT 250 (Supercritical Fluid Technologies, Inc., Newark, Delaware, USA) designada para presiones y temperaturas de hasta 690 bar y 200°C, respectivamente. Este aparato permite extracciones simples y eficientes en condiciones supercriticas con flexibilidad para operar en ya se un modo dinámico o estático. Este dispositivo consiste de estos módulos: un horno, una bomba y control y un módulo de colección. El horno tiene una columna precalentada y un recipiente de extracción de 100 mi. El módulo de bomba está equipado con una bomba accionada por aire comprimido con capacidad de flujo constante de 300 ml/min. El módulo de colección es un vial de vidrio de 40 mi, sellado con tapas y septos para la recuperación de productos extraídos. Se proporciona además con válvulas micrométricas y un medidor de flujo. La presión y temperatura del recipiente de extracción se monitorean y controlan dentro de +/- 3 bar y +/- 1°C. En un ejemplo experimental típico, 25 gramos de hojas de té verde cortadas para té con tamaño aproximado de 105 µp? tamizado por tamiz de 140 malla se cargó en un recipiente de extracción de 100 mi para cada experimento. El horno se precalentó a la temperatura deseada antes de que el recipiente empacado fuera cargado. Después de que el recipiente se conectó en el horno, el sistema de extracción se probó para fuga presurizando el sistema con C02 (850 psig) y se purgó. El sistema se cerró y presurizó a la presión de extracción deseada usando la bomba de líquidos accionada por aire. El sistema se dejó entonces para equilibrio por ~3 min. Un vial de muestreo (40 mi) se pesó y conectó al orificio de muestreo. La extracción se inició haciendo fluir CO2 a una velocidad de 5 SLPM (9.8 g/min) , la cual se controló por una válvula de medición. La relación solvente/alimentación, definida como la relación en peso del C02 total usado para el peso de la materia prima cargada, se calculó. Durante el proceso de extracción, la muestra extraída se peso cara 5 minutos. Se presumió que la extracción finalizó cuando el peso de la muestra no cambio más del 5% entre dos mediciones de peso. El rendimiento se definió como la relación en peso del total exigido para la alimentación de material de alimentación . En esta ejemplo experimental, las condiciones de extracción se ajustaron donde la temperatura se ajustó a 40°C y la presión se ajustó a 200 bar. La velocidad de flujo de C02 fue 9.8 g/min.

Ejemplo 2 Ejemplo de la Etapa 2: Descafeinización de SFE de etapa única del material de la planta de té verde Todas las extracciones de SFE se realizaron en SFT 250 ( Supercritical Fluid Technologies, Inc., Newark, Delaware, USA) . En un ejemplo experimental típico, el residuo de 25 gramos de las hojas de té verde de corte para té extraído de aceite esencial humectado con 25 gm de co-solvente de agua destilada se cargó en recipientes de extracción de 100 mi para cada experimento. El horno se precalentó a la temperatura deseada antes de que el recipiente empacado fuera cargado. Después de que el recipiente se conectó en el horno, el sistema de extracción se probó para fuga presurizando el sistema con CO2 (850 psig) , y se purgó. El sistema se cerró y presurizó a presión de extracción deseada usando la bomba de líquidos accionada por aire. El sistema se dejó entonces para equilibrio por ~3 min. Un vial de muestreo (40 mi) se pesó y conectó al orificio de muestreo. La extracción se inició haciendo fluir C02 a una velocidad de 5 SLPM (9.8 g/min), la cual se controló por una válvula de medición. 3 mi de co-solvente se dosificaron en el sistema cada minuto. El tiempo de extracción fue de 4 horas. Se calculó la relación solvente/alimentación, definida como la relación en peso de C02 total usado para el peso de materia prima cargada. El rendimiento se definió como la relación en peso del total exigida para la alimentación de material de alimentación. Las condiciones de extracción se ajustaron a 70°C y 500 bar .

Ejemplo 3 Ejemplo de la Etapa 3: Extracción por Lixiviación de 95% de etanol Los ejemplos típicos^ de extracciones de solvente de 2 etapas de los constituyentes químicos de catequina de material de hoja de té verde es como sigue: La materia de alimentación fue 25 gm de residuo SFE de hoja de té verde de corte para té a partir de la Etapa 2 de descafeinización de SCC02 o material de alimentación de hoja de té verde. El solvente fue 250 mi de 95% de etanol. En este método, el material de alimentación y 250 mi de 95% etanol se cargaron en forma separada en recipiente de extracción de 500 mi y se mezcló en un baño de agua caliente a 70°C por 2 horas. La solución de extracción se filtró usando papel filtro Fisherbrand P4 que tiene un tamaño de retención de partícula de 4-8 µp?, se centrifugó a 3000 rpm por 20 minutos, y el residuo de particulado se utilizó para extracción adicional. El filtrado (sobrenadante) se colectó para el cálculo de rendimiento y análisis de CLAR. El residuo de la Etapa 1 se extrajo por 2 horas (Etapa 2) usando los métodos antes mencionados. Los extractos de sobrenadante se combinaron y el etanol se removió usando un evaporador giratorio. Si se desea la purificación adicional de la fracción de catequina, entonces el producto de extracción de catequina crudo libre de alcohol se disuelve en 250 mi de agua destilada para el proceso de la Etapa 4. El residuo de la extracción de la Etapa 2 fue el mismo que para el procesamiento adicional para fracciones de teanina y polisacárido (ver Etapa 5) .

Ejemplo 4 Ejemplos de Etapa 4 Extracción de Adsorbente de Afinidad de Fracciones de Catequina. En experimentos típicos, la solución de trabajo fue la solución acuosa transparente del extracto de lixiviación de 95% de etanol de dos etapas de té verde en la Etapa 3. Para estos ejemplos, 25 gm del residuo descafeinado de SFE verde se extrajeron por lixiviación en dos etapas usando 250 mi de 95% etanol a 70°C (relación de alimentación de solvente 20/1) como se describe en la Etapa 3. Los extractos de dos etapas se combinaron y se removió etanol usando evaporación giratoria. El agua destilada se adicionó entonces para reconstituir la concentración original de la solución (500 mi volumen) . La resina de polímero adsorbente de afinidad fue XAD7HP (ver Apéndice 1) . 30 gm de adsorbente de afinidad se prelavaron con 95% etanol (4-5 BV) y agua destilada (4-5 BV antes y después del empacado en una columna de vidrio con un ID de 10 mm y longitud de 350 mm. El BV (volumen de lecho) de adsorbente fue 35 mi. 100 mi de solución acuosa (solución de lixiviación de la etapa 3 desetanolizada) que tiene una concentración en solución = 4.8-9.6 mg/ml se cargó en la columna empacada a una velocidad de flujo de 1.2 ml/min (2 BV/hr) . El tiempo de carga fue de 85 min. La columna cargada se lavó con 150 mi de agua destilada a una velocidad de flujo de 10 BV/hr con un tiempo de lavado de 25 minutos. Para descafeinar la columna cargada, 100 mi de 5% H2S04 en 10% etanol se utilizó para eluir los compuestos de cafeína a una velocidad de flujo de 2.2 ml/min (2 BV/hr). El eluído se descargó. Luego 250 mi de agua destilada se utilizaron para lavar la columna a una velocidad de flujo de 6 ml/min (12 BV/hr) o hasta que las soluciones de lavado alcanzarán el pH neutral. 100 mi de 80% etanol se utilizaron para eluir las catequinas de la columna cargada a una velocidad de flujo de 1.2 ml/min (2 BV/hr) con un tiempo de elución de 85 minutos. Durante la elución, se colectaron 6 fracciones (F1-F6) a 0-0.7 (Fl, 0.8-1.0 (F2), 1.0-1.1 (F3), 1.1-1.3 (F4), 1.3-1.6 (F5), y 1.6-3 (F6) BV, respectivamente. Luego 3 BV de etanol absoluto se utilizaron para limpiar los químicos remanentes en la columna a una velocidad de flujo de 3.6 BV/hr seguido por lavado con 3 BV de agua destilada a 3.8 BV/hr. La carga, efluente, lavados, y eluido de cafeína se colectaron todos, se midieron para contenido de masa y se analizaron usando HPLC para medir las catequinas (EGCG, EGC, ECG, C) , cafeína, teobromo, y ácido clorogénico. Cada fracción de elución se colectó y se analizó por CLAR.

Ejemplo 5 Ejemplo de Etapa Proceso de Lixiviación de Agua para Extracción de Polisacáridos y Teanina. En un ejemplo de experimento típico del proceso de lixiviación de agua, 20 gm de residuo a partir del proceso de lixiviación de 95% etanol de la Etapa 3 y 400 mi de agua destilada se cargaron separadamente en un recipiente de extracción de 500 mi y se mezclaron en un baño de agua a 70°C por 2 horas. La capa limpia superior se decantó y una extracción de segunda etapa del residuo sólido se extrajo con 400 mi de agua destilada usando los mismos métodos. Las soluciones de extracción de dos etapas se centrifugaron a 2000 rpm por 10 minutos y se filtraron con papel Fisherbrand P4 (tamaño de retención de partícula de 4-8 µ??) . Las soluciones de sobrenadante decantadas en dos etapas se colectaron y combinaron para calcular el rendimiento y análisis de CLAR para contenido de teanina.

Ejemplo 6 Ejemplo de Etapa 6 Fracción de Polisacárido y Extracción de Teanina y Purificación Un ejemplo experimental típico de extracción de solvente y precipitación de los constituyentes químicos de fracción de polisacárido purificado insoluble de etanol, soluble en agua y los constituyentes químicos de teanina de té verde es como sigue: 20 gm del residuo sólido de la extracción por lixiviación de 95% etanol de 2 etapas de la Etapa 3 se extrajo usando lixiviación de agua destilada de 2 etapas como se describió anteriormente en la Etapa 5. Las soluciones de extracto de dos etapas de la Etapa 5 se combinaron. La evaporación giratoria al vacío se utilizó para concentrar la solución de extracto de sobrenadante claro removiendo 60% del solvente de agua. Luego, se adicionó etanol anhidro para obtener una concentración de etanol final de 75%. Esta solución se dejó reposar por 1 hora y se observó un precipitado. La solución de extracción se centrifugó a 2,000 rpm por 10 minutos y el sobrenadante se decantó, secó por congelación, y se guardó para proceso adicional. El precipitado de polisacárido se colectó y se secó por congelación. La fracción de polisacárido seca se pesó y se disolvió en agua por análisis de pureza de polisacárido con el método colorimétrico usando dextrano como estándares de referencia. Además, la espectrometría de masa AccuTOF-DART se utilizó para perfilar adicionalmente los pesos moleculares de los compuestos que comprenden las fracciones de polisacáridos . Los resultados se muestran en las Figuras 6-11. El producto de sobrenadante seco que contiene L-teanina se disolvió en agua destilada para hacer una solución al 10%. A esta solución, se adicionaron 4 volúmenes de etanol absoluto, se mezcló y se dejó reposar por 1 hora. La solución se centrifugó entonces a 6,000 rpm por 10 minutos y se decantó. Los precipitados se desecharon. La solución de sobrenadante colectada se concentró usando evaporación giratoria al vacío a 60°C para una solución de 80% etanol. Esta solución de 80% etanol se dejó enfriar a temperatura ambiente. Luego, se adicionaron 4 volúmenes de etanol a la solución. Esta solución se colocó en un refrigerador a 0°C por 24 horas para recristalización del compuesto de teanina. La solución se centrifugó a 2000 rpm por 10 min y los cristales se colectaron entonces y se secaron a 60°C bajo vacío.

Ejemplo 7 Los siguientes ingredientes se mezclaron para la formulación Extracto de Té Verde 150.0 g Fracción de Aceite Esencial (10 mg, 7% peso seco) Fracción de Catequina (90 mg, 60% peso seco) Fracción de Teanina (20, 13% peso seco) Polisacáridos (30 mg, 20% peso seco) Esteviosida (Extracto de Estevia) 12.5 mg Carboximetilcelulosa 35.5 mg Lactosa 77.0 mg Total 275.0 mg El nuevo extracto de té verde comprende fracción de aceite esencial purificado, fracción de catequina, fracción de teanina, y fracción de polisacárido por % peso de masa mayor que aquella encontrada en el material de rizoma natural o productos de extracción convencionales. Las formulaciones se pueden hacer en cualquier forma de dosificación oral y se administran diariamente o a 15 veces por día como sea necesario para los efectos médicos, fisiológicos, psicológicos deseados (antioxidante, depuración de radical libre de oxigeno, y actividades de inhibición de nitrosación, mejoramiento inmunológico, anti-osteoporosis , prevención y terapia de enfermedad cardiovascular, prevención y terapia de enfermedad cerebrovascular , actividad de reducción de colesterol, prevención y tratamiento de cáncer, tratamiento de VIH y enfermedades virales, pérdida de peso y termogénesis , prevención del envejecimiento, manejo de diabetes mellitus, mejoramiento de la memoria y cognición, reducción de ansiedad, y mejoramiento del humor).

Ejemplo 8 Los siguientes ingredientes se mezclaron para la siguiente formulación Extracto de Té Verde 150.0 g Fracción de Aceite Esencial (5 mg, 3% peso seco) Fracción de Acido Fenólico (90.0 mg, 60% peso seco) Teanina (10.0 mg, 7% peso seco) Polisacáridos (45.0 mg, 30% peso seco) Vitamina C 15.0 mg Sucralosa 35.0 mg Polvo de frijol Mung 50.0 mg Sabor de Moca 40.0 mg Sabor de Chocolate 10.0 mg Total 300.0 mg La nueva composición de extracto de té Verde comprende fracciones de aceite esencial purificado, catequina, teanina, y fracciones de constituyente químico de polisacárido en % en peso de masa mayor que aquélla encontrada en el material de planta natural o productos de extracción convencionales. La formulación se puede hacer en cualquier forma de dosificación oral y se puede administrar en forma segura hasta 15 veces por día cuando sea necesario para los efectos fisiológicos, psicológicos y médicos deseados.

REFERENCIAS CITADAS 1. Alschuler L . Am J Nat ed 5:28-31, 1998. 2. Balentine DA et al. Crit Rev Food Sci Nutr 37:693-704, 1997. 3. Graham HN . Prev Med 21:a334-350, 1992. 4. Lin Y-L et al. J Agrie Food Chem 44:1387-1394, 1996. 5. Lu H et al. Drug Metab Dispos 31:452-461, 2003. 6. Chen H et al. J Agrie Food Chem 52(11): 3333- 3336, 2004. 7. Chen C-W & Ho CT . J Food Lipids 2:35-46, 1995. 8. Katiyar SK et al. Carcinogenesis 14:849-855, 1993. 9. Yen G-C et al. J Agrie Food Chem 43:27-32, 1995. 10. Mukhtar HM et al. Prev Med 21:351-360, 1992. 11. Wang ZY et al. Cáncer Res 52:1162-1170, 1992. 12. Brown MD. Alt Med Rev 4:360-370, 1999. 13. Katiyar SK et al. Arch Dermatol 136:989-994, 2000. 14. Sugiyama T & Sadzuka Y. Biochim Biophys Acta 1653 (2) :47-59, 2003. 15. Elmets CA et al. J Am Acad Dermatol 44:425-432, 2001. 16. Tsubono Y & Tsugane S. Ann Epidemiol 7:280- 284, 1997. 17. Geleijnse JM et al. Arch Intern Med 159:2170-2174, 1999. 18. Egashira N et al. Neurosci Lett 363 ( 1 ): 58-61 , 2004. 19. Kakuda T. Biol Pharm Bull 25(12): 1531-1538, 2002. 20. Rrahwinkel T & Willershausen B. Brit Med J 310:693-696, 1995. 21. Hegarty VM et al. Am J Clin Nutr 71 : 1003-1007, 2000. 22. Kamath AB et al. Proc Nati Acad Sci USA 100:6009-6014, 2003. 23. Weisburger JH. Tea and Health. In: Herbal and Tradition Medicine (Packer, L, Ong CN, & Halliwell B, eds) , Marcel Dekker, New York, 2004, pp.117-144. 24. Zheng G et al. In Vivo 18(l):55-62, 2004. 25. Juneja LR et al. Trends Food Sci Tech 10:199-204, 1999. 26. Lu K et al. Hum Psychopharmacol 19(7) :457- 465, 2004. 27. Wang DW et al. J Agrie Food Chem 49(1) :507- 510, 2001. 28. Williamson EM. Phytomedicine 8(5) : 401-409, 2001. 29. Xu X et al. Zhong Yao Caí 28 ( 4 ): 327-329, 2005. 30. Kopcak UaM & Rahoma S. J Supercritical Fluids 34:209-214, 2005.

Claims (4)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiéndose descrito la presente se considera como novedad, y por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES 1. Un extracto de especies de té verde, caracterizado porque comprende una fracción que tiene un cromatograma de espectrometría de masas de Análisis Directo en Tiempo Real (DART), de cualquiera de las Figuras 6 a 25. 2. El extracto de especies de té verde conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el extracto comprende un compuesto seleccionado del grupo que consiste de un aceite esencial, un polifenol, un polisacárido y combinaciones de los mismos. 3. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el aceite esencial se selecciona del grupo que consiste de ácido n-hexadecanoico, ácido tetradecanoico, 9-hexadecanol , 1-undecanol, 1-hexadecanol , alcohol oleílico, 9-octadecen-l-ol, nonadecanol, y combinaciones de los mismos. 4. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque el polifenol se selecciona del grupo que consiste de catequinas, flavonoles, glicósidos de flavonoles, y combinaciones de los mismos. 5. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la catequina se selecciona del grupo que consiste de catequina (C) , epicatequina (EC) , galato de epicatequina (ECG) , galocatequina (GC) , galato de epigalocatequina (EGCG) , epigalocatequina (EGC) , y combinaciones de los mismos . 6. Las especies de té verde de conformidad con la reivindicación 4, caracterizadas porque el flavonol se selecciona del grupo que consiste de quercetina y rutina. 7. Las especies de té verde de conformidad con la reivindicación 4, caracterizadas porque el glicósido de flavonol es caemferol. 8. Las especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada porque el polisacárido se selecciona del grupo que consiste de glucosa, arabinosa, galactosa, rhamnosa, xilosa, ácido urónico y combinaciones de los mismos. 9. Las especies de té verde de conformidad con la reivindicación 1, caracterizadas porque están sustancialmente libres de cafeína, ácido oxálico, o taninos . 10. Las especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizadas porque la cantidad de aceite esencial es mayor de 2% en peso. 11. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la cantidad de aceite esencial es desde 25% hasta 90% en peso . 12. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la cantidad de aceite esencial es dése 50% hasta 90% en peso . 13. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la cantidad de aceite esencial es desde 75% hasta 90% en peso . 14. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la cantidad de polifenol es mayor de 40% en peso. 15. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la cantidad de polifenol es desde 50% hasta 90% en peso. 16. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la cantidad de polifenol es desde 75% hasta 90% en peso. 17. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la cantidad de polisacárido es mayor de 15% en peso. 18. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la cantidad de polisacárido es desde 25% hasta 90% en peso. 19. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la cantidad de polisacárido es desde 50% hasta 90% en peso. 20. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque la cantidad de polisacárido es desde 75% hasta 90% en peso. 21. El extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el extracto comprende un aceite esencial desde 2% hasta 97% en peso, una catequina desde 15% hasta 98% en peso, una teanina desde 4% hasta 90% en peso, y un polisacárido desde 9% hasta 98% en peso. 22. Alimento o medicamento, caracterizado porque comprende el extracto de especies de té verde de conformidad con la reivindicación 1. 23. Un método para preparar un extracto de especies de té verde, caracterizado porque tiene al menos, una característica predeterminada que comprende extraer secuencialmente un material de planta de especie de té verde, para proporcionar una fracción de aceite esencial, una fracción de polifenol, y una fracción de polisacárido mediante a) extraer un material de planta de especies de té verde por extracción de dióxido de carbono súper critica para proporcionar una fracción de aceite esencial y un primer residuo; b) extraer ya sea un material de planta de especies de té verde o el primer residuo de la etapa a) por extracción alcohólica para proporcionar la fracción de polifenol y un segundo residuo; y c) extraer el segundo residuo dé la etapa b) por extracción de agua y precipitar el polisacárido con alcohol para proporcionar la fracción de polisacárido. 24. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el primer residuo de la etapa a) es además descafeinado por extracción de dióxido de carbono supercritico . 25. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la fracción polifenólica es además purificada por cromatografía de adsorbente de afinidad. 26. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la etapa a) comprende :

1) cargar en un recipiente de extracción, material de planta de especies de té verde molidas;

2) agregar dióxido de carbono bajo condiciones supercriticas ;

3) contactar el material de planta de especies de té verde y el dióxido de carbono por un tiempo; y

4) colectar una fracción de aceite esencial en un recipiente de colección. 27. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque además comprende la etapa de alterar las relaciones de compuesto químico de aceite esencial, dividiendo la fracción de aceite esencial con un sistema de separación fraccional de dióxido de carbono supercrítico . 28. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque las condiciones supercríticas comprenden 60 bars hasta 800 bars de presión a 35°C hasta 90°C. 29. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque las condiciones supercríticas comprenden 60 bars hasta 500 bars de presión a 40°C hasta 80°C. 30. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el tiempo es 30 minutos hasta 2.5 horas. 31. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque el tiempo es 1 hora . 32. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la etapa b) comprende : 1) contactar el material de planta de especies de té verde molidas o el primer residuo de la etapa a) con un solvente alcohólico por un tiempo suficiente para extraer constituyentes químicos de polifenol; 2) pasar una solución acuosa de constituyentes químicos polifenólicos extraídos de la etapa 1) a través de una columna de resina adsorbente de afinidad, en donde los constituyentes polifenólicos son adsorbidos; 3) eluir los compuestos de cafeína a partir del adsorbente de afinidad usando un solvente de elución acídico; y 4) eluir los constituyentes químicos polifenólicos a partir de la resina adsorbente de afinidad usando un solvente de elución hidro-alcohólico . 33. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la solución hidroalcohólica comprende etanol y agua, en donde la concentración de etanol es 10-95% en peso. 34. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la solución hidroalcohólica comprende etanol y agua en donde la concentración de etanol es 25% en peso. 35. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la etapa 1) se realiza de 30°C hasta 100°C. 36. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque la etapa 1) se realiza de 60°C hasta 100°C. 37. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el tiempo es 1-10 horas . 38. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el tiempo es 1-5 horas . 39. El método de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el tiempo es 2 horas . 40. El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque la etapa c) comprende : 1) contactar el segundo residuo de la etapa b) con agua por un tiempo suficiente para extraer polisacáridos ; y 2) precipitar los polisacáridos de la solución acuosa por precipitación de alcohol 41. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el agua está de 70°C hasta 90°C. 42. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el agua está de 80°C hasta 90°C. 43. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el tiempo es 1-5 horas . 44. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el tiempo es 2-4 horas . 45. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el tiempo es 2 horas . 46. El método de conformidad con la reivindicación 40, caracterizado porque el alcohol es etanol . 47. Un extracto de especies de té verde, caracterizado porque se prepara por el método de conformidad con la reivindicación 23. 48. Un extracto de especies de té verde, caracterizado porque comprende pirogalol, teofilina/teobromina de 25 hasta 35% en peso del pirogalol, ácido shikimico de 0.1 hasta 5% en peso del pirogalol, ácido cumárico de 0.1 hasta 5% en peso del pirogalol, y 3- metoxi-l-tirosina de 0.1 hasta 5% en peso del pirogalol. 49. Un extracto de especies de té verde, caracterizado porque comprende teanina, teofilina/teobromina de 20 hasta 30% en peso de la teanina, catequina/epicatequina de 1 hasta 10% en peso de la teanina, ácido gálico de 1 hasta 10% en peso de la teanina, catequina quinona de 0.1 hasta 5% en peso de la teanina, cinamaldehido de 0.1 hasta 5% en peso de la teanina, y 3-metoxi-l-tirosina de 1 hasta 10% en peso de la teanina. 50. Un extracto de especies de té verde, caracterizado porque comprende teanina, teofilina/teobromina de 45 hasta 55% en peso de la teanina, catequina/epicatequina de 1 hasta 10% en peso de la teanina, ácido carnósico de 0.1 hasta 5% en peso de la teanina, ácido gálico de 1 hasta 10% en peso de la teanina, catequina quinona de 0.5 hasta 5% en peso de la teanina, cinamaldehido de 1 hasta 10% en peso de la teanina, ácido metilcinámico de 0.1 hasta 5% en peso de la teanina, cinamida de 1 hasta 10% en peso de la teanina, y 3-metoxi-1-tirosina de 1 hasta 10% en peso de la teanina. 51. Un extracto de especies de té verde, caracterizado porque comprende pirogalol, teofilina/teobromina de 1 hasta 10% en peso del pirogalol, teanina de 0.1 hasta 5% en peso del pirogalol, catequina/epicatequina de 1 hasta 10% en peso del pirogalol, caemferol de 5 hasta 15% en peso del pirogalol, miricitina de 0.1 hasta 5% en peso del pirogalol, gallocatequina quinona de 0.1 hasta 5% en peso del pirogalol, ácido gálico de 65 hasta 75% en peso del pirogalol, catequina quinona de 0.5 hasta 5% en peso del pirogalol, ácido vanílico de 1 hasta 10% en peso del pirogalol, y 3-metoxi-l-tirosina de 1 hasta 5% en peso del pirogalol . 52. Un extracto de especies de té verde, caracterizado porque comprende caemferol, teanina de 1 hasta 10% en peso del caemferol, catequina/epicatequina de 95 hasta 105% en peso del caemferol, quercetina de 20 hasta 30% en peso del caemferol, miricitina de 5 hasta 15% en peso del caemferol, galocatequina quinona de 5 hasta 10% en peso del caemferol, ácido gálico de 55 hasta 65% en peso del caemferol, catequina quinona de 1 hasta 10% en peso del caemferol, ácido cumárico de 10 hasta 20% en peso del caemferol, ácido vanílico de 1 hasta 10% en peso del caemferol, y 3-metoxi-l-tirosina de 15 hasta 25% en peso del caemferol. 53. Un extracto de especies de té verde, caracterizado porque comprende pirogalol, teofilina/teobromina de 0.5 hasta 5% en peso del pirogalol, catequina/epicatequina de 95 hasta 105% en peso del pirogalol, caemferol de 55 hasta 65% en peso del pirogalol, quercetina de 20 hasta 30% en peso del pirogalol, miricitina de 10 hasta 20% en peso del pirogalol, gallocatequina quinona de 20 hasta 30% en peso del pirogalol, ácido gálico de 50 hasta 60% en peso del pirogalol, catequina quinona de 15 hasta 25% en peso del pirogalol, ácido cumárico de 15 hasta 25% en peso del pirogalol, ácido vanílico de 1 hasta 10% en peso del pirogalol, y 3-metoxi-l-tirosina de 0.5 hasta 5% en peso del pirogalol. 54. Un extracto de especies de té verde, caracterizado porque comprende pirogalol, teofilina/teobromina de 0.5 hasta 5% en peso del pirogalol, catequina/epicatequina de 95 hasta 105% en peso del pirogalol, caemferol de 55 hasta 65% en peso del pirogalol, quercetina de 20 hasta 30% en peso del pirogalol, miricitina de 10 hasta 20% en peso del pirogalol, gallocatequina quinona de 20 hasta 30% en peso del pirogalol, ácido gálico de 50 hasta 60% en peso del pirogalol, catequina quinona de 15 hasta 25% en peso del pirogalol, ácido cumárico de 15 hasta 25% en peso del pirogalol, ácido vanílico de 1 hasta 10% en peso del pirogalol, y 3-metoxi-l-tirosina de 0.5 hasta 5% en peso del pirogalol. 55. Un extracto de especies de té verde, caracterizado porque comprende pirogalol, teanina en peso del pirogalol, catequina/epicatequina de 90 hasta 100% en peso del pirogalol, caemferol de 65 hasta 75% en peso del pirogalol, quercetina de 15 hasta 25% en peso del pirogalol, miricitina de 5 hasta 15% en peso del pirogalol, gallocatequina quinona de 5 hasta 15% en peso del pirogalol, ácido gálico de 65 hasta 75% en peso del pirogalol, catequina quinona de 5 hasta 15% en peso del pirogalol, ácido cumárico de 10 hasta 20% en peso del pirogalol, ácido vanílico de 1 hasta 10% en peso del pirogalol, y 3-metoxi-l-tirosina de 1 hasta 10% en peso del pirogalol .