MX2008008280A

MX2008008280A - Modulos de ensayo que tienen reactivos de ensayo y metodos para hacer y utilizar los mismos.

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Publication number: MX2008008280A
Application number: MX2008008280A
Authority: MX
Inventors: Eli N Glezer; Bandele Jeffrey-Coker; Jeff D Debad; Sudeep M Kumar; George Sigal; Gisbert Spieles; Michael Tsionksy; Michael Warnock
Original assignee: Meso Scale Technologies Llc
Priority date: 2005-12-21
Filing date: 2006-12-21
Publication date: 2008-11-06
Also published as: IL228029A0; CA3006231A1; CN102841195B; JP2009521686A; MX364297B; US20210339243A1; CA3179247A1; US11065615B2; WO2007076023A3; DK1963853T3; CN101389960A; AU2006330913A1; AU2006330913B2; CN101389960B; EP3431994A1; JP6113788B2; US20130065788A1; CA3006231C; KR20090003156A; CA2634522A1

Abstract

Describimos módulos de ensayo (por ejemplo, placas de ensayo, cartuchos, placas de ensayo con múltiples pozos, recipientes de reacción, etc.), procedimientos para su preparación y métodos de su uso para realizar ensayos; los reactivos pueden estar presentes en forma libre o soportados en fases sólidas incluyendo las superficies de compartimientos (por ejemplo, cámaras, canales, celdas de flujo, pozos, etc.) en los módulos de ensayo o la superficie de coloides, perlas, u otros soportes particulados; en particular, los reactivos secos pueden incorporarse en los compartimientos de estos módulos de ensayo y reconstituirse antes de su uso de acuerdo con los métodos de ensayo; un material desecante puede utilizarse para mantener y estabilizar estos reactivos en un estado seco.

Description

MODULOS DE ENSAYO QUE TIENEN REACTIVOS DE ENSAYO Y METODOS PARA HACER Y UTILIZAR LOS MISMOS REFERENCIA CRUZADA A LAS SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama la prioridad de la Solicitud Provisional de E.U.A. No. 60/752,475, presentada en Diciembre 21 , del 2005; la Solicitud Provisional de E.U.A. No. 60/752,513, presentada en Diciembre 21 , del 2005; y la Solicitud de E.U.A. No. 1 1/642,968 (Expediente del Apoderado 4504-16), presentada en Diciembre 21 , del 2006, titulada "Aparatos, métodos y reactivos de ensayo"; cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia.

DECLARACION CON RESPECTO A LA INVESTIGACION PATROCINADA FEDERALMENTE Esta invención se hizo con apoyo federal bajo HDTRA1 -05-C-0005 otorgado por el Departamento de Defensa. El gobierno de E.U.A. tiene ciertos derechos sobre la invención.

CAMPO DE LA INVENCION La invención se relaciona con módulos de ensayo, tales como placas de ensayo, cartuchos, placas de ensayo con múltiples pozos, recipientes de reacción y métodos para realizar ensayos químicos, bioquímicos y/o biológicos. La invención también se relaciona con la incorporación de reactivos secos en estos módulos y/o el uso de un reactivo seco en estos métodos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Numerosos métodos y sistemas se han desarrollado para realizar ensayos químicos, bioquímicos y/o biológicos. Estos métodos y sistemas son esenciales en una variedad de aplicaciones, incluyendo diagnósticos médicos, pruebas de alimentos y bebidas, verificación ambiental, control de calidad en la fabricación, descubrimiento de fármacos e investigación científica básica. Dependiendo de la aplicación, es deseable que los métodos y sistemas de ensayo tengan una o más de las siguientes características: i) alto rendimiento, ii) alta sensibilidad, iii) gran intervalo dinámico, iv) alta precisión y/o exactitud, v) bajo costo, vi) bajo consumo de reactivos, vii) compatibilidad con la instrumentación existente para el manejo y procesamiento de la muestra, viii) corto tiempo para el resultado, ¡x) capacidad de multiplexión y x) insensibilidad a los interferentes y matrices de muestra complejas. También es deseable en muchas aplicaciones, que estos tipos de beneficios del desempeño se logren con formatos de ensayo que sean fáciles de llevarse a cabo, sean susceptibles de automatización y/o utilicen reactivos secos estables. Existe un valor sustancial para los nuevos métodos y sistemas de ensayo con estas características. Una variedad de enfoques se ha desarrollado para proporcionar reactivos para los ensayos en forma estable seca. La Patente de E.U.A. 5,413,732, describe ciertas esferas de reactivo seco que son capaces de disolverse en una solución. La Patente de E.U.A. 6,429,026, describe ciertos inmunoensayos que utilizan reactivos secos y detección de la fluorescencia resuelta con el tiempo. Un anticuerpo de captación se inmoviliza en la superficie de un pozo de microtitulación. Una capa aislante que contiene un carbohidrato y/o una proteína se seca en la parte superior del anticuerpo de captación en el fondo del pozo. Un anticuerpo marcado se agrega en un pequeño volumen y se seca en la parte superior de la capa aislante. El anticuerpo se marca con un quelato de lantánido que puede detectarse utilizando técnicas de fluoroinmunoensayo con lantánido que mejora la disociación (DELFIA). Para iniciar el inmunoensayo, se agregan una muestra y un amortiguador de ensayo común. Después de permitir que ocurran las reacciones del anticuerpo, el pozo se lava varias veces, se agrega un amortiguador de mejora de DELFIA y se lleva a cabo la medición de la vida de la fluorescencia.

La Publicación de E.U.A. 2003/0108973, describe un inmunoensayo alternado que emplea un tubo de prueba que contiene una mezcla liofilizada que comprende un anticuerpo de captura inmovilizado en perlas de poliestireno magnetizables de 2.8 pm y un anticuerpo de detección marcado con una marca electroquimioluminiscente. La mezcla podría incluir también agentes de bloqueo para reducir la unión específica del anticuerpo de detección a las perlas durante el procedimiento de liofilización. La adición de una muestra que contiene el analto de interés, resulta en la formación de complejos alternados en las perlas. Una suspensión de perlas se aspiró a continuación en una célula de flujo reutilizable, en donde se recolectó en un electrodo y se analizó utilizando técnicas de detección de la electroquioluminiscencia (ECL). La Patente de E.U.A. 6,673,533, de Wohlstadter et al., describe un inmunoensayo alternado basado en ECL que utiliza reactivos secos. Un anticuerpo de captura se inmovilizó en un electro compuesto. Los otros reactivos utilizados en el ensayo se secaron en la superficie del electrodo agregando y liofilizando una solución que contiene un anticuerpo de detección enlazado a una marca de ECL, fosfato, tripropilamina, seroalbúmina bovina, sacarosa, cloracetamida y TRITON X-100. Los inmunoensayos se realizaron agregando una muestra a los reactivos secos en los electrodos, incubando las soluciones, y aplicando un potencial al electrodo para inducir la ECL. No se requirió un paso de lavado.

Una variedad de técnicas se ha desarrollado para incrementar el rendimiento del ensayo. El uso de placas de ensayo con múltiples pozos (también conocidas como placas de microtitulación o microplacas), permite el procesamiento y el análisis paralelo de múltiples muestras distribuidas en múltiples pozos de una placa. Las placas de ensayo con múltiples pozos pueden tomar una variedad de formar, tamaños y configuraciones. Por conveniencia, han aparecido algunos estándares para la instrumentación utilizada para procesar las muestras para ensayos de alto rendimiento. Las placas de ensayo con múltiples pozos típicamente se hacen en tamaños y formas estándar, y tienen arreglos de pozos estándar. Los arreglos de los pozos incluyen aquéllos encontrados en las placas de 96 pozos (12 x 8 arreglos de pozos), las placas de 384 pozos (24 x 16 arreglos de pozos) y las placas de 1536 pozos (48 x 32 arreglos de pozos). La Sociedad para la Selección Biomolecular ha publicado las especificaciones recomendadas de las microplacas para una variedad de formatos de placas (véase, http://www.sbsonline.org). Las Publicaciones de E.U.A. 2004/0022677 y 2005/0052646 de las Solicitudes de E.U.A. 10/185,274 y 10/185,363, respectivamente, de Wohlstadter et al., describen soluciones que son útiles para llevar a cabo ensayos ECL sencillos y múltiples, en un formato de placa con múltiples pozos. Incluyen placas que comprenden una parte superior de la placa con orificios pasantes que forman las paredes de los pozos y una parte inferior de la placa sellada contra la parte superior de la placa para formar el fondo de los pozos. La parte inferior de la placa tiene capas conductoras con un patrón que proporcionan a los pozos superficies de electrodo que actúan como soportes de fase sólida para las reacciones de unión, así como electrodos para inducir la ECL. Las capas conductoras también pueden incluir contactos eléctricos para aplicar energía eléctrica a las superficies del electrodo. A pesar de tales métodos y sistemas conocidos para realizar ensayos, se necesitan módulos de ensayo mejorados para realizar ensayos químicos, bioquímicos y/o biológicos.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La invención se relaciona con módulos de ensayo (por ejemplo, placas de ensayo, cartuchos o placas de ensayo con múltiples pozos, recipientes de reacción, etc.), que tienen reactivos de ensayo precargados en los pozos, cámaras o regiones de ensayo del módulo de ensayo. En ciertas modalidades, estos reactivos de ensayo se almacenan en un estado seco. Además, los módulos de ensayo pueden comprender materiales desecantes para mantener estos reactivos de ensayo en un estado seco estable. Se proporciona un método para hacer tales módulos de ensayo y métodos para utilizar los módulos de ensayo en los ensayos. Se proporciona una placa con múltiples pozos, que comprende al menos un pozo que tiene (1 ) una superficie de unión que tiene un primer reactivo de unión inmovilizado en la misma y (2) al menos un reactivo seco adicional, en donde al menos un reactivo seco adicional no entra en contacto con la superficie de unión. La placa con múltiples pozos puede tener una superficie de electrodo con una superficie de unión incorporada en al menos un pozo de la placa con múltiples pozos. Se proporciona una placa de ensayo con múltiples pozos que comprende un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, la pluralidad de pozos comprende una superficie de unión que tiene un reactivo de captura inmovilizado en la misma y un reactivo seco reconstituible. Opcionalmente, la superficie de unión puede seleccionarse para ser adecuada para utilizarse como un electrodo en un ensayo electroquímico o un ensayo de electroquimioluminiscencia. Además, las superficies de unión pueden estar recubiertas con una capa protectora reconstituible. El reactivo seco, que puede ser un reactivo de detección marcado, está suelto o localizado en una superficie del pozo que no se superpone con la superficie de unión. En un ejemplo específico, la superficie de unión se localiza en el fondo del pozo y el reactivo seco reconstituible se localiza en una pared del pozo y, opcionalmente, en una plataforma de almacenamiento del reactivo definida en la pared. En otro ejemplo, la superficie de unión y el reactivo seco reconstituible se localizan ambos en regiones no superpuestas de la superficie inferior del pozo. En otro ejemplo específico, el reactivo seco reconstituible es una pildora suelta. La placa de ensayo con múltiples pozos pueden comprender además un analito de control del ensayo seco reconstituible que puede tener una afinidad de unión por el reactivo de captura inmovilizado y/o, si está presente, el reactivo de detección marcado. En ciertas modalidades, el analito de control tiene afinidad por los reactivos de captura inmovilizados y/o los reactivos de detección marcados adentro del pozo, pero está presente en forma no unida que no está en contacto con la superficie de unión o el reactivo de detección marcado. La placa de ensayo con múltiples pozos puede comprender además uno o más reactivos de captura inmovilizados adicionales. El reactivo de captura y los reactivos de captura adicionales tienen un patrón en la superficie de unión para formar un arreglo de dominios de unión en la superficie de unión. Estos dominios de unión/reactivos de captura pueden diferir en la especificidad o afinidad por los compañeros de unión. Además, los pozos pueden contener una pluralidad de diferentes reactivos de detección marcados secos reconstituibles que difieren en la especificidad o afinidad por los compañeros de unión. Las placas con múltiples pozos, descritas anteriormente, pueden utilizarse en métodos para llevar a cabo ensayos que comprenden agregar una muestra a uno o más de los pozos de una placa que comprende los reactivos de captura inmovilizados y los reactivos de detección marcados secos reconstituibles, reconstituir los materiales secos reconstituibles en estos pozos para formar una mezcla de reacción, incubar la mezcla de reacción bajo condiciones que fomentan la unión de los reactivos de captura y detección a sus compañeros de unión correspondientes, y medir la formación de los complejos que comprenden los reactivos de captura inmovilizados y los reactivos de unión marcados. Mediante la elección apropiada de los reactivos de captura y detección, estos métodos pueden incluir métodos de ensayo y de unión alternados y métodos de ensayo de unión competitivos. Se proporciona un método para preparar placas de ensayo con múltiples pozos para utilizarse en un ensayo, que comprende llevar a cabo lo siguiente en al menos dos pozos de una placa: inmovilizar un reactivo de captura en una superficie de un pozo de la placa para formar una superficie de unión, distribuir un reactivo líquido que comprende un reactivo de detección marcado a una superficie del pozo que no se superpone con la superficie de unión, y secar el reactivo líquido para formar un reactivo de detección seco reconstituible. El método también puede incluir distribuir un reactivo de protección en la superficie de unión y secar el reactivo de protección para formar una capa protectora seca reconstituible en la superficie de unión. Por ejemplo, el reactivo de protección se distribuye y se seca antes de distribuir el reactivo líquido que comprende un reactivo de detección marcado. En ciertas modalidades específicas, la superficie de unión es una superficie inferior del pozo y el reactivo líquido se distribuye y seca en una superficie inferior del pozo no superpuesta del pozo o en una pared del pozo. Opcionalmente, la pared comprende una plataforma de almacenamiento de líquido y el reactivo líquido es (i) distribuido y secado en la plataforma o (¡i) distribuido en la pared en una ubicación por encima de la plataforma, de manera que el reactivo líquido que corre hacia abajo de la pared se recolecta y se seca posteriormente en la plataforma. Los métodos para preparar placas pueden comprender además inmovilizar uno o más reactivos de captura adicionales para formar un arreglo de dominios de unión en la superficie de unión que difieren en su especificidad o afinidad por los compañeros de unión. De manera similar, el reactivo líquido puede comprender uno o más reactivos de detección marcados adicionales, que difieren en su especificidad o afinidad por los compañeros de unión. Además, el método puede incluir distribuir y secar un reactivo líquido adicional, que comprende un analito de control del ensayo con afinidad de unión para el reactivo de captura o detección marcado, el reactivo líquido adicional se distribuye y seca de manera que no entra en contacto con los reactivos de captura o de detección marcados. En ciertas modalidades alternas de los métodos descritos anteriormente, la distribución y secado de un reactivo líquido que comprende un reactivo de detección marcado se omiten y un reactivo de detección marcado seco reconstituible se agrega en forma suelta, por ejemplo, como una pildora suelta. De manera preferida, antes de agregar el reactivo de detección, un reactivo de protección se distribuye y seca en la superficie de unión para formar una capa protectora reconstituible. El método también puede incluir inmovilizar uno o más reactivos de captura adicionales para formar un arreglo de dominios de unión en la superficie de unión, que difieren en su especificidad o afinidad por los compañeros de unión. De manera similar, el reactivo seco reconstituible puede comprender uno o más reactivos de detección marcados adicionales, que difieren en su especificidad o afinidad por los compañeros de unión. Además, el método puede incluir agregar al pozo un reactivo seco suelto adicional que comprende un analito de control del ensayo que tiene una afinidad de unión por los reactivos de captura y/o de detección. Se proporciona una placa con múltiples pozos que comprende un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, que incluyen: a) una pluralidad de pozos del primer reactivo que sostienen un primer reactivo seco reconstituible y b) una pluralidad de pozos del segundo reactivo que sostienen un segundo reactivo seco, en donde, el primer y segundo reactivos corresponden con los reactivos para realizar un ensayo. Se proporciona un método para llevar a cabo ensayos en estas placas, que comprende: a) agregar una muestra a uno de los pozos del primer reactivo, b) reconstituir los reactivos de detección marcados secos reconstituibles en el pozo del primer reactivo para formar una mezcla de reacción, c) transferir una alícuota de la mezcla de reacción a uno o más de los pozos del segundo reactivo, y d) incubar la mezcla de reacción en los pozos del segundo reactivo para llevar a cabo el ensayo en la muestra. En una modalidad, la placa de ensayo con múltiples pozos puede dividirse en una pluralidad de conjuntos de pozos, que consisten de un pozo del primer reactivo y uno o más pozos del segundo reactivo, y el método comprende además repetir el procedimiento de (a)-(d) para cada conjunto de pozos.

En una modalidad específica de la placa con múltiples pozos que tiene pozos de primer y segundo reactivos, los pozos del primer reactivo se colocan en un patrón regular de dos dimensiones y los pozos del primer reactivo tienen pisos del pozo y paredes del pozo, las paredes de pozo tienen superficies internas de la pared y superficies externas de la pared. Además, los pozos del segundo reactivo tienen pisos del pozo y paredes del pozo, las paredes del pozo están definidas por las superficies externas de la pared de los pozos de detección y por elementos de reborde que conectan las superficies externas de la pared de los pozos de detección adyacentes. Opcionalmente, los pozos del primer reactivo tienen perímetros de abertura de pozo que son redondos y/o los pozos del primer reactivo están colocados en un arreglo cuadrado de 8 x 12. Se proporciona una placa de ensayo con múltiples pozos que comprende un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, incluyendo: a) una pluralidad de pozos de detección, cada pozo de detección comprende una superficie de unión que tiene un reactivo de captura inmovilizado en la misma, y b) una pluralidad de pozos de reconstitución del reactivo, cada pozo de reconstitución del reactivo comprende un reactivo de detección marcado reconstituible, en donde al menos un pozo de detección y un pozo de reconstitución del reactivo comprenden reactivos de captura y detección correspondientes para medir un analito de interés. Opcionalmente, la superficie de unión puede seleccionarse para que sea adecuada para utilizarse como un electrodo en un ensayo electroquímico o de electroquimioluminiscencia. En una modalidad, los pozos de detección y de reconstitución del reactivo se agrupan en una pluralidad de conjuntos de ensayo que consisten de un pozo de reconstitución del reactivo y uno o más pozos de detección, el pozo de reconstitución del reactivo y los pozos de detección están adentro de un conjunto que comprende reactivos de captura y detección correspondientes para medir un analito de interés. Estos conjuntos pueden consistir de un pozo de reconstitución del reactivo y un pozo de detección. Una modalidad específica de la placa con múltiples pozos con pozos de detección y pozos de reconstitución del reactivo incluye: a) una pluralidad de pozos de detección, en donde los pozos de detección, i) tienen pisos del pozo y paredes del pozo, las paredes del pozo tienen superficies internas de la pared y superficies externas de la pared, ii) están colocados en un patrón regular de dos dimensiones, y iii) comprenden en las superficies internas de cada uno de los pozos de detección, una superficie de unión que tiene un arreglo de un reactivo de captura inmovilizado en las mismas; b) una pluralidad de pozos de reconstitución del reactivo, en donde los pozos de reconstitución del reactivo i) tienen pisos del pozo y paredes del pozo, las paredes del pozo están definidas por las superficies externas de la pared de los pozos de detección y por elementos de reborde que conectan las superficies externas de la pared de pozos de detección adyacentes, y ii) comprenden, en cada pozo de reconstitución del reactivo, un reactivo de detección marcado seco reconstituible. Opcionalmente, los pozos de detección tienen perímetros de la abertura de pozo que no tienen ángulos o curvas reentrantes (por ejemplo, perímetros redondos), y los pozos de reconstitución del reactivo tienen perímetros de la abertura del pozo con ángulos o curvas reentrantes. Los pozos de detección o de reconstitución del reactivo de las placas con múltiples pozos con pozos de detección y pozos de reconstitución del reactivo pueden comprender además un analito de control del ensayo seco reconstituible. Los pozos de detección pueden comprender también uno o más reactivos de captura inmovilizados adicionales. En esta modalidad, los reactivos de captura tienen un patrón para formar un arreglo con un patrón de dominios de unión en la superficie de unión, que difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. Además, el reactivo seco reconstituible puede comprender además uno o más reactivos de detección marcados adicionales, el reactivo de detección y los reactivos de detección adicionales difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. Se proporciona un método para llevar a cabo ensayos en placas con múltiples pozos con pozos de detección y pozos de reconstitución del reactivo. Una modalidad comprende a) agregar una muestra a uno de los pozos de reconstitución del reactivo, b) reconstituir los reactivos de detección marcados secos reconstituibles en el pozo de reconstitución para formar una mezcla de reacción, c) transferir una alícuota de la mezcla de reacción a uno o más de los pozos de detección, c) incubar la mezcla de reacción en los pozos de detección bajo condiciones que fomentan la unión de los reactivos de captura y detección a sus compañeros de unión correspondientes, y d) medir la formación de los complejos que comprenden los reactivos de captura inmovilizados y el reactivo de unión marcado. Opcionalmente, la placa de ensayo con múltiples pozos puede dividirse en una pluralidad de conjuntos de pozos que consisten de un pozo del primer reactivo y uno o más pozos del segundo reactivo, y el método comprende además repetir el procedimiento de (a)-(d) para cada uno de los conjuntos de pozos. Se proporciona una placa de ensayo con múltiples pozos que comprende un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, que tienen pisos del pozo y paredes del pozo que se extienden de los pisos a una altura hw por encima de los pisos, las paredes tienen una forma para proporcionar elementos de plataforma a una altura hs, en donde 0 < hs < hw. Los pozos pueden colocarse en formatos de placa con múltiples pozos estándar, incluyendo arreglos de 4 x 6, 8 x 12, 16 x 24 y 32 x 48 pozos colocados en redes cuadradas. En ciertas modalidades, hs es mayor que o igual a 0.02 hw, 0.05 hw o 0.1 hw, pero menor que o igual a 0.1 hw, 0.25 hw o 0.5 hw. En otras modalidades, hs es mayor o igual a aproximadamente 0.1 mm, 0.2 mm 0.5 mm, o 1 mm, pero menor que o igual a aproximadamente 1 mm, 2 mm, o 5 mm. Los elementos de plataforma pueden utilizarse para sostener los reactivos secos. Así, otra modalidad es una placa con reactivos secos reconstituibles en las plataformas. Se proporciona un método para preparar placas para utilizarse en un ensayo, que comprende distribuir un reactivo liquido en un pozo de una placa con múltiples pozos, que tiene un elemento de plataforma y secar el reactivo para formar un reactivo seco reconstituible, en donde el reactivo se distribuye y seca en la plataforma o se distribuye en la pared por encima de la plataforma y se seca, de manera que el reactivo líquido que corre hacia debajo de la pared del pozo, se recolecta y se seca en la plataforma. En ciertas modalidades de la placa con pozos con elementos de plataforma, el cuerpo de la placa es una parte moldeada por inyección de una pieza. En otras modalidades, el cuerpo de la placa comprende una parte superior de la placa que tiene una pluralidad de orificios pasantes que definen las paredes de pozo y una parte inferior de la placa que está sellada contra la parte superior de la placa y define los pisos del pozo. Opcionalmente, la parte inferior de la placa proporciona superficies conductoras del electrodo que están expuestas al volumen interior de los pozos, y que pueden utilizarse como electrodos en ensayos electroquímicos o ensayos con electroquimioluminiscencia. Se proporciona una placa con múltiples pozos que comprende a) un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, que incluye: i) una pluralidad de pozos de ensayo que comprenden un reactivo de ensayo seco; y ii) una pluralidad de pozos para el desecante que comprenden un desecante, y b) un sello de la placa sellado contra el cuerpo de la placa, aislando por lo tanto la pluralidad de pozos del medio externo. La placa está colocada opcionalmente, de manera que los pozos están en un arreglo de pozos estándar (por ejemplo, arreglos de 4 x 6, 8 x 12, 16 x 24 ó 32 x 48 pozos colocados en una red cuadrada). Las configuraciones adecuadas de los pozos de ensayo incluyen, de manera no exclusiva, pozos con reactivos secos (por ejemplo, reactivos de captura y/o detección) como se describió en las modalidades descritas anteriormente. De manera ventajosa, los pozos para el desecante pueden conectarse mediante conductos de secado a los pozos de ensayo, los conductos permiten la difusión del vapor de agua de los pozos de ensayo a los pozos para el desecante, pero intersecan los pozos a una altura en el pozo de ensayo por encima de la ubicación del reactivo de ensayo seco. En una modalidad, tales conductos pueden proporcionarse sellando el sello de la placa contra los canales rebajados en la superficie superior del cuerpo de la placa que conectan los pozos de ensayo con los pozos para el desecante. En ciertas modalidades, los pozos de la placa están divididos en una pluralidad de paneles de ensayo que comprenden al menos un pozo de ensayo y al menos un pozo para el desecante. En estas modalidades, los pozos en un panel de ensayo están ¡nterconectados vía conductos de secado, pero no están conectados a los pozos en otros paneles de ensayo. En una modalidad específica, un panel de ensayo comprende un pozo de ensayo y un pozo para el desecante. En una modalidad de una placa con múltiples pozos con pozos de ensayo y pozos para el desecante, el pozo de ensayo comprende una superficie de unión que tiene un reactivo de captura inmovilizado en la misma y un reactivo de detección marcado seco reconstituible. El pozo de ensayo puede comprender además uno o más reactivos de captura inmovilizados adicionales, el reactivo de captura y los reactivos de captura adicionales forman un arreglo con un patrón de dominios de unión en la superficie de unión, los dominios de unión difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. Además, el reactivo seco reconstituible puede comprender además uno o más reactivos de detección marcados adicionales, el reactivo de detección y los reactivos de detección adicionales difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. Opcionalmente, la superficie de unión es adecuada para utilizarse como un electrodo en un ensayo de electroquimioluminiscencia. En ciertas modalidades de una placa con múltiples pozos con pozos de ensayo y pozos para el desecante, el cuerpo de la placa es una parte moldeada por inyección de una pieza. De manera alterna, el cuerpo de la placa puede comprender la parte superior de la placa que tiene una pluralidad de orificios pasantes que define las paredes del pozo y una parte inferior de la placa que se sella contra la parte superior de la placa y define los pisos del pozo. Los orificios pasantes y la parte inferior de la placa pueden definir todos los pozos o solo porciones de los pozos, por ejemplo, sólo los pozos de ensayo o sólo los pozos para el desecante. La parte inferior de la placa puede, opcionalmente, proporcionar superficies conductoras del electrodo que están expuestas al volumen interior de los pozos. También se proporciona una placa con múltiples pozos que comprende a) un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, que contiene un reactivo de ensayo seco, el cuerpo de la placa comprende una parte superior de la placa que tiene una pluralidad de orificios pasantes que definen las paredes del pozo y una parte inferior de la placa que se sella contra la parte superior de la placa y define los pisos del pozo, b) un sello de la placa sellado contra el cuerpo de la placa, aislando por lo tanto la pluralidad de pozos del medio externo, y c) un material desecante. La placa está colocada opcionalmente, de manera que los pozos están en un arreglo de pozos estándar (por ejemplo, arreglos de 4 x 6, 8 x 12, 16 x 24 ó 32 x 48 pozos colocados en un cuadrado). La parte inferior de la placa puede, opcionalmente, proporcionar superficies conductoras del electrodo que están expuestas al volumen interior de los pozos. Las configuraciones adecuadas para los pozos de ensayo incluyen, de manera no exclusiva, pozos con reactivos secos (por ejemplo, reactivos de captura y/o detección) como se describió en las modalidades anteriores. En ciertas modalidades, el desecante está comprendido en el sello de la placa, una capa de junta obturadora entre el sello de la placa y la parte superior de la placa, la parte superior de la placa, una capa de junta obturadora entre la parte superior de la placa y la parte inferior de la placa y/o la parte inferior de la placa. Por ejemplo, el desecante puede impregnarse en estos componentes o en un recubrimiento en estos componentes, etc. De manera alterna, el cuerpo de la placa puede definir uno o más pozos adicionales que sostienen el desecante. En una modalidad, el pozo de ensayo comprende una superficie de unión que tiene un reactivo de captura inmovilizado en la misma y un reactivo de detección marcado seco reconstituible. Opcionalmente, la superficie de unión es adecuada para utilizarse como un electrodo en ensayos electroquímicos o de electroquimioluminiscencia. El pozo de ensayo puede comprender además uno o más reactivos de captura inmovilizados adicionales, el reactivo de captura y los reactivos de captura adicionales forman un arreglo con un patrón de dominios de unión en la superficie de unión que difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. Además, el reactivo seco reconstituible puede comprender además uno o más reactivos de detección marcados adicionales, el reactivo de detección y los reactivos de detección adicionales difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS Las Figuras a-1 e muestran vistas esquemáticas no a escala de varias modalidades de los pozos de la placa con múltiples pozos que incluyen reactivos secos. Las Figuras 2a-2j muestran vistas superior y en sección transversal esquemáticas no a escala de varias modalidades de los pozos que tienen paredes con elementos de plataforma, incluyendo salientes (Figuras 2a-2f), puentes (Figuras 2g-2h) y mesas (Figuras 2i-2j), que se utilizan para soportar los reactivos secos. Las Figuras 3a-3c muestran ilustraciones esquemáticas de placas con múltiples pozos que tienen pozos de detección y pozos de reconstitución del reactivo. Las Figuras 4a-4b muestran vistas esquemáticas superior y en sección transversal de una modalidad de una placa que tiene pozos de detección y pozos de reconstitución del reactivo, los pozos de reconstitución del reactivo se localizan en los espacios intersticiales entre los pozos de detección. Las Figuras 5a-5f muestran vistas esquemáticas de placas con múltiples pozos 500 (Figuras 5a-5b), 520 (Figuras 5c-5d) y 540 (Figuras 5e-5f) que tienen pozos de ensayo y pozos para el desecante. La Figura 6 es una vista en despiece esquemática de una modalidad de una placa de ensayo con múltiples pozos.

Las Figuras 7a-7c muestran tres vistas esquemáticas de una placa con múltiples pozos que está configurada para llevar a cabo ensayos de electroquimioluminiscencia multiplexados basados en el arreglo. La Figura 8 muestra una modalidad de una placa con pozos cuadrada con salientes del reactivo seco y siete puntos por pozo. La Figura 9 muestra una modalidad de una placa con pozos cuadrada con salientes del reactivo seco, siete puntos por pozo y conductos de secado entre los pares de pozos adyacentes. La Figura 10 muestra el efecto de incorporar los pozos para el desecante en las placas de ensayo en la estabilidad de los reactivos secos almacenados en las placas.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Describimos módulos de ensayo (por ejemplo, placas de ensayo, cartuchos, placas de ensayo con múltiples pozos, recipientes de reacción, etc.), que tienen reactivos de ensayo precargados en los pozos, cámaras o regiones de ensayo del módulo de ensayo. En ciertas modalidades, estos reactivos de ensayo se almacenan en un estado seco. Además, los módulos de ensayo pueden comprender materiales desecantes para mantener los reactivos de ensayo en un estado seco. Los módulos de ensayo precargados con los reactivos de ensayo pueden mejorar en gran medida la velocidad y reducir la complejidad de las mediciones del ensayo mientras que mantienen una excelente estabilidad durante el almacenamiento. También describimos métodos para hacer tales módulos de ensayo y métodos para utilizar los módulos de ensayo en los ensayos. Los reactivos de ensayo secos pueden ser cualquier reactivo de ensayo que pueda secarse y a continuación reconstituirse antes de utilizarse en un ensayo. Estos incluyen, de manera no exclusiva, reactivos de unión útiles en ensayos de unión, enzimas, sustratos enzimáticos, tintes indicadores y otros compuestos reactivos que pueden utilizarse para detectar un analito de interés. Los reactivos de ensayo también pueden incluir sustancias que no están involucradas directamente en el mecanismo de detección, pero que juegan un papel auxiliar en el ensayo incluyendo, de manera no exclusiva, agentes de bloqueo, agentes estabilizantes, detergentes, sales, amortiguadores del pH, conservadores, etc. Los reactivos pueden estar presentes en forma libre o soportados en fase sólida, incluyendo las superficies de los compartimientos (por ejemplo, cámaras, canales, celdas de flujo, pozos, etc.), en los módulos de ensayo o las superficies de coloides, perlas u otros soportes particulados. En ciertas modalidades, se incluye un reactivo seco (por ejemplo, un reactivo seco reconstituible), que comprende fosfato de amonio como un componente amortiguador, comprende otras sales de amonio, y/o comprende menos de aproximadamente 1 % (peso/peso) o menos de aproximadamente 0.1 % (peso/peso) de iones de sodio o potasio. Muchas de las modalidades se describirán en el contexto de placas con múltiples pozos que sostienen reactivos de captura y detección secos para ensayos de unión, en donde los reactivos de captura y detección están almacenados en la placa de una manera que evita que estén en contacto unos con otros. Pero será claro para aquellos con experiencia en la técnica que tales modalidades pueden aplicarse más generalmente al almacenamiento de cualquier número de diferentes reactivos de ensayo secos (ya sea que sean reactivos de unión, inmovilizados o no, marcados o no, etc.), de una manera que evite que entren en contacto unos con otros antes del uso. De igual manera, aunque muchos de los dibujos utilizan un símbolo "Y" para representar los reactivos o reactivos de unión, el uso de este símbolo no debe interpretarse como limitante de estos reactivos a anticuerpos a menos que se indique de manera específica. También será claro que las modalidades pueden aplicarse más generalmente a reactivos de ensayo almacenados en otros tipos de módulos de ensayo en compartimientos diferentes de los pozos (por ejemplo, cámaras, canales, celdas de flujo, etc.). El descriptor "seco reconstituiré" puede utilizarse para referirse a reactivos secos como en reactivos secos reconstituibles con reactivos de detección marcados o capas protectoras reconstituibles secas, etc. Esta terminología se utiliza para referirse a reactivos secos que son reconstituidos mediante la adición de una muestra o solvente para formar una solución o suspensión. De manera preferida, son solubles en agua o reconstituibles de otra manera mediante la adición de una muestra acuosa. En comparación, un reactivo "inmovilizado", como se utiliza el término en la presente, se refiere al reactivo que permanecerá normalmente en una superficie después de la adición de una muestra durante la realización de un ensayo, aunque puede haber condiciones específicas que pueden utilizarse para disociarlo de manera activa de la superficie. Los reactivos secos reconstituibles pueden prepararse in situ en un compartimiento de un módulo de ensayo (por ejemplo, en el pozo de una placa de ensayo con múltiples pozos). A manera de ejemplo, un volumen de un reactivo líquido puede distribuirse en el pozo u otro compartimiento y secarse (por ejemplo, mediante secado con aire, secado a vacio, secado por congelación, etc.), para formar el reactivo seco reconstituible. Al agregar un pequeño volumen que permanece confinado en una superficie discreta del compartimiento (por ejemplo, una ubicación discreta en el fondo o la pared de un pozo), el reactivo seco resultante puede permanecer confinado de manera fija en esa ubicación. De manera alterna, puede agregarse un volumen que es suficiente para dispersarse a través de la superficie inferior o para llenar el compartimiento/pozo para formar una capa de reactivo seco sobre las superficies en contacto. Los reactivos secos reconstituibles pueden prepararse fuera del módulo de ensayo y agregarse a un compartimiento del módulo (por ejemplo, un pozo de una placa con múltiples pozos) en forma seca (por ejemplo, como un polvo seco o como una pildora seca suelta). Pildora se refiere en la presente a un objeto seco contiguo tal como una tableta seca prensada o una perla seca liofilizada (como en la Patente de E.U.A. 5,413,732).

Algunas modalidades incluyen o emplean reactivos de unión secos que son útiles para llevar a cabo los ensayos de unión. Los reactivos de unión que pueden utilizarse en los módulos y métodos de ensayo incluyen, de manera no exclusiva, anticuerpos, receptores, ligandos, haptenos, antígenos, epitopos, mimitopos, aptámeros, compañeros de hibridación e intercaladores. Las composiciones del reactivo de unión, adecuadas incluyen, de manera no exclusiva, proteínas, ácidos nucleicos, fármacos, esferoides, hormonas, lípidos, polisacáridos y combinaciones de los mismos. Los ácidos nucleicos y las proteínas (en particular, anticuerpos) han probado ser especialmente útiles en los ensayos de unión. La persona con experiencia será capaz de identificar los reactivos de unión apropiados para una aplicación específica. Como se utiliza en la presente, el término "anticuerpo" incluye moléculas de un anticuerpo intacto (incluyendo anticuerpos híbridos montados mediante reasociación in vitro de subunidades del anticuerpo), fragmentos de anticuerpo y constructos de proteínas recombinantes que comprenden un dominio de unión al antigeno de un anticuerpo (como se describió, por ejemplo, en Porter & Weir, J. Cell. Physíol., 61 (Supl. 1 ): 51 -64, 1966 y Hochman et al. Biochemistry 12:1 130-1 135, 1973). El término también incluye moléculas de un anticuerpo intacto, fragmentos de anticuerpo y constructos de anticuerpo que se han modificado químicamente, por ejemplo, mediante la introducción de una marca. Como se utiliza en la presente, el término ácido nucleico se aplicará generalmente para incluir no sólo ADN y ARN sino también análogos (tales como ácidos nucleicos peptídicos o ácidos nucleicos enlazados a fosforotioato), que pueden participar en reacciones de hibridación específicas de Watson-Crick o Hoogstein con secuencias de ADN o ARN y también incluyen ácidos nucleicos y análogos que se han modificado químicamente, por ejemplo, mediante la introducción de una marca. El término "reactivo de captura" se utiliza en la presente para referirse a reactivos de unión que son inmovilizados en la superficie para formar una superficie de unión para utilizarse en un ensayo de unión en fase sólida. Los módulos y métodos de ensayo pueden emplear también o incluir otro reactivo de unión, "el reactivo de detección" cuya participación en las reacciones de unión de la superficie de unión puede medirse. Los reactivos de detección pueden medirse midiendo una característica intrínseca del reactivo tal como el color, luminiscencia, radioactividad, campo magnético, carga, índice de refracción, masa, actividad química, etc. De manera alterna, el reactivo de detección puede marcarse con una marca detectable y medirse midiendo una característica de la marca. Las marcas adecuadas incluyen, de manera no exclusiva, marcas seleccionadas del grupo que consiste de marcas electroquimioluminiscentes, marcas luminescentes, marcas fluorescentes, marcas fosforescentes, marcas radioactivas, marcas enzimáticas, marcas electroactivas, marcas magnéticas y marcas que dispersan la luz. Los ensayos que pueden llevarse a cabo incluyen "ensayos intercalados" que emplean un reactivo de captura inmovilizado y un reactivo de detección que pueden unirse de manera simultánea a un analito de interés para tener el efecto de secuestrar el reactivo de detección en la superficie de unión. Así, la presencia del analito puede medirse midiendo la acumulación del reactivo de detección en la superficie. Los ensayos también pueden incluir "ensayos competitivos" que, i) emplean un reactivo de captura inmovilizado que compite con un analito para unirse a un reactivo de detección o ii) un reactivo de detección que compite con un analito para unirse a un reactivo de captura inmovilizado. En el caso del ensayo competitivo, la presencia del analito conduce a una disminución mensurable en la cantidad del reactivo de detección en la superficie de unión. Los reactivos de captura o de detección pueden unirse directamente a (o competir con) un analito de interés o pueden interactuar de manera indirecta a través de uno o más ligandos de puenteado. En consecuencia, los reactivos de ensayo secos pueden incluir tales ligandos de puenteado. A manera de ejemplo, puede utilizarse estreptavidina o avidina como reactivos de captura o detección empleando reactivos de puenteado marcados con biotina que se unen o compiten con el analito de interés. De manera similar, los anticuerpos antihapteno pueden utilizarse como reactivos de captura o de detección empleando reactivos de unión marcados con hapteno que se unen o compiten con el analito de interés. En otro ejemplo, se utilizan anticuerpos antiespecies o receptores de Fe (por ejemplo, Proteína A, G o L) como reactivos de captura o detección a través de su capacidad para unirse a los anticuerpos específicos del analito. Tales técnicas están bien establecidas en el campo de los ensayos de unión y alguien con experiencia promedio en la técnica será capaz de identificar fácilmente los ligandos de puenteado adecuados para una aplicación específica. Ciertas modalidades de los módulos/placas de ensayo incluyen un reactivo de captura inmovilizado en una superficie del módulo/placa para formar una superficie de unión. La inmovilización puede llevarse a cabo utilizando técnicas de inmovilización bien establecidas en el campo de los ensayos de unión en fase sólida, tales como las técnicas que se han establecido para llevar a cabo ensayos ELISA o ensayos de unión basados en un arreglo. En un ejemplo, los reactivos de unión pueden absorberse de manera no específica a una superficie de un pozo de una placa con múltiples pozos. La superficie puede no tratarse o puede haberse sometido a un tratamiento (por ejemplo, el tratamiento con un plasma o un polímero cargado) para mejorar las propiedades de adsorbancia de la superficie. En otro ejemplo, la superficie puede tener una funcionalidad química activa que permite el acoplamiento covalente de los reactivos de unión. Después de inmovilizar el reactivo, la superficie puede, opcionalmente, ponerse en contacto con un reactivo que comprende un agente de bloqueo para bloquear los sitios no recubiertos en la superficie. Para realizar mediciones multiplexadas, pueden utilizarse superficies de unión con arreglos de diferentes reactivos de captura. Una variedad de técnicas para formar arreglos de reactivos de captura está ahora bien establecida en el campo de los ensayos basados en un arreglo.

Las superficies de unión están, opcionalmente, recubiertas con una capa protectora seca reconstituible. La capa protectora puede utilizarse para estabilizar una superficie de unión, para evitar que una superficie de unión entre en contacto con los reactivos de detección durante la fabricación o almacenamiento, o simplemente como una ubicación para almacenar los reactivos de ensayo tales como reactivos de puenteado, reactivos de bloqueo, amortiguadores del pH, sales, detergentes, correactivos de electroquimioluminiscencia, etc. Los estabilizantes que pueden encontrarse en la capa protectora incluyen, de manera no exclusiva, azúcares (sacarosa, trehalosa, manitol, sorbitol, etc.), polisacáridos y polímeros de azúcar (dextrano, FICOLL, etc.), polímeros (polietilenglicol, polivinilpirrolidona, etc.), osmolitos zwitteriónicos (glicina, betaina, etc.) y otros osmolitos estabilizantes (trimetilamina-N-óxido, etc.). Los agentes de bloqueo son materiales que evitan la unión no específica de los componentes del ensayo, especialmente reactivos de detección, a las superficies de unión e incluyen proteínas (tales como seroalbúmínas, gamma globulinas, inmunoglobulinas, leche seca o caseína purificada, gelatina, etc.), polímeros (tales como óxido de polietileno y óxido de polipropileno) y detergentes (por ejemplo, clases de detergentes no iónicos o agentes tensoactivos son conocidos por las marcas comerciales de BRIJ, TRITON, TWEEN, THESIT, LUBROL, GENAPOL, PLURONIC, TETRONIC y SPAN). En ciertas modalidades, se incluye una capa protectora, que comprende fosfato de amonio como un componente amortiguador, que comprende otras sales de amonio y/o que comprende menos de 1 % o 0.1 % (peso/peso) de iones de sodio o potasio. Una modalidad es una placa con múltiples pozos que comprende al menos un pozo que tiene (1 ) un primer reactivo de ensayo seco y (2) un segundo reactivo de ensayo seco, en donde uno o ambos del primer y segundo reactivos secos es un reactivo seco reconstituible y en donde el primer y segundo reactivos secos no están en contacto uno con el otro. El pozo puede incluir además uno o más reactivos secos adicionales. Estos pueden incluir uno o más reactivos secos reconstituibles que no están en contacto con el primer y/o segundo reactivos secos. La modalidad también incluye métodos para realizar ensayos en estas placas para un analito de interés, que comprende agregar muestras líquidas a uno o más pozos de una placa, reconstituir los reactivos secos reconstituibles en los pozos y medir una señal del ensayo dependiente del analito para medir el analito en la muestra. La persona con experiencia será capaz de seleccionar fácilmente los reactivos y la metodología de detección para medir una amplia variedad de analitos basándose en el conocimiento en la técnica del ensayo. Las señales detectables que pueden medirse incluyen, de manera no exclusiva, absorbancia óptica, fotoluminiscencia (por ejemplo, fluorescencia), químioluminiscencia, corriente o potencial eléctrico, actividad catalítica, actividad química, dispersión de la luz, aglutinación, radiactividad, electroquimioluminiscencia, magnetismo, cambios en el índice de refracción y otras señales que se han utilizado en las mediciones del ensayo.

Otra modalidad es una placa con múltiples pozos que comprende al menos un pozo que tiene (1 ) una superficie de unión que tiene un primer reactivo de unión inmovilizado en la misma y (2) al menos un reactivo seco adicional, en donde al menos un reactivo seco adicional es un reactivo seco reconstituible que no entra en contacto con la superficie de unión. La placa con múltiples pozos puede tener una superficie de electrodo con una superficie de unión incorporada en al menos un pozo de la placa con múltiples pozos. Las Figuras 1 a-1 e muestran vistas esquemáticas no a escala de varias modalidades del pozo 100 de una placa con múltiples pozos. El pozo está definido por un piso del pozo 120 y paredes del pozo 10. El piso 120 y las paredes 1 10 pueden formarse de un solo material contiguo o pueden ser componentes separados (por ejemplo, una parte superior de la placa y una parte inferior de la placa) que coinciden. El pozo 100 también contiene un primer reactivo seco 130 localizado en el piso 120 que, como se muestra, puede ser uno o más reactivos de captura que están inmovilizados en el piso 120 para formar una superficie de unión. El primer reactivo seco 130 puede incluir una pluralidad de reactivos de captura inmovilizados (por ejemplo, los reactivos 130a, 130b y 130c) que tienen un patrón en una pluralidad de dominios de unión discretos (por ejemplo, un arreglo). De manera ventajosa, los reactivos/dominios de unión pueden tener diferente afinidad o especificidad por los compañeros de unión; tales dominios de unión pueden utilizarse para llevar a cabo mediciones basadas en el ensayo multiplexado.

Una capa protectora reconstituible 140 cubre el reactivo seco 130. La capa protectora 140 puede omitirse, por ejemplo, cuando se no requiere para separar físicamente los reactivos 130 y 150. El pozo 100 también comprende un segundo reactivo seco 150 que es un reactivo seco reconstituible. El segundo reactivo seco 150 puede comprender un reactivo de detección tal como un reactivo de detección marcado 160. Opcionalmente, el segundo reactivo seco 150 comprende una pluralidad de reactivos de detección que difieren en afinidad o especificidad por los compañeros de unión. El pozo 100 puede incluir también, un reactivo seco reconstituible adicional opcional 170, que comprende un analito de control del ensayo 180 (como se muestra en las Figuras 1 c-1 e). También se muestra un sello de la placa 190. El sello de la placa 190, que puede omitirse, se sella contra la superficie superior de las paredes 1 10 para proteger los reactivos secos del medio ambiente. La Figura 1 a muestra una modalidad en la cual el primer reactivo seco 130 se recubre con una capa protectora reconstituible 140. El segundo reactivo seco 150 se coloca en capas sobre la capa protectora 140, que evita que el segundo reactivo seco 150 entre en contacto con la capa del primer reactivo seco 130. En un ejemplo de esta modalidad, el segundo reactivo seco 150 se deposita dispersándolo en forma de líquido en la capa protectora 40; la capa protectora 140 se elige para tener suficiente espesor o masa, de manera que puede absorber este líquido sin permitir que entre en contacto con el reactivo seco 130. El líquido se seca a continuación para formar un segundo reactivo seco 150. En un ejemplo alterno, la capa protectora 140 se introduce en forma líquida y se congela en el pozo para formar una primera capa congelada. El reactivo 150 se introduce a continuación en forma líquida y se congela como una segunda capa congelada sobre la primera capa congelada. La liofilización de las dos capas congeladas proporciona la estructura en capas del reactivo seco. La Figura 1 b muestra una modalidad en donde los reactivos 130 y 150 están localizados ambos de manera fija en regiones no superpuestas del piso 120. Los reactivos secos adicionales, tales como los reactivos de control del ensayo (no mostrados), pueden localizarse en otras regiones no superpuestas del piso 120. La ubicación de los reactivos en las regiones seleccionadas del piso 120 puede llevarse a cabo utilizando técnicas estándar en la deposición o distribución del reactivo con patrón. Opcionalmente, el piso 120 tiene dominios relativamente hidrofílicos rodeados por áreas relativamente hidrofóbicas, de manera que los volúmenes apropiados de los reactivos distribuidos en los dominios hidrofílicos, se dispersarán para definir los límites determinados por las áreas hidrofóbicas. En ésta y otras modalidades en donde los reactivos secos reconstituibles están localizados en una superficie, uno puede pretratar la superficie con agentes de bloqueo para evitar la adsorción de los reactivos a las superficies y/o incluir agentes de bloqueo en la composición del reactivo. La Figura 1 c muestra una modalidad en donde el segundo reactivo seco 150 está localizado de manera fija, como una o más pilas de reactivo seco, en las paredes 1 10. Las pildoras pueden formarse, por ejemplo, distribuyendo una o más gotas del reactivo (en forma líquida) en las paredes 1 10 y secándolas para formar las pildoras del reactivo seco. La Figura 1 c también muestra el reactivo seco adicional opcional 170 con el analito de control 180 localizado de manera fija en otra región no superpuesta de las paredes 1 10. La Figura 1 d muestra una modalidad que es similar a aquélla mostrada en la Figura 1 c, excepto que los reactivos 150 y 170 se localizan en las plataformas 1 15 en las paredes 1 10. Los reactivos secos 150 y 170 pueden formarse de reactivos líquidos distribuyéndolos y secándolos en las plataformas 1 15 o distribuyéndolos por encima de las plataformas 15, de manera que corren hacia debajo de las paredes 1 10 hacia las plataformas 1 15, en donde se secan. De manera alterna, las pildoras de reactivo seco sueltas pueden colocarse en las plataformas 1 15. Finalmente, la Figura 1 e muestra una modalidad en donde el reactivo 150 y un reactivo opcional 170 son pildoras de reactivo seco sueltas. También se incluyen modalidades del pozo 100 en las cuales hay alguna combinación de los reactivos secos reconstituibles en el piso del pozo, las paredes del pozo, las plataformas del pozo y/o en forma suelta. En las modalidades alternas, se emplea alguna combinación de reactivos secos reconstituibles localizados de manera fija y sueltos. Como se muestra en las modalidades en las Figuras 1 a-1 -e, las placas con múltiples pozos incluyen aquéllas que tienen pozos con múltiples reactivos secos físicamente distintos. De manera similar, para llevar a cabo diferentes ensayos en diferentes pozos, puede haber diferentes reactivos secos en diferentes pozos. Puede ser deseable, por ejemplo, para propósitos de QC, asegurarse que los reactivos secos correctos están presentes en los pozos de una placa. En consecuencia, los reactivos secos pueden incluir indicadores (tales como tintes o fluoróforos) que pueden utilizarse en la inspección óptica de las placas. Al utilizar diferentes indicadores distinguibles en diferentes reactivos secos, es posible inspeccionar ópticamente una placa para asegurarse que los reactivos correctos están en las ubicaciones apropiadas en los pozos apropiados de una placa. Las Figuras 2a-2j muestran vistas esquemáticas no a escala de varias modalidades de pozos, que tienen elementos de plataforma, en los cuales los reactivos líquidos pueden sostenerse y secarse y/o en los cuales los reactivos secos sueltos pueden soportarse por encima del fondo del pozo. Los elementos de plataforma pueden incluir salientes, puentes o mesas como se describe a continuación. La Figura 2a es una sección transversal de un pozo 200 que muestra el fondo del pozo 200 y la pared del pozo 210, la pared del pozo tiene salientes tales como las salientes 230 y 235 que pueden soportar los reactivos secos. La saliente 230 tiene un ángulo que es sustancialmente de 90° o menos que 90° con relación a la pared directamente por encima de la saliente, de manera que un volumen apropiado del reactivo puede distribuirse en la saliente 230 y acumularse en la saliente 230 sin desbordarse hacia el fondo del pozo 200. Las salientes también pueden tener características adicionales para ayudar a contener los reactivos, tales como un labio 240 en la saliente 235.

Los elementos de plataforma tales como la saliente 235 pueden localizarse a cualquier altura (hs) encima del fondo del pozo 240 (hb = 0) y debajo de la altura del pozo (hw). En algunas modalidades, hs es mayor que o igual a 0.02 hw, 0.05 hw o 0.1 hw, pero menor que o igual a 0.1 hw, 0.25 hw o 0.5 hw. En otras modalidades, hs es mayor o igual a aproximadamente 0.1 mm, 0.2 mm, 0.5 mm o 1 mm, pero menor que o igual a aproximadamente 1 mm, 2 mm o 5 mm. A través de la selección apropiada de la altura de la plataforma y los volúmenes de muestra/reactivo agregados durante el curso de un ensayo, es posible controlar el orden o sincronizar las reacciones del ensayo. En un ejemplo, la altura de la plataforma y el volumen de la muestra se eligen de manera que la adición de la muestra al pozo proporciona una altura de líquido que entra en contacto con los reactivos en el fondo del pozo y también reconstituye los reactivos en una o más plataformas. De manera alterna, la altura de la plataforma puede elegirse de manera que la adición de un volumen definido de un primer líquido, entra en contacto con los reactivos secos en el fondo del pozo (reconstituyendo los reactivos reconstituibles en el fondo y/o permitiendo que procedan las reacciones que involucran los reactivos almacenados en el fondo), pero no alcanza la altura de una o más plataformas. Las reacciones que involucran los reactivos en las plataformas pueden comenzarse a un tiempo posterior agregando un volumen suficiente de un segundo líquido, de manera que el nivel del líquido alcanza la altura de las plataformas para reconstituir el reactivo seco en las plataformas. Al realizar un ensayo, la muestra a ser mediada puede ser el primer líquido, el segundo líquido o ambos. Las Figuras 2b-2f muestran vistas superiores de varias modalidades del pozo 200 y muestran que las aberturas del pozo pueden tener una variedad de formas, incluyendo de manera no exclusiva, cuadrada (Figuras 2b-2d) y redonda (Figuras 2e-2f). Además, los elementos de plataforma pueden extenderse alrededor del perímetro del pozo como en las Figuras 2b y 2e o pueden ser uno o más elementos de plataforma aislados que sólo se extienden parcialmente alrededor del pozo como en las Figuras 2c-2d y 2f. Un pozo puede incluir también una pluralidad de elementos de plataforma a diferentes alturas adentro de un pozo. Las Figuras 2g-2h muestran vistas en sección transversal y superiores, respectivamente, de un pozo 290 en el cual un elemento de plataforma se proporciona por el puente 250 que se extiende a través del pozo. Las Figuras 2i-2j muestran vistas en sección transversal y superiores, respectivamente, de un pozo 295 en el cual un elemento de plataforma se proporciona por una mesa 260 que se extiende verticalmente desde un área del fondo del pozo 220. Se proporciona una placa con múltiples pozos que comprende un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, que incluye: a) una pluralidad de pozos del primer reactivo que sostienen un primer reactivo seco reconstituible y b) una pluralidad de pozos del segundo reactivo que sostienen un segundo reactivo seco (que puede ser un reactivo seco reconstituible o un reactivo inmovilizado), en donde el primer y segundo reactivos son reactivos correspondientes para realizar un ensayo (es decir, se utilizan ambos para realizar un ensayo de interés). Los reactivos pueden localizarse en una variedad de ubicaciones con los pozos, tales como en el fondo del pozo, las paredes del pozo, en elementos de plataforma, como pildoras sueltas o polvos, etc. Se proporciona un método para llevar a cabo ensayos en estas placas, que comprende: a) agregar una muestra a uno de los pozos del primer reactivo, b) reconstituir los reactivos de detección marcados secos reconstituibles en el pozo del primer reactivo para formar una mezcla de reacción, c) transferir una alícuota de la mezcla de reacción a uno o más de los pozos del segundo reactivo, y d) incubar la mezcla de reacción en los pozos del segundo reactivo para llevar a cabo el ensayo en la muestra. En una modalidad, la placa de ensayo con múltiples pozos puede dividirse en una pluralidad de conjuntos de pozos, que consisten de un pozo del primer reactivo y uno o más pozos del segundo reactivo, y el método comprende además repetir el procedimiento de (a)-(d) para cada conjunto de pozos. La Figura 3a es una ilustración esquemática (no a escala) de una modalidad que muestra vistas en sección transversal de dos pozos de una placa con múltiples pozos 300. El pozo 302 es un pozo de reconstitución del reactivo que comprende uno o más reactivos secos reconstituibles que pueden incluir un reactivo de detección marcado (tal como el reactivo seco 350 que comprende el reactivo de detección marcado 360) o un analito de control del ensayo (tal como el reactivo seco 370 que comprende el analito de control del ensayo 380). Estos reactivos secos pueden incluir componentes de reactivo adicionales tales como agentes de bloqueo, estabilizantes, conservadores, sales, amortiguadores del pH, detergentes, reactivos de puenteado, correactivos de ECL y lo similar. Los reactivos pueden localizarse en los fondos de pozo, en ubicaciones específicas en los fondos del pozo, en las paredes del pozo, en los elementos de plataforma o pueden ser sueltos (como para la discusión de las Figuras 1 a-1 e y 2a-2j). El pozo 301 es un pozo de detección que comprende uno o más reactivos secos, que pueden incluir reactivos secos reconstituibles o un reactivo seco inmovilizado. Como se muestra, el pozo 301 comprende reactivos de captura inmovilizados 330 que tienen un patrón en tres dominios de unión 330a, 330b y 330c para formar una superficie de unión. El pozo 301 también comprende una capa protectora reconstituible 340 que puede omitirse. En una modalidad de un ensayo, la muestra se agrega al pozo de reconstitución del reactivo, en donde los reactivos secos reconstituibles son reconstituidos. La muestra se transfiere a continuación al pozo de detección, en donde la medición del ensayo se lleva a cabo. De manera alterna, un amortiguador de reconstitución puede utilizarse para reconstituir los reactivos en el pozo de reconstitución del reactivo; el amortiguador de reconstitución se combina a continuación con la muestra en el pozo de detección. Las Figuras 3a-3c también muestran un sello de la placa 390 que se sella contra las aberturas de los pozos 301 y 302 para proteger el contenido de los pozos del medio ambiente. Los pozos de detección y de reconstitución del reactivo en una placa con múltiples pozos pueden agruparse en una pluralidad de conjuntos de ensayo que consisten de un pozo de reconstitución del reactivo y uno o más pozos de detección, el pozo de reconstitución del reactivo y los pozos de detección dentro de un conjunto comprenden reactivos de captura y detección correspondientes para medir un analito de interés. La Figura 3b muestra un arreglo en donde un conjunto tiene un pozo de reconstitución del reactivo 302 y tres pozos de detección 301 . Durante un ensayo, una muestra agregada al pozo 302 puede distribuirse entonces entre los tres pozos de detección 301 asociados para realizar múltiples replicas, o en donde los pozos de detección sostienen diferentes reactivos, múltiples ensayos diferentes. La Figura 3c muestra un arreglo en donde un conjunto tiene un pozo de reconstitución del reactivo 302 y un pozo de detección 301 . Los pozos de reconstitución del reactivo y los pozos de detección pueden ser similares en tamaño y forma o pueden tener diferentes tamaños y/o formas. En alguna modalidad, los pozos en una placa con múltiples pozos estándar se dividen entre dos tipos de pozos. Las Figuras 4a-4b muestran una vista esquemática no a escala de un arreglo alterno de pozos. La Figura 4a muestra una vista superior de una placa con múltiples pozos 400 que tiene pozos de detección 440 que están colocados en un patrón regular de dos dimensiones y que tienen las paredes de los pozos de detección 430 con superficies internas de pared y superficies externas de la pared. La placa con múltiples pozos también tiene pozos de reconstitución del reactivo 460 en los espacios intersticiales entre los pozos de detección. Los pozos de reconstitución del reactivo 460 tienen paredes del pozo que están definidas por las superficies externas del pozo de las paredes del pozo de detección 430 y elementos de reborde 450 que conectan las superficies externas de las paredes del pozo 430 de pozos de detección adyacentes (y, en la parte más externa de los pozos, por la superficie interna de la pared del armazón de la placa 410). Como se muestra, los pozos de detección pueden formarse para no tener curvas o ángulos reentrantes (es decir, que apuntan hacia adentro), mientras que los pozos intersticiales pueden tener curvas y/o ángulos reentrantes. La Figura 4b muestra una vista en sección transversal a lo largo de la línea punteada en la Figura 4a y muestra las superficies inferiores de los dos tipos de pozos (que pueden estar a diferentes alturas en el cuerpo de la placa). La placa 400 puede formarse de un solo material contiguo. En una modalidad alterna, la placa 400 se forma de una parte superior de la placa 405 y una parte inferior de la placa 420 que se hacen coincidir a lo largo de la línea punteada en la Figura 4b. De manera ventajosa, la disposición básica de los arreglos de pozos redondos con pozos intersticiales definidos por las paredes del pozo y los elementos de reborde es una característica común de muchas placas de 96 pozos y partes superiores de la placa moldeadas por inyección, y permiten que estos componentes se utilicen para formar placas de reactivo seco como se muestra en las Figuras 4a-4b. Se proporciona una placa con múltiples pozos que comprende a) un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, que incluye: i) una pluralidad de pozos de ensayo que comprenden un reactivo de ensayo seco; y ii) una pluralidad de pozos para el desecante que comprenden un desecante, y b) un sello de la placa sellado contra el cuerpo de la placa, aislando por lo tanto la pluralidad de pozos del medio externo. En algunas modalidades, los pozos de ensayo comprenden los reactivos necesarios para llevar a cabo un ensayo en el pozo de ensayo. También se incluyen modalidades en las cuales los pozos para el desecante están conectados por conductos de secado a los pozos de ensayo, los conductos permiten la difusión del vapor de agua de los pozos de ensayo a los pozos para el desecante, pero intersecan los pozos a una altura en el pozo de ensayo por encima de la ubicación del reactivo de ensayo seco. Además de las placas con múltiples pozos que contienen reactivos secos y desecantes, las placas mismas (es decir, sin reactivos secos y desecantes), en particular, se proporcionan placas que tienen elementos de conductos o canales (por ejemplo, como se muestra en las Figuras 5a-5f descritas a continuación) que son adecuadas para conectar conjuntos de pozos para el desecante y de ensayo con los reactivos secos. Las Figuras 5a-5f muestra vistas esquemáticas no a escala de una placa con múltiples pozos 500 que tiene pozos de ensayo 501 y pozos para el desecante 502 (los reactivos desecantes y secos no se muestran). La Figura 5a es una vista superior que muestra las paredes del pozo 510 y los conductos 508 que conectan los pozos con uno (por ejemplo, como en la hilera A) o más pozos de ensayo (por ejemplo, como en la hilera B). La Figura 5b muestra una vista en sección transversal a lo largo de la línea punteada en la Figura 5a y junto con la Figura 5a muestra como los conductos 508 pueden formarse sellando el sello de la placa 515 contra los canales en la superficie superior del cuerpo de la placa. El sello de la placa 515 se sella contra estos canales y las partes superiores de los pozos para formar conjuntos de pozos de ensayo y descantes que están interconectados por conductos, pero están aislados del medio y de otros conjuntos de pozos. En consecuencia, uno o más conjuntos de pozos pueden no sellarse y utilizarse en un ensayo y los conjuntos restantes de los pozos se mantendrán en un medio seco protegido ambientalmente. La placa 500 puede formarse de un solo material contiguo. En una modalidad alterna, la placa 500 se forma de una parte superior de la placa 505 y una parte inferior de la placa 512 que coinciden a lo largo de la linea punteada mostrada en la Figura 5b, la parte inferior de la placa 512 define el piso de al menos algunos de los pozos. Los pozos de ensayo o conjuntos de pozos en la placa 500 pueden incluir uno o más de cualquiera de los pozos que contienen el reactivo seco descritos anteriormente, por ejemplo, en las descripciones de las Figuras 1 -4 y pueden incluir tanto pozos de detección como pozos de reconstitución del reactivo. Los desecantes utilizados en el pozo para el desecante pueden seleccionarse de materiales desecantes conocidos incluyendo, de manera no exclusiva, sílice, alúmina activada, arcillas activadas, tamices moleculares y otras zeolítas, sales hidroscópicas (por ejemplo, sulfato de calcio anhidro, sulfato de magnesio, sulfato de sodio, hidróxido de sodio y cloruro de litio), soluciones hidroscópicas (por ejemplo, soluciones concentradas de cloruro de litio) y materiales reactivos al agua tales como pentóxido de fósforo. En algunas modalidades, el desecante está presente como un polvo seco libre o un material granular. En otras modalidades, el desecante está presente como una pildora seca, por ejemplo, una tableta prensada o un material polimérico impregnado con el desecante. En otras modalidades, el desecante está contenido en una bolsa o recipiente permeable al vapor de agua (por ejemplo, como en bolsitas de sílice comerciales). De manera ventajosa, el desecante en forma de pildora o los recipientes para empacados pueden "prensarse" en los pozos para el desecante para evitar el movimiento en el pozo durante el envío o uso. Las Figuras 5c-5d muestran vistas superiores y en sección transversal de una modalidad de una placa con múltiples pozos 520 con pozos de ensayo y desecantes. La placa 520 tiene pozos de ensayo 521 (que pueden contener reactivos de ensayo secos) que están colocados en un patrón regular de dos dimensiones y que tienen paredes del pozo de ensayo 523 con superficies internas de la pared y superficies externas de la pared. También tiene pozos para el desecante 522 en los espacios intersticiales entre los pozos de detección (de manera alterna, los pozos 521 se utilizan como pozos para el desecante y los pozos 522 se utilizan como pozos de ensayo). Los pozos para el desecante 522 tienen paredes del pozo que están definidas por las superficies externas del pozo de las paredes del pozo de detección 523 y elementos de reborde 525 que conectan las superficies externas de las paredes del pozo 523 de los pozos de ensayo adyacentes (y, en la parte más externa de los pozos, por la superficie interna de la pared del armazón de la placa 526). Los canales 524 ranurados en la parte superior de las paredes del pozo 523 proporcionan, cuando se hacen coincidir con un sello de la placa, trayectorias para que el vapor de agua se desplace de los pozos de ensayo a los pozos para el desecante. Como se muestra, los pozos de ensayo pueden formarse para no tener curvas o ángulos reentrantes (es decir, que apuntan hacia adentro), mientras que los pozos intersticiales pueden tener curvas y/o ángulos reentrantes. La Figura 5d muestra una vista en sección transversal a lo largo de la línea punteada en la Figura 5c y muestra el sello de la placa 527 que coincide con la parte superior de la placa para formar conjuntos de pozos de ensayo desecantes que están conectados vía conductos 524, pero aislados de otros pozos y del medio ambiente. La placa 520 puede formarse de un solo material contiguo. En una modalidad alterna, la placa 520 se forma de una parte superior de la placa 528 y una parte inferior de la placa 529 que coinciden a lo largo de la línea punteada mostrada en la Figura 5d. La Figura 5e muestra una vista esquemática de otra modalidad de una placa con múltiples pozos con pozos de ensayo (que pueden contener reactivos secos) y pozos para el desecante y muestra una placa 540 con pozos de ensayo 541 y pozos para el desecante 543 que están conectados en conjuntos de pozos vía los canales 542 en el cuerpo de la placa. La placa con múltiples pozos 540 es bastante análoga a la modalidad de la placa 500 ilustrada en las Figuras 5a-5b, excepto que en la placa 540, los pozos para el desecante 542 son mucho menos profundos y más pequeños en área que los pozos de ensayo, permitiendo que una porción más grande de la huella de la placa se dedique a los pozos utilizados en las mediciones del ensayo. La Figura 5f muestra una vista en sección transversal a lo largo de la línea punteada en la Figura 5e y también muestra el sello de la placa 544 que se sella contra la parte superior de la placa para formar los conjuntos conectados de pozos de ensayo y desecantes. La placa 540 puede formarse de un solo material contiguo. En una modalidad alterna, la placa 540 se forma de una parte superior de la placa 545 y una parte inferior de la placa 546 que coinciden a lo largo de la línea punteada mostrada en la Figura 5f, la parte inferior de la placa 546 también define el piso de los pozos de ensayo 541 . La Figura 6 es una vista en despiece esquemática de una modalidad de una placa de ensayo con múltiples pozos. La placa de ensayo con múltiples pozos 600 comprende una parte superior de la placa 610 con orificios pasantes 615 que definen las paredes de los pozos. La parte superior de la placa 610 está sellada contra la parte inferior de la placa 620 a través de la junta obturadora 625, de manera que la parte inferior de la placa 620 define la superficie inferior de los pozos. Opcionalmente, la parte superior de la placa 610 se sella directamente a la parte inferior de la placa 620 y la junta obturadora 625 se omite. El sellado puede lograrse a través de técnicas de sellado tradicionales, tales como adhesivos, soldadura con solvente, soldadura con calor, soldadura sónica y lo similar. En otra modalidad opcional, la parte superior de la placa 610 define completamente los lados y el fondo de los pozos y la parte inferior de la placa 620 y la junta obturadora 625 pueden omitirse. El contenido de los pozos, que puede incluir los pozos configurados para contener el reactivo seco y/o el desecante como se describió anteriormente, pueden protegerse del medio exterior sellando (por ejemplo, vía técnicas de sellado tradicionales) el sello de la placa 630 a la parte superior de la placa 610 directamente o vía la junta obturadora 635 opcional. Los componentes de la placa 600 pueden hacerse de una variedad de diferentes materiales incluyendo, de manera no exclusiva, plásticos, metales, cerámicas, cauchos, vidrios o combinaciones de los mismos. De acuerdo con los requisitos de la tecnología de detección particular utilizada con las placas, algunos de los componentes o todos los componentes pueden seleccionarse para ser transparentes, coloreados, opacos o altamente dispersores de la luz. En una modalidad, la parte superior de la placa 610 es un plástico moldeado por inyección tal como poliestireno, polipropileno o copolímero de olefina cíclica (COC) moldeado por inyección. Opcionalmente, uno o más de los componentes puede hacerse de o comprender (por ejemplo, en la forma de un recubrimiento), un material que tiene una baja velocidad de transmisión del vapor de agua, por ejemplo, una velocidad de transmisión del vapor de agua menor que 1 g/m2 por día a través de un espesor de 100 um. Los materiales de baja transmisión del vapor de agua incluyen, de manera no exclusiva, vidrio, metales o películas metálicas (por ejemplo, películas de aluminio), COC, cloruro de polivinilideno (PvDC), polipropileno, policlorotrifluoroetileno (PCTFE), y polímeros de cristal líquido (LCP). La placa 600 puede incluir pozos para el desecante como se describió anteriormente. De manera alterna o además, el desecante puede incorporarse directamente en la parte superior de la placa 610, la parte inferior de la placa 620, el sello de la placa 630, la junta obturadora 625 y/o la junta obturadora 635. Por ejemplo, la Patente de E.U.A. 6,174,952 de Hekal et al., describe combinaciones de polímero que contienen el desecante que pueden moldearse, vaciarse en revestimientos, o formar en películas, hojas, perlas o gránulos. En algunas modalidades, la parte inferior de la placa 620 tiene características que facilitan la colocación en un patrón de los reactivos en el fondo de los pozos (por ejemplo, características hidrofílicas con un patrón rodeadas por áreas hidrofóbicas) y/o capas conductoras que proporcionan electrodos que están expuestos a los volúmenes interiores de los pozos de la placa 600, de manera que pueden llevarse a cabo ensayos electroquímicos o de luminiscencia inducida por electrodos (por ejemplo, ensayos de electroquimioluminiscencia). La parte inferior de la placa 620 también puede incluir contactos del electrodo para permitir que un instrumento eléctrico aplique un potencial/corriente eléctrica a los electrodos. Los enfoques, configuraciones y composiciones adecuados para tales características, capas conductoras y contactos del electrodo incluyen aquéllos descritos en las Publicaciones de E.U.A. 2004/0022677 y 2005/0052646, de Wohlstadter et al.

La instrumentación y métodos adecuados que pueden utilizarse para realizar las mediciones de ECL utilizando los módulos de ensayo incluyen aquéllos descritos en las Publicaciones de E.U.A. 2004/0022677 y 2005/0052646 de las Solicitudes de E.U.A. 10/185,274 y 10/185,363, respectivamente; la Publicación de E.U.A. 2003/01 13713 de la Solicitud de E.U.A. 10/238,391 ; la Publicación de E.U.A. 2005/0142033 de la Solicitud de E.U.A. 10/980,198; y la Solicitud de E.U.A. presentada de manera concurrente 1 1 /642,968 de Clinton et al., titulada "Aparatos, métodos y reactivos de ensayo". Las Figura 7a-7c proporcionan ilustraciones esquemáticas de una modalidad especifica que incluye algunos de los conceptos inventivos descritos anteriormente en el contexto de una placa con múltiples pozos configurada para llevar a cabo ensayos de electroquimioluminiscencia multiplexados basados en un arreglo. La Figura 7a muestra una sección de una placa con múltiples pozos 700 que tiene una pluralidad de pozos de ensayo 710, que pueden comprender reactivos secos y una pluralidad de pozos para el desecante 720 que pueden comprender un desecante. Los canales 725 en la superficie superior de la placa 700 enlazan cada pozo para el desecante a un pozo de ensayo. Opcionalmente, los pozos para el desecante 720 y los canales 725 se omiten. Los pozos de ensayo 710 tienen salientes 712 que pueden utilizarse para soportar un reactivo seco reconstituible (por ejemplo, reactivos secos que comprenden controles del ensayo y/o reactivo de detección marcados de ECL). Los pozos de ensayo también tienen superficies de electrodo de trabajo 714 que están cubiertas por una capa dieléctrica con un patrón 716 para exponer una pluralidad de superficies del electrodo expuestas o "puntos" (mostrados como círculos dentro de los pozos). Además, se proporcionan contraelectrodos 718 para proporcionar un circuito electroquímico completo. Opcionalmente, la superficie de la capa dieléctrica 716 es hidrofóbica con relación a una superficie del electrodo 714, de manera que volúmenes pequeños de reactivos con patrón en los puntos pueden mantenerse confinados a los puntos. Los diferentes puntos pueden tener diferentes reactivos de captura inmovilizados en los mismos para formar una superficie de unión con un arreglo de dominios de unión que difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión (por ejemplo, analitos de interés). De manera alterna, algunos de los puntos pueden tener reactivos secos reconstituibles confinados en los mismos que, por ejemplo, pueden contener controles del ensayo y/o reactivos de detección marcados de ECL. El pozo de ensayo puede comprender además una capa protectora reconstituible sobre la superficie de unión. La Figura 7b proporciona una vista en sección transversal en despiece a lo largo de la línea punteada en la Figura 7a e ilustra un procedimiento para formar las capas de electrodo/dieléctricas en los pozos de ensayo 710. La placa con múltiples pozos comprende una superficie superior de la placa 730 que define los pozos para el desecante 720 y tiene orificios pasantes que definen las paredes de los pozos de ensayo 710 y salientes 712. La parte superior de la placa 730 también tiene canales 725 que forman conductos entre los pozos de ensayo 710 y los pozos para el desecante 720, cuando el sello de la placa 750 se sella contra la superficie superior de la parte superior de la placa 730. En un ejemplo no limitante, la parte superior de la placa 730 es una parte moldeada por inyección moldeada de un plástico con una baja transmisión del vapor de agua. En otro ejemplo no limitante, el sello de la placa 750 es una película sellable con calor que comprende un plástico o una película de metal (por ejemplo, aluminio) con baja transmisión del vapor de agua. La Figura 7b también muestra la parte inferior de la placa 740 que se sella contra la parte superior de la placa 730 y define el fondo de los pozos de ensayo 710. La parte inferior de la placa 740 comprende un sustrato 715 que soporta las capas conductoras con un patrón que proporcionan los electrodos 714 y 718. La capa dieléctrica con patrón 716 en los electrodos define los puntos expuestos del electrodo. Una variedad de materiales puede utilizarse para proporcionar el sustrato y las capas conductoras y dieléctricas (véanse, por ejemplo, las Publicaciones de E.U.A. 2004/0022677 y 2005/0052646). En un ejemplo no limitante, el sustrato es una película de plástico (hecha, por ejemplo, de un poliéster tal como MYLAR, cloruro de polívinilo, o un material de baja transmisión de vapor de agua tal como COC), las capas conductoras son tintas conductoras para serigrafía (por ejemplo, tintas de carbón para serigrafía) y la capa dieléctrica es una tinta aislante para serigrafía. También se muestran en la Figura 7b los contactos del electrodo 780 y 785, que son capas conductoras del fondo del sustrato 715 que proporcionan conectividad (por ejemplo, vía conductora a través de los orificios en el sustrato 715 a los electrodos 714 y 718. Los contactos del electrodo también pueden proporcionarse mediante tintas conductoras para serigrafia que durante la impresión pueden llenar los orificios en el sustrato 715 para también proporcionar los orificios pasantes conductores. De manera ventajosa, los orificios pasantes conductores pueden localizarse directamente por debajo de las paredes del pozo para limitar la transmisión del vapor de agua a través de los orificios. Además, una capa de sellado inferior opcional 790 puede sellarse al fondo del sustrato 715. La capa de sellado inferior 790 se hace de un material con baja transmisión de vapor de agua y cubre la mayoría de la superficie inferior del sustrato 715, excepto por las aberturas definidas en la capa de sellado 790 que se localizan para permitir que un instrumento de lectura de la placa entre en contacto con los contactos del electrodo 780 y 785. La Figura 7c muestra una vista angulada más detallada de una modalidad de la placa 700 y muestra las pildoras desecantes 722 que están prensadas en los pozos para el desecante 720. Una variedad de muestras que pueden contener un analito o actividad de interés puede probarse. En un ejemplo, una muestra se introduce a una placa de ensayo o uno o más pozos de una placa de ensayo que tiene reactivos secos reconstituibles precargados en la misma, reconstituyendo así estos reactivos de ensayo y una señal de ensayo se mide para medir (de manera cuantitativa o cualitativa) la cantidad de analito en la muestra. Los reactivos pueden incluir una sustancia luminiscente, electroquimioluminiscente, quimioluminiscente y/o activa rédox. En consecuencia, la señal de ensayo es de manera preferida una señal luminiscente o electroquímica. Los formatos de ensayo que pueden llevarse a cabo incluyen métodos homogéneos y heterogéneos. Los ensayos que pueden llevarse a cabo incluyen formatos que emplean soportes en fase sólida para acoplar la medición del analito o actividad con la separación de los reactivos marcados en las porciones soportadas en fase en solución y en fase sólida. Los ejemplos incluyen ensayos de unión en fase sólida que miden la formación de un complejo de un material y su compañero de unión específico (uno del par está inmovilizado o capaz de ser inmovilizado, en el soporte en fase sólida), la formación de complejos intercalados (incluyendo un reactivo de captura que está inmovilizado, o capaz de ser inmovilizado en el soporte en fase sólida), la competencia de dos competidores por un compañero de unión (el compañero de unión o uno de los competidores está inmovilizado, o es capaz de ser inmovilizado en el soporte en fase sólida), la escisión enzimática o química de una marca (o material marcado) de un reactivo que está inmovilizado, o capaz de ser inmovilizado en un soporte en fase sólida y la unión enzimática o química de una marca (o material marcado) a un reactivo que está inmovilizado o es capaz de ser inmovilizado en un soporte en fase sólida. El término "capaz de ser inmovilizado" se utiliza en la presente para referirse a reactivos de puenteado que pueden participar en las reacciones en solución y posteriormente ser capturados en una fase sólida durante o antes de la detección. Por ejemplo, el reactivo puede capturarse utilizando un reactivo de unión específico del reactivo que está inmovilizado en la fase sólida. De manera alterna, el reactivo está enlazado a una porción de captura y un compañero de unión específico de la porción de captura está inmovilizado en la fase sólida. Los ejemplos de pares de porción de captura-compañero de unión útiles incluyen bíotína-estreptavidina (o avidina), anticuerpo-hapteno, receptor-ligando, ácido nucleico-ácído nucleico complementario, etc. En los ensayos llevados a cabo en soportes en fase sólida, la cantidad o actividad del analito puede determinarse midiendo la cantidad de la marca en el soporte en fase sólida y/o en solución utilizando ¡) una técnica selectiva de la superficie, ii) una técnica selectiva de la solución y/o iii) después de la separación de las dos fases. En los métodos electroquimioluminiscentes, el soporte en fase sólida también puede ser un electrodo de trabajo utilizado para inducir la electroquimioluminiscencia de las marcas unidas a la fase sólida. Los métodos de electroquimioluminiscencia pueden incluir el lavado para eliminar los reactivos marcados con electroquimioluminiscencia no unidos antes de la adición de un correactivo de ECL (por ejemplo, aminas terciarias tales como tripropilamína o piperacin-1 ,4- bís(ácido 2-etansulfóníco)), y la aplicación de un potencial para inducir la ECL de las marcas unidas. De manera alterna, debido a la selectividad de la superficie de las mediciones de electroquimioluminiscencia, el método puede correrse sin lavado. De manera ventajosa, en los ensayos sin lavado, el correactivo de ECL puede preagregarse a los pozos de ensayo en la forma de un reactivo seco reconstituible o capa protectora. Otra modalidad se relaciona con equipos para utilizarse para realizar ensayos que comprenden los módulos de ensayo/placas con múltiples pozos. El equipo puede incluir uno o más reactivos adicionales en uno o más recipientes, incluyendo, de manera no exclusiva, calibradores de ensayo, controles de ensayo, diluyentes del ensayo, correactivos de ECL y amortiguadores de lavado. De acuerdo con una modalidad, el equipo comprende uno o más de los componentes de ensayo en uno o más pozos de la placa, de manera preferida en forma seca. En una modalidad preferida, el equipo comprende una placa de ensayo que tiene una unión (sic) inmovilizada en uno o más electrodos de trabajo dentro de un módulo de ensayo y uno o más reactivos de ensayo adicionales depositados en la forma de una perla, gránulo o pildora seca directamente en el pozo, de manera preferida en una posición separada espacialmente de un electrodo de trabajo, o de manera alterna, depositada en uno o más pozos intersticiales. De manera preferida, los equipos no contienen ningún líquido en los pozos.

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos son ilustrativos de algunos de los métodos e instrumentación que caen dentro del alcance de la presente invención. Por supuesto, no deben considerarse de ninguna manera limitante de la invención. Numerosos cambios y modificaciones pueden hacerse con respecto a la invención por alguien con experiencia ordinaria en la técnica sin experimentación indebida.

Materiales y métodos Anticuerpos de detección marcados Los anticuerpos de detección marcados se marcaron con SULFO-TAG éster de NHS (Meso Scale Discovery, Gaithersburg, MD), una marca electroquimioluminiscente basada en un derivado sulfonado de la rutenio-tris-bipiridina (compuesto 1 ilustrado a continuación). Los anticuerpos marcados se purificaron mediante cromatografía con exclusión de tamaños en SEPHADEX G-50 (Pharmacia).

Pildoras del anticuerpo de detección liofilizada Se formaron pildoras que comprenden uno o más anticuerpos de detección marcados de una solución que contiene 1 pg/mL de cada uno de los anticuerpos marcados, 2% de seroalbúmina bovina y 20% de sacarosa en un suero fisiológico amortiguado con fosfato. Las gotas congeladas de esta solución se formaron distribuyendo gotas de 20 pL en nitrógeno líquido. Las gotas congeladas se transfirieron a charolas de aluminio enfriadas (<-78°C) que se colocaron en las plataformas de un liofilizador ADVANTAGE XL (Virtis). Las plataformas del liofilizador se preenfriaron a <-45°C antes de la introducción de las charolas de aluminio y se utilizó una pasta conductora para mejorar la transferencia de calor entre las plataformas y las charolas que contienen las perlas. En un protocolo de liofilización típico, la cámara del liofilizador se evacuó y la temperatura de la plataforma se incrementó lentamente a -30°C, -20°C, -15°C y finalmente a +20°C (condiciones ambientales) durante el curso de aproximadamente 24 horas. La temperatura se mantuvo a cada uno de estos niveles durante un tiempo suficiente para permitir el equilibrio mientras se controla la presión de la cámara a 0.01 torr. Las titulaciones de Karl Fisher de las perlas liofilizadas mostraron típicamente contenidos de agua de menos de 4% en peso. El contenido de agua podría reducirse por debajo de 2% mediante el almacenamiento extendido en la presencia de un desecante.

Placas con múltiples pozos para las mediciones de la electroquimioluminiscencia Las mediciones de la electroquimioluminiscencia se llevaron a cabo utilizando placas con múltiples pozos diseñadas especialmente, que tienen integrados electrodos de tinta de carbón para serigrafía para llevar a cabo las mediciones de electroquimioluminiscencia (placas MULTI-ARRAY o MULTI-SPOT, Meso Scale Discovery, una división de Meso Scale Diagnostics, LLC, Gaithersburg, MD). Una capa dieléctrica con un patrón colocado en un patrón sobre el electrodo de trabajo en el fondo de cada pozo expone una o más regiones o "puntos" en el electrodo de trabajo. En algunos experimentos, las superficies del electrodo se trataron con plasma de oxígeno antes de inmovilizar los anticuerpos en las mismas. Diferentes anticuerpos de captura se inmovilizaron en los diferentes puntos mediante la microdistribución con un patrón de las soluciones de los anticuerpos en los puntos utilizando un distribuidor de nanolitros (Bio-Dot, Inc.). Los volúmenes distribuidos en los puntos se seleccionaron de manera que se dispersan a los límites definidos por las capas dieléctricas, pero permanecieron confinados en los puntos, permitiendo así la inmovilización de cada anticuerpo (vía adsorción pasiva) en una región definida del electrodo de trabajo; si las superficies del electrodo no se trataron con plasma, una pequeña cantidad de detergente de TRITON X- 00 se agregó a las soluciones de los puntos para mejorar la dispersión. Se dejó proceder la adsorción durante al menos 2 horas, después de lo cual las placas se lavaron con un amortiguador de lavado estabilizante (sacarosa al 2%, fosfato de amonio dibásico 185 mM, fosfato de amonio monobásico 13 mM, TWEEN 20 al 0.1 %, y conservador KATHON CG/ICP II), se secaron y almacenaron en la presencia de un desecante. Al controlar la cantidad de amortiguador de lavado dejado en los pozos antes de secar (típicamente entre 5-20 µ?_), las películas de sacarosa de diferentes espesores pueden dejarse sobre las superficies del electrodo de trabajo.

Instrumento de medición de la electroquimioluminiscencia La electroquimioluminiscencia se indujo y midió en las placas MULTI-SPOT utilizando un lector Sector® Imager 6000 o un lector Sector® PR 400 (ambos de Meso Scale Discovery, una división de Meso Scale Diagnostics, LLC, Gaithersburg, MD). El instrumento Sector® Imager 6000 aplica potenciales eléctricos a los electrodos de trabajo en la placa y forma la imagen de la ECL resultante. Se emplean algoritmos de análisis de la imagen para distinguir y cuantificar la luz emitida de cada punto en un pozo. El instrumento Sector® PR 400 aplica un potencial eléctrico a los electrodos de trabajo en una columna de la placa a la vez. Un arreglo de fotodiodos se utiliza para medir la ECL emitida de los pozos en la columna.

EJEMPLO 1 Detección multiplexada de citocina utilizando anticuerpos de detección marcados en perlas liofilizadas Se prepararon placas MULTI-SPOT de alta unión que tienen un arreglo de 7 puntos de anticuerpos de captura contra siete diferentes citocinas humanas (TNF-a, ??_1 -ß IL2, IL5, IL6, IL8, IL12 y GM-CSF) y perlas liofilizadas que contienen los anticuerpos de detección marcados contra las mismas siete citocinas, como se describió anteriormente. Una perla se colocó en cada pozo, y las placas se almacenaron en la presencia de desecante hasta que se utilizaron. Se llevaron a cabo ensayos multiplexados para la citocina introduciendo las soluciones de citocina (40 pl por pozo preparados en medio de cultivo celular RPMI suplementado con suero de becerro fetal al 10%) de concentraciones predefinidas en los pozos de la placa y se incubaron durante 2 horas a temperatura ambiente en un agitador de placas. El AMORTIGUADOR P MSD® READ (Meso Scale Discovery), una solución que contiene un correactivo de ECL de amina terciaria, se agregó a una concentración 2x a los pozos (1 10 µ?/????), y la placa se analizó en un instrumento Sector® Imager 6000. Las señales resultantes en cada punto mostraron buena linealidad para todas las siete citocinas entre 10 y 10,000 pg/ml. Las desviaciones estándar de las señales fueron típicamente menores que 10% de las señales promedio. Las señales de fondo y las sensibilidades calculadas fueron similares a aquellas obtenidas cuando los anticuerpos se agregaron a los pozos como soluciones liquidas.

EJEMPLO 2 Mediciones de la citocina utilizando un anticuerpo de detección marcado que está seco en una capa protectora que cubre una superficie de captura Este ensayo utilizó una placa MULTI-ARRAY con puntos pequeños con un solo punto por pozo. El punto tratado, como se describió en la sección de Materiales y métodos con una solución que contiene un anticuerpo de captura de TNF-a antihumano para inmovilizar el anticuerpo en la superficie del punto. El pozo se llenó a continuación con 75 µ?_ de AMORTIGUADOR P MSD® READ 4x, que se suplemento con FICOLL al 7% (un polímero hidrofílico altamente ramificado de sacarosa), y la placa se enfrió hasta congelación y se liofilizó durante la noche para proporcionar una capa de "torta" protectora sobre el fondo del pozo. Una pequeña gota (35 nL) de una solución concentrada del anticuerpo de detección de TNF-a antihumano marcado se distribuyó en la superficie de la torta. La placa se secó a vacío durante 5 minutos y se almacenó en la presencia del desecante hasta que se utilizó. Los ensayos se llevaron a cabo agregando a los pozos 150 pL de soluciones que contienen concentraciones predeterminadas del TNF-a humano en medio de cultivo celular RPMI suplementado con suero de becerro fetal al 10% y agitando durante dos horas. A continuación, la placa se analizó en un instrumento Sector® Imager 6000. Los límites de detección calculados de 5-6 pg/mL son comparables con aquéllos observados en los ensayos sin lavar utilizando soluciones del anticuerpo de detección líquido.

EJEMPLO 3 Mediciones de la citocina utilizando un anticuerpo de detección marcado que está seco en los lados de los pozos de una placa con múltiples pozos Este ensayo utilizó una placa MULTI-ARRAY con puntos pequeños con un solo punto por pozo. El pozo se recubrió, como se describió en la sección de Materiales y métodos con un anticuerpo de captura de TNF-a antihumano. Gotas (1 µ?_) de una solución de 24 pg/mL del anticuerpo de detección en sacarosa al 4.8% se distribuyeron en las paredes interiores de los pozos y se dejaron secar. Las placas se almacenaron en la presencia de desecante hasta que se utilizaron en un ensayo. El protocolo de ensayo involucró agregar 80 pL de una solución de TNF-a a cada pozo, agitar la placa durante 30 minutos a temperatura ambiente, lavar la placa, agregar 150 pL de AMORTIGUADOR T MSD® READ 1 x (Meso Scale Discovery), y analizar la placa en un instrumento Sector® Imager 6000. Las placas almacenadas durante 18 días a temperatura ambiente o 4°C, proporcionaron límites de detección que fueron menores que 1 pg/mL y comparables con aquellos observados en los ensayos con lavado que emplean soluciones del anticuerpo de detección liquido.

EJEMPLO 4 Mediciones de la citocina utilizando una placa con múltiples pozos con pozos que tienen una capa de captura recubierta con una capa protectora que contiene una proteína y anticuerpo de detección marcado seco en las paredes del pozo Este ensayo utilizó una placa MULTI-ARRAY con un solo punto por pozo. El electrodo de trabajo en cada pozo se recubrió con estreptavidina (placa MULTI-ARRAY con estreptavidina, Meso Scale Discovery). El anticuerpo monoclonal anti-ILI -ß se inmovilizó en el electrodo de trabajo de acuerdo con el siguiente protocolo. Los pozos se lavaron tres veces con PBS y a continuación se trataron con 20 pL de una solución de 3 pg/mL de anticuerpo I L 1 -ß marcado con biotina. La inmovilización se dejó proceder durante 2 horas bajo agitación en un agitador de placas. Los pozos se lavaron a continuación tres veces con PBS. Un volumen de 20 pL de una solución amortiguada de BSA y sacarosa se agregó a los pozos y a continuación se secó en los pozos bajo vacío para formar una película seca en el fondo de las placas. Una pildora seca de anticuerpo policlonal anti-ILI -ß marcado con SULFO-TAG se formó en la pared del pozo de acuerdo con el siguiente protocolo. Una microgota de 100 nL de una solución de 482 g/mL del anticuerpo marcado se distribuyó en cada pared del pozo utilizando un microdistribuidor BIO-DOT (Bio-Dot, Inc.) con una punta angulada. La gota permaneció en la pared del pozo, en donde se dejó secar durante 30 minutos en una cámara de un desecador. Los pozos se sellaron a continuación con una placa sellada con calor. En algunos experimentos, una baja concentración de fluoresceína se agregó a la solución del anticuerpo de detección. La fluorescencia de la fluoresceína podría utilizarse para proporcionar una verificación del control de calidad identificando cualquier pozo en el cual el anticuerpo de detección corrió hacia abajo de la pared del pozo o se extendió en el fondo del pozo. La fluoresceína no afecta el desempeño del ensayo. Los ensayos para ILI -ß se llevaron a cabo agregando 125 µ? de soluciones que contienen cantidades conocidas de IL1 -p a los pozos, e incubando durante 37 minutos mientras se agita la placa. La placa se lavó a continuación con PBS, se agregó AMORTIGUADOR T MSD READ y la placa se analizó en un instrumento Sector® PR 400. Los ensayos que utilizan placas con anticuerpos de detección secos se realizaron de una manera comparable a los ensayos que utilizaron soluciones del anticuerpo de detección líquido.

EJEMPLO 5 Ensayos en placas con múltiples pozos utilizando reactivos secos: almacenamiento de los anticuerpos marcados secos en las salientes en los pozos Este ensayo utilizó una placa Multi-Spot configurada como se muestra en la Figura 8. La placa fue similar a aquélla mostrada en las Figuras 7a-7c, excepto por el uso de un patrón de 7 puntos y la omisión de los pozos para el desecante 720, los canales 725, las pildoras desecantes 722, y la capa de sellado inferior 790. La parte superior de la placa fue de polipropileno moldeado por inyección. Los anticuerpos de captura se inmovilizaron mediante la distribución en los puntos individuales, de los anticuerpos contra toxina A botulínica (BotA), dinitrofenilo (DNP), ricina, enterotoxina B de estafilococos (SEB), encefalitis equina de Venezuela (VEE), y Yersinia pestis (YP). La IgG de ratón no inmune se inmovilizó en los puntos restantes para utilizarse como un control negativo. La inmovilización se llevó a cabo distribuyendo 75 nL de soluciones que comprenden entre 100-500 pg/mL de un anticuerpo, 750 pg/mL de BSA, y TRITON X-100 al 0.03%. Una excepción fue el anticuerpo de captura BotA que fue biotinilado e inmovilizado después de preunirlo a 1200 pg/mL de avidina y que se inmovilizó en la ausencia de BSA. La IgG no inmune no debe participar en un complejo alterno y debe dar una señal baja para todas las muestras. La elevación de esta señal fuera de un intervalo seleccionado puede utilizarse como una indicación de que un artefacto de la medición está produciendo una unión no específica elevada de los anticuerpos de detección, y que hay un riesgo de resultados falsos positivos. Más generalmente, puede utilizarse cualquier reactivo de unión que no esté apareado con un reactivo de detección correspondiente. Opcionalmente, el reactivo de unión puede seleccionase para compartir las propiedades estructurales con los reactivos de captura de prueba, por ejemplo, en un inmunoensayo puede incluir inmunoglobulinas de una o más de las especies de las cuales se derivan los otros anticuerpos de captura. El punto anti-DNP se utilizará como un control positivo. El pozo también incluirá un anticuerpo antifluoresceína (FL) marcado con SULFO-TAG seco, y una cantidad definida de BSA seco marcado con DNP y FL (DNP-FL-BSA). La señal del control positivo debe proporcionar por lo tanto, una señal positiva constante indicativa de la cantidad definida de DNP-FL-BSA. La reducción de esta señal por debajo de un intervalo seleccionado puede utilizarse como una indicación de que la muestra interfiere con las reacciones de unión o la generación de la señal y que hay riesgo de resultados falsos negativos. Más generalmente, el control positivo puede ser un ensayo para cualquier analito que puede estar sembrado en la mezcla de reacción. De manera preferida, existe una baja probabilidad de encontrar el analito en las muestras de interés. Las soluciones del anticuerpo de captura se dejaron secar durante 30 minutos en un medio de secado y a continuación se secaron durante 30-60 minutos bajo vacío. Los pozos se lavaron con un amortiguador de lavado estabilizante que contiene sacarosa, descrito en la sección de Materiales y Métodos, bloqueado con BSA al 5% durante 45 minutos y lavado una vez más con el amortiguador de lavado estabilizante. Una solución estabilizante/de bloqueo (20 µ?_ de fosfato de amonio 305 mM, cloruro de amonio 100 mM, TRITON X-100 al 0.02%, sacarosa al 2%, BSA al 2%, y conservador KATHON al 0.02%, pH 7.4), se agregó y la solución se secó en el pozo bajo vacío para formar una torta de reactivo seco en el fondo del pozo. Una mezcla de los anticuerpos de detección marcados con STAG (0.5 µ?. de una mezcla de anticuerpos contra BotA, FL, ricina, SEB, VEE y YP a entre 40-240 pg/mL en la solución estabilizante/de bloqueo) se distribuyó (utilizando un distribuidor BIO-DOT con una punta de distribución angulada) en las paredes de los pozos, justo por encima de la saliente del reactivo seco y se dejó fluir hacia abajo hacia la saliente. Una solución que contiene 80 ng/mL del analito de control positivo (DNP-FL-BSA) se distribuyó en la pared opuesta. El anticuerpo de detección y las soluciones de control se dejaron secar durante 30-60 minutos bajo vacío. Las placas se empacaron a continuación con desecante hasta que se utilizaron. El protocolo utilizado para realizar los ensayos con estas placas fue: agregar 80 pl_ de la muestra (cantidades definidas de uno o más de los analitos de ensayo en TRITON X-100 al 0.1 % en suero fisiológico amortiguado con fosfato (PBS)), incubar 1 hora con agitación, lavar con PBS, agregar 150 µ?_ de AMORTIGUADOR T MSD READ 1 x (Meso Scale Diagnostics, LLC), y analizar la placa utilizando un instrumento MSD Sector® Imager 6000. VEE y YP utilizadas en este ensayo se inactivaron mediante radiación. La BotA utilizada en el ensayo se inactivo con formalina.

El cuadro siguiente muestra las señales observadas en cada punto para las muestras que no contienen el analito (-) o para las muestras que contienen 10 ng/mL de BotA, 1 ng/mL de ricina, 50 ng/mL de SEB, 1000 ng/mL de VEE o 10,000 CFU/mL de YP. El cuadro muestra la detección sensible y específica de los analitos objetivos y el desempeño apropiado de los puntos de control positivo y negativo.

Punto de captura Analito BotA Ricina SEB VEE YP Neg Pos BotA 28893 78 97 182 159 134 9456 Ricina 243 15502 106 222 142 129 8776 SEB 276 165 9518 230 177 162 8288 VEE 1516 233 88 1 1821 204 237 8506 YP 243 129 107 21 1 4280 152 8656 - 249 81 75 212 1 15 121 8923 El siguiente cuadro compara las señales observadas con estas placas con los ensayos llevados a cabo bajo condiciones comparables, excepto por el uso de reactivos de detección líquidos. El cuadro proporciona sólo la señal en el punto específico para un analito dado, y proporciona la señal en la presencia del analito (10 ng/mL de BotA, 1 ng/mL de ricina, 50 ng/mL de SEB, 1000 ng/mL de VEE o 10,000 CFU/mL de YP) la señal de fondo en la ausencia del analito. El cuadro muestra que los ensayos en seco y en húmedo se realizaron de manera comparable.

Señal en el Punto Específico Seco Húmedo Analito Fondo Señal Fondo Señal BotA 249 12098 156 4809 Ricina 81 1 5502 94 12631 SEB 75 9518 68 6299 VEE 212 1 1821 260 7497 YP 1 15 4280 145 3876 EJEMPLO 6 Ensayos en placas con múltiples pozos con pozos de ensayo y pozos para el desecante Este ensayo utilizó una placa MULTI-SPOT configurada como se muestra en la Figura 9. La placa fue similar a aquélla mostrada en la Figura 8, excepto por la inclusión de conductos 910 que conectan los pares de pozos adyacentes. Los conductos se proporcionaron mediante hendiduras poco profundas que se cortaron en las paredes que separan los pozos adyacentes.

En este ejemplo, un pozo de cada par de pozos se utilizó para llevar a cabo un inmunoensayo multiplexado y el otro se utilizó para sostener el desecante para mantener el pozo de ensayo en un estado seco durante el almacenamiento. El ensayo utilizó un immunoensayo intercalado multiplexado con reactivos de captura y detección secos, preparados como en el Ejemplo 5.

Los anticuerpos de captura fueron anW-Bacillus subtilis variedad Niger (BG), fago anti-MS2, anti-FL, anti-DNP, e IgG de ratón como control negativo. La pildora del anticuerpo de detección seco incluyó anti-BG marcado, anti-MS2, y anti-ovalbúmina (Ova) (para detectar FL-Ova y DNP-Ova). Después de que se prepararon las placas, los pozos para el desecante se llenaron con aproximadamente 50 mg a 200 mg de desecantes de gel de sílice o DRIERITE (sulfato de calcio) y las placas se sellaron con una lámina de aluminio sellada con calor. Después de sellar el sello de lámina a la parte superior de la placa, las muescas en los pozos proporcionaron los conductos entre los conjuntos de los pozos de ensayo y desecantes. Algunas placas se prepararon sin desecante en los pozos para el desecante para comparación. Las placas se mantuvieron a 4°C bajo condiciones secas durante varios días para permitir que los reactivos secos se sequen completamente. Las placas se expusieron a continuación a temperatura y humedad elevadas durante varios días antes de utilizarlas para llevar a cabo mediciones de los organismos objetivos (utilizando el protocolo de ensayo del Ejemplo 5). La Figura 10 proporciona señales para las muestras que contienen cantidades definidas de los analitos objetivo y compara las señales de las placas con el desecante de sílice, el desecante de sulfato de calcio y sin desecante después de la exposición a 60% de humedad a 30°C durante 7 días. Las señales se proporcionan como un porcentaje de la señal obtenida de una placa que se preparó al mismo tiempo que las otras, pero que se ha mantenido seca a 4°C durante el periodo de 7 días. Los resultados indican que los pozos para el desecante fueron muy efectivos para mejorar la estabilidad de los reactivos secos al calor y a la humedad. Las patentes, solicitudes de patente y publicaciones citadas en esta descripción se incorporan como referencia en su totalidad. La presente invención no está limitada en alcance por las modalidades específicas descritas en la presente. En realidad, varias modificaciones de la invención, además de aquéllas descritas en la presente, se volverán evidentes para aquellos con experiencia en la técnica a partir de la descripción anterior y los dibujos acompañantes. Tales modificaciones pretenden caer dentro del alcance de las reivindicaciones. Una reivindicación que expone "que comprende", permite la inclusión de otros elementos para que estén dentro del alcance de la reivindicación; la invención también se describe por tales reivindicaciones que exponen las frases de transición "que consiste esencialmente de (es decir, que permite la inclusión de otros elementos para que estén dentro del alcance de la reivindicación si no afectan de manera material la operación de la invención) o "que consiste de" (es decir, que permite solo los elementos listados en la reivindicación diferentes a las impurezas o actividades sin importancia que están asociadas de manera ordinaria con la invención), en lugar del término "que comprende". Cualquiera de estas tres transiciones puede utilizarse para reclamar la invención.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1 . - Una placa de ensayo con múltiples pozos que comprende un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, en donde la pluralidad de pozos comprende: (a) una superficie de unión que tiene un reactivo de captura inmovilizado en la misma y (b) un reactivo seco reconstituible, en donde el reactivo seco está (i) suelto o (¡i) localizado en una superficie del pozo que no se superpone con la superficie de unión. 2. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque el reactivo seco reconstituible comprende un reactivo de detección marcado. 3. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque el reactivo seco reconstituible está localizado de manera fija en una superficie del pozo que no se superpone con la superficie de unión. 4. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 3, caracterizada además porque la superficie de unión se localiza en una superficie inferior del pozo y el reactivo seco reconstituible se localiza en una pared del pozo. 5. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada además porque la pared del pozo comprende una plataforma para almacenar el reactivo en la cual se localiza el reactivo seco reconstituible. 6. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque la superficie de unión y el reactivo seco reconstituible se localizan ambos en regiones no superpuestas de una superficie inferior del pozo. 7. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque el reactivo seco reconstituible está suelto. 8.- La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque el reactivo seco reconstituible es una pildora suelta. 9. - La placa con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-8, caracterizada además porque la superficie de unión está recubierta con una capa protectora reconstituible. 10. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-9, caracterizada además porque también comprende un analito de control del ensayo seco reconstituible, en donde el analito de control del ensayo tiene una afinidad de unión por el reactivo de captura inmovilizado y/o el reactivo de detección marcado. 1 1 . - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada además porque el analito de control del ensayo tiene una afinidad de unión por, pero no está unido a un reactivo de captura inmovilizado y/o al reactivo de detección marcado. 12.- La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-1 1 , caracterizada además porque también comprende uno o más reactivos de captura inmovilizados adicionales, en donde el reactivo de captura y los reactivos de captura adicionales forman un arreglo con un patrón de dominios de unión en la superficie de unión, y los dominios de unión difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. 13.- La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada además porque el reactivo seco reconstituible comprende además uno o más reactivos de detección marcados adicionales, y el reactivo de detección y los reactivos de detección adicionales difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. 14.- La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-13, caracterizada además porque la superficie de unión es adecuada para utilizarse como un electrodo en un ensayo de electroquimioluminiscencia. 15.- La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-14, caracterizada además porque los reactivos de captura y detección se seleccionan del grupo que comprende anticuerpos y ácidos nucleicos. 16.- Un método para llevar a cabo un ensayo en la placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 2-15, el método comprende: (a) agregar una muestra a uno o más de la pluralidad de pozos, (b) reconstituir los materiales secos reconstituibles en uno o más pozos para formar una mezcla de reacción, (c) incubar la mezcla de reacción bajo condiciones que fomentan la unión de los reactivos de captura y detección a sus compañeros de unión correspondientes, y (d) medir la formación de los complejos que comprenden los reactivos de captura inmovilizados y el reactivo de unión marcado. 17.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque el ensayo es un ensayo de unión intercalado, y el reactivo de captura y el reactivo de detección pueden unirse de manera simultánea a un analito de interés. 18.- El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque el ensayo es un ensayo de unión competitivo y el reactivo de captura se une a un analito de interés y el reactivo de detección compite con el analito para unirse al reactivo de captura o el reactivo de detección se une a un analito de interés y el reactivo de captura compite con el analito para unirse al reactivo de detección. 19.- Un método para preparar una placa de ensayo con múltiples pozos para utilizarse en un ensayo, el método comprende llevar a cabo lo siguiente en al menos dos pozos de la placa: (a) inmovilizar un reactivo de captura en una superficie de un pozo de la placa para formar una superficie de unión, (b) distribuir un reactivo líquido que comprende un reactivo de detección marcado a una superficie del pozo que no se superpone con la superficie de unión, y (c) secar el reactivo líquido para formar un reactivo de detección seco reconstituible. 20.- El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado además porque la superficie de unión está en el fondo del pozo. 21 .- El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado además porque el reactivo líquido se distribuye en una superficie inferior del pozo. 22.- El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado además porque el reactivo líquido se distribuye y seca en una pared del pozo. 23. - El método de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado además porque la pared comprende una plataforma para el almacenamiento de líquido, y el reactivo líquido (i) se distribuye y seca en la plataforma o (ii) se distribuye en la pared en una ubicación por encima de la plataforma, de manera que el reactivo líquido que corre hacia debajo de la pared se recolecta y se seca posteriormente en la plataforma. 24. - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19-23, caracterizado además porque comprende distribuir un reactivo de protección en la superficie de unión y secar el reactivo de protección para formar una capa protectora reconstituible sobre la superficie de unión, en donde la distribución y secado del reactivo de protección ocurren antes de distribuir el reactivo líquido que comprende un primer reactivo de unión marcado. 25. - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19-23, caracterizado además porque la inmovilización de un reactivo de captura comprende inmovilizar uno o más reactivos de captura adicionales para formar un arreglo de dominios de unión en la superficie de unión, y los dominios de unión difieren en su especificidad o afinidad por los compañeros de unión. 26. - El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado además porque el reactivo líquido comprende además uno o más reactivos de detección marcados adicionales, y el reactivo de detección marcado y los reactivos de detección marcados adicionales difieren en su especificidad o afinidad por los compañeros de unión. 27. - El método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 19-26, caracterizado además porque comprende: (d) distribuir un reactivo líquido adicional que comprende un control del ensayo a una superficie del pozo que no se superpone con la superficie de unión, el control del ensayo tiene una afinidad de unión por el reactivo de captura y/o el reactivo de detección marcado y (e) secar el reactivo líquido adicional para formar un ensayo control seco reconstituible; en donde el reactivo de detección seco y el control del ensayo seco no están en contacto físico. 28. - Un método para preparar una placa de ensayo con múltiples pozos para utilizarse en un ensayo, el método comprende llevar a cabo lo siguiente en al menos dos pozos de la placa: (a) inmovilizar un reactivo de captura en una superficie de un pozo de la placa para formar una superficie de unión, (b) distribuir un reactivo de protección en la superficie de unión y secar el reactivo de protección para formar una capa protectora reconstituible sobre la superficie de unión, y (c) agregar al pozo, una pildora de un reactivo seco reconstituible que comprende un reactivo de detección marcado. 29. - El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado además porque la inmovilización de un reactivo de captura comprende inmovilizar uno o más reactivos de captura adicionales para formar un arreglo de dominios de unión en la superficie de unión, y el dominio de unión difiere en su especificidad o afinidad por los compañeros de unión. 30. - El método de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado además porque la pildora del reactivo seco reconstituible comprende además uno o más reactivos de detección marcados adicionales, y el reactivo de detección y los reactivos de detección marcados adicionales difieren en su especificidad o afinidad por los compañeros de unión. 31 . - El método de conformidad con la reivindicación 28, caracterizado además porque comprende: (d) agregar al pozo, una pildora del reactivo seco adicional que comprende un control del ensayo que tiene una afinidad de unión por el reactivo de captura inmovilizado y/o el reactivo de detección marcado. 32. - Una placa de ensayo con múltiples pozos que comprende un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, que comprende: (a) una pluralidad de pozos de detección, en donde cada pozo de detección comprende una superficie de unión que tiene un reactivo de captura inmovilizado en la misma, y (b) una pluralidad de pozos de reconstitución del reactivo, en donde cada pozo de reconstitución del reactivo comprende un reactivo de detección marcado reconstituible, en donde al menos un pozo de detección y un pozo de reconstitución del reactivo comprende reactivos de captura y detección correspondientes para medir un analito de interés. 33.- Una placa de ensayo con múltiples pozos que comprende un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, que comprende: (a) una pluralidad de pozos de detección, en donde los pozos de detección (i) tienen pisos del pozo y paredes del pozo, en donde las paredes del pozo tienen superficies internas de la pared y superficies externas de la pared, (ii) están colocados en un patrón regular de dos dimensiones, y (iii) comprenden, en las superficies internas de cada uno de los pozos de detección, una superficie de unión que tiene un arreglo de un reactivo de captura inmovilizado en las mismas; y (b) una pluralidad de pozos de reconstitución del reactivo, en donde los pozos de reconstitución del reactivo (i) tienen pisos del pozo y paredes del pozo, en donde las paredes del pozo están definidas por las superficies extemas de la pared de los pozos de detección y mediante elementos de reborde que conectan las superficies externas de la pared de los pozos de detección adyacentes y (ii) comprenden, en cada pozo de reconstitución del reactivo, un reactivo de detección marcado seco reconstituible; en donde al menos un pozo de detección y un pozo de reconstitución del reactivo comprende reactivos de captura y detección correspondientes para medir un analito de interés. 34. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 33, caracterizada además porque los pozos de detección tienen perímetros de abertura del pozo sin ángulos o curvas reentrantes y los pozos de reconstitución del reactivo tienen perímetros de la abertura del pozo con curvas o ángulos reentrantes. 35. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 33, caracterizada además porque los pozos de detección tienen perímetros de la abertura del pozo que son redondos. 36. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 32-35, caracterizada además porque los pozos de detección y de reconstitución del reactivo pueden agruparse en una pluralidad de conjuntos de ensayo que consisten de uno o más pozos de detección y un pozo de reconstitución del reactivo, y los pozos de detección y el pozo de reconstitución del reactivo dentro de un conjunto comprenden reactivos de captura y detección correspondiente para medir un analito de interés. 37. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 36, caracterizada además porque los conjuntos consisten de un pozo de detección y un pozo de reconstitución del reactivo. 38. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 32-37, caracterizada además porque los pozos de detección o el pozo de reconstitución del reactivo comprenden además un analito de control del ensayo seco reconstituible. 39. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 32-38, caracterizada además porque también comprende uno o más reactivos de captura inmovilizados adicionales, en donde el reactivo de captura y los reactivos de captura adicionales forman un arreglo con un patrón de dominios de unión en la superficie de unión, y los dominios de unión difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. 40. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 39, caracterizada además porque el reactivo seco reconstituible comprende uno o más reactivos de detección marcados adicionales, y el reactivo de detección y los reactivos de detección adicionales difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. 41 . - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 32-40, caracterizada además porque la superficie de unión es adecuada para utilizarse como un electrodo en un ensayo de electroquimioluminiscencia. 42. - Un método para llevar a cabo un ensayo en la placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 32-41 , el método comprende: (a) agregar una muestra a uno de los pozos de reconstitución del reactivo, (b) reconstituir los reactivos de detección marcados secos reconstituibles en el pozo de reconstitución para formar una o más mezclas de reacción, (c) transferir una alícuota de la mezcla de reacción a uno o más pozos de detección, (d) incubar la mezcla de reacción en los pozos de detección bajo condiciones que fomentan la unión de los reactivos de captura y detección a sus compañeros de unión correspondientes, y (e) medir la formación de los complejos que comprenden los reactivos de captura inmovilizados y el reactivo de unión marcado. 43. - El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado además porque la placa de ensayo con múltiples pozos puede dividirse en una pluralidad de conjuntos de pozos que consisten de un pozo del primer reactivo y uno o más pozos del segundo reactivo, y el método comprende además repetir el procedimiento de (a)-(d) para cada uno de los conjuntos de pozos. 44. - Una placa con múltiples pozos que comprende un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, que comprende: (a) una pluralidad de pozos del primer reactivo que sostienen un primer reactivo seco reconstituible y (b) una pluralidad de pozos del segundo reactivo que sostienen un segundo reactivo seco, en donde el primer y segundo reactivos son reactivos correspondientes para realizar un ensayo. 45. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 44, caracterizada además porque los pozos del primer reactivo están colocados en un patrón regular de dos dimensiones y los pozos del primer reactivo tienen pisos del pozo y paredes del pozo, las paredes del pozo tienen superficies internas de la pared y superficies externas de la pared y los pozos del segundo reactivo tienen pisos del pozo y paredes del pozo, las paredes del pozo están definidas por las superficies externas de la pared de los pozos de detección y por elementos de reborde que conectan las superficies externas de la pared de pozos de detección adyacentes. 46.- La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 45, caracterizada además porque los pozos del primer reactivo tienen perímetros de la abertura del pozo que son redondos. 47. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 46, caracterizada además porque los pozos de detección están colocados en un arreglo de 8 x 12. 48. - Un método para llevar a cabo un ensayo en la placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 44-47, caracterizado además porque el método comprende: (a) agregar una muestra a uno de los pozos del primer reactivo, (b) reconstituir los reactivos de detección marcados secos reconstituibles en el pozo del primer reactivo para formar una mezcla de reacción, (c) transferir una alícuota de la mezcla de reacción a uno o más de los pozos del segundo reactivo, y (d) incubar la mezcla de reacción en los pozos del segundo reactivo para llevar a cabo el ensayo en la muestra. 49.- El método de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado además porque la placa de ensayo con múltiples pozos puede dividirse en una pluralidad de conjuntos de pozos que consisten de un pozo del primer reactivo y uno o más pozos del segundo reactivo, y el método comprende además repetir el procedimiento de (a)-(d) para cada uno de los conjuntos de pozos. 50. - Una placa de ensayo con múltiples pozos que comprende un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, que tienen pisos del pozo y paredes del pozo que se extienden de los pisos a una altura hw por encima de los pisos, en donde las paredes están formadas para proporcionar elementos de plataforma a una altura hs, en donde 0 < hs < hw. 51 . - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 50, caracterizada además porque 0.05hw < hs < 0.25hw. 52.- La placa con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 50, caracterizada además porque 0.2 mm < hs < 5 mm. 53.- La placa con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 50, caracterizada además porque el cuerpo de la placa es una parte moldeada por inyección de una pieza. 54.- La placa con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 50, caracterizada además porque el cuerpo de la placa comprende una parte superior de la placa que tiene una pluralidad de orificios pasantes que definen las paredes del pozo y una parte inferior de la placa que se sella contra la parte superior de la placa, y la parte inferior de la placa define los pisos del pozo. 55.- La placa con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 54, caracterizada además porque la parte inferior de la placa proporciona superficies conductoras del electrodo que se exponen al volumen interior de los pozos. 56. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 50-55, caracterizada además porque la placa define pozos colocados en un arreglo de 4 x 6, 8 x 12, 16 x 24 ó 32 x 48. 57. - Una placa de ensayo con múltiples pozos que comprende (a) un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, que incluye: (i) una pluralidad de pozos de ensayo que comprenden un reactivo de ensayo seco y (ii) una pluralidad de pozos para el desecante que comprenden un desecante, y (b) un sello de la placa sellado contra el cuerpo de la placa, aislando por lo tanto la pluralidad de pozos del medio externo. 58. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 57, caracterizada además porque los pozos para el desecante están conectados por conductos de secado a los pozos de ensayo, y los conductos permiten la difusión del vapor de agua de los pozos de ensayo a los pozos para el desecante e intersecan los pozos de ensayo a una altura en el pozo de ensayo por encima de la ubicación del reactivo de ensayo seco. 59. - La placa con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 58, caracterizada además porque la superficie superior del cuerpo de la placa tiene canales rebajados que conectan los pozos de ensayo con los pozos para el desecante, y el sello de la placa se sella contra los canales para formar los conductos. 60. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 58-59, caracterizada además porque (i) los pozos de la placa están divididos en una pluralidad de paneles de ensayo que comprenden al menos un pozo de ensayo y al menos un pozo para el desecante, (ii) los pozos en un panel de ensayo están interconectados vía conductos de secado, y (iii) los pozos en diferentes paneles no están interconectados vía conductos de secado. 61 . - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 60, caracterizada además porque los paneles consisten de un pozo de ensayo y un pozo para el desecante. 62. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 57-61 , caracterizada además porque el pozo de ensayo comprende una superficie de unión que tiene un reactivo de captura inmovilizado en la misma y un reactivo de detección marcado seco reconstituible. 63. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 62, caracterizada además porque el pozo de ensayo comprende uno o más reactivos de captura inmovilizados adicionales, el reactivo de captura y los reactivos de captura adicionales forman un arreglo con un patrón de dominios de unión en la superficie de unión, y el dominio de unión difiere en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. 64. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 63, caracterizada además porque el reactivo seco reconstituible comprende uno o más reactivos de detección marcados adicionales, y el reactivo de detección y los reactivos de detección adicionales difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. 65. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 62-64, caracterizada además porque la superficie de unión es adecuada para utilizarse como un electrodo en un ensayo de electroquimioluminiscencia. 66. - La placa con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 57-65, caracterizada además porque el cuerpo de la placa es una parte moldeada por inyección de una pieza. 67. - La placa con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 57-65, caracterizada además porque el cuerpo de la placa comprende una parte superior de la placa que tiene una pluralidad de orificios pasantes que definen las paredes del pozo y una parte inferior de la placa que se sella contra la parte superior de la placa y define los pisos del pozo, 68. - La placa con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 67, caracterizada además porque la parte inferior de la placa proporciona superficies conductoras del electrodo que se exponen al volumen interior de los pozos. 69. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 57-68, caracterizada además porque la placa define pozos colocados en un arreglo de 4 x 6, 8 x 12, 16 x 24 ó 32 x 48. 70. - Una placa de ensayo con múltiples pozos, que comprende: (a) un cuerpo de la placa con una pluralidad de pozos definidos en el mismo, que contiene un reactivo de ensayo seco, el cuerpo de la placa comprende una parte superior de la placa que tiene una pluralidad de orificios pasantes que definen las paredes del pozo y una parte inferior de la placa que se sella contra la parte superior de la placa y define los pisos del pozo, (b) un sello de la placa sellado contra el cuerpo de la placa, aislando por lo tanto la pluralidad de pozos del medio extemo, y (c) un material desecante. 71 . - La placa con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 70, caracterizada además porque el sello de la placa comprende el material desecante. 72. - La placa con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 70, caracterizada además porque también comprende una capa de una junta obturadora entre el sello de la placa y el cuerpo de la placa, en donde la capa de la junta obturadora comprende el material desecante. 73. - La placa con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 70, caracterizada además porque la parte superior de la placa está impregnada con el material desecante. 74. - La placa con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 70, caracterizada además porque también comprende una capa de una junta obturadora entre la parte superior de la placa y la parte inferior de la placa, en donde la capa de la junta obturadora comprende el material desecante. 75. - La placa con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 70, caracterizada además porque la parte inferior de la placa comprende el material desecante. 76. - La placa con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 70, caracterizada además porque el cuerpo de la placa define uno o más pozos adicionales, y los pozos adicionales sostienen el material desecante. 77. - La placa con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 70-76, caracterizada además porque la parte inferior de la placa proporciona superficies conductoras del electrodo que se exponen al volumen interior de los pozos. 78. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 70-77, caracterizada además porque el pozo de ensayo comprende una superficie de unión que tiene un reactivo de captura inmovilizado en la misma y un reactivo de detección marcado seco reconstituible. 79. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 78, caracterizada además porque el pozo de ensayo comprende uno o más reactivos de captura inmovilizados adicionales, el reactivo de captura y los reactivos de captura adicionales forman un arreglo con un patrón de dominios de unión en la superficie de unión, y los dominios de unión difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. 80. - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con la reivindicación 79, caracterizada además porque el reactivo seco reconstituible comprende uno o más reactivos de detección marcados adicionales, y el reactivo de detección y los reactivos de detección adicionales difieren en especificidad o afinidad por los compañeros de unión. 81 . - La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 70-80, caracterizada además porque la superficie de unión es adecuada para utilizarse como un electrodo en un ensayo de electroquimioluminiscencia. 82.- La placa de ensayo con múltiples pozos de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 70-81 , caracterizada además porque la placa define pozos colocados en un arreglo de 4 x 6, 8 x 12, 16 x 24 ó 32 x 48.