JPH10142227A - 免疫分析用ウェルプレート - Google Patents
免疫分析用ウェルプレートInfo
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- JPH10142227A JPH10142227A JP30503396A JP30503396A JPH10142227A JP H10142227 A JPH10142227 A JP H10142227A JP 30503396 A JP30503396 A JP 30503396A JP 30503396 A JP30503396 A JP 30503396A JP H10142227 A JPH10142227 A JP H10142227A
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- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5302—Apparatus specially adapted for immunological test procedures
- G01N33/5304—Reaction vessels, e.g. agglutination plates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/01—DNA viruses
- G01N2333/02—Hepadnaviridae, e.g. hepatitis B virus
-
- G—PHYSICS
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- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/20—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Spirochaetales (O), e.g. Treponema, Leptospira
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 予めウエルに試薬が添加されていて、分析操
作が簡略化されかつ保存、運搬等が可能なウエルプレー
トを提供する。 【解決手段】 ウエルプレートの各ウエルに乾燥した試
薬が入れられていて、各ウエルがウエルプレート上面に
おいて乾燥剤入りフィルムで密封されている免疫分析用
ウエルプレート。
作が簡略化されかつ保存、運搬等が可能なウエルプレー
トを提供する。 【解決手段】 ウエルプレートの各ウエルに乾燥した試
薬が入れられていて、各ウエルがウエルプレート上面に
おいて乾燥剤入りフィルムで密封されている免疫分析用
ウエルプレート。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は、免疫分析用ウェ
ルプレートに関する。
ルプレートに関する。
【０００２】
【従来の技術】９６穴ウェル等のウェルプレートは、赤
血球や着色粒子を用いた凝集反応や、ストリップを用い
るイムノクロマトグラフィーのサンプル槽等として用い
られている。これらの測定方法においては、試薬は測定
時にウェルプレートの各ウェルに添加され、被検体が測
定される。従って、一定の試薬が一定量ずつ各ウェルに
予め添加されていれば測定作業が簡便になる。また、ウ
ェルプレートは酵素免疫測定法（以下、ＥＩＡ）、蛍光
免疫測定法（以下、ＦＩＡ）や化学発光免疫測定法（以
下、ＣＬＩＡ）等の固相としても使用することができる
が、抗原又は抗体等を固定化したウェルプレートは、抗
原や抗体等の試薬が酸素や湿気等により劣化するのを防
ぐために脱湿剤を入れた袋に密封されていることが必要
である。しかし、この包装には多くの費用がかかる。
血球や着色粒子を用いた凝集反応や、ストリップを用い
るイムノクロマトグラフィーのサンプル槽等として用い
られている。これらの測定方法においては、試薬は測定
時にウェルプレートの各ウェルに添加され、被検体が測
定される。従って、一定の試薬が一定量ずつ各ウェルに
予め添加されていれば測定作業が簡便になる。また、ウ
ェルプレートは酵素免疫測定法（以下、ＥＩＡ）、蛍光
免疫測定法（以下、ＦＩＡ）や化学発光免疫測定法（以
下、ＣＬＩＡ）等の固相としても使用することができる
が、抗原又は抗体等を固定化したウェルプレートは、抗
原や抗体等の試薬が酸素や湿気等により劣化するのを防
ぐために脱湿剤を入れた袋に密封されていることが必要
である。しかし、この包装には多くの費用がかかる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】この発明の目的は、し
たがって、予めウェルに試薬が添加されていて、保存、
運搬等が可能なウェルプレートを提供することにある。
たがって、予めウェルに試薬が添加されていて、保存、
運搬等が可能なウェルプレートを提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】ウェルプレートの各ウェ
ルに乾燥した試薬を入れ、次いで各ウェルをウェルプレ
ート上面において乾燥剤入りフィルムで密封することに
より、保存、運搬等が可能なウェルプレートを提供する
ことができた。
ルに乾燥した試薬を入れ、次いで各ウェルをウェルプレ
ート上面において乾燥剤入りフィルムで密封することに
より、保存、運搬等が可能なウェルプレートを提供する
ことができた。
【０００５】
【発明の実施の形態】すなわちこの発明は、ウェルプレ
ートの各ウェルに乾燥した試薬が入れられていて、各ウ
ェルがウェルプレート上面において乾燥剤入りフィルム
で密封されている免疫分析用ウェルプレートである。
ートの各ウェルに乾燥した試薬が入れられていて、各ウ
ェルがウェルプレート上面において乾燥剤入りフィルム
で密封されている免疫分析用ウェルプレートである。
【０００６】従来より用いられているウェルプレートの
いずれもが本発明のウェルプレートとすることができ
る。多くの場合９６穴ウェルプレートが用いられてい
る。９６穴ウェルプレートは、８行、１２列のウェルか
らなっている。さらに８穴単位又は１２穴単位毎等に分
離して使用できるウェルも本発明のウェルプレートとす
ることができる。
いずれもが本発明のウェルプレートとすることができ
る。多くの場合９６穴ウェルプレートが用いられてい
る。９６穴ウェルプレートは、８行、１２列のウェルか
らなっている。さらに８穴単位又は１２穴単位毎等に分
離して使用できるウェルも本発明のウェルプレートとす
ることができる。
【０００７】ウェルの形状は、Ｕ字型、Ｖ字型、平底型
等、用途によって種々の形状がある。Ｕ字型ウェル及び
Ｖ字型ウェルは、免疫反応の結果生じた感作赤血球や着
色粒子等の凝集程度を目視で観察するのに適している。
平底型は、透過光を測定するのに適しており、ＥＩＡや
コロイド凝集法などの測定に使用されている。このよう
に免疫分析用ウェルプレートとして種々のものが知られ
ており、そのウェルの径や深さ、あるいはウェルの数や
分離できる単位も種々のものが存在するが、この発明で
は、これらウェルプレートの形状等に限定されることな
く何れのウェルプレートも使用することができる。
等、用途によって種々の形状がある。Ｕ字型ウェル及び
Ｖ字型ウェルは、免疫反応の結果生じた感作赤血球や着
色粒子等の凝集程度を目視で観察するのに適している。
平底型は、透過光を測定するのに適しており、ＥＩＡや
コロイド凝集法などの測定に使用されている。このよう
に免疫分析用ウェルプレートとして種々のものが知られ
ており、そのウェルの径や深さ、あるいはウェルの数や
分離できる単位も種々のものが存在するが、この発明で
は、これらウェルプレートの形状等に限定されることな
く何れのウェルプレートも使用することができる。
【０００８】ウェルに予め添加され乾燥される試薬は免
疫反応に用いられる試薬である。免疫反応が凝集反応で
あれば、予め添加され乾燥される試薬は抗原又は抗体を
感作した赤血球や着色粒子である。赤血球を担体として
用いる受身赤血球凝集反応（以下、ＰＨＡ）は、抗原を
感作した赤血球を用い、赤血球が凝集反応を起こせば感
作した抗原に対する特異抗体が存在することを示す。逆
受身赤血球凝集反応（以下、ＲＰＨＡ）は抗体を感作し
た赤血球を用いて、感作赤血球の凝集を観察することに
よって検体中の抗原を検出あるいは定量するための方法
である。赤血球の代わりに何らかの着色粒子を用いた凝
集反応も一般に行われている。着色粒子としては、ポリ
スチレン、ゼラチン、リポソーム、金属あるいは非金属
の粒子などが用いられている。凝集反応においては、抗
原あるいは抗体を結合又は感作したこれらの着色粒子や
赤血球をウェルに分注し乾燥させる。
疫反応に用いられる試薬である。免疫反応が凝集反応で
あれば、予め添加され乾燥される試薬は抗原又は抗体を
感作した赤血球や着色粒子である。赤血球を担体として
用いる受身赤血球凝集反応（以下、ＰＨＡ）は、抗原を
感作した赤血球を用い、赤血球が凝集反応を起こせば感
作した抗原に対する特異抗体が存在することを示す。逆
受身赤血球凝集反応（以下、ＲＰＨＡ）は抗体を感作し
た赤血球を用いて、感作赤血球の凝集を観察することに
よって検体中の抗原を検出あるいは定量するための方法
である。赤血球の代わりに何らかの着色粒子を用いた凝
集反応も一般に行われている。着色粒子としては、ポリ
スチレン、ゼラチン、リポソーム、金属あるいは非金属
の粒子などが用いられている。凝集反応においては、抗
原あるいは抗体を結合又は感作したこれらの着色粒子や
赤血球をウェルに分注し乾燥させる。
【０００９】ウェルがイムノクロマトグラフィー等の反
応槽又はサンプル槽である場合には、予め添加され乾燥
される試薬は酵素や着色微粒子等で標識された抗原又は
抗体である。着色微粒子としては、ポリスチレン、ゼラ
チン、リポソーム、金属あるいは非金属の粒子などが用
いられている。イムノクロマトグラフィーによる測定
は、ウェルに検体液を添加し、ウェルに予め添加、乾燥
されて存在する標識抗体（あるいは抗原）と検体液中の
抗原（あるいは抗体）とを反応させ複合体を形成させた
後に、反応液を毛管現象によりストリップ担体中を移動
させ、ストリップ担体中の検出部位に予め不動化されて
いる固相化抗体（あるいは抗原）と該複合体を反応さ
せ、検出部位に蓄積された標識物質を検出することによ
り行う。
応槽又はサンプル槽である場合には、予め添加され乾燥
される試薬は酵素や着色微粒子等で標識された抗原又は
抗体である。着色微粒子としては、ポリスチレン、ゼラ
チン、リポソーム、金属あるいは非金属の粒子などが用
いられている。イムノクロマトグラフィーによる測定
は、ウェルに検体液を添加し、ウェルに予め添加、乾燥
されて存在する標識抗体（あるいは抗原）と検体液中の
抗原（あるいは抗体）とを反応させ複合体を形成させた
後に、反応液を毛管現象によりストリップ担体中を移動
させ、ストリップ担体中の検出部位に予め不動化されて
いる固相化抗体（あるいは抗原）と該複合体を反応さ
せ、検出部位に蓄積された標識物質を検出することによ
り行う。
【００１０】ＥＩＡ，ＦＩＡ及びＣＬＩＡ等において
は、予め添加され乾燥される試薬は、予めウェルに固定
化された抗原あるいは抗体である。固定化は、通常、吸
着や共有結合により行う。さらに、予め添加され乾燥さ
れる試薬として標識化抗原または標識化抗体を使用する
ことによって、ＥＩＡ等の免疫測定における試薬の分注
回数を減らし、より簡便に行うことができる。
は、予め添加され乾燥される試薬は、予めウェルに固定
化された抗原あるいは抗体である。固定化は、通常、吸
着や共有結合により行う。さらに、予め添加され乾燥さ
れる試薬として標識化抗原または標識化抗体を使用する
ことによって、ＥＩＡ等の免疫測定における試薬の分注
回数を減らし、より簡便に行うことができる。
【００１１】乾燥は、ウェルプレートの各ウェルに予め
一定量の試薬溶液を添加し、凍結乾燥又は真空乾燥する
ことにより行う。
一定量の試薬溶液を添加し、凍結乾燥又は真空乾燥する
ことにより行う。
【００１２】前述のように、ＥＩＡ、ＦＩＡ及びＣＬＩ
Ａ等においては、抗原又は抗体をウェルに固定化する
が、固定化の方法は、多くの場合ポリスチレン（Ｐ
Ｓ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）
等のプラスチック製プレートの各ウェルに抗原又は抗体
溶液の一定量を分注し、一定時間放置後、各ウェルの溶
液を捨て、各ウェルを洗浄液にて洗浄後、ウェルプレー
トを脱水し、デシケーター等にて乾燥させる。また、ウ
ェルプレートの材料に官能基を導入し、試薬の官能基と
反応させ共有結合により結合させることもできる。共有
結合による場合には必要によりリンカーを介して結合さ
せる方法も一般に用いられている。次いで固定化された
抗原又は抗体を乾燥する。
Ａ等においては、抗原又は抗体をウェルに固定化する
が、固定化の方法は、多くの場合ポリスチレン（Ｐ
Ｓ）、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）
等のプラスチック製プレートの各ウェルに抗原又は抗体
溶液の一定量を分注し、一定時間放置後、各ウェルの溶
液を捨て、各ウェルを洗浄液にて洗浄後、ウェルプレー
トを脱水し、デシケーター等にて乾燥させる。また、ウ
ェルプレートの材料に官能基を導入し、試薬の官能基と
反応させ共有結合により結合させることもできる。共有
結合による場合には必要によりリンカーを介して結合さ
せる方法も一般に用いられている。次いで固定化された
抗原又は抗体を乾燥する。
【００１３】乾燥試薬が結合又は添加されているウェル
プレートは、乾燥剤入りフィルムでウェルプレート上面
において密封される。
プレートは、乾燥剤入りフィルムでウェルプレート上面
において密封される。
【００１４】乾燥剤入りフィルムは、（１）乾燥剤が熱
可塑性樹脂に練り込まれてフィルム状にされた乾燥剤シ
ートと、（２）水分を実質的に透過しない外面フィルム
と、（３）乾燥剤シートがウェルプレート上面と密着で
きないものであるときはウェルプレート上面と密着する
ことができ水分を透過する内面フィルムとからなる、多
層ラミネートフィルムである。外面フィルムは更にその
外側に外面フィルムを保護するためのフィルムがラミネ
ートされることがある。
可塑性樹脂に練り込まれてフィルム状にされた乾燥剤シ
ートと、（２）水分を実質的に透過しない外面フィルム
と、（３）乾燥剤シートがウェルプレート上面と密着で
きないものであるときはウェルプレート上面と密着する
ことができ水分を透過する内面フィルムとからなる、多
層ラミネートフィルムである。外面フィルムは更にその
外側に外面フィルムを保護するためのフィルムがラミネ
ートされることがある。
【００１５】乾燥剤入りフィルムは、更に酸素吸収剤入
りフィルムを有する場合もある。酸素吸収剤入りフィル
ムを有する場合には、外面フィルムは水分及び酸素を実
質的に透過しないものであり、内面フィルムは水分透過
性及び酸素透過性のあるものである。
りフィルムを有する場合もある。酸素吸収剤入りフィル
ムを有する場合には、外面フィルムは水分及び酸素を実
質的に透過しないものであり、内面フィルムは水分透過
性及び酸素透過性のあるものである。
【００１６】乾燥剤シートは、乾燥剤として用いられる
塩化カルシウム、シリカゲル、モレキュラーシーブ、二
酸化珪素、アルミナ、ゼオライト等をＰＥ、ＰＰ、ＰＳ
等の熱可塑性であって水分を透過する高分子樹脂に練り
込んで通常のフィルム製造法により調製できる。乾燥剤
シートの例として、「モイスチャーガード」（東洋製缶
（株）製）、「ハイシート・ドライフィルム」（丸谷化
工機（株）製）がある。
塩化カルシウム、シリカゲル、モレキュラーシーブ、二
酸化珪素、アルミナ、ゼオライト等をＰＥ、ＰＰ、ＰＳ
等の熱可塑性であって水分を透過する高分子樹脂に練り
込んで通常のフィルム製造法により調製できる。乾燥剤
シートの例として、「モイスチャーガード」（東洋製缶
（株）製）、「ハイシート・ドライフィルム」（丸谷化
工機（株）製）がある。
【００１７】また、酸素吸収剤入りフィルムは、活性酸
化鉄、ピロガロール等の酸素吸収剤をＰＥ、ＰＰ、ＰＳ
等の熱可塑性であって酸素を透過する高分子樹脂に練り
込んで通常のフィルム製造法により、調製できる。酸素
吸収剤入りフィルムの例として、「オキシガード」（東
洋製缶（株）製）がある。
化鉄、ピロガロール等の酸素吸収剤をＰＥ、ＰＰ、ＰＳ
等の熱可塑性であって酸素を透過する高分子樹脂に練り
込んで通常のフィルム製造法により、調製できる。酸素
吸収剤入りフィルムの例として、「オキシガード」（東
洋製缶（株）製）がある。
【００１８】外面フィルムの例として、３００μｍ以上
のＰＥ、３００μｍ以上のＰＰ、１０μｍ以上のポリ塩
化ビニリデン（ＰＶＤＣ）、７μｍ以上のアルミニウム
箔などがある。また、水分及び酸素を実質的に透過しな
いフィルムの例として、１５μｍ以上のＰＶＤＣ、１５
μｍ以上のポリビニルアルコールの鹸化物、７μｍ以上
のアルミニウム箔などがある。
のＰＥ、３００μｍ以上のＰＰ、１０μｍ以上のポリ塩
化ビニリデン（ＰＶＤＣ）、７μｍ以上のアルミニウム
箔などがある。また、水分及び酸素を実質的に透過しな
いフィルムの例として、１５μｍ以上のＰＶＤＣ、１５
μｍ以上のポリビニルアルコールの鹸化物、７μｍ以上
のアルミニウム箔などがある。
【００１９】内面フィルムの例として、３０μｍ以下の
ＰＥ、ＰＰ、ＰＳフィルム及びＰＥ、ＰＰ、ＰＳを主と
し適当量の副材料を加えてフィルムとしたものがある。
内面フィルムの材質はウェルプレートとの熱シール適
性、熱シール後の剥がし易さなどを考慮して決められ
る。
ＰＥ、ＰＰ、ＰＳフィルム及びＰＥ、ＰＰ、ＰＳを主と
し適当量の副材料を加えてフィルムとしたものがある。
内面フィルムの材質はウェルプレートとの熱シール適
性、熱シール後の剥がし易さなどを考慮して決められ
る。
【００２０】外面フィルムを更に保護するためのフィル
ムの例として、１２μｍのポリエステル（ＰＥＴ）、１
２μｍのナイロンなどがある。
ムの例として、１２μｍのポリエステル（ＰＥＴ）、１
２μｍのナイロンなどがある。
【００２１】乾燥剤入りフィルムは、ウェルプレート上
面と密着してウェルを密封する。密着は、ウェルプレー
ト使用時に剥がすことができるようにしなければならな
い。
面と密着してウェルを密封する。密着は、ウェルプレー
ト使用時に剥がすことができるようにしなければならな
い。
【００２２】密着方法は糊付けでも良いし熱シールでも
良い。前述したように、内面フィルムは乾燥剤シートが
熱シールできるものであれば不要である。また、糊付け
する場合には、多くの場合乾燥剤シートに直接糊を塗布
するので、その場合には内面フィルムは不要である。
良い。前述したように、内面フィルムは乾燥剤シートが
熱シールできるものであれば不要である。また、糊付け
する場合には、多くの場合乾燥剤シートに直接糊を塗布
するので、その場合には内面フィルムは不要である。
【００２３】剥がすことが可能なように熱シールするた
めには、乾燥剤入りフィルムの内面とウェルプレート上
面とが異なる材料の熱可塑性樹脂であればよく、あるい
は、乾燥剤入りフィルム内面にホットメルト剤をコーテ
ィングすればよい。
めには、乾燥剤入りフィルムの内面とウェルプレート上
面とが異なる材料の熱可塑性樹脂であればよく、あるい
は、乾燥剤入りフィルム内面にホットメルト剤をコーテ
ィングすればよい。
【００２４】乾燥剤入りフィルムが糊付けされる場合に
は、ゴム系、アクリル系、あるいはビニルポリマーエー
テル系等の糊が使用される。
は、ゴム系、アクリル系、あるいはビニルポリマーエー
テル系等の糊が使用される。
【００２５】本発明のウェルプレートの材料として、Ｐ
Ｓの他、水分の透過を防ぐためにＰＥ、ＰＰ、ＰＥＴ、
ポリ塩化ビニル等の低透湿性材料を用いてもよい。ま
た、ウェルプレートの下面に水分の透過を防ぐためにア
ルミニウムなどの金属を蒸着したり、ＰＶＤＣ入り塗料
を塗布したり、あるいはウェルプレートの厚さを大にし
たりすることもある。アルミニウムの蒸着は特別の方法
を要しない。
Ｓの他、水分の透過を防ぐためにＰＥ、ＰＰ、ＰＥＴ、
ポリ塩化ビニル等の低透湿性材料を用いてもよい。ま
た、ウェルプレートの下面に水分の透過を防ぐためにア
ルミニウムなどの金属を蒸着したり、ＰＶＤＣ入り塗料
を塗布したり、あるいはウェルプレートの厚さを大にし
たりすることもある。アルミニウムの蒸着は特別の方法
を要しない。
【００２６】更に、ウェルプレートの下面あるいは側面
からの水分の透過を防ぐ目的で、アルミニウム箔入りフ
ィルム、例えば７０μｍのＰＥあるいはＰＰ／７μｍの
アルミニウム箔／１２μｍのＰＥＴをウェルプレートの
下面あるいは側面に熱シールすることもある。この熱シ
ールは使用時に容易に剥がすことができるようにするこ
とが望ましい。
からの水分の透過を防ぐ目的で、アルミニウム箔入りフ
ィルム、例えば７０μｍのＰＥあるいはＰＰ／７μｍの
アルミニウム箔／１２μｍのＰＥＴをウェルプレートの
下面あるいは側面に熱シールすることもある。この熱シ
ールは使用時に容易に剥がすことができるようにするこ
とが望ましい。
【００２７】ウェルプレートの材質、厚さの変更、ウェ
ルプレート下面あるいは側面の修飾等は酸素透過を防ぐ
ためにも有用である。
ルプレート下面あるいは側面の修飾等は酸素透過を防ぐ
ためにも有用である。
【００２８】また、水分及び酸素からウェルプレートを
完全に遮断するために、本発明のウェルプレートの１個
又は複数個をアルミニウム箔入りフィルム等の袋に入れ
ることもある。
完全に遮断するために、本発明のウェルプレートの１個
又は複数個をアルミニウム箔入りフィルム等の袋に入れ
ることもある。
【００２９】本発明のウェルプレートの免疫分析への使
用は、乾燥剤入りフィルムを剥がし、被検体を含むサン
プル液や対照溶液を各ウェルに添加し、通常の方法で免
疫反応を行わせればよい。
用は、乾燥剤入りフィルムを剥がし、被検体を含むサン
プル液や対照溶液を各ウェルに添加し、通常の方法で免
疫反応を行わせればよい。
【００３０】
［実施例１］「Ｆａｓｔｅｃ Ｕ Ｐｌａｔｅ」（富士
レビオ（株）製）の各ウェルに、抗ＨＢｓＡｇマウスモ
ノクローナル抗体／セレニウムコロイド−コンジュゲー
ト（ダイナボット（株）製「ダイナスクリーンＨＢｓＡ
ｇ」）１瓶を精製水１．５ｍＬで溶解したものを、２５
μＬずつピペットで分注した。これを試薬分注済みウェ
ルプレートとした。この試薬分注済みウェルプレートを
マイナス５０℃で３０分間予備凍結した後、マイナス５
０℃からマイナス５℃まで１２０分間かけて昇温し、マ
イナス５℃で１０時間保持、マイナス５℃から４０℃ま
で１２０分間かけて昇温、４０℃で１２０分間保持、４
０℃から２５℃まで３０分間で降温、２５℃で３０分間
保持することにより凍結乾燥した（プレートＡ）。
レビオ（株）製）の各ウェルに、抗ＨＢｓＡｇマウスモ
ノクローナル抗体／セレニウムコロイド−コンジュゲー
ト（ダイナボット（株）製「ダイナスクリーンＨＢｓＡ
ｇ」）１瓶を精製水１．５ｍＬで溶解したものを、２５
μＬずつピペットで分注した。これを試薬分注済みウェ
ルプレートとした。この試薬分注済みウェルプレートを
マイナス５０℃で３０分間予備凍結した後、マイナス５
０℃からマイナス５℃まで１２０分間かけて昇温し、マ
イナス５℃で１０時間保持、マイナス５℃から４０℃ま
で１２０分間かけて昇温、４０℃で１２０分間保持、４
０℃から２５℃まで３０分間で降温、２５℃で３０分間
保持することにより凍結乾燥した（プレートＡ）。
【００３１】別の試薬分注済みウェルプレートを真空デ
シケーター内に置き、真空ポンプで徐々に脱気した。完
全に脱気後、そのまま室温（２３〜２８℃）に１５時間
放置し真空乾燥した。完全に試薬が乾燥したのを目視で
確認後、ウェルプレートを真空デシケーターから取り出
した（プレートＢ）。
シケーター内に置き、真空ポンプで徐々に脱気した。完
全に脱気後、そのまま室温（２３〜２８℃）に１５時間
放置し真空乾燥した。完全に試薬が乾燥したのを目視で
確認後、ウェルプレートを真空デシケーターから取り出
した（プレートＢ）。
【００３２】プレートＡ及びプレートＢを、１２μｍの
ＰＥＴ／１５μｍのＡｌ／１１０μｍの乾燥剤入りＰＥ
／ＰＳシートで構成される乾燥剤入りフィルムで、１６
５℃の熱板によって０．７秒熱シールした。この乾燥剤
入りＰＥ／ＰＳシートには１ｍ2 当たり８ｇのゼオライ
トが練り込まれている。
ＰＥＴ／１５μｍのＡｌ／１１０μｍの乾燥剤入りＰＥ
／ＰＳシートで構成される乾燥剤入りフィルムで、１６
５℃の熱板によって０．７秒熱シールした。この乾燥剤
入りＰＥ／ＰＳシートには１ｍ2 当たり８ｇのゼオライ
トが練り込まれている。
【００３３】プレートＡ及びプレートＢの乾燥剤入りシ
ールを剥がし各ウェルに、１．６、３．１、６．３、１
２．５、２５ｎｇ／ｍＬのＨＢｓＡｇを添加した正常人
血清の各５０μＬずつ（ｎ＝２）を分注した。分注後２
分間放置しよく撹拌した。これらの各ウェルに、前記抗
ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体固定化シート（ダ
イナボット（株）製「ダイナスクリーンＨＢｓＡｇ」を
入れ、１５分後及び４０分後に判定を行った。
ールを剥がし各ウェルに、１．６、３．１、６．３、１
２．５、２５ｎｇ／ｍＬのＨＢｓＡｇを添加した正常人
血清の各５０μＬずつ（ｎ＝２）を分注した。分注後２
分間放置しよく撹拌した。これらの各ウェルに、前記抗
ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体固定化シート（ダ
イナボット（株）製「ダイナスクリーンＨＢｓＡｇ」を
入れ、１５分後及び４０分後に判定を行った。
【００３４】コントロールとして、上記試薬を入れてい
ない「Ｆａｓｔｅｃ Ｕ Ｐｌａｔｅ」の各ウェルに、
前記抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体／セレニウ
ムコロイド−コンジュゲート１瓶を精製水１．５ｍＬで
溶解したものを２５μＬ分注し、１．６，３．１，６．
３，１２．５，２５ｎｇ／ｍｌのＨＢｓＡｇを含む正常
人血清の各２５μＬを分注した。これらの対照ウェル
に、前記抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体固定化
シートを入れ、同様に１５分後及び４０分後に判定し
た。
ない「Ｆａｓｔｅｃ Ｕ Ｐｌａｔｅ」の各ウェルに、
前記抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体／セレニウ
ムコロイド−コンジュゲート１瓶を精製水１．５ｍＬで
溶解したものを２５μＬ分注し、１．６，３．１，６．
３，１２．５，２５ｎｇ／ｍｌのＨＢｓＡｇを含む正常
人血清の各２５μＬを分注した。これらの対照ウェル
に、前記抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体固定化
シートを入れ、同様に１５分後及び４０分後に判定し
た。
【００３５】表１に示すように、プレートＡ及びプレー
トＢは共に抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体／セ
レニウムコロイド−コンジュゲートの抗ＨＢｓＡｇ抗体
活性を保持していた。
トＢは共に抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体／セ
レニウムコロイド−コンジュゲートの抗ＨＢｓＡｇ抗体
活性を保持していた。
【００３６】
【表１】
【００３７】乾燥剤入りフィルムでの熱シール後のプレ
ートを、２〜８℃及び３０℃に保存し、１カ月後，３カ
月後及び６カ月後に抗ＨＢｓＡｇ抗体活性を調べた。
ートを、２〜８℃及び３０℃に保存し、１カ月後，３カ
月後及び６カ月後に抗ＨＢｓＡｇ抗体活性を調べた。
【００３８】保存後のプレートＡに、１．６，３．１，
６．３，１２．５，２５ｎｇ／ｍＬのＨＢｓＡｇを添加
した正常人血清を５０μＬずつ（ｎ＝２）を分注した。
６．３，１２．５，２５ｎｇ／ｍＬのＨＢｓＡｇを添加
した正常人血清を５０μＬずつ（ｎ＝２）を分注した。
【００３９】コントロールとして上記試薬を入れていな
い「Ｆａｓｔｅｃ Ｕ Ｐｌａｔｅ」の各ウェルに、前
記抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体／セレニウム
コロイド−コンジュゲート１瓶を精製水１．５ｍＬで溶
解したものを２５μＬ、１．６，３．１，６．３，１
２．５，２５ｎｇ／ｍｌのＨＢａＡｇを含む正常人血清
を２５μＬずつ分注した。以上のプレートは、分注後２
分間放置し、良く撹拌した。これらのウェルに、前記抗
ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体固定化シートを入
れ、その１５分後及び４０分後に判定した。
い「Ｆａｓｔｅｃ Ｕ Ｐｌａｔｅ」の各ウェルに、前
記抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体／セレニウム
コロイド−コンジュゲート１瓶を精製水１．５ｍＬで溶
解したものを２５μＬ、１．６，３．１，６．３，１
２．５，２５ｎｇ／ｍｌのＨＢａＡｇを含む正常人血清
を２５μＬずつ分注した。以上のプレートは、分注後２
分間放置し、良く撹拌した。これらのウェルに、前記抗
ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗体固定化シートを入
れ、その１５分後及び４０分後に判定した。
【００４０】結果は表２に示すとおりで、保存後のプレ
ートＡは保存前の抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗
体／セレニウムコロイド−コンジュゲートの抗ＨＢｓＡ
ｇ抗体活性を保持していた。
ートＡは保存前の抗ＨＢｓＡｇマウスモノクローナル抗
体／セレニウムコロイド−コンジュゲートの抗ＨＢｓＡ
ｇ抗体活性を保持していた。
【００４１】
【表２】
【００４２】［実施例２］トレポネーマ・パリダム（以
下ＴＰ）可溶化抗原を０．４％炭酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ９．８）で０．２μｇ／ｍＬになるように希釈し
た。これを「イムノプレート・ポリソルブＦ−９６」
（９６穴平底プレート：ヌンク社製）の各ウェルに、９
０μＬずつ分注し、蓋をして２〜８℃に１６時間放置し
た。ウェルの溶液を捨て、各ウェルにＴｗｅｅｎ２０を
０．１％含む０．９％塩化ナトリウム溶液（洗浄液）を
２００μＬずつ入れて洗浄し、洗浄液を捨てた。この洗
浄操作を２回繰り返した。吸い取り紙上で水を切った
後、真空デシケーター内で真空状態にして室温で２時間
乾燥した。このようにして得られたＴＰ抗原固定化プレ
ートを実施例１と同様の方法により乾燥剤入りフィルム
で熱シールした。
下ＴＰ）可溶化抗原を０．４％炭酸ナトリウム緩衝液
（ｐＨ９．８）で０．２μｇ／ｍＬになるように希釈し
た。これを「イムノプレート・ポリソルブＦ−９６」
（９６穴平底プレート：ヌンク社製）の各ウェルに、９
０μＬずつ分注し、蓋をして２〜８℃に１６時間放置し
た。ウェルの溶液を捨て、各ウェルにＴｗｅｅｎ２０を
０．１％含む０．９％塩化ナトリウム溶液（洗浄液）を
２００μＬずつ入れて洗浄し、洗浄液を捨てた。この洗
浄操作を２回繰り返した。吸い取り紙上で水を切った
後、真空デシケーター内で真空状態にして室温で２時間
乾燥した。このようにして得られたＴＰ抗原固定化プレ
ートを実施例１と同様の方法により乾燥剤入りフィルム
で熱シールした。
【００４３】乾燥前入りフィルム熱シール前後のプレー
トを用いて試料（ＴＰ抗原）の活性が保持されているか
否かを調べた。熱シールしたプレートの乾燥剤入りフィ
ルムを剥がした各ウェルに、陰性コントロール（正常人
血清）及び正常人血清で希釈したＴＰ抗体陽性血清を１
００μＬずつ分注し、３７℃で１時間インキュベートし
た。洗浄液２００μＬを各ウェルに入れて洗浄した。こ
の洗浄を３回行なった後、ペルオキシダーゼ標識抗ヒト
ＩｇＧヤギ抗体液を１００μＬ加えて３７℃で１時間イ
ンキュベートした。洗浄液２００μＬで各ウェルを３回
洗浄後、基質発色液（和光純薬（株）製２，２′−アジ
ノビス−（３−エチルベンゾチオアゾリン−６−スルホ
ン酸）（ＡＢＴＳ））を０．１％、過酸化水素を０．０
５％含む０．０５％クエン酸緩衝液）１００μＬを加え
て３７℃、３０分間インキュベートした。反応停止液
（１％フッ化ナトリウム、２％クエン酸を含む溶液）１
００μＬ加えて発色を停止し、発色停止後１０分以内に
４０５ｎｍにおける吸光度を測定した。
トを用いて試料（ＴＰ抗原）の活性が保持されているか
否かを調べた。熱シールしたプレートの乾燥剤入りフィ
ルムを剥がした各ウェルに、陰性コントロール（正常人
血清）及び正常人血清で希釈したＴＰ抗体陽性血清を１
００μＬずつ分注し、３７℃で１時間インキュベートし
た。洗浄液２００μＬを各ウェルに入れて洗浄した。こ
の洗浄を３回行なった後、ペルオキシダーゼ標識抗ヒト
ＩｇＧヤギ抗体液を１００μＬ加えて３７℃で１時間イ
ンキュベートした。洗浄液２００μＬで各ウェルを３回
洗浄後、基質発色液（和光純薬（株）製２，２′−アジ
ノビス−（３−エチルベンゾチオアゾリン−６−スルホ
ン酸）（ＡＢＴＳ））を０．１％、過酸化水素を０．０
５％含む０．０５％クエン酸緩衝液）１００μＬを加え
て３７℃、３０分間インキュベートした。反応停止液
（１％フッ化ナトリウム、２％クエン酸を含む溶液）１
００μＬ加えて発色を停止し、発色停止後１０分以内に
４０５ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００４４】乾燥剤入りフィルムでの熱シール前のプレ
ートを用いて同様の測定を行い対照とした。
ートを用いて同様の測定を行い対照とした。
【００４５】結果を表３に示す。乾燥剤入りフィルムで
の熱シール後もＴＰ抗原の活性の低下はみられなかっ
た。
の熱シール後もＴＰ抗原の活性の低下はみられなかっ
た。
【００４６】
【表３】
【００４７】熱シール後のプレートＣを、２〜８℃及び
３０℃に保存し、熱シールをしなかったプレートＤは、
シリカゲル５ｇとともにアルミニウム箔袋に入れて密封
し、２〜８℃に保存した。保存後１カ月後、３カ月後及
び６カ月後に固相化ＴＰ抗原の活性を調べた。
３０℃に保存し、熱シールをしなかったプレートＤは、
シリカゲル５ｇとともにアルミニウム箔袋に入れて密封
し、２〜８℃に保存した。保存後１カ月後、３カ月後及
び６カ月後に固相化ＴＰ抗原の活性を調べた。
【００４８】各プレートに、陰性コントロール（正常人
血清）及び正常人血清で希釈したＴＰ抗体陽性血清を１
００μＬ加えて蓋をし、３７℃で１時間インキュベート
した。
血清）及び正常人血清で希釈したＴＰ抗体陽性血清を１
００μＬ加えて蓋をし、３７℃で１時間インキュベート
した。
【００４９】洗浄液２００μＬを各ウェルに入れて洗浄
を３回行い、更にペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧヤ
ギ抗体液を１００μＬ加えて蓋をし、３７℃で１時間イ
ンキュベートした。
を３回行い、更にペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧヤ
ギ抗体液を１００μＬ加えて蓋をし、３７℃で１時間イ
ンキュベートした。
【００５０】洗浄液２００μＬを各ウェルに入れて３回
洗浄し、更に基質発色液（和光純薬ＡＢＴＳ０．１％及
び過酸化水素０．０５％を含む０．５％クエン酸緩衝
液）を１００μＬ加えて蓋をし、３７℃で３０分インキ
ュベートした。
洗浄し、更に基質発色液（和光純薬ＡＢＴＳ０．１％及
び過酸化水素０．０５％を含む０．５％クエン酸緩衝
液）を１００μＬ加えて蓋をし、３７℃で３０分インキ
ュベートした。
【００５１】反応停止液（１％フッ化ナトリウム、２％
クエン酸を含む溶液）を１００μＬ加えて発色を停止
し、それから１０分以内に４０５ｎｍの吸光度を測定し
た。結果は表４に示すとおりで、保存後のプレートＣ及
びプレートＤについて固定化ＴＰ抗原の活性低下は見ら
れなかった。
クエン酸を含む溶液）を１００μＬ加えて発色を停止
し、それから１０分以内に４０５ｎｍの吸光度を測定し
た。結果は表４に示すとおりで、保存後のプレートＣ及
びプレートＤについて固定化ＴＰ抗原の活性低下は見ら
れなかった。
【００５２】
【表４】
【００５３】
【発明の効果】予めウエルに試薬が添加されていて、保
存、運搬等が可能なウエルプレートを提供した。これに
より免疫分析操作が簡略化できる。
存、運搬等が可能なウエルプレートを提供した。これに
より免疫分析操作が簡略化できる。
Claims (1)
- 【請求項１】 ウェルプレートの各ウェルに乾燥した試
薬が入れられていて、各ウェルがウェルプレート上面に
おいて乾燥剤入りフィルムで密封されている免疫分析用
ウェルプレート。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30503396A JPH10142227A (ja) | 1996-11-15 | 1996-11-15 | 免疫分析用ウェルプレート |
| EP97912430A EP0947831A1 (en) | 1996-11-15 | 1997-11-12 | Welled plate for immunological analysis |
| CA002270068A CA2270068A1 (en) | 1996-11-15 | 1997-11-12 | Well plate for immunoassay |
| PCT/JP1997/004117 WO1998022823A1 (fr) | 1996-11-15 | 1997-11-12 | Plaque pour analyse immunologique comportant des cupules |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30503396A JPH10142227A (ja) | 1996-11-15 | 1996-11-15 | 免疫分析用ウェルプレート |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10142227A true JPH10142227A (ja) | 1998-05-29 |
Family
ID=17940296
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30503396A Pending JPH10142227A (ja) | 1996-11-15 | 1996-11-15 | 免疫分析用ウェルプレート |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0947831A1 (ja) |
| JP (1) | JPH10142227A (ja) |
| CA (1) | CA2270068A1 (ja) |
| WO (1) | WO1998022823A1 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002347714A (ja) * | 2001-05-28 | 2002-12-04 | Asahi Kasei Corp | 吸湿性フィルムを包装する方法 |
| JP2015232568A (ja) * | 2005-12-21 | 2015-12-24 | メソ スケール テクノロジーズ エルエルシー | アッセイ試薬を具備するアッセイモジュールとその製造方法およびその使用方法 |
| JP2018112556A (ja) * | 2005-12-21 | 2018-07-19 | メソ スケール テクノロジーズ エルエルシー | アッセイ試薬を具備するアッセイモジュールとその製造方法およびその使用方法 |
| US10794914B2 (en) | 2005-12-21 | 2020-10-06 | Meso Scale Technologies, Llc | Assay apparatuses, methods and reagents |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4608231A (en) * | 1984-12-12 | 1986-08-26 | Becton, Dickinson And Company | Self-contained reagent package device for an assay |
| JPS6246262A (ja) * | 1985-08-23 | 1987-02-28 | Eiken Kagaku Kk | 妊娠診断用乾燥試薬 |
| DE4013799A1 (de) * | 1990-04-28 | 1991-10-31 | Gaplast Gmbh | Behaelter und behaelterverschluss aus kunststoff, insbesondere fuer arznei- und genussmittel |
| FR2694809A1 (fr) * | 1992-08-11 | 1994-02-18 | Mikralgen | Dispositif réactionnel pour identifier un produit, et son procédé d'obtention. |
| PL179210B1 (pl) * | 1994-08-05 | 2000-08-31 | Smithkline Beecham Plc | Pojemnik z substancja wrazliwa na wilgoc PL PL PL PL |
| GB9505425D0 (en) * | 1995-03-17 | 1995-05-03 | Unilever Plc | Assay devices |
| JPH08268481A (ja) * | 1995-03-30 | 1996-10-15 | Toppan Printing Co Ltd | 試験片用保存安定剤シート及びそれを用いた包装体 |
-
1996
- 1996-11-15 JP JP30503396A patent/JPH10142227A/ja active Pending
-
1997
- 1997-11-12 CA CA002270068A patent/CA2270068A1/en not_active Abandoned
- 1997-11-12 EP EP97912430A patent/EP0947831A1/en not_active Withdrawn
- 1997-11-12 WO PCT/JP1997/004117 patent/WO1998022823A1/ja not_active Application Discontinuation
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002347714A (ja) * | 2001-05-28 | 2002-12-04 | Asahi Kasei Corp | 吸湿性フィルムを包装する方法 |
| JP2015232568A (ja) * | 2005-12-21 | 2015-12-24 | メソ スケール テクノロジーズ エルエルシー | アッセイ試薬を具備するアッセイモジュールとその製造方法およびその使用方法 |
| JP2018112556A (ja) * | 2005-12-21 | 2018-07-19 | メソ スケール テクノロジーズ エルエルシー | アッセイ試薬を具備するアッセイモジュールとその製造方法およびその使用方法 |
| US10794914B2 (en) | 2005-12-21 | 2020-10-06 | Meso Scale Technologies, Llc | Assay apparatuses, methods and reagents |
| US11300571B2 (en) | 2005-12-21 | 2022-04-12 | Meso Scale Technologies, Llc. | Assay apparatuses, methods and reagents |
| US11892455B2 (en) | 2005-12-21 | 2024-02-06 | Meso Scale Technologies, Llc. | Assay apparatuses, methods and reagents |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2270068A1 (en) | 1998-05-28 |
| EP0947831A1 (en) | 1999-10-06 |
| WO1998022823A1 (fr) | 1998-05-28 |
| EP0947831A4 (ja) | 1999-10-06 |
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