MX2008000734A - Anticuerpos neutralizadores humanos anti-b7rp1. - Google Patents

Abstract

Esta invencion proporciona los anticuerpos que interactuan con o que se enlazan a la proteina 1 relacionada a B7 humano (B7RP1) y los anticuerpos que se enlazan a y neutralizan la funcion de B7RP1. La invencion tambien proporciona las composiciones farmaceuticas de los anticuerpos y metodos para neutralizar la funcion de B7RP1 y particularmente para tratar trastornos inmunes (por ejemplo, respuesta inmune inapropiada) al administrar una cantidad farmaceuticamente efectiva de los anticuerpos anti- B7RP1. Se proporcionan tambien los metodos para tratar la cantidad de B7RP1 en una muestra, utilizando los anticuerpos anti- B7RP1.

Description

ANTICUERPOS NEUTRALIZADORES HUMANOS ANTI-B7RP1 CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a los anticuerpos monoclonales humanos que se enlazan a la proteína 1 relacionada a B7 (B7RP1) . Las composiciones y métodos para tratar enfermedades y trastornos relacionados a la inmunosupresión y a la activación inmune, son también descritos .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las células T inician la respuesta inmune, son mediadoras de las funciones efectoras específicas del antígeno, y regulan la actividad de otros leucocitos mediante secreción de citocinas. Para la generación de la respuesta inmune de linfocitos T (célula T) apropiada, deben ser proporcionadas dos señales a la célula T por las células presentadoras de antígeno (APC) . El antígeno debe ser presentado al receptor de la célula T (TCR) vía un complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) , en un evento que determina la especificidad. Las células T pueden únicamente reconocer el antigeno presentado sobre una APC. Además del receptor del antigeno, la activación apropiada de la célula T también requiere una interacción de otras moléculas de la superficie celular sobre la célula T y la APC. Estas REF. :189270 moléculas, denominadas como moléculas co-estimuladoras, consisten de un receptor sobre la célula correspondiente y un ligando presente sobre la célula inductora. Esta señal coestimuladora independiente del antigeno debe ser distribuida por el acoplamiento de los miembros de la familia B7 sobre la APC con sus receptores sobre las células T. Una respuesta inmune productora conduce a la proliferación, diferenciación, expansión clonal y función efectora. En ausencia de la segunda señal co-estimuladora, las células T sufren un estado de incapacidad de respuesta especifica del antígeno, de larga duración, denominada anergia. Los experimentos clínicos de fase II han demostrado que el bloqueo de una vía de coestimulación es eficaz en el tratamiento de la psoriasis (Abrams et al, 2000, J Exp Med. 192: 681-94; Abrams et al, 1999, J. Clin. Invest. 103: 1243-52) y la artritis reumatoide (Kremer et al, 2003, New England Journal of Medicine 342: 1907-15), indicando que esta estrategia general es un buen objetivo para la terapia inmunomoduladora. Una molécula B7 co-estimuladora particular, la proteína 1 relacionada a B7 (B7RP1), es una proteína transmembranal de tipo 1 con una secuencia de señal y un dominio extracelular en el extremo amino, un dominio extracelular que comprende dos bucles de Ig, un dominio transmembranal, y un dominio intracelular carboxilo-terminal (Solicitud del PCT Publicación No. WO 00/46240) . B7RP1 se enlaza preferentemente a ICOS (que significa "coestimulador inducible"; Yoshinga et al, 2000, Int. Immun. 12: 1439-1447) expresado sobre la superficie celular de las células T. ICOS juega un papel importante en la producción de las citocinas de tipo 1 y tipo 2 por las células T activadas (Coyle et al, 2000, Immunity 13: 95-105). B7RP1 es el único ligando expresado constitutivamente sobre las APCs (Yoshinaga et al, 1999, Nature. 402: 827-32), mientras que ICOS es expresado únicamente sobre las células T activadas (McAdam et al, 2000, Journal of Immunology 165: 5035-40). La señalización dependiente de B7RP1 es requerida para la activación de la célula T efectora (por ejemplo, completamente activada) , así como su maduración desde su precursor intacto (Dong et al, 2003, Journal of Autoimmunity. 21: 255-60; Coyle et al, 2000, Immunity. 13: 95-105). En consecuencia, la interacción B7RPI/IC0S es requerida para las respuestas inmunes de recuerdo o remembranza dependientes de células T, apropiadas (Dong et al, 2003, Journal of Autoimmunity. 21: 255-60). Los intentos actuales para interferir con la vía de las células T co-estimuladoras se han enfocado principalmente a los polipéptidos co-estimuladores que bloquean la activación de células T únicamente, pero no se han enfocado a la activación y a la maduración. En consecuencia, estas terapias proporcionan inhibición general de la función de las células T. En contraste, el bloqueo de la interacción B7RP1/IC0S proporciona una inhibición más específica de la función de las células T al afectar únicamente a las células T efectoras, maduras. De este modo, el bloqueo de la interacción B7RP1/IC0S en un panorama clinico es altamente deseable debido a que podria proporcionar un perfil de efecto colateral más limitado que las terapias de co-estimulación que bloquean la activación de células T intactas únicamente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención proporciona anticuerpos monoclonales que se enlazan a la proteina 1 relacionada B7 (B7RP1). En una modalidad, los anticuerpos monoclonales son anticuerpos monoclonales humanos que neutralizan las actividades biológicas de B7RP1 y son particularmente útiles para inhibir parcial o completamente la actividad co-estimuladora inmune de B7RP1. También son proporcionadas por la invención, particularmente células de hibridoma que producen los anticuerpos monoclonales de la invención. En aspectos particulares, los anticuerpos de la invención se enlazan específicamente a la región H o D de B7RP1 como se describe en la presente. La invención proporciona además las proteínas de fusión que comprenden las secuencias de una región Fc del anticuerpo y una o más secuencias identificadas como SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 40. Tales moléculas pueden ser preparadas utilizando métodos como se describe, por ejemplo, en la Solicitud de Patente Internacional, Publicación No. WO 00/24782, la cual se incorpora por referencia en la presente. Tales moléculas pueden ser expresadas, por ejemplo, en células de mamífero (por ejemplo células de Ovario de Hámster Chino) o células bacterianas (por ejemplo células de E . coli ) . En ciertos aspectos, la invención proporciona los anticuerpos que comprenden una cadena pesada y una cadena ligera, en donde la cadena pesada comprende una región constante de cadena pesada seleccionada de las regiones constantes de cadena pesada de IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA e IgE o cualquier variante alélica de las mismas (como se discute en Kabat et al, 1991, SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242) incorporada por referencia en la presente, y la región variable de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de la SEQ ID NO: 7 a la SEQ ID NO: 14, o un fragmento de inmunoglobulina de la misma, que se enlaza al antigeno o inmunológicamente funcional. Un anticuerpo de la invención comprende ya sea una secuencia de aminoácidos de la región constante de cadena pesada de IgG2 como se describe en la SEQ ID NO: 41, o bien un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo, o una secuencia de aminoácidos de la región constante de la cadena pesada de IgGl como se describe en la SEQ ID NO: 42, o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o un fragmento funcional del mismo. En ciertas modalidades, los anticuerpos son anticuerpos monoclonales, anticuerpos humanos, o preferentemente anticuerpos monoclonales humanos. En ciertos aspectos, la invención proporciona los anticuerpos que comprenden una cadena pesada y una cadena ligera, en donde la cadena ligera comprende una región constante que tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 43 o un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo, y la región variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de la SEQ ID NO: 1 a la SEQ ID NO: 6, o un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. En ciertas modalidades, los anticuerpos son anticuerpos monoclonales, anticuerpos humanos, o preferentemente anticuerpos monoclonales humanos. En ciertos aspectos, los anticuerpos de la invención comprenden una cadena pesada y una cadena ligera, en donde la región variable de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 7 o la SEQ ID NO: 8, o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o inmunológicamente funcional del mismo. En otros aspectos, la región variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 1 o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o inmunológicamente funcional del mismo. En ciertos aspectos, los anticuerpos de la invención comprenden una cadena pesada y una cadena ligera, en donde la región variable de la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 7 o la SEQ ID NO: 9, o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o inmunológicamente funcional del mismo. En otros aspectos, la región variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 2 o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antigeno o inmunológicamente funcional del mismo. En aspectos adicionales, la cadena pesada comprende al menos una región de determinación de la complementariedad (CDR) que tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 27 a la SEQ ID NO: 40, o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o inmunológicamente funcional del mismo. En aspectos adicionales, la cadena ligera comprende al menos una CDR que tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de la SEQ ID NO: 15 a la SEQ ID NO: 26, o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o inmunológicamente funcional del mismo. La invención también proporciona los anticuerpos que se enlazan específicamente a B7RP1, en donde la cadena pesada comprende una región variable que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 7 o la SEQ ID NO: 8, o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o inmunológicamente funcional del mismo, y la cadena ligera comprende una región variable que incluye una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 1, o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antigeno o inmunológicamente funcional del mismo. Además la invención proporciona los anticuerpos que se enlazan específicamente a B7RP1, en donde la cadena pesada comprende una región variable que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 9 o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antigeno o inmunológicamente funcional del mismo, y la cadena ligera comprende una región variable que incluye una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 2, o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antigeno o inmunológicamente funcional del mismo. En ciertos aspectos, la invención también proporciona los anticuerpos, que comprenden una cadena pesada y una cadena ligera, en donde la cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada, y en donde la región variable de cadena pesada comprende una secuencia que tiene al menos aproximadamente 75%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o al menos aproximadamente 99% de identidad a la secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 7 a la SEQ ID NO: 14, y en donde la cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera, y en donde la región variable de cadena ligera comprende una secuencia que tiene al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o al menos aproximadamente 99% de identidad a la secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de la SEQ ID NO: 1 a la SEQ ID NO: 6, en donde el anticuerpo se enlaza específicamente a B7RP1. La invención también proporciona los anticuerpos que se enlazan específicamente a B7RP1, en donde la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 44 o la SEQ ID NO: 45, o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o inmunológicamente funcional del mismo, y la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 45, o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o inmunológicamente funcional del mismo.

La invención también proporciona los anticuerpos que se enlazan específicamente a B7RP1, en donde la cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 47 o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antigeno o inmunológicamente funcional del mismo, y la cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 48, o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antigeno o inmunológicamente funcional del mismo. En ciertos aspectos, la invención también proporciona los anticuerpos, que comprenden una cadena pesada y una cadena ligera, en donde la cadena pesada comprende una región variable de cadena pesada, y en donde la región variable de cadena pesada comprende al menos una CDR que tiene una secuencia que tiene al menos aproximadamente 75%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o al menos aproximadamente 99% de identidad a la secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 27 a la SEQ ID NO: 40, y en donde la cadena ligera comprende una región variable de cadena ligera, y en donde la región variable de cadena ligera comprende al menos una CDR que tiene una secuencia de aminoácidos que tiene al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, al menos aproximadamente 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o al menos aproximadamente 99% de identidad a la secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de la SEQ ID NO: 15 a la SEQ ID NO: 26, en donde el anticuerpo se enlaza específicamente a B7RP1. La invención también proporciona anticuerpos de cadena simple, anticuerpos Fv de cadena simple, anticuerpos F(ab), anticuerpos F(ab)' y anticuerpos (Fab')2- En aspectos particulares, la invención proporciona una cadena ligera que incluye una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 15 a la SEQ ID NO: 26, o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o inmunológicamente funcional del mismo. Además, la invención proporciona una cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 27 o la SEQ ID NO: 40 o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antigeno o inmunológicamente funcional del mismo. La invención también se refiere a los anticuerpos humanos aislados que se enlazan específicamente a B7RP1, en donde el anticuerpo comprende: (a) las regiones estructurales de cadena pesada humanas, una región CDRl de cadena pesada humana, una región CDR2 de cadena pesada humana, y una región CDR3 de cadena pesada humana; y (b) las regiones estructurales de cadena ligera humanas, una región CDRl de cadena ligera humana, una región CDR2 de cadena ligera humana, y una región CDR3 de cadena ligera humana. En ciertos aspectos, la región CDRl de cadena pesada humana puede ser la región CDRl de cadena pesada como se muestra en cualquiera de las SEQ ID NOs: 27, 30 ó 35 y la región CDRl de cadena ligera humana puede ser la región CDRl de cadena ligera mostrada en cualquiera de las SEQ ID NOs: 15, 18 ó 24. En otros aspectos, la región CDR2 de cadena pesada humana puede ser la región CDR2 de cadena pesada como se muestra en cualquiera de las SEQ ID NOs: 28, 31, 33, 36 ó 39, y la región CDR2 de cadena ligera humana puede ser la CDR2 de cadena ligera como se muestra en cualquiera de las SEQ ID NOs: 16, 19 ó 21. En otros aspectos adicionales, la región CDR3 de cadena pesada humana es la región CDR3 de cadena pesada como se muestra en cualquiera de las SEQ ID NOs: 29, 32, 34, 37, 38 ó 40, y la región CDR3 de cadena ligera humana es la región CDR3 de cadena ligera como se muestra en cualquiera de las SEQ ID NOs: 17, 20, 22, 23, 25 ó 26. Los anticuerpos de la invención están caracterizados por la habilidad de enlazarse específicamente a B7RP1. Además, los anticuerpos de la invención tienen la capacidad para antagonizar al menos una de la actividad in vi tro y/o in vivo asociada con los polipéptidos B7RP1. La invención proporciona los anticuerpos humanos aislados anti-B7RP1 humano con enlace de alta afinidad a los polipéptidos B7RP1, en donde los anticuerpos se enlazan a un polipéptido B7RP1 humano y se disocia del polipéptido B7RP1 humano con una constante de disociación (KD) de aproximadamente 10~6 M, 10"7 M, 10"8 M, 10"9 M, 10"10 M, 10"11 M, 10"12 M o menos, como se determina utilizando KinExA, o que muestran supervivencia inducida por B7RP1 en un ensayo de neutralización in vi tro con una EC50 de aproximadamente 10"6 M, 10"7 M, 10~8 M, 10"9 M, 10"10 M, 10"11 M, 10~12 M o menos. La invención también proporciona los anticuerpos humanos aislados o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o inmunológicamente funcional del mismo que se enlazan específicamente a B7RP1, en donde los anticuerpos o fragmentos comprenden una región variable de cadena pesada que comprende una CDRl, CDR2 y CDR3 de cadena pesada, en donde: a) la CDRl de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 27, la CDR2 de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 28, y la CDR3 de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 29; b) la CDRl de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 23, la CDR2 de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 31, y la CDR3 de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 32; c) la CDRl de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 27, la CDR2 de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 33, y la CDR3 de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 34; d) la CDRl de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 35, la CDR2 de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 26, y la CDR3 de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 37; e) la CDRl de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 27, la CDR2 de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 33, y la CDR3 de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 38; f) la CDRl de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 35, la CDR2 de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 39, y la CDR3 de cadena pesada tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 40; La invención también proporciona los anticuerpos humanos aislados o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o inmunológicamente funcional del mismo que se enlazan específicamente a B7RP1, en donde los anticuerpos o fragmentos comprenden una región variable de cadena ligera que comprende una CDRl, CDR2 y CDR3 de cadena ligera, en donde : a) la CDRl de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 15, la CDR2 de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 16, y la CDR3 de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 17; b) la CDRl de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 18, la CDR2 de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 19, y la CDR3 de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 20; c) la CDRl de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 15, la CDR2 de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 21, y la CDR3 de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 22; d) la CDRl de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 18, la CDR2 de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 19, y la CDR3 de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 23; e) la CDRl de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 24, la CDR2 de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 16, y la CDR3 de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 25; f) la CDRl de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 24, la CDR2 de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 16, y la CDR3 de cadena ligera tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID NO: 26; La invención también proporciona los anticuerpos que compiten con el enlace de los anticuerpos descritos en la presente a B7RP1. En ciertos aspectos, un anticuerpo competitivo de la invención compite con el enlace de un anticuerpo que comprende cualquiera de la SEQ ID NO: 1-40 a B7RP1 humano. También, parte de la invención son las secuencias polinucleotídicas que codifican para los anticuerpos humanos anti-B7RPl humano, los vectores que comprenden las secuencias polinucleotídicas que codifican para los anticuerpos humanos anti-B7RPl humano, las células hospederas transformadas con los vectores que incorporan los polinucleótidos que codifican para los anticuerpos humanos anti-B7RPl humano, las formulaciones que comprenden los anticuerpos humanos anti-B7RP1 humano, y los métodos de elaboración y uso de los mismos . La invención también proporciona los métodos para detectar B7RP1 en una muestra biológica, que comprende el paso de poner en contacto la muestra con un anticuerpo de la invención, o el fragmento de enlace al antígeno del mismo. Un anticuerpo anti-B7RPl de la invención puede ser empleado en cualquier método de ensayo conocido, tal como los ensayos de enlace competitivos, los ensayos de emparedado directo e indirecto, los ensayos de inmunoprecipitación y los ensayos inmunosorbentes ligados a enzima (ELISA) (Ver Sola, 1987, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158, CRC Press, Inc.) para la detección y cuantificación de B7RP1. Los anticuerpos pueden enlazarse a B7RP1 con una afinidad que es apropiada para el método de ensayo que es empleado. Además, la invención proporciona los métodos para tratar una enfermedad asociada con la producción incrementada de B7RP1, la sensibilidad incrementada a B7RP1, y/o las enfermedades relacionadas para controlar las respuestas de células T, que comprende el paso de administrar una cantidad farmacéuticamente efectiva de una composición farmacéutica que comprende al menos un anticuerpo de la invención o un fragmento de inmunoglobulina de enlace al antígeno o inmunológicamente funcional del mismo, a un individuo en necesidad del mismo. Las modalidades de la invención se volverán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada y las reivindicaciones.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1A describe la secuencia de la región variable del anticuerpo 16H (SEQ ID NO: 7) y la secuencia de linea germinal de línea variable 16H correspondiente (16Hg) (SEQ ID NO: 8) . La Figura IB describe los resultados de los ensayos de co-estimulación utilizando anti-CD3 y la proteína de fusión hB7RPl-Fc, demostrando que 16Hg conserva sus actividades biológicas en comparación con 16H. La Figura 2 muestra los resultados de los ensayos de enlace Biacore® con los anticuerpos 16H, 16Hg y 5D. La Figura 3 muestra los resultados del ensayo de enlace KinExA con el anticuerpo 5D. La Figura 4 muestra los resultados del ensayo de enlace KinExA con el anticuerpo 2H. La Figura 5 muestra los resultados del ensayo de enlace KinExA con el anticuerpo de linea germinal 2H (2Hg) . La Figura 6 describe los resultados de los ensayos de competencia de enlace que muestran que el anticuerpo 16H compite con el enlace de ICOS-Fc sobre B7RP1, analizado mediante citometría de flujo. La Figura 7 describe un sumario de un análisis de polimorfismo de nucleótido simple B7RP-1 (SNP) . La Figura 8 describe un sumario del análisis de un grupo de anticuerpos monoclonales anti-B7RP-l humano en ensayos de competencia de ELISA. Los valores mostrados son las IC5o para la inhibición del enlace de una proteína de fusión ICOS-Fc. La Figura 9A muestra la tinción fluorescente del dominio extracelular de B7RP1 (ECD) con los anticuerpos 16H, 5D e ICOS marcados. La Figura 9B muestra la eficacia de enlace similar de los anticuerpo 16H y 5D a una variante SNP de B7RP1. La Figura 9C describe los resultados de los ensayos de co-estimulación con los anticuerpos 16H o 5D y las variantes de SNP. La Figura 10A muestra los resultados del ensayo de co-estimulación en placa con anticuerpos monoclonales 1B7V2 en comparación con un número de diferentes anticuerpos monoclonales anti-B7RP-l murino. Las Figuras 10B, 10C y 10D muestran los resultados de los experimentos de reto de antígeno, analizados para la IgM sérica especifica del antígeno (Figura 10B) , IgG2a (Figura 10C) e IgGl (Figura 10D) . La Figura 11 describe los resultados de ELISA que demuestran que los niveles de IL-5 en suero son reprimidos por los anticuerpos 1B7V2. La Figura 12A muestra que los anticuerpos 16H pueden enlazarse a B7RP1 de mono cynomolgus (panel derecho) y a B7RP1 de humano (panel izquierdo) . La Figura 12B muestra que los anticuerpos 16H, 15Hg y 5D pueden inhibir la activación de células T dependiente de B7RP1/ICOS de mono cynomolgus. La Figura 13A describe los valores de los títulos medios de monos cynomolgus individuales y grupales en el día 53 y el día 57 después del reto secundario con el toxoide tetánico en el día 42, en animales tratados con anticuerpos 16H. La Figura 13B describe los valores de los títulos medios de monos cynomolgus individuales y grupales en el día 53 y el día 57 después del reto secundario con el toxoide tetánico en el día 42, en animales tratados con anticuerpos 5D.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los encabezados de sección utilizados en la presente son para fines organizacionales únicamente y no deben ser considerados como limitantes de la materia de interés descrita. Todas las referencias citadas en esta solicitud son expresamente incorporadas por referencia en la presente para cualquier propósito.

Definiciones Pueden ser utilizadas técnicas convencionales para ADN recombinante, sintesis de oligonucleótidos, y cultivo y transformación de tejidos (por ejemplo, electroporación, lipofección) . Las reacciones enzimáticas y las técnicas de purificación pueden ser realizadas de acuerdo con las especificaciones del fabricante o como es comúnmente logrado en la técnica o como se describe en la presente. Las técnicas y procedimientos anteriores pueden ser en general realizados de acuerdo con los métodos bien conocidos en la materia y como se describe en diversas referencias generales y más específicas que son citadas y discutidas a todo lo largo de la presente especificación. Ver, por ejemplo, Sambrook et al, 2001, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 3a ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., la cual se incorpora por referencia en la presente para cualquier propósito. A no ser que se proporcionen definiciones específicas, la nomenclatura utilizada en conexión con, y las técnicas de laboratorio y técnicas de, química analítica, química orgánica sintética, y química medicinal y farmacéutica descritas en la presente, son aquellas bien conocidas y comúnmente utilizadas en la materia. Similarmente, las técnicas convencionales pueden ser utilizadas para la síntesis química, análisis químico, preparación farmacéutica, formulación, y distribución y tratamiento de pacientes. Como se utiliza de acuerdo con la presente descripción, se entenderá que los siguientes términos, a no ser que se indique de otro modo, tendrán los siguientes significados. Las frases "propiedad biológica", "característica biológica" y el término "actividad" en referencia a un anticuerpo de la presente invención son utilizados intercambiablemente en la presente e incluyen, pero no están limitados a, afinidad de epitopo y especificidad (por ejemplo, el anticuerpo humano anti-B7RPl humano que se enlaza a B7RP1 humano) , la habilidad para antagonizar la actividad del polipéptido objetivo (por ejemplo, la actividad de B7RP1) , la estabilidad in vivo del anticuerpo, y las propiedades inmunogénicas del anticuerpo. Otras propiedades biológicas identificables o características de un anticuerpo reconocido en la técnica incluyen, por ejemplo, reactividad cruzada (por ejemplo, con homólogos no humanos de B7RP1, o con otras proteinas o tejidos, en general), y la habilidad para preservar altos niveles de expresión de la proteína en células de mamífero. Las propiedades o características anteriormente mencionadas pueden ser observadas o medidas utilizando técnicas reconocidas en la materia que incluyen, pero no están limitadas a ELISA, ELISA competitivo, análisis de resonancia de plasmón superficial, ensayos de neutralización in vi tro e in vivo (por ejemplo, Ejemplo 2), e inmunohistoquímica con secciones tisulares de diferentes fuentes incluyendo fuentes de humanos, primates o cualquier otra fuente apropiada. Las actividades y propiedades biológicas particulares de los anticuerpos humanos anti-B7RPl humano son descritos con detalle adicional en los siguientes ejemplos. El término "polinucleótido aislado" como se utiliza en la presente, significará un polinucleótido de ADN genómico, ADNc, ARN o de origen sintético o alguna combinación de los mismos, que en virtud de su origen el polinucleótido aislado (1) no está asociado con toda o una porción de un polinucleótido con el cual el polinucleótido aislado es encontrado en la naturaleza, (2) es ligado a un polinucleótido al cual éste no está enlazado a la naturaleza, o (3) no aparece en la naturaleza como parte de una secuencia más grande. El término "polinucleótido" como se hace referencia en la presente, significa los polímeros de ácido nucleico de una sola hebra o de doble hebra de al menos 10 nucleótidos de longitud. En ciertas modalidades, los nucleótidos que comprenden el polinucleótido pueden ser ribonucleótidos o desoxirribonucleótidos o una forma modificada de cualquier tipo de nucleótido. Dichas modificaciones incluyen las modificaciones de base tales como bromouridina, modificaciones de ribosa tales como arabinósido y 2 ',3'-desoxirribosa y modificaciones de enlace internucleotídico tales como fosforotioato, fosforoditioato, fosforoselenoato, fosforodiselenoato, fosforoanilotioato, fosforaniladato y fosforoamidato. El término "polinucleótido" incluye específicamente las formas de una sola hebra y de doble hebra de ADN o del ARN. El término "oligonucleótido" referido en la presente incluye los nucleótidos de origen natural y modificados, enlazados entre si por enlaces oligonucleotídicos de origen natural y/o no de origen natural. Los oligonucleótidos son un subgrupo de polinucleótidos que comprenden miembros que son en general de una sola hebra y tienen una longitud de 200 nucleótidos o menos. En ciertas modalidades, los oligonucleótidos son de 10 a 60 nucleótidos de longitud. En ciertas modalidades, los oligonucleótidos son de 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, ó 20 a 40 nucleótidos de longitud. Los oligonucleótidos pueden ser de una sola hebra o de doble hebra, por ejemplo, para el uso en la construcción de un mutante genético. Los oligonucleótidos de la invención pueden ser oligonucleótidos en sentido o antisentido con referencia a una secuencia que codifica para la proteina. El término "nucleótidos de origen natural" incluye los desoxirribonucleótidos y ribonucleótidos. El término "nucleótidos modificados" incluye los nucleótidos con grupos azúcar modificados o sustituidos y similares. El término "enlaces oligonucleotídicos" incluye los enlaces oligonucleotídicos tales como fosforotioato, fosforoditioato, fosforoselenoato, fosforodiselenoato, fosforoanilotioato, fosforaniladato, fosforoamidato y similares. Ver, por ejemplo, LaPlanche et al., 1986, Nucí. Acids Res., 14: 9081; Stec et al, 1984, J. Am. Chem. Soc, 106: 6077; Stein et al, 1988, Nucí. Acids Res., 16: 3209; Zon et al, 1991, Anti-Cancer Drug Design, 6: 539; Zon et al, 1991, OLIGONUCLEOTIDES AND ANALOGUES: A PRACTICAL APPROACH, pp . 87-108 (F. Eckstein, Ed.), Oxford University Press, Oxford England; Stec et al, Patente de los Estados Unidos No. 5,151,510; Uhlmann y Peyman, 1990, Chemical Reviews, 90: 543, las descripciones de las cuales se incorporan por referencia en la presente para cualquier propósito. Un oligonucleótido puede incluir un marcador detectable para hacer posible la detección del oligonucleótido o la hibridación del mismo.

El término "proteina aislada" referido en la presente significa que una proteína objetivo (1) está libre de al menos algunas otras proteinas con las cuales éste sería encontrado en la naturaleza, (2) está esencialmente libre de otras proteinas de la misma fuente, por ejemplo, de la misma especie, (3) es expresado por una célula proveniente de una especie diferente, (4) ha sido separado de al menos aproximadamente 50% de los polinucleótidos, lípidos, carbohidratos u otros materiales con los cuales está asociado en la naturaleza, (5) no está asociado (por interacción covalente o no covalente) con porciones de una proteína con las cuales la "proteína aislada" está asociada en la naturaleza, (6) está operablemente asociado (por interacción covalente o no covalente) con un polipéptido con el cual éste no está asociado en la naturaleza, o (7) no aparece en la naturaleza. Tal proteína aislada puede ser codificada por ADN genómico, ADNc, mARN u otro ARN, de origen sintético, o cualquier combinación de los mismos. En una modalidad, la proteína aislada está sustancialmente aislada libre de proteínas o polipéptidos u otros contaminantes que son encontrados en su ambiente natural que podría interferir con su uso (terapéutico, de diagnóstico, profiláctico, de investigación o de otro modo) . Un anticuerpo "aislado" es uno que ha sido identificado y separado y/o recuperado de un componente de su ambiente natural. Los componentes contaminantes de su ambiente natural son materiales que podrían interferir con los usos diagnósticos o terapéuticos para el anticuerpo, y pueden incluir enzimas, hormonas y otras sustancias proteicas o no proteicas. En ciertas modalidades, el anticuerpo es purificado (1) a más de 95% o más de 99% en peso del anticuerpo como es determinado por el método de Lowry, (2) a un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de la secuencia de aminoácidos N-terminal o interna mediante el uso de un secuenciador de copa giratoria, o (3) hasta la homogeneidad mediante SDS-PAGE bajo condiciones reductoras o no reductoras utilizando azul de Coomassie o tinción de plata. El anticuerpo aislado incluye el anticuerpo in si tu dentro de las células recombinantes ya que al menos un componente del ambiente natural del anticuerpo no estará presente. Los términos "polipéptido" o "proteína" significan las moléculas que tengan la secuencia de proteínas nativas, es decir, proteínas producidas por células de origen natural y específicamente no recombinantes, o células manipuladas por ingeniería genética o recombinantes, y comprenden moléculas que tienen la secuencia de aminoácidos de la proteína nativa, o moléculas que tienen supresiones de, adiciones a, y/o sustituciones de uno o más aminoácidos de la secuencia nativa. Los términos "polipéptido" y "proteina" abarcan específicamente los anticuerpos anti-B7RPl o las secuencias que tienen supresiones de, adiciones a, y/o sustituciones de uno o más aminoácidos de un anticuerpo anti-B7RPl. El término "fragmento de polipéptido" se refiere a un polipéptido que tiene una supresión amino-terminal, una supresión carboxilo-terminal y/o una supresión interna. En ciertas modalidades, los fragmentos son al menos 5 a aproximadamente 500 aminoácidos de longitud. Se apreciará que en ciertas modalidades, los fragmentos son al menos de 5, 6, 8, 10, 14, 20, 50, 70, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400, ó 450 aminoácidos de longitud. Los fragmentos polipeptidicos particularmente útiles incluyen dominios funcionales, incluyendo dominios de enlace particularmente dominios de enlace al antígeno, especialmente en donde el antígeno es un epitopo de B7RP1 humano. En el caso de un anticuerpo anti-B7RPl, los fragmentos útiles incluyen pero no están limitados a una región de CDR, un dominio variable de una cadena pesada o ligera, una porción de una cadena de anticuerpo o solo su región variable que incluye dos CDRs, y similares. El término "agente de enlace específico" se refiere a una molécula de origen natural o de origen no natural que se enlaza específicamente a un objetivo. Los ejemplos de agentes de enlace específicos incluyen, pero no están limitados a, proteínas, péptidos, ácidos nucleicos, carbohidratos y lipidos. En ciertas modalidades, un agente de enlace específico es un anticuerpo. El término "agente de enlace específico a B7RP1" se refiere a un agente de enlace específico que se enlaza específicamente a cualquier porción de B7RP1. En ciertas modalidades, un agente de enlace específico a B7RP1 es un anticuerpo que se enlaza específicamente a B7RP1. A manera de ejemplo, un anticuerpo "se enlaza específicamente" a un objetivo si el anticuerpo, cuando está marcado, puede ser competido de su objetivo por el anticuerpo no marcado correspondiente. El término "fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional" como se utiliza en la presente, se refiere a un fragmento de polipéptido que contiene al menos las CDRs de las cadenas pesada y ligera de inmunoglobulina. Un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional de la invención es capaz de enlazarse a un antígeno. En ciertas modalidades, el antígeno es un ligando que se enlaza específicamente a un receptor. En estas modalidades, el enlace de un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional de la invención previene el enlace del ligando a su receptor, interrumpiendo la respuesta biológica resultante del enlace del ligando al receptor. En una modalidad, el fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional de la invención, se enlaza específicamente a B7RP1. Preferentemente, el fragmento se enlaza específicamente a B7RP1 humano. El término "de origen natural" o "nativo" como se utiliza en la presente, y aplicado a un objetivo se refiere al hecho de que el objetivo puede ser encontrado en la naturaleza. Por ejemplo, un polipéptido o secuencia polinucleotídica que está presente en un organismo (incluyendo virus) que puede ser aislado de una fuente en la naturaleza y que no ha sido intencionalmente modificado por el hombre es de origen natural. El término "no de origen natural" o "no nativo" como se utiliza en la presente se refiere a un material que no es encontrado en la naturaleza o que es estructuralmente modificado o sintetizado por el hombre. Por ejemplo, "de origen no natural" puede referirse a una variante, tal como una variante de polinucleótido que puede ser producida utilizando técnicas de mutagénesis conocidas en la materia, o una variante polipeptídica producida mediante tal variante polinucleotídica. Tales variantes incluyen, por ejemplo, aquellas producidas por sustituciones, supresiones o adiciones de nucleótidos que pueden involucrar uno o más nucleótidos. Las variantes de polinucleótido pueden ser alteradas en las regiones de codificación o no codificación, o ambas. Las alteraciones en las regiones de codificación pueden producir sustituciones, supresiones o adiciones de aminoácidos conservadoras o no conservadoras. Especialmente algunas de entre éstas son sustituciones, adiciones, supresiones y sustituciones conservadoras silenciosas, las cuales no alteran las propiedades y actividades de un anticuerpo para B7RP1 de la invención. Una persona experta en la técnica puede determinar fácilmente cómo generar tal variante utilizando métodos bien conocidos en la materia. El término "operablemente enlazado" significa que los componentes a los cuales es aplicado el término están en una relación que les permite llevar a cabo sus funciones inherentes bajo condiciones adecuadas. Por ejemplo, una secuencia de control "operablemente enlazada" a una secuencia de codificación de la proteína es ligada a ésta de modo que la expresión de la secuencia que codifica para la proteína es lograda bajo condiciones compatibles con la actividad transcripcional de las secuencias de control. El término "secuencia de control" como se utiliza en la presente, se refiere a las secuencias polinucleotídicas que pueden efectuar la expresión, procesamiento o localización intracelular de las secuencias de codificación a las cuales éstas están operablemente enlazadas. La naturaleza de tales secuencias de control puede depender del organismo hospedero. En modalidades particulares, las secuencias de control para los procariotes pueden incluir un promotor, sitio de enlace ribosomal, y secuencia de terminación de la transcripción. En otras modalidades particulares, las secuencias de control para los eucariotes pueden incluir promotores que comprenden uno o una pluralidad de sitios de reconocimiento para los factores de transcripción, secuencias aumentadoras de la transcripción, secuencias de terminación de la transcripción y secuencias de poliadenilación. En ciertas modalidades, las "secuencias de control" pueden incluir secuencias guía y/o proteínas socias de fusión. El término "vector" incluye una molécula de ácido nucleico capaz de llevar dentro de una célula otro ácido nucleico al cual éste ha sido enlazado. Un tipo de vector es un "plásmido" que se refiere a un bucle de ADN circular de doble hebra dentro del cual pueden ser ligados segmentos de ADN adicionales. Otro tipo de vector es un vector viral, en donde los segmentos de adicionales de ADN pueden ser ligados dentro del genoma viral. Ciertos vectores son capaces de realizar la replicación autónoma en una célula hospedera dentro de la cual éstos son introducidos (por ejemplo, vectores bacterianos que tienen un origen bacteriano de replicación y vectores de mamífero episomales) . Otros vectores (por ejemplo, vectores de mamífero no episomales) pueden ser integrados dentro del genoma de una célula hospedera después de la introducción en la célula hospedera, y con esto son replicados junto con el genoma del hospedero.

Además, ciertos vectores son capaces de dirigir la expresión de los genes a los cuales éstos son operablemente ligados. Tales vectores son denominados en la presente como "vectores de expresión recombinante" o simplemente "vectores de expresión". En general, los vectores de expresión útiles en la práctica de las técnicas de ADN recombinante están a menudo en la forma de plásmidos. En la presente especificación, "plásmido" y "vector" pueden ser utilizados intercambiablemente ya que el plásmido es la forma de vector más comúnmente utilizada. No obstante, la invención está destinada a incluir otras formas tales de vectores de expresión, tales como los vectores virales (por ejemplo, retrovirus defectuosos en replicación, adenovirus y virus adeno-asociados), los cuales sirven funciones equivalentes. La frase "célula hospedera recombinante" (o simplemente "célula hospedera") incluye una célula dentro de la cual ha sido introducido un vector de expresión recombinante. Podrá ser comprendido por aquellos expertos en la técnica que tales términos están destinados a referirse no solamente a la célula objetivo particular sino también a la progenie de tal célula. Debido a que ciertas modificaciones pueden ocurrir en generaciones subsecuentes debido ya sea a mutación o influencias ambientales, tal progenie de hecho puede no ser idéntica a la célula progenitora, pero son todavía incluidas dentro del alcance del término "célula hospedera" como se utiliza en la presente. Una amplia variedad de sistemas de expresión hospederos pueden ser utilizados para expresar los anticuerpos de la presente invención incluyendo sistemas de expresión bacterianas, de levadura, baculovirales y de mamífero (así como los sistemas de expresión de visualización de fago). Un ejemplo de un vector de expresión bacteriano adecuado es pUC19. Para expresar un anticuerpo recombinantemente, una célula hospedera es transfectada con uno o más vectores de expresión recombinantes que poseen fragmentos de ADN que codifican para las cadenas ligera y pesada de inmunoglobulina del anticuerpo, tal que las cadenas ligera y pesada son expresadas en la célula hospedera y pueden ser secretadas hacia el medio en el cual las células hospederas son cultivadas, de cuyo medio pueden ser recuperados los anticuerpos. Las metodologías estándares de ADN recombinantes son utilizadas para obtener genes de las cadenas pesadas y ligeras del anticuerpo, incorporar estos genes dentro de vectores de expresión recombinantes e introducir los vectores dentro de las células hospederas, tales como aquellos descritos en Sambrook et al, 2001, MOLECULAR CLONING, A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratories, Ausubel, F.M. et al. (eds.), CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, Greene Publishing Associates, (1989) y Patente de los Estados Unidos No. 4,816,397 a Boss et al.

El término "transducción" es utilizado para referirse a la transferencia de genes de una bacteria hacia otra, usualmente por un fago. "Transducción" también se refiere a la adquisición y transferencia de secuencias celulares eucarióticas por retrovirus. El término "transfección" se utiliza para referirse a la captación o absorción de ADN extraño o exógeno por una célula, y una célula ha sido "transfectada" cuando el ADN exógeno ha sido introducido dentro de la membrana celular. Un número de técnicas de transfección son bien conocidas en la materia y son descritas en la presente. Ver, por ejemplo, Graham et al, 1973, Virology 52: 456; Sambrook et al, 2001, MOLECULAR CLONING, A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratories; Davis et al, 1986, BASIC METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, Elsevier; y Chu et al, 1981, Gene 13: 197. Tales técnicas pueden ser utilizadas para introducir una o más porciones de ADN exógenas dentro de las células hospederas adecuadas . El término "transformación" como se utiliza en la presente, se refiere a un cambio en las características genéticas de una célula, y una célula ha sido transformada cuando ésta ha sido modificada para contener un ADN nuevo. Por ejemplo, una célula es transformada donde ésta es genéticamente modificada a partir de su estado nativo. Después de la transfección o transducción, el ADN transformante puede recombinarse con el ADN proveniente de la célula mediante la integración fisica dentro de un cromosoma, de la célula, o puede ser mantenido transitoriamente como un elemento episomal sin ser replicado, o puede replicarse independientemente como un plásmido. Se considera que una célula ha sido establemente transformada cuando el ADN es replicado con la división de la célula. El término "antigeno" se refiere a una molécula o una porción de una molécula capaz de ser enlazada por un agente de enlace selectivo, tal como un anticuerpo, y adicionalmente capaz de ser utilizado en un animal para producir anticuerpos capaces de enlazarse a un epitopo de ese antígeno. Un antígeno puede tener uno o más epitopos. En ciertas modalidades, las variantes del anticuerpo incluyen variantes de glucosilación en donde el número y/o tipo de sitio de glucosilación ha sido alterado en comparación a las secuencias de aminoácidos del polipéptido progenitor. En ciertas modalidades, las variantes de proteína comprenden un número mayor o menor de sitios de glucosilación N-enlazados que la proteína nativa. Un sitio de glucosilación N-enlazado está caracterizado por la secuencia: Asn- Xaa-Ser o Asn-Xaa-Thr, en donde el residuo de aminoácidos designado como Xaa puede ser cualquier residuo de aminoácidos excepto la prolina. La sustitución de los residuos de aminoácido para crear esta secuencia proporciona un nuevo sitio potencial para la adición de una cadena de carbohidrato N-enlazada. Alternativamente, las sustituciones que eliminan esta secuencia eliminarán una cadena de carbohidrato N-enlazada existente. También proporciona un reacomodo de las cadenas de carbohidrato N-enlazadas en donde uno o más sitios de glucosilación N-enlazados (típicamente aquellos que son de origen natural) son eliminados y uno o más nuevos sitios N-enlazados son creados. Las variantes de anticuerpo adicionales incluyen variantes de cisteína en donde uno o más residuos de cisteína son suprimidos de o sustituidos por otra (por ejemplo, serina) en comparación a la secuencia de aminoácido progenitora. Las variantes de cisteína pueden ser útiles cuando los anticuerpos pueden ser replegados en una conformación biológicamente activa tal como después del aislamiento de los cuerpos de inclusión insolubles. Las variantes de cisteína tienen en general menos residuos de cisteína que la proteína nativa, y típicamente tienen un número par para reducir al mínimo las interacciones resultantes de las cisteínas no apareadas. En modalidades adicionales, las variantes de anticuerpo pueden incluir anticuerpos que comprenden un fragmento Fc modificado o una región constante de cadena pesada modificada. Un fragmento Fc, el cual significa "fragmento que cristaliza", o una región constante de cadena pesada puede ser modificado mediante mutación para conferir a un anticuerpo características alteradas de enlace. Ver, por ejemplo, Burton y Woof, 1992, Advances in Immunology 51: 1-84; Ravetch and Bolland, 2001, Annu. Rev. Im unol. 19: 275-90; Shields et al., 2001, Journal of Biol. Chem 276: 6591-6604; Telleman y Junghans, 2000, Immunology 100: 245-251; Medesan et al, 1998, Eur. J. Immunol. 28: 2092-2100; todas las cuales son incorporadas por referencia en la presente) . Tales mutaciones pueden incluir sustituciones, adiciones, supresiones o cualquier combinación de las mismas, y son típicamente producidas mediante mutagénesis dirigida al sitio utilizando uno o más oligonucleótidos mutagénicos de acuerdo con los métodos descritos en la presente, así como de acuerdo con los métodos conocidos en la materia (ver, por ejemplo, Sambrook et al., MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 3a Ed., 2001, Cold Spring Harbor, N.Y. y Berger y Kimmel, METHODS IN ENZYMOLOGY, Volumen 152, Guide to Molecular Cloning Techniques, 1987, Academic Press, Inc., San Diego, CA., las cuales se incorporan por referencia en la presente) . De acuerdo con ciertas modalidades, las sustituciones de aminoácidos (1) pueden reducir la susceptibilidad a la proteólisis, (2) reducen la susceptibilidad a la oxidación, (3) alteran la afinidad de enlace, y/o (4) confieren o modifican otras propiedades fisicoquímicas o funcionales sobre tales polipéptidos. De acuerdo con ciertas modalidades, las sustituciones simples o múltiples aminoácidos (en ciertas modalidades, sustituciones conservadoras de aminoácidos) pueden ser realizadas en la secuencia de origen natural (en ciertas modalidades, en la porción del polipéptido fuera del o de los dominios que forman los contactos intermoleculares) . En ciertas modalidades, una sustitución conservadora de aminoácido típicamente no cambia sustancialmente las características estructurales de la secuencia progenitora (por ejemplo, una aminoácido de reemplazo debe perturbar o tender a perturbar la estructura secundaria que caracteriza una secuencia progenitora, tal como una hélice) . Los ejemplos de estructuras secundarias y terciarias polipeptídicas, reconocidas en la técnica son descritas en PROTEINS, STRUCTURES AND MOLECULAR PRINCIPLES, (Creighton, Ed. ) , 1984, W. H. Freeman and Company, New York; INTRODUCTION TO PROTEIN STRUCTURE (C. Branden y J. Tooze, eds.), 1991, Garland Publishing, New York, N.Y.; y Thornton et al., 1991, Nature 354: 105, cada una de las cuales se incorporan por referencia en la presente. "Anticuerpo" o "péptido (s) de anticuerpo" se refiere a un anticuerpo intacto, o un fragmento de enlace del mismo que compite con el anticuerpo intacto para el enlace específico. En ciertas modalidades, los fragmentos de enlace son producidos mediante técnicas de ADN recombinante. En modalidades adicionales, los fragmentos de enlace son producidos mediante escisión enzimática o química de los anticuerpos intactos. Los fragmentos de enlace incluyen, pero no están limitados a anticuerpos F(ab), F(ab'), F(ab')2. Fv, de cadena simple. La invención proporciona los anticuerpos que comprenden una cadena pesada y una cadena ligera, en donde las cadenas pesada y ligera conjuntamente forman una estructura de enlace al antígeno capaz de enlazarse específicamente a B7RP1. Una cadena pesada de longitud completa incluye un dominio de la región variable, VH, y tres dominios de la región constante, CH1, CH2, y CH3. El dominio VH está en el extremo amino del polipéptido y el dominio CH3 está en el extremo carboxilo. El término "cadena pesada", como se utiliza en la presente, abarca una cadena pesada de longitud completa y fragmentos de la misma. Una cadena ligera de longitud completa incluye un dominio de la región variable, V- , y un dominio de la región constante, CL. Como la cadena pesada, el dominio de la región variable de la cadena ligera está en el extremo amino del polipéptido. El término "cadena ligera" como se utiliza en la presente, abarca la cadena ligera de longitud completa y fragmentos de la misma. Un fragmento F(ab) está comprendido de una cadena ligera y las regiones CH1 y variable de una cadena pesada. La cadena pesada de una molécula de F(ab) no puede formar un enlace disulfuro con otra molécula de cadena pesada. Un fragmento F(ab') contiene una cadena ligera y una cadena pesada que contiene más de la región constante, entre los dominios CH1 y CH2, tal que un enlace disulfuro intercatenario puede ser formado entre dos cadenas pesadas para formar una molécula de F(ab')2- La región Fv comprende las regiones variables provenientes de las cadenas pesadas y ligeras, pero carece de las regiones constantes. Los anticuerpos de cadena simple son moléculas de Fv en las cuales las regiones variables de cadena pesada y ligera han sido conectadas por un enlazador flexible para formar una cadena polipeptídica simple, que forman una región de enlace al antígeno. Los anticuerpos de cadena simple son discutidos con detalle en la Solicitud de Patente Internacional Publicación No. WO 88/01649 y Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,946,778 y 5,260,203. Un anticuerpo bivalente diferente de un anticuerpo "multiespecífico" o "multifuncional" en ciertas modalidades, se entiende que comprende los sitios de enlace que tienen especificidad antigénica idéntica. En la" evaluación del enlace al anticuerpo y la especificidad de acuerdo con la invención, un anticuerpo inhibe sustancialmente la adhesión de un ligando a un receptor, cuando un exceso del anticuerpo reduce la cantidad de ligando enlazado al receptor por al menos aproximadamente 20% 40%, 60%, 80%, 85%, o más (como se mide, entre otros, utilizando un ensayo de enlace competitivo in vi tro) . Por "anticuerpo neutralizador" se entiende una molécula de anticuerpo que es capaz de bloquear o reducir sustancialmente una función efectora de un antígeno objetivo al cual éste se enlaza. En consecuencia, un anticuerpo "neutralizador" anti-B7RPl es capaz de bloquear o reducir sustancialmente una función efectora, tal como el enlace al receptor y/o la promoción de una respuesta celular, de B7RP1. "Reducir sustancialmente" se pretende que signifique al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 75%, al menos aproximadamente 80%, al menos aproximadamente 85%, o al menos aproximadamente 90% de reducción de una función efectora del antígeno objetivo (por ejemplo, B7RP1 humano) . El término "epitopo" incluye cualquier sitio sobre un antigeno que sea capaz de enlazarse específicamente a una inmunoglobulina o receptor de célula T. En ciertas modalidades, los determinantes epitópicos incluyen agrupaciones superficiales químicamente activos de moléculas tales como aminoácidos, cadenas laterales de azúcar, grupos fosforilo, o grupo sulfonilo y, en ciertas modalidades pueden tener características estructurales tridimensionales, especificas, y/o características de carga específica. Un epitopo es una región de un antígeno que es enlazada por un anticuerpo. En ciertas modalidades, se dice que un anticuerpo se enlaza específicamente a un antígeno cuando éste reconoce preferentemente su antígeno objetivo en una mezcla compleja de proteínas y/o macromoléculas. En ciertas modalidades, se dice que un anticuerpo se enlaza específicamente a un antígeno cuando la constante de disociación en el equilibrio es de aproximadamente 10~6 M, 10"7 M, 10~8 M, 10-9 M, 10"10 M, 10~u M, 10"12 M, o menor de aproximadamente 10~12 M. Un anticuerpo se enlaza "esencialmente el mismo epitopo" como un anticuerpo de referencia, cuando los dos anticuerpos reconocen epitopos idénticos o estéricamente traslapados. Los métodos más ampliamente utilizados y rápidos para determinar si dos anticuerpos se enlazan o no a epitopos idénticos estéricamente traslapados, son ensayos de competencia, los cuales pueden ser configurados en cualquier número de formatos diferentes, utilizando ya sea el antigeno marcado o bien el anticuerpo marcado. Usualmente, el antígeno es utilizado sobre un sustrato, y se mide la habilidad de los anticuerpos no marcados para bloquear el enlace de los anticuerpos marcados, utilizando isótopos radioactivos o marcadores enzimáticos. El término "agente" se utiliza en la presente para denotar un compuesto químico, una mezcla de compuestos químicos, una macromolécula biológica, o un extracto elaborado de materiales biológicos.

Como se utiliza en la presente, los términos "marcador" o "marcado" se refiere a la incorporación de un marcador detectable, por ejemplo, mediante incorporación de un aminoácido radiomarcado o el enlace a un polipéptido de moléculas de biotina que pueden ser detectadas por la avidina marcada (por ejemplo, estreptavidina que comprende un marcador detectable tal como un marcador fluorescente, un marcador quimioluminiscente o una actividad enzimática que puede ser detectada por métodos ópticos o colorimétricos) . En ciertas modalidades, el marcador puede ser también terapéutico. Diversos métodos de marcación de polipéptidos y glucoproteínas son conocidos en la técnica y pueden ser utilizados ventajosamente en los métodos descritos aquí. Los ejemplos de marcadores para los polipéptidos incluyen, pero no están limitados a radioisótopos o radionúclidos tales como 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99mTc, llxIn, 125I, y 131I, marcadores fluorescentes (por ejemplo, isotiocianato de fluoresceína o FITC, rodamina o materiales fosforescentes lantánidos) , marcadores enzimáticos (por ejemplo, peroxidasa de rábano, ß-galactosidasa, luciferasa, fosfatasa alcalina) , marcadores quimioluminiscentes, marcadores de hapteno tales como grupos biotinilo y epitopos polipeptídicos predeterminados reconocidos por un reportero secundario (por ejemplo, las secuencias de pares de cremallera de leucina, sitios de enlace para anticuerpos secundarios, dominios de enlace a metales, o marcadores epitópicos) . En ciertas modalidades, los marcadores son enlazados por brazos espaciadores (tales como (CH2)n, donde n<aproximadamente 20) de diversas longitudes para reducir el impedimento estérico potencial. El término "muestra biológica" como se utiliza en la presente, incluye pero no está limitada a, cualquier cantidad de una sustancia proveniente de una cosa viviente o cosa antiguamente viviente. Tales cosas vivientes incluyen, pero no están limitadas a humanos, ratones, monos, ratas, conejos y otros animales. Tales sustancias incluyen, pero no están limitadas a sangre, suero, orina, células, órganos, tejidos, hueso, médula ósea, nodulos linfáticos y piel. El término "agente farmacéutico o fármaco" como se utiliza en la presente, se refiere a un compuesto químico o composición capaz de inducir un efecto terapéutico deseado cuando se administra adecuadamente a un paciente. La expresión "cantidad farmacéuticamente efectiva" en referencia a una composición farmacéutica que comprende uno o una pluralidad de los anticuerpos de la invención, se entiende que significa de acuerdo con la invención, una cantidad de la composición farmacéutica que es capaz de abolir, en un paciente, la disminución en el umbral de sensibilidad a los estímulos externos con un entorno de este umbral de sensibilidad a un nivel comparable a aquel observado en sujetos saludables.

Un "trastorno" es cualquier afección que pudiera beneficiarse del tratamiento de acuerdo con la presente invención. "Trastorno" y "afección" son utilizados intercambiablemente aquí e incluyen los trastornos del sistema inmune crónico o agudo o las enfermedades del sistema inmune asociadas con la respuesta inmune inapropiada, incluyendo aquellas condiciones patológicas que predisponen al mamífero al trastorno en cuestión. Un número de condiciones y trastornos que podrían beneficiarse del tratamiento de acuerdo con la presente invención son descritos, por ejemplo, en la Solicitud de Patente Internacional del PCT No. PCT/US00/01871 (Publicación No. WO 00/46240) , la descripción de la cual se incorpora por referencia en la presente en su totalidad. Los términos "enfermedad del sistema inmune" y "afección del sistema inmune" abarcan cualquier afección médica o trastorno asociado con los niveles incrementados de B7RP1, sensibilidad incrementada a B7RP1, o enfermedades mediadas por células T, incluyendo, pero no limitadas a, la enfermedad autoinmune, supervivencia del injerto trasplante de órgano y de médula ósea, alosensibilización debida a transfusiones sanguíneas, síndrome de choque tóxico enfermedades mediadas por células B dependientes de células T, enfermedades inflamatorias crónicas asociadas con disfunción crónica de las células inmunes, trastornos linfoproliferativos (tales mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstom, y crioglobulinemias) y cáncer . Los ejemplos no limitantes de enfermedades autoinmunes incluyen lupus eritematoso sistémico, artritis reumatoide, púrpura trombocitopénica inmune (ITP), esclerosis múltiple, diabetes y psoriasis. Los ejemplos no limitantes de enfermedades inflamatorias crónicas incluyen enfermedad inflamatoria del intestino (tal como enfermedad de Crohn y colitis ulcerativa) , enfermedad de Grave, tiroiditis de Hashimoto y diabetes mellitus. Los términos "enfermedad del sistema inmune" y "afección del sistema inmune" también abarcan cualquier afección clínica que pudiera ser mejorada por la inhibición de la producción de anticuerpos, tales como las reacciones de hipersensibilidad. Las reacciones de hipersensibilidad pueden ser provocadas, por ejemplo, por la fiebre del heno, alergias, asma, atopia y edema agudo. Los ejemplos no limitantes de enfermedades provocan reacciones de hipersensibilidad mediada por anticuerpo incluyen lupus eritematoso sistémico, artritis (tales como artritis reumatoide, artritis reactiva, artritis psoriática) , neuropatías (tales como glomerulonefritis, membranosa, mesangiocapilar, segmental focal, necrozante focal, en media luna y neuropatías proliferativas tales como tubulopatías) , trastornos de la piel (tales como pénfigo y penfigoide, eritema nodoso) , endocrinopatías (tales como tiroiditis, enfermedad de Grave, enfermedad de Hashimoto, diabetes mellitus dependiente de insulina) , diversas neuropatías (tales como alveolitos extrínseca) , diversas vasculopatías, enfermedad celiaca, enfermedades con producción aberrante de IgA, muchas anemias y trombocitopenias, síndrome de Guillain-Barre, y miastenia gravis. Como se utiliza en la presente, los términos "cantidad efectiva" y "cantidad terapéuticamente efectiva" cuando se utilizan con referencia a una composición farmacéutica o un vehículo que comprende uno o más anticuerpos humanos anti-B7RPl humano, se refiere a una cantidad o dosis suficiente para producir un resultado deseado (por ejemplo, donde para la terapia con los anticuerpos humanos anti-B7RPl humano o los vehículos de la presente invención el resultado deseado es la modulación deseada de las respuestas de células T, por ejemplo) o apoyar una disminución observable en el nivel de una o más actividades biológicas de B7RP1. Más específicamente, una cantidad terapéuticamente efectiva es una cantidad del o de los anticuerpos humanos anti-B7RPl humano para inhibir, por algún periodo de tiempo, uno o más de los procesos patológicos clínicamente definidos asociados con la afección en cuestión, por ejemplo, trastornos y enfermedades inmunes, en un sujeto tratado in vivo con el agente. En la presente invención, una "cantidad efectiva" de un anticuerpo anti-B7RP1 puede modular las respuestas de células T en un paciente. En los métodos de la presente invención, el término "control" y variantes gramaticales del mismo, se utilizan para referirse a la prevención, o la inhibición parcial o completa, la reducción, el retraso o el alentamiento de un evento no deseado, por ejemplo, una respuesta inmune. La cantidad efectiva puede variar dependiendo del vehiculo especifico o de los anticuerpos humanos anti-B7RPl humano seleccionados, y es también dependiente de una variedad de factores y condiciones relacionadas al sujeto que va a ser tratado y a la severidad del trastorno. Por ejemplo, si el vehiculo o el o los anticuerpos humanos anti-B7RPl humano van a ser administrados in vivo, podrían ser considerados, entre otros, la edad, el peso y la salud del paciente, así como las curvas de dosis-respuesta y los datos de toxicidad obtenidos en el trabajo preclinico con animales. Si el agente va a ser puesto en contacto con las células in vi tro, se podría también diseñar una variedad de estudios preclínicos in vi tro para evaluar parámetros tales como la absorción, vida media, dosis, toxicidad, etc. La determinación de una cantidad efectiva o una cantidad terapéuticamente efectiva para un agente dado está muy por dentro de la habilidad de aquellos expertos en la técnica.

Como se utiliza en la presente, los términos "proteína 1 relacionada a B7" y "B7RP1" son definidos como todas las especies de mamífero de B7RP1 de secuencia nativa, que es descrita en la Solicitud de Patente Internacional Publicación No. WO 00/46240, que es incorporada por referencia en la presente. Como se utiliza en la presente, "sustancialmente puro (a)" o "sustancialmente purificado (a) " significa un compuesto o especie que es la especie predominante presente (por ejemplo, en una base molar ésta es más abundante que cualquier otra especie individual en la composición) . En ciertas modalidades, una fracción sustancialmente purificada es una composición en donde la especie comprende al menos aproximadamente 50 por ciento (en una base molar) de todas las especies macromoleculares presentes) . En ciertas modalidades, una composición sustancialmente pura comprenderá más de aproximadamente 80%, 85%, 90%, 95% o 99% de todas las especies macromoleculares presentes en la composición. En ciertas modalidades, la especie es purificada hasta la homogeneidad esencial (las especies contaminantes no pueden ser detectadas en la composición mediante métodos de detección convencionales) en donde la composición consiste esencialmente de una especie macromolecular simple. El término "paciente" incluye sujetos humanos y animales.

"Tratamiento" o "tratar" se refieren al tratamiento terapéutico o profiláctico o a las medidas preventivas. Aquellos en necesidad de tratamiento incluyen aquellos ya con el trastorno, así como aquellos propensos a tener el trastorno o aquellos en los cuales va a ser prevenido el trastorno. A no ser que se requiera de otro modo por el contexto, los términos singulares incluirán las pluralidades, y los términos plurales también incluirán los singulares. De acuerdo con ciertas modalidades de la invención, los anticuerpos dirigidos a B7RP1 pueden ser utilizados para tratar trastornos del sistema inmune y enfermedades del sistema inmune, incluyendo pero no limitadas a aquellas mencionadas anteriormente. En un aspecto de la invención, se proporcionan los anticuerpos monoclonales completamente humanos producidos contra y que tienen especificidad biológica e inmunológica para enlazarse a B7RP1 humano. En otro aspecto más, la invención proporciona los ácidos nucleicos que comprenden secuencias nucleotídicas que codifican para las secuencias de aminoácidos para las moléculas de inmunoglobulina de cadena pesada y ligera, particularmente las secuencias correspondientes a las regiones variables de las mismas. Las modalidades particulares de este aspecto de la invención son las secuencias correspondientes a las regiones de determinación de la complementariedad (CDRs), específicamente de la CDRl a la CDR3, de las cadenas pesada y ligera proporcionadas por la invención. En otro aspecto más, la invención proporciona las células hibridomas y las líneas celulares expresan las moléculas de inmunoglobulina y anticuerpos, tales como los anticuerpos monoclonales de la invención. La invención también proporciona las preparaciones biológica e inmunológicamente purificadas de los anticuerpos, tales como los anticuerpos monoclonales producidos contra y que tienen especificidad biológica e inmunológica para enlazarse a B7RP1 humano. La habilidad para clonar y reconstruir los locus humanos en tamaños de megabases en cromosomas artificiales de levadura (YACs) y para introducirlos dentro de la línea germinal de ratón, proporciona un procedimiento ventajoso para elucidar los componentes funcionales de los locus muy grandes o crudamente mapeados, así como la generación de modelos útiles de la enfermedad humana. Además, la utilización de tal tecnología para la sustitución del locus de ratón con sus equivalentes humanos, proporciona introspectivas únicas hacia la expresión y regulación de los productos de genes humanos durante el desarrollo, su comunicación con otros sistemas, y su involucramiento en la inducción y progresión de la enfermedad. Una aplicación práctica importante de tal estrategia es la "humanización" del sistema inmune humoral de ratón. La introducción de los locus de inmunoglobulina humana (Ig) dentro de ratones en los cuales han sido inactivados los genes de Ig endógenos, ofrece la oportunidad de estudiar los mecanismos subyacentes a la expresión y el ensamblaje programados de los anticuerpos, así como su papel en el desarrollo de las células B. Además, tal estrategia proporciona una fuente para la producción de anticuerpos monoclonales completamente humanos (MAbs) . El término "anticuerpo humano" incluye los anticuerpos que tienen regiones variables y constantes sustancialmente correspondientes a las secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana. En ciertas modalidades, los anticuerpos humanos son producidos en mamíferos no humanos, incluyendo, pero no limitados a, roedores tales como ratones y ratas, y lagomorfos, tales como conejos. En ciertas modalidades, los anticuerpos humanos son producidos en células hibridomas. En ciertas modalidades, los anticuerpos humanos son producidos recombinantemente. El término "recombinante" en referencia a un anticuerpo incluye los anticuerpos que son preparados, expresados, creados o aislados por medios recombinantes. Los ejemplos representativos incluyen anticuerpos expresados utilizando un vector de expresión recombinante transfectado dentro de una célula hospedera, los anticuerpos aislados de una biblioteca combinatoria de anticuerpos humanos, recombinante, los anticuerpos aislados de un animal (por ejemplo, un ratón) que es transgénico para los genes de inmunoglobulina humana (ver por ejemplo, Taylor, et al., 1992, Nucí. Acids Res. 20:6287-6295); o los anticuerpos preparados, expresados, creados o aislados por cualquier medio que involucre el empalme de las secuencias de genes de inmunoglobulina humana para otras secuencias de ADN. Tales anticuerpos humanos recombinantes tienen regiones variables y constantes, derivadas de las secuencias de inmunoglobulina humana de línea germinal. Los anticuerpos humanos tienen al menos tres ventajas sobre los anticuerpos no humanos y quiméricos para el uso en terapia humana. 1) debido a que la porción efectora del anticuerpo es humana, ésta puede interactuar mejor con las otras partes del sistema inmune humano (por ejemplo, destruir las células objetivo más eficientemente por la citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) o la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo (ADCC) ) ; 2) el sistema inmune humano no debe reconocer el anticuerpo humano como extraño, y por lo tanto, la respuesta del anticuerpo contra tal anticuerpo inyectado debe ser menor que contra un anticuerpo no humano totalmente extraño, o un anticuerpo quimérico parcialmente extraño; 3) los anticuerpos no humanos inyectados han sido reportados como poseedores de una vida media en la circulación humana mucho más corta que la vida media de anticuerpos humanos. Los anticuerpos humanos inyectados tendrán una vida media esencialmente idéntica a los anticuerpos humanos de origen natural, permitiendo que sean administradas dosis más pequeñas y menos frecuentes. De este modo, se espera que los anticuerpos completamente humanos reduzcan al mínimo las respuestas inmunogénicas y alérgicas intrínsecas a los MAbs de ratones o derivatizados de ratón, y con esto incrementen la eficacia y la seguridad de los anticuerpos administrados. Los anticuerpos completamente humanos de la invención, por lo tanto, pueden ser utilizados en el tratamiento de enfermedades y trastornos asociados con la respuesta inmune apropiada, el tratamiento de los mismos que requiere administración repetida del anticuerpo. De este modo, una ventaja particular de los anticuerpos anti-B7RPl de la invención es que los anticuerpos son completamente humanos y pueden ser administrados a pacientes de una manera no aguda, al tiempo que reducen al minimo las reacciones adversas comúnmente asociadas con los anticuerpos humanos anti-ratón u otros anticuerpos no completamente humanos, previamente descritos, provenientes de especies humanas. Una persona experta en la técnica puede manipular por ingeniería las cepas de ratón deficientes en la producción de anticuerpo de ratón con fragmentos grandes de los locus de Ig humanos, de modo que tales ratones producen anticuerpos humanos en ausencia de anticuerpos de ratón. Los fragmentos de Ig humanos grandes pueden preservar la diversidad génica variable grande así como la regulación adecuada de la producción y expresión de los anticuerpos. Al explotar la maquinaria celular de ratón para la diversificación y selección de anticuerpos, y la falta de tolerancia inmunológica a las proteínas humanas, el repertorio de anticuerpos humanos reproducidos en estas cepas de ratón produce anticuerpos de alta afinidad contra cualquier antígeno de interés, incluyendo antígenos humanos. Utilizando la tecnología de hibridoma los MAbs humanos específicos del antígeno con la especificidad deseada pueden ser producidos y seleccionados. Los animales transgénicos (por ejemplo, ratones) pueden ser también utilizados para producir anticuerpos humanos en ausencia de la producción de inmunoglobulina endógena. Por ejemplo, la transferencia del arreglo del gen de inmunoglobulina de línea germinal humana en tales ratones mutantes de línea germinal, dará como resultado la producción de anticuerpos humanos después del reto con el antígeno (ver por ejemplo, Jakobovits et al, 1993, Proc. Natl. Acad Sci. USA 90: 2551-2555; Jakobovits et al, 1993, Nature 362: 255- 258; Bruggemann et al., 1993, Year in Immun. 7:33, 1994, Nature 148: 1547-1553) y, 1996, Nature Biotechnology 14: 826; Gross et al, 2000, Nature 404: 995-999; y Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,877,397, 5,874,299, 5,814,318, 5,789,650, 5,770,429, 5,661,016, 5,633,425, 5,625,126, 5,569,825, y 5,545,806, (cada una de las cuales se incorpora por referencia en su totalidad para todos los propósitos) ) . Los anticuerpos humanos pueden ser también producidos en bibliotecas de visualización de fagos (Hoogenboom y Winter, 1992, J. Mol. Biol 227: 381; Marks et al, 1991, J. Mol. Biol. 222: 581). Las técnicas de Colé et al. y Boerner et al. están también disponibles para la preparación de anticuerpos monoclonales humanos (Colé et al, 1985, MONOCLONAL ANTIBODIES AND CÁNCER THERAPY Alan R. Liss, p. 77; y Boerner et al, 1991, J. Immunol. 147: 86-95). Los anticuerpos humanos recombinantes pueden también ser sometidos a mutagénesis in vi tro (o, cuando se utiliza un animal transgénico para las secuencias de Ig humanas, la mutagénesis somática in vivo) y de este modo, las secuencias de aminoácidos de las regiones VH y VL de los anticuerpos recombinantes son secuencias que, mientras que son derivadas de aquellas relacionadas a las secuencias VH y VL de línea germinal humana, pueden no existir de manera natural dentro del repertorio de línea germinal del anticuerpo humano in vivo .

En ciertas modalidades, el experto en la materia puede utilizar las regiones constantes provenientes de especies diferentes de la humana, junto con la o las regiones variables humanas en tales ratones, para producir anticuerpos quiméricos. Un anticuerpo biespecífico o bifuncional típicamente es un anticuerpo híbrido artificial que tiene dos pares diferentes de cadena pesada/cadena ligera y dos sitios de enlace diferentes. Los anticuerpos biespecíficos pueden ser producidos por una variedad de métodos que incluyen, pero no están limitados a, función de hibridomas o enlace de fragmentos F(ab'). Ver, por ejemplo, Songsivilai & Lachmann, 1990, Clin. Exp Immunol 79: 315-321; Kostelny et al, 1992, J. Immunol. 148: 1547-1553. La invención proporciona los anticuerpos que se enlazan a B7RP1 humano. Estos anticuerpos pueden ser producidos mediante inmunización con B7RP1 de longitud completa o fragmentos del mismo. Los anticuerpos de la invención pueden ser policlonales o monoclonales, y/o pueden ser anticuerpos recombinantes. En modalidades preferidas, los anticuerpos de la invención son anticuerpos humanos preparados, por ejemplo, mediante inmunización de animales transgénicos capaces de producir anticuerpos humanos (ver por ejemplo, Solicitud de Patente Internacional, Publicación WO 93/12227) .

Las regiones de determinación de la complementariedad (CDRs) de las regiones variables de cadena ligera y cadena pesada de los anticuerpos anti-B7RPl de la invención, pueden ser injertadas a las regiones estructurales (FRs) provenientes de la misma o de otra especie. En ciertas modalidades, las CDRs de las regiones variables de cadena ligera y cadena pesada del anticuerpo anti-B7RPl pueden ser injertadas a las FRs humanas de consenso. Para crear FRs humanas de consenso, las FRs provenientes de varias secuencias de aminoácidos de cadena pesada humana o de cadena lingera humana son alineadas para identificar una secuencia de aminoácidos de consenso. Las FRs de la cadena pesada o la cadena ligera del anticuerpo anti-B7RPl pueden ser reemplazadas con las FRs provenientes de una cadena pesada diferente o una cadena ligera diferente. Los aminoácidos raros en las FRs de las cadenas pesadas y ligeras del anticuerpo anti-B7RPl tipicamente no son reemplazadas, mientras que el resto de los aminoácidos de FR pueden ser reemplazados. Los aminoácidos raros son aminoácidos específicos que están en posiciones en las cuales éstos no son usualmente encontrados en las FRs. Las regiones variables injertadas provenientes de anticuerpos anti-B7RPl de la invención, pueden ser utilizadas con una región constante que es diferente de la región constante del anticuerpo anti-B7RPl. Alternativamente, las regiones variables injertadas son parte de un anticuerpo Fv de cadena simple. El injerto de CDR es descrito, por ejemplo, en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 6,180,370, 5,693,762, 5,693,761, 5,585,089, y 5,530,101, las cuales se incorporan por referencia en la presente para cualquier propósito. Los anticuerpos de la invención pueden ser preparados utilizando ratones transgénicos que tienen una porción sustancial del locus productor del anticuerpo humano, insertado en las células productoras de anticuerpo de los ratones, y que son además manipulados por ingeniería genética para ser deficientes en la producción de anticuerpos murinos, endógenos. Tales ratones son capaces de producir moléculas de inmunoglobulina y anticuerpos humanos y no producen o producen cantidades sustancialmente reducidas de moléculas de inmunoglobulina y anticuerpos murinos. Las tecnologías utilizadas para lograr este resultado son descritas en las patentes, solicitudes y referencias descritas en la especificación de la presente. En ciertas modalidades, el experto en la materia puede emplear métodos como se describen en la Solicitud de Patente Internacional Publicación No. WO 98/24893, la cual se incorpora por referencia en la presente para cualquier propósito. Ver también Méndez et al., 1997, Nature Genetics 15: 146-156, la cual se incorpora por referencia en la presente para cualquier propósito. Los anticuerpos monoclonales (mAbs) de la invención pueden ser producidos mediante una variedad de técnicas, incluyendo la metodología convencional de anticuerpos monoclonales, por ejemplo, la técnica estándar de hibridación de células somáticas de Kohier y Milstein (1975, Nature 256: 495). Otras técnicas para producir anticuerpos monoclonales pueden ser empleadas, por ejemplo, la transformación viral u oncogénica de los linfocitos B. Un sistema animal ejemplar para preparar hibridomas es el ratón. La producción de hibridomas en el ratón es conocida en la técnica y los protocolos de inmunización y las técnicas para el aislamiento de los esplenocitos inmunizados para la fusión, son también conocidas en la materia. Los socios de fusión (por ejemplo, células de mieloma murina) y procedimientos de fusión, son también conocidos. En una cierta modalidad, los anticuerpos humanos monoclonales dirigidos contra B7RP1 pueden ser generados utilizando ratones transgénicos que son portadores de partes del sistema inmune humano en vez del sistema de ratón. Estos ratones transgénicos, denominados en la presente como ratones "HuMab", contienen un minilocus del gen de inmunoglobulina humana que codifica para las secuencias de inmunoglobulina de cadena pesada (µ y ?) y cadena ligera K humanas, no reacomodadas, conjuntamente con mutaciones dirigidas que inactivan los locus de las cadenas µ y K endógenas (Lonberg et al., 1994, Nature 368: 856-859). En consecuencia, los ratones muestran expresión reducida de IgM de ratón o K en respuesta a la inmunización, los transgenes de cadena pesada y de cadena ligera humanos, introducidos, sufren cambio de clase y mutación somática para generar anticuerpos monoclonales IgG K humanos, de alta afinidad (Lonberg et al., supra.; Lonberg y Huszar, 1995, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93; Harding y Lonberg, 1995, Ann. N.Y. Acad. Sci. 764: 536-546) . La preparación de ratones HuMab es descrita con detalle en Taylor et al, 1992, Nucleic Acids Res. 20: 6287-6295; Chen et al, 1993, International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al, 1994, J. Immunol . 152: 2912- 2920; Lonberg et al, 1994, Nature 368: 856-859; Lonberg, 1994, Handbook of Exp. Pharmacology 113: 49-101; Taylor et al, 1994, International Immunology 6: 579-591; Lonberg & Huszar, 1995, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93; Harding & Lonberg, 1995, Ann. NY. Acad. Sci 764: 536-546; Fishwild et al, 1996, Nature Biotechnology 14: 845-851, los contenidos de las cuales se incorporan por referencia en la presente en su totalidad. Ver además las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,789,650; 5,877,397; 5,661,016; 5,814,318; 5,874,299; y 5,770,429; todas a Lomberg y Kay, así como la Patente de los Estados Unidos No. 5,545,807 a Surani et al; Solicitudes de Patente Internacional Publicaciones Nos. WO 93/1227, publicada el 24 de junio de 1993; WO 92/22646, publicada el 23 de diciembre de 1992; y WO 92/03918, publicada el 19 de marzo de 1992, las descripciones de todas las cuales se incorporan por referencia en la presente, en su totalidad. Alternativamente, las cepas de ratones descritas en los Ejemplos siguientes pueden ser utilizadas para generar anticuerpos humanos anti-B7RPl. La presente invención proporciona los anticuerpos monoclonales humanos que son específicos para y neutralizan los polipéptidos de B7RP1 humanos, bioactivos. También, son proporcionadas las secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera del anticuerpo que son altamente específicas para y neutralizan los polipéptidos de B7RP1 cuando éstos son enlazados a ellos. Esta alta especificidad hace posible que los anticuerpos humanos anti-B7RPl humano, y los anticuerpos monoclonales humanos con especificidad similar, sean una inmunoterapia efectiva para las enfermedades asociadas a B7RP1. En un aspecto, la invención proporciona los anticuerpos humanos aislados que se enlazan al mismo o esencialmente al mismo epitopo que el anticuerpo 16H proporcionado en la presente. En un aspecto, la invención proporciona los anticuerpos humanos aislados que comprenden al menos una de las secuencias de aminoácidos mostradas en las SEQ ID NOs: 1-40 ó 44-58 que se enlazan a un epitopo del polipéptido de B7RP1 con alta afinidad, y tiene la capacidad para antagonizar la actividad del polipéptido B7RP1. Estos anticuerpos pueden enlazarse al mismo o esencialmente al mismo epitopo que los anticuerpos anti-B7RPl mostrados en los ejemplos de la presente. En ciertas modalidades, los anticuerpos aislados se enlazan al polipéptido B7RP1 con una constante de disociación (KD) de 10"6 M, 10"7 M, 10"8 M, 10~9 M, 10"10 M, 10"11 M o menos, e inhibe la supervivencia inducida por B7RP1 en un ensayo de neutralización in vi tro con una EC50 de aproximadamente 10"6 M, 10"7 M, 10"8 M, 10"9 M o menos. Los ejemplos de anticuerpos humanos anti-B7RPl humano que cumplen los criterios de enlace y neutralización anteriormente mencionados, son proporcionados en la presente. En ciertas modalidades, los anticuerpos humanos anti-B7RPl humano de la invención son denominados en la presente como 16H, 16Hg (linea germinal), 5D, 2H, 2Hg (linea germinal), 15H, 41H, y 43H. El anticuerpo 16H comprende las secuencias polipeptídicas de VL y VH como se muestran en la SEQ ID NO: 7 y la SEQ ID NO: 1, respectivamente. El anticuerpo 16Hg comprende las secuencias polipeptídicas de una cadena ligera variable (VL) y una cadena pesada variable (VH) como se muestra en la SEQ ID NO: 1 y la SEQ ID NO: 8, respectivamente. El anticuerpo 5D comprende las secuencias polipeptídicas de VL y VH como se muestra en la SEQ ID NO: 2 y la SEQ ID NO: 9, respectivamente. El anticuerpo 2H comprende las secuencias polipeptídicas de VL y VH como se muestra en la SEQ ID NO: 3 y la SEQ ID NO: 10, respectivamente. El anticuerpo 2Hg comprende las secuencias polipeptídicas de VL y VH como se muestra en la SEQ ID NO: 3 y la SEQ ID NO: 11, respectivamente. El anticuerpo 15H comprende las secuencias polipeptídicas de VL y VH como se muestra en la SEQ ID NO: 14 y SEQ ID NO: 12, respectivamente. El anticuerpo 41H comprende las secuencias polipeptídicas de VL y VH como se muestra en la SEQ ID NO: 5 y la SEQ ID NO: 13, respectivamente. El anticuerpo 43H comprende las secuencias polipeptídicas de VL y VH como se muestra en la SEQ ID NO: 6 y la SEQ ID NO: 14, respectivamente. Las propiedades de los anticuerpos humanos anti-B7RPl humano de la presente invención son específicamente descritas en los Ejemplos. Particularmente notable es la alta afinidad para el polipéptido B7RP1 y la alta capacidad para antagonizar la actividad del polipéptido B7RP1 demostrada en la presente. La constante de disociación (KD) de un anticuerpo humano anti-B7RPl humano puede ser determinada por resonancia de plasmón superficial como se describe en general en los ejemplos siguientes. En general, el análisis de resonancia de plasmón superficial mide las interacciones de enlace en tiempo real entre el ligando (polipéptido B7RP1 recombinante inmovilizado sobre una matriz biosensora) y el analito (anticuerpos en solución) mediante resonancia de plasmón superficial (SPR) utilizando el sistema BIAcore® (Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ) . El análisis de plasmón superficial puede ser también realizado mediante la inmovilización del analito (anticuerpos sobre una matriz biosensora) y presentando el ligando (V recombinante en solución) . La constante de disociación (KD) del anticuerpo humano anti-B7RPl humano puede también ser determinada mediante el uso de la tecnología KinExA. En ciertas modalidades de la invención, los anticuerpos se enlazan a B7RP1 con una KD de aproximadamente 10"5 M, 10"6 M, 10"7 M, 10"8 M, 10~9 M, 10"10 M, 10"u M, o 10"12 M. El término "KD" como se utiliza en la presente, está destinado a referirse a la constante de disociación de una interacción particular anticuerpo-antígeno. Para los propósitos de la presente invención, la KD fue determinada como se muestra en los Ejemplos siguientes. En ciertas modalidades, los anticuerpos de la invención son del isotipo IgGl, IgG2, IgG3 o IgG . Los anticuerpos pueden ser del isotipo IgG2 o IgGl. En otras modalidades, los anticuerpos de la invención pueden ser del isotipo IgM, IgA, IgE, o IgD. En ciertas modalidades de la invención, los anticuerpos comprenden una cadena ligera kappa humana y una cadena pesada IgGl, IgG2, IgG3, o IgG4 humana. La expresión de los anticuerpos de la invención que comprenden una región constante de cadena pesada de IgGl o IgG2, se describe en los Ejemplos siguientes. En modalidades particulares, las regiones variables de los anticuerpos son ligadas a una región constante diferente de la región constante para el isotipo IgGl, IgG2, IgG3, o IgG4. En ciertas modalidades, los anticuerpos de la invención han sido clonados para la expresión en células de mamífero. En ciertas modalidades, las modificaciones conservadoras para las cadenas pesadas y cadenas ligeras de los anticuerpos anti-B7RPl (y las modificaciones correspondientes a los nucleótidos de codificación) producirán anticuerpos anti-B7RPl que tienen características funcionales y químicas similares a aquellas de los anticuerpos anti-B7RPl descritos en la presente. En contraste, las modificaciones sustanciales en las características funcionales y/o químicas de los anticuerpos anti-B7RPl pueden ser logradas mediante la selección de sustituciones en la secuencia de aminoácidos en las cadenas pesadas y ligeras que difieren significativamente en su efecto sobre el mantenimiento de (a) la estructura de la cadena principal molecular en el área de la sustitución, por ejemplo, como una conformación de lámina o hélice, (b) la carga o la hidrofobicidad de la molécula en el sitio diana u objetivo, o (c) el volumen de la cadena lateral. Por ejemplo, una "sustitución conservadora de aminoácidos" puede involucrar una sustitución de un residuo de aminoácido nativo con un residuo no nativo, tal que exista poco o ningún efecto sobre la polaridad o la carga del residuo de aminoácido en esa posición. Además, cualquier residuo nativo en el polipéptido puede ser también sustituido con alanina, como ha sido previamente descrito para la "mutagénesis de exploración de alanina". Las sustituciones de aminoácidos (ya sea conservadoras o no conservadoras) pueden ser determinadas por aquellos expertos en la técnica al tiempo que se deseen tales sustituciones. En ciertas modalidades, las sustituciones de aminoácidos pueden ser utilizadas para identificar aquellos residuos de aminoácidos de un anticuerpo anti-B7RPl que están involucrados en la especificidad de enlace y/o la afinidad del anticuerpo para B7RP1 (por ejemplo residuos que están involucrados en el enlace del anticuerpo a un epitopo particular) , tales como los residuos de aminoácidos en las regiones CDRl, CDR2 y/o CDR3 de las cadenas ligera o pesada como se describe en la presente. Tales sustituciones de aminoácidos pueden incrementar o disminuir la afinidad de los anticuerpos anti-B7RPl descritos en la presente. Cambios menores en una secuencia de aminoácidos tales como la supresión, adición o sustitución de uno, unos pocos o incluso varios aminoácidos, puede conducir a una forma alélica de la proteína original que tienen propiedades sustancialmente idénticas. Por lo tanto, además de los anticuerpos específicamente descritos en la presente, otros anticuerpos "sustancialmente homólogos" pueden ser fácilmente diseñados y fabricados utilizando diversas técnicas de ADN recombinante bien conocidas por aquellos expertos en la materia. En general, las modificaciones de los genes pueden ser fácilmente logradas por una variedad de técnicas bien conocidas, tales como la mutagénesis dirigida al sitio. Por lo tanto, la presente invención contempla los anticuerpos humanos anti-B7RPl "variantes" o "mutantes" que tienen características sustancialmente similares a los anticuerpos humanos anti-B7RPl descritos en la presente (ver, por ejemplo WO 00/56772, todas las cuales se incorporan por referencia en la presente) . De este modo, por el término "variante" o "mutante" en referencia a un anticuerpo humano anti-B7RPl se entiende cualquier molécula de enlace (molécula X) (i) en la cual las regiones hipervariables CDRl, CDR2 y CD3 de la cadena pesada o las regiones hipervariables CDRl, CDR2 y CDR3 de la cadena ligera tomadas como un todo son al menos aproximadamente 80% homologas, al menos aproximadamente 90% homologas, o al menos aproximadamente 95% homologas a las regiones hipervariables como se muestran en la SEQ ID NO: 15 a la SEQ ID NO: 26 o la SEQ ID NO: 27 hasta la SEQ ID NO: 40, respectivamente, y (ii) en donde la variante o el mutante es capaz de inhibir la actividad de B7RP1 humano al mismo grado como un anticuerpo humano anti-B7RPl de referencia que tiene regiones estructurales idénticas a aquellas de la molécula X. Tales anticuerpos pueden enlazarse a B7RP1 humano o a B7RP1 de ratón o a ambos. La secuencia de B7RP1 de ratón es descrita en WO 00/46240, la cual se incorpora por referencia en la presente. Ordinariamente, una variante de anticuerpo humano anti-B7RPl tendrá las CDRs de cadena ligera y/o cadena pesada, cuando sea tomado como un todo, existe al menos una identidad en la secuencia de aminoácidos de aproximadamente 80%, una identidad en la secuencia de aproximadamente 85%, una identidad en la secuencia de aproximadamente 90%, una identidad en la secuencia de aproximadamente 91%, una identidad en la secuencia de aproximadamente 92%, una identidad en la secuencia de aproximadamente 93%, una identidad en la secuencia de aproximadamente 94%, una identidad en la secuencia de aproximadamente 95%, una identidad en la secuencia de aproximadamente 96%, una identidad en la secuencia de aproximadamente 97%, una identidad en la secuencia de aproximadamente 98%, o una identidad en la secuencia de aproximadamente 99%, a la secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 15 a la SEQ ID NO: 26 y/o SEQ ID NO: 27 a la SEQ ID NO: 40, respectivamente. Tales anticuerpos pueden enlazarse a B7RP1 humano o a B7RP1 de ratón o ambos.

Una variante de anticuerpo humano anti-B7RPl tendrá una región variable de cadena ligera, cuando sea tomada como un todo, que tiene al menos aproximadamente 80% de identidad en la secuencia de aminoácidos, al menos aproximadamente 82% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 83% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 84% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 85% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 86% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 87% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 8% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 9% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 90% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 91% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 92% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 93% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 94% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 95% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 96% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 97% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 98% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 99% de la secuencia de aminoácidos a la secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 1 a la SEQ ID NO: 6. y/o una región variable de cadena pesada, cuando sea tomada como un todo, que tiene al menos aproximadamente 70% de identidad en la secuencia de aminoácidos, al menos aproximadamente 75% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 80% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 81% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 82% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 83% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 84% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 85% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 86% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 87% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 88% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 89% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 90% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 91% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 92% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 93% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 94% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 95% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 96% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 97% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 98% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 99% de la secuencia de aminoácidos a la secuencia de aminoácidos como se muestra en la SEQ ID NO: 7 a la SEQ ID NO: 4. Tales anticuerpos pueden enlazarse a B7RP1 humano y/o B7RP1 de ratón.

Como será apreciado por aquellos expertos en la técnica, muchos de los residuos potenciales de contacto con CDR son adecuados para la sustitución por otros aminoácidos y todavía permiten que el anticuerpo conserve la afinidad sustancial por el antígeno. De igual modo, muchos de los residuos estructurales no en contacto con las CDRs en las cadenas pesadas y ligeras pueden acomodar sustituciones de aminoácidos a partir de las posiciones correspondientes provenientes de otros anticuerpos humanos, por aminoácidos de consenso humanos, o a partir de otros anticuerpos de ratón, sin pérdida significativa de la afinidad o la no inmunogenicidad del anticuerpo humano. La selección de diversos aminoácidos alternativos puede ser utilizada para producir versiones de los anticuerpos anti-B7RPl descritos y fragmentos de los mismos, que tienen combinaciones variantes de afinidad, especificidad, no inmunogenicidad, facilidad de fabricación y otras propiedades deseables. Una "variante" con referencia a un polinucleótido está destinada a referirse a una molécula de ácido nucleico que tiene al menos aproximadamente 75% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, con una secuencia polinucleotídica de la presente invención. Ordinariamente, una variante de polinucleótido tendrá al menos aproximadamente 75% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 80% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 81% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 82% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 83% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 84% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 85% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 86% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 87% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 88% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 89% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 90% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 91% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 92% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 93% de identidad secuencial, al menos aproximadamente 94% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 95% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 96% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 97% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, al menos aproximadamente 98% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos, o al menos aproximadamente 99% de identidad en la secuencia de ácidos nucleicos con una secuencia de ácidos nucleicos nuevos descrita en la presente. En modalidades alternativas, los anticuerpos de la invención pueden ser expresados en líneas celulares diferentes de las líneas de células hibridomas. En estas modalidades, las secuencias que codifican para los anticuerpos particulares pueden ser utilizadas para la transformación de una célula hospedera de mamífero, adecuada. De acuerdo con estas modalidades, la transformación puede ser lograda utilizando cualquier método conocido para introducir polinucleótidos en una célula hospedera, incluyendo por ejemplo el empaquetamiento del polinucleótido en un virus (o dentro de un vector viral) y la transducción de una célula hospedera con el virus (o el vector) o mediante procedimientos de transfección conocidos en la técnica, como se ejemplifica en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,399,216, 4,912,040, 4,740,461, y 4,959,455 (todas las cuales son incorporadas por referencia en la presente para cualquier propósito) . En general, el procedimiento de transformación utilizado puede depender del hospedero que va a ser transformado. Los métodos para introducir los polinucleótidos heterólogos dentro de las células de mamífero son bien conocidos en la técnica e incluyen, pero no están limitados a, transfección mediada por dextrano, precipitación con fosfato de calcio, transfección mediada por polibreno, fusión de protoplastos, electroporación, encapsulamiento del o de los polinucleótidos en liposomas, y microinyección directa del ADN dentro de los núcleos. Una molécula de ácido nucleico que codifica para la secuencia de aminoácidos de una región constante de cadena pesada, una región variable de cadena pesada, una región constante de cadena ligera, o una región variable de cadena ligera de un anticuerpo anti-B7RPl de la invención, es insertada dentro de un vector de expresión apropiado utilizando técnicas de ligadura estándares. En una modalidad, la cadena pesada del anticuerpo anti-B7RPl o la región constante de cadena ligera del mismo es anexada al extremo C de la región variable apropiada, y es ligada dentro de un vector de expresión. El vector es típicamente seleccionado para ser funcional en la célula hospedera particular empleada (por ejemplo, el vector es compatible con la maquinaria de células hospederas tal que puede ocurrir la purificación del gen y/o la expresión del gen) . Para una revisión de los vectores de expresión, ver METHODS IN. ENZYMOLOGY 185 (Goeddel, ed. ) , 1990, Academic Press. Típicamente, los vectores de expresión utilizados en cualquiera de las células hospederas contendrán secuencias para el mantenimiento del plásmido y para la clonación y expresión de las secuencias nucleotídicas exógenas. Tales secuencias, colectivamente denominadas como "secuencias flanqueantes" en ciertas modalidades, incluirán tipicamente una o más de las siguientes secuencias de nucleótidos: un promotor, una o más secuencias aumentadoras, un origen de replicación, una secuencia de terminación de la transcripción, una secuencia de intrón completa que contiene un sitio de empalme al donador y al aceptor, una secuencia que codifica para una secuencia guía para la secreción del polipéptido, un sitio de enlace al ribosoma, una secuencia de poliadenilación, una región poliligadora para la inserción del ácido nucleico que codifica para el polipéptido que va a ser expresado, y un elemento marcador seleccionable. Cada una de estas secuencias es discutida más adelante. Opcionalmente, el vector puede contener una secuencia que codifica para "el marcador", por ejemplo, una molécula oligonucleotídica localizada en el extremo 5' o 3' de la secuencia que codifica para el polipéptido del anticuerpo anti-B7RPl; la secuencia oligonucleotídica que codifica para poliHis (tal como hexaHis), u otro "marcador" tal como FLAG, HA (hemaglutinina del virus de la influenza) , o myc para el cual existen anticuerpos comercialmente disponibles. Este marcador está típicamente fusionado al polipéptido después de la expresión del polipéptido, y puede servir como un medio para la purificación por afinidad o detección del anticuerpo anti-B7RPl a partir de la célula hospedera. La purificación por afinidad puede ser lograda, por ejemplo, mediante cromatografía en columna utilizando anticuerpos contra el marcador como una matriz de afinidad. Opcionalmente, el marcador puede ser subsecuentemente removido del polipéptido del anticuerpo anti-B7RPl purificado mediante diversos medios tales como el uso de ciertas peptidasas para la escisión. Las secuencias flanqueantes pueden ser homologas (por ejemplo, a partir de la misma especie o cepa que la célula hospedera) , heterólogas (por ejemplo, provenientes de una especie diferente de la especie o cepa de célula hospedera), híbrida (por ejemplo, una combinación de secuencias flanqueantes provenientes de más de una fuente) , sintéticas o nativas. Como tal, la fuente de una secuencia flanqueante puede ser cualquier organismo procariótico o eucariótico, cualquier organismo vertebrado o invertebrado, o cualquier planta, con la afección de que la secuencia flanqueante sea funcional en, y pueda ser activada por, la maquinaria de la célula hospedera. Las secuencias flanqueantes útiles en los vectores de esta invención pueden ser obtenidas mediante cualquiera de los diversos métodos bien conocidos en la técnica. Típicamente, las secuencias flanqueantes útiles en la presente habrán sido previamente identificadas mediante mapeo y/o mediante digestión con endonucleasa de restricción y pueden de este modo ser aisladas a partir de la fuente tisular apropiada utilizando las endonucleasas de restricción apropiadas. En algunos casos, la secuencia nucleotídica completa de una secuencia flanqueante puede ser conocida. Aquí, la secuencia flanqueante puede ser sintetizada utilizando los métodos descritos en la presente para la sintesis y clonación del ácido nucleico. Si toda o únicamente una porción de la secuencia flanqueante es conocida, ésta puede ser obtenida utilizando la reacción en cadena de polimerasa (PCR) y/o mediante selección de una biblioteca genómica con una sonda adecuada tal como un fragmento de la secuencia oligonucleotídica y/o flanqueante proveniente de la misma o de otra especie. Donde la secuencia flanqueante no es conocida, un fragmento del ADN que contiene una secuencia flanqueante puede ser aislado a partir de una pieza más grande de ADN que puede contener, por ejemplo, una secuencia de codificación o incluso otro gen o genes. El aislamiento puede ser logrado mediante digestión con endonucleasa de restricción para producir el fragmento de ADN adecuado, seguido por el aislamiento utilizando purificación en gel de agarosa, cromatografía en columna Quiagen® (Chatsworth, CA) , u otros métodos conocidos por el experto en la materia. La selección de las enzimas adecuadas para lograr este propósito será fácilmente aparente para una persona de experiencia ordinaria en la técnica. Un origen de replicación es típicamente una parte de aquellos vectores de expresión procarióticos adquiridos comercialmente, y el origen ayuda en la amplificación del vector en una célula hospedera. Si el vector de elección no contiene un origen del sitio de replicación, se puede sintetizar químicamente con base en una secuencia conocida, y ligado dentro del vector. Por ejemplo, el origen de replicación proveniente del plásmido pBR322 (New England Biolabs, Beverly, MA) es adecuado para la mayoría de las bacterias gram negativas, y diversos orígenes virales (por ejemplo, SV40, polioma, adenovirus, el virus de la estomatitis vesicular (VSV) , o papilomavirus tales como HPV o BPV) son útiles para los vectores de clonación en las células de mamífero. En general, el origen del componente de replicación no es necesario para los vectores de expresión en mamífero (por ejemplo, el origen SV40 es a menudo utilizado únicamente debido a que éste también contiene el promotor temprano del virus) . Una secuencia de terminación de la transcripción es típicamente localizada 3' al extremo de una secuencia de codificación del polipéptido y sirve para terminar la transcripción. Usualmente, una secuencia de terminación de la transcripción en células procarióticas es un fragmento rico en G-C seguido por una secuencia poli-T. Mientras que la secuencia es fácilmente clonada a partir de una biblioteca o incluso comercialmente adquirida como parte de un vector, ésta puede ser también fácilmente sintetizada utilizando métodos para la sintesis de ácido nucleico tales como aquellos descritos en la presente. Un gen marcador seleccionable codifica para una proteína necesaria para la supervivencia y el crecimiento de una célula hospedera desarrollada en un medio de cultivo selectivo. Los genes marcadores de selección típicos codifican para proteínas que (a) confieren resistencia a antibióticos u otras toxinas, por ejemplo, ampicilina, tetraciclina o kanamicina para las células hospederas procarióticas; (b) complementan deficiencias auxotróficas de la célula hospedera; o (c) suministran nutrientes críticos no disponibles a partir de medios complejos o definidos. Los marcadores seleccionables ejemplares son el gen de resistencia a la kanamicina, el gen de resistencia a la ampicilina, y el gen de resistencia a la tetraciclina. Ventajosamente, un gen de resistencia a la neomicina puede ser también utilizado para la selección en células hospederas procarióticas y eucarióticas. Otros genes seleccionables pueden ser utilizados para amplificar el gen que será expresado. La amplificación es el proceso en donde los genes que son requeridos para la producción de una proteína crítica para el crecimiento o la supervivencia celular, son reiterados en tándem dentro de los cromosomas de generaciones sucesivas de células recombinantes. Los ejemplos de marcadores seleccionables adecuados para las células de mamífero incluyen la dihidrofolato-reductasa (DHFR) y los genes de la timidina-cinasa sin promotor. Los transformantes de células de mamífero son colocados bajo la presión de selección en donde únicamente los transformantes son únicamente adaptados para sobrevivir en virtud del gen seleccionable presente en el vector. La presión de selección es impuesta por el cultivo de las células transformadas bajo condiciones en las cuales la concentración del agente de selección en el medio es sucesivamente incrementada, con lo cual se conduce la amplificación del gen seleccionable y del ADN que codifica para otro gen, tal como un anticuerpo que se enlaza al polipéptido B7RP1. Como resultado, cantidades incrementadas de un polipéptido tal como un anticuerpo anti-B7RPl son sintetizadas a partir del ADN amplificado. Un sitio de enlace al ribosoma es usualmente necesario para el inicio de la traducción del mARN y está caracterizado por una secuencia de Shine-Dalgarno (procariotes) o una secuencia Kozak (eucariotes) . El elemento está típicamente localizado 3' al promotor y 5' a la secuencia de codificación del polipéptido que va a ser expresado. En algunos casos, tales como donde es deseada la glucosilación en un sistema de expresión de célula hospedera eucariótica, se pueden manipular las diversas pre- o prosecuencias para mejorar la glucosilación o el rendimiento. Por ejemplo, se puede alterar el sitio de escisión de peptidasa de un polipéptido de señal particular, o agregar prosecuencias, las cuales también afectan la glucosilación. El producto de proteína final puede tener, en la posición -1 (con relación al primer aminoácido de la proteina madura) uno o más aminoácidos adicionales incidentes a la expresión, los cuales pueden no haber sido totalmente removidos. Por ejemplo, el producto de la proteína final puede tener uno o dos residuos de aminoácidos encontrados en el sitio de escisión de peptidasa, enlazado al extremo amino. Alternativamente, el uso de algunos sitios de escisión con enzima pueden dar como resultado una forma ligeramente truncada del polipéptido deseado, si la enzima corta en tal área dentro del polipéptido maduro. Los vectores de expresión y de clonación de la invención típicamente contendrán un promotor que es reconocido por el organismo hospedero, y operablemente enlazados a la molécula que codifica para el anticuerpo anti-B7RP1. Los promotores son secuencias no transcritas localizadas con dirección 5' (por ejemplo, 5') al codón de inicio de un gen estructural (en general dentro de aproximadamente 100 a 1000 pares de bases) que controlan la transcripción del gen estructural. Los promotores son convencionalmente agrupados en una de dos clases. Promotores inducibles y promotores constitutivos. Los promotores inducibles inician los niveles incrementados de transcripción a partir del ADN bajo su control, en respuesta a cierto grado en las condiciones de cultivo, tal como la presencia o ausencia de un nutriente o un cambio en la temperatura. Los promotores constitutivos, por otra parte, transcriben uniformemente los genes a los cuales éstos son operablemente enlazados, es decir, con poco o ningún control sobre la expresión del gen. Un gran número de promotores, reconocidos por una variedad de células hospederas potenciales, son bien conocidos. Un promotor adecuado es operablemente enlazado al ADN que codifica para la cadena pesada o la cadena ligera, que comprende un anticuerpo anti-B7RPl de la invención, mediante la eliminación del promotor a partir del ADN fuente mediante digestión con enzima de restricción e inserción de la secuencia promotora deseada dentro del vector. Los promotores adecuados para el uso con los hospederos de levadura son también bien conocidos en la materia. Los aumentadores de levadura son ventajosamente utilizados con promotores de levadura. Los promotores adecuados para el uso con las células hospederas de mamífero son bien conocidos e incluyen, pero no están limitados a, aquellos obtenidos a partir de los genomas de virus tales como el virus del polioma, virus de la viruela aviar, adenovirus (tal como el adenovirus 2), virus del papiloma bovino, virus del sarcoma aviar, citomegalovirus, retrovirus, virus de la hepatitis B y virus 40 de simio (SV40) . Otros promotores de mamífero adecuados incluyen promotores de mamífero heterólogos, por ejemplo, promotores de choque térmico y el promotor de actina. Los promotores adicionales que pueden ser de interés incluyen, pero no están limitados a: el promotor temprano del SV40 (Bernoist y Chambón, 1981, Nature 290: 304-10); el promotor CMV (Thomsen et al, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 659-663); el promotor contenido en la repetición terminal larga 31 del virus del sarcoma de Rous (Yamamoto, et al, 1980, Cell 22: 787-97); el promotor de la timidina-cinasa del herpes (Wagner et al, 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78: 1444-45); las secuencias promotoras y reguladoras provenientes del gen de la metalotionina (Brinster et al., 1982, Nature 296: 39-42); y los promotores procarióticos tales como el promotor de beta-lactamasa (Villa-Kamaroff et al, 1978, Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A., 75: 3727-31); o el promotor tac (DeBoer et al, 1983, Proc. Natl. Acad Sci. U.S.A., 80: 21-25). También de interés son las siguientes regiones de control transcripcional de animales, que muestran especificidad de tejido y han sido utilizadas en animales transgénicos; la región de control del gen de la elastasa I que es activo en células acinares pancreáticas (Swift et al, 1984, Cell 38: 639-46; Ornitz et al, 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant Biol. 50: 399-409 (1986); MacDonald, 1987, Hepatology 7: 425-515); la región de control del gen de insulina que es activa en células beta-pancreáticas (Hanahan, 1985, Nature 315: 115-22); la región de control del gen de la inmunoglobulina, que es activa en células linfoides (Grosschedl et al, 1984, Cell 38: 647-58; Adames et al, 1985, Nature 318: 533-38; Alexander et al, 1987, Mol. Cell. Biol, 7: 1436-44); la región de control del virus del tumor mamario de ratón, que es activo en células testiculares, de mama, linfoides y mastocitos (Leder et al, 1986, Cell 45: 485-95); la región de control del gen de la albúmina que es activa en el hígado (Pinkert et al, 1987, Genes y Devel 1: 268-76); la región de control del gen de la alfa-feto-proteína, que es activa en hígado (Krumlauf et al, 1985, Mol. Cell Biol, 5: 1639-48; Hammer et al, 1987, Science 235: 53-58); la región de control del gen de la alfa-1-antitripsina, que es activa en hígado (Kelsey et al, 1987, Genes and Devel. 1: 161-71); la región de control del gen de la beta-globina que es activa en células mieloides (Mogram et al, 1985, Nature 315: 338-40; Kollias et al, 1986, Cell 46: 89-94); la región de control del gen de la proteína básica de mielina, que es activa en células oligodendrocitos en el cerebro (Readhead et al, 1987, Cell 48: 703-12); la región de control del gen de la cadena ligera 2 de miosina, que es activa en el músculo esquelético (Sani, 1985, Nature 314: 283-86); y la región de control del gen de la hormona de liberación gonadotrópica, que es activa en el hipotálamo (Masón et al, 1986, Science 234: 1372-78). Una secuencia aumentadora puede ser insertada dentro del vector para incrementar la transcripción del ADN que codifica para la cadena ligera o la cadena pesada, que comprende un anticuerpo anti-B7RPl de la invención por eucariotes superiores. Los aumentadores son elementos que actúan en posición cis del ADN, usualmente de aproximadamente 10 a 300 pares de bases de longitud, que actúan sobre el promotor para incrementar la transcripción. Los aumentadores son relativamente independientes de la orientación y de la posición, habiendo sido encontrados en las posiciones 5' y 3' hacia la unidad de transcripción. Diversas secuencias aumentadoras disponibles de genes de mamífero son conocidas (por ejemplo, globina, elastasa, albúmina, alfa-feto-proteína e insulina) . Tipicamente, no obstante, es utilizado un aumentador proveniente de un virus. El aumentador del SV40, el aumentador del promotor temprano de citomegalovirus, el aumentador de polioma, y los aumentadores de adenovirus conocidos en la técnica, son elementos de aumento o mejoramiento ejemplares para la activación de los promotores eucarióticos. Mientras que un aumentador puede ser colocado en el vector ya sea 5' o 3 'a una secuencia de codificación, éste está típicamente localizado en un sitio 5' desde el promotor. Los vectores de expresión de la invención pueden ser construidos a partir de un vector inicial tal como un vector comercialmente disponible. Tales vectores pueden o no contener todas las secuencias flanqueantes deseadas. Donde una o más secuencias flanqueantes descritas en la presente no están ya presentes en el vector, éstas pueden ser individualmente obtenidas y ligadas dentro del vector. Los métodos utilizados para la obtención de cada una de las secuencias flanqueantes, son bien conocidos por aquellos expertos en la materia. Después de que el vector ha sido construido y una molécula de ácido nucleico que codifica para la cadena ligera, una cadena pesada, o una cadena ligera y una cadena pesada, que comprende un anticuerpo anti-B7RPl, ha sido insertada dentro del sitio apropiado del vector, el vector completado puede ser insertado dentro de una célula hospedera adecuada para la amplificación y/o expresión del polipéptido. La transformación de un vector de expresión para un anticuerpo anti-B7RPl dentro de una célula hospedera seleccionada, puede ser lograda mediante métodos bien conocidos que incluyen transfección, infección, co-precipitación con fosfato de calcio, electroporación, microinyección, lipofección, transfección mediada por DEAE-dextrano, u otras técnicas conocidas. El método seleccionado será en parte una función del tipo de célula hospedera que va a ser utilizada. Estos métodos y otros métodos adecuados son bien conocidos para la persona experta en la materia, y son descritos por ejemplo, en Sambrook et al., supra. Una célula hospedera, cuando es cultivada bajo condiciones apropiadas, sintetiza un anticuerpo anti-B7RPl que puede ser subsecuentemente recolectado del medio de cultivo (si la célula hospedera lo secreta hacia el medio) o directamente desde la célula hospedera que lo produce (si ésta no es secretada) . La selección de una célula hospedera apropiada dependerá de diversos factores, tales como los niveles de expresión deseados, las modificaciones del polipéptido que son deseables o necesarias para la actividad (tales como la glucosilación o la fosforilación) y la facilidad de plegamiento en una molécula biológicamente activa . Las líneas celulares de mamífero disponibles como hospederos para la expresión son bien conocidas en la técnica e incluyen, pero no están limitadas a, lineas celulares inmortalizadas disponibles de la American Type Culture Collection (ATCC) , que incluyen pero no están limitadas a células de ovario de hámster Chino (CHO) , células HeLa, células de riñon de hámster bebé (BHK) , células de riñon de mono (COS), células de carcinoma celular humano (por ejemplo, Hep G2), y un número de otras líneas celulares. En ciertas modalidades, las líneas celulares pueden ser seleccionadas a través de la determinación de cuáles líneas celulares tiene altos niveles de expresión y producen constitutivamente los anticuerpos con propiedades de enlace a B7RP1. En otra modalidad, una linea celular proveniente de una linea de células B que no elabora por si misma el anticuerpo, pero que tiene una capacidad para elaborar y secretar un anticuerpo heterólogo, puede ser seleccionada. Los anticuerpos de la invención son útiles para detectar B7RP1 en muestras biológicas y la identificación de células o tejidos que producen la proteina B7RP1. Los anticuerpos de la invención que se enlazan específicamente a B7RP1 pueden ser útiles en el tratamiento de enfermedades mediadas por B7RP1. Dichos anticuerpos pueden ser utilizados en ensayos de enlace para detectar B7RP1 y para inhibir B7RP1 para que no forme un complejo con los receptores de B7RP1. Los anticuerpos que se enlazan a B7RP1 y bloquean la interacción con otros compuestos de enlace, pueden tener uso terapéutico en la modulación de las enfermedades mediadas por B7RP1. En ciertas modalidades, los anticuerpos para B7RP1 pueden bloquear el enlace de B7RP1 a su receptor, que puede dar como resultado la perturbación de la cascada de transducción de señal, inducida por B7RP1. La presente invención también se refiere al uso de uno o más de los anticuerpos de la presente invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un trastorno o afección provocada por la expresión incrementada de B7RP1 o la sensibilidad incrementada a B7RP1 en un paciente, tal como cualquiera de los trastornos o condiciones descritas en la presente. En ciertas modalidades, la invención proporciona las composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o una pluralidad de anticuerpos de la invención, conjuntamente con un diluyente farmacéuticamente aceptable, portador, solubilizador, emulsificante, conservador y/o adyuvante también farmacéuticamente aceptables. Los materiales de formulación aceptables son no tóxicos para los recipientes o pacientes a las dosis y concentraciones empleadas. En modalidades preferidas, se proporcionan las composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de los anticuerpos anti-B7RPl. En ciertas modalidades, los materiales de formulación aceptable son no tóxicos para los pacientes a las dosis y concentraciones empleadas. En ciertas modalidades, la composición farmacéutica puede contener materiales de formulación para modificar, mantener, o preservar, por ejemplo, el pH, la osmolaridad, la viscosidad, la claridad, el color, la isotonicidad, el olor, la esterilidad, la estabilidad, la velocidad de dilución o la liberación, adsorción o penetración de la composición. En tales modalidades, los materiales de formulación adecuados incluyen, pero no están limitados a, aminoácidos (tales como glicina, glutamina, asparagina, arginina o lisina) , antimicrobianos; antioxidantes (tales como ácido ascórbico, sulfito de sodio o sulfito ácido de sodio) ; amortiguadores (tales como borato, bicarbonato, Tris-HCl, citratos, fosfatos u otros ácidos orgánicos) ; agentes de volumen (tales como manitol o glicina) ; agentes quelantes (tales como ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) ) ; agentes formadores de complejo (tales como cafeína, polivinilpirrolidona, beta-ciclodextrina o hidroxipropil-beta-ciclodextrina) ; rellenadores; monosacáridos; disacáridos; y otros carbohidratos (tales como glucosa, mañosa o dextrinas); proteínas (tales como albúmina sérica, gelatina o inmunoglobulinas); agentes colorantes, saborizantes y diluyentes; agentes emulsificantes; polímeros hidrofílicos (tales como polivinilpirrolidona); polipéptidos de bajo peso molecular; contraiones formadores de sales (tales como sodio) ; conservadores (tales como cloruro de benzalconio, ácido benzoico, ácido salicílico, timerosal, alcohol fenetilico, metilparabeno, propilparabeno, clorhexidina, ácido sórbico o peróxido de hidrógeno) ; solventes (tales como glicerina, propilenglicol o polietilenglicol) ; alcoholes de azúcar (tales como manitol o sorbitol); agentes suspensores; agentes surfactantes o humectantes (tales como pluronics, PEG, esteres de sorbitan, polisorbatos tales como polisorbato 20, polisorbato 80, tritón, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal) ; agentes aumentadores de la estabilidad (tales como sucrosa o sorbitol); agentes aumentadores de la tonicidad (tales como haluros de metal alcalino, por ejemplo, cloruro de sodio o potasio, manitol, sorbitol); vehículos de distribución; diluyentes; excipientes y/o adyuvantes farmacéuticos. Ver REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18a Edición, (A.R. Gennaro, ed. ) , 1990, Mack Publishing Company. En ciertas modalidades, la composición farmacéutica óptima será determinada por una persona experta en la técnica dependiendo de, por ejemplo, la ruta de administración pretendida, el formato de distribución y la dosis deseada. Ver, por ejemplo, REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, supra. En ciertas modalidades, tales composiciones pueden influenciar el estado físico, la estabilidad, la velocidad de liberación in vivo y la velocidad de despejo in vivo de los anticuerpos de la invención. En ciertas modalidades, el vehiculo o portador primario en una composición farmacéutica puede ser ya sea de naturaleza acuosa o no acuosa. Por ejemplo, un vehículo o portador adecuado puede ser agua para inyección, solución salina fisiológica o fluido cerebroespinal artificial, posiblemente suplementado con otros materiales comunes en las composiciones para la administración parenteral. La solución salina amortiguada neutra o la solución salina mezclada con albúmina sérica son vehículos ejemplares adicionales. En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden amortiguador Tris de aproximadamente pH 7.0-8.5, o amortiguador de acetato de aproximadamente pH 4.0-5.5, y pueden incluir además sorbitol, sucrosa, Tween-20 y/o un sustituto adecuado para los mismos. En ciertas modalidades de la invención, las composiciones del anticuerpo anti-B7RPl pueden ser preparadas para el almacenamiento mediante- mezclado de la composición seleccionada que tiene el grado deseado de pureza, con agentes de formulación óptimos (REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, supra) en la forma de una torta liofilizada o una solución acuosa. Además, en ciertas modalidades, el producto del anticuerpo anti-B7RPl puede ser formulado como un liofilizado utilizando excipientes apropiados tales como sucrosa . Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser seleccionadas para la distribución parenteral. Alternativamente, las composiciones pueden ser seleccionadas para inhalación o para la distribución a través del tracto digestivo, tales como oralmente. La preparación de tales composiciones farmacéuticamente aceptables está dentro de la experiencia de la técnica. Los componentes de formulación están presentes en concentraciones que son aceptables para el sitio de administración. En ciertas modalidades, los amortiguadores son utilizados para mantener las composiciones a un pH fisiológico o a un pH ligeramente inferior, tipicamente dentro de un intervalo de pH de aproximadamente 5 a aproximadamente 8. Cuando la administración parenteral es contemplada, las composiciones terapéuticas para el uso en esta invención pueden ser proporcionadas en la forma de una solución acuosa parenteralmente aceptable, libre de pirógenos, que comprende el anticuerpo anti-B7RPl deseado en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Un vehículo particularmente adecuado para la inyección parenteral es agua destilada estéril en la cual el anticuerpo anti-B7RPl es formulado como una solución isotónica estéril, adecuadamente preservada. En ciertas modalidades, la preparación puede involucrar la formulación de la molécula deseada con un agente, tales como microesferas inyectables, partículas bioerosionables, compuestos poliméricos (tales como ácido poliláctico o ácido poliglicólico) , esferas o liposomas, que pueden proporcionar liberación controlada o sostenida del producto que puede ser distribuido via la inyección de depósito. En ciertas modalidades, el ácido hialurónico puede también ser utilizado, teniendo el efecto de promover la liberación sostenida en la circulación. En ciertas modalidades, los dispositivos de administración de fármaco implantable pueden ser utilizados para introducir la molécula de anticuerpo deseada. Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser formuladas para la inhalación. En estas modalidades, los anticuerpos anti-B7RPl son ventajosamente formuladas como un polvo inhalable seco. En ciertas modalidades, las soluciones de inhalación del anticuerpo anti-B7RPl pueden ser también preparadas con un propelente para la distribución del aerosol. En ciertas modalidades, las soluciones pueden ser nebulizadas. La administración pulmonar y los métodos de formulación por lo tanto son además descritas en la Solicitud de Patente Internacional No. PCT/US94/001875, la cual se incorpora por referencia y describe la distribución pulmonar de las proteínas químicamente modificadas. Se contempla también que las formulaciones pueden ser administradas oralmente. Los anticuerpos anti-B7RPl que son administrados de esta manera pueden ser formulados con o sin portadores rutinariamente utilizados en la composición de formas de dosis sólidas tales como tabletas y cápsulas. En ciertas modalidades, una cápsula puede ser diseñada para liberar la porción activa de la formulación en el punto en el tracto gastrointestinal cuando la biodisponibilidad es elevada al máximo y se reduce al mínimo la degradación presistémica . Agentes adicionales pueden ser incluidos para facilitar la absorción del anticuerpo anti-B7RPl. Los diluyentes, saborizantes, ceras de bajo punto de fusión, aceites vegetales, lubricantes, agentes suspensores, agentes de desintegración de tabletas y aglutinantes, pueden ser también empleados. Una composición farmacéutica de la invención es proporcionada para comprender una cantidad efectiva de uno o una pluralidad de anticuerpos anti-B7RPl en una mezcla con excipientes no tóxicos que son adecuados para la fabricación de tabletas. Mediante la disolución de las tabletas en agua estéril u otro vehículo apropiado, pueden ser preparadas las soluciones en forma de dosis unitaria. Los excipientes adecuados incluyen, pero no están limitados a, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio o bicarbonato de sodio, lactosa o fosfato de calcio; o agentes aglutinantes, tales como almidón, gelatina o acacia; o agentes lubricantes tales como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las composiciones farmacéuticas adicionales serán evidentes para aquellos expertos en la técnica, incluyendo las formulaciones que involucran anticuerpos anti-B7RPl en formulaciones de distribución sostenida o controlada. Las técnicas para la formulación de una variedad de otros medios de distribución sostenida o controlada, tales como portadores de liposoma, micropartículas bio-erosionables o esferas porosas e inyecciones de depósitos, son también conocidas por expertos en la técnica. Ver por ejemplo, la Solicitud de Patente Internacional No. PCT/US93/00829, la cual se incorpora por referencia y descrito en la liberación controlada de micropartículas poliméricas porosas para la distribución de composiciones farmacéuticas. Las preparaciones de liberación sostenida pueden incluir matrices poliméricas semi-permeables en la forma de artículos conformados, por ejemplo, películas o microcápsulas. Las matrices de liberación sostenida pueden incluir poliésteres, hidrogeles, poliláctidos (como se describe en la Patente de los Estados Unidos No. 3,773,919 y la Solicitud de Patente Europea Publicación No. EP 058481, cada una de las cuales se incorpora por referencia en la presente) , los copolímeros de ácido L-glutámico y gamma-etil-L- glutamato (Sidman et al, 1983, Biopolymers 22:547-556), poli- (2-hidroxietil-metacrilato) (Langer et al, 1981, J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277 y Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105), acetato de etilenvinilo (Langer et al, supra) o ácido poli-D(-)-3-hidroxibutírico (Solicitud de Patente Europea Publicación No. EP 133,988). Las composiciones de liberación sostenida pueden también incluir liposomas que pueden ser preparados mediante cualquiera de los diversos métodos conocidos en la materia. Ver por ejemplo, Eppstein et al, 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. Estados Unidos 82:3688-3692; Solicitudes de Patentes Europea Publicaciones Nos. EP 036,676; EP 088,046 y EP 143,949, incorporadas por referencia. Las composiciones farmacéuticas utilizadas para la administración in vivo son típicamente proporcionadas como preparaciones estériles. La estabilización puede ser lograda mediante filtración a través de membranas de filtración estériles. Cuando la composición es liofilizada, la esterilización utilizando este método puede ser conducida ya sea antes de o después de la liofilización de la reconstitución. Las composiciones para la administración parenteral pueden ser almacenadas en forma liofilizada o en una solución. Las composiciones parenterales son en general colocadas en un recipiente que tiene una compuerta de aceite estéril, por ejemplo, una bolsa de solución intravenosa o un frasco que tiene un tapón perforable por una aguja de inyección hipodérmica. Una vez que la composición farmacéutica ha sido formulada, ésta puede ser almacenada en frascos estériles, como una solución, suspensión, gel, emulsión, sólido, o como un polvo deshidratado o liofilizado. Tales formulaciones pueden ser almacenadas ya sea en forma lista para el uso o en una forma (por ejemplo, liofilizada) que es reconstituida antes de la administración. La invención también proporciona los kits para producir una unidad de administración de dosis simple. Los kits de la invención pueden cada uno contener un primer recipiente que tiene una proteína deshidratada y un segundo recipiente que tiene una formulación acuosa. En ciertas modalidades de esta invención, son proporcionados los kits que contienen jeringas prellenadas simples y de cámaras múltiples (por ejemplo, jeringas liquidas y liojeringas) . La cantidad efectiva de una composición farmacéutica que contiene el anticuerpo anti-B7RPl, que va a ser empleada terapéuticamente dependerá, por ejemplo, del contexto terapéutico y de los objetivos. Una persona experta en la técnica apreciará que los niveles de dosificación apropiados para el tratamiento variaran dependiendo, en parte, de la molécula distribuida, la indicación para la cual está siendo utilizado el anticuerpo anti-B7RPl, la vía de administración y el tamaño (peso corporal, superficie corporal o tamaño de órgano) y/o la afección (la edad, y la salud general) del paciente. En ciertas modalidades, el médico puede titular la dosis y modificar la vía de administración para obtener el efecto terapéutico óptimo. Una dosis típica puede estar en el intervalo de aproximadamente 0.1 µg/kg hasta aproximadamente 30 mg/kg o más, dependiendo de los factores mencionados anteriormente.

En ciertas modalidades, la dosis puede estar en el intervalo de 0.1 µg/kg hasta aproximadamente 30 mg/kg; de 1 µg/kg hasta aproximadamente 30 mg/kg; y desde 5 µg/kg hasta aproximadamente 30 mg/kg. La frecuencia de dosificación dependerá de los parámetros farmacocinéticos del anticuerpo anti-B7RPl particular en la formulación utilizada. Típicamente, un médico administra la composición hasta que es alcanzada una dosis que logra el efecto deseado. La composición puede ser administrada por lo tanto como una dosis simple, o como dos o más dosis (que pueden o no contener la misma cantidad de la molécula deseada) sobre el tiempo, o como una infusión continua vía un dispositivo de implantación o catéter. La refinación adicional de la dosis apropiada es ordinariamente realizada por aquellos de experiencia ordinaria en la técnica, y está dentro del ámbito de las tareas rutinariamente realizadas por ellos. Las dosis apropiadas pueden ser averiguadas a través del uso de los datos-respuesta apropiados. En ciertas modalidades, los anticuerpos de la invención pueden ser administrados a pacientes a todo lo largo de un periodo de tiempo prolongado. La administración crónica de un anticuerpo de la invención reduce al mínimo la respuesta inmune alérgica o adversa comúnmente asociada con los anticuerpos que son producidos contra un antígeno humano en un animal no humano, por ejemplo, un anticuerpo no completamente humano producido en una especie no humana. La ruta de administración de la composición farmacéutica está de acuerdo con los métodos conocidos, por ejemplo, oralmente, a través de inyección por las rutas intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimal) , intracerebroventricular, intramuscular, intra-ocular, intraarterial, intraportal, o intralesional; mediante los sistemas de liberación sostenida o mediante dispositivos de implantación. En ciertas modalidades, las composiciones pueden ser administradas por inyección de bolo o continuamente por infusión o dispositivos de implantación. La composición puede también ser administrada localmente vía la implantación de una membrana, esponja u otro material apropiado sobre el cual la molécula deseada ha sido absorbida o encapsulada. En ciertas modalidades, donde es utilizado un dispositivo de implantación, el dispositivo puede ser implantado dentro de cualquier tejido u órgano adecuado, y la distribución de la molécula deseada puede ser vía la difusión, bolo de liberación sincronizado o administración continúa. Puede ser también deseable utilizar composiciones farmacéuticas del anticuerpo anti-B7RPl de acuerdo con la invención ex vivo . En tales casos, las células, tejidos u órganos que han sido removidos del paciente son expuestos a las composiciones farmacéuticas del anticuerpo anti-B7RPl después de lo cual las células, los tejidos y/o los órganos, son subsecuentemente implantados nuevamente en el paciente. En particular, los anticuerpos anti-B7RPl pueden ser distribuidos mediante implantación de ciertas células que han sido manipuladas por ingeniería genética, utilizando métodos tales como aquellos descritos en la presente para expresar y secretar el polipéptido. En ciertas modalidades, tales células pueden ser células animales o humanas, y pueden ser autólogas, heterólogas, o xenogénicas. En ciertas modalidades, las células pueden ser inmortalizadas. En otras modalidades, con el fin de disminuir la probabilidad inmunológica, las células pueden ser encapsuladas para evitar la infiltración de los tejidos circunvecinos. En modalidades adicionales, los materiales de encapsulamiento son tipicamente biocompatibles, alojamientos poliméricos semipermeables o membranas que permiten la liberación del o de los productos proteicos, pero previene la destrucción de las células por el sistema inmune del paciente o por otros factores dañinos de los tejidos circunvecinos.

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos, incluyendo los experimentos conducidos y los resultados logrados, son proporcionados para fines ilustrativos únicamente, y no se pretende que sean limitantes de la invención.

Ejemplo 1 Producción de Anticuerpos Monoclonales Humanos Contra la proteína 1 relacionada a B7 (B7RP1) An tígeno B7RP1 humano recombinante purificado (hB7RPl-l) preparado como se describe en la Solicitud de Patente Internacional No. No. WO 00/46240, la cual se incorpora por referencia en la presente, o las células CHO transfectadas para expresar hB7RP-l fueron utilizadas como el antígeno. El B7RP-1 humano maduro tiene la secuencia de aminoácidos de los residuos X al 302 en la secuencia mostrada en WO 00/46240 como SEQ ID No: 17, en donde X puede ser 19, 20, 21, 22, 24 ó 28.

Ra tones HuMab transgénicos Los anticuerpos monoclonales completamente humanos para B7RP-1 fueron preparados utilizando las cepas HCo7 y HCol2 de los ratones transgénicos HuMab, las cuales expresan los genes de anticuerpo humanos. En estas dos cepas de ratón, el gen de la cadena ligera kappa de ratón endógena ha sido homogéneamente desintegrado como se describe en Chen et al. (1993) EMBO J. 12:811-820 y el gen de la cadena pesada de ratón endógena ha sido homozigótamente desintegrado como se describe en el Ejemplo 1 de la Publicación del PCT WO 01/09187. Cada una de estas cepas de ratón lleva un transgen de la cadena ligera kappa humana, KCo5, como se describe en Fishwild et al. (1996) Nature Biotechnology 14:845-851. La cepa HCo7 lleva el transgen de la cadena pesada humana HCo7 como se describe en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,545,806; 5,625,825; y 5,545,807. La cepa HCol2 lleva el transgen de la cadena pesada humana HCol2 como se describe en el Ejemplo 2 de la Publicación del PCT WO 01/09187.

Inmunizaciones de HuMab : Para generar anticuerpos monoclonales completamente humanos para B7RP-1, los ratones HuMab de la cepa HCo7 ó HCol2 fueron inmunizados con B7RP-1 recombinante purificado ó células CHO transfectadas para expresar B7RP-1. Los esquemas de inmunización generales para los ratones HuMab son descritos en Lonberg et al (1994) Nature 368(6474): 856-859; Fishwild et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851 y la Publicación del PCT WO 98/24884. Los ratones fueron de 6-16 semanas de edad después de la primera infusión del antígeno. Una preparación recombinante purificada del antígeno de B7RP-1 (50 µg) o una preparación de las células CHO transfectadas (células 3.5 x 106 - 1 x 107) se utilizó para inmunizar a los ratones HuMab intraperitonealmente.

Ratones transgénicos fueron inmunizados dos veces con el antígeno purificado en adyuvante completo de Freund intraperitonealmente, seguido por 2-4 semanas de inmunizaciones IP (hasta un total de 8 inmunizaciones) con el antígeno purificado en adyuvante incompleto de Freund. La inmunización de células CHO transfectadas para expresar B7RP-1 fue la misma, excepto que no se utilizaron con las células el adyuvante completo de Freund y el adyuvante incompleto de Freund. La respuesta inmune fue monitorizada mediante sangrados retroorbitales . El plasma fue seleccionado por ELISA (como se describe más adelante) , y los ratones con suficientes títulos de inmunoglobulina humana anti-B7RP-l fueron utilizadas para las fusiones. Los ratones fueron reforzados intravenosamente con el antígeno, 3 y 2 días antes del sacrificio y el retiro del bazo. Típicamente, se realizaron 10-20 fusiones para cada antigeno. Varias docenas de ratones fueron inmunizados para cada antígeno. Un total de 28 ratones de las cepas de ratones HCo7 y HCol2 fueron inmunizados con B7RP-1.

Selección de ra tones HuMab que Producen los Anticuerpos an ti -B7RP-1 Para seleccionar los ratones HuMab que producen los anticuerpos que se enlazaron a B7RP-1, los sueros provenientes de los ratones inmunizados fueron probados por ELISA como se describe por Fishwild et al. (1996). En resumen, las placas de microtitulación fueron recubiertas con el B7RP-1 recombinante purificado a 1-2 µg /ml en PBS, 50 µl/pozo incubados a 4°C toda la noche, y luego bloqueados con 200 µl/pozo de suero de pollo al 5% en PBS/Tween (0.05%). Las diluciones del plasma provenían de ratones inmunizados con B7RP-1 fueron agregadas a cada pozo e incubadas por 1-2 a temperatura ambiente. Las placas fueron lavadas con PBS/Tween y luego incubadas con un anticuerpo policlonal Fc de cabra anti-lgG humana, conjugado con peroxidasa de rábano (HRP) por 1 hora a temperatura ambiente. Después del lavado, las placas fueron reveladas con el sustrato ABTS (Sigma, A-1888, 0.22 mg/ml) y analizadas por espectrofotómetro a OD 415-495. Los ratones que desarrollaron los títulos más altos de los anticuerpos anti-B7RP-l fueron utilizados para las fusiones. Las fusiones fueron realizadas como se describe más adelante y los sobrenadantes de hibridoma fueron probados para la actividad anti-B7RP-l mediante ELISA.

Generación de Hibridomas que Producen Anticuerpos Monoclonales Humanos para B 7RP-1 : Los esplenocitos de ratón, aislados de ratones HuMab, fueron fusionados con PEG a una línea celular de mieloma de ratón basado en los protocolos estándares. Los hibridomas resultantes fueron luego seleccionados para la producción de anticuerpos específicos del antígeno. Suspensiones celulares simples de linfocitos esplénicos provenientes de los ratones inmunizados, fueron fusionadas a un cuarto del número de células de mieloma de ratón que no secretan SP2/0 (ATCC, CRL 1581) con 50% de PEG (Sigma) . Las células fueron sembradas en placa aproximadamente a 1 x 105/pozo en placas de microtitulación de fondo plano, seguido por aproximadamente dos semanas de incubación en medio selectivo que contenía 10% de suero fetal bovino, 10% de medio condicionado con P388D1 (ATCC, CRL TIB-63) 3-5% de origen (IGEN) en DMEM (Mediatech, CRL 10013, con alto contenido de glucosa, L-glutamina y piruvato de sodio) más HEPES 5 mM, 2-mercaptoetanol 0.055 mM, 50 mg/ml de gentamicina y lx de HAT (Sigma, CRL P-7185) . Después de 1-2 semanas, las células fueron cultivadas en el medio en el cual el HAT fue reemplazado con HT . Las células individuales fueron luego seleccionadas por ELISA (descrito anteriormente) para los anticuerpos IgG monoclonales anti-B7RP-l humanos. Una vez que ocurrió el crecimiento de hibridoma extenso, el medio fue monitorizado usualmente después de 10-14 dias. Los hibridomas que secretan el anticuerpo fueron sembrados nuevamente en placa, seleccionados nuevamente y, si eran todavía positivos para la IgG humana, los anticuerpos monoclonales anti-B7RP-l fueron subclonados al menos dos veces mediante dilución limitante. Los subclones estables fueron luego cultivados in vi tro para generar pequeñas cantidades del anticuerpo en el medio de cultivo tisular para la caracterización posterior.

Ejemplo 2 Clonación de las Cadenas Pesadas y Ligeras del Anticuerpo an ti -B7RPl El hibridoma que expresa el anticuerpo monoclonal que se enlaza a B7RP1, 16H, fue utilizado como una fuente para aislar el ARN total utilizando el reactivo TRIzol® (Invitrogen). Un oligonucleótido 51 RACE (amplificación rápida de los extremos de ADNc) (5'- CGA CUG GAG CAC GAG GAC ACU GAC AUG GAC UGA AGG AGU AGA AA-3 ' ; SEQ ID No: 69) fue ligado al ARN utilizando los componentes del kit GeneRacerMR (Invitrogen) y el protocolo del mismo. El ADNc de primera hebra fue sintetizado utilizando un cebador aleatorio con un adaptador de extensión (5'-_GGC CGG ATA GGC CTC CAN NNN NNT-3') (SEQ ID No: 59) y un ensayo preparativo 5 ' RACE (amplificación rápida de los extremos de ADNcA) fue realizada utilizando el kit GeneRacerMR (Invitrogen) de acuerdo con las instrucciones provenientes del fabricante. Para la preparación del ADNc, que codifica para la cadena ligera completa, el cebador delantero fue el cebador anidado GeneRacerMR, y el cebador inverso fue (5'- GGG GTC AGG CTG GAA CTG AGG-3') (SEQ ID No: 60). Para preparar el ADNc que codifica para la región variable de cadena pesada, el cebador delantero fue el cebador anidado GeneRacerMR y el cebador inverso fue (5' -TGA GGA CGC TGA CCA CAC G-31) (SEQ ID No: 61) . Los productos de RACE fueron clonados dentro de pCR4-TOPO (Invitrogen) y las secuencias fueron determinadas. Las secuencias de consenso fueron utilizadas para diseñar cebadores para la amplificación por PCR en cadena del anticuerpo de longitud completa. Para preparar ADNc que codifica para la cadena ligera kappa de 16H anti-B7RPl, el cebador de PCR 5' codificó el extremo amino de la secuencia de señal, un sitio de enzima de restricción Xbal una secuencia Kozak optimizada (5' -CAG CAG AAG CTT CTA GAC CAC CAT GGA CAT GAG GGT CCT CGC TCA GCT CCT GGG-3') (SEQ ID No: 62). El cebador 3' codifica para el extremo carboxilo y el codón de terminación, así como un sitio de restricción Salí (5' -CTT GTC GAC TCA ACA CTC TCC CCT GTT GAA GCT C-3') (SEQ ID No: 63) . El fragmento del producto de PCR resultante fue purificado, digerido con Xbal y Salí, y luego aislado en gel y ligado dentro del vector de expresión de mamífero pDSRo.20 (ver Solicitud Internacional, Publicación No. WO 90/14363, que se incorpora por referencia en la presente para cualquier propósito. pDSR 20 fue producido mediante el cambio del nucleótido 2563 en pDSRal9 de una "guanosina" a una "adenosina" mediante mutagénesis dirigida al sitio) . Para preparar el ADNc que codifica para la cadena pesada de 16H anti-B7RPl, el cebador de PCR 5' codificó el extremo amino de la secuencia de señal, un sitio de enzima de restricción Xbal, y una secuencia Kozak optimizada (5 '-ACA ACA AAG CTT CTA GAC CAC CAT GGA GTT GGG GCT GAA CTG G-3') (SEQ ID No: 64). El cebador 3' codificó el extremo carboxilo de la región variable, incluyendo un sitio BsmBI de hebra en sentido, de origen natural (5' -GTG GAG GCA CTA GAG ACG GTG ACC AGG ATT CC -3'; SEQ ID No: 65). El producto resultante fue purificado, digerido con Xbal y BsmBI, aislado en gel y ligado dentro del vector pDSRa20 que contenia la región constante de IgGl humana y también dentro del vector pDSRa20 que contenia la región constante de IgG2 humana. Todas las regiones variables de cadena pesada anti-B7RPl derivadas del hibridoma no obstante de la región constante nativa asociada, fueron clonadas como se describe anteriormente dentro de los vectores pDSRa20 que contenían la IgGl humana y las regiones constantes de IgG2 humana.

Ejemplo 3 Expresión de los Anticuerpos Anti-B7RP1 en Células de Ovario de Hámster Chino (CHO) La expresión estable del mAb 16H anti-B7RPl fue lograda mediante co-transfección de los plásmidos 16H-cadena pesada/pDSRal9 IgG2 B7RPl-kappa/pDSRal9 dentro de células de ovario de hámster Chino adaptadas libres de suero, deficientes en la dihidrofolato-reductasa (DHFR-) utilizando un método de fosfato de calcio (secuencia de cadena pesada de 16H de longitud completa, es mostrada en la SEQ ID No: 44; la secuencia de cadena kappa 16H es mostrada en la SEQ ID No: 45). Las células transfectadas fueron seleccionadas en el medio que contenia suero dializado pero no contenía la hipoxantina-timidina para asegurar el crecimiento de las células que expresan la enzima DHFR. Los clones transfectados fueron seleccionados utilizando ensayos tales como ELISA, con el fin de detectar la expresión del mAb 16H anti-B7RPl en el medio condicionado. Los clones de más alta expresión fueron sometidos a concentraciones cada vez mayores de metotrexato (MTX) para la amplificación de DHFR. Los clones amplificados por MTX fueron seleccionados utilizando ensayos tales como ELISA con el fin de detectar la más alta expresión del mAb 16H anti-B7RPl en el medio condicionado. Los clones de más alta expresión fueron sometidos a subclonación para obtener una población homogénea y la creación de bancos de células. Otros anticuerpos anti-B7RPl recombinantes de la invención pueden ser generados en células de ovario de hámster Chino deficientes en DHFR utilizando el mismo protocolo que se describe anteriormente para el anticuerpo monoclonal anti-B7RP1. Las secuencias de ADN que codifican para la cadena pesada o la cadena ligera completas de cada anticuerpo anti-B7RPl de la invención son clonadas dentro de los vectores de expresión. Las células CHOd son co-transfectadas con un vector de expresión capaz de expresar una cadena pesada completa y un vector de expresión que expresa la cadena ligera completa del anticuerpo anti-B7RPl apropiado. Por ejemplo, para generar un anticuerpo 5D anti-B7RPl, las células son co-t ranfectadas con un vector capaz de expresar una cadena pesada completa que comprende la secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 47 y un vector capaz de expresar una cadena ligera completa que comprende la secuencia de aminoácidos descrita en la SEQ ID No: 48. La Tabla 2 resume las cadenas ligeras completas, ejemplares y las cadenas pesadas completas, ejemplares para los anticuerpos anti-B7RPl que tienen las regiones constantes de cadena pesada de IgG humana. Una persona experta en la técnica reconocerá que la IgGl o la IgG2 podrían ser sustituidas una por la otra (por ejemplo, donde la IgGl es listada en la tabla, la IgG2 podría estar presente, y viceversa) .

Alternativamente, cualquier otra inmunoglobulina (por ejemplo, IgM, IgA, IgE ó IgH) podría ser utilizado para generar anticuerpos de la invención.

Tabla 2 Anticuerpo Región Variable de Cadena Cadenas Pesadas Pesada + Región Constante de Completas Cadena Pesada 16H(IgG2) SEQ ID NO: 7 + SEQ ID NO: 41 SEQ ID NO: 44 16H(IgGl) SEQ ID NO: 7 + SEQ ID NO: 42 SEQ ID NO: 70 16Hg(IgG2) SEQ ID NO: 8 + SEQ ÍD NO: 41 SEQ ID NO: 46 16Hg(IgGl) SEQ ID NO: 8 + SEQ ID NO: 42 SEQ ID NO: 71 5D(IgGl) SEQ ID NO: 9 + SEQ ID NO: 42 SEQ ID NO: 47 5D(IgG2) SEQ ID NO: 9 + SEQ ID NO: 41 SEQ ID NO: 72 2H(IgG2) SEQ ID NO: 10 + SEQ ID NO: 41 SEQ ID NO: 49 2H(IgGl) SEQ ID NO: 10 + SEQ ID NO: 42 SEQ ID NO: 73 2Hg(IgG2) SEQ ID NO: 11 + SEQ ID NO: 41 SEQ ID NO: 51 2Hg(IgGl) SEQ ID NO: 11 + SEQ ID NO: 42 SEQ ID NO: 74 43H(IgG2) SEQ ID NO: 14 + SEQ ID No: 1 SEQ ID NO: 52 43H(IgGl) SEQ ID NO: 14 + SEQ ID NO: 42 SEQ ID NO: 75 4lH(IgG2) SEQ ID NO: 13 + SEQ ID NO: 41 SEQ ID NO: 54 41H(IgGl) SEQ ID NO: 13 + SEQ ID NO: 42 SEQ ID NO: 76 Ejemplo 4 Producción del Anticuerpo anti-B7RPl El anticuerpo anti-B7RPl es producido mediante la expresión de una línea clonal de células CHO. Para cada corriente de producción, las células provenientes de un frasco simple son descongeladas en el medio de cultivo celular libre de suero. Las células son desarrolladas inicialmente en un matraz T seguido por matraces giratorios y luego desarrolladas en reactores de acero inoxidable de escala cada vez mayor hasta un biorreactor de 2000 1. La producción es llevada a cabo en un biorreactor de 2000 1 utilizando un cultivo de lote alimentado, en el cual una alimentación de nutrientes que contiene los componentes del medio concentrado, es agregada para mantener el crecimiento celular y la viabilidad del cultivo. La producción dura aproximadamente dos semanas tiempo durante el cual el anticuerpo anti-B7RPl es constitutivamente producido por las células y secretada hacia el medio de cultivo celular. El reactor de producción es controlado a un pH, temperatura y nivel de oxígeno disuelto predeterminado: el pH es controlado por el gas dióxido de carbono y la adición de carbonato de sodio; el oxigeno disuelto es controlado por aire, nitrógeno y flujos de gas de oxígeno. Al final de la producción, el caldo celular es alimentado dentro de una centrifuga de pila de discos y el sobrenadante de cultivo es separado de las células. El concentrado es posteriormente clarificado a través de un filtro profundo seguido por un filtro de 0.2 µm. El medio condicionado aclarado es luego concentrado mediante ultrafiltración de flujo tangencial. El medio condicionado es concentrado 15 a 30 veces. El medio condicionado concentrado, resultante es luego procesado a través de purificación o congelado para la purificación en una etapa posterior .

Ejemplo 5 Creación de línea germinal del mAb 16H La alineación de la secuencia del anticuerpo 16H con las secuencias humanas de línea germinal, mostró que la secuencia estructural en la región variable del anticuerpo 16H fue la más idéntica a las secuencias de línea germinal VH 3-07 y JH4, únicamente con tres diferencias de aminoácidos (Figura ÍA) . La secuencia estructural para la región VK del anticuerpo 16H se encontró que era idéntica para la secuencia de línea germinal VK1-L15. Es teóricamente posible que sean reconocidas hipermutaciones somáticas como extrañas por la respuesta inmune de un paciente; en cuyo caso el paciente podría generar una respuesta anti-idiotipo que podría neutralizar el agente terapéutico. Para reducir esta posibilidad, los tres cambios de aminoácidos en la región estructural VH fueron convertidos nuevamente a las secuencias de línea germinal VH 3-07 y JH4 (Figura ÍA) . Ya que los segmentos de los genes VH y JH de línea germinal están presentes en cada genoma humano, la versión de línea germinal de 16H probablemente no va a ser conocida como extraña por la respuesta inmune de un paciente dosificado. Los bioensayos de co-estimulación en placa fueron conducidos para determinar si los anticuerpos de línea germinal podrían inducir la proliferación de células T con una IC50 similar a la IC50 de los anticuerpos no de linea germinal. Los ensayos de co- estimulación fueron conducidos como se describe más adelante utilizando anti-CD3 y la proteína de fusión hB7RP-l-Fc, confirmando que este anticuerpo de línea germinal, denominado como ldHgermline o 16Hg, conserva las actividades biológicas (Figura IB) .

Ejemplo 6 Medición de Afinidad de los Anticuerpos Monoclonales por Biacore® y KinExA Tres anticuerpos (5D y 16H, preparados como se describe en el Ejemplo 1, y la línea germinal 16H, preparada como se describe en el Ejemplo 5) fueron purificados y sometidos a análisis de afinidad de enlace. El B7RP1-FC fue inmovilizado a una alta densidad sobre un chip sensor CM5 utilizando la química de acoplamiento de amina estándar. Una concentración fija del mAb fue luego incubada con concentraciones variantes de B7RP-1 ó B7RP1-Fc por al menos ocho horas a temperatura ambiente para permitirles alcanzar el equilibrio. Las muestras fueron luego inyectadas sobre la superficie de B7RP1-Fc, y la señal de enlace observada representó el anticuerpo libre remanente en la solución en el equilibrio. Mediante el uso de diferentes concentraciones de anticuerpo (0.2 nM y 1 nM) , la KD de la interacción entre un mAb particular y el ligando fue calculada a partir del análisis de regresión no lineal de las curvas de competencia utilizando un modelo de enlace homogéneo de un solo sitio, de curva doble (Adamczyk et al, 1999, Bioconjugate Chem. 10:1032-37; Adamczyk et al, 2000, Methods 20:319-28). Como se muestra en la Figura 2 y en la Tabla 3, los mAbs 16H, 16Hg, y 5D mAbs todos se enlazaron a las proteínas solubles B7RP-1 y B7RP-1-Fc con altas afinidades. Además, los resultados indicaron que el 16H (no de línea germinal) y el 16Hg (línea germinal) reaccionaron similarmente, demostrando que la línea germinal no afectó significativamente el enlace entre el anticuerpo y el ligando.

Tabla 3 Sumario de los Valores de KD B7RP-1 B7RP1-FC 5D 37 pM 1.6 pM 16H 1.9 nM 27 pM 16H (de linea 2.7 nM 17 pM germinal) El enlace de los anticuerpos 5D, 2H, y 2H de linea germinal fue también probado utilizando la tecnología KinExA (ensayo de exclusión cinética) . En este ensayo, hB7RP-l fue acoplado a las esferas de agarosa. Las esferas fueron utilizadas para crear una columna de esferas. Las muestras que contenían el anticuerpo a una concentración fija, que se dejaron alcanzar el equilibrio con concentraciones variantes de hB7RP-l, se hicieron luego pasar sobre la columna de esferas. El anticuerpo no formó complejo con el ligando enlazado a las esferas recubiertas. Un anticuerpo secundario anti-Fc humano, marcado fluorescentemente, fue utilizado para detectar el anticuerpo de prueba enlazado. La señal obtenida fue proporcional al anticuerpo libre en solución a una concentración dada del ligando. Utilizando diferentes concentraciones de anticuerpo, la KD de la interacción fue calculada a partir del análisis de regresión no lineal de las curvas de competencia, utilizando un modelo de enlace homogéneo de un solo sitio, de curva doble (Adamczyk et al, 1999, Bioconjugate Chem. 10:1032-37; Adamczyk et al, 2000, Methods 20:319-28) . Las Figuras 3, 4, y 5 muestran los ajustes de curva doble para los anticuerpos 5D, 2H y 2H (línea germinal). Utilizando esa técnica, se observó una diferencia de aproximadamente 10 veces en las KDS para los anticuerpos 5D y 2H. Los resultados de los ensayos Biacore® y KinExA demostraron que el anticuerpo 5D tiene una más alta afinidad por hB7RP-l que para 2H ó 16H. También, la versión de línea germinal del anticuerpo 2H no muestra una diferencia significativa a partir de la construcción no de línea germinal.

Ejemplo 7 Características Funcionales de los Anticuerpos anti-B7RPl Las características funcionales de los anticuerpos B7RP-1 de la invención fueron evaluadas utilizando los ensayos de competencia de enlace, ensayos de co-estimulación in vi tro, ensayos de toxoide tetánico in vi tro .

Estudios de competencia de enlace Los estudios de competencia de enlace fueron conducidos como mAbs 16H para demostrar que éstos pueden competir por el enlace de ICOS para B7RP-1. Las células CHO transfectadas con un gen que codifica para B7RP-1 humano de longitud completa fueron primeramente incubados con cantidades cada vez menores del mAb I6H no marcado, y subsecuentemente teñidas con una proteína de fusión ICOS-Fc marcada fluorescentemente. Las células fueron luego analizadas utilizando citometría de flujo. Como se muestra en la Figura 6, ICOS-Fc tiñeron las células CHO transfectadas con B7RP-1; 0.4 µg/ml del mAb 16H no afectaron el enlace de ICOS-Fc. No obstante, 6 y 25 µg/ml de 16H compitieron eficientemente por el enlace de ICOS-Fc, indicando que el mAb 16H más bien compitió por el enlace de ICOS sobre B7RP-1.

Ensayos de co-estimulación Las placas de cultivo de células (Falcon, Cat No. 353077, fondo U) fueron recubiertas con 1 µg/ml de anticuerpo anti-CD3 humano (PharMingen Cat No. 555336) y 10 µg/ml de la IgG anti-humana (específica de Fc, Sigma Cat No. 13391). Los anticuerpos anti-CD3 y la inmunoglobulina anti-humana en solución salina amortiguada con fosfato (PBS) fueron agregados a cada pozo (100 µl/pozo) . Las placas recubiertas fueron incubadas a 4°C toda la noche a temperatura ambiente por 2 horas. Las placas fueron luego lavadas con PBS dos veces. Después del lavado, se agregaron a cada pozo 1 µg/ml de B7-2Fc humano (R&D System, Cat No.l41-B2) ó 5 µg/ml de hB7RPlFc, cada uno diluido en PBS (100 µl por pozo) . Las placas fueron luego incubadas a temperatura ambiente por 3 horas y lavadas dos veces con PBS después de esto. Las células T humanas purificadas fueron agregadas (1 x 105 por pozo) en un volumen de 200 µl de medio (RPMl 1640 suplementado con 10% de suero fetal de ternera (FCS), penicilina-estreptomicina-L-glutamina (PSG), ß-mercaptoetanol (2-ME) , aspartato de N-acetilo (NAA) y napiruvato) y se incubaron a 37°C, 5% de C02 por 48 horas. La 3_H timidina (ICN Cat No.2404205) fue agregada a 1 µCi/pozo y las células fueron incubadas toda la noche a 37°C, 5% de C02. Las células fueron luego cosechadas y contadas. Placas de cultivo celular (Falcon, Cat No.353077, fondo en U) fueron recubiertas con 0.1 µg/ml de CD3 anti-humano como se describe anteriormente. Las células CHO transfectadas con hB7RPl (irradiadas con 5000RAD) fueron agregadas a 2 x 104 por pozo, seguido por células T humanas purificadas a 1 x 105 por pozo en un volumen de 200 µl. Las placas fueron incubadas a 37 C, 5% de C0 por 48 horas como se describió anteriormente. Se agregó 3~H-timidina a 1 µCi/pozo. Las células fueron incubadas toda la noche, cosechadas y contadas como se describe anteriormente.

Ensayos de Toxoide Tetánico Las PBMC fueron purificadas a partir de sangre humana utilizando un gradiente de Ficoll-Paque (Amersham Biosciences) como sigue. La sangre fue diluida 1:2 con PBS, la sangre diluida fue colocada en capas sobre la parte superior del Ficoll (1/3 de Ficoll a temperatura ambiente + 2/3 de sangre diluida) , centrifugada a 2500 rpm por 30 minutos a temperatura ambiente, la capa superior (plasma y plaquetas) fue aspirada, y la capa de células mononucleares fue transferida a un tubo fresco de 50 ml . Las PBMC aisladas fueron lavadas con PBS (3x el volumen de la capa de células mononuclear) y centrifugado por 10 minutos a 1300 rpm a temperatura ambiente, y lavadas como se describe anteriormente. Las PBMC fueron resuspendidas en el medio (RPMl 1640 + 10% de FBS inactivado por calor + IX PSG + IX NEAA + 55 µM 2-ME) y las células fueron contadas. Las PMBC fueron agregadas a los pozos de una placa de fondo redondo de 96 pozos a 100 µl de PBMC/pozo (3 x 106/ml) . El toxoide tetánico (20 µg/ml; University of Massachusetts) fue agregado para una concentración final de 5 µg/ml. Las células fueron incubadas por 3 días a 37°C; se recolectaron 100 µl del sobrenadante y se incubaron para una adición de 6 a 8 horas en presenciad de 1 µCi/pozo de 3H-timidina (MP Biomedicals) . Las células fueron luego cosechadas y contadas. La Tabla 4 resume las características funcionales de ciertos anticuerpos de la invención como es determinada utilizando los ensayos descritos anteriormente.

Tabla 4 *valores de EC50/KD en pM Ejemplo 8 Mapeo de epitopos Los experimentos fueron conducidos para identificar la región sobre B7RP-1 a la cual se enlazan los anticuerpos monoclonales 16H/16Hg y 5D. Para hacer esto, se desarrolló un novedoso ensayo de enlace de Clasificador de Células Activado por Fluorescencia (FACS) . El dominio extracelular humano (ECD) de B7RP1 (SEQ ID No: 66) así como las formas truncadas de B7RP-1 que contienen ya sea la Igl (similar a IgV; SEQ ID No: 67) o la Ig2 (similar a IgC; SEQ ID No: 68) fueron expresadas como fracciones N-terminales infraestructurales con avidina de pollo. SEQ ID No: 66 (ECD) : DTQEKEVRAMVGSDVELSCACPEGSRFDLNDVYVY QTSESKTWTYHIPQNSSLENVDSRYRNRALMS PAGMLRGDFSLRLFNVTPQDEQKFHCLVLSQSLGFQEVLSVEVTLHVAANFSVPVVSAPHSPSQDELTF TCTSINGYPRPNVY INKTDNSLLDQALQNDTVFLNMRGLYDVVSVLRIARTPSVNIGCCIENVL QQN LTVGSQTGNDIGERDKITENP SEQ ID NO: 67 (similar a IgV) : DTQEKEVRAMVGSDVELSCACPEGSRFDLNDVYVYWQTSESKTVVTYHIPQNSSLENVDSRYRNRALMS PAGMLRGDFSLRLFNVTPQDEQKFHCLVLSQSLGFQEVLSVEVTLHVAANFSVPVVSAPHSPSQDELTF T SEQ ID No: 68 (similar a IgC) : LGFQEVLSVEVTLHVAANFSVPVVSAPHSPSQDELTFTCTSINGYPRPNVY INKTDNSLLDQALQNDT VFLNMRGLYDWSVLRIARTPSVNIGCCIENVLLQQNLTVGSQTGNDIGERDKITENP Los vectores de expresión que contienen los genes que codifican para estas proteínas de fusión fueron individualmente transfectados dentro de las células 293T y los medios condicionados provenientes de estas líneas celulares fueron utilizados como la fuente de la proteina de fusión. El marcador de avidina fue utilizado para capturar las proteinas de fusión B7RP1 a partir de la solución utilizando una esfera recubierta con biotina. Las proteínas de fusión fueron incubadas ya sea con cualquiera de los mAbs 16H ó 5D marcados fluorescentemente, o una proteína de fusión ICOS-Fc marcada fluorescentemente, e incubados con esferas recubiertas con biotina. Las esferas fueron recubiertas y analizadas utilizando citometria de flujo sobre un Becton-Dickinson Bioscience FACScan (BD, Franklin Lakes, NJ) . Como se muestra en la Figura 9A, la tinción fluorescente de las esferas fue detectada con los reactivos 16H, 5D, e ICOS cuando el ECD completo de B7RP-1 fue acoplado, indicando que todos estos tres reactivos podrían enlazarse a ECD de B7RP-1. Similarmente, estos tres reactivos se enlazaron a la proteina de fusión de avidina que contiene únicamente el dominio Igl, indicando que ambos ICOS y los mAbs anti-B7RP-l de bloqueo pudieron enlazarse a esta región. En contraste, ni ICOS ni los mAbs anti-B7RP-l pudieron enlazarse a la proteina de fusión que contenia únicamente el dominio Ig2 próximo a la membrana. De este modo, las regiones de enlace a ICOS, 16H, y 5D sobre B7RP-1 fueron localizadas en el dominio de Igl. Los anticuerpos generados como se describe anteriormente en el Ejemplo 1 y probados para el enlace utilizando el ensayo de enlace de fusión de avidina, pudieron ser divididos en dos clases de epitopos, H y D, como se muestra en la Tabla 5. De los 100 anticuerpos inicialmente seleccionados con base en su habilidad para enlazarse a B7RP1, 15 fallaron en enlazarse al ensayo de enlace de fusión de avidina, más probablemente debido a la degradación.

Tabla 5 Ejemplo 9 Identificación de SNP y análisis funcional Una variante de polimorfismo simple mayor (SNP) fue identificada en B7RP-1 que está presente en la población con una frecuencia de alelo de 28.4% (Figura 7) . La variante fue identificada dentro de la secuencia de codificación de la proteina madura. Una búsqueda del banco de datos del Centro Nacional para la Información de Biotecnología (National Center for Biotechnology Information (NCBI)) reveló una segunda variante de SNP; la segunda variante fue identificada en un análisis individual de 1.5 (cromosoma tres) . La primera variante de SNP (V1281) estuvo localizado en el primer dominio similar a IgV, mientras que la variante NCBI SNP (L221F) estuvo localizada en el segundo dominio similar a IgC. Como se discutió anteriormente, ambos anticuerpos monoclonales, 16H y 5D se enlazan al primer dominio similar a IgV, es improbable que la última variante L221F afecte ya sea el enlace o la función del mAb 16H ó 5D. No obstante, para determinar si estas variantes de SNP afectan el enlace y/o la función de 16H o de 5D, fueron conducidos dos experimentos diferentes. En el primer grupo de experimentos, las proteínas de fusión de avidina fueron construidas con las dos variantes de SNP y probadas para el enlace a los anticuerpos 16H ó 5D en el ensayo de citometría de flujo como se describió anteriormente. Estos mAbs representativos provenientes de las clases de epitopos H y D se enlazaron a las variantes de SNP con eficacia similar que el B7RP-1 de tipo silvestre (Figura 9B) . Estos datos sugirieron que los anticuerpos provenientes de ambas clases de epitopos H y D se enlazan a las variantes SNP de B7RP-1. En el segundo procedimiento, las proteínas de fusión Fc fueron construidas utilizando las secuencias variantes SNP de B7RP-1 y comparadas para la habilidad de estas proteínas para estimular las células T en el ensayo de co-estimulación en placa (Figura 9C) . Los anticuerpos 16H y 5D inhibieron la co-estimulación mediada por las proteínas de fusión Fc de las variantes SNP con similares EC50S que la proteína de fusión tipo silvestre. Tomados conjuntamente, estos datos indicaron que las dos variantes de SNP de B7RP-1 potenciales fueron reconocidos por los anticuerpos de la invención. De este modo, los anticuerpos de la invención pueden enlazarse al objetivo a los pacientes que contienen estas variantes de SNP.

Ejemplo 10 Modelos de Eficacia Animal In vivo Se realizó la habilidad de los anticuerpos para B7RP-1 para inhibir la respuesta inmune utilizando un anticuerpo monoclonal de rata murinizado anti-B7RP-l murino (lB7v2) y retando a ratones BALB/c con la hemocianina de lapa en forma de hoyo de cerradura (KLH) .

Genera ción del anticuerpo monoclonal de ra ta murinizado anti -B7RP-1 1B 7V2 La linea celular de ovario de hámster Chino que sobreexpresó un B7RP-1 murino de longitud completa se inyectó dentro de ratas como una inmunización primaria y subsecuentemente con proteína de fusión murina B7RP-1-Fc para reforzar la respuesta inmune. Los bazos fueron cosechados 3 ó 4 días después del refuerzo intravenoso y las células B esplénicas fueron fusionadas con la línea de mieloma de rata Y3-Agl.2.3 (ATCC CRL-1631). Las células fueron luego seleccionadas en medios suplementados con hipoxantina-aminopterina-timidina (HAT) por 2 semanas y subsecuentemente las células simples subclonadas por dilución limitante. Estos procedimientos son descritos en "Practical Immunology, 2a. ed." Leslie Hudson y Frank C. Hay; Blackwell Scientific Publications 1980. Los genes que codifican para la inmunoglobulina 1B7 fueron clonados a partir de la línea celular 1B7 utilizando procedimientos estándares (Sambrook et al, 2001, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 3a. ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y). El cambio de isotipo de los mAbs humanos anti-huB7Rpl fue logrado mediante clonación de los fragmentos de la región variable que contienen extremos cohesivos de los sitios de restricción Xbal y BsmBI dentro del vector pDSRa con la IgGl humana ó la región constante huIgG2 también tuvo extremos Xbal y BsmBI . Para el anti-muB7RPl de rata, IB7, la quimera fue formada por un procedimiento de PCR de traslape de tres pasos. La región variable de rata fue amplificada por PCR con un cebador 3' que contenía parte, ~ 25-35 de nucleótidos, de la región constante murina. La región constante murina fue amplificada con un cebador 5' que contenía parte, ~ 25-35 nucleótidos, de la región variable de rata. Los dos fragmentos fueron luego utilizados como plantilla y la región variable de rata 5' (que contenia Xbal) y los cebadores de la región constante murina 3' (que contenía Salí) fueron utilizados para generar una cadena ligera o cadena pesada de longitud completa. Los productos de PCR de cadena ligera y cadena pesada fueron luego digeridos con Xbal y Salí y clonados dentro de pDSRal9. Un total de 25 µg de ADN linearizado (12.5 µg pDC323B LC + 12.5 µg pDC324 HC) fueron transfectados dentro de las células CS-9 utilizando electroporación y seleccionados sobre el medio suplementado con DHFR. Para probar la eficacia del mAb 1B7V2, fueron conducidos ensayos de co-estimulación en placa con este mAb. Los resultados fueron comparados con otros mAbs anti-B7RP-l murinos (Figura 10A) . Como se discutió anteriormente, 1B7 es el mAb producido por el hibridoma original; fueron probadas dos preparaciones diferentes (marcadas 1.33 y 7.4). 5E1 y 11HG10 fueron otros anticuerpos monoclonales anti-mB7RP-l generados en las fusiones descritas anteriormente. Finalmente, HK5.3 fue un anticuerpo anti-mB7RP-l comercialmente disponible (ebiosciences # 16-5985-85). El mAb 1B7V2 bloqueó la activación de células T en este ensayo, igual o mejor que cualquiera de los otros mAbs, y de este modo fue seleccionado como la terapéutica subrogada para estudios adicionales.

Reto con el Antigeno en Ra tones La hemocianina de rata en forma de hoyo de cerradura (KLH) fue adquirida de Pierce Biotechnology (Rockford, Illinois) . La solución de dosificación #1 (KLH 5mg/kg en 1 mg/ratón de ALUM) se preparó con partes iguales de 2x ALUM (500 mg de ALUM más 50 ml de PBS (solución salina amortiguada con fosfato)) y 2x KLH (2.0 ml dH20 (libre de ARNasa) mezclada con 20 mg de KLH liofilizado, aforado hasta 20 ml con lx PBS) . La solución de dosificación #2 (KLH 1 mg/kg en 1 mg/ratón ALUM) se preparó con 1 parte de 2x KLH mezclada con 4 partes de solución salina amortiguada con fosfato lx. Ratones BALB/c hembra fueron cebados ya sea con 1 mg/kg de KLH/alumbre y re-inmunizados en el dia 21 con 5 mg/kg de KLH únicamente, introducido mediante inyección intraperitoneal. Los ratones fueron tratados mediante inyección intraperitoneal con lB7v.2, el anticuerpo control isotipo (anti-AGP3 PB) o el vehículo (PBS) solo, comenzando en el día 1 (un día antes de la cebadura con KLH/alumbre) en un volumen final de 200 µl para 5 días. Los ratones fueron sangrados cada 7 días retro-orbitalmente (aproximadamente 200 µl) para obtener aproximadamente 50-100 µl de suero para el análisis de la IgM en suero específica del antígeno (Figura 10B) , IgG2a (Figura 10C) , e IgGl (Figura 10D) . Los ratones isotipo-control y tratado con vehículo mostraron respuestas inmunes primarias y secundarias significativas. La respuesta de IgM no fue afectada por el tratamiento, mientras que el bloqueo de B7RP-1-ICOS con 1B7V2 disminuyó las respuestas de IgG2a e IgGl primaria y secundaria, de una manera estadísticamente significativa . IL-5 es una citocina ligada por células T en respuesta a la estimulación con el antigeno que induce diferenciación y función de células B. Ya que se cree que la interacción B7RP-1/ICOS es critica para la función de las células B dependiente de células T, la medición de los niveles de IL-5 en suero fue utilizada para determinar si la interdicción del B7RP-1/ICOS estaba más bien afectando la función celular. Como se esperaba, el bloqueo de B7RP-1 también inhibió los niveles de IL-5 en suero inducidos por el antígeno. Los sueros fueron cosechados y los ratones provenientes del experimento de reto con antígeno descrito anteriormente, 24 horas después del reto con el antígeno en el día 21, y los niveles de IL-5 en suero fueron determinados mediante ELISA. Como se muestra en la figura 11, los niveles de IL-5 elevados fueron detectados en los ratones de prueba tan tempranamente como las 9 horas después del reto; los niveles comenzaron a declinar a las 48 horas y regresaron a la línea base por las 72 horas. El tratamiento de los ratones con el mAb 1B7V2 condujo a una expresión estadísticamente significativa de los niveles de IL-5 en el punto de tiempo de 24 horas.

Ejemplo 11 Enlace a B7RP-1 de mono cynomolgus Para determinar si los mAbs anti-hB7RP-l también se enlazan a B7RP-1, fueron conducidos experimentos de tinción citométrica de flujo con el mAb 16H, y las células B fueron purificadas a partir de monos cynomolgus y humanos. Como se muestra en la Figura 12A, la adición de 16H marcado fluorescentemente a las células B de cynomolgus condujo a la tinción, indicando que 16H se enlazó más bien B7RP-1 (panel derecho) . Como se esperaba, 16H también tiñó células B humanas (panel izquierdo) . Además, 16H, 16Hg, y 5D fueron probados en ensayos de co-estimulación en placa utilizando células T de cynomolgus, B7RP-1-Fc, y el mAb anti-CD3. Como se muestra en la Figura 12B, los tres mAbs inhibieron la activación de células T de cynomolgus dependiente de B7RP-1 de cynomolgus, indicando que estos mAbs bloquearon funcionalmente la interacción de IC0S-B7RP-1 de cynomolgus.

Ejemplo 12 Respuestas de Antígeno Dependientes de Células T en el Mono Cynomolgus Después de la Administración de los Anticuerpos Anti-B7RP-1 Un estudio con mono cynomolgus fue conducido con dos anticuerpos monoclonales anti-B7RP-l, 16H y 5D, para evaluar la habilidad de los anticuerpos para inhibir la respuesta al antígeno de células B dependiente de células T como se determina por los niveles en suero del anticuerpo específico. En resumen, fueron examinadas las respuestas de anticuerpo anti-hemocianina de lapa (KLH) y del anticuerpo anti-toxoide tetánico, después del reto con el antígeno en presencia de anticuerpos de B7RP-1 del mono cynomolgus. El artículo de prueba 1 fue 16H y el Artículo de prueba 2 fue 5D. El artículo control fue el vehículo para el anticuerpo B7RP-1 (acetato de sodio 0.01, pH 5.0, 5% de sorbitol, 0.004% de Tween 20). La hemocianina de lapa en forma de hoyo de cerradura (KLH) fue adquirida de Pierce Biotechnology (Rockford, Illinois) . La KLH fue preparada mediante reconstitución con agua estéril para producir una solución de reserva de 10 mg/ml. La solución de reserva fue diluida con agua estéril para producir una solución de dilución a 1 mg/ml. El toxoide tetánico utilizado para estos experimentos fue el toxoide tetánico Super-Tet® con w/Havlogen®, adquirido de Intervet™ Inc. (Milsboro, Delaware). El nivel de dosis para estos experimentos fue de 75 IU (0.5 de ml de 150 IU/ml) . La Tabla 6 muestra la distribución del grupo de tratamiento de 28 monos cynomolgus.

Tabla 6 Las dosis del articulo de prueba fueron administradas vía la inyección intravenosa a todos los animales en los días 1, 8, 15, 22, 29, 36, 43, y 50. Los animales programados para necropsia en los grupos 1-4 ( 1/sexo/grupo) recibieron una dosis adicional en el dia 57. La evaluación de la respuesta inmune fue conducida en todos los animales por medio de inmunización con antígenos de KLH y de toxoide tetánico seguido por el muestreo de sangre para las inmunoglobulinas específicas del antigeno (IgM e IgG) . Los valores del titulo estuvieron presentes después de la administración primaria de los antígenos de KLH y de tétanos. Para KLH, los valores primarios del título estuvieron en el intervalo de 0 a 900 para IgM e IgG. Conforme se administró el reto primario con KLH antes de la administración del artículo de prueba, no se evaluó ningún efecto de los anticuerpos para B7RP-1. Para el toxoide tetánico, los valores del título primario tuvieron en el intervalo de 0 a 50 para IgM y de 0 a 4050 para IgG. No existieron diferencias en la respuesta primaria al toxoide tetánico entre los grupos anticuerpo B7RP-1 y el grupo control . Como se esperaba, los valores del título para IgG fueron incrementados después de la administración secundaria de los antígenos de KLH y de tétanos, cuando se compararon a los valores del título primario. Para KLH, los valores del titulo secundario estuvieron en el intervalo de 0 a 300 para IgM y de 0 a 8100 para IgG. No obstante, no existió evidencia de inhibición de la respuesta secundaria de KLH atribuida a la administración de los anticuerpos para B7RP-1. Para el toxoide tetánico, los valores de título secundario estuvieron por debajo de 50 para IgM y estuvieron en el intervalo de 1350 a 36450 para IgG. Los resultados para los valores medios de animales individuales y por grupo son presentados en la Figura 13A (anticuerpo 16H) y la Figura 13B (anticuerpo 5D) para los dias 53 y 57 después del reto secundario con el toxoide tetánico en el día 42. En el día 53, el número de animales que alcanza la respuesta máxima fue de 3/4, 1/4, y 1/4 a niveles de dosis de 0.1, 1, y 8 mg/kg de 16H, respectivamente, y 1/4, 1/4, y 1/4 a los niveles de dosis de 0.1, 1, y 8 mg/kg de 5D respectivamente, en comparación a los 2/4 de los animales control. De este modo, en general, el número de animales que alcanza un titulo alto en el día 53 fue reducido en los grupos tratados con los anticuerpos para B7RP-1. En el día 57, los valores de los títulos fueron mantenidos en los animales control, mientras que los valores de los títulos para varios de los animales tratados con el anticuerpo B7RP-1 declinaron de los valores del dia 53. El número de animales con altos títulos en el día 57 fue de 0/4, 0/4, y 1/4 de niveles de dosis de 0.1, 1, y 8 mg/kg de 16H, respectivamente, y 0/4, 0/4, y 0/4 de niveles de dosis de 0.1, 1, y 8 mg/kg de 5D respectivamente, en comparación a 2/4 de los animales control.

Estos resultados mostraron que los dos anticuerpos 16H y 5D para B7RP-1 inhibieron una respuesta de antígeno de células B dependiente de células T en los monos cynomolgus, como se determinó por los niveles en suero del anticuerpo especifico del toxoide tetánico. Además, la presencia de los anticuerpos para B7RP-1 fue importante para el bloqueo de la interacción de B7RP-1-IC0S durante la respuesta primaria con el fin de detectar un efecto después del reto secundario. Estos resultados y los resultados del Ejemplo 10 demostraron que el producto terapéutico subrogado y los candidatos terapéuticos bloquearon la respuestas inmunes dependientes de las células T y las células B en sistemas modelo murinos y de mono, lo cual indicó que el bloqueo de este eje co-estimulador puede ser eficaz en el tratamiento de enfermedades mediadas por células B tales como el lupus eritomatoso sistémico (SLE) , asma, y artritis reumatoide (RA) . Se debe entender que la descripción anterior enfatiza ciertas modalidades específicas de la invención y que todas las modificaciones o alternativas equivalentes a éstas, están dentro del espíritu y alcance de la invención como se describe en las reivindicaciones anexas . Se hace constar que con relación a esta fecha el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un anticuerpo que se enlaza específicamente a B7RP1, caracterizado porque el anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene una región variable de cadena pesada y una cadena ligera, en donde la región variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad secuencial a la secuencia de aminoácidos descrita en las SEQ ID Nos: 7-14, o un enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 2. El anticuerpo aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo se enlaza específicamente a B7RP1 humano pero no a B7RP1 de ratón. 3. El anticuerpo aislado de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el anticuerpo se enlaza específicamente a B7RP1 humano y a B7RP1 de ratón. 4. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la región variable de cadena pesada comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en las SEQ ID Nos: 7-14, o un sitio de enlace al antigeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 5. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la cadena pesada comprende una CDRl de cadena pesada humana que tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en las SEQ ID Nos: 27, 30 ó 35, o un sitio de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 6. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la cadena pesada comprende una CDR3 de cadena pesada humana que tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en las SEQ ID Nos: 29, 32, 34, 37, 38 ó 40, o un sitio de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 7. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la cadena pesada comprende una CDR2 de cadena pesada humana que tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en las SEQ ID Nos: 28, 31, 33, 36 ó 39, o un sitio de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 8. Un anticuerpo aislado que se enlaza específicamente a B7RP1, caracterizado porque comprende: a) una cadena pesada que tiene una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 7, un enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo, y una cadena ligera que tiene una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 1 o un enlace de antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo; b) una cadena pesada que tiene una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 8, un enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo, y una cadena ligera que tiene una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 1 o un enlace de antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo; c) una cadena pesada que tiene una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 9, un enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo, y una cadena ligera que tiene una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 2 o un enlace de antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo; d) una cadena pesada que tiene una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 10, un enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo, y una cadena ligera que tiene una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 3 o un enlace de antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo; e) una cadena pesada que tiene una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 11, un enlace al antigeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo, y una cadena ligera que tiene una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 3 o un enlace de antigeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo; f) una cadena pesada que tiene una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 12, un enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo, y una cadena ligera que tiene una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 4 o un enlace de antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo; g) una cadena pesada que tiene una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 13, un enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo, y una cadena ligera que tiene una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 5 o un enlace de antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo; h) una cadena pesada que tiene una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 14, un enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo, y una cadena ligera que tiene una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en la SEQ ID No: 6 o un enlace de antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo; 9. Un anticuerpo aislado que se enlaza específicamente a B7RP1, caracterizado porque el anticuerpo comprende una cadena pesada y una cadena ligera que tiene una región variable de cadena ligera en donde la región variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 80% de identidad secuencial a la secuencia de aminoácidos descrita en las SEQ ID Nos: 1-6, o un fragmento de enlace al antigeno o inmunogénico del mismo. 10. El anticuerpo aislado de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el anticuerpo se enlaza específicamente a B7RP1 humano pero no a B7RP1 de ratón . 11. El anticuerpo aislado de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque el anticuerpo se enlaza específicamente a B7RP1 humano y a B7RP1 de ratón. 12. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la región variable de cadena ligera comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 90% de identidad secuencial a la secuencia de aminoácidos como se describe en las SEQ ID Nos: 1-6, o un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 13. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la cadena ligera comprende una CDRl de cadena ligera humana que tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en las SEQ ID Nos: 15, 18, ó 24, o un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 14. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la cadena ligera comprende una CDR3 de cadena ligera humana que tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en las SEQ ID Nos: 17, 20, 22, 23, 25, ó 26, o un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 15. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la cadena ligera comprende un CDR2 de cadena ligera humana que tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en las SEQ ID Nos: 16, 19, ó 21, o un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 16. Un anticuerpo aislado que se enlaza específicamente a B7RP1, caracterizado porque comprende: a) la CDRl de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 27, la CRD2 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 28, y la CDR3 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 29; b) la CDRl de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 30, la CRD2 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 31, y la CDR3 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 32; c) la CDRl de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 27, la CRD2 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 33, y la CDR3 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 34; d) la CDRl de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 35, la CRD2 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 36, y la CDR3 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 37; e) la CDRl de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 27, la CRD2 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 33, y la CDR3 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 38; f) la CDRl de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 35, la CRD2 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 39, y la CDR3 de cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácido como se describe en la SEQ ID No: 40; 17. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, 9, ó 16, caracterizado porque la cadena pesada y cadena ligera están conectadas por un ligador flexible para formar un anticuerpo de cadena simple. 18. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque es un anticuerpo Fv de cadena simple. 19. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, 9, ó 16, caracterizado porque es un anticuerpo Fab. 20. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, 9, ó 16, caracterizado porque es un anticuerpo Fab'. 21. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, 9, ó 16, caracterizado porque es un anticuerpo (Fab')2. 22. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, 9, ó 16, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo completamente humano. 23. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, 9, ó 16, caracterizado porque el anticuerpo inhibe la actividad de B7RP1. 24. Un método para tratar una enfermedad autoinmune o respuesta inflamatoria en un paciente, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo aislado que se enlaza específicamente a B7RP1, en donde el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de las SEQ ID Nos: 1-40, 44-58, ó 70-76, o un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 25. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la enfermedad autoinmune es artritis reumatoide, o lupus eritomatoso sistémico. 26. El método de conformidad con la reivindicación 24, caracterizado porque la respuesta inflamatoria es asma. 27. Un método para inhibir la activación de células T de señal co-estimuladora en un paciente, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente una cantidad farmacéuticamente efectiva de un anticuerpo humano aislado que se enlaza específicamente a B7RP1, donde el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de las SEQ ID Nos: 1-40, 44-58, ó 70-76, o un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 28. Un método de tratamiento de un paciente que tiene asma, artritis reumatoide, o lupus eritomatoso sistémico, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente una cantidad farmacéuticamente efectiva de un anticuerpo humano aislado que se enlaza específicamente a B7RP1, en donde el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de las SEQ ID Nos: 1-40, 44-58, ó 70-76, o un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 29. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva de un anticuerpo 15 aislado que se enlaza específicamente a B7RP1, en donde el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de las SEQ ID Nos: 1-40, 44-58, ó 70-76, o un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 30. Un método para tratar una enfermedad autoinmune o respuesta inflamatoria en un paciente, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 29. 31. Un método para detectar B7RP1 en una muestra biológica caracterizado porque comprende: a) poner en contacto la muestra con el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, 9, ó 16, bajo condiciones que permiten el enlace del anticuerpo a B7RP1; y b) medir el nivel de anticuerpo enlazado a la muestra. 32. Una molécula de ácido nucleico caracterizado porque codifica para el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 1, 9, ó 16. 33. Una célula hospedera caracterizada porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 32. 34. Una línea celular aislada, caracterizada porque produce un anticuerpo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 9, ó 16. 35. Un agente de enlace específico de B7RP1, caracterizado porque al menos una secuencia de aminoácidos es seleccionada de las SEQ ID Nos: 15-40, y en donde el agente de enlace específico puede enlazarse a B7RP1. 36. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva del agente aglutinante de conformidad con la reivindicación 35. 37. Un método para tratar una enfermedad autoinmune o respuesta inflamatoria en un paciente, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 36. 38. El agente de enlace de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado porque es una proteína. 39. Una molécula de ácido nucleico, caracterizada porque codifica para el agente de enlace de conformidad con la reivindicación 35. 40. Una célula hospedera, caracterizada porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 39. 41. Una linea celular aislada, caracterizada porque produce el agente de enlace de conformidad con la reivindicación 35. 42. Un método para tratar una enfermedad autoinmune o respuesta inflamatoria en un paciente, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente una cantidad farmacéuticamente efectiva del agente de enlace de conformidad con la reivindicación 35. 43. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque la enfermedad autoinmune es artritis reumatoide, o lupus eritomatoso sistémico. 44. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque la respuesta inflamatoria es asma. 45. Un método para detectar B7RP1 en una muestra biológica caracterizado porque comprende: a) poner en contacto la muestra con el agente de enlace de conformidad con la reivindicación 35, bajo condiciones que permiten el enlace del agente de enlace a B7RP1; y b) medir el nivel de anticuerpo enlazado en la muestra . 46. Una molécula aislada de ácido nucleico, caracterizada porque comprende una secuencia nucleotídica que codifica para un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de las SEQ ID Nos: 1-39. 47. Un anticuerpo aislado, caracterizado porque se enlaza específicamente a: a) la región D de B7RP1, o un fragmento de enlace al antigeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo; o b) la región H de B7RP1, o un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 48. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque la cadena pesada y cadena ligera están conectadas por un ligador flexible para formar un anticuerpo de cadena simple. 49. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 48, caracterizado porque es un anticuerpo Fv de cadena simple. 50. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque es un anticuerpo Fab. 51. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque es un anticuerpo Fab' . 52. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque es un anticuerpo (Fab') 2. 53. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo completamente humano. 54. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque el anticuerpo inhibe la actividad de B7RP1. 55. Un método para tratar una enfermedad autoinmune o respuesta inflamatoria en un paciente, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente una cantidad farmacéuticamente efectiva del anticuerpo de conformidad con la reivindicación 54. 56. El método de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado porque la enfermedad autoinmune es artritis reumatoide, o lupus eritomatoso sistémico. 57. El método de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado porque la respuesta inflamatoria es asma. 58. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un portador farmacéuticamente efectivo y una cantidad terapéuticamente efectiva del anticuerpo de conformidad con la reivindicación 55. 59. Un método para tratar una enfermedad autoinmune o respuesta inflamatoria en un paciente, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 58. 60. Un método para detectar B7RP1 en una muestra biológica, caracterizado porque comprende: a) poner en contacto la muestra con el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 47, bajo condiciones que permiten el enlace del anticuerpo a B7RP1; y b) medir el nivel de anticuerpo enlazado en la muestra. 61. Una molécula de ácido nucleico, caracterizada porque codifica para el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 47. 62. Una célula hospedera, caracterizada porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 61. 63. Una línea celular aislada, caracterizada porque produce un anticuerpo de conformidad con la reivindicación 47. 64. Un anticuerpo aislado, caracterizado porque es competitivo con el enlace de un anticuerpo que comprende cualquiera de las SEQ ID Nos: 1-40. 65. Una molécula de ácido nucleico, caracterizada porque codifica para el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 64. 66. Una célula hospedera, caracterizada porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 65. 67. Una linea celular aislada, caracterizada porque produce un anticuerpo de conformidad con la reivindicación 64. 68. Un anticuerpo humano aislado, caracterizado porque se enlaza específicamente a B7RP1, en donde el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de las SEQ ID Nos: 44-58 ó 70-76, o un fragmento de enlace al antígeno o un fragmento de inmunoglobulina inmunológicamente funcional del mismo. 69. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 68, caracterizado porque la cadena pesada y cadena ligera están conectadas por un ligador flexible para formar un anticuerpo de cadena simple. 70. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 69, caracterizado porque es un anticuerpo Fv de cadena simple. 71. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 68, caracterizado porque es un anticuerpo Fab. 72. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 68, caracterizado porque es un anticuerpo Fab' . 73. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 68, caracterizado porque es un anticuerpo (Fab')2. 74. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 68, caracterizado porque el anticuerpo es un anticuerpo completamente humano. 75. El anticuerpo de conformidad con la reivindicación 68, caracterizado porque el anticuerpo inhibe la actividad de B7RP1. 76. Un método para tratar una enfermedad autoinmune o respuesta inflamatoria en un paciente, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente una cantidad farmacéuticamente efectiva del anticuerpo de conformidad con la reivindicación 75. 77. El método de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado porque la enfermedad autoinmune es artritis reumatoide, o lupus eritomatoso sistémico. 78. El método de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado porque la respuesta inflamatoria es asma. 79. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende un portador farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva del anticuerpo de conformidad con la reivindicación 75. 80. Un método para tratar una afección provocada por la expresión incrementada de B7RP1 o la sensibilidad incrementada a B7RP1 en un paciente, caracterizado porque comprende administrarle a un paciente la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 79. 81. Un método para detectar B7RP1 en una muestra biológica, caracterizado porque comprende: a) poner en contacto la muestra con el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 68, bajo condiciones que permiten el enlace del anticuerpo a B7RP1; y b) medir el nivel de anticuerpo enlazado en la muestra . 82. Una molécula de ácido nucleico, caracterizada porque codifica para el anticuerpo de conformidad con la reivindicación 68. 83. Una célula hospedera, caracterizada porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 82. 84. Una línea celular aislada, caracterizada porque produce un anticuerpo de conformidad con la reivindicación 68. 85. Una molécula aislada de ácido nucleico, caracterizada porque codifica para un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos como se describe en cualquiera de las SEQ ID Nos: 1-40, 44-58 ó 70-76. 86. Una célula hospedera, caracterizada porque comprende el ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 85. 87. Una línea celular aislada, caracterizada porque produce un polipéptido de conformidad con la reivindicación 85.