LT4018B - Protein, biologically active hormone, method for protein production, pharmaceutical preparation - Google Patents
Protein, biologically active hormone, method for protein production, pharmaceutical preparation Download PDFInfo
- Publication number
- LT4018B LT4018B LTIP1652A LTIP1652A LT4018B LT 4018 B LT4018 B LT 4018B LT IP1652 A LTIP1652 A LT IP1652A LT IP1652 A LTIP1652 A LT IP1652A LT 4018 B LT4018 B LT 4018B
- Authority
- LT
- Lithuania
- Prior art keywords
- cys
- thr
- protein
- fsh
- ser
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 38
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 38
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 title claims abstract description 9
- 239000005556 hormone Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 36
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims 8
- 230000014616 translation Effects 0.000 title 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 claims abstract description 38
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims abstract description 3
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 claims description 104
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 claims description 104
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 claims description 104
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 claims description 33
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 claims description 33
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 claims description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 29
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 14
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 11
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 claims description 10
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 claims description 10
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 claims description 10
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 8
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N lactose group Chemical group OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)CO)[C@H](O1)CO GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 7
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 6
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000003708 ampul Substances 0.000 claims description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 5
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- OQCWXQJLCDPRHV-UWVGGRQHSA-N Arg-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OQCWXQJLCDPRHV-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 4
- KYQJHBWHRASMKG-ZLUOBGJFSA-N Asn-Ser-Cys Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O KYQJHBWHRASMKG-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims description 4
- HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Ser Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HAOUOFNNJJLVNS-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 4
- JTNKVWLMDHIUOG-IHRRRGAJSA-N Cys-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O JTNKVWLMDHIUOG-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims description 3
- VFGADOJXRLWTBU-JBDRJPRFSA-N Cys-Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N VFGADOJXRLWTBU-JBDRJPRFSA-N 0.000 claims description 3
- NJCALAAIGREHDR-WDCWCFNPSA-N Glu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NJCALAAIGREHDR-WDCWCFNPSA-N 0.000 claims description 3
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- WLYPRKLMRIYGPP-JYJNAYRXSA-N Phe-Lys-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 WLYPRKLMRIYGPP-JYJNAYRXSA-N 0.000 claims description 3
- NLJKZUGAIIRWJN-LKXGYXEUSA-N Thr-Asp-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O NLJKZUGAIIRWJN-LKXGYXEUSA-N 0.000 claims description 3
- ITDWWLTTWRRLCC-KJEVXHAQSA-N Tyr-Thr-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 ITDWWLTTWRRLCC-KJEVXHAQSA-N 0.000 claims description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 3
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N (2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-acetamido-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanoyl]amino]-6-aminohexanamide Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=C(O)C=C1 GJLXVWOMRRWCIB-MERZOTPQSA-N 0.000 claims description 2
- 108010076441 Ala-His-His Proteins 0.000 claims description 2
- FQNILRVJOJBFFC-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Asp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N FQNILRVJOJBFFC-FXQIFTODSA-N 0.000 claims description 2
- HCBKAOZYACJUEF-XQXXSGGOSA-N Ala-Thr-Gln Chemical compound N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)O HCBKAOZYACJUEF-XQXXSGGOSA-N 0.000 claims description 2
- CUQDCPXNZPDYFQ-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ser-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CUQDCPXNZPDYFQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims description 2
- XEEIQMGZRFFSRD-XVYDVKMFSA-N Cys-Ala-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N XEEIQMGZRFFSRD-XVYDVKMFSA-N 0.000 claims description 2
- XELISBQUZZAPQK-CIUDSAMLSA-N Cys-His-Cys Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N XELISBQUZZAPQK-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims description 2
- VLIJYPMATZSOLL-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Cys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN VLIJYPMATZSOLL-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 2
- KZTLOHBDLMIFSH-XVYDVKMFSA-N His-Ala-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KZTLOHBDLMIFSH-XVYDVKMFSA-N 0.000 claims description 2
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 claims description 2
- JWOBLHJRDADHLN-KKUMJFAQSA-N Ser-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O JWOBLHJRDADHLN-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims description 2
- XKFJENWJGHMDLI-QWRGUYRKSA-N Ser-Phe-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(O)=O XKFJENWJGHMDLI-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims description 2
- DIHPMRTXPYMDJZ-KAOXEZKKSA-N Thr-Tyr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N)O DIHPMRTXPYMDJZ-KAOXEZKKSA-N 0.000 claims description 2
- KOVXHANYYYMBRF-IRIUXVKKSA-N Tyr-Glu-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N)O KOVXHANYYYMBRF-IRIUXVKKSA-N 0.000 claims description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 claims description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 2
- NINQYGGNRIBFSC-CIUDSAMLSA-N Ala-Lys-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NINQYGGNRIBFSC-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- WQLDNOCHHRISMS-NAKRPEOUSA-N Ala-Pro-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WQLDNOCHHRISMS-NAKRPEOUSA-N 0.000 claims 1
- ZXKNLCPUNZPFGY-LEWSCRJBSA-N Ala-Tyr-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N ZXKNLCPUNZPFGY-LEWSCRJBSA-N 0.000 claims 1
- JOTRDIXZHNQYGP-DCAQKATOSA-N Arg-Ser-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N JOTRDIXZHNQYGP-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- IBLAOXSULLECQZ-IUKAMOBKSA-N Asn-Ile-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O IBLAOXSULLECQZ-IUKAMOBKSA-N 0.000 claims 1
- UXHYOWXTJLBEPG-GSSVUCPTSA-N Asn-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O UXHYOWXTJLBEPG-GSSVUCPTSA-N 0.000 claims 1
- DZQKLNLLWFQONU-LKXGYXEUSA-N Asp-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O DZQKLNLLWFQONU-LKXGYXEUSA-N 0.000 claims 1
- SAEVTQWAYDPXMU-KATARQTJSA-N Cys-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SAEVTQWAYDPXMU-KATARQTJSA-N 0.000 claims 1
- BOMGEMDZTNZESV-QWRGUYRKSA-N Cys-Tyr-Gly Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 BOMGEMDZTNZESV-QWRGUYRKSA-N 0.000 claims 1
- KYFSMWLWHYZRNW-ACZMJKKPSA-N Gln-Asp-Cys Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N KYFSMWLWHYZRNW-ACZMJKKPSA-N 0.000 claims 1
- LWDGZZGWDMHBOF-FXQIFTODSA-N Gln-Glu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O LWDGZZGWDMHBOF-FXQIFTODSA-N 0.000 claims 1
- JNENSVNAUWONEZ-GUBZILKMSA-N Gln-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O JNENSVNAUWONEZ-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- CELXWPDNIGWCJN-WDCWCFNPSA-N Gln-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CELXWPDNIGWCJN-WDCWCFNPSA-N 0.000 claims 1
- FQCILXROGNOZON-YUMQZZPRSA-N Gln-Pro-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O FQCILXROGNOZON-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims 1
- SVZIKUHLRKVZIF-GUBZILKMSA-N Glu-Asn-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N SVZIKUHLRKVZIF-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- BCYGDJXHAGZNPQ-DCAQKATOSA-N Glu-Lys-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BCYGDJXHAGZNPQ-DCAQKATOSA-N 0.000 claims 1
- NMROINAYXCACKF-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NMROINAYXCACKF-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims 1
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- LBCAQRFTWMMWRR-CIUDSAMLSA-N His-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LBCAQRFTWMMWRR-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- CKRJBQJIGOEKMC-SRVKXCTJSA-N His-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CKRJBQJIGOEKMC-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims 1
- QICVAHODWHIWIS-HTFCKZLJSA-N Ile-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N QICVAHODWHIWIS-HTFCKZLJSA-N 0.000 claims 1
- DXYBNWJZJVSZAE-GUBZILKMSA-N Leu-Gln-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N DXYBNWJZJVSZAE-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- WAAZECNCPVGPIV-RHYQMDGZSA-N Lys-Thr-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O WAAZECNCPVGPIV-RHYQMDGZSA-N 0.000 claims 1
- UZWMJZSOXGOVIN-LURJTMIESA-N Met-Gly-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O UZWMJZSOXGOVIN-LURJTMIESA-N 0.000 claims 1
- WPTHAGXMYDRPFD-SRVKXCTJSA-N Met-Lys-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O WPTHAGXMYDRPFD-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims 1
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WEDZFLRYSIDIRX-IHRRRGAJSA-N Phe-Ser-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 WEDZFLRYSIDIRX-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- VXCHGLYSIOOZIS-GUBZILKMSA-N Pro-Ala-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 VXCHGLYSIOOZIS-GUBZILKMSA-N 0.000 claims 1
- VWHJZETTZDAGOM-XUXIUFHCSA-N Pro-Lys-Ile Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O VWHJZETTZDAGOM-XUXIUFHCSA-N 0.000 claims 1
- BUEIYHBJHCDAMI-UFYCRDLUSA-N Pro-Phe-Phe Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O BUEIYHBJHCDAMI-UFYCRDLUSA-N 0.000 claims 1
- YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N 0.000 claims 1
- CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N Thr-Cys Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O CUTPSEKWUPZFLV-WISUUJSJSA-N 0.000 claims 1
- VEWZSFGRQDUAJM-YJRXYDGGSA-N Thr-Cys-Tyr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N)O VEWZSFGRQDUAJM-YJRXYDGGSA-N 0.000 claims 1
- XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N Thr-Ser-Glu Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N)O XHWCDRUPDNSDAZ-XKBZYTNZSA-N 0.000 claims 1
- CKKFTIQYURNSEI-IHRRRGAJSA-N Tyr-Asn-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 CKKFTIQYURNSEI-IHRRRGAJSA-N 0.000 claims 1
- HSBZWINKRYZCSQ-KKUMJFAQSA-N Tyr-Lys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O HSBZWINKRYZCSQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 claims 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 claims 1
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 claims 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 claims 1
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 claims 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 claims 1
- 108010049041 glutamylalanine Proteins 0.000 claims 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 claims 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 claims 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 claims 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 17
- 102000003864 Human Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010082302 Human Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 abstract description 5
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 206010062767 Hypophysitis Diseases 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 210000003635 pituitary gland Anatomy 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 5
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 2-(4-fluorophenyl)-1,3-dioxoisoindole-5-carboxylic acid Chemical compound O=C1C2=CC(C(=O)O)=CC=C2C(=O)N1C1=CC=C(F)C=C1 JVIPLYCGEZUBIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001425 Diethylaminoethyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 108010057021 Menotropins Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 3
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 3
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 3
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 3
- ZDRRIRUAESZNIH-BZGUUIOASA-N (2s)-1-[(4r,7s,10s,13s,16s,19r)-19-amino-7-(2-amino-2-oxoethyl)-13-[(2s)-butan-2-yl]-10-[(1r)-1-hydroxyethyl]-16-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carbonyl]-n-[(2s)-1-[(2-amino-2-oxoethyl)amino]- Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(N)=O)[C@@H](C)O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZDRRIRUAESZNIH-BZGUUIOASA-N 0.000 description 2
- CBUWTGCATVNMJE-UHFFFAOYSA-N 6,6-dimethylheptanal Chemical compound CC(C)(C)CCCCC=O CBUWTGCATVNMJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCIYCBSJBQGDGM-LPEHRKFASA-N Ala-Arg-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N UCIYCBSJBQGDGM-LPEHRKFASA-N 0.000 description 2
- CKLDHDOIYBVUNP-KBIXCLLPSA-N Ala-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O CKLDHDOIYBVUNP-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WRFOZIJRODPLIA-QWRGUYRKSA-N Gly-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN)O WRFOZIJRODPLIA-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- NCSIQAFSIPHVAN-IUKAMOBKSA-N Ile-Asn-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N NCSIQAFSIPHVAN-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 2
- HJDZMPFEXINXLO-QPHKQPEJSA-N Ile-Thr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N HJDZMPFEXINXLO-QPHKQPEJSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N L-isoleucyl-L-alanine Natural products CCC(C)C(N)C(=O)NC(C)C(O)=O RCFDOSNHHZGBOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YEIYAQQKADPIBJ-GARJFASQSA-N Lys-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O YEIYAQQKADPIBJ-GARJFASQSA-N 0.000 description 2
- PBIPLDMFHAICIP-DCAQKATOSA-N Lys-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PBIPLDMFHAICIP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- OJDFAABAHBPVTH-MNXVOIDGSA-N Lys-Ile-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O OJDFAABAHBPVTH-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010047196 Urofollitropin Proteins 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 2
- 108010069495 cysteinyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 2
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 2-[[6-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]-2-methylpyrimidin-4-yl]amino]-n-(2-methyl-6-sulfanylphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide;hydrate Chemical compound O.C=1C(N2CCN(CCO)CC2)=NC(C)=NC=1NC(S1)=NC=C1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1S WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KFDVPJUYSDEJTH-UHFFFAOYSA-N 4-ethenylpyridine Chemical compound C=CC1=CC=NC=C1 KFDVPJUYSDEJTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 208000007984 Female Infertility Diseases 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- SOEPMWQCTJITPZ-SRVKXCTJSA-N Glu-Met-Lys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N SOEPMWQCTJITPZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010021928 Infertility female Diseases 0.000 description 1
- UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- TVOOGUNBIWAURO-KATARQTJSA-N Lys-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O TVOOGUNBIWAURO-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- ZLGQEBCCANLYRA-RYUDHWBXSA-N Phe-Gly-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O ZLGQEBCCANLYRA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- WTPKKLMBNBCCNL-ACZMJKKPSA-N Ser-Cys-Glu Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CO)N WTPKKLMBNBCCNL-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- UZJDBCHMIQXLOQ-HEIBUPTGSA-N Thr-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O UZJDBCHMIQXLOQ-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 1
- DKNYWNPPSZCWCJ-GBALPHGKSA-N Thr-Trp-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O DKNYWNPPSZCWCJ-GBALPHGKSA-N 0.000 description 1
- JISIQDCOHJOOPU-WFBYXXMGSA-N Trp-Cys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JISIQDCOHJOOPU-WFBYXXMGSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- ZAGPDPNPWYPEIR-SRVKXCTJSA-N Tyr-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZAGPDPNPWYPEIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N Tyr-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 PDSLRCZINIDLMU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 206010062662 Uterine mass Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006408 female gonad development Effects 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 1
- 229940090343 human menopausal gonadotrophin Drugs 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000012872 hydroxylapatite chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000001581 pretranslational effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 sodium carbohydrate Chemical class 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- CIJQGPVMMRXSQW-UHFFFAOYSA-M sodium;2-aminoacetic acid;hydroxide Chemical compound O.[Na+].NCC([O-])=O CIJQGPVMMRXSQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g.hCG [human chorionic gonadotropin]; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/24—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/11—Gonadotropin; related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Crystals, And After-Treatments Of Crystals (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Šis išradimas skirtas iš šlapimo išskirtam folikulus stimuliuojančiam hormonui bei jį turinčioms vaistinėms kompozicijoms ir jo valymo būdui.
Folikulus stimuliuojantis hormonas (FSH), kaip žinoma, naudojamas gydant nevaisingumą. Šį hormoną turintys preparatai naudojami išsaugant nėštumą in vivo ir in vitro. Žmogaus FSH išskirtas iš žmogaus hipofizio ir iš poklimaksinio periodo moters šlapimo. Neseniai FSH gautas panaudojant rekombinantines DNR metodiką.
Pirmo komercinio preparato, turinčio FSH, sudėtyje buvo (pavyzdžiui, Fergonal® Serono) žmogaus menopauzės gonadotropinas (ŽMG), ekstrahuotas iš poklimaksinio šlapimo. Tai buvo FSH, liuteinizuojančio hormono (LH) bei kitų šlapimo baltymų mišinys. Tiek moksliniams, tiek ir terapiniams tikslams stengiamasi gauti išvalytus FSH preparatus. Šiuo metu parduodamas produktas Metrodin® (Serono) yra iš šlapimo išskirtas FSH preparatas, turintis ir kitų šlapimo baltymų, tačiau LH kiekis jame minimalus, ir jis naudojamas gydant nevaisingumą. Šis produktas ypač naudotinas tais atvejais, kai nepageidautina drauge su FSH įvesti ir egzogeninį LH, pavyzdžiui, esant kiaušidžių polikistozės sindromui (KPS).
Iki šiol gydymo tikslais FSH buvo naudojamas injekcijų į raumenis pavidalų. Kadangi šias injekcijas daro gydytojai ar kiti profesionalūs medikai, ligoniams tenka lankytis reguliariai chirurgo kabinete ar ligoninėje tam, kad gautų gydymą. Tai sudaro tam tikrus sunkumus. Be to, ligoniai dažnai išreiškia nepasitenkinimą ryšium su tuo, kad gydymas užsitęsia keletą savaičių ar net mėnesių ir visą tą laikotarpį reikia gaišti laiką vaistinių preparatų įvedimui.
Poodinės injekcijos suteiktų galimybę ligoniui pačiam susileisti vaistus ir jis pats labiau galėtų dalyvauti gydyme.
Žmogaus menopauzės gonadotropino (ŽMG) poodinės injekcijos jau aprašytos (Nakamura ir kt., Vaisingumas ir nevaisingumas, 46 (i), p.46-54, 1985) moters nevaisingumo gydymo metu peristaltinio poodinio siurbliuko pagalba pulsuojančiai įvedant ŽMG. Poodines injekcijas gali lydėti vietinės alergijos reakcijos, sukeltos preparate esančių priemaišų, ir gali tekti nutraukti gydymą.
P. Ruz (Žmogaus folikulus stimuliuojantis hormonas,
Actą Endocrinologica Supplementum, 131, 1968) aprašė ir apibūdino hipofizio ir šlapimo FSH išgrynintus preparatus, išskirtus atitinkamai iš užšaldytų hipofizių ir poklimaksinio šlapimo koncentrato. Hipofizio FSH biologinis aktyvumas buvo apie 14000 tarptautinių vienetų/1 mg, o šlapimo FSH - 780 tarptautinių vienetų / 1 mg. Tikimasi, kad daugumoje aktyvių hipofizio ir šlapimo preparatų LH priemaiša sudaro apytikriai 0,1 % masės. Preparato valymui naudojama viena ar daugiau sekančių metodikų, kaip antai chromatografija dietilaminoetilceliuliozėje, Sefadekso G-100 gel-filtracija, hidroksilapatitinė chromatografija, elektroforeze poliakrilamido gelyje ir pan.
Donini ir kt. (Klimaksinio šlapimo FSH išvalymas ir dalinis fizikocheminis ištyrimas Gonadotropinai ir kiaušidžių vystymasis. Dviejų darbinių susitikimų medžiaga, E. ir C. Livingston, Edinburgas ir Londonas, 1970) aprašė vieną iš labiausiai išvalytų FSH preparatų, kuris turėjo 1255,6 tarptautinių vienetų / 1 mg biologinį aktyvumą, o LH priemaiša sudarė iki 3,2 tarptautinių vienetų / 1 mg. Šiam atvejui pradine medžiaga pasitarnavo žmogaus klimaksinis gonadotropinas (ZKG) preparato Pergonal® pavidalu, kuris, kaip buvo nurodyta aukščiau, yra FSH, LH bei kitų šlapimo baltymų mišinys. Galutinis. rezultatas buvo pasiektas periodiškai valant pradinį ZKG dietilaminoetilceliuliozės kolonėlėje, gel-filtruojant Sefadekse G-100 ir paskutinėje stadijoje panaudojant preparatyvinę poliakrilamido gelioelektroforezę.
Dar didesnio efektyvumo pasiekė H. van Heli ir kt. (Žmogaus šlapimo FSH ir LH valymas ir kai kurie ypatumai, Gonadotropinai, I tarptautinio simpoziumo gonadotropinu klausimu medžiaga, 1971, Uili, Intersaiens, Niujorkas) prie tradicinių chromatografinio valymo metodų pridėjęs dar papildomas imunochromatografijos ir gel-filtracijos stadijas. Imunochromatografija atlikta panaudojant pririštus prie Sefarozės antikūnus žmogaus chorioniniam gonadotropinui, tam, kad būtų iš dalinai išvalyto FSH pašalintos LH. Labiausiai išvalytos FSH frakcijos FSH aktyvumas buvo 4720 tarptautinių vienetų / 1 mg, o LH aktyvumas tesudarė tik 15 tarptautinių vienetų / 1 mg, išmatuojant radioimunoanalizės būdu.
Donini ir kt. aprašė imunochromatografinį valymo būdą (FSH ir LH išvalymas ir išskyrimas iš ZKG, Actą Endocrinologica, 52, p. 186-198, 1966), kuomet dar 1966 m. gavo FSH preparatą, kurio aktyvumas buvo 329,7 tarptautiniai vienetai / 1 mg ir LH - 2,4 tarptautiniai vienetai / 1 mg. Kadangi preparato, pasižymėjusio FSH aktyvumu 329,7 tarptautiniai vienetai / 1 mg, jokia radioimunoanalizė nebuvo daryta, todėl galima prielaida pagal analogiją su H. van Helo rezultatais (žr. aukščiau), kad galbūt radioimunoanalizės (RIA) metu būtų galima aptikti pėdsakinius LH kiekius.
Donini ir kt. parodė net minimalių LH priemaišų fiziologinį svarbumą (Naujas liuteinizuojančio hormono biologinio nustatymo metodas, Actą Endocrinologica, 58, p.463-472, 1968), pasiūlę naują kiekybinį LH biologinio aktyvumo nustatymo būdą nesubrendusioms intaktinėms pelėms įvedant pastovią fiziologiškai švaraus FSH preparato dozę su vis didėjančia LH priemaiša ir po to išmatuojant gimdos masę, kaip atsaką proporcingą LH aktyvumui. Pagal gautus duomenis nustatyta, kad įvedus drauge su FSH 4,4 tarptautiniais vienetais viso labo tik LH 0,068 tarptautinius vienetus, pastarųjų pakanka, kad padidėtų gimdos masė.
Iš šių duomenų seka, kad pageidautina turėti absoliučiai išvalytą FSH preparatą, kuomet gydymui reikalingas FSH aktyvumas ir visiškai nereikia LH.
Kaip aukščiau paminėta, šiuo metu prekyboje esantis produktas Metrodinas® (Serono) yra išvalytas FSH preparatas, gautas metodu praktiškai identišku tam, kuris aprašytas Donini ir kt. aukščiau nurodytame darbe (Actą Endocrinologica, 52, p.186-198, 1986). Kokybės kontrolės techniniai reikalavimai atitinkamai su pateiktu nurodyto preparato biologiniu grynumu yra LH 0,7 tarptautinio vieneto /FSH 75 tarptautiniams vienetams, tai yra beveik aktyvumo biologinio mėginio jautrumo riba. Tačiau kai kurioms terapinėms priemonėms pageidautina, kad absoliučiai nebūtų LH aktyvumo. Be to, Metrodine® be žmogaus FSH dar yra pakankamas kiekis kitų šlapimo baltymų, tai reiškia, kad tai ne chemiškai grynas FSH preparatas.
Didžiosios Britanijos patento paraiškoje Nr. 2173803 siūlomas dar vienas hipofizio glikoproteininių hormonų, tarp kurių yra ir FSH, išgryninimo būdas. Šis būdas grindžiamas hormono komplekso su imobilizuotais antikūniais susidarymu ir po to sekančiu hormono išplovimu tam tikslui panaudojant rūgštų vandeninį buferį, kurio pH nuo 3 iki 4. Gautas gerai. išvalytas FSH turi tačiau tam tikrą kiekį priemaišų: 0,1 % masės sudaro LH priemaiša ir 0,5 % masės tireostimuliuojantis hormonas (TSH).
Apžvalginiame straipsnyje Skotas K. Čapelas ir kt.
(Endokrininės apžvalgos, 4(2), p.179-211, 1983) aprašė FSH mikroheterogeniškumą ir FSH lydinčių molekulių angliavandeninių dalių fiziologinę reikšmę. Galima prielaida, kad kai kurios modifikacijos vyksta metabolizmo metu iki pat šlapimo sekrecijos. Cheminėfizinė diferenciacija parodyta eksperimente, lyginant labai išvalytą FSH, išskirtą iš šlapimo pagal šį išradimą, su labai išvalytu FSH preparatu, išskirtu iš hipofizio.
Iki- ir po- transliacinės modifikacijos, matyt, ir sudaro FSH mikroheterogeniškumo pagrindą, FSH- tai glikoproteidas, sudarytas iš dviejų skirtingų glikozilintų nekovalentiškai sujungtų polipeptidinių grandinių, žinomų kaip alfa ir beta subvienetai. Betasubvienetas sąlygoja molekulės biologinį specifiškumą.
Be visa kita, šis straipsnis bando paaiškinti esminį skirtumą, stebimą lyginant biologinį aktyvumą / mg labai išvalytų FSH, išskirtų iš šlapimo ir iš hipofizio. Galima prielaida, ' kad tai sąlygoja angliavandeninės dalys, o konkrečiai, sialo rūgšties galinės liekanos.
Tenka pažymėti, kad, nežiūrint to, kad tiek hipofizio FSH, tiek ir šlapimo FSH vadinami FSH, tačiau nėra tvirto įrodymo, kad šios molekulės, išskirtos iš skirtingų dviejų šaltinių yra cheminiu požiūriu vienodos ir ekvivalentiškos.
Išradimo aprašymas
Šiuo metu žinoma, kad iš poklimaksinio šlapino koncentrato galima išskirti labai išvalytą žmogaus šlapimo FSH, neturintį net pėdsakinių kiekių LH ar kitųxšlapimo baltymų. Be to, atlikus išskirto pagal šį išradimą šlapimo FSH aminorūgščių analizę, netikėtai išaiškintas naujas FSH beta- subvienetas, susidedantis iš 111 aminorūgščių, vietoje 118 ar 108, kaip tai buvo nurodyta anksčiau (žr. pvz., Skotas ir kt. aukščiau) apibūdinant žinomą FSH beta- subvienetą. Šis išradimas siūlo naują FSH beta- subvieneto aminorūgščių seką:
| Asn Ser Cys | Glu | Leu Thr Asn 20 | Ile Thr Ile Ala Ile Glu | |||||||||
| Lys | Glu | Glu | Cys | Arg | Phe | Cys | Ile | Ser | Ile | Asn | Thr | Thr |
| 30 | ||||||||||||
| Trp | Cys | Ala | Gly | Tyr | Cys | Tyr | Thr | Arg | Asp | Leu | Vai | Tyr |
| 40 | 50 | |||||||||||
| Lys | Asp | Pro | Ala | Arg | Pro | Lys | Ile | Gln | Lys | Thr | Cys | Thr |
| 60 | ||||||||||||
| Phe | Lys | Glu | Leu | Vai | Tyr | Glu | Thr | Vai | Arg | Vai | Pro | Gly |
| 70 | ||||||||||||
| cys | Ala | His | His | Ala | Asp | Ser | Leu | Tyr | Thr | Tyr | Pro | Vai |
| 80 | 90 | |||||||||||
| Ala | Thr | Gln | Cys | His | Cys | Gly | Lys | Cys | Asp | Ser | Asp | Ser |
| 100 | ||||||||||||
| Thr | Asp | Cys | Thr | Vai | Arg | Gly | Leu | Gly | Pro | Ser | Tyr | Cys |
| 110 | ||||||||||||
| Ser | Phe | Gly | Glu | Met | Lys | Glu | ||||||
| o taip | pat | naują baltymą, | turintį | naują gonadotropino |
alfa-subvienetą ir beta-subvienetą, susidedantį iš 111 aukščiau išvardintų aminorūgščių. Baltymas pasižymi folikulus stimuliuojančio hormono (FSH) biologiniu aktyvumu. Jis dažniausiai sutinkamas glikozilintoje formoje. Jo didžiausias privalumas, kad jis neturi liuteinizuojančio hormono ir kitų šlapimo baltymų priemaišų pėdsakų.
Šio išradimo realizacijos kitas variantas yra farmacinė 5 kompozicija turinti pagal išradimą išvalytą baltymų ir farmaciniu požiūriu tinkamą užpildą. Tinkamiausia jai forma yra poodinės injekcijos. Po oda įšvirkšti šie vaistai nesukelia alerginių reakcijų, būdingų vartojant žinomus FSH preparatus.
10
Pagal šio išradimo kitą variantą siūlomas naujo ir labai išvalyto FSH gavimo būdas. Būdas grindžiamas imunovalymo stadijos ir atvirkščių fazių aukšto slėgio skysčių chromatografijos kombinacija. Imunovalymo stadijoje naudojami imobilizuoti monokloniniai antikūniai lygiai taip, kaip tai aprašyta aukščiau paminėto patento (Didžioji Britanija Nr. 2173803A) paraiškoje, su vieninteliu esminiu skirtumu, kad FSH iš imunokomplekso eliuojamas esant aukštesnėms pH reikšmėms.
Pagal šiame išradime pateikiamą būdą eliucijai patogu naudoti vandeninį tirpalą, kurio pH apytikriai 10 ir moliaringumas - apytikriai 0,5. Pateikėjų atlikti eksperimentai parodė, kad esant tokioms sąlygoms, imobilizuoti antikūniai neinaktyvuojami. Tai prieštarauja aukščiau paminėtos patento paraiškos (Didžioji Britanija) (1 psl., 36-37 eilutės) doktrinai, skelbiančiai Eliuentu, turinčių tokias aukštas pH reikšmes, panaudojimas praktikoje neįmanomas, kadangi tai sukelia greitą antikūnių inaktyvaciją .
Šį skirtumą gali sąlygoti metodų, naudotų antikūnio surišimui su polimeru, skirtumai.
Pagal šį išradimą eliuento geresnis pH aukščiau 11, o geriausias yra intervale nuo 11,3 iki 11,7.
Moliaringumo reikšmė geresnė daugiau 0,8 ir geriausia apie 1.
Pagal išradimą tinkami eliuentai yra amoniakas, dietilaminas ir tokie buferiai kaip TRIS-buferis, glicinas-NaOH ir pan.
Sekanti atvirkščių fazių aukšto slėgio skysčių chromatografijos stadija leidžia pašalinti bet kurį iš priemaišinių baltymų. Imunovalymo stadijos vienos nepakanka tokiam išvalymui pasiekti, tai pripažįstama ir Didžiosios Britanijos patento paraiškos tekste. Panaudota papildoma aukščiau paminėta valymo stadija ne tik efektyviai išvalo preparatą nuo priemaišų pėdsakų, bet taip pat išsaugo pilną FSH aktyvumą. Pastarasis rezultatas yra visai netikėtas P. Chalino ir S.A. Chano straipsnio šviesoje (J. Liq. Chromat., 9/13, p, 28552868/1986), kuriame skelbiama, kad jaučio FSH ir žmogaus FSH (ZKG standartas) praranda biologinį aktyvumą skysčių chromatografijos su atvirkščiomis fazėmis metu. Kita vertus, tame pačiame straipsnyje parodomas patenkinamas biologinio aktyvumo atstatymas, tačiau pasiekiamas tik dalinis išvalymas, kuomet žmogaus šlapimo preparatas, turintis tiek FSH, tiek ir LH, valomas aukščiau nurodytu būdu.
Po atvirkščių fazių aukšto slėgio skystinės chromatografijos stadijos FSH atstatomas panaudojant gradiento metodikas. Produktą galima liofilizuoti saugojimo ir/arba manipuliavimo tikslu. Produkto koncentracijai, stabilizacijai ar kitam apdorojimui numatomos kitos tam tikslui tinkamos metodikos.
Be abejo, poklimaksinis šlapimas yra žymiai prieinamesnė medžiaga negu žmogaus hipofizis. Ši aplinkybė suteikia šiam išradimui ryškų privalumą.
FSH-specifinius monokloninius antikūnius, naudojamus pagal šį išradimą gavimo būdui, galima gauti panaudojant žinomas metodikas.
Tipišku atveju hibridomos 9/14 linijos ląstelės skrininguojamos optimalaus afiniškumo FSH atžvilgiu Kembridžo Universitete. Ląstelės kultivuojamos ir monokloniniai antikūnai produkuojami į supernatanto terpę, iš kurios jie išskiriami panaudojant 50% amonio sulfatą (skaičiuojant svorį tūriui). Po to naudojama atvirkščių fazių joninė chromatografija ir aukšto slėgio skystinė chromatografinė gel-filtracija ir dializė.
Ląstelių 9/14 linijos produkuojami ir nurodytu aukščiau būdu išvalyti monokloniniai antikūniai atitinka šiuos techninius reikalavimus:
a) baltymo švarumas ne mažiau 90%;
b) imunoglobulino klasė: IgG 1;
c) afiniškumo konstanta; 3,5 χ 108 l.mol'1;
d) specifiškumas:
Antigenas % kryžminės reakcijos
FSH 100
ChGH 1
ChGH-beta-subvienetas 1
LH 1
TSH 1
e) susijungimo su FSH tarptautinių vienetų FSH 1 geba tirpale: mg MoAK.
apie 1000
FSH-specifiniai monokloniniai antikūniai chemiškai surišami su Sefaroze 4B panaudojant divinilsulfoną pagal metodą, kuri, aprašė Dž. Poratas Methods in Enzymology: 34, p.13-30, 1974.
Tipiškame pavyzdyje 1 litras Sefarozės 4B praplaunamas porėtame stikliniame šviesofiltre iš pradžių 5 litrais distiliuoto vandens, o po to 5 litrais 1 M natrio karbohidrato tirpalo, pH 11. Išplauta sefarozė suspenduojama 1 litre 1 M natrio karbonato tirpalo (pH 11). Nuolat maišant, lašais pridedama 200 ml divinilsulfono. Reakcija pabaigiama per 70 min kambario temperatūroje ir nutraukiama pridedant 1 N HCI tirpalo (pH iki 7,0).
Aktyvuota smala suspenduojama 1 litre 0,25 M natrio bikarbonato tirpalo (pH 9,0), turinčio 2 g anti-FSH monokloninių antikūnių, gaunant didesnį negu 90% antikūnių susirišimą su aktyvuota derva. Gauta imunoderva saugoma 4°C temperatūroje.
pavyzdyje pateikiamos šio išradimo dvi valymo būdo stadijos, tinkamos komerciniam ZKH, t. y. Pergonalo® preparato (Serono) aktyviam ingradientui.
Reikia suprasti, kad nors ZKH yra geresnė išeitinė medžiaga šio išradimo būdui, tačiau visa tai tinka ir kitoms mažiau išvalytoms medžiagoms tokioms kaip poklimaksinio šlapimo koncentratai ir panašioms. Geri rezultatai gauti naudojant kaip išeitinę medžiagą šlapimo koncentratą, turintį tik 1 tarptautini vienetą FSH / 1 mg.
Kiti šio išradimo variantai ir privalumai bus akivaizdūs susipažinus su sekančiais pavyzdžiais, kuriais išradimas neapsiriboja.
n pavyzdys: Labai išvalyto šlapimo FSH gavima?
stadija: Imunovalymas panaudojant anti-FSH MoAK-DVS5 Sefarozę.
ZKG naudojamas kaip išeitinė medžiaga.
Imunoderva anti-FSH MoAK-DVS-Sefarozė inkubuojama su
0,1 M. Tris-HCl, 0,3 M NaCl buferyje, pH 7,54°C temperatūroje. Į kolonėlę įvedama tam tikrą SH kiekį tarptautiniais vienetais (RIA), atitinkantį 80-90% bendros FSH rišančios gebos.
Laisvi baltymai eliuojami buferiu tol, kol eliuato optinis tankis apie 280 nm (oD 280) nebus mažiau 0,02.
Absorbuotas šlapimo FSH eliuojamas iš imunodervos 1 M amoniako tirpalu 4°C temperatūroje. Amoniakiniai eliuatai, atitinkantys apytikriai 4- kartinį imunodervos tūrį, yra grupuojami, pH pasiekiamas iki 9,0 kaip galima greičiau 4°C temperatūroje pridedant ledinės acto rūgšties. Po to tirpalas ultrafiltruojamas Amikon aparate (membrana C.0.10000 daltonų) ir koncentruojamas iki mažo tūrio.
stadija. Atvirkščių fazių aukšto slėgio chromatografija
Gauto tirpalo pH privedamas iki 5,6, po to jis įvedamas į kolonėlę C18 su atvirkščiomis fazėmis (Pre Pak waters), kuri prieš tai buvo supusiausvyrinta 0,05 M buferiniu amonio acetato tirpalu kambario temperatūroje. Tirpiklio fronto judėjimo greitis - 100 ml/min. Eliuatas matuojamas ties 280 nm.
Valymui naudojamas aparatas Prep 500 A (Waters), turintis UV-detektorių ir preparatyvaus gradiento generatorių.
Biologiškai aktyvus labai išvalytas šlapimo FSH eliuojamas izopropanolio gradientu iki 50 % judrios fazės. Frakcijos tikrinamos panaudojant analitinę gelchromatografiją ir radioimunoanalizę.
Organinis tirpiklis pašalinamas distiliuojant vakuume 40°C temperatūroje. Po to tirpalas užšaldomas ir liofilizuojamas.
pavyzdys: FSH tyrimas
Pagal šį išradimą gautą labai išvalytą šlapimo FSH preparatą tiria keliais cheminiais-fiziniais, biologiniais ir imunologiniais metodais tam, kad gautų jo pilną charakteristiką. Kaip nurodyta žemiau, dauguma tyrimų atlikta lyginant su labai išvalytu FSH preparatu, išskirtu iš hipofizio, gautu pagal žemiau aprašytą metodą.
Išeitine medžiaga panaudotas neišvalytas žmogaus hipofizio ekstraktas, gautas kaip pašalinis produktas ekstrahuojant žmogaus augimo hormoną.
Metodika susideda iš sekančių stadijų:
1) Neišvalyto žmogaus hipofizio ekstrakto pirminis išvalymas ekstrahuojant 40% etanoliu, turinčiu 6% amonio acetato, pH 5,6, precipituojant supernatantą 96% šaltu etanoliu.
2) Tolimesnis valymas panaudojant joninę chromatografiją dietilaminoetilceliuliozėje su 0,15 M natrio acetato tirpalu, pH 7,0 kaip eliuentu, ir po to precipituojant 96% šaltu etanoliu.
3) FSH frakcijos tolimesnis valymas gel-filtracijos Sefadekse S 100 būdu, panaudojant kaip buferį 0,05 M amonio bikarbonatą.
4) FSH valymo paskutinė stadija, panaudojant joninę chromatografiją kolonėlėje SP Sefadeksas S 50. Labai išvalytas hipofizio FSH eliuojamas 0,1 M fosfatiniu buferiniu tirpalu pH 6,2 ir po to liofilizuojamas.
Kaip buvo nustatyta, hipofizio FSH biologinis santykinis aktyvumas in vivo (Stilmano-Rolei testas; tarptautinis vienetas antrojo IRP-NMS) sudaro 4770 tarptautinių FSH vienetų 1 mg liofilizuotų miltelių. Šiam nustatymui naudota metodika, aprašyta žemiau po antrašte Biologinio aktyvumo kiekybinis nustatymas.
Atliekami sekantys tyrimai:
Kontaminacija LH
Šis testas atliekamas panaudojant specifinę LH (liuteinizuojantis hormonas) radioimunoanalizę su LH standarto pagalba graduoto pagal antrąjį IRP-ZKH P125fLH kaip žymėtą atomą, naudojant trigubą KIT (kodas 10204, pagamintą Biodata® kompanijos. Kaip antiserumas naudotas ožkos anti-ChGH (žmogaus choriono, gonadotropinas) antiserumas, kurį gavo pareiškėjas. Šis antiserumas rodė 100 % kryžminę reakciją su LH ir mažiau negu 0,1 % su FSH.
Radioimunoanalizės metodas būtinas patikrinant, ar gautas pagal 1 pavyzdį labai išvalytas šlapimo FSH nėra užterštas liuteinizuojančiu hormonu.
Aukščiau pateikti rezultatai patvirtinti panaudojant kitą jautresnį metodą DELFIA (disociacija-pagerinta lautanid-fluoro-imunoanalizė), kuriam įrangą pateikia firma LKB-Farmacija.
Elektroforezė poliakrilamido gelyje su natrio dodecilsulfatu
Blokinė elektroforezė plokščiame gelyje su natrio dodecilsulfatu vykdoma redukcinėmis sąlygomis 13,5 % poliakrilamido gelyje, pH 8,8 pagal metodą aprašytą Lemli žurnale Nature, 227, p.680-685 (1970).
Dažoma briliantiniu Kumasi mėliu R-250, 0,25 % 25 % metanolio /75 % acto rūgšties.
Šiuo metodu tiriamas tiek labai išvalyto FSH preparatas, gautas pagal šį išradimą, tiek ir labai išvalytas hipofizio FSH, gautas kaip aprašyta aukščiau. Bandymo rezultatai parodyti Fig. 1, kur parodytos tiek šlapimo, tiek hipofizio FSH preparatų juostos drauge su molekulinės masės markeriais (M.M.).
Abiejuose FSH preparatuose pagrindinė didžioji juosta, būdinga glikoproteidams, sutinkama vienos ir tos pačios molekulės masės, apytikriai 20000 daltonų, kas atitinka literatūrinius duomenis. Dėl žinomo glikoproteidų elgesio šios elektroforezės sąlygomis gautas dydis yra šiek tiek didesnis nei iš tikrųjų.
Mainų chromatografija
Labai išvalyti preparatai, išskirti iš šlapimo ir iš hipofizio, analizuojami kolonėlėje TKG 2000 SW naudojant 0,1 M buferinį fosfatinį tirpalą, pH 6,8 +
0,2 M NaCl kaip eliuentą. Tirpiklio fronto judėjimo greitis 0,7 ml/min, matuojama ties 230 nm.
Fig. 2 pateikiami duomenys, kurie rodo įprastus pagrindinius šlapimo ir hipofizio FSH pi\us, kurių laikai panašūs (atitinkamai 13,37 ir 13,35 min).
Izoelektrofokusavimas
Izoelektrofokusavimas atliekamas 5 % plonasluoksniame poliakrilamidiniame gelyje (Anfolin, LKB®, pH 3,5-9,5), fiksuojama 11,5 % (masės) trichloracto rūgštimi ir 3,5 % (masės) sulfosalicilo rūgštimi, dažoma sidabru iŠ BIO-RED? rinkinio.
Fig. 3 pateikti duomenys apie labai išvalytus FSH preparatus, išskirtus iš šlapimo ir hipofizio, įskaitant ir izoelektrinio taško markerius. Kaip matyti iš paveikslėlio, abu preparatai rodo keletą juostų, tačiau jų piešinys skiriasi. Šlapimo FSH pagrindinės juostos yra pH intervale mažiau kaip 4,8, kai tuo tarpu hipofizio FSH pagrindinės juostos pasireiškia aukštesniame pH intervale.
Šie bandymai rodo, kad šlapimo ir hipofizio FSH nėra identiškos molekulės ir kad jų skirtumus sąlygoja angliavandenilių, o gal ir pačių baltyminių dalių skirtumai.
Biologinio aktyvumo kiekybinis nustatymas
Labai išvalyto šlapimo FSH preparato biologini aktyvumą in vivo nustato Stilmano- Rolėj metodu (Endokrinologija, 53, p.604-616, 1953) naudodami kaip etaloną ZKH-Haus etaloną pagal 2-ąj i Tarptautinį Etaloninį Preparatą ZKH, skirtą biologinio aktyvumo kiekybiniam nustatymui. Šią analizę priėmė visos pagrindinės Farmakopėjos ir Tarptautinių Vienetų nustatymo Sveikatos apsaugos Tarnybos FSH biologinio aktyvumo nustatymui.
Nustatyta, kad labai išvalytas šlapimo FSH preparatas, gautas pagal aukščiau pateiktą pavyzdį, pasižymi santykiniu aktyvumu lygiu 6200 T.V. FSH / 1 mg liofilizuotų miltelių, tai didžiausias kada nors aprašytas iš šlapimo išskirto FSH aktyvumas.
Aminorūgščių sekos nustatymas
a) Šlapimo FSH subvienetų išskyrimas
Šlapimo FSH subvienetai išskiriami panaudojant aukšto slėgio skysčių chromatografijos sistemą Waters, turinčią kolonėlę Akvapor RP-300, 200 x 4,6 mm, 7 ųm (Braunli Lebs). Eliuentai sekantys: A=0,l % TFA (trifluoracto rūgštis, Iners), B=0,055% TFA acetonitrile. Tirpiklio fronto judėjimo greitis - 1 ml/min prie 35°C. Pradinis režimas - 15 %. B per 20 min gradientas padidinamas 40% B. UV-detektorius dirba ties 229 nm. Įvedama analizinė serija - 20 μ 0,5 mg/ml FSH tirpalo ir 0,5 % TFA. Pradinė inkubacija TFA tirpale nebūtina. Preparatyviai išskiriama toje pačioje kolonėlėje. Gaunama gera skiriamoji geba, kuomet Įvedama 0,5 mg labai išvalyto žmogaus šlapimo FSH (serija Nr. 032), ištirpinto A buferyje. Frakcijos renkamos rankiniu būdu ir džiovinamos koncentratoriuje Spid. Vak. Subvienetai ištirpinami vandenyje, analizuojami aukšto slėgio skysčių chromatografija ir saugomi minus 20°C temperatūroje.
Beta-subvienetas eliuojamas apytikriai po 10,5 min kaip platus pikas, alfa-subvienetas eliuojamas per 15 min kaip smailus pikas. Kiekvienas pikas identifikuojamas kaip alfa- ir beta-subvienetas radioimuninės analizės būdu. Paprastai redukuojama apie 50% subvieneto, kai tuo tarpu alfa-subvieneto redukuojama daugiau kaip 90%.
b) Alfa- ir beta-subvienetų redukavimas ir karboksimetilinimas
Išskirtų, kaip aprašyta a) dalyje, subvienetų redukavimas atliekamas panaudojant 0,5 % Tris, 0,1 % EDTA, 6 M guanidin-HCl, pH 8,5 2 vai bėgyje 37°C temperatūroje pridėjus DTT (ditiotreitolio, Servą) 15kartų didesniu moliaringumu negu cisteino. Po to į reakcijos mišinį pridedama natrio jodacetato (2,1 moliaringumo negu DTT) ir paliekama 30 min tamsoje. Reakcija sustabdoma pridėjus 1% merkaptoetanolio ir TFA. Karboksimetilintus subvienetus valo aukšto slėgio skysčių chromatografija. Beta-karboksimetilintas subvienetas blogai tirpsta vandenyje, todėl galutinė išeiga nereikšminga.
c) Beta-subvieneto redukavimas, piridiletilinimas ir poveikis tripsinu.
Išskirto kaip aprašyta a) dalyje, beta-subvieneto redukavimas atliekamas kambario temperatūroje 2 vai bėgyje šiuo būdu: 0,1 mg beta-subvieneto inkubuojama su 0,5 ml 0,5 M Tris tirpalo, 0,1 % EDTA, 6 M guanidinHCl, pH 8,5, 2,7 mg ditiotreitolio. Piridiletilinama pridėjus 0,02 ml 4-vinilpiridino prie aukščiau paminėto tirpalo. Reakcija vyksta 2 vai kambario temperatūroje. Pagaliau, reakcijos mišinys patalpinamas į S4-patroną (Beiker), su 0,1 % TFA. Patronas praplaunamas 0,1 % TFA ir piridiletilintas beta-subvienetas eliuojamas 40% acetonitrilu, 0,1 % TFA. Eliuotas frakcijos džiovinamos ir valomos aukšto slėgio skysčių chromatografija kaip tai aprašyta aukščiau. Išvalytas piridiletilintas betasubvienetas ištirpinamas 1 % NH4HCO3 tirpale, pH 8.
d) Alfa-subvieneto sekvenavimas
Alfa-subvieneto, karboksimetilinto alfa-subvieneto arba viso labai išvalyto šlapimo FSH sekvenavimas (aminorūgščių liekanų sekos nustatymas) atliekamas panaudojant 5 nmolius ar mažiau į baltymini sekvenseri, (470 A, Eplaid Biosistem) ir panaudojant standartinę programą 03PRTH, pateiktą Eplaid Biosistem, arba specialią programą, kurioje ciklai, skaldantys P o arba Cly, pakeisti specialiu ciklu 03CPPO. Pradedant nuo molekulės NH2 galo identifikuojama pirmos 45 liekanos, šie rezultatai patvirtina seką,žinomą iš literatūros (J. Biol. Chem., 250, p. 6735/1975). Asn 52 padėtyje ir 78 padėtyje žinomoje sekoje prasidedančioje Ala, ir yra tos aminorūgštys, kur vyksta glikozilinimas. NH2 gale visada yra nevienodumas ir jis visada toks pats visuose sekvenuotuose mėginiuose. Visa molekulė (t.y. prasidedanti Ala) būna 65 % grandinių, molekulė, neturinti pirmųjų dviejų aminorūgščių (t.y. prasidedanti Asp), pasitaiko 5% molekulių, o neturinti pirmųjų trijų aminorūgščių (t.y. prasidedanti Vai) pasitaiko 30% atvejų.
| 1 | 5 | |||
| 65% | grandinių Ala | Pro Asp | Vai | Glu... |
| 5% | grandinių | Asp | Vai | Glu... |
| 30% | grandinių | Vai | Glu·. |
Alfa-subvieneto nevienodumas
e) Beta-subvieneto sekvenavimas
Atliekamos kelios sekvenavimo serijos, panaudojant beta-subvienetus, karboksimetilintus beta-subvienetus, visą labai išvalytą žmogaus šlapimo FSH ir piridiletilinto beta-subvieneto tripsinizuotus peptidus. Mėginiai sudedami į baltymų sekvenseri (470 A9 Eplaid Biosistem) ir panaudojama programa 03PPTH, pateikta Eplaid Biosistem. Duomenys rodo kad šis subvienetas turi 111 aminorūgščių ilgį ir sekančią seką:
| Asn | Ser | Cys | Glu | Leu | Thr | Asn | 10 Ile | Thr | Ile | Ala | Ile | Glu |
| Lys | Glu | Glu | Cys | Arg | Phe | 20 Cys | Ile | Ser | Ile | Asn | Thr | Thr |
| Trp | Cys | Ala | 30 Gly | Tyr | Cys | Tyr | Thr | Arg | Asp | Leu | Vai | Tyr |
| 40 Lys | Asp | Pro | Ala | Arg | Pro | Lys | Ile | Gln | Lys | 50 Thr | Cys | Thr |
| Phe | Lys | Glu | Leu | Vai | Tyr | Glu | 60 Thr | Vai | Arg | Vai | Pro | Gly |
| Thr | Asp | Cys | Thr | Vai | Arg | Gly | Leu | 100 Gly | Pro | Ser | Tyr | Cys |
| Ser | Phe | Gly | Glu | Met | no Lys | Glu |
Asn 7 ir 24 padėtyje, pradedant nuo Asn 1 padėtyje, yra tos aminorūgštys, kur vyksta glikozilinimas.
Beta-subvieneto NH2 gale visada vienodas visuose sekvenuotuose molekulė (t.y. prasidedanti nuo grandinių, molekulė, neturinti nevienodumas, kuris mėginiuose. Pilna
Asn) pasitaiko 35% pirmos aminorūgšties (t.y. prasidedanti Ser) pasitaiko 15%, o molekulė, neturinti pirmųjų dviejų aminorūgščių (t.y. prasidedanti Cys) pasitaiko 50%.
5
| 35% | undinių,, Asn | Ser Cys’·’ | Glu | ‘^eu... |
| 15% | grandinių | Ser Cys | Glu | Leu... |
| 30% | grandinių | Glu | Leu... |
Beta-subvieneto nevienodumas pavyzdys: Vaistiniai preparatai
Farmacinių vaisto formų, turinčių labai išvalytą šlapimo FSH, gautą pagal šį išradimą, gavimas nesudaro sunkumų. Kadangi medžiaga išlaiko savo biologinį aktyvumą po liofilizacijos, pastaroji talkina gaunant formą, tinkamą injekuojamiems preparatams.
Liofilizuotas preparatas, turintis labai išvalytą šlapimo FSH, tirpinamas fiziologiniame tirpale ir/ar kitokiame tinkamame skiediklyje ir gaunamas švirkščiamas tirpalas.
Kai kurie užpildai gali būti panaudoti kompozicijoje kaip jos dalis, pavyzdžiui, manitas, laktozė, glicinas, gliukozė, sacharozė ir jų mišiniai. Galima naudoti ir kitus tradicinius užpildus ar jų mišinius.
Bandymuose, atliktuose pagal išradimą, švirkščiamiems preparatams kaip užpildas panaudota laktozė.
Gaminant injekcinius preparatus, pasirinktinai gali keisti pH iki tam tikros reikšmės, pridedant tradicinių rūgštinių ar šarminių medžiagų. Kaip rūgštinė medžiaga gali būti naudojama acto rūgštis ir pan. Iš šarminių medžiagų naudojamas natrio šarmas ir pan. Galima naudoti mišinius.
Šio išradimo rėmuose galima panaudoti vieną ar daugiau stabilizatorių, pavyzdžiui, albuminą ir pan.
20000 ampulių, kurių kiekviena turi 75 tarptautinių vienetų FSH, partijos vaistų gamybos pavyzdys atrodo sekančiai:
Liofilizuotų FSH miltelių paskaičiuotas kiekis (biologinio aktyvumo vienetais) ištirpinamas 700 ml Šalto apirogeninio vandens, skirto injekcijoms. Jeigu reikalinga, pH pasiekiamas intervale nuo 6,2, iki 6,8 tam tikslui panaudojant acto rūgštį ar natrio šarmą. Po to tirpalas sterilinamas filtruojant per filtrą, kurio poros 0,2 pm dydžio.
200 g laktozės ištirpinama 2 litruose apirogeninio vandens, skirto injekcijoms, sterilizuoja kaip aprašyta aukščiau ir prideda prie FSH tirpalo.
Apirogeninis vanduo injekcijoms pridedamas tam, kad būtų pasiektas galutinis 15 litrų tūris. Po to tirpalas išpilstomas į ampules (po 0,75 ml kiekviena) ir liofilizuojama steriliame liofilizatoriuje. Gaunamos ampulės, kurių kiekviena turi po 75 tarptautinius vienetus FSH ir 10 mg laktozės.
Geresniame variante kiekviena ampulė gali turėti 150 tarptautinių vienetų FSH ir 10 mg laktozės.
Pagal kitą vaistinio preparato pavyzdį gaunamos ampulės, turinčios be laktozės kaip užpildo dar po 1 mg albumino kaip stabilizatoriaus.
Nors šis išradimas iliustruojamas specifiniais pavyzdžiais reikia suprasti, kad įvairūs variantai gali būti papildomai realizuoti šio išradimo apimties ir esmės ribose.
Claims (27)
1. Baltymas, turintis alfa- ir beta-subvienetus, kurio alfa-subvienetas yra gonadotropino alfa-subvienetas ir beta-subvienetas turi sekančią aminorūgščių seką:
aminorūgščių ir turintį jų seką, nustatytą pagal 1 punktą, tačiau be pradinio Asn (1 padėtis).
3. Baltymas pagal 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad turi beta-subvienetą, susidedantį iš 109 aminorūgščių ir turintį jų seką, nustatytą pagal 1 punktą, tačiau be pradinių Asn ir Ser (2 padėtis).
4. Baltymas pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad gonadotropino alfa-subvienetas turi sekančią aminorūgščių seką:
5. Baltymas pagal bet kurį iš 1-4 punktų, besiskiriantis tuo, kad turi alfa-subvienetą, susidedanti iš 90 aminorūgščių ir turintį jų seką, nustatytą pagal 4 punktą, tačiau be pradinių Ala ir Pro (2 padėtis).
6. Baltymas pagal bet kurį iš 1-5 punktų, besiskiriantis tuo, kad turi alfa-subvienetą, susidedantį iš 89 aminorūgščių ir turinti jų seką, nustatytą‘'pagal^^unktą, tačiau £>e pradinių Ala ir Pro (2 padėtis) ir Asp (3 padėtis).
7. Baltymas pagal bet kurį iš 1-6 punktų, besiskiriantis tuo, kad yra glikozilintoje formoje.
8. Baltymas pagal 7 punktą, besiskiriantis tuo, kad glikozilinami beta-subvieneto (betasubvienetų) Asn 7 ir 24 padėtyse ir alfa-subvieneto (alfa-subvienetų) Asn 52 ir 78 padėtyse.
9. Baltymas pagal 7 punktą, besiskiriantis tuo, kad pasižymi folikulus stimuliuojančio hormono (FSH) aktyvumu.
10. Baltymas pagal bet kurį iš 1-6 punktų, besiskiriantis tuo, kad neturi liuteinizuojančio hormono ir kitų šlapimo baltymų priemaišų pėdsakų.
11. Baltymas pagal 10 punktą, besiskiriantis tuo, kad jį ekstrahuoja iš žmogaus klimaksinio šlapimo.
12. Biologiškai aktyvus iš šlapimo išskirtas folikulus stimuliuojantis hormonas, neturintis liuteinizuojančio hormono ir kitų šlapimo baltymų priemaišų pėdsakų.
13. Biologiškai aktyvus hormonas pagal 12 punktą, b esiskiriantis tuo, kad turi gonadotropino alfa-subvienetą ir beta-subvienetą, kurio aminorugščių seka apibrėžta 1 punkte.
14. Baltymas pagal 9 ar 12 punktus, besiskiriantis tuo, kad pasižymi santykiniu aktyvumu, ne mažesniu kaip 6200 tarptautinių vienetų FSH 1 mg liofilizuotų miltelių.
15. Baltymo pagal bet kurį iš 1-14 punktų gavimo būdas, besiskiriantis tuo, kad poklimaksinio šlapimo koncentratą valo imuniniu būdu, panaudojant specifinius FSH imobilizuotus monokloninius antikūnus, po to eliuoja FSH, iš kurio išvalo bet kokius pėdsakinius priemaišų kiekius tam tikslui panaudojant atvirkščių fazių aukšto slėgio skysčių chromatografiją.
16. Būdas pagal 15 punktą, besiskiriantis 5 tuo, kad išeitine medžiaga panaudojamas žmogaus klimaksinis gonadotropinas.
17. Būdas pagal 15 arba 16 punktą, besiskiriantis tuo, kad iš imunokomplekso eliminuojant FSH
10 kaip eliuentą panaudoja vandeninį tirpalą, kurio pH aukštesnis negu 10, ir moliaringumas aukštesnis negu 0,5.
18. Būdas pagal 17 punktą, besiskiriantis
15 tuo, kad eliuento pH yra nuo 11,3 iki 11,7 ir moliaringumas apie 1.
19. Būdas pagal 18 punktą, besiskiriantis tuo, kad eliuentas yra 1M amoniakas.
20. Vaistinis preparatas, besiskiriantis tuo, kad turi baltymo pagal bet kurį iš 1-14 punktų terapiškai efektyvų kiekį.
25
21. Vaistinis preparatas pagal 20 punktą, besiskiriantis tuo, kad turi tinkamą užpildą.
22. Vaistinis preparatas pagal 21 punktą, besiskiriantis tuo, kad užpildas yra laktozė.
23. Vaistinis preparatas pagal bet kurį iš 20-22 punktų, besiskirian-tis tuo, kad yra liofilizuotoje injekcijoms skirtoje formoje.
35
24. Vaistinis preparatas pagal bet kurį iš 20-23 punktų, besiskiriantis tuo, kad skirtas poodiniam įšvirkštimui.
25. Vaistinis preparatas pagal 20 punktą, besiskiriantis tuo, kad turi 75 tarptautinius vienetus FSH ampulėje.
26. Vaistinis preparatas pagal 20 punktą, besiskiriantis tuo, kad turi 150 tarptautinius vienetus FSH ampulėje.
10
27. Vaistinis preparatas pagal bet kurį iš 20-26 punktu, besiskiriantis tuo, kad turi žmogaus albuminą kaip stabilizatorių.
28. Baltymo pagal bet kurį iš 1-14 punktų panaudojimas vaistinio preparato pagal 20 punktą gamybai.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT8748110A IT1206302B (it) | 1987-06-26 | 1987-06-26 | Ormone follicolo-stimolante urinario |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| LTIP1652A LTIP1652A (en) | 1995-08-25 |
| LT4018B true LT4018B (en) | 1996-08-26 |
Family
ID=11264576
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| LTIP1654A LT3999B (en) | 1987-06-26 | 1993-12-21 | Protein, biologically active hormone, pharmaceutical preparation |
| LTIP1652A LT4018B (en) | 1987-06-26 | 1993-12-21 | Protein, biologically active hormone, method for protein production, pharmaceutical preparation |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| LTIP1654A LT3999B (en) | 1987-06-26 | 1993-12-21 | Protein, biologically active hormone, pharmaceutical preparation |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5128453A (lt) |
| EP (1) | EP0322438B1 (lt) |
| JP (1) | JP2523843B2 (lt) |
| KR (1) | KR0156565B1 (lt) |
| CN (2) | CN1031714C (lt) |
| AR (1) | AR243241A1 (lt) |
| AT (1) | ATE115148T1 (lt) |
| AU (1) | AU615930B2 (lt) |
| CA (1) | CA1340649C (lt) |
| DE (1) | DE3852383T2 (lt) |
| DK (1) | DK173349B1 (lt) |
| ES (1) | ES2009948A6 (lt) |
| FI (1) | FI96608C (lt) |
| GE (2) | GEP19971042B (lt) |
| GR (1) | GR1003186B (lt) |
| HK (1) | HK143195A (lt) |
| IL (1) | IL86847A (lt) |
| IT (1) | IT1206302B (lt) |
| LT (2) | LT3999B (lt) |
| LV (2) | LV10628B (lt) |
| MX (1) | MX9203471A (lt) |
| NO (1) | NO177498C (lt) |
| RU (2) | RU2059412C1 (lt) |
| UA (1) | UA19101A (lt) |
| WO (1) | WO1988010270A1 (lt) |
| ZA (1) | ZA884492B (lt) |
Families Citing this family (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1206302B (it) * | 1987-06-26 | 1989-04-14 | Serono Cesare Ist Ricerca | Ormone follicolo-stimolante urinario |
| US5087615A (en) * | 1989-03-17 | 1992-02-11 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Novel method of ovulation induction in humans |
| IT1250075B (it) * | 1991-12-18 | 1995-03-30 | Serono Cesare Ist Ricerca | Composizioni farmaceutiche contenenti gonadotropine. |
| IT1270866B (it) * | 1993-03-10 | 1997-05-13 | Eniricerche Spa | Vettore ricombinante e suo impiego per la preparazione esocellulare di anticorpi in forma di singola molecola da bacillus subtilis |
| US6737515B2 (en) * | 1993-11-19 | 2004-05-18 | Washington University | Follicle stimulating hormone-glycosylation analogs |
| US6162905A (en) * | 1996-11-07 | 2000-12-19 | Ibsa Institut Biochimique S.A. | FSH and LH separation and purification process |
| TW518235B (en) * | 1997-01-15 | 2003-01-21 | Akzo Nobel Nv | A gonadotropin-containing pharmaceutical composition with improved stability on prolong storage |
| US5990288A (en) * | 1997-10-21 | 1999-11-23 | Vitro Diagnostics, Inc. | Method for purifying FSH |
| US6414123B1 (en) * | 1997-10-21 | 2002-07-02 | Vitro Diagnostics, Inc. | Method for purifying FSH |
| US20030166525A1 (en) * | 1998-07-23 | 2003-09-04 | Hoffmann James Arthur | FSH Formulation |
| JP4719357B2 (ja) * | 1998-07-23 | 2011-07-06 | アレス トレイディング ソシエテ アノニム | Ｆｓｈ及びｆｓｈ変異体の製剤、製品及び方法 |
| EP1169053A1 (en) | 1999-04-13 | 2002-01-09 | Inhale Therapeutic Systems, Inc. | Pulmonary administration of dry powder formulations for treating infertility |
| GB9924351D0 (en) * | 1999-10-14 | 1999-12-15 | Brennan Frank | Immunomodulation methods and compositions |
| JP2001349892A (ja) * | 2000-04-03 | 2001-12-21 | Unilever Nv | 検査方法及びデバイス |
| CA2405507A1 (en) * | 2000-05-19 | 2001-11-22 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Use of pyrazole derivatives for treating infertility |
| ATE355849T1 (de) * | 2000-12-21 | 2007-03-15 | Nektar Therapeutics | Lagerstabile pulverzusammensetzungen mit interleukin-4 rezeptor |
| EP1487479B1 (en) | 2001-10-22 | 2012-06-20 | Merck Serono SA | Mutant glycoproteins |
| EP1438336B1 (en) * | 2001-10-22 | 2006-06-14 | Applied Research Systems ARS Holding N.V. | Compositions of fsh with high sialylation degree and their use for the preparation of medicaments |
| US7754722B2 (en) * | 2002-09-20 | 2010-07-13 | Merck Serono Sa | Piperazine derivatives and methods of use |
| MXPA05010373A (es) * | 2003-04-01 | 2005-12-05 | Applied Research Systems | Inhibidores de fosfodiesterasas en infertilidad. |
| EA012565B1 (ru) * | 2003-04-02 | 2009-10-30 | Арес Трейдинг С.А. | Жидкие фармацевтические композиции фолликулостимулирующего гормона (фсг) и лютеинизирующего гормона (лг), содержащие неионогенное поверхностно-активное вещество |
| CA2526099C (en) * | 2003-06-20 | 2013-02-05 | Ares Trading Sa | Freeze-dried fsh / lh formulations |
| DE602004023757D1 (de) * | 2003-12-22 | 2009-12-03 | Ares Trading Sa | Methode zur reinigung von fsh |
| US20070270339A1 (en) * | 2004-04-23 | 2007-11-22 | Serono, Inc. | Use of GPCR54 Ligands for the Treatment of Infertility |
| EA011673B1 (ru) | 2004-11-09 | 2009-04-28 | Арес Трейдинг С.А. | Способ очистки fsh |
| KR20080044836A (ko) | 2005-07-15 | 2008-05-21 | 라보라뚜와르 세로노 에스. 에이. | 자궁내막증 치료용 ｊｎｋ 억제제 |
| BRPI0613042A2 (pt) | 2005-07-15 | 2010-12-14 | Serono Lab | inibidores de jnk para o tratamento de endometriose |
| WO2007022799A1 (en) | 2005-08-26 | 2007-03-01 | Ares Trading S.A. | Process for the preparation of glycosylated interferon beta |
| CA2621057A1 (en) | 2005-09-07 | 2007-03-15 | Laboratoires Serono S.A. | Ikk inhibitors for the treatment of endometriosis |
| KR20080043301A (ko) * | 2005-09-14 | 2008-05-16 | 아레스 트레이딩 에스.에이. | 폴록사머의 정량 방법 |
| JP5199112B2 (ja) | 2005-12-09 | 2013-05-15 | アレス トレーディング ソシエテ アノニム | Ｆｓｈ又はｆｓｈ変異体を精製するための方法 |
| US20090093019A1 (en) * | 2007-04-27 | 2009-04-09 | Phelps Jamie P | Production and in vivo assembly of soluble recombinant icosahedral virus-like particles |
| EA022993B1 (ru) | 2007-06-28 | 2016-04-29 | Рациофарм Гмбх | Молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие альфа- и бета-цепи фолликулостимулирующего гормона человека (fsh) |
| EP2249869B1 (en) | 2008-02-08 | 2011-09-07 | BioGeneriX AG | Liquid formulation of fsh |
| TWI488640B (zh) | 2008-04-16 | 2015-06-21 | Ferring Int Ct Sa | 藥學製劑 |
| CN101269215B (zh) * | 2008-05-15 | 2011-03-23 | 上海天伟生物制药有限公司 | 一种糖蛋白激素组合物 |
| JP2009273427A (ja) | 2008-05-16 | 2009-11-26 | Jcr Pharmaceuticals Co Ltd | 組換え体ヒトｆｓｈの製造方法 |
| HUE025959T2 (en) | 2009-04-01 | 2016-05-30 | Ratiopharm Gmbh | A method for purifying recombinant FSH |
| TWI604850B (zh) | 2009-10-05 | 2017-11-11 | 菲瑞茵國際中心股份有限公司 | 藥學製劑 |
| EP2325194A1 (en) | 2009-11-24 | 2011-05-25 | Glycotope GmbH | Process for the purification of glycoproteins |
| CN103619358B (zh) | 2011-03-31 | 2017-02-15 | 辉凌公司 | 药物制剂 |
| CN103509121B (zh) | 2012-11-22 | 2015-01-28 | 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 | 一种fsh融合蛋白及其制备方法和用途 |
| WO2016039418A1 (ja) | 2014-09-11 | 2016-03-17 | 久光製薬株式会社 | マイクロニードルデバイス |
| JP6621754B2 (ja) | 2014-10-27 | 2019-12-18 | 久光製薬株式会社 | 遺伝子組換型卵胞刺激ホルモンを含有するマイクロニードルデバイス |
| CN110072542A (zh) * | 2016-10-11 | 2019-07-30 | 恩科格林医疗股份公司 | 在肿瘤的诊断和治疗中的fsh激素受体的配体 |
| CN111349154A (zh) * | 2018-12-21 | 2020-06-30 | 江苏众红生物工程创药研究院有限公司 | 一种重组人促卵泡激素及其制备方法和药物应用 |
| KR20210083173A (ko) * | 2019-12-26 | 2021-07-06 | 주식회사 엘지화학 | 여포 자극 호르몬의 정제 방법 |
| CN116120449A (zh) * | 2021-07-09 | 2023-05-16 | 苏州晟济药业有限公司 | 抗体以及包含其的结合剂、免疫吸附材料及其应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2173803A (en) | 1985-04-22 | 1986-10-22 | Health Lab Service Board | Isolating pituitary glycoprotein hormones |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3852422A (en) * | 1971-06-26 | 1974-12-03 | Serono Ist Farm | Long-active gonadotropins |
| SU618113A1 (ru) * | 1976-11-19 | 1978-08-05 | Всесоюзный научно-исследовательский институт технологии кровезаменителей и гормональных препаратов | Способ получени фолликулостимулирующего гормона |
| US4923805A (en) * | 1983-11-02 | 1990-05-08 | Integrated Genetics, Inc. | Fsh |
| JPS6176421A (ja) * | 1984-04-03 | 1986-04-18 | セロノ ラボラトリ−ズ インコ−ポレイテツド | 排卵誘発方法およびインビトロ受精方法 |
| US4845077A (en) * | 1984-04-03 | 1989-07-04 | Serono Laboratories, Inc. | Method of inducing ovulation |
| GB2174600B (en) * | 1985-05-10 | 1989-12-20 | Univ Melbourne | Induction of ovulation in mares |
| IT1206302B (it) * | 1987-06-26 | 1989-04-14 | Serono Cesare Ist Ricerca | Ormone follicolo-stimolante urinario |
-
1987
- 1987-06-26 IT IT8748110A patent/IT1206302B/it active
-
1988
- 1988-06-23 IL IL86847A patent/IL86847A/xx not_active IP Right Cessation
- 1988-06-23 ZA ZA884492A patent/ZA884492B/xx unknown
- 1988-06-24 UA UA4613604A patent/UA19101A/uk unknown
- 1988-06-24 WO PCT/IT1988/000048 patent/WO1988010270A1/en active IP Right Grant
- 1988-06-24 US US07/337,766 patent/US5128453A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-24 JP JP63505461A patent/JP2523843B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-24 AT AT88906018T patent/ATE115148T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-06-24 RU SU4613604/14A patent/RU2059412C1/ru active
- 1988-06-24 GR GR880100418A patent/GR1003186B/el not_active IP Right Cessation
- 1988-06-24 AU AU19620/88A patent/AU615930B2/en not_active Expired
- 1988-06-24 DE DE3852383T patent/DE3852383T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-24 KR KR1019890700354A patent/KR0156565B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-06-24 GE GEAP19881706A patent/GEP19971042B/en unknown
- 1988-06-24 ES ES8801994A patent/ES2009948A6/es not_active Expired
- 1988-06-24 RU SU4743338/13A patent/RU2105012C1/ru active
- 1988-06-24 EP EP88906018A patent/EP0322438B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-24 AR AR88311231A patent/AR243241A1/es active
- 1988-06-24 CA CA000570438A patent/CA1340649C/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-24 MX MX9203471A patent/MX9203471A/es unknown
- 1988-06-25 CN CN88103966A patent/CN1031714C/zh not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-02-24 NO NO890805A patent/NO177498C/no not_active IP Right Cessation
- 1989-02-24 DK DK198900899A patent/DK173349B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-02-24 FI FI890893A patent/FI96608C/fi active IP Right Grant
-
1993
- 1993-08-25 GE GEAP19931489A patent/GEP19981274B/en unknown
- 1993-11-17 LV LVP-93-1241A patent/LV10628B/xx unknown
- 1993-11-22 LV LVP-93-1256A patent/LV10196B/lv unknown
- 1993-12-21 LT LTIP1654A patent/LT3999B/lt not_active IP Right Cessation
- 1993-12-21 LT LTIP1652A patent/LT4018B/lt not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-03-30 US US08/413,936 patent/US5767067A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-07-20 CN CN95107562A patent/CN1069062C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-07 HK HK143195A patent/HK143195A/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-12-29 US US08/580,858 patent/US5840857A/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2173803A (en) | 1985-04-22 | 1986-10-22 | Health Lab Service Board | Isolating pituitary glycoprotein hormones |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| E. IR C. LIVINGSTON: "Klimaksinio šlapimo FSH išvalymas" |
| P. DONINI ET AL.: "PURIFICATION AND SEPARATION OF FOLLICLE STIMULATING HORMONE (FSH) AND LUTEINIZING HORMONE (LH) FROM HUMAN POSTMENOPAUSAL GONADOTROPHIN (HMG)", ACTA ENDOCRINOL, 1966, pages 169 - 185 |
| ROOS P.: "Human follicle-stimulating hormone. Its isolation from the pituitary gland and from postmenopausal urine and a study of some chemical, physical immunological, and biological properties of the hormone from these two sources", ACTA ENDOCRINOL (COPENH)., 1968, pages 3 - 93 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| LT4018B (en) | Protein, biologically active hormone, method for protein production, pharmaceutical preparation | |
| Keutmann et al. | A receptor-binding region in human choriogonadotropin/lutropin beta subunit. | |
| US20060079460A1 (en) | Purified LH | |
| Matsuura et al. | Antibodies to the carboxyl-terminal fragment of human chorionic gonadotropin. beta.-subunit: characterization of antibody recognition sites using synthetic peptide analogs | |
| Pearlman et al. | Stability and characterization of protein and peptide drugs: case histories | |
| KR970009353B1 (ko) | 초고활성 인체 인슐린 동족체 | |
| JP4574865B2 (ja) | 高度に精製されたゴナドトロピン組成物およびそれらの製造方法 | |
| CA1057742A (en) | Antigenic modification of polypeptides | |
| Fahrenkrug et al. | Production and evaluation of antibodies for radioimmunoassay of secretin | |
| Birken et al. | Preparation and analysis of the common urinary forms of human chorionic gonadotropin | |
| JPH01502662A (ja) | たん白 | |
| JP2651488B2 (ja) | Ｆｓｈ放出ペプチド | |
| US7022822B1 (en) | Highly purified gonadotropin compositions and process for preparing them | |
| Boden et al. | Immunological comparison of natural and synthetic secretins | |
| SEGRE et al. | The Chemistry of Growth Hormone and the Lactogenic Hormones |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD9A | Change of patent owner |
Owner name: INDUSTRIA FARMACEUTICA SERONO S.P.A., IT Effective date: 20050921 |
|
| MK9A | Expiry of a patent |
Effective date: 20131221 |