JP2001349892A - 検査方法及びデバイス - Google Patents

検査方法及びデバイス

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JP2001349892A
JP2001349892A JP2001103658A JP2001103658A JP2001349892A JP 2001349892 A JP2001349892 A JP 2001349892A JP 2001103658 A JP2001103658 A JP 2001103658A JP 2001103658 A JP2001103658 A JP 2001103658A JP 2001349892 A JP2001349892 A JP 2001349892A
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JP2001103658A
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Lorraine Diane Butlin
ロレイン・ダイアン・バトリン
John Coley
ジヨン・コーリイ
Stephen J Eida
ステイーブン・ジエイムズ・アイダ
Mohamed M Gani
モハメド・ムトワハル・ガーニ
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Unilever NV
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
    • G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors

Abstract

(57)【要約】 【課題】 異なる形態で存在し得るアナライト、例えば
卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の状態を区別するための方
法及び検査デバイスを提供する。 【解決手段】 ２つのアナライト状態を区別しない第１
アッセイと、２つのアナライト状態を区別する第２アッ
セイの２つの同時アッセイを使用し、アッセイ結果を比
較する。閉経前及び閉経後ＦＳＨ試料を区別するために
サンドイッチフォーマットアッセイにおいて一緒に使用
され得る新規な抗−ＦＳＨモノクローナル抗体の対を開
示する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の分野】本発明は検査方法及びデバイスに関し、
より具体的には各種形態、例えばイソフォームとして存
在するアナライトの状態を区別するための方法に関す
る。
【０００２】
【発明の背景】閉経に関連するホルモンレベルについて
臨床的に重要な情報を提供する目的の検査が現在利用さ
れたり、提案されている。問題となる主要ホルモンは卵
胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）である。閉経後状態では、循
環ＦＳＨレベルが上昇している。このため、血液や尿の
ような体液試料中のＦＳＨレベルを検出するための検査
が開発されてきた。これらの検査は「全」ＦＳＨを検出
するように設計されており、ＦＳＨの異なるイソフォー
ムを区別しない。
【０００３】上記した公知の検査は、医者がホルモン補
充療法（ＨＲＴ）を推奨し、モニターする際に使用され
ている。閉経は循環エストロゲン代謝物レベルの低下を
も伴うので、ＨＲＴでは通常エストロゲンの欠乏を抑
え、閉経に関連する症状を軽減するためにエストロゲン
を投与している。
【０００４】ＦＳＨが各種形態で存在することは公知で
あるが、これら形態の閉経のような状態との関係におけ
る臨床的意義は余り解明されていない。異なる形態はイ
ソフォームまたはグリコフォームであり得る。しかしな
がら、各種形態で存在しているために、確かな臨床診断
の基礎としての「全」ＦＳＨ検査の妥当性が問題とな
る。
【０００５】閉経状態をより確実に診断し、ＨＲＴの処
方及び調整を容易とするためにゴナドトロピンホルモ
ン、特にＦＳＨをモニターする改良方法が必要されてい
る。
【０００６】より一般的には、特にアナライトの試料中
に存在する各種形態の種類及び／または相対量が臨床上
重要であり得るときに、複数の形態で存在するアナライ
トの状態を区別する方法が必要されている。前記形態
は、物理的特性（例えば、電荷により分離可能な「イソ
フォーム」）及び化学的特性（例えば、ＦＳＨまたは類
似分子の場合には「グリコフォーム」）のいずれか、ま
たは実際にはその両方の点で相互に異なり得る。
【０００７】
【発明の一般的記載】本発明は、複数の形態で存在する
アナライトの、該アナライト中に存在する１つ以上の形
態の種類及び／または量の点で相互に異なる２つの状態
を区別する方法を提供し、その方法は、 ａ）アナライトに対する特異性が、アナライトが１つの
形態または他の形態にあるかに関係なく本質的に一定の
第１アッセイ、及びアナライトに対する特異性が、アナ
ライトの形態に応じて異なる第２アッセイの、少なくと
も２つの同時アッセイを実施し、 ｂ）第１及び第２アッセイの結果を比較することを含
む。
【０００８】本発明の好ましい実施態様において、ゴナ
ドトロピン、特にＦＳＨについての２つの別々の同時検
査を含む、女性の閉経状態の存在を検査する方法が提供
される。第１検査は、閉経前被験者及び閉経後被験者中
のゴナドトロピンを区別しない。しかしながら、第２検
査はこの点を区別する。ゴナドトロピンに対する第２検
査の特異性は、検査試料が閉経前被験者または閉経後被
験者に由来するかに応じて異なる。両検査を本質的に同
時に実施することにより、循環ゴナドトロピンの総レベ
ル及びゴナドトロピンが閉経状態に関連し得るタイプで
あるかが確実に示される。
【０００９】特に、本発明は、個々の女性被験者のホル
モン状態をモニターする方法を提供し、その方法では、
閉経状態に入るかまたはそこから脱するかを示す方法
で、ゴナドトロピンレベル及びその特性が変化している
かを調べるために同時検査を繰り返し、例えば数週間毎
のように定期的に実施する。
【００１０】別の態様で、本発明は女性の閉経状態の存
在をゴナドトロピンアッセイにより検査する方法を提供
し、その方法は、 ａ）ゴナドトロピンに対する特異性が、女性が閉経前ま
たは閉経後であるかに関係なく本質的に一定の第１アッ
セイ、及びゴナドトロピンに対する特異性が、女性が閉
経前または閉経後であるかに応じて異なる第２アッセイ
の、少なくとも２つの同時アッセイを実施し、 ｂ）第１及び第２アッセイの結果を比較することを含
む。
【００１１】本発明の別の態様は、女性から得た体液試
料を検査するためのアッセイデバイスであり、このデバ
イスは、試料が閉経前または閉経後被験者に由来するか
に関係なく対照標準に比して一定の読取り可能信号を与
える第１アナライト応答性（好ましくは、ゴナドトロピ
ン応答性）信号発生手段、及び試料が閉経前または閉経
後被験者に由来するかに応じて対照標準に比して異なる
読取り可能信号を与える第２アナライト応答性（好まし
くは、ゴナドトロピン応答性）信号発生手段を有する。
【００１２】各読取り可能な信号は、直接粒状標識（例
えば、金ゾルまたは着色ラテックス粒子）で標識した特
異的結合物質が検出ゾーンにおいて結合することにより
生じ得る。或いは、他の信号発生標識、例えば酵素標
識、蛍光標識または放射性標識を使用することができ
る。
【００１３】望ましくは、特異的結合物質は免疫グロブ
リンの抗原結合部位を含む。便宜的には、特異的結合物
質は抗体（例えば、ＩｇＧまたはＩｇＡ分子）である
か、またはその抗原結合部分（例えばＦｖ、Ｆａｂ、ｓ
ｃＦｖ）、二重特異性抗体、ダイアボディー(diabody)
等を含み得る。これらはすべて当業者に周知である。
【００１４】特に好ましい結合物質はモノクローナル抗
体である。
【００１５】本発明の同時検査は、ＨＲＴコースの有効
性をモニターするために繰り返し、通常少なくとも１週
間の間隔で実施され得る。
【００１６】同時アッセイで検査される試料は、被験者
からの適当な体液、例えば血液、血清、血漿、唾液、
涙、歯肉滲出液等の試料であり得る。最も便宜的な試料
は尿試料である。
【００１７】ＦＳＨは本発明に従って使用するのに好ま
しいアナライトであるが、ゴナドトロピン類の他のメン
バーを使用することもできる。これらには、ヒト絨毛性
ゴナドトロピン（ｈＣＧ）、黄体化ホルモン（ＬＨ）及
び甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）が含まれる。これらの
ゴナドトロピンのすべてが糖ペプチドである。その主要
構造は２つのペプチド鎖を含む。α鎖として公知の１つ
のペプチド鎖はゴナドトロピン類のすべてのメンバーで
共通である。β鎖として公知の他のペプチド鎖は、分子
毎に異なる。更に、各分子は糖タンパク質側鎖を含む。
これら分子の詳細な構造は完全には解明されていない。
しかしながら、糖タンパク質側鎖の組成の違いにより各
分子の形態（「グリコフォーム」）が異なると考えられ
ている。当業者は、異なるグリコフォームが異なるイソ
フォームを構成し得るように、糖タンパク質側鎖の化学
特性の違いが、分子全体の物理的特性（例えば、電荷）
にも影響を与え得ることをわかっている。従って、例え
ばＦＳＨの場合、現在の科学知識では、α及びβペプチ
ド鎖はすべてのＦＳＨ型で同一であるが、糖タンパク質
側鎖に微妙な違いがあると考えられている。閉経状態で
存在するＦＳＨの形態の相対比率は閉経前状態のものと
は異なると考えられている。
【００１８】本発明以前は、閉経状態を確実に検出し得
る程度に充分にＦＳＨ形態を区別する特異的結合アッセ
イが開発され得ることは認識されていなかった。
【００１９】本発明の好ましい実施態様では、両アッセ
イはサンドイッチフォーマットを有する。従って、各ア
ッセイは、２つの特異的結合物質（例えば、抗体）を必
要とし、１つの結合物質は好ましくはＦＳＨ分子のα鎖
に対するものであり、他の結合物質は好ましくはＦＳＨ
分子のβ鎖に対するものである。抗体対は異なるもので
なければならない。各対の少なくとも１つのメンバー、
例えば抗−β抗体は他の対の対応抗体とは異なっていな
ければならない。しかしながら、これのみで必ずしも所
望の目的が達成されるわけではない。驚くことに、本発
明者らは、第２抗体対のメンバーの両方が第１抗体対の
メンバーと異なっているならば閉経前ＦＳＨと閉経後Ｆ
ＳＨを更に明確に区別し得ることを知見した。従って、
２つのアッセイでは、捕捉抗体及び標識抗体の両方が異
なることが好ましい。従って、好ましい実施態様で、本
発明は、抗体が分子のα及びβ−ペプチド鎖に対するも
のであるが、糖タンパク質側鎖の微細な変化により生ず
る特定形態のＦＳＨに対する特異性における差異を示
す、ＦＳＨに対する２つのサンドイッチフォーマットの
免疫アッセを使用する。
【００２０】本発明において使用するのに適した抗体対
は、閉経前及び閉経後女性から得たＦＳＨ試料に対する
広範囲の抗ＦＳＨ抗体対をスクリーニングすることによ
り同定することができる。第１抗体対は、サンドイッチ
フォーマットアッセイが、閉経前または閉経後ＦＳＨ試
料を使用するかに関係なく、対照標準に比して一定の結
果を与えるものとして選択される。第２抗体対は、同一
条件下でＦＳＨ試料が、閉経前または閉経後であるかに
応じて、明確に異なるアッセイ結果をもたらす。
【００２１】第１抗体対に適当な抗体を選択するための
適当なソースは、「全」ＦＳＨアッセイにおける使用が
推奨されている市販の抗体である。
【００２２】第２抗体対（アナライト形態を区別する）
を選択するための抗体のソースを提供するために、当該
アナライト形態に対する抗体のパネルを作成することが
望ましいが、必須ではない。これは、通常のハイブリド
ーマ方法により実施することができる。或いは、免疫グ
ロブリン産生バクテリオファージライブラリーをスクリ
ーニングすることもできる。
【００２３】ＦＳＨ試料の分析への適用に関連する本発
明の特定態様は、閉経前及び閉経後ＦＳＨ試料を区別す
る新規な抗−ＦＳＨモノクローナル抗体の対である。そ
れぞれに、これらの新規なモノクローナル抗体を発現す
る２つのマウスのハイブリドーマ細胞系がブダペスト条
約１９７７の規定に従って、ヨーロピアン・コレクショ
ン・オブ・セル・カルチャー（ＥＣＡＣＣ；英国ウィル
トシャー州ＳＰ４ １ＪＧ、ソールスベリーに所在のＣ
ｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌｏｇｙ ＆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）にいずれも２００
０年３月２０日に寄託された： ａ）抗−β−ＦＳＨモノクローナル抗体を発現するＢａ
ｌｂ／ｃマウスハイブリドーマクローン“４８１３．
２”：ＥＣＡＣＣ ０００３２００４、 ｃ）抗−α−ＦＳＨモノクローナル抗体を発現するＢａ
ｌｂ／ｃマウスハイブリドーマクローン“４８８２．
１”：ＥＣＡＣＣ ０００３２００５。
【００２４】本発明は、本明細書に記載の方法または分
析検査デバイスにおける、上記寄託細胞系より発現させ
た抗−ＦＳＨモノクローナル抗体のいずれかまたは両方
の使用をも包含する。
【００２５】実際には、２つのアッセイは、２つのアッ
セイが公平に相互に比較し得る結果を与えるように、同
一の臨床試料に対して所要により分割後実施され、また
は同一被験者からほぼ同時期（すなわち、同日または好
ましくは同時間）に採取した２つの試料に対して実施す
べきである。この意味で、前記アッセイは同時と見做さ
れる。例えば、試料を検査同士の間適当に（例えば、−
２０℃で凍結することにより）保存し得るならば、同時
アッセイを実際には異なる時期に実施してもよい。従っ
て、２つのアッセイが、同一試料または同一試料の別ア
リコートに対して、またはほぼ同時期に被験者から得た
別の試料に対して実施する場合２つのアッセイは同時ア
ッセイと見做され得る。２つの同時アッセイの結果を比
較して、閉経状態が存在するかどうかを決める。
【００２６】１つの実施態様では、例えば色濃度の差に
より容易に判断できる目視検査読取り値が２つのアッセ
イにより与えられるならば、検査結果を例えば目により
定性的もしくは半定量的に分析することができる。所要
により、この目視測定を助けるために、対照標準を用意
してもよい。２つのアッセイは目視評価を助けるように
構成され得る。例えば、非閉経状態では両アッセイが特
定色または色濃度の点で近似する信号を生ずるが、閉経
状態では第２アッセイが明確に異なる色または色濃度を
生ずるように２つのアッセイの性能を変更し得る。
【００２７】閉経状態をより正確に診断するために、ア
ッセイ結果を数的に測定することが適当であり得る。こ
のためには、通常信号強度の小さな変化を測定し、それ
をＦＳＨ濃度に関連させるように適合することができる
複雑な読取りシステム、例えば光学透過率または反射率
による読取りシステムが必要である。この場合、第１及
び第２アッセイの信号の比を数字で測定することが適当
であり得る。この比の有意な変化で、閉経前から閉経後
またはその逆の変化を表すことができる。よって、例え
ば数週間毎に実施した一連の同時検査の結果を相関さ
せ、得た信号比の変化を使用して状態の変化を診断する
ことができる。
【００２８】ＨＲＴモニタリングのために、例えば連続
２回検査から得た比の値を所定レベルに維持するように
ＨＲＴ治療のために使用する治療薬またはその用量レベ
ルを調節することができる。
【００２９】本発明のアッセイを使用する検査デバイス
は、家庭で使用するかまたは医院もしくは病院で使用す
べく提供され得る。或いは、臨床検査用アッセイも使用
できる。好ましいアッセイフォーマットには、例えば欧
州特許出願公開第２９１１９４号明細書に記載されてい
るような単一ステップフォーマットが含まれる。前記ア
ッセイは、所望により例えば国際特許出願公開第９５／
１３５３１号パンフレットに記載されているような電子
リーダーと組合せて使用することができる。この場合、
電子リーダーは好ましくは情報をダウンロードする手
段、例えば転送可能なデータカード（「スマートカー
ド」）を有し、そこから使用者（例えば、医者）は患者
の診察中にデータをコンピユータに移すことができ、こ
れにより反復検査からの蓄積情報が診断のために正確に
解釈することができる。コンピュータには、医者が各被
験者のために適切なＨＲＴ治療を確立するのに役立つプ
ログラム化情報を含み得る。
【００３０】通常、本発明の方法は、特異的結合物質の
２つの異なる対の使用を包含し、各対を同時アッセイの
１つで使用する。２つのアッセイは通常、２つのアッセ
イ間の結果の違いが、使用した結合物質の違いにのみ起
因するように、可能な限りほぼ同一条件下で操作する同
一フォーマット、例えばともに不均一サンドイッチフォ
ーマットを有する。
【００３１】下記実施例により本発明をより詳細に説明
する。
【００３２】実施例 １．抗−ＦＳＨモノクローナル抗体の作成 尿及び下垂体ソースを起源とし、免疫前に免疫アフィニ
ティーにより精製したヒトＦＳＨ調製物を用いて、Ｂａ
ｌｂ／ｃマウスを免疫化した。モノクローナル抗体を免
疫化マウスから、脾細胞を不死パートナーとしてのＳＰ
２／Ａｇ１４細胞と融合することにより通常のクローニ
ング方法を用いて作成した。
【００３３】抗−ＦＳＨモノクローナル抗体のサブユニ
ット特異性を、ＬＨ、ＴＳＨ及びｈＣＧと交差反応性の
抗−αサブユニット抗体を用いて特定した。
【００３４】２．抗−ＦＳＨ抗体対の妊性状態バイアス
を用いる同定 ａ）各種の抗体対をスクリーニングするために７つのヒ
ト尿試料のパネルを使用した。（定期的月経周期を有す
る３５歳以下の）若い妊性女性からの試料を、月経周期
の（１）初期卵胞期、（２）中期卵胞期、（３）排卵
期、（４）中期黄体期及び（５）後期黄体期に採取し
た。各妊性期については、２人の被験者からプールした
試料を使用した。月経周期の相はホルモンＦＳＨ、Ｌ
Ｈ、Ｅ３Ｇ及びＰ３Ｇの尿プロフィールにより遡及的に
決定した。妊性試料に加えて、（６）ＨＲＴ治療開始の
１ヶ月前及び（７）ＨＲＴ治療を開始してから少なくと
も１ヶ月後に採取した２つの閉経後尿試料を使用した。
【００３５】抗体スクリーニングに使用するために、尿
パネルをＦＳＨ濃度推定値に基づいて正規化した。ＦＳ
Ｈ濃度推定値は、サンドイッチフォーマットのＥＬＩＳ
Ａアッセイにおいて、市販されている抗−ＦＳＨモノク
ローナル抗体（フィンランド国のＭｅｄｉｘ Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｃａ製のクローン番号６６０１及び６６０２）
を用いて得た。試料を遠心濾過により濃縮することによ
り正規化した。
【００３６】ｂ）スクリーニング方法 １． スクリーニング用ＦＳＨ抗体を、０．２Ｍ炭酸ナ
トリウム緩衝液（ｐＨ８．０）中２．５μｇ／ｍｌの濃
度で調製した。 ２． スクリーニングすべき抗体希釈液２００μｌを高
結合Ｇｒｅｉｎｅｒ９６ウェルマイクロタイタープレー
トのウェルに添加し、その後３７℃で一晩インキュベー
トした。 ３． プレートをＰＢＳＴＡで３回洗浄した。 ４． ０．３８Ｍトリス１００μｌをすべてのプレート
ウェルに添加した。ただし、ブランクのウェルにはＰＢ
ＳＴＡを添加した。スクリーニングパネル（パラグラフ
ａ参照）からの各尿試料１００μｌを、抗体／コンジュ
ゲートの各対について３つのウェルに１５．３ｍＩＵ／
ｍｌ（６６０２／６６０１アッセイ推定値に基づいて）
で添加した。 ５． プレートを室温で１時間インキュベートした。 ６． ステップ３を繰り返した。 ７． アルカリホスファターゼ結合抗−βＦＳＨサブユ
ニット抗体のＰＢＳＴＡ中最適希釈物２００μｌを、抗
−αＦＳＨサブユニット捕捉抗体で感作したウェルに添
加した。アルカリホスファターゼ結合抗−αＦＳＨサブ
ユニット抗体のＰＢＳＴＡ中最適希釈物２００μｌを抗
−βＦＳＨサブユニット捕捉抗体で感作したウェルに添
加した。 ８． 各スクリーニングランのコントロールとして、尿
パネルをＭｅｄｉｘ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａクローン番
号６６０１と捕捉抗体としてＭｅｄｉｘ Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｃａクローン番号６６０２のコンジュゲートを用い
る対照アッセイ（Ｍｅｄｉｘアッセイ）で検査した。 ９． ステップ５を繰り返した。 １０． ステップ３を繰り返した。 １１． ＤＥＡＥ基質２００μｌをすべてのプレートの
すべてのウェルにピペットで添加した。 １２． ステップ５を繰り返した。 １３． １時間３０分インキュベート後、プレートを４
５０ｎｍでＤｙｎａｔｅｃｈプレートリーダーで読み取
った。 １４． ３回の実験の平均値を計算し、Ｍｅｄｉｘアッ
セイのＯＤ値と比較した。こうして、Ｍｅｄｉｘアッセ
イに対する試料認識においてバイアスを示す抗体対を同
定できる。
【００３７】この方法により、現在ＥＣＡＣＣに寄託さ
れている上述の２つのハイブリドーマ細胞系を選択し
た。
【００３８】３．閉経を確認するためのＦＳＨ比の使用 以下のセクション５に記載の方法を、８人の妊性女性の
各々における８周期から及び８人の閉経後女性の各々の
３０日試料からの尿試料を検査するために使用した。こ
の実験で、妊性女性及び閉経後女性の尿を区別するアッ
セイの能力についてＦＳＨアッセイ比を（対照アッセイ
を用いる）全ＦＳＨ測定と比較した。
【００３９】ＦＳＨアッセイ比は妊性女性と閉経後女性
を明確に区別する。
【００４０】４．ＨＲＴ治療に関連するＦＳＨアッセイ
比の変化 ＨＲＴ治療前及びＨＲＴ治療後６週間までに採取した閉
経後女性の尿試料をセクション３に記載のように検査し
た。治療開始から２週間後にＦＳＨアッセイは閉経後レ
ベルよりも高くなることが判明した。前記比は、治療の
継続とともに上昇し、妊性女性で得られる値にまで達す
る。
【００４１】５．ＦＳＨ比を用いる閉経状態を評価する
ために使用する方法 １． Ｇｒｅｉｎｅｒ高結合９６ウェルマイクロタイタ
ープレートを、炭酸緩衝液（ｐＨ９．８）中５μｇ／ｍ
ｌのストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅコード番号２１
１２５）２００μｌ／ウェルを用いて＋４℃で一晩感作
した。 ２． ＦＳＨ標準物質（Ｓｃｉｐａｃ ＦＳＨ９６０６
ストック，ＦＳＨ濃度＝９９．６ｎｇ／ｍｌ）をＰＢＳ
中［ＦＳＨ］＝１０ｎｇ／ｍｌに希釈し、このストック
から０．０２〜１０ｎｇ／ｍｌのＦＳＨ濃度範囲とする
９つの二倍希釈物を同一緩衝液を用いて作成した。妊性
女性からの尿試料は希釈せずにアッセイし、閉経前及び
閉経後女性からの尿試料は希釈しないで及びＰＢＳを用
いて１／５に希釈してアッセイした。 ３． ストレプトアビジン感作プレートをプレート洗浄
機を用いてＰＢＳＴＡで３回洗浄した。 ４． ＰＢＳＴＡ中２．５μｇ／ｍｌのビオチニル化抗
−ＦＳＨ抗−βサブユニットモノクローナル抗体（クロ
ーン番号６６０２）またはバイアスアッセイ（例２）か
らの捕捉抗体の２００μｌ／ウェルをプレートに添加し
た。このプレートを水浴において３７℃で３０分間イン
キュベートした。 ５． 抗体感作プレートをＰＢＳＴＡで３回洗浄した。 ６． ２．３Ｍトリス（ｐＨ８．０）中２％ｗ／ｖ Ｂ
ＳＡ３０μｌ／ウェルをプレートに添加した。 ７． 検査試料１７０μｌを１つの６６０２及び１つの
バイアスアッセイプレートの２つのウェルに添加した。
また、ＦＳＨ標準物質希釈物１７０μｌを各感作プレー
トの２つのウェルに添加した。 ８． プレートを水浴において３７℃で１時間インキュ
ベートした。９． ステップ３を繰り返した。 １０． アルカリフォスファターゼ結合クローン番号６
６０１の抗−αＦＳＨサブユニットモノクローナル抗体
のＰＢＳＴＡ中１／６００希釈物の２００μｌ／ウェル
を６００２感作プレートに添加した。バイアスアッセイ
のためのアルカリフォスファターゼ結合パートナー抗体
のＰＢＳＴＡ中最適希釈物２００μｌ／ウェルをバイア
スアッセイプレートに添加した。 １１． ステップ８を繰り返した。 １２． ステップ３を繰り返した。 １３． アルカリフォスファターゼ基質２００μｌ／ウ
ェルをプレートに添加した。 １４． 十分に発色するまで両方の感作プレートを水浴
において３７℃でインキュベートし、その後Ｏ．Ｄ．
（４０５ｎｍ）をプレートリーダーで読み取った。 １５． 各尿試料の全ＦＳＨ濃度を両ＦＳＨアッセイか
ら標準曲線を用いて計算した。バイアスアッセイの対照
アッセイに対する比も各試料について計算した。
【００４２】上で使用した標準緩衝液は、 ＰＢＳＴＡ：０．０１Ｍリン酸塩（ｐＨ７．２）、０．
９％塩化ナトリウム、０．１５％ツィーン２０及び０．
０２％アジ化ナトリウムを含むリン酸緩衝食塩水； ＰＢＳＡ：上記と同じ、ただしツィーン２０を含まな
い； ＰＢＳ：上記と同じ、ただしツィーン２０及びアジ化ナ
トリウムを含まない；であった。
【００４３】
【表１】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｃ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ Ｃ１２Ｐ 21/08 5/00 Ｂ (72)発明者 ジヨン・コーリイ イギリス国、ベツドフオード・エム・ケ ー・44・１・エル・キユー、シヤーンブル ツク、コルワース・ハウス、ユニリーバ ー・リサーチ・コルワース気付（番地な し) (72)発明者 ステイーブン・ジエイムズ・アイダ イギリス国、ベツドフオード・エム・ケ ー・44・１・エル・キユー、シヤーンブル ツク、コルワース・ハウス、ユニリーバ ー・リサーチ・コルワース気付（番地な し) (72)発明者 モハメド・ムトワハル・ガーニ イギリス国、ベツドフオード・エム・ケ ー・44・１・エル・キユー、シヤーンブル ツク、コルワース・ハウス、ユニリーバ ー・リサーチ・コルワース気付（番地な し) Ｆターム(参考） 4B024 AA11 BA55 GA03 HA15 4B064 AG27 CA10 CA20 CC24 DA13 4B065 AA92X AB05 AC14 BA08 CA06 CA25 CA46 4H045 AA11 AA40 DA76 EA50

Claims (17)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 複数の形態で存在するアナライトの、該
    アナライト中に存在する１つ以上の形態の種類及び／ま
    たは量の点で相互に異なる２つの状態を区別する方法で
    あって、 ａ）アナライトに対する特異性がアナライトが１つの形
    態または他の形態にあるかに関係なく本質的に一定の第
    １アッセイ、及びアナライトに対する特異性がアナライ
    トの形態に応じて異なる第２アッセイの、少なくとも２
    つの同時アッセイを実施し、 ｂ）第１及び第２アッセイの結果を比較することを含む
    ことを特徴とする前記方法。
  2. 【請求項２】 女性の閉経状態の存在をゴナドトロピン
    アッセイにより検査する方法であって、 ａ）ゴナドトロピンに対する特異性が女性が閉経前また
    は閉経後であるかにか関係なく本質的に一定の第１アッ
    セイ、及びゴナドトロピンに対する特異性が女性が閉経
    前または閉経後であるかに応じて異なる第２アッセイ
    の、少なくとも２つの同時アッセイを実施し、 ｂ）第１及び第２アッセイの結果を比較することを含む
    ことを特徴とする前記方法。
  3. 【請求項３】 アナライトがゴナドトロピンであること
    を特徴とする、請求項１に記載の方法。
  4. 【請求項４】 ゴナドトロピンが卵胞刺激ホルモン（Ｆ
    ＳＨ）であることを特徴とする、請求項２または３に記
    載の方法。
  5. 【請求項５】 両同時アッセイがサンドイッチフォーマ
    ットアッセイであることを特徴とする、請求項１〜４の
    いずれか１項に記載の方法。
  6. 【請求項６】 少なくとも２つの同時アッセイの各々
    が、ゴナドトロピンのα及びβペプチド鎖に対する抗体
    対を使用するが、第１アッセイの抗体対の両メンバーが
    第２アッセイの抗体対のメンバーと異なることを特徴と
    する、請求項２〜５のいずれか１項に記載の方法。
  7. 【請求項７】 各アッセイが定量的結果を与え、閉経状
    態の指標として２つの結果の比を取ることを特徴とす
    る、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
  8. 【請求項８】 閉経状態が変化しているかを調べるため
    に、少なくとも２つの同時アッセイを少なくとも１週間
    の間隔で繰り返すことを特徴とする、請求項１〜７のい
    ずれか１項に記載の方法。
  9. 【請求項９】 被験者がＨＲＴを受けているヒトである
    ことを特徴とする、請求項８に記載の方法。
  10. 【請求項１０】 女性から得た体液試料を検査するため
    のアッセイデバイスであって、試料が閉経前または閉経
    後被験者に由来するかに関係なく対照標準に比して一定
    の読取り可能信号を与える第１アナライト応答性（好ま
    しくは、ゴナドトロピン応答性）信号発生手段、及び試
    料が閉経前または閉経後被験者に由来するかに応じて対
    照標準に比して異なる読取り可能信号を与える第２アナ
    ライト応答性（好ましくは、ゴナドトロピン応答性）信
    号発生手段を有することを特徴とする前記デバイス。
  11. 【請求項１１】 ゴナドトロピンがＦＳＨであることを
    特徴とする、請求項１０に記載のデバイス。
  12. 【請求項１２】 各読取り可能信号が、粒状直接標識で
    標識した特異的結合物質の検出ゾーンでの結合により生
    ずることを特徴とする、請求項１０または１１に記載の
    デバイス。
  13. 【請求項１３】 実質的に本明細書に記載されている、
    請求項１に記載の方法または請求項１０に記載のアッセ
    イデバイス。
  14. 【請求項１４】 第１アッセイまたは第１ゴナドトロピ
    ン応答性信号発生手段が、適宜「全」ＦＳＨを検出する
    １対の抗−ＦＳＨ抗体を使用することを特徴とする、請
    求項４に記載の方法、または請求項１１に記載のアッセ
    イデバイス。
  15. 【請求項１５】 ハイブリドーマ細胞系ＥＣＡＣＣ ０
    ００３２００４より発現させた抗−ＦＳＨモノクローナ
    ル抗体。
  16. 【請求項１６】 ハイブリドーマ細胞系ＥＣＡＣＣ ０
    ００３２００５より発現させた抗−ＦＳＨモノクローナ
    ル抗体。
  17. 【請求項１７】 第２アッセイが請求項１５及び／また
    は請求項１６に記載の抗−ＦＳＨ抗体のいずれかまたは
    両方を使用することを特徴とする、請求項４に記載の方
    法、または請求項１１に記載のアッセイデバイス。
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Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030119203A1 (en) * 2001-12-24 2003-06-26 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Lateral flow assay devices and methods for conducting assays
US6837171B1 (en) 2002-04-29 2005-01-04 Palmer/Snyder Furniture Company Lightweight table with unitized table top
US7285424B2 (en) * 2002-08-27 2007-10-23 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Membrane-based assay devices
US7432105B2 (en) * 2002-08-27 2008-10-07 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Self-calibration system for a magnetic binding assay
US7781172B2 (en) 2003-11-21 2010-08-24 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method for extending the dynamic detection range of assay devices
US20040121334A1 (en) * 2002-12-19 2004-06-24 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Self-calibrated flow-through assay devices
US7713748B2 (en) 2003-11-21 2010-05-11 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Method of reducing the sensitivity of assay devices
US7943395B2 (en) 2003-11-21 2011-05-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Extension of the dynamic detection range of assay devices
US20050191704A1 (en) * 2004-03-01 2005-09-01 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Assay devices utilizing chemichromic dyes
CA2581896C (en) * 2004-09-29 2015-11-10 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Fsh and fsh receptor modulator compositions and methods for inhibiting osteoclastic bone resorption and bone loss in osteoporosis
US7939342B2 (en) 2005-03-30 2011-05-10 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Diagnostic test kits employing an internal calibration system
US20060259651A1 (en) * 2005-04-13 2006-11-16 Sierra Wireless, Inc. Methods and apparatuses for providing combination personal computer cards
US7803319B2 (en) * 2005-04-29 2010-09-28 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Metering technique for lateral flow assay devices
US7858384B2 (en) * 2005-04-29 2010-12-28 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Flow control technique for assay devices
US8003399B2 (en) * 2005-08-31 2011-08-23 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Nitrite detection technique
US7829347B2 (en) * 2005-08-31 2010-11-09 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Diagnostic test kits with improved detection accuracy
US7504235B2 (en) * 2005-08-31 2009-03-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Enzyme detection technique
US7618810B2 (en) * 2005-12-14 2009-11-17 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Metering strip and method for lateral flow assay devices
US8012761B2 (en) * 2006-12-14 2011-09-06 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Detection of formaldehyde in urine samples
US7846383B2 (en) * 2006-12-15 2010-12-07 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Lateral flow assay device and absorbent article containing same
US8377379B2 (en) 2006-12-15 2013-02-19 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Lateral flow assay device
US7935538B2 (en) * 2006-12-15 2011-05-03 Kimberly-Clark Worldwide, Inc. Indicator immobilization on assay devices
US20100022487A1 (en) * 2008-07-24 2010-01-28 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Method, device, and kit for maintaining physiological levels of steroid hormone in a subject
US20100061976A1 (en) * 2008-07-24 2010-03-11 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Method for treating or preventing osteoporosis by reducing follicle stimulating hormone to cyclic physiological levels in a mammalian subject
US20100022497A1 (en) * 2008-07-24 2010-01-28 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Method for treating or preventing a cardiovascular disease or condition utilizing estrogen receptor modulators based on APOE allelic profile of a mammalian subject
US20100022494A1 (en) * 2008-07-24 2010-01-28 Searete Llc, A Limited Liability Corporation Of The State Of Delaware Method, device, and kit for maintaining physiological levels of steroid hormone in a subject
US20100290948A1 (en) * 2009-05-15 2010-11-18 Xuedong Song Absorbent articles capable of indicating the presence of urinary tract infections
EP3490591A4 (en) * 2016-07-29 2020-07-29 Icahn School of Medicine at Mount Sinai COMPOSITIONS AND METHODS FOR REDUCING ADIPOSITAS BY INHIBITING FSH / FSHR
CN107490700A (zh) * 2017-10-11 2017-12-19 江西科技师范大学 一种定量检测人促卵泡激素的双抗夹心酶联免疫分析法

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4123510A (en) * 1977-04-11 1978-10-31 American Home Products Corp. (Del.) Method for the determination of gonadotropins
US4208187A (en) * 1977-12-19 1980-06-17 American Home Products Corporation Diagnostic test
DE3507849A1 (de) * 1985-03-06 1986-09-11 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und reagenz zur bestimmung des follikel stimulierenden hormons sowie hierzu geeignete monoklonale antikoerper
IT1206302B (it) * 1987-06-26 1989-04-14 Serono Cesare Ist Ricerca Ormone follicolo-stimolante urinario
US5087615A (en) * 1989-03-17 1992-02-11 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Novel method of ovulation induction in humans
US5366863A (en) * 1990-04-05 1994-11-22 Hygeia Sciences, Inc. Total gonadotropal alpha peptide chain assay
FR2662804B1 (fr) * 1990-06-01 1994-05-27 Agronomique Inst Nat Rech Anticorps polyclonaux anti-lh et leurs applications a la detection et/ou au dosage de la lh, chez de multiples especes animales.
JPH07503540A (ja) * 1992-01-22 1995-04-13 アボツト・ラボラトリーズ 半定量結合検定用校正試薬および装置
US5391272A (en) * 1992-03-06 1995-02-21 Andcare, Inc. Electrochemical immunoassay methods
US5914241A (en) * 1993-01-19 1999-06-22 Biosite Diagnostics, Inc. Assays and kits for detecting analytes in the presence of cross-reacting substances
JP3479100B2 (ja) * 1993-06-02 2003-12-15 帝国臓器製薬株式会社 免疫化学的簡易半定量方法および装置
AU2365895A (en) * 1994-04-26 1995-11-16 Regents Of The University Of Michigan, The Unitary sandwich enzyme immunoassay cassette, device and method of use
US5976876A (en) * 1995-12-11 1999-11-02 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Antibodies specific for hLH β core fragment
US5776785A (en) * 1996-12-30 1998-07-07 Diagnostic Products Corporation Method and apparatus for immunoassay using fluorescent induced surface plasma emission
US6087184A (en) * 1997-11-10 2000-07-11 Beckman Coulter, Inc. Opposable-element chromatographic assay device for detection of analytes
US6927034B2 (en) * 1998-02-03 2005-08-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for detecting trophoblast malignancy by HCG assay
WO1999039202A1 (en) * 1998-02-03 1999-08-05 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York DETERMINATION OF THE AMOUNT OF hLHβ CORE FRAGMENT IN A SAMPLE FROM A SUBJECT AND USES THEREOF
US6174665B1 (en) * 1999-09-10 2001-01-16 Biex, Inc. Hormone replacement therapy monitoring
GB0103755D0 (en) * 2001-02-15 2001-04-04 Genosis Ltd Urine assay
GB2394547B (en) * 2001-09-18 2005-09-21 Inverness Medical Switzerland Improvements in or relating to detection of impaired fertility
FI20040825A0 (fi) * 2004-06-15 2004-06-15 Ani Biotech Oy Suodatinväline, sen käyttö, menetelmä ja kitti
JP3922278B2 (ja) * 2004-09-10 2007-05-30 コニカミノルタフォトイメージング株式会社 振れ補正機構付きカメラ
JP2007003970A (ja) * 2005-06-27 2007-01-11 Pentax Corp 撮像装置および撮像装置の偏光フィルタ回転制御方法
GB2430827B (en) * 2005-06-30 2011-05-04 Pentax Corp Flexible printed wiring board arrangement of an imaging device
JP4744964B2 (ja) * 2005-07-22 2011-08-10 Ｈｏｙａ株式会社 撮像装置
US8019209B2 (en) * 2005-09-30 2011-09-13 Hoya Corporation Optical axis correction apparatus of an imaging device, and optical axis correction method for an imaging device
JP2007114311A (ja) * 2005-10-18 2007-05-10 Pentax Corp 像振れ補正装置及び撮像装置の像振れ補正方法

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