KR940703854A - 사람 쿠니즈형 프로테아제 저해제 변이체(a human kunitz-type protease inhibitor variant) - Google Patents

사람 쿠니즈형 프로테아제 저해제 변이체(a human kunitz-type protease inhibitor variant)

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Abstract

조직인자 경로저해제(TEPI)의 사람 쿠니즈형(Kunitz-type) 프로테아제 저해제 도메인 Ⅰ의 변이체로서, 다음의 아미노산서열.
X1Asp Phe Cys Phe Leu Glu Glu Asp X2, Gly, X3Cys X4X5X6X7X8X9Tyr Phe Tyr
Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg Phe X10Tyr Gly Gly Cys X11, X12, X13, Met, Asn
Asn Phe X14Thr Leu Glu Glu Cys Lys Ans Ile Cys Glu Asp X15(SEQ ID No. 1)
로 이루어지며, 여기서 X1은 H 또는 Cys를 제외한 1-5개의 자연발생 아미노산잔기를 나타내고, X2-X14는 각각 독립적으로 자연발생 아미노산잔기를 나타내고, X15은 OH 또는 Cys를 제외한 1-5개의 자연발생 아미노산 잔기를 나타내며, 단, 아미노산잔기 X1-X15중 적어도 하나는 천연서열의 대응 아미노산 잔기와 다르다.

Description

사람 쿠니즈형 프로테아제 저해제 변이체(A HUMAN KUNITZ-TYPE PROTEASE INHIBITOR VARIANT)
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 본 발명의 TFPI 쿠니즈형 도메인 Ⅱ 변이체를 코드화하는 DNA 서열을 함유하는 플라스미드 pKFN-1603의 제조를 예시하는 도면, 제2도 및 제3도는 405nm에서 측정한 잔류 세린 프로테이나제 활성을 여러 농도의 KFN 1593에 대해 도시한 TFPI 쿠니즈 도메인 Ⅱ(KFN 1593)에 의한 세린 프로테이나제의 저해활성을 나타내는 그래프이다.

Claims (41)

  1. 다음의 아미노산서열로 이루어지는 조직인자 경로저해제(TEPI)의 사람 쿠니즈형(Kunitz-type) 프로테아제 저해제 도메인 Ⅱ의 변이체.
    X1Asp Phe Cys Phe Leu Glu Glu Asp X2, Gly, X3Cys X4X5X6X7X8X9Tyr Phe Tyr
    Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg Phe X10Tyr Gly Gly Cys X11, X12, X13, Met, Asn
    Asn Phe X14Thr Leu Glu Glu Cys Lys Asn Ile Cys Glu Asp X15(SEQ ID No. 1)
    여기서 X1은 H 또는 Cys를 제외한 1-5개의 자연발생 아미노산잔기를 나타내고, X2-X14은 각각 독립적으로 자연발생 아미노산잔기를 나타내고, X15은 OH 또는 Cys를 제외한 1-5개의 자연발생 아미노산잔기를 나타내며, 단, 아미노산잔기 X1-X15중 적어도 하나는 천연서열의 대응 아미노산잔기와 다르다.
  2. 제1항에 있어서, X1은 Lys-Pro인 것을 특징으로 하는 변이체.
  3. 제1항에 있어서, X2은 Ala, Arg, Thr, Asp, Pro, Glu, Lys, Gln, Ser, Ile 및 Val로 구성되는 군으로 부터 선택된 아미노산잔기인 것을 특징으로 하는 변이체.
  4. 제3항에 있어서, X2는 Thr 또는 Pro인 것을 특징으로 하는 변이체.
  5. 제1항에 있어서, X3은 Pro, Thr, Leu, Arg, Val 및 Ile로 구성되는 군으로 부터 선택된 아미노산잔기인 것을 특징으로 하는 변이체.
  6. 제5항에 있어서, X3은 Pro 또는 Ile인 것을 특징으로 하는 변이체.
  7. 제1항에 있어서, X4은 Lys, Arg, Val, Thr, Ile, Leu, Phe, Gly, Ser, Met, Trp, Tyr, Gln, Asn 및 Ala로 구성되는 군으로 부터 선택된 아미노산잔기인 것을 특징으로 하는 변이체.
  8. 제7항에 있어서, X4은 Lys, Val, Leu, Ile, Thr, Met, Gln, 또는 Arg인 것을 특징으로 하는 변이체.
  9. 제1항에 있어서, X5는 Ala, Gly, Thr, Arg, Phe, Gln 및 Asp로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 잔기인 것을 특징으로 하는 변이체.
  10. 제9항에 있어서, X5는 Ala, Thr, Asp 또는 Gly인 것을 특징으로 하는 변이체.
  11. 제1항에 있어서, X6은 Arg, Ala, Lys, Leu, Gly, His, Ser, Asp, Gln, Glu, Val, Thr, Tyr, Phe, Asn, Ile 및 Met로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산잔기인 것을 특징으로 하는 변이체.
  12. 제11항에 있어서, X6는 Arg, Phe, Ala, Leu 또는 Tyr인 것을 특징으로 하는 변이체.
  13. 제1항에 있어서, X7은 Ile, Met, Gln, Glu, Thr, Leu, Val 및 Phe로 구성되는 군으로 부터 선택된 아미노산 잔기인 것을 특징으로 하는 변이체.
  14. 제13항에 있어서, X7은 Ile인 것을 특징으로 하는 변이체.
  15. 제1항에 있어서, X8은 Ile, Thr, Leu, Asn, Lys, Ser, Gln, Glu, Arg, Pro 및 Phe로 구성되는 군으로 부터 선택된 아미노산 잔기인 것을 특징으로 하는 변이체.
  16. 제15항에 있어서, X8은 Ile 또는 Thr인 것을 특징으로 하는 변이체.
  17. 제1항에 있어서, X9은 Arg, Ser, Ala, Gln, Lys 및 Leu로 구성되는 군으로 부터 선택된 아미노산잔기인 것을 특징으로 하는 변이체.
  18. 제17항에 있어서, X9인 Arg인 것을 특징으로 하는 변이체.
  19. 제1항에 있어서, X10은 Gln, Pro, phe, Ile, Lys, Trp, Ala, Thr, Leu, Ser, Tyr, His, Asp, Met, Arg 및 Val로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산잔기인 것을 특징으로 하는 변이체.
  20. 제19항에 있어서, X10은 Val 또는 Lys인 것을 특징으로 하는 변이체.
  21. 제1항에 있어서, X11은 Gly, Met, Gln, Glu, Leu, Arg, Lys, Pro 및 Asn로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 잔기인 것을 특징으로 하는 변이체.
  22. 제21항에 있어서, X11은 Arg 또는 Glu인 것을 특징으로 하는 변이체.
  23. 제1항에 있어서, X12은 Ala 또는 Gly인 것을 특징으로 하는 변이체.
  24. 제1항에 있어서, X13은 Lys, Asn 및 Asp로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 잔기인 것을 특징으로 하는 변이체.
  25. 제24항에 있어서, X11은 Lys 또는 Asn인 것을 특징으로 하는 변이체.
  26. 제1항에 있어서, X14는 Val, Tyr, Asp, Glu, Thr, Gly, Leu, Ser, Ile, Gln, His, Asn, Pro, Phe, Met, Ala, Arg, Trp 및 Lys로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산잔기인 것을 특징으로 하는 변이체.
  27. 제26항에 있어서, X14는 Lys 또는 Glu인 것을 특징으로 하는 변이체.
  28. 제1항에 있어서, X15는 Gly인 것을 특징으로 하는 변이체.
  29. 제1항에 있어서, X1은 Lys-Pro이고, X15는 Gly인 것을 특징으로 하는 변이체.
  30. 다음의 아미노산 서열로 이루어지는 제1항에 따르는 변이체.
    X1Asp Phe Cys Phe Leu Glu Glu Asp X2, Gly X3Cys X4X5X6X7X8X9
    Tyr Phe Tyr Asn X16Gln X17Lys Gln Cys Glu Arg Phe X10Tyr Gly Gly
    Cys X11X12X13Met Asn Asn Phe X14Thr Leu Glu Glu Cys Lys As Ile
    Cys Glu Asp X15(SEQ ID No. 2)
    여기서 X1-X15은 제1항에서 표시한 것과 같으며, X16은 Gln, Gly, Ala, Ser, Val 및 Phe로 구성되는 군으로 부터 선택된 아미노산잔기, 특히 Gln, Ala이며, X17은 Thr 또는 Ala로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 잔기이다.
  31. 제1항에 있어서, 다음 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 변이체.
    Lys Pro Asp Phe Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Lys Ala
    Arg Ile Thr Arg Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg
    Phe Lys Tyr Gly Gly Cys Len Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu
    Glu Glu Cys Lys Asn Ile Cys Glu Asp Gly (SEQ ID No. 3.)
  32. 제1항에 있어서, 다음 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 변이체.
    Lys Pro Asp Phe Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Lys Ala
    Arg Ile Thr Arg Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg
    Phe Lys Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu
    Glu Glu Cys Lys Asn Ile Cys Glu Asp Gly (SEQ ID No. 4.)
  33. 제1항에 있어서, 다음 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 변이체.
    Lys Pro Asp Phe Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Lys Ala
    Arg Ile Thr Arg Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg
    Phe Lys Tyr Gly Gly Cys Arg Gly Asn Met Asn Asn Phe Glu Thr Leu
    Glu Glu Cys Lys Asn Ile Cys Glu Asp Gly (SEQ ID No. 5.)
  34. 제1항에 있어서, 다음 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 변이체.
    Lys Pro Asp Phe Cys Phe Leu Glu Glu Asp Pro Gly Ile Cys Lys Ala
    Arg Ile Ile Arg Tyr Phe Tyr Asn Asn Gln Thr Lys Gln Cys Glu Arg
    Phe Val Tyr Gly Gly Cys Arg Ala Lys Met Asn Asn Phe Lys Thr Leu
    Glu Glu Cys Lys Asn Ile Cys Glu Asp Gly (SEQ ID No. 6.)
  35. 제1항 내지 제34항중 어느 한 항에 따른 사람 쿠니즈형 프로테아 저해제 변이체를 코드화하는 DNA 서열로 이루어지는 DNA 구조물.
  36. 제35항에 따르는 DNA 구조물로 이루어지는 재조합 발현벡터.
  37. 제35항에 따르는 DNA 구조물 또는 제36항에 따르는 발현벡터를 함유하는 세포.
  38. 단백질의 발현에 도움이되는 조건하에 제37항에 따르는 세포를 배양하고 결과된 단백질을 배양액으로 부터 회수하는 것으로 이루어지는 제1항 내지 제34항중 어느 한 항에 따르는 사람 쿠니즈형 프로테아제 저해제 변이체의 제조방법.
  39. 제1항 내지 제34항중 어느 한 항에 따르는 사람 쿠니즈형 프로테아제 저해제 변이체와 약학적으로 허용되는 담체 또는 부형체로 이루어지는 약학 조성물.
  40. 제39항에 있어서, 헤파린으로 더 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
  41. 병리학적 단백질 분해와 관련된 질환 또는 상태들의 예방 또는 치료를 위한 의약의 제조를 위한 제1항 내지 제34항중 어느 한 항에 따르는 TFPI의 사람 쿠니즈형 프로테아제 저해제 도메인 Ⅱ 또는 그의 변이체의 이용.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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