CN108602893A - 血浆激肽释放酶抑制剂及其治疗遗传性血管性水肿发作的用途 - Google Patents

Abstract

本文提供了结合至活性血浆激肽释放酶的血浆激肽释放酶抗体以及使用该抗体治疗和预防遗传性血管性水肿发作的方法，该方法可涉及第一治疗期和任选的第二治疗期。还提供了使用这种抗体治疗遗传性血管性水肿的方法，所述方法涉及将单剂量的抗体给予已经历先前HAE治疗的受试者，如果受试者在单剂量之后经历HAE发作，接着给与多剂量的相同抗体。

Description

血浆激肽释放酶抑制剂及其治疗遗传性血管性水肿发作的 用途

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年12月11日递交的美国临时申请No.62/266,175、2015年12月11日递交的美国临时申请No.62/266,192和2016年9月16日递交的美国临时申请No.62/395,833的权益。这些引用的申请中的每一篇的全部内容通过引用并入本文。

背景技术

血浆激肽释放酶是接触系统的丝氨酸蛋白酶组分并且是不同的炎症疾病、心血管疾病、传染性疾病(败血症)和肿瘤学疾病的潜在药物靶标(Sainz I.M.等，Thromb Haemost98,77-83,2007)。接触系统在暴露于外来的或带负电荷的表面时通过因子XIIa激活，或在内皮细胞表面上通过脯氨酰羧肽酶激活(Sainz I.M.等，Thromb Haemost 98,77-83,2007)。血浆激肽释放酶的激活通过其因子XII的反馈激活放大内在凝固，并通过促炎性九肽缓激肽的产生增强炎症。作为循环中的主要激肽原酶，血浆激肽释放酶主要负责脉管系统中缓激肽的生成。C1抑制剂蛋白(C1-INH)——血浆激肽释放酶的主要的天然抑制剂——中的遗传缺陷导致遗传性血管性水肿(HAE)。具有HAE的患者遭受通常由未知触发物促成的疼痛性水肿的急性发作(Zuraw B.L.等，N Engl J Med 359,1027-1036,2008)。

发明内容

本文提供了使用能够结合和抑制活性形式的人血浆激肽释放酶(pKal)的抗体来治疗遗传性血管性水肿(HAE)发作、降低HAE发作率或阻断HAE发作的方案，所述抗体例如，与DX-2930(又名SHP643)结合相同表位的抗体或与DX-2930竞争结合活性的人pKal的抗体。

在一些方面，本公开提供了用于治疗遗传性血管性水肿(HAE)发作或降低HAE发作率的方法，所述方法包括向有此需要的受试者以单剂量和/或多剂量施用(例如，皮下)本文所述的任何抗-pKal抗体(例如DX-2930)。在一些实施方式中，抗体在第一治疗期(例如26周)内以多剂量施用给受试者(例如，人类患者)。例如，可以在第一治疗期内每两周大约300mg、每四周大约300mg或每四周大约150mg施用抗体。

本文描述的任何方法可进一步包括在第一治疗期后的第二治疗期(例如26周)向受试者施用抗体。在一些实施方式中，第二治疗期的第一剂量(dose)是第一治疗期末次剂量后的大约两周。在一些实施方式中，第二治疗期包括每两周以大约300mg多剂量的抗体，持续例如26周。

可选地，所述方法可进一步包括在第一治疗期后向受试者施用单剂量的抗体(例如大约300mg)。如果HAE发作在单剂量后发生，则单剂量可后续有抗体的一个或多个剂量的抗体(例如，每2周大约300mg)。后续治疗的第一剂量可在HAE发作后一周内。在一些实施方式中，单剂量和后续治疗的第一剂量相隔至少10天。

本公开的其它方面提供了用于在已经经历先前的HAE治疗的受试者中治疗遗传性血管性水肿(HAE)发作或降低HAE发作率的方法，其包括：(i)向有此需要的受试者以大约300mg的单剂量施用(例如，皮下)本文所述的任何抗-pKal抗体(例如DX-2930抗体)；(ii)如果受试者在(i)之后经历HAE发作，则以每两周大约300mg的多剂量向受试者进一步施用抗体。受试者可以已经经历了如本文描述的第一HAE治疗。例如，第一HAE治疗可以是涉及相同抗体(例如DX-2930)的治疗。在一些实例中，第一HAE治疗包括每四周施用多剂量的大约150mg或300mg的抗体或每两周施用多剂量的大约300mg的抗体。可选地或另外，多剂量的第一剂量在HAE发作后一周内给予受试者。

在本文描述的任何治疗方法中，受试者可以是具有HAE、疑似具有HAE或者处于HAE风险的人类患者。在一些实施方式中，受试者是具有I型HAE或II型HAE的人类患者。例如，受试者可在第一治疗期的第一剂量之前的四周内具有至少一次HAE发作，或者在第一治疗期的第一剂量之前的八周内具有至少两次HAE发作。在其他实例中，受试者可以是在治疗前每年已经历至少两次HAE发作的人类患者。可选地或另外，受试者是没有进行先前治疗的人类患者，例如，在第一治疗期的第一剂量前至少两周没有进行先前治疗。

在一些实施方式中，待要通过本文描述的任何方法治疗的受试者(其涉及使用同样在本文描述的任何抗-pKal抗体(例如DX-2930))已经在抗-pKal抗体的第一剂量之前接受一次或多次HAE治疗。这种先前的HAE治疗可涉及C1-抑制剂(例如C1-INH)、血浆激肽释放酶抑制剂(例如艾卡拉肽(ecallantide))、缓激肽受体拮抗剂(例如艾替班特(icatibant))、减毒雄性激素(例如达那唑)、抗纤维蛋白溶解剂(例如氨甲环酸)或其组合。这种受试者可以经历减量期(taper period)以逐渐从先前的HAE治疗过渡为本文描述的抗-pKal抗体治疗。在一些实例中，减量期可以在2-4周的范围。在第一剂量的抗-pKal抗体之前或者第一剂量的抗-pKal抗体给予受试者后的三周内，可以终止先前的HAE治疗。可选地，受试者可以从任何先前的HAE治疗直接过渡为本文描述的抗-pKal抗体治疗。

在一些实施方式中，受试者在第一治疗期之前、在第一治疗期期间和/或在第二治疗期期间没有进行HAE的长期预防，或没有进行涉及血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、含雌性激素药物或雄性激素的HAE治疗。

用于本文描述的治疗方案的抗-pKal抗体可以是全长抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，抗体可以包含与DX-2930相同的CDR。在一个实例中，抗体是DX-2930。

在本文描述的任何方法中，抗体可以配制在包含药学上可接受的载体的药物组合物中。在一些实施方式中，药物组合物包含磷酸钠、柠檬酸、组氨酸、氯化钠和吐温80。在一个实例中，磷酸钠的浓度为大约30mM，柠檬酸的浓度为大约19mM，组氨酸的浓度为大约50mM，氯化钠的浓度为大约90mM，和/或聚山梨醇酯80为大约0.01％。

在下面的描述中阐述了本发明的一个或多个实施方式的细节。本发明的其他特征或优点将从下面的附图和几个实施方式的详细描述以及所附权利要求中变得显而易见。

附图说明

图1示出包含第一治疗期的示例性给药方案，其中患者以每两周300mg、每四周300mg、或者每4周150mg的剂量施用DX-2930。

图2示出包含第一治疗期后的第二治疗期的示例性给药方案。在第二治疗期内，以300mg施用患者单剂量的DX-2930。如果患者经历HAE发作，则抗体随后每两周以300mg的剂量施用。

图3示出来自以指定剂量(30mg、100mg、300mg或400mg)在指定天数用DX-2930治疗的HAE患者的血浆样品的2-链高分子量激肽原(HMWK)，如通过Western印迹分析检测。在健康受试者中检测到的2-链HMWK的基线用虚线表示。对于每一天，柱从左至右对应于安慰剂、30mg、100mg、300mg和400mg。

具体实施方式

定义

为了方便起见，在进一步描述本发明之前，在本说明书、实施例和所附权利要求书中使用的某些术语在此被定义。其他术语如同它们在说明书一样被定义。

除非上下文另有明确规定，否则单数形式“一种”、“一个”和“该”包括复数指代。

如本文所用，术语“大约”是指具体值+/-5％。例如，大约300毫克的抗体包括在285毫克和315毫克之间的任何量的抗体。

术语“抗体”是指通过位于免疫球蛋白分子的可变区中的至少一个抗原识别位点，能够与靶标特异性结合的免疫球蛋白分子，所述靶标例如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等。抗体可以包括至少一个包含重链免疫球蛋白可变结构域(V_H)的重(H)链、至少一个包含轻链免疫球蛋白可变结构域(V_L)的轻链、或两者。例如，抗体可以包括重(H)链可变区(本文缩写为V_H或HV)和轻(L)链可变区(本文缩写为V_L或LV)。在另一实例中，抗体包括两个重(H)链可变区和两个轻(L)链可变区。

如本文所用，术语“抗体”不仅涵盖完整的(即全长)多克隆或单克隆抗体，而且还涵盖其抗原结合片段(例如Fab、Fab'、F(ab')₂、Fv)、单链(scFv)、结构域抗体(dAb)片段(deWildt等，Euro.J.Immunol.(1996)26(3)：629-639)、其任何突变体、包含抗体部分的融合蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、双抗体、线性抗体、单链抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)以及包含所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰构型，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和共价修饰的抗体。抗体包括任何类别的抗体，例如IgD、IgE、IgG、IgA或IgM(或其亚类)，并且抗体不需要是任何特定的类别。根据其重链恒定结构域的抗体氨基酸序列，可将免疫球蛋白分为不同类别。存在五个主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中几种可进一步分成亚类(同种型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。与不同类别的免疫球蛋白对应的重链恒定结构域分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。抗体可以来自任何来源，但灵长类动物(人类和非人类灵长类动物)和灵长类化(primatized)动物是优选的。

V_H区和/或V_L区可以包括天然存在的可变结构域的全部或部分氨基酸序列。例如，序列可以省略一个、两个或更多个N-或C-末端氨基酸，内部氨基酸可以包括一个或多个插入或另外的末端氨基酸，或者可以包括其他改变。在一个实施方式中，包含免疫球蛋白可变结构域序列的多肽可以与另一免疫球蛋白可变结构域序列缔合以形成抗原结合位点，例如优先与血浆激肽释放酶相互作用的结构。

V_H区和V_L区可以进一步细分为称为“互补决定区”(“CDR”)的高变区，其中散布有被称为“框架区”(“FR”)的更保守的区域。已经定义了框架区和CDR的范围(参见Kabat，EA等，(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，美国卫生和人类服务部(Department of Health and Human Services)，NIH出版号91-3242，和Chothia,C.等(1987)J.Mol.Biol.196：901-917)。本文使用Kabat定义。每个VH和VL通常包括三个CDR和四个FR，从氨基末端到羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。

除V_H区或V_L区外，抗体的重链或轻链可进一步包括重链或轻链恒定区的全部或部分。在一个实施方式中，抗体是两个免疫球蛋白重链和两个免疫球蛋白轻链的四聚体，其中免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链通过例如二硫键相互连接。在IgG中，重链恒定区包括三个免疫球蛋白结构域，CH1、CH2和CH3。轻链恒定区包含一个CL结构域。重链的可变区和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结构域。抗体的恒定区通常介导抗体与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。免疫球蛋白的轻链可以是κ型或λ型。在一个实施方式中，抗体被糖基化。抗体可以用于抗体依赖性细胞毒性和/或补体介导的细胞毒性。

抗体的一个或多个区可以是人的或实质上是人的。例如，一个或多个可变区可以是人的或实质上是人的。例如，一个或多个CDR可以是人的，例如HC CDR1、HC CDR2、HCCDR3、LC CDR1、LC CDR2和/或LC CDR3。轻链(LC)CDR和/或重链(HC)CDR中的每一个都可以是人的。HC CDR3可以是人的。一个或多个框架区可以是人的，例如HC和/或LC的FR1、FR2、FR3和/或FR4。例如，Fc区可以是人的。在一个实施方式中，所有框架区都是人的，例如衍生自人的体细胞，例如产生免疫球蛋白或非造血细胞的造血细胞。在一个实施方式中，人序列是种系(germline)序列，例如由种系核酸编码。在一个实施方式中，所选Fab的框架(FR)残基可以转化为最相似灵长类种系基因、特别是人种系基因中的相应残基的氨基酸类型。一个或多个恒定区可以是人的或实质上是人的。例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、98％或100％的免疫球蛋白可变结构域、恒定区、恒定结构域(CH1、CH2、CH3、和/或CL1)、或者整个抗体可以是人的或实质上是人的。

抗体可以由免疫球蛋白基因或其片段编码。示例性的人免疫球蛋白基因包括κ、λ、α(IgA1和IgA2)、γ(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、δ、ε和μ恒定区基因，以及许多免疫球蛋白可变区基因。全长免疫球蛋白“轻链”(大约25KDa或大约214个氨基酸)由在NH2-末端(大约110个氨基酸)处由可变区基因编码，且在COOH-末端处由κ或λ恒定区基因编码。全长免疫球蛋白“重链”(大约50KDa或大约446个氨基酸)，类似地由可变区基因(大约116个氨基酸)和其他上述恒定区基因之一编码，例如，γ(编码大约330个氨基酸)。人HC的长度变化很大，因为HCCDR3从大约3个氨基酸残基变为35个以上的氨基酸残基。

术语全长抗体的“抗原结合片段”是指全长抗体的一个或多个片段，其保留与感兴趣的靶标特异性结合的能力。包含在术语全长抗体的“抗原结合片段”中并且保留功能性的结合片段的实例包括：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')₂片段，包括在铰链区由二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由V_H结构域和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的V_L结构域和V_H结构域组成的Fv片段；(v)dAb片段(Ward等，(1989)Nature 341：544-546)，其由V_H结构域组成；和(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的两个结构域V_L和V_H由不同的基因编码，但它们可以使用重组方法通过合成接头连接，所述接头使得它们能够被制成单个蛋白质链，其中，V_L区和V_H区配对形成被称为单链Fv(scFv)的单价分子。参见，例如美国专利5,260,203、4,946,778和4,881,175；Bird等人(1988)Science 242：423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883。可以使用包括本领域技术人员已知的常规技术的任何适当技术来获得抗体片段。

术语“单特异性抗体”是指对于特定靶标、例如表位显示单一结合特异性和亲和力的抗体。该术语包括“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”，其在文中指单一分子组合物的抗体或其片段的制剂，而不考虑如何生成抗体。只要结合性质实质上保留，则通过将框架区中的一个或多个非种系氨基酸还原为抗体的相应种系氨基酸而将抗体“种系化”。

抑制常数(Ki)提供抑制剂效力的量度；它是将酶活性降低一半所需的抑制剂浓度并且不依赖于酶浓度或底物浓度。通过测量不同浓度的抑制剂(例如抑制结合蛋白)对反应程度(例如酶活性)的抑制效应，获得在不同底物浓度下的表观Ki(Ki,app)；将作为抑制剂浓度函数的伪一级速率常数的变化拟合为Morrison方程(等式1)得到表观Ki值的估计值。Ki从Ki,app与底物浓度的图的线性回归分析中提取的y截距获得。

等式1

其中，v＝测量的速率；v0＝不存在抑制剂时的速率；Ki,app＝表观抑制常数；I＝总抑制剂浓度；和E＝总酶浓度。

如本文所用，“结合亲和力”是指表观结合常数或K_A。K_A是解离常数(K_D)的倒数。例如，对于特定的靶标分子，例如血浆激肽释放酶，结合抗体可以具有至少105、106、107、108、109、1010和1011M-1的结合亲和力。相对于第二靶标，结合抗体对于第一靶标的较高亲和力结合可以由相较于用于结合第二靶标的K_A(或数值K_D)更高的用于结合第一靶标的K_A(或较小数值K_D)表示。在这种情况下，相对于第二靶标(例如第二构象的相同蛋白质或其模拟物；或者第二蛋白质)，结合抗体对于第一靶标(例如第一构象的蛋白质或其模拟物)具有特异性。结合亲和力的差异(例如，对于特异性或其他比较)可以是至少1.5、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、70、80、90、100、500、1000、10,000或10⁵倍。

结合亲和力可以通过多种方法测定，所述方法包括平衡透析、平衡结合、凝胶过滤、ELISA、表面等离子体共振或光谱学(例如使用荧光测定法)。评价结合亲和力的示例性条件是在HBS-P缓冲液(10mM HEPES pH7.4，50mM NaCl，0.005％(v/v)表面活性剂P20)中。这些技术可用于测量作为结合蛋白质(靶标)浓度的函数的已结合的结合蛋白和游离的结合蛋白的浓度。已结合的结合蛋白([已结合的])的浓度与游离的结合蛋白([游离的])的浓度和靶标上结合蛋白的结合位点的浓度相关，通过以下等式表示，其中(N)是每个靶分子的结合位点的数目：

[已结合的]＝[N]·[游离的]/(1/K_A+[游离的])

然而，并非总是需要精确确定K_A，因为有时足以获得与K_A成比例的亲和力的定量测量(例如使用诸如ELISA或FACS分析的方法测定)，并且因此可以用于比较，例如确定较高的亲和力(例如2倍高)是否获得亲和力的定性测量或者获得对亲和力的推断，例如通过功能测定(例如体外或体内测定)中的活性。

术语“结合抗体”(或本文可互换使用的“结合蛋白”)是指可与靶标分子相互作用的抗体。该术语可与“配体”互换使用。“血浆激肽释放酶结合抗体”是指可与血浆激肽释放酶相互作用(例如结合)的抗体，并且特别包括优先或特异性地与血浆激肽释放酶相互作用和/或抑制血浆激肽释放酶的抗体。如果与在不存在抗体的情况下以及在相同条件下血浆激肽释放酶的活性相比，抗体使得血浆激肽释放酶的活性降低，则该抗体抑制血浆激肽释放酶。

“保守氨基酸替换”是其中氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基取代的保守氨基酸替换。本领域已经定义了具有类似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电的极性侧链的氨基酸(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β-支化侧链的氨基酸(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳族侧链的氨基酸(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。

相对于本文描述的结合蛋白，结合蛋白的一个或多个框架和/或CDR氨基酸残基可能包括一个或多个突变(例如，替换(例如，保守替换或非必需氨基酸的替换)、插入或缺失)。相对于本文描述的结合蛋白，血浆激肽释放酶结合蛋白可以具有突变(例如，替换(例如，保守替换或非必需氨基酸的替换)、插入或缺失)(例如，至少一个、两个、三个、或四个，和/或小于15、12、10、9、8、7、6、5、4、3或2个的突变)，例如对蛋白质功能不具有实质性的影响的突变。突变可存在于框架区、CDR和/或恒定区。在一些实施方式中，突变存在于框架区中。在一些实施方式中，突变存在于CDR中。在一些实施方式中，突变存在于恒定区中。例如通过评估突变是否是保守的或者通过Bowie等人的方法(1990)Science 247：1306-1310能够预测是否可以容许特定的替换，即不会不利地影响诸如结合活性的生物学特性。

“实质上人的”免疫球蛋白可变区是这样的免疫球蛋白可变区，其包括足够数量的人框架氨基酸位置，使得免疫球蛋白可变区不会在正常人中引发免疫原性应答。“实质上人的”抗体是包括足够数量的人氨基酸位置的抗体，使得抗体不在正常人中引发免疫原性应答。

“表位”是指结合蛋白(例如抗体，如Fab或全长抗体)结合的靶标化合物上的位点。在靶标化合物是蛋白质的情况下，位点可以完全包括氨基酸组分，完全包括蛋白质的氨基酸的化学修饰(例如糖基部分)或包括其组合。重叠表位包括至少一个常见的氨基酸残基、糖基基团、磷酸根基团、硫酸根基团或其他分子特征。

如果第一结合抗体结合至与第二结合抗体所结合的靶标化合物上的相同位点，或者结合至与第二结合抗体所结合的位点重叠的位点(例如就氨基酸序列或其他分子特征(例如，糖基基团、磷酸根基团或硫酸根基团)方面，例如50％、60％、70％、80％、90％或100％的重叠)，则第一结合抗体与第二结合抗体一样“结合至相同的表位”。

如果第一结合抗体与其表位的结合减少(例如10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更多)结合其表位的第二结合抗体的量，则第一结合抗体与第二结合抗体“竞争结合”。竞争可以是直接的(例如，第一结合抗体结合至与第二结合抗体结合的表位相同或重叠的表位)或间接结合(例如，第一结合抗体与其表位的结合导致靶标化合物的空间变化，这降低了第二结合抗体结合其表位的能力)。

计算两个序列之间的“同源性”或“序列同一性”(这些术语在本文中可互换使用)如下进行。为了最佳比较目的，序列进行比对(例如，为了最佳比对，可以在第一和第二氨基酸或核酸序列中的一个或两个中引入缺口，并且为了比较的目的，可以忽略非同源序列)。使用GCG软件包中的GAP程序，利用Blossum 62得分矩阵将最佳比对确定为最佳得分，其中空位罚分为12，空位延长罚分为4，和移码空位罚分为5。然后比较在相应的氨基酸位置或核苷酸位置处的氨基酸残基或核苷酸。当第一序列中的位置被与第二序列中的相应位置相同的氨基酸残基或核苷酸占据时，则该分子在该位置是相同的(如本文所用，氨基酸或核酸“同一性”等同于氨基酸或核酸“同源性”)。两个序列之间的同一性百分数是这两个序列共享的相同位置的数目的函数。

在一个优选的实施方式中，为比较目的而比对的参考序列的长度为至少30％、优选至少40％、更优选至少50％、甚至更优选至少60％、甚至更优选至少70％、80％、90％、92％、95％、97％、98％或100％的参考序列长度。例如，参考序列可以是免疫球蛋白可变结构域序列的长度。

“人源化”免疫球蛋白可变区是这样的免疫球蛋白可变区，其被修饰为包括足够数量的人框架氨基酸位置，使得免疫球蛋白可变区不引发在正常人中的免疫原性应答。“人源化”免疫球蛋白的描述包括例如U.S.6,407,213和U.S.5,693,762。

“分离的”抗体指从可以从其获得分离抗体的天然样品的至少一种组分的至少90％中除去的抗体。如果感兴趣的物种或感兴趣的物种种群基于重量-重量计为至少5％、10％、25％、50％、75％、80％、90％、92％、95％、98％或99％的纯度，那么抗体可以具有“至少”某种程度。

待通过受试者方法处理的“患者”、“受试者”或“宿主”(这些术语可互换使用)可以意指人类或非人类动物。受试者可能是已经进行先前HAE治疗的受试者，例如涉及本文描述抗体的治疗。在一些实施方式中，受试者是儿科受试者(例如，婴儿、儿童或青少年受试者)。

术语“前激肽释放酶”和“血浆前激肽释放酶”在本文中可互换使用，并且指活性血浆激肽释放酶的酶原形式，其也被称为前激肽释放酶。

如本文所用，术语“基本上相同的”(或“基本上同源的”)在本文中用于指第一氨基酸或核酸序列，其含有足够数量的与第二氨基酸或核酸序列相同或等同的(例如具有相似侧链，例如保守的氨基酸替换)氨基酸残基或核苷酸，使得第一氨基酸或核酸序列和第二氨基酸或核酸序列具有相似活性(或编码具有相似活性的蛋白质)，例如结合活性、结合偏好、或生物活性。在抗体的情况下，第二抗体具有相同的特异性并且相对于相同的抗原具有至少50％、至少25％或至少10％的亲和力。

与本文公开的序列相似或同源的序列(例如至少大约85％序列同一性)也是本申请的一部分。在一些实施方式中，序列同一性可以是大约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高。在一些实施方式中，血浆激肽释放酶结合抗体可以与本文描述的抗体具有大约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。在一些实施方式中，血浆激肽释放酶结合抗体可以与本文描述的抗体(例如DX-2930)在HC和/或LC框架区(例如，HC和/或LC FR 1、2、3和/或4)具有大约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。在一些实施方式中，血浆激肽释放酶结合抗体可以与本文描述的抗体(例如DX-2930)在HC CDR和/或LC CDR(例如，HC和/或LC的CDR 1、CDR2和/或CDR3)具有大约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。在一些实施方式中，血浆激肽释放酶结合抗体可以与本文描述的抗体(例如DX-2930)在恒定区(例如，CH1、CH2、CH3和/或CL1)具有大约85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。

另外，当核酸区段在选择性杂交条件(例如高度严格的杂交条件)下与该链的互补链杂交时，存在实质上的同一性。核酸可以在全细胞中、细胞裂解物中存在或以部分纯化或基本上纯的形式存在。

统计显著性可以通过本领域任何已知的方法来确定。示例性的统计测试包括：Students T检验、Mann Whitney U非参数检验和Wilcoxon非参数统计检验。一些统计学上显著性关系具有小于0.05或0.02的P值。特定的结合蛋白可在例如特异性或结合上显示出统计学上的显著差异(例如，P值<0.05或P值<0.02)。例如，表示两种状态之间的可区分的定性或定量差异的术语“诱导”、“抑制”、“增强”、“升高”、“增加”、“减少”等可以是指两种状态之间的差异，例如统计上显著的差异。

“治疗有效剂量”优选地相对于未处理的受试者以统计学显著的程度或至少大约20％、更优选地至少大约40％、甚至更优选地至少大约60％、且仍更优选地至少大约80％来调节可测量参数，例如血浆激肽释放酶活性。化合物调节可测量参数(例如疾病相关参数)的能力可以在预测人类紊乱和病症的功效的动物模型系统中评估。可选地，可以通过检查化合物在体外调节参数的能力来评估组合物的这种特性。

如本文所用的术语“治疗”是指将包括一种或多种活性剂的组合物应用或施用给受试者(该受试者具有变应性疾病、变应性疾病的症状或朝向变应性疾病的倾向)，旨在治疗、治愈、减轻、缓解、改变、补救、缓和、改善或影响疾病、疾病症状或疾病倾向。“预防性治疗(prophylactic treatment)”也称为“预防性治疗(preventive treatment)”，指旨在保护人免受或降低他或她已患疾病或可能患病的风险的治疗。在一些实施方式中，本文描述的治疗方法旨在防止HAE的发生和/或复发。

术语“预防”受试者中的疾病是指使受试者进行药物治疗，例如药物的施用，从而预防疾病的至少一种症状，也就是说，在不期望的病症(例如，宿主动物的疾病或其他不期望的状态)的临床表现之前施用，以便它保护宿主免于发展不期望的病症。“预防”疾病也可以被称为“预防”或“预防性治疗”。

“预防有效量”是指在必要的剂量和时间段内有效达到所需预防结果的量。通常，因为在疾病的早期阶段之前或疾病的早期阶段在受试者中使用预防剂量，所以预防有效量将小于治疗有效量。

结合至血浆激肽释放酶(pKal)的抗体

用在本文描述的方法中的血浆激肽释放酶结合抗体(抗pKal抗体)可以是全长的(例如IgG(包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA(包括IgA1、IgA2)、IgD和IgE)，或者可以仅包括抗原结合片段(例如Fab、F(ab')₂或scFv片段)。结合抗体可以包括两个重链免疫球蛋白和两个轻链免疫球蛋白，或可以是单链抗体。血浆激肽释放酶结合抗体可以是重组蛋白，例如人源化的、CDR移植的、嵌合的、去免疫的或体外生成的抗体，并且可以任选地包括源自人种系的免疫球蛋白序列的恒定区。在一个实施方式中，血浆激肽释放酶结合抗体是单克隆抗体。

在一个方面，本公开的特征在于结合至血浆激肽释放酶(例如，人血浆激肽释放酶和/或鼠激肽释放酶)的抗体(例如分离的抗体)，并且包括至少一个免疫球蛋白可变区。例如，抗体包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列。在一个实施方式中，抗体结合至并抑制血浆激肽释放酶，例如人血浆激肽释放酶和/或鼠激肽释放酶。

抗体可以包括一个或多个以下特征：(a)人CDR或人框架区；(b)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含一个或多个(例如1、2或3个)CDR，其与本文描述的HC可变结构域的CDR具有至少85％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性；(c)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含一个或多个(例如1、2或3个)CDR，其与本文描述的LC可变结构域的CDR具有至少85％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性；(d)LC免疫球蛋白可变结构域序列与本文描述的LC可变体结构域具有至少85％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性(例如，整体或在框架区或CDR中)；(e)HC免疫球蛋白可变结构域序列与本文描述的HC可变体结构域具有至少85％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的同一性(例如，整体或在框架区或CDR中)；(f)抗体结合本文描述的抗体所结合的表位，或与本文描述的抗体竞争结合；(g)灵长类动物CDR或灵长类动物框架区；(h)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含CDR1，其与本文描述的HC可变结构域的CDR1的区别在于至少一个氨基酸、但不超过2或3个氨基酸；(i)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含CDR2，其与本文描述的HC可变结构域的CDR2的区别在于至少一个氨基酸、但不超过2、3、4、5、6、7或8个氨基酸；(j)HC免疫球蛋白可变结构域序列包含CDR3，其与本文描述的HC可变结构域的CDR3的区别在于至少一个氨基酸、但不超过2、3、4、5或6个氨基酸；(k)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含CDR1，其与本文描述的LC可变结构域的CDR1区别在于至少一个氨基酸、但不超过2、3、4或5个氨基酸；(1)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含CDR2，其与本文描述的LC可变结构域的CDR2区别在于至少一个氨基酸、但不超过2、3或4个氨基酸；(m)LC免疫球蛋白可变结构域序列包含CDR3，其与本文描述的LC可变结构域的CDR3区别在于至少一个氨基酸但不多于2、3、4或5个氨基酸；(n)LC免疫球蛋白可变结构域序列与本文描述的LC可变结构域的区别在于至少一个氨基酸、但不超过2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸(例如，整体或在框架区或CDR中)；和(o)HC免疫球蛋白可变结构域序列与本文描述的HC可变结构域的区别在于至少一个氨基酸、但不超过2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸(例如，整体或在框架区或CDR中)。

血浆激肽释放酶结合蛋白可以是分离的抗体(例如，至少70％、80％、90％、95％或99％不含其他蛋白)。在一些实施方式中，血浆激肽释放酶结合抗体或其组合与抗体裂解片段(例如DX-2930)分离，与血浆激肽释放酶结合抗体相比，所述抗体裂解片段裂解片段无活性或部分活性(例如，以5000nM或更高的Ki,app结合血浆激肽释放酶)。例如，血浆激肽释放酶结合抗体至少70％不含这种抗体裂解片段；在其它实施方式中，结合抗体至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或甚至100％不具有无活性或部分活性的抗体裂解片段。

血浆激肽释放酶结合抗体可另外地抑制血浆激肽释放酶，例如人血浆激肽释放酶。

在一些实施方式中，血浆激肽释放酶结合抗体不结合前激肽释放酶(例如，人前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但结合活性形式的血浆激肽释放酶(例如，人血浆激肽释放酶和/或鼠激肽释放酶)。

在某些实施方式中，抗体在血浆激肽释放酶或其片段的催化结构域的活性位点处或附近结合，或结合与血浆激肽释放的活性位点重叠的表位。

在一些方面，抗体结合相同的表位或与本文描述的抗体竞争结合。

抗体可以至少10⁵、10⁶、10⁷、10⁸、10⁹、10¹⁰和10¹¹M^-1的结合亲和力结合至血浆激肽释放酶，例如人血浆激肽释放酶。在一个实施方式中，抗体以小于1×10^-3s^-1、5×10^-4s^-1或1×10^-4s^-1的K_off结合至人血浆激肽释放酶。在一个实施方式中，抗体以快于1×10²、1×10³或5×10³M^-1s^-1的K_on结合至人血浆激肽释放酶。在一个实施方式中，抗体结合至血浆激肽释放酶，但不结合至组织激肽释放酶和/或血浆前激肽释放酶(例如，与其结合血浆激肽释放酶相比，抗体不太有效地结合至组织激肽释放酶和/或血浆前激肽释放酶(例如与阴性对照相比，例如低5倍、10倍、50倍、100倍或1000倍，或根本不结合))。

在一个实施方式中，抗体抑制人血浆激肽释放酶活性，例如具有小于10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9和10^-10M的Ki。抗体可以具有例如小于100nM、10nM、1nM、0.5nM或0.2nM的IC₅₀。例如，抗体可以调节血浆激肽释放酶活性，以及因子XIIa(例如来自因子XII)和/或缓激肽(例如来自高分子量激肽原(HMWK))的产生。抗体可以抑制血浆激肽释放酶活性和/或因子XIIa(例如来自因子XII)和/或缓激肽(例如来自高分子量激肽原(HMWK))的产生。抗体对于人血浆激肽释放酶的亲和力可以通过小于100nm、小于10nM、小于5nM、小于1nM、小于0.5nM的K_D来表征。在一个实施方式中，抗体抑制血浆激肽释放酶，但不抑制组织激肽释放酶(例如，与抑制血浆激肽释放酶相比，抗体不太有效地抑制组织激肽释放酶(例如与阴性对照相比，例如低5倍、10倍、50倍、100倍或1000倍，或根本不抑制))。

在一些实施方式中，抗体具有小于1000nM、500nM、100nM、5nM、1nM、0.5nM或0.2nM的表观抑制常数(Ki,app)。

血浆激肽释放酶结合抗体可具有包括在单个多肽(例如scFv)中或不同多肽(例如IgG或Fab)上的HC和LC可变结构域序列。

在一个实施方式中，HC和LC可变结构域序列是同一多肽链的组成部分。另一实施方式中，HC和LC可变结构域序列是不同多肽链的组成部分。例如，抗体是IgG，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。抗体可以是可溶性Fab。在其他实施方案中，抗体包括Fab2'、scFv、微抗体、scFv::Fc融合物、Fab::HSA融合物、HSA::Fab融合物、Fab::HSA::Fab融合物或包含文中结合蛋白之一的抗原结合位点的其他分子。这些Fab的VH区和VL区可以作为IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、聚乙二醇化的Fab、聚乙二醇化的scFv、聚乙二醇化的Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他合适的构建体提供。

在一个实施方式中，抗体是人抗体或人源化抗体或在人中是非免疫原性的。例如，抗体包括一个或多个人抗体框架区，例如所有人框架区或与人框架区具有至少85％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的同一性的框架区。在一个实施方式中，抗体包含人Fc结构域或与人Fc结构域具有至少95％、96％、97％、98％或99％的同一性的Fc结构域。

在一个实施方式中，抗体是灵长类动物(primate)抗体或灵长类动物化的(primatized)抗体或在人体中是非免疫原性的。例如，抗体包括一个或多个灵长类动物抗体框架区，例如所有灵长类动物框架区，或与灵长类动物框架区具有至少至少85％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性的框架区。在一个实施方式中，抗体包含灵长类动物Fc结构域，或与灵长类动物Fc结构域具有至少95％、96％、97％、98％、99％的同一性的Fc结构域。“灵长类动物”包括人(智人(Homo sapiens))、黑猩猩(黑猩猩(Pan troglodytes)和倭黑猩猩(Pan paniscus)(倭猴))、大猩猩(Gorillagorilla)、长臂猿(gibon)、猴子、狐猴、指猴(Daubentonia madagascariensis)和眼镜蛇。在一些实施方式中，灵长类动物抗体对于人血浆激肽释放酶的亲和力通过小于1000nM、500nM、100nM、10nM、5nM、1nM、0.5nM，例如小于10nM、小于1nM或小于0.5nM的K_D来表征。

在某些实施方式中，抗体不包括来自小鼠或兔的序列(例如不是鼠或兔抗体)。

在一些实施方式中，用于本文描述方法的抗体可以是如本文描述的DX-2930或其功能变体，或与DX-2930结合相同表位或与DX-2930竞争结合活性血浆激肽释放酶的抗体。

在一个实例中，DX-2930的功能变体包含与DX-2930相同的互补决定区(CDR)。在另一实例中，与DX-2930的VH和VL中的那些相比，DX-2930的功能变体可以在VH或VL的FR中包含一个或多个突变(例如，保守替换)。优选地，这种突变不会发生在预期与一个或多个CDR相互作用的残基上，这可以通过常规技术来确定。在其他实施方式中，本文描述的功能变体在DX-2930的CDR区的一个或多个区域内含有一个或多个突变(例如，1、2或3个)。优选地，此类功能变体保留与母体相同的用于抗原结合的区/残基。在其他实施方式中，DX-2930的功能变体可以包含V_H链和/或V_L链，该V_H链包括与DX-2930的V_H链具有至少85％(例如90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列，该V_L链具有与DX-2930的V_L链具有至少85％(例如90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)同一性的氨基酸序列。这些变体能够结合至血浆激肽释放酶的活性形式，并且优选不与前激肽释放酶结合。

两个氨基酸序列的“百分比同一性(percent identity)”使用Karlin和Altschul的Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-77，1993改良的Karlin和AltschulProc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-68，1990的算法确定。该算法被纳入至Altschul,等J.Mol.Biol.215:403-10,1990的NBLAST和XBLAST程序(版本2.0)中。BLAST蛋白质搜索可以用XBLAST程序，得分＝50，字长＝3进行，以获得与感兴趣的蛋白质分子同源的氨基酸序列。当两个序列之间存在空位时，可以使用如Altschul等，Nucleic Acids Res.25(17):3389-3402，1997中描述的Gapped BLAST。当使用BLAST和Gapped BLAST程序时，可以使用各个程序(例如XBLAST和NBLAST)的默认参数。

在一些实施方式中，用于本文描述的方法和组合物中的抗体可以是DX-2930抗体。下面提供了DX-2930的重链和轻链全序列和可变序列，信号序列以斜体表示。CDR被加粗体和下划线。

DX-2930的重链氨基酸序列(451个氨基酸，49439.02Da)

DX-2930的轻链氨基酸序列(213个氨基酸，23419.08Da)

DX-2930的重链可变结构域的氨基酸序列

DX-2930的轻链可变结构域的氨基酸序列

表1：DX-2930的CDR

CDR	氨基酸序列
		重链CDR1	HYIMM(SEQ ID NO:5)
重链CDR2	GIYSSGGITVYADSVKG(SEQ ID NO:6)
		重链CDR3	RRIGVPRRDEFDI(SEQ ID NO:7)
轻链CDR1	RASQSISSWLA(SEQ ID NO:8)
		轻链CDR2	KASTLES(SEQ ID NO:9)
轻链CDR3	QQYNTYWT(SEQ ID NO:10)

抗体制备

如本文描述的抗体(例如DX-2930)可以通过本领域已知的任何方法制备。参见例如Harlow和Lane,(1988)Antibodies:A Laboratory Manual，冷泉港实验室，纽约和格林菲尔德,(2013)Antibodies:A Laboratory Manual，第二版，冷泉港实验室出版社。

编码感兴趣的抗体(例如DX-2930)的序列可保持在宿主细胞的载体中并且可然后扩增宿主细胞并且冷冻用于将来使用。在替选方案中，多核苷酸序列可用于遗传操作以“人源化”抗体或者改善抗体的亲和力(亲和力成熟)，或其他特征。例如，恒定区可进行工程化以与人恒定区更加相似，进而如果抗体用在人的临床试验和治疗中避免免疫响应。可期望遗传操作抗体序列，以获得对靶抗原更大的亲和力和对于抑制PKal活性的更大的功效。对本领域技术人员显而易见的是，可对抗体进行一个或多个多核苷酸改变并且仍维持其对靶抗原的结合特异性。

在其他实施方式中，可通过使用商业上可得的小鼠获得全人抗体，所述小鼠已经被工程化以表达特定的人免疫球蛋白蛋白质。设计为产生更期望的(例如，全人抗体)或更强健的免疫应答的转基因动物也可用于产生人源化的或人抗体。这样的技术的实例是来自Amgen,Inc.(Fremont,Calif.)的Xenomouse^RTM和来自Medarex,Inc.(Princeton,N.J.)的HuMAb-Mouse^RTM和TC Mouse^TM。在另一替选方案中，抗体可通过噬菌体展示或酵母技术重组制备。参见，例如美国专利号5,565,332、5,580,717、5,733,743和6,265,150；以及Winter等(1994)Annu.Rev.Immunol.12:433-455。可选地，噬菌体展示技术(McCafferty等(1990)Nature 348:552-553)可用于从来自未免疫化的供体的免疫球蛋白可变(V)结构域基因谱系(gene repertoires)在体外产生人抗体和抗体片段。

可经常规方法制备完整抗体(全长抗体)的抗原结合片段。例如，可通过胃蛋白酶消化抗体分子产生F(ab')₂片段，和可通过还原F(ab')₂片段的二硫键产生Fab片段。

基因工程化抗体，如人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体和双特异性抗体可以通过例如常规重组技术产生。在一个实例中，编码对靶标抗原特异的单克隆抗体的DNA可以容易地分离或合成。可将DNA置于一个或多个表达载体中，然后将其转染到宿主细胞、如大肠杆菌(E.coli)细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary，CHO)细胞或不另外产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞蛋白质，从而获得重组宿主细胞中单克隆抗体的合成。参见，例如PCT公开号WO 87/04462。然后可以通过例如用人重链和轻链恒定结构域的编码序列代替同源鼠序列(Morrison等(1984)Proc.Nat.Acad.Sci.81:6851)或通过将全部或部分的非免疫球蛋白多肽的编码序列共价连接至免疫球蛋白编码序列，来修饰DNA。以这种方式，可以制备具有靶抗原的结合特异性的基因工程化抗体，如“嵌合”或“杂交”抗体。

用于产生“嵌和抗体”而开发的技术是在本领域中众所周知的。参见，例如Morrison等(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81,6851；Neuberger等(1984)Nature 312,604；和Takeda等(1984)Nature 314:452。

构建人源化抗体的方法在本领域中也是众所周知的。参见例如Queen等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，86：10029-10033(1989)。在一个实例中，亲本非人抗体的V_H和V_L的可变区遵照本领域已知的方法进行三维分子建模分析。接下来，使用相同的分子建模分析鉴定预期对于形成正确的CDR结构重要的框架氨基酸残基。同时，使用亲本V_H和V_L的序列作为搜索查询，从任何抗体基因数据库中鉴定具有与亲本非人抗体同源的氨基酸序列的人V_H链和V_L链。然后选择人V_H和V_L受体基因。

所选人受体基因内的CDR区可以用来自亲本非人抗体或其功能变体的CDR区置换。必要时，在预测与CDR区相互作用中重要的亲本链的框架区内的残基(参见上文描述)可用于替代人受体基因中的相应残基。

可经重组技术通过连接编码重链可变区的核苷酸序列和编码轻链可变区的核苷酸序列来制备单链抗体。优选地，柔性接头并入在两个可变区之间。可选地，可采用描述用于产生单链抗体的技术(美国专利No.4,946,778和No.4,704,692)，以产生噬菌体或酵母scFv文库，并且可根据常规程序从该文库中鉴定对PKal特异的scFv克隆。阳性克隆可进行进一步筛选以鉴定抑制PKal活性的克隆。

一些抗体，例如Fab，可以在细菌细胞、例如大肠杆菌细胞中产生(参见例如Nadkarni,A.等，2007Protein Expr Purif 52(1)：219-29)。例如，如果Fab由在展示实体和噬菌体蛋白质(或其片段)之间包括可抑制终止密码子的噬菌体展示载体中的序列编码，则可以将载体核酸转移至细菌细胞中，所述细菌细胞不能抑制终止密码子。在这种情况下，Fab不与基因III蛋白融合并分泌到周质和/或培养基中。

抗体也可以在真核细胞中产生。在一个实施方式中，抗体(例如scFv抗体)在诸如毕赤酵母属酵母(Pichia)(参见，例如Powers等2001,J.Immunol.Methods.251:123-35；Schoonooghe S.等2009BMC Biotechnol.9:70；Abdel-Salam,HA.等2001Appl MicrobiolBiotechnol 56(1-2):157-64；Takahashi K.等2000Biosci Biotechnol Biochem 64(10):2138-44；Edqvist,J.等1991J Biotechnol 20(3):291-300)、汉森酵母属(Hanseula)、或者酵母属(Saccharomyces)的酵母细胞中表达。本领域技术人员能够通过优化例如氧条件(参见，例如Baumann K.,等2010BMC Syst.Biol.4:141)、渗透性(参见，例如Dragosits,M.等2010BMC Genomics 11:207)、温度(参见，例如Dragosits,M.等2009J Proteome Res.8(3):1380-92)、发酵条件(参见，例如Ning,D.等2005J.Biochem.and Mol.Biol.38(3):294-299)、酵母应变(参见，例如Kozyr,AV等2004Mol Biol(Mosk)38(6):1067-75；Horwitz,AH.等1988Proc Natl Acad Sci USA 85(22):8678-82；Bowdish,K.等1991J Biol Chem 266(18):11901-8)、用以提高抗体产生的蛋白的过度表达(参见，例如Gasser,B.等2006Biotechol.Bioeng.94(2):353-61)、培养物的酸度水平(参见，例如Kobayashi H.,等1997FEMS Microbiol Lett 152(2):235-42)、底物和/或离子的浓度(参见，例如Ko JH.等2996Appl Biochem Biotechnol 60(1):41-8)来优化抗体在酵母中的产生。另外，酵母系统可被用于产生具有延长的半衰期的抗体(参见，例如Smith,BJ.等2001Bioconjug Chem 12(5):750-756)。

在一个优选的实施方式中，抗体在哺乳动物细胞中产生。用于表达克隆抗体或其抗原结合片段的优选哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(包括dhfr-CHO细胞，在Urlaub和Chasin，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216-4220中描述，与DHFR选择标记一起使用，例如如在Kaufman和Sharp，1982，Mol.Biol.159：601-621中所述)、淋巴细胞细胞系，例如NS0骨髓瘤细胞和SP2细胞、COS细胞、HEK293T细胞(J.Immunol.Methods(2004)289(1-2)：65-80)以及来自转基因动物例如转基因哺乳动物的细胞。例如，细胞是乳腺上皮细胞。

在一些实施方式中，血浆激肽释放酶结合抗体在植物或基于无细胞的系统中产生(参见，例如Galeffi,P.等2006J Transl Med 4:39)。

除了编码多样化免疫球蛋白结构域的核酸序列之外，重组表达载体还可以携带另外的序列，例如调节宿主细胞中载体复制的序列(例如复制起点)和可选择标记基因。可选择标记基因有助于对引入了载体的宿主细胞的选择(参见，例如美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，通常地，可选择的标记基因赋予已引入载体的宿主细胞对药物(如G418、潮霉素或甲氨蝶呤)的抗性。优选的可选择的标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于利用甲氨蝶呤选择/扩增的dhfr^-宿主细胞)和neo基因(用于G418选择)。

在用于抗体或其抗原结合部分的重组表达的示例性系统中，通过磷酸钙介导的转染将编码抗体重链和抗体轻链的重组表达载体引入至dhfr^-CHO细胞。在重组表达载体内，抗体重链和轻链基因各自可操作地连接至增强子/启动子调控元件(例如源自SV40、CMV、腺病毒等)，例如CMV增强子/AdMLP启动子调控元件或SV40增强子/AdMLP启动子调控元件，以驱动高水平的基因转录。重组表达载体还携带DHFR基因，其允许使用甲氨蝶呤选择/扩增选择已经用载体转染的CHO细胞。培养选择的转化体宿主细胞以允许表达抗体重链和轻链，从培养基中回收完整的抗体。使用标准分子生物学技术来制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化体、培养宿主细胞并从培养基中回收抗体。例如，一些抗体可以通过亲和力层析用蛋白A或蛋白G偶联的基质分离。

对于包括Fc结构域的抗体，抗体产生系统可以产生Fc区被糖基化的抗体。例如，IgG分子的Fc结构域在CH2结构域中的天冬酰胺297处被糖基化。该天冬酰胺是双触角型寡糖修饰的位点。已经证明，该糖基化对于由Fcg受体和补体C1q介导的效应子功能是必需的(Burton和Woof，1992，Adv.Immunol.51：1-84；Jefferis等1998，Immunol.Rev.163：59-76)。在一个实施方式中，Fc结构域在哺乳动物表达系统中产生，所述哺乳动物表达系统适当地糖基化对应于天冬酰胺297的残基。Fc结构域还可包括其他真核细胞的翻译后修饰。

抗体也可以由转基因动物产生。例如，美国专利号5,849,992描述了在转基因哺乳动物的乳腺中表达抗体的方法。构建转基因，其包含乳特异性启动子和编码感兴趣的抗体的核酸和用于分泌的信号序列。由这种转基因哺乳动物的雌性产生的奶包括其中分泌的感兴趣的抗体。抗体可以从奶中纯化，或者用于某些应用，直接使用。

药物组合物

如本文描述的抗体(例如DX-2930)可存在于组合物中，例如药学上可接受的组合物或药物组合物。本文描述的抗体(例如DX-2930)可以与药学上可接受的载体一起配制。在一些实施方式中，150mg或300mg的DX-2930抗体任选地与药学上可接受的载体一起存在于组合物中，例如药学上可接受的组合物或药物组合物。

药学上可接受的载体包括生理学相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。优选地，载体适用于皮下、静脉内、肌内、肠胃外、脊髓或表皮施用(例如通过注射或输注)，尽管也考虑适合于吸入和鼻内施用的载体。

本文描述的药物组合物中的药学上可接受的载体可包括缓冲剂、氨基酸和张力调节剂中的一种或多种。在本文描述的药物组合物中可以使用任何合适的缓冲剂或缓冲剂的组合以维持或帮助维持组合物的适当的pH。缓冲剂的非限制性实例包括磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸、琥珀酸钠、组氨酸、Tris和乙酸钠。在一些实施方式中，缓冲剂可以是大约5-100mM、5-50mM、10-50mM、15-50mM或大约15-40mM的浓度。例如，一种或多种缓冲剂可以是大约15mM、16mM、17mM、18mM、19mM、20mM、21mM、22mM、23mM、24mM、25mM、26mM、27mM、28mM、29mM、30mM、31mM、32mM、33mM、35mM、36mM、37mM、38mM、39mM或大约40mM的浓度。在一些实例中，药学上可接受的载体包含磷酸钠和柠檬酸，其分别可以是大约30mM和大约19mM的浓度。

在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括一种或多种氨基酸，其可以减少施用之前在储存期间抗体的聚集和/或增加抗体的稳定性。用于制备本文描述的药物组合物的示例性氨基酸包括但不限于丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、脯氨酸或丝氨酸。在一些实例中，药物组合物中氨基酸的浓度可以是大约5-100mM、10-90mM、20-80mM、30-70mM、40-60mM或大约45-55mM。在一些实例中，氨基酸(例如组氨酸)的浓度可以是大约40mM、41mM、42mM、43mM、44mM、45mM、46mM、47mM、48mM、49mM、50mM、51mM、52mM、53mM、54mM、55mM、56mM、57mM、58mM、59mM或大约60mM。在一个实例中，药物组合物含有浓度为大约50mM的组氨酸。

任何合适的张力调节剂都可以用于制备本文描述的药物组合物。在一些实施方式中，张力调节剂是盐或氨基酸。合适的盐的实例包括但不限于氯化钠、琥珀酸钠、硫酸钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁和氯化钙。在一些实施方式中，药物组合物中的张力调节剂可以是大约10-150mM、50-150mM、50-100mM、75-100mM或大约85-95mM的浓度。在一些实施方式中，张力调节剂的浓度可以是大约80mM、81mM、82mM、83mM、84mM、85mM、86mM、87mM、88mM、89mM、90mM、91mM、92mM、93mM、94mM、95mM、96mM、97mM、98mM、99mM或大约100mM。在一个实例中，张力调节剂可以是氯化钠，其可以是大约90mM的浓度。

本文描述的药物组合物中的药学上可接受的载体可以进一步包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。通常，药学上可接受的赋形剂是药理学上无活性的物质。赋形剂的非限制性实例包括乳糖、甘油、木糖醇、山梨醇、甘露糖醇、麦芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖、牛血清白蛋白(BSA)、葡聚糖、聚乙酸乙烯酯(PVA)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚乙烯亚胺(PEI)、明胶、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟乙基纤维素(HEC)、聚乙二醇(PEG)、乙二醇、甘油、二甲亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、聚氧乙烯山梨糖醇酐单月桂酸酯(吐温-20)、聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(吐温-80)、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚山梨醇酯、聚氧乙烯共聚物、磷酸钾、乙酸钠、硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、三甲胺N-氧化物、甜菜碱、锌离子、铜离子、钙离子、锰离子、镁离子、CHAPS、蔗糖单月桂酸酯和2-O-β-甘露糖酸。在一些实施方式中，药学上可接受的载体包含在大约0.001％-0.1％、0.001％-0.05％、0.005-0.1％、0.005％-0.05％、0.008％-0.05％0.008％-0.03％或大约0.009％-0.02％之间的赋形剂。在一些实施方式中，赋形剂为大约0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或大约0.1％。在一些实施方式中，赋形剂是聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(吐温-80)。在一个实例中，药学上可接受的载体含有0.01％的吐温-80。

在一些实例中，本文描述的药物组合物包括如本文中还描述的抗-pKal抗体(例如DX-2930)，和磷酸钠(例如磷酸钠二元二水合物)、柠檬酸(例如柠檬酸一水合物)、组氨酸(例如L-组氨酸)、氯化钠和聚山梨醇酯80中的一种或多种。例如，药物组合物可以包含抗体、磷酸钠、柠檬酸、氨基酸、氯化钠和聚山梨醇酯80。在一些实例中，抗体配制在大约30mM磷酸钠、大约19mM柠檬酸、大约50mM组氨酸、大约90mM氯化钠和大约0.01％聚山梨醇酯80中。组合物中抗体(例如DX-2930)的浓度可以是大约150mg/mL或300mg/mL。在一个实例中，组合物包含或者由以下组成：每1毫升溶液大约150毫克的DX-2930、大约30mM的磷酸钠二元二水合物、大约19mM(例如19.6mM)的柠檬酸一水合物、大约50mM的L-组氨酸、大约90mM的氯化钠、和大约0.01％的聚山梨醇酯80。在另一实例中，组合物包含或者由以下组成：每1毫升溶液大约300毫克的DX-2930、大约30mM的磷酸钠二元二水合物、大约19mM(例如19.6mM)的柠檬酸一水合物、大约50mM的L-组氨酸、大约90mM的氯化钠和大约0.01％聚山梨醇酯80。

药学上可接受的盐是保留化合物的所需生物学活性并且不赋予任何不希望的毒理学效应的盐(参见例如Berge,SM等1977，J.Pharm.Sci.66：1-19)。这种盐的例子包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括衍生自无毒无机酸，如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、磷酸等的那些盐，以及衍生自无毒有机酸，如脂族单羧酸和二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳族酸、脂族磺酸和芳族磺酸等的那些盐。碱加成盐包括衍生自碱土金属，如钠、钾、镁、钙等的盐，以及衍生自无毒有机胺，如N,N'-二苄基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等的盐。

该组合物可以有多种形式。这些包括例如液体、半固体和固体剂型，例如液体溶液(例如注射液和输注液)、分散液或混悬液、片剂、料丸(pill)、粉剂、脂质体和栓剂。所述形式可以取决于预期的施用模式和治疗应用。许多组合物呈可注射或可输注的溶液形式，例如与用于向人施用抗体的组合物类似的组合物。示例性的施用模式是肠胃外(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内)。在一个实施方式中，血浆激肽释放酶结合蛋白通过静脉内输注或注射施用。在另一实施方式中，血浆激肽释放酶结合蛋白通过肌内注射施用。在另一实施方式中，血浆激肽释放酶结合蛋白通过皮下注射施用。在另一个优选的实施方式中，血浆激肽释放酶结合蛋白通过腹膜内注射施用。

本文使用的短语“肠胃外施用”和“经过肠胃外施用”是指除肠内和局部施用之外的施用模式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眼眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。在一些实施方式中，抗体是皮下施用。

该组合物可以配制成溶液、微乳液、分散体、脂质体或适用于高药物浓度的其他有序结构。无菌注射液可通过将所需量的结合蛋白掺入在具有需要的上面列举的成分中的一种或其组合的合适的溶剂中，然后过滤灭菌来制备。通常，通过将活性化合物掺入无菌载体中制备分散体，该无菌载体含有基本分散介质和来自上面列举的那些所需的其他成分。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其从其先前的无菌过滤溶液中产生活性成分以及任何另外的所需成分的粉末。例如，通过使用诸如卵磷脂的包衣、通过维持在分散的情况下所需的粒度和通过使用表面活性剂，可以保持溶液的适当的流动性。通过在组合物中包含延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸盐和明胶，可以带来可注射组合物的延长吸收。

如本文描述的抗体(例如DX-2930)可以通过多种方法施用，包括静脉内注射、皮下注射或输注。例如，对于一些治疗应用，抗体可以以小于30mg/min、20mg/min、10mg/min、5mg/min或1mg/min的速率通过静脉内输注施用以达到大约1mg/m²至100mg/m²、或7mg/m²至25mg/m²的剂量。施用的途径和/或模式将根据期望的结果而变化。在某些实施方式中，活性化合物可以用保护化合物免于快速释放的载体制备，例如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可使用可生物降解的生物相容性聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。许多制备这种制剂的方法都是可用的。参见，例如Sustained andControlled Release Drug Delivery Systems，J.R.Robinson编，1978，Marcel Dekker,Inc.，纽约。

药物组合物可以利用医疗装置施用。例如，在一个实施方式中，可以将本文公开的药物组合物以装置，例如无针皮下注射装置、泵或植入物施用。

在某些实施方式中，本文描述的抗体(例如DX-2930)可以配制成确保体内适当的分布。例如，血脑屏障(BBB)排除许多高度亲水性的化合物。为确保本文公开的治疗性化合物穿过BBB(如果需要)，可以将它们配制在例如脂质体中。对于制造脂质体的方法，参见例如美国专利号4,522,811、5,374,548和No.5,399,331。脂质体可包含选择性转运到特定细胞或器官中的一个或多个部分，从而增强靶标药物递送(参见，例如V.V.Ranade，1989，J.Clin.Pharmacol.29：685)。

调整给药方案以提供最佳的期望响应(例如治疗响应)。例如，可以施用单个丸剂(bolus)，可以随着时间推移施用几次分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度指示按比例减少或增加剂量。以剂量单位形式配制肠胃外组合物以便于施用和剂量均匀性是特别有利的。本文使用的剂量单位形式是指适合作为待要治疗的受试者的单一剂量的物理离散单位(discrete unite)；每个单位含有预定量的活性化合物，经计算产生与所需药物载体相关的所需治疗效果。剂量单位形式的规格可由以下决定并且直接取决于以下：(a)活性化合物的独特特征和待实现的特定治疗效果和(b)在混合这种活性化合物以用于处理个体敏感性的领域中固有的限制。

本文描述的治疗或预防有效量的抗体(例如DX-2930)的示例性的非限制性范围是大约150mg或300mg。如本领域普通技术人员将理解，对于儿科受试者，抗体的治疗或预防有效量可比对于成人受试者低。在一些实施方式中，施用给儿科受试者的有效量是固定剂量或基于体重的剂量。在一些实施方式中，对小儿受试者施用小于大约150mg或300mg的有效量。在一些实施方式中，对于第一治疗期，每两周或每四周施用治疗或预防有效量的抗体。在一些实施方式中，对于第二治疗期，可以将抗体施用至受试者。在一些实施方式中，第一治疗期中的抗体的治疗或预防有效量不同于第二治疗期中的抗体的治疗或预防有效量。在一些实施方式中，第一治疗期中的抗体的治疗或预防有效量为150mg，并且第二治疗期中的抗体的治疗或预防有效量为300mg。在一些实施方式中，第一治疗期的抗体的治疗或预防有效量与第二治疗期的抗体的治疗或预防有效量相同。在一个实例中，第一治疗期和第二治疗期中的抗体的治疗或预防有效量为300mg。

在一些实施方式中，治疗或预防有效量的本文描述抗体(例如DX-2930)的示例性的非限制性范围是大约300mg。在一些实施方式中，治疗或预防有效量的抗体以单剂量施用。如果受试者经历HAE发作，抗体可以以多剂量进一步施用给受试者，例如每两周施用大约300mg的剂量。

试剂盒

如本文描述的抗体(例如DX-2930)可以在试剂盒中提供，例如作为试剂盒的组分。例如，试剂盒包括(a)DX-2930抗体，例如包含抗体的组合物(例如药物组合物)，和任选地(b)信息材料。该信息材料可以是描述性的、指导性的、市场销售或涉及本文描述方法和/或本文描述的抗体(例如DX-2930)的用途、例如用于本文描述的方法的用途的其他材料。在一些实施方式中，该试剂盒包含一个或多个剂量的DX-2930。在一些实施方式中，一个或多个剂量是150mg或300mg。

试剂盒的信息材料的形式不受限制。在一个实施方式中，信息材料可以包括关于化合物的生产、化合物的分子量、浓度、有效期、批次或生产地点信息等的信息等。在一个实施方式中，信息材料涉及使用抗体来治疗、预防或诊断紊乱和病症，例如血浆激肽释放酶相关的疾病或病症。

在一个实施方式中，信息材料可以包括以合适的方式施用如本文描述的抗体(例如DX-2930)以执行本文描述的方法的说明书，例如以合适的剂量、剂型、施用模式或给药方案(例如本文描述的剂量、剂型、给药方案或给药方式)。在另一实施方式中，信息材料可以包括将如本文描述的抗体(例如DX-2930)施用给合适的受试者，例如人，例如患有或处于血浆激肽释放酶相关的疾病或病症风险的人的说明书。例如，所述材料可以包括例如根据本文描述的给药方案向患有本文描述的紊乱或病症(例如血浆激肽释放酶相关的疾病)的患者施用如本文描述的抗体(例如DX-2930)的说明书。试剂盒的信息材料的形式不受限制。在许多情况下，信息材料(例如说明书)以印刷形式提供，但也可以是其他形式，例如计算机可读材料。

如本文描述的抗体(例如DX-2930)可以以任何形式提供，例如液体、干燥或冻干形式。优选地，抗体是基本上纯的和/或无菌的。当在液体溶液中提供抗体时，液体溶液优选为水溶液，优选为无菌水溶液。当抗体以干燥形式提供时，通常通过添加合适的溶剂进行重构(reconstitution)。溶剂，例如无菌水或缓冲液可以任选地提供在试剂盒中。

该试剂盒可以包含一个或多个用于含有本文描述的抗体(例如DX-2930)的组合物的容器。在一些实施方式中，试剂盒包含用于组合物和信息材料的分开的容器、分隔器(divider)或隔室。例如，组合物可以容纳在瓶、小瓶或注射器中，并且信息材料可以与容器相关联地容纳。在其他实施方式中，试剂盒的单独元件包含在单个未分开的容器内。例如，组合物被容纳在具有标签形式的信息材料附着于其上的瓶、小瓶或注射器中。在一些实施方式中，试剂盒包括多个(例如一包)单独的容器，每个容器包含如本文描述的抗体(例如DX-2930)的一个或多个单位剂型(例如，本文描述的剂型)。例如，试剂盒包括多个注射器、安瓿、箔包或泡罩包(blister pack)，每个包含单一单位剂量的如本文描述的抗体(例如DX-2930)。试剂盒的容器可以是气密的、防水的(例如不透水分或蒸发的变化)和/或不透光的。

试剂盒任选地包括适于施用组合物的装置，例如注射器或任何这种递送装置。在一个实施方式中，该装置是分配计量剂量的抗体的可植入装置。本公开内容的特征还在于例如通过组合本文描述的组分来提供试剂盒的方法。

治疗

在一些方面，本公开提供了如本文描述的抗体(例如DX-2930)在治疗HAE中的用途。

(ⅰ)遗传性血管性水肿

遗传性血管性水肿(HAE)也被称为“Quincke水肿”、C1酯酶抑制剂缺乏症、C1抑制剂缺乏症和遗传性血管神经性水肿(HANE)。HAE的特征在于是不可预知的、反复发作的严重皮下或粘膜下肿胀(血管性水肿)，其可影响例如四肢、面部、生殖器、胃肠道和气道(Zuraw，2008)。HAE的症状包括例如手臂、腿、嘴唇、眼睛、舌头和/或咽喉的肿胀；能够引起咽喉肿胀的气道阻塞、突然的声音嘶哑和/或导致窒息死亡(Bork等，2012；Bork等，2000)。大约50％的HAE患者在其一生中将经历喉部发病，并且无法预测哪些患者有喉部发病的风险(Bork等，2003；Bork等，2006)。HAE症状还包括无明显原因的腹部痉挛的重复发作；和/或肠肿胀，这可能是严重的并且可能导致腹部痉挛、呕吐、脱水、腹泻、疼痛、休克和/或类似腹部紧急情况的肠道症状，这可能导致不必要的手术(Zuraw，2008)。肿胀可持续五天或更长时间。大约三分之一的患有这种HAE的个体在发作期间发展一种称为边缘性红斑的非发痒性皮疹。大多数患者每年经历多次发作。

HAE是一种罕见紊乱，其确切流行率(prevalence)尚不清楚，但目前估计范围为每10,000人1人至每150,000人1人，许多作者同意每50,000人1人可能是最接近的估计(Bygum，2009；Goring等，1998；Lei等，2011；Nordenfelt等，2014；Roche等，2005)。

血浆激肽释放酶在HAE发作的发病机理中起着关键作用(Davis，2006；Kaplan和Joseph，2010)。在正常生理学中，C1-INH调节血浆激肽释放酶以及多种其他蛋白酶(如C1r、C1s、因子XIa和因子XIIa)的活性。血浆激肽释放酶调节从高分子量激肽原(HMWK)释放缓激肽。由于HAE中C1-INH缺乏，发生血浆激肽释放酶活性失控，并且导致缓激肽过量的生成。缓激肽是一种血管扩张剂，其被认为是导致局部肿胀、炎症和疼痛的特征性HAE症状的原因(Craig等，2012；Zuraw等，2013)。

气道肿胀可能危及生命并导致一些患者死亡。死亡率估计为15-33％。每年HAE导致大约15,000至30,000次急诊访问。

创伤或应激(stress)，例如，牙科手术、疾病(例如，病毒性疾病，比如感冒和流感)、月经和外科手术可触发血管性水肿的发作。为了防止HAE的急性发作，患者可尝试避免先前造成发作的特定刺激。但是，在许多情况下，在没有已知触发的情况下出现发作。典型地，HAE症状第一次出现在童年并且在青春期加重。平均而言，未治疗的个体每1至2周发作，并且大部分发作持续约3至4天(ghr.nlm.nih.gov/condition/hereditary-angioedema)。发作的频率和持续时间在患有遗传性血管性水肿的人中间、甚至在同一家族的人中间变化很大。

有三种类型的HAE，称为I、II和III型，其全部可通过本文描述的方法治疗。据估计，50,000人中HAE感染1人，I型占约85％的病例，II型占约15％的病例，和III型是非常罕见的。III型是最近描述的形式并且最初认为仅仅出现在女人中，但是已经鉴定出受影响的男性的家族。

HAE是以常染色体显性模式遗传，使得受影响的人可从一个受影响的亲代继承突变。也可出现基因中的新突变，因此HAE也可出现在他们家族中没有该紊乱历史的人中。据估计，20-25％的病例来自新的自发突变。

SERPING1基因的突变造成I型和II型遗传性血管性水肿。SERPING1基因提供了制备对于控制炎症重要的C1抑制剂蛋白质的指导。C1抑制剂阻断某些促进炎症的蛋白质的活性。引起遗传性血管性水肿I型的突变导致了血液中C1抑制剂的水平下降。相反，引起II型的突变使得产生功能异常的C1抑制剂。大概85％的患者具有I型HAE，其特征在于极少产生功能正常的C1-INH蛋白质，而剩余的大概15％的患者具有II型HAE且产生正常的或者升高水平的功能受损的C1-INH(Zuraw，2008)。在没有适当水平的功能性C1抑制剂的情况下，从高分子量激肽原(HMWK)产生过量的缓激肽，并且在内皮细胞的表面上存在增加的由结合至B2受体(B2-R)的缓激肽介导的血管渗漏(Zuraw，2008)。通过增加经过血管壁进入身体组织的流体的渗漏，缓激肽促进炎症。流体在身体组织中的过多积聚引起患有I型和II型遗传性血管性水肿的个体中可见的肿胀的发作。

F12基因中的突变与一些III型遗传性血管性水肿病例相关。F12基因提供了制备凝固因子XII的指导。除了在血液凝结(凝聚)中起到关键作用外，因子XII也是重要的炎症刺激剂并且参与缓激肽的产生。F12基因中的某些突变使得产生具有增加活性的因子XII。结果，产生更多的缓激肽并且血管壁变得更加渗漏，其引起肿胀的发作。III型遗传性血管性水肿的其他病例的原因仍是未知的。一个或多个仍未鉴定的基因的突变可造成这些病例中的紊乱。

HAE可类似于源自变态反应或其他医学病况的其他形式的血管性水肿存在，但是明显不同的是病因和治疗。当遗传性血管性水肿被误诊为变态反应时，其最通常用一般对HAE无效的抗组胺剂、类固醇类和/或肾上腺素治疗，但是肾上腺素可用于威胁生命的反应。误诊也已经导致对患腹部肿胀的患者不必要的试探性外科手术，并且在一些HAE患者中腹部疼痛已经被错误地诊断为身心失调。

与成年人一样，患有HAE的孩子可经历复发和虚弱的发作。症状可在儿童时期极早出现，已报道在年龄为3岁的HAE患者中具有上呼吸道血管性水肿(Bork等，2003)。在对49名儿科HAE患者进行的一项病例研究中，有23名在18岁以前至少发作一次气道血管性水肿(Farkas，2010)。患有HAE的孩子、尤其是青少年中存在重要的未满足的医疗需求，因为该疾病通常在青春期后恶化(Bennett和Craig，2015；Zuraw，2008)。

C1抑制剂疗法以及用于HAE的其他疗法描述在Kaplan,A.P.,J AllergyClinImmunol,2010,126(5):918-925中。

提供HAE发作的应急治疗，以尽可能快速地停止水肿的进展。静脉内施用的来自供体血液的C1抑制剂浓缩物是一种应急治疗；但是，该治疗在许多国家中不可利用。在C1抑制剂浓缩物不可利用的紧急情况下，新鲜冷冻的血浆(FFP)可用作替代物，因为其也包含C1抑制剂。

从1979年起源自人血液的纯化的C1抑制剂已经在欧洲使用。数种C1抑制剂治疗现可在美国使用并且两种C1抑制剂产品现可在加拿大使用。巴氏消毒的Berinert P(CSLBehring)于2009年被F.D.A.批准用于急性发作。纳米过滤的CINRYZE(ViroPharma)于2008年被F.D.A.批准用于预防。Rhucin(Pharming)是处在开发阶段的重组C1抑制剂，其不具有由于人血液传播的病原体引起的传染病传播的风险。

急性HAE发作的治疗也可包括用于疼痛缓解的药物和/或IV流体。

其他治疗形式可刺激C1抑制剂的合成，或降低C1抑制剂消耗。雄激素药物，比如达那唑(danazol)，可通过刺激C1抑制剂的产生而降低发作的频率和严重程度。

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)可触发腹部发作。治疗幽门螺杆菌的抗生素将减少腹部发作。

更新的治疗攻击接触级联反应。艾卡拉肽(DX-88，Dyax)抑制血浆激肽释放酶并且已经在美国被批准。艾替班特(Shire)抑制缓激肽B2受体，并且已经在欧洲和美国被批准。

HAE的诊断可依赖于例如家族历史和/或血液测试。与I型、II型和III型HAE相关的实验室发现描述在例如Kaplan,A.P.，J Allergy Clin Immunol,2010,126(5):918-925中。在I型HAE中，如C4的水平一样，C1抑制剂的水平下降，而C1q水平是正常的。在II型HAE中，C1抑制剂的水平是正常的或增加；但是，C1抑制剂功能异常。C4水平下降和C1q水平是正常的。在III型中，C1抑制剂、C4和C1q的水平都可以是正常的。

可例如使用问卷，例如，通常由患者、临床医生或家庭成员完成的问卷，评估HAE的症状。这样的问卷是本领域已知的并且包括，例如，视觉模拟评分。参见，例如，McMillan,C.V.等Patient.2012；5(2):113-26。在一些实施方式中，受试者具有I型HAE或II型HAE。可以使用本领域已知的任何方法，例如通过与HAE一致的临床历史(例如，皮下或粘膜的非瘙痒的肿胀发作)或诊断测试(例如C1-INH功能测试和C4水平评估)诊断。

(ii)用抗-pKal抗体治疗HAE

本公开提供了：例如根据本文所述的给药方案，通过向具有或疑似具有遗传性血管性水肿(HAE)的受试者施用本文描述的抗体(例如本文描述的治疗有效量的抗体)来治疗HAE(例如改善、稳定或消除HAE的一种或多种症状)的方法。另外提供了：例如根据本文描述的给药方案，通过施用本文描述的抗体(例如本文描述的治疗有效量的抗体)来治疗HAE的方法，或与第二疗法(例如与诸如本文所述的一种其它试剂)联合来治疗HAE的方法。本公开还提供了：例如根据本文描述的给药方案，通过向处于发展HAE风险的受试者(例如，具有患有HAE的家族成员或其基因易感性的受试者)施用本文描述的抗体(例如，本文描述的预防有效量的抗体)来预防HAE或其症状的方法。在一些实例中，受试者可能是在治疗时没有HAE症状的人类患者。在一些实施方式中，受试者是具有I型HAE或II型HAE的人类患者。在一些实施方式中，受试者是在治疗前一年内已经历至少两次(例如2、3、4、5或更多次)HAE发作的人类患者。

治疗包括施用有效减轻、缓解、改变、补救、改良、改善或影响紊乱、紊乱症状或紊乱倾向的量。治疗还可延迟疾病或者病症的发生(onset)，例如预防疾病或者病症的发生，或预防疾病或病症的恶化。

施用DX-2930抗体的方法也在“药物组合物”中描述。所用抗体的合适剂量可取决于受试者的年龄和体重以及所用的具体药物。该抗体可以用作竞争试剂以抑制、减少不希望的相互作用，例如血浆激肽释放酶与其底物(例如因子XII或HMWK)之间的相互作用。抗体的剂量可以是足以阻止患者中，特别是在疾病位点的90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.9％的血浆激酶活性的量。在一些实施方式中，每两周或每四周施用150mg或300mg的抗体。在一些实施方式中，300mg的抗体以单剂量施用。如果受试者在单剂量后经历HAE发作，则可以每两周施用300mg抗体。

在一个实施方式中，抗体用于抑制血浆激肽释放酶的活性(例如，抑制血浆激肽释放酶的至少一种活性，例如减少因子XIIa和/或缓激肽的产生)，例如体内抑制。结合蛋白可以其本身使用或者与试剂(例如细胞毒性药物、细胞毒素酶或放射性同位素)缀合使用。

抗体可通过天然补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)直接用于体内消除抗原表达细胞。本文描述的抗体可以包括补体结合效应子结构域，例如来自IgG1、IgG2或IgG3的Fc部分或与补体结合的IgM的相应部分。在一个实施方式中，靶细胞群体用本文描述的抗体和适当的效应细胞离体处理。治疗可以通过添加补体或含有补体的血清来补充。此外，通过补体蛋白的结合可以改善用本文描述的抗体包被的靶细胞的吞噬作用。在另一实施方式中，用包含补体结合效应子结构域的抗体包被的靶细胞通过补体裂解。

施用DX-2930抗体的方法在“药物组合物”中描述。所用分子的合适剂量将取决于受试者的年龄和体重以及所用的特定药物。该抗体可用作竞争试剂以抑制或减少不希望的相互作用，例如天然试剂或病理试剂和血浆激肽释放酶之间的相互作用。

如本文描述的治疗有效量的抗体可以被施用于具有、疑似具有HAE或处于HAE风险中的受试者，从而治疗紊乱(例如减轻或改善紊乱的症状或特征，减缓、稳定和/或停止疾病进展)。

本文描述的抗体可以以治疗有效量施用。抗体的治疗有效量是在单剂量或多剂量施用至受试者时有效治疗受试者的量，例如治疗(cure)、缓解、缓和或改善受试者的紊乱的至少一个症状至超出在没有这种治疗的情况下预期的程度。

可以调整给药方案以提供最佳的期望响应(例如治疗响应)。例如，可以施用单个丸剂，可以随着时间推移施用几次分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度指示按比例减少或增加剂量。在其他实例中，可以施用丸剂之后随着时间推移进行几次剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度指示按比例减少或增加剂量。在其他实例中，剂量可被分为几次剂量且随着时间施用。以剂量单位形式配制肠胃外组合物以便于施用和剂量均匀性是特别有利的。本文使用的剂量单位形式是指适合作为待要治疗的受试者的单一剂量的物理离散单位；每个单位含有预定量的活性化合物，经计算产生与所需药物载体相关的所需治疗效果。

在一些实施方式中，本文描述的抗体在第一治疗期期间以剂量方案施用。在一些实施方式中，抗体在第一治疗期以多剂量施用。在此期间，抗体(例如DX-2930)的治疗或预防有效量可以是大约150mg或300mg，并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长时间施用。在一些实施方式中，抗体(例如DX-2930)的治疗或预防有效量可以是大约150mg或300mg，并且每两周或每四周施用一次。在一些实施方式中，治疗或预防有效量施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次或更多次。在一些实施方式中，第一治疗期为26周。在一些实施方式中，治疗或预防有效量为150mg，并且每四周施用给受试者(例如，每四周一次，持续26周，获得总共7次剂量的递送)。在一些实施方式中，治疗或预防有效量为300mg，并且每两周施用给受试者(例如，每两周一次，持续26周，获得总共13次剂量的递送)。

在一个实例中，第一治疗期为26周，并且在第0天、第28天、第56天、第84天、第112天、第140天和第168天施用抗体。在另一实例中，第一治疗期为26周，并且在第0天、第14天、第28天、第42天、第56天、第70天、第84天、第98天、第112天、第126天、第140天、第154天和第168天施用抗体。已被本领域技术人员理解，所列出的治疗方案允许±4天(例如，±3天、±2天或±1天)窗口。例如，在第10-18天给予的剂量将涵盖在上述第14天的剂量中。

在一些实施方式中，治疗或预防有效量在第一治疗期之后的第二治疗期期间以剂量方案施用。在一些实施方式中，第一治疗期和第二治疗期的治疗或预防有效量不同。在一些实施方式中，第二治疗期的治疗或预防有效量是大约300mg。在此期间，抗体可以以大约300mg的多剂量施用，例如每两周施用300mg。在一些实施方式中，在第二治疗期中，施用多剂量的抗体至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次。在一些实施方式中，第二治疗期为26周。在一些实施方式中，抗体以每两周大约300mg的剂量施用26周(例如获得13次剂量的递送)。在一些实施方式中，第一治疗期的最后一次剂量之后大约两周施用第二治疗期的单个第一剂量。

在本文描述的任何实施方式中，抗体的施用时机是大约的并且可包括指定日期之前三天和之后三天(例如，每两周施用涵盖在第11天、第12天、第13天、第14天、第15天、第16天或第17天施用)。

在一些实施方式中，将本文描述的抗体以大约300mg的单剂量施用至已经历了先前的HAE治疗(第一治疗)的受试者，诸如利用相同的本文描述的抗-pKal抗体(如DX-2930)的多剂量治疗。如果受试者在单次剂量后经历HAE发作，则受试者可用抗体以每两周大约300mg的多剂量治疗合适的时期，例如26周。在一些实施方式中，多剂量的第一次在HAE发作的一周内施用(例如，在HAE发作的1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天内)。在一些实施方式中，抗体施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次或更多。

先前的HAE治疗可以涉及与本文描述相同的抗体(例如DX-2930)。在一些实施方式中，先前的HAE治疗可涉及以每两周或每四周多剂量的DX-2930。在一些实施方式中，将DX-2930以每两周150mg、每两周300mg、或每四周300mg给予受试者(例如皮下)。在一个实例中，在施用单剂量抗体之前，受试者先前每两周或每四周施用抗体，持续26周。在一些实施方式中，先前治疗的多剂量的抗体施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次。在一些实施方式中，抗体先前施用至第0天、第28天、第56天、第84天、第112天、第140天和第168天。在一些实施方式中，大约300mg单剂量的抗体在先前治疗的最后一次剂量之后大约两周施用。在一个实例中，在第一治疗期的第182天施用第二治疗期的单剂量。

在本文描述的任何实施方式中，抗体施用的时机是大约的并且包括指定日期之前三天和指定日期之后三天(例如，每两周施用涵盖在第11天、第12天、第13天、第14天、第15天、第16天或第17天的施用)。

在一些实施方式中，在根据本文描述的任何方法施用抗体之前，可以评估受试者以建立HAE发作的基线发生率(baseline rate)。这种评估期可称为“磨合期(run-inperiod)”。在一些实施方式中，HAE发作的基线发生率必须满足或超过给定时间段内HAE发作的最小数量。在一个实例中，受试者在第一次施用抗体之前的四周磨合期中经历至少一次HAE发作。在另一实例中，受试者在第一次施用抗体之前的八周磨合期中经历至少两次HAE发作。

本文描述的任何受试者可以已经历先前的HAE治疗，例如HAE的预防性或治疗性治疗。本公开的方面还提供了向已经接受了HAE的一个或多个先前治疗的受试者施用如本文描述的抗体(例如DX-2930)的方法。在一些实施方式中，HAE的先前治疗是涉及本文描述抗体(例如DX-2930)的治疗。在一些实施方式中，受试者先前每两周或每四周施用多剂量的DX-2930。在一些实施方式中，受试者先前每两周施用150mg的DX-2930。在一些实施方式中，受试者先前每两周施用300mg的DX-2930。在一些实施方式中，受试者先前每四周施用300mg的DX-2930。在一些实施方式中，先前治疗的多剂量的抗体施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次。

在一些实施方式中，受试者已经接受了一次或多次先前的HAE治疗，其可涉及本领域已知的对于HAE的任何治疗剂。示例性的抗HAE试剂包括但不限于C1-抑制剂(例如，或)、血浆激肽释放酶抑制剂(例如)、缓激肽受体抑制剂(例如)、减毒雄性激素(例如，达那唑)和抗纤维蛋白溶解剂(例如，凝血酸(traexamic acid))。在一些实例中，受试者可在接受如本文描述的抗-pKal抗体治疗之前经历减量期。减量期指在抗-pKal抗体治疗之前的一段时间，在此期间处于抗HAE治疗(例如C1-INH、口服雄性激素和/或口服抗纤维蛋白溶解剂)的受试者逐渐减少抗HAE剂的剂量、频率或两者，使得受试者可以从先前的HAE治疗逐渐过渡为如本文描述抗-pKal抗体治疗。在一些实施方式中，减量涉及逐渐或逐步减少先前治疗剂量和/或先前治疗施用频率的方法。减量期可以持续2-4周，并可以因个体特征因素不同而不同。在一些实例中，在抗-pKal抗体治疗开始之前终止先前的治疗。在其它实例中，先前的治疗可以在受试者已被给予他或她的第一剂量的抗-pKal抗体后的合适时间范围内(例如2周、3周或4周)终止。

可选地，先前HAE治疗的受试者可直接转变为本文描述的抗-pKal抗体治疗，而无需减量期。

在其他实施方式中，受试者在第一治疗、第一治疗期和/或后续的本文描述的单剂量和多剂量治疗(第二治疗期)之前没有任何先前的HAE治疗。在一些实施方式中，受试者在第一治疗期期间和/或第二治疗期期间除了本文描述的抗体之外不具有任何治疗。在一些实施方式中，受试者在第一治疗或第一治疗期之前至少两周(例如至少2、3、4、5周或更长时间)、第一治疗或第一治疗期期间、和/或第二治疗期期间，没有进行任何先前的HAE治疗。在一些实施方式中，受试者在第一治疗或第一治疗期之前至少两周、第一治疗期期间、和/或第二治疗期期间，没有对HAE的长期预防(例如C1抑制剂、减毒雄性激素、抗纤维蛋白溶解剂)。在一些实施方式中，在第一次治疗或者第一治疗期之前的至少四周、在第一治疗期期间和/或第二治疗期期间，受试者没有涉及血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂的HAE治疗。在一些实施方式中，在第一治疗或者第一治疗期之前的至少四周、在第一治疗期期间和/或第二治疗期期间，受试者没有使用含有雌激素的药物。在一些实施方式中，在第一治疗或者第一治疗期之前的至少两周、在第一治疗期期间和/或第二治疗期期间，受试者没有使用雄性激素(例如，司坦唑醇、达那唑、氧雄龙、甲基睾酮、睾酮)。

本文描述的任何方法可进一步包括在治疗之前和之后或治疗过程中监测患者的副作用(例如，磷酸肌酸水平的升高)和/或抗体对pKal的抑制水平(例如抗体的血清或血浆浓度或pKal活性水平)。如果观察到一个或多个不利影响，则可减少抗体的剂量或可终止治疗。如果抑制水平低于最低治疗水平，则可以向患者施用另外剂量的抗体。也可以对于针对所施用抗体的抗体生成；C1-抑制剂、C4和/或C1q的活性；生活质量；任何HAE发作率、健康相关的生活质量、焦虑和/或抑郁(例如医院焦虑和抑郁量表(Hospital Anxiety andDepression Scale)(HADS))、工作生产力(例如工作效率和活动障碍问卷(WorkProductivity and Activity Impairment Questionnaire)(WPAI))、相对于其他注射剂皮下施用抗体(例如D-2930)的偏好、生活质量(例如血管性水肿-生活质量(AE-QOL)、EuroQoLGroup-5维报告)评估患者。

在一些实施方式中，抗体(例如DX-2930)的血浆或血清浓度可以在治疗过程中(例如初始剂量之后)测量，以评估治疗的功效。如果抗体的血浆或血清浓度低于大约80nM，则可能需要后续剂量，其可以与初始剂量相同或更高。抗体的血浆或血清浓度可通过测定从受试者获得的血浆或血清样品中抗体的蛋白质水平，例如通过免疫测定或MS测定来测量。抗体的血浆或血清浓度还可通过测定从用抗体治疗的受试者获得的血浆或血清样品中pKal的抑制水平来测量。这样的测定可以包括如本文描述的用于测量裂解的激肽原的合成底物测定或Western印迹测定。

可选地或另外，可以在治疗过程期间监测肌酸激酶的血浆或血清水平和/或一个或多个凝血参数(例如，活化的部分的促凝血酶原激酶时间(aPTT)、凝血酶原时间(PT)、出血事件)。如果发现治疗期间肌酸激酶的血浆或血清水平升高，则可以减少抗体剂量或可以终止治疗。类似地，如果在治疗过程中发现一个或多个凝血参数显著受到影响，则可以改变抗体的剂量或可以终止治疗。

在一些实施方式中，可以如下确定抗体(例如DX-2930)的最佳剂量(例如最佳预防剂量或最佳治疗剂量)。将抗体以初始剂量给予至需要治疗的受试者。测量受试者中抗体的血浆浓度。如果血浆浓度低于80nM，则在随后的施用中增加抗体的剂量。维持抗体血浆浓度高于大约80nM的抗体剂量可被选择为受试者的最佳剂量。在治疗过程中可以监测受试者的肌酸磷酸激酶水平，并根据肌酸磷酸激酶水平进一步调整该受试者的最佳剂量，例如在治疗期间观察到肌酸磷酸激酶升高，可降低抗体剂量。

(iii)组合疗法

可以将本文描述的抗体(例如DX-2930)与一种或多种其他疗法组合施用，用于治疗与血浆激肽释放酶活性相关的疾病或病症，例如本文描述的疾病或病症。例如，本文描述的抗体(例如DX-2930)可以(例如，在治疗过程之前、期间或之后)与另一抗血浆激肽释放酶Fab或IgG(例如本文描述的另一Fab或IgG)、另一血浆激肽释放酶抑制剂、肽抑制剂、小分子抑制剂或手术一起治疗性或预防性使用。可与本文描述的血浆激肽释放酶结合抗体一起用在组合疗法中的血浆激肽释放酶抑制剂的实例包括在例如WO 95/21601或WO 2003/103475中描述的血浆激肽释放酶抑制剂。

一种或多种血浆激肽释放酶抑制剂可以与本文描述的抗体(例如DX-2930)组合使用。例如，该组合可导致需要较低剂量的抑制剂，从而减少副作用。

如本文描述的抗体(例如DX-2930)可以与一种或多种治疗HAE的当前疗法组合施用。例如，DX-2930抗体可以与第二抗HAE治疗剂共用，第二抗HAE治疗剂如艾卡拉肽、C1酯酶抑制剂(例如CINRYZE^TM)、抑肽酶和/或缓激肽B2受体抑制剂(例如，艾替班特)。

术语“组合”是指使用两种或更多种试剂或疗法来治疗同一患者，其中试剂或疗法的使用或作用在时间上重叠。试剂或疗法可以同时施用(例如，作为向患者施用的单一制剂或作为两个同时施用的分开的制剂)或以任何顺序依次施用。依次施用是在不同时间给予的施用。一个试剂和另一试剂的施用之间的时间可以是几分钟、几小时、几天或几周。本文描述的血浆激肽释放酶结合抗体的使用还可用于减少另一种疗法的剂量，例如减少与正在施用的另一试剂相关的副作用。因此，组合可以包括以比不存在血浆激肽释放酶结合抗体时所使用的剂量低至少10％、20％、30％或50％的剂量施用第二试剂。在一些实施方式中，可以与本文描述的抗-pKal抗体(例如DX-2930)的第一剂量同时给予受试者作为加载IV剂量或SC剂量的C1-抑制剂。然后受试者可以继续进行抗-pKal抗体治疗(不需要进一步剂量的C1-抑制剂)。

组合疗法可以包括施用降低其他疗法的副作用的试剂。该试剂可以是减少血浆激肽释放酶相关疾病治疗的副作用的试剂。

(iv)用于评估治疗方案的试验

同样在本公开的范围内的是用于评估本文描述的任何治疗方法的功效的测定方法。在一些实施方式中，可以在治疗过程之前和/或治疗过程期间(例如在初始剂量之后)测量与HAE相关的一个或多个生物标志物(例如，2-链HMWK)的血浆或血清浓度，以评估治疗的功效。在一些实施方式中，将在剂量施用后的一个时间点获得的与HAE相关的一个或多个生物标志物的血浆或血清浓度(水平)与在剂量施用后更早的一个时间点或在初始剂量施用之前获得的样品中的生物标志物的浓度进行比较。在一些实施方式中，生物标志物是2-HMWK。

生物标志物的水平可以通过使用特异性检测生物标志物的抗体检测从受试者获得的血浆或血清样品中的生物标志物来测量，例如通过免疫测定法，如Western印迹测定法或ELISA。在一些实施方式中，从受试者获得的血浆或血清样品中的2-HWMK水平通过免疫测定法评估。用于检测2-HWMK的免疫测定法的抗体是本领域已知的，并且用于本文描述方法中的这种抗体的选择对于本领域普通技术人员而言将是显而易见的。

在没有进一步的阐述的情况下，相信本领域技术人员可以基于上述描述最大限度地利用本发明。因此，以下具体实施方式仅被解释为说明性的，而不以任何方式限制本公开的其余部分。出于本文所引用主题的目的，本文引用的所有出版物都通过引用并入。

实施例

实施例1：使用多剂量评估DX-2930功效和安全性的双盲研究

研究概述

描述了第3阶段、多中心、随机双盲安慰剂对照的试验以评估DX-2930在预防患有I型和II型HAE患者的急性发作中的功效和安全性。这项双盲研究之后可以有后续治疗期。通常，包括这样的受试者：年龄在12岁及以上，并记录了在磨合期期间每4周经历至少1次发作的I型HAE或II型HAE的诊断。

长期预防性(LTP)疗法清除

在知情同意后，受试者接受筛选评估。经筛选的对HAE进行长期预防性治疗的受试者需要在磨合期开始前经历最少2周的清除期(washout peroid)。只要研究人员确定这样做不会使受试者处于任何不适当的安全性风险并且受试者至少年满18岁，则允许LTP清除。这些标准确保了应该保留LTP的患者针对本研究不进行清除，但确实允许患有严重疾病的适当患者登记(enrollment)，同时尽量减少脱离LTP的时间。目前的治疗指南认可治疗HAE的两种不同标准的护理方法，其包括LTP疗法和按需疗法(Cicardi等，2012；Craig等，2012；Zuraw等，2013)。在整个研究过程中，受试者被允许治疗急性HAE发作。因此，那些停止LTP以进入研究并随后被随机分配到安慰剂组的受试者仍然在不降低其护理标准的情况下进行管理。确认受试者已成功完成2周的清除期，他们才能进入磨合期。

磨合期

没有进行HAE的长期预防性疗法或已经完成了所需的清除期的经筛选的受试者进行4周的磨合期以确定基线HAE发作率。只有受试者满足每4周至少1次确认的HAE发作的最低基线发生率才有资格登记和随机化。在4周结束前经历3次或更多次确认的发作的受试者可以提前退出磨合期并继续进行登记和随机化。在磨合4周后没有至少1次确认的发作的受试者，使其磨合期延长另一个4周，在此期间，他们需要至少2次确认的发作才能继续进行登记和随机化。

为了符合登记条件，已经使其磨合延长的受试者在进入治疗期之前必须完成整个8周的磨合期。在磨合期间没有满足最低发作率或其他因筛选评估而被认定为不合格者的受试者被认为是筛选失败并且不允许重新筛选进入研究。

治疗期

在验证资格后，受试者以双盲方式2：1随机分配接受DX-2930或安慰剂的重复皮下(SC)施用。被随机分配到DX-2930的受试者按1：1：1的比例分配给下述三个剂量方案之一：每2周300毫克、每4周300毫克或每4周150毫克。通过初始与非初始受试者(接受方案DX-2930-02中的活性研究药物的受试者)以及在磨合期期间观察到的基线发作率将所有治疗组的随机化分成以下的组：每4周1次至<2次发作、每4周2次<3次发作、和每4周≥3次发作。

每位受试者经历由13次剂量的盲法研究性药物产品(InvestigationalMedicinal Product)(IMP)组成的治疗期，持续26周的时期，从第0天第一剂量的日期至最终剂量后的两周。被随机分配到4个治疗组之一的受试者根据表2中的给药方案接受DX-2930或安慰剂剂量。

表2：治疗期给药方案

治疗描述

DX-2930

DX-2930是一种无菌、无防腐剂的注射用溶液，pH 6.0。使用下列药典组分配制活性成分DX-2930：30mM磷酸氢二钠二水合物、19.6mM柠檬酸一水合物、50mM L-组氨酸、90mM氯化钠、0.01％聚山梨醇酯80。每个小瓶含有在1mL溶液中标称浓度为150mg的DX-2930活性成分。测试产品以不知情的方式通过皮下注射施用至上臂中。

对于每个300mg剂量的DX-2930，每位受试者接受总共2mL，分成2次独立的1.0mLSC注射的DX-2930。2次注射在同一上臂给予，每次注射位点之间至少分开2厘米。对于每个150mg剂量的DX-2930，每位受试者总共接受2mL，分成2次独立的1.0mL皮下注射，其中一次注射是DX-2930，另一次是安慰剂。2次注射在同一上臂给予，每次注射位点之间至少分开2厘米。

安慰剂

安慰剂由测试产品的非活性制剂组成：30mM磷酸氢二钠二水合物、19.6mM柠檬酸一水合物、50mM L-组氨酸、90mM氯化钠、pH 6.0，具有0.01％聚山梨醇酯80。根据表1的给药方案，将安慰剂剂量施用至随机分配到安慰剂治疗组的受试者，并且对于随机分配到每4周300mg或150mg DX-2930的受试者的治疗组，在DX-2930剂量之间施用安慰剂剂量。

对于每个安慰剂剂量，每位受试者接受总共2mL，分成2个独立的1.0mL皮下注射安慰剂。2次注射在同一上臂给予，每次注射位点之间至少分开2厘米。

随访期

受试者可以在8周的随访期期间进一步进行安全性和额外评估(即药代动力学和药效学评估)。受试者(或护理人员)被指示告知受试者在最后的随访后经历的任何HAE发作的位点。

停止规则

如果在任何时候确定必须因重要的安全性信号而放弃剂量组，则剩余的未登记的受试者可以重新随机分入至剩余的较低的DX-2930给药组或安慰剂组，并继续登记以双盲方式进行剩余的研究。使用这些受试者的数据直至决定在功效分析中以及在整体的安全性分析中放弃给药的时间。

如果受试者在研究者的评估中经历了DX-2930相关的严重不良反应(或与DX-2930相关的临床显著的非严重不良反应)，则停止任何个体受试者的给药，保证为受试者的健康(well-being)而停止进一步给药。研究者有能力就此类事项与医疗监督员进行联系和磋商。除非要求他们退出研究，否则受试者将完成所有计划访问。已停止进一步给药的受试者将没有资格参加开放标签扩展(open label extension)(OLE)。

研究群体

该研究登记多达120名受试者，以提供108名完成受试者。受试者年满12岁以及以上，具有确诊为在磨合期期间每4周经历至少1次确认的发作的HAE(I型或II型)。该研究旨在登记至少5名12岁至17岁的受试者。HAE诊断通过记录的符合HAE的临床病史和在筛选访问之前或期间进行的诊断测试被证实。

受试者纳入标准

符合下列标准的患者是进行本文描述的治疗的受试者：

1.筛选时男性和女性12岁或以上。

2.基于以下所有情况对HAE(I型或II型)进行记录诊断：

-记录符合HAE的临床病史(皮下或粘膜的非瘙痒性肿胀发作而没有伴随的荨麻疹)

-筛选期间获得的确认HAE I型或II型的诊断测试结果：C1抑制剂(C1-INH)功能水平<正常水平的40％。具有C1-INH的功能水平为正常水平的40-50％的受试者，如果其也具有低于正常范围的C4水平，则可以被登记。受试者可以在这些诊断结果可用之前开始参与磨合期。如果结果与临床病史不一致，或者结果被认为与最近的LTP使用混淆，可重新测试受试者。

-至少以下一种情况：首次血管性水肿症状报告发病的年龄≤30岁，符合HAE I型或II型家族史或C1q在正常范围内。

3.在磨合期期间经历确认的每4周至少1次研究者确认的HAE发作的基线率。

4.成人受试者和未满18岁的受试者的看护者愿意并能够阅读、理解并签署知情同意书。受试者12至17岁，其看护者提供知情同意书、愿意并能够阅读、理解并签署同意书。

5.能生育的和性活跃的男性和女性在研究期间必须遵守如下避孕要求：

-具有生育可能的女性必须同意禁欲、或者建议在从筛选至最终研究访视后30天使用高效避孕形式。这包括与抑制排卵相关的仅孕酮口服避孕药(口服、可注射的或可植入的)、宫内节育器(IUD、所有类型)或宫内激素释放系统(IUS)。其男性伴侣进行了输精管切除术的女性必须同意使用另一种医学上可接受的避孕形式。使用带或不带杀精子剂或宫颈帽的男用避孕套，带有杀精子剂的膈膜或海绵或组合(双重屏障方法)不被认为是非常有效的。

-定义为手术不育(女性子宫切除术后、双侧卵巢切除术或双侧输卵管结扎的状态)或绝经后至少12个月的非生育可能女性在研究期间不需要避孕。

-男性，包括手术不育(输精管切除术后)的男性以及其女性伴侣有生育可能的男性必须同意禁欲，或者从筛选至最终研究访视后60天使用医学上可接受的避孕方式。

受试者排除标准

具有一个或多个以下标准的患者可被排除在本文描述的治疗之外：

1.伴随诊断另一种形式的慢性复发性血管性水肿，例如获得性血管性水肿(AAE)、具有正常C1-INH的HAE(也称为III型HAE)、特发性血管性水肿或与荨麻疹相关的复发性血管性水肿。

2.在筛选前4周内给予研究药物或暴露于研究装置。

3.在筛选前4周内接触(epxosure to)血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或任何具有全身吸收的含雌性激素的药物(如口服避孕药或激素替代疗法)。

4.在进入磨合期之前2周内接触雄性激素(例如，司坦唑醇、达那唑、氧雄龙、甲睾酮、睾酮)。

5.在进入磨合期前2周内使用对于HAE的长期预防性疗法(C1-INH、减毒雄性激素或抗纤维蛋白溶解剂)。

6.在进入磨合期前7天内使用对于HAE的短期预防。短期预防定义为用于避免来自医学上指示的程序的血管性水肿并发症的C1-INH、减毒雄性激素或抗纤维蛋白溶解剂。

7.任何以下肝功能检查异常：丙氨酸转氨酶(ALT)>正常上限的3倍或天冬氨酸转氨酶(AST)>正常上限的3倍，或总胆红素>正常上限的2倍(除非胆红素升高是吉尔伯特综合征的结果)。

8.怀孕或哺乳。

9.受试者具有任何可被认为损害其安全性或顺应性(compliance)、妨碍研究顺利进行、或干涉对结果的解释的情况(例如药物滥用或依赖史、重大的预先存在的疾病或研究者认为可能会混淆研究结果的解释的其他主要合并症)。

主要终点和次要终点

从第14天到第182天评估以下主要和次要功效终点：

研究的主要终点是HAE发作的次数。

次要终点以等级次序包括：

1.需要紧急治疗的HAE发作的次数

2.中度至重度HAE发作的次数

探索性功效终点

1.至第14天之后首次发作的时间，即受试者在第14天之后没有发作直到其第一次发作的持续时间。

2.每周高发病率HAE发作的数量；高发病率HAE发作被定义为具有至少一个以下特征的任何发作：严重、导致住院(住院观察<24小时的除外)、血液动力学显著(收缩压<90，需IV补液(hydration)或伴有晕厥或近晕厥)或侵犯喉头(laryngeal)。

临床实验室测试

参与临床研究的受试者进行实验室检测，包括一般的安全性参数(血液学、凝血、尿分析和血清化学)、血清学、妊娠试验、C1-INH功能分析、C4分析、C1q分析、PK样品、血浆抗药物抗体测试和PD样品。所有的实验室测试均采用公认的和经过验证的方法进行。

实施例2：用于评估DX-2930的功效和安全性的开放标签研究(open labelstudy)

研究概述

描述了3期多中心、随机、开放标签扩展试验以评估研究性药物产品(IMP)DX-2930在预防患有I型和II型HAE的患者中的急性血管性水肿发作的功效和安全性，所述患者已经进行涉及DX-2930的先前的HAE治疗。本研究大体上遵循先前的HAE治疗方案，其涉及每四周多剂量的大约150mg或300mg的DX-2930或每两周300mg DX-2930。通常，包括年龄12岁及以上、并有记录的I型或II型HAE诊断，并且在DX-2930治疗之前在磨合期期间每4周经历至少1次发作的受试者(例如，累计(rollover)患者，例如按照实施例1中公开的方案已经用DX-2930治疗过的患者，或者非累计(non-rollover)患者，例如那些从未用DX-2930治疗过的患者)。

本次研究的受试者年龄在12岁及以上且确诊为在涉及DX-2930的先前的HAE治疗之前每4周经历至少1次确诊的发作的HAE(I型或II型)。HAE诊断通过记录的符合HAE的临床病史和在筛选访视之前或期间进行的诊断检测被证实。

治疗期

(i)累计受试者

每个累计受试者(例如，已经按照例如在上面的实施例1中的本文描述的治疗方案用DX-2930进行治疗的人类患者)在第0天接受皮下施用(SC)的单一的300mg DX-2930的开放标签剂量(open-label dose)。受试者直至其首次报告并且研究者确认HAE发作才会接受任何额外的DX-2930剂量。第一次开放标签剂量和首次报告HAE发作之间的持续时间因累计受试者不同而不同。直至累计受试者报告他们的第一次HAE发作，他们才将进行预定的研究访视，其中必须进行以下测试和评估：怀孕测试、临床实验室测试、体格检查、12-导联心电图、QoL、PK、PD和抗药物抗体样品收集。

一旦累计受试者报告他或她的第一次HAE发作，受试者就会以受试者和位点方案所允许的尽可能快地进入DX-2930的第二个开放标签剂量的调查位点。在施用第二次开放标签剂量的DX-2930的访视中，受试者进行生命体征、体格检查、临床实验室测试和用于PK、PD和抗药物抗体评估的血液采样的给药前评估。给药后1小时获得生命体征。

无论累计受试者的第一次HAE发作什么时候发生，他们的第一次开放标签剂量和第二次开放标签剂量之间有最少10天。在其第二次剂量后，按照计划的给药方案在治疗期的剩余持续时间内，累计受试者将继续接受每2周开放标签300mg DX-2930的重复SC施用。从第一次开放标签剂量的日期，治疗期持续350天。基于每位受试者的第二次剂量的日期不同，在该期间使用的剂量数根据受试者不同而不同，但不会超过26次剂量。

(ii)非累计受试者

一旦所有筛选评估均已完成并获得确认合格，则非累计受试者到达研究位点，并在给药前(pre-dose)评估之后，在第0天接受SC施用的开放标签剂量的300mg DX-2930。非累计受试者按照计划的给药在整个治疗期持续期间继续接受每2周开放标签300mg DX-2930的SC施用。在第350天的研究访视中施用最后一次剂量，总共施用26次剂量。

(iii)所有受试者：

所有剂量(除了用于累计受试者的第二次剂量外)在两次施用期间都需要最少10天且最多18天，并且落入符合研究访视可接受的±4天窗口内。如果受试者在研究期间的任何时间经历急性血管性水肿发作，且研究者认为需要医疗干预，则应基于受试者的病史和按照当地批准的产品信息提供标准的护理疗法。

即使受试者在计划剂量的研究药物当天(如果是自行施用)或计划的研究访视当天接受用于重大血管性水肿(breakthrough angioedema)发作的治疗，DX-2930的施用和研究过程仍继续进行，而不改变方案研究活动计划。

(iv)治疗持续时间：

所有受试者在350天治疗期期间内接受开放标签DX-2930。累积受试者在此期间接受的剂量的数量因受试者不同而不同，但不会超过26次。施用于这些受试者的开放标签DX-2930的最后剂量可在第350天研究访视中给予。

非累计受试者每2周接受300mg DX-2930，总共26次剂量，第一次剂量在第0天施用，标签最终剂量在第350天研究访视时施用。

存在符合(around)每次研究访视的±4天的窗口。在任意两次剂量之间存在最少10天。对于累计受试者，排除在第一次和第二次开放标签剂量之间的间隔，在任意两次剂量之间存在最多18天。在研究位点处通过对于计划的研究位点访视的给药后1小时监测受试者。对于选择离开研究位点自行施用的受试者，不进行生命体征的监测。

测试产品；剂量和施用模式：

DX-2930(DX-2930)是一种无菌、无防腐剂的注射用溶液，pH6.0。使用下列药典组分配制活性成分DX-2930：30mM磷酸氢二钠二水合物、19.6mM柠檬酸(例如柠檬酸一水合物)、50mM组氨酸(例如L-组氨酸)、90mM氯化钠、0.01％聚山梨醇酯80。每个小瓶含有在1mL溶液中标称浓度为150mg的DX-2930活性成分。测试产品以不知情的方式通过皮下注射施用至上臂中。

对于每个300mg剂量的DX-2930，每位受试者接受总共2mL，分成2次独立的1.0mLSC注射的DX-2930。2次注射在同一上臂给予，每次注射位点之间至少分开2厘米。

对于每个150mg剂量的DX-2930，每位受试者接受总共2mL，分成2次独立的1.0mLSC注射，其中一次注射是DX-2930，另一次注射是安慰剂。2次注射在同一上臂给予，每次注射位点之间至少分开2厘米。

DX-2930可以在受试者接受研究者或指定人员适当的培训且他们的理解被确认后，在没有监督(青少年受试者需要家长监督)的情况下进行自行施用。受试者在研究位点接受前2次剂量的DX-2930后可以开始自行施用，并可继续自行施用所有后续的剂量。另见文中的描述。

随访期

受试者在8周的随访期期间进行安全性和额外评估(即药代动力学和药效学评估)。受试者(或护理人员)被指示告知受试者在最终随访后经历的任何HAE发作的位点。

停止规则

如果在任何时候确定剂量具有重要的安全性信号，则可减少任何剂量的DX-2930。如果受试者经历了DX-2930相关的严重不良反应(或与DX-2930相关的临床显著的非严重不良反应)，则将停止任何个体受试者的给药，保证为受试者的健康而停止进一步给药。

受试者纳入标准

符合下列标准的患者是进行本文描述的治疗的受试者：

1.筛选时男性和女性12岁或以上。

2.基于以下所有情况对HAE(I型或II型)进行记录诊断：

-记录符合HAE的临床病史(皮下或粘膜的非瘙痒性肿胀发作而没有伴随的荨麻疹)

-筛选过程期间获得的确认HAE I型或II型的诊断测试结果：C1抑制剂(C1-INH)功能水平<正常水平的40％。其中C1-INH的功能水平为正常水平的40-50％的受试者，如果其也具有低于正常范围的C4水平，则可以被登记。受试者可以在这些诊断结果可得之前开始参与磨合期。如果结果与临床病史不一致，或者结果被认为与最近的LTP用途或者被最近的LTP用途混淆，则可重新测试受试者。

-至少以下一种情况：首次血管性水肿症状报告发病的年龄≤30岁，符合HAE I型或II型家族史或C1q在正常范围内。

3.在磨合期期间经历确认的每4周至少1次研究者确认的HAE发作的基线率。

4.成人受试者和未满18岁的受试者的看护者愿意并能够阅读、理解并签署知情同意书。受试者12至17岁，其看护者提供知情同意书、愿意并能够阅读、理解并签署同意书。

5.能生育的和性活跃的男性和女性在研究期间必须遵守如下避孕要求：

-具有生育能力的女性必须同意禁欲、或者必须在从筛选至最终研究访视后30天使用高效避孕形式。这包括在研究筛选之前三个月，稳定剂量的与抑制排卵相关的含组合的雌激素和孕酮的激素避孕药(口服、可注射的或可植入的)、与抑制排卵相关的仅孕酮激素避孕药、宫内节育器(IUD、所有类型)或宫内激素释放系统(IUS)。应注意，其男性伴侣进行了输精管切除术的女性必须同意使用另一种医学上可接受的避孕形式。此外，使用带或不带杀精子剂或宫颈帽的男用避孕套，带有杀精子剂的膈膜或海绵或组合(双重屏障方法)不被认为是非常有效的。

-定义为手术不育(子宫切除术后、双侧卵巢切除术或双侧输卵管结扎的状态)或绝经后至少12个月的非生育可能女性在研究期间不需要避孕。

-男性，包括手术不育(输精管切除术后)的男性以及其女性伴侣有生育能力的男性必须同意禁欲，或者从筛选至最终研究访视后60天使用医学上可接受的避孕方式。

受试者排除标准

具有一个或多个以下标准的患者可被排除在本文描述的治疗之外：

1.伴随诊断有另一种形式的慢性复发性血管性水肿，例如获得性血管性水肿(AAE)、具有正常C1-INH的HAE(也称为HAE III型)、特发性血管性水肿或与荨麻疹相关的复发性血管性水肿。

2.在筛选前4周内给予研究药物(除了DX-2930或其他HAE疗法)或暴露于研究装置。

3.在筛选前4周内接触血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂或任何具有全身吸收的含雌性激素的药物(如口服避孕药或激素替代疗法)。

4.任何以下肝功能检查异常：丙氨酸转氨酶(ALT)>正常上限的3倍，或天冬氨酸转氨酶(AST)>正常上限的3倍，或总胆红素>正常上限的2倍(除非胆红素升高是吉尔伯特综合征的结果)。

5.怀孕或哺乳。

6.受试者具有任何可被认为损害其安全性或顺应性的情况，妨碍研究顺利进行，或干涉对结果的解释(例如药物滥用或依赖史，重大的预先存在的疾病或研究者认为可能会混淆研究结果的解释的其它主要合并症)。

禁止的伴随治疗

在研究期间不允许使用以下治疗：

-一旦停用LTP(在第一剂量的DX-2930后的3周内)，HAE的长期预防(LTP)(例如，用于长期预防的C1-INH、减毒雄性激素或抗纤维蛋白溶解剂的使用)。

-血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂。

-具有全身吸收的含雌性激素的药物(如口服避孕药或激素替代疗法)。

-对于非HAE相关的医学病症或在头三周期间中断后的HAE，使用雄性激素(例如，司坦唑醇、达那唑、氧雄龙、甲睾酮、睾酮)。

-任何其他研究药物或装置。

临床实验室测试

参与临床研究的受试者将接受实验室检测，包括常见的安全性参数(血液学、凝血、尿分析和血清化学)、血清学、妊娠试验、C1-INH功能分析、C4分析、C1q分析、PK样本、PD样品和血浆抗药物抗体测试。所有实验室测试将使用公认的和进过验证的方法进行。

自行施用

被视为合适候选人(即那些具有身体和脑力学习能力并愿意接受培训的人)的所有受试者(青少年或成人)被允许自行施用治疗。受试者必须已完成研究者或指定人员的适当培训，并且对培训的理解必须由研究者或指定人员确认。

受试者在研究位点接受前两次剂量的DX-2930后可以开始自行施用。一旦开始，受试者被允许在研究位点(当访视是计划的研究位点访视时)或受试者的家中或其他约定的位置(当研究允许离位点给药时)自行施用后续剂量的DX-2930。自行施用研究产品的青少年受试者受父母/法定监护人/护理人员的监督。可选地，父母/法定监护人/护理人员在完成适当培训后，可以在没有研究位点人员监督的情况下将DX-2930施用给青少年。在计划的离位点自行施用后位点人员呼叫受试者以确保发生的施用、收集不良事件(AE)、伴随药物，并确保所有的发作都已被适当记录。

功效评估：

功效终点的其他标准包括：

-对于累计受试者第一次HAE发作的时间(基于从第一次开放标签研究剂量直至第一次HAE发作的时间)

-治疗期期间研究者确认的HAE发作的次数

-治疗期期间研究者确认的需要紧急治疗的HAE发作的次数

-治疗期期间中度或重度HAE发作的次数

-治疗期期间高发病率的HAE发作的次数；高发病率HAE发作定义为具有至少一个以下特征的任何发作：严重、导致住院(住院观察<24小时除外)、血液动力学显著(收缩压<90，需IV补液或伴有晕厥或近晕厥)或侵犯喉头。

其他措施包括：

-抗药物抗体开发

-药代动力学(PK)

-药效学(PD)效应

-生活质量评估

-DX-2930注射报告

-DX-2930自行施用和皮下注射调查

实施例3：在DX-2930治疗后的HMWK的评估

将HAE患者随机分为接受活性药物(DX-2930)的组(包括不同剂量组(30mg、100mg、300mg和400mg))和接受安慰剂的组，并施用皮下剂量的安慰剂或DX-2930(DX-2930)。在接受剂量之前(“给药前”)和在第8天、第22天、第50天、第64天、第92天和第120天施用后的时间点收集血浆样品。

将血浆样品进行生物标志物测定以评估患者血浆中DX-2930的药效学活性。具体而言，在使用特异性结合2-链HMWK的抗体的测定中评估样品中2-链HMWK的存在。

如图3所示，DX-2930的施用导致接受DX-2930，例如接受300mg或400mg的DX-2930的患者中的2-链HMWK的水平降低。在施用后第8天和22天这些受试者中的双链HMWK水平接近在健康受试者中检测到的2-链HMWK的水平，并且在施用后至少第92天时仍然减少。

这些结果表明，施用DX-2930降低了2-链HMWK(用于评估血浆激肽释放酶不稳定性和Dx-2930的稳定化作用的生物标志物)水平，其可以在施用后几个月内检测到。2-链HMWK也被用作评估血浆激肽释放酶的生物标志物。

其他实施方式

本说明书中公开的所有特征可以以任何组合方式结合。本说明书中公开的每个特征可以被用于相同、等同或类似的目的的替代特征替代。因此，除非另有明确说明，否则所公开的每个特征仅仅是等同或类似特征的通用系列的例子。

根据以上描述，本领域技术人员可以容易地确定本发明的基本特征，并且在不脱离其精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种改变和变型以使其适应各种用途和条件。因此，其他实施方式也在权利要求的范围内。

等同内容

虽然本文已经描述和说明了几个创造性的实施方式，但是本领域的普通技术人员将容易想到用于执行功能和/或获得结果和/或一个或多个在此描述的优点的各种其他方式和/或结构，并且这些变化和/或变型中的每一个被认为是在本文描述的发明实施方式的范围内。更一般地，本领域技术人员将容易理解，本文描述的所有参数、尺寸、材料和配置都是示例性的，并且实际参数、尺寸、材料和/或配置将取决于本发明的教导所用于的具体的一个应用或者多个应用。本领域技术人员将认识到，或仅仅使用常规实验就能够确定本文描述的具体发明实施方式的许多等同物。因此，应该理解的是，前述实施方式仅以示例的方式给出，并且在所附权利要求及其等同内容的范围内，可以以与具体描述和要求保护的方式不同的方式实施发明实施方式。本公开的创造性实施方式涉及本文描述的每个单独的特征、系统、物品、材料、试剂盒和/或方法。此外，如果这些特征、系统、物品、材料、试剂盒和/或方法相互一致，则两个或更多个这样的特征、系统、物品、材料、试剂盒和/或方法的任何组合都包括在本公开的发明范围内。

如本文所定义和使用的所有定义应理解为控制字典定义、通过引用并入的文献中的定义和/或所定义的术语的普通含义。

除非有明确的相反指示，否则本文在说明书和权利要求书中使用的不定冠词“一种”和“一个”应理解为意指“至少一个/种”。

如本文在说明书和权利要求书中使用的短语“和/或”应理解为意指如此结合的要素中的“一个或两个”，即在一些情况下联合存在并且其他情况下是分离地存在的。以“和/或”列出的多个要素应该以相同的方式解释，即如此连接的要素中的“一个或多个”。其他要素可以任选地存在，除了由“和/或”子句明确标识的要素之外，不管与具体标识的那些要素相关还是不相关。因此，作为非限制性示例，当与开放式语言比如“包含”结合使用时，提及“A和/或B”在一个实施方式中可以仅指代A(任选地包括除B以外的其他要素)；在另一实施方式中，仅指代B(任选地包括除A以外的元素)；在另一种实施方式中，涉及A和B(任选地包括其他元素)等等。

如在本说明书和权利要求书中所使用的，“或”应被理解为具有与如上所定义的“和/或”相同的含义。例如，当分离列表中的项目时，“或”或“和/或”应被解释为包含性的，即包含许多或一列要素的至少一个，但也包括许多或一列要素的多于一个，以及任选的其他未列出的项目。只有明确指出相反的术语，例如“仅一个”或“恰好一个”或者当在权利要求中使用时“由...组成”，将指包含许多或一列要素中的恰好一个。通常，本文使用的术语“或”应当仅被解释为在排他性术语(例如“两者之一”、“其中之一”、“仅一个”或“恰好一个”)之前指示排他性的替代方案(即“一者或另一者，而非两者”)。当在权利要求中使用时，“基本上由......组成”应具有其在专利法领域中使用的普通含义。

如本文在说明书和权利要求中所使用的，关于一个或多个要素的列表的短语“至少一个”应该理解为是指从要素列表中的任何一个或多个要素中选择的至少一个要素，但不一定包括要素列表内具体列出的每个要素中的至少一个，并且不排除要素列表中要素的任何组合。除了在短语“至少一个”所指的要素列表内具体标识的要素之外，该定义还允许要素可以任选地存在，不管与具体标识的那些要素相关还是不相关。因此，作为非限制性示例，“A和B中的至少一个”(或者等同地，“A或B中的至少一个”，或者等同地“A和/或B中的至少一个”)可以在一个实施方式中指代至少一个、任选地包括多于一个的A，不存在B(并且任选地包括除了B之外的要素)；在另一种实施方式中，指代至少一个、任选地包括多于一个的B，不存在A(并且任选地包括除了A之外的要素)；在另一实施方式中，指代至少一个、任选地包括多于一个的A和至少一个、任选地包括多于一个的B(并且任选地包括其他元素)等等。

还应该理解的是，除非另有相反的指示，否则在本文所要求的包括多于一个步骤或行为的任何方法中，该方法的步骤或行为的次序不一定限于所记载的该方法的步骤或行为的次序。

在权利要求以及以上说明书中，所有连接词，诸如“包含(comprising)”、“包括(including)”、“携带(carrying)”、“具有(having)”、“含有(containing)”、“涉及(involving)”、“持有(holding)”、“包括(composed of)”等应被理解为是开放式的，即意味着包括但不限于。只有连接词“由...组成(consisting of)”和“基本上由...组成(consisting essentially of)”应分别是封闭式或半封闭式连接词，如美国专利局专利审查程序手册第2111.03节所述。

序列表

<110> 戴埃克斯有限公司

<120> 血浆激肽释放酶抑制剂及其治疗遗传性血管性水肿发作的用途

<130> D0617.70110WO00

<140> 尚未指定

<141> 2016-12-09

<150> US 62/395,833

<151> 2016-09-16

<150> US 62/266,175

<151> 2015-12-11

<150> US 62/266,192

<151> 2015-12-11

<160> 10

<170> PatentIn 版本3.5

<210> 1

<211> 469

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 1

Met Gly Trp Ser Cys Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly Ala

1 5 10 15

His Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro

20 25 30

Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser

35 40 45

His Tyr Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu

50 55 60

Trp Val Ser Gly Ile Tyr Ser Ser Gly Gly Ile Thr Val Tyr Ala Asp

65 70 75 80

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr

85 90 95

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr

100 105 110

Tyr Cys Ala Tyr Arg Arg Ile Gly Val Pro Arg Arg Asp Glu Phe Asp

115 120 125

Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

130 135 140

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

145 150 155 160

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

165 170 175

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

180 185 190

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

195 200 205

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

210 215 220

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro

225 230 235 240

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu

245 250 255

Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

260 265 270

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

275 280 285

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

290 295 300

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn

305 310 315 320

Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp

325 330 335

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro

340 345 350

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu

355 360 365

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

370 375 380

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

385 390 395 400

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

405 410 415

Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

420 425 430

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

435 440 445

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

450 455 460

Ser Leu Ser Pro Gly

465

<210> 2

<211> 231

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 2

Met Gly Trp Ser Cys Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly Ala

1 5 10 15

His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser

20 25 30

Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser

35 40 45

Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

50 55 60

Leu Ile Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

65 70 75 80

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

85 90 95

Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr

100 105 110

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

115 120 125

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

130 135 140

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

145 150 155 160

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

165 170 175

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

180 185 190

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

195 200 205

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

210 215 220

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

225 230

<210> 3

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 3

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser His Tyr

20 25 30

Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Gly Ile Tyr Ser Ser Gly Gly Ile Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Tyr Arg Arg Ile Gly Val Pro Arg Arg Asp Glu Phe Asp Ile Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 4

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 4

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Trp Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 5

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 5

His Tyr Ile Met Met

1 5

<210> 6

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 6

Gly Ile Tyr Ser Ser Gly Gly Ile Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 7

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 7

Arg Arg Ile Gly Val Pro Arg Arg Asp Glu Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 8

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 8

Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Trp Leu Ala

1 5 10

<210> 9

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 9

Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser

1 5

<210> 10

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 10

Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Trp Thr

1 5

Claims (59)

1.一种用于治疗遗传性血管性水肿(HAE)发作或降低HAE发作率的方法，所述方法包括：

在第一治疗期向有此需要的受试者以多剂量施用与DX-2930结合相同的表位的抗体或与DX-2930竞争结合活性血浆激肽释放酶的抗体；

其中所述抗体在所述第一治疗期以大约150mg或大约300mg的多剂量施用。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述抗体包含与DX-2930相同的CDR。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述抗体是全长抗体或其抗原结合片段。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述抗体是DX-2930。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述抗体以每两周大约300mg或每四周大约300mg的多剂量施用。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述抗体以每四周大约150mg的多剂量施用。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述抗体被配制在包含药学上可接受的载体的药物组合物中。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述药物组合物包含磷酸钠、柠檬酸、组氨酸、氯化钠和聚山梨醇酯80。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述磷酸钠的浓度为大约30mM，所述柠檬酸的浓度为大约19mM，所述组氨酸的浓度为大约50mM，所述氯化钠的浓度为大约90mM，所述聚山梨醇酯80为大约0.01％。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述抗体是皮下施用。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述受试者是具有HAE、疑似具有HAE或处于HAE风险下的人类患者。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述受试者具有I型HAE或II型HAE。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述受试者是在所述第一治疗期之前每年经历至少两次HAE发作的人类患者。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述受试者是在所述第一治疗期之前已经接受一次或多次先前的HAE治疗的人类患者。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述先前的HAE治疗包括C1-抑制剂、血浆激肽释放酶抑制剂、缓激肽受体拮抗剂、雄性激素、抗氨甲环酸、或其组合。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述先前的HAE治疗包括C1-INH、艾卡拉肽、艾替班特、达那唑、氨甲环酸或其组合。

17.根据权利要求14-16中任一项所述的方法，其中所述方法包括对于一个或多个先前的HAE治疗的减量期。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述减量期为大约2-4周。

19.根据权利要求14-18中任一项所述的方法，其中一个或多个先前的HAE治疗在所述抗体的第一剂量之前或在所述抗体的第一剂量之后的三周内终止。

20.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述受试者是没有先前的HAE治疗的人类患者。

21.根据权利要求19所述的方法，其中所述受试者是在所述抗体的第一剂量之前至少两周没有先前的HAE治疗的人类患者。

22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述受试者是在所述第一治疗期的第一剂量之前的四周内具有至少一次HAE发作的人类患者，或者是在所述第一治疗期的第一剂量之前的八周内具有至少两次HAE发作的人类患者。

23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述第一治疗期为26周或更长。

24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括对于所述第一治疗期之后的第二治疗期向所述受试者施用所述抗体。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述第二治疗期的第一剂量在所述第一治疗期的最后一次剂量后大约两周。

26.根据权利要求24或权利要求25所述的方法，其中所述第二治疗期为26周或更长。

27.根据权利要求24-26中任一项所述的方法，其中所述第二治疗期包括一个或多个剂量的大约300mg的所述抗体。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述第二治疗期包括多剂量的每两周大约300mg的所述抗体。

29.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述受试者是在所述第一治疗期之前、所述第一治疗期期间和/或所述第二治疗期期间没有HAE长期预防的人类患者，或没有涉及血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、含雌性激素药物或雄性激素的HAE治疗的人类患者。

30.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，还包括：

(a)在所述第一治疗期之后，向有此需要的受试者施用单剂量大约300mg的所述抗体；和

(b)如果所述受试者在(a)之后经历HAE发作，则向所述受试者进一步施用一个或多个剂量的大约300mg的所述抗体。

31.根据权利要求30所述的方法，其中在步骤(b)中，所述受试者每两周以大约300mg多剂量施用所述抗体。

32.根据权利要求31所述的方法，其中步骤(b)的第一剂量在所述HAE发作后的一周内。

33.根据权利要求30-32中任一项所述的方法，其中(a)的单剂量和(b)的第一剂量相隔至少10天。

34.一种治疗遗传性血管性水肿(HAE)发作或降低HAE发作率的方法，所述方法包括：

(i)向有此需要的受试者施用单剂量大约300mg的抗体，其中所述抗体与DX-2930结合相同的表位或与DX-2930竞争结合活性血浆激肽释放酶，并且其中所述受试者已经历第一HAE治疗；和

(ii)如果所述受试者在(i)之后经历HAE发作，则向所述受试者进一步施用一个或多个剂量的大约300mg的所述抗体。

35.根据权利要求34所述的方法，其中所述第一HAE治疗涉及相同的抗体。

36.根据权利要求34或权利要求35所述的方法，其中在步骤(ii)中，向所述受试者每两周以大约300mg施用多剂量的所述抗体。

37.根据权利要求34-36中任一项所述的方法，其中步骤(ii)的第一剂量在所述HAE发作后的一周内。

38.根据权利要求34-37中任一项所述的方法，其中(i)的单剂量和(ii)的第一剂量相隔至少10天。

39.根据权利要求34-38中任一项所述的方法，其中所述第一HAE治疗包括向所述受试者施用多剂量的大约150mg或300mg的所述抗体。

40.根据权利要求39所述的方法，其中所述第一HAE治疗包括向所述受试者每两周或每四周施用多剂量的大约300mg的所述抗体，或向所述受试者每四周施用多剂量的大约150mg的所述抗体。

41.根据权利要求34-40中任一项所述的方法，其中所述抗体包含与DX-2930相同的CDR。

42.根据权利要求34-41中任一项所述的方法，其中所述抗体是全长抗体或其抗原结合片段。

43.根据权利要求42所述的方法，其中所述抗体是DX-2930。

44.根据权利要求34-43中任一项所述的方法，其中所述抗体被配制在包含药学上可接受的载体的药物组合物中。

45.根据权利要求44所述的方法，其中所述药物组合物包含磷酸钠、柠檬酸、组氨酸、氯化钠和聚山梨醇酯80。

46.根据权利要求45所述的方法，其中所述抗体配制在大约30mM磷酸钠、大约19mM柠檬酸、大约50mM组氨酸、大约90mM氯化钠和大约0.01％聚山梨醇酯80中。

47.根据权利要求34-46中任一项所述的方法，其中所述抗体是皮下施用。

48.根据权利要求34-47中任一项所述的方法，其中所述受试者是具有HAE、疑似具有HAE或处于HAE风险下的人类患者。

49.根据权利要求34-48中任一项所述的方法，其中所述受试者是具有I型HAE或II型HAE的人类患者。

50.根据权利要求34-49中任一项所述的方法，其中所述受试者是在所述第一HAE治疗之前每年已经历至少两次HAE发作的人类患者。

51.根据权利要求34-50中任一项所述的方法，其中所述受试者是在所述第一HAE治疗之前已接受一次或多次先前的HAE治疗的人类患者。

52.根据权利要求51所述的方法，其中所述先前的HAE治疗包括C1-抑制剂、血浆激肽释放酶抑制剂、缓激肽受体拮抗剂、雄性激素、抗氨甲环酸、或其组合。

53.根据权利要求52所述的方法，其中所述先前的HAE治疗包含C1-抑制剂、艾卡拉肽、艾替班特、达那唑、氨甲环酸或其组合。

54.根据权利要求51-53中任一项所述的方法，其中所述受试者已经历了对于一个或多个先前的HAE治疗的减量期。

55.根据权利要求54所述的方法，其中所述减量期为大约2-4周。

56.根据权利要求51-55中任一项所述的方法，其中一个或多个先前的HAE治疗在所述第一HAE治疗中在所述抗体的第一剂量之前或在所述第一HAE治疗中在所述抗体的第一剂量之后的三周内终止。

57.根据权利要求34-55中任一项所述的方法，其中所述受试者是在所述第一HAE治疗之前至少两周没有先前的治疗的人类患者。

58.根据权利要求34-57中任一项所述的方法，其中所述受试者是在所述第一HAE治疗之前的四周内具有至少一次HAE发作的人类患者，或者是在所述第一HAE治疗之前的八周内具有至少两次HAE发作的人类患者。

59.根据权利要求34-58中任一项所述的方法，其中所述受试者是在所述第一HAE治疗之前、所述第一HAE治疗期间和/或在(i)和(ii)期间没有HAE长期预防的人类患者，或没有涉及血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂、含雌性激素药物或雄性激素的HAE治疗的人类患者。