CN115297927A - 血浆激肽释放酶抑制剂及其用于治疗儿科遗传性血管性水肿发作的用途 - Google Patents

血浆激肽释放酶抑制剂及其用于治疗儿科遗传性血管性水肿发作的用途 Download PDF

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Abstract

本文提供了使用与活性血浆激肽释放酶结合的抗体用例如每两周约150mg或每四周约150mg的特定治疗方案来治疗和预防儿科亚群中的遗传性血管性水肿发作的方法。

Description

血浆激肽释放酶抑制剂及其用于治疗儿科遗传性血管性水肿 发作的用途
相关申请
本申请根据美国法典第35篇第119条(e)款要求2020年1月13日提交的美国临时申请号62/960,333的权益，所述临时申以引用的方式整体并入本文。
背景技术
血浆激肽释放酶是接触系统的丝氨酸蛋白酶组分，并且是不同炎性、心血管、感染(败血症)和肿瘤疾病的潜在药物靶标(Sainz I.M.等人,Thromb Haemost 98,77-83,2007)。接触系统在暴露于外来或带负电荷的表面中时被因子XIIa激活或者在内皮细胞表面上被脯氨酰羧肽酶激活(Sainz I.M.等人,Thromb Haemost 98,77-83,2007)。血浆激肽释放酶的激活经由其对因子XII的反馈激活来扩大内因性凝血，并且经由产生促炎症九肽缓激肽来增强炎症。作为循环中的主要激肽原酶，血浆激肽释放酶主要负责脉管系统中缓激肽的产生。血浆激肽释放酶的主要天然抑制剂C1抑制剂蛋白(C1-INH)的遗传缺陷导致遗传性血管性水肿(HAE)。HAE患者遭受急性疼痛性水肿发作，这种发作往往由未知的触发因素诱发(Zuraw B.L.等人,N Engl J Med 359,1027-1036,2008)。
发明内容
本文提供了使用能够结合和抑制呈活性形式的人血浆激肽释放酶(pKal)的抗体治疗遗传性血管性水肿(HAE)发作、降低HAE发作率，或阻断HAE发作的方案，所述抗体为例如具有与DX-2930(又名SHP643，拉那鲁单抗(lanadelumab))相同的互补决定区(CDR)的抗体。
本公开的方面涉及用于治疗遗传性血管性水肿(HAE)发作或降低HAE发作率的方法，所述方法包括在第一治疗期内向有需要的人类受试者施用包含与DX-2930相同的互补决定区(CDR)的抗体；其中在所述第一治疗期中，所述抗体每两周或每四周按多剂量以约150mg或300mg被施用给人类受试者；并且其中所述人类受试者患有、疑似患有HAE，或处于HAE的风险中并且是在2岁与小于12岁之间的儿科受试者。在一些实施方案中，所述人类受试者在2岁与小于6岁之间并且每四周以约150mg施用所述抗体。在一些实施方案中，所述人类受试者在6岁与小于12岁之间并且每两周以约150mg施用所述抗体。在一些实施方案中，所述人类受试者在2岁与小于6岁之间并且每四周以约300mg施用所述抗体。在一些实施方案中，所述人类受试者在6岁与小于12岁之间并且每两周以约300mg施用所述抗体。
在一些实施方案中，所述抗体是全长抗体或其抗原结合片段。在一些实例中，所述抗体包含由SEQ ID NO:3所示的重链可变区和/或由SEQ ID NO:4所示的轻链可变区。在一些实例中，所述抗体包含由SEQ ID NO:1所示的重链和由SEQ ID NO:2所示的轻链。在一些实施方案中，所述抗体是DX-2930(也称为拉那鲁单抗)。在一些实施方案中，所述抗体是
Figure BDA0003842956920000021
(拉那鲁单抗(lanadelumab-flyo))。在一些实施方案中，所述抗体是皮下施用的。
在本文所述的任何方法中，所述抗体可以被配制成包含药学上可接受的载剂的药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物包含磷酸钠、柠檬酸、组氨酸、氯化钠和聚山梨醇酯80。在一个实例中，磷酸钠的浓度为约30mM，柠檬酸的浓度为约19mM，组氨酸的浓度为约50mM，氯化钠的浓度为约90mM，并且聚山梨醇酯80为约0.01％。
在一些实施方案中，人类受试者患有I型或II型HAE。在一些实施方案中，人类受试者在第一治疗期之前具有每12周至少一次HAE发作的HAE发作率。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括在第一治疗期之后的第二治疗期向所述受试者施用所述抗体。
下文描述中阐述了本发明的一个或多个实施方案的细节。本发明的其他特征和优势将根据以下附图和几个实施方案的详细描述以及根据所附权利要求而显而易知。
附图说明
图1示出了示例性给药方案，包括筛查期、观察期、第一治疗期(“治疗期A”)、第二治疗期(“治疗期B”)和随访期。在第一和第二治疗期期间，2岁与小于6岁之间的患者每四周被施用150mg拉那鲁单抗，持续26周，而6岁与小于21岁之间的患者每两周被施用150mg拉那鲁单抗，持续26周。
具体实施方式
定义
为了方便，在本发明的进一步描述之前，在此定义本说明书、实施例以及所附权利要求书中采用的某些术语。其他术语在本说明书中出现时进行定义。
除非上下文中另外明确指定，否则单数形式“一种/一个(a)”、“一种/一个(an)”和“所述(the)”包括复数指代物。
如本文所用，术语“约”是指特定值+/-5％。例如，约150mg的抗体包括在142.5mg–157.5mg之间的任何量的抗体。
术语“抗体”是指能够通过位于免疫球蛋白分子可变区中的至少一个抗原识别位点特异性地结合靶标(诸如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等)的免疫球蛋白分子。抗体可以包括至少一条包含重链免疫球蛋白可变结构域(VH)的重链(H)、至少一条包含轻链免疫球蛋白可变结构域(VL)的轻链，或两者。例如，抗体可以包括重(H)链可变区(本文缩写为VH或HV)和轻(L)链可变区(本文缩写为VL或LV)。在另一个实例中，抗体包括两个重(H)链可变区和两个轻(L)链可变区。
如本文所用，术语“抗体”不仅涵盖完整的(即全长)多克隆或单克隆抗体，而且还涵盖其抗原结合片段(诸如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、单链(scFv)、结构域抗体(dAb)片段(deWildt等人,Euro.J.Immunol.(1996)26(3):629-639)、其任何突变体、包含抗体部分的融合蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、双抗体、线性抗体、单链抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)以及免疫球蛋白分子的包含具有所需特异性的抗原识别位点的任何其他经修饰的构型(包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和共价修饰的抗体)。抗体包括任何类别的抗体，诸如IgD、IgE、IgG、IgA或IgM(或其亚类)，并且所述抗体不需要属于任何特定类别。根据抗体的重链的恒定结构域的氨基酸序列，可以将免疫球蛋白归属为不同类别。有五种主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的几种可以被进一步划分成亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。与不同类别的免疫球蛋白对应的重链恒定结构域分别被称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是熟知的。抗体可以来自任何来源，但灵长类动物(人类和非人类灵长类动物)和灵长类动物源化的抗体是优选的。
VH和/或VL区可以包括天然存在的可变结构域的全部或部分氨基酸序列。例如，该序列可以省略一个、两个或更多个N末端或C末端氨基酸、内部氨基酸，可以包括一个或多个插入或附加的末端氨基酸，或者可以包括其他改变。在一个实施方案中，包含免疫球蛋白可变结构域序列的多肽可以与另一个免疫球蛋白可变结构域序列缔合从而形成抗原结合位点，例如优先与血浆激肽释放酶相互作用的结构。
VH和VL区可以被进一步细分为高变区(称为“互补决定区”(“CDR”))，该高变区中散布有更保守的区域(称为“框架区”(“FR”))。框架区和CDR的范围已被定义(参见Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH出版号91-3242；以及Chothia,C.等人(1987)J.Mol.Biol.196:901-917)。本文使用Kabat定义。每个VH和VL通常由三个CDR和四个FR构成，该三个CDR和四个FR从氨基末端至羧基末端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
除了VH或VL区以外，抗体的重链或轻链还可以进一步包括重链或轻链恒定区的全部或部分。在一个实施方案中，所述抗体是两条重免疫球蛋白链和两条轻免疫球蛋白链的四聚体，其中所述重和轻免疫球蛋白链通过例如二硫键互相连接。在IgG中，重链恒定区包括三个免疫球蛋白结构域：CH1、CH2和CH3。轻链恒定区包括CL结构域。该重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。所述抗体的恒定区通常介导所述抗体与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一成分(C1q))的结合。免疫球蛋白的轻链可以是κ型或λ型。在一个实施方案中，抗体是经糖基化的。抗体可以具有抗体依赖性细胞毒性和/或补体介导的细胞毒性的功能。
抗体的一个或多个区可以是人的或效果上(effectively)是人的。例如，可变区中的一个或多个可变区可以是人的或效果上是人的。例如，CDR中的一个或多个CDR可以是人的，例如HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2和/或LC CDR3。轻链(LC)和/或重链(HC)CDR中的每一个均可以是人的。HC CDR3可以是人的。框架区中的一个或多个框架区可以是人的，例如HC和/或LC的FR1、FR2、FR3和/或FR4。例如，Fc区可以是人的。在一个实施方案中，所有框架区都是人的，例如衍生自人的体细胞，例如产生免疫球蛋白的造血细胞或非造血细胞。在一个实施方案中，人序列是种系序列，例如，由种系核酸编码的种系序列。在一个实施方案中，所选Fab的框架(FR)残基可以被转化为在最相似的灵长类动物种系基因(尤其是人种系基因)中的相应残基的氨基酸类型。所述恒定区中的一个或多个恒定区可以是人的或实际上是人的。例如，至少70％、75％、80％、85％、90％、92％、95％、98％或100％的免疫球蛋白可变结构域、恒定区、恒定结构域(CH1、CH2、CH3和/或CL1)或者整个抗体可以是人的或效果上是人的。
抗体可以由免疫球蛋白基因或其区段编码。示例性人免疫球蛋白基因包括κ、λ、α(IgA1和IgA2)、γ(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、δ、ε和μ恒定区基因，以及许多免疫球蛋白可变区基因。全长免疫球蛋白“轻链”(约25KDa或约214个氨基酸)由位于NH2-末端的可变区基因(约110个氨基酸)和位于COOH-末端的κ或λ恒定区基因编码。全长免疫球蛋白“重链”(约50KDa或约446个氨基酸)类似地由可变区基因(约116个氨基酸)和其他前述恒定区基因之一(例如，γ(编码约330个氨基酸))编码。人HC的长度变化很大，因为HC CDR3从约3个氨基酸残基至超过35个氨基酸残基不等。
术语全长抗体的“抗原结合片段”是指保留特异性地结合所关注的靶标的能力的完整抗体的一个或多个片段。涵盖在全长抗体的术语“抗原结合片段”内并且保留功能性的结合片段的实例包括(i)Fab片段，其是一种由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，其是一种包括在铰链区通过二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)dAb片段(Ward等人,(1989)Nature341:544-546)，其由VH结构域组成；和(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由分开的基因编码，但它们可以使用重组方法通过合成接头联接起来，该合成接头使它们能够被制成单个蛋白质链，其中VL和VH区配对从而形成称为单链Fv(scFv)的单价分子。参见例如，美国专利号5,260,203、4,946,778和4,881,175；Bird等人(1988)Science 242:423-426；以及Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883。可以使用任何适当的技术(包括本领域技术人员已知的常规技术)获得抗体片段。
术语“单特异性抗体”是指对特定靶标(例如表位)显示出单一结合特异性和亲和力的抗体。该术语包括“单克隆抗体”或“单克隆抗体组合物”，如本文所用的所述单克隆抗体组合物是指具有单分子组成的抗体或其片段的制备物，而不管抗体是如何产生的。抗体通过如下方式“种系化(germlined)”：将框架区中的一个或多个非种系氨基酸恢复为抗体的相应种系氨基酸，只要基本保留结合特性即可。
抑制常数(Ki)提供了抑制剂效力的量度；它是将酶活性降低一半所需的抑制剂浓度，并且不依赖于酶或底物浓度。表观Ki(Ki,app)在不同底物浓度下通过如下方式获得：测量不同浓度的抑制剂(例如抑制结合蛋白)对反应程度(例如酶活性)的抑制作用；将作为抑制剂浓度的函数的伪一级速率常数的变化拟合到莫里森方程式(Morrison equation)(方程式1)，从而得到表观Ki值的估计值。Ki是从提取自Ki,app与底物浓度的曲线的线性回归分析中的y截距获得的。
Figure BDA0003842956920000071
方程式1
其中v＝测量的速度；v0＝在没有抑制剂的情况下的速度；Ki,app＝表观抑制常数；I＝总抑制剂浓度；并且E＝总酶浓度。
如本文所用，“结合亲和力”是指表观缔合常数或KA。KA是解离常数(KD)的倒数。例如，结合抗体可以对特定靶分子(例如血浆激肽释放酶)具有至少105、106、107、108、109、1010和1011M-1的结合亲和力。相对于第二靶标，结合抗体与第一靶标的更高亲和力结合可以由比结合第二靶标的KA(或数值KD)更高的结合第一靶标的KA(或更小的数值KD)来指示。在此类情况下，相对于第二靶标(例如，处于第二构象的蛋白质或其模拟物；或第二蛋白质)，结合抗体对第一靶标(例如，处于第一构象的相同蛋白质或其模拟物)具有特异性。结合亲和力的差异(例如，用于特异性或其他比较)可以是至少1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、15倍、20倍、30倍、40倍、50倍、70倍、80倍、90倍、100倍、500倍、1000倍、10,000倍或105倍。
结合亲和力可以通过多种方法确定，所述方法包括平衡透析、平衡结合、凝胶过滤、ELISA、表面等离子体共振或光谱学(例如，使用荧光测定法)。用于评价结合亲和力的示例性条件是在HBS-P缓冲液(10mM HEPES pH 7.4、150mM NaCl、0.005％(v/v)表面活性剂P20)中。这些技术可以用于测量作为结合蛋白(或靶标)浓度的函数的被结合的结合蛋白和游离的结合蛋白的浓度。根据以下等式，被结合的结合蛋白的浓度([被结合])与游离的结合蛋白的浓度([游离])和靶标上结合蛋白的结合位点的浓度有关，其中(N)是每个靶分子的结合位点数目：
[被结合]＝N·[游离]/((1/KA)+[游离])。
并不总是需要精确确定KA，因为有时获得亲和力的定量测量值(例如，使用诸如ELISA或FACS分析的方法确定的亲和力的定量测量值)就足够了，所述亲和力与KA成比例，并且因此可以被用于比较，诸如确定较高的亲和力是否例如高了2倍，以获得亲和力的定性测量，或者以获得对亲和力的推断，例如，根据功能测定(例如，体外或体内测定)中的活性的推断。
术语“结合抗体”(或在本文可互换使用的“结合蛋白”)是指可以与靶分子相互作用的抗体。术语“靶分子”可与“配体”互换使用。“血浆激肽释放酶结合抗体”是指可以与血浆激肽释放酶相互作用(例如，结合)的抗体，并且尤其包括优先或特异性地与血浆激肽释放酶相互作用并且/或者抑制血浆激肽释放酶的抗体。如果与在不存在抗体的情况下和在相同条件下的血浆激肽释放酶的活性相比，抗体引起血浆激肽释放酶活性降低，则抗体抑制血浆激肽释放酶。
“保守的氨基酸取代”是氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替代。具有相似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中被定义。这些家族包括具有以下的氨基酸：碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-支化的侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
结合蛋白的一个或多个框架和/或CDR氨基酸残基有可能包括相对于本文所述的结合蛋白的一个或多个突变(例如，取代(例如，非必需氨基酸的一个或多个保守取代)、插入或缺失)。血浆激肽释放酶结合蛋白可能具有相对于本文所述的结合蛋白的突变(例如，取代(例如，非必需氨基酸的一个或多个保守取代)、插入或缺失)(例如，至少一个、两个、三个或四个，和/或少于15、12、10、9、8、7、6、5、4、3或2个突变)，例如对蛋白质功能没有显著影响的突变。突变可以存在于框架区、CDR和/或恒定区中。在一些实施方案中，突变存在于框架区中。在一些实施方案中，突变存在于CDR中。在一些实施方案中，突变存在于恒定区中。可以例如通过评估突变是否是保守的或通过Bowie等人Science(1990)247:1306-1310的方法来预测特定的取代是否可以被忍受，即不会对生物学特性(诸如结合活性)产生不利影响。
“效果上是人的”免疫球蛋白可变区是这样的免疫球蛋白可变区，该免疫球蛋白可变区包括足够数量的人框架氨基酸位置从而使得该免疫球蛋白可变区不会在正常人中引发免疫原性反应。“效果上是人的”抗体是这样的抗体，该抗体包括足够数量的人氨基酸位置从而使得该抗体不会在正常人中引发免疫原性反应。
“表位”是指靶化合物上被结合蛋白(例如抗体诸如Fab或全长抗体)结合的位点。在靶化合物是蛋白质的情况下，该位点可以完全由氨基酸组分构成、完全由蛋白质的氨基酸的化学修饰(例如糖基部分)构成，或者由它们的组合构成。重叠表位包括至少一个常见的氨基酸残基、糖基基团、磷酸酯基团、硫酸酯基团或其他分子特征。
“人源化”免疫球蛋白可变区是这样的免疫球蛋白可变区，该免疫球蛋白可变区被修饰成包括足够数量的人框架氨基酸位置，从而使得该免疫球蛋白可变区不会在正常人中引发免疫原性反应。“人源化”免疫球蛋白的描述包括例如U.S.6,407,213和U.S.5,693,762。
“分离的”抗体是指这样的抗体，该抗体可获自的天然样本中的至少一种组分的至少90％已从该抗体中被去除。如果所关注的物质或物质群体在重量-重量的基础上为至少5％、10％、25％、50％、75％、80％、90％、92％、95％、98％或99％纯的，则抗体可以具有“至少”一定程度的纯度。
本文所述的方法涉及向有需要的人类受试者施用多剂量的抗体。术语“患者”、“受试者”或“宿主”可以互换使用。受试者可以是已接受过在先HAE治疗(诸如涉及本文所述的抗体的治疗)的受试者。在一些实施方案中，受试者是儿科受试者(例如，婴儿、儿童或青少年受试者)。在一些实施方案中，人类受试者是小于12岁的儿科受试者。在一些实施方案中，人类受试者是在2岁与12岁之间的儿科受试者。在一些实施方案中，人类受试者是在2岁与小于12岁之间的儿科受试者。在一些实施方案中，人类受试者是在2岁与6岁之间的儿科受试者。在一些实施方案中，人类受试者是在2岁与小于6岁之间的儿科受试者。在一些实施方案中，人类受试者是在6岁与12岁之间的儿科受试者。在一些实施方案中，人类受试者是在6岁与小于12岁之间的儿科受试者。
术语“前激肽释放酶”和“前血浆激肽释放酶”在本文中可互换使用，并且是指活性血浆激肽释放酶的酶原形式，其也称为前激肽释放酶。
如本文所用，术语“基本同一”(或“基本同源”)在本文中用于指第一氨基酸或核酸序列含有足够数量的与第二氨基酸或核酸序列同一或等效的(例如，具有相似的侧链(例如，保守的氨基酸取代))氨基酸残基或核苷酸，从而使得所述第一和第二氨基酸或核酸序列具有相似活性(或编码具有相似活性的蛋白质)，所述活性例如结合活性、结合偏好或生物活性。在抗体的情况下，第二抗体具有相同的特异性并且相对于相同抗原具有至少50％、至少25％或至少10％的亲和力。
可以通过任何本领域已知的方法确定统计显著性。示例性统计检验包括：学生T检验、Mann Whitney U非参数检验和Wilcoxon非参数统计检验。一些具有统计学意义的关系的P值小于0.05或0.02。特定的结合蛋白可能会表现出具有统计学意义(例如，P值<0.05或0.02)的差异例如在特异性或结合力方面的差异。例如表示两种状态之间可区分的定性或定量差异的术语“诱导”、“抑制”、“增强”、“提升”、“增加”、“减少”等可以是指两种状态之间的差异，例如统计学显著的差异。
“治疗有效剂量”优选地相对于未治疗的受试者将可测量参数(例如血浆激肽释放酶活性)调节了统计学显著的程度，或者调节了至少约20％、更优选地至少约40％、甚至更优选地至少约60％以及仍更优选地至少约80％。化合物调节可测量参数(例如疾病相关参数)的能力可以在预测在人类疾病和病状中的功效的动物模型系统中进行评估。可替代地，可以通过检查化合物在体外调节参数的能力来评估组合物的这种特性。
如本文所用的术语“治疗”是指将包含一种或多种活性剂的组合物施用于患有HAE、具有HAE的症状、疑似患有HAE，或具有患上HAE的易感性或风险的受试者，目的是治愈、治好、缓和、缓解、改变、补救、改善(ameliorate)、改良(improve)或影响该疾病、该疾病的症状或患该疾病的易感性。“防治性治疗(Prophylactic treatment)”也称为“预防性治疗(preventive treatment)”，是指旨在保护一个人免受他或她已经或可能接触到的疾病的影响，或者减少他或她已经或可能接触到的疾病风险的治疗。在一些实施方案中，本文所述的治疗方法旨在预防HAE的发生和/或复发。
术语“预防”受试者的疾病是指使受试者经受药物治疗(例如药物的施用)以使得该疾病的至少一种症状得到预防，即在不希望的病状(例如，宿主动物的疾病或其他不希望的状态)的临床表现出现之前施用，以便保护宿主免于罹患不希望的病状。“预防”疾病也可以被称为“防治”或“防治性治疗”。
“防治有效量”是指在必要的剂量和时间段内有效地实现所需的防治结果的量。通常，因为在疾病之前或疾病的早期阶段在受试者中使用防治剂量，所以防治有效量将小于治疗有效量。
与血浆激肽释放酶(pKal)结合的抗体
用于本文所述的方法的血浆激肽释放酶结合抗体(抗pKal抗体)可以是全长的(例如，IgG(包括IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA(包括，IgA1、IgA2)、IgD和IgE)，或者可以仅包括抗原结合片段(例如，Fab、F(ab')2或scFv片段)。结合抗体可以包括两条重链免疫球蛋白和两条轻链免疫球蛋白或者可以是单链抗体。血浆激肽释放酶结合抗体可以是重组蛋白，诸如人源化抗体、CDR移植抗体、嵌合抗体、去免疫抗体或体外产生的抗体，并且可以任选地包括源自人种系免疫球蛋白序列的恒定区。在一个实施方案中，血浆激肽释放酶结合抗体为单克隆抗体。
在一个方面，本公开的特征在于结合血浆激肽释放酶(例如，人血浆激肽释放酶和/或鼠激肽释放酶)并包括至少一个免疫球蛋白可变区的抗体(例如，分离的抗体)。例如，所述抗体包括重链(HC)免疫球蛋白可变结构域序列和/或轻链(LC)免疫球蛋白可变结构域序列。在一个实施方案中，所述抗体结合至并抑制血浆激肽释放酶，例如人血浆激肽释放酶和/或鼠激肽释放酶。
在一些实施方案中，本文所述的抗体具有与DX-2930(也称为SHP643或拉那鲁单抗)相同的CDR序列，例如，如SEQ ID NO:5-7所示的重链CDR序列和如SEQ ID NO:8-10所示的轻链CDR序列。在一些实施方案中，所述抗体包含与DX-2930相同的CDR序列和与本文所述的LC可变结构域(例如，整体或在框架区中)至少85％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的LC免疫球蛋白可变结构域序列。在一些实施方案中，所述抗体包含与DX-2930相同的CDR序列以及与本文所述的HC可变结构域(例如，整体或在框架区中)至少85％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的HC免疫球蛋白可变结构域序列。在一些实施方案中，所述抗体包含与DX-2930相同的CDR序列以及与本文所述的LC序列(例如，整体或在框架区中)至少85％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的LC序列。在一些实施方案中，所述抗体包含与DX-2930相同的CDR序列以及与本文所述的HC序列(例如，整体或在框架区中)至少85％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的HC序列。
血浆激肽释放酶结合蛋白可以是分离的抗体(例如，至少70％、80％、90％、95％或99％不含其他蛋白质)。在一些实施方案中，血浆激肽释放酶结合抗体或其组合物是从与血浆激肽释放酶结合抗体相比无活性或具有部分活性(例如，以5000nM或更大的Ki,app结合血浆激肽释放酶)的抗体切割片段(例如DX-2930)中分离的。例如，血浆激肽释放酶结合抗体至少70％不含此类抗体切割片段；在其他实施方案中，结合抗体至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或甚至100％不含无活性或具有部分活性的抗体切割片段。
血浆激肽释放酶结合抗体可以另外抑制血浆激肽释放酶，例如人血浆激肽释放酶。
在一些实施方案中，血浆激肽释放酶结合抗体不结合前激肽释放酶(例如，人前激肽释放酶和/或鼠前激肽释放酶)，但是结合至血浆激肽释放酶的活性形式(例如，人血浆激肽释放酶和/或鼠激肽释放酶)。
在某些实施方案中，抗体在血浆激肽释放酶或其片段的催化结构域的活性位点处或附近结合，或者结合与血浆激肽释放酶的活性位点重叠的表位。
所述抗体可以结合至血浆激肽释放酶(例如人血浆激肽释放酶)，其中结合亲和力为至少105、106、107、108、109、1010和1011M-1。在一个实施方案中，所述抗体以比1×10-3、5×10-4s-1或1×10-4s-1更慢的解离速率常数(Koff)结合人血浆激肽释放酶。在一个实施方案中，所述抗体以比1×102、1×103或5×103M-1s-1更快的结合速率常数(Kon)结合至人血浆激肽释放酶。在一个实施方案中，所述抗体结合至血浆激肽释放酶，但不结合至组织激肽释放酶和/或血浆前激肽释放酶(例如，所述抗体结合至组织激肽释放酶和/或血浆前激肽释放酶的效率比它结合至血浆激肽释放酶的效率低(例如，低5倍、10倍、50倍、100倍或1000倍或根本不结合，例如与阴性对照相比))。
在一个实施方案中，所述抗体例如以小于10-5、10-6、10-7、10-8、10-9和10-10M的Ki抑制人血浆激肽释放酶活性。所述抗体可以具有例如小于100nM、10nM、1nM、0.5nM或0.2nM的IC50。例如，所述抗体可以调节血浆激肽释放酶活性，以及因子XIIa(例如，从因子XII)和/或缓激肽(例如，从高分子量激肽原(HMWK))的产生。所述抗体可以抑制血浆激肽释放酶活性，以及/或者因子XIIa(例如，从因子XII)和/或缓激肽(例如，从高分子量激肽原(HMWK))的产生。所述抗体对人血浆激肽释放酶的亲和力可以通过小于100nm、小于10nM、小于5nM、小于1nM、小于0.5nM的KD来表征。在一个实施方案中，所述抗体抑制血浆激肽释放酶，但不抑制组织激肽释放酶(例如，所述抗体抑制组织激肽释放酶的效率比它抑制血浆激肽释放酶的效率低(例如，低5倍、10倍、50倍、100倍或1000倍或根本不一致，例如与阴性对照相比))。
在一些实施方案中，所述抗体具有小于1000nM、500nM、100nM、5nM、1nM、0.5nM或0.2nM的表观抑制常数(Ki,app)。
血浆激肽释放酶结合抗体的HC和LC可变结构域序列可以包含在单个多肽(例如，scFv)中，或者包含在不同的多肽(例如，IgG或Fab)上。
在一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列是相同多肽链的组分。在另一个实施方案中，HC和LC可变结构域序列是不同多肽链的组分。例如，所述抗体是IgG，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。所述抗体可以是可溶性Fab。在其他实施方式中，所述抗体包括Fab2'、scFv、微抗体、scFv::Fc融合物、Fab::HSA融合物、HSA::Fab融合物、Fab::HSA::Fab融合物，或其他包含本文的结合蛋白之一的抗原结合位点的分子。这些Fab的VH和VL区可以作为IgG、Fab、Fab2、Fab2'、scFv、PEG化Fab、PEG化scFv、PEG化Fab2、VH::CH1::HSA+LC、HSA::VH::CH1+LC、LC::HSA+VH::CH1、HSA::LC+VH::CH1或其他适当的构造提供。
在一个实施方案中，所述抗体是人或人源化抗体或者在人类中是非免疫原性的。例如，所述抗体包含一个或多个人抗体框架区，例如所有人框架区，或与人框架区至少85％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的框架区。在一个实施方案中，所述抗体包括人Fc结构域，或与人Fc结构域至少95％、96％、97％、98％或99％同一的Fc结构域。
在一个实施方案中，所述抗体是灵长类动物或灵长类动物源化抗体或者在人类中是非免疫原性的。例如，所述抗体包括一个或多个灵长类动物抗体框架区，例如所有灵长类动物框架区，或与灵长类动物框架区至少85％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一的框架区。在一个实施方案中，所述抗体包括灵长类动物Fc结构域，或与灵长类动物Fc结构域至少95％、96％、97％、98％或99％同一的Fc结构域。“灵长类动物”包括人类(智人(Homo sapiens))、黑猩猩(黑猩猩(Pan troglodytes)和矮黑猩猩(Pan paniscus)(倭黑猩猩))、大猩猩(大猩猩(Gorilla gorilla))、长臂猿、猴子、狐猴、指猴(指猴(Daubentonia madagascariensis))和跗猴。在一些实施方案中，灵长类动物抗体对人血浆激肽释放酶的亲和力的特征在于KD小于1000、500、100、10、5、1或0.5nM，例如小于10nM、小于1nM或小于0.5nM。
在某些实施方案中，所述抗体不包含来自小鼠或兔的序列(例如，不是鼠或兔抗体)。
在一些实施方案中，本文所述的方法中使用的抗体可以是如本文所述的DX-2930或其功能变体。
在一个实例中，DX-2930的功能变体包含与DX-2930相同的互补决定区(CDR)。在另一个实例中，与DX-2930的VH和VL中的FR相比，DX-2930的功能变体可能在VH或VL的FR中含有一个或多个突变(例如，保守取代)。优选地，此类突变不会发生在预计与CDR中的一个或多个CDR发生相互作用的残基处，这可以通过常规技术确定。在其他实施方案中，本文所述的功能变体在DX-2930的CDR区中的一个或多个CDR区内含有一个或多个突变(例如，1个、2个或3个突变)。优选地，此类功能变体保留与亲本相同的负责抗原结合的区域/残基。在又其他实施方案中，DX-2930的功能变体可以包含含有与DX-2930的VH的氨基酸序列至少85％(例如，90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)同一的氨基酸序列的VH链，和/或具有与DX-2930的VL的氨基酸序列至少85％(例如，90％、92％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)同一的氨基酸序列的VL链。这些变体能够与血浆激肽释放酶的活性形式结合，并且优选地不结合至前激肽释放酶。
使用以下文献的算法确定两个氨基酸序列的“同一性百分比”：Karlin和AltschulProc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264-68,1990，按照Karlin和AltschulProc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-77,1993修改。此种算法被并入NBLAST和XBLAST程序(2.0版)中(Altschul等人J.Mol.Biol.215:403-10,1990)。可以使用XBLAST程序，得分＝50，字长＝3进行BLAST蛋白质搜索，以获得与所关注的蛋白质分子同源的氨基酸序列。如果两个序列之间存在间隙，则可以如Altschul等人,Nucleic Acids Res.25(17):3389-3402,1997所述的那样使用Gapped BLAST。当使用BLAST和Gapped BLAST程序时，可以使用各自程序的默认参数(例如，XBLAST和NBLAST)。
在一些实施方案中，本文所述的方法和组合物中使用的抗体可以是DX-2930抗体(也称为“拉那鲁单抗”)。下面提供了DX-2930的重链和轻链全长和可变序列，其中信号序列以斜体表示。CDR以粗体表示并加有下划线。
DX-2930重链氨基酸序列(451个氨基酸，49439.02Da)
Figure BDA0003842956920000171
Figure BDA0003842956920000181
DX-2930轻链氨基酸序列(213个氨基酸，23419.08Da)
Figure BDA0003842956920000182
DX-2930重链可变结构域氨基酸序列
Figure BDA0003842956920000183
DX-2930轻链可变结构域氨基酸序列
Figure BDA0003842956920000184
表1.DX-2930的CDR。
CDR 氨基酸序列
重链CDR1 HYIMM(SEQ ID NO:5)
重链CDR2 GIYSSGGITVYADSVKG(SEQ ID NO:6)
重链CDR3 RRIGVPRRDEFDI(SEQ ID NO:7)
轻链CDR1 RASQSISSWLA(SEQ ID NO:8)
轻链CDR2 KASTLES(SEQ ID NO:9)
轻链CDR3 QQYNTYWT(SEQ ID NO:10)
抗体制备
如本文所述的抗体(例如，DX-2930)可以通过本领域已知的任何方法制备。参见例如，Harlow和Lane,(1988)Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring HarborLaboratory；New York和Greenfield,(2013)Antibodies:A Laboratory Manual,第二版,Cold Spring Harbor Laboratory Press.
可以将编码所关注的抗体(例如，DX-2930)的序列维持在宿主细胞的载体中，并且然后可以扩增和冷冻宿主细胞以备将来使用。在替代方案中，多核苷酸序列可以被用于基因操作以“人源化”抗体或者以提高抗体的亲和力(亲和力成熟)或其他特性。例如，如果抗体被用于人的临床试验和治疗，则恒定区可以被工程化成更类似于人恒定区以避免免疫应答。可能需要对抗体序列进行基因操作，以获得对靶抗原的更大亲和力和抑制PKal活性的更大功效。对于本领域技术人员而言显而易见的是，可以对抗体进行一个或多个多核苷酸改变并且仍然保持该抗体对靶抗原的结合特异性。
在其他实施方案中，可以通过使用已被工程化成表达特定人免疫球蛋白的可商购获得的小鼠获得完全人抗体。被设计为产生更理想的(例如，完全人抗体)或更稳健的免疫应答的转基因动物也可以被用于产生人源化或人抗体。此种技术的实例是来自Amgen,Inc.(Fremont,Calif.)的
Figure BDA0003842956920000191
和来自Medarex,Inc.(Princeton,N.J.)的
Figure BDA0003842956920000192
和TC MouseTM。在另一个替代方案中，可以通过噬菌体展示或酵母技术重组地制备抗体。参见例如，美国专利号5,565,332、5,580,717、5,733,743和6,265,150；和Winter等人,(1994)Annu.Rev.Immunol.12:433-455。可替代地，噬菌体展示技术(McCafferty等人,(1990)Nature 348:552-553)可以被用于在体外从来自未经免疫的供体的免疫球蛋白可变(V)结构域基因库产生人抗体和抗体片段。
完整抗体(全长抗体)的抗原结合片段可以通过常规方法制备。例如，F(ab')2片段可以通过用胃蛋白酶消化抗体分子来产生，并且Fab片段可以通过还原F(ab')2片段的二硫桥来产生。
基因工程化抗体(诸如人源化抗体、嵌合抗体、单链抗体和双特异性抗体)可以通过例如常规重组技术产生。在一个实例中，编码对靶抗原有特异性的单克隆抗体的DNA可以容易地被分离出来或合成。将该DNA置于一种或多种表达载体中，然后将该一种或多种表达载体转染到原本不产生免疫球蛋白的宿主细胞诸如大肠杆菌细胞、猿COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，或骨髓瘤细胞中，以获得单克隆抗体在重组宿主细胞中的合成。参见例如PCT公开号WO87/04462。然后可以例如用人重链和轻链恒定结构域的编码序列代替同源鼠序列(Morrison等人,(1984)Proc.Nat.Acad.Sci.81:6851)或通过将非免疫球蛋白多肽的全部或部分编码序列共价联接到免疫球蛋白编码序列来修饰该DNA。以这种方式，可以制备具有靶抗原结合特异性的基因工程化抗体，诸如“嵌合”或“杂合”抗体。
为产生“嵌合抗体”而开发的技术在本领域是熟知的。参见例如，Morrison等人(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81,6851；Neuberger等人(1984)Nature 312,604；以及Takeda等人(1984)Nature 314:452。
用于构建人源化抗体的方法也是本领域熟知的。参见例如，Queen等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,86:10029-10033(1989)。在一个实例中，按照本领域已知的方法对亲本非人抗体的VH和VL的可变区进行三维分子建模分析。接下来，使用相同的分子建模分析鉴定预测对正确CDR结构的形成很重要的框架氨基酸残基。平行地，使用亲本VH和VL序列作为搜索查询，从任何抗体基因数据库中鉴定具有与亲本非人抗体的氨基酸序列同源的氨基酸序列的人VH和VL链。然后选择人VH和VL受体基因。
可将所选人受体基因内的CDR区用来自亲本非人抗体或其功能变体的CDR区替代。必要时，可以用预测在与CDR区相互作用中重要的亲本链的框架区内的残基(参见上文描述)取代人受体基因中的相应残基。
单链抗体可以经由重组技术通过连接编码重链可变区的核苷酸序列和编码轻链可变区的核苷酸序列来制备。优选地，在两个可变区之间并入柔性接头。可替代地，针对单链抗体的产生描述的技术(美国专利号4,946,778和4,704,692)可以被改适用于产生噬菌体或酵母scFv文库，并且对PKal有特异性的scFv克隆可以按照常规程序从该文库中被鉴定出来。可以对阳性克隆进行进一步筛选以鉴定出抑制PKal活性的那些克隆。
一些抗体(例如Fab)可以在细菌细胞(例如大肠杆菌细胞)中产生(参见例如，Nadkarni,A.等人,2007Protein Expr Purif 52(1):219-29)。例如，如果Fab由包括介于展示实体与噬菌体蛋白(或其片段)之间的可抑制终止密码子的噬菌体展示载体中的序列编码，则可以将载体核酸转移到不能抑制终止密码子的细菌细胞中。在这种情况下，Fab不与基因III蛋白融合，而是被分泌到周质和/或培养基中。
也可以在真核细胞中生产抗体。在一个实施方案中，所述抗体(例如，scFv)在酵母细胞诸如毕赤酵母(Pichia)(参见例如，Powers等人,2001,J.Immunol.Methods.251:123-35；Schoonooghe S.等人,2009BMC Biotechnol.9:70；Abdel-Salam,HA.等人,2001ApplMicrobiol Biotechnol 56(1-2):157-64；Takahashi K.等人,2000Biosci BiotechnolBiochem 64(10):2138-44；Edqvist,J.等人,1991J Biotechnol20(3):291-300)、汉逊酵母(Hanseula)或酵母菌(Saccharomyces)中表达。本领域技术人员可以通过如下方式来优化抗体在酵母中的生产：优化例如氧气条件(参见例如，Baumann K.等人2010BMCSyst.Biol.4:141)、渗透压(参见例如，Dragosits,M.等人,2010BMC Genomics11:207)、温度(参见例如，Dragosits,M.等人,2009J Proteome Res.8(3):1380-92)、发酵条件(参见例如，Ning,D.等人2005J.Biochem.以及Mol.Biol.38(3):294-299)、酵母菌株(参见例如，Kozyr,AV等人2004Mol Biol(Mosk)38(6):1067-75；Horwitz,AH.等人,1988Proc NatlAcad Sci USA 85(22):8678-82；Bowdish,K.等人1991J Biol Chem266(18):11901-8)、用于增强抗体产生的蛋白质的过表达(参见例如,Gasser,B.等人,2006Biotechnol.Bioeng.94(2):353-61)、培养物的酸度水平(参见例如，Kobayashi H.等人,1997FEMS Microbiol Lett152(2):235-42)、底物和/或离子浓度(参见例如，Ko JH.等人,2996Appl Biochem Biotechnol 60(1):41-8)。此外，酵母系统可以被用于生产具有延长半衰期的抗体(参见例如，Smith,BJ.等人2001Bioconjug Chem12(5):750-756)。
在一个优选的实施方案中，在哺乳动物细胞中生产抗体。用于表达克隆抗体或其抗原结合片段的优选哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括dhfr-CHO细胞(描述于Urlaub和Chasin,1980,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220)中，与DHFR选择性标记，例如，如Kaufman和Sharp,1982,Mol.Biol.159:601 621中所述的DHFR选择性标记一起使用)、淋巴细胞系(例如NS0骨髓瘤细胞和SP2细胞、COS细胞、HEK293T细胞(J.Immunol.Methods(2004)289(1-2):65-80))，以及来自转基因动物(例如转基因哺乳动物)的细胞。例如，该细胞是乳腺上皮细胞。
在一些实施方案中，在基于植物或无细胞的系统中生产血浆激肽释放酶结合抗体(参见例如，Galeffi,P.,et al.,2006J Transl Med 4:39)。
除了编码多样化免疫球蛋白结构域的核酸序列以外，重组表达载体还可以携带附加的序列，诸如调节载体在宿主细胞中的复制的序列(例如复制起点)和选择性标记基因。选择性标记基因有助于选择已引入载体的宿主细胞(参见例如美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，通常选择性标记基因赋予已引入载体的宿主细胞对药物(诸如G418、潮霉素或甲氨蝶呤)的抗性。优选的选择性标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于具有甲氨蝶呤选择/扩增的dhfr-宿主细胞)和neo基因(用于G418选择)。
在用于重组表达抗体或其抗原结合部分的示例性系统中，通过磷酸钙介导的转染将编码抗体重链和抗体轻链两者的重组表达载体引入到dhfr-CHO细胞中。在重组表达载体内，抗体重链和轻链基因各自与增强子/启动子调控元件(例如源自SV40、CMV、腺病毒等，诸如CMV增强子/AdMLP启动子调控元件或SV40增强子/AdMLP启动子调控元件)可操作地连接以驱动基因的高水平转录。重组表达载体还携带DHFR基因，该DHFR基因允许使用甲氨蝶呤选择/扩增来选择已用该载体转染的CHO细胞。培养所选的转化株宿主细胞以允许抗体重链和轻链的表达，并且从培养基中回收完整的抗体。将标准分子生物学技术用于制备重组表达载体、转染宿主细胞、选择转化株、培养宿主细胞并从培养基中回收抗体。例如，一些抗体可以通过利用蛋白A或蛋白G偶联基质的亲和层析来分离。
对于包含Fc结构域的抗体，抗体生产系统可以生产其中Fc区被糖基化的抗体。例如，IgG分子的Fc结构域在CH2结构域中的天冬酰胺297处被糖基化。该天冬酰胺是用于用双触角型寡糖修饰的位点。已经证明，这种糖基化是由Fcγ受体和补体C1q介导的效应子功能所必需的(Burton和Woof,1992,Adv.Immunol.51:1-84；Jefferis等人,1998,Immunol.Rev.163:59-76)。在一个实施方案中，Fc结构域在哺乳动物表达系统中产生，该哺乳动物表达系统适当地使与天冬酰胺297对应的残基糖基化。Fc结构域还可以包括其他真核翻译后修饰。
抗体也可以由转基因动物产生。例如，美国专利号5,849,992描述了使抗体在转基因哺乳动物的乳腺中表达的方法。构建的转基因包括乳特异性启动子和编码所关注抗体的核酸和用于分泌的信号序列。由此类转基因哺乳动物的雌性动物产生的乳含有在其中分泌的所关注的抗体。该抗体可以从该乳中被纯化出来，或者对于一些应用，该抗体被直接使用。
药物组合物
如本文所述的抗体(例如，DX-2930)可以以组合物，例如，药学上可接受的组合物或药物组合物的形式存在。如本文所述的抗体(例如，DX-2930)可以与药学上可接受的载剂一起配制。在一些实施方案中，150mg DX-2930抗体以任选地含有药学上可接受的载剂的组合物，例如药学上可接受的组合物或药物组合物的形式存在。在一些实施方案中，300mgDX-2930抗体以任选地含有药学上可接受的载剂的组合物，例如药学上可接受的组合物或药物组合物的形式存在。
药学上可接受的载剂包括任何和所有生理上相容的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。优选地，该载剂适合用于皮下、静脉内、肌内、肠胃外、脊髓或表皮施用(例如，通过注射或输注)，但是也考虑适合用于吸入和鼻内施用的载剂。
在本文所述的药物组合物中的药学上可接受的载剂可以包括缓冲剂、氨基酸和张度调节剂中的一者或多者。任何合适的缓冲剂或缓冲剂的组合都可以用于本文所述的药物组合物中以维持或帮助维持组合物的适当pH。缓冲剂的非限制性实例包括磷酸钠、磷酸钾、柠檬酸、琥珀酸钠、组氨酸、Tris和乙酸钠。在一些实施方案中，缓冲剂的浓度可以为约5-100mM、5-50mM、10-50mM、15-50mM或约15-40mM。例如，一种或多种缓冲剂的浓度可以为约15mM、16mM、17mM、18mM、19mM、20mM、21mM、22mM、23mM、24mM、25mM、26mM、27mM、28mM、29mM、30mM、31mM、32mM、33mM、35mM、36mM、37mM、38mM、39mM或约40mM。在一些实例中，药学上可接受的载剂包括磷酸钠和柠檬酸，它们的浓度可以分别为约30mM和约19mM。
在一些实施方案中，药学上可接受的载剂包括一种或多种这样的氨基酸，该氨基酸可以减少抗体的聚集并且/或者增加抗体在施用前储存期间的稳定性。用于制备本文所述的药物组合物的示例性氨基酸包括但不限于丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、脯氨酸或丝氨酸。在一些实例中，药物组合物中的氨基酸的浓度可以为约5-100mM、10-90mM、20-80mM、30-70mM、40-60mM或约45-55mM。在一些实例中，氨基酸(例如，组氨酸)的浓度可以为约40mM、41mM、42mM、43mM、44mM、45mM、46mM、47mM、48mM、49mM、50mM、51mM、52mM、53mM、54mM、55mM、56mM、57mM、58mM、59mM或约60mM。在一个实例中，药物组合物含有浓度为约50mM的组氨酸。
任何合适的张度调节剂都可以用于制备本文所述的药物组合物。在一些实施方案中，张度调节剂是盐或氨基酸。合适的盐的实例包括但不限于氯化钠、琥珀酸钠、硫酸钠、氯化钾、氯化镁、硫酸镁和氯化钙。在一些实施方案中，药物组合物中的张度调节剂的浓度可以为约10-150mM、50-150mM、50-100mM、75-100mM或约85-95mM。在一些实施方案中，张度调节剂的浓度可以为约80mM、81mM、82mM、83mM、84mM、85mM、86mM、87mM、88mM、89mM、90mM、91mM、92mM、93mM、94mM、95mM、96mM、97mM、98mM、99mM或约100mM。在一个实例中，张度调节剂可以是氯化钠，其浓度可以为约90mM。
在本文所述的药物组合物中的药学上可接受的载剂可以进一步包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。通常，药学上可接受的赋形剂是药理学上无活性的物质。赋形剂的非限制性实例包括乳糖、甘油、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麦芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖、牛血清白蛋白(BSA)、葡聚糖、聚乙烯醋酸酯(PVA)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚乙烯亚胺(PEI)、明胶、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟乙基纤维素(HEC)、聚乙二醇(PEG)、乙二醇、甘油、二甲亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯(Tween-20)、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯(Tween-80)、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚山梨醇酯、聚氧乙烯共聚物、磷酸钾、乙酸钠、硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、三甲胺N-氧化物、甜菜碱、锌离子、铜离子、钙离子、锰离子、镁离子、CHAPS、蔗糖单月桂酸酯和2-O-β-甘露糖甘油酸酯(2-O-beta-mannoglycerate)。在一些实施方案中，药学上可接受的载剂包含在约0.001％-0.1％、0.001％-0.05％、0.005％-0.1％、0.005％-0.05％、0.008％-0.05％、0.008％-0.03％或约0.009％-0.02％的赋形剂。在一些实施方案中，赋形剂为约0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或约0.1％。在一些实施方案中，赋形剂是聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯(Tween-80)。在一个实例中，药学上可接受的载剂含有0.01％Tween-80。
在一些实例中，本文所述的药物组合物包含同样如本文所述的抗pKal抗体(例如，DX-2930)，以及磷酸钠(例如，磷酸氢二钠二水合物)、柠檬酸(例如，柠檬酸一水合物)、组氨酸(例如L-组氨酸)、氯化钠和聚山梨醇酯80中的一者或多者。例如，药物组合物可以包含所述抗体、磷酸钠、柠檬酸、组氨酸、氯化钠和聚山梨醇酯80。在一些实例中，所述抗体被配制在约30mM磷酸钠、约19mM柠檬酸、约50mM组氨酸、约90mM氯化钠和约0.01％聚山梨醇酯80中。所述组合物中所述抗体(例如，DX-2930)的浓度可以为约150mg/mL。在一个实例中，所述组合物包含或由以下组成：每1mL溶液约150mg的DX-2930、约30mM磷酸氢二钠二水合物、约19mM(例如19.6mM)柠檬酸一水合物、约50mM L-组氨酸、约90mM氯化钠和约0.01％聚山梨醇酯80。
药学上可接受的盐是保留所述化合物的所需生物活性并且不赋予任何不希望的毒理学作用的盐(参见例如，Berge,S.M.等人,1977,J.Pharm.Sci.66:1-19)。此类盐的实例包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括衍生自无毒无机酸(诸如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等)的那些，以及衍生自无毒有机酸(诸如脂肪族单羧酸和二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳香族酸、脂肪族和芳香族磺酸等)的那些。碱加成盐包括衍生自碱土金属(诸如钠、钾、镁、钙等)的那些，以及衍生自无毒有机胺(诸如N,N'-二苄基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、普鲁卡因等)的那些。
所述组合物可以是多种形式。这些形式包括例如液体、半固体和固体剂型，诸如液体溶液(例如，可注射和可输注的溶液)、分散体或悬浮液、片剂、丸剂、粉剂、脂质体和栓剂。该形式可以取决于预期的施用模式和治疗应用。许多组合物是可注射或可输注溶液的形式，诸如与用于向人类施用抗体的组合物相似的组合物。示例性的施用模式是肠胃外(例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内)。在一个实施方案中，血浆激肽释放酶结合蛋白通过静脉内输注或注射施用。在另一个实施方案中，血浆激肽释放酶结合蛋白通过肌内注射施用。在另一个实施方案中，血浆激肽释放酶结合蛋白通过皮下注射施用。在另一个优选的实施方案中，血浆激肽释放酶结合蛋白通过腹膜内注射施用。
如本文所用的短语“肠胃外施用”和“肠胃外地施用”意指除了肠内和局部施用以外的施用模式，通常通过注射施用，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊髓内、硬膜外和胸骨内注射和输注。在一些实施方案中，所述抗体是皮下施用的。
所述组合物可以被配制为适合于高药物浓度的溶液、微乳剂、分散体、脂质体或其他有序结构。可以通过如下方式制备无菌可注射溶液：根据需要将所需量的结合蛋白与上文列举的成分中的一种或上文列举的成分的组合一起掺入在适当的溶剂中，接着进行过滤灭菌来制备。一般来说，通过将活性化合物掺入无菌媒介物中来制备分散体，所述媒介物含有碱性分散介质和上文列举的所需要的其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，该干燥产生活性成分外加任何附加的所需成分(其来自其先前经无菌过滤的溶液)的粉末。例如，通过使用包衣诸如卵磷脂，在分散体的情况下通过保持所需要的颗粒大小，和通过使用表面活性剂，可以保持溶液的适当流动性。可以通过在组合物中包含延长吸收的剂(例如单硬脂酸盐和明胶)实现可注射组合物的延长吸收。
如本文所述的抗体(例如，DX-2930)可以通过包括静脉内注射、皮下注射或输注在内的多种方法施用。例如，对于一些治疗应用，所述抗体可以通过静脉内输注以低于30、20、10、5或1mg/min的速率施用，以达到约1至100mg/m2或7至25mg/m2的剂量。施用途径和/或模式将根据所需结果而变化。在某些实施方案中，活性化合物可以被制备成含有将保护化合物免于快速释放的载剂，诸如包括植入物和微囊化递送系统在内的受控释放制剂。可以使用生物可降解的生物相容的聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。许多制备此类制剂的方法是可用的。参见例如，Sustained and ControlledRelease Drug Delivery Systems,J.R.Robinson,编辑,1978,Marcel Dekker,Inc.,NewYork。
药物组合物可以与医疗装置一起施用。例如，在一个实施方案中，本文公开的药物组合物可以与装置，例如无针皮下注射装置、泵或植入物一起施用。
在某些实施方案中，如本文所述的抗体(例如，DX-2930)可以被配制成确保在体内适当地分布。例如，血脑屏障(BBB)排除了许多高度亲水的化合物。为了确保本文公开的治疗性化合物穿过BBB(如果需要的话)，它们可以被配制在例如脂质体中。关于制造脂质体的方法，参见例如美国专利号4,522,811、5,374,548和5,399,331。脂质体可以包含一种或多种被选择性地转运到特定细胞或器官中，从而增强靶向性药物递送的部分(参见例如，V.V.Ranade,1989,J.Clin.Pharmacol.29:685)。
调整剂量方案以提供最佳的期望应答(例如治疗应答)。例如，可以施用单次推注，可以随时间推移施用若干个分次剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度，按比例减少或增加剂量。特别有利的是将肠胃外组合物配制成剂量单位形式以便施用方便和剂量均匀。本文使用的剂量单位形式是指适合作为用于待治疗的受试者的单位剂量的物理上离散单位；每个单位含有经计算可产生所需治疗效果的与期望药物载体结合的预定量的活性化合物。剂量单位形式的规格受支配于以下并且直接取决于以下：(a)活性化合物的独特特征和待实现的特定治疗效果，和(b)合成这种用于治疗个体敏感性的活性化合物的领域的固有限制。
如本文所述的抗体(例如DX-2930)的治疗或防治有效量的示例性非限制性范围为约150mg。在一些实施方案中，如本文所述的抗体(例如DX-2930)的治疗或防治有效量为约300mg。如本领域普通技术人员将理解的，与用于成人受试者相比，抗体用于儿科受试者的治疗或防治有效量可能较低。在一些实施方案中，施用于儿科受试者的有效量是固定剂量或基于体重的剂量。在一些实施方案中，将小于约150mg的有效量施用于儿科受试者。在一些实施方案中，在第一治疗期中每两周或每四周施用治疗或防治有效量的抗体。在一些实施方案中，可以在第二治疗期中将抗体施用于受试者。在一些实施方案中，第一治疗期中抗体的治疗或防治有效量与第二治疗期中抗体的治疗或防治有效量相同。在一些实施方案中，第一治疗期中的抗体的治疗或防治有效量为150mg，并且第二治疗期中的抗体的治疗或防治有效量为150mg。在一些实施方案中，第一治疗期中的抗体的治疗或防治有效量为300mg，并且第二治疗期中的抗体的治疗或防治有效量为300mg。在一些实施方案中，第一治疗期中的抗体的治疗或防治有效量为150mg，并且第二治疗期中的抗体的治疗或防治有效量为300mg。在一些实施方案中，第一治疗期中的抗体的治疗或防治有效量为300mg，并且第二治疗期中的抗体的治疗或防治有效量为150mg。在一些实施方案中，第一治疗期中抗体的治疗或防治有效量与第二治疗期中抗体的治疗或防治有效量不同。在一些实施方案中，第一治疗期中抗体的治疗或防治有效量与第二治疗期中抗体的治疗或防治有效量相同。
试剂盒
如本文所述的抗体(例如，DX-2930)可以在试剂盒中提供，例如作为试剂盒的组分提供。例如，该试剂盒包括：(a)DX-2930抗体，例如，包含所述抗体的组合物(例如，药物组合物)；以及任选的(b)信息材料。该信息材料可以是与本文所述的方法和/或如本文所述的抗体(例如，DX-2930)的用途(例如，用于本文所述的方法中的用途)有关的描述性材料、指导性材料、营销性材料或其他材料。在一些实施方案中，所述试剂盒包含一个或多个剂量的DX-2930。在一些实施方案中，该一个或多个剂量是150mg。在一些实施方案中，该一个或多个剂量是300mg。
所述试剂盒的信息材料不受限于其形式。在一个实施方案中，所述信息材料可以包括关于化合物的生产、化合物的分子量、浓度、有效期、批次或生产地点信息等等的信息。在一个实施方案中，所述信息材料涉及使用抗体来治疗、预防或诊断病症和病状，例如血浆激肽释放酶相关疾病或病状。
在一个实施方案中，所述信息材料可以包括关于以合适的方式(例如以合适的剂量、剂型、施用模式或给药计划表(例如，本文所述的剂量、剂型、给药计划表或施用模式))施用如本文所述的抗体(例如，DX-2930)以执行本文所述的方法的说明书。在另一个实施方案中，所述信息材料可以包括关于将如本文所述的抗体(例如，DX-2930)施用于合适的受试者(例如人，例如患有血浆激肽释放酶相关疾病或病状或者有患上血浆激肽释放酶相关疾病或病状的风险的人类)的说明书。例如，所述材料可以包括关于例如根据本文所述的给药计划表将如本文所述的抗体(例如，DX-2930)施用于患有本文所述的病症或病状(例如血浆激肽释放酶相关疾病)的患者的说明书。所述试剂盒的信息材料不受限于其形式。在许多情况下，所述信息材料(例如说明书)以印刷形式提供，但也可以采用其他格式，诸如计算机可读材料。
可以将如本文所述的抗体(例如，DX-2930)以任何形式(例如液体、干燥或冻干形式)提供。优选地，抗体是基本上纯的和/或无菌的。当抗体以液体溶液提供时，液体溶液优选地为水溶液，其中无菌水溶液是优选的。当抗体作为干燥形式提供时，一般通过添加合适的溶剂进行重构。试剂盒中可以任选地提供溶剂，例如无菌水或缓冲液。
试剂盒可以包括一个或多个供含有如本文所述的抗体(例如，DX-2930)的组合物用的容器。在一些实施方案中，试剂盒含有供组合物和信息材料用的单独容器、分隔器或隔室。例如，组合物可以容纳在瓶、小瓶或注射器中，并且信息材料可以与容器相联合地被容纳。在其他实施方案中，试剂盒的单独元件包含在单个未分开的容器中。例如，组合物容纳在瓶、小瓶或注射器中，该瓶、小瓶或注射器上已附有呈标签形式的信息材料。在一些实施方案中，试剂盒包括多个(例如，一包)单个容器，每个容器均含有如本文所述的抗体(例如，DX-2930)的一个或多个单位剂型(例如，本文所述的剂型)。例如，所述试剂盒包括多个注射器、安瓿、铝箔包装或泡罩包装，它们每个均含有单个单位剂量的如本文所述的抗体(例如，DX-2930)。所述试剂盒的容器可以是气密的、防水的(例如，不渗透水分变化或蒸发)和/或不透光的。
所述试剂盒任选地包括适合于施用组合物的装置，例如注射器或任何此类递送装置。在一个实施方案中，所述装置是一种分配计量剂量的抗体的可植入装置。本公开的特征还在于提供试剂盒(例如，通过组合本文所述的组分来提供试剂盒)的方法。
治疗
在一些方面，本公开提供了如本文所述的抗体(例如，DX-2930)在治疗HAE中的用途。
(i)遗传性血管性水肿
遗传性血管性水肿(HAE)也称为“昆克水肿(Quincke edema)”、C1酯酶抑制剂缺乏症、C1抑制剂缺乏症和遗传性血管神经性水肿(HANE)。HAE的特征在于严重皮下或黏膜下肿胀(血管性水肿)的不可预测的反复发作，其可影响例如四肢、面部、生殖器、胃肠道和气道(Zuraw,2008)。HAE的症状包括例如手臂、腿部、嘴唇、眼睛、舌头和/或喉咙的肿胀；可能涉及喉咙(喉)肿胀、突然声音嘶哑和/或导致窒息死亡的气道阻塞(Bork等人,2012；Bork等人,2000)。所有HAE患者的大约50％在其一生中会经历喉部发作，并且无法预测哪些患者有喉部发作的风险(Bork等人,2003；Bork等人,2006)。HAE症状还包括反复发作的无明显原因的腹部绞痛；和/或肠道肿胀，该肠道肿胀可能会很严重并且可能导致腹部绞痛、呕吐、脱水、腹泻、疼痛、休克和/或类似于腹部紧急情况的肠道症状，这可能会导致不必要的手术(Zuraw,2008)。肿胀可能持续至多五天或更长时间。约三分之一患有这种HAE的个体在发作期间会出现称为边缘性红斑的不痒皮疹。大多数患者每年都会遭受多次发作。
HAE是一种孤儿病症，其确切患病率未知，但目前估计的范围为每10,000人有1人至每150,000人有1人，许多作者同意每50,000人有1人可能是最接近的估计值(Bygum,2009；Goring等人,1998；Lei等人,2011；Nordenfelt等人,2014；Roche等人,2005)。
血浆激肽释放酶在HAE发作的发病机制中起着关键作用(Davis,2006；Kaplan和Joseph,2010)。在正常生理学中，C1-INH调节血浆激肽释放酶以及多种其他蛋白酶(诸如C1r、C1s、因子XIa和因子XIIa)的活性。血浆激肽释放酶调节缓激肽从高分子量激肽原(HMWK)的释放。由于HAE中C1-INH的缺乏，会发生不受控制的血浆激肽释放酶活性并导致缓激肽的过量产生。缓激肽是一种血管扩张剂，被认为是导致局部肿胀、炎症和疼痛的典型HAE症状的原因(Craig等人,2012；Zuraw等人,2013)。
气道肿胀可能危及生命，并导致一些患者死亡。死亡率估计为15％-33％。HAE每年导致约15,000-30,000次急诊室就诊。
创伤或压力(例如牙科手术、疾病(例如，病毒疾病诸如感冒和流感)、月经和外科手术)可能引发血管性水肿的发作。为了防止HAE的急性发作，患者可以尝试避免先前引起发作的特定刺激。然而，在许多情况下，发作会在没有已知触发物的情况下发生。通常，HAE症状首先出现在儿童期，并在青春期恶化。平均而言，未经治疗的个体每1至2周发作一次，并且大多数发作持续约3至4天(ghr.nlm.nih.gov/condition/hereditary-angioedema)。在患有遗传性血管性水肿的个人之间发作频率和持续时间差异很大，即使在同一家族中的个人之间也是如此。
存在三种类型的HAE，称为I型、II型和III型，所有这些类型都可以通过本文所述的方法进行治疗。据估计，每50,000人中就有1人受累于HAE，I型占病例数的约85％，II型占病例数的约15％，III型非常罕见。III型是最新描述的形式，并且最初被认为仅发生在女性中，但已鉴定出有受累男性的家族。
HAE以常染色体显性模式遗传，因此受累的人可以从一个受累的父母那里遗传突变。基因中也可以发生新的突变，因此HAE也可发生在其家族没有病症史的人身上。据估计，20％-25％的病例是由新的自发突变引起的。
SERPING1基因的突变导致I型和II型遗传性血管性水肿。SERPING1基因提供了制造C1抑制剂蛋白的指令，该C1抑制剂蛋白对于控制炎症很重要。C1抑制剂阻断某些促进炎症的蛋白质的活性。导致I型遗传性血管性水肿的突变导致血液中C1抑制剂水平降低。相反，导致II型的突变会导致产生功能异常的C1抑制剂。大约85％的患者患有I型HAE，其特征在于产生非常低水平的功能正常的C1-INH蛋白，而其余大约15％的患者患有II型HAE并且产生正常或升高水平的功能受损的C1-INH(Zuraw,2008)。在没有适当水平的功能性C1抑制剂的情况下，高分子量激肽原(HMWK)会产生过量的缓激肽，并且由缓激肽与内皮细胞表面上的B2受体(B2-R)的结合介导的血管渗漏增加(Zuraw,2008)。缓激肽通过增加流体通过血管壁渗入身体组织来促进炎症。身体组织中过多的流体积聚导致在I型和II型遗传性血管性水肿个体中见到的肿胀发作。
F12基因中的突变与某些III型遗传性血管性水肿病例相关。F12基因提供了制造凝血因子XII的指令。除了在血液凝固(凝血)中发挥关键作用以外，因子XII还是炎症的重要刺激剂并参与缓激肽的产生。F12基因中的某些突变导致具有增加活性的因子XII的产生。结果，产生了更多的缓激肽，并且血管壁变得更具渗漏性，从而导致肿胀发作。其他III型遗传性血管性水肿病例的原因仍然未知。一个或多个尚未确认的基因中的突变可能是导致在这些病例中的病症的原因。
HAE的表现可能与由过敏或其他医学病状引起的其他形式的血管性水肿相似，但它在病因和治疗方面存在显著差异。当遗传性血管性水肿被误诊为过敏时，最常使用通常对HAE无效的抗组胺药、类固醇和/或肾上腺素进行治疗，但肾上腺素可以用于危及生命的反应。误诊还导致对腹部肿胀患者进行不必要的探查性手术，并且在一些HAE患者中，腹部疼痛被错误地诊断为心身性疼痛(psychosomatic)。
像成人一样，患有HAE的儿童可能会遭受反复发作和使人虚弱的发作。症状可能在儿童期很早就出现，并且在小至3岁的HAE患者中报告了上气道血管性水肿(Bork等人,2003)。在一项对49名儿科HAE患者的病例研究中，23名到18岁时遭受过至少一次气道血管性水肿发作(Farkas,2010)。患有HAE的儿童(尤其是青少年)存在重要的未满足的医疗需求，因为该疾病通常在青春期后恶化(Bennett和Craig,2015；Zuraw,2008)。
Kaplan,A.P.,J Allergy Clin Immunol,2010,126(5):918-925中描述了C1抑制剂疗法以及HAE的其他疗法。
提供了对HAE发作的急性治疗以尽快阻止水肿的进展。静脉内注射来自供体血液的C1抑制剂浓缩物是一种急性治疗；然而，这种治疗在许多国家是不可获得的。在C1抑制剂浓缩物不可获得的紧急情况下，可以将新鲜冷冻血浆(FFP)用作替代物，因为它也含有C1抑制剂。
源自人类血液的纯化C1抑制剂自1979年以来已在欧洲使用。美国现在有几种C1抑制剂治疗可用，并且加拿大现在有两种C1抑制剂产品可用。经巴氏杀菌的Berinert P(CSLBehring)于2009年被F.D.A.批准用于急性发作。经纳米过滤的Cinryze(ViroPharma)于2008年被F.D.A.批准用于防治。Rhucin(Pharming)是一种正在开发中的重组C1抑制剂，其不会因人类血液携带的病原体而带来传染性疾病传播的风险。
急性HAE发作的治疗还可以包括用于缓解疼痛的药物和/或IV流体。
其他治疗方式可以刺激C1抑制剂的合成或减少C1抑制剂的消耗。雄激素药物诸如达那唑可以通过刺激C1抑制剂的产生来降低发作的频率和严重性。
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)可以引发腹部发作。治疗幽门螺杆菌的抗生素将会减少腹部发作。
较新的治疗攻击接触级联。艾卡仑肽(Ecallantide,
Figure BDA0003842956920000351
DX-88,Dyax)抑制血浆激肽释放酶，并且已在美国获批。艾替班特(Icatibant，
Figure BDA0003842956920000352
Shire)抑制缓激肽B2受体，并且已在欧洲和美国获批。
HAE的诊断可以依赖于例如家族史和/或血液检验。与I型、II型和III型HAE相关的实验室发现在例如Kaplan,A.P.,J Allergy Clin Immunol,2010,126(5):918-925中有所描述。在I型HAE中，C1抑制剂水平降低，C4水平也降低，然而C1q水平正常。在II型HAE中，C1抑制剂水平正常或升高；然而，C1抑制剂功能异常。C4水平降低，并且C1q水平正常。在III型中，C1抑制剂、C4和C1q水平全部均可正常。
可以例如使用问卷(例如由患者、临床医生或家族成员完成的问卷)评估HAE的症状。此类问卷在本领域中是已知的并且包括例如视觉模拟量表。参见例如，McMillan,C.V.等人.Patient.2012；5(2):113-26。在一些实施方案中，受试者患有I型HAE或II型HAE。可以使用本领域已知的任何方法，诸如通过符合HAE的临床病史(例如，皮下或粘膜、非瘙痒性肿胀发作)或诊断测试(例如，C1-INH功能测试和C4水平评估)诊断I型HAE或II型HAE。
(ii)用抗PKal抗体治疗HAE
本公开提供了通过如下方式治疗遗传性血管性水肿(HAE)(例如，改善、稳定或消除其一种或多种症状)的方法：例如根据本文所述的给药计划表向患有或疑似患有HAE的受试者施用本文所述的抗体(例如，治疗有效量的本文所述的抗体)。另外提供了通过如下方式治疗HAE的方法：例如根据本文所述的给药计划表或与第二疗法(例如，与一种其他剂，例如，本文所述的其他剂)组合施用本文所述的抗体(例如，治疗有效量的本文所述的抗体)。本公开还提供了通过如下方式预防HAE或其症状的方法：例如根据本文所述的给药计划表将本文所述的抗体(例如，防治有效量的本文所述的抗体)施用于有罹患HAE风险的受试者(例如，具有患有HAE或对HAE具有遗传易感性的家族成员的受试者)。在一些实例中，受试者可以是在治疗的时候没有HAE症状的人类患者。在一些实施方案中，受试者是患有I型HAE或II型HAE的人类患者。在一些实施方案中，受试者是在治疗前一年经历至少两次(例如，2次、3次、4次、5次或更多次)HAE发作的人类患者。
在一些实施方案中，受试者是小于12岁的儿科受试者。在一些实施方案中，受试者是2岁至小于12岁的儿科受试者。在一些实施方案中，受试者是2岁至小于6岁的儿科受试者。在一些实施方案中，受试者是6岁至小于12岁的儿科受试者。在一些实施方案中，受试者是12岁或更小的儿科受试者。在一些实施方案中，受试者是2岁至12岁的儿科受试者。在一些实施方案中，受试者是2岁至6岁的儿科受试者。在一些实施方案中，受试者是6岁至12岁的儿科受试者。
在一些实施方案中，任何人类患者亚组可以每两周被施用约150mg的抗pKal抗体(例如DX-2930)。在一些实施方案中，任何人类患者亚组可以每四周被施用约150mg的抗pKal抗体(例如DX-2930)。在一些实施方案中，受试者是2至6岁的儿科受试者并且每四周被施用约150mg的所述抗体。在一些实施方案中，受试者是6至12岁的儿科受试者并且每两周被施用约150mg的所述抗体。在一些实施方案中，人类患者每两周被施用约150mg的抗pKal抗体(例如DX-2930)，并且如果受试者至少6个月没有发作，则所述抗体的给药被减少至每四周约150mg。
在一些实施方案中，任何人类患者亚组可以每两周被施用约300mg的抗pKal抗体(例如DX-2930)。在一些实施方案中，任何人类患者亚组可以每四周被施用约300mg的抗pKal抗体(例如DX-2930)。
治疗包括施用可有效缓和、缓解、改变、补救、改善(ameliorate)、改良(improve)或影响所述病症、所述病症的症状或对所述病症的易感性的量。治疗还可以延迟疾病或病状的发作，例如预防疾病或病状的发作或恶化。
在“药物组合物”中也描述了施用DX-2930抗体的方法。所使用的抗体的合适剂量可取决于受试者的年龄和体重以及所使用的具体药物。所述抗体可以用作用于抑制、减少不希望的相互作用(例如在血浆激肽释放酶与其底物(例如因子XII或HMWK)之间的相互作用)的竞争性剂。所述抗体的剂量可以是足以阻断患者中(尤其是疾病部位处)的血浆激肽释放酶活性的90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.9％的量。在一些实施方案中，每两周或每四周向受试者施用150mg所述抗体。在一些实施方案中，在第一治疗期中向受试者施用抗体，包括每两周或每四周施用150mg所述抗体。在一些实施方案中，每两周或每四周向受试者施用300mg所述抗体。在一些实施方案中，在第一治疗期中向受试者施用所述抗体，包括每两周或每四周施用300mg所述抗体。在一些实施方案中，第一治疗期是26周。在一些实施方案中，第一治疗期是52周。在一些实施方案中，在第一治疗期中受试者被施用13剂。在一些实施方案中，在第一治疗期中受试者被施用14剂。在一些实施方案中，在第一治疗期中受试者被施用26剂。在一些实施方案中，在第一治疗期中受试者被施用27剂。在一些实施方案中，在第一治疗期之后的第二治疗期中向受试者施用所述抗体。
在一个实施方案中，所述抗体被用于例如在体内抑制血浆激肽释放酶的活性(例如，抑制血浆激肽释放酶的至少一种活性，例如，减少因子XIIa和/或缓激肽的产生)。结合蛋白可以它们本身单独使用或者与剂(例如细胞毒性药物、细胞毒性酶或放射性同位素)结合使用。
所述抗体可以被直接在体内用于通过天然补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞毒性(ADCC)消除表达抗原的细胞。本文所述的抗体可以包括补体结合效应结构域，诸如来自IgG1、IgG2或IgG3的Fc部分，或IgM的结合补体的相应部分。在一个实施方案中，用本文所述的抗体和合适的效应细胞离体处理靶细胞群。所述处理可以通过添加补体或含有补体的血清来补充。进一步地，可以通过补体蛋白的结合来提高包被有本文所述的抗体的靶细胞的吞噬作用。在另一个实施方案中，包被有包含补体结合效应结构域的抗体的靶细胞被补体裂解。
“药物组合物(Pharmaceutical Compositions)”中描述了施用DX-2930抗体的方法。所使用的分子的合适剂量将取决于受试者的年龄和体重以及所使用的具体药物。所述抗体可以用作用于抑制或减少不希望的相互作用(例如在天然或病理性剂与血浆激肽释放酶之间的相互作用)的竞争性剂。
可以将治疗有效量的如本文所述的抗体施用于患有、疑似患有HAE或有患上HAE的风险的受试者，从而治疗该病症(例如，改善或改良该病症的症状或特征，减缓，稳定和/或阻止疾病进展)。
可以按治疗有效量施用本文所述的抗体。治疗有效量的抗体是在向受试者施用单剂量或多剂量后可有效治疗受试者(例如治愈、缓和、缓解或改良受试者的病症的至少一种症状至超过在不存在这种治疗的情况下预期的程度)的量。
可以调整剂量方案以提供最佳的期望应答(例如治疗应答)。例如，可以施用单次推注，可以随时间推移施用若干个分次剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度，按比例减少或增加剂量。在其他实例中，可以施用推注，随后随着时间推移可施用若干次剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度，按比例减少或增加剂量。在其他实例中，一次剂量可以被分成若干次剂量并随着时间推移进行施用。特别有利的是将肠胃外组合物配制成剂量单位形式以便施用方便和剂量均匀。本文使用的剂量单位形式是指适合作为用于待治疗的受试者的单位剂量的物理上离散单位；每个单位含有经计算可产生所需治疗效果的与期望药物载体结合的预定量的活性化合物。
在一些实施方案中，在第一治疗期期间按剂量方案施用如本文所述的抗体。在一些实施方案中，在第一治疗期按多剂量施用所述抗体。在此期间，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约150mg，并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长时间被施用。在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约150mg，并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长时间被施用给小于12岁的受试者。在一些实施方案中，在第一治疗期中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约300mg，并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长时间被施用。在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约300mg，并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长时间被施用给小于12岁的受试者。
在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约150mg，并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长时间被施用给2岁与小于6岁之间的受试者。在一些例子中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约150mg并且每四周被施用给2岁与小于6岁之间的受试者。
在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约150mg，并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长时间被施用给6岁与小于12岁之间的受试者。在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约150mg并且每两周被施用给6岁与小于12岁之间的受试者。
在一些实施方案中，所述抗体(例如DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约150mg并且每两周或每四周被施用。在一些实施方案中，所述抗体(例如DX-2930)的治疗或防治有效量可以为150mg并且每两周被施用给受试者。在一些实施方案中，所述抗体(例如DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约150mg并且每四周被施用给受试者。在一些实施方案中，治疗或防治有效量被施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次或更多次。
在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约300mg，并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长时间被施用给2岁与小于6岁之间的受试者。在一些情况下，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约300mg并且每四周被施用给2岁与小于6岁之间的受试者。
在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约300mg，并且每周、每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长时间被施用给6岁与小于12岁之间的受试者。在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约300mg并且每两周被施用给6岁与小于12岁之间的受试者。
在一些实施方案中，所述抗体(例如DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约300mg并且每两周或每四周被施用。在一些实施方案中，所述抗体(例如DX-2930)的治疗或防治有效量可以为300mg并且每两周被施用给受试者。在一些实施方案中，所述抗体(例如DX-2930)的治疗或防治有效量可以为约300mg并且每四周被施用给受试者。在一些实施方案中，治疗或防治有效量被施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次或更多次。
在一些实施方案中，第一治疗期是26周。在一些实施方案中，治疗或防治有效量是150mg或300mg并且每两周被施用给受试者(例如，每两周被施用，持续26周，导致总共递送13剂)。在一些实施方案中，治疗或防治有效量是150mg或300mg并且每两周被施用给受试者(例如，每两周被施用，持续26周并进行随访，导致总共递送13剂)。在一些实施方案中，治疗或防治有效量是150mg或300mg并且每四周被施用给受试者(例如，每四周被施用，持续26周，导致总共递送7剂)。在一些实施方案中，治疗或防治有效量是150mg或300mg并且每两周被施用给受试者(例如，每两周被施用，持续26周，导致总共递送13剂)。在一些实施方案中，治疗或防治有效量是150mg或300mg并且每四周被施用给受试者(例如，每四周被施用，持续26周，导致总共递送7剂)。
在一个实例中，第一治疗期是26周，并且在第0天、第28天、第56天、第84天、第112天、第140天和第168天施用所述抗体。在另一个实例中，第一治疗期是26周，并且在第0天、第14天、第28天、第42天、第56天、第70天、第84天、第98天、第112天、第126天、第140天、第154天和第168天施用所述抗体。本领域技术人员将理解，所列出的治疗计划表允许±4天(例如±3天、±2天或±1天)的窗口。例如，在第10-18天给予的剂量将被上面指出的第14天的剂量所涵盖。
在一些实施方案中，第一治疗期是52周。在一些实施方案中，治疗或防治有效量是150mg并且每两周被施用给受试者(例如，每两周被施用，持续52周，导致总共递送26剂)。在一些实施方案中，第一治疗期是52周。在一些实施方案中，治疗或防治有效量是300mg并且每两周被施用给受试者(例如，每两周被施用，持续52周，导致总共递送26剂)。在一些实施方案中，治疗或防治有效量是150mg并且每四周被施用给受试者(例如，每四周被施用给，持续52周，导致总共递送13剂)。在一些实施方案中，治疗或防治有效量是300mg并且每四周被施用给受试者(例如，每四周被施用给，持续52周，导致总共递送13剂)。
在一个实例中，第一治疗期是52周，并且在第0天、第28天、第56天、第84天、第112天、第140天、第168天、第196天、第224天、第252天、第280天、第308天和第336天施用所述抗体。在另一个实例中，第一治疗期是52周，并且在第0天、第14天、第28天、第42天、第56天、第70天、第84天、第98天、第112天、第126天、第140天、第154天、第168天、第182天、第196天、第210天、第224天、第238天、第252天、第266天、第280天、第294天、第308天、第322天、第336天和第350天施用所述抗体。本领域技术人员将理解，所列出的治疗计划表允许±3天(例如±3天、±2天或±1天)的窗口。例如，在第10-18天给予的剂量将被上面指出的第14天的剂量所涵盖。
在一些实施方案中，在第一治疗期之后的第二治疗期期间按剂量方案施用治疗或防治有效量。在一些实施方案中，治疗或防治有效量在第一治疗期和第二治疗期中是不同的。在一些实施方案中，第二治疗期的治疗或防治有效量为约150mg。在这个治疗期期间，可以按约150mg的多剂量施用抗体，诸如每两周施用150mg或每四周施用150mg。在一些实施方案中，第二治疗期的治疗或防治有效量为约300mg。在这个治疗期期间，可以按约300mg的多剂量施用所述抗体，诸如每两周施用300mg或每四周施用300mg。在一些实施方案中，如果受试者至少6个月没有发作，则可以减少给药频率。例如，如果受试者至少6个月没有发作，则每两周被施用150mg或300mg的抗体的受试者可以每四周被施用约150mg的抗体。在一些实施方案中，在第二治疗期中，多剂量的抗体被施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次。
在一些实施方案中，第二治疗期是52周。在一些实施方案中，每两周以约150mg或300mg剂量施用所述抗体，持续52周(例如，导致递送26剂)。在一些实施方案中，每四周以约150mg或300mg剂量施用所述抗体，持续26周(例如，导致递送13剂)。在一些实施方案中，第二治疗期是26周。在一些实施方案中，每两周以约150mg或300mg剂量施用所述抗体，持续26周(例如，导致递送13剂)。在一些实施方案中，每四周以约150mg或300mg剂量施用所述抗体，持续26周(例如，导致递送7剂)。在一些实施方案中，每两周以约150mg或300mg剂量施用所述抗体，持续26周(例如，导致递送13剂)。在一些实施方案中，在第一治疗期的最后一剂后约两周施用第二治疗期的首次单剂。
在本文所述的任何实施方案中，施用抗体的时间安排是近似的并且可以包括在指示日期之前的三天和之后的三天(例如，每两周施用涵盖在第11天、第12天、第13天、第14天、第15天、第16天或第17天施用)。
在先HAE治疗可以涉及与如本文所述的抗体(例如，DX-2930)相同的抗体。在一些实施方案中，在先HAE治疗可以涉及每两周或每四周施用多剂量的DX-2930。在一些实施方案中，DX-2930每两周以150mg或每四周以150mg被给予至受试者(例如皮下)。在一些实施方案中，DX-2930每两周以300mg或每四周以300mg被给予至受试者(例如皮下)。在一个实例中，在施用单剂量的所述抗体之前，受试者先前每两周或每四周施用所述抗体，持续26周。在一些实施方案中，在先治疗中的多剂量的抗体被施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次。在一些实施方案中，先前在第0天、第28天、第56天、第84天、第112天、第140天和第168天施用了所述抗体。在一些实施方案中，在先前治疗中的最后一剂后约两周施用单剂量的约150mg抗体。在一些实施方案中，在先前治疗中的最后一剂后约两周施用单剂量的约300mg抗体。在一个实例中，在第一治疗期的第182天施用第二治疗期的单剂量。
在一些实施方案中，在根据本文所述的任何方法施用抗体之前，可以评估受试者以确定HAE发作的基线率。这样的评估期可以被称为“导入期(run-in period)”。在一些实施方案中，HAE发作的基线率必须达到或超过给定时间段内HAE发作的最小数量。在一个实例中，受试者在首次施用抗体之前的四周导入期中经历至少一次HAE发作。在另一个实例中，受试者在首次施用抗体之前的四周导入期中每月经历1次与少于2次之间的发作。在另一个实例中，受试者在首次施用抗体之前的四周导入期中每月经历2次与少于3次之间的发作。在另一个实例中，受试者在首次施用抗体之前的四周导入期中每月经历3次或更多次发作。在另一个实例中，受试者在首次施用抗体之前的八周导入期中经历至少两次HAE发作。在又另一实例中，受试者每月平均经历至少一次HAE发作。
在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以是约150mg并且被施用给在首次施用所述抗体之前的一段时间内经历过每12周至少1次HAE发作的历史HAE发作率的受试者。在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以是约150mg并且每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长时间被施用给在首次施用所述抗体之前的一段时间内经历过每12周至少一次HAE发作的受试者。在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以是约300mg并且被施用给在首次施用所述抗体之前的一段时间内经历过每12周至少1次HAE发作的历史HAE发作率的受试者。在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以是约300mg并且每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长时间被施用给在首次施用所述抗体之前的一段时间内经历过每12周至少一次HAE发作的受试者。
在一些实施方案中，根据本文所述的任何方法施用抗体导致受试者中的平均HAE发作率降低。在一些实施方案中，可以确定相对于未接受抗体的受试者(例如，施用安慰剂的受试者)的HAE发作率，根据本文所述的任何方法施用所述抗体之后的平均HAE发作率的降低百分比。在一些实施方案中，所述平均HAE发作率的降低百分比可以为相对于未接受抗体的受试者(例如，施用安慰剂的受试者)的HAE发作率的至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％。
本文所述的任何受试者可能已经接受过在先HAE治疗，诸如防治性或治疗性HAE治疗。本公开的方面还提供了将如本文所述的抗体(例如，DX-2930)施用给已经接受过一种或多种在先HAE治疗的受试者的方法。在一些实施方案中，在先HAE治疗是涉及本文所述的抗体(例如DX-2930)的治疗。在一些实施方案中，受试者先前每两周或每四周施用多剂量的DX-2930。在一些实施方案中，受试者先前每两周施用150mg的DX-2930。在一些实施方案中，受试者先前每四周施用150mg的DX-2930。在一些实施方案中，受试者先前每两周施用300mg的DX-2930。在一些实施方案中，先前每四周向受试者施用300mg的DX-2930。在一些实施方案中，在先治疗中的多剂量的抗体被施用至少两次、至少三次、至少四次、至少五次、至少六次、至少七次、至少八次、至少九次、至少十次、至少十一次、至少十二次、至少十三次。
在一些实施方案中，受试者已经接受过一种或多种在先HAE治疗(诸如长期防治性治疗)，该治疗可能涉及本领域已知的任何HAE治疗剂。示例性的抗HAE剂包括但不限于C1抑制剂(例如，
Figure BDA0003842956920000461
Figure BDA0003842956920000462
或
Figure BDA0003842956920000463
)、血浆激肽释放酶抑制剂(例如，
Figure BDA0003842956920000464
)、缓激肽受体抑制剂(例如，
Figure BDA0003842956920000465
)、减毒雄激素(例如达那唑)和抗纤维蛋白溶解剂(例如氨甲环酸(traexamic acid))。在一些实施方案中，受试者在第一治疗期之前已经接受过C1抑制剂治疗。在一些实例中，受试者在接受如本文所述的抗pKal抗体治疗之前可能会经受减量期(tapering period)。减量期是指在抗pKal抗体治疗之前的一段时间，在此期间，接受抗HAE治疗(例如，C1-INH、口服雄激素和/或口服抗纤维蛋白溶解剂)的受试者逐渐减少抗HAE剂的剂量、频率或两者，使得受试者可以逐渐从在先HAE治疗过渡到如本文所述的抗pKal抗体治疗。在一些实施方案中，减量涉及减少在先治疗的剂量和/或施用在先治疗的频率的逐渐或逐步的方法。减量期可能会持续2-4周，并且可根据个体患者的因素而有所不同。在一些实例中，在先治疗在抗pKal抗体治疗开始之前终止。在其他实例中，在先治疗可以在受试者被给予他或她的第一剂抗pKal抗体之后的合适时间范围(例如，2周、3周或4周)内终止。
可替代地，接受在先HAE治疗的受试者可以直接转变至如本文所述的抗pKal抗体治疗，而无需减量期。
在一些实施方案中，所述抗体(例如，DX-2930)的治疗或防治有效量可以是约150mg或300mg并且每两周、每三周、每四周、每五周、每六周、每七周、每八周或更长时间被施用给已经接受过一种或多种在先HAE治疗的受试者。
在其他实施方案中，受试者在如本文所述的第一治疗、第一治疗期和/或后续单剂量和多剂量治疗(第二治疗期)之前没有接受任何在先HAE治疗。在一些实施方案中，受试者在第一治疗期期间和/或在第二治疗期期间没有接受除了本文所述的抗体之外的任何治疗。在一些实施方案中，受试者在第一治疗或第一治疗期之前至少两周(例如，至少两周、三周、四周、五周或更长时间)、在第一治疗或第一治疗期期间和/或在第二治疗期期间没有接受任何在先HAE治疗。在一些实施方案中，受试者在第一治疗或第一治疗期之前至少两周、在第一治疗期期间和/或在第二治疗期期间没有接受长期HAE防治(例如，C1抑制剂、减毒雄激素、抗纤维蛋白溶解剂)。在一些实施方案中，受试者在第一治疗或第一治疗期之前至少四周、在第一治疗期期间和/或在第二治疗期期间没有接受涉及血管收缩素转化酶(ACE)抑制剂的HAE治疗。在一些实施方案中，受试者在第一治疗或第一治疗期之前至少四周、在第一治疗期期间和/或在第二治疗期期间没有接受含雌激素的药物。在一些实施方案中，受试者在第一治疗或第一治疗期之前至少两周、在第一治疗期期间和/或在第二治疗期期间没有接受雄激素(例如，司坦唑醇、达那唑、氧雄龙、甲睾酮、睾酮)。
本文所述的任何方法可以进一步包括在治疗之前和之后或在治疗过程期间监测患者的副作用(例如，肌酸磷酸酶水平的升高)和/或抗体对pKal的抑制水平(例如，抗体的血清或血浆浓度或pKal活性水平)。如果观察到一种或多种不良反应，则可能会减少抗体的剂量(给药量或给药频率)，或者可能终止治疗。如果抑制水平低于最低治疗水平，则可以向患者施用进一步剂量的抗体。还可以评估患者是否产生针对所施用抗体的抗体；C1-抑制剂、C4和/或C1q的活性；生活质量；任何HAE发作的发生率、与健康相关的生活质量、焦虑和/或抑郁(例如，医院焦虑和抑郁量表(HADS))、工作生产力(例如，工作生产力和活动障碍问卷(WPAI))、相对于其他注射剂对抗体(例如，DX-2930)皮下施用的偏好、生活质量(例如，血管性水肿-生活质量(AE-QOL)、EuroQoL组5维报告)。
在一些实施方案中，可以在治疗过程期间(例如，在初始剂量之后)测量抗体(例如，DX-2930)的血浆或血清浓度以评估治疗的功效。如果抗体的血浆或血清浓度低于约80nM，则可能需要后续剂量，其可能与初始剂量相同或比初始剂量更高。可以通过确定从受试者获得的血浆或血清样品中抗体的蛋白质水平(例如通过免疫测定或质谱(MS)测定)来测量抗体的血浆或血清浓度。也可以通过确定从用抗体治疗的受试者获得的血浆或血清样品中pKal的抑制水平来测量抗体的血浆或血清浓度。此类测定可以包括用于测量被切割的激肽原(诸如本文所述的那些)的合成底物测定或Western印迹测定。
可替代地或此外，可以在治疗过程中监测肌酸激酶的血浆或血清水平和/或一种或多种凝血参数(例如，激活部分促凝血酶原激酶时间(aPTT)、凝血酶原时间(PT)、出血事件)。如果在治疗期间发现肌酸激酶的血浆或血清水平升高，则可以减少抗体的剂量(给药量或给药频率)，或者可以终止治疗。类似地，如果在治疗期间发现一种或多种凝血参数受到显著影响，则可以修改抗体的剂量，或者可以终止治疗。
在一些实施方案中，可以如下确定抗体(例如，DX-2930)的最佳剂量(例如，最佳防治剂量或最佳治疗剂量)。以初始剂量将该抗体给予至需要治疗的受试者。测量该受试者中的该抗体的血浆浓度。如果血浆浓度低于80nM，则在随后的施用中增加该抗体的剂量。可以选择维持体血浆浓度高于约80nM的抗体剂量作为受试者的最佳剂量。可以在治疗过程期间监测受试者的肌酸磷酸激酶水平，并且可以根据肌酸磷酸激酶水平进一步调整该受试者的最佳剂量，例如，如果在治疗期间观察到肌酸磷酸激酶升高，则可能会降低抗体的剂量。
(iii)组合疗法
如本文所述的抗体(例如，DX-2930)可以与用于治疗与血浆激肽释放酶活性相关的疾病或病状(例如本文所述的疾病或病状)的其他疗法中的一种或多种疗法组合施用。例如，如本文所述的抗体(例如，DX-2930)可以与另一种抗血浆激肽释放酶Fab或IgG(例如，本文所述的另一种Fab或IgG)、另一种血浆激肽释放酶抑制剂、肽抑制剂、小分子抑制剂或外科手术一起(例如，在治疗过程之前、期间或之后)治疗性地或防治性地使用。可以与本文所述的血浆激肽释放酶结合抗体一起以组合疗法使用的血浆激肽释放酶抑制剂的实例包括例如PCT公开号WO 1995/21601或WO 2003/103475中描述的血浆激肽释放酶抑制剂。
一种或多种血浆激肽释放酶抑制剂可以与如本文所述的抗体(例如，DX-2930)组合使用。例如，所述组合可以导致需要更低剂量的抑制剂，从而减少副作用。
如本文所述的抗体(例如，DX-2930)可以与一种或多种用于治疗HAE的当前疗法组合施用。例如，DX-2930抗体可以与第二抗HAE治疗剂诸如艾卡仑肽、C1酯酶抑制剂(例如CINRYZETM)、抑肽酶
Figure BDA0003842956920000491
和/或缓激肽B2受体抑制剂(例如，艾替班特
Figure BDA0003842956920000492
)一起共同使用。
术语“组合”是指使用两种或更多种剂或疗法来治疗同一患者，其中该剂或疗法的使用或作用在时间上重叠。该剂或疗法可以同时施用(例如，作为施用于患者的单一制剂或作为并行施用的两种单独的制剂)或以任何顺序依次施用。依次施用是在不同时间给予的施用。介于一种剂的施用与另一种剂的施用之间的时间可以是数分钟、数小时、数天或数周。本文所述的血浆激肽释放酶结合抗体的使用也可以用于减少另一种疗法的剂量，例如减少与正在施用的另一种剂相关的副作用。因此，组合可以包括以比在不存在血浆激肽释放酶结合抗体的情况下使用的剂量低至少10％、20％、30％或50％的剂量施用第二剂。在一些实施方案中，可以将呈负荷静脉内(IV)剂量或皮下(SC)剂量的C1抑制剂与第一剂如本文所述的抗pKal抗体(例如，DX-2930)同时给予至受试者。然后受试者可以继续接受抗pKal抗体治疗(无需进一步剂量的C1抑制剂)。
组合疗法可以包括施用减少其他疗法的副作用的剂。该剂可以是降低血浆激肽释放酶相关疾病治疗的副作用的剂。
(iv)用于评估治疗方案的测定
用于评估本文所述的任何治疗方法的功效的测定方法也在本公开的范围内。在一些实施方案中，可以在治疗过程之前和/或期间(例如，在初始剂量之后)测量与HAE相关的一种或多种生物标志物(例如，2-链HMWK)的血浆或血清浓度剂量，以评估治疗功效。在一些实施方案中，将在剂量施用后的某个时间点获得的与HAE相关的一种或多种生物标志物的血浆或血清浓度(水平)与在剂量施用后更早的时间点或在初始剂量施用之前获得的样品中的生物标志物的浓度进行比较。在一些实施方案中，所述生物标志物是2-HMWK。
所述生物标志物的水平可以通过使用特异性地检测生物标志物的抗体例如通过免疫测定(诸如Western印迹测定或ELISA)检测从受试者获得的血浆或血清样品中的生物标志物来测量。在一些实施方案中，通过免疫测定来评估从受试者获得的血浆或血清样品中的2-HWMK的水平。在用于检测2-HWMK的免疫测定中使用的抗体是本领域已知的，并且对用于本文所述方法中的此种抗体的选择对于本领域普通技术人员而言是显而易见的。
在没有进一步详细说明的情况下，据信本领域技术人员可以根据上文的描述在最大程度上利用本发明。因此，以下具体实施方案应被解读为仅是说明性的，而不以任何方式限制本公开的其余部分。出于本文所提及的主题的目的，本文引用的所有出版物均以引用的方式并入。
实施例
实施例：拉那鲁单抗(DX-2930)治疗在人类儿科患者中的功效和安全性
对于年龄<12岁的遗传性血管性水肿(HAE)的儿科患者的安全、有效和方便的长期防治性疗法的需求尚未得到满足。拉那鲁单抗(DX-2930)是一种靶向血浆激肽释放酶的全人单克隆抗体，被批准用于常规预防≥12岁患者中的复发性HAE发作。一项开放标签、多中心3期研究旨在调查拉那鲁单抗用于预防年龄为2岁至<12岁的患有I型HAE或II型HAE的儿科患者中的HAE发作的安全性、药代动力学(PK)和药效学(PD)。
拉那鲁单抗是一种无菌、无防腐剂的注射溶液(pH 6.0)。使用以下药典组分配制活性成分抗体DX-2930：30mM磷酸氢二钠二水合物、19.6mM柠檬酸一水合物、50mM L-组氨酸、90mM氯化钠、0.01％聚山梨醇酯80。每个小瓶含有在1mL溶液中的标称浓度的150mg DX-2930活性成分(“测试产品”)。测试产品以盲法通过皮下(SC)注射施用到上臂中。
安慰剂由测试产品的无活性制剂组成：30mM磷酸氢二钠二水合物、19.6mM柠檬酸一水合物、50mM L-组氨酸、90mM氯化钠(pH6.0)与0.01％聚山梨醇酯80。将安慰剂剂量施用给随机分配到安慰剂治疗组的受试者，并且对于随机分配到150mg DX-2930每4周一次的治疗组的受试者，在DX-2930的剂量之间施用。
招募筛查年龄为2至<12岁且有记录的I/II型HAE和≥1次发作/12周的患者。计划招募≥20名患者，2至<6岁和6至<12岁的每个年龄组中有≥5名患者。计划对有足够数量患者进行泊松回归的亚组进行探索性分析。下面提供了纳入和排除标准。
纳入标准包括：
·筛查的时候为2岁至小于(<)12岁的儿童(男性或女性)。
·基于以下两项的记录在案的HAE(I型或II型)诊断：
ο记录在案的符合HAE的临床病史(SC或黏膜、非瘙痒性肿胀发作，但不伴有荨麻疹)，
ο在筛查期间从资助者批准的中心实验室获得的诊断测试结果确认C1-INH功能水平<正常水平的40百分比(％)。对于功能性C1酯酶抑制剂(C1-INH)水平为正常水平的40％-50％的参与者，如果他们的补体4(C4)水平也低于正常范围，则可以被录入。经资助者事先批准，如果结果与临床病史不一致或研究者认为近期补体1(C1)抑制剂会混淆结果，则可以在基线观察期间重新测试参与者。
·历史基线HAE发作率为每3个月至少1次发作。注意：此外，在12周基线观察期内每三个月经历大于或等于(>＝)1.0次血管性水肿发作并且根据纳入标准仍然符合条件的参与者将进入拉那鲁单抗治疗期。
·同意遵守协议限定的治疗计划表、评估和程序。
·有一位或多位家长/法定监护人被告知研究的性质，并且可以在执行任何特定于研究的程序之前为儿童提供书面知情同意书以参与研究(在适当的情况下征得儿童的同意)。
·有生育能力的女性必须同意在从筛查到最终研究访视后70天的研究持续时间内禁欲或同意遵守本协议的适用避孕要求。
排除标准包括：
·同时诊断出另一种形式的慢性、复发性血管性水肿，诸如获得性血管性水肿(AAE)、C1-INH正常的HAE、特发性血管性水肿或与荨麻疹相关的复发性血管性水肿。
·在筛查前4周内接受了研究药物或暴露于研究装置。
·怀孕或哺乳。
·在进入观察期前2周内启动了雄激素治疗(例如，司坦唑醇、达那唑、氧雄龙、甲睾酮和睾酮)。
·在筛查前4周内暴露于血管收缩素转化酶(ACE)抑制剂或任何全身吸收的含雌激素药物(诸如口服避孕药或激素替代疗法)。
·在治疗期A的第一剂研究药物之前24小时内有任何活动性传染病或被定义为口腔温度高于(>)38摄氏度(℃)(100.4华氏度[℉])、鼓室温度>38.5℃(101.3℉)、腋窝温度>38℃(100.4℉)或直肠/核心温度>38.5℃(101.3℉)的发热。
·在治疗期A的第一剂研究药物之前有任何未消退的HAE发作。
·有任何以下肝功能检查异常情况：丙氨酸氨基转移酶(ALT)>3x正常上限(ULN)，或天冬氨酸氨基转移酶(AST)>3x ULN，或总胆红素>2x ULN(除非胆红素升高是由于吉尔伯特综合征引起的)。
·有研究者或资助者认为可能损害安全性或依从性、妨碍研究成功进行或干扰结果的解释的任何情况(任何手术或医疗情况)(例如，研究者认为可能混淆研究结果的解释的重大预先存在的疾病或其他主要合并症)。
·参与者对研究产品或其组分具有已知的超敏反应。
如图1所示，在4周至12周的观察期(如果发生HAE发作则少于12周；“导入期”)之后，患者将接受拉那鲁单抗的皮下治疗。知情同意时年龄为2岁至<6岁的患者每4周(q4weeks)接受150mg，知情同意时年龄为6岁至<12岁的患者每2周(q2wks)接受150mg。
期中分析在治疗26周后进行，最终分析在总共52周的治疗和4周的随访后进行。如果患者6个月无发作，则每2周150mg的剂量可以改为每4周150mg。研究的主要终点包括拉那鲁单抗治疗的安全性和药代动力学(PK)测量，包括：不良事件、生命体征(例如，血压、心率、体温和呼吸速率)、临床实验室检验(例如，血液学、临床化学、凝血)、测量拉那鲁单抗血浆浓度和血浆中的其他PK参数。次要终点包括临床结果测量，诸如治疗期期间的HAE发作次数；需要急性疗法使用的HAE发作次数；中度或重度HAE发作次数；到第一次发作的时间；任何HAE发作的特征(例如，持续时间、严重性、发作部位、所使用的急救药物)；在评估期实现无发作状态；药效学(PD)测量，包括血浆激肽释放酶活性(例如，如通过切割的高分子量激肽原水平所测量)；以及在所测试的儿科人群中，拉那鲁单抗的免疫原性(例如，中和与非中和抗药物抗体)。附加的探索性终点包括生活质量评估(例如，PedsQL通用核心量表、PedsQL-PIM和EQ-5D-Y问卷)；探索性药效学终点和拉那鲁单抗对C1-INH、C4、HK1和C1q的影响。
其他实施方案
本说明书中公开的所有特征均可以以任意组合进行组合。本说明书中公开的每个特征可以被用于相同、等效或类似目的的替代特征替代。因此，除非另有明确说明，否则所公开的每个特征仅是通用系列的等价或类似特征的实例。
从前面的描述中，本领域技术人员可以容易地确定本发明的基本特征，并且在不背离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种变化和修改以使其适应于各种用途和条件。因此，其他实施方案也在权利要求范围内。
等效方案
虽然本文已经描述和说明了本发明的几个实施方案，但是本领域的普通技术人员将容易地想到用于执行功能和/或获得结果和/或本文所述的一个或多个优点的多种其他手段和/或结构，并且此类变化和/或修改中的每一个均被认为在本文所述的本发明实施方案的范围内。更一般地，本领域技术人员将容易地理解，本文所述的所有参数、尺寸、材料和构造都意在为示例性的，并且实际的参数、尺寸、材料和/或构造将取决于使用本发明的教导的一种或多种具体应用。本领域技术人员将认识到或者仅仅使用常规实验就能够确定本文所述的本发明具体实施方案的很多等效方案。因此，应当理解，前述实施方案仅以示例的方式呈现，并且在所附权利要求及其等同物的范围内，本发明实施方案可以按不同于具体描述和要求保护的方式实施。本公开的本发明实施方案涉及本文所述的每个单独的特征、系统、制品、材料、试剂盒和/或方法。此外，如果此类特征、系统、制品、材料、试剂盒和/或方法不是相互不一致的，则两种或更多种此类特征、系统、制品、材料、试剂盒和/或方法的任何组合都包括在本公开的本发明范围内。
如本文所定义和使用的所有定义都应该理解为控制字典定义、以引用的方式并入的文档中的定义和/或所定义术语的普通含义。
如本文在说明书和权利要求中所使用的不定冠词“一个”和“一种”应该理解为意指“至少一个/至少一种”，除非有明确相反的指示。
如本文在说明书中和权利要求书中使用的短语“和/或”应理解为表示如此被联接起来的要素中的“任一个或两个”要素，即在一些情况下联接存在而在其他情况下分离存在的要素。用“和/或”列出的多个要素应该以相同的方式解释，即“一个或多个”如此结合的要素。除了由“和/或”从句具体指明的要素之外，任选地存在其他要素，无论是否与具体指明的那些要素相关。因此，作为非限制性实例，当与诸如“包括”的开放式语言结合使用时，对“A和/或B”的引用在一个实施方案中可以仅指A(任选地包括除B之外的要素)；在另一个实施方案中，仅指B(任选地包括除A之外的要素)；在又一个实施方案中，A和B两者(任选地包括其他要素)；等等。
如本文在说明书和权利要求中所使用，“或”应该理解为具有与如上文所定义的“和/或”相同的含义。例如，当分离列表中的项目时，“或”或“和/或”应被解释为包含性的，即，包含许多要素或要素列表中的至少一个，但也包括多于一个，以及任选地，附加的未列出的项目。清楚地相反指示的仅有术语，诸如“其中的仅一个”或“其中的确切地一个”，或当在权利要求中使用时，“由……组成”将是指包含许多要素或要素列表中的确切一个要素。一般而言，如本文所用的术语“或”应仅被解释为表示排他性替代物(即，“一个或另一个但不是两者”)，在其之前是排他性术语，诸如“任一个”、“其中的一个”、“其中的仅一个”或“其中的确切一个”。当在权利要求中使用时，“基本上由……组成”应具有其在专利法领域中所使用的一般含义。
如本文在说明书和权利要求书中使用的，短语“至少一个”在提及一个或多个要素的列表时，应理解为表示选自要素列表中的任何一个或多个要素的至少一个要素，但不一定包括要素列表中具体列出的每个要素中的至少一个要素，并且不排除要素列表中的要素的任何组合。该定义还允许除了在短语“至少一个”所指的要素列表内具体标识的要素之外，要素可以任选地存在，无论是否与具体标识的那些要素相关。因此，作为非限制性实例，“A和B中的至少一个”(或等效地，“A或B中的至少一个”，或等效地“A和/或B中的至少一个”)可以指，在一个实施方案中，至少一个，任选地包括多于一个的A，不存在B(并且任选地包括除B之外的要素)；在另一个实施方案中，至少一个，任选地包括多于一个的B，不存在A(并且任选地包括除A之外的要素)；在又一个实施方案中，至少一个，任选地包括多于一个的A，和至少一个，任选地包括多于一个的B(并且任选地包括其他要素)；等等。
还应当理解，除非有明确相反的指示，否则在本文所要求保护的包括多于一个步骤或动作的任何方法中，所述方法的步骤或动作的顺序不必限于陈述所述方法的步骤或动作的顺序。
在权利要求以及上述说明书中，所有过渡短语诸如“包含”、“包括”、“携带”、“具有”、“含有”、“涉及”、“持有”、“由……构成”等将被理解为是开放式的，即意味着包括但不限于。如美国专利局专利审查程序手册(United States Patent Office Manual ofPatent Examining Procedures)第2111.03章节所述，只有过渡短语“由……组成”和“基本上由……组成”应分别为封闭或半封闭过渡短语。
序列表
<110> 戴埃克斯有限公司(Dyax Corp.)
<120> 血浆激肽释放酶抑制剂及其用于治疗遗传性血管性水肿发作的用途
<130> D0617.70134WO00
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> US 62/960,333
<151> 2020-01-13
<160> 10
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 1
Met Gly Trp Ser Cys Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly Ala
1 5 10 15
His Ser Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
20 25 30
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
35 40 45
His Tyr Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
50 55 60
Trp Val Ser Gly Ile Tyr Ser Ser Gly Gly Ile Thr Val Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr
85 90 95
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ala Tyr Arg Arg Ile Gly Val Pro Arg Arg Asp Glu Phe Asp
115 120 125
Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro
225 230 235 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly
465
<210> 2
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
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His Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser
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Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser
35 40 45
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65 70 75 80
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
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Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
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Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
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Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
195 200 205
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Trp Thr
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> PRT
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Gly Ile Tyr Ser Ser Gly Gly Ile Thr Val Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<223> 合成多肽
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<400> 8
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<212> PRT
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<223> 合成多肽
<400> 9
Lys Ala Ser Thr Leu Glu Ser
1 5
<210> 10
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成多肽
<400> 10
Gln Gln Tyr Asn Thr Tyr Trp Thr
1 5

Claims (13)

1.一种用于治疗遗传性血管性水肿(HAE)发作或降低HAE发作率的方法，所述方法包括：
在第一治疗期中向有需要的人类受试者施用包含与DX-2930相同的互补决定区(CDR)的抗体；
其中在所述第一治疗期中，所述抗体按多剂量以约150mg每两周或每四周被施用给人类受试者；并且
其中所述人类受试者患有HAE、疑似患有HAE或处于HAE的风险中并且是在2岁至小于12岁之间的儿科受试者。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述人类受试者在2岁与小于6岁之间，并且所述抗体以约150mg每四周被施用。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述人类受试者在6岁与小于12岁之间，并且所述抗体以约150mg每两周被施用。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述抗体是全长抗体或其抗原结合片段。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述抗体包含如SEQ ID NO:3所示的重链可变区和/或如SEQ ID NO:4所示的轻链可变区。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述抗体包含如SEQ ID NO:1所示的重链和如SEQ ID NO:2所示的轻链。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述抗体被配制成包含药学上可接受的载剂的药物组合物。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述药物组合物包含磷酸钠、柠檬酸、组氨酸、氯化钠和聚山梨醇酯80。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述磷酸钠的浓度为约30mM，所述柠檬酸的浓度为约19mM，所述组氨酸的浓度为约50mM，所述氯化钠的浓度为约90mM，并且所述聚山梨醇酯80为约0.01％。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述抗体是皮下施用的。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述人类受试者患有I型或II型HAE。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述人类受试者在所述第一治疗期之前具有每12周至少一次HAE发作的HAE发作率。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括在所述第一治疗期之后的第二治疗期向所述受试者施用所述抗体。
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