KR910003619B1 - 트립신형 프로테아제의 펩타이드 붕산 억제제 - Google Patents

트립신형 프로테아제의 펩타이드 붕산 억제제 Download PDF

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Abstract

내용 없음.

Description

트립신형 프로테아제의 펩타이드 붕산 억제제
제 1 도는 본 발명의 두가지 억제제, H-(D)Phe-Pro-보로 Arg-C10H16및 Boc-(D)Phe-Phe-보로 Arg-C10H16의 억제제 농도에 대한 상대적 응고 시간을 풀롯한 것이다.
본 발명은 일반적으로 리신, 오르니틴 및 아르기닌, 호모아르기닌 및 상응하는 이의 이소티오우로늄 동족체의 C-말단 알파-아미노붕산 유도체, 및 트롬빈, 혈장 칼리크레인 및 플라즈민과 같은 트립신형 세린프로테아제의 억제제로서의 이의 용도에 관한 것이다.
많은 생물학적 시스템의 활성은 전구체 단백질을 특이적인 장소에서 분해하는 가수분해 또는 단백질분해 효소에 의해 중재된다. 이러한 효소의 4가지 군(class)은 메탈로, 티올, 산 및 세린 프로테아제이다. 혈액응고, 피브린 분해, 보체 및 칼리크레인-키닌과 같은 시스템은 모두 세린 프로테아제의 소군(Subclass), 트립신형 프로테아제, 아르기닐 또는 리실 잔기에 중요한 특이성을 갖는 효소 그룹에 의해 조절된다.
각 군내에서 특이적 억제제를 분류하기 위한 효소의 작용 기작 및 활성부위 잔기뿐만 아니라 이의 감도는 유사하다. 그러나 특정 프로테아제 또는 프로테아제의 특정 소군을 효과적으로 억제하는 화합물의 활성은 주로 화합물의 구조 및 조성에 좌우된다.
프로테아제 억제에 관한 분야에서 많은 연구들이 진행되고 있고, 이러한 분야의 많은 연구원들이 붕소-함유 억제제를 사용하여 실험하고 있다.
예를 들어, 쉔비(Shenvi)의 미합중국 특허 제4,537,773호(1985)에는 지방족 및 방향족 알킬 측쇄를 함유하는 아미노산의 알파-아미노붕산 동족체가 메탈로효소의 유효한 억제제라는 것이 보고되어 있다. 또한, 쉔비 등의 미합중국 특허 제4,499,082호(1985)에는 펩타이드에 혼입된 알파-아미노붕산이 췌장 및 백혈구 엘라스타제, 카이모트립신 및 카텝신 G와 같이, 중성 측쇄에 의해 주요 특이성 요구조건이 충족되는 세린프로테아제를 억제한다고 기술되어 있다. 이러한 후자의 특허에는 이러한 단백질 분해효소의 유효하고 가역적인 억제제로서 C-말단 알파-아미노붕산 잔기를 함유하는 테트라펩타이드가 기술되어 있다. 그러나 기술되어 있는 펩타이드에는 리신, 오르니틴, 아르기닌, 호모아르기닌 또는 상응하는 이소티오우로늄 염의 C:말단 알파-아미노붕산 잔기가 포함되지 않았다.
쾨홀러(Koehler)등은 문헌[참조:Biochemistry, 10 :2477(1971)]에서 2-페닐-에탄붕산이 카이모트립신의 억제제라고 보고하였다. 마테손(Matteson)등은 문헌[참조:J. Am. Chem. Soc. 103:5241(1981)]에서 (R)-1-아세트아미도-2-페닐에탄붕산의 합성방법 및 카이모트립신의 억제제로서 이의 용도를 기술하였다. 이 저자들은 Ki=4uM로 나타내었다.
린하드(Lienhard)는 문헌[참조:Enzyme Inhibitors as Drugs, Sandler ed., University Park Press, Baltimore pp. 43-51(1980)]에서 알파-이미노 붕산의 펩타이드 동족체가 세린 및 티올 프로테아제의 유효한 억제제일 것이라고 추측하고 있다.
또한, 킨더(Kinder)등의 문헌[참조:J.Med. Chem. 28:1917-1925(1985)]에서 N-아실 및 티펩타이드 붕산, 및 페닐 알라닌, 페닐글리신, 알리닌, 발린 및 이소로이신의 디플루오로보란 동족체가 기술되어 있고, 마테손(Matteson)의 문헌[참조:Organometallics 3:1284-1288(1984)]에는 알파-아미노 감마-치환된 붕산 에스테르의 합성 방법이 기술되어 있다. 후자의 저자는 이러한 화합물을 아르기닌 및 프롤린의 붕산 동족체에 대해 가능한 전구체로서 제조한다고 기술하고 있다.
트립신형 프로테아제는 많은 생리학적 과정을 조절하는데 있어서 매우 중요하다. 이러한 활성에 대해서는 문헌[참조:"Proteases and Biological Control", Reich, Rifkin 및 Shaw eds., Cold Spring Harbor Press(1975)]을 참조하시오. 트립신형 프로테아제의 한 형태인 트롬빈은 응혈과정에서 명확하고 결정적인 역활을 한다. 응혈은 자이모겐 활성의 두가지 분기중 하나를 통해 일어난다. 이러한 경로중 각각에 있어서 최종 프로테아제는 트롬빈이고, 이는 피브리노겐을 가수분해하여 피브린을 형성하며, 다시 응집하여 혈괴를 형성한다. 이 트롬빈 촉매 가수분해는 응혈 과정에 필수적이다.
또 하나의 트립신형 프로테아제인 혈장 칼리크레인도 응혈 과정, 특히 응혈 경로중 하나의 개시에 관련된다. 또한, 칼리크레인은 키니노겐에 작용하여 노나펩타이드, 브라디키닌을 유리시킨다. 브라디키닌은 통증과 관련된 저혈증의 펩타이드이다. 또한, 칼리크레인은 다른 생물학적 기능을 갖는 것으로 생각된다. 최근정보는 혈장 칼리크레인이 염증과 관련있음을 제시한다. 바음가텐(Baumgarten)등은 문헌[참조:J. Immun 137:977-982(1986)]에서, 예를 들어, 알레르겐의 공격을 받은 알레르기 체질인 사람들의 키닌 및 칼리크레인의 상승도를 보고하였다. 와취포겔(Wachtfogel)등은 문헌[참조:Blood 67:1731-1737(1986)]에 혈장 칼리크레인이 사람의 중성호체를 응집시키고 호중성 엘라스타제를 분비한다고 보고하고 있다. 엘라스타제의 분비 및 수반되는 엘라스타제-중개 조직 파괴는 염증 과정과 연관된 경우이다.
생물학적 과정을 조절하기 위한 트립신형 효소의 특이 억제제에 대한 구상은 새로운 개념은 아니다. 혈전중의 치료에 있어서 헤파린 치료법과 연관된 부작용 없이 헤파린을 대치시키기 위한 트롬빈의 억제제 제조에 특별한 노력을 쏟고 있다[참조:Markwardt TIPS 153-157(1980) 및 Green et al., Thromb Res., 37:145-153(1985)]. 매우 유효한 펩타이드 클로로메틸 케톤은 케트너(Kettner)등에 의해 [참조:Methods in Enzymology 80:826-842(1981)]많은 트립신형 프로테아제용으로 제조되어 왔다. 한가지 예로, H-(D)Phe-Pro-ArgCH2CI은 트롬빈의 억제(Ki=37nM)에 매우 효과적이고, 샤우(Shaw)등의 미합중국 특허 제4,318,904호(1982)에는 래비트 모델에서 관상 동맥 혈전증의 예방에 유효한 것으로 기술되어 있다. 유사하게, 바주쯔(Bajusz)등은 문헌[참조:Int. J. Peptide Protein Res. 12:217-221(1979)]에, 펩타이드 알데하이드 H-(D) Phe-Pro-Arg-H가 유용한 트롬빈 억제제(Ki=75nM)라고 보고하였으며, 트리몰리(Tremoli)등의 문헌[참조:Thromb. Res. 23:549-553(1981)]에는 관련 화합물, Boc-(D)-Phe-Pro-Arg-H가 래트에서 정맥 혈전증의 규모를 감소시키는 것으로 보고되어 있다.
2급 아민으로 구성된 치환된 아르기닌 아미드는 또한 유효한 트롬빈 억제제인 것으로 보인다. 기쿠모토(Kikumoto)등은 문헌[참조:Biochemistry 23:85-90(1984)]에 (2R, 4R)-4-메틸-1[N2-[(3-메틸-1, 2, 3, 4-테트라하이드로-8-퀴놀리닐)설포닐]-L-아르기닐]-2-피레리딘카복실산은 트롬빈 억제제(Ki=19nM)라고 발표하였다. 그린(Green)등의 보고에 의하면[참조:Thromb. Res. 37:145-153(1985)]이러한 억제제는 시험관내 응혈 측정에 있어서 혈장의 프로트롬빈 시기를 1uM에서 2배 증가시키며, 요시쿠니(Yoshikuni)등에 의해 조직 플라즈미노겐 활성제와 혼합하여 사용되는 피브린분해 강화제로서 청구되어 있다[참조:유럽 특허원 제0,181,267호(1986)]. 끝으로 스터제베처(Sturzebecher)등[참조:Thromb. Res. 29:635-642(1983)]및 카이저(Kaiser)등[참조: Thromb. Res 43:613-620(1986)]은, N-알파-(2-나프틸설포닐-글리실)-4-아미디노페닐-알라닌 피페리다이드가 공지된 가장 유효한 트롬빈 억제제(Ki=6nM)라고 보고하였으며, 마우스 및 래트에서 생체내효율을 설명하였다.
상기 내용에도 불구하고, 트롬빈 및 다른 트립신형 효소의 신규하고 더욱 좋은 억제제 군은 응혈질환, 염증 및 다른 포유류의 질병을 치료하기 위한 매우 유용한 치료제를 제공하기에 필요하다. 본 발명은 이러한 목적에 관한 것이다.
본 발명은 일반식(Ⅰ)의 화합물 또는 이의 생리학적으로 허용되는 염을 제공한다.
Figure kpo00001
상기식에서, Y1및 Y2는 독립적으로 -OH 또는 F이거나, 함께는 1 내지 약 20개의 탄소원자 및 임의로 N,S 또는 O일 수 있는 헤테로원자를 함유하는 쇄 또는 환내의 적어도 두개의 연결원자에 의해 분리된 적어도 두개의 하이드록시 그룹을 갖는 디하이드록시 화합물로부터 유도된 잔기를 형성하고; R2는 -(CH2)z-X, -CH(CH3)-(CH2)2-X, -CH2-CH(CH3)-CH2-X, -(CH2)2-CH(CH3)-X 및 -(CH2)2-CH(CH3)2-X[여기에서, X는 -NH2, -NH-C(NH)-NH2또는 -S-C(NH)-NH2이고, z는 3내지 5이다]로 구성된 그룹으로부터 선택되는 치환된 알킬이고: n,o,p 및 q는 독립적으로 1또는 0이고: A1, A2및 A3는 독립적으로 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, GIn, GIu, GIy, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 L-또는 D-배위의 아미노산이며; R1은 1 내지 약 20개의 아미노산을 함유하는 펩타이드, 1내지 약20개의 탄소원자를 함유하는 아실 또는 설포닐 그룹, H 또는 N-말단보호 그룹이다.
본 발명은 또한 상기 일반식(Ⅰ)의 화합물 하나 이상을 함유하는 조성물, 및 트롬빈 및 혈장 칼리크레인과 같은 트립신형 세린 프로테아제의 억제 및 트립신형 프로테이제에 의해 중개되는 응혈 질환 및 염증을 포함하는 것과 같은 이상의 (aberrant) 생리학적 질환의 치료에 상기 화합물 또는 조성물을 사용하는 방법을 제공한다.
또한, 상기 화합물에 대해 중간체의 두 군이 제공된다. 이러한 중간체의 첫번째 군에는 일반식(Ⅱ)의 화합물이 포함된다.
Figure kpo00002
상기식에서, Y3는 1내지 약20개의 탄소원자를 함유하는 쇄 또는 환내의 적어도 두개의 연결원자에 의해 분리된 적어도 두개의 하이드록시 그룹을 갖는 디하이드록시 화합물로부터 유도된 잔기이고; R3는 (CH2)z-W1, -CH(CH3)-(CH2)2-W1, -CH2-CH(CH3)-CH2-W1, -(CH2)2-CH(CH3)-W1및 -(CH2)2-CH-(CH3)2-W1으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 치환된 알킬이고; W및 W1는 독립적으로 CI 또는 Br이고 ; z는 3내지 5이다.
중간체의 두번째 군에는 일반식(Ⅲ)의 화합물이 포함된다.
Figure kpo00003
상기식에서, A1, A2, A3, Y3, R1, n, o, p 및 q는 상기 정의한 바와 같고; R4는 -(CH2)2-W2,, -CH(CH3)-(CH2)2-W2, -CH2-CH(CH3)-CH2-W2, -(CH2)2-CH(CH3)-W2및 -CH(CH2)2-CH(CH3)2-W2로 구성된 그룹으로부터 선택되는 치환된 알킬이며, W2는 CI, Br 또는 N3이고; z는 3내지 5이다.
제 1 도는 본 발명의 두가지 억제제, H-(D) Phe-Pro-보로 Arg-C10H16및 Boc-(D) Phe-Phe-보로 Arg-C10H16의 억제제 농도에 대한 상대적 농도 시간을 플롯한 것이다. 제 1 도의 데이터는 표 3 및 4에서 얻은 것이다. 상대적 응고 시간은, 경우에 따라 각각 APTT(트롬보플라스틴 시간) 또는 PT(프로프롬빈 시간)로 나누어 억제제의 존재하에, 억제제의 부재하에 활성화된 부분적 APTT 또는 PT이다. 억제제 농도는 마이크로 몰로 나타낸다.
본 발명의 일반식(Ⅰ) 화합물의 중요한 화합물은 C-말단 잔기가 리신, 오르니틴 및 아르기닌, 호모아르기닌 및 이의 상응하는 이소티오우로늄염 동족체로 구성되는 알파-아미노붕산의 N-아실 및 펩타이드 유도체이다. 이러한 화합물은 몇몇 트립신형 단백분해효소, 특히 사람의 트롬빈, 혈장 칼리크레인 및 플라즈민의 억제제로서 이의 효능이 특징적이다.
본 화합물의 산 말단 붕소는 임의로 비보호된 붕산(즉, 이때 Y1및 Y2는 각각 -OH이다) 형태일 수 있고, 또는 이불화보란(즉, Y1및 Y2는 각각 -F이다)이거나, 이의 조합물이다. 다르게는, 말단 붕소기 Y1및 Y2는 함께 (-Y1-Y2-)잔기를 형성하게 되는 ,매우 다양한 보호그룹으로 보호될 수 있다.
Y1및 Y2가 -Y1-Y2-인 적합한 보호 그룹에는 쇄 또는 환내에 적어도 두 개의 결합원자에 의해 분리된 적어도 두 개의 하이드록시 그룹을 갖는 화합물, 원칙적으로는 디올로부터 유래된 잔기가 포함된다. ‘쇄’라는 것은 측쇄 및 비측쇄 둘다를 의미한다. 쇄 또는 환은 1내지 약20개의 탄소원자로 구성되며 임의로 N,S 또는 O일수 있는 헤테로원자를 포함할 수도 있다. 상기 설명내에서 고려되는 화합물에는, 예를 들어, 피난디올, 피나콜, 퍼플루오로피나콜, 에틸렌글리콜, 디에틸렌글리콜, 카테콜, 1,2-사이클로헥산디올, 1,3-프로판디올, 2,3-부탄디올, 1,2-부탄디올, 1,4-부탄디올, 글리세롤, 디에탄올아민 및 다른 아미노알코올 및 본 분야의 전문가에게 공지된 다른 등가물이 포함된다.
명세서에 사용되는 아미노산 잔기 또는 아미노산에 대한 약자는 다음과 같이 적용된다:Ala=L-알라닌,Arg=L-아르기닌, Asn=L-아스파라긴, Asp=L-아스파르트산, Cys=L-시스테인, GIn=L-글루타민, GIu=L-글루탐산, GIy=글리신, His=L-히스티딘, Ile=L-이소로이신, Leu=L-로이신, Lys=L-리신, Met=L-메티오닌, Phe=L-페닐알라닌, Pro=L-프롤린, Ser=L-세린, Thr=L-트레오닌, Trp=L-트립토판, Tyr=L-티로신, Val=L-발린.
상기에서, "D"가 접두사로 붙여진 것은 상기 약자가 D-배위의 아미노산임을 가리키는 것이다. "D또는 L"의 경우 상기 약자는 아미노산 D-또는 L-배위일 수 있음을 나타낸다.
본원에 사용된 "N-말단 보호 그룹"은 펩타이드 합성에 사용되는 각종 아미노-말단 보호그룹을 언급하는 것이다. 적합한 그룹의 예로는 아실 보호그룹, 예을 들어, 포밀, 아세틸(Ac), 벤조일(Bz), 트리플루오로 아세틸, 및 메톡시숙시닐(MeOSuc) ; 방향족 우레탄 보호그룹, 예를 들어, 벤질옥시카보닐(Z) ; 및 지방족 우레탄 보호 그룹, 예를 들어, 3급-부톡시카보닐(Boc)또는 아다만틸옥시카보닐이 포함된다. 문헌[참조:Gross and Mienhoffer, eds., The Peptides, Vol. 3:3-88(1981), Academic Press, New York 1981]에는 많은 적합한 아민 보호 그룹이 기술되어 있다.
다음에 바람직한 N-말단 보호그룹 R1을 나타낸다:
Figure kpo00004
측쇄 아미노 그룹을 갖는, 예를 들어, A1,A2또는 A3가 Lys 또는 Arg인 본 발명의 화합물은 측쇄에 결합된 적당한 N-말단 보호그룹을 함유할 수 있고, 유사하게는 산성 또는 하이드록시 측쇄를 갖는 아미노산 잔기는 t-부틸, 벤질 또는 다른 적합한 에스테르 또는 에테르 형태로 보호될 수 있다.
상기한 바와 같이, R2는 아미노, 구아니디노 또는 이소티오우로늄 그룹에 결합된 3 내지 5개의 탄소로 구성된 알킬 그룹을 언급하는 것이다. 바람직하게는, R2가 -(CH2)2-X이다. 더욱 바람직하게는 R2가 -(CH2)2-X이고, 이때 z는 3내지 4이다. R2의 더욱 바람직한 예로는 3-구아디니노-프로필, 3-아미노-프로필 및 4-아미노-부틸이 포함된다. 가장 바람직한 것은 3-구아니디노-프로필이다.
약자 및 "보로-"라는 접두용어는 일반식(Ⅰ)에서 말단 카복실 그룹 -CO2H가 붕산의 작용기
Figure kpo00005
로 대체되는 아미노산을 가르킨다.
따라서 "보로아르기닌"또는 "보로 Arg-"는 아르기닌의 붕산 동족체를 언급하고; "보로리신"또는 "보로 Lys-"는 리신의 붕산 동족체를; "보로오르니틴"또는 "보로 Orn-" 오르니틴의 붕산 동족체를 언급하는 것이다. "호모보로아르기닌"또는 "호모보로 Arg-"에서와 같이 접두사 "호모"는 측쇄가 부가 메틸렌그룹을 갖는 보로아르기닌 동족체에 관한 것이다. "Irg"는 티오우로늄 그룹, -S-C(NH)-NH가 구아니디노 그룹, -NH-C(NH)-NH로 대체로 아르기닌 또는 호모아르기닌의 이소티오우로늄 유사체를 언급하는 것이고, "보로 Irg-"또는 "보로호모 -Irg-"는 상응하는 붕산 동족체에 대한 약자이다.
본 발명의 화합물을 명명하는데 있어서, Y1및 Y2는 디플루오로보란(Y1=Yt=F)에 대해서 접미사 "-F"로, 비보호된 붕산(Y1=Y2=-OH)에 대해서 "-OH"로, 피나콜에스테르(Y1및 Y2는 함께 -C6H12이다)에 대해서 "-C10H16"로, 피난디올 에스테르(Y1및 Y2는 함께 -C10H16이다)에 대해서 -"C10H16"으로 약식화한다.
본 발명은 또한 일반식(Ⅰ)의 생리학적으로 허용되는 염에 관한 것이다. 이러한 염에는 산부가염, 예를 들어, 벤젠설폰산(BSA), 염산(HCI), 브롬화수소산(HBr), 아세트산, 트리플루오로아세트산(TFA), 석신산, 시트르산의 염 또는 다른 적당한 산부가염이 포함된다. 본 발명의 화합물을 명명하는데 사용되는 경우, 이러한 염은 화합물명에 "·”으로 도입될 것이다.
본 발명의 범위내에서 고려되는 화합물의 군에는 D-또는 L-배위의 다음 아미노산이 포함된다. 제1군은 A1이 Ala, Pro, GIy, Val, Leu, Ile 또는 Met, 즉 중성측쇄를 갖는 아미노산인 화합물이 포함된다. 제2군은 A1이 Phe, Trp 또는 Tyr, 즉 방향족 측쇄를 갖는 아미노산인 화합물이 포함된다. 제3군에는 A1이 Lys 또는 Arg, 즉 염기성 아미노산인 화합물이 포함되고, 제4군에는 A1이 Ser 또는 Thr, 즉 하이드록시 측쇄를 갖는 아미노산인 화합물이 포함된다. 마지막으로, 제5군은 A1이 Asp, GIu, Asn 또는 GIn, 즉 산성 또는 카복스아미도 측쇄를 갖는 아미노산인 화합물이 포함된다. A1 치환제로 바람직한 것은 Lys, Phe, Pro, Ala, Leu, GIy, Glu, Val, Thr, Ile, Met, Tyr, Trp, Arg, Asn 및 GIn이 포함된다. 이러한 치환체중 바람직한 군에는 Lys, Phe, Pro, Ala, Leu, GIy, Val 및 Thr이 포함된다.
상기 주요군에는 바람직한 R2에 상응하는 소군이 포함되고 이러한 소군은 R2및 N-말단 보호그룹 R1에 대해 바람직한 것에 의해 정의된 그룹에 상당하는 것이다.
A2에 대해 바람직한 것은 D-배위를 갖는 모든 아미노산, 가장 바람직하게는 (D)Phe이 포함된다. A2에 대해 기타 바람직한 것은 (D 또는 L)Phe, (D 또는 L)Ala, (D 또는 L)Leu, (D 또는 L)Pro, (D 또는 L)GIu 및 (D 또는 L)GIy가 포함된다. A2치환체의 또다른 군에는 (L)GIu 및 (D)Val이 포함된다.
바람직하게는, 일반식(Ⅰ) 화합물은 보로아미노산 동족체를 포함하여, 총 2 내지 4개의 아미노산 치환체를 갖는다. A1위치에 Pro을 가지고 보로아미노산 유사체로서 보로 Arg을 갖는, R1-(D)-Pro-보로
Figure kpo00006
와 같은 3개의 아미노산으로 된 화합물은 특히 IC50이 두렷하게 5nM 미만인, 트롬빈 억제제로 적당하다.
상기 화합물의 명백한 등가물에는 별로 일반적이 아니거나 변형된 아미노산, 예를 들어, 노르로이신, 하이드록시프롤린, 피로글루탐산 또는 다른 유도체를 함유하고, 측쇄보호 그룹을 함유하는 잔기를 함유하며, 본 발명의 알파-아미노붕산 펩타이드에 혼입될 수 있는 화합물이 포함된다.
본 발명의 범위내에서 특정 화합물은 상기 규칙에 따라 명명되었고, 다른 예를 포함한다:
Ac-(D,L)Phe-보로 Arg-C10H16·BSA
AC-Phe-보로 Orn-C10H16·BSA
Ac-Phe-보로 Arg-C10H16·HCI
H-(D)Phe-Pro-보로 Irg-C10H16·HBr·HCI
Boc-(D)Phe-Pro-보로 Irg-C10H16·HBr
Ac-Phe-보로 Irg-C10H16·HBr
Ac-Ala-Lys(Boc)-보로 Orn-C10H16·BSA
Ac-Ala-Lys(Boc)-보로 Irg-C10H16·HBr
Boc-(D)Phe-Pro-보로 Arg-C10H16·BSA
Boc-(D)Phe-Phe:보로 Irg-C10H16·HBr
H-(D)Phe-Pro-보로 Arg-C10H16·HCI
Boc-(D)Phe-Phe-보로 Orn-C10H16·BSA
Boc-(D)Phe-Phe-보로 Arg-C10H16·BSA
Ac-Ala-Lys(Boc)-보로 Arg-C10H16·BSA
Ac-(D)Phe-Pro-보로 Arg-C10H16·HCI
Ac-(D)Phe-Pro-보로 Arg-OH-HCI
Boc-Leu-GIy-Leu-Ala-보로Irg-C10H16·HBr
Boc-Leu-GIy-Leu-Ala-보로 Orn-C10H16·BSA
Boc-Leu-GIy-Leu-Ala-보로 Arg-C10H16·BSA
Bz-Pro-Phe-보로 Orn-C10H16·BSA
Bz-Pro-Phe-보로 Arg-C10H16·BSA
Boc-Ala-Phe-(D,L)보로 Irg-C10H16·HBr
Bz-GIu(OBu)GIy-보로 Irg-C10H16·HBr
Bz-GIu-GIy-보로 Arg-C10H16·BSA
Bz-GIu(OBu)GIy-보로 Org-C10H16·BSA
Bz-GIu-(OBu)-GIy-보로 Arg-C10H16·BSA
Bz-Pro-Phe-보로 Irg-C10H16·HBr
Z-Phe-GIy-GIy-보로 Irg-C10H16·HBr
Boc-Ala-Phe-(D,L)보로호모 Irg-C6H12·HBr
Bz-Pro-Phe-보로 Arg-OH·HCI
Bz-Pro-Phe-보로 Arg-F
H-(D)Phe-Pro-보로 Arg-C10H16·2HCI
H-(D)Phe-Phe-보로 Arg-C10H16·2HCI
Ac-Ala-Lys-보로 Arg-C10H16·2HCI
H-Leu-GIy-Leu-Ala-보로 Arg-C10H16·HCI·BSA
Boc-Ala-Phe-(D,L)보로 Lys-C6H12·HCI
H-Ala-Phe-(D,L)보로 Lys-C6H12·2HCI
Boc-(D)Val-Leu-보로 Lys-C6H12·HCI
Ac-Phe-보로 Lys-C6H12·HCI
Bz-GIu-GIy-보로 Arg-C10H16·BSA
H-(D)Phe-Phe:보로 Irg-C10H16·2HBr
H-Leu-GIy-Leu-Ala-보로 Irg-C10H16·2HBr
H-Ala-Phe-(D,L)보로 Irg-C6H12·2HBr
Bz-GIu-GIy-보로 Irg-C10H16·HBr
H-Ala-Phe-(D,L)보로호모 Irg-C6H12·2HBr
Ac-Ala-Lys-보로 Irg-C10H16·2HBr
Bz-보로 Irg-C6H12·HBr
Bz-보로 Orn-C6H12·BSA
Bz-보로 Arg-C6H12·BSA
Ac-Leu-Thr(OBu)보로 Orn-C10H16·BSA
Ac-Leu-Thr(OBu)보로 Arg-C10H16·BSA
Ac-Leu-Thr-보로 Arg-C10H16·BSA
Ac-Lys(Boc)-Pro-보로 Orn-C10H16·BSA
Ac-Lys(Boc)-Pro-보로 Arg-C10H16·BSA
Ac-Lys-Pro-보로 Arg-C10H16·BSA
Ac-Ala-GIu(OBu)-보로 Orn-C10H16·BSA
Ac-Ala-GIu(OBu)-보로 Arg-C10H16·BSA
Ac-Ala-GIu-보로 Arg-C10H16·BSA
Boc-Val-Val-보로 Lys-C6H12·BSA
H-Val-Val-보로 Lys-C6H12·BSA·TFA
Boc-(D)Phe-Phe-보로 Lys-C6H12·BSA
H-(D)Phe-Phe-보로 Lys-C6H12·BSA·TFA
Boc-GIu-Phe-보로 Lys-C6H12·BSA
PyroGIu-Phe-보로 Lys-C6H12·BSA
본 발명은 또한 트롬빈, 혈장 칼리크레인 및 플라즈민을 포함하지만 이로써 제한하지는 않는, 트립신형세린 프로테아제를 억제하기 위한 조성물 및 방법 및 포유류에서 응혈 및 염증을 포함하지만 이로써 제한하지는 않는, 생리학적 이상 질환을 치료하기 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 일반식(Ⅰ)의 화합물 및 생리학적으로 허용되는 담체 및 희석제 유효량을 함유한다. 본 발명의 방법을 수행하는데 있어서, 화합물 또는 조성물을 단독으로 사용하거나, 서로 혼합하거나 또는 다른 치료제와 혼합하여 사용할 수 있다. 이것들은 각종 용량형태로 경구, 비경구, 정맥내, 피하, 근육내, 결장내, 직장내, 비강내 또는 복막내 투여할 수 있다. 투여되는 유용한 용량 및 투여 양식은 처리되는 포유류, 나이, 체중 및 사용되는 특정 화합물에 따라 변한다. 전형적으로 치료는 낮은 투여용량의 수준에서 시작하여 목적하는 효과가 달성될 때까지 증가시킨다.
본 발명은 또한 일반식(Ⅰ)의 화합물에 대한 중요한 중간체로 일반식(Ⅱ) 및 (Ⅲ)의 화합물, 두군에 관한 것이다. 일반식(Ⅱ) 중간체는 하기 일반식(Ⅱ)의 화합물을 포함한다:
Figure kpo00007
상기식에서, Y3는 1 내지 약 20개의 탄소원자를 함유하는 쇄 또는 환내에 적어도 두 개의 결합원자에 의해 분리되는 적어도 두 개의 하이드록시 그룹을 갖는 디하이드록시 화합물로부터 유도된 잔기이고, R3은 -(CH2)z-W1, -CH(CH3)-(CH2)2-W1-, -CH2-CH(CH3)-CH2-W1, -(CH2)2-CH(CH3)-W1및 -(CH2)2-CH(CH3)2-W1이고, W 및 W1은 독립적으로 CI 또는 Br이고, z는 3 내지 5이다. 특히 바람직한 일반식(Ⅱ)의 화합물은 R3가 -(CH2)zW1이고 z가 3 내지 4인 화합물이다.
중간체의 두 번째 군은 하기 일반식(Ⅲ)의 화합물을 포함한다:
Figure kpo00008
상기식에서, A1, A2, A3, Y3, R1, n, o, p 및 q는 상기 정의한 바와 같고; R4는 -(CH2)z-W2, -CH(CH3)-(CH2)2-W2, -CH2-CH(CH3)-CH2-W2, -(CH2)2-CH(CH3)-W2및 -CH(CH2)2-CH(CH3)2-W2이고 W2는 CI,Br 또는 N3이고 z는 3 내지 5 이다.
일반식(Ⅲ)의 범위안에서 고려되는 화합물군은 유사한 일반식(Ⅰ)의 화합물에 대해 설명한 것과 같다. 특히 바람직한 일반식(Ⅲ)의 화합물은 R4가 -(CH2)2-W2이고 z가 3 내지 4인 화합물이다.
억제제의 제조
온도는 ℃이다. 하기 설명되는 "합성도식"이란 표제로 나타낸, 번호가 붙은 화합물은 이들의 각 번호에 따라서 본 명세서에 언급된다. 본원에 사용되는 것과 같은 "NMR"은 양자 핵자기공명을 의미한다.
Figure kpo00009
Figure kpo00010
본원에서 설명한 방법에 따라, 본 발명의 일반식(Ⅰ) 화합물은 사용가능한 고순도로 즉, 80 내지 100%의 순수한 형태로 수득할 수 있다.
출발물질은 화학적 공급원으로부터 고순도로 이용 가능하거나, 본 기술의 전문가에게 공지된 방법에 의해 쉽게 합성할 수 있다. 합성 도식은 본 발명의 화합물이 합성되는 일반적인 순서를 나타낸다. 화합물 1 내지 4는 방법이 대규모 제조로 변형된 것을 제외하고는 문헌[참조: Matteson et al., Organometallics 3: 1284-1288(1984)]에 설명된 바와 같이 제조된다.
화합물은 1은 알켄 할라이드를 카테콜 보란으로 수소화붕소 첨가반응시켜 제조한다. 성분들을 테트라하이드로푸란 또는 몇몇 다른 불활성 용매중에서 가열하고 증류시켜 생성물을 분리한다. 할로-치환된 알킬 붕산-카테콜 에스테르는 테트라하이드로푸란중 적당한 디올(알파-피난디올, 피나콜, 2,3-부탄디올 등)과 반응시킴으로써 트랜스에스테르화시킨다. (+)-알파-피난디올은 마테손(Matteson)등의 관찰[참조:J. Am. Chem. Soc. 103:5241(1981)]의 관점에서, 분자내의 입체적 제한으로 화합물 3의 형성에 있어서 -CHCI-그룹의 입체 특이적 첨가 및 "L" 배위에 있어서 아미노 그룹의 연속적인 도입이 허용되므로 바람직한 것이다. 합성도식에서 구조식 3 내지 9는 피난디올 보호그룹과 함께 나타낸 것이다. 대량 제조를 위해서 에스테르화 반응의 생성물인 카테콜의 제거는 카테콜의 용해도가 제한되어온 용매인 헥산으로부터 결정화하여 수행한다. 화합물 2는 실리카겔 크로마토그래피 또는 증류시켜 정제하거나 또는 추가로 정제하지 않고 사용된다. 화합물 2는 피난디올 에스테르로서 용매를 제거하여 거의 분석적 순도로 수득된다. 추가 정제는 실리카겔 크로마토그래피하여 수행할 수 있다. 화합물 2의 피나콜에스테르를 위한 최종단계는 증류하는 것이 바람직하다.
화합물 3은 CHCI- 2Li+을 사용하여 2를 동족체화시켜 제조한다. 이 시약은 메틸랜클로라이드를 테트라하이드로푸란중 n-부틸리튬으로 -100℃에서 처리함으로써 만든다. 화합물 2에 염화아연 0.65당량을 -100℃에서 가한다. 혼합물을 실온까지 서서히 가온하고 밤새 교반한다. 화합물 3은 용매를 증발시킨 후 헥산에 잔류물을 용해시키고, 유기층을 수세척하고, 황산 마그네슘으로 건조시킨 후 최종적으로 헥산을 증발시켜 수득한다. 화합물 3은 피난디올 에스테르로서 보호된 경우 추가로 정제하지 않고 사용하고, 또한 피나콜 에스테르로서 보호된 경우에는 증류시킬 수 있다.
화합물 4는 알파-클로로-치환된 붕산 에스테르인 화합물 3을 [(CH3)3Si]2N-Li+로 처리하여 제조한다. 헥사메틸디실라잔을 테트라하이드로푸란에 용해시키고 n-부틸리튬 1당량을 -78℃에서 첨가한다. 혼합물을 실온까지 가온하고 -78℃로 재냉각시킨 후, 화합물 31당량을 테트라하이드로푸란중에서 첨가한다. 혼합물을 실온까지 서서히 가온하고 밤새 교반시킨다. 알파-비스[트리메틸실란]-보호된 아민은 용매를 증발시키고 무수 조건하에서 헥산을 첨가함으로써 분리한다. 불용성 잔류물은 질소 블랭킷(blanket)하에서 여과하여 제거함으로써 화합물 4의 헥산용액을 수득한다.
화합물 5는 화합물 4의 헥산 용액을 -78℃까지 냉각시키고 염화수소 3당량을 첨가하여 수득한다. 용액을 실온까지 가온하고 1.5내지 2시간동안 교반시킨다. 다음에 여과하여 화합물 5를 분리하고 클로로포름에 용해시키고 불용성 물질을 제거함으로써 추가 정제한다. 화합물 5는 증발시켜 클로로포름을 제거하고 에틸 아세테이트로 잔류물을 결정화하여 백색 결정화하여 백색 결정성 고체로서 수득한다.
화합물 3을 화합물 5로 전환시키는 상기 과정에 의해 놀랍게도 화합물 5의 분석학적으로 순수한 제제를 얻게 되고, 이 화합물 5는 이질성 물질을 커플링하는데 일반적으로 직면하게 되는 어려움 없이 화합물 6을 수득하게 된다. 이 기술은 순수한 샘플을 수득하기 위하여 화합물 4가 화합물 5로 전환하기 전에 정제되어야 한다는 것을 강력하게 암시한다. 순수한 알파-아미노붕산의 제조에 유일하게 공지된 방법은 쉔비의 미합중국 특허 제4,537,773호에 기술되어 있고, 쉔비 등의 미합중국 특허 제4,499,082호에 사용된 것이다. 쉔비 등의 기술내용에 있어서, 방향족 및 알킬부분의 쇄를 함유하는 이외에는 화합물 4와 유사한 화합물은 증류시켜 정제한다. 화합물 4는 쉔비 등의 증류방법에는 불안정하고 다른 생성물이 수득된다.
화합물 5의 N-아실 또는 N-펩티딜형인 화합물 6은 두가지 다른 경로로 제조될 수 있다. 첫째는 마테손 등이 설명한 방법[참조:Organometallics 3:1284-1288(1984)]의 변형이고, 이 방법에는 동일 반응계내에서 제조된(용매의 증발 및 여과에 의한 염의 제거없이) 화합물 4를 아세트산 1당량 및 과량의 아세트산 무수물로 처리하여 N-아세틸-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-피난디올을 수득한다. 이 방법은 아세트산 전처리를 생략하는 변형으로 N-아세틸-페닐알라닌(Ac-Phe-CI)의 고반응성 산 염화물을 커플링하는데 적용가능하다. 아세트산을 Ac-Phe-CI과 함께 첨가하는 경우, 매우 저수율로 수득되는 것은, Ac-Phe 및 아세트산의 혼합된 무수물의 형성 및 후속되는, 화학적으로 바람직한 커플링의 결과인 N-아세틸-NH-CH-[(CH2)3-Br]BO2-피나콜에 기인하는 것 같다. 화합물 6의 제조에 있어서 혼합된 무수물 방법의 적용은 목적하는 생성물의 저수율 및 정제에 있어서, 광범위한 문제를 초래한다. 따라서, 이 방법은 산염화물 방법을 사용한 화합물 4에 대한 알킬, 아릴 및 N-보호된 아미노산의 커플링에 적용시킬 수 있다. 그러나 산염화물 커플링 방법의 필요에 기인하는 제한들이 있다는 것을 명심하여야 한다. 첫째, 이 방법은 단일 아미노산 잔기에 작용을 제한하는 옥사졸리논 형성과 같은 부반응 때문에 펩타이드 커플링에 쉽게 적용시킬 수 없다. 둘째, 산 염화물의 형성동안에 생성된 과량의 HCI 때문에 산에 안정한 보호그룹이 요구된다. 최종적으로, 이 방법에 있어서 본래 아미노산 잔기가 라세미화된다.
화합물 6의 제조에 대한 두번째 방법은 화합물 5에 대한 적당한 측쇄 보호와 함께 아실 그룹 또는 N-보호된 펩타이드의 커플링이다. 이 방법은 첫 번째 방법보다 매우 우수하고 그 이유는 불충분한 용해성과 같은, 펩타이드 합성동안 일반적으로 직면하게 되는 한계내에서는 어떤 펩타이드의 합성에도 충분히 적용될 수 있기 때문이다. 산 염화물 또는 아실 그룹의 다른 활성 형태를 커플링할 수 있다. 펩타이드에 대해서는 앤더슨(Anderson)등의 혼합된 무수물 방법이 바람직하다[참조:J. Am. Chem. Soc. 89:5012(1967)]. 적당한 측쇄 보호그룹과 함께 디펩타이드로부터 테트라펩타이드까지 길이가 다양한 N-보호된 아미노산 또는 펩타이드의 혼합된 무수물은 테트라하이드로푸란에 주어진 펩타이드를 용해시키고 N-메틸모르폴린 1당량을 첨가하여 제조한다. 용액을 -20℃까지 냉각시키고 1당량의 이소부틸 클로로포르메이트 1당량을 첨가한다. 5분 후에, 이 혼합물 및 트리에틸아민(또는 다른 입체적으로 간섭된 염기) 1당량을 냉각 클로로포름 또는 테트라하이드로푸란에 용해된 화합물 5용액에 첨가한다. 반응혼합물을 -20℃에서 1시간 및 실온에서 1내지 2시간동안 통상적으로 교반시킨다. 불용성 물질을 여과하여 제거하고, 용매는 증발시켜 제거한 후 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시킨다. 유기 용액을 0.20N 염산, 5% 수성 중탄산 나트륨 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척한다. 유기상을 무수 황산 나트륨으로 건조시키고, 여과하고 증발시켜 대부분의 경우 부분적 고체로 수득한다. 많은 화합물에 대해, 화합물 6의 추가 정제가 불필요한 것으로 간주된다. 화합물 6의 정제에 적용시킬 수 있는 방법은 실리카겔 크로마토그래피, 어떤 경우에는 결정화이고, 용매로서 메탄올 및 세파댁스(Sephadex TM) LH-20을 사용한 겔투과(gel permeation) 크로마토그래피이다. 후자의 방법이 바람직하다. 전형적으로, NMR 스팩트럼은 델타 3.45에서 -CH2-Br 밴드를, 피난디올 보호그룹중에서 메틸 그룹하나에 대해 델타 0.80 내지 0.95에서 가는 단일 밴드 또는 피나콜 그룹에 대해 델타 1.3에서 단일 밴드를 나타낸다.
펩타이드 알킬 할라이드인 화합물 6은 100℃에서 3시간동안 디메틸포름아미드중 나트륨 아지드 2당량으로 처리함으로써 화합물 7인 알킬 아자이드로 전환된다. 모든 경우에서, 이 반응은 반응조건을 달리하지 않고 순조롭게 진행된다. CDCI3중의 화합물 7에 대한 NMR 스펙트럼은 전형적으로 아지드로의 전환에 대해 -CH2-Br의 델타 0.1 내지 0.2ppm 상단이동을 나타낸다. 추가 정제는 LH-20 크로마토그래피에 의해 수득될 수 있지만, 많은 펩타이드에 대해 필요치 않다.
보로오르니틴 펩타이드인 화합물 8은 알코올중 벤젠설폰산 1당량 및 10% Pd/C의 존재하에 화합물 7인 알킬 아지드의 촉매적 수소화에 의해 통상적으로 제조한다. 수소화는 파르(Parr)기구에서 수행한다. 또한, 수소화 반응은 대기압하에서 수행할 수 있고 벤젠설폰산을 무기산으로 대치시킬 수 있다 .촉매적 수소화에 안정한 펩타이드 보호그룹을 사용할 필요가 있다는 것을 명심해야 한다. 이러한 펩타이드 보호그룹은 본 분야의 전문가에게 공지되어 있으며 문헌[참조:"The Peptides", E. Gross and J. Meienhofer eds. Vol. 3, Academic Press, New York(1981)]에 기술되어 있다. 바람직한 보호그룹은 아미노그룹에 대해 t-부틸옥시 카보닐 그룹이고, 하이드록시 및 카복실산 축쇄에 대해 t-부틸 에테르 및 에스테르이다. 다른 적당한 보호그룹에는 디이소프로필 메틸옥시카보닐, t-아밀옥시카보닐, 아다만틸옥시카보닐, 비페닐이소프로필 옥시카보닐 및 토실이 포함된다. 아지드를 다른 환원제로 환원시킴으로써 아민으로 전환시키는 방법은, 문헌[참조:Maiti et al., Tetrahedron Lett., 27: 1423-1424(1986) 및 Koziara et al., Synthesis, 202-204(1985)]에 설명된 바와 같이 염화주석(Ⅲ) 및 트리알킬 아인산염과 같은 시약을 사용하여 수행할 수 있다고 기대된다. 이러한 시약은 촉매적 수소화에 불안정한 펩타이드 보호그룹에 적합한 것으로 기대된다. 보로오르니틴 펩타이드는 통상적으로 세파댁스 TM LH-20상에서 크로마토그램하고 에테르로 연마한 후 백색 무정형 고체로 수득된다.
보로아르기닌 펩타이드인 화합물 9는 이에 상응하는 보로오르니틴 펩타이드인 화합물 8을 100℃에서 무수 에탄올중 4배 이상(50㎎/㎖) 시안이미드와 반응시켜 제조한다. 처음에 성분들을 질소 블랭캣하에서 수냉각기로 적절하게 2 내지 3일 반응시킨다. 수냉각은 불연속적이며 반응 혼합물은 수일에 걸쳐 서서히 농축시킨다. 반응의 완료는 보로아르기닌 잔기의 구아니디노그룹에 대한 사카구치(Sakaguchi)염색으로 염색한 물질의 강도에 있어서 점차적인 증가 및 메탄올:물(85:15)에서 수행한 역상 박층 플레이트상의 보로오르니틴 잔기의 아미노그룹에 대한 닌히드린 염색으로 양성 염색된 물질의 소멸에 의해 결정한다. 전형적으로 플레이트의 기점으로부터 줄을 그리며 진행되는 보로아르기닌 펩타이드는 플레이트의 중간지점에 뚜렷한 스포트를 형성하며, 시안아미드는 용매와 함께 전단부로 이동하여 각 성분을 확인할 수 있게 한다. 구아니디노그룹 및 아니노그룹에 대한 특이한 염색은 펩타이드 합성에 일반적으로 사용된다. 화합물 9는 용매로서 메탄올 및 세파댁스 TM LH-20을 사용하여 겔 투과 크로마토그래피함으로써 정제한다. 이 크로마토그래피단계는 저분자량 부산물 및 미반응 시안아미드로부터 쉽게 보로아르기닌 펩타이드를 분리시킨다. 대부분의 경우에, 더 이상 정제가 필요하지 않다. 그러나 화합물 8 및 9의 혼합물을 분리하는 것이 불가능한 경우, 화합물 8의 구아니딘화 반응이 어렵기 때문에 완결시키는 것이 필수적이다. 최종 생성물은 에테르로 연마하여 무정형 백색 고체로서 수득하고 대부분의 경우, NMR, 질량 스팩트럼 및 연소분석으로 분석적 순도를 측정한다.
화합물 8을 시안아미드로 구아니딘화시키는 것은 반응조건에 매우 의존적인 것으로 밝혀졌음을 명심해야 한다. 첫째, 상술한 바와같이, 화합물 8이 화합물 9로 비교적 완전히 전환되도록 반응을 충분히 길게 수행하는 것이 중요하다. 7일까지의 반응시간 및 서서히 용매를 증발시켜 시약을 농축시키는 것이 종종 요구된다. 화합물 8을 구아니딘화시키기 위한 반응이 초기 조사에 있어서, 염산염과 같은 화합물 8은 수시간동안 에탄올중 시안아미드와 함께 환류시킨다. 목적하는 생성물인 화합물 9는 검출할 수 없다. 무수에탄올을 테트라하이드로푸란으로 대체시키는 이외에는 상기 성공적인 조건을 사용하여 화합물 8을 구아니딘화시키려고 시도했으나, 검출가능한 생성물을 수득하지 못했다. 유사하게, 보로오르니틴 펩타이드의 아미노그룹의 벤젠 설폰산염을 구아니딘화시키기 전에 중성화시키는 것 이외에는 이러한 조건을 사용하여 화합물 8을 구아니딘화시키는 경우, 화합물 9는 겨우 검출한 정도로만 존재하게 된다. 바람직한 조건에는 화합물8(비중성화)의 벤젠설폰산염과의 반응이 포함된다. 성공적인 반응은 또한 이에 상응하는 염산염으로 수행하여 왔다.
펩타이트 합성 분야의 숙련가들에 의해 사용되며 상응하는 아르기닌 펩타이드를 생성시키는 오르니틴 펩타이드를 구아니딘화시키는 유용한 방법은 오르니틴 펩타이드의 아민을 중성화하고 S-알킬 또는 O-알킬 이소우레아 또는 구아닐-3,5-디메틸 피라졸 니트레이트와 커플링시키는 것이다.[참조:Barany et al., in The Peptides, E. Gross and J.Meienhofer eds, Vol.2, pp. 169-175, Academic Press, New York(1980)].배나드(Bannard)등은 아민의 구아니딘화에 대한 다른 방법을 조사하여 왔고 [참조:Can.J.Chem.36:1541-1549(1958)], 구아닐-3,5-디메닐 피라졸이 S-메틸 이소우레아의 사용보다 월등하다는 것을 밝혀내고 시안아미드로 구아니딘화시키는 것이 초기 문헌에 설명되어 있지만 허용될 수 없다고 결론지었다. 각종 조건하에서 구아닐-3,5-디메틸 피라졸 및 에탄올중 S-메틸 이소우레아로 수행한 반응은 보로오르니틴 펩타이드를 구아니딘화시키지 못하였다. 이 경우에 있어서, 반응성의 결핍은 아마도 오르니틴 측쇄의 아미노그룹 및 붕산 에스테르 사이의 내부 루이스(Lewis)산 염기 착화합물의 형성에 기인한 것이다. 화합물 6을 에탄올중 구아니딘으로 처리하여 화합물 9를 합성하는 것은 또는 허용될 수 없는 형성방법이다. 약 50%순도의 화합물 6은 구아니딘과 6의 반응으로부터 1%이하의 수율로 분리된다.
보로아르기닌-피난디올의 구아니디노그룹은 일단 이것이 분자에 혼입되면 중성 아미노산 아르기닌의 구아니디노 그룹과 유사한 방식으로 작용한다. 예를 들어, 알파-아미노그룹은 보로아르기닌의 구아니디노 그룹에 영향을 미치지 않고 무수물을 사용하여 선택적으로 아실화시킬 수 있다. 따라서, 화합물 9를, H-보로아르기닌-피난디올을 합성하고 계속해서 혼합된 무수물 방법을 사용하여 분자의 펩타이드 부분의 N-보호된 형태를 첨가함으로써 제조할 수 있고 유사하게는, 보로아르기닌을 함유하는 디-, 트리- 등의 펩타이드 동족체를 추가 아미노산 또는 펩타이드를 커플링하여 길이를 연장시킬 수 있다는 것이 기대된다.
보호된 보로아르기닌 펩타이드의 추가정제는 세파댁스TM 이온교환 크로마토그래피로 수행할 수 있다. 펩타이드를 20%아세트산에 용해시키고 이의 H+형태로 컬럼에 적용시킨다. 20%아세트산으로 컬럼을 세척한 후, 생성물을 20%아세트산중 0 내지 0.3N염산의 구배를 이용하여 용출시킨다. 생성물은 피난디올에스테르 및 유리펩타이드 붕산의 혼합물로서 용출된다. 균일한 제제는 혼합물을 무수조건하에서 피난디올로 처리하고 에테르로 생성물을 연마시켜 수득한다.
피난디올 보로그룹을 제거하여 유리붕산인 화합물 10을 수득하는 두가지 방법이 개발되어 왔다. 첫째는 상기 정제방법의 변형으로, 유리붕산 및 피난디올에테르의 혼합물을 이온 교환 컬럼으로부터 동시-용출시키는 것이다. 이러한 화합물은 LH-20 크로마토그래피로 쉽게 분리된다. 두 번째 방법은 킨더(Kinder)등의 방법을 변형시킨 것이다[참조: J.Med.Chem.28:1917-1925(1985)]. 붕산 에스테르를 메틸렌 클로라이드 중 삼염화붕소 2 내지 3배량으로 -78℃에서 5분동안 처리하고 혼합물을 0℃빙욕에서 15분동안 교반시킨다.
물을 서서히 가하여 삼염화붕소를 가수분해시켜 붕산 및 염산이 된다. 이 반응은 20%아세트산으로 추가 희석하여 최종 농도가 0.05M인 염산을 수득한다. 염산의 농도는 반응에 사용한 삼염화붕소의 초기양을 기준으로 한다. 수성상을 SP-세파댁스 컬럼에 적용시키고 생성물을 상술한 바와같은 염산염으로 용출시킨다. 유리붕산 펩타이드는 백색 무정형 고체로서 수득된다.
화합물 10을 킨더(Kinder)등의 방법을 [참조:J.Med.Chem. 28:1917-1925(1985)]변형시켜 사용하여 디플루오로보란인 화합물 11로 전화시킬 수 있다. 펩타이드 붕산을 0.50N 수성 수소화불소산의 5배몰 과량으로 실온에서 처리한다. 과량의 수소화불소산 및 물를 동결건조에 의해 제거하고 그 결과 생성된 고체를 에테르로 연마하여 백색 무정형 고체로서 목적하는 생성물을 수득한다.
상기 설명에 있어서, 유리붕산인 화합물 10의 제조는 보로아르기닌-피나디올 에스테르로부터이고, 디플루로보란산인 화합물 11은 화합물 10으로부터 제조한다. 에스테르 보호그룹의 제거방법은 피난디올, 피나콜 또는 다른 에스테르 보호그룹으로서 보호된 보로오르니틴, 보로리신 및 보로호모아르기닌의 아실 펩타이드에 적용가능해야 한다. 유사하게, 상응하는 유리붕산은 디플루오로보란으로 전환될 수 있다.
분자의 펩타이드 부분의 바람직난 측쇄보호그룹 및 N-말단 보호그룹은 촉매적 수소화반응에 안정하고 무수염화수소 또는 트리플루오로아세트산에 대한 불활성인 것이다. 이러한 기준은 하이드록시 및 산성 측쇄에 대한 t-부틸옥시카보닐 아미노 보호그룹 및 t-부틸 에테르 및 에스테르에 의해 쉽게 직면하게 된다. 이러한 그룹을 제거하기 위하여, 펩타이드를 실온에서 디옥산중 4N염화수소로 처리한다. 탈보호된 펩타이드를 용매를 증발시키거나 에테르로 침전시켜 분리한다. 특히 모든 염화수소를 증발시켜 제거하기 위한 산성축쇄를 함유하는 펩타이드는 주의해야 한다. 이것은 보로아르기닌 펩타이드가 벤젠설폰산염으로서 유지된다는 것을 설명한다. 다른 펩타이드가 혼합된 염화수소-벤젠설폰산염으로서 분리할 수 있거나 또는 대부분을 CI-이온형태의 음이온 교환 컬럼에 통과시켜 염산염으로 전환시킬 수 있다.
화합물 6의 이소티오우로늄 유도체는 화합물 6을 무수에탄올 중 티오우레아로 처리하여, 화합물 10인 펩타이드 보로아르기닌 에스테르의 동족체인 화합물 12를 수득함으로써 제조한다. 통상적으로, 알킬 할라이드를 실온에서 수일동안 4 내지 5배 과량의 티오우레아와 함께 교반시킨다. 필요한 경우, 미반응 화합물 6에 대해 에테르로 연마하여 생성물을 분리한다. 화합물 6은 대부분 펩타이드에 대해 에테르에 쉽게 용해되는 반면 생성물은 불용성이다. 과량의 티오우레아를 제거하는 최종 정제단계는 메탄올중 세파댁스 LH-20 크로마토그래피 및 에테르로 연마하여 수행함으로써 브롬화수소산으로서 최종 생성물을 수득한다. 측쇄 및 N-말단 보호그룹은 무수브롬화 수소 또는 다른 무수산으로 처리함으로써 제거한다.
[생물학적 활성]
본 발명의 화합물의 생물학적 활성은 트립선형 효소, 사람의 트롬빈 및 혈장 칼리크레인에 의한 합성 기질 가수분해의 억제, 및 응혈 및 염증과 같은 이러한 효소에 의해 촉매화되는 생리학적 작용의 억제에 관계하는 생체내 및 시험관내 데이터에 의해 설명된다.
하기 예에 있어서, 각 효소의 가수분해 활성은 억제제의 존재 및 부재와 결정된 효소활성율 %로 결정된다. 혈장 칼리크레인 및 트롬빈의 가장 유효한 억제제는 안정상태에 도달할 때까지 시간에 따라 점차적으로 효과가 증가되는 서행-결합 억제제라는 것을 밝혀냈다. 안정 상태는 상당히 빨리 도달하게 되며 거의 5분내에 완결된다. 활성은 성분들의 혼합되어 반응성분이 평형상태인 것이 확실하며 10 내지 20분 사이에 평가한다. 시험되는 억제제의 최저 농도는 효소의 평가 농도에 의해 측정된다. 과량의 효소 농도에서 억제제 농도의 5배는 가상 1차 반응 조건을 관찰하기 위한 농도가 유지되는 최저 농도이다. 가상 1차 반응 조건의 유기 및 각 측정법의 민감도는 칼리크레인 억제제에 대해 10nM 및 트롬빈 억제제에 대해서는 5nM에서 시험되는 억제제의 최저한계 수준을 결정한다.
일반적으로, 가역적인 억제제 효과는 효소-억제제 복합체에 대한 해리 상수인 Ki를 측정하여 평가한다. 정의에 의해, 이러한 수치는 기질의 부재하에 효소 50%를 억제하는데 필요한 억제제의 농도이다. 그러나 기질은 보호 효과가 있으므로, 더욱 높은 농도의 억제제가 50% 억제하는데 요구된다. 그럼에도 불구하고,Ki의 보존적인 평가는 %활성(억제)데이타 및 억제제의 농도로부터 얻을 수 있다. Ki보다 약 20배 높은 억제제 수준은 반응을 95% 억제시키는데 필요하고 Ki보다 약 50배 높은 억제제 수준은 98% 억제시키는데 요구된다.
혈장 칼리크레인은 바람직하게는 가수분해되고 브라디키닌(bradykinin)으로 해리된다. 보로아르기닌에 인접한 Phe를 함유하는 보로아르기닌 펩타이드는 이 효소의 가장 유효한 억제제이다. 예를 들어, 10nM H-(D)Phe-Phe-보로 Arg-C10H16은 칼리크레인 95%이상 억제한다. 보로아르기닌 피난디올 에스테르 및 이에 상응하는 이소티오우로늄 동족체(보로Irg)의 효과에는 뚜렷한 차이점이 관찰되지 않는다. 또한, 비보호 붕산 및 이에 상응하는 디플루오로보란의 효과에서도 차이점이 나타나지 않는다.
칼리크레인을 사용하는 것과 유사한 결과는 트롬빈이 보로아르기닌에 인접한 부위에 프롤린이 있는 억제제에 대한 친화성이 매우 높은 것을 제외하고는, 합성기질을 사용한 측정법에서 트롬빈에 대해서도 얻을 수있다. 가장 효과적인 억제제는 Ac-(D)Phe-Pro-보로 Arg-C10H16이고, 이것은 5nM농도에서 99%를 트롬빈을 억제한다. 문헌에 보고된 가장 강력한 억제제는 N-알파-(2-나프틸설포닐글리실)-4-아미디노페닐-알라닌 피페리다이드이고, 이것은 6nM의 Ki를 갖는다. 이것은 카이저 등[참조:Thromb. Res. 43:613-620(1986)] 및 스터제베처 등 [참조:Thromb.Res. 29:635-642(1983)]에 의해 보고되었다. 억제제 농도 Ki 및 상술한 억제율(%)의 관계는 Ac-(D)Phe-Pro-보로 Arg-C10H16의 Ki가 피코몰 범위인 것을 제시한다. 더구나, (D)Phe-Pro-보로Arg-서열을 갖는 억제제의 효과는 아미노 말단 보호그룹의 특징 또는, 존재 또는 부재에 비교적 덜 민감하다. Boc 및 Ac 보호그룹을 갖고, 보호그룹을 갖지 않는 이러한 화합물은 각각 5nM미만의 I.C.50을 나타내며, 유사하게 트롬빈을 억제한다.
표적 효소에 대해 천연 기질과 경쟁을 하게 되는 반응에서 억제제의 효과는 응혈측정으로 시험관내 측정한다. 두가지 다른 측정이 사용되는데 APTT(activated partial thromboplastin times) 및 PT(prothrombin times)측정이다. 이러한 측정은 생체내 응혈과정을 흉내낸 것이다. 응혈은 두가지 경로중 하나를 통해 일어나는데, 각각은 지모겐 활성 단계의 분지를 구성한다. 그 경로를 내부 및 외부 경로로 언급한다. [참조:L.Lorand, Methods in Enzymology 45:31-37(1976)]. 내부 경로는 혈장 칼리크레인, 인자 ⅩⅡ 및 인자 Ⅸ가 활성화된 후 인자 Ⅸ 및 Ⅹ 및 프로트롬빈이 칼슘-의존적인 단계에서 활성화되는, 음전하를 띠는 표면에 의해 시작된다. 분자중 최종 프로테아제인 트롬빈은 피브리노겐을 피브린으로 가수분해한 결과 혈괴응고가 일어난다. APTT측정에서는 혈장 성분을 음전하를 띤 표면에 노출시킴으로써 활성화 시키고 혈전 형성 시간을 칼슘을 이 시스템에 첨가한 후 측정한다. 외부 경로에서, 조직 트롬보플라스틴은 인자 Ⅶ를 활성화시키고 인자 Ⅹ를 활성화시켜 트롬빈의 활성화를 일으킨다. 이러한 사건들은 프로트롬빈 시간 측정에서 측정된다.
보로아르기닌의 펩타이드 및 이에 상응하는 이소티오우로늄 동족체는 이러한 두가지 측정에서 혈액응고를 유효하게 억제한다. 트롬빈에 대한 본 발명의 가장 효과적인 억제제는 두가지 측정에 대해 가장 효과적이다. 한편, 칼리크레인 억제제는 혈액응고 억제에는 덜효과적인 반면, PT 측정에서보다 APTT 측정(칼리크레인이 이 측정의 초기에 포함된다)을 더욱 효과적으로 억제한다. 이것은 혈장의 상대적 응고시간에 대한 H-(D)Phe-Pro-보로 Arg-C10H16트롬빈 억제제)효과로 제1도에 잘 나타나 있다. 이것은 오히려 복잡한 생물학적 시스템에서 트리펩타이드 억제제중의 단일 아미노산을 변화시킴으로써 달성될 수 있는 선택성을 보여준다. 트롬빈 억제제의 유효수준은 헤파린과 같은 몰 범위내이다. 일반적으로, 혈장 ㎖당 헤파린 0.2 내지 0.4 유니트는 응고시간을 2 내지 2.5배 단축시킨다. 헤파린의 평균 분자량이 15.000이고 특이적 활성이 150유니트/㎎이라 하면, 몰 농도는 86 내지 170이다. APTT 측정에서 응고 시간을 증가시키는데 필요한 보로아르기닌 펩타이드의 농도는 170 내지 230nM범위이다. 헤파린은 고분자량 프로테아제 억제제, 항-트롬빈 Ⅲ에 대한 보조인자라는 것을 명심해야 한다.
사람의 혈장에서 보로아르기닌 펩타이드의 안정성은 응고과정을 지연시키는 유효농도에서 혈장과 함께 이들을 배양시킴으로써 나타낸다. 억제제의 샘플은 증가되는 시간 간격에 취하여, 응고를 지연시키는 활성을 각간격에서 측정한다. 응고시간에 있어서의 무변화는 혈장에서 배양시키는 동안 억제제의 억제활성에 변화가 없음을 나타낸다. 억제제 활성에 있어서 H-(D)-Phe-보로Arg-C10H16이외에서는 뚜렷한 변화가 관찰되지 않고, 24시간 후 활성을 잃는다. 본 발명의 억제제 또한 H-(D)Phe-Pro-보로Arg-C10H16을 제외하고는 pH 7.5의 인산염 완충액에서 24시간동안 안정하지만, 1시간내에 억제활성을 상실한다. 완충액중 이 억제제의 불안정성이 큰 것은 인삼염 완충액에서 24시간동안 안정하지만, 1시간내에 억제활성을 상실한다. 완충액중 이 억제제의 불안정성이 큰 것은 인삼염 완충액이 화합물을 불안정화시키는 역할을 하는 것을 나타낸다.
제공된 생체내 데이터는 포유류 시스템에 있어서 혈액 응고의 억제제로서 본 화합물의 효능을 뚜렷하게 나타낸다.
본 발명의 화합물은 또한 화합물이 자극제와 함께 국소적으로 적용되는 경우 래트의 귀 부종의 억제에 의해 나타난 것과 같이 유효한 소염제이다. 약리학적 활성에 대한 분자의 기본은 공지되어 있지 않은데, 염증이 일어나는 동안 많은 사건이 일어나기 때문이다. 그러나 키닌을 유리시키는 혈장 칼리크레인 및 아나필라톡신 펩타이드를 유리시키는 보체시스템의 효소와 같은 혈관 침투도를 증가시키는 프로테아제는 염증과정에 관련되어 있다고 생각되어진다.
최종적으로 보로리신의 펩타이드는 플라즈민, 즉 지혈작용에 중요한 역할을 하는 효소를 효과적으로 억제하는 것으로 나타났다.
[용도]
본 발명의 오르니틴, 아르기닌, 리신 및 효모 아르기닌의 동족체인 N-아실 및 N-펩타이드 알파-아미노 붕산은 트립신형 효소의 강력한, 가역적인 억제제의 신규한 군이다. 트립신형 효소는 염기성 잔기에서 펩타이드 결합을 가수분해하여 C-말단 아르기닐 또는 리실 잔기를 유리시키는 프로테아제의 한 그룹이다. 이러한 효소중에 혈액응고시스템(인자, ⅩⅡa,Ⅹla,Ⅸa,Ⅶa,Ⅹa 및 트롬빈), 피브린 분해 시스템(플라즈미노겐 활성제 및 플라즈민), 보체시스템(CIs,CIr,C3전환효소, 인자 D등), 췌장의 트립신 (소화기능으로서), 및 아크로신의 프로테아제(정자와 관계있고 수정에 필요한 프로테아제)이다.
트립신형 프로테아제를 억제하는 본 발명의 화합물의 작용은 두가지 다른 트립신형 효소, 즉 사람의 트롬빈 및 혈장 칼리크레인을 억제함으로써 측정된다. 본 발명의 화합물은 기타 공지된 가역적인 억제제보다 이러한 두가지 효소의 훨씬 강력한 억제제이다. 예를 들어, 데이터에 보고된 트롬빈의 가장 유효한 억제제는 Ki가 6nM인 N-알파-(2-나프틸-설포닐-글리실)-4-아미디노 페닐알라닌 피페리딘이다. 본 발명의 화합물은 Ki가 InM 미만을 나타내는 5nM농도에서 트롬빈을 거의 완전하게 억제하고, 따라서 혈액응고와 같은 트롬빈 중개과정의 조절에 대한 우수한 작용을 제공한다 .가장 유효한 보로 아르기닌 펩타이드는 APT시간 및 PT시간의 증가에 의해 나타난 것과 같이 혈액응고를 억제한다. 이의 유효수준은 분자의 기준에 대한 헤파린의 유효수준과 유사하다. 또한, 화합물은 사람의 혈장에서 안정하다. 화합물은 단백질 분리뿐만 아니라 임상 시험을 위한 혈장의 제조에 있어서 항응고제로서 사용될 수 있다.
추가예는 프로테아제, 즉 플라스민이고, 이것은 혈괴의 용해에 중요한 역할을 한다. 보로리신을 함유하는 펩타이드를 제조하여 시험하고 플라즈민의 활성 억제제임을 밝힌다.
본 발명의 화합물은 생체내 단백질 분해를 조절하는데 유효하고 비조절 프로테아제 활성으로 야기되는 포유류의 질환을 치료하는데 있어서 약제학적으로 유효하여야 한다. 이들중 혈전증 및 폐결핵의 응혈이상증과 관련된 질병이 중요하다. 관상동맥 혈전증은 심근경색증을 야기시키는데 중요한 작용을 한다. 폐결핵의 응혈이상증, 즉 응혈 인자 및 혈장 프로테아제 억제제의 감소로 나타나는 질환은 급성 췌장염 및 전염된 혈관내응고(DIC)질환이 있는 환자에서 관찰된다. 본 발명의 화합물은 헤파린의 혈장 보조인자인 항-트롬빈Ⅲ가 반응에 쓰이지 않는 잇점이 있으므로 헤파린 대신 사용될 수 있다고 기대된다. 또한, 헤파린 치료의 부작용인 혈소판감소증도 관찰되지 않는다. 더구나, 본 발명의 화합물은 유전성 부종과 같은 트립신형 효소의 천연 억제제의 결핍으로 인한 질환을 치료하는데 중요하다고 기대되어진다. 이러한 질환은 혈장 칼리크레인의 중요한 억제제인, CI 억제제의 결핍으로부터 야기된다.
결국, 본 발명의 화합물은 생체내 효과적인 항-염증성 활성을 보여주었다.
[합성실시예]
하기 실시에는 본 발명의 특정 태양을 설명한다. 보고된 모든 융점은 보정되지 않은 것이다. 모든 부는 중량에 대한 것이고 모든 온도는 섭씨이다. 양자핵자기공명(NMR 또는 1H NMR)은 내부 표준 테트라메틸실란으로부터 ppm(patrs per million) 다운필드(dewnfidld)를 델타단위로 나타낸다. 사용된 많은 약자에는 TFA=트리플루오로 아세트산; DMF=N,N-디메틸포름아미드;MS=질량 분광법; TLC=박층 크로마토그래피; RP-TLC=역상 박층 크로마토그래피가 포함된다. 붕산에 대한 에스테르 보호그룹은 -C6H12=피나콜 그룹 및 -C10H16=피닌디올그룹으로 약자화한다. "Irg"는 아르기닌(Arg)의 이소티오우로늄 동족체에 대한 약어이고 접두사 "호모"는 측쇄가 추가 메틸렌 그룹을 함유하는 구조임을 가르킨다. 모든 아미노산 잔기는 특정하지 않는 한 "L"배위이다.
TLC 및 RP-TLC는 각각 이.머크 실리카겔 60 플레이트(E.Merk Silica Gel 60 Plate; Catalog # 5534, E.M.Sciences, Gibbstown, NJ) 및 와트만(Whatman) KC 18F 역상 플레이트(Catalog # 4803-600, Whatman Co., Clifton, NJ)상에서 수행한다. 중성 화합물은 UN광 하에서 요오드 증기에 노출시킨 후 가시화된다. 유리 아미노 그룹을 갖는 화합물은 닌히드린으로 염색되고, 구아니디노 그룹을 갖는 화합물은 사카구치로 염색된다. 사카구치 염색은 보로 아르기닌 펩타이드에 존재하는 것들과 같은 모노치환된 구아니딘에 대해 상당한 특이성을 나타낸다[참조: Chemistry of the Amino Acids, 3 ; (1984)Green-stein and Winitz, eds., Robert E.Krieger Publishing Co., Malabar, FL].
[실시예 1a]
1-아미노-4-브로모-부틸 보로네이트 피난디올.HCI
NH2-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16·HCI
4-브로모-1-클로로부틸 보로네이트 피난디올은 대량 제조용으로 번형시킨 것을 제외하고는 마테손의 방법[참조 : Organometallics 3 : 1284-1288(1984)]에 의해 제조한다. 전형적인 실험에 있어서 알릴 브로마이드 173㎖(2.00mole)를 카테콜 보란 240㎖(2.00mole)와 함께, 알릴 브로마이드에 보란을 첨가함으로써 수소화붕소화시키고, 질소압하 100℃에서, 4시간 동안 반응물을 가열시킨다. 생성물인 3-브로모프로필 보로네이트 카테콜(비점 95 내지 102℃, 0.25㎜)을 증류시켜 49% 수율로 분리한다. 카테콜 에스테르 124g(0.52mole)을 (+)알파-피난디올 88g(0.52mole)으로 테트라하이드로푸란(THF) 50㎖중 성분과 혼합하고 0℃에서 0.5시간 및 실온에서 교반시켜 트랜스에스테르화시킨다. 용매를 증발시켜 제거하고 헥산 250㎖를 첨가한다. 카테콜은 결정성 고체로서 제거한다. 정량적인 제거는 헥산으로 500㎖ 및 1000㎖ 연속 희석하여 수행하고 각 희석단계에서 결정을 제거한다. 용매를 증발시킴으로써 생성물 147g을 오일로서 수득한다.
C13H22O2BrB에 대한 원소분석:
계산치(%) : C ; 51.85, H ; 7.38, 및 Br ; 26.54
실측치(%) : C ; 52.85, H ; 7.30, 및 Br ; 26.58
4-브로모-1-클로로부틸 보로네이트 피난디올을 상응하는 프로필 보로네이트를 동족체화시켜 제조한다. 메틸렌 클로라이드 34.8㎖(0.54mole)를 THF 500㎖에 용해시키고, 헥산 중의 1.54N n-부틸리튬 350㎖(0.540mole)을 -100℃에서 서서히 첨가한다. 3-브로모프로필 보로네이트 피난디올 148g(0.490mole)을 THF 500㎖에 용해시키고 용액의 빙점으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물에 가한다. 염화 아연 33.5g(0.246mole)을 THF 250㎖에 용해시키고 0℃로 냉각한 후, 몇 개의 분획으로 나누어 반응 혼합물에 가한다 .반응 혼합물을 교반시키면서 밤새 실온으로 서서히 가온시킨다. 용매를 증발시키고 잔류물을 헥산에 용해시켜 물로 세척한다. 무수 황산 마그네슘으로 건조시키고 여과한 후 용매를 제거하여 목적 생성물 140g을 수득한다.
1-아미노-4-브로모부틸 보로네이트 피난디올을 헥사메틸디실리잔 28.0g(80.0mmole)을 THF 30㎖에 용해시키고 용액을 -78℃로 냉각한 후 헥산중의 1.62N n-부틸리튬 49.4㎖(80.0mmole)를 첨가하여 먼저 제조한다. 용액을 실온으로 서서히 가온시킨 후 -78℃로 재냉각시키고 THF 20㎖중의 4-브로모-4-클로로부틸 보로네이트 피난디올 28.0g(80.0mmole)을 첨가한다.
혼합물을 실온으로 서서히 가온시키고 밤새 교반시킨다. 용매를 증발에 의해 제거하고 무수 헥산 400㎖을 첨가하여 수득한 침전물을 질소 대기하에 여과시켜 제거한다. 여액을 -78℃로 냉각시키고 디옥산 중의 4N 염화수소 60㎖(240mmole)를 첨가한다. 반응을 실온으로 서서히 가온시키고, 이 온도에서 2시간 동안 교반시킨다. 생성된 생성물 20g을 여과에 의해 고체로 분리한다. 진공중에 건조시킨 후, 조 생성물을 클로로포름에 용해시키고 불용성 물질을 여과에 의해 제거한다. 여액을 증발시키고 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시킨다. 생성물을 에틸 아세테이트로부터 재결정화하여 15.1g(융점 142 내지 144.5℃)을 수득한다.
[α]D 25=+16.7±0.80, c=1.0(무수 에탄올에서)
C14H26NO2BrCIB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 45.87, H ; 7.16, N ; 3.82, 및 B ; 2.95
실측치(%) : C ; 45.76, H ; 7.21, N ; 3.79, 및 B ; 3.04
[실시예 1b]
(D,L) 1- (아미노-4-브로모부틸 보로네이트 피나콜·HCI
(D,L) NH2-CH[(CH2)3Br]BO2-C6H12·HCI
4-브로모-1-클로로부틸 보로네이트 피나콜을 상응하는 피난디올에 대한 제조방법(실시예 1a)에 의해 제조하되, 피난디올을 피나콜로 대체시키고 3-브로모프로필 보로네이트 피나콜(비점 60 내지 64℃, 0.35㎜) 및 4-브로모-1-클로로부틸 보로네이트 피나콜(비점 110 내지 112℃, 0.20㎜)을 증류한다.
C10H19O2BrCIB에 대한 원소분석:
계산치(%) : C ; 40.38 및 H ; 6.45
실측치(%) : C ; 40.70 및 H ; 6.37
1-아미노-4-브로모부틸 보로네이트 피나콜 염화수소를 또한 실시예 1a의 방법에 의해 제조한다. 최종 생성물을 에틸 아세테이트 : 헥산으로부터 결정화하여 52% 수율로 수득한다.
C10H22NO2BrCIB에 대한 원소분석:
계산치(%) : C ; 38.19, H ; 7.05, N ; 4.45, CI ; 11.27 및 Br ; 25.41
실측치(%) : C ; 38.28, H ; 7.39, N ; 4.25, CI ; 11.68 및 Br ; 26.00
[실시예 1c]
1-아미노-4-클로로부틸 보로네이트 피나콜·HCI
(D,L) NH2-CH[(CH2)3CI]BO2-C6H12·HCI
알릴 브로마이드 대신 알릴 클로라이드로 및 피난디올 대신 피나콜로 치환시키는 것 외에는 실사예 1a와 같은 방법으로 3-클로로프로필 보로네이트 카테콜(비점 80 내지 85℃, 0.30㎜) 및 3-클로로프로필 보로네이트 피나콜(비점 63℃, 0.20㎜)을 제조한다.
C9H18O2CIB에 대한 원소분석:
계산치(%) : C ; 52.85, H ; 8.89, 및 CI ; 17.33
실측치(%) : C ; 53.41, H ; 8.15, 및 CI ; 16.81
또한 실시예 1a의 방법에 의해 동족체와 반응을 수행하고, 생성물은 65%의 수율로 증류(비점 95℃, 0.25㎜)분리시킨다.
C10H19O2CI2B에 대한 원소분석:
계산치(%) : C ; 47.47, H ; 7.58, 및 CI ; 28.02
실측치(%) : C ; 47.17, H ; 7.45, 및 CI ; 27.75
1-아미노-4-클로로부틸 보로네이트 피나콜·HCI은 실시예 1a와 같은 방법으로 제조한다. 생성물을 에틸아세테이트로부터 결정시켜 융점 132 내지 135.5℃의 물질 8.8g 및 융점 145 내지 147℃의 물질 2.2g을 수득한다. 융점 145 내지 147℃의 생성물을 분석에 사용한다.
C10H22NO2CI2B에 대한 원소분석:
계산치(%) : C ; 44.47, H ; 8.23, N ; 5.19, 및 B ; 4.00
실측치(%) : C ; 44.01, H ; 8.23, N ; 4.77, 및 B ; 3.80
[실시예 1d]
(D,L) 1-아미노-5-브로모펜틸 보로네이트-피나콜·HCI
(D,L) NH2-CH[(CH2)Br]BO2C6H12·HCI
알릴 브로마이드 대신 4-브로모-1-부텐으로 및 피난디올 대신 피나콜로 치환시키는 것 외에는 3-브로모프로필 보로네이트 피난디올(실시예 1a)에 대해 기술한 방법에 의해 4-브로모부틸 보로네이트 피나콜을 제조한다. 생성물은 오일(비점 77℃, 0.3㎜)로 분리된다. 동족체화시켜 5-브로모-1-클로로펜틸 보로네이트 피나콜을 수득한다.
C11H21O2BrCIB에 대한 MS(CI)
계산치(%) : H ; 310.47
실측치(%) : 310
최종 생성물 1-아미노-5-브로모펜틸 보로네이트 피나콜·HCI은 실시예 1의 방법에 의해 제조된다(수율 :35%).
C11H24NO2BrBCI 대한 원소분석:
계산치(%) : C ; 40.22, H ; 7.36, N ; 4.26, CI ; 10.79, Br ; 24.32, 및 B ; 3.29
실측치(%) : C ; 39.23, H ; 7.18, N ; 4.04, CI ; 15.21, Br ; 25.66, 및 B ; 3.75
[실시예 2]
Boc-(D) Phe -Pro-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16
Boc(D) Phe-Pro-OH는 디펩타이드 벤질 에스테르를 먼저 제조한 후 촉매적 수소화 반응에 의해 에스테르를 제거함으로써 제조한다. Boc-(D) Phe-OH 10.0g(37.7mmole)을 THF 50㎖에 용해시키고, N-메틸모르폴린 4.14㎖(37.7mmole)을 첨가한다. 이 용액을 -20℃로 냉각시키고, 이소부틸 클로로포르메이트 4.90㎖(37.7mmole)을 첨가한다. 5분 후, 클로로포름 50㎖에 용해시키고, -20℃로 냉각시킨 H-Pro-OBzl·HCI 9.11g(37.7mmole)을 첨가한다. 트리에틸아민 5.25㎖(37.7mmole)을 첨가하고, 이 혼합물을 -20℃에서 1시간 동안 및 실온에서 2시간 동안 교반시킨다. 반응 혼합물을 여과하고, 여액을 증발시킨다. 잔류물을 에틸아세테이트에 용해시키고, 0.2N 염산, 5% 중탄산나트륨 수용액 및 포화 염화나트륨으로 세척한다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과 및 증발시켜 Boc-(D) Phe-Pro-OBzl 15.2g을 오일로서 수득한다. 벤질에스테르 15.2g을 메탄올 100㎖에 용해시키고, 10% Pd/C 0.5g 존재하에 파르(Parr)기구상에서 초기압 40psi로 수소화시킨다. 반응액을 "셀라이트(Celite)TM"를 통과시켜 여과하고 증발시켜 고체를 수득한다. 이 고체 물질을 분리시키고, 에틸아세테이트로 세척한 후, 에테르로 세척하여 융점 176.5 내지 177℃의 목적 생성물 10.0g을 수득한다.
C19H26N2O5에 대한 원소분석:
계산치(%) : C ; 62.95, H ; 7.24, 및 N ; 7.73
실측치(%) : C ; 62.91, H ; 7.15, 및 N ; 7.53
Boc-(D) Phe -Pro-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16은 혼합 무수물 방법을 이용하여 디펩타이드를 상응하는 아민과 결합시켜 제조한다. 혼합무수물 Boc-(D) Phe-Pro-OH를 THF 30㎖에 이러한 산 4.94g(13.6mmole)을 용해시키고, N-메틸모르폴린 1.50㎖(13.6mmole)을 첨가하여 제조한다. 이 용액을 -20℃로 냉각시키고, 이소부틸 클로로포르메이트 1.77㎖(13.6mmole)을 첨가한다. -20℃에서 5분간 교반시킨 후, 이 혼합물을 실시예 1a에서와 같이, 냉클로로포름 10ml에 용해시킨 아민 NH -CH[(CH2)3Br] BO2-C10H16에 첨가한다. 냉 THF 10㎖ 및 트리에틸아민 1.90㎖(13.6mmole)을 첨가하고, 혼합물을 -20℃에서 1시간 동안 및 대략 실온에서 2시간 동안 교반시킨다. 혼합물을 여과하고, 여액중의 액체를 증발시킨다. 잔류물을 에틸아세테이트에 용해시키고, 0.2N염산, 5% 중탄산나트륨 수용액 및 포화염화나트륨 수용액으로 세척한다. 유기상을 무수 황산나트륨상에서 건조 및 여과시키고, 용매를 증발시켜 오일 9.0g을 수득한다. 이 물질을 메탄올에 용해시키고, 2.5×50㎝ 컬럼의 LH-20상에서 크로마토그램(chromato-gram)시킨다. 목적하는 생성물을 함유하는 분획을 풀링(pooling)시키고, 증발시켜 고체 5.8g을 수득한다. 메탄올:클로로포름(=1:9)을 사용하는 TLC분석은 단일 스포트를 나타내고, 분배 계수 Rf=0.70이다.
C33H49N3O6BBr에 대한 MS(FAB) :
계산치(%) : ＋H ; 674.30
실측치(%) : 674.30
[실시예 3]
Boc-(D) Phe-Pro-NH-CH[(CH2)3N3]BO2-C10H16
실시예 2의 생성물인 Boc-(C) Phe-Pro-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H164.4g(6.54mmole)을 DMF 7㎖에 용해시키고 아지드화 나트륨 0.919g(14.4mmole)을 첨가한다. 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열시킨다. 에틸 아세테이트 100㎖를 반응 혼합물에 첨가하고 물 및 포화 염화 나트륨 수용액으로 세척한다. 유기상을 무수 황산 나트륨 상에 건조시키고, 여과 및 증발시켜 생성된 고체 4.1g을 수득한다. 이 물질을 2.5×50㎝ 컬럼의 LH-20상에서 메탄올중 크로마토그래피시킨다. 바람직한 생성물을 함유하는 분획을 풀링시키고, 액체를 증발시켜 아지드 2.3g을 수득한다. 메탄올:클로로포름(=1:9)을 사용하는 TLC분석은 단일 스포트를 나타내고, Rf=0.76이다.
C33H48N6O6B에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 62.35, H ; 7.63, N ; 13.33, 및 B ; 1.70
실측치(%) : C ; 63.63, H ; 8.02, N ; 11.58, 및 B ; 1.80
C33H48N6O6B에 대한 MS(FAB) :
계산치(%) : ＋H ; 637.39
실측치(%) : 637.49
[실시예 4]
Boc-(D) Phe-Pro-NH-CH[(CH2)3NH2]BO2-C10H16·벤젠 설폰산
실시예 3의 아지드 8.80g(13.8mmole)을 메탄올 150㎖에 용해시키고, 파르 장치(Parr apparatus)상에서 10% Pd/C 0.50g 및 벤젠 설폰산 2.19g(13.8mmole)의 존재하에 40psi에서 수소를 첨가한다. 1시간 후, 촉매를 제거하고 용액을 증발시켜 수득한 고체를 헥산으로 연마하여 바람직한 생성물 9.9g을 수득한다. 메탄올:물(=85:15)을 사용하는 RP-TLC분석은 UV 스포트시에는 Rf=0.91을 나타내고, 닌히드린 양성 스포트시에는 Rf=0.52를 나타낸다.
[실시예 5]
Boc-(D) Phe-Pro-NH-CH[(CH2)3-NH-C(NH)NH2]
BO2-C10H16·벤젠 설폰산
Boc-(D) Phe-Pro-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산
실시예 4의 Boc-(D) Phe-Pro-보로 Orn-C10H16·벤젠설폰산 4.6g(6.11mmole)을 시안아미드(50㎎/㎖)를 함유하는 무수 에탄올 20㎖중 100℃에서 환류시킨다. 아민 출발물질(Rf=0.54)에 대한 닌히드린 스포트의 소실 및 생성물(Rf=0 내지 0.13)에 대한 사카구치 스트리크(Sakaquchi streak)의 출현이 관찰되는 반응의 진행은 메탄올:물(=85:15)을 사용하는 RP-TLC에 의해 탐지된다. 생성물을 18시간 동안 환류시킨 후에 검지할 수 있는데 이의 수준은 시간에 따라 점차로 증가한다. 7일 후에는, 아민을 검출할 수 없게 되고 반응액을 수동적 증발을 통해 약 50% 용액이 될 때까지 농축시킨다. 반응액을 여과, 농축, 및 LH-20 2.5×100㎝컬럼상에서 메탄올중 크로마토그래피 시킨다. 바람직한 생성물을 함유하는 분획을 풀링시키고, 증발시켜 바람직한 생성물 3.7g을 수득한다. 일부(2.3g)를 에틸 아세테이트: 헥산에 대해 결정화시켜 0.89g을 수득하고 잔류물 1.2g을 에테르로 연마함으로써 고체로 수득한다. 분리 시험에 있어서 분석결과는 다음과 같다.
C34H53N6O6SB에 대한 MS(FAB) :
계산치(%) : ＋H ; 653.42
실측치(%) : 653.38
C40H59N6O9SB·H2O에 대한 원소분석:
계산치(%) : C ; 57.95, H ; 7.43, N ; 10.14 및 B ; 1.30
실측치(%) : C ; 57.20, H ; 7.14, N ; 10.94 및 B ; 1.01
[실시예 6]
H-(D) Phe-Pro-보로 Arg-C10H16·2HCI
실시예 5의 생성물, Boc-(D)-Phe-Pro-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산 1.17g(1.54mmole)을 디옥산중 4N 염화수소 5㎖와 실온에서 15분 동안 반응시킨다. 에테르를 첨가함으로써 생성물을 침전, 분리 및 에테르로 세척 및 진공중에서 건조시킨다. 이를 물 10㎖에 용해시키고, BIO-RAD AGI×8TM[CI-형,BIO-RAD CO., Richmond, CA]의 5㎖음이온 교환 컬럼을 통과시키고, 컬럼을 물 약 30㎖로 세척한다. 유출액을 진공중에 증발시키고 잔류물을 에테르로 연마시켜 바람직한 생성물 0.80g을 수득한다.
C29H45N6O4B에 대한 MS(FAB) :
계산치(%) : ＋H ; 553.37
실측치(%) : 553.40 및 538.40(미확인)
H-(D) Phe-Pro-보로 Arg-C10H16·1BSA TFA의 분석:
실측치: 553.4
[실시예 7 내지 8]
AC-(D) Phe-Pro-보로 Arg-C10H16·HCI(실시예 7)
AC-(D)-Phe-Pro-보로 Arg-OH·HCI(실시예 8)
실시예 5의 생성물, Boc-(D) Phe-Pro-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산 0.86g(1.13mole)을 무수 TFA 약 5㎖와 실온에서 15분 동안 반응시킨다. 과량의 TFA를 증발시켜 제거하고 잔류물을 에테르로 연마시켜 0.76g을 수득한다. 이 생성물 0.70g(0.91mmole)을 디옥산 2㎖ 및 물 1㎖를 함유하는 혼합물에 용해시킨다. 아세트산 무수물 0.47㎖(5.0mmole) 및 중탄산나트륨 0.42g(5.0mmole)을 첨가한다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반시킨다. 에틸 아세테이트 50㎖ 및 물 5㎖를 첨가한다. 상을 분리시키고 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 용매를 증발 제거시켜 부분적 고체 0.56g을 수득한다.
샘플을 빙초산 4㎖에 용해시키고 물 16㎖로 희석한다. 이것을 SP-세파댁스(H형태) 15㎖를 함유하는 컬럼에 즉시 적용시키고 20% 아세트산으로 평형시킨다. 컬럼을 20% 아세트산 300㎖로 세척하고 20% 아세트산 100㎖로부터 20% 아세트산 100㎖를 0.30N 염산으로 조절한 선형 구배를 수행한다. 0.08 내지 0.17N 염산으로부터 수집한 분획은 유리 붕산 및 피난디올 에스테르의 혼합물로서 N-아세틸 펩타이드 0.29g을 함유한다.
피난디올 에스테르 및 유리 붕산을 메탄올중 LH-20의 2.5×100㎝ 컬럼 크로마토그래피하여 분리한다. 분획 크기는 8.2㎖이다. 피난디올 에스테르 102㎎은 분획 41-43에 용출되는 반면 유리 붕산 131㎎은 분획 45-129에 서서히 용출된다.
MS(FAB)(실시예 7) :
C31H47N6O5B에 대한 (Ac-(D) Phe-Pro-보로 Arg-C10H16)
계산치(%) : ＋H ; 595.33
실측치(%) : 595.33
MS(FAB)(실시예 8) :
C21H33N6O5에 대한 (Ac-(D) Phe-Pro-보로 Arg-OH HCI)
계산치(%) : ＋H ; 449.60
실측치(%) : 579.24-581.24
후자의 결과는 해석할 수 없다. 그러나 NMR은 델타 0.85(3H), 1.30(3H) 및 1.36(3H)에서 관찰되는 메틸그룹 단일 스포트와 같은 피난디올 그룹에 대한 명확한 밴드가 보이지 않기 때문에 유리 붕산의 구조와 일치한다. 구조의 추가 증거로서, 유리 붕산의 샘플을 재에스테르화하여 실시예 7의 생성물을 수득한다. 분석학적 샘플 20㎎을 5분 동안 메탄올 3㎖중 피난디올 2배 과량(14㎎)으로 처리한다. 용매를 증발시키고 과량의 피난디올을 에테르로 샘플을 연마시킴으로써 제거하여 생성물 26㎎을 수득한다. MS(FAB)(실측치:595.38) 및 NMR은 에스테르화된 생성물의 기대치와 일치하고 실시예 7의 피난디올 생성물과 거의 동일하다.
[실시예 9]
Ac-Phe-보로 Arg-C10H16·HCI
Ac-Phe-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16은 실시예 2에서 설명한 방법에 의해 제조한다. Ac-Phe-OH 0.565g(2.73mmole)의 혼합 무수물을 THF 10㎖중에서 제조하고 냉 THF 10㎖에 용해된 NH2-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16·HCI(실시예 1a의 생성물, 1.00g, 2.73mmole)에 커플링하여 백색 기포 1.47g을 수득한다. 이 물질을 밤새 헥산과 함께 교반시켜 고체 1.01g(융점 106.5-109)을 수득한다.
C25H36N2O4BrB에 대한 원소분석
계산치(%) : C ; 57.81, H ; 7.00, N ; 5.40, Br ; 15.40, B ; 2.08
실측치(%) : C ; 58.33, H ; 7.33, N ; 4.76, Br ; 14.18, B ; 1.80
C25H36N2O4BrB에 대한 MS(FAB)
계산치(%) : ＋H ; 519.20
실측치(%) : 519.23
Ac-Phe-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산은 에탄올 중 시안아미드(100㎎/㎖)용액 10㎖를 Ac-Phe-보로 Orn-C10H16·벤젠 설폰산 2.0g(3.26mmole)에 처리하여 제조한다. 반응시간 3일 및 반응 혼합물이 출발물질 및 생성물의 혼합물을 함유하는 것을 제외하고는 실시예 5의 구아니딘화 방법을 사용한다. 이것은 연장된 반응 시간에 의해 거의 필요하지 않을 수 있는 추가 정제 단계를 요구한다. 용액을 농축시키고 메탄올 중 LH-20 2.5×100㎝ 컬럼 크로마토그래피한다. 사카구치 염색으로 검출한 목적 생성물을 함유하는 분획을 모아 증발시켜 1.4g을 수득한다. 생성된 물질 1.2g을 아세트산 6㎖에 용해시키고 물 30㎖로 희석시켜 유액을 수득한다. 이것을 20% 수성 아세트산으로 평형시킨 SP-세파댁스TMC-25(H+형태)의 30㎖ 컬럼에 적용시킨다. 컬럼을 20% 아세트산 240㎖로 세척하고, 20% 아세트산 250㎖에서부터 0.3N 염산을 함유한 20% 아세트산 250㎖까지의 선형구배를 수행한다. 0.12N에서 0.16N까지 염산구배에서 용출된 분획을 모아 유리 붕산 치 피난디올 에스테르의 혼합물로서 목적하는 펩타이드 0.42g을 수득한다. 이 혼합물을 메탄올 10㎖에 용해시키고 유리 붕산을 에스테르화시키기 위해 피난디올 80㎎을 첨가한다. 30분 동안 교반시킨 후, 용매를 증발시키고 잔류물을 에테르로 연마하여 목적 생성물 0.28g을 수득한다.
분획을 모아 증발시켜 1.4g을 수득한다. 생성된 물질 1.2g을 아세트산 6㎖에 용해시키고 물 30㎖로 희석시켜 유액을 수득한다. 이것을 20% 수성 아세트산으로 평형시킨, SP-세파댁스TM C-25(H+형태)의 30㎖ 컬럼에 적용시킨다. 컬럼을 20% 아세트산 240㎖로 세척하고, 20% 아세트산 250㎖에서부터 0.3N 염산을 함유한 20% 아세트산 250㎖까지의 선형구배를 수행한다. 0.12N에서 0.16N까지 염산구배에서 용출된 분획을 모아 유리 붕산 및 피난디올 에스테르의 혼합물로서 목적하는 펩타이드 0.42g을 수득한다. 이 혼합물을 메탄올 10㎖에 용해시키고 유리 붕산을 에스테르화시키기 위해 피난디올 80㎎을 첨가한다. 30분 동안 교반시킨 후, 용매를 증발시키고 잔류물을 에테르로 연마하여 목적 생성물 0.28g을 수득한다.
C20H40N5O4B·HCI·2H2O에 대한 원소분석
계산치(%) : C ; 54.78, H ; 8.15, N ; 12.30, 및 B ; 1.90
실측치(%) : C ; 55.34, H ; 7.83, N ; 11.66, 및 B ; 1.99
C26H40N4B에 대한 MS(FAB) :
계산치(%) : ＋H ; 498.32
실측치(%) : 498.31
[실시예 10]
Ac-(D,L) Phe-(D,L)보로 Arg-C6H12
중간체, Ac-(D,L) Phe-(D,L)-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C6H12는 실시에 1b 및 2의 방법을 변형시켜 제조한다. Ac-Phe-OH의 산 염화물은 THF 175㎖중 오염화인 30g(0.145mole)과 Ac-Phe-OH 30g(0.145mole)을 -10℃에서 반응시켜 제조한다. 약 1시간 동안 0℃에서 교반시킨 후 냉 에테르로 350㎖ 용적까지 희석시킨다. 생성물을 고체로 분리하고, 냉에테르로 세척하고 진공 상태에서 건조시켜 21g을 수득한다. 활성화된 Ac-Phe 유도체 14.8g(65.6mmole)을 THF 40㎖에 용해시키고 4-브로모-1-클로로부틸 보로네이트 피나콜 및 헥사메틸디실리잔(20mmole 범위로 제조)의 반응 생성물에 -78℃에서 첨가한다. 반응 혼합물을 실온까지 가온하고 밤새 교반시킨다. 용매를 증발 제거한다. 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시키고 연속적으로 물, 5% 중탄산나트륨 용액 및 포화된 염화나트륨 수용액으로 세척한다. 생성된 혼합물의 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 농축시켜 결정형 고체1.37g(융점 146.5-148℃)으로 목적생성물을 수득한다.각 실험에 있어서, 다음과 같이 분석된다.
C21H32N2O4BrB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 53.98, H ; 6.92, N ; 6.00, Br ; 17.10 및 B ; 2.31
실측치(%) : C ; 54.54, H ; 6.78, N ; 5.89, Br ; 16.46 및 B ; 3.40
알킬 브로마이드를 실시예 3에서의 방법에 의해 이에 상응하는 아지드로 전환시킨다. 생성물을 에틸 아세테이드(융점 143-144)로 결정화한다.
C21H32N5O4B에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 58.74, H ; 7.53, N ; 16.31, 및 B ; 2.53
실측치(%) : C ; 58.85, H ; 7.48, N ; 16.53, 및 B ; 2.93
아지드를 수소화 반응을 대기압하에서 수행하는 것을 제외하고는 실시예 4의 방법에 의해 Ac-(D,L)Phe-(D,L)보로 Orn-C6H12·벤젠 설폰산으로 전환시킨다.
Ac-(D,L) Phe-(D,L)보로 Orn-C6H12·벤젠 설폰산 0.243g(0.433mmole)을 100℃에서 무수 에탄올 2㎖중 시안아미드 0.020g(0.476mmole)와 밤새 반응시킨다. 용액을 농축시키고 에테르로 연마하여 백색 고체 0.21g을 수득한다. 물질의 RP-TLC는, 보로 Arg 펩타아이드에 대한 사카쿠치 염색에 양성인 특이적인 염색전, Rf 0 내지 0.55 및 반응하지 않은 출발 물질에 상응하는 뚜렷한 스포트, Rf 0.68을 나타낸다. 생성물 81㎎을 상기 방법에 의해 시안아미드(10㎎/㎖)2㎖로 밤새 재처리하여 에테르로 연마시킨 후 71㎎을 수득한다.
C22H37N5O4B에 대한 MS(FAB) :
계산치(%) : ＋H ; 446.30
실측치(%) : 446.23 및 404.19(미반응 보로 Orn 펩타이드에 상응)
실시예 5의 방법은 보로아르기닌 펩타이드를 제조하는 우수한 방법이고 더욱 많은 과량의 시안아미드 및 장기간 반응 시간을 사용한 점에서 다르다는 것에 유의한다.
[실시예 11]
Boc-(D) Phe-Phe-보로 Arg-C6H16·벤젠 설폰산
Boc-(D) Phe-phe-OH는 실시예 2에서 Boc-(D) Phe-Pro-OH에 대해 설명한 방법에 의해 제조한다. 벤질 에스테르를 수소화하고, 그 물질을 클로로포름: 헥산으로 결정화하여 목적하는 펩타이드를 수득한다(융점 133-133.5℃)
C23H28N2O3에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 66.96, H ; 6.86, 및 N ; 6.79
실측치(%) : C ; 66.75, H ; 6.79, 및 N ; 6.56
Boc-(D) Phe-Phe-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16은 LH-20 크로마토그래피 단계를 제거한 것을 제외하고는 실시예 2에서 설명한 방법을 사용하여 Boc-(D) Phe-Phe-OH(6.00g, 14.5mmoles)를 NH2-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16·HCI(실시예 1a, 5.33g(14.5mmole)에 커플링시킴으로써 제조한다. 생성물을 에틸 아세테이트로 결정화하여 첫 수득물로 2.47g(융점 132-134) 및 두 번째 수득물로 5.05g(융점 133-135)을 수득한다. 메탄올:물(85:15)중 RP-TLC는 단일 스포트, Rf 0.29를 나타낸다.
C37H51N3O6BrB에 대한 원소분석
계산치(%) : C ; 61.32, H ; 7.11, N ; 5.80, Br ; 11.03
실측치(%) : C ; 61.21, H ; 7.02, N ; 5.59, Br ; 10.22
Boc-(D) Phe-Phe-NH-CH[(CH2)3N3]BO2-C6H16은 LH-20 크로마토그래피 단계가 정제를 위해 필요하지 않다는 것을 제외하고는, 실시예 3의 방법을 사용하여, 상응하는 알킬 브로마이드를 나트륨 아지드로 처리하여 제조한다. 생성물은 에틸 아세테이트: 헥산 용액으로부터 겔로서 나타내고 이것을 분리하고 헥산으로 세척하여 제1수득물로 3.0g 및 제2수득물로 2.9g을 수득한다.
Boc-(D) Phe-Phe-보로 Orn-C10H16·벤젠 설폰산은 실시예 4의 방법에 의해 아지드 5.37g(7.82mmole)로부터 제조하여 5.33g을 수득한다. RP-TLC 메탄올:물(85:15)은 진한 닌히드린 양성 스포트, Rf 0.42 및 약한 UV광 스포트, 0.92(Rf 0.92에서 UV 스포트는 벤젠 설폰산염인 구아니디노 화합물 또는 아민의 전형적인 것이다)를 나타낸다.
C37H53N4O6B에 대한 MS(FAB) :
계산치(%): ＋H ; 661.76
실측치(%) : 661.14
Boc-(D) Phe-Phe-보로 Arg-C10H16은 실시예 5에서의 방법에 의해 수득한다. 보로오르니틴 펩타이드 7.83g(5.90mmole)을 무수 에탄올 20㎖중 시안아미드(50㎎/㎖)로 7일 동안 처리한다.
출발 물질 1.0g에 상응하는 반응 혼합물 일부를 제거하고, 환류 냉각기의 부재하에 독립적으로 밤새 가열시켜 아민을 구아니디노 화합물을 완전히 전환시킨다. LH-20 크로마토그래피한 후 생성물을 에테르로 연마시켜, 목적 생성물 0.52g을 수득한다.
C44H61N6O9SB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 61.38, H ; 7.16, N ; 9.76, B ; 1.25
실측치(%) : C ; 59.69, H ; 7.41, N ; 9.82, B ; 1.26
C38H55N6O6B에 대한 MS(FAB) :
계산치(%) : ＋H ; 703.43
실측치(%) : 703.49
[실시예 12]
H-(D) Phe-Phe-보로 Arg-C10H16·2HCI
Boc(D) Phe-Phe-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산(실시예 11, 0.59g, 1.25mmole)은 샘플을 20% 에탄올 중에서 이온 교환 컬럼에 적용시키고 컬럼을 20% 에탄올로 용출시키는 것을 제외하고는 실시예 6의 방법으로 제조한다. 생성물(0.424g)은 백색 고체로서 수득한다.
C33H47N6O4B에 대한 MS(FAB) :
계산치(%): ＋H ; 603.38
실측치(%): 603.41
[실시예 13]
Ac-Ala-Lys(Boc)-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산
Ac-Ala-Lys(Boc)-OH는 앤더슨(Anderson)등의 방법[참조: J.Am. Chem. Soc.86:1839, (1964)]에 의해 Ac-Ala-OH의 N-하이드록시석신이미드 에스테르를 H-Lys(Boc)-OH에 커플링시켜 제조한다.
Ac-Ala-OH의 N-하이드록시 석신이미드 6.25g, (27.4mmole)을 디옥산 30㎖에 용해시키고 1.0N 수산화나트륨 및 트리에틸아민 2.12㎖(15.0mmole), 30㎖로 구성된 용액에 용해된 H-Lys(Boc)-OH 7.50g(30.4mmole) 용액에 첨가한다. 반응 혼합물을 밤새 교반시키고, 염산으로 산성화시킨다. 용액을 포화시키기에 충분한 무수 염화나트륨을 첨가한다. 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하고 포화된 수성 염화나트륨 중에서 제조된 0.2N 염산으로 세척한다. 유기상을 무수황산나트륨으로 건조하고 여과한다. 용매를 증발 제거한다. 생성물을 에틸 아세테이트:헥산으로 결정화하여 7.3g(융점 86-89℃)을 수득한다
Ac-Ala-Lys(Boc)-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16은 생성물을 에틸 아세테이트로부터 분별 결정하여 정제하는 것을 제외하고는 실시예 2의 방법에 의해 제조한다. 제2 및 제3 수득물로 수득한 생성물(1.13g)은 Rf 0.51인, 메탄올:물(85:15) 중에서 RP-TLC상 단일 스포트를 나타낸다. TLC 플레이트 염산 증기에 노출시키고 이때 결과로 생성된 아민은 닌히드린 염색후에 검출한다.
Ac-Ala-Lys(Boc)-NH-CH[(CH2)3N3]BO2-C10H16은 생성물을 LH-20 크로마토그래피보다 에틸 아세테이트로 결정화시켜 정제하는 것을 제외하고는, 실시예 3의 방법에 의해 상응하는 알킬 브로마이드 1.95g, (2.90mmole)으로부터 제조한다. 조 생성물 1.60g을 결정화시켜 잔류물 0.55g(융점 79-84℃) 및 0.96g을 수득한다. 결정성 생성물의 분석은 다음과 같다.
C30H52N7O7B에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 56.86, H ; 8.29, N ; 15.48, 및 B ; 1.71
실측치(%) : C ; 56.76, H ; 8.26, N ; 15.89, 및 B ; 1.65
Ac-Ala-Lys(Boc)-보로 Orn-C10H16
벤젠 설폰산은 실시예 4에 설명된 방법을 사용하여 상응하는 알킬 아지드 0.433g(0.683mmole)으로부터 제조한다. 촉매 및 용매를 제거하고, 생성물(0.45g)을 에테르로 연마하여 수득한다.
C30H54N5O7B에 대한 MS(FAB) :
계산치(%) : ＋H ; 608.42
실측치(%) : 608.49
Ac-Ala-Lys(Boc)-보로 Arg-C10H16, 벤젠 설폰산은 실시예 5의 방법을 사용하여, 상응하는 보로오르니틴 펩타이드를 시안아미드와 반응시켜 제조한다. 목적 생성물을 함유하는 크로마토그래피 분획을 에테르로 연마하여 백색 고체로서 0.83g을 수득한다.
C37H62N7O10BS에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 55.00, H ; 7.75, N ; 12.14, 및 B ; 1.34
실측치(%) : C ; 54.09, H ; 7.53, N ; 12.22, 및 B ; 1.34
[실시예 14]
Ac-Ala-Lys-보로 Arg-C10H16·2HCI
Ac-Ala-Lys(Boc)-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산 0.200g(0.248mmole)은 실시예 6의 방법에 의해 제조한다. 이온 교환, 용매 증발, 진공 건조 및 에테르 연마시킨후, 물질 0.14g을 수득한다.
C26H48N7O5B에 대한 MS(FAB) :
계산치(%): ＋H ; 550.39
실측치(%): 550.42
[실시예 15]
Boc-Leu-GIY-Leu-Ala-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산
Boc-Leu-Ala-OBzl은 실시예 2에서 디펩타이드 합성에 대해 설명한 방법에 의해 제조한다. Boc-Leu-Ala-OBzl 23.7g(57.7mmole)은 무수 트리플루오로아세트산 40㎖에 용해시킨다. 15분 후, 과량의 트리플루오로아세트산은 증발시켜 제거하고 잔류물을 에테르로 처리하여 H-Leu-Ala-OBzl 트리플루오로아세트산을 결정성 생성물(22.8g)로서 수득한다.
C18H25N2O5F3에 대한 원소분석:
계산치(%) : C ; 53.19, H ; 6.21, 및 N ; 6.89
실측치(%) : C ; 53.37, H ; 5.68, 및 N ; 6.84
Boc-GIy-Leu-Ala-OBzl 은 실시예 2에서 기술된 혼합 무수물 방법을 사용하여 Boc-GIy-OH 5.70g(32.6mmole)을 H-Leu--Ala-OBzl에 커플링시켜 제조한다. 생성물(13.8g)은 무정형 고체로서 수득된다. Boc-GIy-Leu-Ala-OBzl은 트리플루오로아세테이트 염이 에테르에 용해될 수 있다는 것을 제외하고는, H-Leu-Ala-OBzl의 제조에 대해 설명한 방법에 의해 트리플루오로아세트산을 이용하여 제조한다. 이 제제를 에틸 아세테이트에 용해시키고 무수 염화수소로 처리한다. 생성된 생성물을 에테르를 첨가함으로써 침전시켜 H-GIy-Leu-Ala-OBzl-HCI 7.7g을 제1수득물로 수득한다.
Boc-Leu-GIy-Leu-Ala-OBzl은 실시예 2의 혼합 무수물 방법에 의해 Boc-Leu-OH 2.62g(10.5mmole)을 H-GIy-Leu-Ala-OBzl에 커플링시켜 제조한다. 생성된 생성물은 에틸 아세테이트:헥산으로 결정화하여 제1수득물로 2.7g(융점 95-96℃)을 수득한다.
C29H46N4O7에 대한 원소분석:
계산치(%) : C ; 61.89, H ; 8.26, 및 N ; 9.96
실측치(%) : C ; 62.00, H ; 8.40, 및 N ; 9.83
Boc-Leu-GIy-Leu-Ala-OH는 실시예 2의 방법에 의해 벤질 에스테르 2.6g(4.62mmole)을 촉매적 수소화시켜 제조하여 2.1g을 수득한다. 생성된 생성물을 뜨거운 에틸 아세테이트로 결정화시켜 1.4g을 수득한다.
C22H40N4O7에 대한 원소분석:
계산치(%) : C ; 55.90, H ; 8.55, 및 N ; 11.86
실측치(%) : C ; 55.42, H ; 8.47, 및 N ; 11.73
Boc-Leu-GIy-Leu-Ala-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16는 실시예 1로부터 아민에 Boc-Leu-GIy-Ala-OH 1.40g(2.96mmole)을 커플링시켜 제조한다. 이것은 크로마토그래피 단계가 없다는 것을 제외하고는 실시예 2의 방법에 의해 수행한다.
이 생성물을 에틸 아세테이트: 헥산으로 결정화하여 1.17g을 수득한다. 메탄올;클로로포름(1:9)중에서의 TLC는 RF 0.68의 단일 스포트를 나타낸다.
C36H63N5O8BrB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 55.10, H ; 8.11, N ; 8.93, 및 B ; 1.38
실측치(%) : C ; 55.96, H ; 8.30, N ; 8.74, 및 B ; 1.33
상응하는 아지드는 실시예 3에서의 방법에 의해 97% 수율로 제조하고 실시예 4의 방법에 의해 Boc-Leu-GIy-Leu-Ala-보로 Orn-C10H16로 전환시킨다. 분석학적 샘플은 생성물을 에테르로 침전시키고 LH-20 크로마토그래피한 후 헥산과 함께 클로로포름으로 재침전시켜 제조한다.
C36H65N6O8B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H ; 721.50
실측치: 721.55
Boc-Leu-GIy-Leu-Ala-보로 Arg-C16H16·벤젠 설폰산은 실시예 5의 방법에 의해 제조한다. 이에 상응하는 보로오르니틴 펩타이드 0.695g(0.791mmole)을 무수 에탄올중 시안아미드(50㎎/㎖)용액 5㎖와 반응시킨다. 상기 혼합물을 크로마토그래피하고 에테르로 연마시키고, 이때 목적 생성물 0.41g을 수득한다.
C37H67N8B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 763.53
실축치: 763.8
[실시예 16]
H-Leu-GIy-Leu-Ala-보로 Arg-C10H16·HCI·벤젠설폰산
Boc-Leu-GIy-Leu-Ala-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산(실시예 15, 0.050g, 0.0543mmole)을 디옥산중 4N 염화수소 2㎖와 실온에서 5분동안 반응시킨다. 용매 및 과량의 염화수소를 증발시켜 제거한다. 샘플을 진공 상태에서 수산화칼륨으로 밤새 건조시키고 에테르로 연마하여 혼합된 염으로 생성물을 습득한다.
C32H59N8O6B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 663.47
실측치 : 663.50
[실시예 17]
Bz-GIu(OBu)-GIy-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산
Bz-GIu(OBu)-GIy-NH-CH[(CH2)3Br]
BO2-C10H16은 실시예 2의 방법에 따라 아민에 Bz-GIu(OBu)-GIy-OH을 커플링시켜 제조한다. 이에 상응하는 아지드를 실시예 3의 방법에 의해 제조하고 보로오르니틴 펩타이드는 실시예 4의 방법에 의해 제조한다.
C32H49N4O7B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 613.38
실측치 : 613.60
최종 생성물은 실시예 5의 방법으로 수득한다.
C33H51N6O7B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 655.40
실측치 : 655.37
C39H57N6O10SB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 57.62, H ; 7.08, N ; 10.34, 및 B ; 1.33
실측치(%) : C ; 57.43, H ; 7.25, N ; 9.91, 및 B ; 1.23
[실시예 18]
Bz-GIu-GIy-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산
Bz-GIu(OBu)-GIy-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산 0.13g(0.16mmole)을 디옥산 5㎖에 용해시키고, 벤젠 설폰산 0.10g(0.66mmole)에 첨가하고 용액을 실온에서 밤새 교반시킨다. 용액을증발시켜 약 1㎖까지 농축시키고 에테르로 연마하여 고체(0.14g)을 수득한다. 물질을 메탄올 중에서 LH-20 2.5×50㎝ 컬럼 크로마토그래피한다. 목적 생성물을 함유하는 분획을 증발시키고 잔류물을 에테르로 연마하여 목적생성물 53㎎을 수득한다.
C29H43N6O7B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 599.34
실측치 : 599.35＋613.36(미확인)
[실시예 18a]
Bz-GIu-GIy-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산
Bz-GIu(OBu)-GIy-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산 (실시예 17, 0.20g, 0.246mmoles)을 실시예 6의 방법에 의해 무수 염화수소로 45분 동안 처리한다. 물질을 에테르로 연마한 후, NMR은 t-부틸 보호 그룹 약 30%가 아직 남아 있음을 나타낸다. 생성물을 실온에서 45분 동안 무수 TFA와 반응시킨다. TFA를 증발시켜 제거하고 잔류물을 에테르로 연마하여 143㎎을 수득한다.
C29H43N6O7B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 599.34
실측치 : 599.35
[실시예 19]
Bz-Pro-Phe-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산
Bz-Pro-Phe-OH(융점 200-201℃)는 디펩타이드 합성에 대해 실시예 2에서 설명한 방법으로 제조한다.
C21H22N2O4에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 68.82, H ; 6.06, 및 N ; 7.65
실측치(%) : C ; 68.91, H ; 6.09, 및 N ; 7.47
Bz-Pro-Phe-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16은 크로마토그래피 단계가 없다는 것을 제외하고는, 실시예 2에서 설명한 일반적인 방법을 사용하여 아민에 Bz-Pro-Phe-OH를 커플링시켜 제조한다. 메탄올:클로로포름 (1:9)중에서의 TLC는 Rf 0.72에서 중요한 스포트 및 Rf 0.86에서 흔적 스포트를 나타낸다.
C35H45N3O3BBr에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 678.27
실측치 : 677.95
실시예 3 및 4의 방법으로 알킬 할라이드를 아지드 및 보로오르니틴 펩타이드로 전환시킨다.
(Bz-Pro-Phe-보로 Orn-C10H16)C35H47N4O5B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 615.37
실측치 : 615.42
Bz-Pro-Phe-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산은 실시예 5의 방법으로 제조한다.
C36H49N6O5B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 657.39
실측치 : 657.13
C42H55N6O8SB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 61.90, H ; 6.82, N ; 10.31, 및 B ; 1.33
실측치(%) : C ; 60.16, H ; 7.27, N ; 9.79, 및 B ; 1.44
[실시예 20]
Bz-Pro-Phe-보로 Arg-OH·HCI
Bz-Pro-Phe-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산(실시예 19의 화합물, 0.64g, 0.79mmole)을 메틸렌 클로라이드 4㎖에 용해시키고 -78℃로 냉각시킨다. 이것을 무수 빙욕에서, 무수 메틸렌 클로라이드로 1.0N 삼염화붕소(제조원:Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI)를 50% 희석시켜 제조한 0.50N 삼염화붕소 4㎖를 함유하는 플라스크에 첨가한 용액을 -78℃에서 5분 동안 교반시키고, 플라스크를 0℃빙욕에 옮기고 15분동안 교반시킨다. 냉수 5㎖를 서서히 첨가한 후 용액을 20% 아세트산으로 120㎖까지 희석한다. 분리된 유기상을 제거하여 버린다. 수성상을 20% 아세트산으로 평형시킨 SP-세파덱스TM 20㎖ 컬럼에 적용시킨다. 컬럼을 약 150㎖의 20% 아세트산으로 세척하고 20% 아세트산 200㎖로부터 0.30 염산을 함유하는 20% 아세트산 200㎖까지의 선형 구배를 수행한다. 염산의 농도가 0.08 및 0.15N이 되면 생성물을 유출시킨다. 용매를 증발시키고, 진공 상태에서 잔류물을 건조시키고, 에테르로 연마하여 목적 생성물(0.19g)을 수득한다.
C26H35N6O5B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H ; 523.29
실측치 : 579.34(미확인)
C26H36N6O5CIB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 53.29, H ; 6.55, N ; 14.34 및 B ; 1.84
실측치(%) : C ; 53.27, H ; 6.58, N ; 13.25, 및 B ; 1.89
실시예 8a에 설명한 것과 같이 생성물을 피난디올로 에스테르화시켜 NMR 및 MS 특성이 실시예 19의 출발에스테르와 일치하는 생성물을 수득한다.
C30H49N6O5B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 657.40
실측치 : 657.23
[실시예 21]
Bz-Pro-Phe-보로 Arg-F·HCI
Bz-Pro-Phe-NH-CH[(CH2)3NH-C(NH)NH2]BF2·HCI
Bz-Pro-Phe-보로 Arg-F는 킨더(Kinder)등의 방법[참조:J.Med.Chem., 28:1917-1925, (1985)]을 변형시켜 제조한다. 유리 붕산(실시예 20의 화합물, 0.100g, 0.179mmole)을 물 2㎖에 용해시킨다. 여기에 48% 불소화수소산 0.040㎖를 실온에서 첨가한다. 고무상 침점물은 거의 즉시 형성된다. 10분 동안 교반시킨 후 혼합물을 동결시키고 과량의 불소화수소산 및 물을 진공 상태에서 제거한다. 전류물을 메탄올에 용해시키고, 농축시켜 에테르로 연마한다. 0.093g의 수율을 수득한다.
C26H33N6O3BF2에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 527.29
실측치 : 527.31 및 유리 붕산의 추가 질량 특성
C26H34N6O3BF2CI·H2PO에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 53.47, H ; 6.25, N ; 14.47, B ; 1.86 및 F ; 6.54
실측치(%) : C ; 54.00, H ; 6.40, N ; 13.48, B ; 1.95 및 F ; 7.06
[실시예 22]
Boc-(D)Phe-Pro-보로 Irg-C10H16·HBr
보로 Irg-는 -NH-CH[(CH2)3S-C(NH)NH2] BO2-에 대한 약자이고, 여기에서 이소티오우로늄 그룹은 보로아르기닌의 구아니디노를 대신한다. Boc-(D) Phe-Pro-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16(실시예 2의 화합물, 1.00g, 1.61mmole)을 무수 에탄올 4㎖에 용해시키고 티오우레아 0.37g(4.82mmole)을 첨가한다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반시킨다. 용액을 농축시키고 잔류물을 에테르로 연마하여 고체 0.58g을 수득한다. 생성된 고체를 메탄올 중에서 LH20 2.5×50㎝ 컬럼 크로마토그래피한다. 목적 생성물을 함유하고 플링된 분획을 증발시켜 생성물 0.26g을 수득한다. 샘플을 에테르로 연마시켜 무정형 고체 0.150g을 수득한다.
C34H53N5O6BS에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 670.38
실측치 : 670.39
C34H53N5O6SBrB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 54.40, H ; 7.13, N ; 9.33 및 B ; 1.44
실측치(%) : C ; 54.10, H ; 7.39, N ; 9.27, 및 B ; 1.47
이 반응으로 수득된 에테르 가용성 잔류물은 장기간 반응 시간에 의해 이소티오우로늄염으로 전환된 출발 물질로 주로 구성된다.
이러한 일반적인 방법은 어떤 경우에 4배 과량의 티오우레아 및 3 내지 4일 반응 시간을 사용하는 것을 제외하고는, 다른 이소티오우로늄 염을 제조하는데 사용된다.
[실시예 23]
H-(D) Phe-Pro-보로 Irg-C10H16·HBr·HCI
Boc-(D) Phe-Pro-보로 Irg-C10H16·HBr(실시예 22의 화합물, 0.050g, 0.067mmole)을 디옥산 중 4N 염화수소 Iml와 실온에서 15분 동안 반응시킨다. 용매를 증발시키고 잔류물을 에테르로 연마시켜 백색 고체 0.040g을 수득한다.
C29H45N5O4SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 571.29
실측치 : 570.47
[실시예 24]
Ac-Ala-Lys(Boc)-보로 Irg-C10H16·HBr
Ac-Ala-Lys(Boc)-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16(실시예 13으로부터, 0.700g, 1.04mmole)을 무수 에탄올 4㎖중에서 4일 동안 티오우레아 0.320g(4.00 mmole)과 반응시킨다. 생성물을 실시예 22의 방법 에 의해 정제한다. 크로마토그래피한 후, 목적 생성물 0.28g을 수득한다. 에테르로 연마하여 무정형 백색 고체로서 생성물 0.173g을 수득한다.
C31H55N6O7SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 667.8
실측치 : 667
C31H56N6O7SBrB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 49.79, H ; 7.56, N ; 11.24 및 B ; 1.44
실측치(%) : C ; 49.20, H ; 7.62, N ; 11.31, 및 B ; 1.36
[실시예 25]
Ac-Ala-Lys-보로 Irg-C10H16·2HBr
Ac-Ala-Lys(Boc)-보로 Irg-C10H16·HBr(실시예 24의 화합물, 0.050g, 0.067mmole)을 메탄올 1㎖중에 용해시키고 브롬화수소 가스를 10분동안 용액에 도입한다. 용매를 증발 제거하고 잔류물을 에테르로 연마하여 목적 생성물을 고체(49㎎)로서 수득한다.
C36H47N6O5SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 567.35
실측치 : 567.41
[실시예 26]
Ac-Phe-보로 Irg-C10H16·HBr
Ac-Phe-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16(실시예 9, 1.00g, 2.41mmole)을 실시예 22의 방법에 따라 무수 에탄올 5㎖중 티오우레아 3배 과량으로 반응시킨다. 생성물 0.284g을 백색 무정형 고체로서 수득한다. 추가 생성물은 잔여 에테르 가용성 물질을 티오우레아로 재반응시키고 정제 단계를 반복하여 수득한다.
C26H39N4O4SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 515.29
실측치 : 515.29
C26H39N4O4SB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 52.44, H ; 6.79, N ; 9.41 및 B ; 1.82
실측치(%) : C ; 52.83, H ; 6.89, N ; 8.47, 및 B ; 1.85
[실시예 27]
Bz-Pro-Phe-보로 Irg-C10H16·HBr
Bz-Pro-Phe-NH-CH[(CH2)3Br]BO2C10H16(실시예 19의 생성물, 0.500g, 0.737mmole)은 실시예 22의 방법에 따라 이 실시예의 생성물을 제조하는데 사용한다. 생성물 0.358g을 백색 고체로서 수득한다.
C36H48N5O5SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 674.36
실측치 : 674.27
C36H49N5O5SBBr에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 57.29, H ; 6.56, N ; 9.28 및 B ; 1.43
실측치(%) : C ; 57.46, H ; 6.45, N ; 8.78, 및 B ; 1.38
[실시예 28]
BOc-Leu-GIy-Leu-Ala-보로 Irg-C10H16·HBr
BOc-Leu-GIy-Leu-Ala-NH-CH[(CH2)3Br]
BO2-C10H16(실시예 15의 생성물, 0.770g, 0.980mmole)은 실시예 22의 방법에 의해 이 실시예의 이소티오우로늄염을 제조하는데 사용한다. 반응 생성물을 크로마토그래피한 후, 최종 생성물 0.400g을 헥산으로 연마하여 백색 고체로서 수득한다.
C37H66N7O8SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 780.48
실측치 : 780.52
C37H67N5O8SBrB에 원소분석 :
계산치 ＋H : 780.48
실측치 : 780.52
C37H67N5O8SBrB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 51.62, H ; 7.86, N ; 11.39, 및 B ; 1.26
실측치(%) : C ; 51.03, H ; 7.86, N ; 11.14, 및 B ; 1.18
[실시예 29]
H-Leu-GIy-Leu-Ala-보로 Irg-C10H16·2HBr
Boc-Leu-GIy-Leu-Ala-보로 Irg-C10H16·HBr(실시예 28의 화합물, 0.100g, 0.12mmole)을 메탄올 1㎖에 용해시키고 메틸렌 클로라이드중 0.7N 브롬화 수소 1㎖를 가한다. 이 혼합물은 15분 동안 실온에서 교반시킨다. 용매 및 과량의 브롬화수소를 증발시켜 제거하고 잔류물은 에테르로 연마하여 목적 생성물을 거의 정량적인 수율로 수득한다.
C32H58N7O6SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 680.43
실측치 : 680.50
[실시예 30]
Bz-GIu(OBu)-GIy-보로 Irg-C10H16·HBr
Bz-GIu(OBu)-GIy-NH[(CH2)3Br]BO2-C10H16(실시예 17의 생성물, 0.293g, 0.433mmole)은 실시예 22의 방법을 사용하여 이소티오우로늄 동족체 0.220g을 제조하는데 사용한다.
C33H50N5O7SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 672.36
실측치 : 672.3
C33H51N5O7SBBr에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 52.66, H ; 6.84, N ; 9.31 및 B ; 1.44
실측치(%) : C ; 52.38, H ; 6.76, N ; 8.81, 및 B ; 1.46
[실시예 31]
Bz-GIu-GIy-보로 Irg-C10H16·HBr
Bz-GIu(OBu)-GIy-보로 Irg-C10H16·HBr(실시예 30의 생성물, 0.050g, 0.066mmole)을 THF 1㎖에 용해시키고 실온에서 1시간 동안 교반시킨다. 메틸렌 클로라이드 중 브롬화수소 0.35mmole을 첨가하고 생성된 용액의 액체를 증발시킨다. 잔류물을 에테르로 연마하여 47㎎을 수득한다.
C29H42N5O7SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 616.30
실측치 : 616.34
[실시예 32]
Boc-(D)Phe-Phe-보로 Irg-C10H16·HBr
Boc-(D)Phe-Phe-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16(실시예 11의 화합물, 1.50g, 2.07mmole)은 실시예 22의 방법을 사용하여 이소티오우로늄 동족체 (0.90g)를 제조하는데 사용한다.
C38H34N5O6SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 719.84
실측치 : 720
C38H53N5O6SBBr에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 56.99, H ; 6.94, N ; 8.75 및 B ; 1.35
실측치(%) : C ; 55.89, H ; 6.87, N ; 8.59, 및 B ; 1.18
[실시예 33]
H-(D)Phe-Phe-보로 Irg-C10H16·2HBr
Boc-(D)Phe-Phe-보로 Irg-C10H16·HBr(실시예 20의 화합물, 0.20g, 0.25mmole)은 실시예 29의 방법에 의해 브롬화수소와 반응시켜 목적 생성물 188㎎을 수득한다.
C33H46N5O5SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 629.34
실측치 : 629.40
[실시예 34]
Z-Phe-GIy-GIy-보로 Irg-C10H16·HBr
Z-Phe-GIy-GIy-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16을 실시예 2의 방법에 의해 아민(실시예 1a)에 Z-Phe-GIy-GIy-OH을 커플링시켜 제조한다.
C35H46N4O7BBr에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 57.93, H ; 6.40, N ; 7.72 및 B ; 1.49
실측치(%) : C ; 58.42, H ; 6.83, N ; 7.74, 및 B ; 1.96
알킬 할라이드 1.00g(1.38mmole)을 실시예 22의 방법에 의해 이소티오우로늄 동족체로 전환시켜 백색 무정형 고체로서 생성물 0.87g을 수득한다.
C38H49N6O7SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 721.36
실측치 : 721.32
C36H50N6O7SBBr에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 54.00, H ; 6.31, N ; 10.50, 및 B ; 1.35
실측치(%) : C ; 53.17, H ; 6.50, N ; 10.03, 및 B ; 1.25
[실시예 35]
Boc-Ala-Phe-(D,L)보로 Irg-C6H12·HBr
Boc-Ala-Phe-OMe은 실시예 2의 혼합된 무수물 방법을 사용하여 제조한다.
C18H26N2O5에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 61.70, H ; 7.48, N ; 7.99
실측치(%) : C ; 61.51, H ; 7.56, N ; 7.92
메틸 에스테르를 염기로 가수분해시켜 56% 수율로 Boc-Ala-Phe-OH를 수득한다. Boc-Ala-Phe-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C6H12은 LH-20 크로마토그래피를 사용하지 않는 것을 제외하고는, 실시예 2의 방법을 사용하여 Boc-Ala-Phe-OH를 NH2-CH[(CH2)3Br]BO2-C6H12·HCI(실시예 1b)을 커플링시켜 제조한다.
Boc-Ala-Phe-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C6H121.00g(1.72mmole)을 실시예 22의 방법에 의해 티오우레아와 반응시켜 백색 고체로서 이소티오우로늄 동족체 0.485g을 수득한다.
C28H46N5O6SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 592.33
실측치 : 592.60
C28H47N5O6SBBr에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 50.00, H ; 7.06, N ; 10.41 및 B ; 1.61
실측치(%) : C ; 49.50, H ; 7.24, N ; 10.22, 및 B ; 1.41
[실시예 36]
H-Ala-Phe-(D,L)보로 Irg-C6H12·2HBr
Boc-Ala-Phe-보로 Irg-C6H12·HBr(실시예 35,의 0.10g, 0.149mmole)을 실시예 29의 방법에 의해 브롬화수소와 반응시켜 목적 생성물을 거의 정량적인 수율로 수득한다.
C23H38N5O6SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 492.28
실측치 : 492.26
[실시예 37]
Boc-Ala-Phe-(D,L)보로호모 Irg-C6H12·HBr
Boc-Ala-Phe-NH-CH[(CH2)4-S-C(NH)NH2]BO2-C6H12·HBr
Boc-Ala-Phe-OH(실시예 35)을 아민 (실시예 1d)과 커플링시켜 Boc-Ala-Phe-NH-CH[(CH2)4Br]BO2-C6H12을 수득한다. LH-20 크로마토그래피 단계가 정제를 위해 필요하지 않는 이외에는, 실시예 2의 방법을 사용한다. 분석학적 샘플은 용출제로서 에틸 아세테이트를 사용하여 실리카겔 크로마토그래피하여 수득한다.
C28H45N3O6BrB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 610.27
실측치 : 610.24
C28H45N3O6BrB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 55.19, H ; 7.28, N ; 6.90, Br ; 13.11 및 B ; 1.78
실측치(%) : C ; 55.30, H ; 7.39, N ; 6.40, Br ; 12.07 및 B ; 1.95
알킬 브로마이드 0.537g(0.883mmole)을 실시예 22의 방법을 사용하여 티오우레아와 반응시킨다. 생성물을 0.23g을 에테르로 연마시킨 후 무정형 백색 고체로서 수득한다.
C29H48N5O6S에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 606.35
실측치 : 606.38
C29H49N5O6SBBr에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 50.73, H ; 7.21, N ; 10.20, 및 B ; 1.57
실측치(%) : C ; 50.22. H ; 7.46, N ; 9.74, 및 B ; 1.55
[실시예 38]
H-Ala-Phe-(D,L)-보로호모 Irg-C6H12·2HBr
Boc-Ala-Phe-(D,L)보로호모 Irg-C6H12·HBr(실시예 37의 화합물, 0.050g, 0.073mmole)을 실시예 29의 방법에 의해 브롬화수소와 반응시켜 목적 생성물 44㎎을 수득한다.
C24H40N5O4SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 506.30
실측치 : 506.39
[실시예 39]
Boc-Ala-Phe-(D,L)보로 Lys-C6H12·HCI
Boc-Ala-Phe-NH-CH[(CH2)4-NH2]BO2-C6H12·벤젠 설폰산
Boc-Ala-Phe-NH-CH[(CH2)4Br]BO2-C6H12(실시예 35)를, LH-20 크로마토그래피 단계가 정제시 필요하지 않는 이외에는, 실시예 3의 방법을 사용하여, 알킬 아지드로 전환시킨다. 아지드는 실시예 4의 방법으로 수소화시키되 2당량의 벤젠 설폰산을 사용하고 수소화반응 시간은 2시간으로 하여 최종 생성물을 40% 수율로 수득한다[융점 154-160℃, (분해)].
C28H46N4O6B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 547.38
실측치 : 547.43
[실시예 40]
H-Ala-Phe-(D,L)보로 Lys-C6H12·TFA·벤젠 설폰산
Boc-Ala-Phe-(D,L)보로 Lys-C6H12·벤젠 설폰산(실시예 39의 화합물)을 실온에서 1시간 동안 트리플루오로아세트산과 반응시킨다. 용매를 증발시키고 잔류물을 에테르로 연마하여 고체를 수득한다.
C23H39N4O4B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 447.31
실측치 : 447.31
C31H46N4O9SF3B·2H2O에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 49.34, H ; 6.68, N ; 7.42, 및 B ; 1.43
실측치(%) : C ; 49.26. H ; 5.94, N ; 7.12, 및 B ; 1.34
[실시예 41]
Boc-(D) Val-Leu-보로 Lys-C6H12·벤젠 설폰산
Boc-(D) Val-Leu-OH는 실시예 2의 방법에 의해 제조된다. 벤질 에스테르를 76% 수율로 수득한다.
C23H30N2O5에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 421.27
실측치 : 421.38
수소화시킨 후 유리산을 백색 결정성 고체로서 100% 수율로 수득한다.
C16H29N2O5에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 59.34, H ; 8.87, 및 N ; 8.50
실측치(%) : C ; 59.34. H ; 8.87, 및 N ; 8.50
Boc-(D) Val-Leu-OH는 실시예 37에서 설명된 Boc-Ala-Phe-OH를 커플링시키는 방법을 사용하여 아민(실시예 1)에 커플링시켜 Boc-(D) Val-Leu-NH-CH[(CH2)4Br]BO2-C6H12를 97% 수율로 수득한다.
C27H51N3O6BBr에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 604.31
실측치 : 604.31
알킬 보로마이드를 이에 상응하는 아지드로 실시예 3의 방법에 의해 85% 수율로 전환시키고, 아지드를 실시예 39의 방법으로 수소화시켜 백색 고체로서 최종 산물을 62% 수율로 수득한다.
C27H53N4O6B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 541.41
실측치 : 541.46
C33H59N4O9SB·1.5H2O에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 54.62, H ; 8.61, N ; 7.73, 및 B ; 1.49
실측치(%) : C ; 54.58, H ; 8.59, N ; 7.92, 및 B ; 1.98
[실시예 42]
Ac-Phe-보로 Lys-C6H12·벤젠 설폰산
실시예 42는 실시예 39의 방법에 따라 제조한다.
Ac-Phe-NH-CH[(CH2)4Br]BO2-C6H12는 72%로 수율로 제조된다.
C22H34N2O4BBr에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 481.00
실측치 : 481.21
아지드를 57% 수율로 수득한다. 최종 생성물은 50% 수율로 수득한다.
C22H37N3O4B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 418.29
실측치 : 418.31
C29H42N3O7SB·H2O에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 56.66, H ; 7.47, N ; 7.08, 및 B ; 1.82
실측치(%) : C ; 56.88. H ; 7.43, N ; 7.22, 및 B ; 1.53
[실시예 43]
Bz-(D,L)보로 Irg-C6H12·HBr
Bz-(D,L) NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C6H12는 아민(실시예 1b, 5.0g, 15.9mmole)을 디옥산 4㎖ 및 물4㎖로 구성된 혼합물 중 동량의 벤조일 클로라이드 및 2당량의 중탄산나트륨과 0℃에서 반응시켜 제조한다. 처음에 시약을 혼합한 후, 반응물을 50% 디옥산:물 6㎖로 희석하고 실온에서 가온한다. 반응 혼합물을 약 30분간 실온에서 교반시키고 생성물을 에틸 아세테이트로 추출하고 물, 0.2N 염산, 5% 수성 중탄산나트륨 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척한다. 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고 증발시켜 결정성 생성물을 수득한다. 분리 및 에틸 아세테이트로 세척한 후, 화합물 3.26g(융점 176-177℃)을 수득한다.
C17H25NO3BrB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 53.44, H ; 6.59, N ; 3.67, 및 B ; 2.83
실측치(%) : C ; 54.50. H ; 6.76, N ; 3.68, 및 B ; 2.84
알킬 할라이드 1.00g(2.62mmole)을 실시예 22에 설명된 방법에 의해 상응하는 이소티오우로늄 염으로 전환시킨다. 생성물 0.84g을 백색 고체로서 수득한다.
C18H28N3O3SB에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 378.20
실측치 : 378.21
C18H29N3O3SBBr에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 47.18, H ; 6.38, N ; 9.17, 및 B ; 2.36
실측치(%) : C ; 46.11. H ; 6.71, N ; 8.97, 및 B ; 2.22
[실시예 44]
Bz-(D,L)보로 Arg-C6H12·벤젠 설폰산
알킬 할라이드(실시예 43, 2.0g,5.25mmole)를 실시예 3의 방법에 의해 아지드(융점 138-139℃) 0.97g으로 전환시킨다. 아지드를 실시예 4의 방법을 사용하여 거의 정량적인 수율로 Bz-보로 Orn-C6H12·벤젠 설폰산으로 전환시킨다.
C18H27N2O3B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 319.22
실측치 : 319.26
Bz-보로 Orn-C6H12·벤젠 설폰산 0.90g(1.84mmole)을 실시예 5의 방법을 사용하여 시안 아미드와 반응시켜 결정성 생성물 0.65g(융점 242-244℃)을 수득한다.
C18H29N4O3B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 361.24
실측치 : 361.24
C24H35N4O6SB에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 55.59, H ; 6.82, N ; 10.81, 및 B ; 2.08
실측치(%) : C ; 54.60. H ; 6.70, N ; 11.24, 및 B ; 1.87
[실시예 45]
Ac-Leu-Thr(OBu)-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산
Ac-Leu-Thr(OBu)-OH를 LH-20 크로마토그래피시킨 후 최종 생성물이 무정형 백색 고체로 수득되는 것을 제외하고는 디펩타이드 합성에 대해 실시예 13의 방법을 사용하여, Ac-Leu-Osu를 H-Thr(OBu)-OH에 커플링시켜 제조한다. Ac-Leu-Thr(OBu)-OH 3.29g(9.90mmole)은 LH-20 크로마토그래피 단계를 필요하지 않는 것을 제외하고는, 실시예 2의 혼합 무수물 방법으로 아민(실시예 1a)에 커플링시킨다. Ac-Leu-Thr(OBu)-NH-CH[(CH2)3Br]BO2-C10H16는 무정형 백색 고체로서 5.39g을 수득한다. 알킬 할라이드는 크로마토그래피 단계를 추가 정제에 사용하는 것을 제외하고는, 실시예 3의 방법에 의해 82% 수율로 상응하는 아지드로 전환시킨다. 아지드 3.88g(6.42mmole)은 실시예 4의 방법에 의해 수소화시킨다. 생성물 Ac-Leu-Thr(OBu)-보로 Orn-C10H16·벤젠 설폰산은 생성물을 LH-20 크로마토그래피하고 에테르로 연마한 후 74% 수율로 수득한다.
C30H55N4O6B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 579.43
실측치 : 579.48
보로오르니틴 펩타이드는 실시예 5의 방법에 의해 최종 생성물로 86% 수율로 전환된다.
C31H57N6O6B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 621.45
실측치 : 621.50
C37H63N6SO9B에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 57.05, H ; 8.17, N ; 10.79, 및 B ; 1.39
실측치(%) : C ; 56.47, H ; 8.01, N ; 10.93, 및 B ; 1.34
[실시예 46]
Ac-Leu-Thr-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산
Ac-Leu-Thr(OBu)-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산(실시예 45, 0.200g, 0.257mmole)을 메틸렌 클로라이드 2㎖ 및 2㎖의 4N HCI ; 디옥산의 혼합물에 용해시키고 실온에서 30분 동안 교반시킨다. 용매를 증발시키고 잔류물을 고진공하에 건조시킨다. 목적 생성물을 에테르로 연마하여 수율 97%의 백색고체로서 수득한다.
C27H49N6O6B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 565.39
실측치 : 565.48
[실시예 47]
Ac-Lys(Boc)-Pro-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산
Ac-Lys(Boc)-Pro-OH는 실시예 13에서 설명한 방법으로 제조한다. 이것은 에틸 아세테이트에 결정화한 후 백색 고체로서 (융점 160-161.5℃)수득한다. Ac-Lys(Boc)-Pro-OH 3.15g(8.18mmole)은 실시예 2의 방법을 사용하여 아민(실시예 1a)에 커플링한다. 생성물 5.8g은 추가 정제하지 않고 사용한다.이것을 LH-20 크로마토그래피한 후 실시예 3의 방법에 의해 73% 수율의 아지드로 전환시킨다. 실시예 4의 수소화 반응 방법. LH-20 크로마토그래피 및 샘플을 에테르로 연마하여 Ac-Lys(Boc)-Pro-보로 Orn-C10H16·벤젠 설폰산을 81% 수율로 수득한다.
C32H55N5O7B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 634.43
실측치 : 634.46
실시예 5의 방법으로 보로오르니틴 펩타이드 2.0g(2.53mmole)을 시안아미드와 반응시켜 목적 생성물 1.8g을 백색 고체로서 수득한다.
C33H57N7O7B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 676.46
실측치 : 676.41
C39H63N7O10BS에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 56.23, H ; 7.64, N ; 11.77, 및 B ; 1.30
실측치(%) : C ; 56.06, H ; 7.48, N ; 11.75, 및 B ; 1.22
[실시예 48]
Ac-Lys-Pro-보로 Arg-C10H16·2HCI
Ac-Lys(Boc)-Pro-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산(실시예 47, 0.30g, 0.360mmole)을 빙초산 및 4N HCI: 디옥산의 50:50 혼합물과 실온에서 15분동안 반응시킨다. 용매를 증발시키고 잔류물을 진공하여 건조시킨다. 잔류물을 물에 용해시키고 AGI-X8(CI-형태) 5㎖ 컬럼을 통과시킨다. 샘플을 증발시키고 잔류물을 에테르로 연마하여 목적 생성물을 백색 고체로서 230㎎ 수득한다.
C28H49H7O5B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 576.40
실측치 : 576.45
[실시예 49]
Ac-Ala-GIu(OBu)-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산
AC-Ala-GIu(OBu)-OH는 실시예 13의 방법을 사용하여 Ac-Ala-Osu를 H-GIu(OBu)-OH에 커플링시켜 제조한다. 생성물을 에틸 아세테이트 : 헥산으로 결정화한다.(융점 147.5-148℃).
C14H24N2O6에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 53.14, H ; 7.66, 및 N ; 8.85
실측치(%) : C ; 53.28. H ; 7.53, 및 N ; 9.08
Ac-Ala-GIu(OBu)-NH-CH[(CH2)3)Br]
BO2-C10H16는 실시예 2의 방법으로 제조하되, 반응의 초기 수행 동안 유기상에 대해 에틸 아세테이트 대신 클로로포름을 사용하고 LH-20 크로마토그래피를 사용하지 않는다. 목적 생성물은 유기상을 증발시킨 후 부분적으로 결정형인 고체로서 87% 수율로 수득한다. 알킬 브로마이드는 실시예 3의 방법에 의해 아지드로 전환시킨다. 목적 생성물(융점 163.5-166℃)은 클로로포름으로 조생성물을 결정화하여 50% 수율로 수득한다.
C28H47N6O7B에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 53.51, H ; 7.55, N ; 6.69, 및 B ; 1.73
실측치(%) : C ; 55.51, H ; 7.50, N ; 6.50, 및 B ; 1.66
보로오르니틴 펩타이드는 실시예 4의 방법으로 제조하여 79% 수율로 목적 생성물을 수득한다.
C28H49N4O7B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 565.38
실측치 : 565.51
최종 산물은 실시예 5의 방법을 사용하여 무정형의 백색 고체로서 70% 수율로 수득한다.
C29H51N6O7B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 607.40
실측치 : 607.41
C35H57N6O10BS에 대한 원소분석 :
계산치(%) : C ; 54.96, H ; 7.53, N ; 10.99, 및 B ; 1.41
실측치(%) : C ; 54.36, H ; 7.71, N ; 11.27 및 B ; 1.21
[실시예 50]
Ac-Ala-GIu-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산
Ac-Ala-GIu(Bu)-보로 Arg-C10H16·벤젠 설폰산(실시예 49, 0.10g, 0.131mmole)을 아세트산10㎖에 용해시키고 무수 HCI로 20분 동안 용액내에서 거품을 일으킨다. 용액을 실온에서 1.5시간 동안 교반시키고 용매를 증발시켜 오일을 수득한다. 목적 생성물은 진공하에서 건조시키고 에테르로 연마한 후 백색 고체 82㎎으로 수득한다.
C25H43N6O7B에 대한 MS(FAB) :
계산치 ＋H : 551.34
실측치 : 551.41
하기 화합물도 또한 상시 실시예 39 및 40에서와 실질적으로 같은 방법을 사용하여 제조한다.
Boc-Val-Val-보로 Lys-C6H12·BSA:
H-Val-Val-보로 Lys-C6H12·BSA·TFA:
Boc-(D)Phe-Phe-보로 Lys-C6H12·BSA:
H-(D)Phe-Phe-보로 Lys-C6H12·BSA·TFA
Boc-GIu-Phe-보로 Lys-C6H12·BSA:
PyoGIu-Phe-보로 Lys-C6H12·BSA:
[생물학적 실시예]
하기 실시예에서, u는 마이크로를 뜻한다.
[실시예 51-71]
사람의 혈장 칼리크레인의 억제
사람의 혈장 칼리크레인은 프로토겐 AG(Protogen AG: Switzerland)로부터 얻는다. 공급자에 의해 설명된 것으로서의 특이적 활성은 ㎎당 15유니트이다. 1유니트는 기질 농도 0.50mM, 25℃, 50mM 인산 칼륨 완충액(pH 8.0)중에서 1분당 기질인 H-(D) Pro-Phe-Arg-D-니트로아닐리드(Kabi S2302) 1umole을 가수분해시키는데 필요한 효소의 양으로서 정의된다.
효소 저장 용액(1유니트/㎖)은 0.24M 염화나트륨 및 0.1% PEG 6000(폴리에틸렌 글리콜)을 함유하는 pH 7.5의 50% 글리세롤- 0.10M 인산나트륨 완충액 중에서 제조한다. 표준 분석에 있어서, 칼리크레인 저장 용액 10ul를 0.20M 염화나트륨 및 0.1% PEG를 함유하는, pH 7.5의 0.10mM 인산나트륨 완충액 중 0.20mM S2302로 구성된 용액 990ul에 25에서 첨가한다. 억제제의 효과는 억제제의 존재 및 부재하에서 시간에 따라 405nm에서의 흡수도 증가를 측정함으로써 결정되는 효소 활성을 모니터하여 평가한다.표 1은 억제제 수준 및 반응 개시후 10분에서 20분까지 시간 간격을 두고 측정된 잔여 활성을 나타낸다. 대조군의 활성은 0.0092±0.0095/분이다.
[표 1a]
사람의 혈장 칼리크레인의 억제
Figure kpo00011
[표 1b]
Figure kpo00012
[실시예 72-110]
트롬빈의 억제(에스테라제 활성)
사람의 트롬빈(특이적 활성 2345NIH 유니트/㎖)은 알.큐.피.래보러토리(R.Q.P.Laboratories,South Bend, IN)(Lot HT102)로부터 얻는다. 트롬빈의 저장 용액은 0.75M 염화나트륨을 함유하는 pH 6.0의 0.010M PIPES 완충액 중에서 제조한다. 트롬빈의 측정은 그린(Green) 및 사우(Shaw)의 방법[참조 : Anal.Biochem.,93 : 223(1979)]에 따라 0.20M 염화나트륨 및 0.1% PEG 6000을 함유하는, pH 7.5의 인산나트륨 용액 중에서 수행한다. 기질의 초기 농도는 0.10nM이고 트롬빈의 농도는 1.0nM(중량 기준)이다. 표 2는 억제제 수준 및 반응 개시후 10분에서 20분까지 시간 간격을 두고 측정한 잔여 활성을 나타낸다. 대조군의 트롬빈 활성은 0.0076±0.0005/분이다.
[표 2a]
트롬빈의 억제
Figure kpo00013
[표 2b]
Figure kpo00014
[실시예 111-124]
APTT 및 PT 측정에 의해 나타낸 혈액 응고의 억제
시험관내 혈액 응고에 대한 프로테아제 억제제의 영향은 두 가지 다른 임상적 매개 변수, 즉 활성화된 부분적 트롬보플라스틴 시간(APTT) 및 프로트롬빈 시간(PT)에 대한 이들의 영향을 측정함으로써 결정한다. 이 측정법 각각에 대한 시약은 시판품을 구입한다(제조원 : General Diagnostics, Jessup MD). 억제제의 저장 용액은 0.10M 염화나트륨을 함유하는 pH 7.5의 25mM HEPES 완충액 중에서 제조한다. APTT 측정을 하기 위해서, 억제제 용액 0.100㎖를 정상 사람의 혈장 0.100㎖ 및 자동화된 APTT 시약 0.100㎖와 함께 배양한다. 37℃에서 5.0분 동안 배양한 후, 염화칼슘 0.100㎖를 첨가하고 초단위로 측정되는 응고 시간은 피브로미터(fibrometer)로 측정한다. 억제제의 부재하에 수행한 대조군의 응고 시간과 비교해서 혈액 응고 시간에 대한 억제제의 여러 농도의 영향은 표 3과 같다.
PT 측정을 위해서는, 억제제 용액 0.100㎖를 정상 사람의 혈장 0.100㎖와 37℃에서 2분 동안 배양 시킨다. 심플라스틴(Simplastin) 시약 0.200㎖를 첨가하고 응고 시간을 측정한 것은 표 4에서와 같다.
표 5는 표 3 및 4에서의 결과를 요약한 것이고, APTT(2×APTT 및 PT(2×PT)를 2배로 증가시키는데 필요한 억제제의 적당한 농도를 나타낸다.
표 3-5, 7-10에서의 화합물 명칭
억제제의 명칭
Figure kpo00015
[표 3]
활성화된 부분적 트롬보플라스틴 시간(초 단위로 측정)
Figure kpo00016
[표 4]
프로트롬빈 시간(초 단위로 측정)
Figure kpo00017
[표 5]
혈액응고의 억제
Figure kpo00018
[실시예 125-127]
TT측정에 의해 나타낸 혈액 응고의 억제
시험관내 혈액 응고에 대한 프로테아제 억제제 Ac-(D) Phe-Pro-보로 Arg-OH(실시예 8)의 영향은 트롬빈 시간(TT)에 대한 이의 영향을 측정함으로써 결정한다. 정상 토끼 혈장 0.2㎖ 및 목적하는 최종 농도 6배로 억제제를 함유하는 완충액 0.05㎖의 혼합물을 37℃까지 가온한다. 응고는 트롬빈의 첨가에 의해(최종 농도 6배로 0.05㎖) 개시된다. 사용된 트롬빈은 시그마 케미칼 컴파니(Sigma Chemical Company, No.T-6634, activity 1190 NIH 유니트/단백질 1㎎)로부터 구입하여 완충액 중에 제조한다. 억제제 및 트롬빈에 사용되는 완충액은 0.154M NaCl(8.84g/1) 및 2.5㎎/㎖ 소의 혈청 알부민을 함유하는 0.1M 트리스 완충액(12.10g/1)(pH 7.4)이다. 초단위로 측정되는 응고 시간은 피브로 미터를 사용하여 결정한다.억제제의 부재하에 수행된 대조군의 혈액 응고 시간과 비교해서 혈액 응고 시간에 대한 억제제의 영향은 표6과 같다. 수치는 3회 이상 측정치의 평균이다. 300초 내에 응고가 일어나지 않은 경우, 반응을 종결시킨다.
[표 6]
Figure kpo00019
[실시예 128-132]
APTT에 의해 측정된 사람의 혈장에서 억제제의 안정성
혈장에서 억제제의 안정성은 혈액 응고를 억제하는 활성에 의해 결정한다. 우선, 0.10M 염화나트륨을 함유하는 pH 7.5의 25mM HEPES 완충액 중에서 시험되는 억제제의 저장 용액 1.0uM을 정상 사람의 혈장으로 50% 희석한다. 이 혼합물을 ℃로 만든 후, 분취량 0.200㎖을 꺼내어 37℃에서 2분동안 배양시킨다. 자동화된 APTT 시약을 등량적으로 가하고 실시예 111-117에서 기술된 바와 같이 응고 시간을 측정한다. 응고 측정 동안 억제제의 최종 농도는 250nM이다. 각 억제제에 대한 배양 시간(수시간으로 나타냄) 및 응고 시간(초로 측정)은 표 7과 같다. 화합물 E 및 F에 대한 수치는 대조군과 동시에 측정한다. 화합물 A,B, 및 C는 다른 날에 수득한 것이다.
[표 7]
사람의 혈장에서 억제제의 안정성
Figure kpo00020
[실시예 133-136]
완충액중 억제제의 안정성
1.0uM의 농도로 억제제 각각을 0.20M 염화나트륨 및 0.10% PEG를 함유하는 pH 7.5의 0.20M 인산나트륨 완충액 중에 실온에서 배양시킨다. 분취량 4.0ul를 취하여 실시예 72-110에서와 같이 트롬빈 측정법으로 측정한다. 억제제를 인산나트륨 완충액중 배양 및 시간 경과 후 트롬빈 잔여 활성율(%)은 표 8에 보고되어 있다. 억제제 A 및 C의 경우, 억제제 활성의 손실이 거의 없다. 억제제 B는 1시간 경과후 생물학적 활성을 상실한다.
[표 8]
완충액중 억제제의 안정성
Figure kpo00021
[실시예 137-142]
생체내 경구투여후 혈액 응고의 억제
수컷 래트(Sprague Dawley CD Rats, 130-140g ; Charles River Labs, Inc., Wilmington, MA)를 나트륨 펜토바비탈(50㎎/㎏, 복강내 투여)로 마취시킨다. 목의 복부 표면을 중앙선 절개하고 폴리에틸렌 카테테르(catheter)를 경동맥중 하나에 삽입하고 목의 등쪽으로 끄집어낸다. 마취로부터 깨어난 후 대조 혈액 샘플을 경동맥의 카테테르로부터 취하고, 나트륨 시트레이트로 항응고시키고 원심분리한다(2000×g, 10분). 혈장을 플라스틱 튜브에 옮기고 측정할 때까지 빙상에서 유지시킨다. 트롬빈 시간은 실시예 125-127 에서와 같이 피브로미터를 사용하여 측정한다.
래트에게 비히클 중의 프로테아제 억제제 Ac-(D) Phe-Pro-보로 Arg-OH 또는 비히클 단독을 4㎖미만의 용적으로 구강 섭식으로 공급한다. 사용된 비히클은 식염수중 5% 디메틸설폭사이드이다. 혈액 샘플을 경구투여후 여러 시간에 취하고 상술한 바와 같이 측정한다. 응고 시간을 초로 나타낸 결과를 하기 표 9에 기재한다. 응고 시간이 300초를 경과한 경우, ＞300으로 나타낸다. 나머지 데이터는 초로 측정되는 응고에 필요한 평균시간, 표준 편차이다.
[표 9]
생체내 경구 투여후 혈액응고의 억제
Figure kpo00022
*ND=측정되지 않음.
[실시예 143]
경구 투여후 혈액 응고의 생체내 억제
이 화합물의 생체내 혈액 응고를 억제하는 작용을 추가로 실증하기 위하여, 래트를 나트륨 펜토바비탈(50㎎/㎏, 복강내 투여)로 마취시키고, 경정맥 카테테르를 삽입하고 절개한 부분을 닫는다. 마취에서 회복된 후, 래트에 물을 용해시킨 프로테아제 억제제 Ac-(D) Phe-Pro-보로 Arg-OH 5㎎/㎏ 또는 등용적의 물을 구강내 투여한다. 30 내지 60분 후에, 모든 쥐에게 1분에 걸쳐 트롬빈 500유니트/㎏을 주입한다. 물만이 공급된 14마리 래트 14마리는 모두 트롬빈을 주입한지 10분 내에 죽는다. 이에 비해 억제제-함유물로 처리한 17마리의 래트중 8마리만 10분 내에 죽지만, 나머지는 안락사시킬 때까지 1시간 동안 생존한다.
[실시예 144-162]
구강, 결장 및 직장내 투여후 혈액 응고의 생체내 억제 일반적인 방법:
300 내지 350g의 수컷 레위스(Lewis) 래트를 나트륨 펜토바비톨(50㎎/㎏, 복강내 투여)로 마취시키고 경정맥에 폴리에틸렌 50관에 부착된 플라스틱 관을 사용하여 카뉼레를 삽입한다. 관을 목의 후부로 빼고 정지 콕을 거쳐 주사기에 부착시킨다. 프로테아제 억제제 Ac-(D) Phe-Pro-보로 Arg-OH를 투여하기 전에 및 후에 다른 시간 간격으로, 각각을 수집하기 전에 시트레이트 완충액으로 세척한 주사기에 혈액 샘플(0.5㎖)을 모은다. 혈액 샘플을 시트레이트 완충액을 함유하는 바큐테이너에 옮긴다. 또한, 각각을 수집한 후 카뉼레를 염수로 세척한다. 혈액 샘플을 즉시 원심분리(2500rpm, 15분)하고 혈장 샘플 0.2㎖를 응고시간 측정에 사용한다. 응고 시간 측정은 다음과 같이 피브로미터를 사용하여 수행한다. 우선, 혈장 0.2㎖를 피브로 컵에 넣고 pH 7.4의 트리스 완충액 50ul를 첨가한다. 혈장 완충 용액을 1분동안 37℃에서 배양시키고 트리스 완충액중 24u/㎖ 트롬빈 용액 50ul를 첨가한 후, 초 단위로 응고 시간을 측정한다. 응고 시간이 300초를 초과하는 경우, ＞300로서 하기에 나타낸다.
[경구투여:]
경정맥에 카뉼레가 삽입된 래트가 마취에서 깨어난 후 경구내 투여한다. 래트의 체중 ㎏당 물 0.75㎖용적중의 래트의 체중 ㎏당 억제제 3㎎(약 1㎎/래트)으로 구성된, 프로테아제 억제제 Ac-(D) Phe-Pro-보로 Arg-OH 수용액을 섬식에 의해 투여한다. 그 결과는 하기 표10과 같다.
[결장내 투여]
마취 상태하에서 경정맥에 카뉼레가 삽입된 래트의 복부를 3㎝ 절개한다. 결장을 찾아내어 전단 및 말단을 묶는다. 래트 체중 ㎏당 물 1㎖ 용적 중의 래트 체중 ㎏당 억제제 3㎎(약 1㎎/래트)으로 구성된, 프로테아제 억제제 Ac-(D) Phe-Pro-보로 Arg-OH 수용액을 결장내 전단부에서 주입한다. 상처 클립을 사용하여 절개부를 닫는다. 결과는 하기 표 11과 같다.
[직장내 투여]
경정맥에 카뉼레가 삽입된 래트에서 직장내 투여하는 방법은 카미야(Kamiya)등에 의해 설명되어 있다. [참조 : J. Pharm. Sci., 71:621(1982)]. 간단히 말해서, 2㎝ 길이의 전선으로 연결시킨 0.89㎝ 및 0.71㎝ 실리콘 고무마개 격막으로 구성된 장치를 만든다. 이 장치를 래트의 직장에 삽입하고, 큰 격막을 먼저, 적당한 접착제를 사용하여 항문에 부착시킨다. 노출된 격막을 통해 주입함으로써 투여한다. 직장내 투여량은 래트 체중 ㎏당 물 0.6㎖ 용적 중의 래트 체중 ㎏당 프로테아제 억제제 Ac-(D) Phe-Pro-보로 Arg-OH 3㎎(약 1㎎/래트)이다. 결과는 하기 표 12에 보고되어 있다.
[표 10]
경구 투여후 혈액응고의 생체내 억제
Figure kpo00023
* 데이타는 2마리 래트에 대한 평균이다.
** 데이타는 3마리 래트에 대한 평균이다.
[표 11]
결장내 투여후 혈액응고의 생체내 억제
Figure kpo00024
* 데이타는 2마리 래트에 대한 평균이다.
** 데이타는 3마리 래트에 대한 평균이다.
[표 12]
직장내 투여후 혈액응고의 생체내 억제
Figure kpo00025
* 데이타는 1마리 래트로부터 얻은 것이다.
** 데이타는 3마리 래트에 대한 평균이다.
[실시예 163-168]
크로톤 오일(Croton Oil) 유도된 염증의 생체내 억제
두 용액을 제조하는데, 제1용액은 아세톤 담체중에 5% 크로톤 오일, 공지된 염증체로 구성되고(Croton Solution) 제2용액은 아세톤 담체 중에 5% 크로톤 오일로 구성된 것에 본 발명의 화합물 10㎎/㎖를 첨가한 것이다(Compound Solution) 크로톤 용액(10ul)또는 다르게는 화합물 용액(10ul)을 각 동물(Sprague Dawley CD Rats, 130-140g: 제조원 Charles River Labs, Inc., Wilmington, MA)의 오른쪽 귀에 적용한다. 아세톤 담체를(Aceton Solution, 10ul)단독으로 각 래트의 왼쪽 귀에 적용한다. 처리한지 1시간 후에, 동물을 치사시키고, 귀를 떼어내어 직경 1/4인치 디스크로 떠내어 무게를 단다. 크로톤 용액으로 처리한 오른쪽 귀 및 아세톤 용액 처리한 왼쪽 귀 사이에 무게의 차이로서 팽창을 측정한다. 그 결과를, 화합물 용액과 실질적으로 동일한 방법으로 제조하고 적용시킨, 공지된 비스테로이드 소염제(인도메타신 용액)인 인도메타신과 비교한다.
평균 데이터는 화합물 F, Ac-Phe-보로 Arg-C10H16에 대한 표 13에 나타나 있다. 하기 사용된 "투여용량"이란 용어는 각 오른쪽 귀에 적용시킨 용액중 ug의 활성 소염 성분(경우에 따라, 화합물 A,C,D,E,F, 또는 G, 또는 인도메타신)의 양을 나타내고, "n"은 각 시험에 사용된 래트의 수를 나타낸다. "SE"는 표준오차이다. 표 14의 실시예 164-168은 기본적으로 같은 조건하에서(투여용량=100ug) 수행된 화합물 A,C,D,E,F 및 G에 대한 소염 활성을 나타낸다.
[표 13]
결장내 투여후 혈액응고의 생체내 억제
Figure kpo00026
[표 14]
크로톤 오일 유도된 염증의 억제
Figure kpo00027

Claims (30)

  1. 하기 일반식(Ⅰ)의 화합물 또는 이의 생리학적으로 허용되는 염.
    Figure kpo00028
    상기식에서 Y1및 Y2는 독립적으로 -OH 또는 F이거나, 함께는 1 내지 약 20개의 탄소원자 및 임의로 N,S 또는 O일 수 있는 헤테로원자를 함유하는 쇄 또는 환내의 적어도 두 개의 연결 원자에 의해 분리된 적어도 두 개의 하이드록시 그룹을 갖는 디하이드록시 화합물로부터 유도된 잔기를 형성하고 ; R2는 -(CH2) z-X, -CH(CH3)-(CH2)2-X, -CH2-CH(CH3)-CH2-X, -(CH2)2-CH(CH3)-X 및 -(CH2)2-CH(CH3)2-X[여기에서, X는 -NH2, -NH-C(NH)-NH2또는 -S-C(NH)-NH2이고, z는 3 내지 5이다]로 구성된 그룹으로부터 선택되는 치환된 알킬이고 : n,o,p 및 q는 독립적으로 1 또는 0이고 : A1,A2및 A3는 독립적으로 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, GIn, GIu, GIy, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 L-또는 D-배위의 아미노산이며 ; R1은 1 내지 약 20개의 아미노산을 함유하는 펩타이드, 1 내지 약 20개의 탄소원자를 함유하는 아실 또는 설포닐그룹, H 또는 N-말단보호 그룹이다.
  2. 제 1 항에 있어서, A1이 Lys, Phe, Pro, Ala, Leu, GIy, GIu, Val, Thr, Ile, Met, Tyr, Trp, Arg, Asp, Asn 및 GIn로 구성된 그룹으로부터 선택되는 L- 또는 D-배위의 아미노산인 화합물.
  3. 제 2 항에 있어서, A1이 Lys, Phe, Pro, Ala, Leu, GIy, GIu, Val 및 Thr 로 구성된 그룹으로부터 선택되는 L-또는 D-배위의 아미노산인 화합물.
  4. 제 1 항에 있어서, A2가 D-배위의 아미노산인 화합물.
  5. 제 4 항에 있어서, A2가 Phe인 화합물.
  6. 제 1 항에 있어서, A2가 Phe, Ala, Leu, Pro, GIu 및 GIy로 구성된 그룹으로부터 선택되는 L-또는 D-배위의 아미노산인 화합물.
  7. 제 1 항에 있어서, R2가 일반식 -(CH2)z-X로 구성된 그룹으로부터 선택되는 치환된 알킬인 화합물.
  8. 제 7 항에 있어서, z가 3 내지 4인 화합물.
  9. 제 7 항에 있어서, R2가 3-구아니디노-프로필, 3-아미노-프로필 및 4-아미노-부틸로 구성된 그룹으로부터 선택되는 화합물.
  10. 제 9 항에 있어서, R2가 3-구아니디노-프로필인 화합물.
  11. 제 1 항에 있어서, Ac-(D)Phe-Pro-보로-Arg-OH인 화합물.
  12. 제 1 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 트립신형 세린 프로테아제를 억제하기 위한 조성물.
  13. 제 2 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 트립신형 세린 프로테아제를 억제하기 위한 조성물.
  14. 제 11 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 트립신형 세린 프로테아제를 억제하기 위한 조성물.
  15. 제 1 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 트롬빈을 억제하기 위한 조성물.
  16. 제 2 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 트롬빈을 억제하기 위한 조성물.
  17. 제 11 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 트롬빈을 억제하기 위한 조성물.
  18. 제 1 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 혈장 칼리크레인을 억제하기 위한 조성물.
  19. 제 2 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 혈장 칼리크레인을 억제하기 위한 조성물.
  20. 제 1 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 플라즈민을 억제하기 위한 조성물.
  21. 제 2 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 플라즈민을 억제하기 위한 조성물.
  22. 제 1 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 혈액응고를 치료하기 위한 조성물.
  23. 제 2 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 혈액응고를 치료하기 위한 조성물.
  24. 제 11 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 혈액응고를 치료하기 위한 조성물.
  25. 제 1 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 염증을 치료하기 위한 조성물.
  26. 제 2 항의 화합물 유효량 및 생리학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함함을 특징으로 하는, 포유류에서 염증을 치료하기 위한 조성물.
  27. 하기 일반식(Ⅱ)의 화합물.
    Figure kpo00029
    상기식에서, Y3는 1 내지 약 20 개의 탄소원자를 함유하는 쇄 또는 환내의 적어도 두 개의 연결원자에 의해 분리된 적어도 두 개의 하이드록시 그룹을 갖는 디하이드록시 화합물로부터 유도된 잔기이고 ; R3는 -(CH2)z-W1, -CH(CH3)-(CH2)2-W1, -CH2-CH(CH3)-CH2-W1, -(CH2)2-CH(CH3)-W1및 -(CH2)2-CH(CH3)2-W1으로 구성된그룹으로부터 선택되는 치환된 알킬이고 ; W 및 W1은 독립적으로 CI또는 Br이고 ; z는 3 내지 5 이다.
  28. 제 27 항에 있어서, R3가 -(CH2)z-W이고, 3 내지 4인 화합물.
  29. 하기 일반식(Ⅲ)의 화합물.
    Figure kpo00030
    상기식에서, Y3는 1 내지 약 20개의 탄소원자를 함유하는 쇄 또는 환내의 적어도 두 개의 연결원자에 의해 분리된 적어도 두 개의 하이드록시 그룹을 갖는 디하이드록시 화합물로부터 유도된 잔기이고 ; R4는 -(CH2)z-W2, -CH(CH3)-(CH2)2-W2, -CH2-CH(CH3)-CH2-W2, -(CH2)2-CH(CH3)-W2및 -(CH2)2-CH(CH3)2-W2로 구성된 그룹으로부터 선택되는 치환된 알킬이며 ; W2는 CI, Br 또는 N3이고 ; z는 3 내지 5이고 ; A1,A2및 A3는 독립적으로 Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, GIn, GIu, GIy, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr 및 Val으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 L-또는 D-배위의 아미노산이며 ; R1은 1 내지 약 20개의 아미노산을 함유하는 펩타이드, 1 내지 약 20개의 탄소원자를 함유하는 아실 또는 설포닐그룹, H 또는 N-말단보호 그룹이고 ; n,o,p 및 q는 독립적으로 1 또는 0이다.
  30. 제 29 항에 있어서, R4가 -(CH2)z-W2이고 z가 3 내지 4인 화합물.
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