KR880001817A - 산성 섬유아세포 성장인자의 클로닝 및 발현 - Google Patents

산성 섬유아세포 성장인자의 클로닝 및 발현 Download PDF

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Abstract

내용 없음

Description

산성 섬유아세포 성장인자의 클로닝 및 발현
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 산성 섬유 아세포 성장인자(aFGF)에 대한 유전자를 함유하는 pkk 223-3 플라스미드를 도시한 것이다.

Claims (63)

  1. 재조합 소 산성 섬유아세포 성장인자(recombinant bovine acidic fibroblast growth factor).
  2. 하기의 아미노산 서열을 갖는 재조합 소 산성 섬유 아세포 성장인자.
  3. 제2항에 있어서, 메티오닌이 제1위치의 페닐알라닌에 결합되어 있는 제조합 소 산성 섬유 아세포 성장인자.
  4. 재조합 소 산성 섬유아세포 성장인자의 미소이종형(microheterogeneous form).
  5. 소 산성 섬유 아세포 성장인자를 코드화한 뉴클레오타이드 서열.
  6. 제2항의 재조합 소 산성 섬유 아세포 성장인자를 코드화한 뉴클레오타이드 서열.
  7. 제3항의 재조합 소 산성 섬유 아세포 성장인자를 코드화한 뉴클레오타이드 서열.
  8. 제6항에 있어서, 염기 서열이 다음 염기 서열중의 어느 하나인 뉴클레오타이드 서열.
    상기 서열에서, Q는 C 또는 T이며, P는 A또는 G이고, N은 A, T, C 또는 G이다.
  9. 제8항에 있어서, 메티오닌에 대한 코드가 페닐알라닌에 대한 코드의 앞에 있는 뉴클레오타이드 서열.
  10. 제9항에 있어서, 염기 서열이 하기와 같은 뉴클레오타이드 서열.
  11. 삽입된 제10항의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고 있는 발현 플라스미드.
  12. 제11항에 있어서, 구조가 제1도에 도시된 바와 같은 플라스미드.
  13. 제11항에 있어서, 플라스미드가 pBR322인 플라스미드.
  14. 제11항의 플라스미드에 대해 적합하며 이 플라스미드를 함유하는 숙주(host).
  15. 제14항에 있어서, 숙주가 에쉐리키아 콜라이(E. Coli)인 숙주.
  16. 제15항에 있어서, 숙주가 에쉐리키아 콜라이 JM105 또는 에쉐리키아 콜라이 DH5인 숙주.
  17. 제11항에 있어서, 소 산성 섬유아세포 성장인자의 아미노산 서열을 발현시킬 수 있는 플라스미드.
  18. 반응성 세포에서 DNA 합성을 촉진시킬 수 있는 제14항의 숙주에 의해 생성된 단백질.
  19. a) 소 산성 섬유아세포 성장인자를 코드화한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 플라스미드를 제조하고 [여기에서 뉴클레오타이드 서열은 플라스미드를 함유한 숙주에 의해 발현될 수 있다];
    b) 플라스미드를 숙주내에 이입시키고:
    c) 플라스미드를 함유한 숙주를, 소 산성 섬유아세포 성장인자를 생성하는 뉴클레오타이드서열을 발현시키기에 적합한 조건하에 유지시키는 단계로 이루어짐을 특징으로 하여, 소 산성 섬유아세포 성장인자를 제조하는 방법.
  20. 제19항에 있어서, 단계 a)에서의 뉴쿨레오타이드 서열이 제10항의 서열인 방법.
  21. 제19항에 있어서, 단계 b)에서의 숙주가 에쉐리키아 콜라이인 방법.
  22. 약제학적 담체, 및 창상 치유에 유효한 양의 제1항의 재조합 소 산성 섬유아세포 성장인자로 이루어짐을 특징으로 하는 창상 치유용 약제학적 조성물.
  23. 약제학적 담체, 및 창상 치유에 유효한 양의 제2항의 재조합 소 산성 섬유아세포 성장인자로 이루어짐을 특징으로 하는 창상 치유용 약제학적 조성물.
  24. 약제학적 담체, 및 창상 치유에 유효한 양의 제3항의 재조합 소 산성 섬유아세포 성장인자로 이루어짐을 특징으로 하는 창상 치유용 약제학적 조성물.
  25. 창상의 치료를 필요로 하는 환자에게 창상 치유에 유효한 양의 제2항의 재조합 소 산성 섬유아세포 성장인자를 투여함을 특징으로 하는 창상 치유를 촉진시키는 방법.
  26. 창상의 치료를 필요로 하는 환자에게 창상 치유에 유효한 양의 제3항의 재조합 소 산성 섬유아세포 성장인자를 투여함을 특징으로 하여 창상 치유를 촉진시키는 방법.
  27. 재조합 인간 산성 섬유아세포 성장인자.
  28. 하기의 아미노산 서열을 갖는 재조합 인간 산성 섬유아세포 성장인자.
  29. 제28항에 있어서, 메티오닌이 제1위치의 페닐알라닌에 결합되어 있는 제조합 인간 산성 섬유아세포 성장인자.
  30. 제28항에 있어서, 제1위치의 페닐알라닌이 제거되고 제2위치의 아미노산이 아스파라긴 또는 아스파르트산인 재조합 인간 산성 섬유아세포 성장인자.
  31. 재조합 인간 산성 섬유아세포 성장인자의 미소 이종형.
  32. 재조합 인간 산성 섬유아세포 성장인자를 코드화한 뉴클레타이드 서열,
  33. 제29항의 재조합 인간 산성 섬유아세포 성장인자를 코드화한 뉴클레오타이드 서열.
  34. 제33항에 있어서, 염기 서열이 하기와 같은 뉴클레오타이드 서열.
  35. 제10항에 있어서, 염기 서열이 점 돌연변이(point mutation)에 의해 치환되어 제34항의 염기서열을 형성한 뉴클레오타이드 서열.
  36. 삽입된 제34항의 뉴클레오타이드 서열을 포함하고 있는 발현 플라스미드.
  37. 제36항에 있어서, 구조가 제1도에 도시되어 있는 플라스미드.
  38. 제37항에 있어서, 플라스미드가 pBR322인 플라스미드.
  39. 제36항의 플라스미드에 대해 적합하며, 이 플라스미드를 함유 하는 숙주.
  40. 제39항에 있어서, 에쉐리키아 콜라이인 숙주.
  41. 제40항에 있어서, 숙주가 에쉐리키아 콜라이 JM 105 또는 웨쉐리키아 콜라이 DH5인 숙주.
  42. 제36항에 있어서, 인간 산성 섬유아세포 성장인자의 유전자를 발현시킬 수 있는 플라스미드.
  43. 제36항에 있어서, 인간 산성 섬유아세포 성장인자에 대한 합성 뉴클레오타이드 서열을 발현시킬 수 있는 플라스미드.
  44. 반응성 세포에서 DNA 합성을 촉진시킬 수 있는 제39항의 숙주에 의해 생성된 단백질.
  45. a) 인간 aFGF를 코드화한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 플라스미드를 제조하고[여기에서, 뉴클레오타이드 서열은 플라스미드를 함유하는 숙주에 의해 발현될 수 있다]:
    b) 플라스미드를 숙주내에 이입시키고:
    c) 플라스미드를 함유한 숙주를 인간 aFGF를 생성하는 뉴클레오타이드 서열을 발현시키기에 적합한 조건하에서 유지시키는 단계로 이루어짐을 특징으로 하여 인간 aFGF를 제조하는 방법.
  46. 제45항에 있어서, 단게 a)에서의 뉴클레오타이드 서열이 제34항의 서열인 방법.
  47. 제45항에 있어서, 단게 b)에서의 숙주가 에쉐리키아 콜라이인 방법.
  48. 약제학적 담체, 및 창상 치유에 유효한 양의 제27항의 재조합 인간 산성 섬유아세포 성장인자로 이루어짐을 특징으로 창사아칭유용 약제학적 조성물.
  49. 약제학적 담체, 및 창상 치유에 유효한 양의 제28항의 재조합 인간 산성 섬유아세포 성장인자로 이루어짐을 특징으로 하는 창상치유용 약제학적 조성물.
  50. 약제학적 담체, 및 창상 치유에 유효한 양의 제29항의 재조합 인간 산성 섬유아세포 성장인자로 이루어짐을 특징으로 하는 창상치유용 약제학적 조성물.
  51. 약제학적 담체, 및 창상치유에 유효한 양의 재조합 인간 산성 섬유아세포 성장인자의 미소이종형으로 이루어짐을 특징으로 하는 창상치유용 약제학적 조성물.
  52. 창상의 치료를 필요로 하는 환자에게 창상치유에 유효한 양의 제27항의 재조합 인간 산성 섬유아세포성장인자를 투여함을 특징으로 하여 창상치유를 촉진시키는 방법.
  53. 창상의 치료를 필요로 하는 환자에게 창상치유에 유효한 양의 제28항의 재조합 인간 산성 섬유아세포성장인자를 투여함을 특징으로 하여 창상치유를 촉진시키는 방법.
  54. 창상의 치료를 필요로 하는 환자에게 창상치유에 유효한 양의 제29항의 재조합 인간 산성 섬유아세포성장인자를 투여함을 특징으로 하여 창상치유를 촉진시키는 방법.
  55. 창상의 치료를 필요로 하는 환자에게 성장촉진에 유효한 양의 재조합 인간 산성 섬유아세포 성장인자의 미소이종형을 투여함을 특징으로 하여 창상치유를 촉진시키는 방법.
  56. a) 친화성 크로마토그라피 매트릭스와 허용되는 용출제를 사용하여 재조합 aFGF를 부분적으로 정제하고,
    b) 부분적으로 정제된 재조합 aFGF를, 알킬 실란 기질 및 허용되는 용출제를 사용하는 역상 고성능 액체 크로마토그라피에 의해 최종적으로 정제하는 단계로 이루어짐을 특징으로 하여 재조합 산성 섬유아세포 성장인자(aFGF)를 순수한 형태로 정제하는 방법.
  57. 제56항에 있어서, 단계 a)에서의 친화성 매트릭스가 헤파린-사페로즈인 방법.
  58. 제56항에 있어서, 단계 b)에서의 알킬 실란 기질이 3내지 18개의 탄소원자를 함유하는 방법.
  59. 제56항에 있어서, 단계 b)에서의 알킬 실란 기질이 4개의 탄소원자를 함유하는 방법.
  60. 제56항에 있어서, 단계 a)에서 aFGF를 염화나트륨으로 용출시키는 방법.
  61. 제56항에 있어서, 단계 b)에서 aFaF를 산과 유기용매로 구성되는 용출구 OH에 의해 정제하는 방법.
  62. 제61항에 있어서, 산이 트리플루오로 아세트산, 인산 또는 아세트산인 방법.
  63. 제61항에 있어서, 유기용매가 아세토니트릴 또는 에탄올인 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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