KR20200123403A - 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 및 이를 유효성분으로 포함하는 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료용 조성물 - Google Patents

줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 및 이를 유효성분으로 포함하는 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료에 사용되는 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 및 이를 유효성분으로 포함하는 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다. 본 발명의 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물은 줄기세포 유래 엑소좀을 안정화시키면서도 여드름을 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료할 수 있고, 여드름 증상과 관련된 피부 트러블 등을 완화 내지 개선시킬 수 있다. 또한, 본 발명의 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물은 여드름의 주요 원인이면서 여드름 증상에 의해 악화되는 염증에 대한 항염 효과가 우수하며, 특히 줄기세포 배양액으로부터 분리·정제된 줄기세포 유래 엑소좀에 비해 월등히 뛰어난 항염 효능을 나타낸다.

Description

줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 및 이를 유효성분으로 포함하는 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료용 조성물 {Freeze-dried formulation of exosomes derived from stem cell and composition for preventing, suppressing, alleviating, improving or treating acne comprising the same}
본 발명은 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료에 사용되는 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 및 이를 유효성분으로 포함하는 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물을 이용하여 치료용을 제외한 여드름의 예방, 억제, 완화 또는 개선을 통해 포유동물 피부를 부드럽고 매끄럽게 하고 피부톤을 깨끗하게 하는 미용방법을 제공하는데 있다.
여드름은 과거에는 사춘기 청소년에게 주로 발생하였으나, 최근에는 공기 오염, 약물 남용 등으로 연령에 관계없이 발생하고 있다. 여드름이 심한 경우에는 얼굴에 영구적인 흉터를 남기게 되며 치료 후에도 재발률이 높다. 따라서, 여드름은 미용적 관점에서 삶의 질을 떨어뜨리는 질환이다.
여드름의 발생에는 다양한 인자가 관련되어 있으며 여러 인자의 상호작용으로 인하여 증상이 나타나지만 정확한 원인은 아직 밝혀지고 있지 않다. 현재까지의 연구결과에 따르면, 여드름은 면포형성과 남성호르몬에 의해 유발된 피지 생산 및 분비의 증가, 피부 상재균들의 증식, 유전적 소질, 염증유발 및 피부장벽의 기능 이상 등의 주요 인자가 복합적으로 작용하여 발생하는 것으로 알려져 있다. 특히, 여드름의 발병에는 모낭 내에 상주하는 상재균들 중 대표적인 여드름균인 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)[또는 큐티박테리움 아크네(Cutibacterium acnes)로 알려짐]가 크게 관여하는 것으로 알려져 있다.
여드름의 발병 및 악화에는 여러 가지 요인이 복합적으로 작용하기 때문에 여드름의 치료에도 여러 가지 방법이 사용된다. 예를 들어, 여드름균 감염이 동반된 염증성 여드름의 경우 항생제 복용 및 도포를 통해 증상을 억제시킬 수 있다. 그러나 여드름의 치료에 주로 사용되는 테트라사이클린(tetracycline), 클린다마이신(clindamycin), 에리트로마이신(erythromycin) 등에 대한 항생제 내성을 갖는 여드름균의 균주 발생으로 지속적인 사용이 어렵고, 간독성, 피부 발진 등의 부작용이 있다. 한편, 여드름의 원인이 남성 호르몬 분비 과다인 점을 감안하여 부신피질 호르몬제 또는 에스트로겐을 사용하는 방법도 있으나, 피부가 얇아지고 재발률이 높은 문제가 있다.
또한, 비타민 A를 변형시켜서 만든 비타민 A 유도체인 레티노이드는 피지 억제 효과, 모낭의 각화와 폐쇄된 모공을 정상화시키고 모낭 내 여드름균과 염증을 억제하는 효과가 있으나 구순 건조, 기형 유발 등의 부작용이 있다.
여드름 증상으로 나빠진 피부 상태의 개선을 위해 레이저 박피, 물리적 박피, 화학적 박피 등의 박피술이 이용되고 있으나, 이러한 박피술은 일상 생활에 지장을 초래하는 문제와, 피부 장벽손상에 따른 통증과 심한 건조증, 발열, 홍반 현상, 각질 탈락이 유발될 수 있는 단점이 있다.
한편, 최근 세포 분비물(secretome)에 세포의 행동(behavior)을 조절하는 다양한 생체활성인자가 포함되어 있다는 연구가 보고되고 있으며, 특히 세포 분비물 내에는 세포 간 신호전달 기능을 갖는 '엑소좀(exosome)'이 포함되어 있어 그 성분과 기능에 대한 연구가 활발히 진행 중에 있다.
세포는 세포외 환경에 다양한 막(membrane) 유형의 소포체를 방출하는데, 통상 이러한 방출 소포체들을 세포외 소포체(Extracellular vesicles, EV)라고 부르고 있다. 세포외 소포체는 세포막 유래 소포체, 엑토좀(ectosomes), 쉐딩 소포체(shedding vesicles), 마이크로파티클(microparticles), 엑소좀 등으로 불려지기도 하며, 경우에 따라서는 엑소좀과는 구별되어 사용되기도 한다.
엑소좀은 세포막의 구조와 동일한 이중인지질막으로 이루어진 수십 내지 수백 나노미터 크기의 소포체로서 내부에는 엑소좀 카고(cargo)라고 불리는 단백질, 핵산(mRNA, miRNA 등) 등이 포함되어 있다. 엑소좀 카고에는 광범위한 신호전달 요소들(signaling factors)이 포함되며, 이들 신호전달 요소들은 세포 타입에 특이적이고 분비세포의 환경에 따라 상이하게 조절되는 것으로 알려져 있다. 엑소좀은 세포가 분비하는 세포 간 신호전달 매개체로서 이를 통해 전달된 다양한 세포 신호는 표적 세포의 활성화, 성장, 이동, 분화, 탈분화, 사멸(apoptosis), 괴사(necrosis)를 포함한 세포 행동을 조절한다고 알려져 있다. 엑소좀은 유래된 세포의 성질 및 상태에 따라 특이적인 유전물질과 생체활성 인자들이 포함되어 있다. 증식하는 줄기세포 유래 엑소좀의 경우 세포의 이동, 증식 및 분화와 같은 세포 행동을 조절하고, 조직 재생과 관련된 줄기세포의 특성이 반영되어 있다(Nature Review Immunology 2002 (2) 569-579).
즉, 세포의 아바타라고 불리는 엑소좀은 세포와 유사하게 성장인자와 같은 생체활성 인자들이 포함되어 있는데, 엑소좀을 실온에서 보관할 경우 생체활성 인자들의 활성이 저하되는 안정성의 문제가 발생한다. 또한, 엑소좀을 단순 냉장 보관할 경우에도 보관 시간 및 방법 등에 따라 전체적인 엑소좀의 물성 및 안정성에 변화가 생기고, 엑소좀에 포함된 생체활성 인자들의 활성도 저하될 수 있다.
그러나 엑소좀을 이용한 특정 질환의 치료에 대한 가능성 제시 등 다양한 연구가 이루어지고 있음에도 불구하고, 엑소좀을 안정적으로 유지·보관할 수 있는 새로운 제형 개발과 엑소좀의 사용 편의성 및 효능 증대 등을 위한 다양한 의료 내지는 미용기술과의 접목은 상대적으로 주목받고 있지 못하고 있다.
본 발명자들은 줄기세포 유래 엑소좀을 안정적으로 유지·보관할 수 있는 새로운 제형 개발과 의료 내지는 미용기술과의 접목에 대해 예의 연구를 거듭하던 중, 줄기세포 유래 엑소좀을 안정화시키면서도 여드름 증상의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료 효과가 우수한 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 및 이를 포함하는 조성물을 개발하여 본 발명을 완성하였다.
한편, 상기한 배경기술로서 설명된 사항들은 본 발명의 배경에 대한 이해 증진을 위한 것일 뿐, 본 발명의 "선행 기술"로서 이용될 수 있다는 승인으로서 인용한 것은 아님을 이해하여야 한다.
대한민국 등록특허공보 제10-1018352호 (2011.03.04) 대한민국 등록특허공보 제10-1623553호 (2016.05.23)
Asian J Beauty Cosmetol 2018; 16(1): 82-92 (2018.03.30)
본 발명의 목적은 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료에 사용되는 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 및 이를 유효성분으로 포함하는 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 약학 조성물, 기능성 화장료 조성물 및 피부외용제를 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물을 이용하여 치료용을 제외한 여드름의 예방, 억제, 완화 또는 개선을 통해 포유동물 피부를 부드럽고 매끄럽게 하고 피부톤을 깨끗하게 하는 미용방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물을 이용하여, 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료하는 방법을 제공하는데 있다.
그러나, 전술한 바와 같은 본 발명의 과제는 예시적인 것으로, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명은 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료에 사용되는 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 및 이를 유효성분으로 포함하는 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 용어 "여드름"은 특별히 제한되지 않으며, 면포형성과 남성호르몬에 의해 유발된 피지 생산 및 분비의 증가, 피부 상재균들의 증식, 유전적 소질, 염증유발, 피부장벽의 기능 이상, 또는 이들의 조합에 의해 유발된 것을 포함한다. 하나의 예시로서, 여드름은 화농성 여드름과 비화농성 여드름으로 나눌 수 있다. 화농성 여드름은 가벼운 면포가 나타나 모낭이 각화되는 제1단계, 구진이 나타나는 제2단계, 농포성 여드름이 생겨 염증이 심화되는 제3단계, 낭포가 생기는 제4단계, 및 가장 심각하게 결절이 생기고 반흔이 남는 제5단계로 구별될 수 있다. 비화농성 여드름은 개방성 면포와 폐쇄성 면포로 구분될 수 있다.
본 명세서에서 용어, "엑소좀(exosomes)"은 세포막의 구조와 동일한 이중인지질막으로 이루어진 수십 내지 수백 나노미터(바람직하게는 대략 30~200 nm) 크기의 소포체를 의미한다(단, 분리 대상이 되는 세포 종류, 분리방법 및 측정방법에 따라 엑소좀의 입자 크기는 가변될 수 있음)(Vasiliy S. Chernyshev et al., "Size and shape characterization of hydrated and desiccated exosomes", Anal Bioanal Chem, (2015) DOI 10.1007/s00216-015-8535-3). 엑소좀에는 엑소좀 카고(cargo)라고 불리는 단백질, 핵산(mRNA, miRNA 등) 등이 포함되어 있다. 엑소좀 카고에는 광범위한 신호전달 요소들(signaling factors)이 포함되며, 이들 신호전달 요소들은 세포 타입에 특이적이고 분비세포의 환경에 따라 상이하게 조절되는 것으로 알려져 있다. 엑소좀은 세포가 분비하는 세포 간 신호전달 매개체로서 이를 통해 전달된 다양한 세포 신호는 표적 세포의 활성화, 성장, 이동, 분화, 탈분화, 사멸(apoptosis), 괴사(necrosis)를 포함한 세포 행동을 조절한다고 알려져 있다.
한편, 본 명세서에서 사용된 "엑소좀"이란 용어는 줄기세포에서 분비되어 세포외 공간으로 방출된 나노 크기의 베지클 구조를 갖고 있고 엑소좀과 유사한 조성을 갖는 베지클(예를 들어, 엑소좀-유사 베지클)을 모두 포함하는 것을 의미한다. 상기 줄기세포의 종류는 제한되지 않으나, 본 발명을 한정하지 않는 하나의 예시로서, 바람직하게는 중간엽 줄기세포, 예를 들어 지방, 골수, 제대 또는 제대혈 유래 줄기세포일 수 있으며, 보다 바람직하게는 지방 유래 줄기세포일 수 있다. 상기 지방 유래 줄기세포의 종류는 병원체에 의한 감염의 위험이 없고 면역 거부 반응을 일으키지 않는 것이라면 제한되지 않으나, 바람직하게는 인간지방 유래 줄기세포일 수 있다.
그러나 본 발명에서 사용되는 줄기세포 유래 엑소좀은 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료 효과가 있고 인체에 불리한 작용을 일으키지 않는 것이라면 당업계에서 사용되고 있거나 향후 사용될 수 있는 다양한 줄기세포 유래 엑소좀을 사용할 수 있음은 물론이다. 따라서, 후술하는 실시예들의 분리방법에 따라 분리된 줄기세포 유래 엑소좀은 본 발명에서 사용될 수 있는 엑소좀의 일례로서 이해되어야 하며, 본 발명은 이에 제한되는 것이 아님을 명백히 밝혀 둔다.
본 명세서에서 용어, "이온토포레시스(iontophoresis)"는 유효물질이 적용된 피부에 미세전류를 흐르게 하여 전위차를 주어 피부의 전기적 환경을 변화시킴으로써 이온화된 유효성분을 전기적 반발력으로 피부를 투과하게 하는 방법을 의미한다. 본 발명의 일 구체예에 사용되는 이온토포레시스(iontophoresis)는 피부 위의 전극 패치에 외부전원으로부터의 전류가 흘러들어가 피부에 미세전류가 도입되는 방식, 전극 패치 자체에 배터리가 장착되어 피부에 미세전류가 도입되는 방식, 고농도 전해질 용액 및 저농도 전해질 용액 간의 이온 농도 차이를 통해 전류를 발생시키는 역전기투석(Reversed Electrodialysis) 수단이 장착된 패치를 통해 피부에 미세전류가 도입되는 방식 등을 포함할 수 있다. 그러나, 본 발명은 이에 제한되는 것이 아니며, 다양한 방식의 이온토포레시스가 사용될 수 있음은 물론이다.
본 발명의 일 구체예의 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료를 위한 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제는 줄기세포 유래 엑소좀과, 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스를 유효성분으로 포함한다. 예를 들어, 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스의 중량비는 1:1:1이다.
본 발명의 일 구체예의 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제는 아스코르브산 및 레티놀을 추가로 함유할 수 있다. 예를 들어, 메티오닌, 만니톨, 트레할로오스, 아스코르브산 및 레티놀의 중량비는 9:9:9:0.5:0.5이다.
본 발명의 일 구체예의 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료를 위한 조성물은 상기 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제와, 희석제를 포함한다. 예를 들어, 상기 희석제는 주사용수, 생리적 식염수, 인산염 완충용액, 정제수, 또는 탈이온수일 수 있다. 또한, 상기 희석제는 히알루론산 또는 히알루론산염(예를 들어, 히알루론산 나트륨)을 추가로 포함할 수 있다. 일례로서, 상기 조성물은 현탁액일 수 있다.
본 발명의 일 구체예의 조성물은 마이크로니들링, 이온토포레시스 또는 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 일 구체예의 조성물은 약학 조성물, 화장료 조성물 또는 피부 외용제일 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물은 주사제로 제조될 수 있다.
본 발명의 일 구체예의 조성물이 약학 조성물로 사용되는 경우 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제 등을 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 트레할로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 카보네이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스(microcrystalline cellulose), 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 미네랄 오일 등을 들 수 있으며, 이에 제한되지 않는다. 또한, 본 발명의 일 구체예의 약학 조성물의 유효량은 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료 효과를 기대하기 위하여 투여에 요구되는 양을 의미한다.
본 발명의 일 구체예의 약학 조성물의 배합비율은 전술한 바와 같은 추가 성분들의 종류나 양, 형태 등에 따라서 적당하게 선택할 수 있다. 예를 들어, 주사제 전량에 대해, 본 발명의 약학 조성물은 약 0.1 내지 99 중량%, 바람직하게는 약 10 내지 90 중량% 정도 포함될 수 있다. 또한, 본 발명의 일 구체예의 약학 조성물의 적합한 투여량은 여드름 및 이와 관련된 염증의 경중, 제형의 종류, 제제화 방법, 환자의 연령, 성별, 체중, 건강 상태, 식이, 배설률, 투여 시간 및 투여 방법에 따라 조절될 수 있다. 예를 들어, 성인에게 본 발명의 일 구체예의 약학 조성물을 투여하는 경우, 하루에 0.001 mg/kg ~ 100 mg/kg의 용량으로 1 내지 수회에 나누어 투여할 수 있다.
한편. 본 발명의 일 구체예의 조성물이 피부외용제 및/또는 화장료 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 효과를 손상하지 않는 범위내에서 통상 화장품이나 피부외용제에 이용되는 성분, 예를 들면 보습제, 산화방지제, 유성성분, 자외선 흡수제, 유화제, 계면활성제, 증점제, 알콜류, 분말성분, 색재, 수성성분, 물, 각종 피부영양제 등을 필요에 따라 적절히 배합할 수 있다.
또한, 본 발명의 일 구체예의 피부외용제 및/또는 화장료 조성물은 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 또는 이를 포함하는 조성물 이외에, 그 작용(예를 들어, 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료, 항염증, 피부 상태의 개선, 피부 미용 등)을 손상시키지 않는 한도에서 종래부터 사용된 여드름 치료제 및/또는 보습제를 함께 혼합하여 사용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 또는 이를 포함하는 조성물은 하이드로겔, 히알루론산, 히알루론산 염(예를 들어 히알루론산 나트륨 등), 또는 히알루론산 겔 중 적어도 1종에 담지되거나 혼합될 수 있다. 본 발명의 일 구체예의 피부외용제 및/또는 화장료 조성물에서, 상기 하이드로겔의 종류는 제한되지 않으나, 바람직하게는 겔화 고분자를 다가 알코올에 분산시켜 얻은 하이드로겔일 수 있다. 상기 겔화 고분자는 플루로닉, 정제한천, 아가로오스, 젤란검, 알긴산, 카라기난, 카시아검, 잔탄검, 갈락토만난, 글루코만난, 펙틴, 셀룰로오스, 구아검 및 로커스트빈검으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종일 수 있고, 상기 다가 알코올은 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 이소부틸렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 소르비톨, 자일리톨 및 글리세린으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종일 수 있다.
본 발명의 일 구체예의 피부외용제 및/또는 화장료 조성물은 예를 들면, 패취, 마스크팩, 마스크시트, 크림, 토닉, 연고, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 로션, 젤, 오일, 팩, 스프레이, 에어졸, 미스트, 파운데이션, 파우더, 기름 종이 등의 다양한 형태에 적용할 수 있다. 예를 들어, 상기 피부외용제 및/또는 화장료 조성물은 패취, 마스크팩 또는 마스크시트의 적어도 일면(一面)에 도포되거나 침적될 수 있다.
본 발명의 일 구체예의 화장료 조성물은 여드름 증상의 예방, 억제, 완화 또는 개선 등의 목적으로 사용될 수 있으며, 화장품 제형은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어 패취, 마스크팩, 마스크시트, 유연화장수, 영양화장수, 수렴화장수, 영양크림, 마사지크림, 아이크림, 클렌징크림, 에센스, 아이에센스, 클렌징로션, 클렌징폼, 클렌징워터, 선스크린, 립스틱, 비누, 샴푸, 계면활성제-함유 클렌징, 입욕제, 바디로션, 바디크림, 바디오일, 바디에센스, 바디세정제, 염모제, 헤어토닉 등으로 제형화할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구체예의 피부외용제 및/또는 화장료 조성물은 피부외용제 및/또는 화장품에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 그리고 담체를 포함할 수 있다. 또한, 피부외용제 및/또는 화장료 조성물에 대한 각각의 제형에 있어서, 다른 성분들은 피부외용제 및/또는 화장료 조성물의 종류 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.
또한, 본 발명은 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 또는 이를 포함하는 조성물을 이용하여, 치료용을 제외한 여드름의 예방, 억제, 완화 또는 개선을 통해 포유동물 피부를 부드럽고 매끄럽게 하고 피부톤을 깨끗하게 하는 미용방법을 제공한다.
본 발명의 일 구체예의 미용방법은, (a) 상기 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제를 유효성분으로 포함하는 조성물을 준비하는 단계와, (b) 상기 조성물을 포유동물의 피부에 처리하는 단계를 포함한다.
본 발명의 일 구체예의 미용방법에 있어서, 상기 조성물은 마이크로니들링, 이온토포레시스 또는 주사에 의해 피부에 투여될 수 있다.
본 발명의 일 구체예의 미용방법은, (c) 상기 조성물이 처리된 포유동물의 피부에 미세전류를 흐르게 하여 이온토포레시스(iontophoresis)를 수행하는 단계와, (d) 상기 미세전류를 통하여 상기 조성물을 포유동물 피부 내부로 전달하는 단계를 추가로 포함한다.
본 발명의 일 구체예의 미용방법에 있어서, 상기 조성물은 예를 들면, 패취, 마스크팩, 마스크시트, 크림, 토닉, 연고, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 로션, 젤, 오일, 팩, 스프레이, 에어졸, 미스트, 파운데이션, 파우더, 기름 종이 등의 다양한 형태에 적용할 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물은 마스크팩, 마스크시트 또는 패취의 적어도 일면(一面)에 도포되거나 침적될 수 있다.
본 발명의 일 구체예의 미용방법에 있어서, 상기 (b) 단계는 (b1) 상기 조성물을 상기 포유동물의 피부에 직접 도포하는 것, (b2) 상기 조성물이 도포되거나 침적된 마스크팩, 마스크시트 또는 패취를 상기 포유동물의 피부에 접촉 또는 부착하는 것, 또는 상기 (b1) 및 (b2)를 순차적으로 진행하는 것에 의해 수행될 수 있다.
본 발명의 일 구체예의 미용방법에 있어서, 상기 마스크팩, 마스크시트 또는 패취의 적어도 일면(一面)에는 하이드로겔, 히알루론산, 히알루론산 염(예를 들어 히알루론산 나트륨 등), 또는 히알루론산 겔 중 적어도 1종이 도포될 수 있다. 상기 하이드로겔의 종류는 제한되지 않으나, 바람직하게는 겔화 고분자를 다가 알코올에 분산시켜 얻은 하이드로겔일 수 있다. 상기 겔화 고분자 및 다가 알코올은 앞선 설명에서 예시된 것일 수 있다.
본 발명의 일 구체예의 미용방법에 있어서, 상기 (c) 단계는 이온토포레시스 디바이스를 상기 포유동물의 피부에 접촉 또는 부착시켜 수행될 수 있다.
본 발명의 일 구체예의 미용방법에 있어서, 상기 이온토포레시스 디바이스는 가요성 배터리, 리튬이온 이차 전지, 알칼리 전지, 건전지, 수은 전지, 리튬 전지, 니켈-카드뮴 전지, 및 역전기 투석 전지로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 1종의 전지를 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체예는 상기 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물의 치료학적으로 유효한 양을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물은 줄기세포 유래 엑소좀을 안정화시키면서도 여드름을 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료할 수 있고, 여드름 증상과 관련된 피부 트러블 등을 완화 내지 개선시킬 수 있다. 본 발명의 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물은 약학 조성물, 피부외용제 및 화장료 조성물로의 응용이 가능하다. 예를 들어, 본 발명의 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제는 희석제와 간단하게 혼합하여 현탁액으로 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 또는 이를 유효성분으로 포함하는 조성물은 여드름의 주요 원인이면서 여드름 증상에 의해 악화되는 염증에 대한 항염 효과가 우수하며, 특히 줄기세포 배양액으로부터 분리·정제된 줄기세포 유래 엑소좀에 비해 월등히 뛰어난 항염 효능을 나타낸다.
한편, 전술한 바와 같은 효과들에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다.
도 1은 본 발명의 일 구체예에 따라 얻어진 줄기세포 유래 엑소좀의 물리적 특성 분석 결과를 도시한 것이다. "도 1A"는 NTA(nanoparticle tracking analysis)에 의해 얻어진 입자 크기 분포와 입자수를 나타낸다. "도 1B"는 TEM(transmitted electron microscopy)으로 촬영된 입자 이미지 사진이다. "도 1C"는 본 발명의 일 구체예에 따라 얻어진 줄기세포 유래 엑소좀의 포지티브 마커에 대한 웨스턴 블랏 결과를 나타낸다. "도 1D"는 본 발명의 일 구체예에 따라 얻어진 줄기세포 유래 엑소좀의 네거티브 마커에 대한 웨스턴 블랏 결과를 나타낸다. "도 1E"는 본 발명의 일 구체예에 따라 얻어진 줄기세포 유래 엑소좀에 대한 마커 분석에 있어서 CD9, CD63 및 CD81에 대한 유세포분석 결과를 나타낸다.
도 2는 인체 피부섬유아세포인 HS68 세포에 본 발명의 일 구체예에 따른 줄기세포 유래 엑소좀을 처리한 후 세포 독성이 없음을 확인한 결과를 도시한다.
도 3은 본 발명의 일 구체예의 방법에 따라 동결건조된 엑소좀의 양호한 성상을 나타내는 사진이다.
도 4a 내지 도 4g는 동결건조 보호제 성분의 조합을 다르게 하고 동결건조를 수행한 후, 동결건조 보호제 성분 조합별로 동결건조 엑소좀의 성상을 촬영한 사진이다.
도 5는 본 발명의 일 구체예의 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제를 유효성분으로 함유하는 조성물을 실험대상자 1(도 5A) 및 실험대상자 2(도 5B)의 얼굴에 2회 처치한 후 여드름 증상이 현저히 개선된 것을 보여주는 사진이다.
도 6은 본 발명의 일 구체예에 따른 줄기세포 유래 엑소좀이 함유된 액상 침적 시트 마스크를 여드름 증상이 있는 사람의 얼굴의 눈과 입 부분에 맞추어 얼굴 전체에 고르게 밀착시킨 후 미세 전류가 흐르도록 액티베이션된 경피투과 촉진 시트 마스크(이온토포레시스 디바이스를 포함하는 마스크)를 상기 액상 침적 시트 마스크 위에 적층시켜 사용한 후 사용 전후의 피부 상태를 비교하는 사진이다.
도 7 내지 도 10은 멀티플렉스 패널을 이용한 염증성 사이토카인 분석 결과를 도시한 그래프로서, RAW 264.7 세포에 대해 LPS와 함께 실시예 2에서 준비된 줄기세포 유래 엑소좀(줄기세포 배양액으로부터 분리·정제된 엑소좀)을 농도별(mL 당 입자수 기준)로 처리한 경우 LPS에 의해 유도되는 IL-1β, IL-6, IL-27 및 IFN-β의 생성량이 엑소좀의 농도의존적으로 감소하는 것을 나타낸다.
도 11 내지 도 14는 멀티플렉스 패널을 이용한 염증성 사이토카인 분석 결과를 도시한 그래프로서, RAW 264.7 세포에 대해 LPS와 함께 실시예 5-1에서 준비된 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제를 배양배지와 혼합하여 희석한 수용액을 농도별(mL 당 입자수 기준)로 처리한 경우 LPS에 의해 유도되는 IL-1β, IL-6, IL-27 및 IFN-β의 생성량이 동결건조제제의 농도의존적으로 현저하게 감소하는 것을 나타낸다.
이하 본 발명을 하기 실시예에서 보다 상세하게 기술한다. 다만, 하기 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 권리범위를 제한하거나 한정하는 것이 아니다. 본 발명의 상세한 설명 및 실시예로부터 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 기술자가 용이하게 유추할 수 있는 것은 본 발명의 권리범위에 속하는 것으로 해석된다. 본 발명에 인용된 참고문헌들은 본 발명에 참고로서 통합된다.
명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.
실시예
실시예 1: 세포의 배양
인체 피부 섬유아세포(human dermal fibroblast)인 HS68 세포는 ATCC에서 구입하여, 10% 우태아 혈청 (fetal bovine serum: ThermoFisher Scientific에서 구입) 및 1% 항생제-항진균제 (antibiotics-antimycotics: ThermoFisher Scientific에서 구입)가 함유된 DMEM (ThermoFisher Scientific에서 구입) 배지에 5% CO2, 37℃ 조건에서 계대 배양하였다.
당해 발명이 속하는 기술분야에 알려진 세포배양 방법에 따라 5% CO2, 37℃ 조건에서 지방 유래 줄기세포를 배양하였다. 그 다음, 인산염 완충용액(phosphate-buffered saline)(ThermoFisher Scientific에서 구입)으로 세척 후, 무혈청, 무페놀레드 배지로 교체하여 1일 내지 10일간 배양하고 그 상층액(이하, 배양액)을 회수하였다.
엑소좀의 분리 과정에서 입자크기 분포가 균일하고 순도가 높은 엑소좀을 수득하기 위하여 배양액에 트레할로오스를 2 중량% 첨가하였다. 트레할로오스를 첨가한 후 배양액을 0.22 ㎛ 필터로 여과하여 세포 잔해물, 노폐물 및 거대 입자 등의 불순물을 제거해 주었다. 여과된 배양액은 즉시 분리 과정을 통해 엑소좀을 분리하였다. 또한, 여과된 배양액은 냉장고(영상 10℃ 이하)에서 보관한 후 엑소좀 분리에 사용하였다. 또한, 여과된 배양액은 -60℃ 이하의 초저온 냉동고에서 동결 보관하였다가 해동시킨 후 엑소좀 분리를 수행하였다. 이후, 배양액으로부터 접선흐름여과장치(Tangential Flow Filtration; TFF)를 이용하여 엑소좀을 분리하였다.
실시예 2: TFF 방법에 의한 엑소좀의 분리 및 정제
실시예 1에서 0.22 ㎛ 필터로 여과된 배양액으로부터 엑소좀을 분리, 농축, 탈염과 버퍼교환(diafiltration)을 위해 TFF(Tangential Flow Filtration) 방법을 사용하였다. TFF 방법을 위한 필터로는 카트리지 필터(cartridge filter, 일명 hollow fiber filter; GE Healthcare에서 구입) 또는 카세트 필터(cassette filter; Pall 또는 Sartorius 또는 Merck Millipore에서 구입)를 사용하였다. TFF 필터는 다양한 분자량 차단(molecular weight cutoff;MWCO)에 의해 선택될 수 있다. 선택된 MWCO에 의해 선별적으로 엑소좀을 분리, 농축하였고, MWCO보다 작은 입자나 단백질, 지질, 핵산, 저분자 화합물 등은 제거하였다.
엑소좀을 분리, 농축하기 위하여 MWCO 100,000 Da(Dalton), 300,000 Da, 또는 500,000 Da의 TFF 필터를 사용하였다. 배양액을 TFF 방법을 이용하여 1/100 내지 1/25 정도의 부피가 될 때까지 농축하면서, MWCO보다 작은 물질들은 제거하여 엑소좀을 분리하였다.
분리, 농축된 엑소좀 용액은 TFF 방법을 이용하여 추가로 탈염과 버퍼교환(diafiltration)을 수행하였다. 이때, 탈염과 버퍼교환은 연속적으로 수행(continuous diafiltration)하거나 단속적으로 수행(discontinuous diafiltration)하였으며, 시작 부피(starting volume)에 대하여 적어도 4배, 바람직하게는 6배 내지는 10배 이상, 보다 바람직하게는 12배 이상의 부피를 갖는 완충용액을 이용하여 수행하였다. 완충용액에는 입자크기 분포가 균일하고 순도가 높은 엑소좀을 수득하기 위하여 PBS에 녹인 2 중량%의 트레할로오스를 첨가하였다.
실시예 3: 분리된 엑소좀의 특성 분석
분리된 엑소좀은 나노입자 트랙킹 분석(nanoparticle tracking analysis:　NTA; Malvern에서 구입)에 의해 입자의 크기와 농도를 측정하였다. 분리된 엑소좀의 균일도와 크기는 투과전자현미경(transmitted electron microscopy: TEM)을 이용하여 분석하였다. 본 발명의 일 구체예의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀의 NTA, TEM 분석 결과는 도 1A 및 도 1B에 도시하였다.
도 1C는 본 발명의 일 구체예의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀의 포지티브 마커에 대한 웨스턴 블랏을 수행한 결과로서, CD63, CD9, CD81, Alix 및 TSG101 마커의 존재를 확인하였다. 각 마커에 대한 항체로는 각각 항-CD63, 항-CD9, 항-CD81, 항-Alix 및 항-TSG101을 사용하였다.
도 1D는 본 발명의 일 구체예의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀의 네거티브 마커에 대한 웨스턴 블랏을 수행한 결과이다. 각 마커에 대한 항체로는 각각 항-GM130 및 항-칼넥신(Calnexin)을 사용하였다. GM130 및 칼넥신(Calnexin)은 엑소좀의 특성 분석 시 엑소좀에 존재하지 않아야 하는 네거티브 마커이다. 도 1D에 도시된 바와 같이 GM130 및 칼넥신(Calnexin)은 지방줄기세포의 파쇄물에서는 존재하는 것으로 확인되었지만, 본 발명의 일 구체예의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀에서는 존재하지 않는 것으로 확인되었다. 따라서, 도 1C 및 도 1D의 결과를 종합할 때, 본 발명의 일 구체예의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀은 포지티브 마커 및 네거티브 마커 특성분석을 만족하는 엑소좀임을 알 수 있다.
도 1E는 본 발명의 일 구체예의 분리방법에 따라 분리된 엑소좀에 대해 유세포분석기를 이용하여 분석한 결과로서 CD9, CD63 및 CD81 마커의 존재를 확인하였다. CD81에 대해 양성(positive)인 엑소좀을 분리하기 위하여 엑소좀-휴먼 CD81 분리/검출 키트(ThermoFisher Scientific에서 구입)를 제조사의 방법에 따라 사용하였고, PE-마우스 항-인간 CD9 (PE-Mouse anti-human CD9)(BD에서 구입), PE-마우스 항-인간 CD63 (PE-Mouse anti-human CD63)(BD에서 구입) 및 PE-마우스 항-인간 CD81 (PE-mouse anti-human CD81)(BD에서 구입)을 사용하여 마커를 염색한 후, 유세포분석기 (ACEA Biosciences)를 이용하여 분석하였다.
실시예 4: 엑소좀 처리에 따른 세포 독성 측정
인체 피부 섬유아세포인 HS68 세포에서 본 발명의 일 구체예의 분리 방법에 따라 수득된 엑소좀의 독성을 평가하기 위해 세포에 농도별로 엑소좀을 처리하고 세포의 증식률을 확인하였다. HS68 세포를 10% FBS를 포함한 DMEM에 현탁시킨 후 80 내지 90%의 밀집도(confluency)를 갖도록 분주하고 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 24시간 후, 배양액을 제거하고 실시예 2에서 준비된 엑소좀을 농도 별로 처리하여 24 내지 72시간 동안 배양하면서 세포 생존율을 평가하였다. 세포 생존율을 WST-1 시약(WST-1 reagent)(Takara에서 구입), MTT 시약(Sigma에서 구입), 셀타이터-글로 시약(CellTiter-Glo reagent)(Promega에서 구입), 또는 아라마르 블루 시약(alamarBlue reagent)(ThermoFisher Scientific에서 구입)과 마이크로플레이트 리더(microplate reader)(Molecular Devices에서 구입)를 이용하여 측정하였다.
비교군은 엑소좀이 처리되지 않은 일반 세포배양배지에서 배양된 세포수를 기준으로 하였고, 시험된 농도 범위 내에서 본 발명의 엑소좀에 의한 세포 독성이 나타나지 않음을 확인하였다(도 2).
실시예 5: 엑소좀의 동결건조
실시예 5-1: 동결건조 조건
엑소좀의 동결건조를 위해 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스를 포함하는 동결건조 보호제를 준비하였다. 아스코르브산 및 레티놀을 각각 0.5 mg/mL로 함유하고 있는 1 mL의 수용액[(주)바이오에프디엔씨(대한민국 전남 화순군 소재)에서 외주 제작]에 상기 동결건조 보호제를 첨가한 수용액을 준비하였다. 본 실시예에서는 동결건조 보호제를 아스코르브산 및 레티놀을 함유하고 있는 용액에 첨가하였으나, 주사용수, 정제수, 생리적 식염수, 또는 탈이온수에 동결건조 보호제를 첨가하여 수용액을 준비할 수도 있다. 상기 수용액 내의 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스의 농도는 각각 9 mg/mL가 되도록 하였다.
동결건조 보호제가 함유된 수용액에 실시예 2에서 준비된 엑소좀(5×108 입자)을 혼합한 후 동결건조 장비(제조사: VIRTIS, ITEM No.: 344424)를 이용하여 하기 표 1의 조건으로 동결건조를 수행하였다. 동결건조는 하기 표 1의 조건 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 및 8의 순서로 진행하였다.
동결건조 조건
총 시간 (min) 4320
조건 시간 (min) 온도 (℃) 압력 (mmHg)
1 700 -50 760
2 60 -50 760
3 999 -50 0
4 999 -50 0
5 999 -50 0
6 370 -50 0
7 120 -20 0
8 73 10 0
메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스를 포함하는 동결건조 보호제를 처리하여 엑소좀을 동결건조 후 성상을 확인한 결과, 색은 유백색이며 다공성의 스폰지 형상을 유지하는 양호한 성상을 나타내는 것을 확인할 수 있었다(도 3). 즉, 본 발명의 엑소좀의 동결건조 방법에서는 감압 하에서의 건조 시간을 길게 하고 동결건조 보호제를 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스의 조합으로 구성함으로써 우수한 성상을 나타내는 동결건조 제품을 수득할 수 있었다.
실시예 5-2: 동결건조 보호제 성분에 따른 동결건조 엑소좀의 성상 비교
한편, 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스 (이하, 동결건조 보호제 성분이라 함) 중 적어도 1종을 포함하는 다양한 동결건조 보호제를 사용하여 엑소좀을 동결건조한 경우의 엑소좀의 성상을 비교하였다. 상기 실시예 5-1에 기재된 방법에 따라 동결건조 보호제 성분 단독, 2가지 성분의 조합, 또는 3가지 성분 조합을 첨가한 7가지 종류의 수용액을 준비하였다. 상기 수용액 내에서 각 동결건조 보호제 성분의 농도는 9 mg/mL가 되도록 하였다. 상기 실시예 5-1의 동결건조 조건 및 방법에 따라, 동결건조 보호제 성분의 각 조합이 함유된 수용액에 실시예 2에서 준비된 엑소좀(5×108 입자)을 혼합한 후 동결건조를 수행하였다.
동결건조된 엑소좀 제품들에 대한 외형 성상을 촬영하고 평가하였다(도 4a 내지 도 4g). 동결건조된 엑소좀 제품의 케익 모양의 좋고 나쁨에 따라 가장 좋은 것은 5점으로 하고 가장 나쁜 것은 1점으로 하여 외형 성상을 상대 평가하였다. 동결건조 보호제 성분 조합별로 동결건조 엑소좀 제품의 성상을 평가한 결과는 하기 표 2와 같다.
동결건조 보호제 성분별 동결건조 엑소좀 제품의 성상 비교
동결건조 보호제 성분 조성 만니톨 트레할로오스 메티오닌 메티오닌+
트레할로오스		 메티오닌+
만니톨		 트레할로오스+
만니톨		 메티오닌+만니톨+트레할로오스(본 발명)
평가점수 1 1 4 3 4 2 5
도면 도 4a 도 4b 도 4c 도 4d 도 4e 도 4f 도 4g
도 4a 내지 도 4g 및 상기 표 2에서 확인되는 바와 같이 본 발명의 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스의 조합으로 구성된 동결건조 보호제를 사용하여 엑소좀을 동결건조한 경우가 제품 외형 성상이 가장 양호하였고, 상기 3가지 성분 중 1가지 또는 2가지 성분이 빠진 조합으로 동결건조한 엑소좀은 제품 외형 성상이 본 발명의 경우 보다 불량함을 알 수 있었다.
실시예 6: 여드름 증상을 갖는 실험대상자에 대한 1차 임상시험
실시예 5-1에서 준비된 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제를 여드름 및 이로 인한 피부 트러블로 스트레스를 받고 있는 실험대상자 1 및 2의 얼굴에 2회 적용하여 여드름 증상이 완화 내지는 개선되는지를 평가하였다.
5×108 입자/vial의 농도로 줄기세포 유래 엑소좀이 함유된 동결건조 제품을 정제수와 혼합하여 2.5 mL의 수용액(본 발명의 일 구체예의 조성물)을 준비하였다. 아주 가느다란 니들이 장착된 가정용(일반용) MTS((Microneedle Therapy System)를 사용하여 실험대상자 1 및 2의 안면부에 본 발명의 일 구체예의 줄기세포 유래 엑소좀 동결건조제제를 포함하는 조성물을 적용하였다. 1회 처치 후 2주째에 여드름 스코어를 하기 표 3의 기준에 따라 채점하였다. 그리고 나서, 실험대상자 1 및 2의 안면부에 본 발명의 일 구체예의 조성물을 다시 처치하고, 2주 후에 여드름 스코어를 재차 채점하였다.
여드름 스코어 채점 기준
스코어 여드름 증상
1 피부가 깨끗함. 염증성 병변(적색 융기, 백색 또는 황색의 짜낼 수 있는 스폿) 또는 비염증성 병변(흑색면포 또는 백색면포)이 없는 것을 나타냄
2 피부에 산재하는 몇개의 흑색면포 및 백색면포, 피부의 기름기 존재
3 안면의 4분의 1에 30~40개의 작은 적색 융기, 흑색면포 및 백색면포 존재
4 안면의 약 절반에 작은 적색 융기, 흑색면포 및 표층성의 백색 또는 황색의 짜낼 수 있는 스폿 존재
5 안면의 4분의 3에 다수의 흑색면포 및 백색 또는 황색의 짜낼 수 있는 스폿 존재
6 안면의 대부분이 큰 염증성 적색 융기 및/또는 흑색면포, 백색면포, 또는 백색 또는 황색의 짜낼 수 있는 스폿에 의해 영향 받음
실험대상자 1의 경우 본 발명의 일 구체예의 조성물 처치 전에는 여드름 스코어가 4인 반면에, 1회 처치 후에는 여드름 스코어가 2, 2회 처치 후에는 여드름 스코어가 1로서 여드름 증상이 현저히 개선되었다(도 5A). 또한, 실험대상자 2의 경우 본 발명의 일 구체예의 조성물 처치 전에는 여드름 스코어가 3인 반면에, 1회 처치 후에는 여드름 스코어가 2, 2회 처치 후에는 여드름 스코어가 1로서 여드름 증상이 현저히 개선되었다(도 5B).
한편, 실험대상자 1 및 2 모두 여드름 증상 개선 뿐만 아니라 안면부의 확대된 모공 감소, 피부 보습 향상, 피부 매끄러움 향상, 얼굴의 붉은기나 홍조 감소 등의 전체적인 안면부 피부 상태 개선의 효과가 얻어졌다.
따라서, 본 발명의 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제를 유효성분으로 포함하는 조성물은 여드름 및 이와 관련된 피부트러블을 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료하는 효과가 있다.
실시예 7: 여드름 증상을 갖는 실험대상자에 대한 2차 임상시험
실시예 2의 줄기세포 유래 엑소좀이 함유된 액상 침적 시트 마스크(5×105 입자의 줄기세포 유래 엑소좀 함유)와 경피투과 촉진 시트 마스크(이온토포레시스 디바이스가 장착된 마스크)로 구성된 시험 제품을 여드름 증상이 있는 사람의 얼굴에 4일에 한번씩 총 4회 적용하여 여드름 증상 및 이와 관련된 피부 트러블이 완화 내지는 개선되는지를 평가하였다. 5×105 입자의 줄기세포 유래 엑소좀 엑소좀이 포함된 액상 침적 시트 마스크를 눈과 입 부분에 맞추어 여드름 증상이 있는 사람의 얼굴 전체에 고르게 밀착시킨 다음, 약 0.3~0.4 mA의 미세 전류가 흐르도록 액티베이션된 경피투과 촉진 시트 마스크를 액상 침적 시트 마스크 위에 적층시켜 25~30분 정도 사용하였다.
그 결과, 줄기세포 유래 엑소좀을 5×105 입자/마스크의 농도로 함유하는 액상 침적 시트 마스크와 경피투과 촉진 시트 마스크로 구성된 시험 제품 사용에 의해 염증 부위가 사라졌고 뾰루지가 발생하지 않았으며, 피부가 부드럽고 매끄럽게 되었으며 피부톤이 깨끗하게 되었다(도 6 참조). 상기 시험 제품 사용 전 여드름 스코어는 2이고, 적용 후는 1이다.
실시예 8: 염증성 사이토카인 생성 감소 효과 확인
마우스 대식세포주인 RAW 264.7 세포에서 실시예 2의 줄기세포 유래 엑소좀과 실시예 5-1의 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제의 염증성 사이토카인 생성 감소 효과를 다음과 같이 확인하였다.
RAW 264.7 세포를 10% FBS(Fetal Bovine Serum) 및 1% 페니실린-스트렙토마이신이 첨가된 DMEM (Dulbecco Modified Eagle Medium; ThermoFisher Scientific에서 구입) 배지에 현탁시킨 후 96웰 플레이트에 2.5×104 세포/웰의 밀도로 접종하였고, 실시예 2에서 준비된 줄기세포 유래 엑소좀(줄기세포 배양액으로부터 분리·정제된 엑소좀)을 농도별(mL 당 입자수 기준)로 처리한 후 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 또한, 전술한 줄기세포 유래 엑소좀 처리 방식과 동일한 방식으로, RAW 264.7 세포에 대해 실시예 5-1의 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제(5×109 입자/vial)를 배양배지와 혼합하여 희석한 수용액(본 발명의 일 구체예의 조성물)을 농도별(mL 당 입자수 기준)로 처리한 후, 처리된 RAW 264.7 세포를 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 한편, 양성대조군 물질로는 덱사메타손을 사용하였다(도 7 내지 도 14에 DEX로 표기됨).
그리고 나서, 100 ng/mL의 LPS(Sigma에서 구입)를 처리하였고 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 동안 배양하여 RAW 264.7 세포의 활성화를 유도하였다.
배양이 끝난 RAW 264.7 세포의 배양 상등액(Culture supernatant)을 수거하였고, 배양 상등액 내의 IL-1β, IL-6, IL-27 및 IFN-β의 생성량을 LEGENDplexTM 비드-기반 면역 측정법(bead-based immnnoassay) 마우스 염증 패널(mouse inflammation panel)(Biolegend에서 구입) 및 노보사이트 유세포 분석기(NovoCyte Flow Cytometer)(ACEA에서 구입)를 이용하여 측정하여 항염증 효과를 확인하였다.
또한, 줄기세포 유래 엑소좀과 본 발명의 일 구체예의 조성물에 의한 세포 생존율 변화 측정과 이를 통한 사이토카인 생성량 보정을 위하여 MTT 어세이를 수행하였다. 배양이 끝난 RAW 264.7 세포의 배양 배지를 0.5 mg/mL 티아졸릴 블루 테트라졸륨 브로마이드(Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide)(Sigma에서 구입)를 포함한 DMEM 배지로 교환하였고 1시간 동안 배양하였다. 이후 세포배양 플레이트 바닥에 형성된 포르마잔(formazan)이 흩어지지 않게 상등액을 제거하였고 디메틸 설폭시드(Dimethyl Sulfoxide)(AMRESCO에서 구입)로 용해시킨 후 570 nm에서 흡광도를 측정하여 세포 생존율을 확인하였다. 그리고 각각의 사이토카인(IL-1β, IL-6, IL-27 및 IFN-β) 생성량을 세포 생존율로 보정하였다.
도 7 내지 도 10에 도시된 바와 같이, 멀티플렉스 패널을 이용한 염증성 사이토카인 분석 결과, RAW 264.7 세포에 대해 LPS와 함께 줄기세포 유래 엑소좀을 처리한 경우 LPS에 의해 유도되는 IL-1β, IL-6, IL-27 및 IFN-β의 생성량이 줄기세포 유래 엑소좀의 농도의존적으로 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 도 11 내지 도 14에 도시된 비와 같이, 멀티플렉스 패널을 이용한 염증성 사이토카인 분석 결과, RAW 264.7 세포에 대해 LPS와 함께 본 발명의 일 구체예의 조성물을 처리한 경우에도 LPS에 의해 유도되는 IL-1β, IL-6, IL-27 및 IFN-β의 생성량이 상기 조성물의 농도의존적으로 현저하게 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
이러한 결과로부터, 본 발명의 일 구체예의 조성물은 유효성분으로 함유하고 있는 줄기세포 유래 엑소좀의 항염 효능을 안정하게 유지하고 있으며, 동결건조, 보관 및 유통 과정에서 줄기세포 유래 엑소좀의 물성 변화가 없음을 알 수 있다. 특히, 줄기세포 유래 엑소좀의 항염 효능(도 7 내지 도 10)과 본 발명의 일 구체예의 조성물의 항염 효능(도 11 내지 도 14)을 비교하면, 줄기세포 유래 엑소좀은 2.0×109 입자수/mL의 농도에서 상기 4종의 염증성 사이토카인의 생성을 억제하지 못하거나 대략 27~45% 정도만 억제하지만, 본 발명의 일 구체예의 조성물은 유사한 농도인 2.5×109 입자수/mL의 농도에서 상기 4종의 염증성 사이토카인의 생성을 대략 90% 이상 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명의 조성물은 줄기세포 유래 엑소좀을 상업적으로 활용가능하도록 안정화시키면서도 줄기세포 유래 엑소좀 보다도 훨씬 우수한 항염 효능을 나타내어 여드름의 주요 원인이면서 여드름 증상에 의해 악화되는 염증을 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료하는데 유용하게 사용될 수 있다.
이상, 본 발명을 상기 실시예를 들어 설명하였으나, 본 발명은 이에 제한되는 것이 아니다. 당업자라면 본 발명의 취지 및 범위를 벗어나지 않고 수정, 변경을 할 수 있으며 이러한 수정과 변경 또한 본 발명에 속하는 것임을 알 수 있을 것이다.

Claims (12)

  1. (A1) 줄기세포에서 분비되어 세포외 공간으로 방출된, 이중인지질막 구조를 갖는 세포외소포인 줄기세포 유래 엑소좀과,
    (A2) 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스의 조합으로 이루어진 동결건조 보호제를 유효성분으로 포함하는, 여드름 예방 또는 치료용 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제.
  2. 제1항에 있어서,
    아스코르브산 및 레티놀을 추가로 함유하는, 여드름 예방 또는 치료용 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제.
  3. (A1) 줄기세포에서 분비되어 세포외 공간으로 방출된, 이중인지질막 구조를 갖는 세포외소포인 줄기세포 유래 엑소좀과, (A2) 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스의 조합으로 이루어진 동결건조 보호제를 유효성분으로 포함하는 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제와,
    (B) 희석제를 포함하는, 여드름 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 희석제는 주사용수, 생리적 식염수, 인산염 완충용액, 정제수, 또는 탈이온수인 것을 특징으로 하는, 여드름 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 희석제는 히알루론산 또는 히알루론산염을 추가로 포함하는, 여드름 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  6. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    현탁액인, 여드름 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  7. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    마이크로니들링, 이온토포레시스 또는 주사에 의해 투여되는, 여드름 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    주사제인 것을 특징으로 하는, 여드름 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  9. (ⅰ) (A1) 줄기세포에서 분비되어 세포외 공간으로 방출된, 이중인지질막 구조를 갖는 세포외소포인 줄기세포 유래 엑소좀과, (A2) 메티오닌, 만니톨 및 트레할로오스의 조합으로 이루어진 동결건조 보호제를 유효성분으로 포함하는 (A) 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제를 포함하는, 여드름 개선용 화장료 조성물을 준비하는 단계와,
    (ⅱ) 상기 여드름 개선용 화장료 조성물을 포유동물의 피부에 도포하는 단계를 포함하는, 치료용을 제외한 여드름의 예방, 억제, 완화 또는 개선을 통한 피부 미용방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 여드름 개선용 화장료 조성물은 패취, 마스크팩, 마스크시트, 크림, 토닉, 연고, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 로션, 젤, 오일, 팩, 스프레이, 에어졸, 미스트, 파운데이션, 파우더 및 기름 종이로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 1종의 형태에 적용하는 것을 특징으로 하는, 미용방법.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 여드름 개선용 화장료 조성물은 마스크팩, 마스크시트 또는 패취의 적어도 일면(一面)에 도포되거나 침적되는, 미용방법.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 (ⅱ) 단계는 (ⅱ-1) 상기 여드름 개선용 화장료 조성물을 상기 포유동물의 피부에 직접 도포하는 것, (ⅱ-2) 상기 여드름 개선용 화장료 조성물이 도포되거나 침적된 마스크팩, 마스크시트 또는 패취를 상기 포유동물의 피부에 접촉 또는 부착하는 것, 또는 상기 (ⅱ-1) 및 (ⅱ-2)를 순차적으로 진행하는 것에 의해 수행되는, 미용방법.
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KR1020190020924A KR102163806B1 (ko) 2018-07-30 2019-02-22 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피지분비 감소용 조성물
KR1020190034695A KR102148011B1 (ko) 2018-07-30 2019-03-26 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 및 이를 유효성분으로 포함하는 항염조성물
KR1020190088673A KR102170387B1 (ko) 2018-07-30 2019-07-23 줄기세포 유래 엑소좀의 동결건조제제 및 이를 유효성분으로 포함하는 여드름의 예방, 억제, 완화, 개선 또는 치료용 조성물
KR1020200127643A KR102359387B1 (ko) 2018-07-30 2020-10-01 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 피지분비 감소용 조성물

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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102649069B1 (ko) 2018-05-31 2024-03-19 주식회사 엑소코바이오 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 안면 홍조 개선용 조성물
WO2020027466A1 (ko) 2018-07-28 2020-02-06 주식회사 엑소코바이오 엑소좀의 동결건조 방법
KR102165525B1 (ko) 2020-05-26 2020-10-14 박성은 여드름 피부 개선용 조성물
WO2022158816A1 (ko) * 2021-01-20 2022-07-28 성균관대학교산학협력단 줄기세포 유래 엑소좀, 히알루론산, 및 bdde를 포함하는 피부 주름개선용 필러 조성물 및 이의 제조 방법
CN113082058A (zh) * 2021-03-19 2021-07-09 瑞太生物科技(沈阳)有限公司 一种细胞来源的外泌体在制备治疗阿尔茨海默病生物制剂中的应用
CN114134109B (zh) * 2021-12-10 2023-01-24 广州远想生物科技股份有限公司 Egf间充质干细胞外泌体的纯化方法
KR102564765B1 (ko) 2022-10-25 2023-08-09 (주)지에프씨생명과학 라벤다, 어성초 또는 티트리 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 항염 및 피부 진정용 화장료 조성물

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090086397A (ko) * 2006-10-06 2009-08-12 에스씨아이엘 테크놀로지 게엠베하 약학적 응용을 위한 건조된 재구성 소포 형성
KR101018352B1 (ko) 2009-07-28 2011-03-04 동성제약주식회사 봉독을 유효성분으로 하는 여드름 예방 및 치료용 조성물
KR101623553B1 (ko) 2013-07-23 2016-05-23 동성제약주식회사 여드름 치료, 예방 또는 개선에 유효한 클로린 e6
KR20170082111A (ko) * 2016-01-05 2017-07-13 바이오센서연구소 주식회사 마스크팩에 장착되는 장치, 그를 포함하는 마스크팩 및 키트

Family Cites Families (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH10508578A (ja) 1994-09-23 1998-08-25 ザ リポソーム カンパニー、インコーポレーテッド 凍結乾燥リポソーム生成物の製造方法
CN1160582A (zh) 1996-12-27 1997-10-01 暨南大学生物工程研究所 含有细胞生长因子的皮肤外用组合物
IT1289938B1 (it) 1997-02-20 1998-10-19 Angelini Ricerche Spa Preparazione farmaceutica comprendente liposomi liofilizzati in cui e' incapsulato un principio attivo altamente insolubile in acqua e
KR101252550B1 (ko) 2006-03-06 2013-04-08 (주)아모레퍼시픽 피지분비 억제용 화장료 조성물
EP2148923B1 (en) 2007-05-18 2012-08-22 MedImmune, LLC Preservation of bioactive materials by freeze dried foam
GB0821806D0 (en) 2008-11-28 2009-01-07 Circassia Ltd Compositions with reduced dimer formation
JP2012530721A (ja) 2009-06-18 2012-12-06 ワイス・エルエルシー 小モジュール免疫薬のための凍結乾燥製剤
CN102018672B (zh) 2010-11-29 2013-09-18 广州朗圣药业有限公司 一种水溶性药物的脂质体冻干组合物及其制备方法
ES2614815T3 (es) 2010-12-22 2017-06-02 Wyeth Llc Composiciones inmunogénicas estables de antígenos de Staphylococcus aureus
PT2935331T (pt) 2012-12-24 2018-06-04 Abbvie Inc Proteínas de ligação ao recetor de prolactina e suas utilizações
KR101491705B1 (ko) 2013-05-24 2015-02-11 재단법인 제주테크노파크 누은분홍잎 추출물을 이용한 항염증용 조성물
JP6426410B2 (ja) 2013-09-11 2018-11-21 第一三共株式会社 室温保存用凍結乾燥製剤
EP3120857B1 (en) * 2014-03-18 2021-02-17 Samsung Life Public Welfare Foundation Compositions for use in treating inflammatory brain disease comprising stem-cell-derived exosomes as an active ingredient
KR101555219B1 (ko) 2014-05-29 2015-09-24 코스맥스 주식회사 구절초, 속수자 및 해송자 추출 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물
CN106687129B (zh) 2014-09-27 2021-07-20 大日本住友制药株式会社 注射用药物组合物
ES2831298T3 (es) 2014-11-07 2021-06-08 Exocobio Inc Composición que incluye exosomas derivados de células madre para blanquear la piel o mejorar las arrugas
KR101663912B1 (ko) 2015-01-08 2016-10-10 한양대학교 에리카산학협력단 줄기세포로부터 추출된 엑소좀을 함유하는 피부 미백, 주름개선 또는 재생용 화장료 조성물
CN114984054A (zh) 2015-06-12 2022-09-02 哈德逊医学研究中心 一种治疗方法
WO2017015622A2 (en) * 2015-07-22 2017-01-26 Scholar Rock, Inc Gdf11 binding proteins and uses thereof
PL3328416T3 (pl) 2015-07-30 2024-05-20 Biomarin Pharmaceutical Inc. Zastosowanie wariantów peptydu natriuretycznego typu c w leczeniu dysplazji szkieletowej
WO2017117585A1 (en) * 2015-12-30 2017-07-06 The Regents Of The University Of California Methods for enhanced production and isolation of cell-derived vesicles
WO2017122095A1 (en) 2016-01-15 2017-07-20 Orbsen Therapeutics Limited Sdc-2 exosome compositions and methods of isolation and use
KR101773041B1 (ko) 2016-01-26 2017-08-31 한양대학교 에리카산학협력단 줄기세포로부터 추출된 엑소좀을 함유하는 베이지 지방세포 분화 유도용 조성물
KR20180003344A (ko) * 2016-06-30 2018-01-09 (주)아모레퍼시픽 효모 유래 세포밖 소포체를 포함하는 항염 조성물
TW202309276A (zh) 2016-08-03 2023-03-01 美商武田疫苗股份有限公司 用於與經改良之調配物一起穩定黃病毒的組成物及方法
RU2019110875A (ru) 2016-09-13 2020-10-15 Аллерган, Инк. Небелковые композиции клостридиального токсина
US11166915B2 (en) * 2016-09-16 2021-11-09 Leukocare Ag Method for obtaining efficient viral vector-based compositions for vaccination or gene therapy
US20190231694A1 (en) * 2016-10-12 2019-08-01 Agency For Science, Technology And Research Method for lyophilising an exosome
IT201600109148A1 (it) * 2016-10-28 2018-04-28 Pharmaexceed Srl Processo per isolare e liofilizzare vescicole extracellulari
CN106701672B (zh) 2017-01-10 2018-02-13 广东康仹生命科技有限公司 一种人源脂肪间充质干细胞因子及其制备方法和用途
CN107006452A (zh) 2017-04-20 2017-08-04 深圳市赛欧细胞生物科技有限公司 一种人脐带间充质干细胞源外泌体冻干保存方法及其应用
EP3646877B1 (en) 2017-06-30 2023-12-06 Exocobio Inc. Composition comprising stem cell-derived exosome as effective ingredient for use in prevention or alleviation of pruritus
KR20190069301A (ko) 2017-12-11 2019-06-19 주식회사 엑소코바이오 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 민감성 피부의 예방, 억제, 완화 또는 개선용 화장료 조성물
KR101982657B1 (ko) 2018-04-30 2019-05-27 대한민국(환경부 국립생물자원관장) 테트라세라 로우레이리 추출물을 이용한 항염증용 조성물
KR102649069B1 (ko) 2018-05-31 2024-03-19 주식회사 엑소코바이오 줄기세포 유래의 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 안면 홍조 개선용 조성물
WO2020027466A1 (ko) 2018-07-28 2020-02-06 주식회사 엑소코바이오 엑소좀의 동결건조 방법

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090086397A (ko) * 2006-10-06 2009-08-12 에스씨아이엘 테크놀로지 게엠베하 약학적 응용을 위한 건조된 재구성 소포 형성
KR101018352B1 (ko) 2009-07-28 2011-03-04 동성제약주식회사 봉독을 유효성분으로 하는 여드름 예방 및 치료용 조성물
KR101623553B1 (ko) 2013-07-23 2016-05-23 동성제약주식회사 여드름 치료, 예방 또는 개선에 유효한 클로린 e6
KR20170082111A (ko) * 2016-01-05 2017-07-13 바이오센서연구소 주식회사 마스크팩에 장착되는 장치, 그를 포함하는 마스크팩 및 키트

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Asian J Beauty Cosmetol 2018; 16(1): 82-92 (2018.03.30)

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Publication number Publication date
KR102148011B1 (ko) 2020-08-25
JP2021526155A (ja) 2021-09-30
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