KR101555219B1

KR101555219B1 - 구절초, 속수자 및 해송자 추출 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101555219B1
Application number: KR1020140064905A
Authority: KR
Inventors: 이경은; 염종경; 윤석균; 김종광; 김한곤
Original assignee: 코스맥스 주식회사
Priority date: 2014-05-29
Filing date: 2014-05-29
Publication date: 2015-09-24

Abstract

본 발명은 구절초, 속수자 및 해송자 추출 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 구절초, 속수자 및 해송자의 추출 혼합물을 포함하는 피지 분비 억제 또는 여드름 증상 개선용 화장료 조성물의 경우, 3가지 원료가 시너지(synergy)적으로 SREBP1을 억제시킴으로써 피지 분비를 완화시켜 결과적으로 여드름 증상을 개선할 수 있다.

Description

구절초, 속수자 및 해송자 추출 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물{Cosmetic composition for inhibition of sebum secretion and acnes improvement comprising extracts mixture of Chrysanthemum zawadskii var. latilobum, Euphorbia lathyris and Pinus koraiensis}

본 발명은 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 구절초, 속수자 및 해송자 추출 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피지분비억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

보통 사춘기에 주로 발생하는 여드름은 범세계적인 일반적인 피부질환으로써 사춘기 청소년의 약 85% 이상에서 관찰되며 때로는 30대 이후까지 지속 되기도 한다.

일반적으로 여드름은 모낭의 피지선 샘 단위의 만성 염증질환으로서 면포, 구진, 고름물집, 결절, 유사낭 등 다양한 피부 변화를 수반하며, 그에 따른 후유증으로 노목한 흉터 또는 확대된 흉터를 남기기도 하므로 외모적인 문제와 함께 대인관계에 어려움을 주기도 한다.

이러한 여드름은 주로 피지선이 몰려 있는 안면, 목, 가슴, 등에 많이 발생하며 자모공이 좁아지거나 막혀 피지가 배출되지 못함으로써 발생하며, 피지선의 피지 분비가 늘어나거나, 모낭 입구가 막히면 여드름균의 증식이 활발하게 되어 여드름을 유발하는 것으로 알려져 있다.

상기한 여드름의 원인으로서는 여러 가지가 있지만 남성호르몬인 안드로겐(androgen)에 의한 피지분비과잉, 모낭벽의 과각화, 여드름 유발균인 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acne)의 증식으로 인한 모낭자극이 주요원인으로 파악되고 있다. 여드름 환자의 경우 안드로겐이 피지선을 자극하여 피지 분비를 증가시키고, 이렇게 증가된 피지들이 죽은 피부세포들과 엉키고 뭉쳐지게 되면서 모낭 입구를 막는 것으로 보고되어 있다(Eur J Dermatol, 2004, 14, 4-12).

피지선은 안드로겐을 생성하고 대사하는 기능을 가지고 있다. 이러한 안드로겐은 지질합성 관여하는 효소의 유전자 발현을 증가시킴으로 지질합성 경로를 촉진시키는데, 해당하는 효소로는 지방산 합성효소(fatty acid synthase(fas)), 아세틸-CoA 카르복실라아제(acetyl-CoA carboxylase (ACC)), 말산효소(malic enzyme), ATP-시트르산 분해효소(ATP-citrate lyase), 스테롤 조절인자(sterol-regulatory element binding protein (SREBP)) 등이 있다. 이런 지질대사 관련 효소들은 공통적으로 SRE라는 전사조절부위를 가지며, 안드로겐은 SRE(sterol regulatory element)에 결합하는 SREBP(sterol regulatory element-binding proteins)를 조절함으로써 위의 효소들을 조절하는 것으로 보고되고 있다(Proc. Natl. Acad. Sci., 1997, 94, 12975-12980).

여기서, 스테롤 조절인자 결합단백질(sterol regulatory element-binding proteins(SREBP))은 스테롤에 의한 유전자의 전사조절부위인 SRE(sterol regulatory element)에 결합하여 콜레스테롤과 지방산을 포함한 지질생성을 조절한다. 상기한 SREBP는 3가지 이성질체로 존재하며, SREBP-1a와 SREBP-1c는 하나의 유전자로부터 유래 되어, 다른 전사개시위치(trasncription initiation site)를 사용한다. 나머지 SREBP-2는 다른 유전자에서 전사되어 콜레스테롤의 항상성에 관여하고 위의 두 가지 이성질체와 비슷한 기능을 한다. 따라서 지질합성에 관여하는 SREBP의 생성억제는 피지생성 억제에 중요한 요인으로 알려져 있다(Journal of Investigative Dermatology, 2006, 126, 1226-11232).

근래 들어 여드름은 외부적 스트레스, 호르몬 이상 경향 및, 환경오염의 증가 및 심화 등으로 인하여 청소년뿐만 아니라 성인에게서도 유발되는 경향이 해마다 증가하고 그 정도 또한 현저해지는 경향을 나타내고 있기 때문에 여드름의 예방과 치료에 대한 다양한 방법들이 시도되어 왔다.

종래, 여드름 피부를 개선하기 위한 전형적인 시도로서, 흡착 파우더를 이용하여 생성된 피지를 제거하거나 살리실산, 삼염소산 및 트리하이드록시 팔미트산을 화장료 조성물에 적용함으로써 모공을 막고 있는 각질을 제거해 주거나 여드름균의 증식을 억제함으로써 여드름을 예방 및 치료하는 방법과 달맞이꽃 종자 추출물을 이용하여 5알파-리덕타아제(5α-reductase)의 활성을 억제함으로써 피지 분비를 억제시키거나, 프로피오니박테리움 아크내에 항균력을 가진 송화가루 추출물을 적용하여 여드름을 예방하는 방법 등이 제안되어 있지만, 여전히 충분히 만족스러운 것은 못되었다.

구절초(Chrysanthemum zawadskii var . latilobum)는 국화과에 속하는 다년생 초본으로 생약명은 선모초 라고도 하며, 개화기는 8-10월이고 높이는 50 cm 내외이다. 구절초는 전국 산지와 고원지에서 자생하고 일본, 중국, 러시아 등지에서 자라며 줄기와 잎은 건위제로 전초와 꽃은 폐렴, 기관지염, 기침, 감기, 인두염 및 고혈압 등에 사용되어왔다. 이외에도 구절초 추출물은 항알레르기 효과(한국등록특허 10-0543074), 골관절질환 예방 및 치료 효과(한국등록특허 10-1183573) 등이 보고되고 있다.

속수자(Euphorbia lathyris)는 지중해와 서남아시아가 원산지인 약용식물이다. 높이는 1m 내외이며 털이 없고, 잎은 밑에서는 어긋나고 위에서는 마주난다. 꽃은 여름에 피고, 열매는 둥글고 지름 1cm 정도이며, 3개의 능선이 있다. 한방에서는 이 종자를 속수자라고 하며, 기름을 짜고 난 찌꺼기를 이뇨제, 부종, 복수, 월경정지 및 식중독 등에 사용된다. 이외에도 5알파-리덕테이즈의 활성 억제를 통한 속수자 추출물의 피지 억제 효과(한국등록특허 10-0310613), 미백효과(일본특허 제08175954호) 및 이의 지표 성분의 미백용 조성물(한국등록특허 10-0336982)등이 일려져 있다.

해송자(Pinus koraiensis)는 잣나무의 종자를 일컫는 것으로 잣이라고 하고 일명 오엽송, 송자, 백자라 부르기도 한다. 이들 잣나무는 우리나라 전역, 중국, 일본, 시베리아 등에서 자생한다. 잣은 잣나무 및 다른 소나무와 같이 솔방울 속에서 생기고, 지름 6~10cm, 길이 9~15cm 정도의 솔방울 속에 평균 100알 정도 결실된다. 이는 장을 부드럽게 하는 효능이 있고, 마른기침, 풍비 및 변비 치료에 사용된다. 또한 활성산소 소거 효과, 피부 노화 방지 및 피부 보습용 화장료 조성물(한국등록특허 10-1252548) 및 해송자를 포함한 복합 추출물의 미백 화장료 조성물(한국등록특허 10-0898306)등이 제안되고 있다.

그러나 상기한 화장료 조성물 또는 여드름 치료용 조성물의 그 어느 것도 본 발명과 같은 천연물의 특정한 조합에 따른 추출 혼합물을 이용함으로써 피지 분비 관련 효소의 생성을 시너지(synergy)적으로 억제함으로써 피지 분비 억제 효과를 가지는 여드름 증상 개선용 화장료 조성물을 암시하거나 시사하고 있지 못하다.

따라서 피지 생성을 효과적으로 억제할 수 있는 안전한 천연추출물을 발굴하여 이를 화장료의 유효성분으로 이용함으로써 여드름 증상의 효과적인 개선 내지 경감과 예방을 도모할 수가 있는 화장료 조성물의 개발이 오랜 기간 당업계에 요망되어 왔다.

이에, 본 발명자들은 상기 종래 기술들의 문제점들을 극복하기 위하여 연구한 결과, 구절초, 속수자 및 해송자의 추출 혼합물을 포함하는 피지 분비 억제 또는 여드름 증상 개선용 화장료 조성물의 경우, 3가지 원료가 시너지(synergy)적으로 SREBP1을 억제시킴으로써 피지 분비를 완화시켜 결과적으로 여드름 증상을 개선 할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.

KR

10-0543074

B

KR

10-0310613

B

KR

10-1252548

B

따라서, 본 발명의 주된 목적은 SREBP1을 억제시킴으로써 피지 분비를 완화 시켜 결과적으로 여드름 개선 효과를 갖는 구절초, 속수자 및 해송자 추출 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 구절초, 속수자 및 해송자 추출 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명은 여드름 발생에 있어 주요 원인이 되는 피지생성에 관여하는 SREBP-1의 과발현을 저해하고 그 대사과정을 억제하여 궁극적으로 피지선에서의 피지생성을 저해하는 효과를 가지는 것으로, 본 발명자들에 의해 규명된 구절초, 속수자 및 해송자 추출 혼합물을 화장료에 적용함으로써 여드름 증상의 완화 내지 경감, 또는 예방 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다. 대한등록특허 10-0310613에는 속수자의 단독 추출물에 대한 피지 억제 또는 여드름 치료용 화장료 조성물에 대해 기재하고 있으나, 본원발명과 같이 속수자, 구절초 및 해송자의 추출 혼합물에 대한 피지 억제 또는 여드름 개선 시너지 효과에 대해서는 어디에도 기재되어 있지 않으며 이에, 본 발명자들은 상기 추출 혼합물이 피지 억제 또는 여드름 개선에 시너지 효과를 나타내는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명에 있어서, 상기 추출 혼합물은 구절초 : 속수자 : 해송자의 함량이 1~6 : 1~6 : 1~6의 중량비로 혼합되는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 구절초, 속수자 및 해송자의 단독 추출물을 각각 1~6의 중량비로 혼합한 추출물의 형태이며, 또한 상기 혼합 추출물의 형태 이외에도 구절초의 줄기와 잎 20~60중량%, 해송자 20~60중량% 및 속수자 20~60중량%로 이루어지는 혼합물을 추출하여 얻은 혼합 추출물의 형태일 수도 있으며, 상기한 구절초의 줄기와 잎, 속수자 및 해송자의 혼합 중량은 해당 비율에 따라 각각의 분말을 혼합한 다음, 이로부터 얻어지는 혼합 추출물일 수 있다. 즉, 본 발명에 있어서는 상기 기재한 바와 같이 3가지 원료를 함께 혼합하여 용매 추출하는 것이 효율성 측면에서 바람직하지만, 경우에 따라서 이들 3가지 원료 각각에 대하여 동일한 용매 및 용매량과 추출 조건으로 추출액을 얻은 다음, 이를 등(等)량으로 혼합하거나 또는 상기한 바와 같이 해당하는 중량% 비율로 혼합하여 사용할 수 있으며, 상기한 추출액은 농축액의 형태 또는 동결 건조시켜 분체화 시킨 형태일 수도 있다.

상기 구절초의 줄기와 잎, 속수자 및 해송자는 음건(陰乾) 또는 풍건(風乾)시킨 재료를 파쇄하여 사용하며, 바람직하게는 추출 효율을 높이기 위하여 파쇄하여 분체화(分體化) 시킨 것을 사용한다.

본 발명의 실험예에 따르면, 구절초:속수자:해송자의 다양한 비율에 따른 SREBP1 저해 효과를 확인한 결과, 상기 세 가지를 혼합한 모든 비율에서 SREBP1의 저해 효과를 나타냈다. 이러한 결과로 볼 때, 본 발명의 추출 혼합물은 어떠한 비율에서도 시너지 효과를 나타내어 SREBP1를 저해함으로써 피지를 억제하여 여드름을 개선하는 효과를 나타낼 수 있음을 의미한다(실험예 2 및 도 2).

본 발명에 있어서, 상기 추출 혼합물은 종래에 사용되어진 어떠한 용매로도 추출될 수 있으며, 바람직하게는 물, 탄소수 1 내지 4의 저가 알코올, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜 또는 이들의 혼합용매로 추출되는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물에 유효 성분으로서 함유되는 상기한 추출 혼합물을 얻기 위하여 사용될 수 있는 추출 용매로서는 정제수, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 메탄올, 에탄올, 프로필알코올, 부틸알코올, 글리세린, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜을 포함하는 용매군 중에서 선택된 하나의 순수 용매 또는 둘 이상이 조합된 혼합용매를 이용할 수 있으나, 이는 본 발명에 있어서 제한적인 것은 아니다. 추출 용매의 첨가량은 혼합 원료의 전체 부피 대비 1 내지 20 배의 부피량이면 바람직하다.

보다 구체적으로는 본 발명의 화장료 조성물에 포함하는 상기의 추출 혼합물은 구절초의 줄기와 잎, 속수자 및 해송자를 분쇄 또는 파쇄하여 분말을 만들고, 상기 전술한 추출 용매를 침적하여 24 내지 72 시간 동안 실온에서 추출한다. 이어 얻어진 추출 여액을 여과하고, 감압 건조하여, 농축 혼합 추출액을 얻거나 또는 이를 동결 건조하여 분체를 수득한다.

상기 추출 혼합물은 조성물 총 중량 대비 0.001 내지 30중량% 함유될 수 있으며, 바람직하게는 0.01 내지 10중량%로 함유하는 것을 특징으로 한다. 상기 범위에서 0.001 중량% 미만일 경우 여드름 개선 효과가 미약하게 될 우려가 있어 바람직하지 못하며, 역으로 30중량%를 초과하는 것은 경제성 측면에서 바람직하지 못할 수 있다.

본 발명에 있어서, 추출 혼합물은 스테롤 조절인자 결합 단백질(sterol regulatory element binding protein)을 저해하는 것을 특징으로 한다.

스테롤 조절인자 결합단백질(sterol regulatory element-binding proteins(SREBP))은 스테롤에 의한 유전자의 전사조절부위인 SRE(sterol regulatory element)에 결합하여 콜레스테롤과 지방산을 포함한 지질생성을 조절한다. 따라서 지질합성에 관여하는 SREBP1의 생성억제는 피지생성 억제에 중요한 요인이다. 본 발명의 추출 혼합물은 상기 SREBP1를 저해함으로써 피지를 억제하고 여드름을 개선한다.

본 발명의 실험예에 따르면, 단독 추출물(비교예 1) 및 추출 혼합물(실시예 1)의 SREBP1의 저해 효과를 확인하였다. 그 결과, 본원 발명의 추출 혼합물이 단독 추출물보다 더 뛰어난 SREBP1 저해 효과를 나타내었다. 이러한 결과로 볼 때, 본 발명의 추출 혼합물의 시너지 효과는 SREBP1를 저해함으로써 피지 생성을 억제하여 여드름을 개선할 수 있음을 의미한다(실험예 1 및 도 1).

본 발명에 있어서, 상기 추출 혼합물은 제형화 시, 제형에는 특별한 제한이 없으며, 바람직하게는 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 보습 크림, 영양 에센스, 젤 로션 및 연고로 구성된 군에서 선택된 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 화장품 조성물은 담체 이외에 다른 보조제를 포함할 수 있는데, 예를 들면 보존제, 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 실험예에 따르면, 본 발명의 조성물을 함유하는 화장료 조성물을 통해 피지 분비 억제 효능을 확인하였다. 그 결과, 본 발명의 추출 혼합물을 함유하는 화장료 조성물의 경우 단독 추출물보다 효과적으로 피지 분비를 감소시켰다. 이러한 결과로 볼 때, 본 발명의 추출 혼합물이 화장료 조성물로 함께 함유되었을 경우 피지를 억제하여 여드름을 개선할 수 있음을 알 수 있다.

본 발명에 따른 구절초, 속수자, 해송자 추출 혼합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 SREBP-1 발현을 효과적으로 억제하여 궁극적으로 피지 분비 감소를 초래하게 되므로, 결과적으로 우수한 피부 트러블 예방, 여드름 예방 및 개선 효과를 가진다.

도 1은 덱사메타손에 의해 지질합성이 과잉 생성된 피지선 세포에서 구절초, 속수자, 해송자 단독 추출물 및 그 추출 혼합물 처리 시 SREBP-1a 및 SREBP-1c의 유전자 발현 억제 정도를 나타내는 실험예 1의 결과에 대한 그래프이다.
도 2는 덱사메타손에 의해 지질합성이 과잉 생성된 피지선 세포에서 구절초, 속수자, 해송자의 조합 비율별 추출 혼합물 처리 시 SREBP-1a 및 SREBP-1c의 유전자 발현 억제 정도를 나타내는 실험예 2의 결과에 대한 그래프이다.
도 3는 덱사메타손에 의한 지질합성이 과잉 생성된 피지선 세포에서 구절초, 속수자, 해송자 단독 추출물 및 그 추출 혼합물 처리 시 세포 내 지질합성의 억제 정도를 나타나는 실험예 3의 결과이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

비교예 1: 구절초, 속수자 및 해송자의 단독 추출물

구절초의 전초, 속수자 및 해송자는 경동시장(한국, 서울)에서 구입하여 분말화 한 후 각각 100 g 씩 취하여 각각 별개의 용기에 넣고, 추출용매로서 70중량% 에탄올 수용액 1 L에 침적하여 24 시간 동안 실온에 방치하여 추출액을 얻었다. 얻어진 추출액을 여과지를 이용하여 여과를 한 다음 여액을 회전식 증발 건조기로 감압 농축하여 구절초 9.6 g, 속수자 7.7 g, 해송자 16.7g의 추출물을 얻었다.

실시예 1: 구절초, 속수자 및 해송자의 추출 혼합물 제조

상기 비교예 1에서 얻은 구절초, 속수자 및 해송자 단독 추출물을 하기의 표1에 나타난 바와 같이 혼합하여 추출 혼합물을 얻었다.

상기의 얻어진 추출 혼합물을 용해제로서 DMSO(Dimethyl sulfoxide)에 10 mg/㎖의 농도로 용해시켜 이하의 실험예 1~3에 사용하였다.

	원료명(중량%)
조합비율	구절초	속수자	해송자
1:1:1	33.3	33.3	33.3
2:1:1	50.0	25.0	25.0
1:2:1	25.0	50.0	25.0
1:1:2	25.0	25.0	50.0
3:1:1	60.0	20.0	20.0
1:3:1	20.0	60.0	20.0
1:1:3	20.0	20.0	60.0

실험예 1: SREBP -1 발현 억제 평가

구절초, 속수자, 해송자의 단독추출물과 추출 혼합물의 지질합성 저해 효과를 평가하기 위해 사람의 피지선 세포주(Human immortalized sebocyte)에서의 SREBP-1a 및 SREBP-1c의 발현량을 측정하였다.

세포를 6웰 플레이트(well plate)에 분주하고 배양한 후, 각 웰에 유리지방산 송치 혈청 알부민(fatty acid free bovine serum albumin), 소 뇌하수체 추출물, 인간 상피 성장인자(human epidermal growth factor(hEGF)), 글루타맥스(glutamax), 젠타마이신(gentamicin)을 첨가한 배지로 24 시간 더 배양하였다.

24 시간 후, 인산 완충 식염수 용액(PBS)으로 세척하고, 덱사메타손(dexamethasone)과 함께 비교예 1에서 얻은 구절초, 속수자, 해송자의 단독추출물 및 실시예 1에서 얻은 추출 혼합물 등량 비율로 각각 10㎍/㎖가 되도록 위의 배지에 희석시켜 각 웰에 첨가하였다.

이후 24 시간 더욱 배양하고, 세포내 mRNA를 추출하여 cDNA를 합성하였다. 합성된 cDNA를 타겟 주형(primer) 및 시아닌 염료인 SYBR 그린(green) 마스터 혼합물(master mix)을 사용하여 실시간(real-time) 중합효소 연쇄반응(PCR)을 실시하여 최종적으로 SREBP-1a 및 SREBP-1c의 유전자 발현 정도를 평가하였다.

그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 덱사메타손에 의해 과발현된 SREBP-1a 및 SREBP-1c이 각 원료별로 그 억제됨을 확인할 수 있었고, 구절초, 속수자 및 해송자의 추출 혼합물의 경우 가장 높고 현저한 억제능을 확인할 수 있었다.

실험예 2: 혼합 비율별 SREBP -1 발현 억제 평가

상기의 실험예 1에 기술한 방법과 동일한 방법으로 배양 한 후, 인산 완충 식염수 용액(PBS)으로 세척하고, 덱사메타손(dexamethasone)과 함께 실시예 1에서 얻은 구절초, 속수자, 해송자 추출 혼합물을 표 1과 같은 비율별로 혼합하여 최종 농도 10 ㎍/㎖가 되도록 위의 배지에 희석시켜 각 웰에 첨가하였다.

이후 24 시간 더욱 배양하고, 상기의 실험예 1과 동일한 방법으로 실시간(real-time) 중합효소 연쇄반응(PCR)을 실시하여 최종적으로 SREBP-1a 및 SREBP-1c의 유전자 발현 정도를 평가하였다.

그 결과, 도 2에 나타낸 바와 같이, 덱사메타손에 의해 과발현된 SREBP-1a 및 SREBP-1c이 각 비율별 혼합물에서 그 억제됨을 확인할 수 있었고, 그 중 3 가지 원료에 대해 동량으로(1:1:1) 조합한 추출 혼합물에서 가장 높고 현저한 억제능을 확인 할 수 있었다.

실험예 3: 세포내 지질합성 저해효과 평가

상기의 실험예 1에 기술한 방법과 동일한 방법으로 세포를 배양한 후, 실험을 위해 4 쳄버 슬라이드(chamber slides)에 세포를 분주하고, 2일간 배양한 후에 덱사메타손과 비교예 1 및 실시예 1에서 만들어진 단독 추출물 및 추출 혼합물 10㎍/㎖을 첨가한 후 24 시간 더 배양하였다. 이후 PBS로 세척하고 10% 포르말린(formalin)으로 1시간 동안 세포를 고정 시킨 후, 60% 이소프로판올로 5분간 세척하고 오일 레드(Oil red O) 용액을 각 웰에 첨가하였다. 1시간 염색 후 곧바로 PBS로 3회 세척한 후 헤마토자일린(hematoxylin)으로 2분간 세포를 염색하고 바로 PBS로 4회 세척하고 슬라이드를 건조시켰다. 건조 후 마운팅 솔루션(mounting solution)을 떨어뜨려 고정 시키고 광학 현미경을 이용하여 세포 내 염색된 지질을 확인하였다.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이 덱사메타손에 의해 증가된 지질의 양이 추출 혼합물 10㎍/㎖ 처리 시 확연하게 감소하는 것을 확인할 수 있었다.

제형예 1 및 비교 제형예 : 영양에센스의 제조

하기의 표 2와 같은 조성성분 및 조성비로 영양에센스를 제조하였으며, 각각 제형예 1 및 비교 제형예로 하였다.

성분(함량: 중량%)	제형예 1	비교제형예
구절초, 속수자, 해송자 추출 혼합물	1.0	-
글리세린	7.0	7.0
부틸렌글라이콜	3.0	3.0
글리세릴스테아레이트/피이지-100스테아레이트	1.0	1.0
폴리솔페비트60	0.5	0.5
소르비탄세스퀴올리에이트	0.5	0.5
스쿠알란	3.0	3.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드	5.0	5.0
쉬어버터	2.0	2.0
스테아릴 알코올	0.5	0.5
스테아린산	0.5	0.5
카르복실비닐폴리머	0.2	0.2
아르기닌	0.2	0.2
방부제, 향료	적량	적량
정제수	잔량	잔량

실험예 4: 피지 분비 억제 효능 평가

상기 실험예 1 및 2의 시험물질의 피지 분비 억제 효과를 확인하고자 피검자를 선별하여 각 군당 6명을 대상으로 하기의 방법에 의하여 평가하였다.

1) 매일 저녁 세안 후, 각 시험군 별로 제형예 1 또는 비교 제형예의 영양 에센스를 한 달간 사용하였다.

2) 세안 후 30분 동안 항온 항습실에서 피지측정기(sebumeter)를 이용하여 이마의 피지량을 측정하였다.

3) 제형예 1 및 비교 제형예의 영양에센스 사용 전에 측정한 피지량을 초기값으로 지정하여 제형예 1 또는 비교 제형예의 영양에센스를 지속적으로 사용하고, 1주 간격으로 2회 피지량을 측정하였다.

구절초, 속수자, 해송자 추출 혼합물이 함유된 영양에센스(제형예 1)의 피지 분비 억제 효과(㎍/cm2·hr, N=6, 평균)에 대한 결과를 하기의 표 3에 나타낸다.

측정부위	이마					뺨
측정시기	초기	1주	2주	3주	4주	초기	1주	2주	3주	4주
제형예 1	103.1	96.9	91.5	86.7	78.8	80.4	76.5	73.3	68.7	63.5
비교제형예	103.8	99.7	98.8	97.5	97.3	81.7	79.4	78.5	76.9	76.3

상기의 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 추출 혼합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 피지 분비를 효과적으로 감소시키는 효과가 있음을 확인 할 수 있었다.

제형예 2: 화장수

상기 실시예 1에서 얻은 추출 혼합물을 함유하는 화장수를 하기의 표 4에 나타낸 조성 성분 및 조성비에 따라 통상적인 방법으로 제조하였다.

성분	함량(중량%)
구절초, 해송자, 속수자 추출혼합물	1.0
글리세린	5.0
에탄올	3.0
폴리옥시에칠렌경화피마자유	0.5
폴리솔페비트80	0.5
부틸렌글라이콜	3.0
카르복실비닐폴리머	0.5
방부제, 향료	적량
정제수	잔량

제형예 3: 보습크림의 제조

실시예 1에서 얻은 추출 혼합물을 함유하는 보습 크림을 하기의 표 5에 나타낸 바와 같은 조성 성분 및 조성비에 따라 통상적인 방법으로 제조하였다.

성분	함량(중량%)
구절초, 속수자, 해송자 추출혼합물	1.0
글리세린	7.0
부틸렌글라이콜	5.0
글리세릴스테아레이트/피이지-100스에아레이트	2.0
폴리솔베이트60	0.5
소르비탄 스테아레이트	0.5
피토스쿠알란	5.0
호호바 오일	3.0
카프릴릭/카프릭 트리그리세라이드	10.0
알로에 버터	3.0
밀납	1.0
스테아릴 알코올	0.5
베헤릴 알코올	0.5
스테아린산	0.5
카르복실비닐폴리머	0.2
잔탄검	0.2
아르기닌	0.3
디메치콘	0.5
베타글루칸	0.2
방부제, 향료	적량
정제수	잔량

Claims

구절초, 속수자 및 해송자 추출 혼합물을 유효성분으로 함유하는 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출 혼합물은 구절초 : 속수자 : 해송자의 함량이 1~6 : 1~6 : 1~6의 중량비로 혼합되는 것을 특징으로 하는 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출 혼합물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저가 알코올, 글리세린, 프로필렌 글리콜, 부틸렌 글리콜 또는 이들의 혼합용매로 추출되는 것을 특징으로 하는 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출 혼합물은 조성물 총 중량 대비 0.001 내지 30중량% 함유하는 것을 특징으로 하는 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 추출 혼합물은 스테롤 조절인자 결합 단백질(sterol regulatory element binding protein)을 저해하는 것을 특징으로 하는 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 보습 크림, 영양 에센스, 젤 로션 및 연고로 구성된 군에서 선택된 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피지 분비 억제 또는 여드름 개선용 화장료 조성물.