KR20200013060A - 플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법 - Google Patents

플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법 Download PDF

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마코토 오제키
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타이요 카가꾸 가부시키가이샤
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Abstract

람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를, 시클로덱스트린의 존재하, 람노시다아제 활성을 갖는 효소로 처리하여 람노오스를 탈리하는 탈리 공정을 포함하는, 플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법. 본 발명의 제조 방법에 의하면, 물에 대한 용해성이 우수한 플라보노이드 포접 화합물이나 플라보노이드 배당체 조성물을 효율적으로 생산할 수 있고, 의약품, 음식품, 건강 식품, 특정 보건용 식품, 및 화장품 등의 분야에 있어서 적합하게 이용할 수 있다.

Description

플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법
본 발명은, 플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법, 플라보노이드 배당체 조성물의 제조 방법, 플라보노이드 포접 화합물, 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물, 이소퀘르시트린 배당체 조성물, 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물, 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물, 이들의 화합물 또는 조성물을 포함하는 음식품, 의료품, 또는 화장품, 및 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드의 용해성을 향상시키는 방법에 관한 것이다.
플라보노이드에는, 산화 방지 효과가 있기 때문에, 식품의 향미 열화 방지, 색소의 퇴색 방지 등에 사용되고 있고, 일본의 식품 첨가물, 기존 첨가물, 산화 방지제 리스트에는, 플라보노이드를 유효 성분으로 하고 있는 카테킨, 효소 처리 루틴, 루틴 추출물, 차 추출물, 소귀나무 추출물 등이 많이 보고되어 있다. 또 생리 작용으로서, 플라보노이드는, 항종양, 콜레스테롤 저하, 강압, 혈당 하강, 체지방 감소 등이 보고되어 있고, 의약품, 음식품, 건강 식품, 특정 보건용 식품, 및 화장품 등에도 많이 사용되고 있다.
플라보노이드는, 야채, 과실, 차 등에 포함되어 약 3000 종류 이상이 알려져 있지만, 물 난용해성의 것이 많기 때문에, 청량 음료수, 수제 (水劑) 등, 물 용해 용이성 필요해지는 식품, 음료, 의약품 및 화장품에 사용하는 것이 어렵다. 예를 들어, 플라보노이드에서 대표적인 헤스페리딘이나, 루틴의 물에 대한 용해도는, 0.01 ％ 이하이기 때문에, 청량 음료수, 화장수 등에 대한 사용은 곤란하다.
난용해성 플라보노이드는 람노시드 구조를 갖는 것과 람노시드 구조를 갖지 않는 것으로 나눌 수 있지만, 람노시드 구조를 갖는 루틴, 헤스페리딘, 나린긴보다, 람노오스가 탈리한 이소퀘르시트린, 헤스페레틴-7-글루코사이드, 나린게닌, 나린게닌-7-글루코사이드 쪽이 래트에서의 체내 흡수성이 높아지는 것이 보고되어 있다 (비특허문헌 1 ∼ 3).
또, 난용성 플라보노이드를 시클로덱스트린으로 포접시키는 것이나, 난용성 플라보노이드를 배당체화시킴으로써 체내 흡수성이 향상하고, 생리 활성을 효과적으로 나타내는 것이 알려져 있다. 포접 화합물에 대해서는, 예를 들어, 이소퀘르시트린 (1M)·γ-시클로덱스트린 (5M) 포접 화합물이, 이소퀘르시트린보다 인간에서의 체내 흡수율이 높아지는 것이나 (특허문헌 1), 마우스 실험에서, 헤스페레틴·β-시클로덱스트린 포접 화합물 등이, 헤스페레틴보다 체내 흡수성 (AUC0-9 시간) 이 높아져, 알레르기 반응 억제 작용, 혈류 개선 작용, 냉한 체질 개선 작용의 효과가 높아지는 것이나 (특허문헌 2), 나린게닌·하이드록시프로필β-시클로덱스트린 포접 화합물이, 나린게닌과 비교하여 체내 흡수성 (래트) 이 상승하고, VLDL (very low lipoprotein) 을 감소시키고, 글루코오스 클리어런스의 비율을 증가시키는 것 등이 보고되어 있다 (비특허문헌 4). 배당체화에 대해서는, 예를 들어, 마우스의 항알레르기 효과가, 「효소 처리 루틴 ＜ 이소퀘르시트린 ＜ 효소 처리 이소퀘르시트린」 의 순서가 되어, 람노오스를 제거하고, 또한 수용성의 효소 처리 이소퀘르시트린이 가장 효과를 나타내는 것이 보고되어 있다 (비특허문헌 5).
상기 문헌 외에, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드로부터 람노오스를 탈리하는 방법으로는, 예를 들어, 특허문헌 3 ∼ 6 에 개시되어 있다. 난용성 플라보노이드를 시클로덱스트린으로 포접하는 방법으로는, 예를 들어, 특허문헌 2, 7, 8 에 개시되어 있다. 난용성 플라보노이드를 배당체화하는 방법으로는, 예를 들어, 특허문헌 9, 10 에 개시되어 있다. 그 외, 특허문헌 11 에는, 난용성 플라보노이드를 물 용해 용이성으로 하는 방법으로서, 수성 매체 중에 난용성 플라보노이드와 대두 사포닌 및/또는 말로닐 이소플라본 배당체 조성물을 공존시킴으로써 가용화하는 방법이 개시되어 있다.
또 난용성 플라보노이드의 용해성을 개선하는 방법으로서, 난용성 플라보노이드와 물 용해 용이성 플라보노이드 배당체를 조합하는 것을 특징으로 하는 수용성 개선방법 (특허문헌 3 ∼ 4, 특허문헌 12), 난용성 플라보노이드-β-시클로덱스트린과, 글리코실헤스페리딘을 함유하는 것을 특징으로 하는 수용성 플라보노이드가 개시되어 있다 (특허문헌 8).
일본 특허공보 제5002072호 일본 특허공보 제5000884호 일본 특허공보 제4902151호 일본 특허공보 제3833775호 일본 특허공보 제4498277호 일본 특허공보 제5985229호 일본 특허공보 제3135912호 일본 특허공보 제5000373호 일본 특허공보 제4202439호 일본 특허공보 제3989561호 일본 공개특허공보 2011-225586호 일본 공개특허공보 평7-10898호
British Journal of Nutrition, 102, 976-984, 2009 Biological & Pharmaceutical Bulletin, 32 (12), 2034-2040, 2009 American Journal of Physiology : Gastrointestinal and Liver Physiology, 279, 1148-1154, 2000 PL0S ONE (4), e18033, 2011 Journal of natural Medicines, Oct, 67 (4), 881-6, 2013
그러나, 상기 선행 기술 문헌에 개시되는 제조 방법은 생산 효율이 좋은 것이라고는 할 수 없고, 또, 얻어지는 플라보노이드의 물에 대한 용해성을 충분히 만족하는 것은 아니고, 추가적인 개량이 요망되는 바이다.
본 발명의 과제는, 물에 대한 용해성이 우수한 플라보노이드 포접 화합물 및 플라보노이드 배당체 조성물의 간편하고 효율적인 제조 방법을 새롭게 제공하는 것이다. 또, 물에 대한 용해성이 우수한 플라보노이드 포접 화합물, 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물, 이소퀘르시트린 배당체 조성물, 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물, 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물, 이들의 화합물 또는 조성물을 포함하는 음식품, 의료품, 또는 화장품, 및 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드의 용해성을 향상시키는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명은,
[1] 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를, 시클로덱스트린의 존재하, 람노시다아제 활성을 갖는 효소로 처리하여 람노오스를 탈리하는 탈리 공정을 포함하는, 플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법,
[2] [1] 기재의 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 포접 화합물을 당전이 효소로 처리하여 배당체화하는 배당체화 공정을 포함하는, 플라보노이드 배당체 조성물의 제조 방법,
[3] 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를, 시클로덱스트린의 존재하, 람노시다아제 활성을 갖는 효소로 처리하여 람노오스를 탈리하는 탈리 공정, 및 상기 탈리 공정을 거쳐 얻어진 플라보노이드 포접 화합물을 당전이 효소로 처리하여 배당체화하는 배당체화 공정을 포함하는, 플라보노이드 배당체 조성물의 제조 방법,
[4] 이소퀘르시트린이 γ-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 이소퀘르시트린과 상기 γ-시클로덱스트린의 몰비 (γ-시클로덱스트린/이소퀘르시트린) 가 0.9 ∼ 1.8 이고, 상기 이소퀘르시트린의 물에 대한 용해도가 2 ％ 이상인, 플라보노이드 포접 화합물,
[5] 이소퀘르시트린이 γ-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 이소퀘르시트린과 상기 γ-시클로덱스트린의 몰비 (γ-시클로덱스트린/이소퀘르시트린) 가 0.9 ∼ 4.0 이고, 상기 이소퀘르시트린의 물에 대한 용해도가 2.5 ％ 이상인, 플라보노이드 포접 화합물,
[6] 이소퀘르시트린이 β-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 이소퀘르시트린과 상기 β-시클로덱스트린의 몰비 (β-시클로덱스트린/이소퀘르시트린) 가 1.0 ∼ 3.0 이고, 상기 이소퀘르시트린의 물에 대한 용해도가 0.1 ％ 이상인, 플라보노이드 포접 화합물,
[7] 헤스페레틴-7-글루코사이드가 시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 헤스페레틴-7-글루코사이드와 상기 시클로덱스트린의 몰비 (시클로덱스트린/헤스페레틴-7-글루코사이드) 가 1.0 ∼ 3.0 이고, 상기 헤스페레틴-7-글루코사이드의 물에 대한 용해도가 0.01 ％ 이상인, 플라보노이드 포접 화합물,
[8] 나린게닌-7-글루코사이드가 β-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 나린게닌-7-글루코사이드와 상기 β-시클로덱스트린의 몰비 (β-시클로덱스트린/나린게닌-7-글루코사이드) 가 1.0 ∼ 3.0 이고, 상기 나린게닌-7-글루코사이드의 물에 대한 용해도가 0.01 ％ 이상인, 플라보노이드 포접 화합물,
[9] [4] ∼ [8] 어느 하나에 기재된 플라보노이드 포접 화합물과 람노오스를 포함하고, 상기 플라보노이드 포접 화합물과 상기 람노오스의 몰비 (람노오스/플라보노이드 포접 화합물) 가 0.8 ∼ 1.2 인, 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물,
[10] [4] ∼ [8] 어느 하나에 기재된 플라보노이드 포접 화합물과, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를 포함하고, 상기 플라보노이드 포접 화합물 중의 플라보노이드와 상기 난용성 플라보노이드의 몰비 (난용성 플라보노이드/포접 화합물 중의 플라보노이드) 가 0.001 ∼ 0.1 인, 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물,
[11] 하기 일반식 (1) 로 나타내는 화합물을 포함하는 이소퀘르시트린 배당체 조성물로서, 상기 배당체 조성물 중, n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 30 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 50 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상인, 이소퀘르시트린 배당체 조성물,
[화학식 1]
Figure pct00001
(일반식 (1) 중, Glc 는 글루코오스 잔기를, n 은 0 또는 1 이상의 정수를 의미한다)
[12] 하기 일반식 (2) 로 나타내는 화합물을 포함하는 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물로서, 상기 배당체 조성물 중, n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 30 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 50 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상인, 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물,
[화학식 2]
Figure pct00002
(일반식 (2) 중, Glc 는 글루코오스 잔기를, n 은 0 또는 1 이상의 정수를 의미한다)
[13]
하기 일반식 (3) 으로 나타내는 화합물을 포함하는 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물로서, 상기 배당체 조성물 중, n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 30 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 50 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상인, 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물,
[화학식 3]
Figure pct00003
(일반식 (3) 중, Glc 는 글루코오스 잔기를, n 은 0 또는 1 이상의 정수를 의미한다)
[14] [1] 기재의 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 포접 화합물, [2] 또는 [3] 기재의 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 배당체 조성물, [4] ∼ [8] 어느 하나에 기재된 플라보노이드 포접 화합물, [9] 또는 [10] 기재의 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물, [11] 기재의 이소퀘르시트린 배당체 조성물, [12] 기재의 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물, 및 [13] 기재의 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물로 이루어지는 군에서 선택되는 1 종 이상의 화합물 또는 조성물을 포함하는, 음식품,
[15] [1] 기재의 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 포접 화합물, [2] 또는 [3] 기재의 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 배당체 조성물, [4] ∼ [8] 어느 하나에 기재된 플라보노이드 포접 화합물, [9] 또는 [10] 기재의 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물, [11] 기재의 이소퀘르시트린 배당체 조성물, [12] 기재의 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물, 및 [13] 기재의 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물로 이루어지는 군에서 선택되는 1 종 이상의 화합물 또는 조성물을 포함하는, 의약품,
[16] [1] 기재의 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 포접 화합물, [2] 또는 [3] 기재의 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 배당체 조성물, [4] ∼ [8] 어느 하나에 기재된 플라보노이드 포접 화합물, [9] 또는 [10] 기재의 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물, [11] 기재의 이소퀘르시트린 배당체 조성물, [12] 기재의 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물, 및 [13] 기재의 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물로 이루어지는 군에서 선택되는 1 종 이상의 화합물 또는 조성물을 포함하는, 화장품, 그리고
[17] 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드와, [1] 기재의 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 포접 화합물 혹은 [4] ∼ [8] 어느 하나에 기재된 플라보노이드 포접 화합물을, 상기 플라보노이드 포접 화합물 중의 플라보노이드와 상기 난용성 플라보노이드의 몰비 (포접 화합물 중의 플라보노이드/난용성 플라보노이드) 가 0.1 ∼ 0.9 가 되도록 매체 중에서 혼합하는, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드의 용해성을 향상시키는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 의하면, 물에 대한 용해성이 우수한 플라보노이드 포접 화합물 및 플라보노이드 배당체 조성물의, 간편하고 효율적인 제조 방법이 새롭게 제공된다. 또, 물에 대한 용해성이 우수한 플라보노이드 포접 화합물, 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물, 이소퀘르시트린 배당체 조성물, 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물, 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물, 이들의 화합물 또는 조성물을 포함하는 음식품, 의료품, 또는 화장품, 및 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드의 용해성을 향상시키는 방법을 제공할 수 있다.
도 1 은, 실시예 39 의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
도 2 는, 실시예 40 의 HPLC 크로마토그램을 나타낸다.
본 발명자들이 상기 과제를 검토한 결과, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를 시클로덱스트린의 존재하에서 람노오스를 탈리함으로써, 람노오스 탈리와 동시에 플라보노이드 포접 화합물을 제조할 수 있고, 탈리 공정과 포접 공정을 따로 따로 실시하고 있던 종래법보다 효율적으로 제조할 수 있는 것을 알아내었다. 또한 의외로, 이러한 제조 방법으로 얻어진 플라보노이드 포접 화합물이, 종래법으로 제조한 플라보노이드 포접 화합물보다 물에 대한 용해성이 우수한 것을 알아내었다. 본 발명에 있어서는, 시클로덱스트린 외에 각종 고리형 올리고당을 동일하게 사용할 수 있다. 여기서, 고리형 올리고당이란, 단당이 고리형으로 이어진 화합물을 나타내고, 보다 구체적으로는, 시클로덱스트린, 사이클로덱스트란, 사이클로프룩탄, 사이클로아르타난, 클러스터 덱스트린 등이 예시된다. 이하의 설명에서는, 시클로덱스트린을 사용한 양태를 예로 하여 설명하지만, 본 발명은 이것에 한정되는 것이 아니라, 그 밖의 고리형 올리고당도 동일하게 사용할 수 있다.
본 발명의 플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법은, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를, 시클로덱스트린의 존재하, 람노시다아제 활성을 갖는 효소로 처리하여 람노오스를 탈리하는 탈리 공정을 포함한다.
탈리 공정은, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드로부터 람노오스를 탈리하여, 람노시드 구조를 갖지 않는 플라보노이드와 시클로덱스트린의 포접 화합물 (「플라보노이드 포접 화합물」 이라고도 칭한다) 을 얻는 공정이다. 탈리 공정은, 물 등의 용매 중에서 정치 (靜置), 또는 교반하면서 실시할 수 있고, 반응 중의 산화, 또는 갈변을 방지하기 위해서, 반응계의 헤드 스페이스의 공기를 질소 등의 불활성 가스로 치환해도 되고, 또 아스코르브산 등의 산화 방지제를 반응계에 첨가하는 것도 가능하다. 탈리 공정은, 반응액을 가열에 의해 효소 실활시키는 방법 등 공지된 방법에 의해 종료할 수 있다.
람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드로는, 플라보놀류, 플라바논류, 플라본류, 이스플라본류에서 선택되는 것을 들 수 있고, 플라보노이드 골격의 벤젠 고리에 하이드록시기가 1 개 이상, 바람직하게는 2 개 이상 결합하고, 또한 람노오스를 보유하는 구조를 갖는 것을 사용할 수 있다. 여기서 「난용성」 이란, 25 ℃ 에서의 물에 대한 용해도가 1.0 질량％ 이하, 바람직하게는 0.1 ％ 이하, 보다 바람직하게는 0.01 질량％ 이하인 것을 말한다. 구체적으로는, 루틴, 헤스페리딘, 나리루틴, 나린긴, 디오스민, 에리오시트린, 미리시트린, 네오헤스페리딘, 루테올린-7-루티노시드, 델피니딘-3-루티노시드, 시아니딘-3-루티노시드, 이소람네틴-3-루티노시드, 켐페롤-3-루티노시드, 아피게닌-7-루티노시드, 아카세틴-7-루티노시드 및 이들의 유도체 등을 들 수 있다. 유도체로는, 아세틸화물, 말로닐화물, 메틸화물 등을 들 수 있다.
람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드의 사용량은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 반응계 중, 바람직하게는 0.1 ∼ 20 질량％, 보다 바람직하게는 1 ∼ 15 질량％, 더욱 바람직하게는 2 ∼ 14 질량％ 로 할 수 있다. 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를 2 종 이상 사용하는 경우의 사용량은, 그 합계량을 가리킨다.
본 발명의 제조 방법에 사용되는 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를 함유하는 원료는, 특별히 정제될 필요는 없지만, 정제되는 것이 바람직하다. 상기 원료 중의 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드의 함량에 관해서는, 특별히 제한이 없고, 바람직하게는 5 ％ 이상이고, 보다 바람직하게는 20 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 50 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 80 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 90 ％ 이상의 것을 사용할 수 있다.
탈리 공정에 있어서 존재시키는 시클로덱스트린 (CD) 으로는, 특별히 제한은 되지 않지만, 보다 바람직하게는, β-시클로덱스트린 (β-CD), 분지 β-시클로덱스트린 (분기 β-CD), 및 γ-시클로덱스트린 (γ-CD) 으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 종 이상을 사용할 수 있다. 시클로덱스트린은, D-글루코오스가, α-1,4글리코사이드 결합에 의해 결합하여 고리형 구조를 취한 고리형 올리고당의 1 종으로, 7 개 결합하고 있는 것이 β-시클로덱스트린, 8 개 결합하고 있는 것이 γ-시클로덱스트린이 된다. 분지 β-CD 는, β-CD 에 1 개 이상의 글루코오스 잔기, 갈락토실기, 또는 하이드록시프로필기가 측사슬로서 연결한 것으로, 말토실β-CD (G2-β-CD), 하이드록시프로필-β-CD (HP-β-CD) 등이 있다. 또한, 「시클로덱스트린의 존재하」 란, 탈리 반응계 중에 시클로덱스트린이 포함된 상태인 것을 가리킨다.
존재시키는 시클로덱스트린의 양은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 반응계 중, 바람직하게는 0.01 ∼ 60 질량％, 보다 바람직하게는 1 ∼ 50 질량％, 더욱 바람직하게는 3 ∼ 40 질량％ 로 할 수 있다. 시클로덱스트린을 2 종 이상 사용하는 경우의 양은, 그 합계량을 가리킨다.
람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드에 대한, 시클로덱스트린의 몰비 (시클로덱스트린/플라보노이드) 는, 효율성의 관점에서, 바람직하게는 0.01 이상이고, 보다 바람직하게는 0.1 이상이고, 더욱 바람직하게는 0.9 이상이고, 더욱 바람직하게는 1.0 이상이고, 경제성의 관점에서, 바람직하게는 10.0 이하이고, 보다 바람직하게는 6.0 이하이고, 더욱 바람직하게는 4.0 이하이고, 더욱 바람직하게는 3.0 이하이다.
람노시다아제 활성을 갖는 효소로는, 그 기원에 한정은 없고, 동물 유래, 식물 유래, 미생물 유래 등의 모든 유래의 것으로 사용할 수 있다. 또한, 유전자 재조합 효소여도 된다. 또 당해 효소의 형태는 특별히 한정되지 않는다.
람노시다아제 활성을 갖는 효소의 구체예로는, 헤스페리디나아제, 나린기나아제, 및 β-글루코시다아제, 펙티나아제 등을 들 수 있다.
람노시다아제 활성을 갖는 효소의 사용량은, 사용하는 효소의 종류, 반응 조건, 원료의 람노시드 구조를 갖는 난용해성 플라보노이드류의 종류 등에 따라 상이하지만, 예를 들어, 헤스페리디나아제, 나린기나아제, 및 β-글루코시다아제의 경우, 람노시드 구조를 갖는 난용해성 플라보노이드류 1 g 에 대하여 0.01 ∼ 1000 U 인 것이 바람직하다. 반응 조건은, 사용하는 효소의 특성에 맞추어 반응 온도나 반응액의 pH 를 선택할 수 있지만, pH 3 ∼ 7 로 하는 것이 바람직하고, pH 3.5 ∼ 6.5 로 하는 것이 더욱 바람직하다. 또, 람노시드 구조를 갖는 난용해성 플라보노이드류를 알칼리역에서 용해 후에 pH 7 이하로 효소 반응할 수도 있다. 반응계에 사용되는 용매로는 물 매체를 들 수 있다. 본 명세서에 있어서 물 매체란, 물, 또는 유기 용매의 수용액을 말한다. 물로는, 수도물, 증류수, 이온 교환수, 정제수가 예시된다. 유기 용매로는, 물과 균일하게 혼합하는 것이면 특별히 한정되지 않는다. 유기 용매로는 식품에 적용 가능하다는 관점에서 에탄올이 바람직하다. 또 반응 온도는 바람직하게는 10 ∼ 80 ℃ 이며, 보다 바람직하게는 40 ∼ 75 ℃ 이다. 또, 반응 시간은, 효소의 종류 등에 따라 상이하지만, 예를 들어, 1 ∼ 100 시간으로 할 수 있고, 2 ∼ 24 시간이 바람직하다.
람노시다아제 활성을 갖는 효소는, 글루코시다아제 활성을 갖는 경우도 있어, 글루코시다아제 활성에 의해, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드 (헤스페리딘, 루틴, 나린긴, 미리시트린 등) 로부터, 아글리콘 포접 화합물 (케르세틴 포접 화합물, 헤스페레틴 포접 화합물, 나린게닌 포접 화합물, 미리세틴 포접 화합물 등) 을 얻는 것도 제한은 없고, 이들도 본 발명에 관련된 플라보노이드 포접 화합물에 포함된다.
생성한 플라보노이드 포접 화합물은, 상기한 바와 같이 람노시드 구조를 갖지 않는 플라보노이드와 시클로덱스트린의 포접 화합물이다. 여기서, 포접 화합물이란, 일방의 화학종이, 분자 규모의 공간을 만들고, 그 공간에 형상과 치수가 적합함으로써, 타방의 화학종을 포접함으로써 생기는 화합물을 나타낸다.
람노시드 구조를 갖지 않는 플라보노이드로는, 이소퀘르시트린, 케르세틴, 헤스페레틴-7-글루코사이드, 헤스페레틴, 나린게닌-7-글루코사이드 (프루닌), 나린게닌, 루테올린-7-글루코사이드, 디오스메틴-7-글루코사이드, 미리세틴, 에리오딕티올-7-글루코사이드, 델피니딘-3-글루코사이드, 시아니딘-3-글루코사이드, 이소람네틴-3-글루코사이드, 켐페롤-3-글루코사이드, 아피게닌-7-루티노시드, 및 아카세틴-7-글루코사이드 등을 들 수 있다.
람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드와, 람노시드 구조를 갖지 않는 플라보노이드의 구조식의 구체예를 이하에 나타낸다. 람노시드 구조를 갖는 루틴 (RTN), 헤스페리딘 (HSP), 나린긴 (NRG), 및 람노시드 구조를 갖지 않는 이소퀘르시트린 (IQC), 케르세틴 (QCT), 헤스페레틴-7-글루코사이드 (HPT-7G), 헤스페레틴 (HPT), 나린게닌-7-글루코사이드 (프루닌) (NGN-7G, prunin), 나린게닌 (NGN) 의 구조식은 하기 식이 된다.
[화학식 4]
Figure pct00004
람노시드 구조를 갖지 않는 플라보노이드에 대한, 시클로덱스트린의 포접체에서의 몰비 (시클로덱스트린/플라보노이드) 는, 효율성의 관점에서, 바람직하게는 0.01 이상이고, 보다 바람직하게는 0.1 이상이고, 더욱 바람직하게는 0.9 이상이고, 더욱 바람직하게는 1.0 이상이고, 경제성의 관점에서, 바람직하게는 10.0 이하이고, 보다 바람직하게는 6.0 이하이고, 더욱 바람직하게는 4.0 이하이고, 더욱 바람직하게는 3.0 이하이다.
생성한 플라보노이드 포접 화합물의 수율은, 바람직하게는 10 ∼ 100 ％, 보다 바람직하게는 40 ∼ 100 ％ 이고, 보다 바람직하게는 70 ∼ 100 ％ 이고, 더욱 바람직하게는 90 ∼ 100 ％ 이다. 수율은, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드로부터 람노시드 구조를 갖지 않는 플라보노이드로의 전화율이며, 후술하는 실시예에 기재하는 방법에 의해 산출할 수 있다. 또한, 생성한 플라보노이드 포접 화합물은, 사용 원료의 플라보노이드 함량이나 전화율에 의해, 원료인 람노시드 구조를 갖는 플라보노이드 (예를 들어 루틴, 헤스페리딘, 나린긴 등) 나, 원료에 함유하는 경우가 있는 플라보노이드 (예를 들어, 케르세틴, 켐페롤-3-루티노시드, 켐페롤-3-글루코사이드, 헤스페레틴, 나린게닌 등) 와의 혼합물이 되는 경우이더라도, 그 비율에 제한은 없다.
생성한 플라보노이드 포접 화합물 또는 후술하는 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물 (양자를 「플라보노이드 포접 화합물 등」 이라고 칭하는 경우가 있다) 에 있어서, 플라보노이드 부분의 물에 대한 용해도는, 사용하는 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드 및 시클로덱스트린의 종류나 양에 따라 다르기도 하지만, 바람직하게는 0.01 ％ 이상이고, 보다 바람직하게는 0.015 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 0.02 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 1.0 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 2.0 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 2.5 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 3 ％ 이상이다. 상한은 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어 20 ％ 이하로 할 수 있다. 본 명세서에 있어서 플라보노이드 부분의 물에 대한 용해도는, 25 ℃ 에 있어서의 질량 퍼센트 농도이며, 후술하는 실시예에 기재하는 방법으로 측정할 수 있다.
구체적인 양태를 이하에 나타낸다.
양태 1-1
이소퀘르시트린이 γ-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 이소퀘르시트린과 상기 γ-시클로덱스트린의 포접체에서의 몰비 (γ-시클로덱스트린/이소퀘르시트린) 가, 생산 코스트를 억제하는 관점에서, 바람직하게는 0.9 ∼ 4.0 인 경우, 보다 바람직하게는 0.9 ∼ 1.8 인 경우에는, 상기 이소퀘르시트린의 물에 대한 용해도가 바람직하게는 0.01 ％ 이상이고, 보다 바람직하게는 2 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 2.5 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 3 ％ 이상이다.
양태 1-2
이소퀘르시트린이 β-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 이소퀘르시트린과 상기 β-시클로덱스트린의 포접체에서의 몰비 (β-시클로덱스트린/이소퀘르시트린) 가 1.0 ∼ 3.0 인 경우에는, 상기 이소퀘르시트린의 물에 대한 용해도가 바람직하게는 0.01 ％ 이상이고, 보다 바람직하게는 0.02 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 0.03 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 0.05 ％ 이상이다.
양태 1-3
헤스페레틴-7-글루코사이드가 시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 헤스페레틴-7-글루코사이드와 상기 시클로덱스트린의 포접체에서의 몰비 (시클로덱스트린/헤스페레틴-7-글루코사이드) 가 1.0 ∼ 3.0 인 경우에는, 상기 헤스페레틴-7-글루코사이드의 물에 대한 용해도가 바람직하게는 0.01 ％ 이상이고, 보다 바람직하게는 0.02 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 0.03 ％ 이상이다.
양태 1-4
나린게닌-7-글루코사이드가 β-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 나린게닌-7-글루코사이드와 상기 β-시클로덱스트린의 포접체에서의 몰비 (시클로덱스트린/나린게닌-7-글루코사이드) 가 1.0 ∼ 3.0 인 경우에는, 상기 나린게닌-7-글루코사이드의 물에 대한 용해도가 바람직하게는 0.01 ％ 이상이고, 보다 바람직하게는 0.02 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 0.03 ％ 이상이다.
본 발명의 플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법에 의하면, 미정제의 경우, 플라보노이드 포접 화합물과 람노오스를 포함하는 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물이 얻어진다. 이 경우에 있어서 상기 플라보노이드 포접 화합물 중의 플라보노이드와 탈리한 람노오스의 몰비 (람노오스/플라보노이드) 는 0.8 ∼ 1.2 가 된다.
본 발명의 플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법에 의하면, 상기의 수율이 100 ％ 가 아닌 경우에는, 미반응물로서 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를 함유하는 것이 된다. 이와 같은 미반응물을 포함하는, 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물에 있어서의 상기 플라보노이드 포접 화합물 중의 플라보노이드와 상기 난용성 플라보노이드의 몰비 (난용성 플라보노이드/포접 화합물 중의 플라보노이드) 는, 장기 안정성의 관점에서, 바람직하게는 0.1 이하이고, 보다 바람직하게는 0.08 이하이고, 더욱 바람직하게는 0.05 이하이다. 하한값은 특별히 한정되는 것은 아니지만, 0.001 이상, 0.003 이상, 0.004 이상, 0.01 이상이어도 된다.
또, 놀랍게도, 본 발명의 제조 방법으로 얻어지는 플라보노이드 포접 화합물에 의해, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드의 용해성을 개선할 수 있는 것도 알 수 있었다. 보다 구체적으로는, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드와, 본 발명의 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 포접 화합물을, 상기 플라보노이드 포접 화합물 중의 플라보노이드와 상기 난용성 플라보노이드의 몰비 (포접 화합물 중의 플라보노이드/난용성 플라보노이드) 가 바람직하게는 0.1 ∼ 0.9, 보다 바람직하게는 0.1 ∼ 0.7, 더욱 바람직하게는 0.1 ∼ 0.3 이 되도록 매체 중에서 혼합함으로써, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드의 용해성을 향상시킬 수 있다. 여기서, 매체 중이란, 물 매체 중, 혹은 당류, 염류, 산미료, 감미료, 향료, 글리세린, 프로필렌글리콜 등, 식품 첨가물이나, 레몬 엑기스, 한방 엑기스 등, 식품이나 한방을 함유하는 수용액 중인 것을 말한다. 이 용해성 향상 방법은, 미반응물을 포함하는 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물을 그대로 사용함으로써 실시해도 되고, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드에 플라보노이드 포접 화합물 등을 첨가함으로써 실시해도 된다. 여기서, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드나, 본 발명의 제조 방법으로 얻어지는 플라보노이드 포접 화합물에 대해서는 상기한 바와 같고, 예를 들어, 루틴과 이소퀘르시트린-γ-시클로덱스트린 포접 화합물, 헤스페리딘과 헤스페레틴-7-글루코사이드-β-시클로덱스트린 포접 화합물, 나린긴과 나리게닌-7-글루코사이드-β-시클로덱스트린 포접 화합물, 루틴과 나리게닌-7-글루코사이드-β-시클로덱스트린 포접 화합물을 조합할 수 있다.
본 발명의 플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법은, 탈리 공정 이외에, 필요에 따라 정제를 하는 것에는 특별히 제한이 없고, 수지 처리 공정 (흡착법, 이온 교환법 등), 막 처리 공정 (한외 여과막 처리법, 역침투막 처리법, 제타 전위막 처리법 등), 및 전기 투석법, 염석, 산석, 재결정, 용매 분획법 등으로 정제할 수 있다. 예를 들어, 탈리 공정에서 얻어진 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물을, 다공성 합성 흡착제에 의해 흡착시키고, 물 세정에 의해 람노오스 등을 제거 후, 알코올 용출하고, 분무 건조시킴으로써 정제된 분말을 얻을 수 있고, 또 알코올 용출 후, 당해 조성물 이외의 성분으로서, 희석 소재, 또는 그 밖의 첨가제를 함유해도 된다. 또한, 람노오스 등을 분획하고, 식품 분야, 의약품, 의약 부외품 분야, 및 향장품 분야 등에서 이용할 수도 있다. 또 제조된 플라보노이드 포접 화합물로부터, 플라보노이드만을 정제할 수도 있다.
희석 소재로는, 본 발명의 효과를 방해하지 않는 것이면 특별히 제한되지 않고, 예를 들어, 설탕, 글루코오스, 덱스트린, 전분류, 트레할로스, 젖당, 말토오스, 물엿, 액당 등의 당류 ; 에탄올, 프로필렌글리콜, 글리세린 등의 알코올류 ; 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리트리톨, 말티톨, 환원 물엿, 마니트 등의 당알코올 ; 또는 물을 들 수 있다. 또 첨가제로는, 인산염류, 유기산류, 킬레이트제 등의 보조제, 아스코르브산 등의 산화 방지제 등을 들 수 있다.
다음으로, 본 발명의 플라보노이드 배당체 조성물의 제조 방법에 대해서 설명한다.
본 발명의 플라보노이드 배당체 조성물의 제조 방법은, 본 발명의 플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 포접 화합물을 당전이 효소로 처리하여 배당체화하는 배당체화 공정을 포함한다. 즉, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를, 시클로덱스트린의 존재하, 람노시다아제 활성을 갖는 효소로 처리하여 람노오스를 탈리하는 탈리 공정, 및 상기 탈리 공정을 거쳐 얻어진 플라보노이드 포접 화합물을 당전이 효소로 처리하여 배당체화하는 배당체화 공정을 포함하는 것이다.
탈리 공정 및 탈리 공정을 거쳐 얻어진 플라보노이드 포접 화합물에 대해서는 상기한 바와 같다. 또한, 탈리 공정을 거쳐 얻어졌다는 것은, 탈리 공정 이외의 공정을 포함하는 것을 배제하는 취지가 아니라, 임의로 정제 공정 등을 거쳐 얻어진 것에 대해서도 포함하는 것이다.
배당체화 공정은, 탈리 공정을 거쳐 얻어진 플라보노이드 포접 화합물에 당전이 효소를 작용시켜 배당체화하고, 플라보노이드 배당체 조성물을 얻는 공정이다. 또, 배당체화 공정은, 탈리 공정과 마찬가지로, 물 등의 용매 중에서 정치, 또는 교반하면서 실시할 수 있으며, 반응 중의 산화, 또는 갈변을 방지하기 위해서, 반응계의 헤드 스페이스의 공기를 질소 등의 불활성 가스로 치환해도 되고, 또 아스코르브산 등의 산화 방지제를 반응계에 첨가하는 것도 가능하다. 배당화 공정은, 반응액을 가열에 의해 효소 실활시키는 방법 등 공지된 방법에 의해 종료할 수 있다.
배당체화 공정에서는, 플라보노이드 포접 화합물의 시클로덱스트린이 당공여체가 되어, 플라보노이드 배당체 조성물을 제조할 수 있지만, 당공여체를 추가 공여하는 것에 제한은 없다. 추가 공여되는 당공여체의 구체예로는, 전분, 덱스트린, 말토올리고당 등의 전분 부분 가수 분해물, 자일로올리고당, 및 이들의 함유물 등을 들 수 있다.
당전이 효소로는, 탈리 공정을 거쳐 얻어진 플라보노이드 포접 화합물에 대하여 당의 전이 활성을 갖는 효소이면 특별히 제한은 없다. 당전이 효소는, 그 기원에 한정은 없고, 동물 유래, 식물 유래, 미생물 유래 등의 모든 유래의 것을 사용할 수 있다. 또한, 유전자 재조합 기술, 부분 가수 분해 등에 의한 인공 효소여도 된다. 또, 당전이 효소의 형태는 특별히 한정되지 않고, 효소 단백질의 건조물, 불용성 담체로 고정화된 효소, 및 효소 단백질을 포함하는 액체 등을 사용할 수 있다.
당전이 효소의 구체예로는, 시클로덱스트린글루카노트랜스페라아제, 글루코실트랜스페라아제, α-글루코시다아제, β-글루코시다아제, α-갈락토시다아제, β-갈락토시다아제, α-아밀라아제, 자일라나아제, 풀루라나아제, 아라비노푸라노시다아제 등을 들 수 있다.
당전이 효소의 사용량은, 사용하는 효소의 종류, 당전이 반응의 조건, 당의 종류 등에 따라 상이하지만, 예를 들어, 시클로덱스트린글루카노트랜스페라아제의 경우, 플라보노이드 포접 화합물 1 g 에 대하여 1 ∼ 10000 U 가 바람직하다. 난용성 플라보노이드를 배당화하는 경우, 난용성 플라보노이드를 가용화시키기 위해, 알칼리측으로 하여 효소 반응을 시키는 것이 일반적이기는 하지만, pH 7 를 초과하는 알칼리역에서는, 플라보노이드의 안정성이 나빠져, 분해·갈색화되기 쉬울 뿐만 아니라, 갈색물의 제거 공정이 필요해지고, 또한 알칼리 중화에 의한 탈염 공정도 필요해진다. 그러나, 본 발명의 제조 방법으로 얻어지는 플라보노이드 포접 화합물은, 난용성 플라보노이드가 pH 7 이하에서도 고농도로 가용화하고 있기 때문에, 효소 반응은 pH 7 이하에서도 효율적으로 배당체화한다. 따라서, 생산 효율이나 품질의 관점에서, pH 3 ∼ 7 로 하는 것이 바람직하고, pH 6 ∼ 6.8 로 하는 것이 더욱 바람직하다. 단, 알칼리역에서 당전이 하는 것이나, 알칼리역으로 조정한 후에 pH 7 이하로 조정하여 당전이할 수도 있다. 반응계에 사용되는 용매로는 물 매체를 들 수 있다. 또 반응 온도는 바람직하게는 40 ∼ 70 ℃ 이며, 보다 바람직하게는 50 ∼ 65 ℃ 이다. 또, 반응 시간은, 효소의 종류 등에 따라 상이하지만, 예를 들어, 0.5 ∼ 120 시간으로 할 수 있고, 1 ∼ 30 시간이 바람직하다. 또, 생산 효율의 관점에서, 탈리 공정 후, 연속해서, 온도, pH 를 매우 적합하게 변경하고, 당전이 효소를 첨가하여 배당체화 공정을 실시하는 것이 바람직하다.
플라보노이드에 결합하는 당의 결합 양식은 α-결합 또는 β-결합 중 어느 것이어도 된다. 결합하는 당의 종류는, 특별히 제한되지 않지만, 글루코오스, 갈락토오스, 프룩토오스 등의 5 ∼ 6 단당에서 선택되는 적어도 1 종 이상이 바람직하다. 또, 당의 결합수는, 바람직하게는 1 ∼ 30 개이고, 보다 바람직하게는 1 ∼ 25 개이고, 더욱 바람직하게는 1 ∼ 20 개이고, 더욱 바람직하게는 1 ∼ 15 개이고, 더욱 바람직하게는 1 ∼ 10 개이다. 플라보노이드 배당체 조성물은, 플라보노이드에 상기 당류가 결합한 배당체의 혼합물을 포함하는 것을 말하며, 각 배당체의 결합수 비율에 제한은 없지만, 음식품 등의 향미를 저해하지 않는 관점에서, 이하의 양태가 바람직하다.
양태 2-1
하기 일반식 (1) 로 나타내는 화합물을 포함하는 이소퀘르시트린 배당체 조성물로서, 상기 배당체 조성물 중, n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 30 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 50 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상인, 이소퀘르시트린 배당체 조성물. 바람직하게는, n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 30 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 35 몰％ 이상 45 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상 50 몰％ 이하이다.
[화학식 5]
Figure pct00005
(일반식 (1) 중, Glc 는 글루코오스 잔기를, n 은 0 또는 1 이상의 정수를 의미한다)
양태 2-2
하기 일반식 (2) 로 나타내는 화합물을 포함하는 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물로서, 상기 배당체 조성물 중, n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 30 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 50 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상인, 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물. 바람직하게는, n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 25 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 35 몰％ 이상 50 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상 50 몰％ 이하이다.
[화학식 6]
Figure pct00006
(일반식 (2) 중, Glc 는 글루코오스 잔기를, n 은 0 또는 1 이상의 정수를 의미한다)
양태 2-3
하기 일반식 (3) 으로 나타내는 화합물을 포함하는 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물로서, 상기 배당체 조성물 중, n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 30 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 50 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상인, 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물.
[화학식 7]
Figure pct00007
(일반식 (3) 중, Glc 는 글루코오스 잔기를, n 은 0 또는 1 이상의 정수를 의미한다)
또한, 글루코오스기의 결합수 (n 수) 는, 임의로 조정할 수 있다. 예를 들어, 플라보노이드 배당체 조성물 생성 후에, 각종 아밀라아제 (α-아밀라아제, β-아밀라아제, 글루코아밀라아제, α-글루코시다아제 등) 를 단독 혹은 복수 조합하여 처리함으로써, 플라보노이드 배당체 조성물 분자 중의 글루코오스 당사슬 수를 감소시켜, 임의의 글루코오스 당사슬 길이를 갖는 플라보노이드 배당체 조성물을 얻을 수도 있다.
본 발명의 플라보노이드 배당체 조성물의 제조 방법은, 탈리 공정, 배당체화 공정 이외에, 필요에 따라 정제를 하는 것에는 특별히 제한이 없고, 수지 처리 공정 (흡착법, 이온 교환법 등), 막 처리 공정 (한외 여과막 처리법, 역침투막 처리법, 제타 전위막 처리법 등), 및 전기 투석법, 염석, 산석, 재결정, 용매 분획법 등으로 정제할 수 있다. 예를 들어, 배당체화 공정에서 얻어진 플라보노이드 배당체 조성물을, 다공성 합성 흡착제에 의해, 배당체 조성물을 흡착, 물 세정, 알코올 용출 후, 분무 건조시킴으로써 정제된 분말을 얻을 수 있다. 또 알코올 용출 후, 당해 조성물 이외의 성분으로서, 희석 소재, 또는 그 밖의 첨가제를 함유해도 된다.
희석 소재의 구체예로는, 플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법에서 기재한 것과 동일하다.
본 발명의 제조 방법으로 얻어지는 플라보노이드 배당체 조성물에 있어서의 물에 대한 용해도는, 플라보노이드 환산값으로, 바람직하게는 0.01 ％ 이상이고, 보다 바람직하게는 0.015 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 0.02 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 0.1 ％ 이상이고, 더욱 바람직하게는 0.5 ％ 이상이다. 상한은 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어 20 ％ 이하로 할 수 있다.
본 발명의 제조 방법으로 얻어지는 플라보노이드 포접 화합물, 플라보노이드 배당체 조성물은, 체내 흡수성이 느리다고 일컬어지고 있는 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드, 혹은 람노시드 구조를 갖는 플라보노이드 배당체 조성물과 조합함으로써, 체내 흡수율이 지속적으로 향상된 식품의 형태로 할 수 있다. 예를 들어, 이소퀘르시트린 포접 화합물과 루틴의 조합, 이소퀘르시트린 배당체 조성물과 루틴 배당체 조성물 (예를 들어 αG 루틴, 토요 제당 (주)) 의 조합, 헤스페레틴-7-글루코사이드 포접 화합물과 헤스페리딘 배당체 조성물 (예를 들어 αG 헤스페리딘, 토요 제당 (주)) 의 조합, 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물과 헤스페리딘 배당체 조성물 (예를 들어 모노글루코실헤스페리딘, (주) 하야시바라) 의 조합 등을 들 수 있다.
또, 본 발명의 제조 방법으로 얻어지는 플라보노이드 배당체 조성물은, 다른 난용성 플라보노이드와 조합함으로써, 다른 난용성 플라보노이드의 용해성을 개선할 수 있다. 예를 들어, 이소퀘르시트린 배당체 조성물과 루틴, 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물과 헤스페리딘, 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물과 미리시트린을 조합하는 것을 들 수 있다. 또 그 몰비율 (배당체 조성물/다른 난용성 플라보노이드) 은, 바람직하게는 0.1 ∼ 0.5 이고, 보다 바람직하게는 0.1 ∼ 0.3 이며, 더욱 바람직하게는 0.1 ∼ 0.15 이다.
본 발명의 제조 방법으로 얻어진 플라보노이드 포접 화합물, 및/또는 플라보노이드 배당체 조성물은, 상기한 바와 같이 체내 흡수율이 우수한 것 외에, 퇴색 방지, 향미 열화 방지, 보존 안정성도 우수하기 때문에, 식품용 조성물, 의약용 조성물, 화장용 조성물, 및 식품 첨가물용 조성물로서 적합하게 사용할 수 있다. 보다 상세하게는, 항알레르기, 항산화, 항암, 항염증, 장내 플로라 개선, 소취 (消臭), 혈장 콜레스테롤 상승 억제, 혈압 상승 억제, 혈당 상승 억제, 혈소판 응집 억제, 치매 예방, 체지방 연소, 체지방 축적 억제, 지구력 향상, 항피로, 냉증 개선, 피부 상태 개선, 육모, 근위축 억제, 수면을 위한 소재로서, 또, 식품 첨가물의 산화 방지제, 퇴색 방지제, 향미 열화 방지제로서 사용할 수 있다. 식품 첨가물 조성물은, 감미료, 착색료, 보존료, 증점 안정제, 발색제, 표백제, 곰팡이 방지제, 검 베이스, 고미료 (苦味料), 광택제, 산미료, 조미료, 유화제, 강화제, 제조 용제, 향료의 열화 방지 등을 위해서 첨가하고, 혼합 제제로 할 수 있다. 즉, 본 발명에 있어서는, 본 발명의 제조 방법으로 얻어진 플라보노이드 포접 화합물, 및/또는 플라보노이드 배당체 조성물을 포함하는, 음식품, 의약품, 화장품 등을 제공할 수 있다.
음식품은, 식품과 음료를 포함하는 것이며, 예를 들어, 영양 보조 식품, 건강 식품, 특정 보건용 식품, 기능성 표시 식품, 식사 요법용 식품, 종합 건강 식품, 서플리먼트, 차 음료, 커피 음료, 쥬스, 청량 음료, 드링크제 등을 들 수 있다.
의약품은, 의약품 또는 의약 부외품을 포함하는 것이며, 경구 제제, 또는 피부용 외용제인 것이 바람직하고, 액제, 정제, 과립제, 환제, 시럽제, 또는 로션제, 스프레이제, 연고제의 형태로 할 수 있다.
화장품으로는, 크림, 액상 로션, 유액상 로션, 스프레이의 형태로 할 수 있다.
본 발명의 음식품, 의약품, 또는 화장품 중에 있어서의 플라보노이드 포접 화합물 및/또는 플라보노이드 배당체 조성물의 배합량은, 특별히 한정되지 않지만, 플라보노이드류의 바람직한 1 일 섭취량을 참고로, 용해성, 정매 등을 고려하여, 적절히 설계할 수 있다. 예를 들어, 식품용 조성물 중에 있어서의 본 발명의 제조 방법으로 얻어진 플라보노이드 포접 화합물 및/또는 플라보노이드 배당체 조성물의 플라보노이드 부분으로서의 배합량을 바람직하게는 0.001 ∼ 30 질량％, 보다 바람직하게는 0.01 ∼ 20 질량％, 더욱 바람직하게는 0.02 ∼ 10 질량％ 로 할 수 있고, 플라보노이드 포접 화합물 및/또는 플라보노이드 배당체 조성물을 1 일당 바람직하게는 10 ㎎ ∼ 20 g, 보다 바람직하게는 30 ㎎ ∼ 10 g, 더욱 바람직하게는 100 ㎎ ∼ 5 g 을 1 ∼ 수 회 (예를 들어 3 회) 로 나누어 섭취할 수 있도록, 식품용 조성물 중의 배합량을 결정할 수도 있다. 또, 식품 첨가물 제제에 대한 플라보노이드 포접 화합물 및/또는 플라보노이드 배당체 조성물의 배합량은, 플라보노이드류가 효과를 나타내는 용량으로서 바람직하게는 0.001 ∼ 50 질량％, 보다 바람직하게는 0.01 ∼ 40 질량％, 더욱 바람직하게는 0.1 ∼ 30 질량％ 로 사용할 수 있다.
실시예
이하에, 실시예에 의해 본 발명을 구체적으로 설명하는데, 본 발명은 이들 실시예에 의해 조금도 한정되는 것은 아니다. 또한, 특별히 기재가 없는 한, 「％」 는 「질량％」 를 의미하는 것으로 한다.
플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물의 조제
실시예 1 ∼ 31
1000 ㎖ 용량의 비커에, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드 (루틴 또는 헤스페리딘) 와 시클로덱스트린을 표 1, 2 에 나타내는 바와 같이 첨가하고, 물을 첨가하여 1000 g 으로 하고, 70 ℃, pH 4.5 로 조정하였다. 그 후 교반하면서, 나린기나아제 (아마노 엔자임 (주) 155 u/g) 를 3 ∼ 30 g 첨가하고, 24 시간 반응시킨 후, 실온으로 되돌려, 여과지 여과 후, 람노시드 구조를 갖지 않는 플라보노이드 (이소퀘르시트린 또는 헤스페레틴-7-글루코사이드) 와 시클로덱스트린의 포접 화합물, 및 탈리한 람노오스를 포함하는 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물을 얻었다.
비교예 1 ∼ 3
시클로덱스트린을 첨가하지 않는 것 이외에는 실시예 16, 17 과 동일하게 하여 각각 비교예 1, 3 의 조성물을 조제하였다. 또, 시클로덱스트린 대신에, 덱스트린을 첨가한 것 이외에는 실시예 16 과 동일하게 하여 비교예 2 의 조성물을 조제하였다.
비교예 101
100 ㎖ 용량의 비커에, 하기에서 조제한 이소퀘르시트린과 γ-시클로덱스트린을 표 1-2 에 나타내는 바와 같이 첨가하고, 물을 첨가하여 100 g 으로 하고, 70 ℃, pH 4.5 로 24 시간 교반 후, 실온으로 되돌려, 여과지 여과하고, 이소퀘르시트린과 γ-시클로덱스트린의 포접 화합물을 함유하는 조성물을 조제하였다.
이소퀘르시트린의 조제
표 1 에서 사용한 루틴 10 g 을 100 ℓ 수용액에 첨가하고, 70 ℃, pH 4.5 로 조정하였다. 그 후 교반하면서, 나린기나아제 (아마노 엔자임 (주) 155 u/g) 를 1 g 첨가하고, 회수·건조시킴으로써, 함량 96 ％ 이상의 이소퀘르시트린을 7.2 g 얻었다. 시약 이소퀘르시트린 (Wako) 을 사용하여 HPLC 로 동일한 것을 확인하였다.
실시예 101 ∼ 109
표 2-2 에 나타내는 원료를 사용한 것 이외에는 실시예 1 ∼ 31 과 동일하게 하여 나린게닌-7-글루코사이드와 β-시클로덱스트린의 포접 화합물을 함유하는 조성물을 조제하였다.
비교예 102
시클로덱스트린을 첨가하지 않는 것 이외에는 실시예 104 와 동일하게 하여 비교예 102 의 조성물을 조제하였다.
표 1, 1-2, 2, 2-2 에서 사용한 상세한 내용을 이하에 나타낸다.
RTN : 하기에서 조제한 루틴
콩과 식물인 회화나무의 꽃봉오리 50 ㎏ 을 500 ℓ 의 열수 (熱水) 에 3 시간 침지한 후, 여과 분리한 여과액을 취득하였다. 그 후, 실온까지 냉각시켜 침전한 성분을 여과 분리하고, 침전부를 물 세정, 재결정, 및 건조시킴으로써, 함량 96 ％ 이상의 루틴 3190 g 을 얻었다. 시약 루틴 (Wako) 을 사용하여 HPLC 로 동일 피크인 것을 확인하였다.
HSP : 헤스페리딘 (함량 97 ％ 이상, 하마리 약품 공업 주식회사 제조)
NRG : 나린긴 (함량 95 ％ 이상 SIGMA 사 제조)
β-CD : β-시클로덱스트린 (펄에이스사 제조)
γ-CD : γ-시클로덱스트린 (펄에이스사 제조)
덱스트린 : 산덱크 ＃70 (산와 전분 공업 주식회사 제조)
루틴으로부터 이소퀘르시트린으로의 전화율
실시예 1 ∼ 16, 및 비교예 1 ∼ 2 의 미여과의 반응 종료 혼합액을 측정 샘플로 하고, HPLC (SHIMADZU) 의 면적비 (이소퀘르시트린의 피크 면적/루틴의 피크 면적) ＜HPLC 조건 ; 칼럼 : CAPCELL PAK C18 SIZE 4.6 ㎜ × 250 ㎜ (SHISEIDO), 용리액 : 20 ％ (v/v) 아세토니트릴/0.1 ％ 인산 수용액, 검출 : 351 ㎚, 유속 : 0.4 ㎖/min, 칼럼 온도 : 70 ℃＞ 로부터, 전화율 (％) = 이소퀘르시트린의 피크 면적 × 100 / (루틴의 피크 면적 ＋ 이소퀘르시트린의 피크 면적) 으로서 산출하였다. 이소퀘르시트린은, 시약 이소퀘르시트린 (Wako) 을 사용하여 HPLC 로 동일한 피크인 것으로 확인하였다. 실시예 1 ∼ 16 에 있어서의 전화율은 모두 96 ％ 이상이었다. 한편, 실시예 16 과 동 (同) 효소량으로 비교한 비교예 1 에 있어서의 전화율은 56 ％, 비교예 2 에 있어서의 전화율은 57 ％ 로 낮은 것이었다.
헤스페리딘으로부터 헤스페레틴-7-글루코사이드로의 전화율
실시예 17 ∼ 31, 및 비교예 3 의 미여과의 반응 종료 혼합액을 측정 샘플로 하고, HPLC (SHIMADZU) 의 면적비 (헤스페레틴-7-글루코사이드의 피크 면적/헤스페리딘의 피크 면적) ＜HPLC 조건 ; 칼럼 : CAPCELL PAK C18 SIZE 4.6 ㎜ × 250 ㎜ (SHISEIDO), 용리액 : 40 ％ (v/v) 아세토니트릴/0.1 ％ 인산 수용액, 검출 : 280 ㎚, 유속 : 0.4 ㎖/min, 칼럼 온도 : 70 ℃＞ 로부터, 전화율 (％) = 헤스페레틴-7-글루코사이드의 피크 면적 × 100 / (루틴의 피크 면적 ＋ 헤스페레틴-7-글루코사이드의 피크 면적) 으로서 산출하였다. 헤스페레틴-7-글루코사이드는, NMR 에 의해 헤스페레틴-7-글루코사이드인 것을 확인한 건조품을 사용하여, HPLC 로 동일한 피크인 것으로 확인하였다. 실시예 17 ∼ 31 에 있어서의 전화율은 모두 96 ％ 이상이었다. 한편, 비교예 3 에 있어서의 전화율은 57 ％ 로 낮은 것이었다.
나린긴으로부터 나린게닌-7-글루코사이드로의 전화율
실시예 101 ∼ 109, 및 비교예 102 의 미여과의 반응 종료 혼합액을 측정 샘플로 하고, HPLC (SHIMADZU) 의 면적비 (나린게닌-7-글루코사이드의 피크 면적/나린긴의 피크 면적) ＜HPLC 조건 ; 칼럼 : CAPCELL PAK C18 SIZE 4.6 ㎜ × 250 ㎜ (SHISEIDO), 용리액 : 25 ％ (v/v) 아세토니트릴/0.1 ％ 인산 수용액, 검출 : 280 ㎚, 유속 : 0.4 ㎖/min, 칼럼 온도 : 70 ℃＞ 로부터 산출하였다. 즉 전화율 (％) = 나린게닌-7-글루코사이드의 피크 면적 × 100 / (나린긴의 피크 면적 ＋ 나린게닌-7-글루코사이드의 피크 면적) 으로서 산출하였다. 나린게닌-7-글루코사이드는, 시약 나린게닌-7-글루코사이드 (Wako) 를 사용하여 HPLC 로 동일한 피크인 것으로 확인하였다. 실시예 101 ∼ 109, 및 비교예 102 의 전화율은 95 ％ 이상이었다.
이소퀘르시트린 (IQC) 농도 (흡광도 분석법)
실시예 1 ∼ 16, 비교예 1, 2, 101 의 반응 종료액을, 실온 정치 후에, 상청액 1 ㎖ 를 필터 여과하고, 측정 샘플로 하였다. 시약 루틴 (Wako) 을 사용하고 흡광도 351 ㎚ (0.1 ％ 인산 용액) 로 검량선을 작성 후, 측정 샘플의 흡광도로부터 루틴 농도를 산출하고, 전화율로 보정 후 0.761 (이소퀘르시트린/루틴의 분자량비 (464.38/610.52 = 0.761)) 을 곱한 것을 이소퀘르시트린 농도로서 산출하였다. 결과를 표 1, 1-2 에 나타낸다. 또한, 농도 산출 시의 전화율은, 농도 분석과 동 샘플을 HPLC 측정 후 산출하였다.
헤스페레틴-7-글루코사이드 (HPT-7G) 농도 (흡광도 분석법)
실시예 17 ∼ 31, 비교예 3 의 반응 종료액을, 실온 정치 후에, 상청액 1 ㎖ 를 필터 여과하고, 측정 샘플로 하였다. 시약 헤스페리딘 (Wako) 을 사용한 흡광도 280 ㎚ (0.1 ％ 인산 용액) 로 검량선을 작성 후, 측정 샘플의 흡광도로부터 헤스페리딘 농도를 산출하고, HPLC 분석의 전화율로 보정 후, 0.761 (헤스페레틴-7-글루코사이드/헤스페리딘의 분자량비 (464.42/610.56 = 0.761)) 을 곱한 것을 헤스페레틴-7-글루코사이드 농도로서 산출하였다. 결과를 표 2 에 나타낸다. 또한, 농도 산출 시의 전화율은, 농도 분석과 동 샘플을 HPLC 측정 후 산출하였다.
나린게닌-7-글루코사이드 (NGN-7G) 농도 (흡광도 분석법)
실시예 101 ∼ 109, 및 비교예 102 의 반응 종료액을, 실온 정치 후에, 상청액 1 ㎖ 를 필터 여과하고, 측정 샘플로 하였다. 시약 나린긴 (SIGMA 사 제조, 이하 NRG) 을 사용한 흡광도 280 ㎚ (0.1 ％ 인산 용액) 로 검량선을 작성 후, 측정 샘플의 흡광도로부터 나린긴 농도를 산출하고, HPLC 분석의 전화율로 보정 후, 0.748 (나린긴/나린게닌-7-글루코사이드의 분자량비 (434.39/580.54 = 0.748)) 을 곱한 것을 나린게닌-7-글루코사이드 농도로서 산출하였다. 결과를 표 2-2 에 나타낸다. 또한, 농도 산출 시의 전화율은, 농도 분석과 동 샘플로 HPLC 측정 후 산출하였다.
몰비 (CD/IQC (몰비), CD/HPT-7G (몰비), CD/NGN-7G (몰비)) (HPLC 당분석법)
실시예 1 ∼ 31, 101 ∼ 109 및 비교예 101 의 반응 종료액을, 실온 정치 후, 상청액 1 ㎖ 를 필터 여과하고, 측정 샘플로 하였다. HPLC (SHIMADZU) 분석 ＜HPLC 조건 : 칼럼 : Inertsil NH2 (4.6 × 150 ㎜ (지엘 사이언스), 용리액 : 65 ％ 아세토니트릴/물 (v/v), 검출 : 시차 굴절계 RID-10A (SHIMADZU), 유속 : 1 ㎖/min, 칼럼 온도 : 40 ℃＞ 으로부터, β-시클로덱스트린 (Wako), γ-시클로덱스트린 (Wako) 의 검량선을 작성 후, 샘플의 시클로덱스트린의 몰 농도를 산출하고, 또 이소퀘르시트린, 헤스페레틴-7-글루코사이드, 및 나린게닌-7-글루코사이드의 몰 농도로, 시클로덱스트린/이소퀘르시트린, 시클로덱스트린/헤스페레틴-7-글루코사이드, 시클로덱스트린/나린게닌-7-글루코사이드의 몰비를 산출하였다. 결과를 표 1, 1-2, 2, 2-2 에 나타낸다. 또한, 반응 종료 후 여과액의 몰비는, 동결 건조물에서도 동일하였다.
용해도 (IQC 용해도, HPT-7G 용해도, NGN-7G 용해도)
실시예 1 ∼ 31, 101 ∼ 109 및 비교예 1 ∼ 3, 101, 102 의 반응 종료액을, 실온 정치 후, 여과지 여과하고, 동결 건조에 의해 건조물을 얻었다. 물을 50 ㎖ 넣은 100 ㎖ 용량의 비커 중에, 상기에서 조제한 건조물을, 50 ℃ 에서, 교반하면서, 다 용해되지 못하고 석출될 때까지 첨가하였다. 실온 (25 ℃) 정치 후, 상청액 1 ㎖ 를 필터 여과하고, 흡광도 분석법으로 이소퀘르시트린 농도, 헤스페레틴-7-글루코사이드 농도, 나린게닌-7-글루코사이드 농도를 산출하고, 용해도로 하였다. 단, 용해도 측정 시, 건조물량이 불충분한 경우, 동 실시예 실험을 반복함으로써 필요량을 취득하고, 용해도를 측정하였다. 또, 실시예 1 ∼ 31, 101 ∼ 109 및 비교예 101 에서 플라보노이드가 시클로덱스트린과 포접되어 있는 것을, 시차 주사 열량계 (DSC), 핵 자기 공명 (NMR), 및 푸리에 변환 적외 분광 광도계 (FT-IR) 로부터 확인하였다. 용해도의 결과를 표 1, 1-2, 2, 2-2 에 나타낸다. 또한, 실시예 1 ∼ 31, 101 ∼ 109 의 반응 종료 후, 실온 여과액을, 투석에 의해 람노오스를 제거한 플라보노이드 포접 화합물의 동결 건조물도 거의 동일한 용해도를 나타내었다.
[표 1]
Figure pct00008
표 1 의 주석
(1) 반응 개시 시의 루틴 농도 (질량％)
(2) 반응 개시 시의 β-시클로덱스트린 농도 (질량％)
(3) 반응 개시 시의 γ-시클로덱스트린 농도 (질량％)
(4) 반응 개시 시의 덱스트린 농도 (질량％)
(5) 반응 개시 시의 시클로덱스트린/루틴 (몰비)
(6) 반응 종료 후 여과액의 이소퀘르시트린 농도 (질량％)
(7) 반응 종료 후 여과액의 시클로덱스트린/이소퀘르시트린 (몰비)
(8) 반응 종료 후 여과액 동결 건조물의 이소퀘르시트린 용해도 (질량％)
[표 1-2]
Figure pct00009
표 1-2 의 주석
(11) 가열 교반 개시 시의 이소퀘르시트린 농도 (질량％)
(12) 가열 교반 개시 시의 γ-시클로덱스트린 농도 (질량％)
(13) 가열 교반 개시 시의 시클로덱스트린/이소퀘르시트린 (몰비)
(14) 가열 교반 후 여과액의 이소퀘르시트린 농도 (질량％)
(15) 가열 교반 후 여과액의 시클로덱스트린/이소퀘르시트린 (몰비)
(16) 가열 교반 후 여과액 동결 건조물의 이소퀘르시트린 용해도 (질량％)
표 1 로부터 분명한 바와 같이, 본 발명의 제조 방법에 의하면, 루틴으로부터 람노오스 탈리 반응과 함께, 이소퀘르시트린과 시클로덱스트린의 포접체가 효율적으로 얻어지는 것을 알 수 있었다. 한편, 비교예 1 및 2 에서는, 전화율이 낮고, 또 용해도도 낮았다. 또한, 실시예 7, 8, 및 비교예 1 ∼ 3 의 반응액 및 반응 종료액은 현탁 상태였다. 그러나 실시예 1 ∼ 6, 및 실시예 9 ∼ 16 은, 반응 초기, 반응 중기에는, 반응액은 현탁 상태였지만, 반응 종료 시, 및 그 후의 실온 정치 시에는 용해되어 있고, 이소퀘르시트린-시클로덱스트린 포접 화합물의 포접화율 (포접 화합물 중의 이소퀘르시트린 농도 (반응 종료 후, 실온 정치 여과액의 농도) × 100 / 반응 종료액 (미여과의 혼합액) 중의 이소퀘르시트린 농도) 은, 거의 100 ％ 였다. 그러나, 표 1-2 의 비교예 101 과 같이, 실시예 10 과 동 조성의 이소퀘르시트린과 γ-시클로덱스트린을 혼합 가열하는 것만으로는, 시종 현탁 상태로, 포접화율 (포접 화합물 중의 이소퀘르시트린 농도 (반응 종료 후, 실온 정치 후 여과액의 농도) × 100 / 반응 종료액 (미여과의 혼합액) 중의 이소퀘르시트린 농도) 도 12 ％ 로 낮고, 또 여과액의 동결 건조물의 용해도도 낮았다.
[표 2]
Figure pct00010
표 2 의 주석
(21) 반응 개시 시의 헤스페리딘 농도 (질량％)
(22) 반응 개시 시의 β-시클로덱스트린 농도 (질량％)
(23) 반응 개시 시의 γ-시클로덱스트린 농도 (질량％)
(24) 반응 개시 시의 시클로덱스트린/헤스페리딘 (몰비)
(25) 반응 종료 후 여과액의 헤스페레틴-7-글루코사이드 농도 (질량％)
(26) 반응 종료 후 여과액의 시클로덱스트린/헤스페레틴-7-글루코사이드 (몰비)
(27) 반응 종료 후 여과액 동결 건조물의 헤스페레틴-7-글루코사이드 용해도 (질량％)
표 2 로부터 분명한 바와 같이, 본 발명의 제조 방법에 의하면, 헤스페리딘으로부터 람노오스 탈리 반응과 함께, 헤스페레틴-7-글루코사이드와 시클로덱스트린의 포접체가 효율적으로 얻어지는 것을 알 수 있었다. 한편, 비교예 3 에서는, 전화율이 낮고, 또 용해도도 낮았다. 또한, 실시예 17, 26, 및 비교예 3 은, 반응액 및 반응 종료액은 현탁 상태였다. 그러나 실시예 18 ∼ 25, 및 실시예 27 ∼ 31 은, 반응 초기 및 반응 중기에는, 반응액은 현탁 상태였지만, 반응 종료 시, 및 실온 정치 시에는 용해되어 있고, 헤스페레틴-7-글루코사이드-시클로덱스트린 포접 화합물이 되는 포접화율 (포접 화합물 중의 헤스페레틴-7-글루코사이드 농도 (반응 종료 후, 실온 정치 여과액의 농도) × 100 / 반응 종료액 (미여과의 혼합액) 의 헤스페레틴-7-글루코사이드 농도) 은 거의 100 ％ 였다.
[표 2-2]
Figure pct00011
표 2-2 의 주석
(31) 반응 개시 시의 나린긴 농도 (질량％)
(32) 반응 개시 시의 β-시클로덱스트린 농도 (질량％)
(33) 반응 개시 시의 시클로덱스트린/나린긴 (몰비)
(34) 반응 종료 후 여과액의 나린게닌-7-글루코사이드 농도 (질량％)
(35) 반응 종료 후 여과액의 시클로덱스트린/나린게닌-7-글루코사이드 (몰비)
(36) 반응 종료 후 여과액 동결 건조물의 나린게닌-7-글루코사이드 용해도 (질량％)
표 2-2 로부터 분명한 바와 같이, 본 발명의 제조 방법에 의하면, 나린긴으로부터 람노오스 탈리 반응과 함께, 나린게닌-7-글루코사이드와 β시클로덱스트린의 포접체가 효율적으로 얻어지고, 용해성도 개선되었다. 비교예 102 는, 전화율은 95 ％ 이상이었지만, 반응 종료 후, 실온 정치로 곧바로 침전이 생겼기 때문에, 낮은 용해도가 되었다. 그러나 실시예 101 ∼ 109 의 반응 종료 후, 실온 정치 여과액은 용해되어 있고, 나린게닌-7-글루코사이드-시클로덱스트린 포접 화합물이 되는 포접화율 (포접 화합물 중의 나린게닌-7-글루코사이드 농도 (반응 종료 후, 실온 정치 여과액의 농도) × 100 / 반응 종료액 (미여과의 혼합액) 의 나린게닌-7-글루코사이드 농도) 은 거의 100 ％ 였다.
플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물 중의 몰비 (람노오스/플라보노이드)
또 실시예 18 ∼ 25, 27 ∼ 31, 101 ∼ 109 의 반응 종료 후 여과액의 람노오스 함량을 측정 (HPLC 당분석법과 동 조건, 람노오스 (Wako) 로 검량선 작성) 후, 람노오스의 몰 농도를 산출한 결과, 포접 화합물의 플라보노이드의 몰비 (람노오스/플라보노이드) 는, 0.8 ∼ 1.2 였다.
플라보노이드 포접 화합물의 풍미 평가
실시예 10 ∼ 15 의 반응 종료액의 각 100 ㎖ 를, 투석막 (스펙트라/포어 CE 투석용 튜브, MWCO 500-1000, funakoshi 사 제조) 에 넣고, 물 10 ℓ 중에서 투석 (5 회 물 교환, 10 ℃) 을 실시함으로써 람노오스를 제거하고, 그 후 각 액을 동결 건조시켜 10 g ∼ 30 g 의 건조물을 얻었다. 얻어진 건조물을, 시판되는 탄산음료 (무당) (「남알프스의 천연수 스파클링」, 산토리사 제조), 커피 음료 (무당) (「완다 골드 블랙」, 아사히 음료사 제조), 및 차 (「오이오차」, 이토엔사 제조) 에 이소퀘르시트린 환산 농도로서 0.1 질량％ 첨가하고, 5 명의 패널리스트에 의해, 무첨가품을 대조로, 관능 평가 (이미 (異味), 감미) 를 실시하였다. 하기의 평가 기준에 따라서, 각각의 평균점을 산출하였다. 결과를 표 3 에 나타낸다.
이미의 평가 기준
1 : 이미를 강하게 느낀다
2 : 이미를 약간 강하게 느낀다
3 : 이미를 느낀다
4 : 이미를 살짝 느낀다
5 : 이미를 느끼지 않는다
감미의 평가 기준
1 : 감미를 강하게 느낀다
2 : 감미를 약간 강하게 느낀다
3 : 감미를 느낀다
4 : 감미를 살짝 느낀다
5 : 감미를 느끼지 않는다
[표 3]
Figure pct00012
표 3 으로부터 분명한 바와 같이, 몰비 (γCD/IQC) 가 1.0 ∼ 1.8 이면, 몰비가 2.0 ∼ 4.0 인 것과 비교하여 이미나 감미가 적고, 음료 등의 식품의 풍미에 대한 영향을 작게 하는 관점에서 바람직한 것을 알 수 있다. 또, 표에는 나타내지 않지만, 헤스페레틴-7-글루코사이드 포접 화합물에 대해서는, 몰비 (CD/HPT-7G) 가 1.0 ∼ 1.9 이면, 몰비가 2.0 ∼ 3.0 인 것과 비교하여 이미 (무첨가와 상이한 풍미) 나 감미가 적어, 음식품에 적합하게 사용할 수 있다.
플라보노이드 배당체 조성물의 조제
실시예 32 ∼ 39
실시예 4 에서 조제한 반응액 (70 ℃, pH 4.5, 이소퀘르시트린 농도 2.3 질량％) 에, 소량의 알칼리를 첨가하여 60 ℃, pH 6.5 로 조정 후, 시클로덱스트린글루카노트랜스페라아제 (CGTase : 아마노 엔자임 (주), 상품명 「콘티자임」, 600 U/㎖) 20 g 을 첨가하여 반응을 개시하고, 24 시간 유지하였다. 얻어진 반응액을, 가열 살균, 여과 후, 동결 건조시켜, 일반식 (1) 로 나타내는 화합물을 포함하는 이소퀘르시트린 배당체 조성물 158 g (시료 1) 을 얻었다. 얻어진 이소퀘르시트린 배당체 조성물 (시료 1) 에 있어서의 물에 대한 용해도는, 이소퀘르시트린 환산값으로 2.7 ％ 였다. 얻어진 이소퀘르시트린 배당체 조성물 (시료 1) 을 물에 용해 후, 다이아이온 HP-20 (다공성 합성 흡착 수지, 미츠비시 케미컬사 제조) 을 충전한 칼럼에 통액하여 이소퀘르시트린 배당체 조성물을 흡착시키고, 수지 용량의 2 배의 물로 세정함으로써 람노오스 등의 당류를 제거하였다. 그 후, 수지 용량의 2 배의 65 ％ (v/v) 에탄올에 의해 흡착 성분을 용리시킨 용출액을 농축 후, 동결 건조시켜, 실시예 39 의 배당체 조성물을 조제하였다. 실시예 39 의 HPLC 크로마토그램을 도 1 에 나타낸다. 이 결과는, 시료 1 의 HPLC 크로마토그램과 동등하였다. 또, 실시예 39 와 동일한 방법으로, 이소퀘르시트린 배당체 조성물 (시료 1) 을 흡착, 물 세정 후, 용출시키는 에탄올 농도를 10 ∼ 60 ％ (v/v) 로 용출시켰다. 그들 용출액 (10, 20, 30, 40, 50, 60 ％ (v/v) 용출액) 을 조합하여 몰비 조정한 용액을, 농축 후 동결 건조시켜, 실시예 32 ∼ 38 의 배당체 조성물을 조제하였다. 실시예 32 ∼ 39 의 배당체 조성물의 물에 대한 용해도는, 이소퀘르시트린 환산값으로 10 ％ 이상이었다. 또한, 당전이 반응 시, 동 효소량으로, pH 7.5, pH 8.5 에서의 반응액을 조제한 결과, 거의 동량의 이소퀘르시트린 배당체 조성물이 산생했지만, 플라보노이드의 일부 분해에 의해, 용액의 색조가 갈흑색화했기 때문에, pH 6.5 에서 반응시킨 것을 사용하였다. 또한, 실시예 1 ∼ 3, 10 ∼ 16 에서 조제한 반응액도, 동 조건으로 시료 1 과 동일한 HPLC 크로마토그램 (도 1) 의 이소퀘르시트린 배당체 조성물이 제조되었다.
[화학식 8]
Figure pct00013
(일반식 (1) 중, Glc 는 글루코오스 잔기를, n 은 0 또는 1 이상의 정수를 의미한다)
실시예 40 ∼ 46
실시예 22 에서 조제한 반응액 (70 ℃, pH 4.5, 헤스페레틴-7-글루코사이드 농도 2.9 질량％) 에, 소량의 알칼리를 첨가하여 60 ℃, pH 6.5 로 조정 후, 시클로덱스트린글루카노트랜스페라아제 (CGTase : 아마노 엔자임 (주), 상품명 「콘티자임」, 600 U/㎖) 5 g 을 첨가하여 반응을 개시하고, 24 시간 유지하였다. 얻어진 반응액을, 가열 살균, 여과 후, 분무 건조시켜, 일반식 (2) 로 나타내는 화합물을 포함하는 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물 136 g (시료 2) 을 얻었다. 얻어진 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물 (시료 2) 에 있어서의 물에 대한 용해도는, 헤스페레틴-7-글루코사이드 환산값으로 5.1 ％ 였다. 얻어진 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물 (시료 2) 을 물에 용해 후, 다이아이온 HP-20 (다공성 합성 흡착 수지, 미츠비시 케미컬사 제조) 을 충전한 칼럼에 통액하여 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물을 흡착시키고, 수지 용량의 2 배의 물로 세정함으로써 람노오스 등의 당류를 제거하였다. 그 후, 수지 용량의 2 배의 65 ％ (v/v) 에탄올에 의해 흡착 성분을 용리시킨 용출액을 농축 후, 동결 건조시켜, 실시예 40 의 배당체 조성물을 조제하였다. 실시예 40 의 HPLC 크로마토그램을 도 2 에 나타낸다. 이 결과는, 시료 2 의 HPLC 크로마토그램과 동등하였다. 또, 실시예 40 과 동일한 방법으로, 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물 (시료 2) 을 흡착, 물 세정 후, 용출시키는 에탄올 농도를 10 ∼ 60 ％ (v/v) 로 용출시켰다. 그들 용출액 (10, 20, 30, 40, 50, 60 ％ (v/v) 용출액) 을 조합하여 몰비 조정한 용액을, 농축 후 동결 건조시켜, 실시예 41 ∼ 46 의 배당체 조성물을 조제하였다. 실시예 40 ∼ 46 의 배당체 조성물의 물에 대한 용해도는, 헤스페레틴-7-글루코사이드 환산값으로 10 ％ 이상이었다. 또한, 당전이 반응 시, 동 효소량으로, pH 7.5, pH 8.5 에서의 반응액을 조제한 결과, 거의 동량의 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물이 산생했지만, 플라보노이드의 일부 분해에 의해, 용액의 색조가 갈흑색화했기 때문에, pH 6.5 에서 반응시킨 것을 사용하였다. 또한, 실시예 21, 23, 27 ∼ 31 에서 조제한 반응액도, 동 조건으로 시료 2 와 동일한 HPLC 크로마토그램 (도 2) 의 이소퀘르시트린 배당체 조성물이 제조되었다.
[화학식 9]
Figure pct00014
(일반식 (2) 중, Glc 는 글루코오스 잔기를, n 은 0 또는 1 이상의 정수를 의미한다)
용해도 (IQC 환산값, HPT-7G 환산값)
시료 1, 2, 및 실시예 32 ∼ 46 의 플라보노이드 배당체 조성물의 용해도는, 상기 IQC 용해도, HPT-7G 용해도와 동법 (同法) 으로, 이소퀘르시트린 농도, 헤스페레틴-7-글루코사이드 농도를 산출하고, 이소퀘르시트린 환산값, 헤스페레틴-7-글루코사이드 환산값으로 하였다. 또한, 각 환산값이 10 ％ 이상으로 석출이 관찰되지 않는 것은, 용해도를 10 ％ 이상으로서 기술하였다.
실시예 32 ∼ 46 의 플라보노이드 배당체 조성물에 있어서의 몰비 (％) 는 이하의 HPLC (SIMADZU) 조건에서의 분석 결과로부터 다음 식으로부터 산출하였다. 결과를 표 4 에 나타낸다. 또한, 도 1, 도 2 의 n = 0 ∼ n = 7 의 각 피크는, LC/MS (액체 크로마토그래피 질량 분석, SHIMADZU) 에 의해 분석하고, 배당체수를 확인하였다.
몰비 (％) = 플라보노이드 배당체 조성물의 각 피크 면적 × 100 / 플라보노이드 배당체 조성물의 총 피크 면적
＜HPLC 조건 : 실시예 32 ∼ 39＞
칼럼 : CAPCELL PAK C18 SIZE 4.6 ㎜ × 250 ㎜ (SHISEIDO)
용리액 : 물/아세토니트릴/인산 = 799/200/1 (체적비)
검출 : 파장 351 ㎚ 에 있어서의 흡광도 측정
유속 : 0.4 ㎖/min
칼럼 온도 : 70 ℃
<HPLC 조건 : 실시예 40 ∼ 46>
칼럼 : CAPCELL PAK C18 SIZE 4.6 ㎜ × 250 ㎜ (SHISEIDO)
용리액 : 물/아세토니트릴/인산 = 849/150/1 (체적비)
검출 : 파장 280 ㎚ 에 있어서의 흡광도 측정
유속 : 0.4 ㎖/min
칼럼 온도 : 70 ℃
플라보노이드 배당체 조성물의 풍미 평가
실시예 32 ∼ 46 의 플라보노이드 배당체 조성물의 동결 건조물을, 산당액 (酸糖液) (pH 3.1, Brix 10°) 에, 이소퀘르시트린 환산 농도가 0.05 ％ (실시예 32 ∼ 39), 혹은 헤스페레틴-7-글루코사이드 환산 농도가 0.05 ％ (실시예 40 ∼ 46) 가 되도록 첨가하고, 7 명의 패널리스트에 의해 관능 평가 (쓴맛, 아린맛, 수렴미 (收斂味)) 를 실시하였다. 하기의 평가 기준에 따라서, 각각의 평균점을 산출하였다. 또한, 비교예 101 에서 조제한 이소퀘르시트린 0.05 ％ 함유 산당액 (조제 직후 용해액) 에 있어서의 쓴맛, 아린맛, 및 수렴미의 평가점을 가장 강한 1 로서 비교하였다. 또 이소퀘르시트린 0.05 ％ 함유 산당액은, 조제 후 실온에서 30 분은 침전이 관찰되지 않았기 때문에, 그 사이에 관능 평가를 실시하였다. 결과를 표 4 에 나타낸다.
쓴맛의 평가 기준
1 : 쓴맛을 강하게 느낀다
2 : 쓴맛을 약간 강하게 느낀다
3 : 쓴맛을 느낀다
4 : 쓴맛을 살짝 느낀다
5 : 쓴맛을 느끼지 않는다
아린맛의 평가 기준
1 : 아린맛을 강하게 느낀다
2 : 아린맛을 약간 강하게 느낀다
3 : 아린맛을 느낀다
4 : 아린맛을 살짝 느낀다
5 : 아린맛을 느끼지 않는다
수렴미의 평가 기준
1 : 수렴미를 강하게 느낀다
2 : 수렴미를 약간 강하게 느낀다
3 : 수렴미를 느낀다
4 : 수렴미를 살짝 느낀다
5 : 수렴미를 느끼지 않는다
[표 4]
Figure pct00015
표 4 로부터 분명한 바와 같이, 일반식 (1) (2) 에 있어서의 n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 30 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 50 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상인 실시예 36, 38, 39, 40, 41 의 배당체 조성물에서는, 산당액에 의한 관능 평가에서, 유의하게 쓴맛, 아린맛, 및 수렴미가 감소하고 있어, 음식품 용도에 있어서 적합하게 사용할 수 있다. 또한, 실시예 32 ∼ 46 의 배당체 조성물은, 모두 용해성이 우수하기 때문에, 미각과 관계가 없는 용도, 예를 들어, 화장품 등의 용도에 적합하게 사용할 수 있다. 또, 표에는 나타내고 있지 않지만, 실시예 104 ∼ 106 에서 조제한 반응액을 사용하여 얻어진 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물에 대해서도, n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 30 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 50 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상이면, 산당액 아래, 나린게닌-7-글루코사이드 환산 농도 0.05 ％ 에 의한 관능 평가에서, 유의하게 쓴맛, 아린맛, 및 수렴미가 감소하고 있었다.
플라보노이드 배당체 조성물 중의 몰비 (람노오스/플라보노이드)
시료 1, 및 시료 2 의 람노오스 함량 측정 (HPLC 당분석법과 동 조건, 람노오스 (Wako) 로 검량선을 작성) 후에 산출된 몰 농도와 이소퀘르시트린 환산값, 헤스페레틴-7-글루코사이드 환산값으로부터 산출한 몰 농도의 몰비 (람노오스/플라보노이드) 는, 0.8 ∼ 1.2 였다.
퇴색 방지 효과의 평가
실시예 16 의 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물 및 실시예 39 의 플라보노이드 배당체 조성물을, 적양배추 색소 제제 0.05 ％ 함유 산당액 (pH 3.0) 에, 이소퀘르시트린 환산 농도가 0.005 ％ 가 되도록 첨가하고, 자외선 페이드 미터 처리 4 시간 후의 색소 잔존율을 비교한 결과, 무첨가품과 비교해서 퇴색 방지 효과가 관찰되었다. 결과를 표 5 에 나타낸다.
[표 5]
Figure pct00016
표 5 로부터 분명한 바와 같이, 이소퀘르시트린·γ-시클로덱스트린 포접 화합물 함유 조성물, 및 이소퀘르시트린 배당체 조성물에서, 적양배추 색소에 대한 퇴색 방지 효과가 관찰되었다.
향미 열화 방지 효과의 평가 (우유)
실시예 16 의 반응 종료액 100 ㎖ 를, 투석막 (스펙트라/포어 CE 투석용 튜브, MWCO 500-1000, funakoshi 사 제조) 에 넣고, 물 10 ℓ 중에서 투석 (5 회 물 교환, 10 ℃) 을 실시함으로써 람노오스를 제거하고, 그 용액을 동결 건조시켜 22 g 의 건조물을 얻었다. 얻어진 건조물 및 실시예 39 의 플라보노이드 배당체 조성물을, 시판되는 우유 (유지방 3.5 ％, 「메이지 유업」, 메이지사 제조) 에, 이소퀘르시트린 환산 농도가 0.005 ％ 가 되도록 100 ㎖ 투명 유리병에 첨가하고, 형광등 조사 (20000 룩스, 5 시간, 10 ℃) 후의 향미에 대해, 하기 평가 기준에 의해 패널리스트 10 명의 평균점으로 비교한 결과, 향미 열화 방지 효과가 관찰되었다. 결과를 표 6 에 나타낸다.
＜평가 기준＞
1 : 미조사품보다 현저하게 변화하고 있다
2 : 미조사품보다 꽤 변화하고 있다
3 : 미조사품보다 조금 변화하고 있다
4 : 미조사품과 약간 변화하고 있다
5 : 미조사품과 변화 없음
[표 6]
Figure pct00017
표 6 으로부터 분명한 바와 같이, 이소퀘르시트린·γ-시클로덱스트린 포접 화합물, 및 이소퀘르시트린 배당체 조성물에서, 우유에 있어서의 향미 열화 방지 효과가 관찰되었다.
향미 열화 방지 효과의 평가 (젤리)
그레이프후르츠 과즙 (1/6) 0.5 ％, 젤라틴 3 ％, 그레이프후르츠 과립 1 ％, 멀티톨 6 ％, 홍화 황색 제제 0.025 ％ 를 원료로 하는 무첨가품의 그레이프후르츠 젤리를 조제하였다. 실시예 22, 28 의 반응 종료액 100 ㎖ 를, 투석막 (스펙트라/포어 CE 투석용 튜브, MWCO 500-1000, funakoshi 사 제조) 에 넣고, 물 10 ℓ 중에서 투석 (5 회 물 교환, 10 ℃) 을 실시함으로써 람노오스를 제거하고, 그 용액을 동결 건조시켜 실시예 22 로부터 12 g, 실시예 28 로부터 16 g 의 건조물을 얻었다. 얻어진 각 건조물 및 실시예 40 의 플라보노이드 배당체 조성물을, 헤스페레틴-7-글루코사이드 환산 농도가 0.005 ％ 가 되도록 무첨가품의 그레이프후르츠 젤리에 첨가하고, 첨가품의 그레이프후르츠 젤리를 각각 조제하였다. 그 후 93 ℃ 로 가열하고, 이들을 투명 유리병에 밀봉 후, 냉각시키고, 실온하, 통상적인 형광등이 비추는 방에서, 1 개월 보존한 후의 향미에 대해, 하기 평가 기준에 의해 패널리스트 10 명의 평균점으로 비교한 결과, 각 첨가품에 향미 열화 방지 효과가 관찰되었다. 결과를 표 7 에 나타낸다.
＜평가 기준＞
1 : 미조사품보다 현저하게 변화하고 있다
2 : 미조사품보다 꽤 변화하고 있다
3 : 미조사품보다 조금 변화하고 있다
4 : 미조사품과 약간 변화하고 있다
5 : 미조사품과 변화 없음
[표 7]
Figure pct00018
표 7 로부터 분명한 바와 같이, 헤스페레틴-7-글루코사이드·β-시클로덱스트린 포접 화합물, 헤스페레틴-7-글루코사이드·γ-시클로덱스트린 포접 화합물, 및 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물에서, 그레이프후르츠 젤리에 있어서의 향미 열화 방지 효과가 관찰되었다.
보존 안정성의 평가 (산당액)
비교예 101 에서 조제한 이소퀘르시트린, 실시예 16 의 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물, 및 실시예 39 의 플라보노이드 배당체 조성물을, 이소퀘르시트린 환산 농도가 0.03 ％ 가 되도록, 하기 조성으로 이루어지는 pH 3 의 산당액에 용해하고, 100 ㎖ 용량의 유리병에 핫팩 충전 (93 ℃) 하였다. 조제한 용액은 방랭 후, 각각 4 ℃, 25 ℃, 40 ℃ 의 조건하에서 4 개월간 정치하고, 석출의 유무를 육안으로 관찰하였다. 투명하고 침전이 관찰되지 않은 것을 ○, 침전이 관찰된 것을 × 로 하였다. 결과를 표 8 에 나타낸다.
산당액 처방
(질량％)
1. 설탕 10
2. 시트르산 (결정) 0.08
3. 시트르산3나트륨 pH 를 조정 (pH 3)
4. 물 잔부
[표 8]
Figure pct00019
표 8 에 나타내는 바와 같이, 산당액에 이소퀘르시트린을 첨가한 경우, 냉장 (4 ℃), 실온 (25 ℃), 40 ℃ 중 어느 것에 있어서도 보존 직후에 침전이 관찰되었지만, 이소퀘르시트린·γ-시클로덱스트린 포접 화합물, 및 이소퀘르시트린 배당체 조성물을 첨가한 경우에는, 4 개월간 정치해도 침전이 없고, 또한 5 개월의 장기 보존을 해도 침전이 관찰되지 않았다.
보존 안정성의 평가 (차)
헤스페리딘 (하마리 약품 공업 주식회사 제조), 헤스페레틴-7-글루코사이드 (하기에서 조제한 것), 실시예 22 의 플라보노이드 포접 화합물, 및 실시예 40 의 플라보노이드 배당체 조성물의 헤스페레틴-7-글루코사이드 환산 농도가 0.03 ％ 가 되도록, 시판되는 차 (「오이오차」, 이토엔사 제조) 에 첨가하고, 4 ℃, 25 ℃ 에 7 일간 정치 후, 침전의 유무를 육안으로 관찰하였다. 투명하고 침전이 관찰되지 않은 것을 ○, 침전이 관찰된 것을 × 로 하였다. 결과를 표 9 에 나타낸다.
헤스페리딘 (하마리 약품 공업 주식회사 제조) 7 g 을 100 ℓ 수용액에 첨가하고, 70 ℃, pH 4.5 로 조정하였다. 그 후 교반하면서, 나린기나아제 (아마노 엔자임 (주) 155 u/g) 를 0.5 g 첨가하고, 회수·건조시킴으로써, 함량 96 ％ 이상의 헤스페레틴-7-글루코사이드를 4.2 g 얻었다. 헤스페레틴-7-글루코사이드인 것 및 함량은, 상기와 동일하게 NMR 및 HPLC 로부터 분석하였다.
[표 9]
Figure pct00020
표 9 에 나타내는 바와 같이, 차에 헤스페리딘, 헤스페레틴-7-글루코사이드를 첨가한 경우, 냉장 (4 ℃), 실온 (25 ℃) 중 어느 것에 있어서도 보존 직후에 침전이 관찰되었지만, 헤스페레틴-7-글루코사이드 포접 화합물 함유 조성물, 및 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물을 첨가한 경우에는, 7 일 정치해도 침전이 관찰되지 않았다.
보존 안정성의 평가 (레몬 음료)
나린긴 (SIGMA 사 제조), 나린게닌-7-글루코사이드 (하기에서 조제한 것), 실시예 109 의 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물의 나린게닌-7-글루코사이드 환산 농도가 0.3 ％ 가 되도록, 시판되는 레몬 음료 (C1000 레몬 워터, 하우스웰네스 푸즈사 제조) 에 첨가하고, 4 ℃, 25 ℃ 에 1 개월간 정치 후, 침전의 유무를 육안으로 관찰하였다. 투명하고 침전이 관찰되지 않은 것을 ○, 침전이 관찰된 것을 × 로 하였다. 결과를 표 9-2 에 나타낸다.
비교예 102 에 의한 반응 종료 후, 실온 정치 후의 침전물을 회수 후, 물 세정, 재결정, 건조시킴으로써, 함량 95 ％ 이상의 나린게닌-7-글루코사이드를 13 g 얻었다. 시약 나린게닌-7-글루코사이드 (Wako) 를 사용하여 HPLC 로 동일한 것 및 함량을 분석하였다.
[표 9-2]
Figure pct00021
표 9-2 에 나타내는 바와 같이, 레몬 음료에 나린긴, 나린게닌-7-글루코사이드를 첨가한 경우, 냉장 (4 ℃), 실온 (25 ℃) 중 어느 것에 있어서도 침전이 관찰되었지만, 나린게닌-7-글루코사이드 포접 화합물 함유 조성물을 첨가한 경우에는, 1 개월 정치해도 침전이 관찰되지 않았다.
체내 흡수성의 평가
9 주령의 Wister 래트 (수컷) 에게 사료로서, MF (오리엔탈 효모 (주)) 를 주어 7 일간 사육한 후, 시험 물질 투여 전날부터 절식 (絶食) 하에 두었다. 그 후, 향미 열화 방지 효과의 평가에 있어서 조제한 실시예 16 의 건조물 100 μ㏖/㎏ (IQC 환산값), 루틴 현탁액 (알프스 약품 공업, 100 μ㏖/㎏ (IQC 환산값)), 향미 열화 방지 효과의 평가에 있어서 조제한 실시예 22 의 건조물 1000 μ㏖/㎏ (HPT-7G 환산값), 헤스페리딘 현탁액 (하마리 약품 공업 주식회사, 1000 μ㏖/㎏ (HPT-7G 환산값)) 을 단회 경구 투여 (존데 강제 경구 투여, n = 2) 하고, 30 분후, 1 시간 후, 3 시간 후에 있어서, 래트 꼬리 정맥으로부터 헤파린 채혈하고, 원심 분리하여 혈장을 얻었다. 채취한 혈청 시료 중의 케르세틴 유도체 양은 마키노 등의 방법 (Biol. pharm. Bull. 32 (12) 2034,2009), 헤스페레틴 유도체 양은, 야마다 등의 방법 (Biosci. Biotechnol. Biochem, 70 (6), 1386, 2006) 에 준하여, 고속 액체 크로마토그래피 (SHIMADZU) 에 걸고, 포토다이오드 어레이 검출기 (SPD-M30A, SHIMADZU) 를 사용하여 분석하였다. 결과를 표 10, 11 에 나타낸다. 표 10 에는, 0 ∼ 3 시간의 케르세틴 및 케르세틴 유도체 (이소람네틴, 타마리세틴) 의 농도 (μM), 및 그들의 총합의 혈중 농도 시간 곡선하 면적 (AUC) (μM ·h) 을 나타내었다. 또, 표 11 에는, 헤스페레틴 유도체는 검출되지 않았기 때문에, 0 ∼ 3 시간의 헤스페레틴 농도 (μM), 및 그 혈중 농도 시간 곡선하 면적 (AUC) (μM ·h) 을 나타내었다.
[표 10]
Figure pct00022
[표 11]
Figure pct00023
표 10, 11 에 나타내는 바와 같이, AUC 1 ∼ 3 시간 비교에서는, 루틴이나 헤스페리딘과 비교하여, 이소퀘르시트린·γ-시클로덱스트린 포접 화합물이나 헤스페레틴-7-글루코사이드·β-시클로덱스트린 포접 화합물이 래트에게 효율적으로 흡수되는 것을 알 수 있었다. 또 표에는 기재하고 있지 않지만, 실시예 39 의 이소퀘르시트린 배당체 조성물 100 μ㏖/㎏ (IQC 환산값) 은 실시예 16 의 체내 흡수율과 거의 동일하고, 실시예 40 의 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물 1000 μ㏖/㎏ (HPT-7G 환산값) 은 실시예 22 의 체내 흡수율과 거의 동일하였다.
난용성 플라보노이드의 용해성 개선 효과
실시예 110 ∼ 113
표 12 에 나타내는 성분 용량으로 루틴 (RTN) 및 이소퀘르시트린과 γ-시클로덱스트린의 포접 화합물 (IQC-rCD) 을 산당액 (pH 3.1, Brix 10°) 에 용해하고, 100 ㎖ 의 유리병에 핫팩 충전하였다. 조제한 용액을 방랭하고, 냉장 보존 (4 ℃, 6 개월) 후, 침전의 유무를 육안 관찰하였다. 결과를 표 12 에 나타낸다.
비교예 103 ∼ 106, 참고예
표 13 에 나타내는 성분 용량으로 루틴 (RTN) 및 이소퀘르시트린 (IQC) 을 산당액에 용해한 것 이외에는 실시예 110 ∼ 113 과 동일하게 하여 조제, 방랭, 냉장 보존하고, 침전의 유무를 육안 관찰하였다. 결과를 표 13 에 나타낸다.
표 12, 13 에 있어서, IQC/RTN (몰비) 은, 조제 성분 용해 직후의 산당액 1 ㎖ 를 측정 샘플로 하고, HPLC (SHIMADZU, 전화율과 동 조건) 분석 후, 면적비 (이소퀘르시트린의 피크 면적/루틴의 피크 면적) 를 몰비로서 나타내었다.
[표 12]
Figure pct00024
[표 13]
Figure pct00025
표 12, 13 의 주석
(41) 산당액 중의 루틴 농도 (질량％)
(42) 산당액 중의 이소퀘르시트린-γ-시클로덱스트린 포접 화합물 농도 (질량％)
(43) 산당액 중의 이소퀘르시트린 농도 (질량％)
(44) 산당액 중의 γ-시클로덱스트린 농도 (질량％)
(45) 용해성 :
침전이 관찰되지 않는다 : ―
침전의 양이 적다 : ＋
침전의 양이 약간 많다 : ＋＋
침전의 양이 많다 : ＋＋＋
(46) 산당액 중의 이소퀘르시트린/루틴 (몰비)
표 12, 13 에 나타내는 바와 같이, 이소퀘르시트린-γ-시클로덱스트린 포접 화합물을 첨가한 실시예 110 ∼ 113 에서는 루틴의 용해성이 향상되어 있고, 특히 이소퀘르시트린과 루틴의 몰비 (이소퀘르시트린/루틴) 가 0.1 ∼ 0.7 의 범위에서는, 침전이 관찰되지 않았다. 이들 결과는, 실시예 10, 13, 14 의 플라보노이드 포접 화합물 동결 건조물 (람노오스를 투석에 의해 제거한 것), 및 람노오스를 함유하는 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물 동결 건조물에서도 동일한 결과를 나타내었다. 한편, 표 13 에 나타내는 바와 같이, 이소퀘르시트린만을 첨가한 것에서는, 모두 침전이 관찰되었다.
또, 표 12, 13 에 있어서, 이소퀘르시트린과 이소퀘르시트린-β-시클로덱스트린 (실시예 1 ∼ 7 의 동결 건조물), 또 루틴 대신에 헤스페리딘과 헤스페레틴-7-글루코사이드-β-시클로덱스트린 (실시예 18 ∼ 23 의 동결 건조물), 혹은 헤스페레틴-7-글루코사이드-γ-시클로덱스트린 (실시예 27 ∼ 31 의 동결 건조물) 에 있어서도 동일한 결과가 얻어졌다.
이소퀘르시트린-γ-시클로덱스트린 포접 화합물의 장기 안정성 및 수렴미의 평가
실시예 114 ∼ 117
표 14 에 나타내는 성분 용량으로 한 것 이외에는 실시예 110 ∼ 113 과 동일하게 용액을 조제하고, 방랭 직후에 수렴미에 대해 관능 평가를 실시하였다. 또 동 성분 용량의 것을 별도 조제하고, 냉장 보존 (4 ℃, 12 개월) 후, 침전의 유무를 육안 관찰하였다. 결과를 표 14 에 나타낸다.
비교예 107 ∼ 110
표 15 에 나타내는 성분 용량으로 한 것 이외에는 비교예 103 ∼ 106 과 동일하게 용액을 조제하고, 방랭 직후에 수렴미에 대해 관능 평가를 실시하였다. 또 동 성분 용량의 것을 별도 조제하고, 냉장 보존 (4 ℃, 12 개월) 후, 침전의 유무를 육안 관찰하였다. 결과를 표 15 에 나타낸다.
표 14, 15 에 있어서, RTN/IQC (몰비) 는, 조제 성분 용해 직후의 산당액 1 ㎖ 를 측정 샘플로 하고, HPLC (SHIMADZU, 전화율과 동 조건) 분석 후, 면적비 (루틴의 피크 면적/이소퀘르시트린의 피크 면적) 를 몰비로서 나타내었다.
[표 14]
Figure pct00026
[표 15]
Figure pct00027
표 14, 15 의 주석
(51) 산당액 중의 이소퀘르시트린-γ-시클로덱스트린 포접 화합물 농도 (질량％)
(52) 산당액 중의 이소퀘르시트린 농도 (질량％)
(53) 산당액 중의 γ-시클로덱스트린 농도 (질량％)
(54) 산당액 중의 루틴 농도 (질량％)
(55) 용해성 :
침전이 관찰되지 않는다 : ―
침전의 양이 적다 : ＋
침전의 양이 약간 많다 : ＋＋
침전의 양이 많다 : ＋＋＋
(56) 산당액 중의 루틴/이소퀘르시트린 (몰비)
(57) 산당액 조제 방랭 직후, 10 명의 패널리스트에 의해, 무첨가의 산당액과 비교하여, 가장 강하게 수렴미를 느낀 샘플을 3 점으로 하고, 이하, 2 점, 1 점으로 하고, 그 평균을 나타내었다.
또한, 비교예 107 ∼ 110 은 조제 방랭 후, 실온에서 30 분간은 침전이 관찰되지 않았기 때문에, 그 사이에 관능 평가를 실시하였다.
표 14 에 나타내는 바와 같이, 본 발명의 제조 방법으로 얻어진 이소퀘르시트린과 γ-시클로덱스트린의 포접 화합물을 포함하는 조성물 중에, 루틴을 특정량 함유해도 포접 화합물의 장기 안정성에 문제가 없는 것을 확인하였다. 또, 수렴미에 대해서도 약하고, 음식품에 첨가했을 때에 있어서의 풍미에 미치는 영향이 적어지는 것을 확인하였다. RTN/IQC (몰비) 가 0.08 이하인 범위 (실시예 114 ∼ 117) 에서는, 특히 수렴미가 약했다. 이들 결과는, 실시예 10, 13, 14 의 플라보노이드 포접 화합물 동결 건조물 (람노오스를 투석에 의해 제거한 것), 및 람노오스를 함유하는 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물 동결 건조물에서도 동일한 결과를 나타내었다. 한편, 표 15 에 나타내는 바와 같이, 이소퀘르시트린을 포함하는 조성물에 있어서는, 루틴을 함유하면 모두 침전이 관찰되고, 수렴미에 대해서도 강한 것이었다.
또, 표 14, 15 에 있어서, 이소퀘르시트린과 이소퀘르시트린-β-시클로덱스트린 (실시예 1 ∼ 7 의 동결 건조물), 또 루틴 대신에 헤스페리딘과 헤스페레틴-7-글루코사이드-β-시클로덱스트린 (실시예 18 ∼ 23 의 동결 건조물), 혹은 헤스페레틴-7-글루코사이드-γ-시클로덱스트린 (실시예 27 ∼ 31 의 동결 건조물) 에 있어서도 동일한 결과가 얻어졌다.
실시예 110 ∼ 117, 비교예 103 ∼ 110, 참고예에서 사용한 성분의 상세한 내용을 하기에 나타낸다.
RTN : 99.5 ％ 용량 에탄올 90 g 과 루틴 (조제품 : 이소퀘르시트린/루틴의 몰비가 0.3/99.7) 10 g 의 가열 용해물
IQC-rCD : 실시예 16 의 동결 건조품 (투석에 의한 람노오스 제거품, (루틴/이소퀘르시트린의 몰비가 0.3/99.7))
IQC : 99.5 ％ 용량 에탄올 18 g 과 이소퀘르시트린 (조제품 : 루틴/이소퀘르시트린의 몰비가 0.3/99.7) 2 g 의 가열 용해물
플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물, 및 플라보노이드 배당체 조성물의 처방예
처방예 1 : 그레이프후르츠 음료
향미 열화 방지를 위해서, 실시예 16 의 이소퀘르시트린·γ-시클로덱스트린 포접 화합물 함유 조성물의 건조물을 함유하는 음료를 조제하였다. 본품은, 음료로서 적합하게 이용할 수 있다.
성분 질량％
그레이프후르츠 농축 과즙 5.0
포도당 과당 혼합액당 0.9
멀티톨 2.0
산미료 0.3
비타민 C 0.02
향료 0.1
실시예 16 의 건조물 0.02
물 잔부
합계 100
처방예 2 : 젤리
향미 열화 방지를 위해서, 실시예 22 의 헤스페레틴-7-글루코사이드·β-시클로덱스트린 포접 화합물 함유 조성물의 건조물을 함유하는 젤리를 조제하였다. 본품은, 식품 (젤리) 으로서 적합하게 이용할 수 있다.
성분 질량％
설탕 10.0
레몬 농축 과즙 8.5
치자나무 황색 제제 0.004
산미료 1.0
겔화제 1.5
비타민 C 0.02
향료 0.2
실시예 22 의 건조물 0.04
물 잔부
합계 100
처방예 3 : 화장품
칙칙함이나 부종의 피부 개선을 위해서, 실시예 40 의 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물의 건조물을 함유하는 화장품을 조제하였다. 본품은, 스킨 케어 화장품으로서 적합하게 이용할 수 있다.
성분 질량％
글리세린 5.0
프로필렌글리콜 4.0
올레일알코올 0.1
계면 활성제 2.0
에틸알코올 10.0
향료 0.1
실시예 40 의 건조물 0.26
정제물 잔부
합계 100
처방예 4 : 정제
체온 완화를 위해서, 실시예 22 의 헤스페레틴-7-글루코사이드·β-시클로덱스트린 포접 화합물 함유 조성물의 건조물을 함유하는 정제를 조제하였다. 본품은, 건강 식품으로서 적합하게 사용할 수 있다.
성분 질량％
멀티톨 69.0
트레할로스 12.9
산미료 2.5
스테아르산 Ca 0.5
비타민 C 0.02
향료 0.08
실시예 22 의 건조물 15.0
합계 100
처방예 5 : 커피 음료
체지방 감소를 위해서, 실시예 39 의 이소퀘르시트린 배당체 조성물의 건조물을 함유하는 커피 음료를 조제하였다. 본품은, 특정 보건용 식품으로서 적합하게 이용할 수 있다.
성분 질량％
커피 추출물 32.6
설탕 6.0
향료 0.06
실시예 39 의 건조물 0.06
물 잔부
합계 100
처방예 6 : 홍차 음료
중성 지방 감소를 위해서, 실시예 40 의 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물의 건조물을 함유하는 홍차 음료를 조제하였다. 본품은, 기능성 표시 식품으로서 적합하게 이용할 수 있다.
성분 질량％
홍차 추출액 18.6
탄산수소나트륨 0.002
수크랄로오스 0.003
비타민 C 0.03
향료 0.1
실시예 40 의 건조물 0.06
물 잔부
합계 100
처방예 7 : 육모제
두피 개선을 위해서, 실시예 22 의 헤스페레틴-7-글루코사이드·β-시클로덱스트린 포접 화합물 함유 조성물의 건조물을 함유하는 육모제를 조제하였다.
성분 질량％
에틸알코올 60.0
쓴풀 엑기스 5.0
아세트산 토코페롤 0.2
판토테닐에틸에테르 0.2
프로필렌글리콜 5.0
방부제 0.1
향료 0.2
실시예 22 의 건조물 0.03
정제물 잔부
합계 100
처방예 8 : 헤어 샴푸
염증 예방을 위해서, 실시예 27 의 헤스페레틴-7-글루코사이드·γ-시클로덱스트린 포접 화합물 함유 조성물의 건조물을 함유하는 헤어 샴푸를 조제하였다.
성분 질량％
폴리옥시에틸렌(2)라우릴에테르
황산나트륨 9.0
라우릴황산나트륨 4.0
야자유 지방산 아미드프로필베타인 3.0
고중합 메틸폴리실록산 2.0
메틸폴리실록산 1.0
야자유 지방산 모노에탄올아미드 1.0
프로필렌글리콜 2.0
디스테아린산에틸렌글리콜 2.0
방부제 0.1
향료 0.1
실시예 27 의 건조물 0.03
물 잔부
합계 100
처방예 9 : 다이어트용 정제
다이어트를 위해서, 실시예 109 의 나린게닌-7-글루코사이드-β-시클로덱스트린 포접 화합물 함유 조성물의 건조물을 함유하는 정제를 조제하였다. 본품은, 건강 식품으로서 적합하게 이용할 수 있다.
성분 질량％
멀티톨 64.0
트레할로스 12.9
산미료 2.5
스테아르산 Ca 0.5
비타민 C 0.02
향료 0.08
실시예 109 의 건조물 20.0
합계 100
산업상 이용가능성
본 발명의 제조 방법에 의하면, 물에 대한 용해성이 우수한 플라보노이드 포접 화합물이나 플라보노이드 배당체 조성물을 효율적으로 생산할 수 있고, 의약품, 음식품, 건강 식품, 특정 보건용 식품, 및 화장품 등의 분야에 있어서 적합하게 이용할 수 있다.

Claims (34)

  1. 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를, 시클로덱스트린의 존재하, 람노시다아제 활성을 갖는 효소로 처리하여 람노오스를 탈리하는 탈리 공정을 포함하는, 플라보노이드 포접 화합물의 제조 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드가, 루틴, 헤스페리딘, 나리루틴, 나린긴, 디오스민, 에리오시트린, 미리시트린, 네오헤스페리딘, 루테올린-7-루티노시드, 델피니딘-3-루티노시드, 시아니딘-3-루티노시드, 이소람네틴-3-루티노시드, 켐페롤-3-루티노시드, 아피게닌-7-루티노시드, 및 아카세틴-7-루티노시드로 이루어지는 군에서 선택되는 1 종 이상인, 제조 방법.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 시클로덱스트린이, β-시클로덱스트린, 분지 β-시클로덱스트린, 및 γ-시클로덱스트린으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 종 이상인, 제조 방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드 1 몰에 대하여, 상기 시클로덱스트린을 0.01 몰 이상의 비율로 존재시키는, 제조 방법.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 탈리 공정이 pH 3 ∼ 7 의 물 매체에서 실시되는, 제조 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 플라보노이드 포접 화합물이, 상기 람노시드 구조를 갖지 않는 난용성 플라보노이드가 시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물이고, 상기 람노시드 구조를 갖지 않는 난용성 플라보노이드와 상기 시클로덱스트린의 몰비 (시클로덱스트린/플라보노이드) 가 1.0 ∼ 3.0 인, 제조 방법.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 플라보노이드 포접 화합물이, 이소퀘르시트린이 γ-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물이고, 상기 이소퀘르시트린과 상기 γ-시클로덱스트린의 몰비 (γ-시클로덱스트린/이소퀘르시트린) 가 0.9 ∼ 4.0 인, 제조 방법.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 플라보노이드 포접 화합물이, 이소퀘르시트린이 γ-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물이고, 상기 이소퀘르시트린과 상기 γ-시클로덱스트린의 몰비 (γ-시클로덱스트린/이소퀘르시트린) 가 0.9 ∼ 1.8 인, 제조 방법.
  9. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 플라보노이드 포접 화합물이, 이소퀘르시트린이 β-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물이고, 상기 이소퀘르시트린과 상기 β-시클로덱스트린의 몰비 (β-시클로덱스트린/이소퀘르시트린) 가 1.0 ∼ 3.0 인, 제조 방법.
  10. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 플라보노이드 포접 화합물이, 헤스페레틴-7-글루코사이드가 시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물이고, 상기 헤스페레틴-7-글루코사이드와 상기 시클로덱스트린의 몰비 (시클로덱스트린/헤스페레틴-7-글루코사이드) 가 1.0 ∼ 3.0 인, 제조 방법.
  11. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 플라보노이드 포접 화합물이, 나린게닌-7-글루코사이드가 β-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물이고, 상기 나린게닌-7-글루코사이드와 상기 β-시클로덱스트린의 몰비 (β-시클로덱스트린/나린게닌-7-글루코사이드) 가 1.0 ∼ 3.0 인, 제조 방법.
  12. 제 7 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,
    얻어지는 이소퀘르시트린 포접 화합물은 체내 흡수성이 향상된 것인, 제조 방법.
  13. 제 10 항에 있어서,
    얻어지는 헤스페레틴-7-글루코사이드 포접 화합물은 체내 흡수성이 향상된 것인, 제조 방법.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 포접 화합물을 당전이 효소로 처리하여 배당체화하는 배당체화 공정을 포함하는, 플라보노이드 배당체 조성물의 제조 방법.
  15. 제 14 항에 있어서,
    상기 배당체화 공정이 pH 3 ∼ 7 의 물 매체에서 실시되는, 제조 방법.
  16. 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를, 시클로덱스트린의 존재하, 람노시다아제 활성을 갖는 효소로 처리하여 람노오스를 탈리하는 탈리 공정, 및 상기 탈리 공정을 거쳐 얻어진 플라보노이드 포접 화합물을 당전이 효소로 처리하여 배당체화하는 배당체화 공정을 포함하는, 플라보노이드 배당체 조성물의 제조 방법.
  17. 이소퀘르시트린이 γ-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 이소퀘르시트린과 상기 γ-시클로덱스트린의 몰비 (γ-시클로덱스트린/이소퀘르시트린) 가 0.9 ∼ 1.8 이고, 상기 이소퀘르시트린의 물에 대한 용해도가 2 ％ 이상인, 플라보노이드 포접 화합물.
  18. 이소퀘르시트린이 γ-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 이소퀘르시트린과 상기 γ-시클로덱스트린의 몰비 (γ-시클로덱스트린/이소퀘르시트린) 가 0.9 ∼ 4.0 이고, 상기 이소퀘르시트린의 물에 대한 용해도가 2.5 ％ 이상인, 플라보노이드 포접 화합물.
  19. 제 17 항 또는 제 18 항에 있어서,
    상기 이소퀘르시트린과 상기 γ-시클로덱스트린의 몰비 (γ-시클로덱스트린/이소퀘르시트린) 가 1.0 ∼ 1.8 이고, 감미가 저감되어 있는, 플라보노이드 포접 화합물.
  20. 이소퀘르시트린이 β-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 이소퀘르시트린과 상기 β-시클로덱스트린의 몰비 (β-시클로덱스트린/이소퀘르시트린) 가 1.0 ∼ 3.0 이고, 상기 이소퀘르시트린의 물에 대한 용해도가 0.1 ％ 이상인, 플라보노이드 포접 화합물.
  21. 헤스페레틴-7-글루코사이드가 시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 헤스페레틴-7-글루코사이드와 상기 시클로덱스트린의 몰비 (시클로덱스트린/헤스페레틴-7-글루코사이드) 가 1.0 ∼ 3.0 이고, 상기 헤스페레틴-7-글루코사이드의 물에 대한 용해도가 0.01 ％ 이상인, 플라보노이드 포접 화합물.
  22. 제 21 항에 있어서,
    상기 헤스페레틴-7-글루코사이드와 상기 시클로덱스트린의 몰비 (시클로덱스트린/헤스페레틴-7-글루코사이드) 가 1.0 ∼ 1.9 이고, 감미가 저감되어 있는, 플라보노이드 포접 화합물.
  23. 나린게닌-7-글루코사이드가 β-시클로덱스트린에 포접된 플라보노이드 포접 화합물로서, 상기 나린게닌-7-글루코사이드와 상기 β-시클로덱스트린의 몰비 (β-시클로덱스트린/나린게닌-7-글루코사이드) 가 1.0 ∼ 3.0 이고, 상기 나린게닌-7-글루코사이드의 물에 대한 용해도가 0.01 ％ 이상인, 플라보노이드 포접 화합물.
  24. 제 17 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 기재된 플라보노이드 포접 화합물과 람노오스를 포함하고, 상기 플라보노이드 포접 화합물 중의 플라보노이드와 상기 람노오스의 몰비 (람노오스/플라보노이드) 가 0.8 ∼ 1.2 인, 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물.
  25. 제 17 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 기재된 플라보노이드 포접 화합물과, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드를 포함하고, 상기 플라보노이드 포접 화합물 중의 플라보노이드와 상기 난용성 플라보노이드의 몰비 (난용성 플라보노이드/포접 화합물 중의 플라보노이드) 가 0.001 ∼ 0.1 인, 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물.
  26. 하기 일반식 (1) 로 나타내는 화합물을 포함하는 이소퀘르시트린 배당체 조성물로서, 상기 배당체 조성물 중, n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 30 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 50 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상인, 이소퀘르시트린 배당체 조성물.
    Figure pct00028

    (일반식 (1) 중, Glc 는 글루코오스 잔기를, n 은 0 또는 1 이상의 정수를 의미한다)
  27. 제 26 항에 있어서,
    쓴맛이 저감된, 이소퀘르시트린 배당체 조성물.
  28. 하기 일반식 (2) 로 나타내는 화합물을 포함하는 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물로서, 상기 배당체 조성물 중, n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 30 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 50 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상인, 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물.
    Figure pct00029

    (일반식 (2) 중, Glc 는 글루코오스 잔기를, n 은 0 또는 1 이상의 정수를 의미한다)
  29. 제 28 항에 있어서,
    쓴맛이 저감된, 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물.
  30. 하기 일반식 (3) 으로 나타내는 화합물을 포함하는 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물로서, 상기 배당체 조성물 중, n = 0 의 배당체의 함유량이 10 몰％ 이상 30 몰％ 이하이고, n = 1 ∼ 3 의 배당체의 함유량이 50 몰％ 이하이고, n = 4 이상의 배당체의 함유량이 30 몰％ 이상인, 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물.
    Figure pct00030

    (일반식 (3) 중, Glc 는 글루코오스 잔기를, n 은 0 또는 1 이상의 정수를 의미한다)
  31. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 포접 화합물, 제 14 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 배당체 조성물, 제 17 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 기재된 플라보노이드 포접 화합물, 제 24 항 또는 제 25 항에 기재된 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물, 제 26 항 또는 제 27 항에 기재된 이소퀘르시트린 배당체 조성물, 제 28 항 또는 제 29 항에 기재된 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물, 및 제 30 항에 기재된 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물로 이루어지는 군에서 선택되는 1 종 이상의 화합물 또는 조성물을 포함하는, 음식품.
  32. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 포접 화합물, 제 14 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 배당체 조성물, 제 17 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 기재된 플라보노이드 포접 화합물, 제 24 항 또는 제 25 항에 기재된 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물, 제 26 항 또는 제 27 항에 기재된 이소퀘르시트린 배당체 조성물, 제 28 항 또는 제 29 항에 기재된 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물, 및 제 30 항에 기재된 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물로 이루어지는 군에서 선택되는 1 종 이상의 화합물 또는 조성물을 포함하는, 의약품.
  33. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 포접 화합물, 제 14 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 배당체 조성물, 제 17 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 기재된 플라보노이드 포접 화합물, 제 24 항 또는 제 25 항에 기재된 플라보노이드 포접 화합물 함유 조성물, 제 26 항 또는 제 27 항에 기재된 이소퀘르시트린 배당체 조성물, 제 28 항 또는 제 29 항에 기재된 헤스페레틴-7-글루코사이드 배당체 조성물, 및 제 30 항에 기재된 나린게닌-7-글루코사이드 배당체 조성물로 이루어지는 군에서 선택되는 1 종 이상의 화합물 또는 조성물을 포함하는, 화장품.
  34. 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드와, 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 기재된 제조 방법에 의해 얻어진 플라보노이드 포접 화합물 혹은 제 17 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 기재된 플라보노이드 포접 화합물을, 상기 플라보노이드 포접 화합물 중의 플라보노이드와 상기 난용성 플라보노이드의 몰비 (포접 화합물 중의 플라보노이드/난용성 플라보노이드) 가 0.1 ∼ 0.9 가 되도록 매체 중에서 혼합하는, 람노시드 구조를 갖는 난용성 플라보노이드의 용해성을 향상시키는 방법.
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