KR20150129668A - 호흡기 세포융합 바이러스 f 단백질에 대한 인간 항체 및 이것의 사용방법 - Google Patents

호흡기 세포융합 바이러스 f 단백질에 대한 인간 항체 및 이것의 사용방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질에 결합하는 완전한 인간 항체, 상기 항체를 포함하는 조성물 및 이것의 사용 방법을 제공한다. 본 발명의 항체는 바이러스의 세포막 융합을 방지하고 상기 바이러스의 세포간 전파를 방지하는 데 유용하기 때문에, 상기 감염을 예방하거나, 또는 상기 감염을 앓는 환자를 치료하고 상기 바이러스 감염과 관련된 하나 이상의 증상 또는 합병증을 완화하기 위한 수단을 제공한다. 상기 항체는 또한 RSV에 의한 감염의 진단에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질에 대한 인간 항체 및 이것의 사용방법{HUMAN ANTIBODIES TO RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS F PROTEIN AND METHODS OF USE THEREOF}
본 발명은 특이적으로 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 결합하는 인간 항체 및 인간 항체의 항원-결합 절편, 이와 같은 항체를 포함하는 조성물 및 이와 같은 항체의 사용 방법에 관한 것이다.
호흡기 세포융합 바이러스(RSV)는 영유아의 중증 기도감염의 주요 원인인 음성 극성, 단일 가닥 RNA 바이러스로, 1차 감염은 생후 6주에서 2세의 아동에게서 발생하고, 이례적으로 병원 감염성 전염병 기간 동안 출생 후 4주 동안 발생한다(Hall 등, 1979, New Engl. J. Med. 300:393-396). (Feigen 등,eds., 1987, In: Textbook of Pediatric Infectious Diseases, W B Saunders, Philadelphia at pages 1653-1675; New Vaccine Development, Establishing Priorities, Vol. 1, 1985, National Academy Press, Washington D.C. at pages 397-409; Ruuskanen 등, 1993, Curr. Probl. Pediatr. 23:50-79; Hall 등, 1979, New Engl. J. Med. 300:393-396). 특정 계층의 아동은 RSV 감염 발생의 위험이 있는데, 이와 같은 아동에는 조산아 (Hall 등, 1979, New Engl. J. Med. 300:393-396), 선천성 기도 기형, 기관지폐이형성증이 있는 아동(Groothuis 등, 1988, Pediatrics 82:199-203), 선천성 심장병이 있는 아동(MacDonald 등, New Engl. J. Med. 307:397-400), 선천성 또는 후천성 면역결핍증이 있는 아동(Ogra 등, 1988, Pediatr. Infect. Dis. J. 7:246-249; 및 Pohl 등, 1992, J. Infect. Dis. 165:166-169), 및 낭포성 섬유증이 있는 아동(Abman 등, 1988, J. Pediatr. 113:826-830)이 포함된다.
RSV는 성인층도 감염시킬 수 있다. 이와 같은 계층에서, RSV는 주로 상기도 질환을 유발시키는데, 면역억제된 성인, 특히 골수 이식 환자(Hertz 등, 1989, Medicine 68:269-281)를 비롯하여, 고령 환자는 중증 감염 및 (Evans, A. S., eds., 1989, Viral Infections of Humans. Epidemiology and Control, 3rd ed., Plenum Medical Book, New York at pages 525-544)에 걸릴 위험이 더 클 수 있다. 그 밖의 위험 환자에는울혈성 심부전을 앓는 환자 및 만성 폐쇄성 폐질환(즉, COPD)을 않는 환자가 포함된다. 요양원 입원 환자 및 보호시설 수감 중인 청년들 사이에서의 전염병에 대한 보고들이 있었다(Falsey, A. R., 1991, Infect. Control Hosp. Epidemiol. 12:602-608; 및 Garvie 등, 1980, Br. Med. J. 281:1253-1254).
기존 RSV 질환에 대한 치료 선택이 제한될 경우, 하기도의 좀더 심각한 형태의 질병은 종종 상당한 보조적 치료, 가습 산소 및 호흡기 보조를 요구한다(Fields 등, eds, 1990, Fields Virology, 2nd ed., Vol. 1, Raven Press, New York at pages 1045-1072).
감염 치료용으로 승인된 유일한 약물인 리바비린이 RSV 감염과 관련된 폐렴 및 기관지염의 치료에 효과가 있는 것으로 나타난 바 있고, 면역적격 아동에서 중증 RSV 질환의 경과를 변경시키는 것으로 나타난 바 있다(Smith 등, 1991, New Engl. J. Med. 325:24-29). 리바비린의 사용은 제한적인데, 그 이유는 병원 환경에서 투여되는 동안 에어로졸화된 약물에 노출될 수 있는 임신부에 대한 상기 약물의 잠재적 위험을 둘러싼 문제 때문이다.
이와 유사하게, 백신이 유용할 수 있지만, 지금까지 구매할 수 있는 백신은 개발되지 않은 상태다. 여러 백신 후보군이 폐기되었고, 다른 후보군들은 개발 중이다(Murphy 등, 1994, Virus Res. 32:13-36). 백신 개발이 문제임이 입증된 바 있다. 특히, 하기도 질환의 최고 발생률이 생후 2 개월 내지 5개월 연령의 영아에게서 발생하기 때문에 출산 직후의 신생아 시기에 면역 예방주사가 요구될 것이다. 그러나, 신생아면역 반응은 그 당시에 성숙하지 못한 것으로 알려져 있다. 그 뿐만 아니라, 그 시점의 영아는 모체에게서 얻은 RSV 항체의 높은 역가를 갖고, 이것이 백신 면역원성을 감소시킬 수도 있다(Murphy 등, 1988, J. Virol. 62:3907-3910; 및 Murphy 등, 1991, Vaccine 9:185-189).
RSV 표면 상의 두 당단백질인 F 및 G는 중화 항체의 표적임이 나타난 바 있다(Fields 등, 1990, supra; 및 Murphy 등, 1994, supra). 이와 같은 두 단백질은 또한 바이러스 인지 및 표적 세포로의 진입의 주요한 원인이다; G 단백질은 특이적 세포 수용체에 결합하고, F 단백질은 상기 바이러스와 세포의 융합을 촉진한다. F 단백질은 또한 감염된 세포의 표면에서 발현되어 기타 세포들과의 순차적 융합의 원인이 되어, 결과적으로 합보체(syncytia) 형성 및 세포간 바이러스 전파를 초래한다.
현재, RSV 질환의 예방과 관련하여 유일하게 승인된 접근방법은 수동 면역이다. 예를 들어, F 단백질 상의 항원결정부에 특이적인 인간화된 항체, 팔리비주맙(SYNAGIS®)이 RSV 유행시기(북반구의 경우 11월에서 4월까지)에 걸쳐, RSV에 의해 유발되는 중증 하기도 질환의 예방을 위해, 소아환자에게 체중당 1개월 권장 복용량 15 mg/kg의 근육내 투여가 승인된 바 있다. SYNAGIS®는 인간(95%)과 쥣과 (5%) 항체 서열의 복합체이다. (Johnson 등, (1997), J. Infect. Diseases 176:1215-1224 and U.S. Pat. No. 5,824,307).
SYNAGIS®가 소아 환자의 RSV 감염 예방에 성공적으로 사용되고 있지만, 예방 효과를 달성하기 위해서는 SYNAGIS® 15 mg/kg의 근육내 투여가 여러 차례 필요하다. 항체를 여러 차례 근육내 투여해야 할 경우, 수회 의사를 방문해야 하는데, 이것은 환자에게 불편할 뿐만 아니라, 또한 투여를 빼먹는 결과를 낳을 수 있다.
항-RSV-F 항체의 치료 프로파일을 개선하기 위한 노력이 이루어졌고, 이것은 결과적으로 NUMAX™이라고도 알려진 모타비주맙(motavizumab)의 확인 및 개발을 가져왔다. 그러나, 임상실험 결과, 모타비주맙을 투여받은 환자들 중 일부가 중증 과민 반응을 나타낸다는 것이 밝혀졌다. 이후 상기의 인간화 항-RSV-F 항체의 추가적인 개발은 중지되었다.
RSV-F 단백질에 대한 기타 항체를 US6656467; US5824307, US 7786273; US 7670600; US 7083784; US6818216; US7700735; US7553489; US7323172; US7229619; US7425618; US7740851; US7658921; US7704505; US7635568; US6855493; US6565849; US7582297; US7208162; US7700720; US6413771; US5811524; US6537809; US5762905; US7070786; US7364742; US7879329; US7488477; US7867497; US5534411; US6835372; US7482024; US7691603; US8562996; US8568726; US20100015596; WO2009088159A1에서 찾을 수 있다. 오늘날, SYNAGIS® 이외의 어떤 약도 규제기관에 의해 RSV 감염의 예방에 사용을 승인 받지 못했다.
따라서, RSV-F와 같은 RSV 항원에 특이적으로 결합하고, 상당히 강력하며, 임상에 사용하기 위한 승인을 불가능하게 하는 부작용을 야기하지 않는 항체에 대한 요구가 여전히 존재한다.
발명의 요약
본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 완전한 인간 단클론 항체(mAbs) 및 이것의 항원-결합 절편을 제공한다. 바이러스와 세포의 융합 및 바이러스의 세포간 전파에서의 F 단백질의 역할을 고려할 때, 본원에 기술된 항체는 RSV 감염에 노출되었거나 또는 감염을 얻을 위험에 있는 환자의 감염을 방지하기 위해, 또는 RSV 감염에 노출되었거나 또는 감염을 얻을 위험에 처한, 또는 RSV 감염을 앓는 환자에게서 RSV 감염 관련 증상들 중 하나 이상을 치료하고 및/또는 완화하기 위해 사용될 수 있는, 감염 과정을 억제하는 방법을 제공한다. 본원에 기술된 항체는 또한 기저 질환 또는 기존의 질환 때문에 좀 더 중증의 RSV 감염 형태를 경험할 수 있는 환자에게서 RSV 감염을 예방하거나 또는 치료하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 항체를 이용한 치료로 혜택을 볼 수 있는 환자는 미숙아, RSV 유행시기(대략 늦은 가을(11월)에서 초봄(4월)까지)에 태어난, 선천성 심장병 또는 만성 폐질환을 비롯한 기타 기존의 의료 상황 또는 기저 질환 때문에 위험이 있는 만삭 출생아, 기저 질환이 있거나 또는 없는 만 1세를 초과한 아동, 보호시설에 수감된 또는 입원한 환자, 또는 기저 질환, 예컨대 울혈성 심부전(CHF) 또는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD)이 있는 또는 없는 노인(> 만 65세)일 것이다. 이와 같은 치료로 혜택을 받을 수 있는 환자는 손상된 폐, 심혈관, 신경근육 또는 면역계로 인한 질환을 앓을 수 있다. 예를 들어, 상기 환자는 기도의 비정상 또는 기도의 기능 부전, 만성 폐질환, 만성 또는 선천성 심질환, 호흡기 분비물의 취급을 어렵게 만드는 신경근육 질환을 앓을 수 있고, 또는 상기 환자는 중증 복합 면역결핍증 질환 또는 중증 후천성 면역결핍증 질환으로 인해 면역이 억제되었거나, 또는 면역 억제를 초래하는 기타 다른 기저 감염성 질환 또는 암 질환을 앓을 수 있고, 또는 상기 환자는 면역억제제(예를 들어, 이식 환자를 치료하기 위해 사용되는 약물) 치료 또는 방사선 치료로 인해 면역이 억제되었을 수 있다. 본 발명의 항체로 혜택을 받을 수 있는 환자는 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 낭포성 섬유증(CF), 기관지폐이형성증, 울혈성 심부전 (CHF), 또는 선천성 심 질환을 앓는 환자일 수 있다.
본 발명의 항체가 알려진 항체와 비교하여 RSV의 중화에 더욱 효과적이기 때문에, 더 적은 용량의 항체 또는 항체 절편을 사용하여 RSV 감염에 대한 더 높은 수준의 보호를 달성하고, RSV 감염 관련 증상의 좀 더 효과적인 치료 및/또는 개선을 달성할 수 있다. 이에 따라, 면역 특이적으로 RSV-F 항원에 결합하는 항체 또는 이것의 절편을 더 적은 용량 사용하는 것은 심각한 부작용을 더 적게 초래할 수 있다. 이와 마찬가지로, 좀 더 효과적인 중화 항체의 사용은 기존에 감염의 예방, 또는 바이러스 중화, 또는 RSV 감염과 관련된 하나 이상의 증상의 치료 또는 개선을 위해 필요하다고 구상되었던 투여 빈도보다 감소된 투여빈도의 상기 항체 또는 항체 절편의 필요를 야기할 수 있다. RSV 감염의 증상에는 산소 부족(저산소증)으로 인한 청색증, 호흡 곤란(가쁜 호흡 또는 숨가쁨), 기침, 크루프성 기침 (“물개 짖는 소리”와 같은 기침), 열, 비공 확장, 비충혈 (코막힘), 무호흡, 식욕 감퇴, 탈수증, 음식섭취 곤란, 정신상태 변화, 또는 천명이 포함될 수 있다.
이와 같은 항체는 예방차원에서 투여될 때(바이러스에 노출 전 및 바이러스 감염 전), RSV의 1차 감염의 중증도 또는 기간을 축소시키거나 또는 상기 감염과 관련된 1가지 이상의 증상을 개선하는 데 유용하게 사용될 수 있다. 상기 항체는 단독으로 또는 RSV 감염을 치료하기 위해 유용한 부차 제제와 병용하여 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 항체는 단독으로, 또는 부차 제제와 병용하여 치료차원(바이러스에 노출된 후 및 바이러스 감염 후)으로 투여되어 1차 감염의 중증도 또는 기간을 축소하거나, 또는 상기 감염과 관련된 1가지 이상의 증상을 개선할 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 항체는 앞서 기술된 환자들과 같이, RSV 감염을 얻을 위험이 있는 환자들을 보호가 위한 단일 요법으로서 예방차원으로 사용될 수 있다. 이와 같은 계층의 모든 환자들은 예를 들어, 리바비린, 또는 기타 항-바이러스 백신과 같은 항-바이러스 요법을 비롯한 부차 제제와 병용하여 또는 단독으로 투여될 때, 본 발명의 항체로의 치료를 통해 혜택을 받을 수 있을 것이다.
본 발명의 항체는 전장(예컨대, IgG1 또는 IgG4 항체)일 수 있고, 또는 항원-결합 부분(예컨대, Fab, F(ab')2 또는 scFv 절편)만을 포함할 수 있고, 변형되어 기능성에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 잔기 반응기 기능을 제거할 수 있다(Reddy 등, (2000), J. Immunol. 164:1925-1933).
이에 따라, 첫 양태에서 본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질 (RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체는 하기의 특징들 중 1가지 이상을 갖는다:
(a) 온전한 인간 단클론 항체임;
(b) 서열 식별 번호: 354의 약 161번 위치 내지 약 188번 위치의 범위에 해당하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열과 상호작용함;
(c) 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 또는 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 중 하나, 또는 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 및 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 둘 다와 상호작용함;
(d) 호흡기 세포융합 바이러스 서브타입 A 및 서브타입 B 균주를 체외에서 중화할 수 있음;
(e) RSV 감염의 동물 모형에서 코 및/또는 폐 바이러스 부하(viral load)를 체내에서 유의미하게 감소시키는 능력을 나타냄; 또는
(f) 바이러스의 세포 융합을 억제함.
한 구현예에서, 본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 상기 항체는 서열 식별 번호: 354의 약 161번 위치 내지 약 188번 위치의 범위에 해당하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열과 상호작용한다.
한 구현예에서, 상기 항체는 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 온전한 인간 단클론 항체이거나 또는 이것의 항원-결합 절편으로, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 354의 약 161번 위치 내지 약 188번 위치의 범위에 해당하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열과 상호작용하고, 상기 항체는 호흡기 세포융합 바이러스 서브타입 A 및/또는 서브타입 B 균주를 체외 및 체내에서 중화한다.
한 구현예에서, 본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 RSV 감염의 마우스 모형에서 약 0.05 mg/kg 내지 약 0.15 mg/kg의 범위의 용량으로 투여했을 때, 폐 바이러스 부하를 유의미하게 감소시키는 능력을 나타낸다.
한 구현예에서, 본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 RSV 감염의 코튼 랫트(cotton rat) 모형에서 팔리비주맙과 비교하여, 약 0.62 mg/kg 내지 약 5.0 mg/kg의 범위의 용량을 투여하였을 때, 코 및/또는 폐 바이러스 역가의 1-2 logs 더 큰 감소를 나타낸다.
한 구현예에서, 본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 RSV 서브타입 A 감염의 마우스 모형에서 투여 시, 약 0.15 mg/kg 이하의 ED99 를 나타낸다.
한 구현예에서, 본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 RSV 서브타입 A 감염의 코튼 랫트 모형에서 투여 시, 약 0.62 mg/kg 이하의 ED99 를 나타낸다.
한 구현예에서, 본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 RSV 서브타입 B 감염의 코튼 랫트 모형에서 투여 시, 약 2.5 mg/kg 이하의 ED99를 나타낸다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 팔리비주맙 또는 모타비주맙에 대한 ED99 보다 약 2~3배 낮은 ED99를 나타낸다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 RSV의 RSV 서브타입 A 균주에 특이적인 미세중화분석에서 약 2 pM 내지 약 600 pM의 반수 최대 억제 농도(IC50)를 나타낸다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 RSV의 RSV 서브타입 B 균주에 특이적인 미세중화분석에서 약 6 pM 내지 100 pM의 반수 최대 억제 농도(IC50)를 나타낸다.
한 구현예에서, RSV-F 단백질에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 RSV의 하나 이상의 서브타입 A 실험실 균주에 대해, 팔리비주맙 대비 약 15 내지 17배 개선된 중화능(neutralization potency)을 나타내거나, 또는 RSV의 하나 이상의 서브타입 A 임상 균주에 대해, 팔리비주맙 대비 약 10 내지 22배 개선된 중화능을 나타낸다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 RSV의 하나 이상의 서브타입 B 실험실 균주에 대해, 팔리비주맙 대비 약 2 내지 5배 개선된 중화능을 나타낸다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 RSV의 하나 이상의 서브타입 A 실험실 균주 또는 서브타입 A 임상 균주에 대해, AM-22 대비 약 0.5 내지 2배 개선된 중화능을 나타낸다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 RSV의 하나 이상의 서브타입 B 실험실 균주에 대해, AM-22 대비 약 2.5 내지 17배 개선된 중화능을 나타낸다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된 바에 따르면 1 X 10-7 M 내지 6 X 10-10 M의 범위의 KD를 보여준다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된 바에 따르면 1 X 10-7 M 내지 9 X 10-9 M 범위의 KD를 보여준다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 306, 322 및 338로 이루어진 군에서 선택되는 HCVR 아미노산 서열에 함유된 중쇄 CDR 3개(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 서열 식별 번호: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330 및 346으로 이루어진 군에서 선택되는 LCVR 아미노산 서열에 함유된 경쇄 CDR 3개(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)를 포함한다.
HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 내부의 CDR를 확인하는 방법 및 기법은 당해기술에 잘 알려져 있고, 본원에 개시된 구체적인 HCVR 및/또는 LCVR 아미노산 서열 내 CDR를 확인하기 위해 사용될 수 있다. CDR의 경계를 확인하는 데 사용될 수 있는 예시적인 규약에는, 예컨대, 카밧(Kabat) 정의, 코티아(Chothia) 정의 및 AbM 정의가 포함된다. 일반적으로, 카밧 정의는 서열 가변성을 기준으로 하고, 코티아 정의는 구조적 루프 영역의 위치를 기준으로 하고, 마지막으로 AbM 정의는 카밧과 코티아의 방식의 절충안이다. 예를 들어, Kabat, "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani 등, (1997), J. Mol. Biol. 273:927-948; 및 Martin 등, (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:9268-9272. 참조. 어떤 항체 내 CDR 서열을 확인하기 위한 공공 데이터베이스 또한 이용가능하다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 306, 322 및 338로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변부 (HCVR)을 포함한다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330 및 346으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변부(LCVR)를 포함한다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 306, 322 및 338로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변부 (HCVR); 및 서열 식별 번호: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330 및 346으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변부 (LCVR)를 포함한다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 363의 중쇄 아미노산 서열 및 서열 식별 번호: 364의 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, 322/330 및 338/346으로 이루어진 군에서 선택되는 HCVR/LCVR 아미노산 서열 쌍을 포함한다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 274/282 및 338/346로 이루어진 군에서 선택되는 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함한다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 하기를 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296, 312, 328 및 344로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR3 도메인; 및
(b) 서열 식별 번호: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 304, 320, 336 및 352로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR3 도메인.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 추가로 하기를 포함한다:
(c) 서열 식별 번호: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292, 308, 324 및 340으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR1 도메인;
(d) 서열 식별 번호: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294, 310, 326 및 342로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR2 도메인;
(e) 서열 식별 번호: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300, 316, 332 및 348로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR1 도메인; 및
(f) 서열 식별 번호: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302, 318, 334 및 350으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 도메인.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 하기를 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292, 308, 324 및 340으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR1 도메인;
(b) 서열 식별 번호: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294, 310, 326 및 342로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR2 도메인;
(c) 서열 식별 번호: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296, 312, 328 및 344로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR3 도메인;
(d) 서열 식별 번호: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300, 316, 332 및 348로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR1 도메인;
(e) 서열 식별 번호: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302, 318, 334 및 350으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 도메인; 및
(f) 서열 식별 번호: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 304, 320, 336 and 352로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR3 도메인.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 하기를 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 276 및 340으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR1 도메인;
(b) 서열 식별 번호: 278 및 342로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR2 도메인;
(c) 서열 식별 번호: 280 및 344로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR3 도메인;
(d) 서열 식별 번호: 284 및 348로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR1 도메인;
(e) 서열 식별 번호: 286 및 350으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 도메인; 및
(f) 서열 식별 번호: 288 및 352로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR3 도메인.
한 구현예에서, RSV-F에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 276, 278 및 280 각각의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열 및, 서열 식별 번호: 284, 286 및 288 각각의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구현예에서, RSV-F에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 340, 342 및 344 각각의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 아미노산 서열 및, 서열 식별 번호: 348, 350 및 352 각각의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은, RSV-F와의 특이적 결합에 대해, 서열 식별 번호: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, 322/330 및 338/346으로 이루어진 군에서 선택되는 중쇄 및 경쇄 서열쌍을 포함하는 항체 또는 항원-결합 절편과 경쟁한다.
한 구현예에서, 서열 식별 번호: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, 322/330 및 338/346으로 이루어진 군에서 선택되는 중쇄 및 경쇄 서열쌍을 포함하고, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은, RSV-F와의 특이적 결합에 대해, 팔리비주맙, 모타비주맙 또는 AM-22와 경쟁하지 않는다.
한 구현예에서, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, 322/330 및 338/346으로 이루어진 군에서 선택되는 중쇄 및 경쇄 서열쌍을 포함하는 항체에 의해 동일하게 인식되는, RSV-F 상의 항원결정부와 결합한다.
한 구현예에서, 서열 식별 번호: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, 322/330 및 338/346으로 이루어진 군에서 선택되는 중쇄 및 경쇄 서열쌍을 포함하고, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 상기의 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 팔리비주맙 또는 모타비주맙과 동일한 RSV-F상의 항원결정부에 결합하지 않는다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 완전한 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기의 항체 또는 이것의 절편은 하기의 특징들 중 하나 이상을 보여준다: (i) 서열 식별 번호: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 306, 322 및 338로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 HCVR을 포함함; (ii) 서열 식별 번호: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330 및 346으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 LCVR를 포함함; (iii) 서열 식별 번호: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296, 312, 328 및 344로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 HCDR3 도메인; 및 서열 식별 번호: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 304, 320, 336 및 352로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 LCDR3 도메인을 포함함; (iv) 서열 식별 번호: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292, 308, 324 및 340으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 HCDR1 도메인을 포함함; (v) 서열 식별 번호: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294, 310, 326 및 342로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 HCDR2 도메인을 포함함; (vi) 서열 식별 번호: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300, 316, 332 및 348로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 LCDR1 도메인을 포함함; (vii) 서열 식별 번호: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302, 318, 334 및 350으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 도메인을 포함함; (viii) 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된 바에 따르면, 약 1 X 10-7 M 내지 약 6 X 10-10 M 범위의 KD를 보여줌; (ix) 호흡기 세포융합 바이러스 서브타입 A 및/또는 서브타입 B 균주를 체외에서 중화할 수 있음; (x) 약 0.05 내지 약 0.15 mg/kg 범위의 용량으로 투여 시, RSV 감염의 마우스 모형에서 바이러스 부하를 유의미하게 감소시킬 수 있는 능력을 나타냄; (xi) 팔리비주맙과 비교하여, 약 0.62 내지 약 5.0 mg/kg 범위의 용량으로, 감염의 코튼 랫트 모형에서 코 및/또는 폐 바이러스 역가의 1 내지 2 logs보다 큰 감소를 나타냄; (xii) RSV 감염의 동물 모형 (예컨대 마우스 모형 또는 코튼 랫트 모형)에서 투여 시 약 0.15 내지 약 2.5 mg/kg 범위의 유효 용량 99 (ED99)을 나타냄; 또는 (xiii) RSV의 RSV 서브타입 A 균주에 특이적인 미세중화분석에서 약 2 pM 내지 약 15 pM의 반수 최대 억제 농도 (IC50)를, 미세중화 분석에서 약 6 pM 내지 약 100 pM의 반수 최대 억제 농도 (IC50)를 나타냄.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 완전한 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 절편은 하기의 특징들 중 하나 이상을 보여준다: (i) 서열 식별 번호: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 306, 322 및 338로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 HCVR를 포함함; (ii) 서열 식별 번호: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330 및 346 으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 LCVR를 포함함; (iii) 서열 식별 번호: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296, 312, 328 및 344 로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% or 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 HCDR3 도메인; 및 서열 식별 번호: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 304, 320, 336 및 352 로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 LCDR3 도메인을 포함함; (iv) 서열 식별 번호: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292, 308, 324 및 340으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 HCDR1 도메인을 포함함; (v) 서열 식별 번호: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294, 310, 326 및 342로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 HCDR2 도메인; (vi) 서열 식별 번호: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300, 316, 332 및 348로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 LCDR1 도메인; (vii) 및 서열 식별 번호: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302, 318, 334 및 350으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 도메인을 포함함; (viii) 약 1 X 10-7 M 내지 약 6 X 10-10 M 범위의 KD 범위를 보여줌; (ix) 호흡기 세포융합 바이러스 서브타입 A 및/또느 서브타입 B 균주를 체외에서 중화할 수 있음; (x) 약 0.05 mg/kg 내지 약 0.15 mg/kg 범위의 용량으로 투여 시, RSV 감염의 동물 모형(예컨대, 마우스 모형)에서 바이러스 부하를 유의미하게 감소시킬 수 있는 능력을 나타냄; (xi) 팔리비주맙과 비교하여, 약 0.62 내지 약 5.0 mg/kg 범위의 용량에서, RSV 감염의 동물 모형(예컨대, 코튼 랫트 모형)에서, 코 및/또는 폐 바이러스 역가의 1 내지 2 logs 좀 더 큰 감소를 나타냄; (xii) RSV 감염의 동물 모형(예컨대, 마우스 모형 또는 코튼 랫트 모형)에 투여 시, 약 0.05 내지 약 2.5 mg/kg 범위의 유효 용량 99(ED99)를 나타냄; (xiii) 팔리비주맙 또는 모타비주맙의 ED99 보다 약 2 내지 3배 낮은 ED99 를 나타냄; (xiv) RSV의 하나 이상의 서브타입 A 실험실 균주에 대해, 팔리비주맙 대비 약 15 내지 17배 개선된 중화능을 나타내거나, 또는 RSV의 하나 이상의 서브타입 A 임상 균주에 대해, 팔리비주맙 대비 약 10 내지 22배 개선된 중화능을 나타냄; (xv) RSV의 하나 이상의 서브타입 B 실험실 균주에 대해, 팔리비주맙 대비 약 2 내지 5배 개선된 중화능을 나타냄; (xvi) RSV의 하나 이상의 서브타입 A 실험실 균주 또는 서브타입 A 임상 균주에 대해, AM-22 대비 약 0.5 내지 2배 개선된 중화능을 나타냄; (xvii) RSV의 하나 이상의 서브타입 B 실험실 균주에 대해, AM-22 대비 약 2.5 내지 17배 개선된 중화능을 나타냄.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 완전한 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 절편은 하기의 특징들 중 하나 이상을 보여준다: (i) 서열 식별 번호: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 306, 322 및 338 로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 HCVR를 포함함; (ii) 서열 식별 번호s: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330 및 346으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 LCVR를 포함함; (iii) 서열 식별 번호: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296, 312, 328 및 344로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 HCDR3 도메인; 및 서열 식별 번호: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 304, 320, 336 및 352 로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 LCDR3 도메인을 포함함; (iv) 서열 식별 번호: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292, 308, 324 및 340으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 HCDR1 도메인을 포함함; (v) 서열 식별 번호: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294, 310, 326 및 342로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 HCDR2 도메인; (vi) 서열 식별 번호: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300, 316, 332 및 348로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 LCDR1 도메인; (vii) 및 서열 식별 번호: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302, 318, 334 및 350으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 도메인; (viii) 약 1 X 10-7 M 내지 약 6 X 10-10 M범위의 KD를 보임; (ix) 호흡기 세포융합 바이러스 서브타입 A 및/또는 서브타입 B 균주를 체외에서 중화할 수 있음; (x) RSV 감염이 있는 포유류에서 바이러스 부하를 유의미하게 감소시키는 능력을 나타냄; (xi) 서열 식별 번호: 354의 약 161번 위치 내지 약 188번 범위에 해당하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열과 상호작용함; (xii) 서열식별번호: 354의 173번 위치의 세린 또는 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 중 하나, 또는 서열식별번호: 354의 173번 위치의 세린 및 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 둘 다와 상호작용함; (xiii) RSV의 숙주 세포와의 융합을 억제함; (xiv) RSV-F 결합에 대해, 팔리비주맙 또는 AM-22와 교차 경쟁하지 않음.
한 구현예에서, 본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질 (RSV-F) 에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 354의 약 161번 위치 내지 약 188번 위치의 범위에 해당하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열과 상호작용한다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기의 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 355 및 356으로 이루어진 군에서 선택되는 최소한 하나의 아미노산 서열과 상호작용 한다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기의 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 354의 잔기 161번 내지 188번 내의 최소한 하나의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 355 또는 서열 식별 번호:356 내 최소한 하나의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 또는 354의 위치의 트레오닌 중 하나, 또는 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 및 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 둘 다와 상호작용한다.
한 구현예에서, 본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F) 에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 354의 약 161번 위치 내지 약 188번 위치의 범위에 해당하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열과 상호작용하고, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 274의 중쇄 가변부 (HCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 중쇄 CDR 3개(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 서열 식별 번호: 282의 경쇄 가변부 (LCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 경쇄 CDR 3개(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 하기를 포함한다:
(a) 서열 식별 번호: 276의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
(b) 서열 식별 번호: 278의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
(c) 서열 식별 번호: 280의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
(d) 서열 식별 번호: 284의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
(e) 서열 식별 번호: 286의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
(f) 서열 식별 번호: 288의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체는 서열 식별 번호: 274의 중쇄 가변부 (HCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 HCDR 3개; 및 서열 식별 번호: 282의 경쇄 가변부 (LCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 경쇄 CDR 3개(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)를 포함하고, 상기 항원 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 355 및 356으로 이루어진 군에서 선택되는 최소한 하나의 아미노산 서열과 상호작용한다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체는 서열 식별 번호: 274의 중쇄 가변부 (HCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 HCDR 3개; 및 서열 식별 번호: 282의 경쇄 가변부(LCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 경쇄 CDR 3개(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하고, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 354의 잔기 161번 내지 188번 내의 최소한 하나의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체는 서열 식별 번호: 274의 중쇄 가변부 (HCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 HCDR 3개; 및 서열 식별 번호: 282의 경쇄 가변부(LCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 경쇄 CDR 3개(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)를 포함하고, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 355 또는 서열 식별 번호: 356 내의 최소한 하나의 아미노산과 상호작용한다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체는 서열 식별 번호: 274의 중쇄 가변부(HCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 HCDR 3개; 및 서열 식별 번호: 282의 경쇄 가변부(LCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 경쇄 CDR 3개(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)를 포함하고, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린, 또는 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 중 하나, 또는 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 및 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 둘 다와 상호작용한다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F와의 결합에 대해, 팔리비주맙 또는 모타비주맙과 교차 경쟁하지 않는 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F와의 결합에 대해, AM-22와 교차 경쟁하지 않는 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 팔리비주맙과 동일한, RSV-F 상의 항원결정부와 결합하지 않는 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 모타비주맙과 동일한, RSV-F 상의 항원결정부와 결합하지 않는 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열 식별 번호: 354의 약 아미노산 잔기 255번 내지 약 아미노산 잔기 276번의 범위에 해당하는 RSV-F 상의 항원결정부와 결합하지 않는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공한다.
한 구현예에서, 상기 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 팔리비주맙과 동일한, RSV-F 상의 항원결정부에 결합하지 않는데, 여기서 상기 항원결정부는 서열 식별 번호: 354의 약 아미노산 잔기 255번 내지 약 아미노산 잔기 276번의 범위에 해당한다.
두 번째 측면에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이것의 절편을 인코딩하는 핵산 분자를 제공한다. 본 발명의 핵산을 품은 재조합형 발현 벡터 및 이와 같은 벡터가 도입된 숙주 세포 역시 본 발명의 범위에 포함되며, 상기 항체의 생산을 허용하고, 생산된 항체를 회수하는 조건 하에서 상기 숙주 세포를 배양함으로써, 상기 항체를 생산하는 방법들 역시 본 발명의 범위에 포함된다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열 식별 번호: 1, 17, 33, 49, 65, 81, 97, 113, 129, 145, 161, 177, 193, 209, 225, 241, 257, 273, 289, 305, 321 및 337로 이루어진 군에서 선택되는 핵산 서열 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98%, 또는 최소한 99% 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 핵산 서열에 의해 인코딩되는 HCVR를 포함하는 항체 또는 이것의 절편을 제공한다.
한 구현예에서, 상기 HCVR는 서열 식별 번호: 273 및 337로 이루어진 군에서 선택되는 핵산 서열에 의해 인코딩된다.
한 구현예에서, 상기 항체 또는 이것의 절편은 추가로 서열 식별 번호: 9, 25, 41, 57, 73, 89, 105, 121, 137, 153, 169, 185, 201, 217, 233, 249, 265, 281, 297, 313, 329 및 345로 이루어진 군에서 선택되는 핵산 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 상동성을 갖는 실질적으로 동일한 핵산 서열에 의해 인코딩되는 LCVR를 포함한다.
한 구현예에서, 상기 LCVR는 서열 식별 번호: 281 및 345로 이루어진 군에서 선택되는 핵산 서열에 의해 인코딩된다.
한 구현예에서, 본 발명은 또한 서열 식별 번호: 7, 23, 39, 55, 71, 87, 103, 119, 135, 151, 167, 183, 199, 215, 231, 247, 263, 279, 295, 311, 327 및 343으로 이루어진 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 HCDR3 도메인; 및 서열 식별 번호: 15, 31, 47, 63, 79, 95, 111, 127, 143, 159, 175, 191, 207, 223, 239, 255, 271, 287, 303, 319, 335 및 351로 이루어진 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 LCDR3 도메인을 포함하는 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공한다.
한 구현예에서, 본 발명은 서열 식별 번호: 3, 19, 35, 51, 67, 83, 99, 115, 131, 147, 163, 179, 195, 211, 227, 243, 259, 275, 291, 307, 323 및 339로 이루어진 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 HCDR1 도메인; 서열 식별 번호: 5, 21, 37, 53, 69, 85, 101, 117, 133, 149, 165, 181, 197, 213, 229, 245, 261, 277, 293, 309, 325 및 341 로 이루어진 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 HCDR2 도메인; 서열 식별 번호: 11, 27, 43, 59, 75, 91, 107, 123, 139, 155, 171, 187, 203, 219, 235, 251, 267, 283, 299, 315, 331 및 347 로 이루어진 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열, 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 LCDR1 도메인; 및 서열 식별 번호: 13, 29, 45, 61, 77, 93, 109, 125, 141, 157, 173, 189, 205, 221, 237, 253, 269, 285, 301, 317, 333 및 349로 이루어진 군에서 선택되는 뉴클레오티드 서열 또는 이것과 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 실질적으로 유사한 뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 LCDR2 도메인을 추가로 포함하는 항체 또는 이것의 절편을 제공한다.
세 번째 측면에서, 본 발명은 VH, DH 및 JH 생식계열 서열에서 유도된 뉴클레오티드 서열 절편에 의해 인코딩되는 HCVR 및 VK 및 JK 생식계열 서열에서 유도된 뉴클레오티드 서열 절편에 의해 인코딩되는 LCVR를 포함하는, RSV-F에 특이적인, 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 특징으로 한다.
본 발명은 변성된 글리코실화 패턴을 갖는 항체를 아우른다. 일부 출원/응요에서, 바람직하지 않은 글리코실화 부위를 제거하기 위한 변성, 예컨대 항체 의존 세포의 세포독성 (ADCC) 기능을 높이기 위한 푸코오스(fucose) 모이어티 제거가 유용할 수 있다(Shield 등 (2002) JBC 277:26733 참조). 다른 응용 분야에서는, 보완체 의존 세포독성(CDC)을 변성하기 위해 갈락토실화의 변성이 이루어질 수 있다.
네 번째 측면에서, 본 발명은 RSV-F에 결합하는 최소한 하나의 단리된 완전한 인간 단클론 항체 또는이것의 항원-결합 절편 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F상의 동일한 항원결정부 또는 서로 다른 2개의 항원결정부에 결합하는 2개의 완전한 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편 및 하나의 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 본원에 기술된 항체들의 모든 조합물이 약제학적 조성물에 사용되어 이와 같은 치료를 필요로 하는 환자 계층에 원하는 결과를 달성할 수 있음이 이해될 것이다. 예컨대, RSV-F를 인식하고 및/또는 이것에 결합하는 두 항체가 하나의 조성물에 사용될 수 있다. 선택적으로, RSV-F를 인식하고 및/또는 이것에 결합하는 한 항체와 RSV 상의 또 다른 항원(예컨대 RSV-G)에 결합하는 두 번째 항체, 이렇게 두 항체가 하나의 조성물에 사용될 수 있다. 한 구현예에서, RSV-F를 인식하고 및/또는 이것에 결합하는 한 항체와 메타뉴모바이러스 항원에 결합하는 두 번째 항체, 이렇게 두 항체가 하나의 조성물에 사용될 수 있다. 선택적으로, 둘 이상의 항체, 즉 RSV-F를 인식하고 및/또는 이것에 결합하는 한 항체, 메타뉴모바이러스 항원에 결합하는 한 항체 및 독감 바이러스 항원 또는 호흡기 질환을 유발하는 기타 다른 바이러스에 결합하는 항체가 한 조성물에 사용될 수 있다.
한 구현예에서, 상기 약제학적 조성물은 RSV-F에 결합하고, 서열 식별 번호: 274/282 및 338/346으로 이루어진 군에서 선택되는 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 갖는 항체를 포함한다.
한 구현예에서, 상기 약제학적 조성물은 RSV-F에 결합하고 서열 식별 번호: 274/282로 이루어진 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 갖는 항체를 포함한다.
한 구현예에서, 상기 약제학적 조성물은 RSV-F에 결합하고, 서열 식별 번호: 338/346로 이루어진 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 갖는 항체를 포함한다.
한 구현예에서, 상기 약제학적 조성물은 RSV-F에 결합하는 최소한 하나의 항체를 포함하는데, 여기서 상기 항체는 서열 식별 번호: 274 및 338로 이루어진 군에서 선택되는 모든 중쇄 가변부 (HCVR) 아미노산 서열들 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 3개(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 서열 식별 번호: 282 및 346으로 이루어진 군에서 선택되는 모든 경쇄 가변부 (LCVR) 아미노산 서열들 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 3개 (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명의 항체, 또는 본 발명의 항체를 하나 이상 함유하는 조성물이 사용되어 RSV의 모든 서브타입 A 또는 서브타입 B 균주로부터 RSV를 중화할 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 항체 또는 이것의 항원-결합 절편과 두 번째 치료 제제의 조합물인 조성물을 특징으로 한다.
상기의 두 번째 치료제제는 소분자 약물, 단백질/폴리펩티드, 항체, 안티센스 분자와 같은 핵산 분자, 또는 siRNA일 수 있다. 두 번째 치료 제제는 합성 또는 천연유래일 수 있다.
상기의 두 번째 치료제제는 본 발명의 항체 또는 이것의 절편과 유용하게 조합되는 모든 제제, 예를 들어, 항바이러스 제제(예컨대 리바비린), RSV-특이적인 백신 또는 독감 바이러스에 특이적인 백신, 또는 메타뉴모바이러스(MPV)에 특이적인 백신, RSV 항원에 특이적인 siRNA, 독감 바이러스 항원에 특이적인 siRNA, 메타뉴모바이러스 (MPV) 항원에 특이적인 siRNA, RSV 항원, 또는 메타뉴모바이러스 (MPV) 항원, 또는 독감 항원에 특이적인 두 번째 항체, 또는 항-IL4R 항체, 항-RSV-G 항체 또는 NSAID일 수 있다. 특정 구현예에서, 상기의 두 번째 치료 제제는, 부작용(들)이 발생하는 경우, 본 발명의 항체 또는 이것의 절편과 관련된 모든 가능한 부작용(들)에 대응하거나 또는 이들을 감소시키는 데 도움을 주는 모든 제제일 수 있다.
본 발명의 항체 및 본 발명의 약제학적으로 허용가능한 조성물은 병용 요법에 활용될 수 있음이, 즉, 상기의 항체 및 약제학적으로 허용가능한 조성물이 하나 이상의 다른 바람직한 치료법 또는 의료 절차와 동시에, 그 전에, 또는 이후에, 투여될 수 있음이 또한 이해될 것이다. 병용 요법에 활용하기 위해 특정한 요법들(치료법 또는 절차)을 조합할 때, 원하는 치료법들 및/또는 절차들의 병용가능성(compatibility) 및 달성하고자 하는 원하는 치료 효과가 고려된다. 또한 활용되는 요법들이 동일한 장애에 대해 원하는 효과를 달성할 수 있고(예컨대, 한 항체가 동일한 장애를 치료하기 위해 사용되는 또 다른 제제와 동시에 투여될 수 있다), 또는 서로 다른 효과를 달성할 수도 있다(예컨대, 모든 부작용의 조절). 본원에 사용되는 바와 같이, 특정 질환 또는 질병을 치료 또는 예방하기 위해 일반적으로 투여되는 추가적인 치료 제제는 치료받을 질환 또는 질병에 적절하다.
복수의 치료 요법이 공동으로 실시될 때, 복용량은 당해 기술에서 인식되는 바와 같이, 조절될 수 있다.
본 발명의 다섯 번째 측면은 감염 예방이 필요한 환자에게서 호흡기 세포융합 바이러스로의 감염을 예방하기 위한 방법, 또는 RSV로의 감염을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 방법, 또는 RSV 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증을 개선하기 위한 방법을 제공하고, 상기 방법은 본원에 기술된 하나 이상의 항체 또는 이것의 항원-결합 절편, 또는 본원에 기술된 본 발명에 따른 하나 이상의 항체 또는 이것의 절편을 포함하는 약제학적 조성물을, 상기 치료가 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함하는데, 이로써 RSV 감염이 예방되고 또는 상기 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증이 완화되거나 개선되거나 또는 중증도 및/또는 기간의 측면에서 감소된다.
관련 구현예에서, 상기 발명은 본 발명에 따른 하나 이상의 항체를 단독으로 또는 두 번째 치료 제제와 조합하여 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는데, 이것은 상기 조성물이 필요한 환자에게서 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 감염을 예방하는 데 사용하기 위한 것, 또는 RSV 감염을 앓는 환자를 치료하기 위한 것, 또는 상기 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증을 완화하기 위한 것으로, 여기서 상기 감염이 예방되거나, 또는 상기 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증이 예방되거나 완화되거나 또는 중증도 및/또는 기간이 축소된다.
한 구현예에서, 본 발명은 본 발명에 따라 하나 이상의 항체를 단독으로, 또는 두 번째 치료 제제와 조합하여 포함하는 약제학적 조성물을, 약물이 필요한 환자에게서 호흡기 세포융합 바이러스(RSV) 감염을 예방하기 위해, RSV 감염을 앓는 환자를 치료하기 위해, 또는 상기 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증을 완화하기 위한 약물의 제조에 제공하는데, 여기서 상기 감염이 예방되거나, 또는 상기 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증이 예방되거나 완화되거나, 또는 중증도 및/또는 기간의 측면에서 축소된다.
한 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이것의 항원-결합 절편으로의 치료가 필요한 환자는 기저 질환 또는 기존 질환 때문에 좀 더 중증 형태의 RSV 감염을 경험할 수 있는 환자이다. 한 구현예에서, 상기 방법은 감염의 위험이 있는 환자에게서 RSV 감염의 발병을 예방하는 것을 가능하게 하고, 상기 방법은 상기 환자에게 RSV의 F 단백질에 결합하는 항체 또는 이것의 항원-결합 절편의 유효량, 또는 RSV의 F 단백질에 결합하는 항체 또는 이것의 항원-결합 절편의 유효량을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 것을 포함함으로써, 상기 감염이 예방되거나, 완화되거나 또는 중증도 및/또는 기간의 측면에서 축소되거나, 또는 상기 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증이 예방되거나 또는 완화되거나, 또는 중증도 또는 기간의 측면에서 축소된다. 한 구현예에서, 단리된 인간 RSV-F 항체 또는 이것의 항원-결합 절편의 투여는 환자에게서 천명의 재발을 예방하는 결과를 야기한다. 한 구현예에서, 단리된 인간 RSV-F 항체 또는 이것의 항원-결합 절편의 투여는 아동에게서 RSV-관련 천식을 예방하는 결과를 야기한다. 한 구현예에서, 단리된 인간 RSV-F 항체 또는 이것의 항원-결합 절편의 투여는 서브타입 A 또는 서브타입 B 호흡기 세포융합 바이러스에 의해 유발되는 RSV 감염을 예방하는 결과를 야기한다.
한 구현예에서, 본 발명에 따른 항체 또는 이것의 항원-결합 절편으로 치료될 수 있는, RSV 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증은 저산소증, 산소 부족으로 인한 청색증, 호흡 곤란 (예컨대, 가쁜 호흡 또는 숨가쁨), 기침, 크루프성 기침 (“물개가 짖는 소리”와 같은 기침), 열, 비공 확장, 코막힘, 천명, 폐렴, 무호흡, 탈수증, 음식섭취 곤란, 정신상태 변화, 식욕 감퇴 또는 기관지염으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명의 항체로또는 본 발명의 하나 이상의 항체를 포하하는 조성물로 치료받을 시 혜택을 받을 수 있는, RSV 감염이 발발할 위험이 있는 환자는 조산아, 일부 기타 기저 질환에 의해 손상되었거나 및/또는 RSV 유행 시기에 노출된 만삭아, 기저 질환 (예컨대 선천성 심질환, 만성 폐질환, 낭포성 섬유증, 면역결핍증, 신경근육 질환)이 있는 또는 없는 만 1세 이상의 아동, 보호 시설에 수감 중이거나 또는 입원 중인 환자, 울혈성 심부전 또는 만성 폐쇄성 폐 질환과 같은 기저 질환이 있는 또는 없는 고령 환자 (≥ 만65세), 기저 질환으로 인해 또는 면역억제 치료의 실시로 인해 면역손상된 환자, RSV 감염을 수득하도록 취약하게 만들 수 있는 일부 기저 질환, 예컨대, 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 울혈성 심부전, 낭포성 섬유증, 기관지폐이형성증, 기도 부전, 만성 폐질환이 있는 환자, 암 환자, 또는 면역억제요법을 받는 중인 이식 환자로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명에 따른 항체로 치료할 수 있는 후보군 환자는 손상된 폐, 심혈관, 신경근육, 또는 면역계로 인한 질병을 앓을 수 있다. 상기 질환은 기도 기형, 만성 폐질환, 만성 심 질환, 호흡기 분비물의 취급을 위태롭게 하는 손상시키는 신경근육 질환 및 면역 억제로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 상기 만성 폐질환은 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 낭포성 섬유증, 또는 기관지폐이형성증일 수있다. 상기 만성 심 질환은 울혈성 심부전(CHF) 또는 선천성 심 질환일 수 있다. 신경근육 질병 또는 질환은 신경퇴행성 질환, 또는 신경계 손상 또는 사고, 예컨대 뇌졸증 또는 척수외상으로 인한 호흡기 분비물 취급 및/또는 제거 불능일 수 있다. 상기 면역 억제는 중증 복합 면역결핍증 또는 중증 후천성 면역결핍증의 결과일 수 있고, 또는 면역 억제를 초래하는 그 밖의 다른 전염성 질환 또는 암 질환의 결과일 수 있고, 또는 면역억제 약물 요법 또는 방사선 요법을 이용한 치료의 결과이다.
한 구현예에서, 상기 항체는 RSV 감염이 발생할 위험이 있는 환자 또는 RSV 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증이 발생할 위험이 있는 환자에게 예방 차원으로 투여된다(감염의 발생 전에 투여됨). 본 발명의 항체를 이용한 치료를 받을 후보군 환자는 하나 이상의 항체를 포함하는 조성물을, 투여에 적합한 모든 전달 방식, 예를 들어 비제한적으로 정맥 주입, 근육내 주입, 또는 피하 주입으로 투여받을 수 있다.
한 구현예에서, 상기 항체는 RSV 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증의 중증도 및/또는 기간을 완화하거나 또는 감소시키기 위해 환자에게 치료차원에서 투여된다(감염 발생 후 투여).
한 구현예에서, 본 발명의 항체는 RSV 감염의 치료에 유용한 하나 이상의 치료 제제와 병행하여 환자에게 투여될 수 있다. 상기의 하나 이상의 치료 제제는 항바이러스 제제; RSV에 특이적인 백신, 독감 바이러스에 특이적인 백신 또는 메타뉴모바이러스(MPV)에 특이적인 백신; RSV 항원에 특이적인 siRNA 또는 메타뉴모바이러스(MPV) 항원에 특이적인 siRNA; RSV 항원 또는 메타뉴모바이러스(MPV) 항원에 특이적인 두 번째 항체; 항-IL4R 항체, 독감 바이러스 항원에 특이적인 항체, 항-RSV-G 항체 및 NSAID로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
본 발명의 여섯 번째 측면은 개체, 바람직하게는 인간에게 투여되었을 때, 그와 같은 개체에서 호흡기 세포융합 바이러스(RSV) 항원에 대한 면역 반응을 유도하는 면역성 조성물, 즉 백신을 제공한다.
한 구현예에서, 상기 면역성 조성물, 즉 백신은 RSV 항원, 예컨대, RSV-F 단백질, 폴리펩티드, 또는 이것의 면역성 절편, 또는 RSV-F 폴리펩티드 또는 이것의 절편의 항원 내 함유되었거나 및/또는 그것으로부터 수득되는 항원결정부를 포함하고, 및/또는 RSV-F 폴리펩티드의 항원으로부터 항원결정부를 인코딩하고 발현시키는 DNA 및/또는 RNA, 또는 본 발명의 기타 폴리펩티드를 포함한다.
본 발명의 한 구현예에서, 상기 면역성 조성물, 즉 백신은 서열 식별 번호: 354에 나타난 RSV-F 단백질를 포함할 수 있다. 본 발명의 한 구현예에서, 상기 면역성 조성물, 즉 백신은 서열 식별 번호: 354의 잔기 161번 내지 188번을 포함하는 RSV-F 폴리펩티드 절편을 포함할 수 있다. 본 발명의 한 구현예에서, 상기 면역성 조성물, 즉 백신은 서열 식별 번호: 355 및/또는 서열 식별 번호: 356 내에 함유된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 본 발명의 한 구현예에서, 상기 면역성 조성물, 즉 백신은 서열 식별 번호: 355 및/또는 서열 식별 번호: 356를 포함할 수 있다.
관련된 측면에서, 본 발명은 감염, 특히 호흡기 세포융합 바이러스(RSV) 감염으로부터 개인을 보호하기 위한 항체 및/또는 T 세포 면역 반응을 생성하기에 충분한, RSV-F 단백질을 포함하는 면역성 조성물 또는 백신, 또는 이것의 면역성 절편, 또는 RSV-F 항원 내 함유된 하나 이상의 항원결정부를 포함하는 RSV-F 항원 또는 이것의 면역성 절편 또는 이것의 절편을, 한 개인에게 투여함으로써, 한 개체, 특히 포유류, 바람직하게는 인간에게서, 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다.
한 구현예에서, 세포간 전파의 진행을 억제하거나 또는 둔화시키는 면역 반응을 유도하기 위해 본 발명의 면역성 조성물, 즉 백신을 사용하는 방법이 제공된다. 또한 투여 시 개인의 면역 반응을 유도하는, RSV-F 항원 내 함유된 최소한 하나의 RSV-F 항원 또는 하나 이상의 항원결정부를 포함하는 면역성 조성물, 즉 백신을 투여함으로써, RSV 감염과 관련된 최소한 하나의 증상을 완화하는 방법들이 제공된다.
예컨대, 한 구현예에서 본 발명은 면역 반응을 유도하기 위해, RSV-F 항원(예컨대, 서열 식별 번호: 354에 보여지는 아미노산 서열), 또는 이것의 항원 절편(예컨대, 서열 식별 번호: 354의 잔기161번 내지 188번을 포함하는 폴리펩티드), 또는 이와 같은 바이러스 폴리펩티드, 또는 이것의 절편 또는 돌연변이의 체내에서의 발현을 지시하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 벡터를 포함하는 면역성 조성물, 즉 백신을 개인에게 전달하는 것을 포함하는, 개인에게서 면역 반응을 유도하는 방법을 제공한다.
본 발명의 한 구현예에서, 개인에게서 면역 반응을 유도하기 위해 면역성 조성물, 즉 백신에 사용되는 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 354의 잔기 161번 내지 188번을 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 개인에게서 면역 반응을 유도하기 위해 면역성 조성물, 즉 백신에 사용되는 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 355 및/또는 서열 식별 번호: 356에 함유된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 개인에게서 면역 반응을 유도하기 위해 면역성 조성물, 즉 백신에 사용되는 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 355 및/또는 서열 식별 번호: 356을 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 상기 면역성 조성물, 즉 백신은 RSV의 RSV-F 항원에 특이적인 항체 반응 또는 T 세포 반응을 초래할 수 있는데, 여기서 생성된 상기 항체는 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 또는 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 중 하나와, 또는 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 및 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 둘 다와 상호작용한다.
본 발명의 어떤 구현예에서, 상기 면역성 조성물, 즉 백신은 약제학적으로 허용가능한 담체/부형제와 같은 적합한 담체/부형제와 함께, 본 발명의 면역성 폴리펩티드 및/또는 폴리뉴클레오티드 또는 이들의 조합물을 포함할 수 있다. 본 발명의 상기 면역성 조성물, 즉 백신은 또한 상기 제형의 면역성을 향상시키기 위한 아쥬반트(adjuvants)를 포함할 수 있다.
어떤 구현예에서, RSV-F 항원 또는 이것의 절편은, 기타 병원체, 바람직하게는 바이러스 및/또는 박테리아에 대한 면역성을 이끌어내기 위해 면역성, 바람직하게는 유효한, 양의 추가 항원을 포함하는 면역성 조성물, 즉 백신에 제형화되는 것이 유용하다. 이와 같은 추가적인 항원은 독감 바이러스 항원, 메타뉴모바이러스 유래 항원, 코로나 바이러스 유래 항원, 해모필러스 독감균 유래 항원, 연쇄상 폐렴구균 유래 항원, 또는 백일해균 유래 항원을 포함할 수 있다. RSV-G 당단백질, 또는 이것의 면역성 절편, HN 단백질, 또는 이것의 유도체와 같은 기타 RSV 항원들이 면역성 조성물, 즉 백신에 포함될 수 있다.
도면의 간단한 설명
도 1은 RSV-F 단백질의 개략도이다.
도 2a 및 2b는 H1H3592P3이 바이러스와 세포막의 융합을 억제함으로써 바이러스 진입을 차단하는 것을 보여준다.
상세한 설명
본 발명의 방법들이 기술되기 전, 본 발명이 기술되는 특정 방법 및 실험 조건에 제한되지 않으며, 이와 같은 방법 및 조건이 달라질 수 있음이 이해되어야 한다. 또한 본 발명의 범위는 첨부된 청구항에 의해서만 제한되기 때문에, 본원에 사용되는 용어는 특정 구현예를 기술하기 위한 것이지, 제한하기 위한 것이 아님이 이해되어야 한다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속한 당해기술의 숙련가에 의해 일반적으로 이해되는 것과 같은 의미를 가진다. 특별히 언급되는 수치값과 관련하여 사용될 때, 본원에 사용되는 용어 “약”은 상기 값이 언급된 값에서 1% 이하로 변할 수 있음을 뜻한다. 예컨대, 본원에 사용되는 표현 "약 100"은 99와 101을 포함하고 그 사이의 모든 값들(예컨대, 99.1, 99.2, 99.3, 99.4 등)을 포함한다.
본원에 기술된 것과 유사하거나 또는 동등한 모든 방법 및 물질이 본 발명의 실행 또는 시험에 사용될 수 있으나, 바람직한 방법 및 재료들이 이후 기술된다.
정의
“호흡기 세포융합 바이러스-F 단백질”, 또는 “RSV-F”는 유형 I 막통과 표면 단백질로, N 말단 쪼개짐 신호 펩티드와, C 말단 근처의 막고정 닻(membrane anchor)을 갖는다(Collins, P.L. 등, (1984), PNAS (USA) 81:7683-7687). RSV-F 단백질은 F0으로 표기되는 불활성 67 KDa 전구체로 합성된다(Calder, L.J.; 등, Virology (2000), 271,122-31). F0 단백질은 두 지점에서 Golgi 복합체의 두 위치에서 퓨린(furin)-유사 단백질분해효소에 의한 단백질가수분해로 활성화되어, 각각 N 및 C 말단에서 2개의 디설파이드-연결 폴리펩티드, F2 및 F1를 생산한다. “pep27”이라고 불리는 27 아미노산 펩티드가 방출된다. pep27의 양쪽 중 한쪽에 퓨린 쪼개짐 지점(FCS)이 있다(Collins, P.L.; Mottet, G. (1991), J.Gen.Virol., 72: 3095-3101; Sugrue, R.J , 등 (2001), J..Gen.Virol., 82,1375-1386). F2 서브유닛은 헵타드 반복 C (HRC)로 이루어지는 반면, F1은 융합 폴리펩티드(FP), 헵타드 반복 A (HRA), 도메인 I, 도메인 II, 헵타드 반복 B (HRB), 막통과(TM) 및 세포질막 도메인 (CP)을 함유한다(Sun, Z. 등 Viruses (2013), 5:211-225 참조). RSV-F 단백질은 바이러스 입자의 세포막 융합에서 역할을 하고, 감염된 세포 표면에서 발현됨으로써, 바이러스의 세포간 전달 및 합포체 형성에서 역할을 한다. RSV-F 단백질의 아미노산 서열이 승인번호 AAX23994로 GenBank에 제공되었고, 또한 본원에서 서열 식별 번호: 354라고 일컬어진다.
RSV-F 단백질의 유전조작된 구조가 서열 식별 번호: 353의 아미노산 서열을 갖는 것으로 본원에 나타나 있다.
본원에서 사용되는 용어 "실험실 균주"는 체외 세포 배양에서 광범위하게 계대배양된 RSV의 균주(서브타입 A 또는 B)를 가리킨다. "실험실 균주"는 그것의 생물학적 특성들에 영향을 미칠 수 있는 적응성 돌연변이를 획득할 수 있다. 본원에서 사용되는 "임상 균주"는 감염된 개인에게서 수득되고, 단리되어 낮은 계대배양의 조직 배양에서 자란 RSV 분리균(서브타입 A 또는 B)를 가리킨다.
용어 “유효 용량 99” 즉 “ED99”은 동형 (음성) 대조군 대비, 바이러스 형성 플라크의 99% 감소 효과를 가져오는 제제의 용량을 가리킨다. 본 발명에서, ED99는 실시예 5에 기술된 바와 같이 체내에서 바이러스 감염을 중화(예컨대 바이러스 부하의 99% 감소) 하는 항 RSV-F 항체의 용량을 가리킨다.
용어 “IC50”은 “반수 최대 억제 농도”를 가리키는데, 생물학적 또는 생화학적 유용성을 향한 화합물(예컨대 항-RSV-F 항체) 억제의 효과성을 측정한 값이다. 이와 같은 정량적 측정은 소정의 생물학적 과정을 절반으로 억제하기 위해 특정 억제제에 요구되는 양을 가리킨다.
“SYNAGIS®”이라고도 불리는 “팔리비주맙”은 US7635568 및 5824307에 기술된 아미노산 서열들(또한 본원에서 상기 항체의 중쇄의 경우 서열 식별 번호: 361로, 상기 항체의 경쇄의 경우 서열 식별 번호: 362으로 나타남)을 갖는 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 갖는 인간화된 항-RSV-F 항체이다. 면역특이적으로 RSV-F 단백질에 결합하는 이와 같은 항체는 현재 고위험 아동의 심각한 RSV 질환의 수동 면역예방에 대해 FDA 승인을 받았고, RSV 유행 시기(북반구의 경우 11월부터 4월까지) 동안 체중 1kg당 1개월 권장 용량 15 mg/kg이 근육내 투여된다. SYNAGIS®은 95%의 인간 항체 서열과 5% 의 쥣과 항체 서열로 구성된다. 또한 Johnson 등, (1997), J. Infect. Diseases 176:1215-1224 참조.
“NUMAX™”이라고도 일컬어지는 “모타비주맙”은 팔리비주맙의 중쇄 및 경쇄의 상보성 결정부의 체외 친화성 성숙에 의해 유도된 중화능이 향상된 RSV-F-특이적 인간화 단클론 항체이다. 미국 특허 공보 제 2003/0091584호 및 미국 특허 제 6,818,216 호 및 Wu 등, (2005) J. Mol. Bio. 350(1):126-144 and in Wu, 등 (2007) J. Mol. Biol. 368:652-665에 개시되어 있는 NUMAX™ 항체의 아미노산 서열을 참조 할 수 있다. 또한 본원에서는 상기 항체의 중쇄의 경우 서열 식별 번호: 359로, 경쇄의 경우 서열 식별 번호: 360으로 표시되어 있다.
본원에서 사용되는 용어 "치료하다," "치료" 및 "치료하는"은 하나 이상의 치료 요법(예컨대, 비제한적으로 하나 이상의 예방용 제제 또는 하나 이상의 치료용 제제의 투여)을 실시한 결과로 인한, 상기도 및/또는 하기도 RSV 감염, 중이염, 또는 그것과 관련된 증상 또는 호흡기 질환(예컨대 천식, 천명, 또는 이들의 복합)의 진행, 중증도 및/또는 기간의 감소 또는 완화를 가리킨다. 구체적인 구현예에서, 이와 같은 용어들은 RSV의 복제의 감소 또는 억제, 다른 조직 또는 다른 개체로의 RSV 전파(예컨대, 하기도로 전파)의 억제 또는 감소, RSV의 세포 감염의 억제 또는 감소, 또는 상기도 및/또는 하기도 RSV 감염 또는 중이염과 관련된 하나 이상의 증상의 완화를 가리킨다.
본원에 사용되는 용어 "예방하다," "예방하는," 및 "예방"은 한 개체에서 상기도 및/또는 하기도 RSV 감염, 중이염 또는 그것과 관련된 호흡기 질환의 발발 또는 시작의 예방 또는 억제, 하나의 요법의 실시(예컨대, 예방용 또는 치료용 제제)결과로 인한, 상기도 RSV 감염의 하기도 RSV 감염, 중이염 또는 그와 관련된 호흡기 질환으로의 진행의 예방 또는 억제, 상기도 및/또는 하기도 RSV 감염, 중이염 또는 그와 관련된 호흡기 질환의 증상의 예방, 또는 요법들의 조합의 실시(예컨대, 예방용 또는 치료용 제제의 조합)를 가리킨다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 4개의 폴리펩티드 사슬로 이루어진 면역글루빈 분자를 가리기키 위한 것으로, 이황화 결합(disulfide bonds)에 의해 서로 연결된 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)(즉, "완전한 항체 분자")뿐만 아니라 이것의 다합체(예컨대 IgM) 또는 이것의 항원-결합 절편이 포함된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변부(“HCVR” 또는 “VH”)와 중쇄 불변부(도메인CH1, CH2 및 CH3으로 구성)로 이루어진다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변부(“LCVR” 또는 “VL”) 및 경쇄 불변부(CL)로 이루어진다. VH 및 VL 부위는 추가로 상보성 결정 영역(CDR)이라 불리는 과변이 부위로 세분화되어, 뼈대부위(FR)라 불리는 좀 더 보존적인 부위와 교차로 배치될 수 있다. VH 및 VL 각각은 3개의 CDR와 4개의 FR로 이루어지고, 이들은 아미노-말단에서 카복시-말단으로, 다음 순서대로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 본 발명의 어떤 구현예에서, 상기 항체(또는 이것의 항원-결합 절편)의 FR들은 인간 생식계열 서열과 동일할 수 있고, 또는 자연적으로 또는 인공적으로 변성될 수 있다. 아미노산 공통서열은 둘 이상의 CDR들의 병렬(side-by-side) 분석을 기초로 규정될 수 있다.
하나 이상의 CDR 잔기의 치환 또는 하나 이상의 CDR의 결실 또한 가능하다. 항체는 과학문서에서 하나 또는 두 개의 CDR가 결합을 위해 제거될 수 있다고 기술된 바 있다. Padlan 등 (1995 FASEB J. 9:133-139)은 공개된 결정구조를 근거로, 항체와 그것의 항원 사이의 접촉 부위를 분석하여, CDR 잔기의 약 1/5 내지 1/3만이 사실상 상기 항원에 접촉한다는 결론을 내렸다. Padlan은 또한 하나 또는 두 개의 CDR가 항원과 접촉하는 아미노산을 갖지 않는 여러 항체를 발견하였다(또한, Vajdos 등 2002 J Mol Biol 320:415-428 참조).
항원과 접촉하지 않는 CDR 잔기들은, 분자 모형화에 의해 및/또는 경험적으로, 이전 연구들(예컨대 CDRH2 중 잔기H60-H65가 종종 요구되지 않음)을 근거로, Chothia CDR 밖에 놓인 Kabat CDR의 부위로부터, 확인될 수 있다. 만약 CDR 하나 또는 이것의 잔기(들)이 누락된 경우, 보통 또 다른 인간 항체 서열 또는 이와 같은 서열의 공통서열에서 상응하는 위치를 차지하는 아미노산으로 치환된다. CDR 내 치환될 위치 및 치환할 아미노산는 또한 경험적으로 선택될 수 있다. 경험적 치환은 보존적 치환 또는 비-보존적 치환이 될 수 있다.
본원에 개시된 완전한 인간 단클론 항체는 상응하는 생식계열 서열과 비교되는 바와 같이, 하여, 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 뼈대 부위 및/또는 CDR 부위에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 이와 같은 변이는 예컨대, 공공 항체 서열 데이터베이스에서 확보 가능한 생식계열 서열과 본원에 개시된 아미노산 서열을 비교함으로써 쉽게 확인될 수 있다. 본 발명은 본원에 개시된 모든 아미노산 서열에서 유도된 항체 및 항원-결합 절편을 포함하고, 여기서 하나 이상의 뼈대 부위 및/또는 CDR 부위 내 하나 이상의 아미노산이 상기 항체가 유도된 생식계열 서열의 상응하는 잔기(들)로, 또는 또 다른 인간 생식계열 서열의 상응하는 잔기(들)로, 또는 상응하는 생식계열 잔기(들)의 보존적 아미노산 치환으로 변이된다(이와 같은 서열 변화는 본원에서 총체적으로 "생식계열 변이"라 부른다). 당해기술의 숙련가는 본원에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변부 서열로 시작하여, 하나 이상의 개별 생식계열 변이 또는 이들의 조합들을 포함하는 수많은 항체 및 이것의 항원-결합 절편을 쉽게 생산할 수 있다. 어떤 구현예에서는, V H 및/또는 V L 도메인 내 모든 뼈대 및/또는 CDR 잔기들이 상기 항체가 유도된 근원 생식계열 서열 부위에서 발견되는 잔기들로 역변이된다. 기타 구현예에서는, 일부 잔기들만이, 예컨대, FR1의 처음 8개 아미노산 내에서 또는 FR4의 마지막 8개 아미노산 내에서 발견되는 변이된 잔기들만, 또는 CDR1, CDR2 또는 CDR3 내에서 발견되는 변이된 잔기들만, 상기의 근원 생식계열 서열로 역변이된다. 기타 구현예에서, 하나 이상의 뼈대 및/또는 CDR 잔기(들)이 다른 생식계열 서열(즉, 상기 항체가 애초에 유도된 생식계열 서열과 다른 생식계열 서열)의 상응하는 잔기(들)로 변이된다. 뿐만 아니라, 본 발명의 항체는 뼈대 및/또는 CDR 부위 내에 둘 이상의 생식계열 돌연변이의 모든 조합을 함유할 수 있는데, 예컨대, 어떤 개별 잔기들은 특정 생식계열 서열의 상응하는 잔기로 변이되는 반면, 근원 생식계열 서열과는 다른 그 밖의 어떤 잔기들은 그대로 유지되거나 또는 다른 생식계열 서열의 상응하는 잔기로 변이된다. 하나 이상의 생식계열 돌연변이를 함유하는 항체 및 항원-결합 절편은, 일단 획득되면, 결합 특이성 향상, 결합친화도 증가, 길항적 또는 표현적 생물학적 특성들의 개선 또는 향상(해당하는 경우), 면역성 감소 등과 같은 하나 이상의 원하는 특성에 대해 쉽게 시험할 수 있다. 이와 같은 일반적은 방식으로 획득된 항체 및 항원-결합 절편은 본 발명의 범위에 포함된다.
본 발명에는 또한 하나 이상의 보존적 치환을 갖는 본원에 개시된HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열들 중 어떤 것의 변종들을 포함하는 완전한 단클론 항체가 포함된다. 예컨대, 본 발명에는 예컨대, 본원에 개시된 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열들 중 어떤 것에 비해 보존적 아미노산 치환이 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하인 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열들을 갖는 항체가 포함된다.
본원에 사용되는 용어 "인간 항체"는 인간 생식계열 면역글루불린 서열에서 유도된 가변부 및 불변부를 갖는 항체를 포함하기 위한 것이다. 본 발명의 인간 mAbs에는, 예컨대 CDR들 및 특정 CDR3에서, 인간 생식계열 면역글루불린 서열에 의해 인코딩되지 않은 아미노산 잔기(예컨대, 체외에서의 임의 또는 위치-특이적 돌연변이 유발에 의해 또는 체내에서의 체세포 돌연변이에 의해 유도된 돌연변이)가 포함될 수 있다. 본원에 사용되는 용어 "인간 항체"는 또다른 포유류종(예컨대, 마우스)의 생식계열에서 유도된 CDR 서열이 인간 FR 서열에 접합된 mAbs는 포함하지 않는 것이다.
용어 "재조합형"은 일반적으로 유전공학방법에 의해 생성되는 관심대상의 유전자를 발현하는 단백질, 폴리펩티드, 세포 모두를 가리킨다. 단백질 또는 폴리펩티드와 관련하여 사용되는 용어 "재조합형"은 재조합형 폴리뉴클레오티드의 발현에 의해 생성된 폴리펩티드를 의미한다. 본 발명의 면역성 조성물에 사용되는 단백질들은 천연 자원에서 단리되거나 또는 유전공학방법에 의해 생성될 수 있다.
본 발명의 항체는, 일부 구현예에서, 재조합형 인간 항체일 수 있다. 본원에 사용되는 용어 "재조합형 인간 항체"는 재조합형 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 모든 인간 항체를 포함하는 것으로, 예를 들어 숙주 세포(추후 하기 기술됨)에 형질주입된 재조합형 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합형, 조합(combinatorial) 인간 항체 라이브러리(추후 하기 기술됨)에서 단리된 항체, 인간 면역글루불린 유전자를 위해 형질전환된 동물(예컨대, 마우스)에서 단리된 항체(예컨대, Taylor 등 (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295 항체 참조) 또는 인간 면역글루불린 유전자 서열을 기타 DNA 서열로 스플라이싱(splicing)하는 것과 관련된 기타 다른 방식으로 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체이다. 이와 같은 재조합형 인간 항체는 인간 생식계열 면역글루불린 서열에서 유도된 가변부 및 불변부를 갖는다. 그러나, 어떤 구현예에서는 이와 같은 재조합형 인간 항체가 체외 돌연변이 유발(또는 인간 Ig 서열을 위한 형질전환 동물이 사용될 경우, 체내 체세포 돌연변이 유발)을 겪고, 그래서 상기 재조합형 항체의 VH 및 VL 부위의 아미노산 서열은 인간 생식계열 VH 및 VL 서열에서 유도되고 이것과 관련되지만, 체내 인간 항체 생식계열 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
용어 "특이적 결합" 또는 “특이적으로 결합하다” 등은 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 생리적 조건 하에서 비교적 안정적인, 항체와의 복합체를 형성하는 것을 의미힌다. 특이적 결합은 최소한 약 1x10-6 M 이하의 평형해리상수를 특징으로 가질 수있다(예컨대, KD가 작을수록 더 긴밀한 결합을 의미한다). 두 분자가 특이적으로 결합하는 여부를 결정하는 방법들이 당해기술에 잘 알려져 있는데, 예컨대, 평행투석법, 표면 플라즈몬 공명 등이 포함된다. 본원에 기술된 바와 같이, RSV-F에 특이적으로 결합하는 항체는 표면 플라즈몬 공명, 예컨대, BIACORE™로 확인해왔다. 게다가, RSV-F 단백질 및 하나 이상의 추가적인 항원에 결합하는 다중-특이성 항체 또는 RSV-F의 서로 다른 두 부위에 결합하는 이중특이성 항체는 본원에서 사용되는 “특이적으로 결합하는” 항체로 고려되지 않는다.
용어 “고친화도” 항체는 표면 플라즈몬 공명, 예컨대, BIACORE™ 또는 용액 친화도 ELISA에 의해 측정된 RSV-F에 대한 결합 친화도(KD로 표현)가 최소한 10-9 M; 바람직하게는 10-10M, 더욱 바람직하게는 10-11M, 더 바람직하게는 10-12M인 mAbs를 가리킨다.
둔화율(“slow off rate”)라는 용어로, “Koff” 또는 “kd”는 표면 플라즈몬 공명, 예컨대, BIACORE™에 의해 측정된 1 x 10-3 s-1 이하, 바람직하게는 1 x 10-4 s-1 이하의 속도 상수로 RSV-F에서 해리되는 항체이다.
본원에 사용되는 용어 항체의 "항원-결합 부분", 항체의 "항원-결합 절편" 등에는 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는, 모든 천연유래의, 효소반응에 의해 획득가능한, 합성의, 또는 유전조작된 폴리펩티드 또는 당단백질이 포함된다. 본원에 사용되는 용어 항체의 "항원-결합 부분" 또는 "항체 절편”은 RSV-F에 결합하는 능력을 보유한 항체의 하나 이상의 절편을 가리킨다.
구체적 구현에에서, 본 발명의 항체 또는 항체 절편은 치료용 모이어티, 예컨대 항생제, 2차 항-RSV-7 항체, 백신, 또는 톡소이드, 또는 RSV 감염 치료에 유용한 기타 모든 치료용 모이어티에 접합될 수 있다(“면역접합체”).
본원에 사용되는 용어 "단리된 항체"는 서로 다른 항원 특이성을 갖는 기타 항체(Abs)가 실질적으로 없는 항체를 가리키는 것이다(예컨대, RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 항체, 또는 이것의 절편은 RSV-F 이외의 다른 항원에 특이적으로 결합하는 Abs가 실질적으로 없다).
본원에 사용되는 용어 “차단 항체” 또는 "중화 항체"(또는 " RSV-F 활성을 중화하는 항체 ")는 RSV-F와의 결합이 결과적으로 RSV-F의 최소한 하나의 생물학적 활성을 억제하는 항체를 가리키는 것이다. 예컨대, 본 발명의 항체는 RSV의 숙주 세포와의 융합을 차단하는 것을 돕거나, 또는 합포체 형성을 방지하거나, 또는 RSV에 의해 유발되는 1차 질환을 방지할 수 있다. 선택적으로, 본 발명의 항체는 RSV 감염의 최소한 하나의 증상을 완화할 수 있는 능력을 나타낼 수 있다. 이와 같은 RSV-F의 생물학적 활성의 억제는 여러 표준 체외 분석법(예컨대 본원에 기술된 중화 분석법) 또는 당해기술에 알려져 있는 체내 분석법(예컨대, 본원에 기술된 항체를 한 번 이상 투여한 후, RSV의 면역반응 유도로부터 보호를 관찰하기 위한 동물 모형) 중 하나 이상에 의해 RSV-F 생물학적의 하나 이상의 표지자를 측정함으로써 평가될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "표면 플라즈몬 공명"은, 예컨대 BIACORE™ 시스템 (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.)을 사용하여, 바이오센서 매트릭스 내 단백질 농도의 변화를 검출함으로써 실시간 생분자 상호작용의 분석을 가능하게 하는 광학적 현상을 가리킨다.
본원에 사용되는 용어 "KD "는 특정 항체-항원 상호작용의 평형해리상수를 가리키는 것이다.
용어 “항원결정부”는, 항원결합부(paratope)라고 알려진, 항체 분자의 가변부의 특이적 항원결합부위와 상호작용하는 항원성 결정인자를 가리킨다. 단일 항원은 둘 이상의 항원결정부를 가질 수 있다. 따라서 서로 다른 항체가 항원의 서로 다른 부분에 결합할 수 있고, 서로 다른 생물학적 효과를 나타낼 수 있다. 용어 “항원결정부”는 또한 B 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 상의 부위를 가리킨다. 이것은 또한 항체에 의해 결합되는 항원의 부위를 가리킨다. 항원결정부는 구조적으로 또는 기능적으로 규정될 수 있다. 기능적 항원결정부는 일반적으로 구조적 항원결정부의 하위집합으로, 상기 상호작용의 친화도에 직접 기여하는 잔기들을 갖는다. 항원결정부는 또한 입체적(conformational)일 수 있는데, 즉, 비선형 아미노산들로 이루어진다. 어떤 구현예에서, 항원결정부는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 작용기, 또는 술포닐 작용기와 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹핑(groupings)인 결정인자들을 포함할 수 있고, 어떤 구현예에서는, 특이적인 3차원 구조 특징, 및/또는 특이적 전하 특징을 가질 수 있다.
핵산 또는 그것의 절편을 가리킬 경우, 용어 "실질적 동일성" 또는 "실질적으로 동일한"은 최적으로 적절한 뉴클레오티드 삽입 또는 결실의 존재 하에 또다른 핵산(또는 그것의 상보성 가닥)과 나란히 나열하였을 때, 하기 기술된 FASTA, BLAST 또는 GAP와 같은 잘 알려진 서열 동일성의 알고리즘에 의해 측정된 바에 따라, 뉴클레오티드 염기의 최소한 약 90%, 및 더 바람직하게는 최소한 약 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 뉴클레오티드 서열 동일성이 있음을 가리킨다. 참조 핵산 분자와 실질적인 동일성을 갖는 핵산 분자는, 어떤 경우에는, 참조 핵산 분자에 의해 인코딩되는 폴리펩티드와 동일하거나 또는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 인코딩할 수 있다
용어 "실질적인 유사성” 또는 “실질적으로 유사한”이란, 폴리펩티드에 적용될 경우, 2개의 펩티드 서열이, 예컨대 기본 간극 중량(default gap weights)을 사용하는 프로그램 GAP 또는 BESTFIT에 의해 최적으로 배열되었을 경우, 최소한 90% 서열 동일성을, 좀 더 바람직하게는 최소한 95%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 공유함을 뜻한다. 바람직하게는, 서로 동일하지 않은 잔기 위치들은 보존적 아미노산 치환에 따라 달라진다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 화학적 특성(예컨대, 전하 또는 소수성)을 가지고 하나의 측쇄(R 작용기)를 가진 다른 아미노산 잔기로 치환되는 것이다. 일반적으로, 보존적 아미노산 치환은 실질적으로 단백질의 기능적 특성을 변화시키지 않는다. 둘 이상의 아미노산 서열이 보존적 치환에 의해 서로 다른 경우, 유사 백분율 또는 유사도가 상기 치환의 보존적 성격에 대해 보정되도록 상향 조정될 수 있다. 이와 같은 조정을 하기 위한 수단이 당해 기술의 숙련가들에게 잘 알려져 있다. (예컨대, Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331 참조). 유사한 화학적 특성을 가지며 측쇄를 갖는 아미노산 군의 예에는 1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 이소류신; 2) 지방족 -히드록실 측쇄: 세린 밍 트레오닌; 3) 아미드-함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; 4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 타이로신 및 트립토판; 5) 염기성 측쇄: 라이신, 아르기닌 및 히스티딘; 6) 산성 측쇄: 아스파르트산염 및 글루탐산염, 및 7) 황-함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌. 바람직한 보존적 아미노산 치환 군은 발린-류신-이소류신, 페닐알라닌-타이로신, 라이신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루탐산염-아스파르트산염, 및 아스파라긴-글루타민이다. 선택적으로, 보존적 교체는 Gonnet 등 (1992) Science 256: 1443 45에 개시된 PAM250 log-likelihood matrix에서 양성값을 갖는 모든 변화이다. "적당히 보존적인" 교체는 PAM250 log-likelihood matrix에서 비음성값을 갖는 모든 변화이다.
폴리펩티드에 대한 서열 유사성은 전형적으로 서열 분석 소프트웨어를 사용하여 측정된다. 단백질 분석 소프트웨어는 보존적 아미노산 치환을 비롯하여 다양한 치환, 결실 및 기타 변성에 할당된 유사성의 측정값을 사용하여 유사한 서열들의 짝을 짖는다. 예를 들어, GCG 소프트웨어는 서로 다른 종의 유기체들에서 유래되었거나 또는 야생형 단백질과 이것의 돌연변이 단백질 사이의 상동성 폴리펩티드와 같이 긴밀하게 관련된 폴리펩티드들 사이의 서열 상동성 또는 서열 동일성을 판단하기 위해, 기본 매개변수(default parameters) 와 함께 사용될 수 있는 GAP 및 BESTFIT와 같은 프로그램들을 함유한다. 예컨대, GCG Version 6.1 참조. 폴리펩티드 서열들은 또한 기본 또는 권장 매개변수와 함께 FASTA(GCG Version 6.1의 프로그램)를 사용하여 비교될 수 있다. FASTA(예컨대, FASTA2 및 FASTA3)는 query ? search 서열들 사이의 최적의 중첩 부위의 배열 및 백분율 서열 동일성을 제공한다(Pearson (2000) supra). 본 발명의 서열을 서로 다른 유기체에서 유래한 수많은 서열을 함유하는 데이터베이스에 비교할 때 또 다른 바람직한 알고리즘은, 기본 매개변수를 사용하는, 컴퓨터 프로그램인 BLAST, 특히 BLASTP 또는 TBLASTN이다(예컨대 Altschul 등 (1990) J. Mol. Biol. 215: 403 410 and (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389 402 참조).
구체적 구현에에서, 본 발명의 방법에 사용하기 위한 상기 항체 또는 항체 절편은 단일-특이성, 이중-특이성 또는 다중-특이성일 수 있다. 다중-특이성 항체는 하나의 표적 폴리펩티드의 서로 다른 항원결정부들에 특이적일 수도 있고, 또는 둘 이상의 표적 폴리펩티드의 항원결정부들에 특이적인 항원-결합 도메인을 함유할 수도 있다. 본 발명의 상황에 사용될 수 있는 예시적인 이중특이성 항체 포맷은 첫 번째 면역글루불린 (Ig) CH3 도메인과 두 번째 Ig CH3 도메인의 사용을 요구하는데, 여기서 첫 번째 및 두 번째 Ig CH3 도메인은 서로 최소한 하나의 아미노산 차이가 나고, 최소한 하나의 아미노산 차이는, 아미노산 차이가 없는 이중특이성 항체와 비교할 때, 이중특이성 항체의 단백질 A 결합을 감소시킨다. 한 구현예에서, 첫 번째 Ig CH3 도메인은 단백질 A에 결합하고, 두 번째 Ig CH3 도메인은 단백질 A 결합을 감소시키거나 또는 폐지하는 돌연변이체, 예컨대 H95R 변성체(엑손 넘버링에 의한 IMGT; EU 넘버링에 의한 H435R)를 함유한다. 두 번째 CH3은 추가로 Y96F 변성체(IMGT기준; EU 기준 Y436F)를 포함할 수 있다. 두 번째 CH3내에서 발견될 수 있는 추가적 변성체에는, IgG1 mAbs의 경우, D16E, L18M, N44S, K52N, V57M, 및 V82I(IMGT 기준; D356E, L358M, N384S, K392N, V397M, 및 V422I, EU 기준); IgG2 mAbs의 경우, N44S, K52N 및 V82I (IMGT; N384S, K392N 및 V422I); 및 IgG4 mAbs의 경우, Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q, 및 V82I (IMGT 기준; EU 기준 Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q 및 V422I)이 포함된다. 상기에서 기술된 이중특이성 항체 상의 변형들이 본원의 범위 내에서 고려된다.
“치료차원의 유효량”이란 문구는 투여될 때 원하는 효과를 생산하는 용량을 의미한다. 정확한 양은 치료 목적에 따라 달라지고, 알려진 기법을 사용하여 당해기술의 숙련가에 의해 확인될 수 있다(예컨대, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding 참조).
"면역성 조성물"은, 수혜자의 체액 및/또는 세포 면역체계를 상기 면역성 조성물에 존재하는 하나 이상의 항원/면역원에 자극하기 위해 투여되는, 항원/면역원, 예컨대 바이러스 또는 박테리아와 같은 미생물, 또는 이것의 구성성분, 단백질, 폴리펩티드, 단백질 또는 폴리펩티드의 절편, 완전한 세포, 불활성, 서브유닛 또는 약화된 바이러스, 또는 폴리사카라이드 또는 이들의 조합을 함유하는 조성물을 가리킨다. 본 발명의 면역성 조성물은 전신 경로를 통해 상기 면역성 조성물을 투여함으로써, RSV에 감염되기 쉬운 인간을 치료하는 데 사용될 수 있다. 이와 같은 투여에는 근육내(i.m.), 피내(i.d.), 비강내 또는 흡입 경로를 통한, 또는 피하(s.c.) 경로를 통한 주입; 패치 또는 기타 경피 전달 장치에 의한 적용이 포함된다. 한 구현예에서, 상기 면역성 조성물은 백신의 제조에, 또는 수동적으로 포유류를 보호하거나 또는 치료하기 위해 사용될 수 있는 다중클론 또는 단클론 항체의 유발에 사용될 수 있다.
상호교환하여 사용될 수 있는 용어 "백신" 또는 "백신 조성물"은 동물에서 면역 반응을 유도하는 최소한 하나의 면역성 조성물을 포함하는 조성물을 가리킨다.
본 발명의 한 구현예에서, 관심대상의 단백질은 항원을 포함한다. 용어 "항원," "면역원," "항원성," "면역성," "항원적 활성인" 및 "면역학적으로 활성인"은 분자와 관련하여 사용될 때, 특이적 체액 및/또는 세포-매개 면역 반응을 유도할 수 있는 모든 성분을 가리킨다. 한 구현예에서, 상기 항원은 상기에서 정의된 항원결정부를 포함한다.
본원에 사용되는 용어 "면역학적 보호량(Immunologically protective amount)"은 질환의 징후 또는 증상, 예컨대 건강에 미치는 부작용 또는 이것의 합병증을 예방하거나 또는 완화하기에 충분한 면역성 반응을 수혜자에게서 유도하기 위해 유효한 항원의 양이다. 체액 면역력 또는 세포-매개 면역력 중 하나, 또는 둘 다 유도될 수 있다. 조성물에 대한 동물의 면역성 반응이, 예컨대, 항체 역가의 측정, 림프구 증식 분석법을 통해 간접적으로, 또는 상기 미생물로 면역반응을 유도(challenge)한 후 징후 및 증상을 모니터링함으로써 직접적으로, 평가될 수 있다. 면역성 조성물 즉 백신에 의해 부여되는 보호성 면역력은 예컨대, 면역반응 유도 유기체의 폐기의 감소, 임상 징후들, 예컨대 사망률, 병적상태, 온도 및 전반적인 신체 상황, 상기 개체의 건강 및 운동능력의 감소를 측정함으로써 평가될 수 있다. 상기 면역 반응은 비제한적으로, 세포성 및/또는 체액 면역력의 유도를 포함한다. 치료차원에서 유효한 조성물 즉 백신의 양은 사용되는 특정 유기체에 따라, 또는 치료받거나 또는 백신접종을 맞는 동물의 상태에 따라 달라질 수 있다.
본원에 사용되는 "면역 반응" 또는 "면역학적 반응"은 한 개체에서, 항원/면역원에 대한 체액 면역 반응, 세포성-면역 반응, 또는 체액 및 세포성 면역 반응의 발생을 가리킨다. "체액 면역 반응"은 적어도 부분적으로 최소한 항체에 의해 매개되는 것을 가리킨다. "세포성 면역 반응"은 T-림프 또는 기타 백혈구 또는 둘 다에 의해 매개되는것으로, 활성화된 T-세포, 백혈구, 또는 둘 다에 의해 생성되는 사이토킨, 케모카인 또는 유사 분자의 생성을 포함한다. 면역 반응은 당해기술에 알려져 있는 표준 면역분석법 및 중화 분석법을 사용하여 판단될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "면역력"은 확인된 질환을 유발하는 박테리아 또는 바이러스에 특이적으로 대항하는 면역 반응을 유발하는 단백질 또는 폴리펩티드의 능력을 가리킨다.
일반적 설명
호흡기 세포융합 바이러스(RSV)은 영유아 및 아동의 중증 기도감염의 주요 원인인 음성 극성, 단일가닥 RNA 바이러스로, 1차 감염이 생후 6주 내지 만2세의 유아에게서 발생하고, 이례적으로 병원감염 유행시기에 생후 4주의 영아에게서 발생한 적이 있다(Hall 등, 1979, New Engl. J. Med. 300:393-396). (Feigen 등,eds., 1987, In: Textbook of Pediatric Infectious Diseases, W B Saunders, Philadelphia at pages 1653-1675; New Vaccine Development, Establishing Priorities, Vol. 1, 1985, National Academy Press, Washington D.C. at pages 397-409; Ruuskanen 등, 1993, Curr. Probl. Pediatr. 23:50-79; Hall 등, 1979, New Engl. J. Med. 300:393-396). 어떤 계층의 아동은 RSV 감염이 발생할 위험에 처해 있는데, 이들은 조산아(Hall 등, 1979, New Engl. J. Med. 300:393-396), 선천성 기도 기형이 있는 영유아, 기관지폐이형성증이 있는 영유아(Groothuis 등, 1988, Pediatrics 82:199-203), 선천성 심장병이 있는 영유아(MacDonald 등, New Engl. J. Med. 307:397-400) 및 선천성 또는 후천성 면역결핍증이 있는 영유아(Ogra 등, 1988, Pediatr. Infect. Dis. J. 7:246-249; 및 Pohl 등, 1992, J. Infect. Dis. 165:166-169) 및 낭포성 섬유증이 있는 영유아(Abman 등, 1988, J. Pediatr. 113:826-830)를 포함한다.
RSV는 성인층 역시 감염시킬 수 있다. 성인층에서 RSV는 주로 상기도 질환을 유발하지만, 노년층 환자들은 중증 감염 및 폐렴의 더 큰 위험에 처할 수 있고(Evans, A. S., eds., 1989, Viral Infections of Humans. Epidemiology and Control, 3rd ed., Plenum Medical Book, New York at pages 525-544), 면역이 억제된 성인, 특히 골수이식 환자의 경우도 마찬가지다(Hertz 등, 1989, Medicine 68:269-281). 그 밖의 위험 환자는 울혈성 심부전을 앓는 환자 및 만성 폐쇄성 폐질환(즉, COPD)을 앓는 환자를 포함한다. 또한 요양원 환자 및 보호 시설에 수감된 젊은이들 사이에서 유행된 경우가 보고된 바 있다(Falsey, A. R., 1991, Infect. Control Hosp. Epidemiol. 12:602-608; 및 Garvie 등, 1980, Br. Med. J. 281:1253-1254).
기존의 RSV 질환에 대한 치료 선택안이 제한적인 반면, 좀 더 중증 형태의 하기도 질환은 종종 상당한 보조적 치료를 필요로 하는데, 여기에는 가습 산소의 투여 및 호흡기 도움(Fields 등, eds, 1990, Fields Virology, 2nd ed., Vol. 1, Raven Press, New York at pages 1045-1072)이 포함된다.
감염 치료에 승인된 유일한 약물인 리바비린은 RSV 감염과 관련된 폐렴 및 기관지염의 치료에 효과적임이 보여진 바 있고, 면역적격 영유아의 경우, 중증 RSV 질환의 경과를 바꾼다는 것이 입증된 바 있다(Smith 등, 1991, New Engl. J. Med. 325:24-29). 그러나, 리바비린의 사용은, 이것이 병원 환경에서 투여되는 동안 에어로졸화된 약물에 노출될 수 있는 임신부에 대한 잠재적 위험을 둘러싼 문제 때문에, 제한적이다. 이것의 사용은 비교적 높은 비용 때문에 역시 제한적이다.
RSV 감염의 다른 펩티드 억제제들이 확인된 바 있는데, 이들은 체외에서 바이러스 성장을 억제하나, 체내에서 시험했을 때 실패하였고, 가장 큰 이유는 경구투여 가능성(oral availability)의 결여 및 비교적 낮은 순환 반감기 때문이다(Lambert, D.M., 등 (1996), PNAS (USA) 93:2186-2191; Magro, M. 등, (2010), J. Virol. 84:7970-7982; Park, M. 등 (2011), Anal. Biochem. 409:195-201).
RSV 감염의 다른 소분자 억제제 또한 확인된 바 있으나, 여러 이유로 연구가 중단되었고, 그 이유 중 일부는 독성 부작용 때문일 것이다(Wyde, P.R. 등 (1998), Antiviral Res. 38:31-42; Nikitenko, A.A. 등 (2001), Bioorg Med Chem Lett 11:1041-1044; Douglas, J.L., 등 (2003), J. Virol 77:5054-5064; Bonfanti, J.F. 등, (2008), J. Med Chem 51:875-896).
이와 유사하게, 어떤 백신이 유용할 수 있는지는 몰라도, 지금까지 개발된 판매 백신은 없다. 여러 백신 후보들은 연구가 중단되었고, 다른 백신 후보들은 개발 중이다(Murphy 등, 1994, Virus Res. 32:13-36). 백신의 개발이 문제의 핵심임이 입증된 바있다. 특히, 하기도 질환의 최고 발생시기는 생후 2 내지 5개월 때이기 때문에, 출생 직후 신생아 시기에 예방주사가 필요할지 모른다. 그러나, 신생아 면역 반응은 그 당시 미성숙하다. 게다가 이 때 신생아는 여전히 모성유래 후천성 RSV 항체가 높은 역가를 나타내어, 백신 면역력을 감소시킬 수 있다(Murphy 등, 1988, J. Virol. 62:3907-3910; 및 Murphy 등, 1991, Vaccine 9:185-189).
현재, 수동 면역이 RSV 질환의 예방을 위해 유일하게 승인된 방식으로 보인다. IgG에 대한 보호 역할을 시사하는 최초의 증거는 흰담비를 대상으로(Prince, G. A., Ph.D. diss., University of California, Los Angeles, 1975) 그리고 인간을 대상으로(Lambrecht 등, 1976, J. Infect. Dis. 134:211-217; 및 Glezen 등, 1981, J. Pediatr. 98:708-715) 모성 항체를 입증하기 위한 연구에서 획득되었다.
Hemming 등 (Morell 등, eds., 1986, Clinical Use of Intravenous Immunoglobulins, Academic Press, London at pages 285-294)은 신생아 패혈증을 가진 것으로 의심되는 신생아에게서 정맥 면역글루빈(IVIG)의 약동학과 관련된 연구를 진행 중에 RSV 감염의 치료 또는 예방에 RSV 항체를 활용할 수 있는 가능성을 인식하였다. 이들 연구자들 그룹은, 이어서 RSV 중화 항체를 위해 강화된, 과면역 혈청 또는 면역글루불린이 RSV 감염에 대해 코튼 랫트 및 영장류를 보호하는 능력을 조사하였다(Prince 등, 1985, Virus Res. 3:193-206; Prince 등, 1990, J. Virol. 64:3091-3092; Hemming 등, 1985, J. Infect. Dis. 152:1083-1087; Prince 등, 1983, Infect. Immun. 42:81-87; 및 Prince 등, 1985, J. Virol. 55:517-520). 이들 연구의 결과는 예방차원에서 투여된 RSV 중화 항체가 코튼 랫트에서 RSV의 기도 복제(replication)를 억제함을 시사하였다. 치료차원으로 투여된 경우, RSV 항체가 코튼 랫트에서, 그리고 비-인간 영장류 모형에서 폐 바이러스 복제를 감소시켰다.
좀 더 최근의 연구들은 중화 항체의 표적으로서, 두 가지 당단백질(RSV 표면에서 발견), F 및 G의 역할에 중점을 두고 있는데, 이것은 바이러스의 숙주 세포 부착 및 융합에서 이들 당단백질의 역할 때문이다(Fields 등, 1990, supra; 및 Murphy 등, 1994, supra). G 단백질은 특이적 세포 수용체에 결합하고 F 단백질은 바이러스와 상기 세포의 융합을 촉진한다. F 단백질은 또한 감염된 세포의 표면에서 발현되고, 합포체 형성을 초래하는 다른 세포들과의 추후 융합의 원인이다. 따라서, F 단백질에 대한 항체가 바이러스를 직접 중화하거나, 또는 바이러스와 세포의 융합을 차단하거나, 또는 합포체 형성을 방지함으로써 세포간 전파를 방지할 수 있을 것이다.
RSV에 의해 유발되는 중증 하기도 질환의 예방을 위해 소아 환자에게 사용이 승인된 첫 번째 인간화 항체는 팔리비주맙(SYNAGIS®)로, 이것은 면역 특이적으로 F 단백질에 결합하고, RSV 유행 시기(북반구의 경우 11월부터 4월까지)를 통틀어 체중 1kg 당 1개월 권장용량 15 mg/kg이 근육내로 투여된다. SYNAGIS®는 95%가 인간 항체 서열이고 5%가 쥣과 항체 서열이다. (Johnson 등, 1997, J. Infect. Diseases 176:1215-1224 and U.S. Pat. No. 5,824,307 참조).
SYNAGIS®가 소아 환자의 RSV 감염 예방에 성공적으로 사용되어 왔으나, SYNAGIS® 권장용량 15 mg/kg을 여러 차례 근육내 투여하기 위해 의사를 수차례 방문해야하기 때문에, 이는 환자에게 불편할 뿐만 아니라, 또한 투여를 빼먹는 결과를 초래할 수도 있다. 따라서, RSV 항원에 대한 면역특이성을 보유하면서, 좀 더 강력하고 개선된 약동학 프로파일을 갖는, 그래서 전반적으로 개선된 치료 프로파일을 갖는 항체의 개발에 대한 요구가 있었다. 이와 같은 항체가 미국 특허공보 제2003/0091584호에 기술되어 있고 모타비주맙(NUMAX™)으로 알려져 있다. 비록 NUMAX™ 가 SYNAGIS®의 경우 상기에 기술한 더 높은 수준의 투여 필수사항을 극복할 수 있는 개선된 결합 특징들을 갖지만, SYNAGIS®와 비교할 때, 과민 반응의 빈도수 및 중증도가 3 내지 5배 증가하였다. 이후, NUMAX™은 향후 개발 계획에서 제외되었다.
이에 따라, RSV 감염에 효과적인 치료법에 대한 요구가 여전히 존재하고, 특히, 상기 내용과 관련된 부작용이 없으면서, RSV 감염의 예방 및 치료에 좀 더 강력한 항체의 확인에 대한 요구가 존재한다. 본원에 기술된 항체는, 팔리비주맙 또는 모타비주맙보다 RSV-F에 대한 더 낮은 결합 친화도를 나타내지만(즉, 본 발명의 항체는 팔리비주맙만큼 RSV-F에 단단히 결합하지 않음), 더 나은 중화 능력을 나타내는 것으로 보여 상기의 요구를 해결한다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 항체는 온전한 RSV 입자(살아있는, 약화된, 또는 비활성화된)와 같은 1차 면역원으로, 또는 상기 바이러스의 재조합형 형태로, 또는 정제된 F 단백질(GenBank 승인 번호 AAX23994.1 (서열 식별 번호: 354) 참조), 또는 재조합으로 생성된 F 단백질(서열 식별 번호: 353 참조)로 면역조치되고, 2차 면역원(온전한 바이러스, 또는 정제된 F 단백질)로, 또는 F 단백질의 면역학적 활성 절편으로 면역조치된 마우스에서 획득하였다.
상기 면역원은 F 단백질을 인코딩하는 DNA이거나 또는 이것의 활성 절편일 수 있다.
상기 면역원은 67 KDa 전구체(F0)의 N-말단 또는 C-말단 도메인에서, 또는 N 말단 및 C 말단 각각에서 F2 및 F1라고 명명되는 2개의 이황화 결합 폴리펩티드를 산출하는 퓨린-유사 단백질분해효소에 의해 상기 전구체에서 생성되는 2개 절편 중 하나에서 유도될 수 있다. 상기 절편은 RSV-F 단백질의 알려진 모든 부위에서 유도될 수 있다(Sun, Z. 등 (2013), Viruses 5:211-225).
RSV-F의 전장 아미노산 서열은 서열 식별 번호: 354로 보여지고, 또한 GenBank 승인 번호 AAX23994.1에 보여진다.
RSV의 F 단백질을 함유하는 유전자 구조가 서열 식별 번호: 353으로서 보여진다.
어떤 구현예에서, RSV-F에 특이적으로 결합하는 항체가 상기 부위의 절편, 또는 본원에 기술된 부위의 N 말단 또는 C 말단 중 하나, 또는 둘 모두에서 약 5개 내지 약 20개 아미노산 잔기만큼 지정된 부위를 넘어서 연장되는 펩티드를 사용하여 제조될 수 있다. 어떤 구현예에서, 상기 언급된 부위들의 모든 조합 또는 이들의 절편이 RSV-F 특이성 항체의 제조에 사용될 수 있다. 어떤 구현예에서, RSV-F의 상기 언급된 부위들의 하나 이상, 또는 이것의 절편이 단일특이성, 이중특이성, 또는 다중 특이성 항체의 제조에 사용될 수 있다.
항체의 항원-결합 절편
구체적으로 달리 표시되지 않는 한, 본원에 사용되는 용어 "항체"는 2개의 면역글루불린 중쇄 및 2개의 면역글루불린 경쇄를 포함하는 항체 분자(즉, "완전한 항체 분자")뿐만 아니라 이것의 항원-결합 절편을 아우르는 것으로 이해되어야 한다. 항체의 "항원-결합 부분", 항체의 "항원-결합 절편" 등 본원에 사용되는 용어는 천연유래, 효소반응에 의해 획득가능한, 합성의, 또는 유전조작된 폴리펩티드 중 어떤 것이든, 또는 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 당단백질을 포함한다. 본원에 사용되는 용어 항체의 "항원-결합 부분" 또는 "항체 절편”은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 항체의 하나 이상의 절편을 가리킨다. 항체 절편에는 Fab 절편, F(ab')2 절편, Fv 절편, dAb 절편, CDR 하나를 함유하는 절편, 또는 단리된 CDR이 포함될 수 있다. 항체의 항원-결합 절편은 단백질 가수분해 소화 또는 항체 가변부 및 (선택적으로) 불변 도메인을 인코딩하는 DNA의 조작 및 발현과 관련된 재조합형 유전자조작 기법과 같은 모든 적합한 표준 기법을 사용하여, 예컨대 온전한 항체 분자에서 유도될 수 있다. 이와 같은 DNA이 알려져 있고 및/또는 예컨대, 상업적 공급처, DNA 라이브러리(예컨대, 파지-항체 라이브러리 포함)에서 쉽게 구할 수 있고, 또는 합성될 수 있다. 상기 DNA는 예컨대, 하나 이상의 가변부 및/또는 불변 도메인을 적합한 구성으로 배열하기 위해, 또는 코돈을 도입하고, 시스테인 잔기를 생성하고, 아미노산을 변형, 첨가 또는 결실하기 위해, 시퀀싱되고, 화학적으로 또는 분자 생물학 기법을 사용하여 조작될 수 있다.
항원-결합 절편의 비제한적 예에는 (i) Fab 절편; (ii) F(ab')2 절편; (iii) Fd 절편; (iv) Fv 절편; (v) 단일사슬 Fv (scFv) 분자; (vi) dAb 절편; 및 (vii) 항체의 초가변부(예컨대, CDR3 펩티드와 같은 단리된 상보성 결정 부위(CDR)), 또는 제약된(constrained) FR3-CDR3-FR4 펩티드를 모방하는 아미노산 잔기들로 이루어진 최소 인식 단위가 포함될 수 있다. 기타 조작된 분자, 예컨대 도메인-특이성 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실된 항체, 키메라 항체, CDR-접합 항체, 디아바디, 트라이바디, 테트라바디, 미니바디, 나노바디(예컨대 1가 나노바디, 2가 나노바디 등), 소모듈 면역약제(SMIPs), 및 샤크 가변부 IgNAR 도메인 또한 본원에 사용되는 표현 "항원-결합 절편"에 포함된다.
항체의 항원-결합 절편은 전형적으로 최소한 하나의 가변 도메인을 포함한다. 상기 가변 도메인은 모든 크기의 아미노산 조성물로, 일반적으로 하나 이상의 뼈대 서열에 근접한 또는 이것과 프레임을 함께 하는 최소한 하나의 CDR를 포함할 수 있다. VL 도메인과 관련된 VH 도메인을 갖는 항원-결합 절편에서, VH 및 VL 도메인이 모든 적합한 배열방식으로 서로를 상대로 배치될 수 있다. 예컨대, 상기 가변부는VH - VH, VH - VL 또는 VL - VL 이합체와 같은 이합체일 수 있다. 선택적으로, 항체의 항원-결합 절편은 단일체인 VH 또는 VL 도메인을 함유할 수 있다.
어떤 구현예에서, 항체의 항원-결합 절편은 최소한 하나의 불변 도메인에 공유 결합된 최소한 하나의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원-결합 절편 내에서 발견될 수 있는 가변부 및 불변 도메인의 비제한적인 예시적 구성에는 (i) VH -CH1; (ii) VH -CH2; (iii) VH -CH3; (iv) VH -CH1-CH2; (v) VH -CH1-CH2-CH3; (vi) VH -CH2-CH3; (vii) VH -CL; (viii) VL -CH1; (ix) VL -CH2; (x) VL -CH3; (xi) VL -CH1-CH2; (xii) VL -CH1-CH2-CH3; (xiii) VL -CH2-CH3; 및 (xiv) VL -CL이 포함된다. 앞서 나열된 모든 예시적 구성을 비롯하여, 가변부 및 불변 도메인의 모든 구성에서, 상기 가변부 및 불변 도메인은 서로 직접 연결되어 있거나 또는 완전한 또는 부분적인 경첩 또는 링커 부위에 의해 연결될 수 있다. 경첩 부위은 최소한 2개(예컨대, 5, 10, 15, 20, 40, 60개 이상)의 아미노산으로 이루어질 수 있고, 이로써 단일 폴리펩티드 분자에서 이웃한 가변부 및/또는 불변 도메인 사이에 유연한 또는 반-유연한 연결이 생성된다. 게다가, 본 발명의 항체의 항원-결합 절편은 앞서 나열된 모든 가변부 및 불변 도메인 구성의 동형-이합체 또는 이형-이합체(또는 기타 다합체)를, 서로 비공유 결합의 형태로, 및/또는 하나 이상의 단일체 VH 또는 VL 도메인과의 비공유결합(예컨대, 이황화 결합(들))의 형태로 포함할 수 있다.
완전한 항체 분자와 마찬가지로, 항원-결합 절편은 단일특이성 또는 다중-특이성(예컨대, 이중특이성)일 수 있다. 항체의 다중특이성 항원-결합 절편은 전형적으로 최소한 2개의 서로 다른 가변 도메인을 포함하는데, 여기서 각각의 가변 도메인은 별도의 항원 또는 동일한 항원의 서로 다른 항원결정부에 특이적으로 결합할 수 있다. 본원에 개시된 예시적 이중특이성 항체 형식을 비롯하여 모든 다중-특이성 항체 형식은 당해기술에서 확보할 수 있는 일반적인 기법을 사용하여 본 발명의 항체의 항원-결합 절편의 상태에서 사용되도록 개조될 수도 있다.
인간 항체의 제조
형질전환 마우스에서 인간 항체를 생성하는 방법이 당해기술에 알려져 있다. 이와 같이 알려진 모든 방법들이 RSV-F에 특이적으로 결합하는 인간 항체를 제조하는 본 발명의 상황에서 사용될 수 있다.
VELOCIMMUNE® 기술(예컨대, US 6,596,541, Regeneron Pharmaceuticals, VELOCIMMUNE® 참조) 또는 단클론 항체 생성의 알려진 모든 방법을 사용하여, 인간 가변부 및 마우스 불변부를 갖는, RSV-F에 대한 고친화도 키메라 항체가 최초로 단리되었다. VELOCIMMUNE® 기술은 상기 마우스가 반응 항원성 자극에 대한 반응에서 인간 가변부 및 마우스 불변부를 포함하는 항체를 생산하도록, 내생적 마우스 불변부 부위(loci)에 작동가능하게 결합된 인간 중쇄 및 경쇄 가변부을 포함하는 게놈을 갖는 형질전환 마우스의 생성을 수반한다. 상기 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변부를 인코딩하는 DNA가 단리되어 상기 인간 중쇄 및 경쇄 불변부를 인코딩하는 DNA에 작동가능하게 결합된다. 상기 DNA는 이어서 완전한 인간 항체를 발현할 수 있는 세포에서 발현된다.
일반적으로, VELOCIMMUNE® 마우스는 관심대상의 상기 항원으로 면역반응이 유도되고, 림프 세포(예컨대 B-세포)가 항체를 발현하는 마우스에서 회수된다. 림프 세포는 골수종 세포주와 융합되어 불멸의 혼성 세포주를 제조할 수 있고, 이와 같은 혼성 세포주는 검사 및 선택되어 관심대상의 항원에 특이적인 항체를 생산하는 혼성 세포주를 확인할 수 있다. 상기 중쇄 및 경쇄의 가변부를 인코딩하는 DNA가 단리되어 상기 중쇄 및 경쇄의 바람직한 이소타입 불변부에 결합될 수 있다. 이와 같은 항체 단백질이 CHO 세포와 같은 세포에서 생산될 수 있다. 선택적으로, 항원-특이적 키메라 항체 또는 상기의 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인을 인코딩하는 DNA가 항원-특이적 림프구에서 직접 단리될 수 있다.
애초에, 인간 가변부 및 마우스 불변부를 갖는 고친화도 키메라 항체가 단리된다. 하기 실험 부분에서와 같이, 상기 항체는 친화도, 선택성, 항원결정부 등을 비롯하여 바람직한 특징들에 대해 특징지어지고 선택된다. 상기 마우스 불변부는 원하는 인간 불변부와 교체되어 본 발명의 완전한 인간항체, 예컨대 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4를 생성할 수 있다. 선택된 불변부는 구체적 사용에 따라 달라질 수 있는 반면, 고친화도 항원-결합 및 표적 특이성 특징은 상기 가변부에 속한다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 항체는 고체 상 또는 용액 상에 고정된 항원에 결합함으로써 측정될 때, 약 1.0 x 10 -7 M 내지 약 1.0 x 10-12M범위의 친화도(KD) 를 갖는다. 어떤 구현예에서, 본 발명의 항체는 고체 상 또는 용액 상에 고정된 항원에 결합함으로써 측정될 때, 약 1 x 10-7 M 내지 약 6 x10-10M 범위의 친화도(KD)를 갖는다. 어떤 구현예에서, 본 발명의 항체는 고체 상 또는 용액 상에 고정된 항원에 결합함으로써 측정될 때, 약 1 x 10-7 M 내지 약 9 x10-10M의 범위의 친화도(KD)를 갖는다. 상기 마우스 불변부는 원하는 인간 불변부로 교체되어 본 발명의 완전한 인간항체가 생성될 수 있다. 선택된 불변부는 구체적 사용에 따라 달라질 수 있지만, 고친화도 항원-결합 및 표적 특이성 특징들은 상기 가변부에 속한다. 놀랍게도, 본 발명의 어떤 항체는, 모타비주맙보다 낮은 친화도를 보이지만, 바이러스 중화의 관점에서는 더욱 강력하다.
생물학적 등가
본 발명의 항-RSV-F 항체 및 항체 절편은 기술된 항체의 아미노산 서열과 다르지만, RSV-F에 결합하는 능력을 보유한 아미노산 서열들을 갖는 단백질을 아우른다. 이와 같은 변이체 항체 및 항체 절편은 부모 서열과 비교할 때, 아미노산의 하나 이상의 첨가, 결실 또는 치환을 포함하지만, 기술된 항체의 것과 본질적으로 동등한 생물학적 활성을 나타낸다. 이와 마찬가지로, 본 발명의 항체-인코딩 DNA 서열은 개시된 서열과 비교할 때, 뉴클레오티드의 하나 이상의 첨가, 결실 또는 치환을 포함하지만, 본 발명의 항체 또는 항체 절편과 본질적으로 생물학적 등가 관계인 항체 또는 항체 절편을 인코딩하는 서열들을 아우른다.
2개의 항원-결합 단백질, 즉 항체는, 예컨대, 두 단백질이 1회 투여 또는 다중 투여로 유사한 실험 조건 하에서 동일한 몰 용량으로 투여될 때, 흡수율 및 흡수 범위가 유의미한 차이를 보이지 않는 약제학적 등가물이거나 약제학적 대안물인 경우, 생물학적 등가로 여겨진다. 일부 항체는 이들이 흡수 범위에서는 동등하지만 흡수율에서는 그렇지 않을 경우, 등가물 또는 약제학적 대안물로 여겨질 것이고, 더 나아가 흡수율에서의 이와 같은 차이가 의도적인 것이고, 표지에 반영되고, 예컨대, 만성 사용 시 효과적인 신체 약물 농도의 달성에 필수적인 조건이 아니고, 연구 대상인 특정 약품의 경우 의학적으로 무의미한 것으로 여겨지기 때문에, 생물학적 등가로 여겨질 수 있다.
한 구현예에서, 두 개의 항원-결합 단백질은 이들의 안전성, 순도 및 효능에서 임상적으로 의미 있는 차리가 없는 경우, 생물학적 등가이다.
한 구현예에서, 환자가 임상적으로 유의미한 면역력의 변화, 또는 축소된 효과성을 비롯한 부작용에 대해 예상되는 위험 없이, 참조 제품과 생물학적 제품 사이를 1회 이상 번갈아 왔다 갔다 하는 경우, 이와 같은 전환 없는 연속적인 요법과 비교할 때, 두 개의 항원-결합 단백질은 생물학적 등가이다.
한 구현예에서, 두 개의 항원-결합 단백질은 일반 메커니즘에 따라, 또는 사용의 조건 또는 조건들에 대한 작용의 메커니즘에 따라 둘 다 그와 같은 메커니즘이 알려진 정도로 작용할 경우, 생물학적 등가이다.
생물학적 등가성은 체내 및/또는 체외 방법에 의해 입증될 수있다. 생물학적 등가성 측정은 예컨대, (a) 인간 또는 기타 포유류에서의 체내 검사(상기 항체 또는 그것의 대사물질의 농도가 혈액, 혈장, 혈청, 또는 기타 생물학적 액체에서 시간의 함수로서 측정된다); (b) 체외 검사(인간 체내 생물학적 이용가능성 데이터와의 상관관계를 보여주었고, 합리적으로 예측됨); (c) 인간 또는 기타 포유류에서의 체내 검사(상기 항체(또는 이것의 표적)의 적합한 급성 약리 작용이 시간의 함수로 측정됨); 및 (d) 통제된 임상 시험(항체의 안전성, 효능 또는 생물학적 이용가능성 또는 생물학적 등가성을 성립함)이 포함된다.
본 발명의 항체의 생물학적 등가 변이체가 예컨대, 잔기 또는 서열의 다양한 치환을 실시하거나, 또는 생물학적 활성에 필요하지 않은 말단 또는 내부 잔기 또는 서열을 제거함으로써, 구성될 수 있다. 예컨대, 생물학적 활성에 필수요소가 아닌 시스틴 잔기가 결실되거나 또는 기타 아미노산으로 교체되어 재생(renaturation) 시 불필요하거나 또는 부정확한 분자간 이황화 다리(bridges)의 형성을 방지할 수 있다. 다른 상황에서, 생물학적 등가 항체는 아미노산 변화를 포함하는 항체 변이체를 포함할 수 있는데, 이것은 상기 항체의 글리코실화 특징을 변경하는 것으로, 예컨대, 글리코실화를 없애거나 또는 제거하는 돌연변이체이다.
상기 항체의 생물학적 특징
일반적으로, 본 발명의 항체는 RSV-F에 결합함으로써 기능을 할 수 있는데, 그렇게 하면서 바이러스 막의 숙주 세포막과의 융합을 차단하는 작용을 한다. 본 발명의 상기 항체는 또한 RSV-F에 결합함으로써 기능할 수 있고, 그렇게 함으로써 상기 바이러스의 세포간 전파를 차단하고 세포의 RSV 감염과 관련된 합포체 형성을 차단할 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 항체는 전장 생 F 단백질의 모든 다른 부위 또는 절편, 즉, 서열 식별 번호: 354로 보여지고, 또한 GenBank 승인 번호 AAX23994.1로 보여지는 것의 아미노산 서열에 결합함으로써 상기 세포막과의 RSV 융합을 차단 또는 억제함으로써 기능을 할 수 있다. 상기 항체는 또한 서열 식별 번호: 353에서 발견되는 모든 부위, 또는 서열 식별 번호: 353 내에서 발견되는 절편에 결합할 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV 서브타입 A 또는 B의 F 단백질에 결합하는 완전한 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 절편은 하기의 특징들 중 하나 이상을 보여준다: (a) 완전한 인간 단클론 항체임; (b) 약 1 X 10-7 M 내지 약 6 x 10-10M의 범위의 KD를 보여줌; (c) 호흡기 세포융합 바이러스 서브타입 A 및 서브타입 B 균주를 체외에서 중화할 수 있음; (d) RSV 감염의 동물 모형에서 바이러스 부하를 유의미하게 감소시키는 능력을 나타냄; (e) 팔리비주맙과 비교할 때, 코 및/또는 폐 바이러스 역가의 1 내지 2 logs 더 큰 감소를 나타냄; (f) RSV 서브타입 A 감염의 마우스 모형에서 피하로 투여했을 때, 약 0.15 mg/kg 이하의 유효 용량 99 (ED99)을, RSV 서브타입 A 감염의 코튼 랫트 모형에 투여했을 때 약 0.62 mg/kg 이하의 ED99를, 또는 RSV 서브타입 B 감염의 코튼 랫트 모형에 투여했을 때 약 2.5 mg/kg 이하의 ED99를 나타냄; (g) 팔리비주맙 또는 모타비주맙의 경우의 ED99보다 약 2 내지 3배 낮은 ED99를 나타냄; 또는 (h) 팔리비주맙 대비 약 15 내 17배 개선된, RSV의 하나 이상의 서브타입 A 실험실 균주에 대한 중화능을 나타내거나 또는 팔리비주맙 대비 10 내지 22배 개선된, RSV의 하나 이상의 서브타입 A 임상 균주에 대한 중화능을 나타냄; (i) 팔리비주맙 대비 약 2 내지 5배 개선된, RSV의 서브타입 B 실험실 균주에 대한 중화능을 나타냄; (j) AM-22 대비 약 0.5 내지 2배 개선된, RSV의 서브타입 A 실험실 균주 또는 임상 균주에 대한 중화능을 나타냄; (k) AM-22 대비 약 2.5 내지 17배 개선된, RSV의 하나 이상의 서브타입 B 실험실 균주에 대한 중화능을 나타냄; (l) 서열 식별 번호: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 306, 322 및 338로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 HCVR을 포함함; (m) 서열 식별 번호: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330 및 346으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 LCVR를 포함함; (n) 서열 식별 번호: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296, 312, 328 및 344로 이루어진 군에서선택되는 아미노산 서열, 또는 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 HCDR3 도메인, 및 서열 식별 번호: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 304, 320, 336 및 352로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 LCDR3 도메인을 포함함; (o) 서열 식별 번호: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292, 308, 324 및 340으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 HCDR1 도메인; 서열 식별 번호: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294, 310, 326 및 342으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 HCDR2 도메인; 서열 식별 번호: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300, 316, 332 및 348로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 LCDR1 도메인; 및 서열 식별 번호: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302, 318, 334 및 350으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열, 또는 최소한 90%, 최소한 95%, 최소한 98% 또는 최소한 99% 서열 동일성을 갖는 이것의 실질적으로 유사한 서열을 갖는 LCDR2 도메인을 포함함; (p) 서열 식별 번호: 354의 약 161번 위치 내지 약 188번 위치에 해당하는 잔기들을 포함하는 아미노산 서열과 상호작용함; (q) 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 또는 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 중 하나, 또는 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 및 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 둘 다와 상호작용함; (r) 팔리비주맙 또는 모타비주맙과 RSV-F 단백질에 결합을 놓고 교차경쟁하지 않음; (s) 바이러스의 세포 융합을 억제함.
본 발명의 어떤 항- RSV-F 항체는, 체외 분석법에 의해 측정된 바에 따르면, RSV의 F 단백질에 결합할 수 있고, RSV의 서브타입 A 및 B 둘다의 감염성을 중화할 수 있다. 본 발명의 항체의 RSV의 서브타입에 결합하고 이것의 감염성을 중화하는 능력은 본원에 기술된 결합 분석법, 또는 중화 분석법, 또는 체내 보호 분석법을 비롯하여, 당해기술의 숙련가에 알려진 모든 표준 방법을 사용하여 측정될 수 있다.
결합 활성 및 체외 중화 및 체내 효능을 측정하기 위한 비제한적인 예시적 체외 및 체내 분석법들이 본원의 실시예 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11 및 12에 기술되어 있다. 실시예 3에서, 인간 항-RSV-F 항체의 결합 친화도 및 운동 상수가 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되었고, 상기 측정은 Biacore 4000 또는 T200 기기 상에서 수행되었다. 실시예 4에서, 상기 항체의 효능이 RSV 미세중화 분석에서 테스트되었다. 실시예 5는 2개의 서로 다른 동물 모형에서 RSV 감염을 체내에서 중화하는 본 발명의 항체의 능력을 보여준다. 실시예 7과 8은 본 발명의 항체와 RSV-F 단백질 상의 특정 결합 부위와의 상호작용을 보여준다. 실시예 9 및 10은 RSV 서브타입 A 및 B의 여러 실험실 및 임상 균주에서 상기 항체의 중화 능력을 보여준다. 실시예 11은 바이러스의 세포 융합을 억제하는 본 발명의 항체의 능력을 보여준다. 실시예 12는 RSV-F에 결합을 놓고 다양한 항체 간의 교차 경쟁을 보여준다.
항원결정부 매핑 및 관련 기술
당해기술의 숙련가에게 알려진 다양한 기법들이 한 항체가 폴리펩티드 또는 단백질 내의 “하나 이상의 아미노산과 상호작용”하는지 여부를 판단하기 위해 사용될 수 있다. 예시적 기법에는 예컨대, 일반적인 교차-차단 분석법이 포함되며, Antibodies, Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)에 설명된 그 분석법이 시행될 수 있다. 기타 방법들에는 알라닌 스캐닝 돌연변이 분석, 펩티드 blot 분석 (Reineke (2004) Methods Mol Biol 248:443-63), 펩티드 쪼개짐 분석 결정학 연구 및 NMR 분석이 포함된다. 또한, 항원결정부 제거, 항원의 항원결정부 추출 및 화학적 변성과 같은 방법들이 활용될 수 있다(Tomer (2000) Protein Science 9: 487-496). 항체가 상호작용하는, 폴리펩티드 내 아미노산을 확인하기 위해 사용될 수 있는 또 다른 방법은 질량 분석법에 의해 검출되는 수소/중수소 교환이다. 일반적으로, 수소/중수소 교환법은 관심대상의 단백질에 중수소를 표지하고, 이어서 중수소로 표지된 단백질에 상기 항체를 결합하는 것을 수반한다. 그러고 나서, 상기 단백질/항체 복합체는 물로 전환되고, 상기 항체 복합체에 의해 보호되는, 아미노산 내 교환가능한 양성자는 접촉면의 일부가 아닌 아미노산 내 교환가능한 양성자보다 더 느린 속도로 중수소에서 수소로의 역교환을 거친다. 결과적으로, 단백질/항체 접촉면의 일부를 형성하는 아미노산이 중수소를 보유할 수 있고, 따라서 상기 접촉면에 포함되지 않는 아미노산과 비교하여 비교적 더 높은 질량을 나타낼 수 있다. 상기 항체의 해리 후, 상기 표적 단백질은 단백질분해효소 쪼개짐(cleavage)과 질량 분석법 분석을 거침으로써, 상기 항체가 상호작용하는 특이적 아미노산에 상응하는 중수소가 표지된 잔기를 드러낸다. 예컨대, Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267(2):252-259; Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A 참조.
용어 "항원결정부"는 B 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 상의 부위를 가리킨다. B-세포 항원결정부는 단백질의 3차 접힘(folding)에 의해 병치된 근접한 아미노산들 또는 비근접한 아미노산들 모두로부터 형성될 수 있다. 근접한 아미노산들로 형성된 항원결정부는 전형적으로 변성 용매에 노출될 시 유지되는 한편, 3차 접힘에 의해 형성된 항원결정부는 전형적으로 변성 용매로 처리 시 손실된다. 항원결정부는 전형적으로 독특한 입체구성으로 최소한 3개, 좀 더 일반적으로 최소한 5개 또는 8 내지 10개의 아미노산을 포함한다.
항원 구조-기반 항체 프로파일링(ASAP)으로도 알려진 변성-보조 프로파일링(MAP)은 화학적으로 또는 효소차원에서 변성된 항원 표면에 각 항체의 결합 프로파일의 유사성에 따라 동일한 항원에 대한 수많은 단클론 항체들(mAbs)을 분류하는 방법이다(US 2004/0101920). 각각의 분류는 또다른 분류에 의해 표시되는 항원결정부와 뚜렷히 다르거나 또는 부분적으로 겹치는 독특한 항원결정부를 반영할 수 있다. 이와 같은 기술은 유전적으로 동일한 항체의 빠른 필터링을 가능하게 하기 때문에, 특징화가 유전적으로 뚜렷한 항체에 중점적으로 이루어질 수 있다. 혼성 검사에 적용될 경우, MAP는 원하는 특징을 갖는 mAbs를 생산하는 희귀한 혼성 클론의 확인을 촉진할 수 있다. MAP는 본 발명의 항체를 항체 결합 서로 다른 항원결정부에 결합하는 항체들 그룹으로 분류하는 데 사용될 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 354의 약 161번 위치 내지 약 188번 위치에 해당하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열과 상호작용할 수 있다. 어떤 구현예에서, 본 발명의 항체는 약 5 내지 10개의 아미노산 잔기, 또는 약 10 내지 15개의 아미노산 잔기, 또는 약 15 내지 20개의 아미노산 잔기만큼 앞서 확인된 부위를 넘어 RSV-F 단백질의 아미노 말단 또는 카르복시 말단 중 하나를 향해, 연장되는 아미노산 잔기와 상호작용할 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체, 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 355 및 356으로 이루어진 군에서 선택되는 최소한 하나의 아미노산 서열과 상호작용한다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 354의 잔기 161 내지 188 내 최소한 하나의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 355 또는 서열 식별 번호:356 내의 최소한 하나의 아미노산 잔기와 상호작용한다.
한 구현예에서, 본 발명은 RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 단클론 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 제공하는데, 여기서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편은 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 또는 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 중 하나, 또는 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 및 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 둘 다와 상호작용한다.
본 발명은 표 1에서 본원에 기술된 모든 특이적 예시적 항체로서 동일한 항원결정부에 결합하는 항-RSV-F 항체를 포함한다. 이와 마찬가지로, 본 발명은 또한 표 1에서 본원에 기술된 모든 특이적 예시적 항체와 RSV-F 절편에 결합을 두고 경쟁하는 항-RSV-F 항체를 포함한다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 항체는 팔리비주맙, 모타비주맙 또는 AM-22와 RSV-F 결합에 대해 교차 경쟁하지 않는다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 항체는 팔리비주맙 또는 모타비주맙와 동일한, RSV-F 단백질 상의 항원결정부에 결합하지 않는다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 항체는 서열 식별 번호: 354의 아미노산 잔기 255 내지 아미노산 잔기 276의 범위에 해당하는 RSV-F 상의 항원결정부에 결합하지 않는다.
당해기술에 알려진 일반적인 방법을 사용함으로써, 항체가 참조 항-RSV-F 항체와 동일한 항원결정부에 결합하는지 또는 참조 항체와 결합에 대해 경쟁하는지 여부를 쉽게 판단할 수 있다. 예컨대, 시험 항체가 본 발명의 참조 RSV-F 항체와 동일한 항원결정부에 결합하는지 여부를 판단하기 위해, 참조 항체는 포화 조건 하에서 RSV-F 단백질 또는 펩티드에 결합되는 것이 허용된다. 그러고 나서, 시험 항체가 RSV-F 분자에 결합하는 능력이 평가된다. 만약 참조 항- RSV-F 항체와의 포화 결합 후, 상기 시험 항체가 RSV-F에 결합할 수 있다면, 상기의 시험 항체가 참조 항- RSV-F 항체와는 다른 항원결정부에 결합한다는 결론을 내릴 수 있을 것이다. 반면, 만약 참조 항-RSV-F 항체와의 포화 결합 후, 시험 항체가 RSV-F 분자에 결합할 수 없다면, 상기 시험 항체는 본 발명의 참조 항- RSV-F 항체에 의해 결합되는 항원결정부와 동일한 항원결정부에 결합할 것이다.
항체가 참조 항- RSV-F 항체와 결합에 대해 경쟁하는지 여부를 판단하기 위해, 두 가지 방향으로 앞서 기술된 결합 방법이 수행된다: 첫 번째 방향은, 상기 참조 항체가 포화 조건 하에서 RSV-F 분자에 결합하는 것이 허용되고, 이어서 시험 항체의 RSV-F 분자 결합의 평가가 이루어진다. 두 번째 방향은, 시험 항체가 포화 조건 하에서 RSV-F 분자에 결합하는 것이 허용되고, 이어서 참조 항체의 RSV-F 분자 결합의 평가가 이루어진다. 만약 두 방향 모두에서, 첫 번째 (포화) 항체만 RSV-F 분자에 결합할 수 있다면, 상기 시험 항체와 상기 참조 항체가 RSV-F 결합에 대해 경쟁한다는 결론이 나온다. 당해기술의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, 결합에 대해 참조 항체와 경쟁하는 항체가 반드시 참조 항체와 동일한 항원결정부에 결합하지 않을 수 있으나, 중첩되는 또는 이웃한 항원결정부에 결합함으로써 상기 참조 항체의 결합을 입체구조적으로 차단할 수 있다.
두 항체가 각각 경쟁적으로 상대의 항원 결합을 억제(차단)하는 경우, 두 항체는 동일하거나 또는 겹치는 항원결정부에 결합한다. 즉, 1-, 5-, 10-, 20- 또는 100-배 초과하는 하나의 항체가 경쟁적 결합 분석법에 측정된 바에 따르면 최소한 50%, 그러나 바람직하게는 75%, 90% 또는 심지어 99%, 다른 항체의 결합을 억제한다 (예컨대, Junghans 등, Cancer Res. 1990 50:1495-1502 참조). 선택적으로, 한 항체의 결합을 감소시키거나 또는 제거하는, 항원에서의 모든 아미노산 돌연변이가 반드시 다른 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 또는 제거하는 경우, 두 항체는 동일한 항원결정부를 갖는다. 한 항체의 결합을 감소시키거나 또는 제거하는 일부 아미노산 돌연변이가 다른 하나의 항체의 결합을 감소시키거나 제거하는 경우, 두 항체는 겹치는 항원결정부를 갖는다.
추가적인 일반 실험(예컨대, 펩티드 돌연변이 및 결합 분선)은 이어서 수행되어 시험 항체의 관찰된 결합 부족이 사실상 참조 항체와 동일한 항원결정부에 결합하기 때문이지 여부, 또는 입체적 차단(또는 또다른 현상)이 관찰된 결합의 부족의 원인인지 여부를 확인할 수 있다. 이런 종류의 실험들은 ELISA, RIA, 표면 플라즈몬 공명, 유동 세포분석법 또는 당해기술에서 이용가능한 기타 모든 정량적 또는 정성적 항체-결합 분석법을 사용하여 수행될 수 있다.
면역접합체
본 발명은 치료용 모이어티, 예컨대 RSV의 1차 감염의 중증도를 감소시킬 수 있거나 또는 기침, 열, 폐렴 또는 이것의 중증도를 비롯하여 RSV 감염과 관련된 최소한 하나의 증상을 완화할 수 있는 제제에 접합된 인간 RSV-F 단클론 항체(“면역접합체”)를 아우른다. 이와 같은 제제는 RSV-F에 대한 두 번째 다른 항체, 즉 백신일 수 있다. 항- RSV-F 항체에 접합될 수 있는 치료용 모이어티의 유형은 치료 받을 질환과 달성하고자 하는 원하는 치료 효과를 감안하여 선택된다. 선택적으로, 원하는 치료 효과가 RSV 감염과 관련된 후유증 또는 증상, 또는 이와 같은 감염으로 인해 야기된 기타 다른 질환들, 예컨대 비제한적으로 폐렴을 치료하는 것이라면, 상기 질환의 후유증 또는 증상을 치료하거나 또는 본 발명의 항체의 모든 부작용을 완화하기 위해 적합한 제제를 접합하는 것이 이로울 수 있다. 면역접합체를 형성하기에 적합한 제제의 예들은 당해 기술에 알려져 있다. 예컨대, WO 05/103081 참조.
다중-특이성 항체
본 발명의 항테는 단일특이성, 이중특이성 또는 다중특이성일 수 있다. 다중특이성 항체는 하나의 표적 폴리펩티드의 서로 다른 항원결정부들에 특이적일 수 있고, 또는 둘 이상의 표적 폴리펩티드에 특이적인 항원-결합 도메인을 함유할 수도 있다. 예컨대, Tutt 등, 1991, J. Immunol. 147:60-69; Kufer 등, 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244 참조. 본 발명의 항체는 또다른 기능성 분자, 예컨대, 또다른 펩티드 또는 단백질에 결합되거나 또는 이들과 공동발현될 수 있다. 예컨대, 항체 또는 이것의 절편은 하나 이상의 다른 분자체, 예컨대 두 번째 결합 특이성을 갖는 이중특이성또는 다중-특이성 항체를 생산하는 또다른 항체 또는 항체 절편에 기능적으로 결합될 수 있다(예컨대, 화학적 결합, 유전자 융합, 비공유 결합 또는 그 밖의 다른 방법에 의해).
본 발명의 상황에서 사용될 수 있는 예시적 이중특이성 항체 형태는 첫 번째 면역글루불린 (Ig) CH3 도메인 및 두 번째 Ig CH3 도메인의 사용을 수반하는데, 여기서 상기 첫 번째 및 두 번째 Ig CH3 도메인은 최소한 하나의 아미노산이 서로 다르고, 그리고 여기서 최소한 하나의 아미노산 차이는, 아미노산 차이가 없는 이중특이성 항체와 비교하여, 이중특이성 항체의 단백질 결합을 감소시킨다. 한 구현예에서, 상기 첫 번째 Ig CH3 도메인은 단백질 A와 결합하고, 상기 두 번째 Ig CH3 도메인은 단백질 A 결합을 감소시키거나 또는 폐기하는 돌연변이, 예컨대 H95R 변성(IMGT 엑손 넘버링에 의한; EU 넘버링에 의한 H435R)을 함유한다. 상기 두 번째 CH3은 추가로 Y96F 변성(IMGT에 의해; EU에 의해 Y436F)을 포함할 수 있다. 상기 두 번째 CH3 내에서 발견될 수 있는 추가의 변성에는 IgG4 항체의 경우에는 D16E, L18M, N44S, K52N, V57M, 및 V82I (IMGT에 의해; EU에 의해 D356E, L358M, N384S, K392N, V397M 및 V422I); IgG2 항체의 경우에는 N44S, K52N 및 V82I (IMGT; EU에 의한 N384S, K392N 및 V422I); 및 IgG4 항체의 경우 Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q 및 V82I (IMGT에 의해; EU에 의해 Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q 및 V422I)이 포함된다. 앞서 기술된 이중특이성 항체 형태 상의 변형은 본 발명의 범위 내에서 고려된다.
치료법 실시 및 제형
본 발명은 본 발명의 항-RSV-F 항체 또는 이것의 항원-결합 절편을 포함하는 치료용 조성물을 제공한다. 본 발명에 따른 치료용 조성물의 투여는 개선된 이동, 전달, 관용 등을 제공하기 위해 제형에 병합된 적절한 담체, 부형제 및 기타 제제와 함께 실시될 것이다. 다수의 적합한 제형들이 모든 약제학 관련 화학자에게 알려진 처방서에서 발견될 수 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. 이와 같은 제형에는 예컨대, 분말, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 소낭을 함유한 지질(양이온성 또는 음이온성)(예컨대, LIPOFECTIN™), DNA 접합체, 무수물흡수 페이스트, 수중유 및 유중수 에멀젼, 에멀젼 카보왁스(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반-고체 겔 및 카보왁스를 함유한반-고체 혼합물이 포함된다. 또한 Powell 등 "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311 참조.
본 발명의 항체들 각각의 용량은 투여될 개체의 연령 및 신체 크기, 표적 질환, 상태, 투여 경로 등에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 항체가 한 환자의 RSV 감염을 치료하기 위해 또는 RSV 감염과 관련된 하나 이상의 증상, 예컨대 한 환자의 RSV 감염 관련 기침 또는 폐렴을 치료하기 위해, 또는 상기 질환의 중증도를 축소하기 위해 사용될 경우, 본 발명의 항체 각각을 일반적으로 체중 1kg당 단일 용량 약 0.01 내지 약 30 mg/으로, 바람직하게는 약 0.1 내지 약 20 mg으로, 또는 약 0.1 내지 약 15 mg, 또는 약 0.02 내지 약 7 mg으로, 약 0.03 내지 약 5 mg으로, 또는 약 0.05 내지 약 3 mg, 또는 약 1 mg 또는 약 3.0 mg, 또는 약 10 mg, 또는 약 20 mg으로 정맥내 또는 피하로 투여하는 것이 이롭다. 다중용량이 필요한 만큼 투여될 수도 있다. 질환의 중증도에 따라, 치료의 빈도수 및 기간이 조절될 수 있다. 어떤 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 절편은 초기 용량으로 최소한 약 0.1 내지 약 800 mg, 약 1 내지 약 600 mg, 약 5 내지 약 300 mg, 또는 약 10 내지 약 150 mg, 또는 약 100 mg, 또는 약 50 mg 투여될 수 있다. 어떤 구현예에서, 초기 용량에 이어, 초기 용량과 대략 동일하거나 또는 그보다 적은 양의 항체 또는 항원-결합 절편의 두 번째, 또는 복수의 추후 용량이 투여될 수 있는데, 여기서 추후 용량은 최소한 1 내지 3일; 최소한 1주, 최소한 2주; 최소한 3주; 최소한 4주; 최소한 5주; 최소한 6주; 최소한 7주; 최소한 8주; 최소한 9주; 최소한 10주; 최소한 12주; 또는 최소한 14주 간격으로 투여된다.
다양한 전달 체계가 알려져 있고, 예컨대, 리포좀 내 캡슐, 미립자, 마이크로 캡슐, 변이체 바이러스를 발현할 수 있는 재조합형 세포, 수용체-매개 세포내 섭취(endocytosis) (예컨대, Wu 등 (1987) J. Biol. Chem. 262:4429-4432 참조) 등의 체계가 본 발명의 약제학적 조성물을 투여하기 위해 사용될 수 있다. 투입 방법에는, 비제한적으로, 피내, 경피, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외 및 경구 경로가 포함된다. 상기 조성물은 편리한 경로로 예컨대 내부 융합 또는 볼루스 주사, 상피 또는 점막피부 내막(예컨대, 경구 점막, 콧속 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있고, 생물학적으로 활성인 제제와 함께 투여될 수도 있다. 투여는 전신 또는 국소로 이루어질 수 있다. 에어로졸화 제형으로 전달될 수도 있다(US2011/0311515 및 US2012/0128669 참조). 흡입을 통한 호흡기 질환 치료에 유용한 제제의 전달이 점점 더 널리 수용되고 있다(A. J. Bitonti and J. A. Dumont, (2006), Adv. Drug Deliv. Rev, 58:1106-1118 참조). 이와 같은 전달 메커니즘은 국소 폐 질환의 치료에 효과적일 뿐만 아니라, 또한 항체의 전신 전달에도 유용할 수 있다(See Maillet 등 (2008), Pharmaceutical Research, Vol. 25, No. 6, 2008 참조).
상기 약제학적 조성물은 또한 소포, 특히 리포좀으로 전달될 수 있다(예컨대, Langer (1990) Science 249:1527-1533 참조).
어떤 경우에, 상기 약제학적 조성물은 서방형 체계로 전달될 수 있다. 한 구현예에서, 펌프가 사용될 수도 있다. 또 다른 구현예에서, 중합체 물질이 사용될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 서방형 시스템이 조성물의 표적 근처에 놓임으로써, 전신 용량의 일부만을 필요로 할 수 있다.
주입가능 제제는 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주사, 융합에 드립(drip) 등을 위한 복용 형태를 포함할 수도 있다. 이와 같은 주입가능 제제는 공개된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예컨대, 상기 주입가능 제제는 예컨대, 앞서 기술된 항체 또는 그것의 염을 주사를 위해 종래 사용되는 멸균 수성 매체 또는 유성 매체에 용해, 현탁 또는 에멀젼화하여 제조될 수 있다. 주입용 수성 매체로서, 예컨대, 생리학적 식염수, 글루코오스 및 기타 보조 제제 등을 함유하는 등장 용액이 있는데, 이들은 알코올(예컨대, 에탄올), 폴리알코올(예컨대, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제[예컨대, 폴리소르베이트 80, HCO-50 (수소첨가 피마자 기름의 폴리옥시에틸렌 (50 mol) 첨가물)] 등과 같은 적절한 용해성 제제와 함께 조합하여 사용될 수 있다. 유성 매체로서, 예컨대, 참기름, 콩기름 등이 활용되고, 이것은 벤질 벤조에이트, 벤질 알코올 등과 같은 용해성 제제와 조합하여 사용될 수 있다. 이렇게 제조된 상기 주입제제는 바람직하게는 적절한 앰플에 충전된다.
본 발명의 약제학적 조성물은 표준 바늘과 주사기로 피하 또는 정맥내로 전달된다. 뿐만 아니라, 피하 전달과 관련하여, 펜 전달 장치가 본 발명의 약제학적 조성물을 전달하는 데 손쉽게 활용된다. 이와 같은 펜 전달 장치는 재사용하거나 일회용일 수 있다. 재사용 펜 전달 장치는 일반적으로 약제학적 조성물을 함유한 교체용 카트리지를 활용한다. 상기 카트리지 내의 약제학적 조성물이 모두 투여되어, 카트리지가 비면, 빈 카트리지는 손쉽게 제거하여 약제학적 조성물을 함유한 새 카트리지로 교체될 수 있다. 그런 다음, 펜 전달 장치가 재사용될 수 있다. 일회용 펜 전달 장치의 경우, 교체가능한 카트리지가 없다. 오히려, 일회용 펜 전달 장치는 장치 내 저장고에 담긴 약제학적 조성물로 사전충전된다. 상기 저장고에 약제학적 조성물이 모두 빠져나가면, 전체 장치는 폐기된다.
수많은 재사용 펜 및 자동주입 전달 장치가 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에 활용된다. 예에는, 비제한적으로, AUTOPEN™(Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC™ 펜(Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25™ 펜, HUMALOG™ 펜, HUMALIN 70/30™ 펜(Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II 및 III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD™ 펜(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™ 및 OPTICLIK™ (sanofi-aventis, Frankfurt, Germany) 등이 포함된다. 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에 활용되는 일회용 펜 전달 장치의 예에는, 비제한적으로, SOLOSTAR™ 펜(sanofi-aventis), FLEXPEN™(Novo Nordisk) 및 KWIKPEN™(Eli Lilly), SURECLICK ™ Autoinjector(Amgen, Thousands Oaks, CA), PENLET ™(Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN(Dey, L.P.) 및 HUMIRA ™ 펜(Abbott Labs, Abbott Park, IL) 등이 포함된다.
이롭게는, 앞서 기술된 경구 또는 비경구용 약제학적 조성물이 활성 성분의 용량을 채우기에 적합한 단위 용량으로 용량 제형으로 제조된다. 이와 같은 단위용량의 용량 제형에는 예컨대, 정제, 알약, 캡슐, 주사(앰플), 좌약등이 포함된다. 상기 함유된 항체의 양은 일반적으로 단위용량의 용량 제형당 약 5 내지 약 500 mg이고; 특히 주사 형태의 경우, 바람직하게는 상기 항체가 다른 용량 제형의 경우에 약 5 내지 약 100 mg 및 약 10 내지 약 250 mg 함유된다.
투여 요법
본 발명의 어떤 구현예들에 따르면, RSV-F에 대한 항체의 다중 용량이 규정된 시간 경과에 걸쳐 한 개체제 투여될 수 있다. 본 발명의 상기 양태에 따른 방법은 RSV-F에 대한 항체의 다중 용량을 개체에 순차적으로 투여하는 것을 포함한다. 본원에 사용되는 용어 "순차적으로 투여"는 항체 to RSV-F에 대한 항체의 각 용량이 서로 다른 시간 대에 상기 개체에 투여되된다는 의미로, 예컨대, 사전설정된 간격(예컨대, 몇시간, 며칠, 몇주 또는 몇 개월)으로 서로 다른 날에 투여된다는 의미이다. 본 발명에는 항체 RSV-F에 대한 항체의 단일 최초 용량을 환자에게 순차적으로 투여하고, 이어서 RSV-F에 대한 항체의 2차 용량을 1회 이상, 이어서 임의로 RSV-F에 대항 항체의 3차 용량을 1회 이상 투여하는 것을 포함하는 방법이 포함된다.
용어 "최초 용량", "2차 용량" 및 "3차 용량"은 RSV-F에 대한 항체의 투여의 시간적 순서를 가리킨다. 따라서, "최초 용량”은 치료 요법의 시작 시점에 투여되는 용량(“기준 용량”이라고도 불림)이고; “2차 용량”은 최초 용량 투여 후에 투여되는 용량들이고; 그리고 “3차 용량”은 2차 용량 투여 후 투여되는 용량들이다. 최초, 2차 및 3차 용량은 모두 RSV-F에 대한 항체를 동일한 양으로 함유할 수도 있으나, 일반적으로 투여 빈도의 관점에서 서로 다를 수 있다. 그러나, 어떤 구현예에서, 최초, 2차 및/또는 3차 용량에 함유된 RSV-F에 대한 항체의 양은 치료 과정 중에 서로 달라진다(예컨대, 적절하게 상향조절 또는 하향조절된다). 어떤 구현예에서, 둘 이상(예컨대, 2, 3, 4 또는 5)의 용량이 “부하 용량”으로 치료 요법 시작 시점에 투여되고, 이어서 추후 용량이 더 적은 빈도수로 투여된다(예컨대, "유지 용량").
본 발명의 하나의 예시적 구현예에서, 각각의 2차 및/또는 3차 용량은 바로 직전의 투여 후 1 내지 26주(예컨대, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½, 15, 15½, 16, 16½, 17, 17½, 18, 18½, 19, 19½, 20, 20½, 21, 21½, 22, 22½, 23, 23½, 24, 24½, 25, 25½, 26, 26½ 또는 그 이상) 후에 투여된다. 본원에 사용되는 구문 "직전 투여 용량"는, 다중 투여의 순서에서, 중간 투여 없이 순서상 바로 다음 용량의 투여 이전에 환자에게 투여된 RSV-F에 대한 항체의 용량이다.
본 발명의 이와 같은 양태에 따른 방법들은 RSV-F에 대한 항체의 모든 수의 2차 및/또는 3차 용량을 환자에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 예컨대, 어떤 구현예에서는, 단일 2차 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 구현예에서, 둘 이상(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 그 이상)의 2차 용량이 환자에게 투여된다. 이와 마찬가지로, 어떤 구현예에서는 오직 단일 3차 용량만이 환자에게 투여된다. 다른 구현예에서는, 둘 이상(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 그 이상)의 3차 용량이 환자에게 투여된다.
다중 2차 용량을 수반하는 구현예에서, 각각의 2차 용량은 다른 2차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예컨대, 각각의 2차 용량은 직전 투여 1 내지 2주 후, 환자에게 투여될 수 있다. 이와 유사하게, 다중 3차 용량을 수반하는 구현예에서는, 각각의 3차 용량이 다른 3차 용량과 동일한 빈도로 투여될 수 있다. 예컨대, 각각의 3차 용량은 직전 투여 2 내지 4주 후 환자에게 투여될 수 있다. 선택적으로, 2차 및/또는 3차 용량이 환자에게 투여되는 빈도수는 치료 요법의 경과에 걸쳐 달라질 수 있따. 투여의 빈도수는 또한 임상 실험을 따르는 개별 환자의 요구에 따라 주치의에 의해 치료 경과 중 조절될 수 있다.
항체의 치료차원의 사용
RSV 융합 단백질(RSV-F)과의 결합/상호작용 때문에, 본 발명의 항체는 바이러스의 숙주 세포 막 융합을 방지하거나, 세포간 바이러스 전파를 방지하거나, 및 합포체 형성의 억제에 유용하다. 이와 마찬가지로, 본 발명의 항체는 예방차원에서 투여되었을 때 개체의 RSV 감염을 예방하는 데 유용하다. 선택적으로, 본 발명의 항체는 상기 감염과 관련된 최소한 하나의 증상, 예컨대 기침, 열, 폐렴을 완화하고, 또는 상기 감염의 중증도, 기간 및/또는 빈도수를 축소시키는 데 유용할 것이다. 본 발명의 항체는 또한 RSV 감염이 발생 또는 상기 감염을 획득할 위험이 있는 환자에게 예방차원으로 사용하는 것이 고려된다. 이들 환자에는 조산아, RSV 유행시기(늦은 가을부터 초봄까지)에 태어난 만삭아, 노년층(예컨대, 만 65세 이상), 또는 질병 또는 면역억제 치료로 인해 면역이 손상된 환자, 또는 RSV 감염에 취약하게 만드는 기저질환을 앓고 있을 수 있는 환자(예컨대, 낭포성 섬유증환자, 울혈성 심부전 또는 기타 심질환 환자, 기도 손상 환자, COPD 환자)가 포함된다. 본 발명의 항체가 단독으로 사용될 수도 있고, RSV 감염을 치료하거나, 또는 RSV 감염과 관련되거나 그와 같은 감염으로 인해 야기되는 최소한 하나의 증상 또는 합병증, 예컨대 열, 기침, 기관지염 또는 폐렴을 완화하기 위해, 두 번째 제제 또는 세 번째 제제와 함께 사용될 수 있음이 고려된다. 상기의 두 번째 또는 세 번째 제제는 본 발명의 항체와 동시에 전달될 수도 있고, 또는 본 발명의 항체 이전에 또는 이후에 별도로 투여될 수도 있다. 상기의 두 번째 또는 세 번째 제제는 항-바이러스 제제, 예컨대 리바비린, NSAID 열 또는 통증을 감소시키는 다른 제제, RSV-F에 특이적으로 결합하는 또 다른 두 번째, 그러나 다른 항체, 또 다른 RSV 항원, 예컨대 RSV-G에 결합하는 제제(예컨대 항체), RSV 백신, RSV 항원에 특이적인 siRNA일 수 있다.
추가로 본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 발명의 항체가 RSV 감염을 앓고 있는 환자를 치료하기 위한 약제학적 조성물의 제조를 위해 사용된다. 그밖의 또 다른 구현예에서는, 본 발명의 항체가 RSV의 1차 감염의 중증도를 감소시키기 위한, 또는 상기 감염의 기간을 단축시키기 위한, 또는 RSV 감염과 관련된 최소한 하나의 증상을 감소시키기 위한 약제학적 조성물의 제조에 사용된다. 본 발명의 추가적인 구현예에서, 본 발명의 항체는 RSV 감염을 치료하기에 유용한 모든 기타 제제, 예를 들어, 항바이러스, 톡소이드, 백신, 두 번째 RSV-F 항체 또는 RSV-G 항체를 비롯하여 RSV 항원에 특이적인 모든 기타 항체, 또는 당해기술의 숙련가에 알려진 기타 모든 완화 치료(palliative therapy)와 함께 부가 요법(adjunct therapy)으로 사용된다.
병용 요법
앞서 기술된 바와 같이, 본 발명의 방법들은, 어떤 구현예들에 따라, RSV-F에 대항 항체와 조합하여 하나 이상의 부가적 치료 제제를 개체에 투여하는 것을 포함한다. 본원에 사용되는 표현 "~와 조합하여"는 부가적 치료 제제가 항-RSV-F 항체를 포함하는 약제학적 조성물 전에, 후에 또는 그것과 동시에 투여되는 것을 의미한다. 용어 “~와 조합하여”는 또한 항-RSV-F 항체 및 두 번째 치료 제제의 순차적 또는 동시적 투여를 포함한다.
예컨대, 항-RSV-F 항체를 포함하는 약제학적 조성물 “이전에” 투여된 경우, 상기 부가적 치료 제제는 항-RSV-F 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 투여 약 72시간, 약 60시간, 약 48시간, 약 36시간, 약 24시간, 약 12시간, 약 10시간, 약 8시간, 약 6시간, 약 4시간, 약 2시간, 약 1시간, 약 30분, 약 15분 또는 약 10분 전에 투여될 수 있다. 항-RSV-F 항체를 포함하는 약제학적 조성물 “이후에” 투여되는 경우, 부가적인 치료 제제가 항-RSV-F 항체를 포함하는 약제학적 조성물 투여 약 10분, 약 15분, 약 30분, 약 1 시간, 약 2시간, 약 4시간, 약 6시간, 약 8시간, 약 10시간, 약 12시간, 약 24시간, 약 36시간, 약 48시간, 약 60시간 또는 약 72시간 후 투여될 수 있다. 항-RSV-F 항체를 포함하는 약제학적 조성물과 함께 “동시에” 투여라는 것은 부가적 치료 제제가 항-RSV-F 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 투여 5분 내외로(이전, 이후, 또는 동시), 별도의 용량 제형으로 상기 개체에 투여되거나, 또는 부가적 치료 제제 및 항-RSV-F 항체를 둘 다 포함하는 단일 복합 용량 제형으로 상기 개체에 투여된다.
병용 요법은 본 발명의 항-RSV-F 항체와, 본 발명의 항체, 본 발명의 항체의 생물학적으로 활성인 절편과 유리하게 조합될 수 있는 모든 부가적 치료 제제를 포함할 수 있다.
예컨대, 항 바이러스, 예컨대, 리바비린과 같은 두 번째 또는 세 번째 치료 제제가 폐에서의 바이러스 부하를 감소시키는 데 도움을 주기 위해 활용될 수 있다. 상기 항체는 또한 앞서 기술된 바와 같이 다른 용법들, 예를 들어 톡소이드, RSV에 특이적인 백신, RSV-F에 특이적인 두 번째 항체, 또는 RSV-G와 같은 또 다른 RSV 항원에 특이적인 항체와 결합하여 사용될 수 있다.
진단을 위한 상기 항체의 사용
본 발명의 항-RSV 항체는 또한 샘플 중의 RSV를 검출 및/또는 측정하기 위해, 예컨대, 진단용으로 사용될 수 있다. RSV에 의해 유발된다고 생각되는 감염의 확인이 본 발명의 하나 이상의 항체의 사용을 퉁해 바이러스의 존재를 측정함으로써 이루어질 수 있음이 고려된다. 예시적인 RSV에 대한 진단 분석법은 예컨대, 환자에게서 획득한 샘플을 본 발명의 항-RSV-F 항체와 접촉시키는 것을 포함할 수 있는데, 여기서 항-RSV-F 항체는 검출가능한 표지 또는 리포터 분자로 표지되거나 또는 환자 샘플에서 F 단백질을 함유하는 바이러스를 선택적으로 단리하게 해주는 포집 리간드(capture ligand로서 사용될 수 있다. 선택적으로, 표지되지 않은 항-RSV-F 항체가 그 자체로 검출가능하게 표지된 2차 항체와 조합하여 진단 응용에 사용될 수 있다. 검출가능한 표지 또는 리포터 분자는 방사선동위원소, 예컨대 3H, 14C, 32P, 35S 또는 125I; 형광 또는 화학적 발광 모이어티, 예컨대 플루오레세인 이소티오시아네이트, 또는 로다민; 또는 효소, 예컨대 알칼린 포스파타아제, β-갈락토다아제, 겨자무과산화효소 또는 발광효소를 포함한다. 샘플에서 F 단백질를 함유하는 RSV를 검출 또는 측정하기 위해 사용될 수 있는 특이적 예시적 분석법에는 효소-결합 면역흡착 분석법(ELISA), 방사선면역 분석법(RIA) 및 형광 -활성 세포 정리(FACS)가 포함된다.
본 발명에 따른 RSV 진단 분석법에 사용될 수 있는 샘플에는 환자에게서 획득가능한 조직 또는 체액 샘플이 포함되는데, 이것은 정상적인 또는 병리적인 상황 하에서 RSV-F 단백질 또는 이것의 절편의 검출가능한 양을 함유한다. 일반적으로, 건강한 환자(예컨대, RSV-F의 존재와 관련된 질환 또는 상태로 고통받지 않는 환자)에게서 획득한 특정 샘플 중에 RSV-F 수치는 애초에 RSV에서 F 단백질의 기준전 또는 표준 수치를 성립시키기 위해서 측정될 수 있다. 상기의 RSV-F의 기준 수치는, 이어서 RSV 감염, 또는 이와 같은 감염과 관련된 증상이 있는 것으로 의심되는 개인에게서 획득한 샘플에서 측정된 RSV-F 수치와 비교될 수 있다.
백신 및 면역성 조성물
본 발명의 한 양태는, 개인, 바람직하게는 인간에게 투여했을 시, 그와 같은 개인에게서 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 항원, 예컨대, RSV-F 폴리펩티드에 대한 면역 반응을 유도하는 면역성 조성물, 즉 백신을 제공하는데, 여기서 상기 조성물은 재조합형 RSV-F 단백질, 또는 RSV-F 단백질의 폴리펩티드 절편, 또는 RSV-F 폴리펩티드의 항원 내에 함유된 및 상기 항원에서 획득된 항원결정부 또는 이것의 절편을 포함할 수 있고, 및/또는 본 발명의 항원 RSV-F 폴리펩티드, 또는 기타 폴리펩티드에서 유래된 항원결정부를 인코딩하고 발현하는 DNA 및/또는 RNA를 포함한다. 상기 면역성 조성물 즉 백신은 치료용으로 또는 면역용으로 사용될 수 있고, 항체 면역력 및/또는, CTL 또는 CD4+ T 세포에서 발생한 세포 면역력과 같은, 세포 면역력을 유발하는 데 사용될 수 있다.
본 발명의 한 구현예에서, 상기 면역성 조성물, 즉 백신은 서열 식별 번호: 354에서 보이는 RSV-F 단백질을 포함할 수 있다. 본 발명의 한 구현예에서 상기 면역성 조성물, 즉 백신은 서열 식별 번호: 354의 잔기 161 내지 188을 포함하는 RSV-F 폴리펩티드 절편을 포함할 수 있다. 본 발명의 한 구현예에서, 상기 면역성 조성물, 또는 백신은 서열 식별 번호: 355 및/또는 서열 식별 번호: 356 내에 함유된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 본 발명의 한 구현예에서, 상기 면역성 조성물, 또는 백신은 서열 식별 번호: 355 및/또는 서열 식별 번호: 356를 포함할 수 있다.
관련 양태에서, 본 발명은 RSV-F 단백질을 포함하는 면역성 조성물, 즉 백신 또는 이것의 면역성 절편, 또는 상기 RSV-F 항원 또는 이것의 절편 내에 함유된 하나 이상의 항원결정부를 포함하는 RSV-F 항원 또는 이것의 면역성 절편을 개체에 투여함으로써, 항체 및/또는 T 세포 면역 반응을 생성하여 개체를 감염으로부터, 특히 호흡기 세포융합 바이러스(RSV) 감염으로부터 보호하기에 적합한 면역반응을, 개체에서, 특히 포유류에게서, 바람직하게는 인간에게서, 유도하는 방법을 제공한다. 또한 세포간 바이러스 전파의 진행을 억제 또는 둔화시키는 결과를 야기하는 면역반응을 유도하기 위해 본 발명의 면역성 조성물, 즉 백신을 사용하는 방법이 제공된다. 또한 최소한 하나의 RSV-F 항원, 또는 RSV-F 항원 내 함유된 하나 이상의 항원결정부를 포함하는 면역성 조성물, 즉 백신(투여 시, 개체에서의 면역 반응을 유도함)을 투여함으로써, RSV 감염과 관련된 최소한 하나의 증상을 완화하기 위한 방법들이 제공된다.
예컨대, 한 구현예에서 본 발명은, 면역 반응을 유도하기 위해, RSV-F 항원(예컨대 서열 식별 번호: 354에 보이는 아미노산 서열), 또는 이것의 항원 절편 (예컨대 서열 식별 번호: 354의 잔기 161 내지 188을 포함하는 폴리펩티드), 또는 그와 같은 바이러스 폴리펩티드의 발현을 지시하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 벡터, 또는 이것의 절편 또는 변종을 포함하는 면역성 조성물, 즉 백신을 체내에서 개체에 전달하는 것을 포함하는, 개체에서의 면역반응 유도 방법을 제공한다.
본 발명의 한 구현예에서, 개체에서 면역 반응을 유도하기 위해 면역성 조성물 또는 백신에 사용될 상기 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 354의 잔기161 내지 188을 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 한 개체에서의 면역 반응을 유도하기 위해 면역성 조성물 또는 백신에 사용될 폴리펩티드는 서열 식별 번호: 355 및/또는 서열 식별 번호: 356 내에 함유된 하나 이상의 아미노산 잔기를 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 한 개체에서의 면역반응을 유도하기 위해 면역성 조성물 또는 백신에 사용될 상기 폴리펩티드 서열 식별 번호: 355 및/또는 서열 식별 번호: 356을 포함한다. 본 발명의 한 구현예에서, 상기 면역성 조성물, 즉 백신은 RSV의 RSV-F 항원에 특이적인 항체 반응을 유발할 수 있는데, 여기서 생성된 상기 항체는 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 또는 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 중 하나와, 또는 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 및 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 둘 다와 상호작용한다.
어떤 구현예에서, RSV-F 항원 또는 이것의 절편이 다른 병원체, 바람직하게는 바이러스 및/또는 박테리아에 대해 면역력을 끌어내기 위해 면역성, 바람직하게는 면역학적으로 유효한 양의 추가 항원을 포함하는 면역성 조성물, 즉 백신으로 제형되는 것이 유리하다. 이와 같은 추가 항원에는 독감 바이러스 항원, 메타뉴모바이러스 또는 코로나 바이러스 유래 항원, 해모필러스 독감, 폐렴구균 또는 백일해균 유래 항원이 포함된다. RSV-G 당단백질 또는 이것의 면역성 절편, HN 단백질, 또는 이것의 유도체와 같은 기타 RSV 항원이 면역성 조성물, 즉 백신에 포함될 수 있다. 어떤 구현예에서, 본 발명의 면역성 조성물 즉 백신에 포함될 독감 바이러스 항원은 계란 또는 MDCK 세포, 또는 Vero 세포 또는 완전한 독감 비로좀에서 자란 온전한, 살아있는(live) 또는 불활성 바이러스, 분열된 독감 바이러스, 또는 이것의 정재되거나 재조합된 단백질, 예컨대 HA, NP, NA 또는 M 단백질, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다.
본 발명의 어떤 구현예에서, 상기 면역성 조성물, 즉 백신 제형은, 적절한 담체/부형제, 예컨대 약제학적으로 허용가능한 담체/부형제와 함께, 본 발명의 면역성 재조합형 폴리펩티드 및/또는 폴리뉴클레오티드, 또는 이들의 조합을 포할 수 있다. 상기 면역성 조성물 및/또는 백신은 바람직하게는 비경구 투여되는데, 에를 들어, 예컨대, 피하, 근육내, 정맥내, 피내 투여된다. 비경구 투여에 적합한 제형에는 수성 및 비-수성 멸균 주입 용액으로, 이 용액은 항산화제, 완충용액, 정균 화합물 및, 상기 제형을 상기 개체의 체액, 바람직하게는 혈액과 등장으로 만드는 용질; 및 현탁제제 또는 점착제를 포함할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 현탁액을 함유할 수 있다. 상기 제형은 밀봉된 앰플 및 유리병과 같이 단일 용량 또는 다중 용량 용기로 제공될 수 있고, 사용 직전에 멸균 액체 담체의 첨가만이 필요한 냉동건조 조건에서 보관될 수 있다.
본 발명의 면역성 조성물, 즉 백신 제형은 또한 상기 제형의 면역력을 향상시키기 위한 아쥬반트를 포함할 수 있다. 이 때, 인간에게 널리 사용되는 유일한 아쥬반트는 알룸(알루미늄 포스페이트 또는 수산화알루미늄) 및 칼슘 포스페이트 겔이었다. Freund's 완전한 아쥬반트 및 연구 및 수의학 응용에 사용되는 기타 아쥬반트는 독성이 있어서, 인간 백신에 사용될 수 있는 잠재성에 한계가 있다. 그러나, 화학적으로 정의된 제제, 예컨대 오일 에멀젼 및 계면활성제-기반 제형, 예컨대, MF59(미소유체 세제 안정화된 수중유 에멀젼), QS21(정제된 사포닌), AS02 [SBAS2] (수중유 에멀젼 + MPL + QS-21), 몬타나이드 ISA-51 및 ISA-720(안정화된 유중수 에멀젼)이 또한 개발 중이다. 추가로, 미생물 유도체(천연 및 합성), 예컨대, 뮤라밀 디펩티드, 모노포스포릴 지질 A(예컨대 3 데-O-아실레이트 모노포스포릴 지질 A, (일명 3D-MPL), Ribi Immunochem, Montana에서 제조), Detox(MPL + M. Phlei세포벽 뼈대), AGP [RC-529] (합성 아실레이티드 모노사카라이드), DCChol (리포좀으로 스스로 조직될 수 있는 유지질 면역증강물질), OM-174 (지질 A 유도체), CpG 모티프(면역증강 CpG 모티프를 함유하는 합성 올리고 뉴클레오티드), 변성된 LT 및 CT (비독성 아쥬반트 효과를 제공하기 위한 유전적으로 변성된 박테리아 독소), 및 QS21, Quillaja Saponaria Molina의 나무껍질에서 유도Hplc 정제된 비독성 분획이 인간용으로 개발 중에 있다.
3 데-O-아실레이티드 모노포스포릴 지질 A의 바람직한 형태가 유럽 특허 0 689 454 B1 (SmithKline Beecham Biologicals SA)에 개시되었다.
그 밖의 특정 아쥬반트에는 예컨대, 비로좀 (바이러스 항원을 병합하는 unilamellar liposomal 담체), AS04 ( [SBAS4] MPL를 가진 Al 염), ISCOMS(사포닌과 지질의 구조화된 복합체), 폴리락티드 코-글리콜리드(PLG)가 포함된다.
그 밖의 적합한 아쥬반트에는 사이토카인, 케모카인, 또는 콜로니 자극 인자들과 같은 모든 허용가능한 면역증강 화합물이 포함된다. 예컨대, 여기에는 인터루킨 IL-1, IL-2, IL-4, IL-7, IL-12, 감마-인터페론 및 hGM-CSF가 포함될 수 있다.
사용될 아쥬반트 및/또는 면역증강 화합물은 상기 백신, 즉 면역성 조성물이 투여될 개체, 주입 경로 및 주입 횟수에 따라 달라진다는 것이 이해되어야 한다.
본 발명이 특정 RSV-F 폴리펩티드와 관련하여 기술되었으나, 본 발명이 천연유래 폴리펩티드의 절편, 및 재조합형 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드의 면역 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 첨가, 결실 또는 치환을 갖는 유사한 폴리펩티드를 모두 포괄한다는 점이 이해되어야 한다.
실시예
하기 실시예들은 본 발명의 방법 및 조성물의 제조 및 사용 방법에 대한 완전한 개시 및 설명을 당해기술의 숙련가에게 제공하기 위해 제시된 것으로, 발명가들이 그들의 발명으로 여기는 것의 범위를 제한하기 위한 것이 아니다. 본원에 사용된 숫자들(예컨대, 양, 온도 등)과 관련하여 정확성을 확보하기 위해 노력을 기울였으나, 일부 실험 오차 및 편차가 고려되어야 한다. 달리 명시되지 않는 한, 부(parts)는 중량부를, 분자량은 평균 분자량을, 온도는 섭씨를, 압력은 대기압 또는 근처 대기압을 가리킨다.
실시예 1. RSV-F 단백질에 대한 인간 항체의 생성
하기 중 하나를 포함하는 면역원을 사용하여 RSV-F 단백질에 대한 항체를 생성할 수 있다. 어떤 구현예에서, 본 발명의 항체를 1차 면역원, 예컨대 온전한 호흡기 세포융합 바이러스 분리균, 또는 살아있는, 약화된 또는 고사된/비활성화된 것으로 면역처리한 마우스에서 획득하였다. 상기 마우스에게 동일한 바이러스 분리균을 함유하는 1회 이상의 추가 접종을 실시할 수 있고, 또는 RSV-F 단백질 자체로 추가접종을 할 수 있다. 어떤 구현예에서, 상기 마우스에 살아있는 바이러스를 주입하고, 이어서 서열 식별 번호: 353으로 표현되는 구조물, 또는 바이러스 분리균에서 획득되었거나 또는 재조합하여 제조된 단리된 RSV-F 단백질(또한 GenBank 승인 번호 AAX23994.1 참조)를 추가 접종하였다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 항체를 1차 면역원, 예컨대 생물학적으로 활성인 RSV, 서브타입 A 또는 B, 및/또는 RSV 융합 (F) 단백질, 또는 RSV 융합 (RSV-F) 단백질의 면역성 절편, 또는 전장 단백질을 인코딩하는 DNA 또는 이것의 활성 절편으로 면역처리된 마우스에서 획득하였다. 상기 면역원은 근육내, 피하, 정맥내 또는 비강내를 포함하는 비제한적인 모든 경로를 통해 동물에 전달될 수 있다.
어떤 구현예에서, 전체 바이러스, 또는 RSV-F 단백질 또는 이것의 절편은 단일 특이성, 이중특이성, 또는 다중특이성 항체를 제조하는 데 사용될 수 있다.
앞서 기술된 바와 같이 면역원으로 사용되었던 전체 바이러스, 또는 전장 단백질, 또는 이것의 절편을, 면역 반응을 증강하기 위해, 아쥬반트와 함께 인간 면역글루불린 중쇄 및 카파 경쇄 가변부를 인코딩하는 DNA 를 포함하는 VELOCIMMUNE® 마우스에 직접 투여하였다. 상기 항체 면역 반응을 RSV-F 면역 분석법으로 모니터링하였다. 원하는 면역 반응이 달성되었을 때, 지라세포(splenocytes)를 수확하여 마우스 골수종 세포와 융합함으로써, 이것의 생존력을 보존하고 혼성 세포주를 형성하였다. 상기 혼성 세포주를 검사하고 확인하여 RSV-F-특이성 항체를 생산하는 세포주를 확인하였다. 이와 같은 기법과 앞서 기술된 다양한 면역원을 사용하여, 여러 키메라 항체 (즉, 인간 가변 도메인과 마우스 불변 도메인을 갖는 항체)를 획득하였고; 이와 같은 방식으로 생성된 어떤 예시적 항체를 H1M3621N, H1M3622N, H1M2634N 및 H1M3627N으로 명명하였다.
U.S. 2007/0280945A1에 기술된 바와 같이, 골수종 세포와 융합 없이, 항원-양성 B 세포에서 항-RSV-F 항체를 직접 단리하였다. 이와 같은 방법을 사용하여, 여러 완전한 인간항-RSV-F 항체 (즉, 인간 가변 도메인과 인간 불변 도메인을 갖는 항체)를 획득하였고; 이와 같은 방식으로 생성된 예시적 항체를 다음과 같이 명명하였다: H1H3564P, H1H3565P, H1H3566P, H1H3567P, H1H3581P, H1H3583P, H1H3589P, H1H3591P, H1H3592P, H1H3597P, H1H3598P, H1H3603P, H1H3604P, H1H3605P, H1H3607P, H1H3608P2, H1H3592P2 및 H1H3592P3.
본 실시예의 방법에 따라 생성된 예시적 항체의 생물학적 특성은 아래 명시된 실시예들에 상세히 기술하였다.
실시예 2. 중쇄 및 경쇄 가변부 아미노산 서열
표 1은 RSV-F 단백질에 특이적인 선택된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변부 아미노산 서열쌍 및 이들의 상응하는 항체 식별자를 제시한다. 항체는 전형적으로 본원에서 하기의 명명법에 따라 언급된다: Fc 접두사 (예컨대 “H4H”, “H1M, “H2M”), 이어서 숫자 식별자(예컨대 표 1에 나타난 바와 같이 “3117”), 이어서 “P” 또는 “N” 접미사. 따라서, 이와 같은 명명법에 따라, 항체는 예컨대 “H1H3117”라고 불린다. 상기의 항체 명칭에 붙는 본원에서 사용되는 H4H, H1M 및 H2M 접두사는 상기 항체의 특정 Fc 부위를 나타낸다. 예컨대, “H2M” 항체는 마우스 IgG2 Fc를 갖는 반면, “H4H” 항체는 인간 IgG4 Fc를 갖는다. 당해기술의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, H1M 또는 H2M 항체는 H4H 항체로 전환될 수 있고, 역방향도 마차가지이나, 어떤 경우에, 표 1에 나타난 숫자 식별자에 의해 표시되는 상기 가변 도메인(CDR 포함)은 변함없이 유지된다. 동일한 숫자 항체 명칭을 가지고 있지만, 문자 접미사 N, B 또는 P가 다른 항체는 동일한 CDR 서열을 갖고 있으나 CDR 서열의 밖에 있는 부위(즉, 뼈대 부위)에 서열 변형이 있는 중쇄 및 경쇄를 갖는 항체를 가리킨다. 따라서, 특정 항체의 N, B 및 P 변이체는 중쇄 및 경쇄 가변부내에 동일한 CDR 서열을 갖지만, 이들의 뼈대 부위 내에서 서로 다르다.
항체 비교군(Comparator)
비교 목적으로 항-RSV-F 항체 대조군을 하기 실시예들에 포함시켰다. 아이소토프가 매칭된 음성 대조군 또한 실시예에서 사용하였다. 본원에서 대조군 I로 명명한 항-RSV-F 대조군 항체는 US7635568 및 US5824307에 제시된 팔리비주맙 (SYNAGIS®) 인간화항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 가진 인간화 항-RSV-F 항체이다. 상기 가변부 경쇄 및 중쇄를 인간 카파 및 감마-1 상수로 각각 표현하였다. 본원에서 대조군 II로 명명한 항-RSV-F 항체는 US2003/0091584 및 Wu 등, (2007), J. Mol. Biol. 368:652-665에 기술된 모타비주맙 (Numax™) 인간화 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 갖는 팔리비주맙의 인간화 항-RSV-F 항체 변종이다. 상기 가변부 경쇄 및 중쇄를 인간 카파 및 감마-1 상수로 각각 표현하였다. 대조군 III (AM-22라 불림)으로 명명된 또다른 항-RSV-F 항체는 미국 특허 제 8568726호에 기술되었다. AM-22의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 (항체의 중쇄의 경우) 서열 식별 번호: 357에 나타나 있고, (항체의 경쇄의 경우) 서열 식별 번호: 358에 나타나 있다.
표 1
Figure pct00001
실시예 3. 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된 인간 단클론 항- RSV -F 항체의 항체 결합 친화도 및 운동 상수
인간 단클론 항-RSV-F 항체의 결합 친화도 및 운동 상수를 25℃에서 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정하였다(표 2~3). Biacore 4000 또는 T-200 기기에서 측정을 수행하였다. 마우스 F (AbPID 접두사 H1M; H2M) 또는 인간 IgG1 Fc(AbPID 접두사 H1H)중 하나로 표현되는 항체를 항-마우스 또는 항-인간 Fc 센서 표면에서 포집하고(Mab 포집 형태), 용해성 단량체(RSV-F.mmh; 서열 식별 번호: 353) 단백질을 상기 표면 상에 주입하였다. 모든 Biacore 결합 연구를 HBST 작동 완충용액(0.01 M HEPES pH 7.4, 0.15 M NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% v/v 계면활성제P20)에서 수행하였다. HBST 작동 완충용액에서 제조한 서로 다른 농도의 RSV-F.mmh를 유속 30㎕/min(Biacore 4000) 또는 유속 50㎕/min (Biacore T-200)으로, 항-RSV-F 단클론 항체가 포집된 표면에 주입하고, 였다. RSV-F.mmh와 포집된 단클론 항체의 결합을 각각 6분 또는 3분 동안 모니터링하였다. HBST 작동 완충용액에서 상기 단클론 항체로부터 RSV-F.mmh의 해리를 25℃에서 8~10분 동안 모니터링 하였다. Scrubber 2.0 곡선 적합 소프트웨어를 사용하여, 상기 데이터를 처리하고 1:1 결합 모형에 맞춤으로써, 운동 결합(ka) 및 해리(kd) 속도 상수를 계산하였다. 운동속도상수: KD (M) = kd / ka; 및 t1/2 (min) = (ln2/(60*kd)으로 결합 해리 평형상수(KD) 및 해리 반감기(t½)를 계산하였다.
본 발명의 항-RSV-F 항체는 RSV-F.mmh에 대해 광범위한 친화도를 나타내었다. US 7,635,568에 제시된 팔리비주맙의 공공 서열을 토대로 생산된 대조군 I 및 Wu 등, (2007), (J. Mol. Biol. 368:652-665)에 기술된 모타비주맙의 공공 서열을 토대로 생산된 대조군 II는 사전에 보고된 친화도에서 대략 ~70-배 차이(대조군 1; 38nM vs 대조군 II; 0.43nM)를 나타내었다.
표 2: 25℃에서 혼성 mAbs의 Biacore 결합 친화도
Figure pct00002
표 3: 25℃에서 인간 Fc mAbs의 Biacore 결합 친화도
Figure pct00003
NB: 상기 실험의 조건 하에서 관찰된 결합이 없음
실시예 4. 호흡기 세포융합 바이러스 융합(RSV-F) 단백질 항체가 RSV 서브타입 A 및 서브타입 B 균주에 대해 강력한 중화능을 나타낸다
정제된 항체를 RSV 미세중화 분석법으로 검사하여 효능을 판단하였다. 간략하게, 5% Hyclone FBS, L-글루타민 및 항생제로 보충한 MEM 고 글루코오스 배지에서 배양한 104개 HEp-2 세포를 96-웰 투명 바닥-블랙 마이크로플레이트에 시딩하여 16~18시간 동안 배양하였다(37℃, 5% CO2). 그러고 나서, 666 nM으로 시작하여 추후 배지에 1:5 희석제를 첨가한 다양한 농도의 항체를 0.04의 MOI로 RSV 1540 (A2) 균주와 함께 2시간 동안 배양하였다(37℃, 5% CO2). 바이러스-없는 무관한 이소타입 대조군을 포함시켰다.
배양 후, 상기 항체:바이러스 혼합물을 HEp-2 세포에 첨가하여 3일 동안 감염을 유지하였다. 2% PFA에 세포를 고정하여 감염의 정도를 측정하고, 염소 항-RSV/항-염소 HRP 항체로 ELISA를 수행하였다. 발광 시약을 상기 웰에 첨가하여 플레이트 해독기(Victor X3, Perkin Elmer)를 사용하여 신호를 검출하였다. 11-포인트 반응 곡선(GraphPad Prism)에서3-매개변수 로지스틱 방정식으로 발광값을 분석하였다.
본 발명의 항체는 RSV A2 (1540) 균주에 대해 광범위한 중화 활성을 나타내었다(표 4~5). 여러 항체가 대조군 I보다 낮은 IC50 값을 나타낸 반면, 몇몇 예시적 항체 H1H3627N, H1H3591P, H1H3592P 및 H1H3592P3만이 대조군 II보다 양호한 중화를 나타내었다. RSV 서브타입 B 균주를 중화하는 능력에 대해 선택 항체(H1H3627N, H1H3592P3)를 검사하였다(표 6).
본 실시예는 기존 대조군에 대해 사전에 입증된 것보다 더 큰 효능으로, 두 서브타입에 대해, 체외에서 RSV-F의 여러 균주를 중화하는, 본 발명의 항체의 효능을 입증하였다.
표 4: RSV A2(1540)에 대한 선택 mAbs의 중화능
Figure pct00004
표 5: RSV 서브타입 A에 대한 선택 mAbs의 중화능
Figure pct00005
표 6: RSV 서브타입 B에 대한 선택 mAbs의 중화능
Figure pct00006
실시예 5. 선택된 항- RSV -F 항체가 RSV 감염의 강력한 체내 중화능을 나타낸다
A. 마우스 모형
체내 RSV 중화 연구를 위해 Balb/c 마우스를 사용하여 예시적 항체 H1H3627N 및 H1H3592P3을 선택하였다. 간략히, 7주령 Balb/c 마우스(n=4-5)에 피하 주사로 H1H3627N, H1H3592P3, 대조군 I, 대조군 II 또는 이소타입 매칭된 항체를 사용하여 두 용량(0.15 또는 0.05 mg/kg)을 주입하였다. 담체 항체(1 mg/kg) 의 사용을 모든 실험에 활용하여 항-RSV-F 항체의 손실을 최소화하였다.
주입 1일 후, 마우스에 RSV A2 (1540) 균주 50 ul (106 pfu)를 비강내로 투여하였다. 감염 4일 후, 혈청을 채취하고, 마우스를 희생시켜, 폐를 적출하고 OmniGLH 균질기를 사용하여 PBS 1mL에서 균질화하였다. 폐 세포분쇄액을 원심분리하여 세포 파편을 제거하고, 상청액의 일부를 사용하여 폐에서의 항-RSV-F mAb 농도를 결정하였다. 남은 상청액을 사용하여 2시간 동안 HEp-2 세포로 배양한 연속적 희석물을 제조하여, 바이러스 진입을 허용하였다.
추후에, 상청액을 제거하고, 상기 세포에 1% 메틸셀롤로오스를 덮어 씌웠다. 6일 후, 세포를 크리스탈 바이올렛으로 염색하여, 플라크를 세었다. 그리고 이소타입 대조군 대비 log10 바이러스 감소를 계산하였다.
예시적 항체 H1H3627N 및 H1H3592P3는 대조군 I 또는 대조군 II 항-RSV-F 항체보다 체내 바이러스 부하 감소에 더 효능적이었다(표 7a~7e). 구체적으로, 항체 H1H3627N, H1H3592P3 및 대조군 II 모두, 0.15 mg/kg의 용량으로, 대조군 I와 비교하여 거의 검출될 수 없는 정도로 폐에서 RSV 감염을 효과적으로 감소시켰다(바이러스 감소 log(10) 배수 변화 = 2.10). 폐와 혈청에서의 총 인간 IgG 측정값은 두 그룹 사이에 항체 수치가 비교적 일관되었음을 확인해주었다.
보다 낮은 투여량의 경우, 대조군 I 대비 상기 3가지 항체 사이의 중화 효능에 보다 큰 편차가 분명히 드러났다. 0.05 mg/kg으로, 바이러스 부하 감소 배수 변화가 H1H3627N의 경우 1.08 내지 1.36 logs이고, 대조군 II의 경우 0.01 내지 0.65 logs인 것과 비교하여, H1H3592P3은 1.49 내지 > 2.07 logs의 범위의 배수 변화로 가장 큰 바이러스 부하 감소를 나타내었다. 이와 같이 낮은 용량에서 대조군 I는 0.03 내지 1.03 logs의 바이러스 부하 감소 변화로 단지 약간 효과적이었다.
이와 같은 결과는 H1H3627N 및 H1H3592P3모두 강력한 체내 RSV 중화 항체임을 시사하고, 후자는 더 낮은 용량에서 RSV 감염에 대해 좀 더 효과적인 중화능을 갖는 경향이 있음을 나타내었다.
앞서 기술된 동일한 프로토콜에 따라 용량투여 범위 실험을 수행하여, 4가지 다른 용량의 대조군 I 항체(0.6, 0.3, 0.15 및 0.05mg/kg) 및 2가지 용량(0.15 및 0.05mg/kg)의 H1H3592P3 및 대조군 II를 피하주입하였다. 폐에서의 바이러스 감소를 이소타입 대조군의 백분율로 계산하였다 (Exp M4, 표 7d~e).
예시적 항체 H1H3592P3가 대조군 I 또는 대조군 II 항-RSV-F 항체보다 (마우스에서) 체내 바이러스 부하를 감소시키는 데 좀 더 효능이 있었다. 뿐만 아니라, 폐에서 추가로, 99% 바이러스 감소에 도달하기에 필요한 대조군 I의 용량은 H1H3592P3의 용량보다 3~4배 높았다.
표 7(a-e): 마우스에서 항-RSV-F 항체 투여 후 RSV 바이러스 감소 (log (10))
표 7a
Figure pct00007
표 7b
Figure pct00008
표 7c
Figure pct00009
표 7d
Figure pct00010
ND: 측정 안 됨
표 7e
Figure pct00011
ND: 측정 안 됨
B. 코튼 랫트 모형
코튼 랫트를 사용한 체내 RSV 중화 연구를 위해 예시적 항체 H1H3627N 및 H1H3592P3를 선택하였다. 간략하게, 6~8주령 코튼 랫트(n=5)에 H1H3627N, H1H3592P3, 대조군 I, 대조군 II 또는 이소타입-매칭된 항체 중 하나를 사용하여 2가지 용량(5 내지 0.6 mg/kg)으로 근육내 주입을 실시하였다.
주입 1일 후, 래트에게서 RSV A2 균주 100 ul(105 pfu)의 비강내 투여로 면역반응을 유도하였다. 감염 4일 후, 혈청을 채취하고, 래트를 희생시켜, 바이러스 적정을 위해 폐와 콧속 조직을 추출하였다. 폐 세포분쇄액을 원심분리하여 세포 파편을 제거하고, 상청액의 일부분은 사용하여 폐에서 항-RSV-F mAb 농도를 측정하였다. 남은 상청액을 사용하여 연속적인 희석물을 만들어, HEp-2 세포로 배양하여 바이러스 진입을 허용하였다. 추후에, 상청액을 제거하고, 상기 세포에 1% 메틸셀룰로오스를 씌웠다. 6일 후, 세포를 염색하고 플라크를 세어, 이소타입 대조군 대비 log10 바이러스 감소를 계산하였다.
예시적 항체 H1H3592P3은 대조군 I에 비해 폐와 코에서의 바이러스 부하를 감소시키는 데 더욱 효능이 있었고, 폐에서는 대조군 II만큼 효능이 있고, 코에서는 효능이 더욱 뛰어났다. 예시적 항체 H1H3627N은 오직 대조군 I보다 뛰어났고 코에서 대조군 II만큼 효능이 있었다(표 8). 구체적으로, 5 mg/kg 용량으로, 항체 H1H3627N, H1H3592P3, 대조군 I 및 대조군 II 모두 이소타입 대조군과 비교하여 폐에서 거의 검출되지 않을 정도로 RSV 감염을 효과적으로 감소시켰다(바이러스 감소 log(10) 배수 변화 = 2.33). 그러나, 코에서는 대조군 I과 비교하여 H1H3627N, H1H3592P3, 대조군 II 사이의 중화 효능에 더 큰 차이가 분명했다. H1H3592P3는 H1H3627N (1.46 logs) 또는 대조군 II (1.33 logs)와 비교하여, 바이러스 부하에 더 큰 감소(2.65 logs)를 나타내었다.
더 낮은 투여 용량에서, 대조군 I와 비교하여, 상기 세 가지 항체 사이의 중화 효능의 더 큰 차이가 폐에서 분명하였다. 0.6 mg/kg의 용량에서, H1H3592P3가 대조군 II와 유사한 바이러스 부하 감소를 나타내었고(1.5 logs), 이들은 둘 두 대조군 I (0.624 logs)보다 더 효능이 있었다. H1H3627N이 다른 세 가지 항체보다 낮은 효능을 나타내었다.
이어서 코튼 랫트 모형을 이용하여 RSV 서브타입 B을 체내에서 중화하는 능력을 테스트하기 위해 예시적 항-RSV-F 항체 H1H3592P3를 선택하였다. RSV/A와 마찬가지로, 6 내지 8주령 코튼 랫트(n= 4~6/그룹 /실험)에 H1H3592P3, 대조군 I 또는 대조군 II 5 또는 0.6 mg/kg을 근육내 투여하였다. 다음날, 동물에게 10^5 pfu의 RSV/B 균주 18537로 면역반응을 유도하였다. 면역반응 유도 4일 후, 폐와 코에서 바이러스 역가를 혈청 항체 역가와 함께 측정하였다. 표 9에 보여진 결과는 2가지 독립적인 실험에서 수집된 데이타이다.
H1H3592P3은 고용량 및 저용량 모두에서 폐의 RSV/B 바이러스 부하의 감소에 효능을 나타내었다(표 9). 5.0 mg/kg의 용량에서, 폐의 RSV/B 바이러스 부하는 H1H3592P3로 2.21 logs 감소하였고, 반면 이에 비해, 대조군 I로 2.11 logs 감소하였고, 대조군 II로 2.18 logs 감소하였다. 0.6 mg/kg의 용량에서, 폐의 RSV/B 바이러스 부하가 H1H3592P3으로 1.29 logs 감소하였고, 이에 비해 대조군 I로 0.75 logs 감소하였고, 대조군 II로 0.83 logs 감소하였다.
전체적으로, H1H3592P3이 0.6 mg/kg의 용량에서, 대조군 I 및 대조군 II에 비해 폐에서의 RSV 서브타입 B의 중화에서 탁월함을 나타내었다. 5 mg/kg의 용량에서, H1H3592P3은 대조군 I 및 대조군 II과 비교하여 폐에서 바이러스 부하를 감소시키는 중화 능력은 비슷하였다.
상기 결과는 H1H3592P3이 코튼 랫트에서 체내 RSV 서브타입 균주 A 및 B를 중화시키는 강력한 중화제이고, 코에서는 고용량에서 RSV 감염의 중화에 좀 더 효과적이고, 폐에서는 저용량에서 더 효과적임을 보여준다. 저용량에서의 효능은 임상에서 저용량 요법의 가능성을 시사한다.
표 8: 코튼 랫트에서 항- RSV -F 항체 투여 후 RSV -A 바이러스 감소 (log (10))
Figure pct00012
표 9: 코튼 랫트에서 항- RSV -F 항체의 투여 후 RSV -B 바이러스 감소 (log (10))
Figure pct00013
C. 코튼 랫트 모형 - 예시적 항체 H1H3592P3의 ED 99 의 측정
코튼 랫트을 이용한 용량-범위 연구를 수행하여 예시적 항체 H1H3592P3가 바이러스 부하를 >99% 감소시키는 용량(즉 ED99)을 측정하였다. 코튼 랫트에 10, 5, 2.5, 1.25 또는 0.62 mg/kg 중 하나의 용량으로, H1H3592P3 또는 대조군 1 항체를 예방차원에서 근육내 투여하였다. 추가적으로, 이소타입 대조군 항체를 10 내지 0.62 mg/kg 중 한 용량으로 투여하여 본 연구에서의 활성 제제를 묶어 주었다. 항체 치료 후, 서브타입 A(RSV A2 균주) 또는 서브타입 B(RSV B 균주 18537)의 비강내 RSV 면역반응 유도를 수행하였다. 감염 4일 후, 혈청을 채취하고 래트를 희생시켜, 바이러스 적정을 위해 폐 조직을 추출하였다. 0.62 mg/kg의 용량으로, H1H3592P3이 폐에서 >99% 바이러스 부하 감소를 달성하였고, 이에 비해 대조군 1은 이와 동일한 >99% 바이러스 감소에 도달하기 위해서는 2.5 mg/kg의 용량이 필요하였다(표 10). 계산된 ED99에서의 평균 말단 대조군 1 농도(27 ㎍/mL)는 사전에 공개된 연구(Scott and Lamb, 1999)와 상관관계가 있는데, 이것은 RSV 감염의 시점에, 30-40 ?/mL의 혈청 팔리비주맙 농도(즉, 대조군 1)가 폐 바이러스 부하의 99% 감소와 연관되어 있음을 시사하였다. 평균 말단 H1H3592P3 농도(4.9 ㎍/mL)는 ED99.에서 전달되는 4배 적은 용량과 상관관계가 있다. H1H3592P3에 대한 ED99 가 2.5 mg/kg의 용량에서 달성된 반면 대조군 1은 동일한 >99% 바이러스 폐 감소를 획득하기 위해 대략 4배 더 많은 용량 (10 mg/kg)이 필요했기 때문에, 서브타입 B 면역반응 유도에 대한 결과는 유사하였다(표 11).
요약하면, 이와 같은 연구들은 H1H3592P3를 덜 자주 투여하는 것이 팔리비주맙으로 현재 매월 투여하는 패러다임과 동일한 보호수준을 제공할 수 있음을 뒷받침한다.
표 10. RSV 서브타입 A 면역반응 유도 후 항RSV -F 항체에 대한 ED99 의 측정
Figure pct00014
표 11. RSV 서브타입 B 면역반응 유도 후 항 RSV -F 항체에 대한 ED 99 의 측정
Figure pct00015
실시예 6. 이중특이성 항체의 생성
본 발명의 방법들을 실현하는 데 사용하기 위해 다양한 이중특이성 항체를 생성하였다. 예컨대, RSV-F 특이성 항체를 RSV- F 단백질의 서로 다른 도메인에 결합하는 가변부들이 함께 연결되어 단일 결합 분자 내 이중 도메인 특이성을 부여하는 이중특이성 형식으로 생성하였다("이중특이성"). 적절히 고안된 이중특이성은 특이성 및 결합력을 증진시킴으로써 전반적인 바이러스 중화 효능을 향상시킬 수 있다. 개별 도메인에 대한 특이성을 갖는 가변부들이 구조적 스캐폴드(scaffold)상에서 짝을 이루어, 각 부위가 별도의 항원결정부에 또는 하나의 도메인 내부에서 서로 다른 부위에 동시에 결합하는 것을 허용한다. 이중특이성에 대한 한 예에서, 하나의 도메인에 대한 특이성을 갖는 결합제에서 유래된 중쇄 가변부(VH)가 두 번째 도메인에 대한 특이성을 갖는 일련의 결합제에서 유래된 경쇄 가변부들(VL)과 재조합되어 상기 VH에 대한 본래의 특이성을 훼손시키지 않으면서 본래의 VH 와 짝을 이룰 수 있는 동족이 아닌(non-cognate) VL 짝을 식별할 수 있다. 이런 방식으로 단일 VL 절편(예컨대, VL1) 이 서로 다른 2개의 VH 도메인(예컨대, VH1 및 VH2)과 조합되어 2개의 결합 "팔"(VH1- VL1 및 VH2- VL1)로 이루어진 이중특이성을 생성할 수 있다. 단일 VL 절편의 사용은 시스템의 복잡성을 감소시키고, 그럼으로써 상기의 이중특이성을 생성하기 위해 사용되는 복제, 발현 및 정제 과정을 단순화하고 이들의 효율을 향상시킨다(예컨대, USSN13/022759 및 US2010/0331527 참조).
선택적으로, RSV-F와 두 번째 표적에 결합하는 항체, 예컨데, 비제한적으로, 두 번째 서로 다른 항-RSV-F 항체, 또는 톡소이드, 또는 백신이 본원에 기술된 기법들 또는 당해기술의 숙련가에게 알려진 기법들을 사용하여 이중특이성 형식으로 제조될 수 있다. 서로 다른 부위에 결합된 항체 가변부들이 예컨대, 서로 다른 바이러스 항원 상의 관련 지점에 결합하는 가변부들과 함께 연결되어 단일 결합 분자 내에 이중-항원 특이성을 부여할 수 있다. 이러한 성격을 갖는 적절히 고안된 이중특이성은 이중적인 기능을 한다. 예컨대, 즉,RSV-F 및 RSV-G에 결합하는 이중특이성 항체의 경우, 2개의 별개의 항체를 함유하는 조성물의 투여에 대한 요구 없이 상기 바이러스를 보다 더 잘 중화할 수 있다. RSV-F에 특이성을 갖는 가변부들이 RSV-G에 특이성을 갖는 가변부와 조합되어 구조적 스캐폴드 상에서 짝을 이룸으로써 각 가변부가 별도의 항원에 결합하는 것을 허용한다.
항체의 경우 앞서 기술된 모든 분석법으로, 결합 및 표적 항원, 예컨대, RSV-F 및 RSV-G의 기능적 차단에 대해 상기 이중특이성 결합제를 테스트하였다. 예컨대, 용해성 단백질 결합을 측정하는 표준 방법들, 예컨대 Biacore, ELISA, 크기 배제 크로마토그래피, 다중각도 레이저광 산란, 직접 스캐닝 열량계 및 기타 방법을 사용하여, 이중특이성 상호작용을 평가하였다. 서로 다른 항원들을 나타내는 합성 펩티드가 마이크로티터 플레이트의 웰 상에서 코팅되는 ELISA 결합 분석법의 사용을 통해, 이중특이성 항체의 RSV-F 및 RSV-G의 쌍결합을 측정하고, 2차 검출 항체의 사용을 통해 이중특이성의 결합을 측정하였다. 결합 실험 역시 펩티드와 항체의 실시간 결합 작용이 이중특이성 또는 펩티드가 각각 포집되는 센서 표면을 가로질러 펩티드 또는 이중특이성을 유동시킴으로써 측정되는 표면 플라즈몬 공명 실험을 사용하여 실행될 수 있다. 모든 생물학적 분석법, 예컨대 본원에 기술된 중화 분석법, 또는 적절한 동물 모형(본원에 기술된 것과 같은) 또는 폐 감염의 체내 모형을 사용하여 이중특이성에 의해 RSV-F 및 RSV-G 둘 다의 기능적 체외 차단을 측정하였다.
실시예 7: H1H3592P3의 결합 항원결정부를 결정하기 위한 RSV 탈출 돌연변이체(Escape 돌연변이체)의 체외 생성
H1H3592P3에 탈출 돌연변이체 생성
1개 웰당 3x105 개 Hep-2 세포를 6-웰 플레이트에 24시간 동안 플레이팅하였다. 50 ug/mL 내지 0.016 ug/mL 범위의 농도의 H1H3592P3를 37℃에서 1시간 동안 RSV 서브타입 A 균주 1540 또는 RSV 서브타입 B 균주 1580과 혼합하였다. 공동 배양 후, 세포 1개당 10 플라크-형성 단위(pfu)의 다수의 감염(MOI)으로, 미리 시딩된 HEp-2 세포에 RSV/항체 혼합물을 첨가하였다. 세포를 6일 동안 배양하였고, 광 현미경 관찰법을 사용하여 매일 세포 변성 작용(cytopathic effects)을 모니터링하였다. 6일째, 각 웰의 내용물을 수확하여 항체의 최초 농도로 조절하고, 이것을 사용하여 새로 시딩된 HEp-2 세포를 감염시켰다. 항체의 IC50보다 대략 2 logs 더 큰, H1H3592P3의 고농도(50 ug/mL)에서 뚜렷한 세포 변성 작용이 관찰될 때까지, 이와 같은 연속 계대배양을 반복한 결과, 바이러스 돌연변이체의 존재를 시사하였다. 미세중화 분석법(아래 기술됨)을 통해 내성 바이러스의 존재로부터 이와 같은 웰의 상청액을 확인하였고, 10 cm 조직 배양접시에서 플라크 단리를 수행하였다. 개별 플라크 10개를 6-웰 플레이트에서 팽창시키고, 미세중화 분석법을 통해 바이러스의 내성에 대한 테스트를 다시 수행하였다. 이들 바이러스 돌연변이체에 시퀀싱을 수행하였다.
미세중화분석
H1H3592P3의 압력 하에 생성된 탈출 돌연변이체가 중화에 내성이 있는지 여부를 확인하기 위해, Hep-2 세포에서 미세중화분석을 수행하였다. 간략하게, 5% Hyclone FBS, L-글루타민 및 항생제를 보충한 DMEM 1x 배지에서 배양된 105개 Hep2 세포를 96-웰 투명 바닥 블랙 마이크로플레이트에 시딩하고 16~18시간 배양하였다(37℃, 5% CO2).
그러고 나서, 666 nM에서 시작하여 배지에 1:5로 희석된, 다양한 농도의 항체를 RSV 야생형 (서브타입 A 또는 B) 또는 서브타입 A 및 B 둘 다에서 유래된 탈출 돌연변이체로, 0.04 내지 0.4의 MOI로 2시간 (37℃, 5% CO2) 동안 배양하였다. 바이러스를 함유하지 않는 대조군 또는 바이러스를 함유하지만 항체는 함유하지 않는 대조군을 포함시켰다. 항체를 이중으로 희석시켰다. 배양 후, 상기 항체/바이러스 혼합물을 세포에 첨가하고 3일 동안 감염을 허용하였다. 상기 세포를 2% PFA에 고정시켜 감염을 측정하고, 염소 항-RSV/항-염소 HRP 항체로 ELISA를 수행하였다. 발광 시약을 상기 웰에 첨가하고, 플레이트 해독기(Victor X3, Perkin Elmer)를 사용하여 신호를 검출하였다. 11-포인트 반응 곡선(GraphPad Prism)에 걸쳐 3-매개변수 로지스틱 방정식으로 발광 값을 분석하였다.
결과
호흡기 세포융합 바이러스 탈출 돌연변이체를 생성하여 H1H3592P3의 RSV-F에 대한 특이적 결합 부위를 발견하였다. 간략하게, RSV 균주 1540(서브타입 A) 또는 1580(서브타입 B)로 감염시킨 HEp-2 세포에 50 내지 0.016 ug/mL 범위의 H1H3592P3 치료를 실시하였다. 6일 후, 각 웰의 내용물을 사용하여 새로 시딩된 HEp-2 세포를 감염시켰다. 최고 항체 용량의 존재 하에 HEp-2 세포에서 세포 변성 작용이 관찰될 때까지 이와 같은 연속 계대배양을 반복한 결과, 선택 압력 하에 생성된 RSV 바이러스 돌연변이체의 존재를 시사하였다. 전체적으로, 바이러스 돌연변이체를 10개의 서로 다른 플라크에서 단리하여, H1H3592P3의 존재 하에 중화 내성에 대해 확인하고, 추후에 시퀀싱하였다.
서열 분석은 H1H3592P3에 대한 탈출 돌연변이체가 RSV-F(서열 식별 번호: 354)의 아미노산 위치 173 및 174(S173Y 및 T174K)에 발견되었음을 확인해주었고, 이것은 이들 아미노산이 항체 결합 및 바이러스 중화에 중요한 역할을 수행함을 시사하였다. 이전 보고서에서는 항-RSV 대조군 I 및 대조군 II 항체에 대한 결합 항원결정부가 S255 내지 N276 사이에 존재한다고 밝혀왔다. 상기 연구에서 획득한 데이터는 바이러스 중화에서 주요한 역할을 하고(표 12 참조) 사전에 성립된 대조군 항체에 대해 요구되는 것과 뚜렷이 차이가 나는, RSV-F 상의 H1H3592P3에 대한 결합 지점을 시사한다.
표 12: H1H3592P3 및 항- RSV 대조군 항체의 RSV 서브타입 A 및 B 균주에 대한 중화 효능 및 관련된 탈출 돌연변이체
Figure pct00016
실시예 8: 수소 -중수소 교환 & 질량 분석법을 사용하여 RSV -F에 대한 H1H3592P3의 결합 항원결정부의 측정
재조합형 RSV-F에 대한 항-RSV-F 항체 H1H3592P3의 결합 항원결정부를 측정하기 위해, 펩신 소화 및 질량 분석법과 병행하여 수소/중수소 교환 (H/D 교환)을 수행하였다. 2가지 H/D 교환 형식(아래 상세히 기술)을 활용하였다: H1H3592P3에 의해 역-교환으로부터 보호받는 RSV-F 펩티드 절편이 D2O를 보유하고, 질량 분석법에 의해 더 높은 분자량(m/z 값)을 산출하는 '온-용액/오프-비드' 방법 및 모든 RSV-F 펩티드에 대한 기준 m/z 값을 성립시키는 '온-용액/오프-비드' 대조 방법. '온-용액/오프-비드' 방법을 사용하여 획득한 m/z 값에서 대조군 m/z 값의 차감이 0이 아닌 델터 m/z 값, 즉 H1H3592P3 및 RSV-F 사이의 결합 항원결정부에 상응하는 잔류 D2O를 나타내는 어떤 아미노산 부위를 산출한다.
방법
온 용액/ 오프 비드 형식
'온-용액/오프-비드' (용액에서 교환 진행, 이어서 비드에서 교환 중지) 형식에서, RSV-F.mmh 단백질(서열 식별 번호: 353)을 D2O로 제조한 PBS 완충용액에서 5분 또는 10분 동안 중수소치환하고, 이어서 2분간 배양을 통해 N-히드록시숙신이미드(NHS) 아가로오스 비드(GE Lifescience)에 공유결합으로 결합된 H1H3592P3에 결합시켰다. RSV-F / H1H3592P3 비드 복합체를 PBS 완충용액(중수소로 치환되지 않는 H2O로 제조)으로 세척하고, 교환 진행(on-exchange) 중 절반의 시간 동안 PBS 완충용액에서 배양하였다. 교환이 중지(off-exchange)된 후, 얼음처럼 찬 낮은 pH TFA 용액으로 비드에서 결합된 RSV-F를 용출하였다. 이어서, 상기 용출된 RSV-F를 고정화 펩신(Thermo Scientific)으로 5분 동안 소화시켰다. 수득된 펩티드를 ZipTip 크로마투그래프 피펫 끝을 사용하여 탈염하고, UltrafleXtreme MALDI-TOF(Matrix assisted laser desorption ionization time of flight)-TOF 질량 분석법 (MS)으로 특시 분석하였다.
온- 비드 / 오프 비드 형식
'온-용액/오프-비드' (비드에서 교환 진행, 이어서 비드에서 교환 중지) 형식으로, RSV-F.mmh(서열 식별 번호: 353)을 우선 H1H3592P3 아가로오스 비드에 결합시키고, 이어서 교환 진행 동안 D2O에서 5분 또는 10분 동안 배양하였다. RSV-F / H1H3592P3 비드 복합체를 PBS 완충용액(중수소로 치환되지 않는 H2O로 제조)으로 세척하고, 교환 진행 중 절반의 시간 동안 PBS 완충용액에서 배양하였다. 교환 중지 후, 결합된 RSV-F를 얼음처럼 차가운 낮은 pH TFA 용액으로 비드에서 용출하였다. 상기 용출된 RSV-F를 5분 동안 고정화 펩신(Thermo Scientific)으로 소화시켰다. 수득된 펩티드를 ZipTip 크로마토그래프 피펫 끝을 이용하여 탈염하고, 그 즉시 MALDI-TOF-TOF 질량 분석법으로 분석하였다. 검출된 모든 펩티드의 무게중심 값 또는 평균 질량대전하 비율(m/z)을 계산하고, 이것과 '온-용액/오프-비드' 실험을 비교하였다.
펩티드 식별
액체 크로마토그래피-Orbitrap Elite(Thermo Scientific)를 사용하여, 상기 펩티드의 식별을 수행하였다.
결과
표 13은 H/D 교환 및 펩신 소화 이후 MALDI-TOF 질량 분석법에 의해 검출된 모든 RSV-F 펩티드의 델타 무게중심 m/z 값들의 상세한 비교이다. 서열 식별 번호: 354의 아미노산 161-171(EGEVNKIKSAL, (서열 식별 번호: 355)) 및 172-188(LSTNKAVVSLSNGVSVL, (서열 식별 번호: 356))에 해당하는 2개의 절편은 항체-단백질 접촉의 표지로 여겨지고, 그래서 항원결정부 부위로 여겨지는 내부관찰 임계값인 0.20보다 더 높은 델타 무게중심 값을 갖는다. 아미노산 161~171에 상응하는 펩티드 신호는 잡음에 대한 낮은 신호 때문에 10분 동안의 교환 진행 실험에서 정량화될 수 없음이 언급되어야 한다. 그러나 5분 교환진행 실험에서 검출된 델타값 0.88은 임계값 0.2를 훨씬 초과하는데, 이것은 RSV-F의 H1H3592P3 결합 시, H/D 교환률의 유의미한 변경에 기인한 것일 수 있다.
이뿐만 아니라, 아미노산 172-188에 상응하는 펩티드 절편은 H1H3592P3 치료에 내성이 있는 2개의 RSV 탈출 돌연변이체(S173Y 및 T174K; 실시예 7 참조)의 아미노산들을 함유하고, 이것은 이들 두 아미노산이 항체 결합 및 바이러스 중화에 역할을 수행함을 시사한다. 따라서 시퀀싱 탈출 RSV 돌연변이체와 H/D 교환의 조합은 항체 H1H3592P3에 대해 최소한 부분적으로RSV-F의 결합 부위를 규정하는 서열 식별 번호: 354의 아미노산 161~188을 뒷받침한다.
표 13. H1H3592P3의 부재(온-용액/오프-비드) 및 이것의 존재(온-비드/오프-비드) 하에서 중수소 치환에 이은 역-교환 후, RSV -F 위액 펩티드의 무게중심 (m/z) 값
Figure pct00017
Figure pct00018
실시예 9. 호흡기 세포융합 바이러스 융합 ( RSV -F) 단백질 항체가 RSV 서브타입 A 및 B 실험실 균주에 대해 강력한 중화능을 나타낸다
중화능을 측정하기 위해 RSV 미세중화 분석법으로, H1H3592P3 및 대조군 I 및 대조군 II 항체를 테스트하였다. 간략하게, 5% Hyclone FBS, L-글루타민 및 항생제로 보충한 DMEM 1x 배지에서 배양한 104개 HEp-2 세포를 96-웰 투명바닥-블랙 마이크로플레이트에 시딩하고, 16~18시간 동안 배양하였다(37℃, 5% CO2). 그러고 나서, 666 nM으로 시작하여 추후에 배지에서 1:5로 희석된 다양한 농도의 항체를 0.042의 MOI에서 2시간 동안 ATCC에서 제공하는 다양한 RSV 서브타입 A 실험실 균주로 배양하였다(37℃, 5% CO2). 바이러스-없는 무관한 이소타입 대조군을 포함시켰다.
배양 후, 상기 항체:바이러스 혼합물을 HEp-2 세포에 첨가하고, 3일 동안 감염을 유지시켰다. 세포를 2% PFA에 고정시키고 염소 항-RSV/항-염소 HRP 항체로 ELISA를 수행함으로써, 감염 정도를 측정하였다. 발광 시약을 상기 웰에 첨가하고, 플레이트 해독기(Victor X3, Perkin Elmer)를 사용하여 신호를 검출하였다. 11-포인트 반응 곡선(GraphPad Prism)에서 3-매개변수 로지스틱 방정식으로 발광 값을 분석하였다.
본 발명의 항체는 RSV 실험실 균주에 대해 광밤위한 중화 활성을 나타내었다(표 14). 항체 H1H3592P3 및 AM22는 RSV 서브타입 A 실험실 균주에 대해 대조군 II와 유사한 중화능을 나타내었다. 대조군 I와 비교하여, H1H3592P3는 15~17배 더 높은 중화능 (IC50 44-140 pM)을 보인 반면, AM22는 9~23배 더 높은 중화능(IC50 86-91 pM)을 나타내었다(표 14). 서브타입 B의 경우, 항체 H1H3592P3은 대조군 II와 유사한 종화능을 나타냈으나, AM22 및 대조군 I보다 훨신 뛰어났다. 대조군 I과 비교할 때, H1H3592P3은 2~5배 더 높은 중화능(IC50 33-230 pM)을 나타낸 반면, AM22는 0.13~2배 더 높은 중화능(IC50 190-2508 pM)을 나타내었다.
본 실시예는 본 발명의 항체가 서브타입 A 및 B에서 유래된 RSV의 여러 실험실 균주를 체외에서 중화하는 효능을 보여주는데, 기존의 대조군에서 보인 것보다 훨씬 더 강력하다.
표 14
Figure pct00019
실시예 10. 호흡기 세포융합 바이러스 융합 ( RSV -F) 단백질 항체가 RSV 서브타입 A 임상 분리균에 대해 강력한 중화능을 나타낸다
중화능을 측정하기 위해, H1H3592P3 및 대조군 I, II 및 III 항체를 RSV 미세중화 분석법에서 테스트하였다 간략하게, 5% Hyclone FBS, L-글루타민 및 항생제를 보충한 DMEM 1x 배지에서 배양한 104 개 HEp-2 세포를 96-웰 투명 바닥-블랙 마이크로플레이트에 시딩하고 16~18시간 동안 배양하였다(37℃, 5% CO2). 그러고 나서, 666 nM에서 시작하여, 추후 배지에 1:5 희석된 다양한 농도의 항체를 0.015 내지 0.128 범위의 MOI로, 2시간 동안 Dr. Moore (Emory University)에서 제공한 다양한 RSV 서브타입 A 임상 분리균으로 배양하였다(37℃, 5% CO2). 바이러스가 없고 무관한 이소타입 대조군을 포함시켰다.
배양 후, 상기 항체:바이러스 혼합물을 HEp-2 세포에 첨가하고, 3일 동안 감염을 유지시켰다. 세포를 2% PFA에 고정시키고 염소 항-RSV/항-염소 HRP 항체로 ELISA를 수행함으로써, 감염의 정도를 측정하였다. 발광 시약을 상기 웰에 첨가하고, 플레이트 해독기(Victor X3, Perkin Elmer)를 사용하여 신호를 검출하였다. 11-포인트 반응 곡선(GraphPad Prism)에서 3-매개변수 로지스틱 방정식으로 발광 값을 분석하였다.
본 발명의 항체는 RSV 임상 분리균에 대해 광범위한 중화 활성을 나타내었다(표 15). 항체 H1H3592P3는 대부분의 임상 분리균에 대해 대조군 II 및 III과 유사한 중화능을 나타내었다. 대조군 I과 비교하여, H1H3592P3는 10~22배 더 강력한 중화능을 나타내었다 (IC50 34-66 pM) (표 15).
본 실시예는 RSV의 여러 임상 분리균을 체외에서 중화시키는 본 발명의 항체의 효능을 나타내는데, 기존 대조군이 보여준 것보다 훨신 더 강력한 중화능을 나타내었다.
표 15. RSV -F 항체가 RSV 서브타입 A 임상 분리균에 대해 강력한 중화능을 나타낸 다
Figure pct00020
실시예 11. H1H3592P3이 바이러스와 세포막의 융합을 억제함으로써 바이러스 진입을 차단한다
본 발명의 항체가 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 감염을 차단하는 메커니즘을 확인하기 위해 연구를 수행하였다. RSV의 숙주 세포와의 융합을 방지/억제하는 기능이 있는지 역부를 확인하기 위해 본 발명의 한 예시적 항체인 H1H3592P3을 테스트하였다(도 2A 및 2B). 대조군 I (팔리비주맙 서열을 근거로 하는 양성 대조군 mAb)에 대한 작용 기전은 앞서 바이러스의 숙주 세포와의 융합의 억제로 기술된 바 있다 (Huang 등, J. of Virol., (2010), Aug. 84(16):8132-40). RSV-F이 숙주 수용체 뉴클레오린의 상호작용을 통한 세포 부착 및 바이러스와 플라즈마막의 융합에 관여하기 때문에, H1H3592P3의 작용기전을 확인하기 위해 분석법을 수행하였다.
또는 양성 대조군 항체(대조군 I) 중 하나의 존재 하에 RSV (서브타입 A, 균주 A2)를 배양하고, 이어서 HEp-2 세포와의 혼합물을 4℃에서 1시간 동안 배양하여 바이러스와 세포의 결합을 허용함으로써, 부착 분석법(도 2A)을 수행하였다. 결합되지 않은 바이러스를 세척해서 제거하고, 세포를 고정하여 ELISA로 부착된 바이러스의 백분율을 측정하였다. RSV 부착을 차단하는 헤파린을 대조군으로 사용하였다.
4℃에서 바이러스 부착을 허용하고, 결합하지 않은 바이러스를 세척하여 제거하고, 이어서 H1H3592P3, 양성 대조군 I 또는 이소타입 음성대조군 항체를 4℃에서 배양하여 세포를37℃로 옮겨서 바이러스 융합 및 진입을 촉진함으로써, 바이러스 융합을 검출하였다. 3일후, ELISA로 바이러스 감염을 측정하였다(도 2B). RLU: 상대적 발광 단위.
H1H3592P3은 대조군 I와 마찬가지로 RSV 융합을 차단하고, RSV이 세포 표면에 부착되는 것을 차단하지 않는 반면, 이소타입 (음성) 대조군 mAb은 바이러스 융합에 어떤 영향도 미치지 않았다(도 2B). 헤파린은 효과적으로 RSV의 세포 부착을 차단하였고(Hallack 등, Virology (2000), 271(2):264-75), 반면 항체는 RSV 부착을 억제하지 않았다(도 2A). H1H3592P3은 230Pm의 IC50으로, 이와 같은 분석 형식에서 바이러스 융합을 차단한 반면, 상기 양성 대조군 mAb (대조군 I)은 1nM의 IC50로 바이러스 융합을 차단하였다(도 2B). 이와 유사한 결과가 RSV 서브타입 B 균주에서도 관찰되었다(데이터 표시하지 않음).
실시예 12. RSV-F 결합에 대한 항-RSV-F 항체의 옥텟(Octet) 교차 경쟁
Octet® HTX 바이오센서(Pall ForteBio Corp.) 상에서 실시간, 표지없는 바이오-레이어 간섭법 분석법으로, 항-RSV-F mAb들의 패널 사이의 결합 경쟁을 측정하였다. 전체 실험을 25℃, HBST 동력학 완충용액(0.01 M HEPES pH7.4, 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 0.05% v/v 계면활성제 Tween-20, 0.1mg/mL BSA)에서 1000 rpm의 속도로 플레이트를 교반하면서 수행하였다. 두 항체가 C-말단 myc-myc-헥사히스티딘 태그(RSV-F-mmH)로 표현되는 재조합형 RSV-F 단백질 상의 각각의 항원결정부에 결합하는 것에 대해 서로 경쟁할 수 있는지 여부를 평가하기 위해, 상기 바이오센서를 재조합형 RSV-F-mmH의 10㎍/mL 용액을 함유한 웰에 3분 동안 침지함으로써, 약 0.36nm의 RSV-F-mmH를 항-Penta-His 항체로 코팅된 Octet 바이오센서(Fortebio Inc, Cat# 18-5079) 상에서 우선 포집하였다. mAb-1의 100-200㎍/mL 용액을 함유한 웰에 10분 동안 담금으로써, 바이오센서에서 포집된 항원을, 이어서 첫 번째 항-RSV-F 단클론 항체(추후 mAb-1이라 불림)으로 포화시켰다. 이어서 상기 바이오센서를 두 번째 항-RSV-F 단클론 항체(추후 mAb-2라 불림)의 100~200 ㎍/mL 용액을 함유하는 웰에 5분 동안 담가서, mAb-1에 사전 결합된 RSV-F-mmH에 mAb-2가 결합하는지 여부를 점검하였다. 실험의 각 단계 사이에 상기 바이오센서를 HBST 동력학 완충용액으로 세척하였다. 실시간 결합 반응을 실험 과정 내내 모니터링하였고, 모든 단계에서 최대 결합 반응을 기록하였다. mAb-1이 사전결합된 RSV-F-mmH에 대한 mAb-2 결합 반응을 측정하고, 서로 다른 항-RSV-F 단클론 항체의 경쟁적/비-경쟁적 행동을 확인하였다.
결과
Octet® HTX에서 수행한 순차적인 결합 연구는 항-RSV-F 단클론 항체 중 어떤 것도 서로 경쟁하지 않으며 비-경쟁적으로 RSV-F-mmH에 결합할 수 없음을 보여준다. 표 16에 표시된 바와 같이, 검은 폰트의 어두운 회삭 상자가 자가 경쟁에 대한 결합 반응을 보여준다. 뚜렷한 결합 항원결정부를 시사하는 항체들 사이의 경쟁 없음은 검정 폰트의 흰 상자로 표시되었다. 첫 번째 항-RSV-F 단클론 항체 (mAb-1)의 항-His-포집 RSV-F-mmH 단백질 결합은 두 번째 항-RSV-F 단클론 항체 (mAb-2)의 결합을 막지 않는다. 본 연구에서 모든 항-RSV-F 단클론 항체의 경우, 관찰된 mAb-2 결합 신호는 mAb-1 부재(mAb 없음) 하에서 관찰된 것과 견줄만한 것임이 밝혀졌다. 게다가, 모든 항-RSV-F 단클론 항체에 대한 mAb-2의 관찰된 결합은 항-RSV-F 항체의 결합 순서와 무관함이 밝혀졌다; 이것은 연구 중인 모든 항-RSV-F 항체가 뚜렷한 결합 항원결정부를 가짐을 시사한다.
표 16. 항- RSV -F 단클론 항체들의 교차경쟁
Figure pct00021
<110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc. <120> Human Antibodies to Respiratory Syncytial Virus F Protein and Methods of Use Thereof <130> 1800A-WO <150> US 61/782,215 <151> 2013-03-14 <150> US 61/911,093 <151> 2013-12-03 <160> 364 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 1 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccctcagt aataacgctt tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gttgggaggg ttcaacccga tctttgatac tgcaaactac 180 gcgcaaaagt tccagggcag aatcacgatc accctggacg catccacggg cacagtctac 240 atggaactga gcagcctgag atctgaggac acgggcgtgt attactgcgc gggaactggg 300 gcccattttg agttctgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctcagc ctccaccaag 360 ggccca 366 <210> 2 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 2 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Leu Ser Asn Asn 20 25 30 Ala 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Leu Leu Ser Thr Asn Lys 165 170 175 Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val Leu Thr Ser Lys Val 180 185 190 Leu Asp Leu Lys Asn Tyr Ile Asp Lys Gln Leu Leu Pro Ile Val Asn 195 200 205 Lys Gln Ser Cys Arg Ile Ser Asn Ile Glu Thr Val Ile Glu Phe Gln 210 215 220 Gln Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu Ile Thr Arg Glu Phe Ser Val Asn 225 230 235 240 Ala Gly Val Thr Thr Pro Val Ser Thr Tyr Met Leu Thr Asn Ser Glu 245 250 255 Leu Leu Ser Leu Ile Asn Asp Met Pro Ile Thr Asn Asp Gln Lys Lys 260 265 270 Leu Met Ser Asn Asn Val Gln Ile Val Arg Gln Gln Ser Tyr Ser Ile 275 280 285 Met Ser Ile Ile Lys Glu Glu Val Leu Ala Tyr Val Val Gln Leu Pro 290 295 300 Leu Tyr Gly Val Ile Asp Thr Pro Cys Trp Lys Leu His Thr Ser Pro 305 310 315 320 Leu Cys Thr Thr Asn Thr Lys Glu Gly Ser Asn Ile Cys Leu Thr Arg 325 330 335 Thr Asp Arg Gly Trp Tyr Cys Asp Asn Ala Gly Ser Val Ser Phe Phe 340 345 350 Pro Gln Ala Glu Thr Cys Lys Val Gln Ser Asn Arg Val Phe Cys Asp 355 360 365 Thr Met Asn Ser Leu Thr Leu Pro Ser Glu Val 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<220> <223> Synthetic <400> 355 Glu Gly Glu Val Asn Lys Ile Lys Ser Ala Leu 1 5 10 <210> 356 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 356 Leu Ser Thr Asn Lys Ala Val Val Ser Leu Ser Asn Gly Val Ser Val 1 5 10 15 Leu <210> 357 <211> 454 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic AM22 HC <400> 357 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Thr Val Lys Val Ser Cys Lys Ile Ser Gly His Thr Leu Ile Lys Leu 20 25 30 Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Tyr Glu Gly Glu Val Asp Glu Ile Phe Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln His Arg Leu Thr Val Ile Ala Asp Thr Ala Thr Asp Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Gly Arg Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Gly Thr Leu Gly Val Thr Val Thr Glu Ala Gly Leu Gly Ile Asp Asp 100 105 110 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140 Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 195 200 205 Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 210 215 220 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 225 230 235 240 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 245 250 255 Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 260 265 270 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 275 280 285 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn 290 295 300 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 305 310 315 320 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 325 330 335 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 340 345 350 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn 355 360 365 Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 370 375 380 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 385 390 395 400 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 405 410 415 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 420 425 430 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 435 440 445 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 358 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic AM22 LC <400> 358 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ile Val Ser Arg Asn 20 25 30 His Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Phe Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Val Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Gly Leu Ala 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Ser Ser Asp Ser Ser Ile 85 90 95 Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Phe Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 359 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Motavizumab HC <400> 359 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ala 20 25 30 Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Asp Ile Trp Trp Asp Asp Lys Lys His Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Asp Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Asp Met Ile Phe Asn Phe Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 360 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Motavizumab LC <400> 360 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Arg Val Gly Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 361 <211> 450 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Palivizumab HC <400> 361 Gln Val Thr Leu Arg Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Gly Met Ser Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala Asp Ile Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val 65 70 75 80 Val Leu Lys Val Thr Asn Met Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Ser Met Ile Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Val Trp Gly Ala 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys 450 <210> 362 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Palivizumab LC <400> 362 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Cys Gln Leu Ser Val Gly Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp 65 70 75 80 Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro 100 105 110 Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr 115 120 125 Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys 130 135 140 Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu 145 150 155 160 Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser 165 170 175 Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala 180 185 190 Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe 195 200 205 Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 363 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 363 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr 20 25 30 Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Val Ser Trp Ser Gly Ser Thr Val Gly Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Gln Lys Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Lys Asp Ala Tyr Lys Phe Asn Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 225 230 235 240 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 364 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic <400> 364 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Leu Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210

Claims (72)

  1. 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편으로, 상기 항체가 하기 특징들 중 하나 이상을 갖는 상기 절편:
    (a) 완전한 인간 단클론 항체임;
    (b) 서열 식별 번호: 354의 약 161번 위치 내지 약 188번 위치에 해당하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열과 상호작용함;
    (c) 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린, 또는 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 중 하나와, 또는 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린, 또는 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 둘 다와 상호작용함;
    (d) 호흡기 세포융합 바이러스 서브타입 A 및 서브타입 B 균주를 체외에서 중화할 수 있음;
    (e) RSV 감염의 동물 모형에서 코 및/또는 폐 바이러스 부하를 체내에서 유의미하게 감소시키는 능력을 보임; 또는
    (f) 바이러스의 세포 융합을 억제함.
  2. 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 서열 식별 번호: 354의 약 161번 위치 내지 약 188번 위치에 해당하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열과 상호작용하는 것인, 호흡기 세포융합 바이러스 F 단백질(RSV-F)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  3. 청구항 2에 있어서, 상기 항체가 호흡기 세포융합 바이러스 서브타입 A 및/또는 서브타입 B 균주를 체외 및 체내에서 중화하는 완전한 인간 단클론 항체인 것인 단리된 항체.
  4. 청구항 1 내지 청구항 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합절편이 RSV 감염의 마우스 모형에서 약 0.05 내지 약 0.15 mg/kg의 용량으로 투여되었을 때, 폐 바이러스 부하를 유의미하게 감소시키는 능력을 보이는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 RSV 감염의 코튼 랫트 모형에서, 약 0.62 내지 약 5.0 mg/kg의 용량으로 투여되었을 때, 팔리비주맙과 비교하여 코 및/또는 폐 바이러스 역가의 1 내지 2 logs 더 큰 감소를 보이는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  6. 청구항 1 내지 청구항 5 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 RSV 서브타입 A 감염의 마우스 모형에서 투여되었을 때, 약 0.15 mg/kg 이하의 ED99 를 보이는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  7. 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 RSV 서브타입 A 감염의 코튼 랫트 모형에 투여되었을 때, 약 0.62 mg/kg 이하의 ED99 를 보이는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  8. 청구항 1 내지 청구항 7 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 RSV 서브타입 B 감염의 코튼 랫트 모형에서 투여되었을 때, 약 2.5 mg/kg 이하의 ED99 를 보이는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  9. 청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 팔리비주맙 또는 모타비주맙의 ED99 보다 약 2 내지 3배 낮은 ED99를 보이는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  10. 청구항 1 내지 청구항 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 팔리비주맙 대비 15 내지 17 배 개선된, RSV의 하나 이상의 서브타입 A 실험실 균주에 대한 중화능을 보이거나, 또는 팔리비주맙 대비 약 10 내지 22배 개선된, RSV의 하나 이상의 서브타입 A 임상 균주에 대한 중화능을 보이는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  11. 청구항 1 내지 청구항 10 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 팔리비주맙 대비 2 내지 5배 개선된, RSV의 하나 이상의 서브타입 B 실험실 균주에 대한 중화능을 보이는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  12. 청구항 1 내지 청구항 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 AM-22대비 약 0.5 내지 2배 개선된, RSV의 하나 이상의 서브타입 A 실험실 균주 또는 서브타입 A 임상 균주에 대한 중화능을 보이는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  13. 청구항 1 내지 청구항 12 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 AM-22 대비 2.5 내지 17배 개선된, RSV의 하나 이상의 서브타입 B 실험실 균주에 대한 중화능을 보이는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  14. 청구항 1 내지 청구항 13 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정된 1.0 x 10-7 M 내지 6.0 x 10-10 M 범위의 KD로, RSV-F에 특이적으로 결합하는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  15. 청구항 1 내지 청구항 14 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 서열 식별 번호: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 306, 322 및 338로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변부 (HCVR)를 포함하는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  16. 청구항 1 내지 청구항 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 서열 식별 번호: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330 및 346으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변부(LCVR)를 포함하는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  17. 청구항 1 내지 청구항 16 중 어느 한 항에 있어서, 서열 식별 번호들: 서열 식별 번호: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, 322/330 및 338/346으로 이루어진 군에서 선택되는 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  18. 청구항 17에 있어서, 서열 식별 번호: 274/282 및 338/346으로 이루어진 군에서 선택되는 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  19. 상기 항체가 서열 식별 번호: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 306, 322 및 338로 이루어진 군에서 선택되는 중쇄 가변부 (HCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 서열 식별 번호: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330 및 346으로 이루어진 군에서 선택되는 경쇄 가변부 (LCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR(LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)를 포함하는 것인, RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  20. 하기를 포함하는, RSV-F에 특이적으로 결합하는 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편:
    (a) 서열 식별 번호: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296, 312, 328 및 344로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR3 도메인; 및
    (b) 서열 식별 번호: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 304, 320, 336 및 352로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR3 도메인.
  21. 청구항 20에 있어서, 추가로 하기를 포함하는 단리된 인간 항체 또는 이것의 항원-결합 절편:
    (c) 서열 식별 번호: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292, 308, 324 및 340으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR1 도메인;
    (d) 서열 식별 번호: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294, 310, 326 및 342로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR2 도메인;
    (e) 서열 식별 번호: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300, 316, 332 및 348로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR1 도메인; 및
    (f) 서열 식별 번호: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302, 318, 334 및 350으로 이루어진 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR2 도메인.
  22. 서열 식별 번호: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, 322/330 및 338/346으로 이루어진 군에서 선택되는 중쇄 및 경쇄 서열쌍을 포함하는 항체 또는 항원-결합 절편과 RSV-F에 특이적 결합을 놓고 경쟁하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  23. 서열 식별 번호: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, 322/330 및 338/346으로 이루어진 군에서 선택되는 중쇄 및 경쇄 서열쌍을 포함하는 항체에 의해 인식되는 RSV-F상의 동일한 항원결정부에 결합하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  24. 청구항 1 내지 청구항 23 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 서열 식별 번호: 355 및 356으로 이루어진 군에서 선택되는 최소한 하나의 아미노산 서열과 상호작용하는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  25. 청구항 1 내지 청구항 23 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 서열 식별 번호: 354의 잔기161 내지 188 내의 최소한 하나의 잔기와 상호작용하는 것인 단리된 항체. 또는 이것의 항원-결합 절편.
  26. 청구항 1 내지 청구항 23 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 서열 식별 번호: 355 또는 서열 식별 번호: 356 내 최소한 하나의 잔기와 상호작용하는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  27. 청구항 1 내지 청구항 23 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 또는 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 중 하나와, 또는 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 및 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 둘 다와 상호작용하는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  28. 청구항 2 또는 청구항 3에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 서열 식별 번호: 274의 중쇄 가변부 (HCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 중쇄 CDR(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 서열 식별 번호: 282의 경쇄 가변부(LCVR) 아미노산 서열 내에 함유된 3개의 경쇄 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함하는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  29. 청구항 28에 있어서, 하기를 포함하는 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편:
    (a) 서열 식별 번호: 276의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1 도메인;
    (b) 서열 식별 번호: 278의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2 도메인;
    (c) 서열 식별 번호: 280의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3 도메인;
    (d) 서열 식별 번호: 284의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1 도메인;
    (e) 서열 식별 번호: 286 의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2 도메인; 및
    (f) 서열 식별 번호: 288의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3 도메인.
  30. 청구항 28 또는 청구항 29에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 서열 식별 번호: 355 및 356으로 이루어진 군에서 선택되는 최소한 하나의 아미노산 서열과 상호작용하는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  31. 청구항 28 또는 청구항 29에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 서열 식별 번호: 354의 잔기 161 내지 188 내 최소한 하나의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  32. 청구항 28 또는 청구항 29에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 서열 식별 번호: 355 또는 서열 식별 번호:356 내 최소한 하나의 아미노산 잔기와 상호작용하는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  33. 청구항 28 또는 청구항 29에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 또는 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 중 하나와, 또는 서열 식별 번호: 354의 173번 위치의 세린 및 서열 식별 번호: 354의 174번 위치의 트레오닌 둘 다와 상호작용하는 것인 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편.
  34. 청구항 1 내지 청구항 21 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 팔리비주맙, 또는 AM-22와 RSV-F에 결합을 놓고 교차경쟁하지 않는 것인 단리된 항체.
  35. 청구항 1 내지 청구항 21항, 또는 청구항 28 내지 청구항 34 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 서열 식별 번호: 354의 아미노산 잔기 255 내지 아미노산 잔기 276에 해당하는 RSV-F 상의 항원결정부에 결합하지 않는 것인 단리된 인간 항체.
  36. 청구항 1 내지 청구항 35 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원-결합 절편을 인코딩하는 단리된 핵산 분자.
  37. 청구항 36의 핵산 분자을 포함하는 발현 벡터.
  38. 청구항 37의 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  39. 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 감염, 또는 RSV 감염과 관련된 최소한 하나의 증상을 예방 또는 치료하기 위한 방법으로, RSV 감염이 예방되고, 또는 상기 감염이 관련된 최소한 하나의 증상이 완화되거나 또는 수 또는 중증도가 감소되도록, 상기 방법이 청구항 1 내지 청구항 35 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 절편을, 또는 청구항 1 내지 청구항 35 중 어느 한 항의 항체 또는 항원-결합 절편을 포함하는 조성물을, 이것을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  40. 청구항 39에 있어서, 상기 투여가 상기 환자의 재발성 천명의 예방을 야기하는 것인 방법.
  41. 청구항 39에 있어서, 상기 투여가 아동의 RSV-관련 천식의 예방을 야기하는 것인 방법.
  42. 청구항 39에 있어서, RSV 감염이 서브타입 A 또는 서브타입 B 호흡기 세포융합 바이러스에 의해 유발되는 것인 방법.
  43. 청구항 39에 있어서, 이 방법을 필요로 하는 환자가 RSV 감염을 얻을 위험이 높은 환자이거나 또는 기저 질환 또는 기존의 질환 때문에 좀 더 중증 형태의 RSV 감염을 경험할 수 있는 환자인 것인 방법.
  44. 청구항 43에 있어서, 상기 환자가 조산아, 만삭아, 기저 질환(예컨대 선천성 심 질환, 만성 폐질환, 낭포성 섬유증, 면역결핍증, 신경근육 장애)이 있거나 또는 없는 만1세 이상의 아동, 보호시설에 수감 중이거나 입원 중인 환자, 또는 기저 질환, 예컨대 울혈성 심부전 또는 만성 폐쇄성 폐 질환이 있거나 없는 노년층(만 65세 초과)인 것인 방법.
  45. 청구항 43 또는 청구항 44에 있어서, 상기 환자가 손상된 폐, 심혈관, 신경근육, 또는 면역체계로 야기되는 질환을 앓고 있는 것인 방법.
  46. 청구항 45에 있어서, 상기 질환이 기도 기형, 만성 폐질환, 만성 심 질환, 호흡기 분비물의 취급을 어렵게 만드는 신경근육 질환 및 면역 억제로 이루어진 군에서 선택되는 것인 방법.
  47. 청구항 46에 있어서, 상기 만성 폐질환이 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 낭포성 섬유증 또는 기관지폐이형성증인 것인 방법.
  48. 청구항 46에 있어서, 상기 만성 심 질환이 울혈성 심부전 (CHF) 또는 선천성 심 질환인 것인 방법.
  49. 청구항 46에 있어서, 상기 면역 억제가 중증 복합 면역결핍증 또는 중증 후천성 면역결핍증의 결과이거나, 또는 면역 억제를 야기하는 기타 감염성 질환 또는 암 질환의 결과이거나, 또는 면역억제 약물 요법 또는 방사선 요법을 이용한 치료의 결과인 것인 방법.
  50. 청구항 39에 있어서, 상기의 최소한 하나의 증상이 열, 비충혈, 기침, 식욕 감퇴, 저산소증, 호흡 곤란(가쁜 호흡 또는 숨가쁨), 천명, 무호흡, 탈수증, 음식섭취 곤란 및 정신상태 변화로 이루어진 군에서 선택되는 것인 방법.
  51. 청구항 39에 있어서, 상기 방법을 필요로 하는 상기 환자에게 예방차원에서 또는 치료 차원에서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 투여되는 것인 방법.
  52. 청구항 39에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 정맥내, 근육내, 및 피하로 이루어지는 군에서 선택되는 경로를 통해 투여되는 것인 방법.
  53. 청구항 39에 있어서, 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 두 번째 치료 제제와 병행하여 환자에게 투여되는 것인 방법.
  54. 청구항 53에 있어서, 상기 두 번째 치료 제제가 항바이러스 제제; RSV에 특이적인 백신, 독감 바이러스에 특이적인 백신, 메타뉴모바이러스(MPV)에 특이적인 백신; RSV 항원 또는 메타뉴모바이러스 (MPV) 항원에 특이적인 siRNA; RSV 항원 또는 메타뉴모바이러스(MPV) 항원에 특이적인 두 번째 항체; 항-IL4R 항체, 독감 바이러스 항원에 특이적인 항체, 항-RSV-G 항체 및 NSAID로 이루어진 군에서 선택되는 것인 방법.
  55. 청구항 1 내지 청구항 35 중 어느 한 항의 하나 이상의 단리된 항체 또는 이것의 항원-결합 절편 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  56. 청구항 55에 있어서, 상기 약제학적 조성물을 필요로 하는 환자에게서 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 감염을 예방하는데 사용하기 위한, 또는 RSV 감염을 앓는 환자를 치료하기 위한, 또는 상기 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증을 완화하기 위한 약제학적 조성물로, 상기 감염이 에방되거나 또는 상기 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증이 예방, 완화 또는 중증 및/또는 기간이 축소되는 것인 약제학적 조성물.
  57. 약물을 필요로 하는 환자에게서 호흡기 세포융합 바이러스 (RSV) 감염을 예방하기 위한, RSV 감염을 앓는 환자를 치료하기 위한, 또는 상기 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증을 완화하기 위한 약물의 제조에 청구항 55의 약제학적 조성물의 용도로서, 상기 감염이 예방되거나 또는 상기 감염과 관련된 최소한 하나의 증상 또는 합병증이 예방, 완화 또는 중증도 및/또는 기간이 축소되는 것인 상기 조성물의 용도.
  58. 청구항 56 또는 청구항 57에 있어서, 상기의 약제학적 조성물의 사용을 필요로 하는 환자가 RSV 감염을 얻기 쉬운 고위험군 환자이거나, 또는 기저 질환 또는 기존의 질환 때문에 좀 더 중증 형태의 RSV 감염을 경험할 수 있는 환자인 경우에서의 용도.
  59. 청구항 56 내지 청구항 58 중 어느 한 항에 있어서, 상기의 약제학적 조성물을 필요로 하는 환자가 조산아, 만삭아, 기저 질환(예컨대 선천성 심 질환, 만성 폐질환, 낭포성 섬유증, 면역결핍증, 신경근육 장애)가 있거나 없는 만 1세 이상의 아동, 보호시설에 수감 중이거나 입원 중인 환자, 또는 기저 질환, 예컨대 울혈성 심부전 또는 만성 폐쇄성 폐 질환이 있는 또는 없는 노년층(만 65세 초과)인 경우에서의 용도.
  60. 청구항 59에 있어서, 상기 환자가 손상된 폐, 심혈관, 신경근육 또는 면역체계로 야기되는 질환을 않는 경우에서의 용도.
  61. 청구항 60에 있어서, 상기 질환이 기도 기형, 만성 폐질환, 만성 심 질환, 호흡기 분비물의 취급을 어렵게 만드는 신경근육 질환 및 면역 억제로 이루어진 군에서 선택되는 경우에서의 용도.
  62. 청구항 61에 있어서, 상기 만성 폐질환이 만성 폐쇄성 폐질환(COPD), 낭포성 섬유증, 또는 기관지폐이형성증인 경우에서의 용도.
  63. 청구항 61에 있어서, 상기 만성 심 질환이 울혈성 심부전(CHF) 또는 선천성 심 질환인 경우에서의 용도.
  64. 청구항 61에 있어서, 상기 면역 억제가 중증 복합 면역결핍증 또는 중증 후천성 면역결핍증의 결과이거나, 또는 면역 억제를 야기하는 모든 기타 감염성 질환 또는 암 질환의 결과이거나, 또는 면역 억제 약물 요법 또는 방사선 요법을 이용한 치료의 결과인 경우에서의 용도.
  65. 청구항 56 또는 청구항 57에 있어서, 상기의 최소한 하나의 증상이 열, 비충혈, 기침, 식욕 감퇴, 저산소증, 호흡 곤란(가쁜 호흡 또는 숨가쁨), 천명, 무호흡, 탈수증, 음식섭취 곤란 및 정신상태 변화로 이루어진 군에서 선택되는 경우에서의 용도.
  66. 청구항 56 또는 청구항 57에 있어서, 상기 약제학적 조성물을 필요로 하는 환자에게 예방차원에서 또는 치료차원에서 상기 항체 또는 이것의 항원-결합 절편이 투여되는 경우에서의 용도.
  67. 청구항 56 또는 청구항 57에 있어서, 상기 조성물이 정맥내, 근육내, 및 피하로 이루어진 군에서 선택되는 경로를 통해 투여되는 경우에서의 용도.
  68. 청구항 56 또는 청구항 57에 있어서, 상기 조성물이 두 번째 치료 제제와 병행하여 환자에게 투여되는 경우에서의 용도.
  69. 청구항 68에 있어서, 항바이러스 제제; RSV에 특이적인 백신, 독감 바이러스에 특이적인 백신, 또는 메타뉴모바이러스(MPV)에 특이적인 백신; RSV 항원 또는 메타뉴모바이러스(MPV) 에 특이적인 siRNA; RSV 항원 또는 메타뉴모바이러스 (MPV) 항원에 특이적인 두 번째 항체; 항-IL4R 항체, 독감 바이러스 항원에 특이적인 항체, 항-RSV-G 항체 및 NSAID로 이루어진 군에서 선택되는 경우에서의 용도.
  70. 서열 식별 번호: 354의 약 161번 위치 내지 약 188번 위치에 해당하는 아미노산 서열 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 면역성 조성물.
  71. 서열 식별 번호: 355 및/또는 서열 식별 번호: 356의 아미노산 서열 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 면역성 조성물.
  72. 청구항 70 또는 청구항 71에 있어서, 아쥬반트를 추가로 포함하는 면역성 조성물.
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MY (1) MY174772A (ko)
PH (1) PH12015501558B1 (ko)
SG (2) SG10201610336QA (ko)
TW (1) TWI659968B (ko)
UY (1) UY35416A (ko)
WO (1) WO2014159822A2 (ko)
ZA (1) ZA201504952B (ko)

Families Citing this family (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI659968B (zh) 2013-03-14 2019-05-21 再生元醫藥公司 針對呼吸道融合病毒ｆ蛋白質的人類抗體及其使用方法
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
KR20170093120A (ko) 2014-10-10 2017-08-14 아블린쓰 엔.브이. Rsv 감염의 치료 방법
RU2700650C2 (ru) 2014-10-10 2019-09-18 Аблинкс Н.В. Игаляционное устройство для использования в аэрозольной терапии респираторных заболеваний
US9340604B1 (en) * 2014-10-29 2016-05-17 Aridis Pharmaceuticals, Inc. Human monoclonal antibody specific for the F protein of respiratory syncytial virus (RSV)
US20180171125A1 (en) 2015-06-25 2018-06-21 Sabic Global Technologies B.V. Polymer composition comprising linear low-density polyethylene
CA2991156A1 (en) * 2015-07-02 2017-01-05 Spring Bank Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of viral infection
TW202340452A (zh) 2015-08-04 2023-10-16 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法
JO3555B1 (ar) 2015-10-29 2020-07-05 Merck Sharp & Dohme جسم مضاد يبطل فعالية فيروس الالتهاب الرئوي البشري
CN106496324B (zh) * 2015-11-30 2020-01-14 天津昊免生物技术有限公司 一种抗呼吸道合胞病毒的全人源抗体
EP3504328A1 (en) 2016-08-24 2019-07-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Host cell protein modification
KR20190103147A (ko) 2016-10-21 2019-09-04 아디맵 엘엘씨 항-호흡기 세포융합 바이러스 항체, 그리고 이의 생성 방법 및 사용 방법
WO2018075974A2 (en) 2016-10-21 2018-04-26 Adimab, Llc Anti-respiratory syncytial virus antibodies, and methods of their generation and use
JP7265984B2 (ja) 2016-10-21 2023-04-27 アディマブ， エルエルシー 抗呼吸器合胞体ウイルス抗体、及び、それらの生成及び使用の方法
US10259865B2 (en) 2017-03-15 2019-04-16 Adma Biologics, Inc. Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection
MX2020000228A (es) 2017-07-06 2020-08-10 Regeneron Pharma Proceso de cultivo celular para producir una glicoproteina.
CA3075510A1 (en) * 2017-10-13 2019-04-18 Adimab, Llc Anti-respiratory syncytial virus antibodies, methods of their generation and use
EP3727629A1 (en) 2017-12-22 2020-10-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. System and method for characterizing drug product impurities
JP2021512600A (ja) * 2018-01-31 2021-05-20 ザ ウィスター インスティテュート オブ アナトミー アンド バイオロジー 呼吸器合胞体ウイルスに対して使用するための核酸抗体構築物
JP7349998B2 (ja) 2018-01-31 2023-09-25 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド サイズバリアントおよび電荷バリアントである薬物製品不純物を特徴解析するためのシステムおよび方法
TWI786265B (zh) 2018-02-02 2022-12-11 美商再生元醫藥公司 用於表徵蛋白質二聚合之系統及方法
MX2020008988A (es) 2018-02-28 2020-09-28 Regeneron Pharma Sistemas y metodos para la identificacion de contaminantes virales.
CN111868085A (zh) 2018-03-19 2020-10-30 瑞泽恩制药公司 微芯片毛细管电泳测定法及试剂
TW202016125A (zh) 2018-05-10 2020-05-01 美商再生元醫藥公司 用於定量及調節蛋白質黏度之系統與方法
KR20210052389A (ko) 2018-08-27 2021-05-10 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 다운스트림 정제에서의 라만 분광법의 사용
EA202190032A1 (ru) 2018-08-30 2021-03-12 Ридженерон Фармасьютикалз, Инк. Способы определения характеристик белковых комплексов
WO2020124846A1 (zh) * 2018-12-18 2020-06-25 珠海泰诺麦博生物技术有限公司 抗呼吸道合胞病毒的中和抗体及其应用
KR20210114926A (ko) 2019-01-16 2021-09-24 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 단백질 내에서 유리 티올을 식별하는 방법
CN111606993B (zh) * 2019-02-26 2022-06-28 中国科学院上海生命科学研究院 抗呼吸道合胞病毒的全人广谱中和抗体4f1及其应用
JP2022532503A (ja) 2019-05-13 2022-07-15 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 改善された競合的リガンド結合アッセイ
JP2022548394A (ja) 2019-09-24 2022-11-18 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド クロマトグラフィーの使用および再生のためのシステムおよび方法
JP2023502500A (ja) 2019-11-25 2023-01-24 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 非水性エマルションを使用した持続放出製剤
IL303596A (en) 2020-01-21 2023-08-01 Regeneron Pharma Deglycosylation methods for electrophoresis of glycosylated proteins
BR112023003273A2 (pt) 2020-08-31 2023-05-02 Regeneron Pharma Estratégias de alimentação de asparagina para melhorar desempenho da cultura celular e mitigar variantes da sequência de asparagina
US20220160828A1 (en) 2020-11-25 2022-05-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sustained release formulations using non-aqueous membrane emulsification
CN116710124A (zh) 2020-12-17 2023-09-05 瑞泽恩制药公司 包封蛋白质的微凝胶的制造
KR20230134117A (ko) 2021-01-20 2023-09-20 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 세포 배양물에서 단백질 역가를 개선시키는 방법
BR112023017442A2 (pt) 2021-03-03 2023-09-26 Regeneron Pharma Métodos para identificar regiões em uma proteína e para modificar a viscosidade de uma droga proteica, e, droga proteica
MX2023010794A (es) 2021-03-26 2023-10-25 Regeneron Pharma Metodos y sistemas para el desarrollo de protocolos de mezcla.
IL308864A (en) 2021-06-01 2024-01-01 Regeneron Pharma In-house capillary electrophoresis tests and reagents
US20230077710A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. HIGH-THROUGHPUT AND MASS-SPECTROMETRY-BASED METHOD FOR QUANTITATING ANTIBODIES AND OTHER Fc-CONTAINING PROTEINS
TW202328179A (zh) 2021-09-20 2023-07-16 美商再生元醫藥公司 控制抗體異質性之方法
US20230116199A1 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods of ph modeling and control
TW202331252A (zh) 2021-10-07 2023-08-01 美商再生元醫藥公司 Ｐｈ計校準與校正
IL312372A (en) 2021-10-26 2024-06-01 Regeneron Pharma Systems and methods for producing laboratory water and dispersing laboratory water at different temperatures
US20230296559A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for analyzing polypeptide variants
US20240198253A1 (en) 2022-12-16 2024-06-20 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and systems for assessing chromatographic column integrity

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001051673A1 (en) * 1999-07-09 2001-07-19 Trimeris, Inc. Methods and compositions for inhibition of membrane fusion-associated events, including hiv transmission
JP2002543822A (ja) * 1999-05-18 2002-12-24 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション ヒトモノクローナル抗体
JP2013501527A (ja) * 2009-08-13 2013-01-17 クルセル ホランド ベー ヴェー ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ｒｓｖ）に対する抗体および使用方法

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5824307A (en) 1991-12-23 1998-10-20 Medimmune, Inc. Human-murine chimeric antibodies against respiratory syncytial virus
DK0671927T3 (da) 1992-09-16 2003-04-22 Us Gov Health & Human Serv Neutraliserende humane monoklonale antistoffer mod respiratorisk syncytialvirus
US5811524A (en) 1995-06-07 1998-09-22 Idec Pharmaceuticals Corporation Neutralizing high affinity human monoclonal antibodies specific to RSV F-protein and methods for their manufacture and therapeutic use thereof
WO1997010846A1 (en) 1995-09-18 1997-03-27 Intracel Corporation Neutralizing monoclonal antibodies to respiratory syncytial virus
ATE474854T1 (de) 2000-01-27 2010-08-15 Medimmune Llc Rsv neutralisierende antikörper mit sehr hohen affinität
CA2401652A1 (en) 2000-03-01 2001-09-07 Medimmune, Inc. High potency recombinant antibodies and method for producing them
US6855493B2 (en) * 2000-11-28 2005-02-15 Medimmune, Inc. Methods of administering/dosing anti-RSV antibodies for prophylaxis and treatment
WO2006041970A2 (en) 2004-10-08 2006-04-20 Abbott Biotechnology Ltd. Treatment of respiratory syncytial virus (rsv) infection
KR20080113223A (ko) * 2006-03-06 2008-12-29 심포젠 에이/에스 호흡기세포 융합 바이러스 감염 치료용 재조합 폴리클로날 항체
EP1997830A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 AIMM Therapeutics B.V. RSV specific binding molecules and means for producing them
CA2703667C (en) 2007-10-25 2015-12-29 Lawrence M. Kauvar Anti-rsv g protein antibodies
US8852608B2 (en) * 2009-02-02 2014-10-07 Medimmune, Llc Antibodies against and methods for producing vaccines for respiratory syncytial virus
US20120164176A1 (en) 2009-07-15 2012-06-28 Kurt Swanson Rsv f protein compositions amd methods for making same
US20110097358A1 (en) 2009-10-12 2011-04-28 Techno Vax, Inc. RESPIRATORY SYNCYTIAL VIRUS (RSV) VIRUS-LIKE PARTICLES (VLPs)
CN102850454B (zh) * 2011-09-27 2014-06-25 上海博沃生物科技有限公司 抗呼吸道合胞病毒的人单克隆抗体
US9498531B2 (en) 2012-03-20 2016-11-22 Humabs Biomed Sa Antibodies that neutralize RSV, MPV and PVM and uses thereof
ES2778899T3 (es) 2013-02-01 2020-08-12 Medimmune Llc Epítopos de proteína F del virus sincitial respiratorio
TWI659968B (zh) 2013-03-14 2019-05-21 再生元醫藥公司 針對呼吸道融合病毒ｆ蛋白質的人類抗體及其使用方法
WO2015010792A1 (en) 2013-07-24 2015-01-29 Humabs Biomed Sa Antibodies that potently neutralize rsv and uses thereof

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002543822A (ja) * 1999-05-18 2002-12-24 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション ヒトモノクローナル抗体
WO2001051673A1 (en) * 1999-07-09 2001-07-19 Trimeris, Inc. Methods and compositions for inhibition of membrane fusion-associated events, including hiv transmission
JP2013501527A (ja) * 2009-08-13 2013-01-17 クルセル ホランド ベー ヴェー ヒト呼吸器合胞体ウイルス（ｒｓｖ）に対する抗体および使用方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Journal of Molecular Biology, Vol. 368, pp. 652-665(2007.04.06.) *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105050622B (zh) 2018-10-23
US9447173B2 (en) 2016-09-20
CA2904995A1 (en) 2014-10-02
US10125188B2 (en) 2018-11-13
NZ710829A (en) 2021-01-29
WO2014159822A3 (en) 2015-01-08
TW201444866A (zh) 2014-12-01
SG11201505338RA (en) 2015-08-28
EA201591771A1 (ru) 2016-06-30
JP2016512554A (ja) 2016-04-28
AU2014244411A1 (en) 2015-08-20
MX360253B (es) 2018-10-26
EP2968534B1 (en) 2019-02-27
HK1220372A1 (zh) 2017-05-05
MY174772A (en) 2020-05-14
EA034767B1 (ru) 2020-03-18
CL2015002570A1 (es) 2016-07-29
WO2014159822A2 (en) 2014-10-02
KR102211907B1 (ko) 2021-02-05
UY35416A (es) 2014-10-31
IL240067A0 (en) 2015-09-24
JP6537492B2 (ja) 2019-07-03
PH12015501558A1 (en) 2015-09-21
CN105050622A (zh) 2015-11-11
AU2014244411B2 (en) 2018-04-19
US20140271653A1 (en) 2014-09-18
BR112015019066A2 (pt) 2017-08-22
ZA201504952B (en) 2016-07-27
US20190031741A1 (en) 2019-01-31
TWI659968B (zh) 2019-05-21
PH12015501558B1 (en) 2015-09-21
MX2015009416A (es) 2015-10-05
US20170029488A1 (en) 2017-02-02
SG10201610336QA (en) 2017-01-27
EP2968534A2 (en) 2016-01-20

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