JP2016512554A - 呼吸器合胞体ウイルスｆタンパク質に対するヒト抗体及びその使用方法 - Google Patents

呼吸器合胞体ウイルスｆタンパク質に対するヒト抗体及びその使用方法 Download PDF

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Abstract

本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質に結合する、完全ヒト抗体、該抗体を含む組成物及びその使用方法を提供する。本発明の抗体は、このウイルスが細胞と融合することを防止し、このウイルスが細胞から細胞へ拡散することを防止するのに有用であり、それによって、感染の予防、または感染患者の治療及びウイルス感染に付随する１または２以上の徴候もしくは合併症の緩和の手段を提供する。この抗体はまた、ＲＳＶによる感染の診断にも有用であり得る。【選択図】なし

Description

本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）と特異的に結合するヒト抗体及びヒト抗体の抗原結合フラグメント、このような抗体を含む組成物及びこのような抗体の用法に関する。
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）は、乳幼児及び小児における重篤な呼吸器感染症の主な原因であるマイナス・センス、一本鎖ＲＮＡウイルスの一種であり、当該感染症は、院内感染の時期に生後６週間〜２歳の小児に初感染として発生するが、生後４週間以内の小児にはまれである（非特許文献１）。（非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５）。特定の小児の集団にはＲＳＶ感染症の発症リスクがみられ、このような集団には早産児（非特許文献６）、気道の先天性奇形の小児、気管支肺異形成症の小児（非特許文献７）、先天性心疾患の小児（非特許文献８）のほか、先天性または後天性免疫不全（非特許文献９；及び非特許文献１０）及び嚢胞性線維症の小児が含まれる（非特許文献１１）。
ＲＳＶは成人集団にも感染し得る。成人集団では、ＲＳＶは主に上気道感染症を引き起こし、高齢患者には深刻な感染症及び肺炎の高リスクがみられるが、（非特許文献１２）、同様のリスクが特に骨髄移植患者など、免疫抑制を受けている成人においてもみられ得る（非特許文献１３）。このほか、うっ血性心不全に罹患している患者及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤなど）に罹患している患者もリスク集団に含まれる。また、介護施設の患者内及び入所施設の若年成人集団内での感染の流行も報告されている（非特許文献１４；及び非特許文献１５）。
確定診断されたＲＳＶ疾患に対する治療的選択肢は少なく、下気道のＲＳＶ疾患のきわめて重症型に対しては、加湿酸素及び呼吸補助の使用などの相当な支持療法が必要となることが多い（非特許文献１６）。
この感染症の治療のために承認されている唯一の薬剤であるリバビリンは、これまでにＲＳＶ感染関連の肺炎及び細気管支炎の治療に有効であるほか、免疫正常小児における重篤なＲＳＶ疾患の経過を改善することが示されている（非特許文献１７）。リバビリンは、病院環境での投与の間にリバビリンのエアロゾル化剤に曝露されるかもしれないという、妊娠女性に対する潜在的リスクのみられる環境への懸念から、使用が制限されている。
同様に、ワクチンも有用であり得るが、市販のワクチンはこれまでに開発されていない。数種のワクチン対象が断念されており、その他は開発中である（非特許文献１８）。ワクチン開発には問題の多いことが証明されている。特に、免疫処置は、下気道疾患の発生率のピークが２〜５月齢で生じるため、既に新生児期から必要であると思われる。しかし、この時期の新生児の免疫応答は未熟であることが知られている。加えて、この時期の新生児は、未だ母方から獲得した高力価のＲＳＶ抗体を保持しているため、これがワクチンの免疫原性を低減させる可能性がある（非特許文献１９；及び非特許文献２０）。
ＲＳＶの表面上の２種の糖タンパク質Ｆ及びＧは、中和抗体の標的であることが示されている（非特許文献１６及び非特許文献１８）。また、この２種のタンパク質は、主にウイルス認識及び標的細胞への侵入にも関与する。Ｇタンパク質は特定の細胞受容体と結合し、Ｆタンパク質はウイルスと細胞との融合を促進する。Ｆタンパク質はまた、感染した細胞の表面で発現し、その後の合胞体の形成につながる他の細胞との融合及び細胞間のウイルス拡散に関与する。
現在、唯一承認されているＲＳＶ疾患に対する予防的アプローチは、受動免疫処置である。例えば、ヒト化抗体であるパリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標））は、Ｆタンパク質上のエピトープに特異的であり、ＲＳＶによって引き起こされる重篤な下気道疾患の予防のため、ＲＳＶの時期（北半球では１１月から４月）を通じ、推奨される１５ｍｇ／体重ｋｇの月用量で小児患者に筋注投与することが承認されている。ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）は、ヒト（９５％）及びマウス（５％）抗体配列の複合体である（非特許文献２１及び特許文献１）。
ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）は、小児患者におけるＲＳＶ感染症の予防に首尾よく使用されてきたが、予防効果を達成するためには１５ｍｇ／ｋｇのＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）を複数回の筋注投与が必要である。抗体を複数回筋注投与する必要性により、診療所を何度も訪れることが必要となり、患者にとって不便であるばかりでなく、投与を逸することになり得る。
このため、抗−ＲＳＶ−Ｆ抗体の治療的プロフィールの改善に向けた努力が行われ、このことが、モタビズマブ、別名ＮＵＭＡＸ（商標）の同定及び開発をもたらした。しかし、臨床試験からモタビズマブを投与した一部の患者に重篤な過敏症反応が認められたことが明らかになった。このため、このヒト化抗−ＲＳＶ−Ｆ抗体の今後の開発は中止された。
ＲＳＶ−Ｆタンパク質に対するその他の抗体に関する説明は、以下に記載されている：特許文献２〜特許文献３８。これまでに、ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）以外では、ＲＳＶ感染症を予防する用途で規制当局の承認を受けた薬剤はない。
このため、ＲＳＶ−ＦなどのＲＳＶ抗原と特異的に結合し、高力価であり、臨床使用の承認の妨げとなるような有害作用をもたらさない抗体が、未だに必要とされている。
米国特許第５，８２４，３０７号明細書 ＵＳ６６５６４６７ ＵＳ５８２４３０７ ＵＳ７７８６２７３ ＵＳ７６７０６００ ＵＳ７０８３７８４ ＵＳ６８１８２１６ ＵＳ７７００７３５ ＵＳ７５５３４８９ ＵＳ７３２３１７２ ＵＳ７２２９６１９ ＵＳ７４２５６１８ ＵＳ７７４０８５１ ＵＳ７６５８９２１ ＵＳ７７０４５０５ ＵＳ７６３５５６８ ＵＳ６８５５４９３ ＵＳ６５６５８４９ ＵＳ７５８２２９７ ＵＳ７２０８１６２ ＵＳ７７００７２０ ＵＳ６４１３７７１ ＵＳ５８１１５２４ ＵＳ６５３７８０９ ＵＳ５７６２９０５ ＵＳ７０７０７８６ ＵＳ７３６４７４２ ＵＳ７８７９３２９ ＵＳ７４８８４７７ ＵＳ７８６７４９７ ＵＳ５５３４４１１ ＵＳ６８３５３７２ ＵＳ７４８２０２４ ＵＳ７６９１６０３ ＵＳ８５６２９９６ ＵＳ８５６８７２６ ＵＳ２０１０００１５５９６ ＷＯ２００９０８８１５９Ａ１
Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３００：３９３−３９６ Ｆｅｉｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７，Ｉｎ：Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｗ Ｂ Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ １６５３−１６７５頁 Ｎｅｗ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｐｒｉｏｒｉｔｉｅｓ，Ｖｏｌ．１，１９８５，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．３９７−４０９頁 Ｒｕｕｓｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｐｅｄｉａｔｒ．２３：５０−７９ Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３００：３９３−３９６ Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３００：３９３−３９６ Ｇｒｏｏｔｈｕｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ ８２：１９９−２０３ ＭａｃＤｏｎａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３０７：３９７−４００ Ｏｇｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｊ．７：２４６−２４９ Ｐｏｈｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６５：１６６−１６９ Ａｂｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１１３：８２６−８３０ Ｅｖａｎｓ，Ａ．Ｓ．，ｅｄｓ．，１９８９，Ｖｉｒａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，３rd ｅｄ．，Ｐｌｅｎｕｍ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｏｏｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ５２５−５４４頁 Ｈｅｒｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６８：２６９−２８１ Ｆａｌｓｅｙ，Ａ．Ｒ．，１９９１，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｈｏｓｐ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１２：６０２−６０８ Ｇａｒｖｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．２８１：１２５３−１２５４ Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，１９９０，Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２nd ｅｄ．，Ｖｏｌ．１，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １０４５−１０７２頁 Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ． ３２５：２４−２９ Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ．３２：１３−３６ Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：３９０７−３９１０ Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｖａｃｃｉｎｅ ９：１８５−１８９ Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９７），Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓｅａｓｅｓ １７６：１２１５−１２２４
本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する、単離された完全ヒトモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）及びその抗原結合断片を提供する。Ｆタンパク質は、このウイルスが細胞と融合し、このウイルスが細胞と細胞の間を伝染する際に役割を果たすので、ここに記載する抗体は、この過程を阻害する方法を提供するものであり、したがって、ＲＳＶにさらされた患者もしくはＲＳＶに感染するリスクのある患者が感染することを予防するため、またはＲＳＶにさらされた患者もしくはＲＳＶに感染するリスクのある患者もしくはＲＳＶに感染した患者における、ＲＳＶ感染に伴う１または２以上の徴候を治療し及び／もしくは軽減するために用いることができる。ここに記載する抗体はまた、基礎疾患または既存の症状に起因してＲＳＶ感染のより重篤な形態を経験するかもしれない患者においてＲＳＶ感染を予防しまたは治療するために用いることができる。本発明の抗体での治療により利益を受けるかもしれない患者は、ＲＳＶシーズン（およそ晩秋（１１月）から早春（４月）の間に生まれた、先天性心疾患または慢性肺疾患を包含する、既存の症状または基礎疾患の故にリスクのある早期産児、正期産児、基礎疾患をもつまたはもたない１歳超の子供、施設収容患者もしくは入院患者、またはうっ血性心不全（ＣＨＦ）もしくは慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）等の基礎疾患を有するもしくは有しない高齢者（６５歳を超える者）である。このような治療から利益を得るかもしれない患者は、肺系統、心血管系、筋神経系、または免疫系の欠陥に起因する症状を有し得る。例えば、該患者は、気道の異常もしくは気道機能不全、慢性肺疾患、慢性もしくは先天性心疾患または呼吸分泌の取扱を不全にする筋神経疾患患者であり得、または該患者は重症複合免疫不全疾患もしくは後天的免疫不全疾患、もしくは他の何らかの基礎感染疾患もしくは免疫抑制状態を引き起こす癌状態に起因して免疫抑制状態にあり得、または該患者は、免疫抑制剤（例えば移植患者の処置に用いられるいずれかの薬剤）による処置もしくは放射線治療に起因して免疫抑制状態にあり得る。本発明の抗体から利益を受け得る患者は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、気管支肺異形成症、うっ血性心不全（ＣＨＦ）または先天性心疾患を罹患している患者であり得る。
本発明の抗体は、ＲＳＶの中和について公知の抗体よりも有効であるので、少ない投与量の抗体または抗体断片を用いて、ＲＳＶの感染に対するより大きな保護、並びにＲＳＶ感染に付随する徴候のより効果的な治療及び／または緩和を達成することができる。したがって、ＲＳＶ−Ｆ抗原に免疫特異的に結合する抗体またはその断片のより少ない投与量を用いて、より少ないまたはより小さい副作用をもたらすことが可能である。同様に、より高い中和抗体を用いることにより、感染の予防またはウイルス中和、またはＲＳＶ感染に付随する１もしくは２以上の徴候の治療もしくは緩和のために必要であるとこれまで考えられていたよりも、抗体または抗体断片の頻繁な投与の必要性が減少し得る。ＲＳＶ感染の徴候は、酸素欠乏に起因する青い皮膚色（低酸素症）、呼吸困難（速い呼吸または呼吸の短さ）、咳、クループ性の咳（「シールバーク」（“ｓｅａｌ ｂａｒｋ”）咳）、熱、鼻孔の開き、鼻詰まり（鼻閉）、無呼吸、食欲減退、脱水症状、食欲不振、異常な精神状態または喘鳴を包含し得る。
このような抗体は、予防的に投与（ウイルスに対する曝露及びウイルス感染の前）すると重篤性を減少し、またはＲＳＶによる一次感染の期間を短くし、または感染に付随する少なくとも１の徴候の緩和に有用であり得る。抗体は、単独で用いてもよいし、ＲＳＶ感染の治療に有用な第２の剤と共に用いてもよい。ある実施形態では、抗体は、単独で、または第２の剤と共に、治療的に投与（ウイルスに対する曝露及びウイルス感染の後）して重篤性を減少させ、または一次感染の期間を短くし、または感染に付随する少なくとも１の徴候を緩和することができる。ある実施形態では、抗体は、ＲＳＶに感染するリスクのある、上記したような患者を保護するために単独治療として予防的に用いることができる。これらの患者集団のいずれも、本発明の抗体を単独で、または、例えば、リバビリンもしくは他の抗ウイルスワクチンのような抗ウイルス治療を包含する第２の剤と共に投与すると、本発明の抗体での治療から利益を受け得る。
本発明の抗体は、全長（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体）であり得、または抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2もしくはｓｃＦｖ断片）のみを含んでいてもよく、機能に影響するように、例えば、残存するエフェクター機能を排除するように修飾してもよい（Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．，（２０００），Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５−１９３３）。
従って、第一の態様において、本発明は呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
一つの実施形態において、本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供し、ここで該抗体は下記特徴のうちの１以上を有する：
（ａ）完全ヒトモノクローナル抗体である；
（ｂ）配列番号３５４の約１６１位〜約１８８位のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列と相互作用する；
（ｃ）配列番号３５４の１７３位のセリン、もしくは配列番号３５４の１７４位のスレオニンのいずれかと、または配列番号３５４の１７３位のセリン及び配列番号３５４の１７４位のスレオニンの両者と相互作用する；
（ｄ）呼吸器合胞体ウイルスサブタイプＡ及びサブタイプＢ系統をインビトロで中和できる；
（ｅ）ＲＳＶ感染の動物モデルにおいて、鼻及び／または肺のウイルス量をインビボで有意に低減する能力を示す；または
（ｆ）ウイルスの細胞への融合を阻害する。
一つの実施形態において、本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供し、ここで該抗体は、配列番号３５４の約１６１位〜約１８８位のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列と相互作用する。
一つの実施形態において、抗体は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であり、ここで該抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３５４の約１６１位〜約１８８位のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列と相互作用し、該抗体は、呼吸器合胞体ウイルスサブタイプＡ及び／またはサブタイプＢ系統をインビトロ及びインビボで中和する。
一つの実施形態において、本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）と特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供し、ここで該抗体またはその抗原結合性断片は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約０．１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した場合に、マウスＲＳＶ感染モデルにおいて肺のウイルス量を有意に低減する能力を示す。
一つの実施形態において、本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供し、ここで該抗体またはその抗原結合性断片は、約０．６２ｍｇ／ｋｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した場合に、コットンラットＲＳＶ感染モデルにおいて、パリビズマブ（ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）と比べて対数値で１〜２高い鼻及び／または肺のウイルス力価の減少度を示す。
一つの実施形態において、本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供し、ここで該抗体またはその抗原結合性断片は、マウスＲＳＶサブタイプＡ感染モデルにおいて投与した場合に約０．１５ｍｇ／ｋｇ以下のＥＤ99を示す。
一つの実施形態において、本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供し、ここで該抗体またはその抗原結合性断片は、コットンラットＲＳＶサブタイプＡ感染モデルにおいて投与した場合に約０．６２ｍｇ／ｋｇ以下のＥＤ99を示す。
一つの実施形態において、本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片を提供し、ここで該抗体またはその抗原結合性断片は、コットンラットＲＳＶサブタイプＢ感染モデルにおいて投与した場合に約２．５ｍｇ／ｋｇ以下のＥＤ99を示す。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、パリビズマブまたはモタビズマブ（ｍｏｔａｖｉｚｕｍａｂ）のＥＤ99よりも約２〜３倍低いＥＤ99を示す。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、ＲＳＶサブタイプＡ系統に特異的なマイクロ中和アッセイにおいて約２ｐＭ〜約６００ｐＭの半数阻害濃度（ＩＣ50）を示す。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、ＲＳＶサブタイプＢ系統に特異的なマイクロ中和アッセイにおいて約６ｐＭ〜約１００ｐＭの半数阻害濃度（ＩＣ50）を示す。
一つの実施形態において、ＲＳＶ−Ｆタンパク質に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、１種以上のＲＳＶサブタイプＡ実験室株に対してパリビズマブよりも約１５〜１７倍向上した中和力を示すか、または、１種以上のＲＳＶサブタイプＡ臨床株に対してパリビズマブよりも約１０〜２２倍向上した中和力を示す。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、１種以上のＲＳＶサブタイプＢ実験室株に対してパリビズマブよりも約２〜５倍向上した中和力を示す。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、１種以上のＲＳＶサブタイプＡ実験室株またはサブタイプＡ臨床株に対してＡＭ−２２よりも約０．５〜２倍向上した中和力を示す。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片は、１種以上のＲＳＶサブタイプＢ実験室株に対してＡＭ−２２よりも約２．５〜１７倍向上した中和力を示す。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、表面プラズモン共鳴による測定値で１Ｘ１０-7Ｍ〜６Ｘ１０-10ＭのＫDを示す。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、表面プラズモン共鳴による測定値で１Ｘ１０-7Ｍ〜９Ｘ１０-9ＭのＫDを示す。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２及び３３８からなる群より選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列中に含まれる３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）と、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０及び３４６からなる群より選択されるＬＣＶＲアミノ酸配列中に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）とを含む。
ＨＣＶＲ及びＬＣＶＲのアミノ酸配列中のＣＤＲを同定するための方法及び技術はこの分野で周知であり、本明細書において開示される特定のＨＣＶＲ及び／またはＬＣＶＲのアミノ酸配列中のＣＤＲを同定するために用いることができる。ＣＤＲの境界を同定するために使用可能な従来法の典型例としては、例えば、Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義、及びＡｂＭの定義が挙げられる。一般論として、Ｋａｂａｔの定義は配列の変動性に基づいており、Ｃｈｏｔｈｉａの定義は構造的ループ領域の位置に基づいており、ＡｂＭの定義はＫａｂａｔとＣｈｏｔｈｉａのアプローチを折衷したものである。例えば、Ｋａｂａｔ，“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ．（１９９１）；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７−９４８；及びＭａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８９），Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：９２６８−９２７２を参照。公共のデータベースも抗体中のＣＤＲ配列の同定に利用可能である。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２及び３３８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０及び３４６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２及び３３８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）と、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０及び３４６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）とを含む。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号３６３の重鎖アミノ酸配列と、配列番号３６４の軽鎖アミノ酸配列とを含む。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０及び３３８／３４６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号２７４／２８２及び３３８／３４６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、及び３４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；並びに
（ｂ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６及び３５２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、
（ｃ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４及び３４０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｄ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６及び３４２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｅ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２及び３４８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；並びに
（ｆ） 配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４及び３５０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン
をさらに含む。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４及び３４０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６及び３４２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、及び３４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２及び３４８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４及び３５０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；並びに
（ｆ） 配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６及び３５２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む。
一つの実施形態において、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号２７６及び３４０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）配列番号２７８及び３４２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号２８０及び３４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号２８４及び３４８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号２８６及び３５０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；並びに
（ｆ）配列番号２８８及び３５２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む。
一実施形態では、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する単離ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号２７６、２７８及び２８０のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列のほか、それぞれ配列番号２８４、２８６及び２８８のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する単離ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、それぞれ配列番号３４０、３４２及び３４４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３アミノ酸配列のほか、それぞれ配列番号３４８、３５０及び３５２のＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
一実施形態では、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）と特異的に結合する単離ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０及び３３８／３４６からなる群より選択される重鎖及び軽鎖配列ペアを含有する抗体または抗原結合フラグメントとＲＳＶ−Ｆとの特異的な結合に競合する。
一実施形態では、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０及び３３８／３４６からなる群より選択される重鎖及び軽鎖配列ペアを含有し、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）と特異的に結合する単離ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ＲＳＶ−Ｆとパリビズマブ、モタビズマブまたはＡＭ−２２との特異的な結合に競合しない。
一実施形態では、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）と特異的に結合する単離ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０及び３３８／３４６からなる群より選択される重鎖及び軽鎖配列ペアを含有する抗体によって認識されるＲＳＶ−Ｆ上の同じエピトープに結合する。
一実施形態では、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０及び３３８／３４６からなる群より選択される重鎖及び軽鎖配列ペアを含有し、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）と特異的に結合する単離ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントは、ＲＳＶ−Ｆ上でパリビズマブまたはモタビズマブと同じエピトープには結合しない。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、該抗体またはそのフラグメントは、以下の特徴の１つまたは複数を呈する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２及び３３８からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＨＣＶＲを含有し；（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０及び３４６からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＬＣＶＲを含有し；（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８及び３４４からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；及び配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６及び３５２からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含有し；（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４及び３４０からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；（ｖ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６及び３４２からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；（ｖｉ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２及び３４８からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；（ｖｉｉ）及び配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４及び３５０からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン含有し；（ｖｉｉｉ）表面プラズモン共鳴による測定で約１Ｘ１０-7Ｍから約６Ｘ１０-10Ｍの範囲のＫDを示し；（ｉｘ）ｉｎ ｖｉｔｒｏで呼吸器合胞体ウイルスサブタイプＡ及び／またはサブタイプＢ株の中和を可能にし；（ｘ）約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約０．１５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与した場合に、ＲＳＶ感染症のマウスモデルにおけるウイルス量を有意に減少させる能力を示し；（ｘｉ）約０．６２ｍｇ／ｋｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で、ＲＳＶ感染症のコットンラットモデルにおける鼻及び／または肺のウイルス価が、パリビズマブよりも１〜２ｌｏｇ上回る減少を示し；（ｘｉｉ）ＲＳＶ感染症の動物モデル（マウスモデルまたはコットンラットモデルなど）に投与した場合、約０．１５ｍｇ／ｋｇ〜約２．５ｍｇ／ｋｇの範囲の有効量９９（ＥＤ99）を示し；または（ｘｉｉｉ）ＲＳＶのＲＳＶサブタイプＡ株に特異的なマイクロ中和アッセイにおける約２ｐＭ〜約１５ｐＭの半数阻害濃度（ＩＣ50）及びマイクロ中和アッセイにおける約６ｐＭ〜約１００ｐＭの半数阻害濃度（ＩＣ50）を示す。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、該抗体またはそのフラグメントは、以下の特徴の１つまたは複数を呈する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２及び３３８からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＨＣＶＲを含有し；（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０及び３４６からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＬＣＶＲを含有し；（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８及び３４４からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；及び配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６及び３５２からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含有し；（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４及び３４０からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；（ｖ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６及び３４２からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；（ｖｉ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２及び３４８からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；（ｖｉｉ）及び配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４及び３５０からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含有し；（ｖｉｉｉ）約１Ｘ１０-7Ｍ〜約６Ｘ１０-10Ｍの範囲のＫDを呈する；（ｉｘ）呼吸器合胞体ウイルスサブタイプＡ及び／またはサブタイプＢ株の中和をｉｎ ｖｉｔｒｏで可能にし；（ｘ）ＲＳＶ感染症の動物モデル（マウスモデルなど）において、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約０．１５ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で投与した場合、ウイルス量を有意に減少させる能力を示し；（ｘｉ）約０．６２ｍｇ／ｋｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇの用量で、ＲＳＶ感染症の動物モデル（コットンラットモデルなど）における鼻及び／または肺のウイルス価が、パリビズマブよりも１〜２ｌｏｇ上回る減少を示し；（ｘｉｉ）ＲＳＶ感染症の動物モデル（マウスモデルまたはコットンラットモデルなど）に投与した場合、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約２．５ｍｇ／ｋｇの範囲の有効量９９（ＥＤ99）を示し；（ｘｉｉｉ）パリビズマブまたはモタビズマブのＥＤ99よりも約２〜３倍少ないＥＤ99を示し；（ｘｉｖ）ＲＳＡの１つまたは複数のサブタイプＡ実験株に対する中和効力が、パリビズマブを約１５〜１７倍上回る改善を示し、またはＲＳＶの１つまたは複数のサブタイプＡ臨床株に対する中和力価が、パリビズマブを約１０〜２２倍上回る改善を示し；（ｘｖ）ＲＳＶの１つまたは複数のサブタイプＢ実験株に対する中和力価が、パリビズマブを約２〜５倍上回る改善を示し；（ｘｖｉ）ＲＳＶの１つまたは複数のサブタイプＡ実験株またはサブタイプＡ臨床株に対する中和力価が、ＡＭ−２２を約０．５〜２倍上回る改善を示し；（ｘｖｉｉ）ＲＳＶの１つまたは複数のサブタイプＢ実験株に対する中和力価が、ＡＭ−２２を約２．５〜１７倍上回る改善を示す。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、該抗体またはそのフラグメントは、以下の特徴の１つまたは複数を呈する：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２及び３３８からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＨＣＶＲを含有し；（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０及び３４６からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＬＣＶＲを含有し；（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、及び３４４からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；及び配列番号：１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６及び３５２からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含有し；（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４及び３４０からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；（ｖ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６及び３４２からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；（ｖｉ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２及び３４８からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；（ｖｉｉ）及び配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４及び３５０からなる群より選択されるアミノ酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含有し；（ｖｉｉｉ）約１Ｘ１０-7Ｍ〜約６Ｘ１０-10Ｍの範囲のＫDを示し；（ｉｘ）呼吸器合胞体ウイルスサブタイプＡ及び／またはサブタイプＢ株の中和をｉｎ ｖｉｔｒｏで可能にし；（ｘ）ＲＳＶ感染症の哺乳類におけるウイルス量を有意に減少させる能力を示し；（ｘｉ）配列番号３５４の約１６１位〜１８８位のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列と相互作用し；（ｘｉｉ）配列番号３５４の１７３位のセリンもしくは配列番号３５４の１７４位のトレオニンのいずれか一方、または配列番号３５４の１７３位のセリン及び配列番号３５４の１７４位のトレオニンの両者と相互作用し；（ｘｉｉｉ）ＲＳＶの宿主細胞への融合を阻害し；（ｘｉｖ）ＲＳＶ−Ｆへの結合に関してパリビズマブまたはＡＭ−２２と交差競合しない。
一実施形態では、本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）と特異的に結合する単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３５４の約１６１位〜約１８８位のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列と相互作用する。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３５５及び３５６からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列と相互作用する。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３５４の残基１６１〜１８８内の少なくとも一つのアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３５５または配列番号３５６内の少なくとも一つのアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３５４の１７３位のセリンもしくは配列番号３５４の１７４位のトレオニンのいずれか一方、または配列番号３５４の１７３位のセリン及び配列番号３５４の１７４位のトレオニンの両者と相互作用する。
一実施形態では、本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）と特異的に結合する単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３５４の約１６１位〜約１８８位のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列と相互作用し、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号２７４の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３種の重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）；及び配列番号２８２の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３種の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含む。
一実施形態では、本発明は、呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）と特異的に結合する単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメントは以下を含む：
（ａ）配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２ドメイン；及び
（ｆ）配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３ドメイン。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、該抗体は、配列番号２７４の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３種のＨＣＤＲ；及び配列番号２８２の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３種の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含有し、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３５５及び３５６からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸配列と相互作用する。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、該抗体は、配列番号２７４の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３種のＨＣＤＲ；及び配列番号２８２の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３種の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含有し、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３５４の残基１６１〜１８８内の少なくとも一つのアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、該抗体は、配列番号２７４の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３種のＨＣＤＲ；及び配列番号２８２の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３種の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含有し、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３５５または配列番号３５６内の少なくとも一つのアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供し、ここで、該抗体は、配列番号２７４の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３種のＨＣＤＲ；及び配列番号２８２の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３種の軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含有し、ここで、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号３５４の１７３位のセリンもしくは配列番号３５４の１７４位のトレオニンのいずれか一方、または配列番号３５４の１７３位のセリン及び配列番号３５４の１７４位のトレオニンの両者と相互作用する。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆへの結合に関してパリビズマブまたはモタビズマブと交差競合しない単離ヒト抗体もしくはその抗原結合フラグメントを提供する。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆへの結合に関してＡＭ−２２と交差競合しない単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆ上でパリビズマブと同じエピトープに結合しない単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆ上でモタビズマブと同じエピトープに結合しない単離ヒト抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する。
一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆ上で配列番号３５４のアミノ酸残基約２５５〜アミノ酸残基約２７６の範囲のエピトープに結合しない単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントを提供する
一実施形態では、単離ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメントは、ＲＳＶ−Ｆ上で配列番号３５４のアミノ酸残基約２５５〜アミノ酸残基約２７６の範囲のパリビズマブと同じエピトープに結合しない。
第二の態様では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する抗体またはそのフラグメントをエンコードする核酸分子を提供する。また、本発明は、本発明の核酸を運搬する組み換え発現ベクター、及びそのようなベクターを内部に導入した宿主細胞も包含し、抗体の製造を可能にする条件下で宿主細胞を培養することによる抗体の製造方法抗体の製造及び製造した抗体の回収方法も包含する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１、１７、３３、４９、６５、８１、９７、１１３、１２９、１４５、１６１、１７７、１９３、２０９、２２５、２４１、２５７、２７３、２８９、３０５、３２１及び３３７からなる群より選択される核酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一の配列によってエンコードされるＨＣＶＲを含有する抗体またはそのフラグメントを提供する。
一実施形態では、ＨＣＶＲは配列番号２７３及び３３７からなる群より選択される核酸配列によってエンコードされる。
一実施形態では、抗体またはそのフラグメントはさらに、配列番号９、２５、４１、５７、７３、８９、１０５、１２１、１３７、１５３、１６９、１８５、２０１、２１７、２３３、２４９、２６５、２８１、２９７、３１３、３２９及び３４５からなる群より選択される核酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の相同性を有する実質的に同一の配列によってエンコードされるＬＣＶＲを含む。
一実施形態では、ＬＣＶＲは、配列番号２８１及び３４５からなる群より選択される核酸配列によってエンコードされる。
一実施形態では、本発明は、また、配列番号：７、２３、３９、５５、７１、８７、１０３、１１９、１３５、１５１、１６７、１８３、１９９、２１５、２３１、２４７、２６３、２７９、２９５、３１１、３２７、及び３４３からなる群より選択される核酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列によってエンコードされるＨＣＤＲ３ドメイン；及び配列番号：１５、３１、４７、６３、７９、９５、１１１、１２７、１４３、１５９、１７５、１９１、２０７、２２３、２３９、２５５、２７１、２８７、３０３、３１９、３３５、及び３５１からなる群より選択される核酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列によってエンコードされるＬＣＤＲ３ドメインを含む抗体または抗体の抗原結合フラグメントを提供する。
一実施形態では、本発明は、さらに、配列番号３、１９、３５、５１、６７、８３、９９、１１５、１３１、１４７、１６３、１７９、１９５、２１１、２２７、２４３、２５９、２７５、２９１、３０７、３２３、及び３３９からなる群より選択される核酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列によってエンコードされるＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号：５、２１、３７、５３、６９、８５、１０１、１１７、１３３、１４９、１６５、１８１、１９７、２１３、２２９、２４５、２６１、２７７、２９３、３０９、３２５、及び３４１からなる群より選択される核酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列によってエンコードされるＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号：１１、２７、４３、５９、７５、９１、１０７、１２３、１３９、１５５、１７１、１８７、２０３、２１９、２３５、２５１、２６７、２８３、２９９、３１５、３３１、及び３４７からなる群より選択される核酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列によってエンコードされるＬＣＤＲ１ドメイン；及び配列番号：１３、２９、４５、６１、７７、９３、１０９、１２５、１４１、１５７、１７３、１８９、２０５、２２１、２３７、２５３、２６９、２８５、３０１、３１７、３３３、及び３４９からなる群より選択される核酸配列、またはそれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に同等の配列によってエンコードされるＬＣＤＲ２ドメインを含む抗体またはそのフラグメントを提供する。
第三の態様では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆに特異的なヒト抗体または抗原結合フラグメントが、ＶH、ＤH及びＪH生殖系列配列由来の核酸配列セグメントによってエンコードされるＨＣＶＲ、及びＶK及びＪK生殖系列配列由来の核酸配列セグメントによってエンコードされたＬＣＶＲを含むことを特徴とする。
本発明は、修正された糖鎖付加パターンを有する抗体を包含する。幾つかの用途では、望ましくない糖鎖付加部位を除去するための修飾、または抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）機能を増大させるためのフコース成分の除去などが有用であり得る（Ｓｈｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（２００２）ＪＢＣ ２７７：２６７３３参照されたい）。別の用途では、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）を改変するためにガラクトシル化の改変をなし得る。
第四の態様では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆと結合する少なくとも１種類の単離完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント及び薬剤的に許容できるキャリアまたは希釈剤を含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆ上の同じエピトープまたは２種類の異なるエピトープのいずれかと結合する２種類の完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合フラグメント及び薬剤的に許容できるキャリアまたは希釈剤を含む医薬組成物を提供する。本明細書に記載するこれらの抗体のいずれかの組み合わせは、このような治療を必要とする患者集団において望ましい結果を達成するため、医薬組成物中に使用し得る。例えば、ＲＳＶ−Ｆを認識する、及び／またはこれと結合する２種類の抗体を組成物中に使用し得る。あるいは、ＲＳＶ−Ｆを認識する、及び／またはこれと結合する一つの抗体及びＲＳＶ上の別の抗原（ＲＳＶ−Ｇなど）と結合する第２の抗体である２種類の抗体を組成物中に使用し得る。一実施形態では、ＲＳＶ−Ｆを認識する、及び／またはこれと結合する一つの抗体及びメタ肺炎ウイルス抗原と結合する第２の抗体である２種類の抗体を組成物中に使用し得る。あるいは、ＲＳＶ−Ｆを認識する、及び／またはこれと結合する一つの抗体、メタ肺炎ウイルス抗原と結合する一つの抗体及びインフルエンザウイルス抗原または呼吸器疾患を引き起こすその他のウイルスと結合する一つの抗体である、２種類またはそれ以上の抗体を組成物中に使用し得る。
一実施形態では、該医薬組成物は、ＲＳＶ−Ｆと結合し、配列番号２７４／２８２及び３３８／３４６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを有する抗体を含有する。
一実施形態では、該医薬組成物は、ＲＳＶ−Ｆと結合し、配列番号２７４／２８２からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを有する抗体を含有する。
一実施形態では、該医薬組成物は、ＲＳＶ−Ｆと結合し、配列番号３３８／３４６からなるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを有する抗体を含有する。
一実施形態では、該医薬組成物はＲＳＶ−Ｆと結合する少なくとも１種類の抗体を含有し、ここで、該抗体は、配列番号２７４及び３３８からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列のいずれか１つの中に含有される３種類の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）；及び、配列番号２８２及び３４６からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列のいずれか１つの中に含有される３種類の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含む。
一実施形態では、本発明の抗体または本発明の１つまたは複数の抗体を含有する組成物は、ＲＳＶのサブタイプＡまたはサブタイプＢ株のいずれかを中和するために使用し得る。
一実施形態では、本発明は、本発明の抗体または抗体の抗原結合フラグメントと第２治療薬との組み合わせである組成物を特徴とする。
第２治療薬は、小分子薬、タンパク質／ポリペプチド、抗体、アンチセンス分子またはｓｉＲＮＡなどの核酸分子であってもよい。第２治療薬は、合成または天然由来であってもよい。
第２治療薬は、本発明の抗体またはそのフラグメントと優先的に結合するいずれかの薬剤であってもよく、例えば、抗ウイルス薬（リバビリンなど）、ＲＳＶに特異的なワクチン、またはインフルエンザウイルスに特異的なワクチン、またはメタ肺炎ウイルス（ＭＰＶ）に特異的なワクチン、ＲＳＶ抗原に特異的なｓｉＲＮＡ、インフルエンザウイルス抗原に特異的なｓｉＲＮＡ、メタ肺炎ウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的なｓｉＲＮＡ、第２のＲＳＶ抗原、またはメタ肺炎ウイルス（ＭＰＶ）抗原、またはインフルエンザ抗原に特異的な抗体、抗ＩＬ４Ｒ抗体、抗ＲＳＶ−Ｇ抗体またはＮＳＡＩＤなどが挙げられる。特定の実施形態においては、第２治療薬は、本発明の抗体または抗体の抗原結合フラグメントに関連して生じ得る副作用が生じた場合に、これに拮抗する、または減弱させるのに有用な薬剤であり得る。
本発明の抗体及び薬剤的に許容できる組成物は、併用治療に使用することが可能であり、即ち、抗体及び薬剤的に許容できる組成物は、１つまたは複数の他の望ましい治療薬または医療処置と同時、それより前、またはそれより後に投与してもよいことを理解されたい。併用レジメンに用いる特定の治療の組み合わせ（治療薬または処置）においては、望ましい治療薬及び／または処置の適合性及び達成すべき望ましい治療効果を考慮されたい。また、用いる治療が同じ疾患に対する望ましい効果（例えば、ある抗体は同じ疾患を治療するために使用する別の薬剤と同時に投与し得る）を達成し得ることもあれば、異なる効果（有害作用のコントロールなど）を達成し得ることもあることを理解されたい。本明細書で用いる場合、特定の疾患、または症状を治療または予防するために通常投与する追加的な治療薬は、疾患または症状を治療するために適切なものである。
複数の治療薬を共投与する場合には、用量は関連技術において認められているように相応に調節することができる。
本発明の第五の態様は、呼吸器合胞体ウイルス感染症の予防を必要とする患者の呼吸器合胞体ウイルス感染症を予防し、ＲＳＶ感染症に罹患している患者の治療、またはＲＳＶ感染症関連の少なくとも１種類の症状もしくは合併症を改善するための方法を提供し、該方法は、本明細書に記載の１つまたは複数の抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または、本明細書に記載の本発明の１つまたは複数の抗体もしくはそのフラグメントを含有する医薬組成物をそれを必要とする患者に投与することを含み、それによって、ＲＳＶ感染症を予防する、または、感染症関連の少なくとも１種類の症状もしくは合併症を改善、緩和する、または、その重篤度及び／もしくは期間を軽減する。
関連する実施形態では、本発明は、単独または第２治療薬と組み合わせて、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の予防を必要とする患者の呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の予防、またはＲＳＶ感染症に罹患している患者の治療、または感染症関連の少なくとも１種類の症状もしくは合併症の改善に使用する１つまたは複数の本発明の抗体を含む医薬組成物を提供し、感染症を予防する、または、感染症関連の少なくとも１種類の症状もしくは合併症を予防、改善するまたは、その重篤度及び／もしくは期間を軽減する。
一実施形態では、本発明は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の予防を必要とする患者の呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症の予防、またはＲＳＶ感染症に罹患している患者の治療、または感染症関連の少なくとも１種類の症状もしくは合併症の改善のための医薬品の製造において単独または第２治療薬と組み合わせて、１つまたは複数の本発明の抗体を含む医薬組成物を提供し、感染症を予防する、または、感染症関連の少なくとも１種類の症状もしくは合併症を予防、改善する、または、その重篤度及び／もしくは期間を軽減する。
一実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントによる治療を必要とする患者は、基礎症状または既存の医学的症状に起因するＲＳＶ感染症のより重篤な形態を経験する可能性がある患者である。一実施形態では、方法は、ＲＳＶのリスクのみられる患者に対してＲＳＶによる感染症の発生を予防することを提供し、該方法は、ＲＳＶのＦタンパクと結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントの有効量、またはＲＳＶのＦタンパクと結合する抗体もしくはその抗原結合フラグメントの有効量を含む医薬組成物を患者に投与するを含み、それによって、感染症を予防、改善し、または、重篤度及び／もしくは期間を軽減する、または、感染症関連の少なくとも１種類の症状または合併症を予防、改善する、または、重篤度もしくはまたは期間を軽減する。一実施形態では、単離ヒトＲＳＶ−Ｆ抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することが、患者の再発性喘鳴の予防をもたらす。一実施形態では、単離ヒトＲＳＶ−Ｆ抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することが、小児のＲＳＶ関連の喘息の予防をもたらす。一実施形態では、単離ヒトＲＳＶ−Ｆ抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することが、サブタイプＡまたはサブタイプＢ呼吸器合胞体ウイルスによって引き起こされるＲＳＶ感染症の予防をもたらす。
一実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントによって治療し得るＲＳＶ感染症関連の少なくとも１種類の症状または合併症が、酸素不足に起因する低酸素症、皮膚の蒼白化、呼吸困難（呼吸促迫または息切れなど）、咳、クループ性の咳（「アザラシの吠え声」のような咳）、発熱、鼻翼呼吸、鼻詰まり、喘鳴、肺炎、無呼吸、脱水症、食欲不振、異常な精神状態、食欲減退、または細気管支炎からなる群より選択され得る。
一実施形態では、ＲＳＶ感染症を発症する可能性のある患者が、本発明の抗体、または本発明の１つまたは複数の抗体を含む組成物による治療によって利益を得られる可能性があり、当該患者は、他の幾つかの医学的基礎症状が原因で脆弱性がみられる及び／またはＲＳＶのピークシーズン中に曝露された早期産児、正期産児、医学的基礎症状（先天性心疾患、慢性肺疾患、嚢胞性線維症、免疫不全、神経筋疾患など）の有無を問わない１歳以上の年齢の小児、施設入所患者または入院患者、うっ血性心不全または慢性閉塞性肺疾患などの医学的基礎症状の有無を問わない高齢患者（６５歳以上）、基礎疾患または免疫抑制剤に起因する免疫抑制のみられる患者、ＲＳＶ感染症に易罹患性と成り得る医学的基礎症状がみられる患者、例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、うっ血性心不全、嚢胞性線維症、気管支肺異形成症、気道機能不全、慢性肺疾患、癌患者、または免疫抑制治療を受けた移植患者などからなる群より選択され得る。
一実施形態では、本発明の抗体による治療の対象は、脆弱な肺、心血管、心筋、または免疫系に起因する症状に罹患している可能性がある患者である。当該症状は、気道の異常、慢性肺疾患、慢性心疾患、呼吸分泌物の処理に脆弱性がみられる神経筋疾患及び免疫抑制からなる群より選択され得る。当該慢性肺疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、または気管支肺異形成症であり得る。当該慢性心疾患は、うっ血性心不全（ＣＨＦ）、または先天性心疾患であり得る。当該神経筋疾患または症状は、神経変性疾患、または脳卒中、または脊髄損傷などの神経系の損傷または事故に起因する呼吸分泌物を処理及び／または除去する能力の低下などであり得る。当該免疫抑制は、重篤な複合免疫不全または重篤な後天性免疫不全の結果であり得る、または免疫抑制を引き起こす他の感染疾患または癌性症状であり得る、あるいは免疫抑制治療または放射線治療の結果である。
一実施形態では、抗体はＲＳＶ感染症を発症するリスクのみられる患者、またはＲＳＶ感染症関連の少なくとも１種類の症状または合併症を発症するリスクのみられる患者に対して予防的に投与する（当該感染症の発症前に投与する）。本発明の抗体による治療の対象は、１つまたは複数の抗体を含む組成物を静注、筋注、または皮下注などを含むがこれに限定するものではない適切な投与ルートによって投与され得る。
一実施形態では、抗体を治療的に患者に投与（当該感染症の発症後に投与）し、ＲＳＶ感染症関連の少なくとも１種類の症状または合併症を改善する、または重篤度及び／または期間を軽減する。
一実施形態では、発明の抗体は、ＲＳＶ感染症の治療に有用な１つまたは複数の治療薬と組み合わせて患者に投与してもよい。当該１つまたは複数の治療薬は、抗ウイルス薬；ＲＳＶに特異的なワクチン、インフルエンザウイルスに特異的なワクチン、または、メタ肺炎ウイルス（ＭＰＶ）に特異的なワクチン；ＲＳＶ抗原またはメタ肺炎ウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的なｓｉＲＮＡ；第２のＲＳＶ抗原またはメタ肺炎ウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的な抗体；抗ＩＬ４Ｒ抗体、インフルエンザウイルス抗原に特異的な抗体、抗ＲＳＶ−Ｇ抗体及びＮＳＡＩＤからなる群より選択され得る。
本発明の第六の態様は、個体、好ましくはヒトに投与した場合、当該個体に呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原に対する免疫反応を誘発するような免疫原性組成物またはワクチンを提供する。
一実施形態では、免疫原性組成物またはワクチンは、ＲＳＶ抗原、例えばＲＳＶ−Ｆタンパク、ポリペプチド、またはそれらの免疫原性フラグメント、またはＲＳＶ−Ｆポリペプチドの抗原またはそのフラグメント中に含有されている及び／またはそこから得たエピトープを含み、及び／またはＲＳＶ−Ｆポリペプチド抗原由来のエピトープをエンコード及び発現するようなＤＮＡ及び／またはＲＮＡまたは、その他の本発明のポリペプチドを含む。
本発明の一実施形態では、免疫原性組成物またはワクチンは、配列番号３５４で示されるＲＳＶ−Ｆタンパク質を含有し得る。本発明の一実施形態では、免疫原性組成物またはワクチンは、配列番号３５４の残基１６１〜１８８を含有するＲＳＶ−Ｆポリペプチドフラグメントを含有し得る。本発明の一実施形態では、免疫原性組成物またはワクチンは、配列番号３５５及び／または配列番号３５６中に含まれる１つまたは複数のアミノ酸残基を含有し得る。本発明の一実施形態では、免疫原性組成物またはワクチンは、配列番号３５５及び／または配列番号３５６を含有し得る。
関連する態様においては、本発明は、個体、特に哺乳類、好ましくはヒトに対し、ＲＳＶ−Ｆタンパク質、またはその免疫原性フラグメント、または該ＲＳＶ−Ｆ抗原またはそのフラグメント中に含まれる１つまたは複数のエピトープを含有するＲＳＶ−Ｆ抗原またはその免疫原性フラグメントを含む免疫原性組成物またはワクチンを投与することによって個体に免疫反応を誘発し、感染症、特に呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）による感染症から個体を防護するための抗体及び／またはＴ細胞免疫反応を生じさせるのに適切な」方法を提供する。
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物またはワクチンを用いて免疫反応を誘発し、その結果、細胞から細胞へのウイルスの拡散を阻害し、またはその進行を遅延させるような方法を提供する。また、投与した場合に個体に免疫反応を誘発する少なくとも１種類のＲＳＶ−Ｆ抗原、またはＲＳＶ−Ｆ抗原中に含有される１つまたは複数のエピトープを含む免疫原性組成物またはワクチンを投与することにより、ＲＳＶ感染症関連の少なくとも１種類の症状を改善する方法を提供する。
例えば、一実施形態では、本発明は、ＲＳＶ−Ｆ抗原（配列番号３５４で示されるアミノ酸配列など）またはその抗原フラグメント、（配列番号３５４の残基１６１〜１８８を含むポリペプチドなど）、またはこのようなウイルスのポリペプチドを直接発現させるためのヌクレオチド配列を含む核酸ベクター、またはｉｎ ｖｉｖｏで免疫反応を誘発するためのそのフラグメントまたは変異体を含む免疫原性組成物またはワクチンを個体に送達することを含めた個体に免疫反応を誘発する方法を提供する。
本発明の一実施形態では、配列番号３５４の残基１６１〜１８８を含む該ポリペプチドは、免疫原性組成物中またはワクチン中に使用され、個体に免疫反応を誘発する。本発明の一実施形態では、配列番号３５５及び／または配列番号３５６中に含有される１つまたは複数のアミノ酸残基を含む該ポリペプチドは、免疫原性組成物中またはワクチン中に使用され、個体に免疫反応を誘発する。本発明の一実施形態では、免疫原性組成物中またはワクチン中に使用され、個体に免疫反応を誘発する該ポリペプチドは、配列番号３５５及び／または配列番号３５６を含む。本発明の一実施形態では、該免疫原性組成物またはワクチンは、ＲＳＶのＲＳＶ−Ｆ抗原に特異的な抗体応答またはＴ細胞応答を誘発し得、生成された抗体は、配列番号３５４の１７３位のセリンもしくは３５４位のトレオニンのいずれか一方、または配列番号３５４の１７３位のセリン及び配列番号３５４の１７４位のトレオニンの両者と相互作用する。
本発明の特定の実施形態においては、免疫原性組成物またはワクチンは、薬剤的に許容できるキャリア／賦形剤などの適切なキャリア／賦形剤と共に、本発明の免疫原性ポリペプチド及び／またはポリヌクレオチド、またはそれらの組み合わせを含有し得る。また、本発明の免疫原性組成物またはワクチンは、製剤の免疫原性を増強するためのアジュバントを含有し得る。
特定の実施形態においては、ＲＳＶ−Ｆ抗原またはそれらのフラグメントが、その他の病原体、好ましくはウイルス及び／または細菌に対する免疫を誘発するための免疫原性、好ましくは免疫学的有効量の追加的な抗原を含有する免疫原性組成物またはワクチン中に配合されることは有益である。このような追加的な抗原には、インフルエンザウイルス抗原、メタ肺炎ウイルスまたはコロナウイルス由来の抗原、ヘモフィルスインフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、連鎖球菌肺炎（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｈｅｕｍｏｎｉａ）、または百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）由来の抗原が含まれ得る。その他のＲＳＶ抗原には、ＲＳＶ−Ｇ糖タンパク質、またはその免疫原性フラグメント、ＨＮタンパク、またはその誘導体などの免疫原性組成物またはワクチンが含まれ得る。
ＲＳＶ−Ｆタンパク質の模式図である。 Ａ及びＢは、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３がウイルスと細胞膜の融合を阻害することによりウイルスの侵入をブロックすることを示す。
本方法を説明する前に、本発明は記載の特定の方法及び実験条件に限定されるものではなく、このような方法及び条件は変動し得るということが理解されなければならない。また、本発明の範囲は添付の請求項によってのみ限定されるのであるから、本明細書で用いる専門用語は、特定の実施形態を説明する目的でのみ用いられるものであり、限定を意図するものではないことも理解されなければならない。
他に定義されない限り、本明細書で用いられる全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書で用いられる用語「約」が、挙げられた特定の数値に対して用いられる場合、この値は挙げられた値から１％を超えては変動し得ないことを意味する。例えば本明細書で用いられる表現「約１００」には、９９及び１０１、並びにその間の全ての値（例えば９９．１、９９．２、９９．３、９９．４など）が含まれる。
本明細書に記載される方法及び材料と同様であるかまたは同等であるいずれの方法及び材料も、本発明を実施するかまたは試行するために用いることができるが、好ましい方法及び材料について次に説明する。
定義
「ＲＳＶ−Ｆ」とも称される「呼吸器合胞体ウイルス−Ｆタンパク質」は、Ｎ末端に切断型シグナルペプチドを有し、Ｃ末端の近傍に膜アンカーを有するＩ型膜貫通型表面タンパク質である（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｐ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，（１９８４），ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）８１：７６８３−７６８７）。ＲＳＶ−Ｆタンパク質は、Ｆ０とされる不活性型の６７ＫＤａ前駆体として合成される（Ｃａｌｄｅｒ，Ｌ．Ｊ．；ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２０００），２７１，１２２−１３１。Ｆ０タンパク質は、ゴルジ複合体においてフューリン様プロテアーゼが２か所に作用し、Ｎ及びＣ末端それぞれから２つのジスルフィド連結ポリペプチドであるＦ２及びＦ１がもたらされることによって、タンパク質分解性に活性化される。放出された２７個のアミノ酸ペプチドは「ｐｅｐ２７」と称される。ｐｅｐ２７の両端にはフューリン切断部位（ＦＣＳ）が存在する（Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｐ．Ｌ．；Ｍｏｔｔｅｔ，Ｇ．（１９９１），Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，７２：３０９５−３１０１；Ｓｕｇｒｕｅ，Ｒ．Ｊ，ｅｔ ａｌ．（２００１），Ｊ．．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．，８２，１３７５−１３８６）。Ｆ２サブユニットは７個繰り返しＣ（ＨＲＣ）から構成され、一方でＦ１は、融合ポリペプチド（ＦＰ）、７個繰り返しＡ（ＨＲＡ）、ドメインＩ、ドメインＩＩ、７個繰り返しＢ（ＨＲＢ）、膜貫通部位（ＴＭ）、及び細胞質ドメイン（ＣＰ）を含む（Ｓｕｎ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．Ｖｉｒｕｓｅｓ（２０１３），５：２１１−２２５を参照されたい）。ＲＳＶ−Ｆタンパク質はウイルス粒子を細胞膜へ融合させる役割を果たす。ＲＳＶ−Ｆタンパク質は感染細胞の表面に発現していることから、ウイルスの細胞から細胞への感染、及び合胞体形成に役立つ。ＲＳＶ−Ｆタンパク質のアミノ酸配列は受託番号ＡＡＸ２３９９４としてＧｅｎＢａｎｋから入手可能であり、本明細書では配列番号３５４としても参照される。
配列番号３５３のアミノ酸配列を有するものとして、ＲＳＶ−Ｆタンパク質の遺伝的に改変されたコンストラクトを本明細書に示す。
本明細書で用いられる用語「実験室株」は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞培養によって高頻度に継代したＲＳＶ（亜型ＡまたはＢ）の株を指す。「実験室株」には、その生物学的特性に影響し得る、適応型の変異がもたらされる可能性がある。本明細書で用いられる用語「臨床株」は、感染した個体から得た後に分離し、組織培養によって低頻度の継代の下に増殖させたＲＳＶ（亜型ＡまたはＢ）の分離株を指す。
用語「有効量９９」または「ＥＤ99」は、ウイルスプラークの形成が、アイソタイプ（陰性）対照に比較して９９％減少するという望ましい効果をもたらす、薬剤の投与量を指す。本発明におけるＥＤ99は、実施例５に記載するように、ｉｎ ｖｉｖｏでのウイルス感染を中和する（例えばウイルス量が９９％減少する）、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体の投与量を指す。
用語「ＩＣ５０」は「半数阻害濃度」を指し、この値は、生物学的または生化学的有用性を目指した、化合物（例えば抗ＲＳＶ−Ｆ抗体）による阻害の有効性の基準となる。この定量的基準は、所定の生物学的過程の半分を阻害するために必要とされる、特定の阻害物質の量を示している。
「ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）」とも称される「パリビズマブ」は、ＵＳ７６３５５６８及び５８２４３０７に示すアミノ酸配列の重鎖及び軽鎖可変ドメインを有するヒト化抗ＲＳＶ−Ｆ抗体である（本明細書では、抗体の重鎖は配列番号３６１として、抗体の軽鎖は配列番号３６２として示す）。ＲＳＶ−Ｆタンパク質に免疫特異的に結合するこの抗体は、小児におけるリスクの高い重篤なＲＳＶ疾患に対する受動免疫的な予防のために、現在ＦＤＡによって認可されており、ＲＳＶが流行する時期（北半球では１１月から４月）を通して毎月、体重あたりの推奨用量である１５ｍｇ／ｋｇが筋肉内投与される。ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）は、９５％がヒトの抗体配列から、５％がマウスの抗体配列から構成される。Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９７），Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓｅａｓｅｓ １７６：１２１５−１２２４も参照されたい。
「ＮＵＭＡＸ（商標）」とも称される「モタビズマブ」は、パリビズマブの重鎖及び軽鎖の相補性決定領域をｉｎ ｖｉｔｒｏにて親和性成熟させることによって効力を増強させた、ＲＳＶ−Ｆ特異的なヒト化モノクローナル抗体である。参照のため、ＮＵＭＡＸ（商標）抗体のアミノ酸配列は、米国特許出願公開公報第２００３／００９１５８４号及び米国特許第６，８１８，２１６号、並びにＷｕ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．３５０（１）：１２６−１４４及びＷｕ，ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６８：６５２−６６５に開示される。本明細書では、抗体の重鎖は配列番号３５９として、抗体の軽鎖は配列番号３６０として示す。
本明細書で用いられる用語「治療する」、「治療」、及び「治療している」は、
１以上の治療法の実施（限定はされないが、１以上の予防薬または治療薬の投与を含む）によってもたらされた、上気道及び／または下気道におけるＲＳＶ感染、中耳炎、またはそれらに関連する症状もしくは呼吸器の状態（例えば喘息、喘鳴、またはそれらの組み合わせ）の進行、重症度、及び／または持続の減少または寛解を指す。特定の実施形態によれば、このような用語は、ＲＳＶ複製の減少または阻害、その他の組織または被験体へのＲＳＶの拡散（例えば下気道への拡散）の阻害または減少、細胞へのＲＳＶの感染の阻害または減少、または上気道及び／もしくは下気道におけるＲＳＶ感染または中耳炎に付随する１以上の症状の寛解を指す。
本明細書で用いられる用語「予防する」、「予防している」、及び「予防」は、上気道及び／または下気道におけるＲＳＶ感染、中耳炎、またはそれらに関連する呼吸器の状態が、被験体において発生または開始することの予防または阻害、治療法の実施（例えば予防薬または治療薬）によってもたらされた、上気道におけるＲＳＶ感染から下気道におけるＲＳＶ感染、中耳炎、またはそれらに関連する呼吸器の状態の予防または阻害、上気道及び／または下気道におけるＲＳＶ感染、中耳炎、またはそれらに関連する呼吸器の状態の症状の予防、または治療法の組み合わせの実施（例えば予防薬または治療薬の組み合わせ）を指す。
本明細書で用いられる用語「抗体」は、２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖がジスルフィド結合によって相互に連結された４本のポリペプチド鎖（即ち「完全抗体分子」）、及びその多量体（例えばＩｇＭ）またはその抗原結合断片から構成される免疫グロブリン分子を指すことが意図される。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶH」）及び重鎖定常領域（ドメインＣH１、ＣH２、及びＣH３から構成される）から構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶL」）及び軽鎖定常領域（ＣL）から構成される。ＶH及びＶL領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変領域へさらに分割することができ、このＣＤＲは、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存された領域と共に散在する。ＶH及びＶLはそれぞれ３個のＣＤＲと４個のＦＲから構成され、これらはアミノ末端からカルボキシ末端まで、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順に並んでいる。本発明の特定の実施形態によれば、抗体のＦＲ（またはその抗原結合断片）は、ヒトの生殖系列配列と同じであってよいか、または自然もしくは人工的に改変されていてもよい。アミノ酸共通配列は、２個以上のＣＤＲの並行した解析に基づいて定義され得る。
１以上のＣＤＲ残基が置換されていること、または１以上のＣＤＲが欠失していることも可能である。科学文献には、抗体が結合するために、１個または２個のＣＤＲは無くてもよいと記載されている。Ｐａｄｌａｎら（１９９５ ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３−１３９）は、抗体と、対応する抗原との間の接触領域を公開されている結晶構造に基づいて解析し、抗原と実際に接触しているＣＤＲ残基は、約５分の１から３分の１だけであると結論付けた。Ｐａｄｌａｎはまた、１個または２個のＣＤＲが、抗原と接触するアミノ酸を有していない抗体は多いということも見出した（Ｖａｊｄｏｓ ｅｔ ａｌ．２００２ Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３２０：４１５−４２８も参照されたい）。
抗原と接触していないＣＤＲ残基は、これまでの研究に基づき（例えばＣＤＲＨ２の残基Ｈ６０〜Ｈ６５は、多くの場合不必要である）、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの外部にあるＫａｂａｔ ＣＤＲの領域から、分子モデリング及び／または経験的に同定することができる。ＣＤＲまたはその単数もしくは複数の残基が欠失している場合、それは、通常別のヒト抗体配列またはそれらの配列の共通部分内の対応する部位に存在するアミノ酸によって置換される。ＣＤＲ内の置換される位置、及び置換されるアミノ酸もまた、経験的に選択することができる。経験に従った置換は、保存された置換であってもよく、保存されていない置換であってもよい。
本明細書に開示する完全なヒトモノクローナル抗体は、重鎖及び軽鎖可変ドメインのフレームワーク領域及び／またはＣＤＲ領域内に、対応する生殖系列配列に比較して、１以上のアミノ酸の置換、挿入、及び／または欠失を含んでいてもよい。このような変異は、本明細書に開示するアミノ酸配列と、例えば公共の抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列とを比較することによって、容易に確認することができる。本発明には、本明細書に開示するアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体及びその抗原結合断片が包含され、ここでは１以上のフレームワーク領域及び／またはＣＤＲ領域内の１以上のアミノ酸が、該抗体に由来する生殖系列配列の対応する単数または複数の残基に対して、または別のヒト生殖系列配列の対応する単数または複数の残基に対して、対応する単数または複数の生殖系列残基における保存されたアミノ酸置換に対して変異している（本明細書では、このような配列の変化を「生殖系列変異」と総称する）。本明細書に開示する重鎖及び軽鎖可変領域配列から作業を開始した当業者は、１以上の個別の生殖系列変異またはそれらの組み合わせを含む多数の抗体及び抗原結合断片を容易に産生し得る。特定の実施形態によれば、ＶH及び／またはＶLドメイン内の全てのフレームワーク残基及び／またはＣＤＲ残基は、抗体が由来する元の生殖系列配列内に見出される残基へ戻るように変異する。その他の実施形態によれば、特定の残基のみが、例えばＦＲ１の最初の８アミノ酸内かもしくはＦＲ４の最後の８アミノ酸内に見出される変異した残基のみが、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、もしくはＣＤＲ３内に見出される変異した残基のみが、元の生殖系列配列へ戻るように変異する。その他の実施形態によれば、単数または複数のフレームワーク残基及び／またＣＤＲ残基の１以上が、異なる生殖系列配列（即ち抗体が元々由来する生殖系列配列とは異なる生殖系列配列）の、対応する単数または複数の残基となるように変異する。さらに、本発明の抗体は、フレームワーク領域及び／またはＣＤＲ領域内の、２以上の生殖系列変異のいずれかの組み合わせを含んでもよく、例えば特定の残基が特定の生殖系列配列の対応する残基となるように個別に変異する一方で、元の生殖系列配列とは異なるその他の特定の残基は維持されるか、または別の生殖系列配列の対応する残基となるように変異する。１以上の生殖系列変異を含む抗体及び抗原結合断片がいったん得られた後、これらは、例えば改良された結合特異性、増大した結合親和性、改良されたかもしくは増強された（場合に応じて）アンタゴニストまたはアゴニストとしての生物学的特性、少ない免疫原性などのような、１以上の望ましい特性について容易に試験することができる。このような一般的方法によって得られた抗体及び抗原結合断片は、本発明に包含される。
本発明には、１以上の保存された置換を有する、本明細書に開示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかの変異体を含む完全なモノクローナル抗体も包含される。例えば本発明には、本明細書に開示するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかに比較して、例えば１０以下、８以下、６以下、４以下などの保存されたアミノ酸置換を有するＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、及び／またはＣＤＲアミノ酸配列をもつ抗体が包含される。
本明細書で用いられる用語「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の可変領域及び定常領域を有する抗体を包含することが意図される。本発明のヒトｍＡｂは、例えばＣＤＲ内、特にＣＤＲ３内に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってはコードされないアミノ酸残基（例えばｉｎ ｖｉｔｒｏでの無作為的もしくは部位特異的変異誘発によって、またはｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞変異によって導入された変異）を含み得る。しかしながら、本明細書で用いられる用語「ヒト抗体」は、別の哺乳類種（例えばマウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列をヒトＦＲ配列に移植したｍＡｂを包含することが意図されるものではない。
用語「組換え」は、一般に、遺伝子工学の方法によって産生された、タンパク質、ポリペプチド、または関心のある遺伝子を発現する細胞のいずれかを指す。用語「組換え」がタンパク質またはポリペプチドに関して用いられる場合、この用語は、組換えポリヌクレオチドの発現によって産生されたポリペプチドを意味する。本発明の免疫原性組成物中に用いられるタンパク質は、天然源から分離されてよいか、または遺伝子工学の方法によって産生されてもよい。
幾つかの実施形態によれば、本発明の抗体は組換えヒト抗体であってよい。本明細書で用いられる用語「組換えヒト抗体」は、組換え手段によって調製され、発現され、作り出されたか、または分離された全てのヒト抗体、例えば宿主細胞（以下に詳しく述べる）にトランスフェクトした組換え発現ベクターを用いて発現させた抗体、組換えのコンビナトリアルヒト抗体ライブラリー（以下に詳しく述べる）から分離した抗体、ヒト免疫グロブリン遺伝子のトランスジェニック動物（例えばマウス）から分離した抗体（例えばＴａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５を参照されたい）、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列からその他のＤＮＡ配列へのスプライシングに関連するその他のいずれかの手段によって調製され、発現され、作り出されたか、または分離された抗体を包含することが意図される。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する。しかしながら特定の実施形態によれば、このような組換えヒト抗体はｉｎ ｖｉｔｒｏ変異誘発（ヒトＩｇ配列のトランスジェニック動物を用いた場合にはｉｎ ｖｉｖｏ体細胞変異誘発）に供されるため、組換え抗体のＶH及びＶL領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列ＶH及びＶL配列に由来し、関連する一方で、ｉｎ ｖｉｖｏにおける天然のヒト抗体生殖系列レパトアには存在し得ない配列である。
「特異的に結合する」または「〜へ特異的に結合する」などの用語は、抗体またはその抗原結合断片が、生理的な条件下で抗原と共に比較的安定な複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０-6Ｍ以下の平衡解離定数によって特徴付けられ得る（例えばより小さなＫDは、より堅固な結合を意味する）。２つの分子が特異的に結合しているか否かを決定するための方法は当該技術分野において公知であり、このような方法としては、例えば平衡透析、表面プラズモン共鳴などが挙げられる。本明細書に記載するように、表面プラズモン共鳴、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって、ＲＳＶ−Ｆへ特異的に結合する抗体が同定された。さらに、ＲＳＶ−Ｆタンパク質と１以上のさらなる抗原とに結合する多重特異性抗体、またはＲＳＶ−Ｆの異なる２つの領域に結合する二重特異性抗体であっても、本明細書で用いられる「特異的に結合する」抗体であるとみなされる。
用語「高親和性」抗体は、表面プラズモン共鳴、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（商標）、または溶液親和性（ｓｏｌｕｔｉｏｎ−ａｆｆｉｎｉｔｙ）ＥＬＩＳＡによって測定された、ＫDで表されるＲＳＶ−Ｆに対する結合親和性が、少なくとも１０-9Ｍ、さらに好ましくは１０-10Ｍ、さらに好ましくは１０-11Ｍ、さらに好ましくは１０-12ＭであるｍＡｂを指す。
「スローオフレート」、「Ｋｏｆｆ」、または「ｋｄ」との用語は、表面プラズモン共鳴、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって決定された、ＲＳＶ−Ｆから解離する際の速度定数が１×１０-3ｓ-1以下、好ましくは１×１０-4ｓ-1以下である抗体を意味する。
本明細書で用いられる用語、抗体の「抗原結合部位」、抗体の「抗原結合断片」などには、天然の、酵素的に入手可能な、合成の、もしくは遺伝的に改変された、抗原へ特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドまたは糖タンパク質のいずれもが包含される。本明細書で用いられる用語、抗体の「抗原結合部位」または「抗体断片」は、ＲＳＶ−Ｆへの結合能を保持している、抗体の１以上の断片を指す。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体または抗体断片には、例えば抗生物質、抗ＲＳＶ−７二次抗体、ワクチン、トキソイド、またはＲＳＶ感染を治療するために有用なその他のいずれかの治療用成分のような治療用成分が抱合していてもよい（「免疫抱合体」）。
本明細書で用いられる「分離抗体」は、抗原特異性の異なるその他の抗体（Ａｂ）を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、ＲＳＶ−Ｆへ特異的に結合する分離抗体またはその断片は、ＲＳＶ−Ｆ以外の抗原へ特異的に結合するＡｂを実質的に含まない）。
本明細書で用いられる「遮断抗体」または「中和抗体」（または「ＲＳＶ−Ｆ活性を中和する抗体」）は、ＲＳＶ−Ｆに結合してＲＳＶ−Ｆの生物学的活性の少なくとも一つを阻害する抗体を指すことが意図される。例えば本発明の抗体は、ＲＳＶと宿主細胞との融合の遮断、または合胞体形成の阻止、またはＲＳＶにより引き起こされる原疾患の阻止を補助し得る。あるいは本発明の抗体は、ＲＳＶ感染による少なくとも１の症状を寛解させる能力を示し得る。ＲＳＶ−Ｆの生物学的活性に対するこのような阻害は、幾つかの標準的なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば本明細書に記載する中和アッセイ）または当該技術分野において公知のｉｎ ｖｉｖｏアッセイ（例えば、本明細書に記載する抗体の１以上を投与した後の、ＲＳＶの負荷に対する防御を観察するための動物モデル）のうちの１以上を用いて、ＲＳＶ−Ｆの生物学的活性の１以上の指標を測定することによって評価することができる。
本明細書で用いられる用語「表面プラズモン共鳴」は、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（商標）システム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ、ウプサラ、スウェーデン、及びピスカタウェイ、ニュージャージー州）を用い、バイオセンサーマトリックス内でタンパク質濃度の変化を検出することによって、生体分子の相互作用をリアルタイムで分析することが可能となる光学現象を指す。
本明細書で用いられる用語「ＫD」は、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すことが意図される。
用語「エピトープ」は、抗体分子の可変領域内の、パラトープとして知られる特異的な抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原が、１を超えるエピトープを有していてもよい。このように、異なる抗体が抗原上の異なる領域に結合して、異なる生物学的効果を発揮する可能性がある。用語「エピトープ」はまた、Ｂ細胞及び／またはＴ細胞が反応して結合する抗原上の部位も指す。また、抗体が結合する抗原の領域も指す。エピトープは、構造的または機能的に定義され得る。機能的エピトープとは、一般には構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。エピトープはまた、立体構造的、即ち直鎖ではないアミノ酸から構成されていてもよい。特定の実施形態によれば、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基のような分子が、化学的に活性のあるように表面配置された決定基を含んでもよい。また、特定の実施形態によれば、エピトープは、特異的な三次元構造特性及び／または電荷特性を有してもよい。
用語「実質的な同一性」または「実質的に同一」が核酸またはその断片に関して用いられる場合、この用語は、核酸を適切なヌクレオチドの挿入または欠失と共に、別の核酸（またはその相補性鎖）と最適に整列させた際、以下に述べるようにＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴ、またはＧＡＰのような公知の配列同一性アルゴリズムのいずれかによって測定されたヌクレオチド配列同一性が、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９０％、さらに好ましくは少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であることを示す。参照核酸分子に対して実質的に同一な核酸分子は、ある場合には、参照核酸分子によってコードされるポリペプチドと同一かまたは実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし得る。
用語「実質的な類似性」または「実質的に類似」をポリペプチドに対して用いる場合、この用語は、例えばギャップウェイトを初期設定で用いたＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴプログラムによって最適に整列させた２つのペプチド配列が、少なくとも９０％の配列同一性、さらに好ましくは少なくとも９５％、９８％、または９９％の配列同一性を有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基の位置は、保存されたアミノ酸置換によって区別される。「保存されたアミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、同様の化学的特性（例えば電荷または疎水性）をもつ側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基による置換である。保存されたアミノ酸置換は、一般にタンパク質の機能的特性を実質的には変更しない。２以上のアミノ酸配列が、保存された置換によって互いに区別される場合、類似性のパーセントまたは程度は、その置換に保存されている特性によって修正するために、上方へ調節してよい。このような調節のための手段は当業者に公知である（例えばＰｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７−３３１を参照されたい）。同様の化学的特性をもつ側鎖を有するアミノ酸群の例としては、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシン、２）脂肪族−ヒドロキシル側鎖：セリン及びスレオニン、３）アミド含有側鎖：アスパラギン及びグルタミン、４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン、５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、及びヒスチジン、６）酸性側鎖：アスパラギン酸塩及びグルタミン酸塩、並びに７）硫黄含有側鎖：システイン及びメチオニン、が挙げられる。保存されたアミノ酸置換基の好ましいものは、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸塩−アスパラギン酸塩、及びアスパラギン−グルタミンである。あるいは保存された置換とは、Ｇｏｎｎｅｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１４４３ ４５に開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を示すいずれかの変更である。「中程度に保存された」置換とは、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負ではない値を示すいずれかの変更である。
ポリペプチドの配列類似性は、典型的には配列解析ソフトウェアを用いて測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、様々な置換、欠失、及び保存されたアミノ酸置換を含むその他の修飾について指定された類似性を測定することによって、類似配列を一致させる。例えばＧＣＧソフトウェアには、異なる生物種に由来する相同ポリペプチドのような、密接に関連するポリペプチドの間、または野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の配列相同性または配列同一性を決定するために初期設定のパラメータによって用いられ得る、ＧＡＰ及びＢＥＳＴＦＩＴのようなプログラムが含まれる。例えばＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列はまた、ＧＣＧバージョン６．１に含まれるプログラムであるＦＡＳＴＡを、初期設定のパラメータ、または推奨されるパラメータによって用いても比較することができる。ＦＡＳＴＡ（例えばＦＡＳＴＡ２及びＦＡＳＴＡ３）によって、クエリ配列とサーチ配列の間で最もよく重複する領域のアラインメント及びパーセント配列同一性が得られる（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上記）。本発明の配列を、異なる生物に由来する配列を多数含むデータベースに対して比較する際に好ましい別のアルゴリズムは、初期設定のパラメータを用いた、コンピュータプログラムであるＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである（例えばＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３ ４１０及び（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９ ４０２を参照されたい）。
特定の実施形態によれば、本発明の方法において用いるための抗体または抗体断片は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性であってよい。多重特異性抗体は、一つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であるか、または二つ以上の標的ポリペプチドのエピトープに特異的な抗原結合ドメインを含んでいてもよい。本発明において用いられてもよい代表的な二重特異性抗体の型式には、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣH３ドメイン及び第２のＩｇ ＣH３ドメインの使用が含まれ、第１及び第２のＩｇ ＣH３ドメインは少なくとも一つのアミノ酸が互いに異なり、また、二重特異性抗体に少なくとも一つのアミノ酸の違いがある場合、アミノ酸に違いがない二重特異性抗体に比較して、プロテインＡへの結合が低下する。一実施形態によれば、第１のＩｇ ＣH３ドメインはプロテインＡに結合し、第２のＩｇ ＣH３ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴのエクソン番号付けによる。ＥＵの番号付けではＨ４３５Ｒである。）のような、プロテインＡへの結合が低下するかまたはプロテインＡへ結合しなくなる変異を含む。第２のＣH３には、さらにＹ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる。ＥＵによればＹ４３６Ｆ。）が含まれ得る。第２のＣH３に見出され得るさらなる修飾として、ＩｇＧ１ ｍＡｂの場合にはＤ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる。ＥＵによればＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、及びＶ４２２Ｉ）、ＩｇＧ２ ｍＡｂの場合にはＮ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる。ＥＵによればＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、及びＶ４２２Ｉ。）、並びにＩｇＧ４ ｍＡｂの場合にはＱ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる。ＥＵによればＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、及びＶ４２２Ｉ。）が挙げられる。上記の二重特異性抗体の型式における変動は、本発明の範囲内であることが意図される。
「治療上有効な量」との語句は、投与された対象に望ましい効果をもたらす量を意味する。正確な量は治療の目的によって異なり、これは当業者が公知の技術を用いることによって確認可能である（例えばＬｌｏｙｄ（１９９９）Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）。
「免疫原性組成物」は、抗原／免疫原、例えばウイルスもしくは細菌のような微生物またはその成分、タンパク質、ポリペプチド、タンパク質またはポリペプチドの断片、不活化全細胞、弱毒化ウイルスのサブユニット、もしくは多糖、またはこれらの組み合わせを含有する組成物に関する。免疫原性組成物は、これに含まれる抗原／免疫原の１以上に対するレシピエントの液性及び／または細胞性の免疫系を刺激するために投与される。本発明の免疫原性組成物はＲＳＶ感染に感受性のヒトを処置するために用いられてよく、該免疫原性組成物は全身性の経路を介して投与される。このような投与としては、筋肉内（ｉ．ｍ．）、皮内（ｉ．ｄ．）、鼻腔内もしくは吸入経路、または皮下経路（ｓ．ｃ．）を介した注入、パッチまたはその他の経皮送達用装置による使用が挙げられる。一実施形態によれば、免疫原性組成物は、ワクチンを製造するためか、または哺乳類の受動的な防御または治療に用いることのできるポリクローナルまたはモノクローナル抗体を誘発するために用いてよい。
互換的に用いられる用語である「ワクチン」及び「ワクチン組成物」は、動物に免疫応答を誘導する少なくとも１の免疫原性組成物を含む組成物を指す。
本発明の一実施形態によれば、関心のあるタンパク質は抗原を含む。用語「抗原」、「免疫原」、「抗原性の」、「免疫原性」、「抗原活性のある」、及び「免疫活性のある」が分子に関して用いられる場合、これらの用語は、特異的な液性及び／または細胞介在性の免疫応答を誘導することのできるいずれかの物質を指す。一実施形態によれば、抗原は、上で定義したエピトープを含む。
本明細書で用いられる「免疫的に防御可能な量」は、健康への有害作用またはその合併症を含む疾病の徴候または症状を阻止もしくは寛解させるために十分な、レシピエントに免疫原性応答を誘導するために有効な抗原の量である。液性免疫もしくは細胞介在性免疫のいずれか、またはそれらの両方が誘導されてよい。組成物に対する動物の免疫原性応答は、例えば抗体力価の測定、リンパ球増殖アッセイによって間接的に、または微生物を負荷した後の徴候及び症状のモニターを通して直接的に評価することができる。免疫原性組成物またはワクチンによって付与される防御免疫は、例えば負荷した生物の脱殻の減少、死亡率、罹患率、体温のような臨床徴候の減少、並びに被験体の全体的な身体の状態、健康及び能力を測ることによって評価することができる。免疫応答は、細胞免疫及び／または液性の誘導を含み得るが、これらに限定されない。組成物またはワクチンの治療上有効な量は、使用する生物、または処置もしくはワクチン接種される動物の状態によって異なり得る。
被験体について本明細書で用いられる「免疫応答」または「免疫学的応答」は、抗原／免疫原に対する液性免疫応答、細胞性免疫応答、または液性免疫応答及び細胞性免疫応答の発生を指す。「液性免疫応答」は、少なくとも部分的に抗体によって仲介される免疫応答を指す。「細胞性免疫応答」は、Ｔリンパ球もしくはその他の白血球またはそれらの両方によって仲介される免疫応答であり、これにはサイトカイン、ケモカイン、及び活性化Ｔ細胞、白血球、またはそれらの両方によって産生される類似分子の産生が含まれる。免疫応答は、当該技術分野において公知の標準的な免疫アッセイ及び中和アッセイを用いて決定することができる。本明細書で用いられる「免疫原性」は、確認された疾病の原因となる細菌またはウイルスへ特異的に向けられる免疫応答を誘発するための、タンパク質またはポリペプチドの能力を指す。
一般的説明
呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）は、乳幼児及び小児における重篤な気道感染症の主な原因である、マイナス鎖かつ一本鎖のＲＮＡウイルスであり、このウイルスが院内で流行した場合の一次感染は６週齢から２歳までの小児に発生し、生後４週齢までの発生はまれである（Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３００：３９３−３９６）。（Ｆｅｉｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７，Ｉｎ：Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｗ Ｂ Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ １６５３−１６７５頁；Ｎｅｗ Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｐｒｉｏｒｉｔｉｅｓ，Ｖｏｌ．１，１９８５，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．３９７−４０９頁；Ｒｕｕｓｋａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｕｒｒ．Ｐｒｏｂｌ．Ｐｅｄｉａｔｒ．２３：５０−７９；Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３００：３９３−３９６）。ＲＳＶ感染のリスクがある小児の集団としては、早産児（Ｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３００：３９３−３９６）、気道に先天性奇形を有する小児、気管支肺異形成症の小児（Ｇｒｏｏｔｈｕｉｓ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ ８２：１９９−２０３）、先天性心疾患の小児（ＭａｃＤｏｎａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３０７：３９７−４００）、先天性または後天性免疫不全の小児（Ｏｇｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．Ｊ．７：２４６−２４９；及びＰｏｈｌ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６５：１６６−１６９）、及び嚢胞性線維症の小児（Ａｂｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１１３：８２６−８３０）が挙げられる。
ＲＳＶは成人集団にも同じように感染し得る。この集団においてＲＳＶは主に上気道疾患を引き起こすが、高齢患者（Ｅｖａｎｓ，Ａ．Ｓ．，ｅｄｓ．，１９８９，Ｖｉｒａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｈｕｍａｎｓ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，３rd ｅｄ．，Ｐｌｅｎｕｍ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｏｏｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ ５２５−５４４頁）、及び免疫が抑制された、特に骨髄移植患者である成人（Ｈｅｒｔｚ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６８：２６９−２８１）では、重篤な感染症及び肺炎のリスクが高い可能性がある。リスクのあるその他の患者としては、うっ血性心不全の患者及び慢性閉塞性肺疾患（即ちＣＯＰＤ）の患者が挙げられる。老人ホームの患者及び施設に収容された青年の間で流行したという報告もある（Ｆａｌｓｅｙ，Ａ．Ｒ．，１９９１，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｈｏｓｐ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．１２：６０２−６０８；及びＧａｒｖｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｂｒ．Ｍｅｄ．Ｊ．２８１：１２５３−１２５４）。
確定したＲＳＶ疾患を治療するための選択肢は限られているが、さらに重篤な下気道疾患では、しばしば加湿酸素や呼吸補助のようなかなりの対症的治療が必要とされる（Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，１９９０，Ｆｉｅｌｄｓ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２nd ｅｄ．，Ｖｏｌ．１，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １０４５−１０７２頁）。
感染を治療するために認可された唯一の薬物であるリバビリンは、ＲＳＶ感染に付随する肺炎及び細気管支炎の治療に有効であること、及び免疫力のある小児における重篤なＲＳＶ疾患の経過を改善することが示されている（Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２５：２４−２９）。しかしながら、リバビリンの使用は、病院内でエアロゾル剤が投与された際、これに曝露された妊婦がリスクを負う可能性があるという心配のために限定されている。リバビリンの使用はまた、これが比較的高価であることからも限定されている。
ＲＳＶ感染に対するその他のペプチド阻害剤が同定されており、これらはｉｎ ｖｉｔｒｏでのウイルスの増殖を阻害するが、ｉｎ ｖｉｖｏでは効果を示さなかった。その最も考えられる原因は、経口で利用できないこと及び循環中での半減期が比較的短いことである（Ｌａｍｂｅｒｔ，Ｄ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（１９９６），ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９３：２１８６−２１９１；Ｍａｇｒｏ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，（２０１０），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．８４：７９７０−７９８２；Ｐａｒｋ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２０１１），Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４０９：１９５−２０１）。
ＲＳＶ感染に対するその他の小分子阻害剤も同定されているが、それらのあるものは毒性の副作用をもち得るといったような様々な理由から製造を中止されている（Ｗｙｄｅ，Ｐ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９８），Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．３８：３１−４２；Ｎｉｋｉｔｅｎｋｏ，Ａ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（２００１），Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ Ｌｅｔｔ １１：１０４１−１０４４；Ｄｏｕｇｌａｓ，Ｊ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．（２００３），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ ７７：５０５４−５０６４；Ｂｏｎｆａｎｔｉ，Ｊ．Ｆ．ｅｔ ａｌ，（２００８），Ｊ．Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ５１：８７５−８９６）。
同様に、ワクチンは有用であり得るが、今日までに市販のワクチンは開発されていない。幾つかのワクチン候補は放棄され、その他のものは開発中である（Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ．３２：１３−３６）。ワクチン開発には問題が多いことが証明されている。特に下気道疾患発生のピークは２〜５か月齢であることから、新生児期にはすぐに免疫が必要となる。しかしながら、この時期に新生児の免疫応答は未熟であることが知られている。加えて、乳幼児にはこの時点でもなお母体から得たＲＳＶ抗体が高力価で存在しており、このためにワクチンの免疫原性が低下する可能性がある（Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：３９０７−３９１０；及びＭｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｖａｃｃｉｎｅ ９：１８５−１８９）。
現在、ＲＳＶ疾患の予防のために認可された唯一の方法は受動免疫法である。ＩｇＧの防御的役割を示唆した最初の証拠は、フェレット（Ｐｒｉｎｃｅ，Ｇ．Ａ．，Ｐｈ．Ｄ．ｄｉｓｓ．，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ，１９７５）及びヒト（Ｌａｍｂｒｅｃｈｔ ｅｔ ａｌ，１９７６，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１３４：２１１−２１７；及びＧｌｅｚｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．９８：７０８−７１５）における母体由来の抗体を示した研究から得られた。
Ｈｅｍｍｉｎｇら（Ｍｏｒｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８６，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｕｓｅ ｏｆ Ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ ２８５−２９４頁）は、新生児敗血症に罹患した疑いのある新生児における静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）の薬物動態試験を行っている間に、ＲＳＶ感染の治療または予防にはＲＳＶ抗体が有用である可能性を認識した。次に同じ研究グループは、ＲＳＶ中和抗体が濃縮された過免疫血清または免疫グロブリンが、コットンラット及び霊長類をＲＳＶ感染から防御し得るか否かについて試験を行った（Ｐｒｉｎｃｅ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｖｉｒｕｓ Ｒｅｓ．３：１９３−２０６；Ｐｒｉｎｃｅ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６４：３０９１−３０９２；Ｈｅｍｍｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１５２：１０８３−１０８７；Ｐｒｉｎｃｅ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．４２：８１−８７；及びＰｒｉｎｃｅ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．５５：５１７−５２０）。これらの試験結果により、予防のために投与されたＲＳＶ中和抗体は、コットンラットの気道におけるＲＳＶの複製を阻害することが示唆された。ＲＳＶ抗体を治療のために投与した場合には、コットンラット及び非ヒト霊長類モデルの両方で、肺におけるウイルスの複製が減少した。
さらに最近の研究は、Ｆ及びＧと名付けられた２つの糖タンパク質の役割に集中した。これらの糖タンパク質はＲＳＶの表面に見出され、宿主細胞へのウイルスの付着及び融合に役割を果たしていることから、中和抗体の標的となる（Ｆｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９０，上記；及びＭｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，１９９４，上記）。Ｇタンパク質は特異的な細胞受容体に結合し、Ｆタンパク質はウイルスの細胞への融合を促進する。Ｆタンパク質は感染細胞の表面にも発現しており、次に他の細胞と融合して合胞体を形成する。このように、Ｆタンパク質に対する抗体はウイルスを直接中和するか、またはウイルスと細胞との融合を遮断するか、または合胞体形成を阻止することで、細胞から細胞への伝播を阻止する。
ＲＳＶによって引き起こされる重篤な下気道疾患を予防するため、小児科患者に用いることが認可された最初のヒト化抗体は、Ｆタンパク質へ特異的に結合するパリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標））である。パリビズマブは、ＲＳＶが流行する時期（北半球では１１月から４月）を通して毎月、体重あたりの推奨用量である１５ｍｇ／ｋｇが筋肉内投与される。ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）は、９５％がヒトの抗体配列から、５％がマウスの抗体配列から構成される（Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓｅａｓｅｓ １７６：１２１５−１２２４及び米国特許第５，８２４，３０７号を参照されたい）。
小児科患者に対するＲＳＶ感染の予防のために、ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）の使用は成功を収めてきたが、診療所へ何度も来診して、１５ｍｇ／ｋｇのＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）を何度も筋肉内投与する必要があるため、患者にとって不便であるばかりか、投与を逃す可能性もある。このように、ＲＳＶ抗原に対する免疫特異性を維持しつつ、さらに強力で、かつ薬物動態特性が改善されたことにより、全体的に治療特性が改善された抗体の開発が必要とされた。このような抗体はモタビズマブ（ＮＵＭＡＸ（商標））として知られており、これについては米国特許出願公開公報第２００３／００９１５８４号に記載されている。ＮＵＭＡＸ（商標）は、ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）について上に述べたような、投薬に対する高い要求を克服し得る改良された結合特性を有するが、過敏反応を起こす頻度及びその重症度がＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標）に比較して３ないし５倍高い。このために、ＮＵＭＡＸ（商標）に対するさらなる開発は中止された。
したがって、ＲＳＶ感染に対する有効な治療法がなお必要とされており、特に、ＲＳＶ感染を予防及び治療するための、さらに強力ではあるが、有害な副作用をもたない抗体の同定が必要とされている。本明細書に記載する抗体がＲＳＶ−Ｆに対して示す結合親和性は、パリビズマブまたはモタビズマブに比べれば低いが（即ち本発明の抗体はＲＳＶ−Ｆに対してパリビズマブのように強く結合しない）、より良い中和能を示すために、このような必要性に対応するものである。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、生、弱毒化、もしくは不活性化ＲＳＶ全粒子、または組換え型ウイルス、または精製Ｆタンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＸ２３９９４．１（配列番号３５４）を参照）、または組換え技術によって産生したＦタンパク質（配列番号３５３を参照）のような一次免疫原によって免疫した後に、二次免疫原（全ウイルスまたは精製Ｆタンパク質）またはＦタンパク質の免疫原活性断片によって免疫したマウスから得た。
免疫原は、Ｆタンパク質をコードするＤＮＡか、またはその活性断片であってよい。
免疫原は、６７ＫＤａ前駆体（Ｆ０）のＮ末端もしくはＣ末端ドメインのいずれか、またはフューリン様プロテアーゼにより、前駆体のＮ末端及びＣ末端それぞれから得られた２つの断片である、Ｆ２及びＦ１と名付けられた２つのジスルフィド連結ポリペプチドのいずれかに由来してよい。断片は、ＲＳＶ−Ｆタンパク質の既知の領域のいずれかに由来してよい（Ｓｕｎ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．（２０１３），Ｖｉｒｕｓｅｓ ５：２１１−２２５を参照されたい）。
ＲＳＶ−Ｆの完全長アミノ酸配列は配列番号３５４として示され、またＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＸ２３９９４．１にも示される。
ＲＳＶのＦタンパク質を含む遺伝コンストラクトを配列番号３５３に示す。
特定の実施形態によれば、ＲＳＶ−Ｆへ特異的に結合する抗体は、上記領域の断片を用いるか、または本明細書に記載する領域のＮ末端もしくはＣ末端、またはその両方から、指定領域を約５ないし約２０アミノ酸残基延長したペプチドを用いて調製されてよい。特定の実施形態によれば、上記領域またはその断片のいずれかの組み合わせが、ＲＳＶ−Ｆ特異的な抗体の調製のために用いられてよい。特定の実施形態によれば、ＲＳＶ−Ｆの上記領域またはその断片のいずれか１以上が、単一特異性、二重特異性、または多重特異性抗体の調製のために用いられてよい。
抗体の抗原結合断片
他に特別な指示がない限り、本明細書で用いられる用語「抗体」は、２本の免疫グロブリン重鎖及び２本の免疫グロブリン軽鎖を含む抗体分子（即ち「完全抗体分子」）、及びその抗原結合断片を包含するものとして理解される。本明細書で用いられる用語、抗体の「抗原結合部位」、抗体の「抗原結合断片」などには、天然の、酵素的に入手可能な、合成の、もしくは遺伝的に改変された、抗原へ特異的に結合して複合体を形成するポリペプチドまたは糖タンパク質のいずれもが包含される。本明細書で用いられる用語、抗体の「抗原結合部位」または「抗体断片」は、ＲＳＶ−Ｆへの特異的な結合能を保持している、抗体の１以上の断片を指す。抗体断片には、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）2断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲを含む断片、または分離されたＣＤＲが含まれてよい。抗体の抗原結合断片は、タンパク質分解性の消化、または抗体の可変ドメイン及び（任意に）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作及び発現に関連する組換え遺伝工学技術のような、適切な標準的技術のいずれかを用いることにより、例えば完全抗体分子から作られる。このようなＤＮＡは既知であるか、かつ／または例えば市販の材料、ＤＮＡライブラリー（例えばファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能であるか、または合成可能である。ＤＮＡは配列決定され、化学的に、または分子生物学の技術を用いて、例えば１以上の可変ドメイン及び／または定常ドメインを適切な立体配置とするためか、コドンを導入するためか、システイン残基を作り出すためか、アミノ酸の修飾、負荷、または欠失などのために操作されてよい。
抗原結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、（ｉｉｉ）Ｆｄ断片、（ｉｖ）Ｆｖ断片、（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、（ｖｉ）ｄＡｂ断片、及び（ｖｉｉ）残基抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基（例えばＣＤＲ３ペプチドのような、分離された相補性決定領域（ＣＤＲ））または限定されたＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドからなる最小認識単位が挙げられるが、これらに限定されない。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ、トリボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば一価のナノボディ、二価のナノボディなど）、小モジュール式免疫薬（ｓｍａｌｌ ｍｏｄｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ：ＳＭＩＰ）、及びサメＩｇＮＡＲ可変ドメインのようなその他の改変分子も、本明細書で用いられる表現「抗原結合断片」に包含される。
抗体の抗原結合断片は、典型的には少なくとも１の可変ドメインを含む。可変ドメインはいずれかの大きさのアミノ酸組成物であってよく、一般には１以上のフレームワーク配列に隣接するかまたはフレーム内にある、少なくとも１のＣＤＲを含む。ＶLドメインと共にＶHドメインを有する抗原結合断片において、ＶH及びＶLドメインは、互いに適切に配置され得る。例えば可変領域は二量体であってよく、ＶH−ＶH、ＶH−ＶL、またはＶL−ＶL二量体を含む。あるいは、抗体の抗原結合断片は単量体のＶHまたはＶLドメインを含んでいてもよい。
特定の実施形態によれば、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１の定常ドメインに共有結合した少なくとも１の可変ドメインを含んでよい。本発明の抗体の抗原結合断片内に見出され得る可変ドメイン及び定常ドメインの代表的な立体配置としては、（ｉ）ＶH−ＣH１、（ｉｉ）ＶH−ＣH２、（ｉｉｉ）ＶH−ＣH３、（ｉｖ）ＶH−ＣH１−ＣH２、（ｖ）ＶH−ＣH１−ＣH２−ＣH３、（ｖｉ）ＶH−ＣH２−ＣH３、（ｖｉｉ）ＶH−ＣL、（ｖｉｉｉ）ＶL−ＣH１、（ｉｘ）ＶL−ＣH２、（ｘ）ＶL−ＣH３、（ｘｉ）ＶL−ＣH１−ＣH２、（ｘｉｉ）ＶL−ＣH１−ＣH２−ＣH３、（ｘｉｉｉ）ＶL−ＣH２−ＣH３、及び（ｘｉｖ）ＶL−ＣLが挙げられるが、これらに限定されない。上に挙げた代表的な立体配置を含む可変ドメイン及び定常ドメインのいずれの立体配置においても、可変ドメイン及び定常ドメインは、互いに直接結合しているか、または全体的もしくは部分的にヒンジまたはリンカー領域によって結合してよい。ヒンジ領域は、単一のポリペプチド分子内の隣接する可変ドメイン及び／または定常ドメインの間を可動性または半可動性に結合させる、少なくとも２（例えば５、１０、１５、２０、４０、６０、またはそれを超えた）アミノ酸から構成されてよい。さらに、本発明の抗体の抗原結合断片は、上述の立体配置である可変ドメイン及び定常ドメインのいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（またはその他の多量体）を、互いの非共有結合性の会合（例えば単数または複数のジスルフィド結合）及び／または１以上の単量体のＶHドメインまたはＶLドメインとして含み得る。
完全抗体分子と同様に、抗原結合断片は単一特異性または多重特異性（例えば二重特異性）であってよい。多重特異性抗体の抗原結合断片には、少なくとも２つの異なる可変ドメインが典型的に含まれ、各可変ドメインは別々の抗原へ、または同じ抗原上の異なるエピトープへ、特異的に結合可能である。本明細書に開示される代表的な二重特異性抗体の型式を含む多重特異性抗体の型式のいずれかは、当該技術分野において利用できるルーチン技術を用いて、本発明の抗体の抗原結合断片への使用に適応されてよい。
ヒト抗体の調製
トランスジェニックマウスによってヒト抗体を産生する方法は、当該技術分野において公知である。このような公知の方法のいずれかは、本発明に関連して、ＲＳＶ−Ｆへ特異的に結合するヒト抗体を作製するために用いることができる。
最初に、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術（例えばＵＳ６，５９６，５４１、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）を参照されたい）またはモノクローナル抗体産生のためのその他の公知の方法を用いて、ヒト可変領域とマウス定常領域とを有する、ＲＳＶ−Ｆに対する高親和性キメラ抗体を分離する。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、内在性マウス定常領域座位へ機能的に連結するヒト重鎖及び軽鎖の可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの作製に関連するものであり、このマウスは抗原刺激に応答してヒト可変領域とマウス定常領域とを含む抗体を産生する。該抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが分離され、ヒト重鎖及び軽鎖の定常領域をコードするＤＮＡへ機能的に連結される。次にこのＤＮＡは、完全ヒト抗体を発現することが可能な細胞内で発現される。
一般には、関心のある抗原をＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスへ負荷し、次に抗体を発現するマウスからリンパ球（例えばＢ細胞）を回収する。リンパ球をミエローマ細胞株と融合させて不死ハイブリドーマ細胞株を調製してよく、このようなハイブリドーマ細胞株はスクリーニングされて、関心のある抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定するために選択される。重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡが分離されて、望ましいアイソタイプの重鎖及び軽鎖の定常領域へ連結されてよい。このような抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞のような細胞内で産生されてよい。あるいは、抗原特異的なキメラ抗体または軽鎖及び重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡが、抗原特異的なリンパ球から直接分離されてもよい。
最初に、ヒト可変領域とマウス定常領域とを有する高親和性キメラ抗体を分離する。以下の実施例の項で説明するように、抗体は、その性質を決定された後、親和性、選択性、エピトープなどの望ましい特性について選択される。マウス定常領域を望ましいヒト定常領域に置換して、本発明の完全ヒト抗体、例えば野生型もしくは改変型のＩｇＧ１またはＩｇＧ４を産生する。選択される定常領域は使用の特異性にしたがって様々であり得るが、可変領域には高親和性の抗原結合特性及び標的特異的な特性が備わっている。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、固相に固定化されたかまたは液相にある抗原への結合によって測定した際、約１．０×１０-7Ｍないし約１．０×１０-12Ｍの範囲
の親和性（ＫD）を有する。特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、固相に固定化されたかまたは液相にある抗原への結合によって測定した際、約１×１０-7Ｍないし約６×１０-10Ｍの範囲の親和性（ＫD）を有する。特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、固相に固定化されたかまたは液相にある抗原への結合によって測定した際、約１×１０-7Ｍないし約９×１０-10Ｍの範囲の親和性（ＫD）を有する。マウス定常領域を望ましいヒト定常領域に置換して、本発明の完全ヒト抗体を産生する。選択される定常領域は使用の特異性にしたがって様々であり得るが、可変領域には高親和性の抗原結合特性及び標的特異的な特性が備わっている。驚くべきことに、本発明のある抗体はモタビズマブよりも低い親和性を示したが、ウイルス中和に関してはモタビズマブよりも強力であった。
生物学的同等性
本発明のＲＳＶ−Ｆ抗体及び抗体断片には、それが有するアミノ酸配列が記載された抗体のアミノ酸配列とは異なるが、ＲＳＶ−Ｆへの結合能は保持しているタンパク質も包含される。このような変異抗体及び抗体断片は、親配列と比較した際に、アミノ酸の付加、欠失、または置換を１以上含むが、記載された抗体の生物活性と基本的に同等の生物活性を示す。同様に、本発明の抗体をコードするＤＮＡ配列には、開示した配列と比較した際にヌクレオチドの付加、欠失、または置換を１以上含むが、本発明の抗体または抗体断片と基本的には生物学的に同等な抗体または抗体断片をコードする配列も包含される。
２つの抗原結合タンパク質、即ち抗体が、同じモル用量を同様の実験条件下で、単回用量または複数回用量にて投与した際に、例えば吸収の速度及び程度に有意差がみられない場合、これらは医薬等価物または医薬代替物とみなされる。ある抗体は、吸収の程度が同等であるが、吸収の速度が同等ではない場合にも等価物または医薬代替物であるとみなされ、さらに、このような吸収速度の相違は意図的であり、標識法を反映しており、例えば慢性的な使用において有効な体内の薬物濃度を達成するために必須ではなく、かつ試験された特定の製剤に対して医学的に重要ではないと考えられるため、生物学的に同等であるとみなされ得る。
一実施形態によれば、２つの抗原結合タンパク質は、これらの安全性、純度、及び効力について臨床的に意味のある相違がない場合、生物学的に同等である。
一実施形態によれば、２つの抗原結合タンパク質は、患者が参照製剤と生物学的製剤を１回以上交換した場合、このような交換なしに継続した治療法に比較して、臨床的に有意な免疫原性の変化または有効性の減少を含む有害作用のリスク増大を予想することなく交換が可能であった際に、生物学的に同等である。
一実施形態によれば、２つの抗原結合タンパク質は、これらの両方が１または２以上の使用状態に対する共通の１または２以上の作用機構によって作用する場合、このような機構が公知である限り、生物学的に同等である。
生物学的同等性は、ｉｎ ｖｉｖｏ及び／またはｉｎ ｖｉｔｒｏでの方法によって示され得る。生物学的同等性の評価としては、例えば（ａ）ヒトまたはその他の哺乳類において、血液、血漿、血清、またはその他の体液中の抗体もしくはその代謝産物の濃度が時間の関数として測定されるｉｎ ｖｉｖｏ試験、（ｂ）ヒトのｉｎ ｖｉｖｏにおける生物学的利用能データに関連し、かつ該データから合理的に予想可能なｉｎ ｖｉｔｒｏ試験、（ｃ）ヒトまたはその他の哺乳類において、抗体（またはその標的）の適切な急性の薬理学的効果が時間の関数として測定されるｉｎ ｖｉｖｏ試験、及び（ｄ）抗体の安全性、有効性、または生物学的利用能もしくは生物学的同等性が確立された、十分に制御された治験が挙げられる。
本発明の抗体の生物学的に同等な変異体は、例えば残基もしくは配列を様々に置換すること、または生物活性に不必要な末端または内部の残基もしくは配列を削除することによって構築され得る。例えば、生物活性に必須ではないシステイン残基を削除するかまたはその他のアミノ酸によって置換することで、再生後に起こる不必要または不正確な分子内ジスルフィド橋の形成を阻止できる。その他に、生物学的に同等な抗体としては、抗体のグリコシル化特性を改変するアミノ酸の変更、例えばグリコシル化を排除または除去する変異を含む抗体変異体が挙げられてよい。
抗体の生物学的特性
一般に、本発明の抗体はＲＳＶ−Ｆへ結合することによって、ウイルス膜と宿主細胞膜との融合を遮断するように作用し得る。本発明の抗体はまた、ＲＳＶ−Ｆへ結合することによって、細胞から細胞へのウイルスの伝播を遮断し、かつ細胞のＲＳＶ感染に付随する合胞体形成も遮断し得る。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、そのアミノ酸配列が配列番号３５４及びＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＸ２３９９４．１に示される、完全長の未変性Ｆタンパク質のその他のいずれかの領域または断片へ結合することによって、ＲＳＶの細胞膜への融合を遮断または阻害することで作用し得る。該抗体は、配列番号３５３に見出されるいずれかの領域、または配列番号３５３内に見出される断片にも結合し得る。
一実施形態によれば、本発明によって、ＲＳＶの亜型ＡまたはＢのＦタンパク質に結合する完全ヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合断片が提供され、該抗体またはその断片は、以下に記載する特性の１以上を示す。（ａ）完全ヒトモノクローナル抗体であること、（ｂ）約１×１０-7Ｍないし約６×１０-10Ｍの範囲のＫDを示すこと、（ｃ）呼吸器合胞体ウイルスの亜型Ａ及び亜型Ｂ株を、ｉｎ ｖｉｔｒｏで中和できること、（ｄ）ＲＳＶ感染の動物モデルにおいて、ウイルス量を有意に減少させる能力を示すこと、（ｅ）鼻及び／または肺におけるウイルス力価の減少が、パリビズマブに比較して１〜２ｌｏｇ大きいこと、（ｆ）ＲＳＶの亜型Ａに感染したマウスモデルに皮下投与した際、有効量９９（ＥＤ99）が約０．１５ｍｇ／ｋｇ以下であること、またはＲＳＶの亜型Ａに感染したコットンラットモデルに投与した際、ＥＤ99が約０．６２ｍｇ／ｋｇ以下であること、またはＲＳＶの亜型Ｂに感染したコットンラットモデルに投与した際、ＥＤ99が約２．５ｍｇ／ｋｇ以下であること、（ｇ）ＥＤ99が、パリビズマブまたはモタビズマブのＥＤ99よりも約２ないし３倍低いこと、（ｈ）ＲＳＶの１以上の亜型Ａ実験室株に対する中和力が、パリビズマブよりも約１５ないし１７倍改善されていること、またはＲＳＶの１以上の亜型Ａ臨床株に対する中和力が、パリビズマブよりも約１０ないし２２倍改善されていること、（ｉ）ＲＳＶの亜型Ｂ実験室株に対する中和力が、パリビズマブよりも約２ないし５倍改善されていること、（ｊ）ＲＳＶの亜型Ａ実験室株または臨床株に対する中和力が、ＡＭ−２２よりも約０．５ないし２倍改善されていること、（ｋ）ＲＳＶの１以上の亜型Ｂ実験室株に対する中和力が、ＡＭ−２２よりも約２．５ないし１７倍改善されていること、（ｌ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、及び３３８からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列が少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、その実質的な類似配列を有するＨＣＶＲを含むこと、（ｍ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、及び３４６からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列が少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、その実質的な類似配列を有するＬＣＶＲを含むこと、（ｎ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、及び３４４からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列が少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、その実質的な類似配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、並びに配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、及び３５２からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列が少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、その実質的な類似配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含むこと、（ｏ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、及び３４０からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列が少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、その実質的な類似配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、及び３４２からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列が少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、その実質的な類似配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、及び３４８からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列が少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、その実質的な類似配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、並びに配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、及び３５０からなる群より選択されるアミノ酸配列、または配列が少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％同一である、その実質的な類似配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含むこと、（ｐ）配列番号３５４のおおよその位置１６１ないしおおよその位置１８８の範囲の残基を含むアミノ酸配列と相互作用すること、（ｑ）配列番号３５４の位置１７３のセリン、または配列番号３５４の位置１７４のスレオニン、または配列番号３５４の位置１７３のセリン及び配列番号３５４の位置１７４のスレオニンの両方と相互作用すること、（ｒ）ＲＳＶ−Ｆタンパク質への結合に対して、パリビズマブまたはモタビズマブと交差競合しないこと、（ｓ）ウイルスの細胞への融合を阻害すること。
本発明の特定の抗ＲＳＶ−Ｆ抗体は、ＲＳＶのＦタンパク質に結合してＲＳＶの亜型Ａ及びＢ両方の感染力を中和可能であることが、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイによって決定された。本発明の抗体がＲＳＶの亜型に結合してその感染力を中和する能力は、本明細書に記載するように、結合アッセイ、または中和アッセイ、またはｉｎ ｖｉｖｏ防御アッセイを含む当業者に公知の標準的方法のいずれかを用いて測定されてよい。
結合活性、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける中和、及びｉｎ ｖｉｖｏにおける有効性を測定するための、限定されない代表的なｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏアッセイについて、本明細書の実施例３、４、５、７、８、９、１０、１１、及び１２で説明する。実施例３では、ヒト抗ＲＳＶ−Ｆ抗体の結合親和性及び速度定数を表面プラズモン共鳴によって決定した。測定はＢｉａｃｏｒｅ４０００またはＴ２００装置によって行った。実施例４では、抗体の効力をＲＳＶのマイクロ中和アッセイによって試験した。実施例５では、２つの異なった動物モデルにおいて、本発明の抗体がｉｎ ｖｉｖｏにおいてＲＳＶ感染を中和する能力をもつことを示した。実施例７及び８では、本発明の抗体と、ＲＳＶ−Ｆタンパク質の特定の結合部位との相互作用を示した。実施例９及び１０では、ＲＳＶの亜型Ａ及びＢの幾つかの実験株及び臨床株に対する抗体の中和能を示した。実施例１１では、本発明の抗体が、ウイルスの細胞への融合を阻止する能力をもつことを示した。実施例１２では、ＲＳＶ−Ｆへ結合する様々な抗体の交差競合について示した。
エピトープマッピングと関連技術
抗体がポリペプチドまたはタンパク質内の「１以上のアミノ酸と相互作用する」か否かを決定するため、当業者に公知の様々な技術が用いられてよい。代表的な技術として、例えば、Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅのＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．，ＮＹ）に記載されるようなルーチンの交差遮断アッセイが行われてよい。その他の方法としては、アラニン走査変異解析、ペプチドブロット分析（Ｒｅｉｎｅｋｅ（２００４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２４８：４４３−６３）、ペプチド切断分析、結晶学的試験、及びＮＭＲ分析が挙げられる。加えて、抗原のエピトープ切断、エピトープ抽出、及び化学修飾のような方法も用いられてよい（Ｔｏｍｅｒ（２０００）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ９：４８７−４９６）。抗体が相互作用するポリペプチド内のアミノ酸を同定するために用いられる別の方法は、マススペクトロメトリーにより検出される水素／重水素交換である。一般的な用語として、水素／重水素交換法は、関心のあるタンパク質を重水素で標識した後、この重水素標識タンパク質へ抗体を結合させることに関連する。次に、タンパク質／抗体複合体を水中へ移すと、抗体複合体によって保護されたアミノ酸内の交換性プロトンは、接触面の一部ではないアミノ酸内の交換性プロトンよりも遅い速度で、重水素から水素へ逆交換される。結果として、タンパク質／抗体の接触面の一部を形成するアミノ酸は、重水素を保持し得るため、接触面に含まれていないアミノ酸に比較して質量が大きい。抗体の解離後、標的タンパク質をプロテアーゼ切断及びマススペクトロメトリー分析に供することによって、抗体が相互作用する特異的なアミノ酸に関連する、重水素で標識された残基が明らかとなる。例えば、Ｅｈｒｉｎｇ（１９９９）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６７（２）：２５２−２５９；Ｅｎｇｅｎ ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ （２００１）Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．７３：２５６Ａ−２６５Ａを参照されたい。
用語「エピトープ」は、Ｂ細胞及び／またはＴ細胞が応答する、抗原上の部位を指す。Ｂ細胞エピトープは、連続したアミノ酸、またはタンパク質の三次構造フォールディングに隣接する非連続のアミノ酸の両方から形成され得る。連続したアミノ酸から形成されたエピトープは、典型的には変性溶媒にさらしても保持されているが、三次構造フォールディングによって形成されたエピトープは、典型的には変性溶媒による処理後に失われる。エピトープは独自の空間的構造内に、典型的には少なくとも３の、さらに一般的には少なくとも５、または８〜１０のアミノ酸を含む。
抗原構造に基づいた抗体プロファイリング（Ａｎｔｉｇｅｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ：ＡＳＡＰ）としても知られる改変援助プロファイリング（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ：ＭＡＰ）は、化学的または酵素的に修飾した抗原表面への各抗体の結合プロファイルの類似性に従い、同一の抗原に対する多数のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を分類する方法である（ＵＳ２００４／０１０１９２０）。各分類は、別の分類で表されるエピトープと明らかに異なっているか、または部分的に重複している独特なエピトープを反映し得る。この技術によれば、遺伝的に異なる抗体に焦点を当てて、遺伝的に同等な抗体を選別することが可能となる。ＭＡＰをハイブリドーマのスクリーニングに応用することで、望ましい特性をもつｍＡｂを産生するまれなハイブリドーマクローンの同定が容易となり得る。ＭＡＰは、本発明の抗体を異なるエピトープに結合する抗体群へ分別するために用いてよい。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体または抗原結合断片は、配列番号３５４のおおよその位置１６１ないしおおよその位置１８８の範囲のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列と相互作用する。特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、上で同定した領域を超えて、ＲＳＶ−Ｆタンパク質のアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかに向かって約５ないし１０アミノ酸残基、または約１０ないし１５アミノ酸残基、または約１５ないし２０アミノ酸残基延長したアミノ酸残基と相互作用し得る。
一実施形態によれば、本発明によって、ＲＳＶ−Ｆへ特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合断片が提供され、該抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３５５及び３５６からなる群より選択される少なくとも１のアミノ酸配列と相互作用する。
一実施形態によれば、本発明によって、ＲＳＶ−Ｆへ特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合断片が提供され、該抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３５４の残基１６１ないし１８８のうちの少なくとも１のアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態によれば、本発明によって、ＲＳＶ−Ｆへ特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合断片が提供され、該抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３５５または配列番号３５６内の少なくとも１のアミノ酸残基と相互作用する。
一実施形態によれば、本発明によって、ＲＳＶ−Ｆへ特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体、またはその抗原結合断片が提供され、該抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３５４の位置１７３のセリンもしくは配列番号３５４の位置１７４のスレオニンのいずれか、または配列番号３５４の位置１７３のセリン及び配列番号３５４の位置１７４のスレオニンの両方と相互作用する。
本発明には、本明細書の表１に記載する特異的な代表的抗体のいずれかに結合するエピトープと同じエピトープに結合する抗ＲＳＶ−Ｆ抗体が含まれる。同様に本発明には、本明細書の表１に記載する特異的な代表的抗体のいずれかと競合的にＲＳＶ−Ｆ断片へ結合する抗ＲＳＶ−Ｆ抗体も含まれる。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、ＲＳＶ−Ｆへの結合に関してパリビズマブ、モタビズマブ、またはＡＭ−２２と交差競合しない。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、パリビズマブまたはモタビズマブが結合するＲＳＶ−Ｆタンパク質上の同じエピトープに結合しない。
特定の実施形態によれば、本発明の抗体は、配列番号３５４のアミノ酸残基２５５ないしアミノ酸残基２７６の範囲にある、ＲＳＶ−Ｆ上のエピトープに結合しない。
当該技術分野において公知のルーチン法を用いることによって、ある抗体が、参照抗ＲＳＶ−Ｆ抗体が結合するエピトープと同じエピトープへ結合するか否か、または結合に関して競合するか否かを容易に判定することができる。例えば試験抗体が、本発明の参照ＲＳＶ−Ｆ抗体が結合する同じエピトープへ結合するか否かについて判定するためには、参照抗体を、飽和状態でＲＳＶ−Ｆタンパク質またはペプチドに結合させる。次に、試験抗体のＲＳＶ−Ｆ分子への結合能を評価する。参照抗ＲＳＶ−Ｆ抗体がＲＳＶ−Ｆへ飽和状態で結合した後に、試験抗体の結合が可能であった場合に、試験抗体は、参照抗ＲＳＶ−Ｆ抗体が結合したエピトープとは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。一方で、参照抗ＲＳＶ−Ｆ抗体がＲＳＶ−Ｆへ飽和状態で結合した後に、試験抗体がＲＳＶ−Ｆ分子へ結合できなかった場合には、試験抗体は、本発明の参照抗ＲＳＶ−Ｆ抗体が結合したエピトープと同じエピトープに結合し得る。
ある抗体が、結合に関して参照抗ＲＳＶ−Ｆ抗体と競合するか否かについて判定するためには、上記の結合の方法論を２つの方向で行う。第１の方向では、参照抗体を飽和状態でＲＳＶ−Ｆ分子に結合させた後、試験抗体のＲＳＶ−Ｆ分子への結合について評価する。第２の方向では、試験抗体を飽和状態でＲＳＶ−Ｆ分子に結合させた後、参照抗体のＲＳＶ−Ｆ分子への結合について評価する。両方向において、最初の（飽和させた）抗体のみがＲＳＶ−Ｆ分子へ結合できる場合、試験抗体と参照抗体とは、ＲＳＶ−Ｆへの結合に対して競合すると結論される。当業者によって理解され得るように、結合に関して参照抗体と競合する抗体は、必ずしも参照抗体が結合するエピトープと同一のエピトープに結合するわけではなく、重複するかまたは隣接するエピトープへの結合によって参照抗体の結合を立体的に遮断する場合がある。
２つの抗体のそれぞれが、抗原へのもう一方の結合を競合的に阻害（遮断）する場合、これら２つの抗体は同一であるかまたは重複したエピトープへ結合する。即ち、競合的結合アッセイを用いた測定によれば、１、５、１０、２０、または１００倍過剰な一抗体は、もう一方の結合を、少なくとも５０％、好ましくは７５％、９０％、または９９％までも阻害する（例えばＪｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９０ ５０：１４９５−１５０２を参照されたい）。あるいは、一抗体の結合を減少または排除する抗原内の全てのアミノ酸変異が、基本的にもう一方の結合を減少または排除する場合、２つの抗体は同じエピトープに対するものである。一抗体の結合を減少または排除する幾つかのアミノ酸変異が、もう一方の結合を減少または排除する場合、２つの抗体に対するエピトープは重複している。
試験抗体の結合が観察されなかった場合、これが実際には参照抗体が結合するエピトープと同一のエピトープへ結合するためであるか、または立体的遮断（またはその他の現象）のためであるかを確認するため、さらなるルーチン実験（例えばペプチド変異及び結合解析）を行ってもよい。この種の実験は、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、または当該技術分野において利用可能なその他の定量的もしくは定性的な抗体結合アッセイを用いて行うことができる。
免疫抱合体
本発明は、治療用成分、例えばＲＳＶによる一次感染の重症度を低下させるか、または咳、発熱、肺炎を含む、ＲＳＶ感染に付随する少なくとも１の症状もしくはその重症度を寛解させる薬剤、に抱合したヒトＲＳＶ−Ｆモノクローナル抗体（「免疫抱合体」）を包含する。このような薬剤は、ＲＳＶ−Ｆに対する別の第２抗体またはワクチンであってもよい。抗ＲＳＶ−Ｆ抗体に抱合されてよい治療用成分の型については、治療が必要な状態及び達成されるべき望ましい治療効果が考慮されるであろう。あるいは、望ましい治療効果が、ＲＳＶ感染、またはこのような感染からもたらされる、限定はされないが肺炎のような、その他のいずれかの状態に付随する続発症もしくは症状、を治療するためのものである場合、このような状態の続発症または症状を治療するためか、または本発明の抗体のいずれかの副作用を軽減するために適切な薬剤を抱合させることが有利であり得る。免疫抱合体を形成するために適した薬剤の例は当該技術分野において公知である。例えばＷＯ０５／１０３０８１を参照されたい。
多重特異性抗体
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性であってよい。多重特異性抗体は、一つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに対して特異的であるか、または二つ以上の標的ポリペプチドに特異的な抗原結合ドメインを含んでいてもよい。例えばＴｕｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９；Ｋｕｆｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２２：２３８−２４４を参照されたい。本発明の抗体は、別の機能的分子、例えば別のペプチドまたはタンパク質に連結させてよいか、またはこれらと共に発現させてもよい。例えば、抗体またはその断片を（例えば化学結合、遺伝的融合、非共有結合性の会合などによって）別の抗体または抗体断片のようなその他の分子的物質の１以上へ機能的に連結させて、第２の結合特異性をもつ二重特異性または多重特異性抗体を産生することができる。
本発明において用いられてもよい代表的な二重特異性抗体の型式には、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣH3ドメイン及び第２のＩｇ ＣH3ドメインの使用が含まれ、第１及び第２のＩｇ ＣH3ドメインは少なくとも一つのアミノ酸が互いに異なり、また、二重特異性抗体に少なくとも一つのアミノ酸の違いがある場合、アミノ酸に違いがない二重特異性抗体に比較して、プロテインＡへの結合が低下する。一実施形態によれば、第１のＩｇ ＣH3ドメインはプロテインＡに結合し、第２のＩｇ ＣH3ドメインは、Ｈ９５Ｒ修飾（ＩＭＧＴのエクソン番号付けによる。ＥＵの番号付けではＨ４３５Ｒである。）のような、プロテインＡへの結合が低下するかまたはプロテインＡへ結合しなくなる変異を含む。第２のＣH3には、さらにＹ９６Ｆ修飾（ＩＭＧＴによる。ＥＵによればＹ４３６Ｆ。）が含まれ得る。第２のＣH3に見出され得るさらなる修飾として、ＩｇＧ１抗体の場合にはＤ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる。ＥＵによればＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、及びＶ４２２Ｉ）、ＩｇＧ２抗体の場合にはＮ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる。ＥＵによればＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、及びＶ４２２Ｉ。）、並びにＩｇＧ４抗体の場合にはＱ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、及びＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる。ＥＵによればＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、及びＶ４２２Ｉ。）が挙げられる。上記の二重特異性抗体の型式における変動は、本発明の範囲内であることが意図される。
治療用の投与及び製剤
本発明は、本発明の抗ＲＳＶ−Ｆ抗体またはその抗原結合断片を含む治療用組成物を提供する。本発明に従った治療用組成物は、製剤中に含まれて移動、送達、耐性などを改善する適切な担体、賦形剤、及びその他の薬剤と共に投与される。多数の適切な製剤が、全ての製薬化学者に知られている処方集であるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ中に見出される。これらの製剤としては、例えば、散剤、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（陽イオン性または陰イオン性）を含む小胞（例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標））、ＤＮＡ抱合体、無水吸収ペースト、水中油型及び油中水型乳剤、乳剤、カーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、及びカーボワックスを含む半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”ＰＤＡ（１９９８）Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ ５２：２３８−３１１も参照されたい。
本発明の各抗体の用量は、投与される被験体の年齢及び体重、標的となる疾病、状態、投与経路などによって異なり得る。本発明の抗体を、患者のＲＳＶ感染を治療するため、または咳のような、ＲＳＶ感染に付随する１以上の症状を治療するため、または患者のＲＳＶ感染に付随する肺炎を治療するため、または疾病の重症度を低下させるために使用する際、本発明の各抗体を、静脈内または皮下に、通常体重あたり約０．０１ないし約３０ｍｇ／ｋｇ、さらに好ましくは体重あたり約０．１ないし約２０ｍｇ／ｋｇ、または体重あたり約０．１ないし約１５ｍｇ／ｋｇ、または体重あたり約０．０２ないし約７ｍｇ／ｋｇ、体重あたり約０．０３ないし約５ｍｇ／ｋｇ、または体重あたり約０．０５ないし約３ｍｇ／ｋｇ、または体重あたり約１ｍｇ／ｋｇ、または体重あたり約３．０ｍｇ／ｋｇ、または体重あたり約１０ｍｇ／ｋｇ、または体重あたり約２０ｍｇ／ｋｇの単回用量によって投与することが有利である。必要に応じて複数回用量を投与してもよい。状態の重症度によって、治療の頻度及び期間を調整することができる。特定の実施形態によれば、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも約０．１ｍｇないし約８００ｍｇ、約１ないし約６００ｍｇ、約５ないし約３００ｍｇ、または約１０ないし約１５０ｍｇ、約１０ないし約１００ｍｇ、または約１０ないし約５０ｍｇの初回用量によって投与されてよい。特定の実施形態によれば、初回用量に続いて、初回用量と大体同じかまたはそれよりも少ない量の、抗体またはその抗原結合断片の第２の、または複数回の用量が投与されてよく、この初回用量に続く用量は、少なくとも１日ないし３日、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも３週間、少なくとも４週間、少なくとも５週間、少なくとも６週間、少なくとも７週間、少なくとも８週間、少なくとも９週間、少なくとも１０週間、少なくとも１２週間、または少なくとも１４週間の間をあけて投与される。
本発明の医薬組成物を投与するために、例えばリポソーム内の被包、微粒子、マイクロカプセル、変異ウイルスを発現可能な組換え細胞、受容体を介したエンドサイトーシスのような公知の様々な送達系を用いることができる（例えばＷｕ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２を参照されたい）。導入方法としては、皮内、経皮、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。組成物は、簡便な経路のいずれか、例えば点滴またはボーラス投与によって、上皮または皮膚粘膜の内面（例えば口腔粘膜、鼻粘膜、直腸及び腸粘膜など）を通した吸収によって投与されてよく、かつ生物学的に活性のあるその他の薬剤と共に投与されてよい。投与は全身性または局所性であってよい。組成物はエアロゾル製剤として送達されてもよい（ＵＳ２０１１／０３１１５１５及びＵＳ２０１２／０１２８６６９を参照されたい）。呼吸器疾患の治療に有用な薬剤の吸入による送達は、さらに広く受け入れられるようになってきている（Ａ．Ｊ．Ｂｉｔｏｎｔｉ ａｎｄ Ｊ．Ａ．Ｄｕｍｏｎｔ，（２００６），Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ，５８：１１０６−１１１８を参照されたい）。このような送達機構は、肺疾患の局所的な治療において有効であることに加え、抗体の全身的な送達にも有用であり得る（Ｍａｉｌｌｅｔ ｅｔ ａｌ．（２００８），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．２５，Ｎｏ．６，２００８を参照されたい）。
医薬組成物は、小胞、特にリポソームによって送達することもできる（例えばＬａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３を参照されたい）。
ある状況では、医薬組成物は制御された放出系によって送達されてもよい。一実施形態によればポンプが用いられ得る。別の実施形態によれば、高分子材料を用いることができる。さらに別の実施形態によれば、制御された放出系は組成物の標的の近傍に配置可能であるため、全身に対する用量の一部分のみが必要とされる。
注射用製剤としては、静脈内、皮下、皮内、及び筋肉内注射、点滴などのための剤形が挙げられてよい。これらの注射用製剤は、公知の方法によって調製され得る。例えば注射用製剤は、従来から注射用に用いられている無菌水性溶媒または油性溶媒中に、上記の抗体またはその塩を溶解、懸濁、または乳化させることにより調製されてよい。注射用の水性溶媒としては、例えば、生理食塩水、グルコース及びその他の助剤を含む等張溶液などが挙げられ、これらは、アルコール（例えばエタノール）、多価アルコール（例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性の界面活性剤［例えばポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加体）］などのような、適切な可溶化剤と組み合わせて用いてよい。油性溶媒としては、例えば、胡麻油、大豆油などが使用され、これらは、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどのような可溶化剤と組み合わせて用いてよい。このようにして調製された注射用製剤は、適切なアンプル内に好ましく詰められる。
本発明の医薬組成物は、標準的な針及びシリンジを用いて、皮下または静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関しては、ペン型注入器が本発明の医薬組成物の送達へ容易に応用できる。このようなペン型注入器は再使用可能であるか、または使い捨てである。再使用可能なペン型注入器には、一般に医薬組成物を含む交換カートリッジが用いられている。カートリッジ内の医薬組成物が全て投与されると、空になったカートリッジを廃棄して、医薬組成物を含む新しいカートリッジと容易に交換できる。こうしてペン型注入器は再使用できる。使い捨てのペン型注入器では、交換可能なカートリッジは用いらず、医薬組成物がプレフィルされたリザーバーが注入器内に取り付けられている。リザーバーの医薬組成物が空になると、装置全体が廃棄される。
本発明の医薬組成物を皮下送達するためには、多数の、再使用可能なペン型注入器及び自動注入器が応用できる。数例として、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．，ウッドストック、英国）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，ブルグドルフ、スイス）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．，インディアナポリス、インディアナ州）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ，ＩＩ及びＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，コペンハーゲン、デンマーク）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，コペンハーゲン、デンマーク）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，フランクリン・レイクス、ニュージャージー州）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、及びＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ，フランクフルト、独国）が挙げられるが、確実にこれらには限定されない。本発明の医薬組成物の皮下送達に応用できる使い捨てのペン型注入器の数例として、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（ｓａｎｏｆｉ−ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、ＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ，サウザンドオークス、カリフォルニア州）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ，シュトゥットガルト、独国）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ，Ｌ．Ｐ．）、及びＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ，アボットパーク、イリノイ州）が挙げられるが、確実にこれらには限定されない。
上記の経口または非経口による使用のための医薬組成物は、有効成分の用量に適した単位用量の剤形として有利に調製される。このような単位用量の剤形としては、例えば錠剤、丸剤、カプセル、注射（アンプル）、坐薬などが挙げられる。前記抗体の含有量は、一般に単位用量の剤形あたり約５ないし約５００ｍｇであり、特に注射用には、前記抗体は約５ないし約１００ｍｇ、その他の剤形には約１０ないし約２５０ｍｇ含まれることが好ましい。
投与計画
本発明の特定の実施形態によれば、ＲＳＶ−Ｆに対する抗体の複数回用量が、規定の期間にわたって被験体へ投与されてよい。本発明のこの態様に従った方法は、ＲＳＶ−Ｆに対する抗体の複数回用量を、被験体へ連続的に投与することを含む。本明細書で用いられる「連続的に投与する」は、ＲＳＶ−Ｆに対する抗体の各用量が、異なる時点で、例えば所定の間隔（例えば時間、日、週、または月）によって隔てられた異なる日に、被験体へ投与されることを意味する。本発明には、ＲＳＶ−Ｆに対する抗体の初回用量を１回、それに続くＲＳＶ−Ｆに対する抗体の第２用量を１回以上、及び任意に、それに続くＲＳＶ−Ｆに対する抗体の第３用量を１回以上、患者へ連続的に投与することを含む方法も包含される。
用語「初回用量」、「第２用量」、及び「第３用量」は、ＲＳＶ−Ｆに対する抗体の投与についての時系列を指す。したがって「初回用量」は、治療計画の最初に投与される用量であり（「ベースライン用量」とも称される）、「第２用量」は初回用量の後に投与される用量であり、「第３用量」は第２用量の後に投与される用量である。初回用量、第２用量、及び第３用量は、全てＲＳＶ−Ｆに対する抗体を同量含み得るが、一般に、投与頻度に関しては互いに異なり得る。しかしながら特定の実施形態によれば、初回用量、第２用量、及び／または第３用量に含まれるＲＳＶ−Ｆに対する抗体の量は、治療過程において互いに異なる（例えば適切に増減される）。特定の実施形態によれば、治療計画の最初に、「負荷用量」として２回以上（例えば２、３、４、または５回）の用量が投与され、それに続く用量は低い頻度で投与される（例えば「維持用量」）。
本発明の代表的な一実施形態によれば、各第２用量及び／または第３用量は、直前の用量投与後１ないし２６週（例えば１、１と１／２、２、２と１／２、３、３と１／２、４、４と１／２、５、５と１／２、６、６と１／２、７、７と１／２、８、８と１／２、９、９と１／２、１０、１０と１／２、１１、１１と１／２、１２、１２と１／２、１３、１３と１／２、１４、１４と１／２、１５、１５と１／２、１６、１６と１／２、１７、１７と１／２、１８、１８と１／２、１９、１９と１／２、２０、２０と１／２、２１、２１と１／２、２２、２２と１／２、２３、２３と１／２、２４、２４と１／２、２５、２５と１／２、２６、２６と１／２週、またはそれを超えた週）の間に投与される。本明細書で用いられる「直前の用量」との語句は、連続する複数回投与において、すぐ次の用量を投与する前に、介在する用量なしに連続的に患者へ投与される、ＲＳＶ−Ｆに対する抗体の用量を意味する。
本発明のこの態様に従った方法は、ＲＳＶ−Ｆに対する抗体の第２用量及び／または第３用量を、いずれかの回数患者に投与することを含み得る。例えば特定の実施形態によれば、第２用量が単回のみ患者に投与される。その他の実施形態によれば、第２用量が２回以上（例えば２、３、４、５、６、７、８回、またはそれを超えて）患者に投与される。同様に、特定の実施形態によれば、第３用量が単回のみ患者に投与される。その他の実施形態によれば、第３用量が２回以上（例えば２、３、４、５、６、７、８回、またはそれを超えて）患者に投与される。
複数回の第２用量に関する実施形態によれば、各第２用量は、他の第２用量と同頻度にて投与されてよい。例えば各第２用量は、直前の用量の１ないし２週間後に患者に投与されてよい。同様に、複数回の第３用量に関する実施形態によれば、各第３用量は、他の第３用量と同頻度にて投与されてよい。例えば各第３用量は、直前の用量の２ないし４週間後に患者に投与されてよい。あるいは、第２用量及び／または第３用量を患者に投与する頻度は、治療計画の過程を通して異なり得る。投与の頻度は、治療過程の間に、臨床検査に従った各患者の必要性に応じて医師によっても調整され得る。
治療のための抗体の使用
本抗体はＲＳＶ融合タンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）への結合／相互作用を有することから、ウイルスと宿主細胞膜との融合を阻止するため、細胞から細胞へのウイルスの伝播を阻止するため、及び合胞体形成を阻害するために有用である。このように、本発明の抗体を予防的に投与することは、被験体へのＲＳＶ感染を阻止するために有用である。あるいは本発明の抗体は、咳、発熱、肺炎のような、感染に付随する少なくとも１の症状を寛解させるため、または感染の重症度、持続、及び／または頻度を低下させるために有用であり得る。本発明の抗体はまた、ＲＳＶ感染を発生または獲得するリスクを有する患者に対する予防的な使用も意図される。このような患者としては、ＲＳＶが流行する時期（晩秋から早春）に出生した早期産児及び正期産児、高齢者（例えば６５歳以上の者）、または疾病または免疫抑制療法による免疫不全患者、またはＲＳＶ感染を起こしやすくする医学的状態を有し得る患者（例えば嚢胞性線維症患者、うっ血性心不全またはその他の心臓病患者、気道障害を有する患者、ＣＯＰＤ患者）が挙げられる。本発明の抗体は単独で用いてよいか、またはＲＳＶ感染を治療するため、または発熱、咳、細気管支炎のような、ＲＳＶ感染に付随する少なくとも１の症状もしくは合併症、またはこのような感染に付随するかもしくはこのような感染からもたらされる肺炎を緩和するための第２薬剤または第３薬剤と併用してもよいことが意図される。第２薬剤または第３薬剤は、本発明の抗体と同時に投与されてよいか、またはこれらは本発明の抗体の前か後に、別々に投与されてもよい。第２薬剤または第３薬剤は、リバビリンのような抗ウイルス薬、発熱または疼痛を減少させるためのＮＳＡＩＤまたはその他の薬剤、ＲＳＶ−Ｆへ特異的に結合する別の第２抗体、ＲＳＶ−Ｇのような別のＲＳＶ抗原に結合する薬剤（例えば抗体）、ＲＳＶに対するワクチン、ＲＳＶ抗原に特異的なｓｉＲＮＡであってよい。
本発明のさらなる実施形態によれば、本抗体は、ＲＳＶ感染を患う患者を治療するための医薬組成物の調製に用いられる。本発明のさらに別の実施形態によれば、本抗体は、ＲＳＶによる一次感染の重症度を低下させるため、または感染の持続を短縮させるため、またはＲＳＶ感染に付随する少なくとも１の症状を減少させるための医薬組成物の調製に用いられる。本発明のさらなる実施形態によれば、本抗体は、抗ウイルス剤、トキソイド、ワクチンのようなＲＳＶ感染の治療に有用なその他のいずれかの薬剤、第２のＲＳＶ−Ｆ抗体、またはＲＳＶ−Ｇ抗体のようなＲＳＶ抗原に特異的なその他のいずれかの抗体、または当業者に公知であるその他のいずれかの対症療法と共に補助療法として用いられる。
併用療法
上記のように、特定の実施形態に従った本発明の方法は、ＲＳＶ−Ｆに対する抗体と併用して、１以上のさらなる治療薬を被験体へ投与することを含む。本明細書で用いられる表現「〜と併用して」は、さらなる治療薬が、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物の前、後、または該医薬組成物と同時に投与されることを意味する。用語「〜と併用して」には、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体と第２の治療薬との連続投与または同時投与も含まれる。
例えば、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物の「前に」投与する場合、さらなる治療薬は、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物の投与より約７２時間前、約６０時間前、約４８時間前、約３６時間前、約２４時間前、約１２時間前、約１０時間前、約８時間前、約６時間前、約４時間前、約２時間前、約１時間前、約３０分前、約１５分前、または約１０分前に投与されてよい。抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物の「後に」投与する場合、さらなる治療薬は、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物の投与から約１０分後、約１５分後、約３０分後、約１時間後、約２時間後、約４時間後、約６時間後、約８時間後、約１０時間後、約１２時間後、約２４時間後、約３６時間後、約４８時間後、約６０時間後、または約７２時間後に投与されてよい。抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物との「同時」投与は、別の剤形であるさらなる治療薬が、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を含む医薬組成物の投与の５分未満で（前、後、または同時に）被験体へ投与されるか、または、さらなる治療薬と抗ＲＳＶ−Ｆ抗体との両方を組み合わせて含む単回用量製剤が被験体へ投与されることを意味する。
併用療法には、本発明の抗ＲＳＶ−Ｆ抗体と、本発明の抗体または本発明の抗体の生物学的に活性のある断片と有利に組み合わせられ得るいずれかのさらなる治療薬とが含まれてよい。
例えばリバビリンのような抗ウイルス薬が、第２または第３の治療薬として、肺におけるウイルス量を減少させるために用いられてよい。上記のように、抗体は、トキソイド、ＲＳＶに特異的なワクチン、ＲＳＶ−Ｆに特異的な第２抗体、ＲＳＶ−Ｇのような別のＲＳＶ抗原に特異的な抗体のような、その他の治療法と併用して用いられてもよい。
診断のための抗体の使用
本発明の抗ＲＳＶ抗体は、例えば診断目的で、試料中のＲＳＶを検出及び／または測定するために用いられてもよい。ＲＳＶが原因であると考えられる感染の確認は、本発明の抗体のいずれか１以上の使用を通して、ウイルスの存在を測定することにより行われることが想定される。ＲＳＶに対する代表的な診断用アッセイは、例えば、患者から得た試料と本発明の抗ＲＳＶ−Ｆ抗体とを接触させることを含んでよく、ここで抗ＲＳＶ−Ｆ抗体は、Ｆタンパク質を含むウイルスを患者の試料から選択的に分離するため、検出可能な標識またはレポーター分子によって標識されるか、または捕捉リガンドとして用いられる。あるいは未標識の抗ＲＳＶ−Ｆ抗体は、それ自体が検出可能なように標識された二次抗体と組み合わせて、診断に用いることができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、3Ｈ、14Ｃ、32Ｐ、35Ｓ、もしくは125Ｉのような放射性同位元素、フルオレセインイソチオシアネートもしくはローダミンのような蛍光または化学発光成分、またはアルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼのような酵素であってよい。試料中に、Ｆタンパク質を含むＲＳＶを検出または測定するために用いることのできる特異的かつ代表的なアッセイとしては、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、及び蛍光標識細胞分取（ＦＡＣＳ）が挙げられる。
本発明に従ったＲＳＶの診断用アッセイに用いてよい試料としては、正常または病的状態の患者から得られる、検出可能な量のＲＳＶ−Ｆタンパク質またはその断片を含んでいるいずれかの組織または体液試料が挙げられる。一般に、健常患者（例えばＲＳＶ−Ｆに付随する疾病または状態を有さない患者）から得た特定の試料中のＲＳＶ−Ｆの量が、ＲＳＶ由来のＦタンパク質のベースライン、即ち標準的な量を確定するため、最初に測定される。このＲＳＶ−Ｆのベースライン量は、次に、ＲＳＶに感染しているかまたは感染に付随する症状を有する疑いのある個体から得た試料において測定されたＲＳＶ−Ｆの量と比較することができる。
ワクチン及び免疫原性組成物
本発明の一態様によれば、個体、好ましくはヒトに投与した際、このような個体に呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）抗原、例えばＲＳＶ−Ｆポリペプチドに対する免疫応答を誘導する免疫原性組成物またはワクチンが提供され、該組成物は、組換えＲＳＶ−Ｆタンパク質、またはＲＳＶ−Ｆタンパク質のポリペプチド断片、またはＲＳＶ−Ｆポリペプチドもしくはその断片の抗原中に含まれ、抗原から得られるエピトープを含んでよいか、かつ／またはＲＳＶ−Ｆポリペプチドまたは本発明のその他のポリペプチドの抗原に由来するエピトープをコード及び発現するＤＮＡ並びに／またはＲＮＡを含む。免疫原性組成物またはワクチンは、治療的または予防的に用いられてよく、かつ抗体による免疫及び／またはＣＴＬもしくはＣＤ４＋Ｔ細胞によって引き起こされる細胞性免疫のような細胞性免疫を誘発するために用いられてよい。
本発明の一実施形態によれば、免疫原性組成物またはワクチンは、配列番号３５４に示すＲＳＶ−Ｆタンパク質を含んでよい。本発明の一実施形態によれば、免疫原性組成物またはワクチンは、配列番号３５４の残基１６１ないし１８８を含むＲＳＶ−Ｆポリペプチド断片を含んでよい。本発明の一実施形態によれば、免疫原性組成物またはワクチンは、配列番３５５及び／または配列番号３５６に含まれるアミノ酸残基を１以上含んでよい。本発明の一実施形態によれば、免疫原性組成物またはワクチンは、配列番号３５５及び／または配列番号３５６を含んでよい。
本発明の関連する態様によれば、感染、特に呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）による感染から個体を保護する抗体及び／またはＴ細胞免疫応答を誘導するために十分な、ＲＳＶ−Ｆタンパク質もしくはその免疫原性断片を含むか、またはＲＳＶ−Ｆ抗原もしくはその免疫原性断片中に存在するエピトープを１以上含むＲＳＶ−Ｆ抗原もしくはその断片を含む免疫原性組成物またはワクチンを個体に投与することを含む、個体、特に哺乳類、好ましくはヒトに免疫応答を誘導するための方法が提供される。また、細胞から細胞へのウイルスの伝播を阻害するかまたは進行を遅延させる免疫応答を誘導するための、本発明の免疫原性組成物またはワクチンを用いた方法も提供される。また、投与することによって個体に免疫応答免疫応答を誘導する少なくとも１のＲＳＶ−Ｆ抗原もしくはＲＳＶ−Ｆ抗原内に存在する１以上のエピトープを含む免疫原性組成物またはワクチンを投与することによって、ＲＳＶ感染に付随する少なくとも１の症状を寛解させる方法も提供される。
例えば本発明の一実施形態によれば、個体に免疫応答を誘導するための方法であって、ＲＳＶ−Ｆ抗原（例えば配列番号３５４に示すアミノ酸配列）、またはその抗原性断片（例えば配列番号３５４の残基１６１ないし１８８を含むポリペプチド）、またはこのようなウイルスポリペプチドの発現を誘導するヌクレオチド配列またはその断片もしくは変異体を含む核酸ベクターを含む免疫原性組成物またはワクチンを、免疫応答を誘導するため個体のｉｎ ｖｉｖｏに送達することを含む方法が提供される。
本発明の一実施形態によれば、個体に免疫応答を誘導するための免疫原性組成物またはワクチンに用いるポリペプチドは、配列番号３５４の残基１６１ないし１８８を含む。本発明の一実施形態によれば、個体に免疫応答を誘導するための免疫原性組成物またはワクチンに用いるポリペプチドは、配列番号３５５及び／または配列番号３５６に含まれる１以上のアミノ酸残基を含む。本発明の一実施形態によれば、個体に免疫応答を誘導するための免疫原性組成物またはワクチンに用いるポリペプチドは、配列番号３５５及び／または配列番号３５６を含む。本発明の一実施形態によれば、免疫原性組成物またはワクチンは、ＲＳＶのＲＳＶ−Ｆ抗原に特異的に応答する抗体を誘発してよく、産生された抗体は、配列番号３５４の位置１７３のセリンもしくは位置３５４のスレオニンと、または配列番号３５４の位置１７３のセリン及び配列番号３５４の位置１７４のスレオニンの両方と相互作用する。
特定の実施形態によれば、その他の病原体、好ましくはウイルス及び／または細菌に対する免疫を誘発するための、免疫原性があり、好ましくは免疫学的に有効な量の、さらなる抗原を含む免疫原性組成物またはワクチン中に、ＲＳＶ−Ｆ抗原またはその断片を処方することは有利である。このような、さらなる抗原としては、インフルエンザウイルス抗原、メタニューモウイルスまたはコロナウイルス由来の抗原、インフルエンザ菌、肺炎球菌、または百日咳菌由来の抗原が挙げられる。免疫原性組成物またはワクチンには、ＲＳＶ−Ｇ糖タンパク質またはその免疫原性断片、ＨＮタンパク質またはその誘導体のような、その他のＲＳＶ抗原が含まれていてもよい。特定の実施形態によれば、本発明の免疫原性組成物またはワクチンに含まれるインフルエンザウイルス抗原として、卵またはＭＤＣＫ細胞またはベロ細胞内で生育させた、生または不活性化全粒子ウイルス、スプリットインフルエンザウイルス、または全粒子流感ビロソーム、またはＨＡ、ＮＰ、ＮＡ、もしくはＭタンパク質、またはそれらの組み合わせのような、それらの精製もしくは組換えタンパク質が挙げられる。
本発明の特定の実施形態によれば、免疫原性組成物またはワクチン製剤には、本発明の免疫原性組換えポリペプチド及び／またはポリヌクレオチド、またはそれらの組み合わせが、薬剤的に許容される担体／賦形剤のような、適切な担体／賦形剤と共に含まれてよい。免疫原性組成物及び／またはワクチンは、例えば皮下、筋肉内、静脈内、または皮内投与のように、非経口的に好ましく投与される。非経口投与に適した製剤としては、抗酸化剤、緩衝液、静菌性化合物、及び製剤を個体の体液、好ましくは血液と等張にするための溶質を含んでよい水性及び非水性の無菌注射液、並びに懸濁剤もしくは増粘剤を含んでよい水性または非水性の無菌懸濁液が挙げられる。製剤は、単位用量または複数単位用量の容器、例えば密封されたアンプル及びバイアルに入れられ、使用直前に無菌の液体担体を添加することのみが必要とされる凍結乾燥状態で保存されてよい。
本発明の免疫原性組成物またはワクチン製剤は、製剤の免疫原性を増強させるためのアジュバントも含んでよい。この時点で、ヒトに対して広く使用されているアジュバントは、ミョウバン（リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウム）及びリン酸カルシウムゲルのみであった。研究並びに獣医学に応用されているフロイント完全アジュバント及びその他のアジュバントは、ヒトワクチンへの使用の可能性を限定する毒性を有している。しかしながら、油乳剤及び界面活性剤ベースの製剤、例えばＭＦ５９（マイクロフルダイズされ、界面活性剤によって安定化された水中油型乳剤）、ＱＳ２１（精製サポニン）、ＡＳ０２［ＳＢＡＳ２］（水中油型乳剤＋ＭＰＬ＋ＱＳ−２１）、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ ＩＳＡ−５１及びＩＳＡ−７２０（安定化油中水型乳剤）のような、化学的に特徴付けられた調製物も開発中である。さらに、微生物誘導体（天然及び合成）、例えばムラミルジペプチド、モノホスホリルリピドＡ（例えばＲｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ（モンタナ州）により製造され、３Ｄ−ＭＰＬとしても知られる、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ）、Ｄｅｔｏｘ（ＭＰＬ＋Ｍ．フレイの細胞壁骨格）、ＡＧＰ［ＲＣ−５２９］（合成のアシル化単糖）、ＤＣＣｈｏｌ（リポソームへ自己組織化するリン脂質の免疫賦活物）、ＯＭ−１７４（リピドＡ誘導体）、ＣｐＧモチーフ（免疫賦活性のＣｐＧモチーフを含む合成オリゴヌクレオチド）、改変型ＬＴ及びＣＴ（無毒性のアジュバント効果を示す、遺伝的に改変された細菌毒素）、及びシャボンノキの樹皮に由来する、Ｈｐｌｃにより精製された無毒性画分であるＱＳ２１は全て、ヒトに対する使用のために開発中である。
３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡの好ましい型が、欧州特許第０ ６８９ ４５４ Ｂ１号（ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ ＳＡ）に開示されている。
その他の粒状アジュバントとしては、例えばビロソーム（ウイルス抗原を取り込んだ単層リポソームビヒクル）、ＡＳ０４（［ＳＢＡＳ４］アルミニウム塩とＭＰＬとを含む）、ＩＳＣＯＭＳ（サポニンと脂質との構造化複合体）、ポリラクチド−ｃｏ−グリコリド（ＰＬＧ）が挙げられる。
その他の適切なアジュバントには、サイトカイン、ケモカイン、またはコロニー刺激因子のような、許容される全ての免疫賦活性化合物が含まれる。例えばこれらとしては、インターロイキンＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−７、ＩＬ−１２、ガンマインターフェロン、及びｈＧＭ−ＣＳＦが挙げられる。
使用されるアジュバント及び／または免疫刺激化合物は、ワクチンまたは免疫原性組成物が投与される被検者、注入経路及び投与される注入回数に依存することを理解すべきである。
本発明をある種のＲＳＶ−Ｆポリペプチドを参照しつつ説明するが、本発明には天然ポリペプチドの断片、及び組換えポリペプチドまたはポリヌクレオチドの免疫特性に実質的に影響を与えない付加、欠失または置換を有する類似のポリペプチドが包含されることを理解すべきである。
実施例
以下の実施例は、本発明の方法及び組成物の作製及び使用法についての完全な開示及び説明を当業者に提示するために示すものであり、発明者が自らの発明とみなすものの範囲を限定することを意図するものではない。使用される数字（例えば、量、温度等）に関する精度を確保しようと努めはするが、実験誤差や偏差を考慮すべきである。別途記載しない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏温度であり、圧力は大気圧またはその近傍である。
実施例１．ＲＳＶ−Ｆタンパク質に対するヒト抗体の作製
ＲＳＶ−Ｆタンパク質に対する抗体を作製するために、以下のいずれか１つを含む免疫原を使用することができる。ある実施形態では、本発明の抗体は、生きているか、弱毒化または死菌化／不活性化された呼吸器多核体全粒子ウイルス分離株（ｗｈｏｌｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｃｙｔｉａｌ ｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅ）のような第１の免疫原で免疫したマウスから得られる。マウスには、いずれかの同一のウイルス分離株を含む１回以上の追加免疫を行ってもよく、またはＲＳＶ−Ｆタンパク質自体を追加免疫してもよい。ある実施形態では、マウスに生ウイルスを注射し、次いで、分離されたかまたは組換えにより調製されたウイルスから得られた、配列番号３５３に示される構築物または分離されたＲＳＶ−Ｆタンパク質で追加免疫する（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＡＸ２３９９４．１を参照）。
ある実施形態では、本発明の抗体は、生物活性ＲＳＶのサブタイプＡもしくはＢ、及び／またはＲＳＶ融合（Ｆ）タンパク質、もしくはＲＳＶ融合（ＲＳＶ−Ｆ）タンパク質の免疫原性断片、または全長タンパク質をコードするＤＮＡもしくはその活性断片等の第１の免疫原で免疫したマウスから得られる。免疫原は、筋肉内、皮下、静脈内または鼻腔内を含むがこれらに限定されないいずれかの経路で動物に投与することができる。
ある実施形態では、全粒子ウイルス（ｗｈｏｌｅ ｖｉｒｕｓ）、即ちＲＳＶ−Ｆタンパク質またはその断片は、単一特異性抗体、二重特異性抗体または多重特異性抗体を調製するために使用できる。
前述のように免疫原として使用した全粒子ウイルス、即ち全長タンパク質またはその断片を、免疫応答を刺激するアジュバントと共に、ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域及びκ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含むＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに直接投与した。抗体の免疫応答は、ＲＳＶ−Ｆイムノアッセイによりモニタリングした。所望の免疫応答を達成したら、脾細胞を採取し、マウス骨髄腫細胞と融合させてそれらの生存能を維持し、ハイブリドーマ細胞株を形成した。ＲＳＶ−Ｆ特異抗体を産生する細胞株を同定するために、ハイブリドーマ細胞株をスクリーニング及び選択した。この技術及び前述の様々な免疫原を使用して、数種類のキメラ抗体（即ち、ヒト可変ドメインとマウス定常ドメインを有する抗体）を得、この方法で作製したある例示的な抗体を、Ｈ１Ｍ３６２１Ｎ、Ｈ１Ｍ３６２２Ｎ、Ｈ１Ｍ２６３４Ｎ及びＨ１Ｍ３６２７Ｎと命名した。
Ｕ．Ｓ．２００７／０２８０９４５Ａ１に記載されるように、骨髄腫細胞に融合させることなく、抗原陽性Ｂ細胞から抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を直接単離した。この方法を用いて、幾つかの完全ヒト抗ＲＳＶ−Ｆ抗体（即ち、ヒト可変領ドメインとヒト定常ドメインを有する抗体）を得、この方法で作製した例示的な抗体を次のように命名した：Ｈ１Ｈ３５６４Ｐ、Ｈ１Ｈ３５６５Ｐ、Ｈ１Ｈ３５６６Ｐ、Ｈ１Ｈ３５６７Ｐ、Ｈ１Ｈ３５８１Ｐ、Ｈ１Ｈ３５８３Ｐ、Ｈ１Ｈ３５８９Ｐ、Ｈ１Ｈ３５９１Ｐ、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ、Ｈ１Ｈ３５９７Ｐ、Ｈ１Ｈ３５９８Ｐ、Ｈ１Ｈ３６０３Ｐ、Ｈ１Ｈ３６０４Ｐ、Ｈ１Ｈ３６０５Ｐ、Ｈ１Ｈ３６０７Ｐ、Ｈ１Ｈ３６０８Ｐ２、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ２及びＨ１Ｈ３５９２Ｐ３。
本実施例の方法に従って作製した例示的な抗体の生物特性を、以下に記載する実施例で詳細に説明する。
実施例２．重鎖及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列
表１に、ＲＳＶ−Ｆタンパク質に特異的な選択抗体の重鎖及び軽鎖可変領域アミノ酸配列ペア、並びにそれらの対応する抗体識別子を記載する。抗体は、典型的には、本明細書では以下の命名法に従って名付けられる：Ｆｃの接頭辞（例えば「Ｈ４Ｈ」、「Ｈ１Ｍ」、「Ｈ２Ｍ」）、続いて番号識別子（例えば表１で示されている「３１１７」）、続いて「Ｐ」または「Ｎ」の接尾辞。従って、この命名法によれば、抗体は、例えば「Ｈ１Ｈ３１１７」と称され得る。本明細書で使用される抗体名称のＨ４Ｈ、Ｈ１Ｍ及びＨ２Ｍという接頭辞は、抗体の特定のＦｃ領域を示す。例えば、「Ｈ２Ｍ」抗体はマウスＩｇＧ２のＦｃを有するが、「Ｈ４Ｈ」抗体は、ヒトＩｇＧ４のＦｃを有する。当業者によって理解されるように、Ｈ１ＭまたはＨ２Ｍ抗体をＨ４Ｈ抗体に変換することができ、その逆もまた同様であるが、いずれにしても、表１に示される番号識別子で示される可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は依然として同じである。抗体名称の番号は同じであるが、接尾辞Ｎ、ＢまたはＰが異なる抗体は、ＣＤＲ配列は同一であるが、ＣＤＲ配列以外の領域（即ち、フレームワーク領域）に配列の変化を伴う重鎖及び軽鎖を有する抗体を指す。従って、特定の抗体のＮ、Ｂ及びＰ変異体は、重鎖及び軽鎖可変領域内に同一のＣＤＲ配列を有するが、フレームワーク領域内では互いに異なる。
抗体比較物
比較目的のために、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体対照を以下の実施例に含めた。実施例では、アイソタイプマッチ陰性対照も使用した。ある抗ＲＳＶ−Ｆ対照抗体を本明細書では対照Ｉと命名し、これは、ＵＳ７６３５５６８及びＵＳ５８２４３０７に記載されているパリビズマブ（ＳＹＮＡＧＩＳ（登録商標））ヒト化抗体の重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列を有するヒト化抗ＲＳＶ−Ｆ抗体である。可変する軽鎖及び重鎖は、それぞれヒトκ及びγ−１定常部と共に発現する。ある抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を本明細書では対照ＩＩと命名し、これは、ＵＳ２００３／００９１５８４に記載され、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．（２００７），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６８：６５２−６６５によるモタビズマブ（ＮＵＭＡＸ（商標））ヒト化抗体の重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列を有する、パリビズマブのヒト化抗ＲＳＶ−Ｆ抗体変異体である。可変する軽鎖及び重鎖は、それぞれヒトκ及びγ−１定常部と共に発現する。別の抗ＲＳＶ−Ｆ抗体を対照ＩＩＩと命名し（ＡＭ−２２とも称される）、これは米国特許第８５６８７２６号明細書に記載されている。ＡＭ−２２の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を、配列番号３５７（抗体の重鎖について）及び配列番号３５８（抗体の軽鎖について）に示す。
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実施例３．表面プラズモン共鳴により決定されたヒモノクロ−ナルル抗ＲＳＶ−Ｆ抗体の抗体結合親和性及び速度定数
ヒモノクロ−ナルル抗ＲＳＶ−Ｆ抗体の結合親和性及び速度定数を、２５℃の表面プラズモン共鳴により決定した（表２〜３）。Ｂｉａｃｏｒｅ４０００またはＴ−２００機器で測定を行った。マウスＦｃ（ＡｂＰＩＤ接頭辞Ｈ１Ｍ；Ｈ２Ｍ）か、またはヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（ＡｂＰＩＤ接頭辞Ｈ１Ｈ）のいずれかを用いて発現した抗体を、抗マウスまたは抗ヒト−Ｆｃのセンサー表面上に捕捉し（Ｍａｂ捕捉フォーマット）、可溶性単量体（ＲＳＶ−Ｆ．ｍｍｈ；配列番号３５３）タンパク質をその表面上に注入した全ててのＢｉａｃｏｒｅ結合試験を、ＨＢＳＴ泳動用緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．００５％ｖ／ｖ 界面活性剤Ｐ２０）中で実施した。ＨＢＳＴ泳動用緩衝液中で調製した様々な濃度のＲＳＶ−Ｆ．ｍｍｈを、抗ＲＳＶ−Ｆモノクロ−ナル抗体を捕捉した表面上に、流速３０μｌ／分（Ｂｉａｃｏｒｅ４０００、または流速５０μｌ／分（ＢｉａｃｏｒｅＴ−２００）で注入し、捕捉しモノクロ−ナルル抗体に対するＲＳＶ−Ｆ．ｍｍｈの会合をそれぞれ６分間または３分間モニタリングした。ＨＢＳＴ泳動用緩衝液中におけモノクロ−ナルル抗体からのＲＳＶ−Ｆ．ｍｍｈの解離を２５℃で８〜１０分間モニタリングした。Ｓｃｒｕｂｂｅｒ２．０カーブフィッティングソフトウェア（Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０ ｃｕｒｖｅ ｆｉｔｔｉｎｇ ｓｏｆｔｗａｒｅ）を使用してデータを１：１結合モデルに加工してフィッティングすることにより速度論的な会合（ｋa）速度定数と解離（ｋd）速度定数を決定した。速度論的な速度定数から、ＫD（Ｍ）＝ｋd／ｋa及びｔ1/2（分）＝［ｌｎ２／（６０*ｋd）］に従って、結合解離平衡定数（ＫD）と解離半減期（ｔ1/2）を計算した。
本発明の抗ＲＳＶ−Ｆ抗体は、ＲＳＶ−Ｆ．ｍｍｈ．に対し幅広い親和性を示した。ＵＳ７，６３５，５６８に記載されたパリビズマブの公開配列（ｐｕｂｌｉｃ ｓｅｑｕｅｎｃｅ）に基づいて作製された対照Ｉ、及びＷｕ ｅｔ ａｌ．（２００７）（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３６８：６５２−６６５）に記載されたモタビズマブの公開配列に基づいて作製された対照ＩＩは、約７０倍の親和性差（対照Ｉ；３８ｎＭに対し、対照ＩＩ；０．４３ｎＭ）を示したことが以前報告された。
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実施例４．呼吸器多核体ウイルス融合（ＲＳＶ−Ｆ）タンパク質抗体は、ＲＳＶサブタイプＡ株及びサブタイプＢ株に対し強力な中和効力を示す
精製した抗体をＲＳＶマイクロ中和アッセイにおいて試験し効力を決定した。簡潔に言えば、５％Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳ、Ｌ−グルタミン及び抗生物質を補充したＭＥＭ高グルコース培地中で培養したＨＥｐ−２細胞１０4個を、９６ウェル透明底ブラックマイクロプレートに播種し、１６〜１８時間インキュベートした（３７℃、５％ＣＯ2）。次いで、培地中で６６６ｎＭから開始し５分の１に連続希釈した様々な濃度の抗体を、ＲＳＶ１５４０（Ａ２）株と共に、ＭＯＩ ０．０４で２時間インキュベートした（３７Ｃ、５％ＣＯ2）。ウイルスを含まず、無関係のアイソタイプ対照を含めた。
インキュベートの後、抗体とウイルスの混合物をＨＥｐ−２細胞に添加し、３日間感染を維持した。感染の程度は、２％ＰＦＡ中に細胞を固定し、ヤギ抗ＲＳＶ／抗ヤギＨＲＰ抗体を用いてＥＬＩＳＡを行うことにより決定した。発光試薬をウェルに添加し、プレートリーダー（ＶｉｃｔｏｒＸ３、パーキンエルマー）を用いて信号を検出した。発光値は、１１ポイント反応曲線に対する３パラメータロジスティック方程式により分析した（グラフパッド・プリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ））。
本発明の抗体は、ＲＳＶ Ａ２（１５４０）株に対し幅広い中和活性を示した（表４〜５）。数種の抗体は対照Ｉよりも低いＩＣ50値を示したが、ごくわずかの例示的
な抗体Ｈ１Ｈ３６２７Ｎ、Ｈ１Ｈ３５９１Ｐ、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ及びＨ１Ｈ３５９２Ｐ３は、対照ＩＩよりも良好な中和を示した。選択抗体（Ｈ１Ｈ３６２７Ｎ、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３）についても、ＲＳＶサブタイプＢ株に対する中和能を試験した（表６）。
本実施例は幾つつかのＲＳＶ−Ｆ株を２種類のサブタイプについて、本発明の抗体がｉｎ ｖｉｔｒｏで中和する効力は、確立された対照について既に実証された効力よりも優れることを示す。
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実施例５．選択抗ＲＳＶ−Ｆ抗体はｉｎ ｖｉｖｏでのＲＳＶ感染に優れた中和を示す
Ａ．マウスモデル
例示的な抗体Ｈ１Ｈ３６２７Ｎ及びＨ１Ｈ３５９２Ｐ３を、Ｂａｌｂ／ｃマウスを用いるｉｎ ｖｉｖｏＲＳＶ中和試験用に選択した。簡潔に言えば、７週齢のＢａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝４〜５）に、Ｈ１Ｈ３６２７Ｎ、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３、対照Ｉ、対照ＩＩ及びアイソタイプマッチ抗体のいずれかを用いて、２種類の投与量（０．１５または０．０５ｍｇ／ｋｇ）で皮下注射した。抗ＲＳＶ−Ｆ抗体のロスを最小限にするために、全ての実験においてキャリア抗体（１ｍｇ／ｋｇ）を使用した。
注射１日後に、ＲＳＶ Ａ２（１５４０）株５０ｕｌ（１０6ｐｆｕ）をマウスの鼻腔内に投与した。感染の４日後に血清を採取し、マウスを屠殺して肺を取り出し、ＯｍｎｉＧＬＨホモジナイザーを用いて、ＰＢＳ １ｍＬ中でホモジナイズした。肺のホモジネートを遠心分離して細胞残屑を除去し、上澄みの一部を用いて肺中の抗ＲＳＶ−Ｆ ｍＡｂ濃度を決定した。残った上澄みを使用して、ＨＥｐ−２細胞と共に２時間インキュベートした段階希釈液を調製し、ウイルスを侵入させた。続いて上澄みを除去し、細胞を１％メチルセルロースで覆った。６日後、細胞をクリスタルバイオレットで染色し、プラークをカウントして、アイソタイプ対照に対するｌｏｇ10ウイルス減少を計算した。
例示的な抗体Ｈ１Ｈ３６２７Ｎ及びＨ１Ｈ３５９２Ｐ３は、ｉｎ ｖｉｖｏでのウイルス量を低下させるのに、対照Ｉまたは対照ＩＩ抗ＲＳＶ−Ｆ抗体よりも有効であった（表７ａ〜７ｅ）。具体的には、投与量０．１５ｍｇ／ｋｇでは、抗体Ｈ１Ｈ３６２７Ｎ、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３及び対照ＩＩは全て対照Ｉと比べて、肺におけるＲＳＶ感染を殆ど検出不能なレベルまで効果的に低減させた（ウイルスの低減ｌｏｇ（１０）の倍数変化（ｆｏｌｄ ｃｈａｎｇｅ）≧２．１０）。肺及び血清における全体のヒトＩｇＧ測定値により、抗体値は各群間で比較的一定であることが確認された。
低投与量では、対照Ｉと比べ３種類の抗体間では中和効率により大きな差があることが明らかであった。０．０５ｍｇ／ｋｇでは、Ｈ１Ｈ３６２７Ｎが１．０８〜１．３６ｌｏｇの倍数変化、対照ＩＩが０．０１〜０．６５ｌｏｇの倍数変化でウイルス量を低減させたことと比べると、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は、１．４９〜２．０７ｌｏｇを超える範囲の倍数変化でウイルス量を最も低減させた。この低投与量では、対照Ｉは、ウイルス量の低減変化が０．０３〜１．０３ｌｏｇとなり、適度な有効性を示しただけであった。
以上の結果は、Ｈ１Ｈ３６２７Ｎ及びＨ１Ｈ３５９２Ｐ３は、両方共ｉｎ ｖｉｖｏにおいて強力なＲＳＶ中和抗体であり、後者は低投与量でＲＳＶ感染のより有効な中和剤となる傾向があることを示している。
前記と同一のプロトコルに従い投与量範囲実験を行い、４種類の異なる投与量の対照Ｉ抗体（０．６、０．３、０．１５及び０．０５ｍｇ／ｋｇ）、並びに２種類の投与量（０．１５及び０．０５ｍｇ／ｋｇ）のＨ１Ｈ３５９２Ｐ３及び対照ＩＩを皮下注射した。肺におけるウイルスの低減をアイソタイプ対照のパーセンテージとして計算した（実験Ｍ４、表７ｄ〜ｅ）。
例示的な抗体Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は、対照Ｉまたは対照ＩＩの抗ＲＳＶ−Ｆ抗体に比べ、ｉｎ ｖｉｖｏでの（マウスにおける）ウイルス量をより効果的に低減させたさらにに、肺において９９％のウイルス低減を達成するのに必要とされる対照Ｉの投与量は、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３の投与量よりも３〜４倍多かった。
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Ｂ．コットンラットモデル
コットンラットを用いるｉｎ ｖｉｖｏＲＳＶ中和試験用に、例示的な抗体Ｈ１Ｈ３６２７Ｎ及びＨ１Ｈ３５９２Ｐ３を選択した。簡潔に言えば、６〜８週齢のコットンラット（ｎ＝５）に、Ｈ１Ｈ３６２７Ｎ、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３、対照Ｉ、対照ＩＩ及びアイソタイプマッチ抗体のいずれかを用いて、２種類の投与量（５または０．６ｍｇ／ｋｇ）で筋肉内注射した。
注射１日後に、１００ｕｌ（１０5ｐｆｕ）のＲＳＶ Ａ２株をマウスの鼻腔内に投与した。感染の４日後に、血清を採取し、ラットを屠殺して、ウイルス滴定のために肺組織及び鼻腔組織を摘出した。肺のホモジネートを遠心分離して細胞残屑を除去し、上澄みの一部を用いて肺中の抗ＲＳＶ−Ｆ ｍＡｂ濃度を決定した。残った上澄みを使用して段階希釈液を調製し、ＨＥｐ−２細胞と共にインキュベートしてウイルスを侵入させた。続いて、上澄みを除去し、細胞を１％メチルセルロースで覆った。６日後、細胞を染色し、プラークをカウントして、アイソタイプ対照に対するｌｏｇ10ウイルス減少を計算した。
例示的な抗体Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は、肺と鼻におけるウイルス量を低下させるのに対照Ｉよりも効果的であり、肺では対照ＩＩと同程度に効果的であり、鼻ではより良好であった。例示的な抗体Ｈ１Ｈ３６２７Ｎは、鼻においては、対照Ｉよりも僅かに良好であり、対照ＩＩと同程度に効果的であった（表８）。具体的には、投与量５ｍｇ／ｋｇでは、抗体Ｈ１Ｈ３６２７Ｎ、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３、対照Ｉ及び対照ＩＩは、全てアイソタイプ対照（ウイルス低減ｌｏｇ（１０）倍数変化≧２．３３）と比べ、肺におけるＲＳＶ感染を殆ど検出不能なレベルまで効果的に低減させた。しかし、鼻においては、Ｈ１Ｈ３６２７Ｎ、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３及び対照ＩＩの間で中和効率の差が対照Ｉに比べ大きいことが明らかであった。Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は、Ｈ１Ｈ３６２７Ｎ（１．４６ｌｏｇ）または対照ＩＩ（１．３３ｌｏｇ）よりもウイルス量（２．６５ｌｏｇ）を大きく低減することが示された。
低投与量では、肺においては、３種類の抗体間の中和効率は、対照Ｉに比べより大きな差があることが明らかであった。０．６ｍｇ／ｋｇでは、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は、対照ＩＩ（１．５ｌｏｇ）に類似したウイルス量の低減を示し、両者は対照Ｉ（０．６２４ｌｏｇ）よりも効果的であった。Ｈ１Ｈ３６２７Ｎは他の３種の抗体よりも有効性に劣っていた。
次に、コットンラットモデルを用い、ｉｎ ｖｉｖｏでＲＳＶサブタイプＢを中和する能力を試験するために、典型的な抗ＲＳＶ−Ｆ抗体Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３を選択した。ＲＳＶ／Ａの場合と同様に、６〜８週齢のコットンラット（ｎ＝４〜６／群／実験）に、５または０．６ｍｇ／ｋｇのＨ１Ｈ３５９２Ｐ３、対照Ｉまたは対照ＩＩを筋肉内投与した。翌日、動物に１０＾５ｐｆｕのＲＳＶ／Ｂ株１８５３７を投与した。投与の４日後、肺及び鼻におけるウイルス価を血清抗体価と共に決定した。表９に示した結果は、２つの独立した実験から統合されたデータである。
Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は、高投与量及び低投与量の両方で、肺におけるＲＳＶ／Ｂウイルス量の低減に効果的であることが示された（表９）。５．０ｍｇ／ｋｇでは、肺のＲＳＶ／Ｂウイルス量は、対照Ｉによる２．１１ｌｏｇの低減、及び対照ＩＩによる２．１８ｌｏｇの低減に比べ、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３では２．２１ｌｏｇ低減した。０．６ｍｇ／ｋｇでは、肺のＲＳＶ／Ｂウイルス量は、対照Ｉによる０．７５ｌｏｇの低減、及び対照ＩＩによる０．８３ｌｏｇの低減に比べ、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３では１．２９ｌｏｇ低減した。
全体として、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は、０．６ｍｇ／ｋｇの対照Ｉ及びＩＩの両方に対し、肺におけるＲＳＶサブタイプＢの中和において優位性を示した。５ｍｇ／ｋｇでは、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は、肺ウイルス量の低減において、対照Ｉ及び対照ＩＩに匹敵し得る中和能を示した。
以上の結果は、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３が、コットンラットにおいて、ＲＳＶサブタイプ株Ａ及びＢのｉｎ ｖｉｖｏでの強力な中和剤であり、鼻では高投与量で、また肺では低投与量で、ＲＳＶ感染のより有効な中和剤となることを示している。低投与量での効力は、臨床における低用量治療の可能性を示している。
Figure 2016512554
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Ｃ．コットンラットモデル−例示的な抗体Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３のＥＤ99の決定
コットンラットを用いた投与量決定試験を行い、どの投与量であれば例示的な抗体Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３が９９％を超えてウイルス量を低減するか（即ち、ＥＤ99）を決定した。コットンラットに、１０、５、２．５、１．２５または０．６２ｍｇ／ｋｇの筋肉内（ＩＭ）投与量で、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３または対照Ｉ抗体を予防的に投与したさらにに、アイソタイプ対照抗体を１０または０．６２ｍｇ／ｋｇのいずれかで投与して本試験における活性剤の効果を除外（ｂｒａｃｋｅｔ）した。抗体処理に続き、サブタイプＡ（ＲＳＶ Ａ２株）またはサブタイプＢ（ＲＳＶ Ｂ株１８５３７）のいずれかのＲＳＶを鼻腔内投与した。感染４日後に、血清を採取し、ラットを屠殺して、ウイルス滴定のために肺組織を摘出した。９９％を超える同程度のウイルス低減を達成するのに投与量２．５ｍｇ／ｋｇを必要とした対照１と比較すると、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は投与量０．６２ｍｇ／ｋｇで、肺における９９％を超えるウイルス量の低減を達成した（表１０）。算出されたＥＤ99における対照１の平均最終濃度（２７μｇ／ｍＬ）は、既に発行された研究（Ｓｃｏｔｔ及びＬａｍｂ、１９９９年）とよく相関し、このことは、ＲＳＶ感染時の血清パリビズマブ濃度（即ち、対照１）３０−４０μｇ／ｍＬが肺ウイルス量を９９％低減することと関連することを示した。Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３の平均最終濃度（４．９μｇ／ｍＬ）は、そのＥＤ99において示された投与量の４分の１とよく相関した。サブタイプＢ投与に対する結果は、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３のＥＤ99は２．５ｍｇ／ｋｇで達成されたのに対し、対照１では同じく９９％を超えて肺ウイルスを低減させるためにはおよそ４倍の投与量（１０ｍｇ／ｋｇ）を必要とした点で類似する（表１１）。
要約すると、上記実験は、投与頻度の低いＨ１Ｈ３５９２Ｐ３は、パリビズマブを用いた現在の毎月の投与パラダイムと同レベルの保護を与え得ることを裏付けている。
Figure 2016512554
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実施例６．二重特異性抗体の作製
本発明の方法の実施に使用するために、様々な二重特異性抗体を作製する。例えば、ＲＳＶ−Ｆタンパク質の異なるドメインに結合する可変領域を共に結合して、単一の結合分子内に二重ドメイン特異性を付与する二重特異性フォーマット（「二重特異性物」）で、ＲＳＶ−Ｆ特異的抗体を作製する。適切に設計された二重特異性物は、特異性及び結合アビディティーの両方を増加させることによって、全体的なウイルス中和効果を増強し得る。個々のドメインに対する特異性を有する可変領域を、各領域が別個のエピトープまたは１つのドメイン内の異なる領域に同時に結合することを可能とする構造的な足場において対合させる。二重特異性物の一例では、元のＶHに対する元の特異性を破壊せずにそのＶHと対合し得る非同種ＶLパートナーを同定するために、１つのドメインに対する特異性を有する結合物由来の重鎖可変領域（ＶH）を、第２のドメインに対する特異性を有する一連の結合物由来の軽鎖可変領域（ＶL）と再結合させる。このようにして、単一のＶLセグメント（例えば、ＶL１）を、２つの異なるＶHドメイン（例えば、ＶH１及びＶH２）と組み合わせて、２つの結合「アーム」（ＶH１−ＶL１及びＶH２−ＶL１）から構成される二重特異性物を作製することができる。単一のＶLセグメントを使用することによって、系の複雑性が低減され、これによって二重特異性物を作製するのに使用されるクローニング、発現及び精製工程の効率が単純化され増大する（例えば、ＵＳＳＮ１３／０２２７５９及びＵＳ２０１０／０３３１５２７を参照のこと）。
あるいは、例えば、限定されないが、第２の異なる抗ＲＳＶ−Ｆ抗体またはトキソイドまたはワクチン等の、ＲＳＶ−Ｆ及び第２の標的に結合する抗体が、本明細書に記載される技術または当業者に公知の他の技術を使用して、二重特異性フォーマットで調製することができる。単一の結合分子内に二重抗原特異性を付与するために、異なる領域に結合する抗体可変領域を、例えば、異なるウイルス抗原の関連部位に結合する可変領域と連結することができる。この性質を有する適切に設計された二重特異性物は、二重機能性物として役立つ。例えば、ＲＳＶ−Ｆ及びＲＳＶ−Ｇに結合する二重特異性抗体の場合、２つの別個の抗体を含有する組成物の投与を必要としなくても、ウイルスをより良く中和することができる。ＲＳＶ−Ｆに対する特異性を有する可変領域を、ＲＳＶ−Ｇに対する特異性を有する可変領域と組み合わせ、各可変領域が別個の抗原に結合することを可能とする構造的な足場において対合させる。
抗体についての上記アッセイのいずれかにおいて、二重特異性結合物を、標的抗原、例えば、ＲＳＶ−Ｆ及びＲＳＶ−Ｇに対する結合及びこれらの機能的遮断について試験する。例えば、Ｂｉａｃｏｒｅ、ＥＬＩＳＡ、サイズ除外クロマトグラフィー、複数角度レーザー光散乱、直接走査熱量測定、及び他の方法などの、可溶性タンパク質の結合を測定する標準的な方法を使用して、二重特異性相互作用を評価する。異なる抗原を表す合成ペプチドをマイクロタイタープレートのウェル上にコーティングするＥＬＩＳＡ結合アッセイを使用してＲＳＶ−Ｆ及びＲＳＶ−Ｇの両方に対する二重特異性抗体の結合を決定し、二次検出抗体を使用して二重特異物の結合を決定する。また、それぞれ二重特異性物またはペプチドが捕捉されているセンサー表面にペプチドまたは二重特異性物を流すことによって、抗体に対するペプチドのリアルタイム結合相互作用を測定する表面プラズモン共鳴実験を使用して結合実験を行うことができる。二重特異性物によるＲＳＶ−Ｆ及びＲＳＶ−Ｇの両方のｉｎ ｖｉｔｒｏ機能的遮断は、本明細書に記載される中和アッセイなどの任意のバイオアッセイを使用して、または本明細書に記載されるものなどの適切な動物モデルにおけるｉｎ ｖｉｖｏ保護研究によって、または肺炎症のｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいて測定される。
実施例７：Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３の結合エピトープを決定するためのＲＳＶエスケープ変異体のＩｎ ｖｉｔｒｏ産生
Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３に対するエスケープ変異体の産生
３ｘ１０5個のＨｅｐ−２細胞／ウェルを６−ウェルプレートに播種して２４時間培養した。５０ｕｇ／ｍＬ〜０．０１６ｕｇ／ｍＬの範囲の濃度のＨ１Ｈ３５９２Ｐ３をＲＳＶサブタイプＡ株１５４０またはＲＳＶサブタイプＢ株１５８０と３７℃で１時間混合した。共インキュベーションの後、ＲＳＶ／抗体混合物を、既に播種したＨＥｐ−２細胞に１０プラーク形成単位（ｐｆｕ）／細胞の感染効率（ＭＯＩ）で添加した。細胞を６日間インキュベートし、細胞変性効果を光学顕微鏡を用いて毎日モニタリングした。６日目に、各ウェルの内容物を回収し、抗体の初期濃度に調節し、新たに播種したＨＥｐ−２細胞を感染させるために使用した。抗体のＩＣ50よりも約２ｌｏｇ高い高濃度のＨ１Ｈ３５９２Ｐ３（５０ｕｇ／ｍＬ）において、ウイルス変異体の存在を示唆する明らかな細胞変性効果が観察されるまで、この連続継代を繰り返した。マイクロ中和アッセイ（前記）により、上記ウェルからの上澄みを耐性ウイルスの存在により確認し、１０ｃｍの組織培養皿にプラークを分離した。１０個の別々のプラークを６−ウェルププレート中で膨張させ、マイクロ中和によりウイルスの耐性を再試験した。続いて、これらのウイルス変異体について配列決定を行った。
マイクロ中和アッセイ
Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３の存在下で生成したエスケープ変異体が中和耐性を有するか否かを確認するために、Ｈｅｐ−２細胞のマイクロ中和アッセイを行った。簡潔に言えば、５％Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳ、Ｌ−グルタミン及び抗生物質を補充したＤＭＥＭ １ｘ培地で培養した１０5個のＨｅｐ２細胞を、９６ウェル透明底ブラックマイクロプレートに播種し、１６〜１８時間インキュベートした（３７Ｃ、５％ＣＯ2）。
次に、培地中で６６６ｎＭから開始し５分の１に連続希釈した様々な濃度の抗体を、ＲＳＶ野生型（サブタイプＡまたはＢ）、またはサブタイプＡ及びＢの両方からのエスケープ変異体と共に、０．０４〜０．４のＭＯＩで２時間インキュベートした（３７℃、５％ＣＯ2）。ウイルスを含まない対照、またはウイルスを含むが抗体を含まない対照を含ませた。全ての抗体希釈物について２回実施した。インキュベーションの後、抗体／ウイルス混合物を細胞に添加し、３日間感染させた。２％ＰＦＡ中に細胞を固定することにより感染を決定し、ヤギ抗ＲＳＶ／抗ヤギＨＲＰ抗体を用いてＥＬＩＳＡを行った。発光試薬をウェルに添加し、プレートリーダー（ＶｉｃｔｏｒＸ３、パーキンエルマー）を用いて信号を検出した。発光値は、１１ポイント反応曲線に対する３パラメータロジスティック方程式により分析した（グラフパッド・プリズム）。
結果
Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３のＲＳＶ−Ｆに対する特異結合領域をマッピングするために、呼吸器多核体ウイルスのエスケープ変異体を産生させた。簡潔に言えば、ＲＳＶ株１５４０（サブタイプＡ）または１５８０（サブタイプＢ）に感染したＨＥｐ−２細胞を、５０ｕｇ／ｍＬ〜０．０１６ｕｇ／ｍＬの範囲のＨ１Ｈ３５９２Ｐ３で処理した。６日後、各ウェルからの内容物を用いて、新たに播種したＨＥｐ−２細胞を感染させた。最も高い抗体投与量の存在下でも、淘汰圧下で産生したＲＳＶウイルス変異体の存在を示す細胞変性効果がＨＥｐ−２細胞において確認されるまで、この連続継代を継続した。全体として、１０個の異なるプラークからウイルス変異体を単離し、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３存在下における中和耐性を確認し、続いて配列決定を行った。
配列分析により、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３に対するエスケープ変異体は、ＲＳＶ−Ｆ（配列番号３５４）のアミノ酸位置１７３及び１７４（Ｓ１７３Ｙ及びＴ１７４Ｋ）に見出されることが確認され、これらのアミノ酸が抗体結合及びウイルス中和において重要な役割を果たすことを示している。先行する報告により、抗ＲＳＶ対照Ｉ抗体及び対照ＩＩ抗体に対する結合エピトープが、Ｓ２５５〜Ｎ２７６の間に位置することが特定された。これらの研究によるデータは、ＲＳＶ−Ｆ上のＨ１Ｈ３５９２Ｐ３に対する結合部位がウイルスの中和において主要な役割を果たし（表１２を参照）、既に確立された対照抗体に必要とされる結合部位とは異なることを示唆する。
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実施例８：水素−重水素交換及び質量分析法を用いたＨ１Ｈ３５９２Ｐ３のＲＳＶ−Ｆに対する結合エピトープの決定
抗ＲＳＶ−Ｆ抗体Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３の組換えＲＳＶ−Ｆに対する結合エピトープを決定するために、ペプシン消化とみ組合せた水素／重水素交換（Ｈ／Ｄ交換）及び質量分析法を行った。２種類のＨ／Ｄ交換フォーマット（以下に詳述する）を使用した：Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３により逆交換から保護されるＲＳＶ−Ｆペプチド断片が、Ｄ2０を保持し、質量分析法でより大きな分子量（ｍ／ｚ値）を得る「オン−溶液（ｏｎ−ｓｏｌｕｔｉｏｎ）／オフ−ビーズ（ｏｆｆ−ｂｅａｄｓ）」方法、及び全てのＲＳＶ−Ｆペプチドについてベースラインｍ／ｚ値を確立する「オン−ビーズ（ｏｎ−ｂｅａｄｓ）／オフ−ビーズ（ｏｆｆ−ｂｅａｄｓ）」対照方法。「オン−溶液／オフ−ビーズ」方法を用いて得られたｍ／ｚ値から対照ｍ／ｚ値を差し引くと、ゼロではないデルタｍ／ｚ値、即ち、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３とＲＳＶ−Ｆの間の結合エピトープに対応する残留Ｄ2０を示す特定のアミノ酸領域が得られる。
方法
オン−溶液／オフ−ビーズフォーマット
「オン−溶液／オフ−ビーズ」（溶液中のオン−交換（ｏｎ−ｅｘｃｈａｎｇｅ）に続いてビーズ上でオフ−交換（ｏｆｆ−ｅｘｃｈａｎｇｅ））フォーマットでは、Ｄ2Ｏを用いて調製したＰＢＳ緩衝液中で、ＲＳＶ−Ｆ．ｍｍｈタンパク質（配列番号３５３）を５分間または１０分間重水素化し、次いで２分間のインキュベーションにより、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）アガロースビーズ（ＧＥ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅ）に共有結合したＨ１Ｈ３５９２Ｐ３に結合させた。ＲＳＶ−Ｆ／Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３ビーズ複合体をＰＢＳ緩衝液（非重水素化Ｈ2Ｏを用いて調製）で洗浄し、ＰＢＳ緩衝液中でオン−交換時間の半分の間インキュベートした。オフ−交換の後、結合したＲＳＶ−Ｆを低ｐＨの氷冷ＴＦＡ溶液を用いてビーズから溶離させた。次いで、溶離したＲＳＶ−Ｆを固定化ペプシン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で５分間消化した。得られたペプチドをＺｉｐＴｉｐクロマトグラフィーピペットチップを用いて脱塩し、ＵｌｔｒａｆｌｅＸｔｒｅｍｅマトリックス支援レーザー脱離イオン化−飛行時間型（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）−ＴＯＦ質量分析法（ＭＳ）により直ちに分析した。
オン−ビーズ／オフ−ビーズフォーマット
「オン−ビーズ／オフ−ビーズ」（ビーズ上でのオン−交換後にビーズ上でのオフ−交換）フォーマットにおいて、最初にＲＳＶ−Ｆ．ｍｍｈ（配列番号３５３）をＨ１Ｈ３５９２Ｐ３アガロースビーズに結合させ、次いでオン−交換のためにＤ2Ｏ中で５分間または１０分間インキュベートした。ＲＳＶ−Ｆ／Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３ビーズ複合体を、ＰＢＳ緩衝液（非重水素化Ｈ2Ｏを用いて調製）で洗浄し、ＰＢＳ緩衝液中でオン−交換時間の半分の間インキュベートした。オフ−交換の後、結合したＲＳＶ−Ｆを低ｐＨの氷冷ＴＦＡ溶液を用いてビーズから溶離させた。次いで、溶離したＲＳＶ−Ｆを固定化ペプシン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で５分間消化した。得られたペプチドをＺｉｐＴｉｐクロマトグラフィーピペットチップを用いて脱塩し、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ−ＴＯＦ質量分析法により直ちに分析した。全ての検出ペプチドの重心値（ｃｅｎｔｒｏｉｄ ｖａｌｕｅｓ）または平均質量対電荷比（ｍ／ｚ）を計算し、この実験を「オン−溶液／オフ−ビーズ」実験と比較した。
ペプチドの同定
液体クロマトグラフィー−Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｅｌｉｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて、ペプチドの同定を行った。
結果
Ｈ／Ｄ交換及びペプシン消化に続くＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析によって検出された全てのＲＳＶ−Ｆペプチドについてのデルタ重心ｍ／ｚ値の詳細な比較を表１３に示す。配列番号３５４のアミノ酸１６１−１７１（ＥＧＥＶＮＫＩＫＳＡＬ、（配列番号３５５））及び１７２−１８８（ＬＳＴＮＫＡＶＶＳＬＳＮＧＶＳＶＬ、（配列番号３５６））に対応する２つのセグメントは、抗体−タンパク質の接触、従ってエピトープ領域を示すと考えられる社内で観察された閾値である０．２より高いデルタ重心値を有した。アミノ酸１６１−１７１に対応するペプチド信号は、低い信号雑音比のため１０分間のオン−交換実験では定量されなかった点も留意すべきである。しかし、５分間のオン−交換実験で検出されたデルタ値０．８８は閾値０．２をはるかに超え、これはＲＳＶ−ＦがＨ１Ｈ３５９２Ｐ３に結合することにより、Ｈ／Ｄ交換速度が有意に変化したことに起因する。
さらに、アミノ酸１７２−１８８に対応するペプチドセグメントは、２種のＲＳＶエスケープ変異体（Ｓ１７３Ｙ及びＴ１７４Ｋ；実施例７を参照のこと）のアミノ酸を含んでおり、この変異体はＨ１Ｈ３５９２Ｐ３の処置に対する耐性を有していたが、このことは、上記２種のアミノ酸が抗体の結合とウイルスの中和に影響を及ぼすことを示している。従って、エスケープＲＳＶ変異体の配列決定とＨ／Ｄ交換のみ組わ合せにより、抗体Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３に対するＲＳＶ−Ｆの結合領域を少なくとも部分的に規定する、配列番号３５４のアミノ酸１６１−１８８が裏付けられる。
Figure 2016512554
Figure 2016512554
実施例９．呼吸器多核体ウイルス融合（ＲＳＶ−Ｆ）タンパク質抗体は、ＲＳＶサブタイプＡ及びＢ実験室株に対し強力な中和効力を示す
Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３並びに対照Ｉ及びＩＩ抗体をＲＳＶマイクロ中和アッセイにおいて試験し効力を測定した。簡潔に言えば、５％Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳ、Ｌ−グルタミン及び抗生物質を補充したＤＭＥＭ １ｘ培地で培養したＨｅｐ２細胞１０4個を、９６ウェル透明底ブラックマイクロプレートに播種し、１６〜１８時間インキュベートした（３７℃、５％ＣＯ2）。次に、培地中で６６６ｎＭから開始し５分の１に連続希釈した様々な濃度の抗体を、ＡＴＣＣから提供された種々のＲＳＶサブタイプＡ実験室株と共に、ＭＯＩ ０．０４２で２時間インキュベートした（３７Ｃ、５％ＣＯ2）。ウイルスを含まず、無関係のアイソタイプ対照を含ませた。
インキュベートの後、抗体とウイルスの混合物をＨＥｐ−２細胞に添加し、３日間感染を維持した。感染の程度は、２％ＰＦＡ中で細胞を固定し、ヤギ抗ＲＳＶ／抗ヤギＨＲＰ抗体を用いてＥＬＩＳＡを行うことにより決定した。発光試薬をウェルに添加し、プレートリーダー（Ｖｉｃｔｏｒ Ｘ３、パーキンエルマー）を用いて信号を検出した。発光値は、１１ポイント反応曲線に対する３パラメータロジスティック方程式により分析した（グラフパッド・プリズム）。
本発明の抗体は、ＲＳＶ実験室株に対し幅広い中和活性を示した（表１４）。抗体Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３及びＡＭ２２は、ＲＳＶサブタイプＡ実験室株に対し、対照ＩＩに類似した効力を示した。対照Ｉと比較すると、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は１５〜１７倍高い効力（ＩＣ５０ ４４−１４０ｐＭ）を示したが、ＡＭ２２は、９−２３倍高い効力（ＩＣ５０ ８６−９１ｐＭ）を示した（表１４）。サブタイプＢについては、抗体Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は対照ＩＩに類似した効力を示したが、Ｍ２２及び対照Ｉよりも優れていた。対照Ｉと比較すると、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は２−５倍高い効力（ＩＣ５０ ３３−２３０ｐＭ）を示したが、ＡＭ２２は０．１３−２倍高い効力（ＩＣ５０ １９０−２５０８ｐＭ）を示した。
本実施例は、本発明の抗体がサブタイプＡ及びＢ両方のＲＳＶの数種実験株をｉｎ ｖｉｔｒｏで中和する効力は、確立された対照について既に実証された効力に比べ優れることを示す。
Figure 2016512554
実施例１０．呼吸器多核体ウイルス融合（ＲＳＶ−Ｆ）タンパク質抗体は、ＲＳＶサブタイプＡ臨床分離株に対し強力な中和効力を示す
Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３並びに対照Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ抗体を、ＲＳＶマイクロ中和アッセイにおいて試験して効力を測定した。簡潔に言えば、５％Ｈｙｃｌｏｎｅ ＦＢＳ、Ｌ−グルタミン及び抗生物質を補充したＤＭＥＭ １ｘ培地で培養したＨｅｐ−２細胞１０4個を、９６ウェル透明底ブラックマイクロプレートに播種し、１６〜１８時間インキュベートした（３７Ｃ、５％ＣＯ2）。次に、培地中で６６６ｎＭから開始し５分の１に連続希釈した様々な濃度の抗体を、Ｄｒ．Ｍｏｏｒｅ（エモリー大学（Ｅｍｏｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ））から提供された種々のＲＳＶサブタイプＡ臨床分離株と共に、ＭＯＩ ０．０１５〜０．１２８の範囲で２時間インキュベートした（３７Ｃ、５％ＣＯ2）。ウイルスを含まず、無関係のアイソタイプ対照を含ませた。
インキュベートの後、抗体とウイルスの混合物をＨＥｐ−２細胞に添加し、３日間感染を維持した。感染の程度は、２％ＰＦＡ中で細胞を固定し、ヤギ抗ＲＳＶ／抗ヤギＨＲＰ抗体を用いてＥＬＩＳＡを行うことにより決定した。発光試薬をウェルに添加し、プレートリーダー（ＶｉｃｔｏｒＸ３、パーキンエルマー）を用いて信号を検出した。発光値は、１１ポイント反応曲線に対する３パラメータロジスティック方程式により分析した（グラフパッド・プリズム）。
本発明の抗体は、ＲＳＶ臨床分離株に対し幅広い中和活性を示した（表１５）。殆どの臨床分離株について、抗体Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は対照ＩＩ及び対照ＩＩＩに類似
した効力を示した。対照Ｉと比較すると、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は１０〜２２倍高い効力（ＩＣ５０ ３４−６６ｐＭ）を示した（表１５）。
本実施例は、本発明の抗体が数種のＲＳＶ臨床分離株をｉｎ ｖｉｔｒｏで中和する効力は、確立された対照について既に実証された効力に比べ優れることを示す。
Figure 2016512554
実施例１１．Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３はウイルスと細胞膜の融合を阻害することによりウイルスの侵入をブロックする
本発明の抗体が呼吸器多核体ウイルス（ＲＳＶ）の感染をブロックするメカニズムを決定するための研究を行った。本発明の１つの例示的な抗体であるＨ１Ｈ３５９２Ｐ３が、ＲＳＶの宿主細胞との融合を防止／阻害するよう作用するか否かを決定するための試験を行った（図２Ａ及び２Ｂ）。対照Ｉ（パリビズマブの配列に基づく陽性対照ｍＡｂ）の作用メカニズムは、宿主細胞に対するウイルス融合の阻害として既に記載されている（Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ｏｆ Ｖｉｒｏｌ．，（２０１０），Ａｕｇ．８４（１６）：８１３２−４０）。ＲＳＶ−Ｆは、宿主受容体ヌクレオリンの相互作用による細胞への付着と、ウイルスと細胞膜の融合の両方に関与するため、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３のメカニズムを決定するためのアッセイを行った。
Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３または陽性対照抗体（対照Ｉ）の存在下でＲＳＶ（サブタイプＡ、Ａ２株）をインキュベートし、次いでその混合物をＨＥｐ−２細胞と共に４℃で１時間インキュベートして、ウイルスを細胞に結合させることにより、付着性アッセイ（図２Ａ）を実施した。未結合のウイルスを洗浄除去し、細胞を固定化して、付着ウイルスのパーセンテージをＥＬＩＳＡにより測定した。ＲＳＶの付着をブロックするヘパリンを対照として用いた。
４℃でウイルスを付着させ、未結合ウイルスを洗浄除去し、次いでＨ１Ｈ３５９２Ｐ３、陽性対照Ｉ、またはアイソタイプ陰性対照抗体と共に４℃でインキュベートし、細胞を３７℃にして、ウイルスの融合と侵入を促進させることにより、ウイルスの融合を検出した。ウイルスの感染をＥＬＩＳＡにより３日後に測定した（図２Ｂ）。ＲＬＵ：相対発光ユニット。
対照Ｉと同様に、Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は、ＲＳＶの融合をブロックし、細胞表面へのＲＳＶの付着をブロックしないが、アイソタイプ（陰性）対照ｍＡｂはウイルス融合に対し影響を及ぼさなかった（図２Ｂ）。ヘパリンは、ＲＳＶの細胞への付着を効果的にブロックしたが（Ｈａｌｌａｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ（２０００），２７１（２）：２６４−７５）、いずれの抗体もＲＳＶの付着を阻害しなかった（図２Ａ）。Ｈ１Ｈ３５９２Ｐ３は、本アッセイフォーマットにおいてウイルスの融合を２３０ｐＭのＩＣ50でブロックしたが、陽性対照ｍＡｂ（対照Ｉ）は１ｎＭのＩＣ50でウイルスの融合をブロックした（図２Ｂ）。ＲＳＶサブタイプＢ株（データは示されていない）については、類似した結果が観察された。
実施例１２．ＲＳＶ−Ｆへの結合に対する抗ＲＳＶ−Ｆ抗体のＯｃｔｅｔ交差競合
Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸバイオセンサー（Ｐａｌｌ ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ．）により、リアルタイム・ラベルフリー・バイオレイヤー干渉アッセイを用いて、抗ＲＳＶ−Ｆ ｍＡｂのパネル間の結合競合を測定した。全体の実験を、ＨＢＳＴカイネティックバッファー（ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｂｕｆｆｅｒ）（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｔｗｅｅｎ−２０、０．１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ）中、２５℃で、速度１０００ｒｐｍでプレートを振とうさせながら行った。Ｃ末端ｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを有して発現する組換えＲＳＶ−Ｆタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ−ｍｍＨ）上のそれぞれのエピトープへの結合に対し、２種類の抗体が互いに競合し得るか否かを評価するために、１０μｇ／ｍＬの組換えＲＳＶ−Ｆ−ｍｍＨ溶液を含むウェルにバイオセンサーを３分間浸すことにより、まず初めに約０．３６ｎｍのＲＳＶ−Ｆ−ｍｍＨを、抗Ｐｅｎｔａ−Ｈｉｓ抗体を被覆したＯｃｔｅｔバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｉｎｃ、Ｃａｔ＃ １８−５０７９）上に捕捉した。次いで、抗原を捕捉したバイオセンサーを１００−２００μｇ／ｍＬのｍＡｂ−１溶液を含むウェルに１０分間浸すことにより、第１の抗ＲＳＶ−モノクロ−ナルル抗体（以後はｍＡｂ−１と称する）で飽和させた。続いて、バイオセンサーを１００−２００μｇ／ｍＬの第２の抗ＲＳＶ−モノクロ−ナルル抗体（以後はｍＡｂ−２と称する）溶液を含むウェルに５分間浸し、予めｍＡｂ−１に結合しているＲＳＶ−Ｆ−ｍｍＨへのｍＡｂ−２の結合を調べた。バイオセンサーは、あらゆる実験工程の間でＨＢＳＴカイネティックバッファー中で洗浄した。実験過程を通しリアルタイム結合反応をモニタリングし、全工程の最大結合反応を記録した。予めｍＡｂ−１と結合しているＲＳＶ−Ｆ−ｍｍＨへのｍＡｂ−２の結合反応を測定し、異なる抗ＲＳＶ−モノクロ−ナルル抗体の競合／非競合挙動を測定した。
結果
Ｏｃｔｅｔ（登録商標）ＨＴＸで実施した逐次結合研究は、どの抗ＲＳＶ−モノクロ−ナルル抗体も互いに競合することはなく、ＲＳＶ−Ｆ−ｍｍＨに対し非競合的に結合できないことを示している。表１６に示すように、黒のフォント（ｂｌａｃｋ ｆｏｎｔ）で囲んだダークグレーの枠内は、自己競合（ｓｅｌｆ−ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｏｎ）のための結合反応を示す。異なる結合エピトープを示唆する、抗体間の競合がない場合を、黒のフォントで囲んだ白枠内に示した。第１の抗ＲＳＶ−モノクロ−ナルル抗体（ｍＡｂ−１）の抗Ｈｉｓ−捕捉ＲＳＶ−Ｆ−ｍｍＨタンパク質に対する結合は、第２抗ＲＳＶ−モノクロ−ナルル抗体（ｍＡｂ−２）の結合を防止しない。本研究の全ての抗ＲＳＶ−モノクロ−ナルル抗体について観察されたｍＡｂ−２の結合信号は、ｍＡｂ−１の不存在下（ｍＡｂなし）で観察された結合信号に匹敵することが判明したさらにに、全ての抗ＲＳＶ−モノクロ−ナルル抗体について観察されたｍＡｂ−２の結合は、抗ＲＳＶ−Ｆ抗体の結合順には無関係であることが判明し、これは研究中の全ての抗ＲＳＶ−Ｆ抗体は別々の結合エピトープを有することを示す。
Figure 2016512554

Claims (72)

  1. 呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体は下記特徴のうちの１以上を有する、単離された抗体またはその抗原結合性断片：
    （ａ）完全ヒトモノクローナル抗体である；
    （ｂ）配列番号３５４の約１６１位〜約１８８位のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列と相互作用する；
    （ｃ）配列番号３５４の１７３位のセリン、もしくは配列番号３５４の１７４位のスレオニンのいずれかと、または配列番号３５４の１７３位のセリン及び配列番号３５４の１７４位のスレオニンの両者と相互作用する；
    （ｄ）呼吸器合胞体ウイルスサブタイプＡ及びサブタイプＢ系統をインビトロで中和できる；
    （ｅ）ＲＳＶ感染の動物モデルにおいて、鼻及び／または肺のウイルス量をインビボで有意に低減する能力を示す；または
    （ｆ）ウイルスの細胞への融合を阻害する。
  2. 呼吸器合胞体ウイルスＦタンパク質（ＲＳＶ−Ｆ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合性断片であって、配列番号３５４の約１６１位〜約１８８位のアミノ酸残基を含むアミノ酸配列と相互作用する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  3. 前記抗体は、呼吸器合胞体ウイルスサブタイプＡ及び／またはサブタイプＢ系統をインビトロ及びインビボで中和する完全ヒトモノクローナル抗体である、請求項２記載の単離された抗体。
  4. 約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約０．１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した場合に、マウスＲＳＶ感染モデルにおいて肺のウイルス量を有意に低減する能力を示す、請求項１〜３のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  5. 約０．６２ｍｇ／ｋｇ〜約５．０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した場合に、コットンラットＲＳＶ感染モデルにおいて、パリビズマブ（ｐａｌｉｖｉｚｕｍａｂ）と比べて対数値で１〜２高い鼻及び／または肺のウイルス力価の減少度を示す、請求項１〜４のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  6. マウスＲＳＶサブタイプＡ感染モデルにおいて投与した場合に約０．１５ｍｇ／ｋｇ以下のＥＤ99を示す、請求項１〜５のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  7. コットンラットＲＳＶサブタイプＡ感染モデルにおいて投与した場合に約０．６２ｍｇ／ｋｇ以下のＥＤ99を示す、請求項１〜６のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  8. コットンラットＲＳＶサブタイプＢ感染モデルにおいて投与した場合に約２．５ｍｇ／ｋｇ以下のＥＤ99を示す、請求項１〜７のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  9. パリビズマブまたはモタビズマブ（ｍｏｔａｖｉｚｕｍａｂ）のＥＤ99よりも約２〜３倍低いＥＤ99を示す、請求項１〜８のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  10. １種以上のＲＳＶサブタイプＡ実験室株に対してパリビズマブよりも約１５〜１７倍向上した中和力を示すか、または、１種以上のＲＳＶサブタイプＡ臨床株に対してパリビズマブよりも約１０〜２２倍向上した中和力を示す、請求項１〜９のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  11. １種以上のＲＳＶサブタイプＢ実験室株に対してパリビズマブよりも約２〜５倍向上した中和力を示す、請求項１〜１０のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  12. １種以上のＲＳＶサブタイプＡ実験室株またはサブタイプＡ臨床株に対してＡＭ−２２よりも約０．５〜２倍向上した中和力を示す、請求項１〜１１のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  13. １種以上のＲＳＶサブタイプＢ実験室株に対してＡＭ−２２よりも約２．５〜１７倍向上した中和力を示す、請求項１〜１２のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  14. 表面プラズモン共鳴による測定値で１．０ｘ１０-7Ｍ〜６．０ｘ１０-10ＭのＫDでＲＳＶ−Ｆと特異的に結合する、請求項１〜１３のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  15. 配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２及び３３８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）を含む、請求項１〜１４のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  16. 配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０及び３４６からなる群より選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）を含む、請求項１〜１５のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  17. 配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０及び３３８／３４６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項１〜１６のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  18. 配列番号２７４／２８２及び３３８／３４６からなる群より選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列ペアを含む、請求項１７記載の単離された抗体または抗原結合性断片。
  19. ＲＳＶ−Ｆに特異的に結合する単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片であって、前記抗体は、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２及び３３８からなる群より選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）を含み、かつ、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０及び３４６からなる群より選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）を含む、単離されたヒト抗体またはその抗原結合性断片。
  20. （ａ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、及び３４４からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；並びに
    （ｂ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６及び３５２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
    を含む、ＲＳＶ−Ｆに特異的に結合する単離されたヒト抗体または抗原結合性断片。
  21. （ｃ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４及び３４０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
    （ｄ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６及び３４２からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
    （ｅ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２及び３４８からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；並びに
    （ｆ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４及び３５０からなる群より選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン
    をさらに含む、請求項２０記載の単離されたヒト抗体または抗原結合性断片。
  22. 配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０及び３３８／３４６からなる群より選択される重鎖・軽鎖配列ペアを含む抗体または抗原結合性断片とＲＳＶ−Ｆへの特異的結合に関して競合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  23. 配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０及び３３８／３４６からなる群より選択される重鎖・軽鎖配列ペアを含む抗体によって認識されるＲＳＶ−Ｆ上の同一エピトープに結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  24. 配列番号３５５及び３５６からなる群より選択される少なくとも１のアミノ酸配列と相互作用する、請求項１〜２３のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  25. 配列番号３５４の１６１番〜１８８番残基のうちの少なくとも１の残基と相互作用する、請求項１〜２３のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  26. 配列番号３５５または配列番号３５６中の少なくとも１の残基と相互作用する、請求項１〜２３のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  27. 配列番号３５４の１７３位のセリン、もしくは配列番号３５４の１７４位のスレオニンのいずれかと、または配列番号３５４の１７３位のセリン及び配列番号３５４の１７４位のスレオニンの両者と相互作用する、請求項１〜２３のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  28. 配列番号２７４の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３つの重鎖ＣＤＲ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３）と、配列番号２８２の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列中に含まれる３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２及びＬＣＤＲ３）とを含む、請求項２または３のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  29. （ａ）配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１ドメイン；
    （ｂ）配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２ドメイン；
    （ｃ）配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３ドメイン；
    （ｄ）配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１ドメイン；
    （ｅ）配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２ドメイン；及び
    （ｆ）配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３ドメイン
    を含む、請求項２８記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  30. 配列番号３５５及び３５６からなる群より選択される少なくとも１のアミノ酸配列と相互作用する、請求項２８または２９のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  31. 配列番号３５４の１６１番〜１８８番残基のうちの少なくとも１のアミノ酸残基と相互作用する、請求項２８または２９のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  32. 配列番号３５５または配列番号３５６中の少なくとも１のアミノ酸残基と相互作用する、請求項２８または２９のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  33. 配列番号３５４の１７３位のセリン、もしくは配列番号３５４の１７４位のスレオニンのいずれかと、または配列番号３５４の１７３位のセリン及び配列番号３５４の１７４位のスレオニンの両者と相互作用する、請求項２８または２９のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片。
  34. ＲＳＶ−Ｆへの結合に関してパリビズマブ、またはＡＭ−２２と交差競合しない、請求項１〜２１のいずれかに記載の単離された抗体。
  35. 配列番号３５４の２５５番アミノ酸残基から２７６番アミノ酸残基までのＲＳＶ−Ｆ上のエピトープに結合しない、請求項１〜２１、または２８〜３４のいずれかに記載の単離されたヒト抗体。
  36. 請求項１〜３５のいずれかに記載の抗体または抗原結合性断片をコードする単離された核酸分子。
  37. 請求項３６記載の核酸分子を含む発現ベクター。
  38. 請求項３７記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
  39. 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染、またはＲＳＶ感染に関連する少なくとも１種の症状を予防または治療する方法であって、請求項１〜３５のいずれかに記載の抗体もしくは抗原結合性断片、または請求項１〜３５のいずれかに記載の抗体もしくは抗原結合性断片を含む組成物を、それを必要とする患者に対し、ＲＳＶ感染が防止されるように、または該感染に関連する少なくとも１種の症状が数もしくは重症度において緩和もしくは低減されるように投与することを含む、方法。
  40. 前記投与の結果、患者において反復性の喘鳴が予防される、請求項３９記載の方法。
  41. 前記投与の結果、子供においてＲＳＶ関連喘息が予防される、請求項３９記載の方法。
  42. ＲＳＶ感染がサブタイプＡまたはサブタイプＢ呼吸器合胞体ウイルスによって生じる、請求項３９記載の方法。
  43. 前記それを必要とする患者が、ＲＳＶ感染を得るリスクが高い患者、または基礎疾患もしくは既存の症状に起因してより深刻なＲＳＶ感染を経験するおそれのある患者である、請求項３９記載の方法。
  44. 前記患者が、早期産児、正期産児、基礎疾患（例えば先天性心疾患、慢性肺疾患、嚢胞性線維症、免疫不全症、神経筋疾患）を有するもしくは有しない１歳以上の子供、施設収容患者もしくは入院患者、またはうっ血性心不全もしくは慢性閉塞性肺疾患等の基礎疾患を有するもしくは有しない高齢者（６５歳を超える者）である、請求項４３記載の方法。
  45. 前記患者は、肺系統、心血管系、筋神経系、または免疫系の欠陥に起因する症状を有する、請求項４３または４４のいずれかに記載の方法。
  46. 前記症状は、気道の異常、慢性肺疾患、慢性心疾患、呼吸器分泌物の処理を弱める神経筋疾患及び免疫抑制からなる群より選択される、請求項４５記載の方法。
  47. 慢性肺疾患が慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、または気管支肺異形成症である、請求項４６記載の方法。
  48. 慢性心疾患がうっ血性心不全（ＣＨＦ）、または先天性心疾患である、請求項４６記載の方法。
  49. 免疫抑制が、重症複合免疫不全もしくは重症後天性免疫不全の結果であるか、または免疫抑制をもたらす他の感染性疾患もしく癌ん性疾患の結果であるか、または免疫抑制剤療法もしくは放射線療法による治療の結果である、請求項４６記載の方法。
  50. 前記少なくとも１種の症状が、発熱、鼻詰まり、咳、食欲減退、低酸素症、呼吸困難（呼吸促迫または息切れ）、喘鳴、無呼吸、脱水症状、食欲不振及び精神状態の変化からなる群より選択される、請求項３９記載の方法。
  51. 前記それを必要とする患者は、前記抗体またはその抗原結合性断片を予防的に、または治療的に投与される、請求項３９記載の方法。
  52. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、静脈内、筋肉内、及び皮下からなる群より選択される経路で投与される、請求項３９記載の方法。
  53. 前記抗体または抗原結合性断片が、第二の治療剤と組み合わせて前記患者に投与される、請求項３９記載の方法。
  54. 前記第二の治療剤が、抗ウイルス剤；ＲＳＶに特異的なワクチン、インフルエンザウイルスに特異的なワクチン、またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）に特異的なワクチン；ＲＳＶ抗原またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的なｓｉＲＮＡ；ＲＳＶ抗原またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的な第二の抗体；抗−ＩＬ４Ｒ抗体、インフルエンザウイルス抗原に特異的な抗体、抗−ＲＳＶ−Ｇ抗体及びＮＳＡＩＤからなる群より選択される、請求項５３記載の方法。
  55. 請求項１〜３５のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合性断片のうちのいずれか１以上と、薬剤的に許容される担体とを含む、医薬組成物。
  56. 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染の予防を必要とする患者において呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染を予防するため、またはＲＳＶ感染している患者を治療するため、または該感染に関連する少なくとも１種の症状もしくは合併症を改善するために用いられ、該感染が防止されるか、または該感染に関連する少なくとも１種の症状もしくは合併症が防止され、改善され、もしくはその重症度及び／もしくは持続期間が低減される、請求項５５記載の医薬組成物。
  57. 呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染の予防を必要とする患者において呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染を予防するための、またはＲＳＶ感染している患者を治療するための、または該感染に関連する少なくとも１種の症状もしくは合併症を改善するための医薬であって、該感染が防止されるか、または該感染に関連する少なくとも１種の症状もしくは合併症が防止され、改善され、もしくはその重症度及び／もしくは持続期間が低減される医薬の製造のための、請求項５５記載の医薬組成物の使用。
  58. 前記それを必要とする患者が、ＲＳＶ感染を得るリスクが高い患者、または基礎疾患もしくは既存の症状に起因してより深刻なＲＳＶ感染を経験するおそれのある患者である、請求項５６または５７記載の使用。
  59. 前記それを必要とする患者が、早期産児、正期産児、基礎疾患（例えば先天性心疾患、慢性肺疾患、嚢胞性線維症、免疫不全症、神経筋疾患）を有するもしくは有しない１歳以上の子供、施設収容患者もしくは入院患者、またはうっ血性心不全もしくは慢性閉塞性肺疾患等の基礎疾患を有するもしくは有しない高齢者（６５歳を超える者）である、請求項５６〜５８のいずれかに記載の使用。
  60. 前記患者は、肺系統、心血管系、筋神経系、または免疫系の欠陥に起因する症状を有する、請求項５９記載の使用。
  61. 前記症状は、気道の異常、慢性肺疾患、慢性心疾患、呼吸器分泌物の処理を弱める神経筋疾患及び免疫抑制からなる群より選択される、請求項６０記載の使用。
  62. 慢性肺疾患が慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症、または気管支肺異形成症である、請求項６１記載の使用。
  63. 慢性心疾患がうっ血性心不全（ＣＨＦ）、または先天性心疾患である、請求項６１記載の使用。
  64. 免疫抑制が、重症複合免疫不全もしくは重症後天性免疫不全の結果であるか、または免疫抑制をもたらす他の感染性疾患もしく癌ん性疾患の結果であるか、または免疫抑制剤療法もしくは放射線療法による治療の結果である、請求項６１記載の使用。
  65. 前記少なくとも１種の症状が、発熱、鼻詰まり、咳、食欲減退、低酸素症、呼吸困難（呼吸促迫または息切れ）、喘鳴、無呼吸、脱水症状、食欲不振及び精神状態の変化からなる群より選択される、請求項５６または５７記載の使用。
  66. 前記それを必要とする患者は、前記抗体またはその抗原結合性断片を予防的に、または治療的に投与される、請求項５６または５７記載の使用。
  67. 前記組成物が、静脈内、筋肉内、及び皮下からなる群より選択される経路で投与される、請求項５６または５７記載の使用。
  68. 前記組成物が第二の治療剤と組み合わせて前記患者に投与される、請求項５６または５７記載の使用。
  69. 前記第二の治療剤が、抗ウイルス剤；ＲＳＶに特異的なワクチン、インフルエンザウイルスに特異的なワクチン、またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）に特異的なワクチン；ＲＳＶ抗原またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的なｓｉＲＮＡ；ＲＳＶ抗原またはメタニューモウイルス（ＭＰＶ）抗原に特異的な第二の抗体；抗−ＩＬ４Ｒ抗体、インフルエンザウイルス抗原に特異的な抗体、抗−ＲＳＶ−Ｇ抗体及びＮＳＡＩＤからなる群より選択される、請求項６８記載の使用。
  70. 配列番号３５４の約１６１位〜約１８８位のアミノ酸配列と、薬剤的に許容される担体とを含む、免疫原性組成物。
  71. 配列番号３５５及び／または配列番号３５６のアミノ酸配列と、薬剤的に許容される担体とを含む、免疫原性組成物。
  72. アジュバントをさらに含む、請求項７０または７１のいずれかに記載の免疫原性組成物。
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