CN107922455A - 用于治疗病毒感染的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于治疗感染的组合物和方法，所述感染例如为RSV、流感病毒、腺病毒或鼻病毒的感染。

Description

用于治疗病毒感染的组合物和方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年7月2日递交的美国临时专利申请62/188,300的优先权，其全部内容通过引用合并于此。

技术领域

本发明涉及用于治疗病毒感染的组合物和方法，所述病毒感染包括呼吸道感染，如由病毒(例如RSV、流感病毒、腺病毒和鼻病毒)引起的那些。

背景技术

对于现有和新出现的病毒性疾病的治疗存在显著的未满足的医疗需求，而上述疾病对全球数百万人造成严重的健康风险。尽管有疫苗可用，但每年都发生甲型流感病毒(flu)流行病，在年轻人、老年人和严重疾病患者中每年有三百万-五百万重症病例，每年死亡人数高达50万人。抗病毒药物如奥司他韦仅有微弱的效果，并且对患有流感并发症的患者无效。人类副流感病毒3(HPIV3)是导致婴幼儿严重呼吸道呼吸系统疾病的主要呼吸道RNA病毒之一，也没有针对HPIV3的疫苗。与呼吸道合胞病毒(RSV)有关的疾病影响婴儿、儿童、免疫受损者和老年人，每年造成约30万次住院和1万人死亡，并且是儿童喘息和哮喘的主要驱动因素，导致了较高的医疗成本。RSV和flu是成人急性哮喘和COPD恶化的一个原因，占成人哮喘住院人数的7.2％、肺炎入院人数的10.6％、COPD入院人数的11.4％。RSV是一种重要的病原体，特别是在患有慢性肺病或免疫力受损的成年人中。对于严重的RSV感染，使用预防性的帕利珠单抗或利巴韦林，但是其具有显著的副作用。研究表明，未能激活足够的先天性免疫反应是病毒清除率降低、哮喘和肺部疾病(即大块性肺炎)恶化以及死亡的主要原因。因此，总的来说，对flu、呼吸道合胞病毒和其它呼吸道感染的有效治疗仍存在基本未得到满足的医疗需求。鼻病毒是人类中最常见的病毒感染物，也是导致普通感冒的主要原因。已经鉴定出至少99种对人类有影响的人鼻病毒血清型。没有针对这些病毒的疫苗，因为在血清型之间几乎没有交叉保护。

发明内容

在一方面，本发明的特征在于用于治疗患有病毒感染如呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒、腺病毒或鼻病毒的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用式(I)化合物或其前药或药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

在一个实施方案中，通过吸入或通过气管内递送来施用所述化合物。在一个实施方案中，所述化合物通过口服递送或通过肠胃外递送。在一个实施方案中，所述化合物通过鼻内递送。

在一个实施方案中，所述前药为式(P)化合物：

其中，

X为键、O、NH或S；且

R¹为被任选取代的烷基或杂烷基。

在一个实施方案中，X为键且R¹为烷基(例如，叔丁基)。在一个实施方案中，X为键且R¹为杂烷基(例如，被任选取代的杂烷基)。

在一个实施方案中，X为O且R¹为烷基或杂烷基。

在一些实施方案中，式(I)的前药为式(II)化合物，其中所述化合物选自：

或其药学上可接受的盐(例如，酒石酸盐)。

在一个实施方案中，式(I)的前药为式(III)、式(IV)、式(V)或式(VI)的化合物：

或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，可使用由式III-VI表示的前药的各异构体形式，例如以下所述的比例和百分比的式(I)和(II)化合物。

在一些实施方案中，向受试者给药包含本发明所述化合物(例如，式(I)化合物)的混合物的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含式(Ib)和式(Ic)的混合物。在一些实施方案中，所述混合物包含的式(Ib)与式(Ic)的比例为约1:1(例如，外消旋混合物)。在一些实施方案中，所述混合物包含的式(Ib)与式(Ic)的比例为约51:49、约52:48、约53:47、约54:46、约55:45、约60:40、约65:35、约70:30、约75:25、约80:20、约85:15、约90:10、约95:5或约99:1或更大。在一些实施方案中，所述混合物包含的式(Ic)与式(Ib)的比例为约51:49、约52:48、约53:47、约54:46、约55:45、约60:40、约65:35、约70:30、约75:25、约80:20、约85:15、约90:10、约95:5或约99:1或更大。

在一些实施方案中，所述组合物包含式(Ib)且包含小于约5％的式(Ic)，例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(Ic)，或基本不含式(Ic)。在一些实施方案中，所述组合物包含式(Ic)且包含小于约5％的式(Ib)，例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(Ib)，或基本不含式(Ib)。

在一些实施方案中，向受试者给药包含式(II)化合物的混合物的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含式(IIb)和式(IIc)的混合物。在一些实施方案中，所述化合物包含的式(IIb)与式(IIc)的比例为约1:1(例如，外消旋化合物)。在一些实施方案中，所述混合物包含的式(IIb)与式(IIc)的比例为约51:49、约52:48、约53:47、约54:46、约55:45、约60:40、约65:35、约70:30、约75:25、约80:20、约85:15、约90:10、约95:5或约99:1或更大。在一些实施方案中，所述混合物包含的式(IIc)与式(IIb)的比例为约51:49、约52:48、约53:47、约54:46、约55:45、约60:40、约65:35、约70:30、约75:25、约80:20、约85:15、约90:10、约95:5或约99:1或更大。

在一些实施方案中，所述组合物包含式(IIb)且包含小于约5％的式(IIc)，例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(IIc)，或基本不含式(IIc)。在一些实施方案中，所述组合物包含式(IIc)且包含小于约5％的式(IIb)，例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(IIb)，或基本不含式(IIb)。

在一些实施方案中，所述受试者为哺乳动物。在一些实施方案中，所述受试者为人类。在一些实施方案中，所述受试者为成年人(例如，超过约18岁，例如，超过约65岁)。在一些实施方案中，所述受试者为儿童(例如，小于约18岁，例如，小于约5岁，例如，小于约2岁)。在一些实施方案中，所述受试者免疫受损(例如，受试者相对于参考标准可具有弱化的免疫系统，或者可患有免疫疾病或病症)。

在一些实施方案中，所述方法为治疗RSV的方法。在一些实施方案中，所述受试者被诊断患有RSV感染。在一些实施方案中，所述受试者此前已感染RSV或被诊断患有RSV感染。在一些实施方案中，RSV感染的基因型、血清型、亚型或抗原组是已知的。在一些实施方案中，所述RSV感染为A亚型RSV或B亚型RSV。在一些实施方案中，所述受试者患有严重的RSV感染。在一些实施方案中，所述受试者患有细支气管炎、肺炎或其它呼吸道疾病或病症。

在一些实施方案中，所述受试者未经治疗。在一些实施方案中，所述受试者此前已针对RSV感染进行治疗(例如，通过抗体或抗病毒剂)。在一些实施方案中，所述受试者此前已针对免疫缺陷进行治疗。

在一些实施方案中，所述方法为治疗流感的方法。在一个实施方案中，所述受试者已被诊断患有流感。在一个实施方案中，所述流感为甲型、乙型或丙型。在一个实施方案中，所述方法降低流感的严重性或预防流感的并发症(例如，病毒性肺炎、继发性细菌性肺炎、鼻窦感染和此前健康问题如哮喘或心力衰竭的恶化)。

在一些实施方案中，所述方法涉及治疗造成普通感冒的感染。在一个实施方案中，所述受试者被诊断患有鼻病毒感染，其造成了普通感冒。

在一些实施方案中，所述方法包括每日施用所述剂量。在一些实施方案中，所述施用为每日一次。在一些实施方案中，所述施用为每日超过一次，例如，每日两次、每日三次、每日四次。在一些实施方案中，所述方法包括以低于一天一次的频率施用所述剂量，例如，每36小时一次、每两天一次或一周一次。在一些实施方案中，所述方法包括用化合物预防性治疗。

在一些实施方案中，所述剂量包含约0.5mg/kg至约100mg/kg。在一些实施方案中，所述剂量包含约0.5mg/kg至约95mg/kg、约90mg/kg、约85mg/kg、约80mg/kg、约75mg/kg、约70mg/kg、约65mg/kg约60mg/kg、约55mg/kg、约50mg/kg、约45mg/kg、约40mg/kg、约35mg/kg、约30mg/kg、约25mg/kg、约20mg/kg、约15mg/kg或约10mg/kg。在一些实施方案中，所述剂量包含约0.5mg/kg至约50mg/kg。在一些实施方案中，所述剂量包含约0.5mg/kg至约40mg/kg。

在一些实施方案中，所述剂量高于约0.5mg/kg,例如，约1.0mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg或约90mg/kg，直至约100mg/kg。在一些实施方案中，所述剂量包含约5mg/kg至约50mg/kg。在一些实施方案中，所述剂量包含约10mg/kg至约50mg/kg。在一些实施方案中，所述剂量包含约15mg/kg至约50mg/kg。

在一个实施方案中，所述剂量被配置为用于吸入或气管内施用。在一些实施方案中，所述剂量被配置为用于鼻内施用。在一些实施方案中，所述剂量被配置为用于口服或肠胃外施用。在一些实施方案中，所述剂量包括液体或固体剂型。在一些实施方案中，液体剂型包括混悬剂、溶液剂、乳剂、喷雾剂、雾剂、气雾剂、酏剂或糖浆。在一些实施方案中，所述喷雾剂、雾剂或气雾剂包含约0.01微米至约10微米大小的颗粒。在一些实施方案中，所述喷雾剂、雾剂或气雾剂包含约0.01微米、约0.025微米、约0.05微米、约0.075微米、约0.1微米、约0.25微米、约0.5微米、约0.75微米、约1微米、约1.25微米、约1.5微米、约1.75微米、约2微米、约3微米、约4微米、约5微米、约6微米、约7微米、约8微米、约9微米或约10微米大小的颗粒，但颗粒的实际大小可以在该范围之外。

在一些实施方案中，固体剂型包括片剂、胶囊剂、软凝胶、颗粒剂、微粒剂、散剂、凝胶剂或微胶囊剂型。在一些实施方案中，所述颗粒剂、微粒剂、散剂、凝胶剂或微胶囊剂型包含约0.01微米至约10微米大小的颗粒。在一些实施方案中，所述颗粒剂、微粒剂、散剂、凝胶剂或微胶囊剂型包含约0.01微米、约0.025微米、约0.05微米、约0.075微米、约0.1微米、约0.25微米、约0.5微米、约0.75微米、约1微米、约1.25微米、约1.5微米、约1.75微米、约2微米、约3微米、约4微米、约5微米、约6微米、约7微米、约8微米、约9微米或约10微米大小的颗粒，但颗粒的实际大小可以在该范围之外。

在一些实施方案中，使用雾化器或吸入器(例如，干粉吸入器、定量吸入器)施用所述化合物。

在一些实施方案中，所述化合物作为药物组合物施用。在一些实施方案中，所述组合物包含药学上可接受的赋形剂、载剂或添加剂。

在一些实施方案中，本发明所述的方法进一步包括分析来自受试者的肺样本或血液样本或接收来自受试者的肺样本或血液样本的分析结果。在一些实施方案中，所述肺样本或血液样本在感染RSV后约4小时至约96小时后被分析(例如，约16小时至约72小时)。在一些实施方案中，分析所述血液样本的病毒载量、IL6水平、TNF水平、IFN-β水平、RSV核壳体(N)蛋白水平、RIG-I水平或NOD2水平(例如，通过RT-PCR)。在一些实施方案中，分析所述肺样本的病毒载量、IL6水平、TNF水平、IFN-β水平、RSV核壳体(N)蛋白水平、RIG-I水平或NOD2水平(例如，通过RT-PCR、菌斑分析或组织学染色)。在一些实施方案中，分析所述肺样本或血液样本的干扰素(例如，干扰素α或干扰素β)、干扰素刺激蛋白(例如，ISG15、CXCL10、OAS1)或其它细胞因子的表达水平。在一些实施方案中，分析肺样本的阻塞、炎症、免疫细胞浸润、肺泡腔的大小和坏死。

本文所述的方法还包括施用治疗有效量的其它药剂。在一些实施方案中，所述其它药剂是抗病毒剂、抗菌剂、抗癌剂、抗炎剂、抗体、支气管扩张剂、止痛剂、退热剂、镇咳剂或抗组胺药。在一些实施方案中，抗病毒剂包括干扰素、核苷类似物、非核苷类抗病毒剂或非干扰素类免疫增强剂。在一些实施方案中，干扰素包括干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-n1、复合α干扰素(interferon alfacon-1)或聚乙二醇化干扰素(例如聚乙二醇化干扰素α-2a、聚乙二醇化干扰素α-2b)。在一些实施方案中，所述抗病毒剂包含衣壳蛋白抑制剂、进入抑制剂、分泌抑制剂、微RNA、反义RNA剂、RNAi剂或其它设计用于抑制病毒RNA的药剂。在一些实施方案中，核苷类似物包括恩替卡韦(entecavir)、拉米夫定(lamuvidine)、阿德福韦、达芦那韦(darunavir)、索非布韦、特拉匹韦、替诺福韦、齐多夫定、利巴韦林、拉米夫定、恩替卡韦或AL-8176。

在一些实施方案中，抗癌剂包括甲氨喋呤、5-氟尿嘧啶、多柔比星、长春新碱、博来霉素、长春碱、达卡巴嗪、依托泊苷(toposide)、顺铂、表柔比星和甲苯磺酸索拉非尼。在一些实施方案中，抗炎剂、止痛剂或退热剂包括对乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬、萘普生、非诺洛芬、右布洛芬或酮洛芬。在一些实施方案中，支气管扩张剂包括沙丁胺醇、柳丁胺醇、肾上腺素(例如，外消旋肾上腺素)、左沙丁胺醇、吡布特罗、麻黄素、特布他林、沙美特罗、克仑特罗、福莫特罗、班布特罗或茚达特罗。

在另一方面，本发明的特征在于一种预防病毒感染如呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒、腺病毒或鼻病毒感染的方法，所述方法包括向受试者施用式(I)化合物或其前药或药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

在一个实施方案中，所述化合物通过鼻内递送、吸入或通过气管内递送来给药。在一个实施方案中，所述化合物通过口服或肠胃外递送。

在一个实施方案中，所述前药为式(P)化合物

其中,

X为键、O、NH或S；且

R¹为被任选取代的烷基或杂烷基。

在一个实施方案中，X为键且R¹为烷基(例如，叔丁基)。在一个实施方案中，X为键且R¹为杂烷基(例如，被任选取代的杂烷基)。

在一个实施方案中，X为O且R¹为烷基或杂烷基。

在一些实施方案中，式(I)的前药为式(II)化合物，其中所述化合物选自：

或其药学上可接受的盐(例如，酒石酸盐)。

在一个实施方案中，式(I)的前药为式(III)、式(IV)、式(V)或式(VI)的化合物:

或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，可使用由式III-VI表示的前药的各异构体形式，例如以下所述的比例和百分比的式(I)和(II)化合物。

在一些实施方案中，向受试者施用包含式(I)化合物的混合物的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含式(Ib)和式(Ic)的混合物。在一些实施方案中，所述混合物包含的式(Ib)与式(Ic)的比例为约1:1(例如，外消旋混合物)。在一些实施方案中，所述混合物包含的式(Ib)与式(Ic)的比例为约51:49、约52:48、约53:47、约54:46、约55:45、约60:40、约65:35、约70:30、约75:25、约80:20、约85:15、约90:10、约95:5或约99:1或更大。在一些实施方案中，所述混合物包含的式(Ic)与式(Ib)的比例为约51:49、约52:48、约53:47、约54:46、约55:45、约60:40、约65:35、约70:30、约75:25、约80:20、约85:15、约90:10、约95:5或约99:1或更大。

在一些实施方案中，所述组合物包含式(Ib)且包含小于约5％的式(Ic),例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(Ic)，或基本不含式(Ic)。在一些实施方案中，所述组合物包含式(Ic)且包含小于约5％的式(Ib),例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(Ib)，或基本不含式(Ib)。

在一些实施方案中，向受试者施用包含式(II)化合物的混合物的组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含式(IIb)和式(IIc)的混合物。在一些实施方案中，所述混合物包含的式(IIb)与式(IIc)的比例为约1:1(例如，外消旋混合物)。在一些实施方案中，所述混合物包含的式(IIb)与式(IIc)的比例为约51:49、约52:48、约53:47、约54:46、约55:45、约60:40、约65:35、约70:30、约75:25、约80:20、约85:15、约90:10、约95:5或约99:1或更大。在一些实施方案中，所述混合物包含的式(IIc)与式(IIb)的比例为约51:49、约52:48、约53:47、约54:46、约55:45、约60:40、约65:35、约70:30、约75:25、约80:20、约85:15、约90:10、约95:5或约99:1或更大。

在一些实施方案中，所述组合物包含式(IIb)且包含小于约5％的式(IIc)，例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(IIc)，或基本不含式(IIc)。在一些实施方案中，所述组合物包含式(IIc)且包含小于约5％的式(IIb)，例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(IIb)，或基本不含式(IIb)。

在一些实施方案中，所述受试者为哺乳动物。在一些实施方案中，所述受试者为人类。在一些实施方案中，所述受试者为成年人(例如，超过约18岁，例如，超过约65岁)。在一些实施方案中，所述受试者为儿童(例如，小于约18岁，例如，小于约5岁，例如，小于约2岁)。在一些实施方案中，所述受试者免疫受损(例如，受试者相对于参考标准具有弱化的免疫系统，或者可患有免疫疾病或病症)。

在一些实施方案中，所述方法为预防RSV的方法。在一些实施方案中，受试者此前已感染有RSV感染或被诊断患有RSV感染。在一些实施方案中，RSV感染的基因型、血清型、亚型或抗原组是已知的。在一些实施方案中，RSV感染是A亚型RSV或B亚型RSV。在一些实施方案中，所述受试者患有严重的RSV感染。在一些实施方案中，所述受试者患有细支气管炎、肺炎或其它呼吸道疾病或病症。

在一些实施方案中，所述方法为预防流感的方法。在一个实施方案中，所述受试者已被诊断患有流感。在一个实施方案中，所述流感为甲型流感、乙型流感或丙型流感。在一个实施方案中，所述方法降低了流感病毒的严重性或预防流感病毒的并发症(例如，病毒性肺炎、继发性细菌性肺炎、鼻窦感染和此前健康问题如哮喘或心力衰竭的恶化)。

在一些实施方案中，所述方法为预防普通感冒的方法。在一个实施方案中，所述受试者已被诊断患有鼻病毒感染。

在一些实施方案中，所述受试者未经治疗。在一些实施方案中，所述受试者已经针对RSV感染进行治疗(例如，通过抗体或抗病毒剂)。在一些实施方案中，所述受试者此前已针对免疫缺陷进行治疗。

在一些实施方案中，所述方法包括每日施用所述剂量。在一些实施方案中，所述施用为每日一次。在一些实施方案中，所述施用为每日超过一次，例如，每日两次、每日三次、每日四次。在一些实施方案中，所述方法包括以小于每天一次的频率施用所述剂量，例如，每36小时一次、每两天一次或一周一次。

在一些实施方案中，所述剂量包含约0.5mg/kg至约100mg/kg。在一些实施方案中，所述剂量包含约0.5mg/kg至约95mg/kg、约90mg/kg、约85mg/kg、约80mg/kg、约75mg/kg、约70mg/kg、约65mg/kg、约60mg/kg、约55mg/kg、约50mg/kg、约45mg/kg、约40mg/kg、约35mg/kg、约30mg/kg、约25mg/kg、约20mg/kg、约15mg/kg或约10mg/kg。在一些实施方案中，所述剂量包含约0.5mg/kg至约50mg/kg。在一些实施方案中，所述剂量包含约0.5mg/kg至约40mg/kg。

在一些实施方案中，所述剂量高于约0.5mg/kg，例如，约1.0mg/kg、约1.5mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约50mg/kg、约55mg/kg、约60mg/kg、约65mg/kg、约70mg/kg、约75mg/kg、约80mg/kg、约85mg/kg或约90mg/kg up至约100mg/kg。在一些实施方案中，所述剂量包含约5mg/kg至约50mg/kg。在一些实施方案中，所述剂量包含约10mg/kg至约50mg/kg。在一些实施方案中，所述剂量包含约15mg/kg至约50mg/kg。

在一些实施方案中，所述剂量包括液体或固体剂型。在一些实施方案中，液体剂型包括混悬剂、溶液剂、乳剂、喷雾剂、雾剂、气雾剂、酏剂或糖浆。在一些实施方案中，所述喷雾剂、雾剂或气雾剂包含约0.01微米至约10微米大小的颗粒。在一些实施方案中，所述喷雾剂、雾剂或气雾剂包含约0.01微米、约0.025微米、约0.05微米、约0.075微米、约0.1微米、约0.25微米、约0.5微米、约0.75微米、约1微米、约1.25微米、约1.5微米、约1.75微米、约2微米、约3微米、约4微米、约5微米、约6微米、约7微米、约8微米、约9微米或约10微米大小的颗粒，但颗粒的实际大小可以在该范围之外。

在一些实施方案中，固体剂型包括片剂、胶囊剂、软凝胶、颗粒剂、微粒剂、散剂、凝胶剂或微胶囊剂型。在一些实施方案中，所述颗粒剂、微粒剂、散剂、凝胶剂或微胶囊剂型包含约0.01微米至约10微米大小的颗粒。在一些实施方案中，所述颗粒剂、微粒剂、散剂、凝胶剂或微胶囊剂型包含约0.01微米、约0.025微米、约0.05微米、约0.075微米、约0.1微米、约0.25微米、约0.5微米、约0.75微米、约1微米、约1.25微米、约1.5微米、约1.75微米、约2微米、约3微米、约4微米、约5微米、约6微米、约7微米、约8微米、约9微米或约10微米大小的颗粒，但颗粒的实际大小可以在该范围之外。

在一些实施方案中，所述化合物使用雾化器或吸入器(例如，干粉吸入器、定量吸入器)施用。

在一些实施方案中，所述化合物作为药物组合物施用。在一些实施方案中，所述组合物包含药学上可接受的赋形剂、载剂或添加剂。

在一些实施方案中，本发明所述的方法进一步包括分析来自受试者的肺样本或血液样本或接受来自受试者的肺样本或血液样本的分析结果。在一些实施方案中，在感染RSV约4小时至约96小时(例如，约16小时至约72小时)后分析肺样本或血液样本。在一些实施方案中，分析血液样本的病毒载量、IL6水平、TNF水平、IFN-β水平、RSV核壳体(N)蛋白水平、RIG-I水平或NOD2水平(例如，通过RT-PCR)。在一些实施方案中，分析肺样本的病毒载量、IL6水平、TNF水平、IFN-β水平、RSV核壳体(N)蛋白水平、RIG-I水平或NOD2水平(例如，通过RT-PCR、菌斑分析或组织学染色)。在一些实施方案中，分析肺样本或血液样本的干扰素(例如，干扰素α或干扰素β)、干扰素刺激蛋白(例如，ISG15、CXCL10、OAS 1)或其它细胞因子的表达水平。在一些实施方案中，分析肺样本的阻塞、炎症、免疫细胞浸润、肺泡腔的大小和坏死。

在一些实施方案中，本发明所述的方法进一步包括施用治疗有效量的其它药剂。例如，在一个实施方案中，本发明所述的化合物(例如，式(I)化合物或其前药)可与另一种药剂(例如，治疗另一种病毒感染，如HBV或HIV)共同使用。例如，在一个实施方案中，具有另一种病毒感染(如HIV)且用HIV剂治疗的受试者可发展出另一种本发明所述的病毒，如RSV或流感病毒，并用式(I)化合物或其前药治疗。在一个实施方案中，患有癌症且用抗癌剂治疗的受试者可发展出本发明所述的病毒感染，如RSV或流感病毒，并用式(I)化合物或其前药治疗。在一些实施方案中，所述其它药剂为抗病毒剂、抗菌剂、抗癌剂、抗炎剂、抗体和支气管扩张剂、止痛剂、退热剂、镇咳剂或抗组胺药。在一些实施方案中，抗病毒剂包括干扰素、核苷类似物、非核苷类抗病毒剂或非干扰素类免疫增强剂。在一些实施方案中，干扰素包括干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-n1、复合α干扰素或聚乙二醇化干扰素(例如聚乙二醇化干扰素α-2a、聚乙二醇化干扰素α-2b)。在一些实施方案中，所述抗病毒剂包含衣壳蛋白抑制剂、进入抑制剂、分泌抑制剂、微RNA、反义RNA剂、RNAi剂或其它设计用于抑制病毒RNA的试剂。在一些实施方案中，核苷类似物包括恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦、达芦那韦、索非布韦、特拉匹韦、替诺福韦、齐多夫定、利巴韦林、拉米夫定、恩替卡韦或AL-8176。

在一些实施方案中，所述抗癌剂包括甲氨喋呤、5-氟尿嘧啶、多柔比星、长春新碱、博来霉素、长春碱、达卡巴嗪、依托泊苷、顺铂、表柔比星和甲苯磺酸索拉非尼。在一些实施方案中，所述抗炎剂、止痛剂或退热剂包括对乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬、萘普生、非诺洛芬、右布洛芬或酮洛芬。在一些实施方案中，所述支气管扩张剂包括沙丁胺醇、柳丁胺醇、肾上腺素(例如，外消旋肾上腺素)、左沙丁胺醇、吡布特罗、麻黄素、特布他林、沙美特罗、克仑特罗、福莫特罗、班布特罗或茚达特罗。

附图说明

图1A-1B为描述感染了RSV的小鼠的气道中IL-6的生成的图。向BALB/c小鼠(每组n＝5)气管内施用水(载剂)或式(II)(10mg/kg)。施用后16小时，在式(II)或水的存在下使小鼠感染RSV。在感染RSV后2天或4天，收集小鼠的肺部，并通过对肺匀浆的ELISA分析确定气道中IL-6的水平。用化合物1治疗的小鼠的肺部显示降低水平的促炎性细胞因子IL-6。

图2A-2B为描述感染了RSV的小鼠的气道中TNF-α生成的图。向BALB/c小鼠(每组n＝5)气管内施用水(载剂)或式(II)(10mg/kg)。施用后16小时，在式(II)或水的存在下使小鼠感染RSV。在感染RSV后2天或4天，收集小鼠的肺部，并通过对肺匀浆的ELISA分析确定气道中TNF的水平。用化合物1治疗的小鼠的肺部显示降低水平的促炎性细胞因子TNF-α。

图3为描述感染了RSV的小鼠的气道中IFN-β的生成的图。与上述过程类似，向BALB/c小鼠(每组n＝5)气管内施用水(载剂)或式(II)(10mg/kg)。施用后16小时，在式(II)或水的存在下使小鼠感染RSV。在感染RSV后2天，收集小鼠的肺部，并通过对肺匀浆的ELISA分析确定气道中IFN-β的水平。用化合物1的治疗导致IFN初始生成的增加，其在抑制病毒复制并减少感染之后逐渐下降。总的来说，这导致对感染的控制并降低了炎性反应。

图4A-4B为显示出在式(II)治疗的小鼠的气道中RSV感染减少的琼脂糖凝胶。向BALB/c小鼠(每组n＝5)气管内施用水(载剂)或式(II)(10mg/kg)。施用后16小时，在式(II)或水的存在下使小鼠感染RSV。在感染RSV后2天或4天，收集肺部，并通过RT-PCR定量RSV核壳体(N)基因表达来研究RSV感染的程度。将GADPH表达用作负载对照(loading control)。RSV+水以及RSV+SB的各泳道表示来自一只小鼠的结果，且该数据代表每组3只小鼠。

图5描述了对感染了RSV的小鼠的肺部中RIG-I表达的琼脂糖凝胶分析。向BALB/c小鼠(每组n＝5)气管内施用水(载剂)或式(II)(10mg/kg)。施用后16小时，在式(II)或水的存在下使小鼠感染RSV。在感染RSV后2天，收集肺部，并通过RT-PCR检验呼吸道内RIG-I表达的程度。将GADPH表达用作负载对照。RSV+水以及RSV+SB的各泳道表示来自一只小鼠的结果，且该数据代表每组3只小鼠。

图6描述了对感染了RSV的小鼠的肺部中NOD2表达的琼脂糖凝胶分析。向BALB/c小鼠(每组n＝5)气管内施用水(载剂)或式(II)(10mg/kg)。施用后16小时，在式(II)或水的存在下使小鼠感染RSV。在感染RSV后2天收集肺部，并通过RT-PCR检验呼吸道内NOD2表达的程度。将GADPH表达用作负载对照。RSV+水以及RSV+SB的各泳道表示来自一只小鼠的结果，且该数据代表每组3只小鼠。

图7A-7F描述了感染了RSV并用式(II)治疗的小鼠的固定肺切片。向BALB/c小鼠(每组n＝5)气管内施用水(载剂)或式(II)(10mg/kg)。施用后16小时，在式(II)或水的存在下使小鼠感染RSV。在感染RSV(p.i)后2天或4天，收集肺部，固定肺切片并通过H&E染色。

图8描述了显示式(II)在小鼠的肺中的抗RSV活性的图。使BALB/c小鼠(n＝5)气管内感染RSV。在感染RSV后16小时，向小鼠施用水(载剂)或式(II)(20mg/kg)。在第一剂量后24小时施用第二剂量的载剂或式(II)。24小时后(感染RSV后64小时)，收集被感染的小鼠的肺，并对所得组织匀浆进行菌斑分析以确定肺中的RSV滴度。

图9描述了显示式(II)在小鼠的肺中的抗RSV活性的菌斑分析。使BALB/c小鼠(n＝5)气管内感染RSV。在感染RSV后16小时，向小鼠施用水(载剂)或式(II)(20mg/kg)。在第一剂量后24小时施用第二剂量的载剂或式(II)。24小时后(感染RSV后64小时)，收集被感染的小鼠的肺，并对所得组织匀浆进行菌斑分析以确定肺中的RSV滴度。每个孔代表来自一只小鼠的结果。

图10描述了显示感染有RSV随后用式(II)治疗的小鼠的肺中降低的IFN-β水平的图。使BALB/c小鼠(n＝5)气管内感染RSV。在感染RSV后16小时，向小鼠施用水(载剂)或式(II)(20mg/kg)。在第一剂量后24小时施用第二剂量的载剂或式(II)。24小时后(感染RSV后64小时)，收集被感染的小鼠的肺，并对所得组织匀浆进行ELISA分析以定量肺中的IFN-β水平。

图11描述了显示感染有RSV随后用式(II)治疗的小鼠的肺中降低的TNF水平的图。使BALB/c小鼠(n＝5)气管内感染RSV。在感染RSV后16小时，向小鼠施用水(载剂)或式(II)(20mg/kg)。在第一剂量后24小时施用第二剂量的载剂或式(II)。24小时后(感染RSV后64小时)，收集被感染的小鼠的肺，并对所得组织匀浆进行ELISA分析以定量肺中的TNF水平。

图12描述了显示式IV化合物的抗RSV活性的图。人肺上皮(HLE)A549细胞的病毒感染。使HLE细胞用载剂或化合物IV(20μM)预处理16小时。然后在载剂或化合物IV的存在下用RSV(0.5MOI)感染细胞18小时。在无血清无抗生素的OPTI-MEM培养基(GIBCO)中用RSV感染HLE细胞。在37℃吸收1.5小时后，用含有DMEM的血清清洗细胞两次，并在血清(+/-IV)的存在下继续感染。通过来自被感染细胞的培养基上清液的菌斑分析计算感染性病毒滴度。使用CV-1细胞进行菌斑分析。

图13A和13B描述了显示式VI化合物的预防性和治疗型抗RSV活性的图。人肺上皮(HLE)A549细胞的病毒感染。对于预防性活性，将HLE细胞用载剂或化合物VI(20μM)预处理16小时。然后在载剂或化合物VI的存在下用RSV(0.5MOI)感染细胞18小时。在无血清无抗生素的OPTI-MEM培养基(GIBCO)中用RSV感染HLE细胞。在37℃吸收1.5小时后，用含有DMEM的血清清洗细胞两次，并在血清(+/-VI)的存在下继续感染。通过来自被感染细胞的培养基上清液的菌斑分析计算感染性病毒滴度。使用CV-1细胞进行菌斑分析。为了证实治疗性活性，用RSV感染HLE细胞，并在24小时后用化合物VI处理细胞，并如上所述确定病毒滴度。

图14描述了同分异构体式IIb和IIc(酒石酸盐形式)在HLE(A549)细胞中的体外抗RSV活性。用载剂或IIc或IIc的酒石酸盐(20μM)预处理HLE细胞16小时。然后在载剂或异构体的存在下用人RSV感染细胞16小时。通过来自被感染细胞的培养基上清液的菌斑分析计算感染性病毒滴度。使用学生t检验计算*p和**p为<0.05。

图15描述了式IIa的抗流感活性。用载剂或40μM的IIa预处理A549细胞16小时。(在图中，SB4367或SB438代表IIa的两个不同的合成批次)。然后在载剂或IIa的存在下用flu(流感病毒株A/Puerto Rico/8/1934H1N1)(1MOI或2MOI)感染细胞24小时。通过RT-PCR分析flu血凝素(HA)基因表达，由此研究flu感染。GAPDH表达被用作负载对照。

发明详述

本发明涉及治疗被病毒感染的受试者的方法，所述病毒例如为RSV、流感病毒、腺病毒或鼻病毒，所述方法包括施用本发明所述的化合物，例如式I-VI的化合物或其药学上可接受的盐。

定义

如本发明所用，冠词“一个”是指一个或多于一个(例如，至少一个)的该冠词的语法对象。

“约”和“大约”通常应指考虑到测量的性质或精确度的情况下所测量的量的可接受的误差程度。示例性误差度在给定数值或数值范围的百分之20(％)以内，通常在10％以内，更通常在5％以内。

如本发明所用，术语“获得”作为在本发明中使用的术语，是指获得物理实体(例如，样品，例如血液样本或肝脏活检样品)或值(例如数值)，其包括“直接获得”或“间接获得”物理实体或值。“直接获得”是指进行一个过程(例如分析方法)以获得物理实体或值。“间接获得”是指从另一方或另一来源接收物理实体或值(例如，直接获得物理实体或值的第三方实验室)。直接获得值包括进行一个过程，其包括在样品或另一种物质中的物理变化，例如进行包括了在物质(例如样品)中的物理变化的分析过程、执行分析方法(例如本发明所述的方法)，例如通过对体液(如血液)的样品分析，例如通过质谱(例如LC-MS)。

如本发明所用，有效治疗病症(例如本发明所述的病症)的化合物、缀合物或物质的量、“治疗有效量”、“有效量”或“有效疗程”是指在向受试者单次或多次施用剂量后，有效治疗受试者或有效治愈、减轻、缓解或改善患有病症(例如微生物感染)的受试者的化合物、物质或组合物的量，其效果超出了在缺少这种治疗的情况下所预期的效果。

如本文所用，术语“预防”在用于病症或疾病的情况下，是指将药剂施用至对象，例如，向受试者施用本发明的化合物(例如，式(I)化合物或前药(例如，式(II-VI)化合物)，使得该病症或疾病的至少一种症状的发作与没有给予所述药剂的情况下相比被延迟。

如本文所用，术语“受试者”旨在包括人类和非人类动物。示例性人类受试者包括患有病症(例如本文所述的病症)的人类患者或正常受试者。在一些实施方案中，所述受试者为人，例如儿童或成人。术语“非人类动物”包括所有的脊椎动物，如非哺乳动物(如鸡、两栖类、爬行动物)和哺乳动物，如非人类的灵长类动物、驯养的和/或者农业上有用的动物，如绵羊、狗、猫、牛、猪等。在一些实施方案中，受试者是小鼠(例如，BALB/c小鼠)。

如本文所用，术语“治疗”患有病症或疾病的受试者是指使受试者经受治疗方案，例如施用式(I)化合物或前药(例如式(II-VI)化合物)或其药学上可接受的盐，或施用包含式(I)或前药(例如式(II-VI)的化合物)或其药学上可接受的盐的组合物，从而使得病症或疾病的至少一种症状被治愈、恢复、减轻、缓解、改变、补救、改进或改善。治疗包括施用有效减轻、缓解、改变、补救、改进、改善或影响病症或疾病或该疾病或疾病的症状的量。该治疗可以抑制疾病或病症的症状的恶化或变坏。

本发明提供了数值范围，例如每天施用的药物量的范围。在一些实施方案中，范围包括两个端点。在其他实施方案中，范围不包括一个端点或不包括两个端点。举例来说，所述范围可不包括下端点。因此，在这样的实施方案中，不包括下端点的250至400mg/天的范围将覆盖小于或等于400mg/天且大于250mg/天的量。

化合物

本发明的特征在于用于治疗病毒感染或感染并发症的方法。示例性的病毒感染包括受试者中RSV、流感病毒、腺病毒和鼻病毒的感染，包括施用式(I)化合物或其前药或药学上可接受的盐(例如，本发明所述的盐，如酒石酸盐)。活性剂为式(I)，其可被描述为式(Ia)、式(Ib)和式(Ic)中的任一个，或其组合。

在一个实施方案中，所述前药为式(P)化合物：

其中,

X为键、O、NH或S；且

R¹为被任选取代的烷基或杂烷基。

在一个实施方案中，X为键，且R¹为烷基(例如，叔丁基)。在一个实施方案中，X为键，且R¹为杂烷基(例如，被任选取代的杂烷基)。

在一个实施方案中，X为O，且R¹为烷基或杂烷基。

本发明的组合物可包含式(I)的前药，其中所述前药为式(II)化合物。前药(例如，式(II)化合物)可被描述为式(IIa)、式(IIb)和式(IIc)中的任一个，或其组合：

在一个实施方案中，式(I)的前药为式(III)、式(IV)、式(V)或式(VI)的化合物：

或其药学上可接受的盐。

在一个实施方案中，所述化合物为药学上可接受的盐，如本发明所述的盐(例如，酒石酸盐)。

在一个实施方案中，本发明所述的化合物以富集单一异构体的制剂(例如富集Rp或Sp异构体的制剂)给药。上文描述了富集的示例性相对比例和百分比。在一些实施方案中，可以使用由式III-VI表示的前药的各异构体形式，例如，如上述比例和百分比的式(I)和(II)化合物。

式(I)及其前药式(II)是结合了抗病毒和免疫调节活性的小分子核酸杂交(二核苷酸)化合物。后一种活性通过刺激先天性免疫反应介导被病毒感染的细胞的受控细胞凋亡，类似于在患有病毒感染的患者中通过IFN-α治疗所实现的那样。

不希望被理论所束缚，本发明所述的式(I)及其前药(例如式(II-VI))的作用机制可以分解为两个组分：第一种组分需要式(I)的宿主免疫刺激活性，其中式(I)通过激活病毒传感器蛋白如视黄酸诱导基因1(RIG-I)和含有核苷酸结合寡聚化结构域的蛋白质2(NOD2)诱导内源性IFN(Takeuchi,O.和Akira S.Cell(2010)140:805-820；Sato,S.等人，Immunity(2015)42:123-132；Sabbah,A.等人，Nat Immunol(2009)10:1073-1080)。活化可通过使式(I)结合RIG-I/NOD2蛋白的核苷酸结合域而发生。RIG-1和NOD2蛋白位于细胞(包括气道上皮细胞)的胞质溶胶中，且通常识别外源核酸的标记模式，如病原体相关分子模式(PAMP)。一旦病毒RNA或DNA中的PAMP被识别，RIG-I和NOD2可被激活并触发IFN信号级联反应，其然后导致IFN和干扰素-刺激的基因(ISG)产生并诱导细胞中的抗病毒状态。在RSV的情况下，PAMP被认为是单链基因组RNA。

式(I)和前药如式(II-VI)化合物的作用机制的第二个组分涉及其直接的抗病毒活性，其通过空间阻断病毒聚合酶来抑制病毒核酸的合成。该阻断可通过式(I)与如上所述的RIG-I和NOD2的相互作用来实现，其然后阻止聚合酶与病毒核酸模板接合来进行的复制(即RSV RNA)。使用一组细胞系进行前药如式(II-VI)的化合物的细胞毒性潜能的初始评估。与母体药物类似，式(II)表现出优异的安全性，其中50％细胞毒性浓度(CC50)大于1000μM(Coughlin,J.E.等人，Bioorg Med Chem Lett(2010)20:1783-1786)。在基于细胞的测定中针对野生型HBV以及针对拉米夫定-(3TC)和阿德福韦(ADV)耐药性突变HBV，进一步评估了式(II)的抗HBV活性，并且其也表现出抗HCV和其他病毒感染的效力。

在一些实施方案中，本发明所述的方法包括施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在其它实施方案中，本发明所述的方法包括施用式(I)的前药(例如，式(II-VI)的化合物)或其药学上可接受的盐。在其它实施方案中，本发明所述的方法包括施用组合物，其由式(I)化合物及其前药如式(II-VI)化合物或其药学上可接受的盐(例如，酒石酸盐)的组合组成。已证明，前药式(II)在施用后被转化为活性药物式(I)(例如，Rp-和Sp异构体，例如，式(Ib)和式(Ic))。

本文提供的化合物可以含有一个或多个不对称中心，因此作为外消旋体和外消旋混合物、单一对映异构体、单独的非对映异构体和非对映异构体混合物存在。这些化合物的所有这些异构体形式都明确地被包括在本发明的范围内。除非另有说明，否则当化合物通过没有指定立体化学的结构来命名或描述、并且具有一个或多个手性中心时，其应理解为表示该化合物的所有可能的立体异构体。本文提供的化合物还可以包含连接基(例如碳-碳键、磷-氧键或磷-硫键)或可以包括限制键旋转的取代基，例如由于存在环或双键而产生的限制。

病毒感染

本发明涉及对病毒感染的治疗。示例性的病毒感染包括呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒、副流感病毒和鼻病毒。本发明涉及通过施用式(I)-(VI)或前药式(II)、或其药学上可接受的盐(例如，酒石酸盐)来治疗被RSV感染的受试者的方法。

RSV是包膜RNA病毒，属于副粘病毒科病毒属。病毒基因组由具有负极性的单链RNA组成，并且包含编码11种蛋白质的10个基因。基于病毒包膜蛋白F(融合)和G(糖蛋白)上存在的抗原表位，病毒被表征为两种主要的血清型(血清型A和B)。在一些实施方案中，本发明所述的方法用于治疗患有任何已知形式的RSV感染(例如，RSV的任何基因型或血清型或其组合或变体)的受试者。

RSV具有高度传染性，通常通过已感染的鼻腔和口腔液感染受试者。一旦存在于受试者中，病毒通过细胞间传递迅速沿着呼吸道上皮传播。到达下呼吸道时，RSV经常在受试者中诱导细支气管炎或肺炎，其可与RSV感染共存。RSV的典型潜伏期为2-8天，更常见的是3-6天。RSV往往感染小孩，据估计几乎所有儿童在三岁前都感染过该病毒。在成年人中，RSV感染对包括老年人在内的高危人群造成了类似于流感的疾病负担，在美国65岁以上的人群中每年造成约10,000人的死亡。

目前只有两种治疗RSV感染的方法被批准。首先，单克隆抗体帕利珠单抗作为一种预防性治疗方法，用于有风险的幼儿，如早产儿和患有慢性心肺疾病的患者。第二种治疗是抗病毒剂利巴韦林，其被认为干扰了病毒mRNA的表达。然而，利巴韦林治疗并不是普遍成功的，并且与高剂量或长期使用的毒性有关。因此，迫切需要一种新型的RSV疗法，其可以在免疫系统减弱的患者中中和病毒而不诱导毒性和病毒抗性。

尽管有疫苗，甲型流感病毒(flu)每年在年轻人、老年人以及具有严重身体状况者中有3-5百万重症病例，每年死亡人数高达500,000万人。抗流感病毒的两大类抗病毒药物为神经氨酸酶抑制剂如扎那米韦和奥司他韦，或病毒M2蛋白抑制剂，如金刚烷胺和金刚乙胺。这些药物在感染后不久服用可立即降低症状的严重程度，也可以服用以降低感染的风险。但是，已经出现了显示对两类药物都有抗药性的病毒株。此外，抗病毒药物如奥司他韦和扎那米韦仅略微有效并且在flu并发症患者中无效。

有三种流感病毒，其被称为甲型流感病毒、乙型流感病毒和丙型流感病毒。由于病毒体携带的RNA的极性，流感病毒是(-)链RNA病毒。

人类副流感病毒3(HPIV3)是引起婴儿和儿童严重的呼吸道疾病的主要呼吸道RNA病毒之一，且并没有针对HPIV3的疫苗。人副流感病毒(hPIV)是引起“人副流感病”的病毒。hPIV是四种不同血清型的包膜单链RNA病毒组，其属于副粘病毒科。

鼻病毒引起普通感冒。根据其表面蛋白(血清型)的不同，有99种公认的人类鼻病毒。它们是溶解性的，是直径约30纳米的最小病毒之一。鼻病毒的单链正义RNA基因组长度在7200nt到8500nt之间。在基因组的5'末端是病毒编码的蛋白质，并携带3'多腺嘌呤尾(poly-A tail)。在基因组的5'区编码结构蛋白，在3'末端是非结构的。病毒颗粒没有被包膜，在结构上是二十面体。

药物组合物

本发明特征在于用于治疗感染RSV的受试者的方法，该方法包括施用式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物)，或其药学上可接受的盐。

尽管本发明的化合物(例如，式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物))可以被单独施用，但优选将所述化合物作为药物组合物或制剂施用，其中该化合物与一种或多种药学上可接受的稀释剂、赋形剂或载体组合。根据本发明的化合物可以被配制成以任何方便的方式施用以用于人或兽医药物。在一些实施方案中，包含在药物制剂中的化合物本身可以是活性的，或者可以是前药(例如，式(II-VI)化合物)，例如能够在生理环境中转化为活性化合物。无论所选的给药途径是什么，本发明的化合物(其可以以合适的水合形式使用)和/或本发明的药物组合物都可被配制成如下所述的药学上可接受的剂型，或通过本领域技术人员已知的其它常规方法配制。

本发明的化合物(例如，式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物)在药物组合物中的量和浓度，以及被施用至受试者的药物组合物的量，可以根据以下进行选择：临床相关因素如受试者的医学相关特性(例如年龄、体重、性别、其它医疗状况等)、化合物在药物组合物中的溶解性、化合物的效力和活性以及药物组合物的施用方式。关于施用途径和给药方案的进一步信息，读者可以参照Comprehensive Medicinal Chemistry(CorwinHansch；编委会主席),Pergamon Press 1990中第5卷第25.3章。

因此，本发明的另一方面提供了药学上可接受的组合物，其包含治疗有效量或预防有效量的本发明所述的化合物(例如，式(I)化合物或其前药(例如式(II-VI)化合物)，其与一种或多种药学上可接受的载体(添加剂)和/或稀释剂一起配制。如下文详细描述的，本发明的药物组合物可以专门被配制用于以固体或液体形式给药，包括适用于口服或肠胃外给药例如通过口服剂量或通过皮下、肌内或静脉内注射的那些，例如以无菌溶液或悬浮液形式。然而，在一些实施方案中，主题化合物可以简单地溶解或悬浮在无菌水中。在一些实施方案中，药物制剂是无热原性的，即不提高患者的体温。

本发明所用的短语“全身性施用”、“全身施用”、“外周性施用”和“外周施用”是指化合物不是直接施用到中枢神经系统中，而是进入患者系统，其经受代谢和其他类似的过程，例如皮下施用。

本文使用的短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断范围内适合用于与人类和动物的组织接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症的那些化合物、材料、组合物和/或剂型，其与合理的利益/风险比相称。

如本文所用，短语“药学上可接受的载体”是指涉及将所述拮抗剂从一个器官或身体的一部分携带或运输至另一器官或身体的一部分的药学上可接受的材料、组合物或载体，如液体或固体填充剂、稀释剂、稳定剂、赋形剂、溶剂或包囊材料。每种载体必须是“可接受的”，意指其与制剂的其他成分相容且对患者无害。可用作药学上可接受的载体的材料的一些例子包括但不限于：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和马铃薯淀粉；(3)纤维素及其衍生物，如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)粉末黄蓍树胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂，如可可脂和栓剂蜡；(9)油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；(10)二醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨糖醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；(15)海藻酸；(16)抗坏血酸；(17)无热原水；(18)等渗盐水；(19)林格氏液；(20)乙醇；(21)磷酸盐缓冲溶液；(22)环糊精如和(23)其它无毒的可相容物质，如在药物制剂中使用的抗氧化剂和杀菌剂。

如上所述，本文所述化合物的一些实施方案可以含有碱性官能团如胺，因此能够与药学上可接受的酸形成药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”是指那些在合理的医学判断范围内适用于与人类和低等动物的组织接触、且没有不适当的毒性、刺激性、过敏反应等的盐，并且与合理的效益/风险比相称。药学上可接受的盐在本领域中是公知的。例如，Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences(1977)66:1-19中详细描述了药学上可接受的盐。本发明化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适的无机及有机的酸和碱的那些。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例是与无机酸(如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸)或与有机酸(如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸)或通过使用本领域中使用的其它方法如离子交换形成的氨基的盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘化物、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。衍生自合适的碱的药学上可接受的盐包括碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和N⁺(C_1–4烷基)₄盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。适当时，其它药学上可接受的盐包括无毒的铵盐、季铵盐和胺阳离子，其使用抗衡离子形成，如卤素离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根。

润湿剂、乳化剂和润滑剂如月桂基硫酸钠和硬脂酸镁以及着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂和芳香剂、防腐剂和抗氧化剂也可存在于组合物中。药学上可接受的抗氧化剂包括：(1)水溶性抗氧化剂，如抗坏血酸、半胱氨酸盐酸盐、硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠等；(2)油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)、卵磷脂、没食子酸丙酯、α-生育酚等；和(3)金属螯合剂，如柠檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。

药学上可接受的载体以及润湿剂、乳化剂、润滑剂、着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂、抗氧化剂和其它附加组分的量可以为本申请组合物的约0.001％至99％。例如，所述药学上可接受的载体以及润湿剂、乳化剂、润滑剂、着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、防腐剂、抗氧化剂和其它额外组分的量可以为本发明所述组合物的约0.005％、约0.01％、约0.05％、约0.1％、约0.25％、约0.5％、约0.75％、约1％、约1.5％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约85％、约90％、约95％或约99％。

本发明的药物组合物可以是适合于口服给药的形式，例如液体或固体口服剂型。在一些实施方案中，液体剂型包括混悬剂、溶液剂、药糖剂、乳剂、饮料、酏剂或糖浆。在一些实施方案中，固体剂型包括胶囊、片剂、散剂、糖锭剂或散剂。药物组合物可以是适于单次施用的精确剂量的单位剂型。除了本发明所述的化合物(例如，式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物)或其药学上可接受的盐之外，药物组合物还可以包含药学上可接受的载体，且可任选地进一步包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，例如稳定剂(例如粘合剂，例如聚合物，例如沉淀抑制剂、稀释剂、粘合剂和润滑剂)。

在一些实施方案中，本文所述的组合物包含用于口服给药的液体剂型，例如溶液剂或混悬剂。在其它实施方案中，本文所述的组合物包含用于口服的固体剂型，其可以被直接压制成片剂。另外，所述片剂可以包含其它药物或药剂、载体和/或佐剂。示例性药物组合物包括压制片剂(例如，直接压制的片剂)，例如，其包含本发明的化合物(例如，式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物)或其药学上可接受的盐。

本发明的制剂包括适用于肠胃外施用的那些。制剂可以方便地以单位剂型提供，并且可以通过制药领域中公知的任何方法制备。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据被治疗的宿主、特定的施用方式而变化。可与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量通常为产生治疗效果的该化合物的量。通常，以百分比计，该量范围为约1％至约99％活性成分、优选约5％至约70％活性成分、最优选约10％至约30％活性成分。适用于肠胃外施用的本发明的药物组合物包含本发明的化合物与一种或多种药学上可接受的无菌等渗水性或非水性的溶液、分散体、悬浮液或乳液或在使用之前可重构成无菌可注射或可吸入的溶液或分散体的无菌粉末，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质或助悬剂或增稠剂。

在一些实施方案中，本发明所述的组合物包含用于吸入施用的液体剂型，例如溶液剂、混悬剂、乳剂、喷雾剂、雾剂或气溶胶。在一些实施方案中，本发明所述的组合物包含用于气管内施用的液体剂型，例如溶液剂、混悬剂、乳剂、喷雾剂、雾剂或气溶胶。在一些实施方案中，所述喷雾剂、雾剂或气溶胶包含大小为约0.01微米至约10微米的颗粒。在一些实施方案中，所述喷雾剂、雾剂或气溶胶包含大小为约0.01微米、约0.025微米、约0.05微米、约0.075微米、约0.1微米、约0.25微米、约0.5微米、约0.75微米、约1微米、约1.25微米、约1.5微米、约1.75微米、约2微米、约3微米、约4微米、约5微米、约6微米、约7微米、约8微米、约9微米或约10微米的颗粒，但颗粒的实际大小可在该范围以外。

在一些实施方案中，本发明所述的组合物包含用于通过吸入施用的固体剂型，例如颗粒剂、微粒剂、散剂、凝胶剂或微胶囊剂型。在一些实施方案中，本发明所述的组合物包含用于气管内施用的固体剂型，例如颗粒剂、微粒剂、散剂、凝胶剂或微胶囊剂型。在一些实施方案中，所述颗粒剂、微粒剂、散剂、凝胶剂或微胶囊剂型包含大小为约0.01微米至约10微米的颗粒。在一些实施方案中，所述颗粒剂、微粒剂、散剂、凝胶剂或微胶囊剂型包含大小为约0.01微米、约0.025微米、约0.05微米、约0.075微米、约0.1微米、约0.25微米、约0.5微米、约0.75微米、约1微米、约1.25微米、约1.5微米、约1.75微米、约2微米、约3微米、约4微米、约5微米、约6微米、约7微米、约8微米、约9微米或约10微米的颗粒，但颗粒的实际大小可在该范围以外。

此外，所述剂型和制剂可包含其它药物或药剂、载体、赋形剂和/或佐剂。示例性的药物组合物包括压制片剂(例如，直接压制的片剂)，例如，其包含本发明的化合物(例如，式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物)或其药学上可接受的盐。

可用于本发明药物组合物中的合适的水性和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油如橄榄油、和可注射的有机酯如油酸乙酯。适当的流动性可通过例如使用包衣材料(如卵磷脂)、在分散体的情况下维持所需的粒度以及使用表面活性剂来保持。

这些组合物还可以含有佐剂，如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过包含各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等，可以确保防治微生物的作用。也会需要在组合物中包含等渗剂如糖、氯化钠等。另外，通过包含延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝和明胶，可以延长可注射或可吸入药物形式的吸收。

在一些情况下，为了延长本发明化合物(例如，式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物)的效果，会需要减慢来自皮下或肌内注射的药物的吸收。这可以通过使用水溶性较差的结晶或无定形物质的液体悬浮液来实现。药物的吸收速率取决于其溶解速率，而溶解速率又取决于晶体大小和结晶形式。或者，本发明化合物的肠胃外施用形式的延迟吸收是通过将化合物溶解或悬浮于油性载体中来实现的。

在一些实施方案中，以持续方式施用本发明化合物(例如，式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物))是有利的。应理解，可以使用提供持续吸收曲线的任何制剂。在一些实施方案中，持续吸收可以通过将本发明的化合物与减缓其进入全身性循环的释放性质的其它药学上可接受的成分、稀释剂或载体组合来实现。

施用途径

本领域技术人员将理解，用于本发明所述方法中的化合物和组合物可根据所选择的施用途径以各种形式给予受试者。用于本发明所述方法中的组合物的示例性给药途径包括吸入、气管内、鼻内、局部、肠内或肠胃外施用。局部施用包括但不限于经皮、吸入、灌肠、滴眼、滴耳和通过体内粘膜的应用。肠内施用包括口服施用、直肠施用、阴道施用和胃管。肠胃外施用包括静脉内、动脉内、囊内、眶内、心内、皮内、气管内、经气管、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外、胸骨内、腹膜内、皮下、肌内、经上皮、鼻内、肺内、鞘内、直肠和局部施用方式。肠胃外施用可以通过在选定的时间段内连续输注。在本发明的一些实施方案中，包含式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物)的本发明所述的组合物被口服给药。在本发明的其它实施方案中，包含式(I)化合物或其前药的本发明所述的组合物被肠胃外施用(例如，腹腔内)。

对于静脉内、腹膜内、鞘内或气管内递送或直接注射，组合物必须是无菌且在一定程度上是流动的，以使得组合物可通过注射器递送。除了水之外，载体还可以是等渗缓冲盐溶液、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇等)以及它们的合适的混合物。例如，通过使用包衣如卵磷脂、通过在分散体的情况下维持所需的粒度以及通过使用表面活性剂来维持适当的流动性。在许多情况下，优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(如甘露醇或山梨糖醇)以及氯化钠。可以通过在组合物中包含延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝或明胶来实现可注射组合物的长时间吸收。

施用途径的选择将取决于是否实现局部或全身效果。例如，对于局部效果，可将组合物配制成局部施用，并在需要其作用的地方直接施用。对于全身性的长期的效果，所述组合物可以配制为用于肠内给药并且通过消化道给予。对于全身、立即和/或短期效果，组合物可以被配制成肠胃外给药并且通过非消化道的途径给予。

在一些实施方案中，本发明的方法的特征在于通过吸入或通过气管内递送式(I)或式(II-VI)的化合物。在一些实施方案中，所述化合物或其组合物可通过雾化器或吸入器(例如，干粉吸入器或定量吸入器)施用。

剂量

本发明组合物通过本领域技术人员已知的常规方法被配制成可接受的剂型。本发明组合物中活性成分(例如，式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物))的实际剂量水平可以变化以获得对于特定受试者、组合物和施用模式有效实现所需治疗响应的活性成分的量，同时对受试者又无毒性。所选的剂量水平将取决于各种药代动力学因素，包括所使用的本发明的具体组合物的活性、施用途径、施用时间、所使用的具体药剂的吸收速率、治疗持续时间、与所用特定组合物组合使用的其他药物、物质和/或材料、正在治疗的受试者的年龄、性别、体重、状况、一般健康状况和医药前史以及医学领域中众所周知的类似因素。具有本领域普通技术的医生或兽医可以容易地确定并开出所需组合物的有效量。例如，医生或兽医可以以低于实现所需治疗效果的所需水平作为用于组合物中的本发明的物质的起始剂量，并逐渐增加剂量，直到实现所需效果。通常，本发明组合物的合适的每日剂量将是有效产生治疗效果的最低剂量的物质的量。这种有效剂量通常将取决于上述因素。优选地，治疗组合物的有效每日剂量可以以2、3、4、5、6个或更多个亚剂量在全天以适当间隔分开施用，任选以单位剂型施用。

优选的治疗剂量水平为向患有本发明所述病症(例如RSV感染)的受试者每天施用(例如口服或腹膜内)约0.1mg/kg至约1000mg/kg(例如，约0.2mg/kg,0.5mg/kg,1.0mg/kg,1.5mg/kg,2mg/kg,3mg/kg,4mg/kg,5mg/kg,10mg/kg,15mg/kg,20mg/kg,25mg/kg,30mg/kg,35mg/kg,40mg/kg,45mg/kg,50mg/kg,60mg/kg,70mg/kg,80mg/kg,90mg/kg,100mg/kg,125mg/kg,150mg/kg,175mg/kg,200mg/kg,250mg/kg,300mg/kg,350mg/kg,400mg/kg,450mg/kg,500mg/kg,600mg/kg,700mg/kg,800mg/kg,900mg/kg或1000mg/kg)的组合物。优选的预防性剂量水平为向受试者每天施用(例如口服或腹膜内)约0.1mg/kg至约1000mg/kg(例如，约0.2mg/kg,0.5mg/kg,1.0mg/kg,1.5mg/kg,2mg/kg,3mg/kg,4mg/kg,5mg/kg,10mg/kg,15mg/kg,20mg/kg,25mg/kg,30mg/kg,35mg/kg,40mg/kg,45mg/kg,50mg/kg,60mg/kg,70mg/kg,80mg/kg,90mg/kg,100mg/kg,125mg/kg,150mg/kg,175mg/kg,200mg/kg,250mg/kg,300mg/kg,350mg/kg,400mg/kg,450mg/kg,500mg/kg,600mg/kg,700mg/kg,800mg/kg,900mg/kg,or 1000mg/kg)的组合物。剂量也可以被滴定(例如，剂量可以逐渐升高直到出现毒性症状，如头痛、腹泻或恶心)。

治疗频率也可有所不同。受试者每天可以被治疗一次或多次(例如，一次，两次，三次，四次或更多次)或每隔几个小时治疗一次(例如，每2、4、6、8、12或24个小时)。该组合物可以每24小时给药1次或2次。治疗的时程可以是不同的持续时间，例如持续2、3、4、5、6、7、8、9、10天或更多天、持续2周、1个月、2个月、4个月、6个月、8个月、10个月或超过1年。例如，治疗可以是一天两次持续三天、一天两次持续七天、一天两次持续十天。治疗周期可以以一定间隔重复，例如每周一次、每两个月一次或者每月一次，这些周期由没有给予治疗的时期分开。治疗可以是单次治疗或可以持续受试者终生(例如，多年)。

患者选择和监控

本文所述的本发明的方法涉及施用式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物)或其药学上可接受的盐以治疗RSV感染。因此，可选择患者和/或受试者以使用式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物)或其药学上可接受的盐进行治疗，其首先评估患者和/或受试者以确定该受试者是否感染有RSV并确定病毒的血清型和基因型分类。可使用本领域已知的方法评估受试者是否感染RSV。还可以例如在施用本发明所述的化合物(例如，式(I)化合物或其前药(例如，式(II-VI)化合物)或其药学上可接受的盐之后，监控受试者。

在一些实施方案中，受试者为哺乳动物。在一些实施方案中，受试者为人类。在一些实施方案中，受试者为成人(例如，超过约18岁、超过约35岁、超过约65岁、超过约80岁)。在一些实施方案中，受试者为儿童(例如，小于约5岁、小于约4岁、小于约3岁、小于约2岁、小于约1岁)。在一些实施方案中，受试者患有严重的RSV感染。在一些实施方案中，受试者是免疫受损的(例如，受试者可具有相对于参考标准减弱的免疫系统，或可患有免疫疾病或病症)。在一些实施方案中，受试者患有细支气管炎、肺炎或其它呼吸道疾病或病症。在一些实施方案中，受试者患有心脏疾病或病症。在一些实施方案中，受试者患有细菌感染。

在一些实施方案中，所述受试者未经治疗。在一些实施方案中，受试者此前治疗过RSV感染(例如，通过抗体或抗病毒剂)。在一些实施方案中，受试者此前感染过RSV或被诊断感染RSV。在一些实施方案中，受试者此前治疗过免疫缺陷(例如，通过抗菌剂、抗病毒剂、抗体、治疗蛋白或其它试剂)。在一些实施方案中，受试者此前治疗过或者现在正在治疗细支气管炎、肺炎或其它呼吸道疾病或病症。在一些实施方案中，受试者此前治疗过或现在正在治疗心脏疾病或病症。在一些实施方案中，受试者此前治疗过或现在正在治疗细菌感染。

在一些实施方案中，RSV感染的基因型、血清型、亚型或抗原组是已知的(例如，RSV-A或RSV-B)。

在一些实施方案中，受试者是非人类哺乳动物。在一些实施方案中，受试者为非人类灵长类或啮齿类动物。在一些实施方案中，受试者为小鼠(例如，BALB/C小鼠)、大鼠(例如，棉鼠)、豚鼠、猪、马、绵羊、猴、狒狒、黑猩猩、雪貂、土拨鼠或栗鼠。

组合疗法

在一些实施方案中，可与本发明的组合物一起施用额外的治疗剂以治疗RSV或其任何症状或相关病症。当使用组合疗法时，额外的治疗剂可以作为独立制剂施用或可与本发明所述的任何组合物组合。

例如，本发明所述的任何方法可进一步包括施用治疗有效量的额外药剂。在一些实施方案中，所述额外药剂为抗病毒剂、抗菌剂、抗癌剂、抗炎剂、抗体、支气管扩张剂、止痛剂、退热剂、止咳剂或抗组胺药。在一些实施方案中，所述额外的药剂旨在治疗RSV感染的症状或副作用。在一些实施方案中，所述额外的药剂旨在治疗本发明所方法的副作用或症状。在一些实施方案中，超过一种额外的药剂可与本发明所述的式(I)或式(II-VI)化合物组合施用。

在一些实施方案中，抗病毒剂包括干扰素、核苷类似物、非核苷抗病毒剂或非干扰素类免疫增强剂。在一些实施方案中，干扰素包括干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-n1、复合α干扰素或聚乙二醇化干扰素(例如聚乙二醇化干扰素α-2a、聚乙二醇化干扰素α-2b)。在一些实施方案中，抗病毒剂包括衣壳蛋白抑制剂、进入抑制剂、分泌抑制剂、微RNA、反义RNA剂、RNAi剂或其它设计用于抑制病毒RNA的试剂。在一些实施方案中，核苷类似物包括恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦、达芦那韦、索非布韦、特拉匹韦、替诺福韦、齐多夫定、利巴韦林、拉米夫定、恩替卡韦或AL-8176。在一些实施方案中，抗病毒剂为利巴韦林。

在一些实施方案中，所述抗炎剂、止痛剂或退热剂包括对乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬、萘普生、非诺洛芬、右布洛芬或酮洛芬。在一些实施方案中，所述止咳剂(例如，镇咳药)包括喷托维林(carbetapentane)、苯佐那酯或右美沙芬。在一些实施方案中，所述抗组胺药包括非索非那定、氯雷他定、苯茚达明、右氯苯那敏、特非那定、西替立嗪、曲普利啶、异丙嗪、苯海拉明、赛庚啶、异丙嗪、卡比沙明(carbinoxamine)、羟嗪或氯马斯汀。在一些实施方案中，所述抗癌剂包括甲氨喋呤、5-氟尿嘧啶、多柔比星、长春新碱、博来霉素、长春碱、达卡巴嗪、依托泊苷、顺铂、表柔比星和甲苯磺酸索拉非尼。在一些实施方案中，所述支气管扩张剂包括沙丁胺醇、柳丁胺醇、肾上腺素(例如，外消旋肾上腺素)、左沙丁胺醇、吡布特罗、麻黄素、特布他林、沙美特罗、克仑特罗、福莫特罗、班布特罗或茚达特罗。

实施例

实施例1.式(II)在小鼠中针对RSV感染的预防性抗病毒活性

为了研究式(II)对RSV感染的预防活性，在用RSV感染前，在用式(II)预处理的小鼠中测定多个下游信号标记物的水平。向BALB/c小鼠组(每组n＝5)气管内施用水(载剂)或式(II)(10mg/kg)。施用后16小时，在式(II)或水的存在下使小鼠感染RSV。在感染RSV后2天或4天(或两者)，收集小鼠的肺部，并通过对肺匀浆的ELISA分析确定气道中IL-6、TNF和IFN-β的水平。如图1A-1B所示，在感染RSV后两天，被式(II)治疗的小鼠的IL-6水平略为增加，但在感染后4天显著降低。在4天期间小鼠中的TNF水平降低(图2A-2B)，而在相同时间段内观察到受试者的IFN-β生成增加(图3)。因为所有三种下游信号标记物在肺部炎症和疾病反应中起重要作用，因此这些结果清楚地证明了式(II)抗RSV感染的治疗效果。

通过RT-PCR定量RSV感染的程度以及肺匀浆中RIG-I和NOD2的水平。图4A-4B显示感染后第2天和第4天小鼠RSV滴度的琼脂糖凝胶分析，证实了与对照受试者相比，被式(II)治疗的小鼠气道中存在的RSV水平降低。在这些样品中还观察到了RIG-I(图5)和NOD2(图6)的水平降低，这可以通过在病毒负荷较低的情况下促炎介质如RIG-I和NOD2的“关闭”来解释。

通过用H&E染色固定肺切片来进行肺泡结构和完整性的分析(图7A-7F)。如图所示，在被式(II)治疗的未感染的小鼠中显示很少或没有炎症。在未治疗的感染有RSV的小鼠中，观察到高度炎症，这与RSV感染的已知免疫病理学相一致。感染RSV的小鼠的气道充满了浸润的免疫细胞并显示出严重的炎症。相比之下，用式(II)预治疗的RSV感染的小鼠表现出减少的肺部炎症以及许多无障碍的气道空间，这在未治疗的受试者的肺中是未观察到的。这些结果表明式(II)能够减少与RSV感染有关的疾病严重程度。

实施例2.在感染RSV的小鼠中多剂量式(II)的预防和治疗活性

向BALB/c小鼠组(每组n＝5)气管内施用水(载剂)或式(II)(10mg/kg)。如实施例1所述，施用后16小时，在式(II)或水的存在下使小鼠感染RSV。在第一剂量后24小时施用第二剂量的载剂或式(II)。24小时后(感染RSV后64小时)，收集被感染的小鼠的肺，并对所得组织匀浆进行分析以确定肺中的RSV滴度以及多个下游信号传导标记物的水平。通过菌斑分析确定RSV滴度水平，并证明在式(II)治疗的小鼠的肺中RSV负荷降低。通过ELISA分析确定IFN-β和TNF的水平，且与未治疗的对照相比，其在被式(II)治疗的小鼠中全部减少，表明式(II)不会造成可引起炎症和组织损伤的异常的IFN-β和TNF水平。

实施例3.在感染RSV的小鼠中多剂量式(II)的治疗活性

向BALB/c小鼠组(每组n＝5)气管内施用水(载剂)或式(II)(10mg/kg)。如实施例1所述，施用后16小时，在式(II)或水的存在下使小鼠感染RSV。在第一剂量后24小时施用第二剂量的载剂或式(II)。24小时后(感染RSV后64小时)，收集被感染的小鼠的肺，并对所得组织匀浆进行分析以确定肺中的RSV滴度以及多个下游信号标记物的水平。通过菌斑分析确定RSV滴度水平(图8和图9)，并表明在式(II)小鼠的肺中RSV负荷降低。通过ELISA分析确定IFN-β(图10)和TNF(图11)的水平，且与未治疗的对照相比，其在被式(II)治疗的小鼠中全部减少，表明式(II)不会造成可引起炎症和组织损伤的异常的IFN-β和TNF水平。

实施例4.式(IV)和式(VI)抗RSV感染的预防性抗病毒活性。

用载剂或式(IV)(20μM)将HLE细胞预处理16小时。然后在载剂或式(IV)的存在下用RSV感染细胞18小时。通过来自被感染细胞的培养基上清液的菌斑分析计算感染性病毒滴度。100％对照表示来自用载剂处理的(对照)细胞的感染性病毒滴度。我们观察到式(IV)化合物的抗RSV活性(图12)。

用式(VI)进行相同的实验(图13A-13B)，在RSV(0.5MOI)感染之前，用式(VI)(20微摩尔)处理HLE细胞16小时，并在式(VI)的存在下处理12小时(图13A和13B)。

用Rp-式(II)和Sp-式(II)酒石酸盐(20μM)进行相同的实验达16小时。通过来自被感染细胞的培养基上清液的菌斑分析计算感染性病毒滴度。使用学生t检验计算*p和**p为<0.05。结果示于图14中。

实施例5:式(II)的抗flu活性。

用载剂或40μM的SB 9200预处理A549细胞16小时。(在图15中，SB4367或SB438代表式(II)的两个不同的合成批次)。然后在载剂或SB 9200的存在下用flu(流感病毒株A/Puerto Rico/8/1934H1N1)(1MOI或2MOI)感染细胞24小时。通过RT-PCR分析flu血凝素(HA)基因表达的表达，由此来研究flu感染。GAPDH表达被用作负载对照。结果示于图15中。

等效方案

本文引用的每个专利、专利申请和出版物的公开内容在此通过引用整体并入本文。虽然已经参照具体方面描述了本发明，但是显而易见的是，其他方面和变化可以由本领域的其他技术人员在不脱离本发明的真实精神和范围的前提下修改。所附权利要求书旨在被解释为包括所有这些方面和等同变型。所述通过引用并入本文的任何专利、出版物或其他公开材料的全部或部分仅在所并入的材料与本公开中阐述的已有定义、陈述或其他公开材料不冲突的情况下被并入本文。因此，并且在必要的范围内，本文明确阐述的公开内容取代通过引用并入本文的任何冲突材料。

尽管已经参考其优选实施例具体示出和描述了本发明，但是本领域技术人员将理解，可以在其中进行形式和细节上的各种改变，而不脱离所附权利要求所包含的本发明的范围。

Claims (110)

1.治疗感染有呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒、腺病毒或鼻病毒的受试者的方法，所述方法包括向受试者施用式(I)化合物或其前药或药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

2.权利要求1的方法，其中所述化合物通过吸入施用或通过气管内递送施用。

3.权利要求1的方法，其中所述化合物口服施用或肠胃外施用。

4.权利要求1的方法，其中式(I)的前药为式(P)化合物：

其中,

X为键、O、NH或S；且

R¹为被任选取代的烷基或杂烷基。

5.权利要求1的方法，其中式(I)的前药为式(II)化合物，其中所述式(II)化合物选自：

或其药学上可接受的盐。

6.权利要求5的方法，其中式(II)的化合物为药学上可接受的盐(例如，酒石酸盐)。

7.权利要求1的方法，其中式(I)的前药为式(III)、式(IV)、式(V)或式(VI)的化合物：

或其药学上可接受的盐。

8.权利要求1的方法，其中向所述受试者施用组合物，所述组合物包含式(I)化合物的混合物，例如，式(Ib)和式(Ic)的混合物。

9.权利要求8的方法，其中所述组合物包含式(Ib)且包含小于约5％的式(Ic)(例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(Ic))，或基本不含式(Ic)。

10.权利要求8的方法，其中所述组合物包含式(Ic)且包含小于约5％的式(Ib)(例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(Ib)，或基本不含式(Ib))。

11.权利要求5的方法,其中向所述受试者施用组合物，所述组合物包含式(II)化合物的混合物，例如，式(IIb)和式(IIc)的混合物。

12.权利要求11的方法,其中所述组合物包含式(IIb)且包含小于约5％的式(IIc)(例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(IIc)，或基本不含式(IIc))。

13.权利要求11的方法，其中所述组合物包含式(IIc)且包含小于约5％的式(IIb)(例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(IIb)，或基本不含式(IIb))。

14.权利要求1的方法，其中所述受试者为哺乳动物。

15.权利要求14的方法，其中所述受试者为人类。

16.权利要求15的方法，其中所述受试者为成人(例如，超过约18岁，例如，超过约65岁)。

17.权利要求16的方法，其中所述受试者为儿童(例如，小于约18岁，例如，小于约5岁，例如，小于约2岁)。

18.权利要求14的方法，其中所述受试者免疫受损(例如，受试者相对于参考标准可具有弱化的免疫系统，或者可患有免疫疾病或病症)。

19.权利要求1的方法，其中所述方法为治疗RSV感染的方法。

20.权利要求1的方法，其中所述受试者被诊断患有RSV感染。

21.权利要求1的方法，其中所述受试者此前患有RSV感染或被诊断患有RSV感染。

22.权利要求1的方法，其中所述RSV感染的基因型、血清型、亚型或抗原组是已知的。

23.权利要求1的方法，其中所述RSV感染为A亚型RSV或B亚型RSV。

24.权利要求1的方法，其中所述受试者患有严重的RSV感染。

25.权利要求1的方法，其中所述方法为治疗流感的方法。

26.权利要求1的方法，其中所述流感病毒为甲型流感病毒、乙型流感病毒或丙型流感病毒。

27.权利要求1的方法，其中所述方法为治疗副流感的方法。

28.权利要求1的方法，其中所述方法为治疗鼻病毒或腺病毒的方法。

29.权利要求1的方法，其中所述受试者患有细支气管炎、肺炎或其它呼吸道疾病或病症。

30.权利要求1的方法，其中所述受试者未经治疗。

31.权利要求1的方法，其中所述受试者此前治疗过RSV感染(例如，通过抗体或抗病毒剂)。

32.权利要求1的方法，其中所述受试者此前治疗过免疫缺陷。

33.权利要求1的方法，其中所述方法包括每天施用所述剂量。

34.权利要求1的方法，其中所述施用为每天一次。

35.权利要求1的方法，其中所述剂量包含约0.5mg/kg至约100mg/kg。

36.权利要求1的方法，其中所述剂量包含约0.5mg/kg至约50mg/kg。

37.权利要求1的方法，其中所述剂量包括液体或固体剂型。

38.权利要求37的方法，其中所述液体剂型包括混悬剂、溶液剂、乳剂、喷雾剂、雾剂、气溶胶、酏剂或糖浆。

39.权利要求38的方法，其中所述喷雾剂、雾剂、气溶胶包含大小为约0.01微米至约10微米的颗粒。

40.权利要求37的方法，其中所述固体剂型包括片剂、胶囊剂、软凝胶、颗粒剂、微粒剂、散剂、凝胶剂或微胶囊剂型。

41.权利要求1的方法，其中使用雾化器或吸入器(例如，干粉吸入器或定量吸入器)施用所述组合物。

42.权利要求1的方法，还包括分析来自受试者的肺样本或血液样本或接收来自受试者的肺样本或血液样本的分析结果。

43.权利要求42的方法，其中所述肺样本或血液样本在感染RSV后约4小时至约96小时(例如，约16小时至约72小时)后进行分析。

44.权利要求42的方法，其中分析所述血液样本的病毒载量、IL6水平、TNF水平、IFN-β水平、RSV核壳体(N)蛋白水平、RIG-I水平或NOD2水平(例如，通过RT-PCR)。

45.权利要求42的方法，其中分析所述肺样本的病毒载量、IL6水平、TNF水平、IFN-β水平、RSV核壳体(N)蛋白水平、RIG-I水平或NOD2水平(例如，通过RT-PCR、菌斑分析或组织学染色)。

46.权利要求42的方法，其中分析所述肺样本或血液样本的干扰素(例如，干扰素α或干扰素β)、干扰素刺激蛋白(例如，ISG15、CXCL10、OAS 1)或其它细胞因子的表达水平。

47.权利要求42的方法，其中分析所述肺样本的阻塞、炎症、免疫细胞浸润、肺泡腔的大小和坏死。

48.权利要求1的方法，还包括施用治疗有效量的额外药剂。

49.权利要求48的方法，其中所述额外药剂为抗病毒剂、抗菌剂、抗癌剂、抗炎剂、抗体、支气管扩张剂、止痛剂、退热剂、止咳剂或抗组胺剂。

50.权利要求49的方法，其中所述抗病毒剂包括干扰素、核苷类似物、非核苷类抗病毒剂或非干扰素类免疫增强剂。

51.权利要求50的方法，其中所述干扰素包括干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-n1、复合α干扰素或聚乙二醇化干扰素(例如聚乙二醇化干扰素α-2a、聚乙二醇化干扰素α-2b)。

52.权利要求49的方法，其中所述抗病毒剂包括衣壳蛋白抑制剂、进入抑制剂、分泌抑制剂、微RNA、反义RNA剂、RNAi剂或其它经设计用于抑制病毒RNA的试剂。

53.权利要求50的方法，其中所述核苷类似物包括恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦、达芦那韦、索非布韦、特拉匹韦、替诺福韦、齐多夫定、利巴韦林、拉米夫定、恩替卡韦或AL-8176。

54.权利要求49的方法，其中所述抗癌剂包括甲氨喋呤,5-氟尿嘧啶,多柔比星,长春新碱,博来霉素,长春碱,达卡巴嗪,依托泊苷,顺铂,表柔比星和甲苯磺酸索拉非尼。

55.权利要求49的方法，其中所述抗炎剂、止痛剂或退热剂包括对乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬、萘普生、非诺洛芬、右布洛芬或酮洛芬。

56.权利要求49的方法，其中所述支气管扩张剂包括沙丁胺醇、柳丁胺醇、肾上腺素(例如，外消旋肾上腺素)、左沙丁胺醇、吡布特罗、麻黄素、特布他林、沙美特罗、克仑特罗、福莫特罗、班布特罗或茚达特罗。

57.用于预防受试者中呼吸道合胞病毒(RSV)感染、流感病毒、腺病毒或鼻病毒的方法，所述方法包括向受试者施用式(I)化合物或其前药或药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：

58.权利要求57的方法，其中所述化合物通过吸入施用或通过气管内递送施用。

59.权利要求57的方法，其中所述化合物口服施用或肠胃外施用。

60.权利要求57的方法，其中式(I)的前药为式(P)化合物：

其中,

X为键、O、NH或S；且

R¹为被任选取代的烷基或杂烷基。

61.权利要求57的方法，其中式(I)的前药为式(II)化合物，其中所述化合物选自：

或其药学上可接受的盐。

62.权利要求61的方法，其中式(II)化合物为药学上可接受的盐(例如，酒石酸盐)。

63.权利要求57的方法，其中向所述受试者施用组合物，所述组合物包含式(I)化合物的混合物，例如式(Ib)和式(Ic)的混合物。

64.权利要求63的方法，其中所述组合物包含式(Ib)且包含小于约5％的式(Ic)(例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(Ic))，或基本不含式(Ic)。

65.权利要求63的方法，其中所述组合物包含式(Ic)且包含小于约5％的式(Ib)(例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(Ib)，或基本不含式(Ib))。

66.权利要求61的方法，其中向所述受试者施用组合物，其包含式(II)化合物的混合物，例如，式(IIb)和式(IIc)的混合物。

67.权利要求66的方法，其中所述组合物包含式(IIb)且包含小于约5％的式(IIc)(例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(IIc)，或基本不含式(IIc))。

68.权利要求66的方法，其中所述组合物包含式(IIc)且包含小于约5％的式(IIb)(例如，小于约4％、小于约3％、小于约2％、小于约1％、小于约0.5％或小于约0.1％的式(IIb)，或基本不含式(IIb))。

69.权利要求57的方法，其中所述受试者为哺乳动物。

70.权利要求69的方法，其中所述受试者为人类。

71.权利要求70的方法，其中所述受试者为成人(例如，超过约18岁，例如，超过约65岁)。

72.权利要求70的方法，其中所述受试者为儿童(例如，小于约18岁，例如，小于约5岁，例如，小于约2岁)。

73.权利要求57的方法，其中所述受试者免疫受损(例如，受试者相对于参考标准可具有弱化的免疫系统，或者可患有免疫疾病或病症)。

74.权利要求57的方法，其中所述方法为预防RSV感染的方法。

75.权利要求57的方法，其中所述受试者此前患有RSV感染或被诊断患有RSV感染。

76.权利要求57的方法，其中所述RSV感染的基因型、血清型、亚型或抗原组为已知的。

77.权利要求76的方法，其中所述RSV感染为A亚型RSV或B亚型RSV。

78.权利要求57的方法，其中所述受试者患有严重的RSV感染。

79.权利要求57的方法，其中所述方法为预防流感病毒的方法。

80.权利要求79的方法，其中所述流感病毒为甲型流感病毒、乙型流感病毒或丙型流感病毒。

81.权利要求57的方法，其中所述方法为预防副流感病毒的方法。

82.权利要求57的方法，其中所述方法为预防鼻病毒或腺病毒感染的方法。

83.权利要求57的方法，所述受试者患有细支气管炎、肺炎或其它呼吸道疾病或病症。

84.权利要求57的方法，其中所述受试者未经治疗。

85.权利要求57的方法，其中所述受试者此前治疗过RSV感染(例如，通过抗体或抗病毒剂)。

86.权利要求57的方法，其中所述受试者此前治疗过免疫缺陷。

87.权利要求57的方法，其中所述方法包括每天施用所述剂量。

88.权利要求57的方法，其中所述施用为每天一次。

89.权利要求57的方法，其中所述剂量包含约0.5mg/kg至约100mg/kg。

90.权利要求57的方法，其中所述剂量包含约0.5mg/kg至约50mg/kg。

91.权利要求57的方法，其中所述剂量包括液体或固体剂型。

92.权利要求91的方法，其中所述液体剂型包括混悬剂、溶液剂、乳剂、喷雾剂、雾剂、气溶胶、酏剂或糖浆。

93.权利要求92的方法，其中所述喷雾剂、雾剂、气溶胶包含大小为约0.01微米至约10微米的颗粒。

94.权利要求91的方法，其中所述固体剂型包括片剂、胶囊剂、软凝胶、颗粒剂、微粒剂、散剂、凝胶剂或微胶囊剂型。

95.权利要求57的方法，其中使用雾化器或吸入器(例如，干粉吸入器或定量吸入器)施用所述化合物。

96.权利要求57的方法，还包括分析来自受试者的肺样本或血液样本或接收来自受试者的肺样本或血液样本的分析结果。

97.权利要求96的方法，其中所述肺样本或血液样本在感染RSV后约4小时至约96小时(例如，约16小时至约72小时)后被分析。

98.权利要求96的方法，其中分析所述血液样本的病毒载量、IL6水平、TNF水平、IFN-β水平、RSV核壳体(N)蛋白水平、RIG-I水平或NOD2水平(例如，通过RT-PCR)。

99.权利要求96的方法，其中分析所述肺样本的病毒载量、IL6水平、TNF水平、IFN-β水平、RSV核壳体(N)蛋白水平、RIG-I水平或NOD2水平(例如，通过RT-PCR、菌斑分析或组织学染色)。

100.权利要求96的方法，其中分析所述肺样本或血液样本的干扰素(例如，干扰素α或干扰素β)、干扰素刺激蛋白(例如，ISG15、CXCL10、OAS 1)或其它细胞因子的表达水平。

101.权利要求96的方法，其中分析所述肺样本的阻塞、炎症、免疫细胞浸润、肺泡腔的大小和坏死。

102.权利要求57的方法，还包括施用治疗有效量的额外药剂。

103.权利要求102的方法，所述额外药剂为抗病毒剂、抗菌剂、抗癌剂、抗炎剂、抗体、支气管扩张剂、止痛剂、退热剂、止咳剂或抗组胺剂。

104.权利要求103的方法，其中所述抗病毒剂包括干扰素、核苷类似物、非核苷类抗病毒剂或非干扰素类免疫增强剂。

105.权利要求104的方法，其中所述干扰素包括干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素α-n1、复合α干扰素或聚乙二醇化干扰素(例如聚乙二醇化干扰素α-2a、聚乙二醇化干扰素α-2b)。

106.权利要求103的方法，其中所述抗病毒剂包括衣壳蛋白抑制剂、进入抑制剂、分泌抑制剂、微RNA、反义RNA剂、RNAi剂或其它设计用于抑制病毒RNA的试剂。

107.权利要求104的方法，其中所述核苷类似物包括恩替卡韦、拉米夫定、阿德福韦、达芦那韦、索非布韦、特拉匹韦、替诺福韦、齐多夫定、利巴韦林、拉米夫定、恩替卡韦或AL-8176。

108.权利要求103的方法，其中所述抗癌剂包括甲氨喋呤、5-氟尿嘧啶、多柔比星、长春新碱、博来霉素、长春碱、达卡巴嗪、依托泊苷、顺铂、表柔比星和甲苯磺酸索拉非尼。

109.权利要求103的方法，其中所述抗炎剂、止痛剂或退热剂包括对乙酰氨基酚、阿司匹林、布洛芬、萘普生、非诺洛芬、右布洛芬或酮洛芬。

110.权利要求103的方法，其中所述支气管扩张剂包括沙丁胺醇、柳丁胺醇、肾上腺素(例如，外消旋肾上腺素)、左沙丁胺醇、吡布特罗、麻黄素、特布他林、沙美特罗、克仑特罗、福莫特罗、班布特罗或茚达特罗。