KR20150023748A - 제초제에 대해 증가된 내성을 갖는 식물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 프로토포르피리노겐 옥시다제 (PPO)-억제 제초제에 대해 저항성 또는 내성인 야생형 또는 돌연변이된 PPO를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 적어도 1개의 핵산을 포함하는 식물을 식물 재배 지역에 제공하는 단계, 및 상기 지역에 유효량의 상기 제초제를 적용하는 단계를 포함하는, 식물 재배 지역에서 바람직하지 않은 식생을 방제하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 야생형 또는 돌연변이된 PPO 효소를 포함하는 식물, 및 이러한 식물을 수득하는 방법에 관한 것이다.

Description

제초제에 대해 증가된 내성을 갖는 식물 {PLANTS HAVING INCREASED TOLERANCE TO HERBICIDES}
본 발명은 일반적으로 제초제에 대한 농업 수준의 내성을 식물에게 부여하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 PPO-억제 제초제에 대해 증가된 내성을 갖는 식물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 돌연변이유발 및 교배-육종 및 형질전환에 의해 PPO-억제 제초제에 대해 증가된 내성을 갖는, 식물을 수득하는 방법 및 수득된 식물에 관한 것이다.
프로토포르피린 IX의 생합성에서 주요 효소인 프로토포르피리노겐 옥시다제 (이하 프로톡스 또는 PPO; EC:1.3.3.4로서 지칭됨)를 억제하는 제초제가 잡초의 선택적 방제를 위해 1960년대 이후로 사용되어 왔다. PPO는 프로토포르피리노겐 IX의 프로토포르피린 IX로의 산화인, 클로로필 및 헴 생합성 중 마지막의 공통 단계를 촉매한다 (Matringe et al. 1989. Biochem. 1. 260: 231). PPO-억제 제초제는 구조상 상이한 부류의 분자를 다수 포함한다 (Duke et al. 1991. Weed Sci. 39: 465; Nandihalli et al. 1992. Pesticide Biochem. Physiol. 43: 193; Matringe et al. 1989. FEBS Lett. 245: 35; Yanase and Andoh. 1989. Pesticide Biochem. Physiol. 35: 70). 이들 제초 화합물은 디페닐에테르 {예를 들어, 락토펜, (+-)-2-에톡시-1-메틸-2-옥소에틸 5-{2-클로로-4-(트리플루오로메틸)페녹시}-2-니트로벤조에이트; 아시플루오르펜, 5-{2-클로로-4-(트리플루오로메틸)페녹시}-2-니트로벤조산; 그의 메틸 에스테르; 또는 옥시플루오르펜, 2-클로로-1-(3-에톡시-4-니트로페녹시)-4-(트리플루오로벤젠)}, 옥시디아졸, (예를 들어, 옥시디아존, 3-{2,4-디클로로-5-(1-메틸에톡시)페닐}-5-(1,1-디메틸에틸)-1,3,4-옥사디아졸-2-(3H)-온), 시클릭 이미드 (예를 들어, S-23142, N-(4-클로로-2-플루오로-5-프로파르길옥시페닐)-3,4,5,6-테트라히드로프탈이미드; 클로로프탈림, N-(4-클로로페닐)-3,4,5,6-테트라히드로프탈이미드), 페닐 피라졸 (예를 들어 TNPP-에틸, 에틸 2-{1-(2,3,4-트리클로로페닐)-4-니트로피라졸릴-5-옥시}프로피오네이트; M&B 39279), 피리딘 유도체 (예를 들어 LS 82-556), 및 페노필레이트 및 그의 O-페닐피롤리디노- 및 피페리디노카르바메이트 유사체를 포함한다. 이들 화합물들 다수는 겉보기상 기질 유사체로서 작용하면서, 효소에 의해 촉매되는 정상적인 반응을 경쟁적으로 억제한다.
PPO-억제 제초제를 적용시키면 엽록체 및 미토콘드리아에서 프로토포르피리노겐 IX가 축적되게 되며, 이는 시토졸로 누출되어 여기서 퍼옥시다제에 의해 산화되는 것으로 여겨진다. 빛에 노출되었을 때, 프로토포르피린 IX는 시토졸에서 일중항 산소를 형성하게 되고, 반응성 산소종을 형성하게 되는데, 이는 지질 과산화 및 막 파괴를 일으켜 세포를 빠르게 사멸시킬 수 있다 (Lee et al. 1993. Plant Physiol. 102: 881).
모든 PPO 효소가 식물 PPO 효소를 억제하는 제초제에 대해 감수성인 것은 아니다. 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) 및 바실루스 서브틸리스(Bacillus subtilis) PPO 효소 (Sasarmen et al. 1993. Can. J. Microbiol. 39: 1155; Dailey et al. 1994. J. Biol. Chem. 269: 813)는 둘 다 이들 제초 억제제에 대해 저항성이다. 페닐이미드 제초제 S-23142에 대해 저항성인 단세포 조류 클라미도모나스 레인하르드티이(Chlamydomonas reinhardtii)의 돌연변이체가 보고되어 있다 (Kataoka et al. 1990. J. Pesticide Sci. 15: 449; Shibata et al. 1992. In Research in Photosynthesis, Vol. III, N. Murata, ed. Kluwer:Netherlands. pp. 567-70). 이들 돌연변이체 중 적어도 1종은 돌연변이체가 선택된 제초 억제제에 대해서 뿐만 아니라, 다른 부류의 프로톡스 억제제에 대해서도 저항성인 변경된 PPO 활성을 갖는 것으로 보인다 (Oshio et al. 1993. Z. Naturforsch. 48c: 339; Sato et al. 1994. In ACS Symposium on Porphyric Pesticides, S. Duke, ed. ACS Press: Washington, D.C.). 돌연변이체 담배 세포주는 또한 억제제 S-21432에 대해 저항성인 것으로 보고되어 있다 (Che et al. 1993. Z. Naturforsch. 48c: 350). 클로닝된 식물 PPO-억제 제초제의 제초제 저항성을 확인하는데 영양요구성 이. 콜라이 돌연변이체가 사용되어 왔다.
식물이 제초제에 대해 내성이도록 만드는 데에는 3가지 주된 전략, 즉 (1) 제초제 또는 그의 활성 대사산물을 비독성 생성물로 형질전환시키는 효소, 예컨대 예를 들어 브로목시닐에 대해 또는 바스타에 대한 내성을 위한 효소로 제초제를 해독시키거나 (EP242236, EP337899); (2) 표적 효소를 제초제 또는 그의 활성 대사산물에 대해 덜 감수성인 기능적 효소로, 예컨대 예를 들어 글리포세이트에 대한 내성을 위한 효소로 돌연변이시키거나 (EP293356, Padgette S. R. et al., J.Biol. Chem., 266, 33, 1991); 또는 (3) 표적 효소의 동역학적 상수를 고려하여 제초제에 대해 충분한 정도의 양으로 이 효소를 식물에서 생산하기 위해, 그의 억제제의 존재에도 불구하고 기능적 효소를 충분히 이용가능하도록 하기 위해 감수성 효소를 과다발현시키는 것이 이용가능하다. 제3 전략은 PPO 억제제에 대해 내성인 식물을 성공적으로 수득하기 위한 것으로서 기재된 바 있다 (예를 들어, US5,767,373 또는 US5,939,602 및 그의 특허 패밀리 구성원 참조). 또한, US 2010/0100988 및 WO 2007/024739에는 아미노산 서열이 PPO 억제제 제초 화학물질, 특히 PPO 돌연변이체에 대해 특이적인 3-페닐우라실 억제제에 대해 저항성이도록 하는 효소적 활성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열이 개시되어 있다.
현재까지는, 선행 기술에서 본 발명에 따른 적어도 1개의 야생형 또는 돌연변이된 PPO 핵산을 함유하는 PPO-억제 제초제 내성 식물이 기재된 바 없다. PPO 유전자가 유래된 게놈 이외의 게놈 상에 돌연변이를 함유하는 PPO-억제 제초제 내성 농작물 역시 선행 기술에서는 기재된 바 없다. 따라서, 관련 기술분야에서는 추가의 게놈 및 종으로부터 PPO-억제 제초제 내성 유전자를 확인하는 것이 요구되고 있다. 관련 기술분야에서는 또한 제초제, 예컨대 PPO-억제 제초제에 대해 증가된 내성을 갖고 적어도 1개의 야생형 및/또는 돌연변이된 PPO 핵산을 함유하는 농작물 및 농작물도 요구되고 있다. 또한, 이러한 농작물 또는 농작물 부근의 잡초 성장을 방제하는 방법도 요구되고 있다. 이들 조성물 및 방법은 농작물 또는 농작물을 함유하는 구역에 제초제를 적용할 때 스프레이 오버 기술의 사용을 고려할 수 있을 것이다.
상기 과제는,
a) 프로토포르피리노겐 옥시다제 (PPO)-억제 제초제에 대해 저항성 또는 내성인 야생형 PPO 또는 돌연변이된 프로토포르피리노겐 옥시다제 (mut-PPO)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 적어도 1개의 핵산을 포함하는 식물을 식물 재배 지역에 제공하는 단계,
b) 상기 지역에 유효량의 상기 제초제를 적용하는 단계
를 포함하는, 식물 재배 지역에서 바람직하지 않은 식생을 방제하는 방법에 관한 본 발명에 의해 해결된다.
또한, 본 발명은 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 또는 그의 변이체에 의해 코딩된 본 발명의 야생형 또는 mut-PPO를 사용함으로써 PPO-억제 제초제를 확인하는 방법에 관한 것이다.
상기 방법은
a) 본 발명의 mut-PPO를 코딩하는 핵산을 포함하는 트랜스제닉 세포 또는 식물을 생성하며, 여기서 본 발명의 mut-PPO는 발현되는 것인 단계;
b) PPO-억제 제초제를 a)의 트랜스제닉 세포 또는 식물 및 동일한 품종의 대조군 세포 또는 식물에 적용하는 단계;
c) 상기 시험 화합물의 적용 후, 트랜스제닉 세포 또는 식물 및 대조군 세포 또는 식물의 성장 또는 생존율을 결정하는 단계; 및
d) 트랜스제닉 세포 또는 식물의 성장과 비교하여 대조군 세포 또는 식물에게 감소된 성장을 부여하는 시험 화합물을 선택하는 단계를 포함한다.
또 다른 목적은
a) mut-PPO-코딩 핵산 라이브러리를 생성하는 단계,
b) 세포 또는 식물에서 각각의 상기 핵산을 발현시키고 상기 세포 또는 식물을 PPO-억제 제초제로 처리함으로써, 생성된 mut-PPO-코딩 핵산 집단을 스크리닝하는 단계,
c) 상기 mut-PPO 코딩 핵산 집단에 의해 제공되는 PPO-억제 제초제-내성 수준을 대조군 PPO-코딩 핵산에 의해 제공되는 PPO-억제 제초제-내성 수준과 비교하는 단계,
d) 대조군 PPO-코딩 핵산에 의해 제공되는 것과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대해 유의하게 증가된 수준의 내성을 제공하는 적어도 1개의 mut-PPO-코딩 핵산을 선택하는 단계
를 포함하는, PPO-억제 제초제에 대해 저항성 또는 내성인 mut-PPO를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 확인하는 방법에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에서, 단계 d)에서 선택된 mut-PPO-코딩 핵산은 대조군 PPO-코딩 핵산에 의해 제공되는 것과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대해 적어도 2배 더 큰 내성을 제공한다.
저항성 또는 내성은 단계 a)의 라이브러리의 핵산 서열을 포함하는 트랜스제닉 식물을 생성하고 상기 트랜스제닉 식물을 대조군 식물과 비교하는 것에 의해 결정될 수 있다.
또 다른 목적은
a) 식물 세포 또는 녹조류 배양에서 유효량의 PPO-억제 제초제를 확인하는 단계,
b) 상기 식물 세포 또는 녹조류를 돌연변이유발제로 처리하는 단계,
c) 상기 돌연변이유발된 세포 집단을 a)에서 확인된 유효량의 PPO-억제 제초제와 접촉시키는 단계,
d) 이들 시험 조건에서 살아남은 적어도 1개의 세포를 선택하는 단계,
e) d)에서 선택된 세포로부터의 PPO 유전자의 PCR 증폭 및 서열분석을 수행하고, 이러한 서열을 야생형 PPO 유전자 서열과 각각 비교하는 단계
를 포함하는, PPO-억제 제초제에 대해 저항성 또는 내성인 mut-PPO를 코딩하는 핵산을 함유하는 식물 또는 조류를 확인하는 방법에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에서, 돌연변이유발제는 에틸메탄술포네이트이다.
또 다른 목적은 mut-PPO를 코딩하며, 하기 정의된 바와 같은 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45의 서열 또는 그의 변이체를 포함하는 단리된 핵산에 관한 것이다.
또 다른 목적은 하기 정의된 바와 같은 서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 또는 46에 기재된 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하는, 단리된 mut-PPO 폴리펩티드에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에서, 핵산은 상기 정의된 바와 같은 방법에 의해 확인가능하다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 식물 세포에서의 핵산의 발현이 식물 세포의 야생형 품종과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대한 저항성 또는 내성을 증가시키는, 본 발명에 따른 야생형 또는 mut-PPO 핵산에 의해 형질전환되고 이를 발현하는 식물 세포, 또는 본 발명에 따른 야생형 또는 mut-PPO 핵산을 발현, 바람직하게는 과다-발현하는 식물을 수득하기 위해 돌연변이된 식물에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 식물에서의 핵산의 발현이 식물의 야생형 품종과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대한 식물의 저항성을 증가시키는, 본 발명에 따른 식물 세포를 포함하는 식물에 관한 것이다.
본 발명의 식물은 트랜스제닉 또는 비-트랜스제닉일 수 있다.
바람직하게는, 식물에서의 본 발명의 핵산의 발현은 식물의 야생형 품종과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대한 식물의 저항성을 증가시킨다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 식물 세포를 포함하는 트랜스제닉 식물에 의해 생산된, 종자의 야생형 품종과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대해 증가된 저항성을 위한 순수 육종인 종자에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 식물 세포를 야생형 또는 mut-PPO 핵산을 포함하는 발현 카세트로 형질전환시키는 단계를 포함하는, 식물 세포의 야생형 품종과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대해 증가된 저항성을 갖는 트랜스제닉 식물 세포를 생산하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 (a) 식물 세포를 야생형 또는 mut-PPO 핵산을 포함하는 발현 카세트로 형질전환시키는 단계, 및 (b) 식물 세포로부터 PPO-억제 제초제에 대해 증가된 저항성을 갖는 식물을 생성하는 단계를 포함하는, 트랜스제닉 식물을 생산하는 방법에 관한 것이다.
바람직하게는, 발현 카세트는 식물에서 기능성인 전사 개시 조절 영역 및 번역 개시 조절 영역을 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 선택 마커로서 본 발명의 mut-PPO를 사용하는 것에 관한 것이다. 본 발명은 a) 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분을 제공하며, 여기서 상기 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분은 하기 기재된 바와 같은 본 발명의 mut-PPO 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산을 포함하고, 여기서 폴리펩티드는 선택 마커로서 사용되고, 여기서 상기 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분은 임의로 추가의 단리된 관심 핵산을 포함할 수 있는 것인 단계; b) 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분을 적어도 1종의 PPO-억제 억제 화합물과 접촉시키는 단계; c) 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분이 억제제 또는 억제 화합물에 의해 영향을 받는지 여부를 결정하는 단계; 및 d) 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분을 확인 또는 선택하는 단계를 포함하는, 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분을 확인 또는 선택하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 제초제 내성에 대한 추가 개선을 설계하는 분자 모델링 연구에서 유용한, 본원에 기재된 돌연변이를 함유하는 정제된 mut-PPO 단백질로 구현된다. 단백질 정제 방법은 널리 공지되어 있으며, 이는 예를 들어, 문헌 [Protein Biotechnology, Walsh and Headon (Wiley, 1994)]에 기재되어 있는 바와 같이, 구체적으로 설계된 방법 또는 상업적으로 입수가능한 제품을 사용하여 용이하게 달성될 수 있다.
도 1은 아마란투스 투베르쿨라투스(Amaranthus tuberculatus) (에이. 투베르쿨라투스), 아마란투스 투베르쿨라투스 저항성 (에이. 투베르쿨라투스_R), 아라비돕시스 탈리아나(Arabidopsis thaliana) 장쇄 (에이. 탈리아나_2), 스피나시아 올레라세아(Spinacia oleracea) 단쇄 (에스. 올레라세아_2), 니코티아나 타바쿰(Nicotiana tabacum) 단쇄 (엔. 타바쿰_2), 글리신 맥스(Glycine max) (글리신_맥스), 아라비돕시스 탈리아나 단쇄 (에이. 탈리아나_1), 니코티아나 타바쿰 장쇄 (엔. 타바쿰_1), 클라미도모나스 레인하르드티이 장쇄 (씨. 레인하르드티이_1), 제아 메이스(Zea mays) (제트. 메이스), 오리자 사티바(Oryza sativa) (오. 사티바_1), 솔라눔 투베로숨(Solanum tuberosum) (에스. 투베로숨), 쿠쿠미스 사티부스(Cucumis sativus) (씨. 사티부스), 시코리움 인티부스(Cichorium intybus) (씨. 인티부스_1), 스피나시아 올레라세아 장쇄 (에스. 올레라세아_1), 폴리토멜라 종 프링스하임(Polytomella sp. Pringsheim) 198.80 (폴리토멜라) PPO 서열의 아미노산 서열 정렬을 나타낸다. 보존 영역은 옅은 회색, 회색 및 흑색으로 표시된다.
도 2는 PPO-억제 제초제 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 대해 저항성인 클라미도모나스 레인하르드티이 균주의 선택을 나타낸다. (A) 선택제 부재 하의 고체 배지에 플레이팅된 돌연변이유발된 세포. (B) 1x10-7 M PPO-억제 제초제 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)을 함유하는 고체 배지에 플레이팅된 돌연변이유발된 세포. PPO-억제 제초제에 대해 저항성인 세포는 콜로니를 형성하는 반면에 (동그라미 및 숫자 31 및 32로 표시함), 감수성인 세포는 성장하지 못한다. B와 비교하여 플레이트 A 상의 더 많은 수의 콜로니는 플레이트 B 상의 콜로니가 PPO-억제 제초제 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 대해 저항성임을 나타낸다.
도 3은 PPO-억제 제초제 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 대해 저항성인 선택된, 도 2에서 관찰된 바와 같은 클라미도모나스 레인하르드티이 균주의 성장-특성을 나타낸다. (A) PPO-억제 제초제 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)으로 처리된 야생형 세포의 용량-반응 곡선 (각각 IC50). (B) PPO-억제 제초제 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)으로 처리된 돌연변이유발된 세포 (균주 17)의 용량-반응 곡선 (각각 IC50). PPO-억제 제초제 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 대해 저항성인 균주 17 (B)은 야생형 세포와 비교하여 훨씬 더 낮은 IC50을 나타낸다.
도 4는 1% MSO와 함께 PPO 억제 제초제로 표시된 스프레이 속도 (g ai/ha)로 처리된 야생형 및 트랜스제닉 T1 대두 식물을 나타낸다.
A는 야생형 대두 식물을 의미함
B는 위치 397에서의 류신이 아스파르트산에 의해 치환되고 위치 420에서의 페닐알라닌이 발린에 의해 치환된 서열 2의 mut-PPO를 코딩하는 핵산으로 형질전환된 대두 식물을 의미함
1은 비스프레이된 것을 의미함
2는 150 g 사플루페나실을 의미함
3은 100 g 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)을 의미함
4는 150 g 플루미옥사진을 의미함
5는 600 g 포메사펜을 의미함
서열 목록에 대한 기호설명
<표 1>
Figure pct00001
Figure pct00002
상세한 설명
"한"은 하나 또는 하나 초과 (즉, 적어도 하나)의 대상을 지칭하는 것으로 본원에 사용된다. 예로서, "한 요소"는 하나 이상의 요소를 의미한다.
본원에 사용된 단어 "포함하는" 또는 파생어, 예컨대 "포함하다" 또는 "포함하는"은 언급된 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 군을 포함하지만, 임의의 다른 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소들, 정수들 또는 단계들의 군을 배제하는 것을 의미하는 것은 아님을 이해할 것이다.
본 발명은
a) 프로토포르피리노겐 옥시다제 (PPO)-억제 제초제에 대해 저항성 또는 내성인 야생형 프로토포르피리노겐 옥시다제 또는 돌연변이된 프로토포르피리노겐 옥시다제 (mut-PPO)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 적어도 1개의 핵산을 포함하는 식물을 식물 재배 지역에 제공하는 단계,
b) 상기 지역에 유효량의 상기 제초제를 적용하는 단계
를 포함하는, 식물 재배 지역에서 바람직하지 않은 식생을 방제하는 방법에 관한 것이다.
용어 "바람직하지 않은 식생의 방제"는 잡초를 사멸시키고/거나, 다르게는 잡초의 정상적인 성장을 지연시키거나 억제한다는 의미로서 이해하여야 한다. 가장 넓은 의미에서, 잡초는 해당 위치에서 성장하는 바람직하지 않은 모든 식물을 의미하는 것으로 이해된다. 본 발명의 잡초는, 예를 들어 쌍자엽 및 단자엽 잡초를 포함한다. 쌍자엽 잡초는 시나피스(Sinapis), 레피디움(Lepidium), 갈리움(Galium), 스텔라리아(Stellaria), 마트리카리아(Matricaria), 안테미스(Anthemis), 갈린소가(Galinsoga), 케노포디움(Chenopodium), 우르티카(Urtica), 세네시오(Senecio), 아마란투스(Amaranthus), 포르툴라카(Portulaca), 크산티움(Xanthium), 콘볼불루스(Convolvulus), 이포모에아(Ipomoea), 폴리고눔(Polygonum), 세스바니아(Sesbania), 암브로시아(Ambrosia), 시르시움(Cirsium), 카르두스(Carduus), 손쿠스(Sonchus), 솔라눔, 로리파(Rorippa), 로탈라(Rotala), 린데르니아(Lindernia), 라미움(Lamium), 베로니카(Veronica), 아부틸론(Abutilon), 에멕스(Emex), 다투라(Datura), 비올라(Viola), 갈레옵시스(Galeopsis), 파파베르(Papaver), 센타우레아(Centaurea), 트리폴리움(Trifolium), 라눈쿨루스(Ranunculus) 및 타락사쿰(Taraxacum) 속의 잡초를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 단자엽 잡초는 에키노클로아(Echinochloa), 세타리아(Setaria), 파니쿰(Panicum), 디기타리아(Digitaria), 플레움(Phleum), 포아(Poa), 페스투카(Festuca), 엘레우시네(Eleusine), 브라키아리아(Brachiaria), 롤리움(Lolium), 브로무스(Bromus), 아베나(Avena), 시페루스(Cyperus), 소르굼(Sorghum), 아그로피론(Agropyron), 시노돈(Cynodon), 모노코리아(Monochoria), 핌브리스틸리스(Fimbristyslis), 사기타리아(Sagittaria), 엘레오카리스(Eleocharis), 시르푸스(Scirpus), 파스팔룸(Paspalum), 이스카에뭄(Ischaemum), 스페노클레아(Sphenoclea), 닥틸로크테니움(Dactyloctenium), 아그로스티스(Agrostis), 알로페쿠루스(Alopecurus) 및 아페라(Apera) 속의 잡초를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 본 발명의 잡초는, 예를 들어 바람직하지 않은 위치에서 성장하고 있는 농작물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 우세하게는 대두를 포함하는 밭에서의 자생 옥수수 식물은, 옥수수 식물이 대두 식물 밭에서 바람직하지 않은 것일 경우에, 잡초인 것으로 간주될 수 있다.
용어 "식물"은 유기 물질과 관련되어 가장 넓은 의미로 사용되고, 식물계의 구성원인 진핵 유기체를 포괄하는 것으로 의도되며, 그의 예는 관다발 식물, 채소류, 곡물, 꽃, 교목, 허브, 관목, 풀, 덩굴 식물, 양치 식물, 선류, 진균 및 조류 등, 뿐만 아니라, 무성 번식에 사용되는 식물의 클론, 자손 및 부분 (예를 들어, 꺾꽂이 순, 관조직, 새싹, 근경, 지하경, 덤불, 근두, 구근, 구경, 괴경, 근경, 조직 배양 등에서 생산된 식물/조직 등)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 용어 "식물"은 추가로 전체 식물, 식물의 조상 및 자손, 및 종자, 새싹, 줄기, 잎, 뿌리 (괴경 포함), 꽃, 낱꽃, 과실, 작은 꽃자루, 화경, 수술, 꽃밥, 암술머리, 암술대, 씨방, 꽃잎, 꽃받침, 심피, 근단, 근관, 근모, 엽모, 종자모, 화분립, 소포자, 자엽, 배축, 상배축, 물관부, 체관부, 연조직, 배젖, 동반 세포, 공변 세포, 및 식물의 임의의 다른 공지된 기관, 조직 및 세포, 및 조직 및 기관을 비롯한 식물 부분을 포괄하며, 여기서 상기 언급된 것들은 각각 관심 유전자/핵산을 포함한다. 용어 "식물"은 또한 식물 세포, 현탁 배양물, 캘러스 조직, 배아, 분열조직부, 배우체, 포자체, 화분 및 소포자를 포괄하고, 또한 상기 언급된 것들은 각각 관심 유전자/핵산을 포함한다.
본 발명의 방법에서 특히 유용한 식물은 녹색식물(Viridiplantae) 슈퍼패밀리에 속하는 모든 식물, 특히 에이서 아종(Acer spp.), 악티니디아 아종(Actinidia spp.), 아벨모스쿠스 아종(Abelmoschus spp.), 아가베 사이잘라나(Agave sisalana), 아그로피론 아종(Agropyron spp.), 아그로스티스 스톨로니페라(Agrostis stolonifera), 알리움 아종(Allium spp.), 아마란투스 아종, 암포필라 아레나리아(Ammophila arenaria), 아나나스 코모수스(Ananas comosus), 안노나 아종(Annona spp.), 아피움 그라베올렌스(Apium graveolens), 아라키스 아종(Arachis spp.), 아르토카르푸스 아종(Artocarpus spp.), 아스파라거스 오피시날리스(Asparagus officinalis), 아베나 아종(Avena spp.) (예를 들어, 아베나 사티바(Avena sativa), 아베나 파투아(Avena fatua), 아베나 비잔티나(Avena byzantina), 아베나 파투아 변종 사티바(Avena fatua var. sativa), 아베나 하이브리다(Avena hybrida)), 아베르호마 카람볼라(Averrhoa carambola), 밤부사 종(Bambusa sp.), 베닌카사 히스피다(Benincasa hispida), 베르톨레시아 엑셀사(Bertholletia excelsea), 베타 불가리스(Beta vulgaris), 브라시카 아종(Brassica spp.) (예를 들어, 브라시카 나푸스(Brassica napus), 브라시카 라파 아종(Brassica rapa ssp.) [카놀라, 유지종자 평지, 순무 평지]), 카다바 파리노사(Cadaba farinosa), 카멜리아 시넨시스(Camellia sinensis), 칸나 인디카(Canna indica), 칸나비스 사티바(Cannabis sativa), 캅시쿰 아종(Capsicum spp.), 카렉스 엘라타(Carex elata), 카리카 파파야(Carica papaya), 카리싸 마크로카르파(Carissa macrocarpa), 카르야 아종(Carya spp.), 카르타무스 틴크토리우스(Carthamus tinctorius), 카스타네아 아종(Castanea spp.), 세이바 펜탄드라(Ceiba pentandra), 시코리움 엔디비아(Cichorium endivia), 신나모뭄 아종(Cinnamomum spp.), 시트룰루스 라나투스(Citrullus lanatus), 시트러스 아종(Citrus spp.), 코코스 아종(Cocos spp.), 코피아 아종(Coffea spp.), 콜로카시아 에스쿨렌타(Colocasia esculenta), 콜라 아종(Cola spp.), 코르코루스 종(Corchorus sp.), 코리안드럼 사티붐(Coriandrum sativum), 코릴루스 아종(Corylus spp.), 크라타에구스 아종(Crataegus spp.), 크로쿠스 사티부스(Crocus sativus), 쿠쿠르비타 아종(Cucurbita spp.), 쿠쿠미스 아종(Cucumis spp.), 키나라 아종(Cynara spp.), 다우쿠스 카로타(Daucus carota), 데스모디움 아종(Desmodium spp.), 디모카르푸스 론간(Dimocarpus longan), 디오스코레아 아종(Dioscorea spp.), 디오스피로스 아종(Diospyros spp.), 에키노클로아 아종(Echinochloa spp.), 엘라에이스(Elaeis) (예를 들어, 엘라에이스 귀네엔시스(Elaeis guineensis), 엘라에이스 올레이페라(Elaeis oleifera)), 엘레우시네 코라카나(Eleusine coracana), 에라그로스티스 테프(Eragrostis tef), 에리안투스 종(Erianthus sp.), 에리오보트리야 자포니카(Eriobotrya japonica), 유칼립투스 종(Eucalyptus sp.), 유제니아 우리피오라(Eugenia uniflora), 파고피룸 아종(Fagopyrum spp.), 파구스 아종(Fagus spp.), 페스투카 아룬디나세아(Festuca arundinacea), 피쿠스 카리카(Ficus carica), 포르투넬라 아종(Fortunella spp.), 프라가리아 아종(Fragaria spp.), 징코 빌로바(Ginkgo biloba), 글리신 아종 (예를 들어, 글리신 맥스, 소자 히스피다(Soja hispida) 또는 소자 맥스(Soja max)), 고시피움 히르수툼(Gossypium hirsutum), 헬리안투스 아종(Helianthus spp.) (예를 들어, 헬리안투스 안누스(Helianthus annuus)), 헤메로칼리스 풀바(Hemerocallis fulva), 히비스쿠스 아종(Hibiscus spp.), 호르데움 아종(Hordeum spp.) (예를 들어, 호르데움 불가레(Hordeum vulgare)), 이포모에아 바타타스(Ipomoea batatas), 주글란스 아종(Juglans spp.), 락투카 사티바(Lactuca sativa), 라티루스 아종(Lathyrus spp.), 렌즈 쿨리나리스(Lens culinaris), 리눔 우시타티시뭄(Linum usitatissimum), 리치 키넨시스(Litchi chinensis), 로투스 아종(Lotus spp.), 루파 아쿠탄굴라(Luffa acutangula), 루피누스 아종(Lupinus spp.), 루줄라 실바티카(Luzula sylvatica), 리코페르시콘 아종(Lycopersicon spp.) (예를 들어, 리코페르시콘 에스쿨렌툼(Lycopersicon esculentum), 리코페르시콘 리코페르시쿰(Lycopersicon lycopersicum), 리코페르시콘 피리포르메(Lycopersicon pyriforme)), 마크로틸로마 아종(Macrotyloma spp.), 말루스 아종(Malus spp.), 말피기아 에마르기나타(Malpighia emarginata), 맘메아 아메리카나(Mammea americana), 만기페라 인디카(Mangifera indica), 마니호트 아종(Manihot spp.), 마닐카라 자포타(Manilkara zapota), 메디카고 사티바(Medicago sativa), 멜리로투스 아종(Melilotus spp.), 멘타 아종(Mentha spp.), 미스칸투스 시넨시스(Miscanthus sinensis), 모모르디카 아종(Momordica spp.), 모루스 니그라(Morus nigra), 무사 아종(Musa spp.), 니코티아나 아종, 올레아 아종(Olea spp.), 오푼티아 아종(Opuntia spp.), 오르니토푸스 아종(Ornithopus spp.), 오리자 아종 (예를 들어, 오리자 사티바, 오리자 라티폴리아(Oryza latifolia)), 파니쿰 밀리아세움(Panicum miliaceum), 파니쿰 비르가툼(Panicum virgatum), 파시플로라 에둘리스(Passiflora edulis), 파스티나카 사티바(Pastinaca sativa), 펜니세툼 종(Pennisetum sp.), 페르세아 아종(Persea spp.), 페트로셀리눔 크리스품(Petroselinum crispum), 팔라리스 아룬디나세아(Phalaris arundinacea), 파세오루스 아종(Phaseolus spp.), 플레움 프라텐세(Phleum pratense), 포에닉스 아종(Phoenix spp.), 프라그니테스 오스트랄리스(Phragmites australis), 피살리스 아종(Physalis spp.), 피누스 아종(Pinus spp.), 피스타시아 베라(Pistacia vera), 피숨 아종(Pisum spp.), 포아 아종(Poa spp.), 포풀루스 아종(Populus spp.), 프로소피스 아종(Prosopis spp.), 프루누스 아종(Prunus spp.), 프시디움 아종(Psidium spp.), 푸니카 그라나툼(Punica granatum), 피루스 콤뮤니스(Pyrus communis), 퀘르쿠스 아종(Quercus spp.), 라파누스 사티부스(Raphanus sativus), 레움 라바르바룸(Rheum rhabarbarum), 리베스 아종(Ribes spp.), 리시누스 콤뮤니스(Ricinus communis), 루부스 아종(Rubus spp.), 사카룸 아종(Saccharum spp.), 살릭스 종(Salix sp.), 삼부커스 아종(Sambucus spp.), 세칼레 세레알레(Secale cereale), 세사뭄 아종(Sesamum spp.), 시나피스 아종, 솔라눔 아종 (예를 들어, 솔라눔 투베로숨, 솔라눔 인테그리폴리움(Solanum integrifolium) 또는 솔라눔 리코페르시쿰(Solanum lycopersicum)), 소르굼 비콜로르(Sorghum bicolor), 스피나시아 아종, 시지기움 아종(Syzygium spp.), 타게테스 아종(Tagetes spp.), 타마린두스 인디카(Tamarindus indica), 테오브로마 카카오(Theobroma cacao), 트리폴리움 아종(Trifolium spp.), 트립사쿰 닥틸로이데스(Tripsacum dactyloides), 트리티코세카레 림파우이(Triticosecale rimpaui), 트리티쿰 아종 (예를 들어, 트리티쿰 아에스티붐(Triticum aestivum), 트리티쿰 두룸(Triticum durum), 트리티쿰 투르기둠(Triticum turgidum), 트리티쿰 히베르눔(Triticum hybernum), 트리티쿰 마차(Triticum macha), 트리티쿰 사티붐(Triticum sativum), 트리티쿰 모노콕쿰(Triticum monococcum) 또는 트리티쿰 불가레(Triticum vulgare)), 트로패올룸 미누스(Tropaeolum minus), 트로패올룸 마주스(Tropaeolum majus), 바시니움 아종(Vaccinium spp.), 비시아 아종(Vicia spp.), 비그나 아종(Vigna spp.), 비올라 오도라타(Viola odorata), 비티스 아종(Vitis spp.), 제아 메이스, 지자니아 팔루스트리스(Zizania palustris), 지지푸스 아종(Ziziphus spp.), 아마란스, 돼지감자, 아스파라거스, 브로콜리, 브뤼셀 스프라우트, 양배추, 카놀라, 당근, 콜리플라워, 셀러리, 대형 양배추, 아마, 케일, 렌틸, 유지종자 평지, 오크라, 양파, 감자, 벼, 대두, 딸기, 사탕무, 사탕수수, 해바라기, 토마토, 호박, 차 및 조류를 포함하는 목록으로부터 선택되는 사료 또는 먹이 콩과식물, 관상 식물, 식용 작물, 교목 또는 관목을 비롯한, 단자엽 및 쌍자엽 식물을 포함한다. 본 발명의 바람직한 실시양태에 따라, 식물은 농작물이다. 농작물의 예는 특히 대두, 해바라기, 카놀라, 알팔파, 평지씨, 목화, 토마토, 감자 또는 담배를 포함한다. 추가로 바람직하게, 식물은 단자엽 식물, 예컨대 사탕수수이다. 추가로 바람직하게, 식물은 곡물, 예컨대 벼, 옥수수, 밀, 보리, 기장, 호밀, 수수 또는 귀리이다.
바람직한 실시양태에서, 식물은 하기에 보다 상세하게 기재된 바와 같이, 본 발명에 따른 야생형 또는 mut-PPO 트랜스진을 도입하고, 이를 과다발현시킴으로써 식물을 재조합적으로 제조하는 단계를 포함하는 방법에 의해 생산된다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 식물은 계내에서 식물 세포를 돌연변이유발하여 mut-PPO를 발현하는 식물 세포를 수득하는 방법에 의해 생산된다.
본원에 개시된 바와 같이, 본 발명의 핵산은 그의 게놈 내에 제초제-내성 야생형 또는 mut-PPO 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하는 식물의 제초제 내성을 증진시키는데 용도가 발견된다. 이러한 유전자는 하기 기재된 바와 같이, 내인성 유전자 또는 트랜스진일 수 있다. 추가로, 특정 실시양태에서, 본 발명의 핵산은 목적하는 표현형을 갖는 식물을 생성하기 위해 관심 폴리뉴클레오티드 서열의 임의의 조합으로 적층될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 핵산은 예를 들어 바실루스 투리기엔시스(Bacillus thuringiensis) 독소 단백질 (미국 특허 번호 5,366,892; 5,747,450; 5,737,514; 5,723,756; 5,593,881; 및 문헌 [Geiser et al (1986) Gene 48: 109]에 기재됨), 5-엔올피루빌쉬키메이트-3-포스페이트 신타제 (EPSPS), 글리포세이트 아세틸 트랜스퍼라제 (GAT), 시토크롬 P450 모노옥시게나제, 포스피노트리신 아세틸트랜스퍼라제 (PAT), 아세토히드록시산 신타제 (AHAS; EC 4.1.3.18, 아세토락테이트 신타제 또는 ALS로도 공지됨), 히드록시페닐 피루베이트 디옥시게나제 (HPPD), WO 02/068607에 개시되어 있는 피토엔 데새투라제 (PD) 및 디캄바 분해 효소, 또는 WO 2008141154 또는 WO 2005107437에 개시되어 있는 페녹시아세트산- 및 페녹시프로피온산-유도체 분해 효소와 같은 살충 및/또는 살곤충 활성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 임의의 다른 폴리뉴클레오티드와 함께 적층될 수 있다. 생성된 조합물은 또한 관심 폴리뉴클레오티드 중 어느 하나의 다중 카피를 포함할 수 있다.
일반적으로, 용어 "제초제"는 식물을 사멸시키거나, 방제하거나, 또는 다르게는 그의 성장을 불리하게 변형시키는 활성 성분을 의미하는 것으로 본원에 사용된다. 제초제의 바람직한 양 또는 농도는 "유효량" 또는 "유효 농도"이다. "유효량" 및 "유효 농도"란, 각각 유사한 야생형, 식물, 식물 조직, 식물 세포 또는 숙주 세포를 사멸시키거나 그의 성장을 억제하기에는 충분하지만, 상기 양이 본 발명의 제초제-저항성 식물, 식물 조직, 식물 세포 및 숙주 세포를 심하게 사멸시키거나 그의 성장을 억제하지는 않는 것인 양 및 농도로 의도된다. 전형적으로, 제초제의 유효량은 농업 생산 시스템에서 관심 잡초를 사멸시키기 위해 통상적으로 사용되는 양이다. 이러한 양은 통상의 기술자에게 공지된다. 제초 활성은 본 발명에 유용한 제초제가 임의의 성장 단계에, 또는 식재 또는 출아 이전에 식물에 또는 식물이 있는 장소에 직접 적용되었을 때에 그에 의해 나타난다. 관찰되는 효과는 방제하고자 하는 식물 종, 식물 성장 단계, 희석 및 스프레이 액적 크기에 관한 적용 파라미터, 고체 성분의 입자 크기, 사용 시점의 환경 조건, 사용되는 구체적 화합물, 사용되는 구체적인 아주반트 및 담체, 토양 유형 등, 뿐만 아니라, 적용되는 화학물질의 양에 의존적이다. 이들 및 다른 인자는 비선택적 또는 선택적인 제초 작용을 촉진시키기 위하여 관련 기술분야에 공지되어 있는 바와 같이 조정될 수 있다. 일반적으로, 잡초를 최대로 방제하기 위해서는 제초제를 출아후에 상대적으로 미성숙한 바람직하지 않은 식생에 적용하는 것이 바람직하다.
"제초제-내성" 또는 "제초제-저항성" 식물이란, 정상 또는 야생형 식물을 정상적으로 사멸시키거나 그의 성장을 억제하는 수준의 적어도 1종의 제초제에 대해 내성 또는 저항성인 식물을 의도한다. "제초제-내성 야생형 또는 mut-PPO 단백질" 또는 "제초제-저항성 야생형 또는 mut-PPO 단백질"이란, PPO 활성을 방해하는 것으로 공지되어 있는 적어도 1종의 제초제가 야생형 mut-PPO 단백질의 PPO 활성을 억제하는 것으로 공지되어 있는 농도 또는 수준으로 존재할 때, 이러한 PPO 단백질이 야생형 PPO 단백질의 PPO 활성에 비하여 더 높은 PPO 활성을 나타낸다는 것을 의도한다. 추가로, 상기 제초제-내성 또는 제초제-저항성 mut-PPO 단백질의 PPO 활성은 본원에서 "제초제-내성" 또는 "제초제-저항성" PPO 활성인 것으로 지칭될 수 있다.
일반적으로, 본 발명의 문맥상 사용될 수 있는, 본원에 기재된 바와 같은 PPO-억제 제초제 (A) 및/또는 제초 화합물 B가 기하 이성질체, 예를 들어 E/Z 이성질체를 형성할 수 있는 경우에, 본 발명에 따른 조성물 중에 순수한 이성질체 및 그의 혼합물을 둘 다 사용하는 것이 가능하다. 본원에 기재된 바와 같은 PPO-억제 제초제 A 및/또는 제초 화합물 B가 1개 이상의 키랄성 중심을 가지며, 그 결과 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체로서 존재하는 경우에, 본 발명에 따른 조성물 중에 순수한 거울상이성질체 및 부분입체이성질체 및 그의 혼합물을 둘 다 사용하는 것이 가능하다. 본원에 기재된 바와 같은 PPO-억제 제초제 A 및/또는 제초 화합물 B가 이온화성 관능기를 갖는 경우에, 이들은 또한 그의 농업상 허용되는 염 형태로 사용될 수 있다. 일반적으로, 양이온 및 음이온 각각이 활성 화합물의 활성에 유해한 영향을 갖지 않는, 양이온의 염 및 산의 산 부가염이 적합하다. 바람직한 양이온은 알칼리 금속, 바람직하게는 리튬, 나트륨 및 칼륨, 알칼리 토금속, 바람직하게는 칼슘 및 마그네슘, 및 전이 금속, 바람직하게는 망가니즈, 구리, 아연 및 철 이온, 추가의 암모늄, 및 1 내지 4개의 수소 원자가 C1-C4-알킬, 히드록시-C1-C4-알킬, C1-C4-알콕시-C1-C4-알킬, 히드록시-C1-C4-알콕시-C1-C4-알킬, 페닐 또는 벤질에 의해 대체된 치환된 암모늄, 바람직하게는 암모늄, 메틸암모늄, 이소프로필암모늄, 디메틸암모늄, 디이소프로필암모늄, 트리메틸암모늄, 헵틸암모늄, 도데실암모늄, 테트라데실암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 테트라부틸암모늄, 2-히드록시에틸암모늄 (올라민 염), 2-(2-히드록시에트-1-옥시)에트-1-일암모늄 (디글리콜아민 염), 디(2-히드록시에트-1-일)암모늄 (디올아민 염), 트리스(2-히드록시에틸)암모늄 (트롤아민 염), 트리스(2-히드록시프로필)암모늄, 벤질트리메틸암모늄, 벤질트리에틸암모늄, N,N,N-트리메틸에탄올암모늄 (콜린 염), 추가의 포스포늄 이온, 술포늄 이온, 바람직하게는 트리(C1-C4-알킬)술포늄, 예컨대 트리메틸술포늄, 및 술폭소늄 이온, 바람직하게는 트리(C1-C4-알킬)술폭소늄, 및 최종적으로 다염기성 아민, 예컨대 N,N-비스-(3-아미노프로필)메틸아민 및 디에틸렌트리아민의 염이다. 유용한 산 부가염의 음이온은 주로 클로라이드, 브로마이드, 플루오라이드, 아이오다이드, 히드로겐술페이트, 메틸술페이트, 술페이트, 디히드로겐포스페이트, 히드로겐포스페이트, 니트레이트, 비카르보네이트, 카르보네이트, 헥사플루오로실리케이트, 헥사플루오로포스페이트, 벤조에이트 및 또한 C1-C4-알칸산의 음이온, 바람직하게는 포르메이트, 아세테이트, 프로피오네이트 및 부티레이트이다.
카르복실 기를 갖는 본원에 기재된 바와 같은 PPO-억제 제초제 A 및/또는 제초 화합물 B는 산의 형태, 상기 언급된 바와 같은 농업상 적합한 염 형태 또는 달리 농업상 허용되는 유도체 형태, 예를 들어 아미드, 예컨대 모노- 및 디-C1-C6-알킬아미드 또는 아릴아미드로서, 에스테르로서, 예를 들어 알릴 에스테르, 프로파르길 에스테르, C1-C10-알킬 에스테르, 알콕시알킬 에스테르, 테푸릴 ((테트라히드로푸란-2-일)메틸)에스테르 및 또한 티오에스테르로서, 예를 들어 C1-C10-알킬티오 에스테르로서 사용될 수 있다. 바람직한 모노- 및 디-C1-C6-알킬아미드는 메틸 및 디메틸아미드이다. 바람직한 아릴아미드는, 예를 들어 아닐리드 및 2-클로로아닐리드이다. 바람직한 알킬 에스테르는, 예를 들어 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 펜틸, 멕실 (1-메틸헥실), 멥틸 (1-메틸헵틸), 헵틸, 옥틸 또는 이소옥틸 (2-에틸헥실) 에스테르이다. 바람직한 C1-C4-알콕시-C1-C4-알킬 에스테르는 직쇄 또는 분지형 C1-C4-알콕시 에틸 에스테르, 예를 들어 2-메톡시에틸, 2-에톡시에틸, 2-부톡시에틸 (부토틸), 2-부톡시프로필 또는 3-부톡시프로필 에스테르이다. 직쇄 또는 분지형 C1-C10-알킬티오 에스테르의 예는 에틸티오 에스테르이다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 PPO 억제 제초제의 예는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 아자페니딘, 벤카르바존, 벤즈펜디존, 비페녹스, 부타페나실, 카르펜트라존, 카르펜트라존-에틸, 클로메톡시펜, 시니돈-에틸, 플루아졸레이트, 플루펜피르, 플루펜피르-에틸, 플루미클로락, 플루미클로락-펜틸, 플루미옥사진, 플루오로글리코펜, 플루오로글리코펜-에틸, 플루티아세트, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 할로사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥사디아존, 옥시플루오르펜, 펜톡사존, 프로플루아졸, 피라클로닐, 피라플루펜, 피라플루펜-에틸, 사플루페나실, 술펜트라존, 티디아지민, 티아페나실, 클로르니트로펜, 플루미프로핀, 플루오로니트로펜, 플루프로파실, 푸릴옥시펜, 니트로플루오르펜, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), N-에틸-3-2,6-디클로로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452098-92-9), N-테트라히드로푸르푸릴-3-(2,6-디클로로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 915396-43-9), N-에틸-3-(2-클로로-6-플루오로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452099-05-7), N-테트라히드로푸르푸릴-3-(2-클로로-6-플루오로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452100-03-7), 3-[7-플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일]-1,5-디메틸-6-티옥소-[1,3,5]트리아지난-2,4-디온 (CAS 451484-50-7), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-4,5,6,7-테트라히드로-이소인돌-1,3-디온 (CAS 1300118-96-0), 1-메틸-6-트리플루오로메틸-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-1H-피리미딘-2,4-디온, 메틸 (E)-4-[2-클로로-5-[4-클로로-5-(디플루오로메톡시)-1H-메틸-피라졸-3-일]-4-플루오로-페녹시]-3-메톡시-부트-2-에노에이트 [CAS 948893-00-3], 3-[7-클로로-5-플루오로-2-(트리플루오로메틸)-1H-벤즈이미다졸-4-일]-1-메틸-6-(트리플루오로메틸)-1H-피리미딘-2,4-디온 (CAS 212754-02-4), 및
하기 화학식 III의 우라실 (그의 농업상 허용되는 알칼리 금속 염 또는 암모늄 염 포함)이다.
<화학식 III>
Figure pct00003
상기 식에서,
R30 및 R31은 서로 독립적으로 F, Cl 또는 CN이고;
R32는 O 또는 S이고;
R33은 H, F, Cl, CH3 또는 OCH3이고;
R34는 CH 또는 N이고;
R35는 O 또는 S이고;
R36은 H, CN, CH3, CF3, OCH3, OC2H5, SCH3, SC2H5, (CO)OC2H5 또는 CH2R38이고,
여기서 R38은 F, Cl, OCH3, SCH3, SC2H5, CH2F, CH2Br 또는 CH2OH이고;
R37은 (C1-C6-알킬)아미노, (C1-C6-디알킬)아미노, (NH)OR39, OH, OR40 또는 SR40이고,
여기서 R39는 CH3, C2H5 또는 페닐이고;
R40은 서로 독립적으로 C1-C6-알킬, C2-C6-알케닐, C3-C6-알키닐, C1-C6-할로알킬, C1-C6-알콕시-C1-C6-알킬, C1-C6-알콕시-C1-C6-알콕시-C1-C6-알킬, C2-C6-시아노알킬, C1-C4-알콕시-카르보닐-C1-C4-알킬, C1-C4-알킬-카르보닐-아미노, C1-C6-알킬술피닐-C1-C6-알킬, C1-C6-알킬-술포닐-C1-C6-알킬, C1-C6-디알콕시-C1-C6-알킬, C1-C6-알킬-카르보닐옥시-C1-C6-알킬, 페닐-카르보닐-C1-C6-알킬, 트리(C1-C3-알킬)-실릴-C1-C6-알킬, 트리(C1-C3-알킬)-실릴-C1-C6-알케닐, 트리(C1-C3-알킬)-실릴-C1-C6-알키닐, 트리(C1-C3-알킬)-실릴-C1-C6-알콕시-C1-C6-알킬, 디메틸아미노, 테트라히드로피라닐, 테트라히드로푸라닐-C1-C3-알킬, 페닐-C1-C6-알콕시-C1-C6-알킬, 페닐-C1-C3-알킬, 피리딜-C1-C3-알킬, 피리딜, 페닐 (상기 피리딜 및 페닐은 서로 독립적으로 할로겐, C1-C3-알킬 또는 C1-C2-할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기에 의해 치환됨), C3-C6-시클로알킬 또는 C3-C6-시클로알킬-C1-C4-알킬 (상기 시클로알킬은 서로 독립적으로 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C3-알킬 및 C1-C2-할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기에 의해 치환됨)이다.
본 발명에 따라 사용될 수 있는 바람직한 PPO-억제 제초제는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 아자페니딘, 벤카르바존, 벤즈펜디존, 부타페나실, 카르펜트라존-에틸, 시니돈-에틸, 플루펜피르-에틸, 플루미클로락-펜틸, 플루미옥사진, 플루오로글리코펜-에틸, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥사디아존, 옥시플루오르펜, 펜톡사존, 피라플루펜-에틸, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), N-에틸-3-(2,6-디클로로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452098-92-9), N-테트라히드로푸르푸릴-3-(2,6-디클로로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 915396-43-9), N-에틸-3-(2-클로로-6-플루오로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452099-05-7), N-테트라히드로푸르푸릴-3-(2-클로로-6-플루오로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452100-03-7), 3-[7-플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일]-1,5-디메틸-6-티옥소-[1,3,5]트리아지난-2,4-디온 (CAS 451484-50-7), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-4,5,6,7-테트라히드로-이소인돌-1,3-디온 (CAS 1300118-96-0); 1-메틸-6-트리플루오로메틸-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-1H-피리미딘-2,4-디온 (CAS 1304113-05-0), 3-[7-클로로-5-플루오로-2-(트리플루오로메틸)-1H-벤즈이미다졸-4-일]-1-메틸-6-(트리플루오로메틸)-1H-피리미딘-2,4-디온 (CAS 212754-02-4),
하기 화학식 III.1의 우라실 (R30은 F이고, R31은 Cl이고, R32는 O이고; R33은 H이고; R34는 CH이고; R35는 O이고, R37은 OR40인 화학식 III의 우라실에 상응함)
<화학식 III.1>
Figure pct00004
(상기 식에서,
R36은 OCH3, OC2H5, SCH3 또는 SC2H5이고;
R40은 C1-C6-알킬, C2-C6-알케닐, C3-C6-알키닐, C1-C6-할로알킬, C1-C6-알콕시-C1-C6-알킬, C1-C6-알콕시-C1-C6-알콕시-C1-C6-알킬, C1-C3-시아노알킬, 페닐-C1-C3-알킬, 피리딜-C1-C3-알킬, C3-C6-시클로알킬 또는 C3-C6-시클로알킬-C1-C4-알킬이고,
상기 시클로알킬은 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C3-알킬 및 C1-C2-할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기에 의해 치환됨),
및
하기 화학식 III.2의 우라실 (R30은 F이고; R31은 Cl이고; R32는 O이고; R33은 H이고; R34는 N이고; R35는 O이고, R37은 OR40이고, R40은 C1-C6-알킬인 화학식 III의 우라실에 상응함)이다.
<화학식 III.2>
Figure pct00005
본 발명에 따라 사용될 수 있는 특히 바람직한 PPO-억제 제초제는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 카르펜트라존-에틸, 시니돈-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 3-[7-플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일]-1,5-디메틸-6-티옥소-[1,3,5]트리아지난-2,4-디온 (CAS 451484-50-7), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 및 2-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-4,5,6,7-테트라히드로-이소인돌-1,3-디온 (CAS 1300118-96-0), 1-메틸-6-트리플루오로메틸-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-1H-피리미딘-2,4-디온 (CAS 1304113-05-0),
하기 화학식 III.1.1의 우라실 (R30은 F이고, R31은 Cl이고, R32는 O이고; R33은 H이고; R34는 CH이고; R35는 O이고, R36은 OCH3이고, R37은 OR40인 화학식 III의 우라실에 상응함)
<화학식 III.1.1>
Figure pct00006
(상기 식에서,
R40은 C1-C6-알킬, C2-C6-알케닐, C3-C6-알키닐, C1-C6-할로알킬, C1-C6-알콕시-C1-C6-알킬, C1-C6-알콕시-C1-C6-알콕시-C1-C6-알킬, C1-C3-시아노알킬, 페닐-C1-C3-알킬, 피리딜-C1-C3-알킬, C3-C6-시클로알킬 또는 C3-C6-시클로알킬-C1-C4-알킬이고,
상기 시클로알킬은 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C3-알킬 및 C1-C2-할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 내지 5개의 치환기에 의해 치환되고;
바람직하게는 CH3, CH2CH2OC2H5, CH2CHF2, 시클로헥실, (1-메틸시클로프로필)메틸 또는 CH2(피리딘-4-일)임),
하기 화학식 III.2.1의 우라실 (R30은 F이고; R31은 Cl이고; R32는 O이고; R33은 H이고; R34는 N이고; R35는 O이고, R37은 OR40이고, R40은 CH3인 화학식 III의 우라실에 상응함),
<화학식 III.2.1>
Figure pct00007
및
하기 화학식 III.2.2의 우라실 (R30은 F이고; R31은 Cl이고; R32는 O이고; R33은 H이고; R34는 N이고; R35는 O이고, R37은 OR40이고, R40은 C2H5인 화학식 III의 우라실에 상응함)이다.
<화학식 III.2.2>
Figure pct00008
특히 바람직한 PPO-억제 제초제는 하기 표 A에 열거된 PPO-억제 제초제 A.1 내지 A.14이다.
<표 A>
Figure pct00009
본 발명을 수행하는데 유용한 상기 기재된 PPO-억제 제초제는 보다 폭넓은 품종의 바람직하지 않은 식생을 방제하기 위해 1종 이상의 다른 제초제와 함께 종종 최상으로 적용된다. 예를 들어, PPO-억제 제초제는 농작물이 자연적으로 내성이거나 또는 상기 언급한 바와 같은 1종 이상의 추가의 트랜스진의 발현을 통해 저항성인 추가의 제초제와 함께 추가로 사용될 수 있다. 다른 표적화 제초제와 함께 사용될 경우에, 본 발명에서 청구하는 화합물은 다른 제초제 또는 제초제들과 함께 제제화될 수 있거나, 다른 제초제 또는 제초제들과 함께 탱크 혼합될 수 있거나, 또는 다른 제초제 또는 제초제들과 함께 순차적으로 적용될 수 있다.
혼합물을 위한 적합한 성분은, 예를 들어 하기 부류 b1) 내지 b15)의 제초제로부터 선택된다.
B) 부류 b1) 내지 b15)의 제초제:
b1) 지질 생합성 억제제;
b2) 아세토락테이트 신타제 억제제 (ALS 억제제);
b3) 광합성 억제제;
b4) 프로토포르피리노겐-IX 옥시다제 억제제,
b5) 표백 제초제;
b6) 엔올피루빌 쉬키메이트 3-포스페이트 신타제 억제제 (EPSP 억제제);
b7) 글루타민 신테타제 억제제;
b8) 7,8-디히드로프테로에이트 신타제 억제제 (DHP 억제제);
b9) 유사분열 억제제;
b10) 초장쇄 지방산의 합성 억제제 (VLCFA 억제제);
b11) 셀룰로스 생합성 억제제;
b12) 탈커플링 제초제;
b13) 옥신 제초제;
b14) 옥신 수송 억제제; 및
b15) 브로모부티드, 클로르플루레놀, 클로르플루레놀-메틸, 신메틸린, 쿠밀루론, 달라폰, 다조메트, 디펜조쿼트, 디펜조쿼트-메틸술페이트, 디메티핀, DSMA, 딤론, 엔도탈 및 그의 염, 에토벤자니드, 플람프로프, 플람프로프-이소프로필, 플람프로프-메틸, 플람프로프-M-이소프로필, 플람프로프-M-메틸, 플루레놀, 플루레놀-부틸, 플루르프리미돌, 포사민, 포사민-암모늄, 인다노판, 인다지플람, 말레산 히드라지드, 메플루이디드, 메탐, 메티오졸린 (CAS 403640-27-7), 메틸 아지드, 메틸 브로마이드, 메틸-딤론, 메틸 아이오다이드, MSMA, 올레산, 옥사지클로메폰, 펠라르곤산, 피리부티카르브, 퀴노클라민, 트리아지플람, 트리디판 및 6-클로로-3-(2-시클로프로필-6-메틸페녹시)-4-피리다지놀 (CAS 499223-49-3) 및 그의 염 및 에스테르로 이루어진 군으부터 선택되는 다른 제초제;
(그의 농업상 허용되는 염 또는 유도체 포함).
본 발명에 따라 PPO-억제 제초제와 함께 사용될 수 있는 제초제 B의 예는 다음과 같다:
b1) 지질 생합성 억제제 군으로부터의 것:
ACC-제초제, 예컨대 알록시딤, 알록시딤-소듐, 부트록시딤, 클레토딤, 클로디나포프, 클로디나포프-프로파르길, 시클록시딤, 시할로포프, 시할로포프-부틸, 디클로포프, 디클로포프-메틸, 페녹사프로프, 페녹사프로프-에틸, 페녹사프로프-P, 페녹사프로프-P-에틸, 플루아지포프, 플루아지포프-부틸, 플루아지포프-P, 플루아지포프-P-부틸, 할록시포프, 할록시포프-메틸, 할록시포프-P, 할록시포프-P-메틸, 메타미포프, 피녹사덴, 프로폭시딤, 프로파퀴자포프, 퀴잘로포프, 퀴잘로포프-에틸, 퀴잘로포프-테푸릴, 퀴잘로포프-P, 퀴잘로포프-P-에틸, 퀴잘로포프-P-테푸릴, 세톡시딤, 테프랄록시딤, 트랄콕시딤,
4-(4'-클로로-4-시클로프로필-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-5-히드록시-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3(6H)-온 (CAS 1312337-72-6); 4-(2',4'-디클로로-4-시클로프로필[1,1'-비페닐]-3-일)-5-히드록시-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3(6H)-온 (CAS 1312337-45-3); 4-(4'-클로로-4-에틸-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-5-히드록시-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3(6H)-온 (CAS 1033757-93-5); 4-(2',4'-디클로로-4-에틸[1,1'-비페닐]-3-일)-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3,5(4H,6H)-디온 (CAS 1312340-84-3); 5-(아세틸옥시)-4-(4'-클로로-4-시클로프로필-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-3,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3-온 (CAS 1312337-48-6); 5-(아세틸옥시)-4-(2',4'-디클로로-4-시클로프로필-[1,1'-비페닐]-3-일)-3,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3-온; 5-(아세틸옥시)-4-(4'-클로로-4-에틸-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-3,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3-온 (CAS 1312340-82-1); 5-(아세틸옥시)-4-(2',4'-디클로로-4-에틸[1,1'-비페닐]-3-일)-3,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3-온 (CAS 1033760-55-2); 4-(4'-클로로-4-시클로프로필-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-5,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-5-옥소-2H-피란-3-일 탄산 메틸 에스테르 (CAS 1312337-51-1); 4-(2',4'-디클로로-4-시클로프로필-[1,1'-비페닐]-3-일)-5,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-5-옥소-2H-피란-3-일 탄산 메틸 에스테르; 4-(4'-클로로-4-에틸-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-5,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-5-옥소-2H-피란-3-일 탄산 메틸 에스테르 (CAS 1312340-83-2); 4-(2',4'-디클로로-4-에틸[1,1'-비페닐]-3-일)-5,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-5-옥소-2H-피란-3-일 탄산 메틸 에스테르 (CAS 1033760-58-5); 및 비 ACC 제초제, 예컨대 벤푸레세이트, 부틸레이트, 시클로에이트, 달라폰, 디메피페레이트, EPTC, 에스프로카르브, 에토푸메세이트, 플루프로파네이트, 몰리네이트, 오르벤카르브, 페불레이트, 프로술포카르브, TCA, 티오벤카르브, 티오카르바질, 트리알레이트 및 베르놀레이트;
b2) ALS 억제제 군으로부터의 것:
술포닐우레아, 예컨대 아미도술푸론, 아짐술푸론, 벤술푸론, 벤술푸론-메틸, 클로리무론, 클로리무론-에틸, 클로르술푸론, 시노술푸론, 시클로술파무론, 에타메트술푸론, 에타메트술푸론-메틸, 에톡시술푸론, 플라자술푸론, 플루세토술푸론, 플루피르술푸론, 플루피르술푸론-메틸-소듐, 포람술푸론, 할로술푸론, 할로술푸론-메틸, 이마조술푸론, 아이오도술푸론, 아이오도술푸론-메틸-소듐, 이오펜술푸론, 이오펜술푸론-소듐, 메소술푸론, 메타조술푸론, 메트술푸론, 메트술푸론-메틸, 니코술푸론, 오르토술파무론, 옥사술푸론, 프리미술푸론, 프리미술푸론-메틸, 프로피리술푸론, 프로술푸론, 피라조술푸론, 피라조술푸론-에틸, 림술푸론, 술포메투론, 술포메투론-메틸, 술포술푸론, 티펜술푸론, 티펜술푸론-메틸, 트리아술푸론, 트리베누론, 트리베누론-메틸, 트리플록시술푸론, 트리플루술푸론, 트리플루술푸론-메틸 및 트리토술푸론,
이미다졸리논, 예컨대 이마자메타벤즈, 이마자메타벤즈-메틸, 이마자목스, 이마자픽, 이마자피르, 이마자퀸 및 이마제타피르, 트리아졸로피리미딘 제초제 및 술폰아닐리드, 예컨대 클로란술람, 클로란술람-메틸, 디클로술람, 플루메트술람, 플로라술람, 메토술람, 페녹스술람, 피리미술판 및 피록스술람,
피리미디닐벤조에이트, 예컨대 비스피리박, 비스피리박-소듐, 피리벤족심, 피리프탈리드, 피리미노박, 피리미노박-메틸, 피리티오박, 피리티오박-소듐, 4-[[[2-[(4,6-디메톡시-2-피리미디닐)옥시]페닐]메틸]아미노]-벤조산-1-메틸에틸 에스테르 (CAS 420138-41-6), 4-[[[2-[(4,6-디메톡시-2-피리미디닐)옥시]페닐]메틸]아미노]-벤조산 프로필 에스테르 (CAS 420138-40-5), N-(4-브로모페닐)-2-[(4,6-디메톡시-2-피리미디닐)옥시]벤젠메탄아민 (CAS 420138-01-8),
술포닐아미노카르보닐-트리아졸리논 제초제, 예컨대 플루카르바존, 플루카르바존-소듐, 프로폭시카르바존, 프로폭시카르바존-소듐, 티엔카르바존 및 티엔카르바존-메틸; 및 트리아파몬;
이들 중, 본 발명의 바람직한 실시양태는 적어도 1종의 이미다졸리논 제초제를 포함하는 조성물에 관한 것임;
b3) 광합성 억제제 군으로부터의 것:
아미카르바존, 광화학계 II의 억제제, 예를 들어 트리아진 제초제, 예컨대 클로로트리아진, 트리아지논, 트리아진디온, 메틸티오트리아진 및 피리다지논, 예컨대, 아메트린, 아트라진, 클로리다존, 시아나진, 데스메트린, 디메타메트린, 헥사지논, 메트리부진, 프로메톤, 프로메트린, 프로파진, 시마진, 시메트린, 테르부메톤, 테르부틸라진, 테르부트린 및 트리에타진, 아릴 우레아, 예컨대 클로로브로무론, 클로로톨루론, 클로록수론, 디메푸론, 디우론, 플루오메투론, 이소프로투론, 이소우론, 리누론, 메타미트론, 메타벤즈티아주론, 메토벤주론, 메톡수론, 모노리누론, 네부론, 시두론, 테부티우론 및 티아디아주론, 페닐 카르바메이트, 예컨대 데스메디팜, 카르부틸레이트, 펜메디팜, 펜메디팜-에틸, 니트릴 제초제, 예컨대 브로모페녹심, 브로목시닐 및 그의 염 및 에스테르, 이옥시닐 및 그의 염 및 에스테르, 우라실, 예컨대 브로마실, 레나실 및 테르바실 및 벤타존 및 벤타존-소듐, 피리데이트, 피리다폴, 펜타노클로르 및 프로파닐, 및 광화학계 I의 억제제, 예컨대 디쿼트, 디쿼트-디브로마이드, 파라쿼트, 파라쿼트-디클로라이드 및 파라쿼트-디메틸술페이트. 이들 중, 본 발명의 바람직한 실시양태는 적어도 1종의 아릴 우레아 제초제를 포함하는 조성물에 관한 것임. 유사하게, 이들 중, 본 발명의 바람직한 실시양태는 적어도 1종의 트리아진 제초제를 포함하는 조성물에 관한 것임. 유사하게, 이들 중, 본 발명의 바람직한 실시양태는 적어도 1종의 니트릴 제초제를 포함하는 조성물에 관한 것임;
b4) 프로토포르피리노겐-IX 옥시다제 억제제 군으로부터의 것:
아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 아자페니딘, 벤카르바존, 벤즈펜디존, 비페녹스, 부타페나실, 카르펜트라존, 카르펜트라존-에틸, 클로메톡시펜, 시니돈-에틸, 플루아졸레이트, 플루펜피르, 플루펜피르-에틸, 플루미클로락, 플루미클로락-펜틸, 플루미옥사진, 플루오로글리코펜, 플루오로글리코펜-에틸, 플루티아세트, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 할로사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥사디아존, 옥시플루오르펜, 펜톡사존, 프로플루아졸, 피라클로닐, 피라플루펜, 피라플루펜-에틸, 사플루페나실, 술펜트라존, 티디아지민, 티아페나실, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), N-에틸-3-(2,6-디클로로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452098-92-9), N-테트라히드로푸르푸릴-3-(2,6-디클로로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 915396-43-9), N-에틸-3-(2-클로로-6-플루오로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452099-05-7), N-테트라히드로푸르푸릴-3-(2-클로로-6-플루오로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452100-03-7), 3-[7-플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일]-1,5-디메틸-6-티옥소-[1,3,5]트리아지난-2,4-디온, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-4,5,6,7-테트라히드로-이소인돌-1,3-디온, 1-메틸-6-트리플루오로메틸-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-1H-피리미딘-2,4-디온 (CAS 1304113-05-0), 메틸 (E)-4-[2-클로로-5-[4-클로로-5-(디플루오로메톡시)-1H-메틸-피라졸-3-일]-4-플루오로-페녹시]-3-메톡시-부트-2-에노에이트 [CAS 948893-00-3], 및 3-[7-클로로-5-플루오로-2-(트리플루오로메틸)-1H-벤즈이미다졸-4-일]-1-메틸-6-(트리플루오로메틸)-1H-피리미딘-2,4-디온 (CAS 212754-02-4);
b5) 표백 제초제 군으로부터 것:
PDS 억제제: 베플루부타미드, 디플루페니칸, 플루리돈, 플루로클로리돈, 플루르타몬, 노르플루라존, 피콜리나펜, 및 4-(3-트리플루오로메틸페녹시)-2-(4-트리플루오로메틸페닐)피리미딘 (CAS 180608-33-7), HPPD 억제제: 벤조비시클론, 벤조페납, 클로마존, 이속사플루톨, 메소트리온, 피라술포톨, 피라졸리네이트, 피라족시펜, 술코트리온, 테푸릴트리온, 템보트리온, 토프라메존 및 비시클로피론, 표백제, 미공지 표적: 아클로니펜, 아미트롤 및 플루오메투론;
b6) EPSP 신타제 억제제 군으로부터의 것:
글리포세이트, 글리포세이트-이소프로필암모늄, 글리포세이트-포타슘 및 글리포세이트-트리메슘 (술포세이트);
b7) 글루타민 신타제 억제제 군으로부터의 것:
빌라나포스 (비알라포스), 빌라나포스-소듐, 글루포시네이트, 글루포시네이트-P 및 글루포시네이트-암모늄;
b8) DHP 신타제 억제제 군으로부터의 것:
아술람;
b9) 유사분열 억제제 군으로부터의 것:
K1 군의 화합물: 디니트로아닐린, 예컨대 벤플루랄린, 부트랄린, 디니트라민, 에탈플루랄린, 플루클로랄린, 오리잘린, 펜디메탈린, 프로디아민 및 트리플루랄린, 포스포르아미데이트, 예컨대 아미프로포스, 아미프로포스-메틸 및 부타미포스, 벤조산 제초제, 예컨대 클로르탈, 클로르탈-디메틸, 피리딘, 예컨대 디티오피르 및 티아조피르, 벤즈아미드, 예컨대 프로피자미드 및 테부탐; K2 군의 화합물: 클로르프로팜, 프로팜 및 카르베타미드, 이들 중 K1 군의 화합물, 특히 디니트로아닐린이 바람직하며;
b10) VLCFA 억제제 군으로부터의 것:
클로로아세트아미드, 예컨대 아세토클로르, 알라클로르, 부타클로르, 디메타클로르, 디메테나미드, 디메테나미드-P, 메타자클로르, 메톨라클로르, 메톨라클로르-S, 페톡사미드, 프레틸라클로르, 프로파클로르, 프로피소클로르 및 테닐클로르, 옥시아세트아닐리드, 예컨대 플루페나세트 및 메페나세트, 아세트아닐리드, 예컨대 디페나미드, 나프로아닐리드 및 나프로파미드, 테트라졸리논, 예컨대 펜트라자미드, 및 다른 제초제, 예컨대 아닐로포스, 카펜스트롤, 페녹사술폰, 이프펜카르바존, 피페로포스, 피록사술폰 및 하기 화학식 II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 및 II.9의 이속사졸린 화합물:
Figure pct00010
(화학식 II의 이속사졸린 화합물은 관련 기술분야에, 예를 들어 WO 2006/024820, WO 2006/037945, WO 2007/071900 및 WO 2007/096576으로부터 공지되어 있음);
VLCFA 억제제 중 클로로아세트아미드 및 옥시아세트아미드가 바람직함;
b11) 셀룰로스 생합성 억제제 군으로부터의 것:
클로르티아미드, 디클로베닐, 플루폭삼, 인다지플람, 트리아지플람, 이속사벤 및 1-시클로헥실-5-펜타플루오르페닐옥시-14-[1,2,4,6]티아트리아진-3-일아민;
b12) 탈커플링 제초제 군으로부터의 것:
디노세브, 디노테르브 및 DNOC 및 그의 염;
b13) 옥신 제초제 군으로부터의 것:
2,4-D 및 그의 염 및 에스테르, 예컨대 클라시포스, 2,4-DB 및 그의 염 및 에스테르, 아미노시클로피라클로르 및 그의 염 및 에스테르, 아미노피랄리드 및 그의 염, 예컨대 아미노피랄리드-트리스(2-히드록시프로필)암모늄 및 그의 에스테르, 베나졸린, 베나졸린-에틸, 클로람벤 및 그의 염 및 에스테르, 클로메프로프, 클로피랄리드 및 그의 염 및 에스테르, 디캄바 및 그의 염 및 에스테르, 디클로르프로프 및 그의 염 및 에스테르, 디클로르프로프-P 및 그의 염 및 에스테르, 플루록시피르, 플루록시피르-부토메틸, 플루록시피르-멥틸, 할록시펜 및 그의 염 및 에스테르 (CAS 943832-60-8); MCPA 및 그의 염 및 에스테르, MCPA-티오에틸, MCPB 및 그의 염 및 에스테르, 메코프로프 및 그의 염 및 에스테르, 메코프로프-P 및 그의 염 및 에스테르, 피클로람 및 그의 염 및 에스테르, 퀸클로락, 퀸메락, TBA (2,3,6) 및 그의 염 및 에스테르 및 트리클로피르 및 그의 염 및 에스테르;
b14) 옥신 수송 억제제 군으로부터의 것: 디플루펜조피르, 디플루펜조피르-소듐, 나프탈람 및 나프탈람-소듐;
b15) 다른 제초제 군으로부터의 것: 브로모부티드, 클로르플루레놀, 클로르플루레놀-메틸, 신메틸린, 쿠밀루론, 시클로피리모레이트 (CAS 499223-49-3) 및 그의 염 및 에스테르, 달라폰, 다조메트, 디펜조쿼트, 디펜조쿼트-메틸술페이트, 디메티핀, DSMA, 딤론, 엔도탈 및 그의 염, 에토벤자니드, 플람프로프, 플람프로프-이소프로필, 플람프로프-메틸, 플람프로프-M-이소프로필, 플람프로프-M-메틸, 플루레놀, 플루레놀-부틸, 플루르프리미돌, 포사민, 포사민-암모늄, 인다노판, 인다지플람, 말레산 히드라지드, 메플루이디드, 메탐, 메티오졸린 (CAS 403640-27-7), 메틸 아지드, 메틸 브로마이드, 메틸-딤론, 메틸 아이오다이드, MSMA, 올레산, 옥사지클로메폰, 펠라르곤산, 피리부티카르브, 퀴노클라민, 트리아지플람 및 트리디판.
본 발명에 따라 PPO-억제 제초제와 함께 사용될 수 있는 바람직한 제초제 B는 다음과 같다:
b1) 지질 생합성 억제제 군으로부터의 것:
클레토딤, 클로디나포프-프로파르길, 시클록시딤, 시할로포프-부틸, 디클로포프-메틸, 페녹사프로프-P-에틸, 플루아지포프-P-부틸, 할록시포프-P-메틸, 메타미포프, 피녹사덴, 프로폭시딤, 프로파퀴자포프, 퀴잘로포프-P-에틸, 퀴잘로포프-P-테푸릴, 세톡시딤, 테프랄록시딤, 트랄콕시딤, 4-(4'-클로로-4-시클로프로필-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-5-히드록시-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3(6H)-온 (CAS 1312337-72-6); 4-(2',4'-디클로로-4-시클로프로필[1,1'-비페닐]-3-일)-5-히드록시-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3(6H)-온 (CAS 1312337-45-3); 4-(4'-클로로-4-에틸-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-5-히드록시-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3(6H)-온 (CAS 1033757-93-5); 4-(2',4'-디클로로-4-에틸[1,1'-비페닐]-3-일)-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3,5(4H,6H)-디온 (CAS 1312340-84-3); 5-(아세틸옥시)-4-(4'-클로로-4-시클로프로필-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-3,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3-온 (CAS 1312337-48-6); 5-(아세틸옥시)-4-(2',4'-디클로로-4-시클로프로필-[1,1'-비페닐]-3-일)-3,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3-온; 5-(아세틸옥시)-4-(4'-클로로-4-에틸-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-3,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3-온 (CAS 1312340-82-1); 5-(아세틸옥시)-4-(2',4'-디클로로-4-에틸[1,1'-비페닐]-3-일)-3,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3-온 (CAS 1033760-55-2); 4-(4'-클로로-4-시클로프로필-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-5,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-5-옥소-2H-피란-3-일 탄산 메틸 에스테르 (CAS 1312337-51-1); 4-(2',4'-디클로로-4-시클로프로필-[1,1'-비페닐]-3-일)-5,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-5-옥소-2H-피란-3-일 탄산 메틸 에스테르; 4-(4'-클로로-4-에틸-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-5,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-5-옥소-2H-피란-3-일 탄산 메틸 에스테르 (CAS 1312340-83-2); 4-(2',4'-디클로로-4-에틸[1,1'-비페닐]-3-일)-5,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-5-옥소-2H-피란-3-일 탄산 메틸 에스테르 (CAS 1033760-58-5); 벤푸레세이트, 디메피페레이트, EPTC, 에스프로카르브, 에토푸메세이트, 몰리네이트, 오르벤카르브, 프로술포카르브, 티오벤카르브 및 트리알레이트;
b2) ALS 억제제 군으로부터의 것:
아미도술푸론, 아짐술푸론, 벤술푸론-메틸, 비스피리박-소듐, 클로리무론-에틸, 클로르술푸론, 클로란술람-메틸, 시클로술파무론, 디클로술람, 에타메트술프론-메틸, 에톡시술푸론, 플라자술푸론, 플로라술람, 플루카르바존-소듐, 플루세토술푸론, 플루메트술람, 플루피르술푸론-메틸-소듐, 포람술푸론, 할로술푸론-메틸, 이마자메타벤즈-메틸, 이마자목스, 이마자픽, 이마자피르, 이마자퀸, 이마제타피르, 이마조술푸론, 아이오도술푸론, 아이오도술푸론-메틸-소듐, 이오펜술푸론, 이오펜술푸론-소듐, 메소술푸론, 메타조술푸론, 메토술람, 메트술푸론-메틸, 니코술푸론, 오르토술파무론, 옥사술푸론, 페녹스술람, 프리미술푸론-메틸, 프로폭시카르바존-소듐, 프로피리술푸론, 프로술푸론, 피라조술푸론-에틸, 피리벤족심, 피리미술판, 피리프탈리드, 피리미노박-메틸, 피리티오박-소듐, 피록스술람, 림술푸론, 술포메투론-메틸, 술포술푸론, 티엔카르바존-메틸, 티펜술푸론-메틸, 트리아술푸론, 트리베누론-메틸, 트리플록시술푸론, 트리플루술푸론-메틸, 트리토술푸론 및 트리아파몬;
b3) 광합성 억제제 군으로부터의 것:
아메트린, 아미카르바존, 아트라진, 벤타존, 벤타존-소듐, 브로목시닐 및 그의 염 및 에스테르, 클로리다존, 클로로톨루론, 시아나진, 데스메디팜, 디쿼트-디브로마이드, 디우론, 플루오메투론, 헥사지논, 이옥시닐 및 그의 염 및 에스테르, 이소프로투론, 레나실, 리누론, 메타미트론, 메타벤즈티아주론, 메트리부진, 파라쿼트, 파라쿼트-디클로라이드, 펜메디팜, 프로파닐, 피리데이트, 시마진, 테르부트린, 테르부틸라진 및 티디아주론;
b4) 프로토포르피리노겐-IX 옥시다제 억제제 군으로부터의 것:
아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 아자페니딘, 벤카르바존, 벤즈펜디존, 부타페나실, 카르펜트라존-에틸, 시니돈-에틸, 플루펜피르-에틸, 플루미클로락-펜틸, 플루미옥사진, 플루오로글리코펜-에틸, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥사디아존, 옥시플루오르펜, 펜톡사존, 피라플루펜-에틸, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), N-에틸-3-(2,6-디클로로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452098-92-9), N-테트라히드로푸르푸릴-3-(2,6-디클로로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 915396-43-9), N-에틸-3-(2-클로로-6-플루오로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452099-05-7), N-테트라히드로푸르푸릴-3-(2-클로로-6-플루오로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452100-03-7), 3-[7-플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일]-1,5-디메틸-6-티옥소-[1,3,5]트리아지난-2,4-디온, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-4,5,6,7-테트라히드로-이소인돌-1,3-디온; 1-메틸-6-트리플루오로메틸-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-1H-피리미딘-2,4-디온, 및 3-[7-클로로-5-플루오로-2-(트리플루오로메틸)-1H-벤즈이미다졸-4-일]-1-메틸-6-(트리플루오로메틸)-1H-피리미딘-2,4-디온 (CAS 212754-02-4);
b5) 표백 제초제 군으로부터의 것:
아클로니펜, 베플루부타미드, 벤조비시클론, 클로마존, 디플루페니칸, 플루로클로리돈, 플루르타몬, 이속사플루톨, 메소트리온, 노르플루라존, 피콜리나펜, 피라술포톨, 피라졸리네이트, 술코트리온, 테푸릴트리온, 템보트리온, 토프라메존, 비시클로피론, 4-(3-트리플루오로메틸페녹시)-2-(4-트리플루오로메틸페닐)피리미딘 (CAS 180608-33-7), 아미트롤 및 플루메투론;
b6) EPSP 신타제 억제제 군으로부터의 것:
글리포세이트, 글리포세이트-이소프로필암모늄, 글리포세이트-포타슘 및 글리포세이트-트리메슘 (술포세이트);
b7) 글루타민 신타제 억제제 군으로부터의 것:
글루포시네이트, 글루포시네이트-P, 글루포시네이트-암모늄;
b8) DHP 신타제 억제제 군으로부터의 것: 아술람;
b9) 유사분열 억제제 군으로부터의 것:
벤플루랄린, 디티오피르, 에탈플루랄린, 오리잘린, 펜디메탈린, 티아조피르 및 트리플루랄린;
b10) VLCFA 억제제 군으로부터의 것:
아세토클로르, 알라클로르, 아닐로포스, 부타클로르, 카펜스트롤, 디메테나미드, 디메테나미드-P, 펜트라자미드, 플루페나세트, 메페나세트, 메타자클로르, 메톨라클로르, S-메톨라클로르, 나프로아닐리드, 나프로파미드, 프레틸라클로르, 페녹사술폰, 이프펜카르바존, 피록사술폰 테닐클로르 및 상기 언급된 바와 같은 화학식 II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 및 II.9의 이속사졸린-화합물;
b11) 셀룰로스 생합성 억제제 군으로부터의 것: 디클로베닐, 플루폭삼, 이속사벤 및 1-시클로헥실-5-펜타플루오르페닐옥시-14-[1,2,4,6]티아트리아진-3-일아민;
b13) 옥신 제초제 군으로부터의 것:
2,4-D 및 그의 염 및 에스테르, 아미노시클로피라클로르 및 그의 염 및 에스테르, 아미노피랄리드 및 그의 염, 예컨대 아미노피랄리드-트리스(2-히드록시프로필)암모늄 및 그의 에스테르, 클로피랄리드 및 그의 염 및 에스테르, 디캄바 및 그의 염 및 에스테르, 디클로로프로프-P 및 그의 염 및 에스테르, 플루록시피르-멥틸, 할록시펜 및 그의 염 및 에스테르 (CAS 943832-60-8), MCPA 및 그의 염 및 에스테르, MCPB 및 그의 염 및 에스테르, 메코프로프-P 및 그의 염 및 에스테르, 피클로람 및 그의 염 및 에스테르, 퀸클로락, 퀸메락 및 트리클로피르 및 그의 염 및 에스테르;
b14) 옥신 수송 억제제 군으로부터의 것: 디플루펜조피르 및 디플루펜조피르-소듐;
b15) 다른 제초제 군으로부터의 것: 브로모부티드, 신메틸린, 쿠밀루론, 시클로피리모레이트 (CAS 499223-49-3) 및 그의 염 및 에스테르, 달라폰, 디펜조쿼트, 디펜조쿼트-메틸술페이트, DSMA, 딤론 (= 다이무론), 플람프로프, 플람프로프-이소프로필, 플람프로프-메틸, 플람프로프-M-이소프로필, 플람프로프-M-메틸, 인다노판, 인다지플람, 메탐, 메틸브로마이드, MSMA, 옥사지클로메폰, 피리부티카르브, 트리아지플람 및 트리디판.
본 발명에 따라 PPO-억제 제초제와 함께 사용될 수 있는 특히 바람직한 제초제 B는 다음과 같다:
b1) 지질 생합성 억제제 군으로부터의 것: 클로디나포프-프로파르길, 시클록시딤, 시할로포프-부틸, 페녹사프로프-P-에틸, 피녹사덴, 프로폭시딤, 테프랄록시딤, 트랄콕시딤, 4-(4'-클로로-4-시클로프로필-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-5-히드록시-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3(6H)-온 (CAS 1312337-72-6); 4-(2',4'-디클로로-4-시클로프로필[1,1'-비페닐]-3-일)-5-히드록시-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3(6H)-온 (CAS 1312337-45-3); 4-(4'-클로로-4-에틸-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-5-히드록시-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3(6H)-온 (CAS 1033757-93-5); 4-(2',4'-디클로로-4-에틸[1,1'-비페닐]-3-일)-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3,5(4H,6H)-디온 (CAS 1312340-84-3); 5-(아세틸옥시)-4-(4'-클로로-4-시클로프로필-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-3,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3-온 (CAS 1312337-48-6); 5-(아세틸옥시)-4-(2',4'-디클로로-4-시클로프로필- [1,1'-비페닐]-3-일)-3,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3-온; 5-(아세틸옥시)-4-(4'-클로로-4-에틸-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-3,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3-온 (CAS 1312340-82-1); 5-(아세틸옥시)-4-(2',4'-디클로로-4-에틸[1,1'-비페닐]-3-일)-3,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-2H-피란-3-온 (CAS 1033760-55-2); 4-(4'-클로로-4-시클로프로필-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-5,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-5-옥소-2H-피란-3-일 탄산 메틸 에스테르 (CAS 1312337-51-1); 4-(2',4'-디클로로-4-시클로프로필-[1,1'-비페닐]-3-일)-5,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-5-옥소-2H-피란-3-일 탄산 메틸 에스테르; 4-(4'-클로로-4-에틸-2'-플루오로[1,1'-비페닐]-3-일)-5,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-5-옥소-2H-피란-3-일 탄산 메틸 에스테르 (CAS 1312340-83-2); 4-(2',4'-디클로로-4-에틸[1,1'-비페닐]-3-일)-5,6-디히드로-2,2,6,6-테트라메틸-5-옥소-2H-피란-3-일 탄산 메틸 에스테르 (CAS 1033760-58-5); 에스프로카르브, 프로술포카르브, 티오벤카르브 및 트리알레이트;
b2) ALS 억제제 군으로부터의 것: 벤술푸론-메틸, 비스피리박-소듐, 시클로술파무론, 디클로술람, 플루메트술람, 플루피르술푸론-메틸-소듐, 포람술푸론, 이마자목스, 이마자픽, 이마자피르, 이마자퀸, 이마제타피르, 이마조술푸론, 아이오도술푸론, 아이오도술푸론-메틸-소듐, 이오펜술푸론, 이오펜술푸론-소듐, 메소술푸론, 메타조술푸론, 니코술푸론, 페녹스술람, 프로폭시카르바존-소듐, 프로피리술푸론, 피라조술푸론-에틸, 피록스술람, 림술푸론, 술포술푸론, 티엔카르바존-메틸, 트리토술푸론 및 트리아파몬;
b3) 광합성 억제제 군으로부터의 것: 아메트린, 아트라진, 디우론, 플루오메투론, 헥사지논, 이소프로투론, 리누론, 메트리부진, 파라쿼트, 파라쿼트-디클로라이드, 프로파닐, 테르부트린 및 테르부틸라진;
b4) 프로토포르피리노겐-IX 옥시다제 억제제 군으로부터의 것: 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 3-[7-플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일]-1,5-디메틸-6-티옥소-[1,3,5]트리아지난-2,4-디온, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 및 2-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-4,5,6,7-테트라히드로-이소인돌-1,3-디온, 및 1-메틸-6-트리플루오로메틸-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-1H-피리미딘-2,4-디온;
b5) 표백 제초제 군으로부터의 것: 클로마존, 디플루페니칸, 플루로클로리돈, 이속사플루톨, 메소트리온, 피콜리나펜, 술코트리온, 테푸릴트리온, 템보트리온, 토프라메존, 비시클로피론, 아미트롤 및 플루메투론;
b6) EPSP 신타제 억제제 군으로부터의 것: 글리포세이트, 글리포세이트-이소프로필암모늄 및 글리포세이트-트리메슘 (술포세이트);
b7) 글루타민 신타제 억제제 군으로부터의 것: 글루포시네이트, 글루포시네이트-P 및 글루포시네이트-암모늄;
b9) 유사분열 억제제 군으로부터의 것: 펜디메탈린 및 트리플루랄린;
b10) VLCFA 억제제 군으로부터의 것: 아세토클로르, 카펜스트롤, 디메테나미드-P, 펜트라자미드, 플루페나세트, 메페나세트, 메타자클로르, 메톨라클로르, S-메톨라클로르, 페녹사술폰, 이프펜카르바존 및 피록사술폰; 마찬가지로, 상기 언급된 바와 같은 화학식 II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 및 II.9의 이속사졸린 화합물이 바람직함;
b11) 셀룰로스 생합성 억제제 군으로부터의 것: 이속사벤;
b13) 옥신 제초제 군으로부터의 것: 2,4-D 및 그의 염 및 에스테르, 예컨대 클라시포스, 및 아미노시클로피라클로르 및 그의 염 및 에스테르, 아미노피랄리드 및 그의 염 및 그의 에스테르, 클로피랄리드 및 그의 염 및 에스테르, 디캄바 및 그의 염 및 에스테르, 플루록시피르-멥틸, 퀸클로락 및 퀸메락;
b14) 옥신 수송 억제제 군으로부터의 것: 디플루펜조피르 및 디플루펜조피르-소듐,
b15) 다른 제초제 군으로부터의 것: 딤론 (= 다이무론), 인다노판, 인다지플람, 옥사지클로메폰 및 트리아지플람.
또한, PPO-억제 제초제를 상기 기재된 화합물 B와 함께 사용하는 경우에, 완화제와 함께 적용하는 것이 유용할 수 있다. 완화제는 원치않는 식물에 대한 제초제의 제초 작용에는 주요 영향을 미치지 않으면서, 유용한 식물에 대한 손상은 막거나 감소시키는 화학적 화합물이다. 이는 파종 이전에 (예를 들어 종자 처리물, 새싹 또는 묘목에), 유용한 식물의 출아전 적용 또는 출아후 적용으로 적용될 수 있다.
추가로, 완화제 C, PPO-억제 제초제 및/또는 제초제 B는 동시에 또는 연속적으로 적용될 수 있다.
적합한 완화제는, 예를 들어 (퀴놀린-8-옥시)아세트산, 1-페닐-5-할로알킬-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복실산, 1-페닐-4,5-디히드로-5-알킬-1H-피라졸-3,5-디카르복실산, 4,5-디히드로-5,5-디아릴-3-이속사졸 카르복실산, 디클로로아세트아미드, 알파-옥시미노페닐아세토니트릴, 아세토페노녹심, 4,6-디할로-2-페닐피리미딘, N-[[4-(아미노카르보닐)페닐]술포닐]-2-벤조산 아미드, 1,8-나프탈산 무수물, 2-할로-4-(할로알킬)-5-티아졸 카르복실산, 포스포르티올레이트 및 N-알킬-O-페닐카르바메이트 및 그의 농업상 허용되는 염 및 그의 농업상 허용되는 유도체, 예컨대 아미드, 에스테르 및 티오에스테르이며, 이들이 산성 기를 가질 것을 단서로 한다.
바람직한 완화제 C의 예는 베녹사코르, 클로퀸토세트, 시오메트리닐, 시프로술파미드, 디클로르미드, 디시클로논, 디에톨레이트, 펜클로라졸, 펜클로림, 플루라졸, 플룩소페님, 푸릴라졸, 이속사디펜, 메펜피르, 메페네이트, 나프탈산 무수물, 옥사베트리닐, 4-(디클로로아세틸)-1-옥사-4-아자스피로[4.5]데칸 (MON4660, CAS 71526-07-3) 및 2,2,5-트리메틸-3-(디클로로아세틸)-1,3-옥사졸리딘 (R-29148, CAS 52836-31-4)이다.
특히 바람직한 완화제 C는 베녹사코르, 클로퀸토세트, 시프로술파미드, 디클로르미드, 펜클로라졸, 펜클로림, 플루라졸, 플룩소페님, 푸릴라졸, 이속사디펜, 메펜피르, 나프탈산 무수물, 옥사베트리닐, 4-(디클로로아세틸)-1-옥사-4-아자스피로[4.5]데칸 (MON4660, CAS 71526-07-3) 및 2,2,5-트리메틸-3-(디클로로아세틸)-1,3-옥사졸리딘 (R-29148, CAS 52836-31-4)이다.
특히 바람직한 완화제 C는 베녹사코르, 클로퀸토세트, 시프로술파미드, 디클로르미드, 펜클로라졸, 펜클로림, 푸릴라졸, 이속사디펜, 메펜피르, 나프탈산 무수물, 4-(디클로로아세틸)-1-옥사-4-아자스피로[4.5]데칸 (MON4660, CAS 71526-07-3) 및 2,2,5-트리메틸-3-(디클로로아세틸)-1,3-옥사졸리딘 (R-29148, CAS 52836-31-4)이다.
또한, 바람직한 완화제 C는 베녹사코르, 클로퀸토세트, 시프로술파미드, 디클로르미드, 펜클로라졸, 펜클로림, 푸릴라졸, 이속사디펜, 메펜피르, 4-(디클로로아세틸)-1-옥사-4-아자스피로[4.5]데칸 (MON4660, CAS 71526-07-3) 및 2,2,5-트리메틸-3-(디클로로아세틸)-1,3-옥사졸리딘 (R-29148, CAS 52836-31-4)이다.
본 발명에 따른 조성물의 구성성분인 성분 C로서의 특히 바람직한 완화제 C는 상기 정의된 바와 같은 완화제 C; 특히 하기 표 C에 열거된 완화제 C.1 - C.12이다:
<표 C>
Figure pct00011
PPO-억제 제초제 및 군 b1) 내지 b15)의 활성 화합물 B 및 활성 화합물 C는 공지된 제초제 및 완화제이며, 예를 들어 문헌 [The Compendium of Pesticide Common Names (http://www.alanwood.net/pesticides/); Farm Chemicals Handbook 2000 volume 86, Meister Publishing Company, 2000; B. Hock, C. Fedtke, R. R. Schmidt, Herbizide [Herbicides], Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1995; W. H. Ahrens, Herbicide Handbook, 7th edition, Weed Science Society of America, 1994; 및 K. K. Hatzios, Herbicide Handbook, Supplement for the 7th edition, Weed Science Society of America, 1998]을 참조한다. 2,2,5-트리메틸-3-(디클로로아세틸)-1,3-옥사졸리딘 [CAS 번호 52836-31-4]은 또한 R-29148로서 지칭된다. 4-(디클로로아세틸)-1-옥사-4-아자스피로[4.5]데칸 [CAS 번호 71526-07-3]은 또한 AD-67 및 MON 4660으로서 지칭된다.
활성 화합물들의 각각의 작용 메카니즘에 대한 할당은 현재 지식을 기준으로 한다. 작용의 여러 메카니즘이 한 활성 화합물에 적용되는 경우에, 이 물질은 작용의 한 메카니즘에만 할당된다.
카르복실 기를 갖는 활성 화합물 B 및 C는 본 발명에 따른 조성물 중에 산의 형태, 상기 언급된 바와 같은 농업상 적합한 염의 형태 또는 달리 농업상 허용되는 유도체의 형태로 사용될 수 있다.
디캄바의 경우에, 적합한 염은 반대이온이 농업상 허용되는 양이온인 것을 포함한다. 예를 들어, 디캄바의 적합한 염은 디캄바-소듐, 디캄바-포타슘, 디캄바-메틸암모늄, 디캄바-디메틸암모늄, 디캄바-이소프로필암모늄, 디캄바-디글리콜아민, 디캄바-올라민, 디캄바-디올아민, 디캄바-트롤아민, 디캄바-N,N-비스-(3-아미노프로필)메틸아민 및 디캄바-디에틸렌트리아민이다. 적합한 에스테르의 예는 디캄바-메틸 및 디캄바-부토틸이다.
2,4-D의 적합한 염은 2,4-D-암모늄, 2,4-D-디메틸암모늄, 2,4-D-디에틸암모늄, 2,4-D-디에탄올암모늄 (2,4-D-디올아민), 2,4-D-트리에탄올암모늄, 2,4-D-이소프로필암모늄, 2,4-D-트리이소프로판올암모늄, 2,4-D-헵틸암모늄, 2,4-D-도데실암모늄, 2,4-D-테트라데실암모늄, 2,4-D-트리에틸암모늄, 2,4-D-트리스(2-히드록시프로필)암모늄, 2,4-D-트리스(이소프로필)암모늄, 2,4-D-트롤아민, 2,4-D-리튬, 2,4-D-소듐이다. 2,4-D의 적합한 에스테르의 예는 2,4-D-부토틸, 2,4-D-2-부톡시프로필, 2,4-D-3-부톡시프로필, 2,4-D-부틸, 2,4-D-에틸, 2,4-D-에틸헥실, 2,4-D-이소부틸, 2,4-D-이소옥틸, 2,4-D-이소프로필, 2,4-D-멥틸, 2,4-D-메틸, 2,4-D-옥틸, 2,4-D-펜틸, 2,4-D-프로필, 2,4-D-테푸릴 및 클라시포스이다.
2,4-DB의 적합한 염은, 예를 들어 2,4-DB-소듐, 2,4-DB-포타슘 및 2,4-DB-디메틸암모늄이다. 2,4-DB의 적합한 에스테르는, 예를 들어 2,4-DB-부틸 및 2,4-DB-이소옥틸이다.
디클로르프로프의 적합한 염은, 예를 들어 디클로르프로프-소듐, 디클로르프로프-포타슘 및 디클로르프로프-디메틸암모늄이다. 디클로르프로프의 적합한 에스테르의 예는 디클로르프로프-부토틸 및 디클로르프로프-이소옥틸이다.
MCPA의 적합한 염 및 에스테르는 MCPA-부토틸, MCPA-부틸, MCPA-디메틸암모늄, MCPA-디올아민, MCPA-에틸, MCPA-티오에틸, MCPA-2-에틸헥실, MCPA-이소부틸, MCPA-이소옥틸, MCPA-이소프로필, MCPA-이소프로필암모늄, MCPA-메틸, MCPA-올라민, MCPA-포타슘, MCPA-소듐 및 MCPA-트롤아민을 포함한다.
MCPB의 적합한 염은 MCPB 나트륨이다. MCPB의 적합한 에스테르는 MCPB-에틸이다.
클로피랄리드의 적합한 염은 클로피랄리드-포타슘, 클로피랄리드-올라민 및 클로피랄리드-트리스-(2-히드록시프로필)암모늄이다. 클로피랄리드의 적합한 에스테르의 예는 클로피랄리드-메틸이다.
플루록시피르의 적합한 에스테르의 예는 플루록시피르-멥틸 및 플루록시피르-2-부톡시-1-메틸에틸이며, 플루록시피르-멥틸이 바람직하다.
피클로람의 적합한 염은 피클로람-디메틸암모늄, 피클로람-포타슘, 피클로람-트리프로판올암모늄, 피클로람-트리이소프로필암모늄 및 피클로람-트롤아민이다. 피클로람의 적합한 에스테르는 피클로람-이소옥틸이다.
트리클로피르의 적합한 염은 트리클로피르-트리에틸암모늄이다. 트리클로피르의 적합한 에스테르는, 예를 들어 트리클로피르-에틸 및 트리클로피르-부토틸이다.
클로람벤의 적합한 염 및 에스테르는 클로람벤-암모늄, 클로람벤-디올아민, 클로람벤-메틸, 클로람벤-메틸암모늄 및 클로람벤-소듐을 포함한다. 2,3,6-TBA의 적합한 염 및 에스테르는 2,3,6-TBA-디메틸암모늄, 2,3,6-TBA-리튬, 2,3,6-TBA-포타슘 및 2,3,6-TBA-소듐을 포함한다.
아미노피랄리드의 적합한 염 및 에스테르는 아미노피랄리드-포타슘 및 아미노피랄리드-트리스(2-히드록시프로필)암모늄을 포함한다.
글리포세이트의 적합한 염은, 예를 들어 글리포세이트-암모늄, 글리포세이트-디암모늄, 글리포세이트-디메틸암모늄, 글리포세이트-이소프로필암모늄, 글리포세이트-포타슘, 글리포세이트-소듐, 글리포세이트-트리메슘 뿐만 아니라 에탄올아민 및 디에탄올아민 염, 바람직하게는 글리포세이트-디암모늄, 글리포세이트-이소프로필암모늄 및 글리포세이트-트리메슘 (술포세이트)이다.
글루포시네이트의 적합한 염은 예를 들어 글루포시네이트-암모늄이다.
글루포시네이트-P의 적합한 염은 예를 들어 글루포시네이트-P-암모늄이다.
브로목시닐의 적합한 염 및 에스테르는, 예를 들어 브로목시닐-부티레이트, 브로목시닐-헵타노에이트, 브로목시닐-옥타노에이트, 브로목시닐-포타슘 및 브로목시닐-소듐이다.
이옥소닐의 적합한 염 및 에스테르는, 예를 들어 이옥소닐-옥타노에이트, 이옥소닐-포타슘 및 이옥소닐-소듐이다.
메코프로프의 적합한 염 및 에스테르는 메코프로프-부토틸, 메코프로프-디메틸암모늄, 메코프로프-디올아민, 메코프로프-에타딜, 메코프로프-2-에틸헥실, 메코프로프-이소옥틸, 메코프로프-메틸, 메코프로프-포타슘, 메코프로프-소듐 및 메코프로프-트롤아민을 포함한다.
메코프로프-P의 적합한 염은, 예를 들어 메코프로프-P-부토틸, 메코프로프-P-디메틸암모늄, 메코프로프-P-2-에틸헥실, 메코프로프-P-이소부틸, 메코프로프-P-포타슘 및 메코프로프-P-소듐이다.
디플루펜조피르의 적합한 염은 예를 들어 디플루펜조피르-소듐이다.
나프탈람의 적합한 염은 예를 들어 나프탈람-소듐이다.
아미노시클로피라클로르의 적합한 염 및 에스테르는, 예를 들어 아미노시클로피라클로르-디메틸암모늄, 아미노시클로피라클로르-메틸, 아미노시클로피라클로르-트리프로판올암모늄, 아미노시클로피라클로르-소듐 및 아미노시클로피라클로르-포타슘이다.
퀸클로락의 적합한 염은 예를 들어 퀸클로락-디메틸암모늄이다.
퀸메락의 적합한 염은 예를 들어 퀸클로락-디메틸암모늄이다.
이마자목스의 적합한 염은 예를 들어 이마자목스-암모늄이다.
이마자픽의 적합한 염은 예를 들어 이마자픽-암모늄 및 이마자픽-이소프로필암모늄이다.
이마자피르의 적합한 염은 예를 들어 이마자피르-암모늄 및 이마자피르-이소프로필암모늄이다.
이마자퀸의 적합한 염은 예를 들어 이마자퀸-암모늄이다.
이마제타피르의 적합한 염은 예를 들어 이마제타피르-암모늄 및 이마제타피르-이소프로필암모늄이다.
토프라메존의 적합한 염은 예를 들어 토프라메존-소듐이다.
하기 본원에 언급된 본 발명의 바람직한 실시양태는 서로 독립적으로 또는 서로 조합하여 바람직한 것으로서 이해되어야 한다.
본 발명의 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 성분 B로서 적어도 1종, 바람직하게는 정확하게 1종의 제초제 B를 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 적어도 2종, 바람직하게는 정확하게 2종의 서로 상이한 제초제 B를 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 적어도 3종, 바람직하게는 정확하게 3종의 서로 상이한 제초제 B를 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 성분 A로서 적어도 1종, 바람직하게는 정확하게 1종의 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100; 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 및 성분 B로서 적어도 1종, 바람직하게는 정확하게 1종의 제초제 B를 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 성분 A로서 적어도 1종, 바람직하게는 정확하게 1종의 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 및 적어도 2종, 바람직하게는 정확하게 2종의 서로 상이한 제초제 B를 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 성분 A로서 적어도 1종, 바람직하게는 정확하게 1종의 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 및 적어도 3종, 바람직하게는 정확하게 3종의 서로 상이한 제초제 B를 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b1)로부터의, 특히 클레토딤, 클로디나포프-프로파르길, 시클록시딤, 시할로포프-부틸, 페녹사프로프-P-에틸, 플루아지포프, 피녹사덴, 프로폭시딤, 퀴잘로포프, 세톡시딤, 테프랄록시딤, 트랄콕시딤, 에스프로카르브, 프로술포카르브, 티오벤카르브 및 트리알레이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b2)로부터의, 특히 벤술푸론-메틸, 비스피리박-소듐, 클로란술람-메틸, 시클로술파무론, 디클로술람, 플루메트술람, 플루피르술푸론-메틸-소듐, 포람술푸론, 할로술푸론-메틸, 이마자목스, 이마자픽, 이마자피르, 이마자퀸, 이마제타피르, 이마조술푸론, 아이오도술푸론, 아이오도술푸론-메틸-소듐, 메소술푸론-메틸, 메타조술푸론, 니코술푸론, 페녹스술람, 프로폭시카르바존-소듐, 피라조술푸론-에틸, 피리티오박-소듐, 피록스술람, 림술푸론, 술포술푸론, 티엔카르바존-메틸, 티펜술푸론-메틸, 트리플록시술푸론 및 트리토술푸론으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b3)으로부터의, 특히 아메트린, 아트라진, 벤타존, 브로목시닐, 디우론, 플루오메투론, 헥사지논, 이소프로투론, 리누론, 메트리부진, 파라쿼트, 파라쿼트-디클로라이드, 프로메트린, 프로파닐, 테르부트린 및 테르부틸라진으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b4)로부터의, 특히 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 아자페니딘, 벤카르바존, 벤즈펜디존, 비페녹스, 부타페나실, 카르펜트라존, 카르펜트라존-에틸, 클로메톡시펜, 시니돈-에틸, 플루아졸레이트, 플루펜피르, 플루펜피르-에틸, 플루미클로락, 플루미클로락-펜틸, 플루미옥사진, 플루오로글리코펜, 플루오로글리코펜-에틸, 플루티아세트, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 할로사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥사디아존, 옥시플루오르펜, 펜톡사존, 프로플루아졸, 피라클로닐, 피라플루펜, 피라플루펜-에틸, 사플루페나실, 술펜트라존, 티디아지민, 티아페나실, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), N-에틸-3-(2,6-디클로로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452098-92-9), N-테트라히드로푸르푸릴-3-(2,6-디클로로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 915396-43-9), N-에틸-3-(2-클로로-6-플루오로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452099-05-7), N-테트라히드로푸르푸릴-3-(2-클로로-6-플루오로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452100-03-7), 3-[7-플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일]-1,5-디메틸-6-티옥소-[1,3,5]트리아지난-2,4-디온, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-4,5,6,7-테트라히드로-이소인돌-1,3-디온, 1-메틸-6-트리플루오로메틸-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-1H-피리미딘-2,4-디온, 메틸 (E)-4-[2-클로로-5-[4-클로로-5-(디플루오로메톡시)-1H-메틸-피라졸-3-일]-4-플루오로-페녹시]-3-메톡시-부트-2-에노에이트 [CAS 948893-00-3], 3-[7-클로로-5-플루오로-2-(트리플루오로메틸)-1H-벤즈이미다졸-4-일]-1-메틸-6-(트리플루오로메틸)-1H-피리미딘-2,4-디온 (CAS 212754-02-4)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b5)로부터의, 특히 클로마존, 디플루페니칸, 플루로클로리돈, 이속사플루톨, 메소트리온, 피콜리나펜, 술코트리온, 테푸릴트리온, 템보트리온, 토프라메존, 비시클로피론, 아미트롤 및 플루메투론으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b6)으로부터의, 특히 글리포세이트, 글리포세이트-이소프로필암모늄 및 글리포세이트-트리메슘 (술포세이트)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b7)로부터의, 특히 글루포시네이트, 글루포시네이트-P 및 글루포시네이트-암모늄으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b9)로부터의, 특히 펜디메탈린 및 트리플루랄린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b10)으로부터의, 특히 아세토클로르, 카펜스트롤, 디메테나미드-P, 펜트라자미드, 플루페나세트, 메페나세트, 메타자클로르, 메톨라클로르, S-메톨라클로르, 페녹사술폰 및 피록사술폰으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함한다.
마찬가지로, PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b10)으로부터의, 특히 상기 정의된 바와 같은 화학식 II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 및 II.9의 이속사졸린 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함하는 조성물이 바람직하다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b13)으로부터의, 특히 2,4-D 및 그의 염 및 에스테르, 아미노시클로피라클로르 및 그의 염 및 에스테르, 아미노피랄리드 및 그의 염, 예컨대 아미노피랄리드-트리스(2-히드록시프로필)암모늄 및 그의 에스테르, 클로피랄리드 및 그의 염 및 에스테르, 디캄바 및 그의 염 및 에스테르, 플루록시피르-멥틸, 퀸클로락 및 퀸메락으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b14)로부터의, 특히 디플루펜조피르 및 디플루펜조피르-소듐으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태에 따르면, 조성물은 PPO A, 바람직하게는 아시플루오르펜, 아시플루오르펜-소듐, 부타페나실, 시니돈-에틸, 카르펜트라존-에틸, 플루미옥사진, 플루티아세트-메틸, 포메사펜, 락토펜, 옥사디아르길, 옥시플루오르펜, 사플루페나실, 술펜트라존, 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4), 특히 바람직하게는 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)에 더하여, 군 b15)로부터의, 특히 딤론 (= 다이무론), 인다노판, 인다지플람, 옥사지클로메폰 및 트리아지플람으로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 1종 및 특히 정확하게 1종의 제초 활성 화합물을 포함한다.
여기서 및 하기에서, 용어 "2원 조성물"은 1종 이상, 예를 들어 1, 2 또는 3종의 PPO A의 활성 화합물, 및 또한 1종 이상, 예를 들어 1, 2 또는 3종의 제초제 B를 포함하는 조성물을 포함한다.
성분 A로서 적어도 1종의 PPO 및 적어도 1종의 제초제 B를 포함하는 2원 조성물에서, 활성 화합물 A:B의 중량비는 일반적으로 1:1000 내지 1000:1의 범위, 바람직하게는 1:500 내지 500:1의 범위, 특히 1:250 내지 250:1의 범위, 및 특히 바람직하게는 1:75 내지 75:1의 범위이다.
특히 바람직한 제초제 B는 상기 정의된 바와 같은 제초제 B; 특히 하기 표 B에 열거된 제초제 B.1 - B.229이다:
<표 B>
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
아시플루오르펜, 및 표 B-1의 각각의 행에 정의된 바와 같은 물질(들)을 포함하는 조성물 1.1 내지 1.229가 특히 바람직하다:
<표 B-1> (조성물 1.1 내지 1.229):
Figure pct00017
Figure pct00018
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 아시플루오르펜-소듐을 포함하는 점만이 상이한 조성물 2.1. 내지 2.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 아자페니딘을 포함하는 점만이 상이한 조성물 3.1. 내지 3.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 벤카르바존을 포함하는 점만이 상이한 조성물 4.1. 내지 4.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 벤즈펜디존을 포함하는 점만이 상이한 조성물 5.1. 내지 5.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 비페녹스를 포함하는 점만이 상이한 조성물 6.1. 내지 6.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.227과, 성분 A로서 부타페나실을 포함하는 점만이 상이한 조성물 7.1. 내지 7.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 카르펜트라존을 포함하는 점만이 상이한 조성물 8.1. 내지 8.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 카르펜트라존-에틸을 포함하는 점만이 상이한 조성물 9.1. 내지 9.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 클로메톡시펜을 포함하는 점만이 상이한 조성물 10.1. 내지 10.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 시니돈-에틸을 포함하는 점만이 상이한 조성물 11.1. 내지 11.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 플루아졸레이트를 포함하는 점만이 상이한 조성물 12.1. 내지 12.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 플루펜피르를 포함하는 점만이 상이한 조성물 13.1. 내지 13.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 플루펜피르-에틸을 포함하는 점만이 상이한 조성물 14.1. 내지 14.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 플루미클로락을 포함하는 점만이 상이한 조성물 15.1. 내지 15.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 플루미클로락-펜틸을 포함하는 점만이 상이한 조성물 16.1. 내지 16.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 플루미옥사진을 포함하는 점만이 상이한 조성물 17.1. 내지 17.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 플루오로글리코펜을 포함하는 점만이 상이한 조성물 18.1. 내지 18.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 플루오로글리코펜-에틸을 포함하는 점만이 상이한 조성물 19.1. 내지 19.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 플루티아세트를 포함하는 점만이 상이한 조성물 20.1. 내지 20.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 플루티아세트-메틸을 포함하는 점만이 상이한 조성물 21.1. 내지 21.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 포메사펜을 포함하는 점만이 상이한 조성물 22.1. 내지 22.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 할로사펜을 포함하는 점만이 상이한 조성물 23.1. 내지 23.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 락토펜을 포함하는 점만이 상이한 조성물 24.1. 내지 24.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 옥사디아르길을 포함하는 점만이 상이한 조성물 25.1. 내지 25.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 옥사디아존을 포함하는 점만이 상이한 조성물 26.1. 내지 26.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 옥시플루오르펜을 포함하는 점만이 상이한 조성물 27.1. 내지 27.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 펜톡사존을 포함하는 점만이 상이한 조성물 28.1. 내지 28.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 프로플루아졸을 포함하는 점만이 상이한 조성물 29.1. 내지 29.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 피라클로닐을 포함하는 점만이 상이한 조성물 30.1. 내지 30.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 피라플루펜을 포함하는 점만이 상이한 조성물 31.1. 내지 31.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 피라플루펜-에틸을 포함하는 점만이 상이한 조성물 32.1. 내지 32.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 사플루페나실을 포함하는 점만이 상이한 조성물 33.1. 내지 33.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 술펜트라존을 포함하는 점만이 상이한 조성물 34.1. 내지 34.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 티디아지민을 포함하는 점만이 상이한 조성물 35.1. 내지 35.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 티아페나실을 포함하는 점만이 상이한 조성물 36.1. 내지 36.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 에틸 [3-[2-클로로-4-플루오로-5-(1-메틸-6-트리플루오로메틸-2,4-디옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리미딘-3-일)페녹시]-2-피리딜옥시]아세테이트 (CAS 353292-31-6; S-3100)를 포함하는 점만이 상이한 조성물 37.1. 내지 37.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 (CAS 1258836-72-4)을 포함하는 점만이 상이한 조성물 38.1. 내지 38.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 N-에틸-3-(2,6-디클로로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452098-92-9)를 포함하는 점만이 상이한 조성물 39.1. 내지 39.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 N-테트라히드로푸르푸릴-3-(2,6-디클로로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 915396-43-9)를 포함하는 점만이 상이한 조성물 40.1. 내지 40.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 N-에틸-3-(2-클로로-6-플루오로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452099-05-7)를 포함하는 점만이 상이한 조성물 41.1. 내지 41.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 N-테트라히드로푸르푸릴-3-(2-클로로-6-플루오로-4-트리플루오로메틸페녹시)-5-메틸-1H-피라졸-1-카르복스아미드 (CAS 452100-03-7)를 포함하는 점만이 상이한 조성물 42.1. 내지 42.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 3-[7-플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일]-1,5-디메틸-6-티옥소-[1,3,5]트리아지난-2,4-디온을 포함하는 점만이 상이한 조성물 43.1. 내지 43.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 메틸 (E)-4-[2-클로로-5-[4-클로로-5-(디플루오로메톡시)-1H-메틸-피라졸-3-일]-4-플루오로-페녹시]-3-메톡시-부트-2-에노에이트 (CAS 948893-00-3)를 포함하는 점만이 상이한 조성물 44.1. 내지 44.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 3-[7-클로로-5-플루오로-2-(트리플루오로메틸)-1H-벤즈이미다졸-4-일]-1-메틸-6-(트리플루오로메틸)-1H-피리미딘-2,4-디온 (CAS 212754-02-4)을 포함하는 점만이 상이한 조성물 45.1. 내지 45.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 2-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-4,5,6,7-테트라히드로-이소인돌-1,3-디온을 포함하는 점만이 상이한 조성물 46.1. 내지 46.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 성분 A로서 1-메틸-6-트리플루오로메틸-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-프로프-2-이닐-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일)-1H-피리미딘-2,4-디온을 포함하는 점만이 상이한 조성물 47.1. 내지 47.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 완화제 C로서 베녹사코르를 추가로 포함하는 점만이 상이한 조성물 48.1. 내지 48.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 완화제 C로서 클로퀸토세트를 추가로 포함하는 점만이 상이한 조성물 49.1. 내지 49.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 완화제 C로서 시프로술파미드를 추가로 포함하는 점만이 상이한 조성물 50.1. 내지 50.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 완화제 C로서 디클로르미드를 추가로 포함하는 점만이 상이한 조성물 51.1. 내지 51.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 완화제 C로서 펜클로라졸을 추가로 포함하는 점만이 상이한 조성물 52.1. 내지 52.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 완화제 C로서 펜클로림을 추가로 포함하는 점만이 상이한 조성물 53.1. 내지 53.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 완화제 C로서 푸릴라졸을 추가로 포함하는 점만이 상이한 조성물 54.1. 내지 54.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 완화제 C로서 이속사디펜을 추가로 포함하는 점만이 상이한 조성물 55.1. 내지 55.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 완화제 C로서 메펜피르를 추가로 포함하는 점만이 상이한 조성물 56.1. 내지 56.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 완화제 C로서 4-(디클로로아세틸)-1-옥사-4-아자스피로[4.5]데칸 (MON4660, CAS 71526-07-3)을 추가로 포함하는 점만이 상이한 조성물 57.1. 내지 57.229가 특히 바람직하다.
또한, 상응하는 조성물 1.1 내지 1.229와, 완화제 C로서 2,2,5-트리메틸-3-(디클로로아세틸)-1,3-옥사졸리딘 (R-29148, CAS 52836-31-4)을 추가로 포함하는 점만이 상이한 조성물 58.1. 내지 58.229가 특히 바람직하다.
본 발명의 화합물은, 처리되는 작물에 대해 선택적이고, 사용되는 적용률로 이들 화합물에 의해 방제되는 잡초의 범위를 보완하는 제초제와 함께 사용되는 것이 일반적으로 바람직하다. 추가로, 본 발명의 화합물 및 다른 보완적 제초제를 조합 제제로서 또는 탱크 믹스로서 동시에 적용하는 것이 일반적으로 바람직하다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드 분자 및 폴리펩티드는 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45에 기재된 뉴클레오티드 서열, 또는 서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 또는 46에 기재된 아미노산 서열과 충분히 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드 분자 및 폴리펩티드를 포괄하는 것으로 인식된다. 용어 "충분히 동일한"은 제1 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열이 제2 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열과 충분한 또는 최소한의 개수로 동일하거나 등가인 (예를 들어, 유사한 측쇄를 갖는) 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 함유함으로써 제1 및 제2 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열이 공통의 구조 도메인 및/또는 공통의 기능적 활성을 갖는 것을 지칭하는 것으로 본원에서 사용된다.
일반적으로, "서열 동일성"은 최적으로 정렬된 2개의 DNA 또는 아미노산 서열이, 예를 들어 뉴클레오티드 또는 아미노산 성분의 정렬 윈도우 전역에 걸쳐 불변인 정도를 지칭한다. 시험 서열과 참조 서열의 정렬된 절편에 대한 "동일성 분율"은 정렬된 2개의 서열이 공유하는 동일한 성분의 개수를 참조 서열 절편, 즉 전체 참조 서열 또는 참조 서열 중 정의된 보다 작은 부분에 있는 성분의 총 개수로 나눈 것이다. "퍼센트 동일성"은 동일성 분율 x 100이다. 비교 윈도우를 정렬하기 위한 최적의 서열 정렬은 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 스미스(Smith) 및 워터만(Waterman)의 국부 상동성 알고리즘, 니들만(Needleman) 및 운쉬(Wunsch)의 상동성 정렬 알고리즘, 피어슨(Pearson) 및 립만(Lipman)의 유사성 검색 방법과 같은 도구에 의해, 및 바람직하게는 이들 알고리즘의 컴퓨터화된 실행, 예컨대 GCG의 일부로서 이용가능한 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA에 의해 수행될 수 있다. 위스콘신 패키지(Wisconsin Package). (액셀리스 인크.(Accelrys Inc.) 매사추세츠주 벌링톤).
폴리뉴클레오티드 및 올리고뉴클레오티드
단일 또는 이중 가닥의, 센스 또는 안티센스 배향 또는 양쪽의 조합의, dsRNA 또는 그 외의 DNA, RNA 또는 이들의 조합을 포함하는 "단리된 폴리뉴클레오티드"는 천연 상태에서 회합되거나 연결되어 있는 폴리뉴클레오티드 서열로부터 적어도 부분적으로 분리된 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 바람직하게는, 단리된 폴리뉴클레오티드는 그들이 자연적으로 회합되어 있는 다른 성분으로부터 적어도 60% 유리, 바람직하게는 적어도 75% 유리되고, 가장 바람직하게는 적어도 90% 유리된다. 숙련된 통상의 기술자가 알고 있을 바와 같이, 단리된 폴리뉴클레오티드는, 예를 들어 자연적으로는 폴리뉴클레오티드를 포함하지 않는 트랜스제닉 유기체 내에 존재하는 외인성 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 또한, 용어 "폴리뉴클레오티드(들)", "핵산 서열(들)", "뉴클레오티드 서열(들)", "핵산(들)", "핵산 분자"는 본원에서 상호교환가능하게 사용되며, 리보뉴클레오티드 또는 데옥시리보뉴클레오티드 또는 양쪽의 조합의, 임의의 길이의 비분지형 중합체 형태인 뉴클레오티드를 지칭한다.
용어 "mut-PPO 핵산"은 야생형 PPO 핵산으로부터 돌연변이되고, 증가된 PPO-억제 제초제 내성을 발현되는 식물에게 부여하는 서열을 갖는 PPO 핵산을 지칭한다. 또한, 용어 "돌연변이된 프로토포르피리노겐 옥시다제 (mut-PPO)"는 서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 또는 46의 야생형 일차 서열 또는 그의 변이체, 유도체, 상동체, 오르토로그 또는 파라로그의 아미노산이 또 다른 아미노산으로 대체된 것을 지칭한다. 표현 "돌연변이된 아미노산"은 이하에서 또 다른 아미노산에 의해 대체된 아미노산을 지정하고, 이로써 단백질의 일차 서열에서 돌연변이 부위를 지정하는데 사용될 것이다.
바람직한 실시양태에서, PPO 뉴클레오티드 서열은 서열 1, 25, 37 또는 39의 서열 또는 그의 변이체 또는 유도체를 포함한다.
또한, 통상의 기술자는 PPO 뉴클레오티드 서열이 하기 정의된 바와 같은 서열 1, 25, 37 또는 39의 상동체, 파라로그 및 오르토로그를 포괄한다는 것을 이해할 것이다.
서열 (예를 들어, 폴리펩티드 또는 핵산 서열, 예컨대 - 예를 들어 - 본 발명의 전사 조절 뉴클레오티드 서열)과 관련하여 용어 "변이체"는 실질적으로 유사한 서열을 의미하는 것으로 의도된다. 오픈 리딩 프레임을 포함하는 뉴클레오티드 서열의 경우에, 변이체는 유전자 코드의 축중성으로 인해 천연 단백질의 동일한 아미노산 서열을 코딩하는 서열을 포함한다. 이들과 같은 자연 발생 대립유전자 변이체는 널리 공지된 분자 생물학 기술, 예를 들어 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) 및 혼성화 기술을 사용하여 확인될 수 있다. 변이체 뉴클레오티드 서열은 또한, 예를 들어 부위 지정 돌연변이유발을 사용하여 생성된 것과 같은 합성적으로 유래된 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 오픈 리딩 프레임의 경우에, 천연 단백질을 코딩할 뿐만 아니라, 천연 단백질과 비교하여 아미노산 치환을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 합성적으로 유래된 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일반적으로, 본 발명의 뉴클레오티드 서열 변이체는 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45의 뉴클레오티드 서열과 적어도 30, 40, 50, 60 내지 70%, 예를 들어 바람직하게는 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78% 내지 79%, 일반적으로는 적어도 80%, 예를 들어 81%-84%, 적어도 85%, 예를 들어 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% 내지 98% 및 99%의 뉴클레오티드 "서열 동일성"을 가질 것이다. 폴리뉴클레오티드의 % 동일성은 GAP (Needleman and Wunsch, 1970) 분석 (GCG 프로그램)에 의해 갭 생성 패널티=5 및 갭 연장 패널티=0.3으로 결정된다. 달리 언급되지 않는 한, 질의 서열은 적어도 45개 뉴클레오티드 길이이고, GAP 분석은 적어도 45개의 뉴클레오티드 영역에 걸쳐 2개의 서열을 정렬한다. 바람직하게는, 질의 서열은 적어도 150개 뉴클레오티드 길이이고, GAP 분석은 적어도 150개의 뉴클레오티드 영역에 걸쳐 2개의 서열을 정렬한다. 보다 바람직하게는, 질의 서열은 적어도 300개 뉴클레오티드 길이이고, GAP 분석은 적어도 300개의 뉴클레오티드 영역에 걸쳐 2개의 서열을 정렬한다. 보다 더 바람직하게는, GAP 분석은 전체 길이에 걸쳐 2개의 서열을 정렬한다.
폴리펩티드
"실질적으로 정제된 폴리펩티드" 또는 "정제된" 폴리펩티드는 천연 상태에서 회합되어 있는 1종 이상의 지질, 핵산, 다른 폴리펩티드 또는 다른 오염 분자로부터 분리된 것을 의미한다. 실질적으로 정제된 폴리펩티드는 그것이 자연적으로 회합되어 있는 다른 성분으로부터 적어도 60% 유리, 보다 바람직하게는 적어도 75% 유리, 및 보다 바람직하게는 적어도 90% 유리된 것이 바람직하다. 숙련된 통상의 기술자가 인식할 것과 같이, 정제된 폴리펩티드는 재조합적으로 생산된 폴리펩티드일 수 있다. 용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 일반적으로 상호교환가능하게 사용되며, 비-아미노산 기의 추가에 의해 변형되거나 변형되지 않을 수 있는 단일 폴리펩티드 쇄를 지칭한다. 이러한 폴리펩티드 쇄는 다른 폴리펩티드 또는 단백질 또는 다른 분자, 예컨대 보조-인자와 함께 회합될 수 있음을 이해할 것이다. 본원에 사용된 용어 "단백질" 및 "폴리펩티드"는 또한 본원에 기재된 바와 같은 본 발명의 폴리펩티드의 변이체, 돌연변이체, 변형체, 유사체 및/또는 유도체를 포함한다.
폴리펩티드의 % 동일성은 GAP (Needleman and Wunsch, 1970) 분석 (GCG 프로그램)에 의해 갭 생성 패널티=5 및 갭 연장 패널티=0.3으로 결정된다. 질의 서열은 적어도 25개 아미노산 길이이고, GAP 분석은 적어도 25개의 아미노산 영역에 걸쳐 2개의 서열을 정렬한다. 보다 바람직하게는, 질의 서열은 적어도 50개 아미노산 길이이고, GAP 분석은 적어도 50개의 아미노산 영역에 걸쳐 2개의 서열을 정렬한다. 보다 바람직하게는, 질의 서열은 적어도 100개 아미노산 길이이고, GAP 분석은 적어도 100개의 아미노산 영역에 걸쳐 2개의 서열을 정렬한다. 보다 더 바람직하게는, 질의 서열은 적어도 250개 아미노산 길이이고, GAP 분석은 적어도 250개의 아미노산 영역에 걸쳐 2개의 서열을 정렬한다. 보다 더 바람직하게는, GAP 분석은 전체 길이에 걸쳐 2개의 서열을 정렬한다.
정의된 폴리펩티드와 관련하여, 상기 제공된 것보다 더 높은 % 동일성 수치는 바람직한 실시양태를 포괄할 것임을 인식할 것이다. 따라서, 적용가능한 경우에, 최소 % 동일성 수치를 고려하여, 본 발명의 PPO 폴리펩티드는 서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 또는 46과 적어도 40%, 보다 바람직하게는 적어도 45%, 보다 바람직하게는 적어도 50%, 보다 바람직하게는 적어도 55%, 보다 바람직하게는 적어도 60%, 보다 바람직하게는 적어도 65%, 보다 바람직하게는 적어도 70%, 보다 바람직하게는 적어도 75%, 보다 바람직하게는 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 85%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 91%, 보다 바람직하게는 적어도 92%, 보다 바람직하게는 적어도 93%, 보다 바람직하게는 적어도 94%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 보다 바람직하게는 적어도 96%, 보다 바람직하게는 적어도 97%, 보다 바람직하게는 적어도 98%, 보다 바람직하게는 적어도 99%, 보다 바람직하게는 적어도 99.1%, 보다 바람직하게는 적어도 99.2%, 보다 바람직하게는 적어도 99.3%, 보다 바람직하게는 적어도 99.4%, 보다 바람직하게는 적어도 99.5%, 보다 바람직하게는 적어도 99.6%, 보다 바람직하게는 적어도 99.7%, 보다 바람직하게는 적어도 99.8%, 및 보다 더 바람직하게는 적어도 99.9% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것이 바람직하다.
"변이체" 폴리펩티드는 천연 단백질의 N-말단 및/또는 C-말단 끝의 결실 (소위 말단절단) 또는 1개 이상의 아미노산의 부가; 천연 단백질 내의 1개 이상의 부위에서의 1개 이상의 아미노산의 결실 또는 부가; 또는 천연 단백질 내의 1개 이상의 부위에서의 1개 이상의 아미노산의 치환에 의해 서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 또는 46의 단백질로부터 유래된 폴리펩티드를 의도한다. 이러한 변이체는, 예를 들어 유전자 다형성으로부터 또는 인간 조작으로부터 야기될 수 있다. 이러한 조작 방법은 일반적으로 관련 기술분야에 공지되어 있다.
단백질의 "유도체"는 변형되지 않은 해당 단백질과 비교하여 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 그것이 유래된 변형되지 않은 단백질과 유사한 생물학적 및 기능적 활성을 갖는 펩티드, 올리고펩티드, 폴리펩티드, 단백질 및 효소를 포괄한다.
단백질의 "상동체"는 변형되지 않은 해당 단백질과 비교하여 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖고, 그것이 유래된 변형되지 않은 단백질과 유사한 생물학적 및 기능적 활성을 갖는 펩티드, 올리고펩티드, 폴리펩티드, 단백질 및 효소를 포괄한다.
결실은 단백질로부터 1개 이상의 아미노산의 제거를 지칭한다.
삽입은 1개 이상의 아미노산 잔기가 단백질 내의 예정 부위로 도입된 것을 지칭한다. 삽입은 N-말단 및/또는 C-말단 융합 뿐만 아니라 단일 또는 다중 아미노산의 서열내 삽입도 포함할 수 있다. 일반적으로, 아미노산 서열 내의 삽입은 N- 또는 C-말단 융합보다 약 1 내지 10개 잔기 정도만큼 작을 것이다. N- 또는 C-말단 융합 단백질 또는 펩티드의 예는 효소의 2-하이브리드 시스템에서 사용되는 것과 같은 전사 활성화제의 결합 도메인 또는 활성화 도메인, 파지 코트 단백질, (히스티딘)-6-태그, 글루타티온 S-트랜스퍼라제-태그, 단백질 A, 말토스-결합 단백질, 디히드로폴레이트 리덕타제, 태그
Figure pct00019
100 에피토프, c-myc 에피토프, FLAG®-에피토프, lacZ, CMP (칼모듈린-결합 펩티드), HA 에피토프, 단백질 C 에피토프 및 VSV 에피토프를 포함한다.
치환은 단백질의 아미노산의 유사한 특성 (예컨대 유사한 소수성, 친수성, 항원성, α-나선 구조 또는 β-시트 구조를 형성하거나 파괴하는 경향)을 갖는 다른 아미노산으로의 대체를 지칭한다. 아미노산 치환은 전형적으로 단일 잔기 치환이지만, 폴리펩티드에 대한 기능적 제한에 따라 클러스터링될 수 있고, 1 내지 10개의 아미노산의 범위일 수 있으며; 삽입은 통상적으로 약 1 내지 10개의 아미노산 잔기 정도일 것이다. 아미노산 치환은 바람직하게는 보존적 아미노산 치환이다. 보존적 치환 표는 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다 (예를 들어 문헌 [Creighton (1984) Proteins. W.H. Freeman and Company (Eds)] 참조).
<표 2> 보존적 아미노산 치환의 예
Figure pct00020
아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있는 펩티드 합성 기술을 사용하여, 예컨대 고체 상 펩티드 합성 등을 사용하여, 또는 재조합 DNA 조작에 의해 용이하게 이루어질 수 있다. DNA 서열을 조작하여 단백질의 치환, 삽입 또는 결실 변이체를 생산하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, DNA 내의 예정 부위에 치환 돌연변이를 만드는 기술은 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, M13 돌연변이유발, T7-Gen 시험관내 돌연변이유발 (USB, 오하이오주 클리블랜드), 퀵체인지(QuickChange) 부위 지정 돌연변이유발 (스트라타진(Stratagene), 캘리포니아주 샌디에고), PCR-매개 부위 지정 돌연변이유발 또는 다른 부위-지정 돌연변이유발 프로토콜을 포함한다.
"유도체"는 추가로 단백질의 자연 발생 형태, 예컨대 관심 단백질의 아미노산 서열과 비교하여, 아미노산의 비-자연 발생 아미노산 잔기에 의한 치환, 또는 비-자연 발생 아미노산 잔기의 부가를 포함할 수 있는 펩티드, 올리고펩티드, 폴리펩티드를 포함한다. 단백질의 "유도체"는 또한 폴리펩티드의 자연 발생 형태의 아미노산 서열과 비교하여, 자연적으로 변경된 (글리코실화, 아실화, 프레닐화, 인산화, 미리스토일화, 황산화 등) 또는 비-자연적으로 변경된 아미노산 잔기를 포함하는 펩티드, 올리고펩티드, 폴리펩티드를 포괄한다. 유도체는 또한 그것이 유래된 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상의 비-아미노산 치환 또는 부가, 예를 들어 아미노산 서열에 공유 또는 비공유적으로 결합된 리포터 분자 또는 다른 리간드, 예컨대 그의 검출을 용이하게 하기 위해 결합된 리포터 분자, 및 자연 발생 단백질의 아미노산 서열과 비교하여 비-자연 발생 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 추가로, "유도체"는 또한 단백질의 자연 발생 형태와 태깅 펩티드, 예컨대 FLAG, HIS6 또는 티오레독신의 융합체를 포함한다 (태깅 펩티드의 검토를 위해, 문헌 [Terpe, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60, 523-533, 2003] 참조).
"오르토로그" 및 "파라로그"는 유전자의 조상 관계를 기재하는데 사용되는 진화적 개념을 포괄한다. 파라로그는 조상 유전자의 복제를 통해 비롯된 동일한 종 내의 유전자이고; 오르토로그는 종분화를 통해 비롯된 상이한 유기체로부터의 유전자이며, 이는 또한 공통된 조상 유전자로부터 유래된다. 이러한 오르토로그의 예의 비제한적인 목록은 표 1에 제시되어 있다.
파라로그 및 오르토로그는 주어진 부위에 적합한 아미노산 잔기를 보유하는 별개의 도메인, 예컨대 특정한 기질에 대한 결합 포켓 또는 다른 단백질과의 상호작용을 위한 결합 모티프를 공유할 수 있는 것으로 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
용어 "도메인"은 진화상 관련된 단백질의 서열 정렬에 따라 특정 위치에서 보존되는 일련의 아미노산을 지칭한다. 상동체 사이에 다른 위치에 있는 아미노산은 상이할 수 있지만, 특정 위치에서 고도로 보존되는 아미노산은 단백질의 구조, 안정성 또는 기능에 본질적일 가능성을 지닌 아미노산을 나타낸다. 단백질 상동체 패밀리의 정렬된 서열에서 그의 고도한 보존 정도에 의해 확인된 것은 해당 임의 폴리펩티드가 이전에 확인된 폴리펩티드 패밀리에 속하는지 여부를 결정하는데 있어서 식별자로서 사용될 수 있다.
용어 "모티프" 또는 "컨센서스 서열"은 진화상 관련된 단백질의 서열에서 짧은 보존 영역을 지칭한다. 모티프는 빈번하게는 고도로 보존된 도메인 부분이지만, 이는 또한 오직 도메인의 일부만을 포함할 수 있거나, 또는 보존 도메인의 바깥쪽에 위치할 수 있다 (모티프의 아미노산 모두가 정의된 도메인의 바깥쪽에 속하는 경우).
도메인 확인을 위한 전문적인 데이터베이스, 예를 들어 SMART (Schultz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 5857-5864; Letunic et al. (2002) Nucleic Acids Res 30, 242-244), 인터프로(InterPro) (Mulder et al., (2003) Nucl. Acids. Res. 31, 315-318), 프로사이트(Prosite) (Bucher and Bairoch (1994), A generalized profile syntax for biomolecular sequences motifs and its function in automatic sequence interpretation. (In) ISMB-94; Proceedings 2nd International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology. Altman R., Brutlag D., Karp P., Lathrop R., Searls D., Eds., pp53-61, AAAI Press, Menlo Park; Hulo et al., Nucl. Acids. Res. 32:D134-D137, (2004)), 또는 Pfam (Bateman et al., Nucleic Acids Research 30(1): 276-280 (2002))가 존재한다. 단백질 서열의 인실리코 분석을 위한 일련의 도구는 ExPASy 단백질체학 서버에서 입수가능하다 (Swiss Institute of Bioinformatics (Gasteiger et al., ExPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis, Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003)). 도메인 또는 모티프는 또한 예컨대 서열 정렬과 같은 상용 기술을 사용하여 확인할 수 있다.
비교를 위한 서열 정렬 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 이러한 방법은 GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA 및 TFASTA를 포함한다. GAP은 매칭되는 개수를 최대화하고, 갭의 개수를 최소화하는 두 서열의 전반적인 (즉, 완전한 서열에 걸친) 정렬을 찾아내기 위해 니들만 및 운쉬의 알고리즘을 사용한다 ((1970) J Mol Biol 48: 443-453). BLAST 알고리즘 (Altschul et al. (1990) J Mol Biol 215: 403-10)은 퍼센트 서열 동일성을 계산하고, 두 서열 사이의 유사성에 관한 통계적 분석을 수행한다. BLAST 분석 수행용 소프트웨어는 미국 국립 생물 정보 센터(NCBI)를 통해 공개적으로 입수가능하다. 상동체는, 예를 들어 디폴트 쌍별 정렬 파라미터를 사용하는 클러스터W(ClustalW) 다중 서열 정렬 알고리즘 (버전 1.83) 및 백분율로의 스코어링 방법을 사용하여 용이하게 확인할 수 있다. 전반적인 유사성 및 동일성 백분율도 또한 MatGAT 소프트웨어 패키지에서 이용가능한 방법 중 하나를 사용하여 결정할 수 있다 (Campanella et al., BMC Bioinformatics. 2003 Jul 10;4:29. MatGAT: an application that generates similarity/identity matrices using protein or DNA sequences.). 통상의 기술자에게 명백한 바와 같이, 보존 모티프 사이의 정렬을 최적화하기 위해 부차적인 수동 편집을 수행할 수 있다. 추가로, 상동체 확인을 위해 전장 서열을 사용하는 대신, 특정 도메인을 또한 사용할 수 있다. 서열 동일성 값은 디폴트 파라미터를 사용하여 상기 언급된 프로그램을 사용함으로써 전체 핵산 또는 아미노산 서열에 걸쳐 또는 선택된 도메인 또는 보존 모티프(들)에 걸쳐 결정될 수 있다. 국부 정렬의 경우에는 스미스-워터만 알고리즘이 특히 유용하다 (Smith TF, Waterman MS (1981) J. Mol. Biol 147(1);195-7).
본 발명의 발명자들은 주요 아미노산 잔기 중 1개 이상을 치환시킴으로써 서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 또는 46을 갖는 야생형 PPO 효소의 활성과 비교하여 제초제 내성 또는 저항성을 유의하게 증가시킬 수 있다는 것을 발견하게 되었다. mut-PPO의 바람직한 치환은 식물의 제초제 내성은 증가시키지만, 옥시다제 활성의 생물학적 활성은 실질적으로는 영향을 받지 않은 채로 유지시키는 것이다.
따라서, 본 발명의 또 다른 목적에서, PPO 효소, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체의 주요 아미노산 잔기는 임의의 다른 아미노산에 의해 치환된다.
바람직한 실시양태에서, PPO 효소, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체의 주요 아미노산 잔기는 하기 표 2에 기재된 바와 같은 보존된 아미노산에 의해 치환된다.
하기 언급된 아미노산 위치에 아주 근접하게 위치하는 아미노산도 또한 치환될 수 있다는 것을 통상의 기술자는 이해할 것이다. 따라서, 또 다른 실시양태에서, 서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 또는 46의 변이체, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체는 주요 아미노산으로부터 아미노산 ±3, ±2 또는 ±1 아미노산 위치가 임의의 다른 아미노산에 의해 치환된 mut-PPO를 포함한다.
관련 기술분야에 널리 공지된 기술에 기초하여, 고도로 특징적인 서열 패턴이 개발될 수 있고, 그를 수단으로 하여 목적하는 활성을 갖는 추가의 mut-PPO 후보를 검색할 수 있다.
적합한 서열 패턴을 적용하여 추가의 mut-PPO 후보를 검색하는 것 또한 본 발명에 포함될 것이다. 본 서열 패턴이 상기 패턴의 2개의 인접한 아미노산 잔기 사이의 정확한 거리에 의해 제한되지 않는다는 것을 숙련된 독자는 이해할 것이다. 상기 패턴에서 2개의 인접부 사이의 거리는 각각, 목적하는 활성에는 실질적으로 영향을 미치지 않으면서, 예를 들어 서로 독립적으로 최대 ±10, ± 5, ±3, ±2 또는 ±1 아미노산 위치만큼 달라질 수 있다.
또한, 부위 지정 돌연변이유발 방법을 적용하는 것에 의해 본 발명의 발명자들은 돌연변이의 특정 조합을 확인하였고, 이러한 조합은 서열 2 또는 4의 위치 397에서의 류신의 제2 치환과 조합된 서열 2 또는 4의 위치 420에서의 페닐알라닌 잔기의 치환에 관한 것이다.
따라서, 특히 바람직한 실시양태에서, 서열 2 또는 서열 4의 mut-PPO의 변이체 또는 유도체는 하기 표 3a의 조합된 아미노산 치환으로부터 선택된다.
<표 3a> 서열 2 또는 서열 4 (부위 지정 돌연변이유발에 의해 수득된 조합된 아미노산 치환).
Figure pct00021
Figure pct00022
Figure pct00023
추가의 특히 바람직한 실시양태에서, 서열 2 또는 서열 4의 mut-PPO의 변이체 또는 유도체는 하기 표 3b의 조합된 아미노산 치환으로부터 선택된다.
<표 3b> 서열 2 또는 서열 4 (조합된 아미노산 치환)
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
상기 표 3에서 언급된 것 이외의 임의의 아미노산도 치환기로서 사용될 수 있다는 것을 이해하여야 한다. 이러한 돌연변이체의 관능기에 대해 시험하는 검정을 관련 기술분야에서 용이하게 이용가능하며, 이는 각각 본 발명의 실시예 섹션에 기재되어 있다.
바람직한 실시양태에서, 아미노산 서열은 하기 위치: 128, 204, 208, 397, 400, 420, 457 중 하나 이상에서 서열 2 또는 서열 4의 PPO의 아미노산 서열과 상이하다.
이들 아미노산 위치에서의 차이의 예는, 하기 중 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다:
위치 128에서의 아미노산은 아르기닌 이외의 것임;
위치 204에서의 아미노산은 페닐알라닌 이외의 것임;
위치 208에서의 아미노산은 트레오닌 이외의 것임;
위치 397에서의 아미노산은 류신 이외의 것임,
위치 400에서의 아미노산은 류신 이외의 것임,
위치 420에서의 아미노산은 페닐알라닌 이외의 것임,
위치 457에서의 아미노산은 페닐알라닌 이외의 것임.
일부 실시양태에서, 서열 2 또는 서열 4의 mut-PPO 효소는 하기 중 하나 이상을 포함한다:
위치 128에서의 아미노산은 Leu, Ala, Val 또는 Ile임;
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val임;
위치 208에서의 아미노산은 Ser임;
위치 397에서의 아미노산은 Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu 또는 Gln임;
위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met임;
위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu임;
위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val임.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Tyr, Trp, Asp, Glu, Asn, Gln, His, Lys 또는 Arg이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 His이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 His이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 His이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 His이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 His이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp, Glu, Gln, Asn이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val, Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 400에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 400에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 400에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 400에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 400에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 400에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp, Glu, Gln, Asn이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile, Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp, Glu, Gln, Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val, Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val, Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 400에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 400에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 208에서의 아미노산은 Ser이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 208에서의 아미노산은 Ser이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Val이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Val이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Val이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Val이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Val이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile, Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp, Glu, Gln, Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Tyr, Trp, Asp, Glu, Asn, Gln, His, Lys, Arg이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 His이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 His이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 His이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 His이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 His이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp, Glu, Gln, Asn이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val, Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 400에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 400에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 400에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 400에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 400에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 400에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp, Glu, Gln, Asn이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile, Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp, Glu, Gln, Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val, Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val, Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 400에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 400에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 208에서의 아미노산은 Ser이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 208에서의 아미노산은 Ser이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val, Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Val이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Val이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Val이고, 위치 457에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Val이고, 위치 457에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 420에서의 아미노산은 Val이고, 위치 457에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile, Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp, Glu, Gln, Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asp이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Glu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Tyr, Trp, Asp, Glu, Asn, Gln, His, Lys, Arg이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Gly이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ala이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Thr이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Cys이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Val이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Val이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Val이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Val이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Val이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Ile이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Met이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Met이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Met이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Met이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Met이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Pro이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Tyr이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Trp이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Asn이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 His이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 His이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 His이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 His이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 His이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Lys이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 392에서의 아미노산은 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ala이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 392에서의 아미노산은 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 392에서의 아미노산은 Ile이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 40의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 369에서의 아미노산은 Arg이고, 위치 392에서의 아미노산은 Val이다.
특히 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
특히 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Glu이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
특히 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
특히 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Met이다.
특히 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asp이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn, Asp, Glu 또는 Gln이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn, Asp, Glu 또는 Gln이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn, Asp, Glu 또는 Gln이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn, Asp, Glu 또는 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn, Asp, Glu 또는 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn, Asp, Glu 또는 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn, Asp, Glu 또는 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 397에서의 아미노산은 Asn, Asp, Glu 또는 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn, Asp, Glu 또는 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile, 또는 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu, Ala, Val, 또는 Ile이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu, Ala, Val 또는 Ile이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn, Asp, Glu 또는 Gln이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu, Ala, Val 또는 Ile이고, 위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu, Ala, Val 또는 Ile이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu, Ala, Val 또는 Ile이고, 위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 397에서의 아미노산은 Asn, Asp, Glu 또는 Gln이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 208에서의 아미노산은 Ser이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, mut-PPO는 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 여기서:
위치 128에서의 아미노산은 Leu, Ala, Val 또는 Ile이고, 위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met이고, 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu이고, 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile 또는 Val이다.
예컨대 표 1에 기재되어 있는 것과 같은 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45에 의해 코딩되는 상동체, 오르토로그 및 파라로그 사이에 공유되는 보존 영역 및 모티프를 확인하는 것은 통상의 기술자의 지식 범위 내일 것이다. 적합한 결합 모티프를 나타낼 수 있는 이러한 보존 영역을 확인함으로써, 표 3a 및 3b에 열거된 아미노산에 상응하는 아미노산은 임의의 다른 아미노산에 의해, 바람직하게는 표 2에 제시된 바와 같은 보존된 아미노산에 의해, 보다 바람직하게는 표 3a 및 3b의 아미노산에 의해 치환되도록 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45의 뉴클레오티드 서열 또는 그의 변이체 또는 유도체를 포함하는 핵산에 의해 코딩되는 mut-PPO를 사용함으로써 PPO-억제 제초제를 확인하는 방법에 관한 것이다.
상기 방법은
a) mut-PPO를 코딩하는 핵산을 포함하는 트랜스제닉 세포 또는 식물을 생성하며, 여기서 mut-PPO는 발현되는 것인 단계;
b) PPO-억제 제초제를 a)의 트랜스제닉 세포 또는 식물 및 동일한 품종의 대조군 세포 또는 식물에 적용하는 단계;
c) 상기 PPO-억제 제초제의 적용 후, 트랜스제닉 세포 또는 식물 및 대조군 세포 또는 식물의 성장 또는 생존율을 결정하는 단계; 및
d) 트랜스제닉 세포 또는 식물의 성장과 비교하여 대조군 세포 또는 식물에게 감소된 성장을 부여하는 "PPO-억제 제초제"를 선택하는 단계를 포함한다.
"대조군 세포" 또는 "유사한, 야생형, 식물, 식물 조직, 식물 세포 또는 숙주 세포"는 각각, 본원에 개시된 제초제-저항 특성 및/또는 본 발명의 특정한 폴리뉴클레오티드가 결여된 식물, 식물 조직, 식물 세포 또는 숙주 세포를 의도한다. 따라서, 용어 "야생형"의 사용은 식물, 식물 조직, 식물 세포 또는 다른 숙주 세포가 그의 게놈 내에 재조합 DNA가 결여되어 있고/거나, 본원에 개시된 것과 상이한 제초제-저항 특성을 보유하지 않는다는 것을 함축하는 것으로 의도하지 않는다.
또 다른 목적은
a) mut-PPO-코딩 핵산 라이브러리를 생성하는 단계,
b) 세포 또는 식물에서 각각의 상기 핵산을 발현시키고 상기 세포 또는 식물을 PPO-억제 제초제로 처리함으로써, 생성된 mut-PPO-코딩 핵산 집단을 스크리닝하는 단계,
c) 상기 mut-PPO 코딩 핵산 집단에 의해 제공되는 PPO-억제 제초제-내성 수준을 대조군 PPO-코딩 핵산에 의해 제공되는 PPO-억제 제초제-내성 수준과 비교하는 단계,
d) 대조군 PPO-코딩 핵산에 의해 제공되는 것과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대해 유의하게 증가된 수준의 내성을 제공하는 적어도 1개의 mut-PPO-코딩 핵산을 선택하는 단계
를 포함하는, PPO-억제 제초제에 대해 저항성 또는 내성인 mut-PPO를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 확인하는 방법에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에서, 단계 d)에서 선택된 mut-PPO-코딩 핵산은 대조군 PPO-코딩 핵산에 의해 제공되는 것과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대해 세포 또는 식물에게 적어도 2배 더 큰 저항성 또는 내성을 제공한다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 단계 d)에서 선택된 mut-PPO-코딩 핵산은 대조군 PPO-코딩 핵산에 의해 제공되는 것과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대해 세포 또는 식물에게 적어도 2배, 적어도 5배, 적어도 10배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 500배 더 큰 저항성 또는 내성을 제공한다.
저항성 또는 내성은 단계 a)의 라이브러리의 핵산 서열을 포함하는 트랜스제닉 식물 또는 숙주 세포, 바람직하게는 식물 세포를 생성하고 상기 트랜스제닉 식물을 대조군 식물 또는 숙주 세포, 바람직하게는 식물 세포와 비교하는 것에 의해 결정될 수 있다.
또 다른 목적은
a) 식물 세포 또는 녹조류 배양에서 상기 세포를 사멸에 이르게 하는 유효량의 PPO-억제 제초제를 확인하는 단계,
b) 상기 식물 세포 또는 녹조류를 돌연변이유발제로 처리하는 단계,
c) 상기 돌연변이유발된 세포 집단을 a)에서 확인된 유효량의 PPO-억제 제초제와 접촉시키는 단계,
d) 이들 시험 조건에서 살아남은 적어도 1개의 세포를 선택하는 단계,
e) d)에서 선택된 세포로부터의 PPO 유전자의 PCR 증폭 및 서열분석을 수행하고, 이러한 서열을 야생형 PPO 유전자 서열과 각각 비교하는 단계
를 포함하는, PPO-억제 제초제에 대해 저항성 또는 내성인 야생형 또는 mut-PPO를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산을 함유하는 식물 또는 조류를 확인하는 방법에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에서, 상기 돌연변이유발제는 에틸메탄술포네이트 (EMS)이다.
미생물, 식물, 진균, 조류, 혼합 배양물 등 뿐만 아니라, DNA의 환경적 공급원, 예컨대 토양을 비롯한 다양한 상이한 잠재적인 공급원 유기체로부터 mut-PPO를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 확인하는데 적합한 후보 핵산을 수득하기 위해 통상의 기술자에게 널리 공지된 많은 방법들이 이용가능하다. 이들 방법은 특히 cDNA 또는 게놈 DNA 라이브러리의 제조, 적합한 축중성 올리고뉴클레오티드 프라이머의 사용, 공지된 서열 또는 상보물 검정에 기반한 프로브 사용 (예를 들어, 티로신 상에서의 성장에 대한 것) 뿐만 아니라 재조합된 또는 셔플링된 mut-PPO-코딩 서열을 제공하기 위한 돌연변이유발 및 셔플링 사용을 포함한다.
후보 및 대조군 PPO 코딩 서열을 포함하는 핵산을 효모에서, 박테리아 숙주 균주에서, 조류에서 또는 고등 식물, 예컨대 담배 또는 아라비돕시스에서 발현시킬 수 있고, 상이한 농도의 선택된 PPO-억제 제초제의 존재 하에 형질전환된 균주 또는 식물의 시각적 지표 표현형에 따라 PPO 코딩 서열의 고유한 내성의 상대적인 수준을 스크리닝할 수 있다. 용량 반응 및 이들 지표 표현형 (갈색 발색, 성장 억제, 제초 효과 등)과 연관된 용량 반응에서 상대적인 이동은 GR50 (성장을 50% 감소시키는 농도) 또는 MIC (최소 억제 농도) 값으로 편리하게 표현되며, 여기서 값의 증가는 발현된 PPO의 고유한 내성 증가에 상응한다. 예를 들어, 박테리아, 예컨대 이. 콜라이의 형질전환에 기초한 상대적으로 빠른 검정 시스템에서, 각각의 mut-PPO 코딩 서열은 예를 들어 제어가능한 프로모터, 예컨대 lacZ 프로모터의 발현 제어 하에, 상이한 PPO 서열이 가능한 한 유사한 발현 수준으로 수득될 수 있도록 하기 위한, 예를 들어 합성 DNA의 사용, 코돈 용법과 같은 이슈를 적합하게 고려함으로써 DNA 서열로서 발현시킬 수 있다. 대안적 후보 PPO 서열을 포함하는 핵산을 발현하는 이러한 균주를, 임의로 티로신 보충된 배지 내의 상이한 농도의 선택된 PPO-억제 제초제에 플레이팅할 수 있고, 갈색의 흑변성 색소 형성 억제의 정도 및 그러한 억제에 대한 MIC에 기초하여 발현된 PPO 효소의 고유한 내성의 상대적인 수준을 예측할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 후보 핵산으로 식물 물질을 형질전환시켜 트랜스제닉 식물을 생성하고, 형태학상 정상적인 유성 생식 식물로 재생시킨 후, 선택된 PPO-억제 제초제에 대한 차별적 내성에 대해 측정한다. 적합한 선택 마커, 예컨대 카나마이신, 예컨대 아그로박테리움으로부터의 2원 벡터, 및 예를 들어 담배 잎 절편으로부터의 식물 재생물을 사용하는 많은 적합한 형질전환 방법이 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 임의로, 유사하게 대조군 식물 집단을 대조군 PPO를 발현하는 핵산으로 형질전환시킨다. 대안적으로, 형질전환되지 않은 쌍자엽 식물, 예컨대 아라비돕시스 또는 담배를 대조군으로서 사용할 수 있고, 이는 이들이 어느 경우에서든 그 자신의 내인성 PPO를 발현하기 때문이다. 상기 기재된 PPO-억제 제초제에 대한 다양한 일차 식물 형질전환 이벤트 또는 그의 자손의 제초제 내성 수준의 평균 및 분포를 다양한 범위의 상이한 농도의 제초제에서 식물 손상, 분열조직의 백화 증상에 기초하여 통상적인 방식으로 평가한다. 이들 데이터는, 예를 들어 x-축 상에는 "용량"이 플롯팅되어 있고, y-축 상에는 "사멸 백분율", "제초 효과", "출아된 녹색 식물의 개수" 등이 플롯팅되어 있는 용량/반응 곡선으로부터 도출된 GR50 값으로 표현될 수 있으며, 여기서 GR50 값의 증가는 발현된 PPO의 고유한 내성 수준 증가에 상응한다. 제초제는 출아전 또는 출아후에 적합하게 적용될 수 있다.
또 다른 목적은 상기 정의된 방법에 의해 확인될 수 있는, mut-PPO를 코딩하는 단리된 핵산에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 식물 세포에서의 핵산의 발현이 식물 세포의 야생형 품종과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대한 저항성 또는 내성을 증가시키는, 야생형 또는 mut-PPO 핵산에 의해 형질전환된 식물 세포, 또는 야생형 또는 mut-PPO 핵산을 발현하는 식물이 수득되도록 돌연변이된 식물 세포에 관한 것이다.
용어 "발현/발현하는" 또는 "유전자 발현"은 특정 유전자 또는 특정 유전자들, 또는 특정 유전자 구축물의 전사를 의미한다. 용어 "발현" 또는 "유전자 발현"은 특히 유전자 또는 유전자들, 또는 유전자 구축물이 구조 RNA (rRNA, tRNA) 또는 mRNA로 전사되는 것을 의미하며, 후자의 단백질로의 후속적인 번역은 수반하거나 수반하지 않는다. 상기 과정은 DNA 전사, 및 생성된 mRNA 생성물의 프로세싱을 포함한다.
목적하는 효과를 수득하기 위해, 즉 본 발명의 PPO-억제 제초제 유도체 제초제에 대해 내성 또는 저항성인 식물을 수득하기 위해, 적어도 1개의 핵산을 통상의 기술자에게 공지된 방법 및 수단에 의해서 "과다발현"시킨다는 것을 이해할 것이다.
본원에 사용된 용어 "증가된 발현" 또는 "과다발현"은 원래의 야생형 발현 수준에 부가적인 임의의 형태의 발현을 의미한다. 유전자 또는 유전자 산물의 발현을 증가시키는 방법은 관련 기술분야에서 널리 문서화되어 있고, 예를 들어 적절한 프로모터에 의해 구동되는 과다발현, 전사 인핸서 또는 번역 인핵서의 사용을 포함한다. 관심 폴리펩티드를 코딩하는 핵산의 발현을 상향조절하기 위해, 프로모터 또는 인핸서 요소로서의 역할을 하는 단리된 핵산을 비-이종성 형태의 폴리뉴클레오티드의 적절한 위치에 (전형적으로 상류에) 도입할 수 있다. 예를 들어, 유전자의 발현 제어를 위해, 내인성 프로모터는 돌연변이, 결실 및/또는 치환에 의해 생체내에서 변경될 수 있거나 (크미엑(Kmiec), US 5,565,350; 잘링(Zarling) 등, WO9322443 참조), 또는 단리된 프로모터는 본 발명의 유전자로부터 적절한 거리에 적절한 배향으로 도입될 수 있다.
폴리펩티드 발현을 목적으로 하는 경우에, 일반적으로는 폴리뉴클레오티드 코딩 영역의 3'-말단에 폴리아데닐화 영역을 포함시키는 것이 바람직하다. 폴리아데닐화 영역은 천연 유전자로부터, 다양한 다른 식물 유전자로부터, 또는 T-DNA로부터 유래될 수 있다. 부가되는 3' 말단 서열은, 예를 들어 노팔린 신타제 또는 옥토파인 신타제 유전자로부터, 또는 대안적으로 또 다른 식물 유전자로부터, 또는 덜 바람직하게는 임의의 다른 진핵 유전자로부터 유래될 수 있다.
시토졸에 축적되는 성숙한 메세지의 양을 증가시키기 위해 인트론 서열이 또한 부분 코딩 서열의 5' 비번역 영역 (UTR) 또는 코딩 서열에 부가될 수 있다. 식물 및 동물 발현 구축물 둘 다에서 전사 단위에 스플라이싱가능한 인트론을 포함시키는 것은, 유전자 발현을 mRNA 및 단백질 둘 다의 수준에서 최대 1000배까지 증가시키는 것으로 나타났다 (Buchman and Berg (1988) Mol. Cell biol. 8: 4395-4405; Callis et al. (1987) Genes Dev 1:1183-1200). 이러한 인트론에 의한 유전자 발현의 증진은 전형적으로 전사 단위의 5' 말단 가까이에 배치될 때에 가장 크다. 옥수수 인트론인 Adh1-S 인트론 1, 2 및 6, 브론즈(Bronze)-1 인트론의 사용이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 일반적 정보에 대해 문헌 [The Maize Handbook, Chapter 116, Freeling and Walbot, Eds., Springer, N.Y. (1994)]을 참조한다.
본원에 지칭된 용어 "도입" 또는 "형질전환"은 전달에 사용되는 방법에는 상관없이, 외인성 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포 내로 전달하는 것을 포괄한다. 기관발생에 의해서든 또는 배아발생에 의해서든, 후속적인 클론 증식이 가능한 식물 조직을 본 발명의 유전자 구축물로 형질전환시키고, 그로부터 전체 식물을 재생시킬 수 있다. 선택되는 특정한 조직은 형질전환되는 특정한 종에 이용가능한, 및 그에 최적인 클론 증식 시스템에 따라 달라질 것이다. 예시적인 조직 표적은 잎 절편, 화분, 배아, 자엽, 배축, 대배우체, 캘러스 조직, 현 분열조직성 조직 (예를 들어, 선단 분열조직, 곁눈 및 뿌리 분열조직), 및 유도된 분열조직성 조직 (예를 들어, 자엽 분열조직 및 배축 분열조직)을 포함한다. 폴리뉴클레오티드는 일시적으로 또는 안정적으로 숙주 세포 내로 도입될 수 있고, 예를 들어 플라스미드로서 비-통합된 상태로 유지될 수 있다. 대안적으로, 숙주 게놈 내로 통합될 수 있다. 이어서, 생성된 형질전환된 식물 세포를 통상의 기술자에게 공지된 방식으로 사용하여 형질전환된 식물을 재생시킬 수 있다.
외래 유전자를 식물 게놈 내로 전달하는 것을 형질전환이라 일컫는다. 식물 종의 형질전환은 현재 상당히 상용 기술이다. 유리하게도, 관심 유전자를 적합한 조상 세포 내로 도입하는데 여러 형질전환 방법 중 임의의 것이 사용될 수 있다. 식물을 형질전환시키고, 식물 조직 또는 식물 세포로부터 식물을 재생시키는 기재된 방법을 사용하여 일시적으로 또는 안정적으로 형질전환시킬 수 있다. 형질전환 방법은 리포솜 사용, 전기천공, 유리 DNA 흡수를 증가시키는 화학물질, 식물 내로 직접 DNA 주입, 입자 총 충격법, 바이러스 또는 화분을 사용하는 형질전환 및 미세주입을 포함한다. 방법은 원형질체의 경우에, 칼슘/폴리에틸렌 글리콜 방법 (Krens, F.A. et al., (1982) Nature 296, 72-74; Negrutiu I et al. (1987) Plant Mol Biol 8: 363-373); 원형질체 전기천공 (Shillito R.D. et al. (1985) Bio/Technol 3, 1099-1102); 식물 물질 내로의 미세주사 (Crossway A et al., (1986) Mol. Gen Genet 202: 179-185); (비-통합성) 바이러스로 감염된 DNA 또는 RNA-코팅된 입자 충격법 (Klein TM et al., (1987) Nature 327: 70) 등으로부터 선택될 수 있다. 트랜스제닉 농작물을 비롯한 트랜스제닉 식물은 아그로박테리움-매개 형질전환을 통해 바람직하게 생산된다. 유익한 형질전환 방법은 식물체내 형질전환이다. 이를 위해, 예를 들어 아그로박테리아가 식물 종자에 대해 작용할 수 있게 하거나, 또는 식물 분열조직에 아그로박테리아를 접종할 수 있다. 본 발명에 따르면, 형질전환된 아그로박테리아 현탁액이 무손상 식물 또는 적어도 꽃 원시세포에 대해 작용할 수 있도록 하는 것이 특히 적절한 것으로 입증되었다. 이어서, 처리된 식물의 종자를 수득할 때까지 식물을 성장시킨다 (Clough and Bent, Plant J. (1998) 16, 735-743). 벼의 아그로박테리움-매개 형질전환 방법은 널리 공지된 벼 형질전환 방법, 예컨대 하기: 유럽 특허 출원 EP 1198985 A1, 문헌 [Aldemita and Hodges (Planta 199: 612-617, 1996); Chan et al. (Plant Mol Biol 22 (3): 491-506, 1993), Hiei et al. (Plant J 6 (2): 271-282, 1994)] 중 임의의 것에 기재된 것을 포함하며, 이들의 개시내용은 그 전문이 기재된 것과 같이 본원에 참조로 포함된다. 옥수수 형질전환의 경우에, 바람직한 방법은 문헌 [Ishida et al. (Nat. Biotechnol 14(6): 745-50, 1996) 또는 Frame et al. (Plant Physiol 129(1): 13-22, 2002)]에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 그 전문이 기재된 것과 같이 본원에 참조로 포함된다. 상기 방법은 일례로 문헌 [B. Jenes et al., Techniques for Gene Transfer, in: Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung and R. Wu, Academic Press (1993) 128-143 및 in Potrykus Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42 (1991) 205-225)]에 추가로 기재되어 있다. 바람직하게는 발현시키고자 하는 핵산 또는 구축물을 아그로박테리움 투메파시엔스(Agrobacterium tumefaciens)를 형질전환시키는데 적합한 벡터, 예를 들어 pBin19 (Bevan et al., Nucl. Acids Res. 12 (1984) 8711) 내로 클로닝한다. 이어서, 이러한 벡터에 의해 형질전환된 아그로박테리아는, 예를 들어 찧어진 잎 또는 잘게 썰린 잎을 아그로박테리아 용액에 침지시킨 후, 그를 적합한 배지 중에서 배양함으로써, 식물, 예컨대 모델로서 사용되는 식물, 예컨대 아라비돕시스 (아라비돕시스 탈리아나는 본 발명의 범위 내에서 농작물로서 간주되지 않음) 또는 농작물, 예컨대 일례로 담배 식물의 형질전환을 위해 공지된 방식으로 사용될 수 있다. 아그로박테리움 투메파시엔스에 의한 식물의 형질전환은 예를 들어, 문헌 [Hoefgen and Willmitzer in Nucl. Acid Res. (1988) 16, 9877]에 기재되어 있거나, 특히 문헌 [F.F. White, Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; in Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung and R. Wu, Academic Press, 1993, pp. 15-38]으로부터 공지되어 있다.
이어서 무손상 식물로 재생되어야 하는 체세포 형질전환에 더하여, 식물 분열조직 세포, 및 특히, 생식세포로 발생되는 세포도 또한 형질전환시킬 수 있다. 이러한 경우에, 형질전환된 생식세포는 천연 식물 발생을 따르고, 이로써 트랜스제닉 식물이 생성된다. 따라서, 예를 들어 아라비돕시스의 종자를 아그로박테리아로 처리하고, 특정 비율이 형질전환되어 트랜스제닉인 발생 식물로부터 종자를 수득한다 [Feldman, KA and Marks MD (1987). Mol Gen Genet 208:274-289; Feldmann K (1992). In: C Koncz, N-H Chua and J Shell, eds, Methods in Arabidopsis Research. Word Scientific, Singapore, pp. 274-289]. 대안적 방법은 개화의 반복된 제거 및 형질전환된 아그로박테리아와 로제트 중심의 절개 부위의 인큐베이션에 기초하며, 이를 통해 형질전환된 종자는 유사하게 시간상 후속 시점에 수득할 수 있다 (Chang (1994). Plant J. 5: 551-558; Katavic (1994). Mol Gen Genet, 245: 363-370). 그러나, 특히 효과적인 방법은 예컨대, "플로랄 딥" 방법과 같은 진공 침윤 방법 및 그의 변형이다. 아라비돕시스의 진공 침윤의 경우에, 감압 하에서 무손상 식물을 아그로박테리아 현탁액으로 처리하는 반면에 [Bechthold, N (1993). C R Acad Sci Paris Life Sci, 316: 1194-1199], "플로랄 딥" 방법의 경우에는 발생 중인 꽃 조직을 계면활성제-처리된 아그로박테리아 현탁액과 함께 잠깐 동안 인큐베이션시킨다 [Clough, SJ and Bent AF (1998) The Plant J. 16, 735-743]. 양쪽 경우 모두에서 특정 비율의 트랜스제닉 종자를 수거하고, 이들 종자는 상기 기재된 선택 조건하에서 성장시킴으로써 비-트랜스제닉 종자와 구분될 수 있다. 또한, 색소체의 안정한 형질전환은 색소체가 대부분의 작물에서 모계 유전되기 때문에, 화분을 통한 트랜스진 유동의 위험이 감소되어 있거나, 제거되어 있다는 점에서 유익하다. 엽록체 게놈의 형질전환은 일반적으로 문헌 [Klaus et al., 2004 [Nature Biotechnology 22 (2), 225-229]]에 개략적으로 제시되어 있는 과정에 의해 달성된다. 간략하게, 형질전환시키고자 하는 서열을 엽록체 게놈과 상동성인 플랭킹 서열 사이에 있는 선택 마커 유전자와 함께 클로닝시킨다. 이들 상동성 플랭킹 서열이 플라스톰으로의 부위 특이적 통합을 지시한다. 색소체 형질전환은 다수의 상이한 식물 종에 대해 기재되어 있고, 그에 관한 개요는 문헌 [Bock (2001) Transgenic plastids in basic research and plant biotechnology. J Mol Biol. 2001 Sep 21; 312 (3):425-38 또는 Maliga, P (2003) Progress towards commercialization of plastid transformation technology. Trends Biotechnol. 21, 20-28]에 제공되어 있다. 추가의 생물공학적 진전을 통해 일시적으로 공동-통합되는 마커 유전자에 의해 생산될 수 있는, 마커 무함유 색소체 형질전환체 형태가 최근 보고되었다 (Klaus et al., 2004, Nature Biotechnology 22(2), 225-229). 유전자 변형 식물 세포는 통상의 기술자에게 친숙한 모든 방법을 통해 재생될 수 있다. 적합한 방법은 상기 언급된 공개문헌 [S.D. Kung and R. Wu, Potrykus 또는 Hoefgen and Willmitzer]에서 찾아볼 수 있다.
일반적으로 형질전환 후, 식물 세포 또는 세포 군집은 관심 유전자와 함께 공동-전달된 식물-발현가능한 유전자에 의해 코딩되는 1종 이상의 마커의 존재에 대해 선택되고, 이어서 형질전환된 물질은 전체 식물로 재생된다. 형질전환된 식물을 선택하기 위해, 형질전환된 식물이 형질전환되지 않은 식물과 구분될 수 있도록 대체로 형질전환에서 수득된 식물 물질을 선택 조건에 둔다. 예를 들어, 상기 기재된 방식으로 수득된 종자를 식재할 수 있고, 초기 성장기 이후, 스프레이에 의해 적합하게 선택한다. 추가의 가능성은, 적절한 경우에 멸균 후, 형질전환된 종자만이 식물로 성장할 수 있도록 적합한 선택제를 사용하여 한천 플레이트 상에서 종자를 성장시키는 것이다. 대안적으로, 예컨대, 상기 기재된 것과 같은 선택 마커의 존재에 대해 형질전환된 식물을 스크리닝한다.
DNA 전달 및 재생 후, 추정상 형질전환된 식물을 또한 예를 들어, 서던 분석을 사용하여 관심 유전자의 존재, 카피수 및/또는 게놈 편성을 평가할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 새로 도입된 DNA의 발현 수준은 노던 및/또는 웨스턴 분석을 사용하여 모니터링할 수 있으며, 이들 기술은 둘 다 관련 기술분야의 숙련가에게 널리 공지되어 있다.
생성된 형질전환된 식물을 다양한 수단, 예컨대 클론 증식 또는 고전적 육종 기술에 의해 증식시킬 수 있다. 예를 들어, 제1 세대 (또는 T1) 형질전환된 식물을 자가 수정시킬 수 있고, 동형접합 제2-세대 (또는 T2) 형질전환체를 선택한 후, T2 식물을 고전적 육종 기술을 통해 추가로 증식시킬 수 있다. 생성된 형질전환된 유기체는 다양한 형태를 취할 수 있다. 예를 들어, 이는 형질전환된 세포와 형질전환되지 않은 세포의 키메라; 클론 형질전환체 (예를 들어, 발현 카세트를 함유하도록 형질전환된 모든 세포); 형질전환된 조직과 형질전환되지 않은 조직으로 이루어진 이식편 (예를 들어, 식물에서, 형질전환되지 않은 접가지에 이식된 형질전환된 근경)일 수 있다.
바람직하게는, 야생형 또는 mut-PPO 핵산은 a) 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45에 제시된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 그의 변이체 또는 유도체; b) 서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 또는 46에 제시된 바와 같은 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 그의 변이체 또는 유도체; c) a) 또는 b) 중 임의의 것의 적어도 60개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및 d) a) 내지 c) 중 임의의 것의 폴리뉴클레오티드에 상보적인 폴리뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
바람직하게는, 식물에서의 핵산의 발현은 식물의 야생형 품종과 비교하여 식물의 PPO-억제 제초제에 대한 저항성을 증가시킨다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 식물에서의 핵산의 발현이 식물의 야생형 품종과 비교하여 식물의 PPO-억제 제초제에 대한 저항성을 증가시키는, 본 발명에 따른 식물 세포를 포함하는 식물, 바람직하게는 트랜스제닉 식물에 관한 것이다.
본원에 기재된 식물은 트랜스제닉 농작물 또는 비-트랜스제닉 식물일 수 있다.
본 발명의 목적상, 예를 들어 본 발명에 따른 핵산 서열, 발현 카세트, 유전자 구축물 또는 상기 핵산 서열을 포함하는 벡터, 또는 핵산 서열, 발현 카세트 또는 벡터로 형질전환된 유기체와 관련하여 "트랜스제닉," "트랜스진" 또는 "재조합"은
(a) 본 발명의 방법에 유용한 단백질을 코딩하는 핵산 서열, 또는
(b) 본 발명에 따른 핵산 서열과 작동가능하게 연결된 유전자 제어 서열(들), 예를 들어 프로모터, 또는
(c) a) 및 b)
가 그의 천연 유전적 환경에 위치하지 않거나, 재조합 방법에 의해 변형되며, 상기 변형은 예를 들어 1개 이상의 뉴클레오티드 잔기의 치환, 부가, 결실, 역전 또는 삽입의 형태를 취할 수 있는 것인, 재조합 방법에 의해 이루어진 모든 구축을 의미한다. 천연 유전적 환경은 원래의 식물 내 천연 게놈 또는 염색체 유전자좌 또는 게놈 라이브러리 내의 존재를 의미하는 것으로 이해된다. 게놈 라이브러리의 경우에, 핵산 서열의 천연 유전적 환경은 바람직하게는 적어도 부분적으로 유지된다. 환경은 핵산 서열 적어도 한쪽에 플랭킹되고, 서열 길이는 적어도 50 bp, 바람직하게는 적어도 500 bp, 특히 바람직하게는 적어도 1000 bp, 가장 바람직하게는 적어도 5000 bp이다. 발현 카세트가 비-천연, 합성 ("인공") 방법, 예컨대 예를 들어 돌연변이유발 처리에 의해 변형된 경우에, 상기 정의된 바와 같은 자연 발생 발현 카세트 - 예를 들어 핵산 서열의 천연 프로모터와 본 발명의 방법에 유용한 폴리펩티드를 코딩하는 상응하는 핵산 서열의 자연 발생 조합이 트랜스제닉 발현 카세트가 된다. 적합한 방법은, 예를 들어 US 5,565,350 또는 WO 00/15815에 기재되어 있다.
따라서, 본 발명의 목적을 위한 트랜스제닉 식물은 상기와 같이, 본 발명의 방법에서 사용되는 핵산이 상기 식물의 게놈 내의 그의 천연 유전자좌에 존재하지 않고, 핵산은 상동성 또는 이종성으로 발현될 수 있는 것을 의미하는 것으로 이해된다. 그러나, 언급한 바와 같이, 트랜스제닉은 또한 본 발명에 따른 또는 본 발명의 방법에서 사용되는 핵산이 식물의 게놈 내의 그의 천연 위치에 있지만, 서열이 천연 서열과 관련하여 변형된 것이고/거나, 천연 서열의 조절 서열이 변형된 것을 의미한다. 트랜스제닉은 바람직하게는 본 발명에 따른 핵산이 게놈 내 비천연 유전자좌에서 발현되는 것, 즉 핵산의 상동성 또는 바람직하게는 이종성 발현이 일어나는 것을 의미하는 것으로 이해된다. 바람직한 트랜스제닉 식물은 본원에 언급되어 있다. 추가로, 용어 "트랜스제닉"은 적어도 1개의 재조합 폴리뉴클레오티드의 전부 또는 부분을 함유하는 임의의 식물, 식물 세포, 캘러스, 식물 조직 또는 식물 부분을 지칭한다. 많은 경우에 있어서, 재조합 폴리뉴클레오티드의 전부 또는 부분은 염색체 또는 안정한 엑스트라-염색체 요소 내로 안정하게 통합됨으로써 대대로 전해지게 된다. 본 발명의 목적상, 용어 "재조합 폴리뉴클레오티드"는 유전 공학에 의해 변경, 재배열, 또는 변형된 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 예는 임의의 클로닝된 폴리뉴클레오티드, 또는 이종 서열에 연결 또는 결합된 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 용어 "재조합"은 자연 발생 이벤트, 예컨대 자발 돌연변이로부터, 또는 비-자발 돌연변이유발에 이은 선택 육종으로부터 야기된 폴리뉴클레오티드의 변경을 지칭하는 것은 아니다.
비-자발 돌연변이유발 및 선택 육종으로 인해 발생된 돌연변이를 함유하는 식물을 본원에서는 비-트랜스제닉 식물이라 지칭하고, 이는 본 발명에 포함된다. 식물이 트랜스제닉이고, 다중 mut-PPO 핵산을 포함하는 실시양태에서, 핵산은 상이한 게놈으로부터 또는 동일한 게놈으로부터 유래될 수 있다. 대안적으로, 식물이 비-트랜스제닉이고, 다중 mut-PPO 핵산을 포함하는 실시양태에서, 핵산은 상이한 게놈 상에 또는 동일 게놈 상에 위치한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 돌연변이 육종에 의해 생산된 제초제-저항성 식물을 수반한다. 이러한 식물은 mut-PPO를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 1종 이상의 PPO-억제 제초제에 대해 내성이다. 이러한 방법은, 예를 들어 식물 또는 종자를 돌연변이원, 특히 화학적 돌연변이원, 예컨대 예를 들어 에틸 메탄술포네이트 (EMS)에 노출시키고, 적어도 1종 이상의 PPO-억제 제초제에 대하여 증진된 내성을 갖는 식물을 선택하는 것을 수반할 수 있다.
그러나, 본 발명은 화학적 돌연변이원 EMS를 수반하는 돌연변이유발 방법에 의해 생산된 제초제-내성 식물로 제한되지는 않는다. 본 발명의 제초제-저항성 식물을 생산하는데 관련 기술분야에 공지된 임의의 돌연변이유발 방법이 사용될 수 있다. 이러한 돌연변이유발 방법은, 예를 들어 하기 돌연변이원: 방사선, 예컨대 X선, 감마선 (예를 들어, 코발트 60 또는 세슘 137), 중성자 (예를 들어, 원자로에서 우라늄 235에 의한 핵 분열의 생성물), 베타 방사선 (예를 들어, 방사성동위원소, 예컨대 인 32 또는 탄소 14로부터 방출된 것), 및 자외 방사선 (바람직하게는 2500 내지 2900 nm), 및 화학적 돌연변이원, 예컨대, 염기 유사체 (예를 들어, 5-브로모-우라실), 관련 화합물 (예를 들어, 8-에톡시 카페인), 항생제 (예를 들어, 스트렙토니그린), 알킬화제 (예를 들어, 황 머스타드, 질소 머스타드, 에폭시드, 에틸렌아민, 술페이트, 술포네이트, 술폰, 락톤), 아지드, 히드록실아민, 아질산 또는 아크리딘 중 임의의 1종 이상을 사용하는 것을 수반할 수 있다. 제초제-저항성 식물은 또한 조직 배양 방법을 사용하여 제초제-저항성 돌연변이를 포함하는 식물 세포를 선택한 후, 그로부터 제초제-저항성 식물을 재생시키는 것에 의해 생산될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,773,702 및 5,859,348를 참조하고, 이들은 둘 다 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 돌연변이 육종에 관한 추가의 상세한 설명은 문헌 ["Principals of Cultivar Development" Fehr, 1993 Macmillan Publishing Company]에서 찾아볼 수 있으며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
상기 정의에 더하여, 용어 "식물"은 문맥상 달리 명확하게 표시되지 않는 한, 임의의 성숙 또는 발생 단계의 농작물, 뿐만 아니라 임의의 이러한 식물로부터 채취 또는 유래된 임의의 조직 또는 기관 (식물 부분)을 포괄하는 것으로 의도된다. 식물 부분은 줄기, 뿌리, 꽃, 배주, 수술, 잎, 배아, 분열조직부, 캘러스 조직, 꽃밥 배양물, 배우체, 포자체, 화분, 소포자, 원형질체 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 식물은 적어도 1개의 mut-PPO 핵산 또는 과다발현된 야생형 PPO 핵산을 포함하고, 식물의 야생형 품종과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대해 증가된 내성을 갖는다. 본 발명의 식물은 1개 초과의 게놈을 함유할 수 있기 때문에, 이들은 상이한 게놈으로부터의 다중 야생형 또는 mut-PPO 핵산을 가질 수 있다. 예를 들어, 식물은 통상적으로 A 및 B 게놈으로 지칭되는 2개의 게놈을 함유한다. PPO는 필요한 대사 효소이기 때문에, 각각의 게놈은 PPO 효소를 코딩하는 적어도 1개의 유전자 (즉 적어도 1개의 PPO 유전자)를 갖는 것으로 추정된다. 본원에 사용된 용어 "PPO 유전자 유전자좌"는 게놈 상의 PPO 유전자의 위치를 지칭하고, 용어 "PPO 유전자" 및 "PPO 핵산"은 PPO 효소를 코딩하는 핵산을 지칭한다. 각각의 게놈 상의 PPO 핵산은 그의 뉴클레오티드 서열에 있어서 또 다른 게놈 상의 PPO 핵산과 상이하다. 통상의 기술자는 관련 기술분야에 공지되어 있는 유전자 교차 및/또는 서열분석 방법 또는 엑소뉴클레아제 분해 방법을 통해 각각의 PPO 핵산 기원의 게놈을 결정할 수 있다.
본 발명은 식물의 야생형 품종과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대한 내성이 증가된, 1, 2, 3개 또는 그 초과의 mut-PPO 대립유전자를 포함하는 식물을 포함한다. mut-PPO 대립유전자는 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45에 정의된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 그의 변이체 또는 유도체, 서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 또는 46에 정의된 바와 같은 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 그의 변이체 또는 유도체, 상동체, 오르토로그, 파라로그, 상기 언급된 폴리뉴클레오티드 중 임의의 것의 적어도 60개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및 상기 언급된 폴리뉴클레오티드 중 임의의 것에 상보적인 폴리뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
"대립유전자" 또는 "대립유전자 변이체"는 동일한 염색체 위치에 위치하는 주어진 유전자의 대안적 형태이다. 대립유전자 변이체는 단일 뉴클레오티드 다형성 (SNP), 뿐만 아니라 소형 삽입/결실 다형성 (INDEL)을 포함한다. INDEL의 크기는 통상적으로 100 bp 미만이다. SNP 및 INDEL은 대부분의 유기체의 자연 발생 다형성 균주에서 가장 큰 서열 변이체 세트를 형성한다.
용어 "품종"은 통상의 기술자에 의해 한 재배품종 또는 품종을 또 다른 재배품종 또는 품종과 구분하기에 충분한 것으로서 인정되는 공통적인 특징 또는 형질 세트를 공유하는, 정의된 종 내의 식물 군을 지칭한다. 임의의 주어진 재배품종 또는 품종의 모든 식물이 전체 유전자 또는 분자 수준에서 유전적으로 동일할 것이라거나, 또는 임의의 주어진 식물이 모든 유전자좌에서 동형접합일 것이라는 것을 함축하는 것은 아니다. 순수-육종 재배품종 또는 품종이 자가 수분되었을 때 자손들 모두가 형질을 함유하는 경우에, 재배품종 또는 품종은 특정한 형질에 대해 "순수 육종"인 것으로 간주된다. 용어 "육종 계통" 또는 "계통"은 통상의 기술자에 의해 한 육종 계통 또는 계통을 또 다른 육종 계통 또는 계통과 구분하기에 충분한 것으로서 인정되는 공통적인 특징 또는 형질 세트를 공유하는, 정의된 재배품종 내의 식물 군을 지칭한다. 임의의 주어진 육종 계통 또는 계통의 모든 식물이 전체 유전자 또는 분자 수준에서 유전적으로 동일할 것이라거나, 또는 임의의 주어진 식물이 모든 유전자좌에서 동형접합일 것이라는 것을 함축하는 것은 아니다. 순수-육종 계통 또는 육종 계통이 자가 수분되었을 때 자손들 모두가 형질을 함유하는 경우에, 육종 계통 또는 계통은 특정한 형질에 대해 "순수 육종"인 것으로 간주된다. 본 발명에서, 형질은 식물 또는 종자의 PPO 유전자 내의 돌연변이로부터 발생한다.
mut-PPO 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 본 발명의 제초제-저항성 식물은 또한 유성 생식을 수반하는 통상적인 식물 육종을 통해 식물의 제초제-저항성을 증가시키는 방법에서 용도가 발견된다. 상기 방법은 본 발명의 제초제-저항성 식물인 제1 식물을, 제1 식물과 동일한 제초제 또는 제초제들에 대해 저항성이거나 저항성이지 않을 수 있거나, 또는 제1 식물과 상이한 제초제 또는 제초제들에 대해 저항성을 띨 수 있는 제2 식물에 교배시키는 것을 포함한다. 제2 식물은 제1 식물과 교배되었을 때 생육가능한 자손 식물 (즉, 종자)을 생산할 수 있는 임의의 식물일 수 있다. 반드시 그러한 것은 아니지만, 전형적으로 제1 및 제2 식물은 동일한 종이다. 상기 방법은 제1 식물의 mut-PPO 폴리펩티드 및 제2 식물의 제초제 저항성 특징을 포함하는 자손 식물을 선택하는 것을 임의로 수반할 수 있다. 본 발명의 이러한 방법에 의해 생산된 자손 식물은 제1 또는 제2 식물 중 어느 하나 또는 둘 다와 비교하여 제초제에 대해 증가된 저항성을 갖는다. 제1 및 제2 식물이 상이한 제초제에 대하여 저항성인 경우에, 자손 식물은 제1 및 제2 식물의 조합된 제초제 내성 특징을 가질 것이다. 본 발명의 방법은 제1 교배의 자손 식물을 제1 또는 제2 식물과 동일한 계통 또는 유전자형의 식물에 역교배시킨 하나 이상의 세대를 추가로 수반할 수 있다. 대안적으로, 제1 교배 또는 임의의 후속 교배의 자손을 제1 또는 제2 식물과 상이한 계통 또는 유전자형의 제3 식물에 교배시킬 수 있다. 본 발명은 또한 본 발명의 적어도 1개의 폴리뉴클레오티드 분자, 발현 카세트 또는 형질전환 벡터로 형질전환된 식물, 식물 기관, 식물 조직, 식물 세포, 종자 및 비-인간 숙주 세포를 제공한다. 이러한 형질전환된 식물, 식물 기관, 식물 조직, 식물 세포, 종자 및 비-인간 숙주 세포는 각각 형질전환되지 않은 식물, 식물 조직, 식물 세포 또는 비-인간 숙주 세포를 사멸시키거나 그의 성장을 억제하는 제초제의 수준에서 적어도 1종의 제초제에 대해 증진된 내성 또는 저항성을 갖는다. 바람직하게는, 본 발명의 형질전환된 식물, 식물 조직, 식물 세포 및 종자는 아라비돕시스 탈리아나 및 농작물이다.
본 발명의 식물은 mut-PPO 핵산에 더하여 야생형 PPO 핵산을 포함할 수 있다는 것을 이해하여야 한다. PPO-억제 제초제 내성 계통은 다중 PPO 동종효소 중 오직 하나에만 돌연변이를 함유할 수 있는 것으로 고려된다. 따라서, 본 발명은 1개 이상의 야생형 PPO 핵산에 더하여 1개 이상의 mut-PPO 핵산을 포함하는 식물을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 식물 세포를 포함하는 트랜스제닉 식물에 의해 생산된, 종자의 야생형 품종과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대해 증가된 저항성을 위한 순수 육종인 종자에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 mut-PPO 핵산을 포함하는 발현 카세트로 식물 세포를 형질전환시키는 것을 포함하는, 식물 세포의 야생형 품종과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대해 증가된 저항성을 갖는 트랜스제닉 식물 세포를 생산하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 (a) mut-PPO 핵산을 포함하는 발현 카세트로 식물 세포를 형질전환시키는 단계, 및 (b) 상기 식물 세포로부터 PPO-억제 제초제에 대해 증가된 저항성을 갖는 식물을 생성하는 단계를 포함하는, 트랜스제닉 식물을 생산하는 방법에 관한 것이다.
결과적으로, 본 발명의 mut-PPO 핵산은 관심 식물에서의 발현을 위한 발현 카세트에 제공된다. 카세트는 본 발명의 mut-PPO 핵산 서열에 작동가능하게 연결된 조절 서열을 포함할 것이다. 본원에 사용된 용어 "조절 요소"는 작동가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드의 전사를 조절할 수 있는 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 이는 프로모터, 인핸서, 인트론, 5' UTR 및 3' UTR을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "작동가능하게 연결된"은 프로모터 서열이 제2 서열에 상응하는 DNA 서열의 전사를 개시시키고 매개하는, 프로모터와 제2 서열 사이의 기능적인 연결을 의도한다. 일반적으로, 작동가능하게 연결된은 연결된 핵산 서열들이 인접해 있고, 2개의 단백질 코딩 영역을 연결시키는 것이 필요한 경우에는 인접하여 동일한 리딩 프레임 내에 있는 것을 의미한다. 카세트는 유기체 내로 공동형질전환시키고자 하는 적어도 1개의 추가의 유전자를 추가로 함유할 수 있다. 대안적으로, 추가의 유전자(들)는 다중 발현 카세트들 상에서 제공될 수 있다.
이러한 발현 카세트에는 mut-PPO 핵산 서열이 조절 영역의 전사 조절 하에 있도록 삽입하기 위한 다수의 제한 부위가 제공된다. 발현 카세트는 선택 마커 유전자를 추가로 함유할 수 있다.
본 발명의 발현 카세트는 5'-3' 전사 방향으로 식물 내에서 기능적인 전사 및 번역 개시 영역 (즉, 프로모터), 본 발명의 mut-PPO 핵산 서열, 및 전사 및 번역 종결 영역 (즉, 종결 영역)을 포함할 것이다. 프로모터는 식물 숙주 및/또는 본 발명의 mut-PPO 핵산 서열에 대해 천연 또는 유사, 또는 외래 또는 이종일 수 있다. 추가로, 프로모터는 천연 서열일 수 있거나, 대안적으로 합성 서열일 수 있다. 프로모터가 식물 숙주에 대해 "외래" 또는 "이종"인 경우에, 이는 프로모터가 도입되는 천연 식물에서 이러한 프로모터가 발견되지 않는다는 것을 의도한다. 프로모터가 본 발명의 mut-PPO 핵산 서열에 대해 "외래" 또는 "이종"인 경우에, 이는 프로모터가 작동가능하게 연결된 본 발명의 mut-PPO 핵산 서열에 대해 천연 또는 자연 발생 프로모터가 아니라는 것을 의도한다. 본원에 사용된 키메라 유전자는 코딩 서열에 이종인 전사 개시 영역에 작동가능하게 연결된 코딩 서열을 포함한다.
이종 프로모터를 사용하여 본 발명의 mut-PPO 핵산을 발현시키는 것이 바람직할 수 있지만, 천연 프로모터 서열이 사용될 수 있다. 이러한 구축물은 식물 또는 식물 세포에서 mut-PPO 단백질의 발현 수준을 변화시킬 것이다. 따라서, 식물 또는 식물 세포의 표현형이 변경된다.
종결 영역은 전사 개시 영역과 천연일 수 있거나, 작동가능하게 연결된 관심 mut-PPO 서열과 천연일 수 있거나, 식물 숙주와 천연일 수 있거나, 또는 또 다른 공급원으로부터 유래될 수 있다 (즉, 프로모터, 관심 mut-PPO 핵산 서열, 식물 숙주 또는 그의 임의의 조합에 대해 외래 또는 이종). 에이. 투메파시엔스의 Ti-플라스미드, 예컨대 옥토핀 신타제 및 노팔린 신타제 종결 영역으로부터 편리한 종결 영역이 이용가능하다. 또한, 문헌 [Guerineau et al. (1991) Mol. Gen. Genet. 262: 141-144; Proudfoot (1991) Cell 64:671-674; Sanfacon et al. (1991) Genes Dev. 5: 141-149; Mogen et al. (1990) Plant Cell 2: 1261-1272; Munroe et al. (1990) Gene 91: 151-158; Ballas t al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:7891-7903; 및 Joshi et al. (1987) Nucleic Acid Res. 15:9627-9639]을 참조한다. 적절한 경우에, 유전자(들)가 형질전환된 식물에서의 증가된 발현을 위해 최적화될 수 있다. 즉, 개선된 발현을 위해 식물이 선호하는 코돈을 사용하여 유전자들을 합성할 수 있다. 예를 들어, 숙주가 선호하는 코돈 용법에 관한 논의에 대한 문헌 [Campbell and Gowri (1990) Plant Physiol. 92: 1-11]을 참조한다. 식물이 선호하는 유전자를 합성하기 위한 방법은 관련 기술분야에서 이용가능하다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,380,831 및 5,436,391 및 문헌 [Murray et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:477-498]을 참조하며, 이들은 본원에 참조로 포함된다.
세포 숙주에서의 유전자 발현을 증진시키는 추가의 서열 변형이 공지되어 있다. 이들은 가성 폴리아데닐화 신호, 엑손-인트론 스플라이스 부위 신호, 트랜스포손-유사 반복부를 코딩하는 서열, 및 유전자 발현에 해로울 수 있는 널리 특성화되어 있는 다른 서열의 제거를 포함한다. 숙주 세포에서 발현된 공지된 유전자를 참고하여 계산된 바와 같이, 서열의 G-C 함량을 주어진 세포 숙주에 대해 평균인 수준으로 조정할 수 있다. 가능한 경우에, 예상되는 헤어핀 이차 mRNA 구조를 회피하기 위해 서열을 변형한다. 유전자 발현을 증진시키기 위한 뉴클레오티드 서열이 또한 식물 발현 벡터에서 사용될 수 있다. 이들은 옥수수 Adhl, 인트론l 유전자의 인트론 (Callis et al. Genes and Development 1: 1183-1200, 1987), 및 담배 모자이크 바이러스 (TMV), 옥수수 황화 반점 바이러스 및 알팔파 모자이크 바이러스로부터의 리더 서열 (W-서열) (Gallie et al. Nucleic Acid Res. 15:8693-8711, 1987 및 Skuzeski et al. Plant Mol. Biol. 15:65-79, 1990)을 포함한다. 옥수수의 쉬룬켄(shrunken)-1 유전자좌로부터의 제1 인트론이 키메라 유전자 구축물에서 유전자의 발현을 증가시키는 것으로 나타났다. 미국 특허 번호 5,424,412 및 5,593,874는 유전자 발현 구축물에서의 특정 인트론의 사용을 개시하고, 문헌 [Gallie et al. (Plant Physiol. 106:929-939, 1994)]은 또한 인트론이 조직 특이적으로 유전자 발현을 조절하는데 유용함을 보여준다. mut-PPO 유전자 발현을 추가로 증진시키거나 최적화하기 위해, 본 발명의 식물 발현 벡터는 또한 매트릭스 부착 영역 (MAR)을 함유하는 DNA 서열을 함유할 수 있다. 이러한 변형된 발현 시스템으로 형질전환된 식물 세포는, 이에 의해 본 발명의 뉴클레오티드 서열의 과다발현 또는 구성적 발현을 나타낼 수 있다.
본 발명의 발현 카세트는 발현 카세트 구축물 내에 5' 리더 서열을 추가로 함유할 수 있다. 이러한 리더 서열은 번역을 증진시키는 작용을 할 수 있다. 번역 리더는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 피코르나바이러스 리더, 예를 들어 EMCV 리더 (엔세팔로미오카르디티스(Encephalomyocarditis) 5' 비코딩 영역) (Elroy-Stein et al. (1989) Proc. Natl. Acad. ScL USA 86:6126-6130); 포티바이러스 리더, 예를 들어 TEV 리더 (담배 식각 바이러스) (Gallie et al. (1995) Gene 165(2):233-238), MDMV 리더 (옥수수 왜소 모자이크 바이러스) (Virology 154:9-20), 및 인간 이뮤노글로불린 중쇄 결합 단백질 (BiP) (Macejak et al. (1991) Nature 353:90-94); 알팔파 모자이크 바이러스의 코트 단백질 mRNA로부터의 비번역 리더 (AMV RNA 4) (Jobling et al. (1987) Nature 325:622-625); 담배 모자이크 바이러스 리더 (TMV) (Gallie et al. (1989) in Molecular Biology of RNA, ed. Cech (Liss, New York), pp. 237-256); 및 옥수수 황화 반점 바이러스 리더 (MCMV) (Lommel et al. (1991) Virology 81:382-385)를 포함한다. 또한 문헌 [Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968]을 참조한다. 번역을 증진시키는 것으로 공지되어 있는 다른 방법, 예를 들어 인트론 등이 사용될 수 있다.
발현 카세트의 제조에 있어서, DNA 서열을 적절한 배향으로, 및 적절하게는 적절한 리딩 프레임 내에 제공하기 위해 다양한 DNA 단편을 조작할 수 있다. 이를 위해, DNA 단편들을 연결하기 위해 어댑터 또는 링커가 사용될 수 있거나, 또는 편리한 제한 부위, 여분의 DNA의 제거, 제한 부위의 제거 등을 위해 다른 조작이 수반될 수 있다. 이러한 목적을 위해, 시험관내 돌연변이유발, 프라이머 수선, 제한, 어닐링, 재치환, 예를 들어 전이 및 전환이 수반될 수 있다.
본 발명을 수행하는데 다수의 프로모터가 사용될 수 있다. 목적하는 결과를 기초로 하여 프로모터를 선택할 수 있다. 핵산은 식물에서의 발현을 위한 구성적 프로모터, 조직-선호형 프로모터 또는 다른 프로모터와 조합될 수 있다. 이러한 구성적 프로모터는, 예를 들어 WO 99/43838 및 미국 특허 번호 6,072,050에 개시되어 있는 Rsyn7 프로모터 및 다른 구성적 프로모터의 코어 프로모터; 코어 CaMV 35S 프로모터 (Odell et al. (1985) Nature 313:810-812); 벼 액틴 (McElroy et al. (1990) Plant Cell 2: 163-171); 유비퀴틴 (Christensen et al. (1989) Plant Mol. Biol. 12:619-632 및 Christensen et al. (1992) Plant Mol. Biol. 18:675-689); pEMU (Last et al. (1991) Theor. Appl. Genet. 81:581- 588); MAS (Velten et al. (1984) EMBO J. 3:2723-2730); ALS 프로모터 (미국 특허 번호 5,659,026) 등을 포함한다. 다른 구성적 프로모터는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,608,149; 5,608,144; 5,604,121; 5,569,597; 5,466,785; 5,399,680; 5,268,463; 5,608,142; 및 6,177,611을 포함한다.
조직-선호형 프로모터를 사용하여 특정한 식물 조직 내에서 증진된 mut-PPO 발현을 표적화할 수 있다. 이러한 조직-선호형 프로모터는 잎-선호형 프로모터, 뿌리-선호형 프로모터, 종자-선호형 프로모터 및 줄기-선호형 프로모터를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 조직-선호형 프로모터는 문헌 [Yamamoto et al. (1997) Plant J. 12(2):255-265; Kawamata et al. (1997) Plant Cell Physiol. 38(7):792-803; Hansen et al. (1997) Mol. Gen Genet. 254(3):337-343; Russell et al. (1997) Transgenic Res. 6(2): 157-168; Rinehart et al. (1996) Plant Physiol. 112(3): 1331-1341; Van Camp et al. (1996) Plant Physiol. 112(2):525-535; Canevascini et al. (1996) Plant Physiol. 112(2):513-524; Yamamoto et al. (1994) Plant Cell Physiol. 35(5):773-778; Lam (1994) Results Probl. Cell Differ. 20: 181- 196; Orozco et al. (1993) Plant Mol Biol. 23(6): 1129-1138; Matsuoka e/ [alpha]/. (1993) Proc Natl. Acad. Sci. USA 90(20):9586-9590; 및 Guevara-Garcia et al. (1993) Plant J. 4(3):495-505]을 포함한다. 이러한 프로모터는, 필요할 경우에, 약한 발현을 위해 변형될 수 있다. 한 실시양태에서, 관심 핵산은 발현을 위해 엽록체로 표적화된다. 이러한 방식에서, 관심 핵산이 엽록체 내로 직접 삽입되지 않는 경우에, 발현 카세트는 관심 유전자 산물을 엽록체로 지시하는 엽록체 통과 펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 엽록체-표적화 서열을 추가로 함유할 것이다. 이러한 통과 펩티드는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 엽록체-표적화 서열과 관련하여, "작동가능하게 연결된"은 2개의 서열이 인접해 있고 동일한 리딩 프레임 내에 있도록, 통과 펩티드를 코딩하는 핵산 서열 (즉, 엽록체-표적화 서열)이 본 발명의 mut-PPO 핵산에 연결된 것을 의미한다. 예를 들어, 문헌 [Von Heijne et al. (1991) Plant Mol. Biol. Rep. 9: 104-126; Clark et al. (1989) J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968; Romer et al. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421; 및 Shah et al. (1986) Science 233:478-481]을 참조한다. 본 발명의 mut-PPO 단백질이 천연 엽록체 통과 펩티드를 포함하지만, 엽록체-표적화 서열을 본 발명의 성숙한 mut-PPO 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 5'-말단에 작동가능하게 연결시킴으로써 관련 기술분야에 공지된 임의의 엽록체 통과 펩티드를 본 발명의 성숙한 mut-PPO 단백질의 아미노산 서열에 융합시킬 수 있다. 엽록체 표적화 서열은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 이는 리불로스-1,5-비스포스페이트 카르복실라제 (루비스코)의 엽록체 소형 서브유닛 (de Castro Silva Filho et al. (1996) Plant Mol. Biol. 30:769-780; Schnell et al. (1991) J. Biol. Chem. 266(5):3335-3342); 5-(엔올피루빌)쉬키메이트-3-포스페이트 신타제 (EPSPS) (Archer et al. (1990) J. Bioenerg. Biomemb. 22(6):789-810); 트립토판 신타제 (Zhao et al. (1995) J. Biol. Chem. 270(11):6081-6087); 플라스토시아닌 (Lawrence et al. (1997) J. Biol. Chem. 272(33):20357-20363); 코리스메이트 신타제 (Schmidt et al. (1993) J. Biol. Chem. 268(36):27447-27457); 및 집광 클로로필 a/b 결합 단백질 (LHBP) (Lamppa et al. (1988) J. Biol. Chem. 263: 14996-14999)을 포함한다. 또한, 문헌 [Von Heijne et al. (1991) Plant Mol. Biol. Rep. 9: 104- 126; Clark et al. (1989) J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968; Romer et al. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196: 1414-1421; 및 Shah et al. (1986) Science 233:478-481]을 참조한다.
엽록체의 형질전환 방법이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Svab et al. (1990) Proc. Natl. Acad. ScL USA 87:8526-8530; Svab and Maliga (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:913-917; Svab and Maliga (1993) EMBO J. 12:601-606]을 참조한다. 상기 방법은 선택 마커를 함유하는 DNA의 입자 총 전달, 및 상동 재조합을 통한 색소체 게놈으로의 DNA의 표적화에 의존한다. 추가로, 핵-코딩되고 색소체-지시되는 RNA 폴리머라제의 조직-선호형 발현에 의한 침묵 색소체-매개 트랜스진의 전사활성화에 의해 색소체 형질전환이 달성될 수 있다. 이러한 시스템은 문헌 [McBride et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:7301-7305]에 보고된 바 있다. 엽록체로 표적화시키고자 하는 관심 핵산은 식물 핵과 이러한 소기관 사이의 코돈 용법에서의 차이를 고려하여 엽록체에서의 발현에 대해 최적화될 수 있다. 이러한 방식으로, 엽록체-선호형 코돈을 사용하여 관심 핵산을 합성할 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,380,831을 참조하며, 이는 본원에 참조로 포함된다.
바람직한 실시양태에서, mut-PPO 핵산은 a) 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45에 제시된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 그의 변이체 또는 유도체; b) 서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 또는 46에 제시된 바와 같은 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 그의 변이체 또는 유도체; c) a) 또는 b) 중 임의의 것의 적어도 60개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및 d) a) 내지 c) 중 임의의 것의 폴리뉴클레오티드에 상보적인 폴리뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
바람직하게는, 본 발명의 발현 카세트는 식물에서 기능성인 전사 개시 조절 영역 및 번역 개시 조절 영역을 추가로 포함한다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드는 식물 형질전환을 위한 선택 마커 유전자로서의 용도를 발견하였지만, 본 발명의 발현 카세트는 형질전환된 세포의 선택을 위해 또 다른 선택 마커 유전자를 포함할 수 있다. 본 발명의 것을 비롯한 선택 마커 유전자는 형질전환된 세포 또는 조직의 선택을 위해 사용된다. 마커 유전자는 항생제 저항성을 코딩하는 유전자, 예컨대 네오마이신 포스포트랜스퍼라제 II (NEO) 및 히그로마이신 포스포트랜스퍼라제 (HPT)를 코딩하는 것, 뿐만 아니라 제초제 화합물, 예컨대 글루포시네이트 암모늄, 브로목시닐, 이미다졸리논 및 2,4-디클로로페녹시아세테이트 (2,4-D)에 대한 저항성을 부여하는 유전자를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일반적으로, 문헌 [Yarranton (1992) Curr. Opin. Biotech. 3 :506-511 ; Christophers on et al (1992) Proc. Natl. Acad. ScL USA 89:6314-6318; Yao et al. (1992) Cell 71:63-72; Reznikoff (1992) Mol Microbiol 6:2419-2422; Barkley et al (1980) in The Operon, pp. 177-220; Hu et al (1987) Cell 48:555-566; Brown et al (1987) Cell 49:603-612; Figge et al (1988) Cell 52:713-722; Deuschle et al (1989) Proc. Natl Acad. AcL USA 86:5400-5404; Fuerst et al (1989) Proc. Natl Acad. ScL USA 86:2549-2553; Deuschle et al (1990) Science 248:480-483; Gossen (1993) Ph.D. Thesis, University of Heidelberg; Reines et al (1993) Proc. Natl Acad. ScL USA 90: 1917-1921; Labow et al (1990) Mol Cell Biol 10:3343-3356; Zambretti et al (1992) Proc. Natl Acad. ScL USA 89:3952-3956; Bairn et al (1991) Proc. Natl Acad. ScL USA 88:5072-5076; Wyborski et al (1991) Nucleic Acids Res. 19:4647-4653; Hillenand-Wissman (1989) Topics Mol Struc. Biol 10: 143- 162; Degenkolb et al (1991) Antimicrob. Agents Chemother. 35: 1591-1595; Kleinschnidt et al (1988) Biochemistry 27: 1094-1104; Bonin (1993) Ph.D. Thesis, University of Heidelberg; Gossen et al (1992) Proc. Natl Acad. ScL USA 89:5547- 5551; Oliva et al (1992) Antimicrob. Agents Chemother. 36:913-919; Hlavka et al (1985) Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 78 ( Springer-Verlag, Berlin); Gill et al (1988) Nature 334:721-724]를 참조한다. 이러한 개시 내용은 본원에 참조로 포함된다. 선택 마커 유전자들의 상기 목록은 제한적인 것으로 의도되지 않는다. 임의의 선택 마커 유전자가 본 발명에서 사용될 수 있다.
본 발명은 숙주 세포에서의 벡터의 발현이 숙주 세포의 야생형 품종과 비교하여 PPO-억제 제초제에 대한 내성을 증가시키는, 상기 기재된 것과 같은 mut-PPO 핵산을 함유하는 발현 카세트를 포함하는 단리된 재조합 발현 벡터를 제공한다. 본원에 사용된 용어 "벡터"는 연결된 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 벡터의 한 유형은 "플라스미드"로, 이는 추가의 DNA 절편이 라이게이션될 수 있는 환형의 이중 가닥 DNA 루프를 지칭한다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터로, 여기서 추가의 DNA 절편은 바이러스 게놈으로 라이게이션될 수 있다. 특정 벡터는 그가 도입되는 숙주 세포에서 자율 복제할 수 있다 (예를 들어, 박테리아 복제 기점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터 (예를 들어 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주 세포로의 도입시 숙주 세포의 게놈으로 통합되어 숙주 게놈과 함께 복제된다. 또한, 특정 벡터는 작동가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터를 본원에서 "발현 벡터"라 지칭한다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에서 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드 형태이다. 플라스미드가 가장 통상적으로 사용되는 형태의 벡터이므로, 본 명세서에서 "플라스미드" 및 "벡터"는 상호교환적으로 사용될 수 있다. 그러나, 본 발명은 등가의 기능을 제공하는 다른 형태의 발현 벡터, 예컨대 바이러스 벡터 (예를 들어, 복제 결함 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-연관 바이러스)를 포함하는 것으로 의도된다.
본 발명의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 핵산의 발현에 적합한 형태로 본 발명의 핵산을 포함하며, 이는 재조합 발현 벡터가 발현을 위해 사용하고자 하는 숙주 세포에 기초하여 선택된 것으로서 발현시키고자 하는 핵산 서열에 작동가능하게 연결된 1개 이상의 조절 서열을 포함한다는 것을 의미한다. 조절 서열은 다수의 숙주 세포 유형에서 뉴클레오티드 서열의 구성적 발현을 지시하는 것, 및 오직 특정 숙주 세포에서만 또는 특정 조건 하에서만 뉴클레오티드 서열의 발현을 지시하는 것을 포함한다. 발현 벡터의 설계는 형질전환시키고자 하는 숙주 세포의 선택, 목적하는 폴리펩티드의 발현 수준 등과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다는 것을 통상의 기술자는 인식할 것이다. 본 발명의 발현 벡터는 숙주 세포로 도입될 수 있고, 이로써 본원에 기재된 바와 같은 핵산에 의해 코딩되는 융합 폴리펩티드 또는 펩티드 (예를 들어, mut-PPO 폴리펩티드, 융합 폴리펩티드 등)를 비롯한 폴리펩티드 또는 펩티드를 생산할 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시양태에서, mut-PPO 폴리펩티드는 식물 및 식물 세포, 예컨대 단세포 식물 세포 (예컨대 조류) (문헌 [Falciatore et al., 1999, Marine Biotechnology 1(3):239-251] 및 상기 문헌에 포함되어 있는 참고문헌 참조) 및 고등 식물 (예를 들어 종자식물, 예컨대 농작물)로부터의 식물 세포에서 발현된다. mut-PPO 폴리뉴클레오티드는 형질감염, 형질전환 또는 형질도입, 전기천공, 입자 충격, 아그로감염, 바이오리스틱스 등을 비롯한, 임의의 수단에 의해 식물 세포 내로 "도입"될 수 있다.
식물 세포를 비롯한 숙주 세포를 형질전환 또는 형질감염시키는 적합한 방법은 문헌 [Sambrook et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd, ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989)] 및 다른 실험실 매뉴얼, 예컨대 문헌 [Methods in Molecular Biology, 1995, Vol. 44, Agrobacterium protocols, ed: Gartland and Davey, Humana Press, Totowa, New Jersey]에서 찾아볼 수 있다. PPO-억제 제초제에 대해 증가된 내성은 광범위한 품종의 식물, 예컨대 옥수수, 밀, 호밀, 귀리, 트리티케일, 벼, 보리, 대두, 땅콩, 목화, 평지씨 및 카놀라, 마니호트, 후추, 해바라기 및 타게테스, 가지과 식물, 예컨대 감자, 담배, 가지 및 토마토, 비시아(Vicia) 종, 완두콩, 알팔파, 관목 식물 (커피, 카카오, 차), 살릭스(Salix) 종, 교목 (기름 야자, 코코넛), 다년생 풀, 및 먹이 작물로 유전되기를 목적하는 일반적인 형질이므로, 이들 농작물은 또한 본 발명의 추가의 한 실시양태로서 바람직한 유전자 조작용 표적 식물이다. 바람직한 실시양태에서, 식물은 농작물이다. 먹이 작물은 위트그래스(Wheatgrass), 카나리그래스(Canarygrass), 브롬그래스(Bromegrass), 와일드라이 그래스(Wildrye Grass), 블루그래스(Bluegrass), 오차드그래스(Orchardgrass), 알팔파, 살포인(Salfoin), 버즈풋 트레포일(Birdsfoot Trefoil), 앨사이크 클로버(Alsike Clover), 레드 클로버(Red Clover), 및 스위트 클로버(Sweet Clover)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 한 실시양태에서, mut-PPO 폴리뉴클레오티드의 식물로의 형질감염은 아그로박테리움 매개 유전자 전달에 의해 달성된다. 통상의 기술자에게 공지되어 있는 한 형질전환 방법은 아그로박테리아가 mut-PPO 핵산을 함유하는 아그로박테리아 용액 내로 화훼를 침지시킨 후, 형질전환된 생식세포를 육종하는 것이다. 아그로박테리움 매개 식물 형질전환은 예를 들어 GV3101 (pMP90) (Koncz and Schell, 1986, Mol. Gen. Genet. 204:383-396) 또는 LBA4404 (클론테크(Clontech)) 아그로박테리움 투메파시엔스 균주를 사용하여 수행할 수 있다. 형질전환은 표준 형질전환 및 재생 기술에 의해 수행될 수 있다 (Deblaere et al., 1994, Nucl. Acids. Res. 13:4777-4788; Gelvin, Stanton B. and Schilperoort, Robert A, Plant Molecular Biology Manual, 2nd Ed. - Dordrecht : Kluwer Academic Publ., 1995. - in Sect., Ringbuc Zentrale Signatur: BT11-P ISBN 0-7923-2731-4; Glick, Bernard R. and Thompson, John E., Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, Boca Raton : CRC Press, 1993 360 S., ISBN 0-8493-5164-2). 예를 들어, 평지씨는 자엽 또는 배축 형질전환을 통해 형질전환될 수 있다 (Moloney et al., 1989, Plant Cell Report 8:238-242; De Block et al., 1989, Plant Physiol. 91:694-701). 아그로박테리움 및 식물 선택을 위해 항생제를 사용하는 것은 형질전환을 위해 사용되는 2원 벡터 및 아그로박테리움 균주에 따라 달라진다. 평지씨 선택은 통상적으로는 선택가능한 식물 마커로서 카나마이신을 사용하여 수행된다. 아마에의 아그로박테리움 매개 유전자 전달은, 예를 들어 문헌 [Mlynarova et al., 1994, Plant Cell Report 13:282-285]에 기재되어 있는 기술을 사용하여 수행될 수 있다. 추가로, 대두의 형질전환은, 예를 들어 유럽 특허 번호 0424 047, 미국 특허 번호 5,322,783, 유럽 특허 번호 0397 687, 미국 특허 번호 5,376,543 또는 미국 특허 번호 5,169,770에 기재되어 있는 기술을 사용하여 수행될 수 있다. 옥수수의 형질전환은 입자 충격, 폴리에틸렌 글리콜 매개 DNA 흡수에 의해, 또는 탄화규소 섬유 기술을 통해 달성될 수 있다. (예를 들어, 문헌 [Freeling and Walbot "The maize handbook" Springer Verlag: New York (1993) ISBN 3-540-97826-7] 참조). 옥수수 형질전환의 구체적 예는 미국 특허 번호 5,990,387에서 발견되고, 밀 형질전환의 구체적 예는 PCT 출원 번호 WO 93/07256에서 찾아볼 수 있다.
본 발명에 따라, 도입된 mut-PPO 폴리뉴클레오티드가 비-염색체 자율 레플리콘 내로 혼입되거나 식물 염색체 내로 통합되는 경우에, 이는 식물 세포에서 안정적으로 유지될 수 있다. 대안적으로, 도입된 mut-PPO 폴리뉴클레오티드는 염색체외 비-복제 벡터 상에 존재할 수 있고, 일시적으로 발현되거나 일시적으로 활성을 띨 수 있다. 한 실시양태에서, mut-PPO 폴리뉴클레오티드가 염색체 내로 통합되어 있는 상동 재조합 미생물을 생성할 수 있고, 내인성 PPO 유전자를 변경, 예를 들어 기능적으로 파괴시키고, mut-PPO 유전자를 생성하기 위해 결실, 부가 또는 치환이 도입된 PPO 유전자의 적어도 일부를 함유하는 벡터가 제조된다. 상동 재조합을 통해 점 돌연변이를 생성하기 위해, 키메라성형으로 공지되어 있는 기술에 DNA-RNA 하이브리드를 사용할 수 있다 (Cole-Strauss et al., 1999, Nucleic Acids Research 27(5):1323-1330 및 Kmiec, 1999, Gene therapy American Scientist 87(3):240-247). 트리티쿰 종에서의 다른 상동 재조합 절차가 또한 관련 기술분야에 널리 공지되어 있고, 본원에서의 사용이 고려된다.
미생물 또는 식물에서 벡터가 운반하는 외인성 mut-PPO 유전자와 내인성 PPO 유전자 사이의 상동 재조합이 이루어지도록 하기 위해, 상동 재조합 벡터에서 mut-PPO 유전자는 그의 5' 및 3' 말단이 PPO 유전자의 추가의 핵산 분자에 의해 플랭킹될 수 있다. 추가의 플랭킹 PPO 핵산 분자는 내인성 유전자와의 성공적인 상동 재조합을 위한 충분한 길이를 갖는다. 전형적으로, 수백 염기쌍에서 최대 킬로베이스의 플랭킹 DNA (5' 및 3' 말단 둘 다)가 벡터에 포함된다 (예를 들어, 상동 재조합 벡터 설명에 관해서는 문헌 [Thomas, K. R., and Capecchi, M. R., 1987, Cell 51:503] 또는 피스코미트렐라 파텐스(Physcomitrella patens)에서의 cDNA 기반 재조합에 관해서는 문헌 [Strepp et al., 1998, PNAS, 95(8):4368-4373] 참조). 그러나, mut-PPO 유전자는 통상적으로 극소수의 아미노산에서만 PPO 유전자와 상이하기 때문에, 플랭킹 서열이 항상 필요한 것은 아니다. 상동 재조합 벡터는 (예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 매개 DNA를 통해) 미생물 또는 식물 세포 내로 도입되고, 도입된 mut-PPO 유전자가 내인성 PPO 유전자와 상동성으로 재조합되어 있는 세포는 관련 기술분야에 공지된 기술을 사용하여 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 도입된 유전자의 발현을 조절할 수 있는 선택된 시스템을 함유하는 재조합 미생물을 생산할 수 있다. 예를 들어, lac 오페론의 제어 하에 위치하도록 mut-PPO 유전자를 벡터 상에 포함시킴으로써 오직 IPTG의 존재 하에서만 mut-PPO 유전자가 발현되도록 한다. 이러한 조절 시스템은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 본 발명의 재조합 발현 벡터가 도입되어 있는 숙주 세포에 관한 것이다. 용어 "숙주 세포" 및 "재조합 숙주 세포"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 이러한 용어는 특정한 대상 세포를 지칭할 뿐만 아니라, 이러한 세포의 자손 또는 잠재적인 자손에도 적용되는 것으로 이해된다. 돌연변이 또는 환경적 영향에 기인하여 다음 세대에서 특정 변형이 발생할 수 있기 때문에, 사실상 이러한 자손은 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 이는 여전히 본원에 사용된 바와 같은 용어의 범주 내에 포함된다. 숙주 세포는 임의의 원핵 또는 진핵 세포일 수 있다. 예를 들어, mut-PPO 폴리뉴클레오티드는 박테리아 세포, 예컨대 씨. 글루타미쿰(C. glutamicum), 곤충 세포, 진균 세포 또는 포유동물 세포 (예컨대 차이니즈 햄스터 난소 세포 (CHO) 또는 COS 세포), 조류, 섬모충류, 식물 세포, 진균 또는 다른 미생물, 예컨대 씨. 글루타미쿰에서 발현될 수 있다. 다른 적합한 숙주 세포는 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
본 발명의 숙주 세포, 예컨대 배양 중의 원핵 또는 진핵 숙주 세포는 mut-PPO 폴리뉴클레오티드를 생산하는데 (즉, 발현시키는데) 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 본 발명의 숙주 세포를 사용하여 mut-PPO 폴리펩티드를 생산하는 방법을 추가로 제공한다. 한 실시양태에서, 본 방법은 mut-PPO 폴리펩티드가 생산될 때까지 적합한 배지 중에서 (mut-PPO 폴리펩티드를 코딩하는 재조합 발현 벡터가 도입되어 있거나, 게놈에 야생형 또는 mut-PPO 폴리펩티드를 코딩하는 유전자가 도입되어 있는) 본 발명의 숙주 세포를 배양하는 것을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본 방법은 배지 또는 숙주 세포로부터 mut-PPO 폴리펩티드를 단리하는 것을 추가로 포함한다. 본 발명의 또 다른 측면은 단리된 mut-PPO 폴리펩티드 및 그의 생물학적으로 활성인 부분에 관한 것이다. "단리된" 또는 "정제된" 폴리펩티드 또는 그의 생물학적으로 활성인 부분은 재조합 DNA 기술에 의해 생산된 경우에 세포 물질 중 일부가 존재하지 않거나, 화학적으로 합성된 경우에 화학 전구체 또는 다른 화학물질이 존재하지 않는다. 표현 "세포 물질이 실질적으로 존재하지 않는"은 폴리펩티드가 그것이 천연적 또는 재조합적으로 생산된 세포의 세포 성분 중 일부로부터 분리된 것인 mut-PPO 폴리펩티드의 제조물을 포함한다. 한 실시양태에서, 표현 "세포 물질이 실질적으로 존재하지 않는"은 비-mut-PPO 물질 (이는 또한 본원에서 "오염 폴리펩티드"로 지칭됨)을 약 30% (건조 중량 기준) 미만으로, 보다 바람직하게는 비-mut-PPO 물질을 약 20% 미만으로, 보다 더 바람직하게는 비-mut-PPO 물질을 약 10% 미만으로 및 가장 바람직하게는 비-mut-PPO 물질을 약 5% 미만으로 갖는 mut-PPO 폴리펩티드의 제조물을 포함한다.
mut-PPO 폴리펩티드 또는 그의 생물학적으로 활성인 부분이 재조합적으로 생산된 경우에, 또한 바람직하게는 배양 배지가 실질적으로 존재하지 않고, 즉 배양 배지가 폴리펩티드 제조물의 부피의 약 20% 미만, 보다 바람직하게는 약 10% 미만 및 가장 바람직하게는 약 5% 미만을 나타낸다. 표현 "화학 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 존재하지 않는"은 폴리펩티드가 폴리펩티드의 합성에 수반된 화학 전구체 또는 다른 화학물질로부터 분리된 것인 mut-PPO 폴리펩티드의 제조물을 포함한다. 한 실시양태에서, 표현 "화학 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 존재하지 않는"은 화학 전구체 또는 비-mut-PPO 화학물질을 약 30% (건조 중량 기준) 미만으로, 보다 바람직하게는 화학 전구체 또는 비-mut-PPO 화학물질을 약 20% 미만으로, 보다 더 바람직하게는 화학 전구체 또는 비-mut-PPO 화학물질을 약 10% 미만으로 및 가장 바람직하게는 화학 전구체 또는 비-mut-PPO 화학물질을 약 5% 미만으로 갖는 mut-PPO 폴리펩티드의 제조물을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 폴리펩티드 또는 그의 생물학적으로 활성인 부분에는 mut-PPO 폴리펩티드가 유래된 동일한 유기체로부터의 오염 폴리펩티드가 결여되어 있다. 전형적으로, 이러한 폴리펩티드는 미생물, 예컨대 씨. 글루타미쿰, 섬모충류, 조류 또는 진균 이외의 식물에서, 또는 미생물, 예컨대 씨. 글루타미쿰, 섬모충류, 조류 또는 진균에서 예를 들어 mut-PPO 폴리펩티드의 재조합 발현에 의해 생산된다.
상기 기재된 바와 같이, 본 발명은 농작물 또는 종자의 야생형 품종과 비교하여 농작물 또는 종자의 PPO-억제 내성을 증가시키기 위한 조성물 및 방법을 교시한다. 바람직한 실시양태에서, 농작물 또는 종자의 PPO-억제 내성이 증가되어 농작물 또는 종자는 바람직하게는 대략 1-1000 g ai ha-1, 보다 바람직하게는 1-200 g ai ha-1, 보다 더 바람직하게는 5-150 g ai ha-1 및 가장 바람직하게는 10-100 g ai ha-1의 PPO-억제 제초제 적용을 견딜 수 있다. 본원에 사용된 PPO-억제 제초제 적용을 "견디다"는 식물이 이러한 적용에 의해 사멸되지도 손상되지도 않거나, 또는 단지 중간 정도로 손상됨을 의미한다. 적용률은 온도 또는 습도와 같은 환경 조건에 따라, 및 선택된 제초제의 종류 (활성 성분 ai)에 따라 달라질 수 있음을 통상의 기술자는 이해할 것이다.
또한, 본 발명은 상기에서 상세하게 기재된 바와 같은, 임의로 1종 이상의 제초 화합물 B 및 임의로 완화제 C와 조합된 적어도 1종의 PPO-억제 제초제의 사용을 수반하는 방법을 제공한다.
이들 방법에서, PPO-억제 제초제는 종자 처리, 토양 처리 및 잎 처리를 포함하나 이에 제한되지는 않는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 적용될 수 있다. 적용 이전에, PPO-억제 제초제는 통상의 제제, 예를 들어 용액, 에멀젼, 현탁액, 분진, 분말, 페이스트 및 과립으로 전환될 수 있다. 사용 형태는 특정한 의도되는 목적에 의존적이며; 각각의 경우에, 본 발명에 따른 화합물의 충분하고 균일한 분포가 보장되어야 한다.
PPO-억제 제초제에 대해 증가된 내성을 갖는 식물을 제공함으로써, 광범위한 제제를 사용하여 잡초로부터 식물을 보호하고, 그로 인해 식물의 성장을 증진시키고 영양분에 대한 경쟁을 감소시킬 수 있다. PPO-억제 제초제는 본원에 기재된 농작물을 둘러싼 영역에서 출아전, 출아후, 식재전 및 식재시 잡초 방제를 위해 그 자체로 사용될 수 있거나, 또는 다른 첨가제를 함유하는 PPO-억제 제초제 제제가 사용될 수 있다. PPO-억제 제초제는 또한 종자 처리로서 사용될 수 있다. PPO-억제 제초제 제제에서 발견되는 첨가제는 다른 제초제, 세제, 아주반트, 확산제, 점착제, 안정화제 등을 포함한다. PPO-억제 제초제 제제는 습식 또는 건식 제조물일 수 있고, 유동성 분말, 유화성 농축물 및 액체 농축물을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. PPO-억제 제초제 및 제초제 제제는 통상의 방법에 따라, 예를 들어 스프레이, 관개, 살분 등에 의해 적용될 수 있다.
적합한 제제는 PCT/EP2009/063387 및 PCT/EP2009/063386에 상세하게 기재되어 있으며, 이들은 본원에 참조로 포함된다.
상기 내용은 본 발명의 바람직한 실시양태에 관한 것이며, 이는 본 발명의 범위에 벗어나지 않고 그 안에서 다양하게 변화될 수 있음을 또한 이해하여야 한다. 본 발명은 추가로 하기 실시예에 의해 예시되며, 이는 어떤 방식으로든 그의 범위를 제한하는 것으로 해석되서는 안된다. 반대로, 다양한 다른 실시양태, 그의 변형 및 등가물이 있을 수 있으며, 본원의 상세한 설명을 읽은 후, 이들은 본 발명의 취지로부터 및/또는 첨부된 특허청구범위의 범위로부터 벗어나지 않음을 통상의 기술자에게 시사할 수 있음을 명확하게 이해하여야 한다.
실시예
실시예 1: 아마란투스 PPO의 부위 지정 돌연변이유발
아마란투스 PPO의 클로닝
PPO-감수성 및 -저항성 이소형, 및 모든 돌연변이체 조합 및 다중 돌연변이에 대한 아마란투스 투베르쿨라투스 코딩 서열 (서열 1, 3, 5, 7)을 합성하고, 게네아르트(Geneart) (게네아르트 아게(Geneart AG), 독일 레겐스부르크)에 의해 클로닝하였다.
플라스미드 소량분리를 수행하여 이. 콜라이 TOP10으로부터 플라스미드를 단리하고, DNA 서열분석에 의해 확인하였다.
재조합 야생형 및 돌연변이체 PPO의 발현 및 정제
(문헌 [Franck E. Dayan, Pankaj R. Daga, Stephen O. Duke, Ryan M. Lee, Patrick J. Tranel, Robert J. Doerksen. Biochemical and structural consequences of a glycine deletion in the α-8 helix of protoporphyrinogen oxidase. Biochimica et Biophysica Acta 1804 (2010), 1548-56]으로부터 취함)
pRSET 벡터 내의 클론으로 이. 콜라이의 BL21 (DE3)-pLysS 균주를 형질전환시켰다. 세포를 37℃에서 밤새 진탕시키면서, 100 μgmL-1의 카르베니실린을 함유하는 250 mL의 LB 중에서 성장시켰다. 배양물을 항생제를 함유하는 1 L의 LB 중에 희석시키고, 37℃에서 2시간 동안 진탕시키면서 성장시키고, 1 mM IPTG로 유도하고, 25℃에서 추가로 5시간 동안 진탕시키면서 성장시켰다. 1600xg에서 원심분리하여 세포를 수거하고, 0.09% NaCl로 세척하고, -80℃에서 저장하였다.
140 MPa로 프렌치 프레스를 사용하여 세포를 50 mM 인산나트륨 pH 7.5, 1 M NaCl, 5 mM 이미다졸, 5% 글리세롤, 및 1 μg mL-1 류펩틴 중에 용해시켰다. 용해시킨 후, 0.5 U의 벤조나제 (노바젠(Novagen), EMD 케미칼스, 인크.(EMD Chemicals, Inc.), 뉴저지주 깁스타운) 및 PMSF (최종 농도 1 mM)를 첨가하였다. 3000xg에서 원심분리하여 세포 파편을 제거하였다. 20 mM 인산나트륨 pH 8.0, 50 mM NaCl, 5 mM 이미다졸, 5 mM MgCl2, 0.1 mM EDTA 및 17% 글리세롤로 평형화된, 니켈 활성화된 하이트랩 킬레이팅 HP 칼럼(Hitrap Chelating HP column) (지이 헬스케어 바이오-사이언시스 코포레이션(GE Healthcare Bio-Sciences Corp.), 뉴저지주 피스카타웨이) 상에서 His-태깅된 PPO 단백질을 정제하였다.
PPO를 250 mM 이미다졸로 용리시켰다. 20 mM 인산나트륨 완충제 pH 7.5, 5 mM MgCl2, 1 mM EDTA 및 17% 글리세롤로 평형화된 PD-10 칼럼 (지이 헬스케어 바이오-사이언시스 코포레이션, 뉴저지주 피스카타웨이) 상에서 활성 단백질을 탈염시켰다. 배양물 각각의 리터를 대략 10 mg의 순수한 PPO에 제공하고, 검정에 사용할 때까지 -20℃에서 저장하였다.
PPO 활성 검정
PPO 효소 검정 (비-재조합). 이전에 기재된 바와 같이 (Grossmann et al. 2010) 암실-성장 옥수수, 까마중, 나팔꽃 및 어저귀 묘목의 자엽초 또는 새싹 (150 g 생중량)으로부터 PPO 단백질 (EC 1.3.3.4)을 추출하였다. 수거하기 전, 낮은 클로로필 농도에서 틸라코이드 분획 중에서 최고로 특이적인 효소 활성을 달성하기 위해 묘목을 광 존재 하에 2시간 동안 녹화되게 하였다. 높은 클로로필 농도에서는 형광이 유의하게 켄칭되며, 이는 시험에 사용될 수 있는 녹색 틸라코이드의 양을 제한한다. 생중량 대 부피의 비를 1:4로 하여 브라운 블렌더를 사용하여 식물 물질을 냉균질화시켰다. 균질화 완충제는 트리스(히드록시메틸)아미노메탄 (트리스)-HCl (50 mM; pH 7.3), 수크로스 (0.5 M), 염화마그네슘 (1 mM), 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA) (1 mM) 및 소 혈청 알부민 (2 g L-1)으로 이루어졌다. 4층으로 된 미라클로스(Miracloth)를 통해 여과한 후, 10000xg에서 5분 동안 원심분리한 후, 조 색소체 표본을 수득하고, 균질화 완충제 중에 재현탁시킨 후, 150xg에서 2분 동안 원심분리하여 조 세포 파편을 제거하였다. 상청액을 4000xg에서 15분 동안 원심분리하고, 펠릿 분획을 트리스-HCl (50 mM; pH 7.3), EDTA (2 mM), 류펩틴 (2 μM), 펩스타틴 (2 μM) 및 글리세롤 (200 ml L-1)을 함유하는 1 ml의 완충제 중에 재현탁시키고, 사용시까지 -80℃에서 저장하였다. 표준물로서 소 혈청 알부민을 함유하는 효소 추출물 중에서 단백질을 결정하였다. 초기 속도 조건 하에서 화학적으로 환원된 프로토포르피리노겐 IX로부터의 프로토 형성 속도를 모니터링하여 PPO 활성을 형광광도법으로 검정하였다. 검정 혼합물은 총 부피 200 μl 중 트리스-HCl (100 mM; pH 7.3), EDTA (1 mM), 디티오트레이톨 (5 mM), 트윈 80 (0.085%), 프로토포르피리노겐 IX (2 μM), 및 40 μg의 추출 단백질로 이루어졌다. 22℃에서 기질 프로토포르피리노겐 IX를 첨가하여 반응을 개시시켰다. 디메틸 술폭시드 (DMSO) 용액 (검정에서 DMSO의 농도 0.1 mM) 중에서 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온, 플루미옥사진, 부타페나실, 아시플루오르펜, 락토펜, 비페녹스, 술펜트라존, 플러스 음성 대조군으로서 사용된 광합성 억제제 디우론을 제조하고, 0.005 pM 내지 5 μM의 농도로 검정 혼합물에 첨가한 후, 인큐베이션하였다. 폴라스타 옵티마 / 갤럭시(POLARstar Optima / Galaxy) (BMG)를 사용하여 405 nm에서의 여기 및 630 nm에서 모니터링된 방출로 검정 혼합물로부터 형광을 직접 모니터링하였다. 열-불활성화된 추출물의 존재 하의 비-효소적 활성은 무시할 수 있는 것이었다. 제초제에 의해 유도된 효소 활성의 억제를 비처리된 대조군에 대해 상대적인 백분율 억제로 표현하였다. 50% 효소 억제에 요구되는 화합물의 몰 농도 (IC50 값)는 비-선형 회귀 분석을 사용하여 용량-반응 방정식에 값을 피팅하여 계산하였다.
PPO 효소 검정 (재조합). 프로토는 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich) (위스콘신주 밀워키)로부터 구입하였다. 문헌 [Jacobs and Jacobs (N.J. Jacobs, J.M. Jacobs, Assay for enzymatic protoporphyrinogen oxidation, a late step in heme synthesis, Enzyme 28 (1982) 206-219)]에 따라 프로토겐을 제조하였다. 0.1 mM EDTA, 0.1% 트윈 20, 5 μM FAD 및 500 mM 이미다졸을 함유하는 100 mM 인산나트륨 pH 7.4 중에서 검정을 수행하였다. PPO 억제제 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온, 플루미옥사진, 부타페나실, 아시플루오르펜, 락토펜, 비페녹스, 술펜트라존, 플러스 음성 대조군으로서 사용된 광합성 억제제 디우론, 및 MC-15608과의 용량-반응 곡선을 150 μM 프로토겐의 존재 하에 수득하였다. 여기 및 방출 대역폭을 각각 1.5 및 30 nm로 설정하였다. 모든 검정은 2중 또는 3중으로 이루어졌고, 폴라스타 옵티마 / 갤럭시 (BMG)를 사용하여 405 nm에서의 여기 및 630 nm에서 모니터링된 방출로 측정하였다. 50% 효소 억제에 요구되는 화합물의 몰 농도 (IC50 값)는 비-선형 회귀 분석을 사용하여 용량-반응 방정식에 값을 피팅하여 계산하였다.
치환된 PPO 효소에 대한 용량 반응 (IC50) 값이 야생형 (비-치환된) PPO 효소에 대한 IC50 값보다 더 컸다 (표 4a). 이는, 이들 치환된 PPO 효소가 시험된 PPO-억제 제초제에 대해 고유한 저항성을 가짐을 나타낸다. 치환된 PPO 효소 dG210 및 R128L은 아마란투스 투베르쿨라투스 및 암브로시아 아르테미시이폴리아(Ambrosia artemisiifolia)에서 각각 발견된 공지된 치환된 PPO 효소이며, 다양한 PPO 제초제에 대한 식물체내 PPO 저항성을 담당하는 것으로 밝혀졌다 (Dayan et al., 2010, Biochimica et Biophysica Acta, 1804:1548). 이는 또한 IC50 값이 dG210 또는 R128L보다 더 큰, 열거된 다른 치환된 PPO 효소가 또한 다양한 PPO 제초제에 대한 식물체내 저항성을 담당하는 치환된 PPO 효소임을 나타낸다 (표 4a). 모든 치환된 PPO 효소는 야생형 PPO 효소와 비교하여 비슷한 효소 활성, 분당 형광 단위 변화 (FU/분)를 나타낸다 (표 4a). 또한, 치환된 PPO 효소에 대한 모든 활성 값은 치환된 PPO 효소 dG210 또는 R128L보다 더 크다. 치환된 PPO 효소 dG210 및 R128L은 이미 제시한 바와 같이 식물체내 기능을 위해서도 충분히 활성이 있다. 이는 표시된 모든 다른 치환된 PPO 효소 또한 식물체내 기능을 위해서 충분히 활성이 있음을 나타낸다.
<표 4>
억제제 사플루페나실 및 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온에 대한 야생형 및 아미노산 치환된 PPO 효소의 IC50 (M) 값
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
실시예 2. 야생형 또는 돌연변이된 PPO 서열을 갖는 PPO-억제 제초제 내성 식물 조작
올호프트(Olhoft) 등 (미국 특허 2009/0049567)에 의해 기재된 바와 같은 방법에 의해 PPO-유도체 제초제 내성 대두 (글리신 맥스) 또는 옥수수 (제아 메이스) 식물을 생산하였다. 대두 또는 아라비돕시스 탈리아나의 형질전환을 위해, 야생형 또는 돌연변이된 PPO 서열을 문헌 [Sambrook et al. (Molecular cloning (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press)]에 기재된 바와 같이 표준 클로닝 기술을 사용하여, 유비퀴틴 프로모터 (PcUbi) 및 노팔린 신타제 종결자 (NOS) 서열 사이에 저항성 마커 유전자 카세트 (AHAS) 및 돌연변이된 PPO 서열 (GOI로 마킹됨)을 함유하는 2원 벡터에 클로닝하였다. 옥수수 형질전환을 위해, 야생형 또는 돌연변이된 PPO 서열을 문헌 [Sambrook et al. (Molecular cloning (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press)]에 기재된 바와 같이 표준 클로닝 기술을 사용하여, 옥수수 유비퀴틴 프로모터 (ZmUbi) 및 노팔린 신타제 종결자 (NOS) 서열 사이에 저항성 마커 유전자 카세트 (AHAS) 및 돌연변이된 PPO 서열 (GOI로 마킹됨)을 함유하는 2원 벡터에 클로닝하였다. 식물 형질전환을 위해 2원 플라스미드를 아그로박테리움 투메파시엔스로 도입하였다. 플라스미드 구축물을 아그로박테리움-매개 형질전환을 통해 묘목 체외이식편 최초 마디에 있는 대두의 엽액 분열조직 세포 내로 도입하였다. 접종 및 아그로박테리아와의 공동-배양 후, 1주 동안 선택없이 체외이식편을 새싹 도입 배지로 옮겼다. 이어서, 체외이식편을 3주 동안 1-3 μM 이마자피르 (아스날(Arsenal))를 함유하는 새싹 유도 배지로 옮기고 형질전환된 세포를 선택하였다. 이어서, 최초 마디에 건강한 캘러스/새싹 패드를 갖는 체외이식편을, 새싹이 신장될 때까지 또는 체외이식편이 사멸할 때까지, 1-3 μM 이마자피르를 함유하는 새싹 신장 배지로 옮겼다. 트랜스제닉 식물소체를 착근시키고, 트랜스진 존재에 대해 택맨 분석하고, 토양으로 옮기고, 온실에서 성숙해질 때까지 성장시켰다. 맥엘버(McElver) 및 싱(Singh) (WO 2008/124495)에 의해 기재된 방법에 의해 옥수수 식물의 형질전환을 수행하였다. 돌연변이된 PPO 서열을 함유하는 식물 형질전환 벡터 구축물을 아그로박테리움-매개 형질전환을 통해 옥수수 미성숙 배아로 도입하였다.
3-4주 동안 0.5-1.5 μM 이마제타피르로 보충된 선택 배지에서 형질전환된 세포를 선택하였다. 트랜스제닉 식물소체를 식물 재생 배지 상에서 재생시키고, 이후 착근시켰다. 트랜스제닉 식물소체를 트랜스진의 존재에 대해 택맨 분석한 후, 화분재배용 혼합물에 이식하고, 온실에서 성숙해질 때까지 성장시켰다. 맥엘버 및 싱 (WO 2008/124495)에 의해 기재된 바와 같은 플로랄 딥 방법에 의해 아라비돕시스 탈리아나를 야생형 또는 돌연변이된 PPO 서열로 형질전환시켰다. 통합 유전자좌의 개수의 분석을 위해 트랜스제닉 아라비돕시스 식물을 택맨 분석하였다. 펭(Peng) 등 (US 6653529)에 의해 기재된 바와 같은 원형질체 형질전환에 의해 오리자 사티바 (벼)의 형질전환을 수행하였다. 돌연변이된 PPO 서열을 함유하는 대두, 옥수수 및 벼의 T0 또는 T1 트랜스제닉 식물에 대해 하기 PPO-억제 제초제: 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 플루미옥사진, 부타페나실, 아시플루오르펜, 락토펜, 비페녹스, 술펜트라존, 플러스 음성 대조군으로서 사용된 광합성 억제제 디우론과의 온실 연구 및 소형-획지 연구에서 PPO-유래 제초제에 대한 개선된 내성을 시험하였다.
트랜스제닉 아라비돕시스 탈리아나 식물에 대해 48-웰 플레이트에서 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 플루미옥사진, 부타페나실, 아시플루오르펜, 락토펜, 비페녹스, 술펜트라존, 플러스 음성 대조군으로서 사용된 광합성 억제제 디우론에 대해 개선된 내성을 검정하였다. 따라서, T2 종자를 에탄올 + 물 (70+30 부피 기준) 중에서 5분 동안 교반하고, 에탄올 + 물 (70+30 부피 기준)로 1회 세정하고, 멸균 탈이온수로 2회 세정하여 표면 멸균시켰다. 종자를 물 중에 용해된 0.1% 한천 (w/v)에 재현탁시켰다. 웰당 4 내지 5개의 종자를 절반-농도의 무라시게 스쿠그 영양 용액, pH 5.8 (Murashige and Skoog (1962) Physiologia Plantarum 15: 473-497)로 이루어진 고체 영양 배지 상에 플레이팅하였다. 화합물을 디메틸술폭시드 (DMSO)에 용해시키고, 배지에 첨가한 후 응고시켰다 (최종 DMSO 농도 0.1%). 멀티 웰 플레이트를 성장 챔버 내에서 22℃, 75% 상대 습도 및 110 μmol Phot * m-2 * s-1에서 14 : 10시간 명 : 암 광주기로 인큐베이션하였다. 시딩 후 7 내지 10일째에 성장 억제를 야생형 식물과 비교하여 평가하였다. 추가로, 트랜스제닉 T1 아라비돕시스 식물에 대해 하기 PPO-억제 제초제: 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온, 플루미옥사진, 부타페나실, 아시플루오르펜, 락토펜, 비페녹스, 술펜트라존, 플러스 음성 대조군으로서 사용된 광합성 억제제 디우론과의 온실 연구에서 PPO-억제 제초제에 대한 개선된 내성을 시험하였다. 결과를 표 5에 제시한다.
<표 5>
Figure pct00032
실시예 3. 조직 배양 조건
시험관내 조직 배양 돌연변이유발 검정은 프로토포르피리노겐 옥시다제 (PPO) 억제 제초제 (예를 들어 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온, 플루미옥사진, 부타페나실, 아시플루오르펜, 락토펜, 비페녹스, 술펜트라존)에 대해 내성인 식물 조직 (예를 들어, 옥수수, 벼 조직)을 단리하고 특성화하기 위해 개발되었다. 검정은 시험관내 조직 배양에서 발견된 체세포클론 변이를 사용하였다. 체세포클론 변이로부터 유래된 자발 돌연변이는 화학적 돌연변이유발 및 제초제의 농도를 증가시켜 가면서 후속적 단계식 선택에 의해 증진시킬 수 있다.
본 발명은 재생가능한 취성 배발생 옥수수 또는 벼 캘러스의 성장을 장려하기 위한 조직 배양 조건을 제공한다. 캘러스는 각각 제아 메이스 및 자포니카 (타이페이 309, 니폰베어(Nipponbare), 고시히까리(Koshihikari))를 포괄하는 4종의 상이한 옥수수 또는 벼 재배품종 및 인디카 (인디카 1) 품종으로부터 개시시켰다. 대략 1분 동안 70% 에탄올 중에서, 이어서 20분 동안 20% 시판 클로락스(Clorox) 표백제 중에서 종자를 표면 멸균시켰다. 멸균수로 종자를 세정하고, 캘러스 유도 배지 상에 플레이팅하였다. 다양한 캘러스 유도 배지를 시험하였다. 시험된 배지에 대한 성분 목록은 표 6에 제시되어 있다.
<표 6>
Figure pct00033
Figure pct00034
다수의 변이를 시험한 후 R001M 캘러스 유도 배지가 선택되었다. 배양물을 암실에서 30℃에서 유지시켰다. 10-14일 후 배발생 캘러스를 신선한 배지로 계대배양하였다.
실시예 4. 제초제-내성 캘러스의 선택
일단 조직 배양 조건이 결정되면, 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온, 플루미옥사진, 부타페나실, 아시플루오르펜, 락토펜, 비페녹스, 술펜트라존, 플러스 음성 대조군으로서 사용된 광합성 억제제 디우론과의 사멸 곡선에서 조직 생존의 분석을 통해 선택 조건을 추가로 확립하였다. 조직내 제초제 축적 뿐만 아니라, 세포 및 배양 배지 중에서의 그의 지속성 및 안정성을 신중히 고려하였다. 이들 실험을 통해, 돌연변이된 물질의 초기 선택을 위한 준치사량을 확립하였다.
선택 배지 내의 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 플루미옥사진, 부타페나실, 아시플루오르펜, 락토펜, 비페녹스, 술펜트라존, 플러스 음성 대조군으로서 사용된 광합성 억제제 디우론의 출발 용량을 확립한 후, 독성 용량의 존재 하에 왕성하게 성장하는 세포를 회수할 때까지 각각 옮길 때마다 PPO 억제제의 농도를 증가시키면서 단계적으로 조직을 선택하였다. 생성된 캘러스를 매 3-4주마다 선택제를 함유하는 R001M으로 추가로 계대배양하였다. 선택 압력이 사멸 곡선 및 연속 배양의 관찰에 의해 결정된 바와 같은 독성 수준을 초과할 때까지 4-5회의 계대배양 동안 26,000개 초과의 캘러스가 선택되었다.
대안적으로, 천천히 진탕시키고, 매주 계대배양하면서, MS711R에서 캘러스로부터의 액체 배양을 개시하였다. 일단 액체 배양이 확립되면, 각 계대배양시마다 플라스크에 선택제를 직접 첨가하였다. 2-4 라운드의 액체 선택 후, 추가로 성장시키기 위해 배양물을 필터를 걸쳐 고체 R001M 배지 상으로 옮겼다.
실시예 5. 식물 재생
내성 조직을 재생시키고, PPO 유전자 서열 돌연변이에 대해 분자적으로 및/또는 선택제의 존재 하에 변경된 PPO 활성에 대해 생화학적으로 특성화하였다. 또한, 테트라피롤 생합성 및/또는 대사 경로에 직접 및/또는 간접적으로 수반되는 유전자를 또한 서열 분석하여 돌연변이를 특성화하였다. 최종적으로, 운명 (예를 들어 대사, 전위, 수송)이 바뀐 효소 또한 서열 분석하여 돌연변이를 특성화하였다.
제초제 선택 후, 10 - 14일 동안 R025M, 약 2주 동안 R026M, 잘 형성된 새싹이 발생할 때까지 R327M, 및 온실로 옮길 수 있도록 새싹이 잘 착근될 때까지 R008S의 배지 체제를 사용하여 캘러스를 재생시켰다. 광 존재 하에 재생을 수행하였다. 재생 동안에는 선택제를 포함시키지 않았다.
튼튼한 뿌리가 확립되면, M0 재생체를 온실내 사각형 또는 둥근 화분에 이식하였다. 이식물이 온실 조건에 적응할 때까지 이를 투명 플라스틱 컵 하에 유지시켰다. 광주기가 14시간으로 유지되도록 빛을 보충해주면서 600 W의 고압 나트륨 광을 사용하여 27℃/21℃ (80℉/70℉)의 광주기/암주기로 온실을 설정하였다. 날씨에 의존하여 필요에 따라 식물에게 물을 주고, 매일 비료를 주었다.
실시예 6. 서열 분석
이식을 위해 분리된 클론 식물로부터 잎 조직을 수집하고, 개별적으로 분석하였다. 제조업체의 지시에 따라 위자드((Wizard)® 96 마그네틱 DNA 식물계 키트 (프로메가(Promega), 미국 특허 번호 6,027,945 & 6,368,800)를 사용하여 게놈 DNA를 추출하였다. 적절한 전방향 및 역방향 프라이머를 사용하여 단리된 DNA를 PCR 증폭시켰다.
핫스타(Hotstar) Taq DNA 폴리머라제 (퀴아젠(Qiagen))을 사용하여 하기와 같은 터치다운 열순환 프로그램을 사용하여 PCR 증폭을 수행하였다: 96℃에서 15분 동안, 이어서 35 사이클 (96℃, 30초; 사이클당 58℃ - 0.2℃, 30초; 72℃, 3분 및 30초), 72℃에서 10분.
PCR 생성물을 아가로스 겔 전기영동을 통해 농도 및 단편 크기에 대해 확인하였다. PCR 프라이머 (DNA 랜드마크스(DNA Landmarks) 또는 엔텔레콘(Entelechon))를 사용하여 직접 서열에 의해 탈인산화된 PCR 산물을 분석하였다. 벡터 NTI 어드밴스 10™ (인비트로젠)을 사용하여 야생형 유전자와 관련한 돌연변이에 대해 크로마토그램 추적 파일 (.scf)을 분석하였다. 서열 정보에 기초하여 여러 개체에서 돌연변이를 확인하였다. 디폴트 설정을 사용하여 대표 크로마토그램 및 상응하는 얼라인X(AlignX) 정렬 상에서 서열 분석을 수행하고, 이차 피크를 지정하기 위해 편집하였다.
실시예 7. 제초제-내성의 입증
선택된 돌연변이체 및 이탈물을 작은 화분으로 옮겼다. 야생형 재배품종을 종자로부터 발아시키고, 대조군으로서 제공하였다.
이식후 약 3주 후에, 0.1% 메틸화된 종자 오일로 보충된 사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 플루미옥사진, 부타페나실, 아시플루오르펜, 락토펜, 비페녹스, 술펜트라존 (플러스 디우론)을 함유하는 트랙 스프레이기를 사용하여 M0 재생체에 스프레이하였다. 식물이 온실 조건에 적응한 후, 추가의 사플루페나실 또는 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온을 하위세트에 스프레이하였다. 스프레이가 완료되면, 식물을 24시간 동안 건조 조건으로 유지시킨 후, 다시 물 및 비료를 주었다. 스프레이된 식물을 사진촬영하고, 처리 후 1주 및 3주째에 제초제 손상을 등급화하였다. 이형접합 돌연변이를 함유하는 식물에서는 손상이 없거나 낮은 손상 수준이 관찰된 반면에, 대조군 식물 및 조직 배양 이탈물 (서열분석된 돌연변이에 대해 음성인 재생된 식물)은 처리 이후 심하게 손상되었다.
옥수수 및 대두에 대한 내성 등급을 표 7 a-c에 제시한다.
<표 7a> 옥수수
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
Figure pct00050
<표 7b> 대두
Figure pct00051
Figure pct00052
Figure pct00053
Figure pct00054
<표 7c> PPO 억제제 화합물에 대한 대두 내성: 야생형 및 2개의 개별 이벤트로부터의 트랜스제닉 분리 T1 개체
Figure pct00055
Figure pct00056
이하는 상기 측정된 손상 스코어의 정의를 제공한다:
스코어 손상의 설명
0 손상 없음
1 최소한의 손상, 단지 소수의 잎 패치가 손상되거나 황화됨.
2 약간 더 강한 황화를 수반한 최소한의 손상. 전반적인 성장점은 손상되지 않고 남아있음.
3 이차 잎 조직에 대해 약간 더 강한 손상이 있지만, 일차 잎 및 성장점은 여전히 손상되지 않음.
4 전반적인 식물 형태가 약간 다르고, 이차 성장점 및 잎 조직이 일부 황화 및 괴사됨. 줄기는 무손상임. 1주 이내에 재성장의 가능성이 매우 높음.
5 전반적인 식물 형태가 명백하게 다르고, 소수의 잎 및 성장점에 일부 황화 및 괴사가 있지만 일차 성장점은 무손상임. 줄기 조직은 여전히 녹색임. 1주 이내에 재성장의 가능성이 매우 높음.
6 신규 소엽 성장에서 강력한 손상이 관찰됨. 식물은 상이한 성장점에서의 재성장을 통해서만 생존할 높은 가능성을 가짐. 대부분의 잎이 황화/괴사되지만 줄기 조직은 여전히 녹색임. 아마도 재성장할 것이나 손상된 외양을 인지가능함.
7 대부분의 활성 성장점이 괴사됨. 생존할 수 있는 단일 성장점이 존재할 수 있으며, 부분적으로 황화 또는 녹색 및 부분적으로 괴사가 존재할 수 있음. 2개의 잎은 일부가 녹색인 여전히 황화상태일 수 있고; 줄기를 포함한 식물의 나머지는 괴사됨.
8 식물은 아마도 사멸될 것이고, 모든 성장점이 괴사됨. 1개의 잎은 일부가 녹색인 여전히 황화상태일 수 있음. 식물의 나머지는 괴사됨.
9 식물이 사멸됨.
* 시험되지 않음
실시예 8. 조직 배양을 사용한 제초제 선택
상기 명시된 바와 같이 개발된 용도 및 사멸 곡선을 위한 배지를 선택하였다. 선택을 위해, 상이한 기술이 사용되었다. 단계식 선택법을 적용하거나, 즉시 치사 수준의 제초제를 적용하였다. 각각의 경우에, 모든 캘러스를 각각의 새로운 선택 라운드를 위해 옮겼다. 선택은 각각의 사이클에 대해 3-5주로 4-5 사이클의 배양으로 수행하였다. 캘러스를 나일론 막 위에 놓아 옮기기 용이하게 하였다 (200 마이크로미터 공극 시트, 바이오디자인(Biodesign), 메인주 사코). 막을 100x20 mm 페트리 디쉬에 맞게 절단하고, 오토클레이빙한 후, 모든 플레이트에서 25-35개의 캘러스 (평균 중량/캘러스는 22mg임)를 사용하였다. 또한, 한 세트의 캘러스는 매주 계대배양하면서 액체 배양 배지 중에서 선택한 후, 반고체 배지 상에서 추가로 선택하였다.
사플루페나실, 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온 플루미옥사진, 부타페나실, 아시플루오르펜, 락토펜, 비페녹스, 술펜트라존을 사용하여 돌연변이체 계통을 선택하였다. 재생가능한 돌연변이체 계통을 생성하는 캘러스의 백분율, 또는 사용된 조직의 그램을 기준으로 결정된 바와 같은 계통의 개수에 기초하여, 돌연변이체를 수득하는 효율이 높았다.
실시예 9. 제초제 내성 클론의 확인 및 PPO 유전자 중 원인이 되는 돌연변이의 확인을 위한 돌연변이유발된 조류 세포의 스크리닝
"PPO-억제 제초제" 저항성을 부여하는 PPO 유전자에서의 돌연변이를 생성하기 위해, 화학적 또는 UV 돌연변이유발된 세포 집단에 의한 스크리닝을 사용할 수 있다. 특히 클라미도모나스 레인하르드티이와 같은 단세포 유기체는 제초제 저항성을 부여하는 우세한 돌연변이를 확인하는데 유용하다 (Kataoka M, et al.; 1990; J. of Pest. Sci. 15: 449-451; Oshio H, et al.; 1993; Zeitschrift fur Naturforschung 48: 339-344).
클라미도모나스 레인하르드티이 균주 CC-503 및 CC-1691의 조류 세포 (듀크 대학교(Duke University), 미국 더햄)를 TAP 배지 (Gorman and Levine; 1965; PNAS 54: 1665-1669)에서 100 rpm, 22℃ 및 30 μmol Phot * m-2 * s-2 광 조명으로 지속적으로 진탕시켜 증식시켰다. 화합물 스크리닝은 450 μmol Phot * m-2 * s-2 조명에서 수행하였다.
감수성인 클라미도모나스 레인하르드티이 균주를 문헌 [Loppes (1969, Mol Gen Genet 104: 172-177)]에 기재된 바와 같이 0.14 M 에틸메탄술포네이트 (EMS)로 1시간 동안 돌연변이유발하였다. CC-503 또는 CC-1691 균주의 화합물 활성에 의존하여, 사플루페나실 또는 1,5-디메틸-6-티옥소-3-(2,2,7-트리플루오로-3-옥소-4-(프로프-2-이닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)-1,3,5-트리아지난-2,4-디온과 같은 "PPO-억제 제초제"를 야생형-치사 농도로 함유하는 고체 TAP 배지 플레이트 상에서 돌연변이된 세포를 스크리닝하여 내성 균주를 확인하였다.
문헌 [Sambrock et al. (Molecular cloning (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press)]에 기재된 바와 같이 RNA 및 cDNA 합성의 단리를 위해 표준 기술을 사용하였다. 표 5에 열거된 바와 같은 DNA 올리고뉴클레오티드를 사용한 표준 PCR 기술에 의해 야생형 및 저항성 클라미도모나스 레인하르드티이로부터 주형으로서 게놈 DNA 또는 카피 DNA로부터의 PPO 유전자의 증폭을 수행하였다. 생성된 DNA 분자를 표준 서열분석 벡터 (pJET1)로 클로닝하고, 표준 서열분석 기술에 의해 서열분석하였다. 서열 정렬 도구 얼라인 X (벡터 NTI 어드밴스 소프트웨어 버전 10.3, 인비트로젠, 미국 캘리포니아주 칼스배드)에 의해 야생형 및 돌연변이체 PPO 서열을 비교하여 돌연변이를 확인하였다.
<표 8> CrPPO의 증폭을 위한 PCR 프라이머
Figure pct00057
<110> BASF SE <120> PLANTS HAVING INCREASED TOLERANCE TO HERBICIDES <130> PF73943 <150> US 61/661364 <151> 2012-06-19 <150> EP12172557.6 <151> 2012-06-19 <160> 46 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1605 <212> DNA <213> Amaranthus tuberculatus <400> 1 atggtaattc aatccattac ccacctttca ccaaaccttg cattgccatc gccattgtca 60 gtttcaacca agaactaccc agtagctgta atgggcaaca tttctgagcg ggaagaaccc 120 acttctgcta aaagggttgc tgttgttggt gctggagtta gtggacttgc tgctgcatat 180 aagctaaaat cccatggttt gagtgtgaca ttgtttgaag ctgattctag agctggaggc 240 aaacttaaaa ctgttaaaaa agatggtttt atttgggatg agggggcaaa tactatgaca 300 gaaagtgagg cagaggtctc gagtttgatc gatgatcttg ggcttcgtga gaagcaacag 360 ttgccaattt cacaaaataa aagatacata gctagagacg gtcttcctgt gctactacct 420 tcaaatcccg ctgcactact cacgagcaat atcctttcag caaaatcaaa gctgcaaatt 480 atgttggaac catttctctg gagaaaacac aatgctactg aactttctga tgagcatgtt 540 caggaaagcg ttggtgaatt ttttgagcga cattttggga aagagtttgt tgattatgtt 600 atcgaccctt ttgttgcggg tacatgtggt ggagatcctc aatcgctttc catgcaccat 660 acatttccag aagtatggaa tattgaaaaa aggtttggct ctgtgtttgc tggactaatt 720 caatcaacat tgttatctaa gaaggaaaag ggtggagaaa atgcttctat taagaagcct 780 cgtgtacgtg gttcattttc atttcaaggt ggaatgcaga cacttgttga cacaatgtgc 840 aaacagcttg gtgaagatga actcaaactc cagtgtgagg tgctgtcctt gtcatataac 900 cagaagggga tcccctcatt agggaattgg tcagtctctt ctatgtcaaa taataccagt 960 gaagatcaat cttatgatgc tgtggttgtc actgctccaa ttcgcaatgt caaagaaatg 1020 aagattatga aatttggaaa tccattttca cttgacttta ttccagaggt gacgtacgta 1080 cccctttccg ttatgattac tgcattcaaa aaggataaag tgaagagacc tcttgagggc 1140 ttcggagttc ttatcccctc taaagagcaa cataatggac tgaagactct tggtacttta 1200 ttttcctcca tgatgtttcc tgatcgtgct ccatctgaca tgtgtctctt tactacattt 1260 gtcggaggaa gcagaaatag aaaacttgca aacgcttcaa cggatgaatt gaagcaaata 1320 gtttcttctg accttcagca gctgttgggc actgaggacg aaccttcatt tgtcaatcat 1380 Seite 1 ctcttttgga gcaacgcatt cccattgtat ggacacaatt acgattctgt tttgagagcc atagacaaga tggaaaagga tcttcctgga tttttttatg caggtaacca taagggtgga ctttcagtgg gaaaagcgat ggcctccgga tgcaaggctg cggaacttgt aatatcctat ctggactctc atatatacgt gaagatggat gagaagaccg cgtaa 1440 1500 1560 1605 <210> <211> <212> <213> 2 534 PRT Amaranthus tuberculatum <400> 2 Met Val Ile Gln Ser Ile Thr His Leu Ser Pro Asn Leu Ala Leu Pro 1 5 10 15 Ser Pro Leu Ser Val Ser Thr Lys Asn Tyr Pro Val Ala Val Met Gly 20 25 30 Asn Ile Ser Glu Arg Glu Glu Pro Thr Ser Ala Lys Arg Val Ala Val 35 40 45 Val Gly Ala Gly Val Ser Gly Leu Ala Ala Ala Tyr Lys Leu Lys Ser 50 55 60 His Gly Leu Ser Val Thr Leu Phe Glu Ala Asp Ser Arg Ala Gly Gly 65 70 75 80 Lys Leu Lys Thr Val Lys Lys Asp Gly Phe Ile Trp Asp Glu Gly Ala 85 90 95 Asn Thr Met Thr Glu Ser Glu Ala Glu Val Ser Ser Leu Ile Asp Asp 100 105 110 Leu Gly Leu Arg Glu Lys Gln Gln Leu Pro Ile Ser Gln Asn Lys Arg 115 120 125 Tyr Ile Ala Arg Asp Gly Leu Pro Val Leu Leu Pro Ser Asn Pro Ala 130 135 140 Ala Leu Leu Thr Ser Asn Ile Leu Ser Ala Lys Ser Lys Leu Gln Ile 145 150 155 160 Met Leu Glu Pro Phe Leu Trp Arg Lys His Asn Ala Thr Glu Leu Ser 165 170 175 Asp Glu His Val Gln Glu Ser Val Gly Glu Phe Phe Glu Arg His Phe 180 185 190 Gly Lys Glu Phe Val Asp Tyr Val Ile Asp Pro Phe Val Ala Gly Thr 195 200 205 PF73943_AT_AR, BO, PY, UY, PCT_ST25.txt Cys Gly Gly Asp Pro Gln Ser Leu Ser Met His His Thr Phe Pro Glu 210 215 220 Val Trp Asn Ile Glu Lys Arg Phe Gly Ser Val Phe Ala Gly Leu Ile 225 230 235 240 Gln Ser Thr Leu Leu Ser Lys Lys Glu Lys Gly Gly Glu Asn Ala Ser 245 250 255 Ile Lys Lys Pro Arg Val Arg Gly Ser Phe Ser Phe Gln Gly Gly Met 260 265 270 Gln Thr Leu Val Asp Thr Met Cys Lys Gln Leu Gly Glu Asp Glu Leu 275 280 285 Lys Leu Gln Cys Glu Val Leu Ser Leu Ser Tyr Asn Gln Lys Gly Ile 290 295 300 Pro Ser Leu Gly Asn Trp Ser Val Ser Ser Met Ser Asn Asn Thr Ser 305 310 315 320 Glu Asp Gln Ser Tyr Asp Ala Val Val Val Thr Ala Pro Ile Arg Asn 325 330 335 Val Lys Glu Met Lys Ile Met Lys Phe Gly Asn Pro Phe Ser Leu Asp 340 345 350 Phe Ile Pro Glu Val Thr Tyr Val Pro Leu Ser Val Met Ile Thr Ala 355 360 365 Phe Lys Lys Asp Lys Val Lys Arg Pro Leu Glu Gly Phe Gly Val Leu 370 375 380 Ile Pro Ser Lys Glu Gln His Asn Gly Leu Lys Thr Leu Gly Thr Leu 385 390 395 400 Phe Ser Ser Met Met Phe Pro Asp Arg Ala Pro Ser Asp Met Cys Leu 405 410 415 Phe Thr Thr Phe Val Gly Gly Ser Arg Asn Arg Lys Leu Ala Asn Ala 420 425 430 Ser Thr Asp Glu Leu Lys Gln Ile Val Ser Ser Asp Leu Gln Gln Leu 435 440 445 Leu Gly Thr Glu Asp Glu Pro Ser Phe Val Asn His Leu Phe Trp Ser 450 455 460 Asn Ala Phe Pro Leu Tyr Gly His Asn Tyr Asp Ser Val Leu Arg Ala 465 470 475 480 Ile Asp Lys Met Glu Lys Asp Leu Pro Gly Phe Phe Tyr Ala Gly Asn Seite 3 His Lys Gly Gly Leu Ser Val Gly Lys Ala Met Ala Ser Gly Cys Lys 500 505 510 Ala Ala Glu Leu Val Ile Ser Tyr Leu Asp Ser His Ile Tyr Val Lys 515 520 525 Met Asp Glu Lys Thr Ala 530 <210> 3 <211> 1605 <212> DNA <213> Amaranthus tuberculatus <400> 3 atggtaattc aatccattac ccacctttca ccaaaccttg cattgccatc gccattgtca 60 gtttcaacca agaactaccc agtagctgta atgggcaaca tttctgagcg ggaagaaccc 120 acttctgcta aaagggttgc tgttgttggt gctggagtta gtggacttgc tgctgcatat 180 aagctaaaat cccatggttt gagtgtgaca ttgtttgaag ctgattctag agctggaggc 240 aaacttaaaa ctgttaaaaa agatggtttt atttgggatg agggggcaaa tactatgaca 300 gaaagtgagg cagaggtctc gagtttgatc gatgatcttg ggcttcgtga gaagcaacag 360 ttgccaattt cacaaaataa aagatacata gctagagccg gtcttcctgt gctactacct 420 tcaaatcccg ctgcactact cacgagcaat atcctttcag caaaatcaaa gctgcaaatt 480 atgttggaac catttctctg gagaaaacac aatgctactg aactttctga tgagcatgtt 540 caggaaagcg ttggtgaatt ttttgagcga cattttggga aagagtttgt tgattatgtt 600 attgaccctt ttgttgcggg tacatgtggt ggagatcctc aatcgctttc catgcaccat 660 acatttccag aagtatggaa tattgaaaaa aggtttggct ctgtgtttgc cggactaatt 720 caatcaacat tgttatctaa gaaggaaaag ggtggagaaa atgcttctat taagaagcct 780 cgtgtacgtg gttcattttc atttcaaggt ggaatgcaga cacttgttga cacaatgtgc 840 aaacagcttg gtgaagatga actcaaactc cagtgtgagg tgctgtcctt gtcatataac 900 cagaagggga tcccctcact agggaattgg tcagtctctt ctatgtcaaa taataccagt 960 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Met Gly 20 25 30 Asn Ile Ser Glu Arg Glu Glu Pro Thr Ser Ala Lys Arg Val Ala Val 35 40 45 Val Gly Ala Gly Val Ser Gly Leu Ala Ala Ala Tyr Lys Leu Lys Ser 50 55 60 His Gly Leu Ser Val Thr Leu Phe Glu Ala Asp Ser Arg Ala Gly Gly 65 70 75 80 Lys Leu Lys Thr Val Lys Lys Asp Gly Phe Ile Trp Asp Glu Gly Ala 85 90 95 Asn Thr Met Thr Glu Ser Glu Ala Glu Val Ser Ser Leu Ile Asp Asp 100 105 110 Leu Gly Leu Arg Glu Lys Gln Gln Leu Pro Ile Ser Gln Asn Lys Arg 115 120 125 Tyr Ile Ala Arg Ala Gly Leu Pro Val Leu Leu Pro Ser Asn Pro Ala 130 135 140 Ala Leu Leu Thr Ser Asn Ile Leu Ser Ala Lys Ser Lys Leu Gln Ile 145 150 155 160 Met Leu Glu Pro Phe Leu Trp Arg Lys His Asn Ala Thr Glu Leu Ser 165 170 175 Asp Glu His Val Gln Glu Ser Val Gly Glu Phe Phe Glu Arg His Phe 180 185 190 Gly Lys Glu Phe Val Asp Tyr Val Ile Asp Pro Phe Val Ala Gly Thr 195 200 205 Cys Gly Gly Asp Pro Gln Ser Leu Ser Met His His Thr Phe Pro Glu 210 215 220 Val Trp Asn Ile Glu Lys Arg Phe Gly Ser Val Phe Ala Gly Leu Ile 225 230 235 240 Gln Ser Thr Leu Leu Ser Lys Lys Glu Lys Gly Gly Glu Asn Ala Ser 245 250 255 Ile Lys Lys Pro Arg Val Arg Gly Ser Phe Ser Phe Gln Gly Gly Met 260 265 270 Gln Thr Leu Val Asp Thr Met Cys Lys Gln Leu Gly Glu Asp Glu Leu 275 280 285 Lys Leu Gln Cys Glu Val Leu Ser Leu Ser Tyr Asn Gln Lys Gly Ile 290 295 300 Pro Ser Leu Gly Asn Trp Ser Val Ser Ser Met Ser Asn Asn Thr Ser 305 310 315 320 Glu Asp Gln Ser Tyr Asp Ala Val Val Val Thr Ala Pro Ile Arg Asn 325 330 335 Val Lys Glu Met Lys Ile Met Lys Phe Gly Asn Pro Phe Ser Leu Asp 340 345 350 Phe Ile Pro Glu Val Thr Tyr Val Pro Leu Ser Val Met Ile Thr Ala 355 360 365 Phe Lys Lys Asp Lys Val Lys Arg Pro Leu Glu Gly Phe Gly Val Leu 370 375 380 Ile Pro Ser Lys Glu Gln His Asn Gly Leu Lys Thr Leu Gly Thr Leu 385 390 395 400 Phe Ser Ser Met Met Phe Pro Asp Arg Ala Pro Ser Asp Met Cys Leu 405 410 415 Phe Thr Thr Phe Val Gly Gly Ser Arg Asn Arg Lys Leu Ala Asn Ala 420 425 430 Ser Thr Asp Glu Leu Lys Gln Ile Val Ser Ser Asp Leu Gln Gln Leu 435 440 445 Leu Gly Thr Glu Asp Glu Pro Ser Phe Val Asn His Leu Phe Trp Ser 450 455 460 Asn Ala Phe Pro Leu Tyr Gly His Asn Tyr Asp Ser Val Leu Arg Ala 465 470 475 480 Ile Asp Lys Met Glu Lys Asp Leu Pro Gly Phe Phe Tyr Ala Gly Asn 485 490 495 PF73943_AT_AR, BO, PY, UY, PCT_ST25.txt His Lys Gly Gly Leu Ser Val Gly Lys Ala Met Ala Ser Gly Cys Lys 500 505 510 Ala Ala Glu Leu Val Ile Ser Tyr Leu Asp Ser His Ile Tyr Val Lys 515 520 525 Met Asp Glu Lys Thr Ala 530 <210> 5 <211> 1602 <212> DNA <213> Amaranthus tuberculatus <400> 5 atggtaattc aatccattac ccacctttca ccaaaccttg cattgccatc gccattgtca 60 gtttccacca agaactaccc agtagctgta atgggcaaca tttctgagcg agaagaaccc 120 acttctgcta aaagggttgc tgttgttggt gctggagtta gtggacttgc tgctgcatat 180 aagctaaaat cccatggttt gagtgtgaca ttgtttgaag ctgattctag agctggaggc 240 aaacttaaaa ctgttaaaaa agatggtttt atttgggatg agggggcaaa tactatgaca 300 gaaagtgagg cagaggtctc gagtttgatc gatgatcttg ggcttcgtga gaagcaacag 360 ttgccaattt cacaaaataa aagatacata gctagagacg gtcttcctgt 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ggaggaagca gaaatagaaa acttgcaaac gcttcaacgg atgaattgaa gcaaatagtt 1320 tcttctgacc ttcagcagct gttgggcact gaggacgaac cttcatttgt caatcatctc 1380 ttttggagca acgcattccc attgtatgga cacaattacg attgtgtttt gagagccata 1440 gacaagatgg aaaaggatct tcctggattt ttttatgcag gtaaccataa gggtggactt 1500 tcagtgggaa aagcgatggc ctccggatgc aaggctgcgg aacttgtaat atcctatctg 1560 Seite 7 gactctcata tatacgtgaa gatggatgag aagaccgcgt aa 1602 <210> 6 <211> 533 <212> PRT <213> Amaranthus tuberculatum <400> 6 Met Val Ile Gln Ser Ile Thr His Leu Ser Pro Asn Leu Ala Leu Pro 1 5 10 15 Ser Pro Leu Ser Val Ser Thr Lys Asn Tyr Pro Val Ala Val Met Gly 20 25 30 Asn Ile Ser Glu Arg Glu Glu Pro Thr Ser Ala Lys Arg Val Ala Val 35 40 45 Val Gly Ala Gly Val Ser Gly Leu Ala Ala Ala Tyr Lys Leu Lys Ser 50 55 60 His Gly Leu Ser Val Thr Leu Phe Glu Ala Asp Ser Arg Ala Gly Gly 65 70 75 80 Lys Leu Lys Thr Val Lys Lys Asp Gly Phe Ile Trp Asp Glu Gly Ala 85 90 95 Asn Thr Met Thr Glu Ser Glu Ala Glu Val Ser Ser Leu Ile Asp Asp 100 105 110 Leu Gly Leu Arg Glu Lys Gln Gln Leu Pro Ile Ser Gln Asn Lys Arg 115 120 125 Tyr Ile Ala Arg Asp Gly Leu Pro Val Leu Leu Pro Ser Asn Pro Ala 130 135 140 Ala Leu Leu Thr Ser Asn Ile Leu Ser Ala Lys Ser Lys Leu Gln Ile 145 150 155 160 Met Leu Glu Pro Phe Leu Trp Arg Lys His Asn Ala Thr Glu Leu Ser 165 170 175 Asp Glu His Val Gln Glu Ser Val Gly Glu Phe Phe Glu Arg His Phe 180 185 190 Gly Lys Glu Phe Val Asp Tyr Val Ile Asp Pro Phe Val Ala Gly Thr 195 200 205 Cys Gly Asp Pro Gln Ser Leu Ser Met His His Thr Phe Pro Glu Val 210 215 220 Trp Asn Ile Glu Lys Arg Phe Gly Ser Val Phe Ala Gly Leu Ile Gln 225 230 235 240 Seite 8 Ser Thr Leu Leu Ser Lys Lys Glu Lys Gly Gly Glu Asn Ala Ser Ile 245 250 255 Lys Lys Pro Arg Val Arg Gly Ser Phe Ser Phe Gln Gly Gly Met Gln 260 265 270 Thr Leu Val Asp Thr Met Cys Lys Gln Leu Gly Glu Asp Glu Leu Lys 275 280 285 Leu Gln Cys Glu Val Leu Ser Leu Ser Tyr Asn Gln Lys Gly Ile Pro 290 295 300 Ser Leu Gly Asn Trp Ser Val Ser Ser Met Ser Asn Asn Thr Ser Glu 305 310 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780 gtacgtggtt cattttcatt tcaaggtgga atgcagacac ttgttgacac aatgtgcaaa 840 cagcttggtg aagatgaact caaactccag tgtgaggtgc tgtccttgtc atataaccag 900 aaggggatcc cctcattagg gaattggtca gtctcttcta tgtcaaataa taccagtgaa 960 gatcaatctt atgatgctgt ggttgtcact gctccaattc gcaatgtcaa agaaatgaag 1020 attatgaaat ttggaaatcc attttcactt gactttattc cagaggtgac gtacgtaccc 1080 ctttccgtta tgattactgc attcaaaaag gataaagtga agagacctct tgagggcttc 1140 ggagttctta tcccctctaa agagcaacat aatggactga agactcttgg tactttattt 1200 tcctccatga tgtttcctga tcgtgctcca tctgacatgt gtctctttac tacatttgtc 1260 ggaggaagca gaaatagaaa acttgcaaac gcttcaacgg atgaattgaa gcaaatagtt 1320 tcttctgacc ttcagcagct gttgggcact gaggacgaac cttcatttgt caatcatctc 1380 ttttggagca acgcattccc attgtatgga cacaattacg attctgtttt gagagccata 1440 gacaagatgg aaaaggatct tcctggattt ttttatgcag gtaaccataa gggtggactt 1500 tcagtgggaa aagcgatggc ctccggatgc aaggctgcgg aacttgtaat atcctatctg 1560 gactctcata tatacgtgaa gatggatgag aagaccgcgt aa 1602 <210> 8 <211> 533 <212> PRT <213> Amaranthus tuberculatum <400> 8 Met Val Ile Gln Ser Ile Thr His Leu Ser Pro Asn Leu Ala Leu Pro 1 5 10 15 Ser Pro Leu Ser Val Ser Thr Lys Asn Tyr Pro Val Ala Val Met Gly 20 25 30 Asn Ile Ser Glu Arg Glu Glu Pro Thr Ser Ala Lys Arg Val Ala Val 35 40 45 Val Gly Ala Gly Val Ser Gly Leu Ala Ala Ala Tyr Lys Leu Lys Ser 50 55 60 His Gly Leu Ser Val Thr Leu Phe Glu Ala Asn Ser Arg Ala Gly Gly 65 70 75 80 Lys Leu Lys Thr Val Lys Lys Asp Gly Phe Ile Trp Asp Glu Gly Ala 85 90 95 Asn Thr Met Thr Glu Ser Glu Ala Glu Val Ser Ser Leu Ile Asp Asp 100 105 110 Leu Gly Leu Arg Glu Lys Gln Gln Leu Pro Ile Ser Gln Asn Lys Arg 115 120 125 Tyr Ile Ala Arg Asp Gly Leu Pro Val Leu Leu Pro Ser Asn Pro Ala 130 135 140 Ala Leu Leu Thr Ser Asn Ile Leu Ser Ala Lys Ser Lys Leu Gln Ile 145 150 155 160 Met Leu Glu Pro Phe Leu Trp Arg Lys His Asn Ala Thr Glu Leu Ser 165 170 175 Asp Glu His Val Gln Glu Ser Val Gly Glu Phe Phe Glu Arg His Phe 180 185 190 Gly Lys Glu Phe Val Asp Tyr Val Ile Asp Pro Phe Val Ala 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Seite 37 gcgcccgagg gccacatgct gctgctcaac tacatcggcg gcaccaccaa ccgcggcatc 1380 gtcaaccaga ccaccgagca gctggtggag caggtggaca aggacctgcg caacatggtc 1440 atcaagcccg acgcgcccaa gccccgtgtg gtgggcgtgc gcgtgtggcc gcgcgccatc 1500 ccgcagttca acctgggcca cctggagcag ctggacaagg cgcgcaaggc gctggacgcg 1560 gcggggctgc agggcgtgca cctggggggc aactacgtca gcggtgtggc cctgggcaag 1620 gtggtggagc acggctacga gtccgcagcc aacctggcca agagcgtgtc caaggccgca 1680 gtcaaggcct aa 1692 <210> <211> <212> <213> 26 563 PRT Chlamydomonas <400> 26 Met Met Leu Thr Gln Thr Pro Gly Thr Ala Thr Ala Ser Ser Arg Arg 1 5 10 15 Ser Gln Ile Arg Ser Ala Ala His Val Ser Ala Lys Val Ala Pro Arg 20 25 30 Pro Thr Pro Phe Ser Val Ala Ser Pro Ala Thr Ala Ala Ser Pro Ala 35 40 45 Thr Ala Ala Ala Arg Arg Thr Leu His Arg Thr Ala Ala Ala Ala Thr 50 55 60 Gly Ala Pro Thr Ala Ser Gly Ala Gly Val Ala Lys Thr Leu Asp Asn 65 70 75 80 Val Tyr Asp Val Ile Val Val Gly Gly Gly Leu Ser Gly Leu Val Thr 85 90 95 Gly Gln Ala Leu Ala Ala Gln His Lys Ile Gln 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Pro 305 310 315 320 Leu Asn Phe Leu Pro Glu Val Ser Tyr Val Pro Ile Ser Val Met Ile 325 330 335 Thr Thr Phe Lys Lys Glu Asn Val Lys Arg Pro Leu Glu Gly Phe Gly 340 345 350 Val Leu Val Pro Ser Lys Glu Gln Lys Asn Gly Leu Lys Thr Leu Gly 355 360 365 Thr Leu Phe Ser Ser Met Met Phe Pro Asp Arg Ala Pro Ser Asp Leu 370 375 380 Tyr Leu Tyr Thr Thr Phe Ile Gly Gly Thr Gln Asn Arg Glu Leu Ala 385 390 395 400 Gln Ala Ser Thr Asp Glu Leu Arg Lys Ile Val Thr Ser Asp Leu Arg 405 410 415 Lys Leu Leu Gly Ala Glu Gly Glu Pro Thr Phe Val Asn His Phe Tyr 420 425 430 Trp Ser Lys Gly Phe Pro Leu Tyr Gly Arg Asn Tyr Gly Ser Val Leu 435 440 445 Gln Ala Ile Asp Lys Ile Glu Lys Asp Leu Pro Gly Phe Phe Phe Ala 450 455 460 Gly Asn Tyr Lys Gly Gly Leu Ser Val Gly Lys Ala Ile Ala Ser Gly 465 470 475 480 Cys Lys Ala Ala Asp Leu Val Ile Ser Tyr Leu Asn Ser Ala Ser Asp 485 490 495 Asn Thr Val Pro Asp Lys 500 <210> <211> <212> <213> 43 1205 DNA Cucumis sativus <400> 43 agcttccaac cttccgatcc tattctcacc atggtggtgg atagtggctt aaaagatgat 60 ttagttctgg gagacccaga tgcacctcga tttgtattgt ggaatggaaa gctcagacca 120 gtgcctgcga aacctaatga tctacctttc tttgacctga tgagcattgg tggaaaaatc 180 agagcaggct ttggtgccct gggcattcgc cctcctcctc caggtcgaga ggaatcagtt 240 gaagaatttg tccgtcggaa ccttggcaat gaagtttttg aacgtttgat agagccattt 300 PF73943_AT_AR, BO, PY, UY, PCT_ST25.txt tgttctggtg tatacgctgg tgacccttca aagctaagca tgaaagcagc ttttggtaag 360 gtttggaggc tagagcaaaa tggtggtagt attattggtg ggactttcaa agcacttcaa 420 gaaaggaata aaactaccaa accaccaaga gatccgcgtc taccaaagcc taagggccaa 480 actgttggat cttttcggaa aggacttacc atgttgccaa atgctatttc tacttgtttg 540 gggagtaaag taaaagtatc ttggaagcta tctagtatca gtaaagtgga tgacggaggt 600 tatagtttga catacgaaac accagaagga ctagtctcca tactaagcag aagtgtcatc 660 atgacggttc cttcttatat tgctggcact ctgttgcgtc caatctcggg gaaagctgca 720 gatgcacttt caaaatttta ttatccacca gttgcatcag tgaccatatc atatccaaaa 780 ggagcaatta ggaaagaatg cttgattgat ggtgaactaa aggggtttgg tcaattgcac 840 cctcgtagcc agggggtgac tactttggga actatataca gctcatcact ttttcctaat 900 cgagcgccag atggaagggt attgctcttg aactacattg gaggggctac taatactgga 960 attctttctc agacagagag cgagctcata gaagtagttg atcgggattt aagaaaaatc 1020 ctcataaacc caaacgcaga ggatcctcta ccattgagcg tgagggtgtg gccacaagcc 1080 attccacagt tcttgattgg ccatctcgat gttctagaca ccgccaaggc cggactgaga 1140 gaggctggaa tggaggggct atttttaggt ggaaactatg tatgcggtgt ggccttgggg 1200 agatg 1205 <210> 44 <211> 401 <212> PRT <213> Cucumis <400> 44 Ser Phe Gln Pro Ser Asp Pro Ile Leu Thr Met Val Val Asp Ser Gly 1 5 10 15 Leu Lys Asp Asp Leu Val Leu Gly Asp Pro Asp Ala Pro Arg Phe Val 20 25 30 Leu Trp Asn Gly Lys Leu Arg Pro Val Pro Ala Lys Pro Asn Asp Leu 35 40 45 Pro Phe Phe Asp Leu Met Ser Ile Gly Gly Lys Ile Arg Ala Gly Phe 50 55 60 Gly Ala Leu Gly Ile Arg Pro Pro Pro Pro Gly Arg Glu Glu Ser Val 65 70 75 80 Glu Glu Phe Val Arg Arg Asn Leu Gly Asn Glu Val Phe Glu Arg Leu 85 90 95 Ile Glu Pro Phe Cys Ser Gly Val Tyr Ala Gly Asp Pro Ser Lys Leu 100 105 110 Ser Met Lys Ala Ala Phe Gly Lys Val Trp Arg Leu Glu Gln Asn Gly Seite 63 Gly Ser Ile Ile Gly Gly Thr Phe Lys Ala Leu Gln Glu Arg Asn Lys 130 135 140 Thr Thr Lys Pro Pro Arg Asp Pro Arg Leu Pro Lys Pro Lys Gly Gln 145 150 155 160 Thr Val Gly Ser Phe Arg Lys Gly Leu Thr Met Leu Pro Asn Ala Ile 165 170 175 Ser Thr Cys Leu Gly Ser Lys Val Lys Val Ser Trp Lys Leu Ser Ser 180 185 190 Ile Ser Lys Val Asp Asp Gly Gly Tyr Ser Leu Thr Tyr Glu Thr Pro 195 200 205 Glu Gly Leu Val Ser Ile Leu Ser Arg Ser Val Ile Met Thr Val Pro 210 215 220 Ser Tyr Ile Ala Gly Thr Leu Leu Arg Pro Ile Ser Gly Lys Ala Ala 225 230 235 240 Asp Ala Leu Ser Lys Phe Tyr Tyr Pro Pro Val Ala Ser Val Thr Ile 245 250 255 Ser Tyr Pro Lys Gly Ala Ile Arg Lys Glu Cys Leu Ile Asp Gly Glu 260 265 270 Leu Lys Gly Phe Gly Gln Leu His Pro Arg Ser Gln Gly Val Thr Thr 275 280 285 Leu Gly Thr Ile Tyr Ser Ser Ser Leu Phe Pro Asn Arg Ala Pro Asp 290 295 300 Gly Arg Val Leu Leu Leu Asn Tyr Ile Gly Gly Ala Thr Asn Thr Gly 305 310 315 320 Ile Leu Ser Gln Thr Glu Ser Glu Leu Ile Glu Val Val Asp Arg Asp 325 330 335 Leu Arg Lys Ile Leu Ile Asn Pro Asn Ala Glu Asp Pro Leu Pro Leu 340 345 350 Ser Val Arg Val Trp Pro Gln Ala Ile Pro Gln Phe Leu Ile Gly His 355 360 365 Leu Asp Val Leu Asp Thr Ala Lys Ala Gly Leu Arg Glu Ala Gly Met 370 375 380 Glu Gly Leu Phe Leu Gly Gly Asn Tyr Val Cys Gly Val Ala Leu Gly 385 390 395 400 Seite 64 Arg <210> 45 <211> 1521 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 45 atggccgcct ccgacgaccc ccgcggcggg aggtccgtcg ccgtcgtcgg cgccggcgtc 60 agtgggctcg cggcggcgta caggctgagg aagcgcggcg tgcaggtgac ggtgttcgag 120 gcggccgaca gggcgggtgg gaagatacgg accaactccg agggcgggtt catctgggac 180 gaaggggcca acaccatgac agagagtgaa ttggaggcaa gcaggcttat tgacgatctt 240 ggcctacaag gcaaacagca gtatcctaac tcacaacaca agcgttacat tgtcaaagat 300 ggagcaccaa cactgattcc ctcagatccc attgcgctca tgaaaagcac tgttctttct 360 acaaaatcaa agctcaagct atttctggaa ccatttctct atgagaaatc tagcagaagg 420 acctcgggaa aagtgtctga tgaacattta agtgagagtg tgatttttct gtgtatatgt 480 agagataatc aggttgttga ttatcttatt gatccatttg tggctggaac aagcggagga 540 gatcctgagt cattatcaat tcgtcatgca tttccagcat tatggaattt ggagaataag 600 tatggctctg tcattgctgg tgccatcttg tccaaactat ccactaaggg tgattcagtg 660 aagacaggag gtgcttcgcc agggaaagga aggaataaac gtgtgtcatt ttcatttcat 720 ggtggaatgc agtcactaat agatgcactt cacaatgaag ttggagatgg taacgtgaag 780 cttggtacag aagtgttgtc attggcatgt tgctgtgatg gagtctcttc ttctggtggt 840 tggtcaattt ctgttgattc aaaagatgct aaagggaaag atctcagaaa gaaccaatct 900 ttcgatgctg ttataatgac tgctccattg tctaatgtcc agaggatgaa gtttacaaaa 960 ggtggagttc cctttgtgct agactttctt cctaaggtcg attatctacc actatctctc 1020 atggtaacag cttttaagaa ggaagatgtc aaaaaaccat tggaaggatt tggtgccttg 1080 ataccctata aggaacagca aaagcatggt ctcaaaaccc ttgggaccct cttctcctcg 1140 atgatgtttc cagatcgagc tcctaatgat caatatctat atacatcttt cattgggggg 1200 agccataata gagacctcgc tggggctcca acggctattc tgaaacaact tgtgacctct 1260 gacctaagaa agctcttggg tgttgaggga caacctactt ttgtgaagca tgtacattgg 1320 agaaatgctt ttcctttata tggccagaat tatgatctgg tactggaagc tatagcaaaa 1380 atggagaaca atcttccagg gttcttttac gcaggaaata acaaggatgg gttggctgtt 1440 ggaaatgtta tagcttcagg aagcaaggct gctgaccttg tgatctctta tcttgaatct 1500 tgcacagatc aggacaatta g 1521 <210> 46 <211> 506 <212> PRT <213> Oryza sativa Seite 65 <400> 46 Met Ala Ala Ser Asp Asp Pro Arg Gly Gly Arg Ser Val Ala Val Val 1 5 10 15 Gly Ala Gly Val Ser Gly Leu Ala Ala Ala Tyr Arg Leu Arg Lys Arg 20 25 30 Gly Val Gln Val Thr Val Phe Glu Ala Ala Asp Arg Ala Gly Gly Lys 35 40 45 Ile Arg Thr Asn Ser Glu Gly Gly Phe Ile Trp Asp Glu Gly Ala Asn 50 55 60 Thr Met Thr Glu Ser Glu Leu Glu Ala Ser Arg Leu Ile Asp Asp Leu 65 70 75 80 Gly Leu Gln Gly Lys Gln Gln Tyr Pro Asn Ser Gln His Lys Arg Tyr 85 90 95 Ile Val Lys Asp Gly Ala Pro Thr Leu Ile Pro Ser Asp Pro Ile Ala 100 105 110 Leu Met Lys Ser Thr Val Leu Ser Thr Lys Ser Lys Leu Lys Leu Phe 115 120 125 Leu Glu Pro Phe Leu Tyr Glu Lys Ser Ser Arg Arg Thr Ser Gly Lys 130 135 140 Val Ser Asp Glu His Leu Ser Glu Ser Val Ile Phe Leu Cys Ile Cys 145 150 155 160 Arg Asp Asn Gln Val Val Asp Tyr Leu Ile Asp Pro Phe Val Ala Gly 165 170 175 Thr Ser Gly Gly Asp Pro Glu Ser Leu Ser Ile Arg His Ala Phe Pro 180 185 190 Ala Leu Trp Asn Leu Glu Asn Lys Tyr Gly Ser Val Ile Ala Gly Ala 195 200 205 Ile Leu Ser Lys Leu Ser Thr Lys Gly Asp Ser Val Lys Thr Gly Gly 210 215 220 Ala Ser Pro Gly Lys Gly Arg Asn Lys Arg Val Ser Phe Ser Phe His 225 230 235 240 Gly Gly Met Gln Ser Leu Ile Asp Ala Leu His Asn Glu Val Gly Asp 245 250 255 Gly Asn Val Lys Leu Gly Thr Glu Val Leu Ser Leu Ala Cys Cys Cys 260 265 270 Seite 66 Asp Gly Val Ser Ser Ser Gly Gly Trp Ser Ile Ser Val Asp Ser Lys 275 280 285 Asp Ala Lys Gly Lys Asp Leu Arg Lys Asn Gln Ser Phe Asp Ala Val 290 295 300 Ile Met Thr Ala Pro Leu Ser Asn Val Gln Arg Met Lys Phe Thr Lys 305 310 315 320 Gly Gly Val Pro Phe Val Leu Asp Phe Leu Pro Lys Val Asp Tyr Leu 325 330 335 Pro Leu Ser Leu Met Val Thr Ala Phe Lys Lys Glu Asp Val Lys Lys 340 345 350 Pro Leu Glu Gly Phe Gly Ala Leu Ile Pro Tyr Lys Glu Gln Gln Lys 355 360 365 His Gly Leu Lys Thr Leu Gly Thr Leu Phe Ser Ser Met Met Phe Pro 370 375 380 Asp Arg Ala Pro Asn Asp Gln Tyr Leu Tyr Thr Ser Phe Ile Gly Gly 385 390 395 400 Ser His Asn Arg Asp Leu Ala Gly Ala Pro Thr Ala Ile Leu Lys Gln 405 410 415 Leu Val Thr Ser Asp Leu Arg Lys Leu Leu Gly Val Glu Gly Gln Pro 420 425 430 Thr Phe Val Lys His Val His Trp Arg Asn Ala Phe Pro Leu Tyr Gly 435 440 445 Gln Asn Tyr Asp Leu Val Leu Glu Ala Ile Ala Lys Met Glu Asn Asn 450 455 460 Leu Pro Gly Phe Phe Tyr Ala Gly Asn Asn Lys Asp Gly Leu Ala Val 465 470 475 480 Gly Asn Val Ile Ala Ser Gly Ser Lys Ala Ala Asp Leu Val Ile Ser 485 490 495 Tyr Leu Glu Ser Cys Thr Asp Gln Asp Asn 500 505

Claims (23)

  1. a) "프로토포르피리노겐 옥시다제 (PPO) 억제 제초제"에 대해 저항성 또는 내성인 야생형 프로토포르피리노겐 옥시다제 또는 돌연변이된 프로토포르피리노겐 옥시다제 (mut-PPO)를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 적어도 1개의 핵산을 포함하는 식물을 식물 재배 지역에 제공하는 단계, 및/또는
    b) 상기 지역에 유효량의 상기 제초제를 적용하는 단계
    를 포함하는, 식물 재배 지역에서 바람직하지 않은 식생을 방제하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, a)의 뉴클레오티드 서열이 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45의 서열 또는 그의 변이체 또는 유도체를 포함하는 것인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 서열 2 또는 서열 4의 mut-PPO가 하기:
    a) 위치 128에서의 아미노산은 Leu, Ala, Val 또는 Ile임;
    b) 위치 204에서의 아미노산은 Ala, Leu, Ile 또는 Val임;
    c) 위치 208에서의 아미노산은 Ser임;
    d) 위치 397에서의 아미노산은 Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu 또는 Gln임;
    e) 위치 400에서의 아미노산은 Ala, Ile, Val 또는 Met임;
    f) 위치 420에서의 아미노산은 Val, Met, Ala, Ile 또는 Leu임;
    g) 위치 457에서의 아미노산은 Met, Ala, Leu, Ile, Val임
    중 하나 이상을 포함하는 것인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 식물이 제초제 내성 효소를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 적어도 1개의 추가의 이종 핵산을 포함하는 것인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, PPO 억제 제초제가 1종 이상의 추가의 제초제와 함께 적용되는 것인 방법.
  6. 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45의 뉴클레오티드 서열 또는 그의 변이체 또는 유도체를 포함하는 핵산에 의해 코딩되는 mut-PPO를 사용함으로써 PPO 억제 제초제를 확인하는 방법.
  7. 제6항에 있어서,
    a) mut-PPO를 코딩하는 핵산을 포함하는 트랜스제닉 세포 또는 식물을 생성하며, 여기서 mut-PPO는 발현되는 것인 단계;
    b) PPO 억제를 a)의 트랜스제닉 세포 또는 식물 및 동일한 품종의 대조군 세포 또는 식물에 적용하는 단계;
    c) 상기 시험 화합물의 적용 후, 트랜스제닉 세포 또는 식물 및 대조군 세포 또는 식물의 성장 또는 생존율을 결정하는 단계; 및
    d) 트랜스제닉 세포 또는 식물의 성장과 비교하여 대조군 세포 또는 식물에게 감소된 성장을 부여하는 시험 화합물을 선택하는 단계
    를 포함하는 방법.
  8. a) mut-PPO-코딩 핵산 라이브러리를 생성하는 단계,
    b) 세포 또는 식물에서 각각의 상기 핵산을 발현시키고 상기 세포 또는 식물을 PPO 억제로 처리함으로써, 생성된 mut-PPO-코딩 핵산 집단을 스크리닝하는 단계,
    c) 상기 mut-PPO 코딩 핵산 집단에 의해 제공되는 PPO 억제 내성 수준을 대조군 PPO-코딩 핵산에 의해 제공되는 PPO 억제 내성 수준과 비교하는 단계,
    d) 대조군 PPO-코딩 핵산에 의해 제공되는 것과 비교하여 PPO 억제에 대해 유의하게 증가된 수준의 내성을 제공하는 적어도 1개의 mut-PPO-코딩 핵산을 선택하는 단계
    를 포함하는, PPO 억제 제초제에 대해 저항성 또는 내성인 mut-PPO를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 확인하는 방법.
  9. 제8항에 있어서, 단계 d)에서 선택된 mut-PPO-코딩 핵산이 대조군 PPO-코딩 핵산에 의해 제공되는 것과 비교하여 PPO 억제 제초제에 대해 적어도 2배 더 큰 내성을 제공하는 것인 방법.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, 저항성 또는 내성을, 단계 a)의 라이브러리의 핵산 서열을 포함하는 트랜스제닉 식물을 생성하고 상기 트랜스제닉 식물을 대조군 식물과 비교하는 것에 의해 결정하는 것인 방법.
  11. mut-PPO 폴리펩티드를 코딩하며, 핵산이 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45의 뉴클레오티드 서열 또는 그의 변이체 또는 유도체를 포함하는 것인 단리된 핵산.
  12. 제10항에 있어서, 코딩된 mut-PPO가 하기: 위치 128에서의 아미노산이 아르기닌 이외의 것임; 위치 204에서의 아미노산이 페닐알라닌 이외의 것임, 위치 208에서의 아미노산이 트레오닌 이외의 것임; 위치 397에서의 아미노산이 류신 이외의 것임, 위치 400에서의 아미노산이 류신 이외의 것임, 위치 420에서의 아미노산이 페닐알라닌 이외의 것임, 위치 457에서의 아미노산이 페닐알라닌 이외의 것임 중 하나 이상을 포함하는 서열 2 또는 서열 4의 변이체인 핵산.
  13. 위치 420에서의 아미노산이 Ala, Leu, Ile 또는 Val이고, 위치 397에서의 아미노산이 Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu 또는 Gln인 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하며, 야생형 식물과 비교하여 식물에게 PPO 억제 제초제에 대해 증가된 저항성 또는 내성을 부여하는 mut-PPO 폴리펩티드.
  14. mut-PPO 폴리펩티드를 코딩하는 핵산에 의해 형질전환되며, 식물 세포에서의 상기 핵산의 발현은 야생형 품종의 식물 세포와 비교하여 PPO 억제 제초제에 대해 저항성 또는 내성을 증가시키며, 코딩된 mut-PPO는 하기: 위치 128에서의 아미노산이 아르기닌 이외의 것임; 위치 204에서의 아미노산이 페닐알라닌 이외의 것임, 위치 208에서의 아미노산이 트레오닌 이외의 것임; 위치 397에서의 아미노산이 류신 이외의 것임, 위치 400에서의 아미노산이 류신 이외의 것임, 위치 420에서의 아미노산이 페닐알라닌 이외의 것임, 위치 457에서의 아미노산이 페닐알라닌 이외의 것임 중 하나 이상을 포함하는 서열 2 또는 서열 4의 변이체인 트랜스제닉 식물 세포.
  15. 제14항에 있어서, mut-PPO 폴리펩티드 코딩 핵산이 a) 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45에 제시된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 그의 변이체 또는 유도체; b) 서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 또는 46에 제시된 바와 같은 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 그의 변이체 또는 유도체; c) a) 또는 b) 중 임의의 것의 적어도 60개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및 d) a) 내지 c) 중 임의의 것의 폴리뉴클레오티드에 상보적인 폴리뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 트랜스제닉 식물 세포.
  16. 제14항 또는 제15항에 정의된 바와 같은 식물 세포를 포함하며, 식물에서의 mut-PPO 폴리펩티드 코딩 핵산의 발현이 야생형 식물과 비교하여 PPO 억제 제초제에 대한 식물의 저항성을 증가시키는 것인 트랜스제닉 식물.
  17. 위치 420에서의 아미노산이 Met 또는 Val이고, 위치 397에서의 아미노산이 Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu 또는 Gln인 서열 2 또는 서열 4의 서열, 그의 변이체, 유도체, 오르토로그, 파라로그 또는 상동체를 포함하는 돌연변이유발 또는 재조합 mut-PPO 폴리펩티드를 발현하며, 상기 mut-PPO는 식물 내에서 발현되었을 때 식물의 상응하는 야생형 품종과 비교하여 증가된 제초제 내성을 식물에게 부여하는 것인 식물.
  18. 제14항 또는 제15항에 정의된 바와 같은 식물 세포를 포함하는 트랜스제닉 식물 또는 제16항 또는 제17항에 정의된 바와 같은 식물에 의해 생산된, 종자의 야생형 품종과 비교하여 PPO 억제 제초제에 대해 증가된 저항성을 위한 순수 육종인 종자.
  19. mut-PPO 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함하는 발현 카세트로 식물 세포를 형질전환시키는 것을 포함하는, 식물 세포의 야생형 품종과 비교하여 PPO 억제 제초제에 대해 증가된 저항성을 갖는 트랜스제닉 식물 세포를 생산하는 방법.
  20. (a) mut-PPO 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함하는 발현 카세트로 식물 세포를 형질전환시키는 단계, 및 (b) 상기 식물 세포로부터 PPO 억제 제초제에 대해 증가된 저항성을 갖는 식물을 생성하는 단계를 포함하는, 트랜스제닉 식물을 생산하는 방법.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서, mut-PPO 핵산이 a) 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45에 제시된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 그의 변이체 또는 유도체; b) 서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44 또는 46에 제시된 바와 같은 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 그의 변이체 또는 유도체; c) a) 또는 b) 중 임의의 것의 적어도 60개의 연속 뉴클레오티드를 포함하는 폴리뉴클레오티드; 및 d) a) 내지 c) 중 임의의 것의 폴리뉴클레오티드에 상보적인 폴리뉴클레오티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 것인 방법.
  22. 제19항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 발현 카세트가 식물에서 기능성인 전사 개시 조절 영역 및 번역 개시 조절 영역을 추가로 포함하는 것인 방법.
  23. i) 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분을 제공하며, 여기서 상기 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분은 서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43 또는 45에 제시된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 그의 변이체 또는 유도체를 포함하고, 상기 폴리뉴클레오티드는 선택 마커로서 사용되는 mut-PPO 폴리펩티드를 코딩하고, 상기 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분은 추가의 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있는 것인 단계; ii) 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분을 적어도 1종의 PPO 억제 화합물과 접촉시키는 단계; iii) 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분이 억제 화합물에 의해 영향을 받는지 여부를 결정하는 단계; 및 iv) 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분을 확인 또는 선택하는 단계를 포함하는, 형질전환된 식물 세포, 식물 조직, 식물 또는 그의 부분을 확인 또는 선택하는 방법.
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