MD4683C1 - Plante cu toleranţă sporită la erbicide - Google Patents

Plante cu toleranţă sporită la erbicide Download PDF

Info

Publication number
MD4683C1
MD4683C1 MDA20150003A MD20150003A MD4683C1 MD 4683 C1 MD4683 C1 MD 4683C1 MD A20150003 A MDA20150003 A MD A20150003A MD 20150003 A MD20150003 A MD 20150003A MD 4683 C1 MD4683 C1 MD 4683C1
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
amino acid
seq
variant
mut
sequence
Prior art date
Application number
MDA20150003A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Other versions
MD20150003A2 (ro
MD4683B1 (ro
Inventor
Рафаэль Апонте
Стефан ТРЕШ
Маттиас Витшель
Йенс Лерхль
Джилл Мари ПАУЛИК
Чад Броммер
Тобиас СЕЙСЕР
Дарио Масса
Original Assignee
BASF Agro B.V.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BASF Agro B.V. filed Critical BASF Agro B.V.
Publication of MD20150003A2 publication Critical patent/MD20150003A2/ro
Publication of MD4683B1 publication Critical patent/MD4683B1/ro
Publication of MD4683C1 publication Critical patent/MD4683C1/ro

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/02—Amaranthaceae or Chenopodiaceae, e.g. beet or spinach
    • A01H6/024—Beta vulgaris [beet]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/04—Amaryllidaceae, e.g. onion
    • A01H6/045—Allium cepa [onion]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/14—Asteraceae or Compositae, e.g. safflower, sunflower, artichoke or lettuce
    • A01H6/1464—Helianthus annuus [sunflower]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/34—Cucurbitaceae, e.g. bitter melon, cucumber or watermelon 
    • A01H6/348—Cucurbita, e.g. squash or pumpkin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/46—Gramineae or Poaceae, e.g. ryegrass, rice, wheat or maize
    • A01H6/4636—Oryza sp. [rice]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/54—Leguminosae or Fabaceae, e.g. soybean, alfalfa or peanut
    • A01H6/542—Glycine max [soybean]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/74—Rosaceae, e.g. strawberry, apple, almonds, pear, rose, blackberries or raspberries
    • A01H6/7409—Fragaria, i.e. strawberries
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/82—Solanaceae, e.g. pepper, tobacco, potato, tomato or eggplant
    • A01H6/825—Solanum lycopersicum [tomato]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
    • A01H6/82—Solanaceae, e.g. pepper, tobacco, potato, tomato or eggplant
    • A01H6/827—Solanum tuberosum [potato]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/48—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/54—1,3-Diazines; Hydrogenated 1,3-diazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/72—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with nitrogen atoms and oxygen or sulfur atoms as ring hetero atoms
    • A01N43/84—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with nitrogen atoms and oxygen or sulfur atoms as ring hetero atoms six-membered rings with one nitrogen atom and either one oxygen atom or one sulfur atom in positions 1,4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/14—Plant cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/001—Oxidoreductases (1.) acting on the CH-CH group of donors (1.3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y103/00—Oxidoreductases acting on the CH-CH group of donors (1.3)
    • C12Y103/03—Oxidoreductases acting on the CH-CH group of donors (1.3) with oxygen as acceptor (1.3.3)
    • C12Y103/03004—Protoporphyrinogen oxidase (1.3.3.4)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Catching Or Destruction (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la un procedeu de combatere a vegetaţiei nedorite pe un teren de cultivare a plantelor. Procedeul dat include etapa de furnizare pe terenul respectiv a unei plante care conţine cel puţin un acid nucleic, ce cuprinde o secvenţă de nucleotide care codifică protoporfirinogen oxidaza (PPO) mutantă, planta menţionată fiind rezistentă sau tolerantă la un erbicid care inhibă PPO, şi etapa de aplicare pe terenul respectiv a unei cantităţi eficiente de erbicid menţionat. De asemenea, invenţia se referă la plante care cuprind enzime PPO de tip sălbatic sau mutante şi la procedee de obţinere a unor astfel de plante.Revendicări: 13Figuri: 4Secvenţe: 46

Description

Prezenta invenţie se referă, în general, la procedee de conferire plantelor a unei toleranţe la nivel agricol la un erbicid. În special, invenţia se referă la plante cu toleranţă sporită la erbicidele care inhibă PPO. În mod mai special, prezenta invenţie se referă la procedee şi plante obţinute prin mutageneză şi încrucişare, şi transformare, care au toleranţă sporită la erbicidele ce inhibă PPO.
Erbicidele care inhibă protoporfirinogen oxidaza (în continuare denumită Protox sau PPO; EC:1.3.3.4), o enzimă cheie în biosinteza protoporfirinei IX, sunt utilizate pentru controlul selectiv al buruienilor din anii 1960. PPO catalizează ultima etapă obişnuită în biosinteza clorofilului şi a hemului, care reprezintă oxidarea protoporfirinogenului IX în protoporfirina IX. (Matringe et al. 1989. Biochem. 1. 260: 231). Erbicidele care inhibă PPO includ mai multe clase structurale diferite de molecule (Duke et al. 1991. Weed Sci. 39: 465; Nandihalli et al. 1992. Pesticide Biochem. Physiol. 43: 193; Matringe et al. 1989. FEBS Lett. 245: 35; Yanase and Andoh. 1989. Pesticide Biochem. Physiol. 35: 70). Aceşti compuşi erbicizi includ difenileteri {de ex. lactofen, (+-)-2-etoxi-1-metil-2-oxoetil 5-{2-clor-4-(trifluormetil)fenoxi}-2-nitrobenzoat; acifluorfen, acid 5- {2-cloro-4-(trifluormetil)fenoxi}-2-nitrobenzoic; esterul său metilic; sau oxifluorfen, 2-clor-1- (3-etoxi-4-nitrofenoxi)-4- (trifluorobenzen)}, oxidiazoli (de ex. oxidiazon, 3-{2,4-diclor-5-(1-metiletoxi)fenil}-5-(1,1-dimetiletil)-1,3,4-oxadiazol-2-(3H)-onă), imide ciclice (de ex. S-23142, N-(4-clor-2-fluor-5-propargiloxifenil)-3,4,5,6-tetrahidroftalimidă; cloroftalim, N- (4-clorfenil)-3,4,5,6-tetrahidroftalimidă), pirazoli de fenil (de ex. TNPP-etil, etil 2-{1- (2,3,4-triclorofenil)-4-nitropirazolil-5-oxi}propionat; M&B 39279), derivaţi ai piridinei (de ex., LS 82-556), şi fenopilat şi analogii săi O-fenilpirolidino- şi piperidinocarbamat. Majoritatea acestor compuşi inhibă competitiv reacţia normală catalizată de enzimă, care acţionează aparent ca analogi de substrat.
Aplicarea erbicidelor care inhibă PPO are drept rezultat acumularea protoporfirinogenului IX în cloroplast şi mitocondrii, care se consideră că se scurge în citosol, unde este oxidat de o peroxidază. Atunci când este expusă la lumină, protoporfirina IX cauzează formarea oxigenului singlet în citosol şi formarea altor specii de oxigen reactiv, care pot cauza peroxidarea lipidică şi distrugerea membranei, conducând la moartea rapidă a celulelor (Lee et al. 1993. Rev. Plant Physiol. 102: 881).
Nu toate enzimele PPO sunt susceptibile la erbicidele care inhibă enzimele PPO ale plantelor. Atât enzimele PPO ale Escherichia coli, cât şi ale Bacillus subtilis (Sasarmen et al. 1993. Can. J. Microbiol. 39: 1155; Dailey et al. 1994. J. Biol. Chem. 269: 813) sunt rezistente la aceşti inhibitori erbicizi. Au fost raportaţi mutanţi ai algei unicelulare Chlamydomonas reinhardtii rezistenţi la erbicidul fenilimidă S-23142 (Kataoka et al. 1990. J. Pesticide Sci. 15: 449; Shibata et al. 1992. In Research in Photosynthesis, Vol. III, N. Murata, ed. Kluwer:Netherlands. pp. 567-70). Cel puţin unul dintre aceşti mutanţi pare să aibă o activitate modificată a PPO care este rezistentă nu numai la inhibitorul erbicid pe care mutantul a fost selectat, ci şi la alte clase de inhibitori protox (Oshio et al. 1993. Z. Naturforsch. 48c: 339; Sato et al. 1994. In ACS Symposium on Porphyric Pesticides, S. Duke, ed. ACS Press: Washington, D.C.). O linie celulară mutantă de tutun a fost, de asemenea, descrisă, care este rezistentă la inhibitorul S-21432 (Che et al. 1993. Z. Naturforsch. 48c: 350). Mutanţii auxotrofi E. coli au fost utilizaţi pentru confirmarea rezistenţei erbicide a erbicidelor care inhibă PPO a plantelor clonate.
Trei strategii principale sunt disponibile pentru a face plantele tolerante la erbicide, şi anume (1) detoxifierea erbicidului cu o enzimă care transformă erbicidul, sau metabolitul său activ, în produse netoxice, cum ar fi, de exemplu, enzimele de toleranţă la bromoxinil sau basta (EP 242236, EP 337899); (2) transformarea enzimei ţintă într-o enzimă funcţională care este mai puţin susceptibilă la erbicid, sau la metabolitul său activ, cum ar fi, de exemplu, enzimele de toleranţă la glifosat (EP 293356, Padgette S. R. et al., J.Biol. Chem, 266, 33, 1991).; sau (3) supraexprimarea enzimei susceptibile astfel încât să producă cantităţi de enzimă ţintă în plantă care să fie suficiente în raport cu erbicidul, în vederea constantelor cinetice ale acestei enzime, astfel încât să aibă suficientă enzimă funcţională disponibilă în ciuda prezenţei inhibitorului său. Strategia a treia a fost descrisă pentru obţinerea cu succes a plantelor care au fost tolerante la inhibitori PPO (a se vedea de ex. US 5,767,373 [1] sau US 5,939,602, precum şi membrii familiei de brevete ale acestora). În plus, SUA 2010/0100988 şi WO 2007/024739 [2] dezvăluie secvenţe de nucleotide care codifică secvenţele de aminoacizi având o activitate enzimatică, astfel încât secvenţele de aminoacizi să fie rezistente la substanţele chimice erbicide ale inhibitorului PPO, în special mutanţii inhibitorului 3-feniluracil specific PPO.
Până în prezent, stadiul tehnic nu a descris plante tolerante la erbicidele care inhibă PPO conţinând cel puţin un acid nucleic al PPO de tip sălbatic sau mutant conform prezentei invenţii. De asemenea, în stadiul tehnic nu au fost descrise plante de cultură tolerante la erbicidele care inhibă PPO conţinând mutaţii pe genomuri, alţii decât genomul din care este obţinută gena PPO. Prin urmare, în domeniu este necesară identificarea genelor cu toleranţă la erbicidele care inhibă PPO din genomurile şi speciile suplimentare. De asemenea, în domeniu este nevoie de plante de cultură şi plante de cultură cu toleranţă sporită la erbicide, cum ar fi erbicid care inhibă PPO şi conţinând cel puţin un acid nucleic al PPO de tip sălbatic şi/sau mutant. De asemenea, sunt necesare procedee pentru combaterea creşterii buruienilor din vecinătatea acestor plante de cultură sau plantelor de cultură. Aceste compoziţii şi procedee vor permite utilizarea unor tehnici de pulverizare în timpul aplicării erbicidelor pe zone, care conţin plante de cultură sau pe plantele de cultură.
Problema este soluţionată de prezenta invenţie care se referă la un procedeu de combatere a vegetaţiei nedorite pe un teren de cultivare a plantelor, unde procedeul dat cuprinde etapele de:
a) furnizare, pe terenul respectiv, a unei plante care cuprinde cel puţin un acid nucleic cuprinzând o secvenţă de nucleotide care codifică o protoporfirinogen oxidază mutantă (mut-PPO), care este rezistentă sau tolerantă la un "erbicid care inhibă PPO" şi
b) aplicare pe terenul respectiv a unei cantităţi eficiente de erbicid menţionat.
Totodată, secvenţa de nucleotide:
a) cuprinde secvenţa SEQ ID NO: 1, sau 3, sau o variantă a acesteia, având o identitate a secvenţei de cel puţin 80% în raport cu secvenţa de nucleotide SEQ ID NO:1 sau 3,
şi unde mut-PPO a SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4 cuprinde următoarele:
a) aminoacidul ce corespunde poziţiei 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu sau Gln; şi
b) aminoacidul ce corespunde poziţiei 420 este Val sau Met.
Într-o variantă preferenţială de executare a invenţiei, planta cuprinde cel puţin un acid nucleic heterolog suplimentar care cuprinde o secvenţă de nucleotide ce codifică o enzimă tolerantă la erbicid şi erbicidul care inhibă PPO se aplică împreună cu unul sau mai multe erbicide suplimentare.
Un alt obiect se referă la o casetă de expresie care cuprinde un acid nucleic izolat ce codifică o polipeptidă mut-PPO, unde acidul nucleic are o identitate a secvenţei de cel puţin 80% în raport cu secvenţa de nucleotide a SEQ ID NO: 1 sau 3, şi unde mut-PPO codificată este o variantă a SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4, în care aminoacidul ce corespunde poziţiei 420 este Met sau Val, iar aminoacidul ce corespunde poziţiei 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, He, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu sau Gln, unde polipeptida menţionată mut-PPO conferă rezistenţă sau toleranţă sporită la un erbicid care inhibă PPO într-o plantă comparativ cu o plantă sălbatică.
In plus, prezenta invenţie se referă la o polipeptidă mut-PPO ce cuprinde o secvenţă, care este în masură de cel puţin 80% identică cu SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4, în care aminoacidul ce corespunde poziţiei 420 este Met sau Val, iar aminoacidul ce corespunde poziţiei 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu, sau Gln, unde polipeptida mut-PPO menţionată conferă rezistenţă sau toleranţă sporită la un erbicid care inhibă PPO într-o plantă comparativ cu o plantă sălbatică.
Un alt obiect se referă la o celulă de plantă transgenică transformată de un acid nucleic ce codifică o polipeptidă mut-PPO, care este în măsură de cel puţin 80% identică cu SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4, unde expresia acidului nucleic în celula de plantă duce la rezistenţă sau toleranţă sporită la un erbicid care inhibă PPO, comparativ cu un soi sălbatic de celulă de plantă, unde mut-PPO codificată este o variantă a SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4, care include aminoacidul ce corespunde poziţiei 397 şi care este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, He, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu sau Gln, şi aminoacidul ce corespunde poziţiei 420 care este Met sau Val.
Într-o variantă preferenţială de executare a invenţiei, celula de plantă transgenică, unde acidul nucleic ce codifică polipeptida mut-PPO cuprinde o secvenţă de polinucleotide selectată din grupul ce constă dintr-o: a) polinueleotidă prezentată în SEQ ID NO: 1 sau 3, sau o variantă a acesteia, având o identitate a secvenţei de cel puţin 80% în raport cu secvenţa de nucleotide SEQ ID NO:1 sau 3; b) polinueleotidă ce codifică o polipeptidă, care este în măsură de cel puţin 80% identică cu SEQ ID NO:2 sau 4; c) polinucleotidă care cuprinde cel puţin 60 de nucleotide consecutive ale oricăreia dintre a) sau b); d) polinueleotidă complementară polinucleotidei a oricăreia dintre a) - c).
În plus, prezenta invenţie se referă la planta transgenică conform prezentei invenţii care cuprinde o celulă de plantă conform prezentei invenţii, unde expresia acidului nucleic care codifică polipeptida mut-PPO în plantă duce la sporirea rezistenţei plantei la un erbicid care inhibă PPO comparativ cu o plantă sălbatică.
Un alt obiect se referă la o plantă care exprimă o polipeptidă mut-PPO supusă mutagenezei sau recombinantă ce cuprinde o secvenţă care este în măsură de cel puţin 80% identică cu SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4, în care aminoacidul ce corespunde poziţiei 420 este Met sau Val, iar aminoacidul ce corespunde poziţiei 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu sau Gln, unde mut-PPO menţionată conferă plantei toleranţă sporită la erbicid comparativ cu soiul de plantă salbatic corespunzator, atunci când este exprimată în aceasta.
Într-o altă variantă preferenţială de executare a invenţiei, invenţia se referă la o sămânţă produsă de o plantă transgenică care cuprinde o celulă de plantă conform prezentei invenţii, unde sămânţa este o specie pură pentru rezistenţă sporită la un erbicid care inhibă PPO, comparativ cu un soi de sămânţă de tip sălbatic.
Un alt obiect se referă la un procedeu de producere a unei plante transgenice care cuprinde (a) transformarea unei celule de plantă cu o casetă de expresie cuprinzând un acid nucleic ce codifică o polipeptidă mut-PPO, care cuprinde o secvenţă, care este în masură de cel puţin 80% identică cu SEQ ID NO:2 sau SEQ ID NO:4, în care aminoacidul ce corespunde poziţiei 420 este Val sau Met, iar aminoacidul ce corespunde poziţiei 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu sau Gln, şi (b) generarea unei plante cu rezistenţă sporită la erbicidul care inhibă PPO din celula de plantă.
Intr-o variantă preferenţială de executare a invenţiei, acidul nucleic al mut-PPO cuprinde o secvenţă de polinucleotide selectată din grupul ce constă dintr-o: a) polinueleotidă prezentată în SEQ ID NO: 1 sau 3, sau o variantă a acesteia, având o identitate a secvenţei de cel puţin 80% în raport cu secvenţa de nucleotide SEQ ID NO:1 sau 3; b) polinucleotidă ce codifică o polipeptidă, care este în masură de cel puţin 80% identică cu SEQ ID NO:2 sau 4; c) polinueleotidă care cuprinde cel puţin 60 de nucleotide consecutive ale oricăreia dintre a) sau b); şi d) polinucleotidă complementară polinucleotidei a oricăreia dintre a) - c).
De preferintă, caseta de expresie cuprinde suplimentar o regiune de reglare a iniţierii transcripţiei şi o regiune de reglare a iniţierii translaţiei care sunt funcţionale în plantă.
Într-o altă variantă de executare, invenţia se referă la utilizarea mut-PPO din invenţie ca marker de selecţie. Invenţia prezintă un procedeu de identificare sau selectare a unei celule de plantă transformate, a unui ţesut de plantă, a unei plante sau părţi a acesteia care cuprinde a) furnizarea unei celule de plantă transformate, unui ţesut de plantă, unei plante sau părţi a acesteia, unde celula de plantă transformată, ţesutul de plantă, planta sau o parte a acesteia cuprinde un acid nucleic izolat care codifică o polipeptidă a mut-PPO a invenţiei, aşa cum este descris în continuare, în care polipeptida este utilizată ca un marker de selecţie, şi în care celula de plantă transformată, ţesutul de plantă, planta sau o parte a acesteia pot cuprinde opţional un alt acid nucleic izolat relevant; b) tratarea celulei de plantă transformate, ţesutului de plantă, plantei sau părţii acesteia cu cel puţin un compus ce inhibă PPO; c) determinarea dacă celula de plantă, ţesutul de plantă, planta sau o parte a acesteia este afectată de inhibitor sau compusul de inhibare; şi d) identificarea sau selectarea celulei de plantă transformate, ţesutului de plantă, plantei sau unei părţi a acesteia.
Invenţia este, de asemenea, încorporată în proteine purificate ale mut-PPO ce conţin mutaţiile descrise aici, care sunt utile în studii de modelare moleculară pentru elaborarea altor îmbunătăţiri la toleranţa erbicidă. Metode de purificare a proteinelor sunt bine cunoscute, şi pot fi uşor realizate folosind produse disponibile în comerţ sau metode special concepute prezentate, de exemplu, în Biotehnologia proteinelor, Walsh and Headon (Wiley, 1994).
DESCRIEREA SUCCINTĂ A DESENELOR
Figura 1 prezintă o aliniere a secvenţelor de aminoacizi ale secvenţelor PPO de Amaranthus tuberculatus (A.tuberculatus), Amaranthus tuberculatus rezistent (A.tuberculatus_R), Arabidopsis thaliana lung (A.thaliana_2), Spinacia oleracea scurt (S.oleracea_2), Nicotiana tabacum scurt (N.tabacum_2), Glycine max (Glycine_max), Arabidopsis thaliana scurt (A.thaliana_1), Nicotiana tabacum lung (N.tabacum_1), Chlamydomonas reinhardtii lung (C.reinhardtii_1), Zea mays (Z.mays), Oryza sativa (O.sativa1), Solanum tuberosum (S.tuberosum), Cucumis sativus (C.sativus), Cichorium intybus (C.intybus_1), Spinacia oleracea lung (S.oleracea_1), Polytomella sp. Pringsheim 198.80 (Polytomella). Regiunile conservate sunt indicate cu culoare gri deschisă, gri şi neagră.
Figura 2 prezintă selectarea tulpinilor de Chlamydomonas reinhardtii rezistente la erbicidul ce inhibă PPO 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-i1)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4). (A) Celule supuse mutagenezei plasate pe un mediu solid fără un agent de selecţie. (B) Celule supuse mutagenezei plasate pe un mediu solid conţinând 1x10-7 M erbicid ce inhibă PPO 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-ini1)-3,4-dihidro-2H-benzo[b] [1,4] oxazin-6-yil)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4). Celulele care sunt rezistente la erbicidul ce inhibă PPO formează colonii (încercuite şi numerotate 31 şi 32), în timp ce celulele susceptible nu cresc. Numărul mai mare de colonii pe placa A faţă de B, indică că coloniile de pe placa B sunt rezistente la erbicidul ce inhibă PPO 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4] oxazin-6-i1)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4).
Figura 3 prezintă caracteristicile de creştere ale tulpinilor Chlamydomonas reinhardtii selectate după cum se arată in Figura 2, rezistente la erbicidul ce inhibă PPO 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-ini1)-3,4-dihidro-2H-benzo [b] [1,4] oxazin-6-i1)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4). (A) Curba doză-răspuns a celulor de tip sălbatic tratate cu erbicid ce inhibă PPO 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-ini1)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-i1)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4) cu CI50 respectiv. (B) Curba doză-răspuns a celulor supuse mutagenezei (tulpina 17) tratate cu erbicid ce inhibă PPO
1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4) cu CI50 respectiv. Tulpina 17 (B), rezistentă la erbicidul ce inhibă PPO 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihydro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), arată un CI50 mult mai mic, comparativ cu celulele de tip sălbatic.
Figura 4 prezintă plante de soia de tip sălbatic şi transgenice T1 tratate cu rata de pulverizare indicată (g ia/ha) a erbicidelor ce inhibă PPO cu MSO de 1%.
A înseamnă plantă de soia de tip sălbatic.
B înseamnă plantă de soia transformată cu un acid nucleic care codifică o mut-PPO a SECV ID nr. 2, în care leucina la poziţia 397 este înlocuită cu acidul aspartic, şi fenilalanin la poziţia 420 este substituit cu valină.
1 înseamnă nepulverizat.
2 înseamnă 150 g de Saflufenacil.
3 înseamnă 100 g de 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4).
4 înseamnă 150 g de flumioxazin.
5 înseamnă 600 g de fomesafen.
Tabelul 1
SECV. ID Nr.: Descrierea Organismul Gena Nr. de acces: 1 Acidul nucleic al PPO Amaranthus PPX2L_WC DQ386114 2 Aminoacidul PPO Amaranthus ABD52326 3 Acidul nucleic al PPO Amaranthus PPX2L_AC DQ386117 4 Aminoacidul PPO Amaranthus ABD52329 5 Acidul nucleic al PPO Amaranthus PPX2L_CC_R DQ386118 6 Aminoacidul PPO Amaranthus ABD52330 7 Acidul nucleic al PPO Amaranthus PPX2L_AC_R DQ386116 8 Aminoacidul PPO Amaranthus ABD52328 9 Acidul nucleic al PPO Arabidopsis PPX AB007650 10 Aminoacidul PPO Arabidopsis BAB08301 11 Acidul nucleic al PPO Nicotiana ppxI AF044128 12 Aminoacidul PPO Nicotiana AAD02290 13 Acidul nucleic al PPO Cichorium PPX1 AF160961 14 Aminoacidul PPO Cichorium AF160961_1 15 Acidul nucleic al PPO Spinacia SO-POX1 AB029492 16 Aminoacidul PPO Spinacia BAA96808 17 Acidul nucleic al PPO Spinacia SO-POX2 AB046993 18 Aminoacidul PPO Spinacia BAB60710 19 Acidul nucleic al PPO Solanum PPOX AJ225107 20 Aminoacidul PPO Solanum CAA12400 21 Acidul nucleic al PPO Zea ZM_BFc0091B03 BT063659 22 Aminoacidul PPO Zea ACN28356 23 Acidul nucleic al PPO Zea prpo2 NM_001111534 24 Aminoacidul PPO Zea NP_001105004 25 Acidul nucleic al PPO Chlamydomonas Ppx1 AF068635 26 Aminoacidul PPO Chlamydomonas AAC79685 27 Acidul nucleic al PPO Polytomella PPO AF332964 28 Aminoacidul PPO Polytomella AF332964_1 29 Acidul nucleic al PPO Sorghum Hyp. Proteina hyp. XM_002446665 30 Aminoacidul PPO Sorghum XP_002446710 31 Acidul nucleic al PPO Chlorella 32 Aminoacidul PPO Chlorella 51538 33 Acidul nucleic al PPO Oryza PPOX1 AB057771 34 Aminoacidul PPO Oryza BAB39760 35 Acidul nucleic al PPO Amaranthus PPX2 DQ386113 36 Aminoacidul PPO Amaranthus ABD52325 37 Acidul nucleic al PPO Arabidopsis PPOX NM_178952 38 Aminoacidul PPO Arabidopsis NP_849283 39 Acidul nucleic al PPO Nicotiana ppxII AF044129 40 Aminoacidul PPO Nicotiana AAD02291 41 Acidul nucleic al PPO Glicină hemG AB025102 42 Aminoacidul PPO Glicină BAA76348 43 Acidul nucleic al PPO Cucumis CsPPO AB512426 44 Aminoacidul PPO Cucumis BAH84864.1 45 Acidul nucleic al PPO Oryza Hyp. Proteina hyp. AL606613 46 Aminoacidul PPO Oryza CAE01661
Articolele "un" şi "o" sunt utilizate în prezenta pentru a face referinţă la unul sau mai multe (şi anume, la cel puţin unul) din obiectele gramaticale ale articolului. Cu titlu de exemplificare, "un element" înseamnă unul sau mai multe elemente.
După cum este utilizat în prezenta, cuvântul "cuprinzând" sau variaţiile acestuia, cum ar fi "cuprinde" sau "cuprind" implică includerea unui element, număr integru sau etapă menţionată, sau grup de elemente, numere integre sau etape, dar nu excluderea oricărui element, număr integru sau etapă, sau grup de elemente, numere integre sau etape.
Prezenta invenţie se referă la un procedeu de combatere a vegetaţiei nedorite pe un teren de cultivare a plantelor, procedeul dat cuprinzând etapele de:
a) furnizare, pe terenul respectiv, a unei plante care conţine cel puţin un acid nucleic constând dintr-o secvenţă de nucleotide care codifică o protoporfirinogen oxidază de tip sălbatic sau o protoporfirinogen oxidază mutantă (mut-PPO), care este rezistentă sau tolerantă la un erbicid care inhibă PPO,
b) aplicarea pe terenul respectiv a unei cantităţi eficiente de erbicidul menţionat.
Termenul "combaterea vegetaţiei nedorite" trebuie înţeles ca însemnând distrugerea buruienilor şi/sau provocarea întârzierii sau inhibarea în alt mod a creşterii normale a buruienilor. Prin buruieni, în sensul cel mai larg, se va înţelege toate acele plante care cresc pe terenurile unde acestea nu sunt dorite. Buruienile din prezenta invenţie includ, de exemplu, buruieni dicotiledonate şi monocotiledonate. Buruienile dicotiledonate includ, dar nu se limitează la buruienile din genurile: Sinapis, Lepidium, Galium, Stellaria, Matricaria, Anthemis, Galinsoga, Chenopodium, Urtica, Senecio, Amaranthus, Portulaca, Xanthium, Convolvulus, Ipomoea, Polygonum, Sesbania, Ambrosia, Cirsium, Carduus, Sonchus, Solanum, Rorippa, Rotala, Lindernia, Lamium, Veronica, Abutilon, Emex, Datura, Viola, Galeopsis, Papaver, Centaurea, Trifolium, Ranunculus, şi Taraxacum. Buruienile monocotiledonate includ, dar nu se limitează la buruienile din genurile: Echinochloa, Setaria, Panicum, Digitaria, Phleum, Poa, Festuca, Eleusine, Brachiaria, Lolium, Bromus, Avena, Cyperus, Sorghum, Agropyron, Cynodon, Monochoria, Fimbristyslis, Sagittaria, Eleocharis, Scirpus, Paspalum, Ischaemum, Sphenoclea, Dactyloctenium, Agrostis, Alopecurus, şi Apera. În plus, buruienile din prezenta invenţie pot include, de exemplu, plante de cultură care cresc pe un teren nedorit. De exemplu, o plantă de porumb spontană care se află pe un câmp unde se cultivă predominant plante de soia poate fi considerată o buruiană, în cazul în care planta de porumb nu este dorită pe câmpul cu plante de soia.
Termenul "plantă" este folosit în sensul său cel mai larg, deoarece se referă la un material organic şi se intenţionează să cuprindă organisme eucariote care sunt membre ale Regnului vegetal, exemple ale cărora includ dar nu sunt limitate la plante vasculare, legume, cereale, flori, copaci, ierburi, arbuşti, iarbă, viţă de vie, ferigi, muşchi, ciuperci şi alge, etc. precum şi clone, vlăstari, şi părţi de plante utilizate pentru înmulţirea asexuată (de ex., butaşi, lăstari, rizomi, tulpini subterane, tufe, coroane, bulbi, cepe, tuberculi, rizomi, plante/ţesuturi produse în cultura de ţesuturi, etc.). Termenul "plantă" cuprinde, de asemenea, plante întregi, strămoşi şi descendenţi ai plantelor şi părţilor de plante, inclusiv seminţe, lăstari, tulpini, frunze, rădăcini (inclusiv tuberculi), flori, mănunchiuri de flori, fructe, pedunculi, stamine, antere, stigme, stil, ovar, petală, sepală, carpelă, vârf radicular, înveliş radicular, fibre radiculare, fibre de frunză, fibre de sămânţă, granule de polen, microspor, cotiledon hipocotil, epicotil, xilem, floem, parenchim, endosperm, o celulă însoţitor, o celulă de apărare, precum şi orice alte organe, ţesuturi, şi celule cunoscute ale unei plante, şi ţesuturi şi organe, în care fiecare dintre cele sus-menţionate cuprind gena/acidul nucleic relevant. Termenul "plantă" cuprinde, de asemenea, celule de plante, culturi în suspensie, ţesut calus, embrioni, regiuni meristematice, gametofiţi, sporofiţi, polen şi microspori, din nou, unde fiecare dintre cele sus-menţionate cuprind gena/acidul nucleic relevant.
Plantele care sunt în special utile în procedeele invenţiei includ toate plantele care fac parte din superfamilia Viridiplantae, în special plantele monocotiledonate şi dicotiledonate, inclusiv plantele furajere sau leguminoasele furajere, plantele decorative, plantele alimentare, arborii sau arbuştii selectaţi din lista ce include Acer spp., Actinidia spp., Abelmoschus spp., Agave sisalana, Agropyron spp., Agrostis stolonifera, Allium spp., Amaranthus spp., Ammophila arenaria, Ananas comosus, Annona spp., Apium graveolens, Arachis spp, Artocarpus spp., Asparagus officinalis, Avena spp. (de ex., Avena sativa, Avena fatua, Avena byzantina, Avena fatua var. sativa, Avena hybrida), Averrhoa carambola, Bambusa sp., Benincasa hispida, Bertholletia excelsea, Beta vulgaris, Brassica spp. (e.g. Brassica napus, Brassica rapa ssp. [canola, oilseed rape, turnip rape]), Cadaba farinosa, Camellia sinensis, Canna indica, Cannabis sativa, Capsicum spp., Carex elata, Carica papaya, Carissa macrocarpa, Carya spp., Carthamus tinctorius, Castanea spp., Ceiba pentandra, Cichorium endivia, Cinnamomum spp., Citrullus lanatus, Citrus spp., Cocos spp., Coffea spp., Colocasia esculenta, Cola spp., Corchorus sp., Coriandrum sativum, Corylus spp., Crataegus spp., Crocus sativus, Cucurbita spp., Cucumis spp., Cynara spp., Daucus carota, Desmodium spp., Dimocarpus longan, Dioscorea spp., Diospyros spp., Echinochloa spp., Elaeis (e.g. Elaeis guineensis, Elaeis oleifera), Eleusine coracana, Eragrostis tef, Erianthus sp., Eriobotrya japonica, Eucalyptus sp., Eugenia uniflora, Fagopyrum spp., Fagus spp., Festuca arundinacea, Ficus carica, Fortunella spp., Fragaria spp., Ginkgo biloba, Glycine spp. (e.g. Glycine max, Soja hispida or Soja max), Gossypium hirsutum, Helianthus spp. (e.g. Helianthus annuus), Hemerocallis fulva, Hibiscus spp., Hordeum spp. (e.g. Hordeum vulgare), Ipomoea batatas, Juglans spp., Lactuca sativa, Lathyrus spp., Lens culinaris, Linum usitatissimum, Litchi chinensis, Lotus spp., Luffa acutangula, Lupinus spp., Luzula sylvatica, Lycopersicon spp. (e.g. Lycopersicon esculentum, Lycopersicon lycopersicum, Lycopersicon pyriforme), Macrotyloma spp., Malus spp., Malpighia emarginata, Mammea americana, Mangifera indica, Manihot spp., Manilkara zapota, Medicago sativa, Melilotus spp., Mentha spp., Miscanthus sinensis, Momordica spp., Morus nigra, Musa spp., Nicotiana spp., Olea spp., Opuntia spp., Ornithopus spp., Oryza spp. (e.g. Oryza sativa, Oryza latifolia), Panicum miliaceum, Panicum virgatum, Passiflora edulis, Pastinaca sativa, Pennisetum sp., Persea spp., Petroselinum crispum, Phalaris arundinacea, Phaseolus spp., Phleum pratense, Phoenix spp., Phragmites australis, Physalis spp., Pinus spp., Pistacia vera, Pisum spp., Poa spp., Populus spp., Prosopis spp., Prunus spp., Psidium spp., Punica granatum, Pyrus communis, Quercus spp., Raphanus sativus, Rheum rhabarbarum, Ribes spp., Ricinus communis, Rubus spp., Saccharum spp., Salix sp., Sambucus spp., Secale cereale, Sesamum spp., Sinapis sp., Solanum spp. (e.g. Solanum tuberosum, Solanum integrifolium or Solanum lycopersicum), Sorghum bicolor, Spinacia spp., Syzygium spp., Tagetes spp., Tamarindus indica, Theobroma cacao, Trifolium spp., Tripsacum dactyloides, Triticosecale rimpaui, Triticum spp. (e.g. Triticum aestivum, Triticum durum, Triticum turgidum, Triticum hybernum, Triticum macha, Triticum sativum, Triticum monococcum or Triticum vulgare), Tropaeolum minus, Tropaeolum majus, Vaccinium spp., Vicia spp., Vigna spp., Viola odorata, Vitis spp., Zea mays, Zizania palustris, Ziziphus spp., amarant, anghinare, sparanghel, broccoli, varză de Bruxelles, varză, canola, morcov, conopidă, ţelină, salată, in, varză furajeră, linte, rapiţă, bamă, ceapă, cartof, orez, soia, căpşun, sfeclă de zahăr, trestie de zahăr, floarea-soarelui, roşii, dovleac, ceai şi alge, printre altele. Conform unei variante de executare preferenţiale a prezentei invenţii, planta este o plantă de cultură. Exemple de plante de cultură includ, printre altele, soia, floarea-soarelui, canola, lucerna, seminţe de rapiţă, bumbacul, tomatele, cartoful sau tutunul. De preferinţă, planta este o plantă monocotiledonată, cum ar fi trestia de zahăr. De preferinţă, planta este o cereală, cum ar fi orezul, porumbul, grâul, orzul, meiul, secara, sorgul sau ovăzul.
Într-o variantă de executare preferenţială, planta a fost produsă în prealabil printr-un procedeu care cuprinde recombinant prepararea unei plante prin introducerea şi supra-exprimarea unei transgene a PPO de tip sălbatic sau mut-PPO în conformitate cu prezenta invenţie, aşa cum se descrie mai detaliat în continuare.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, planta a fost produsă în prealabil printr-un procedeu care cuprinde in situ celulele de plantă supuse mutagenezei, pentru a obţine celule de plantă care exprimă o mut-PPO.
Aşa cum este descris în prezenta, acizii nucleici ai invenţiei îşi găsesc utilizare în sporirea toleranţei la erbicide a plantelor care cuprind în genomurile lor o genă ce codifică o proteină de tip sălbatic sau o mut-PPO tolerantă la erbicide. O astfel de genă poate fi o genă endogenă sau o transgenă, după cum este descris în continuare. În plus, în anumite variante de executare, acizii nucleici din prezenta invenţie pot fi aranjaţi cu orice combinaţie de secvenţe de polinucleotide relevante cu scopul de a crea plante cu un fenotip dorit. De exemplu, acizii nucleici din prezenta invenţie pot fi aranjaţi cu orice alte polinucleotide care codifică polipeptidele, având o activitate pesticidă şi/sau insecticidă, cum ar fi, de exemplu, proteinele toxinei Bacillus thuringiensis (descrise în brevetele USA nr. 5,366,892; 5,747,450; 5,737,514; 5,723,756; 5,593,881; şi Geiser et al (1986) Gene 48: 109), 5-enolpiruvilsichimat-3-fosfat sintaza (EPSPS), glifosat acetil transferaza (GAT), citocrom P450 monooxigenaza, fosfinotricin acetiltransferaza (PAT), acetohidroxiacid sintaza (AHAS; EC 4.1.3.18, cunoscute, de asemenea, sub denumirea de acetolactat sintaza sau ALS), hidroxifenil piruvat dioxigenaza (HPPD), fitoen desaturaza (PD) şi enzime de degradare a dicambei descrise în WO 02/068607, sau enzime de degradare a derivaţilor fenoxiaceticacidului şi fenoxipropionicacidului descrise în WO 2008141154 sau WO 2005107437. Combinaţiile obţinute pot include, de asemenea, copii multiple ale oricăreia dintre polinucleotidele relevante.
În general, termenul "erbicid" este utilizat aici pentru a semnifica un ingredient activ care distruge, combate sau modifică nefavorabil creşterea plantelor. Cantitatea sau concentraţia preferată de erbicid este o "cantitate eficientă" sau o "concentraţie eficientă". Prin "cantitate eficientă" şi "concentraţie eficientă" se are în vedere o cantitate şi, respectiv, o concentraţie care este suficientă pentru a distruge sau inhiba creşterea unei plante, ţesut de plantă, celulă de plantă, sau celulă gazdă similară, de tip sălbatic, dar cantitatea menţionată nu distruge sau inhibă atât de sever creşterea plantelor, ţesuturilor de plantă, celulelor de plantă, şi celulelor gazdă rezistente la erbicide din prezenta invenţie. De obicei, cantitatea eficientă de un erbicid este o cantitate care este utilizată în mod curent în sistemele de producţie agricolă pentru a distruge buruienile relevante. O astfel de cantitate este cunoscută specialiştilor din domeniu. Activitatea erbicidă este demonstrată de erbicide utile pentru prezenta invenţie, atunci când sunt aplicate direct pe plantă sau pe segmentul plantei la orice etapă de creştere sau înaintea plantării sau apariţiei. Efectul observat depinde de speciile de plante care urmează să fie controlate, stadiul de dezvoltare al plantei, parametrii de aplicare a diluţiei şi mărimea picăturilor pulverizate, mărimea particulelor ingredientelor solide, condiţiile mediului încpnjurător la momentul utilizării, compusul specific utilizat, adjuvanţii specifici şi purtătorii utilizaţi, tipul solului şi altele, precum şi cantitatea de substanţe chimice aplicate. Aceştia şi alţi factori pot fi ajustaţi, după cum se cunoaşte în domeniu, pentru a promova acţiunea erbicidă neselectivă sau selectivă. În general, se preferă aplicarea erbicidului după răsărire pe plantele nedorite, relativ imature pentru a obţine combaterea maximă a buruienilor.
Prin plantă "tolerantă la erbicide" sau "rezistentă la erbicide" se are în vedere că o plantă care este tolerantă sau rezistentă la cel puţin un erbicid la un nivel care în mod normal ar distruge, sau inhiba creşterea unei plante obişnuite sau sălbatice. Prin "proteină PPO de tip sălbatic sau mut-PPO tolerantă la erbicide" sau "proteină PPO de tip sălbatic sau mut-PPO rezistentă la erbicide", se are în vedere că o astfel de proteină PPO manifestă o activitate PPO mai mare, în raport cu activitatea PPO a unei proteine PPO de tip sălbatic, când în prezenţa a cel puţin unui erbicid care este cunoscut că interferează cu activitatea PPO şi la o concentraţie sau nivel al erbicidului care este cunoscut că inhibă activitatea PPO a proteinei mut-PPO de tip sălbatic. În plus, activitatea PPO a unei astfel de proteine mut-PPO tolerantă la erbicide sau rezistentă la erbicide poate fi denumită aici ca activitatea PPO "tolerantă la erbicide" sau "rezistentă la erbicide".
În general, în cazul în care erbicidele care inhibă PPO (A) şi/sau compuşii erbicizi B descrişi aici, care pot fi utilizaţi în contextul prezentei invenţii, sunt capabili să formeze izomeri geometrici, de exemplu izomeri E/Z, este posibil de a utiliza atât izomerii puri, cât şi amestecurile acestora în compoziţiile conform invenţiei. Dacă erbicidele care inhibă PPO A şi/sau compuşii erbicizi B descrişi aici au unul sau mai multe centre de chiralitate şi, în consecinţă, sunt prezenţi ca enantiomeri sau diastereomeri, este posibil de a utiliza ambii, enantiomerii şi diastereomeri puri şi amestecurile acestora, în compoziţiile conform invenţiei. Dacă erbicidele care inhibă PPO A şi/sau compuşii erbicizi descrişi aici au grupe funcţionale ionizabile, acestea pot fi, de asemenea, utilizate sub formă de sărurile lor acceptabile în agricultură. În general, sunt potrivite sărurile acelor cationi şi sărurile de adiţie acide ale acelor acizi ai căror cationi şi, respectiv, anioni, nu au efecte adverse asupra activităţii compuşilor activi. Cationii preferaţi sunt ionii metalelor alcaline, de preferinţă ai litiului, sodiului şi potasiului, ai metalelor alcalino-pământoase, de preferinţă ai calciului şi magneziului, şi ai metalelor de tranziţie, de preferinţă ai manganului, cuprului, zincului şi fierului, amoniului şi amoniului substituit în care 1-4 atomi de hidrogen sunt substituiţi cu C1-C4-alchil, hidroxi-C1-C4-alchil, C1-C4-alcoxi-C1-C4-alchil, hidroxi-C1-C4-alcoxi-C1-C4-alchil, fenil sau benzii, preferabil amoniu, metilamoniu, izopropilamoniu, dimetilamoniu, diizopropilamoniu, trimetilamoniu, heptilamoniu, dodecilamoniu, tetradecilamoniu, tetrametilamoniu, tetraetilamoniu, tetrabutilamoniu, 2-hidroxietilamoniu (sare de olamină), 2-(2-hidroxiet-1-oxi)et-1-ilamoniu (sare de diglicolamină), di(2-hidroxiet-1-il)amoniu (sare de diolamină), tris(2-hidroxietil)amoniu (sare de trolamină), tris(2-hidroxipropil)amoniu, benziltrimetilamoniu, benziltrietilamoniu, N,N,N-trimetiletanolamoniu (sare de colină), în plus ioni de fosfoniu, ioni de sulfoniu, preferabil tri(C1-C4-alchil)sulfoniu, cum ar fi trimetilsulfoniu, şi ioni de sulfoxoniu, preferabil tri(C1-C4-alchil)sulfoxoniu, şi, în final sărurile aminelor polibazicie cum ar fi N,N-bis-(3-aminopropil)metilamină şi dietilentriamină. Anionii sărurilor de adiţie acide utile sunt, în primul rând, clorura, bromura, fluorura, iodura, hidrogensulfatul, metilsulfatul, sulfatul, dihidrogenfosfatul, hidrogenfosfatul, azotatul, bicarbonatul, carbonatul, hexafluorosilicatul, hexafluorofosfatul, benzoatul şi, de asemenea, anionii acizilor alcanoici C1-C4, de preferinţă formiatul, acetatul, propionatul şi butiratul.
Erbicidele care inhibă PPO A şi/sau compuşii erbicizi B descrişi aici având o grupă carboxil pot fi utilizate sub formă de acid, sub formă de o sare adaptată pentru utilizarea în agricultură după cum s-a menţionat mai sus sau în altă parte sub formă de un derivat acceptabil în agricultură, de exemplu ca amidele, cum ar fi mono- şi di-C1-C6-alchilamidele sau arilamidele, ca esterii, de exemplu ca esterii alil, esterii propargil, esterii C1-C10-alchil, esterii alcoxialchilici, esterii tefuril ((tetrahidrofuran-2-il)metil) şi, de asemenea, ca tioesterii, de exemplu ca esterii C1-C10-alchiltio. Mono- şi di-C1-C6-alchilamidele preferate sunt metilul şi dimetilamidele. Arilamidele preferate sunt, de exemplu, anilidele şi 2-cloroanilidele. Esteri alchilici preferaţi sunt, de exemplu, metilul, etilul, propilul, izopropilul, butilul, izobutilul, pentilul, mexilul (1-metilhexil), meptilul (1-metilheptil), heptil,ul octilul sau esterii izooctil (2-etilhexil). Esterii preferaţi C1-C4-alcoxi-C1-C4-alchil sunt esterii etilici liniari sau ramificaţi C1-C4-alcoxi, de exemplu esterul 2-metoxietil, 2-etoxietil, 2-butoxietil (butotil), 2-butoxipropil sau 3-butoxipropil. Un exemplu de ester liniar sau ramificat C1-C10-alchiltio este esterul etiltio.
Exemple de erbicide care inhibă PPO care pot fi utilizate conform prezentei invenţii sunt acifluorfen, acifluorfen-sodiu, azafenidin, bencarbazon, benzfendizon, bifenox, butafenacil, carfentrazon, carfentrazon-etil, clometoxifen, cinidon-etil, fluazolat, flufenpir, flufenpir-etil, flumiclorac, flumiclorac-pentil, flumioxazin, fluoroglicofen, fluoroglicofen-etil, flutiacet, flutiacet-metil, fomesafen, halosafen, lactofen, oxadiargil, oxadiazon, oxifluorfen, pentoxazon, profluazol, piraclonil, piraflufen, piraflufen-etil, saflufenacil, sulfentrazon, tidiazimin, tiafenacil, clornitrofen, flumipropin, fluoronitrofen, flupropacil, furiloxifen, nitrofluorfen, etil [3-[2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100), N-etil-3-2,6-diclor-4-trifluorometilfenoxi) -5-metil-1 H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452098-92-9), N-tetrahidrofurfuril-3- (2,6-diclor-4-trifluormetilfenoxi) -5-metil-1 H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 915396-43-9), N-etil-3-(2-cloro-6-fluoro -4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452099-05-7), N-tetrahidrofurfuril-3-(2-clor-6-fluor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452100-03-7), 3-[7-fluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo-[1,3,5]triazinan-2,4-dionă (CAS 451484-50-7), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-Trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetrahidro-izoindol-1,3-dionă (CAS 1300118-96-0), 1-metil-6-trifluormetil-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidină-2,4-dione, metil (E)-4-[2-clor-5-[4-cloro-5-(difluoromethoxi)-1H-metil-pirazol-3-il]-4-fluor-fenoxi]-3-metoxi-but-2-enoat [CAS 948893-00-3], 3-[7-clor-5-fluor-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol-4-il]-1-metil-6-(trifluorometil)-1H-pirimidină-2,4-dionă (CAS 212754-02-4), şi
uracili cu formula III
unde
R30 şi R31 independent unul de altul sunt F, Cl sau CN;
R32 este O sau S;
R33 este H, F, Cl, CH3 sau OCH3;
R34 este CH sau N;
R35 este O sau S;
R36 este H, CN, CH3, CF3, OCH3, OC2H5, SCH3, SC2H5, (CO)OC2H5 sau CH2R38,
unde R38 este F, Cl, OCH3, SCH3, SC2H5, CH2F, CH2Br sau CH2OH;
şi
R37 este (C1-C6-alchil)amino, (C1-C6-dialchil)amino, (NH)OR39, OH, OR40 sau SR40
unde R39 este CH3, C2H5 sau fenil; şi
R40 este independent unul de altul C1-C6-alchil, C2-C6-alchenil, C3-C6-alchinil, C1-C6-haloalchil, C1-C6-alkoxi-C1-C6-alchil, C1-C6-alkoxi-C1-C6-alkoxi-C1-C6-alchil, C2-C6-cianoalchil, C1-C4-alkoxi-carbonil-C1-C4-alchil, C1-C4-alchil-carbonil-amino, C1-C6-alchilsulfinil-C1-C6-alchil, C1-C6-alchil-sulfonil-C1-C6-alchil, C1-C6-dialkoxi-C1-C6-alchil, C1-C6-alchil-carboniloxi-C1-C6-alchil, fenil-carbonil-C1-C6-alchil, tri(C1-C3-alchil)-silil-C1-C6-alchil, tri(C1-C3-alchil)-silil-C1-C6-alchenil, tri(C1-C3-alchil)-silil-C1-C6-alchinil, tri(C1-C3-alchil)-silil-C1-C6-alkoxi-C1-C6-alchil, dimetilamino, tetrahidropiranil, tetrahidrofuranil-C1-C3-alchil, fenil-C1-C6-alkoxi-C1-C6-alchil, fenil-C1-C3-alchil, piridil-C1-C3-alchil, piridil, fenil,
aceşti piridili şi fenili independent unul de altul sunt substituţi cu 1-5 substituenţi selectaţi din grupul ce constă din halogen, C1-C3-alchil sau C1-C2-haloalchil;
C3-C6-cicloalchil sau C3-C6-cicloalchil-C1-C4-alchil,
aceşti cicloalchili independent unul de altul sunt substituţi cu 1-5 substituenţi selectaţi din grupul ce constă din halogen, C1-C3-alchil şi C1-C2-haloalchil;
inclusiv sărurile lor metalice alcaline acceptabile în agricultură sau sărurile de amoniu.
Erbicide preferate care inhibă PPO şi care pot fi utilizate conform prezentei invenţii sunt:
Acifluorfen, acifluorfen-sodiu, azafenidin, bencarbazon, benzfendizon, butafenacil, carfentrazon-etil, cinidon-etil, flufenpir-etil, flumiclorac-pentil, flumioxazin, fluoroglicofen-etil, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxadiazon, oxifluorfen, pentoxazon, piraflufen-etil, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100, N-etil-3-(2,6-diclor-4-trifluorometilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452098-92-9), N-tetrahidrofurfuril-3-(2,6-diclor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 915396-43-9), N-etil-3-(2-clor-6-fluor -4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452099-05-7), N-tetrahidrofurfuril-3-(2-clor-6-fluor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452100-03-7), 3-[7-fluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo-[1,3,5]triazinan-2,4-dionă (CAS 451484-50-7), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-Trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetrahidro-izoindol-1,3-dionă (CAS 1300118-96-0), 1-metil-6-trifluormetil-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidină-2,4-dionă (CAS 1304113-05-0), 3-[7-clor-5-fluor-2-(trifluormetil)-1H-benzimidazol-4-il]-1-metil-6-(trifluormetil)-1H-pirimidină-2,4-dionă (CAS 212754-02-4) uracilii cu formula III.1 (care corespund uracililor cu formula III, unde R30 este F, R31 este Cl, R32 este O; R33 este H; R34 este CH; R35 este O şi R37 este OR40)
unde
R36 reprezintă OCH3, OC2H5, SCH3 sau SC2H5;
şi
R40 reprezintă C1-C6-alchil, C2-C6-alchenil, C3-C6-alchinil, C1-C6-haloalchil, C1-C6-alcoxi-C1-C6-alchil, C1-C6-alcoxi-C1-C6-alcoxi-C1-C6-alchil, C1-C3-cianoalchil, fenil-C1-C3-alchil, piridil-C1-C3-alchil, C3-C6-cicloalchil sau C3-C6-cicloalchil-C1-C4-alchil,
aceşti cicloalchili sunt nesubstituţi sau substituţi cu 1 - 5 substituenţi selectaţi din gruparea ce constă din halogen, C1-C3-alchil şi C1-C2-haloalchil;
şi
uracili cu formula III.2 (care corespund uracililor cu formula III, unde R30 este F, R31 este Cl, R32 este O; R33 este H; R34 este N; R35 este O şi R37 este OR40 cu R40 fiind C1-C6-alchil)
Erbicide îndeosebi preferate care inhibă PPO şi care pot fi utilizate conform prezentei invenţii sunt: acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, carfentrazon-etil, cinidon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100), 3-[7-fluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo-[1,3,5]triazinan-2,4-dionă (CAS 451484-50-7),1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), şi 2-(2,2,7-Trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetrahidro-izoindol-1,3-dionă (CAS 1300118-96-0),1-Metil-6-trifluormetil-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidină-2,4-dionă (CAS 1304113-05-0), uracili cu formula III.1.1 (care corespund uracililor cu formula III, unde R30 este F, R31 este Cl, R32 este O; R33 este H; R34 este CH; R35 este O, R36 este OCH3 şi R37 este OR40)
unde
R40 este C1-C6-alchil, C2-C6-alchenil, C3-C6-alchinil, C1-C6-haloalchil, C1-C6-alcoxi-C1-C6-alchil, C1-C6-alcoxi-C1-C6-alcoxi-C1-C6-alchil, C1-C3-cianoalchil, fenil-C1-C3-alchil, piridil-C1-C3-alchil, C3-C6-cicloalchil sau C3-C6-cicloalchil-C1-C4-alchil,
aceşti cicloalchili fiind nesubstituţi sau substituţi cu 1 - 5 substituenţi selectaţi din gruparea ce constă din halogen, C1-C3-alchil şi C1-C2-haloalchil;
este, de preferinţă, CH3, CH2CH2OC2H5, CH2CHF2, ciclohexil, (1-metilciclopropil)metil sau CH2(piridină-4-il);
uracili cu formula III.2.1 (care corespund uracililor cu formula III, unde R30 este F; R31 este Cl, R32 este O; R33 este H; R34 este N; R35 este O şi R37 este OR40 cu R40 fiind CH3)
şi
uracili cu formula III.2.2 (care corespund uracililor cu formula III, unde R30 este F; R31este Cl; R32 este O; R33 este H; R34 este N; R35 este O şi R37 este OR40 cu R40 fiind C2H5)
Erbicidele care inhibă PPO, în special preferate, sunt erbicidele care inhibă PPO A.1 - A.14 enumerate mai jos în tabelul A:
Tabelul A
A.1 acifluorfen A.2 butafenacil A.3 carfentrazon-etil A.4 cinidon-etil A.5 flumioxazin A.6 flutiacet-metil A.7 fomesafen A.8 lactofen A.9 oxadiargil A.10 oxifluorfen A.11 saflufenacil A.12 sulfentrazon A.13 etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6) A.14 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4)
Erbicidele care inhibă PPO descrise mai sus, şi care sunt utile pentru realizarea prezentei invenţii sunt adesea aplicate cel mai bine împreună cu unul sau mai multe alte erbicide pentru a obţine combaterea unei varietăţi mai mari de vegetaţie nedorită. De exemplu, erbicidele care inhibă PPO pot fi utilizate, de asemenea, împreună cu erbicide suplimentare faţă de care planta de cultură este tolerantă, în mod natural, sau faţă de care este rezistentă prin expresia uneia sau mai multor transgene suplimentare sus-menţionate. Atunci când sunt utilizaţi împreună cu alte erbicide ţintă, compuşii revendicaţi în prezenta pot fi preparaţi cu un alt erbicid sau erbicide, amestecate în rezervor cu un alt erbicid sau erbicide, sau aplicate succesiv cu un alt erbicid sau erbicide.
Componentele adecvate pentru amestecuri sunt, de exemplu, selectate din erbicidele din clasa b1) - b15)
B) erbicidele din clasa b1) - b15):
b1) inhibitori ai biosintezei lipidelor;
b2) inhibitori ai acetolactat sintazei (inhibitori ALS);
b3) inhibitori ai fotosintezei;
b4) inhibitori ai protoporfirinogen-IX oxidazei,
b5) erbicide de înalbire;
b6) inhibitori ai enolpiruvilsichimat 3-fosfat sintazei (inhibitori EPSP);
b7) inhibitori ai glutamin sintetazei;
b8) inhibitori ai 7,8-dihidropteroat sintazei (inhibitori DHP);
b9) inhibitori ai mitozei;
b10) inhibitori ai sintezei acizilor graşi cu catena foarte lungă (inhibitori VLCFA);
b11) inhibitori ai biosintezei celulozei;
b12) erbicide de decuplare;
b13) erbicide auxinice;
b14) inhibitori de transport a auxinelor; şi
b15) alte erbicide selectate din grupul ce constă din bromobutid, clorflurenol, clorflurenol-metil, cinmetilin, cumiluron, dalapon, dazomet, difenzoquat, difenzoquat-metilsulfat, dimetipin, DSMA, dimron, endotal şi sărurile sale, etobenzanid, flamprop, flamprop-izopropil, flamprop-metil, flamprop-M-izopropil, flamprop-M-metil, flurenol, flurenol-butil, flurprimidol, fosamină, fosamină-amoniu, indanofan, indaziflam, hidrazidă maleică, mefluididă, metam, metiozolin (CAS 403640-27-7), azidă de metil, bromură de metil, metil-dimron, iodură de metil, MSMA, acid oleic, oxaziclomefonă, acid pelargonic, piributicarb, chinoclamină, triaziflam, tridifan şi 6-cloro-3- (2-ciclopropil-6-metilfenoxi) -4-piridazinol (CAS 499223-49-3) şi sărurile şi esterii acestora;
inclusiv sărurile sau derivaţii lor acceptabili în agricultură.
Exemple de erbicide B, care pot fi utilizate în combinaţie cu erbicidele care inhibă PPO conform prezentei invenţii sunt:
b1) din grupa inhibitorilor biosintezei lipidelor:
erbicidele ACC cum sunt aloxidim, aloxidim-sodiu, butroxidim, cletodim, clodinafop, clodinafop-propargil, cicloxidim, cihalofop, cihalofop-butil, diclofop, diclofop-metil, fenoxaprop, fenoxaprop-etil, fenoxaprop-P, fenoxaprop-P-etil, fluazifop, fluazifop-butil, fluazifop-P, fluazifop-P-butil, haloxifop, haloxifop-metil, haloxifop-P, haloxifop-P-metil, metamifop, pinoxaden, profoxidim, propaquizafop, quizalofop, quizalofop-etil, quizalofop-tefuril, quizalofop-P, quizalofop-P-etil, quizalofop-P-tefuril, setoxidim, tepraloxidim, tralcoxidim, 4-(4'-Clor-4-ciclopropil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-5-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-onă (CAS 1312337-72-6); 4-(2',4'-Diclor-4-ciclopropil[1,1'-bifenil]-3-il)-5-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-onă (CAS 1312337-45-3); 4-(4'-clor-4-etil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-5-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-onă (CAS 1033757-93-5); 4-(2',4'-Diclor-4-etil[1,1'-bifenil]-3-il)-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3,5(4H,6H)-dionă (CAS 1312340-84-3); 5-(Acetiloxi)-4-(4'-clor-4-ciclopropil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-3,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-onă (CAS 1312337-48-6); 5-(Acetiloxi)-4-(2 ́,4'-diclor-4-ciclopropil- [1,1'-bifenil]-3-il)-3,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-onă; 5-(Acetiloxi)-4-(4'-clor-4-etil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-3,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-onă (CAS 1312340-82-1); 5-(Acetiloxi)-4-(2',4'-diclor-4-etil[1,1'-bifenil]-3-il)-3,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-onă (CAS 1033760-55-2); 4-(4'-clor-4-ciclopropil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-5,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-il acid carbonic metil ester (CAS 1312337-51-1); 4-(2 ́,4'-Diclor-4-ciclopropil- [1,1'-bifenil]-3-il)-5,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-il acid carbonic metil ester; 4-(4'-clor-4-etil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-5,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-il acid carbonic metil ester (CAS 1312340-83-2); 4-(2',4'-Diclor-4-etil[1,1'-bifenil]-3-il)-5,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-il acid carbonic metil ester (CAS 1033760-58-5); şi erbicidele non-ACC cum sunt benfuresat, butilat, cicloat, dalapon, dimepiperat, EPTC, esprocarb, etofumesat, flupropanat, molinat, orbencarb, pebulat, prosulfocarb, TCA, tiobencarb, tiocarbazil, trialate şi vernolat;
b2) din grupa inhibitorilor ALS:
sulfoniluree, cum sunt amidosulfuron, azimsulfuron, bensulfuron, bensulfuron-metil, clorimuron, clorimuron-etil, clorsulfuron, cinosulfuron, ciclosulfamuron, etametsulfuron, etametsulfuron-metil, etoxisulfuron, flazasulfuron, flucetosulfuron, flupirsulfuron, flupirsulfuron-metil-sodiu, foramsulfuron, halosulfuron, halosulfuron -metil, imazosulfuron, iodosulfuron, iodosulfuron-metil-sodiu, iofensulfuron, iofensulfuron-sodiu, mezosulfuron, metazosulfuron, metsulfuron, metsulfuron-metil, nicosulfuron, ortosulfamuron, oxasulfuron, primisulfuron, primisulfuron-metil, propirisulfuron, prosulfuron, pirazosulfuron, pirazosulfuron-etil, rimsulfuron, sulfometuron, sulfometuron-metil, sulfosulfuron, tifensulfuron, tifensulfuron-metil, triasulfuron, tribenuron, tribenuron-metil, trifloxisulfuron, triflusulfuron, triflusulfuron-metil şi tritosulfuron,
imidazolinone cum sunt imazametabenz, imazametabenz-metil, imazamox, imazapic, imazapir, imazaquin şi imazetapir, erbicide triazolopirimidină şi sulfonanilide cum sunt cloransulam, cloransulam-metil, diclosulam, flumetsulam, florasulam, metosulam, penoxsulam, pyrimisulfan şi piroxsulam,pirimidinilbenzoate cum sunt bispiribac, bispiribac-sodiu, piribenzoxim, piriftalid, piriminobac, piriminobac-metil, piritiobac, piritiobac-sodiu, 4-[[[2-[(4,6-dimetoxi-2-pirimidinil)oxi]fenil]metil]amino]-acid benzoic -1-metiletil ester (CAS 420138-41-6), 4-[[[2-[(4,6-dimetoxi-2-pirimidinil)oxi]fenil]metil]amino]-acid benzoic propil ester (CAS 420138-40-5), N-(4-bromofenil)-2-[(4,6-dimetoxi-2-pirimidinil)oxi]benzenmetanamină (CAS 420138-01-8),
erbicide sulfonilaminocarbonil-triazolinone erbicide, cum sunt flucarbazon, flucarbazon-sodiu, propoxicarbazon, propoxicarbazon-sodiu, tiencarbazon şi tiencarbazon-metil; şi triafamonă;
printre acestea, o variantă de executare preferenţială a invenţiei se referă la acele compoziţii care cuprind, cel puţin, un erbicid imidazolinonă;
b3) din grupa inhibitorilor fitosintezei:
amicarbazon, inhibitori ai fotosistemului II, de ex. erbicide triazinice, inclusiv ai clorotriazinei, triazinonelor, triazindionelor, metiltiotriazinelor şi piridazinonelor, cum sunt ametrin, atrazin, cloridazonă, cianazină, desmetrin, dimetametrin, hexazinonă, metribuzin, prometon, prometrin, propazină, simazină, simetrin, terbumeton, terbutilazin, terbutrin şi trietazin, aril uree cum sunt clorbromuron, clortoluron, clorxuron, dimefuron, diuron, fluometuron, izoproturon, izouron, linuron, metamitron, metabenztiazuron, metobenzuron, metoxuron, monolinuron, neburon, siduron, tebutiuron şi tiadiazuron, carbamaţi de fenil, cum sunt desmedifam, karbutilat, fenmedifam, fenmedifam-etil, erbicide nitril cum sunt bromofenoxim, bromoxinil şi sărurile şi esterii săi, ioxinil şi sărurile şi esterii săi, uracili cum sunt bromacil, lenacil şi terbacil, şi bentazon şi bentazon-sodiu, piridat, piridafol, pentanoclor şi propanil şi inhibitori ai fotosistemului I, cum sunt diquat, diquat-dibromură, paraquat, paraquat diclorură şi paraquat-dimetilsulfat. Printre acestea, o variantă de executare preferenţială a invenţiei se referă la acele compoziţii care cuprind, cel puţin, un erbicid de aril uree. Printre acestea, o variantă de executare preferenţială a invenţiei se referă, de asemenea, la acele compoziţii care cuprind, cel puţin, un erbicid triazinic. Printre acestea, o variantă de executare preferenţială a invenţiei se referă, de asemenea, la acele compoziţii care cuprind, cel puţin, un erbicid nitrilic;
b4) din grupa inhibitorilor protoporfirinogen-IX oxidazei:
acifluorfen, acifluorfen-sodiu, azafenidin, bencarbazon, benzfendizon, bifenox, butafenacil, carfentrazon, carfentrazon-etil, clometoxifen, cinidon-etil, fluazolat, flufenpir, flufenpir-etil, flumiclorac, flumiclorac-pentil, flumioxazin, fluoroglicofen, fluoroglicofen-etil, flutiacet, flutiacet-metil, fomesafen, halosafen, lactofen, oxadiargil, oxadiazon, oxifluorfen, pentoxazon, profluazol, piraclonil, piraflufen, piraflufen-etil, saflufenacil, sulfentrazon, tidiazimin, tiafenacil, etil [3-[2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100, N-etil-3-(2,6-diclor-4-trifluorometilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452098-92-9), N-tetrahidrofurfuril-3-(2,6-diclor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 915396-43-9), N-etil-3-(2-cloro-6-fluor -4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452099-05-7), N-tetrahidrofurfuril-3-(2-clor-6-fluor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452100-03-7), 3-[7-fluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo-[1,3,5]triazinan-2,4-dionă, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-Trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetrahidro-izoindol-1,3-dionă, 1-metil-6-trifluormetil-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidină-2,4-dionă (CAS 1304113-05-0), metil (E)-4-[2-cloro-5-[4-clor-5-(difluormethoxi)-1H-metil-pirazol-3-il]-4-fluor-fenoxi]-3-metoxi-but-2-enoat [CAS 948893-00-3], şi 3-[7-clor-5-fluor-2-(trifluormetil)-1H-benzimidazol-4-il]-1-metil-6-(trifluormetil)-1H-pirimidină-2,4-dionă (CAS 212754-02-4);
b5) din grupa inhibitorilor de înalbire:
inhibitori PDS: beflubutamid, diflufenican, fluridonă, flurocloridonă, flurtamonă, norflurazon, picolinafen, şi 4-(3-trifluormetilfenoxi)-2- (4-trifluormetilfenil)pirimidină (CAS 180608-33-7), inhibitori HPPD: benzobiciclon, benzofenap, clomazon, izoxaflutol, mezotrion, pirasulfotol, pirazolinat, pirazoxifen, sulcotrion, tefuriltrion, tembotrion, topramezon şi biciclopiron, înalbitor, ţintă necunoscută: aclonifen, amitrol şi flumeturon;
b6) din grupa inhibitorilor EPSP sintazei:
glifosat, glifosat-izopropilamoniu, glifosat-potasiu şi glifosat-trimesium (sulfosat);
b7) din grupa inhibitorilor glutamin sintazei:
bilanafos (bialafos), bilanafos-sodiu, glufosinat, glufosinat-P şi glufosinat-amoniu;
b8) din grupa inhibitorilor DHP sintazei:
asulam;
b9) din grupa inhibitorilor mitozei:
compuşi din grupa K1: dinitroaniline cum sunt benfluralin, butralin, dinitramină, etalfluralin, flucloralin, orizalin, pendimetalin, prodiamină şi trifluralin, fosforamidaţi cum sunt amiprofos, amiprofos-metil, şi butamifos, erbicide cu acid benzoic cum sunt clortal, clortal-dimetil, piridine cum sunt ditiopir şi tiazopir, benzamide cum sunt propizamidă şi tebutam; compuşi din grupa K2: clorprofam, profam şi carbetamidă, printre acestea, compuşi din grupa K1, în special se preferă dinitroanilinele;
b10) din grupa inhibitorilor VLCFA:
cloracetamide, cum sunt acetoclor, alaclor, butaclor, dimetaclor, dimetenamid, dimetenamid-P, metazaclor, metolaclor, metolaclor-S, petoxamid, pretilaclor, propaclor, propisoclor şi tenilclor, oxiacetanilide, cum sunt flufenacet şi mefenacet, acetanilide, cum sunt difenamid, naproanilid şi napropamid, tetrazolinone, cum sunt fentrazamidă, şi alte erbicide, cum sunt anilofos, cafenstrol, fenoxasulfon, ipfencarbazon, piperofos, piroxasulfon şi compuşii izoxazolinei cu formulele II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 şi II.9
compuşii izoxazolinei cu formula (I)I sunt cunoscuţi în domeniu, de ex. din WO 2006/024820, WO 2006/037945, WO 2007/071900 şi WO 2007/096576;
printre inhibitorii VLCFA, se acordă preferinţă cloracetamidele şi oxiacetamidele;
b11) din grupa inhibitorilor biosintezei celulozei:
clortiamid, diclobenil, flupoxam, indaziflam, triaziflam, izoxaben şi 1-Ciclohexil-5-pentafluorfeniloxi-14-[1,2,4,6]tiatriazin-3-ilamină;
b12) din grupa erbicidelor de decuplare:
dinoseb, dinoterb şi DNOC şi sărurile sale;
b13) din grupa erbicidelor auxinice:
2,4-D şi sărurile şi esterii săi, cum sunt clacifo, 2,4-DB şi sărurile şi esterii săi, aminociclopiraclor şi sărurile şi esterii săi, aminopiralid şi sărurile sale, cum sunt aminopiralid-tris(2-hidroxipropil)amoniu şi esterii săi, benazolin, benazolin-etil, cloramben şi sărurile şi esterii săi, clomeprop, clopiralid şi sărurile şi esterii săi, dicamba şi sărurile şi esterii săi, diclorprop şi sărurile şi esterii săi, diclorprop-P şi sărurile şi esterii săi, fluroxipir, fluroxipir-butometil, fluroxipir-meptil, halauxifen şi sărurile şi esterii săi(CAS 943832-60-8); MCPA şi sărurile şi esterii săi, MCPA-tioetil, MCPB şi sărurile şi esterii săi, mecoprop şi sărurile şi esterii săi, mecoprop-P şi sărurile şi esterii săi, picloram şi sărurile şi esterii, săi quinclorac, quinmerac, TBA (2,3,6) şi sărurile şi esterii săi şi triclopir şi sărurile şi esterii săi;
b14) din grupa inhibitorilor de transport a auxinelor: diflufenzopir, diflufenzopir-sodiu, naptalam şi naptalam-sodiu;
b15) din grupa altor erbicide: bromobutid, clorflurenol, clorflurenol-metil, cinmetilin, cumiluron, ciclopirimorat (CAS 499223-49-3) şi sărurile şi esterii săi, dalapon, dazomet, difenzoquat, difenzoquat-metilsulfat, dimetipin, DSMA, dimron, endotal şi sărurile sale, etobenzanid, flamprop, flamprop-izopropil, flamprop-metil, flamprop- M-izopropil, flamprop-M-metil, flurenol, flurenol-butil, flurprimidol, fosamină, fosamină-amoniu, indanofan, indaziflam, hidrazidă maleică, mefluididă, metam, metiozolin (CAS 403640-27-7), azidă de metil, bromură de metil, metil-dimron, iodură de metil, MSMA, acid oleic, oxaziclomefonă, acid pelargonic, piributicarb, quinoclamină, triaziflam şi tridifan.
Erbicide B preferate, care pot fi utilizate în combinaţie cu erbicidele care inhibă PPO conform prezentei invenţii sunt:
b1) din grupa inhibitorilor biosintezei lipidelor:
cletodim, clodinafop-propargil, cicloxidim, cihalofop-butil, diclofop-metil, fenoxaprop-P-etil, fluazifop-P-butil, haloxifop-P-metil, metamifop, pinoxaden, profoxidim, propaquizafop, quizalofop-P-etil, quizalofop- P-tefuril, setoxidim, tepraloxidim, tralcoxidim, 4-(4'-Clor-4-ciclopropil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-5-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-onă (CAS 1312337-72-6); 4-(2',4'-Diclor-4-ciclopropil[1,1'-bifenil]-3-il)-5-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-onă (CAS 1312337-45-3); 4-(4'-clor-4-etil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-5-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-onă (CAS 1033757-93-5); 4-(2',4'-Diclor-4-etil[1,1'-bifenil]-3-il)-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3,5(4H,6H)-dionă (CAS 1312340-84-3); 5-(Acetiloxi)-4-(4'-clor-4-ciclopropil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-3,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-onă (CAS 1312337-48-6); 5-(Acetiloxi)-4-(2 ́,4'-diclor-4-ciclopropil- [1,1'-bifenil]-3-il)-3,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-onă; 5-(Acetiloxi)-4-(4'-clor-4-etil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-3,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-onă (CAS 1312340-82-1); 5-(Acetiloxi)-4-(2',4'-diclor-4-etil[1,1'-bifenil]-3-il)-3,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-onă (CAS 1033760-55-2); 4-(4'-clor-4-ciclopropil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-5,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-il acid carbonic metil ester (CAS 1312337-51-1); 4-(2 ́,4'-Diclor-4-ciclopropil- [1,1'-bifenil]-3-il)-5,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-il acid carbonic metil ester; 4-(4'-clor-4-etil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-5,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-il acid carbonic metil ester (CAS 1312340-83-2); 4-(2',4'-Diclor-4-etil[1,1'-bifenil]-3-il)-5,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-il acid carbonic metil ester (CAS 1033760-58-5); benfuresat, dimepiperat, EPTC, esprocarb, etofumesat, molinat, orbencarb, prosulfocarb, tiobencarb, şi trialat;
b2) din grupa inhibitorilor ALS:
amidosulfuron, azimsulfuron, bensulfuron-metil, bispiribac-sodiu, clorimuron-etil, clorsulfuron, cloransulam-metil, ciclosulfamuron, diclosulam, etametsulfuron-metil, etoxisulfuron, flazasulfuron, florasulam, flucarbazon-sodiu, flucetosulfuron, flumetsulam, flupirsulfuron-metil-sodiu, foramsulfuron, halosulfuron-metil, imazametabenz-metil, imazamox, imazapic, imazapir, imazaquin, imazetapir, imazosulfuron, iodosulfuron, iodosulfuron-metil-sodiu, iofensulfuron, iofensulfuron-sodiu, mezosulfuron, metazosulfuron, metosulam, metsulfuron-metil, nicosulfuron, ortosulfamuron, oxasulfuron, penoxsulam, primisulfuron-metil, propoxycarbazon-sodiu, propirisulfuron, prosulfuron, pirazosulfuron-etil, piribenzoxim, pirimisulfan, piriftalid, piriminobac-metil, piritiobac-sodiu, piroxsulam, rimsulfuron, sulfometuron-metil, sulfosulfuron, tiencarbazon-metil, tifensulfuron-metil, triasulfuron, tribenuron-metil, trifloxisulfuron, triflusulfuron-metil, tritosulfuron şi triafamon;
b3) din grupa inhibitorilor fitosintezei:
ametrin, amicarbazon, atrazin, bentazon, bentazon-sodiu, bromoxinil şi sărurile şi esterii săi, cloridazon, clorotoluron, cianazină, desmedifam, diquat-dibromură, diuron, fluometuron, hexazinonă, ioxinil şi sărurile şi esterii săi, izoproturon, lenacil, linuron, metamitron, metabenztiazuron, metribuzin, paraquat, paraquat-diclorură, fenmedifam, propanil, piridat, simazin, terbutrin, terbutilazină şi tidiazuron;
b4) din grupa inhibitorilor protoporfirinogen-IX oxidazei:
acifluorfen, acifluorfen-sodiu, azafenidin, bencarbazon, benzfendizon, butafenacil, carfentrazon-etil, cinidon-etil, flufenpir-etil, flumiclorac-pentil, flumioxazin, fluoroglicofen-etil, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxadiazon, oxifluorfen, pentoxazon, piraflufen-etil, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100), N-etil-3-(2,6-diclor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452098-92-9), N-tetrahidrofurfuril-3-(2,6-diclor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 915396-43-9), N-etil-3-(2-cloro-6-fluor -4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452099-05-7), N-tetrahidrofurfuril-3-(2-clor-6-fluor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452100-03-7), 3-[7-fluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo-[1,3,5]triazinan-2,4-dionă, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-Trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetrahidro-izoindol-1,3-dionă; 1-metil-6-trifluormetil-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidină-2,4-dionă, şi 3-[7-Clor-5-fluor-2-(trifluormetil)-1H-benzimidazol-4-il]-1-metil-6-(trifluormetil)-1H-pirimidină-2,4-dionă (CAS 212754-02-4);
b5) din grupa inhibitorilor de înalbire:
aclonifen, beflubutamid, benzobiciclon, clomazon, diflufenican, flurocloridonă, flurtamonă, izoxaflutol, mezotrion, norflurazon, picolinafen, pirasulfotol, pirazolinat, sulcotrion, tefuriltrionă, tembotrionă, topramezonă, biciclopiron, 4- (3-trifluormetilfenoxi)-2-(4-trifluorometilfenil)pirimidină (CAS 180608-33-7), amitrol şi flumeturon;
b6) din grupa inhibitorilor EPSP sintazei:
glifosat, glifosat-izopropilamoniu, glifosat-potasiu şi glifosat-trimesium (sulfosat);
b7) din grupa inhibitorilor glutamin sintazei:
glufosinat, glufosinat-P, glufosinat-amoniu;
b8) din grupa inhibitorilor DHP sintazei: asulam;
b9) din grupa inhibitorilor mitozei:
benfluralin, ditiopir, etalfluralin, orizalin, pendimetalin, tiazopir şi trifluralin;
b10) din grupa inhibitorilor VLCFA:
acetoclor, alaclor, anilofos, butaclor, cafenstrol, dimetenamid, dimetenamid-P, fentrazamidă, flufenacet, mefenacet, metazaclor, metolaclor, S-metolaclor, naproanilid, napropamid, pretilaclor, fenoxasulfonă, ipfencarbazon, piroxasulfon tenilclor şi compuşii izoxazolinei cu formulele II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 şi II.9 după cum s-a menţionat mai sus;
b11) din grupa de inhibitori ai biosintezei celulozei: diclobenil, flupoxam, izoxaben şi 1-ciclohexil-5-pentafluorfeniloxi-14-[1,2,4,6]tiatriazin-3-ilamină;
b13) din grupa erbicidelor auxinice:
2,4-D şi sărurile şi esterii săi, aminociclopirachor şi sărurile şi esterii săi, aminopiralid şi sărurile sale, cum ar fi aminopiralid-tris (2-hidroxipropil)amoniu şi esterii săi, clopiralid şi sărurile şi esterii săi, dicamba şi sărurile şi esterii săi, diclorprop-P şi sărurile şi esterii săi, fluroxipir-meptil, halauxifen şi sărurile şi esterii săi (CAS 943832-60-8), MCPA şi sărurile şi esterii săi, MCPB şi sărurile şi esterii săi, mecoprop-P şi sărurile şi esterii săi, picloram şi sărurile şi esterii săi, quinclorac, quinmerac şi triclopir şi sărurile şi esterii săi;
b14) din grupa inhibitorilor de transport a auxinei: diflufenzopir şi diflufenzopir-sodiu;
b15) din grupa altor erbicide: bromobutid, cinmetilin, cumiluron, ciclopirimorat (CAS 499223-49-3) şi sărurile şi esterii săi, dalapon, difenzoquat, difenzoquat-metilsulfat, DSMA, dimron (= daimuron), flamprop, flamprop-izopropil, flamprop-metil, flamprop-M-izopropil, flamprop-M-metil, indanofan, indaziflam, metam, metilbromură, MSMA, oxaziclomefonă, piributicarb, triaziflam şi tridifan.
Erbicide B îndeosebi preferate, care pot fi utilizate în combinaţie cu erbicidele ce inhibă PPO conform prezentei invenţii sunt:
b1) din grupa inhibitorilor biosintezei lipidelor: clodinafop-propargil, cicloxidim, cihalofop-butil, fenoxaprop-P-etil, pinoxaden, profoxidim, tepraloxidim, tralcoxidim, 4-(4'-Clor-4-ciclopropil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-5-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-onă (CAS 1312337-72-6); 4-(2',4'-Diclor-4-ciclopropil[1,1'-bifenil]-3-il)-5-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-onă (CAS 1312337-45-3); 4-(4'-clor-4-etil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-5-hidroxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-onă (CAS 1033757-93-5); 4-(2',4'-Diclor-4-etil[1,1'-bifenil]-3-il)-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3,5(4H,6H)-dionă (CAS 1312340-84-3); 5-(Acetiloxi)-4-(4'-clor-4-ciclopropil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-3,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-onă (CAS 1312337-48-6); 5-(Acetiloxi)-4-(2 ́,4'-diclor-4-ciclopropil- [1,1'-bifenil]-3-il)-3,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-onă; 5-(Acetiloxi)-4-(4'-clor-4-etil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-3,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-onă (CAS 1312340-82-1); 5-(Acetiloxi)-4-(2',4'-diclor-4-etil[1,1'-bifenil]-3-il)-3,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-onă (CAS 1033760-55-2); 4-(4'-clor-4-ciclopropil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-5,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-il acid carbonic metil ester (CAS 1312337-51-1); 4-(2 ́,4'-Diclor-4-ciclopropil- [1,1'-bifenil]-3-il)-5,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-il acid carbonic metil ester; 4-(4'-clor-4-etil-2'-fluor[1,1'-bifenil]-3-il)-5,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-il acid carbonic metil ester (CAS 1312340-83-2); 4-(2',4'-Diclor-4-etil[1,1'-bifenil]-3-il)-5,6-dihidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-il acid carbonic metil ester (CAS 1033760-58-5); esprocarb, prosulfocarb, tiobencarb, şi trialat;
b2) din grupa inhibitorilor ALS: bensulfuron-metil, bispiribac-sodiu, ciclosulfamuron, diclosulam, flumetsulam, flupirsulfuron-metil-sodiu, foramsulfuron, imazamox, imazapic, imazapir, imazaquin, imazetapir, imazosulfuron, iodosulfuron, iodosulfuron-metil- sodiu, iofensulfuron, iofensulfuron-sodiu, mezosulfuron, metazosulfuron, nicosulfuron, penoxsulam, propoxycarbazon-sodiu, propirisulfuron, pirazosulfuron-etil, piroxsulam, rimsulfuron, sulfosulfuron, tiencarbazon-metil, tritosulfuron şi triafamon;
b3) din grupa inhibitorilor fotosintezei: ametrin, atrazin, diuron, fluometuron, hexazinonă, izoproturon, linuron, metribuzin, paraquat, diclorură de paraquat, propanil, terbutrin şi terbutilazină;
b4) din grupa inhibitorilor protoporfirinogen-IX oxidazei: acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6, S-3100),3-[7-fluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo-[1,3,5]triazinan-2,4-dionă,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), şi 2-(2,2,7-Trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihydro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetrahidro-izoindol-1,3-dionă, şi 1-Metil-6-trifluormetil-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidină-2,4-dionă;
b5) din grupa erbicidelor de înălbire: clomazon, diflufenican, flurocloridon, isoxaflutol, mesotrion, picolinafen, sulcotrion, tefuriltrion, tembotrion, topramezon, biciclopiron, amitrol şi flumeturon;
b6) din grupa inhibitorilor EPSP sintazei: glifosat, glifosat-izopropilamoniu şi glifosat-trimesium (sulfosat);
b7) din grupa inhibitorilor glutamin sintazei: glufosinat, glufosinat-P şi glufosinat-amoniu;
b9) din grupa inhibitorilor mitozei: pendimetalin şi trifluralin;
b10) din grupa inhibitorilor VLCFA: acetoclor, cafenstrol, dimetenamid-P, fentrazamidă, flufenacet, mefenacet, metazaclor, metolaclor, S-metolaclor, fenoxasulfon, ipfencarbazon şi piroxasulfon; de asemenea, se dă preferinţă compuşilor de izoxazolină cu formulele II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 şi II.9 după cum s-a menţionat mai sus;
b11) din grupa inhibitorilor biosintezei celulozei: izoxaben;
b13) din grupa erbicidelor auxinice: 2,4-D şi sărurile şi esterii săi, cum ar fi clacifos şi aminociclopiraclor şi sărurile şi esterii săi, aminopiralid şi sărurile şi esterii săi, clopiralid şi sărurile şi esterii săi, dicamba şi sărurile şi esterii săi, fluroxipir-meptil, quinclorac şi quinmerac;
b14) din grupa inhibitorilor de transport a auxinelor: diflufenzopir şi diflufenzopir-sodiu;
b15) din grupa altor erbicide: dimron (= daimuron), indanofan, indaziflam, oxaziclomefon şi triaziflam.
Mai mult decât atât, poate fi util de a aplica erbicidele care inhibă PPO, atunci când sunt utilizate în combinaţie cu un compus B descrise mai sus, în combinaţie cu agenţi fitoprotectori. Agenţii fitoprotectori sunt compuşi chimici care împiedică sau reduc deteriorarea plantelor utile, fără a avea un impact major asupra acţiunii erbicide a erbicidelor faţă de plantele nedorite. Ele pot fi aplicate fie înaintea însămânţării (de ex., în tratamentul seminţelor, pe muguri sau răsaduri) sau în aplicarea înainte de răsărire sau după răsărire a plantei utile.
Totodată, agenţii fitoprotectori C, erbicidele care inhibă PPO şi/sau erbicidele B pot fi aplicate simultan sau succesiv.
Agenţi fitoprotectori adecvaţi sunt de ex. acizii acetici (quinolin-8-oxi), acizii carboxilici 1-fenil-5-haloalchil-1H-1,2,4-triazol-3, acizii dicarboxilici 1-fenil-4,5-dihidro-5-alchil-1H-pirazol-3,5, acizii carboxilici 4,5-dihidro-5,5-diaril-3-izoxazol, dicloracetamidele, alfa-oximinofenilacetonitrilele, acetofenonoximele, 4,6-dihalo-2-fenilpirimidinele, amidele N-[[4-(aminocarbonil)fenil] sulfonil]-2-benzoice, anhidrida 1,8-naftalică, acizii carboxilici 2-halo-4-(haloalchil)-5-tiazol, fosfortiolatele şi N-alchil-O-fenilcarbamatele şi sărurile lor acceptabile în agricultură şi derivaţii acestora acceptabili în agricultură cum sunt amidele, esterii, tioesterii, cu condiţia ca ele au o grupare acidă.
Exemple de agenţi fitoprotectori C preferaţi sunt benoxacor, cloquintocet, ciometrinil, ciprosulfamidă, diclormid, diciclonon, dietolat, fenclorazol, fenclorim, flurazol, fluxofenim, furilazol, izoxadifen, mefenpir, mefenat, anhidridă naftalică, oxabetrinil, 4-(dicloracetil)-1-oxa 4-azaspiro[4.5]decan (MON4660, CAS 71526-07-3) şi 2,2,5-trimetil-3-(dicloracetil)-1,3-oxazolidină (R-29148, CAS 52836-31-4).
Agenţi fitoprotectori C preferaţi în mod special sunt benoxacor, cloquintocet, ciprosulfamidă, diclormid, fenclorazol, fenclorim, flurazol, fluxofenim, furilazol, izoxadifen, mefenpir, anhidridă naftalică, oxabetrinil, 4-(dicloracetil) -1-oxa-4-azaspiro[4.5] decan (MON4660, CAS 71526-07-3) şi 2,2,5-trimetil-3-(dicloracetil) -1,3-oxazolidină (R-29148, CAS 52836-31-4).
Agenţi fitoprotectori C îndeosebi preferaţi sunt benoxacor, cloquintocet, ciprosulfamidă, diclormid, fenclorazol, fenclorim, furilazol, izoxadifen, mefenpir, anhidridă naftalică, 4-(dicloracetil)-1-oxa-4-azaspiro[4.5] decan (MON4660, CAS 71526-07-3), şi 2,2,5-trimetil-3-(dicloracetil) -1,3-oxazolidină (R-29148, CAS 52836-31-4).
De asemenea, agenţi fitoprotectori C preferaţi sunt benoxacor, cloquintocet, ciprosulfamidă, diclormid, fenclorazol, fenclorim, furilazol, izoxadifen, mefenpir, 4-(dicloracetil)-1-oxa-4-azaspiro[4.5] decan (MON4660, CAS 71526-07-3), şi 2,2,5-trimetil-3-(dicloracetil) -1,3-oxazolidină (R-29148, CAS 52836-31-4).
Agenţi fitoprotectori C îndeosebi preferaţi, care, în calitate de componenta C, sunt formaţi din compoziţia conform invenţiei, sunt agenţii fitoprotectori C definiţi mai sus; în special agenţii fitoprotectori C.1 - C.12 enumeraţi mai jos în tabelul C:
Tabelul C
Agentul fitoprotector C C.1 benoxacor C.2 cloquintocet C.3 ciprosulfamidă C.4 diclormid C.5 fenclorazol C.6 fenclorim C.7 furilazol C.8 izoxadifen C.9 mefenpir C.10 anhidrida acidului naftalic C.11 4-(dicloroacetil)-1-oxa-4-azaspiro[4.5]decan (MON4660, CAS 71526-07-3) C.12 2,2,5-trimetil-3-(dicloracetil)-1,3-oxazolidină (R-29148, CAS 52836-31-4)
Erbicidele care inhibă PPO şi compuşii activi B) din grupele b1) - b15) şi compuşii activi C sunt erbicide şi agenţi fitoprotectori cunoscuţi, a se vedea, de exemplu, The Compendium of Pesticide Common Names (Compendiul denumirilor comune de pesticide) (http://www.alanwood.net/pesticides/); Farm Chemicals Handbook 2000 volume 86 (Manualul produselor chimice agricole 2000 volumul 86), Meister Publishing Company, 2000; B. Hock, C. Fedtke, R. R. Schmidt, Herbizide (Erbicide), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1995; W. H. Ahrens, Herbicide Handbook, 7th edition (Manualul Erbicidelor, ediţia a 7-a), Weed Science Society of America, 1994; şi K. K. Hatzios, Herbicide Handbook, Supplement for the 7th edition (Manualul Erbicidelor, supliment la ediţia a 7-a), Weed Science Society of America, 1998. 2,2,5-Trimetil-3-(dicloracetil)-1,3-oxazolidină [CAS nr. 52836-31-4] este denumit, de asemenea, R-29148. 4-(Dicloracetil)-1-oxa-4-azaspiro[4.5]decan [CAS nr. 71526-07-3] este denumit, de asemenea, AD-67 şi MON 4660.
Atribuirea compuşilor activi mecanismelor respective de acţiune se bazează pe cunoştinţele curente. În cazul în care mai multe mecanisme de acţiune se aplică unui compus activ, substanţa respectivă a fost atribuită doar unui singur mecanism de acţiune.
Compuşii activi B şi C având o grupare carboxil pot fi utilizaţi sub formă de acid, sub forma unei sări adecvate pentru agricultură după cum s-a menţionat mai sus sau în altă parte sub forma unui derivat acceptabil în agricultură în compoziţiile conform invenţiei.
În cazul dicambei, sărurile adecvate includ acelea, în care contraionul este un cation acceptabil în agricultură. De exemplu, săruri adecvate de dicamba sunt dicamba-sodiu, dicamba-potasiu, dicamba-metilamoniu, dicamba-dimetilamoniu, dicamba-izopropilamoniu, dicamba-diglicolamină, dicamba-olamină, dicamba-diolamină, dicamba-trolamină, dicamba-N,N- bis-(3-aminopropil)metilamină şi dicamba-dietilentriamină. Exemple de ester adecvat sunt dicamba-metil şi dicamba-butotil.
Săruri adecvate ale 2,4-D sunt 2,4-D-amoniu, 2,4-D-dimetilamoniu, 2,4-D-dietilamoniu, 2,4-D-dietanolamoniu (2,4-D-diolamină), 2,4-D-trietanolamoniu, 2,4-D-izopropilamoniu, 2,4-D-triizopropanolamoniu, 2,4-D-heptilamoniu, 2,4-D-dodecilamoniu, 2,4-D-tetradecilamoniu, 2,4-D-trietilamoniu, 2,4-D-tris(2-hidroxipropil)amoniu, 2,4-D-tris(izopropil)amoniu, 2,4-D-trolamină, 2,4-D-litiu, 2, 4-D-sodiu. Exemple de esteri adecvaţi ai 2,4-D sunt 2,4-D-butotil, 2,4-D-2-butoxipropil, 2,4-D-3-butoxipropil, 2,4-D-butil, 2,4-D-etil, 2,4-D-etilhexil, 2,4-D-izobutil, 2,4-D-izooctil, 2,4-D-izopropil, 2,4-D-meptil, 2,4-D -metil, 2,4-D-octil, 2,4-D-pentil, 2,4-D-propil, 2,4-D-tefuril şi clacifos.
Săruri adecvate ale 2,4-DB sunt, de exemplu 2,4-DB-sodiu, 2,4-DB-potasiu şi 2,4-DB-dimetilamoniu. Esteri adecvaţi ai 2,4-DB sunt, de exemplu 2,4-DB-butil şi 2,4-DB-izoctil.
Săruri adecvate ale diclorprop sunt, de exemplu diclorprop-sodiu, diclorprop-potasiu şi diclorprop-dimetilamoniu. Exemple de esteri adecvaţi ai diclorprop sunt diclorprop-butotil şi diclorprop-izoctil.
Săruri şi esteri adecvaţi ai MCPA includ MCPA-butotil, MCPA-butil, MCPA-dimetilamoniu, MCPA-diolamină, MCPA-etil, MCPA-tioetil, MCPA-2-etilhexil, MCPA-izobutil, MCPA-izoctil, MCPA-izopropil, MCPA -izopropzlamoniu, MCPA-metil, MCPA-olamină, MCPA-potasiu, MCPA-sodiu şi MCPA-trolamină.
O sare adecvată a MCPB este MCPB sodiu. Un ester adecvat al MCPB este MCPB-etil.
Săruri adecvate ale clopiralidului sunt clopiralid-potasiu, clopiralid-olamină şi clopiralid-tris-(2-hidroxipropil)amoniu. Exemplu de esteri adecvaţi ai clopiralidului este clopiralid-metil.
Exemple de un ester adecvat al fluroxipirului sunt fluroxipir-meptil şi fluroxipir-2-butoxi-1-metiletil, în care fluroxipir-meptilul este preferat.
Sărurile adecvate ale picloramului sunt picloram-dimetilamoniu, picloram-potasiu, picloram-triisopropanolamoniu, picloram-triisopropilamoniu şi picloram-trolamină. Un ester adecvat al picloramului este picloram-izoctil.
O sare adecvată a triclopirului este triclopir-trietilamoniu. Esterii adecvaţi ai triclopirului sunt, de exemplu, triclopir-etil şi triclopir-butotil.
Săruri şi esteri adecvaţi ai clorambenului includ cloramben-amoniu, cloramben-diolamină, cloramben-metil, cloramben-metilamoniu şi cloramben-sodiu. Săruri şi esteri adecvaţi ai 2,3,6-TBA includ 2,3,6-TBA-dimetilamoniu, 2,3,6-TBA-litiu, 2,3,6-TBA-potasiu şi 2,3,6-TBA -sodiu.
Săruri şi esteri adecvaţi ai aminopiralidului includ aminopiralid-potasiu şi aminopiralid-tris (2-hidroxipropil)amoniu.
Sărurile adecvate ale glifosatului sunt, de exemplu glifosat-amoniu glifosat-diamoniu, glifoste-dimetilamoniu, glifosat-izopropilamoniu, glifosat-potasiu, glifosat-sodiu, glifosat-trimesium, precum sărurile etanolaminei şi dietanolaminei, preferabil glifosat-diamoniu, glifosat-izopropilamoniu şi glifosat-trimesium (sulfosat).
O sare adecvată a glufosinatului este, de exemplu, glufosinat-amoniu.
O sare adecvată a glufosinatului-P este, de exemplu, glufosinat-P-amoniu.
Săruri şi esteri adecvaţi ai bromoxinilului sunt, de exemplu, bromoxinil-butirat, bromoxinil-heptanoat, bromoxinil-octanoat, bromoxinil-potasiu şi bromoxinil-sodiu.
Săruri şi esteri adecvaţi ai ioxonilului sunt, de exemplu ioxonil-octanoat, ioxonil-potasiu şi ioxonil-sodiu.
Săruri şi esteri adecvaţi ai mecopropului includ mecoprop-butotil, mecoprop-dimetilamoniu, mecoprop-diolamină, mecoprop-etadil, mecoprop-2-etilhexil, mecoprop-izoctil, mecoprop-metil, mecoprop-potasiu, mecoprop-sodiu şi mecoprop-trolamină.
Sărurile adecvate ale mecopropului-P sunt, de exemplu, mecoprop-P-butotil, mecoprop-P-dimetilamoniu, mecoprop-P-2-etilhexil, mecoprop-P-izobutil, mecoprop-P-potasiu şi mecoprop-P-sodiu.
O sare adecvată a diflufenzopirului este, de exemplu diflufenzopir-sodiu.
O sare adecvată a naftalamului este, de exemplu, naftalam-sodiu.
Săruri şi esteri adecvaţi ai aminociclopiraclorului sunt, de exemplu, aminociclopiraclor-dimetilamoniu, aminociclopiraclor-metil, aminociclopiraclor-triizopropanolamoniu, aminociclopiraclor-sodiu şi aminociclopiraclor-potasiu.
O sare adecvată a quincloracului este, de exemplu, quinclorac-dimetilamoniu.
O sare adecvată a quinmeracului este, de exemplu, quinclorac-dimetilamoniu.
O sare adecvată a imazamoxului este de exemplu, imazamox-amoniu.
Săruri adecvate ale imazapicului sunt, de exemplu, imazapic-sodiu şi imazapic-izopropilamoniu.
Săruri adecvate ale imazapirului sunt, de exemplu, imazapir-amoniu şi imazapir-izopropilamoniu.
O sare adecvată a imazaquinului este, de exemplu, imazaquin-amoniu.
Săruri adecvate ale imazetapirului sunt, de exemplu, imazetapir-amoniu şi imazetapir-izopropilamoniu.
O sare adecvată a topramezonului este, de exemplu, topramezon-sodiu.
Variantele preferenţiale de executare a invenţiei, menţionate în continuare, trebuie să fie înţelese ca fiind preferate fie independent una de alta sau combinate între ele.
Conform unei variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine în calitate de componenta B, cel puţin unul, de preferinţă exact un erbicid B.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine cel puţin două, de preferinţă exact două, erbicide B diferite una de alta.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine cel puţin trei, de preferinţă exact trei, erbicide B diferite una de alta.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine în calitate de componenta A, cel puţin una, de preferinţă exact o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100; 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), şi în calitate de componenta B cel puţin unul, de preferinţă exact un erbicid B.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine în calitate de componenta A, cel puţin una, de preferinţă exact o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100; 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), şi cel puţin două, de preferinţă exact două, erbicide B diferite una de alta.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine în calitate de componenta A, cel puţin una, de preferinţă exact o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100; 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), şi cel puţin trei, de preferinţă exact trei, erbicide B diferite una de alta.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100); 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus activ erbicid din grupa b1), în special selectat din grupa ce constă din cletodim, clodinafop-propargil, cicloxidim, cihalofop-butil, fenoxaprop-P-etil, fluazifop, pinoxaden, profoxidim, quizalofop, setoxidim, tepraloxidim, tralcoxidim, esprocarb, prosulfocarb, tiobencarb şi trialat.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100); 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus erbicid activ din grupa b2), selectat în special din grupa ce constă din bensulfuron-metil, bispiribac-sodiu, cloransulam-metil, ciclosulfamuron, diclosulam, flumetsulam, flupirsulfuron-metil-sodiu, foramsulfuron, halosulfuron-metil, imazamox, imazapic, imazapir, imazaquin, imazetapir, imazosulfuron, iodosulfuron, iodosulfuron-metil-sodiu, mezosulfuron-metil, metazosulfuron, nicosulfuron, penoxsulam, propoxicarbazon-sodiu, pirazosulfuron-etil, piritiobac-sodiu, piroxsulam, rimsulfuron, sulfosulfuron, tiencarbazon-metil, tifensulfuron-metil, trifloxisulfuron şi tritosulfuron.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100); 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus erbicid activ din grupa b3), în special selectat din grupa ce constă din ametrin, atrazin, bentazon, bromoxinil, diuron, fluometuron, hexazinon, izoproturon, linuron, metribuzin, paraquat, paraquat-diclorură, prometrin, propanil, terbutrin şi terbutilazină.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100); 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus erbicid activ din grupa b4), selectat în special din grupa ce constă din acifluorfen, acifluorfen-sodiu, azafenidin, bencarbazon, benzfendizon, bifenox, butafenacil, carfentrazon, carfentrazon-etil, clometoxifen, cinidon-etil, fluazolat, flufenpir, flufenpir-etil, flumiclorac, flumiclorac-pentil, flumioxazin, fluoroglicofen, fluoroglicofen-etil, flutiacet, flutiacet-metil, fomesafen, halosafen, lactofen, oxadiargil, oxadiazon, oxifluorfen, pentoxazon, profluazol, pyraclonil, piraflufen, piraflufen-etil, saflufenacil, sulfentrazon, tidiazimin, tiafenacil, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100), N-etil-3-(2,6-diclor-4-trifluormetilfenoxi) -5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452098-92-9) , N-tetrahidrofurfuril-3-(2,6-diclor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 915396-43-9), N-etil-3-(2-clor-6- fluor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452099-05-7), N-tetrahidrofurfuril-3-(2-clor-6-fluor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452100-03-7), 3-[7-fluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo-[1,3,5]triazinan-2,4-dionă, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-Trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetrahidro-izoindol-1,3-dionă, 1-Metil-6-trifluormetil-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidină-2,4-dionă, metil (E)-4-[2-clor-5-[4-clor-5-(difluormetoxi)-1H-metil-pirazol-3-il]-4-fluor-fenoxi]-3-metoxi-but-2-enoat [CAS 948893-00-3], 3-[7-Clor-5-fluor-2-(trifluormetil)-1H-benzimidazol-4-il]-1-metil-6-(trifluorometil)-1H-pirimidină-2,4-dionă (CAS 212754-02-4).
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100); 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus erbicid activ din grupa b5), selectat în special din grupa ce constă din clomazon, diflufenican, flurocloridon, izoxaflutol, mezotrion, picolinafen, sulcotrion, tefuriltrion, tembotrion, topramezon, biciclopiron, amitrol şi flumeturon.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100); 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus erbicid activ din grupa b6), selectat în special din grupa ce constă din glifosat, glifosat-izopropilamoniu şi glifosat-trimesium (sulfosat).
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100); 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus erbicid activ din grupa b7), selectat în special din grupa ce constă din glufosinat, glufosinat-P şi glufosinat-amoniu.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus erbicid activ din grupa b9), selectat în special din grupa ce constă din pendimetalin şi trifluralin.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus erbicid activ din grupa b10), selectat în special din grupa ce constă din acetoclor, cafenstrol, dimetenamid-P, fentrazamidă, flufenacet, mefenacet, metazaclor, metolaclor, S-metolaclor, fenoxasulfon şi piroxasulfon. De asemenea, sunt preferate compoziţiile care conţin, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100); 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus erbicid activ din grupa b10), în special selectat din grupa ce constă din compuşi ai izoxazolinei cu formulele II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 şi II.9, precum s-a definit mai sus.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100); 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus erbicid activ din grupa b13), selectat în special din grupa ce constă din 2,4-D şi sărurile şi esterii săi, aminociclopiraclor şi sărurile şi esterii săi, aminopiralid şi sărurile sale, cum sunt aminopiralid-tris(2-hidroxipropil)amoniu şi esterii săi, clopiralid şi sărurile şi esterii săi, dicamba şi sărurile şi esterii săi, fluroxipir-meptil, quinclorac şi quinmerac.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus erbicid activ din grupa b14), selectat în special din grupa ce constă din diflufenzopir şi diflufenzopir-sodiu.
Conform unei alte variante preferenţiale de executare a invenţiei, compoziţia conţine, pe lângă o PPO A, de preferinţă acifluorfen, acifluorfen-sodiu, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazon-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazon, etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), se preferă în mod special saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4), cel puţin un şi în special exact un compus erbicid activ din grupa b15), selectat în special din grupa ce constă din dimron (= daimuron), indanofan, indaziflam, oxaziclomefon şi triaziflam.
Aici şi în continuare, termenul "compoziţii binare" include compoziţii care conţin unul sau mai mulţi, de exemplu 1, 2 sau 3, compuşi activi ai PPO A şi unul sau mai multe, de exemplu 1, 2 sau 3, erbicide B.
În compoziţiile binare care conţin cel puţin o PPO A în calitate de componenta A şi cel puţin un erbicid B, raportul de greutate al compuşilor activi A:B este cuprins, în general, în intervalul de 1:1000...1000:1, de preferinţă 1:500...500:1, în special 1:250...250:1 şi mai preferabil 1:75...75:1.
Erbicide îndeosebi preferate B sunt erbicidele B sus-menţionate; în special erbicidele B.1 - B.229 prezentate mai jos în tabelul B:
Tabelul B
Erbicidul B B.1 cletodim B.2 clodinafop-propargil B.3 cicloxidim B.4 cihalofop-butil B.5 fenoxaprop-etil B.6 fenoxaprop-P-etil B.7 fluazifop B.8 metamifop B.9 pinoxaden B.10 profoxidim B.11 quizalofop B.12 setoxidim B.13 tepraloxidim B.14 tralkoxidim B.15 esprocarb B.16 etofumesat B.17 molinat B.18 prosulfocarb B.19 tiobencarb B.20 trialat B.21 bensulfuron-metil B.22 bispiribac-sodiu B.23 cloransulam-metil B.24 clorsulfuron B.25 clorimuron B.26 ciclosulfamuron B.27 diclosulam B.28 florasulam B.29 flumetsulam B.30 flupirsulfuron-metil-sodiu B.31 foramsulfuron B.32 halosulfuron-metil B.33 imazamox B.34 imazamox-amoniu B.35 imazapic B.36 imazapic-amoniu B.37 imazapic-izopropilamoniu B.38 imazapir B.39 imazapir-amoniu B.40 imazapir-izopropilamoniu B.41 imazaquin B.42 imazaquin-amoniu B.43 imazetapir B.44 imazetapir-amoniu B.45 imazetapir-izopropilamoniu B.46 imazosulfuron B.47 iodosulfuron-metil-sodiu B.48 iofensulfuron B.49 iofensulfuron-sodiu B.50 mezosulfuron-metil B.51 metazosulfuron B.52 metsulfuron-metil B.53 metosulam B.54 nicosulfuron B.55 penoxsulam B.56 propoxcarbazon-sodiu B.57 pirazosulfuron-etil B.58 piribenzoxim B.59 piriftalid B.60 piritiobac-sodiu B.61 piroxsulam B.62 propirisulfuron B.63 rimsulfuron B.64 sulfosulfuron B.65 tiencarbazon-metil B.66 tifensulfuron-metil B.67 tribenuron-metil B.68 trifloxisulfuron B.69 tritosulfuron B.70 triafamon B.71 ametrină B.72 atrazină B.73 bentazon B.74 bromoxinil B.75 bromoxinil-octanoat B.76 bromoxinil-heptanoat B.77 bromoxinil-potasiu B.78 diuron B.79 fluometuron B.80 hexazinon B.81 izproturon B.82 linuron B.83 metamitron B.84 metribuzin B.85 prometrin B.86 propanil B.87 simazin B.88 terbutilazin B.89 terbutrin B.90 paraquat-diclorură B.91 acifluorfen B.92 acifluorfen-sodiu B.93 azafenidin B.94 bencarbazon B.95 benzfendizon B.96 bifenox B.97 butafenacil B.98 carfentrazon B.99 carfentrazon-etil B.100 clometoxifen B.101 cinidon-etil B.102 fluazolat B.103 flufenpir B.104 flufenpir-etil B.105 flumiclorac B.106 flumiclorac-pentil B.107 flumioxazin B.108 fluoroglicofen B.109 fluoroglicofen-etil B.110 flutiacet B.111 flutiacet-metil B.112 fomesafen B.113 halosafen B.114 lactofen B.115 oxadiargil B.116 oxadiazon B.117 oxifluorfen B.118 pentoxazon B.119 profluazol B.120 piraclonil B.121 piraflufen B.122 piraflufen-etil B.123 saflufenacil B.124 sulfentrazon B.125 tidiazimin B.126 tiafenacil B.127 etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6) B.128 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4) B.129 N-etil-3-(2,6-diclor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452098-92-9) B.130 N-tetrahidrofurfuril-3-(2,6-diclor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 915396-43-9) B.131 N-etil-3-(2-clor-6-fluor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452099-05-7) B.132 N-tetrahidrofurfuril-3-(2-cloro-6-fluor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452100-03-7) B.133 3-[7-fluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo-[1,3,5]triazinan-2,4-dionă B.134 2-(2,2,7-Trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetrahidro-izoindol-1,3-dionă B.135 1-Metil-6-trifluormetil-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidină-2,4-dionă B.136 metil (E)-4-[2-clor-5-[4-clor-5-(difluormetoxi)-1H-metil-pirazol-3-il]-4-fluor-fenoxi]-3-metoxi-but-2-enoat [CAS 948893-00-3] B.137 3-[7-Clor-5-fluor-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol-4-il]-1-metil-6-(trifluormetil)-1H-pirimidină-2,4-dionă (CAS 212754-02-4) B.138 benzobiciclon B.139 clomazon B.140 diflufenican B.141 flurocloridonă B.142 izoxaflutol B.143 mezotrion B.144 norflurazon B.145 picolinafen B.146 sulcotrion B.147 tefuriltrion B.148 tembotrion B.149 topramezon B.150 topramezon-sodiu B.151 biciclopiron B.152 amitrol B.153 fluometuron B.154 glifosat B.155 glifosat-amoniu B.156 glifosat-dimetilamoniu B.157 glifosat-izopropzlamoniu B.158 glifosat-trimesium (sulfosat) B.159 glifosat-potasiu B.160 glufosinat B.161 glufosinat-amoniu B.162 glufosinat-P B.163 glufosinat-P-amoniu B.164 pendimetalin B.165 trifluralin B.166 acetoclor B.167 butaclor B.168 cafenstrol B.169 dimetenamid-P B.170 fentrazamidă B.171 flufenacet B.172 mefenacet B.173 metazaclor B.174 metolaclor B.175 S-metolaclor B.176 pretilaclor B.177 fenoxasulfon B.178 izoxaben B.179 ipfencarbazon B.180 piroxasulfon B.181 2,4-D B.182 2,4-D-izobutil B.183 2,4-D-dimetilamoniu B.184 2,4-D-N,N,N-trimetiletanolamoniu B.185 aminopiralid B.186 aminopiralid-metil B.187 aminopiralid-tris(2-hydroxipropil)amoniu B.188 clopiralid B.189 clopiralid-metil B.190 clopiralid-olamină B.191 dicamba B.192 dicamba-butotil B.193 dicamba-diglicolamină B.194 dicamba-dimetilamoniu B.195 dicamba-diolamină B.196 dicamba-izopropzlamoniu B.197 dicamba-potasiu B.198 dicamba-sodiu B.199 dicamba-trolamină B.200 dicamba-N,N-bis-(3-aminopropil)metilamină B.201 dicamba-dietilentriamină B.202 fluroxipir B.203 fluroxipir-meptil B.204 MCPA B.205 MCPA-2-etilhexil B.206 MCPA-dimetilamoniu B.207 quinclorac B.208 quinclorac-dimetilamoniu B.209 quinmerac B.210 quinmerac-dimetilamoniu B.211 aminociclopiraclor B.212 aminociclopiraclor-potasiu B.213 aminociclopiraclor-metil B.214 diflufenzopir B.215 diflufenzopir-sodiu B.216 dimron B.217 indanofan B.218 indaziflam B.219 oxaziclomefon B.220 triaziflam B.221 II.1 B.222 II.2 B.223 II.3 B.224 II.4 B.225 II.5 B.226 II.6 B.227 II.7 B.228 II.8 B.229 II.9
În special sunt preferate compoziţiile 1.1 - 1.229, care conţin acifluorfen şi substanţa(ele) definită(e) în rândul respectiv din tabelul B-1:
Tabelul B-1 (compoziţiile 1.1 - 1.229):
nr. comp. erbicidul B 1.1 B.1 1.2 B.2 1.3 B.3 1.4 B.4 1.5 B.5 1.6 B.6 1.7 B.7 1.8 B.8 1.9 B.9 1.10 B.10 1.11 B.11 1.12 B.12 1.13 B.13 1.14 B.14 1.15 B.15 1.16 B.16 1.17 B.17 1.18 B.18 1.19 B.19 1.20 B.20 1.21 B.21 1.22 B.22 1.23 B.23 1.24 B.24 1.25 B.25 1.26 B.26 1.27 B.27 1.28 B.28 1.29 B.29 1.30 B.30 1.31 B.31 1.32 B.32 1.33 B.33 1.34 B.34 1.35 B.35 1.36 B.36 1.37 B.37 1.38 B.38 1.39 B.39 1.40 B.40 1.41 B.41 1.42 B.42 1.43 B.43 1.44 B.44 1.45 B.45 1.46 B.46 1.47 B.47 1.48 B.48 1.49 B.49 1.50 B.50 1.51 B.51 1.52 B.52 1.53 B.53 1.54 B.54 1.55 B.55 1.56 B.56 1.57 B.57 1.58 B.58. 1.59 B.59 1.60 B.60 1.61 B.61 1.62 B.62 1.63 B.63 1.64 B.64 1.65 B.65 1.66 B.66 1.67 B.67 1.68 B.68 1.69 B.69 1.70 B.70 1.71 B.71 1.72 B.72 1.73 B.73 1.74 B.74 1.75 B.75 1.76 B.76 1.77 B.77 1.78 B.78 1.79 B.79 1.80 B.80 1.81 B.81 1.82 B.82 1.83 B.83 1.84 B.84 1.85 B.85 1.86 B.86 1.87 B.87 1.88 B.88 1.89 B.89 1.90 B.90 1.91 B.91 1.92 B.92 1.93 B.93 1.94 B.94 1.95 B.95 1.96 B.96 1.97 B.97 1.98 B.98 1.99 B.99 1.100 B.100 1.101 B.101 1.102 B.102 1.103 B.103 1.104 B.104 1.105 B.105 1.106 B.106 1.107 B.107 1.108 B.108 1.109 B.109 1.110 B.110 1.111 B.111 1.112 B.112 1.113 B.113 1.114 B.114 1.115 B.115 1.116 B.116 1.117 B.117 1.118 B.118 1.119 B.119 1.120 B.120 1.121 B.121 1.122 B.122 1.123 B.123 1.124 B.124 1.125 B.125 1.126 B.126 1.127 B.127 1.128 B.128 1.129 B.129 1.130 B.130 1.131 B.131 1.132 B.132 1.133 B.133 1.134 B.134 1.135 B.135 1.136 B.136 1.137 B.137 1.138 B.138 1.139 B.139 1.140 B.140 1.141 B.141 1.142 B.142 1.143 B.143 1.144 B.144 1.145 B.145 1.146 B.146 1.147 B.147 1.148 B.148 1.149 B.149 1.150 B.150 1.151 B.151 1.152 B.152 1.153 B.153 1.154 B.154 1.155 B.155 1.156 B.156 1.157 B.157 1.158 B.158 1.159 B.159 1.160 B.160 1.161 B.161 1.162 B.162 1.163 B.163 1.164 B.164 1.165 B.165 1.166 B.166 1.167 B.167 1.168 B.168 1.169 B.169 1.170 B.170 1.171 B.171 1.172 B.172 1.173 B.173 1.174 B.174 1.175 B.175 1.176 B.176 1.177 B.177 1.178 B.178 1.179 B.179 1.180 B.180 1.181 B.181 1.182 B.182 1.183 B.183 1.184 B.184 1.185 B.185 1.186 B.186 1.187 B.187 1.188 B.188 1.189 B.189 1.190 B.190 1.191 B.191 1.192 B.192 1.193 B.193 1.194 B.194 1.195 B.195 1.196 B.196 1.197 B.197 1.198 B.198 1.199 B.199 1.200 B.200 1.201 B.201 1.202 B.202 1.203 B.203 1.204 B.204 1.205 B.205 1.206 B.206 1.207 B.207 1.208 B.208 1.209 B.209 1.210 B.210 1.211 B.211 1.212 B.212 1.213 B.213 1.214 B.214 1.215 B.215 1.216 B.216 1.217 B.217 1.218 B.218 1.219 B.219 1.220 B.220 1.221 B.221 1.222 B.222 1.223 B.223 1.224 B.224 1.225 B.225 1.226 B.226 1.227 B.227 1.228 B.228 1.229 B.229
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 2.1 - 2.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A acifluorfen-sodiu.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 3.1 - 3.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A azafenidin.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 4.1 - 4.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A bencarbazon.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 5.1 - 5.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A benzfendizon.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 6.1 - 6.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A bifenox.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 7.1 - 7.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.227 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A butafenacil.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 8.1 - 8.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A carfentrazon.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 9.1 - 9.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1. 229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A carfentrazon-etil.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 10.1 - 10.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A clometoxifen.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 11.1 - 11.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A cinidon-etil.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 12.1 - 12.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A fluazolat.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 13.1 - 13.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A flufenpir.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 14.1 - 14.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A flufenpir-etil.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 15.1 - 15.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A flumiclorac.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 16.1 - 16.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A flumiclorac-pentil.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 17.1 - 17.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A flumioxazin.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 18.1 - 18.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A fluoroglicofen.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 19.1 - 19.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A fluoroglicofen-etil.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 20.1 - 20.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A flutiacet.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 21.1 - 21.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A flutiacet-metil.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 22.1 - 22.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A fomesafen.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 23.1 - 23.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A halosafen.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 24.1 - 24.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A lactofen.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 25.1 - 25.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A oxadiargil.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 26.1 - 26.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A oxadiazon.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 27.1 - 27.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A oxifluorfen.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 28.1 - 28.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A pentoxazon.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 29.1 - 29.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A profluazol.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 30.1 - 30.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A piraclonil.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 31.1 - 31.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A piraflufen.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 32.1 - 32.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A piraflufen-etil.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 33.1 - 33.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A saflufenacil.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 34.1 - 34.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A sulfentrazon.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 35.1 - 35.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A tidiazimin.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 36.1 - 36.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A tiafenacil.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 37.1 - 37.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A etil [3-[2-clor-4-fluor-5-(1-metil-6-trifluormetil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetrahidropirimidin-3-il)fenoxi]-2-piridiloxi]acetat (CAS 353292-31-6; S-3100).
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 38.1 - 38.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4).
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 39.1 - 39.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A N-etil-3-(2,6-diclor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452098-92-9).
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 40.1 - 40.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A N-tetrahidrofurfuril-3-(2,6-diclor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 915396-43-9).
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 41.1 - 41.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A N-etil-3-(2-clor-6-fluor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452099-05-7).
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 42.1 - 42.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A N-tetrahidrofurfuril-3-(2-clor-6-fluor-4-trifluormetilfenoxi)-5-metil-1H-pirazol-1-carboxamidă (CAS 452100-03-7).
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 43.1 - 43.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A 3-[7-fluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo-[1,3,5]triazinan-2,4-dionă.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 44.1 - 44.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A metil (E)-4-[2-clor-5-[4-clor-5-(difluormetoxi)-1H-metil-pirazol-3-il]-4-fluor-fenoxi]-3-metoxi-but-2-enoat (CAS 948893-00-3).
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 45.1 - 45.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A 3-[7-Clor-5-fluor-2-(trifluormetil)-1H-benzimidazol-4-il]-1-metil-6-(trifluormetil)-1H-pirimidină-2,4-dionă (CAS 212754-02-4).
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 46.1 - 46.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A 2-(2,2,7-Trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetrahidro-izoindol-1,3-dionă.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 47.1 - 47.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin în calitate de componenta A 1-Metil-6-trifluormetil-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidină-2,4-dionă
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 48.1 - 48.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin suplimentar benoxacor în calitate de agent fitoprotector C.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 49.1 - 49.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin suplimentar cloquintocet în calitate de agent fitoprotector C.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 50.1 - 50.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin suplimentar ciprosulfamidă în calitate de agent fitoprotector C.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 51.1 - 51.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin suplimentar diclormid în calitate de agent fitoprotector C.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 52.1 - 52.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin suplimentar fenclorazol în calitate de agent fitoprotector C.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 53.1 - 53.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin suplimentar fenclorim în calitate de agent fitoprotector C.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 54.1 - 54.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin suplimentar furilazol în calitate de agent fitoprotector C.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 55.1 - 55.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin suplimentar izoxadifen în calitate de agent fitoprotector C.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 56.1 - 56.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin suplimentar mefenpir în calitate de agent fitoprotector C.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 57.1 - 57.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin suplimentar 4-(dicloracetil)-1-oxa-4-azaspiro[4.5]decan (MON4660, CAS 71526-07-3) în calitate de agent fitoprotector C.
De asemenea, îndeosebi preferate sunt compoziţiile 58.1 - 58.229, care diferă de compoziţiile corespunzătoare 1.1 - 1.229 doar prin faptul că ele conţin suplimentar 2,2,5-trimetil-3-(dicloracetil)-1,3-oxazolidină (R-29148, CAS 52836-31-4) în calitate de agent fitoprotector C.
În general, se preferă utilizarea compuşilor invenţiei în combinaţie cu erbicide care sunt selective pentru cultura tratată şi care completează spectrul de buruieni combătute cu aceşti compuşi la rata de aplicare folosită. În continuare, se preferă, în general, aplicarea compuşilor invenţiei şi altor erbicide complementare în acelaşi timp, fie ca un preparat combinat sau ca un amestec în rezervor.
Este recunoscut faptul că moleculele de polinucleotide şi polipeptidele invenţiei cuprind molecule de polinucleotide şi polipeptide care conţin o secvenţă de nucleotide sau de aminoacizi care este suficient de identică cu secvenţele de nucleotide prezentate în SECV ID nr.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, sau 45, sau cu secvenţele de aminoacizi prezentate în SECV ID nr.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, sau 46. Termenul "suficient identic" este utilizat aici cu referire la o primă secvenţă de aminoacizi sau nucleotide care conţine un număr suficient sau minim de reziduuri de aminoacizi sau nucleotide identice sau echivalente (de ex., cu o catenă laterală similară) cu o a doua secvenţă de aminoacizi sau nucleotide, astfel încât prima şi a doua secvenţă de aminoacizi sau nucleotide au un domeniu structural comun şi/sau o activitate funcţională comună.
În general, "identitatea secvenţelor" se referă la gradul în care două secvenţe de ADN sau de aminoacizi optim aliniate sunt constante pe parcursul unei ferestre de aliniere a componentelor, de ex., a nucleotidelor sau aminoacizilor. O "fracţie de identitate" pentru segmentele aliniate ale unei secvenţe de testare şi ale unei secvenţe de referinţă este numărul componentelor identice care sunt comune celor două secvenţe aliniate împărţit la numărul total al componentelor din segmentul secvenţei de referinţă, adică întreaga secvenţă de referinţă sau o parte mai mică definită a secvenţei de referinţă. "Identitate procentuală" este fracţiunea de identitate înmulţită cu 100. Alinierea optimă a secvenţelor pentru alinierea unei ferestre de comparaţie este bine cunoscută de specialiştii din domeniu şi poate fi realizată prin instrumente, cum ar fi algoritmul de omologie locală al lui Smith şi Waterman, algoritmul de aliniere a omologiei al lui Needleman şi Wunsch, metoda de căutare a similitudinii a lui Pearson şi Lipman, şi preferabil prin implementări computerizate ale acestor algoritmi cum ar fi GAP, BESTFIT, FASTA şi TFASTA disponibile ca parte a GCG. Wisconsin Package. (Accelrys Inc. Burlington, Mass.)
Polynucleotides and Oligonucleotides
Printr-o "polinucleotidă izolată", inclusiv ADN, ARN, sau o combinaţie a acestora, cu catenă simplă sau dublă, în orientare sens sau antisens sau o combinaţie a acestora, ARNds sau altfel, se are în vedere o polinucleotidă care este cel puţin parţial separată de secvenţele de polinucleotide cu care este asociată sau legată în stare nativă. Preferabil, polinucleotida izolată este în măsură de, cel puţin 60%, preferabil, cel puţin, 75%, şi cel mai preferabil, cel puţin, 90% lipsită de alte componente cu care este asociată în mod natural. După cum vor cunoaşte specialiştii în domeniu, o polinucleotidă izolată poate fi o polinucleotidă exogenă prezentă, de exemplu, într-un organism transgenic care nu cuprinde în mod natural polinucleotida. În plus, termenii "polinucleotidă(e)", "secvenţă(e) de acid nucleic", "secvenţă(e) de nucleotide (s)", "acid(zi) nucleic(i)", "moleculă de acid nucleic" sunt utilizaţi interschimbabil în prezenta şi se referă la nucleotide, fie ribonucleotide sau dezoxiribonucleotide sau o combinaţie a acestora, într-o formă polimerică neramificată de orice lungime.
Termenul "acid nucleic al mut-PPO" se referă la un acid nucleic al PPO având o secvenţă care este transformată dintr-un acid nucleic al PPO de tip sălbatic şi care conferă toleranţă sporită la erbicidul care inhibă PPO unei plante în care este exprimat. În plus, termenul "protoporfirinogen oxidază mutantă (mut-PPO)" se referă la înlocuirea unui aminoacid din secvenţele primare de tip sălbatic SECV ID nr.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, sau 46, sau o variantă, un derivat, ortolog, sau paralog al acesteia, cu un alt aminoacid. Expresia "aminoacid mutant" va fi folosită în continuare pentru a desemna aminoacidul care este înlocuit cu un alt aminoacid, desemând astfel segmentul mutaţiei în secvenţa primară a proteinei.
Într-o variantă de executare preferenţială, secvenţa de nucleotide a PPO cuprinde secvenţa SECV ID nr.: 1, 25, 37 sau 39 sau o variantă sau un derivat al acesteia.
În plus, se va înţelege de către un specialist în domeniu că secvenţele de nucleotide ale PPO cuprind omologi, paralogi şi ortologi ai SECV ID nr.: 1, 25, 37 sau 39 precum se va descrie în continuare.
Prin termenul "variantă" cu privire la o secvenţă (de ex., o polipeptidă sau o secvenţă de acid nucleic, cum ar fi - de exemplu - o secvenţă de nucleotide care reglează transcripţia conform invenţia) se are în vedere secvenţe substanţial similare. Pentru secvenţele de nucleotide care cuprind un cadru de citire deschis, variantele includ acele secvenţe care, datorită degenerării codului genetic, codifică secvenţa de aminoacizi identică a proteinei native. Variantele alelice de origine naturală cum ar fi acestea pot fi identificate prin utilizarea tehnicilor de biologie moleculară bine cunoscute, ca, de exemplu, reacţia în lanţ a polimerazei (PCR) şi tehnicile de hibridizare. Variante de secvenţe de nucleotide includ, de asemenea, secvenţe de nucleotide derivate sintetic, cum ar fi cele generate, de exemplu, prin utilizarea mutagenezei situs-direcţionată şi pentru cadre de citire deschise, codifică proteina nativă, precum şi cele care codifică o polipeptidă care are substituţii de aminoacizi în raport cu proteină nativă. În general, variantele de secvenţe ale nucleotidelor conform invenţiei vor prezenta o "identitate a secvenţelor" nucleotidelor de, cel puţin, 30, 40, 50, 60, şi 70%, de ex., de preferinţă 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78% , până la 79%, în general cel puţin 80%, de ex., 81% -84%, cel puţin 85%, de ex., 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, până la 98% şi 99% cu secvenţa de nucleotide a SECV ID nr.: SECV ID nr.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, sau 45. Identitatea procentuală a unei polinucleotide este determinată prin analiza GAP (Needleman şi Wunsch, 1970) (programul GCG) cu o penalizare de creare a diferenţelor = 5, şi o penalizare de extindere a diferenţelor = 0,3. Dacă nu se specifică altfel, secvenţa de interogare este de, cel puţin, 45 de nucleotide în lungime, iar analiza GAP aliniază cele două secvenţe peste o regiune de, cel puţin, 45 de nucleotide. De preferinţă, secvenţa de interogare este de, cel puţin,150 de nucleotide în lungime, iar analiza GAP aliniază cele două secvenţe peste o regiune de, cel puţin, 150 de nucleotide. Mai preferabil, secvenţa de interogare este de, cel puţin, 300 de nucleotide în lungime, iar analiza GAP aliniază cele două secvenţe peste o regiune de, cel puţin, 300 de nucleotide. Chiar mai preferabil, analiza GAP aliniază cele două secvenţe pe întreaga lor lungime.
Polipeptide
Prin "polipeptidă substanţial purificată" sau "polipeptidă purificată" se va înţelege că a fost separată de una sau mai multe lipide, acizi nucleici, alte polipeptide, sau alte molecule contaminante cu care este asociată în starea sa nativă. Se preferă ca polipeptida purificată substanţial să fie în măsură de, cel puţin 60%, mai preferabil, cel puţin, 75%, şi mai preferabil, cel puţin, 90% lipsită de alte componente cu care este asociată în mod natural. După cum vor aprecia specialiştii din domeniu, polipeptida purificată poate fi o polipeptidă produsă recombinant. Termenii "polipeptidă" şi "proteină" sunt folosiţi, în general, interschimbabil şi se referă la un singur lanţ polipeptidic, care poate sau nu poate fi modificat prin adăugarea grupelor de non-aminoacizi. Se va înţelege că astfel de lanţuri polipeptidice se pot asocia cu alte polipeptide sau proteine sau alte molecule, cum ar fi co-factori. Termenii "proteine" şi "polipeptide" aşa cum sunt folosiţi în prezenta includ, de asemenea, variante, mutanţi, modificări, analogi şi/sau derivaţi ai polipeptidelor invenţiei aşa cum este descris aici.
Identitatea procentuală a unei polipeptide este determinată prin analiza GAP (Needleman şi Wunsch, 1970) (programul GCG) cu o penalizare de creare a diferenţelor= 5, şi o penalizare de extindere a diferenţelor= 0,3. Secvenţa de interogare este de, cel puţin, 25 de aminoacizi în lungime, iar analiza GAP aliniază cele două secvenţe peste o regiune de, cel puţin, 25 de aminoacizi. Mai preferabil, secvenţa de interogare este de, cel puţin, 50 de aminoacizi în lungime, iar analiza GAP aliniază cele două secvenţe peste o regiune de, cel puţin, 50 de aminoacizi. Mai preferabil, secvenţa de interogare este de, cel puţin, 100 de aminoacizi în lungime, iar analiza GAP aliniază cele două secvenţe peste o regiune de, cel puţin, 100 de aminoacizi. Chiar mai preferabil, secvenţa de interogare este de, cel puţin, 250 de aminoacizi în lungime, iar analiza GAP aliniază cele două secvenţe peste o regiune de, cel puţin, 250 de aminoacizi. Chiar mai preferabil, analiza GAP aliniază cele două secvenţe pe întreaga lor lungime.
Cu privire la o polipeptidă definită, se va aprecia ca cifrele identităţii procentuale mai mari decât cele prezentate mai sus să cuprindă variante de executare preferenţiale. Astfel, dacă este cazul, în lumina cifrelor identităţii procentuale minime, se preferă ca polipeptida PPO a invenţiei să cuprindă o secvenţă de aminoacizi, care este în măsură de, cel puţin, 40%, mai preferabil cel puţin 45%, mai preferabil cel puţin 50%, mai preferabil cel puţin 55%, mai preferabil cel puţin 60%, mai preferabil cel puţin 65%, mai preferabil cel puţin 70%, mai preferabil cel puţin 75%, mai preferabil cel puţin 80%, mai preferabil cel puţin 85%, mai mult preferabil cel puţin 90%, mai preferabil cel puţin 91%, mai preferabil cel puţin 92%, mai preferabil cel puţin 93%, mai preferabil cel puţin 94%, mai preferabil cel puţin 95%, mai preferabil cel puţin 96%, mai preferabil cel puţin 97%, mai preferabil cel puţin 98%, mai preferabil cel puţin 99%, mai preferabil cel puţin 99,1%, mai preferabil cel puţin 99,2%, mai preferabil cel puţin 99,3%, mai preferabil cel puţin 99,4%, mai preferabil cel puţin 99,5%, mai preferabil cel puţin 99,6%, mai preferabil cel puţin 99,7%, mai preferabil cel puţin 99,8%, şi chiar mai preferabil cel puţin 99,9% identică cu SECV ID nr.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, sau 46.
Prin polipeptidă "variantă" se are în vedere o polipeptidă derivată din proteina SECV ID nr.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, sau 46 prin deleţia (aşa-numita trunchiere) sau adăugarea unuia sau mai multor aminoacizi la capătul N-terminal şi/sau C-terminal al proteinei native; deleţia sau adiţia unuia sau mai multor aminoacizi la unul sau mai multe situsuri în proteina nativă; sau substituirea unuia sau mai multor aminoacizi la unul sau mai multe situsuri din proteina nativă. Astfel de variante pot rezulta, de exemplu, din polimorfism genetic sau din manipulare umană. Metode pentru astfel de manipulări sunt, în general, cunoscute în domeniu.
"Derivaţi" ai unei proteine cuprind peptide, oligopeptide, polipeptide, proteine şi enzime având substituţii, deleţii şi/sau inserţii de aminoacizi în raport cu proteina nemodificată în cauză şi având o activitate biologică şi funcţională similară ca şi proteina nemodificată din care sunt obţinuţi.
"Omologi" ai unei proteine cuprind peptide, oligopeptide, polipeptide, proteine şi enzime având substituţii, deleţii şi/sau inserţii de aminoacizi în raport cu proteina nemodificată în cauză şi având o activitate biologică şi funcţională similară ca şi proteina nemodificată din care sunt obţinuţi.
O deleţie se referă la îndepărtarea unuia sau mai multor aminoacizi dintr-o proteină.
O inserţie se referă la unul sau mai multe reziduuri de aminoacizi introduşi într-un situs predeterminat într-o proteină. Inserţiile pot cuprinde fuziuni N-terminale şi/sau C-terminale, precum şi inserţii între secvenţele de aminoacizi unici sau multipli. În general, inserţiile în secvenţa de aminoacizi vor fi mai mici decât fuziunile N- sau C-terminale, de ordinul de circa 1 - 10 reziduuri. Exemple de proteine sau peptide cu fuziuni N- sau C-terminale includ domeniul de legare sau domeniul de activare a unui activator transcripţional precum este utilizat în sistemul bihibrid de drojdie, proteinele de fagi, (histidină)-6-tag, glutationul S-transferază-tag, proteina A, proteina de legare a maltozei, dihidrofolatul reductază, epitopul Tag·100, epitopul c-myc, epitopul FLAG®, lacZ, CMP (peptidă de legare a calmodulinei), epitopul HA, epitopul proteinei C şi epitopul VSV.
O substituţie se referă la înlocuirea aminoacizilor proteinei cu alţi aminoacizi având proprietăţi similare (cum ar fi hidrofobie, hidrofilie, antigenitate predilecţie similară pentru a forma sau distruge structurile α-elicoidale sau structurile β-coli). Substituţiile de aminoacizi sunt, de regulă, cu reziduuri unice, dar pot fi grupate în funcţie de constrângerile funcţionale impuse polipeptidei şi pot varia între 1 - 10 aminoacizi; inserţiile vor fi de obicei de ordinul a circa 1 - 10 reziduuri de aminoacizi. Substituţiile de aminoacizi sunt, de preferinţă, substituţii de aminoacizi conservatoare. Tabele cu substituţii conservatoare sunt bine cunoscute în domeniu (a se vedea, de exemplu Creighton (1984) Proteine. W.H. Freeman and Company (Eds).
Exemple de substituţii de aminoacizi conservate
Tabelul 2
Reziduul Substituţii conservatoare Reziduul Substituţii conservatoare Ala Ser Leu Ile; Val Arg Lys Lys Arg; Gln Asn Gln; His Met Leu; Ile Asp Glu Phe Met; Leu; Tyr Gln Asn Ser Thr; Gly Cys Ser Thr Ser; Val Glu Asp Trp Tyr Gly Pro Tyr Trp; Phe His Asn; Gln Val Ile; Leu Ile Leu, Val
Substituţii, deleţii şi/sau inserţii de aminoacizi pot fi uşor preparate folosind tehnicile de sinteză a peptidelor bine cunoscute în domeniu, cum ar fi sinteza peptidelor în fază solidă şi altele, sau prin manipularea ADN-ului recombinant. Metode pentru manipularea secvenţelor de ADN cu scopul de a produce variante de substituţie, inserţie sau deleţie a unei proteine sunt bine cunoscute în domeniu. De exemplu, tehnicile pentru prepararea mutaţiilor de substituţie la situsuri predeterminate în ADN sunt bine cunoscute de către specialiştii în domeniu şi includ mutageneza M13, mutageneza T7-Gen in vitro (USB, Cleveland, OH), mutageneza situs-direcţionată QuickChange (Stratagene, San Diego , CA), mutageneza situs-direcţionată mediată de PCR sau alte protocoale de mutageneză situs-direcţionată.
"Derivaţii" includ, de asemenea, peptide, oligopeptide, polipeptide care pot, comparativ cu secvenţa de aminoacizi de formă naturală a proteinei, cum ar fi proteina relevantă, cuprinde substituţii de aminoacizi cu reziduuri de aminoacizi de origine nenaturală, sau adiţii de reziduuri de aminoacizi de origine nenaturală. "Derivaţii" unei proteine cuprind, de asemenea, peptide, oligopeptide, polipeptide care cuprind reziduuri de aminoacizi de origine naturală modificate (glicozilate, acilate, prenilate, fosforilate, miristoilate, sulfatate, etc.) sau de origine nenaturală modificate comparate cu secvenţa de aminoacizi a unei polipeptide cu forma de origine naturală. Un derivat poate cuprinde, de asemenea, unul sau mai mulţi substituenţi sau adiţii de non-aminoacizi în comparaţie cu secvenţa de aminoacizi din care este obţinut, de exemplu o moleculă raportor sau un alt ligand, legat covalent sau necovalent de secvenţa de aminoacizi, cum ar fi o moleculă raportor, care este legată pentru a facilita detectarea acesteia, şi reziduurile de aminoacizi de origine nenaturală în raport cu secvenţa de aminoacizi a unei proteine de origine naturală. În plus "derivaţii" includ, de asemenea fuziuni de formă naturală a proteinei cu peptide de marcare, cum ar fi FLAG, HIS6 sau tioredoxină (o analiză a peptidelor de marcare este prezentată în Terpe, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60, 523-533, 2003).
"Ortologi" şi "paralogi" cuprind concepte evolutive utilizate pentru a descrie relaţiile ancestrale ale genelor. Paralogii sunt gene din aceeaşi specie care au provenit prin dublarea unei gene ancestrale; ortologii sunt gene de la diferite organisme, care au provenit prin speciaţie, şi, de asemenea, derivă dintr-o genă comună ancestrală. În Tabelul 1 este prezentată o listă nelimitativă de exemple de astfel de ortologi.
Este bine cunoscut faptul în domeniu că paralogii şi ortologii pot avea domenii distincte comune care conţin reziduuri de aminoacizi adecvaţi la anumite situsuri, cum ar fi buzunare de legare pentru anumite substraturi sau motive de legare pentru interacţiunea cu alte proteine.
Termenul "domeniu" se referă la un set de aminoacizi conservaţi la poziţii specifice de-a lungul unei alinieri a secvenţelor proteinelor legate evolutiv. În timp ce aminoacizii la alte poziţii pot varia de la un omolog la altul, aminoacizii care sunt puternic conservaţi la poziţii specifice indică aminoacizi care sunt posibil esenţiali în structura, stabilitatea sau funcţia unei proteine. Fiind identificaţi de gradul lor înalt de conservare în secvenţele aliniate ale unei familii de omologi de proteine, aceştia pot fi folosiţi ca identificatori pentru a determina dacă vreo polipeptidă în cauză aparţine unei familii de polipeptide identificate anterior.
Termenul "motiv" sau "secvenţă consens" se referă la o regiune conservată pe o perioadă scurtă în secvenţa proteinelor legate evolutiv. Motive sunt adesea părţi de domenii puternic conservate, dar pot include, de asemenea, doar o parte a domeniului, sau pot fi localizate în afara domeniului conservat (dacă toţi aminoacizii motivului sunt în afara unui domeniu definit).
Există baze de date specializate pentru identificarea domeniilor, de exemplu, SMART (Schultz et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 5857-5864; Letunic et al. (2002) Nucleic Acids Res 30, 242-244), InterPro (Mulder et al., (2003) Nucl. Acids. Res. 31, 315-318), Prosite (Bucher and Bairoch (1994), O sintaxă a profilurilor generalizate pentru motivele secvenţelor biomoleculare şi funcţia sa în interpretarea automată a secvenţelor. (In) ISMB-94; Procedurile Conferinţei Internaţionale Ediţia a 2-a privind Sistemele Inteligente pentru Biologia Moleculară. Altman R., Brutlag D., Karp P., Lathrop R., Searls D., Eds., pp53-61, AAAI Press, Menlo Park; Hulo et al., Nucl. Acids. Res. 32:D134-D137, (2004)), sau Pfam (Bateman et al., Nucleic Acids Research 30(1): 276-280 (2002)). Un set de instrumente pentru analiza in silico a secvenţelor de proteine este disponibil pe serverul proteomic ExPASy (Institutul Elveţian de Bioinformatică (Gasteiger et al., ExPASy: serverul proteomic pentru cunoştinţe şi analiza mai amănunţită a proteinelor, Acizi Nucleici Res. 31:3784-3788(2003)). Domeniile sau motivele pot fi, de asemenea, identificate folosind tehnici curente, cum ar fi prin alinierea secvenţelor.
Metode pentru alinierea secvenţelor pentru comparaţie sunt bine cunoscute în domeniu, astfel de metode includ GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA şi TFASTA. GAP foloseşte algoritmul Needleman şi Wunsch ((1970) J Mol Biol 48: 443-453) pentru a depista alinierea globală (de ex., cuprinzând secvenţele complete) a două secvenţe care maximizează numărul de potriviri şi minimizează numărul de diferenţe. Algoritmul BLAST (Altschul et al. (1990) J Mol Biol 215: 403-10) calculează identitatea procentuală a secvenţelor şi efectuează o analiză statistică a similtudinii dintre cele două secvenţe. Software-ul pentru efectuarea analizei BLAST este disponibil publicului prin intermediul Centrului Naţional de Informaţii Biotehnologice (NCBI). Omologii pot fi uşor identificaţi folosind, de exemplu, algoritmul de aliniere a secvenţelor multiple ClustalW (versiunea 1.83), cu parametrii de aliniere implicită a perechilor şi o metodă de punctare în procente. Procentele globale de similitudine şi identitate pot fi, de asemenea, determinate folosind una dintre metodele disponibile în pachetul software MatGAT (Campanella et al., BMC Bioinformatics. 2003 Jul 10;4:29. MatGAT: o aplicaţie care generează matricele de similitudine/identitate folosind secvenţele de proteine sau ADN). Editarea manuală minoră poate fi efectuată pentru a optimiza alinierea între motivele conservate, după cum va fi evident unui specialist în domeniu. În plus, pot fi utilizate, de asemenea, domenii specifice în loc de utilizarea secvenţelor cu lungimea completă pentru identificarea omologilor. Valorile de identitate a secvenţelor pot fi determinate pe întreaga secvenţă de acizi nucleici sau de aminoacizi sau pe domenii selectate sau motiv(e) conservat(e), cu ajutorul programelor sus-menţionate folosind parametrii impliciţi. Pentru alinieri locale, algoritmul Smith-Waterman este deosebit de util (Smith TF, Waterman MS (1981) J. Mol. Biol 147(1);195-7).
Inventatorii prezentei invenţii au constatat că prin substituirea unuia sau mai multor reziduuri de aminoacizi cheie, toleranţa sau rezistenţa la erbicide poate fi sporită în mod remarcabil, comparativ cu activitatea enzimelor PPO de tip sălbatic a SECV ID nr.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, sau 46. Substituţii preferate ale mut-PPO sunt cele care sporesc toleranţa la erbicide a plantei, însă nu afectează semnificativ activitatea biologică a activităţii oxidazei.
Prin urmare, într-un alt aspect al prezentei invenţii reziduurile de aminoacizi cheie ale unei enzime PPO, unei variante, unui derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, sunt substituite cu orice alt aminoacid.
Într-o variantă de executare prefrenţială, reziduurile de aminoacizi cheie ale unei enzime PPO, unei variante, unui derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, sunt substituite cu un aminoacid conservat prezentat în Tabelul 2.
Se va înţelege de către un specialist în domeniu că aminoacizii situaţi în imediata apropiere de poziţiile aminoacizilor menţionaţi mai jos pot fi, de asemenea, substituiţi. Astfel, într-o altă variantă de executare varianta SECV ID nr.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, sau 46, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia cuprinde o mut-PPO, în care un aminoacid ±3, ±2 sau ±1 poziţiile aminoacizilor dintr-un aminoacid cheie este substituit cu orice alt aminoacid.
Pe baza tehnicilor bine cunoscute în domeniu, poate fi elaborat un şablon de secvenţe extrem de caracteristic, prin intermediul căruia pot fi căutaţi alţi candidaţi mut-PPO cu activitatea dorită.
Căutarea altor candidaţi mut-PPO prin aplicarea unui model de secvenţe adecvat va fi, de asemenea, cuprins de prezenta invenţie. Se va înţelege de către un specialist că modelul prezent de secvenţe nu este limitat de distanţele exacte dintre două reziduuri de aminoacizi adiacenţi din modelul respectiv. Fiecare distanţă dintre doi vecini din modelele de mai sus poate, de exemplu, varia în mod independent una de alta cu până la ±10, ± 5, ±3, ±2 sau ±1 poziţie de aminoacizi, fără a afecta în mod substanţial activitatea dorită.
În plus, prin aplicarea metodei de mutageneză situs-direcţionată, inventatorii prezentei invenţii au identificat combinaţii specifice de mutaţii, această combinaţie referindu-se la o substituţie a reziduului de Fenilalanină la poziţia 420 în SECV ID nr.: 2 sau 4, combinată cu o a doua substituţie a Leucinei la poziţia 397 în SECV ID nr.: 2 sau 4.
Astfel, într-o variantă de executare îndeosebi preferată, varianta sau derivatul mut-PPO a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.: 4 este selectat din substituţiile combinate de aminoacizi din următorul Tabel 3a.
SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 (substituţii combinate de aminoacizi obţinuţi prin mutageneza situs-direcţionată)
Tabelul 3a
Numărul combinaţiei SECV ID nr.: Combinaţia poziţiilor aminoacizilor cheie Substituţia preferată 1 2 sau 4 Leu397 Gly Phe420 Met 2 2 sau 4 Leu397 Ala Phe420 Met 3 2 sau 4 Leu397 Ser Phe420 Met 4 2 sau 4 Leu397 Thr Phe420 Met 5 2 sau 4 Leu397 Cys Phe420 Met 6 2 sau 4 Leu397 Val Phe420 Met 7 2 sau 4 Leu397 Ile Phe420 Met 8 2 sau 4 Leu397 Met Phe420 Met 9 2 sau 4 Leu397 Pro Phe420 Met 10 2 sau 4 Leu397 Phe Phe420 Met 11 2 sau 4 Leu397 Tyr Phe420 Met 12 2 sau 4 Leu397 Trp Phe420 Met 13 2 sau 4 Leu397 Asp Phe420 Met 14 2 sau 4 Leu397 Glu Phe420 Met 15 2 sau 4 Leu397 Asn Phe420 Met 16 2 sau 4 Leu397 Gln Phe420 Met 17 2 sau 4 Leu397 His Phe420 Met 18 2 sau 4 Leu397 Lys Phe420 Met 19 2 sau 4 Leu397 Arg Phe420 Met 20 2 sau 4 Leu397 Gly Phe420 Val 21 2 sau 4 Leu397 Ala Phe420 Val 22 2 sau 4 Leu397 Ser Phe420 Val 23 2 sau 4 Leu397 Thr Phe420 Val 24 2 sau 4 Leu397 Cys Phe420 Val 25 2 sau 4 Leu397 Val Phe420 Val 26 2 sau 4 Leu397 Ile Phe420 Val 27 2 sau 4 Leu397 Met Phe420 Val 28 2 sau 4 Leu397 Pro Phe420 Val 29 2 sau 4 Leu397 Phe Phe420 Val 30 2 sau 4 Leu397 Tyr Phe420 Val 31 2 sau 4 Leu397 Trp Phe420 Val 32 2 sau 4 Leu397 Asp Phe420 Val 33 2 sau 4 Leu397 Glu Phe420 Val 34 2 sau 4 Leu397 Asn Phe420 Val 35 2 sau 4 Leu397 Gln Phe420 Val 36 2 sau 4 Leu397 His Phe420 Val 37 2 sau 4 Leu397 Lys Phe420 Val 38 2 sau 4 Leu397 Arg Phe420 Val
Într-o altă variantă de executare îndeosebi preferată, varianta sau derivatul mut-PPO a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.: 4 este selectat din substituţiile combinate de aminoacizi din următorul Tabel 3b.
SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 (substituţii combinate ale aminoacizilor)
Tabelul 3b
Numărul combinaţiei SECV ID nr.: Combinaţia poziţiilor aminoacizilor cheie Substituţia preferată 39 2 sau 4 Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn Leu400 Ala, Ile, Val, Met 40 2 sau 4 Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 41 2 sau 4 Phe204 Ala, Leu, Ile, Val Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn 42 2 sau 4 Thr208 Ser Leu400 Ala, Ile, Val, Met 43 2 sau 4 Leu400 Ala Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 44 2 sau 4 Phe204 Ile Leu400 Ala, Ile, Val, Met 45 2 sau 4 The208 Ser Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 46 2 sau 4 Phe204 Ile Thr208 Ser 47 2 sau 4 Phe204 Ile Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 48 2 sau 4 Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe420 Val, Met, Ala, Ile, Leu 49 2 sau 4 Phe204 Ile Phe420 Val, Met, Ala, Ile, Leu 50 2 sau 4 Phe420 Val, Met, Ala, Ile, Leu Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 51 2 sau 4 Arg128 Ala, Leu, Ile, Val Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn 52 2 sau 4 Thr208 Ser Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 53 2 sau 4 Phe204 Ile The208 Ser Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn 54 2 sau 4 Phe204 Ile Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 55 2 sau 4 Thr208 Ser Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 56 2 sau 4 Phe204 Ile Thr208 Ser Leu400 Ala, Ile, Val, Met 57 2 sau 4 Phe204 Ile Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 58 2 sau 4 Thr208 Ser Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn Leu400 Ala, Ile, Val, Met 59 2 sau 4 Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 60 2 sau 4 Phe204 Ile Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn Leu400 Ala, Ile, Val, Met 61 2 sau 4 Phe204 Ile Thr208 Ser Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 62 2 sau 4 Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val 63 2 sau 4 Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 64 2 sau 4 Phe204 Ile Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val 65 2 sau 4 Phe204 Ile Thr208 Ser Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val 66 2 sau 4 Thr208 Ser Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 67 2 sau 4 Phe204 Ile Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 68 2 sau 4 Arg128 Ala, Leu, Ile, Val Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val 69 2 sau 4 Arg128 Ala, Leu, Ile, Val Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val 70 2 sau 4 Arg128 Ala, Leu, Ile, Val Phe204 Ile Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val 71 2 sau 4 Arg128 Ala, Leu, Ile, Val Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 72 2 sau 4 Thr208 Ser Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val 73 2 sau 4 Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 74 2 sau 4 Phe204 Ile Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val 75 2 sau 4 Phe204 Ile Thr208 Ser Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 76 2 sau 4 Phe204 Ile Thr208 Ser Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 77 2 sau 4 Arg128 Ala, Leu, Ile, Val Phe204 Ile Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 78 2 sau 4 Phe204 Ile Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 79 2 sau 4 Phe204 Ile Thr208 Ser Leu397 Asp, Glu, Gln, Asn Leu400 Ala, Ile, Val, Met 80 2 sau 4 Phe204 Ile Thr208 Ser Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val 81 2 sau 4 Arg128 Ala, Leu, Ile, Val Phe204 Ile Leu400 Ala, Ile, Val, Met Phe420 Met, Ala, Leu, Ile, Val Phe457 Met, Ala, Leu, Ile, Val
Se va înţelege că orice aminoacid, pe lângă cele menţionate în tabelele 3 de mai sus, poate fi folosit în calitate de un substituent. Analizele privind testul de funcţionalitate a acestor mutanţi sunt disponibile pe larg în domeniu, şi respectiv, sunt descrise în secţiunea Exemple din prezenta invenţie.
Într-o variantă de executare preferenţială, secvenţa de aminoacizi diferă de o secvenţă de aminoacizi a SECV ID Nr.: 2 sau SECV ID nr.: 4 la una sau mai multe din următoarele poziţii: 128, 204, 208, 397, 400, 420, 457.
Exemple de deosebiri la aceste poziţii ale aminoacizilor includ, dar nu sunt limitate la, una sau mai multe dintre următoarele:
aminoacidul la poziţia 128 este altul decât Arginină;
aminoacidul la poziţia 204 este altul decât Fenilalanină;
aminoacidul la poziţia 208 este altul decât Treonină;
aminoacidul la poziţia 397 este altul decât Leucină;
aminoacidul la poziţia 400 este altul decât Leucină;
aminoacidul la poziţia 420 este altul decât Fenilalanină,
aminoacidul la poziţia 457 este altul decât Fenilalanină.
În unele variante de executare, enzima mut-PPO a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.: 4 cuprinde una sau mai multe dintre următoarele:
aminoacidul la poziţia 128 este Leu, Ala, Val, sau Ile;
aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val;
aminoacidul la poziţia 208 este Ser;
aminoacidul la poziţia 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu, sau Gln;
aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met;
aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu;
aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, Val;
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Tyr, Trp, Asp, Glu, Asn, Gln, His, Lys, sau Arg, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 420 este IIe.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 420 este IIe.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acestora, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acestora, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acestora, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acestora, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acestora, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acestora, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este His, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este His, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este His, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este His, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este His, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, Glu, Gln, Asn, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care:
aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 400 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 400 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 400 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 400 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 400 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 400 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 400 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 400 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, Glu, Gln, Asn, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp, Glu, Gln, Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 400 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 400 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 400 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 400 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 208 este Ser.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 208 este Ser.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care:aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Met, Ala, Leu, Ile, Val, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acestora, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acestora, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Val, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Val, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Val, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Val, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Val, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ala, Leu, Ile, Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp, Glu, Gln, Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Tyr, Trp, Asp, Glu, Asn, Gln, His, Lys, Arg, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 420 este IIe.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 420 este IIe.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este His, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este His, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este His, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este His, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este His, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, Glu, Gln, Asn, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 400 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 400 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 400 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 400 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 400 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 400 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 400 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 400 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, Glu, Gln, Asn, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp, Glu, Gln, Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 400 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 400 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 400 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 400 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 208 este Ser.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 208 este Ser.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Met, Ala, Leu, Ile, Val, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Val, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Val, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Val, iar aminoacidul la poziţia 457 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Val, iar aminoacidul la poziţia 457 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 420 este Val, iar aminoacidul la poziţia 457 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ala, Leu, Ile, Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp, Glu, Gln, Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asp.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Glu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Val, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Tyr, Trp, Asp, Glu, Asn, Gln, His, Lys, Arg, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met, Ala, Leu, Ile, Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Gly, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ala, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 392 este IIe.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Thr, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 392 este IIe.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Cys, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Val, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Val, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Val, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Val, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Val, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Ile, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Met, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Met, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Met, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Met, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Met, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Pro, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Tyr, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Trp, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Asn, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este His, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este His, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este His, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este His, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este His, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Lys, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 392 este Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ala.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 392 este Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 392 este Ile.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 40, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 369 este Arg, iar aminoacidul la poziţia 392 este Val.
Într-o variantă de executare îndeosebi preferată, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o variantă de executare îndeosebi preferată, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Glu, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o variantă de executare îndeosebi preferată, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o variantă de executare îndeosebi preferată, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Met.
Într-o variantă de executare îndeosebi preferată, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau 4, o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asp, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, aminoacidul la poziţia 397 este Asn, Asp, Glu, sau Gln, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 397 este Asn, Asp, Glu, sau Gln.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, aminoacidul la poziţia 397 este Asn, Asp, Glu, sau Gln, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, aminoacidul la poziţia 397 este Asn, Asp, Glu, sau Gln, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acestora, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, Asp, Glu, sau Gln, aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val,, aminoacidul la poziţia 397 este Asn, Asp, Glu, sau Gln, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, Asp, Glu, sau Gln, aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 397 este Asn, Asp, Glu, sau Gln, aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, aminoacidul la poziţia 397 este Asn, Asp, Glu, sau Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, aminoacidul la poziţia 208 este Ser, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, Ala, Val, sau Ile, aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, Ala, Val, sau Ile, aminoacidul la poziţia 397 este Asn, Asp, Glu, sau Gln, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, Ala, Val, sau Ile, aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, Ala, Val, sau Ile, aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 208 este Ser, aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.: 4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met, aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met, iar aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, aminoacidul la poziţia 208 este Ser, aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val, sau Met, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, aminoacidul la poziţia 208 este Ser, aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile, sau Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, Ala, Val, sau Ile, aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile, sau Val, aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile sau Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile sau Val, aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val sau Met, aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile sau Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile, sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acestora, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile sau Val, aminoacidul la poziţia 208 este Ser, aminoacidul la poziţia 397 este Asn, Asp, Glu sau Gln, iar aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val sau Met.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile sau Val, aminoacidul la poziţia 208 este Ser, aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val sau Met, aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile sau Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile sau Val.
Într-o altă variantă de executare preferenţială, mut-PPO cuprinde o secvenţă a SECV ID nr.: 2 sau SECV ID nr.:4 o variantă, un derivat, ortolog, paralog sau omolog al acesteia, în care: aminoacidul la poziţia 128 este Leu, Ala, Val sau IIe, aminoacidul la poziţia 204 este Ala, Leu, Ile sau Val, aminoacidul la poziţia 400 este Ala, Ile, Val sau Met, aminoacidul la poziţia 420 este Val, Met, Ala, Ile sau Leu, iar aminoacidul la poziţia 457 este Met, Ala, Leu, Ile sau Val.
Specialistul în domeniu va fi în stare să identifice regiunile conservate şi motivele pe care le au în comun omologii, ortologii şi paralogii codificaţi de SECV ID nr.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, sau 45, ca şi cele prezentate în Tabelul 1. Prin identificarea unor astfel de regiuni conservate care pot reprezenta motive adecvate de legare, aminoacizii ce corespund aminoacizilor prezentaţi în Tabelul 3a şi 3b, pot fi selectaţi pentru a fi substituiţi cu orice alt aminoacid, preferabil cu aminoacizi conservaţi aşa cum s-a prezentat în tabelul 2, şi mai preferabil cu aminoacizii din tabele 3a şi 3b.
În plus, prezenta invenţie se referă la un procedeu de identificare a unui erbicid care inhibă PPO prin utilizarea unei mut-PPO codificată de un acid nucleic care cuprinde secvenţa de nucleotide a SECV ID nr.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, sau 45, sau o variantă sau un derivat al acestora.
Procedeul menţionat cuprinde următoarele etape:
a) producerea unei celule sau plante transgenice care conţine un acid nucleic ce codifică o mut-PPO, în care mut-PPO este exprimată;
b) aplicarea unui erbicid care inhibă PPO pe celula sau planta transgenică din etapa a) şi într-o celulă sau plantă de control din acelaşi soi;
c) determinarea creşterii sau viabilităţii celulei sau plantei transgenice şi celulei sau plantei de control după aplicarea erbicidului care inhibă PPO menţionat, şi
d) selectarea "erbicidelor ce inhibă PPO" care conferă o creştere redusă celulei sau plantei de control în comparaţie cu creşterea celulei sau plantei transgenice.
Prin "celulă de control" sau "plantă, ţesut de plantă, celulă de plantă sau celulă gazdă similară, de tip sălbatic" se înţelege o plantă, ţesut de plantă, celulă de plantă sau, respectiv, o celulă gazdă, care nu posedă caracteristicile de rezistenţă la erbicid şi/sau polinucleotida particulară a invenţiei, care sunt descrise în prezenta. Prin urmare, folosirea termenului "de tip sălbatic" nu are ca scop să se înţeleagă că o plantă, ţesut de plantă, celulă de plantă, sau o altă celulă gazdă nu posedă ADN recombinant în genomul său, şi/sau nu posedă caracteristici rezistente la erbicid care diferă de cele descrise în prezenta.
Un alt obiect se referă la un procedeu de identificare a unei secvenţe de nucleotide care codifică o mut-PPO, care este rezistentă sau tolerantă la un erbicid ce inhibă PPO, procedeul cuprinzând:
a) generarea unei bănci de acizi nucleici care codifică mut-PPO,
b) screening-ul unei populaţii de acizi nucleici rezultaţi care codifică mut-PPO prin exprimarea fiecăruia dintre acizii nucleici menţionaţi într-o celulă sau plantă şi tratarea celulei sau plantei respective cu un erbicid ce inhibă PPO,
c) compararea nivelurilor de toleranţă la erbicidul care inhibă PPO oferite de populaţia menţionată de acizi nucleici care codifică mut-PPO cu nivelul de toleranţă la erbicidul care inhibă PPO oferit de un acid nucleic de control care codifică PPO,
d) selectarea, cel puţin, unui acid nucleic ce codifică mut-PPO, care oferă un nivel de toleranţă mult mai mare la erbicidul ce inhibă PPO în comparaţie cu cel oferit de acidul nucleic de control ce codifică PPO.
Într-o variantă de executare preferenţială, acidul nucleic ce codifică mut-PPO selectat în etapa d) oferă cel puţin o rezistenţă sau toleranţă dublă a unei celule sau plante la un erbicid ce inhibă PPO în comparaţie cu cea oferită de acidul nucleic de control ce codifică PPO.
Într-o altă variantă preferenţială, acidul nucleic care codifică mut-PPO selectat în etapa d) oferă cel puţin o rezistenţă sau toleranţă de 2 ori, cel puţin de 5 ori, cel puţin de 10 ori, cel puţin de 20 ori, cel puţin de 50 ori, cel puţin de 100 ori, cel puţin de 500 ori a unei celule sau plante la un erbicid care inhibă PPO în comparaţie cu cea oferită de acidul nucleic de control care codifică PPO.
Rezistenţa sau toleranţa poate fi determinată prin generarea unei plante transgenice sau celule gazdă, preferabil unei celule de plantă, care cuprinde o secvenţă de acid nucleic din banca din etapa a) şi compararea plantei transgenice respective cu o plantă sau celulă gazdă de control, preferabil o celulă de plantă.
Un alt obiect se referă la un procedeu de identificare a unei plante sau alge care conţine un acid nucleic ce cuprinde o secvenţă de nucleotide care codifică o PPO de tip sălbatic sau mut-PPO, care este rezistentă sau tolerantă la un erbicid ce inhibă PPO, procedeul cuprinzând:
a) identificarea unei cantităţi eficiente de erbicid care inhibă PPO într-o cultură de celule de plantă sau alge verzi care duce la moartea celulelor respective.
b) tratarea celulelor de plantă sau algelor verzi menţionate cu un agent mutagen,
c) tratarea populaţiei de celule mutagene menţionate cu o cantitate eficientă de erbicid care inhibă PPO, identificate în etapa a),
d) selectarea a, cel puţin, unei celule supravieţuitoare acestor condiţii de testare,
e) amplificarea prin PCR şi secvenţierea genelor PPO din celulele selectate în etapa d) şi, respectiv, compararea acestor secvenţe cu secvenţele genelor PPO de tip sălbatic.
Într-o variantă de executare preferenţială, agentul mutagen respectiv este etilmetansulfonat (EMS).
Numeroase metode bine cunoscute de specialiştii în domeniu sunt disponibile pentru obţinerea acizilor nucleici adecvaţi pentru identificarea unei secvenţe de nucleotide care codifică o mut-PPO dintr-o varietate de diferite organisme potenţiale surse, inclusiv microbi, plante, fungi, alge, culturi mixte etc., precum şi surse de mediu ale ADN-ului, cum ar fi solul. Aceste metode includ, printre altele, prepararea ADNc sau bazelor de ADN genomic, folosirea amorselor de oligonucleotide degenerate adecvat, folosirea sondelor pe bază de secvenţe cunoscute sau teste de complementare (de exemplu, pentru creşterea pe tirozină), precum şi folosirea mutagenezei şi amestecarea în scopul de a oferi secvenţe care codifică mut-PPO recombinat sau amestecat.
Acizii nucleici care cuprind secvenţe ce codifică PPO candidat şi de control pot fi exprimate în drojdie, într-o tulpină gazdă bacteriană, într-o algă sau într-o plantă mai înaltă, cum ar fi tutunul sau Arabidopsis şi nivelurile relative ale toleranţei inerente a secvenţelor care codifică PPO selectate conform unui fenotip indicator vizibil al tulpinei sau plantei transformate în prezenţa a diferitor concentraţii ale erbicidului selectat care inhibă PPO. Răspunsurile dozei şi devierile relative în răspunsurile dozei asociate cu aceste fenotipuri indicatoare (formarea culorii maro, inhibarea creşterii, efectul erbicid etc.) sunt exprimate în mod convenabil, de exemplu, în valorile GR50 (concentraţia pentru reducerea de 50% a creşterii) sau MIC (concentraţia minimă de inhibare), unde creşterile valorilor corespund creşterilor toleranţei inerente a PPO exprimate. De exemplu, într-un sistem de analiză relativ rapidă bazată pe transformarea unei bacterii cum ar fi E. coli, fiecare secvenţă care codifică mut-PPO poate fi exprimată, de exemplu, ca o secvenţă de ADN sub controlul de expresie a unui promotor controlabil cum ar fi promotorul lacZ şi ţinând cont, de exemplu prin utilizarea ADN-ului sintetic, de astfel de aspecte cum ar fi utilizarea codonului pentru a obţine un nivel de expresie cât mai comparabil posibil de diverse secvenţe PPO. Astfel de tulpini ce exprimă acizi nucleici care cuprind secvenţe de PPO candidate alternative pot fi plasate pe diverse concentraţii de erbicid selectat care inhibă PPO, opţional, pe un mediu suplimentat de tirozină şi nivelurile relative ale toleranţei inerente a enzimelor PPO exprimate estimate pe baza nivelului şi MIC pentru inhibarea formării pigmentului maro, ocronotic.
Într-o altă variantă de executare, acizii nucleici candidaţi sunt transformaţi în materialul de plantă pentru a genera o plantă transgenică, regenerată în plante fertile morfologic normale care sunt apoi măsurate cu privire la toleranţa diferenţială faţă de erbicidele care inhibă PPO selectate. Numeroase metode adecvate pentru transformare folosind markeri de selecţie adecvaţi, cum ar fi kanamicina, vectori binari cum ar fi din Agrobacterium şi regenerarea plantelor cum ar fi, de exemplu, din discuri de frunze de tutun sunt bine cunoscute în domeniu. Opţional, o populaţie de control a plantelor este, de asemenea, transformată cu un acid nucleic care exprimă PPO de control. Alternativ, o plantă dicotiledonată netransformată, cum ar fi Arabidopsis sau tutunul pot fi utilizate în calitate de control, deoarece aceasta, în orice caz, exprimă propria sa PPO endogenă. Media, şi distribuirea, nivelurilor de toleranţă la erbicide a unei serii de evenimente de transformare a plantelor primare sau descendenţilor lor faţă de erbicidele care inhibă PPO descrise mai sus sunt evaluate în mod obişnuit pe baza daunelor cauzate plantelor, simptomele de înălbire meristematică etc., la concentraţii diferite ale erbicidelor. Aceste date pot fi exprimate, de exemplu, în valorile GR50 obţinute din curbele doză/răspuns având "doza" reprezentată pe axa x şi "procentul de distrugere", "efectul erbicid", "numerele plantelor verzi emergente" etc. reprezentate pe axa y, unde valorile sporite GR50 corespund nivelurilor sporite de toleranţă inerentă a PPO exprimată. Erbicidele pot fi aplicate în mod adecvat înainte sau după apariţie.
Un alt obiect se referă la un acid nucleic izolat care codifică o mut-PPO, unde acidul nucleic poate fi identificat printr-un procedeu definit mai sus.
Într-o altă variantă de executare, invenţia se referă la o celulă de plantă transformată de un acid nucleic al PPO de tip sălbatic sau mut-PPO sau o celulă de plantă care a fost transformată pentru a obţine o plantă care exprimă un acid nucleic al PPO de tip sălbatic sau mut-PPO, în care expesia acidului nucleic în celula de plantă duce la sporirea rezistenţei sau toleranţei la un erbicid care inhibă PPO, comparativ cu un soi de tip sălbatic al celulei de plantă.
Termenul "expresie/exprimare" sau "expresia genelor" înseamnă transcripţia unei gene specifice sau unor gene specifice sau structuri genetice specifice. Termenul "expresia" sau "expresia genelor" înseamnă, în special, transcripţia unei gene sau unor gene sau structuri genetice în ARN structural (ARNr, ARNt) sau ARNm cu sau fără translaţia ulterioară a acestuia din urmă într-o proteină. Procedeul include transcripţia ADN-ului şi prelucrarea produsului ARNm rezultat.
Pentru a obţine efectul dorit, şi anume plantele care sunt tolerante sau rezistente la erbicidul care inhibă PPO al prezentei invenţii, se va înţelege că, cel puţin, un acid nucleic este "supra-exprimat" prin metodele şi mijloacele cunoscute unui specialist în domeniu.
Prin termenul "expresie sporită" sau "supraexpresie" după cum este utilizat în prezenta se înţelege orice formă de expresie, care este suplimentară faţă de nivelul iniţial de expresie de tip sălbatic. Metode pentru sporirea expresiei genelor sau produselor de gene sunt bine documentate în domeniu şi includ, de exemplu, supraexpresia condusă de promotori corespunzători, utilizarea potenţiatorilor de transcripţie sau potenţiatorilor de translaţie. Acizi nucleici izolaţi care servesc în calitate de elemente promotoare sau potenţiatoare pot fi introduse într-o poziţie corespunzătoare (de obicei în sens ascendent) a unei forme neheterologe a unei polinucleotide, astfel încât să supraregleze expresia unui acid nucleic care codifică polipeptida relevantă. De exemplu, promotorii endogeni pot fi modificaţi in vivo prin mutaţie, deleţie şi/sau substituţie (a se vedea, Kmiec, SUA 5565350; Zarling et al., WO9322443), sau promotori izolaţi pot fi introduşi într-o celulă de plantă în orientarea corectă şi la o distanţă de la o genă a prezentei invenţii, astfel încât să controleze expresia genei.
Dacă se doreşte expresia polipeptidelor, este, în general, dezirabil includerea unei regiuni de poliadenilare la capătul 3' al unei regiuni de codificare a polinucleotidelor. Regiunea de poliadenilare poate fi obţinută din gena naturală, dintr-o varietate de alte gene de plantă, sau din T-ADN. Secvenţa la capătul 3' ce trebuie adăugată poate fi obţinută, de exemplu, din genele de nopalină-sintaza sau octopină-sintaza gene, sau alternativ de la o altă genă de plantă, sau mai puţin preferabil de la orice altă genă eucariotă.
O secvenţă intron poate fi, de asemenea, adăugată la regiunea 5' netranslată (UTR) sau secvenţa de codificare a secvenţei de codificare parţială pentru a spori cantitatea mesajului matur care se acumulează în citosol. Includerea unui intron, care poate fi îmbinat, în unitatea de transcripţie atât în structurile plantelor, cât şi ale animalelor s-a dovedit că sporeşte expresia genelor atât la nivelul ARNm, cât şi la cel proteic până la 1000 ori (Buchman and Berg (1988) Mol. Cell biol. 8: 4395-4405; Callis et al. (1987) Genes Dev 1:1183-1200). O astfel de sporire a intronilor de expresie a genei este de obicei cea mai mare atunci când este plasată în apropierea capătului 5' a unităţii de transcripţie. Utilizarea intronilor de porumb Adh1-S intronul 1, 2, şi 6, intronul Bronze-1 este cunoscută în domeniu. Informaţii generale sunt prezentate în: The Maize Handbook, Chapter 116, Freeling and Walbot, Eds., Springer, N.Y. (1994)
Termenul "introducere" sau "transformare", aşa cum se menţionează în prezenta cuprinde transferul unei polinucleotide exogene într-o celulă gazdă, indiferent de metoda utilizată pentru transfer. Ţesutul de plantă capabil de propagare clonală ulterioară, fie prin organogeneză sau embriogeneză, poate fi transformat cu o structură genetică conform prezentei invenţii şi o plantă întreagă regenerată din acestea. Ţesutul selectat va varia în funcţie de sistemele de propagare clonală disponibile, şi cele mai potrivite, pentru specia respectivă care este supusă transformării. Exemple de ţesuturi ţintă includ discuri ale frunzei, polen, embrioni, cotiledoane, hipocotile, megagametofite, ţesut de calus, ţesut meristematic existent (de ex., meristem apical, muguri axilari şi meristeme radiculare) şi ţesut meristem indus (de ex., meristem de cotiledoane şi meristem de hipocotile). Polinucleotida poate fi introdusă tranzitoriu sau stabil într-o celulă gazdă şi poate fi menţinută neintegrată, de exemplu, ca o plasmidă. Alternativ, ea poate fi integrată în genomul gazdă. Celula plantei transformată rezultată poate fi apoi utilizată pentru a regenera o plantă transformată într-o manieră cunoscută specialiştilor în domeniu.
Transferul genelor străine în genomul unei plante este numit transformare. Transformarea speciei de plantă este astăzi o tehnică de rutină. În mod avantajos, oricare din câteva metode de transformare poate fi utilizată pentru a introduce gena relevantă într-o celulă ancestrală adecvată. Metodele descrise pentru transformarea şi regenerarea plantelor din ţesuturi de plante sau celule de plante pot fi utilizate pentru transformarea tranzitorie sau stabilă. Metodele de transformare includ utilizarea lipozomilor, electroporării, substanţelor chimice care sporesc absorbţia ADN-ului liber, injectarea ADN-ului direct în plantă, bombardamentul cu particule, transformarea folosind virusuri sau polen şi microproiectare. Metodele pot fi selectate dintre metoda calciu/polietilenglicol pentru protoplaşti (Krens, F.A. et al., (1982) Nature 296, 72-74; Negrutiu I et al. (1987) Plant Mol Biol 8: 363-373); electroporarea protoplaştilor (Shillito R.D. et al. (1985) Bio/Technol 3, 1099-1102); microinjectarea în materialul de plante (Crossway A et al., (1986) Mol. Gen Genet 202: 179-185); bombardamentul cu particule acoperite cu ADN sau ARN (Klein TM et al., (1987) Nature 327: 70) infecţia cu viruşi (non-integrativi) şi altele. Plantele transgenice, inclusiv plantele de cultură transgenice, sunt obţinute, de preferinţă, prin transformarea mediată de Agrobacterium. O metodă de transformare avantajoasă este transformarea în câmp. În acest scop, este posibil, de exemplu, de a permite agrobacteriilor să acţioneze pe seminţele de plante sau să inoculeze meristemul plantei cu agrobacterii. S-a dovedit a fi deosebit de eficient în conformitate cu invenţia de a permite o suspensie de agrobacterii transformate să acţioneze pe planta intactă sau cel puţin pe primordii de flori. Planta este crescută ulterior până la obţinerea seminţelor plantei tratate (Clough and Bent, Plant J. (1998) 16, 735-743). Metode pentru transformarea mediată de Agrobacterium a orezului includ metode bine cunoscute pentru transformarea orezului, cum ar fi cele descrise în oricare dintre următoarele: cererea de brevet european EP 1198985 A1, Aldemita and Hodges (Planta 199: 612-617, 1996); Chan et al. (Plant Mol Biol 22 (3): 491-506, 1993), Hiei et al. (Plant J 6 (2): 271-282, 1994), descrierile căreia sunt incluse prin referinţă în prezenta ca şi cum ar fi expuse în întregime. În cazul transformării porumbului, metoda preferată este aşa cum a fost descrisă fie în Ishida et al. (Nat. Biotechnol 14(6): 745-50, 1996) sau Frame et al. (Plant Physiol 129(1): 13-22, 2002), descrierile căreia sunt incluse prin referinţă în prezenta ca şi cum ar fi expuse în întregime. Metodele sus-menţionate sunt descrise, de asemenea, cu titlu de exemplificare în B. Jenes et al., Techniques for Gene Transfer (Tehici de transfer al genelor), în: Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung and R. Wu, Academic Press (1993) 128-143 şi în Potrykus Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42 (1991) 205-225). Acizii nucleici sau constructul care urmează să fie exprimat este, de preferinţă, clonat într-un vector, care este potrivit pentru transformarea Agrobacterium tumefaciens, de exemplu pBIN19 (Bevan et al., Nucl. Acids Res. 12 (1984) 8711). Agrobacteriile transformate de un astfel de vector pot fi apoi utilizate în modul cunoscut pentru transformarea plantelor, cum ar fi plantele folosite în calitate de model, ca Arabidopsis (Arabidopsis thaliana în domeniul de aplicare al prezentei invenţii nu este considerată o cultură de plante), sau plantele de cultură cum ar fi, cu titlu de exemplificare, plantele de tutun, de exemplu, prin imersarea frunzelor zdrobite sau mărunţite într-o soluţie agrobacteriană şi apoi cultivarea acestora pe medii adecvate. Transformarea plantelor cu ajutorul Agrobacterium tumefaciens este descrisă, de exemplu, de Höfgen şi Willmitzer în Nucl. Acid Res. (1988) 16, 9877 sau este cunoscută, printre altele, din F.F. White, Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; în Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S.D. Kung and R. Wu, Academic Press, 1993, pp. 15-38.
Pe lângă transformarea celulelor somatice, care apoi trebuie să fie regenerate în plante intacte, este posibil, de asemenea, de a transforma celulele meristemelor de plante şi, în special, celule care se dezvoltă în gameţi. În acest caz, gameţii transformaţi urmează dezvoltarea naturală a plantelor, dând naştere plantelor transgenice. Astfel, de exemplu, seminţele de Arabidopsis sunt tratate cu agrobacterii şi seminţele sunt obţinute din plantele în dezvoltare, din care o anumită parte este transformată şi, astfel sunt transgenice [Feldman, KA si Marks MD (1987). Mol Gen Genet 208:274-289; Feldmann K (1992). In: C Koncz, N-H Chua and J Shell, eds, Methods in Arabidopsis Research. Word Scientific, Singapore, pp. 274-289]. Metodele alternative se bazează pe eliminarea repetată a influorescenţelor şi incubarea porţiunii de excizie în centrul rozetei cu agrobacterii transformate, prin care seminţele transformate pot fi, de asemenea, obţinute mai târziu (Chang (1994). Plant J. 5: 551-558; Katavic (1994). Mol Gen Genet, 245: 363-370). Cu toate acestea, o metodă deosebit de eficientă este metoda de infiltrare în vid cu modificările sale cum ar fi metoda "floral dip". În cazul infiltrării în vid a Arabidopsis, plantele intacte sub presiune redusă sunt tratate cu o suspensie agrobacteriană [Bechthold, N (1993). C R Acad Sci Paris Life Sci, 316: 1194-1199], în timp ce în cazul metodei "floral dip", ţesutul floral în curs de dezvoltare este incubat pe o perioadă scurtă de timp cu o suspensie agrobacteriană tratată cu surfactant [Clough, SJ and Bent AF (1998) The Plant J. 16, 735-743]. O anumită proporţie de seminţe transgenice sunt recoltate în ambele cazuri, şi aceste seminţe pot fi deosebite de seminţele non-transgenice prin cultivarea în condiţiile selective descrise mai sus. În plus, transformarea stabilă a plastidelor prezintă avantaje deoarece plastidele sunt moştenite pe linie maternă în majoritatea culturilor, reducând sau eliminând riscul de curgere transgenă prin polen. Transformarea genomului cloroplastului este realizată, în general, printr-un procedeu care a fost expus schematic în Klaus et al., 2004 [Nature Biotechnology 22 (2), 225-229]. Pe scurt, secvenţele care trebuie transformate sunt clonate împreună cu o genă marker selectată între secvenţele de flancare omoloage cu genomul cloroplastului. Aceste secvenţe de flancare omoloage sunt direcţionate integrării specifice site-ului în plastom. Transformarea plastidă a fost descrisă pentru mai multe specii de plante diferite şi o prezentare generală este oferită în Bock (2001) Transgenic plastids in basic research and plant biotechnology. J Mol Biol. 2001 Sep 21; 312 (3):425-38 or Maliga, P (2003) Progress towards commercialization of plastid transformation technology. Trends Biotechnol. 21, 20-28. Recent s-a raportat un alt progres biotehnologic sub formă de transformanţi de plastide fără markeri, care pot fi produşi de o genă marker co-integrată tranzitoriu (Klaus et al., 2004, Nature Biotechnology 22(2), 225-229). Celulele de plantă modificate genetic pot fi regenerate prin toate metodele care sunt cunoscute lucrătorului calificat. Metode adecvate pot fi găsite în publicaţiile sus-menţionate scrise de SD Kung and R. Wu, Potrykus or Höfgen and Willmitzer.
În general, după transformare, celule de plante sau grupările de celule sunt selectate în vederea prezenţei unuia sau mai multor markeri care sunt codificaţi de genele ce pot exprimate în plante co-transferate cu gena de interes, după care materialul transformat este regenerat în toată planta. Pentru a selecta plantele transformate, materialul de plantă obţinut în urma transformării este, de regulă, supus condiţiilor selective, astfel încât plantele transformate pot fi deosebite de cele netransformate. De exemplu, seminţele obţinute în modul descris mai sus pot fi plantate şi, după o perioadă de creştere iniţială, supuse unei selecţii adecvate prin pulverizare. O altă posibilitate constă în creşterea seminţelor, dacă este cazul după sterilizare, pe plăci cu agar, folosind un agent de selecţie adecvat, astfel încât numai seminţele transformate pot creşte în plante. Alternativ, plantele transformate sunt sortate pentru prezenţa unui marker de selecţie, cum ar fi cei descrişi mai sus.
După transferul şi regenerarea ADN-ului, plantele transformate prezumtiv pot fi, de asemenea, evaluate, de exemplu, folosind analiza Southern, pentru prezenţa genei de interes, numărul de copii şi/sau organizarea genomică. Alternativ sau suplimentar, nivelurile de expresie ale ADN-ului nou introdus pot fi monitorizate folosind analizele Northern şi/sau Western, ambele tehnici fiind bine cunoscute persoanelor cu pregătire medie în domeniu.
Plantele transformate obţinute pot fi cultivate printr-o varietate de mijloace, cum ar fi înmulţirea clonală sau tehnicile clasice de reproducere. De exemplu, o plantă transformată de primă generaţie (sau T1) poate fi auto-polenizată şi transformanţii homozigoţi de a doua generaţie (sau T2) selectaţi, iar plantele T2 pot fi apoi cultivate prin tehnici clasice de reproducere. Organismele transformate obţinute pot lua forme variate. De exemplu, ele pot fi himere ale celulelor transformate şi netransformate; transformanţi clonali (de ex., toate celulele transformate să conţină caseta de expresie); grefe de ţesuturi transformate şi netransformate (de ex., în plante, un portaltoi transformat altoit pe un altoi netransformat).
De preferinţă, acidul nucleic al PPO de tip sălbatic sau mut-PPO cuprinde o secvenţă de polinucleotide selectată din grupa ce constă dintr-o: a) polinucleotidă prezentată în SECV ID nr.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, sau 45, sau o variantă sau un derivat al acesteia; b) polinucleotidă care codifică o polipeptidă prezentată în SECV ID nr.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, sau 46, sau o variantă sau un derivat al acesteia; c) polinucleotidă care cuprinde cel puţin 60 de nucleotide consecutive ale oricăreia dintre a) sau b); şi d) o polinucleotidă complementară polinucleotidei oricăreia dintre a) - c).
De preferinţă, expresia acidului nucleic în plantă duce la creşterea rezistenţei plantei la erbicidul care inhibă PPO comparativ cu un soi de tip sălbatic al plantei.
Într-o altă variantă de executare, invenţia se referă la o plantă, preferabil o plantă transgenică, care conţine o celulă de plantă conform prezentei invenţii, în care expresia acidului nucleic în plantă duce la creşterea rezistenţei plantei la erbicidul care inhibă PPO comparativ cu un soi de tip sălbatic al plantei.
Plantele descrise în prezenta pot fi plante de cultură transgenice sau plante non-transgenice.
Pentru scopurile invenţiei, "transgenic", "transgenă" sau "recombinant" înseamnă în ceea ce priveşte, de exemplu, unei secvenţe de acizi nucleici, o casetă de expresie, o structură de gene sau un vector care cuprinde secvenţa de acizi nucleici sau un organism transformat cu secvenţe de acizi nucleici, casete de expresie sau vectori conform invenţiei, toate aceste structuri realizate prin metode recombinante în care:
(a) secvenţele de acizi nucleici care codifică proteinele utile în procedeele invenţiei, sau
(b) secvenţa(ele) de control genetic, care este legată(e) în mod funcţional cu secvenţa de acizi nucleici conform invenţiei, de exemplu un promotor, sau
(c) a) şi b),
nu se află în mediul lor genetic natural sau au fost modificate prin metode recombinante, fiind posibil ca modificarea să ia forma, de exemplu, unei substituţii, adiţii, deleţii, inversii sau inserţii a unuia sau mai multor reziduuri de nucleotide. Prin mediul genetic natural se înţelege locusul genomic sau cromozomial natural în planta de origine sau prezenţa într-o bază genomică. În cazul unei baze genomice, mediul genetic natural al secvenţei de acizi nucleici este preferabil menţinut, cel puţin în parte. Mediul protejează secvenţa de acizi nucleici, cel puţin, pe o parte şi are o lungime a secvenţei de cel puţin 50 pb, preferabil cel puţin 500 pb, îndeosebi preferabil cel puţin 1000 pb, cel mai preferabil cel puţin 5000 pb. O casetă de expresie naturală - de exemplu, combinaţia naturală a promotorului natural al secvenţelor de acizi nucleici cu secvenţa corespunzătoare de acid nucleic care codifică o polipeptidă utilă în metodele din prezenta invenţie, aşa cum este definit mai sus - devine o casetă de expresie transgenică când aceasta casetă de expresie este modificată prin metode nenaturale, sintetice ("artificiale"), cum ar fi, de exemplu, tratamentul mutagen. Metode adecvate sunt descrise, de exemplu în US 5,565,350 sau WO 00/15815.
Prin plantă transgenică pentru scopurile invenţiei se înţelege astfel, ca şi mai sus, că acizii nucleici utilizaţi în metoda invenţiei nu sunt la locusul lor natural în genomul plantei respective, fiind posibil ca acizii nucleici să fie exprimaţi în mod omolog sau heterolog. Cu toate acestea, după cum s-a menţionat, transgenic înseamnă, de asemenea, că, în timp ce acizii nucleici conform invenţiei sau utilizaţi în metoda invenţiei sunt în poziţia lor naturală în genomul unei plante, secvenţa a fost modificată în ceea ce priveşte secvenţa naturală, şi/sau că secvenţele reglatoare ale secvenţelor naturale au fost modificate. Transgenic este preferabil înţeles ca semnificând expresia acizilor nucleici conform invenţiei la un locus nenatural în genom, adică are loc expresia omoloagă sau, de preferinţă, heteroloagă a acizilor nucleici. Plante transgenice preferate sunt menţionate în prezenta. În plus, termenul "transgenic" se referă la orice plantă, celulă de plantă, calus, ţesut de plantă, sau parte de plantă, care conţine toate sau o parte de cel puţin o polinucleotidă recombinantă. În majoritatea cazurilor, toată sau o parte a polinucleotidei recombinantă este integrată stabil într-un cromozom sau un element extra-cromozomial stabil, astfel încât este transmis generaţiilor succesive. Pentru scopurile invenţiei, termenul "polinucleotidă recombinantă" se referă la o polinucleotidă care a fost modificată, rearanjată, sau modificate prin ingineria genetică. Exemple includ orice polinucleotidă clonată, sau polinucleotide, care sunt legate sau unite cu secvenţele heterologe. Termenul "recombinant" nu se referă la modificări de polinucleotide care rezultă din evenimentele naturale, cum ar fi mutaţiile spontane, sau din mutageneza nespontană urmată de reproducerea selectivă.
Plantele care conţin mutaţii apărute ca urmare a mutagenezei nespontane şi reproducerii selective sunt denumite în prezenta ca plante netransgenice şi sunt incluse în prezenta invenţie. În variantele de executare în care planta este transgenică şi cuprinde numeroşi acizi nucleici ai mut-PPO, acizii nucleici pot fi obţinuţi din diferite genomuri sau din acelaşi genom. Alternativ, în variantele de executare în care planta nu este transgenică şi cuprinde numeroşi acizi nucleici ale mut-PPO, acizii nucleici sunt amplasaţi pe diverse genomuri sau pe acelaşi genom.
În anumite variante de executare, prezenta invenţie include plante rezistente la erbidicide care sunt produse prin reproducere mutaţională. Astfel de plante cuprind o polinucleotidă care codifică o mut-PPO şi sunt tolerante la una sau mai multe erbicide care inhibă PPO. Astfel de metode pot implica, de exemplu, expunerea plantelor sau seminţelor la un mutagen, în special un mutagen chimic, cum ar fi, de exemplu, etil metansulfonat (EMS) şi selectarea plantelor care au o toleranţă sporită la, cel puţin, unul sau mai multe erbicide care inhibă PPO.
Cu toate acestea, prezenta invenţie nu se limitează la plantele tolerante la erbicide, care sunt produse printr-o metodă de mutageneză ce impică mutagenul chimic EMS. Orice metodă de mutageneză cunoscută în domeniu poate fi utilizată pentru a produce plantele rezistente la erbicide din prezenta invenţie. Astfel de metode de mutageneză pot implica, de exemplu, utilizarea unuia sau mai multora dintre următorii agenţi mutageni: radiaţia, cum ar fi razele X, razele Gamma (de ex., cobalt 60 sau cesiu 137), neutroni, (de ex., produs de fisiune nucleară cu uraniu 235 într-un reactor atomic), radiaţia beta (de ex., emisă din radioizotopi, cum ar fi fosforul 32 sau carbonul 14), şi radiaţia ultravioletă (preferabil între 2500 şi 2900 nm), şi mutageni chimici, cum ar fi analogi de bază (de ex., 5-bromo-uracil), compuşi înrudiţi (de ex., cafeină 8-etoxi), antibiotice (de ex., streptonigrin), agenţi de alchilare (de ex., iperite cu sulf, iperite cu azot, epoxizi, etilenamine, sulfaţi, sulfonaţi, sulfone, lactone), azidă, hidroxilamină, acid de azot, sau acridine. Plante rezistente la erbicide pot fi produse, de asemenea, prin aplicarea metodelor de cultivare a ţesutului pentru a selecta celulele de plante care cuprind mutaţii rezistente la erbicide şi apoi regenerarea plantelor rezistente la erbicide din acestea. A se vedea, de exemplu, Brevetul SUA nr. 5,773,702 şi 5,859,348, ambele fiind incluse în prezenta în totalitate prin referinţă. Mai multe detalii privind reproducerea mutaţională pot fi găsite în "Principals of Cultivar Development" Fehr, 1993 Macmillan Publishing Company, descrierea căreia este inclusă în prezenta prin referinţă.
Pe lângă definiţia de mai sus, termenul "plantă" cuprinde plantele de cultură la orice etapă de maturitate sau de dezvoltare, precum şi orice ţesuturi sau organe (părţi de plante) prelevate sau obţinute din orice astfel de plantă, dacă contextul nu indică altfel în mod expres. Părţile de plantă includ, dar nu se limitează la, tulpini, rădăcini, flori, ovule, stamine, frunze, embrioni, regiuni meristematice, ţesutul calus, culturi de antere, gametofiţi, sporofiţi, polen, microspori, protoplaste, şi altele.
Planta din prezenta invenţie cuprinde, cel puţin, un acid nucleic al mut-PPO sau acid nucleic al PPO supra-exprimat de tip sălbatic, şi a sporit toleranţa la un erbicid care inhibă PPO în comparaţie cu un soi de tip sălbatic al plantei. Este posibil ca plantele din prezenta invenţie să aibă numeroşi acizi nucelici cu PPO de tip sălbatic sau mut-PPO din diferite genomuri, deoarece aceste plantepotconţine mai mult de un genom. De exemplu, o plantă conţine două genomuri, denumite, de obicei, genomurile A şi B. Dat fiind că PPO este o enzimă metabolică necesară, se presupune că fiecare genom are cel puţin o genă care codifică enzima PPO (adică cel puţin o genă PPO). Aşa cum se foloseşte în prezenta, termenul "locusul genei PPO" se referă la poziţia unei gene PPO pe un genom, iar termenii "gena PPO" şi "acidul nucleic al PPO" se referă la un acid nucleic care codifică enzima PPO. Acidul nucleic al PPO pe fiecare genom diferă după secvenţa de nucleotide de un acid nucleic al PPO pe un alt genom. Un specialist în domeniu poate determina genomul de origine a fiecărui acid nucleic al PPO prin încrucişarea genetică şi/sau prin metode de secvenţiere sau metode de digestie a exonucleazelor cunoscute de specialiştii în domeniu.
Prezenta invenţie include plante care cuprind una, două, trei, sau mai multe alele ale mut-PPO, în care planta are toleranţă sporită la un erbicid care inhibă PPO în comparaţie cu un soi de tip sălbatic al plantei. Alelele mut-PPO pot cuprinde o secvenţă de nucleotide selectată din grupa ce constă dintr-o polinucleotidă definită în SECV ID nr.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, sau 45, sau o variantă sau un derivat al acestora, o polinucleotidă care codifică o polipeptidă definită în SECV ID nr.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, sau 46, sau o variantă sau un derivat, omolog, ortolog, paralog al acestora, o polinucleotidă care cuprinde cel puţin 60 de nucleotide consecutive ale oricăreia dintre polinucleotidele sus-menţionate; şi o polinucleotidă complementară la oricare dintre polinucleotidele sus-menţionate.
"Alelele" sau "variantele alelice" sunt forme alternative ale unei anumite gene, situată în aceeaşi poziţie cromozomială. Variantele alelice cuprind Polimorfisme Unice ale Nucleotidelor (SNP), precum şi Polimorfisme Mici de Inserţie/Deleţie (INDEL). Dimensiunea INDEL este de obicei mai mică de 100 pb. SNP şi INDEL formează cel mai mare set de variante de secvenţe în tulpinile polimorfe de origine naturală ale majorităţii organismelor.
Termenul "soi" se referă la o grupă de plante din cadrul unei specii definită printr-un set comun de caracteristici sau trăsături acceptate de către specialiştii în domeniu ca fiind suficient pentru a distinge un cultivar sau soi de un alt cultivar sau soi. Nici un termen nu implică faptul că toate plantele dintr-un anumit cultivar sau soi vor fi identice genetic la nivelul întregii gene sau la nivel molecular sau că orice plantă anumită va fi homozigotă la toţi loci. Un cultivar sau soi este considerat "specie pură" pentru o anumită trăsătură dacă, atunci când cultivarul sau soiul pur este auto-polenizat, toţi descendenţii conţin trăsătura. Termenii "linia de înmulţire" sau "linie" se referă la o grupă de plante din cadrul unui cultivar definită printr-un set comun de caracteristici sau trăsături acceptate de către specialiştii în domeniu ca fiind suficient pentru a distinge o linie de înmulţire sau linie de o altă linie de specie sau linie. Nici un termen nu implică faptul că toate plantele dintr-o anumită linie de înmulţire sau linie vor fi identice genetic la nivelul întregii gene sau la nivel molecular sau că orice plantă anumită va fi homozigotă la toţi loci. O linie de înmulţire sau linie este considerată "specie pură" pentru o anumită trăsătură dacă, atunci când linia de înmulţire pură sau linia de înmulţire este auto-polenizată, toţi descendenţii conţin trăsătura. În prezenta invenţie, trăsătura apare dintr-o mutaţie într-o genă PPO a plantei sau seminţei.
Plantele rezistente la erbicide ale invenţiei care cuprind polinucleotide care codifică polipeptidele mut-PPO îşi găsesc, de asemenea, utilizare în metode pentru sporirea rezistenţei la erbicide a unei plante prin reproducerea convenţională a plantelor, care implică reproducerea sexuată. Metodele cuprind încrucişarea unei prime plante care este o plantă rezistentă la erbicide a invenţiei cu o a doua plantă care poate sau poate să nu fie rezistentă la acelaşi erbicid sau erbicide ca şi prima plantă sau poate fi rezistentă la un erbicid sau erbicide diferite spre deosebire de prima plantă. A doua plantă poate fi orice plantă care este capabilă să producă plante descendente viabile (şi anume, seminţe), atunci când este încrusişată cu prima plantă. De obicei, dar nu în mod necesar, prima şi a doua plantă sunt din aceeaşi specie. Metodele pot implica în mod opţional selectarea plantelor descendente care cuprind polipeptidele mut-PPO ale primei plante şi caracteristicile de rezistenţă la erbicide ale celei de-a doua plantă. Plantele descendente produse prin metoda dată, conform prezentei invenţii, posedă rezistenţă sporită la un erbicid în comparaţie cu prima sau a doua plantă sau ambele. Atunci când prima şi a doua plantă sunt rezistente la diferite erbicide, plantele descendente vor avea caracteristicile combinate de toleranţă la erbicide ale primei şi a doua plantă. Metodele invenţiei pot implica în plus una sau mai multe generaţii de încrucişare inversă a plantelor descendente din prima încrucişare cu o plantă din aceeaşi linie sau genotip ca şi prima sau a doua plantă. Alternativ, plantele descendente din prima încrucişare sau orice încrucişare ulterioară pot fi încrucişate cu o a treia plantă care este dintr-o linie sau genotip diferit decât prima sau a doua plantă. Prezenta invenţie oferă, de asemenea, plante, organe de plante, ţesuturi de plante, celule de plante, seminţe, şi celule gazdă neumane, care sunt transformate cu, cel puţin, o moleculă de polinucleotidă, o casetă de expresie, sau vectorul de transformare a invenţiei. Astfel de plante, organe de plante, ţesuturi de plante, celule de plante, seminţe, şi celule gazdă neumane transformate au sporit toleranţa sau rezistenţa la cel puţin un erbicid, la niveluri de erbicid care distrug sau inhibă creşterea unei plante, unui ţesut de plantă, unei celule de plantă sau, respectiv, unei celule gazdă neumane netransformate. De preferinţă, plantele, ţesuturile de plante, celulele de plante şi seminţele transformate conform invenţiei sunt Arabidopsis thaliana şi plantele de cultură.
Se va înţelege că planta din prezenta invenţie poate cuprinde un acid nucleic al PPO de tip sălbatic pe lângă un acid nucleic al mut-PPO. Se are în vedere faptul că liniile tolerante la erbicide care inhibă PPO pot conţine o mutaţie doar într-o singură din mai multe izoenzime ale PPO. Prin urmare, prezenta invenţie include o plantă care cuprinde unul sau mai mulţi acizi nucleici ai mut-PPO pe lângă unul sau mai mulţi acizi nucleici ai PPO de tip salbatic.
Într-o altă variantă de executare, invenţia se referă la o sămânţă produsă de o plantă transgenică care cuprinde o celulă de plantă conform prezentei invenţii, în care sămânţa este o specie pură pentru rezistenţa sporită la un erbicid ce inhibă PPO, comparativ cu un soi de tip sălbatic al seminţei.
Într-o altă variantă de executare, invenţia se referă la un procedeu de producere a unei celule de plantă transgenice cu rezistenţă sporită la un erbicid ce inhibă PPO, comparativ cu un soi de tip sălbatic al celulei de plantă care cuprinde, transformarea celulei de plantă cu o casetă de expresie cuprinzând un acid nucleic al mut-PPO.
Într-o altă variantă de executare, invenţia se referă la un procedeu de producere a unei plante transgenice cuprinzând, (a) transformarea unei celule de plantă cu o casetă de expresie care cuprinde un acid nucleic al mut-PPO, şi (b) generarea unei plante cu rezistenţă sporită la erbicidul care inhibă PPO din celula de plantă.
Prin urmare, acizii nucleici ai mut-PPO ai invenţiei sunt furnizaţi în casete de expresie pentru expresia în planta relevantă. Caseta va include secvenţe de reglare legate funcţional de o secvenţă de acizi nucleici ai mut-PPO ai invenţiei. Termenul "element de reglare" folosit în prezenta se referă la o polinucleotidă care este capabilă să regleze transcripţia unei polinucleotide legate funcţional. Acesta include, dar nu se limitează la, promotori, potenţiatori, introni, 5' UTR, şi 3' UTR. Prin "legat în mod funcţional" se are în vedere o legătură funcţională între un promotor şi o a doua secvenţă, în care secvenţa promotorului iniţiază şi mediază transcripţia secvenţei de ADN corespunzătoare celei de a doua secvenţă. În general, legat în mod funcţional înseamnă că secvenţele de acizi nucleici legate sunt adiacente şi, dacă este necesar să lege două proteini care codifică regiunile, adiacente şi în acelaşi cadru de citire. Caseta poate conţine în plus cel puţin o genă suplimentară pentru a fi co-transformată în organism. Alternativ, gena(ele) suplimentară poate fi furnizată pe mai multe casete de expresie.
O astfel de casetă de expresie este prevăzută cu o multitudine de situsuri de restricţie pentru ca inserţia secvenţei de acizi nucleici ai mut-PPO să fie sub reglarea transcripţională a regiunilor de reglare. Caseta de expresie poate conţine în plus gene marker de selecţie.
Caseta de expresie din prezenta invenţie va include în direcţia 5'-3' a transcripţiei, o regiune de iniţiere transcripţională şi translaţională (adică, un promotor), o secvenţă de acizi nucleici ai mut-PPO din invenţiei şi o regiune de terminare transcripţională şi translaţională (de ex., regiunea de terminare) funcţională în plante. Promotorul poate fi nativ sau analog, sau străin sau heterolog, pentru planta gazdă şi/sau pentru secvenţa de acizi nucleici ai mut-PPO a invenţiei. În plus, promotorul poate fi secvenţa naturală sau, alternativ, o secvenţă sintetică. Dacă promotorul este "străin" sau "heterolog" pentru planta gazdă, se are în vedere că promotorul nu se găseşte în planta nativă în care este introdus promotorul. Dacă promotorul este "străin" sau "heterolog" pentru secvenţa de acizi nucleici ai mut-PPO din invenţie, se are în vedere că promotorul nu este promotorul nativ sau de origine naturală pentru secvenţa de acizi nucleici ai mut-PPO legată funcţional din invenţie. După cum se foloseşte în prezenta, o genă himerică cuprinde o secvenţă de codificare legată operaţional de o regiune de iniţiere a transcripţiei care este heterologă pentru secvenţa de codificare.
În timp ce poate fi preferabil de a exprima acizi nucleici ai mut-PPO din invenţie folosind promotori heterologi, pot fi utilizate secvenţe native ale promotorului. Astfel de structuri vor schimba nivelurile de expresie ale proteinei mut-PPO în plantă sau celula de plantă. Astfel, este modificat fenotipul plantei sau celulei de plantă.
Regiunea de terminaţie poate fi nativă cu regiunea de iniţiere a transcripţiei, poate fi nativă cu secvenţa relevantă a mut-PPO legată funcţional, poate fi nativă cu gazda plantă, sau poate fi obţinută dintr-o altă sursă (şi anume, străină sau heterologă promotorului, secvenţa relevantă de acizi nucleici ai mut-PPO, gazda plantă, sau orice combinaţie a acestora). Regiuni de terminaţie convenabile sunt disponibile din Ti-plasmida A. tumefaciens, cum ar fi regiunile de terminaţie octopină-sintază şi nopalină-sintază. A se vedea, de asemenea, Guerineau et al. (1991) MoI. Gen. Genet. 262: 141-144; Proudfoot (1991) Cell 64:671-674; Sanfacon et al. (1991) Genes Dev. 5: 141-149; Mogen et al. (1990) Plant Cell 2: 1261-1272; Munroe et al. (1990) Gene 91: 151-158; Ballas t al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:7891-7903; and Joshi et al. (1987) Nucleic Acid Res. 15:9627-9639. După caz, gena(le) poate fi optimizată în vederea unei expresii sporite în planta transformată. Adică, genele pot fi sintetizate folosind codoni preferaţi de plantă în scopul îmbunătăţirii expresiei. A se vedea, de exemplu, Campbell and Gowri (1990) Plant Physiol. 92: 1-11 unde sunt prezentate comentarii privind utilizarea codonilor preferaţi de plantă. În domeniu sunt disponibile metode pentru sintetizarea genelor preferate de plante. A se vedea, de exemplu, brevetul SUA nr. 5,380,831, şi 5,436,391, şi Murray et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17:477-498, incluse în prezenta prin referinţă.
Se cunoaşte că modificările suplimentare ale secvenţelor sporesc expresia genelor într-o celulă gazdă. Acestea includ eliminarea secvenţelor care codifică semnalele de poliadenilare false, semnalele site-ului de matisare exon-intron, repetările similare transpozonilor, şi alte astfel de secvenţe bine caracterizate, care pot fi dăunătoare pentru expresia genelor. Conţinutul G-C al secvenţei poate fi ajustat până la niveluri medii pentru o anumită gazdă de celulă, aşa cum este calculat prin referinţă la genele cunoscute exprimate în celula gazdă. Atunci când este posibil, secvenţa este modificată pentru a evita structurile ARNm secundare prezise în formă de U. Secvenţele de nucleotide pentru sporirea expresiei genelor pot fi utilizate şi în vectorii de expresie a plantelor. Aceştia includ intronii de porumb Adhl, gena intronl (Callis et al. Genes and Development 1: 1183-1200, 1987), şi secvenţele lider, (W- secvenţa) din virusul Mozaicului Tutunului (TMV), Virusul Pestriţ Clorotic al Porumbului şi Virusul Mozaicului Lucernei (Gallie et al. Nucleic Acid Res. 15:8693-8711, 1987 and Skuzeski et al. Plant MoI. Biol. 15:65-79, 1990). Primul intron din locusul de porumb încreţit- 1, s-a dovedit că sporeşte expresia genelor în structurile genelor himerice. U.S. Pat. Nr. 5424412 şi 5593874 descriu utilizarea intronilor specifici în structurile de expresie a genelor, şi Gallie et al. (Plant Physiol. 106:929-939, 1994) au arătat, de asemenea, că intronii sunt utili pentru reglarea expresiei genelor pe o bază specifică de ţesut. Pentru a spori sau optimiza şi mai mult expresia genelor mut-PPO, vectorii de expresie a plantelor din invenţie, pot conţine, de asemenea, secvenţe de ADN care conţin regiuni de ataşare a matricei (MARs). Celulele de plante transformate cu astfel de sisteme de expresie modificate, pot manifesta ulterior supraexpresia sau expresia constitutivă a unei secvenţe de nucleotide a invenţiei.
Casetele de expresie din prezenta invenţie pot conţine în plus secvenţe lider 5' în structura casetei de expresie. Astfel de secvenţe lider pot acţiona pentru a spori translaţia. Liderii de translaţie sunt cunoscuţi în domeniu şi includ: lideri picornavirus, de exemplu, liderul EMCV (regiunea encefalomiocarditei 5' necodificatoare) (Elroy-Stein et al. (1989) Proc. Natl. Acad. ScL USA 86:6126-6130); lideri potivirus, de exemplu, lider TEV (Tobacco Etch Virus - Virusul Etch al Tutunului) (Gallie et al. (1995) Gene 165(2):233-238), liderul MDMV (Maize Dwarf Mosaic Virus - Virusul Mozaicului la Porumb) (Virology 154:9-20), şi proteina de legare cu lanţ greu a imunoglobulinei umane (BiP) (Macejak et al. (1991) Nature 353:90-94); lider netranslat din proteina de acoperire ARNm a virusului mozaicului de lucernă (AMV ARN 4) (Jobling et al. (1987) Nature 325:622-625); virusul lider al mozaicului tutunului (TMV) (Gallie et al. (1989) in Molecular Biology of RNA, ed. Cech (Liss, New York), pp. 237-256); şi virusul lider clorotic pestriţ al porumbului (MCMV) (Lommel et al. (1991) Virology 81:382-385). A se vedea, de asemenea, Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968. Pot fi utilizate şi alte metode cunoscute care sporesc translaţia, de exemplu, introni şi altele.
La prepararea casetei de expresie, diferite fragmente de ADN pot fi manipulate, astfel încât să genereze secvenţe ADN în orientarea corectă şi, după caz, în cadrul de citire corect. În acest scop, pot fi utilizaţi adaptori sau linkeri pentru a uni fragmentele de ADN sau alte manipulări pot fi implicate pentru a genera situsuri de restricţie convenabile, eliminarea ADN-ului în exces, eliminarea situsurilor de restricţie, sau altele. În acest scop, pot fi incluse mutageneza in vitro, reparaţia amorselor, restricţia, recoacerea, resubstituţiile, de ex., tranziţiile şi versiunile trans.
Mai mulţi promotori pot fi utilizaţi în practica invenţiei. Promotorii pot fi selectaţi în funcţie de rezultatul dorit. Acizii nucleici pot fi combinaţi cu promotori constitutivi, preferaţi de ţesut, sau alţi promotori pentru expresia în plante. Astfel de promotori constitutivi includ, de exemplu, promotorul principal al promotorului Rsyn7 şi alţi promotori constitutivi descrişi în WO 99/43838 şi brevetul USA 6072050; promotorul principal CaMV 35S (Odell et al. (1985) Nature 313:810-812); actina de orez (McElroy et al. (1990) Plant Cell 2: 163-171); ubicuitina (Christensen et al. (1989) Plant MoI. Biol. 12:619-632 and Christensen et al. (1992) Plant MoI. Biol. 18:675-689); pEMU (Last et al. (1991) Theor. Appl. Genet. 81:581- 588); MAS (Velten et al. (1984) EMBO J. 3:2723-2730); promotorul ALS (brevetul SUA nr. 5659026), şi altele. Alţi promotori constitutivi includ, de exemplu, brevetul SUA nr. 5,608,149; 5,608,144; 5,604,121; 5,569,597; 5,466,785; 5,399,680; 5,268,463; 5,608,142; şi 6,177,611.
Promotori preferaţi de ţesut pot fi utilizaţi pentru a viza expresia sporită a mut-PPO într-un anumit ţesut de plantă. Astfel de promotori preferaţi de ţesut includ, dar nu se limitează la, promotori preferaţi de frunze, promotori preferaţi de rădăcină, promotori preferaţi de seminţe, şi promotori preferaţi de tulpină. Promotori preferaţi de ţesut includ Yamamoto et al. (1997) Plant J. 12(2):255-265; Kawamata et al. (1997) Plant Cell Physiol. 38(7):792-803; Hansen et al. (1997) MoI. Gen Genet. 254(3):337-343; Russell et al. (1997) Transgenic Res. 6(2): 157-168; Rinehart et al. (1996) Plant Physiol. 112(3): 1331-1341; Van Camp et al. (1996) Plant Physiol. 112; 2:525-535; Herr, R.J. et al., Bioorg. (1996) Plant Physiol. 112(2):513-524; Yamamoto et al. (1994) Plant Cell Physiol. 35(5):773-778; Lam (1994) Results Probl. Cell Differ. 20: 181- 196; Orozco et al. (1993) Plant MoI Biol. 23(6): 1129-1138; Matsuoka e/ [alpha]/. (1993) Proc Natl. Acad. Sci. USA 90(20):9586-9590; şi Guevara-Garcia et al. (1993) Plant J. 4(3):495-505. Astfel de promotori pot fi modificaţi, dacă e necesar, din cauza expresiei slabe. Într-o variantă de executare, acizii nucleici relevanţi sunt direcţionaţi spre cloroplast pentru expresie. În acest mod, în cazul în care acidul nucleic relevant nu este inserat direct în cloroplast, caseta de expresie va conţine în plus o secvenţă de direcţionare spre cloroplast care cuprinde o secvenţă de nucleotide ce codifică o peptidă tranzit a cloroplastului pentru a direcţiona produsul genei relevant spre cloroplaste. Astfel de peptide de tranzit sunt cunoscute în domeniu. În ce priveşte secvenţele de direcţionare spre cloroplast "legat funcţional " înseamnă că secvenţa de acizi nucleici care codifică o peptidă de tranzit (adică, secvenţa de direcţionare spre cloroplast) este legată de acidul nucleic al mut-PPO a invenţiei, astfel încât cele două secvenţe sunt adiacente şi în acelaşi cadru de citire. A se vedea, de exemplu, Von Heijne et al. (1991) Plant MoI. Biol. Rep. 9: 104-126; Clark et al. (1989) J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968; Romer et al. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421; and Shah et al. (1986) Science 233:478-481. În timp ce proteinele mut-PPO ale invenţiei includ o peptidă de tranzit a cloroplastelor native, orice peptidă de tranzit a cloroplastelor cunoscută în domeniu poate fi fuzionată la secvenţa de aminoacizi a unei proteine mature mut-PPO a invenţiei, prin legarea funcţională o secvenţei de direcţionare spre cloroplast spre capătul 5' al unei secvenţe de nucleotide care codifică o proteină matură mut-PPO a invenţiei. Secvenţele de direcţionare spre cloroplast sunt cunoscute în domeniu şi includ subunitatea mică a cloroplastului ribuloză-l,5-bifosfat carboxilază (Rubisco) (de Castro Silva Filho et al. (1996) Plant MoI. Biol. 30:769-780; Schnell et al. (1991) J. Biol. Chem. 266(5):3335-3342); 5 -(enolpiruvil)sichimat-3-fosfat sintază(EPSPS) (Archer et al. (1990) J. Bioenerg. Biomemb. 22(6):789-810); triptofan sintază (Zhao et al. (1995) J. Biol. Chem. 270(11):6081-6087); plastocianin(Lawrence et al. (1997) J. Biol. Chem. 272(33):20357-20363); corismat sintază (Schmidt et al. (1993) J. Biol. Chem. 268(36):27447-27457); şi proteina ce leagă clorofila a/b care absoarbe lumina (LHBP) (Lamppa et al. (1988) J. Biol. Chem. 263: 14996-14999). A se vedea, de asemenea, Von Heijne et al. (1991) Plant MoI. Biol. Rep. 9: 104- 126; Clark et al. (1989) J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84:965-968; Romer et al. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196: 1414-1421; şi Shah et al. (1986) Science 233:478-481.
În domeniu sunt cunoscute metode de transformare a cloroplastelor. A se vedea, de exemplu, Svab et al. (1990) Proc. Natl. Acad. ScL USA 87:8526-8530; Svab and Maliga (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:913-917; Svab and Maliga (1993) EMBO J. 12:601-606. Metoda se bazează pe furnizarea particulelor de ADN care conţin un marker de selecţie şi direcţionarea ADN-ului spre genomul plastidei prin recombinarea omoloagă. În plus, transformarea plastidelor poate fi realizată prin transactivarea unei transgene tacite ce poartă plastide prin expresia preferată de ţesut a unei ARN polimeraze codificată nuclear şi direcţionată spre plastide. Un astfel de sistem a fost descris în McBride et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:7301-7305. Acizii nucleici relevanţi care urmează să fie direcţionaţi spre cloroplast pot fi optimizaţi pentru expresia în cloroplast pentru a explica diferenţele în utilizarea codonilor între nucleul plantei şi această organelă. În acest mod, acizii nucleici relevanţi pot fi sintetizaţi folosind codoni preferaţi de cloroplast. A se vedea, de exemplu, brevetul SUA nr. 5,380,831, inclus în prezenta prin referinţă.
Într-o variantă de executare preferenţială, acidul nucleic al mut-PPO cuprinde o secvenţă de polinucleotide selectată din grupa ce constă din: a) o polinucleotidă prezentată în SECV ID nr.: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, sau 45, sau o variantă sau un derivat al acestora; b) o polinucleotidă care codifică o polipeptidă prezentată în SECV ID nr.: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, sau 46, sau o variantă sau un derivat al acestora; c) o polinucleotidă care cuprinde cel puţin 60 de nucleotide consecutive ale oricăreia dintre a) sau c); şi d) o polinucleotidă complementară la polinucleotida oricăreia dintre a) - c).
De preferinţă, caseta de expresie din prezenta invenţie mai cuprinde o regiune de reglare a iniţierii transcripţiei şi o regiune de reglare a iniţiereii translaţiei care sunt funcţionale în plantă.
În timp ce polinucleotidele invenţiei îşi găsesc utilizarea ca gene marker de selecţie pentru transformarea plantei, casetele de expresie ale invenţiei pot include o altă genă marker de selecţie pentru selectarea celulelor transformate. Gene marker de selecţie, inclusiv cele din prezenta invenţie, sunt utilizate pentru selectarea celulelor sau ţesuturilor transformate. Genele marker includ, dar nu se limitează la, genele care codifică rezistenţa la antibiotice, cum ar fi cele care codifică neomicin fosfotransferaza II (NEO) şi higromicin fosfotransferaza (HPT), precum şi genele care conferă rezistenţă la compuşii erbicizi, cum ar fi amoniu glufosinat, bromoxinil, imidazolinone şi 2,4-diclorofenoxiacetat (2,4-D). A se vedea, în general, Yarranton (1992) Curr. Opin. Biotech. 3 :506-511 ; Christophers on et al (1992) Proc. Natl. Acad. ScL USA 89:6314-6318; Yao et al. (1992) Cell 71:63-72; Reznikoff (1992) MoI Microbiol 6:2419-2422; Barkley et al (1980) in The Operon, pp. 177-220; Hu et al (1987) Cell 48:555-566; Brown et al (1987) Cell 49:603-612; Figge et al (1988) Cell 52:713-722; Deuschle et al (1989) Proc. Natl Acad. AcL USA 86:5400-5404; Fuerst et al (1989) Proc. Natl Acad. ScL USA 86:2549-2553; Deuschle et al (1990) Science 248:480-483; Gossen (1993) Ph.D. Thesis, University of Heidelberg; Reines et al (1993) Proc. Natl Acad. ScL USA 90: 1917-1921; Labow et al (1990) MoI Cell Biol 10:3343-3356; Zambretti et al (1992) Proc. Natl Acad. ScL USA 89:3952-3956; Bairn et al (1991) Proc. Natl Acad. ScL USA 88:5072-5076; Wyborski et al (1991) Nucleic Acids Res. 19:4647-4653; Hillenand-Wissman (1989) Topics MoI Struc. Biol 10: 143- 162; Degenkolb et al (1991) Antimicrob. Agents Chemother. 35: 1591-1595; Kleinschnidt et al (1988) Biochemistry 27: 1094-1104; Bonin (1993) Ph.D. Thesis, University of Heidelberg; Gossen et al (1992) Proc. Natl Acad. ScL USA 89:5547- 5551; Oliva et al (1992) Antimicrob. Agents Chemother. 36:913-919; Hlavka et al (1985) Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 78 ( Springer-Verlag, Berlin); Gill et al (1988) Nature 334:721-724. Astfel de dezvăluiri sunt incluse în prezenta prin referinţă. Lista de gene marker de selecţie prezentată mai sus nu este limitativă. Orice genă marker de selecţie poate fi utilizată în prezenta invenţie.
Invenţia prezintă în plus un vector de expresie recombinantă izolat care cuprinde caseta de expresie ce conţine un acid nucleic al mut-PPO aşa cum este descris mai sus, în care expresia vectorului într-o celulă gazdă duce la toleranţă sporită la un erbicid care inhibă PPO comparativ cu un soi de tip sălbatic a celulei gazdă. Aşa cum este utilizat în prezenta, termenul "vector" se referă la o moleculă de acid nucleic capabilă să transporte un alt acid nucleic la care a fost legat. Un tip de vector este o "plasmidă", care se referă la o buclă de ADN dublu-spiralată circulară în care pot fi legate segmente suplimentare de ADN. Un alt tip de vector este un vector viral, în care segmentele suplimentare de ADN pot fi legate în genomul viral. Anumiţi vectori sunt capabili de replicare autonomă într-o celulă gazdă în care ei sunt introduşi (de ex., vectori bacterieni având o origine bacteriană de replicare şi vectori epizomali de mamifere). Alţi vectori (de ex., vectori de mamifere non-epizomali) sunt integraţi în genomul unei celule gazdă după introducerea în celula gazdă, şi astfel sunt replicate, împreună cu genomul gazdă. În plus, anumiţi vectori sunt capabili să direcţioneze expresia genelor de care sunt legaţi funcţional. Astfel de vectori sunt denumiţi în prezenta "vectori de expresie". În general, vectorii de expresie de utilitate în tehnicile de ADN recombinant sunt adesea sub formă de plasmide. În prezenta descriere, "plasmidă" şi "vector" pot fi utilizate alternativ, deoarece plasmida este cea mai frecvent utilizată formă a vectorului. Cu toate acestea, invenţia are ca scop includerea altor forme de vectori de expresie de acest tip, cum ar fi vectorii virali (de ex., retrovirusuri defectuoşi de replicare, adenovirusuri şi virusuri adeno-asociate), care au funcţii echivalente.
Vectorii de expresie recombinantă ai invenţiei cuprind un acid nucleic al invenţiei sub o formă adecvată pentru expresia acidului nucleic într-o celulă gazdă, ceea ce înseamnă că vectorii de expresie recombinantă includ una sau mai multe secvenţe de reglare, selectate în funcţie de celulele gazdă pentru a fi utilizate pentru expresie, care este legată funcţional de secvenţa de acid nucleic pentru a fi exprimată. Secvenţele de reglare includ cele care direcţionează expresia constitutivă a unei secvenţe de nucleotide în multe tipuri de celule gazdă şi cele care direcţionează expresia secvenţei de nucleotide numai în anumite celule gazdă sau în anumite condiţii. Se va aprecia de către specialiştii în domeniu că modelul vectorului de expresie poate depinde de asemenea factori precum alegerea celulei gazdă care urmează a fi transformată, nivelul de expresie a polipeptidei dorite, etc. Vectorii de expresie ai invenţiei pot fi introduşi în celulele gazdă pentru a produce astfel polipeptide sau peptide, inclusiv polipeptide sau peptide de fuziune, codificate de acizii nucleici aşa cum este descris în prezenta (de ex., polipeptide ale mut-PPO, polipeptide de fuziune, etc.).
Într-o variantă de executare preferenţială a prezentei invenţii, polipeptidele mut-PPO sunt exprimate în plante şi celule de plante cum ar fi celulele de plante unicelulare (cum ar fi algele) (a se vedea Falciatore et al., 1999, Marine Biotechnology 1(3):239-251 şi referinţele din aceasta) şi celule de plante din plantele mai înalte (de ex., spermatofite, cum ar fi plantele de cultură). O polinucleotidă a mut-PPO poate fi "introdusă" într-o celulă de plantă prin orice mijloace, inclusiv transfectare, transformare sau transducţie, electroporare, bombardament cu particule, agroinfectoare, biolistică, şi altele.
Metode adecvate pentru transformarea sau transfectarea celulelor gazdă, inclusiv celulelor de plante pot fi găsite în Sambrook et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd, ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989) şi alte manuale de laborator cum ar fi Methods in Molecular Biology, 1995, Vol. 44, Agrobacterium protocols, ed: Gartland and Davey, Humana Press, Totowa, New Jersey. Dat fiind cătoleranţa sporită la erbicide care inhibă PPO este o trăsătură generală dorită să fie moştenită într-o varietate mare de plante cum ar fi porumbul, grâul, secara, ovăzul, triticala, orezul, orzul, soia, arahidele, bumbacul, rapiţa şi canola, manihotul, piperul, floarea soarelui şi crăiţa, plantele solanacee ca tutunul, cartoful, vinetele, roşiile, specia Vicia, mazărea, lucerna, plantele arbuşti (cafea, cacao, ceai), specia de Salix, arbori (uleiul de palmier, cocos), ierburile perene şi culturile furajere, aceste plante de cultură sunt, de asemenea, plante ţintă preferate pentru ingineria genetică ca o altă variantă de executare a prezentei invenţii. Într-o variantă de executare preferenţială, planta este o plantă de cultură. Culturile furajere includ, dar nu se limitează la, pir, iarba-cănăraşului, obsigă, orzişor, firuţă, iarbă de livadă, lucernă, salfoin, ghizdei, trifoi hibrid, trifoi roşu, şi trifoi dulce.
Într-o variantă de executare a prezentei invenţii, transfectarea unei polinucleotide a mut-PPO într-o plantă se realizează prin transferul de gene mediat de Agrobacterium. O metodă de transformare cunoscută de specialiştii în domeniu este scufundarea unei plante cu flori într-o soluţie de agrobacterii, în care agrobacteriile conţin acidul nucleic al mut-PPO, urmată de reproducerea garneţilor transformaţi. Transformarea plantelor mediată de agrobacterii poate fi efectuată folosind, de exemplu, GV3101 (pMP90) (Koncz and Schell, 1986, Mol. Gen. Genet. 204:383-396) or LBA4404 (Clontech) Agrobacterium tumefaciens strain. Transformarea poate fi efectuată prin tehnici standard de transformare şi regenerare (Deblaere et al., 1994, Nucl. Acids. Res. 13:4777-4788; Gelvin, Stanton B. and Schilperoort, Robert A, Plant Molecular Biology Manual, 2nd Ed. - Dordrecht : Kluwer Academic Publ., 1995. - in Sect., Ringbuc Zentrale Signatur: BT11-P ISBN 0-7923-2731-4; Glick, Bernard R. and Thompson, John E., Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, Boca Raton : CRC Press, 1993 360 S., ISBN 0-8493-5164-2). De exemplu, seminţele de rapiţă pot fi transformate prin transformarea cotiledoanelor sau hipocotilelor (Moloney et al., 1989, Plant Cell Report 8:238-242; De Block et al., 1989, Plant Physiol. 91:694-701). Utilizarea antibioticelor pentru agrobacteriile şi selecţia plantelor depinde de vectorul binar şi tulpina agrobacteriilor utilizată pentru transformare. Selecţia seminţelor de rapiţă este realizată în mod normal folosind kanamicină ca marker de plantă de selecţie. Transferul genelor mediat de agrobacterii în in poate fi realizată folosind, de exemplu, o tehnică descrisă de Mlynarova et al., 1994, Plant Cell Report 13:282-285. În plus, transformarea soiei poate fi efectuată folosind, de exemplu, o tehnică descrisă în brevetul european nr. 0424 047, brevetul USA nr. 5 322 783, brevetul european nr. 0397 687, brevetul USA nr. 5,376,543, sau brevetul USA nr. 5 169 770. Transformarea porumbului poate fi realizată prin bombardament cu particule, absorbţia ADN-ului mediată de polietilenglicol, sau prin tehnica fibrelor de carbură de siliciu. (A se vedea, de exemplu, Freeling and Walbot “The maize handbook” Springer Verlag: New York (1993) ISBN 3-540-97826-7). Un exemplu specific de transformare a porumbului este prezentat în brevetul USA 5990387, şi un exemplu specific de transformare a grâului poate fi găsit în cererea de brevet nr. WO 93/07256.
Conform prezentei invenţii, polinucleotida mut-PPO introdusă poate fi menţinută stabil în celula de plantă dacă este inclusă într-un replicon autonom non-cromozomial sau integrat în cromozomii de plante. Alternativ, polinucleotida mut-PPO introdusă poate fi prezentă pe un vector extra-cromozomial care nu este capabil de replicare şi poate fi exprimată tranzitoriu sau activă tranzitoriu. Într-o variantă de executare, un microorganism recombinant omolog poate fi creat, în care polinucleotida mut-PPO este integrată într-un cromozom, un vector este preparat care conţine, cel puţin, o porţiune a unei gene PPO în care a fost introdusă o deleţie, adiţie sau substituţie pentru a modifica astfel, de ex., perturbarea funcţională, gena endogenă a PPO şi pentru a crea o genă mut-PPO. Pentru a crea o mutaţie punctiformă prin recombinarea omoloagă, pot fi utilizaţi hibrizii ADN-ARN într-o tehnică cunoscută ca chimeraplastie (Cole-Strauss et al., 1999, Nucleic Acids Research 27(5):1323-1330 and Kmiec, 1999, Gene therapy American Scientist 87(3):240-247). Alte proceduri de recombinare omoloagă în speciile de Triticum sunt, de asemenea, bine cunoscute în domeniu şi sunt examinate pentru utilizarea în prezenta.
În vectorul de recombinare omoloagă, gena mut-PPO poate fi flancată la capetele sale 5' şi 3' de o moleculă suplimentară de acid nucleic a genei PPO pentru a permite apariţia recombinării omoloage între gena exogenă mut-PPO purtată de vector şi o genă endogenă PPO, într-un microorganism sau a plantă. Molecula de acid nucleic a PPO de flancare suplimentară are o lungime suficientă pentru recombinarea omoloagă de succes cu gena endogenă. De obicei, câteva sute de perechi de bază până la kilobaze de flancare a ADN-ului (atât la capătul 5', cât şi 3') sunt incluse în vector (a se vedea de ex. Thomas, K. R., and Capecchi, M. R., 1987, Cell 51:503 pentru o descriere a vectorilor de recombinare omoloagă sau Strepp et al., 1998, PNAS, 95(8):4368-4373 pentru recombinarea bazată pe ADNc în Physcomitrella patens). Cu toate acestea, dat fiind că gena mut-PPO diferă în mod normal de gena PPO prin foarte puţini aminoacizi, o secvenţă de flancare nu este întotdeauna necesară. Vectorul de recombinare omoloagă este introdus într-o celulă de microorganism sau de plantă (de ex., prin ADN mediat de polietilenglicol), şi celulele în care gena mut-PPO introdusă a recombinat omolog cu gena endogenă PPO sunt selectate folosind tehnici cunoscute în domeniu.
Într-o altă variantă de executare, microorganisme recombinate pot fi produse ce conţin sisteme selectate care permit expresia reglată a genei introduse. De exemplu, includerea unei gene mut-PPO pe un vector plasând-o sub controlul operonului lac permite expresia genei mut-PPO doar în prezenţa IPTG. Astfel de sisteme de reglare sunt bine cunoscute în domeniu.
Un alt aspect al invenţiei se referă la celule gazdă în care a fost introdus un vector de expresie recombinantă conform invenţiei. Termenii "celulă gazdă" şi "celulă gazdă recombinantă" sunt utilizaţi în mod interschimbabil în prezenta. Se înţelege că astfel de termeni se referă nu doar la celula unui anumit subiect, ci aceştia se aplică, de asemenea, la descendenţii sau descendenţii potenţiali ai unei astfel de celule. Deoarece anumite modificări pot apărea în generaţiile următoare din cauza influenţelor de mutaţie sau de mediu, astfel de descendenţi nu pot fi, în realitate, identici cu celula parentală, dar sunt totuşi incluşi în domeniul de aplicare al termenului aşa cum este utilizat în prezenta. O celulă gazdă poate fi orice celulă procariotă sau eucariotă. De exemplu, o polinucleotidă a mut-PPO poate fi exprimată în celulele bacteriene cum ar fi C. glutamicum, celulele de insecte, celule fungice, sau celulele de mamifere (cum ar fi celule ovariene de hamster chinezesc (CHO) sau celulele COS), alge, ciliate, celule de plante, ciuperci sau alte microorganisme, cum ar fi C. glutamicum. Alte celule gazdă adecvate sunt cunoscute specialiştilor în domeniu.
O celulă gazdă a invenţiei, cum ar fi o celulă gazdă procariotă sau eucariotă în culturi, poate fi utilizată pentru a produce (de exemplu, exprima) o polinucleotidă a mut-PPO. În consecinţă, invenţia prezintă în continuare metode pentru producerea polipeptidelor mut-PPO folosind celulele gazdă ale invenţiei. Într-o variantă de executare, metoda cuprinde cultivarea celulei gazdă a invenţiei (în care a fost introdus un vector de expresie recombinantă care codifică o polipeptidă mut-PPO, sau în genomul căruia a fost introdusă o genă care codifică o polipeptidă a PPO de tip sălbatic sau mut-PPO) într-un mediu adecvat, până când este produsă polipeptida mut-PPO. Într-o altă variantă de executare, metoda cuprinde în plus izolarea polipeptidelor mut-PPO din mediu sau celula gazdă. Un alt aspect al invenţiei se referă la polipeptide izolate ale mut-PPO, şi porţiuni active biologic ale acestora. O polipeptidă "izolată" sau "purificată" sau porţiune biologic activă a acesteia este lipsită de material celular atunci când este produsă prin tehnici de ADN recombinant, sau precursori chimici sau alte substanţe chimice atunci când este sintetizată chimic. Expresia "lipsită substanţial de material celular" include preparate de polipeptide mut-PPO în care polipeptida este separată de unele dintre componentele celulare ale celulelor în care este produsă în mod natural sau prin recombinare. Într-o variantă de executare, expresia "lipsită substanţial de material celular" include preparate de o polipeptidă mut-PPO având mai puţin de circa 30% (în greutate uscată) de material non-mut-PPO (denumită aici şi ca "polipeptidă contaminantă" ), mai preferabil mai puţin de circa 20% de material non-mut-PPO, încă mai preferabil mai puţin de circa 10% de material non-mut-PPO, şi cel mai preferabil mai puţin de circa 5% de material non-mut-PPO.
Atunci când polipeptida mut-PPO, sau porţiunea activă biologic a acesteia, este produsă recombinant, ea, de asemenea, este preferabil lipsită substanţial de mediu de cultură, adică, mediul de cultură constituie mai puţin de circa 20%, mai preferabil mai puţin de circa 10%, şi cel mai preferabil mai puţin de circa 5% din volumul preparatului polipeptidic. Expresia "lipsită substanţial de precursori chimici sau alte substanţe chimice" include preparate de polipeptidă mut-PPO în care polipeptida este separată de precursorii chimici sau alte substanţe chimice care sunt implicate în sinteza polipeptidei. Într-o variantă de executare, expresia "lipsită substanţial de precursori chimici sau alte substanţe chimice" include preparate de polipeptidă mut-PPO având mai puţin de circa 30% (în greutate uscată) de precursori chimici sau substanţe chimice non-mut-PPO, mai preferabil mai puţin de circa 20% de precursori chimici sau substanţe chimice non-mut-PPO, încă mai preferabil mai puţin de circa 10% de precursori chimici sau substanţe chimice non-mut-PPO, şi cel mai preferabil mai puţin de circa 5% de precursori chimici sau substanţe chimice non-mut-PPO. În variantele de executare preferenţiale, polipeptidele izolate, sau porţiunile biologic active ale acestora, sunt lipsite de polipeptide de contaminare din acelaşi organism din care este obţinută polipeptida mut-PPO. De obicei, astfel de polipeptide sunt produse prin expresia recombinantă, de exemplu, a unei polipeptide mut-PPO în alte plante decât, sau în microorganisme, cum ar fi C. glutamicum, ciliate, alge, ciuperci sau plante.
Aşa cum este descris mai sus, prezenta invenţie prezintă compoziţii şi metode pentru sporirea toleranţei de inhibare a PPO a unei plante de cultură sau seminţe în comparaţie cu un soi de tip sălbatic al plantei sau seminţei. Într-o variantă de executare preferenţială, toleranţa unei plante de cultură sau seminţe de inhibare a PPO este sporită astfel încât planta sau sămânţa poate rezista unei aplicări a erbicidului de inhibare a PPO preferabil de circa 1…1000 g ia ha-1, mai preferabil 1…200 g ia ha-1, chiar mai preferabil 5…150 g ia ha-1, şi cel mai preferabil 10…100 g ia ha-1. După cum este utilizat în prezenta, pentru a "rezista" unei aplicări a erbicidului de inhibare a PPO înseamnă că planta fie că nu este nimicită sau nu este deteriorată, sau este doar moderat deteriorată de o astfel de aplicare. Se va înţelege de către un specialist în domeniu că ratele de aplicare pot varia, în funcţie de condiţiile de mediu, cum ar fi temperatura sau umiditatea, şi în funcţie de tipul de erbicid selectat (ingredient activ ia).
În plus, prezenta invenţie furnizează metode care implică utilizarea a cel puţin unui erbicid de inhibare a PPO, opţional în combinaţie cu unul sau mai mulţi compuşi erbicizi B, şi, opţional, un agent fitoprotector, C, aşa cum este descris în detalii mai sus.
În aceste metode, erbicidul de inhibare a PPO poate fi aplicat prin orice metodă cunoscută în domeniu, inclusiv, dar fără a se limita la, tratarea seminţelor, tratarea solului, şi tratamentul foliar. Înainte de aplicare, erbicidul de inhibare a PPO poate fi transformat în preparate obişnuite, de exemplu soluţii, emulsii, suspensii, prafuri, pulberi, paste şi granule. Forma de utilizare depinde de scopul propus; în fiecare caz, ea trebuie să asigure o distribuţie fină şi uniformă a compusului conform invenţiei.
Prin furnizarea plantelor cu toleranţă sporită la erbicidul de inhibare a PPO, o gamă largă de preparate pot fi folosite pentru protecţia plantelor de buruieni, astfel încât să sporească creşterea plantelor şi să reducă concurenţa pentru nutrienţi. Un erbicid de inhibare a PPO poate fi folosit de unul singur pentru pre-răsărire, post-răsărire, pre-plantare, şi controlul buruienilor la plantare în zonele învecinate plantelor de cultură descrise în prezenta, sau poate fi folosit un preparat erbicid de inhibare a PPO care conţine alţi aditivi. Erbicidul de inhibare a PPO poate fi, de asemenea, utilizat ca tratament pentru seminţe. Aditivii depistaţi într-un preparat erbicid de inhibare a PPO includ alte erbicide, detergenţi, adjuvanţi, agenţi de pulverizare, agenţi de lipire, agenţi de stabilizare, sau alţii. Preparatul erbicid de inhibare a PPO poate fi un preparat umed sau uscat şi poate include, dar nu se limitează la, pulberi fluide, concentrate emulsionabile, şi concentrate lichide. Erbicidul şi preparatele erbicide de inhibare a PPO pot fi aplicate în conformitate cu metodele convenţionale, de exemplu, prin pulverizare, irigare, pudrare, sau altele.
Preparatele adecvate sunt descrise detaliat în PCT/EP2009/063387 şi PCT/EP2009/063386, care sunt incluse aici prin referinţă.
De asemenea, se va înţelege că cele sus-menţionate se referă la variantele de executare preferenţiale ale prezentei invenţii şi că numeroase modificări pot fi făcute la acestea fără a se îndepărta de la scopul invenţiei. Invenţia este ilustrată în continuare prin următoarele exemple, care nu trebuie să fie interpretate în nici un fel ca impunând limitări asupra domeniului de aplicare a acesteia. Dimpotrivă, trebuie să se înţeleagă în mod clar că se poate recurge la diverse alte variante de executare, modificări şi echivalentele acestora, care, după citirea descrierii din prezenta, ar putea să fie sugerate specialiştilor în domeniu, fără îndepărtarea de la esenţa prezentei invenţii şi/sau domeniul de aplicare a revendicărilor anexate.
EXEMPLE
EXEMPLUL 1: Mutageneza situs-direcţionată a PPO de Amaranthus
Clonarea PPO de Aramanthus
Secvenţa de codificare a Amaranthus tuberculatus pentru izoforme rezistente şi susceptibile la PPO, şi toate combinaţiile mutante şi mutaţiile multiple (SECV ID nr.: 1, 3, 5, 7) au fost sintetizate şi clonate de Geneart (Geneart AG, Regensburg, Germany).
Plasmidele au fost izolate din E. coli TOP10 prin efectuarea unei minprepararări a plasmidelor şi confirmată prin secvenţierea ADN-ului.
Expresia şi purificarea PPO de tip sălbatic recombinant şi mutant
(Preluat de la: Franck E. Dayan, Pankaj R. Daga, Stephen O. Duke, Ryan M. Lee, Patrick J. Tranel, Robert J. Doerksen. Consecinţele biochimice şi structurale ale unei deleţii a glicinei în spirala α-8 a protoporfirinogen oxidazei. Biochimica et Biophysica Acta 1804, (2010), p. 1548-56).
Clonele în vectorul pRSET au fost transformate în tulpina BL21 (DE3)-pLysS a E. coli. Celulele au fost crescute în 250 ml de LB cu 100 µgml-1 de carbenicilină, fiind agitate timp de o noapte la 37°C. Culturile au fost diluate în 1 l de LB cu antibiotic şi crescute la 37°C agitând timp de 2 ore, induse cu 1 mM IPTG şi cultivate la 25°C, agitând timp de încă 5 ore. Celulele au fost recoltate prin centrifugare la 1600xg, spălate cu 0,09% NaCl şi păstrate la -80°C.
Celulele au fost lizate folosind o presă franceză la 140 MPa în 50 mM fosfat de sodiu pH 7,5, 1 M NaCI, 5 mM imidazol, 5% glicerol, şi 1 µg ml-1 leupeptină. În urma lizei, s-a adăugat 0,5 U de benzonază (Novagen, EMD Chemicals, Inc., Gibbstown, NJ) şi PMSF (concentraţia finală de 1 mM). Resturile celulare au fost îndepărtate prin centrifugare la 3000×g. Proteinele PPO marcate His au fost purificate pe o coloană HP Hitrap Chelating activată cu nichel (GE Healthcare Bio-Sciences Corp, Piscataway, NJ) echilibrată cu 20 mM fosfat de sodiu pH 8,0, 50 mM NaCl, 5 mM imidazol, 5 mM MgCl2, 0,1 mM EDTA, şi 17% glicerol.
PPO a fost eluată cu 250 mM de imidazol. Proteina activă a fost desalinizată pe o coloană PD-10 (GE Healthcare Bio-Sciences Corp, Piscataway, NJ) echilibrată cu o soluţie tampon de fosfat de sodiu 20 mM, pH 7,5, MgCl2 5 mM, EDTA 1 mM şi 17% glicerol. Fiecare litru de cultură a furnizat aproximativ 10 mg de PPO pură, care a fost păstrată la -20°C până la utilizarea în analize.
Analiza activităţii PPO
Analiza enzimei PPO (nerecombinantă). Proteina PPO (CE 1.3.3.4) a fost extrasă din coleoptile sau lăstari (150 g greutate în stare proaspătă) de răsad de porumb crescut la întuneric, zârnă neagră, volbură, şi teişor descrise anterior (Grossmann et al. 2010). Înainte de recoltare, răsadurile au fost lăsate să înverzească timp de 2 ore la lumină pentru a obţine cele mai înalte activităţi enzimatice specifice în fracţiunile tilacoide la concentraţii scăzute de clorofilă. La concentraţii înalte de clorofilă se produce o extincţie semnificativă de fluorescenţă, care limitează cantitatea de tilacoide verzi care pot fi utilizate în test. Materialele plantei au fost omogenizate la rece cu un blender Braun folosind un raport de greutate proaspătă la volum de 1: 4. Soluţia tampon de omogenizare a fost compusă din tris(hidroximetil)aminometan (Tris)-HCI (50 mM; pH 7,3), zaharoză (0,5 M), clorură de magneziu (1 mM), acid etilendiaminotetraacetic (EDTA) (1 mM) şi albumină din ser bovin (2 g/l-1). După filtrare prin patru straturi de Miracloth, s-au obţinut preparate de plastide brute după centrifugarea la 10000 x g timp de 5 min şi resuspendarea în soluţie tampon de omogenizare înainte de centrifugare la 150 x g timp de 2 min pentru a îndepărta resturile celulare brute. Supernatantul a fost centrifugat la 4000 x g timp de 15 min şi fracţiunea peletului a fost repusă în suspensie în 1 ml de soluţie tampon conţinând Tris-HCl (50 mM; pH 7,3), EDTA (2 mM), leupeptină (2 µM), pepstatin (2 µM ) şi glicerol (200 ml
l-1) şi depozitată la -80°C până la utilizare. Proteina a fost determinată în extractul de enzimă cu albumină din ser bovin în calitate de standard. Activitatea PPO a fost analizată fluorometric prin monitorizarea ratei de formare Proto din protoporfirinogen IX redus chimic în condiţii iniţiale de viteză. Amestecul de analiză a constat din Tris-HCl (100 mM, pH 7,3), EDTA (1 mM), ditiotreitol (5 mM), Tween 80 (0,085%), protoporfirinogen IX (2 µM), şi 40 µg de proteină extrasă într-un volum total de 200 µl. Reacţia a fost iniţiată prin adăugarea substratului de protoporfirinogen IX la 22°C. saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă, flumioxazin, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazon, plus diuron inhibitor al fotosintezei, care a fost utilizat ca martor negativ, au fost preparate în soluţie de dimetilsulfoxid (DMSO) (concentraţia de 0,1 mM de DMSO în test) şi s-a adăugat la amestecul de testare în concentraţii de 0,005 pM până la 5 µM înainte de incubare. Fluorescenţa a fost monitorizată direct din amestecul de testare folosind un Polarstar Optima / Galaxy (BMG) cu excitaţie la 405 nm şi emisie monitorizată la 630 nm. Activitatea non-enzimatică în prezenţa extractului inactivat termic a fost neînsemnată. Inhibarea activităţii enzimatice induse de erbicid a fost exprimată ca inhibare procentuală în raport cu controalele netratate. Concentraţiile molare ale compusului necesare pentru inhibarea enzimei în mărime de 50% (valorile CI50) au fost calculate prin ajustarea valorilor ecuaţiei doză-răspuns folosind analiza de regresie neliniară.
Analiza enzimei PPO (recombinantă).
Proto a fost procurat de la Sigma-Aldrich (Milwaukee,WI). Protogenul a fost preparat conform lui Jacobs and Jacobs (N.J. Jacobs, J.M. Jacobs, Assay for enzymatic protoporphyrinogen oxidation, a late step in heme synthesis, Enzyme 28 (1982) 206-219) . Testele au fost realizate în fosfat de sodiu 100 mM pH 7.4 cu EDTA 0,1 mM, 0,1% Tween 20, 5 µM FAD, şi 500mM imidazol. Curbele doză-răspuns cu inhibitori ai PPO saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă, flumioxazin, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazon, plus diuron inhibitor al fotosintezei, care a fost utilizat ca martor negativ şi MC-15608 au fost obţinute în prezenţa a 150 µM Protogen. Lăţimile de benzi de excitaţie şi emisie au fost setate la 1,5 şi, respectiv, 30 nm. Toate testele au fost efectuate de două sau de trei ori şi măsurate folosind un Polarstar Optima / Galaxy (BMG) cu excitaţie la 405 nm şi emisie monitorizată la 630 nm. Concentraţiile molare ale compusului necesare pentru inhibarea enzimei în mărime de 50% (valorile CI50) au fost calculate prin ajustarea valorilor ecuaţiei doză-răspuns folosind analiza de regresie neliniară.
Valorile doză-răspuns (CI50) pentru enzimele substituite ale PPO sunt mai mari decât valoarea CI50 pentru enzima PPO de tip sălbatic (ne-substituită) (Tabelul 4a). Acest fapt indică că aceste enzime PPO substituite au o rezistenţă inerentă la erbicide care inhibă PPO testate. Enzima PPO substituită dG210 şi R128L sunt enzime PPO substituite cunoscute găsite în Amaranthus tuberculatus şi Ambrosia artemisiifolia, şi s-au dovedit a fi responsabile de rezistenţa PPO in planta la o varietate de erbicide PPO (Dayan et al., 2010, Biochimica et Biophysica Acta, 1804:1548). Acest lucru indică faptul că celelalte enzime PPO substituite enumerate, având, de asemenea, o valoare CI50 mai mare decât dG210 sau R128L, sunt, la fel, enzime PPO substituite care sunt responsabile pentru rezistenţa in planta împotriva unei varietăţi de erbicide PPO (Tabelul 4a). Toate enzimele PPO substituite demonstrează o activitate enzimatică comparabilă, schimbarea unităţii de fluorescenţă per minut (FU/min) comparativ cu enzima PPO tip sălbatic (Tabelul 4a). În plus, toate valorile de activitate pentru enzimele PPO substituite sunt mai mari decât enzima PPO substituită dG210 sau R128L. Enzima PPO substituită dG210 şi R128L sunt suficient de active pentru funcţia in planta aşa cum s-a demonstrat deja. Acest lucru indică că toate celelalte enzime PPO substituite indicate sunt, de asemenea, suficient de active pentru funcţia in planta.
Valorile CI50 (M) pentru enzima PPO substituită de tip sălbatic şi de aminoacizi, pentru inhibitoriisaflufenacil şi 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă.
Tabelul 4
Substituirea aminoacizilor SECV. ID nr. Activitatea enzimei relative (FU/min) Saflufenacil 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă CI50 (M) PPO2 WC susceptibilă la erbicid PPO 2 1000 1,86E-09 5,17E-10 PPO2 AC susceptibilă la erbicid PPO 4 800 1,78E-10 5,96E-11 dG210 6 & 8 80 1,60E-06 2,12E-09 R128L 2 & 4 700 2,22E-07 7,73E-10 R128A, L397D 2 & 4 100 1,00E-05 5,90E-09 R128L, L397D 2 & 4 ND ND F204I, T208S 2 & 4 745 5,89E-11 1,29E-10 F204I, L397D 2 & 4 ND ND F204I, L400A 2 & 4 150 4,57E-11 F204I, T208S, F420V 2 & 4 265 4,69E-09 F204I, F457M 2 & 4 200 1,89E-11 7,52E-11 T208S, L397D 2 & 4 150 4,08E-07 1,25E-10 T208S, L400A 2 & 4 ND ND T208S, F420V 2 & 4 520 8,48E-07 2,34E-09 T208S, F457M 2 & 4 550 1,02E-10 1,95E-10 L397D, L400A 2 & 4 ND ND L397R, F420M 2 & 4 ND ND L397N, F420M 2 & 4 90 1,63E-08 L397D, F420M 2 & 4 120 >0,00001 2,95E-08 L397A, F420V 2 & 4 ND ND L397R, F420V 2 & 4 ND ND L397N, F420V 2 & 4 ND ND L397Q, F420V 2 & 4 90 >0,00001 1,01E-07 L397K, F420V 2 & 4 ND ND L397F, F420V 2 & 4 ND ND L397P, F420V 2 & 4 ND ND L397W, F420V 2 & 4 ND ND L397V, F420V 2 & 4 150 1,21E-08 L397H, F420V 2 & 4 ND ND L397I, F420M 2 & 4 410 1,98E-10 L397M, F420K 2 & 4 ND ND L397M, F420M 2 & 4 250 2,32E-10 L397F, F420M 2 & 4 ND ND L397S, F420M 2 & 4 210 3,33E-09 L397W, F420M 2 & 4 ND ND L397Y, F420M 2 & 4 ND ND L397I, F420V 2 & 4 100 4,09E-09 L397A, F420M 2 & 4 150 4,53E-09 L397C, F420M 2 & 4 370 1,79E-09 L397D, F420V 2 & 4 60 >0,00001 1,16E-06 L397C, F420V 2 & 4 150 5,54E-08 L397E, F420V 2 & 4 105 >0,00001 1,41E-07 L397G, F420V 2 & 4 ND ND L397H, F420V 2 & 4 ND ND L397M, F420V 2 & 4 140 8,79E-09 L397S, F420V 2 & 4 110 4,26E-08 L397T, F420V 2 & 4 150 1,31E-08 L397Q, F420M 2 & 4 110 1,00E-06 5,41E-09 L397E, F420M 2 & 4 340 1,00E-06 6,03E-09 L397G, F420M 2 & 4 80 6,06E-08 L397P, F420M 2 & 4 ND ND L397T, F420M 2 & 4 ND ND L397V, F420M 2 & 4 400 1,05E-09 L397D, F457M 2 & 4 ND ND L400A, F420V 2 & 4 ND ND L400A, F457M 2 & 4 160 1,35E-11 F420V, F457M 2 & 4 105 1,02E-09 R128A, F204I, F420V 2 & 4 ND ND R128A, T208S, F420V 2 & 4 200 >0,00001 1,25E-08 R128A, L397D, F420V 2 & 4 ND ND R128A, L400A, F420V 2 & 4 ND ND R128A, F420V, F457M 2 & 4 ND ND F204I, T208S, L397D 2 & 4 100 5,52E-11 F204I, T208S, L400A 2 & 4 105 2,64E-11 F204I, T208S, F420V 2 & 4 80 3,87E-09 F204I, T208S, F457M 2 & 4 200 4,21E-11 F204I, T208S, F457M 2 & 4 470 5,11E-11 1,70E-10 F204I, L397D, L400A 2 & 4 ND ND F204I, L397D, L400A 2 & 4 ND ND F204I, L397D, F457M 2 & 4 ND ND F204I, L400A, F420V 2 & 4 100 8,23E-08 F204I, L400A, F457M 2 & 4 ND ND F204I, F420V, F457M 2 & 4 80 2,10E-09 T208S, L397D, L400A 2 & 4 ND ND T208S, L397D, F420V 2 & 4 ND ND T208S, L397D, F457M 2 & 4 ND ND T208S, L400A, F420V 2 & 4 ND ND T208S, L400A, F457M 2 & 4 60 9,68E-12 T208S, F420V, F457M 2 & 4 90 3,41E-09 L397D, L400A, F420V 2 & 4 ND ND L397D, L400A, F457M 2 & 4 ND ND L397D, F420V, F457M 2 & 4 ND ND L400A, F420V, F457M 2 & 4 ND ND R128A, F204I, T208S, F420V 2 & 4 ND ND R128A, F204I, F420V, F457M 2 & 4 80 4,63E-08 R128A, F204I, L397D, F420V 2 & 4 ND ND R128A, F204I, L400A, F420V 2 & 4 ND ND R128A, T208S, L397D, F420V 2 & 4 ND ND R128A, T208S, L400A, F420V 2 & 4 ND ND R128A, T208S, F420V, F457M 2 & 4 ND ND R128A, L397D, F420V, F457M 2 & 4 ND ND R128A, L400A, F420V, F457M 2 & 4 ND ND F204I, T208S, L397D, L400A 2 & 4 80 2,38E-09 F204I, T208S, L397D, F420V 2 & 4 ND ND F204I, T208S, L397D, F457M 2 & 4 ND ND F204I, T208S, L400A, F420V 2 & 4 ND ND F204I, T208S, L400A, F457M 2 & 4 100 2,88E-11 F204I, T208S, F420V, F457M 2 & 4 200 4,72E-09 F204I, L397D, L400A, F420V 2 & 4 ND ND F204I, L397D, L400A, F457M 2 & 4 ND ND F204I, L397D, F420V, F457M 2 & 4 ND ND F204I, L400A, F420A, F457M 2 & 4 60 3,69E-08 T208S, L397D, L400A, F420V 2 & 4 ND ND T208S, L397D, L400A, F457M 2 & 4 ND ND T208S, L397D, F420V, F457M 2 & 4 ND ND T208S, L400A, F420V, F457M 2 & 4 ND ND L397D, L400A, F420V, F457M 2 & 4 ND ND R128A, F204I, T208S, L400A, F420V 2 & 4 ND ND R128A, F204I, T208S, L397D, F420V 2 & 4 ND ND R128A, F204I, T208S, F420V, F457M 2 & 4 ND ND R128A, F204I, L397D, F420V, F457M 2 & 4 ND ND R128A, T208S, L397D, F420V, F457M 2 & 4 ND ND R128A, T208S, L400A, F420V, F457M 2 & 4 ND ND F204I, T208S, L397D, L400A, F420V 2 & 4 ND ND F204I, T208S, L397D, L400A, F457M 2 & 4 ND ND F204I, T208S, L397D, F420V, F457M 2 & 4 ND ND F204I, T208S, L400A, F420V, F457M 2 & 4 60 9,24E-08 F204I, L397D, L400A, F420V, F457M 2 & 4 ND ND T208S, L397D, L400A, F420V, F457M 2 & 4 ND ND R128A, F204I, L400A, F420V, F457M 2 & 4 50 4,05E-07 R128A, F204I, T208S, L397D, F420V, F457M 2 & 4 ND ND R128A, F204I, T208S, L400A, F420V, F457M 2 & 4 ND ND F204I, T208S, L397D, L400A, F420V, F457M 2 & 4 ND ND
EXEMPLUL 2
Ingineria plantelor tolerante la erbicid care inhibă PPO cu secvenţe PPO de tip sălbatic sau mutante.
Plantele de soia (Glycine max) sau porumb (Zea mays) tolerante la erbicide derivate ai PPO sunt produse printr-o metodă descrisă de Olhoft et al. (US patent 2009/0049567). Pentru transformarea soiei sau Arabidopsis thaliana, secvenţele PPO de tip sălbatic sau mutante sunt clonate folosind tehnicile de clonare standard descrise în Sambrook et al. (Molecular cloning (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press) într-un vector binar care conţine caseta de gene marker de rezistenţă (AHAS) şi secvenţa de PPO mutantă (marcată GOI) între promotorul ubiquitină (PcUbi) şi secvenţa terminală nopalin-sintază (NOS). Pentru transformarea porumbului, secvenţele PPO de tip sălbatic sau mutante sunt clonate folosind tehnicile de clonare standard descrise în Sambrook et al. (Molecular cloning (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press) într-un vector binar care conţine caseta de gene marker de rezistenţă (AHAS) şi secvenţa de PPO mutantă (marcată GOI) între promotorul ubiquitină (ZmUbi) şi secvenţa terminală nopalin-sintază (NOS). Plasmidele binare sunt introduse în Agrobacterium tumefaciens pentru transformarea plantei. Structurile plasmide sunt introduse în celulele meristemului axilar al soiei, la nodul principal al explantelor de răsad prin transformarea mediată de agrobacteria. După inoculare şi co-cultivare cu agrobacterii, explantele sunt transferate în medii de introducere a lăstarilor fără selecţie timp de o săptămână. Explantele au fost ulterior transferate într-un mediu de inducţie s lăstarilor cu 1…3 µM imazapir (Arsenal) timp de 3 săptămâni pentru a selecta celulele transformate. Explantele cu tampoane de calus/lăstari sănătoşi la nodul primar sunt apoi transferate în mediu de alungire a lăstarilor conţinând 1…3 µM imazapir până când un lăstar alungit sau explantul moare. Plantele transgenice sunt înrădăcinate, supuse analizei TaqMan în vederea detectării prezenţei transgenei, transferate în sol şi crescute până la maturitate în seră. Transformarea plantelor de porumb este realizată printr-o metodă descrisă de McElver and Singh (WO 2008/124495). Structuri de vector pentru transformarea plantelor care conţin secvenţe de PPO mutante sunt introduse în embrioni imaturi de porumb prin transformarea mediată de Agrobacterium.
Celulele transformate au fost selectate în medii de selecţie la care s-au adăugat 0,5…1,5 µM imazetapir timp de 3…4 săptămâni. Plantele transgenice au fost regenerate pe medii de regenerare a plantelor şi după aceea înrădăcinate. Plantele transgenice sunt supuse analizei TaqMan în vederea detectării prezenţei transgenei înainte de a fi transplantate în amestecul din ghiveci şi crescute până la maturitate în seră. Arabidopsis thaliana sunt transformate cu secvenţe de PPO de tip sălbatic sau mutant prin metoda "floral dip" descrisă de McElver and Singh (WO 2008/124495). Plantele transgenice de Arabidopsis au fost supuse analizei TaqMan pentru analiza numărului de loci de integrare. Transformarea Oryza sativa (orezului) este efectuată prin transformarea protoplaştilor descrisă de Peng et al. (US 6653529) TEST Planta transgenică T0 sau T1 de soia, porumb, şi orez conţinând secvenţe PPO mutante sunt testate în vederea îmbunătăţirii toleranţei la erbicide derivate ale PPO în studii de seră şi studii pe parcele mici cu următoarele erbicide care inhibă PPO: saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă flumioxazin, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazon, plus diuron inhibitor al fotosintezei, care a fost utilizat ca martor negativ.
Plantele transgenice Arabidopsis thaliana au fost analizate în vederea toleranţei îmbunătăţite la saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă, flumioxazin, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazon, plus diuron inhibitor al fotosintezei, care a fost utilizat ca martor negativ, în plăci du 48 de godeuri. Prin urmare, seminţele T2 sunt sterilizate la suprafaţă prin agitare timp de 5 min în etanol + apă (70 + 30 în volum), fiind clătite o dată cu etanol + apă (70 + 30 în volum) şi de două ori cu apă sterilă, deionizată. Seminţele sunt repuse în suspensie în 0,1% agar dizolvat în apă (g/v). Patru sau cinci seminţe per godeu sunt puse pe mediu nutritiv solid format din soluţie nutritivă murashige skoog semisolidă, pH 5,8 (Murashige and Skoog (1962) Physiologia plantarum 15: 473-497). Compuşii sunt dizolvaţi în dimetilsulfoxid (DMSO) şi adăugaţi la mediu înainte de solidificare (concentraţia finală de DMSO 0,1%). Plăcile cu godeuri multiple sunt incubate într-o cameră de creştere la 22°C, 75% umiditate relativă şi 110 µmol Phot * m-2 * s-1 cu 14 : 10 ore lumină : fotoperioada la întuneric. Inhibarea creşterii este evaluată peste şapte - zece zile după însămânţare, în comparaţie cu plantele de tip sălbatic. În plus, plantele transgenice T1 Arabidopsis au fost testate cu privire la îmbunătăţirea toleranţei la erbicidele care inhibă PPO în studiile de seră cu următoarele erbicide care inhibă PPO: saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă, flumioxazin, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazon, plus diuron inhibitor al fotosintezei, care a fost utilizat ca martor negativ. Rezultatele sunt prezentate în Tabelul 5.
Tabelul 5
Gradul de vătămare 0…100% (0 = nicio vătămare, 100 = control total) 300 150 75 Linia Evaluarea ZDT (ZDT= Zile după tratament) SECV_ID Substituţia 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă g/Ha + 1%MSO 1 7 2 & 4 L397D, F420V 100 30 98 1 19 2 & 4 L397D, F420V 98 65 95 2 7 2 & 4 L397D, F420V 30 98 100 2 19 2 & 4 L397D, F420V 60 100 100 3 7 2 & 4 L397D, F420V 35 98 80 3 19 2 & 4 L397D, F420V 80 100 95
EXEMPLUL 3
Condiţiile de cultivare a ţesuturilor.
A fost elaborată o analiză de mutageneză a culturii de ţesut in vitro pentru a izola şi caracteriza ţesutul plantei (de ex., ţesutul de porumb, orez), care este tolerant la erbicidele care inhibă protoporfirinogen oxidaza (PPO) (de ex. saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă, flumioxazin, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazon). Analiza utilizează variaţia somaclonală care se găseşte în culturile de ţesuturi in vitro. Mutaţiile spontane obţinute din variaţia somaclonală pot fi îmbunătăţite treptat prin mutageneză chimică şi selecţia ulterioară, pe concentraţiile crescute de erbicid.
Prezenta invenţie prezintă condiţiile de cultivare a ţesuturilor pentru stimularea creşterii calusului friabil, embriogen la porumb sau orez, care este regenerabil. Au fost iniţiate calusuri de la 4 soiuri diferite de porumb sau orez, inclusiv soiurile Zea mays şi Japonica (Taipei 309, Nipponbare, Koshihikari) şi, respectiv, Indica (Indica 1). Seminţele au fost sterilizate la suprafaţă în 70% etanol timp de aproximativ 1 min, apoi s-au decolorat cu 20% Clorox comercial timp de 20 min. Seminţele au fost clătite cu apă sterilă şi plasate pe mediu de inducţie a calusului. Diferite medii de inducţie a calusului au fost testate. Listele de ingrediente pentru mediile testate sunt prezentate în Tabelul 6.
Tabelul 6
Ingredientul Furnizorul R001M R025M R026M R327M R008M MS711R Vitamine B5 Sigma 1,0 X Săruri MS Sigma 1,0 X 1,0 X 1,0 X 1,0 X Vitamine MS Sigma 1,0 X 1,0 X Săruri N6 Phytotech 4,0 g/l 4,0 g/l Vitamine N6 Phytotech 1,0 X 1,0 X L-Prolină Sigma 2,9 g/l 0,5 g/l 1,2 g/l Acizi Casamino BD 0,3 g/l 0,3 g/l 2 g/l Caseină hidrolizată Sigma 1,0 mg/l L-Asp Monohidrat Phytotech 150 mg/l Acid nicotinic Sigma 0,5 g/l Hidroclorură de piridoxină Sigma 0,5 g/l Hidroclorură de tiamină Sigma 1,0 mg/l Mio-inozitol Sigma 100 mg/l MES Sigma 500 mg/l 500 mg/l 500 mg/l 500 mg/l 500 mg/l 500 mg/l Maltoză VWR 30 g/l 30 g/l 30 g/l 30 g/l Sorbitol Duchefa 30 g/l Zaharoză VWR 10 g/l 30 g/l NAA Duchefa 50 µg/l 2,4-D Sigma 2,0mg/l 1,0 mg/l MgCl2·6H2O VWR 750 mg/l →pH 5,8 5,8 5,8 5,8 5,8 5,7 Gelrite Duchefa 4,0 g/l 2,5 g/l Agaroză Tip 1 Sigma 7,0 g/l 10 g/l 10 g/l →Autoclavă 15 min 15 min 15 min 15 min 15 min 20 min Kinetină Sigma 2,0 mg/l 2,0 mg/l NAA Duchefa 1,0 mg/l 1,0 mg/l ABA Sigma 5,0 mg/l Cefotaxim Duchefa 0,1 g/l 0,1 g/l 0,1 g/l Vancomicin Duchefa 0,1 g/l 0,1 g/l 0,1 g/l G418 Disulfat Sigma 20 mg/l 20 mg/l 20 mg/l
Mediul de inducţie a calusului R001M a fost selectat după testarea numeroaselor variaţii췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍췍păstrate la întuneric la 30°C. Calusul embriogenic a fost subcultivat pe mediu proaspăt după 10…14 zile.
EXEMPLUL 4
Selectarea calusurilor tolerante la erbicide.
Odată ce condiţiile de cultivare a ţesuturilor au fost determinate, s-au stabilit condiţiile ulterioare de selecţie prin analiza supraveţuirii ţesuturilor în curbele de distrugere cu saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă, flumioxazin, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazon, plus diuron inhibitor al fotosintezei, care a fost utilizat ca martor negativ. S-a efectuat o analiză minuţioasă a acumulării de erbicid în ţesut, precum şi rezistenţa şi stabilitatea sa în celule şi mediul de cultură. Prin aceste experimente, s-a stabilit o doză sub-letală pentru selecţia iniţială a materialului mutant.
Alternativ, s-au iniţiat culturi lichide din calusuri în MS711R cu agitare lentă şi subculturi săptămânale. Odată ce au fost stabilite culturile lichide, agentul de selecţie a fost adăugat direct în balon la fiecare subcultură. După 2…4 runde de selecţie lichidă, culturile au fost transferate în filtre pe medii solide R001M pentru creşterea ulterioară.
După stabilirea dozei iniţiale de saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă, flumioxazin, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazon, plus diuron inhibitor al fotosintezei, care a fost utilizat ca martor negativ, în mediile de selecţie, ţesuturile au fost selectate treptat prin creşterea concentraţiei inhibitorului PPO cu fiecare transfer până la recuperarea celulelor, care au crescut viguros în prezenţa dozelor toxice. Calusurile rezultate au fost subcultivate ulterior la fiecare 3…4 săptămâni pe R001M cu agent selectiv. Peste 26.000 de calusuri au fost supuse selecţiei pentru 4…5 subculturi până când presiunea selectivă a depăşit nivelurile toxice determinate de curbele de distrugere şi s-au continuat observaţiile culturii.
EXEMPLUL 5
Regenerarea plantelor.
Ţesutul tolerant a fost regenerat şi caracterizat molecular cu privire la mutaţiile secvenţei genei PPO şi/sau biochimic pentru activitatea modificată a PPO în prezenţa agentului selectiv. În plus, genele implicate direct şi/sau indirect în biosinteza tetrapirolică şi/sau căile metabolice au fost, de asemenea, secvenţionate pentru a caracteriza mutaţiile. În cele din urmă, enzimele care schimbă calea metabolică (de ex., metabolismul, translocaţia, transportarea) au fost, de asemenea, secvenţionate pentru a caracteriza mutaţiile.
După selecţia erbicidelor, calusurile au fost regenerate cu ajutorul unui regim de medii R025M pentru 10…14 zile, R026M timp de cca 2 săptămâni, R327M până la dezvoltarea lăstarilor bine formaţi, şi R008S până când lăstarii au fost bine înrădăcinaţi pentru transferul în seră. Regenerarea a fost efectuată la lumină. Nici un agent de selecţie n-a fost inclus în timpul regenerării.
După înrădăcinarea puternică, agenţii de regenerare M0 au fost transferaţi în seră în ghivece de formă pătrată sau rotundă. Transplanturile au fost menţinute sub un pahar de plastic transparent până când au fost adaptate la condiţiile din seră. În seră s-a folosit un ciclu zi/noapte de 27°C/21°C (80°F/70°F) cu lumini de sodiu de înaltă presiune de 600W, menţinând lumina pe parcursul a 14 ore în timpul zilei. Plantele au fost udate conform necesităţii, în funcţie de vreme şi au fost fertilizate zilnic.
EXEMPLUL 6
Analiza secvenţelor.
Ţesutul tisular a fost colectat din plantele clonale separate pentru sădire şi analizate ca indivizi. ADN-ul genomic a fost extras folosind kitul Wizard® 96 Magnetic DNA Plant System kit (Promega, brevetele SUA nr. 6,027,945 & 6,368,800) conform instrucţiunilor producătorului. ADN-ul izolat a fost amplificat prin PCR folosind amorsa sens şi anti-sens adecvată.
Amplificarea PCR a fost realizată cu ajutorul polimerazei ADN Hotstar Taq (Qiagen) folosind programul de termociclare la punctul de contact după cum urmează: 96ºC timp de 15 min, urmat de 35 de cicluri (96ºC, 30 sec; 58ºC - 0,2 ºC per ciclu, 30 sec; 72ºC, 3 min şi 30 sec), 10 min la 72ºC.
Produsele PCR au fost verificate în ce priveşte concentraţia şi mărimea fragmentelor prin electroforeză pe gel de agaroză. Produsele PCR defosforilate au fost analizate prin secvenţierea directă, folosind amorsele PCR (DNA Landmarks, sau Entelechon). Fişierele cromatogramei (scf) au fost analizate cu privire la mutaţia în raport cu gena de tip sălbatic folosind Vectorul NTI Advance 10™ (Invitrogen). Pe baza informaţiilor privind secvenţele, mutaţiile au fost identificate în mai mulţi indivizi. Analiza secvenţelor a fost realizată pe cromatogramele reprezentative şi corespunzătoare alinierii AlignX cu setările implicite şi editate pentru a apela TEST vârfurile secundare.
EXEMPLUL 7
Demonstrarea toleranţei la erbicide.
Plantele mutante şi cele care au devenit sălbatice selectate au fost transferate în ghivece mici. Soiuri de tip sălbatic au fost germinate din seminţe pentru a servi în calitate de martori.
Peste circa 3 săptămâni după sădire, agenţii de regenerare M0 au fost pulverizaţi cu ajutorul unui pulverizator cu saflufenacil,1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă, flumioxazin, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazon (plus diuron) la care s-a adăugat 0,1% ulei de seminţe metilat. După ce plantele s-au adaptat la condiţiile de seră, un subset a fost pulverizat cu saflufenacil suplimentar sau1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă. După ce a fost pulverizat, plantele nu au fost udate timp de 24 ore şi apoi au fost fertilizate din nou. Plantele pulverizate au fost fotografiate şi evaluate cu privire la daunele cauzate de erbicid după 1 şi 3 săptămâni de tratament. Nu s-au observat daune sau un grad redus de daună a fost observat pe plantele ce conţineau mutaţia heterozigotă, în timp ce plantele de control şi plantele devenite sălbatice în cultivarea ţesuturilor (plante regenerate negative la mutaţiile secvenţionate) au fost grav deteriorate după tratament.
Ratele de toleranţă pentru porumb şi soia sunt prezentate în Tabelele 7 a-c.
Porumb
Tabelul 7 a
Substituirea aminoacizilor SECV ID Nr. Evenimentul Saflufenacil (g ai/ha) 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4) (g ia/ha) 0 25 50 100 50 niciuna niciuna 1 0 * * * * 2 3 * * * * 3 0 * * * * 4 0 * * * * 5 0 * * * * 6 0 * * * * 7 0 * * * * 8 * * 7 * * 9 * * 7 * * 10 * * * 7 * 11 * * * 7 * 12 * * * 8 * 13 * * * 7 * 14 * * * 8 * 15 * * * * 6 16 * * * * 7 17 * * * * 6 18 * * * * 6 19 * * * * 7 20 * * * * 6 niciuna 40 1 * 7 * * * 2 * 7 * * * 3 * * * * * 4 * 8 * * * 5 * 7 * * * 6 * * 8 * * 7 * * 8 * * 8 * * 7 * * 9 * * 8 * * 1 * * 8 * * 2 * * 8 * * 3 * * * 7 * 4 * * * 8 * 5 * * * 8 * 6 * * * 8 * 7 * * * 8 * 8 * 7 * * * 9 * 7 * * * 10 * 7 * * * 11 * 4 * * * 12 * 5 * * * 13 * 4 * * * 14 * 7 * * * 15 * * 7 * * 16 * * 7 * * 17 * * 7 * * 18 * * 6 * * 19 * * 7 * * 20 * * 7 * * 21 * * 7 * * 22 * * 7 * * 23 * * 7 * * 24 * * 7 * * 25 * * 6 * * 26 * * 7 * * 27 * * 7 * * 28 * * * 7 * 29 * * * 7 * 30 * * * 6 * 31 * * * 6 * 32 * * * 7 * 33 * * * 8 * 34 * * * 7 * 35 * * * 7 * 36 * * * 6 * 37 * * * 8 * 38 * * * 7 * L369D, F392V 40 1 * 7 * * * 2 * 4 * * * 3 * 6 * * * 4 * 6 * * * 5 * 7 * * * 6 * 6 * * * 7 * 7 * * * 8 * * 7 * * 9 * * 6 * * 10 * * 7 * * 11 * * 6 * * 12 * * 8 * * 13 * * 7 * * 14 * * 7 * * 15 * * 8 * * 16 * * 6 * * 17 * * 7 * * 18 * * 7 * * 19 * * 7 * * 20 * * 7 * * 21 * * 8 * * 22 * * 9 * * 23 * * 7 * * 24 * * 4 * * 25 * * 6 * * 26 * * 7 * * 27 * * 7 * * 28 * * 8 * * 29 * * 5 * * 30 * * * 8 * 31 * * * 8 * 32 * * * 7 * 33 * * * 7 * 34 * * * 7 * 35 * * * 8 * 36 * * * 7 * 37 * * * 6 * 38 * * * 7 * 39 * * * 7 * 40 * * * 8 * 41 * * * 8 * 42 * * * 8 * 43 * * * 7 * 44 * * * 8 * 45 * * * 7 * 46 * * * 7 * 47 * * * 8 * niciuna 2 1 * 7 * * * 2 * 7 * * * 3 * 8 * * * 4 * 6 * * * 5 * 6 * * * 6 * 7 * * * 7 * 7 * * * 8 * 7 * * * 9 * 7 * * * 10 * 6 * * * 11 * * 6 * * 12 * * 6 * * 13 * * 7 * * 14 * * 8 * * 15 * * 7 * * 16 * * 6 * * 17 * * 7 * * 18 * * 6 * * 19 * * 7 * * 20 * * 7 * * 21 * * 8 * * 22 * * 8 * * 23 * * 7 * * 24 * * 8 * * 25 * * 7 * * 26 * * 8 * * 27 * * * 8 * 28 * * * 7 * 29 * * * 8 * 30 * * * 7 * 31 * * * 7 * 32 * * * 8 * 33 * * * 8 * 34 * * * 7 * 35 * * * 8 * 36 * * * 7 * 37 * * * 7 * 38 * * * 8 * 39 * * * 6 * 40 * * * 7 * 41 * * * 8 * 42 * * * 7 * F420V 2 1 0 * * * * 2 0 * * * * 3 * 6 * * * 4 * 7 * * * 5 * 6 * * * 6 * 7 * * * 7 * 6 * * * 8 * 4 * * * 9 * 6 * * * 10 * 6 * * * 11 * 6 * * * 12 * 7 * * * 13 * 7 * * * 14 * 7 * * * 15 * * 7 * * 16 * * 8 * * 17 * * 7 * * 18 * * 7 * * 19 * * 7 * * 20 * * 7 * * 21 * * 7 * * 22 * * 7 * * 23 * * 7 * * 24 * * 6 * * 25 * * 7 * * 26 * * 8 * * 27 * * 7 * * 28 * * 6 * * 29 * * 7 * * 30 * * 7 * * 31 * * 7 * * 32 * * 7 * * 33 * * * 7 * 34 * * * 7 * 35 * * * 7 * 36 * * * 7 * 37 * * * 7 * 38 * * * 7 * 39 * * * 7 * 40 * * * 8 * 41 * * * 7 * 42 * * * 8 * 43 * * * 7 * 44 * * * 7 * 45 * * * 9 * 46 * * * 8 * 47 * * * 7 * 48 * * * 7 * 49 * * * 8 * 50 * * * 7 * 51 * * * 7 * L397D 2 1 0 * * * * 2 0 * * * * 3 0 * * * * 4 0 * * * * 5 0 * * * * 6 0 * * * * 7 0 * * * * 8 0 * * * * 9 0 * * * * 10 0 * * * * 11 0 * * * * 12 0 * * * * 13 1 * * * * 14 0 * * * * 15 0 * * * * 16 0 * * * * 17 0 * * * * 18 0 * * * * 19 0 * * * * 20 0 * * * * 21 0 * * * * 22 0 * * * * 23 0 * * * * 24 0 * * * * 25 0 * * * * 26 0 * * * * 27 0 * * * * 28 0 * * * * 29 0 * * * * 30 0 * * * * 31 0 * * * * 32 0 * * * * 33 0 * * * * 34 0 * * * * 35 1 * * * * 36 0 * * * * 37 * 6 * * * 38 * 6 * * * 39 * 6 * * * 40 * 6 * * * 41 * 6 * * * 42 * 7 * * * 43 * 6 * * * 44 * 5 * * * 45 * 6 * * * 46 * 8 * * * 47 * 7 * * * 48 * 7 * * * 49 * 6 * * * 50 * 4 * * * 51 * 7 * * * 52 * 4 * * * 53 * 4 * * * 54 * * 6 * * 55 * * 6 * * 56 * * 6 * * 57 * * 6 * * 58 * * 6 * * 59 * * 7 * * 60 * * 6 * * 61 * * 6 * * 62 * * 4 * * 63 * * 7 * * 64 * * 7 * * 65 * * 7 * * 66 * * 7 * * 67 * * 6 * * 68 * * 6 * * 69 * * 5 * * 70 * * 4 * * 71 * * 7 * * 72 * * 7 * * 73 * * 6 * * 74 * * 7 * * 75 * * 6 * * 76 * * 7 * * 77 * * 7 * * 78 * * 7 * * 79 * * 7 * * 80 * * 7 * * 81 * * 5 * * L397D, F420V 2 1 0 * * * * 2 0 * * * * 3 0 * * * * 4 0 * * * * 5 0 * * * * 6 0 * * * * 7 0 * * * * 8 0 * * * * 9 0 * * * * 10 0 * * * * 11 0 * * * * 12 0 * * * * 13 0 * * * * 14 0 * * * * 15 0 * * * * 16 0 * * * * 17 0 * * * * 18 0 * * * * 19 0 * * * * 20 0 * * * * 21 0 * * * * 22 0 * * * * 23 0 * * * * 24 0 * * * * 25 0 * * * * 26 * 6 * * * 27 * 5 * * * 28 * 6 * * * 29 * 7 * * * 30 * 7 * * * 31 * 6 * * * 32 * 6 * * * 33 * * 4 * * 34 * * 6 * * 35 * * 6 * * 36 * * 6 * * 37 * * 6 * * 38 * * 6 * * 39 * * 7 * * 40 * * 6 * * 41 * * 7 * * 42 * * 6 * * 43 * * 7 * * 44 * * 7 * * 45 * * 7 * * 46 * * 7 * * 47 * * 7 * * 48 * * 7 * * 49 * * 7 * * 50 * * 6 * * F420L 2 1 0 * * * * 2 0 * * * * 3 0 * * * * 4 0 * * * * 5 * 6 * * * 6 * 7 * * * 7 * 6 * * * 8 * 7 * * * 9 * 7 * * * 10 * 6 * * * 11 * 7 * * * 12 * 6 * * * 13 * 7 * * * 14 * 7 * * * 15 * 6 * * * 16 * 7 * * * 17 * * 7 * * 18 * * 8 * * 19 * * 7 * * 20 * * 7 * * 21 * * 7 * * 22 * * 7 * * 23 * * 7 * * 24 * * 7 * * 25 * * 7 * * 26 * * 7 * * 27 * * 7 * * 28 * * 7 * * 29 * * 8 * * 30 * * 7 * * 31 * * 6 * * 32 * * 7 * * 33 * * 7 * * 34 * * 7 * * 35 * * 6 * * 36 * * 7 * * 37 * * 7 * * 38 * * 7 * * 39 * * 7 * * 40 * * * 8 * 41 * * * 7 * 42 * * * 7 * 43 * * * 7 * 44 * * * 7 * 45 * * * 7 * 46 * * * 7 * 47 * * * 7 * 48 * * * 7 * 49 * * * 7 * 50 * * * 7 * 51 * * * 7 * 52 * * * 7 * 53 * * * 7 * 54 * * * 7 * 55 * * * 6 * 56 * * * 8 * 57 * * * 7 * 58 * * * 8 * 59 * * * 7 * 60 * * * 7 * F420M 2 1 0 * * * * 2 0 * * * * 3 0 * * * * 4 1 * * * * 5 0 * * * * 6 0 * * * * 7 0 * * * * 8 0 * * * * 9 0 * * * * 10 0 * * * * 11 0 * * * * 12 0 * * * * 13 0 * * * * 14 0 * * * * 15 0 * * * * 16 * 4 * * * 17 * 6 * * * 18 * 8 * * * 19 * 7 * * * 20 * 7 * * * 21 * 5 * * * 22 * 5 * * * 23 * 6 * * * 24 * 8 * * * 25 * * 7 * * 26 * * 7 * * 27 * * 6 * * 28 * * 8 * * 29 * * 8 * * 30 * * 7 * * 31 * * 7 * * 32 * * 7 * * 33 * * 7 * * 34 * * 7 * * 35 * * 8 * * 36 * * 8 * * 37 * * 8 * * 38 * * 7 * * 39 * * 7 * * L397E, F420V 2 1 0 * * * * 2 0 * * * * 3 0 * * * * 4 0 * * * * 5 0 * * * * 6 0 * * * * 7 0 * * * * 8 1 * * * * 9 0 * * * * 10 2 * * * * 11 0 * * * * 12 1 * * * * 13 0 * * * * 14 0 * * * * 15 0 * * * * 16 0 * * * * 17 0 * * * * 18 2 * * * * 19 1 * * * * 20 0 * * * * 21 1 * * * * 22 2 * * * * 23 1 * * * * 24 2 * * * * 25 2 * * * * 26 1 * * * * 27 2 * * * * 28 1 * * * * 29 * 1 * * * 30 * 0 * * * 31 * 0 * * * 32 * 3 * * * 33 * 1 * * * 34 * 0 * * * 35 * 1 * * * 36 * * 1 * * 37 * * 1 * * 38 * * 0 * * 39 * * 2 * * 40 * * 0 * * 41 * * 1 * * 42 * * 3 * * 43 * * 2 * * 44 * * 0 * * 45 * * 2 * * 46 * * 1 * * 47 * * 2 * * 48 * * 2 * * 49 * * 3 * * 50 * * 2 * * 51 * * * 0 * 52 * * * 0 * 53 * * * 1 * 54 * * * 3 * 55 * * * 2 * 56 * * * 2 * 57 * * * 2 * 58 * * * 1 * 59 * * * 1 * 60 * * * * 3 61 * * * * 1 62 * * * * 2 63 * * * * 2 64 * * * * 3 L397Q, F420V 2 1 0 * * * * 2 0 * * * * 3 0 * * * * 4 0 * * * * 5 1 * * * * 6 0 * * * * 7 0 * * * * 8 0 * * * * 9 0 * * * * 10 * * * 4 * 11 * * * 2 * 12 * * * 3 * 13 * * * 2 * 14 * * * 7 * 15 * * * 3 * 16 * * * 3 * 17 * * * 3 * 18 * * * 5 * 19 * * * * 3 20 * * * * 2 21 * * * * 3 22 * * * * 3 23 * * * * 2 L397E, F420M 2 1 1 * * * * 2 0 * * * * 3 0 * * * * 4 0 * * * * 5 0 * * * * 6 0 * * * * 7 0 * * * * 8 0 * * * * 9 * * * 1 * 10 * * * 0 * 11 * * * 1 * 12 * * * 0 * 13 * * * 7 * 14 * * * 1 * 15 * * * 0 * 16 * * * 1 * 17 * * * * 0 18 * * * * 1 L397Q, F420M 2 1 0 * * * * 2 0 * * * * 3 0 * * * * 4 0 * * * * 5 1 * * * * 6 0 * * * * 7 0 * * * * 8 0 * * * * 9 1 * * * * 10 * * * 0 * 11 * * * 0 * 12 * * * 1 * 13 * * * 1 * 14 * * * 1 * 15 * * * 1 * 16 * * * 1 * 17 * * * * 3 18 * * * * 3 L397D, F420M 2 1 0 * * * * 2 0 * * * * 3 0 * * * * 4 0 * * * * 5 0 * * * * 6 0 * * * * 7 0 * * * * 8 0 * * * * 9 0 * * * * 10 0 * * * * 11 1 * * * * 12 1 * * * * 13 0 * * * * 14 0 * * * * 15 2 * * * * 16 1 * * * * 17 1 * * * * 18 1 * * * * 19 0 * * * * 20 1 * * * * 21 * 2 * * * 22 * 2 * * * 23 * 2 * * * 24 * 3 * * * 25 * 1 * * * 26 * 3 * * * 27 * 3 * * * 28 * 3 * * * 29 * 3 * * * 30 * 3 * * * 31 * 3 * * * 32 * * 1 * * 33 * * 1 * * 34 * * 2 * * 35 * * 1 * * 36 * * 1 * * 37 * * 3 * * 38 * * 3 * * 39 * * 2 * * 40 * * 0 * * 41 * * 3 * * 42 * * 3 * * 43 * * 2 * * 44 * * 1 * * 45 * * 2 * * 46 * * 2 * * 47 * * * 7 * 48 * * * 3 * 49 * * * 3 * 50 * * * 3 * 51 * * * * 3 L397Q 2 1 0 * * * * 2 1 * * * * 3 0 * * * * 4 1 * * * * 5 0 * * * * 6 0 * * * * 7 * * * 4 * 8 * * * 4 * 9 * * * 4 * 10 * * * 4 * 11 * * * 4 * 12 * * * 5 * 13 * * * 5 * 14 * * * 5 * 15 * * * * 6 16 * * * * 6 17 * * * * 5 18 * * * * 7 19 * * * * 6
Soia
Tabelul 7 b)
Substituirea aminoacizilor SECV ID Nr. saflufenacil (g ia/ha) 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă (CAS 1258836-72-4) (g ia/ha) 0 12,5 25 50 100 200 12,5 25 50 75 niciuna niciuna 0 9 9 9 9 9 7 8 9 9 niciuna 40 1 8 9 8 * * 8 8 * * 1 9 9 * * * 8 9 * * 0 3 6 9 * * 6 6 * * 2 4 6 8 * * 6 7 * * 1 9 9 9 * * 7 7 * * 0 9 9 9 * * 8 8 * * 0 8 9 8 * * 8 * * * 0 8 9 9 * * 7 9 * * 0 7 9 9 * * 8 9 * * 0 9 9 9 * * 8 9 * * 0 9 9 9 * * 9 9 * * 0 8 9 8 * * 7 8 * * 0 9 9 9 * * 8 9 * * L369D, F392V 40 0 9 9 9 * * 8 9 * * 0 7 9 9 * * 8 8 * * 0 4 5 6 * * 5 6 * * 0 5 6 7 * * 8 8 * * 0 9 9 9 * * 7 9 * * 0 6 7 7 * * 8 7 * * 0 4 4 5 * * 5 4 * * 2 5 6 6 * * 6 7 * * * 4 5 6 * * 4 6 * * 0 5 6 6 * * 5 7 * * 0 4 5 5 * * 4 6 * * 0 * 6 9 9 * * 8 8 * * * 5 6 6 * * 6 7 * niciuna 2 0 2 4 7 * * 3 5 * * 0 4 3 7 * * 7 7 * * 0 4 7 8 * * 6 6 * * 0 7 9 9 * * 6 8 * * 1 7 8 9 * * 7 8 * * 0 8 7 9 * * 5 6 * * 0 5 8 9 * * 7 * * * 5 7 8 9 * * 7 * * * 0 5 7 6 * * 6 7 * * L397D 2 2 * 7 9 9 * * 8 9 * 1 * 2 4 4 * * 4 5 * 1 * 9 9 9 * * 8 8 * 1 * 2 3 4 * * 4 4 * 0 * 5 6 6 * * 5 5 * 0 * 3 5 5 * * 4 5 * * * 2 4 6 * * 5 6 * L397E 2 0 5 3 3 * * 5 5 * * 1 4 6 6 * * 7 8 * * 0 4 4 4 * * 6 8 * * * 4 5 6 * * 4 6 * * 0 4 6 6 * * 6 7 * * 1 4 6 6 * * 6 8 * * 0 0 1 3 * * 8 6 * * 0 5 4 4 * * 5 8 * * 0 3 6 7 * * 6 8 * * L397Q 2 0 4 3 8 * * 7 9 * * F420L 2 1 * 9 9 9 * * 9 * * 0 1 0 0 * * 2 1 * * 1 0 2 2 * * * 3 * * 1 3 1 1 * * 1 * * * 0 * 2 3 4 * * 4 6 * 0 * 2 5 6 * * 5 6 * 0 * 2 3 5 * * 5 6 * F420M 2 1 * 0 3 3 * * 4 * * 0 * 4 6 5 * * * 3 * 0 * 0 2 3 * * 1 4 * 0 * 4 3 3 * * 4 * * 0 * 0 3 2 * * * 2 * 0 * 0 3 3 * * 1 2 * 2 * 5 6 6 * * 5 5 * 0 * 9 9 9 * 8 9 * L397D, F420V 2 0 * 3 6 6 * * 5 4 * 1 1 1 2 * * 2 * * * 1 0 0 1 * * 3 1 * * 2 * 4 6 6 * * 6 6 * 0 * 6 7 7 * * 6 6 * 0 * 5 4 5 * * 5 5 * 0 * 5 4 4 * * 6 * * 0 * 5 5 5 * * 6 * * * * 8 9 9 * * 6 7 * L397D, F420M 2 0 * * * 6 * * 0 3 * * * * 9 9 * * * 9 8 3 * * 3 2 * * 1 2 3 L397E, F420V 2 1 * * 0 0 * * 1 2 2 0 * * 8 8 * * 7 8 8 2 * * 6 6 * * 6 7 7 L397Q, F420V 2 0 * * 3 5 * * 5 4 6 0 * * 1 * * * 0 1 3 0 * * 6 7 * * 7 7 7 0 * * 8 9 * * 9 8 9 2 * * 2 2 * * 5 4 7 * * * 3 3 * * 4 4 4 1 * * 9 9 * * 8 8 9 0 * * 0 2 * * 0 1 1 0 * * 0 3 * * 2 4 5 0 * * 0 0 * * 4 5 5 0 * * 7 7 * * 6 7 7 L397E, F420M 2 0 * * 1 2 * * 2 2 2 0 * * 0 0 * * 1 1 3 0 * * 2 1 * * 0 1 1 L397Q, F420M 2 0 * * 0 0 * * 3 2 3 1 * * 6 7 * * 7 7 7 1 * * 6 7 * * 7 7 8 1 * * 1 3 * * 2 3 4 0 * * 0 3 * * 0 4 5 0 * * 0 0 * * 2 4 4 * * * 5 6 * * 6 6 6 2 * * 4 6 * * 6 6 * 3 * * 0 0 * * 3 5 5 1 * * 0 1 * * 2 1 2 0 * * 1 2 * * 2 3 4
Toleranţa soiei la compuşi inhibitori ai PPO: Indivizi T1 de tip sălbatic şi de segregare transgenică din 2 evenimente independente Tabelul 7 c) Substituirea aminoacizilor SECV ID Nr. saflufenacil 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă Fomesafen Flumioxazin Sulfentrazon Sulfentrazon Oxifluorfen Oxifluorfen Nepulverizat 150 g ai/ha 100 g ai/ha 600 g ai/ha 150 g ai/ha 350 g ai/ha 700 g ai/ha 600 g ai/ha 1200 g ai/ha niciuna niciuna 0 9 9 5 9 9 9 8 9 0 9 9 5 9 9 9 7 9 0 9 9 4 9 7 9 8 9 0 9 9 4 9 7 9 9 9 0 9 9 4 9 8 9 7 8 1 9 8 5 9 9 9 8 9 * 9 9 4 9 9 9 9 9 * 9 9 5 9 9 9 7 8 L397D_F420V 2 0 3 9 1 9 9 2 4 5 Evenimentul A 0 5 4 2 6 * 3 4 5 0 3 4 0 6 6 7 5 4 0 4 4 0 5 3 7 6 4 0 6 4 1 5 5 4 6 3 0 4 9 0 4 3 4 9 4 * 3 4 2 4 5 6 4 4 * 5 4 4 6 6 4 4 5 L397D_F420V 2 1 3 4 2 5 4 4 6 5 Evenimentul B 0 2 3 4 6 4 5 4 5 0 3 3 1 6 4 5 8 4 0 3 3 3 5 5 4 4 5 0 4 4 2 6 5 5 4 4 0 4 3 1 4 4 6 5 6 * 3 4 3 5 6 6 4 5 * 4 4 3 4 4 5 6 5
În continuare sunt definite punctajele de vătămare măsurate mai sus:
Punctaj Descrierea vătămării
0 - Nicio vătămare
1 - Vătămare minimă, doar câteva pete de vătămare a frunzei sau cloroză.
2 - Vătămare minimă cu cloroză puţin mai puternică. Punctele generale de creştere rămân nevătămate.
3 - Vătămare puţin mai puternică asupra ţesutului secundar al frunzei, dar frunza primară şi punctele de creştere sunt încă nevătămate.
4 - Morfologia generală a plantei este puţin diferită, o uşoară cloroză şi necroză în punctele de creştere secundare şi ţesutul frunzei. Tulpinile sunt intacte. Regenerarea este foarte probabilă după o săptămână.
5 - Morfologia generală a plantei este clar diferită, o uşoară cloroză şi necroză pe câteva frunze şi puncte de creştere, însă punctul de creştere primar este intact. Ţesutul tulpinii este încă verde. Regenerarea este foarte probabilă după o săptămână.
6 - O vătămare puternică poate fi observată în creşterea frunzei noi. Planta are o probabilitate înaltă de supravieţuire doar prin regenerarea la diferite puncte de creştere. Majoritatea frunzelor sunt clorotice/necrotice, dar ţesutul tulpinii este încă verde. Poate avea loc regenerarea dar cu aspect vizibil vătămat.
7 - Majoritatea punctelor de creştere activă sunt necrotice. Poate exista un singur punct de creştere care ar putea supravieţui şi poate fi parţial clorotic sau verde şi parţial necrotic. Două frunze pot fi încă clorotice de nuanţă puţin verzuie; restul plantei inclusiv tulpina este necrotică.
8 - Planta se va usca probabil, şi toate punctele de creştere sunt necrotice. O frunză poate fi încă clorotică de nuanţă puţin verzuie. În rest planta este necrotică.
9 - Planta este moartă.
* Netestată
EXEMPLUL 8
Selecţia erbicidelor folosind cultura de ţesut.
Mediul a fost selectat pentru utilizare şi curbele de ucidere au fost elaborate conform descrierii de mai sus. Pentru selectare, au fost utilizate diverse tehnici. S-a aplicat o selecţie treptată, sau s-a aplicat un nivel letal imediat al erbicidului. În ambele cazuri, toate calusurile au fost transferate pentru fiecare nouă rundă de selecţie. Selecţia a fost de 4…5 cicluri de cultură cu 3…5 săptămâni pentru fiecare ciclu. Calusurile au fost plasate pe membranele de nylon pentru a facilita transferul (foi cu pori de 200 microni, Biodesign, Saco, Maine). Membranele au fost tăiate pentru a fi ajustate la vasele Petri de 100x20 mm şi au fost sterilizate în autoclavă înainte de utilizare; 25…35 de calusuri (greutatea medie/calusuri fiind 22 mg) au fost utilizate în fiecare placă. În plus, un set de calusuri a fost supus selecţiei în medii de cultură lichidă cu subculturi săptămânale, urmată de selecţia ulterioară pe medii semisolide.
Liniile mutante au fost selectate folosind saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă flumioxazin, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazon. Eficacitatea obţinerii mutanţilor a fost înaltă chiar şi pe baza unui procentaj de calusuri care a dat naştere unei linii mutante, regenerabile sau numărului de linii determinat de gramul de ţesut utilizat.
EXEMPLUL 9
Screeningul celulelor de alge supuse mutagenezei pentru a identifica clonele tolerante la erbicide şi identificarea mutaţţilor cauzative în genele PPO
Pentru a genera mutaţii în genele PPO care conferă rezistenţă "erbicidelor ce inhibă PPO", poate fi utilizat screeningul cu populaţii de celule mutante chimice sau UV. În special organismele unicelulare ca Chlamydomonas reinhardtii sunt utile pentru identificarea mutaţiilor dominante care conferă rezistenţă la erbicide (Kataoka M, et al.; 1990; J. of Pest. Sci. 15: 449-451; Oshio H, et al.; 1993; Zeitschrift für Naturforschung 48: 339-344).
Celulele de alge ale tulpinilor Chlamydomonas reinhardtii CC-503 şi CC-1691 (Duke University, Durham, SUA) au fost răspândite în mediul TAP (Gorman and Levine; 1965; PNAS 54: 1665-1669) prin agitarea constantă la 100 rpm, 22°C şi 30 µmol Phot * m-2 * s-2 fotoiluminare. Screeningul compuşilor a fost efectuat la 450 µmol Phot * m-2 * s-2 iluminare.
Tulpini sensibile de Chlamydomonas reinhardtii au fost supuse mutagenezei cu 0,14 M etilmetansulfonat (EMS) timp de 1 oră după cum este descris de Loppes (1969, Mol Gen Genet 104: 172-177). Tulpini tolerante sunt identificate prin screeningul celulelor mutagene pe plăci cu mediu TAP solid conţinând "erbicid care inhibă PPO" ca saflufenacil sau 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluor-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinan-2,4-dionă în concentraţii letale, în funcţie de activitatea compusului în tulpina CC-503 sau CC-1691.
Tehnicile standard au fost utilizate pentru izolarea ARN-ului şi sinteza ADNc după cum este descris de Sambrock et al. (Molecular cloning (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press). Amplificarea genelor PPO din Chlamydomonas reinhardii de tip sălbatic şi rezistent din ADN genomic sau copie de ADN ca model a fost realizată prin tehnici de PCR standard cu oligonucleotide ADN prezentate în Tabelul 5. Moleculele de ADN rezultate au fost clonate în vectorul de secvenţiere standard (pJET1) şi secvenţionate prin tehnici de secventionare standard. Mutaţiile au fost identificate prin compararea secvenţelor de PPO de tip sălbatic şi mutant prin instrumentul de aliniere a secvenţelor Align X (Vector NTI Advance Software Version 10.3, Invitrogen, Carlsbad, CA, SUA).
Amorsa PCR pentru amplificarea CrPPO
Tabelul 8
Denumirea amorsei Secvenţa amorsei (5' - 3') Cr_PPO1_Fw ATGATGTTGACCCAGACTCCTGGGAC Cr_PPO1_Rv TTAGGCCTTGACTGCGGCCTTGGAC
1. US 5767373 A 1998.06.16
2. WO 2007/024739 A2 2007.03.01

Claims (13)

1. Procedeu de combatere a vegetaţiei nedorite pe un teren de cultivare a plantelor, procedeul dat fiind format din etapele: a) furnizare pe terenul respectiv a unei plante care conţine cel puţin un acid nucleic, ce cuprinde o secvenţă de nucleotide care codifică sau o protoporfirinogen oxidază mutantă (mut-PPO), care este rezistentă sau tolerantă la un erbicid care inhibă PPO, şi b) aplicare pe terenul respectiv a unei cantităţi eficiente de erbicidul menţionat, unde secvenţa de nucleotide din etapa a) cuprinde secvenţa SEQ ID NO: 1 sau 3 sau o variantă a acesteia, având o identitate a secvenţei de cel puţin 80% în raport cu secvenţa de nucleotide SEQ ID NO: 1 sau 3, şi unde mut-PPO a SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4 cuprinde următoarele: a) aminoacidul ce corespunde poziţiei 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu, sau Gln; şi b) aminoacidul ce corespunde poziţiei 420 este Val sau Met.
2. Procedeu conform revendicării 1, unde planta include, cel puţin, un acid nucleic heterolog suplimentar care cuprinde o secvenţă de nucleotide ce codifică o enzimă tolerantă la erbicid.
3. Procedeu conform uneia dintre revendicările 1 - 2, unde erbicidul care inhibă PPO se aplică împreună cu unul sau mai multe erbicide suplimentare.
4. Casetă de expresie, care cuprinde un acid nucleic izolat ce codifică o polipeptidă mut-PPO, unde acidul nucleic are o identitate a secvenţei de cel puţin 80% în raport cu secvenţa de nucleotide SEQ ID NO: 1 sau 3, şi unde mut-PPO codificată este o variantă a SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4, în care aminoacidul ce corespunde poziţiei 420 este Val sau Met, iar aminoacidul ce corespunde poziţiei 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu, sau Gln, unde polipeptida menţionată mut-PPO conferă rezistenţă sau toleranţă sporită la un erbicid care inhibă PPO într-o plantă comparativ cu o plantă sălbatică.
5. Polipeptidă mut-PPO care cuprinde o secvenţă, care este în măsură de cel puţin 80% identică cu SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4, în care aminoacidul ce corespunde poziţiei 420 este Met sau Val, iar aminoacidul ce corespunde poziţiei 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu, sau Gln, în care polipeptida mut-PPO menţionată conferă rezistenţă sau toleranţă sporită la un erbicid care inhibă PPO într-o plantă comparativ cu o plantă sălbatică.
6. Celulă de plantă transgenică transformată de un acid nucleic care codifică o polipeptidă mut-PPO, care este în măsură de cel puţin 80% identică cu SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4, unde expresia acidului nucleic în celula de plantă duce la sporirea rezistenţei sau toleranţei la un erbicid care inhibă PPO, comparativ cu un soi sălbatic de celula de plantă şi unde mut-PPO codificată este o variantă a SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4, care include aminoacidul ce corespunde poziţiei 397 şi care este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu sau Gln, şi aminoacidul ce corespunde poziţiei 420, care este Met sau Val.
7. Celulă de plantă transgenică, conform revendicării 6, unde acidul nucleic care codifică polipeptida mut-PPO cuprinde o secvenţă de polinucleotide selectată din grupul ce constă dintr-o: a) polinucleotidă prezentată în SEQ ID NO: 1 sau 3, sau o variantă a acesteia, având o identitate a secvenţei de cel puţin 80% în raport cu secvenţa de nucleotide SEQ ID NO: 1 sau 3; b) polinucleotidă care codifică o polipeptidă, care este în măsură de cel puţin 80% identică SEQ ID NO: 2 sau 4; c) polinucleotidă care cuprinde cel puţin 60 de nucleotide consecutive ale oricăreia dintre a) sau b); şi d) polinucleotidă complementară polinucleotidei oricăreia dintre a) - c).
8. Plantă transgenică care cuprinde o celulă de plantă, conform revendicării 6 sau 7, unde expesia acidului nucleic care codifică polipeptida mut-PPO în plantă duce la sporirea rezistenţei plantei la un erbicid care inhibă PPO comparativ cu o plantă sălbatică.
9. Plantă care exprimă o polipeptidă mut-PPO supusă mutagenezei sau recombinantă ce cuprinde o secvenţă, care este în măsură de cel puţin 80% identică cu SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4, în care aminoacidul ce corespunde poziţiei 420 este Met sau Val, iar aminoacidul ce corespunde poziţiei 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu, sau Gln, unde mut-PPO menţionată conferă plantei toleranţă sporită la erbicid comparativ cu soiul de plantă sălbatic corespunzător, atunci când este exprimată în aceasta.
10. Sămânţă produsă de o plantă transgenică care cuprinde o celulă de plantă, conform revendicării 6 sau 7, sau produsă de o plantă conform revendicării 8 sau 9, unde sămânţa este o specie pură pentru rezistenţă sporită la un erbicid care inhibă PPO, comparativ cu soiul de sămânţă de tip sălbatic.
11. Procedeu de producere a unei plante transgenice, ce include (a) transformarea unei celule de plantă cu o casetă de expresie cuprinzând un acid nucleic ce codifică o polipeptidă mut-PPO, care cuprinde o secvenţă, care este în măsură de cel puţin 80% identică cu SEQ ID NO: 2 sau SEQ ID NO: 4, în care aminoacidul ce corespunde poziţiei 420 este Val sau Met, iar aminoacidul ce corespunde poziţiei 397 este Gly, Ala, Ser, Thr, Cys, Val, Ile, Met, Pro, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Asn, Asp, Glu, sau Gln, şi (b) generarea unei plante cu rezistenţă sporită la erbicidul care inhibă PPO din celula de plantă.
12. Procedeu, conform revendicării 11, unde acidul nucleic al mut-PPO cuprinde o secvenţă de polinucleotide selectată din grupa ce constă dintr-o: : a) polinucleotidă prezentată în SEQ ID NO: 1 sau 3, sau o variantă a acesteia, având o identitate a secvenţei de cel puţin 80% în raport cu secvenţa de nucleotide SEQ ID NO: 1 sau 3; b) polinucleotidă care codifică o polipeptidă, care este în măsură de cel puţin 80% identică SEQ ID NO: 2 sau 4; c) polinucleotidă care cuprinde cel puţin 60 de nucleotide consecutive ale oricăreia dintre a) sau b); şi d) polinucleotidă complementară polinucleotidei oricăreia dintre a) - c).
13. Procedeu, conform uneia dintre revendicările 11-12, unde caseta de expresie cuprinde suplimentar o regiune de reglare a iniţierii transcripţiei şi o regiune de reglare a iniţierii translaţiei care sunt funcţionale în plantă.
MDA20150003A 2012-06-19 2013-06-19 Plante cu toleranţă sporită la erbicide MD4683C1 (ro)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261661364P 2012-06-19 2012-06-19
EP12172557 2012-06-19
PCT/EP2013/062744 WO2013189984A2 (en) 2012-06-19 2013-06-19 Plants having increased tolerance to herbicides

Publications (3)

Publication Number Publication Date
MD20150003A2 MD20150003A2 (ro) 2015-06-30
MD4683B1 MD4683B1 (ro) 2020-03-31
MD4683C1 true MD4683C1 (ro) 2020-12-31

Family

ID=48669967

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDA20150003A MD4683C1 (ro) 2012-06-19 2013-06-19 Plante cu toleranţă sporită la erbicide

Country Status (25)

Country Link
US (3) US10100329B2 (ro)
EP (1) EP2861742B1 (ro)
JP (2) JP2015519913A (ro)
KR (1) KR102320526B1 (ro)
CN (1) CN104662155B8 (ro)
AR (1) AR091489A1 (ro)
AU (1) AU2013279363B2 (ro)
BR (1) BR112014031832A2 (ro)
CA (2) CA3210121C (ro)
CO (1) CO7160071A2 (ro)
CR (1) CR20150013A (ro)
EA (1) EA036015B1 (ro)
EC (1) ECSP15001671A (ro)
ES (1) ES2909315T3 (ro)
IL (1) IL236044B (ro)
IN (1) IN2014MN02498A (ro)
MD (1) MD4683C1 (ro)
MX (1) MX357709B (ro)
MY (1) MY173455A (ro)
PH (1) PH12014502821B1 (ro)
PL (1) PL2861742T3 (ro)
UA (1) UA120741C2 (ro)
UY (1) UY34867A (ro)
WO (1) WO2013189984A2 (ro)
ZA (1) ZA201500284B (ro)

Families Citing this family (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MY169304A (en) 2010-12-16 2019-03-21 Basf Agro Bv Plants having increased tolerance to herbicides
AR091489A1 (es) 2012-06-19 2015-02-11 Basf Se Plantas que tienen una mayor tolerancia a herbicidas inhibidores de la protoporfirinogeno oxidasa (ppo)
US10041087B2 (en) 2012-06-19 2018-08-07 BASF Agro B.V. Plants having increased tolerance to herbicides
UA123757C2 (uk) * 2013-08-12 2021-06-02 Басф Агро Б. В. Мутована протопорфіриногеноксидаза, що надає рослинам стійкості до ппо-інгібуючого гербіциду
CA2920591A1 (en) 2013-08-12 2015-02-19 BASF Agro B.V. Plants having increased tolerance to herbicides
MD4770B1 (ro) * 2013-12-18 2021-10-31 BASF Agro B.V. Plante cu toleranţă sporită la erbicide
CN106232604A (zh) 2014-04-17 2016-12-14 巴斯夫欧洲公司 具有除草活性的取代吡啶化合物
US9545108B2 (en) 2014-08-28 2017-01-17 Sumitomo Chemical Company, Limited Herbicidal composition
PH12017501047B1 (en) * 2014-12-16 2022-06-15 Farmhannong Co Ltd Methods for conferring or enhancing herbicide resistance on plants and/or alga with protoporphyrinogen oxidase variants
MX389329B (es) * 2015-06-17 2025-03-11 Basf Agro Bv Plantas que tienen una mayor tolerancia a herbicidas.
EP3331997B1 (en) 2015-08-03 2024-01-24 Monsanto Technology LLC Methods and compositions for herbicide tolerance in plants
US10563220B2 (en) * 2015-12-21 2020-02-18 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for efficient targeting of transgenes
EP3458591B1 (en) 2016-05-20 2024-10-23 BASF Agro B.V. Dual transit peptides for targeting polypeptides
CA3024985A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Farmhannong Co., Ltd. Methods and compositions for conferring and/or enhancing herbicide tolerance using protoporphyrinogen oxidase or variant thereof
WO2017217794A1 (en) 2016-06-16 2017-12-21 Farmhannong Co., Ltd. Protoporphyrinogen oxidase variants and methods and compositions for conferring and/or enhancing herbicide tolerance using the same
CA3032014A1 (en) 2016-07-27 2018-02-01 BASF Agro B.V. Plants having increased tolerance to herbicides
UA127343C2 (uk) 2016-07-29 2023-07-26 Монсанто Текнолоджі Ллс Спосіб і композиція для експресії генів в рослині
CN110382702A (zh) 2016-12-20 2019-10-25 巴斯夫农业公司 具有增加的除草剂耐性的植物
PH12020550693B1 (en) 2017-11-29 2024-04-17 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
US11219221B2 (en) 2017-12-15 2022-01-11 Farmhannong Co., Ltd. Composition and method for conferring and/or enhancing herbicide tolerance using variants of protoporphyrinogen IX oxidase from cyanobacteria
KR102227354B1 (ko) * 2017-12-15 2021-03-15 주식회사 팜한농 Ppo의 변이체를 이용하는 제초제 내성 부여 및/또는 증진을 위한 조성물 및 방법
US10772329B2 (en) 2018-12-26 2020-09-15 Sumitomo Chemical Company, Limited Method of controlling weeds
CN109722487B (zh) * 2019-02-15 2021-02-02 中国农业科学院植物保护研究所 抗ppo抑制剂类除草剂反枝苋的检测方法及试剂盒
JP2022044851A (ja) * 2019-04-09 2022-03-18 住友化学株式会社 有限伸育性ダイズの栽培地における雑草防除方法
EP4250928A1 (en) 2020-11-24 2023-10-04 Syngenta Crop Protection AG Herbicidal compounds
CN118956784A (zh) 2021-04-02 2024-11-15 青岛清原种子科学有限公司 对ppo抑制剂类除草剂具有耐受性的ppo多肽及应用
AU2022253338B2 (en) 2021-04-07 2024-09-12 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compounds
CA3230261A1 (en) 2021-09-03 2023-03-09 Manuel Dubald Plants having increased tolerance to herbicides
AR127152A1 (es) 2021-09-27 2023-12-20 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Plantas de girasol no transgénicas que tienen tolerancia aumentada a herbicidas
AU2023231748A1 (en) 2022-03-11 2024-09-05 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compounds
WO2023222589A1 (en) 2022-05-20 2023-11-23 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compounds
AR129821A1 (es) 2022-07-13 2024-10-02 Syngenta Crop Protection Ag Compuestos herbicidas
CN120769701A (zh) 2022-12-22 2025-10-10 巴斯夫农业公司 利用ppo除草剂及组合在除草剂耐受性作物植物中控制不希望的植物的方法
UY40630A (es) 2023-02-03 2024-08-15 Syngenta Crop Protection Ag “Plantas y partes de estas que se han modificado para comprender una enzima BioA o BIO3-BIO1 (BioDA
WO2024175475A1 (en) 2023-02-24 2024-08-29 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compositions
WO2024175476A1 (en) 2023-02-24 2024-08-29 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compositions
CN120752221A (zh) 2023-03-17 2025-10-03 先正达农作物保护股份公司 除草三嗪衍生物
WO2024200525A1 (en) 2023-03-29 2024-10-03 Basf Agro B. V. Method for controlling parasitic weeds (orobanche) in protoporphyrinogen oxidase (ppo)-inhibitor tolerant sunflower crop
UY40714A (es) 2023-04-19 2024-12-13 Syngenta Crop Protection Ag Una enzima o fragmento funcional de protoporfirinógeno oxidasa (ppo) modificado, y plantas que compr
WO2025016885A1 (en) 2023-07-20 2025-01-23 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compositions
WO2025016884A1 (en) 2023-07-20 2025-01-23 Syngenta Crop Protection Ag Herbicidal compositions
WO2025031864A1 (en) 2023-08-04 2025-02-13 Basf Se Herbicidal compositions comprising trifludimoxazin
WO2025031862A1 (en) 2023-08-04 2025-02-13 Basf Se Herbicidal compositions comprising saflufenacil
WO2025098807A1 (en) 2023-11-07 2025-05-15 Basf Se Herbicidal compositions comprising glyphosate
WO2025114125A1 (en) 2023-12-01 2025-06-05 Basf Se Herbicidal compositions comprising glufosinate
WO2025124944A1 (en) 2023-12-12 2025-06-19 Basf Se Herbicidal compositions comprising 2,4-d
WO2025153595A1 (en) 2024-01-17 2025-07-24 Basf Se Plants having increased tolerance to herbicides
WO2025172127A1 (en) 2024-02-16 2025-08-21 Basf Se Herbicidal compositions comprising imazethapyr
WO2025172125A1 (en) 2024-02-16 2025-08-21 Basf Se Herbicidal compositions comprising pyroxasulfone
WO2025176575A1 (en) 2024-02-23 2025-08-28 Basf Se Herbicidal compositions comprising dimethenamid
WO2025180968A1 (en) 2024-02-27 2025-09-04 Basf Se Herbicidal compositions comprising mesotrione
WO2025209887A1 (en) 2024-04-05 2025-10-09 Basf Se Herbicidal compositions comprising topramezone
WO2025228721A1 (en) 2024-04-30 2025-11-06 Basf Se Herbicidal compositions comprising isoxaflutole
WO2025237738A1 (en) 2024-05-16 2025-11-20 Basf Se Herbicidal compositions comprising clethodim
WO2025237737A1 (en) 2024-05-16 2025-11-20 Basf Se Herbicidal compositions comprising acetochlor
WO2025237741A1 (en) 2024-05-16 2025-11-20 Basf Se Herbicidal compositions comprising diclosulam

Family Cites Families (88)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5380831A (en) 1986-04-04 1995-01-10 Mycogen Plant Science, Inc. Synthetic insecticidal crystal protein gene
US5569597A (en) 1985-05-13 1996-10-29 Ciba Geigy Corp. Methods of inserting viral DNA into plant material
DE3765449D1 (de) 1986-03-11 1990-11-15 Plant Genetic Systems Nv Durch gentechnologie erhaltene und gegen glutaminsynthetase-inhibitoren resistente pflanzenzellen.
US5268463A (en) 1986-11-11 1993-12-07 Jefferson Richard A Plant promoter α-glucuronidase gene construct
US5608142A (en) 1986-12-03 1997-03-04 Agracetus, Inc. Insecticidal cotton plants
BE1000563A6 (fr) 1987-05-18 1989-02-07 Cedres Castro Herminio S Dispositif accessoire, retractable dans un wc du type traditionnel destine a l'hygiene du corps.
ATE105585T1 (de) 1987-12-21 1994-05-15 Univ Toledo Transformation von keimenden pflanzensamen mit hilfe von agrobacterium.
US5198013A (en) 1988-02-05 1993-03-30 Sagami Chemical Research Center Benzoxazinone compounds and herbicidal composition containing the same
FR2629098B1 (fr) 1988-03-23 1990-08-10 Rhone Poulenc Agrochimie Gene chimerique de resistance herbicide
US5990387A (en) 1988-06-10 1999-11-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Stable transformation of plant cells
US5322783A (en) 1989-10-17 1994-06-21 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Soybean transformation by microparticle bombardment
ATE225853T1 (de) 1990-04-12 2002-10-15 Syngenta Participations Ag Gewebe-spezifische promotoren
EP0528857B1 (en) 1990-04-26 2002-01-30 Aventis CropScience N.V. New bacillus thuringiensis strain and its gene encoding insecticidal toxin
US5498830A (en) 1990-06-18 1996-03-12 Monsanto Company Decreased oil content in plant seeds
US5277905A (en) 1991-01-16 1994-01-11 Mycogen Corporation Coleopteran-active bacillus thuringiensis isolate
US5399680A (en) 1991-05-22 1995-03-21 The Salk Institute For Biological Studies Rice chitinase promoter
CA2112676C (en) 1991-08-02 2007-07-03 Michio Ohba Novel microorganism and insecticide
US5604121A (en) 1991-08-27 1997-02-18 Agricultural Genetics Company Limited Proteins with insecticidal properties against homopteran insects and their use in plant protection
WO1993007256A1 (en) 1991-10-07 1993-04-15 Ciba-Geigy Ag Particle gun for introducing dna into intact cells
TW261517B (ro) 1991-11-29 1995-11-01 Mitsubishi Shozi Kk
US5593874A (en) 1992-03-19 1997-01-14 Monsanto Company Enhanced expression in plants
DE69333955D1 (de) 1992-04-24 2006-02-02 Stanford Res Inst Int Targeting homologer sequenzen in eukaryotenzellen
DK0733059T3 (da) 1993-12-09 2000-10-16 Univ Jefferson Forbindelser og fremgangsmåder til site-rettede mutationer i eukaryote celler
JP2909796B2 (ja) 1993-12-28 1999-06-23 ローム株式会社 サーマルプリントヘッドおよびその製造方法
US5593881A (en) 1994-05-06 1997-01-14 Mycogen Corporation Bacillus thuringiensis delta-endotoxin
US5939602A (en) 1995-06-06 1999-08-17 Novartis Finance Corporation DNA molecules encoding plant protoporphyrinogen oxidase and inhibitor-resistant mutants thereof
US5767373A (en) 1994-06-16 1998-06-16 Novartis Finance Corporation Manipulation of protoporphyrinogen oxidase enzyme activity in eukaryotic organisms
US5608144A (en) 1994-08-12 1997-03-04 Dna Plant Technology Corp. Plant group 2 promoters and uses thereof
DE19505995A1 (de) 1995-02-21 1996-08-22 Degussa Verfahren zur Herstellung von Thietanonen
US5659026A (en) 1995-03-24 1997-08-19 Pioneer Hi-Bred International ALS3 promoter
US6084155A (en) * 1995-06-06 2000-07-04 Novartis Ag Herbicide-tolerant protoporphyrinogen oxidase ("protox") genes
WO1997004088A1 (en) 1995-07-20 1997-02-06 Sumitomo Chemical Company, Ltd. Porphyrin-accumulating type herbicide resistance gene
US5737514A (en) 1995-11-29 1998-04-07 Texas Micro, Inc. Remote checkpoint memory system and protocol for fault-tolerant computer system
PL187094B1 (pl) 1996-02-28 2004-05-31 Syngenta Participations Ag Izolowana cząsteczka DNA kodująca enzym oksydazę protoporfirynogenu (protox) pszenicy, chimerowy gen, sposób wytwarzania roślin oraz sposób zwalczania chwastów
US5948917A (en) 1996-03-26 1999-09-07 Nippon Soda Co., Ltd. 3-(isoxazol-5-yl)-substituted benzoic acid derivative and method for production thereof
AU1671097A (en) 1996-04-26 1997-11-19 Nippon Soda Co., Ltd. Benzene derivatives substituted by heterocycles and herbicides
AU1670997A (en) 1996-04-26 1997-11-19 Nippon Soda Co., Ltd. Novel benzene derivatives substituted by heterocycles and herbicides
AU1670797A (en) 1996-04-26 1997-11-19 Nippon Soda Co., Ltd. Benzene derivatives substituted by heterocycles and herbicides
US6072050A (en) 1996-06-11 2000-06-06 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Synthetic promoters
FR2751347B1 (fr) 1996-07-16 2001-12-07 Rhone Poulenc Agrochimie Gene chimere a plusieurs genes de tolerance herbicide, cellule vegetale et plante tolerantes a plusieurs herbicides
US5773702A (en) 1996-07-17 1998-06-30 Board Of Trustees Operating Michigan State University Imidazolinone herbicide resistant sugar beet plants
US5859348A (en) 1996-07-17 1999-01-12 Board Of Trustees Operating Michigan State University Imidazolinone and sulfonyl urea herbicide resistant sugar beet plants
US7586023B1 (en) 1996-12-27 2009-09-08 Sumitomo Chemical Company, Limited Methods of conferring ppo-inhibiting herbicide resistance to plants by gene manipulation
JP4451933B2 (ja) * 1996-12-27 2010-04-14 住友化学株式会社 遺伝子操作による植物へのｐｐｏ阻害性除草剤耐性付与法
US6027945A (en) 1997-01-21 2000-02-22 Promega Corporation Methods of isolating biological target materials using silica magnetic particles
ZA98371B (en) 1997-01-31 1999-07-16 Du Pont Genetically transformed plants demonstrating resistance to porphyrinogen biosynthesis-inhibiting herbicides.
US7105724B2 (en) 1997-04-04 2006-09-12 Board Of Regents Of University Of Nebraska Methods and materials for making and using transgenic dicamba-degrading organisms
US5939360A (en) 1997-07-08 1999-08-17 Nippon Soda Co., Ltd. Compound and herbicidal composition for weed control
AU741013B2 (en) 1997-09-11 2001-11-22 Nihon Nohyaku Co., Ltd. Novel protoporphyrinogen oxidase tolerant to light-requiring herbicides
US6177611B1 (en) 1998-02-26 2001-01-23 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Maize promoters
US6555732B1 (en) 1998-09-14 2003-04-29 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Rac-like genes and methods of use
DE69942750D1 (de) 1999-07-22 2010-10-21 Nat Inst Agrobio Res Verfahren zur superschnellen transformation von monokotyledonen
CN1373811A (zh) * 1999-08-13 2002-10-09 辛根塔参与股份公司 耐除草剂的原卟啉原氧化酶
DE19939095A1 (de) 1999-08-18 2001-02-22 Univ Eberhard Karls Von Coxsackieviren abgeleitetes Vektorsystem für Gentransfer
AU2001260114A1 (en) 2000-03-14 2001-09-24 Syngenta Participations Ag Protoporphyrinogen oxidase ("protox") genes
US6936467B2 (en) 2000-03-27 2005-08-30 University Of Delaware Targeted chromosomal genomic alterations with modified single stranded oligonucleotides
BR0110410A (pt) 2000-04-28 2003-07-01 Basf Ag Uso do gene ahas 2 mutante x112 de milho e herbicidas de imidazolinona para seleção de mudas transgênicas de monocotiledÈneas de milho, arroz e trigo resistentes aos herbicidas de imidazolinona
DK1226127T3 (da) 2000-05-04 2009-10-19 Basf Se Substituerede phenylsulfamoylcarboxamider
US7462481B2 (en) 2000-10-30 2008-12-09 Verdia, Inc. Glyphosate N-acetyltransferase (GAT) genes
CN100537764C (zh) 2001-10-19 2009-09-09 住友化学工业株式会社 除草剂代谢蛋白质,其基因及其应用
KR101291006B1 (ko) 2001-10-19 2013-07-30 스미또모 가가꾸 가부시키가이샤 잡초 방제제 대사 단백질, 그의 유전자 및 그의 용도
EP2319932B2 (en) 2004-04-30 2016-10-19 Dow AgroSciences LLC Novel herbicide resistance gene
CA2567779A1 (en) 2004-06-07 2005-12-22 Basf Plant Science Gmbh Improved transformation of soybean
PL1789401T3 (pl) 2004-09-03 2010-07-30 Syngenta Ltd Pochodne izoksazoliny i ich zastosowanie jako herbicydów
CA2579091A1 (en) 2004-10-05 2006-04-13 Syngenta Limited Isoxazoline derivatives and their use as herbicides
US20070021515A1 (en) 2005-07-19 2007-01-25 United States (as represented by the Secretary of Agriculture) Expandable starch-based beads and method of manufacturing molded articles therefrom
US7842856B2 (en) * 2005-08-25 2010-11-30 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Herbicide resistance gene, compositions and methods
US7671254B2 (en) 2005-08-25 2010-03-02 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Herbicide resistance gene, compositions and methods
WO2007034953A1 (ja) 2005-09-26 2007-03-29 Nippon Soda Co., Ltd. アシフルオルフェンに対する耐性を付与する活性を有するプロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ及びその遺伝子
GB0526044D0 (en) 2005-12-21 2006-02-01 Syngenta Ltd Novel herbicides
GB0603891D0 (en) 2006-02-27 2006-04-05 Syngenta Ltd Novel herbicides
US20070214515A1 (en) 2006-03-09 2007-09-13 E.I.Du Pont De Nemours And Company Polynucleotide encoding a maize herbicide resistance gene and methods for use
VN21892A1 (en) 2007-04-04 2010-01-25 Basf Plant Science Gmbh Ahas mutants
EP2145007B1 (en) 2007-05-09 2017-01-25 Dow AgroSciences LLC Novel herbicide resistance genes
US8097774B2 (en) 2007-05-30 2012-01-17 Syngenta Participations Ag Cytochrome P450 genes conferring herbicide resistance
CN101215289A (zh) 2008-01-11 2008-07-09 南开大学 具有PPO抑制活性及除草活性的3-取代苯基-吡唑并[3,4-d][1,2,3]三嗪-4-酮类化合物
BRPI0920102A2 (pt) 2008-10-29 2015-08-18 Basf Se Compostos de piridina, processo para preparar os compostos, agente, e, processo para combater vegetação indesejada
BRPI1010081B8 (pt) 2009-06-19 2017-06-27 Basf Se benzoxazinonas, processo para preparar benzoxazinonas de fórmula i, compostos, acetamidas, composições herbicidas, composição para a dessecação/desfolhação de plantas, processos para preparar composições, método para controlar vegetação indesejada, método para a dessecação/desfolhação de plantas e uso das benzoxazinonas de fórmula i
UY32838A (es) * 2009-08-14 2011-01-31 Basf Se "composición activa herbicida que comprende benzoxazinonas
UA112969C2 (uk) 2010-08-03 2016-11-25 Сібас Юс Ллс Рослина, стійка до одного або більше ррх-інгібуючих гербіцидів, яка містить мутантний ген протопорфіриноген ix оксидази (ррх)
US20120122223A1 (en) 2010-08-03 2012-05-17 Cibus Us Llc Mutated protoporphyrinogen ix oxidase (ppx) genes
CN103221409B (zh) 2010-10-01 2016-03-09 巴斯夫欧洲公司 除草的苯并*嗪酮类
MY169304A (en) 2010-12-16 2019-03-21 Basf Agro Bv Plants having increased tolerance to herbicides
US10041087B2 (en) 2012-06-19 2018-08-07 BASF Agro B.V. Plants having increased tolerance to herbicides
AR091489A1 (es) 2012-06-19 2015-02-11 Basf Se Plantas que tienen una mayor tolerancia a herbicidas inhibidores de la protoporfirinogeno oxidasa (ppo)
UA123757C2 (uk) 2013-08-12 2021-06-02 Басф Агро Б. В. Мутована протопорфіриногеноксидаза, що надає рослинам стійкості до ппо-інгібуючого гербіциду
CA2920591A1 (en) 2013-08-12 2015-02-19 BASF Agro B.V. Plants having increased tolerance to herbicides
MD4770B1 (ro) 2013-12-18 2021-10-31 BASF Agro B.V. Plante cu toleranţă sporită la erbicide

Also Published As

Publication number Publication date
WO2013189984A3 (en) 2014-02-20
CO7160071A2 (es) 2015-01-15
MD20150003A2 (ro) 2015-06-30
EP2861742B1 (en) 2021-12-29
CA2875941A1 (en) 2013-12-27
US20190062778A1 (en) 2019-02-28
UA120741C2 (uk) 2020-02-10
IN2014MN02498A (ro) 2015-07-17
ES2909315T3 (es) 2022-05-06
US20230279420A1 (en) 2023-09-07
KR102320526B1 (ko) 2021-11-04
AU2013279363A1 (en) 2015-01-15
US20150299725A1 (en) 2015-10-22
JP2015519913A (ja) 2015-07-16
EA201590004A1 (ru) 2015-05-29
CN104662155B (zh) 2020-11-27
CN104662155B8 (zh) 2021-03-12
EP2861742A2 (en) 2015-04-22
BR112014031832A2 (pt) 2019-03-06
AU2013279363B2 (en) 2018-02-08
JP6698758B2 (ja) 2020-05-27
PL2861742T3 (pl) 2022-05-02
ZA201500284B (en) 2016-12-21
MY173455A (en) 2020-01-26
JP2018186826A (ja) 2018-11-29
US11441154B2 (en) 2022-09-13
EA036015B1 (ru) 2020-09-14
IL236044A0 (en) 2015-01-29
PH12014502821A1 (en) 2015-02-02
MD4683B1 (ro) 2020-03-31
ECSP15001671A (es) 2015-11-30
IL236044B (en) 2020-04-30
AR091489A1 (es) 2015-02-11
CA3210121C (en) 2025-10-07
KR20150023748A (ko) 2015-03-05
US10100329B2 (en) 2018-10-16
CA3210121A1 (en) 2013-12-27
CR20150013A (es) 2015-04-16
UY34867A (es) 2013-12-31
MX357709B (es) 2018-07-20
MX2014015943A (es) 2015-10-29
CN104662155A (zh) 2015-05-27
WO2013189984A2 (en) 2013-12-27
CA2875941C (en) 2023-10-10
PH12014502821B1 (en) 2021-09-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230279420A1 (en) Plants having increased tolerance to herbicides
US11866720B2 (en) Transgenic or non-transgenic plants with mutated protoporphyrinogen oxidase having increased tolerance to herbicides
AU2021202102B2 (en) Plants having increased tolerance to herbicides
US20220315943A1 (en) Plants having increased tolerance to herbicides
US10968462B2 (en) Plants having increased tolerance to herbicides
AU2016280215A1 (en) Plants having increased tolerance to herbicides
WO2025160032A2 (en) Plants having increased tolerance to herbicides
BR112017027179B1 (pt) Método para controlar vegetação indesejada em um local de cultivo de plantas, método para produzir uma célula vegetal transgênica e método para produzir uma planta transgênica

Legal Events

Date Code Title Description
FG4A Patent for invention issued