JP2018186826A - 除草剤に対する増加した耐性を有する植物 - Google Patents

除草剤に対する増加した耐性を有する植物 Download PDF

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Abstract

【課題】除草剤に対する増加した耐性を有する植物の提供。【解決手段】植物の栽培部位において望ましくない植生を制御するための方法であって、a）前記部位に、PPO(プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ)阻害除草剤に対して抵抗性又は耐性である野生型プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ又は突然変異プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（mut-PPO）をコードするヌクレオチド配列を含む少なくとも一つの核酸を含む植物を提供するステップ、及び／又はb）前記部位に有効量の前記除草剤を適用するステップを含む前記方法。【選択図】図４

Description

本発明は、概して、除草剤に対する農業レベルの耐性を植物にもたらす方法に関する。特に本発明は、PPO阻害除草剤に対する増加した耐性を有する植物について言及する。より具体的には、本発明は、突然変異誘発及び交雑育種及び形質転換により得られる、PPO阻害除草剤に対する増加した耐性を有する方法及び植物に関する。
プロトポルフィリンIXの生合成における鍵酵素であるプロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ(以下にプロトックス又はPPO; EC:1.3.3.4と称される)を阻害する除草剤は、1960年代から選択的雑草制御に使用されてきた。PPOは、プロトポルフィリノーゲンIXのプロトポルフィリンIXへの酸化である、葉緑素及びヘム生合成における最後の共通ステップを触媒する(Matringeら、1989年、Biochem. 1. 260:231)。PPO阻害除草剤は、多数のさまざまな分子の構造的クラスを含む(Dukeら、1991年、Weed Sci. 39: 465; Nandihalliら、1992年、Pesticide Biochem. Physiol. 43: 193; Matringeら、1989年、FEBS Lett. 245: 35; Yanase及びAndoh.1989年、Pesticide Biochem. Physiol. 35: 70)。これらの除草剤化合物は、ジフェニルエーテル{例えばラクトフェン(lactofen)、(+-)-2-エトキシ-1-メチル-2-オキソエチル5-{2-クロロ-4-(トリフルオロメチル)フェノキシ}-2-ニトロベンゾエート;アシフルオルフェン、5-{2-クロロ-4-(トリフルオロメチル)フェノキシ}-2-ニトロ安息香酸;そのメチルエステル;又はオキシフルオルフェン、2-クロロ-1-(3-エトキシ-4-ニトロフェノキシ)-4-(トリフルオロベンゼン)}、オキシジアゾール(oxidiazole)、(例えばオキシジアゾン(oxidiazon)、3-{2,4-ジクロロ-5-(1-メチルエトキシ)フェニル}-5-(1,1-ジメチルエチル)-1,3,4-オキサジアゾール(oxadiazol)-2-(3H)-オン)、環状イミド(例えばS-23142、N-(4-クロロ-2-フルオロ-5-プロパルギルオキシフェニル)-3,4,5,6-テトラヒドロフタルイミド;クロロフタリム(chlorophthalim)、N-(4-クロロフェニル)-3,4,5,6-テトラヒドロフタルイミド)、フェニルピラゾール(例えばTNPP-エチル、エチル2-{1-(2,3,4-トリクロロフェニル)-4-ニトロピラゾリル-5-オキシ}プロピオン酸; M&B 39279)、ピリジン誘導体(例えばLS 82-556)並びにフェノピレート(phenopylate)及びそのO-フェニルピロリジノ及びピペリジノカルバメート類似体を含む。これらの化合物の多くは、見かけ上は基質類似体として作用し、酵素によって触媒される正常な反応を競合的に阻害する。
PPO阻害除草剤の適用は、葉緑体及びミドコンドリアにおけるプロトポルフィリノーゲンIXの蓄積をもたらし、それがペルオキシダーゼによって酸化されるサイトゾルに漏出すると考えられている。光に曝された際にプロトポルフィリンIXは、サイトゾルにおいて一重項酸素の形成及び他の反応性酸素種の形成を引き起こし、脂質過酸化及び急速な細胞死をもたらす膜破壊を引き起こす可能性がある(Leeら、1993年、Plant Physiol. 102: 881)。
すべてのPPO酵素が植物PPO酵素を阻害する除草剤に感受性であるのではない。大腸菌(Escherichia coli)及び枯草菌(Bacillus subtilis)PPO酵素の両方(Sasarmenら、1993年、Can. J. Microbiol. 39: 1155; Daileyら、1994年、J. Biol. Chem. 269: 813)は、これらの除草性阻害剤に抵抗性である。フェニルイミド除草剤S-23142に抵抗性の単細胞藻類コナミドリムシ(Chlamydomonas reinhardtii)の突然変異体が報告されている(Kataokaら、1990年、J. Pesticide Sci. 15: 449; Shibataら、1992年、In Research in Photosynthesis、III巻、N. Murata編、Kluwer: Netherlands. 567-70頁)。これらの突然変異体の少なくとも一つは、突然変異体が選択された除草性阻害剤だけでなく、プロトックス阻害剤の他のクラスにも抵抗性である改変されたPPO活性を有すると考えられる(Oshioら、1993年、Z. Naturforsch. 48c: 339; Satoら、1994年、In ACS Symposium on Porphyric Pesticides、S. Duke編 ACS Press: Washington、D.C.)。阻害剤S-21432に抵抗性である突然変異体タバコ細胞系も報告されている(Cheら、1993年、Z. Naturforsch. 48c: 350)。栄養要求性大腸菌突然変異体は、クローニングされた植物PPO阻害剤除草剤の除草剤抵抗性を確認するために使用されている。
除草剤に対して耐性の植物を作るために三つの主要な戦略が利用可能であり、すなわち、(1)除草剤又はその活性代謝産物を非毒性産物に変換する酵素、例えば、ブロモキシニル(bromoxynil)に対する耐性又はバスタ(basta)に対する耐性のための酵素(EP242236、EP337899)などにより除草剤を解毒すること、(2)標的酵素を、除草剤又はその活性代謝産物に対する感受性が低い機能酵素、例えばグリホセート(glyphosate)に対する耐性のための酵素(EP293356、Padgette S. R.ら、J.Biol. Chem.、266、33、1991年)などに突然変異させること、又は(3)酵素の反応速度定数を考慮して、植物において除草剤に関して十分な量の標的酵素を産生させるように感受性酵素を過剰発現させ、阻害剤の存在にもかかわらず利用可能な十分な機能酵素を有するようにすることである。第三の戦略は、PPO阻害剤に対して耐性である植物が首尾よく得られることが記載された(例えば米国特許第5,767,373号又は米国特許第5,939,602号及びその特許ファミリーメンバーを参照されたい)。加えて米国特許出願公開第2010/0100988号及びWO2007/024739は、アミノ酸配列がPPO阻害剤の除草性化学物質に対して抵抗性であるような酵素活性を有するアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列、特に3-フェニルウラシル阻害剤特異的PPO突然変異体を開示している。
現在までに、先行技術は、本発明による少なくとも一種の野生型又は突然変異PPO核酸を含有する、PPO阻害除草剤耐性植物を記載してはいない。先行技術は、PPO遺伝子が由来するゲノム以外のゲノムにおいて突然変異を含有する、PPO阻害除草剤耐性作物もまた記載していない。したがって、当分野において必要とされるものは、追加のゲノム及び種に由来するPPO阻害除草剤耐性遺伝子の同定である。当分野においてさらに必要とされるものは作物、並びにPPO阻害除草剤などの除草剤に対する耐性が増加し、少なくとも一種の野生型及び/又は突然変異PPO核酸を含有する作物である。さらに、このような作物の近傍及び作物における雑草の成長を制御する方法が必要である。除草剤を作物を含有する範囲又は作物に適用する場合、これらの組成物及び方法は、散布技術の使用が可能である。
該課題は、植物栽培部位における望ましくない植生を制御する方法であって、
a)前記部位において、PPO阻害除草剤に対して抵抗性若しくは耐性である、野生型プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ(PPO)又は突然変異プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ(mut-PPO)をコードするヌクレオチド配列を含む少なくとも一種の核酸を含む植物を提供するステップ、
b)前記部位に有効量の前記除草剤を適用するステップ
を含む前記方法について言及する本発明により解決される。
加えて本発明は、野生型又は配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43若しくは45、又はその変異体のヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされる本発明の野生型又はmut-PPOを使用することによる、PPO阻害除草剤を同定するための方法に言及する。
前記方法は、
a)本発明のmut-PPOをコードする核酸を含むトランスジェニック細胞又は植物を作製するステップであって、本発明のmut-PPOが発現される前記ステップ、
b)PPO阻害除草剤を、a)のトランスジェニック細胞又は植物及び同じ変種の対照細胞又は植物に適用するステップ、
c)前記試験化合物の適用後にトランスジェニック細胞又は植物及び対照細胞又は植物の成長又は生存率を決定するステップ、並びに
d)トランスジェニック細胞又は植物の成長と比較して、対照細胞又は植物の成長に減少した成長を与える試験化合物を選択するステップ
を含む。
別の目的は、PPO阻害除草剤に対して抵抗性又は耐性であるmut-PPOをコードするヌクレオチド配列を同定する方法であって、
a)mut-PPOコード核酸のライブラリーを作製するステップ、
b)細胞又は植物において前記核酸のそれぞれを発現させ、前記細胞又は植物をPPO阻害除草剤によって処理することによって、得られたmut-PPOコード核酸の集団をスクリーニングするステップ、
c)mut-PPOコード核酸の前記集団により提供されるPPO阻害除草剤耐性レベルと、対照PPOコード核酸により提供されるPPO阻害除草剤耐性レベルとを比較するステップ、
d)対照PPOコード核酸により提供されるPPO阻害除草剤に対する耐性のレベルと比較して、有意に増加したPPO阻害除草剤に対する耐性レベルを提供する、少なくとも一種のmut-PPOコード核酸を選択するステップ
を含む方法について言及することである。
好ましい実施形態において、ステップd)において選択されたmut-PPOコード核酸は、対照PPOコード核酸により提供されるPPO阻害除草剤に対する耐性と比較して、少なくとも二倍高いPPO阻害除草剤に対する耐性を提供する。
抵抗性又は耐性は、ステップa)のライブラリーの核酸配列を含むトランスジェニック植物を作製し、前記トランスジェニック植物と対照植物とを比較することよって決定することができる。
別の目的は、PPO阻害除草剤に対して抵抗性又は耐性であるmut-PPOをコードする核酸を含有する植物又は藻類を同定する方法であって、
a)植物細胞又は緑藻類の培養液において有効量のPPO阻害除草剤を同定するステップ、
b)前記植物細胞又は緑藻類を、突然変異誘発剤により処理するステップ、
c)前記突然変異誘発された細胞の集団と、a)において同定された有効量のPPO阻害除草剤とを接触させるステップ
d)これらの試験条件で生存する少なくとも一つの細胞を選択するステップ、
e)d)において選択された細胞由来のPPO遺伝子をPCR増幅及び配列決定し、このような配列と野生型のPPO遺伝子配列とをそれぞれ比較するステップ
を含む前記方法について言及することである。
好ましい実施形態において、突然変異誘発剤は、エチルメタンスルホン酸である。
別の目的は、mut-PPOをコードする単離された核酸であって、以降に定義される配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43若しくは45の配列又はその変異体を含む核酸について言及することである。
別の目的は、単離されたmut-PPOポリペプチドであって、以降に定義される配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44若しくは46に示される配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ又はホモログを含むポリペプチドについて言及することである。
好ましい実施形態において核酸は、上に定義の方法によって同定できる。
別の実施形態において、本発明は、本発明による野生型若しくはmut-PPOの核酸により形質転換され、及び発現する植物細胞、又は本発明による野生型若しくはmut-PPO核酸を発現する、好ましくは過剰発現する植物を得るために突然変異されている植物について言及し、ここで植物細胞における前記核酸の発現は、野生型の変種の植物細胞と比較してPPO阻害除草剤に対する抵抗性又は耐性の増加をもたらす。
別の実施形態において、本発明は、本発明による植物細胞を含む植物であって、植物における核酸の発現が、野生型変種の植物と比較して、PPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性を有する植物のをもたらす前記植物について言及する。
本発明の植物は、トランスジェニック植物であっても、又は非トランスジェニック植物であってもよい。
好ましくは、植物における本発明の核酸の発現が、野生型変種の植物と比較して、PPO阻害除草剤に対する植物の増加した抵抗性をもたらす。
別の実施形態において、本発明は、本発明の植物細胞を含むトランスジェニック植物により産生された種子であって、野生型変種の種子と比較してPPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性について純粋種（true-breeding）である種子について言及する。
別の実施形態において、本発明は、野生型変種の植物細胞と比較してPPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性を有するトランスジェニック植物細胞を作製する方法であって、野生型又はmut-PPO核酸を含む発現カセットにより植物細胞を形質転換するステップを含む前記方法について言及する。
別の実施形態において、本発明は、(a)野生型又はmut-PPO核酸を含む発現カセットにより植物細胞を形質転換するステップ、及び(b)植物細胞から、PPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性を有する植物を作製するステップを含む、トランスジェニック植物を作製する方法について言及する。
好ましくは、発現カセットは、植物において機能性である転写開始制御領域及び翻訳開始制御領域をさらに含む。
別の実施形態において、本発明は、選択可能なマーカーとして本発明のmut-PPOを使用することに関する。本発明は、形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部を同定又は選択する方法であって、a)形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部を提供するステップであって、前記形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部が以下に記載の本発明のmut-PPOポリペプチドをコードする単離された核酸を含み、該ポリペプチドが選択マーカーとして使用され、前記形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部が対象となる単離された核酸を場合によりさらに含み得る前記ステップ、b)形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部と、少なくとも一種のPPO阻害化合物とを接触させるステップ、c)植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部が、阻害剤又は阻害化合物によって影響を受けるかどうか決定するステップ、及びd)形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はこれらの一部を同定又は選択するステップを含む前記方法を提供する。
本発明は、また、本明細書に記載の突然変異を含有する、精製されたmut-PPOタンパク質において例示され、これらは除草剤耐性に対するさらなる改良を設計するための分子モデリング研究において有用である。タンパク質精製の方法は周知であり、市販の製品又は例えば、Protein Biotechnology、Walsh及びHeadon (Wiley、1994年)に記載されているような、特別に設計された方法を使用して容易に達成できる。
アマランサス・ツベルクラタス(Amaranthus tuberculatus)(A.tuberculatus)、アマランサス・ツベルクラタス抵抗性(A.tuberculatus_R)、シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana)ロング(A.thaliana_2)、ホウレンソウ(Spinacia oleracea)ショート(S.oleracea_2)、タバコ(Nicotiana tabacum)ショート(N.tabacum_2)、ダイズ(Glycine max)(Glycine_max)、シロイヌナズナショート(A.thaliana_1)、タバコロング(N.tabacum_1)、コナミドリムシ(Chlamydomonas reinhardtii)ロング(C.reinhardtii_1)、トウモロコシ(Zea mays)(Z.mays)、イネ(Oryza sativa) (O.sativa_1)、ジャガイモ(Solanum tuberosum)(S.tuberosum)、キュウリ(Cucumis sativus)(C.sativus)、チコリー(Cichorium intybus)(C.intybus_1)、ホウレンソウロング(S.oleracea_1)、ポリトメラ属の種(Polytomella sp.)プリングスヘイム(Pringsheim)198.80(Polytomella)PPO配列のアミノ酸配列アラインメントの図である。保存領域は薄灰色、灰色及び黒で示されている。 図１−１の続き。 PPO阻害除草剤1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4) に対して抵抗性のコナミドリムシ系統の選択の図である。(A)選択化剤を含まない固体培地にプレーティングされた突然変異誘発された細胞の図である。(B)1x10-7MのPPO阻害除草剤1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)を含有する固体培地にプレーティングされた突然変異誘発された細胞の図である。PPO阻害除草剤に対して抵抗性である細胞はコロニー(丸で囲まれており、31及び32と番号付けられている)を形成できるが一方、感受性細胞は、成長できない。プレートBと比較してプレートA上の多数のコロニーは、プレートB上のコロニーがPPO阻害除草剤1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)に抵抗性であることを示す。 PPO阻害除草剤 1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)に抵抗性である図2に示される選択されたコナミドリムシ系統の増殖特徴を示す図である。(A)それぞれのIC50のPPO阻害除草剤1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)で処置した野生型細胞の用量応答曲線。(B)それぞれのIC50のPPO阻害除草剤1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)で処置した突然変異誘発された細胞(系統17)の用量応答曲線。PPO阻害除草剤1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)に抵抗性である系統17(B)は、野生型細胞と比較してより低いIC50を示す。 1%MSOを含むPPO阻害除草剤の示すスプレー率(g ai/ha)で処置した野生型及びトランスジェニックT1大豆植物を示す図である。Aは野生型大豆植物を意味するBはmut-PPO配列番号2をコードする核酸で形質転換した大豆植物であって、位置397のロイシンがアスパラギン酸によって置換されており、位置420のフェニルアラニンがバリンによって置換されている前記大豆植物を意味する1は未スプレーを意味する2はサフルフェナシル(Saflufenacil)、150gを意味する3は1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、100gを意味する4はフルミオキサジン(flumioxazin)、150gを意味する5はホメサフェン(fomesafen)、600gを意味する
配列表への鍵
Figure 2018186826
Figure 2018186826
本明細書において使用される冠詞「a」及び「an」は、冠詞の文法的目的語の一つ以上(すなわち、少なくとも一つ)を指す。例としては、「要素(an element)」は一つ以上の要素を意味する。
本明細書において使用する場合、「含む(comprising)」という単語又は「含む(comprises)」若しくは「含む(comprising)」などの変形は、述べられた要素、整数若しくはステップ、又は要素、整数若しくはステップの群の包含を意味するが、任意の他の要素、整数若しくはステップ、又は要素、整数若しくはステップの群の除外を意味するものではないことは理解されるであろう。
本発明は、植物栽培部位における望ましくない植生を制御する方法であって、
a)前記部位において、PPO阻害除草剤に対して抵抗性若しくは耐性である、野生型プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ若しくは突然変異プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ(mut-PPO)をコードするヌクレオチド配列を含む少なくとも一種の核酸を含む植物を提供するステップ、
b)前記部位に、有効量の前記除草剤を適用するステップ
を含む前記方法について言及する。
「望ましくない植生の制御」という用語は、雑草の死滅及び/又は、さもなければ雑草の正常な成長の遅延若しくは阻害を意味するものして理解されるべきである。最も広い意味において、雑草は、その植物が望ましくない場所において成長する、すべての植物を意味すると理解される。本発明の雑草は、例えば、双子葉植物及び単子葉植物の雑草を含む。双子葉植物の雑草は、限定するものではないが、下記の属の雑草を含む:シロガラシ属(Sinapis)、マメグンバイナズナ属(Lepidium)、ヤエムグラ属(Galium)、ハコベ属(Stellaria)、シカギク属(Matricaria)、ローマカツミレ属(Anthemis)、コゴメギク属(Galinsoga)、アカザ属(Chenopodium)、イラクサ属(Urtica)、キオン属(Senecio)、ヒユ属(Amaranthus)、スベリヒユ属(Portulaca)、オモナミ属(Xanthium)、セイヨウヒルガオ属(Convolvulus)、サツマイモ属(Ipomoea)、タデ属(Polygonum)、ツノクサネム属(Sesbania)、ブタクサ属(Ambrosia)、アザミ属(Cirsium)、ヒレアザミ属(Carduus)、ノゲシ属(Sonchus)、ナス属(Solanum)、イヌガラシ属(Rorippa)、キカシグサ属(Rotala)、アゼナ属(Lindernia)、オドリコソウ属(Lamium)、クワガタソウ属(Veronica)、イチビ属(Abutilon)、エメクス属(Emex)、チョウセンアサガオ属(Datura)、スミレ属(Viola)、チシマオドリコ属(Galeopsis)、ケシ属(Papaver)、ヤグルマギク属(Centaurea)、シャジクソウ属(Trifolium)、キンポウゲ属(Ranunculus)及びタンポポ属(Taraxacum)。単子葉植物の雑草は、限定するものではないが、下記の属の雑草を含む:ヒエ属(Echinochloa)、エノコログサ属(Setaria)、キビ属(Panicum)、メシヒバ属(Digitaria)、アワガエリ属(Phleum)、イチゴツナギ属(Poa)、ウシノケグサ属(Festuca)、オシヒバ属(Eleusine)、ビローソキビ属(Brachiaria)、ソクムギ属(Lolium)、スズメノチャヒキ属(Bromus)、カラスムギ属(Avena)、カヤツリグサ属(Cyperus)、モロコシ属(Sorghum)、カモジグサ属(Agropyron)、ギョウギシバ属(Cynodon)、ミズアオイ属(Monochoria)、テンツキ属(Fimbristyslis)、オモダカ属(Sagittaria)、ハリイ属(Eleocharis)、ホタルイ属(Scirpus)、スズメノヒエ属(Paspalum)、カモノハシ属(Ischaemum)、ナガボノウルシ属(Sphenoclea)、タツノツメガヤ属(Dactyloctenium)、コヌカグサ属(Agrostis)、スズメノテッポウ属(Alopecurus)及びアペラ属(Apera)。加えて、本発明の雑草は、例えば、望ましくない場所において成長する作物を含み得る。例えば、大豆植物の畑においてトウモロコシ植物が望ましくない場合、大豆植物を優勢に含む畑に存在する自生のトウモロコシ植物は、雑草と考えることができる。
「植物」という用語は、最も広い意味において、有機材料に属し、植物界のメンバーである真核生物を包含することが意図され、これらの例は、限定するものではないが、維管束植物、野菜、穀物、花、樹木、ハーブ、灌木、牧草、蔓植物、シダ、コケ、菌類及び藻類など並びに分枝系、側枝、並びに無性繁殖に使用される植物の一部(例えば、挿し穂、パイピング(pipings)、シュート、根茎、地下茎、木立、樹冠、球根、鱗茎、塊茎、根茎、組織培養において作製された植物/組織など)を含む。「植物」という用語は、全植物、植物の祖先及び子孫並びに植物の一部、例えば種子、シュート、茎、葉、根(塊茎を含む)、花、小花、果実、小花柄、花柄、雄ずい、葯、柱頭、花柱、子房、花弁、萼片、心皮、根端、根冠、根毛、葉毛、種子毛、花粉粒、小胞子、子葉、胚軸、上胚軸、木部、師部、柔組織、内胚乳、伴細胞、孔辺細胞、並びに植物の任意の他の公知の器官、組織、及び細胞、並びに組織及び器官をさらに包含し、ここで前述のそれぞれが対象となる目的の遺伝子/核酸を含むもの。「植物」という用語はまた、植物細胞、懸濁培養液、カルス組織、胚、成長点領域、配偶体、胞子体、花粉及び小胞子を包含し、ここでまた、前述のそれぞれが対象となる遺伝子/核酸を含む。
本発明の方法において特に有用な植物は、カエデ属の種(Acer spp.)、マタタビ属の種(Actinidia spp.)、トロロアオイ属の種(Abelmoschus spp.)、サイザルアサ(Agave sisalana)、カモジグサ属の種(Agropyron spp.)、ハイコヌカグサ(Agrostis stolonifera)、アリウム属の種(Allium spp.)、ヒユ属の種(Amaranthus spp.)、アンモフィラ・アレナリア(Ammophila arenaria)、パイナップル(Ananas comosus)、バンレイシ属の種(Annona spp.)、セロリ(Apium graveolens)、ラッカセイ属の種(Arachis spp.)、パンノキ属の種(Artocarpus spp.)、アスパラガス(Asparagus officinalis)、カラスムギ属の種(Avena spp.)(例えば、エンバク(Avena sativa)、カラスムギ(Avena fatua)、レッドオート(Avena byzantina)、アベナ・ファツアvar.サチバ(Avena fatua var. sativa)、アベナ・ヒブリダ(Avena hybrida)、スターフルーツ(Averrhoa carambola)、ホウライチク属の種(Bambusa sp.)、トウガン(Benincasa hispida)、ブラジルナッツ(Bertholletia excelsea)、サトウダイコン(Beta vulgaris)、アブラナ属の種(Brassica spp.)(例えば、セイヨウアブラナ(Brassica napus)、カブ属の種(Brassica rapa ssp)[キャノーラ、アブラナ、ナバナ(turnip rape)]、カダバ・ファリノーサ(Cadaba farinosa)、チャノキ(Camellia sinensis)、カンナ・インディカ(Canna indica)、アサ(Cannabis sativa)、トウガラシ属の種(Capsicum spp.)、カレックス・エラータ(Carex elata)、パパイヤ(Carica papaya)、カリッサ・マクロカルパ(Carissa macrocarpa)、ペカン属の種(Carya spp.)、ベニバナ(Carthamus tinctorius)、クリ属の種(Castanea spp.)、パンヤノキ(Ceiba pentandra)、エンダイブ(Cichorium endivia)、ニッケイ属の種(Cinnamomum spp.)、スイカ(Citrullus lanatus)、シトラス属の種(Citrus spp.)、ココス属の種(Cocos spp.)、コーヒーノキ属の種(Coffea spp.)、サトイモ(Colocasia esculenta)、コラノキ属の種(Cola spp.)、シナノキツナソ属の種(Corchorus sp.)、コリアンダー(Coriandrum sativum)、ハシバミ属の種(Corylus spp.)、サンザシ属の種(Crataegus spp.)、サフラン(Crocus sativus)、カボチャ属の種(Cucurbita spp.)、キュウリ属の種(Cucumis spp.)、チョウセンアザミ属の種(Cynara spp.)、ニンジン(Daucus carota)、ヌスビトハギ属の種(Desmodium spp.)、リュウガン(Dimocarpus longan)、ヤマノイモ属の種(Dioscorea spp.)、カキノキ属の種(Diospyros spp.)、ヒエ属の種(Echinochloa spp.)、アブラヤシ属(Elaeis)(例えば、ギニアアブラヤシ(Elaeis guineensis)、アメリカアブラヤシ(Elaeis oleifera))、エレウシン・コラカナ(Eleusine coracana)、エラグロスティス・テフ(Eragrostis tef)、エリアンサス属の種(Erianthus sp.)、ビワ(Eriobotrya japonica)、ユーカリ属の種(Eucalyptus sp.)、ビタンガ(Eugenia uniflora)、ソバ属の種(Fagopyrum spp.)、ブナ属の種(Fagus spp.)、オニウシノケグサ(Festuca arundinacea)、イチジク(Ficus carica)、キンカン属の種(Fortunella spp.)、フラガリア属の種(Fragaria spp.)、ギンコ・ビローバ(Ginkgo biloba)、グリシン属の種(Glycine spp.)(例えば、ダイズ、ソヤ・ヒスピダ又はソヤ・マックス)、ワタ(Gossypium hirsutum)、ヒマワリ属の種(Helianthus spp.)(例えば、ヒマワリ(Helianthus annuus)、ノカンゾウ(Hemerocallis fulva)、ハイビスカス属の種(Hibiscus spp.)、オオムギ属の種(Hordeum spp.)(例えば、オオムギ(Hordeum vulgare)、サツマイモ(Ipomoea batatas)、クルミ属の種(Juglans spp.)、レタス(Lactuca sativa)、ラチルス属の種(Lathyrus spp.)、レンズマメ(Lens culinaris)、アマ(Linum usitatissimum)、レイシ(Litchi chinensis)、ハス属の種(Lotus spp.)、トカドヘチマ(Luffa acutangula)、ルピナス属の種(Lupinus spp.)、ルズラ・シルバチカ(Luzula sylvatica)、トマト属の種(Lycopersicon spp.)(例えば、リコペルシコン・エスクレンタム(Lycopersicon esculentum)、リコペルシコン・リコペルシカム(Lycopersicon lycopersicum)、リコペルシコン・ピリフォルメ(Lycopersicon pyriforme)、マクロチローマ属の種(Macrotyloma spp.)、リンゴ属の種(Malus spp.)、アセロラ(Malpighia emarginata)、マミーアップル(Mammea americana)、マンゴー(Mangifera indica)、キャッサバ属の種(Manihot spp.)サポジラ(Manilkara zapota)、ムラサキウマゴヤシ(Medicago sativa)、シナガワハギ属の種(Melilotus spp.)、ハッカ属の種(Mentha spp.)、ススキ(Miscanthus sinensis)、ツルレイシ属の種(Momordicaspp.)、クロミグワ(Morus nigra)、バショウ種(Musa spp.)、タバコ種(Nicotiana spp.)、オリーブ属種(Olea spp.)、オプンティア属の種(Opuntia spp.)、オルニトプス属の種(Ornithopus spp.)、オリザ属の種(Oryza spp.)(例えば、イネ、オリザ・ラティフォリア(Oryza latifolia))、キビ(Panicum miliaceum)、スイッチグラス(Panicum virgatum)、パッションフルーツ(Passiflora edudis)、バースニップ(Pastinaca sativa)、チカラシバ属の種(Pennisetum sp.)、ワニナシ属の種(Persea spp.)、イタリアンパセリ(Petroselinum crispum)、クサヨシ(Phalaris arundinacea)、インゲンマメ属の種(Phaseolus spp.)、オオアワガエリ(Phleum pratense)、ナツメヤシ属の種(Phoenix spp.)、ヨシ(Phragmites australis)、ホオズキ属の種(Physalis spp.)、マツ属の種(Pinus spp.)、ピスタチオ(Pistacia vera)、エンドウ属の種(Pisum spp.)、イチゴツナギ属の種(Poa spp.)、ハコヤナギ属の種(Populus spp.)、プロソピス属の種(Prosopis spp.)、サクラ属の種(Prunus spp.)、パンジロウ属の種(Psidium spp.)、ザクロ(Punica granatum)、セイヨウナシ(Pyrus communis)、コナラ属の種(Quercus spp.)、ラディッシュ(Raphanus sativus)、ショクヨウダイオウ(Rheum rhabarbarum)、スグリ属の種(Ribes spp.)、トウゴマ(Ricinus communis)、キイチゴ属の種(Rubus spp.)、サトウキビ属の種(Saccharum spp.)、ヤナギ属の種(Salix sp.)、ニワトコ属の種(Sambucus spp.)、ライムギ(Secale cereale)、ゴマ属の種(Sesamum spp.)、シナピス属の種(Sinapis sp.)、ナス属の種(Solanum spp.)(例えば、ジャガイモ(Solanum tuberosum)、ヒラナス(Solanum integrifolium)又はトマト(Solanum lycopersicum))、モロコシ(Sorghum bicolor)、ホウレンソウ属の種(Spinacia spp.)、シジジウム属の種(Syzygium spp.)、マンジュギク属の種(Tagetes spp.)、タマリンディス・インディカ(Tamarindus indica)、テオブロマ・カカオ(Theobroma cacao)、トリフォリウム属の種(Trifolium spp.)、トリプサカム・ダクチロイデス(Tripsacum dactyloides)、トリチコセケル・リンパウイ(Triticosecale rimpaui)、コムギ属の種(Triticum spp.)(例えば、コムギ（Triticum aestivum）、デュラムコムギ(Triticum durum)、リベットコムギ(Triticum turgidum)、トリチカム・ヒベルナム(Triticum hybernum)、トリチカム・マチャ(Triticum macha)、トリチカム・サチバム(Triticum sativum)、マカロニコムギ(Triticum monococcum)又はトリチカム・バルガレ(Triticum vulgare))、トロパエオルム・ミヌス(Tropaeolum minus)、トロパエオルム・マジャス(Tropaeolum majus)、スノキ属の種(Vaccinium spp.)、ソラマメ属の種(Vicia spp.)、ササゲ属の種(Vigna spp.)、ニオイスミレ(Viola odorata)、ブドウ属の種(Vitis spp.)、トウモロコシ（Zea mays）、ワイルドライス(Zizania palustris)、ナツメ属の種(Zizphus spp.)、アマランス、アーティチョーク、アスパラガス、ブロッコリ、芽キャベツ、キャベツ、キャノーラ、ニンジン、カリフラワー、セロリ、コラードグリーン、アマ、ケール、レンズマメ、アブラナ、オクラ、タマネギ、ジャガイモ、イネ、大豆、イチゴ、テンサイ、サトウキビ、ヒマワリ、トマト、カボチャ、茶及び藻類などを含むリストから選択される、上科の緑色植物界に属するすべての植物、特に、飼葉若しくはマメ科牧草を含む単子葉植物及び双子葉植物、観賞植物、食用作物、樹木若しくは低木を含む。本発明の好ましい実施形態に従って、植物は作物である。作物の例は、特に、大豆、ヒマワリ、キャノーラ、アルファルファ、ナタネ、ワタ、トマト、ジャガイモ又はタバコを含む。さらに好ましくは、植物は、サトウキビなどの単子葉植物である。さらに好ましくは、植物は、イネ、トウモロコシ、小麦、大麦、雑穀(millet)、ライ麦、モロコシ又はオート麦などの穀類である。
好ましい実施形態において、植物は、以下により詳細に記載のように、本発明による野生型若しくはmut-PPOの導入遺伝子を導入及び過剰発現させることにより植物を組換えによって調製するステップを含む方法によってあらかじめ作製されている。
別の好ましい実施形態において、植物は、in situで植物細胞を突然変異誘発させ、mut-PPOを発現する植物細胞を得るステップを含む方法によってあらかじめ作製されている。
本明細書に開示する場合、本発明の核酸は、それらのゲノム中に除草剤-耐性の野生型若しくはmut-PPOのタンパク質をコードする遺伝子を含む植物の、除草剤耐性の強化における使用が見出される。以下に記載のように、このような遺伝子は、内因性遺伝子であっても、又は導入遺伝子であってもよい。さらに、特定の実施形態において本発明の核酸は、所望の表現型を有する植物を作製するために、対象となるポリヌクレオチド配列の任意の組合せで積み重ねられてもよい。例えば、本発明の核酸は、殺有害生物性(pesticidal)及び/又は殺虫性の活性を有するポリペプチド、例えば、バチルス・チューリンゲンシス(Bacillus thuringiensis)毒タンパク質(米国特許第5,366,892号、第5,747,450号、第5,737,514号、第5,723,756号、第5,593,881号及びGeiserら(1986年) Gene 48: 109に記載)、5-エノールピルビルシキミ酸-3-リン酸合成酵素(EPSPS)、グリホセートアセチルトランスフェラーゼ(GAT)、チトクロームP450モノオキシゲナーゼ、ホスフィノトリシン(phosphinothricin)アセチルトランスフェラーゼ(PAT)、アセトヒドロキシ酸合成酵素(AHAS;EC4.1.3.18、アセト乳酸合成酵素若しくはALSとしても知られる)、ピルビン酸ヒドロキシフェニルジオキシゲナーゼ(HPPD)、フィトエンデサチュラーゼ(PD)及びWO02/068607に開示のジカンバ(dicamba)分解酵素又はWO2008141154若しくはWO2005107437に開示のフェノキシ酢酸及びフェノキシプロピオン酸の誘導体分解酵素などをコードする任意の他のポリヌクレオチドで積み重ねてもよい。作製された組合せは、対象となるポリヌクレオチドの任意の一つの複数のコピーをさらに含んでいてよい。
概して、「除草剤」という用語は、死滅、制御又はさもなければ植物の成長を不利に修飾する有効成分を意味するために本明細書において使用される。除草剤の好ましい量又は濃度は、「有効量」又は「有効濃度」である。「有効量」及び「有効濃度」は、それぞれ同様の野生型、植物、植物組織、植物細胞又は宿主細胞の成長を死滅又は阻害するために十分であるが、前記量が本発明の除草剤抵抗性の植物、植物組織、植物細胞及び宿主細胞の成長を激しく死滅又は阻害しない量及び濃度を意図する。通常、有効量の除草剤は、対象となる雑草を死滅させるために農業生産系において日常的に使用される量である。このような量は、当業者には公知である。成長の任意の段階又は植え付け若しくは出芽前に植物又は植物遺伝子部位に直接用いた場合、除草活性は、本発明にとって有用な除草剤により示される。観察される効果は、制御される植物種、植物の成長段階、希釈及びスプレー液滴サイズの適用パラメーター、固体成分の粒径、使用時の環境条件、用いる具体的な化合物、用いる具体的なアジュバント及び担体、土壌の型など、並びに適用される化学物質の量に依存する。これら及び他の因子は、非選択性又は選択性除草剤の作用を促進するために当分野において公知のように調整可能である。概して、除草剤を出芽後に、比較的未熟な望ましくない植生に適用し、雑草の最大制御を達成することが好ましい。
「除草剤耐性」又は「除草剤抵抗性」の植物は、正常な又は野生型の植物の成長を通常死滅又は阻害するであろうレベルで、少なくとも一種の除草剤に耐性又は抵抗性である植物を意図する。「除草剤耐性の野生型又はmut-PPOタンパク質」又は「除草剤抵抗性の野生型又はmut-PPOタンパク質」は、PPO活性に干渉することが公知である少なくとも一種の除草剤の存在下、及び野生型mut-PPOタンパク質のPPO活性を阻害することが公知である除草剤の濃度又はレベルの場合に、このようなPPOタンパク質が、野生型PPOタンパク質のPPO活性と比較して、より高いPPO活性を示すことを意図する。さらに、このような除草剤耐性又は除草剤抵抗性のmut-PPOタンパク質のPPO活性は、本明細書において「除草剤耐性」又は「除草剤抵抗性」のPPO活性と称され得る。
概して、本発明に関連して使用できる本明細書に記載のPPO阻害除草剤(A)及び/又は除草性化合物Bが、幾何異性体、例えばE/Z異性体を形成できる場合、本発明による組成物中で、純粋な異性体及びその混合物の両方を使用できる。本明細書に記載のPPO阻害除草剤(A)及び/又は除草性化合物Bが一個以上のキラル中心を有する場合及び、結果として鏡像異性体又はジアステレオマーとして存在する場合、本発明による組成物中で、純粋な鏡像異性体及びジアステレオマー並びにその混合物の両方を使用できる。本明細書に記載のPPO阻害除草剤(A)及び/又は除草性化合物Bがイオン化できる官能基を有する場合、それらはそれらの農業的に許容される塩の形態でも使用できる。概して適切なのは、そのカチオン及びアニオンのそれぞれが活性化合物の活性に悪影響を有さないこれらのカチオンの塩及びこれらの酸の酸付加塩である。好ましいカチオンは、アルカリ金属、好ましくはリチウム、ナトリウム及びカリウムの、アルカリ土類金属、好ましくはカルシウム及びマグネシウムの、並びに遷移金属、好ましくはマンガン、銅、亜鉛及び鉄のイオンであり、さらにアンモニウム及び、一個から四個の水素原子がC1-C4-アルキル、ヒドロキシ-C1-C4-アルキル、C1-C4-アルコキシ-C1-C4-アルキル、ヒドロキシ-C1-C4-アルコキシ-C1-C4-アルキル、フェニル又はベンジルによって置き換えられた置換アンモニウム、好ましくはアンモニウム、メチルアンモニウム、イソプロピルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、ジイソプロピルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、ヘプチルアンモニウム、ドデシルアンモニウム、テトラデシルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、テトラブチルアンモニウム、2-ヒドロキシメチルアンモニウム(オラミン塩)、2-(2-ヒドロキシエタ-1-オキシ)エタ-1-イルアンモニウム(ジグリコールアミン塩)、ジ(2-ヒドロキシエタ-1-イル)-アンモニウム(ジオールアミン塩)、トリス(2-ヒドロキシエチル)アンモニウム(トロールアミン(trolamine)塩)、トリス(2-ヒドロキシプロピル)アンモニウム、ベンジルトリメチルアンモニウム、ベンジルトリエチルアンモニウム、N,N,N-トリメチルエタノールアンモニウム(コリン塩)、さらにホスホニウム塩、スルホニウム塩、好ましくはトリメチルスルホニウムなどのトリ(C1-C4-アルキル)スルホニウム、及びスルホキソニウムイオン、好ましくはトリ(C1-C4-アルキル)スルホキソニウム、並びに最後にN,N-ビス-(3-アミノプロピル)メチルアミン及びジエチレントリアミンなどの多塩基アミンの塩である。有用な酸付加塩のアニオンは、主に塩化物イオン、臭化物イオン、フッ化物イオン、ヨウ化物イオン、硫酸水素イオン、メチル硫酸イオン、硫酸イオン、リン酸二水素イオン、リン酸水素イオン、硝酸イオン、炭酸水素イオン、炭酸イオン、ヘキサフルオロケイ酸イオン、ヘキサフルオロリン酸イオン、安息香酸イオン並びにC1-C4-アルカン酸のアニオン、好ましくはギ酸イオン、酢酸イオン、プロピオン酸イオン及び酪酸イオンである。
カルボキシル基を有する本明細書に記載のPPO阻害除草剤A及び/又は除草剤化合物Bは、酸の形態、上述の農業的に適切な塩の形態又は他に農業的に許容される誘導体、例えばモノ-及びジ-C1-C6-アルキルアミド若しくはアリールアミドなどのアミド類、例えばアリルエステル、プロパルギルエステル、C1-C10-アルキルエステル、アルコキシアルキルエステル、テフリル((テトラヒロドフラン-2-イル)メチル)エステルなどのエステル類並びに、例えばC1-C10-アルキルチオエステルなどのチオエステル類の形態で使用できる。好ましいモノ-及びジ-C1-C6-アルキルアミドは、メチル及びジメチルアミドである。好ましいアリールアミドは、例えばアニリド及び2-クロロアニリドである。好ましいアルキルエステルは、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、メキシル(1-メチルヘキシル)、メプチル(1-メチルヘプチル)、ヘプチル、オクチル又はイソオクチル(2-エチルヘキシル)エステルである。好ましいC1-C4-アルコキシ-C1-C4-アルキルエステルは、直鎖又は分枝C1-C4-アルコキシエチルエステル、例えば2-メトキシエチル、2-エトキシエチル、2-ブトキシエチル(ブトチル(butotyl))、2-ブトキシプロピル又は3-ブトキシプロピルエステルである。直鎖又は分枝C1-C10-アルキルチオエステルの例は、エチルチオエステルである。
本発明により使用できるPPO阻害除草剤の例は、アシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、アザフェニジン(azafenidin)、ベンカルバゾン(bencarbazone)、ベンズフェンジゾン(benzfendizone)、ビフェノックス(bifenox)、ブタフェナシル(butafenacil)、カルフェントラゾン(carfentrazone)、カルフェントラゾン-エチル(carfentrazone-ethyl)、クロメトキシフェン(chlomethoxyfen)、シニドン-エチル(cinidon-ethyl)、フルアゾレート(fluazolate)、フルフェンピル(flufenpyr)、フルフェンピル-エチル(flufenpyr-ethyl)、フルミクロラック(flumiclorac)、フルミクロラック-ペンチル(flumiclorac-pentyl)、フルミオキサジン、フルオログリコフェン(fluoroglycofen)、フルオログリコフェン-エチル(fluoroglycofen-ethyl)、フルチアセット(fluthiacet)、フルチアセット-メチル(fluthiacet-methyl)、ホメサフェン、ハロサフェン(halosafen)、ラクトフェン、オキサジアルギル(oxadiargyl)、オキサジアゾン(oxadiazon)、オキシフルオルフェン(oxyfluorfen)、ペントキサゾン(pentoxazon)、プロフルアゾール(profluazol)、ピラクロニル(pyraclonil)、ピラフルフェン(pyraflufen)、ピラフルフェン-エチル(pyraflufen-ethyl)、サフルフェナシル(saflufenacil)、スルフェントラゾン(sulfentrazon)、チジアジミン(thidiazimin)、チアフェナシル(tiafenacil)、クロルニトロフェン(chlornitrofen)、フルミプロピン(flumipropyn)、フルオロニトロフェン(fluoronitrofen)、フルプロパシル(flupropacil)、フリロキシフェン(furyloxyfen)、ニトロフルオルフェン(nitrofluorfen)、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、N-エチル-3-2,6-ジクロロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452098-92-9)、N-テトラヒドロフルフリル-3-(2,6-ジクロロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 915396-43-9)、N-エチル-3-(2-クロロ-6-フルオロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452099-05-7)、N-テトラヒドロフルフリル-3-(2-クロロ-6-フルオロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452100-03-7)、3-[7-フルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル]-1,5-ジメチル-6-チオキソ-[1,3,5]トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 451484-50-7)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、2-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-4,5,6,7-テトラヒドロ-イソインドール-1,3-ジオン(CAS 1300118-96-0)、1-メチル-6-トリフルオロメチル-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン、メチル(E)-4-[2-クロロ-5-[4-クロロ-5-(ジフルオロメトキシ)-1H-メチル-ピラゾール-3-イル]-4-フルオロ-フェノキシ]-3-メトキシ-ブタ-2-エノエート[CAS 948893-00-3]、3-[7-クロロ-5-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-4-イル]-1-メチル-6-(トリフルオロメチル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン(CAS 212754-02-4)、並びに
式IIIのウラシル類
Figure 2018186826
 式中、
R30及びR31は互いに独立してF、Cl又はCNであり、
R32はO又はSであり、
R33はH、F、Cl、CH3又はOCH3であり、
R34はCH又はNであり、
R35はO又はSであり、
R36はH、CN、CH3、CF3、OCH3、OC2H5、SCH3、SC2H5、(CO)OC2H5又はCH2R38であり
式中、R38はF、Cl、OCH3、SCH3、SC2H5、CH2F、CH2Br又はCH2OHであり、
及び
R37は(C1-C6-アルキル)アミノ、(C1-C6-ジアルキル)アミノ、(NH)OR39、OH、OR40又はSR40
式中、R39はCH3、C2H5又はフェニルであり、並びに
R40は互いに独立してC1〜C6-アルキル、C2〜C6-アルケニル、C3〜C6-アルキニル、C1〜C6-ハロアルキル、C1〜C6-アルコキシ-C1〜C6-アルキル、C1〜C6-アルコキシ-C1〜C6-アルコキシ-C1〜C6-アルキル、C2〜C6-シアノアルキル、C1〜C4-アルコキシ-カルボニル-C1〜C4-アルキル、C1〜C4-アルキル-カルボニル-アミノ、C1〜C6-アルキルスルフィニル-C1〜C6-アルキル、C1〜C6-アルキル-スルホニル-C1〜C6-アルキル、C1〜C6-ジアルコキシ-C1〜C6-アルキル、C1〜C6-アルキル-カルボニルオキシ-C1〜C6-アルキル、フェニル-カルボニル-C1〜C6-アルキル、トリ(C1〜C3-アルキル)-シリル-C1〜C6-アルキル、トリ(C1〜C3-アルキル)-シリル-C1〜C6-アルケニル、トリ(C1〜C3-アルキル)-シリル-C1〜C6-アルキニル、トリ(C1〜C3-アルキル)-シリル-C1〜C6-アルコキシ-C1〜C6-アルキル、ジメチルアミノ、テトラヒドロピラニル、テトラヒドロフラニル-C1〜C3-アルキル、フェニル-C1〜C6-アルコキシ-C1〜C6-アルキル、フェニル-C1〜C3-アルキル、ピリジル-C1〜C3-アルキル、ピリジル、フェニルであり、
そのピリジル及びフェニルは互いに独立して、ハロゲン、C1-C3-アルキル又はC1-C2-ハロアルキルからなる群から選択される一個から五個の置換基によって置換されており、
C3-C6-シクロアルキル又はC3-C6-シクロアルキル-C1-C4-アルキル、
そのシクロアルキルは互いに独立して未置換又は、ハロゲン、C1-C3-アルキル及びC1-C2-ハロアルキルからなる群から選択される一個から五個の置換基によって置換されており、それらの農業的に許容されるアルカリ金属塩又はアンモニウム塩を含む。
本発明により使用できる好ましいPPO阻害除草剤は、
アシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、アザフェニジン、ベンカルバゾン、ベンズフェンジゾン、ブタフェナシル、カルフェントラゾン-エチル、シニドン-エチル、フルフェンピル-エチル、フルミクロラック-ペンチル、フルミオキサジン、フルオログリコフェン-エチル、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン(lactofen)、オキサジアルギル、オキサジアゾン、オキシフルオルフェン、ペントキサゾン、ピラフルフェン-エチル、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、N-エチル-3-(2,6-ジクロロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452098-92-9)、N-テトラヒドロフルフリル-3-(2,6-ジクロロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 915396-43-9)、N-エチル-3-(2-クロロ-6-フルオロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452099-05-7)、N-テトラヒドロフルフリル-3-(2-クロロ-6-フルオロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452100-03-7)、3-[7-フルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル]-1,5-ジメチル-6-チオキソ-[1,3,5]トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 451484-50-7)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、2-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-4,5,6,7-テトラヒドロ-イソインドール-1,3-ジオン(CAS 1300118-96-0);1-メチル-6-トリフルオロメチル-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン(CAS 1304113-05-0)、3-[7-クロロ-5-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-4-イル]-1-メチル-6-(トリフルオロメチル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン(CAS 212754-02-4)、
式III.1のウラシル類(式IIIのウラシル類に対応する、式中、R30はFであり、R31はClであり、R32はOであり、R33はHであり、R34はCHであり、R35はOであり、及びR37はOR40である)
Figure 2018186826
 式中、
R36はOCH3、OC2H5、SCH3又はSC2H5であり、
及び
R40はC1〜C6-アルキル、C2〜C6-アルケニル、C3〜C6-アルキニル、C1〜C6-ハロアルキル、C1〜C6-アルコキシ-C1〜C6-アルキル、C1〜C6-アルコキシ-C1〜C6-アルコキシ-C1〜C6-アルキル、C1〜C3-シアノアルキル、フェニル-C1〜C3-アルキル、ピリジル-C1〜C3-アルキル、C3〜C6-シクロアルキル又はC3〜C6-シクロアルキル-C1〜C4-アルキルであり、
そのシクロアルキルは未置換又は、ハロゲン、C1-C3-アルキル及びC1-C2-ハロアルキルからなる群から選択される一個から五個の置換基によって置換されており、
並びに
式III.2のウラシル類(式IIIのウラシル類に対応する、式中、R30はFであり、R31はClであり、R32はOであり、R33はHであり、R34はNであり、R35はOであり、及びR37はR40がC1-C6-アルキルであるOR40である)
Figure 2018186826
 である。
本発明により使用できる特に好ましいPPO阻害除草剤は、
アシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、カルフェントラゾン-エチル、シニドン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、3-[7-フルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル]-1,5-ジメチル-6-チオキソ-[1,3,5]トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 451484-50-7)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、及び2-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-4,5,6,7-テトラヒドロ-イソインドール-1,3-ジオン(CAS 1300118-96-0)、1-メチル-6-トリフルオロメチル-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン(CAS 1304113-05-0)、
式III.1.1のウラシル類(式IIIのウラシル類に対応する、式中、R30はFであり、R31はClであり、R32はOであり、R33はHであり、R34はCHであり、R35はOであり、R36はOCH3であり、及びR37はOR40である)
Figure 2018186826
 式中、
R40はC1〜C6-アルキル、C2〜C6-アルケニル、C3〜C6-アルキニル、C1〜C6-ハロアルキル、C1〜C6-アルコキシ-C1〜C6-アルキル、C1〜C6-アルコキシ-C1〜C6-アルコキシ-C1〜C6-アルキル、C1〜C3-シアノアルキル、フェニル-C1〜C3-アルキル、ピリジル-C1〜C3-アルキル、C3〜C6-シクロアルキル又はC3〜C6-シクロアルキル-C1〜C4-アルキルであり、
そのシクロアルキルは未置換又は、ハロゲン、C1-C3-アルキル及びC1-C2-ハロアルキルからなる群から選択される一個から五個の置換基によって置換されている;
好ましくはCH3、CH2CH2OC2H5、CH2CHF2、シクロヘキシル、(1-メチルシクロプロピル)メチル又はCH2(ピリジン-4-イル)であり、
式III.2.1のウラシル類(式IIIのウラシル類に対応する、式中、R30はFであり、R31はClであり、R32はOであり、R33はHであり、R34はNであり、R35はOであり、及びR37はR40がCH3であるOR40である)
Figure 2018186826
 並びに
式III.2.2のウラシル類(式IIIのウラシル類に対応する、式中、R30はFであり、R31はClであり、R32はOであり、R33はHであり、R34はNであり、R35はOであり、及びR37はR40がC2H5であるOR40である)
Figure 2018186826
 である。
特に好ましいPPO阻害除草剤は下の表Aに載せるPPO阻害除草剤1からA.14である。
Figure 2018186826
 本発明を実施するために有用な上記PPO阻害除草剤は、より広範囲の望ましくない植生の制御を得るために、一種以上の他の除草剤と併せて適用することが多くの場合最も良い。例えばPPO阻害除草剤は、作物が天然で耐性である、又は上述の一種以上の追加的導入遺伝子の発現を介して抵抗性である追加的除草剤と併せてさらに使用できる。他の標的化除草剤と併せて使用する場合、本願請求項に係る化合物は、他の除草剤又は除草剤(複数種)と一緒に製剤化でき、他の除草剤又は除草剤(複数種)と一緒にタンクで混合でき、又は他の除草剤又は除草剤(複数種)と一緒に連続して適用できる。
混合物のための適切な成分は、例えばクラスb1)からb15)の除草剤から選択される
B)クラスb1)からb15)の除草剤:
b1)脂質生合成阻害剤、
b2)アセト乳酸合成酵素阻害剤(ALS阻害剤)、
b3)光合成阻害剤、
b4)プロトポルフィリノーゲン-IXオキシダーゼ阻害剤、
b5)漂白化型除草剤、
b6)エノールピルビルシキミ酸3-リン酸合成酵素阻害剤(EPSP阻害剤)、
b7)グルタミン合成酵素阻害剤、
b8)7,8-ジヒドロプロテイン酸合成酵素阻害剤(DHP阻害剤)、
b9)有糸分裂阻害剤、
b10)超長鎖脂肪酸の合成の阻害剤(VLCFA阻害剤)、
b11)セルロース生合成阻害剤、
b12)デカプラー(decoupler)除草剤、
b13)オーキシン型除草剤、
b14)オーキシン輸送阻害剤、並びに
b15)ブロモブチド(bromobutide)、クロルフルレノール、クロルフルレノール-メチル、シンメチリン(cinmethylin)、クミルロン(cumyluron)、ダラポン、ダゾメット(dazomet)、ジフェンゾクワット(difenzoquat)、ジフェンゾクワット-メチル硫酸(difenzoquat-metilsulfate)、ジメチピン(dimethipin)、DSMA、ダイムロン(dymron)、エンドタール(endothal)及びその塩、エトベンザニド(etobenzanid)、フラムプロップ(flamprop)、フラムプロップ-イソピロピル(flamprop-isopropyl)、フラムプロップ-メチル(flamprop-methyl)、フラムプロップ-M-イソピロピル(flamprop-M-isopropyl)、フラムプロップ-M-メチル(flamprop-M-methyl)、フラレノール(flurenol)、フラレノール-ブチル(flurenol-butyl)、フルルプリミドール(flurprimidol)、ホサミン(fosamin)、ホサミン-アンモニウム(fosamine-ammonium)、インダノファン(indanofan)、インダジフラム(indaziflam)、マレイン酸ヒドラジド、メフルイジド(mefluidide)、メタム(metam)、メチオゾリン(methiozolin)(CAS403640-27-7)、アジ化メチル、臭化メチル、メチル-ダイムロン(methyl-dymron)、ヨウ化メチル、MSMA、オレイン酸、オキサジクロメホン(oxaziclomefon)、ペラルゴン酸、ピリブチカルブ(pyributicarb)、キノクラミン(quinoclamin)、トリアジフラム(triaziflam)、トリジファン(tridiphan)並びに6-クロル-3-(2-シクロプロピル-6-メチルフェノキシ)-4-ピリダジノール(CAS499223-49-3)及びその塩及びエステルからなる群から選択される他の除草剤、
それらの農業的に許容される塩又は誘導体を含む。
本発明によるPPO阻害除草剤との組合せで使用できる除草剤Bの例は:
b1)脂質生合成阻害剤の群から:
アロキシジム(alloxydim)、アロキシジム-ナトリウム(alloxydim-sodium)、ブトキシジム(butroxydim)、クレトジム(clethodim)、クロジナホップ(clodinafop)、クロジナホップ-プロパルギル(clodinafop-propargyl)、シクロキシジム(cycloxydim)、シハロホップ(cyhalofop)、シハロホップ-ブチル(cyhalofop-butyl)、ジクロホップ(diclofop)、ジクロホップ-メチル(diclofop-methyl)、フェノキサプロップ(fenoxaprop)、フェノキサプロップ-エチル(fenoxaprop-ethyl)、フェノキサプロップ-P(fenoxaprop-P)、フェノキサプロップ-P-エチル(fenoxaprop-P-ethyl)、フレアジホップ(fluazifop)、フレアジホップ-ブチル(fluazifop-butyl)、フレアジホップ-P(fluazifop-P)、フレアジホップ-P-ブチル(fluazifop-P-butyl)、ハロキシホップ(Haloxyfop)、ハロキシホップ-メチル(Haloxyfop-methyl)、ハロキシホップ-P(Haloxyfop-P)、ハロキシホップ-P-メチル(haloxyfop-P-methyl)、メタミホップ(metamifop)、ピノキサデン(pinoxaden)、プロホキシジム(profoxydim)、プロパキザホップ(propaquizafop)、キザロホップ(quizalofop)、キザロホップ-エチル(quizalofop-ethyl)、キザロホップ-テフリル(quizalofop-tefuryl)、キザロホップ-P(quizalofop-P)、キザロホップ-P-エチル(quizalofop-P-ethyl)、キザロホップ-P-テフリル(quizalofop-P-tefuryl)、セトキシジム(sethoxydim)、テプラロキシジム(tepraloxydim)、トラルコキシジム(tralkoxydim),4-(4'-クロロ-4-シクロプロピル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3(6H)-オン(CAS1312337-72-6); 4-(2',4'-ジクロロ-4-シクロプロピル[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3(6H)-オン(CAS1312337-45-3);4-(4'-クロロ-4-エチル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3(6H)-オン(CAS1033757-93-5);4-(2',4'-ジクロロ-4-エチル[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3,5(4H,6H)-ジオン(CAS1312340-84-3);5-(アセチルオキシ)-4-(4'-クロロ-4-シクロプロピル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-3,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3-オン(CAS1312337-48-6);5-(アセチルオキシ)-4-(2',4'-ジクロロ-4-シクロプロピル-[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-3,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3-オン;5-(アセチルオキシ)-4-(4'-クロロ-4-エチル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-3,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3-オン(CAS1312340-82-1);5-(アセチルオキシ)-4-(2',4'-ジクロロ-4-エチル[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-3,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3-オン(CAS1033760-55-2);4-(4'-クロロ-4-シクロプロピル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-5-オキソ-2H-ピラン-3-イル炭酸メチルエステル(CAS1312337-51-1);4-(2',4'-ジクロロ-4-シクロプロピル-[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-5-オキソ-2H-ピラン-3-イル炭酸メチルエステル;4-(4'-クロロ-4-エチル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-5-オキソ-2H-ピラン-3-イル炭酸メチルエステル(CAS1312340-83-2);4-(2',4'-ジクロロ-4-エチル[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-5-オキソ-2H-ピラン-3-イル炭酸メチルエステル (CAS1033760-58-5)などのACC-除草剤;並びにベンフレセート(benfuresate)、ブチレート(butylate)、シクロエート(cycloate)、ダラポン、ジメピペレート(dimepiperate)、EPTC、エスプロカルブ(esprocarb)、エトフメセート(ethofumesate)、フルプロパネート(flupropanate)、モリネート(molinate)、オルベンカルブ(orbencarb)、ペブレート(pebulate)、プロスルホカルブ(prosulfocarb)、TCA、チオベンカルブ(thiobencarb)、チオカルバジル(tiocarbazil)、トリアレート(triallate)及びベルノレート(vernolate)などの非ACC除草剤;
b2)ALS阻害剤の群から:
アミドスルフロン、アジムスルフロン(azimsulfuron)、ベンスルフロン(bensulfuron)、ベンスルフロン-メチル(bensulfuron-methyl)、クロリムロン(chlorimuron)、クロリムロン-エチル(chlorimuron-ethyl)、クロルスルフロン(chlorsulfuron)、シノスルフロン(cinosulfuron)、シクロスルファムロン(cyclosulfamuron)、エタメトスルフロン(ethametsulfuron)、エタメトスルフロン-メチル(ethametsulfuron-methyl)、エトキシスルフロン(ethoxysulfuron)、フラザスルフロン(flazasulfuron)、フルセトスルフロン(flucetosulfuron)、フルピルスルフロン(flupyrsulfuron)、フルピルスルフロン-メチル-ナトリウム(flupyrsulfuron-methyl-sodium)、ホラムスルフロン(foramsulfuron)、ハロスルフロン(halosulfuron)、ハロスルフロン-メチル(halosulfuron-methyl)、イマゾスルフロン(imazosulfuron)、ヨードスルフロン(iodosulfuron)、ヨードスルフロン-メチル-ナトリウム(iodosulfuron-methyl-sodium)、イオフェンスルフロン(iofensulfuron)、イオフェンスルフロン-ナトリウム(iofensulfuron-sodium)、メソスルフロン(mesosulfuron)、メタゾスルフロン(metazosulfuron)、メトスルフロン(metsulfuron)、メトスルフロン-メチル(metsulfuron-methyl)、ニコスルフロン(nicosulfuron)、オルトスルファムロン(orthosulfamuron)、オキサスルフロン(oxasulfuron)、プリミスルフロン(primisulfuron)、プリミスルフロン-メチル(primisulfuron-methyl)、プロピリスルフロン(propyrisulfuron)、プロスルフロン(prosulfuron)、ピラゾスルフロン(pyrazosulfuron)、ピラゾスルフロン-エチル(pyrazosulfuron-ethyl)、リムスルフロン(rimsulfuron)、スルホメチュロン(sulfometuron)、スルホメチュロン-メチル(sulfometuron-methyl)、スルホスルフロン(sulfosulfuron)、チフェンスルフロン(thifensulfuron)、チフェンスルフロン-メチル(thifensulfuron-methyl)、トリアスルフロン(triasulfuron)、トリベヌロン(tribenuron)、トリベヌロン-メチル(tribenuron-methyl)、トリフロキシスルフロン(trifloxysulfuron)、トリフルスルフロン(triflusulfuron)、トリフルスルフロンメチル(triflusulfuron-methyl)及びトリトスルフロンなどのスルホニルウレア類、
イマザメタベンズ(imazamethabenz)、イマザメタベンズ-メチル(imazamethabenz-methyl)、イマザモックス(imazamox)、イマザピック(imazapic)、イマザピル(imzapyr)、イマザキン(imazaquin)及びイマゼタピル(imazethapyr)などのイミダゾリノン類、クロランスラム(cloransulam)、クロランスラム-メチル(cloransulam-methyl)、ジクロスラム(diclosulam)、フルメツラム(flumetsulam)、フロラスラム(florasulam)、メトスラム(metosulam)、ペノキススラム(penoxsulam)、ピリミスルファン(pyrimisulfan)及びピロックススラム(pyroxsulam)などのトリアゾロピリミジン(triazolopyrimidine)除草剤及びスルホンアニリド類、
ビスピリバック(bispyribac)、ビスピリバック-ナトリウム(bispyribac-sodium)、ピリベンゾキシム(pyribenzoxim)、ピリフタリド(pyriftalid)、ピリミノバック(pyriminobac)、ピリミノバック-メチル(pyriminobac-methyl)、ピリチオバック(pyrithiobac)、ピリチオバック-ナトリウム(pyrithiobac-sodium)、4-[[[2-[(4,6-ジメトキシ-2-ピリミジニル)オキシ]フェニル]メチル]アミノ]-安息香酸-1-メチル-エチルエステル(CAS420138-41-6)、4-[[[2-[(4,6-ジメトキシ-2-ピリミジニル)オキシ]フェニル]-メチル]アミノ]-安息香酸プロピルエステル(CAS420138-40-5)、N-(4-ブロモフェニル)-2-[(4,6-ジメトキシ-2-ピリミジニル)オキシ]ベンゼンメタンアミン(CAS420138-01-8)などのピリミジニルベンゾエート類、
フルカルバゾン(flucarbazone)、フルカルバゾン-ナトリウム、プロポキシカルバゾン(propoxycarbazone)、プロポキシカルバゾン-ナトリウム(propoxycarbazone-sodium)、チエンカルバゾン(thiencarbazone)及びチエンカルバゾン-メチル(thiencarbazone-methyl)などのスルホニルアミノカルボニル-トリアゾリノン除草剤;並びにトリアファモン(triafamone)、
これらの内、本発明の好ましい実施形態は、少なくとも一種のイミダゾリロノン除草剤を含む組成物に関する;
b3)光合成阻害剤の群から:
アミカルバゾン(amicarbazone)、光化学系IIの阻害剤、例えば、アメトリン(ametryne)、アトラジン(atrazine)、クロリダゾン(chloridazone)、シアナジン(cyanazine)、デメストリン(desmetryn)、ジメタメトリン(dimethametryn)、ヘキサジノン(hexazinone)、メトリブジン(metribuzin)、プロメトン(prometon)、プロメトリン(prometryne)、プロパジン(propazin)、シマジン(simazine)、シメトリン(simetryn)、テルブメトン(terbumeton)、テルブチラジン(terbuthylazine)、テルブトリン(terbutryn)及びトリエタジン(trietazin)などのクロロトリアジン、トリアジノン(triazinone)、トリアジンジオン(triazindione)、メチルチオトリアジン及びピリダジノン(pyridazinone)を含むトリアジン系除草剤、クロロブロムロン(chlorobromuron)、クロロトルロン(chlorotoluron)、クロロクスロン(chloroxuron)、ジメフロン(dimefuron)、ジウロン、フルオメチュロン(fluometuron)、イソプロチュロン、イソウロン(isouron)、リニュロン(linuron)、メタミトロン(metamitron)、メタベンズチアズロン(methabenzthiazuron)、メトベンズロン(metobenzuron)、メトキスロン(metoxuron)、モノリニュロン(monolinuron)、ネブロン(neburon)、シデュロン(siduron)、テブチウロン(tebuthiuron)及びチジアズロン(thidiazuron)などのアリールウレア、デスメディファム(desmedipham)、カルブチレート(karbutilat)、フェンメジファム(phenmedipham)、フェンメジファム-エチル(phenmedipham-ethyl)などのフェニルカルバメート類、ブロモフェノキシム(bromofenoxim)、ブロモキシニル並びにその塩及びエステル、イオキシニル(ioxynil)並びにその塩及びエステルなどのニトリル除草剤、ブロマシル(bromacil)、レナシル(lenacil)及びテルバシル(terbacil)などのウラシル類、並びにベンタゾン(bentazon)及びベンタゾン-ナトリウム(bentazon-sodium)、ピリデート(pyridate)、ピリダフォル(pyridafol)、ペンタノクロル(pentanochlor) 及びプロパニル(propanil)並びに、ジクワット(diquat)、ジクワット-ジブロミド(diquat-dibromide)、パラコート(paraquat)、パラコート-ジクロリド(paraquat-dichloride)及びパラコート-ジメチル硫酸などの光化学系Iの阻害剤。これらの内、本発明の好ましい実施形態は少なくとも一種のアリールウレア除草剤を含むこれらの組成物に関する。これらの内、同様に本発明の好ましい実施形態は少なくとも一種のトリアジン系除草剤を含む組成物に関する。これらの内、同様に本発明の好ましい実施形態は少なくとも一種のニトリル除草剤を含む組成物に関する;
b4)プロトポルフィリノーゲン-IXオキシダーゼ阻害剤の群から:
アシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、アザフェニジン、ベンカルバゾン、ベンズフェンジゾン、ビフェノックス、ブタフェナシル、カルフェントラゾン、カルフェントラゾン-エチル、クロメトキシフェン、シニドン-エチル、フルアゾレート、フルフェンピル、フルフェンピル-エチル、フルミクロラック、フルミクロラック-ペンチル、フルミオキサジン、フルオログリコフェン、フルオログリコフェン-エチル、フルチアセット、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ハロサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキサジアゾン、オキシフルオルフェン、ペントキサゾン、プロフルアゾール、ピラクロニル、ピラフルフェン、ピラフルフェン-エチル、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、チジアジミン、チアフェナシル、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100、N-エチル-3-(2,6-ジクロロ-4-トリフルオロ-メチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452098-92-9)、N-テトラヒドロフルフリル-3-(2,6-ジクロロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 915396-43-9)、N-エチル-3-(2-クロロ-6-フルオロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452099-05-7)、N-テトラヒドロフルフリル-3-(2-クロロ-6-フルオロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452100-03-7)、3-[7-フルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル]-1,5-ジメチル-6-チオキソ-[1,3,5]トリアジナン-2,4-ジオン、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、2-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-4,5,6,7-テトラヒドロ-イソインドール-1,3-ジオン、1-メチル-6-トリフルオロメチル-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン(CAS 1304113-05-0)、メチル(E)-4-[2-クロロ-5-[4-クロロ-5-(ジフルオロメトキシ)-1H-メチル-ピラゾール-3-イル]-4-フルオロ-フェノキシ]-3-メトキシ-ブタ-2-エノエート[CAS 948893-00-3]、及び3-[7-クロロ-5-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-4-イル]-1-メチル-6-(トリフルオロメチル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン(CAS 212754-02-4);
b5)漂白化型除草剤の群から:
PDS阻害剤:ベフルブタミド(beflubutamid)、ジフルフェニカン(diflufenican)、フルリドン(fluridone)、フルロクロリドン(flurochloridone)、フルルタモネ(flurtamone)、ノルフルラゾン(norflurazon)、ピコリナフェン(picolinafen)及び4-(3-トリフルオロメチル-フェノキシ)-2-(4-トリフルオロメチルフェニル)ピリミジン(CAS180608-33-7)、HPPD阻害剤:ベンソビシクロン(benzobicyclon)、ベンゾフェナップ(benzofenap)、クロマゾン(clomazone)、イソキサフルトール(isoxaflutole)、メソトリオン(mesotrione)、ピラスルホトール(pyrasulfotole)、ピラゾリネート(pyrazolynate)、ピラゾキシフェン(pyrazoxyfen)、サルコトリオン(sulcotrione)、テフリルトリオン(tefuryltrione)、テンボトリオン(tembotrione)、トプラメゾン(topramezone)及びビシクロピロン(bicyclopyrone)、漂白化型、標的未知:アクロニフェン(aclonifen)、アミトロール(amitrole)及びフルメチュロン(flumeturon);
b6)EPSP合成酵素阻害剤の群から:
グリホセート(glyphosate)、グリホセート-イソプロピルアンモニウム(glyphosate-isopropylammonium)、グリホセート-カリウム(glyposate-potassium)及びグリホセート-トリメシウム(glyphosate-trimesium)(スルホセート(sulfosate));
b7)グルタミン合成酵素阻害剤の群から:
ビラナホス(bilanaphos)(ビアラホス(bialaphos))、ビラナホス-ナトリウム(bilanaphos-sodium)、グルホシネート(glufosinat)、グルホシネート-P(glufosinate-P)及びグルホシネート-アンモニウム(glufosinat-ammonium);
b8)DHP合成酵素阻害剤の群から:
アスラム(asulam);
b9)有糸分裂阻害剤の群から:
群K1の化合物:ベンフルラリン(benfluralin)、ブトラリン(butralin)、ジニトラミン(dinitramine)、エタルフルラリン(ethalfluralin)、フルキロラリン(fluchloralin)、オリザリン(oryzalin)、ペンジメタリン(pendimethalin)、プロジアミン(prodiamine)及びトリフルラリン(trifluralin)などのジニトロアニリン類(dinitroanilines)、アミプロホス(amiprophos)、アミプロホス-メチル(amiprophos-methyl)及びブタミフォス(butamiphos)などのホスホロアミデート類、クロルタール(Chlorthal)、クロルタール-ジメチル(Chlorthal-dimethyl)などの安息香酸除草剤、ジチオピル(dithiopyr)及びチアゾピル(thiazopyr)などのピリジン類、プロピザミド(propyzamide)及びテブタム(tebutam)などのベンズアミド類;群K2の化合物:クロルプロファム(chlorpropham)、プロファム(propham)及びカルベタミド(carbetamide)、これらの内、群K1の化合物、特にジニトロアニリンが好ましい;
b10)VLCFA阻害剤の群から:
アセトクロル(acetochlor)、アラクロール(alachlor)、ブタクロール(butachlor)、ジメタクロル(dimethachlor)、ジメタナミド(dimethenamid)、ジメタナミド-P(dimethenamid-P)、メタザクロル(metazachlor)、メトラクロル(metolachlor)、メトラクロル-S(metolachlor-S)、ペトキサミド(pethoxamid)、プレチラクロール(pretilachlor)、プロパクロル(propachlor)、プロピソクロル(propisochlor)及びテニルクロル(thenylchlor)などのクロロアセタミド類、フルフェナセット(flufenacet)及びメフェナセット(mefenacet)などのオキシアセタニリド類(oxyacetanilides)、ジフェナミド(diphenamid)、ナプロアニリド(naproanilide)及びナプロパミド(napropamide)などのアセタニリド類(acetanilides)、フェントラザミド(fentrazamide)などのテトラゾリノン類(tetrazolinones)、並びにアニロホス(anilofos)、カフェンストロール(cafenstrole)、フェノキサスルホン(fenoxasulfone)、イプフェンカルバゾン(ipfencarbazone)、ピペロホス(piperophos)、ピロキサスルホン(pyroxasulfone)及び、式II.1、II.2、II.3、II.4、II.5、II.6、II.7、II.8及びII.9のイソキサゾリン(isoxazoline)化合物などの他の除草剤
Figure 2018186826
 式(I)Iのイソキサゾリン化合物は、例えばWO2006/024820、WO2006/037945、WO2007/071900及びWO2007/096576から当技術分野において公知である;
VLCFA阻害剤の内、選好性はクロロアセタミド及びオキシアセタミドに与えられる;
b11)セルロース生合成阻害剤の群から:
クロルチアミド(chlorthiamid)、ジクロベニル(dichlobenil)、フルポサキム(flupoxam)、インダジフラム、トリアジフラム、イソキサベン及び1-シクロヘキシル-5-ペンタフルオルフェニルオキシ-14-[1,2,4,6]チアトリアジン-3-イルアミン;
b12)デカプラー除草剤の群から:
ジノセブ(dinoseb)、ジノテルブ(dinoterb)並びにDNOC及びその塩;
b13)オーキシン型除草剤の群から:
クラシホス(clacyfos)などの2,4-D並びにその塩及びエステル、2,4-DB並びにその塩及びエステル、アミノシクロピラクロール(aminocyclopyrachlor)並びにその塩及びエステル、アミノピラリド-トリス(2-ヒドロキシプロピル)アンモニウム及びそのエステルなどのアミノピラリド(aminopyralid)並びにその塩、ベナゾリン(benazolin)、ベナゾリン-エチル(benazolin-ethyl)、クロルランベン(chloramben)並びにその塩及びエステル、クロメプロップ(clomeprop)、クロピラリド(clopyralid)並びにその塩及びエステル、ジカンバ並びにその塩及びエステル、ジクロルプロップ(dichlorprop)並びにその塩及びエステル、ジクロルプロップ-P並びにその塩及びエステル、フルロキシピル(fluroxypyr)、フルロキシピル-ブトメチル(fluroxypyr-butometyl)、フルロキシピル-メプチル(fluroxypyr-meptyl)、ハラウキシフェン(halauxifen)並びにその塩及びエステル(CAS943832-60-8); MCPA並びにその塩及びエステル、MCPA-チオエチル、MCPB並びにその塩及びエステル、メコプロップ(mecoprop)並びにその塩及びエステル、メコプロップ-P(mecoprop-P)並びにその塩及びエステル、ピクロラム(picloram)並びにその塩及びエステル、キンクロラック(quinclorac)、キンメラック(quinmerac)、TBA(2,3,6)並びにその塩及びエステル、並びにトリクロピル(triclopyr)並びにその塩及びエステル;
b14)オーキシン輸送阻害剤の群から:ジフルフェンゾピル(diflufenzopyr)、ジフルフェンゾピル-ナトリウム(diflufenzopyr-sodium)、ナプタラム(naptalam)及びナプタラム-ナトリウム(naptalam-sodium);
b15)他の除草剤の群から:ブロモブチド、クロルフルレノール、クロルフルレノール-メチル、シンメチリン、クミルロン、シクロピリモレート(CAS499223-49-3)並びにその塩及びエステル、ダラポン、ダゾメット、ジフェンゾクワット、ジフェンゾクワット-メチル硫酸、ジメチピン、DSMA、ダイムロン、エンドタール及びその塩、エトベンザニド、フラムプロップ、フラムプロップ-イソプロピル、フラムプロップ-メチル、フラムプロップ-M-イソプロピル、フラムプロップ-M-メチル、フラレノール、フラレノール-ブチル、フルルプリミドール、ホサミン、ホサミン-アンモニウム、インダノファン、インダジフラム、マレイン酸ヒドラジド、メフルイジド、メタム、メチオゾリン(CAS403640-27-7)、アジ化メチル、臭化メチル、メチル-ダイムロン、ヨウ化メチル、MSMA、オレイン酸、オキサジクロメホン、ペラルゴン酸、ピリブチカルブ、キノクラミン、トリアジフラム及びトリジファン。
本発明によるPPO阻害除草剤との組合せで使用できる好ましい除草剤Bは:
b1)脂質生合成阻害剤の群から:
クレトジム、クロジナホップ-プロパルギル、シクロキシジム、シハロホップ-ブチル、ジクロホップ-メチル、フェノキサプロップ-P-エチル、フレアジホップ-P-ブチル、ハロキシホップ-P-メチル、メタミホップ、ピノキサデン、プロホキシジム、プロパキザホップ、キザロホップ-P-エチル、キザロホップ-P-テフリル、セトキシジム、テプラロキシジム、トラルコキシジム、4-(4'-クロロ-4-シクロプロピル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3(6H)-オン(CAS 1312337-72-6); 4-(2',4'-ジクロロ-4-シクロプロピル[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3(6H)-オン(CAS 1312337-45-3); 4-(4'-クロロ-4-エチル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3(6H)-オン(CAS 1033757-93-5); 4-(2',4'-ジクロロ-4-エチル[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3,5(4H,6H)-ジオン(CAS 1312340-84-3); 5-(アセチルオキシ)-4-(4'-クロロ-4-シクロプロピル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-3,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3-オン(CAS 1312337-48-6); 5-(アセチルオキシ)-4-(2',4'-ジクロロ-4-シクロプロピル-[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-3,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3-オン; 5-(アセチルオキシ)-4-(4'-クロロ-4-エチル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-3,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3-オン(CAS 1312340-82-1); 5-(アセチルオキシ)-4-(2',4'-ジクロロ-4-エチル[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-3,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3-オン(CAS 1033760-55-2); 4-(4'-クロロ-4-シクロプロピル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-5-オキソ-2H-ピラン-3-イル炭酸メチルエステル(CAS 1312337-51-1); 4-(2',4'-ジクロロ-4-シクロプロピル-[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-5-オキソ-2H-ピラン-3-イル炭酸メチルエステル; 4-(4'-クロロ-4-エチル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-5-オキソ-2H-ピラン-3-イル炭酸メチルエステル(CAS 1312340-83-2); 4-(2',4'-ジクロロ-4-エチル[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-5-オキソ-2H-ピラン-3-イル炭酸メチルエステル(CAS 1033760-58-5);ベンフレセート、ジメピペレート、EPTC、エスプロカルブ、エトフメセート、モリネート、オルベンカルブ、プロスルホカルブ、チオベンカルブ及びトリアレート;
b2)ALS阻害剤の群から:
アミドスルフロン、アジムスルフロン、ベンスルフロン-メチル、ビスピリバック-ナトリウム、クロリムロン-エチル、クロルスルフロン、クロランスラム-メチル、シクロスルファムロン、ジクロスラム、エタメトスルフロン-メチル、エトキシスルフロン、フラザスルフロン、フロラスラム、フルカルバゾン-ナトリウム、フルセトスルフロン、フルメツラム、フルピルスルフロン-メチル-ナトリウム、ホラムスルフロン、ハロスルフロン-メチル、イマザメタベンズ-メチル、イマザモックス、イマザピック、イマザピル、イマザキン、イマゼタピル、イマゾスルフロン、ヨードスルフロン、ヨードスルフロン-メチル-ナトリウム、イオフェンスルフロン、イオフェンスルフロン-ナトリウム、メソスルフロン、メタゾスルフロン、メトスラム、メトスルフロン-メチル、ニコスルフロン、オルトスルファムロン、オキサスルフロン、ペノキススラム、プリミスルフロン-メチル、プロポキシカルバゾン-ナトリウム、プロピリスルフロン、プロスルフロン、ピラゾスルフロン-エチル、ピリベンゾキシム、ピリミスルファン、ピリフタリド、ピリミノバック-メチル、ピリチオバック-ナトリウム、ピロックススラム、リムスルフロン、スルホメチュロン-メチル、スルホスルフロン、チエンカルバゾン-メチル、チフェンスルフロン-メチル、トリアスルフロン、トリベヌロン-メチル、トリフロキシスルフロン、トリフルスルフロン-メチル、トリトスルフロン及びトリアファモン;
b3)光合成阻害剤の群から:
アメトリン、アミカルバゾン、アトラジン、ベンタゾン、ベンタゾン-ナトリウム、ブロモキシニル並びにその塩及びエステル、クロリダゾン、クロロトルロン、シアナジン、デスメディファム、ジクワット-ジブロミド、ジウロン、フルオメチュロン、ヘキサジノン、イオキシニル並びにその塩及びエステル、イソプロチュロン、レナシル、リニュロン、メタミトロン、メタベンズチアズロン、メトリブジン、パラコート、パラコート-ジクロリド、フェンメジファム、プロパニル、ピリデート、シマジン、テルブトリン、テルブチラジン並びにチジアズロン;
b4)プロトポルフィリノーゲン-IXオキシダーゼ阻害剤の群から:
アシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、アザフェニジン、ベンカルバゾン、ベンズフェンジゾン、ブタフェナシル、カルフェントラゾン-エチル、シニドン-エチル、フルフェンピル-エチル、フルミクロラック-ペンチル、フルミオキサジン、フルオログリコフェン-エチル、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキサジアゾン、オキシフルオルフェン、ペントキサゾン、ピラフルフェン-エチル、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、N-エチル-3-(2,6-ジクロロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452098-92-9)、N-テトラヒドロフルフリル-3-(2,6-ジクロロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 915396-43-9)、N-エチル-3-(2-クロロ-6-フルオロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452099-05-7)、N-テトラヒドロフルフリル-3-(2-クロロ-6-フルオロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452100-03-7)、3-[7-フルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル]-1,5-ジメチル-6-チオキソ-[1,3,5]トリアジナン-2,4-ジオン、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、2-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-4,5,6,7-テトラヒドロ-イソインドール-1,3-ジオン;1-メチル-6-トリフルオロメチル-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン、及び3-[7-クロロ-5-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-4-イル]-1-メチル-6-(トリフルオロメチル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン(CAS 212754-02-4);
b5)漂白化型除草剤の群から:
アクロニフェン、ベフルブタミド、ベンゾビシクロン、クロマゾン、ジフルフェニカン、フルロクロリドン、フルルタモネ、イソキサフルトール、メソトリオン、ノルフルラゾン、ピコリナフェン、ピラスルホトール、ピラゾリネート、サルコトリオン、テフリルトリオン、テンボトリオン、トプラメゾン、ビシクロピロン、4-(3-トリフルオロメチル-フェノキシ)-2-(4-トリフルオロメチルフェニル)-ピリミジン(CAS180608-33-7)、アミトロール及びフルメチュロン;
b6)EPSP合成酵素阻害剤の群から:
グリホセート、グリホセート-イソプロピルアンモニウム、グリホセート-カリウム及びグリホセート-トリメシウム(スルホセート);
b7)グルタミン合成酵素阻害剤の群から:
グルホシネート、グルホシネート-P、グルホシネート-アンモニウム;
b8)DHP合成酵素阻害剤の群から:アスラム;
b9)有糸分裂阻害剤の群から:
ベンフルラリン、ジチオピル、エタルフルラリン、オリザリン、ペンジメタリン、チアゾピル及びトリフルラリン;
b10)VLCFA阻害剤の群から:
アセトクロル、アラクロール、アニロホス、ブタクロール、カフェンストロール、ジメタナミド、ジメタナミド-P、フェントラザミド、フルフェナセット、メフェナセット、メタザクロル、メトラクロル、S-メトラクロル、ナプロアニリド、ナプロパミド、プレチラクロール、フェノキサスルホン、イプフェンカルバゾン、ピロキサスルホンテニルクロル並びに上述の式II.1、II.2、II.3、II.4、II.5、II.6、II.7、II.8及びII.9のイソキサゾリン-化合物;
b11)セルロース生合成阻害剤の群から:ジクロベニル、フルポサキム、イソキサベン及び1-シクロヘキシル-5-ペンタフルオルフェニルオキシ-14-[1,2,4,6]チアトリアジン-3-イルアミン;
b13)オーキシン型除草剤の群から:
2,4-D並びにその塩及びエステル、アミノシクロピラクロール並びにその塩及びエステル、アミノピラリド-トリス(2-ヒドロキシプロピル)アンモニウム及びそのエステルなどのアミノピラリド及びその塩、クロピラリド並びにその塩及びエステル、ジカンバ並びにその塩及びエステル、ジクロルプロップ-P並びにその塩及びエステル、フルロキシピル-メプチル、ハラウキシフェン並びにその塩及びエステル(CAS943832-60-8)、MCPA並びにその塩及びエステル、MCPB並びにその塩及びエステル、メコプロップ-P並びにその塩及びエステル、ピクロラム並びにその塩及びエステル、キンクロラック、キンメラック並びに、トリクロピル並びにその塩及びエステル;
b14)オーキシン輸送阻害剤の群から:ジフルフェンゾピル及びジフルフェンゾピル-ナトリウム;
b15)他の除草剤の群から:ブロモブチド、シンメチリン、クミルロン、シクロピリモレート(CAS499223-49-3)並びにその塩及びエステル、ダラポン、ジフェンゾクワット、ジフェンゾクワット-メチル硫酸、DSMA、ダイムロン(dymron)(ダイムロン(daimuron)と同じ)、フラムプロップ、フラムプロップ-イソプロピル、フラムプロップ-メチル、フラムプロップ-M-イソプロピル、フラムプロップ-M-メチル、インダノファン、インダジフラム、メタム、臭化メチル、MSMA、オキサジクロメホン、ピリブチカルブ、トリアジフラム及びトリジファン
本発明によるPPO阻害除草剤との組合せで使用できる特に好ましい除草剤Bは:
b1)脂質生合成阻害剤の群から:クロジナホップ-プロパルギル、シクロキシジム、シハロホップ-ブチル、フェノキサプロップ-P-エチル、ピノキサデン、プロホキシジム、テプラロキシジム、トラルコキシジム、4-(4'-クロロ-4-シクロプロピル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3(6H)-オン(CAS 1312337-72-6); 4-(2',4'-ジクロロ-4-シクロプロピル[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3(6H)-オン(CAS 1312337-45-3); 4-(4'-クロロ-4-エチル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5-ヒドロキシ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3(6H)-オン(CAS 1033757-93-5); 4-(2',4'-ジクロロ-4-エチル[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3,5(4H,6H)-ジオン(CAS 1312340-84-3); 5-(アセチルオキシ)-4-(4'-クロロ-4-シクロプロピル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-3,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3-オン(CAS 1312337-48-6); 5-(アセチルオキシ)-4-(2',4'-ジクロロ-4-シクロプロピル-[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-3,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3-オン; 5-(アセチルオキシ)-4-(4'-クロロ-4-エチル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-3,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3-オン(CAS 1312340-82-1); 5-(アセチルオキシ)-4-(2',4'-ジクロロ-4-エチル[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-3,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-2H-ピラン-3-オン(CAS 1033760-55-2); 4-(4'-クロロ-4-シクロプロピル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-5-オキソ-2H-ピラン-3-イル炭酸メチルエステル(CAS 1312337-51-1); 4-(2',4'-ジクロロ-4-シクロプロピル-[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-5-オキソ-2H-ピラン-3-イル炭酸メチルエステル; 4-(4'-クロロ-4-エチル-2'-フルオロ[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-5-オキソ-2H-ピラン-3-イル炭酸メチルエステル(CAS 1312340-83-2); 4-(2',4'-ジクロロ-4-エチル[1,1'-ビフェニル]-3-イル)-5,6-ジヒドロ-2,2,6,6-テトラメチル-5-オキソ-2H-ピラン-3-イル炭酸メチルエステル(CAS 1033760-58-5);エスプロカルブ、プロスルホカルブ、チオベンカルブ及びトリアレート;
b2)ALS阻害剤の群から:ベンスルフロン-メチル、ビスピリバック-ナトリウム、シクロスルファムロン、ジクロスラム、フルメツラム、フルピルスルフロン-メチル-ナトリウム、ホラムスルフロン、イマザモックス、イマザピック、イマザピル、イマザキン、イマゼタピル、イマゾスルフロン、ヨードスルフロン、ヨードスルフロン-メチル-ナトリウム、イオフェンスルフロン、イオフェンスルフロン-ナトリウム、メソスルフロン、メタゾスルフロン、ニコスルフロン、ペノキススラム、プロポキシカルバゾン-ナトリウム、プロピリスルフロン、ピラゾスルフロン-エチル、ピロックススラム、リムスルフロン、スルホスルフロン、チエンカルバゾン-メチル、トリトスルフロン及びトリアファモン;
b3)光合成阻害剤の群から:アメトリン、アトラジン、ジウロン、フルオメチュロン、ヘキサジノン、イソプロチュロン、リニュロン、メトリブジン、パラコート、パラコート-ジクロリド、プロパニル、テルブトリン及びテルブチラジン;
b4)プロトポルフィリノーゲン-IXオキシダーゼ阻害剤の群から:アシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、3-[7-フルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル]-1,5-ジメチル-6-チオキソ-[1,3,5]トリアジナン-2,4-ジオン、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、及び2-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-4,5,6,7-テトラヒドロ-イソインドール-1,3-ジオン、及び1-メチル-6-トリフルオロメチル-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
b5)漂白化型除草剤の群から:クロマゾン、ジフルフェニカン、フルロクロリドン、イソキサフルトール、メソトリオン、ピコリナフェン、サルコトリオン、テフリルトリオン、テンボトリオン、トプラメゾン、ビシクロピロン、アミトロール及びフルメチュロン;
b6)EPSP合成酵素阻害剤の群から:グリホセート、グリホセート-イソプロピルアンモニウム及びグリホセート-トリメシウム(スルホセート);
b7)グルタミン合成酵素阻害剤の群から:グルホシネート、グルホシネート-P及びグルホシネート-アンモニウム;
b9)有糸分裂阻害剤の群から:ペンジメタリン及びトリフルラリン;
b10)VLCFA阻害剤の群から:アセトクロル、カフェンストロール、ジメタナミド-P、フェントラザミド、フルフェナセット、メフェナセット、メタザクロル、メトラクロル、S-メトラクロル、フェノキサスルホン、イプフェンカルバゾン及びピロキサスルホン;同様に、選好性は上述の式II.1、II.2、II.3、II.4、II.5、II.6、II.7、II.8及びII.9のイソキサゾリン化合物に与えられている;
b11)セルロース生合成阻害剤の群から:イソキサベン;
b13)オーキシン型除草剤の群から:クラシホスなどの2,4-D並びにその塩及びエステル、並びにアミノシクロピラクロール並びにその塩及びエステル、アミノピラリド並びにその塩及びそのエステル、クロピラリド並びにその塩及びエステル、ジカンバ並びにその塩及びエステル、フルロキシピル-メプチル、キンクロラック並びにキンメラック;
b14)オーキシン輸送阻害剤の群から:ジフルフェンゾピル及びジフルフェンゾピル-ナトリウム、
b15)他の除草剤の群から:ダイムロン(dymron)(ダイムロン(daimuron)と同じ)、インダノファン、インダジフラム、オキサジクロメホン及びトリアジフラム。
さらに、上記の化合物Bとの組合せで使用される場合、薬害軽減剤と組合せてPPO阻害除草剤を適用することは有用である場合がある。薬害軽減剤は、望まれない植物に対する除草剤の除草性作用に大きな影響を有することなく有用な植物への損傷を予防又は低減する化合物である。それらは、播種前(例えば種子処置、シュート若しくは実生に)又は有用な植物の出芽前適用若しくは出芽後適用のいずれかで適用できる。
さらに薬害軽減剤C、PPO阻害除草剤及び/又は除草剤Bは、同時に又は連続して適用できる。
適切な薬害軽減剤は、例えば(キノリン-8-オキシ)酢酸、1-フェニル-5-ハロアルキル-1H-1,2,4-トリアゾル-3-カルボン酸、1-フェニル-4,5-ジヒドロ-5-アルキル-1H-ピラゾール-3,5-ジカルボン酸、4,5-ジヒドロ-5,5-ジアリール-3-イソキサゾルカルボン酸、ジクロロアセタミド、アルファ-オキシイミノフェニルアセトニトリル、アセトフェノノキシメ(acetophenonoxime)、4,6-ジハロ-2-フェニルピリミジン、N-[[4-(アミノカルボニル)フェニル]スルホニル]-2-安息香酸アミド、1,8-無水ナフタル酸(naphthalic anhydride)、2-ハロ-4-(ハロアルキル)-5-チアゾールカルボン酸、ホスホルチオレート(phosphorthiolate)並びにN-アルキル-O-フェニル-カルバメート及びそれらの農業的に許容される塩及び、それらが酸性基を有する限り、アミド、エステル及びチオエステルなどのそれらの農業的に許容される誘導体である。
好ましい薬害軽減剤Cの例は、ベノキサコル(benoxacor)、クロキントセット(cloquintocet)、シオメトリニル(cyometrinil)、シプロスルファミド(cyprosulfamide)、ジクロルミド(dichlormid)、ジシクロノン(dicyclonon)、ジエトレート(dietholate)、フェンクロラゾール(fenchlorazole)、フェンクロリム(fenclorim)、フルラゾール(flurazole)、フルキソフェニム(fluxofenim)、フリラゾール(furilazole)、イソキサジフェン(isoxadifen)、メフェンピル(mefenpyr)、メフェナート(mephenat)、無水ナフタル酸、オキサベトリニル(oxabetrinil)、4-(ジクロロアセチル)-1-オキサ-4-アザスピロ[4.5]デカン(MON4660、CAS71526-07-3)及び2,2,5-トリメチル-3-(ジクロロアセチル)-1,3-オキサソリジン(R-29148、CAS52836-31-4)である。
特に好ましい薬害軽減剤Cは、ベノキサコル、クロキントセット、シプロスルファミド、ジクロルミド、フェンクロラゾール、フェンクロリム、フルラゾール、フルキソフェニム、フリラゾール、イソキサジフェン、メフェンピル、無水ナフタル酸、オキサベトリニル、4-(ジクロロアセチル)-1-オキサ-4-アザスピロ-[4.5]デカン(MON4660、CAS71526-07-3)及び2,2,5-トリメチル-3-(ジクロロアセチル)-1,3-オキサソリジン(R-29148、CAS52836-31-4)である。
特に好ましい薬害軽減剤Cは、ベノキサコル、クロキントセット、シプロスルファミド、ジクロルミド、フェンクロラゾール、フェンクロリム、フリラゾール、イソキサジフェン、メフェンピル、無水ナフタル酸、4-(ジクロロアセチル)-1-オキサ-4-アザスピロ-[4.5]デカン(MON4660、CAS71526-07-3)及び2,2,5-トリメチル-3-(ジクロロアセチル)-1,3-オキサソリジン(R-29148、CAS52836-31-4)である。
同様に好ましい薬害軽減剤Cは、ベノキサコル、クロキントセット、シプロスルファミド、ジクロルミド、フェンクロラゾール、フェンクロリム、フリラゾール、イソキサジフェン、メフェンピル、4-(ジクロロアセチル)-1-オキサ-4-アザスピロ-[4.5]デカン(MON4660、CAS71526-07-3)及び2,2,5-トリメチル-3-(ジクロロアセチル)-1,3-オキサソリジン(R-29148、CAS52836-31-4)である。
成分Cとして本発明による組成物の構成成分である特に好ましい薬害軽減剤Cは、上に定義の薬害軽減剤Cであり;特に以下の表Cに載せる薬害軽減剤C.1 - C.12である:
Figure 2018186826
 PPO阻害除草剤及び群b1)からb15)の活性化合物B及び活性化合物Cは、公知の除草剤及び薬害軽減剤であり、例えばThe Compendium of Pesticide Common Names(http://www.alanwood.net/pesticides/); Farm Chemicals Handbook 2000年 volume 86、Meister Publishing Company、2000年; B. Hock、C. Fedtke、R. R. Schmidt、Herbizide [Herbicides]、Georg Thieme Verlag、Stuttgart 1995年; W. H. Ahrens、Herbicide Handbook、7th edition、Weed Science Society of America、1994年;及びK. K. Hatzios、Herbicide Handbook、Supplement for the 7th edition、Weed Science Society of America、1998年を参照されたい。2,2,5-トリメチル-3-(ジクロロアセチル)-1,3-オキサソリジン[CAS No. 52836-31-4]は、R-29148とも称される。4-(ジクロロアセチル)-1-オキサ-4-アザスピロ[4.5]デカン[CAS No. 71526-07-3]は、AD-67及びMON4660とも称される。
それぞれの作用機序への活性化合物の帰属は、現在の知識に基づいている。いくつかの作用機序が一種の活性化合物に適用される場合、この物質は一つの作用機序にだけ帰属された。
カルボキシル基を有する活性化合物B及びCは、本発明による組成物において酸の形態で、上述の農業的に適切な塩の形態で又は他に農業的に許容される誘導体の形態で使用できる。
ジカンバの場合、適切な塩は、対イオンが農業的に許容されるカチオンであるものを含む。例えばジカンバの適切な塩は、ジカンバ-ナトリウム、ジカンバ-カリウム、ジカンバ-メチルアンモニウム、ジカンバ-ジメチルアンモニウム、ジカンバ-イソプロピルアンモニウム、ジカンバ-ジグリコールアミン、ジカンバ-オラミン、ジカンバ-ジオールアミン、ジカンバ-トロールアミン、ジカンバ-N,N-bis-(3-アミノプロピル)メチルアミン及びジカンバ-ジエチレントリアミンである。適切なエステルの例は、ジカンバ-メチル及びジカンバ-ブトチルである。
2,4-Dの適切な塩は、2,4-D-アンモニウム、2,4-D-ジメチルアンモニウム、2,4-D-ジエチルアンモニウム、2,4-D-ジエタノールアンモニウム(2,4-D-ジオールアミン)、2,4-D-トリエタノールアンモニウム、2,4-D-イソプロピルアンモニウム、2,4-D-トリイソプロパノールアンモニウム、2,4-D-ヘプチルアンモニウム、2,4-D-ドデシルアンモニウム、2,4-D-テトラデシルアンモニウム、2,4-D-トリエチルアンモニウム、2,4-D-トリス(2-ヒドロキシプロピル)アンモニウム、2,4-D-トリス(イソプロピル)-アンモニウム、2,4-D-トロールアミン、2,4-D-リチウム、2,4-D-ナトリウムである。2,4-Dの適切なエステルの例は、2,4-D-ブトチル、2,4-D-2-ブトキシプロピル、2,4-D-3-ブトキシプロピル、2,4-D-ブチル、2,4-D-エチル、2,4-D-エチルヘキシル、2,4-D-イソブチル、2,4-D-イソオクチル、2,4-D-イソプロピル、2,4-D-メプチル、2,4-D-メチル、2,4-D-オクチル、2,4-D-ペンチル、2,4-D-プロピル、2,4-D-テフリル及びクラシホスである。
2,4-DBの適切な塩は、例えば2,4-DB-ナトリウム、2,4-DB-カリウム及び2,4-DB-ジメチル-アンモニウムである。2,4-DBの適切なエステルは、例えば2,4-DB-ブチル及び2,4-DB-イソクチルである。
ジクロルプロップの適切な塩は、例えばジクロルプロップ-ナトリウム、ジクロルプロップ-カリウム及びジクロルプロップ-ジメチルアンモニウムである。ジクロルプロップの適切なエステルの例は、ジクロルプロップ-ブトチル及びジクロルプロップ-イソクチルである。
MCPAの適切な塩及びエステルは、MCPA-ブトチル、MCPA-ブチル、MCPA-ジメチルアンモニウム、MCPA-ジオールアミン、MCPA-エチル、MCPA-チオエチル、MCPA-2-エチルヘキシル、MCPA-イソブチル、MCPA-イソクチル、MCPA-イソプロピル、MCPA-イソプロピルアンモニウム、MCPA-メチル、MCPA-オラミン、MCPA-カリウム、MCPA-ナトリウム及びMCPA-トロールアミンを含む。
MCPBの適切な塩はMCPBナトリウムである。MCPBの適切なエステルはMCPB-エチルである。クロピラリドの適切な塩は、クロピラリド-カリウム、クロピラリド-オラミン及びクロピラリド-トリス-(2-ヒドロキシプロピル)アンモニウムである。クロピラリドの適切なエステルの例は、クロピラリド-メチルである。
フルロキシピルの適切なエステルの例は、フルロキシピル-メプチル及びフルロキシピル-2-ブトキシ-1-メチルエチルであり、フルロキシピル-メプチルが好ましい。
ピクロラムの適切な塩は、ピクロラム-ジメチルアンモニウム、ピクロラム-カリウム、ピクロラム-トリイソプロパノールアンモニウム、ピクロラム-トリイソプロピルアンモニウム及びピクロラム-トロールアミンである。ピクロラムの適切なエステルは、ピクロラム-イソクチルである。
トリクロピルの適切な塩は、トリクロピル-トリエチルアンモニウムである。トリクロピルの適切なエステルは、例えばトリクロピル-エチル及びトリクロピル-ブトチルである。クロルランベンの適切な塩及びエステルは、クロルランベン-アンモニウム、クロルランベン-ジオールアミン、クロルランベン-メチル、クロルランベン-メチルアンモニウム及びクロルランベン-ナトリウムを含む。2,3,6-TBAの適切な塩及びエステルは、2,3,6-TBA-ジメチルアンモニウム、2,3,6-TBA-リチウム、2,3,6-TBA-カリウム及び2,3,6-TBA-ナトリウムを含む。
アミノピラリドの適切な塩及びエステルは、アミノピラリド-カリウム及びアミノ-ピラリド-トリス(2-ヒドロキシプロピル)アンモニウムを含む。
グリホセートの適切な塩は、例えばグリホセート-アンモニウム、グリホセート-ジアンモニウム、グリホセート-ジメチルアンモニウム、グリホセート-イソプロピルアンモニウム、グリホセート-カリウム、グリホセート-ナトリウム、グリホセート-トリメシウム並びにエタノールアミン及びジエタノールアミン塩、好ましくはグリホセート-ジアンモニウム、グリホセート-イソプロピルアンモニウム及びグリホセート-トリメシウム(スルホセート)である。
グルホシネートの適切な塩は、例えばグルホシネート-アンモニウムである。
グルホシネート-Pの適切な塩は、例えばグルホシネート-P-アンモニウムである。
ブロモキシニルの適切な塩及びエステルは、例えばブロモキシニル-ブチレート、ブロモキシニル-ヘプタノエート、ブロモキシニル-オクタノエート、ブロモキシニル-カリウム及びブロモキシニル-ナトリウムである。
イオキソニル(ioxonil)の適切な塩及びエステルは、例えばイオキソニル-オクタノエート、イオキソニル-カリウム及びイオキソニル-ナトリウムである。
メコプロップの適切な塩及びエステルは、メコプロップ-ブトチル、メコプロップ-ジメチルアンモニウム、メコプロップ-ジオールアミン、メコプロップ-エタジル、メコプロップ-2-エチルヘキシル、メコプロップ-イソクチル、メコプロップ-メチル、メコプロップ-カリウム、メコプロップ-ナトリウム及びメコプロップ-トロールアミンを含む。
メコプロップ-Pの適切な塩は、例えばメコプロップ-P-ブトチル、メコプロップ-P-ジメチルアンモニウム、メコプロップ-P-2-エチルヘキシル、メコプロップ-P-イソブチル、メコプロップ-P-カリウム及びメコプロップ-P-ナトリウムである。
ジフルフェンゾピルの適切な塩は、例えばジフルフェンゾピル-ナトリウムである。
ナプタラムの適切な塩は、例えばナプタラム-ナトリウムである。
アミノシクロピラクロールの適切な塩及びエステルは、例えばアミノシクロピラクロール-ジメチルアンモニウム、アミノシクロピラクロール-メチル、アミノシクロピラクロール-トリイソプロパノールアンモニウム、アミノシクロピラクロール-ナトリウム及びアミノシクロピラクロール-カリウムである。
キンクロラックの適切な塩は、例えばキンクロラック-ジメチルアンモニウムである。
キンメラックの適切な塩は、例えばキンクロラック-ジメチルアンモニウムである。
イマザモックスの適切な塩は、例えばイマザモックス-アンモニウムである。
イマザピックの適切な塩は、例えばイマザピック-アンモニウム及びイマザピック-イソプロピルアンモニウムである。
イマザピルの適切な塩は、例えばイマザピル-アンモニウム及びイマザピル-イソプロピルアンモニウムである。
イマザキンの適切な塩は、例えばイマザキン-アンモニウムである。
イマゼタピルの適切な塩は、例えばイマゼタピル-アンモニウム及びイマゼタピル-イソプロピルアンモニウムである。
トプラメゾンの適切な塩は、例えばトプラメゾン-ナトリウムである。
本明細書以下に述べる本発明の好ましい実施形態は、相互に独立して又は互いに組み合わされてのいずれか好ましいように理解されるべきである。
本発明の好ましい実施形態により組成物は、成分Bとして少なくとも一種の、好ましくは一種だけの除草剤Bを含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、少なくとも二種、好ましくは二種だけの互いに異なる除草剤Bを含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、少なくとも三種、好ましくは三種だけの互いに異なる除草剤Bを含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、成分Aとして少なくとも一種の、好ましくは一種だけのPPO A、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100;、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、及び成分Bとして少なくとも一種の、好ましくは一種だけの除草剤Bを含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、成分Aとして少なくとも一種の、好ましくは好ましくは一種だけのPPO A、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、及び少なくとも二種、好ましくは二種だけの互いに異なる除草剤Bを含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、成分Aとして少なくとも一種の、好ましくは好ましくは一種だけのPPO A、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)及び少なくとも三種、好ましくは三種だけの互いに異なる除草剤を含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b1)からの、特にクレトジム、クロジナホップ-プロパルギル、シクロキシジム、シハロホップ-ブチル、フェノキサプロップ-P-エチル、フレアジホップ、ピノキサデン、プロホキシジム、キザロホップ、セトキシジム、テプラロキシジム、トラルコキシジム、エスプロカルブ、プロスルホカルブ、チオベンカルブ及びトリアレートからなる群から選択される少なくとも一種の及び特に一種だけの除草性活性化合物を含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b2)からの、特にベンスルフロン-メチル、ビスピリバック-ナトリウム、クロランスラム-メチル、シクロスルファムロン、ジクロスラム、フルメツラム、フルピルスルフロン-メチル-ナトリウム、ホラムスルフロン、ハロスルフロン-メチル、イマザモックス、イマザピック、イマザピル、イマザキン、イマゼタピル、イマゾスルフロン、ヨードスルフロン、ヨードスルフロン-メチル-ナトリウム、メソスルフロン-メチル、メタゾスルフロン、ニコスルフロン、ペノキススラム、プロポキシカルバゾン-ナトリウム、ピラゾスルフロン-エチル、ピリチオバック-ナトリウム、ピロックススラム、リムスルフロン、スルホスルフロン、チエンカルバゾン-メチル、チフェンスルフロン-メチル、トリフロキシスルフロン及びトリトスルフロンからなる群から選択される少なくとも一種の及び特に一種だけの除草性活性化合物を含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b3)からの、特にアメトリン、アトラジン、ベンタゾン、ブロモキシニル、ジウロン、フルオメチュロン、ヘキサジノン、イソプロチュロン、リニュロン、メトリブジン、パラコート、パラコート-ジクロリド、プロメトリン、プロパニル、テルブトリン及びテルブチラジンからなる群から選択される少なくとも一種の及び特に一種だけの除草性活性化合物を含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b4)からの、特にアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、アザフェニジン、ベンカルバゾン、ベンズフェンジゾン、ビフェノックス、ブタフェナシル、カルフェントラゾン、カルフェントラゾン-エチル、クロメトキシフェン、シニドン-エチル、フルアゾレート、フルフェンピル、フルフェンピル-エチル、フルミクロラック、フルミクロラック-ペンチル、フルミオキサジン、フルオログリコフェン、フルオログリコフェン-エチル、フルチアセット、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ハロサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキサジアゾン、オキシフルオルフェン、ペントキサゾン、プロフルアゾール、ピラクロニル、ピラフルフェン、ピラフルフェン-エチル、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、チジアジミン、チアフェナシル、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、N-エチル-3-(2,6-ジクロロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452098-92-9)、N-テトラヒドロフルフリル-3-(2,6-ジクロロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 915396-43-9)、N-エチル-3-(2-クロロ-6-フルオロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452099-05-7)、N-テトラヒドロフルフリル-3-(2-クロロ-6-フルオロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452100-03-7)、3-[7-フルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル]-1,5-ジメチル-6-チオキソ-[1,3,5]トリアジナン-2,4-ジオン、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、2-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-4,5,6,7-テトラヒドロ-イソインドール-1,3-ジオン、1-メチル-6-トリフルオロメチル-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン、メチル(E)-4-[2-クロロ-5-[4-クロロ-5-(ジフルオロメトキシ)-1H-メチル-ピラゾール-3-イル]-4-フルオロ-フェノキシ]-3-メトキシ-ブタ-2-エノエート[CAS 948893-00-3]、3-[7-クロロ-5-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-4-イル]-1-メチル-6-(トリフルオロメチル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン(CAS 212754-02-4)からなる群から選択される少なくとも一種の及び特に一種だけの除草性活性化合物を含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b5)からの、特にクロマゾン、ジフルフェニカン、フルロクロリドン、イソキサフルトール、メソトリオン、ピコリナフェン、サルコトリオン、テフリルトリオン、テンボトリオン、トプラメゾン、ビシクロピロン、アミトロール及びフルメチュロンからなる群から選択される少なくとも一種の及び特に一種だけの除草性活性化合物を含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b6)からの、特にグリホセート、グリホセート-イソプロピルアンモニウム及びグリホセート-トリメシウム(スルホセート)からなる群から選択される少なくとも一種の及び一種だけの除草性活性化合物を含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b7)からの、特にグルホシネート、グルホシネート-P及びグルホシネート-アンモニウムからなる群から選択される少なくとも一種の及び特に一種だけの除草性活性化合物を含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b9)からの、特にペンジメタリン及びトリフルラリンからなる群から選択される少なくとも一種の及び特に一種だけの除草性活性化合物を含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4))、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b10)からの、特にアセトクロル、カフェンストロール、ジメタナミド-P、フェントラザミド、フルフェナセット、メフェナセット、メタザクロル、メトラクロル、S-メトラクロル、フェノキサスルホン及びピロキサスルホンからなる群から選択される少なくとも一種の及び特に一種だけの除草性活性化合物を含む。同様に選好性は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b10)からの、特に上に定義の式II.1、II.2、II.3、II.4、II.5、II.6、II.7、II.8及びII.9のイソキサゾリン化合物からなる群から選択される少なくとも一種の及び特に一種だけの除草性活性化合物を含む組成物に与えられる。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b13)からの、特に2,4-D並びにその塩及びエステル、アミノシクロピラクロール並びにその塩及びエステル、アミノピラリド-トリス(2-ヒドロキシプロピル)アンモニウム及びそのエステルなどのアミノピラリド並びにその塩、クロピラリド並びにその塩及びエステル、ジカンバ並びにその塩及びエステル、フルロキシピル-メプチル、キンクロラック並びにキンメラックからなる群から選択される少なくとも一種の及び特に一種だけの除草性活性化合物を含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b14)からの、特にジフルフェンゾピル並びにジフルフェンゾピル-ナトリウムからなる群から選択される少なくとも一種の及び特に一種だけの除草性活性化合物を含む。
本発明の別の好ましい実施形態により組成物は、PPO Aに加えて、好ましくはアシフルオルフェン、アシフルオルフェン-ナトリウム、ブタフェナシル、シニドン-エチル、カルフェントラゾン-エチル、フルミオキサジン、フルチアセット-メチル、ホメサフェン、ラクトフェン、オキサジアルギル、オキシフルオルフェン、サフルフェナシル、スルフェントラゾン、エチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100)、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)、特に好ましくはサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS1258836-72-4)、群b15)からの、特にダイムロン(dymron)(ダイムロン(daimuron)と同じ)、インダノファン、インダジフラム、オキサジクロメホン並びにトリアジフラムからなる群から選択される少なくとも一種の及び特に一種だけの除草性活性化合物を含む。
本明細書以下で「バイナリー組成物」という用語は、一個以上の、例えば一個、二個又は三個のPPO Aの活性化合物及び一個以上の、例えば一個、二個又は三個のいずれかの除草剤Bを含む組成物を含む。
成分Aとして少なくとも一種のPPO A及び少なくとも一種の除草剤Bを含むバイナリー組成物において、活性化合物の重量比A:Bは、一般に1:1000から1000:1の範囲、好ましくは1:500から500:1の範囲、特に1:250から250:1の範囲及び特に好ましくは1:75から75:1の範囲である。
特に好ましい除草剤Bは、上に定義のような除草剤B;特に以下の表Bに記載の除草剤B.1-B.229である:
Figure 2018186826
Figure 2018186826
Figure 2018186826
Figure 2018186826
特に好ましいのは、アシフルオルフェン及び表B-1の各行で定義される物質を含む、組成物1.1〜1.229である。
Figure 2018186826
Figure 2018186826
Figure 2018186826
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてアシフルオルフェン-ナトリウムを含むという点でのみ異なる組成物2.1.〜2.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてアザフェニジンを含むという点でのみ異なる組成物3.1.〜3.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてベンカルバゾンを含むという点でのみ異なる組成物4.1.〜4.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてベンズフェンジゾンを含むという点でのみ異なる組成物5.1.〜5.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてビフェノックスを含むという点でのみ異なる組成物6.1.〜6.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.227とは、成分Aとしてブタフェナシルを含むという点でのみ異なる組成物7.1.〜7.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてカルフェントラゾンを含むという点でのみ異なる組成物8.1.〜8.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてカルフェントラゾン-エチルを含むという点でのみ異なる組成物9.1.〜9.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてクロメトキシフェンを含むという点でのみ異なる組成物10.1.〜10.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてシニドン-エチルを含むという点でのみ異なる組成物11.1.〜11.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてフルアゾレートを含むという点でのみ異なる組成物12.1.〜12.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてフルフェンピルを含むという点でのみ異なる組成物13.1.〜13.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてフルフェンピル-エチルを含むという点でのみ異なる組成物14.1.〜14.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてフルミクロラックを含むという点でのみ異なる組成物15.1.〜15.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてフルミクロラック-ペンチルを含むという点でのみ異なる組成物16.1.〜16.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてフルミオキサジンを含むという点でのみ異なる組成物17.1.〜17.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてフルオログリコフェンを含むという点でのみ異なる組成物18.1.〜18.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてフルオログリコフェン-エチルを含むという点でのみ異なる組成物19.1.〜19.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてフルチアセットを含むという点でのみ異なる組成物20.1.〜20.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてフルチアセット-メチルを含むという点でのみ異なる組成物21.1.〜21.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてホメサフェンを含むという点でのみ異なる組成物22.1.〜22.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてハロサフェンを含むという点でのみ異なる組成物23.1.〜23.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてラクトフェンを含むという点でのみ異なる組成物24.1.〜24.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてオキサジアルギルを含むという点でのみ異なる組成物25.1.〜25.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてオキサジアゾンを含むという点でのみ異なる組成物26.1.〜26.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてオキシフルオルフェンを含むという点でのみ異なる組成物27.1.〜27.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてペントキサゾンを含むという点でのみ異なる組成物28.1.〜28.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてプロフルアゾールを含むという点でのみ異なる組成物29.1.〜29.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてピラクロニルを含むという点でのみ異なる組成物30.1.〜30.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてピラフルフェンを含むという点でのみ異なる組成物31.1.〜31.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてピラフルフェン-エチルを含むという点でのみ異なる組成物32.1.〜32.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてサフルフェナシルを含むという点でのみ異なる組成物33.1.〜33.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてスルフェントラゾンを含むという点でのみ異なる組成物34.1.〜34.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてチジアジミンを含むという点でのみ異なる組成物35.1.〜35.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてチアフェナシルを含むという点でのみ異なる組成物36.1.〜36.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてエチル[3-[2-クロロ-4-フルオロ-5-(1-メチル-6-トリフルオロメチル-2,4-ジオキソ-1,2,3,4-テトラヒドロピリミジン-3-イル)フェノキシ]-2-ピリジルオキシ]アセテート(CAS 353292-31-6; S-3100を含むという点でのみ異なる組成物37.1.〜37.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとして1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン(CAS 1258836-72-4)を含むという点でのみ異なる組成物38.1.〜38.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分AとしてN-エチル-3-2,6-ジクロロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452098-92-9)を含むという点でのみ異なる組成物39.1.〜39.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分AとしてN-テトラヒドロフルフリル-3-(2,6-ジクロロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 915396-43-9)、を含むという点でのみ異なる組成物40.1.〜40.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分AとしてN-エチル-3-(2-クロロ-6-フルオロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452099-05-7)を含むという点でのみ異なる組成物41.1.〜41.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分AとしてN-テトラヒドロフルフリル-3-(2-クロロ-6-フルオロ-4-トリフルオロメチルフェノキシ)-5-メチル-1H-ピラゾール-1-カルボキサミド(CAS 452100-03-7)を含むという点でのみ異なる組成物42.1.〜42.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとして3-[7-フルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル]-1,5-ジメチル-6-チオキソ-[1,3,5]トリアジナン-2,4-ジオンを含むという点でのみ異なる組成物43.1.〜43.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとしてメチル(E)-4-[2-クロロ-5-[4-クロロ-5-(ジフルオロメトキシ)-1H-メチル-ピラゾール-3-イル]-4-フルオロ-フェノキシ]-3-メトキシ-ブタ-2-エノエート[CAS 948893-00-3]を含むという点でのみ異なる組成物44.1.〜44.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとして3-[7-クロロ-5-フルオロ-2-(トリフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-4-イル]-1-メチル-6-(トリフルオロメチル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン(CAS 212754-02-4)を含むという点でのみ異なる組成物45.1.〜45.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとして2-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-4,5,6,7-テトラヒドロ-イソインドール-1,3-ジオンを含むという点でのみ異なる組成物46.1.〜46.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、成分Aとして1-メチル-6-トリフルオロメチル-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-プロパ-2-イニル-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[1,4]オキサジン-6-イル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオンを含むという点でのみ異なる組成物47.1.〜47.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、薬害軽減剤Cとしてさらにベノキサコルを含むという点でのみ異なる組成物48.1.〜48.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、薬害軽減剤Cとしてさらにクロキントセットを含むという点でのみ異なる組成物49.1.〜49.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、薬害軽減剤Cとしてさらにシプロスルファミドを含むという点でのみ異なる組成物50.1.〜50.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、薬害軽減剤Cとしてさらにジクロルミドを含むという点でのみ異なる組成物51.1.〜51.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、薬害軽減剤Cとしてさらにフェンクロラゾールを含むという点でのみ異なる組成物52.1.〜52.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、薬害軽減剤Cとしてさらにフェンクロリムを含むという点でのみ異なる組成物53.1.〜53.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、薬害軽減剤Cとしてさらにフリラゾールを含むという点でのみ異なる組成物54.1.〜54.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、薬害軽減剤Cとしてさらにイソキサジフェンを含むという点でのみ異なる組成物55.1.〜55.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、薬害軽減剤Cとしてさらにメフェンピルを含むという点でのみ異なる組成物56.1.〜56.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、薬害軽減剤Cとしてさらに4-(ジクロロアセチル)-1-オキサ-4-アザスピロ[4.5]デカン(MON4660、CAS71526-07-3)を含むという点でのみ異なる組成物57.1.〜57.229もまた特に好ましい。
対応する組成物1.1〜1.229とは、薬害軽減剤Cとしてさらに2,2,5-トリメチル-3-(ジクロロアセチル)-1,3-オキサソリジン(R-29148、CAS52836-31-4)を含むという点でのみ異なる組成物58.1.〜58.229もまた特に好ましい。
概して、処理される作物に選択的であり、用いられる施用量でのこれらの化合物によって制御される雑草のスペクトルを補完する除草剤と組み合わせて本発明の化合物を使用することが好ましい。概して、本発明の化合物及び他の補完なな除草剤を、配合剤又はタンク混合物のいずれかとして、同時に適用することが、さらに好ましい。
本発明のポリヌクレオチド分子及びポリペプチドは、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43若しくは45で表されるヌクレオチド配列、又は配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44若しくは46で表されるアミノ酸配列と十分に同一であるヌクレオチド又はアミノ酸配列を含むポリヌクレオチド分子及びポリペプチドを包含することが認識される。「十分に同一」という用語は、第1及び第2のアミノ酸又はヌクレオチド配列が共通の構造ドメイン及び/又は共通の機能活性を有するような、十分又は最小数の、第2のアミノ酸又はヌクレオチド配列と同一又は等価の(例えば同様の側鎖を有する)アミノ酸残基又はヌクレオチドを含有する第1のアミノ酸又はヌクレオチド配列を指すように、本明細書において使用される。
概して、「配列同一性」は、二つの最適にアライメントされたDNA又はアミノ酸配列が、成分、例えばヌクレオチド又はアミノ酸のアライメントのウインドウを通して不変である程度を指す。試験配列及び参照配列のアライメントされたセグメントに関する「同一性割合」は、参照配列セグメント、すなわち、全参照配列又は参照配列のより小さい定義された部分中の成分の合計数で割った、二つのアライメントされた配列により共有される同一成分の数である。「同一性パーセント」は、同一性割合×100である。比較ウインドウをアライメントするための配列の最適アライメントは当業者に周知であり、Smith及びWatermanの局所相同性アルゴリズム、Needleman及びWunschの相同性アライメントアルゴリズム、Pearson及びLipmanの類似性方法に関する検索などのツールにより、並びに好ましくは、GAP、BESTFIT、FASTA及びGCG Wisconsin Package(Accelrys Inc. Burlington、Mass.)の一部として利用可能なTFASTAなどのこれらのアルゴリズムのコンピュータ化された実行により実施できる。
ポリヌクレオチド及びオリゴヌクレオチド
センス若しくはアンチセンス方向又は両方の組合せでDNA、RNA又はこれらの組合せ、一本鎖又は二本鎖を、dsRNA又はその他を含む「単離されたポリヌクレオチド」によって、本発明者らは、その天然状態において会合又は連結しているポリヌクレオチド配列から少なくとも部分的に分離されているポリヌクレオチドを意味する。好ましくは単離されたポリヌクレオチドは、それらが天然で会合している他の成分を少なくとも60%含まず、好ましくは少なくとも75%含まず、最も好ましくは少なくとも90%含まない。当業者が認識するとおり、単離されたポリヌクレオチドは、例えばポリヌクレオチドを天然では含まないトランスジェニック生物に存在する、外来性ポリヌクレオチドであってよい。さらに「ポリヌクレオチド(複数可)」、「核酸配列(複数可)」、「ヌクレオチド配列(複数可)」、「核酸(複数可)」、「核酸分子」という用語は、本明細書において交換可能に使用され、任意の長さの非分枝型ポリマー形態の、リボヌクレオチド若しくはデオキシリボヌクレオチドのいずれか、又は両方の組合せのヌクレオチドを指す。
「mut-PPO核酸」という用語は、野生型PPO核酸から突然変異した配列を有し、それが発現される植物に増加したPPO阻害除草剤耐性を与えるPPO核酸を指す。さらに「突然変異プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ(mut-PPO)」という用語は、野生型一次配列配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44若しくは46、又はそれらの変異体、誘導体、ホモログ、オルソログ若しくはパラログのアミノ酸の別のアミノ酸での交換を指す。「突然変異アミノ酸」という表現は、別のアミノ酸により交換されたアミノ酸を示し、それによってタンパク質の一次配列中の突然変異部位を示すために、以下に使用される。
好ましい実施形態においてPPOヌクレオチド配列は、配列番号1、25、37若しくは39又はその変異体若しくは誘導体の配列を含む。
さらに、PPOヌクレオチド配列が、本明細書以下に定義する配列番号1、25、37又は39のホモログ、パラログ及びオルソログを包含することは当業者に理解される。
配列(例えば、本発明の転写制御ヌクレオチド配列などのポリペプチド又は核酸配列)に関する「変異体」という用語は、実質的に同様の配列を意味することを意図する。オープンリーディングフレームを含むヌクレオチド配列に関しては、変異体は、遺伝子コードの縮重のために、天然タンパク質と同一のアミノ酸配列をコードする配列を含む。これらのような天然の対立遺伝子変異体は、例えば、ポリメラーゼ連鎖反応(PCR)及びハイブリダイゼーション技術を用いた周知の分子生物学技術の使用により同定可能である。変異体ヌクレオチド配列は、例えば、オープンリーディングフレームに関する部位特異的突然変異誘発法の使用により作製された、天然タンパク質をコードするヌクレオチド配列並びに天然タンパク質と比べてアミノ酸置換を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列などの、合成的に誘導されたヌクレオチド配列をさらに含む。概して、本発明のヌクレオチド配列変異体は、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43又は45のヌクレオチド配列と、少なくとも30、40、50、60から70%、例えば、好ましくは、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%から79%、概して、少なくとも80%、例えば、81%-84%、少なくとも85%、例えば、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%から98%及び99%のヌクレオチド「配列同一性」を有するだろう。ポリヌクレオチドの同一性%は、ギャップ生成ペナルティ=5、ギャップ伸長ペナルティ=0.3でのGAP(Needleman及びWunsch、1970年)分析(GCGプログラム)によって決定される。他に述べる場合を除いて、クエリー配列は、長さ少なくとも45ヌクレオチドであり、GAP分析は二つの配列を少なくとも45ヌクレオチドの領域にわたってアライメントする。好ましくはクエリー配列は、長さ少なくとも150ヌクレオチドであり、GAP分析は二つの配列を少なくとも150ヌクレオチドの領域にわたってアライメントする。より好ましくはクエリー配列は、長さ少なくとも300ヌクレオチドであり、GAP分析は二つの配列を少なくとも300ヌクレオチドの領域にわたってアライメントする。さらに好ましくはGAP分析は、二つの配列をそれらの全長にわたってアライメントする。
ポリペプチド
「実質的に精製されたポリペプチド」又は「精製された」ポリペプチドは、天然状態において会合している一種以上の脂質、核酸、他のポリペプチド、又は他の混入分子から分離されていることを意味する。実質的に精製されたポリペプチドが、それらが天然で会合している他の成分を少なくとも60%含まないことは好ましく、より好ましくは少なくとも75%含まず、より好ましくは少なくとも90%含まない。当業者が理解するとおり、精製されたポリペプチドは、組換え的に産生されたポリペプチドであってよい。「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、一般に交換可能に使用され、非アミノ酸基の付加によって修飾されていてもいなくてもよい一本鎖ポリペプチドを指す。そのようなポリペプチド鎖が他のポリペプチド若しくはタンパク質又は補助因子などの他の分子と会合できることは理解される。本明細書において使用する場合「タンパク質」及び「ポリペプチド」という用語は、本明細書に記載の本発明のポリペプチドの変異体、突然変異体、修飾物、類似体及び/又は誘導体を含む。
ポリヌクレオチドの同一性%は、ギャップ生成ペナルティ=5、ギャップ伸長ペナルティ=0.3でのGAP(Needleman及びWunsch、1970年)分析(GCGプログラム)によって決定される。クエリー配列は、長さ少なくとも25アミノ酸であり、GAP分析は二つの配列を少なくとも25アミノ酸にわたってアライメントする。より好ましくはクエリー配列は、長さ少なくとも50アミノ酸であり、GAP分析は二つの配列を少なくとも50アミノ酸の領域にわたってアライメントする。より好ましくはクエリー配列は、長さ少なくとも100アミノ酸であり、GAP分析は二つの配列を少なくとも100アミノ酸の領域にわたってアライメントする。さらに好ましくはクエリー配列は、長さ少なくとも250アミノ酸であり、GAP分析は二つの配列を少なくとも250アミノ酸の領域にわたってアライメントする。さらに好ましくはGAP分析は、二つの配列をそれらの全長にわたってアライメントする。
定義されたポリペプチドに関して、上に提供されるものより高い%同一数が好ましい実施形態を包含することは理解される。したがって、適用できる場合、最小%同一数を考慮すると、本発明のPPOポリペプチドが配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44又は46と少なくとも40%、より好ましくは少なくとも45%、より好ましくは少なくとも50%、より好ましくは少なくとも55%、より好ましくは少なくとも60%、より好ましくは少なくとも65%、より好ましくは少なくとも70%、より好ましくは少なくとも75%、より好ましくは少なくとも80%、より好ましくは少なくとも85%、より好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも91%、より好ましくは少なくとも92%、より好ましくは少なくとも93%、より好ましくは少なくとも94%、より好ましくは少なくとも95%、より好ましくは少なくとも96%、より好ましくは少なくとも97%、より好ましくは少なくとも98%、より好ましくは少なくとも99%、より好ましくは少なくとも99.1%、より好ましくは少なくとも99.2%、より好ましくは少なくとも99.3%、より好ましくは少なくとも99.4%、より好ましくは少なくとも99.5%、より好ましくは少なくとも99.6%、より好ましくは少なくとも99.7%、より好ましくは少なくとも99.8%、及びさらに好ましくは少なくとも99.9%同一であるアミノ酸配列を含むことは好ましい。
「変異体」ポリペプチドは、天然タンパク質のN末端及び/又はC末端への一個以上のアミノ酸の欠失(いわゆる短縮)若しくは付加、天然タンパク質の一つ以上の部位における一個以上のアミノ酸の欠失若しくは付加、又は天然タンパク質の一つ以上の部位における一個以上のアミノ酸の置換により、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44又は46のタンパク質から生じたポリペプチドを意図する。このような変異体は、例えば、遺伝的多型又はヒトの操作から生じ得る。このような操作の方法は、当分野において周知である。
タンパク質の「誘導体」は、問題となる未修飾のタンパク質と比べてアミノ酸の置換、欠失及び/又は挿入を有し、それらが由来する未修飾のタンパク質と同様の生物学活性及び機能活性を有するペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質及び酵素を包含する。
タンパク質の「ホモログ」は、問題となる未修飾のタンパク質と比べてアミノ酸の置換、欠失及び/又は挿入を有し、それらが由来する未修飾のタンパク質と同様の生物学活性及び機能活性を有するペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチド、タンパク質及び酵素を包含する。
欠失は、タンパク質からの一個以上のアミノ酸の除去を指す。
挿入は、一個以上のアミノ酸残基がタンパク質の所定の部位へ導入されることを指す。挿入は、N末端及び/又はC末端の融合並びに単一若しくは複数のアミノ酸の配列内挿入を含み得る。概して、アミノ酸配列内の挿入は、N-末端若しくはC末端の融合より小さい、約一個から十個の残基の大きさである。N末端又はC末端融合のタンパク質又はペプチドの例は、酵母ツーハイブリッド系に使用される転写活性化因子の結合ドメイン若しくは活性化ドメイン、ファージコートタンパク質、(ヒスチジン)-6-タグ、グルタチオンS-トランスフェラーゼ-タグ、プロテインA、マルトース-結合タンパク質、ジヒドロ葉酸レダクターゼ、Tag・100エピトープ、c-mycエピトープ、FLAG(登録商標)エピトープ、lacZ、CMP(カルモジュリン-結合ペプチド)、HAエピトープ、プロテインCエピトープ及びVSVエピトープを含む。
置換は、タンパク質のアミノ酸と、同様の特性(同様の疎水性、親水性、抗原性、αへリックス構造又はβシート構造の形成又は破壊の傾向など)を有する他のアミノ酸との交換を指す。アミノ酸置換は、通常、単一の残基であるが、ポリペプチドに配置された機能的制約によりクラスター化されてもよく、一個から十個のアミノ酸範囲であってもよく、挿入は、普通、約一個から十個のアミノ酸残基の大きさである。アミノ酸置換は、好ましくは保存的アミノ酸置換である。保存的置換の表は、当分野において周知である(例えば、Creighton (1984年) Proteins. W.H. Freeman及びCompany (編)を参照されたい)。
Figure 2018186826
 アミノ酸の置換、欠失及び/又は挿入は、固相ペプチド合成法などの当分野において周知のペプチド合成技術を使用して、又は組換えDNA操作により容易に作ることができる。タンパク質の置換、挿入又は欠失変異体を作るためにDNA配列を操作する方法は、当分野において周知である。例えば、DNAの所定の部位における置換突然変異を作る技術は、当業者に周知であり、M13突然変異誘発、T7-Gen in vitro mutagenesis (USB、Cleveland、OH)、QuickChange Site Directed mutagenesis (Stratagene、San Diego、CA)、PCR媒介部位特異的突然変異誘発又は他の部位特異的突然変異誘発プロトコルを含む。
「誘導体」は、対象となるタンパク質などのタンパク質の天然型のアミノ酸配列と比較して、アミノ酸と非天然のアミノ酸残基との置換又は非天然アミノ酸残基の付加を含み得るペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチドをさらに含む。タンパク質の「誘導体」は、ポリペプチドの天然型のアミノ酸配列と比較して、天然に改変された(グリコシル化、アシル化、プレニル化、リン酸化、ミリストイル化、硫酸化など)又は非天然に改変されたアミノ酸残基を含むペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチドもまた包含する。誘導体は、それが由来するアミノ酸配列と比較して、一個以上の非アミノ酸置換基又は付加、例えば、その検出を容易にするために結合させたリポーター分子などの、アミノ酸配列に共有結合若しくは非共有結合したリポーター分子若しくは他のリガンド、及び天然タンパク質のアミノ酸配列と比べて非天然のアミノ酸残基を含んでよい。さらに、「誘導体」は、FLAG、HIS6又はチオレドキシンなどのタグペプチドとの天然型のタンパク質の融合もまた含む(タグペプチドの総説に関しては、Terpe、Appl. Microbiol. Biotechnol. 60、523-533、2003年を参照されたい)。
「オルソログ」及び「パラログ」は、遺伝子の組先の関係を記載するために使用される進化的概念を包含する。パラログは、祖先の遺伝子の複製を介して生じた同じ種内の遺伝子であり、オルソログは、種分化を介して生じ、さらに共通の祖先の遺伝子に由来する異なる生物由来の遺伝子である。このようなオルソログの例の、限定されない一覧表を、表1に示す。
パラログ及びオルソログが、特定の基質のための結合ポケット又は他のタンパク質との相互作用のための結合モチーフなどの所与の部位に、適切なアミノ酸残基を有する異なるドメインを共有できることは、当分野において周知である。
「ドメイン」という用語は、進化的に関連のあるタンパク質の配列のアライメントに沿った特定の位置において保存されたアミノ酸のセットを指す。一方、他の位置にあるアミノ酸はホモログの間で変化してもよく、特定の位置において高度に保存されたアミノ酸は、タンパク質の構造、安定性又は機能において必須であると思われるアミノ酸を示す。タンパク質ホモログのファミリーのアライメントされた配列において、それらの高い保存程度が同定されると、それらは、問題となる任意のポリペプチドがすでに同定されたポリペプチドファミリーに属するかどうかを決定するための識別子として使用できる。
「モチーフ」又は「コンセンサス配列」という用語は、進化的に関連のあるタンパク質の配列中の短い保存領域を指す。モチーフは、ドメインの高い頻度で高度に保存された部分であるが、ドメインの一部のみを含んでもよく、又は保存されたドメインの外側に位置してもよい(モチーフのアミノ酸のすべてが、既定のドメインの外側に収まる場合)。
専門的なデータベースがドメインの同定のために存在する、例えば、SMART(Schultzら、(1998年) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95、5857-5864; Letunicら、(2002年) Nucleic Acids Res 30、242-244)、InterPro (Mulderら、(2003年) Nucl. Acids. Res. 31、315-318)、Prosite (Bucher及びBairoch (1994年)、A generalized profile syntax for biomolecular sequences motifs and its function in automatic sequence interpretation. ISMB-94; Proceedings 2nd International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology. Altman R.、Brutlag D.、Karp P.、Lathrop R.、Searls D.編、53-61頁、AAAI Press, Menlo Park; Huloら、Nucl. Acids. Res. 32:D134-D137 (2004年))又はPfam (Batemanら、Nucleic Acids Research 30(1): 276-280 (2002年))。タンパク質配列のin silico分析のためのツールのセットが、ExPASy proteomics server (Swiss Institute of Bioinformatics (Gasteigerら、ExPASy: the proteomics server for in-depth protein knowledge and analysis, Nucleic Acids Res. 31:3784-3788(2003年))において利用可能である。ドメイン又はモチーフは、配列アライメントなどの通常の技術を使用しても同定できる。
比較のための配列アライメント方法は当分野において周知であり、このような方法は、GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA及びTFASTAを含む。GAPは、Needleman及びWunschのアルゴリズム((1970年) J Mol Biol 48: 443-453)を使用し、包括的な(すなわち、完全配列に及ぶ)一致数を最大にし、ギャップ数を最小にする、二つの配列のアライメントを見出す。BLASTのアルゴリズム(Altschulら(1990年) J Mol Biol 215: 403-10)は、配列同一性パーセントを計算し、二つの配列の間の類似性の統計分析を実施する。BLAST分析を実施するためのソフトウェアは、National Centre for Biotechnology Information (NCBI)を介して公的に利用可能である。ホモログは、例えば、デフォルトペアワイズアライメントのパラメーター及び百分率でのスコア付け方法により、ClustalW複数配列アライメントアルゴリズム(バージョン1.83)を使用して容易に同定できる。類似性及び同一性の包括的百分率もまた、MatGATソフトウェアパッケージ(Campanellaら、BMC Bioinformatics. 2003年7月10日;4:29. MatGAT: an application that generates similarity/identity matrices using protein or DNA sequences.)において利用可能な方法の一つを使用して決定できる。当業者には明らかである様に、些細な手作業の編集が、保存モチーフ間のアライメントを最適化するために実施できる。さらに、ホモログの同定のために完全長配列を使用する代わりに、特定のドメインを使用することもできる。配列同一性の値は、全核酸若しくはアミノ酸配列にわたって、又は選択されたドメイン若しくは保存モチーフ(複数可)にわたって、上述のプログラムを使用して、デフォルトパラメーターを使用して決定できる。局所アライメントに関しては、Smith-Watermanのアルゴリズムが特に有用である(Smith TF、Waterman MS (1981年) J. Mol. Biol 147(1);195-7)。
本発明の発明者は、一個以上の鍵となるアミノ酸残基を置換することによって、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44又は46の野生型PPO酵素の活性と比較して除草剤耐性又は除草剤抵抗性が著しく増加され得ることを見出した。mut-PPOの好ましい置換は、植物の除草剤耐性を増加させるが、オキシダーゼ活性の生物学的活性を実質的に影響を与えずそのままにするものである。
したがって、本発明の別の目的において、PPO酵素、それらの変異体、誘導体、オルソログ、パラログ又はホモログの鍵となるアミノ酸残基は、任意の他のアミノ酸により置換される。
好ましい実施形態において、PPO酵素、それらの変異体、誘導体、オルソログ、パラログ又はホモログの鍵となるアミノ酸残基は、表2に表された保存アミノ酸により置換される。
以下に述べるアミノ酸の位置に密接して位置するアミノ酸もまた置換できることは、当業者に理解されるだろう。したがって、別の実施形態において、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44又は46の変異体、それらの変異体、誘導体、オルソログ、パラログ又はホモログは、mut-PPOを含み、鍵となるアミノ酸からアミノ酸からアミノ酸±3、±2又は±1個のアミノ酸位置が、任意の他のアミノ酸により置換される。
当分野において周知の技術に基づいて、高度に特徴的な配列パターンが開発でき、これを用いて、所望の活性を有するさらなるmut-PPO候補を探索できる。
適切な配列パターンの適用によるさらなるmut-PPO候補の探索もまた、本発明に包含される。本配列パターンは、前記パターンの二つの隣接するアミノ酸残基の間の正確な距離によって制限されるものではないことは当業者には理解されるであろう。上記のパターンにおける二個の隣接アミノ酸の間のそれぞれの距離は、所望の活性に実質的に影響することなく、例えば、互いに独立して±10、±5、±3、±2又は±1個のアミノ酸位置まで変動してよい。
さらに、部位特異的突然変異誘発の方法を適用することにより、本発明の本発明者は、配列番号2又は4における397位のロイシンの第二の置換と組み合わされた配列番号2又は4における420位のフェニルアラニン残基の置換を指す突然変異の特定の組合せを同定した。
したがって、特に好適な実施形態では、配列番号2又は配列番号4のmut-PPOの変異体又は誘導体は、以下の表3aのアミノ酸置換の組み合わせから選択される。
Figure 2018186826
Figure 2018186826
さらに特に好適な実施形態では、配列番号2又は配列番号4のmut-PPOの変異体又は誘導体は、以下の表3bの組み合わせアミノ酸置換から選択される。
Figure 2018186826
Figure 2018186826
Figure 2018186826
上記表3で記載したものに加えて、任意のアミノ酸が置換物として用いられ得ることを理解されたい。かかる突然変異体の機能性を試験するためのアッセイは、当業者には容易に利用可能であって、それぞれ本発明の実験部分に記載されている。
好適な実施形態では、アミノ酸配列は、以下の位置：128、204、208、397、400、420、457の一以上において、配列番号2又は配列番号4のPPOのアミノ酸配列とは異なる。
これらのアミノ酸位置における相違の例として、限定するものではないが、以下の一以上が挙げられる：
128位のアミノ酸がアルギニン以外である；
204位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；
208位のアミノ酸がトレオニン以外である；
397位のアミノ酸がロイシン以外である；
400位のアミノ酸がロイシン以外である；
420位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；
457位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である。
いくつかの実施形態では、配列番号2又は配列番号4のmut-PPO酵素は、以下の一以上を含む：
128位のアミノ酸がLeu、Ala、Val、又はIleである；
204位のアミノ酸がAla、Leu、Ile、又はValである；
208位のアミノ酸がSerである；
397位のアミノ酸がGly、Ala、Ser、Thr、Cys、Val、Ile、Met、Pro、Phe、Tyr、Trp、His、Lys、Arg、Asn、Asp、Glu、又はGlnである；
400位のアミノ酸がAla、Ile、Val、又はMetである；
420位のアミノ酸がVal、Met、Ala、Ile、又はLeuである；
457位のアミノ酸がMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGly、Ala、Ser、Thr、Cys、Val、Ile、Met、Pro、Tyr、Trp、Asp、Glu、Asn、Gln、His、Lys、又はArgであり、420位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlyであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlyであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlyであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlyであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlyであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はThrであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はThrであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はThrであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はThrであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はThrであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はCysであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はCysであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はCysであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はCysであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はCysであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はProであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はProであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はProであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はProであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はProであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTyrであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTyrであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTyrであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTyrであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTyrであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTrpであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTrpであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTrpであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTrpであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTrpであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はHisであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はHisであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はHisであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はHisであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はHisであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はLysであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はLysであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はLysであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はLysであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はLysであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はArgであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はArgであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はArgであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はArgであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はArgであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsp、Glu、Gln、Asnであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、Metである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、400位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、400位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、400位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、400位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、400位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、400位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、400位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、400位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、400位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、400位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、400位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、400位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、400位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、400位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、400位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、400位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsp、Glu、Gln、Asnであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、Valであり、397位のアミノ酸はAsp、Glu、Gln、Asnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、Metである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、Metである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、400位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、400位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、400位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、400位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、208位のアミノ酸はSerである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、208位のアミノ酸はSerである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、420位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はMetであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はMetであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はMetであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はMetであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はMetであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はLeuであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はLeuであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はLeuであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はLeuであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はLeuであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はValであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はValであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はValであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はValであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はValであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、Valであり、397位のアミノ酸はAsp、Glu、Gln、Asnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGly、Ala、Ser、Thr、Cys、Val、Ile、Met、Pro、Tyr、Trp、Asp、Glu、Asn、Gln、His、Lys、Argであり、420位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlyであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlyであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlyであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlyであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlyであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はThrであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はThrであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はThrであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はThrであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はThrであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はCysであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はCysであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はCysであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はCysであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はCysであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はProであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はProであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はProであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はProであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はProであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTyrであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTyrであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTyrであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTyrであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTyrであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTrpであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTrpであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTrpであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTrpであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はTrpであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はHisであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はHisであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はHisであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はHisであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はHisであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はLysであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はLysであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はLysであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はLysであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はLysであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はArgであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はArgであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はArgであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はArgであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はArgであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsp、Glu、Gln、Asnであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、Metである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、400位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、400位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、400位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、400位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、400位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、400位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、400位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、400位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、400位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、400位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、400位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、400位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、400位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、400位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、400位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、400位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsp、Glu、Gln、Asnであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsnであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、Valであり、397位のアミノ酸はAsp、Glu、Gln、Asnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、Metである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、Metである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、400位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、400位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、400位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、400位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、208位のアミノ酸はSerである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、208位のアミノ酸はSerである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、Metであり、420位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAlaであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はValであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はMetであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はIleであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はMetであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はMetであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はMetであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はMetであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はMetであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はAlaであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はLeuであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はLeuであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はLeuであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はLeuであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はLeuであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はIleであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はValであり、457位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はValであり、457位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はValであり、457位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はValであり、457位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
420位のアミノ酸はValであり、457位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、Valであり、397位のアミノ酸はAsp、Glu、Gln、Asnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はAlaであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeuであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はIleであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はAspである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はGluである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はValであり、397位のアミノ酸はAsnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGly、Ala、Ser、Thr、Cys、Val、Ile、Met、Pro、Tyr、Trp、Asp、Glu、Asn、Gln、His、Lys、Argであり、392位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、Valである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGlyであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGlyであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGlyであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGlyであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGlyであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAlaであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAlaであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAlaであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAlaであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAlaであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はSerであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はSerであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はSerであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はSerであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はSerであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はThrであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はThrであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はThrであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はThrであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はThrであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はCysであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はCysであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はCysであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はCysであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はCysであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はValであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はValであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はValであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はValであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はValであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はIleであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はIleであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はIleであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はIleであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はIleであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はMetであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はMetであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はMetであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はMetであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はMetであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はProであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はProであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はProであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はProであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はProであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はTyrであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はTyrであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はTyrであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はTyrであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はTyrであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はTrpであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はTrpであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はTrpであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はTrpであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はTrpであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAspであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAspであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAspであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAspであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAspであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGluであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGluであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGluであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGluであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGluであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAsnであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAsnであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAsnであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAsnであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はAsnであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGlnであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGlnであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGlnであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGlnであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はGlnであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はHisであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はHisであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はHisであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はHisであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はHisであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はLysであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はLysであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はLysであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はLysであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はLysであり、392位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はArgであり、392位のアミノ酸はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はArgであり、392位のアミノ酸はAlaである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はArgであり、392位のアミノ酸はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はArgであり、392位のアミノ酸はIleである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号40の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
369位のアミノ酸はArgであり、392位のアミノ酸はValである。
特に好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、420位のアミノ酸はValである。
特に好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGluであり、420位のアミノ酸はMetである。
特に好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、420位のアミノ酸はValである。
特に好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はGlnであり、420位のアミノ酸はMetである。
特に好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAspであり、420位のアミノ酸はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、397位のアミノ酸はAsn、Asp、Glu、又はGlnであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、208位のアミノ酸はSerであり、397位のアミノ酸はAsn、Asp、Glu、又はGlnである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、397位のアミノ酸はAsn、Asp、Glu、又はGlnであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、397位のアミノ酸はAsn、Asp、Glu、又はGlnであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsn、Asp、Glu、又はGlnであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、397位のアミノ酸はAsn、Asp、Glu、又はGlnであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、208位のアミノ酸はSerであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsn、Asp、Glu、又はGlnであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
397位のアミノ酸はAsn、Asp、Glu、又はGlnであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、397位のアミノ酸はAsn、Asp、Glu、又はGlnであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、208位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeu、Ala、Val、又はIleであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeu、Ala、Val、又はIleであり、397位のアミノ酸はAsn、Asp、Glu、又はGlnであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeu、Ala、Val、又はIleであり、204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeu、Ala、Val、又はIleであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、208位のアミノ酸はSerであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeu、Ala、Val、又はIleであり、204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、208位のアミノ酸はSerであり、397位のアミノ酸はAsn、Asp、Glu、又はGlnであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、208位のアミノ酸はSerであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
他の好適な実施形態では、mut-PPOは配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含み、ここで：
128位のアミノ酸はLeu、Ala、Val、又はIleであり、204位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、400位のアミノ酸はAla、Ile、Val、又はMetであり、420位のアミノ酸はVal、Met、Ala、Ile、又はLeuであり、457位のアミノ酸はMet、Ala、Leu、Ile、又はValである。
表1に表されるような、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43又は45によってコードされるホモログ、オルソログ及びパラログに共有される保存された領域及びモチーフを同定することは、当業者の知識の範囲内であろう。適切な結合モチーフを表し得るこのような保存領域を同定すると、表3a及び3bに記載したアミノ酸に対応するアミノ酸は任意の他のアミノ酸、好ましくは表2に示す保存アミノ酸、より好ましくは表3a及び3bのアミノ酸による置換のために選択され得る。
加えて、本発明は、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43又は45のヌクレオチド配列又はそれらの変異体若しくは誘導体を含む核酸によりコードされるmut-PPOを使用することによって、PPO阻害除草剤を同定する方法について言及する。
前記方法は、
a) mut-PPOをコードする核酸を含むトランスジェニック細胞又は植物を作製するステップであって、mut-PPOが発現される前記ステップ、
b)PPO阻害除草剤を、a)のトランスジェニック細胞又は植物及び同じ変種の対照細胞又は植物に適用するステップ、
c)前記PPO阻害除草剤の適用後、トランスジェニック細胞又は植物及び対照細胞又は植物の成長又は生存率を決定するステップ、並びに
d)トランスジェニック細胞又は植物の成長と比較して、対照細胞又は植物に減少した成長を与える「PPO阻害除草剤」を選択するステップ
を含む。
「対照細胞」又は「同様の野生型の、植物、植物組織、植物細胞又は宿主細胞」は、除草剤抵抗性特徴及び/又は本明細書に開示の本発明の特定のポリヌクレオチドを欠いた、植物、植物組織、植物細胞又は宿主細胞をそれぞれ意図する。したがって、「野生型」という用語の使用は、そのゲノム中に組換えDNAを欠いた、及び/又は本明細書に開示のものとは異なる除草剤抵抗性特徴を保有しない植物、植物組織、植物細胞又は他の宿主細胞を意味することを意図しない。
別の目的は、PPO阻害除草剤に対して抵抗性又は耐性であるmut-PPOをコードするヌクレオチド配列を同定する方法であって、
a)mut-PPOコード核酸のライブラリーを作製するステップ、
b)細胞又は植物において前記核酸のそれぞれを発現させ、PPO阻害除草剤によって前記細胞又は植物を処理することによって、得られたmut-PPOコード核酸の集団をスクリーニングするステップ、
c)mut-PPOコード核酸の前記集団により提供されるPPO阻害除草剤耐性レベルと、対照PPOコード核酸により提供されるPPO阻害除草剤耐性レベルとを比較するステップ、
d)対照PPOコード核酸により提供されるものと比較して、PPO阻害除草剤に対する有意に増加した耐性レベルを提供する、少なくとも一種のmut-PPOコード核酸を選択するステップを含む前記方法について言及することである。
好ましい実施形態において、ステップd)において選択されるmut-PPOコード核酸は、対照PPOコード核酸により提供されるものと比較して、PPO阻害除草剤に対する少なくとも2倍高い細胞又は植物の抵抗性又は耐性を提供する。
さらに好ましい実施形態において、ステップd)において選択されたmut-PPOコード核酸は、対照PPOコード核酸により提供されるものと比較して、少なくとも2倍、少なくとも5倍、少なくとも10倍、少なくとも20倍、少なくとも50倍、少なくとも100倍、少なくとも500倍高いPPO阻害除草剤に対する細胞又は植物の抵抗性又は耐性を提供する。
抵抗性又は耐性は、ステップa)のライブラリーの核酸配列を含むトランスジェニックな植物又は宿主細胞、好ましくは植物細胞を作製し、前記トランスジェニック植物と、対照の植物又は宿主細胞、好ましくは植物細胞とを比較することによって決定することができる。
別の目的は、PPO阻害除草剤に対して抵抗性又は耐性である野生型又はmut-PPOをコードするヌクレオチド配列を含む核酸を含有する植物又は藻類を同定する方法であって、
a)植物細胞又は緑藻類の培養液における、前記細胞の死につながる有効量のPPO阻害除草剤を同定するステップ、
b)前記植物細胞又は緑藻類を、突然変異誘発剤により処理するステップ、
c)前記突然変異誘発された細胞の集団と、a)で同定された有効量のPPO阻害除草剤とを接触させるステップ、
d)これらの試験条件で生存する少なくとも一種の細胞を選択するステップ、
e)d)において選択された細胞からPPO遺伝子のPCR増幅及び配列決定をし、このような配列と野生型のPPO遺伝子配列とをそれぞれ比較するステップ、
を含む方法について言及することである。
好ましい実施形態において、前記突然変異誘発剤はエチルメタンスルホン酸(EMS)である。
技術者に周知の多くの方法が、微生物、植物、菌類、藻類、混合培養液などを含むさまざまな異なる潜在的供給源生物並びに土壌などのDNAの環境的供給源由来のmut-PPOをコードするヌクレオチド配列を同定するための、適切な候補核酸を得るために利用可能である。これらの方法は、特に、cDNA又はゲノムDNAライブラリーの調製、適切に縮重されたオリゴヌクレオチドプライマーの使用、公知の配列又は相補性アッセイに基づくプローブの使用(例えば、チロシンにおける成長)並びに組換えられた、又はシャッフルされたmut-PPOコード配列を提供するための、突然変異誘発及びシャッフリングの使用を含む。
候補及び対照のPPOコード配列を含む核酸は、酵母、細菌宿主株、藻類又はタバコ若しくはシロイヌナズナなどの高等植物において発現可能であり、PPOコード配列の先天的耐性の相対的レベルは、選択されたPPO阻害除草剤のさまざまな濃度の存在下で、形質転換された菌株又は植物の目に見える指標となる表現型に従ってスクリーニングされる。これらの指標となる表現型(褐色形成、成長阻害、除草効果など)に伴う用量応答及び用量応答における相対的移行は、例えば、GR50(成長が50%減少する濃度)又は値の増加が発現されたPPOの先天性耐性の増加と一致するMIC(最小阻害濃度)の点で便宜的に表現される。例えば、大腸菌(E.coli)などの細菌の形質転換に基づく比較的高速なアッセイ系において、個々のmut-PPOコード配列は、例えば、lacZプロモーターなどの調節可能なプロモーターの発現調節下のDNA配列として、例えば合成DNAの使用により、異なるPPO配列のレベルと可能な限り同等のレベルの発現を得るためのコドンの使用などの問題を適切に考慮して発現できる。別の候補PPO配列を含む核酸を発現するそのような菌株は、場合によりチロシンを添加した培地中のさまざまな濃度の選択されたPPO阻害除草剤にプレーティングでき、発現されたPPO酵素の先天的耐性の相対的レベルを、茶色の、組織褐変性色素の形成の阻害に関する程度及びMICに基づいて推定した。
別の実施形態において、候補核酸を植物材料内に形質転換し、トランスジェニック植物を作製し、選択されたPPO阻害除草剤に対する差次的耐性がその後測定される、形態的に正常な繁殖性植物が再生される。カナマイシンなどの適切な選択マーカー、アグロバクテリウム属(Agrobacterium)由来などのバイナリーベクター及び例えば、タバコのリーフディスク法などの植物再生を使用する、形質転換のための多くの適切な方法が、当分野において周知である。場合により、植物の対照集団は、対照PPOを発現する核酸により同様に形質転換される。代替的に、非形質転換のシロイヌナズナ又はタバコ(Tobacco)などの双子葉植物を、これはどんな場合にもそれ自身の内因性PPOを発現するので、対照として使用できる。上に記載のPPO阻害除草剤に対する、さまざまな一次植物形質転換事象又はそれらの子孫の除草剤耐性レベルの平均及び分布は、さまざまな異なる濃度の除草剤における、植物の損傷、成長点漂白化症状などに基づく正常な様式で評価される。これらのデータは、例えば、「用量」をx軸にプロットし、「死滅百分率」、「除草剤効果」「新生緑色植物の数」などをy軸にプロットした用量/応答曲線に由来するGR50値に関して表すことができ、GR50値の増加は、発現されたPPOの先天的耐性レベルの増加に対応する。除草剤は、出芽前又は出芽後に適切に適用される。
別の目的は、mut-PPOをコードする単離された核酸であって、上記の方法により同定可能である核酸について言及することである。
別の実施形態において、本発明は、野生型若しくはmut-PPO核酸により形質転換された植物細胞又は野生型若しくはmut-PPO核酸を発現する植物を得るために突然変異させた植物細胞であって、植物細胞における核酸の発現が、野生型変種の植物細胞と比較して、PPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性若しくは耐性をもたらす前記植物細胞について言及する。
「発現(expression)/発現する(expressing)」又は「遺伝子発現」という用語は、特定の遺伝子若しくは特定の遺伝子(複数)又は特定の遺伝子構築体の転写を意味する。「発現」又は「遺伝子発現」という用語は、特に、遺伝子若しくは遺伝子(複数)又は遺伝子構築体の、構造RNA(rRNA、tRNA)又はmRNAへの、mRNAのタンパク質へのその後の翻訳を伴う又は伴わない転写を意味する。この過程は、DNAの転写及び得られたmRNA産物のプロセシングを含む。
所望の効果、すなわち、本発明のPPO阻害除草剤に対して耐性又は抵抗性である植物を得るためには、少なくとも一種の核酸が、当業者に公知の方法及び手段により「過剰発現」されることは理解されるであろう。
本明細書において使用する場合、「発現の増加」又は「過剰発現」という用語は、もともとの野生型の発現レベルに追加される、任意の形態の発現を意味する。遺伝子又は遺伝子産物の発現を増加させる方法は、当分野において十分文書化されており、例えば、適切なプロモーターにより駆動される過剰発現、転写エンハンサー又は翻訳エンハンサーの使用を含む。プロモーター又はエンハンサー要素として機能する単離核酸は、対象となるポリペプチドをコードする核酸の発現を上方制御するように、ポリヌクレオチドの非異種形態の適切な位置(通常上流)に導入できる。例えば、内因性プロモーターは、突然変異、欠失、及び/又は置換によりin vivoで改変でき(Kmiec、米国特許第5,565,350号、Zarlingら、WO9322443を参照されたい)又は単離プロモーターは、遺伝子の発現が調節されるように、適切な配向及び本発明の遺伝子から離れて植物細胞に導入できる。
ポリペプチドの発現が望ましい場合、概して、ポリヌクレオチドコード領域の3'末端にポリアデニル化領域を含むことが望ましい。ポリアデニル化領域は、天然の遺伝子、さまざまな他の植物遺伝子又はT-DNAに由来してよい。加えられる3'末端配列は、例えば、ノパリン合成酵素若しくはオクトピン合成酵素の遺伝子又は代替的には、別の植物遺伝子又はあまり好ましくはないが任意の他の真核性遺伝子に由来してよい。
イントロン配列もまた、サイトゾル中に蓄積する成熟メッセージの量を増加させるために、部分的コード配列の5'非翻訳領域(UTR)又はコード配列に加えることができる。植物及び動物の両方の発現構築体の転写ユニット中にスプライシング可能なイントロンを含むことで、mRNA及びタンパク質の両方の遺伝子発現レベルが、1000倍まで増加することが示されている(Buchman及びBerg(1988年)Mol. Cell biol. 8: 4395-4405; Callisら(1987年) Genes Dev 1:1183-1200)。転写ユニットの5'末端近くに配置された場合、遺伝子発現のこのようなイントロン強化が通常最も高い。トウモロコシのイントロンである、Adh1-Sイントロン1、2及び6、Bronze-1イントロンの使用が、当分野において公知である。一般的な情報に関しては、The Maize Handbook, Chapter 116、Freeling及びWalbot編、Springer、N.Y. (1994年)を参照されたい。
本明細書において言及される「導入」又は「形質転換」という用語は、移入に使用する方法にかかわりなく、外因性のポリヌクレオチドの宿主細胞への移入を包含する。器官形成によってであろうと胚形成によってであろうと、その後クローン増殖可能な植物組織は、本発明の遺伝子構築体を用いて形質転換でき、それから植物全体を再生できる。選択された特定の組織は、形質転換される特定の種に利用可能で、最も適したクローン増殖系に依存して変更される。例示的組織標的は、リーフディスク、花粉、胚、子葉、胚軸、大配偶体、カルス組織、既存の分裂組織(例えば、頂端分裂組織、腋芽及び根の分裂組織)及び誘導性分裂組織(例えば、子葉分裂組織及び胚軸分裂組織)を含む。ポリヌクレオチドは、一時的に、又は安定して宿主細胞に導入でき、非統合的に、例えば、プラスミドとして維持され得る。代替的には、ポリヌクレオチドは宿主ゲノムに統合され得る。得られた形質転換された植物細胞は、その後、当業者に公知の様式で形質転換された植物を再生するために使用できる。
外来遺伝子の植物ゲノムへの移入を、形質転換と呼ぶ。植物種の形質転換は、現在きわめて日常の技術である。有利なことに、任意のいくつかの形質転換方法は、対象となる遺伝子を適切な祖先細胞に導入するために使用できる。植物組織又は植物細胞から植物の形質転換及び再生に関して記載された方法は、一時的な、又は安定した形質転換に利用できる。形質転換方法は、リポソーム、エレクトロポレーション、遊離のDNAの取り込みを増加する化学物質、植物へのDNAの直接注入、微粒子銃、ウイルス又は花粉を使用する形質転換及び顕微鏡投影の使用を含む。方法は、プロトプラストのためのカルシウム/ポリエチレングリコール法(Krens, F.A.ら、(1982年) Nature 296、72-74; Negrutiu Iら(1987年) Plant Mol Biol 8: 363-373);プロトプラストのエレクトロポレーション(Shillito R.D.ら(1985年) Bio/Technol 3、1099-1102);植物材料へのマイクロインジェクション(Crossway Aら、(1986年)Mol. Gen Genet 202: 179-185); DNA又はRNAによりコーティングされた粒子衝撃(Klein TMら、(1987年) Nature 327: 70)(非統合的)ウイルスによる感染などから選択できる。トランスジェニック作物を含むトランスジェニック植物は、好ましくは、アグロバクテリウム属媒介形質転換を介して作製される。有利な形質転換方法は、植物体における形質転換である。この目的のために、例えば、アグロバクテリアを植物種子に作用させる、又は植物分裂組織にアグロバクテリアを接種することが可能である。形質転換されたアグロバクテリアの懸濁液を無傷の植物若しくは少なくとも花原基に作用させることは、本発明に従って特に好都合に証明されている。次に、植物は処理した植物の種子が得られるまで成長させる。(Clough及びBent、Plant J. (1998年) 16、735-743)。コメのアグロバクテリウム属媒介形質転換の方法は、下記のいずれかに記載の方法などの、コメの形質転換の周知の方法を含む:欧州特許出願EP 1198985 A1、Aldemita及びHodges (Planta 199: 612-617、1996年); Chanら、(Plant Mol Biol 22 (3): 491-506、1993年)、Hieiら、(Plant J 6 (2): 271-282、1994年)、これらの開示は、完全に記載されたかのように、参照により本明細書に組み込まれる。コーンの形質転換の場合、好ましい方法は、Ishidaら(Nat. Biotechnol 14(6): 745-50、1996年)又はFrameら(Plant Physiol 129(1): 13-22、2002年)のいずれかに記載の方法であり、これらの開示は、完全に記載されたかのように、参照により本明細書に組み込まれる。前記方法は、B. Jenesら、Techniques for Gene Transfer、Transgenic Plants、1巻、Engineering and Utilization、S.D. Kung及びR. Wu編、Academic Press (1993年) 128-143及びPotrykus Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42 (1991年) 205-225)に例としてさらに記載されている。発現される核酸又は構築体は、好ましくは、アグロバクテリウム・ツメファシエンシス(Agrobacterium tumefaciens)の形質転換に適切なベクター、例えば、pBin19 (Bevanら、Nucl. Acids Res. 12 (1984年) 8711)内にクローニングされる。このようなベクターにより形質転換されたアグロバクテリアは、その後、シロイヌナズナ(シロイヌナズナは本発明の範囲内であり、作物とはみなさない)のようなモデルとして使用される植物などの植物、例としてタバコ植物などの作物などの作物の形質転換のための公知の様式に、例えば、傷ついた葉又は刻んだ葉をアグロバクテリアの溶液に浸し、その後それらを適切な培地において培養することによって使用できる。アグロバクテリウム・ツメファシエンシスを用いた植物の形質転換が、例えば、Hofgen及びWillmitzerによるNucl. Acid Res. (1988年) 16、9877により記載され、又は特に、F.F. White、Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; in Transgenic Plants、1巻、Engineering and Utilization、S.D. Kung及びR. Wu編、Academic Press、1993年、15-38頁により公知である。
その後、無傷の植物に再生されなければならない体細胞の形質転換に加えて、植物分裂組織の細胞、特に配偶子に生育するそれらの細胞もまた形質転換できる。この場合、形質転換された配偶子は天然の植物の生育をたどり、トランスジェニック植物を生じる。したがって、例えば、シロイヌナズナの種子をアグロバクテリアにより処理し、種子が、特定の部分が形質転換された、したがってトランスジェニックな生育中の植物から得られる[Feldman, KA及びMarks MD (1987年)。Mol Gen Genet 208:274-289; Feldmann K (1992年) C Koncz、N-H Chua及びJ Shell編、Methods in Arabidopsis Research。Word Scientific、Singapore、274-289頁]。代替の方法は、花序の反復除去及びロゼットの中心の切除部位と形質転換されたアグロバクテリアとのインキュベーションに基づき、それによって、形質転換された種子を同様にのちの時点で得ることができる(Chang (1994年)。Plant J. 5: 551-558; Katavic (1994年)。Mol Gen Genet、245: 363-370)。しかし、特に有効な方法は、「フローラルディップ」法など改変減圧浸潤法である。シロイヌナズナの減圧浸潤の場合、減圧下で無傷の植物をアグロバクテリアの懸濁液により処理し[Bechthold, N (1993年)。C R Acad Sci Paris Life Sci、316: 1194-1199]、一方、「フローラルディップ」法の場合、生育中の花の組織を、界面活性剤により処理されたアグロバクテリアの懸濁液と一緒に少しの間インキュベートする[Clough, SJ及びBent AF (1998年) The Plant J. 16、735-743]。両方の場合に、トランスジェニック種子特定の集団を収穫し、これらの種子は、上記の選択的条件下で成長した非トランスジェニック種子とは識別可能である。加えて、母方から遺伝する色素体は、大部分の作物において導入遺伝子が花粉に流入する危険性を減少又は排除するので、色素体の安定した形質転換が有利である。葉緑体ゲノムの形質転換は、概して、Klausら、2004年[Nature Biotechnology 22 (2)、225-229]に概略的に表示されている方法によって達成される。簡潔に言うと、形質転換された配列を、葉緑体ゲノムに相同な隣接配列の間に、選択可能なマーカー遺伝子と一緒に、クローニングする。これらの相同な隣接配列は、プラストーム内に部位特異的統合に向かう。色素体の形質転換は、多数のさまざまな植物種に関して記載されており、概要は、Bock (2001年) Transgenic plastids in basic research and plant biotechnology. J Mol Biol. 2001年9月21日; 312 (3):425-38又はMaliga, P (2003年) Progress towards commercialization of plastid transformation technology. Trends Biotechnol. 21、20-28に示されている。さらなるバイオテクノロジーの進歩が、無マーカー色素体形質転換体の形態で近年報告されており、これらは一次的に共組込みされたマーカー遺伝子により作製できる(Klausら、2004年、Nature Biotechnology 22(2)、225-229)。遺伝子組換え植物細胞は、技術者によく知られたすべての方法を介して再生できる。適切な方法は、S.D.Kung及びR.Wu,Potrykus又はHofgen及びWillmitzerによる上記の刊行物に見出すことができる。
概して形質転換後、植物細胞又は細胞のグループは、対象となる遺伝子とともに同時移入される、植物の発現可能な遺伝子によりコードされる、一種以上のマーカーの存在に関して選択され、その後、形質転換された材料を植物全体に再構成する。形質転換植物の選択のために、形質転換により得られた植物材料は一般に、形質転換された植物が、非形質転換植物と識別できるような選択条件に供される。例えば、上記の様式において得られた種子を植え付け、初期成長後、スプレーによる適切な選択に供することができる。さらなる可能性は、滅菌後適切な場合、形質転換された種子だけが植物に成長できるように、適切な選択剤を使用して寒天プレート上で種子を成長させることにある。代替的には、形質転換された植物を、上記の一種などの選択可能なマーカーの存在に関してスクリーニングする。
DNAの移入及び再生後、推定される形質転換された植物を、例えば、サザン分析を使用して、対象となる遺伝子、コピー数及び/又はゲノムの組織化の存在に関してさらに評価することができる。代替的には又は追加的に、新しく導入されたDNAの発現レベルはノーザン分析及び/またウエスタン分析を使用してモニターすることができ、双方とも当業者に周知の技術である。
作製された形質転換植物は、クローン増殖又は伝統的な育種技術などのさまざまな手段により繁殖させることができる。例えば、第1世代(又はT1)形質転換植物は自家受粉でき、ホモ接合性の第2世代(又はT2)形質転換体を選択し、T2植物は、その後伝統的な育種技術を介してさらに繁殖させることができる。作製された形質転換生物は、さまざまな形態をとり得る。例えば、それらは、形質転換細胞及び非形質転換細胞のキメラ、クローン性形質転換体(例えば、発現カセットを含有するように形質転換されたすべての細胞)、形質転換組織及び非形質転換組織のグラフト(例えば、植物において、非形質転換の接ぎ穂にグラフトされた形質転換された根茎)であってよい。
好ましくは、野生型若しくはmut-PPOの核酸は、a)配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43若しくは45で示されるポリヌクレオチド又はそれらの変異体若しくは誘導体、b)配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44若しくは46で示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド又はそれらの変異体若しくは誘導体、c)a)又はb)の任意の少なくとも60個の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド、並びにd)a)からc)の任意のポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる群から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
好ましくは、植物における核酸の発現は、野生型変種の植物と比較して、PPO阻害除草剤に対する植物の増加した抵抗性をもたらす。
別の実施形態において、本発明は、本発明による植物細胞を含む植物、好ましくはトランスジェニック植物であって、植物における核酸の発現が、野生型変種の植物と比較して、PPO阻害除草剤に対する植物の増加した抵抗性をもたらす植物について言及する。
本明細書に記載の植物は、トランスジェニック作物又は非トランスジェニック植物のいずれであってもよい。
本発明の目的に関して、「トランスジェニック」、「導入遺伝子」又は「組換え体」は、例えば、核酸配列、発現カセット、遺伝子構築体又は核酸配列を含むベクター若しくは本発明に従った核酸配列、発現カセット若しくはベクターを用いて形質転換された生物に関して意味し、それらすべての構築は組換え法により引き起こされ、
(a)本発明の方法に有用なタンパク質をコードする核酸配列、又は
(b)本発明に従った核酸配列と機能可能に連結された遺伝子調節配列(複数可)、例えばプロモーター、又は
(c)a)及びb)
のいずれかが、それらの天然の遺伝子環境に配置されていない、又は組換え法により修飾されており、例えば、一個以上のヌクレオチド残基の置換、付加、欠失、反転又は挿入の形態をとる修飾が可能である。天然の遺伝子環境は、もともとの植物の天然のゲノム若しくは染色体の遺伝子座又はゲノムライブラリー中の存在の意味と理解される。ゲノムライブラリーの場合、核酸配列の天然の遺伝子環境は、少なくとも一部保有されることが好ましい。該環境は、少なくとも片側で核酸配列に隣接し、少なくとも50bp、好ましくは少なくとも500bp、特に好ましくは少なくとも1000bp、最も好ましくは少なくとも5000bpの配列長を有する。天然の発現カセット、例えば、上記のような、核酸配列の天然プロモーターと、本発明の方法に有用なポリペプチドをコードする、対応する核酸配列との天然の組合せは、この発現カセットが、例えば、変異原性処理などの非天然の、合成(「人工の」)方法により修飾された場合、トランスジェニック発現カセットとなる。適切な方法は、例えば、米国特許第5,565,350号又はWO 00/15815に記載されている。
本発明の目的のためのトランスジェニック植物は、したがって上記のように、本発明の方法に使用する核酸が前記植物のゲノム中のそれらの天然の遺伝子座にはないという意味であり、核酸が同種的に又は異種的に発現される可能性があることが理解されるべきである。しかし、上述のように、トランスジェニックは、本発明に従った核酸又は本発明の方法に使用する核酸は、植物のゲノムのそれらの天然の位置にあるが、この配列が天然配列に関して修飾されている、及び/又は天然配列の制御配列が修飾されているということも意味する。トランスジェニックは、好ましくは、ゲノム中の非天然遺伝子座における、本発明に従った核酸の発現、すなわち、核酸の同種的な又は好ましくは異種的なの発現が起こるという意味に理解されるべきである。好ましいトランスジェニック植物を、本明細書において述べる。さらに「トランスジェニック」という用語は、少なくとも一種の組換えポリヌクレオチドのすべて又は一部を含有する任意の植物、植物細胞、カルス、植物組織又は植物部分を指す。多くの場合、組換えポリヌクレオチドのすべて又は一部は、後続世代に伝わるように染色体又は安定した染色体外の要素に安定に統合される。本発明の目的のために、「組換えポリヌクレオチド」という用語は、遺伝子操作により改変、再構成又は修飾されたポリヌクレオチドを指す。例は、任意のクローニングされたポリヌクレオチド、又は異種配列に連結又は結合されたポリヌクレオチドを含む。「組換え」という用語は、自発的突然変異などの天然事象、又は非自発的突然変異誘発に続く選択的育種によりもたらされるポリヌクレオチドの改変を指すものではない。
本明細書において非自発的突然変異誘発及び選択的育種のために起こる突然変異を含有する植物は、本明細書において非トランスジェニック植物と称され、本発明に含まれる。植物がトランスジェニックであり、複数種のmut-PPO核酸を含む実施形態において、核酸は異なるゲノムに由来しても、又は同じゲノムに由来してもよい。代替的には、植物が非トランスジェニックであり、複数種のmut-PPO核酸を含む実施形態において、核酸は異なるゲノム上に配置されても、又は同じゲノム上に配置されてもよい。
特定の実施形態において、本発明は、突然変異育種により作製された除草剤抵抗性植物を含む。このような植物は、mut-PPOをコードするポリヌクレオチドを含み、一種以上のPPO阻害除草剤に対して耐性である。このような方法は、例えば、植物又は種子を、突然変異原、特に、例えば、エチルメタンスルホン酸(EMS)などの化学的突然変異原に曝露するステップ及び少なくとも一種以上のPPO阻害除草剤に対する強化された耐性を有する植物を選択するステップを含む。
しかし、本発明は、化学的突然変異原EMSを含む突然変異誘発方法により作製された除草剤-耐性植物に限定するものではない。当分野において公知の任意の突然変異誘発方法が、本発明の除草剤抵抗性植物の作製に使用できる。このような突然変異誘発方法は、例えば、任意の一種以上の下記の突然変異原の使用を含み得る:X線、ガンマ線(例えばコバルト60又はセシウム137)、中性子線(例えば、原子炉におけるウラン235による核分裂の産物)、ベータ照射(例えば、リン32又は炭素14などの放射性同位元素からの放射)及び紫外線照射(好ましくは、2500から2900nm)などの照射並びに塩基類似体(例えば、5-ブロモウラシル)、関連化合物(例えば、8-エトキシカフェイン)、抗生物質(例えば、ストレプトニグリン)、アルキル化剤(例えば、スルファマスタード、ナイトロジェンマスタード、エポキシド、エチレンアミン、硫酸塩、スルホン酸塩、スルホン、ラクトン)、アジ化物、ヒドロキシルアミン、亜硝酸又はアクリジンなどの化学的突然変異原。除草剤抵抗性植物は、組織培養法を使用して除草剤抵抗性突然変異を含む植物細胞を選択し、その後、それらから除草剤抵抗性植物を再生することによって作製してもよい。例えば、米国特許第5,773,702号及び第5,859,348号を参照されたく、これらは両方とも、その全体を参照により本明細書に組み込む。突然変異育種のさらなる詳細は、「Principals of Cultivar Development」Fehr、1993年Macmillan Publishing Companyに見出すことができ、この開示は参照により本明細書に組み込まれる。
上の定義に加えて、「植物」という用語は、文脈において明示されていない限り、成熟又は生育の任意の段階の作物並びにこのような植物からとられた又はこのような植物に由来する任意の組織又は器官(植物部分)を包含することを意図する。植物部分は、限定するものではないが、茎、根、花、胚珠、雄ずい、葉、胚、成長点領域、カルス組織、葯培養、配偶体、胞子体、花粉、小胞子、プロトプラストなどを含む。
本発明の植物は、少なくとも一種のmut-PPO核酸又は過剰発現された野生型PPO核酸を含み、野生型変種の植物と比較してPPO阻害除草剤に対して増加した耐性を有する。これらの植物は複数のゲノムを含有できるので、本発明の植物は、異なるゲノムに由来する複数の野生型又はmut-PPO核酸を有することが可能である。例えば、植物は普通はAゲノム及びBゲノムと称される二種のゲノムを含有する。PPOは代謝に必要な酵素であるので、各ゲノムはPPO酵素をコードする少なくとも一種の遺伝子(すなわち、少なくとも一種のPPO遺伝子)を有すると想定される。本明細書において使用する場合、「PPO遺伝子の遺伝子座」という用語は、ゲノム上のPPO遺伝子の位置を指し、「PPO遺伝子」及び「PPO核酸」という用語は、PPO酵素をコードする核酸を指す。各ゲノム上のPPO核酸は、別のゲノム上のPPO核酸とはそのヌクレオチド配列が異なる。当業者は、遺伝子交雑及び/又は当業者に公知の配列決定法又はエクソヌクレアーゼ消化法のいずれかを介して各PPO核酸の起源のゲノムを決定できる。
本発明は、一、二、又は三種以上のmut-PPO対立遺伝子を含む植物を含み、植物は、野生型変種の植物と比較してPPO阻害除草剤に対して増加した耐性を有する。mut-PPOの対立遺伝子は配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43若しくは45で定義されるポリヌクレオチド又はそれらの変異体若しくは誘導体、配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44若しくは46で定義されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド又はそれらの変異体若しくは誘導体、ホモログ、オルソログ、パラログ、任意の前述のポリヌクレオチドの少なくとも60個の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド及び任意の前述のポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むことができる。
「対立遺伝子」又は「対立遺伝子変異体」は、同じ染色体位置に配置された所与の遺伝子の代替の形態である。対立遺伝子変異体は、一塩基多型(Single Nucleotide Polymorphisms)(SNP)並びに小規模挿入/欠失多型(Small Insertion/Deletion Polymorphism)(INDEL)を包含する。INDELのサイズは、普通100bp未満である。SNP及びINDELは、大部分の生物の天然の多型系統中の最も大きなセットの配列変異体を形成する。
「変種」という用語は、一つの栽培品種又は変種と、別の栽培品種又は変種とを識別するために十分な、当業者に認められた特徴又は形質の共通セットの共有により定義される、種内の植物の群を指す。いずれの用語においても、任意の所与の栽培品種又は変種のすべての植物が、全遺伝子若しくは分子レベルのいずれかで遺伝的に同一であると思われる、又は任意の所与の植物が、すべての遺伝子座においてホモ接合性であると思われるという意味ではない。栽培品種又は変種は、特定の形質の「純粋種」と考えられ、純粋種の栽培品種又は変種が自家受粉である場合、すべての子孫がその形質を含有する。「育種系統」又は「系統」という用語は、一つの育種系統又は系統と、別の育種系統又は系統とを識別するために十分な、当業者に認められた特徴又は形質の共通セットの共有により定義される栽培品種内の植物の群を指す。いずれの用語においても、任意の所与の育種系統又は系統のすべての植物が、全遺伝子若しくは分子レベルのいずれかで遺伝的に同一であると思われる、又は任意の所与の植物が、すべての遺伝子座においてホモ接合性であると思われるという意味ではない。育種系統又は系統は、特定の形質の「純粋種」と考えられ、純粋種系統又は育種系統が自家受粉である場合、すべての子孫がその形質を含有する。本発明において、形質は植物又は種子のPPO遺伝子における突然変異により起こる。
mut-PPOポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む本発明の除草剤抵抗性植物は、有性生殖を伴う従来の植物育種を介して植物の除草剤抵抗性を増加する方法における使用もまた見出されている。本方法は、本発明の除草剤抵抗性植物である第一の植物と、同じ除草剤又は除草剤(複数種)に対して抵抗性であっても抵抗性でなくてもよく、又は第一の植物とは異なる除草剤若しくは除草剤(複数種)に対して抵抗性であってもよい第二の植物とを交雑するステップを含む。第二の植物は、第一の植物と交雑する場合、生存能力のある子孫植物(すなわち種子)を産生できる任意の植物であってよい。通常、必ずしも必要ではないが、第一及び第二の植物は同じ種の植物である。本方法は、場合により、第一の植物のmut-PPOポリペプチド及び第二の植物の除草剤抵抗性特徴を含む子孫植物を選択するステップを含む。本発明のこの方法により作製された子孫植物は、第一の植物若しくは第二の植物のいずれか又は両方と比較した場合、除草剤に対する増加した抵抗性を有する。第一の植物及び第二の植物が、異なる除草剤に対して抵抗性である場合、子孫植物は、第一の植物及び第二の植物の組み合わされた除草剤耐性特徴を有すると思われる。本発明の方法は、初回交雑の子孫植物と第一の植物又は第二の植物のいずれかと同じ系統又は遺伝子型の植物との戻し交雑の、一つ以上の世代をさらに含むことができる。代替的には、初回交雑又は任意のその後の交雑の子孫を、第一の植物又は第二の植物のいずれかと異なる系統又は遺伝子型の第三の植物と交雑できる。本発明は、本発明の少なくとも一種のポリヌクレオチド分子、発現カセット又は形質転換ベクターにより形質転換された植物、植物器官、植物組織、植物細胞、種子及び非ヒト宿主細胞をさらに提供する。このような形質転換された植物、植物器官、植物組織、植物細胞、種子及び非ヒト宿主細胞は、それぞれ、非形質転換の植物、植物組織、植物細胞又は非ヒト宿主細胞の成長を死滅させる、又は阻害する除草剤レベルにおいて、少なくとも一種の除草剤に対する強化した耐性又は抵抗性を有する。好ましくは、本発明の形質転換された植物、植物組織、植物細胞、及び種子はシロイヌナズナ及び作物である。
本発明の植物が、mut-PPO核酸に加えて野生型PPO核酸を含み得ることは理解されるであろう。PPO阻害除草剤耐性系統は、複数のPPOアイソザイムの一種のみに突然変異を含有できることが企図される。したがって、本発明は、一種以上の野生型PPO核酸に加えて一種以上のmut-PPO核酸を含む植物を含む。
別の実施形態において、本発明は、本発明の植物細胞を含むトランスジェニック植物により産生された種子について言及し、この種子は、野生型変種の種子と比較してPPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性に関して純粋種である。
別の実施形態において、本発明は、野生型変種の植物細胞と比較して、PPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性を有するトランスジェニック植物細胞を作製する方法であって、mut-PPO核酸を含む発現カセットにより植物細胞を形質転換するステップを含む方法について言及する。
別の実施形態において、本発明は、(a)mut-PPO核酸を含む発現カセットにより植物細胞を形質転換するステップ、及び(b)植物細胞からPPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性を有する植物を作製するステップを含む、トランスジェニック植物を作製する方法について言及する。
結果として、本発明のmut-PPO核酸は、対象となる植物における発現のための発現カセット中に提供される。このカセットは、本発明のmut-PPO核酸配列に機能可能に連結された制御配列を含むだろう。「制御要素」という用語は、本明細書において使用する場合、機能可能に連結されたポリヌクレオチドの転写を制御できるポリヌクレオチドを指す。制御要素は、限定するものではないが、プロモーター、エンハンサー、イントロン、5'UTR及び3'UTRを含む。「機能可能に連結された」は、プロモーターと第二の配列の間の機能的連結を意図し、プロモーター配列は第二の配列に対応するDNA配列の転写を開始し、媒介する。概して、機能可能に連結するは、連結されている核酸配列が隣接しており、二つのタンパク質コード領域を接合する必要がある場合、同じリーディングフレームにおいて隣接していることを意味する。カセットは、さらに、生物に同時形質転換するための、少なくとも一種の追加の遺伝子を含有することができる。代替的には、追加の遺伝子(複数可)は、複数の発現カセットに提供することができる。
このような発現カセットは、制御領域の転写制御下にある、mut-PPO核酸配列の挿入のための複数の制限部位を備えている。この発現カセットは、選択可能なマーカー遺伝子をさらに、含有することができる。
本発明の発現カセットは、転写の5'-3'方向に、転写開始領域及び翻訳開始領域(すなわち、プロモーター)、本発明のmut-PPO核酸配列及び植物において機能的な転写終止領域及び翻訳終止領域(すなわち、終止領域)を含むものとする。プロモーターは、植物宿主に対して、及び/又は本発明のmut-PPO核酸配列に対して、天然若しくはアナログ又は外来性若しくは異種であってもよい。さらに、プロモーターは、天然配列又は代替的には合成配列であってよい。プロモーターが、植物宿主に対して「外来性」又は「異種」である場合、プロモーターは、プロモーターが導入される天然植物において見出されないことが意図される。プロモーターが、本発明のmut-PPO核酸配列に対して「外来性」又は「異種」である場合、機能可能に連結された本発明のmut-PPO核酸配列に対して天然又は天然に発生したプロモーターではないことが意図される。本明細書において使用する場合、キメラ遺伝子は、コード配列に対して異種である転写開始領域に機能可能に連結されたコード配列を含む。
異種プロモーターを使用して本発明のmut-PPO核酸を発現させることが好ましいと思われるが、天然プロモーター配列も使用できる。このような構築体は、植物又は植物細胞においてmut-PPOタンパク質の発現レベルを変化させる。したがって、植物又は植物細胞の表現型は改変される。
終止領域は、転写開始領域に天然であってもよく、機能可能に連結された対象となるmut-PPO配列に天然であってもよく、植物宿主に天然であってもよく、又は別の供給源に由来してもよい(すなわち、プロモーター、対象となるmut-PPO核酸配列、植物宿主又はそれらの任意の組合せに対して外来性又は異種)。都合の良い終止領域は、オクトピン合成酵素及びナポリン合成酵素の終止領域などの、A.ツメファシエンス(A.tumefaciens)のTi-プラスミドから利用可能である。Guerineauら(1991年) MoI. Gen. Genet. 262: 141-144; Proudfoot (1991年) Cell 64:671-674; Sanfaconら(1991年) Genes Dev. 5: 141-149; Mogen(1990年) Plant Cell 2: 1261-1272; Munroeら(1990年) Gene 91: 151-158; Ballasら(1989年) Nucleic Acids Res. 17:7891-7903;及びJoshi et al. (1987年) Nucleic Acid Res. 15:9627-9639もまた参照されたい。必要に応じて、遺伝子(複数可)は、形質転換された植物における増加した発現のために最適化され得る。すなわち、遺伝子は、改善された発現のための植物優先型コドンを使用して合成できる。例えば、宿主優先型コドンの使用の考察に関してはCampbell及びGowri (1990年) Plant Physiol. 92: 1-11を参照されたい。植物優先型遺伝子を合成するための方法が、当分野において利用可能である。例えば、米国特許第5,380,831号及び第5,436,391号並びにMurrayら(1989年) Nucleic Acids Res. 17:477-498を参照されたく、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
追加の配列修飾は、細胞宿主における遺伝子発現を強化することが公知である。これらは、疑似ポリアデニル化シグナルをコードする配列、エクソン-イントロンスプライシング部位のシグナル、トランスポゾン様反復及び遺伝子発現に有害であり得る、十分特徴付けられた他の配列の除去を含む。配列のG-C含有量は、宿主細胞において発現された公知の遺伝子に対する参照により計算された、所与の細胞宿主にとって平均的なレベルに調整できる。可能であれば、配列を、予測されるヘアピン二次mRNA構造を避けるように修正する。遺伝子発現を強化するためのヌクレオチド配列は、植物の発現ベクターにおいても使用することができる。これらは、トウモロコシのAdhlのイントロン、intronl遺伝子(Callisら、Genes and Development 1: 1183-1200、1987年)及びタバコモザイクウイルス(Tobacco Mosaic virus)(TMV)、トウロコシ緑斑病ウイルス(Maize Chlorotic Mottle Virus)及びアルファルファモザイクウイルス(Alfalfa Mosaic Virus)由来のリーダー配列、(W-配列)(Gallieら、Nucleic Acid Res. 15:8693-8711、1987年及びSkuzeskiら、Plant MoI. Biol. 15:65-79、1990年)を含む。トウモロコシのshrunken-1遺伝子座から最初のイントロンは、キメラ遺伝子構築体中の遺伝子の発現を増加させることが示されている。米国特許第5,424,412号及び第5,593,874号は、遺伝子発現構築体における特定のイントロンの使用を開示しており、Gallieら(Plant Physiol. 106:929-939、1994年)もまた、イントロンが、組織特異的基準において遺伝子発現を制御するために有用であることを示している。mut-PPO遺伝子の発現をさらに強化するため、又は最適化するために、本発明の植物発現ベクターは、マトリックス結合領域(MAR)を含有するDNA配列をさらに含有することができる。このような修飾された発現系を用いて形質転換された植物細胞は、その後、本発明のヌクレオチド配列の過剰発現又は構成的発現を示し得る。
本発明の発現カセットは、発現カセット構築体中に5'リーダー配列をさらに含有することができる。このようなリーダー配列は、翻訳を強化するために作用できる。翻訳リーダーは当分野において公知であり、ピコルナウイルスリーダー、例えば、EMCVリーダー(脳心筋炎5'非コード領域)(Elroy-Steinら、(1989年) Proc. Natl. Acad. ScL USA 86:6126-6130);ポチウイルスリーダー、例えば、TEVリーダー(タバコエッチ病ウイルス(tabacco Etch Virus))(Gallieら、(1995年) Gene 165(2):233-238)、MDMVリーダー(トウモロコシ萎縮モザイクウイルス(Maize Dwarf Mosaic Virus))(Virology 154:9-20)及びヒト免疫グロブリン重鎖結合タンパク質(BiP)(Macejakら、(1991年)Nature 353:90-94);アルファルファモザイクウイルスのコートタンパク質mRNA(AMV RNA 4)由来の非翻訳リーダー(Joblingら、(1987年) Nature 325:622-625);タバコモザイクウイルスリーダー(TMV)(Gallieら、(1989年) Molecular Biology of RNA、Cech (Liss、New York)編、237-256頁);並びにトウモロコシ緑斑病ウイルスリーダー(MCMV)(Lommelら、(1991年) Virology 81:382-385)を含む。Della-Cioppaら、(1987年) Plant Physiol. 84:965-968もまた参照されたい。翻訳を強化することが公知の他の方法、例えば、イントロンなどもまた利用できる。
発現カセットの調製において、さまざまなDNA断片を、適切な配向で、必要に応じて、適切なリーディングフレーム中にDNA配列を提供するように操作することができる。このような目的で、アダプター又はリンカーを用いてDNA断片をつなぐことができ、又は他の操作により、都合の良い制限部位の提供、無関係なDNAの除去、制限部位の除去などを伴うことができる。この目的のために、in vitroの突然変異誘発、プライマー修復、制限、アニーリング、再置換、例えば、転位及び転換を伴うことができる。
多数のプロモーターを本発明の実施に使用することができる。プロモーターは、所望の成果に基づいて選択できる。核酸は、構成的プロモーター、組織優先型プロモーター又は植物における発現のための他のプロモーターと組み合わせることができる。このような構成的プロモーターは、例えば、Rsyn7プロモーターのコアプロモーター及びWO 99/43838及び米国特許第6,072,050号に開示された他の構成的プロモーター;コアCaMV 35Sプロモーター(Odellら、(1985年) Nature 313:810-812);コメアクチン(McElroyら、(1990年) Plant Cell 2: 163-171);ユビキチン(Christensenら、(1989年) Plant MoI. Biol. 12:619-632及びChristensenら、(1992年) Plant MoI. Biol. 18:675-689);pEMU(Lastら、(1991年) Theor. Appl. Genet. 81:581- 588); MAS (Veltenら、(1984年) EMBO J. 3:2723-2730);ALSプロモーター(米国特許第5,659,026号)などを含む。他の構成的プロモーターは、例えば、米国特許第5,608,149号、第5,608,144号、第5,604,121号、第5,569,597号、第5,466,785号、第5,399,680号、第5,268,463号、第5,608,142号及び第6,177,611号を含む。
組織優先型プロモーターは、特定の植物組織内での強化されたmut-PPO発現を標的とするために利用できる。このような組織優先型プロモーターは、限定するものではないが、葉優先型プロモーター、根優先型プロモーター、種子優先型プロモーター及び茎優先型プロモーターを含む。組織優先型プロモーターは、Yamamotoら、(1997年) Plant J. 12(2):255-265; Kawamataら、(1997年) Plant Cell Physiol. 38(7):792-803; Hansenら、(1997年) MoI. Gen Genet. 254(3):337-343; Russellら、(1997年) Transgenic Res. 6(2): 157-168; Rinehartら、(1996年) Plant Physiol. 112(3): 1331-1341; Van Campら、(1996年) Plant Physiol. 112(2):525-535; Canevasciniら、(1996年) Plant Physiol. 112(2):513-524; Yamamotoら、(1994年) Plant Cell Physiol. 35(5):773-778; Lam (1994年) Results Probl. Cell Differ. 20: 181-196; Orozcoら、(1993年) Plant MoI Biol. 23(6): 1129-1138; Matsuoka e/ [alpha]/. (1993年) Proc Natl. Acad. Sci. USA 90(20):9586-9590;及びGuevara-Garciaら、(1993年) Plant J. 4(3):495-505を含む。このようなプロモーターは、必要であれば、弱い発現のために修飾できる。一実施形態において、対象となる核酸は、発現に関して葉緑体を標的化する。この様式において、対象となる核酸が、葉緑体に直接挿入されない場合、発現カセットは、対象となる遺伝子産物を葉緑体に向ける葉緑体輸送ペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む、葉緑体標的化配列をさらに含有する。このような輸送ペプチドは当分野において公知である。葉緑体標的化配列に関して、「機能可能に連結された」は、輸送ペプチドをコードする核酸配列(すなわち、葉緑体標的化配列)が、本発明のmut-PPO核酸と、二つの配列が近接し、同じリーディングフレーム内にあるように連結されることを意味する。例えば、Von Heijneら、(1991年) Plant MoI. Biol. Rep. 9: 104-126; Clarkら、(1989年) J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppaら、(1987年) Plant Physiol. 84:965-968; Romerら、(1993年) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196:1414-1421;及びShahら、(1986年) Science 233:478-481を参照されたい。本発明のmut-PPOタンパク質が天然葉緑体輸送ペプチドを含む一方で、当技術分野において公知の任意の葉緑体輸送ペプチドは、本発明の成熟mut-PPOタンパク質をコードしているヌクレオチド配列の5'末端に葉緑体標的化配列を作動可能に連結するステップによって本発明の成熟mut-PPOタンパク質のアミノ酸配列に融合できる。葉緑体標的化配列は当分野において公知であり、リブロース-l,5-二リン酸カルボキシラーゼ(Rubisco)の葉緑体小サブユニット(de Castro Silva Filhoら、(1996年) Plant MoI. Biol. 30:769-780; Schnellら、(1991年) J. Biol. Chem. 266(5):3335-3342); 5 -(エノールピルビル)シキミ酸-3-リン酸合成酵素(EPSPS) (Archerら、(1990年) J. Bioenerg. Biomemb. 22(6):789-810);トリプトファン合成酵素(Zhaoら、(1995年) J. Biol. Chem. 270(11):6081-6087);プラストシアニン(Lawrenceら、(1997年) J. Biol. Chem. 272(33):20357-20363);コリスミ酸合成酵素(Schmidtら、(1993年) J. Biol. Chem. 268(36):27447-27457);及び集光性葉緑素a/b結合タンパク質(LHBP)(Lamppaら、(1988年) J. Biol. Chem. 263: 14996-14999)を含む。Von Heijneら、(1991年) Plant MoI. Biol. Rep. 9: 104-126; Clarkら、(1989年) J. Biol. Chem. 264:17544-17550; Della-Cioppaら、(1987年) Plant Physiol. 84:965-968; Romerら、(1993年) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196: 1414-1421;及びShahら、(1986年) Science 233:478-481もまた参照されたい。
葉緑体の形質転換の方法は、当分野において公知である。例えば、Svabら(1990年) Proc. Natl. Acad. ScL USA 87:8526-8530; Svab及びMaliga (1993年) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:913-917; Svab及びMaliga (1993年) EMBO J. 12:601-606を参照されたい。この方法は、選択可能なマーカーを含有するDNAの粒子銃送達及び相同組換えを介した色素体ゲノムへのDNAの標的化に依存する。さらに、色素体の形質転換は、核によりコードされた、色素体指向性RNAポリメラーゼの組織優先型発現によるサイレントな色素体担持（plastid borne）導入遺伝子のトランス活性化により達成できる。このような系は、McBrideら(1994年) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:7301-7305に報告されている。葉緑体を標的とする対象となる核酸は、葉緑体において発現が最適化され、植物の核とこの細胞小器官との間のコドン使用頻度の差を説明できる。この様式において、対象となる核酸は葉緑体優先型コドンを使用して、合成され得る。例えば、米国特許第5,380,831号を参照されたく、これは参照により本明細書に組み込まれる。
好ましい実施形態において、mut-PPO核酸は、a)配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43若しくは45で示されるポリヌクレオチド又はそれらの変異体若しくは誘導体;b)配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44若しくは46で示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド又はそれらの変異体若しくは誘導体;c)a)又はc)の任意の少なくとも60の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド;並びにd)a)からc)の任意のポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる群から選択されるポリヌクレオチド配列を含む。
好ましくは、本発明の発現カセットは、植物において機能性である転写開始制御領域及び翻訳開始制御領域をさらに含む。
本発明のポリヌクレオチドは、植物形質転換のための選択可能なマーカー遺伝子としての使用を見出したが、本発明の発現カセットは、形質転換された細胞の選択のための別の選択可能なマーカー遺伝子を含むことができる。本発明のものを含む選択可能なマーカー遺伝子は、形質転換された細胞又は組織の選択に利用される。マーカー遺伝子は、限定するものではないが、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼII(NEO)及びヒグロマイシンホスホトランスフェラーゼ(HPT)をコードする遺伝子などの抗生物質抵抗性をコードする遺伝子並びにグルホシネートアンモニウム(glufosinate-ammonium)、ブロモキシニル、イミダゾリノン及び2,4-ジクロロフェノキシ酢酸(2,4-D)などの除草剤化合物に対する抵抗性をもたらす遺伝子を含む。一般には、Yarranton (1992年) Curr. Opin. Biotech. 3 :506-511 ; Christophers onら(1992年) Proc. Natl. Acad. ScL USA 89:6314-6318; Yaoら(1992年) Cell 71:63-72; Reznikoff (1992年) MoI Microbiol 6:2419-2422; Barkleyら(1980年) The Operon、177-220頁; Huら(1987年) Cell 48:555-566; Brownら(1987年) Cell 49:603-612; Figgeら(1988年) Cell 52:713-722; Deuschleら(1989年) Proc. Natl Acad. AcL USA 86:5400-5404; Fuerst et al (1989年) Proc. Natl Acad. ScL USA 86:2549-2553; Deuschle et al (1990年) Science 248:480-483; Gossen (1993年) Ph.D. Thesis、University of Heidelberg; Reinesら(1993年) Proc. Natl Acad. ScL USA 90: 1917-1921; Labowら(1990年) MoI Cell Biol 10:3343-3356; Zambrettiら(1992年) Proc. Natl Acad. ScL USA 89:3952-3956; Bairnら(1991年) Proc. Natl Acad. ScL USA 88:5072-5076; Wyborskiら(1991年) Nucleic Acids Res. 19:4647-4653; Hillenand-Wissman (1989年) Topics MoI Struc. Biol 10: 143-162; Degenkolbら(1991年) Antimicrob. Agents Chemother. 35: 1591-1595; Kleinschnidtら(1988年) Biochemistry 27: 1094-1104; Bonin (1993年) Ph.D. Thesis、University of Heidelberg; Gossenら(1992年) Proc. Natl Acad. ScL USA 89:5547- 5551; Olivaら(1992年) Antimicrob. Agents Chemother. 36:913-919; Hlavkaら(1985年) Handbook of Experimental Pharmacology、78巻(Springer-Verlag、Berlin); Gillら(1988年)Nature 334:721-724を参照されたい。このような開示は、参照により本明細書に組み込む。選択可能なマーカー遺伝子の上記の一リストは、限定する意味ではない。任意の選択可能なマーカー遺伝子が、本発明において使用できる。
本発明は、上記のmut-PPO核酸を含有する発現カセットを含む単離された組換え発現ベクターであって、宿主細胞におけるベクターの発現が、野生型変種の宿主細胞と比較してPPO阻害除草剤に対する増加した耐性をもたらす上記ベクターをさらに提供する。本明細書において使用する場合、「ベクター」という用語は、連結されている別の核酸を輸送できる核酸分子を指す。ベクターの一種は「プラスミド」であり、追加のDNAセグメントをライゲーションできる環状二本鎖DNAループを指す。別の型のベクターは、ウイルスベクターであり、追加のDNAセグメントをウイルスゲノム内にライゲーションできる。あるベクターは、それらが導入された宿主細胞において自律的に複製できる(例えば、複製の細菌起源を有する細菌ベクター及びエピソーム性哺乳動物ベクター)。他のベクター(例えば、非エピソーム性哺乳動物ベクター)は、宿主細胞内への導入において、宿主細胞のゲノムに統合され、それによって、宿主ゲノムにとともに複製される。さらに、あるベクターは、機能可能に連結された遺伝子の発現を指示できる。このようなベクターは「発現ベクター」と称される。概して、組換えDNA技術において有用な発現ベクターは、多くの場合プラスミドの形態である。プラスミドは最も一般的に使用されるベクターの形態なので、本明細書において、「プラスミド」及び[ベクター」は交換可能に使用できる。しかし、本発明は、他の形態の発現ベクター、例えば、同等の機能を果たすウイルスベクター(例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス)を含むことを意図する。
本発明の組換え発現ベクターは、宿主細胞における核酸の発現に適切な形態で本発明の核酸を含み、これは、組換え発現ベクターが、発現に使用される宿主細胞に基づいて選択され、発現される核酸配列に機能可能に連結される一種以上の制御配列を含むことを意味する。制御配列は、多くの型の宿主細胞においてヌクレオチド配列の構成的発現を指示する配列及び特定の宿主細胞において、又は特定の条件下でだけヌクレオチド配列の発現を指示する配列を含む。発現ベクターの設計が、形質転換される宿主細胞の選択、所望のポリペプチドの発現レベルなどの因子に依存し得ることは当業者により理解されるものと思われる。本発明の発現ベクターは、宿主細胞に導入され、それによって、本明細書に記載の核酸(例えば、mut-PPOポリペプチド、融合ポリペプチドなど)によりコードされる、融合ポリペプチド又は融合ペプチドを含むポリペプチド又はペプチドを産生できる。
本発明の好ましい実施形態において、mut-PPOポリペプチドは、単細胞植物細胞(藻類など)(Falciatoreら、1999年、Marine Biotechnology 1(3):239-251及びその中の参考文献を参照されたい)及び高等植物由来の植物細胞(例えば、作物などの種子植物)などの植物及び植物細胞において発現される。mut-PPOポリヌクレオチドはトランスフェクトション、形質転換又はトランスダクション、エレクトロポレーション、粒子衝撃、アグロインフェクション、微粒子銃などを含む任意の手段により植物細胞に「導入」され得る。
植物細胞を含む宿主細胞を形質転換又はトランスフェクトする適切な方法は、Sambrookら(Molecular Cloning: A Laboratory Manual.第二版、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、NY、1989年)及びMethods in Molecular Biology、1995年、44巻、Agrobacterium protocols、Gartland及びDavey編、Humana Press、Totowa、New Jerseyなどの他の実験マニュアルにおいて見出すことができる。PPO阻害除草剤に対する増加した耐性は、トウモロコシ、小麦、ライ麦、オート麦、ライコムギ、コメ、大麦、大豆、落花生、ワタ、ナタネ及びキャノーラ、キャッサバ、コショウ、ヒマワリ及びマンジュギクのような広範囲の植物、ジャガイモ、タバコ、ナス及びトマトのようなナス科植物、ソラマメ属の種(Vicia species)、エンドウ、アルファルファ、灌木植物(コーヒー、カカオ、茶)、シダレヤナギ属の種(Salix species)、樹木(アブラヤシ、ココナッツ)、多年生牧草並びに飼料作物に遺伝されることが望まれる一般的形質であるので、これらの作物また、本発明の一つのさらなる実施形態として、遺伝子操作のための好ましい標的植物である。好ましい実施形態において、この植物は作物である。飼料作物は、限定するものではないが、小麦の草(Wheatgrass)、カナリアクサヨシ(Canarygrass)、ブロムグラス(Bromegrass)、ワイルドライグラス(Wildrye Grass)、イナゴツナギ(Bluegrass)、カモガヤ(Orchardgrass)、アルファルファ、サルホイン(Salfoin)、ミヤコグサ(Birdsfoot Trefoil)、タチクローバー(Alsike Clover)、アカツメクサ(Red Clover)及びスイートクローバー(Sweet Clover)を含む。
本発明の一実施形態において、mut-PPOポリヌクレオチドの植物へのトランスフェクトションは、アグロバクテリウム属媒介の遺伝子移入により達成される。当業者に公知の一形質転換方法は、mut-PPO核酸を含有するアグロバクテリア(Agrobacteria)溶液への開花植物の浸漬、それに続く形質転換された配偶子の育種である。アグロバクテリウム属媒介の植物形質転換は、例えば、GV3101(pMP90)(Koncz及びSchell、1986年、Mol. Gen. Genet. 204:383-396)又はLBA4404 (Clontech)アグロバクテリウム・ツメファシエンス株を使用して実施できる。形質転換は、標準的な形質転換及び再生の技術により実施できる(Deblaereら、1994年、Nucl. Acids. Res. 13:4777-4788; Gelvin, Stanton B.及びSchilperoort, Robert A、Plant Molecular Biology Manual、第二版- Dordrecht : Kluwer Academic Publ.、1995年 Sect., Ringbuc Zentrale Signatur: BT11-P ISBN 0-7923-2731-4; Glick, Bernard R.及びThompson, John E.、Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology、Boca Raton : CRC Press、1993年 360 S.、ISBN 0-8493-5164-2)。例えば、ナタネは、子葉又は胚軸の形質転換を介して形質転換され得る(Moloneyら、1989年、Plant Cell Report 8:238-242; De Blockら、1989年、Plant Physiol. 91:694-701)。アグロバクテリウム属に対する抗生物質の使用及び植物の選択は、形質転換のために使用するバイナリーベクター及びアグロバクテリウム属株に依存する。ナタネの選択は、選択可能な植物マーカーとしてカナマイシンを使用して正常に実施される。亜麻へのアグロバクテリウム属媒介性遺伝子移入は、例えば、Mlynarovaら、1994年、Plant Cell Report 13:282-285に記載の技術を使用して実施できる。さらに、大豆の形質転換は、例えば、欧州特許第0424 047号、米国特許第5,322,783号、欧州特許第0397 687号、米国特許第5,376,543号又は米国特許第5,169,770号に記載の技術を使用して実施できる。トウモロコシの形質転換は、粒子衝撃、ポリエチレングリコール媒介のDNAの取り込みにより、又は炭化ケイ素線維技術を介して達成できる。(例えば、Freeling及びWalbot「The maize handbook」Springer Verlag: New York (1993年) ISBN 3-540-97826-7を参照されたい)。トウモロコシの形質転換の具体的な例は、米国特許第5,990,387号に見出され、小麦の形質転換の具体例は、PCT出願WO 93/07256に見出される。
本発明に従って、導入されたmut-PPOポリヌクレオチドは、それが非染色体の自律的レプリコンに組み込まれた場合、又は植物染色体に統合された場合、植物細胞において安定に維持され得る。代替的には、導入されたmut-PPOポリヌクレオチドは、染色体外の非複製ベクターに存在でき、一時的に発現され得る、又は一時的に活性であり得る。一実施形態において、相同組換え微生物を作り出すことができ、ここで、mut-PPOポリヌクレオチドが染色体に統合され、欠失、付加又は置換が導入されているPPO遺伝子の少なくとも一部を含有するベクターが調製され、その結果として内因性PPO遺伝子が改変、例えば機能的に破壊され、mut-PPO遺伝子が作り出される。相同組換えを介して点突然変異を作り出すために、DNA-RNAハイブリッドを、キメラ形成法として知られる技術において使用することができる(Cole-Straussら、1999年、Nucleic Acids Research 27(5):1323-1330及びKmiec、1999年、Gene therapy American Scientist 87(3):240-247)。コムギ属の種における他の相同組換え手順もまた、当分野において周知であり、本発明における使用が企図される。
相同組換えベクターにおいてmut-PPO遺伝子は、その5'末端及び3'末端において追加のPPO遺伝子の核酸分子に隣接され、微生物又は植物において、ベクターにより運ばれる外因性mut-PPO遺伝子及び内因性PPO遺伝子の間に起こる相同組換えを可能にさせる。追加の隣接PPO核酸分子は、内因性遺伝子との相同組換えが成功するために十分な長さである。通常、数百塩基対〜キロベースの(5'末端及び3'末端の両方における)隣接DNAがベクターに含まれる(例えば、相同組換えベクターの記載に関しては、Thomas, K. R.及びCapecchi, M. R.、1987年、Cell 51:503又はヒメツリガネゴケにおけるcDNAに基づく組換えに関しては、Streppら、1998年、PNAS、95(8):4368-4373を参照されたい)。しかし、普通はmut-PPO遺伝子はPPO遺伝子と異なるアミノ酸がほとんどないので、隣接配列は必ずしも必要ではない。相同組換えベクターは、微生物又は植物細胞に導入され(例えば、ポリエチレングリコール媒介DNAを介して)、mut-PPO遺伝子が導入された細胞は、当分野において公知の技術を使用して選択された内因性PPO遺伝子を用いて相同的に組換えられている。
別の実施形態において、導入された遺伝子の発現の制御が可能な、選択された系を含有する組換え微生物が作製できる。例えば、mut-PPO遺伝子をlacオペロンの調節下に配置してベクターに組み入れることで、IPTGの存在下でのみmut-PPO遺伝子の発現が可能である。このような制御系は当分野において周知である。
本発明の別の態様は、本発明の組換え発現ベクターが導入されている宿主細胞に関する。「宿主細胞」及び「組換え宿主細胞」という用語は、本明細書において交換可能に使用される。このような用語が、特定の対象細胞だけを指すものではなく、このような細胞の子孫又は潜在的子孫にも適用されることは理解されるであろう。特定の修飾が、突然変異又は環境的影響のいずれかのためにその後の世代に起こり得るので、このような子孫は、実際、親細胞とは同一ではないかもしれないが、本明細書において使用する場合、それでもなおこの用語の範囲内に含まれる。宿主細胞は、任意の原核細胞又は真核細胞であってよい。例えば、mut-PPOポリヌクレオチドは、コリネバクテリウム・グルタミクム(C.glutamicum)などの細菌細胞、昆虫細胞、菌類細胞又は哺乳動物細胞(チャイニーズハムスターの卵巣細胞(CHO)又はCOS細胞など)、藻類、絨毛虫、植物細胞、菌類又はコリネバクテリウム・グルタミクムのような他の微生物において発現可能である。他の適切な宿主細胞は、当業者に公知である。
培養液中の原核宿主細胞又は真核宿主細胞などの本発明の宿主細胞は、mut-PPOポリヌクレオチドの作製(すなわち発現)のために使用できる。したがって、本発明は、本発明の宿主細胞を使用してmut-PPOポリペプチドを作製するための方法を、さらに提供する。一実施形態において、本方法は、(mut-PPOポリペプチドをコードする組換え発現ベクターが導入された、又はゲノムが野生型又はmut-PPOポリペプチドをコードする遺伝子に導入されている)発明の宿主細胞を、適切な培地においてmut-PPOポリペプチドが産生されるまで培養するステップを含む。別の実施形態において、本方法は、培地又は宿主細胞からmut-PPOポリペプチドを単離するステップをさらに含む。本発明の別の態様は、単離されたmut-PPOポリペプチド及びそれらの生物学的に活性な部分に関する。「単離された」又は「精製された」ポリペプチド又はそれらの生物学的に活性な部分は、組換えDNA技術より作製された場合、細胞材料の一部を含まず、又は化学的に合成された場合、化学的前駆物質若しくは他の化学物質を含まない。「細胞材料を実質的に含まない」という用語は、ポリペプチドが、天然に又は組換え的に作製された細胞の細胞成分の一部から分離された、mut-PPOポリペプチドの調製を含む。一実施形態において、「細胞材料を実質的に含まない」という用語は、約30%未満(乾燥重量で)の非mut-PPO材料(本明細書において「混入したポリペプチド」とも称される)、より好ましくは約20%未満の非mut-PPO材料、さらにより好ましくは約10%未満の非mut-PPO材料及び最も好ましくは約5%未満の非mut-PPO材料を有するmut-PPOポリペプチドの調製を含む。
mut-PPOポリペプチド又はそれらの生物学的に活性な部分が組換え的に作製された場合、それはまた、好ましくは、培養培地を実質的に含まない、すなわち、培養培地が、約20%未満、より好ましくは約10%未満及び最も好ましくは約5%未満の体積のポリペプチドの調製を表す。「化学的前駆物質又は他の化学物質を実質的に含まない」という用語は、ポリペプチドが、ポリペプチドの合成に関わる化学的前駆物質又は他の化学物質から分離されたmut-PPOポリペプチドの調製を含む。一実施形態において、「化学的前駆物質又は他の化学物質を実質的に含まない」という用語は、約30%未満(乾燥重量で)の化学的前駆物質又は非mut-PPO化学物質、より好ましくは約20%未満の化学的前駆物質又は非mut-PPO化学物質、さらにより好ましくは約10%未満の化学的前駆物質又は非mut-PPO化学物質、及び最も好ましくは約5%未満の化学的前駆物質又は非mut-PPO化学物質を有するmut-PPOポリペプチドの調製を含む。好ましい実施形態において、単離されたポリペプチド又はそれらの生物学的に活性な部分は、mut-PPOポリペプチドが由来する同じ生物からの混入ポリペプチドを欠いている。通常、このようなポリペプチドは、植物において、又はそれ以外にはコリネバクテリウム・グルタミクムなどの微生物、絨毛虫、藻類又は菌類において、例えば、mut-PPOポリペプチドの組換え発現により作製される。
上記のように、本発明は、野生型変種の植物又は種子と比較して、作物又は種子のPPO-阻害耐性を増加させるための組成物及び方法を教示する。好ましい実施形態において、作物又は種子のPPO-阻害耐性は、植物又は種子が、好ましくはおよそ1-1000 g ai ha-1、より好ましくは1-200 g ai ha-1、さらに好ましくは5-150 g ai ha-1、及び最も好ましくは、10-100 g ai ha-1のPPO-阻害除草剤の適用に耐え得るように増加される。本明細書において使用する場合、PPO-阻害除草剤の適用に「耐える」ことは、植物が、このような適用により死滅、又は損傷のいずれもされない若しくは穏やかにだけ損傷されることを意味する。施用量が温度又は湿度などの環境条件に応じて、及び選ばれた除草剤の種類(活性成分ai)に応じて変化する場合があることは当業者によって理解される。
さらに本発明は、上に詳細に記載するとおり、少なくとも一種のPPO阻害除草剤の使用を、場合により一種以上の除草剤化合物B、及び場合により薬害軽減剤Cとの組合せで含む方法を提供する。
これらの方法において、PPO阻害除草剤は、限定するものではないが、種子処理、土壌処理及び茎葉処理を含む、当分野において公知の任意の方法により適用され得る。適用前に、PPO阻害除草剤は、慣例の製剤、例えば、溶液、エマルジョン、懸濁液、細粉、散剤、ペースト及び顆粒に変換できる。使用形態は、特定の意図される目的に依存し、各々の事例において、本発明に従った化合物の細かく均等な分配を確実にするべきである。
PPO阻害除草剤に対する増加した耐性を有する植物を提供することで、広範囲の製剤を、植物の成長を強化し、栄養に対する競合を減少させるように、雑草から植物を保護するために用いることができる。PPO阻害除草剤は、本明細書に記載の作物の周囲の地域において、出芽前、出芽後、植え付け前及び植え付け時の雑草の制御に、それ自体で使用でき、又は他の添加剤を含有するPPO阻害除草剤製剤も使用できる。PPO阻害除草剤は、種子処理としても使用できる。PPO阻害除草剤製剤中に見出される添加剤は、他の除草剤、界面活性剤、アジュバント、展着剤、固着剤、安定化剤などを含む。PPO阻害除草剤製剤は、湿潤調製品であっても、又は乾燥調製品であってもよく、限定するものではないが、流動性散剤、乳化可能濃縮物及び液体濃縮物を含み得る。PPO阻害除草剤及び除草剤製剤は、従来の方法に従って、例えば、スプレー噴霧、灌水、散粉などにより適用できる。
適切な製剤は、PCT/EP2009/063387及びPCT/EP2009/063386に詳細に記載され、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
前述は、本発明の好ましい実施形態に関し、多数の変形が本発明の範囲を逸脱することなくその中でなされ得ることもまた、理解すべきである。本発明を、下記の実施例によりさらに例示するが、これらは、本発明の範囲に限定を課すものとは、決して解釈すべきではない。対照的に、本明細書の記載の読後、本発明の精神及び/又は添付の特許請求の範囲から逸脱することなく、それら自体を当業者に示唆することができる、さまざまな他の実施形態、それらの変形及び等価物に対する報告ができることは明らかに理解されるべきである。
[実施例1]
アマランサスPPOの部位特異的突然変異誘発
アマランサスPPOのクローニング
PPO感受性及び抵抗性アイソフォーム、並びにすべての突然変異体組合せ及び複数の突然変異(配列番号1、3、5、7)についてのアマランサス・ツベルクラタスコード配列を合成し、Geneart(Geneart AG、Regensburg、Germany)によりクローニングした。
プラスミドを大腸菌TOP10からプラスミドミニプリパレーションを実施することにより単離し、DNA配列決定により確認した。
組換え野性型及び突然変異体PPOの発現及び精製
(Franck E. Dayan、Pankaj R. Daga、Stephen O. Duke、Ryan M. Lee、Patrick J. Tranel、Robert J. Doerksen. Biochemical and structural consequences of a glycine deletion in the α-8 helix of protoporphyrinogen oxidase. Biochimica et Biophysica Acta 1804 (2010年)、1548-56から)
pRSETベクター中のクローンを大腸菌のBL21(DE3)-pLysS系統に形質転換した。細胞を100μgmL-1のカルベニシリンを含むLB 250mL中で37℃で一晩振とうし、成長させた。培養液を抗生物質を含むLB 1L中に希釈し、37℃で2時間振とうして成長させ、1mM IPTGで誘導し、25℃でさらに5時間振とうして成長させた。細胞を1600×gでの遠心分離により回収し、0.09% NaClで洗浄し、-80℃保存した。
細胞をフレンチプレスを使用して140MPaで50mMリン酸ナトリウムpH7.5、1M NaCl、5mMイミダゾール、5%グリセロール及び1μg mL-1ロイペプチン中で溶解した。溶解に続いて、0.5Uベンゾナーゼ(Novagen、EMD Chemicals、Inc.、Gibbstown、NJ)及びPMSF(最終濃度1mM)を加えた。細胞片を3000×gでの遠心分離により除去した。His-タグPPOタンパク質を20mMリン酸ナトリウムpH8.0、50mM NaCl、5mMイミダゾール、5mM MgCl2、0.1mM EDTA及び17%グリセロールで平衡化したニッケル活性化Hitrap Chelating HPカラム(GE Healthcare Bio-Sciences Corp.、Piscataway、NJ)で精製した。
PPOを250mMイミダゾールで溶出した。活性タンパク質を20mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH7.5、5mM MgCl2、1mM EDTA及び17%グリセロールで平衡化したPD-10カラム(GE Healthcare Bio-Sciences Corp.、Piscataway、NJ)で脱塩した。培養液1リットルあたり純粋なPPOおよそ10mgをもたらし、アッセイに使用するまで-20℃で保存した。
PPO活性アッセイ
PPO酵素アッセイ(非組換え)。PPOタンパク質(EC1.3.3.4)を以前記載(Grossmannら、2010年)のように暗所で育てられたコーン、イヌホオズキ、アサガオ及びベルベットリーフ(velvetleaf)実生の子葉鞘又はシュート(新鮮重量150g)から抽出した。収穫前に、チラコイド画分において低い葉緑素濃度で最も高い特異的酵素活性を達成するために、実生を光があたる所で2時間緑色にさせた。高い葉緑素濃度では、試験において使用できる緑色チラコイドの量を限定する蛍光の顕著な消光が生じる。植物材料を新鮮重量対容量1:4.の比でBraunブレンダーを使用して冷所で均質化した。均質化緩衝液は、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(トリス)-HCl(50mM;pH7.3)、ショ糖(0.5M)、塩化マグネシウム(1mM)、エチレンジアミン四酢酸酸(EDTA)(1mM)及びウシ血清アルブミン(2g L-1)からなった。四層のMiraclothを通じたろ過後、粗色素体調製物を10000xg、5分間での遠心分離及び均質化緩衝液への再懸濁に続いて粗細胞片を除去するための150xg、二分間での遠心分離の後に得た。上清を4000xg、15分間遠心分離し、沈殿画分をトリス-HCl(50mM;pH7.3)、EDTA(2mM)、ロイペプチン(2μM)、ペプスタチン(2μM)及びグリセロール(200ml L-1)を含有する緩衝液1mlに再懸濁し、使用まで-80℃で保存した。タンパク質をウシ血清アルブミンを標準として用いて酵素抽出物において決定した。PPO活性を、化学的に還元したプロトポルフィリノーゲンIXからの初速度条件下でのプロト(Proto)形成の速度をモニタリングすることにより蛍光定量的にアッセイした。アッセイ混合物は、総容量200μl中のトリス-HCl(100mM;pH7.3)、EDTA(1mM)、ジチオスレイトール(5mM)、Tween80(0.085%)、プロトポルフィリノーゲンIX(2μM)及び抽出されたタンパク質40μgからなった。反応は、22℃での基質プロトポルフィリノーゲンIXの添加によって開始した。サフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン、フルミオキサジン、ブタフェナシル、アシフルオルフェン、ラクトフェン、ビフェノックス、スルフェントラゾンに加えて、陰性対照として使用した光合成阻害剤ジウロンを、ジメチルスルホキシド(DMSO)溶液(アッセイでの濃度0.1mM DMSO)中に調製し、インキュベーション前にアッセイ混合物中に濃度0.005pMから5μMで加えた。蛍光を、405nmでの励起及び630nmで発光をモニターしてPOLARstar Optima/Galaxy(BMG)を使用してアッセイ混合物から直接モニターした。熱不活性化抽出物の存在下での非酵素活性は無視できるものであった。除草剤によって誘導される酵素活性の阻害は、未処置対照と比較した百分率阻害として表した。50%酵素阻害のために必要な化合物のモル濃度(IC50値)は、非線形回帰分析を使用して用量反応式に値をフィットさせることにより算出した。
PPO酵素アッセイ(組換え)。プロトはSigma-Aldrich (Milwaukee,WI)から購入した。プロトゲン(Protogen)はJacobs及びJacobsに従って調製した(N.J. Jacobs、J.M. Jacobs、Assay for enzymatic protoporphyrinogen oxidation、a late step in heme synthesis、Enzyme 28 (1982年) 206-219)。アッセイは、0.1mM EDTA、0.1% Tween20、5μM FAD及び500mMイミダゾールを含む100mMリン酸ナトリウムpH7.4において実施した。PPO阻害剤サフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン、フルミオキサジン、ブタフェナシル、アシフルオルフェン、ラクトフェン、ビフェノックス、スルフェントラゾンに加えて陰性対照として使用した光合成阻害剤ジウロン、及びMC-15608での用量応答曲線を150μMプロトゲンの存在下で得た。励起及び発光バンド幅は、それぞれ1.5及び30nmに設定した。すべてのアッセイは、二回又は三回反復であり、405nmでの励起及び630nmで発光をモニターしてPOLARstar Optima/Galaxy (BMG)を使用して測定した。50%酵素阻害のために必要な化合物のモル濃度(IC50値)は、非線形回帰分析を使用して用量反応式に値をフィットさせることにより算出した。
置換PPO酵素についての用量応答(IC50)値は、野生型(非置換)PPO酵素についてのIC50値よりも大きい(表4a)。これは、これらの置換PPO酵素が試験したPPO阻害除草剤に先天的抵抗性を有することを示す。置換PPO酵素dG210及びR128Lは、アマランサス・ツベルクラタス及びアンブロシア・アルテミシイフォリア(Ambrosia artemisiifolia)においてそれぞれ見出される公知の置換PPO酵素であり、多数のPPO除草剤の変種の植物PPO抵抗性に関与することが示されている(Dayanら、2010年、Biochimica et Biophysica Acta、1804:1548)。これは、dG210又はR128Lよりも高いIC50値も有する、記載した他の置換PPO酵素も、多数のPPO除草剤に対する植物抵抗性に関与する置換PPO酵素であることを示す(表4a)。すべての置換PPO酵素は、野生型PPO酵素と比較して同等の酵素活性、一分間あたりの蛍光単位変化(FU/分)を示す(表4a)。加えて置換PPO酵素についてのすべての活性値は、置換PPO酵素dG210又はR128Lよりも大きい。置換PPO酵素dG210及びR128Lは、すでに示すとおり植物機能において十分に活性である。これは、記載されたすべての他の置換PPO酵素も植物機能において十分活性であることを示す。
Figure 2018186826
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[実施例2]
野生型又は突然変異PPO配列を有するPPO阻害除草剤耐性植物を操作する
PPO誘導体除草剤耐性大豆(ダイズ)又はコーン(トウモロコシ)植物は、Olhoftら(米国特許出願公開第2009/0049567号)によって記載された方法により産生される。大豆又はシロイヌナズナの形質転換について、野生型又は突然変異PPO配列をSambrookら、(Molecular cloning (2001年) Cold Spring Harbor Laboratory Press)に記載の標準的クローニング技術で、抵抗性マーカー遺伝子カセット(AHAS)及び突然変異PPO配列(GOIとしてのマーカー)をユビキチンプロモーター(PcUbi)とナパリン合成酵素ターミネーター(NOS)配列の間に含有しているバイナリーベクターにクローニングする。コーン形質転換について、野生型又は突然変異PPO配列をSambrookら、(Molecular cloning (2001年) Cold Spring Harbor Laboratory Press)に記載の標準的クローニング技術で抵抗性マーカー遺伝子カセット(AHAS)及び突然変異PPO配列(GOIとしてのマーカー)をコーンユビキチンプロモーター(ZmUbi)とナパリン合成酵素ターミネーター(NOS)配列の間に含有しているバイナリーベクターにクローニングする。バイナリープラスミドをアグロバクテリウム・ツメファシエンシスに植物形質転換のために導入する。アグロバクテリウム属媒介形質転換を介してプラスミド構築物を実生外殖片の初生節の大豆の腋生分裂組織細胞内に導入する。アグロバクテリアの接種及び共栽培後、この外殖片を、選択なしのシュート誘導培地に1週間移す。外殖片を、続けて1-3μMのイマザピル(Arsenal)を含むシュート誘導培地に3週間移し、形質転換細胞を選択する。その後、初生節の健康なカルス/シュートパッド(callus/shoot pads)を有する外殖片を、1-3μMのイマザピルを含有するシュート伸長培地に伸長したシュート又は外殖片が死ぬまで移す。トランスジェニック小植物を根付かせ、導入遺伝子の存在に関するTaqMan分析に供し、土壌に移し、温室において成熟まで成長させる。コーン植物の形質転換は、McElver及びSingh(WO2008/124495)によって記載された方法により行われる。突然変異PPO配列を含有する植物形質転換ベクター構築物をアグロバクテリウム属媒介形質転換を介してトウモロコシ未成熟胚に導入する。
形質転換細胞を、0.5-1.5μMのイマゼタピルを添加した選択培地において3-4週間選択した。トランスジェニック小植物を、植物再生培地において再生させ、その後根付かせた。トランスジェニック小植物を、鉢植え用混合物に移植する前に導入遺伝子の存在に関するTaqMan分析に供し、温室において成熟まで成長させる。シロイヌナズナを、野生型又は突然変異PPO配列で、McElver及びSingh(WO2008/124495)により記載されたフローラルディップ方法により形質転換する。トランスジェニックシロイヌナズナ植物を組み込み遺伝子座の数の分析に関するTaqMan分析に供した。イネ(コメ)の形質転換を、Pengら(米国特許第6,653,529号)により記載されたプロトプラスト形質転換により実施する。突然変異PPO配列を含有する大豆、コーン及びコメのT0又はT1トランスジェニック植物を、次のPPO阻害除草剤:サフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン フルミオキサジン、ブタフェナシル、アシフルオルフェン、ラクトフェン、ビフェノックス、スルフェントラゾンに加えて陰性対照として使用した光合成阻害剤ジウロンを用いて、温室研究におけるPPO由来除草剤に対する耐性の改善、及びミニプロット研究に関して試験する。
トランスジェニックシロイヌナズナ植物をサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン フルミオキサジン、ブタフェナシル、アシフルオルフェン、ラクトフェン、ビフェノックス、スルフェントラゾンに加えて陰性対照として使用した光合成阻害剤ジウロンへ耐性の改善に関して48-ウエルプレートにおいてアッセイした。そのため、T2種子をエタノール+水(容量で70+30)中で5分間撹拌し、エタノール+水(容量で70+30)で一回、滅菌脱イオン水で二回リンスすることにより表面滅菌する。水に溶解した0.1%アガー(w/v)に種子を再懸濁する。一ウエルあたり四個から五個の種子を1/2濃度のムラシゲ・スクーグ(murashige skoog)栄養溶液pH 5.8(Murashige及びSkoog(1962年)Physiologia Plantarum 15: 473-497)からなる固体栄養培地にプレーティングする。化合物をジメチルスルホキシド(DMSO)に溶解し、固体化の前に培地に加える(最終DMSO濃度0.1%)。マルチウエルプレートを成長チャンバーにおいて22℃、75%相対湿度及び110μmol Phot * m-2 * s-1、14:10 hの明:暗光周期でインキュベートする。成長阻害を播種7から10日後に野生型植物と比較して評価する。追加的にトランスジェニックT1シロイヌナズナ植物を温室研究において次のPPO阻害除草剤:サフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン、フルミオキサジン、ブタフェナシル、アシフルオルフェン、ラクトフェン、ビフェノックス、スルフェントラゾンに加えて陰性対照として使用した光合成阻害剤ジウロンで、PPO阻害除草剤に対する耐性の改善に関して試験した。結果を表5に示す。
Figure 2018186826
[実施例3]
組織培養条件
in vitro組織培養突然変異誘発アッセイを、プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ(PPO)阻害除草剤(例えばサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン、フルミオキサジン、ブタフェナシル、アシフルオルフェン、ラクトフェン、ビフェノックス、スルフェントラゾン)に耐性である植物組織(例えば、トウモロコシ、コメ組織)を単離及び特徴付けするために開発した。アッセイは、in vitro組織培養において見出される体細胞繁殖系バリエーションを利用する。体細胞繁殖系バリエーションからの自発的突然変異は、化学的突然変異誘発及び除草剤の増加する濃度における段階的様式での選択によって、増強され得る。
本発明は、再生可能な脆弱、胚形成トウモロコシ又はコメカルスの成長を促すための組織培養条件を提供する。カルスをトウモロコシ及びイネ(Japonica)(Taipei 309、Nipponbare、Koshihikari)及びインディカ(Indica 1)変種をそれぞれ包含している4種の異なるトウモロコシ又はコメ栽培品種から始めた。種子を70%エタノール中でおよそ1分間に続く20%市販Clorox bleachで20分間表面滅菌した。種子を滅菌水でリンスし、カルス誘導培地にプレーティングした。種々のカルス誘導培地を試験した。試験した培地の成分リストを表6に示す。
Figure 2018186826
 R001Mカルス誘導培地を多数のバリエーションを試験した後に選択した。培養液を暗所、30℃に保持した。胚形成カルスを10-14日後に新鮮培地に継代培養した。
[実施例4]
除草剤-耐性カルスの選択
組織培養条件が決定されたら、選択条件のさらなる確立は、サフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン、フルミオキサジン、ブタフェナシル、アシフルオルフェン、ラクトフェン、ビフェノックス、スルフェントラゾンに加えて陰性対照として使用した光合成阻害剤ジウロンでの死滅曲線(kill curve)における組織生存の分析を通じて確立された。組織における除草剤の蓄積並びに細胞及び培養培地中のその残留性及び安定性が熟慮された。これらの実験を通じて、亜致死用量が突然変異材料の初期選択に関して確立されている。
選択培地におけるサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン フルミオキサジン、ブタフェナシル、アシフルオルフェン、ラクトフェン、ビフェノックス、スルフェントラゾンに加えて陰性対照として使用した光合成阻害剤ジウロンの出発用量の確立後に、毒性用量の存在下で活発に成長する細胞が再生するまで移行ごとにPPO阻害剤の濃度を増加させることによって段階的様式で組織を選択した。得られたカルスを3-4週間ごとに選択的薬物を含むR001Mにさらに継代培養した。26,000個を超えるカルスを選択圧が死滅曲線及び継続的培養の観察により決定された毒性レベルを超えるまで四回〜五回継代培養に関する選択に供した。
代替的に液体培養をMS711R中、低速振とうでカルスから、毎週の継代培養で開始した。液体培養が確立されたら、選択薬物を各継代培養でフラスコに直接加えた。二〜四回の液体選択後、さらなる成長のために培養液を固体R001M培地上のフィルターに移した。
[実施例5]
植物の再生
耐性組織を再生させ、PPO遺伝子配列突然変異に関して分子的に及び/又は選択的薬物の存在下で変化したPPO活性に関して生化学的に特徴付けた。加えて、直接的に及び/若しくは間接的にテトラピロール生合成並びに/又は代謝経路に関与する遺伝子も突然変異を特徴付けるために配列決定した。最後に、運命(例えば代謝、移行、輸送)を変化させる酵素も突然変異を特徴付けるために配列決定した。
除草剤選択後、カルスをR025Mの培地レジメンを使用して10〜14日間、R026Mで約2週間、R327Mで十分に形成されたシュートが発達するまで、及びR008Sで温室に移すためにシュートが十分に根付くまで再生させた。再生は、光があたる所で行った。選択薬物は再生の際は含まれていなかった。
強い根が確立されたら、M0再生物を四角又は円形ポットで温室に移した。移植物は、温室条件に適応するまで透き通ったプラスチックカップの下で維持した。温室は、14時間日長に維持するために600W高圧ナトリウム光を補って27℃/21℃(80°F/70°F)の日/夜サイクルに設定した。植物は必要により気候に応じて水を掛け、毎日施肥した。
[実施例6]
配列分析
葉組織を移植のために分離されたクローン植物から回収し、個々に分析した。ゲノムDNAをWizard(登録商標)96 Magnetic DNA Plant System kit (Promega、米国特許第6,027,945号及び第6,368,800号)を製造者による指示のとおり使用して抽出した。単離されたDNAを適切なフォワード及びリバースプライマーを使用してPCR増幅した。
PCR増幅を、次の:96℃で15分間、続く35サイクル(96℃、30秒間; 58℃-1サイクルあたり0.2℃、30秒間;72℃、3分間及び30秒間)、72℃で10分間のタッチダウンサーモサイクリングプログラムを使用するHotstar Taq DNA Polymerase (Qiagen)を使用して実施した。
PCR産生物を濃度及び断片サイズに関してアガロースゲル電気泳動を介して検証した。脱リン酸化PCR産生物をPCRプライマー(DNA Landmarks、or Entelechon)を使用する直接配列決定により分析した。クロマトグラムトレースファイル(.scf)をVector NTI Advance 10(商標)(Invitrogen)を使用して野生型遺伝子と比較する突然変異に関して分析した。配列情報に基づいて、突然変異をいくつかの個体において同定した。配列分析を代表的なクロマトグラム及び対応するAlignX配列比較について初期設定で実施し、第2ピークを分類するために編集した。
[実施例7]
除草剤耐性の実証
選択された突然変異体及びエスケープ(escape)を小型ポットに移した。野生型栽培品種を対照とし種子から発芽させた。
移植の約3週間後、M0再生物にトラック噴霧器(track sprayer)を使用して0.1%メチル化種子油を添加したサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン フルミオキサジン、ブタフェナシル、アシフルオルフェン、ラクトフェン、ビフェノックス、スルフェントラゾン(ジウロンを加えた)をスプレーした。植物が温室条件に適応した後に、サブセットに追加的サフルフェナシル又は1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオンをスプレーした。スプレーしたら、植物を24時間渇水条件に保った後に植物に再び水を掛け、施肥した。スプレーした植物を写真撮影し、除草剤損傷に関して処置1及び3週間後に評価した。ヘテロ接合性突然変異を含有する植物においては、損傷なし又は低い損傷レベルが観察された一方で、対照植物及び組織培養エスケープ(配列決定された突然変異に関して陰性の再生植物)は、処置後に重度の損傷を受けた。
コーン及び大豆に関する耐性率を表7a-cに示す。
Figure 2018186826
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次に上で測定した損傷スコアの定義を示す:
スコア 損傷の記載
0 損傷なし
1 微少な損傷、葉損傷又は白化のわずかなパッチだけ。
2 わずかに強い白化を伴う微少な損傷。全体的成長点は障害を受けていない。
3 二次生葉組織でのわずかに強い損傷、しかし初生葉及び成長点は障害を受けていない。
4 植物全体の形態がわずかに異なり、二次成長点及び葉組織においていくらかの白化及び壊死。茎は無傷である。再成長は1週間以内でほぼ確実である。
5 植物全体の形態が明らかに異なる、わずかな葉及び成長点にいくらかの白化及び壊死、しかし初生成長点は無傷。茎組織は緑色のままである。再成長は1週間以内でほぼ確実である。
6 強い損傷が新しい葉の成長で見られる。植物は、異なる成長点での再成長を通じてだけ高確率で生存する。大部分の葉は白化/壊死だが、茎組織は緑のままである。再生する場合もあるが、顕著に損傷された外観を有する。
7 大部分の活性成長点は壊死している。生存できる成長点一個がある場合があり、部分的に白化又は緑色で、部分的に壊死している。葉二枚は、いくらかの緑色を含んで白化したままである場合がある、茎を含む植物の残りは壊死している。
8 植物は死にそうであり、すべての成長点が壊死している。一枚の葉がいくらかの緑色を含んで白化したままである。植物の他の部分は壊死している。
9 植物は死んでいる。
* 未試験
[実施例8]
組織培養を使用する除草剤選択
培地を使用のために選択し、死滅曲線を上に規定のように開発した。選択のためにさまざまな技術を利用した。段階的選択を適用した、又は除草剤の即時致死レベルを適用した、のいずれか。いずれの場合でも、すべてのカルスを選択の各ラウンドのために移行させた。選択は、各サイクルについて3-5週間で培養4-5サイクルであった。移行を促進するためにカルスをナイロン膜に置いた(200ミクロンポアシート、Biodesign, Saco, Maine)。膜を100x20mmペトリ皿に合うように切断し、使用する前にオートクレーブし、カルス25-35個(平均重量/カルスは22mg)をそれぞれのプレートで利用した。加えてカルス1セットを液体培養培地における毎週の継代培養に続く、半固体培地でのさらなる選択に供した。
突然変異体系をサフルフェナシル、1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオン フルミオキサジン、ブタフェナシル、アシフルオルフェン、ラクトフェン、ビフェノックス、スルフェントラゾンを使用して選択した。突然変異体を得る効率は、再生可能な突然変異体系をもたらすカルスの百分率、又は利用した組織のグラムによって決定される系の数のいずれに基づいても高かった。
[実施例9]
除草剤耐性クローンを同定するための突然変異誘発された藻類細胞のスクリーニング及びPPO遺伝子における原因となる突然変異の同定
「PPO阻害除草剤」抵抗性をもたらす突然変異をPPO遺伝子において生成するために、化学的又はUVで突然変異誘発した細胞集団でのスクリーニングを使用できる。特にコナミドリムシのような単細胞生物は、除草剤抵抗性をもたらす優勢な突然変異を同定するために有用である(Kataoka Mら; 1990年; J. of Pest. Sci. 15: 449-451; Oshio Hら; 1993年; Zeitschrift fur Naturforschung 48: 339-344)。
コナミドリムシ系統の藻類細胞CC-503及びCC-1691(Duke University、Durham、USA)を、TAP培地(Gorman及びLevine; 1965年; PNAS 54: 1665-1669)において、100rpm、22℃及び30μmolのPhot * m-2 * s-2光照明における定期的振とうにより増殖させた。化合物のスクリーニングを、450μmolのPhot * m-2* s-2照明において実施した。
コナミドリムシの感受性系統に、Loppes (1969年、Mol Gen Genet 104: 172-177)により記載のように0.14Mのエチルメタンスルホン酸(EMS)、1時間で突然変異を起こした。耐性系統を、「PPO阻害草剤」様サフルフェナシル又は1,5-ジメチル-6-チオキソ-3-(2,2,7-トリフルオロ-3-オキソ-4-(プロパ-2-イニル)-3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]オキサジン-6-イル)-1,3,5-トリアジナン-2,4-ジオンをCC-503又はCC-1691系統における化合物活性に応じて野生型致死濃度で含有する固体TAP培地プレートにおいて突然変異誘発された細胞のスクリーニングにより同定した。
標準的技術をSambrockら(Molecular cloning (2001年) Cold Spring Harbor Laboratory Press)により記載のようにRNA及びcDNA合成の単離のために使用した。ゲノムDNA若しくは鋳型としてのコピーDNAからの野生型及び抵抗性クラミドモナス・レインハーディー(Chlamydomonas reinhardii)由来PPO 遺伝子の増幅を表5に記載のDNAオリゴヌクレオチドで標準的PCR技術により実施した。得られたDNA分子を標準的配列決定ベクター(pJET1)にクローニングし、標準的配列決定技術により配列決定した。突然変異を、野生型と突然変異体PPO配列とを配列比較ツールAlign X(Vectoe NTI Advance Software Version 10.3、Invitrogen、Carlsbad、CA、USA)により比較するステップにより同定した。
Figure 2018186826
Figure 2018186826
 本発明は以下の実施形態を包含する。
[１] 植物の栽培部位において望ましくない植生を制御するための方法であって、
a）前記部位に、PPO阻害除草剤に対して抵抗性又は耐性である野生型プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ又は突然変異プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（mut-PPO）をコードするヌクレオチド配列を含む少なくとも一つの核酸を含む植物を提供するステップ、及び／又は
b）前記部位に有効量の前記除草剤を適用するステップ
を含む前記方法。
[２] a）のヌクレオチド配列が、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、若しくは45の配列、又はその変異体若しくは誘導体を含む、請求項１に記載の方法。
[３] 配列番号2又は配列番号4のmut-PPOが、以下：
a）128位のアミノ酸がLeu、Ala、Val、又はIleである；
b）204位のアミノ酸がAla、Leu、Ile、又はValである；
c）208位のアミノ酸がSerである；
d）397位のアミノ酸がGly、Ala、Ser、Thr、Cys、Val、Ile、Met、Pro、Phe、Tyr、Trp、His、Lys、Arg、Asn、Asp、Glu、又はGlnである；
e）400位のアミノ酸がAla、Ile、Val、又はMetである；
f）420位のアミノ酸がVal、Met、Ala、Ile、又はLeuである；
g）457位のアミノ酸がMet、Ala、Leu、Ile、Valである；
の一以上を含む、請求項１又は２に記載の方法。
[４] 植物が、除草剤耐性酵素をコードするヌクレオチド配列を含む、少なくとも1つのさらなる異種核酸を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
[５] PPO阻害除草剤が、一以上のさらなる除草剤と共に適用される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
[６] 配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、又は45、又はその変異体若しくは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされるmut-PPOを使用することによる、PPO阻害除草剤を同定するための方法。
[７] a）mut-PPOをコードする核酸を含むトランスジェニック細胞又は植物を作製するステップであって、mut-PPOが発現される前記ステップ；
b）PPO阻害を、a）のトランスジェニック細胞又は植物、及び同じ変種の対照細胞又は植に適用するステップ；
c）前記試験化合物の適用後にトランスジェニック細胞又は植物及び対照細胞又は植物の成長又は生存率を決定するステップ；並びに
d）トランスジェニック細胞又は植物の成長と比較して、対照細胞又は植物に減少した成長を与える試験化合物を選択するステップ
を含む、請求項６に記載の方法。
[８] PPO阻害除草剤に対して抵抗性又は耐性であるmut-PPOをコードするヌクレオチド配列を同定する方法であって、
a）mut-PPOコード核酸のライブラリーを作製するステップ；
b）細胞又は植物において前記核酸のそれぞれを発現させ、前記細胞又は植物をPPO阻害によって処理することによって、得られたmut-PPOコード核酸の集団をスクリーニングするステップ；
c）mut-PPOコード核酸の前記集団によって提供されるPPO阻害耐性レベルと、対照PPOコード核酸によって提供されるPPO阻害耐性レベルとを比較するステップ；
d）対照PPOコード核酸により提供されるPPO阻害に対する耐性レベルと比較して、有意に増加したPPO阻害に対する耐性レベルを提供する少なくとも一つのmut-PPOコード核酸を選択するステップ
を含む、前記方法。
[９] ステップd）で選択されるmut-PPOコード核酸が、対照PPOコード核酸によってもたらされるPPO阻害除草剤に対する耐性と比較して、少なくとも2倍高いPPO阻害除草剤に対する耐性をもたらす、請求項８に記載の方法。
[１０] 抵抗性又は耐性が、ステップa）のライブラリーの核酸配列を含むトランスジェニック植物を作製し、前記トランスジェニック植物を対照植物と比較することによって決定される、請求項８又は９に記載の方法。
[１１] mut-PPOポリペプチドをコードする単離された核酸であって、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、又は45、又はその変異体若しくは誘導体のヌクレオチド配列を含む、前記核酸。
[１２] コードされるmut-PPOが、以下：128位のアミノ酸がアルギニン以外である；204位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；208位のアミノ酸がトレオニン以外である；397位のアミノ酸がロイシン以外である；400位のアミノ酸がロイシン以外である；420位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；457位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；の一以上を含む、配列番号2又は配列番号4の変異体である、請求項１０に記載の核酸。
[１３] 配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含むmut-PPOポリペプチドであって、420位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、397位のアミノ酸はGly、Ala、Ser、Thr、Cys、Val、Ile、Met、Pro、Phe、Tyr、Trp、His、Lys、Arg、Asn、Asp、Glu、又はGlnであり、野生型植物と比較して、植物においてPPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性又は耐性を与える、前記mut-PPOポリペプチド。
[１４] mut-PPOポリペプチドをコードする核酸によって形質転換されたトランスジェニック植物細胞であって、植物における該核酸の発現が野生型変種の植物細胞と比較してPPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性又は耐性をもたらし得、コードされるmut-PPOポリペプチドは以下：128位のアミノ酸がアルギニン以外である；204位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；208位のアミノ酸がトレオニン以外である；397位のアミノ酸がロイシン以外である；400位のアミノ酸がロイシン以外である；420位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；457位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；の一以上を含む配列番号2又は配列番号4の変異体である、前記植物細胞。
[１５] mut-PPOポリペプチドコード核酸が、a）配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、又は45に示されるポリヌクレオチド、又はその変異体若しくは誘導体；b）配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、又は46に示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド又はその変異体若しくは誘導体；c）a）又はb）のいずれかの少なくとも60の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド；並びにd）a）〜c）のいずれかのポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項１４に記載のトランスジェニック植物細胞。
[１６] 請求項１４又は１５に規定される植物細胞を含むトランスジェニック植物であって、植物におけるmut-PPOポリペプチドコード核酸の発現が、野生型植物と比較してPPO阻害除草剤に対する植物の増加した抵抗性をもたらす、前記トランスジェニック植物。 [１７] 配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含む突然変異又は組換えmut-PPOポリペプチドを発現する植物であって、420位のアミノ酸がMet又はValであり、397位のアミノ酸がGly、Ala、Ser、Thr、Cys、Val、Ile、Met、Pro、Phe、Tyr、Trp、His、Lys、Arg、Asn、Asp、Glu、又はGlnであり、前記mut-PPOが、植物において発現されたときに、対応する野生型変種の植物と比較して植物に増加した除草剤耐性を与える、前記植物。
[１８] 請求項１４若しくは１５に規定される植物細胞を含むトランスジェニック植物、又は請求項１６若しくは１７に規定される植物によって生産される種子であって、野生型変種の種子と比較してPPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性について純粋種である、前記種子。
[１９] 野生型変種の植物細胞と比較して増加したPPO阻害除草剤に対する耐性を有するトランスジェニック植物細胞を生産する方法であって、mut-PPOポリペプチドをコードする核酸を含む発現カセットにより植物細胞を形質転換するステップを含む、前記方法。 [２０] トランスジェニック植物を生産する方法であって、（a）mut-PPOポリペプチドをコードする核酸を含む発現カセットにより植物を形質転換するステップ、及び（b）該植物細胞からPPO阻害除草剤に対する増加した耐性を有する植物を作製するステップを含む、前記方法。
[２１] mut-PPO核酸が、a）配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、又は45に示されるポリヌクレオチド、又はその変異体若しくは誘導体；b）配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、又は46に示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド又はその変異体若しくは誘導体；c）a）又はb）のいずれかの少なくとも60の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド；並びにd）a）〜c）のいずれかのポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項１９又は２０に記載の方法。
[２２] 発現カセットが、植物において機能的な転写開始調節領域及び翻訳開始調節領域をさらに含む、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
[２３] 形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部を同定又は選択する方法であって：i）形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部を提供するステップであって、前記植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部が、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、又は45に示されるポリヌクレオチド、又はその変異体若しくは誘導体を含み、該ポリヌクレオチドが選択マーカーとして用いられるmut-PPOポリペプチドをコードし、前記形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部が、さらなる単離されたポリヌクレオチドを含み得る前記ステップ；ii）形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部と、少なくとも一つのPPO阻害化合物とを接触させるステップ；iii）植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部が阻害化合物によって影響を受けるか決定するステップ；及びiv）形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部を同定又は選択するステップを含む、前記方法。

Claims (23)

  1. 植物の栽培部位において望ましくない植生を制御するための方法であって、
    a）前記部位に、PPO阻害除草剤に対して抵抗性又は耐性である野生型プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ又は突然変異プロトポルフィリノーゲンオキシダーゼ（mut-PPO）をコードするヌクレオチド配列を含む少なくとも一つの核酸を含む植物を提供するステップ、及び／又は
    b）前記部位に有効量の前記除草剤を適用するステップ
    を含む前記方法。
  2. a）のヌクレオチド配列が、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、若しくは45の配列、又はその変異体若しくは誘導体を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 配列番号2又は配列番号4のmut-PPOが、以下：
    a）128位のアミノ酸がLeu、Ala、Val、又はIleである；
    b）204位のアミノ酸がAla、Leu、Ile、又はValである；
    c）208位のアミノ酸がSerである；
    d）397位のアミノ酸がGly、Ala、Ser、Thr、Cys、Val、Ile、Met、Pro、Phe、Tyr、Trp、His、Lys、Arg、Asn、Asp、Glu、又はGlnである；
    e）400位のアミノ酸がAla、Ile、Val、又はMetである；
    f）420位のアミノ酸がVal、Met、Ala、Ile、又はLeuである；
    g）457位のアミノ酸がMet、Ala、Leu、Ile、Valである；
    の一以上を含む、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 植物が、除草剤耐性酵素をコードするヌクレオチド配列を含む、少なくとも1つのさらなる異種核酸を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
  5. PPO阻害除草剤が、一以上のさらなる除草剤と共に適用される、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、又は45、又はその変異体若しくは誘導体のヌクレオチド配列を含む核酸によってコードされるmut-PPOを使用することによる、PPO阻害除草剤を同定するための方法。
  7. a）mut-PPOをコードする核酸を含むトランスジェニック細胞又は植物を作製するステップであって、mut-PPOが発現される前記ステップ；
    b）PPO阻害を、a）のトランスジェニック細胞又は植物、及び同じ変種の対照細胞又は植に適用するステップ；
    c）前記試験化合物の適用後にトランスジェニック細胞又は植物及び対照細胞又は植物の成長又は生存率を決定するステップ；並びに
    d）トランスジェニック細胞又は植物の成長と比較して、対照細胞又は植物に減少した成長を与える試験化合物を選択するステップ
    を含む、請求項６に記載の方法。
  8. PPO阻害除草剤に対して抵抗性又は耐性であるmut-PPOをコードするヌクレオチド配列を同定する方法であって、
    a）mut-PPOコード核酸のライブラリーを作製するステップ；
    b）細胞又は植物において前記核酸のそれぞれを発現させ、前記細胞又は植物をPPO阻害によって処理することによって、得られたmut-PPOコード核酸の集団をスクリーニングするステップ；
    c）mut-PPOコード核酸の前記集団によって提供されるPPO阻害耐性レベルと、対照PPOコード核酸によって提供されるPPO阻害耐性レベルとを比較するステップ；
    d）対照PPOコード核酸により提供されるPPO阻害に対する耐性レベルと比較して、有意に増加したPPO阻害に対する耐性レベルを提供する少なくとも一つのmut-PPOコード核酸を選択するステップ
    を含む、前記方法。
  9. ステップd）で選択されるmut-PPOコード核酸が、対照PPOコード核酸によってもたらされるPPO阻害除草剤に対する耐性と比較して、少なくとも2倍高いPPO阻害除草剤に対する耐性をもたらす、請求項８に記載の方法。
  10. 抵抗性又は耐性が、ステップa）のライブラリーの核酸配列を含むトランスジェニック植物を作製し、前記トランスジェニック植物を対照植物と比較することによって決定される、請求項８又は９に記載の方法。
  11. mut-PPOポリペプチドをコードする単離された核酸であって、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、又は45、又はその変異体若しくは誘導体のヌクレオチド配列を含む、前記核酸。
  12. コードされるmut-PPOが、以下：128位のアミノ酸がアルギニン以外である；204位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；208位のアミノ酸がトレオニン以外である；397位のアミノ酸がロイシン以外である；400位のアミノ酸がロイシン以外である；420位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；457位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；の一以上を含む、配列番号2又は配列番号4の変異体である、請求項１０に記載の核酸。
  13. 配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含むmut-PPOポリペプチドであって、420位のアミノ酸はAla、Leu、Ile、又はValであり、397位のアミノ酸はGly、Ala、Ser、Thr、Cys、Val、Ile、Met、Pro、Phe、Tyr、Trp、His、Lys、Arg、Asn、Asp、Glu、又はGlnであり、野生型植物と比較して、植物においてPPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性又は耐性を与える、前記mut-PPOポリペプチド。
  14. mut-PPOポリペプチドをコードする核酸によって形質転換されたトランスジェニック植物細胞であって、植物における該核酸の発現が野生型変種の植物細胞と比較してPPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性又は耐性をもたらし得、コードされるmut-PPOポリペプチドは以下：128位のアミノ酸がアルギニン以外である；204位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；208位のアミノ酸がトレオニン以外である；397位のアミノ酸がロイシン以外である；400位のアミノ酸がロイシン以外である；420位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；457位のアミノ酸がフェニルアラニン以外である；の一以上を含む配列番号2又は配列番号4の変異体である、前記植物細胞。
  15. mut-PPOポリペプチドコード核酸が、a）配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、又は45に示されるポリヌクレオチド、又はその変異体若しくは誘導体；b）配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、又は46に示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド又はその変異体若しくは誘導体；c）a）又はb）のいずれかの少なくとも60の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド；並びにd）a）〜c）のいずれかのポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項１４に記載のトランスジェニック植物細胞。
  16. 請求項１４又は１５に規定される植物細胞を含むトランスジェニック植物であって、植物におけるmut-PPOポリペプチドコード核酸の発現が、野生型植物と比較してPPO阻害除草剤に対する植物の増加した抵抗性をもたらす、前記トランスジェニック植物。
  17. 配列番号2又は配列番号4の配列、その変異体、誘導体、オルソログ、パラログ、又はホモログを含む突然変異又は組換えmut-PPOポリペプチドを発現する植物であって、420位のアミノ酸がMet又はValであり、397位のアミノ酸がGly、Ala、Ser、Thr、Cys、Val、Ile、Met、Pro、Phe、Tyr、Trp、His、Lys、Arg、Asn、Asp、Glu、又はGlnであり、前記mut-PPOが、植物において発現されたときに、対応する野生型変種の植物と比較して植物に増加した除草剤耐性を与える、前記植物。
  18. 請求項１４若しくは１５に規定される植物細胞を含むトランスジェニック植物、又は請求項１６若しくは１７に規定される植物によって生産される種子であって、野生型変種の種子と比較してPPO阻害除草剤に対する増加した抵抗性について純粋種である、前記種子。
  19. 野生型変種の植物細胞と比較して増加したPPO阻害除草剤に対する耐性を有するトランスジェニック植物細胞を生産する方法であって、mut-PPOポリペプチドをコードする核酸を含む発現カセットにより植物細胞を形質転換するステップを含む、前記方法。
  20. トランスジェニック植物を生産する方法であって、（a）mut-PPOポリペプチドをコードする核酸を含む発現カセットにより植物を形質転換するステップ、及び（b）該植物細胞からPPO阻害除草剤に対する増加した耐性を有する植物を作製するステップを含む、前記方法。
  21. mut-PPO核酸が、a）配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、又は45に示されるポリヌクレオチド、又はその変異体若しくは誘導体；b）配列番号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、又は46に示されるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド又はその変異体若しくは誘導体；c）a）又はb）のいずれかの少なくとも60の連続するヌクレオチドを含むポリヌクレオチド；並びにd）a）〜c）のいずれかのポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドからなる群より選択されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項１９又は２０に記載の方法。
  22. 発現カセットが、植物において機能的な転写開始調節領域及び翻訳開始調節領域をさらに含む、請求項１９〜２１のいずれか一項に記載の方法。
  23. 形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部を同定又は選択する方法であって：i）形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部を提供するステップであって、前記植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部が、配列番号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、又は45に示されるポリヌクレオチド、又はその変異体若しくは誘導体を含み、該ポリヌクレオチドが選択マーカーとして用いられるmut-PPOポリペプチドをコードし、前記形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部が、さらなる単離されたポリヌクレオチドを含み得る前記ステップ；ii）形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部と、少なくとも一つのPPO阻害化合物とを接触させるステップ；iii）植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部が阻害化合物によって影響を受けるか決定するステップ；及びiv）形質転換された植物細胞、植物組織、植物又はそれらの一部を同定又は選択するステップを含む、前記方法。
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