BR112016014174B1 - Método de controle de vegetação indesejada e método de produção de uma célula vegetal transgênica - Google Patents

Método de controle de vegetação indesejada e método de produção de uma célula vegetal transgênica Download PDF

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Abstract

MÉTODO S DE CONTROLE DE VEGETAÇÃO, CÉLULA VEGETAL, PLANTAS, SEMENTE E MÉTODOS DE PRODUÇÃO DE CÉLULAS VEGETAIS E DE PLANTAS É fornecido um método de controle de vegetação indesejada em um local de cultivo de plantas, em que o método compreende as etapas de fornecimento, no local, de plantas que compreendem um ácido nucleico que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma protoporfirinogene oxidase (PPO) do tipo selvagem ou que sofreu mutação que é resistente ou tolerante a herbicidas inibidores de PPO, por meio da aplicação ao local de quantidade eficaz do herbicida. São adicionalmente fornecidas plantas que compreendem enzimas PPO do tipo selvagem ou que sofreram mutação e métodos de sua obtenção.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
[001] O presente pedido reivindica prioridade do pedido provisório norte-americano n° US 61/917360, depositado em 18 de dezembro de 2013, cujo teor é integralmente incorporado ao presente como referência.
[002] A presente invenção refere-se, de forma geral, a métodos de conferir tolerância a herbicidas em nível agrícola a plantas. Particularmente, a presente invenção refere-se a plantas que possuem tolerância aprimorada a herbicidas inibidores de PPO. Mais especificamente, a presente invenção refere- se a métodos e plantas obtidas por meio de mutagênese, cruzamento de cultivo e transformação que possuem tolerância aprimorada a herbicidas inibidores de PPO.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[003] Herbicidas que inibem protoporfirinogênio oxidase (denominada a seguir Protox ou PPO; EC:1.3.3.4), enzima fundamental na biossíntese de protoporfirina IX, vêm sendo utilizados para controle seletivo de ervas desde a década de 1960. PPO catalisa a última etapa comum da biossíntese de clorofila e heme, que é a oxidação de protoporfirinogênio IX em protoporfirina IX (Matringe et al., 1989, Biochem. 1, 260: 231). Herbicidas inibidores de PPO incluem muitas classes estruturais diferentes de moléculas (Duke et al., 1991, Weed Sci. 39: 465; Nandihalli et al., 1992, Pesticide Biochem. Physiol. 43: 193; Matringe et al., 1989, FEBS Lett. 245: 35; Yanase e Andoh, 1989, Pesticide Biochem. Physiol. 35: 70). Esses compostos herbicidas incluem os difeniléteres (tais como lactofen, 5-{2-cloro-4-(trifluorometil)fenóxi}-2- nitrobenzoato de (+-)-2-etóxi-1-metil-2-oxoetila; acifluorfen, ácido 5-{2-cloro-4- (trifluorometil)fenóxi}-2-nitrobenzoico; seu metil éster; ou oxifluorfen, 2-cloro-1- (3-etóxi-4-nitrofenóxi)-4-trifluorobenzeno)), oxadiazóis (tais como oxadiazon, 3- {2,4-dicloro-5-(1-metiletóxi)fenil}-5-(1,1-dimetiletil)-1,3,4-oxadiazol-2-(3H-ona), imidas cíclicas (tais como S-23142, N-(4-cloro-2-fluoro-5-propargiloxifenil)- 3,4,5,6-tetra-hidroftalimida; cloroftalim, N-(4-clorofenil)-3,4,5,6-tetra- hidroftalimida), fenil pirazóis (por exemplo, TNPP-etil, 2-{1-(2,3,4-triclorofenil)-4- nitropirazol-5-óxi}propionato de etila; M&B 39279), derivados de piridina (por exemplo, LS 82-556) e fenopilato e seus análogos de O-fenilpirrolidino e piperidinocarbamato. Muitos desses compostos inibem competitivamente a reação normal catalisada pela enzima, aparentemente agindo como análogos de substratos.
[004] A aplicação de herbicidas inibidores de PPO resulta no acúmulo de protoporfirinogênio IX no cloroplasta e mitocôndrias, que se acredita vazar para o citosol, onde é oxidado por uma peroxidase. Quando exposta à luz, protoporfirina IX causa formação de oxigênio isolado no citosol e formação de outras substâncias de oxigênio reativas, que podem causar peroxidação de lipídios e rompimento de membrana, gerando rápida morte celular (Lee et al., 1993, Plant Physiol. 102: 881).
[005] Nem todas as enzimas PPO são sensíveis a herbicidas que inibem enzimas PPO vegetais. As enzimas PPO de Escherichia coli e Bacillus subtilis (Sasarmen et al., 1993, Can. J. Microbiol. 39: 1155; Dailey et al., 1994, J. Biol. Chem. 269: 813) são resistentes a esses inibidores de herbicidas. Mutantes da alga unicelular Chlamydomonas reinhardtii resistentes ao herbicida fenilimida S-23142 foram relatados (Kataoka et al., 1990, J. Pesticide Sci. 15: 449; Shibata et al., 1992 em Research in Photosynthesis, Vol. III, N. Murata, ed. Kluwer: Países Baixos, págs. 567-70). Pelo menos um desses mutantes aparentemente possui atividade de PPO alterada que é resistente não só ao inibidor de herbicida sobre o qual o mutante foi selecionado, mas também a outras classes de inibidores de protox (Oshio et al., 1993, Z. Naturforsch. 48c: 339; Sato et al., 1994 em ACS Symposium on Porphyric Pesticides, S. Duke, ed., ACS Press: Washington DC). Também foi relatada uma linhagem mutante de células de fumo que é resistente ao inibidor S-21432 (Che et al., 1993, Z. Naturforsch. 48c: 350). Mutantes de E. coli auxotróficos foram utilizados para confirmar a resistência a herbicidas de herbicidas inibidores de PPO de plantas clonadas.
[006] Três estratégias principais são disponíveis para tornar as plantas tolerantes a herbicidas, ou seja: (1) desintoxicação do herbicida com uma enzima que transforma o herbicida ou seu metabólito ativo em produtos não tóxicos, tais como as enzimas para tolerância a bromoxinil ou basta (EP 242236, EP 337899); (2) mutação da enzima alvo em uma enzima funcional que seja menos sensível ao herbicida ou ao seu metabólito ativo, como as enzimas para tolerância a glifosato (EP 293356, Padgette, S. R. et al., J. Biol. Chem., 266, 33, 1991); ou (3) sobre-expressão da enzima sensível de forma a produzir quantidades da enzima alvo na planta que sejam suficientes com relação ao herbicida, em vista das constantes cinéticas dessa enzima, de forma a ter enzima funcional suficiente disponível apesar da presença do seu inibidor. A terceira estratégia foi descrita para obter com sucesso plantas que eram tolerantes a inibidores de PPO (vide, por exemplo, US 5.767.373 ou US 5.939.602) e membros da sua família de patentes). Além disso, US 2010/0100988 e WO 2007/024739 descrevem sequências de nucleotídeos que codificam sequências de aminoácidos que possuem atividade enzimática, de tal forma que as sequências de aminoácidos sejam resistentes a substâncias herbicidas inibidoras de PPO, particularmente mutantes de PPO específicos de ininbidor 3- feniluracil.
[007] WO 2012/080975 descreve plantas cuja tolerância a um herbicida inibidor de PPO denominado herbicida “derivado de benzoxazinona” (1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona) aumentou por meio da transformação das mencionadas plantas com ácidos nucleicos que codificam enzimas PPO que sofreram mutação. Particularmente, WO 2012/080975 descreve que a introdução de ácidos nucleicos que codificam um PPO mutada de um PPO do tipo II de Amaranthus no qual a arginina na posição 128 havia sido substituída por leucina, alanina ou valina e a fenilalanina na posição 420 havia sido substituída por metionina, cisteína, isoleucina, leucina ou treonina, confere aumento da tolerância/resistência a um herbicida derivado de benzoxazinona. Os inventores da presente invenção descobriram agora, surpreendentemente, que esses tipos de mutantes duplos e, além disso, substituições inovadoras paras R128, L397 e F420 que não são descritos em WO 2012/080975 conferem maior tolerância/resistência a uma ampla variedade de inibidores de PPO quando transferidos para enzimas PPO derivadas de organismos diferentes de Amaranthus, tais como os exibidos em SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117. Até o momento, portanto, o estado da técnica não descreveu plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO que contêm um ácido nucleico de PPO mutada de acordo com a presente invenção, que são tolerantes/resistentes a um amplo espectro de inibidores de PPO. O que é necessário na técnica, portanto, são plantas produtoras e plantas produtoras que possuam maior tolerância a herbicidas tais como herbicida inibidor de PPO e que contenham pelo menos um ácido nucleico de PPO do tipo selvagem e/ou que sofreu mutação de acordo com a presente invenção. Além disso, são necessários métodos de controle do crescimento de ervas nas proximidades dessas plantas produtoras ou plantas produtoras. Esses métodos e composições permitiriam o uso de métodos de pulverização durante a aplicação de herbicidas a regiões que contêm plantas produtoras ou às plantas produtoras.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO
[008] O problema é solucionado pela presente invenção, que se refere a um método de controle de vegetação indesejada em um local de cultivo vegetal, em que o método compreende as etapas de: a. fornecimento, no mencionado local, de plantas que compreendem pelo menos um ácido nucleico que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma protoporfirinogênio oxidase (PPO) do tipo selvagem ou uma protoporfirinogênio oxidase que sofreu mutação (PPO mutada) que é resistente ou tolerante a herbicidas inibidores de PPO e compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117 ou uma de suas variantes; e b. aplicação ao mencionado local de quantidade eficaz do mencionado herbicida. c.
[009] Outro objeto designa um método de identificação de uma sequência de nucleotídeos que codifica um PPO mutada que é resistente ou tolerante a herbicidas inibidores de PPO, em que o método compreende: a. geração de uma biblioteca de ácidos nucleicos que codificam PPO mutada; b. seleção de uma população dos ácidos nucleicos que codificam PPO mutada resultantes por meio da expressão de cada um dos mencionados ácidos nucleicos em uma célula ou planta e tratamento da mencionada célula ou planta com um herbicida inibidor de PPO; c. comparação dos níveis de tolerância a herbicidas inibidores de PPO fornecidos pela mencionada população de ácidos nucleicos que codificam PPO mutada com o nível de tolerância a herbicida inibidor de PPO fornecido por um ácido nucleico codificador de PPO controle; e d. seleção de pelo menos um ácido nucleico codificador de PPO mutada que fornece nível significativamente mais alto de tolerância a herbicidas inibidores de PPO em comparação com o fornecido pelo ácido nucleico codificador de PPO controle.
[010] Em uma realização preferida, o ácido nucleico codificador de PPO mutada selecionado na etapa (d) fornece pelo menos duas vezes mais tolerância a herbicidas inibidores de PPO em comparação com o fornecido pelo ácido nucleico codificador de PPO controle.
[011] A resistência ou tolerância pode ser determinada por meio da geração de plantas transgênicas que compreendem uma sequência de ácidos nucleicos da biblioteca da etapa (a) e comparação da mencionada planta transgênica com uma planta controle.
[012] Outro objeto designa um método de identificação de plantas ou algas que contêm um ácido nucleico que codifica PPO mutada que é resistente ou tolerante a herbicidas inibidores de PPO, em que o método compreende: a. identificação de quantidade eficaz de herbicida inibidor de PPO em um cultivo de células vegetais ou algas verdes; b. tratamento das mencionadas células vegetais ou algas verdes com um agente de mutagênese; c. contato da mencionada população de células que sofreram mutagênese com quantidade eficaz de herbicida inibidor de PPO, identificada em (a); d. seleção de pelo menos uma célula que sobrevive a essas condições de teste; e e. amplificação por PCR e sequenciamento de genes de PPO a partir de células selecionadas em (d) e comparação dessas sequências com sequências genéticas de PPO do tipo selvagem, respectivamente.
[013] Em uma realização preferida, o agente de mutagênese é metanossulfonato de etila.
[014] Outro objeto refere-se a um ácido nucleico isolado e/ou recombinante e/opu sintetizado quimicamente que codifica um polipeptídeo PPO mutado que compreende a sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117 ou suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, conforme definido a seguir.
[015] Outro objeto refere-se a um polipeptídeo PPO mutado, em que o polipeptídeo compreende a sequência definida em SEQ ID N° 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117, sua variante, derivado, ortólogo, parálogo ou homólogo, conforme definido a seguir.
[016] Em uma realização preferida, o ácido nucleico é identificável por meio de um método conforme definido acima.
[017] Em outra realização, a presente invenção refere-se a uma célula vegetal transformada por um ácido nucleico de PPO do tipo selvagem ou que sofreu mutação de acordo com a presente invenção, e que o expressa, ou uma planta que sofreu mutação para obter uma planta que expressa, preferencialmente sobre-expressa, um ácido nucleico de PPO do tipo selvagem ou que sofreu mutação de acordo com a presente invenção, em que a expressão do mencionado ácido nucleico na célula vegetal resulta em aumento da resistência ou tolerância a herbicida inibidor de PPO em comparação com variedade do tipo selvagem da célula vegetal.
[018] Em outra realização, a presente invenção refere-se a uma planta que expressa um polipeptídeo PPO mutado recombinante ou que sofreu mutagênese, em que a mencionada PPO mutada confere à planta maior tolerância a herbicidas em comparação com a variedade do tipo selvagem correspondente da planta quando nele expressa.
[019] Preferencialmente, o polipeptídeo PPO mutado recombinante ou que sofreu mutagênese compreende um ou mais dos motivos a seguir: Motivo 1: SQ [N/K/H]KRYI, em que o Arg na posição 5 do mencionado motivo é substituído por Leu, Ala, Val, Ile, Met, Tyr, Gly, Asn, Cys, Phe, Ser, Thr, Gln ou His; Motivo 2: TLGTLFSS, em que o Leu na posição 2 no mencionado motivo é substituído por Ala, Arg, Val, Ile, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gln, Cys, Gly, Pro, Phe, Tyr ou Trp; Motivo 3: [F/Y]TTF [V/I]GG, em que o Phe na posição 4 no mencionado motivo é substituído por Ala, Leu, Val, Ile, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gln, Cys, Gly, Pro, Arg, Tyr ou Trp.
[020] Em outra realização, a presente invenção refere-se a uma planta que compreende uma célula vegetal de acordo com a presente invenção, em que a expressão do ácido nucleico na planta resulta no aumento da resistência da planta a herbicidas inibidores de PPO em comparação com uma variedade da planta do tipo selvagem.
[021] As plantas de acordo com a presente invenção podem ser transgênicas ou não transgênicas.
[022] Preferencialmente, a expressão do ácido nucleico de acordo com a presente invenção resulta em aumento da resistência da planta a herbicidas inibidores de PPO em comparação com uma variedade da planta do tipo selvagem.
[023] Em outra realização, a presente invenção refere-se a um método de cultivo da planta de acordo com a presente invenção mediante controle das ervas nas proximidades da mencionada planta, em que o mencionado método compreende as etapas de: a. cultivo da mencionada planta; e b. aplicação de composição herbicida que compreende um herbicida inibidor de PPO à planta e ervas, em que o herbicida normalmente inibe a protoporfirinogênio oxidase em nível do herbicida que inibiria o crescimento de plantas do tipo selvagem correspondentes.
[024] Em outra realização, a presente invenção refere-se a sementes produzidas por plantas transgênicas que compreendem uma célula vegetal de acordo com a presente invenção ou sementes produzidas pela planta não transgênica que expressa um polipeptídeo PPO que sofreu mutagênese, em que a semente é o cultivo verdadeiro de aumento da resistência ao herbicida inibidor de PPO em comparação com uma variedade da semente do tipo selvagem.
[025] Em outra realização, a presente invenção refere-se a um método de produção de células vegetais transgênicas com aumento da resistência a herbicidas inibidores de PPO em comparação com uma variedade do tipo selvagem da célula vegetal, que compreende a transformação da célula vegetal com um cassete de expressão que compreende um ácido nucleico de PPO do tipo selvagem ou que sofreu mutação.
[026] Em outra realização, a presente invenção refere-se a um método de produção de plantas transgênicas que compreende (a) transformação de uma célula vegetal com um cassete de expressão que compreende um ácido nucleico de PPO do tipo selvagem ou que sofreu mutação e (b) geração de plantas com aumento da resistência a herbicidas inibidores de PPO da célula vegetal.
[027] Preferencialmente, o cassete de expressão compreende adicionalmente uma região reguladora do início de transcrição e uma região reguladora do início de transcrição e uma região reguladora do início de tradução que são funcionais na planta.
[028] Em outra realização, a presente invenção refere-se ao uso da PPO mutada de acordo com a presente invenção como marcador selecionável. A presente invenção fornece um método de identificação ou seleção de uma célula vegetal, tecido vegetal, planta transformada ou suas partes que compreende (a) fornecimento de células vegetais, tecidos vegetais, plantas transformadas ou suas partes, em que a mencionada célula vegetal, tecido vegetal, planta transformada ou sua parte compreende um ácido nucleico isolado que codifica um polipeptídeo PPO mutado de acordo com a presente invenção conforme descrito anteriormente, o polipeptídeo é utilizado como marcador de seleção e a mencionada célula vegetal, tecido vegetal, planta transformada ou sua parte pode compreender opcionalmente um ácido nucleico isolado de interesse adicional; (b) contato da célula vegetal, tecido vegetal, planta transformada ou sua parte com pelo menos um composto inibidor de PPO; (c) determinação se a célula vegetal, tecido vegetal, planta ou sua parte é afetada pelo inibidor ou composto inibidor; e (d) identificação ou seleção da célula vegetal, tecido vegetal, planta transformada ou sua parte.
[029] A presente invenção também é realizada em proteínas PPO que sofreram mutação purificadas que contêm as mutações descritas no presente, que são úteis em estudos de modelagem molecular para projetar aumentos adicionais da tolerância a herbicidas. Métodos de purificação de proteínas são bem conhecidos e podem ser facilmente realizados utilizando produtos disponíveis comercialmente ou métodos especialmente projetados, conforme descrito, por exemplo, em Protein Biotechnology, Walsh e Headon (Wiley, 1994).
[030] Em outra realização, a presente invenção refere-se a uma combinação útil para o controle de ervas, que compreende (a) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo PPO mutado de acordo com a presente invenção, em que o polinucleotídeo é capaz de ser expresso em uma planta de forma a fornecer àquela planta tolerância a herbicidas inibidores de PPO; e (b) um herbicida inibidor de PPO.
[031] Em outra realização, a presente invenção refere-se a um processo de preparação de combinação útil para controle de ervas que compreende (a) fornecimento de polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo PPO mutado de acordo com a presente invenção, em que o polinucleotídeo é capaz de ser expresso em uma planta, de forma a fornecer àquela planta tolerância a herbicidas inibidores de PPO; e (b) fornecimento de herbicida inibidor de PPO.
[032] Em uma realização preferida, a mencionada etapa de fornecimento de polinucleotídeo compreende o fornecimento de plantas que contêm o polinucleotídeo.
[033] Em outra realização preferida, a mencionada etapa de fornecimento de polinucleotídeo compreende o fornecimento de sementes que contêm o polinucleotídeo.
[034] Em outra realização preferida, o mencionado processo compreende adicionalmente uma etapa de aplicação do herbicida inibidor de PPO à semente.
[035] Em outra realização, a presente invenção refere-se ao uso de combinações úteis para o controle de ervas, que compreendem (a) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo PPO mutado de acordo com a presente invenção, em que o polinucleotídeo é capaz de ser expresso em plantas de forma a fornecer àquela planta tolerância a herbicida inibidor de PPO; e (b) um herbicida inibidor de PPO, para controlar ervas em um local de cultivo de plantas.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[036] A Figura 1 exibe um alinhamento de sequência de aminoácidos de diversas sequências PPO1 e PPOP2. As regiões conservadas são indicadas em cinza claro, cinza e preto.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[037] Os artigos “um” e “uma” são utilizados no presente para designar um ou mais de um (ou seja, pelo menos um) objeto gramatical do artigo. Como forma de exemplo, “um elemento” indica um ou mais elementos.
[038] Da forma utilizada no presente, a expressão “que compreende” ou variações tais como “compreende” ou “compreendendo”” serão compreendidas como indicando a inclusão de um elemento, número inteiro ou etapa indicada, ou grupo de elementos, números inteiros ou etapas, mas não a exclusão de nenhum outro elemento, número inteiro ou etapa, ou grupo de elementos, números inteiros ou etapas.
[039] Os inventores da presente invenção descobriram que a tolerância ou resistência de plantas a herbicidas inibidores de PPO pôde aumentar notadamente por meio da sobre-expressão de um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PPO mutado que compreende a sequência descrita em SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos.
[040] A presente invenção refere-se a um método de controle de vegetação indesejada em um local de cultivo de plantas, em que o método compreende as etapas de: a. fornecimento, no mencionado local, de plantas que compreendem pelo menos um ácido nucleico que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma protoporfirinogênio oxidase do tipo selvagem ou protoporfirinogênio oxidase que sofreu mutação (PPO mutada) que é resistente ou tolerante a um herbicida inibidor de PPO; e b. aplicação ao mencionado local de quantidade eficaz do mencionado herbicida.
[041] A expressão “controle de vegetação indesejada” deve ser compreendida como indicando a morte de ervas e/ou o retardamento ou inibição de outra forma do crescimento normal das ervas. Ervas, no sentido mais amplo, são compreendidas como indicando todas as plantas que crescem em locais onde são indesejadas, tais como locais de cultivo de plantas (produtoras). As ervas de acordo com a presente invenção incluem, por exemplo, ervas dicotiledôneas e monocotiledôneas. Ervas dicotiledôneas incluem, mas sem limitações, ervas dos gêneros: Sinapis, Lepidium, Galium, Stellaria, Matricaria, Anthemis, Galinsoga, Chenopodium, Urtica, Senecio, Amaranthus, Portulaca, Xanthium, Convolvulus, Ipomoea, Polygonum, Sesbania, Ambrosia, Cirsium, Carduus, Sonchus, Solanum, Rorippa, Rotala, Lindernia, Lamium, Veronica, Abutilon, Emex, Datura, Viola, Galeopsis, Papaver, Centaurea, Trifolium, Ranunculus e Taraxacum. Ervas monocotiledôneas incluem, mas sem limitações, ervas dos gêneros: Echinochloa, Setaria, Panicum, Digitaria, Phleum, Poa, Festuca, Eleusine, Brachiaria, Lolium, Bromus, Avena, Cyperus, Sorghum, Agropyron, Cynodon, Monochoria, Fimbristyslis, Sagittaria, Eleocharis, Scirpus, Paspalum, Ischaemum, Sphenoclea, Dactyloctenium, Agrostis, Alopecurus e Apera. Além disso, as ervas de acordo com a presente invenção podem incluir, por exemplo, plantas produtoras que estão crescendo em locais indesejados. Uma possível planta de milho que se encontra em um campo que compreende predominantemente plantas de soja, por exemplo, pode ser considerada erva se a planta de milho for indesejada no campo de plantas de soja.
[042] O termo “planta” é utilizado no seu sentido mais amplo por referir-se a material orgânico e destinar-se a englobar organismos eucarióticos que são membros do reino vegetal, cujos exemplos incluem, mas sem limitações, plantas vasculares, legumes, grãos, flores, árvores, ervas, arbustos, gramas, vinhas, samambaias, musgos, fungos, algas etc., bem como clones, brotos e partes de plantas utilizadas para propagação assexuada (tais como cortes, sementes, brotos, rizomas, caules subterrâneos, tufos, coroas, bulbos, cormos, tubérculos, rizomas, plantas/tecidos produzidos em cultivo de tecidos, etc.). O termo “planta” engloba adicionalmente plantas inteiras, ancestrais e prole das plantas e partes de plantas, incluindo sementes, brotos, caules, folhas, raízes (incluindo tubérculos), flores, floretes, frutos, pedículos, pedúnculos, estames, anteras, estigmas, estilos, ovários, pétalas, sépalas, carpelos, extremidades de raízes, tampas de raízes, pelos de raízes, pelos de folhas, pelos de sementes, grãos de pólen, microesporos, cotilédone, hipocotilédone, epicotilédone, xilema, floema, parênquima, endosperma, célula de companhia, célula de guarda e quaisquer outros órgãos, tecidos e células de plantas, tecidos e órgãos, em que cada um dos mencionados acima compreende o gene/ácido nucleico de interesse. O termo “planta” também engloba células vegetais, cultivos de suspensão, tecido de calo, embriões, regiões meristemáticas, gametófitos, esporófitos, pólen e microesporos, novamente em que cada um dos mencionados acima compreende o gene/ácido nucleico de interesse.
[043] Plantas que são particularmente úteis nos métodos de acordo com a presente invenção incluem todas as plantas que pertencem à superfamília Viridiplantae, particularmente plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas, incluindo legumes de forragem ou feno, plantas ornamentais, safras alimentícias, árvores ou arbustos selecionados a partir da relação que compreende Acer spp, Actinidia spp, Abelmoschus spp, Agave sisalana, Agropyron spp, Agrostis stolonifera, Allium spp, Amaranthus spp, Ammophila arenaria, Annanas comosus, Annona spp, Apium graveolens, Arachis spp, Artocarpus spp, Asparagus officinalis, Avena spp (por exemplo, Avena sativa, Avena fatua, Avena byzantina, Avena fatua var. sativa, Avena hybrida), Averrhoa carambola, Bambusa sp, Benincasa hispida, Bertholletia excelsea, Beta vulgaris, Brassica spp (por exemplo, Brassica napus, Brassica rapa spp (canola, colza oleaginosa, nabo silvestre)), Cadaba farinosa, Camellia sinensis, Canna indica, Cannabis sativa, Capsicum spp, Carex elata, Carica papaya, Carissa macrocarpa, Carya spp, Carthamus tinctorius, Castanea spp, Ceiba pentandra, Cichorium endivia, Cinnamomum spp, Citrullus lanatus, Cidtrus spp, Cocos spp, Coffea spp, Colocasia esculenta, Cola spp, Corchorus sp, Coriandrum sativum, Corylus spp, Crataegus spp, Crocus sativus, Cucurbita spp, Cucumis spp, Cynara spp, Daucus carota, Desmodium spp, Dimocarpus longan, Dioscorea spp, Diospyros spp, Echinochloa spp, Elaeis (por exemplo, Elaeis guineenses, Elaeis oleifera), Eleusine coracana, Eragrostis tef, Erianthus sp, Eriobotrya japonica, Eucalyptus sp, Eugenia uniflora, Fagopyrum spp, Fagus spp, Festuca arundinacea, Ficus carica, Fortunella spp, Fragaria spp, Gingko biloba, Glycine spp (por exemplo, Glycine max, Soja hispida ou Soja max), Gossypium hirsutum, Helianthus spp (por exemplo, Helianthus annuus), Hemerocallis fulva, Hibiscus spp, Hordeum spp (por exemplo, Hordeum vulgare), Ipomoea batatas, Juglans spp, Lactuca sativa, Lathyrus spp, Lens culinaris, Linum usitatissimum, Litchi chinensis, Lotus spp, Luffa acutangula, Lupinus spp, Luzula sylvatica, Lycopersicon spp (por exemplo, Lycopersicon esculentum, Lycopersicon lycopersicum, Lycopersicon pyriforme), Macrotyloma spp, Malus spp, Malpighia emarginata, Mammea americana, Mangifera indica, Manihot spp, Manikara zapota, Medicago sativa, Melilotus spp, Mentha spp, Miscanthus sinensis, Momordica spp, Morus nigra, Musa spp, Nicotiana spp, Olea spp, Opuntia spp, Ornithopus spp, Oryza spp (por exemplo, Oryza sativa, Oryza latifolia), Panicum miliaceum, Panicum virgatum, Passiflora edulis, Pastinaca sativa, Pennisetum sp, Persea spp, Petroselinum crispum, Phalaris arundinacea, Phaseolus spp, Phleum pratense, Phoenix spp, Phragmites australis, Physalis spp, Pinus spp, Pistacia vera, Pisum spp, Poa spp, Populus spp, Prosopis spp, Prunus spp, Psidium spp, Punica granatum, Pyrus communis, Quercus spp, Raphanus sativus, Rheum rhabarbarum, Ribes spp, Ricinus communis, Rubus spp, Saccharum spp, Salix sp, Sambucus sp, Secale cerealke, Sesamum spp, Sinapsis sp, Solanum spp (por exemplo, Solanum tuberosum, Solanum integrifolium ou Solanum lycopersicum), Sorghum bicolor, Spinacia spp, Syzygium spp, Tagetes spp, Tamarindus indica, Theobroma cacao, Trifolium spp, Tripsacum dactyloides, Triticosecale rimpaui, Triticum spp (por exemplo, Triticum aestivum, Triticum durum, Triticum turgidum, Triticum hybernum, Triticum macha, Triticum sativum, Triticum monococcum ou Triticum vulgare), Tropaeolum minus, Tropaeolum majus, Vaccinium spp, Vicia spp, Vigna spp, Viola odorata, Vitis spp, Zea mays, Zizania palustris, Ziziphus spp, amaranto, alcachofra, aspargo, brócolis, couve de Bruxelas, repolho, canola, cenoura, couve-flor, aipo, couve-manteiga, linho, couve, lentilhas, colza oleaginosa, quiabo, cebola, batata, arroz, soja, morango, beterraba, cana de açúcar, girassol, tomate, abóbora, chá e algas, entre outras. Segundo uma realização preferida da presente invenção, a planta é uma planta produtora. Exemplos de plantas produtoras incluem, entre outras, soja, girassol, canola, alfafa, colza, algodão, tomate, batata ou fumo. De preferência adicional, a planta é uma planta monocotiledônea, tal como cana de açúcar. De preferência adicional, a planta é um cereal, tal como arroz, milho, trigo, cevada, milheto, centeio, sorgo ou aveia.
[044] Em uma realização preferida, a planta foi anteriormente produzida por meio de um processo que compreende a preparação recombinante de plantas por meio da introdução e sobre-expressão de um transgene PPO do tipo selvagem ou que sofreu mutação de acordo com a presente invenção, conforme descrito com mais detalhes a seguir.
[045] Em outra realização preferida, a planta foi produzida anteriormente por meio de um processo que compreende a mutagênese in situ de células vegetais, para obter células vegetais que expressam PPO mutada.
[046] Conforme descrito no presente, os ácidos nucleicos de acordo com a presente invenção encontram uso no aumento da tolerância a herbicidas de plantas que compreendem nos seus genomas um gene que codifica uma proteína PPO do tipo selvagem ou que sofreu mutação tolerante a herbicidas. Esse gene pode ser um gene endógeno ou transgene, conforme descrito a seguir.
[047] Em outra realização, portanto, a presente invenção refere-se a um método de aumento ou amplificação da resistência ou tolerância de plantas a herbicidas inibidores de PPO, em que o método compreende a sobre- expressão de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PPO mutado que compreende a sequência descrita em SEQ ID N° 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos.
[048] Além disso, em certas realizações, os ácidos nucleicos de acordo com a presente invenção podem receber qualquer combinação de sequências de polinucleotídeos de interesse, a fim de criar plantas com fenótipo desejado. Os ácidos nucleicos de acordo com a presente invenção podem, por exemplo, receber quaisquer outros polinucleotídeos que codificam polipeptídeos que possuem atividade pesticida e/ou inseticida, tais como as proteínas de toxinas de Bacillus thuringiensis (descritas nas Patentes Norte-Americanas n° 5.366.892, 5.747.450, 5.737.514, 5.723.756 e 5.593.881; e Geiser et al. (1986), Gene 48: 109).
[049] Como forma de exemplo, polinucleotídeos que podem receber os ácidos nucleicos de acordo com a presente invenção incluem ácidos nucleicos que codificam polipeptídeos que conferem resistência a pragas/patógenos tais como vírus, nematoides, insetos ou fungos e similares. Exemplos de polinucleotídeos que podem receber ácidos nucleicos de acordo com a presente invenção incluem polinucleotídeos que codificam: polipeptídeos que possuem atividade pesticida e/ou inseticida, tais como outras proteínas tóxicas de Bacillus thuringiensis (descritas nas Patentes Norte-Americanas n° 5.366.892, 5.747.450, 5.737.514, 5.723.756 e 5.593.881; e Geiser et al. (1986), Gene 48: 109), lectinas (Van Damme et al. (1994), Plant Mol. Biol. 24: 825, pentina (descrita na Patente Norte-Americana n° 5.981.722) e similares; características desejáveis para resistência a doenças ou herbicidas (por exemplo, genes de desintoxicação de fumonisina (Patente Norte-Americana n° 5.792.931); genes de resistência a doenças e avirulência (Jones et al. (1994), Science 266: 789; Martin et al. (1993), Science 262: 1432; Mindrinos et al. (1994), Cell 78: 1089); mutantes de acetolactato sintase (ALS) que geram resistência a herbicidas tais como as mutações S4 e/ou Hra; resistência a glifosato (por exemplo, gene 5-enolpirovilshikimato-3-fosfato sintase (EPSPS), descrito nas Patentes Norte-Americanas n° 4.940.935 e 5.188.642; ou o gene glifosato N- acetiltransferase (GAT), descrito em Castle et al. (2004), Science, 304: 11511154; e nos Pedidos de Patente Norte-Americanos publicados n° 20070004912, 20050246798 e 20050060767)); resistência a glufosinato (por exemplo, genes de fosfinotricino acetil transferase PAT e BAR, descritos nas Patentes Norte- Americanas n° 5.561.236 e 5.276.268); resistência a herbicidas incluindo sulfonil ureia, DHT (2,4-D) e herbicidas PPO (por exemplo, glifosato acetil transferase, arilóxi alcanoato dioxigenase, acetolactato sintase e protoporfirinogênio oxidase); citocromo P450 ou sua variante que confere resistência a herbicidas ou tolerância, entre outros, a herbicidas HPPD (Pedido de Patente Norte- Americano com número de série 12/156.247; Patentes Norte-Americanas n° 6.380.465, 6.121.512, 5.349.127, 6.649.814 e 6.300.544; e Pedido de Patente PCT publicado n° WO 2007000077); e características desejáveis para o processamento ou produtos de processo tais como óleo alto (por exemplo, Patente Norte-Americana n° 6.232.529); óleos modificados (tais como genes dessaturase de ácidos graxos (Patente Norte-Americana n° 5.952.544; WO 94/11516)); amidos modificados (tais como ADPG pirofosforilases (AGPase), sintases de amido (SS), enzimas de ramificação de amido (SBE) e enzimas de desramificação de amido (SDBE)); e polímeros ou bioplásticos (por exemplo, Patente Norte-Americana n° 5.602.321; betacetotiolase, póli-hidroxibutirato sintase e acetoacetil-CoA reductase (Schubert et al. (1988), J. Bacteriol. 170: 5837-5847) facilitam a expressão de póli-hidroxialcanoatos (PHAs)); cujas revelações são incorporadas ao presente como referência.
[050] Em uma realização preferida, a planta compreende pelo menos um ácido nucleico heterólogo adicional que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica uma enzima de tolerância a herbicidas selecionada, por exemplo, a partir do grupo que consiste de 5-enolpiruvilshikimato-3-fosfato sintase (EPSPS), glifosato acetil transferase (GAT), citocromo P450 mono- oxigenase, fosfinotricino acetiltransferase (PAT), aceto-hidroxiácido sintase (AHAS; EC 4.1.3.18, também conhecida como acetolactato sintase oui ALS), hidroxifenil piruvato dioxigenase (HPPD), fitoeno dessaturase (PD) e enzimas de degradação de dicamba conforme descrito em WO 02/068607 ou enzimas de degradação de derivados de ácido fenoxiacético e ácido fenoxipropiônico, conforme descrito em WO 2008141154 ou WO 2005107437. As combinações geradas podem também incluir diversas cópias de qualquer um dos polinucleotídeos de interesse.
[051] Geralmente, o termo “herbicida” é utilizado no presente para indicar um ingrediente ativo que mata, controla ou prejudica de outra forma o crescimento das plantas. A quantidade ou concentração preferida do herbicida é “quantidade eficaz” ou “concentração eficaz”. Por “quantidade eficaz” e “concentração eficaz”, indica-se quantidade e concentração, respectivamente, que é suficiente para matar ou inibir o crescimento de uma planta, tecido vegetal, célula vegetal ou célula hospedeira do tipo selvagem similar, mas a mencionada quantidade não mata nem inibe tão severamente o crescimento das plantas resistentes a herbicidas, tecidos vegetais, células vegetais e células hospedeiras de acordo com a presente invenção. Tipicamente, a quantidade eficaz de um herbicida é uma quantidade rotineiramente utilizada em sistemas de produção agrícola para matar ervas de interesse. Essa quantidade é conhecida dos técnicos comuns no assunto. A atividade herbicida é exibida por herbicidas úteis para a presente invenção quando estes são aplicados diretamente à planta ou ao local da planta em qualquer estágio de crescimento ou antes do plantio ou emergência. O efeito observado depende da espécie vegetal a ser controlada, do estágio de crescimento da planta, dos parâmetros de aplicação de diluição e tamanho de gotas de pulverização, do tamanho de partículas de componentes sólidos, das condições ambientais no momento do uso, do composto específico empregado, dos adjuvantes específicos e veículos empregados, do tipo de solo e similares, bem como da quantidade de substância aplicada. Estes e outros fatores podem ser ajustados como é conhecido na técnica para promover a ação herbicida seletiva ou não seletiva. Geralmente, prefere-se aplicar o herbicida pós-emergência a vegetação indesejável relativamente imatura para atingir o controle máximo das ervas.
[052] Por planta “tolerante a herbicidas” ou “resistente a herbicidas”, indica-se que a planta é tolerante ou resistente a pelo menos um herbicida em nível que normalmente mataria ou inibiria o crescimento de plantas normais ou do tipo selvagem. Por “proteína PPO do tipo selvagem ou que sofreu mutação tolerante a herbicidas” ou “proteína PPO do tipo selvagem ou que sofreu mutação resistente a herbicidas”, indica-se que essa proteína exibe atividade de PPO mais alta, com relação à atividade de PPO de uma proteína PPO do tipo selvagem, na presença de pelo menos um herbicida que conhecidamente interfere com a atividade de PPO em concentração ou nível do herbicida que conhecidamente inibe a atividade de PPO da proteína PPO mutada do tipo selvagem. Além disso, a atividade de PPO dessa proteína PPO mutada tolerante a herbicidas ou resistente a herbicidas pode ser denominada no presente atividade de PPO “tolerante a herbicidas” ou “resistente a herbicidas”.
[053] Geralmente, caso os herbicidas inibidores de PPO (também denominados compostos A) e/ou os compostos herbicidas B conforme descrito no presente, que podem ser empregados no contexto da presente invenção, sejam capazes de formar isômetros geométricos, tais como isômeros E/Z, é possível utilizar ambos, os isômeros puros e suas misturas, nas composições úteis para a presente invenção. Caso os herbicidas inibidores de PPO A e/ou os compostos herbicidas B conforme descrito no presente possuam um ou mais centros de quiralidade e, consequentemente, estejam presentes na forma de enantiômeros ou diaestereômeros, é possível utilizar ambos, os enantiômeros puros, diaestereômeros e suas misturas, nas composições de acordo com a presente invenção. Caso os herbicidas inibidores de PPO A e/ou os compostos herbicidas B conforme descrito no presente contenham grupos funcionais ionizáveis, eles podem também ser empregados na forma de seus sais aceitáveis para uso agrícola. São geralmente apropriados os sais desses cátions e os sais de adição de ácidos desses ácidos cujos cátions e ânions, respectivamente, não possuem efeito adverso sobre a atividade dos compostos ativos. Os cátions preferidos são os íons dos metais alcalinos, preferencialmente de lítio, sódio e potássio, dos metais alcalino-terrosos, preferencialmente de cálcio e magnésio, e dos metais de transição, preferencialmente de manganês, cobre, zinco e ferro, além de amônio e amônio substituído, em que um a quatro átomos de hidrogênio são substituídos por alquila C1-C4, hidroxialquila C1-C4, alcóxi C1-C4 alquila C1C4, hidroxialcóxi C1-C4 alquila C1-C4, fenila ou benzila, preferencialmente amônio, metilamônio, isopropilamônio, dimetilamônio, di-isopropilamônio, trimetilamônio, heptilamônio, dodecilamônio, tetradecilamônio, trimetilamônio, heptilamônio, dodecilamônio, tetradecilamônio, tetrametilamônio, tetraetilamônio, tetrabutilamônio, 2-hidroxietilamônio (sal de olamina), 2-(2-hidroxiet-1-óxi)et-1-ilamônio (sal de diglicolamina), di(2- hidroxiet-1-il)amônio (sal de diolamina), tris(2-hidroxietil)amônio (sal de trolamina), tris(2-hidroxipropil)amônio, benziltrimetilamônio, benziltrietilamônio, N,N,N-trimetiletanolamônio (sal de colina), adicionalmente íons de fosfônio, íons de sulfônio, preferencialmente tri(alquil C1-C4) sulfônio, tal como trimetilsulfônio, e íons de sulfoxônio, preferencialmente tri(alquil C1-C4) sulfoxônio, e finalmente os sais de aminas polibásicas tais como N,N-bis-(3-aminopropil)metilamina e dietilenotriamina. Ânions de sais de adição de ácidos úteis são principalmente cloreto, brometo, fluoreto, iodeto, hidrogênio sulfato, metilsulfato, sulfato, di- hidrogênio fosfato, hidrogênio fosfato, nitrato, bicarbonato, carbonato, hexafluorossilicato, hexafluorofosfato, benzoato e também os ânions de ácidos alcanoicos C1-C4, preferencialmente formato, acetato, propionato e butirato.
[054] Os herbicidas inibidores de PPO A e/ou os compostos herbicidas B conforme descrito no presente que contêm um grupo carboxila podem ser empregados na forma de ácido, na forma de sal apropriado para uso agrícola conforme mencionado acima ou na forma de derivado aceitável para uso agrícola, tal como amidas, tais como mono e dialquilamidas C1-C6 ou arilamidas, como ésteres, tais como alil ésteres, propargil ésteres, alquil C1-C10 ésteres, alcoxialquil ésteres, tefuril ((tetra-hidrofuran-2-il)metil) ésteres e também como tioésteres, tais como alquiltio C1-C10 ésteres. Mono e dialquilamidas C1-C6 preferidas são metil e dimetilamidas. Arilamidas preferidas são, por exemplo, as anilidas e as 2-cloroanilidas. Alquil ésteres preferidos são, por exemplo, metil, etil, propil, isopropil, butil, isobutil, pentil, mexil (1-metil-hexil), meptil (1-metil-heptil), heptil, octil ou iso-octil (2-etil- hexil) ésteres. Alcóxi C1-C4 alquil C1-C4 ésteres preferidos são os alcóxi C1C4 etil ésteres de cadeia linear ou ramificados, tais como 2-metoxietil, 2- etoxietil, 2-butoxietil (butotil), 2-butoxipropil ou 3-butoxipropil éster. Um exemplo de alquiltio C1-C10 éster de cadeia linear ou ramificado é etiltio éster.
[055] Exemplos de herbicidas inibidores de PPO que podem ser utilizados de acordo com a presente invenção são acifluorfen, acifluorfen sódio, aclonifen, azafenidin, bencarbazona, benzofendizona, bifenox, butafenacil, carfentrazona, carfentrazona etil, clometoxifen, cinidon etil, fluazolato, flufempir, flufempir etil, flumiclorac, flumiclorac pentil, flumioxazin, fluoroglicofen, fluroglicofen eitl, flutiacet, flutiacet metil, fomesafen, halosafen, lactofen, oxadiargil, oxadiazon, oxifluorfen, pentoxazona, profluazol, piraclonil, piraflufen, piraflufen etil, saflufenacil, sulfentrazona, tidiazimina, tiafenacil, clornitrofen, flumipropina, fluoronitrofen, flupropacil, furiloxifen, nitrofluorfen, [3- [2-cloro-4- fluoro-5-(1-metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3- il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), N-etil-3,2,6- dicloro-4-trifluorometilfenóxi-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 45209892-9), N-tetra-hidrofurfuril-3-(2,6-dicloro-4-trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H- pirazolo-1-carboxamida (CAS 915396-43-9), N-etil-3-(2-cloro-6-fluoro-4- trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 452099-05-7), N- tetra-hidrofurfuril-3-(2-cloro-6-fluoro-4-trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1- carboxamida (CAS 452100-03-7), 3- [7-fluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro- 2H-benzo [1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo- [1,3,5]triazin-2,4-diona (CAS 451484-50-7), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di- hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-724), 2-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il)- 4,5,6,7-tetra-hidroisoindolo-1,3-diona (CAS 1300118-96-0), 1-metil-6- trifluorometil-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H- benzo [1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidino-2,4-diona, (E)-4- [2-cloro-5- [4-cloro-5- (difluorometóxi)-1H-metilpirazol-3-il]-4-fluorofenóxi]-3-metoxibut-2-enoato de metila (CAS 948893-00-3), 3- [7-cloro-5-fluoro-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol- 4-il]-1-metil-6-(trifluorometil)-1H-pirimidino-2,4-diona (CAS 212754-02-4) e uracilas da fórmula III:
Figure img0001
em que: - R30 e R31, independentemente entre si, são F, Cl ou CN; - R32 é O ou S; - R33 é H, F, Cl, CH3 ou OCH3; - R34 é CH ou N; - R35 é O ou S; - R36 é H, CN, CH3, CF3, OCH3, OC2H5, SCH3, SC2H5, (CO)OC2H5 ou CH2R38, em que R38 é F, Cl, OCH3, SCH3, SC2H5, CH2F, CH2Br ou CH2OH; e - R37 é (alquil C1-C6)amino, (dialquil C1-C6)amino, (NH)OR39, OH, OR40 ou SR40, em que: - R39 é CH3, C2H5 ou fenila; e - R40 é, independentemente entre si, alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C3-C6, haloalquila C1-C6, alcóxi C1-C6 alquila C1-C6, alcóxi C1-C6 alcóxi C1-C6 alquila C1-C6, cianoalquila C2-C6, alcoxicarbonila C1-C4 alquila C1C4, alquilcarbonilamino C1-C4, alquilsulfinila C1-C6 alquila C1-C6, alquilsulfonila C1-C6 alquila C1-C6, dialcóxi C1-C6 alquila C1-C6, alquilcarbonilóxi C1-C6 alquila C1-C6, fenilcarbonilalquila C1-C6, tri(alquila C1-C3) sililalquila C1-C6, tri(alquila C1C3) sililalquenila C1-C6, tri(alquila C1-C3) sililalquinila C1-C6, tri(alquila C1-C3) sililalcóxi C1-C6 alquila C1-C6, dimetilamino, tetra-hidropiranila, tetra- hidrofuranilalquila C1-C3, fenilalcóxi C1-C6 alquila C1-C6, fenilalquila C1-C3, piridilalquila C1-C3, piridila, fenila, em que piridilas e fenilas, independentemente entre si, são substituídos por um a cinco substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halogênio, alquila C1-C3 ou haloalquila C1-C2; cicloalquila C3-C6 ou cicloalquila C3-C6 alquila C1-C4, em que os cicloalquilas, independentemente entre si, são não substituídos ou substituídos por um a cinco substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halogênio, alquila C1-C3 e haloalquila C1-C2; incluindo seus sais de amônio ou sais de metais alcalinos aceitáveis para uso agrícola.
[056] Herbicidas inibidores de PPO preferidos que podem ser utilizados de acordo com a presente invenção são: acifluorfen, acifluorfen sódio, azafenidin, bencarbazona, benzofendizona, butafenacil, carfentrazona etil, cinidon etil, flufenpir etil, flumiclorac pentil, flumioxazina, fluoroglicofen etil, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxadiazona, oxifluorfen, pentoxazona, piraflufen etil, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1- metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2- piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), N-etil-3-(2,6-dicloro-4- trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 452098-92-9), N- tetra-hidrofurfuril-3-(2,6-dicloro-4-trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1- carboxamida (CAS 915396-43-9), N-etil-3-(2-cloro-6-fluoro-4- trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 452099-05-7), N- tetra-hidrofurfuril-3-(2-cloro-6-fluoro-4-trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1- carboxamida (CAS 452100-03-7), 3- [7-fluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro- 2H-benzo [1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo- [1,3,5]triazinan-2,4-diona (CAS 451484-50-7), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di- hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-724), 2-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il)- 4,5,6,7-tetra-hidroisindol-1,3-diona (CAS 1300118-96-0); 1-metil-6-trifluorometil- 3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il)-1H- pirimidino-2,4-diona (CAS 1304113-05-0), 3- [7-cloro-5-fluoro-2-(trifluorometil)- 1H-benzimidazol-4-il]-1-metil-6-(trifluorometil)-1H-pirimidino-2,4-diona (CAS 212754-02-4); - uracilas da fórmula III.1 (correspondentes a uracilas da fórmula III, em que R30 é F, R31 é Cl, R32 é O, R33 é H, R34 é CH, R35 é O e R37 é OR40):
Figure img0002
em que: - R36 é OCH3, OC2H5, SCH3 ou SC2H5; e - R40 é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C3-C6, haloalquila C1-C6, alcóxi C1-C6 alquila C1-C6, alcóxi C1-C6 alcóxi C1-C6 alquila C1C6, cianoalquila C1-C3, fenilalquila C1-C3, piridilalquila C1-C3, cicloalquila C3-C6 ou cicloalquila C3-C6 alquila C1-C4, em que os cicloalquilas são não substituídos ou substituídos por um a cinco substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halogênio, alquila C1-C3 e haloalquila C1-C2; e - uracilas da fórmula III.2 (correspondentes a uracilas da fórmula III, em que R30 é F, R31 é Cl, R32 é O, R33 é H, R34 é N, R35 é O e R37 é OR40, em que R40 é alquila C1-C6):
Figure img0003
[057] Herbicidas inibidores de PPO particularmente preferidos que podem ser utilizados de acordo com a presente invenção são: acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, carfentrazona etil, cinidon etil, flumioxazin, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6-trifluorometil- 2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)-fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 3- [7-fluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro- 2H-benzo [1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo- [1,3,5]triazinan-2,4-diona (CAS 451484-50-7), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4- di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4) e 2-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H- benzo [1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetra-hidroisoindol-1,3-diona (CAS 130011896-0), 1-metil-6-trifluorometil-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-di- hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidino-2,4-diona (CAS 1304113-050), uracilas da fórmula III.1.1 (correspondentes a uracilas da fórmula III, em que R30 é F, R31 é Cl, R32 é O, R33 é H, R34 é CH, R35 é O, R36 é OCH3 e R37 é OR40):
Figure img0004
em que R40 é alquila C1-C6, alquenila C2-C6, alquinila C3-C6, haloalquila C1-C6, alcóxi C1-C6 alquila C1-C6, alcóxi C1-C6 alcóxi C1-C6 alquila C1C6, cianoalquila C1-C3, fenilalquila C1-C3, piridilalquila C1-C3, cicloalquila C3-C6 ou cicloalquila C3-C6 alquila C1-C4, em que os cicloalquilas são não substituídos ou substituídos por um a cinco substituintes selecionados a partir do grupo que consiste de halogênio, alquila C1-C3 e haloalquila C1-C2; é preferencialmente CH3, CH2CH2OC2H5, CH2CHF2, ciclo-hexila, (1-metilciclopropil)metila ou CH2(piridin-4-ila); - uracilas da fórmula III.2.1 (correspondentes a uracilas da fórmula III, em que R30 é F, R31 é Cl, R32 é O, R33 é H, R34 é N, R35 é O e R37 é OR40 em que R40 é CH3):
Figure img0005
e uracilas da fórmula III.2.2 (correspondentes a uracilas da fórmula III, em que R30 é F, R31 é Cl, R32 é O, R33 é H, R34 é N, R35 é O e R37 é OR40 em
Figure img0006
Os herbicidas inibidores de PPO especialmente preferidos são os herbicidas inibidores de PPO A.1 a A.14 relacionados abaixo na Tabela A.
Figure img0007
[058] Os herbicidas inibidores de PPO descritos acima que são úteis para conduzir a presente invenção são frequentemente mais bem aplicados em conjunto com um ou mais herbicidas diferentes para obter o controle de uma variedade mais ampla de vegetação indesejável. Herbicidas inibidores de PPO, por exemplo, podem ser adicionalmente utilizados em conjunto com herbicidas adicionais aos quais a planta produtora é naturalmente tolerante ou aos quais ela é resistente por meio da expressão de um ou mais transgenes adicionais conforme mencionado acima, ou aos quais ela é resistente por meio de mutagênese e métodos de cultivo conforme descrito a seguir. Quando utilizados em conjunto com outros herbicidas direcionadores, os herbicidas inibidores de PPO, aos quais a planta de acordo com a presente invenção tornou-se resistente ou tolerante, podem ser formulados com o(s) outro(s) herbicida(s), misturados em tanque com o(s) outro(s) herbicida(s) ou aplicados sequencialmente com o(s) outro(s) herbicida(s).
[059] Componentes apropriados para misturas são, por exemplo, selecionados a partir dos herbicidas da classe b1 a b15: B. Herbicidas da classe b1 a b15: b1. inibidores da biossíntese de lipídios; b2. inibidores da acetolactato sintase (inibidores de ALS); b3. inibidores da fotossíntese; b4. inibidores da protoporfirinogênio IX oxidase; b5. herbicidas branqueadores; b6. inibidores de enolpiruvil shikimato 3-fosfato sintase (inibidores de EPSPS); b7. inibidores da glutamino sintetase; b8. inibidores de 7,8-di-hidropteroato sintase (inibidores de DHP); b9. inibidores da mitose; b10. inibidores da síntese de ácidos graxos com cadeia muito longa (inibidores de VLCFA); b11. inibidores da biossíntese de celulose; b12. herbicidas desacopladores; b13. herbicidas auxínicos; b14. inibidores do transporte de auxina; e b15. outros herbicidas selecionados a partir do grupo que consiste de bromobutida, clorflurenol, clorfurenol metil, cinmetilina, cumiluron, dalapon, dazomet, difenzoquat, metilsulfato de difenzoquat, dimetipina, DSMA, dimron, endotal e seus sais, etobenzanid, flamprop, flamprop-isopropil, flamprop- metil, flamprop-M-isopropil, flamprop-M-metil, flurenol, flurenol-butil, flurprimidol, fosamina, fosamina-amônio, indanofan, indaziflam, hidrazida maleica, mefluideto, metam, metiozolina (CAS 403640-27-7), metil azida, brometo de metila, metildimron, iodeto de metila, MSMA, ácido oleico, oxaciclomefona, ácido pelargônico, piributicarb, quinoclamina, triaziflam, tridifano e 6-cloro-3-(2- ciclopropil-6-metilfenóxi)-4-piridazinol (CAS 499223-49-3), seus sais e ésteres; incluindo seus sais ou derivados aceitáveis para uso agrícola.
[060] Exemplos de herbicidas B que podem ser utilizados em combinação com os herbicidas inibidores de PPO de acordo com a presente invenção são: b1. do grupo dos inibidores da biossíntese de lipídios: herbicidas ACC tais como aloxidim, aloxidim sódio, butroxidim, cletodim, clodinafop, clodinafop propargil, cicloxidim, ci-halofop, ci-halofop butil, diclofop, diclofop metil, fenoxaprop, fenoxaprop etil, fenoxaprop-P, fenoxaprop-P etil, fluazifop, fluazifop butil, fluazifop-P, fluazifop-P butil, haloxifop, haloxifop metil, haloxifop- P, haloxifop-P metil, metamifop, pinoxaden, profoxidim, propaquizafop, quizalofop, quizalofop etil, quizalofop tefuril, quizalofop-P, quizalofop-P etil, quizalofop-P tefuril, setoxidim, tepraloxidim, tralcoxidim, 4-(4’-cloro-4-ciclopropil- 2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-5-hidróxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-ona (CAS 1312337-72-6); 4-(2’-4’-dicloro-4-ciclopropil [1,1’-bifenil]-3-il)-5-hidróxi-2,2,6,6- tetrametil-2H-piran-3(6H)-ona (CAS 1312337-45-3); 4-(4’-cloro-4-etil-2’- fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-5-hidróxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-ona (CAS 1033757-93-5); 4-(2’,4’-dicloro-4-etil [1,1’-bifenil]-3-il)-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran- 3,5(4H,6H)-diona (CAS 1312340-84-3); 5-(acetilóxi)-4-(4’-cloro-4-ciclopropil-2’- fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-3,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-ona (CAS 1312337-48-6); 5-(acetilóxi)-4-(2’-4’-dicloro-4-ciclopropil- [1,1’-bifenil]-3-il)-3,6-di- hidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-ona; 5-(acetilóxi)-4-(4’-cloro-4-etil-2’- fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-3,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-ona (CAS 1312340-82-1); 5-(acetilóxi)-4-(2’,4’-dicloro-4-etil [1,1’-bifenil]-3-il)-3,6-di-hidro- 2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-ona (CAS 1033760-55-2); metil éster de ácido 4-(4’- cloro-4-ciclopropil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-5,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo- 2H-piran-3-ilcarbônico (CAS 1312337-51-1); metil éster de ácido 4-(2’,4’-dicloro- 4-ciclopropil- [1,1’-bifenil]-3-il)-5,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3- ilcarbônico; metil éster de ácido 4-(4’-cloro-4-etil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-5,6-di- hidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-ilcarbônico (CAS 1312340-83-2); metil éster de ácido 4-(2’,4’-dicloro-4-etil [1,1’-bifenil]-3-il)-5,6-di-hidro-2,2,6,6- tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-ilcarbônico (CAS 1033760-58-5); e herbicidas não de ACC tais como benfuresato, butilato, cicloato, dalapon, dimepiperato, EPTC, esprocarb, etofumesato, flupropanato, molinato, orbencarb, pebulato, prossulfocarb, TCA, tiobencarb, tiocarbazil, trialato e vernolato; b2. do grupo dos inibidores de ALS: sulfonilureias tais como amidossulfuron, azinsulfuron, bensulfuron, bensulfuron metil, clorimuron, clorimuron etil, clorsulfuron, cinossulfuron, ciclossulfamuron, etametsulfuron, etametsulfuron metil, etoxissulfuron, flazassulfuron, flucetossulfuron, flupirsulfuron, flupirsulfuron metil sódio, foransulfuron, halossulfuron, halossulfuron metil, imazossulfuron, iodossulfuron, iodossulfuron metil sódio, iofensulfuron, iofensulfuron sódio, mesossulfuron, metazossulfuron, metsulfuron, metsulfuron metil, nicossulfuron, ortossulfamuron, oxassulfuron, primissulfuron, primmissulfuron metil, propirissulfuron, prossulfuron, pirazossulfuron, pirazossulfuron etil, rinsulfuron, sulfometuron, sulfometuron metil, sulfossulfuron, tifensulfuron, tifensulfuron metil, triassulfuron, tribenuron, tribenuron metil, trifloxissulfuron, triflussulfuron, triflussulfuron metil e tritossulfuron, imidazolinonas tais como imazametabenzo, imazametabenzo metil, imazamox, imazapic, imazapir, imazaquin e imazetapir, herbicidas de triazolopirimidina e sulfonanillidas tais como cloransulam, cloransulam metil, diclossulam, flumetsulam, florassulam, metossulam, penoxsulam, pirimissulfan e piroxsulam, benzoatos de pirimidinila tais como bispiribac, bispiribac sódio, piribenzoxim, piriftalid, piriminobac, piriminobac metil, piritiobac, piritiobac sódio, 1-metiletil éster de ácido 4- [ [ [2- [(4,6-dimetóxi-2-pirimidinil)óxi]fenil]metil]amino]-benzoico (CAS 420138-41-6), propil éster de ácido 4- [ [ [2- [(4,6-dimetóxi-2- piridimidinil)óxi]fenil]metil]amino]-benzoico (CAS 420138-40-5), N-(4- bromofenil)-2- [(4,6-dimetóxi-2-pirimidinil)óxi]benzenometanamina (CAS 420138-01-8), herbicidas de sulfonilaminocarboniltriazolinona tais como flucarbazona, flucarbazona sódio, propoxicarbazona, propoxicarbazona sódio, tiencarbazona e tiencarbazona metil; e triafamona; dentre estes, uma realização preferida da presente invenção refere-se às composições que compreendem pelo menos um herbicida de imidazolinona; b3. do grupo dos inibidores da fotossíntese: amicarbazona, inibidores do fotossistema II, tais como herbicidas de triazina, incluindo de clorotriazina, triazinonas, triazindionas, metiltiotriazinas e piridazinonas tais como ametrina, atrazina, cloridazona, cianazina, desmetrina, dimetametrina, hexazinona, metribuzina, prometo, prometrina, propazina, simazina, simetrina, terbumeton, terbutilazina, terbutrina e trietazina, aril ureia como clorobromuron, clorotoluron, cloroxuron, dimefuron, diuron, fluometuron, isoproturon, isouron, linuron, metamitron, metabenzotiazuron, metobenzuron, metoxuron, monolinuron, neburon, siduron, tebutiuron e tiadiazuron, carbamatos de fenila tais como desmedifam, carbutilat, fenmedifam, fenmedifam etil, herbicidas de nitrila tais como bromofenoxim, bromoxinil e seus sais e ésteres, ioxinil e seus sais e ésteres, uracilas tais como bromacil, lenacil e terbacil e bentazon e bentazon sódio, piridato, piridafol, pentanoclor e propanil e inibidores do fotossistema I tais como diquat, dibrometo de diquat, paraquat, dicloreto de paraquat e dimetilsulfato de paraquat. Dentre estes, uma realização preferida da presente invenção refere-se às composições que compreendem pelo menos um herbicida de aril ureia. Dentre estes, de forma similar, uma realização preferida da presente invenção refere-se às composições que compreendem pelo menos um herbicida de triazina. Dentre estes, de forma similar, uma realização preferida da presente invenção refere-se às composições que compreendem pelo menos um herbicida de nitrila; b4. do grupo de inibidores da protoporfirinogênio IX oxidase: acifluorfen, acifluorfen sódio, azafenidina, bencarbazona, benzofendizona, bifenox, butafenacil, carfentrazona, carfentrazona etil, clometoxifen, cinidon etil, fluazolato, flufempir, flufempir etil, flumiclorac, flumiclorac pentil, flumioxazina, fluoroglicofen, fluoroglicofen etil, flutiacet, flutiacet metil, fomesafen, halosafen, lactofen, oxadiargil, oxadiazon, oxifluorfen, pentoxazona, profluazol, piraclonil, piraflufen, piraflufen etil, saflufenacil, sulfentrazona, tidiazimin, tiafenacil, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6- trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), N-etil-3-(2,6-dicloro-4-trifluorometilfenóxi)-5-metil- 1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 452098-92-9), N-tetra-hidrofurfuril-3-(2,6-dicloro- 4-trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 915396-43-9), N- etil-3-(2-cloro-6-fluoro-4-trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 452099-05-7), N-tetra-hidrofurfuril-3-(2-cloro-6-fluoro-4-trifluorometilfenóxi)-5- metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 452100-03-7), 3- [7-fluoro-3-oxo-4-(prop-2- inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]-oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo- [1,3,5]triazinan-2,4- diona, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7- trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetra- hidroisoindolo-1,3-diona, 1-metil-6-trifluorometil-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-prop-2- inil-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidino-2,4-diona (CAS 1304113-05-0), (E)-4- [2-cloro-5- [4-cloro-5-(difluorometóxi)-1H-metilpirazol-3-il]-4- fluorofenóxi]-3-metoxibut-2-enoato de metila (CAS 948893-00-3) e 3- [7-cloro-5- fluoro-2-(trifluorometil)-1H-benzimidazol-4-il]-1-metil-6-(trifluorometil)-1H-pirimidino- 2,4-diona (CAS 212754-02-4); b5. do grupo dos herbicidas branqueadores: inibidores de PDS: beflubutamid, diflufenican, fluridona, flurocloridona, flurtamona, norflurazon, picolinafen e 4-(3-trifluorometilfenóxi)-2-(4-trifluorometilfenil)pirimidina (CAS 180608-33-7); inibidores de HPHPD: benzobiciclon, benzofenap, clomazona, isoxaflutol, mesotriona, pirassulfotol, pirazolinato, pirazoxifen, sulcotriona, tefuriltriona, tembotriona, topramezona e biciclopirona, branqueador, alvo desconhecido: aclonifen, amitrol e flumeturon; b6. do grupo dos inibidores da EPSP sintase: glifosato, glifosato isopropilamônio, glifosato potássio e glifosato trimésio (sulfosato); b7. do grupo dos inibidores da glutamino sintase: bilanafós (bialafós), bilanafós sódio, glufosinato, glufosinato-P e glufosinato amônio; b8. do grupo dos inibidores da DHP sintase: assulam; b9. do grupo dos inibidores da mitose: compostos do grupo K1: dinitroanilinas tais como benfluralin, butralin, dinitramina, etafluralin, flucloralin, orizalin, pendimetalin, prodiamina e trifluralin, fosforamidatos tais como amiprofós, amiprofós metil e butamifós, herbicidas de ácido benzoico tais como clortal, clortal dimetil, piridinas tais como ditiopir e tiazopir, benzamidas tais como propizamida e tebutam; compostos do grupo K2: clorprofam, profam e carbetamida; dentre estes, são preferidos compostos do grupo K1, particularmente dinitroanilinas; b10. do grupo dos inibidores de VLCFA: cloroacetamidas tais como acetoclor, alaclor, butaclor, dimetaclor, dimetenamid, dimetenamid P, metazaclor, metolaclor, metolaclor S, petoxamid, pretilaclor, propaclor, propisoclor e tenilclor, oxiacetanilidas tais como flufenacet e mefenacet, acetanilidas tais como difenamid, naproanilida e napropamida, tetrazolinonas tais como fentrazamida e outros herbicidas tais como compostos de anilofós, cafenstrol, fenoxassulfona, ipfencarbazona, piperofós, piroxassulfona e isoxazolina das fórmulas II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 e II.9;
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os compostos de isoxazolina da fórmula (I)I são conhecidos na técnica, por exemplo, por meio de WO 2006/024820, WO 2006/0379845, WO 2007/071900 e WO 2007/096576; dentre os inibidores de VLCFA, dá-se preferência às cloroacetamidas e oxiacetamidas; b11. do grupo dos inibidores da biossíntese de celulose: clortiamid, diclobenil, flupoxam, indaziflam, triaziflam, isoxaben e 1-ciclo-hexil-5- pentafluorofenilóxi-14- [1,2,4,6]tiatraizin-3-ilamina; b12. do grupo dos herbicidas desacopladores: dinoseb, dinoterb, DNOC e seus sais; b13. do grupo dos herbicidas auxínicos: 2,4-D e seus sais e ésteres, tais como clacifós, 2,4-DB e seus sais e ésteres, aminociclopiraclor e seus sais e ésteres, aminopiralid e seus sais tais como aminopiralid-tris(2- hidroxipropil)amônio e seus ésteres, benazolin, benazolin etil, cloramben e seus sais e ésteres, clomeprop, clopiralid e seus sais e ésteres, dicamba e seus sais e ésteres, diclorprop e seus sais e ésteres, diclorprop-P e seus sais e ésteres, fluroxipir, fluroxipir-butometil, fluroxipir-meptil, halauxifen e seus sais e ésteres (CAS 943832-60-8); MCPA e seus sais e ésteres, MCPA-tioetil, MCPB e seus sais e ésteres, mecoprop e seus sais e ésteres, mecoprop-P e seus sais e ésteres, picloram e seus sais e ésteres, quinclorac, quinmerac, TBA (2,3,6) e seus sais e ésteres e triclopir e seus sais e ésteres; b14. do grupo dos inibidores do transporte de auxina: diflufenzopir, diflufenzopir sódio, naptalam e naptalam sódio; b15. do grupo dos outros herbicidas: bromobutida, clorflurenol, clorfurenol metil, cinmetilin, cumiluron, ciclopirimorato (CAS 499223-49-3) e seus sais e ésteres, dalapon, dazomet, difenzoquat, metilsulfato de difenzoquat, dimetipin, DSMA, dimron, endotal e seus sais, etobenzanid, flamprop, flamprop isopropil, flamprop metil, flamprop-M isopropil, flamprop-M metil, flurenol, flurenol butil, flurprimidol, fosamina, fosamina amônio, indanofan, indaziflam, hidrazida maleica, mefluideto, metam, metiozolina (CAS 403640-27-7), metil azida, brometo de metila, metil dimron, iodeto de metila, MSMA, ácido oleico, oxaziclomefona, ácido pelargônico, piributicarb, quinoclamina, triaziflam e tridifano.
[061] Herbicidas B preferidos que podem ser utilizados em combinação com os herbicidas inibidores de PPO de acordo com a presente invenção são: b1. do grupo dos inibidores da biossíntese de lipídios: cletodim, clodinafop propargil, cicloxidim, ci-halofop butil, diclofop metil, fenoxaprop-P etil, fluazifop-P butil, haloxifop-P metil, metamifop, pinoxaden, profoxidim, propaquizafop, quizalofop-P etil, quizalofop-P tefuril, setoxidim, tepraloxidim, tralcoxidim, 4-(4’-cloro-4-ciclopropil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-5-hidróxi-2,2,6,6- tetrametil-2H-piran-3(6H)-ona (CAS 1312337-72-6); 4-(2’-4’-dicloro-4- ciclopropil [1,1’-bifenil]-3-il)-5-hidróxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-ona (CAS 1312337-45-3); 4-(4’-cloro-4-etil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-5-hidróxi-2,2,6,6- tetrametil-2H-piran-3(6H)-ona (CAS 1033757-93-5); 4-(2’,4’-dicloro-4-etil [1,1’- bifenil]-3-il)-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3,5(4H,6H)-diona (CAS 1312340-84-3); 5-(acetilóxi)-4-(4’-cloro-4-ciclopropil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-3,6-di-hidro- 2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-ona (CAS 1312337-48-6); 5-(acetilóxi)-4-(2’,4’- dicloro-4-ciclopropil- [1,1’-bifenil]-3-il)-3,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3- ona; 5-(acetilóxi)-4-(4’-cloro-4-etil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-3,6-di-hidro-2,2,6,6- tetrametil-2H-piran-3-ona (CAS 1312340-82-1); 5-(acetilóxi)-4-(2’,4’-dicloro-4- etil [1,1’-bifenil]-3-il)-3,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-ona (CAS 1033760-55-2); metil éster de ácido 4-(4’-cloro-4-ciclopropil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]- 3-il)-5,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-ilcarbônico (CAS 131233751-1); metil éster de ácido 4-(2’,4’-dicloro-4-ciclopropil- [1,1’-bifenil]-3-il)-5,6-di- hidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-ilcarbônico; metil éster de ácido 4-(4’- cloro-4-etil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-5,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H- piran-3-ilcarbônico (CAS 1312340-83-2); metil éster de ácido 4-(2’,4’-dicloro-4- etil [1,1’-bifenil]-3-il)-5,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-ilcarbônico (CAS 1033760-58-5); benfuresato, dimepiperato, EPTC, esprocarb, etofumesato, molinato, orbencarb, prossulfocarb, tiobencarb e trialato; b2. do grupo dos inibidores de ALS: amidossulfuron, azinsulfuron, bensulfuron metil, bispiribac sódio, clorimuron etil, clorsulfuron, cloransulam metil, ciclossulfamuron, diclossulam, etametsulfuron metil, etoxissulfuron, flazassulfuron, florassulam, flucarbazona sódio, flucetossulfuron, flumetsulam, flupirsulfuron metil sódio, foransulfuron, halossulfuron metil, imazametabenzo metil, imazamox, imazapic, imazapir, imazaquin, imazetapir, imazossulfuron, iodossulfuron, iodossulfuron metil sódio, iofensulfuron, iofensulfuron sódio, mesossulfuron, metazossulfuron, metossulam, metsulfuron metil, nicossulfuron, ortossulfamuron, oxassulfuron, penoxsulam, primissulfuron metil, propoxicarbazon sódio, propirissulfuron, prossulfuron, pirazossulfuron etil, piribenzoxim, pirimissulfan, piriftalid, piriminobac metil, piritiobac sódio, piroxsulam, rinsulfuron, sulfometuron metil, sulfossulfuron, tiencarbazona metil, tifensulfuron metil, triassulfuron, tribenuron metil, trifloxissulfuron, triflussulfuron metil, tritossulfuron e triafamona; b3. do grupo dos inibidores de fotossíntese: ametrina, amicarbazona, atrazina, bentazona, benazona sódio, bromoxinil e seus sais e ésteres, cloridazona, clorotoluron, cianazina, desmedifam, dibrometo de diquat, diuron, fluometuron, hexazinona, ioxinil e seus sais e ésteres, isoproturon, lenacil, linuron, metamitron, metabenzotiazuron, metribuzina, paraquat, dicloreto de paraquat, fenmedifam, propanil, piridato, simazina, terbutrina, terbutilazina e tidiazuron; b4. do grupo de inibidores da protoporfirinogênio IX oxidase: acifluorfen, acifluorfen sódio, azafenidina, bencarbazona, benzofendizona, butafenacil, carfentrazona etil, cinidon etil, flufempir etil, flumiclorac pentil, flumioxazina, fluoroglicofen etil, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxadiazon, oxifluorfen, pentoxazona, piraflufen etil, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra- hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S- 3100), N-etil-3-(2,6-dicloro-4-trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1- carboxamida (CAS 452098-92-9), N-tetra-hidrofurfuril-3-(2,6-dicloro-4- trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 915396-43-9), N- etil-3-(2-cloro-6-fluoro-4-trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 452099-05-7), N-tetra-hidrofurfuril-3-(2-cloro-6-fluoro-4- trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 452100-03-7), 3- [7-fluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4-oxazin-6-il]-1,5-dimetil- 6-tioxo- [1,3,5]triazinan-2,4-diona, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4- (prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), 2-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H- benzo [1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetra-hidroisoindol-1,3-diona, 1-metil-6- trifluorometil-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H- benzo [1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidino-2,4-diona e 3- [7-cloro-5-fluoro-2- (trifluorometil)-1H-benzimidazol-4-il]-1-metil-6-(trifluorometil)-1H-pirimidino-2,4- diona (CAS 212754-02-4); b5. do grupo dos herbicidas branqueadores: aclonifen, beflubutamid, benzobiciclon, clomazona, diflufenican, flurocloridona, flurtamona, isoxaflutol, mesotriona, norflurazon, picolinafen, pirassulfotol, pirazolinato, sulcotriona, tefuriltriona, tembotriona, topramezona, biciclopirona, 4-(3- trifluorometilfenóxi)-2-(4-trifluorometilfenil)pirimidina (CAS 180608-33-7), amitrol e flumeturon; b6. do grupo dos inibidores da EPSP sintase: glifosato, glifosato isopropilamônio, glifosato potássio e glifosato trimésio (sulfosato); b7. do grupo dos inibidores da glutamino sintase: glufosinato, glufosinato-P e glufosinato amônio; b8. do grupo dos inibidores da DHP sintase: assulam; b9. do grupo dos inibidores da mitose: benfluralin, ditiopir, etalfluralin, orizalin, pendimetalin, tiazopir e trifluralin; b10. do grupo dos inibidores de VLCFA: acetoclor, alaclor, anilofós, butaclor, cafenstrol, dimetenamid, dimetenamid-P, fentrazamida, flufenacet, mefenacet, metazaclor, metolaclor, metolaclor-S, naproanilida, napropamida, pretilaclor, fenoxassulfona, ipfencarbazona, piroxassulfona tenilclor e compostos de isoxazolina das fórmulas II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 e II.9, conforme mencionado acima; b11. do grupo dos inibidores da biossíntese de celulose: diclobenil, flupoxam, isoxaben e 1-ciclo-hexil-5-pentafluorofenilóxi-14- [1,2,4,6]tiatrazin-3-ilamina; b13. do grupo dos herbicidas auxínicos: 2,4-D e seus sais e ésteres, aminociclopiraclor e seus sais e ésteres, aminopiralid e seus sais tais como aminopiralid-tris(2-hidroxipropil)amônio e seus ésteres, clopiralid e seus sais e ésteres, dicamba e seus sais e ésteres, diclorprop-P e seus sais e ésteres, fluroxipir-meptil, halauxifen e seus sais e ésteres (CAS 943832-60-8); MCPA e seus sais e ésteres, MCPB e seus sais e ésteres, mecoprop-P e seus sais e ésteres, picloram e seus sais e ésteres, quinclorac, quinmerac e triclopir e seus sais e ésteres; b14. do grupo dos inibidores do transporte de auxina: diflufenzopir e diflufenzopir sódio; b15. do grupo dos outros herbicidas: bromobutida, cinmetilin, cumiluron, ciclopirimorato (CAS 499223-49-3) e seus sais e ésteres, dalapon, difenzoquat, metilsulfato de difenzoquat, DSMA, dimron (= daimuron), flamprop, flamprop isopropil, flamprop metil, flamprop-M isopropil, flamprop-M metil, indanofan, indaziflam, metam, brometo de metila, MSMA, oxaziclomefona, piributicarb, triaziflam e tridifano.
[062] Herbicidas B particularmente preferidos que podem ser utilizados em combinação com os herbicidas inibidores de PPO de acordo com a presente invenção são: b1. do grupo dos inibidores da biossíntese de lipídios: clodinafop propargil, cicloxidim, ci-halofop butil, fenoxaprop-P etil, pinoxaden, profoxidim, tepraloxidim, tralcoxidim, 4-(4’-cloro-4-ciclopropil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-5- hidróxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-ona (CAS 1312337-72-6); 4-(2’-4’- dicloro-4-ciclopropil [1,1’-bifenil]-3-il)-5-hidróxi-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)- ona (CAS 1312337-45-3); 4-(4’-cloro-4-etil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-5-hidróxi- 2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3(6H)-ona (CAS 1033757-93-5); 4-(2’,4’-dicloro-4- etil [1,1’-bifenil]-3-il)-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3,5(4H,6H)-diona (CAS 131234084-3); 5-(acetilóxi)-4-(4’-cloro-4-ciclopropil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-3,6-di-hidro- 2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-ona (CAS 1312337-48-6); 5-(acetilóxi)-4-(2’-4’- dicloro-4-ciclopropil- [1,1’-bifenil]-3-il)-3,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3- ona; 5-(acetilóxi)-4-(4’-cloro-4-etil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-3,6-di-hidro-2,2,6,6- tetrametil-2H-piran-3-ona (CAS 1312340-82-1); 5-(acetilóxi)-4-(2’,4’-dicloro-4- etil [1,1’-bifenil]-3-il)-3,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-2H-piran-3-ona (CAS 1033760-55-2); metil éster de ácido 4-(4’-cloro-4-ciclopropil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]- 3-il)-5,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-ilcarbônico (CAS 131233751-1); metil éster de ácido 4-(2’,4’-dicloro-4-ciclopropil- [1,1’-bifenil]-3-il)-5,6-di- hidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-ilcarbônico; metil éster de ácido 4-(4’- cloro-4-etil-2’-fluoro [1,1’-bifenil]-3-il)-5,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H- piran-3-ilcarbônico (CAS 1312340-83-2); metil éster de ácido 4-(2’,4’-dicloro-4- etil [1,1’-bifenil]-3-il)-5,6-di-hidro-2,2,6,6-tetrametil-5-oxo-2H-piran-3-ilcarbônico (CAS 1033760-58-5); esprocarb, prossulfocarb, tiobencarb e trialato; b2. do grupo dos inibidores de ALS: bensulfuron metil, bispiribac sódio, ciclossulfamuron, diclossulam, flumetsulam, flupirsulfuron metil sódio, foransulfuron, imazamox, imazapic, imazapir, imazaquin, imazetapir, imazossulfuron, iodossulfuron, iodossulfuron metil sódio, iofensulfuron, iofensulfuron sódio, mesossulfuron, metazossulfuron, nicossulfuron, penoxsulam, propoxicarbazon sódio, propirissulfuron, pirazossulfuron etil, piroxsulam, rinsulfuron, sulfossulfuron, tiencarbazon metil, tritossulfuron e triafamona; b3. do grupo dos inibidores da fotossíntese: ametrina, atrazina, diuron, fluometuron, hexazinona, isoproturon, linuron, metribuzina, paraquat, dicloreto de paraquat, propanil, terbutrina e terbutilazina; b4. do grupo de inibidores da protoporfirinogênio IX oxidase: acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, cinidon etil, carfentrazona etil, flumioxazina, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6-trifluorometil-2,4- dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 3- [7-fluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [1,4-oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo- [1,3,5]triazinan-2,4-diona, 1,5-dimetil- 6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4) e 2- (2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7- tetra-hidroisoindol-1,3-diona e 1-metil-6-trifluorometil-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4- prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidino-2,4-diona; b5. do grupo dos herbicidas branqueadores: clomazona, diflufenican, flurocloridona, isoxaflutol, mesotriona, picolinafen, sulcotriona, tefuriltriona, tembotriona, topramezona, biciclopirona, amitrol e flumeturon; b6. do grupo dos inibidores da EPSP sintase: glifosato, glifosato isopropilamônio e glifosato trimésio (sulfosato); b7. do grupo dos inibidores da glutamino sintase: glufosinato, glufosinato-P e glufosinato amônio; b9. do grupo dos inibidores da mitose: pendimetalin e trifluralin; b10. do grupo dos inibidores de VLCFA: acetoclor, cafenstrol, dimetenamid-P, fentrazamida, flufenacet, mefenacet, metazaclor, metolaclor, metolaclor-S, fenoxassulfona, ipfencarbazona e piroxassulfona; de forma similar, dá-se preferência a compostos de isoxazolina das fórmulas II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 e II.9, conforme mencionado acima; b11. do grupo dos inibidores da biossíntese de celulose: isoxaben; b13. do grupo dos herbicidas auxínicos: 2,4-D e seus sais e ésteres, tais como clacifós, aminociclopiraclor e seus sais e ésteres, aminopiralid e seus sais e ésteres, clopiralid e seus sais e ésteres, dicamba e seus sais e ésteres, fluroxipir-meptil, quinclorac e quinmerac; b14. do grupo dos inibidores do transporte de auxina: diflufenzopir e diflufenzopir sódio; b15. do grupo dos outros herbicidas: dimron (= daimuron), indanofan, indaziflam, oxaziclomefona e triaziflam.
[063] Além disso, pode ser útil aplicar os herbicidas inibidores de PPO, quando utilizados em combinação com um composto B descrito acima, em combinação com agentes de segurança. Agentes de segurança são compostos químicos que evitam ou reduzem os danos sobre plantas úteis sem que apresentem impacto importante sobre a ação herbicida de herbicidas para plantas indesejadas. Eles podem ser aplicados antes da semeadura (por exemplo, em tratamento de sementes, brotos ou mudas), na aplicação pré- emergência ou pós-emergência da planta útil.
[064] Além disso, os agentes de segurança C, os herbicidas inibidores de PPO e/ou os herbicidas B podem ser aplicados simultânea ou sucessivamente.
[065] Agentes de segurança apropriados são, por exemplo, ácidos (quinolin-8-óxi)acéticos, ácidos 1-fenil-5-haloalquil-1H-1,2,4-triazol-3- carboxílicos, ácidos 1-fenil-4,5-di-hidro-5-alquil-1H-pirazolo-3,5-dicarboxílicos, ácidos 4,5-di-hidro-5,5-diaril-3-isoxazolocarboxílicos, dicloroacetamidas, alfaoximinofenilacetonitrilas, acetofenonoximas, 4,6-di-halo-2-fenilpirimidinas, amidas N- [ [4-(aminocarbonil)fenil]sulfonil-2-benzoicas, anidrido 1,8-naftálico, ácidos 2-halo-4-(haloalquil)-5-tiazolocarboxílicos, fosforotiolatos, O- fenilcarbamatos de N-alquila, seus sais aceitáveis para uso agrícola e seus derivados aceitáveis para uso agrícola, tais como amidas, ésteres e tioésteres, desde que eles contenham um grupo ácido.
[066] Exemplos de agentes de segurança preferidos C são benoxacor, cloquintocet, ciometrinil, ciprossulfamida, diclormid, diciclonon, dietolato, fenclorazol, fenclorim, flurazol, fluxofenim, furilazol, isoxadifen, mefempir, mefenato, anidrido naftálico, oxabetrinil, 4-(dicloroacetil)-1-oxa-4- azaspiro [4.5]decano (MON4660, CAS 71526-07-3) e 2,2,5-trimetil-3- (dicloroacetil)-1,3-oxazolidina (R-29148, CAS 52836-31-4).
[067] Agentes de segurança C especialmente preferidos são benoxacor, cloquintocet, ciprossulfamida, diclormid, fenclorazol, fenclorim, flurazol, fluxofenim, furilazol, isoxadifen, mefempir, anidrido naftálico, oxabetrinil, 4-(dicloroacetil)-1-oxa-4-azaspiro [4.5]decano (MON4660, CAS 71526-07-3) e 2,2,5-trimetil-3-(dicloroacetil)-1,3-oxazolidina (R-29148, CAS 52836-31-4).
[068] Agentes de segurança C particularmente preferidos são benoxacor, cloquintocet, ciprossulfamida, diclormid, fenclorazol, fenclorim, furilazol, isoxadifen, mefempir, anidrido naftálico, 4-(dicloroacetil)-1-oxa-4- azaspiro [4.5]decano (MON4660, CAS 71526-07-3) e 2,2,5-trimetil-3- (dicloroacetil)-1,3-oxazolidina (R-29148, CAS 52836-31-4).
[069] Outros agentes de segurança C preferidos são benoxacor, cloquintocet, ciprossulfamida, diclormid, fenclorazol, fenclorim, furilazol, isoxadifen, mefempir, 4-(dicloroacetil)-1-oxa-4-azaspiro- [4.5]decano (MON4660, CAS 71526-07-3) e 2,2,5-trimetil-3-(dicloroacetil)-1,3-oxazolidina (R-29148, CAS 52836-31-4).
[070] Agentes de segurança C particularmente preferidos que, como componente C, são componentes da composição de acordo com a presente invenção são os agentes de segurança C conforme definido acima; particularmente, os agentes de segurança C.1-C.12 relacionados abaixo na Tabela C.
Figure img0009
[071] Os herbicidas inibidores de PPO (compostos A), os compostos ativos B dos grupos b1 a b15 e os compostos ativos C são herbicidas e agentes de segurança conhecidos; vide, por exemplo, The Compendium of Pesticide Common Names (http://www.alanwood.net/pesticides/); Farm Chemicals Handbook 2000, volume 86, Meister Publishing Company, 2000; B. Hock, C. Fedtke, R. R. Schmidt, Herbizide (Herbicides), Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1995; W. H. Ahrens, Herbicide Handbook, sétima edição, Weed Science Society of America, 1994; e K. K. Hatzios, Herbicide Handbook, Suplemento para a 7a Edição, Weed Science Society of America, 1998. 2,2,5- Trimetil-3-(dicloroacetil)-1,3-oxazolidina (CAS N° 52836-31-4) também é denominada R-29148. 4-(Dicloroacetil)-1-oxa-4-azaespiro [4.5]decano (CAS N° 71526-07-3) também é denominado AD-67 e MON 4660.
[072] A atribuição dos compostos ativos aos mecanismos de ação correspondentes é baseada no conhecimento atual. Caso diversos mecanismos de ação apliquem-se a um composto ativo, esta substância foi atribuída apenas a um mecanismo de ação.
[073] Compostos ativos B e C que contêm um grupo carboxila podem ser empregados na forma de ácido, na forma de sal apropriado para uso agrícola conforme mencionado acima ou na forma de derivado aceitável para uso agrícola nas composições de acordo com a presente invenção.
[074] No caso de dicamba, sais apropriados incluem aqueles em que o contraíon é um cátion aceitável para uso agrícola. Sais apropriados de dicamba são, por exemplo, dicamba sódio, dicamba potássio, dicamba metilamônio, dicamba dimetilamônio, dicamba isopropilamônio, dicamba diglicolamina, dicamba olamina, dicamba diolamina, dicamba trolamina, dicamba-N,N-bis-(3-aminopropil)metilamina e dicamba dietilenotriamina. Exemplos de éster apropriado são dicamba metil e dicamba butotil. Sais apropriados de 2,4-D são 2,4-D-amônio, 2,4-D-dimetilamônio, 2,4-D- dietilamônio, 2,4-D-dietanolamônio (2,4-D-diolamina), 2,4-D-trietanolamônio, 2,4-D-isopropilamônio, 2,4-D-tri-isopropanolamônio, 2,4-D-heptilamônio, 2,4-D- dodecilamônio, 2,4-D-tetradecilamônio, 2,4-D-trietilamônio, 2,4-D-tris(2- hidroxipropil)amônio, 2,4-D-tris(isopropil)amônio, 2,4-D-trolamina, 2,4-D-lítio e 2,4-D-sódio. Exemplos de ésteres apropriados de 2,4-D são 2,4-D-butotila, 2,4- D-2-butoxipropila, 2,4-D-3-butoxipropila, 2,4-D-butila, 2,4-D-etila, 2,4-D-etil- hexila, 2,4-D-isobutila, 2,4-D-iso-octila, 2,4-D-isopropila, 2,4-D-meptila, 2,4-D- metila, 2,4-D-octila, 2,4-D-pentila, 2,4-D-propila, 2,4-D-tefurila e clacifós.
[075] Sais apropriados de 2,4-DB são, por exemplo, 2,4-DB-sódio, 2,4-DB-potássio e 2,4-DB-dimetilamônio. Ésteres apropriados de 2,4-DB são, por exemplo, 2,4-DB-butila e 2,4-DB-isoctila. Sais apropriados de diclorprop são, por exemplo, diclorprop-sódio, diclorprop-potássio e diclorprop-dimetilamônio. Exemplos de ésteres apropriados de diclorprop são diclorprop-butotila e diclorprop-isoctila.
[076] Sais e ésteres apropriados de MCPA incluem MCPA-butotil, MCPA-butil, MCPA-dimetilamônio, MCPA-diolamina, MCPA-etil, MCPA-tioetil, MCPA-2-etil-hexil, MCPA-isobutil, MCPA-isoctil, MCPA-isopropil, MCPA- isopropilamônio, MCPA-metil, MCPA-olamina, MCPA-potássio, MCPA-sódio e MCPA-trolamina.
[077] Um sal apropriado de MCPB é MCPB sódio. Um éster apropriado de MCPB é MCPB-etil.
[078] Sais apropriados de clopiralid são clopiralid-potássio, clopiralid-olamina e clopiralid-tris-(2-hidroxipropil)amônio. Um exemplo de ésteres apropriados de clopiralid é clopiralid-metil.
[079] Exemplos de éster apropriado de fluroxipir são fluroxipir- meptil e fluroxipir-2-butóxi-1-metiletil, em que fluroxipir-meptil é preferido.
[080] Sais apropriados de picloram são picloram-dimetilamônio, picloram-potássio, picloram-tri-isopropanolamônio, picloram-tri-isopropilamônio e picloram-trolamina. Um éster apropriado de picloram é picloram-isoctil.
[081] Um sal apropriado de triclopir é triclopir-trietilamônio. Ésteres apropriados de triclopir são, por exemplo, triclopir-etil e triclopir-butotil.
[082] Sais e ésteres apropriados de cloramben incluem cloramben- amônio, cloramben-diolamina, cloramben-metil, cloramben-metilamônio e cloramben-sódio. Sais e ésteres apropriados de 2,3,6-TBA incluem 2,3,6-TBA- dimetilamônio, 2,3,6-TBA-lítio, 2,3,6-TBA-potássio e 2,3,6-TBA-sódio.
[083] Sais e ésteres apropriados de aminopiralid incluem aminopiralid-potássio e aminopiralid-tris(2-hidroxipropil)amônio.
[084] Sais apropriados de glifosato são, por exemplo, glifosato- amônio, glifosato-diamônio, glifosato-dimetilamônio, glifosato-isopropilamônio, glifosato-potássio, glifosato-sódio, glifosato-trimésio e os sais de etanolamina e dietanolamina, preferencialmente glifosato-diamônio, glifosato-isopropilamônio e glifosato-trimésio (sulfosato).
[085] Um sal apropriado de glufosinato é, por exemplo, glufosinato- amônio.
[086] Um sal apropriado de glufosinato-P é, por exemplo, glufosinato-P-amônio.
[087] Sais e ésteres apropriados de bromoxinil são, por exemplo, butirato de bromoxinil, heptanoato de bromoxinil, octanoato de bromoxinil, bromoxinil-potássio e bromoxinil-sódio.
[088] Sais e ésteres apropriados de ioxonil são, por exemplo, octanoato de ioxonil, ioxonil-potássio e ioxonil-sódio.
[089] Sais e ésters apropriados de mecoprop incluem mecoprop- butotil, mecoprop-dimetilamônio, mecoprop-diolamina, mecoprop-etadil, mecoprop-2-etil-hexil, mecoprop-isoctil, mecoprop-metil, mecoprop-potássio, mecoprop-sódio e mecoprop-trolamina.
[090] Sais apropriados de mecoprop-P são, por exemplo, mecoprop-P-butotil, mecoprop-P-dimetilamônio, mecoprop-P-2-etil-hexil, mecoprop-P-isobutil, mecoprop-P-potássio e mecoprop-P-sódio.
[091] Um sal apropriado de diflufenzopir é, por exemplo, diflufenzopir-sódio.
[092] Um sal apropriado de naptalam é, por exemplo, naptalam- sódio.
[093] Sais e ésteres apropriados de aminociclopiraclor são, por exemplo, aminociclopiraclor-dimetilamônio, aminociclopiraclor-metil, aminociclopiraclor-tri-isopropanolamônio, aminociclopiraclor-sódio e aminociclopiraclor-potássio.
[094] Um sal apropriado de quinclorac é, por exemplo, quinclorac- dimetilamônio.
[095] Um sal apropriado de quinmerac é, por exemplo, quinclorac- dimetilamônio.
[096] Um sal apropriado de imazamox é, por exemplo, imazamox- amônio.
[097] Sais apropriados de imazapic são, por exemplo, imazapic- amônio e imazapic-isopropilamônio.
[098] Sais apropriados de imazapir são, por exemplo, imazapir- amônio e imazapir-isopropilamônio.
[099] Um sal apropriado de imazaquin é, por exemplo, imazaquin- amônio.
[100] Sais apropriados de imazetapir são, por exemplo, imazetapir- amônio e imazetapir-isopropilamônio.
[101] Um sal apropriado de topramezona é, por exemplo, topramezona-sódio.
[102] As realizações preferidas da presente invenção aqui mencionadas abaixo necessitam ser compreendidas como sendo preferidas, independentemente ou em combinação entre si.
[103] Segundo uma realização preferida da presente invenção, a composição compreende como componente B pelo menos um, de preferência exatamente um herbicida B.
[104] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende pelo menos dois, de preferência exatamente dois herbicidas B diferentes entre si.
[105] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende pelo menos três, de preferência exatamente três herbicidas B diferentes entre si.
[106] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende como componente A pelo menos um, de preferência exatamente um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen-sódio, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazona-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4- tetra-hidropirimidin-3-il)-fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S- 3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4- (prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4) e, como componente B, pelo menos um, de preferência exatamente um herbicida B.
[107] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende como componente A pelo menos um, de preferência exatamente um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen-sódio, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazona-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4- tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S- 3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4- (prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4) e pelo menos dois, de preferência exatamente dois herbicidas B diferentes entre si.
[108] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende como componente A pelo menos um, de preferência exatamente um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen-sódio, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazona-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4- tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S- 3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4- (prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4) e pelo menos três, de preferência exatamente três herbicidas B diferentes entre si.
[109] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende, além de um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen-sódio, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazona-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6- trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo- 4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4- diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6- tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin- 6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b1, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de cletodim, clodinafop-propargil, cicloxidim, ci-halofop-butil, fenoxaprop-P-etil, fluazifop, pinoxaden, profoxidim, quizalofop, setoxidim, tepraloxidim, tralcoxidim, esprocarb, prossulfocarb, tiobencarb e trialato.
[110] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende, além de um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen-sódio, butafenacil, cinidon-etil, carfentrazona-etil, flumioxazin, flutiacet-metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6- trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4- (prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3- (2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)- 1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b2, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de bensulfuron metil, bispiribac sódio, cloransulam metil, ciclossulfamuron, diclossulam, flumetsulam, flupirsulfuron metil sódio, foransulfuron, halossulfuron metil, imazamox, imazapic, imazapir, imazaquin, imazetapir, imazossulfuron, iodossulfuron, iodossulfuron metil sódio, mesossulfuron metil, metazossulfuron, nicossulfuron, penoxsulam, propoxicarbazon sódio, pirazossulfuron etil, piritiobac sódio, piroxsulam, rinsulfuron, sulfossulfuron, tiencarbazon metil, tifensulfuron metil, trifloxissulfuron e tritossulfuron.
[111] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende, além de um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, cinidon etil, carfentrazona etil, flumioxazin, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6- trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo- 4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4- diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6- tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin- 6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di- hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-724), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b3, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de ametrina, atrazina, bentazon, bromoxinil, diuron, fluometuron, hexazinona, isoproturon, linuron, metribuzin, paraquat, dicloreto de paraquat, prometrina, propanil, terbutrina e terbutilazina.
[112] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende, além de um herbicida ininbidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, cinidon etil, carfentrazona etil, flumioxazin, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6- trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo- 4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4- diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6- tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin- 6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b4, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de acifluorfen, acifluorfen sódio, azafenidin, bencarbazona, benzofendizona, bifenox, butafenacil, carfentrazona, carfentrazona etil, clometoxifen, cinidon etil, fluazolato, flufempir, flufempir etil, flumiclorac, flumiclorac pentil, flumioxazin, fluoroglicofen, fluoroglicofen etil, flutiacet, flutiacet metil, fomesafen, halosafen, lactofen, oxadiargil, oxadiazon, oxifluorfen, pentoxazona, profluazol, piraclonil, piraflufen, piraflufen etil, saflufenacil, sulfentrazona, tidiazimin, tiafenacil, [3- [2- cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3- il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), N-etil-3-(2,6- dicloro-4-trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 45209892-9), N-tetra-hidrofurfuril-3-(2,6-dicloro-4-trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H- pirazolo-1-carboxamida (CAS 915396-43-9), N-etil-3-(2-cloro-6-fluoro-4- trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 452099-05-7), N- tetra-hidrofurfuril-3-(2-cloro-6-fluoro-4-trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1- carboxamida (CAS 452100-03-7), 3- [7-fluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro- 2H-benzo [1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo- [1,3,5]triazinan-2,4-diona, 1,5- dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), 2- (2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7- tetra-hidroisoindolo-1,3-diona, 1-metil-6-trifluorometil-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4- prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidino-2,4-diona, (E)-4- [2-cloro-5- [4-cloro-5-(difluorometóxi)-1H-metilpirazol-3-il]-4-fluorofenóxi]-3- metoxibut-2-enoato de metila (CAS 948893-00-3), 3- [7-cloro-5-fluoro-2- (trifluorometil)-1H-benzimidazol-4-il]-1-metil-6-(trifluorometil)-1H-pirimidino-2,4- diona (CAS 212754-02-4).
[113] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende, além de um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, cinidon etil, carfentrazona etil, flumioxazin, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6- trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo- 4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4- diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6- tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin- 6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b5, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de clomazona, diflufenican, fluorocloridona, isoxaflutol, mesotriona, picolinafen, sulcotriona, tefuriltriona, tembotriona, topramezona, biciclopirona, amitrol e flumeturon.
[114] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende, além de um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, cinidon etil, carfrentrazona etil, flumioxazin, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6- trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo- 4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4- diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6- tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin- 6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b6, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de glifosato, glifosato- isopropilamônio e glifosato-trimésio (sulfosato).
[115] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende, além de um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, cinidon etil, carfentrazona etil, flumioxazin, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6- trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo- 4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4- diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6- tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b7, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de glufosinato, glufosinato-P e glufosinato-amônio.
[116] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende, além de um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, cinidon eteil, carfentrazona etil, flumioxazin, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1- metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2- piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3- (2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-ininl)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6- il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di- hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b9, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de pendimetalina e trifluralina.
[117] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende, além de um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, cinidon etil, carfentrazona etil, flumioxazina, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1- metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2- piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3- (2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6- il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di- hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b10, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de acetoclor, cafenstrol, dimetenamid-P, fentrazamida, flufenacet, mefenacet, metazaclor, metolaclor, metolaclor-S, fenoxassulfona e piroxassulfona. De forma similar, dá-se preferência a composições que compreendem, além de um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, cinidon etil, carfentrazona etil, flumioxazin, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6-trifluorometil- 2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4- (prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4- diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil- 6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b10, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de compostos de isoxazolina das fórmulas II.1, II.2, II.3, II.4, II.5, II.6, II.7, II.8 e II.9, conforme definido acima.
[118] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende, além de um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, cinidon etil, carfentrazona etil, flumioxazina, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1- metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2- piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100, 1,5-dimetil-6-tioxo-3- (2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6- il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di- hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b13, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de 2,4-D e seus sais e ésteres, aminociclopiraclor e seus sais e ésteres, aminopiralid e seus sais tais como aminopiralid-tris(2- hidroxipropil)amônio e seus ésteres, clopiralid e seus sais e ésteres, dicamba e seus sais e ésteres, fluroxipir meptil, quinclorac e quinmerac.
[119] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende, além de um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, cinidon etil, carfentrazona etil, flumioxazin, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1- metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2- piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3- (2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6- il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di- hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b14, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de diflufenzopir e diflufenzopir sódio.
[120] Segundo outra realização preferida da presente invenção, a composição compreende, além de um herbicida inibidor de PPO, preferencialmente acifluorfen, acifluorfen sódio, butafenacil, cinidon etil, carfentrazona etil, flumioxazin, flutiacet metil, fomesafen, lactofen, oxadiargil, oxifluorfen, saflufenacil, sulfentrazona, [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1- metil-6-trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2- piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100), 1,5-dimetil-6-tioxo-3- (2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6- il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), de preferência especial saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di- hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), pelo menos um e, especialmente, exatamente um composto ativo como herbicida do grupo b15, particularmente selecionado a partir do grupo que consiste de dimron (= daimuron), indanofan, indaziflam, oxaziclomefona e triaziflam.
[121] Aqui e abaixo, a expressão “composições binárias” inclui composições que compreendem um ou mais, tal como um, dois ou três compostos ativos do herbicida inibidor de PPO e um ou mais, tal como um, dois ou três herbicidas B.
[122] Em composições binárias que compreendem pelo menos um herbicida inibidor de PPO como componente A e pelo menos um herbicida B, a razão em peso entre os compostos ativos A:B encontra-se geralmente na faixa de 1:1000 a 1000:1, preferencialmente na faixa de 1:500 a 500:1, particularmente na faixa de 1:250 a 250:1 e, de preferência específica, na faixa de 1:75 a 75:1.
[123] Herbicidas B particularmente preferidos são os herbicidas B conforme definido acima; particularmente, os herbicidas B.1-B.229 relacionados abaixo na Tabela B.
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[124] São particularmente preferidas as composições 1.1 a 1.229, que compreendem acifluorfen e a(s) subtância(s) definida(s) na linha correspondente da Tabela B-1.
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[125] Também são de preferência especial as composições 2.1 a 2.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A acifluorfen-sódio.
[126] Também são de preferência especial as composições 3.1 a 3.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A azafenidina.
[127] Também são de preferência especial as composições 4.1 a 4.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A bencarbazona.
[128] Também são de preferência especial as composições 5.1 a 5.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A benzofendizona.
[129] Também são de preferência especial as composições 6.1 a 6.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A bifenox.
[130] Também são de preferência especial as composições 7.1 a 7.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.227 somente porque compreendem como componente A butafenacil.
[131] Também são de preferência especial as composições 8.1 a 8.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A carfentrazona.
[132] Também são de preferência especial as composições 9.1 a 9.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A carfentrazona-etil.
[133] Também são de preferência especial as composições 10.1 a 10.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A clometoxifeno.
[134] Também são de preferência especial as composições 11.1 a 11.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A cinidon-etil.
[135] Também são de preferência especial as composições 12.1 a 12.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A fluazolato.
[136] Também são de preferência especial as composições 13.1 a 13.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A flufenpir.
[137] Também são de preferência especial as composições 14.1 a 14.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A flufenpir-etil.
[138] Também são de preferência especial as composições 15.1 a 15.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A flumiclorac.
[139] Também são de preferência especial as composições 16.1 a 16.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A flumiclorac-pentil.
[140] Também são de preferência especial as composições 17.1 a 17.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A flumioxazina.
[141] Também são de preferência especial as composições 18.1 a 18.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A fluoroglicofen.
[142] Também são de preferência especial as composições 19.1 a 19.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A fluoroglicofen-etil.
[143] Também são de preferência especial as composições 20.1 a 20.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A flutiacet.
[144] Também são de preferência especial as composições 21.1 a 21.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A flutiacet-metil.
[145] Também são de preferência especial as composições 22.1 a 22.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A fomesafen.
[146] Também são de preferência especial as composições 23.1 a 23.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A halosafen.
[147] Também são de preferência especial as composições 24.1 a 24.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A lactofeno.
[148] Também são de preferência especial as composições 25.1 a 25.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A oxadiargil.
[149] Também são de preferência especial as composições 26.1 a 26.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A oxadiazon.
[150] Também são de preferência especial as composições 27.1 a 27.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A oxifluorfeno.
[151] Também são de preferência especial as composições 28.1 a 28.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A pentoxazona.
[152] Também são de preferência especial as composições 29.1 a 29.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A profluazol.
[153] Também são de preferência especial as composições 30.1 a 30.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A piraclonil.
[154] Também são de preferência especial as composições 31.1 a 31.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A piraflufeno.
[155] Também são de preferência especial as composições 32.1 a 32.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A piraflufeno-etil.
[156] Também são de preferência especial as composições 33.1 a 33.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A saflufenacil.
[157] Também são de preferência especial as composições 34.1 a 34.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A sulfentrazona.
[158] Também são de preferência especial as composições 35.1 a 35.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A tidiazimina.
[159] Também são de preferência especial as composições 36.1 a 36.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A tiafenacil.
[160] Também são de preferência especial as composições 37.1 a 37.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A [3- [2-cloro-4-fluoro-5-(1-metil-6- trifluorometil-2,4-dioxo-1,2,3,4-tetra-hidropirimidin-3-il)fenóxi]-2-piridilóxi]acetato de etila (CAS 353292-31-6; S-3100).
[161] Também são de preferência especial as composições 38.1 a 38.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro- 3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano- 2,4-diona (CAS 1258836-72-4).
[162] Também são de preferência especial as composições 39.1 a 39.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A N-etil-3-(2,6-dicloro-4- trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 452098-92-9).
[163] Também são de preferência especial as composições 40.1 a 40.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A N-tetra-hidrofurfuril-3-(2,6-dicloro-4- trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 915396-43-9).
[164] Também são de preferência especial as composições 41.1 a 41.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A N-etil-3-(2-cloro-6-cloro-4- trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 452099-05-7).
[165] Também são de preferência especial as composições 42.1 a 42.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A N-tetra-hidrofurfuril-3-(2-cloro-6- fluoro-4-trifluorometilfenóxi)-5-metil-1H-pirazolo-1-carboxamida (CAS 45210003-7).
[166] Também são de preferência especial as composições 43.1 a 43.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A 3- [7-fluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4- di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il]-1,5-dimetil-6-tioxo- [1,3,5]trazinan-2,4-diona.
[167] Também são de preferência especial as composições 44.1 a 44.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A (E)-4- [2-cloro-5- [4-cloro-5- (difluorometóxi)-1H-metilpirazol-3-il]-4-fluorofenóxi]-3-metoxibut-2-enoato de metila (CAS 948893-00-3).
[168] Também são de preferência especial as composições 45.1 a 45.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A 3- [7-cloro-5-fluoro-2-(trifluorometil)- 1H-benzimidazol-4-il]-1-metil-6-(trifluorometil)-1H-pirimidino-2,4-diona (CAS 212754-02-4).
[169] Também são de preferência especial as composições 46.1 a 46.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A 2-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-prop-2-inil- 3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il)-4,5,6,7-tetra-hidro-isoindolo-1,3-diona.
[170] Também são de preferência especial as composições 47.1 a 47.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem como componente A 1-metil-6-trifluorometil-3-(2,2,7-tri- fluoro-3-oxo-4-prop-2-inil-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-il)-1H-pirimidino- 2,4-diona.
[171] Também são de preferência especial as composições 48.1 a 48.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem adicionalmente benoxacor como agente de segurança C.
[172] Também são de preferência especial as composições 49.1 a 49.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem cloquintocet como agente de segurança C.
[173] Também são de preferência especial as composições 50.1 a 50.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem adicionalmente ciprossulfamida como agente de segurança C.
[174] Também são de preferência especial as composições 51.1 a 51.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem adicionalmente diclormid como agente de segurança C.
[175] Também são de preferência especial as composições 52.1 a 52.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem adicionalmente fenclorazol como agente de segurança C.
[176] Também são de preferência especial as composições 53.1 a 53.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem fenclorim como agente de segurança C.
[177] Também são de preferência especial as composições 54.1 a 54.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem adicionalmente flurilazol como agente de segurança C.
[178] Também são de preferência especial as composições 55.1 a 55.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem adicionalmente isoxadifen como agente de segurança C.
[179] Também são de preferência especial as composições 56.1 a 56.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem adicionalmente mefempir como agente de segurança C.
[180] Também são de preferência especial as composições 57.1 a 57.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem adicionalmente 4-(dicloroacetil)-1-oxa-4- azaespiro [4.5]decano (MON4660, CAS 71526-07-3) como agente de segurança C.
[181] Também são de preferência especial as composições 58.1 a 58.229 que diferem das composições correspondentes 1.1 a 1.229 somente porque compreendem adicionalmente 2,2,5-trimetil-3-(dicloroacetil)-1,3- oxazolidina (R-29148, CAS 52836-31-4) como agente de segurança C.
[182] Prefere-se geralmente utilizar os compostos de acordo com a presente invenção em combinação com herbicidas que sejam seletivos para o produto sendo tratado e que complementem o espectro de ervas controladas por esses compostos na taxa de aplicação empregada. Prefere-se ainda, de forma geral, aplicar os compostos de acordo com a presente invenção e outros herbicidas complementares ao mesmo tempo, seja como formulação de combinação ou como mistura de tanque.
[183] Reconhece-se que as moléculas de polinucleotídeos e polipeptídeos de acordo com a presente invenção englobam polipeptídeos que compreendem uma sequência de aminoácidos que é suficientemente idêntica às sequências de aminoácidos descritas em SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117. A expressão “suficientemente idêntica" é utilizada no presente para designar uma primeira sequência de aminoácidos ou nucleotídeos que contém quantidade mínima ou suficiente de nucleotídeos ou resíduos de aminoácidos idênticos ou equivalentes (por exemplo, com cadeia lateral similar) a uma segunda sequência de nucleotídeos ou aminoácidos, de tal forma que as primeira e segunda sequências de nucleotídeos ou aminoácidos possuam domínio estrutural comum e/ou atividade funcional comum.
[184] Geralmente, “identidade de sequências” designa a extensão até a qual duas sequências de aminoácidos ou de DNA idealmente alinhadas são invariáveis ao longo de toda uma janela de alinhamento de componentes, tais como nucleotídeos ou aminoácidos. “Fração de identidade” para segmentos alinhados de uma sequência de teste e uma sequência de referência é o número de componentes idênticos que são compartilhados pelas duas sequências alinhadas divididas pelo número total de componentes no segmento de sequências de referência, ou seja, a sequência de referência completa ou uma parte definida menor da sequência de referência. “Percentual de identidade” é a fração de identidade vezes 100. O alinhamento ideal de sequências de alinhmento de uma janela de comparação é bem conhecido dos técnicos no assunto e pode ser conduzido por meio de ferramentas tais como o algoritmo de homologia local de Smith e Waterman, o algoritmo de alinhamento de homologia de Needleman e Wunsch, a busca de método de similaridade de Pearson e Lipman, preferencialmente por meio de implementação computadorizada desses algoritmos tais como GAP, BESTFIT, FASTA e TFASTA disponíveis como parte do Pacote GCG Wisconsin (Accelrys Inc., Burlington, Mass.). POLINUCLEOTÍDEOS E OLIGONUCLEOTÍDEOS
[185] Por “polinucleotídeo isolado", incluindo DNA, RNA ou uma de suas combinações, com fita simples ou dupla, em orientação com ou sem sentido ou uma combinação de ambos, dsRNA ou de outra forma, indicamos polinucleotídeo que é ao menos parcialmente separado das sequências de polinucleotídeos às quais é associado ou ligado no seu estado nativo. Isso significa que outras moléculas de ácido nucleico estão presentes em quantidade de menos de 5% com base no peso da quantidade do ácido nucleico desejado, preferencialmente menos de 2% em peso, de maior preferência menos de 1% em peso e, de preferência superior, menos de 0,5% em peso. Preferencialmente, um ácido nucleico “isolado” é livre de algumas das sequências que ladeiam naturalmente o ácido nucleico (ou seja, sequências localizadas nas extremidades 5’ e 3’ do ácido nucleico) no DNA genômico do organismo do qual é derivado o ácido nucleico. Em várias realizações, por exemplo, a molécula de ácido nucleico que codifica proteína relativa à tolerância e/ou resistência a herbicidas isolada pode conter, por exemplo, menos de cerca de 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0,5 kb ou 0,1 kb de sequências de nucleotídeos que ladeiam naturalmente a molécula de ácido nucleico no DNA genômico da célula da qual é derivado o ácido nucleico. Além disso, uma molécula de ácido nucleico “isolada”, tal como uma molécula de cDNA, pode ser livre de parte do outro material celular ao qual é naturalmente associada ou meio de cultivo quando produzida por meio de métodos recombinantes, precursores químicos ou outras substâncias quando sintetizada quimicamente. Preferencialmente, o polinucleotídeo isolado é pelo menos 60% livre, preferencialmente pelo menos 75% livre e, de preferência superior, pelo menos 90% livre de outros componentes aos quais são naturalmente associados. Como sabem os técnicos no assunto, polinucleotídeos isolados podem ser polinucleotídeos exógenos presentes, por exemplo, em organismos transgênicos que naturalmente não compreendem o polinucleotídeo. Além disso, as expressões “polinucleotídeo(s)”, “sequência(s) de ácido(s) nucleico(s)”, “sequência(s) de nucleotídeo(s)", “ácido(s) nucleico(s)” e “molécula de ácido nucleico” são utilizadas de forma intercambiável no presente e designam nucleotídeos, sejam eles ribonucleotídeos, desoxirribonucleotídeos ou uma de suas combinações, em forma não ramificada polimérica com qualquer comprimento.
[186] A expressão “ácido nucleica PPO mutada" designa um ácido nucleico PPO que contém uma sequência que sofreu mutação de um ácido nucleico PPO do tipo selvagem, tal como SEQ ID N° 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128 ou seus homólogos, parálogos e ortólogos; e que confere aumento da tolerância a herbicidas inibidores de PPO a uma planta na qual é expresso. Além disso, a expressão “protoporfirinogênio oxidase que sofreu mutação (PPO mutada)” designa a substituição de um aminoácido das sequências primárias do tipo selvagem SEQ ID N° 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117 ou uma de suas variantes, derivados, homólogos, ortólogos ou parálogos, por outro aminoácido. A expressão “aminoácido que sofreu mutação” será utilizada abaixo para designar o aminoácido que é substituído por outro aminoácido, de forma a indicar o local da mutação na sequência primária da proteína.
[187] Em uma realização preferida, a sequência de nucleotídeos PPO que codifica um PPO mutada compreende a sequência de SEQ ID N° 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128 ou uma de suas variantes ou derivados.
[188] Além disso, os técnicos no assunto compreenderão que as sequências de nucleotídeos PPO englobam homólogos, parálogos e ortólogos de SEQ ID N° 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127 ou 128, conforme definido a seguir.
[189] O termo “variante”, com relação a uma sequência (tal como uma sequência de polipeptídeos ou ácidos nucleicos, como uma sequência de nucleotídeos de regulagem da transcrição de acordo com a presente invenção), destina-se a indicar sequências substancialmente similares. Para sequências de nucleotídeos que compreendem um quadro de leitura aberta, as variantes incluem as sequências que, devido à degeneração do código genético, codificam a sequência de aminoácidos idêntica da proteína nativa. Variantes alélicas de ocorrência natural como essas podem ser identificadas com o uso de métodos de biologia molecular bem conhecidos, tais como métodos de hibridização e reação em cadeia de polimerase (PCR). Sequências de nucleotídeos variantes também incluem sequências de nucleotídeos derivadas sinteticamente, tais como as geradas, por exemplo, utilizando mutagênese dirigida a local e para quadros de leitura aberta, as que codificam a proteína nativa, bem como aquelas que codificam um polipeptídeo que contém substituições de aminoácidos com relação à proteína nativa, tais como a PPO mutada de acordo com a presente invenção, conforme descrito no presente. Geralmente, as variantes de sequências de nucleotídeos de acordo com a presente invenção possuirão pelo menos 30, 40, 50, 60 a 70%, tal como preferencialmente 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78% a 79%, geralmente pelo menos 80%, tal como 81% a 84%, pelo menos 85%, tal como 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97% a 98% e 99% de “identidade de sequências” de nucleotídeos com a sequência de nucleotídeos que codifica um polipeptídeo de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117. O percentual de identidade de um polinucleotídeo é determinado por meio de análise GAP (Needleman e Wunsch, 1970) (programa GCG) com penalidade de criação de intervalos = 5 e penalidade de extensão de intervalos = 0,3. A menos que indicado em contrário, a sequência de consulta possui pelo menos 45 nucleotídeos de comprimento e a análise de GAP alinha as duas sequências ao longo de uma região de pelo menos 45 nucleotídeos. Preferencialmente, a sequência de consulta possui pelo menos 150 nucleotídeos de comprimento e a análise de GAP alinha as duas sequências ao longo de uma região de pelo menos 150 nucleotídeos. De maior preferência, a sequência de consulta possui pelo menos 300 nucleotídeos de comprimento e a análise de GAP alinha as duas sequências ao longo de uma região de pelo menos 300 nucleotídeos. De preferência ainda maior, a análise de GAP alinha as duas sequências ao longo de todo o seu comprimento. POLIPEPTÍDEOS
[190] Por “polipeptídeo substancialmente purificado” ou “purificado”, indica-se um polipeptídeo que foi separado de um ou mais lipídios, ácidos nucleicos, outros polipeptídeos ou outras moléculas contaminantes às quais é associado no seu estado nativo. Prefere-se que o polipeptídeo substancialmente purificado seja pelo menos 60% livre, de maior preferência pelo menos 75% livre e, de maior preferência, pelo menos 90% livre de outros componentes aos quais é naturalmente associado. Como apreciarão os técnicos no assunto, o polipeptídeo purificado pode ser um polipeptídeo produzido de forma recombinante. Os termos “polipeptídeo” e “proteína” são geralmente utilizados de forma intercambiável e designam uma cadeia de polipeptídeos isolada que pode ou não ser modificada por meio da adição de grupos não de aminoácidos. Compreender-se-ia que essas cadeias de polipeptídeos podem associar-se a outros polipeptídeos, proteínas ou outras moléculas tais como cofatores. Os termos “proteínas” e “polipeptídeos”, da forma utilizada no presente, também incluem variantes, mutantes, modificações, análogos e/ou derivados dos polipeptídeos de acordo com a presente invenção conforme descrito no presente.
[191] O percentual de identidade de um polipeptídeo é determinado por meio de análise GAP (Needleman e Wunsch, 1970) (programa GCG) com penalidade de criação de intervalos = 5 e penalidade e extensão de intervalos = 0,3. A sequência de consulta possui pelo menos 25 nucleotídeos de comprimento e a análise de GAP alinha as duas sequências ao longo de uma região de pelo menos 25 aminoácidos. De maior preferência, a sequência de consulta possui pelo menos 50 aminoácidos de comprimento e a análise de GAP alinha as duas sequências ao longo de uma região de pelo menos 50 aminoácidos. De maior preferência, a sequência de consulta possui pelo menos 100 aminoácidos de comprimento e a análise de GAP alinha as duas sequências ao longo de uma região de pelo menos 100 aminoácidos. De preferência ainda maior, a sequência de consulta possui pelo menos 250 aminoácidos de comprimento e a análise de GAP alinha as duas sequências ao longo de uma região de pelo menos 250 aminoácidos. De preferência ainda maior, a análise de GAP alinha as duas sequências ao longo de todo o seu comprimento.
[192] Com referência a um polipeptídeo definido, apreciar-se-á que números de percentuais de identidade mais altos que os fornecidos acima englobarão realizações preferidas. Quando aplicável, portanto, à luz dos números mínimos de percentual de identidade, prefere-se que o polipeptídeo PPO de acordo com a presente invenção compreenda uma sequência de aminoácidos que seja pelo menos 40%, de maior preferência pelo menos 45%, de maior preferência pelo menos 50%, de maior preferência pelo menos 55%, de maior preferência pelo menos 60%, de maior preferência pelo menos 65%, de maior preferência pelo menos 70%, de maior preferência pelo menos 75%, de maior preferência pelo menos 80%, de maior preferência pelo menos 85%, de maior preferência pelo menos 90%, de maior preferência pelo menos 91%, de maior preferência pelo menos 92%, de maior preferência pelo menos 93%, de maior preferência pelo menos 94%, de maior preferência pelo menos 95%, de maior preferência pelo menos 96%, de maior preferência pelo menos 97%, de maior preferência pelo menos 98%, de maior preferência pelo menos 99%, de maior preferência pelo menos 99,1%, de maior preferência pelo menos 99,2%, de maior preferência pelo menos 99,3%, de maior preferência pelo menos 99,4%, de maior preferência pelo menos 99,5%, de maior preferência pelo menos 99,6%, de maior preferência pelo menos 99,7%, de maior preferência pelo menos 99,8% e, de preferência ainda maior, pelo menos 99,9% idêntica a SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117.
[193] Por polipeptídeo “variante", indica-se um polipeptídeo derivado da proteína de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117, por meio de exclusão (a chamada truncagem) ou adição de um ou mais aminoácidos à extremidade terminal N e/ou terminal C da proteína nativa; exclusão ou adição de um ou mais aminoácidos em um ou mais locais na proteína nativa; ou substituição de um ou mais aminoácidos em um ou mais locais na proteína nativa. Essas variantes podem resultar, por exemplo, de polimorfismo genético ou de manipulação humana. Os métodos dessas manipulações são geralmente conhecidos na técnica.
[194] “Derivados” de uma proteína englobam peptídeos, oligopeptídeos, polipeptídeos, proteínas e/ou enzimas que possuem substituições, exclusões e/ou inserções de aminoácidos com relação à proteína não modificada em questão e possuem atividade funcional e biológica similar à proteína não modificada da qual são derivados.
[195] “Homólogos” de uma proteína englobam peptídeos, oligopeptídeos, polipeptídeos, proteínas e enzimas que possuem substituições, exclusões e/ou inserções de aminoácidos com relação à proteína não modificada em questão e possuem atividade funcional e biológica similar à proteína não modificada da qual são derivados.
[196] Exclusão designa a remoção de um ou mais aminoácidos de uma proteína.
[197] Inserção designa um ou mais resíduos de aminoácidos que são introduzidos em um local previamente determinado em uma proteína. Inserções podem compreender fusões N-terminais e/ou C-terminais bem como inserções intrassequenciais de aminoácidos isolados ou múltiplos. Geralmente, inserções na sequência de aminoácidos serão menores que fusões N ou C- terminais, da ordem de cerca de um a dez resíduos. Exemplos de proteínas de fusão N ou C-terminais ou peptídeos incluem o domínio de ligação ou domínio de ativação de um ativador da transcrição conforme utilizado no sistema bi- híbrido de levedura, proteínas de revestimento de fagos, marca de (histidina)-6, marca de glutationa S-transferase, proteína A, proteína de ligação de maltose, di-hidrofolato reductase, epítopo Marca 100, epítopo c-myc, epítopo FLAG®, lacZ, CMP (peptídeo de ligação de calmodulina), epítopo HA, epítopo de proteína C e epítopo VSV.
[198] Substituição designa a substituição de aminoácidos da proteína por outros aminoácidos que possuam propriedades similares (tais como hidrofobicidade, hidrofilicidade, antigenicidade, propensão à formação ou rompimento de estruturas α-helicoidais ou estruturas de folhas β similares). Substituições de aminoácidos são tipicamente de resíduos isolados, mas podem ser reunidos dependendo de restrições funcionais colocadas sobre o polipeptídeo e podem variar de um a dez aminoácidos; as inserções serão normalmente da ordem de cerca de um a dez resíduos de aminoácidos. As substituições de aminoácidos são preferencialmente substituições de aminoácidos conservadoras. Tabelas de substituição conservadoras são bem conhecidas na técnica (vide, por exemplo, Creighton (1984), Proteins, W. H. Freeman & Company (Eds). TABELA 1
[199] Exemplos de substituições de aminoácidos conservadas:
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[200] Substituições, exclusões e/ou inserções de aminoácidos podem ser facilmente realizadas utilizando métodos sintéticos de peptídeos bem conhecidos na técnica, tais como síntese de peptídeos em fase sólida e similares, ou por meio da manipulação de DNA recombinante. Os métodos de manipulação de sequências de DNA para produzir variantes de substituição, inserção ou exclusão de uma proteína são bem conhecidos na técnica. Métodos de elaboração de mutações de substituição em locais previamente determinados em DNA são bem conhecidos dos técnicos no assunto, por exemplo, e incluem mutagênese de M13, mutagênese in vitro de Gene T7 (USB, Cleveland OH), mutagênese dirigida a local QuickChange (Stratagene, San Diego CA), mutagênese dirigida a local mediada por PCR ou outros protocolos de mutagênese dirigida a local.
[201] “Derivados” incluem adicionalmente peptídeos, oligopeptídeos, polipeptídeos que podem, em comparação com a sequência de aminoácidos da forma de ocorrência natural da proteína, tal como a proteína de interesse, compreendem substituições de aminoácidos por resíduos de aminoácidos não de ocorrência natural ou adições de resíduos de amionácidos não de ocorrência natural. “Derivados” de proteína também englobam peptídeos, oligopeptídeos e polipeptídeos que compreendem resíduos de aminoácidos não alterados de ocorência natural ou alterados de ocorrência natural (glicosilados, acilados, prenilados, fosforilados, miristoilados, sulfatados etc.) em comparação com a sequência de aminoácidos de uma forma de ocorrência natural do polipeptídeo. Um derivado pode também compreender uma ou mais adições ou substituintes não de aminoácidos em comparação com a sequência de aminoácidos da qual é derivado, tal como uma molécula relatora ou outro ligante, ligado de forma covalente ou não covalente à sequência de aminoácidos, tal como uma molécula relatora que é ligada para facilitar a sua detecção, e resíduos de aminoácidos de ocorrência não natural com relação à sequência de aminoácidos de uma proteína de ocorrência natural. Além disso, “derivados” também incluem fusões da forma de ocorrência natural da proteína com peptídeos marcadores tais como FLAG, HIS6 ou tiorredoxina (para análise de peptídeos marcadores, vide Terpe, Appl. Microbiol. Biotechnol. 60, 523-533, 2003).
[202] “Ortólogos” e “parálogos” englobam conceitos evolucionários utilizados para descrever as relações ancestrais de genes. Os parálogos são genes dentro da mesma espécie que se originaram da duplicação de um gene ancestral; ortólogos são genes de diferentes organismos que se originaram por meio da formação de espécies e também são derivados de um gene ancestral comum.
[203] É bem conhecido na técnica que parálogos e ortólogos podem compartilhar domínios distintos que abrigam resíduos de aminoácidos apropriados em dados locais, tais como bolsos de ligação para substratos específicos ou motivos de ligação para interação com outras proteínas.
[204] O termo “domínio” designa um conjunto de aminoácidos conservados em posições específicas ao longo de um alinhamento de sequências de proteínas com evolução relacionada. Embora os aminoácidos em outras posições possam variar entre homólogos, aminoácidos que são altamente conservados em posições específicas indicam aminoácidos que são provavelmente essenciais na estrutura, estabilidade ou função de uma proteína. Identificados pelo seu alto grau de conservação em sequências alinhadas de uma família de homólogos de proteína, eles podem ser utilizados como identificadores para determinar se qualquer polipeptídeo em questão pertence a uma família de polipeptídeos identificada anteriormente.
[205] A expressão “motivo” ou “sequência de consenso” designa uma região conservada curta na sequência de proteínas com evolução relacionada. Os motivos são partes de domínios que frequentemente possuem alta conservação, mas podem também incluir apenas parte do domínio ou estar localizadas fora do domínio conservado (se todos os aminoácidos do motivo encontrarem-se fora de um domínio definido). Os motivos preferidos que estão contidos nas sequências dos polipeptídeos PPO de acordo com a presente invenção são SQ [N/K/H]KRYI, TLGTLFSS e [F/Y]TTF [V/I]GG.
[206] Existem bancos de dados especializados para identificação de domínios, tais como SMART (Schultz et al. (1998), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 95, 5857-5864; Letunic et al. (2002), Nucleic Acids Res. 30, 242-244), InterPro (Mulder et al. (2003), Nucl. Acids Res. 31, 315-318), Prosite (Bucher e Bairoch (1994), A Generalized Profile Syntax for Biomolecular Sequences Motifs and its Function in Automatic Sequence Interpretation, em ISMB-94; Proceedings 2nd International Conference on Intelligent Systems for Molecular Biology, Altman, R., Brutlag, D., Karp, P., Lathrop, R., Searls, D., Eds., págs. 53-61, AAAI Press, Menlo Park; Hulo et al., Nucl. Acids Res. 32: D134-D137 (2004)) ou Pfam (Bateman et al., Nucleic Acids Research 30 (1): 276-280 (2002)). Um conjunto de ferramentas para análise in silico de sequências de proteínas é disponível no servidor proteômico ExPASy (Instituto Suíço de Bioinformática (Gasteiger et al., ExPASy: The Proteomics Server for In-Depth Protein Knowledge and Analysis, Nucleic Acids Res. 31: 3784-3788 (2003)). Domínios ou motivos podem também ser identificados utilizando métodos rotineiros, tais como alinhamento de sequências.
[207] Os métodos de alinhamento de sequências para comparação são bem conhecidos na técnica e esses métodos incluem GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA e TFASTA. GAP utiliza o algoritmo de Needleman e Wunsch ((1970), J. Mol. Biol. 48: 443-453), para encontrar o alinhamento global (ou seja, que cobre as sequências completas) de duas sequências que maximiza o número de coincidências e minimiza o número de intervalos. O algoritmo BLAST (Altschul et al. (1990), J. Mol. Biol. 215: 403-10) calcula o percentual de identidade de sequências e realiza análise estatística da similaridade entre as duas sequências. O software para realização de análises BLAST é disponível ao público por meio do Centro Nacional de Informações Biotecnológicas (NCBI). Homólogos podem ser facilmente identificados utilizando, por exemplo, o algoritmo de alinhamento de sequências múltiplas ClustalW (versão 1.83) com os parâmetros de alinhamento em pares padrão e um método de avaliação percentual. Percentuais globais de similaridade e identidade podem também ser determinados utilizando um dos métodos disponíveis no pacote de software MatGAT (Campanella et al., BMC Bioinformatics, dez de julho de 2003; 4: 29, MatGAT: an Application that Generates Similarity/Identity Matrices Using Protein or DNA Sequences). Podem ser realizadas pequenas edições manuais para otimizar o alinhamento entre motivos conservados, como seria evidente para os técnicos no assunto. Além disso, em vez de utilizar sequências de comprimento total para identificação de homólogos, podem também ser empregados domínios específicos. Os valores de identidade de sequências podem ser determinados ao longo de toda a sequência de aminoácidos ou ácidos nucleicos ou de domínios selecionados ou motivo(s) conservado(s), utilizando os programas mencionados acima utilizando os parâmetros padrão. Para alinhamentos locais, o algoritmo de Smith-Waterman é particularmente útil (Smith, T. F., Waterman, M. S. (1981), J. Mol. Biol. 147 (1); 195-7).
[208] Os inventores da presente invenção descobriram que, substituindo um ou mais dos principais resíduos de aminoácidos principais, por exemplo, por meio do emprego de um dos métodos descritos acima para realizar mutação dos ácidos nucleicos codificadores, a tolerância ou a resistência a herbicidas poderá aumentar sensivelmente em comparação com a atividade das enzimas PPO do tipo selvagem com SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117. Substituições preferidas de PPO mutada são aquelas que aumentam a tolerância a herbicidas da planta, mas deixam a atividade biológica da atividade de oxigenase substancialmente não afetada.
[209] Consequentemente, em outro objeto da presente invenção, os resíduos de aminoácidos principais de uma enzima PPO que compreendem SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos são substituídos por qualquer outro aminoácido.
[210] Em uma realização, os resíduos de aminoácidos principais de uma enzima PPO, sua variante, derivado, ortólogo, parálogo ou homólogo são substituídos por um aminoácido conservado conforme ilustrado na Tabela 1.
[211] Os técnicos no assunto compreenderão que os aminoácidos localizados em boa proximidade das posições de aminoácidos mencionadas abaixo podem também ser substituídos. Desta forma, em outra realização, a variante de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos compreendem PPO mutada, em que um aminoácido nas posições de aminoácidos ±3, ±2 ou ±1 de um aminoácido principal é substituído por qualquer outro aminoácido.
[212] Com base em métodos bem conhecidos na técnica, pode ser desenvolvido um padrão de sequências altamente característico, por meio do qual vários possíveis PPO que sofreram mutação com a atividade desejada podem ser pesquisados.
[213] A pesquisa por possíveis PPO que sofreram mutação adicionais por meio da aplicação de um padrão de sequências apropriado também seria englobada pela presente invenção. Os técnicos no assunto compreenderão que o padrão de sequências do presente não é limitado pelas distâncias exatas entre dois resíduos de aminoácidos adjacentes do mencionado padrão. Cada uma das distâncias entre dois vizinhos nos padrões acima pode variar independentemente entre si, por exemplo, em até ±10, ±5, ±3, ±2 ou ±1 posições de aminoácidos sem afetar substancialmente a atividade desejada.
[214] Além disso, por meio da aplicação do método de mutagênese dirigida a local, particularmente mutagenes de saturação (vide, por exemplo, Schenk et al., Biospektrum 03/2006, págs. 277-279), os inventores da presente invenção identificaram e geraram substituições de aminoácidos específicas e suas combinações, que - quando introduzidas em plantas por meio da transformação e expressão do ácido nucleico que codifica PPO mutada correspondente - conferem maior tolerância ou resistência a herbicidas a um herbicida inibidor de PPO à mencionada planta.
[215] Em uma realização particularmente preferida, portanto, a variante ou o derivado da PPO mutada refere-se a um polipeptídeo que compreende SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, ou 117, que compreende uma substituição de aminoácidos isolada nas posições ilustradas na Tabela 2a a seguir. TABELA 2A
[216] Substituições de aminoácidos isoladas em SEQ ID N° 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117.
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[217] Em uma realização particularmente preferida adicional, a variante ou o derivado da PPO mutada refere-se a SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117, que compreende uma substituição de aminoácido isolada nas posições ilustradas na Tabela 2b a seguir.
[218] Dever-se-á observar que o sítio de mutação 1 da Tabela 2a corresponde à posição 1 da Tabela 2b; o sítio de mutação 2 da Tabela 2a corresponde à posição 16 da Tabela 2b; o sítio de mutação 3 da Tabela 2a corresponde à posição 17 da Tabela 2b; o sítio de mutação 4 da Tabela 2a corresponde à posição 38 da Tabela 2b; e o sítio de mutação 5 da Tabela 2a corresponde à posição 42 da Tabela 2b.
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[219] Testes para determinar a funcionalidade desses mutantes são facilmente disponíveis na técnica e, respectivamente, descritos no capítulo de Exemplos da presente invenção.
[220] Em uma realização preferida, a PPO mutada refere-se a um polipeptídeo de SEQ ID N° 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117, em que a sequência de aminoácidos difere no sítio de mutação 1 (que corresponde a Arg128 de SEQ ID N° 1) de acordo com a Tabela 2a e/ou no sítio de mutação 5 (que corresponde a Phe420 de SEQ ID N° 1) de acordo com a Tabela 2a.
[221] Exemplos de diferenças nessas posições de aminoácidos incluem, mas sem limitações, um ou mais dos seguintes: - o aminoácido no sítio de mutação 1 é diferente de Arginina (ou Tirosina, ou Cisteína; conforme o caso, pode ser de acordo com a Tabela 2a); - o aminoácido no sítio de mutação 5 é diferente de Fenilalanina (ou Metionina, Tirosina ou Leucina, conforme venha a ser o caso de acordo com a Tabela 2a).
[222] Em outra realização particularmente preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 (que corresponde a Arg128 de SEQ ID N° 1) é Leu, Ala, Val, Ile, Met, Tyr, Gly, Asn, Cys, Phe, Ser, Thr, Gln ou His e o aminoácido no sítio de mutação 5 (que corresponde a Phe420 de SEQ ID N° 1) é Ala, Leu, Val, Ile ou Met.
[223] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Leu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[224] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Leu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[225] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Leu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[226] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Leu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[227] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Leu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[228] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[229] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[230] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[231] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[232] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[233] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[234] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[235] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[236] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[237] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[238] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[239] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[240] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[241] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[242] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[243] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[244] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[245] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[246] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[247] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[248] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[249] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[250] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[251] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[252] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[253] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[254] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[255] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[256] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[257] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[258] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[259] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[260] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[261] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[262] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[263] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[264] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[265] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[266] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[267] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[268] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[269] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[270] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[271] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[272] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[273] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[274] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[275] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[276] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[277] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[278] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[279] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[280] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[281] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[282] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[283] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[284] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[285] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[286] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[287] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[288] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[289] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[290] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[291] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[292] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 1 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[293] Em outra realização preferida, a PPO mutada designa um polipeptídeo de SEQ ID N° 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117, em que a sequência de aminoácidos difere no sítio de mutação 4 (que corresponde a Leu397 de SEQ ID N° 1) de acordo com a Tabela 2a e/ou no sítio de mutação 5 (que corresponde a Phe420 de SEQ ID N° 1) de acordo com a Tabela 2a.
[294] Exemplos de diferenças nessas posições de aminoácidos incluem, mas sem limitações, um ou mais dos seguintes: - o aminoácido no sítio de mutação 4 é diferente de Leucina (ou Alanina, Serina ou Fenilalanina, conforme venha a ser o caso de acordo com a Tabela 2a); e - o aminoácido no sítio de mutação 5 é diferente de Fenilalanina (ou Metionina, Tirosina ou Leucina, conforme venha a ser o caso de acordo com a Tabela 2a).
[295] Em uma realização particularmente preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 (que corresponde a Leu397 de SEQ ID N° 1) é Ala, Arg, Val, Ile, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gln, Cys, Gly, Pro, Phe, Tyr ou Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 (que corresponde a Phe420 de SEQ ID N° 1) é Ala, Leu, Val, Ile, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gln, Cys, Gly, Pro, Arg, Tyr ou Trp.
[296] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[297] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[298] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[299] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[300] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[301] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[302] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[303] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[304] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[305] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[306] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[307] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[308] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[309] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[310] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[311] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[312] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[313] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[314] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ala e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[315] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[316] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[317] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[318] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[319] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[320] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[321] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[322] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[323] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[324] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[325] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[326] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[327] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[328] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[329] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[330] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[331] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[332] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[333] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Arg e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[334] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[335] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[336] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[337] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[338] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[339] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[340] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[341] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[342] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[343] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[344] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[345] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[346] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[347] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[348] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[349] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[350] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[351] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[352] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Val e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[353] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[354] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[355] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[356] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[357] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[358] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[359] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[360] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[361] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[362] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[363] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[364] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[365] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[366] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[367] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[368] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[369] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[370] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[371] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ile e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[372] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[373] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[374] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[375] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[376] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[377] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[378] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[379] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[380] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[381] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[382] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[383] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[384] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[385] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[386] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[387] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[388] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[389] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[390] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Met e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[391] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[392] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[393] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[394] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[395] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[396] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[397] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[398] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[399] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[400] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[401] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[402] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[403] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[404] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[405] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[406] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[407] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[408] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[409] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é His e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[410] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[411] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[412] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[413] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[414] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[415] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[416] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[417] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[418] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[419] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[420] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[421] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[422] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[423] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[424] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[425] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[426] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[427] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[428] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Lys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[429] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[430] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[431] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[432] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[433] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[434] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[435] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[436] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[437] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[438] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[439] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[440] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[441] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[442] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[443] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[444] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[445] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[446] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[447] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[448] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[449] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[450] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[451] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[452] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[453] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[454] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[455] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[456] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[457] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[458] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[459] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[460] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[461] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[462] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[463] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[464] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[465] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[466] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Glu e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[467] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[468] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[469] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[470] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[471] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[472] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[473] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[474] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[475] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[476] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[477] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[478] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[479] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[480] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[481] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[482] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[483] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[484] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[485] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Ser e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[486] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[487] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[488] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[489] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[490] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[491] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[492] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[493] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[494] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[495] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[496] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[497] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[498] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[499] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[500] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[501] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[502] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[503] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[504] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Thr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[505] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[506] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[507] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[508] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[509] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[510] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[511] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[512] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[513] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[514] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[515] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[516] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[517] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[518] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[519] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[520] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[521] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[522] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[523] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Asn e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[524] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[525] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[526] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[527] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[528] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[529] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[530] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[531] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[532] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[533] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[534] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[535] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[536] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[537] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[538] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[539] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[540] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[541] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[542] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gln e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[543] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[544] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[545] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[546] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[547] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[548] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[549] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[550] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[551] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[552] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[553] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[554] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[555] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[556] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[557] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[558] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[559] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[560] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[561] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Cys e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[562] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[563] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[564] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[565] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[566] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[567] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[568] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[569] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[570] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[571] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[572] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[573] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[574] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[575] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[576] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[577] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[578] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[579] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[580] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Gly e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[581] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[582] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[583] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[584] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[585] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[586] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[587] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[588] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[589] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[590] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[591] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[592] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[593] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[594] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[595] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[596] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[597] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[598] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[599] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Pro e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[600] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[601] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[602] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[603] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[604] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[605] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[606] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[607] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[608] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[609] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[610] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[611] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[612] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[613] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[614] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[615] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[616] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[617] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[618] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Phe e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[619] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[620] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[621] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[622] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[623] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[624] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[625] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[626] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[627] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[628] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[629] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[630] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[631] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[632] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[633] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[634] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[635] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[636] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[637] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Tyr e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[638] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala.
[639] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Leu.
[640] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Val.
[641] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ile.
[642] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Met.
[643] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é His.
[644] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Lys.
[645] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asp.
[646] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Glu.
[647] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ser.
[648] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Thr.
[649] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Asn.
[650] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gln.
[651] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Cys.
[652] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Gly.
[653] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Pro.
[654] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Arg.
[655] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Tyr.
[656] Em outra realização preferida, a PPO mutada compreende uma sequência de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, suas variantes, derivados, ortólogos, parálogos ou homólogos, em que o aminoácido no sítio de mutação 4 é Trp e o aminoácido no sítio de mutação 5 é Trp.
[657] Encontrar-se-á dentro do conhecimento dos técnicos no assunto a identificação de regiões conservadas e motivos compartilhados entre os homólogos, ortólogos e parálogos de polipeptídeos PPO que compreendem SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117. Após a identificação dessas regiões conservadas que podem representar motivos de ligação apropriados, aminoácidos correspondentes aos aminoácidos relacionados na Tabela 2a e 2b podem ser selecionados para substituição por qualquer outro aminoácido, preferencialmente pelos aminoácidos relacionados nos locais de mutação 1, 2, 3, 4 ou 5.
[658] Consequentemente, os motivos preferidos compartilhados entre os homólogos, ortólogos e parálogos de polipeptídeos PPO descritos acima são Motivo 1: SQ [N/K/H]KRYI, em que o Arg na posição 5 do mencionado motivo é substituído por Leu, Ala, Val, Ile, Met, Tyr, Gly, Asn, Cys, Phe, Ser, Thr, Gln ou His; Motivo 2: TLGTLFSS, em que o Leu na posição 2 do mencionado motivo é substituído por Ala, Arg, Val, Ile, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gln, Cys, Gly, Pro, Phe, Tyr ou Trp; Motivo 3: [F/Y]TTF [V/I]GG, em que o Phe na posição 4 do mencionado motivo é substituído por Ala, Leu, Val, Ile, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gln, Cys, Gly, Pro, Arg, Tyr ou Trp.
[659] Além disso, a presente invenção refere-se a um método de identificação de herbicidas inibidores de PPO utilizanda PPO mutada, que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117 ou uma de suas variantes ou derivados.
[660] O mencionado método compreende as etapas de: a. geração de plantas ou células transgênicas que compreendem um ácido nucleico que codifica PPO mutada, em que a PPO mutada é expresso; b. aplicação de herbicida inibidor de PPO à planta ou célula transgênica de (a) e a uma planta ou célula controle da mesma variedade; c. determinação do crescimento ou da viabilidade da planta ou célula transgênica e da planta ou célula controle após a aplicação do mencionado herbicida inibidor de PPO; e d. seleção de “herbicidas inibidores de PPO” que conferem crescimento reduzido à planta ou célula controle em comparação com o crescimento da planta ou célula transgênica.
[661] Por “célula controle” ou “célula hospedeira, célula vegetal, tecido vegetal, planta, do tipo selvagem, similar”, indica-se uma planta, tecido vegetal, célula vegetal ou célula hospedeira, respectivamente, que não possui as características de resistência a herbicidas e/ou polinucleotídeo específico de acordo com a presente invenção que são descritos no presente. O uso da expressão “tipo selvagem” não se destina, portanto, a indicar que uma planta, tecido vegetal, célula vegetal ou outra célula hospedeira não possui DNA recombinante no seu genoma e/ou não possui características de resistência a herbicidas que são diferentes das descritas no presente.
[662] Outro objeto indica um método de identificação de uma sequência de nucleotídeos que codifica PPO mutada e que é resistente ou tolerante a herbicidas inibidores de PPO, em que o método compreende: a. geração de biblioteca de ácidos nucleicos codificadores de PPO mutada; b. seleção de uma população dos ácidos nucleicos que codificam PPO mutada resultantes por meio da expressão de cada um dos mencionados ácidos nucleicos em células ou plantas, ou do tratamento das mencionadas células ou plantas com herbicidas inibidores de PPO; c. comparação dos níveis de tolerância a herbicidas inibidores de PPO fornecidos pela mencionada população de ácidos nucleicos que codificam PPO mutada com o nível de tolerância a herbicidas inibidores de PPO fornecido por um ácido nucleico codificador de PPO controle; e d. seleção de pelo menos um ácido nucleico codificador de PPO mutada, que fornece nível de tolerância significativamente mais alto a herbicidas inibidores de PPO em comparação com o fornecido pelo ácido nucleico codificador de PPO controle.
[663] Em uma realização preferida, o ácido nucleico codificador de PPO mutada selecionado na etapa d fornece pelo menos duas vezes mais resistência ou tolerância de células ou plantas a herbicidas inibidores de PPO em comparação com o fornecido pelo ácido nucleico codificador de PPO controle.
[664] Em uma realização preferida adicional, o ácido nucleico codificador de PPO mutada selecionado na etapa d fornece pelo menos duas vezes, pelo menos cinco vezes, pelo menos dez vezes, pelo menos vinte vezes, pelo menos cinquenta vezes, pelo menos cem vezes, pelo menos quinhentas vezes mais resistência ou tolerância de células ou plantas a herbicidas inibidores de PPO em comparação com o fornecido pelo ácido nucleico codificador de PPO controle.
[665] A resistência ou tolerância pode ser determinada por meio da geração de células hospedeiras ou plantas transgênicas, preferencialmente células vegetais, que compreendem uma sequência de ácidos nucleicos da biblioteca da etapa a e comparação da mencionada planta transgênica com uma planta controle ou célula hospedeira, preferencialmente célula vegetal.
[666] Outro objeto indica um método de identificação de plantas ou algas que contêm um ácido nucleico que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica PPO mutada ou do tipo selvagem e que é resistente ou tolerante a herbicidas inibidores de PPO, em que o método compreende: a. identificação de quantidade eficaz de herbicida inibidor de PPO em um cultivo de células vegetais ou algas verdes que gera a morte das mencionadas células; b. tratamento das mencionadas células vegetais ou algas verdes com um agente de mutagênese; c. contato da mencionada população de células que sofreram mutagênese com quantidade eficaz de herbicida inibidor de PPO, identificado em a; d. seleção de pelo menos uma célula sobrevivente a essas condições de teste; e e. amplificação por PCR e sequenciamento de genes PPO a partir de células selecionadas em d e comparação dessas sequências com sequências de genes PPO do tipo selvagem, respectivamente.
[667] Em uma realização preferida, o mencionado agente de mutagênese é etilmetanossulfonato (EMS).
[668] Muitos métodos bem conhecidos dos técnicos no assunto são disponíveis para a obtenção de possíveis ácidos nucleicos apropriados, para identificar uma sequência de nucleotídeos que codifica PPO mutada a partir de uma série de diferentes organismos fonte potenciais que incluem micróbios, plantas, fungos, algas, cultivos misturados etc., bem como fontes ambientais de DNA, tais como solo. Esses métodos incluem, entre outros, a preparação de bibliotecas de cDNA ou DNA genômico, o uso de primers de oligonucleotídeos adequadamente degenerados, o uso de sondas com base em sequências conhecidas ou testes de complementação (por exemplo, para crescimento sobre tirosina), bem como o uso de mutagênese e comutação, a fim de fornecer sequências de codificação de PPO mutada recombinadas ou comutadas.
[669] Ácidos nucleicos que compreendem sequências codificadoras de PPO controle e possíveis podem ser expressos em levedura, em uma linhagem hospedeira bacteriana, em algas ou em plantas superiores, como fumo ou Arabidopsis, e os níveis relativos de tolerância inerente das sequências codificadoras de PPO selecionadas de acordo com um fenótipo indicador visível da planta ou linhagem transformada na presença de diferentes concentrações do herbicida inibidor de PPO selecionado. As reações de dosagem e comutações relativas em reações de dosagem associadas a esses fenótipos indicadores (formação de coloração marrom, inibição do crescimento, efeito herbicida etc.) são convenientemente expressas em termos, por exemplo, de valores GR50 (concentração para redução do crescimento de 50%) ou MIC (concentração inibidora mínima), em que os aumentos de valores correspondem a aumentos da tolerância inerente ao PPO expresso. Em um sistema de teste relativamente rápido com base na transformação de bactérias tais como E. coli, por exemplo, cada sequência codificadora de PPO mutada pode ser expressa, por exemplo, na forma de sequência de DNA sob controle de expressão de um promotor controlável tal como o promotor lacZ e controlando adequadamente, por exemplo com o uso de DNA sintético, de questões tais como o uso de códons, a fim de obter o nível de expressão mais comparável possível de diferentes sequências de PPO. Essas linhagens que expressam ácidos nucleicos que compreendem possíveis sequências de PPO alternativas podem ser colocadas em placas sobre diferentes concentrações do herbicida inibidor de PPO selecionado, opcionalmente, em um meio suplementado com tirosina e os níveis relativos de tolerância inerente das enzimas de PPO expressas estimadas com base na extensão e MIC para inibir a formação do pigmento ocronótico marrom.
[670] Em outra realização, possíveis ácidos nucleicos são transformados em material vegetal para gerar plantas transgênicas, regenerados em plantas férteis morfologicamente normais que são medidas em seguida para determinar o diferencial de tolerância a herbicidas inibidores de PPO selecionados conforme descrito no capítulo de Exemplos a seguir. Muitos métodos apropriados de transformação utilizando marcadores de seleção apropriados tais como canamicina, vetores binários tais como de Agrobacterium e regeneração vegetal, tais como de discos de folhas de fumo, são bem conhecidos na técnica. Opcionalmente, uma população controle de plantas é transformada de forma similar com um ácido nucleico que expressa o PPO controle. Alternativamente, plantas dicotiledôneas não transformadas tais como Arabidopsis ou fumo podem ser utilizadas como controle, pois estas, em qualquer dos casos, expressam o seu próprio PPO endógeno. Os níveis médios e a distribuição de níveis de tolerância a herbicidas de uma série de eventos de transformação de plantas primárias ou sua prole a herbicidas inibidores de PPO descritos acima são avaliados de forma normal com base em danos às plantas, sintomas de lixiviação meristemática etc. em uma série de diferentes concentrações de herbicidas. Estes dados podem ser expressos, por exemplo, em termos de valores GR50 derivados de curvas de dosagem/reação que possuem “dose” plotada no eixo X e “percentual de mortalidade”, “efeito herbicida”, “número de plantas verdes emergentes" etc. plotados sobre os eixos Y, em que valores de GR50 mais altos correspondem a níveis maiores de tolerância inerente do PPO expresso. Os herbicidas podem ser adequadamente aplicados antes ou depois da emergência.
[671] Outro objeto da presente invenção refere-se a um ácido nucleico isolado e/ou recombinante e/ou quimicamente sintetizado que codifica PPO mutada e compreende uma sequência de aminoácidos de SEQ ID N° 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117 ou uma de suas variantes ou derivados.
[672] Em uma realização, o ácido nucleico pode ser identificado por meio de um método conforme descrito acima.
[673] Em uma realização preferida, a PPO mutada codificada é uma variante de SEQ ID N° 1, 11,30, 31, 37, 117 ou um de seus ortólogos, que inclui um ou mais dos seguintes: - o aminoácido correspondente ao sítio de mutação 1 é Leu, Ala, Val, Ile, Met, Tyr, Gly, Asn, Cys, Phe, Ser, Thr, Gln ou His; e/ou - o aminoácido no sítio de mutação 4 ou a ele correspondente é Ala, Arg, Val, Ile, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gln, Cys, Gly, Pro, Phe, Tyr ou Trp; e/ou - o aminoácido no sítio de mutação 5 é Ala, Leu, Val, Ile, Met, His, Lys, Asp, Glu, Ser, Thr, Asn, Gln, Cys, Gly, Pro, Arg, Tyr ou Trp.
[674] Em outra realização, a presente invenção designa uma célula vegetal transformada por um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PPO mutado de acordo com a presente invenção ou uma célula vegetal que sofreu mutação para obter uma planta que expressa um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo PPO mutado de acordo com a presente invenção, em que a expressão do ácido nucleico na célula vegetal resulta em aumento da resistência ou tolerância a um herbicida inibidor de PPO em comparação com uma variedade do tipo selvagem da célula vegetal. Preferencialmente, o ácido nucleico que codifica polipeptídeo PPO mutado compreende (a) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo conforme exibido em SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117 ou uma de suas variantes ou derivados; (b) um polinucleotídeo que compreende pelo menos sessenta nucleotídeos consecutivos de qualquer um em (a); e (c) um polinucleotídeo complementar ao polinucleotídeo de qualquer um dentre (a) e (b).
[675] O termo “expressão/expressar” ou “expressão genética” indica a transcrição de um ou mais genes específicos ou construção genética específica. O termo “expressão” ou “expressão genética” indica particularmente a transcrição de um ou mais genes ou construção genética em RNA estrutural (rRNA, tRNA) ou mRNA com ou sem tradução subsequente desta última em proteína. O processo inclui a transcrição de DNA e o processamento do produto de mRNA resultante.
[676] Para obter o efeito desejado, ou seja, plantas que são tolerantes ou resistentes ao herbicida derivado de herbicida inibidor de PPO de acordo com a presente invenção, compreender-se-á que o pelo menos um ácido nucleico é “sobre-expresso” por métodos e meios conhecidos dos técnicos no assunto.
[677] O termo “sobre-expressão” ou “aumento da expressão”, da forma utilizada no presente, indica qualquer forma de expressão que seja adicional ao nível de expressão do tipo selvagem original. Métodos de aumento da expressão de genes ou produtos genéticos são bem documentados na técnica e incluem, por exemplo, sobre-expressão dirigida por promotores apropriados, uso de amplificadores da transcrição ou amplificadores da tradução. Ácidos nucleicos isolados que servem de elementos promotores ou aprimoradores podem ser introduzidos em posição apropriada (tipicamente acima no fluxo) de uma forma não heteróloga de um polinucleotídeo, de forma a regular para cima a expressão de um ácido nucleico que codifica o polipeptídeo de interesse. Promotores endógenos podem ser alterados in vivo, por exemplo, por meio de mutação, exclusão e/ou substituição (vide Kmiec, US 5.565.350; Zarling et al., WO 9322443) ou promotores isolados podem ser introduzidos em uma célula vegetal na orientação e distância adequadas de um gene de acordo com a presente invenção, de forma a controlar a expressão do gene.
[678] Caso se deseje a expressão de polipeptídeos, geralmente é desejável incluir uma região de poliadenilação na extremidade 3’ de uma região de codificação de polinucleotídeos. A região de poliadenilação pode ser derivada do gene natural, de uma série de outros genes vegetais ou de T-DNA. A sequência com extremidade 3’ a ser adicionada pode ser derivada, por exemplo, dos genes nopalino sintase ou octopino sintase ou, alternativamente, de outro gene vegetal ou, de menor preferência, de qualquer outro gene eucariótico.
[679] Uma sequência de introns pode também ser adicionada à região não traduzida 5' (UTR) ou à sequência de codificação da sequência de codificação parcial para aumentar a quantidade da mensagem madura que se acumula no citosol. Demonstrou-se que a inclusão de um intron divisível na unidade de transcrição em construções de expressão animal e vegetal aumenta a expressão genética nos níveis de mRNA e de proteína em até mil vezes (Buchman e Berg (1988), Mol. Cell Biol. 8: 4395-4405; Callis et al. (1987), Genes Dev. 1: 1183-1200). Esse aprimoramento de introns de expressão genética é tipicamente maior quando colocado perto da extremidade 5’ da unidade de transcrição. O uso dos introns de milho intron Adh1-S 1, 2 e 6 e do intron Bronze- 1 é conhecido na técnica. Para informações gerais, consulte: The Maize Handbook, Capítulo 116, Freeling e Walbot, Eds., Springer, Nova Iorque (1994).
[680] O termo “introdução” ou “transformação”, da forma indicada no presente, engloba a transferência de um polinucleotídeo exógeno para uma célula hospedeira, independentemente do método empregado para a transferência. Tecido vegetal capaz de propagação clonal subsequente, seja por meio de organogênese ou de embriogênese, pode ser transformado com uma construção genética de acordo com a presente invenção e uma planta inteira regenerada a partir dela. O tecido específico selecionado variará dependendo dos sistemas de propagação clonal disponíveis e mais adequados à espécie específica sendo transformada. Exemplos de alvos de tecido incluem discos de folhas, pólen, embriões, cotilédones, hipocotilédones, megagametófitos, tecido de calo, tecido meristemático existente (tal como meristema apical, botões axilares e meristemas das raízes) e tecido meristemático induzido (por exemplo, meristema de cotilédone e meristema de hipocotilédone). O polinucleotídeo pode ser introduzido de forma transitória ou estável em células hospedeiras e pode ser mantido de forma não integrada, por exemplo, como plasmídeo. Alternativamente, ele pode ser integrado ao genoma hospedeiro. A célula vegetal transformada resultante pode ser utilizada em seguida para regenerar uma planta transformada de forma conhecida dos técnicos no assunto.
[681] A transferência de genes exógenos para o genoma da planta é denominada transformação. A transformação de espécies vegetais é agora uma técnica razoavelmente rotineira. Convenientemente, qualquer um dentre vários métodos de transformação pode ser utilizado para introduzir o gene de interesse em uma célula ancestral apropriada. Os métodos descritos para a transformação e regeneração de plantas a partir de tecidos vegetais ou células vegetais podem ser utilizados para transformação transitória ou estável. Métodos de transformação incluem o uso de lipossomos, eletroporação, substâncias que aumentam a absorção de DNA livre, injeção do DNA diretamente na planta, bombardeamento de disparador de partículas, transformação utilizando vírus ou pólen e microprojeção. Métodos podem ser selecionados a partir do método de cálcio e polietileno glicol para protoplastas (Krens, F. A. et al. (1982), Nature 296, 72-74; Negrutiu, I. et al. (1987), Plant Mol. Biol. 8: 363-373); eletroporação de protoplastas (Shillitio, R. D. et al. (1985), Bio/Technol. 3, 1099-1102); microinjeção em material vegetal (Crossway, A. et al. (1986), Mol. Gen. Genet. 202: 179-185); bombardeamento de partículas revestidas com RNA ou DNA (Klein, T. M. et al. (1987), Nature 327: 70), infecção com vírus (não integrantes) e similares. Plantas transgênicas, incluindo plantas produtoras transgênicas, são preferencialmente produzidas por meio de transformação mediada por Agrobacterium. Um método de transformação conveniente é a transformação in planta. Com este propósito, é possível, por exemplo, permitir a ação das agrobactérias sobre sementes vegetais ou a inoculação do meristema vegetal com agrobactérias. Comprovou-se ser particularmente conveniente, de acordo com a presente invenção, permitir a ação de uma suspensão de agrobactérias transformadas sobre a planta intacta ou pelo menos sobre os primórdios das flores. A planta é cultivada em seguida até que sejam obtidas as sementes da planta tratada (Clough e Bent, Plant J. (1998) 16, 735-743). Métodos de transformação de arroz mediada por Agrobacterium incluem métodos bem conhecidos de transformação de arroz, tais como os descritos em qualquer um dos seguintes: Pedido de Patente Europeu EP 1198985 A1, Aldemita e Hodges (Planta 199: 612-617, 1996); Chan et al. (Plant Mol. Biol. 22 (3): 491-506, 1993), Hiei et al. (Plant J. 6 (2): 271-282, 1994), cujos teores são incorporados ao presente como referência, como se totalmente descritos. No caso de transformação de milho, o método preferido é conforme descrito em Ishida et al. (Nat. Biotechnol. 14 (6): 745-50, 1996) ou Frame et al. (Plant Physiol. 129 (1): 13-22, 2002), cujos teores são incorporados ao presente como referência, como se totalmente descritos. Os mencionados métodos são adicionalmente descritos como forma de exemplo em B. Jenes et al., Techniques for Gene Transfer em Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S. D. Kung e R. Wu, Academic Press (1993) 128-143 e em Potrykus Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42 (1991) 205-225). Os ácidos nucleicos ou a construção a ser expressa são preferencialmente clonados em um vetor, que é apropriado para a transformação de Agrobacterium tumefaciens, tal como pBin19 (Bevan et al., Nucl. Acids Res. 12 (1984) 8711. Agrobactérias transformadas por esse vetor podem ser utilizadas em seguida de forma conhecida para a transformação de plantas, tais como plantas utilizadas como modelo, como Arabidopsis (Arabidopsis thaliana, dentro do escopo da presente invenção, não é considerada planta produtora) ou plantas produtoras, tais como plantas de fumo, por exemplo, por meio da imersão de folhas esmagadas ou picadas em uma solução agrobacteriana e seu cultivo em seguida em meios adequados. A transformação de plantas por meio de Agrobacterium tumefaciens é descrita, por exemplo, por Hofgen e Willmitzer em Nucl. Acids Res. (1988) 16, 9877, ou é conhecida, entre outros, por meio de F. F. White, Vectors for Gene Transfer in Higher Plants; em Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S. D. Kung e R. Wu, Academic Press, 1993, págs. 15-38.
[682] Além da transformação de células somáticas, que necessitam ser regeneradas em seguida em plantas intactas, também é possível transformar as células de meristemas vegetais e, particularmente, as células que se desenvolvem em gametas. Neste caso, os gametas transformados seguem o desenvolvimento natural das plantas, gerando plantas transgênicas. Desta forma, sementes de Arabidopsis são tratadas, por exemplo, com agrobactérias e as sementes são obtidas das plantas em desenvolvimento, uma certa proporção das quais é transformada e, portanto, transgênica (Feldman, K. A. e Marks, M. D. (1987), Mol. Gen. Genet. 208: 274-289; Feldmann, K. (1992) em C. Koncz, N. H. Chua e J. Shell, eds., Methods in Arabidopsis Research, Word Scientific, Cingapura, págs. 274-289). Métodos alternativos são baseados na remoção repetida das inflorescências e na incubação do local de extirpação no centro da roseta com agrobactérias transformadas, de forma que as sementes transformadas possam ser obtidas de forma similar posteriormente (Chang (1994), Plant J. 5: 551-558; Katavic (1994), Mol. Gen. Genet., 245: 363-370). Um método especialmente eficaz, entretanto, é o método de infiltração a vácuo com suas modificações tais como o método de “mergulhamento floral”. No caso de infiltração a vácuo de Arabidopsis, plantas intactas sob pressão reduzida são tratadas com uma suspensão agrobacteriana (Berchthold, N. (1993), C. R. Acad. Sci. Paris Life Sci., 316: 1194-1199), enquanto, no caso do método de “mergulhamento floral”, o tecido floral em desenvolvimento é rapidamente incubado com uma suspensão agrobacteriana tratada com tensoativo (Clough, S. J. e Bent, A. F. (1998), The Plant J. 16, 735-743). Uma certa proporção de sementes transgênicas é colhida nos dois casos e essas sementes podem ser diferenciadas de sementes não transgênicas por meio de cultivo sob as condições seletivas descritas acima. Além disso, a transformação estável de plastídeos é vantajosa porque os plastídeos são herdados maternalmente na maior parte dos produtos, reduzindo ou eliminando o risco de fluxo de transgene através do pólen. A transformação do genoma de cloroplasta é geralmente atingida por meio de um processo que foi exibido esquematicamente em Klaus et al., 2004 (Nature Biotechnology 22 (2), 225-229). Resumidamente, as sequências a serem transformadas são clonadas entre si com um gene marcador selecionável entre sequências laterais homólogas ao genoma de cloroplasta. Essas sequências laterais homólogas dirigem a integração específica de local no plastoma. A transformação de plastídeos foi descrita para diversas espécies vegetais diferentes e uma análise geral é fornecida em Bock (2001), Transgenic plastids in basic research and plant biotechnology, J. Mol. Biol., 21 de setembro de 2001; 312 (3): 425-38 ou Maliga, P. (2003), Progress towards commercialization of plastid transformation technology, Trends Biotechnol. 21, 20-28. Progresso biotecnológico adicional foi recentemente relatado na forma de transformadores de plastídeos livres marcadores, que podem ser produzidos por um gene marcador cointegrado transitório (Klaus et al., 2004, Nature Biotechnology 22 (2), 225-229. As células vegetais geneticamente modificadas podem ser regeneradas por meio de todos os métodos com os quais os técnicos no assunto são familiares. Métodos apropriados podem ser encontrados nas publicações mencionadas acima por S. D. Kung e R. Wu, Potrykus ou Hofgen e Willmitzer.
[683] Geralmente após a transformação, células vegetais ou agrupamentos celulares são selecionados para determinar a presença de um ou mais marcadores que são codificados por genes que podem ser expressos em plantas cotransferidos com o gene de interesse, após o quê o material transformado é regenerado em uma planta inteira. Para selecionar plantas transformadas, o material vegetal obtido na transformação é, via de regra, submetido a condições seletivas, de forma que plantas transformadas possam ser diferenciadas de plantas não transformadas. As sementes obtidas da forma descrita acima podem ser plantadas, por exemplo, e, após um período de cultivo inicial, submetidas a seleção apropriada por meio de pulverização. Uma possibilidade adicional consiste no cultivo das sementes, se apropriado após esterilização, sobre placas agar utilizando um agente de seleção apropriado, de forma que apenas as sementes transformadas possam crescer e tornar-se plantas. Alternativamente, as plantas transformadas são selecionadas para determinar a presença de marcadores selecionáveis tais como os descritos acima.
[684] Após a transferência e regeneração de DNA, plantas supostamente transformadas podem também ser avaliadas, por exemplo, utilizando análise Southern, para determinar a presença do gene de interesses, número de cópias e/ou organização genômica. Alternativa ou adicionalmente, os níveis de expressão do DNA recém-introduzido podem ser monitorados utilizando análise Northern e/ou Western, em que as duas técnicas são bem conhecidas dos técnicos comuns no assunto.
[685] As plantas transformadas geradas podem ser propagadas por uma série de meios, tais como por meio de propagação clonal ou métodos clássicos de cultivo. Uma primeira geração de plantas transformadas (ou T1) pode ser isolada, por exemplo, os transformados de segunda geração homozigóticos (ou T2) são selecionados e as plantas T2 podem ser propagadas em seguida por meio de métodos clássicos de cultivo. Os organismos transformados gerados podem assumir uma série de formas. Eles podem, por exemplo, ser quimeras de células transformadas e células não transformadas; transformadores clonais (por exemplo, todas as células transformadas para conter o cassete de expressão); enxertos de tecidos transformados e não transformados (por exemplo, em plantas, um conjunto de raízes transformado enxertado em uma muda não transformada).
[686] Preferencialmente, o ácido nucleico PPO do tipo selvagem ou que sofreu mutação compreende uma sequência de polinucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste de: (a) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo conforme exibido em SEQ ID N° 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117 ou uma de suas variantes ou derivados; (b) um polinucleotídeo que compreende pelo menos sessenta nucleotídeos consecutivos de qualquer um em (a); e (c) um polinucleotídeo complementar ao polinucleotídeo de qualquer um dentre (a) e (b).
[687] Preferencialmente, a expressão do ácido nucleico na planta resulta em maior resistência da planta a herbicida inibidor de PPO em comparação com uma variedade da planta do tipo selvagem.
[688] Em outra realização, a presente invenção designa plantas, preferencialmente plantas transgênicas, que compreendem uma célula vegetal de acordo com a presente invenção, em que a expressão do ácido nucleico na planta resulta em aumento da resistência da planta a herbicidas inibidores de PPO em comparação com variedade da planta do tipo selvagem.
[689] As plantas descritas no presente podem ser plantas produtoras transgênicas ou plantas não transgênicas.
[690] Para os propósitos da presente invenção, “transgênico”, “transgene” ou “recombinante” indica que, com relação, por exemplo, a uma sequência de ácidos nucleicos, cassete de expressão, construção genética ou vetor que compreende a sequência de ácidos nucleicos ou um organismo transformado com as sequências de ácidos nucleicos, conjuntos de expressão ou vetores de acordo com a presente invenção, todas as construções decorrentes de métodos recombinantes nas quais: a. as sequências de ácidos nucleicos que codificam proteínas úteis nos métodos de acordo com a presente invenção; ou b. sequência(s) de controle genético que é(são) ligada(s) operativamente à sequência de ácidos nucleicos de acordo com a presente invenção, tal como um promotor; ou c. a e b; não estão localizadas no seu ambiente genético natural ou foram modificadas por meio de métodos recombinantes, sendo possível que a modificação assuma a forma, por exemplo, de substituição, adição, exclusão, inversão ou inserção de um ou mais resíduos de nucleotídeos, a fim de permitir a expressão da PPO mutada de acordo com a presente invenção. O ambiente genético natural é compreendido como indicando o local cromossômico ou genômico natural na planta original ou a presença em uma biblioteca genômica. No caso de biblioteca genômica, o ambiente genético natural da sequência de ácidos nucleicos é preferencialmente retido, ao menos em parte. O meio ambiente ladeia a sequência de ácidos nucleicos ao menos em um lado e possui comprimento de sequência de pelo menos 50 bp, preferencialmente pelo menos 500 bp, de preferência especial pelo menos 1000 bp e, de preferência superior, pelo menos 5000 bp. Um cassete de expressão de ocorrência natural (tal como a combinação de ocorrência natural do promotor natural das sequências de ácidos nucleicos com a sequência de ácidos nucleicos correspondente que codifica um polipeptídeo útil nos métodos de acordo com a presente invenção, conforme definido acima) torna-se um cassete de expressão transgênico quando esse cassete de expressão é modificado por meio de métodos sintéticos, não naturais (“artificiais”), tais como tratamento mutagênico. Métodos apropriados são descritos, por exemplo, em US 5.565.350 ou WO 00/15815.
[691] Uma planta transgênica para os propósitos da presente invenção é compreendida, portanto, como indicando, conforme acima, que os ácidos nucleicos de acordo com a presente invenção não se encontram no seu local natural no genoma da mencionada planta, sendo possível que os ácidos nucleicos sejam expressos de forma homóloga ou heteróloga. Conforme mencionado, entretanto, transgênico também indica que, embora os ácidos nucleicos de acordo com a presente invenção ou utilizados no método de acordo com a presente invenção estejam na sua posição natural no genoma de uma planta, a sequência foi modificada com relação à sequência natural e/ou as sequências reguladoras das sequências naturais foram modificadas. Transgênico é preferencialmente compreendido como indicando a expressão dos ácidos nucleicos de acordo com a presente invenção em um local não natural no genoma, ou seja, tem lugar a expressão homóloga ou, preferencialmente, heteróloga dos ácidos nucleicos. Plantas transgênicas preferidas sãa mencionadas no presente. Além disso, o termo “transgênico” designa qualquer planta, célula vegetal, calo, tecido vegetal ou parte de planta que contenha, no todo ou em parte, pelo menos um polinucleotídeo recombinante. Em muitos casos, o polinucleotídeo recombinante, no todo ou em parte, é integrado de forma estável a um cromossomo ou elemento extracromossômico estável, de forma que seja passado para gerações sucessivas. Para os propósitos da presente invenção, a expressão “polinucleotídeo recombinante" designa um polinucleotídeo que tenha sido alterado, redisposto ou modificado por meio de engenharia genética. Exemplos incluem qual(is)quer polinucleotídeo(s) clonado(s) que seja(m) ligado(s) ou unido(s) a sequências heterólogas. O termo “recombinante” não se refere a alterações de polinucleotídeos que resultem de eventos de ocorrência natural, tais como mutações espontâneas, nem de mutagênese não espontânea seguida por cultivo seletivo.
[692] Plantas que contêm mutações decorrentes de mutagênese não espontânea e cultivo seletivo são denominadas no presente plantas não transgênicas e são incluídas na presente invenção. Em realizações nas quais a planta é transgênica e compreende diversos ácidos nucleicos de PPO que sofreram mutação, os ácidos nucleicos podem ser derivados de diferentes genomas ou do mesmo genoma. Alternativamente, em realizações nas quais a planta não é transgênica e compreende diversos ácidos nucleicos de PPO que sofreram mutação, os ácidos nucleicos estão localizados sobre diferentes genomas ou sobre o mesmo genoma. Da forma utilizada no presente, “que sofreu mutagênese” designa um organismo ou seu DNA que possui alteração(ões) na sequência biomolecular do seu material genético nativo em comparação com a sequência do material genético de um DNA ou organismo do tipo selvagem correspondente, em que a(s) alteração(ões) de material genético foi(ram) induzida(s) e/ou selecionada(s) por meio de ação humana. Métodos de indução de mutações podem induzir mutações em posições aleatórias no material genético ou podem induzir mutações em locais específicos no material genético (ou seja, podem ser métodos de mutagênese dirigida), tal como utilizando um método de genoplastia.
[693] Em certas realizações, a presente invenção envolve plantas resistentes a herbicidas que são produzidas por meio do cultivo de mutações. Essas plantas compreendem um polinucleotídeo que codifica PPO mutada e são tolerantes a um ou mais herbicidas inibidores de PPO. Esses métodos podem envolver, por exemplo, a exposição das plantas ou sementes a um mutagene, particularmente mutagene químico, tal como metanossulfonato de etila (SEM) e seleção de plantas que possuem tolerância aprimorada a pelo menos um ou mais herbicidas inibidores de PPO.
[694] A presente invenção não se limita, entretanto, a plantas tolerantes a herbicidas que são produzidas por meio de um método de mutagênese que envolve o mutagene químico EMS. Qualquer método de mutagênese conhecido na técnica pode ser utilizado para produzir as plantas resistentes a herbicidas de acordo com a presente invenção. Esses métodos de mutagênese podem envolver, por exemplo, o uso de qualquer um ou mais dos mutagenes a seguir: radiação, tal como raios X, raios gama (por exemplo, cobalto 60 ou césio 137), nêutrons, (por exemplo, produto de fissão nuclear por urânio 235 em um reator atômico), radiação Beta (por exemplo, emitida por radioisótopos tais como fósforo 32 ou carbono 14) e radiação ultravioleta (preferencialmente de 2500 a 2900 nm) e mutagenes químicos tais como análogos de base (por exemplo, 5-bromouracil), compostos relacionados (por exemplo, 8-etóxi cafeína), antibióticos (por exemplo, estreptonigrina), agentes alquilantes (por exemplo, mostardas de enxofre, mostardas de nitrogênio, epóxidos, etilenoaminas, sulfatos, sulfonatos, sulfonas e lactonas), azida, hidroxilamina, ácido nitroso ou acridinas. Plantas resistentes a herbicidas podem também ser produzidas utilizando métodos de cultivo de tecidos para selecionar células vegetais que compreendem mutações de resistência a herbicidas e regeneração em seguida de plantas resistentes a herbicidas a partir delas. Vide, por exemplo, as Patentes Norte-Americanas n° 5.773.702 e 5.859.348, ambas as quais são integralmente incorporadas ao presente como referência. Detalhes adicionais de cultivo de mutação podem ser encontrados em Principals of Cultivar Development, Fehr, 1993, Macmillan Publishing Company, cujo teor é incorporado ao presente como referência.
[695] Além da definição acima, o termo “planta” destina-se a englobar plantas produtoras em qualquer estágio de maturidade ou desenvolvimento, bem como quaisquer tecidos ou órgãos (partes de plantas) ou derivados de qualquer dessas plantas, a menos que indicado claramente em contrário pelo contexto. Partes de plantas incluem, mas sem limitações, caules, raízes, flores, óvulos, estames, folhas, embriões, regiões meristemáticas, tecido de calo, cultivos de anteras, gametófitos, esporófitos, pólen, microesporos, protoplastas e similares.
[696] A planta de acordo com a presente invenção compreende pelo menos um ácido nucleica PPO mutada ou ácido nucleico PPO do tipo selvagem sobre-expresso e possui maior tolerância a herbicidas inibidores de PPO em comparação com uma variedade da planta do tipo selvagem. É possível que as plantas de acordo com a presente invenção possuam diversos ácidos nucleicos PPO do tipo selvagem ou que sofreram mutação de diferentes genomas, pois essas plantas podem conter mais de um genoma. Uma planta contém, por exemplo, dois genomas, normalmente denominados genomas A e B. Como PPO é uma enzima metabólica necessária, considera-se que cada genoma possua pelo menos um gene que codifica a enzima PPO (ou seja, pelo menos um gene PPO). Da forma utilizada no presente, a expressão “local de gene PPO” designa a posição de um gene PPO sobre um genoma e as expressões “gene PPO” e “ácido nucleico PPO” designam um ácido nucleico que codifica a enzima PPO. O ácido nucleico PPO sobre cada genoma difere em sua sequência de nucleotídeos de um ácido nucleico PPO sobre outro genoma. Os técnicos no assunto podem determinar o genoma de origem de cada ácido nucleico PPO por meio de métodos de sequenciamento e/ou cruzamento genético ou métodos de digestão de exonuclease conhecidos dos técnicos no assunto.
[697] A presente invenção inclui plantas que compreendem um, dois, três ou mais alelos de PPO que sofreram mutação, em que a planta possui maior tolerância a herbicidas inibidores de PPO em comparação com uma variedade da planta do tipo selvagem. Os alelos de PPO que sofreram mutação podem compreender uma sequência de nucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste de polinucleotídeos que codificam polipeptídeos conforme definido em SEQ ID N° 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117 ou uma de suas variantes, derivados, homólogos, ortólogos ou parálogos, um polinucleotídeo que compreende pelo menos sessenta nucleotídeos consecutivos de qualquer um dos polinucleotídeos mencionados acima e um polinucleotídeo complementar a qualquer um dos polinucleotídeos mencionados acima.
[698] “Alelos” ou “variantes alélicas” são formas alternativas de um dado gene, localizadas na mesma posição cromossômica. Variantes alélicas englobam polimorfismos de nucleotídeos isolados (SNPs), bem como polimorfismos de inserção e exclusão pequenos (INDELs). O tamanho de INDELs é normalmente de menos de 100 bp. SNPs e INDELs formam o conjunto maior de variantes de sequências em linhagens polimórficas de ocorrência natural da maior parte dos organismos.
[699] O termo “série” designa um grupo de plantas em uma espécie definido pelo compartilhamento de um conjunto comum de traços ou características aceitas pelos técnicos no assunto como suficientes para diferenciar um cultivar ou variedade de outro cultivar ou variedade. Não existe implicação em nenhum termo de que todas as plantas de qualquer dado cultivar ou variedade serão geneticamente idênticas no gene completo ou nível molecular, nem que qualquer dada planta será homozigótica em todos os locais. Cultivar ou variedade é considerado “cultivo verdadeiro” para uma característica específica se, quando o cultivar ou variedade de cultivo verdadeiro for autopolinizado, toda a prole contiver a característica. As expressões “linhagem” ou “linhagem de cultivo” designam um grupo de plantas em um cultivar definido pelo compartilhamento de um conjunto comum de traços ou características aceitas pelos técnicos no assunto como suficientes para diferenciar uma linhagem ou linhagem de cultivo de outra linhagem ou linhagem de cultivo. Não existe implicação em nenhum termo de que todas as plantas de qualquer dada linhagem ou linhagem de cultivo serão geneticamente idênticas no gene completo ou nível molecular, nem que qualquer dada planta será homozigótica em todos os locais. Linhagem ou linhagem de cultivo é considerada “cultivo verdadeiro” para uma característica específica se, quando a linhagem de cultivo ou linhagem de cultivo verdadeiro for autopolinizada, toda a prole contiver a característica. Na presente invenção, a característica surge de mutação em um gene PPO da planta ou semente.
[700] Em algumas realizações, emprega-se cultivo de plantas tradicional, em que a característica tolerante a herbicidas inibidores de PPO é introduzida na planta de prole resultante. Em uma realização, a presente invenção fornece um método de produção de plantas de prole tolerantes a herbicidas inibidores de PPO, em que o método compreende: cruzamento de uma planta parental com uma planta tolerante a herbicidas inibidores de PPO para introduzir as características de tolerância a herbicidas inibidores de PPO da planta tolerante a herbicidas inibidores de PPO no germoplasma da planta de prole, em que a planta de prole possui maior tolerância aos herbicidas inibidores de PPO com relação à planta parental. Em outras realizações, o método compreende adicionalmente a etapa de introgressão das características de tolerância a herbicidas inibidores de PPO por meio de métodos de cultivo de plantas tradicionais para obter uma planta descendente que possui as características de tolerância a herbicidas inibidores de PPO.
[701] As plantas resistentes a herbicidas de acordo com a presente invenção que compreendem polinucleotídeos que codificam polipeptídeos PPO que sofreram mutação também encontram uso em métodos de aumento da resistência a herbicidas de uma planta por meio de cultivo de plantas convencional envolvendo reprodução sexual. Os métodos compreendem o cruzamento de primeira planta que é uma planta resistente a herbicidas de acordo com a presente invenção com uma segunda planta que pode ou não ser resistente ao(s) mesmo(s) herbicida(s) da primeira planta ou pode ser resistente a herbicida(s) diferente(s) da primeira planta. A segunda planta pode ser qualquer planta capaz de produzir plantas de prole viáveis (ou seja, sementes) quando cruzadas com a primeira planta. Típica mas não necessariamente, as primeira e segunda plantas são da mesma espécie. Os métodos podem envolver opcionalmente a seleção de plantas de prole que compreendem os polipeptídeos PPO que sofreram mutação da primeira planta e as características de resistência a herbicidas da segunda planta. As plantas de prole produzidas por meio deste método de acordo com a presente invenção possuem maior resistência a herbicidas em comparação com a primeira ou a segunda planta, ou ambas. Quando as primeira e segunda plantas são resistentes a diferentes herbicidas, as plantas de prole terão as características de tolerância a herbicidas combinadas das primeira e segunda plantas. Os métodos de acordo com a presente invenção podem envolver adicionalmente uma ou mais gerações de retrocruzamento das plantas de prole do primeiro cruzamento em uma planta da mesma linhagem ou genótipo da primeira ou da segunda planta. Alternativamente, a prole do primeiro cruzamento ou qualquer cruzamento subsequente pode ser cruzada em uma terceira planta que possui linhagem ou genótipo diferente da primeira ou da segunda planta. A presente invenção também fornece plantas, órgãos de plantas, tecidos vegetais, células vegetais, sementes e células hospedeiras não humanas que são transformadas com a pelo menos uma molécula de polinucleotídeo, cassete de expressão ou vetor de transformação de acordo com a presente invenção. Essas plantas transformadas, órgãos de plantas, tecidos vegetais, células vegetais, sementes e células hospedeiras não humanas possuem resistência ou tolerância aprimorada a pelo menos um herbicida, em níveis do herbicida que matam ou inibem o crescimento de plantas, tecidos vegetais, células vegetais ou células hospedeiras não humanas não transformadas, respectivamente. Preferencialmente, as plantas, tecidos vegetais, células vegetais e sementes transformadas de acordo com a presente invenção são Arabidopsis thaliana e plantas produtoras.
[702] Em outros aspectos, as plantas de acordo com a presente invenção incluem as plantas que, além de serem tolerantes a herbicidas inibidores de PPO, foram submetidas a modificações genéticas adicionais por meio de cultivo, mutagênese ou engenharia genética, por exemplo, e tornaram- se tolerantes a aplicações de outras classes específicas de herbicidas, tais como inibidores de AHAS; herbicidas auxínicos; herbicidas lixiviadores, tais como inibidores da hidroxifenilpiruvato dioxigenase (HPPD) ou inibidores de fitoeno dessaturase (PDS); inibidores de EPSPS tais como glifosato; inibidores da glutamino sintetase (GS) tais como glufosinato; inibidores da biossíntese de lipídios, tais como inibidores de acetil CoA carboxilase (ACCase); ou herbicidas de oxinil (ou seja, bromoxinil ou ioxinil) como resultado de métodos convencionais de cultivo ou engenharia genética. Desta forma, as plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO de acordo com a presente invenção podem tornar-se resistentes a diversas classes de herbicidas por meio de diversas modificações genéticas, tais como resistência a glifosato e glufosinato ou a glifosato e um herbicida de outra classe, tais como inibidores de HPPD, inibidores de AHAS ou inibidores de ACCase. Essas tecnologias de resistência a herbicidas são descritas, por exemplo, em Pest Management Science (volume, ano, página): 61, 2005, 246; 61, 2005, 258; 61, 2005, 277; 61, 2005, 269; 61, 2005, 286; 64, 2008, 326; 64, 2008, 332; Weed Science 57, 2009, 108; Australian Journal of Agricultural Research 58, 2007, 708; Science 316, 2007, 1185; e referências ali indicadas. Em algumas realizações, plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO de acordo com a presente invenção podem, por exemplo, ser tolerantes a inibidores de ACCase, tais como “dims” (por exemplo, cicloxidim, setoxidim, cletodim ou tepraloxidim), “fops” (tais como clodinafop, diclofop, fluazifop, halozifop ou quizalofop) e “dens” (tais como pinoxaden); a herbicidas auxínicos, tais como dicamba; a inibidores de EPSPS, tais como glifosato; a outros inibidores de PPO; e a inibidores de GS, tais como glufosinato.
[703] Além dessas classes de inibidores, plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO de acordo com a presente invenção podem também ser tolerantes a herbicidas que possuem outros modos de ação, tais como inibidores de pigmentos carotenoides/de clorofila, agentes de rompimento de membrana celular, inibidores da fotossíntese, inibidores da divisão celular, inibidores de raízes, inibidores de brotos e suas combinações.
[704] Essas características de tolerância podem ser expressas, por exemplo, como proteínas PPO mutantes ou do tipo selvagem, proteínas AHASL mutantes, proteínas ACCase mutantes, proteínas EPSPS mutantes ou proteínas glutamino sintetase mutantes; ou proteína dioxigenase ariloxialcanoato nativa mutante, congênita ou transgênica (AAD ou DHT), haloarilnitrilase (BXN), desalogenase de ácido 2,2-dicloropropiônico (DEH), glifosato N- acetiltransferase (GAT), glifosato descarboxilase (GDC), glifosato oxidorreductase (GOX), glutationa S-transferase (GSTS), fosfinotricino acetiltransferase (PAT ou bar) ou CYP450 possuem atividade de degradação de herbicidas.
[705] As plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO de acordo com o presente podem também ser portadoras de outras características, incluindo, mas sem limitações, características pesticidas tais como Bt Cry e outras proteínas que possuem atividade pesticida contra coleópteros, lepidópteros, nematoides ou outras pragas; nutrição ou características nutracêuticas tais como teor de óleo modificado ou características de perfil de óleo, características de alta concentração de proteína ou de aminoácidos e outros tipos de características conhecidos na técnica.
[706] Além disso, em outras realizações, também são cobertas plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO que, utilizando métodos de DNA recombinantes e/ou por meio de cultivo e/ou selecionados de outra forma por essas características, tornaram-se capazes de sintetizar uma ou mais proteínas inseticidas, especialmente as conhecidas do gênero bacteriano Bacillus, particularmente de Bacillus thuringiensis, tais como [delta]-endotoxinas, por exemplo, CrylA(b), CrylA(c), CrylF, CryIF(a2), CryllA(b), CrylllA, CrylllB(bl) ou Cry9c; proteínas inseticidas vegetais (VIP), tais como VIP1, VIP2, VIP3 ou VIP3A; proteínas inseticidas de nematoides colonizadores de bactérias, tais como Photorhabdus spp ou Xenorhabdus spp; toxinas produzidas por animais, tais como toxinas de escorpião, toxinas de aracnídeos, toxinas de vespa ou outras neurotoxinas específicas de insetos; toxinas produzidas por fungos, tais como toxinas de estreptomicetes; lectinas vegetais, tais como lectinas de ervilha ou cevada; aglutininas; inibidores da proteinase, tais como inibidores de tripsina, inibidores de serino protease, patatina, cistatina ou inibidores de papaína; proteínas desativadoras de ribossomos (RIP), tais como rícina, milho-RIP, abrina, lufina, saporina ou briodina; enzimas do metabolismo de esteroides, tais como 3-hidroxiesteroide oxidase, ecdisteroide-IDP-glicosiltransferase, colesterol oxidases, inibidores de ecdisona ou HMG-CoA-reductase; bloqueadores de canais de íons, tais como bloqueadores de canais de sódio ou cálcio; esterase de hormônio juvenil; receptores de hormônios diuréticos (receptores de helicoquinina); estilbeno sintase, bibenzil sintase, chitinases ou glucanases. No contexto da presente invenção, estas toxinas ou proteínas inseticidas devem também ser expressamente compreendidas como pré-toxinas, proteínas híbridas, proteínas truncadas ou modificadas de outra forma. Proteínas híbridas são caracterizadas por uma nova combinação de domínios de proteína (vide, por exemplo, WO 02/015701). Exemplos adicionais dessas toxinas ou plantas geneticamente modificadas capazes de sintetizar essas toxinas são descritos, por exemplo, em EP-A 374.753, WO 93/007278, WO 95/34656, EP-A 427.529, EP-A 451.878, WO 03/18810 e WO 03/52073. Os métodos de produção dessas plantas geneticamente modificadas são geralmente conhecidos dos técnicos no assunto e descritos, por exemplo, nas publicações mencionadas acima. Essas proteínas inseticidas contidas nas plantas geneticamente modificadas impõem às plantas produtoras dessas proteínas tolerância a pragas daninhas de todos os grupos taxonômicos de artrópodes, especialmente a besouros (coleópteros), insetos com duas asas (dípteros), traças (lepidópteros) e nematoides (Nematoda).
[707] Em algumas realizações, a expressão de uma ou mais toxinas de proteínas (por exemplo, proteínas inseticidas) nas plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO é eficaz para o controle de organismos que incluem, por exemplo, membros das classes e ordens: coleópteros, tais como o gorgulho do feijão americano Acanthoscelides obtectus; o besouro das folhas Agelastica alni; elaterídeos (Agriotes lineatus, Agriotes obscurus e Agriotes bicolor); o besouro dos grãos Ahasverus advena; o besouro de junho Anphimallon solstitialis; o besouro da mobília Anobium punctatum; Anthonomus spp (gorgulhos); o besouro mangold Pygmy Atomaria linearis; besouros do carpete (Anthrenus spp, Attagenus spp); o gorgulho do grão de bico Callosobruchus maculates; o besouro das frutas secas Carpophilus hemipterus; o gorgulho das vagens de repolho Ceutorhynchus assimilis; o gorgulho das hastes de inverno da canola Ceutorhynchus picitarsis; as brocas Conoderus vespertinus e Conoderus falli; o gorgulho da banana Cosmopolites sordidus; a larva da grama da Nova Zelândia Costelytra zealandica; o besouro de junho Cotinis nitida; o gorgulho do caule de girassol Cylindrocopturus adspersus; o besouro da despensa Dermestes lardarius; as larvas das raízes do milho Diabrotica virgifera, Diabrotica virgifera virgifera e Diabrotica barberi; o besouro do feijão mexicano Epilachna varivestis; a broca das casas velhas Hylotropes bajulus; o gorgulho da alfafa Hypera postica; o besouro aranha brilhante Gibbium psylloides; o besouro do cigarro Lasioderma serricorne; o besouro da batata do Colorado Leptinotarsa decemlineata; besouros Lyctus (Lyctus spp , o besouro do pólen Meligethes aeneus; o besouro comum Melolontha melolontha; o besouro aranha americano Mezium americanum; o besouro aranha dourado Niptus hololeucs; os besouros dos grãos Oryzaephilus surinamensis e Oryzaephilus mercator; o gorgulho preto das uvas Otiorhynchus sulcatus; o besouro mostarda Phaedon cochleariae, o besouro-pulga das crucíferas Phyllotreta cruciferae; o besouro-pulga listrado Phyllotreta striolata; o besouro- pulga das hastes do repolho Psylliodes chrysocephala; Ptinus spp (besouros aranha); a broca menor dos grãos Rhizopertha dominica; o gorgulho do feijão e da ervilha Sitona lineatus; os besouros do arroz e dos grãos Sitophilus oryzae e Sitophilus granaries; o gorgulho vermelho da semente de girassol Smicronyx fulvus; o besouro da farmácia Stegobium paniceum; o besouro amarelo da farinha Tenebrio molitor, os besouros da farinha Tribolium castaneum e Tribolium confusum; besouros dos armazéns e depósitos (Trogoderma spp); o besouro do girassol Zygogramma exclamationis; Dermaptera (lacraias) tais como a lacraia europeia Forficula auricularia e a lacraia listrada Labidura riparia; Dictyoptera tais como a barata oriental Blatta orientalis; a centopeia das estufas Oxidus gracilis; a mosca da beterraba Pegomyia betae; a mosca das fritas Oscinella frit; moscas das frutas (Dacus spp, Drosophila spp); Isoptera (cupins), incluindo espécies das famílias Hodotermitidae, Kalotermitidae, Mastotermitidae, Rhinotermitidae, Serritermitidae, Termitidae e Termopsidae; o besouro envernizado das plantas Lygus lineolaris; o afídeo preto dos grãos Aphis fabae; o afídeo do algodão ou do melão Aphis gossypii; o afídeo da maçã verde Aphis pomi; a mosca branca dos cítricos Aleurocanthus spiniferus; a mosca banca da batata doce Bemesia tabaci; o afídeo do repolho Brevicoryne brassicae; psila da pera Cacopsylla pyricola; afídeo da groselha Cryptomyzus ribis; filoxera das uvas Daktulosphaira vitifoliae; psila dos cítricos Diaphorina citri; a cigarrinha da batata Empoasca fabae; a cigarrinha do feijão Empoasca solana; a cigarrinha das uvas Empoasca vitis; o afídeo da lã Eriosoma lanigerum; mede-palmos das frutas europeu Eulecanium corni; o afídeo da ameixa Hyalopterus arundinis; fulgoromorfos marrons pequenos Laodelphax striatellus; o afídeo da batata Macrosiphum euphorbiae; o afídeo verde do pêssego Myzus persicae; fulgoromorfos verdes do arroz Nephotettix cinticeps; fulgoromorfos marrons Nilaparvata lugens; o afídeo do lúpulo Phorodon humuli; o afídeo da cerejeira brava Rhopalosiphum padi; o afídeo dos grãos Sitobion avenae; lepidópteros, tais como Adoxophyes orana (traça das frutas do verão); Archips podana (traça das árvores frutíferas); Bucculatrix pyrivorella (larva das folhas das peras); Bucculatrix thurberiella (larva das folhas do algodão); Bupalus piniarius (traça do pinheiro); Carpocapsa pomonella (mariposa das maçãs); Chilo suppressalis (broca listrada do arroz); Choristoneura fumiferana (larva dos abetos); Cochylis hospes (mariposa listrada do girassol); Diatraea grandiosella (broca do milho do sudoeste); Eupoecilia ambiguella (mariposa europeia das uvas); Helicoverpa armigera (lagarta do algodão); Helicoverpa zea (lagarta do algodão); Heliothis virescens (lagarta do fumo), Homeosoma electellum (mariposa do girassol); Homona magnanima (mariposa oriental das plantas de chá); Lithocolletis blancardella (lagarta da macieira); Lymantria dispar (mariposa Gypsy); Malacosoma neustria (traça das tendas); Mamestra brassicae (lagarta do repolho); Mamestra configurata (lagarta Bertha); Operophtera brumata (mariposa do inverno); Ostrinia nubilalis (broca europeia do milho), Panolis flammea (mariposa do pinho), Phyllocnistis citrella (lagarta dos cítricos); Pieris brassicae (borboleta branca do repolho); Rachiplusia ni (lagarta da soja); Spodoptera exigua (traça da beterraba); Spodoptera littoralis (lagarta do algodão); Sylepta derogata (lagarta das folhas do algodão); Trichoplusia ni (lagarta do repolho); Orthoptera tais como o grilo comum Acheta domesticus, grilos das árvores (Anacridium spp), o gafanhoto migratório Locusta migratoria, o gafanhoto listrado Melanoplus bivittatus, o gafanhoto diferencial Melanoplus differentials, o gafanhoto das patas vermelhas Melanoplus femurrubrum, o gafanhoto migratório Melanoplus sanguinipes, o grilo do norte Neocurtilla hexadectyla, o gafanhoto vermelho Nomadacris septemfasciata, o grilo de asas curtas Scapteriscus abbreviatus, o grilo do sul Scapteriscus borellii, o grilo escuro Scapteriscus vicinus e o gafanhoto do deserto Schistocerca gregaria; Symphyla, como o sínfilo do jardim Scutigerella immaculata; Thysanoptera, como tripes do fumo Frankliniella fusca, tripes das flores Frankliniella intonsa, tripes das flores do oeste Frankliniella occidentalism, tripes dos botões do algodão Frankliniella schultzei, tripes listrados das estufas Hercinothrips femoralis, tripes da soja Neohydatothrips variabilis, tripes dos cítricos Pezothrips kellyanus, tripes do abacate Scirtothrips perseae, tripes do melão Thrips palmi e tripes da cebola Thrips tabaci; e similares, bem como suas combinações que compreendem um ou mais dos organismos acima.
[708] Em algumas realizações, a expressão de uma ou mais toxinas de proteínas (tais como proteínas inseticidas) nas plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO é eficaz para o controle de besouros saltadores, ou seja, membros da família de besouros saltadores Chrysomelidae, preferencialmente contra Phyllotreta spp, tal como Phyllotreta cruciferae e/ou Phyllotreta triolata. Em outras realizações, a expressão de uma ou mais toxinas de proteínas (tais como proteínas inseticidas) em plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO é eficaz para o controle do gorgulho das vagens de repolho, lagarta Bertha, besouros Lygus ou a traça das crucíferas.
[709] Além disso, em uma realização, são também cobertas plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO que, utilizando, por exemplo, métodos de DNA recombinante e/ou cultivo e/ou outro tipo de seleção para essas características, tornaram-se capazes de sintetizar uma ou mais proteínas para aumentar a resistência ou a tolerância dessas plantas a patógenos bacterianos, virais ou fúngicos. Os métodos de produção dessas plantas geneticamente modificadas são geralmente conhecidos dos técnicos no assunto.
[710] Além disso, em outra realização, são também cobertas plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO que, utilizando, por exemplo, métodos de DNA recombinante e/ou cultivo e/ou outro tipo de seleção para essas características, tornaram-se capazes de sintetizar uma ou mais proteínas para aumentar a produtividade (por exemplo, o teor de óleo), tolerância à seca, salinidade ou outros fatores ambientais limitadores do crescimento ou a tolerância dessas plantas a pragas e patógenos bacterianos, virais ou fúngicos.
[711] Além disso, em outras realizações, também são cobertas plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO que, utilizando, por exemplo, métodos de DNA recombinante e/ou cultivo e/ou outro tipo de seleção para essas características, são alteradas para conter uma quantidade modificada de uma ou mais substâncias ou substâncias novas, por exemplo, para melhorar a nutrição humana ou animal, tais como safras oleaginosas produtoras de ácidos graxos de ômega 9 insaturados ou ácidos graxos de ômega 3 de cadeia longa promotores da saúde (por exemplo, canola Nexera®, Dow Agro Sciences, Canadá).
[712] Além disso, em algumas realizações, também são cobertas plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO que, utilizando, por exemplo, métodos de DNA recombinante e/ou cultivo e/ou outro tipo de seleção dessas características, são alteradas para conter quantidades maiores de vitaminas e/ou sais minerais e/ou perfis aprimorados de compostos nutracêuticos.
[713] Em uma realização, plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO de acordo com a presente invenção, com relação a uma planta do tipo selvagem, compreendem quantidade maior ou perfil aprimorado de um composto selecionado a partir do grupo que consiste de: glucosinolatos (por exemplo, glucorafanina (glucosinato de 4-metilsulfinilbutila), sulforafano, glucosinolato de 3-indolilmetila (glucobrassicina), glucosinolato de 1-metóxi-3- indolilmetila (neoglucobrassicina)); fenólicos (por exemplo, flavonoides (por exemplo, quercetina e caempferol), derivados de hidroxicinamoíla (por exemplo, 1,2,2’-trisinapoilgentiobiose, 1,2-diferuloilgentiobiose, 1,2’-disinapoil-2- feruloilgentiobiose, 3-0-cafeoilquínico (ácido neoclorogênico)); vitaminas e sais minerais (por exemplo, vitamina C, vitamina E, caroteno, ácido fólico, niacina, riboflavina, tiamina, cálcio, ferro, magnésio, potássio, selênio e zinco).
[714] Em outra realização, plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO de acordo com a presente invenção, com relação a uma planta do tipo selvagem, compreendem quantidade maior ou perfil aprimorado de um composto selecionado a partir do grupo que consiste de: progoitrina; isotiocianatos; indóis (produtos da hidrólise de glucosinolato); glutationa; carotenoides tais como betacaroteno, licopeno e os carotenoides de xantofila tais como luteína e zeaxantina; fenólicos que compreendem os flavonoides tais como flavonóis (por exemplo, quercetina e rutina), flavanos/taninos (tais como as procianidinas que compreendem coumarina, proantocianidinas, catequinas e antocianinas); flavonas; fitoestrogenes tais como coumestanos, lignanos, resveratrol, isoflavonas tais como genisteína, daidzeína e gliciteína; lactonas de ácido resorcíclico; compostos de organoenxofre; fitoesteróis; terpenoides tais como carnosol, ácido rosmarínico, glicirrizina e saponinas; clorofila; clorofilina, açúcares, antocianinas e baunilha. Em outras realizações, plantas tolerantes a herbicidas inibidores de PPO de acordo com a presente invenção, com relação a uma planta do tipo selvagem, compreendem quantidade maior ou perfil aprimorado de um composto selecionado a partir do grupo que consiste de: vincristina, vimblastina, taxanos (por exemplo, taxol (paclitaxel), bacatin III, 10- desacetilbacatin III, 10-desacetil taxol, xilosil taxol, 7-epitaxol, 7-epibacatin III, 10- desacetilcefalomanina, 7-epicefalomanina, taxotere, cefalomanina, xilosil cefalomanina, taxagifina, 8-benzoilóxi taxagifina, 9-acetilóxi taxusina, 9-hidróxi taxusina, taiwanxam, taxano Ia, taxano Ib, taxano Ic, taxano Id, GMP paclitaxel, 9-di-hidro 13-acetilbacatin III, 10-desacetil-7-epitaxol, tetra-hidrocanabinol (THC), canabidiol (CBD), genisteína, diadzeina, codeína, morfina, quinina, shikonin, ajmalacina, serpentina e similares.
[715] Deve-se compreender que a planta de acordo com a presente invenção pode compreender um ácido nucleico PPO do tipo selvagem além de um ácido nucleica PPO mutada. Contempla-se que as linhagens tolerantes a herbicidas inibidores de PPO podem conter mutação em apenas uma dentre várias isoenzimas PPO. A presente invenção inclui, portanto, uma planta que compreende um ou mais ácidos nucleicos PPO mutada além de um ou mais ácidos nucleicos PPO do tipo selvagem.
[716] Em outra realização, a presente invenção refere-se a uma semente produzida por uma planta transgênica que compreende uma célula vegetal de acordo com a presente invenção, em que a semente é cultivo verdadeiro de aumento da resistência a herbicidas inibidores de PPO em comparação com uma variedade da semente do tipo selvagem.
[717] Em outra realização, a presente invenção refere-se a um método de produção de células vegetais transgênicas com resistência aprimorada a herbicidas inibidores de PPO em comparação com uma variedade do tipo selvagem da célula vegetal que compreende a transformação da célula vegetal com um cassete de expressão que compreende um ácido nucleica PPO mutada.
[718] Em outra realização, a presente invenção refere-se a um método de produção de plantas transgênicas que compreende (a) transformação de células vegetais com um cassete de expressão que compreende um ácido nucleica PPO mutada e (b) geração de plantas com resistência aprimorada a herbicidas inibidores de PPO da célula vegetal.
[719] Consequentemente, ácidos nucleicos PPO que sofreram mutação de acordo com a presente invenção são fornecidos em conjuntos de expressão para expressão na planta de interesse. O conjunto incluirá sequências reguladoras ligadas operativamente a uma sequência de ácidos nucleicos de PPO mutada de acordo com a presente invenção. A expressão “elemento regulador”, da forma utilizada no presente, designa um polinucleotídeo que é capaz de regular a transcrição de um polinucleotídeo ligado operativamente. Ela inclui, mas sem limitações, promotores, amplificadores, introns, 5’ UTRs e 3’ UTRs. Por “ligado operativamente”, indica-se ligação funcional entre uma sequência promotora e uma segunda sequência, em que a sequência promotora inicia e media a transcrição da sequência de DNA correspondente à segunda sequência. Geralmente, ligado operativamente indica que as sequências de ácidos nucleicos que são ligadas são contíguas e, quando necessário, unem duas regiões de codificação de proteínas contíguas e na mesma estrutura de leitura. O conjunto pode conter adicionalmente pelo menos um gene adicional a ser cotransformado para o organismo. Alternativamente, o(s) gene(s) adicional(is) pode(m) ser fornecido(s) sobre diversos conjuntos de expressão.
[720] Esse cassete de expressão é equipado com uma série de locais de restrição para inserção da sequência de ácidos nucleicos de PPO mutada, para que fique sob a regulagem de transcrição das regiões reguladoras. O cassete de expressão pode conter adicionalmente genes marcadores selecionáveis.
[721] O cassete de expressão de acordo com a presente invenção incluirá a direção 5’-3’ de transcrição, uma região de início de transcrição e tradução (ou seja, promotor), sequência de ácido nucleico que codifica PPO mutada de acordo com a presente invenção e uma região de término de transcrição e tradução (ou seja, região de término) funcional em plantas. O promotor pode ser nativo ou análogo, externo ou heterólogo, para a planta hospedeira e/ou para a sequência de ácidos nucleicos de PPO mutada de acordo com a presente invenção. Além disso, o promotor pode ser a sequência natural ou, alternativamente, uma sequência sintética. Quando o promotor for “externo” ou “heterólogo” para o hospedeiro vegetal, pretende-se que o promotor não seja encontrado na planta nativa na qual é introduzido o promotor. Quando o promotor for “externo” ou “heterólogo” para a sequência de ácidos nucleicos de PPO mutada de acordo com a presente invenção, pretende-se que o promotor não seja o promotor nativo ou de ocorrência natural para a sequência de ácidos nucleicos de PPO mutada ligada operativamente de acordo com a presente invenção. Da forma utilizada no presente, um gene quimérico compreende uma sequência de codificação ligada operativamente a uma região de início de transcrição que é heteróloga para a sequência de codificação.
[722] Embora possa ser preferível expressar os ácidos nucleicos de PPO mutada de acordo com a presente invenção utilizando promotores heterólogos, podem ser utilizadas as sequências promotoras nativas. Essas construções alterariam os níveis de expressão da proteína PPO mutada na planta ou célula vegetal. O fenótipo da planta ou célula vegetal é, portanto, alterado.
[723] A região de término pode ser nativa com a região de início de transcrição, pode ser nativa com a sequência de PPO mutada ligada operativamente de interesse, pode ser nativa com o hospedeiro vegetal ou pode ser derivada de outra fonte (ou seja, externa ou heteróloga para o promotor, a sequência de ácidos nucleicos de PPO mutada de interesse, a planta hospedeira ou qualquer de suas combinações). Regiões de término convenientes são disponíveis a partir do plasmídeo Ti de A. tumefaciens, tais como as regiões de término de octopino sintase e nopalino sintase. Vide também Guerineau et al. (1991), Mol. Gen. Genet. 262: 141-144; Proudfoot (1991), Cell 64: 671-674; Sanfacon et al. (1991), Genes Dev. 5: 141-149; Mogen et al. (1990), Plant Cell 2: 1261-1272; Munroe et al. (1990) Gene 91: 151-158; Ballas et al. (1989), Nucleic Acids Res. 17: 7891-7903; e Joshi et al. (1987), Nucleic Acids Res. 15: 9627-9639. Quando apropriado, o(s) gene(s) pode(m) ser otimizado(s) para maior expressão na planta transformada. Isso significa que os genes podem ser sintetizados utilizando códons preferidos de plantas para expressão aprimorada. Vide, por exemplo, Campbell e Gowri (1990), Plant Physiol. 92: 1-11 para discussão de uso de códons preferidos de hospedeiro. São disponíveis na técnica métodos de síntese de genes preferidos de plantas. Vide, por exemplo, as Patentes Norte-Americanas n° 5.380.831 e 5.436.391 e Murray et al. (1989), Nucleic Acids Res. 17: 477-498, incorporados ao presente como referência.
[724] São conhecidas modificações de sequências adicionais para aumentar a expressão genética em hospedeiros celulares. Estas incluem a eliminação de sequências que codificam sinais de poliadenilação espúrios, sinais de locais de divisão de exon-intron, repetições similares a transposson e outras dessas sequências bem caracterizadas que podem ser prejudiciais para a expressão genética. O teor de G-C da sequência pode ser ajustado em níveis médios para um dado hospedeiro celular, conforme calculado por meio de referência a genes conhecidos expressos na célula hospedeira. Quando possível, a sequência é modificada para evitar estruturas de mRNA secundárias de grampo de cabelo previstas. Sequências de nucleotídeos para amplificar a expressão genética podem também ser utilizadas nos vetores de expressão vegetal. Estes incluem os introns de AdhI de milho, gene intron I (Callis et al., Genes and Development 1: 1183-1200, 1987) e sequências líderes (sequência W) do vírus mosaico do fumo (TMV), vírus mascarado do milho e vírus mosaico da alfafa (Gallie et al., Nucleic Acid Res. 15: 8693-8711, 1987 e Skuzeski et al., Plant Mol. Biol. 15: 65-79, 1990). Demonstrou-se que o primeiro intron do local contraído 1 de milho aumenta a expressão de genes em construções de genes quiméricos. As Patentes Norte-Americanas n° 5.424.412 e 5.593.874 descrevem o uso de introns específicos em construções de expressão genética e Gallie et al. (Plant Physiol. 106: 929-939, 1994) também demonstraram que introns são úteis para a regulagem da expressão genética com base específica de tecido. Para amplificar ou otimizar adicionalmente a expressão genética de PPO, os vetores de expressão vegetal de acordo com a presente invenção podem também conter sequências de DNA que contêm regiões de ligação de matrizes (MARs). Células vegetais transformadas com esses sistemas de expressão modificados podem então exibir sobre-expressão ou expressão constitutiva de uma sequência de nucleotídeos de acordo com a presente invenção.
[725] Os conjuntos de expressão de acordo com a presente invenção podem conter adicionalmente sequências líderes 5’ na construção de cassete de expressão. Essas sequências líderes podem agir para amplificar a tradução. Líderes de tradução são conhecidos na técnica e incluem: líderes de picornavírus, tais como líder de EMCV (região não codificadora 5' de encefalomiocardite) (Elroy-Stein et al. (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 86: 6126-6130); líderes de potivírus, tais como líder de TEV (vírus da corrosão do fumo) (Gallie et al. (1995), Gene 165 (2): 233-238), líder de MDMV (vírus mosaico anão do milho) (Virology 154: 9-20) e proteína de ligação de cadeia pesada de imunoglobulina (BiP) humana (Macejak et al. (1991), Nature 353: 9094); líder não traduzido do mRNA de proteína de revestimento de vírus mosaico da alfafa (RNA AMV 4) (Jobling et al. (1987), Nature 325: 622-625); líder de vírus mosaico do fumo (TMV) (Gallie et al. (1989) em Molecular Biology of RNA, ed. Cech (Liss, Nova Iorque), págs. 237-256); e líder de vírus mascarado de milho (MCMV) (Lommel et al. (1991), Virology 81: 382-385). Vide também Della-Cioppa et al. (1987), Plant Physiol. 84: 965-968. Outros métodos conhecidos por aprimorarem a tradução podem também ser utilizados, tais como introns e similares.
[726] Na preparação do cassete de expressão, os diversos fragmentos de DNA podem ser manipulados, de forma a fornecer as sequências de DNA na orientação adequada e, conforme apropriado, na estrutura de leitura apropriada. Com este propósito, adaptadores ou ligantes podem ser empregados para unir os fragmentos de DNA ou outras manipulações podem ser envolvidas para fornecer locais de restrição convenientes, remoção de DNA supérfluo, remoção de locais de restrição ou similares. Com este propósito, pode-se envolver mutagênese in vitro, reparo de primers, restrição, combinação, ressubstituições, tais como transições e transversões.
[727] Diversos promotores podem ser utilizados na prática da presente invenção. Os promotores podem ser selecionados com base no resultado desejado. Os ácidos nucleicos podem ser combinados com promotores constitutivos, preferidos de tecido ou outros promotores para expressão em plantas. Esses promotores constitutivos incluem, por exemplo, o promotor central do promotor Rsyn7 e outros promotores constitutivos descritos em WO 99/43838 e na Patente Norte-Americana n° 6.072.050; o promotor 35S de CaMV central (Odell et al. (1985), Nature 313: 810-812); actina de arroz (McElroy et al. (1990), Plant Cell 2: 163-171); ubiquitina (Christensen et al. (1989), Plant Mol. Biol. 12: 619-632 e Christensen et al. (1992), Plant Mol. Biol. 18: 675-689); pEMU (Last et al. (1991), Theor. Appl. Genet. 81: 581-588); MAS (Velten et al. (1984), EMBO J. 3: 2723-2730); promotor de ALS (Patente Norte- Americana n° 5.659.026) e similares. Outros promotores constitutivos incluem, por exemplo, as Patentes Norte-Americanas n° 5.608.149, 5.608.144, 5.604.121, 5.569.597, 5.466.785, 5.399.680, 5.268.463, 5.608.142 e 6.177.611.
[728] Promotores preferidos de tecidos podem ser utilizados para dirigir expressão aprimorada de PPO mutada em um tecido vegetal específico. Esses promotores preferidos de tecidos incluem, mas sem limitações, promotores preferidos de folhas, promotores preferidos de raízes, promotores preferidos de sementes e promotores preferidos de caules. Os promotores preferidos de tecidos incluem Yamamoto et al. (1997), Plant J. 12 (2): 255-265; Kawamata et al. (1997), Plant Cell Physiol. 38 (7): 792-803; Hansen et al. (1997), Mol. Gen. Genet. 254 (3): 337-343; Russell et al. (1997), Transgenic Res. 6 (2): 157-168; Rinehart et al. (1996), Plant Physiol. 112 (3): 1331-1341; Van Camp et al. (1996), Plant Physiol. 112 (2): 525-535; Canevascini et al. (1996), Plant Physiol. 112 (2): 513-524; Yamamoto et al. (1994), Plant Cell Physiol. 35 (5): 773-778; Lam (1994), Results Probl. Cell Differ. 20: 181-196; Orozco et al. (1993), Plant Mol. Biol. 23 (6): 1129-1138; Matsuoka et al. (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90 (20): 9586-9590; e Guevara-Garcia et al. (1993), Plant J. 4 (3): 495-505. Esses promotores podem ser modificados, se necessário, para expressão fraca. Em uma realização, os ácidos nucleicos de interesse são dirigidos ao cloroplasta para expressão. Desta forma, quando o ácido nucleico de interesse não for inserido diretamente no cloroplasta, o cassete de expressão conterá adicionalmente uma sequência de direcionamento de cloroplastas que compreende uma sequência de nucleotídeos que codifica um peptídeo de trânsito de cloroplastas para dirigir o produto genético de interesse para os cloroplastas. Esses peptídeos de trânsito são conhecidos na técnica. Com relação às sequências de direcionamento de cloroplastas, “ligado operativamente” indica que a sequência de ácidos nucleicos que codifica um peptídeo de trânsito (ou seja, a sequência de direcionamento de cloroplastas) é ligada ao ácido nucleico de PPO mutada de acordo com a presente invenção, de tal forma que as duas sequências sejam contíguas e encontrem-se na mesma estrutura de leitura. Vide, por exemplo, Von Heijne et al. (1991), Plant Mol. Biol. Rep. 9: 104-126; Clark et al. (1989), J. Biol. Chem. 264: 17544-17550; Della- Cioppa et al. (1987), Plant Physiol. 84: 965-968; Romer et al. (1993), Biochem. Biophys. Res. Commun. 196: 1414-1421; e Shah et al. (1986), Science 233: 478481. Embora as proteínas PPO que sofreram mutação de acordo com a presente invenção incluam um peptídeo de trânsito de cloroplasta, qualquer peptídeo de trânsito de cloroplasta conhecido na técnica pode ser fundido à sequência de aminoácidos de uma proteína PPO mutada de acordo com a presente invenção por meio de ligação operativa de uma sequência de direcionamento de cloroplastas à extremidade 5’ de uma sequência de nucleotídeos que codifica uma proteína PPO mutada madura de acordo com a presente invenção. Sequências de direcionamento de cloroplastas são conhecidas na técnica e incluem a subunidade pequena de cloroplasta de carboxilase 1,5-bisfosfato de ribulose (Rubisco) (de Castro Silva Filho et al. (1996), Plant Mol. Biol. 30: 769780; Schnell et al. (1991), J. Biol. Chem. 266 (5): 3335-3342); 5- (enolpiruvil)shikimato-3-fosfato sintase (EPSPS) (Archer et al. (1990), J. Bioenerg. Biomemb. 22 (6): 789-810); triptofano sintase (Zhao et al. (1995), J. Biol. Chem. 270 (11): 6081-6087); plastocianina (Lawrence et al. (1997), J. Biol. Chem. 272 (33): 20357-20363); corismato sintase (Schmidt et al. (1993), J. Biol. Chem. 268 (36): 27447-27457); e a proteína de ligação de clorofila a/b de colheita leve (LHBP) (Lamppa et al. (1988), J. Biol. Chem. 263: 14996-14999). Vide também Von Heijne et al. (1991), Plant Mol. Biol. Rep. 9: 104-126; Clark et al. (1989), J. Biol. Chem. 264: 17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987), Plant Physiol. 84: 965-968; Romer et al. (1993), Biochem. Biophys. Res. Commun. 196: 1414-1421; e Shah et al. (1986), Science 233: 478-481.
[729] Métodos de transformação de cloroplastas são bem conhecidos na técnica. Vide, por exemplo, Svab et al. (1990), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 87: 8526-8530; Svab e Maliga (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90: 913-917; Svab e Maliga (1993), EMBO J. 12: 601-606. O método depende do fornecimento de disparador de partículas de DNA que contém um marcador selecionável e direcionamento do DNA ao genoma de plastídeo por meio de recombinação homóloga. Além disso, a transformação de plastídeos pode ser realizada por meio de transativação de um transgene contido em plastídeo silencioso pela expressão preferida de tecidos de uma RNA polimerase codificada nuclear e dirigida por plastídeos. Esse sistema foi relatado em McBride et al. (1994), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 91: 7301-7305. Os ácidos nucleicos de interesse a serem dirigidos ao cloroplasta podem ser otimizados para expressão no cloroplasta para compensar as diferenças do uso de códons entre o núcleo da planta e essa organela. Desta forma, os ácidos nucleicos de interesse podem ser sintetizados utilizando códons preferidos de cloroplastas. Vide, por exemplo, a Patente Norte-Americana n° 5.380.831, incorporada ao presente como referência.
[730] Em realização preferida, o ácido nucleica PPO mutada compreende uma sequência de polinucleotídeos selecionada a partir do grupo que consiste de: (a) um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo conforme exibido em SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117 ou uma de suas variantes ou derivados; (b) um polinucleotídeo que compreende pelo menos sessenta nucleotídeos consecutivos de qualquer um em (a); e (c) um polinucleotídeo complementar ao polinucleotídeo de qualquer um dentre (a) e (b).
[731] Preferencialmente, o cassete de expressão de acordo com a presente invenção compreende adicionalmente uma região reguladora do início da transcrição e uma região reguladora do início da tradução que são funcionais na planta.
[732] Embora os polinucleotídeos de acordo com a presente invenção encontrem uso como genes marcadores selecionáveis para transformação vegetal, os conjuntos de expressão de acordo com a presente invenção podem incluir outro gene marcador selecionável para a seleção de células transformadas. Genes marcadores selecionáveis, incluindo os da presente invenção, são utilizados para seleção de tecidos ou células transformadas. Os genes marcadores incluem, mas sem limitações, genes que codificam resistência a antibióticos, tais como os que codificam neomicino fosfotransferase II (NEO) e higromicino fosfotransferase (HPT), bem como genes que conferem resistência a compostos herbicidas, tais como glufosinato de amônio, bromoxinil, imidazolinonas e 2,4-diclorofenoxiacetato (2,4-D). Vide, de forma geral, Yarranton (1992), Curr. Opin. Biotech. 3: 506-511; Christopherson et al. (1992), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 89: 6314-6318; Yao et al. (1992), Cell 71: 63-72; Reznikoff (1992), Mol. Microbiol. 6: 2419-2422; Barkley et al. (1980), The Operon, págs. 177-220; Hu et al. (1987), Cell 48: 555-566; Brown et al. (1987), Cell 49: 603-612; Figge et al. (1988), Cell 52: 713-722; Deuschle et al. (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 86: 5400-5404; Fuerst et al. (1989), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 86: 2549-2553; Deuschle et al. (1990), Science 248: 480-483; Gossen (1993), Tese de PhD, Universidade de Heidelberg; Reines et al. (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 90: 1917-1921; Labow et al. (1990), Mol. Cell Biol. 10: 3343-3356; Zambretti et al. (1992), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 89: 3952-3956; Bairn et al. (1991), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 88: 50725076; Wyborski et al. (1991), Nucleic Acids Res. 19: 4647-4653; Hillenand- Wissman (1989), Topics Mol. Struc. Biol. 10: 143-162; Degenkolb et al. (1991), Antimicrob. Agents Chemother. 35: 1591-1595; Kleinschnidt et al. (1988), Biochemistry 27: 1094-1104; Bonin (1993), Tese de PhD, Universidade de Heidelberg; Gossen et al. (1992), Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 89: 5547-5551; Oliva et al. (1992), Antimicrob. Agents Chemother. 36: 913-919; Hlavka et al. (1985), Handbook of Experimental Pharmacology, Vol. 78 (Springer-Verlag, Berlim); Gill et al. (1988), Nature 334: 721-724. Essas descrições são incorporadas ao presente como referência. A lista acima de genes marcadores selecionáveis não se destina a ser limitadora. Qualquer gene marcador selecionável pode ser utilizado na presente invenção.
[733] A presente invenção fornece adicionalmente um vetor de expressão recombinante isolado que compreende o cassete de expressão que contém um ácido nucleica PPO mutada conforme descrito acima, em que a expressão do vetor em uma célula hospedeira resulta em aumento da tolerância a herbicida inibidor de PPO em comparação com uma variedade do tipo selvagem da célula hospedeira. Da forma utilizada no presente, o termo “vetor” designa uma molécula de ácido nucleico capaz de transportar outro ácido nucleico ao qual foi ligado. Um tipo de vetor é um “plasmídeo”, que designa um circuito de DNA de fita dupla circular ao qual podem ser ligados segmentos de DNA adicionais. Outro tipo de vetor é um vetor viral, no qual segmentos de DNA adicionais podem ser ligados ao genoma viral. Certos vetores são capazes de reprodução autônoma em células hospedeiras nas quais são introduzidos (por exemplo, vetores bacterianos que possuem origem bacteriana de reprodução e vetores de mamíferos epissomais). Outros vetores (tais como vetores de mamíferos não epissomais) são integrados ao genoma de uma célula hospedeira mediante introdução na célula hospedeira e, portanto, são reproduzidos em conjunto com o genoma hospedeiro. Além disso, certos vetores são capazes de dirigir a expressão de genes aos quais são ligados operativamente. Esses vetores são denominados no presente “vetores de expressão”. De forma geral, vetores de expressão úteis em métodos de DNA recombinantes encontram-se frequentemente na forma de plasmídeos. No presente relatório descritivo, “plasmídeo” e “vetor” podem ser utilizados de forma intercambiável, pois o plasmídeo é a forma de vetor mais comumente utilizada. A presente invenção destina-se, entretanto, a incluir outras formas de vetores de expressão, tais como vetores virais (por exemplo, vetores com defeito de reprodução, adenovírus e vírus adenoassociados), que atendem a funções equivalentes.
[734] Os vetores de expressão recombinantes de acordo com a presente invenção compreendem um ácido nucleico de acordo com a presente invenção em forma apropriada para expressão do ácido nucleico em células hospedeiras, o que significa que os vetores de expressão recombinantes incluem uma ou mais sequências reguladoras, selecionadas com base nas células hospedeiras a serem utilizadas para expressão, que é ligado operativamente à sequência de ácidos nucleicos a ser expressa. Sequências reguladoras incluem aquelas que dirigem a expressão constitutiva de uma sequência de nucleotídeos em muitos tipos de células hospedeiras e as que dirigem a expressão da sequência de nucleotídeos somente em certas células hospedeiras ou sob certas condições. Os técnicos no assunto apreciarão que o projeto do vetor de expressão pode depender de fatores tais como a escolha da célula hospedeira a ser transformada, o nível de expressão de polipeptídeo desejado etc. Os vetores de expressão de acordo com a presente invenção podem ser introduzidos em células hospedeiras, de forma a produzir polipeptídeos ou peptídeos, incluindo peptídeos ou polipeptídeos de fusão, codificados por ácidos nucleicos conforme descrito no presente (por exemplo, polipeptídeos PPO que sofreram mutação, polipeptídeos de fusão etc.).
[735] Em uma realização preferida da presente invenção, os polipeptídeos de PPO mutada são expressos em plantas e células vegetais tais como células vegetais unicelulares (por exemplo, algas) (vide Falciatore et al., 1999, Marine Biotechnology 1 (3): 239-251 e referências ali contidas) e células vegetais de plantas speriores (por exemplo, os espermatófitos, tais como plantas produtoras). Um polinucleotídea PPO mutada pode ser “introduzido” em uma célula vegetal por qualquer meio, incluindo transfecção, transformação ou transdução, eletroporação, bombardeamento de partículas, agroinfecções, biolística e similares.
[736] Métodos apropriados de transformação ou transfecção de células hospedeiras, incluindo células vegetais, podem ser encontrados em Sambrook et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, segunda edição, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nova Iorque, 1989) e outros manuais de laboratório, tais como Methods in Molecular Biology, 1995, Vol. 44, Agrobacterium Protocols, ed. Gartland e Davey, Humana Press, Totowa, Nova Jérsei. Como a maior tolerância a herbicidas inibidores de PPO é uma característica geral cuja herança é desejada em uma ampla variedade de plantas como milho, trigo, cevada, aveia, triticale, arroz, centeio, soja, amendoim, algodão, colza, canola, mandioca, pimenta, girassol e tagetes, plantas solanáceas como batata, fumo, berinjela e tomate, espécies de Vicia, ervilha, alfafa, arbustos (café, cacau e chá), espécies de Salix, árvores (palma oleaginosa, coco), gramas perenes e safras forrageiras. Essas plantas produtoras também são plantas alvo de engenharia genética como uma realização adicional da presente invenção. Em uma realização preferida, a planta é uma planta produtora. Safras forrageiras incluem, mas sem limitações, erva de trigo, alpiste, Bromus, azevém selvagem, erva de febra, Dactylis, alfafa, salfoína, cornichão, trevo híbrido, trevo vermelho e trevo de cheiro.
[737] Em uma realização da presente invenção, a transfecção de um polinucleotídea PPO mutada em plantas é atingida por meio de transferência genética mediada por Agrobacterium. Um método de transformação conhecido dos técnicos no assunto é o mergulhamento de planta em floração em uma solução de Agrobacteria, em que a Agrobacteria contém o ácido nucleico de PPO mutada, seguido por cultivo dos gametas transformados. Transformação vegetal mediada por Agrobacterium pode ser realizada utilizando, por exemplo, o GV3101 (pMP90) (Koncz e Schell, 1986, Mol. Gen. Genet. 204: 383-396) ou linhagem LBA4404 de Agrobacterium tumefaciens (Clontech). A transformação pode ser realizada por meio de métodos de transformação e regeneração padrão (Deblaere et al., 1994, Nucl. Acids Res. 13: 4777-4788; Gelvin, Stanton B. e Schilperoort, Robert, A., Plant Molecular Biology Manual, segunda edição - Dordrecth: Kluwer Academic Publ., 1995 - em Sect., RingbucZentrale Signatur BT11-P, ISBN 0-7923-2731-4; Glick, Bernard R. e Thompson, John E., Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, Boca Raton: CRC Press, 1993 360 S., ISBN 0-8493-5164-2). Canola, por exemplo, pode ser transformada por meio da transformação de cotilédones ou hipocotilédones (Moloney et al., 1989, Plant Cell Report 8: 238-242; De Block et al., 1989, Plant Physiol. 91: 694-701). O uso de antibióticos para a seleção de plantas e Agrobacterium depende do vetor binário e da linhagem de Agrobacterium utilizada para transformação. A seleção de canola é normalmente realizada utilizando canamicina como marcador vegetal selecionável. A transferência genética mediada por Agrobacterium para linho pode ser realizada utilizando, por exemplo, um método descrito por Mlynarova et al., 1994, Plant Cell Report 13 (282-285). Além disso, pode-se realizar a transformação de soja utilizando, por exemplo, um método descrito na Patente Europeia n° 0.424.047, Patente Norte-Americana n° 5.322.783, Patente Europeia n° 0.397.687, Patente Norte-Americana n° 5.376.543 ou Patente Norte- Americana n° 5.169.770. A transformação de milho pode ser atingida por meio de bombardeamento de partículas, absorção de DNA mediada por polietileno glicol ou pelo método de fibra de carbureto de silício (vide, por exemplo, Freeling e Walbot, The Maize Handbook, Springer Verlag: Nova Iorque (1993), ISBN 3540-97826-7). Um exemplo específico de transformação de milho é encontrado na Patente Norte-Americana n° 5.990.387 e um exemplo específico de transformação de trigo pode ser encontrado no Pedido PCT n° WO 93/07256.
[738] Segundo a presente invenção, o polinucleotídea PPO mutada introduzido pode ser mantido na célula vegetal de forma estável caso seja incorporado em uma réplica autônoma não cromossômica ou integrado aos cromossomas da planta. Alternativamente, o polinucleotídea PPO mutada introduzido pode estar presente sobre um vetor sem reprodução extracromossômico e pode ser expresso de forma transitória ou ser transitoriamente ativo. Em uma realização, pode ser criado um micro-organismo recombinante homólogo no qual o polinucleotídea PPO mutada é integrado a um cromossomo, é preparado um vetor que contém pelo menos uma parte de um gene PPO no qual tenha sido introduzida uma exclusão, adição ou substituição, de forma a alterar, por exemplo romper funcionalmente, o gene PPO endógeno e criar um gene PPO mutada. Para criar uma mutação pontual por meio de recombinação homóloga, podem ser utilizados híbridos de DNA-RNA em um método conhecido como quimeroplastia (Cole-Strauss et al., 1999, Nucleic Acids Research 27 (5): 1323-1330 e Kmiec, 1999, Gene Therapy American Scientist 87 (3): 240-247). Outros procedimentos de recombinação homóloga em espécies de Triticum também são bem conhecidos na técnica e contemplados para uso no presente.
[739] No vetor de recombinação homóloga, o gene PPO mutada pode ser ladeado nas suas extremidades 5’ e 3’ por uma molécula de ácido nucleico adicional do gene PPO para permitir a ocorrência de recombinação homóloga entre o gene PPO mutada exógeno conduzido pelo vetor e um gene PPO endógeno em micro-organismos ou plantas. A molécula de ácido nucleico PPO lateral adicional possui comprimento suficiente para recombinação homóloga bem sucedida com o gene endógeno. Tipicamente, várias centenas de pares de bases até quilobases de DNA lateral (nas extremidades 5’ e 3’) são incluídas no vetor (vide, por exemplo, Thomas, K. R. e Capecchi, M. R., 1987, Cell 51: 503 para uma descrição de vetores de recombinação homóloga de Strepp et al., 1998, PNAS 95 (8): 4368-4373 para recombinação com base em cDNA em Physcomitrella patens). Como o gene PPO mutada normalmente difere do gene PPO em muito poucos aminoácidos, entretanto, nem sempre é necessária uma sequência lateral. O vetor de recombinação homólogo é introduzido em um micro-organismo ou célula vegetal (por exemplo, por meio de DNA mediado por polietileno glicol) e as células nas quais o gene PPO mutada foi recombinado de forma homóloga com o gene PPO endógeno são selecionadas utilizando métodos conhecidos na técnica.
[740] Em outra realização, podem ser produzidos microorganismos recombinantes que contêm sistemas selecionados que permitem a expressão regulada do gene introduzido. A inclusão de um gene PPO mutada sobre um vetor colocando-o sob o controle do operador de lac, por exemplo, permite a expressão do gene PPO mutada somente na presença de IPTG. Esses sistemas reguladores são bem conhecidos na técnica.
[741] Outro aspecto da presente invenção refere-se a células hospedeiras nas quais foi introduzido um vetor de expressão recombinante de acordo com a presente invenção. As expressões “célula hospedeira” e “célula hospedeira recombinante” são utilizadas de forma intercambiável no presente. Compreende-se que essas expressões não designam apenas a célula objeto específica, mas também se aplicam à prole ou à prole potencial dessa célula. Como certas modificações podem ocorrer em gerações sucessivas devido à mutação ou influências ambientais, essa prole não pode, na verdade, ser idêntica à célula parental, mas ainda é incluída no escopo da expressão utilizada no presente. Uma célula hospedeira pode ser qualquer célula procariótica ou eucariótica. Um polinucleotídea PPO mutada pode ser expresso, por exemplo, em células bacterianas, tais como C. glutamicum, células de insetos, células fúngicas ou células de mamíferos (tais como células de ovário de hamster chinês (CHO) ou células COS), algas, ciliatos, células vegetais, fungos ou outros microorganismos, tais como C. glutamicum. Outras células hospedeiras apropriadas são conhecidas dos técnicos no assunto.
[742] Uma célula hospedeira de acordo com a presente invenção, tal como uma célula hospedeira procariótica ou eucariótica em cultivo, pode ser utilizada para produzir (ou seja, expressar) um polinucleotídea PPO mutada. Consequentemente, a presente invenção fornece ainda métodos de produção de polipeptídeos PPO que sofreram mutação utilizando as células hospedeiras de acordo com a presente invenção. Em uma realização, o método compreende o cultivo da célula hospedeira de acordo com a presente invenção (na qual foi introduzido um vetor de expressão recombinante que codifica um polipeptídeo PPO mutado ou em cujo genoma foi introduzido um gene que codifica um polipeptídeo PPO do tipo selvagem ou que sofreu mutação) em um meio apropriado até a produção de um polipeptídeo PPO mutado. Em outra realização, o método compreende adicionalmente o isolamento de polipeptídeos PPO que sofreram mutação do meio ou da célula hospedeira. Outro aspecto da presente invenção refere-se a polipeptídeos PPO que sofreram mutação isolados e suas porções biologicamente ativas. Polipeptídeo “isolado”, “purificado” ou sua parte biologicamente ativa é livre de parte do material celular quando produzido por meio de métodos de DNA recombinantes, precursores químicos ou outras substâncias quando quimicamente sintetizado. A expressão “substancialmente livre de material celular” inclui preparações de polipeptídeo PPO mutado nas quais o polipeptídeo é separado de alguns dos componentes celulares das células nas quais é produzido de forma natural ou recombinante. Em uma realização, a expressão “substancialmente livre de material celular” inclui preparações de um polipeptídeo PPO mutado que contém menos de cerca de 30% (em peso seco) de material PPO que não sofreu mutação (também denominado no presente “polipeptídeo contaminante”), de maior preferência menos de cerca de 20% de material de PPO que não sofreu mutação, de preferência ainda maior menos de cerca de 10% de material de PPO que não sofreu mutação e, de preferência superior, menos de cerca de 5% de material de PPO que não sofreu mutação.
[743] Quando o polipeptídeo PPO mutado ou sua porção biologicamente ativa é produzido de forma recombinante, ele, preferencialmente, também é substancialmente livre de meio de cultivo, ou seja, o meio de cultivo representa menos de cerca de 20%, de maior preferência menos de cerca de 10% e, de preferência superior, menos de cerca de 5% do volume da preparação de polipeptídeo. A expressão “substancialmente livre de precursores químicos ou outras substâncias” inclui preparações de polipeptídeo PPO mutado nas quais o polipeptídeo é separado de precursores químicos ou outras substâncias que são envolvidas na síntese do polipeptídeo. Em uma realização, a expressão “substancialmente livre de precursores químicos ou outras substâncias” inclui preparações de polipeptídeos PPO que sofreram mutação que contêm menos de cerca de 30% (em peso seco) de precursores químicos ou substâncias de PPO que não sofreu mutação, de maior preferência menos de cerca de 20% de precursores químicos ou substâncias de PPO que não sofreu mutação, de preferência ainda maior menos de cerca de 10% de precursores químicos ou substâncias de PPO que não sofreu mutação e, de preferência superior, menos de cerca de 5% de precursores químicos ou substâncias de PPO que não sofreu mutação. Em realizações preferidas, polipeptídeos isolados ou suas porções biologicamente ativas não contêm polipeptídeos contaminantes do mesmo organismo do qual é derivado o polipeptídeo PPO mutado. Tipicamente, esses polipeptídeos são produzidos por meio da expressão recombinante, por exemplo, de um polipeptídeo PPO mutado em plantas diferentes ou em microorganismos tais como C. glutamicum, ciliatos, algas ou fungos.
[744] Em outros aspectos, é fornecido um método de tratamento de plantas de acordo com a presente invenção.
[745] Em algumas realizações, o método compreende o contato da planta com uma composição agronomicamente aceitável.
[746] Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método de preparação de sementes descendentes. O método compreende o plantio de sementes capazes de produzir plantas de acordo com a presente invenção. Em uma realização, o método compreende adicionalmente o cultivo de plantas descendentes a partir de sementes; e colheita de sementes descendentes a partir da planta descendente. Em outras realizações, o método compreende adicionalmente a aplicação de uma composição herbicida de herbicidas inibidores de PPO à planta descendente.
[747] Em outra realização, a presente invenção refere-se a partes que podem ser colhidas da planta transgênica de acordo com a presente invenção. Preferencialmente, as partes que podem ser colhidas compreendem o ácido nucleico PPO ou a proteína PPO de acordo com a presente invenção. As partes que podem ser colhidas podem ser sementes, raízes, folhas e/ou flores que compreendem o ácido nucleico PPO, a proteína PPO ou suas partes. Partes preferidas de plantas de soja são grãos de soja que compreendem o ácido nucleico PPO ou a proteína PPO.
[748] Em outra realização, a presente invenção refere-se a produtos derivados de plantas de acordo com a presente invenção, suas partes ou partes que podem ser colhidas. Um produto vegetal preferido é forragem, massa de sementes, óleo ou sementes revestidas com tratamento de sementes. Preferencialmente, a massa e/ou o óleo compreende os ácidos nucleicos PPO que sofreram mutação ou proteínas PPO de acordo com a presente invenção.
[749] Em outra realização, a presente invenção refere-se a um método de elaboração de produtos, em que o método compreende: a. cultivo das plantas de acordo com a presente invenção ou que podem ser obtidas por meio dos métodos de acordo com a presente invenção; e b. elaboração do mencionado produto a partir das plantas de acordo com a presente invenção e/ou partes, tais como sementes, dessas plantas, ou por estas.
[750] Em uma realização adicional, o método compreende as etapas de: a. cultivo das plantas de acordo com a presente invenção; b. remoção das partes que podem ser colhidas conforme definido acima das plantas; e c. elaboração do mencionado produto a partir das partes que podem ser colhidas de acordo com a presente invenção ou por estas.
[751] O produto pode ser elaborado no local onde a planta foi cultivada e as plantas e/ou suas partes podem ser removidas do local onde as plantas foram cultivadas para gerar o produto. Tipicamente, a planta é cultivada, as partes que podem ser colhidas desejadas são removidas da planta, quando viável em ciclos repetidos, e o produto é elaborado com as partes da planta que podem ser colhidas. A etapa de cultivo da planta pode ser realizada apenas uma vez quando o método de acordo com a presente invenção é realizado, permitindo ao mesmo tempo, por várias vezes, as etapas de elaboração do produto, tal como por meio de remoção repetida de partes que podem ser colhidas das plantas de acordo com a presente invenção e, se necessário, processamento adicional dessas partes para chegar ao produto. Também é possível que a etapa de cultivo das plantas de acordo com a presente invenção seja repetida e as plantas ou partes que podem ser colhidas sejam armazenadas até realizar-se a elaboração do produto uma vez para as plantas ou partes de plantas acumuladas. Além disso, as etapas de cultivo das plantas e elaboração do produto podem ser realizadas com sobreposição no tempo, mesmo simultaneamente em grande parte ou sequencialmente. Geralmente, as plantas são cultivadas por algum tempo antes da elaboração do produto.
[752] Em uma realização, os produtos elaborados por meio dos mencionados métodos de acordo com a presente invenção são produtos vegetais, tais como, mas sem limitações, alimentos, ração, suplemento alimentar, suplemento de ração, fibra, cosméticos e/ou produtos farmacêuticos. Os alimentos são considerados composições utilizadas para nutrição e/ou para suplementação da nutrição. Particularmente, os alimentos animais e suplementos de ração animal são considerados alimentos.
[753] Em outra realização, os métodos de produção de acordo com a presente invenção são utilizados para elaborar produtos agrícolas, tais como, mas sem limitações, extratos vegetais, proteínas, aminoácidos, carboidratos, gorduras, óleos, polímeros, vitaminas e similares.
[754] É possível que um produto vegetal consista em grande parte de um ou mais produtos agrícolas.
[755] Conforme descrito acima, a presente invenção ensina composições e métodos de aumento da tolerância a inibidores de PPO de uma semente ou planta produtora em comparação com uma variedade do tipo selvagem da planta ou semente. Em uma realização preferida, a tolerância à inibição de PPO de uma semente ou planta produtora aumenta de tal forma que a planta ou semente possa suportar uma aplicação de herbicida inibidor de PPO preferencialmente de cerca de 1-1000 g i.a./ha-1, de maior preferência de 1-200 g i.a./ha-1, de preferência ainda maior 5-150 g i.a./ha-1 e, de preferência superior, 10-100 g i.a./ha-1. Da forma utilizada no presente, “suportar” uma aplicação de herbicida inibidor de PPO indica que a planta não é morta nem moderadamente danificada por essa aplicação. Os técnicos no assunto compreenderão que as taxas de aplicação podem variar, dependendo de condições ambientais tais como temperatura ou umidade e dependendo do tipo escolhido de herbicida (ingrediente ativo i. a.).
[756] Além disso, a presente invenção fornece métodos que envolvem o uso de pelo menos um herbicida inibidor de PPO, opcionalmente em combinação com um ou mais compostos herbicidas B e, opcionalmente, um agente de segurança C, conforme descrito em detalhes acima.
[757] Nesses métodos, o herbicida inibidor de PPO pode ser aplicado por meio de qualquer método conhecido na técnica, incluindo, mas sem limitações, tratamento de sementes, tratamento de solo e tratamento foliar. Antes da aplicação, o herbicida inibidor de PPO pode ser convertido nas formulações costumeiras, tais como soluções, emulsões, suspensões, pós secos, pós, pastas e grânulos. A forma de uso depende do propósito pretendido específico; em cada caso, ela deverá garantir distribuição fina e homogênea do composto de acordo com a presente invenção.
[758] Fornecendo plantas que possuem maior tolerância a herbicidas inibidores de PPO, uma ampla variedade de formulações pode ser empregada para proteger plantas de ervas, de forma a aumentar o crescimento das plantas e reduzir a competição por nutrientes. Pode-se utilizar um herbicida inibidor de PPO isolado para o controle de ervas pré-emergência, pós- emergência, pré-plantio e durante o plantio em regiões vizinhas às plantas produtoras descritas no presente ou pode-se utilizar uma formulação de herbicida inibidor de PPO que contém outros aditivos. O herbicida inibidor de PPO pode também ser utilizado como tratamento de sementes. Aditivos encontrados em uma formulação de herbicida inibidor de PPO incluem outros herbicidas, detergentes, adjuvantes, agentes espalhantes, agentes aglutinantes, agentes estabilizantes ou similares. A formulação de herbicida inibidor de PPO pode ser uma preparação seca ou úmida e pode incluir, mas sem limitações, pós fluidos, concentrados emulsionáveis e concentrados líquidos. O herbicida inibidor de PPO e as formulações de herbicidas podem ser aplicadas de acordo com métodos convencionais, por exemplo, por meio de pulverização, irrigação, polvilhamento ou similares.
[759] Formulações apropriadas são descritas em detalhes em PCT/EP2009/063387 e PCT/EP2009/063386, que são incorporadas ao presente como referência.
[760] Dever-se-á também compreender que o acima refere-se a realizações preferidas da presente invenção e que numerosas alterações podem ser elaboradas sem abandonar o escopo da presente invenção. A presente invenção é adicionalmente ilustrada pelos exemplos a seguir, que não devem ser interpretados, de nenhuma forma, como impondo limitações ao seu escopo. Ao contrário, deve-se compreender claramente que se pode recorrer a várias outras realizações, modificações e seus equivalenes que, após a leitura do presente relatório descritivo, podem ser sugeridos aos técnicos no assunto, sem abandonar o espírito da presente invenção e/ou o escopo das reivindicações anexas.
EXEMPLOS EXEMPLO 1 MUTAGÊNESE DIRIGIDA A LOCAL DE PPO
[761] Toda a sequência de codificação de ácidos nucleicos e mutantes simples e duplos que codificam um polipeptídeo que compreende SEQ ID N° 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21,22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117 são sintetizados e clonados pela Geneart (Geneart AG, Regensburg, Alemanha). Mutantes de projeto racionais são sintetizados pela Geneart. Bibliotecas genéticas de PPO aleatórias são sintetizadas pela Geneart. Os plasmídeos são isolados de E. coli TOP10 realizando-se uma minipreparação de plasmídeos e confirmados por meio de sequenciamento de DNA.
EXEMPLO 2
[762] Expressão e purificação de PPO mutante e do tipo selvagem recombinante (extraído de: Franck E. Dayan, Pankaj R. Daga, Stephen O. Duke, Ryan M. Lee, Patrick J. Tranel, Robert J. Doerksen, Biochemical and structural consequences of a glycine deletion in the α-8 helix of protoporphyrinogen oxidase, Biochimica et Biophysica Acta, 1804 (2010), 1548-56).
[763] Os clones no vetor pRSET são transformados na linhagem BL21(DE3)-pLysS de E. coli. As células são cultivadas em 250 ml de LB com 100 μg/ml-1 de carbenicilina, agitando-se por uma noite a 37 °C. Os cultivos são diluídos em 1 l de LB com antibiótico, cresceram a 37 °C em agitação por duas horas, foram induzidos com 1 mM de IPTG e cultivados a 25 °C em agitação por outras cinco horas. As células são colhidas por meio de centrifugação a 1600xg, lavadas com 0,09% de NaCl e armazenadas a -80 °C. As células foram lisadas utilizando uma prensa francesa a 140 MPa em 50 mM de fosfato de sódio sob pH 7,5, 1 M NaCl, 5 mM de imidazol, 5% de glicerol e 1 μg/ml-1 de leupeptina. Após a lise, são adicionadas 0,5 U de benzonase (Novagen, EMD Chemicals, Inc., Gibbstown NJ) e PMSF (concentração final de 1 mM). Fragmentos celulares são removidos por meio de centrifugação a 3000xg. Proteínas PPO marcadas com His foram purificadas sobre uma coluna HP quelante Hitrap ativada por níquel (GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway NJ) equilibrada com 20 mM de fosfato de sódio, pH 8,0, 50 mM de NaCl, 5 mM de imidazol, 5 mM de MgCl2, 0,1 mM de EDTA e 17% de glicerol. PPO é eluído com 250 mM de imidazol. A proteína ativa é dessalinizada sobre uma coluna PD-10 (GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway NJ) equilibrada com tampão de 20 mM de fosfato de sódio, pH 7,5, 5 mM de MgCl2, 1 mM de EDTA e 17% de glicerol. Cada litro de cultivo forneceu cerca de 10 mg de PPO puro, que é armazenado a -20 °C até ser utilizado em testes.
EXEMPLO 3 TESTE DE ENZIMA PPO (NÃO RECOMBINANTE)
[764] Proteína PPO (EC 1.3.3.4) é extraída de coleóptilos ou brotos (150 g de peso fresco) de milho cultivado no escuro, solanácea negra, ipomeia e mudas de juta-da-china conforme descrito anteriormente (Grossmann et al., 2010). Antes da colheita, as mudas foram mantidas em ambientação por duas horas na luz a fim de atingir as atividades enzimáticas específicas mais altas nas frações de tialcoide em baixas concentrações de clorofila. Em altas concentrações de clorofila, ocorre resfriamento significativo da fluorescência, o que limita a quantidade de tilacoides verdes que podem ser empregados no teste. Materiais vegetais são homogeneizados no frio com um misturador Braun utilizando razão entre peso fresco e volume de 1:4. Tampão de homogeneização consistiu de tris(hidroximetil)aminometano (Tris)-HCl (50 mM; pH 7,3), sacarose (0,5 M), cloreto de magnésio (1 mM), ácido etilenodiaminotetra-acético (EDTA) (1 mM) e albumina de soro bovino (2 g/l-1). Após filtragem através de quatro camadas de Miracloth, são obtidas preparações de plastídeos brutas após centrifugação a 10000xg por cinco minutos e nova suspensão em tampão de homogeneização antes da centrifugação a 150xg por dois minutos para remover fragmentos de células brutas. O sobrenadante é centrifugado a 4000xg por quinze minutos e a fração de pelota é novamente suspensa em 1 ml de tampão contendo Tris-HCl (50 mM; pH 7,3), EDTA (2 mM), leupeptina (2 μM), pepstatina (2 μM) e glicerol (200 ml/l-1) e armazenada a -80 °C até o uso. Determina-se a proteína no extrato de enzima com albumina de soro bovino como padrão. A atividade de PPO é testada fluorometricamente por meio de monitoramento da taxa de formação de Proto a partir de protoporfirinogênio IX quimicamente reduzido sob condições de velocidade inicial. A mistura de teste consistiu de Tris- HCl (100 mM; pH 7,3), EDTA (1 mM), ditiotreitol (5 mM), Tween 80 (0,085%), protoporfirinogênio IX (2 μM) e 40 μg de proteína extraída em volume total de 200 μl. A reação é iniciada por meio da adição de substrato protoporfirinogênio IX a 22 °C. Saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)- 3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofeno, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo são preparados em solução de sulfóxido de dimetila (DMSO) (concentração de 0,1 mM de DMSO no teste) e adicionados à mistura de teste em concentrações de 0,005 pM a 5 μM antes da incubação. A fluorescência é monitorada diretamente a partir da mistura de teste, utilizando POLARstar Optima/Galaxy (BMG) com excitação a 405 nm e a emissão é monitorada a 630 nm. A atividade não enzimática na presença de extrato desativado por calor é desprezível. A inibição da atividade enzimática induzida pelo herbicida é expressa na forma de percentual de inibição com relação a controles não tratados. As concentrações molares de composto necessárias para inibição de 50% da enzima (valores IC50) são calculadas enquadrando-se os valores à equação de reação à dosagem utilizando análise de regressão não linear.
EXEMPLO 4 TESTE DE ENZIMA PPO (RECOMBINANTE)
[765] Proto é adquirido da Sigma-Aldrich (Milwaukee WI). Protogene é preparado de acordo com Jacobs e Jacobs (N. J. Jacobs, J. M. Jacobs, Assay for enzymatic protoporphyrinogen oxidation, a late step in heme synthesis, Enzyme 28 (1982) 206-219). Os testes são conduzidos em 100 mM de fosfato de sódio, pH 7,4, com 0,1 mM de EDTA, 0,1% Tween 20, 5 μM de FAD e 500 mM de imidazol. As curvas de reação à dosagem com os inibidores de PPO saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)- 3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo e MC-15608 são obtidas na presença de 150 μM de Protogen. As amplitudes de banda de excitação e emissão são definidas a 1,5 e 30 nm, respectivamente. Todos os testes são realizados em duplicata ou triplicata e medidos utilizando POLARstar Optima/Galaxy (BMG) com excitação a 405 nm e a emissão é monitorada a 630 nm. As concentrações molares de composto necessárias para inibição de 50% da enzima (valores IC50) são calculadas enquadrando-se os valores à equação de reação à dosagem utilizando análise de regressão não linear. Os resultados são exibidos na Tabela x.
EXEMPLO 5
[766] Elaboração de plantas tolerantes a herbicidas derivados de PPO que possuem sequências de PPO que sofreram mutação ou do tipo selvagem.
[767] Plantas de soja (Glycine max), milho (Zea mays) e canola (Brassica napus, Brassica rapa var. ou Brassica campestris L.) tolerantes a herbicidas derivados de PPO são produzidas por meio de método conforme descrito por Olhoft et al. (Patente Norte-Americana n° 2009/0049567). Para transformação de soja ou Arabidopsis thaliana, sequências de PPO que sofreram mutação ou do tipo selvagem que codificam polipeptídeos PPO que sofreram mutação que compreendem SEQ ID N° 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116 ou 117 são clonados com métodos de clonagem padrão conforme descrito em Sambrook et al. (Molecular Cloning (2001), Cold Spring Harbor Laboratory Press) em um vetor binário que contém conjunto de gene marcador de resistência (AHAS) e sequência de PPO mutada (marcada com GOI) entre sequência promotora da ubiquitina (PcUbi) e terminal de nopalino sintase (NOS). Para transformação de milho, sequências de PPO do tipo selvagem ou que sofreram mutação são clonadas com métodos de clonagem padrão conforme descrito em Sambrook et al. (Molecular Cloning (2001), Cold Spring Harbor Laboratory Press) em um vetor binário que contém conjunto de gene marcador de resistência (AHAS) e sequência de PPO mutada (marcada com GOI) entre sequência promotora da ubiquitina de milho (ZmUbi) e terminal de nopalino sintase (NOS). Plasmídeos binários são introduzidos em Agrobacterium tumefaciens para transformação vegetal. As construções de plasmídeos são introduzidas em células de meristema axilar de soja no nó primário de explantes de mudas por meio de transformação mediada por Agrobacterium. Após a inoculação e cocultivo com Agrobacteria, os explantes são transferidos para meios de introdução de brotos sem seleção por uma semana. Os explantes são transferidos em seguida para meio de indução de brotos com 1-3 μM de imazapir (Arsenal) por três semanas para selecionar células transformadas. Explantes com almofadas de brotos/calos saudáveis no nó primário são transferidos em seguida para meio de alongamento de brotos contendo 1-3 μM de imazapir até o alongamento de um broto ou a morte do explante. Plantículas transgênicas são enraizadas, submetidas a análise TaqMan para determinar a presença do transgene, transferidas para o solo e cultivadas até a maturidade em estufa. A transformação de plantas de milho é realizada por meio de um método descrito por McElver e Singh (WO 2008/124495). Construções de vetores de transformação vegetal que contêm sequências de PPO mutada são introduzidas em embriões imaturos de milho por meio de transformação mediada por Agrobacterium.
[768] Células transformadas são selecionadas em meio de seleção suplementado com 0,5 a 1,5 μM de imazetapir por três a quatro semanas. Plantículas transgênicas são regeneradas sobre meio de regeneração vegetal e enraizadas em seguida. Plantículas transgênicas são submetidas a análise TaqMan para determinar a presença do transgene antes do transplante para mistura de vasos e cultivo até a maturidade em estufa. Arabidopsis thaliana é transformada com sequências de PPO do tipo selvagem ou que sofreu mutação por meio do método de mergulhamento floral conforme descrito por McElver e Singh (WO 2008/124495). Plantas de Arabidopsis transgênicas são submetidas a análise TaqMan para analisar a quantidade de locais de integração. Realiza- se transformação de Oryza sativa (arroz) por meio de transformação de protoplastas conforme descrito por Peng et al. (US 6653529). Plantas transgênicas T0 ou T1 de soja, milho e arroz que contêm sequências de PPO mutada são testadas para determinar o aumento da tolerância a herbicidas derivados de PPO em estudos em estufa e estudos miniplot com os herbicidas inibidores de PPO a seguir: saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3- oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4- diona (CAS 1258836-72-4), flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo.
[769] Plantas de Arabidopsis thaliana transgênicas são testadas para determinar aumento da tolerância a saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3- (2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)- 1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo em placas com 48 cavidades. Sementes T2 são, portanto, esterilizadas na superfície por meio de agitação por cinco minutos em etanol + água (70+30 em volume), enxágue por uma vez com etanol + água (70+30 em volume) e duas vezes com água deionizada estéril. As sementes são novamente suspensas em 0,1% de agar dissolvido em água (p/v). Quatro a cinco sementes por cavidade são colocadas em placas sobre meio nutriente sólido que consiste de solução de nutriente Murashige Skoog com meia resistência, pH 5,8 (Murashige e Skoog (1962), Physiologia Plantarum 15: 473-497). Os compostos são dissolvidos em sulfóxido de dimetila (DMSO) e adicionados ao meio antes da solidificação (concentração de DMSO final de 0,1%). Placas com múltiplas cavidades são incubadas em uma câmara de crescimento a 22 °C, umidade relativa de 75% e 110 μmol de Phot * m-2 * s-1 com fotoperíodo de 14: 10 h de luz: escuro. Sete a dez dias após a semeadura, a inibição do crescimento é avaliada em comparação com plantas do tipo selvagem.
[770] Além disso, plantas de Arabidopsis T1 transgênicas são testadas para determinar o aumento da tolerância a herbicidas inibidores de PPO em estudos em estufa com os herbicidas inibidores de PPO a seguir: saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo.
EXEMPLO 6 CONDIÇÕES DE CULTIVO DE TECIDOS
[771] Foi desenvolvido um teste de mutagênese de cultivo de tecidos in vitro para isolar e caracterizar tecido vegetal (por exemplo, tecido de milho e arroz) que é tolerante para herbicidas inibidires da protoporfirinogênio oxidase (saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)- 3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo. O teste utiliza a variação somaclonal encontrada em cultivo de tecidos in vitro. Mutações espontâneas derivadas de variação somaclonal podem ser ampliadas por meio de mutagênese química e seleção subsequente de forma escalonada, sobre concentrações crescentes de herbicida.
[772] A presente invenção fornece condições de cultivo de tecidos para incentivar o crescimento de calos de arroz ou milho embriogênio quebradiço que sejam regeneráveis. Os calos são iniciados a partir de quatro cultivos diferentes de arroz ou milho que englobam variedades Zea mays e Japonica (Taipei 309, Nipponbare, Koshihikari) e Indica (Indica 1), respectivamente. As sementes são esterilizadas na superfície em etanol a 70% por cerca de um minuto, seguido por alvejante comercial Clorox a 20% por vinte minutos. As sementes são enxaguadas com água estéril e colocadas em placas sobre meios de indução de calos. São testados diversos meios de indução de calos. As listas de ingredientes para os meios testados são apresentadas na Tabela y. TABELA Y
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[773] Meios de indução de calos R001M são selecionados após o teste de diversas variações. Os cultivos são mantidos no escuro a 30 °C. Calo embriogênico é subcultivado em meios novos após 10-14 dias.
EXEMPLO 7 SELEÇÃO DE CALOS TOLERANTES A HERBICIDAS
[774] Após a determinação das condições de cultivo, são adicionalmente estabelecidas condições de seleção por meio da análise da sobrevivência de tecidos em curvas de morte com saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3- (2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5- triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo. Realizou-se consideração cuidadosa do acúmulo de herbicida no tecido, bem como sua persistência e estabilidade nas células e no meio de cultivo. Por meio desses experimentos, estabeleceu-se dose subletal para seleção inicial de material que sofreu mutação. Após o estabelecimento da dose inicial de saflufenacil, 1,5- dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo em meios de seleção, os tecidos são selecionados de forma escalonada por meio de aumento da concentração do inibidor de PPO com cada transferência até que sejam recuperadas células que cresceram vigorosamente na presença de doses tóxicas. Os calos resultantes são adicionalmente subcultivados a cada três a quatro semanas em R001M com agente seletivo. Mais de 26.000 calos são submetidos a seleção por quatro a cinco subcultivos até que a pressão seletiva esteja acima dos níveis tóxicos conforme determinado por curvas de morte e observações de cultivo contínuo. Alternativamente, cultivos líquidos são iniciados a partir de calos em MS711R com lenta agitação e subcultivos semanais. Após o estabelecimento de cultivos líquidos, agente de seleção é adicionado diretamente ao frasco em cada subcultivo. Após duas a quatro rodadas de seleção de líquidos, os cultivos são transferidos para filtros sobre meios R001M sólidos para crescimento adicional.
EXEMPLO 8 REGENERAÇÃO DE PLANTAS
[775] Tecido tolerante é regenerado e caracterizado de forma molecular para mutações de sequências genéticas de PPO e/ou bioquimicamente para atividade de PPO alterada na presença do agente seletivo. Além disso, genes envolvidos direta e/ou indiretamente na biossíntese de tetrapirrol e/ou processos de metabolismo também são sequenciados para caracterizar mutações. Por fim, enzimas que alteram o destino (por exemplo, metabolismo, translocação e transporte) também são sequenciadas em mutações caracterizadas. Após a seleção de herbicidas, calos são regenerados utilizando um regime de meios de R025M por dez a quatorze dias, R026M por cerca de duas semanas, R327M até o desenvolvimento de brotos bem formados e R008S até o bom enraizamento de brotos para transferência para a estufa. A regeneração é conduzida na luz. Nenhum agente de seleção é incluído durante a regeneração. Após o estabelecimento de raízes fortes, regeneradores M0 são transplantados para a estufa em vasos redondods ou quadrados. Os transplantes são mantidos sob uma xícara de plástico transparente até sua adaptação a condições de estufa. A estufa é configurada em ciclo de dia e noite de 27 °C/21 °C com luzes de sódio sob alta pressão de 600 W que suplementam luz para manter período de dia de quatorze horas. As plantas são regadas segundo a necessidade, dependendo do tempo, e fertilizadas diariamente.
EXEMPLO 9 ANÁLISE DE SEQUÊNCIAS
[776] Tecido de folha é coletado de plantas clonais separadas para transplante e analisadas como indivíduos. DNA genômico é extraído utilizando um kit de sistema vegetal DNA magnético Wizard® 96 (Promega, Patentes Norte-Americanas n° 6.027.945 e 6.368.800) conforme instruído pelo fabricante. DNA isolado é amplificado por meio de PCR utilizando o primer frontal e reverso apropriado.
[777] Realiza-se amplificação por meio de PCR utilizando Taq DNA Polimerase Hotstar (Qiagen) empregando programa de termociclização touchdown conforme segue: 96 °C por quinze minutos, seguido por 35 ciclos (96 °C, 30 seg; 58 °C - 0,2 °C por ciclo, 30 seg; 72 °C, 3 min e 30 seg) e 10 min a 72 °C. Produtos de PCR são verificados para determinar a concentração e o tamanho de fragmentos por meio de eletroforese de gel de agarose. Produtos de PCR desfosforilados são analisados por meio de sequência direta utilizando os primers de PCR (DNA Landmarks ou Entelechon). Arquivos de traços de cromatograma (.scf) são analisados para determinar mutações com relação ao gene do tipo selvagem utilizando Vector NTI Advance 10® (Invitrogen). Com base em informações de sequência, são identificadas mutações em diversos indivíduos. Realiza-se análise de sequências sobre os cromatogramas representativos e alinhamento AlignX correspondente com configurações padrão, que é editada para convocar picos secundários.
EXEMPLO 10 DEMONSTRAÇÃO DE TOLERÂNCIA A HERBICIDAS
[778] Plantas transgênicas T0 ou T1 de soja, milho, variedades de canola e arroz que contêm sequências PPO1 e/ou PPO2 são testadas para determinar aumento da tolerância a herbicidas em estudos em estufa e estudos em minicanteiros com os herbicidas a seguir: saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3- (2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)- 1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo. Para o tratamento pré-emergência, os herbicidas são aplicados diretamente após o cultivo por meio de bocais de distribuição fina. Os recipientes são irrigados suavemente para promover a germinação e o crescimento e cobertos em seguida com capelas de plástico transparentes até o enraizamento das plantas. Essa cobertura causa germinação uniforme das plantas de teste, a menos que isso tenha sido impedido pelos herbicidas. Para o tratamento pós-emergência, as plantas de teste são cultivadas em primeiro lugar até a altura de 3 a 15 cm, dependendo dos hábitos da planta, e só então tratadas com os herbicidas. Com este propósito, as plantas de teste são cultivadas diretamente e crescem nos mesmos recipientes ou são cultivadas separadamente em primeiro lugar e transplantadas para os recipientes de teste poucos dias antes do tratamento.
[779] Para o teste de plantas T0, podem ser utilizados cortes. No caso de plantas de soja, broto ideal para corte possui cerca de 7,5 a 10 cm de altura, com a presença de pelo menos dois nós. Cada corte é retirado do transformador original (planta mãe) e mergulhado no pó de hormônio de enraizamento (ácido indolo-3-butírico, IBA). O corte é colocado em seguida em cunhas oásis no interior de uma biocúpula. Cortes do tipo selvagem também são retirados simultaneamente para servir de controle. Os cortes são mantidos na biocúpula por cinco a seste dias, transplantados em seguida para vasos e aclimatados em seguida na câmara de crescimento por mais dois dias. Os cortes são transferidos em seguida para a estufa, aclimatados por cerca de quatro dias e submetidos em seguida a testes de pulverização conforme indicado. Dependendo da espécie, as plantas são mantidas a 10-25 °C ou 20-35 °C. O período de teste estende-se por três semanas. Durante esse período, as plantas são tratadas e sua reação aos tratamentos individuais é avaliada. Avaliações de lesões por herbicidas são tomadas em duas e três semanas após tratamento. Lesões de plantas são avaliadas em escala de 0% a 100%, em que 0% é ausência de lesão e 100% é morte completa.
[780] Plantas de Arabidopsis thaliana transgênicas são testadas para determinar aumento da tolerância a saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3- (2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)- 1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4), flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo em placas com 48 cavidades. Sementes T2 são, portanto, esterilizadas na superfície por meio de agitação por cinco minutos em etanol + água (70+30 em volume), enxágue por uma vez com etanol + água (70+30 em volume) e duas vezes com água deionizada estéril. As sementes são novamente suspensas em 0,1% de agar dissolvido em água (p/v). Quatro a cinco sementes por cavidade são colocadas em placas sobre meio nutriente sólido que consiste de solução de nutriente Murashige Skoog com meia resistência, pH 5,8 (Murashige e Skoog (1962), Physiologia Plantarum 15: 473-497). Os compostos são dissolvidos em sulfóxido de dimetila (DMSO) e adicionados ao meio antes da solidificação (concentração de DMSO final de 0,1%). Placas com múltiplas cavidades são incubadas em uma câmara de crescimento a 22 °C, umidade relativa de 75% e 110 μmol de Phot * m-2 * s-1 com fotoperíodo de 14: 10 h de luz: escuro. Sete a dez dias após a semeadura, a inibição do crescimento é avaliada por meio de comparação com plantas do tipo selvagem. Além disso, plantas de Arabidopsis T1 transgênicas são testadas para determinar o aumento da tolerância a herbicidas em estudos em estufa com os herbicidas a seguir: saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di- hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-724), flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo.
EXEMPLO 11 SELEÇÃO DE HERBICIDAS UTILIZANDO CULTIVO DE TECIDOS
[781] Meios são selecionados para uso e curvas de morte se desenvolveram conforme especificado acima. Para seleção, são utilizados métodos diferentes. Aplica-se seleção escalonada ou nível letal imediato de herbicida. Em qualquer dos casos, todos os calos são transferidos para cada nova rodada de seleção. A seleção é de 4-5 ciclos de cultivo com 3-5 semanas para cada ciclo. Os calos são colocados sobre membranas de nylon para facilitar a transferência (folhas de poros de 200 micra, Biodesign, Saco, Maine). Membranas são cortadas para encaixar-se em 100 placas de Petri de 20 mm e sofrem autoclave antecipadamente para utilizar 25-35 calos (em que o peso médio por calo é de 22 mg) em cada placa. Além disso, um conjunto de calos é submetido a seleção em meio de cultivo de líquidos com subcultivos semanais, seguido por seleção adicional sobre meios semissólidos. Linhagens mutantes são selecionadas utilizando saflufenacil, 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3- oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4- diona (CAS 1258836-72-4), flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo. A eficiência de obtenção de mutantes é alta, seja com base no percentual de calos que geraram uma linhagem mutante regenerável ou na quantidade de linhagens conforme determinado por grama de tecido utilizado.
EXEMPLO 12 TRANSFORMAÇÃO DE PLANTAS INTEGRAIS DE MILHO E TESTE DE TOLERÂNCIA A INIBIDORES DE PPO
[782] Embriões imaturos são transformados de acordo com o procedimento descrito em Peng et al. (WO 2006/136596). As plantas são testadas para determinar a presença de T-DNA por meio de análise Taqman, em que o alvo é o terminal nos que está presente em todas as construções. Plantas com aparência saudável são enviadas para a estufa para endurecimento e subsequente teste por pulverização. As plantas são transplantadas individualmente para solo MetroMix 360 em vasos de 10 cm. Uma vez na estufa (ciclo de dia/noite de 27 °C/12 °C com duração do dia de 14 horas sustentada por luzes de sódio sob alta pressão de 600 W), elas são mantidas em crescimento por quatorze dias. Elas são pulverizadas em seguida com tratamento de 25 a 200 g ia/ha de saflufenacil + 1,0% v/v de óleo de semente metilado (MSO) e/ou 25-200 g ia/ha de 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3- oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4- diona (CAS 1258836-72-4) mais 1% de MSO. Outros herbicidas inibidores de PPO também são testados de forma similar para confirmar a resistência cruzada: flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo. Avaliações de lesões por herbicidas são tomadas em sete, quatorze e 21 dias após tratamento. Avaliações de lesões por herbicidas são tomadas a 2, 7, 14 e 21 dias após a pulverização para verificar lesões a novos pontos de crescimento e a saúde geral da planta. Os principais sobreviventes são transplantados para vasos de galão cheios com MetroMix 360 para a produção de sementes.
EXEMPLO 13 TRANSFORMAÇÃO DE SOJA E TESTE DE TOLERÂNCIA A INIBIDORES DE PPO
[783] Soja cv Jake é transformada conforme descrito anteriormente por Siminszky et al., Phytochem. Rev. 5: 445-458 (2006). Após a regeneração, os transformadores são transplantados para solo em pequenos vasos, colocados em câmaras de crescimento (16 h dia/8 h noite; 25 °C dia/23 °C noite; umidade relativa de 65%; 130-150 microE m-2 s-1) e testados em seguida para determinar a presença de T-DNA por meio de análise Taqman. Após algumas semanas, eventos de cópia simples positivos transgênicos saudáveis são transplantados para vasos maiores e mantidos em crescimento na câmara de crescimento. Um broto ideal para corte tem cerca de 7,5 a 10 cm de altura, com presença de pelo menos dois nós. Cada corte é retirado do transformador original (planta mãe) e mergulhado no pó de hormônio de enraizamento (ácido indolo-3-butírico, IBA). O corte é colocado em seguida em cunhas oásis no interior de uma biocúpula. A planta mãe é levada à maturidade na estufa e colhida para uso como semente. Cortes do tipo selvagem também são tomados simultaneamente para servir de controles negativos. Os cortes são mantidos na biocúpula por cinco a sete dias, transplantados em seguida para vasos de 7,5 cm e então aclimatados na câmara de crescimento por mais dois dias. Em seguida, os cortes são transferidos para a estufa, aclimatados por cerca de quatro dias e pulverizados em seguida com tratamento de 0-200 g ia/ha de saflufenacil mais 1% MSO e/ou 25-200 g ia/ha de 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4-di-hidro-2H- benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona (CAS 1258836-72-4) mais 1% de MSO. Outros herbicidas inibidores de PPO também são testados de forma similar para confirmar a resistência cruzada: flumioxazina, butafenacil, acifluorfen, lactofen, bifenox, sulfentrazona e inibidor da fotossíntese diuron como controle negativo. Avaliações de lesões por herbicidas são tomadas em dois, sete, quatorze e 21 dias após o tratamento. Os resultados são exibidos na Tabela xxx.
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[784] Encontra-se a seguir definição das avaliações de lesão medidas acima:
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EXEMPLO 14 EXPRESSÃO DE PROTEÍNA TRANSITÓRIA EM FOLHAS DE FUMO
[785] A expressão transitória de sequências de PPO que sofreram mutação (tais como SEQ ID N° 1, 30, 31, 11, 37 e 117) como tipo selvagem ou com mutações correspondentes foi realizada conforme descrito anteriormente (Voinnet, O. et al., 2003, The Plant Journal 33, 949-956). Resumidamente, a clonagem de GOI e a transformação de Agrobacterium (linhagem: GV2260) foram realizadas conforme descrito no Exemplo 5. Folhas jovens de Nicotiana benthamiana receberam infiltração de suspensão de Agrobacterium transgênica (OD600 de 1,0) portadora de construções de vetor binário que contêm um gene GOI controlado por uma sequência promotora e terminal. Em 48 a 72 horas após a infiltração, punções de discos de folhas (0,75 cm de diâmetro) foram transferidas para placas com seis cavidades com meio (solução de nutrientes de Linsmaier-Skoog com meia potência (Linsmaier e Skoog (1965), Physiol. Plant, 18: 100-127) ou água) que contém o herbicida de interesse em diferentes concentrações. Placas com múltiplas cavidades foram incubadas em uma câmara de crescimento a 22 °C, umidade relativa de 75% e 110 μmol de Phot * m-2 * s-1 com fotoperíodo de 14: 10 h de luz: escuro.
EXEMPLO 15 DEMONSTRAÇÃO DA TOLERÂNCIA A HERBICIDAS DE DISCOS DE FOLHAS DE FUMO TRANSFORMADAS DE FORMA TRANSITÓRIA
[786] Discos de folhas, gerados conforme descrito no Exemplo 14, que expressam uma proteína codificada por GOI, foram submetidos a análise sobre aumento da tolerância ao tratamento com herbicidas. Para análise dos danos por herbicidas, a fluorescência de clorofila foi identificada como marcador indicativo (Dayan e Zaccaro (2012), Pest. Biochem. Physiol. 102: 189-1907). Além de monitorar o efeito herbicida por meio de inspeção visual, o rendimento fotossintético do fotossistema II foi realizado com uma máquina PAM de formação de imagens MAXI (IMAGINE-PAM Série M, Walz, Effeltrich, Alemanha) 48 horas após o início do tratamento com herbicida. O rendimento de PSII foi medido de acordo com as instruções do fabricante. Fatores de tolerância foram calculados com base em valores IC50 de inibição do rendimento de PSII de discos de folhas transformados em comparação com transformados com vetores vazios. IC50 da inibição do rendimento de PSII em discos de folhas transformados com vetores vazios tratados com Saflufenacil ou 1,5-dimetil-6-tioxo-3-(2,2,7-trifluoro-3-oxo-4-(prop-2-inil)-3,4- di-hidro-2H-benzo [b] [1,4]oxazin-6-il)-1,3,5-triazinano-2,4-diona por 48 horas foi medido com 1,1*10-7 M ou 1,1*10-8 M, respectivamente.
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Claims (4)

1. MÉTODO DE CONTROLE DE VEGETAÇÃO INDESEJADA em um local de cultivo de plantas, caracterizado por compreender as etapas de: (a) fornecimento, no mencionado local, de uma planta que expressa uma protoporfirinogênio oxidase mutada (PPO mutada) que é resistente ou tolerante a herbicidas inibidores de PPO e que consiste em uma sequência de aminoácidos de SEQ ID N°: 11 com uma substituição de aminoácidos dupla selecionada a partir do grupo que consiste em R98A/F390V, L367E/F390V, L367Q/F390V, L367E/F390M e L367Q/F390M, e (b) aplicação ao mencionado local de uma quantidade eficaz do mencionado herbicida.
2. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela planta expressar pelo menos uma enzima tolerante a herbicidas.
3. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pelo herbicida inibidor de PPO ser aplicado em conjunto com um ou mais herbicidas adicionais.
4. MÉTODO DE PRODUÇÃO DE UMA CÉLULA VEGETAL TRANSGÊNICA com uma resistência aumentada a um herbicida inibidor de PPO em comparação com uma variedade do tipo selvagem da célula vegetal, caracterizado por compreender a transformação da célula vegetal para expressar um polipeptídeo PPO mutado que consiste na sequência de SEQ ID N°: 11 com uma substituição de aminoácidos dupla selecionada a partir do grupo que consiste em R98A/F390V, L367E/F390V, L367Q/F390V, L367E/F390M e L367Q/F390M.
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