KR20130092394A - 태반 줄기 세포를 사용한 사르코이드증의 치료 - Google Patents

태반 줄기 세포를 사용한 사르코이드증의 치료 Download PDF

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KR20130092394A
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제임스 에딩거
스티븐 피쉬코프
알렉산더 프랭키
블라디미르 얀코비치
비타오 리앙
필리페 마틴
신시아 레이
샤오쿠이 창
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안트로제네시스 코포레이션
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Abstract

태반 세포, 예를 들어 본원에 기재된 태반 줄기 세포 및 태반 다능 세포 (PDAC)를 사용하여 사르코이드증 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애를 갖는 개체를 치료하는 조성물 및 방법이 본원에 제공된다. 또한, 상기 세포 또는 그의 조성물을 포함하는 키트가 본원에 제공된다.

Description

태반 줄기 세포를 사용한 사르코이드증의 치료 {TREATMENT OF SARCOIDOSIS USING PLACENTAL STEM CELLS}
1. 분야
단리된 태반 세포 (예를 들어, 태반 줄기 세포), 태반 줄기 세포의 집단, 및 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환, 장애 또는 병태, 예를 들어 전신 사르코이드증, 피부 사르코이드증, 뢰프그렌 증후군, 신경사르코이드증, 폐 사르코이드증, 심장 사르코이드증, 안구 사르코이드증, 또는 다른 기관 또는 조직의 침범을 갖는 사르코이드증을 치료하기 위한 그의 사용 방법이 본원에 제공된다.
2. 배경
사르코이드 질환 또는 베스니에-뵈크 질환으로도 불리는 사르코이드증은 다양한 기관 (예를 들어, 폐, 피부, 심장, 안구, 간, 신경계, 신장 또는 근골격계)에 침범할 수 있는 다계통 육아종성 염증성 질환이다. 사르코이드증의 병인은, 이것이 유전적으로 민감한 개체에서 환경적, 직업적 인자 또는 감염원에 대한 노출 후의 면역 반응에서의 변경에 관련되어 있음에도 불구하고, 알려지지 않은 채로 남아 있다.
스테로이드 요법 (예를 들어, 코르티코스테로이드, 예컨대 프레드니손)은 사르코이드증에 대한 표준 치료법이었다. 그러나, 코르티코스테로이드의 사용은 수많은 결점을 갖는다. 예를 들어, 특정 환자는 스테로이드 요법에 반응하지 않는다. 또한, 코르티코스테로이드는 여러 심각한 부작용을 가지며, 그의 사용은 전형적으로 진행성 또는 심각한 병태로 제한된다. 따라서, 예를 들어 인간 태반 줄기 세포를 사용한 사르코이드증의 새로운 치료 방법에 대한 필요가 존재한다.
3. 개요
한 측면에서, 사르코이드증 또는 하나 이상의 사르코이드증-관련 질환, 장애 및/또는 병태 (예를 들어, 사르코이드증과 연관되거나, 사르코이드증을 일으키거나, 또는 사르코이드증에 의해 유발됨)를 치료, 관리, 완화 또는 예방하는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 사르코이드증, 또는 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증과 관련된 질환, 장애 또는 병태의 치료에 사용하기 위한 키트가 본원에 제공된다.
한 실시양태에서, 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환, 장애 또는 병태를 갖는 개체에게 치료 유효량의 조직 배양 플라스틱-부착성 태반 세포, 예를 들어 태반 다능 세포 또는 태반 줄기 세포 (본원에서 PDAC (태반 유래 부착 세포, 예를 들어 하기 섹션 4.2에 기재된 태반-유래 부착 세포)로도 지칭됨), 또는 PDAC (예를 들어, 태반 줄기 세포)에 의해 조건화된 배양 배지를 사르코이드증 또는 상기 질환, 장애 또는 병태의 하나 이상의 증상의 검출가능한 개선에 충분한 양으로 및 충분한 시간 동안 투여하는 것을 포함하는, 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환, 장애 또는 병태를 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공된다.
또 다른 측면에서, 사르코이드증, 또는 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증에 관련된 질환, 장애 및/또는 병태를 치료, 관리, 완화 또는 예방하기 위한 의약의 제조에서의 태반 세포 (예를 들어, 태반 줄기 세포)의 용도가 본원에 제공된다.
또 다른 실시양태에서, PDAC, 또는 예를 들어 제약상 허용되는 담체와 혼합함으로써 제약상 허용되는 형태로 제조될 수 있는 그의 치료 세포 조성물, 및 적용장치를 사용 지침서와 함께 포함하는 키트가 본원에 제공된다.
특정 실시양태에서, 방법은 상기 개체에게 태반 세포 (예를 들어, 태반 줄기 세포)를, 상기 태반 줄기 세포의 투여 전의 개체와 비교하여 상기 사르코이드증 또는 상기 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 검출가능한 개선에 충분한 양으로 및 충분한 시간 동안 투여하는 것을 포함한다.
특정 실시양태에서, 상기 치료 유효량의 태반 세포는 상기 개체에서 상기 하나 이상의 증상의 수 또는 그의 중증도를 감소, 예를 들어 검출가능하게 감소시키거나, 또는 상기 증상의 수 또는 그의 중증도의 증가 속도를 감소시키고/거나, 예를 들어 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환, 장애 또는 병태의 하나 이상의 증상을 검출가능하게 개선시킨다. 구체적 실시양태에서, 상기 치료 유효량의 태반 세포는 상기 개체에서 하나 이상의 육아종의 수 또는 그의 중증도를 감소, 예를 들어 검출가능하게 감소시키거나, 또는 상기 육아종의 수 또는 그의 중증도의 증가 속도를 감소시킨다. 한 실시양태에서, 상기 치료 유효량은 상기 사르코이드증의 하나 이상의 증상에서의 검출가능한 개선을 일으키는 양이다.
한 구체적 실시양태에서, 상기 사르코이드증은 전신 사르코이드증이고, 상기 증상은 육아종의 형성, 피로, 체중 감소, 열, 동통, 통증, 관절염, 안구 건조, 무릎 종창, 흐린 시력, 숨가쁨, 기침 또는 피부 병변 중 하나 이상을 포함한다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 사르코이드증은 피부 사르코이드증이고, 상기 증상은 피부 병변을 포함한다. 보다 구체적 실시양태에서, 상기 피부 사르코이드증은 환상 사르코이드증, 홍피성 사르코이드증, 어린선형 사르코이드증, 저색소침착성 사르코이드증, 반상경피증형 사르코이드증, 점막 사르코이드증, 구진성 사르코이드, 반흔 사르코이드, 피하 사르코이드증 또는 궤양성 사르코이드증 중 하나 이상을 포함한다. 보다 구체적 실시양태에서, 상기 피부 병변은 결절성 홍반, 화폐상 습진, 다형 홍반, 피부 석회증 및 소양증, 동창 루푸스, 피부 플라크, 반점구진성 발진, 피부 내 심부 결절성 병변 또는 오래된 반흔의 침윤 중 하나 이상을 포함한다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 사르코이드증은 뢰프그렌 증후군이고, 상기 증상은 결절성 홍반, 양측 폐문 선병증, 관절염, 관절통 또는 열 중 하나 이상을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 사르코이드증은 신경사르코이드증이고, 상기 증상은 신경계에서의 육아종의 형성, 두통, 착란, 권태감 또는 안면 마비 중 하나 이상을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 사르코이드증은 폐 사르코이드증이고, 상기 증상은 기침, 숨가쁨, 흉통, 흉부에서의 긴장감, 애성, 비폐쇄 및 재발성 또는 지속성 부비동염 중 하나 이상을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 사르코이드증은 심장 사르코이드증이고, 상기 증상은 흉통, 심계항진, 울혈성 심부전, 심막염 또는 유두 근육 기능장애, 숨가쁨, 발목 종창, 불규칙 심장 박동 또는 돌연사 중 하나 이상을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 사르코이드증은 안구 사르코이드증이고, 상기 증상은 충혈안 또는 유루안, 육아종성 포도막염, 홍채 결절, 망막맥락막염, 결막염, 누선 침범 또는 안구돌출 중 하나 이상을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 사르코이드증은 다른 기관 또는 조직의 침범을 갖는 사르코이드증, 예를 들어 근골격, 간, 혈액, 정신, 신장, 비장, 비동, 구강, 위 또는 장, 내분비계, 흉막 또는 생식계의 침범을 갖는 사르코이드증이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 사르코이드증은 폐 조직 또는 기관 이외의 하나 이상의 기관 또는 조직의 사르코이드증이다. 보다 구체적 실시양태에서, 상기 사르코이드증은 폐 이외의 하나 이상의 기관 또는 조직의 사르코이드증이다.
특정 실시양태에서, 치료 방법은 적어도 약 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 5 x 108, 1 x 109, 5 x 109, 또는 1 x 1010개의 태반 세포를 상기 개체에게 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 태반 세포는 시험관내에서 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 집단 배가까지 증식한다. 본원의 임의의 실시양태의 또 다른 실시양태에서, 상기 태반 세포는 동결보존되고 상기 투여 전에 해동된다.
임의의 상기 방법의 특정 실시양태에서, 상기 태반 세포는 조직 배양 플라스틱에 부착성이고, 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD34-, CD10+, CD105+ 및 CD200+이다. 구체적 실시양태에서, 태반 세포는 골형성 또는 연골형성 세포로 분화할 수 있는 능력을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 태반 세포는 조직 배양 플라스틱에 부착성이고; 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD34-, CD10+, CD105+ 및 CD200+이고; 골형성 또는 연골형성 세포의 하나 이상의 특성, 예를 들어 골세포 또는 연골세포의 특성을 갖는 세포로 분화할 수 있는 능력을 갖는다. 다른 실시양태에서, 태반 세포는 추가로 신경 세포 또는 신경원성 세포의 하나 이상의 특성, 예를 들어 뉴런의 특성; 신경교 세포의 하나 이상 특성, 예를 들어 신경교 또는 성상세포의 특성; 지방세포성 세포의 하나 이상 특성, 예를 들어 지방세포의 특성; 췌장 세포의 하나 이상 특성; 및/또는 심장 세포의 하나 이상 특성을 갖는 세포로 분화할 수 있는 능력을 갖는다.
또 다른 실시양태에서, 상기 태반 세포는 유동 세포측정법 및/또는 RT-PCR에 의해 검출시 CD34-, CD10+, CD105+ 및 CD200+, 및 CD38-, CD45-, CD80-, CD86-, CD133-, HLA-DR,DP,DQ-, SSEA3-, SSEA4-, CD29+, CD44+, CD73+, CD90+, CD105+, HLA-A,B,C+, PDL1+, ABC-p+ 및/또는 OCT-4+ 중 하나 이상이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 태반 세포는 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD34-, CD45-, CD10+, CD90+, CD105+ 및 CD200+이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 태반 세포는 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD34-, CD45-, CD10+, CD80-, CD86-, CD90+, CD105+ 및 CD200+이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 태반 세포는 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD34-, CD45-, CD10+, CD80-, CD86-, CD90+, CD105+ 및 CD200+, 및 추가로 CD29+, CD38-, CD44+, CD54+, SH3+ 또는 SH4+ 중 하나 이상이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 태반 세포는 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD34-, CD38-, CD45-, CD10+, CD29+, CD44+, CD54+, CD73+, CD80-, CD86-, CD90+, CD105+ 및 CD200+이다.
또 다른 실시양태에서, 상기 CD34-, CD10+, CD105+ 및 CD200+ 태반 세포는 추가로 CD117-, CD133-, KDR- (VEGFR2-), HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR-, 또는 프로그램화된 사멸-1 리간드 (PDL1)+ 중 하나 이상, 또는 그의 임의의 조합이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 태반 세포는 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD34-, CD38-, CD45-, CD10+, CD29+, CD44+, CD54+, CD73+, CD80-, CD86-, CD90+, CD105+, CD117-, CD133-, CD200+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR-, 또는 프로그램화된 사멸-1 리간드 (PDL1)+이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 태반 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출시 ABC-p+, 또는 예를 들어 RT-PCR에 의해 결정시 OCT-4+ (POU5F1+)이고, 여기서 ABC-p는 태반-특이적 ABC 수송체 단백질 (유방암 내성 단백질 (BCRP)로서 및 미톡산트론 내성 단백질 (MXR)로서도 공지됨)이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 태반 세포는 추가로, 예를 들어 유동 세포측정법에 의해 결정시 SSEA3- 또는 SSEA4-이고, 여기서 SSEA3은 단계 특이적 배아 항원 3이고, SSEA4는 단계 특이적 배아 항원 4이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 태반 세포는 추가로 SSEA3- 및 SSEA4-이다.
본원에 기재된 방법의 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 태반 세포는 추가로 MHC-I+ (예를 들어, HLA-A,B,C+), MHC-II- (예를 들어, HLA-DP,DQ,DR-) 또는 HLA-G- 중 하나 이상이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 태반 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출시 각각 MHC-I+ (예를 들어, HLA-A,B,C+), MHC-II- (예를 들어, HLA-DP,DQ,DR-) 및 HLA-G-이다.
또 다른 실시양태에서, CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 세포는 추가로 CD29+, CD38-, CD44+, CD54+, CD80-, CD86-, SH3+ 또는 SH4+ 중 하나 이상이다. 또 다른 실시양태에서, 세포는 추가로 CD44+이다. 또 다른 실시양태에서, CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 태반 세포는 추가로 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-카드헤린저, CD184/CXCR4-, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR-, HLA-G- 또는 프로그램화된 사멸-1 리간드 (PDL1)+ 중 하나 이상, 또는 그의 임의의 조합이다. 또 다른 실시양태에서, CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 태반 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-카드헤린약, CD184/CXCR4-, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR-, HLA-G-, 및 프로그램화된 사멸-1 리간드 (PDL1)+이다.
본원에 개시된 방법의 다른 실시양태에서, 단리된 태반 줄기 세포는 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD200+ 및 HLA-G-; CD73+, CD105+, 및 CD200+; CD200+ 및 OCT-4+; CD73+, CD105+ 및 HLA-G-; CD73+ 및 CD105+; 또는 OCT-4+; 또는 그의 임의의 조합이다.
본원에 개시된 방법의 특정 실시양태에서, 단리된 태반 줄기 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, OCT-4+, MHC-I+ 또는 ABC-p+ 중 하나 이상이고, 여기서 ABC-p는 태반-특이적 ABC 수송체 단백질 (유방암 내성 단백질 (BCRP) 및 미톡산트론 내성 단백질 (MXR)로서도 공지됨)이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 줄기 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, 및 OCT-4+이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 줄기 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD45-, CD54+, SH2+, SH3+, 및 SH4+이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 줄기 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD45-, CD54+, SH2+, SH3+, SH4+ 및 OCT-4+이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 줄기 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, MHC-1+, SH2+, SH3+, SH4+이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 줄기 세포는 OCT-4+ 및 ABC-p+이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 줄기 세포는 SH2+, SH3+, SH4+ 및 OCT-4+이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 줄기 세포는 OCT-4+, CD34-, SSEA3-, 및 SSEA4-이다. 구체적 실시양태에서, 상기 OCT-4+, CD34-, SSEA3-, 및 SSEA4- 세포는 추가로 CD10+, CD29+, CD34-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, 및 SH4+이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 줄기 세포는 OCT-4+ 및 CD34-, 및 SH3+ 또는 SH4+이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 줄기 세포는 CD34-, 및 CD10+, CD29+, CD44+, CD54+, CD90+ 또는 OCT-4+이다. 특정 실시양태에서, 단리된 태반 줄기 세포는 CD10+, CD34-, CD105+ 및 CD200+이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 유용한 단리된 태반 줄기 세포는 CD10+, CD29-, CD44+, CD45-, CD54/ICAM-, CD62-E-, CD62-L-, CD62-P-, CD80-, CD86-, CD103-, CD104-, CD105+, CD106/VCAM+, CD144/VE-카드헤린약, CD184/CXCR4-, β2-마이크로글로불린약, MHC-I약, MHC-II-, HLA-G약, 및/또는 PDL1약 중 하나 이상이다. 특정 실시양태에서, 이러한 태반 세포는 적어도 CD29- 및 CD54-이다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 단리된 태반 줄기 세포는 적어도 CD44+ 및 CD106+이다. 또 다른 실시양태에서, 이러한 단리된 태반 줄기 세포는 적어도 CD29+이다.
임의의 상기 특성의 특정 실시양태에서, 세포 마커 (예를 들어, 분화 클러스터 또는 면역원성 마커)의 발현은 유동 세포측정법에 의해 결정한다. 특정의 다른 실시양태에서, 세포 마커의 발현은 RT-PCR에 의해 결정한다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 방법에 유용한 상기 태반 세포, 예를 들어 상기 CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ 세포는 하나 이상의 유전자를 동일한 수의 골수-유래 중간엽 줄기 세포보다 검출가능하게 더 높은 수준으로 발현하고, 여기서 상기 하나 이상의 유전자는 ACTG2, ADARB1, AMIGO2, ARTS-1, B4GALT6, BCHE, C11orf9, CD200, COL4A1, COL4A2, CPA4, DMD, DSC3, DSG2, ELOVL2, F2RL1, FLJ10781, GATA6, GPR126, GPRC5B, ICAM1, IER3, IGFBP7, IL1A, IL6, IL18, KRT18, KRT8, LIPG, LRAP, MATN2, MEST, NFE2L3, NUAK1, PCDH7, PDLIM3, PKP2, RTN1, SERPINB9, ST3GAL6, ST6GALNAC5, SLC12A8, TCF21, TGFB2, VTN 및 ZC3H12A 중 하나 이상이고, 상기 골수-유래 중간엽 줄기 세포는 상기 단리된 태반 줄기 세포가 겪은 계대배양의 횟수와 동일한 수의 계대배양을 배양시에 겪었다. 특정 실시양태에서, 상기 하나 이상의 유전자의 상기 발현은 예를 들어 RT-PCR 또는 예를 들어 U133-A 마이크로어레이 (아피메트릭스(Affymetrix))를 사용한 마이크로어레이 분석에 의해 결정된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 단리된 태반 줄기 세포는 60% DMEM-LG (예를 들어, 깁코(Gibco)로부터) 및 40% MCDB-201 (예를 들어, 시그마(Sigma)로부터); 2% 태아 소 혈청 (예를 들어, 하이클론 랩스.(Hyclone Labs.)로부터); 1x 인슐린-트랜스페린-셀레늄 (ITS); 1x 리놀레산-소 혈청 알부민 (LA-BSA); 10-9 M 덱사메타손 (예를 들어, 시그마로부터); 10-4 M 아스코르브산 2-포스페이트 (예를 들어, 시그마로부터); 표피 성장 인자 10 ng/mL (예를 들어, 알앤디 시스템즈(R&D Systems)로부터); 및 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF-BB) 10 ng/mL (예를 들어, 알앤디 시스템즈로부터)를 포함하는 배지 중에서, 예를 들어 약 3 내지 약 35 집단 배가 중 임의의 시점 동안 배양될 때, 상기 하나 이상의 유전자를 발현한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 단리된 태반 줄기 세포는 60% DMEM-LG (예를 들어, 깁코로부터) 및 40% MCDB-201 (예를 들어, 시그마로부터); 2% 태아 소 혈청 (예를 들어, 하이클론 랩스.로부터); 1x 인슐린-트랜스페린-셀레늄 (ITS); 1x 리놀레산-소 혈청 알부민 (LA-BSA); 10-9 M 덱사메타손 (예를 들어, 시그마로부터); 10-4 M 아스코르브산 2-포스페이트 (시그마); 표피 성장 인자 10 ng/mL (예를 들어, 알앤디 시스템즈로부터); 및 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF-BB) 10 ng/mL (예를 들어, 알앤디 시스템즈로부터)를 포함하는 배지 중에서 약 3 내지 약 35 집단 배가 동안 배양될 때, 상기 하나 이상의 유전자를 발현한다.
일부 실시양태에서, 태반 세포는 CD200을 발현하고 HLA-G를 발현하지 않거나, 또는 CD73, CD105 및 CD200을 발현하거나, 또는 CD200 및 OCT-4를 발현하거나, 또는 CD73 및 CD105를 발현하고 HLA-G를 발현하지 않거나, 또는 CD73 및 CD105를 발현하고, 상기 줄기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단이 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진하거나, 또는 OCT-4를 발현하고, 상기 줄기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단이 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진한다.
특정 실시양태에서, 태반 세포는 CD200 및 ARTS1 (유형 1 종양 괴사 인자의 아미노펩티다제 조절제); ARTS-1 및 LRAP (백혈구-유래 아르기닌 아미노펩티다제); IL6 (인터류킨-6) 및 TGFB2 (형질전환 성장 인자, 베타 2); IL6 및 KRT18 (케라틴 18); IER3 (극초기 반응 3), MEST (중배엽 특이적 전사체 상동체) 및 TGFB2; CD200 및 IER3; CD200 및 IL6; CD200 및 KRT18; CD200 및 LRAP; CD200 및 MEST; CD200 및 NFE2L3 (핵 인자 (적혈구-유래 2)-유사 3); 또는 CD200 및 TGFB2를 동일한 수의 골수-유래 중간엽 줄기 세포 (BM-MSC)보다 검출가능하게 더 높은 수준으로 발현하고, 여기서 상기 골수-유래 중간엽 줄기 세포는 상기 태반 줄기 세포가 겪은 계대배양의 횟수와 동일한 수의 계대배양을 배양시에 겪었다. 다른 실시양태에서, 태반 세포는 ARTS-1, CD200, IL6 및 LRAP; ARTS-1, IL6, TGFB2, IER3, KRT18 및 MEST; CD200, IER3, IL6, KRT18, LRAP, MEST, NFE2L3 및 TGFB2; ARTS-1, CD200, IER3, IL6, KRT18, LRAP, MEST, NFE2L3 및 TGFB2; 또는 IER3, MEST 및 TGFB2를 동일한 수의 골수-유래 중간엽 줄기 세포 BM-MSC보다 검출가능하게 더 높은 수준으로 발현하고, 여기서 상기 골수-유래 중간엽 줄기 세포는 상기 태반 줄기 세포가 겪은 계대배양의 횟수와 동일한 수의 계대배양을 배양시에 겪었다.
다양한 실시양태에서, 본원에 개시된 방법에 유용한 상기 단리된 태반 줄기 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포는 세포의 집단 내에 상기 단리된 태반 세포인 세포를 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 함유한다. 특정의 다른 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중의 태반 세포는 모체 유전자형을 갖는 세포를 실질적으로 함유하지 않으며, 예를 들어 상기 집단 중 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 태반 세포가 태아 유전자형을 가지며, 즉 태아 기원이다. 특정의 다른 실시양태에서, 상기 태반 세포를 포함하는 세포의 집단은 모체 유전자형을 갖는 세포를 실질적으로 함유하지 않으며, 예를 들어 상기 집단 중 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 세포가 태아 유전자형을 가지며, 즉 태아 기원이다. 특정의 다른 실시양태에서, 상기 태반 세포를 포함하는 세포의 집단은 모체 유전자형을 갖는 세포를 포함하고; 예를 들어, 상기 집단 내의 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 세포는 모체 유전자형을 가지고, 즉 모체 기원이다.
본원의 태반 세포 (예를 들어, PDAC)의 임의의 실시양태의 실시양태에서, 태반 세포는 상기 집단이 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양될 때, 예를 들어 증식 조건 하에 배양될 때 상기 단리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단 내에서의 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진한다.
본원에 개시된 임의의 태반 세포의 특정 실시양태에서, 세포는 인간 세포이다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포는 수용자에 대해 자가유래의 것이다. 특정의 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포는 수용자에 대해 이종유래의 것이다.
특정 실시양태에서, 태반 세포는 상기 투여 전에 동결보존된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 태반 세포 은행 (예를 들어, PDAC 은행)으로부터 입수한다.
단리된 태반 세포의 임의의 상기 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 일반적으로 성장 배지, 즉, 증식을 촉진시키도록 제조된 배지에서 배양하는 동안, 예를 들어 성장 배지에서 증식하는 동안 분화되지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 증식하기 위해 피더 층을 필요로 하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포를 단지 피더 세포 층의 부재하에 배양한 결과, 이는 배양물 중에서 분화되지 않는다.
특정 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 혈액이 배출되었고 잔류 혈액을 제거하도록 관류되었거나; 혈액이 배출되었지만 잔류 혈액을 제거하도록 관류되지는 않았거나; 또는 혈액이 배출되거나 잔류 혈액을 제거하도록 관류되지 않은 산후 태반의 관류에 의해 수득하였다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 태반 조직의 물리적 및/또는 효소에 의한 파괴에 의해 수득하였다.
본원에 제공된 방법에 유용한, 태반 세포의 세포 표면 마커, 분자 마커 및 유전자 마커가 하기 섹션 4.2에 상세하게 기재되어 있다.
구체적 실시양태에서, 태반 줄기 세포가 투여되는 상기 개체에게 제2 요법 (예를 들어, 제2 치료제) 중 하나 이상을 추가로 투여하며, 여기서 상기 제2 요법 (예를 들어, 제2 치료제)은 항염증제, 스테로이드, 면역 억제제, 항생제, TNF-α 억제제 (예를 들어, 인플릭시맙, 아달리무맙), PDE-4 억제제 (예를 들어, 아프레밀리아스트), IL-12 억제제, IL-23 억제제, 아비프타딜, IFN-γ 억제제 또는 항말라리아제 (예를 들어, 클로로퀸 또는 히드록시클로로퀸)를 포함한다.
사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환, 장애 또는 병태의 치료에 유용한 항염증성 약물의 예는 메살라민, 5-ASA (5-아미노살리실산) 작용제 (예를 들어, 아사콜(ASACOL)® (메살라민, 지연-방출), 디펜툼(DIPENTUM) (오살라진), 펜타사(PENTASA)® (메살라민 제어-방출)), 술파살라진 (5-ASA와 술파피리딘의 조합물), 항염증성 항체 (예를 들어, 인플릭시맙 (레미케이드(REMICADE)®)) 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환, 장애 또는 병태의 치료에 유용한 스테로이드의 예는 코르티손, 히드로코르티손, 프레디손, 메틸프레드니손 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 전형적으로, 당업계에서 실시되는 바와 같이, 스테로이드의 투여량은 우선 상대적으로 큰 용량으로 전달되고, 이어서 염증 진정시에 더 적은 투여량으로 전달된다. 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애에 유용한 면역 억제제의 예는 시클로스포린 A, 6-메르캅토퓨린 또는 아자티오프린을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, 암피실린, 술폰아미드, 세팔로스포린, 테트라시클린 및/또는 메트로니다졸을 비롯한 임의의 항생제는 크론병의 치료에 사용될 수 있다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 제2 요법은 돼지 편충, 예를 들어 트리쿠리스 수이스(Trichuris suis)의 난자의 투여이다.
또 다른 실시양태에서, 태반 세포 (예를 들어, PDAC) 또는 이러한 세포를 포함하는 치료 조성물을 그를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것은 이식, 삽입 (예를 들어, 세포 자체의 또는 매트릭스-세포 조합물의 일부로서 세포의), 주사 (예를 들어, 질환 또는 병태의 부위에 직접, 예를 들어 육아종에 직접), 주입, 카테터를 통한 전달, 또는 세포 요법을 제공하기 위한 당업계에 공지된 임의의 다른 수단에 의해 국부 또는 전신 투여로 달성될 수 있다. 다른 실시양태에서, 태반 세포 (예를 들어, PDAC) 또는 이러한 세포를 포함하는 치료 조성물은 개체에게 정맥내, 동맥내, 복강내, 심실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내, 활액막내, 안내, 유리체내 (예를 들어, 안구 침범이 있는 경우), 뇌내, 뇌실내 (예를 들어, 신경계 또는 뇌 침범이 있는 경우), 심장내 (예를 들어, 심장 침범이 있는 경우), 경막내, 골내 주입, 방광내 및 경피, 수조내, 경막외, 피하 투여에 의해 전달될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 태반 세포는 국부적으로, 예를 들어 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증과 관련된 하나 이상의 손상된 조직 내로 직접 또는 그에 인접하여 (예를 들어, 1-5 cm 이내) 투여된다. 구체적 실시양태에서, 태반 세포는 병변내로, 예를 들어 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증과 관련된 하나 이상의 병변 또는 육아종 내로 직접 또는 그에 인접하여 (예를 들어, 1-5 cm 이내) 투여된다. 특정 실시양태에서, 태반 세포는 매트릭스, 예를 들어 주사가능한 매트릭스와 조합되어 투여된다. 특정의 다른 실시양태에서, 태반 세포는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 고체 매트릭스, 예를 들어 골 대체물, 하기 섹션 4.7.4에 기재된 매트릭스 또는 골 대체물과 조합되어 투여된다.
상기 기재된 방법의 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 볼루스 주사에 의해 투여된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 정맥내 주입에 의해 투여된다. 구체적 실시양태에서, 상기 정맥내 주입은 약 1 내지 약 8시간에 걸친 정맥내 주입이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 두개내 투여된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 복강내 투여된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 동맥내 투여된다. 치료 방법의 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 근육내, 피내, 피하 또는 안내 투여된다.
상기 기재된 방법의 또 다른 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포를 포함하는 물질의 조성물을 상기 개체 내로 수술에 의해 이식함으로써 상기 단리된 태반 세포가 투여된다. 구체적 실시양태에서, 상기 물질의 조성물은 매트릭스 또는 스캐폴드이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 매트릭스 또는 스캐폴드는 히드로겔이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 매트릭스 또는 스캐폴드는 탈세포화된 조직이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 매트릭스 또는 스캐폴드는 합성 생분해성 조성물이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 매트릭스 또는 스캐폴드는 발포체이다.
상기 기재된 방법의 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 상기 개체에게 1회 투여된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 상기 개체에게 2회 이상의 개별 투여로 투여된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 상기 개체 1 kg당 약 1 x 104 내지 1 x 105개의 단리된 태반 세포, 예를 들어 태반 세포를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 상기 개체 1 kg당 약 1 x 105 내지 1 x 106개의 단리된 태반 세포를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 상기 개체 1 kg당 약 1 x 106 내지 1 x 107개의 단리된 태반 세포를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 상기 개체 1 kg당 약 1 x 107 내지 1 x 108개의 단리된 태반 세포를 투여하는 것을 포함한다. 다른 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 상기 개체 1 kg당 약 1 x 106 내지 약 2 x 106개의 단리된 태반 세포; 상기 개체 1 kg당 약 2 x 106 내지 약 3 x 106개의 단리된 태반 세포; 상기 개체 1 kg당 약 3 x 106 내지 약 4 x 106개의 단리된 태반 세포; 상기 개체 1 kg당 약 4 x 106 내지 약 5 x 106개의 단리된 태반 세포; 상기 개체 1 kg당 약 5 x 106 내지 약 6 x 106개의 단리된 태반 세포; 상기 개체 1 kg당 약 6 x 106 내지 약 7 x 106개의 단리된 태반 세포; 상기 개체 1 kg당 약 7 x 106 내지 약 8 x 106개의 단리된 태반 세포; 상기 개체 1 kg당 약 8 x 106 내지 약 9 x 106개의 단리된 태반 세포; 또는 상기 개체 1 kg당 약 9 x 106 내지 약 1 x 107개의 단리된 태반 세포를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 상기 개체에게 상기 개체 1 kg당 약 1 x 107 내지 약 2 x 107개의 단리된 태반 세포를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 상기 개체에게 상기 개체 1 kg당 약 1.3 x 107 내지 약 1.5 x 107개의 단리된 태반 세포를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 상기 개체에게 상기 개체 1 kg당 약 3 x 107개 이하의 단리된 태반 세포를 투여하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 상기 개체에게 약 5 x 106 내지 약 2 x 107개의 단리된 태반 세포를 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 상기 개체에게 약 20 밀리리터 용액 내의 약 150 x 106개의 단리된 태반 세포를 투여하는 것을 포함한다.
구체적 실시양태에서, 상기 투여는 상기 개체에게 약 5 x 106 내지 약 2 x 107개의 단리된 태반 세포를 투여하는 것을 포함하고, 여기서 상기 세포는 10% 덱스트란, 예를 들어 덱스트란-40, 5% 인간 혈청 알부민, 및 임의로 면역억제제를 포함하는 용액 내에 함유된다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 약 5 x 107 내지 3 x 109개의 단리된 태반 세포를 정맥내 투여하는 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 약 9 x 108개의 단리된 태반 세포 또는 약 1.8 x 109개의 단리된 태반 세포를 정맥내 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 약 5 x 107개 내지 1 x 108개의 단리된 태반 세포를 병변내로 투여하는 것을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 투여는 약 9 x 107개의 단리된 태반 세포를 병변내로 투여하는 것을 포함한다.
3.1 정의
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "약"은 언급된 수치에 대해 사용될 때, 언급된 수치의 ±10% 내의 값을 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "SH2"는 세포 마커 CD105 상의 에피토프에 결합하는 항체를 나타낸다. 따라서, SH2+로 지칭되는 세포는 CD105+이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "SH3" 및 "SH4"는 세포 마커 CD73 상에 존재하는 에피토프에 결합하는 항체를 나타낸다. 따라서, SH3+ 및/또는 SH4+로 지칭되는 세포는 CD73+이다.
태반은 태반 내에서 발달하는 태아의 유전자형을 지니지만, 또한 임신 기간 동안 모체 조직과 물리적으로 가깝게 접촉된다. 따라서, 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "태아 유전자형"은 태아의 유전자형, 예를 들어 태아를 임신한 모체의 유전자형과 대조적으로, 그로부터 본원에 기재된 특정 단리된 태반 줄기 세포를 얻는 태반과 연관된 태아의 유전자형을 의미한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "모체 유전자형"은 태아, 예를 들어 그로부터 본원에 기재된 특정 단리된 태반 줄기 세포를 얻는 태반과 연관된 태아를 임신한 모체의 유전자형을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "육아종"은, 예를 들어 면역계가 외래물질로 감지하지만 제거할 수 없는 물질 (예를 들어, 감염성 유기체, 예컨대 박테리아 및 진균 뿐만 아니라 다른 물질, 예컨대 케라틴, 봉합사 단편 및 식물성 입자)을 제거하려고 시도하는 경우에 염증 반응의 결과로서 형성된 면역 세포의 구체-유사 집합물을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "단리된 세포", 예를 들어 "단리된 태반 세포", "단리된 태반 줄기 세포" 등은 줄기 세포가 유래되는 조직, 예를 들어 태반의 다른 상이한 세포로부터 실질적으로 분리된 세포를 의미한다. 예를 들어, 줄기 세포의 수집 및/또는 배양 동안, 줄기 세포와 자연적으로 회합되어 있는 세포, 예를 들어 비-줄기 세포, 또는 상이한 마커 프로파일을 나타내는 줄기 세포의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 적어도 99%가 줄기 세포로부터 제거되면, 세포가 "단리"된다.
본원에 사용된 바와 같이, 세포를 언급할 때 "다능"은 세포가 신체의 일부 유형 (모든 유형일 필요는 없음)의 세포로, 또는 신체의 일부 유형 (모든 유형일 필요는 없음)의 세포의 특성을 갖는 세포로, 또는 3개의 배엽층 중 하나 이상의 세포로 분화하는 능력을 가짐을 의미한다. 특정 실시양태에서, 예를 들어 신경원성, 연골형성 및/또는 골형성 세포의 특성을 갖는 세포로 분화하는 능력을 갖는, 하기 섹션 4.2에 기재된 바와 같은 단리된 태반 세포 (PDAC)는 다능 세포이다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "단리된 세포의 집단"은 그로부터 세포의 집단이 유래되는 조직, 예를 들어 태반의 다른 세포로부터 실질적으로 분리된 세포의 집단을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "태반 세포"는 1차 배양 후 계대배양의 횟수와 무관하게 1차 분리주 또는 배양된 세포로서, 예를 들어 하기 섹션 4.2에 기재된 바와 같이 포유동물 태반으로부터 단리되거나, 또는 포유동물 태반으로부터 단리된 세포로부터 배양된 줄기 세포 또는 전구 세포 (본원에서 " PDAC"로도 지칭됨)를 지칭한다. 그러나, 본원에 사용된 용어 "태반 세포" 및 본원에 제공된 방법에 사용된 태반 세포는 영양막, 세포영양막, 융합세포영양막, 혈관모세포, 혈관모세포, 배아 배세포, 배아 줄기 세포, 배반포의 속세포덩이로부터 수득된 세포, 또는 후기 배아의 생식선 융기로부터 수득된 세포, 예를 들어 배아 생식 세포를 지칭하지 않는다. 세포가 줄기 세포의 속성, 예를 들어 줄기 세포의 1가지 이상의 유형과 관련된 마커 또는 유전자 발현 프로파일; 배양에서 10-40회 이상 복제되는 능력, 및 3가지 배엽층 중 하나 이상의 분화된 세포의 특성을 나타내는 세포로 분화되는 능력을 나타내는 경우 세포가 "줄기 세포"로 간주된다. 본원에서 달리 표시되지 않으면, 용어 "태반"은 제대를 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 단리된 태반 세포는 분화 조건 하에 시험관내에서 분화되거나, 생체내에서 분화되거나, 또는 양쪽 모두이다.
본원에 사용된 태반 세포는 마커가 배경을 초과하여 검출가능한 경우 이러한 특정 마커에 대해 "양성"이다. 특정 마커의 검출은 예를 들어 항체의 사용에 의해, 또는 마커를 코딩하는 유전자 또는 mRNA의 서열을 기초로 한 올리고뉴클레오티드 프로브 또는 프라이머에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 태반 세포는 예를 들어 CD73에 대해 양성인데, 이는 CD73이 배경보다 (예를 들어, 이소형 대조군과 비교하여) 검출가능하게 큰 양으로 태반 세포 상에서 검출가능하기 때문이다. 마커가 세포를 하나 이상의 또 다른 세포 유형으로부터 구별하는 데 사용될 수 있거나 또는 세포에 의해 발현되거나 존재하는 경우 세포를 선택 또는 단리하는 데 사용될 수 있는 경우, 세포는 이러한 마커에 대해 또한 양성이다. 예를 들어, 항체-매개 검출의 문맥에서, 특정 세포 표면 마커의 존재를 표시하는 것으로서의 "양성"은 마커가 마커에 특이적인 항체, 예를 들어 형광-표지된 항체를 사용하여 검출가능함을 의미하고; "양성"은 또한 예를 들어 세포측정기에서 배경을 검출가능하게 초과하는 신호를 생성하는 양으로 마커를 보이는 세포를 지칭한다. 예를 들어, 세포가 CD200에 대해 특이적인 항체로 검출가능하게 표지되고, 항체로부터의 신호가 대조군 (예를 들어, 배경 또는 이소형 대조군)의 신호보다 검출가능하게 높은 경우 세포는 "CD200+"이다. 반대로, 동일한 문맥에서의 "음성"은 세포 표면 마커가 대조군 (예를 들어, 배경 또는 이소형 대조군)과 비교하여 이러한 마커에 대해 특이적인 항체를 사용하여 검출가능하지 않은 것을 의미한다. 예를 들어, 세포가 대조군 (예를 들어, 배경 또는 이소형 대조군)보다 더 큰 정도로 CD34에 특이적인 항체로 재현가능하게 검출가능하게 표지되지 않을 경우, 세포는 "CD34-"이다. 항체를 사용하여 검출되지 않거나 검출가능하지 않은 마커는 적합한 대조군을 사용하여 유사한 방식으로 양성 또는 음성인 것으로 결정된다. 예를 들어, RT-PCR, 슬롯 블롯 등과 같은 RNA 검출 방법에 의해 결정시, 세포 또는 세포의 집단으로부터의 RNA에서 검출된 OCT-4 RNA의 양이 배경보다 검출가능하게 크면 세포 또는 세포의 집단이 OCT-4+인 것으로 결정될 수 있다. 본원에서 달리 표시되지 않으면, 분화 클러스터 ("CD") 마커는 항체를 사용하여 검출된다. 특정 실시양태에서, OCT-4가 RT-PCR을 사용하여 검출가능할 경우에, OCT-4가 존재하는 것으로 결정되고 세포는 "OCT-4+"이다.
본원에 사용된 바와 같이, 유동 세포측정법에서 검출가능한 마커의 발현을 언급할 때 용어 "저"는 마커가 시험되는 세포의 10% 미만에 의해 발현되거나, 또는 예를 들어 유동 세포측정법에서 마커에 기인한 형광이 배경에 비해 1 로그 미만임을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, "치료하다"는 질환, 장애 또는 병태 (예를 들어, 사르코이드증), 또는 그의 임의의 파라미터 또는 증상의 교정, 개선, 중증도의 완화, 또는 시간 경과의 감소를 포함한다.
4. 상세한 설명
4.1 사르코이드증, 또는 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증에 관련된 질환, 장애 또는 병태의 치료
유효량의 조직 배양 플라스틱-부착성 태반 줄기 세포, 예를 들어 하기 섹션 4.2에 기재된 바와 같은 PDAC를 투여하는 것을 포함하는, 사르코이드증, 또는 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증에 관련된 질환 또는 장애의 치료 방법이 본원에 제공된다. 이러한 개체의 치료를 위한 방법, 및 단독의 또는 다른 요법과 조합된 이러한 줄기 세포의 투여를 위한 방법이 하기 상세하게 논의되어 있다.
4.1.1 사르코이드증
사르코이드증은 다계통 육아종성 염증성 질환이다. 상기 질환은 전형적으로 다양한 기관에서의 작은 과립형 염증 병변 또는 육아종 (예를 들어, 비-건락성 육아종)의 형성, 및/또는 침범된 조직 또는 기관에서의 면역 반응의 존재 (예를 들어, CD4+ T 림프구 및 대식세포의 존재)를 특징으로 한다. 육아종성 염증은 단핵구, 대식세포의 축적, 확연한 Th1 반응 및 활성화된 T-림프구, 및 TNF-α, IL-2, IL-12, IFN-γ, IL-1, IL-6 또는 IL-15의 상승된 생산에 기인할 수 있다.
사르코이드증은 전신성 (예를 들어, 전신 사르코이드증) 또는 국부성 (예를 들어, 국부화된 사르코이드-유사 반응)일 수 있다. 육아종은 거의 모든 기관에서 나타날 수 있고, 폐 또는 림프절에서 가장 흔하게 나타날 수 있다. 다른 흔한 부위는 간, 비장, 피부 및 안구를 포함한다. 특정한 기관의 침범은 경미하거나 심각할 수 있고, 자기-제한적이거나 만성일 수 있고, 범위가 제한적이거나 광범위할 수 있다. 증상은 통상적으로 점진적으로 나타나지만, 때로는 갑자기 나타날 수도 있다. 사르코이드증 환자가 경험하는 공통 증상은 피로, 숨가쁨, 멎지 않는 기침, 안면, 팔 또는 정강이 상의 피부 병변 또는 피부 발진, 안구의 염증, 체중 감소, 야간 발한, 호흡곤란, 기침, 흉부 불쾌감, 악설음, 권태감, 무력증, 식욕부진, 체중 감소 또는 열을 포함한다. 다른 증상은, 예를 들어 림프선 비대 (겨드랑이 종괴), 간 비대, 비장 비대, 구강 건조 또는 비출혈을 포함한다. 사르코이드증의 다양한 유형의 증상이 하기 기재되어 있다.
임상 경과는 일반적으로 다양하다. 일부 실시양태에서, 사르코이드증은 무증상일 수 있다. 다른 실시양태에서, 조직 또는 기관은 염증이 생긴 채로 남아있을 수 있거나 조직 또는 기관에서 하나 이상의 육아종이 치유되지 않는 경우에 반흔 또는 섬유증이 될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 사르코이드증은 사망을 유발할 수 있는 소모성 만성 병태 (예를 들어, 비가역적 폐 섬유증)를 일으킬 수 있다.
따라서, 한 측면에서, 본원에 제공된 PDAC, 이러한 세포의 집단, 및 PDAC를 포함하는 세포의 집단은 사르코이드증, 또는 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증에 관련된 하나 이상의 질환, 장애 또는 병태를 나타내는 개체를 치료하는 데 사용될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 사르코이드증을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 사르코이드증의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다. 구체적 실시양태에서, 상기 치료 유효량의 태반 세포는 상기 개체 내의 하나 이상의 육아종을 감소시킨다 (예를 들어, 상기 육아종의 개수 또는 그의 중증도를 검출가능하게 감소시키거나, 또는 상기 육아종의 개수 또는 그의 중증도의 증가 속도를 감소시킴). 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 치료 유효량의 태반 세포는 단핵구, 대식세포 또는 활성화된 T-림프구를 감소시킨다 (예를 들어, 그의 개수를 검출가능하게 감소시키거나, 또는 그의 개수의 증가 속도를 감소시킴). 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 치료 유효량의 태반 세포는 상기 개체에서의 하나 이상의 TNF-α, IL-2, IL-12, IFN-γ, IL-1, IL-6, IL-15 또는 Th1 반응을 감소시킨다 (예를 들어, 그의 수준을 검출가능하게 감소시키거나, 또는 그의 수준의 증가 속도를 감소시킴).
특정 실시양태에서, 상기 사르코이드증은 전신 사르코이드증, 피부 사르코이드증, 뢰프그렌 증후군, 신경사르코이드증, 폐 사르코이드증, 심장 사르코이드증, 안구 사르코이드증, 간 사르코이드증, 근골격 사르코이드증, 신장 사르코이드증 또는 다른 기관 또는 조직의 침범을 갖는 사르코이드증 중 하나 이상이다.
전신 사르코이드증 - 이는 다발 기관 침범을 갖는 사르코이드증이다. 한 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 전신 사르코이드증을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 전신 사르코이드증의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다. 일부 실시양태에서, 상기 전신 사르코이드증의 하나 이상의 증상은 비-특정 전신 증상, 예컨대 체중 감소, 피로, 식욕 감소, 열, 오한, 야간 발한, 육아종의 형성, 피로, 동통, 통증 또는 관절염을 포함한다.
다른 실시양태에서, 전신 사르코이드증은 침범된 특정 기관에 관련된 구체적인 증상 (예를 들어, 안구 건조, 무릎 종창, 흐린 시력, 숨가쁨, 기침, 피부 병변, 예컨대 발진 등)을 나타낼 수 있다. 구체적 실시양태에서, 상기 구체적인 증상은 폐, 폐 림프, 근골격, 간, 관절, 혈액, 피부과, 안구, 정신, 신경계, 신장, 비장, 신경학적, 비동, 심장, 골, 구강, 위, 장, 내분비계, 흉막 또는 생식계 증상 중 하나 이상이다.
피부 사르코이드증 - 이는 피부 침범을 갖는 사르코이드증의 합병증이다. 또 다른 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 피부 사르코이드증을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 피부 사르코이드증의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다. 특정 실시양태에서, 피부 사르코이드증은 환상 사르코이드증, 홍피성 사르코이드증, 어린선형 사르코이드증, 저색소침착성 사르코이드증, 반상경피증형 사르코이드증, 점막 사르코이드증, 구진성 사르코이드, 반흔 사르코이드, 피하 사르코이드증 및 궤양성 사르코이드증을 포함한다. 일부 실시양태에서, 피부 사르코이드증의 하나 이상의 증상은 특이적이거나 비-특이적인 (예를 들어, 몇몇 다른 피부 병태와 유사한) 다양한 피부 병변 또는 병태를 포함한다. 피부 사르코이드증과 관련된 예시적인 피부 병변 또는 병태는 구진 (예를 들어, 육아종성 장미증, 여드름 또는 양성 부속기 종양), 피부 플라크 (예를 들어, 건선, 편평 태선, 화폐상 습진, 원판상 홍반성 루푸스, 환상 육아종, 피부 T-세포 림프종, 카포시 육종 또는 속발성 매독), 동창 루푸스 (예를 들어, 반흔 또는 원판상 홍반성 루푸스), 결절성 홍반 (예를 들어, 융기된 적색의 단단한 피부 상처, 봉와직염, 종기증 또는 다른 염증성 지방층염), 반점구진성 발진, 피부 내 심부 결절성 병변 또는 오래된 반흔의 침윤을 포함한다. 다른 피부 증상은, 예를 들어 피부 발진, 보다 융기된 오래된 반흔, 피부 병변 또는 탈모를 포함한다.
뢰프그렌 증후군 - 이는 전신 사르코이드증의 급성 출현을 나타내고, 이는 전형적으로 결절성 홍반, 양측 폐문 선병증 및 관절염 또는 관절통의 세 징후를 특징으로 한다. 이것은 또한 열을 동반할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 뢰프그렌 증후군을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 뢰프그렌 증후군의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다. 구체적 실시양태에서, 하나 이상의 증상은 결절성 홍반, 양측 폐문 선병증, 관절염, 관절통 또는 열을 포함한다.
신경사르코이드증 또는 신경사르코이드 - 이는 염증 및 비정상적 침착물이 뇌, 척수, 및 신경계의 임의의 다른 지역에서 발생하는 사르코이드증을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 신경사르코이드증을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 신경사르코이드증의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다. 신경사르코이드증은 신경계의 임의의 부분, 예를 들어 안면의 근육으로의 신경 (두개 신경 VII) (이는 안면 무력증의 증상 (예를 들어, 안면 마비)을 유발할 수 있음), 안구 내의 신경, 또는 미각, 후각 또는 청각을 제어하는 신경을 침범할 수 있다.
일부 실시양태에서, 신경사르코이드증의 증상은 월경 주기의 변화, 과도한 지침 (예를 들어, 피로), 두통, 외양 변화, 망막병증, 척수신경근통, 장 또는 방광 제어의 손실, 손목 터널 증후군, 및/또는 하반신마비, 지나친 갈증 또는 높은 요 배설량을 포함한다. 다른 실시양태에서, 신경사르코이드증의 증상은 착란, 방향감각상실, 감소된 청각, 치매 또는 섬망, 어지러움증 또는 현기증 (예를 들어, 비정상적 운동 감각), 복시 또는 다른 시력 문제, 안면 마비 (무력증, 처짐), 두통, 후각 또는 미각의 손실, 비정상적 미각, 정신 장애, 발작 또는 언어 손상, 근무력증 또는 감각 손실, 또는 일부 경우에, 뇌하수체저하증을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 신경사르코이드증의 증상은 신경계 (예를 들어, 뇌, 척수, 또는 안면신경 및 시신경)에서의 육아종의 형성, 두통, 착란, 권태감 또는 안면 마비를 포함한다.
폐 사르코이드증 - 이는 폐 조직 또는 기관 (예를 들어, 폐)에 침범하는 사르코이드증을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 폐 사르코이드증을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 폐 사르코이드증의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다. 폐 사르코이드증의 증상은 통상적으로 폐 및/또는 흉부 증상을 수반하며, 이는 예를 들어 폐 갈륨 (Ga.) 스캔, 흉부 X선, 폐 기능 검사, 운동 펄스 산소측정법, 흉부의 CT 스캔, PET 스캔, CT-유도된 생검, 종격내시경술, 개흉 생검, 또는 생검을 수반하는 기관지경검사에 의해 결정될 수 있다.
특정 실시양태에서, 폐 사르코이드증의 증상은 폐포 격막, 세기관지 및 기관지 벽에서의 육아종, 숨가쁨, 기침, 폐 부피의 손실 및 비정상적 폐 경직, 비정상적 또는 악화되는 폐 기능, 폐 부피의 감소, 감소된 탄성, 폐 조직의 반흔형성, 또는 폐 조직으로부터의 출혈을 포함한다. 다른 증상은, 예를 들어 정상 호기적 유동 속도보다 높은 폐 내로 흡수되는 공기의 한정된 양, 감소된 폐활량 (최대 들숨에서 최대 날숨까지), 증가된 FEV1/FVC 비, 폐쇄성 폐 변화 (이는 내쉴 수 있는 공기의 양의 감소를 유발할 수 있음), 흉부에서의 림프절 비대 (이는 기도를 압박할 수 있음), 또는 내부 염증 또는 결절이 기류를 방해하는 경우에, 폐고혈압 또는 폐 부전을 포함한다.
어떠한 이론에도 얽매이기를 원치 않지만, 스카딩(Scadding) 기준은 폐 사르코이드증을 갖는 환자의 질환 단계에 대해 가장 흔히 이용되는 측정법이다. 간략하게, 각 단계에 대한 방사선촬영 증거는 하기와 같이 설명될 수 있다: 단계 I: 양측 폐문 및/또는 종격 림프절병증 (림프절 비대); 단계 II: 양측 폐문 및/또는 종격 림프절병증; 폐 침윤의 증거; 단계 III: 실질 조직에서의 변경; 림프절 비대 없음; 및 단계 IV: 폐 섬유증의 증거. 따라서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 폐 사르코이드증 또는 폐 사르코이드증에 의해 유발되거나 폐 사르코이드증에 관련된 질환, 장애 또는 병태를 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 스카딩 기준에 의해 결정시 상기 폐 사르코이드증의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다.
일부 실시양태에서, 폐 사르코이드증은 폐 섬유증 (예를 들어, 비가역적 폐 섬유증) (이는 폐의 구조를 왜곡시키고 호흡을 손상시킬 수 있음) 또는 기관지확장증 (대기도의 파괴 및 확장을 특징으로 하는 폐 질환임)으로 발달할 수 있다. 따라서, 구체적 실시양태에서, 상기 질환 또는 장애는 폐 섬유증 또는 기관지확장증이다. 보다 구체적 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증에 관련된 폐 섬유증 (예를 들어, 비가역적 폐 섬유증)을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 폐 섬유증 (예를 들어, 비가역적 폐 섬유증)의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증에 관련된 기관지확장증을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 기관지확장증의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다.
다른 실시양태에서, 사르코이드증은 흉부 X선에 의해 결정시 폐 림프계를 침범할 수 있고 (예컨대, 폐문 또는 종격 침범), 비확장된 말초 또는 경부 림프절병증의 증상을 일으킬 수 있다.
심장 사르코이드증 - 이는 심근 침범을 갖는 사르코이드증을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 심장 사르코이드증을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 심장 사르코이드증의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다.
일부 실시양태에서, 심장 사르코이드증의 하나 이상의 증상은 순환계의 질환 또는 장애, 예를 들어 심근경색, 심근병증, 동맥류, 협심증, 대동맥의 협착, 대동맥염, 부정맥, 동맥경화증, 동맥염, 비대칭 중벽 비대증 (ASH), 아테롬성동맥경화증, 심방 세동 및 조동, 박테리아성 심내막염, 바를로우 증후군 (승모판 탈출증), 서맥, 버거병 (폐쇄성 혈전혈관염), 심장비대, 심장염, 경동맥 질환, 대동맥의 축착, 선천성 심장 결손, 울혈성 심부전, 관상 동맥 질환, 아이젠멩거 증후군, 색전증, 심내막염, 피부홍통증, 세동, 섬유근성 이형성증, 심장 차단, 심장 잡음, 고혈압, 저혈압, 특발성 영아 동맥 석회화, 가와사키병 (점막피부성 림프절 증후군, 점막피부성 림프절 질환, 영아 다발성동맥염), 대사 증후군, 미세혈관 협심증, 심근염, 발작성 심방성 빈맥 (PAT), 결절성 동맥주위염 (다발성동맥염, 결절성 다발성동맥염), 심막염, 말초 혈관 질환, 위독기 사지 허혈, 정맥염, 폐동맥판 협착 (폐 협착), 레이노병, 신동맥 협착, 신혈관성 고혈압, 류마티스성 심질환, 당뇨병성 혈관병증, 중격 결손, 무증상성 허혈, 증후군 X, 빈맥, 다카야스 동맥염, 팔로 사징증, 대혈관 전위증, 삼첨판 폐쇄증, 동맥 줄기, 판막성 심장 질환, 정맥류성 궤양, 정맥류, 혈관염, 심실 중격 결손, 볼프-파킨슨-화이트 증후군, 심내막 융기 결손, 급성 류마티스열, 급성 류마티스성 심낭염, 급성 류마티스성 심내막염, 급성 류마티스성 심근염, 만성 류마티스성 심질환, 승모판 질환, 승모판 협착, 류마티스성 승모판 폐쇄부전, 대동맥판 질환, 다른 심내막 구조의 질환, 허혈성 심장 질환 (급성 및 아급성), 협심증, 급성 폐 심장 질환, 폐 색전증, 만성 폐 심장 질환, 척추후측만곡성 심장 질환, 심근염, 심내막염, 심내막심근 섬유증, 심내막 섬유탄성증, 방실 차단, 심장 리듬장애, 심근 변성, 뇌혈관 질환, 동맥, 세동맥 및 모세혈관의 질환, 또는 정맥 및 림프관의 질환의 증상과 유사하다. 따라서, 특정 실시양태에서, 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애를 갖는 개체 (여기서, 개체는 본원에 제공된 PDAC 또는 치료 조성물을 투여받음)의 개선은 상기 사르코이드증 또는 상기 사르코이드증-관련 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상에서의 검출간으한 개선에 의해 평가되거나 입증될 수 있다.
특정 실시양태에서, 방법은 상기 PDAC의 투여 전의 개체에 비해 흉부 심장 박출량 (CO), 심장 지수 (CI), 폐동맥 쐐기압 (PAWP), 심장 지수 (CI), 분획 단축 % (%FS), 박출 계수 (EF), 좌심실 박출 계수 (LVEF); 좌심실 이완 말기 직경 (LVEDD), 좌심실 수축 말기 직경 (LVESD), 수축성 (dP/dt), 심방 또는 심실 기능의 감소, 펌핑 효율의 증가, 펌핑 효율 손실 속도의 감소, 혈류학적 기능의 손실 감소, 또는 심근병증과 연관된 합병증의 감소인 심장 기능의 하나 이상의 징후의 검출가능한 개선에 충분한 양으로 및 충분한 시간 동안 상기 개체에게 태반 세포를 투여하는 것을 포함한다.
본원에 제공된 치료 방법의 구체적 실시양태에서, PDAC는 줄기 세포 (즉, PDAC가 아닌 줄기 세포), 근모세포, 근세포, 심근모세포, 심근세포, 또는 근모세포, 근세포, 심근모세포 및/또는 심근세포의 전구세포와 함께 투여된다.
구체적 실시양태에서, 본원에 제공된 치료 방법은 PDAC, 예를 들어 상기 세포를 포함하는 치료 조성물을 사르코이드증, 또는 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증에 관련된 질환, 장애 또는 병태가 있는 환자에게 투여하고; 심장 기능의 개선에 대해 환자를 평가하는 것을 포함하며, 여기서 치료 세포 조성물은 매트릭스-세포 복합체로서 투여된다. 특정 실시양태에서, 매트릭스는 적어도 상기 세포를 포함하는 스캐폴드, 바람직하게는 생체흡수성 스캐폴드이다.
이를 위해, 예를 들어 심인성, 혈관신생, 혈관기원 또는 혈관형성 경로를 따라 줄기 또는 전구 세포 분화를 자극하는 하나 이상의 인자와 접촉된, 예를 들어 그의 존재 하에 인큐베이션되거나 배양된 PDAC의 집단이 본원에 제공된다. 이러한 인자는 성장 인자, 케모카인, 시토카인, 세포 생성물, 탈메틸화제, 및 심인성, 혈관신생, 혈관기원 또는 혈관형성 경로 또는 계통을 따라 예를 들어 줄기 세포의 분화를 자극하는 것으로 현재 알려져 있거나 나중에 결정되는 다른 인자와 같은 인자를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
특정 실시양태에서, PDAC는 시험관내에서 탈메틸화제, BMP (골 형태발생 단백질), FGF (섬유모세포 성장 인자), Wnt 인자 단백질, 헷지호그(Hedgehog) 단백질 및/또는 항-Wnt 인자 중 적어도 하나를 포함하는 인자의 존재 하에 세포의 배양에 의해 심인성, 혈관신생, 혈관기원 또는 혈관형성 경로 또는 계통을 따라 분화될 수 있다.
PDAC 및 이러한 세포의 집단은 개체, 예를 들어 사르코이드증에 관련된 심장 또는 순환계의 질환, 장애 또는 병태를 갖거나 그에 침범하는 질환, 장애 또는 병태를 갖는 개체에게 치료상 또는 예방상 제공될 수 있다. 이러한 질환, 장애 또는 병태는 아테롬성동맥경화증, 심근병증, 또는 심장 손상, 예를 들어 예컨대 심근경색 또는 상처로부터의 허혈성 손상으로 인한 울혈성 심부전 (급성 또는 만성)을 포함할 수 있다.
안구 사르코이드증 - 이는 눈에 침범하는 사르코이드증이다. 또 다른 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 안구 사르코이드증을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 안구 사르코이드증의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다. 특정 실시양태에서, 안구 사르코이드증의 하나 이상의 증상은 포도막염 (예를 들어, 육아종성 포도막염), 포도막이하선염, 망막 염증, 시력 감소, 적색 색맹, 유루안, 홍채 결절, 망막맥락막염, 결막염, 누선 침범 또는 안구돌출을 포함한다.
근골격, 간, 혈액, 정신, 신장, 비장, 비동, 구강, 위 또는 장, 내분비계, 흉막 또는 생식계 침범을 갖는 사르코이드증
특정 실시양태에서, 사르코이드증은 근육, 간, 관절, 혈액, 정신, 신장, 비장, 비동, 골, 구강, 위 또는 장, 내분비계, 흉막 또는 생식계를 침범할 수 있고, 각각의 증상을 일으킬 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 근골격, 간, 관절, 혈액, 정신, 신장, 비장, 비동, 구강, 위 또는 장, 내분비계, 흉막 또는 생식계 침범을 갖는 사르코이드증을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 사르코이드증의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다.
한 실시양태에서, 근골격 침범을 갖는 사르코이드증은 효소 상승과 함께 또는 효소 상승 없이 무증상일 수 있거나, 또는 예를 들어 근무력증과 함께 잠행성 또는 급성 근병증, 관절염 (예를 들어, 발목, 무릎, 손목 및 팔꿈치 관절염), 자코우드 기형 또는 지염과 함께 만성 관절염, 관절주위염, 관절통, 골용해성 또는 낭포성 병변, 골감소증 또는 뢰프그렌 증후군의 증상과 함께 나타날 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 간 침범을 갖는 사르코이드증은 무증상일 수 있거나, 또는 하나 이상의 증상, 예컨대 간 기능 시험 결과에서의 경미한 상승, 방사선비투과성 염료를 사용한 CT 스캔 상의 과투과성 병변, 간비대, 간 효소 수준의 변화, 간 질환, 열, 권태감, 피로, 담즙정체, 간경변증, 또는 육아종성 간염과 유사한 증상과 함께 나타날 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 혈액 사르코이드증이 있는 환자는 림프구감소증, 만성 질환의 빈혈, 골수의 육아종성 침윤으로 인한 빈혈, 범혈구감소증, 비장 격리, 혈소판감소증 또는 백혈구감소증 중 하나 이상의 증상을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 사르코이드증이 있는 환자는 정신 증상 (예를 들어, 우울증)을 나타낼 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 신장 침범을 갖는 사르코이드증은 무증상 고칼슘뇨증, 간질성 신염, 신결석증에 의해 초래된 만성 신부전 또는 신석회화증의 증상을 나타낼 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 비장 침범을 갖는 사르코이드증은 무증상일 수 있거나, 또는 통증, 혈소판감소증, 또는 X선 또는 CT 스캔에 의해 결정된 바와 같은 증상을 나타낼 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 비동 침범을 갖는 사르코이드증은 흔한 알레르기성 및 감염성 부비동염과 유사한 증상을 갖는 부비동 점막의 증상 또는 동창 루푸스를 나타낼 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 구강 침범을 갖는 사르코이드증은 무증상 이하선 종창, 구강건조증과 함께 이하선염, 헤르포르트 증후군, 포도막염, 양측 이하선 종창, 안면 마비, 만성 열, 구강 동창 루푸스, 또는 기형 경구개, 협부, 혀 및 치은의 증상을 나타낼 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 위 또는 장, 내분비계, 흉막 또는 생식계 침범을 갖는 사르코이드증의 증상은 위 육아종, 장간막 림프절병증, 복통, 범뇌하수체기능저하증, 갑상선 침윤, 속발성 부갑상선기능저하증, 고칼슘혈증 또는 림프구성 삼출성 삼출을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 폐 조직 또는 기관 이외의 하나 이상의 조직 또는 기관의 침범을 갖는 사르코이드증을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 사르코이드증의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다. 또 다른 실시양태에서, 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 폐 이외의 하나 이상의 조직 또는 기관의 침범을 갖는 사르코이드증을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 사르코이드증의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다.
다른 질환, 장애 또는 병태
일부 실시양태에서, 상기 사르코이드증-관련 질환 또는 장애는 암 (예를 들어, 사르코이드증에서 침범되는 것으로 알려져 있는 기관에서의 암)이다. 개체에게 단리된 태반 세포, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 투여하는 것을 포함하는, 사르코이드증-관련 암을 갖는 개체의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 투여는 상기 사르코이드증-관련 암의 하나 이상의 증상의 진행의 검출가능한 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 일으킨다.
어떠한 이론에도 얽매이기를 원치 않지만, 사르코이드증이 있는 환자는 암 (예를 들어, 폐암 또는 악성 림프종)에 대해 증가된 위험성을 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 암은 고형 종양이다. 일부 실시양태에서, 상기 암은 원발성 관 암종, 백혈병, 급성 T 세포 백혈병, 만성 골수성 림프종 (CML), 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병 (CML), 폐 암종, 결장 선암종, 조직구성 림프종, 결장직장 암종, 결장직장 선암종 또는 망막모세포종이다. 구체적 실시양태에서, 암은 모발상 세포 백혈병, 급성 골수성 백혈병 (급성 골수성 백혈병) 또는 급성 골수모구성 백혈병이다.
다른 실시양태에서, 상기 사르코이드증-관련 질환 또는 장애는 비타민 D 조절이상, 고프로락틴혈증, 갑상선 질환 (예를 들어, 갑상선기능저하증, 갑상선기능항진증 및 갑상선 자가면역), 자가면역 장애 또는 사르코이드증-림프종 증후군 및 과민증 (예를 들어, 셀리악병, 제IV형 과민증)을 포함한다.
전형적으로, 사르코이드증의 하나 이상의 증상을 나타내는 개체는, 예를 들어 사르코이드증의 진단에 도달하기 위해 수행되는 시험의 일부로서 사르코이드증의 최종 진단 전에 적어도 1회 사르코이드증에 대해 평가된다. 또한, 전형적으로, 사르코이드증으로 진단된 개체는 질환의 진전을 측정하기 위해 사르코이드증의 증상에 대해 사르코이드증의 진단 후에 적어도 1회, 통상적으로는 1회 초과로 평가된다. 이러한 평가는 폐 기능 또는 증상의 진단, 예를 들어 종격 림프절의 흉부 영상화, 흉부 X선, 흉부의 CT 스캔, PET 스캔, CT-유도된 생검, 종격내시경술, 개흉 생검, 생검을 수반하는 기관지경검사, 기관지내 초음파 또는 종격 림프절의 FNA를 수반하는 내시경 초음파; 조직 생검, 예를 들어 조직 생검, 안지오텐신-전환 효소 혈액; 예를 들어 심장, 신경계 또는 간 침범을 검출하기 위한 자기 공명 영상화 (MRI), 컴퓨터 단층촬영 (CT) 스캐닝, 양전자 방출 단층촬영 (PET) 스캐닝, 침범된 조직 또는 기관의 심전도; 간 기능 시험; 안구 검사; 혈액, 이온화 및 소변 칼슘 측정; 혈청 인 측정; 갑상선 기능 시험; 포도막염을 검출하기 위한 슬릿 안구 램프 검사; 또는 다른 육아종성 장애의 제거를 포함한다. 사르코이드증의 치료의 유효성, 예를 들어 태반 세포를 투여하는 것의 유효성은 사르코이드증의 이러한 증상 중 임의의 하나, 또는 그 초과에 의해 평가될 수 있다. 유효성은 또한 상기 태반 세포의 투여 전 및 후에, 상기 개체에서의 침범된 기관의 증상 또는 기능의 진행의 감소, 그의 악화의 검출가능한 완화, 및/또는 그의 검출가능한 개선을 모니터링함으로써 평가될 수 있다.
한 측면에서, 치료 세포 조성물을 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환, 장애 또는 병태가 있는 환자에게 투여하고, 사르코이드증의 증상의 개선에 대해 환자를 평가하는 것을 포함하는, 사르코이드증 또는 사르코이드증-관련 질환이 있는 환자의 치료 방법이 본원에 제공되며, 여기서 상기 세포 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 PDAC를 포함한다.
한 실시양태에서, 상기 방법은 (1) 상기 개체에서 침범된 기관의 수 및/또는 그의 정도; (2) 상기 개체에서의 증상의 수 및/또는 그의 정도, (3) 육아종의 수 및/또는 그의 정도; 또는 (4) 상기 개체에서 염증의 정도 중 하나 이상을 상기 투여 전에 1회 또는 다수회 및/또는 상기 투여 후에 1회 또는 다수회 결정하는 것을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 상기 치료 유효량의 태반 세포는, 예를 들어 상기 개체에서의 상기 하나 이상의 증상의 수 또는 그의 중증도를 감소, 예를 들어 검출가능하게 감소시키거나, 또는 상기 증상의 수 또는 그의 중증도의 증가 속도를 감소시키고/거나, 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환, 장애 또는 병태의 하나 이상의 증상의 검출가능한 개선을 일으킨다.
한 실시양태에서, 상기 치료 유효량은 상기 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상에서 검출가능한 개선을 일으키는 양이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 치료 유효량은 면역 세포 또는 다수의 면역 세포의 활성, 예를 들어 증식의 조절, 예를 들어 억제를 일으키는 양이다. 구체적 실시양태에서, 상기 치료 유효량은 하나 이상의 염증 마커 (예를 들어, C-반응성 단백질, IL-6, 또는 PLAC 시험에 의해 결정된 바와 같음)에 의해 결정시 염증 반응의 억제를 일으키는 양이다. 구체적 실시양태에서, 상기 조절 (예를 들어, 억제)은 태반 줄기 세포가 면역 반응을 검출가능하게 조절 (예를 들어, 억제)하기에 충분한 시간 동안 면역 세포(들)를 다수의 태반 줄기 세포와 접촉시킴으로써 수행된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 치료 유효량은, 상기 개체에서 침범된 조직 또는 기관에 이식되는 경우에 침범된 조직 또는 기관에서의 콜로니-형성 유닛의 형성을 허용하는 양이다.
일부 실시양태에서, 상기 치료 유효량의 태반 세포는, 예를 들어 흉부 영상화, 흉부 X선, 흉부의 CT 스캔, PET 스캔 또는 CT-유도된 생검에 의해 결정시 폐 기능을 생성, 예를 들어 검출가능하게 생성한다. 다른 실시양태에서, 상기 치료 유효량의 태반 세포는, 예를 들어 절제 생검에 의해 결정시 피부 병변의 수 및/또는 그의 정도를 감소시킨다. 또 다른 실시양태에서, 암이 수반되는 경우에, 상기 태반 세포는 암성 세포의 수를 상기 태반 세포의 투여 전의 상기 세포의 수와 비교하여 적어도 예를 들어 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%만큼 감소시킨다.
또 다른 실시양태에서, 치료는 또 다른 세포 유형과 함께 또는 또 다른 세포 유형 없이 태반 세포 (예를 들어, PDAC)를 포함하는 치료 세포 조성물을 사용한, 사르코이드증, 또는 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증에 관련된 질환, 장애 또는 병태가 있는 개체의 치료를 포함한다. 특정 실시양태에서, 개체는 치료로부터, 예를 들어 다른 세포, 예를 들어 심장 내에 존재하는 줄기 세포 또는 전구 세포의 성장을 지지하는 세포의 능력으로부터, 조직의 조직 내성장 또는 혈관생성으로부터, 및 유익한 세포성 인자, 케모카인, 시토카인 등의 존재로부터 이익을 경험하지만, 세포는 환자 내에서 통합하거나 증식하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 세포를 사용한 치유적 치료로부터 이익을 얻지만, 세포는 환자 내에서 장기간 동안 생존하지 않는다. 한 실시양태에서, 세포는 수, 생존력 또는 생화학적 활성이 점차 감쇠하고, 다른 실시양태에서 세포의 감쇠 이전에 활성의 기간, 예를 들어 성장, 분열 또는 생화학적 활성의 기간이 있을 수 있다. 다른 실시양태에서, 노화된, 생존불가능한 또는 심지어 죽은 세포가 유익한 치료 효과를 가질 수 있다.
사르코이드증, 또는 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증에 관련된 질환, 장애 또는 병태를 갖는 개체의 개선 (여기서, 개체에게 본원에 제공된 PDAC 또는 치료 조성물을 투여함)은 상기 사르코이드증 또는 상기 사르코이드증-관련 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 검출가능한 개선에 의해 평가 또는 입증될 수 있다.
본원에 제공된 PDAC, 또는 PDAC를 포함하는 치료 조성물을 제공받은 개체의 개선은 또한 주관적인 척도, 예를 들어 투여 후 자신의 건강 상태에 대한 개체의 자가-평가에 의해 평가할 수 있다.
특정 실시양태에서, 세포의 투여의 성공은 투여된 PDAC의 개체 내의 생존에 기초하지 않는다. 대신에, 성공은 상기한 바와 같이 사르코이드증의 하나 이상의 증상의 개선의 하나 이상의 척도에 기초한다. 따라서, 세포는 환자의 침범된 조직 또는 기관 내로 통합하여 박동할 필요가 없다.
4.1.2 태반 세포의 투여
일부 실시양태에서, 태반 세포 (예를 들어, PDAC), 또는 이러한 세포를 포함하는 치료 조성물을 그를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것은 이식, 삽입 (예를 들어, 세포 자체의 또는 매트릭스-세포 조합물의 일부로서 세포의), 주사 (예를 들어, 질환 또는 병태의 부위에 직접, 예를 들어 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증에 관련된 하나 이상의 병변 또는 육아종에 직접), 주입, 카테터를 통한 전달, 또는 세포 요법을 제공하기 위한 당업계에 공지된 임의의 다른 수단에 의해, 국부 또는 전신 투여로 달성될 수 있다. 다른 실시양태에서, 태반 세포 (예를 들어, PDAC) 또는 이러한 세포를 포함하는 치료 조성물은 정맥내, 동맥내, 복강내, 경막내, 심실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내, 활액막내 및 피하 투여에 의해 개체에게 전달될 수 있다.
한 실시양태에서, 치료 세포 조성물은 그를 필요로 하는 개체에게, 예를 들어 개체에서 하나 이상의 부위로의 주사에 의해 제공된다. 구체적 실시양태에서, 심장 침범이 있는 경우에, 치료 세포 조성물은, 예를 들어 심장 내의 허혈 영역으로 심장내 주사에 의해 제공된다. 다른 구체적 실시양태에서, 세포는 침범된 기관의 표면 상에, 인접 영역으로, 또는 심지어 보다 먼 영역으로 주사된다. 바람직한 실시양태에서, 세포는 질환에 걸린 또는 손상된 영역으로 향할 수 있다.
구체적 실시양태에서, 태반 세포는 병변내로, 예를 들어 사르코이드증에 의해 유발되거나 사르코이드증과 관련된 하나 이상의 병변 또는 육아종 내로 직접 또는 그에 인접하여 (예를 들어, 1-5 cm 이내) 투여된다. 특정 실시양태에서, 태반 세포는 매트릭스, 예를 들어 주사가능한 매트릭스와 조합되어 투여된다. 특정의 다른 실시양태에서, 태반 세포는 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 고체 매트릭스, 예를 들어 골 대체물, 하기 섹션 4.7.4에 기재된 매트릭스 또는 골 대체물과 조합되어 투여된다.
특정의 다른 실시양태에서, 태반 세포는 개체에게 정맥내로 투여된다. 태반 세포는 임의의 용기로부터, 및 유체 (예를 들어, 세포를 포함하는 유체)의 전달에 의학적으로 적합한 임의의 전달 시스템에 의해 개체에게 투여될 수 있다. 이러한 용기는, 예를 들어 멸균 플라스틱 백, 플라스크, 병, 또는 태반 세포 집단이 쉽게 분배될 수 있는 기타 용기일 수 있다. 예를 들어, 용기는 혈액 백, 또는 수용자에게 액체를 정맥내 투여하기에 적합한 의학적으로 허용되는 기타 플라스틱 백일 수 있다.
병변내 또는 정맥내 투여는, 예를 들어 단일 용량 내에 약, 적어도 또는 최대 1 x 105, 5 x 105, 1 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 5 x 108, 1 x 109, 5 x 109, 1 x 1010, 5 x 1010, 1 x 1011개 또는 그 초과의 단리된 태반 세포를 포함할 수 있다. 단리된 태반 세포는 치료 과정 동안 1회, 또는 1회 초과로 투여될 수 있다. 바람직하게는, 투여된 태반 세포는 50% 이상의 생존 세포를 포함한다 (즉, 집단 내의 세포의 적어도 약 50%가 기능하거나 살아 있다). 바람직하게는, 집단 내의 세포의 적어도 약 60%가 생존성이다. 보다 바람직하게는, 제약 조성물 내의 집단 내의 세포의 적어도 약 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%가 생존성이다.
특정 실시양태에서, 개체에게 치료 유효량의 PDAC를, 예를 들어 PDAC를 포함하는 세포의 집단으로 투여한다. 구체적 실시양태에서, 집단은 약 50%의 PDAC를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 집단은 PDAC의 실질적으로 균질한 집단이다. 다른 실시양태에서, 집단은 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 PDAC를 포함한다.
사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 병태를 갖는 개체에게 PDAC를 세포가 치료상 유익할 임의의 시점에 투여할 수 있다. 특정 실시양태에서, 예를 들어 본 발명의 PDAC 또는 치료 조성물은 심근경색의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30일 이내에 투여된다. 심근경색에 근접한 시간대, 예를 들어 1-3 또는 1-7일 내의 투여가 심근경색에 먼 시간대, 예를 들어 3 또는 7일 후의 투여에 비해 더 바람직하다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 세포 또는 치료 조성물은 질환 또는 병태의 최초 진단의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30일 이내에 투여된다.
특정 실시양태에서, 치료할 개체는 포유동물이다. 구체적 실시양태에서, 치료할 개체는 임의의 연령의 및/또는 임의의 임상 단계 또는 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환, 장애 또는 병태에 있는 인간이다. 구체적 실시양태에서, 개체는 가축 또는 애완용 동물이다. 다른 구체적 실시양태에서, 치료할 개체는 말, 양, 소 또는 수송아지, 돼지, 개 또는 고양이이다.
4.1.3 조합 요법
사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애, 예를 들어 전신 사르코이드증의 치료는 하나 이상의 제2 요법 (예를 들어, 제2 치료제)과 조합된 단리된 태반 세포, 특히 하기 섹션 4.2에 상세하게 기재된 단리된 태반 세포 (PDAC)를 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 투여하는 것을 포함할 수 있다.
본원에 제공된 조합 요법은 요법이 대상체에게 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 예를 들어, 제1 요법은 제2 요법의 투여 전에 (예를 들어, 1분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주 또는 12주 전에), 그와 동시에, 또는 그 후에 (예를 들어, 1분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주 또는 12주 후에), 주어진 질환을 가졌거나, 갖거나 또는 그에 걸리기 쉬운 대상체에게 투여될 수 있다. 임의의 추가의 요법이 다른 추가의 요법과 함께 임의의 순서로 투여될 수 있다.
특정 실시양태에서, 제2 치료제는 TNF-α 억제제 (예를 들어, 인플릭시맙 또는 아달리무맙), 항말라리아제 (예를 들어, 클로로퀸 또는 히드록시클로로퀸), 탈리도미드, 아자티오프린, 미코페놀레이트, 시클로포스파미드, 클로람부실, 메토트렉세이트, 포칼린, 일로프로스트, 메토트렉세이트, 니코틴, 탈리도미드, 암브리센탄 (예를 들어, 레타이리스), 보센탄, 아토르바스타틴, 펜톡시필린, 아달리무맙, 리툭시맙, 스텔라라 (예를 들어, 우스테키누맙), 아비프타딜, 아프레밀라스트, 레미케이드, 휴미라, 성장 인자, 케모카인, 시토카인, 세포 생성물, 탈메틸화 작용제, 및 줄기 세포의 분화를 자극하는 것으로 현재 알려져 있거나 나중에 결정되는 다른 인자, 인슐린-유사 성장 인자 (IGF), 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 표피 성장 인자 (EGF), 섬유모세포 성장 인자 (FGF), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 간세포 성장 인자 (HGF), 인터류킨 18 (IL-8), 항혈전형성제 (예를 들어, 헤파린, 헤파린 유도체, 우로키나제, 또는 PPack (덱스트로페닐알라닌 프롤린 아르기닌 클로로메틸케톤), 항트롬빈 화합물, 혈소판 수용체 길항제, 항-트롬빈 항체, 항-혈소판 수용체 항체, 아스피린, 디피리다몰, 프로타민, 히루딘, 프로스타글란딘 억제제, 및/또는 혈소판 억제제), 항아폽토시스제 (예를 들어, 에리트로포이에틴 (Epo), Epo 유도체 또는 유사체, 또는 그의 염, 트롬보포이에틴 (Tpo), IGF-I, IGF-II, 간세포 성장 인자 (HGF) 또는 카스파제 억제제), 항염증제 (예를 들어, p38 MAP 키나제 억제제, 스타틴, IL-6 억제제, IL-1 억제제, 페미로라스트, 트라닐라스트, 레미케이드, 시롤리무스 및/또는 비스테로이드성 항염증성 화합물 (예를 들어, 아세틸살리실산, 이부프로펜, 테폭살린, 톨메틴 또는 수프로펜)), 면역억제제 또는 면역조절제 (예를 들어, 칼시뉴린 억제제, 예를 들어 시클로스포린, 타크롤리무스, mTOR 억제제, 예컨대 시롤리무스 또는 에베롤리무스; 항증식제, 예컨대 아자티오프린 및/또는 미코페놀레이트 모페틸; 코르티코스테로이드, 예를 들어 프레드니손, 프레드니솔론 또는 히드로코르티손; 스테로이드-절약제, 예컨대 아자티오프린 및 메토트렉세이트; 항체, 예컨대 모노클로날 항-IL-2Rα 수용체 항체, 바실릭시맙, 다클리주마, 폴리클로날 항-T-세포 항체, 예컨대 항-흉선세포 글로불린 (ATG), 항-림프구 글로불린 (ALG), 및/또는 모노클로날 항-T 세포 항체 OKT3, 또는 미국 특허 번호 7,468,276 및 미국 특허 출원 공보 번호 2007/0275362 (이들 각각의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같은 부착성 태반 줄기 세포), 및/또는 항산화제 (예를 들어, 프로부콜; 비타민 A, C 및/또는 E, 조효소 Q-10, 글루타티온, L 시스테인, N-아세틸시스테인, 또는 임의의 상기한 것들의 항산화제 유도체, 유사체 또는 염)를 포함한다. 특정 실시양태에서, PDAC를 포함하는 치료 조성물은 하나 이상의 추가의 세포 유형, 예를 들어 성체 세포 (예를 들어, 섬유모세포 또는 내배엽 세포), 줄기 세포 및/또는 전구 세포를 추가로 포함한다. 이러한 치료제 및/또는 하나 이상의 추가 유형의 세포는 이를 필요로 하는 개체에게 개별적으로, 또는 2종 이상의 이러한 화합물 또는 작용제의 조합물로 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 제2 치료제는 항염증제, 스테로이드, 면역 억제제 및/또는 항생제이다. 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환, 장애 또는 병태의 치료에 유용한 항염증성 약물의 예는 메살라민, 5-ASA (5-아미노살리실산) 작용제 (예를 들어, 아사콜® (메살라민, 지연-방출), 디펜툼 (오살라진), 펜타사® (메살라민 제어-방출)), 술파살라진 (5-ASA와 술파피리딘의 조합물), 항염증성 항체 (예를 들어, 인플릭시맙 (레미케이드®)) 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환, 장애 또는 병태의 치료에 유용한 스테로이드의 예는 코르티손, 히드로코르티손, 프레디손, 메틸프레드니손 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 전형적으로, 당업계에서 실시되는 바와 같이, 스테로이드의 투여량은 우선 상대적으로 큰 용량으로 전달되고, 이어서 염증 진정시에 더 적은 투여량으로 전달된다. 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애에 유용한 면역 억제제의 예는 시클로스포린 A, 6-메르캅토퓨린 또는 아자티오프린을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 예를 들어 암피실린, 술폰아미드, 세팔로스포린, 테트라시클린 및/또는 메트로니다졸을 비롯한 임의의 항생제는 크론병의 치료에 사용될 수 있다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 제2 요법은 돼지 편충, 예를 들어 트리쿠리스 수이스의 난자의 투여이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 제2 요법은, 예를 들어 사르코이드증-관련 암을 치료하기 위한 항암 요법, 예를 들어 하나 이상의 화학요법 또는 화학요법 화합물이다. 이러한 다른 항암 요법은 상기 태반 세포, 예를 들어 PDAC의 투여와 동시에, 상기 투여와 동일한 치료 과정 동안, 또는 상기 투여와 별개로 개체에게 투여될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 상기 기타 항암 요법의 투여는 상기 태반 세포의 투여와 함께 순차적으로 투여된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 기타 항암 요법 또는 항암 요법들은 상기 태반 세포의 투여 전에 상기 개체에게 투여되며; 예를 들어 이러한 기타 항암 요법 과정은 개체에게 투여되어 단리된 태반 세포를 개체에게 투여하기 전에 완료된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 태반 세포는 상기 기타 항암 요법의 투여 전에 개체에게 투여되며; 예를 들어 태반 세포 과정은 상기 기타 항암 요법의 투여 전에 상기 개체에게 투여되어 상기 기타 항암 요법 또는 항암 요법들을 개체에게 투여하기 전에 완료된다.
구체적 실시양태에서, 항암제는 멜팔란 (L-페닐알라닌 머스타드 또는 L-PAM으로도 또한 공지됨; 상표명 알베르탄)이다. 따라서, 한 실시양태에서, 다발성 골수종을 갖는 개체의 치료 방법은 상기 개체에게 멜팔란을, 예를 들어 치료 유효 용량 또는 용량들의 멜팔란을 투여하는 것을 포함한다. 투여는 전형적으로 경구 또는 정맥내로 행해진다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 항암제는 탈리도미드이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 항암제는 아미노-치환 탈리도미드 유사체 또는 아미노-치환 이미다졸이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 항암제는 포말리도미드 (상표명 악티미드(ACTIMID)®로 판매됨); 레날리도미드 (상표명 레블리미드(REVLIMID)®로 판매됨); 또는 덱사메타손과 조합된 레날리도미드이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 항암 치료제는 보르테조밉 (벨케이드(VELCADE)®)이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 항암제는 멜팔란, 프레드니손 및 탈리도미드의 조합물을 포함한다 (개별적으로 또는 함께 투여됨). 또 다른 구체적 실시양태에서, 항암제는 보르테조밉, 멜팔란 및 프레드니손의 조합물이다 (개별적으로 또는 함께 투여됨).
다른 항암제는 당업계에 널리 공지되어 있다. 따라서, 다른 구체적 실시양태에서, 항암제는 다음을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다: 아시비신; 아클라루비신; 아코다졸 히드로클로라이드; 아크로닌; 아도젤레신; 알데스류킨; 알트레타민; 암보마이신; 아메탄트론 아세테이트; 암사크린; 아나스트로졸; 안트라마이신; 아스파라기나제; 아스페를린; 아자시티딘; 아제테파; 아조토마이신; 바티마스타트; 벤조데파; 비칼루타미드; 비산트렌 히드로클로라이드; 비스나피드 디메실레이트; 비젤레신; 블레오마이신 술페이트; 브레퀴나르 나트륨; 브로피리민; 부술판; 칵티노마이신; 칼루스테론; 카라세미드; 카르베티머; 카르보플라틴; 카르무스틴; 카루비신 히드로클로라이드; 카르젤레신; 세데핀골; 셀레콕시브 (COX-2 억제제); 클로람부실; 시롤레마이신; 시스플라틴; 클라드리빈; 크리스나톨 메실레이트; 시클로포스파미드; 시타라빈; 다카르바진; 닥티노마이신; 다우노루비신 히드로클로라이드; 데시타빈; 덱소르마플라틴; 데자구아닌; 데자구아닌 메실레이트; 디아지쿠온; 도세탁셀; 독소루비신; 독소루비신 히드로클로라이드; 드롤록시펜; 드롤록시펜 시트레이트; 드로모스타놀론 프로피오네이트; 두아조마이신; 에다트렉세이트; 에플로미틴 히드로클로라이드; 엘사미트루신; 엔로플라틴; 엔프로메이트; 에피프로피딘; 에피루비신 히드로클로라이드; 에르불로졸; 에소루비신 히드로클로라이드; 에스트라무스틴; 에스트라무스틴 포스페이트 나트륨; 에타니다졸; 에토포시드; 에토포시드 포스페이트; 에토프린; 파드로졸 히드로클로라이드; 파자라빈; 펜레티니드; 플록수리딘; 플루다라빈 포스페이트; 플루오로우라실; 플루로시타빈; 포스퀴돈; 포스트리에신 나트륨; 겜시타빈; 겜시타빈 히드로클로라이드; 히드록시우레아; 이다루비신 히드로클로라이드; 이포스파미드; 일모포신; 이프로플라틴; 이리노테칸; 이리노테칸 히드로클로라이드; 란레오티드 아세테이트; 레트로졸; 류프롤리드 아세테이트; 리아로졸 히드로클로라이드; 로메트렉솔 나트륨; 로무스틴; 로속산트론 히드로클로라이드; 마소프로콜; 메이탄신; 메클로레타민 히드로클로라이드; 메게스트롤 아세테이트; 멜렌게스트롤 아세테이트; 멜팔란; 메노가릴; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 메토트렉세이트 나트륨; 메토프린; 메투레데파; 미틴도미드; 미토카르신; 미토크로민; 미토길린; 미토말신; 미토마이신; 미토스퍼; 미토탄; 미톡산트론 히드로클로라이드; 미코페놀산; 노코다졸; 노갈라마이신; 오르마플라틴; 옥시수란; 파클리탁셀; 페가스파르가제; 펠리오마이신; 펜타무스틴; 페플로마이신 술페이트; 페르포스파미드; 피포브로만; 피포술판; 피록산트론 히드로클로라이드; 플리카마이신; 플로메스탄; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니무스틴; 프로카르바진 히드로클로라이드; 퓨로마이신; 퓨로마이신 히드로클로라이드; 피라조푸린; 리보프린; 사핀골; 사핀골 히드로클로라이드; 세무스틴; 심트라젠; 스파르포세이트 나트륨; 스파르소마이신; 스피로게르마늄 히드로클로라이드; 스피로무스틴; 스피로플라틴; 스트렙토니그린; 스트렙토조신; 술로페누르; 탈리소마이신; 테코갈란 나트륨; 탁소테레; 테가푸르; 텔록산트론 히드로클로라이드; 테모포르핀; 테니포시드; 테록시론; 테스토락톤; 티아미프린; 티오구아닌; 티오테파; 티아조푸린; 티라파자민; 토레미펜 시트레이트; 트레스톨론 아세테이트; 트리시리빈 포스페이트; 트리메트렉세이트; 트리메트렉세이트 글루쿠로네이트; 트립토렐린; 투불로졸 히드로클로라이드; 우라실 머스타드; 우레데파; 바프레오티드; 베르테포르핀; 빈블라스틴 술페이트; 빈크리스틴 술페이트; 빈데신; 빈데신 술페이트; 비네피딘 술페이트; 빈글리시네이트 술페이트; 빈류로신 술페이트; 비노렐빈 타르트레이트; 빈로시딘 술페이트; 빈졸리딘 술페이트; 보로졸; 제니플라틴; 지노스타틴 및 조루비신 히드로클로라이드.
다른 항암 약물은 다음을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다: 20-에피-1,25 디히드록시비타민 D3; 5-에티닐우라실; 아비라테론; 아클라루비신; 아실풀벤; 아데시페놀; 아도젤레신; 알데스류킨; ALL-TK 길항제; 알트레타민; 암바무스틴; 아미독스; 아미포스틴; 아미노레불린산; 암루비신; 암사크린; 아나그렐리드; 아나스트로졸; 안드로그라폴리드; 혈관신생 억제제; 길항제 D; 길항제 G; 안타렐릭스; 항-등쪽화 형태발생 단백질-1; 항안드로겐, 전립선 암종; 항에스트로겐; 안티네오플라스톤; 안티센스 올리고뉴클레오티드; 아피디콜린 글리시네이트; 아폽토시스 유전자 조절제; 아폽토시스 조절제; 무퓨린산; ara-CDP-DL-PTBA; 아르기닌 데아미나제; 아술라크린; 아타메스탄; 아트리무스틴; 악시나스타틴 1; 악시나스타틴 2; 악시나스타틴 3; 아자세트론; 아자톡신; 아자티로신; 바카틴 III 유도체; 발라놀; 바티마스타트; BCR/ABL 길항제; 벤조클로린; 벤조일스타우로스포린; 베타 락탐 유도체; 베타-알레틴; 베타클라마이신 B; 베툴린산; bFGF 억제제; 비칼루타미드; 비산트렌; 비스아지리디닐스페르민; 비스나피드; 비스트라텐 A; 비젤레신; 브레플레이트; 브로피리민; 부도티탄; 부티오닌 술폭시민; 칼시포트리올; 칼포스틴 C; 캄프토테신 유도체; 카페시타빈; 카르복스아미드-아미노-트리아졸; 카르복시아미도트리아졸; CaRest M3; CARN 700; 연골 유도된 억제제; 카르젤레신; 카세인 키나제 억제제 (ICOS); 카스타노스페르민; 세크로핀 B; 세트로렐릭스; 클로린; 클로로퀴녹살린 술폰아미드; 시카프로스트; 시스-포르피린; 클라드리빈; 클로미펜 유사체; 클로트리마졸; 콜리스마이신 A; 콜리스마이신 B; 콤브레타스타틴 A4; 콤브레타스타틴 유사체; 코나게닌; 크람베스시딘 816; 크리스나톨; 크립토피신 8; 크립토피신 A 유도체; 쿠라신 A; 시클로펜트안트라퀴논; 시클로플라탐; 시페마이신; 시타라빈 옥포스페이트; 세포용해 인자; 시토스타틴; 다클릭시맙; 데시타빈; 데히드로디뎀민 B; 데슬로렐린; 덱사메타손; 덱시포스파미드; 덱스라족산; 덱스베라파밀; 디아지쿠온; 디뎀닌 B; 디독스; 디에틸노르스페르민; 디히드로-5-아자시티딘; 디히드로탁솔, 9-; 디옥사마이신; 디페닐 스피로무스틴; 도세탁셀; 도코산올; 돌라세트론; 독시플루리딘; 독소루비신; 드롤록시펜; 드로나비놀; 두오카르마이신 SA; 엡셀렌; 에코무스틴; 에델포신; 에드레콜로맙; 에플로르니틴; 엘레멘; 에미테푸르; 에피루비신; 에프리스테라이드; 에스트라무스틴 유사체; 에스트로겐 효능제; 에스트로겐 길항제; 에타니다졸; 에토포시드 포스페이트; 엑세메스탄; 파드로졸; 파자라빈; 펜레티니드; 필그라스팀; 피나스테리드; 플라보피리돌; 플레젤라스틴; 플루아스테론; 플루다라빈; 플루오로다우노루니신 히드로클로라이드; 포르페니멕스; 포르메스탄; 포스트리에신; 포테무스틴; 가돌리늄 텍사피린; 갈륨 니트레이트; 갈로시타빈; 가니렐릭스; 젤라티나제 억제제; 겜시타빈; 글루타티온 억제제; 헵술팜; 헤레귤린; 헥사메틸렌 비스아세트아미드; 히페리신; 이반드론산; 이다루비신; 이독시펜; 이드라만톤; 일모포신; 일로마스타트; 이마티닙 (예를 들어, 글리벡(GLEEVEC)®), 이미퀴모드; 면역자극 펩티드; 인슐린-유사 성장 인자-1 수용체 억제제; 인터페론 효능제; 인터페론; 인터류킨; 이오벤구안; 아이오도독소루비신; 이포메아놀, 4-; 이로플락트; 이르소글라딘; 이소벤가졸; 이소호모할리콘드린 B; 이타세트론; 자스플라키놀리드; 카할랄리드 F; 라멜라린-N 트리아세테이트; 란레오티드; 레이나마이신; 레노그라스팀; 렌티난 술페이트; 레프톨스타틴; 레트로졸; 백혈병 억제 인자; 백혈구 알파 인터페론; 류프롤리드 + 에스트로겐 + 프로게스테론; 류프로렐린; 레바미솔; 리아로졸; 선형 폴리아민 유사체; 친유성 디사카라이드 펩티드; 친유성 백금 화합물; 리소클린아미드 7; 로바플라틴; 롬브리신; 로메트렉솔; 로니다민; 로속산트론; 록소리빈; 루르토테칸; 루테튬 텍사피린; 리소필린; 용해 펩티드; 마이탄신; 만노스타틴 A; 마리마스타트; 마소프로콜; 마스핀; 마트릴리신 억제제; 매트릭스 메탈로프로테이나제 억제제; 메노가릴; 메르바론; 메테렐린; 메티오니나제; 메토클로프라미드; MIF 억제제; 미페프리스톤; 밀테포신; 미리모스팀; 미토구아존; 미토락톨; 미토마이신 유사체; 미토나피드; 미토톡신 섬유모세포 성장 인자-사포린; 미톡산트론; 모파로텐; 몰그라모스팀; 에르비툭스, 인간 융모성 고나도트로핀; 모노포스포릴 지질 A+미코박테리아 세포벽 sk; 모피다몰; 머스타드 항암제; 미카퍼옥시드 B; 미코박테리아 세포벽 추출물; 미리아포론; N-아세틸디날린; N-치환된 벤즈아미드; 나파렐린; 나그레스팁; 날록손+펜타조신; 나파빈; 나프테르핀; 나르토그라스팀; 네다플라틴; 네모루비신; 네리드론산; 닐루타미드; 니사마이신; 산화질소 조절제; 니트록시드 항산화제; 니트룰린; 오블리메르센 (게나센스(GENASENSE)®); O6-벤질구아닌; 옥트레오티드; 오키세논; 올리고뉴클레오티드; 오나프리스톤; 온단세트론; 온단세트론; 오라신; 경구 시토카인 유도제; 오르마플라틴; 오사테론; 옥살리플라틴; 옥사우노마이신; 파클리탁셀; 파클리탁셀 유사체; 파클리탁셀 유도체; 팔라우아민; 팔미토일리족신; 팔미드론산; 파낙시트리올; 파노미펜; 파라박틴; 파젤립틴; 페가스파르가제; 펠데신; 펜토산 폴리술페이트 나트륨; 펜토스타틴; 펜트로졸; 페르플루브론; 페르포스파미드; 페릴릴 알콜; 페나지노마이신; 페닐아세테이트; 포스파타제 억제제; 피시바닐; 필로카르핀 히드로클로라이드; 피라루비신; 피리트렉심; 플라세틴 A; 플라세틴 B; 플라스미노겐 활성화제 억제제; 백금 착물; 백금 화합물; 백금-트리아민; 포르피머 나트륨; 포르피로마이신; 프레드니손; 프로필 비스-아크리돈; 프로스타글란딘 J2; 프로테아솜 억제제; 단백질 A-기반 면역 조절제; 단백질 키나제 C 억제제; 단백질 키나제 C 억제제, 미세조류; 단백질 티로신 포스파타제 억제제; 퓨린 뉴클레오시드 포스포릴라제 억제제; 푸르푸린; 피라졸로아크리딘; 피리독실화 헤모글로빈 폴리옥시에틸렌 접합체; raf 길항제; 랄티트렉세드; 라모세트론; ras 파르네실 단백질 트랜스퍼라제 억제제; ras 억제제; ras-GAP 억제제; 레텔립틴 탈메틸화; 레늄 Re 186 에티드로네이트; 리족신; 리보자임; RII 레틴아미드; 로히투킨; 로무르티드; 로퀴니멕스; 루비기논 B1; 루복실; 사핀골; 사인토핀; SarCNU; 사르코피톨 A; 사르그라모스팀; Sdi 1 모방체; 세무스틴; 노화 유도된 억제제 1; 센스 올리고뉴클레오티드; 신호 전달 억제제; 시조피란; 소부족산; 나트륨 보로캅테이트; 나트륨 페닐아세테이트; 솔베롤; 소마토메딘 결합 단백질; 소네르민; 스파르포스산; 스피카마이신 D; 스피로무스틴; 스플레노펜틴; 스폰지스타틴 1; 스쿠알라민; 스티피아미드; 스트로멜리신 억제제; 술피노신; 초활성 혈관활성 장 펩티드 길항제; 수라디스타; 수라민; 스와인소닌; 탈리무스틴; 타목시펜 메티오디드; 타우로무스틴; 타자로텐; 테코갈란 나트륨; 테가푸르; 텔루라피릴륨; 텔로머라제 억제제; 테모포르핀; 테니포시드; 테트라클로로데카옥시드; 테트라조민; 탈리블라스틴; 티오코랄린; 트롬보포이에틴; 트롬보포이에틴 모방체; 티말파신; 티모포이에틴 수용체 효능제; 티모트리난; 갑상선 자극 호르몬; 주석 에틸 에티오푸르푸린; 티라파자민; 티타노센 비클로라이드; 톱센틴; 토레미펜; 번역 억제제; 트레티노인; 트리아세틸우리딘; 트리시리빈; 트리메트렉세이트; 트립토렐린; 트로피세트론; 투로스테리드; 티로신 키나제 억제제; 티르포스틴; UBC 억제제; 우베니멕스; 비뇨생식동-유도된 성장 억제 인자; 우로키나제 수용체 길항제; 바프레오티드; 바리올린 B; 벨라레솔; 베라민; 베르딘; 베르테포르핀; 비노렐빈; 빈살틴; 비탁신; 보로졸; 자노테론; 제니플라틴; 질라스코르브 및 지노스타틴 스티말라머.
또 다른 실시양태에서, 조합 요법은 비스포스포네이트와 조합된 태반 세포의 투여를 포함한다. 한 실시양태에서, 비스포스포네이트는 클로드로네이트 및/또는 팔미드로네이트이다.
구체적 실시양태에서, 본원에 제공된 조합 요법은 하나 이상의 TNF-α 억제제 (예를 들어, 인플릭시맙, 아달리무맙), 코르티코스테로이드 (예를 들어, 프레드니손), PDE-4 억제제 (예를 들어, 아프레밀리아스트), IL-12 억제제, IL-23 억제제, 아비프타딜, IFN-γ 억제제 또는 항말라리아제 (예를 들어, 클로로퀸 또는 히드록시클로로퀸)와 조합된 태반 세포의 투여를 포함한다.
구체적 실시양태에서, 임의로 제2 요법 (예를 들어, 제2 치료제) 중 하나 이상과 조합된 상기 치료 유효량의 태반 세포는, 예를 들어 상기 개체 내의 하나 이상의 육아종의 수 또는 그의 중증도를 감소, 예를 들어 검출가능하게 감소시키거나, 또는 상기 육아종의 수 또는 그의 중증도의 증가 속도를 감소시킨다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 임의로 제2 요법 (예를 들어, 제2 치료제) 중 하나 이상과 조합된 상기 치료 유효량의 태반 세포는 단핵구, 대식세포 또는 활성화된 T-림프구의 수를 감소, 예를 들어 검출가능하게 감소시키거나, 또는 이들의 수의 증가 속도를 감소시킨다 (제2 요법 (예를 들어, 제2 치료제) 중 하나 이상과 조합됨). 또 다른 구체적 실시양태에서, 임의로 제2 요법 (예를 들어, 제2 치료제) 중 하나 이상과 조합된 상기 치료 유효량의 태반 세포는 상기 개체에서의 하나 이상의 TNF-α, IL-2, IL-12, IFN-γ, IL-1, IL-6, IL-15, 또는 Th1 반응의 수준을 감소, 예를 들어 검출가능하게 감소시키거나, 또는 이들의 수준의 증가 속도를 감소시킨다 (제2 요법 (예를 들어, 제2 치료제) 중 하나 이상과 조합됨).
4.2 단리된 태반 세포 및 단리된 태반 세포 집단
사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애를 갖는 개체의 치료에 유용한 단리된 태반 세포, 예를 들어 PDAC는, 조직 배양 기판에 부착되고, 다능 세포 또는 줄기 세포의 특성을 갖지만, 영양막이 아닌, 태반 또는 그의 일부로부터 얻을 수 있는 세포이다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 방법에서 유용한 단리된 태반 세포는 비-태반 세포 유형으로 분화되는 능력을 갖는다.
본원에 개시된 방법에서 유용한 단리된 태반 세포는 기원이 태아 또는 모체일 수 있다 (즉, 각각 태아 또는 모체의 유전자형을 가질 수 있다). 바람직하게는, 단리된 태반 세포 및 단리된 태반 세포의 집단은 태아 기원이다. 본원에 사용된 바와 같이, 어구 "태아 기원" 또는 "비-모체 기원"은 단리된 태반 세포 또는 단리된 태반 세포의 집단이 태아와 관련된, 즉 태아의 유전자형을 지니는 제대 또는 태반 구조물로부터 수득하였다는 것을 가리킨다. 본원에 사용된 바와 같이, 어구 "모체 기원"은 세포 또는 세포의 집단이 모체와 관련된, 예를 들어 모체 유전자형을 지니는 태반 구조물로부터 수득하였다는 것을 가리킨다. 단리된 태반 세포, 예를 들어 PDAC, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단은 기원이 단독으로 태아 또는 모체인 단리된 태반 세포를 포함할 수 있거나, 또는 태아 및 모체 기원 양쪽 모두의 단리된 태반 세포의 혼합 집단을 포함할 수 있다. 단리된 태반 세포, 및 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 하기 논의된 형태학적 특성, 마커 특성, 및 배양 특성에 의해 확인 및 선택할 수 있다. 특정 실시양태에서, 임의의 태반 세포, 예를 들어 본원에 기재된 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포는 수용자, 예를 들어 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애를 갖는 개체에 대해 자가유래의 것이다. 특정의 다른 실시양태에서, 임의의 태반 세포, 예를 들어 본원에 기재된 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포는 수용자, 예를 들어 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애를 갖는 개체에 대해 이종유래의 것이다.
4.2.1 물리적 및 형태학적 특징
본원에 기재된 단리된 태반 세포 (PDAC)는, 1차 배양 또는 세포 배양에서 배양될 때, 조직 배양 기판, 예를 들어 조직 배양 용기 표면 (예를 들어, 조직 배양 플라스틱에, 또는 세포외 매트릭스 또는 리간드, 예컨대 라미닌, 콜라겐 (예를 들어, 천연 또는 변성 콜라겐), 젤라틴, 피브로넥틴, 오르니틴, 비트로넥틴, 및 세포외 막 단백질 (예를 들어, 매트리겔(MATRIGEL)®, BD 디스커버리 랩웨어(BD Discovery Labware), 매사추세츠주 베드포드)로 코팅된 조직 배양 표면에 부착한다. 배양물 내의 단리된 태반 세포는 일반적으로 섬유모세포 모양의 성상 외관을 나타내고, 다수의 세포질 돌기가 중심 세포체로부터 확장된다. 그러나, 단리된 태반 세포가 섬유모세포보다 더 많은 수의 이같은 돌기를 나타내기 때문에, 상기 세포는 동일한 조건 하에 배양된 섬유모세포로부터 형태학적으로 구별가능하다. 형태학적으로, 단리된 태반 세포는 조혈 줄기 세포로부터 또한 구별가능한데, 조혈 줄기 세포는 배양 시 더욱 둥근 형태 또는 자갈 형태를 일반적으로 나타낸다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 방법에 유용한 단리된 태반 세포는, 성장 배지에서 배양될 때, 배아 유사체가 발달된다. 배아 유사체는 증식하는 단리된 태반 세포의 부착 층 상에서 성장할 수 있는 세포의 불연속적 클럼프이다. 용어 "배아 유사"는 배아 줄기 세포의 배양물로부터 성장하는 세포의 클럼프가 배아체와 유사하기 때문에 사용된다. 배아 유사체가 단리된 태반 세포의 증식하는 배양물에서 발달할 수 있는 성장 배지는, 예를 들어 DMEM-LG (예를 들어, 깁코로부터); 2% 태아 소 혈청 (예를 들어, 하이클론 랩스.로부터); 1x 인슐린-트랜스페린-셀레늄 (ITS); 1x 리놀레산-소 혈청 알부민 (LA-BSA); 10-9 M 덱사메타손 (예를 들어, 시그마로부터); 10-4 M 아스코르브산 2-포스페이트 (예를 들어, 시그마로부터); 표피 성장 인자 10 ng/mL (예를 들어, 알앤디 시스템즈로부터); 및 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF-BB) 10 ng/mL (예를 들어, 알앤디 시스템즈로부터)를 포함하는 배지를 포함한다.
4.2.2 세포 표면, 분자 및 유전자 마커
본원에 개시된 방법, 예를 들어 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애의 치료 방법에 유용한 단리된 태반 세포, 예를 들어 단리된 다능 태반 세포 또는 단리된 태반 줄기 세포, 및 상기 단리된 태반 세포의 집단은 다능 세포 또는 줄기 세포의 특성을 갖고, 세포 또는 줄기 세포를 포함하는 세포의 집단을 확인 및/또는 단리하는 데 사용될 수 있는 다수의 마커를 발현하는, 조직 배양 플라스틱-부착성 인간 태반 세포이다. 특정 실시양태에서, PDAC는, 예를 들어 시험관내 또는 생체내에서 혈관형성성이다. 본원에 기재된 단리된 태반 세포 및 태반 세포 집단 (즉, 2가지 이상의 단리된 태반 세포)은 태반 또는 그의 임의의 일부분 (예를 들어, 융모막, 태반엽 등)으로부터 직접 수득되는 태반 세포 및 태반 세포-함유 세포 집단을 포함한다. 단리된 태반 세포의 집단은 배양물 내의 단리된 태반 세포들 (즉, 2가지 이상)의 집단, 및 용기, 예를 들어 백 내의 집단을 또한 포함한다. 본원에 기재된 단리된 태반 세포는 골수-유래 중간엽 세포, 지방-유래 중간엽 줄기 세포, 또는 제대 혈액, 태반 혈액 또는 말초 혈액으로부터 수득된 중간엽 세포가 아니다. 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 태반 세포, 예를 들어 태반 다능 세포 및 태반 세포는, 예를 들어 미국 특허 번호 7,311,904; 7,311,905; 및 7,468,276; 및 미국 특허 출원 공보 번호 2007/0275362 (이들 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재되어 있다.
특정 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 단리된 태반 줄기 세포이다. 특정의 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 단리된 태반 다능 세포이다. 한 실시양태에서, 단리된 태반 세포, 예를 들어 PDAC는 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD34-, CD10+ 및 CD105+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 신경 표현형의 세포, 골형성 표현형의 세포 및/또는 연골형성 표현형의 세포로 분화되는 잠재력을 갖는다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD45- 또는 CD90+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD45- 및 CD90+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 태반 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD90+ 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 태반 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD90+ 및 CD45-이고, 즉 상기 세포는 CD34-, CD10+, CD45-, CD90+, CD105+ 및 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 CD34-, CD10+, CD45-, CD90+, CD105+, CD200+ 세포는 추가로 CD80- 및 CD86-이다.
또 다른 실시양태에서, 상기 태반 세포는 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD34-, CD10+, CD105+ 및 CD200+, 및 CD38-, CD45-, CD80-, CD86-, CD133-, HLA-DR,DP,DQ-, SSEA3-, SSEA4-, CD29+, CD44+, CD73+, CD90+, CD105+, HLA-A,B,C+, PDL1+, ABC-p+, 및/또는 OCT-4+ 중 하나 이상이다. 다른 실시양태에서, 상기 기재된 임의의 CD34-, CD10+, CD105+ 세포는 추가로 CD29+, CD38-, CD44+, CD54+, SH3+ 또는 SH4+ 중 하나 이상이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 세포는 추가로 CD44+이다. 상기 임의의 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포의 또 다른 구체적 실시양태에서, 세포는 추가로 CD117-, CD133-, KDR- (VEGFR2-), HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR-, 또는 프로그램화된 사멸-1 리간드 (PDL1)+ 중 하나 이상, 또는 그의 임의의 조합이다.
또 다른 실시양태에서, CD34-, CD10+, CD105+ 세포는 추가로 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-카드헤린저, CD184/CXCR4-, CD200+, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR-, HLA-G-, 또는 프로그램화된 사멸-1 리간드 (PDL1)+ 중 하나 이상, 또는 그의 임의의 조합이다. 또 다른 실시양태에서, CD34-, CD10+, CD105+ 세포는 추가로 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-카드헤린저, CD184/CXCR4-, CD200+, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR-, HLA-G-, 및 프로그램화된 사멸-1 리간드 (PDL1)+이다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 태반 세포는 유동 세포측정법에 의해 검출시 ABC-p+, 또는 RT-PCR에 의해 결정시 OCT-4+ (POU5F1+)이고, 여기서 ABC-p는 태반-특이적 ABC 수송체 단백질 (유방암 내성 단백질 (BCRP) 및 미톡산트론 내성 단백질 (MXR)로도 공지됨)이고, OCT-4는 옥타머-4 단백질 (POU5F1)이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 태반 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 결정시 SSEA3- 또는 SSEA4-이고, 여기서 SSEA3은 단계 특이적 배아 항원 3이고, SSEA4는 단계 특이적 배아 항원 4이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 태반 세포는 추가로 SSEA3- 및 SSEA4-이다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 태반 세포는 MHC-I+ (예를 들어, HLA-A,B,C+), MHC-II- (예를 들어, HLA-DP,DQ,DR-) 또는 HLA-G- 중 하나 이상이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 태반 세포는 MHC-I+ (예를 들어, HLA-A,B,C+), MHC-II- (예를 들어, HLA-DP,DQ,DR-) 및 HLA-G- 중 하나 이상이다.
본원에 개시된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포를 포함하는, 예를 들어 이러한 세포에 대해 풍부화된, 단리된 태반 세포의 집단, 또는 세포의 집단, 예를 들어 태반 세포의 집단이 또한 본원에 제공된다. 세포의 집단이 예를 들어 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98%의 단리된 CD10+, CD105+ 및 CD34- 태반 세포를 포함하는; 즉, 상기 집단 내의 세포의 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 98%가 단리된 CD10+, CD105+ 및 CD34- 태반 세포인, 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단이 바람직하다. 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 태반 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD90+ 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 태반 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출시 CD90+ 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 기재된 임의의 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD29+, CD38-, CD44+, CD54+, SH3+ 또는 SH4+ 중 하나 이상이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포, 또는 단리된 CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 태반 세포는 추가로 CD44+이다. 상기 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포를 포함하는 임의의 세포 집단의 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 추가로 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-카드헤린저, CD184/CXCR4-, CD200+, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR-, HLA-G-, 또는 프로그램화된 사멸-1 리간드 (PDL1)+ 중 하나 이상, 또는 그의 임의의 조합이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, CD34-, CD10+, CD105+ 세포는 추가로 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-카드헤린저, CD184/CXCR4-, CD200+, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR-, HLA-G-, 및 프로그램화된 사멸-1 리간드 (PDL1)+이다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, OCT-4+ 및 ABC-p+ 중의 하나 이상 또는 전부이고, 여기서 상기 단리된 태반 세포는 태반 조직의 물리적 및/또는 효소적 파괴에 의해 수득된다. 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 OCT-4+ 및 ABC-p+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 OCT-4+ 및 CD34-이고, 여기서 상기 단리된 태반 세포는 다음 특징 중 적어도 하나를 갖는다: CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH3+, SH4+, SSEA3- 및 SSEA4-. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 OCT-4+, CD34-, CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH3+, SH4+, SSEA3- 및 SSEA4-이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 OCT-4+, CD34-, SSEA3- 및 SSEA4-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 OCT-4+ 및 CD34-이고, SH2+ 또는 SH3+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 OCT-4+, CD34-, SH2+ 및 SH3+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 OCT-4+, CD34-, SSEA3-, 및 SSEA4-이고, SH2+ 또는 SH3+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 OCT-4+ 및 CD34-, 및 SH2+ 또는 SH3+이고, CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SSEA3-, 또는 SSEA4- 중 하나 이상이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 OCT-4+, CD34-, CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SSEA3- 및 SSEA4-, 및 SH2+ 또는 SH3+이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 SH2+, SH3+, SH4+ 및 OCT-4+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD44+, CD54+, CD90+, CD34-, CD45-, SSEA3-, 또는 SSEA4-이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3- 및 SSEA4-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3- 및 SSEA4-, CD10+, CD29+, CD44+, CD54+, CD90+, OCT-4+, CD34- 또는 CD45-이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, 및 SH4+이고; 상기 단리된 태반 세포는 추가로 OCT-4+, SSEA3- 또는 SSEA4- 중 하나 이상이다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 CD200+ 또는 HLA-G-이다. 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 CD200+ 및 HLA-G-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 추가로 CD73+ 및 CD105+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 줄기 세포는 CD34-, CD38-, CD45-, CD73+ 및 CD105+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+ 또는 HLA-G- 태반 세포는 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 단리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단에서 배아 유사체의 형성을 촉진한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 줄기 또는 다능 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 CD200+, HLA-G- 줄기 세포를 포함하는, 예를 들어 이에 대해 풍부화된 세포의 집단이다. 구체적 실시양태에서, 상기 집단은 태반 세포의 집단이다. 다양한 실시양태에서, 상기 세포 집단 내의 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%가 단리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포이다. 바람직하게는, 상기 세포 집단 내의 세포의 적어도 약 70%가 단리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포이다. 보다 바람직하게는, 상기 세포의 적어도 약 90%, 95% 또는 99%가 단리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포이다. 세포 집단의 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD73+ 및 CD105+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포는 또한 CD34-, CD38-, CD45-, CD73+ 및 CD105+이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 세포 집단은 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우 하나 이상의 배아 유사체를 생성한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포 집단은 줄기 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포는 이러한 마커들을 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 CD73+, CD105+ 및 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 HLA-G-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 CD34-, CD38-, CD45-, 및 HLA-G-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD73+, CD105+ 및 CD200+ 태반 세포는 단리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단이 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 단리된 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 이러한 마커들을 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 단리된 CD73+, CD105+, CD200+ 태반 세포를 포함하는, 예를 들어 이러한 세포에 대해 풍부화된 세포의 집단이다. 다양한 실시양태에서, 상기 세포 집단 중 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%의 세포는 단리된 CD73+, CD105+, CD200+ 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 70%의 상기 세포는 단리된 CD73+, CD105+, CD200+ 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 90%, 95% 또는 99%의 세포는 단리된 CD73+, CD105+, CD200+ 태반 세포이다. 상기 집단의 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 HLA-G-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38-, CD45- 및 HLA-G-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단은 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양될 때 하나 이상의 배아 유사체를 생성한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 태반 세포의 집단은 줄기 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 태반 세포의 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
특정의 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, OCT-4+, HLA-G- 또는 ABC-p+ 중 하나 이상이다. 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, 및 OCT-4+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD45-, CD54+, SH2+, SH3+, 및 SH4+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD45-, CD54+, SH2+, SH3+, SH4+ 및 OCT-4+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, HLA-G-, SH2+, SH3+, SH4+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 OCT-4+ 및 ABC-p+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 SH2+, SH3+, SH4+ 및 OCT-4+이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 OCT-4+, CD34-, SSEA3-, 및 SSEA4-이다. 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 OCT-4+, CD34-, SSEA3- 및 SSEA4- 태반 세포는 추가로 CD10+, CD29+, CD34-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+ 및 SH4+이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 OCT-4+ 및 CD34-이고, SH3+ 또는 SH4+이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 CD34-, 및 CD10+, CD29+, CD44+, CD54+, CD90+ 또는 OCT-4+이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 CD200+ 및 OCT-4+이다. 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 CD73+ 및 CD105+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 HLA-G-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 CD34-, CD38-, CD45-, CD73+, CD105+ 및 HLA-G-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 단리된 세포를 포함하는 태반 세포의 집단을 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양할 때 상기 집단에 의한 하나 이상의 배아 유사체의 생성을 촉진한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 줄기 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 이들 특성을 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 CD200+, OCT-4+ 태반 세포를 포함하는, 예를 들어 이러한 세포에 대해 풍부화된 세포의 집단이다. 다양한 실시양태에서, 상기 세포 집단 중 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%의 세포는 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 적어도 약 70%의 상기 세포는 상기 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 80%, 90%, 95%, 또는 99%의 세포는 상기 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포이다. 단리된 집단의 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 추가로 CD73+ 및 CD105+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 추가로 HLA-G-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38-, CD45-, CD73+, CD105+ 및 HLA-G-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 세포 집단은 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양할 때 하나 이상의 배아 유사체를 생성한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단은 단리된 CD200+, OCT-4+ 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 CD73+, CD105+ 및 HLA-G-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD73+, CD105+ 및 HLA-G- 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 추가로 OCT-4+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 추가로 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38-, CD45-, OCT-4+ 및 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 상기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단을 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양할 때 상기 집단에서 배아 유사체의 형성을 촉진한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 단리된 CD73+, CD105+ 및 HLA-G- 태반 세포를 포함하는, 예를 들어 이러한 세포에 대해 풍부화된 세포의 집단이다. 다양한 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%의 세포는 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 70%의 세포는 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 90%, 95% 또는 99%의 세포는 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포이다. 상기 집단의 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 추가로 OCT-4+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 추가로 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38-, CD45-, OCT-4+ 및 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단은 CD73+, CD105+, HLA-G- 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 CD73+ 및 CD105+이고, 상기 CD73+, CD105+ 세포를 포함하는 단리된 태반 세포의 집단이 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 추가로 OCT-4+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 추가로 OCT-4+, CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 상기 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 이들 특성을 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 CD73+, CD105+인 단리된 태반 세포를 포함하는, 예를 들어 이러한 세포에 대해 풍부화된 세포의 집단이고, 상기 세포를 포함하는 단리된 태반 세포의 집단이 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진한다. 다양한 실시양태에서, 상기 세포 집단 내의 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%가 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 70%의 세포는 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 90%, 95% 또는 99%의 세포는 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포이다. 상기 집단의 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 추가로 OCT-4+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38-, CD45-, OCT-4+ 및 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단은 상기 단리된 CD73+, CD105+ 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 OCT-4+이고, 상기 세포를 포함하는 단리된 태반 세포의 집단이 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진한다. 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포는 추가로 CD73+ 및 CD105+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포는 추가로 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포는 추가로 CD73+, CD105+, CD200+, CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포는 OCT-4+ 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포는 이들 특성을 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 OCT-4+인 단리된 태반 세포를 포함하는, 예를 들어 이러한 세포에 대해 풍부화된 세포의 집단이고, 상기 세포를 포함하는 단리된 태반 세포의 집단이 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진한다. 다양한 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%의 세포는 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 70%의 세포는 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 80%, 90%, 95% 또는 99%의 세포는 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포이다. 상기 집단의 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포는 추가로 CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포는 추가로 CD73+ 및 CD105+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포는 추가로 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 OCT-4+ 태반 세포는 추가로 CD73+, CD105+, CD200+, CD34-, CD38- 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포 집단은 상기 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 단리된 HLA-A,B,C+, CD45-, CD133- 및 CD34- 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단이고, 여기서 상기 단리된 세포의 집단 내의 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%의 세포는 단리된 HLA-A,B,C+, CD45-, CD133- 및 CD34- 태반 세포이다. 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단은 HLA-A,B,C+, CD45-, CD133- 및 CD34- 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 비-모체 기원이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포의 집단은 실질적으로 모체 성분을 함유하지 않고, 예를 들어 상기 단리된 태반 세포의 집단 중 적어도 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 상기 세포가 비-모체 기원이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 단리된 CD10+, CD13+, CD33+, CD45-, CD117- 및 CD133- 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단이고, 여기서 상기 세포 집단 내의 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%의 세포는 상기 단리된 CD10+, CD13+, CD33+, CD45-, CD117- 및 CD133- 태반 세포이다. 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단은 상기 단리된 태반 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 CD10+, CD13+, CD33+, CD45-, CD117- 및 CD133- 태반 줄기 세포는 비-모체 기원이며, 즉 태아 유전자형을 갖는다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포의 집단 중 적어도 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 상기 세포는 비-모체 기원이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단은 이들 특성을 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 단리된 CD10-, CD33-, CD44+, CD45- 및 CD117- 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 단리된 태반 세포를 포함하는, 예를 들어 이러한 세포에 대해 풍부화된 세포의 집단이고, 여기서 상기 세포 집단 내의 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%의 세포는 단리된 CD10-, CD33-, CD44+, CD45-, 및 CD117- 태반 세포이다. 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단은 상기 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 비-모체 기원이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 상기 세포는 비-모체 기원이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 단리된 CD10-, CD13-, CD33-, CD45- 및 CD117- 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 단리된 CD10-, CD13-, CD33-, CD45- 및 CD117- 태반 세포를 포함하는, 예를 들어 이러한 세포에 대해 풍부화된 세포의 집단이고, 여기서 상기 집단 내의 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 적어도 약 99%의 세포는 CD10-, CD13-, CD33-, CD45- 및 CD117- 태반 세포이다. 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단은 상기 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 비-모체 기원이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 상기 세포는 비-모체 기원이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단은 이들 특성을 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 HLA A,B,C+, CD45-, CD34- 및 CD133-이고, 추가로 CD10+, CD13+, CD38+, CD44+, CD90+, CD105+, CD200+ 및/또는 HLA-G-, 및/또는 CD117 음성이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에서 유용한 세포 집단은 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단이고, 여기서 상기 집단 내의 적어도 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 약 99%의 세포는, HLA A,B,C-, CD45-, CD34-, CD133-이고, 추가로 CD10, CD13, CD38, CD44, CD90, CD105, CD200 양성, 및/또는 CD117 및/또는 HLA-G 음성인 단리된 태반 세포이다. 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단은 상기 세포가 아닌 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 비-모체 기원이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 상기 세포는 비-모체 기원이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단은 이들 마커를 나타내지 않는 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 항체 결합에 의해 결정시 CD200+ 및 CD10+이고, 항체 결합 및 RT-PCR 둘 모두에 의해 결정 시 CD117-인 단리된 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는, CD10+, CD29-, CD54+, CD200+, HLA-G-, MHC 클래스 I+ 및 β-2-마이크로글로불린+인 단리된 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 태반 세포이고, 여기서 하나 이상의 세포 마커의 발현은 중간엽 줄기 세포 (예를 들어, 골수-유래 중간엽 줄기 세포)보다 적어도 2배 더 높다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 비-모체 기원이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단 중 적어도 약 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 상기 세포는 비-모체 기원이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는, CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, CD80-, CD86-, CD103-, CD104-, CD105+, CD106/VCAM+, CD144/VE-카드헤린저, CD184/CXCR4-, β2-마이크로글로불린저, MHC-I저, MHC-II-, HLA-G저 및/또는 PDL1저 중 하나 이상인 단리된 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포이다. 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 적어도 CD29+ 및 CD54+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 적어도 CD44+ 및 CD106+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 적어도 CD29+이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 세포 집단은 단리된 태반 세포를 포함하고, 상기 세포 집단의 세포의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99%는 CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62-E-, CD62-L-, CD62-P-, CD80-, CD86-, CD103-, CD104-, CD105+, CD106/VCAM+, CD144/VE-카드헤린약, CD184/CXCR4-, β2-마이크로글로불린약, HLA-I약, HLA-II-, HLA-G약 및/또는 PDL1약 중 하나 이상인 단리된 태반 세포이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포 집단 내의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 세포는 CD10+, CD29+, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62-E-, CD62-L-, CD62-P-, CD80-, CD86-, CD103-, CD104-, CD105+, CD106/VCAM+, CD144/VE-카드헤린약, CD184/CXCR4-, β2-마이크로글로불린약, MHC-I약, MHC-II-, HLA-G약, 및 PDL1약다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는, CD10+, CD29+, CD34-, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4-, OCT-4+, 및 ABC-p+ 중 하나 이상 또는 전부인 단리된 태반 세포이고, 여기서 ABC-p는 태반-특이적 ABC 수송체 단백질 (유방암 내성 단백질 (BCRP) 및 미톡산트론 내성 단백질 (MXR)로도 공지됨)이고, 상기 단리된 태반 세포는 제대혈을 빼내고 잔여 혈액을 제거하기 위해 관류시킨 포유동물, 예를 들어 인간 태반의 관류에 의해 수득한다.
임의의 상기 특성의 또 다른 구체적 실시양태에서, 세포 마커 (예를 들어, 분화 클러스터 또는 면역원성 마커)의 발현은 유동 세포측정법에 의해 결정하고; 또 다른 구체적인 특정 실시양태에서, 마커의 발현은 RT-PCR에 의해 결정한다.
유전자 프로파일링에서, 단리된 태반 세포, 및 단리된 태반 세포의 집단이 다른 세포, 예를 들어 중간엽 줄기 세포, 예를 들어 골수-유래 중간엽 줄기 세포와 구별된다는 것이 확인된다. 유전자의 발현이 골수-유래 중간엽 줄기 세포와 비교하여 단리된 태반 세포에서 또는 단리된 특정 제대 줄기 세포에서 유의하게 더 높은 하나 이상의 유전자의 발현을 기초로, 본원에 기재된 단리된 태반 세포가, 예를 들어 중간엽 줄기 세포로부터 구별될 수 있다. 특히, 본원에 제공된 치료 방법에 유용한 단리된 태반 세포는 세포가 동등한 조건 하에 성장할 때 그의 발현이 동일한 수의 골수-유래 중간엽 줄기 세포보다 단리된 태반 세포에서 유의하게 더 높은 (즉, 적어도 2배 더 높은) 하나 이상의 유전자의 발현을 기초로 하여 중간엽 줄기 세포, 예를 들어 골수-유래 중간엽 줄기 세포로부터 구별될 수 있고, 여기서 하나 이상의 유전자는 ACTG2, ADARB1, AMIGO2, ARTS-1, B4GALT6, BCHE, C11orf9, CD200, COL4A1, COL4A2, CPA4, DMD, DSC3, DSG2, ELOVL2, F2RL1, FLJ10781, GATA6, GPR126, GPRC5B, HLA-G, ICAM1, IER3, IGFBP7, IL1A, IL6, IL18, KRT18, KRT8, LIPG, LRAP, MATN2, MEST, NFE2L3, NUAK1, PCDH7, PDLIM3, PKP2, RTN1, SERPINB9, ST3GAL6, ST6GALNAC5, SLC12A8, TCF21, TGFB2, VTN, ZC3H12A, 또는 임의의 상기 유전자의 조합이다. 예를 들어, 미국 특허 출원 공보 번호 2007/0275362 (그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)를 참조한다. 특정 구체적 실시양태에서, 상기 하나 이상의 유전자의 상기 발현은 예를 들어 RT-PCR 또는 예를 들어 U133-A 마이크로어레이 (아피메트릭스)를 사용한 마이크로어레이 분석에 의해 결정된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 DMEM-LG (예를 들어, 깁코로부터); 2% 태아 소 혈청 (예를 들어, 하이클론 랩스.로부터); 1x 인슐린-트랜스페린-셀레늄 (ITS); 1x 리놀레산-소 혈청 알부민 (LA-BSA); 10-9 M 덱사메타손 (예를 들어, 시그마로부터); 10-4 M 아스코르브산 2-포스페이트 (예를 들어, 시그마로부터); 표피 성장 인자 10 ng/mL (예를 들어, 알앤디 시스템즈로부터); 및 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF-BB) 10 ng/mL (예를 들어, 알앤디 시스템즈로부터)를 포함하는 배지에서 많은 집단 배가, 예를 들어 약 3 내지 약 35 집단 배가 중 임의의 시점 동안 배양될 때 상기 하나 이상의 유전자를 발현한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포-특이적 또는 단리된 제대 세포-특이적 유전자는 CD200이다.
이러한 유전자에 대한 특정한 서열은 2008년 3월 진뱅크 등록 번호 NM_001615 (ACTG2), BC065545 (ADARB1), (NM_181847 (AMIGO2), AY358590 (ARTS-1), BC074884 (B4GALT6), BC008396 (BCHE), BC020196 (C11orf9), BC031103 (CD200), NM_001845 (COL4A1), NM_001846 (COL4A2), BC052289 (CPA4), BC094758 (DMD), AF293359 (DSC3), NM_001943 (DSG2), AF338241 (ELOVL2), AY336105 (F2RL1), NM_018215 (FLJ10781), AY416799 (GATA6), BC075798 (GPR126), NM_016235 (GPRC5B), AF340038 (ICAM1), BC000844 (IER3), BC066339 (IGFBP7), BC013142 (IL1A), BT019749 (IL6), BC007461 (IL18), (BC072017) KRT18, BC075839 (KRT8), BC060825 (LIPG), BC065240 (LRAP), BC010444 (MATN2), BC011908 (MEST), BC068455 (NFE2L3), NM_014840 (NUAK1), AB006755 (PCDH7), NM_014476 (PDLIM3), BC126199 (PKP-2), BC090862 (RTN1), BC002538 (SERPINB9), BC023312 (ST3GAL6), BC001201 (ST6GALNAC5), BC126160 또는 BC065328 (SLC12A8), BC025697 (TCF21), BC096235 (TGFB2), BC005046 (VTN) 및 BC005001 (ZC3H12A)에서 찾아볼 수 있다.
특정 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 ACTG2, ADARB1, AMIGO2, ARTS-1, B4GALT6, BCHE, C11orf9, CD200, COL4A1, COL4A2, CPA4, DMD, DSC3, DSG2, ELOVL2, F2RL1, FLJ10781, GATA6, GPR126, GPRC5B, HLA-G, ICAM1, IER3, IGFBP7, IL1A, IL6, IL18, KRT18, KRT8, LIPG, LRAP, MATN2, MEST, NFE2L3, NUAK1, PCDH7, PDLIM3, PKP2, RTN1, SERPINB9, ST3GAL6, ST6GALNAC5, SLC12A8, TCF21, TGFB2, VTN 및 ZC3H12A 각각을 동등한 조건 하에 배양되는 경우의 동일한 수의 골수-유래 중간엽 줄기 세포보다 검출가능하게 높은 수준으로 발현한다.
구체적 실시양태에서, 태반 세포는 CD200 및 ARTS1 (유형 1 종양 괴사 인자의 아미노펩티다제 조절제); ARTS-1 및 LRAP (백혈구-유래 아르기닌 아미노펩티다제); IL6 (인터류킨-6) 및 TGFB2 (형질전환 성장 인자, 베타 2); IL6 및 KRT18 (케라틴 18); IER3 (극초기 반응 3), MEST (중배엽 특이적 전사체 상동체) 및 TGFB2; CD200 및 IER3; CD200 및 IL6; CD200 및 KRT18; CD200 및 LRAP; CD200 및 MEST; CD200 및 NFE2L3 (핵 인자 (적혈구-유래 2)-유사 3); 또는 CD200 및 TGFB2를 동일한 수의 골수-유래 중간엽 줄기 세포 (BM-MSC)보다 검출가능하게 더 높은 수준으로 발현하고, 여기서 상기 골수-유래 중간엽 줄기 세포는 배양시에 상기 태반 줄기 세포가 겪은 계대배양 횟수와 동일한 횟수의 계대배양을 겪은 것이다. 다른 구체적 실시양태에서, 태반 세포는 ARTS-1, CD200, IL6 및 LRAP; ARTS-1, IL6, TGFB2, IER3, KRT18 및 MEST; CD200, IER3, IL6, KRT18, LRAP, MEST, NFE2L3, 및 TGFB2; ARTS-1, CD200, IER3, IL6, KRT18, LRAP, MEST, NFE2L3, 및 TGFB2; 또는 IER3, MEST 및 TGFB2를 동일한 수의 골수-유래 중간엽 줄기 세포 (BM-MSC)보다 검출가능하게 더 높은 수준에서 발현하고, 여기서 상기 골수-유래 중간엽 줄기 세포는 배양시에 상기 단리된 태반 세포가 겪은 계대배양 횟수와 동일한 횟수의 계대배양을 겪은 것이다.
상기 언급된 유전자들의 발현을 표준 기술에 의해 평가할 수 있다. 예를 들어, 통상적인 기술에 의해 유전자(들)의 서열을 기초로 하는 프로브들을 개별적으로 선택하여 구축할 수 있다. 예를 들어, 유전자들 중 하나 이상에 대한 프로브를 포함하는 마이크로어레이, 예를 들어 아피메트릭스의 진칩(GENECHIP)® 인간 게놈 U133A 2.0 어레이, 또는 아피메트릭스의 진칩® 인간 게놈 U133 플러스 2.0 (캘리포니아주 산타 클라라) 상에서 유전자의 발현을 평가할 수 있다. 특정 진뱅크 등록 번호에 대한 서열이 수정되더라도 이러한 유전자들의 발현을 평가할 수 있는데, 이는 수정된 서열에 대해 특이적인 프로브가 널리 공지된 표준 기술을 사용하여 쉽게 생성될 수 있기 때문이다.
이러한 유전자들의 발현 수준은 단리된 태반 세포의 집단의 정체를 확인하는 것, 적어도 다수의 단리된 태반 세포를 포함하는 것으로 세포의 집단을 확인하는 것 등에 사용될 수 있다. 정체가 확인된, 단리된 태반 세포의 집단은 클론성일 수 있고, 예를 들어 단일 단리된 태반 세포로부터 확장된 단리된 태반 세포의 집단, 예를 들어 여러 단리된 태반 세포들로부터 확장된 단리된 태반 세포를 단독으로 포함하는 세포의 집단, 또는 본원에 기재된 바와 같은 단리된 태반 세포들 및 하나 이상의 또 다른 유형의 세포를 포함하는 세포의 집단일 수 있다.
이러한 유전자들의 발현 수준은 단리된 태반 세포의 집단을 선택하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 열거된 유전자들 중 하나 이상의 발현이 중간엽 줄기 세포들의 동등한 집단에서보다 세포의 집단으로부터의 샘플에서 유의하게 더 높은 경우 세포들, 예를 들어 클론-확장 세포의 집단이 선택될 수 있다. 이같은 선택은 다수의 단리된 태반 세포 집단, 정체가 공지되지 않은 다수의 세포의 집단 등으로부터의 집단의 선택일 수 있다.
단리된 태반 세포를 하나 이상의 이같은 유전자의 발현 수준을 기초로, 예를 들어 중간엽 줄기 세포 대조군에서의 상기 하나 이상의 유전자의 발현 수준, 예를 들어 동일한 개수의 골수-유래 중간엽 줄기 세포에서의 상기 하나 이상의 유전자의 발현 수준과 비교하여 선택할 수 있다. 한 실시양태에서, 동일한 수의 중간엽 줄기 세포를 포함하는 샘플에서의 상기 하나 이상의 유전자의 발현 수준이 대조군으로 사용된다. 또 다른 실시양태에서, 특정 조건 하에 시험된 단리된 태반 세포에 대한 대조군은 상기 조건 하에서의 중간엽 줄기 세포에서의 상기 하나 이상의 유전자의 발현 수준을 나타내는 수치이다.
본원에 기재된 단리된 태반 세포는, 예를 들어 DMEM-LG (깁코), 2% 태아 소 혈청 (FCS) (하이클론 래보러토리즈), 1x 인슐린-트랜스페린-셀레늄 (ITS), 1x 리놀렌산-소 혈청 알부민 (LA-BSA), 10-9 M 덱사메타손 (시그마), 10-4 M 아스코르브산 2-포스페이트 (시그마), 표피 성장 인자 (EGF) 10 ng/ml (알앤디 시스템즈), 혈소판 유래-성장 인자 (PDGF-BB) 10 ng/ml (알앤디 시스템즈), 및 100U 페니실린/1000U 스트렙토마이신을 포함하는 배지에서 1차 배양에서 또는 증식 동안 상기 특성 (예를 들어, 세포 표면 마커 및/또는 유전자 발현 프로파일의 조합)을 나타낸다.
본원에 개시된 임의의 태반 세포의 특정 실시양태에서, 세포는 인간 세포이다. 본원에 개시된 임의의 태반 세포의 특정 실시양태에서, 세포 마커 특성 또는 유전자 발현 특성은 인간 마커 또는 인간 유전자에 대한 것이다.
상기 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포 집단의 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포 또는 집단은 확장되었으며, 예를 들어 최소, 약 또는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20회로 계대배양되었거나, 또는 최소, 약 또는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38 또는 40 집단 배가로 증식하였다. 상기 단리된 태반 세포, 또는 단리된 줄기 세포를 포함하는 세포의 집단의 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포 또는 집단은 1차 분리주이다. 본원에 개시된, 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단의 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 태아 기원이다 (즉, 태아 유전자형을 갖는다).
특정 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 성장 배지, 즉, 증식을 촉진하도록 제조된 배지에서 배양 동안, 예를 들어 성장 배지에서 증식 동안 분화하지 않는다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 증식하기 위해 피더 층을 필요로 하지 않는다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단지 피더 세포층의 부재로 인해, 상기 단리된 태반 세포는 피더 층의 부재 하에 배양물에서 분화되지 않는다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 세포는 단리된 태반 세포이고, 여기서 다수의 상기 단리된 태반 세포는 알데히드 데히드로게나제 (ALDH) 활성 검정에 의해 평가시 알데히드 데히드로게나제에 대해 양성이다. 이러한 검정은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Bostian and Betts, Biochem. J., 173, 787, (1978)] 참조). 구체적 실시양태에서, 상기 ALDH 검정은 알데플루오르(ALDEFLUOR)® (알다젠, 인크.(Aldagen, Inc.), 오레곤주 애쉬랜드)를 알데히드 데히드로게나제 활성의 마커로 사용한다. 구체적 실시양태에서, 상기 다수는 상기 세포의 집단 내의 세포의 약 3% 내지 약 25%이다. 또 다른 실시양태에서, 알데플루오르®를 알데히드 데히드로게나제 활성의 지표로 사용하는 알데히드 데히드로게나제 활성 검정에 의해 평가시, 다수의 단리된 제대 세포가 알데히드 데히드로게나제에 대해 양성인, 단리된 제대 세포, 예를 들어 다능 단리된 제대 세포의 집단이 본원에서 제공된다. 구체적 실시양태에서, 상기 다수는 상기 세포의 집단 내의 세포의 약 3% 내지 약 25%이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포 또는 단리된 제대 세포의 상기 집단은 세포수가 대략 동일하고 동일한 조건 하에 배양된 골수-유래 중간엽 줄기 세포의 집단보다 3배 이상, 또는 5배 이상 더 높은 ALDH 활성을 나타낸다.
본원에 기재된 단리된 태반 세포를 포함하는 임의의 세포 집단의 특정 실시양태에서, 상기 세포 집단 내의 태반 세포에는 모체 유전자형을 지니는 세포가 실질적으로 없다; 예를 들어, 상기 집단 내의 태반 세포의 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%가 태아 유전자형을 갖는다. 본원에 기재된 단리된 태반 세포를 포함하는 임의의 세포 집단의 특정한 다른 실시양태에서, 상기 태반 세포를 포함하는 세포의 집단에는 모체 유전자형을 지니는 세포가 실질적으로 없다; 예를 들어, 상기 집단 내의 세포의 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%가 태아 유전자형을 갖는다.
임의의 상기 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 세포 집단의 구체적 실시양태에서, 상기 세포, 또는 상기 집단 내의 세포의 적어도 약 95% 또는 약 99%의 핵형이 정상이다. 임의의 상기 태반 세포 또는 세포 집단의 또 다른 구체적 실시양태에서, 세포, 또는 세포의 집단 내의 세포는 비-모체 기원이다.
임의의 상기 마커 조합을 보유하는, 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단이 임의의 비율로 조합될 수 있다. 임의의 2가지 이상의 상기 단리된 태반 세포의 집단이 조합되어 단리된 태반 세포의 집단을 형성할 수 있다. 예를 들어, 단리된 태반 세포의 집단이 상기 기재된 마커 조합들 중 하나에 의해 정의되는 단리된 태반 세포의 제1 집단, 및 또 다른 상기 기재된 마커 조합에 의해 정의되는 단리된 태반 세포의 제2 집단을 포함할 수 있고, 이때 상기 제1 집단과 제2 집단은 약 1:99, 2:98, 3:97, 4:96, 5:95, 10:90, 20:80, 30:70, 40:60, 50:50, 60:40, 70:30, 80:20, 90:10, 95:5, 96:4, 97:3, 98:2 또는 약 99:1의 비율로 조합된다. 유사한 방식으로, 임의의 3, 4, 5가지 또는 그 초과의 상기 기재된 단리된 태반 세포 또는 단리된 태반 세포의 집단이 조합될 수 있다.
본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포는 효소 소화 (섹션 4.3.3 참조) 또는 관류 (섹션 4.3.4 참조)를 사용하거나 사용하지 않으면서, 예를 들어 태반 조직의 파괴에 의해 얻을 수 있다. 예를 들어, 제대혈이 배출되었고 잔류 혈액이 제거되도록 관류된 포유동물 태반을 관류시키는 것; 상기 태반에 관류 용액을 관류시키는 것; 및 상기 관류 용액을 수집하는 것 (여기서, 관류 후의 상기 관류 용액은 단리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단을 포함함); 및 상기 세포의 집단으로부터 다수의 상기 단리된 태반 세포를 단리하는 것을 포함하는 방법에 따라 단리된 태반 세포의 집단이 생성될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 관류 용액은 제대 정맥 및 제대 동맥 둘 모두를 통과하고, 태반으로부터 삼출된 후 수집된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 관류 용액은 제대 정맥을 통과하고 제대 동맥으로부터 수집되거나, 또는 제대 동맥을 통과하고 제대 정맥으로부터 수집된다.
다양한 실시양태에서, 태반의 관류로부터 수득된 세포의 집단 내에 함유된 단리된 태반 세포는 상기 태반 세포의 집단의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 적어도 99.5%이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 관류에 의해 수집된 단리된 태반 세포는 태아 및 모체 세포를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 관류에 의해 수집된 단리된 태반 세포는 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 적어도 99.5% 태아 세포이다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 관류에 의해 수집된, 본원에 기재된 바와 같은 단리된 태반 세포의 집단을 포함하는 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 상기 조성물은 단리된 태반 세포를 수집하는 데 사용된 관류 용액의 적어도 일부분을 포함한다.
본원에 기재된 단리된 태반 세포의 단리된 집단은, 태반 조직을 조직-파괴 효소로 소화시켜 이러한 세포를 포함하는 태반 세포의 집단을 수득하고, 다수의 태반 세포를 나머지 상기 태반 세포로부터 단리하거나 또는 실질적으로 단리함으로써 생성될 수 있다. 본원에 기재된 단리된 태반 세포를 수득하기 위해 전체 태반 또는 그의 임의의 일부분이 소화될 수 있다. 예를 들어, 구체적 실시양태에서, 상기 태반 조직은 전체 태반, 양막, 융모막, 양막과 융모막의 조합물, 또는 임의의 상기의 것들의 조합물일 수 있다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 조직 파괴 효소는 트립신 또는 콜라게나제이다. 다양한 실시양태에서, 태반 소화로부터 수득된 세포의 집단 내에 함유된 단리된 태반 세포는 상기 태반 세포의 집단의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% 또는 적어도 99.5%이다.
상기 기재된 태반 세포의 단리된 집단, 및 단리된 태반 세포의 집단은 일반적으로 대략, 최소 또는 최대 1 x 105, 5 x 105, 1 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 5 x 108, 1 x 109, 5 x 109, 1 x 1010, 5 x 1010, 1 x 1011 또는 그 초과의 단리된 태반 세포를 포함할 수 있다. 본원에 기재된 치료 방법에 유용한 단리된 태반 세포의 집단은, 예를 들어 트리판 블루 배제에 의해, 예를 들어 결정시 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%의 생존 단리된 태반 세포를 포함한다.
4.2.3 배양물의 성장
섹션 4.4.2에서 본원에 기재된 단리된 태반 세포의 성장은, 임의의 포유동물 세포에 대해서와 같이, 성장에 선택된 특정 배지에 부분적으로 좌우된다. 최적의 조건 하에, 단리된 태반 세포는 전형적으로 약 1일 내에 개수가 배가된다. 배양 동안, 본원에 기재된 단리된 태반 세포는 배양 시의 기판, 예를 들어 조직 배양 컨테이너 (예를 들어, 조직 배양 접시 플라스틱, 피브로넥틴-코팅 플라스틱 등)의 표면에 부착하여, 단층을 형성한다.
본원에 기재된 단리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단은, 적합한 조건 하에 배양될 때, 배아 유사체를 형성할 수 있고, 즉, 세포의 3차원 클러스터가 부착 세포층의 상부에서 성장한다. 배아 유사체 내의 세포는 극초기 줄기 세포와 관련된 마커, 예를 들어 OCT-4, Nanog, SSEA3 및 SSEA4를 발현한다. 전형적으로 배아 유사체 내의 세포는 본원에 기재된 단리된 태반 세포가 부착성인 것과 같이 배양 기판에 대해 부착성이지 않지만, 배양 동안 이러한 부착 세포에 부착된 채 유지되는 경향이 있다. 배아 유사체 세포는 생존성을 위해 부착성의 단리된 태반 세포에 의존적인데, 이는 부착성의 단리된 태반 세포의 부재 하에 배아 유사체가 형성되지 않기 때문이다. 따라서 부착성의 단리된 태반 세포는 부착성의 단리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 성장을 촉진한다. 이론에 의해 제한되기를 원치 않으면서, 배아 줄기 세포가 피더 세포층 상에서 성장하는 것과 같이 배아 유사체의 세포가 부착성의 단리된 태반 세포 상에서 성장하는 것으로 생각된다.
4.3 단리된 태반 세포를 수득하는 방법
4.3.1 줄기 세포 수집 조성물
태반 세포, 예를 들어 상기 섹션 4.2.2에 기재된 단리된 태반 세포를 수집하고 단리하는 방법이 본원에 추가로 제공된다. 일반적으로, 이같은 세포는 생리학상 허용되는 용액, 예를 들어 세포 수집 조성물을 사용하여 포유동물 태반으로부터 수득한다. 예시적인 세포 수집 조성물이 관련된 미국 특허 출원 공보 번호 2007/0190042 (발명의 명칭 "Improved Medium for Collecting Placental Stem Cells and Preserving Organs")에 상세하게 기재되어 있고, 그 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
세포 수집 조성물은 세포, 예를 들어 본원에 기재된 단리된 태반 세포의 수집 및/또는 배양에 적합한 임의의 생리학상 허용되는 용액, 예를 들어 염수 용액 (예를 들어, 인산염-완충 염수, 크렙(Kreb) 용액, 변형된 크렙 용액, 이글(Eagle) 용액, 0.9% NaCl 등), 배양 배지 (예를 들어, DMEM, H.DMEM 등) 등을 포함할 수 있다.
세포 수집 조성물은 단리된 태반 세포를 보존하는 경향이 있는, 즉, 수집 시간에서 배양 시간까지, 단리된 태반 세포의 사멸을 방지하는 것, 또는 단리된 태반 세포의 사멸을 지연시키는 것, 사멸하는 세포의 집단 내의 단리된 태반 세포의 수를 감소시키는 것 등의 경향이 있는 하나 이상의 성분을 포함할 수 있다. 상기 성분은 예를 들어 아폽토시스 억제제 (예를 들어, 카스파제 억제제 또는 JNK 억제제); 혈관확장제 (예를 들어, 황산마그네슘, 항고혈압 약물, 심방 나트륨이뇨 펩티드 (ANP), 아드레노코르티코트로핀, 코르티코트로핀-방출 호르몬, 나트륨 니트로푸루시드, 히드랄라진, 아데노신 트리포스페이트, 아데노신, 인도메타신 또는 황산마그네슘, 포스포디에스테라제 억제제 등); 괴사 억제제 (예를 들어, 2-(1H-인돌-3-일)-3-펜틸아미노-말레이미드, 피롤리딘 디티오카르바메이트, 또는 클로나제팜); TNF-α 억제제; 및/또는 산소-운반 퍼플루오로탄소 (예를 들어, 퍼플루오로옥틸 브로마이드, 퍼플루오로데실 브로마이드 등)일 수 있다.
세포 수집 조성물은 하나 이상의 조직-분해 효소, 예를 들어 메탈로프로테아제, 세린 프로테아제, 중성 프로테아제, RNase, 또는 DNase 등을 포함할 수 있다. 이같은 효소는 콜라게나제 (예를 들어, 콜라게나제 I, II, III 또는 IV, 클로스트리듐 히스토리티쿰(Clostridium histolyticum)으로부터의 콜라게나제 등); 디스파제, 써모리신, 엘라스타제, 트립신, 리베라제(LIBERASE), 히알루로니다제 등을 포함하나, 이에 제한되지 것은 아니다.
세포 수집 조성물은 살균 유효량 또는 정균 유효량의 항생제를 포함할 수 있다. 비-제한적인 특정 실시양태에서, 항생제는 매크롤리드 (예를 들어, 토브라마이신), 세팔로스포린 (예를 들어, 세팔렉신, 세프라딘, 세푸록심, 세프프로질, 세파클로르, 세픽심 또는 세파드록실), 클라리트로마이신, 에리트로마이신, 페니실린 (예를 들어, 페니실린 V) 또는 퀴놀론 (예를 들어, 오플록사신, 시프로플록사신 또는 노르플록사신), 테트라시클린, 스트렙토마이신 등이다. 특정 실시양태에서, 항생제는 그람(+) 및/또는 그람(-) 박테리아, 예를 들어 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 등에 대해 활성이다. 한 실시양태에서, 항생제는 젠타마이신 (예를 들어, 배양 배지 내의 약 0.005% 내지 약 0.01% (w/v))이다.
세포 수집 조성물은 하기 화합물들 중 하나 이상을 또한 포함할 수 있다: 아데노신 (약 1 mM 내지 약 50 mM); D-글루코스 (약 20 mM 내지 약 100 mM); 마그네슘 이온 (약 1 mM 내지 약 50 mM); 분자량이 20,000 달톤을 초과하는 거대분자 (한 실시양태에서, 내피 온전성 및 세포 생존성을 유지하는 데 충분한 양으로 존재) (예를 들어, 합성 또는 천연 발생 콜로이드, 폴리사카라이드, 예컨대 덱스트란 또는 폴리에틸렌 글리콜 (약 25 g/l 내지 약 100 g/l, 또는 약 40 g/l 내지 약 60 g/l로 존재)); 항산화제 (예를 들어, 부틸화 히드록시아니솔, 부틸화 히드록시톨루엔, 글루타티온, 비타민 C 또는 비타민 E (약 25 μM 내지 약 100 μM로 존재)); 환원제 (예를 들어, N-아세틸시스테인 (약 0.1 mM 내지 약 5 mM로 존재)); 세포 내로의 칼슘 유입을 방지하는 작용제 (예를 들어, 베라파밀 (약 2 μM 내지 약 25 μM로 존재)); 니트로글리세린 (예를 들어, 약 0.05 g/l 내지 약 0.2 g/l); 항응고제 (한 실시양태에서, 잔류 혈액의 응고 방지를 돕는 데 충분한 양으로 존재) (예를 들어, 헤파린 또는 히루딘 (약 1000 유닛/l 내지 약 100,000 유닛/l의 농도로 존재)); 또는 아밀로리드 함유 화합물 (예를 들어, 아밀로리드, 에틸 이소프로필 아밀로리드, 헥사메틸렌 아밀로리드, 디메틸 아밀로리드 또는 이소부틸 아밀로리드 (약 1.0 μM 내지 약 5 μM로 존재)).
4.3.2 태반의 수집 및 취급
일반적으로, 인간 태반은 출산 후 그의 만출 직후에 회수된다. 바람직한 실시양태에서, 태반은 환자로부터 사전 동의 후에, 및 환자의 완전한 병력을 취하여 태반과 관련시킨 후에 회수된다. 바람직하게는, 병력은 분만 이후에 계속된다. 이러한 병력은 태반 또는 그로부터 수확된 단리된 태반 세포의 후속 사용을 조정하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 단리된 인간 태반 세포는, 병력에 비추어서, 태반과 관련된 영아 또는 영아의 부모, 형제자매 또는 기타 친척을 위한 개인화된 의약에 사용될 수 있다.
단리된 태반 세포의 회수 전에, 제대 혈액 및 태반 혈액은 바람직하게는 제거된다. 특정 실시양태에서, 분만 이후에 태반 내의 제대혈을 회수한다. 통상적인 제대혈 회수 방법이 태반에 적용될 수 있다. 전형적으로, 바늘 또는 캐뉼라를 사용하여 중력의 보조를 받아 태반을 방혈시킨다 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,372,581 (Anderson); 미국 특허 번호 5,415,665 (Hessel et al.) 참조). 바늘 또는 캐뉼라를 통상적으로 제대 정맥에 넣고, 태반으로부터 제대혈이 배출되는 것을 돕도록 태반을 부드럽게 마사지할 수 있다. 이러한 제대혈 회수는 상업적으로, 예를 들어 라이프뱅크 USA(LifeBank USA, 뉴저지주 시더 크놀)에서 수행할 수 있다. 바람직하게는, 제대혈 회수 동안의 조직 파괴를 최소화하도록 태반은 추가적인 조작 없이 중력에 의해 배출된다.
전형적으로, 예를 들어 관류 또는 조직 해리에 의한 제대혈의 회수 및 줄기 세포의 수집을 위해, 태반은 분만실 또는 출산실에서 또 다른 장소, 예를 들어 실험실로 수송된다. 태반은 바람직하게는 멸균 단열 수송 장치 (태반의 온도를 20-28℃ 사이에서 유지시킴)에서 수송되고, 예를 들어 근위 제대를 집게로 집은 태반을 멸균 집-락(zip-lock) 플라스틱 백에 넣은 다음, 이를 단열 용기에 넣는다. 또 다른 실시양태에서, 실질적으로 계류 중인 미국 특허 번호 7,147,626에 기재된 바와 같이 제대혈 수집 키트 내에서 태반이 수송된다. 바람직하게는, 태반은 분만 후 4시간 내지 24시간 내에 실험실로 전달된다. 특정 실시양태에서, 근위 제대를 바람직하게는 태반 원반 내로의 삽입부의 4-5 cm (센티미터) 이내에서, 제대혈 회수 전에 집게로 집는다. 또 다른 실시양태에서, 근위 제대를 제대혈 회수 후에, 그러나 태반의 추가적인 프로세싱 전에 집게로 집는다.
태반은 세포 수집 전에, 멸균 조건 하에 실온 또는 5℃ 내지 25℃의 온도에서 보관될 수 있다. 임의의 잔류 제대혈을 제거하기 위해 태반을 관류하기 전에 4시간 내지 24시간, 48시간 이하, 또는 48시간을 초과하는 시간의 기간 동안 태반이 보관될 수 있다. 한 실시양태에서, 만출 후 약 0시간 내지 약 2시간째에 태반이 수확된다. 태반은 바람직하게는 5℃ 내지 25℃의 온도에서 항응고제 용액 중에 보관된다. 적합한 항응고제 용액은 당업계에 널리 알려져 있다. 예를 들어, 헤파린 또는 와파린 나트륨 용액이 사용될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 항응고제 용액은 헤파린 용액 (예를 들어, 1:1000 용액 중 1% w/w)을 포함한다. 방혈된 태반은 바람직하게는 36시간 이하 동안 보관된 후, 태반 세포가 수집된다.
일단 일반적으로 상기와 같이 수집 및 제조되면, 포유동물 태반 또는 그의 일부분을 단리된 태반 세포를 수득하기 위해 임의의 당업계에 공지된 방식으로 처리할 수 있고, 예를 들어 관류시키거나 파괴할 수 있으며, 예를 들어 하나 이상의 조직 파괴 효소로 소화시킬 수 있다.
4.3.3 태반 조직의 물리적 파괴 및 효소적 소화
한 실시양태에서, 줄기 세포는 포유동물 태반으로부터 상기 기관의 일부분 또는 전체의 물리적 파괴에 의해 수집된다. 예를 들어, 태반 또는 그의 일부분을 예를 들어 압착하거나, 베어내거나, 다지거나, 주사위꼴로 자르거나, 잘게 자르거나, 침연시키는 것 등을 할 수 있다. 이어서, 조직을 배양하여 단리된 태반 세포의 집단을 수득할 수 있다. 전형적으로, 예를 들어 배양 배지, 염수 용액 또는 줄기 세포 수집 조성물을 사용하여 태반 조직을 파괴한다 (섹션 4.5.1 및 하기 참조).
물리적 파괴 및/또는 효소적 소화 및 줄기 세포 회수 전에 태반을 구성성분들로 해부할 수 있다. 단리된 태반 세포는 전체 태반으로부터를 비롯하여, 양막, 융모막, 제대, 태반엽, 또는 이들의 임의의 조합물의 전체 또는 일부분으로부터 수득될 수 있다. 바람직하게는, 단리된 태반 세포는 양막 및 융모막을 포함하는 태반 조직으로부터 수득된다. 전형적으로, 단리된 태반 세포는 태반 조직의 소형 블록, 예를 들어 부피가 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 또는 약 1000 입방 밀리미터인 태반 조직의 블록의 파괴에 의해 수득될 수 있다. 임의의 물리적 파괴 방법이 사용될 수 있고, 단, 파괴 방법은 예를 들어 트리판 블루 배제에 의해 결정될 때, 상기 기관 내의 세포 중 다수, 보다 바람직하게는 대다수, 보다 바람직하게는 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% 또는 99%가 생존성이도록 한다.
일반적으로, 단리된 부착성 태반 세포는 태반 또는 그의 일부분으로부터 만출 후 약 처음 3일 이내의 임의의 시점에 수집될 수 있지만, 바람직하게는 만출 후 약 8시간 내지 약 18시간 사이에 수집한다.
구체적 실시양태에서, 파괴된 조직은 단리된 태반 세포의 증식에 적합한 조직 배양 배지 중에서 배양된다 (예를 들어, 태반 세포, 예를 들어 PDAC의 배양을 기재하는 하기 섹션 4.6 참조).
또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 하나 이상의 조직 소화 효소를 사용함으로써 달성될 수 있는 효소적 소화를 포함하는 태반 조직의 물리적 파괴에 의해 수집된다. 태반 또는 그의 일부분을 또한 물리적으로 파괴하고 하나 이상의 효소로 소화시킨 다음, 생성된 물질을 세포 수집 조성물에 함침시키거나, 세포 수집 조성물 내로 혼합시킬 수 있다.
바람직한 세포 수집 조성물은 하나 이상의 조직 파괴 효소(들)를 포함한다. 태반 조직을 파괴하는 데 사용될 수 있는 효소는 파파인, 데옥시리보뉴클레아제, 세린 프로테아제, 예컨대 트립신, 키모트립신, 콜라게나제, 디스파제 또는 엘라스타제를 포함한다. 세린 프로테아제는 혈청 내의 알파 2 마이크로글로불린에 의해 억제될 수 있고, 따라서 소화에 사용된 배지는 통상적으로 혈청이 없다. EDTA 및 DNase는 효소 소화 절차에서 통상적으로 사용되어 세포 회수의 효율을 증가시킨다. 점성 소화물 내에 세포가 포획되는 것을 피하도록 소화물은 바람직하게는 희석된다.
조직 소화 효소의 임의의 조합물이 사용될 수 있다. 트립신을 사용한 소화를 위한 전형적인 농도는 0.1% 내지 약 2% 트립신, 예를 들어 약 0.25% 트립신을 포함한다. 프로테아제는 조합되어, 즉 2가지 이상의 프로테아제가 동일한 소화 반응에서 사용될 수 있거나, 또는 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 및 태반 다능 세포를 유리시키기 위해 순차적으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 태반 또는 그의 일부분은 먼저 약 1 내지 약 2 mg/ml의 적절한 양의 콜라게나제 I로 예를 들어 30분 동안 소화되고, 이어서 약 0.25% 농도의 트립신으로 예를 들어 10분 동안 37℃에서 소화된다. 바람직하게는 세린 프로테아제를 다른 효소의 사용에 이어서 연속적으로 사용한다.
또 다른 실시양태에서, 줄기 세포를 포함하는 줄기 세포 수집 조성물, 또는 줄기 세포 수집 조성물로의 줄기 세포의 단리 전에 조직이 파괴 및/또는 소화된 용액에 킬레이터, 예를 들어 에틸렌 글리콜 비스(2-아미노에틸 에테르)-N,N,N',N'-테트라아세트산 (EGTA) 또는 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA)을 첨가함으로써 조직을 추가로 파괴할 수 있다.
소화 후, 소화물을 예를 들어 배양 배지로 3회 세척하고, 세척된 세포를 배양 플라스크 내로 시딩한다. 이어서, 세포를 차등 부착에 의해 단리하고, 예를 들어 생존율, 세포 표면 마커, 분화 등에 대해 특성화한다.
전체 태반, 또는 태아 및 모체 세포 둘 모두를 포함하는 태반의 일부분의 경우 (예를 들어, 태반의 일부분이 융모막 또는 태반엽을 함유하는 경우)에, 단리된 태반 세포가 태아 및 모체 공급원 둘 모두로부터 유래된 태반 세포의 혼합물을 포함할 수 있다는 것이 이해될 것이다. 모체 세포를 포함하지 않거나 무시할 수 있는 개수의 모체 세포를 포함하는 태반의 일부분 (예를 들어, 양막)의 경우에, 이로부터 단리된 태반 세포는 거의 배타적으로 태아 태반 세포 (즉, 태아 유전자형을 갖는 태반 세포)를 포함할 것이다.
차등 트립신처리 (하기 섹션 4.3.5 참조)에 이어서, 1개 이상의 새로운 배양 용기에서 신선한 증식 배지 중에서 배양하는 것 (임의로 2차 차등 트립신처리 단계가 이어짐)에 의해 태반 세포, 예를 들어 상기 섹션 4.2.2에 기재된 태반 세포가 파괴된 태반 조직으로부터 단리될 수 있다.
4.3.4 태반 관류
태반 세포, 예를 들어 상기 섹션 4.2.2에 기재된 태반 세포를 또한 포유동물 태반의 관류에 의해 수득할 수 있다. 포유동물 태반을 관류하여 태반 세포를 수득하는 방법은, 예를 들어 미국 특허 번호 7,045,148 및 7,255,729 (Hariri), 및 미국 특허 출원 공보 번호 2007/0275362 및 2007/0190042에 개시되어 있고, 이들 각각의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
예를 들어 관류 용액으로 세포 수집 조성물을 사용하여, 예를 들어 태반 혈관을 통한 관류에 의해 태반 세포를 수집할 수 있다. 한 실시양태에서, 제대 동맥과 제대 정맥 중 어느 한쪽 또는 양쪽에 관류 용액을 통과시킴으로써 포유동물 태반이 관류된다. 태반을 통한 관류 용액의 흐름은 예를 들어 태반 내로의 중력 흐름을 사용하여 달성될 수 있다. 바람직하게는, 관류 용액을 펌프, 예를 들어 연동 펌프를 사용하여 태반을 통하도록 밀어 넣는다. 예를 들어, 멸균 연결 장치, 예컨대 멸균 튜빙(tubing)에 연결된 캐뉼라, 예를 들어 테플론(TEFLON)® 또는 플라스틱 캐뉼라가 제대 정맥에 삽관될 수 있다. 멸균 연결 장치는 관류 매니폴드에 연결된다.
관류에 대비하여, 바람직하게는 태반은 제대 동맥 및 제대 정맥이 태반의 최고점에 위치하는 방식으로 놓인다 (예를 들어, 매달린다). 태반 혈관계 및 주변 조직에 관류 유체를 통과시킴으로써 태반이 관류될 수 있다. 관류 유체를 제대 정맥에 통과시키고 제대 동맥으로부터 수집함으로써, 또는 관류 유체를 제대 동맥에 통과시키고 제대 정맥으로부터 수집함으로써, 태반이 또한 관류될 수 있다.
예를 들어, 한 실시양태에서, 예를 들어 가요성 연결부를 통해 관류 용액의 저장소에 연결된 피펫에, 제대 동맥 및 제대 정맥이 동시에 연결된다. 관류 용액이 제대 정맥 및 동맥 내로 통과된다. 관류 용액이 태반의 주변 조직 내로 혈관의 벽으로부터 삼출되고/되거나 이러한 벽을 통과하고, 임신 동안 모체의 자궁에 부착된 태반의 표면으로부터 적절한 개방형 용기에 수집된다. 또한 관류 용액이 제대 개구부를 통해 도입되어, 모체의 자궁 벽과 계면한 태반의 벽 내의 개구부에서 흘러 나오거나 스며나오게 될 수 있다. "팬(pan)" 방법으로 칭할 수 있는 상기 방법에 의해 수집되는 태반 세포는 일반적으로 태아 및 모체 세포의 혼합물이다.
또 다른 실시양태에서, 관류 용액은 제대 정맥을 통과하여 제대 동맥으로부터 수집되거나, 또는 제대 동맥을 통과하여 제대 정맥으로부터 수집된다. "폐쇄 회로" 방법으로 칭할 수 있는 상기 방법에 의해 수집되는 태반 줄기 세포는 일반적으로 거의 전적으로 태아 세포이다.
팬 방법을 사용하는 관류, 즉 관류액이 태반의 모체 측면으로부터 삼출된 후 수집되는 관류로 태아 및 모체 세포의 혼합물이 생성된다는 것이 이해될 것이다. 그 결과, 이러한 방법에 의해 수집된 세포는 태아 및 모체 기원 둘 모두의 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포의 혼합 집단을 포함할 수 있다. 반면에, 관류 유체가 1개 또는 2개의 태반 혈관을 통과하고 오직 나머지 혈관(들)만을 통하여 수집되는, 태반 혈관계만을 통과한 폐쇄 회로 방법의 관류에서는 거의 배타적으로 태아 기원의 태반 세포의 집단이 수집된다.
한 실시양태에서, 폐쇄 회로 관류 방법이 하기와 같이 수행될 수 있다. 산후 태반을 출산 후 약 48시간 이내에 수득하였다. 제대를 집게로 집고, 집게 위로 절단한다. 제대는 폐기할 수 있거나, 또는 예를 들어 제대 줄기 세포를 회수하기 위해 및/또는 생체재료의 생산을 위해 제대 막을 프로세싱하기 위해 프로세싱할 수 있다. 양막은 관류 동안 유지될 수 있거나, 또는, 예를 들어 손가락으로의 비절개 박리를 사용하여, 융모막으로부터 분리될 수 있다. 양막이 관류 전에 융모막으로부터 분리되는 경우에, 이는 예를 들어 폐기될 수 있거나 또는 프로세싱될 수 있고, 예를 들어 효소에 의한 소화에 의해 줄기 세포를 수득하기 위해, 또는 예를 들어 양막 생체재료, 예를 들어 미국 출원 공보 번호 2004/0048796 (그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 생체재료를 생산하기 위해, 프로세싱될 수 있다. 모든 가시적인 혈병 및 잔류 혈액을, 예를 들어 멸균 거즈를 사용하여 태반에서 청소한 후, 예를 들어 제대 막을 부분적으로 절단하여 제대의 단면을 노출시킴으로써, 제대 혈관을 노출시킨다. 혈관을 확인하고, 예를 들어 닫힌 악어입 집게를 각각의 혈관의 절단 끝부분을 통해 전진시킴으로써 개방시킨다. 이어서, 관류 기구 또는 연동 펌프에 연결된 플라스틱 튜빙과 같은 장치를 각각의 태반 동맥 내로 삽입한다. 펌프는 목적에 적절한 임의의 펌프, 예를 들어 연동 펌프일 수 있다. 이어서, 멸균 수집 저장소, 예를 들어 250 mL 수집 백과 같은 혈액 백에 연결된 플라스틱 튜빙을 태반 정맥 내로 삽입한다. 대안적으로, 펌프에 연결된 튜빙을 태반 정맥 내로 삽입하고, 수집 저장소(들)에 대한 튜브를 태반 동맥 중 하나 또는 양쪽 모두에 삽입한다. 이어서, 태반에 다량의 관류 용액, 예를 들어 약 750 ml의 관류 용액을 관류한다. 이어서, 관류액 내의 세포를, 예를 들어 원심분리에 의해 수집한다. 특정 실시양태에서, 관류 용액, 예를 들어 100-300 mL 관류 용액을 태반에 관류하여 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 및/또는 태반 다능 세포를 수집하기 위한 관류 전에 잔류 혈액을 제거한다. 또 다른 실시양태에서, 태반 세포를 수집하기 위한 관류 전에 잔류 혈액을 제거하기 위해 관류 용액이 태반에 관류되지 않는다.
한 실시양태에서, 근위 제대를 관류 동안 집게로 집고, 더욱 바람직하게는 태반 원반 내로의 제대의 삽입부의 4-5 cm (센티미터)이내에서 집게로 집는다.
방혈 과정 동안 포유동물 태반으로부터의 관류 유체의 1차 수집물은 일반적으로 제대혈 및/또는 태반혈의 잔류 적혈구의 색을 띤다. 관류가 진행되고 잔류 제대혈 세포가 태반으로부터 세척됨에 따라 관류 유체는 더욱 무색이게 된다. 일반적으로, 30 내지 100 ml (밀리리터)의 관류 유체가 처음에 태반을 방혈시키는 데 적절하지만, 관찰된 결과에 따라 더 많거나 더 적은 관류 유체가 사용될 수 있다.
태반 세포를 단리하는 데 사용된 관류 액체의 부피는 수집되는 세포의 수, 태반의 크기, 단일 태반에서 이루어질 수집 횟수 등에 따라 변할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 관류 액체의 부피는 50 mL 내지 5000 mL, 50 mL 내지 4000 mL, 50 mL 내지 3000 mL, 100 mL 내지 2000 mL, 250 mL 내지 2000 mL, 500 mL 내지 2000 mL, 또는 750 mL 내지 2000 mL일 수 있다. 전형적으로, 태반은 방혈 후 700-800 mL의 관류 액체로 관류된다.
태반을 수 시간 또는 수 일에 걸쳐 여러 번 관류할 수 있다. 태반을 다수회 관류시켜야 하는 경우에, 이를 멸균 조건 하에 용기 또는 다른 적합한 수납기 내에 유지하거나 배양하고, 세포 수집 조성물 또는 표준 관류 용액 (예를 들어, 항응고제 (예를 들어, 헤파린, 와파린 나트륨, 쿠마린, 비스히드록시쿠마린)를 함유하거나 함유하지 않고/거나 항미생물제 (예를 들어, β-메르캅토에탄올 (0.1 mM)); 항생제, 예컨대 스트렙토마이신 (예를 들어, 40-100 μg/ml), 페니실린 (예를 들어, 40 U/ml), 암포테리신 B (예를 들어, 0.5 μg/ml)를 함유하거나 함유하지 않는 생리 염수 용액, 예를 들어 포스페이트 완충 염수 ("PBS"))으로 관류시킬 수 있다. 한 실시양태에서, 관류 및 관류액의 수집 전에 태반이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간, 또는 2 또는 3일 또는 그 초과 동안 유지 또는 배양되도록, 단리된 태반을 관류액을 수집하지 않으면서 일정 기간 동안 유지 또는 배양한다. 관류된 태반은 1회 이상의 추가적인 시간(들) 동안, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24시간, 또는 그 초과 동안 유지된 후, 예를 들어 700-800 mL의 관류 유체로 2번째로 관류될 수 있다. 태반은 1, 2, 3, 4, 5회 또는 그 초과로 관류될 수 있고, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5 또는 6시간마다 관류될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 태반의 관류 및 관류 용액, 예를 들어 세포 수집 조성물의 수집은 회수된 유핵 세포의 개수가 100개 세포/ml 미만으로 떨어질 때까지 반복된다. 상이한 시점의 관류액들을 개별적으로 추가로 프로세싱하여, 시간-의존적인 세포, 예를 들어 줄기 세포의 집단을 회수할 수 있다. 상이한 시점으로부터의 관류액들을 또한 모을 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 만출 후 약 8 내지 약 18시간 사이에 태반 세포가 한번에 또는 여러 번 수집된다.
바람직하게는, 상기 용액으로 관류되지 않았고, 태반 세포를 수득하도록 다른 방식 (예를 들어, 조직 파괴, 예를 들어 효소적 소화)으로 처리되지도 않은 포유동물 태반으로부터 수득가능한 개수보다 유의하게 더 많은 태반 세포가 관류로 수집된다. 이러한 상황에서, "유의하게 더 많은"은 10% 이상 더 많은 것을 의미한다. 예를 들어, 태반 또는 그의 일부분이 배양된 배양 배지로부터 수득가능한 태반 세포의 개수보다 유의하게 더 많은 태반 세포가 관류로 산출된다.
하나 이상의 프로테아제 또는 기타 조직 파괴성 효소를 포함하는 용액으로의 관류에 의해 태반으로부터 태반 세포가 단리될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 태반 또는 그의 일부분 (예를 들어, 양막, 양막 및 융모막, 태반 소엽 또는 태반엽, 제대, 또는 임의의 상기의 것들의 조합)을 25-37℃로 만들고, 하나 이상의 조직 파괴성 효소와 함께 200 mL의 배양 배지에서 30분 동안 인큐베이션한다. 관류액으로부터의 세포를 수집하고, 4℃로 만들고, 5 mM EDTA, 2 mM 디티오트레이톨 및 2 mM 베타-메르캅토에탄올을 포함하는 저온 억제제 혼합물로 세척한다. 수 분 후 태반 세포를 저온 (예를 들어, 4℃)의 줄기 세포 수집 조성물로 세척한다.
4.3.5 태반 세포의 단리, 분류 및 특성화
관류에 의해 또는 물리적 파괴, 예를 들어 효소에 의한 소화에 의해 수득되었는지 여부와 관계 없이, 단리된 태반 세포, 예를 들어 상기 섹션 4.2.2에 기재된 세포를 먼저 피콜(Ficoll) 농도구배 원심분리에 의해 다른 세포로부터 정제 (즉, 단리)할 수 있다. 이러한 원심분리는 원심분리 속도 등에 대해 임의의 표준 프로토콜을 따를 수 있다. 한 실시양태에서, 예를 들어 태반으로부터 수집된 세포가 실온에서 15분 동안의 5000 x g의 원심분리에 의해 관류액으로부터 회수되고, 이는 세포를 예를 들어 오염성 잔해물 및 혈소판으로부터 분리한다. 또 다른 실시양태에서, 태반 관류액을 약 200 ml로 농축하고, 부드럽게 피콜 상에 층상화하고, 22℃에서 20분 동안 약 1100 x g로 원심분리하여, 세포의 저밀도 계면층을 추가적인 프로세싱을 위해 수집한다.
세포 펠릿이 신선한 줄기 세포 수집 조성물, 또는 세포 유지, 예를 들어 줄기 세포 유지에 적절한 배지, 예를 들어 2U/ml 헤파린 및 2 mM EDTA (깁코BRL, NY)를 함유하는 IMDM 무혈청 배지에 재현탁될 수 있다. 예를 들어, 림포프렙(Lymphoprep) (니코메드 파마(Nycomed Pharma, 노르웨이 오슬로))을 제조사의 권장 절차에 따라 사용하여 총 단핵 세포 분획을 단리할 수 있다.
관류 또는 소화에 의해 수득된 태반 세포를, 예를 들어 추가로 또는 처음에, 0.2% EDTA를 함유한 0.05% 트립신 용액 (시그마, 미주리주 세인트 루이스)을 예를 들어 사용하는 차등 트립신처리에 의해 단리할 수 있다. 조직 배양 플라스틱-부착성인 단리된 태반 세포는 플라스틱 표면으로부터 약 5분 이내에 전형적으로 탈착되는 반면, 기타 부착성 집단은 20-30분을 초과하는 인큐베이션을 전형적으로 필요로 하기 때문에 차등 트립신처리가 가능하다. 트립신처리 및 트립신 중화 (예를 들어, 트립신 중화 용액 (TNS, 캄브렉스(Cambrex)) 등을 이용) 후에, 탈착된 태반 세포를 수확할 수 있다. 부착 세포를 단리하는 한 실시양태에서, 예를 들어 약 5-10 x 106개 세포의 분취량을 여러 T-75 플라스크, 바람직하게는 피브로넥틴이 코팅된 T-75 플라스크 각각에 담는다. 이러한 실시양태에서, 세포를 시판되는 중간엽 줄기 세포 성장 배지 (MSCGM) (캄브렉스)와 함께 배양하고, 조직 배양 인큐베이터 (37℃, 5% CO2) 내에 놓을 수 있다. 10-15일 후, PBS로 세척함으로써 비-부착 세포를 플라스크로부터 제거한다. 이어서, PBS를 MSCGM으로 교체한다. 바람직하게는 플라스크를 각종 부착 세포 유형의 존재에 대해, 특히 섬유모세포 모양 세포의 클러스터의 확인 및 확장에 대해 매일 검사한다.
포유동물 태반으로부터 수집된 세포의 수 및 유형을, 예를 들어 유동 세포측정법, 세포 분류, 면역세포화학 (예를 들어, 조직 특이적 또는 세포 마커 특이적 항체로의 염색), 형광 활성화 세포 분류 (FACS), 자기 활성화 세포 분류 (MACS)와 같은 표준 세포 검출 기술을 사용하여 형태학 및 세포 표면 마커에서의 변화를 측정하는 것에 의해, 광학 현미경 또는 공초점 현미경을 사용하는 세포 형태학의 검사에 의해, 및/또는 당업계에 공지된 기술, 예컨대 PCR 및 유전자 발현 프로파일링을 사용하여 유전자 발현에서의 변화를 측정하는 것에 의해, 모니터링할 수 있다. 이러한 기술들은 하나 이상의 특정 마커에 대해 양성인 세포들을 확인하는 데 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, CD34에 대한 항체를 사용하여, 세포가 검출가능한 양의 CD34를 포함하는지 여부를 상기의 기술을 사용하여 결정할 수 있고; 세포가 검출가능한 양의 CD34를 포함하는 경우에, 세포는 CD34+이다. 마찬가지로, RT-PCR에 의해 검출될 수 있기에 충분한 OCT-4 RNA 또는 성체 세포보다 유의하게 더 많은 OCT-4 RNA를 세포가 생산하는 경우에, 세포는 OCT-4+이다. 세포 표면 마커 (예를 들어, CD34와 같은 CD 마커)에 대한 항체, 및 OCT-4와 같은 줄기 세포-특이적 유전자의 서열이 당업계에 공지되어 있다.
태반 세포, 특히 피콜 분리, 차등 부착 또는 이들의 조합에 의해 단리된 세포를 형광 활성화 세포 분류기 (FACS)를 사용하여 분류할 수 있다. 형광 활성화 세포 분류 (FACS)는 입자의 형광 성질을 기초로 하는, 세포가 포함되는 입자를 분리하기 위한 공지된 방법이다 (문헌 [Kamarch, 1987, Methods Enzymol, 151:150-165]). 개별적인 입자들 내의 형광 모이어티의 레이저 여기로 작은 전하가 발생하여, 혼합물로부터 양성 입자와 음성 입자가 전자기적으로 분리되도록 한다. 한 실시양태에서, 세포 표면 마커-특이적 항체 또는 리간드가 상이한 형광 표지로 표지된다. 세포가 세포 분류기를 통해 프로세싱되어, 사용된 항체에 결합하는 능력을 기초로 세포가 분리된다. FACS로 분류된 입자들이 96-웰 또는 384-웰 플레이트의 개별적인 웰 내로 직접 침착되어, 분리 및 클로닝을 용이하게 할 수 있다.
한 세포 분류 계획에서, 태반으로부터의 세포, 예를 들어 PDAC가, 예를 들어 마커 CD34, CD38, CD44, CD45, CD73, CD105, OCT-4 및/또는 HLA-G 중 하나 이상의 발현을 기초로 분류된다. 이는 배양 시의 세포의 부착 성질을 기초로 이러한 세포를 선택하는 절차와 함께 이루어질 수 있다. 예를 들어, 조직 배양 플라스틱 부착 선택이 마커 발현을 기초로 하는 분류 전 또는 후에 이루어질 수 있다. 한 실시양태에서, 예를 들어 먼저 세포가 CD34의 발현을 기초로 분류되고; CD34- 세포가 유지되고, 추가적으로 CD200+ 및 HLA-G-인 CD34- 세포가 모든 다른 CD34- 세포로부터 분리된다. 또 다른 실시양태에서, 태반으로부터의 세포가 마커 CD200 및/또는 HLA-G의 발현을 기초로 분류되고; 예를 들어, CD200을 디스플레이하고 HLA-G가 결여된 세포가 추가적인 사용을 위해 단리된다. 구체적 실시양태에서, 예를 들어 CD200을 발현하고/거나 예를 들어 HLA-G가 결여된 세포가 CD73 및/또는 CD105의 발현, 또는 항체 SH2, SH3 또는 SH4가 인식하는 에피토프의 발현, 또는 CD34, CD38 또는 CD45의 발현 결여를 기초로 추가로 분류될 수 있다. 예를 들어, 또 다른 실시양태에서, 태반 줄기 세포는 CD200, HLA-G, CD73, CD105, CD34, CD38 및 CD45의 발현 또는 발현 결여에 의해 분류되고, CD200+, HLA-G-, CD73+, CD105+, CD34-, CD38- 및 CD45-인 태반 세포가 추가 사용을 위해 다른 태반 세포들로부터 단리된다.
분류된 태반 세포의 임의의 상기 실시양태의 구체적 실시양태에서, 분류 후 남아 있는 세포 집단 내의 세포의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상이 상기 단리된 태반 세포이다. 상기 섹션 4.2.2에 기재된 임의의 마커들 중 하나 이상에 의해 태반 세포가 분류될 수 있다.
구체적 실시양태에서, 예를 들어 (1) 조직 배양 플라스틱에 부착성이고, (2) CD10+, CD34- 및 CD105+인 태반 세포는 다른 태반 세포로부터 분류된다 (즉, 단리된다). 또 다른 구체적 실시양태에서, (1) 조직 배양 플라스틱에 부착성이고, (2) CD10+, CD34-, CD105+ 및 CD200+인 태반 세포는 다른 태반 세포로부터 분류된다 (즉, 단리된다). 또 다른 구체적 실시양태에서, (1) 조직 배양 플라스틱에 부착성이고, (2) CD10+, CD34-, CD45-, CD90+, CD105+ 및 CD200+인 태반 세포는 다른 태반 세포로부터 분류된다 (즉, 단리된다).
태반 세포의 뉴클레오티드 서열-기반 검출에 대해, 본원에 수록된 마커의 서열은 공공 데이터베이스, 예컨대 진뱅크 또는 EMBL에서 쉽게 이용가능하다.
태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포의 항체-매개 검출 및 분류와 관련하여, 특정 마커에 대해 특이적인 임의의 항체를 세포의 검출 및 분류 (예를 들어, 형광-활성화 세포 분류)에 적절한 임의의 형광단 또는 기타 표지와 조합하여 사용할 수 있다. 특이적 마커에 대한 항체/형광단 조합물은 HLA-G에 대한 플루오레세인 이소티오시아네이트 (FITC) 접합된 모노클로날 항체 (세로텍(Serotec, 노쓰 캐롤라이나주 랄레이)으로부터 입수가능함); CD10 (BD 이뮤노시토메트리 시스템즈(BD Immunocytometry Systems, 캘리포니아주 산호세)로부터 입수가능함), CD44 (BD 바이오사이언시즈 파밍겐(BD Biosciences Pharmingen, 캘리포니아주 산호세)으로부터 입수가능함), 및 CD105 (알앤디 시스템즈 인크. (미네소타주 미네아폴리스)로부터 입수가능함); CD44, CD200, CD117 및 CD13에 대한 피코에리트린 (PE) 접합된 모노클로날 항체 (BD 바이오사이언시즈 파밍겐); CD33 및 CD10에 대한 피코에리트린-Cy7 (PE Cy7) 접합 모노클로날 항체 (BD 바이오사이언시즈 파밍겐); CD38에 대한 알로피코시아닌 (APC) 접합 스트렙타비딘 및 모노클로날 항체 (BD 바이오사이언시즈 파밍겐); 및 비오니틸화 CD90 (BD 바이오사이언시즈 파밍겐)을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 사용될 수 있는 기타 항체는 CD133-APC (밀테니(Miltenyi)), KDR-비오틴 (CD309, 아브캄(Abcam)), 시토케라틴K-Fitc (시그마 또는 다코(Dako)), HLA ABC-Fitc (BD), HLA DR,DQ,DP-PE (BD), β-2-마이크로글로불린-PE (BD), CD80-PE (BD) 및 CD86-APC (BD)를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 사용될 수 있는 다른 항체/표지 조합물은 CD45-PerCP (페리딘 클로로필 단백질); CD44-PE; CD19-PE, CD10-F (플루오레세인); HLA-G-F 및 7-아미노-악티노마이신-D (7-AAD); HLA-ABC-F 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 목록은 포괄적인 것이 아니고, 다른 공급처로부터의 다른 항체도 상업적으로 입수가능하다.
본원에 제공된 단리된 태반 세포는, 예를 들어 CD117 또는 CD133에 대한 피코에리트린-Cy5 (PE Cy5) 접합 스트렙타비딘 및 비오틴 접합 모노클로날 항체를 사용하여 CD117 또는 CD133에 대해 검정될 수 있지만; 상기 시스템을 사용하여, 세포는 비교적 높은 배경 때문에 각각 CD117 또는 CD133에 대해 양성으로 보일 수 있다.
단리된 태반 세포가 단일 마커에 대한 항체로 표지되어, 검출 및 분류될 수 있다. 또한 태반 세포가 상이한 마커들에 대한 여러 항체로 동시에 표지될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 자기 비드를 사용하여 세포를 분리할 수 있다. 자기 비드 (직경 0.5-100 μm)에 결합하는 능력을 기초로 입자를 분류하는 방법인 자기 활성화 세포 분류 (MACS)를 사용하여 세포들을 분류할 수 있다. 특정 세포 표면 분자 또는 합텐을 특이적으로 인식하는 항체를 공유 결합으로 부가하는 것을 포함하여, 다양한 유용한 변형을 자기 마이크로구체에 수행할 수 있다. 그후, 비드가 세포와 혼합되어 결합이 허용된다. 그후, 세포를 자기장에 통과시켜, 특정 세포 표면 마커가 있는 세포를 분리해 낸다. 한 실시양태에서, 이어서 이러한 세포들을 단리하고, 추가적인 세포 표면 마커에 대한 항체에 커플링된 자기 비드와 다시 혼합한다. 세포를 자기장에 다시 통과시켜, 양쪽 항체에 결합한 세포를 단리한다. 그후, 이러한 세포를 별도의 접시, 예컨대 클론성 단리를 위한 미량역가 접시 내로 희석할 수 있다.
단리된 태반 세포를 세포 형태학 및 성장 특성을 기초로 또한 특성화 및/또는 분류할 수 있다. 예를 들어, 단리된 태반 세포가, 예를 들어 배양 시 섬유모세포 모양의 외관을 갖는 것으로 특성화되고/되거나 이러한 외관을 기초로 선택될 수 있다. 또한 단리된 태반 세포는 배아 유사체를 형성하는 능력이 있는 것으로 특성화되고/되거나 이러한 능력을 기초로 선택될 수 있다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 섬유모세포 모양의 형상이고, CD73 및 CD105를 발현하며, 배양시 하나 이상의 배아 유사체를 형성하는 태반 세포가 다른 태반 세포로부터 단리된다. 또 다른 실시양태에서, 배양시 하나 이상의 배아 유사체를 생산하는 OCT-4+ 태반 세포가 다른 태반 세포로부터 단리된다.
또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포가 콜로니 형성 단위 검정법에 의해 확인 및 특성화될 수 있다. 콜로니 형성 단위 검정법은 메센쿨트(MESENCULT)™ 배지 (스템 셀 테크놀로지스, 인크.(Stem Cell Technologies, Inc., 브리티쉬 콜럼비아 밴쿠버))와 같이 당업계에 통상적으로 공지되어 있다.
단리된 태반 세포는 당업계에 공지된 표준 기술, 예를 들어 트리판 블루 배제 검정, 플루오레세인 디아세테이트 흡수 검정, 프로피듐 아이오다이드 흡수 검정 (생존력을 평가하기 위해); 및 티미딘 흡수 검정 또는 MTT (3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드) 세포 증식 검정 (증식을 평가하기 위해)을 이용하여 생존력, 증식 가능성, 및 수명에 대해 평가할 수 있다. 당업계에 공지된 방법에 의해, 예컨대 확장 배양 시 집단 배가의 최대값을 결정함으로써, 수명을 결정할 수 있다.
단리된 태반 세포, 예를 들어 상기 섹션 4.2.2에 기재된 단리된 태반 세포가 당업계에 공지된 기타 기술, 예를 들어 원하는 세포의 선택적 성장 (양성 선택), 원치 않는 세포의 선택적 파괴 (음성 선택); 예를 들어 대두 응집소와의 혼합 집단 내에서의 차별적인 세포 응집성을 기초로 하는 분리; 냉동-해동 절차; 여과; 통상적 및 구역 원심분리; 원심분리성 정제 (카운터-스트리밍 원심분리); 단위 중량 분리; 역류 분배; 전기 영동 등을 사용하여 다른 태반 세포로부터 또한 단리될 수 있다.
4.4 단리된 태반 세포의 배양
4.4.1 배양 배지
단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단, 또는 태반 세포가 성장해 나오는 세포 또는 태반 조직을 사용하여 세포 배양을 시작하거나 시딩할 수 있다. 일반적으로 세포는 세포외 매트릭스 또는 리간드, 예컨대 라미닌, 콜라겐 (예를 들어, 천연 또는 변성), 젤라틴, 피브로넥틴, 오르니틴, 비트로넥틴, 및 세포외 막 단백질 (예를 들어, 매트리겔®, BD 디스커버리 랩웨어, 매사추세츠주 베드포드)로 코팅되거나 코팅되지 않은 멸균 조직 배양 용기로 옮겨진다.
단리된 태반 세포는 당업계에서 세포, 예를 들어 줄기 세포의 배양에 허용되는 것으로 인식되는 임의의 배지 및 임의의 조건에서 배양될 수 있다. 바람직하게는, 배양 배지는 혈청을 포함한다. 단리된 태반 세포는, 예를 들어 ITS (인슐린-트랜스페린-셀레늄), LA+BSA (리놀레산-소 혈청 알부민), 덱사메타손 L-아스코르브산, PDGF, EGF, IGF-1, 및 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 DMEM-LG (둘베코(Dulbecco) 변형 필수 배지, 저-글루코스)/MCDB 201 (병아리 섬유모세포 기초 배지); 10% 소 태아 혈청 (FBS)을 포함하는 DMEM-HG (고-글루코스); 15% FBS를 포함하는 DMEM-HG; 10% FBS, 10% 말 혈청, 및 히드로코르티손을 포함하는 IMDM (이스코브(Iscove) 변형 둘베코 배지); 1% 내지 20% FBS, EGF, 및 헤파린을 포함하는 M199; 10% FBS, 글루타맥스(GLUTAMAX)™ 및 겐타미신을 포함하는 α-MEM (최소 필수 배지); 10% FBS, 글루타맥스™ 및 겐타미신을 포함하는 DMEM 등에서 배양될 수 있다.
태반 세포를 배양하는 데 사용될 수 있는 다른 배지는 DMEM (고 또는 저 글루코스), 이글 기초 배지, 햄(Ham) F10 배지 (F10), 햄 F-12 배지 (F12), 이스코브 변형 둘베코 배지, 중간엽 줄기 세포 성장 배지 (MSCGM), 라이보비츠(Liebovitz) L-15 배지, MCDB, DMEM/F12, RPMI 1640, 개선된 DMEM (깁코), DMEM/MCDB201 (시그마), 및 셀-그로 프리(CELL-GRO FREE)를 포함한다.
예를 들어, 혈청 (예를 들어, 태아 소 혈청 (FBS), 바람직하게는 약 2-15% (v/v); 말 혈청 (ES); 인간 혈청 (HS)); 베타-메르캅토에탄올 (BME), 바람직하게는 약 0.001% (v/v); 하나 이상의 성장 인자, 예를 들어 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 표피 성장 인자 (EGF), 염기성 섬유모세포 성장 인자 (bFGF), 인슐린-유사 성장 인자-1 (IGF-1), 백혈병 억제 인자 (LIF), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 및 에리트로포이에틴 (EPO); 아미노산, 예를 들어 L-발린; 및 미생물 오염을 제어하기 위한 하나 이상의 항생제 및/또는 항진균제, 예컨대, 페니실린 G, 스트렙토마이신 술페이트, 암포테리신 B, 겐타미신, 및 니스타틴을 비롯한 하나 이상의 성분이 단독으로 또는 함께 조합되어 배양 배지를 보충할 수 있다.
단리된 태반 세포는 표준 조직 배양 조건에서, 예를 들어 조직 배양 접시 또는 멀티웰 플레이트에서 배양될 수 있다. 현적 방법을 사용하여 단리된 태반 세포가 또한 배양될 수 있다. 이러한 방법에서, 단리된 태반 세포가 약 5 mL의 배지 내에 약 1 x 104개 세포/mL로 현탁되고, 1개 이상의 배지 액적이 조직 배양 용기, 예를 들어 100 mL 페트리 접시의 뚜껑의 내부에 놓인다. 상기 소적은, 예를 들어 단일 소적이거나, 또는 예를 들어 다중채널 피페터로부터의 다수의 소적일 수 있다. 뚜껑을 조심스럽게 뒤집고, 다량의 액체, 예를 들어 접시 대기 내의 수분 함량을 유지하는 데 충분한 멸균 PBS를 함유하는 접시 바닥 위에 놓고, 줄기 세포를 배양한다.
한 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 단리된 태반 세포에서 미분화 표현형을 유지하는 작용을 하는 화합물의 존재 하에 배양된다. 구체적 실시양태에서, 화합물은 치환된 3,4-디히드로피리디몰[4,5-d]피리미딘이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 화합물은 하기 화학 구조를 갖는 화합물이다:
Figure pct00001
이러한 화합물은 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단과, 예를 들어 약 1 μM 내지 약 10 μM 사이의 농도로 접촉될 수 있다.
4.4.2 태반 세포의 확장 및 증식
일단 단리된 태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단 (예를 들어, 생체내에서 줄기 세포 또는 줄기 세포 집단과 정상적으로 회합되는 태반 세포의 50% 이상으로부터 분리된 태반 세포 또는 태반 세포 집단)이 수득되면, 이러한 세포 또는 세포의 집단이 시험관내에서 증식 및 확장될 수 있다. 예를 들어, 단리된 태반 세포의 집단이 조직 배양 용기, 예를 들어 접시, 플라스크, 멀티웰 플레이트 등에서, 세포가 70-90% 전면배양률로 증식하는 데 충분한 시간 동안, 즉 세포 및 그의 자손이 조직 배양 용기의 배양 표면적의 70-90%를 차지할 때까지 배양될 수 있다.
단리된 태반 세포가 세포 성장을 허용하는 밀도로 배양 용기에 시딩될 수 있다. 예를 들어, 세포는 저밀도 (예를 들어, 약 1,000개 내지 약 5,000개 세포/cm2) 내지 고밀도 (예를 들어, 약 50,000개 이상의 세포/cm2)로 시딩될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 세포는 공기 중 약 0 내지 약 5 부피%의 CO2 존재 하에 배양된다. 일부 바람직한 실시양태에서, 세포는 공기 중 약 2 내지 약 25%의 O2, 바람직하게는 공기 중 약 5 내지 약 20%의 O2에서 배양된다. 세포는 바람직하게는 약 25℃ 내지 약 40℃, 바람직하게는 37℃에서 배양된다. 바람직하게는 세포는 인큐베이터에서 배양된다. 배양 배지는 정적일 수 있거나, 또는 예를 들어 생물반응기를 사용하여 교반될 수 있다. 바람직하게는, 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포는 낮은 산화성 스트레스 하에 성장된다 (예를 들어, 글루타티온, 아스코르브산, 카탈라제, 토코페롤, N-아세틸시스테인 등이 첨가됨).
일단 100% 미만, 예를 들어 70% 내지 90% 전면배양률이 수득되면, 세포가 계대배양될 수 있다. 예를 들어, 세포를 당업계에 널리 공지된 기술을 사용하여 효소로 처리하여, 예를 들어 트립신처리하여, 조직 배양 표면으로부터 세포를 분리할 수 있다. 세포를 피펫팅에 의해 제거하고 세포를 계수한 후, 약 10,000-100,000개 세포/cm2가 신선한 배양 배지를 함유하는 새로운 배양 용기로 계대배양된다. 전형적으로, 새로운 배지는 단리된 태반 세포가 제거된 배지와 동일한 유형이다. 단리된 태반 세포는 대략, 최소, 또는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18 또는 20회, 또는 그 초과로 계대배양될 수 있다.
4.4.3 단리된 태반 세포의 집단
또한, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포, 예를 들어 상기 섹션 4.2.2에 기재된 단리된 태반 세포의 집단이 본원에 제공된다. 단리된 태반 세포의 집단은 하나 이상의 태반으로부터 직접적으로 단리될 수 있고; 즉, 세포 집단은 관류액으로부터 수득되거나 관류액 내에 함유된, 또는 파괴된 태반 조직, 예를 들어 태반 조직 소화물 (즉, 태반 또는 그의 일부분의 효소에 의한 소화에 의해 수득된 세포들의 수집물)로부터 수득되거나 이러한 소화물 내에 함유된 단리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단일 수 있다. 본원에 기재된 단리된 태반 세포가 또한 배양 및 확장되어 단리된 태반 세포의 집단이 생산될 수 있다. 단리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단이 또한 배양 및 확장되어 태반 세포 집단이 생산될 수 있다.
본원에 제공된 치료 방법에 유용한 태반 세포 집단은 단리된 태반 세포, 예를 들어 본원의 섹션 4.4.2에 기재된 단리된 태반 세포를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 태반 세포 집단 내의 세포의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%가 단리된 태반 세포이다. 즉, 단리된 태반 세포의 집단은, 예를 들어 많게는 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%의 단리된 태반 세포가 아닌 세포를 포함할 수 있다.
본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 단리된 태반 세포 집단은, 예를 들어 특정 마커 및/또는 특정 배양 또는 형태 특성을 발현하는, 효소적 소화 또는 관류로부터 유래된 단리된 태반 세포를 선택함으로써 생성될 수 있다. 한 실시양태에서, 예를 들어 (a) 기판에 부착하고, (b) CD200을 발현하고 HLA-G의 발현이 결여된 태반 세포를 선택하는 단계; 및 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성하는 단계를 포함하는 세포 집단의 생산 방법이 본원에 제공된다. 또 다른 실시양태에서, CD200을 발현하고 HLA-G의 발현이 결여된 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 실시양태에서, (a) 기판에 부착하고, (b) CD73, CD105, 및 CD200을 발현하는 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 실시양태에서, CD73, CD105 및 CD200을 발현하는 태반 세포를 확인하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 실시양태에서, 세포 집단의 생산 방법은 (a) 기판에 부착하고, (b) CD200 및 OCT-4를 발현하는 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 실시양태에서, CD200 및 OCT-4를 발현하는 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 실시양태에서, (a) 기판에 부착하고, (b) CD73 및 CD105를 발현하며, (c) 줄기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단이 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진하는 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 실시양태에서, CD73 및 CD105를 발현하고, 줄기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단이 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진하는 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 실시양태에서, (a) 기판에 부착하고, (b) CD73 및 CD105를 발현하고 HLA-G의 발현이 결여된 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 실시양태에서, CD73 및 CD105를 발현하고 HLA-G의 발현이 결여된 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 실시양태에서, 세포 집단의 생산 방법은 (a) 기판에 부착하고, (b) OCT-4를 발현하며, (c) 줄기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단이 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진하는 태반 세포를 선택하는 단계; 및 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, OCT-4를 발현하며, 줄기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단이 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양되는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진하는 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다.
또 다른 실시양태에서, (a) 기판에 부착하고, (b) CD10 및 CD105을 발현하고 CD34를 발현하지 않는 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 실시양태에서, CD10 및 CD105을 발현하고 CD34를 발현하지 않는 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 실시양태에서, (a) 기판에 부착하고, (b) CD10, CD105 및 CD200을 발현하고 CD34를 발현하지 않는 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 실시양태에서, CD10, CD105 및 CD200을 발현하고 CD34를 발현하지 않는 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, (a) 기판에 부착하고, (b) CD10, CD90, CD105 및 CD200을 발현하고 CD34 및 CD45를 발현하지 않는 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, CD10, CD90, CD105 및 CD200을 발현하고 CD34 및 CD45를 발현하지 않는 태반 세포를 선택하고, 상기 세포를 다른 세포로부터 단리하여 세포 집단을 형성시킴으로써 세포 집단이 생산된다.
상기 섹션 4.2.2에 기재된 임의의 마커 조합을 갖는 태반 세포를 포함하는 선택된 세포 집단은 유사한 방식으로 단리되거나 얻을 수 있다.
임의의 상기 실시양태에서, 단리된 세포 집단의 선택은 ABC-p (태반-특이적 ABC 전달체 단백질; 예를 들어, 문헌 [Allikmets et al., Cancer Res. 58(23):5337-9 (1998)] 참조)를 발현하는 태반 세포를 선택하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다. 이러한 방법은 예를 들어 중간엽 줄기 세포에 대해 특이적인 하나 이상의 특성, 예를 들어 CD44의 발현, CD90의 발현, 또는 상기의 것들의 조합 발현을 나타내는 세포를 선택하는 단계를 또한 포함할 수 있다.
상기 실시양태들에서, 기판은 세포, 예를 들어 단리된 태반 세포의 배양 및/또는 선택이 달성될 수 있는 임의의 표면일 수 있다. 전형적으로, 기질은 플라스틱, 예를 들어 조직 배양 접시 또는 멀티웰 플레이트 플라스틱이다. 조직 배양 플라스틱은 생체분자, 예를 들어 라미닌 또는 피브로넥틴으로 코팅될 수 있다.
세포, 예를 들어 단리된 태반 세포는 세포 선택 분야에 공지된 임의의 수단에 의해 태반 세포 집단에 대해 선택될 수 있다. 예를 들어, 세포는 예를 들어 유동 세포측정법 또는 FACS에서 하나 이상의 세포 표면 마커에 대한 항체 또는 항체들을 이용하여 선택될 수 있다. 선택은 자기 비드와 함께 항체를 사용하여 달성할 수 있다. 특정 줄기 세포-관련 마커에 특이적인 항체는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, OCT-4 (아브캄, 미국 매사추세츠주 캠브리지), CD200 (아브캄), HLA-G (아브캄), CD73 (BD 바이오사이언시즈 파밍겐, 미국 캘리포니아주 샌 디에고), CD105 (아브캄; 바이오디자인 인터내셔널(BioDesign International, 미국 메인주 사코)) 등에 대한 항체가 이용가능하다. 다른 마커에 대한 항체도 또한 상업적으로 이용가능하고, 예를 들어 CD34, CD38 및 CD45에 대한 항체는 예를 들어, 스템셀 테크놀로지스(StemCell Technologies) 또는 바이오디자인 인터내셔널로부터 입수가능하다.
단리된 태반 세포 집단은 줄기 세포가 아닌 태반 세포, 또는 태반 세포가 아닌 세포를 포함할 수 있다.
본원에 제공된 단리된 태반 세포 집단이 하나 이상의 비-줄기 세포 또는 비-태반 세포 집단과 조합될 수 있다. 예를 들어, 단리된 태반 세포의 집단은 혈액 (예를 들어, 태반혈 또는 제대혈), 혈액-유래 줄기 세포 (예를 들어, 태반혈 또는 제대혈로부터 유래된 줄기 세포), 혈액-유래 유핵 세포의 집단, 골수-유래 중간엽 세포, 골-유래 줄기 세포 집단, 미정제(crude) 골수, 성체 (체세포) 줄기 세포, 조직 내에 함유된 줄기 세포의 집단, 배양된 줄기 세포, 완전히 분화된 세포의 집단 (예를 들어, 연골세포, 섬유모세포, 양막 세포, 골모세포, 근육 세포, 심장 세포 등) 등과 조합될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에서 유용한 세포의 집단은 단리된 태반 세포 및 단리된 제대 세포를 포함한다. 단리된 태반 세포 집단 내의 세포는 다른 유형의 다수의 세포와 각 집단 내 총 유핵 새포의 개수를 비교하여 약 100,000,000:1, 50,000,000:1, 20,000,000:1, 10,000,000:1, 5,000,000:1, 2,000,000:1, 1,000,000:1, 500,000:1, 200,000:1, 100,000:1, 50,000:1, 20,000:1, 10,000:1, 5,000:1, 2,000:1, 1,000:1, 500:1, 200:1, 100:1, 50:1, 20:1, 10:1, 5:1, 2:1, 1:1; 1:2; 1:5; 1:10; 1:100; 1:200; 1:500; 1:1,000; 1:2,000; 1:5,000; 1:10,000; 1:20,000; 1:50,000; 1:100,000; 1:500,000; 1:1,000,000; 1:2,000,000; 1:5,000,000; 1:10,000,000; 1:20,000,000; 1:50,000,000; 또는 약 1:100,000,000의 비율로 조합될 수 있다. 단리된 태반 세포 집단 내의 세포는 다수의 세포 유형의 다수의 세포와 또한 조합될 수 있다.
한 실시양태에서, 태반 세포의 단리된 집단은 다수의 조혈 줄기 세포와 조합된다. 이러한 조혈 줄기 세포는 예를 들어, 비가공된 태반, 제대혈 또는 말초 혈액 내에; 태반 혈액, 제대혈 또는 말초 혈액으로부터 총 유핵 세포 내에; 태반 혈액, 제대혈 또는 말초 혈액으로부터 CD34+ 세포의 단리된 집단 내에; 비가공된 골수 내에; 골수로부터 총 유핵 세포 내에; 골수로부터 CD34+ 세포의 단리된 집단 내에 등에 함유될 수 있다.
다른 실시양태에서, 본원에 기재된 태반 세포, 예를 들어 상기 섹션 4.2.2에 기재된 PDAC의 집단은 골형성 태반 부착 세포 (OPAC), 예를 들어 특허 출원 번호 12/546,556 (2009년 8월 24일자로 출원되었고, 발명의 명칭이 "Methods and Compositions for Treatment of Bone Defects With Placental Stem Cells"임)이고, 그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 OPAC와 조합된다.
4.5 태반 세포 은행의 생산
산후 태반으로부터의 단리된 세포, 예를 들어 상기 섹션 4.2.2에 기재된 단리된 태반 세포를 다수의 상이한 방식으로 배양하여, 단리된 태반 세포의 로트(lot) 세트를 생산할 수 있고, 예를 들어 여기서 로트는 개별적으로 투여가능한 용량들의 세트이다. 이러한 로트는, 예를 들어 태반 관류액으로부터 또는 효소로 소화 태반 조직으로부터의 세포로부터 수득할 수 있다. 다수의 태반으로부터 수득된, 태반 세포의 로트 세트가, 예를 들어 장기 보관을 위해 단리된 태반 세포들의 은행에 배열될 수 있다. 일반적으로, 조직 배양 플라스틱-부착성 태반 세포가 태반 물질의 초기 배양물로부터 수득되어 종자 배양물을 형성하고, 이는 제어된 조건 하에 확장되어 대략 동등한 배가수의 세포의 집단을 형성한다. 로트는 바람직하게는 단일 태반의 조직으로부터 유래되지만, 다수의 태반의 조직으로부터 유래될 수 있다.
한 실시양태에서, 태반 세포 로트가 하기와 같이 수득된다. 먼저 태반 조직을, 예를 들어 다져서 파괴하고, 적절한 효소, 예를 들어 트립신 또는 콜라게나제로 소화시킨다 (상기 섹션 4.3.3 참조). 바람직하게는 태반 조직은, 예를 들어 단일 태반으로부터의 전체 양막, 전체 융모막, 또는 양쪽 모두를 포함하지만, 양막 또는 융모막의 일부분만을 포함할 수 있다. 소화된 조직을, 예를 들어 약 1 내지 3주, 바람직하게는 약 2주 동안 배양한다. 비-부착 세포를 제거한 후, 형성된 고밀도 콜로니를 예를 들어 트립신처리에 의해 수집하였다. 이러한 세포들을 수집하고, 편리한 부피의 배양 배지에 재현탁시킨 후, 확장 배양물에 시딩하는 데 사용한다. 확장 배양물은 개별적인 세포 배양 장치들, 예를 들어 셀 팩토리(Cell Factory) 사의 NUNC™의 임의의 배열일 수 있다. 세포들은 확장 배양물에 예를 들어 1 x 103, 2 x 103, 3 x 103, 4 x 103, 5 x 103, 6 x 103, 7 x 103, 8 x 103, 9 x 103, 1 x 104, 1 x 104, 2 x 104, 3 x 104, 4 x 104, 5 x 104, 6 x 104, 7 x 104, 8 x 104, 9 x 104, 또는 10 x 104개 세포/cm2가 시딩되도록 임의의 정도로 세분될 수 있다. 바람직하게는, 약 1 x 103 내지 약 1 x 104개 세포/cm2가 각각의 확장 배양물에 시딩하는 데 사용된다. 확장 배양물의 수는 세포가 수득되는 특정 태반(들)에 따라 수가 더 크거나 작을 수 있다.
배양물 내의 세포의 밀도가 특정 값, 예를 들어 약 1 x 105개 세포/cm2에 도달할 때까지 확장 배양물을 성장시킨다. 세포는 이 지점에서 수집 및 동결보존될 수 있거나, 또는 상기 기재된 바와 같이 새로운 확장 배양물로 계대배양될 수 있다. 세포는 사용 전에, 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20회 계대배양될 수 있다. 바람직하게는 집단 배가의 누적 횟수의 기록이 확장 배양(들) 동안 유지된다. 배양물로부터의 세포는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38 또는 40 배가, 또는 60 배가까지 확장될 수 있다. 그러나, 바람직하게는, 세포의 집단을 개별적인 용량으로 나누기 전의 집단 배가 횟수는 약 15 내지 약 30이다. 세포는 확장 프로세스 전반에 걸쳐 연속적으로 배양될 수 있거나, 또는 확장 동안 1회 이상의 지점에서 냉동될 수 있다.
개별적인 용량에 사용될 세포는 추후의 사용을 위해 동결, 예를 들어 동결보존될 수 있다. 개별적인 용량은, 예를 들어 약 1백만 내지 약 5천만개 세포/ml를 포함할 수 있고, 전체적으로는 약 106개 내지 약 1010개 세포를 포함할 수 있다.
따라서, 한 실시양태에서, 다수의 제1 집단 배가를 위해 인간 산후 태반으로부터 일차 배양 태반 세포를 확장시키는 단계; 상기 태반 세포를 동결보존하여, 마스터 세포 은행(Master Cell Bank)을 형성시키는 단계; 다수의 제2 집단 배가를 위해 마스터 세포 은행으로부터 다수의 태반 세포를 확장시키는 단계; 상기 태반 세포를 동결보존하여, 작업용 세포 은행(Working Cell Bank)을 형성시키는 단계; 다수의 제3 집단 배가를 위해 작업용 세포 은행으로부터 다수의 태반 줄기 세포를 확장시키는 단계; 및 상기 태반 세포를 개별적인 용량으로 동결보존하는 단계를 포함하고, 이때 상기 개별적인 용량들이 총괄적으로 태반 세포 은행을 구성하는 방법에 의해 태반 세포 은행이 제조될 수 있다. 임의적으로, 상기 다수의 제3 집단 배가로부터 다수의 태반 세포가 다수의 제4 집단 배가를 위해 확장될 수 있고, 개별적인 용량으로 동결보존될 수 있으며, 이때 상기 개별적인 용량들이 총괄적으로 태반 세포 은행을 구성한다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 일차 배양 태반 세포는 태반 관류액으로부터의 태반 세포를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 일차 배양 태반 세포는 소화된 태반 조직으로부터의 태반 세포를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 일차 배양 태반 세포는 태반 관류액 및 소화된 태반 조직으로부터의 태반 세포를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 태반 세포 일차 배양물 내의 상기 태반 세포 모두는 동일한 태반으로부터의 것이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 이러한 방법은 상기 작업용 세포 은행으로부터의 상기 다수의 태반 세포로부터 CD200+ 또는 HLA-G- 태반 세포를 선택하여 개별적인 용량을 형성시키는 단계를 추가로 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 개별적인 용량은 약 104개 내지 약 105개의 태반 세포를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 개별적인 용량은 약 105개 내지 약 106개의 태반 세포를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 개별적인 용량은 약 106개 내지 약 107개의 태반 세포를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 개별적인 용량은 약 107개 내지 약 108개의 태반 세포를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 개별적인 용량은 약 108개 내지 약 109개의 태반 세포를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 개별적인 용량은 약 109개 내지 약 1010개의 태반 세포를 포함한다.
바람직한 실시양태에서, 태반이 수득되는 공여자 (예를 들어, 모체)를 하나 이상의 병원체에 대해 시험한다. 모체가 시험된 병원체에 대해 양성인 경우에, 태반으로부터의 전체 로트를 폐기한다. 이러한 테스트는 태반 세포 로트 생산 동안의 임의의 시점에, 예를 들어 확장 배양 동안 수행될 수 있다. 존재가 시험되는 병원체는 A형 간염, B형 간염, C형 간염, D형 간염, E형 간염, 인간 면역결핍 바이러스 (I형 및 II형), 시토메갈로바이러스, 헤르페스바이러스 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
4.6 태반 세포의 보존
단리된 태반 세포, 예를 들어 상기 섹션 4.3.2에 기재된 단리된 태반 세포를 보존할 수 있고, 즉 장기 보관을 허용하는 조건, 또는 예를 들어 아폽토시스 또는 괴사에 의한 세포 사멸을 억제하는 조건 하에 놓을 수 있다.
관련된 미국 출원 공보 번호 2007/0190042 (그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같이, 예를 들어 아폽토시스 억제제, 괴사 억제제 및/또는 산소-운반 퍼플루오로카본을 포함하는 조성물을 사용하여, 태반 세포를 보존할 수 있다. 한 실시양태에서, 본원에 기재된 방법 및 조성물에 유용한 세포의 집단을 보존하는 방법은 상기 세포의 집단을 아폽토시스 억제제 및 산소-운반 퍼플루오로카본을 포함하는 세포 수집 조성물과 접촉시키는 것을 포함하고, 여기서 상기 아폽토시스 억제제는 아폽토시스 억제제와 접촉되지 않은 세포 집단에 비해 세포 집단 내에서 아폽토시스를 감소 또는 방지하기 위해 충분한 양으로, 그에 충분한 시간 동안 존재한다. 구체적 실시양태에서, 상기 아폽토시스 억제제는 카스파제 억제제이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 아폽토시스 억제제는 JNK 억제제이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 JNK 억제제는 상기 세포의 분화 또는 증식을 조정하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 세포 수집 조성물은 상기 아폽토시스 억제제 및 상기 산소-운반 퍼플루오로카본을 개별 상으로 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 세포 수집 조성물은 에멀젼 내에 상기 아폽토시스 억제제 및 상기 산소-운반 퍼플루오로카본을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 세포 수집 조성물은 추가로 유화제, 예를 들어 레시틴을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 아폽토시스 억제제 및 상기 퍼플루오로카본은 세포 접촉 시간에 약 0℃ 내지 약 25℃이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 아폽토시스 억제제 및 상기 퍼플루오로카본은 세포 접촉 시간에 약 2℃ 내지 10℃ 또는 약 2℃ 내지 약 5℃이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 접촉은 상기 세포 집단의 수송 동안 수행된다. 또 다른 더욱 구체적 실시양태에서, 상기 접촉은 상기 세포의 집단의 동결 및 해동 동안 수행된다.
태반 세포의 집단은, 예를 들어 상기 세포의 집단을 아폽토시스 억제제 및 기관-보존 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하고, 이때 상기 아폽토시스 억제제는 아폽토시스 억제제와 접촉되지 않은 세포의 집단과 비교하여, 이러한 세포의 집단에서 아폽토시스를 감소시키거나 방지하는 데 충분한 양으로, 및 이에 충분한 시간 동안 존재하는 방법에 의해 보존될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 기관-보존 화합물은 UW 용액 (미국 특허 번호 4,798,824에 기재되어 있음; 비아스판(ViaSpan)으로도 또한 공지됨; 또한 문헌 [Southard et al., Transplantation 49(2):251-257 (1990)] 참조) 또는 미국 특허 번호 5,552,267 (Stern et al.)에 기재되어 있는 용액이며, 이들의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 기관-보존 화합물은 히드록시에틸 전분, 락토비온산, 라피노스, 또는 이들의 조합물이다. 또 다른 실시양태에서, 세포 수집 조성물은 추가로 산소-운반 퍼플루오로카본을 2-상으로 또는 에멀젼으로서 포함한다.
이러한 방법의 또 다른 실시양태에서, 태반 세포는 관류 동안 아폽토시스 억제제 및 산소-운반 퍼플루오로카본, 기관-보존 화합물 또는 이들의 조합물을 포함하는 세포 수집 조성물과 접촉된다. 또 다른 실시양태에서, 조직 파괴 프로세스, 예를 들어 효소에 의한 소화 동안 상기 세포가 접촉된다. 또 다른 실시양태에서, 태반 세포가 관류에 의한 수집 후에, 또는 조직 파괴, 예를 들어 효소에 의한 소화에 의한 수집 후에 상기 세포 수집 화합물과 접촉된다.
전형적으로, 태반 세포 수집, 강화 및 단리 동안, 저산소증 및 기계적 스트레스로 인한 세포 스트레스를 최소화하거나 제거하는 것이 바람직하다. 따라서, 이러한 방법의 또 다른 실시양태에서, 세포 또는 세포의 집단이 상기 보존 동안 6시간 미만으로 수집, 강화 또는 단리 동안의 저산소성 조건에 노출되고, 이때 저산소성 조건은 정상적인 혈액 산소 농도보다 낮은 산소 농도이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단은 상기 보존 동안 2시간 미만 동안 상기 저산소 조건에 노출된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단은 1시간 미만 또는 30분 미만 동안 상기 저산소 조건에 노출되거나, 수집, 농축 또는 단리 동안 저산소 조건에 노출되지 않는다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포의 집단은 수집, 강화 또는 단리 동안 전단 스트레스에 노출되지 않는다.
태반 세포가 동결보존될 수 있고, 예를 들어 소형 용기, 예를 들어 앰풀 내의 동결보존 배지에 동결보존될 수 있다. 적합한 동결보존 배지로는 예를 들어 성장 배지를 비롯한 배양 배지, 또는 세포 동결 배지, 예를 들어 시판하는 세포 동결 배지, 예를 들어 C2695, C2639 또는 C6039 (시그마)가 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 동결보존 배지는 바람직하게는 DMSO (디메틸술폭시드)를, 예를 들어 약 2% 내지 약 15% (v/v), 예를 들어 약 10% (v/v)의 농도로 포함한다. 동결보존 배지는 추가의 작용제, 예를 들어 메틸셀룰로스 및/또는 글리세롤을 포함할 수 있다. 바람직하게는 태반 세포는 동결보존 동안 약 1℃/분으로 냉각된다. 바람직한 냉동보존 온도는 약 -80℃ 내지 약 -180℃, 바람직하게는 약 -125℃ 내지 약 -140℃이다. 동결보존된 세포는 사용하기 위해 해동하기 전에 액체 질소로 옮겨질 수 있다. 일부 실시양태에서, 예를 들어 앰플이 약 -90℃에서 도달하면 이들은 액체 질소 저장 구역으로 이송된다. 동결보존은 속도 제어 동결기를 사용하여 또한 이루어질 수 있다. 동결보존된 세포는 약 25℃ 내지 약 40℃의 온도, 바람직하게는 약 37℃의 온도에서 해동된다.
4.7 단리된 태반 세포를 포함하는 조성물
본원에, 예를 들어 섹션 4.4.2에 기재된 태반 세포는 본원에 기재된 방법 및 조성물에 사용하기 위한 임의의 생리학상 허용되는 또는 의료상 허용되는 화합물, 조성물 또는 장치와 조합될 수 있다. 본원에 제공된 치료 방법에 유용한 조성물은 본원에 기재된 태반 세포 (상기 섹션 4.4.2 참조) 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 조성물은 제약상 허용되는 조성물, 예를 들어 제약상 허용되는 담체 내에 태반 세포를 포함하는 조성물이다. 하기 섹션 4.9.2를 참조한다.
특정 실시양태에서, 단리된 태반 세포를 포함하는 조성물이 추가적으로 매트릭스, 예를 들어 세포제거 매트릭스 또는 합성 매트릭스를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 매트릭스는 3차원 스캐폴드이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 매트릭스는 콜라겐, 젤라틴, 라미닌, 피브로넥틴, 펙틴, 오르니틴, 또는 비트로넥틴을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 매트릭스는 양막 또는 양막-유래 생체재료이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 매트릭스는 세포외 막 단백질을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 매트릭스는 합성 화합물을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 매트릭스는 생물활성 화합물을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 생물활성 화합물은 성장 인자, 시토카인, 항체, 또는 5,000 달톤 미만의 유기 분자이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 치료 방법에서 유용한 조성물은 상기 태반 세포 중 임의의 것 또는 상기 태반 세포 집단 중 임의의 것에 의해 조건화된 배지를 포함한다.
4.7.1 동결보존된 단리된 태반 세포
본원에 기재된 방법 및 조성물에서 유용한 단리된 태반 세포 집단은 추후 사용을 위해 보존, 예를 들어 동결보존될 수 있다. 세포, 예컨대 줄기 세포의 동결보존 방법은 당업계에 공지되어 있다. 단리된 태반 세포 집단은 개체에게 용이하게 투여가능한 형태로 제조될 수 있고, 예를 들어 단리된 태반 세포 집단이 의학적 사용에 적절한 용기 내에 함유된다. 이러한 용기는, 예를 들어 단리된 태반 세포 집단이 용이하게 분배될 수 있는 시린지, 멸균 플라스틱 백, 플라스크, 병 또는 기타 용기일 수 있다. 예를 들어, 용기는 혈액 백, 또는 수용자에게 액체를 정맥내 투여하는 데 적합한 의학적으로 허용되는 기타 플라스틱 백일 수 있다. 바람직하게는 용기는 조합된 세포 집단의 동결보존을 가능하게 하는 것이다.
동결보존된 단리된 태반 세포 집단은 단일 공여자 또는 다수의 공여자로부터 유래된 단리된 태반 세포를 포함할 수 있다. 단리된 태반 세포 집단은 의도되는 수용자에 대해 HLA가 완전히 매칭되거나, 또는 HLA가 부분적으로 또는 완전히 미스매칭될 수 있다.
따라서, 한 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 용기 내의 조직 배양 플라스틱-부착성 태반 세포 집단을 포함하는 조성물의 형태로 본원에 기재된 방법에 사용될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 단리된 태반 세포가 동결보존된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 용기는 백, 플라스크, 또는 병이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 백은 멸균 플라스틱 백이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 백은 예를 들어, 정맥내 주입에 의한 상기 단리된 태반 세포 집단의 정맥내 투여에 적합하거나 허용하거나 용이하게 한다. 백은 투여 이전에 또는 동안에 단리된 태반 세포와 하나 이상의 다른 용액, 예를 들어 약물의 혼합을 허용하도록 서로 연결된 다중 루멘 또는 구획을 포함할 수 있다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 조성물은 조합된 세포 집단의 동결보존을 용이하게 하는 하나 이상의 화합물을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포 집단은 생리학상 허용되는 수성 용액 내에 함유된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 생리학상 허용되는 수용액은 0.9% NaCl 용액이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포 집단은 상기 세포 집단의 수용자에 대해 HLA가 매칭되는 태반 세포를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 조합된 세포 집단은 상기 세포 집단의 수용자에 대해 적어도 부분적으로 HLA가 미스매칭되는 태반 세포를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 다수의 공여자로부터 유래된다.
특정 실시양태에서, 용기 내의 단리된 태반 세포는 동결보존되었고 용기 내에 함유된 단리된 CD10+, CD34-, CD105+ 태반 세포이다. 구체적 실시양태에서, 상기 CD10+, CD34-, CD105+ 태반 세포는 또한 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ 태반 세포는 또한 CD45- 또는 CD90+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ 태반 세포는 또한 CD45- 또는 CD90+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-카드헤린약, CD184/CXCR4-, CD200+, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR-, HLA-G- 또는 프로그램화된 사멸-1 리간드 (PDL1)+ 중 하나 이상, 또는 이들의 임의의 조합이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD13+, CD29+, CD33+, CD38-, CD44+, CD45-, CD54/ICAM+, CD62E-, CD62L-, CD62P-, SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80-, CD86-, CD90+, SH2+ (CD105+), CD106/VCAM+, CD117-, CD144/VE-카드헤린약, CD184/CXCR4-, CD200+, CD133-, OCT-4+, SSEA3-, SSEA4-, ABC-p+, KDR- (VEGFR2-), HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR-, HLA-G- 및 프로그램화된 사멸-1 리간드 (PDL1)+이다.
특정의 다른 실시양태에서, 상기 언급된 단리된 태반 세포는 동결보존되었고 용기 내에 함유된 단리된 CD200+, HLA-G- 태반 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 동결보존되었고 용기 내에 함유된 CD73+, CD105+, CD200+ 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 동결보존되었고 용기 내에 함유된 CD200+, OCT-4+ 줄기 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 동결보존되었고 용기 내에 함유된 CD73+, CD105+ 세포이고, 이때 상기 단리된 태반 세포는 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 태반 세포의 집단과 함께 배양되는 경우 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진한다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 동결보존되었고 용기 내에 함유된 CD73+, CD105+, HLA-G- 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 동결보존되었고 용기 내에 함유된 OCT-4+ 태반 세포이고, 이때 상기 세포는 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 태반 세포의 집단과 함께 배양되는 경우 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진한다.
또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 언급된 단리된 태반 세포는 유동 세포측정법에 의해 검출될 때 CD34-, CD10+ 및 CD105+인 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포 (예를 들어, PDAC)이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 신경 표현형을 갖는 세포, 골형성 표현형을 갖는 세포, 또는 연골형성 표현형을 갖는 세포로 분화하는 잠재력을 갖는다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 추가로 CD200+이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출될 때 CD90+ 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출될 때 CD90+ 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 태반 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출될 때 CD90+ 또는 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, CD34-, CD10+, CD105+, CD200+ 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출될 때 CD90+ 및 CD45-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, CD34-, CD10+, CD105+, CD200+, CD90+, CD45- 세포는 추가로 유동 세포측정법에 의해 검출될 때 CD80- 및 CD86-이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, CD34-, CD10+, CD105+ 세포는 추가로 CD29+, CD38-, CD44+, CD54+, CD80-, CD86-, SH3+ 또는 SH4+ 중 하나 이상이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 세포는 추가로 CD44+이다. 상기 임의의 단리된 CD34-, CD10+, CD105+ 태반 세포의 구체적 실시양태에서, 세포는 추가로 CD117-, CD133-, KDR- (VEGFR2-), HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR- 및/또는 PDL1+ 중 하나 이상이다.
상기 동결보존된 단리된 태반 세포들 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 상기 용기는 백이다. 다양한 구체적 실시양태에서, 상기 용기는 대략, 최소 또는 최대 1 x 106개의 상기 단리된 태반 세포, 5 x 106개의 상기 단리된 태반 세포, 1 x 107개의 상기 단리된 태반 세포, 5 x 107개의 상기 단리된 태반 세포, 1 x 108개의 상기 단리된 태반 세포, 5 x 108개의 상기 단리된 태반 세포, 1 x 109개의 상기 단리된 태반 세포, 5 x 109개의 상기 단리된 태반 세포, 1 x 1010개의 상기 단리된 태반 세포, 또는 1 x 1010개의 상기 단리된 태반 세포를 포함한다. 상기 동결보존된 집단들 중 임의의 것의 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포는 대략, 최소, 또는 최대 5회, 또는 최대 10회, 최대 15회, 또는 최대 20회 계대배양되었다. 상기 동결보존된 단리된 태반 세포들 중 임의의 것의 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 단리된 태반 세포가 상기 용기 내에서 확장되었다.
4.7.2 유전적으로 조작된 태반 세포
또한, 태반 세포, 예를 들어 임의의 태반 다능 세포 또는 상기 섹션 4.2.2에 기재된 태반 세포, 또는 이러한 태반 세포를 포함하는 제약 조성물이 본원에 제공되며, 여기서 상기 태반 세포는 재조합 또는 외인성 시토카인을 생산하도록 유전적으로 조작되어 있다.
예를 들어 레트로바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스 벡터, 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 세포를 유전적으로 조작하는 방법, 또는 당업자에게 공지된 다른 방법이 사용될 수 있다. 이들은 핵산 분자를 세포 내에 수송하고 발현하는 발현 벡터를 포함한다. (문헌 [Geoddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990)] 참조). 벡터 DNA는 통상적인 형질전환 또는 형질감염 기술을 통해 원핵생물 또는 진핵생물 세포 내로 도입될 수 있다. 숙주 세포의 형질전환 또는 형질감염에 적합한 방법은 문헌 [Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory press (1989)], 및 다른 실험 교재에서 볼 수 있다.
태반 세포, 예를 들어 상기 섹션 4.2에 기재된 PDAC는, 예를 들어 DNA 또는 RNA 바이러스 벡터, 예컨대 레트로바이러스 (렌티바이러스 포함), 원숭이 바이러스 40 (SV40), 아데노바이러스, 신드비스 바이러스, 및 소 유두종바이러스의 사용을 포함하는 바이러스 전달; 화학적 전달, 예를 들어 인산칼슘 형질감염 및 DEAE 덱스트란 형질감염 방법; 예를 들어 DNA-로딩 막 소포, 예컨대 리포솜, 적혈구 고스트, 및 원형질체를 사용한 막 융합 전달; 또는 물리적 전달 기술, 예컨대 미세주사, 전기천공, 또는 네이키드 DNA 전달을 포함하는 방법에 의해 DNA 또는 RNA, 예를 들어 관심있는 단백질을 코딩하는 DNA 또는 RNA를 세포 내로 도입함으로써 유전적으로 변형될 수 있다. 태반 세포는 외인성 DNA의 삽입에 의해, 또는 세포 게놈의 절편의 외인성 DNA로의 치환에 의해 유전적으로 변경될 수 있다. 외인성 DNA 서열(들)의 삽입은, 예를 들어 상동성 재조합에 의해 또는 숙주 세포 게놈 내로의 바이러스 통합에 의해, 또는 플라스미드 발현 벡터 및 핵 국재화 서열을 사용한 DNA의 세포 내로, 특히 그의 핵 내로의 통합에 의해 수행될 수 있다. DNA는 특정 화학물질/약물, 예를 들어 테트라시클린을 사용하여 관심있는 단백질의 발현의 양성 또는 음성 유도를 허용하는 하나 이상의 프로모터를 포함할 수 있고; 다른 실시양태에서, 프로모터는 구성적일 수 있다.
인산칼슘 형질감염은, 예를 들어 관심있는 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 함유하는 플라스미드 DNA를 세포 내로 도입하기 위해 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, DNA를 염화칼슘의 용액과 합한 다음, 포스페이트-완충 용액에 첨가한다. 침전물이 형성되면, 용액을 배양된 세포에 직접 첨가한다. DMSO 또는 글리세롤을 사용한 처리는 형질감염 효율을 개선하기 위해 사용될 수 있고, 안정한 형질감염체의 수준은 비스-히드록시에틸아미노 에탄술포네이트 (BES)를 사용하여 개선될 수 있다. 인산칼슘 형질감염 시스템은 상업적으로 이용가능하다 (예를 들어, 프로펙션(PROFECTION)®, 프로메가 코포레이션(Promega Corp., 위스콘신주 매디슨)). DEAE-덱스트란 형질감염도 또한 이용될 수 있다.
단리된 태반 세포는 또한 미세주사에 의해 유전적으로 조작될 수 있다. 특정 실시양태에서, 유리 마이크로피펫은 DNA 또는 RNA를 주입하기 위해 광학 현미경 하에 세포의 핵 내로 안내된다.
또한, 태반 세포는 전기천공을 이용하여 유전적으로 변형될 수 있다. 특정 실시양태에서, DNA 또는 RNA는 배양된 세포의 현탁액에 첨가되고, DNA/RNA-세포 현탁액을 2개의 전극 사이에 놓고, 전기 펄스를 적용하여 세포의 외막을 일시적으로 투과가능하게 만들고, 이것은 막을 가로지른 세공의 발생에 의해 분명해진다.
세포를 유전적으로 변형하기 위한 DNA 또는 RNA의 리포솜 전달은 임의로 디올레오일 포스파티딜에탄올아민 (DOPE) 또는 디올레오일 포스파티딜콜린 (DOPC), 예를 들어 리포펙틴(LIPOFECTIN)® (라이프 테크놀로지스, 인크.(Life Technologies, Inc.))을 포함하는 양이온성 리포솜을 사용하여 수행할 수 있다. 다른 상업적으로 이용가능한 전달 시스템은 에펙텐(EFFECTENE)™ (퀴아젠(Qiagen)), 도탑(DOTAP) (로슈 몰레큘라 바이오케미칼스(Roche Molecular Biochemicals)), 퓨젠 6(FUGENE 6)™ (로슈 몰레큘라 바이오케미칼스), 및 트랜스펙탐(TRANSFECTAM)® (프로메가)을 포함한다.
바이러스 벡터는 예를 들어 표적 유전자, 폴리뉴클레오티드, 안티센스 분자 또는 리보자임 서열의 세포 내로의 전달에 의해 태반 세포를 유전적으로 변경하기 위해 사용될 수 있다. 레트로바이러스 벡터가 신속하게 분열하는 세포의 형질도입에 효과적이지만, 또한 많은 레트로바이러스 벡터가 DNA를 비-분열 세포 내로 효과적으로 전달하기 위해 개발되었다. 레트로바이러스 벡터에 대한 패키징 세포주는 당업자에게 공지되어 있다. 특정 실시양태에서, 레트로바이러스 DNA 벡터는 다중 클로닝 부위 내로 클로닝된 표적 유전자 서열에 작동가능하게 연결된 SV40 프로모터의 5'에 제1 LTR이 위치하고, 이어서 3'에 제2 LTR이 위치하도록 2개의 레트로바이러스 LTR을 함유한다. 일단 형성된 후에, 레트로바이러스 DNA 벡터는 이전에 설명된 바와 같이 인산칼슘-매개 형질감염을 사용하여 패키징 세포주 내로 전달된다. 바이러스 생산 약 48시간 후에, 이제 표적 유전자 서열을 함유하는 바이러스 벡터를 수거하였다. 렌티바이러스 벡터, 재조합 포진 바이러스, 아데노바이러스 벡터, 또는 알파바이러스 벡터를 사용하여 세포를 형질감염시키는 방법은 당업계에 공지되어 있다.
표적 세포의 성공적인 형질감염 또는 형질도입은 당업자에게 공지된 기술로 유전자 마커를 사용하여 입증될 수 있다. 예를 들어, 에쿼레아 빅토리아(Aequorea victoria)의 녹색 형광 단백질은 유전적으로 변형된 조혈 세포를 확인하고 추적하기 위한 효과적인 마커로 밝혀졌다. 다른 선택 마커는 β-Gal 유전자, 말단절단된 신경 성장 인자 수용체, 또는 약물 선택 마커 (비제한적으로 NEO, MTX, 또는 히그로마이신을 포함하는)를 포함한다.
4.7.3 제약 조성물
단리된 태반 세포, 예를 들어 PDAC의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단이 생체내에서, 예를 들어 본원에 제공된 치료 방법에서 사용하기 위한 제약 조성물로 제제화될 수 있다. 이러한 제약 조성물은 제약상 허용되는 담체, 예를 들어 염수 용액 또는 생체내 투여를 위한 또 다른 허용되는 생리학상 허용되는 용액 내에 단리된 태반 세포의 집단, 또는 단리된 태반 세포를 포함하는 세포의 집단을 포함한다. 본원에 기재된 단리된 태반 세포를 포함하는 제약 조성물은 본원의 다른 곳에 기재된 단리된 태반 세포 집단 또는 단리된 태반 세포 중 임의의 것 또는 임의의 조합을 포함할 수 있다. 제약 조성물은 태아의 단리된 태반 세포, 모체의 단리된 태반 세포, 또는 태아 및 모체 양쪽 모두의 단리된 태반 세포를 포함할 수 있다. 본원에 제공된 제약 조성물은 단일 개체 또는 태반으로부터 또는 다수의 개체 또는 태반으로부터 수득된 단리된 태반 세포를 추가로 포함할 수 있다.
본원에 제공된 제약 조성물은 임의의 개수의 단리된 태반 세포를 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 예를 들어 단리된 태반 세포의 단일 단위 용량은 대략, 최소 또는 최대 1 x 105, 5 x 105, 1 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 5 x 108, 1 x 109, 5 x 109, 1 x 1010, 5 x 1010, 1 x 1011개 또는 이를 초과하는 개수의 단리된 태반 세포를 포함할 수 있다.
본원에 제공된 제약 조성물은 50% 생존 세포 또는 그 초과를 포함하는 세포의 집단을 포함한다 (즉, 집단 중 50% 이상의 세포가 기능하거나 살아있음). 바람직하게는, 집단 중의 세포의 60% 이상이 생존성이다. 더욱 바람직하게는, 제약 조성물에서 집단 중의 세포의 적어도 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99%가 생존성이다.
본원에 제공된 제약 조성물은 예를 들어 생착을 용이하게 하는 하나 이상의 화합물 (예를 들어, 항-T-세포 수용체 항체, 면역억제제 등); 안정화제, 예컨대 알부민, 덱스트란 40, 젤라틴, 히드록시에틸 전분, 플라즈마라이트 등을 포함할 수 있다.
주사용 용액으로 제제화되는 경우에, 한 실시양태에서, 제약 조성물은 약 1% 내지 1.5% HSA 및 약 2.5% 덱스트란을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 제약 조성물은 5% HSA 및 10% 덱스트란을 포함하고 면역억제제, 예를 들어 시클로스포린 A (예를 들어, 10 mg/kg)를 임의로 포함하는 용액 내에 약 5 x 106개 세포/밀리리터 내지 약 2 x 107개 세포/밀리리터를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제약 조성물, 예를 들어 용액은 다수의 세포, 예를 들어 단리된 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포를 포함하고, 이때 상기 제약 조성물은 약 1.0±0.3 x 106개 세포/밀리리터 내지 약 5.0±1.5 x 106개 세포/밀리리터를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 약 1.5 x 106개 세포/밀리리터 내지 약 3.75 x 106개 세포/밀리리터를 포함한다. 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 약 1 x 106개 세포/mL 내지 약 50 x 106개 세포/mL, 약 1 x 106개 세포/mL 내지 약 40 x 106개 세포/mL, 약 1 x 106개 세포/mL 내지 약 30 x 106개 세포/mL, 약 1 x 106개 세포/mL 내지 약 20 x 106개 세포/mL, 약 1 x 106개 세포/mL 내지 약 15 x 106개 세포/mL, 또는 약 1 x 106개 세포/mL 내지 약 10 x 106개 세포/mL를 포함한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 가시적인 세포 클럼프를 포함하지 않거나 (즉, 대형 세포 클럼프가 없음), 또는 이러한 가시적인 클럼프가 실질적으로 없다. 본원에 사용된 "대형 세포 클럼프"는 확대 없이 가시적인, 예를 들어 육안으로 가시적인 세포의 응집체를 의미하고, 일반적으로 약 150 마이크로미터보다 큰 세포 응집체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 약 2.5%, 3.0%, 3.5%, 4.0%, 4.5%, 5.0%, 5.5%, 6.0%, 6.5%, 7.0%, 7.5%, 8.0%, 8.5%, 9.0%, 9.5% 또는 10% 덱스트란, 예를 들어 덱스트란-40을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 상기 조성물은 약 7.5% 내지 약 9% 덱스트란-40을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 상기 조성물은 약 5.5% 덱스트란-40을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 약 1% 내지 약 15% 인간 혈청 알부민 (HSA)을 포함한다. 구체적 실시양태에서, 제약 조성물은 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14% 또는 15% HSA를 포함한다. 구체적 실시양태에서, 상기 세포는 동결보존 및 해동되었다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포는 70 μm 내지 100 μm 필터를 통해 여과하였다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 조성물은 가시적인 세포 클럼프를 포함하지 않는다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 조성물은 106개 세포당 약 200개 미만의 세포 클럼프를 포함하며, 여기서 상기 세포 클럼프는 현미경, 예를 들어 광학 현미경 하에서만 가시적이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 조성물은 106개 세포당 약 150개 미만의 세포 클럼프를 포함하며, 여기서 상기 세포 클럼프는 현미경, 예를 들어 광학 현미경 하에서만 가시적이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 조성물은 106개 세포당 약 100개 미만의 세포 클럼프를 포함하며, 여기서 상기 세포 클럼프는 현미경, 예를 들어 광학 현미경 하에서만 가시적이다.
구체적 실시양태에서, 제약 조성물은 약 1.0±0.3 x 106개 세포/밀리리터, 약 5.5% 덱스트란-40 (w/v), 약 10% HSA (w/v), 및 약 5% DMSO (v/v)를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 다수의 세포, 예를 들어 다수의 단리된 태반 세포를 10% 덱스트란-40을 포함하는 용액 내에 함유하고, 이때 제약 조성물은 약 1.0±0.3 x 106개 세포/밀리리터 내지 약 5.0±1.5 x 106개 세포/밀리리터를 포함하고, 상기 조성물은 육안으로 가시적인 세포 클럼프를 포함하지 않는다 (즉, 대형 세포 클럼프를 포함하지 않는다). 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 약 1.5 x 106개 세포/밀리리터 내지 약 3.75 x 106개 세포/밀리리터를 포함한다. 구체적 실시양태에서, 상기 세포는 동결보존 및 해동되었다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 세포는 70 μm 내지 100 μm 필터를 통해 여과하였다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 조성물은 106개 세포 당 약 200개 미만의 미세 세포 클럼프 (즉, 확대했을 때만 가시적인 세포 클럼프)를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 제약 조성물은 106개 세포 당 약 150개 미만의 미세 세포 클럼프를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 제약 조성물은 106개 세포 당 약 100개 미만의 미세 세포 클럼프를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 제약 조성물은 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3% 또는 2% 미만의 DMSO, 또는 1%, 0.9%, 0.8%, 0.7%, 0.6%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%, 또는 0.1% 미만의 DMSO를 포함한다.
본원에 개시된 방법 중 하나에 의해 생성되는, 세포를 포함하는 조성물이 본원에 추가로 제공된다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 제약 조성물이 세포를 포함하고, 이때 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포를 포함하는 용액을 여과하여, 여과된 세포-함유 용액을 형성시키는 단계; 여과된 세포-함유 용액을, 예를 들어 동결보존 전에, 밀리리터 당 약 1 내지 50 x 106개, 1 내지 40 x 106개, 1 내지 30 x 106개, 1 내지 20 x 106개, 1 내지 15 x 106개, 또는 1 내지 10 x 106개 세포로 제1 용액으로 희석하는 단계; 및 생성된 여과된 세포-함유 용액을 덱스트란을 포함하지만 인간 혈청 알부민 (HSA)은 포함하지 않는 제2 용액으로 희석하여, 상기 조성물을 생산하는 단계에 의해 제약 조성물이 생산된다. 특정 실시양태에서, 약 15 x 106개 세포/밀리리터 이하로 희석하였다. 특정 실시양태에서, 약 10±3 x 106개 세포/밀리리터 이하로 희석하였다. 특정 실시양태에서, 약 7.5 x 106개 세포/밀리리터 이하로 희석하였다. 다른 특정 실시양태에서, 여과된 세포-함유 용액이 희석 전에 약 15 x 106개 미만의 세포/밀리리터를 포함하는 경우에, 여과가 임의적이다. 다른 특정 실시양태에서, 희석 전의 여과된 세포-함유 용액이 약 10±3 x 106개 세포/밀리리터 미만을 포함하는 경우에, 여과는 임의적이다. 다른 특정 실시양태에서, 여과된 세포-함유 용액이 희석 전에 약 7.5 x 106개 미만의 세포/밀리리터를 포함하는 경우에, 여과는 임의적이다.
구체적 실시양태에서, 세포는 제1 희석 용액에 의한 상기 희석 및 상기 제2 희석 용액에 의한 상기 희석 사이에 동결보존된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 제1 희석 용액은 덱스트란 및 HSA를 포함한다. 제1 희석 용액 또는 제2 희석 용액 내의 덱스트란은 임의의 분자량의 덱스트란, 예를 들어 분자량이 약 10 kDa 내지 약 150 kDa인 덱스트란일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상기 제1 희석 용액 또는 상기 제2 용액 내의 상기 덱스트란은 약 2.5%, 3.0%, 3.5%, 4.0%, 4.5%, 5.0%, 5.5%, 6.0%, 6.5%, 7.0%, 7.5%, 8.0%, 8.5%, 9.0%, 9.5% 또는 10% 덱스트란이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 제1 희석 용액 또는 상기 제2 희석 용액 내의 덱스트란은 덱스트란-40이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 제1 희석 용액 및 상기 제2 희석 용액 내의 덱스트란은 덱스트란-40이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 제1 희석 용액 내의 상기 덱스트란-40은 5.0% 덱스트란-40이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 제1 희석 용액 내의 상기 덱스트란-40은 5.5% 덱스트란-40이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 제2 희석 용액 내의 상기 덱스트란-40은 10% 덱스트란-40이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, HSA를 포함하는 상기 용액 내의 상기 HSA는 1 내지 15% HSA이다. 또른 구체적 실시양태에서, HSA를 포함하는 상기 용액 내의 상기 HSA는 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14% 또는 15% HSA이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, HSA를 포함하는 상기 용액 중의 상기 HSA는 10% HSA이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 제1 희석 용액은 HSA를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 제1 희석 용액 내의 상기 HSA는 10% HSA이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 제1 희석 용액은 동결보호제를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 동결보호제는 DMSO이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 제2 희석 용액 내의 상기 덱스트란-40은 약 10% 덱스트란-40이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 세포를 포함하는 상기 조성물은 약 7.5% 내지 약 9% 덱스트란을 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 제약 조성물은 약 1.0±0.3 x 106개 세포/밀리리터 내지 약 5.0±1.5 x 106개 세포/밀리리터를 포함한다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 제약 조성물은 약 1.5 x 106개 세포/밀리리터 내지 약 3.75 x 106개 세포/밀리리터를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, (a) 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포를 포함하는 세포-함유 용액을 동결보존 전에 여과하여, 여과된 세포-함유 용액을 생산하는 단계; (b) 여과된 세포-함유 용액 내의 세포를 약 1 내지 50 x 106개, 1 내지 40 x 106개, 1 내지 30 x 106개, 1 내지 20 x 106개, 1 내지 15 x 106개, 또는 1 내지 10 x 106개 세포/밀리리터로 동결보존하는 단계; (c) 세포를 해동시키는 단계; 및 (d) 여과된 세포-함유 용액을 덱스트란-40 용액으로 약 1:1 내지 약 1:11 (v/v) 희석하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제약 조성물이 제조된다. 특정 실시양태에서, 단계 (a) 전에 세포수가 약 10±3 x 106개 세포/밀리리터 미만이면, 여과가 임의적이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단계 (b)의 세포는 약 10±3 x 106개 세포/밀리리터로 동결보존된다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 단계 (b)의 세포는 약 5% 내지 약 10% 덱스트란-40 및 HSA를 포함하는 용액 내에 동결보존된다. 특정 실시양태에서, 단계 (b)에서 약 15 x 106개 세포/밀리리터 이하로 희석하였다.
또 다른 실시양태에서, (a) 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포를 10% HSA를 포함하는 5.5% 덱스트란-40 용액에 현탁하여, 세포-함유 용액을 형성시키는 단계; (b) 세포-함유 용액을 70 μm 필터로 여과하는 단계; (c) 세포-함유 용액을 5.5% 덱스트란-40, 10% HSA 및 5% DMSO를 포함하는 용액으로 약 1 내지 50 x 106개, 1 내지 40 x 106개, 1 내지 30 x 106개, 1 내지 20 x 106개, 1 내지 15 x 106개, 또는 1 내지 10 x 106개 세포/밀리리터로 희석하는 단계; (d) 세포를 동결보존하는 단계; (e) 세포를 해동시키는 단계; 및 (f) 세포-함유 용액을 10% 덱스트란-40으로 1:1 내지 1:11 (v/v) 희석하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제약 조성물이 제조된다. 특정 실시양태에서, 상기 단계 (c)에서의 희석은 약 15 x 106개 세포/밀리리터 이하이다. 특정 실시양태에서, 상기 단계 (c)에서의 희석은 약 10±3 x 106개 세포/mL 이하이다. 특정 실시양태에서, 상기 단계 (c)에서의 희석은 약 7.5 x 106개 세포/mL 이하이다.
또 다른 실시양태에서, 세포를 포함하는 조성물이 (a) 다수의 세포를 원심분리하여 세포를 수집하는 단계; (b) 세포를 5.5% 덱스트란-40에 재현탁하는 단계; (c) 세포를 원심분리하여 세포를 수집하는 단계; (d) 세포를 10% HSA를 포함하는 5.5% 덱스트란-40 용액에 재현탁시키는 단계; (e) 세포를 70 μm 필터로 여과하는 단계; (f) 세포를 5.5% 덱스트란-40, 10% HSA 및 5% DMSO에서 약 1 내지 50 x 106개, 1 내지 40 x 106개, 1 내지 30 x 106개, 1 내지 20 x 106개, 1 내지 15 x 106개, 또는 1 내지 10 x 106개 세포/밀리리터로 희석하는 단계; (g) 세포를 동결보존하는 단계; (h) 세포를 해동시키는 단계; 및 (i) 세포를 10% 덱스트란-40으로 1:1 내지 1:11 (v/v) 희석하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조된다. 특정 실시양태에서, 단계 (f)에서 약 15 x 106개 세포/밀리리터 이하로 희석하였다. 특정 실시양태에서, 단계 (f)에서 약 10±3 x 106개 세포/mL 이하로 희석하였다. 특정 실시양태에서, 상기 단계 (f)에서의 희석은 약 7.5 x 106개 세포/mL 이하이다. 다른 특정 실시양태에서, 세포의 수가 약 10±3 x 106개 세포/밀리리터 미만인 경우에, 여과는 임의적이다.
본원에 기재된 단리된 태반 세포를 포함하는 조성물, 예를 들어 제약 조성물은 임의의 본원에 기재된 단리된 태반 세포를 포함할 수 있다.
세포성 제품의 투여에 적절한 또 다른 주사가능한 제제가 사용될 수 있다.
한 실시양태에서, 제약 조성물은 실질적으로 또는 완전히 비-모체 기원인, 즉 태아 유전자형을 갖는 단리된 태반 세포를 포함하며, 예를 들어 적어도 약 90%, 95%, 98%, 99% 또는 약 100%가 비-모체 기원이다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 제약 조성물은 CD200+ 및 HLA-G-; CD73+, CD105+, 및 CD200+; CD200+ 및 OCT-4+; CD73+, CD105+ 및 HLA-G-; CD73+ 및 CD105+이며, 상기 태반 세포의 집단을 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양할 때 상기 단리된 태반 세포의 집단을 포함하는 태반 세포의 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진하는 단리된 태반 세포의 집단; 또는 OCT-4+이며, 상기 태반 세포의 집단을 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양할 때 상기 단리된 태반 세포의 집단을 포함하는 태반 세포의 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진하는 단리된 태반 세포의 집단; 또는 이들의 조합인 단리된 태반 세포의 집단을 포함하며, 여기서 적어도 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%의 상기 단리된 태반 세포는 비-모체 기원이다. 또 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 CD10+, CD105+ 및 CD34-; CD10+, CD105+, CD200+ 및 CD34-; CD10+, CD105+, CD200+, CD34-이고, CD90+ 또는 CD45-; CD10+, CD90+, CD105+, CD200+, CD34- 및 CD45-; CD10+, CD90+, CD105+, CD200+, CD34- 및 CD45-; CD200+ 및 HLA-G-; CD73+, CD105+, 및 CD200+; CD200+ 및 OCT-4+; CD73+, CD105+ 및 HLA-G-; CD73+ 및 CD105+ 중 하나 이상이며, 상기 태반 세포의 집단을 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양할 때 상기 단리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진하는 단리된 태반 세포의 집단; OCT-4+이며, 상기 태반 세포의 집단을 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에서 배양할 때 상기 단리된 태반 세포를 포함하는 태반 세포의 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진하는 단리된 태반 세포의 집단; 또는 CD117-, CD133-, KDR-, CD80-, CD86-, HLA-A,B,C+, HLA-DP,DQ,DR- 및/또는 PDL1+ 중 하나 이상인 단리된 태반 세포의 집단; 또는 이들의 조합인 단리된 태반 세포의 집단을 포함하며, 여기서 적어도 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99%의 상기 단리된 태반 세포는 비-모체 기원이다. 구체적 실시양태에서, 제약 조성물은 태반으로부터 수득되지 않은 줄기 세포를 추가로 포함한다.
본원에 제공된 조성물, 예를 들어 제약 조성물 중의 단리된 태반 세포는 단일 공여자로부터 또는 다중 공여자로부터 유래된 태반 세포를 포함할 수 있다. 단리된 태반 세포는 의도된 수용자에게 완전히 HLA-매칭되거나, 또는 부분적으로 또는 완전히 HLA-미스매칭될 수 있다.
4.7.4 단리된 태반 세포를 포함하는 매트릭스
태반 세포, 또는 단리된 태반 세포의 집단을 포함하는 매트릭스, 히드로겔, 스캐폴드 등을 포함하는 조성물이 본원에 추가로 제공된다. 이러한 조성물은 액체 현탁액 내의 세포 대신에 또는 그에 추가로 사용될 수 있다.
본원에 기재된 단리된 태반 세포가 천연 매트릭스, 예를 들어 태반 생체재료 예컨대 양막 물질 상에 시딩될 수 있다. 이러한 양막 물질은, 예를 들어 포유동물 태반으로부터 직접적으로 해부된 양막; 고정되거나 열 처리된 양막, 실질적으로 무수인 (즉 H2O 20% 미만인) 양막, 융모막, 실질적으로 무수인 융모막, 실질적으로 무수인 양막 및 융모막 등일 수 있다. 단리된 태반 세포가 시딩될 수 있는 바람직한 태반 생체재료가 미국 출원 공보 번호 2004/0048796 (Hariri)에 기재되어 있고, 그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본원에 기재된 단리된 태반 세포가 예를 들어 주사에 적절한 히드로겔 용액에 현탁될 수 있다. 상기 조성물에 적합한 히드로겔은 자가조립형 펩티드, 예를 들어 RAD16을 포함한다. 한 실시양태에서, 세포를 포함하는 히드로겔 용액은, 예를 들어 주형 내에서, 세포가 내부에 분산되어 있는 주입용 매트릭스를 형성하도록 경화될 수 있다. 이러한 매트릭스 내의 단리된 태반 세포는 이식 전에 세포가 유사분열에 의해 확장되도록 또한 배양될 수 있다. 히드로겔은, 예를 들어 물 분자를 포획하는 3차원 개방형 격자 구조를 생성하도록 공유 결합, 이온 결합 또는 수소 결합을 통해 가교되어 겔을 형성하는 유기 중합체 (천연 또는 합성)이다. 히드로겔-형성 물질로는 폴리사카라이드, 예컨대 알기네이트 및 그의 염, 펩티드, 폴리포스파진, 및 폴리아크릴레이트 (이온적으로 가교됨), 또는 블록 중합체, 예컨대 폴리에틸렌 옥시드-폴리프로필렌 글리콜 블록 공중합체 (온도 또는 pH에 의해 가교됨)가 각각 포함된다. 일부 실시양태에서, 히드로겔 또는 매트릭스는 생분해성이다.
일부 실시양태에서, 제제는 계내 중합성 겔을 포함한다 (예를 들어, 미국 특허 출원 공보 번호 2002/0022676 (그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함됨); 문헌 [Anseth et al., J. Control Release, 78(1-3): 199-209 (2002)]; [Wang et al., Biomaterials, 24(22):3969-80 (2003)] 참조).
일부 실시양태에서, 중합체는 수용액, 예컨대 물, 완충 염 용액, 또는 하전된 측기를 갖는 수성 알콜 용액, 또는 그의 1가 이온성 염에 적어도 부분적으로 가용성이다. 양이온과 반응할 수 있는 산성 측기를 갖는 중합체의 예는 폴리(포스파젠), 폴리(아크릴산), 폴리(메타크릴산), 아크릴산과 메타크릴산의 공중합체, 폴리(비닐 아세테이트), 및 황산화 중합체, 예컨대 황산화 폴리스티렌이다. 아크릴산 또는 메타크릴산 및 비닐 에테르 단량체 또는 중합체의 반응에 의해 형성된 산성 측기를 갖는 공중합체가 또한 사용될 수 있다. 산성 기의 예는 카르복실산 기, 술폰산 기, 할로겐화 (바람직하게는 플루오린화) 알콜 기, 페놀계 OH 기, 및 산성 OH 기이다.
본원에 기재된 단리된 태반 세포 또는 그의 공동-배양물이 3차원 프레임워크 또는 스캐폴드 상에 시딩되어 생체 내로 이식될 수 있다. 이러한 프레임워크는 조직 형성을 예를 들어 자극하는 임의의 1가지 이상의 성장 인자, 세포, 약물 또는 기타 성분과 조합되어 이식될 수 있다.
사용될 수 있는 스캐폴드의 예로는 부직포 매트, 다공성 발포체, 또는 자가 어셈블링 펩티드가 포함된다. 부직포 매트는 글리콜산 및 락트산의 합성 흡수성 공중합체 (예를 들어, PGA/PLA)로 구성된 섬유 (비크릴(VICRYL), 에티콘, 인크.(Ethicon, Inc.), 뉴저지주 솜머빌)를 사용하여 형성할 수 있다. 동결-건조 또는 냉동건조와 같은 프로세스에 의해 형성된, 예를 들어 폴리(ε-카프로락톤)/폴리(글리콜산) (PCL/PGA) 공중합체로 구성된 발포체 (예를 들어, 미국 특허 제6,355,699호 참조)가 또한 스캐폴드로서 사용될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 생체흡수성 물질 예컨대 PGA, PLA, PCL 공중합체 또는 블렌드, 또는 히알루론산으로부터 제조된 멀티필라멘트사로 예를 들어 구성될 수 있는 펠트 상에 시딩되거나 또는 이와 접촉될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 단리된 태반 세포가 복합 구조물일 수 있는 발포체 스캐폴드 상에 시딩될 수 있다. 이러한 발포체 스캐폴드는 유용한 형상, 예컨대 복원, 대체 또는 확대될 신체 내의 특정 구조물의 일부분의 형상으로 성형될 수 있다. 일부 실시양태에서, 세포 부착을 향상시키기 위해, 프레임워크를 예를 들어, 0.1M 아세트산으로 처리한 후 폴리리신, PBS 및/또는 콜라겐 내에서 인큐베이팅한 후, 세포를 접종한다. 매트릭스의 외부 표면은, 예컨대 매트릭스의 혈장-코팅, 또는 하나 이상의 단백질 (예를 들어, 콜라겐, 탄성 섬유, 세망 섬유), 당단백질, 글리코스아미노글리칸 (예를 들어, 헤파린 술페이트, 콘드로이틴-4-술페이트, 콘드로이틴-6-술페이트, 데르마탄 술페이트, 케라틴 술페이트 등), 세포 매트릭스, 및/또는 기타 물질, 예컨대 이들로 한정되는 것은 아닌 젤라틴, 알기네이트, 한천, 아가로스 및 식물 검 등의 첨가에 의해, 세포의 부착 또는 성장 및 조직의 분화를 개선시키기 위해 변형될 수 있다.
일부 실시양태에서, 스캐폴드는 이를 비-혈전형성성이도록 하는 물질을 포함하거나 또는 이러한 물질로 처리될 수 있다. 이러한 처리 및 물질은 내피 성장, 이동, 및 세포외 매트릭스 침착을 또한 촉진하고 유지시킬 수 있다. 이러한 재료 및 처리의 예는 천연 재료 예컨대 기저막 단백질 예컨대 라미닌 및 IV형 콜라겐, 합성 재료 예컨대 EPTFE, 및 분절형 폴리우레탄 실리콘, 예컨대 푸르스판(PURSPAN)™ (더 폴리머 테크놀로지 그룹, 인크.(The Polymer Technology Group, Inc.), 캘리포니아주 버클리)을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 스캐폴드는 항-혈전제 예컨대 헤파린을 또한 포함할 수 있고; 또한 스캐폴드는 단리된 태반 세포의 시딩 전에 표면 전하가 변경되도록 처리될 수 있다 (예를 들어, 혈장으로 코팅됨).
본원에 제공된 태반 세포 (예를 들어, PDAC)는 또한 모노-, 디-, 트리-, 알파-트리-, 베타-트리-, 및 테트라-칼슘 포스페이트, 히드록시아파타이트, 플루오로아파타이트, 황산칼슘, 플루오린화칼슘, 산화칼슘, 탄산칼슘, 마그네슘 칼슘 포스페이트, 생물학적 활성 유리, 예컨대 바이오글래스(BIOGLASS)®, 및 이들의 혼합물을 포함하고 이로 제한되지 않는 생리학상 허용되는 세라믹 물질 상에 접종되거나 그와 접촉될 수 있다. 현재 시판되는 다공성 생체적합성 세라믹 물질은 서지본(SURGIBONE)® (캔메디카 코포레이션(CanMedica Corp.), 캐나다), 엔도본(ENDOBON)® (머크 바이오머티리얼 프랑스(Merck Biomaterial France), 프랑스), 세로스(CEROS)® (마티스, 아게(Mathys, AG), 스위스 베틀라히), 및 광물화된 콜라겐 골 이식 제품, 예컨대 힐로스(HEALOS)™ (데퓨이, 인크.(DePuy, Inc.), 매사추세츠주 레인햄) 및 비토스(VITOSS)®, 라코스(RHAKOSS)™, 및 코르토스(CORTOSS)® (오르토비타(Orthovita), 펜실베니아주 맬번)를 포함한다. 프레임워크는 천연 및/또는 합성 물질의 혼합물, 블렌드 또는 복합물일 수 있다.
한 실시양태에서, 단리된 태반 세포는 약 0.5 x 106개 내지 약 8 x 106개 세포/mL로 적절한 스캐폴드 상에 시딩되거나 이와 접촉된다.
4.8 불멸화 태반 세포주
성장-촉진 유전자, 즉, 성장-촉진 단백질의 생산 및/또는 활성이 외부 인자에 의해 조절가능하도록, 형질감염된 세포의 성장을 적합한 조건 하에 촉진하는 단백질을 코딩하는 유전자를 함유하는 임의의 적절한 벡터로의 형질감염에 의해 포유동물 태반 세포, 예를 들어 PDAC가 조건부로 불멸화될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 성장-촉진 유전자는 종양유전자, 예컨대 비제한적으로 v-myc, N-myc, c-myc, p53, SV40 대형 T 항원, 폴리오마 대형 T 항원, E1a 아데노바이러스 또는 인간 유두종바이러스의 E7 단백질이다.
성장-촉진 단백질의 외부 조절은 성장-촉진 유전자를 외부-조절가능 프로모터, 예를 들어 형질감염된 세포의 온도 또는 세포와 접촉되는 배지의 조성을 변화시킴으로써 예를 들어 활성이 제어될 수 있는 프로모터의 제어 하에 놓음으로써 달성될 수 있다. 한 실시양태에서, 테트라시클린 (tet)-제어 유전자 발현 시스템이 사용될 수 있다 (문헌 [Gossen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:5547-5551, 1992]; [Hoshimaru et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:1518-1523, 1996] 참조). tet의 부재 하에, 상기 벡터 내의 tet-제어된 전사활성인자 (tTA)는 phCMV *-1 (tet 오퍼레이터 서열에 융합된 인간 시토메갈로바이러스로부터의 최소 프로모터)로부터의 전사를 강하게 활성화시킨다. tTA는 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)의 트랜스포손-10-유래 tet 내성 오페론의 리프레서 (tetR) 및 단순 헤르페스 바이러스의 VP16의 산성 도메인의 융합 단백질이다. tet의 낮은 비-독성 농도 (예를 들어, 0.01 내지 1.0 μg/mL)에서 tTA에 의한 전사활성화가 거의 완전히 폐지된다.
한 실시양태에서, 벡터는 선택가능 마커, 예를 들어 약물 내성을 부여하는 단백질을 코딩하는 유전자를 추가로 함유한다. 박테리아 네오마이신 내성 유전자 (neoR)가 본 발명의 방법에서 사용될 수 있는 이러한 마커 중의 하나이다. neoR을 보유하는 세포는 당업자에게 공지된 수단, 예를 들어 성장 배지에 예를 들어 100-200 μg/mL G418의 첨가에 의해 선택할 수 있다.
형질감염은 레트로바이러스 감염이 포함되지만 이것으로 한정되는 것은 아닌, 당업자에게 공지된 다양한 수단들 중 임의의 것에 의해 달성될 수 있다. 일반적으로, 세포 배양물은 벡터에 대한 생산자 세포주로부터 수집된 조건화 배지 및 N2 보충물 함유 DMEM/F12의 혼합물과의 인큐베이션에 의해 형질감염시킬 수 있다. 예를 들어, 상기 기재된 바와 같이 제조된 태반 세포 배양물이 1 부피의 조건화된 배지 및 2 부피의 N2 보충물 함유 DMEM/F12에서의 약 20시간 동안의 인큐베이션에 의해 시험관내에서 예를 들어 5일 후에 감염될 수 있다. 그후, 선택가능 마커를 보유하는 형질감염된 세포가 상기 기재된 바와 같이 선택될 수 있다.
형질감염 후, 증식을 허용하는, 예를 들어 세포의 30% 이상이 24시간의 기간 내에 배가되도록 하는 표면 상에 배양물이 계대배양된다. 바람직하게는, 기질은 폴리오르니틴 (10 μg/mL) 및/또는 라미닌 (10 μg/mL)으로 코팅된 조직 배양 플라스틱, 폴리리신/라미닌 기질 또는 피브로넥틴으로 처리된 표면으로 구성된 폴리오르니틴/라미닌 기질이다. 그후, 하나 이상의 증식 증강 인자가 보충되었거나 보충되지 않았을 수 있는 성장 배지가 배양물에 3 내지 4일마다 공급된다. 배양물이 50% 미만의 전면배양률을 보이는 경우에 증식 증강 인자가 성장 배지에 첨가될 수 있다.
80-95% 전면배양률이 되었을 때, 표준 기술을 사용하여, 예컨대 트립신처리에 의해 조건부로 불멸화된 태반 세포주가 계대배양될 수 있다. 일부 실시양태에서, 대략 20회의 계대배양까지, 선택을 유지하는 것이 유리하다 (예를 들어, 네오마이신 내성 유전자를 함유하는 세포에 대한 G418의 첨가에 의해). 또한 장기 보관을 위해 세포를 액체 질소 내에 동결시킬 수 있다.
상기 기재된 바와 같이 제조된 조건부로 불멸화된 인간 태반 세포주로부터 클론 세포주가 단리될 수 있다. 일반적으로, 이러한 클론 세포주를 표준 기술을 사용하여, 예컨대 제한 희석에 의해 또는 클로닝 고리를 사용하여 단리할 수 있고, 확장할 수 있다. 일반적으로, 상기 기재된 바와 같이 클론 세포주에 영양을 공급하고 계대배양시킬 수 있다.
클론성일 수 있지만 반드시 클론성일 필요는 없는, 조건부로 불멸화된 인간 태반 세포주는, 일반적으로, 분화를 촉진하는 배양 조건 하에 성장-촉진 단백질의 생산 및/또는 활성을 억제함으로써 분화되도록 유도될 수 있다. 예를 들어, 성장-촉진 단백질을 코딩하는 유전자가 외부적으로 조절가능한 프로모터의 제어 하에 있는 경우에, 조건, 예를 들어 배지의 조성 또는 온도를 변형하여 성장-촉진 유전자의 전사를 억제할 수 있다. 상기 논의된 테트라시클린-제어 유전자 발현 시스템에 대해, 테트라시클린을 첨가하여 성장-촉진 유전자의 전사를 억제함으로써 분화가 달성될 수 있다. 일반적으로, 4-5일 동안의 1 μg/mL 테트라시클린이 분화를 개시시키는 데 충분하다. 추가적인 분화를 촉진하기 위해, 추가적인 작용제가 성장 배지에 포함될 수 있다.
4.9 키트
또 다른 측면에서, 키트의 나머지 내용물로부터 분리된 용기 내에, 조직 배양 플라스틱 부착성 다능 태반 세포, 예를 들어 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포, 예를 들어 상기 섹션 4.2에 기재된 세포 (PDAC), 및 사용 지침서를 포함하는, 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애를 갖는 개체의 치료에 적합한 키트가 본원에 제공된다. 이상적으로, 키트는 사르코이드증, 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애를 갖는 것으로 진단된 환자에게 적용되도록 현장에서, 예를 들어 진료실에서, 또는 응급 치료 제공자에 의해 사용될 수 있다. 바람직하게는, 태반 세포는 제약상 허용되는 용액, 예를 들어 병변내 투여에 적합한 용액 또는 정맥내 투여에 적합한 용액 내에서 제공된다. 특정 실시양태에서, 태반 줄기 세포 또는 태반 다능 세포는 본원에 기재된 CD10+, CD34-, CD105+ 태반 세포, 예를 들어 CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ 태반 세포 또는 CD10+, CD34-, CD45-, CD90+, CD105+, CD200+ 태반 세포 중 임의의 것일 수 있다.
특정 실시양태에서, 키트는 태반 세포를 개체에게 전달하는 것을 용이하게 하는 하나 이상의 성분을 포함한다. 예를 들어, 특정 실시양태에서, 키트는 개체에게 태반 세포를 병변내로 전달하는 것을 용이하게 하는 성분을 포함한다. 상기 실시양태에서, 키트는 예를 들어 세포의 개체에 대한 전달에 적합한 주사기 및 바늘 등을 포함할 수 있다. 이러한 실시양태에서, 태반 세포는 키트에서 백 내에 또는 하나 이상의 바이알 내에 함유될 수 있다. 특정의 다른 실시양태에서, 키트는 개체에게 태반 세포를 정맥내 또는 동맥내 전달하는 것을 용이하게 하는 성분을 포함한다. 이러한 실시양태에서, 태반 세포는, 예를 들어 병 또는 백 (예를 들어, 세포를 포함하는 용액을 약 1.5 L까지 함유할 수 있는 혈액 백 또는 유사한 백) 내에 함유될 수 있고, 키트는 개체에게 세포를 전달하는 데 적절한 튜빙 및 바늘을 추가적으로 포함한다.
추가로, 키트는 개체에서 통증 또는 염증을 감소시키는 하나 이상의 화합물 (예를 들어, 진통제, 스테로이드성 또는 비-스테로이드성 항염증 화합물 등)을 포함할 수 있다. 키트는 항박테리아 또는 항바이러스 화합물 (예를 들어, 하나 이상의 항생제), 개체에서 불안을 감소시키는 화합물 (예를 들어, 알라프라졸람), 개체에서 면역 반응을 감소시키는 화합물 (예를 들어, 시클로스포린 A), 항히스타민제 (디펜히드라민, 로라타딘, 데스로라타딘, 쿠에티아핀, 펙소페나딘, 세티리진, 프로메타진, 클로르페니라민, 레보세티리진, 시메티딘, 파모티딘, 라니티딘, 니자티딘, 록사티딘, 라푸티딘 등)을 또한 포함할 수 있다.
추가적으로, 키트는 1회용품, 예를 들어 멸균 와이프(wipe), 1회용 종이 상품, 장갑 등을 포함할 수 있고, 이들은 개체가 전달에 대비하는 것을 용이하게 하거나 또는 태반 세포 투여 결과로서의 개체에서의 감염 가능성을 감소시킨다.
5. 실시예
5.1 실시예 1: 태반 줄기 세포를 사용한 전신 사르코이드증의 치료
40대 중반의 남성 환자는 무기력, 숨가쁨, 운동성 호흡곤란, 흉통, 중등도의 열, 및 발목 및 무릎 불쾌감의 증상을 기록하고, 신체 검사를 받았다. 흉부 X선 및 CT 스캔에 의해 양측 폐문 및 종격 림프절병증, 우측 폐에서의 실질 병변 및 다수의 결절이 발견되었다. 전신 사르코이드증 및 감염성 관절염이 진단되었다. 개체에게 0.9% 염수 450 mL 중 1 x 109 내지 5 x 109개의 CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ PDAC를 정맥내 투여하고, 이후 3개월 동안 격주로 모니터링하였다. 상기 설명된 임의의 증상이 모니터링 기간 동안 개선되는 경우에 치료 유효성이 확립된다.
5.2 실시예 2: 태반 줄기 세포를 사용한 심장 사르코이드증의 치료
개체는 무호흡, 다리 및 발목 종창, 및 불규칙한 심박을 나타냈다. 다른 원인을 배제한 후, 확증적 심전도를 사용하여 심장 사르코이드증 y의 진단이 이루어졌다. 개체를 니트로글리세린 및 스트렙토키나제로 안정화시킨 후에, 개체에게 0.9% 염수 중 1 x 108 내지 5 x 108개의 CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ PDAC를 국소 마취제가 있는 심장 주사기를 사용하여 이환된 영역에 직접 투여하였다. 개체를 이후 72시간 동안 응급상황에 기초하여 모니터링하였다. 개체를 심전도 및/또는 염료 시각화 기술에 의해 치료 후 3개월에 걸쳐 추가로 모니터링하였다. 상기 설명된 임의의 증상이 모니터링 기간 동안 개선되는 경우에 치료 유효성이 확립된다.
5.3 실시예 3: 태반 줄기 세포를 사용한 피부 사르코이드증의 치료
개체는 하지에서 발병하는 결절의 호소증상을 나타냈다. 표층 생검을 수행하였고, 조직학적 검사에 의해 분극성 이물을 갖는 육아종성 염증이 발견되었다. 다른 원인을 배제한 후, 피부 사르코이드증의 진단이 이루어졌다. 개체에게 0.9% 염수 중 1 x 108 내지 5 x 108개의 CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ PDAC를 피부 병변에 직접 투여하였다. 개체를 피부 결절에서의 변화에 대해 이후 3개월에 걸쳐 모니터링하였다. 임의의 이들 징후가 모니터링 기간 동안 개선을 보이는 경우에 개체에 대한 치료 유효성이 확립된다.
5.4 실시예 4: 태반 줄기 세포를 사용한 신경사르코이드증의 치료
50세의 개체는 다리 마비 및 근무력증의 증상을 나타냈다. 영상화 기법은 척수에서의 불규칙한 윤곽 및 덩어리-유사 병변을 보여주었다. 생검에 의해 척수에서의 섬유증 및 비-건락성 육아종이 발견되었다. 신경사르코이드증의 진단이 이루어졌다. 개체에게 0.9% 염수 450 mL 중 1 x 109 내지 5 x 109개의 CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ PDAC를 정맥내 투여하고, 이후 3개월 동안 격주로 모니터링하였다. 상기 설명된 임의의 증상이 모니터링 기간 동안 개선되는 경우에 치료 유효성이 확립된다.
등가물:
본 발명은 본원에 기재된 구체적인 실시양태에 의해 그 범위가 제한되지 않아야 한다. 실제로, 기재된 것 이외에도, 본원에 제공된 내용의 다양한 변형이 상기 설명 및 첨부 도면으로부터 당업자에게 자명할 것이다. 이러한 변형은 첨부된 특허청구범위 내에 포함되는 것으로 의도된다.
다양한 공보, 특허 및 특허 출원이 본원에서 인용되고, 이들의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

Claims (25)

  1. 사르코이드증 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 치료 유효량의 태반 줄기 세포, 또는 태반 줄기 세포에 의해 조건화된 배양 배지를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 치료 유효량은 상기 사르코이드증 또는 상기 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상에서 검출가능한 개선을 유발하는 데 충분한 양인, 사르코이드증 또는 사르코이드증-관련 질환 또는 장애를 갖는 개체의 치료 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 태반 줄기 세포가 CD10+, CD34-, CD105+, CD200+ 태반 줄기 세포인 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 태반 줄기 세포가 추가로 CD45- 또는 CD90+인 방법.
  4. 제2항에 있어서, 상기 태반 줄기 세포가 추가로 CD38-, CD45-, CD80-, CD86-, CD133-, HLA-DR,DP,DQ-, SSEA3-, SSEA4-, CD29+, CD44+, CD73+, CD90+, CD105+, HLA-A,B,C+, PDL1+, ABC-p+ 또는 OCT-4+ 중 하나 이상인 방법.
  5. 제2항에 있어서, 상기 태반 줄기 세포가 추가로 CD29+, CD38-, CD44+, CD54+, SH3+ 또는 SH4+ 중 하나 이상인 방법.
  6. 제2항에 있어서, 상기 태반 줄기 세포가 추가로 CD44+인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 태반 줄기 세포가 CD200을 발현하고 HLA-G를 발현하지 않거나, 또는 CD73, CD105 및 CD200을 발현하거나, 또는 CD200 및 OCT-4를 발현하거나, 또는 CD73 및 CD105를 발현하고 HLA-G를 발현하지 않거나, 또는 CD73 및 CD105를 발현하고, 상기 줄기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단을 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양하는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진하거나, 또는 OCT-4를 발현하고, 상기 줄기 세포를 포함하는 태반 세포의 집단을 배아 유사체의 형성을 허용하는 조건 하에 배양하는 경우에 상기 집단에서 하나 이상의 배아 유사체의 형성을 촉진하는 것인 방법.
  8. 제1항에 있어서, 상기 사르코이드증이 전신 사르코이드증인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 증상이 육아종의 형성, 피로, 체중 감소, 열, 동통, 통증, 관절염, 안구 건조, 무릎 종창, 흐린 시력, 숨가쁨, 기침 및 피부 병변 중 하나 이상인 방법.
  10. 제1항에 있어서, 상기 사르코이드증이 피부 사르코이드증인 방법.
  11. 제10항에 있어서, 피부 사르코이드증이 환상 사르코이드증, 홍피성 사르코이드증, 어린선형 사르코이드증, 저색소침착성 사르코이드증, 반상경피증형 사르코이드증, 점막 사르코이드증, 구진성 사르코이드, 반흔 사르코이드, 피하 사르코이드증 또는 궤양성 사르코이드증을 포함하는 것인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 증상이 피부 병변인 방법.
  13. 제12항에 있어서, 피부 병변이 결절성 홍반, 화폐상 습진, 다형 홍반, 피부 석회증 및 소양증, 동창 루푸스, 피부 플라크, 반점구진성 발진, 피부 내 심부 결절성 병변 또는 오래된 반흔의 침윤 중 하나 이상인 방법.
  14. 제1항에 있어서, 상기 사르코이드증이 뢰프그렌 증후군인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 증상이 결절성 홍반, 양측 폐문 선병증, 관절염, 관절통 또는 열 중 하나 이상인 방법.
  16. 제1항에 있어서, 상기 사르코이드증이 신경사르코이드증인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 증상이 신경계에서의 육아종의 형성, 두통, 착란, 권태감 또는 안면 마비 중 하나 이상인 방법.
  18. 제1항에 있어서, 상기 사르코이드증이 폐 사르코이드증인 방법.
  19. 제18항에 있어서, 상기 증상이 기침, 숨가쁨, 흉통, 흉부에서의 긴장감, 애성, 비폐쇄 및 재발성 또는 지속성 부비동염 중 하나 이상인 방법.
  20. 제1항에 있어서, 상기 사르코이드증이 심장 사르코이드증인 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 증상이 흉통, 심계항진, 울혈성 심부전, 심막염 또는 유두 근육 기능장애, 숨가쁨, 발목 종창, 불규칙 심장 박동 또는 돌연사 중 하나 이상인 방법.
  22. 제1항에 있어서, 상기 사르코이드증이 안구 사르코이드증인 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 증상이 충혈안 또는 유루안, 육아종성 포도막염, 홍채 결절, 망막맥락막염, 결막염, 누선 침범 또는 안구돌출 중 하나 이상인 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체에게 제2 치료제를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 제2 치료제가 항염증제, 스테로이드, 면역억제제 화합물 또는 항생제인 방법.
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