MX2011005230A

MX2011005230A - Tratamiento de enfermedades, desordenes o condiciones del pulmon usando celulas de placenta.

Info

Publication number: MX2011005230A
Application number: MX2011005230A
Authority: MX
Inventors: Herbert Faleck; Robert J Harri; Andrew Zeitlin
Original assignee: Anthrogenesis Corp
Priority date: 2008-11-21
Filing date: 2009-11-23
Publication date: 2011-06-16
Also published as: BRPI0921999B8; AU2009316376A1; RU2570550C2; NZ602569A; WO2010060031A1; CA2743573A1; RU2015143254A; EP2375907A4; NZ592839A; DK2375907T3; BRPI0921999A2; EP2375907A1; IL212958A0; IL212958B; RU2015143254A3; US20100143312A1; RU2011125311A; CA2743573C; EP2375907B1; RU2732240C2

Abstract

Se proporcionan en la presente composiciones y métodos para tratamiento de individuos que tienen una enfermedad, desorden o condición del pulmón, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta.

Description

TRATAMIENTO DE E FERMEDADES, DESÓRDENES O CONDICIONES DEL PULMÓN USANDO CÉLULAS DE PLACENTA La presente solicitud reclama el beneficio de la Solicitud Provisional de EUA No. 61/117,004, presentada el 21 de noviembre de 2008, la exposición de la cual se incorpora por la presente como referencia en su totalidad. 1. CAMPO Se proporcionan en la presente métodos y composiciones para usar células de placenta para tratar a individuos que tienen una enfermedad, desorden o condición de los pulmones. En ciertas modalidades, la enfermedad, desorden o condición es ocasionada por, o se relaciona con, una respuesta inmune no deseada o dañina. 2. ANTECEDENTES La enfermedad del pulmón es el asesino número tres en América, responsable de una en seis muertes. La enfermedad del pulmón y otros problemas de respiración constituyen una de las causas principales de muerte en bebés menores de un año de edad. En la actualidad, más de 35 millones de americanos viven con enfermedad crónica del pulmón tal como asma, y enfermedad pulmonar obstructiva crónica 8COPD) conocida de otra manera como enfisema y bronquitis crónica (American Lung Association website, www. lungusa . org/site/e . dvLÑUK9QQE/b .33316/, descargado el 21 de noviembre de 2008). No hay suficientes tratamientos adecuados para enfermedades del pulmón, y se necesitan urgentemente terapias nuevas. 3. COMPENDIO Se proporcionan en la presente métodos y composiciones para tratar, manejar, mejorar o prevenir enfermedades, desórdenes y/o condiciones del pulmón que comprenden administrar células de placenta o células de cordón umbilical a un individuo en necesidad de las mismas. En ciertas modalidades, la enfermedad, desorden de condición está asociada con o es ocasionada por una respuesta inmune, v. gr., asociada con, que resulta en u ocasionada por inflamación. En ciertas modalidades, las células de placenta o células de cordón umbilical son células multiponentes de no trofoblasto, adherentes plásticas de cultivo de tejido referidas en la presente como células de tallo de placenta, que se describen en detalle en la Sección 4.2, abajo.

En una modalidad, se proporciona en la presente un método para tratar a un individuo que tiene, se sospecha que tiene, o en riesgo de desarrollar una enfermedad, desorden o condición del pulmón que comprende administrar al individuo células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, o medio acondicionado por células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, de modo que ocurra mejora detectable en uno o más síntomas de, o una reducción en la progresión de uno o más síntomas de la enfermedad, desorden o condición. En una modalidad específica, la enfermedad, desorden o condición es ocasionada por una respuesta inmune, v. gr., inflamación. En otra modalidad específica, la enfermedad, desorden o condición resulta de una causa en adición a una respuesta inmune, v. gr., inflamación. En una modalidad específica, la enfermedad, desorden o condición resulta de una causa distinta a una respuesta inmune, v. gr., inflamación.

En una modalidad específica, la enfermedad, desorden, o condición del pulmón es un daño agudo de pulmón. En modalidades más específicas, el daño agudo de pulmón es uno o más de trauma físico, un daño químico, v. gr. , una quemadura química, inhalación de humo, o exposición a una substancia tóxica. En otra modalidad específica, la enfermedad, desorden, o condición del pulmón es un daño ocasionado por una enfermedad neoplástica o paraneoplástica .

En ciertas modalidades, la enfermedad, desorden o condición es una o más de una enfermedad fibrótica del pulmón, síndrome de angustia respiratoria aguda (ARDS), enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD) , enfisema, asma, una infección viral o bacteriana del pulmón, neumonía (incluyendo neumonía inducida químicamente), o fibrosis cística. En una modalidad específica, la enfermedad fibrótica del pulmón es enfermedad de pulmón intersticial (enfermedad de pulmón parenquimal difusa) . En modalidades más específicas, la enfermedad de pulmón intersticial es silicosis, asbetosis, beriliosis, esclerosis sistémica, polimiositis , o dermatomiositis . En otras modalidades más específicas, la enfermedad de pulmón intersticial es ocasionada por un antibiótico, una droga quimioterapéutica, una droga antiarrítmica, o una infección.

En ciertas modalidades, la enfermedad, desorden o condición del pulmón está asociada con o es ocasionada por una respuesta inmune dañina, perjudicial, inapropiada o no desead, v. gr., inflamación, en donde la enfermedad, desorden o condición es una o más de lupus, v. gr., lupus eritematoso, escleroderma o una enfermedad reumatológica (v. gr., artritis reumatoide) .

En otra modalidad específica, la enfermedad, desorden o condición es enfermedad de pulmón reumatoide (RLD) , v. gr., enfermedad de pulmón reumatoide asociada con artritis reumatoide. En otra modalidad específica, la administración es suficiente para ocasionar una mejora detectable en uno o más síntomas de RLD, o suficiente para reducir de manera detectable o hacer lenta la progresión de uno o más síntomas de RLD, v. gr . , en un pulmón del individuo. En una modalidad más específica, el síntoma de RLD es una condición adjunta a RLD. En una modalidad más específica, la condición adjunta a RLD es una infección, v. gr., una infección viral de los pulmones, o fibrosis de los pulmones (v. gr . , como consecuencia de terapia con metotrexto) .

En otra modalidad específica del método de tratamiento, las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, se han hecho genéticamente para eexpresion una proteína de fusión que comprende IL-2Ra y DHFR.

En otra modalidad específica, la enfermedad, desorden o condición es lupus eritematoso, v. gr., lupus eritematoso sistémico (SLE) . En una modalidad más específica, el síntoma de lupus eritematoso es una o más de inflamación de pulmón y/o plural, pleuresía, peuritis, efusión pleural, lupus neumonitis, o enfermedad de pulmón intersticial difusa crónica .

En otra modalidad específica de cualquiera de los métodos anteriores, el método comprende administración de un segundo agente terapéutico al individuo que tiene la enfermedad, desorden o condición. En una modalidad más especifica, el segundo agente terapéutico es un agente antiinflamatorio, un agente inmunomodulador , y agente inmunosupresor , un medicamento de dolor, o un antibiótico. En una modalidad más especifica, el segundo agente terpéutico es un agente inmunomodulador. En otra modalidad más especifica, el segundo agente es un anticuerpo antiu-CD3 (v. gr., 0KT3, muronomab) , un anticuerpo receptor de anti-IL-2 (v. gr., basiliximab (SI ULECT®) y daclizumab (ZENAPAX®)), un anticuerpo receptor de anti célula T (v. gr., Muromonab-CD3 ) , azatioprina, un inhibidor de calcineurina, un cortocoesteroide , ciclosporina, metotrexato, mercaptopurina, mofeil de micofenolato, tacrolimus, o sirolimus. En otra modalidad más especifica, el segundo agente terapéutico comprende una célula de tallo de otro tipo, v. gr., una célula de tallo mesenquimal derivada de médula de hueso, médula de hueso, o una célula de tallo hematopoiétivca- En ciertas modalidades, las células de placenta son fibroblastoides, adherentes de plástico de cultivo de tejido, tienen la capacidad de diferenciarse en células que presentan una o más características de una célula osteogénica, célula condrogénica o célula neurogénica, se pueden replicar entre alrededor de 10-40 veces en cultivo, y/o presentar marcadores celulares característicos, como se describe en la presente. En una modalidad específica, las células de placenta son células de tallo de placenta o células de placenta multipotentes .

En una modalidad específica, las células de placenta, v. gr . , células de tallo de placenta, son CD10+, CD34", CD105+. En otra modalidad, las células de placenta son adicionalmente CD200+. En todavía otra modalidad, las células de plácente son CD10+, CD34", CD105+, y cuando menos una de: CD200+, CD44 +, CD45~, CD90+, CD117", CD133", KDR", CD80", CD86", HLA-ABC+, HLA-DR" o PDL+. En otra modalidad específica, las células de placenta expresan CD200 y HLA-G, o expresan CD73, CD105, y CD200, o expresan CD200 y OCT-4 (también conocido como Octámero-4; proteína de enlace de octámero 4; POU5F1), o expresan CD73, CD105 y HLA-G, o expresan CD73 y CDE105 y facilitan la formación de uno o más cuerpos semejantes a embrioide, o expresan OCT-4 y facilitan la formación de uno o más cuerpos semejantes a embrioide en una población de células de placenta que comprende la célula de tallo cuando la población se cultiva bajo condiciones que permiten la formación de un cuerpo semejante a embrioide. En una modalidad más específica, las células de placenta suprimen la actividad de una célula inmune, v. gr., suprimen proliferación de células T, v. gr., células CD4+ T o células CD8 'T.

Las células de placenta, células de tallo de placenta, o medio acondicionado por células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, se pueden administrar en una solo dosis, o en múltiples dosis. Cuando se administran en múltiples dosis, las dosis pueden ser parte de un régimen terapéutico diseñado para aliviar uno o más síntomas agudos de enfermedad, desorden o condición, en donde la enfermedad, desorden o condición es ocasionada por, o está asociada con, una respuesta inmune inapropiado o indeseable, o puede ser parte de un régimen terapéutico de térmico prolongado diseñado para prevenir, o reducir la severidad, de un curso crónico de dicha enfermedad, desorden o condición. Cuando se administra un segundo agente terapéutico, la administración de los dos agentes puede ser al mismo tiempo o secuencial. 3.1 DEFINICIONES Como se definen en la presente, el término "SH2" se refiere a un anticuerpo que enlaza un epitope en el marcador CD105. De esta manera, las células que se refieren como SH2+ son CD105+.

Como se usan en la presente, los términos "SH3" y "SH4" se refieren a anticuerpos que enlazan epítopes presentes en el mercador CD73. De esta manera, las c{elulas que se refieren como SH3+ y/o SH4+ son CD73' Como se utiliza en la presente, el término "célula aislada", v. gr., una célula de tallo aislada, significa una célula que está substancialmente separada de otras células del tejido, v. gr., placenta o cordón umbilical, de donde la célula, v. gr., célula de tallo, se deriva. Una célula está "aislada" si cuando menos 50%, 60%, 670%, 80%, 90%, 95%o o cuando menos 99% de las células con las que la célula está naturalmente asociada se remueven de la célula, v. gr., durante la recolección y/o cultivo de la célula.

Como se usa en la presente, el término "población aislada de células" significa una población de células que está substancialmente separada de otras células del tejido, v. gr., placenta, del que la población de células se deriva-Una población, v. gr., de células de tallo está "aislada" si cuando menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o cuando menos 099% de las células con las que la población de células de tallo están naturalmente asociadas se remueven de la población de células de tallo, v. gr., durante recolección y/o cultivo de la población de células de tallo.

Como se utiliza en la presente, el término "célula de tallo de placenta" se refiere a una célula de tallo o célula progenitora que se deriva de una placenta o cordón umbilical de mamífero, independientemente de la morfología, marcadores de superficie de célula, o el número de pasajes después de un cultivo primario, que se adhiere a un substrato de cultivo de tejido (v. gr., plástico de cultivo de tejido o una placa de cultivo de tejido revestida con fibronectina) . El término "derivado", en este contexto, incluye aislados primarios de células de tallo de placenta o células de tallo de placenta que se han expandido en cultivo. El término "célula de tallo de placenta" como se usa en la presente, sin embargo, no se refiere a un trofoblasto, un citotrofoblasto, una célula de germen embriónico, o célula de tallo embriónico, ya que esas células se entiende por personas de experiencia en el ramo. En una modalidad, una célula de tallo de placenta es una célula multipotente, derivada de una placenta de mamífero, que se adhiere a un substrato de cultivo de tejido, v. gr., a plástico de cultivo de tejido.

Como se utiliza en la presente, el término "células de placenta" incluye células derivadas de placenta y células derivadas de cordón umbilical.

Como se usa en la presente, el térmico "célula de tallo de cordón umbilical" se refiere a una célula de tallo o célula progenitora que se deriva de un cordón umbilical de mamífero, independientemente de la morfología, marcadores de superficie de célula, oel número de pasajes después de un cultivo primario, que se adhiere a un substrato de cultivo de tejido (v. gr., plástico de cultivo de tejido o una placa de cultivo de tejido revestida con fibronectina ) . En una modalidad, una célula de tallo de cordón umbilical es una célula multipotente, derivada de un cordón umbilical de mamífero, que se adhiere a un substrato de cultivo de tejido, v. gr., a plástico de cultivo de tejido.

Una célula se considera una "célula de tallo" si la célula retiene cuando menos un atributo de una célula de tallo, v. gr., un marcador o perfil de expresión de gene asociado con uno o más tipos de células de tallo; la capacidad de replicarse cuando menos 10-40 veces en cultivo; multipotencia , v. gr., la capacidad de diferenciar, ya sea in vitro, in vivo o ambos, en cuando menos un subjuego de los tipos de célula en el cuerpo, por ejemplo, de una o más de las tres capas de germen, endodermo, mesodermo, o ectodermo; 1 falta de características de célula adulta 8es decir, diferenciada), o lo semejante. Los términos "célula de tallo de placenta" y "célula de tallo derivado de placenta" se pueden usar intercambiablemente. Las células de tallo de placenta descritas en la presente, en ciertas modalidades, son multipotentes in vitro (es decir, las células se diferencian in vitro bajo condiciones de diferenciación), multipotentes in vivo (es decir, las células se diferencia in vivo) , o ambas .

Como se utiliza en la presente, una célula, v. gr . , célula de tallo es "positiva" para un marcador particular cuando ese marcador es detectable. Por ejemplo, una célula de tallo de placenta es positiva para, v. gr., CD73 debido a que CD73 es detectable en células de tallo de placenta en una cantidad detectablemente mayor que el fondo (en comparación con, v. gr., un control de isotipo) . Una célula también es positiva para un marcador cuando ese marcador se puede usar para distinguir la célula de cuando menos otro tipo de célula, o se puede usar para seleccionar o aislar la célula cuando está presente o se expresa por la célula. Los marcadores expresados en la superficie de célula, por ejemplo, se puede detectar usando tecnología de clasificación de célula tal como citometría de flujo. Los marcadores, por ejemplo, también se pueden detectar usando microdisposición de ácido nucleico o tecnología RT-PCR.

Como se usa en la presente, "inmunomodulación" e "inmunomodulatorio" significan ocasionar, o que tiene la capacidad de ocasionar, un cambio detectable en una respuesta inmune .

Como se utiliza en la presente, "inmunosupresión" e "inmunosupresor" significan ocasionar, o tener la capacidad de ocasionar, una reducción detectable en una respuesta inmune, y la capacidad de ocasionar una supresión detectable de una respuesta inmune. 4. DESCRIPCIÓN DETALLADA En la presente se proporcionan métodos para el tratamiento de un individuo que tiene, se sospecha que tiene, o está en riesgo de desarrollar una enfermedad, desorden o condición de, o que afecta, los pulmones, que comprende administrar al individuo una o más dosis de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, medio acondicionado por células de placenta, células de cordón umbilical, v. gr., células de tallo de cordón umbilical, y/o medio acondicionado por células de cordón umbilical. En ciertas modalidades, la enfermedad, desorden o condición está asociado con, se presenta de, o se relaciona con una respuesta inmune inapropiada, no deseada, dañina o perjudicial, v. gr., una enfermedad autoinmune. Los métodos para el tratamiento de dichos individuos, y para la administración de dichas células de tallo, solas o en combinación con otras terapias, se discuten con detalle abajo 4.1 TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES, DESÓRDENES O CONDICIONES DE PULMÓN USANDO CÉLULAS DE PLACENTA En una modalidad, se proporciona en la presente un método para tratar a un individuo que tiene, se sospecha que tiene, o está en riesgo de desarrollar una enfermedad, desorden o condición de, o que afecta, el pulmón que comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente efectiva de células de cordón umbilical, v. gr., células de tallo de cordón umbilical o medio acondicionado por células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, o medio acondicionado por células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, en donde la cantidad terapéuticamente efectiva ocasiona una mejora detectable en uno o más síntomas de, o una reducción en la progresión de uno o más síntomas de, la enfermedad, desorden o condición ocurre. También se proporciona en la presente el uso de ciertas células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, en la fabricación de un medicamento para tratar, manejar, mejorar o prevenir enfermedades, desórdenes y/o condiciones del pulmón. Las células útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente se describen adicionalmente en la Sección 4.2, abajo.

En ciertas modalidades, la enfermedad, desorden o condición de o afectar, el pulmón es una enfermedad, desorden o condición de, o que afecta el pulmón, no ocasionada por, o relacionada con una enfermedad autoinmune. En modalidades especificas, la enfermedad, desorden o condición de, o que afecta, el pulmón no está relacionada con, o es ocasionada por, enfermedad de injerto contra huésped, lupus eritematoso sistémico, enfermedad de intestino inflamatorio, o artritis reumatoide (v. gr. , no es una enfermedad de pulmón reumatoide) . En ciertas otras modalidades, la enfermedad, desorden o condición de, o que afecta el pulmón no es ocasionada por ni relacionada con inflamación (v. gr., no es ocasionada por inflamación del pulmón, o no es ocasionada por una respuesta inflamatoria en un tejido de no pulmón, etc.).

En una modalidad especifica de cualquiera de las modalidades en la presente, -las células de placenta son células de placenta multipotentes . En otra modalidad specifica, las células de placenta son células de tallo de placenta. En otra modalidad especifica, las células de placenta con células de tallo de placenta multipotente . Las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, usadas en los métodos descritos en la presente se pueden derivar u obtener de una sola placenta, o de múltiples placentas. Las células de placenta también se pueden derivar de una sola speie, v. gr., la especie del recipiente pretendido, o se pueden derivar de múltiples especies, "derivada", como se usa en la presente, significa aislada de placenta o cordón umbilical, o expandida de células aisladas de placenta o cordón umbilical. 4.1.1 Tratamiento de Enfermedades o Desórdenes de Pulmón intersticial .

En ciertas modalidades, la enfermedad, desorden o condición del pulmón tratable usando células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, en una enfermedad de pulmón intersticial (también conocida como enfermedad de pulmón parenquimal difusa) . De esta manera, se proporciona en la presente in método para tratar a un individuo que tiene una enfermedad de pulmón intersticial, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de células e placenta, v. gr., células de tallo de placenta, al individuo, v. gr., al pulmón afectado del individuo. En una modalidad especifica, el método de tratamiento comprende asesorar al individuo para mejora en uno o más parámetros de función de pulmón, después de la administración (v. gr., de 7 días a 30 días posteriormente) , en donde los parámetros de función de pulmón son volumen expiratorio forzado en un segundo (FEVi) ; capacidad vital de volumen forzado (FVC); FEVi/FVC; flujo expiratorio pico (PEF) , flujo expiratorio forzado 25%-50 o 25%-75% (flujo promedio de aire existente en el pulmón durante la porción media de la expiración) ; tiempo expiratorio forzado (FET); capacidad total de pulmón (TKC) , capacidad de difusión, monóxido de carbono (DLCO) , o ventilación voluntaria máxima. En una modalidad más especifica, la administración resulta en mejora en uno o más de dichos parámetros de función de pulmón (1) a 80% o más de los esperado, o (2) ( cuando menos 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 50%. En una modalidad más especifica, el método comprende identificar cualquiera de los parámetros que, antes de la administración, son menos de 80% de los valores esperados para un individuo de la misma altura y peso, y determinar los parámetros después de la administración, en donde la administración resulta en mejora de uno o más de dichos parámetros de función de pulmón (1) a 80% o más de los esperado; o (2) por cuando menos 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 50%.

En ciertas modalidades, la enfermedad de pulmón intersticial no es una enfermedad de via de aire obstructiva o enfermedad de pulmón obstructiva. Estas enfermedades pueden involucrar inflamación del intersticio, el tejido y espacio alrededor de los sacos de aire de los pulmones. En ciertas modalidades, la enfermedad de pulmón intersticial no es ocasionada por inflamación. Los síntomas de enfermedad de pulmón intersticial incluyen, sin limitación, cortedad de respiración (particularmente con esfuerzo) ; fatiga; debilidad; pérdida de apetito; pérdida de peso; tos seca, no productiva (poca o ninguna producción de flema); incomodidad en el pecho; respiración laboriosa; o evidencia de hemorragia en uno o ambos de los pulmones.

En la presente se proporciona un método para tratar a un individuo que tiene una enfermedad o desorden de pulmón intersticial (v. gr., una enfermedad de pulmón parenquimal difusa) , que comprende administrar a dicho individuo una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta. En una modalidad específica, la cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta es una cantidad que, permanente o transientemente, resulta en una mejora detectable en, o reducción del empeoramiento de, uno o más síntomas de la enfermedad de pulmón intersticial. En una modalidad específica, el síntoma es una capacidad por debajo de la normal de un pulmón del individuo de difundir monóxido de carbono (v. gr., capacidad de baja difusión de monóxido de carbono (DLCO) comparada con la normal) . En ciertas modalidades más específicas, el uno o más síntomas de enfermedad de pulmón intersticial comprende cortedad de respiración (particularmente con esfuerzo) ; fatiga; debilidad; pérdida de petito; pérdida de peso, tos seca, no productiva (poca o ninguna producción de flema) ; incomodidad en el pecho; respiración laboriosa; o evidencia de hemorragia en uno o ambos de los pulmones.

En ciertas modalidades específicas, la administración de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, resulta en una mejora detectable en una o más medidas de función de pulmón en el individuo, v. gr., como se evidencia por espirometría, supervisión de flujo de pico, volumen expiratorio forzado, o lo semejante. N una modalidad más específica, la administración resulta en un aumento de cuando menos 5%, 10%, 15% o 20% de difusión de monóxido de carbono, en comparación con la difusión de monóxido de carbono antes de la administración, en un pulmón del individuo. En ciertas otras modalidades específicas, la administración de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, resulta en una mejora detectable en una o más de una exploración de rayos X de pecho, exploración de CT, MRI, broncoscopía o exploración similar (v. gr., mejora visible en la apariencia del pulmón) . En otra modalidad especifica, la administración de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, resulta en una mejora detectable en el nivel de dióxido de carbono detectable en la sangre (v. gr., movimiento de niveles de C02 a dentro de una escala normal) .

En una modalidad especifica, la enfermedad de pulmón intersticial no es ocasionada por lupus eritemaatosis . En una modalidad más especifica, la enfermedad de pulmón intersticial no es enfermedad de pulmón intersticial difusa crónica .

En ciertas modalidades, la enfe3rmedad de pulmón intersticial es una enfermedad de pulmón intersticial con fibrosis (v. gr., enfermedad de pulmón fibroso), tal como fibrosis pulmonar intersticial. En ciertas modalidades, la enfermedad de pulmón intersticial, v. gr., enfermedad de pulm'On fibroso, es neumonía pulmonar idiopática, fibrosis pulmonar idiopática (alveolitis de fibración criptogénica) , neumoconiosis, asbestosis, baritosis, fibrosis de bauxita, vriliosos, síndrome de Caplan, calicosis, neumoconiosis de trabajador de carbón, sarcoidosis pulmonar, siderosis, silicosis, bisinosis, neumonitis de hipersensibilidad, bagaosis, pulmón de criador de aves, o pulmón de granjero. 4.1.2 Tratamiento de Enfermedades y Desórdenes de Pulmón Obstructivo En ciertas modalidades, la enfermedad, desorden o condición del pulmón tratable usando células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, es una enfermedad o desorden de pulmón obstructivo. De esta manera, se proporciona en la presente un método para tratar a un individuo que tiene una enfermedad o desorden de pulmón obstructivo, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, al individuo, v. gr., al pulmón afectado del individuo. En una modalidad especifica, el método de tratamiento comprende asesorar al individuo para mejora en uno o más parámetros de función de pulmón después de la administración (v. gr., de 7 días a 30 días después), en donde los parámetros de la función de pulmón son volumen expiratorio forzado en un segundo (FEVi) ; capacidad vital de volumen forzado (FVC); FEVi/FVC; flujo expiratorio pico (PEF), flujo expiratorio forzado 25%-50%, o 25%-75% /(flujo promedio de aire que sale del pulmón durante la porción media de la expiración); tiempo expiratorio forzado (FET); capacidad total de pulmón (TLC) ; capacidad de difusión, monóxido de carbono (DLCO) ; o ventilación voluntaria máxima. En una modalidad más especifica, la administración resulta en mejora de uno de los parámetros de función de pulmón (1) a 80% o más de los esperado; o (2) por cuando menos 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 50%. En otra modalidad más especifica, el método comprende identificar cualquiera de los parámetros que, antes de la administración, son menos de 80% de los valores esperados para un individuo de la misma altura y peso, y determinar los parámetros después de la administración, en donde la administración resulta en mejora en uno o más de los parámetros de función de pulmón (1) a 80% o más de lo esperado; o (2) por cuando menos 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%m 8%, 9%, 50%.

En modalidades especificas, la enfermedad de pulmón obstructivo es síndrome de angustia respiratoria (ARDS) , asma, broncéctasis , bronquiolectasis, bronciolitis, bronquitis, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (CPD) , o enfisema. En otra modalidad específica, la enfermedad o desorden de pulmón obstructivo no es ocasionada por una enfermedad autoinmune. En una modalidad más específica, la enfermedad o desorden de pulmón obstructivo no es ocasionada por enfermedad de intestino inflamatorio o enfermedad de injerto contra huésped.

De esta manera, se proporciona en la presente un método para tratar a un individuo que tiene una enfermedad de desorden de pulmón obstructivo, que comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta. En una modalidad especifica, la cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta es una cantidad que, permanente o transientemente, resulta en una mejora detectable en, o reducción de empeoramiento de, uno o más síntomas de la enfermedad o desorden de pulmón obstructivo.

En una modalidad específica, la enfermedad o desorden de pulmón obstructivo es enfermedad pulmonar obstructiva crónica, v. gr., como se diagnostica mediante una relación de volumen de aire expiratorio forzado en 1 segundo (FEVi a capacidad vital forzada de menos de 0.7. En una modalidad más específica, la cantidad terapéuticamente efectia de células de placenta, v. gr . , células de tallo de placenta, es una cantidad que resulta en una elevación detectable en la relación de FEVi/FEC superior a 0.7 después de administración, v. gr., una elevación de 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06. 0.07,. 0.08, 0.09,. 0.-10 o más o más.

En otra modalidad específica, la enfermedad o desorden de pulmón obstructivo es asma. En modalidades más específicas, la cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, en una cantidad que resulta en una mejora detectable en uno o más síntomas de asma, v. gr., obstrucción de vía de aire, como se determina mediante espirometría o un medido de flujo de pico.

El tratamiento de una enfermedad, desorden o condición de pulmón obstructivo puede comprender administración de un segundo compuesto terapéutico. En modalidades específicas, v. gr., en donde la enfermedad, desorden o condición del pulmón es asma, la segunda composición terapéutica o segunda terapia puede comprender uno o más de un compuesto terapéutico inhalado o compuesto terapéutico tomado oralmente, v. gr., sin limitación, corticoesteroides inhalados (v. gr . , hidrocortisona, prenisona, prednisolona, metilprednisolona, dexametasona, betametasona, triamcinolona , beclometasona, acetato de fludrocortisona, acetato de desoxicortisona, aldosterona, o lo semejante), o agonistas beta inhalados (v. gr., salbutamol, levosalbutamol , terbutalina, pirbuterol, procaterol, metaproterenol, fenoterol, tibolterol, salmeterol, formoterol, bambuterol, clenbutenol, indacaterol, o lo semejante), inhibidores de leucotrieno (v. gr., zileutón, K-866, montelucasta , zafirlucast, o lo semejante) .

En otras modalidades específicas, en donde la enfermedad, desorden ocondición del pulmón es, v. gr., COPD, la segunda composición terapéutica o segunda terapia puede comprender uno o más de un agonista beta inhalado (ver la lista de agonistas beta mencionada en la discusión de tratamiento de asma arriba); o anticolinérgicos (v. gr., bromuro de ipratropio (Atrovent) , bromuro de oxitropio (Oxivent) , tiotropio (Spiriva), o lo semejante). 4.1.3 Tratamiento de Enfermedades, Desórdentes o Condiciones de Pulmón Ocasionadas por una Respuesta Inmune En ciertas modalidades, en la presente se proporciona un método para tratar un pulmón de un individuo que tiene una enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con u ocasionada por una respuesta inmune dañina, perjudicial, inapropiada o no deseada, qu comprende administrar una cantidad terapéuticmente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, al individuo, v. gr., a un pulmón afectado del individuo. En ciertas modalidades, la enfermedad, desorden, o condición de pulmón es, por ejemplo, una enfermedad alérgica o autoinmune que afecta los pulmones. En una modalidad especifica, la enfermedad, desorden o condición es un desorden o enfermedad de pulmón asociada con, u ocasionada por lupus, v. gr., lupus eritematosis sistémico, escleroderma, enfermedad de injerto contra huésped, o artritis reumatoide (v. gr., enfermedad de Pulmón reumatoide) .

En una modalidad especifica, el método de tratamiento comprende identificar, en un individuo que tiene una respuesta inmune inapropiada, v. gr., una enfermedad autoinmune, un síntoma de la respuesta inmune en el pulmón; administrar células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, al individuo, v. gr. , al pulmón afectado del individuo, y asesorar al individuo para mejora en uno o más parámetros de función de pulmón después de la administración (v. gr., de 7 días a 30 días después), en donde los parámetros de función de pulmón son volumen expiratorio frozado en un segundo (FEC±); capacidad vital de volumen forzado (FVC), FEVi/FVC, flujo expiratorio pico (PEF); flujo expiratorio forzado 25%-50% o 25%-75% (flujo promedio de aire que sale del pulmón durante la porción media de la expiración), tiempo expiratorio forzado (FET); capacidad total de pulmón (TLC), capacidad de difusión, monóxido de carbono (DLCO) , o ventilación voluntaria máxima. En una modalidad más específica, la administración resulta en mejorar uno de los parámetros de la función de pulmón (1) a 80% o más de los esperado; o (2) por cuando menos 2%, 3%, 4%, 4%, 6%, 7%, 8%, 9%, o 10%, o más. En una modalidad más específica, el método comprende identificar cualquiera de los parámetros que, antes de la administración, son menos de 80% de valores esperados para un individuo de la misma altura y peso, y determinar los parámetros de función de pulmón 81) a 80% o más de lo esperado; o (2) por cuando menos 25, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9% o 10%, o más.

En ciertas modalidades, las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, usadas en el método suprimen una respuesta inmune cuando se ponen en contacto con una pluralidad de células inmunes (v. gr. , células CD4+ T, células CD8+ T, o células asesinas naturales (NK) in vivo, v. gr., en un individuo afligido con dicha enfermedad, desorden o condición que afecta los pulmones. En varias modalidades especificas, el contacto es suficiente para suprimir una función inmune asociada con, o causante de, la enfermedad, desorden o condición del pulmón por cuando menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o 95&, comprada con la función inmune del individuo afectado en ausencia de las células de tallo de placenta .

El contacto de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, con células inmune puede ocurrir in vivo en el contexto de, o como un adjunto a, por ejemplo, injerto o trasplante de uno o más tipos de tejidos a un individuo recipiente. Estos tejidos, por ejemplo, pueden ser tejido de pulmón. A este respecto, las células de tallo de placenta se pueden usar para suprimir una o más respuestas inmune de una o más células inmunes contenidas dentro del individuo recipiente, dentro del tejido de pulmón trasplantado, o ambos. El contacto puede ocurrir antes, durante y/o después del injerto o trasplante. Por ejemplo, las células de tallo de placenta se pueden administrar en el momento del trasplante o injerto. Las células de placenta también, o alternativamente se pueden administrar antes del traslante o injerto, v. gr . , alrededor de 1, 2, 3, 4, 5, 6, o 7 dias antes del trasplante o injerto. Las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, también, o alternativamente se pueden administrar a un recipiente de trasplante o injerto después del trasplante o injerto, for ejemplo, alrededor de 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 dias después del trasplante o injerto. De preferencia, las células de placenta s ponen en contacto con las células inmunes antes de cualquier signo o síntoma detectable de una respuesta inmune, ya sea por el individuo recipiente o el tejido trasplantado o injerto, v. gr., un signo o síntoma detectable de enfermedad de injerto contra huésped o inflamación detectable, es detectable .

El tratamiento de un individuo que tiene un desorden, enfermedad o condición de pulmón asociada con, empeorada por, u ocasionada por una respuesta inmune no deseada o dañina puede comprender adicionalmente administración al individuo de uno o más agentes inmunosupresores , particularmente en el contexto in vivo. En una modalidad, la pluralidad de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, se ponen en contacto con la pluralidad de células inmune in vivo en un individuo, y un composición que comprende un agente inmunosupresor se administra al individuo que tiene la enfermedad, desorden o condición de los pulmones. Los agentes inmunosupresores son bien conocidos en el ramo e incluyen, v. gr., anticuerpos receptores de célula anti-T (monoclonales o policlonales , o fragmentos de anticuerpo o derivados de los mismos), anticuerpos receptores de anti-IL-2 (v. gr., Basiliximab (SIMULECT®) o daclizumab (ZANAPAX) ®) , anticuerpos receptores anti célula T (v. gr., Muromonab-CD3 ) , azatioprina, corticoesteroides, ciclosporina, tacrolimus, micofenolato mofetil, sirolimus, inhibidores de calcineurina , y los semejantes. En una modalidad especifica, el agente inmunosupresor es un anticuerpo de neutralización a proteina inflamatoria de macrófago (MIP-?s o MIP-?ß en el individuo, v. gr., en el momento de trasplante.

En ciertas modalidades, un individuo que tiene una enfermedad, desorden o condición de los pulmones se trata mediante administración de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, y opcionalmente, uno o más agentes terapéuticos, en cualquier momento durante la progresión de la enfermedad. Por ejemplo, el individuo puede ser tratado inmediantamente después del diagnóstico, o dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6 dias del diagnóstico, o dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 o más semanas, o 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 o más años después del diagnóstico. El individuo puede ser tratado una vez, o múltiples veces durante 'el curso clínico de la enfermedad. El individuo puede ser tratado, como sea apropiado, durante un ataque agudo, durante la remisión, o durante una fase degenerativa crónica.

En una modalidad específica, el tratamiento de una enfermedad, desorden o condición del pulmón relacionada con u ocasionada por una respuesta inmune inapropiada, perjudicial o dañina comprende administración de una población de un segundo tipo de célula, v. gr. , células de tallo, además de las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta. En una modalidad específica, las células de tallo son células de tallo mesenquimales , v. gr., células de tallo mesenquimales derivadas de médula de hueso. En otras modalidades, el segundo tipo de células son células de tallo multipotentes , células de tella pluripotentes, células progenitoras , células de tallo hetamopoiéticas , v. gr., CD34+ (v. gr., contenidas dentro de la médula de hueso no procesada o sangre de cordón, o células aisladas de médula de hueso o sangre de cordón), células de tallo adultas, células de tallo embriónicas, o células de germen embriónico. El segundo tipo de célula, v. gr., célula de tallo mesenquimal, se puede administrar con las células de placenta, v. gr., céulas de tallo de plante, en cualquier relación, v. gr . , una relación de alrededor de 100:1, 75:1, 50:1, 25:1, 20:1, 15:1, 10:1, 5:1, 1:1, 1:5, 1:10, 1:15, 1:20, 1:25, 1:50, 1:75 o 1:100. Las células de tallo mesenquimales se pueden obtener comercialmente o de una fuente original, v. gr., médula de hueso, aspirado de médula de hueso, tejido adiposo, y lo seme ante . 4.1.3.1 Desórdenes de Pulmón Asociados con Enfermedad de Injerto Contra Huésped.

En ciertas modalidades, se proporciona en la presente un método para tratar a un individuo, v. gr . , un recipiente de trasplante o individuo que recibirá, o ha recibido, un trasplante, que comprende administrar al individuo, v. gr., un pulmón afectado del individuo, una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta. En ciertas modalidades, el trasplante es un trasplante de pulmón o un injerto de una parte de un pulmón. En ciertas otras modalidades, el trasplante es un trasplante de médula de hueso. En modalidades especificas, el recipiente de trasplante tiene, está experimentando un síntoma de, o está en riesgo de desarrollar enfermedad de injerto contra huésped (GVHD) .

En una modalidad, el método de tratamiento comprende asesora a un individuo de uno o más parámetros de función de pulmón antes de un trasplante, v. gr., un trasplante de órgano o trasplante de médula de hueso, y, si el uno o más parámetros empeoran después del trasplante, administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, en donde los parámetros de función de pulmón son volumen expiratorio forzado en un segundo ( FEVi ) ; capacidad vital de volumen forzado ( FVC ) ; FEVi / FVC ; flujo expiratorio pico (FET), capacidad total de pulmón (TLC) ; capacidad de difusión, monóxido de carbono (DLCO); o ventilación voluntaria máxima. En una modalidad más específica, la administración resulta en mejora de uno de los parámetros de función de pulmón (1) a 80% o más de valores esperados por un individuo de la misma altura y peso; o (2) por cuando menos 25, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, o 10%, o más.

En modalidades preferidas, el método comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, medio de cultivo acondicionado por células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, en donde la cantidad terapéuticamente efectiva es una cantidad que resulta en una mejora detectable en uno o más síntomas, o retraso de principio de uno o más síntomas, de la enfermedad, desorden o condición del pulmón asociada con u ocasionada por o asociada con trasplante o GVHD. En ciertas modalidades, la administración resulta en cuando menos estabilización de uno o más síntomas de GVHD; es decir, el uno omás s{intomas no mejoran significativamente, pero no empeoran significativamente, cualquiera., En más modalidades específicas, el uno o más síntomas de GVHD comprenden enfermedad de pulmón obstructiva (que incluye cualquiera de disnea de jadeo y/o tos crónica) .

En ciertas modalidades, el método de tratamiento comprende una determinación de efectividad de la administración de las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta. Por ejemplo, en una modalidad, el método de tratar una enfermedad o desorden de pulmón ocasionado por, o asociado con, un trasplante o GVHD comprende (1) administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, medio de cultivo acondicionado por células de placenta o células de cordón umbilical, v. gr., medio de cultivo acondicionado por células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta; y (2) asesorar al individuo para mejora detectable en uno m más síntomas, o retraso de principio de uno o más síntomas, de la enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con u ocasionado por GVHD. En ciertas modalidades específicas, el método de tratar comprende una segunda (o adicionales) administración de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, al individuo, opcionalmente seguida por un asegundo (o adicionales) asesoramiento del individuo para mejora detectable en uno o más síntomas, o retraso de principio de uno o más síntomas, de la enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con u ocasionado por GVHD.

El método no está limitado por la naturaleza del donador o recipiente. El trasplante puede cruzar líneas de especies. En modalidades preferidas, el donador y recipiente son la misma especia, v. gr., ambos son humanos. El recipiente de trasplante puede ser total o parcialmente alogenéico 1 donador. El trasplante puede ser autólogo. Los recipientes o donadores de trasplante pueden ser de menos de cinco años de edad, de 1 a 10 años de edad, de 5 a 15 años de edad, de 10 a 20 años de edad, de 15 a 25 años de edad, de 20 a 30 años de edad, de 25 a 35 años de edad, de 30 a 40 años de edad, de 35 a 45 años de edad, de 40 a 50 años de edad, de 45 a 55 años de edad, de 50 a 60 años de edad, de 55 s 65 años de edad, de 60 a 70 años de edad, o 70 años de edad o mayores.

Los métodos proporcionados en la presente se pueden usar para tratar una o más manifestaciones pulmonares de GVHD en individuos que exhiben síntomas indicativos de una graduación o etapa de la enfermedad como se muestra en los Cuadros 1 y 2 abajo. GVHD se gradúa generalmente por la severidad de síntomas. Por ejemplo, en una modalidad, los síntomas de GVHD son en etapas, y GVHD se gradúa de 0 (ningún GVHD) - IV (GVHD de amenaza de vida) de conformidad con la piel, hígado, y/o síntomas intestinales, como se muestran en los Cuadros 1 y 2 Cuadro 1. Estacionamiento de Enfermedad Aguda de Injerto Contra Huésped Etapa Piel Hígado (Nivel de Intestino Bilirrubina, mg/dL) + Erupción maculopapu- 2-3 Diarrea 500- lar <325% de 1000 mL/d o superficie de cuerpo náusea persistente ++ Erupción maculopapu- 3-6 Diarreha 1000- Laren 25-50% de la 1500 mL/d superficie del cuerpo +++ Eritroderma 6-15 Diarrea >1500 generalizada mL/d ++++ Descamación y >15 Dolor con o ampollas sin íleo Cuadro 2, Graduación de GVHD Agudo Grado Total Etapa Piel Hígado Intestino Daño Funcional 0 (Ninguno) 0 0 0 0 I (Suave) + a ++ 0 0 0 II (Moderado) + a +++ + + + III (Severo) ++ a +++ ++ a +++ ++ a +++ ++ IV (Amenaza de ++ a ++++ ++ a ++++ ++ a ++++ +++ Vida) En modalidades especificas, las células de placenhta, v. gr. , células de tallo de placenta, se administran al individuo dentro de 14, 13, 12. 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 dia antes del trasplante. En otra modalidad especifica, las células de placenta se administran al mismo tiempo con el trasplante. N otra modalidad especifica, las células de placenta se administran dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 días de trasplante. La administración de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, se puede realizar múltiples veces, v. gr., múltiples veces antes, con o después del trasplante, o cualquier combinación de los mismos. En otra modalidad, las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, se administran en cualquier momento después de trasplante cuando la enfermedad de injerto contra huésped de Grado II o pero se manifiesta en el individuo (recipiente e trasplante) .

En otra modalidad del método, el individuo, v. gr., recipiente de trasplante o un individuo que recibirá un trasplante, se administra una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, y adicionalmente cuando menos otro agente terapéutico. En una modalidad especifica, el agente terapéutico es globulina atimocita, mofetil de micofenolato, sirolimus, Campath-1H, factor de crecimiento de queratinocito (KGF) , ácido suberoilanida hidroxámico (SAHA) , cortisona, hidrocortisona, preisona o metilprednisona. En otra modalidad especifica, el agente terapéutico es un agente inmunosupresor o agente inj unomodulador . Los agentes inmunosupresores ylos agentes inmunomoduladores que se pueden usar como segundos agentes para tratar GVHD, v. gr., para tratar una manifestación de GVHD en los pulmones, incluyen, pero no están limitados a, metotrexato, eflunomida, ciclofosfamida , ciclosporina A, antibióticos de macrolida (v. gr., FK506 (tacrolimus) ) , metilprednisolon (MP) , corticoesteroides , esferoides, mofetil de micofenolato, rapamicina (sirolimus), mizorbina, desoxispergualin, brequinar, malononitriloamindas (v. gr., leflunamida) , moduladores de receptor de cpelula T, y moduladores de receptor de citoquina, mimétidos de péptido, y anticuerpos (v. gr., humanos, humanizados, quim'ricos, monoclonales, policlonales , fragmentos de Fvs, ScFvs, Fab o F(ab)2 o fragmentos de enlace de epitope) , moléculas de ácido nucleico (v. gr., moléculas de ácido nucleico antisentido y hélices triples), moléculas pequeñas, compuestos orgánicos y compuestos inorgánicos. En particular, los agentes inmunomoduladores incluyen, pero no están limitados a, metotrexato, leflunomida, ciclofosfamida, citoxán, Immuran, ciclosporina A, minociclina, azatioprina, antibiótico (v. gr., FK506 ( tacrolimus ) ) , metilprednisolona (MP) , cort icoesteroides , esteroides, mofetil de micofenolato, rapamicin (sirolimus), mizorbin,a desoxisperguualin, brequinar, malononitrolamindas (v. gr., leflunamida) , moduladores de receptor de célula T, y moduladores de receptor de citoquina. Ejemplos de moduladores de receptor de célula T incluyen, pero no están limitados a anticuerpos receptores de anti-célula T (v. gr., anticuerpos anti-CD4 (v. gr., cM-412 (Boehringer) , IDEC-CE9.Is (IDEC y SKB) , mAB 4162 94, ORTHOCLONE® y 0KTedr4a ( Janssen-Cilgad) ) , anticuerpos anti-CD3 (v. gr., NUVION® (Product Design Labs), OKT3 (Johnson & Johnson), o Rituxán (IDEC)), anticuerpos anti-CDt (v. gr., un inmunoco jugado enlazado con ricino anti-CD5) , anticuerpos anti-CD7 (v. gr., CHH-380 (navartis) ) , anticuerpos anti-CD8, anticuerpos de ligando monoclonal de anti-CD40 (v. gr., IDEC-131 (IDEC)), anticuerpos anti-CD52 8v. gr., CAMPATH® 1H (Ilex)), anticuerpos anti-CD2,k anticuerpos anti-CDla (v. gr., Xanelim (Genentech) ) , y anticuerpos anti-B7 (v. gr., IDEC-114) (IDEC) ) ) , CTLA4-inmunoglobulina, tialidomida, o uno de los compuestos de la Sección 5.6.6, arriba. En una modalidad especifica, un modulador de receptor de célula T es un antagonista de CD2. En otras modalidades, un modulador de receptor de célula T no es un antagonista de CD2. En otra modalidad especifica, el agente es anticurpo MEDI-501 (T10B9) . En otra modalidad especifica, un modulador de receptor de célula T es una molécula de enlace de CD2, de preferencia MEDI-507. En otras modalidades, un modulador de receptor de célula T no es una molécula de enlace de CD2. Cualquier combinación de los agentes terapéuticos anteriores, apropiado para tratamiento de GTVHD o un síntoma de GVHD, se puede administrar al individuo. Estos agentes terapéuticos se pueden administrar en cualquier combinación con las células de placenta, v. gr., cálulas de vástabo de placenta, medio de cultivo acondicionado por células de placenta, células de cordón umbilical, v. gr., células de tallo de corón umbilical, y/o medio de cultivo acondicionado por células e cordón umbilical, al mismo tiempo o como un curso de tratamiento separado . 4.1.3.2 Desórdenes de Pulmón Asociados con Artritis Reumatoíde En otra modalidad, se proporciona en la presente un método para tratar a un individuo que tiene, o e3stá experimentando un síntoma de, o está en riesgo de desarrollar, una enfermedad, desorden o condición del pulmón asociada con, u ocasionada por, artritis reumatoide (RA) , que comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, o medio de cultivo acondicionado por células de placenta, en donde la cantidad terapéuticamente efectiva es una cantidad que resulta en una mejora detectable en uno o más síntomas, o retraso e principio de uno o más síntomas, de la enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con u ocasionado por RA. En ciertas modalidades, la administración resulta en cuando menos estabilización de uno o más síntomas de RA qu se manifiestan en un pulmón del individuo; es decir, el uno o más síntomas no mejoran significativamente, pero no empeoran significativamente, cualquiera.

En ciertas modalidades, el método de tratamiento comprende identificar, en un individuo que tiene RA, un síntoma de la RA en el pulmón; administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, al individuo, v. gr., al pulmón afectado del individuo, y asesorar al individuo para mejora en uno o más parámetros de función de pulmón después de la administración 8v. gr., de 7 días a 30 días después), en donde los parámetros de función de pulmón son volumen expiratorio forzado en un segundo (FEVi) ; capacidad vital de volumen forzado (FVC) ; FEV2/FVC; flujo expiratorio pico (PEF); flujo expiratorio forzado 25 -50% o 25-75% (flujo promedio de aire que sale del pulmón durante la porción media de la expiración); tiempo expiratorio forzado (FET); capacidad total de pulmón (TLC) , capacidad de difusión, monóxido de carbono (DLCO); o ventilación voluntaria máxima. En una modalidad más especifica, la administración resulta en mejora de uno de los parámetros de función de pulmón (1) a 80% o más de lo esperado; o (2) por cuando menos 25, 3%, 4%, 5%, 6%, %, 8%, 9%, 40%. En una modalidad más especifica, el método comprende identificar cualquiera de los parámetros que, antes de la administración, eran menos de 80% de valores esperados para un individuo de la misma altura y peso, y determinar los parámetros después de la administración, en donde la administración resulta en la mejora de uno de los parámetros de función de pulmón (1) a 80% o más de lo esperado; o (2) por cuando menos 25, 35, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 50%.

En una modalidad especifica, la administración es suficiente para ocasionar una mejora detectable en uno o más síntomas de RA, o condición adjunto a RA, o suficiente para reducir de manera detectable el principio de uno o más síntomas de RA o condición adjunta a RA, en un pulmón en el individuo, v. gr . , respiración dolorosa, cortedad de respiración (v. gr., debida a efusión pleural), desarrollo o presencia de nodulos de pulmón (nodulos reumatoides ) , k escoriación de los pulmones (fibrosas pulmonr o bronquiolitis obliterans), infección viral del pulmón, fibrosis de los pulmones (v. gr., como consecuencia de terapia de metotrexato) .

En ciertas modalidades, el método de tratamiento comprende la determinación de efectividad de la administración de células de placenta, v. gr. , células de tallo de placenta. Por ejemplo, en una modalidad, el método para tratar una enfermedad o desorden de pulmón ocasionado por, o asociado con RA comprende (1) administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, y/o medio de cultivo acondicionado por células de placenta; y (2) asesorar al individuo para mejora detectable en uno o más síntomas, o retraso de principio de uno o más síntomas, de la enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con u ocasionado por RA. En ciertas modalidades específicas, el método para tratar comprende una segunda (o adicionales) administración de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, al individuo, opcionalmente seguido por un segundo asesorado (o adicional) del individuo para mejora detectable en uno o más síntomas, o retraso de principio de uno o más síntomas, de la enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con u ocasionado por RA.

En una modalidad específica del método, el individuo que tiene una enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con RA se administra una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, o medio de cultivo acondicionado por células de placenta, y adicionalmente cuando menos otro agente terapéutico, v. gr., uh analgésico o un agente antiinflamatorio. En modalidades más específicas, el cuando menos otro agente terpéutico es una droga antireumática de modificación de enfermedad (DMARD), v. gr., un xenobiótico (v. gr., azatioprina, ciclosporina A, D-penicilamina, sales de oro, hidroxicloroquina, leflunomida, metotrexato, inociclina o · sulfasalazina ) o un agente biológico (v. gr . , bloqueadores de factor alfa de necrosis de tumor (TNF-o) , tales como etanercept (ENBREL®) , infliximab (REMICADE®) , adalimumab (HUMIRA®; bloqueadores de interleuquina-1 ; anticuerpo de célula anti-B (CD20 (v. gr., rituximab o RITUXAN®) , o bloqueadores de activación de célula T 8v. gr., abatacept u ORENCIA®) . En otra modalidad más espeifica, el analgésico o agente antiinflamatorio es un glugocorticoide, una droga antiinflamatoria no esferoide, acetaminofén, ibuprofeno, aspirina, un opiato, o lidocaina (tópica) . Estos agentes terapéuticos se pueden administrar n cualquier combinación con las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, al mismo tiempo o como un curso de tratamiento separado.

En una modalidad especifica, una pluralidad de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, administradas a un individuo que tiene Ra, se construyen genéticamente para expresar un polipéptido terapéutico para RA. En una modalidad más especifica, un polipéptido terapéutico para RA es IL-Ira (antagonista receptor de interleuquina-1). En otra modalidad más especifica, el polipéptido terapéutico para RA es una proteina de fusión quecomprende IL-Ira y DHFR (reductasa de dihidrofolato) . En una modalidad más especifica, las células de placenta se transforman con una proteína de fusión de IL-Ira-DHFR qu codifica ácido nucleico, en donde la expresión de la proteína de fusión se mejora mediante un antifolato, v. gr., metotrexato. En una modalidad aún más específica, el ácido nucleico codifica IL-Ira-DHFR-IRES-Luc, en donde IRES es un sitio de entrada ribhosomal interno, yLuc es luciferasa. En otra modalidad specífica, el ácido nucleico comprende una secuencia de nucleótido que permite el control de expresión del polipétido de fusión IL-Ira o IL-Ira-DHFR. 4.1.3.3 Desórdentes de Pulmón Asociados con Lupus Eritematosis En otra modalidad, se proporciona en la presente un método para tratar a un individuo que tiene, o está experimentando un síntoma de, una enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con, u ocasionado por, lupus eritematosis (LE) , que comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, o medio de cultivo acondicionado por células de placenta, v. gr., células de tallo e placenta, en donde la cantidad terapéuticamente efectiva es una cantidad que resulta en una mejora dtectahble en uno o más síntomas, o retraso de principio de uno o más síntomas, de la enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado u ocasionado por LE. En ciertas modalidades, la administración resulta en cuando menos estabilización de uno o más síntomas de LE que se manifiestan en un pulmón del individuo; es decir, el uno o más síntomas no mejoran significativamente, pero no empeoran significativamente, cualquiera. N modalidades específicas, los síntomas comprenden pleuritis (con o sin efusión) , lupus neumonitis o enfermedad de pulmón intersticial difusa crónica.

En ciertas modalidades, el método de tratamiento comprende identificar en un individuo qu tiene LE, un síntoma del LE en el pulmón; administrar células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, al individuo, v. gr., al pulmón afectado del individuo; y asesorar al individuo para mejora en uno o más parámetros de función de pulmón después de la administración (v. gr., de 7 días a 30 días después), en donde los parámetros de la función de pulmón son volumen expiratorio forzado en un segundo (FEVi); capacidad vital de volumen forzado (VC) ; FEVi/FVC; flujo expiratorio pico (PEF), flujo expiratorio forzado 25%-50% o 25%-75% (flujo promedio de aire que sale del pulmón durante la porción media de la expiración), tiempo de expiratorio forzado (FET); capacidad total de pulmón (TLC) ; capacidad de difusión, monóxido de carbono (DLCO); o ventilación voluntaría máxima. En una modalidad más especifica, la administración resulta en mejora de uno o más de los parámetros de función de pulmón 81) a 80% o más de los esperado; o (2) por cuando menos 25, 35, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 50%. En una modalidad más especifica, el métodocomprende identificar cualquiera de los parámetros que,k antes de la administración, son menos de 80% de valores esperados para un individuo de la misma altura y peso, y determinar los parámetros después de la administración, en donde la administración resulta en la mejora de uno o más e los parámetros de función de pulmón (1) a 80% o más de los esperado, o (2) por cuando menos 25, 35, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 50%.

En ciertas modalidades, el método de tratamiento comprende una determinación de la efectividad de la administración de las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta. Por ejemplo, en una modalidad, el método para tratar una enfermedad o desorden de pulmón ocasionado por, o asociado con LE comprende (1) administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, o medio de cultivo acondicionado por células de placenta; (2) asesorar al individuo para mejora detectable en uno o más síntomas, o retraso en el principio de uno o más síntomas, de la enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con u ocasionado por LE. En ciertas modalidades especificas, el método para tratar comprende una segunda administración (o adicional) de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, al individuo, opcionalmente segundo por una segunda determinación (o adicional) del individuo para mejora detectable en uno o más síntomas, o retraso se principio de uno o más síntomas, de la enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con u ocasionado por LE. 4.1.3.4 Desórdenes de Pulmón Asociados con Escleroderma En otra modalidad, se proporciona en la presente un método para tratar a un individuo que tiene, o está experimentando un síntoma de, una enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con, u ocasionado por escleroderma, que comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, o medio de cultivo acondicionado con células de placenta, en donde la cantidad terapéuticamente efectiva es una cantidad que resulta en una mejora detectable en uno o más síntomas, o retraso de principio de uno o más síntomas, de la enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con u ocasionado por escleroderma. En ciertas modalidades, la administración resulta en cuando menos estabilización de uno o más síntomas de escleroderma que se manifiestan en un pulmón del individuo, es decir, el uno o más síntomas no mejoran significativamente, pero no empeoran significativamente, cualquiera. En modalidades específicas, los síntomas comprenden dispnea 8cortedad de respiración) , enfermedad de pulmón intersticial (también referida como una fibrosis alveolitis o fibrosos pulmonar) o enfermedad vascular pulmonar (sola o incluyendo hipertensión pulmonar) .

En ciertas modalidades, el método de tratamiento comprende identificar, en un individuo que tiene escleroderma, un síntoma de la escleroderma en el pulmón; administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, al individuo, v. gr., al pulmón afectado del individuo; y asesorar al individuo para mejora en uno o más parámetros de función de pulmón después de la administración 8v. gr., de 7 días a 30 días después), en donde los parámetros de función de pulmón son volumen expiratorio forzado en un segundo ( FEVi ) ; capacidad vital de volumen forazado (FVC); FEV2FVC; flujo expiratorio pico (PEF) ; flujo expiratorio forzado 25%-50% o 25%-75% (flujo promedio de aire que sale del pulmón durante la porción media de la expiración) ; tiempo expiratorio forzado (FET); capacidad total de pulmón (TLC); capacidad de difusión, monóxido de carbono (DLCO) ; o ventilación voluntaria máxima. En una modalidad más especifica, la administración resulta en mejora de uno de los parámetros de función de pulmón (1) a 80% o más de los esperado, o 82) por cuando menos 25, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 50%. En una modalidad especifica, el método comprende identificar cualquiera ede los parámetros que, antes de la administración son menos de 80% de los valores esperados para un individuo de la misma altura y peso, y determinar los parámetros después de la administración, en donde la administración resulta en la mejora de uno de los parámetros de función de pulmón 81) a 80% o más de los esperado, o 82) por cuando menos 25, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 50%.

En ciertas modalidades, el método de tratamiento comprende una determinación de efectividad de la administración de las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta. Por ejemplo, en una modalidad, el método para tratar una enfermedad o desorden de pulmón ocasionado por, o asociado con escleroderma comprende (1) administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta o células de cordón umbilical, v. gr., células de tallo de placenta, o medio de cultivo acondicionado por células de placenta; y (2) asesorar al individuo para mejora detectable en uno o más síntomas, o retraso en principio de uno o más síntomas, de la enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con u ocasionado por escleroderma . En ciertas modalidades específicas, el método de tratamiento comprende una segunda administración (o adicionales) de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, al individuo, opcionalmente seguido por un segundo asesoramiento (o adicionales) del individuo para mejora detectable en uno o más síntomas, o retraso en principio de uno o más síntomas de la enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con u ocasionado por escleroderma.

En una modalidad específica, el individuo se asesora para capacidad de difusión para monóxido de carbono (DLCO) , y mejora en el individuo comprende una mejora significativa en DLCO después de administración de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, (v. gr., un aumento de cuando menos 3, 4, 5 o más puntos de porcentaje=) comparado con DÑCP antes de la administración. En otra modalidad específica, el individuo es asesorado para capacidad vital forzada (FVC) , y mejora en el individuo comprende un aumento en FVC de cuando menos 10%, cuando menos 15% o cuando menos 20% después de administración de células de placenta, v. gr . , células de tallo de placenta, comparado con FVC antes de la administración, v. gr., por un periodo de cuando menos 1, 2, 3, o 4 semanas, o 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 meses después de la administración.

En otra modalidad especifica, el individuo es asesorado para herida de pulmón o hipertensión pulmonar usando, vi gr., exploración CT de alta resolución de los pulmones, lavado bronqioalveolar, y/o biopsia de pulmón quirúrgica .

En una modalidad especifica del método, el individuo que tiene una enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con RA se administra con células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, o medio de cultivo acondicionado por células de placenta, y adicionalmente cuando menos otro agente terapéutico. En modalidades más especificas, el agente terapéutico comprende, sin limitación, un inhibidor de síntesis de colágeno y/o reticulación de colágeno (v. gr., penicilamina) , un esteroide (v. gr., prednisona) , ciclofosfamida (v. gr., COTPXAMJ1®) , una combinación de cilcofosfamida y un esteroide, una combinación de ciclofosfamida y azatioprina, y antifibrótica (v. gr., interferón-gamma (IFN-?) ) , UNA ANTIENDOTELINA (V. GR., Bosentán 8TRACLEER®9, un análogo de prostaciclina (v. gr., epoprostenol (FLOLAN®) , treprostinil (RE ODULIN®) ) , un análogo de prostaciclina (v. gr., epoprostenol (FLOLAN®) , treprostinil (REMODULIN®) , y/o un receptor de endotelina (v. gr., receptor de endotelina B) antagonista <8v. gr., sitaxetan, ambrisentan (LETAIRISMR) ) . 4.1.3.5 Determinar Potencial Inmunosupresor de Células de Placenta .

En ciertas modalidades opcionales, la capacidad de una población particular de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, para inmunosupresión se determina antes del uso, v. gr., antes de la administración a un individuo que tiene una enfermedad, desorden o condición del pulmón asociado con u ocasionado por una respuesta inmune inapropiada o no deseada. Por ejemplo, el MRL se puede urar para determinar la capacidad inmunosupresora de una población particular de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, v. gr., una dosis particular de células de placental, v. gr., células de tallo de plancenta. Los procedimientos para realizar el MLR y los ensayos de regresión son bien conocidos en el ramo, ver, v. gr., Schwarz, "LKa Reacción de Linfocito Mixta": Una Prueba In Vitro para Tolerancia", J. Exp. Med. 12785) : 879-890 (1968) .; Lacerda y col., "Human Epstein-bart Virus (EBV) (-Specific Cytotoxic T Lymphocytes Home Preferentially to and Induce Selective Regressions of autologous EBV-Induced B Lympohoproliferations in Xenografted C.B-17 Scid/Scid ice". J. Exp. Med. 183:1215-1228 (1996) . En una modalidad preferida, un MLR de realiza en el que una pluralidad de a 'cdelulas de tallo de placenta se ponen en contyacto con una pluralidad de células inmunes (v. gr., linfocitos, por ejemplo, linfocitos T CD3+, CD4+ y/o CD+) . Por ejemplo, una pluralidad de células de placenta se puede probar en un MLR que comprende combinar células T CD4+ o CD8+ células dendriticas (DC ) y células de placenta en una relación de alrededor de 10:1:2, en donde las células T se manchan con un tinte tal como, v. gr., CFSE que se divide en células hija, en donde las células T se dejan proliferar durante alrededor de 6 dias. La pluralidad de células de placenta es inmunosuproesora en la proliferación de célula T en presencia de DC y ausencia de células de placenta. En dicho MLR, las células de placenta están descongeladas o son cosechadas de cultivo. Alrededor de20,000 células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, se resuspenden en 100 ul de medio (tampón RPI 1640, 1 Mh HAPES tampón, antibióticos y 5% de suero humano estancado), y se deja fijar al fondo de un pozo durante 2 horas. Células T CD4+ y/o CD8+ se aislan de las células mononucleares de sangre periférica usando cuentas magnéticas Miltenyi. Las células se manchan con CFSE, y un total de 100,000 células T (células CD4+ T solas, células CD8+ T solas, oi cantidades iguales de células T CD4+ y CD8+) se añaden por pozo. El volumen en el pozo se lleva a 200 ul, y el MLR se deja proseguir. 4.1.4 Tratamiento de Otras Enfermedades y Desórdenes de Pulmón También se proporcionan en la presente métodos para tratar enfermedades . desórdenes o condiciones de pulmón que se presentan de otras causas, que comprenden administrar a un individuo que tiene la enfermedad, desorden o condición vv. Gr., a un pulmón afectado del individuo, una cantidad terapéuticamente efectiva de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta. Por ejemplo, en ciertas modalidades, se proporciona en la presente un método para tratar a un individuo que tiene una enfermedad, desorden o condición que afecta los pulmones, en donde la enfermedad, desorden o condición del pulmón es un daño agudo de pulmón. En modalidades especificas, dicho daño agudo de pulmón es uno o más de trauma físico, daño debido a droga o toxicidad quimioterapéutica 8v. gr., toxicidad debida a tratamiento de bleomicín, ciclofosfamida, nitrofurantoína, meotrexato, combinación d 5fluorouracil y exliplatino en terapia o lo semejante) , un daño inducido por radiación, un daño químico, v. gr., una quemadura química, inhalación de humo, exposición a una substancia tóxica, o neumonía inducida químicamente.

En ciertas otras modalidades, lña enfermedad, desorden o condición de pulmón es un daño ocasionado por una enfermedad neoplástica o parancoplástica .

En todavía otras modalidades, la enfermedad, desoden o condición que afecta el pulmón es una infección viral o bacteriana del pulmón (v. gr., neumonía), una enfermedad de pulmón infecciosa, o fibrosis cística.

En modalidades específicas, la enfermedad, desorden o condición del pulmón es una enfermedad de pulmón ambiental, una enfermedad granulomatosa , una nfermedad obstructiva, una enfermedad vascular, un neoplasma, o un desorden pleural. 4.1.5 Segundas Compsoicviones Terapéuticas y Segundas Terapias En cualquier de los métodos de tratamiento anteriores, el método puede comprender la administración de una segunda composición terapéutica o segunda terapia. La segundas composiciones terapéuticas o segundas terapias arriba enumeradas para las enfermedades, desórdenes o condiciones relacionados con pulmón discutidos en las Secciones 4.1.2-4.14, anteriores. Sin embargo, la mención de segundos compuestos terapéuticos específicos o segundas terapias en los métodos para tratar enfermedades especificas, arriba, no se pretende que sean exclusivas. Por ejemplo, cualquiera de las enfermedades, desórdenes o condiciones discutidas en la presente se pueden tratar con cualquiera de los compuestos antiinflamatorios o compuestos inmunosupresores descritos en la presente.

En modalidades en las que las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, se administran con un segundo agente terapéutico, v. gr., un segundo tipo e célula, las células de placenta y segundo agente terpaúeitco se puede administrar al mismo tiempo o diferentes tiempos, v. gr., las administraciones pueden ocurrir dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, o 50 minutos uno del otro, o 1, 2, 3, 4, 5, 6, 6, 8, 9, 10, 12, m 143, 16, 18, 20, o 22 horas entre cada uno, o dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 6m, 8, 9 o 10 días uno del otro.

En otra modalidad especifica, las segunda terapia comprende un compuesto inmunomodulador, en donde el compuesto inmunomodulador es un compuesto que tiene la estructura en donde uno de X e Y es C=0, el otro de X e Y es C=0 o CH2, y R2 es hidrógeno o alquilo inferior, o una sal farmacéuticamente aceptable, hidrato, solvato, clatrato, enantiómero, diastereómero, racemato, o mezcla de estereoisómeros del mismo. En otra modalidad especifica, el compuesto inmunomodulador es un compuesto que tiene la estructura en donde uno de X e Y es C=0 y el otro es CH2 o C=0; R1 es H, alquilo (Ci-Cs) , cicloalquilo (C3-C7) , alwuenilo (C2-Cs) , bencilo, arilo, alquilo (Co~C4 ) -heterocicloalquilo (Ci-C6) , alquilo-Cg-C4 ) -heteroarilo (C2-C5) , C(0)R3, C(S)R3, alquilo (Ci-C8-N (R6) 2, alquilo ( Ci-C8-OR5. C(0)NHR3, C(S)NHR3, C(0)NR3R3', C(S)NR3R3' o alquilo (Ci-C8) -0(C0) R5; R2 es H, F, bencilo, alquilo (Ci-Cg) , alquenilo (C2-C8) , o aalquinilo (C2-Ca) ; R3 y R4 son independientemente alquilo (Ci-C8) , cicloalquilo (C3-C7) , alquenilo (C2-C8) , alquinilo (C2-C8) , bencilo, arilo, alquilo (C0-C4-heterocicloalquilo (d-C6) , alquilo (C0-C4-heteroarilo (C2-C5) , alquilo (C0-C8-N (R6) 2, alquilo (Ci-C8-OR5, alquilo (Ci-C8-0 (CO) R5, o C(0)OR5; R4 es alquilo (Ci-Cg, alquenilo (C2-C8, alquinilo (C2-C8) alquilo (C1-C4) -0R5, bencilo, arilo, alquilo (C0-C4) -heterocicloalquilo (C1-C6) , o alquiloCo-C5heteroarilo (C2-C5) ; R5 es alquilo (Ci-C8) , alquenilo (C2-C8) , alquinilo (C2-Ce), bencilo, arilo, o heteroarilo (C2-C5) ; cada ocurrencia de R6 independientemente de H, alquilo (Ci-C8, alquenilo (C2-C8 ) , alquinilo (C2-C8, bencilo, arilo, heteroarilo (C2-C5) , o alquilo (C0-C5-C (O) 0-R5 o los grupos R6 pueden unirse para formar un grupo heterocicloalquilo; n es 0 o 1 ; y * representa un centroquiral-carbono ; O una sal farmacéuticamente aceptable, hidrato, solvato, clatrato, enantiómero, diastereómero, racemato, o mezcla de estereoisómeros de los mismos. En otra modalidad más espcifica, el compuesto inmunomodulador es un computesto que tiene la estructura en donde uno de X e Y es C=0 y el otro es CH2 o C=0; R es H o CH2OCOR3-; (i) cada uno de R1, R2, R3, o R4, independientemente de los otros, es halo, alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, o alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono o (ii) uno de R1, R2, R3 , o R4 es nitro o -NHR5 y el resto de R1, R2, R3, o R4 son hidrógeno; R5 es hidrógeno o alquilo de 1 a 8 carbonos; R6 es R7-CHR10-N (R8R9) ; R7 es m-fenileno o p-fenileno o -(CnG2n)- en donde n tiene un valor de 0 a 4; cada uno de R8 y R9 tomdos independientemente del otro es hidrógeno o alquilo de 1 a 8 átomos de carbono, o R8 y R9 tomdos juntos son tetrametileno, pentametileno, hexametileno, o -CH2CH2X1CH2CH2- en la que Xi es -0-, -S-, o -NH-; R10 es hidrógeno, alquilo de 12 a 8 átomos de carbono, o fenilo; y * representa un centro quiral-cabono; o una sal farmacéuticamente aceptable, hidrato, solvato, clatrato, enantiómero, diastereómero, racemato, o mezcla de estereoisómeros de los mismos.

En modalidades más especificas, el compuesto inmunomodulador es 3- ( 4-amino-l-oox-l , 3-dihidroisoindol-2-il ) -piperidin-2 , 6-diona ( lanalidomida) ; 3- (4' aminoisolindolina- ( '-ona) -l-piperidin-2 , 6-diona; 4-(Amino) -2- (2, 6-dion; 4- (Amino) -2- (2, 6-dioxo ( 3-piperidil ) ) -isoindolin-1 , 3-diona (pomalidomida) ; o o- (3-aminoftalimido) glutarimida ( lenalidomida) .

Las células de tallo de palcenta se pueden administrar a un indiduo que sufre una enfermedad, desorden o condición del pulmón en la forma de una composición farmacéutica, v. gr. , una composición farmacéutica apropiada para inyección intravenosa, intr4amuscular o intraperitoneal . Las células de tallo de placenta se puden administrar en una sola dosis o en múltiples dosis. Cuando las c{elulas de tallo de placenta se administran en múltiples dosis, las dosis pueden ser parte de un régimen terapéutico diseñado para aliviar uno o más síntomas agudos de una enfermedad, condición, o desorden o pueden ser parte de un régimen terapéutico de término prolongado diseñado para prevenir, o reducir la severidad, de un curso crónico de la enfermedad. En modalidades en las que las células de tallo de placenta se administran con un segundo agente terapéutico, o con un segundo tipo de célula, las células de tallo de placenta y segundo agente terapéutico, o con un segundo tipo de célula, las células de tallo de placenta y segundo agente terapéutico y/o segundo tipo de célula de tallo se pueden administrar al mismo tiempo o en diferentes tiempos, v. gr., las administraciones pueden ocurrir dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 76, 8, 9, 10, 20, 30, 40, o 50 minutos una de la otra, o 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, o 22 horas una de la otra, o dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 días una de la otra. 4.1.6 Administración de Células de Placenta La administración de las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, pueden ser por cualquier ruta médicamente aceptable. En modalidades especificas, las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, se administran intravenosamente, intra-arterialmente , parenteralmente, subcutáneamente, intramuscularmente , intraperitonealmnte, o lo semejante. Las células de plácente, v. gr., células de tallo de placenta, se pueden administrar sistémicamente, o directamente a un área afectada del pulmón. En ciertas modalidades, 1 células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, se administran al individuo mediante inhalación, v. gr., en una rociadura, aerosol, mediante ventilación externa o mecánica, o mediante aplicación directa (v. gr., inyección o aplicación tópica) a una parte del pulmón, v. gr., tráquea, bronquio, bronquiola, lóbulo, alvéolo, o lo semejante.

Para administración in vivo, las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, se pueden formular como una composición farmacéutica, como se describe abaj o .

En una modalidad, el individuo es administrado con una dosis de alrededor de 200 millones de células de placenta. La dosificación, sin embargo, puede variar de acuerdo con las características físicas el individuo, v. gr., peso, y puede variar de 1 millón a 10 billones de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, por dosis, de preferencia entre 10 millones y 1 billón por dosis, o entre 100 millones y 50 millones de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, por dosis.

La administración durante el curso de tratamiento de un individuo que tiene una enfermedad, desorden o condición del pulmón, puede comprender una sola administración de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, o múltiples administraciones de células de placenta. Si más de una administración de células de placenta se usa en el curso de tratamiento, el individuo puede ser proporcionado con el mismo número aproximado de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, por administración, o pude ser proporcionado con números diferentes de células de placenta. Por ejemplo, en una modalidad, un individuo que sufre de una enfermedad, desorden o condición del pulmón se administra una dosis inicial, relativamente grande de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, mientras que las administraciones subsecuentes comprenden administración de un número relativamente menor de células de placenta, v. gr., alrededor de 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 505, 55%, 609%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% o 95% del número de células en la dosis inicial. 4.2 CÉLULAS DE PLACENTA Y POBLACIONS DE CÉLULA DE PLACENTA Los métodos de tratamiento de enfermedades, desórdenes o condiciones del pulmón, proporcionados en la presente comprenden administración de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, a un individuo que tiene la enfermedad, desorden o condición. Las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente, y métodos para obtener y cultivar dichas células, se describen, v. gr., en las Patentes de EUA Nos. 7,045,148, 7,255,879; 7 , 3111, 904 ; y 7,311,905; y en la Publicación de Solicitud de Patente de EUA Nos. 200770275362 y 2100870226595, las descripcions de cada una de las cuales se incorporan en la presente por referencia en sus totalidades.

Las células de placenta, v. gr., c'lulas de tallo de placenta, pueden ser fetales o maternales en origen (es ecir, puden tener el genotipo de cualquiera la madre o el feto). Las poblaciones de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, o poblaciones de células que comprenden células de placenta, pueden comprender células de placenta que son únicamente fetales o maternales en origen, o pueden comprender una población mixta de células de placenta de ambos origen fetal y maternal. Las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, y poblaciones de células que comprenden las células de placenta, se pueden identificar y seleccionar mediante las características morfológicas, marcadoras y de cultivo abajo discutidas. 4.2.1 Características Físicas y Morfológicas Las células, v. gr., células de tallo de placenta útiles en los métodos para tratar enfermedades, desórdenes o condiciones de pulmón descritas en la presente, cuando se cultivan en cultivos primarios o en cultivo de célula, se adhieren al substrato de cultivo de tejido, v. gr., superficie e contenedor de cultivo de tejido (v. gr., plástico de cultivo de tejido). Las células en cultivo asumen una apariencia generalmente fibroblastoide , de estelado, con un nú8mero de procesos citoplásmicos que se extienden desde el cuerpo de célula central. Las células, sin embargo, son morfológicamente diferenciables de fibroblastos cultivados bajo las mismas condiciones. Por ejemplok, las células generalmente exhiben un mayor número de dichos proceso que los fibroblastos desarrollados bajo las mismas condiciones. Morfológicamente, las células también son distinguibles de células de tallo hematopoiéticas, que generalmente asumen una morfología más redondeada, o de guijarro, en elñ cultivo. 4.2.2 Superficie de Célula, Marcadores Moleculares y Genéticos Las células de placenta aisladas, v. gr . , células de tallo de placenta, y poblaciones de células de tallo de placenta aisladas, útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente, son células de placenta humanas adherentes a plástico de cultivo de tejido o célula de cordón umbilical que tienen características de células multipotentes o células de tallo, y expresan una pluralidad de marcadores que se pueden usar para identificar y/o aislar las células, o poblaciones de células que comprenden las células de tallo. Las células de tallo de placenta aisladas, y las poblaciones de célula que comprenden células de tallo de placenta (es decir, dos o más células aisladas), descritas en la presente, incluyen células y poblaciones que contienen célula obtenidas directamente de la placenta, o cualquier parte de la misma (v. gr., amnión, orión, cotiledones de placenta, y lo semejante), o cordón umbilical. Las poblaciones decélkula de tallo de placenta aisladas también incluyen poblaciones de (es decir, dos o más) células de tallo de placenta aisladas en cultivo, y una población en un recipiente, v. gr., una bolsa .

Las células de tallo de placenta aisladas descritas en la presente no son células mesenquimales derivadas de médula de hueso, células de tallo mesenquimales derivadas de adioposa, o células mesenquimales obtenidas de sangre del cordón umnbilical, sangre de placenta, o sangre periférica. Como se usa en la presente, el término "células de tallo de placenta" barca cualquiera de las células de tallo o células multipotentes descritas en esta sección. Las células de tallo de placenta aisladas tampoco son trofoblastos . Los trofoblastos en cultivo forman típicamente células células multinucleadas llamadas sincitiotrofoblastos ; las células de tallo de placenta, en contraste, no forman células multinucleadas n cultivo, sino que en su lugar se expanden como una población de células uninucleares, similar a la expansión de fibroblastos.

En ciertas modalidades, las células e tallo de placenta son células de tallo aisladas. En ciertas otras modalidades, las células de tallo de placenta son células multipotentes aisladas. En una modalidad, las células aisladas con CD34~, CD10+ y CD1051 como se detecta mediante citometría de flujo. En una modalidad específica, las células CD34", CD10+, CD105+ aisladas son células de tallo. En otra modalidad específica, las células CD34", CD10+, CD105+ son células multipotentes. En otra modalidad específica, las células CD34~, CD10+, CD105+ aisladas tienen el potencial de diferenciarse en células de un fenotipo neural, células de un fenotipo osteogénico, y/o células de un fenotipo condrogénico . En otra modalidad específica, las células CD34", CD10+, CD105+ aisladas son adicionalmente CD45 o CD90+. En otra modalidad específica, las células CD34", CD10+, CD105+ aisladas son adicionalmente CD45" y CD89+, como se detectan mediante citometria de flujo. En una modalidad más especifica, las células CD34", CD10+, CD45", CD89+, CDE105+ y CD200 ' aisladas . En una modalidad más especifica, las células CD34", CD10+, CD45", CD90+, CD105+, CD200+ son adicionalmente CD80" y CD86~.

En una modalidad especifica, cualquiera de las células CD34", CD10+, CD1'5+ arriba descritas son adicionalmente una o más de CD29+ , CD38", CD44+, CD54+ , sH3+ o SH4+. En otra modalidad más especifica, las células son adicionalmente CD44+. En otra modalidad especifica de cualquier de las células CD34", CD10+, CD105+ aisladas anteriores, las células son adicionalmente una o más de CD117", CD133", KDR" (VEGFR2") , HLA-A,B,C+, HLA-DP, DQ, DR" o Ligando de Muerta-1 Programado (PDLl)+m o cualquier combinación de las mismas.

En otra modalidad, las células CD34", CD10+, CD105+ son adicionalmente una o más de CED13+, CD29+, cd33+, CD38", CD44", CD45", cd54 + , CD62E", CD72Ñ", CD62P", SH3+ (CD73+ ) , SH4+ (CD73+), CD80", CD86", CD90+, SH2+ (CD105+) , CD106/VCAM+, CD117" , CD144/VE-cadherinabaja, CD184/CXCR4", CD200+, CD133", OCT-4+, SSEA3", SSEA4", ABC-p+, KDR" (VEGFR2") , HLA-A,B,C,+, HLA-DP, DQ,DR", HLA-G+, o Ligando de Muerta-1 Programada ( PDL1)+, o cualquier combinación d las mismas. En otra modalidad, las células CD34". CD10+, CD105+ son adicionalmente CD13+. CD29+, CD33+, CD398", CD44+, CD4~5~, CD54/1CAM+, CD26E", CD62L", CD6672P", SH3+ (CD73+), SH4+ (CD73+), CD80", CD86", CD90+, SH2+ /(CD105+), CD106/VCAM+, CD117", CD14 /VE-cadherinabaja, CD184/CXCR4", CD200+ , CD133", 0CT-4+ , SSEA3", SSEA4", ABC-p+, KDR" (VEGFR2-) , HLA,A,B,C+, HLA, DP, DQ, DR~, HLA-G+, y Ligando de Muerte-12 Programado (PDL1)+.

En ciertas modalidades, ls células son una o más de SSEA3~, SSEA4" o ABC-p+. Las células aisladas también puden xpresar HLA, ABC (MHc-1) . Estos marcados se puden usar, en cualquier combinación, para identificar las células aisladas, v. gr., células de tallo aisladas o células multipotentes aisladas y para distinguir las élulas aisladas de otros tipos de célula. La falta de expresión de CD34, CD38 y/o CD45, por ejemplo, identifica las células aisladas como células de tallo no hematopoiéticas .

Asimismo se proporcionan en la presente poblaciones de las células aisladas, o poblaciones de déculas de plácente o c' lulas e cordón umbilical, que comprende, v. gr., que están enriquecidas para, células d tallo de placenta, que son útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente. Las poblaciones preferidas de células que comprenden células de tallo de placental, en donde las poblaciones son células son útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente, comprenden, v. gr., cuando menos 10}%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 98% de células de tallo de placenta, v. gr., células aisladas CD10+, CD105+ y CD34; es decir, cuando menos 10%, 155, 20%, 25%, 30}%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60]%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90}%, 95% o 98% de células en la población de células de tallo de placenta, v. gr., células aisladas CD10+, CD105+ y CD34". En una modalidad especifica, las células aisladas CD34", CD10+, CED105+ son adicionalmente CD200+. En una modalidad especifica, las células aisladas CD34", CD10+, CD105+, CD200+ son adicionalmente CD90+ y CD45". Como se detecta mediante citometria de flujo. En una modalidad más especifica, cualquiera de las células aisladas CD34~, CD10+, CD105+, arriba descritas son adicionalmente una o más de CD29+, CD38", CD44+, CD54+, SH3+ o SH4+ . En otra modalidad más especifica, las células aisladas CD34", CD10+, CD105+, o células aisladas CD34", CD10+, CD105+, CD200+, son adicionalmente CD44+. En una modalidad especifica de cualquiera de las poblaciones de células que comprenden las células aisladas CD34~, CD2'+, CD1'5+ anteriores, las células aisladas son adicionalmente una o más de CD13+, CD29+, CD33+, CD38", CD44+, CD45", CD54+, CD62e~, CD62L", CD62P", SH3 ' , (CD73+) , CD80", CD86", CD90+, SH2+ (CD105+ ), CD106/VCA +, CD117-, CD144 /VE-cadherinabaja, CD184/CSCR4", CD200+, CD133", 0CT-4+ , SSEA3", SSEA4", ABC-p+, KDR" (VEGFR2" ) , HLA-A,B,C+, HLA-DP, DQ, DR", HLA-G+, o Ligando de Muerte-1 Programada (PDL1)+, o cualguier combinación de las mismas. En una modalidad más especifica, las células CD34", CD10+, CD105+ son adicionalmente CD13+, CD29+, CD33+, CD398", CD44 +, CD45", CD54/ICAM+, CD62E', CD62L", CD62PO", SH3+ (CD73+) , SH4+ (CD73+), CD80", CD86", CD90+, SH2+ (CD105+) , CD106/VCAM+, CD117", CD144/VE-cadherinabajam CD184 /CXCR4", CD2'00+, CD133", OCT-4+ , SSEA3", SSEA4", ABC-' + , KDR" (VEGFR2"=, HLA-A,B,C+, HLA-DO-Dg, Dr~, HLA-G+ Y Ligando de Muerte-1 Programado (PD11)+.

En ciertas modalidades, las células de tallo de placenta en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células aisladas qu son una o más, o todas de CD10+, CD34~, CD38", CD44+ , CD45". CD54+ . CD90+, SH2+ , SH3+, SH4+, SSEA4", OCT-4+ y ABC-p+, en donde las células aisladas se obtienen mediante disrupción física y/o enzimática de tejido de placenta o tejido de cordón umbilical. En una modalidad específica, las células aisladas son 0CT-4+ y AC-p+. En otra modalidad específica, las células aisladas son 0CT-4+ y CD34", en donde las células aisladas tienen cuando menos una de las siguientes características: CD10+ , CD29+, CD44+ , CD45", CD54 + , CDop+, SH3+, SH4+ , SSEA3. Y SSEA4- En otra modalidad especifica, las células aisladas son 0CT-4+ , CD34", CD10+ , CD29+, CD44+ , CD45", CD65+ , CD90+ , SHe+, SH4 + , SSEA3", y SSEA4". En una modalidad más especifica, las células aisladas son 0CT-4+, CD34", SSEA3", y DDRS5", y son ya sea SH2+ o SH3+. En otra modalidad más especifica, las células aisladas son 0CT-4+ , CD34". SH2+, y SH3+. En otra modalidad más espeifica, las células aisladas son OCT-4+, CD34", SSEA3", yt SSEA4", y son ya sea SH2+ o SH3+, y cuando menos una de CD10+, CD29+, CD55+ , CD45". CD54 +, CD90+, SSEA3", o SSEA4". En otra modalidad más especifica, las células aisladas son OCT-4 + , CD34", CD10+ , CD29+ , CD44+ , CD45", CD54 + , CD90+, SSEA3. Y SSEA4", y ya sea SH2+ o SH3+.

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células SH2+ , SH3+, SH4+ y 0CT-4+ . En una modalidad más especifica, las células aisladas son CD10+, CD29+, CD44+, CD54+ , CD90+ , CD34", CD45". DDRS4", oSSEA4"En otra modalidad, las células aisladas son SH2+, SH3+, SH4+ , SSEA3" y SSEA4" . En una modalidad más especifica, las células aisladas son SH2+, SH3+, SH4 + , SSEA3" y SSEA4", CD10+, CD29+, CD44+ , CD45", D54+, CD90+ , 0CT-4+ , CD34" o CD45".

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos descritos con la presenteson CD10 , CD29+, CD34", CD44+, CD45", CD54+, CD90+, SH2+, SH3+ y SH4+ ; en donde las células son adicionalmente una o más de 0CT-4+, SSEA3" o SSEA4~ .

En ciertas modalidades, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son CD200+ o HLA-G+. En una modalidad especifica, las células son CD200+ y HLA-G+. En otra modalidad especifica, las células son adicionalmente CD73+ y CD106+, . En otra modalidad especifica, las células son adicionalmente CD34", CD39" p CVD45". En otra modalidad especifica, las células aisladas CD200+ o HLA-G+ facilitan la formación de cuerpos semejantes a embroide en una población de células de placenta que comprende las células, bajo condiciones que permiten la formación de cuerpos semejantes a embroide. En otra modalidad especifica, las células de tallo de placenta se aislan lejos de las células de placenta o células de cordón umbilical que no son células de tallo o multipotentes . En otra modalidad especifica, las células de tallo de placenta se aislann lejos de las células de tallo de placenta que no presentan los marcadores arriba descritos.

En otra modalidad, una población de células útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente es una población aislada de células que comprende: v. gr., que está enriquecida para, células de tallo de placenta CD200+, HLA-G+. En una modalidad especifica, la población es una población de células de placenta. En otra modalidad especifica, la población es una población de células de cordón umbilical. En varias modalidades especificas, cuando menos alrededor del 10%, cuando menos alrededor del 20%, cuando menos alrededor del 30}%, cuando menos alrededor del 40%, cuando menos alrededor del 50%, o cuando menos alrededor del 60% de las células en la población de células son CD200+, HLA-G+ aisladas. De preferencia, por lo menos alrededor de 70% de las células en la población de células son células CD200+, HLA-G+ aisladas. Más preferentemente, por lo menos alrededor del 80%, 90T, 95%, o 99% de las células son células CD200+, HLA-G+ aisladas. En una modalidad especifica de las poblaciones de célula, las células CD200+, HLA-G+ aisladas son también CD73+ y CD105+. En otra modalidad especifica, las células CD200+, HLA-G+ aisladas también son CD34", CD38" o CD45~En una modalidad más especifica, las células CD200+, HLA-G2 aisladas también son CD34~, CD38~, CD45", CD73+ y CD105+. En otra modalidad , la población de células produce uno o más cuerpos semejantes a embrión cuando se cultivan bajo condiciones que permiten la formación de cuerpo semejantes a embrión. En otra modalidad, las células CD200+, HLA-G+ producen uno o más cuerpos semejantes a embrión cuando se cultivan bajo condiciones que permiten la formación de cuerpos semejantes a embrión. En otra modalidad especifica, la población de células está aislada lejos de células que no son células de tallo. En otra modalidad especifica, las células CED200+, HLA-G+ aisladas están aisladas lejos de las células de placenta o células de cordón umbilical que no presentan estos marcadores.

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células CD73+, CD105+ y CD200+ aisladas. En otra modalidad especifica, las células son HLA-G+. En otra modalidad especifica, las células aisladas son CD34", CD38~ o CD45~. En otra modalidad especifica, las células son CD34", CD38" y CD45". En una modalidad más especifica, las células son CD34", CD38", CD45", y HLA-G+. En otra modalidad especifica, las células CD73+, CD105+, y CD200+ aisladas facilitan la formación de uno o más cuerpos semejantes a embrión en una población de células de placenta o células de cordón umbilical que comprenden las células de tallo de placenta, cuando la población se cultiva bajo condiciones que permiten la formación de cuerpos semejantes a embrión. En otra modalidad especifica, las células de placenta aisladas se aislan lejos de las células de placenta o células de cordón umbilical que no presentan estos marcadores.

En otra modalidad, una población de célula útil en los métodos de tratamiento descritos en la presente es una población aislada de células que comprende, v. gr., que está enriquecida para, células de tallo de placenta CD73+, CD105+, h CD200+ aisladas. En una modalidad específica, la población es una población de células de placenta. En otra modalidad específica, la población es una población de células de placenta. En otra modalidad específica, la población es una población de células de cuerda umbilical. En varias modalidades, cuando menos alrededor del 10&%, cuando menos alrededor del 20%, cuando menos alrededor del 30%, cuando menos alrededor del 40%, cuando menos alrededor del 50%, o cuando menos alrededor del 60T de células son dichas células CD73+, CD105+, CD200+ aisladas. En otra modalidad, cuando menos alrededor de 80%, 90%, 95% o 99% de células en dicha población de célula son células CD73+, CD105+, CD200+ aisldas. En una modalidad específica de la población de células, las células aisladas son HLA-G+. En otra modalidad específica, las células aisladas son adicionalmente CD34", CD38" o CD45". En otra modalidad específica, las células aisladas son adicionalmente CD34", CD38" y CD45". En una modalidad más especifica, las células aisladas son adicionalmente CD34", CD38", CD45", y HLA-G+. En otra modalidad especifica, la población de células produce uno o más cuerpos semejante a embrión cuando se cultivan bajo condiciones que permiten la formación de cuerpos semejantes a embrión. En otra modalidad especifica, la población de célula está aislada lejos de células que no son células de tallo. En otra modalidad especifica, las células CD73+, CD105+, CD200+ aisladas se aislan lejos de células de placenta o células de cordón umbilical que no presentan estos marcadores.

En ciertas otras modalidades, las células de tallo de placenta son células aisladas de placenta o cordón umbilical que son un o más de CD10+, CD291, CD34", CD38~, CD44+ , CD45", CD54+ , CD90+, DH2+, SH3+, SH4+, SSEA3-, SSEA4", OCT-4+ , HLA-G+o ABC-p+. En una modalidad especifica, las células son CD10+, CD29+, CD34", CD38", CD44 + , CD45", VF65+, VF90+, SH2, SH3, SH4 + , SSEA3-, SSEA4" y OCT-4+ . En otra modalidad especifica, las células son CD10+, CD29+, CD34", CD38", CD45", CD654+ , SH2+ , SH3+ y SH4+. En otra modalidad especifica, las células sonh CD10+ , CD29+, CD34", CD38", CD45", CD54+ , SH2+, SH3+, DH4+ y 0CT-4+. En otra modalidad especifica, las células son CD120+, CD29+, CD435", CD38", CD44 +, CD45 , CD54 + , HLA-G+, D<h3+, SH3+, SH4+. En otra modalidad especifica, las células son 0CT-4+ y ABC-p+. En otra modalidad especifica, las células son SH3+, SH3+, SH4 + y 0CT-4+ . En otra modalidad, las células son OCT-4+ , CD34", DDRS3", y SSEA4". En una modalidad especifica, las células 0CT-4+, CD34", SSEA3", y SSEA4" son adicionalmente CD10+, CD29+, CD34~, CD44+ , CD45", CD54+ , VF90+ , DH2+ , SH3+, y SH4+ . En otra modalidad, las células son 0CT-4+, CD34", SSEA3", y SSEA4" . En una modalidad especifica, las células son 0CT-4+, Cd34~m SSEA3", y SSEA4" son adicionalmente CD10+, CD29+, CD34", CD44+ , CD45", CD54+ , CD90+ , SH2+, SH3+ , y SH4 + . En otra modalidad, las células son OCT-4+ y CD34" y ya sea SH3+ o SH4+. En otra modalidad, las células son CD34" y ya sea VF10+, CD29+, CD44+, CD54', CD90+ , u OCT-4+.

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células aisladas CD200+ y OCT-4+. En una modalidad specifica, las c{eulas son CD73+ y CD106+. En otra modalidad especifica, las células son HGLA-G+, En otra modalidad especifica, las células aisladas CDE200+ y 0CT-4+ son CD34", CD38~ o CD45". En otra modalidad especifica, las células aisladas CD200+ , 0CT-4+ son CE34", CD38" y CD45\ En un modalidad más especifica, las células aisladas CD200+, 0CT-4+ sonj CD34", CD38", CD45", CD73+, CD105+ y HLA-G+. En otra modalidad específica, las células aisladas CD200+, 0CT-4+ facilitan la producción de uno o más cuerpos semejantes a embrión mediante una población de células de placenta o células de cordón umbilical que comprende las células de tallo de placenta, cuando la población se cultiva bajo condiciones que permiten la formación de cuerpos semejantes a embrión. En otra modalidad específica, las células aisladas CD200+, 0]CT-4+ se aislan en alejamiento de las células de plácente que no son células de tallo ni células multipotentes . En otra modalidad espeífica, las células aisladas CD20'0+, 0CVT-4+ se aislan en alejamiento de las células de placenta que no muestran estos marcadores.

En otra modalidad, una población de célula útil en los métodos de tratamiento descritos en la presente es una población aislada de células que comprende, v. gr., que está enriqucida para, CD200+, OCT-4+ células de talo de placenta. En varias modalidades, cuando menos alrededor de 10%&, cuando menos alrededor de 20%, cuando menos alrededor de 30%, cuando menos alrededor de 40%, cuano menos alrededor de 50%, o cuando menos alrededor de 60% de células en la población de célula son células aisladas CD200+, OCT-4+. En otra modalidad, cuando menos alrededor de 70% de las células son células aisladas CD200+, 0CT-4+. En otra modalidad, cuando menos alrededor de 80%, 90%, 95%, o 99% de células en la población de células son células aisladas CD200+, OVCY-4' . En una modalidad específica de las poblaciones aisladas, las células aisladas CD200+, 0CT-4+ son adicionalmente CD73+ y6 CD105+. En otra modalidad específica, las células aisladas CD200+, OCT-4+ son adicionalmente HLA-G+. En otra modalidad específica, las células aisladas CD200+, OCT-4'son adicionalmente CD34", CD38" y CD46". En una modalidad más específica, las células aisladas CD200+, 0CT-4+ son adicionalmente CD34", CD38", CD45", CD73+, CD105+ y HLA-G+. En otra modalidad específica, la población de célula produce uno o más cuerpos semejantes a embrión cuando se cultivan bajo condiciones que permiten la formación de cuerpos semejantes a embrión.

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos descritos en la presente son células aisladas CD73+, CD105+ y HLA-G+. En otra modalidad específica, las células de plácente aisladas CE73+, CD106+ y HLA-G+ son adicionalmente CD34", CD38" o CD45". En otra modalidad específica, las células de placenta aisladas CD73+, CD105+, HLA-G+ son adicionalmente CD34", CD38" y CD45". En otra modalidad específica, las células de placenta aisladas CD73+, CD105', HLA-G+ son adicionalmente OCT-4+. En otra modalidad especifica, las células de placenta aisladas CD73+, CD105+ y HLA-G+ son adicionalmente CD200". En una modalidad más especifica, las células de placenta aisladas CD73+, CD105+, HLA-G+ son adicionalmente CD34", CD38", CD45", 0CT-4+ y CD200+. En otra modalidad especifica, las células de placenta aisladas CD73+, CD105+, HLA-G" facilitan la formación de cuerpos semejantes a embrión en una población de células de placenta que comprende dichas células, cuando la población se cultiva bajo condiciones que permiten la formación de cuerpos semejantes a embrión. En otra modalidad especifica, las células de placenta aisladas CD73+. CD105+, HLA-G+ se aislan lejos de las células de placenta que no son las células de placenta aisladas CD73+, CDE105+, HLA-G+. En otra modalidad especifica, las células ce placenta aisladas Cd73+, CD105+, HLA-G+ se aislan lejos de las células de placenta que no muestran estos marcadores.

En otra modalidad, una población de c'+elulas útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente es una población aislada de células que comprende, v. gr., que está enriquecida para, células de tallo de plancenta aisladas CD73+, CD105+ y HLA-G+. En varias modalidades, cuando menos alrededor de 10%, cuando menos alrededor de 20}%, cuando menos alrededor de 30%, cuando menos alredecor de 40%, cuando menos alrededor de 50%, o cuando menos alrededor de 60% de células en la población de células son células CD73+, CD105+, HLA-G+. En otra modalidad, cuando menos alrededor de 70% de células de la población de células son células aisladas CD73+, CD105+, HLA-G+. En otra modalidad, cuando menos alrededor de 80%, 90%, 95%, o 99% de las células en la población de células son células aisladas CD73+, CD105+, HLA.G+. En una modalidad especifica de las poblaciones anteriores, las células aisldas CD73+, CD105+, HLA-G+ son adicionalmente CD34", CD38" o CD45". En otra modalidad especifica, las células CD73+, CD105+, HLA-G+ son adicionalmente CD34~, CD38" y CD45". En otra modalidad especifica, las células aisladas CD73+, CD105+, HLA-G+ son adicionalmente CD200+. En una modalidad más especifica, las células aisladas CD73+, CD105+, HLA-G+ son adicionalmente CD34~, CD38", CD45-, OCT-4+ y CD200+.

En otra modalidad, las células de tallo e placenta en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células aisladas que son células CDE73+, y CD105+ y facilitan la formación de uno o más cuerpos semejantes a embrión en una población de células aisladas que comprenden las células CD73+, CD105+ cuando la población se cultiva bajo condiciones que permiten la formación de cuerpos semejantes a embrión. En otra modalidad especifica, las células aisladas CD73 , CD105 son adicionalmente CD34", CD39" p CD45". En otra modalidad especifica, las células aisladas CD73+, CD105+ son adicionalmente CD34", CD28" o ]CD45". En otra modalidad especifica, las células aisladas CD73+, CD105+ son adicionalmente 0CT-4+. En una modalidad más especifica, las células aisladas CD73+, CD105+ son adicionalmente 0CT-4+, CD34", VF39~ y CD45". En otra modalidad especifica, las células aisladas CD73+, CD105+ se aislan lejos de las células de placenta o células de cordón umbilical qu no presentan estas características.

En otra modalidad, una población de células útil en los métodos de tratamiento descritos en la presente es una población de células que oomprende, v. gr., que está enriquecida para, células de tallo e placenta aislada que son CD73+ , CD105+ y facilitan la formación de uno o más cuerpos semejantes a embrión en una población de células de placenta o células de cordón umbilical aisladas que comprende dichas células cuando la población se cultiva bajo condiciones que permiten la formación de cuerpos semejantes a embrión. En varias modalidades, cuando menos alrededor del 10%, cuando menos alrededor del 20%, cuando menos alrededor del 30%, cuando menos alrededor del 40%, cuando menos alrededor del 50%, o cuando menos alrededor del 60% de las células en la población de células son dichas células aisladas CD73+, CD105+. En otra modalidad, cuando menos alrededor de 70% de las células en la población de células son las células aisladas CD73+, CD105+. En otra modalidad, cuando menos alrededor de 80%, 90%, 95% o 99% de células en la población de células son las células de placenta aisladas CD73+, CD105+. En una modalidad especifica de las poblaciones anteriores, las células aisladas CD73+, CD10' 5+ son adicionalmente CD34", CD39" o CD45~. En otra modalidad especifica, las células aisladas CD73", CD105+ son adicionalmente OCT-4+. En otra modalidad especifica, las células CD73+, CD105+ aisladas son adicionalmente CD200+. En una modalidad más específica, las células aisladas Cd73', C105+ son adicionalmente CD34", CD38", CD45", 0CY-4+ y CD200+. En otra modalidad específica, la citda población de célula se aisla lejos de la células de placenta que no presentan estos marcadores.

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de trabamiento descritos en la presente son células OCT-4+ aisladas que facilitan la formación de uno o más cuerpos semejantes a embrión en una población de células de placenta aisladas que comprenden las céldas cuando se cultivan bajo condiciones que permiten la formación de cuerpos semejantes a embri8ón. En una modalidad specifica, las células de placenta aisladas OCT-4+ son adicionalmente CD73+ y Cdl05+. En otra modalidad especifica, las células de placenta aisladas 0CT.4+ son adicionalmente CD34", CD38", o CD45", . En otra modalidad especifica, las células de placenta aisladas 0CT-4+ son adicionalmente CE200+. En un modalidad más especifica, las células de placenta aisladas 0CT-4+ son adicionalmente CD73+ , C105+, CD200', CD34", CD38" u VF56". En otra modalidad especifica, las células de placenta aisladas OCT-4+, v. gr., células de tallo de placenta, están aisladas lejos de las células de placenta que no son células de placenta 0CT-4+. En otra modalidad especifica, las células de placenta 0CT-4+ aisladas se aislan lejos de las células de placenta que no presentan estas características.

En otra modalidad, una población de células útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente es una población de células que comprende, v. gr., que está enriquecida para, células de tallo de placenta que son OCT.4+ y facilitan la formación de uno o más cuerpos semejantes a embrión en una población de células de placenta o células de cordón umbilical aisladas que comprenden las células cuando la población se cultiva bajo condiciones que permiten la formación de cuerpos semejantes a embrión. En varias modalidades, cuando menos alrededor de 10%, fcuando menos alrededor de 20%, cuando menos alrededor de 30%, cuando menos alrededor de 40%, cuando menos alrededor de 50%, o cuando menos alrededor de 60% de las células en la población de células son células aisladas OCT-4+. En otra modalidad, cuando menos alrededor del 70% de células en la población de células son las células OCT-4+ aisladas. En otra modalidad, cuando menos alrededor de 80%, 90%, 95% o 99% de células en la población de células son las células OCT- . En una modalidad especifica de las poblaciones anteriores, las células aisladas OCT-4+ son adicionalmente CD34", CD38" y CD45". En otra modalidad especifica, las células aisladas OCT-4+ son adicionalmente CD34", CD38" o CD45". En otra modalidad especifica, las células aisladas OCT-4+ son adicionalmente CD200+. En una modalidad más especifica, las células aisladas 0CT-4+ son adicionalmente CD73+, CD105+, CD200+, CD34", CD38", y CD45". En otra modalidad especifica, la población de células se aisla lejos de las células de placenta o células de cordón umbilical que no presentan estos marcadores .

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células de placenta aisladas HLA-A,B,C+, CD45", CD133" y CD34". En otra modalidad, una población de células útil para los métodos de tratamiento descritos en la presente es una población aislada de células que comprende células de tallo de placenta, en donde cuando menos alrededor de 70%, cuando menos 80%, cuando menos 90%, cuando menos 95% o cuando menos 99% de células en la población aislada de células son células de tallo de placenta aisldas HLA-A,B,C+, CD45", CD133" y CD34" . En una modalidad especifica, la célula aislada o población de células aisladas se aisla lejos de las células que no son HLA-A,B,C+, CD45", CD133" y CD34~. En otra modalidad especifica, las células de placenta aisladas son no maternales en origen. En otra modalidad especifica, la población aislada de células están substancialmente libres de componentes maternales,, v. gr., cuando menos alrededor del 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 90%, 85% 90%, 95%, 98%, o 99% de las células en la población aislada de c{élulas son no maternales en origen.

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células aisladas CD10+, CD13+, CD33+, CD45", CD117" y CD133". En otra modalidad, una población de células útil para los métodos de tratamiento descritos en la presente es una población de células que comprenden células de tallo de placenta, en donde cuando menos alrededor de 70%, cuando menos alrededor de 80%, cuando menos alrededor de 90%, cuando menos alrededor de 95% o cuando menos alrededor de 99% de células en la población decélulas son células de tallo de placenta aisladas CD10+, CD13+, CD33+, CD45", CD117" y CD133\ En una modalidad especifica, las células aisladas o población aislada e células se aisla lejos de las células que no son dichas células. En otra modalidad especifica, las células aisladas CD10+, CD13+, CD33+, CD45", CD117" y CD133" son no maternales en origen, es decir, tienen un genotipo fetal. En otra modalidad especifica, cuando menos 40%, 45%, 505, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de las células en la población aislada de células son de origen no maternal. En otra modalidad especifica, las células aisladas o población aislada de células de placenta están aisladas lejos de las células que no presentan estas características.

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células aisladas CD10-, CD33-, CD44+, CD45-, y CD117-. En otra modalidad, una población de células útil para los métodos de tratamiento descritos en la presente es una población de células que comprenden, fv. Gr., enriquecidas para, células de placenta aisladas, en donde cuando menos alrededor de 70%, Ik cuando menos alrededor de 80%, cuando menos alrededor de 90%, cuando menos alrededor de 95% o cuando menos alrededor de 99% de las células en la población de células son células de tallo de placenta de CD10-, CD33-, CD44+, CD45-, y CD117- aisladas. En una modalidad especifica, la célula aislada o población aislada de células se aislan lejos de las células que no son dichas células. En otra modalidad especifica, las células aisladas son no maternales en origen. En otra modalidad especifica, cuando menos alrededor de 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de las células en la población de células son no maternales en origen. En otra modalidad especifica, la célula aislada o población aislada de células de placenta está aislada lejos de las células que no presentan estos marcadores.

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células aisladas CD10-, CD13-, CD33-, CD45- o CD117-. En otra modalidad, una población de célula útil para los métodos de tratamiento descritos en la presente es una población aislada de células que comprenden, v. grt . , enriquecidas para, c'lulas de tallo de placenta aisladas CD10-, CD13-, CD33-, CD45-, y CD117-, en donde cuando menos alrededor de 70%, cuando menos alrededor de 80%, cuando menos alrededor de 90%, cuando menos alrededor de 95% o cuando menos alrededor de 99% de las c{elulas en la población son dichas células CD10., CD13-, CD33-, CD45-, y CD117-. En una modalidad especifica, las células aisladas o población aislada de células se aislan lejos de las células que no son dichas células. En otra modalidad especifica, las células aisladas son de origen no maternal. En otra modalidad especifica, cuando menos alrededor de 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de las c{elulas en la población de células son de origen no maternal. En otra modalidad especifica, las células aisladas o población aislada de células de aisla lejos de las células que no presentan estas características.

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células HLA A,B,C+, CD45', CD34", y CD133" que son adicionalmente CD10+ , CD13+ , CD38+, CD44+ , CD90+, CD105+, CD200+ y/o HLA-G+, y/o negativo para CD117. En otra modalidad, la población de célula útil para los métodos de tratamiento descritos en la presente es una población aislada de células que comprenden, v. gr., enriquecida para, células de tallo de placenta aisladas, en donde cuando menos alrededor de 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50]%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%k, 9'%, 95%, 98% o alrededor de 99% de las células en la población son células de tallo de placenta que son HLA A,B,C_, CD45~, CD34", CD133", y que son adicionalmente positivos para CIO, Cdl3, CD38, CD44, CD90, CD105, CD200 h/o HLA-G, y/o negativo para Cdll7. En una modalidad especifica, las células aisladas o población aislada de células se aislan lejos de células que no son dichas células. En otra modalidad especifica, las células de placenta aisladas son no maternales en origen. En otra modalidad especifica, cuando menos alrededor de 40%, 45%, 505, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 905, 95%, 98% o 99% de las células en la población son no maternales en origen. En otra modalidad especifica, las células aisladas o población aislada de células se aislan lejos de las células de placenta que no presentan estos marcadores .

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células aisladas que son CD200+ y CD10+, como se determina por enlace de anticuerpo, y CD117", como se determina por ambos enlace de anticuerpo y RT-PCR. En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células aisladas, v. gr., células de tallo o células multipotentes , que sonuna o más de CD10+ , CD29", CD54 + , CD200+, HLA-G+, HLA clase I+ y ß-3-mivtohlonulins . En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células de placenta aisladas o células de cordón umbilical, v. gr., células de tallo de placenta, células multipotentes de placenta, células de tallo de cordón umbilical o células multiponentes de cordón umbilical, qu son una o más de CD10+ , CD29+, CD44+ , CD45", CD54/ICAM+, CD62E", CD62L", CD62P", CD80", CD86", CD103", CD104", CD105+, CD106/VCA +, CD144/VE-cadherinabaja, CD184/CCR4" ß2-microglobulinabaja, MHC-Ibaja, HLA-Gbajam y/o PDLIbaja. En una modalidad especifica, las células aisladas son cuando menos CD29+ y CD54+. En otra modalidad especifica, las c{elulas aisladas son cuando menos CD44+ y CD106+. En otra modalidad especifica, las células aisladas son cuando menos CD29+.

En otra modalidad, una población de células útil en los métodos de tratamiento descritos en la presente comprende células de tallo de placenta aisladas, y cuando menos 50%, 609%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98%, o 99% de las c{elulas en la población de célula son células de tallo de placenta aisladas qu son una o más de CD10+, CD29+ , CD44 + , CD45", CD54/ICAM+, CD62E", CD62Ñ", CD62P", CD80", CD86", CD103", CD104", CD105+, CD106/VCAM+, CD144/VE-cadherinabaja, CD184/CSCR4", ß2-microglobulinabaja, HLA-Ibaja, HLA-II, HLA-Gbaja, y/o PDLlbaja. En una modalidad más espeífica, cuando menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% o 99% de las células de tallo de placenta en la población de células son CD10+, CD29+, CD44+ , CD445", CD54/icam+, CD62-E", CD62-L", CD62-P", CD80", CD86", CD103", CD104", CD105+, CD106/VCAN ' , CD144 /VE-cadherina aja, CD184/CXCR4". B2-microglobulinabaja, MHC-Ibaja, MHC-II", HLA-Gbaja, y PDLlbaja.

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células de placenta aisladas o células de cordón umbilical (v. gr . , células de tallo o células multipotentes ) que son una o más, o todas de CD10+, CD29+, CD34", CD45", CD54/ICAM+, CD62-E~, CD62-L", CD62-P", CD80", CD86", CD103", CD104", CD105+, CD106/VCAM+, CD144 /VE-caderinabaja, CD184 /CXCR4" ß2-microglobulinabaja, HLA-Ibaja, HLA-II, HLA-Gbaja, y/o PDLlbaja. En una modalidad más especifica, cuando menos 50%, . 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% o 99% de las células de tallo de placenta en la población de células son CD10+ , CD29+, CD44+ , CD45\ CD54/ICAM4, CD62-E", CD62-L", CD62P", CD80", CD86"' CD103", 104", CD105+, CD106/VCAM+, CD144/VE-cadherinabaja, CD184 /CXCR4", ß2-microglobulinabaja, MHC-Ibaja, MHC-II", HLA-Gba HLA-Gbja y PDllba:ia.

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células de placenta o células de cordón umbilical aisladas (v. gr., células de tallo o células multipotentes ) que son una o más, o todas, de CD10+ , CD29+, CD34", CD38", CD44+, CD45", CD54+, CD90+, SH2+, SH3+, SH4+ , SSEA3", SSEA4", 0CT-4+, y ABC-p+, en donde ABC-p es una proteina transportadora de ABC especifica de placenta (también conocida como proteina resistencia de cáncer de pecho (BCRP) y como proteina de resistencia de mitoxantrona (MXR) ) , en donde las células de tallo de placenta se obtienen mediante perfusión de un mamífero, v. gr., humano, la placenta se ha drenado de sangre de cordón y perfusión para remover la sangre residual.

En otra modalidad, las células de tallo de plácente útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células de placenta aisladas o células de cordón umbilical en odonde la expresión de cuando menos un marcador celular en las células es cuando menos dos veces más alto que para una célula de tallo mesenquimal (v. gr., una célula de tallo mesenquimal derivada de médula de hueso, o fibroblasto détmico. En otra modalidad específica, las células aisladas son no maternales en origen (es decir, tienen un genotipo fetal) . En otra modalidad especifica, el par contenido dentro de una población de célula en donde cuando menos alrededor de 405, 45%, 505, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% de las células en la población de célula son células de tallo de placenta que son no maternales en el origen .

La proliferación de gene confirma que las células de tallo de placenta aisladas, y poblaciones aisladas de células de tallo de placenta, son distinguibles de otras células, v. gr., fibroblastos dérmicos o células de tallo mesenquimales , v. gr., células de tallo mesenquimal derivadas de médula de hueso, sobre la base de expresión de ciertos genes. Las células de tallo de placenta aisladas descritas en la presente se pueden distinguir de, v. gr., fibroblastos dérmicos o células de tallo mesenquimal derivado de médula de hueso sobre la base de la expresión de uno o más genes, la expresión de los cuales es significativamente superior (v. gr., estadísticamente superior de manera significativa, o dos veces superior) en las células de tallo de placenta en comparación con los fibroblastos dérmicos o células de tallo mesenquimales derivadas de médula de huesa. En particular, las células de tallo de placenta se pueden distinguir e células de tallo mesenquimal sobre la base de la expresión de uno o más genes, la expresión de los cuales es significativamente superio (es decir, cuando menos dos veces superior) en las células de tallo de placenta que en un número equivalente de fibroblastosdérmicos o células de tallo mesenquimal derivadas de mkédula de hueso, en donde el uno o más genes son ACTG2, ADARB1, AMIG02, ARTS-1, B4GALT6, BCH, Cllorf9, CD200, C0L4A1, COL4A2, CPA4, DMD, DSC3, DSG2, EL0VL2, F2RL1 , FLJ10781, GATA6, GPR126, GPRC5B, HLA-G, ICAMI, IER3, IGBFP7 , IL1A, IL6, IL18, KRT18, KR58, LIPG, LRAP, MATN2, EST, NFE2L3, NUAKI, PCDH7 , PDLIM3, PKP2 , RTN1, SERPINB9, ST3GAL6, STGGALNAC5, SLC12A8, TFF21, TGFB2, VTN, ZC3H12A, o una combinación de cualquiera de los anteriores, cuando las células se desarrollan bajo condiciones equivalentes. Ver, v. gr. , Publicación de Solicitud de Patente de EUA No. 2007/0275362, la exposición de la cual se incorpora en la presente por referencia en su totalidad. En una modalidad más especifica, las células de tallo de placenta expresan dicho uno o m's genes 8diferencialmente comparadas con fibroblastos dérmicos o células de tallo mesenquimal derivado de édulo de hueso) cuando se cultivan durante de alrededor de 3 a alrededor 35 duplicaciones de población en un medio que comprende DMEM-LG (v. gr., de Gibco) ; 2% de suelo de oveja vetal (v. gr.k, de Hyclone Labs.); insulina- . transferrina-selenio lx (ITS), Ix ácido linoleico-albúmina de suero bovina (LA-BSA) ; 10~9 dexametosan (v. gr., de Sigma) ; 10"4 M 2-fosfato de ácido ascórbico (v. gr., de Sigma), factor de crecimiento epidérmico 10 ng/mL (v. gr., de R&D Systems); y factor de crecimiento derivado de plaqueta (PDGF-BB), 10 ng/mL (v. gr., de R&D Systems) . En una modalidad especifica, el gene especifico de célula de tallo de placenta es CD200.

Las secuencias para estos genes se pueden encontrar en GenBank en .los nos. de acceso NM_001615 (ACTG2), BC065545 (ADARB1) , (NM_181847 (amigo2), Ay 248490 (ARTS-1) , BC074884 (B4GALT6), BC008396 (BCH#) , BC020196 (Cllorf9) , BC031103 (CD200), NM_001845 (COL4A1) , NM_0'01846 (COL4A2), BC052289 (CPA4), BCO' 94758 (DMD) , AF293359 (DSC3), NM_001943 (DSG2), AF338241 (ELOVL2), AY336105 (F2RLI), NM_018215 (FLJ10781), AY416799 ) GATA& ) , BC075798 (GPR126) , NM_016235 (GPRC5B) , AF340038 (ICAM1), BC000844 (IER3), BC066339 (IGFBP7), BC013142 (I8LIA), BT019749 (IL6) , BC007461 (ILI8), (BC072017), KRT18, BC075839 (KRT8), BC060825 (LIPG) , BC065240 (LRAP) , BC010444 (MATN2), BC011908 (MJEST) , BC068455 (NFE2L3) , NM_014840 (NUAK1) , AB006755 ( PCDH7 ) , NM_014476 (PDLIM3), BC126199 (PKO-2), BC090862 ( RTN1 ) , BC002538 (SERPUINB89) , BC023312 ( ST3GAL6 ) , BC0001201 (AT6GALNAC5 ) , BC126160 o BC065328 ( SLC12A8 ) , BC025697 (TCF21), BC096235 (TGFB2), BC005046 (VTN) , y BC005001 (ZC3H12A) en marzo de 2008.

En una modalidad más específica, las células de tallo de placenta expresan cada uno de ACTG2, ADARB1, AMIG02, ARTS-1, B4GALT6, BCHE, Cllorf9, CD200, COL4A1, COL4A2, CPA4 , DMD, DSC3, DSG2 , ELOVL2, F2RL1 , FLJ10781, GATA6 , GPR126, GPRC5B, HLA-G, ICAMI, IER3, IGFBP7 , ILIA, IL6, IL18, KRT18, KRT8 , LIPG, LRAP, MATN2, MEST, NFE2L3, NUAK1 | , PCDH7 , PDL1M3 , PKP2, RTN1 , ERPINB9, ST3GAL6, ST6GALNACS, SLC12A8 , TCF21, TGFB2, VTN, y AC3H12A a un nivel detectablemente superior que un número equivalente de células de tallo mesenquimal derivadas de médula de huso, cuando las células se desarrollan bajo condiciones equivalentes.

La expresión de los genes arriba mencionados se puede determinar mediante técnicas convencionales. Por ejemplo, las sondas basadas en la secuencia de los genes se puede seleccionar individualmente y construir mediante técnicas convencionales. La expresión de los genes se puede determinar, v. gr., en una microdisposición que comprende sondas a uno o más de los genes, v. gr., una disposición Affymetrix GENECHIP® Human Genome U133A 2.0, o una Affrymetriz GENECHIP® Human Genome U133 Plus 2.0 (Santa Clara, California) . La expresión de estos genes se puede determinar aún cuando la secuencia para un número de acceso de GenBank particular se enmienda debido a sondas especificas para la secuencia enmendada se pude generar fáilmente usando técnicas convencionales bien conocidas.

El nivel de expresión de estos genes se puede usar para confirar la identidad de una población de células d tallo de placenta aisladas, para identificar una población aislada de células como comprendiendo cuando menos una pluralidad de células de tallo de placenta, o lo semejante. Las poblaciones aisladas de células que comprenden células de tallo de placenta, la identidad de las cuales se confirma, puden ser clónales, v. gr., poblaciones aisladas de células de tallo de placenta expandidas de una sola célula de tallo de placenta aislada, o una población mixta de células de tallo que comprenden células de tallo de placenta, v. gr., una población de células que comprenden células de tallo de placenta que se expanden de múltiples células de tallo de placenta aisladas, o una población de células que comprenden células de tallo de placenta aisladas, como se describe en la presente, y cuando menos otro tipo de célula.

El nivel de expresión de estos genes se pude usar para seleccionar poblaciones de células de placenta aisladas. Por ejemplo, una población de células, v. gr., células clonalmente expandidas, se pueden seleccionar si la expresión de uno omás de los genes arriba mencionados es significativamente más elevado en una muestra de la población de células que en una población equivalente de células de tallo mesenquimales . Esta selección pude ser una población de una pluralidad de poblaciones de celda de placenta aisladas, de una pluralidad de poblaciones de célula, la identidad de las cuales no s conocida, etc.

Las células de placenta aisladas, v. gr., las células de tallo de placenta se pueden seleccionar sobre la base del nivel de expresión de uno o más de estos genes en comparación con el nivel de expresión del uno o más genes en, v. gr., un control de célula de tallo mesenquiml, por ejemplo, el nivel de expresión del uno o más genes en un número equivalente de células de tallo mesenquimal derivada de médula de hueso. En una modalidad, elnivel de expresión del uno o más genes en una mustra que comprende un número equivalente de células e tallo mesenquimales se usa como un control. En otra modalidad, el control, para células de placenta aisladas probadas bajo ciertas condiciones, es un valor numérico que representa el nivel de xpresión de uno o más genes en células de tallo mesenquimal bajo las condiciones .

Las células de tallo de placenta aisladas descritas en la presente presentan las características anteriores (v. gr., combinaciones de marcadores de superficie de célula y/o perfiles de expresión de gene9 en cultivo primario, o durante proliferación en medio que comprende, v. grt . , DME -LG (Gibco) , 2% de suero de becerro fetal (FCS) (Hyclone Laboratories), lx insoluna-transferrrina-selenio (ITS), lx-ácido lenolénico-suero-bovino-albúmina (LA-BSA) , 10~9M dexametosona (Sigma) , 1CT4N 2-fosfato de ácido ascórbico (Sigma) , factor de crecimiento epidérmico (EGF) 10ng/ml (R&D Systems) , factor de crecimiento derivado de plaqueta (PDGF-BB) , 10 ng/ml (R&D Systems), y 100U penicilina/lOOOU estreptomicina .

En otra modalidad específica de las células de placenta aisladas, v. gr., células de tallo de placenta, o poblaciones de células que comprenden las células de placenta aisladas, las células o población habiendosido expandida, por ejemplo, pasada cuando menos, alrededor, o no más de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 veces, o proliferada durante cuando menos alrededor o no más de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 7, 9, 10, 12, 143, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38 o 40 duplicaciones de población. En otra modalidad especifica de las células de planta aisladas, v. gr., células de tallo de placenta, o poblaciones de células que comprenden células de placenta aisladas, que se describen en la presente, las células de placenta aisladas son fetales en origen (es decir, tienen el genotipo fetal).

En ciertas modalidades de células de placenta aisladas, v. gr., células de tallo de placenta, las células de placenta aisladas no se diferencian durante el cultivo en medio de crecimiento, es decir, medio formulado para promover la proliferación, v. gr., durante la proliferación en medio de crecimiento. En otra modalidad especifica, las células de placenta aisladas, v. gr., células de tallo de placenta, no requieren una capa alimentadora a in de proliferar. En otra modalidad especifica, las células de placenta aisladas no se diferencian en cultivo en ausencia de una capa alimentadora, únicamente debido a la falta de una capa de célula alimentadora .

En otra modalidad, las células de tallo de placenta útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente son células de placenta aisladas o células de cuerda umbilical, en donde una pluralidad de las células son positivas para dehidrogenasa de aldehido (ALDH) , COMO SE DETERMINA MEDIANTE UN ENSAYO DE ACTIVIDAD DE DESHI DROGENASA DE ALDEHÍDO. Estos ensayos son conocidos en el ramo (ver, v. gr., Bostian y Betts, Biochem, J. , 173, 787, (1978) ) . En una modalidad especifica, el ensayo de ALDH usa ALDEFLUOR® (Aldagen, Inc., Ashalnd, Oregon) como un marcador para actividad de deshidrogenasa de aldehido. En una modalidad especifica, la pluralidad está entre alrededor de 3% y alrededor de 25% de células en la población de células. En otra modalidad, las células de tallo de placental muestran cuando menos tres veces, o cuando menos cinco veces superior la actividad de ALDH que una población de células de tallo mesenquimales derivadas de médula de hueso que tienen alrededor del mismo número de células y cultivadas bajo las mismas condiciones.

En ciertas modalidades de cualquiera de las poblaciones de células que comprende células de tallo de placenta, como se describe en la presente, las células de tallo de placenta en las poblaciones de células están substancialmente libres de células que tienen un genotipo materno; v. gr., cuando menos 40%, 455, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 995 de las, v. gr., células de tallo de placenta en las poblaciones tienen un genotipo fetal. En ciertas otras modalidades de cualquiera de las poblaciones de células que comprenden las células de tallo de placenta descritas en la presente, las poblaciones de células que comprenden las células de tallo de placenta están substancialmente libres de células que tienen un geno tipo materno; v. gr. , cuando menos 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% o 99% de las células (v. gr., células de tallo de placenta) en la población tienen un genotipo fetal.

En una modalidad especifica de cualquiera de lo anterior células de tallo de placenta aisladas, o poblaciones de c'lula aislada que comprende, v. gr., las células de tallo de placenta, el cariotipo de las células de tallo de placenta, o cuando menos alrededor de 95% o alrededor de 995 de las cfelulas en la población es normal. En otra modalidad especifica de cualquiera de las c{elulas de tallo de plcenta anteriores o poblaciones de celda, las células de tallo de placenta, o, v. gr., células de tallo de placenta en la población de células, son no maternales en origen.

Las células de tallo de placenta aisladas, o poblaciones aisladas de células que comprenden células de tallo de placenta, v. gr., que consisten esencialmente de células de tallo de placenta, que tienen cualquiera de las combinaciones anteriores de marcadores, se pueden combinar en cualquier relación. Cualesquiera dos o más de las poblaciones de célula aisladas anteriores se pueden combinar para formar una población de célula aislada. Por ejemplo, una población aislada de células puden comprender una primera población de células definidas por una de las combinaciones de marcador arriba descritas, y una segunda población de células definidas por otra de las combinaciones de marcador arriba descritas, en donde las primera y segunda poblaciones se combinan en una relación, v. gr., de alrededor de 1:99, 2:98, 3:97, 4:96, 5:95, 10:90, 20:80, 30:70, 40:60, 50:50,. 60:40, 70:30, 80:20, 90:10, 95:5, 96:4, 97:3, 98:1 o alrededor de 99.1. En forma semejante, cualesquiera tres, cuatro, cinco o más de las células o poblaciones de célula aislada se pueden combinar .

Las células de tallo de placenta aisladas útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente se pueden obtener, v. gr., mediante disrupción de tejido de placenta o tejido de cuerda umbilical, con o sin digestión enzimática <8ver Sección 5.5.3), o mediante perfusión 8ver Sección 5.5.4). Por ejemplo, las poblaciones de células de tallo de placenta aisladas se pueden producir de conformidad con un método que comprende someter a perfusión una placenta de mamífero que se ha drenado de sangre de cordón y sometido a perfusión para remover la sangre residual.; la perfusión de la placenta con una solución de perfusión; y recolección de la solución de perfusión, en donde la solución de perfusión después de la perfusión comprende una población de células de placenta que comprende células de placenta aisladas; y aislar una pluralidad de las células de placenta aisladas de la población de células. En una modalidad específica, la solución de perfusión se pasa a través de ambas, la vena umbilical y las arterias umbilicales y se recoge después de que se exuda de la placenta. En otra modalidad específica, la solución de perfusión se pasa a través de la vena umbilical y se recoge de las arterias umbilicales, o se pasa a través de las aterías umbilicales y se recoge de la vena umbilical.

En varias modalidades, las células de tallo de placenta aisladas, contenidas dentro de la población de células obtenidas de perfusión de una placenta, son cuando menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% o cuando menos 99.5% de la población de las células de placenta. En otra modalidad específica, las células de tallo de palenta aisladas recogidas por perfusión comprende células fetales y maternales. En otra modalidad específica, las células de placenta aisladas recogidas por perfusión son cuando menos 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 955, 99% o cuando menos 99.5% células fetales.

En otra modalidad especifica, se proporciona en la presente una composición que comprende una población de las células de placenta aisladas, v. gr., células de tallo de placenta, como se describe en la presente, recogidas por perfusión, en donde la composición comprende cuando menos una porción de la solución de perfusión usada para recoger las células de placenta aisladas.

En ciertas modalidades, las poblaciones aisladas de las células de tallo de placenta descritas en la presente se pueden producir digiriendo tejido de placenta o tejido de cordón umbilical con una enzima de disrupcion de tejido para obtener una población de células que comprende las células de tallo de placenta, y aislar, o aislar substancialmente , una pluralidad de las células de tallo de placenta del resto de las células de placenta o cordón umbilical. La totalidad, o cualquier parte de la placenta o cordón umbilical se pude digerir para obtener las células de tallo de plácente descritas en la presente. En modalidades especificas, por ejemplo, el tejido puede ser una placenta completa, una membrana amniótica, un corión, una combinación de amnión o corión, cordón umbilical, o una combinación de cualquiera de lo anterior. En otra modalidad especifica, la enzima de disrupción de tejido es tripsina, colagenasa, dispasa o lo semejante. En varias modalidades, las células de tallo de placenta aisladas contenidas dentro de una población de células obtenidas de digerir una placenta, son cuano menos 50%, 60%, 70%, 80%, 9'%, 95%, 99% o cuando menos 99.5% de la población de células de placenta.

Las poblaciones aisladas de células de tallo de placenta, o poblaciones aisladas de células que comprenden células de tallo de placenta, arriba descritas, pueden comprender alrededor de, cuando menos, o no más de, 1 x 105, 5 x 105m 1 x 106m 5 x 106m 1 x 197, 5 x 107, 1 x 108, 1 x 109m 5 x 109, 1 x 1010, 5 x 1010, 1 x 1011 o más de las células de placenta aisladas. Las poblaciones de células de placenta aisladas útiles en los métodos de tratamiento descritos en la presente comprenden cuando menos 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, o99% de células de placenta aisladas viables como se determina mediante, v. gr., exclusión de azul e triptán. 4.2.3 Crecimiento en Cultivo El crecimiento de las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, descritas en la presente, en cuanto a cualquier célula de mamífero, depende en parte del medio particular seleccionado para crecimiento. Bajo condiciones óptimas, las células de tallo de placenta típicamente se duplican en número d 1-5 días. Durante el cultivo, las células de tallo de placenta proporcionadas en la presente se adhieren a un substrato en el cultivo, v. gr., la superficie de un recipiente de cultivo de tejido (v. gr., plástico de plato de cultivo de tejido, plástico revestido con fibronectina y lo semejante) y forman una monocapa .

Las poblaciones de células de placenta aisladas que comprenden las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, cuando se cultiva bajo condiciones apropiadas, pueden formar cuerpo semejantes a embrión, es decir, grupos tridimensionales de células que crecen sobre la capa de células de tallo de placenta adherente. Las células dentro de los cuerpos semejantes a embrión expresan marcadores asociados con células de tallo muy temprano, v. gr., OCT-4, Nanog, SSEA3 y SSEA4. Las células dentro de los cuerpos semejantes a embrión típicamente no son adherentes al substrato de cultivo, como son las células de tallo de placenta descritas en la presente, sino que permanecen adheridas a las células adherentes durante el cultivo. Las células de cuerpo semejante a embrión dependen de las células de tallo de placenta para viabilidad, como cuerpos semejantes a embrión no se forman en ausencia de las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta. Las c{elulas de tallo de placenta adherentes de esta manera facilitan el crecimiento de uno o más cuerpos semejantes a embrión en una población de células de placenta que comprenden las células de tallo de placenta. Sin desear estar limitados por la teoría, las células de los cuerpos semejantes a embrión se piensa que crecen en las células de tallo de placenta adherentes mucho como las células de tallo embriónicas crecen en una capa de alimentador de células. Las células de tallo mesenquimal, v. gr., células de tallo mesenquimal derivadas de médula de hueso, no desarrollan cuerpos semejantes e embrión en el cultivo. 4.3 MÉTODOS PARA OBTENER CÉLULAS DE TALLO DE PLACENTA 4.3.1 Composición de Recolección de Célula de Tallo Las células de tallo de placenta se pueden recoger y aislar de conformidad con los métodos proporcionados en la presente. Generalmente, las células de tallo se obtienen de una placenta o cordón umbilical de mamífero usando una solución fisiológicamente aceptable, v. gr., una composición de recolección de célula de tallo. Una composición de recolección de célula de tallo se describe con detalle en la Publicación de solicitud de Patente de EUA No. 2007/0190042, la exposición de la cual se incorpora por referencia en la presente en su totalidad.

La composición de recolección de célula de tallo puede comprender cualquier solución fisiológicamente aceptable apropiada para la recolección /o cultivo de células de tallo, por ejemplo, una solución de salina (v. gr., salina tamponada con fosfato, solución de Kreb, solución de Kreb modificada, solución de Eagle, 0.9% de NaCl, etc.), un medio de cultivo (v. gr., DMEM, HD EM, etc.), y lo semejante.

La composición de recolección de célula de tallo puede comprender uno o más componentes que tienden a conservar células de tallo de placenta, es decir, prevenir que células de tallo de placenta se sequen, o retrasen la muerta de las células de tallo de placenta, reduzcan el número de células de tallo de plácente en una población que células que mueren, o lo semejante, desde el tiempo de recolección al tiempo de cultivo. Estos componentes pueden ser, v. gr., un inhibidor de apoptosis (v. gr., un inhibidor de caspasa o inhibidor de JNK) ; un vasodilatador 8v. gr., sulfato de magnesio, una droga antihpertensora, péptido natriurético atrial (ANP) , adrenocorticotropin, hormona qu libera corticotropin, nitroprusuro de sodio, hidralazina, adenosina, trifosfato, adenosina, indometacina o sulfato de magnesio, un inhibidor de fosfodiesterasa, etc.); un inhibidor de necrosis (v. gr., 2- ( lH-indol-3-il ) -3-pentilamino-maleimida, ditiocarbamato de pirrolidina, o clonazepam) ; un inhibidor de TNF-s, y/o un perfluorocarbono portador de oxigeno (v. gr., bromuro de perfluorooctilo, bromuro de perfluorodecilo, etc.).

La composición de recolección de célula de tallo puede comprender una o más enzimas de degradación de tejido, v. gr., una metaloproteasa , una proteasa de suero, una proteasa neutra, un RNase, o un DNase, o lo semejante. Estas enzimas incluyen, pero no están limitadas a, colagenasas (v. gr., colagenasa I, II, III o IV, una colagenasa de Clostridium histoliticum, etc.); dispasa, termolisina, elastasa, tripsina, LIBERASEMR, hialuronidasa, y lo semejante.

La composición de recolección de célula de tallo pude comprender una cantidad bactericida o gacteriostáticamente efectiva de un antibiótyico . En ciertas modalidades no limitantes, el antibiótico es una macrolida (v. gr., tobramicina) , una cefalosporina (v. gr., cefalexina, cefradina, cefuroxima, cefprozil, cefaclor, cefixima o cefadroxil) , o claritromicina, una eritromicina, una penicilina (v. gr., penicilina V) o una quinolon (v. gr., oloxaciina, ciprofloxacina o norfloxacina) , una tetraciclina, una estreptomicina, etc. En una modalidad particular, el antibiótico es activo contra bacterias Gram(+) y/o Gram(-), v. gr., Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, y lo semej ante .

La composición de recolección de célula de tallo también pude comprender uno o más de los siguientes compuestos: adenosina (alrededor de 1 mM a alrededor de 50 mM) ; D-glucosa (alrededor de 20 mM a alrededor de 100 mM) , iones de magnesio (alrededor de 1 mM a alrededor de 50 mM) ; una macromolécula de peso molecular mayor de 20,000 daltons, en una modalidad, presente en una cantidad suficiente para mantener integridad endotelial y viabilidad celular (v. gr., un coloide sintético o que ocurre naturalmente, un polisacárido tal como dextrano o un polietilenglicol presente a alrededor de 25 g/1 a alrededor de 100 g/1, o alrededor de 40 g/1 a alrededor de 60 g/1); un antioxidante (v. gr., hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, glutationa, vitamina C o vitamina E presente a alrededor de 25 uM a alrededor de 100 uM) , un agente reductor (v. gr., N-acetilcisteina presente a alrededor de 0.1 mM a alrededor de 5 mM) , un agente que previene la entrada de calcio en células (v. gr., verapamil presente a alrededor de 2 · uM a alrededor de 25 uM) , nitroglicerina (v. gr., alrededor de 0.05 g/L a alrededor de 0.2g/L); un anticoagulante, en una modalidad, presente en una cantidad suficiente para ayudar a prevenir la coagulación de sangre residual (v. gr., heparina o hirudina presente a una concentración de alrededor de 1000 unidades/1 a alrededor de 100,000 unidades/1); o un compuesto que contiene amilorida (v. gr., amilorida, amilorida de etilispropilo, amilorida de hexametileno, amilorida de dimetilo o amilorida de isobutilo presente a alrededor de 1.0 uM a alrededor de 5 uM) . 4.3.2 Recolección y Manejo de Placenta y Cordón Umbilical Generalmente, una placenta humana, con cordón umbilical, se recuperan poco después de su expulsión después del nacimiento. En una modalidad preferida, la placenta se recupera de una paciente después de informado el consentimiento y después de que se toma una historia médica completa de la paciente y está asociada con la placenta. De preferencia, la historia médica continúa después del parto. Dicha historia médica se puede usar para coordinar uso subsecuente de la placenta/cordón umbilical o las células de tallo cosechadas de las mismas. Por ejemplo, las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, se pueden usar, en la luz de la historia médica, para medicina personalizada para el bebé asociado con la placenta y el cordón umbilical, o para padres, u otros parientes del bebé.

Antes e la recuperación de células de tallo de placenta, la sangre del cordón umbilical y sangre de placenta se remueven. En ciertas modalidades, después del parto, la sangre de cordón y sangre de placenta se recupera. La placenta se puede someter a un proceso de recuperación de sangre de cordón convencional. Típicamente una aguja o cánula se usa, con la ayuda de gravedad, para desangrar la placenta <8ver, v. gr., Anderson, Patente de EUA No. 5,372,581; Hessel y col., Patente de EUA No. 5,415,665) . La aguja o cánula usualmente se coloca en la vena umbilical y la placenta se puede masajear suavemente para ayudar a drenar la sangre de cordón de la placenta. Esta recuperación de sangre de cordón se puede realizar comercialmente , v. gr., LifeBank Inc., Cedar Knolls, N.J., ViaCord, Cor Blood Registry and Cryocell. En ciertas modalidades, la placenta es drenada por gravedad sin manipulación adicional de manera de reducir al mínimo la disrupción de tejido durante la recuperación de sangre de cordón.

Típicamente, una placenta se transporta de la habitación de parto o nacimiento a otra ubicación, v. gr., un laboratorio, para recuperación de sangre de cordón y recolección de las células de tallo por, v. gr., un laboratorio, . para recuperación de sangre de cordón y recolección de células de tallo por, v. gr., perfusión o disociación de tejido. La placenta de preferencia se transporta en un dispositivo de transporte estéril, térmicamente aislado (que mantiene la temperatura de la placenta entre 20-28°C), por ejemplo, colocando la placenta, con cordón umbilical próximo sujetado, en una bolsa de plástico de sujeción de cierre estéril, que luego se coloca en un recipiente aislado. En otra modalidad, la placenta se transporta en un equipo de recolección de sangre de cordón substancialmente como se describe en la Solicitud de Patente de Estados Unidos pendiente No. 2006/0060494, presentada el 19 de septiembre de 2005, o en la Patente de EUA No. 7,147,626. De preferencia, la placfenta se entrega al laboratorio cuatro a veinticuatro horas después del parto. En ciertas modalidades, el cordón umbilical próximo se sujeta, de preferencia dentro de 4-5 cm de la inserción hacia el disco de placenta antes de la recuperación de sangre de cordón. En ciertas otras modalidades, el cordón umbilical se sujeta distantemente, v. gr., en o cerca del extremo del cordón umbilical lejos de la placenta. En otras modalidades, el cordón umbilical se sujeta después de la recuperación de sangre de cordón pero antes de procesamiento adicional de la placenta .

La placenta y el cordón mbilical, antes de la recolección de célula de tallo, se pueden almacenar bajo condiciones estériles y ya sea a temperatura ambiente o a una temperatura de 5 a 25°C (centígrados)). La placenta y el cordón umbilical se pueden almacenar durante un período más prolongado de cuarenta y ocho horas, y de preferencia por un período de cuatro a veinticuatro horas antes de someter a perfusión la placenta para remover cualquier sangre de cordón residual. La placenta y el cordón umbilical de preferencia se almacenan en una solución anticoagulante a una temperatura de 5 a 25 !C. Las soluciones anticoagulantes apropiadas son bien conocidas en el ramo. Por ejemplo, una solución de heparina o sodio de warfarina se puede usar. En una modalidad preferida, la solución anticoagulante comprende una solución de heparina (v. gr.k, 1% p/p en 1:1000 de solución). La placenta desangrada y cordón umbilical de preferencia se almacenan durante no más de 36 horas antes de que las células, v. gr., céluls de tallo de placenta, se recojan.

La placenta de mamífero o una parte de la misma, o cordón umbilical, una vez recogido y preparado generalmente como arriba, se puede tratar en cualquier manera conocida en el ramo, v. gr., se puede someter a perfusión o interrumpir, v. gr., digerir con una o más enzimas de disrupcion de tejido, para obtener células de tallo. 4.3.3 Disrupcion Física y Digestión Enzimática de Tejido En una modalidad, las células de tallo se recogen de una placenta o cordón umbilical de mamífero mediante disrupcion física, v. gr., digestión enzimática, v. gr., usando la composición de recolección de célula de tallo descrita en la Sección 4.3.1, anterior. Por ejemplo, la plaenta, o un porción de la misma, o cordón umbilical, v. gr., puede triturarse, cortarse, molerse, cortarse en cuadros, cortarse, macerarse o lo semejante, mientras que está en contacto con, v. gr., un tampón, medio o una composición de recolección de célula de tallo, y el tejido se digiere subsecuentemente con una o más enzimas. La placenta, o una porción de la misma, o cordón umbilical también puede ser físicamente disrumpto y digerido con una o más enzimas, y el material resultante luego sumergirse en, o mezclarse hace, un tampón, medio o una composición de recolección de célula de tallo, y el tejido subsecuentemente digerido con una o más enzimas. La placenta, o una porción de la misma, ocordón umbilical también · se puede interrumpir o digerir físicamente con una o más enzima, y el material resultante luego se sumerge en, o se mezcla hacia, un tampón, medio o un composición de recolección de célula de tallo. Cualquier método de disrupcion física se puede usar, siempre que el método de disrupcion deje una pluralidad, más preferentemente una mayoría, y más preferentemente cuando menos y0%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% o 99% de las células en el viable de órgano, como se determina por, v. gr., exclusión de azul de tripan .

La placenta o cordón umbilical se puede disectar5 en componaentes antes de la disrupcion física y/o digestión enzimática y recuperación de célula de tallo. Por ejemplo, las células de tallo de placenta se pueden obtener de la membrana amniótica, corión, cotiledóneas de placenta, o cualquier combinación de los mismos, o de una porción de un cordón umbilical. En una modalidad, las células de tallo de placenta se obtienen de tejido de placenta que comprende amnión o corión, amnión-corión, o cordón umbilical. Típicamente, las células de tallo de placenta se pueden obtener mediante disrupcion de un bloque pequeño de tejido de placenta o tejido de cordón umbilical, v. gr., un bloque de tejido de placenta o tejido de cordón umbilical que es alrededor de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 300, 400, 500,600, 700, 800, 900, o alrededor de 1000 milímetros cúbicos en volumen.

Una composición de recolección de célula de tallo preferida comprende una o más enzimas disruptivas de tejido. La digestión enzimática de preferencia usa una combinación de enzimas, v. gr., una combinación de tripsina, colagenasa, y/o dispasa, opcionalmente incluyendo hialuronidasa, o una combinación de LIBERASE (Boehringer Mannheim Corp., indianapolis , Inc.) e hialuronidasa. Otras enzimas que se pueden usar para interrumpir el tejido de placenta incluyen papaína, desoxiribonucleasas , proteasas de suero, tales como tripsina, quimotripsina, o elastasa. Las protesasa de serian se pueden inhibir mediante microglobulina alfa 2 en suero y por lo tanto el medio usado para digestión usualmente está libre de suero, EDTA y DNase se usan comúnmente en procedimientos de digestión de enzima para aumentar la eficiencia de recuperación de célula. El digerido está de preferencia diluido de manera de evitar atrapar células de tallo dentro de la digestión viscosa.

Cualquier combinación de enzimas de digestión de tejido se pueden usar. Las concentraciones típicas para enzimas de digestión de tejido incluyen, v. gr., 50-200 U/mL para colagenasa I y colagenasa IV, 1-10 u/mL para dispasa, y 10-100 U/mL para elastasa. Las proteasas se pueden usar en combinación, es decir, dos o más proteasas en la misma reacción de digestión, o se pueden usar secuencialmente a fin de liberar las células de tallo de placenta. Por ejemplo, en una modalidad, una placenta, o parte de la misma. 0 cordón umbilical, se digiere primero con una cantidad apropiada de colagenasa I a 2 mg/ml durante 30 minutos, seguido por digestión con tripsina, 0.25%, durante 20 minutos, a 37°C. Las proteasas de serina se usan de preferencia consecutivamente siguiendo el uso de otras enzimas.

En otra modalidad, el tejido se puede interrumpir adicionalmente mediante la adición de un quelador, v. gr. Ácido bis(2-éter de aminoetilo) -N, N, N' ' -tetraacético de tilenglicol (GTA) o ácido etilendiaminatetraacético (ECTA) a la composición de recolección de célula de tallo que comprende las células de tallo o a una solución en la que el tejido se interrumpe y/o digiere antes de aislamiento de las células de tallo con la composición de recolección de célula de tallo.

Se apreciará que cuando una placenta completa, o porción de una placenta que comprende células fetales y maternales 8por ejemplo, cuando la porción de la placenta comprende el corión o cotiledonas ) , las células de tallo de placenta recogidas comprenderán una mezcla de células de tallo de placenta derivadas de ambas fuentes fetal y maternal. Cuando una porción de la placenta cp,'remde momgima o una cantidad omisible de células maternales (por ejemplo, amnión) , las células de tallo de placenta recogidas comprenderán casi exclusivamente células de tallo de placenta fetales . 4.3.4 Perfusión de Placenta Las células de tallo e placenta también se pueden obtener mediante perfusión de una placenta de mamífero. Los métodos de perfusión de plantas ¿de mamífero para obtener células de tallo se describen, v. gr., en Hariri, Patentes de EUA Nos. 7,045, 148 y 7,468,276, y en la Publicación de Solicitud de Patente de EUA No. 2007/0190042. Las exposiciones de las cuales se incorporan por la presente por referencia en sus totalidades.

Las células de tallo de placenta se pueden ecoger mediante perfusión, v. gr., a través de la vasculatura de placenta, usando, v. gr., una composición de recolección decélula de tallo como una solución de perfusión. En una modalidad, una placenta de mamífero se hace perfusión mediante pasaje de solución de perfusión a tragés de ya sea o ambas de la arteria umbilical y vena umbilical. El flujo de solución de perfusión a través de la placenta se puede lograr usando, v. gr., flujode grvedad hacia la placenta. De preferencia, la solución de perfusión se fuerza a través de la placenta usando una bomba, v. gr., una bomba peristáltica. La vena umbilical, v. gr., uede ser canulada con una cánula, v. gr., una cánula de TEFLON® o plástico, que está conectada a un aparato de conexión estéril, tal como tubería estéril. El aparato de conexión estéril se conecta a un distribuidor de perfusión. En ciertas modalidades, los vasos e cordón umbilical se canulan cerca de la placenta, v. gr . , dentro de alrededor de 2-3 centímetros de la placenta; en otras modalidades, los vasos de cordón umbilical se conectan a cánulas distantes a la placenta, v. gr., dentro de alrededor de 2-3 centímetros del extremo del cordón umbilical m+ás alejado de la placenta.

En preparación para la perfusión, la placenta se orienta de preferencia (v. gr., suspende) de tal manera que la arteria umbilical y la venta umbilical estén colocadas en el punto más elevado de la placenta. La placenta se puede someter a perfusión mediante pasaje de un fluido de perfusión, v. gr., la composición de recolección de célula de tallo proporcionada en la presente, a través de la vasculatura de placenta, o a través de la vasculatura de placenta y tejido circundante. En una modalidad, la arteria umbilical y la vena umbilical se conecta simultáneamente a una pipeta que está conectada a través de un conector flexible a un depósito de la solución de perfusión. La solución de perfusión se pasa hacia la vena yarteria umbilical. La solución de perfusión exuda de y/o pasa a través de las paredes de los vasos sanguíneos hacia los tejidos circundantes de la placenta, y se recoge en un recipiente vierto apropiado desde la superficie de la placenta que estaba fijada al útero de la madre durante la gestación. La solución de perfusión también se puede introducir a través e la abertura de cordón umbilical y se deja fluir o percollar fuera de las aberturas en la apred de la placenta que se puso en interfaz on la pared uterina maternal. En otra modalidad, la solución de perfusión se psa a través de las venas umbilicales y se recogen de la atería umbilical, o se pasa a través de la arteria umbilical y recogida de las venas umbilicales.

En una modalidad, el cordón umbilical próximo se sujeta durante la perfusión, y más preferentemente, se sujeta dentro de 4-5 cm de la inserción del cordón hacia el disc fr perfusión .

La primera recolección de fluido de perfusión de una placenta de mamífero durante el proceso de desangrado es generalmente coloreada con células de sangre roja residuales de la ssngre de cordón y/o sangre de placenta. El fluido de perfusión se hace más incoloro a medida que la perfusión prosigue y las células de sangre de cordón residuales se lavan fuera de la placenta. Generalmente de 30 a 100 mi de fluido de perfusión es adecuado para desangrar inicialmente la placenta, pero más o menos fluido de perfusión se puede usar dependiendo de los resultados observados.

El volumen de liquido de perfusión usado para recoger células de tallo de placenta, puede variar dependiendo del número de células de tallo que se va a recoger, el tamaño de la placenta, el número de recolecciones que se van a hacer de una sola placenta, etc. En varias modalidades, el volumen de liquido de perfusión puede ser de 50 mL a 5000 mL, 50 mL a 4000 mL, 50 mL a 3000 mL, 100 mL a 2000 mL, 250 mL a 2000 mL, 500 mL a 2000 mL, o 750 mL a 2000 mL. Típicamente, la placenta se somete a perfusión con 700-800 mL de líquido de perfusión después del desangrado.

La placenta se puede someter a perfusión una pluralidad de veces durante el curso de varias horas o varios días. Cuando la placenta se va a someter a perfusión una pluralidad de veces, se puede mantener y cultivar bajo condiciones asépticas en un recipiente u otro recipiente apropiado, y someterse a perfusión con la composición de recolección de célula de tallo, o una solución de perfusión convencional (v. gr., una solución salina normal tal como salina tamponada con fosfato ("PBS") ) ) con o sin un anticoagulante (v. gr., heparina, sodio de wafarina, curamrina, bishidroxicumarina) , y/o con o sin un agente antimicrobiano (v. gr., ß-mercaptoetanol (0.1 m ) ; antibióticos tales como streptomicina (v. gr . , a 40-100 ug/ml) , penicilina 8v. gr., a 40U/ml), anfotericina B (v. gr., a 0.5 ug/ml) . En una modalidad, una placenta aislada se mantiene o cultiva durante un periodo de tiempo sin recoger el perfusado, de modo que la placenta se mantiene o cultiva durante 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, o 24 horas, o 2 o 3 o más dias antes de la perfusión de recolección del resultado de perfusión. La placenta sometida a perfusión se puede mantenr durante una o más tiempos adicionales, v. gr., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 78, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 15, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 o más horas, y someterse a perfusión una segunda vez con, v. gr., 700-800 mL de fluido de perfusión. La placenta se puede someter a perfusión 1, 2, 3, 4, 5 o más veces, por ejemplo una vez cada 1, 2, 3, 4, 5 o 6 horas. En una modalida preferida, la perfusión de la placenta y la recolección de solución e perfusión, v. gr., composición de recolcción de célula e tallo, se repite hasta que el número de células nucleadas recuperadas cae por debajo de 100 células/ml. Los resultados de perfusión de diferentes puntos de tiempo también se pueden estancar.

Sin desear estar limitados por ninguna teoría, después del desangrado y un tiempo suficiente de perfusión de la placenta, las células de tallo se cree que migran hacia la microcirculación desagrada y sometida a perfusión de la placenta y cordón umbilical en donde se recoge, de preferencia lavando hacia un recipiente de recolección por perfusión. La perfusión de la placenta aislada no solamente sirve para remover la sangre de cordón residual sino también proporcionar a la placenta con los nutrientes apropiados, incluyendo oxígeno. La placenta se puede cultivar y someter a perfusión con una solución similar que se usó para remover las células de sangre de cordón residual, de preferencia, sin la adición de agentes anticoagulantes.

La perfusión como se describe en la presente resulta en la recolección de significativamente más células de tallo que el número obtenible de una placenta de mamífero no sometida a perfusión con la solución, y no tratada de otra manera para obtener células de tallo (v. gr., mediante disrupcion de tejido, v. gr., digestión enzimática) . En este contexto, , "significativamente mas" significa cuando menos 10% más. La perfusión proporciona significativamente más c{elulas de tallo que, v. gr., el número de células de tallo que se pueden obtener del medio de cultivo en el que una placenta, o porción de la misma, se ha cultivado.

Las células de tallo se pueden aislar de la placenta mediante perfusión con una solución que comprende una o más proteasas u otras enzimas disruptivas de tejido. En una modalidad especifica, una placenta o porción de la misma (v. gr. , membrana amniótica, amnión y corión, lóbulo de placenta o cotiledón, o combinación de cualquiera de lo anterior) se lleva a 25-37°C, y se incuba con una o más enzimas disruptivas de tejido en 200 mL de un medio de cultivo durante 30 minutos. Las células del perfundido se recogen ¿, se llevan a 4°C, y se lavan con una mezcla inhibidora fría que comprende 5 mm de EDTA, 2 mM de ditiotreitol y 2 mM de beta-mercatpetanol . Las células de tallo se lavan después de varios minutos con una composición de recolección de célula de tallo fría (v. gr., 4°C) descrita en otro lugar en la presente.

Se apreciará que la perfusión que usa el método de bandeja, es decir, mediante la cual el resultado de perfusión se recoge después de que ha exudado del lado maternal de la placenta, resulta en una mezcla de células fetales y maternales. Como resultado, las células recogidas mediante este método comprenden una población mixta de células de tallo de placenta de ambos orígenes fetal y Omaterno. En contraste, la perfusión solamente a través de la vasculatura de placenta, mediante la cual el fluido de perfusión se pasa a través de uno o más vasos de placenta y se recoge solamente a través de los vasos restantes, los resultados en la recolección de una población de células de tallo de placenta casi exclusivamente de origen fetal. 4.3.5 Aislamiento, Clasificación, y Caracterización de Células de Tallo de Placenta Las células de tallo de placenta o cordón umbilical de mamífero, ya sea obtenidas por perfusión o digestión enzimática, se pueden purificar inicialmente de (es decir, aislarse de9 otras células mediante centrifugación de gradiente de Ficoll. Esta centrifugación pueden seguir cualquier protocolo convencional para velocidad de centrifugación, etc. En una modalidad, por ejemplo, ls células recogidas de la placenta o cordón umbilical se recuperan del perfundido mediante centrifugación a 5000 x g durante 15 minutos a temperatura ambiente, que separa las células de, v. gr., basura contaminante y plaquetas. En otra modalidad, el perfundido de placenta se concentra a alrededor de 200 mi, se forma en capas suavemente sobre Ficoll, yse centrifuga a alrededor de 1100 x g durante 20 minutos a 22°C, y la capa de interfaz de baja densidad de células se recoge para procesamiento adicional.

Los gránulos de célula se pueden suspender nuevamente en composición de recolección de célula de tallo fresca, o un medio apropiado para mantenimiento de célula de tallo, v. gr., IMDM medio libre de suero que contiene 7U/ml de heparina y 2 mM de EDTA 8GibcoBRL, NY) . La fracción de célula mononuclear total se puede aislar, v. gr., usando Lymphoprepr (nycomed Pharma, Oslo, noruega) de conformidad con el procedimiento recomendado por el fabricante.

Como se utiliza en la presente, "aislar" células de tallo de placenta, medios para remover cuando menos 20%, 30%, 40%, 505, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, o 99% de las c{elulas con las que las células de tallo están normalmente asociadas en la placenta o cordón umbilical de mamífero intactas. Una célula de tallo de un órganose "aisla" cuando está presente en una población de células que comprenden menos de 50% de las c{elulas con las que la célula de tallo está normalmente asociada en el órgano intacto.

Las células de tallo de placenta obtenidas por perfusión o digestión, por ejemplo, pueden adicional o inicialmente, aislarse mediante tripsinización diferencial usando, v. gr., una solución de 0.05% de tripsina con 0.2% de EDTA (Sigma, St. Louis MO) . La tripsinizción diferencial es posible debido a que las células de tallo de palcenta y células de tallo de cordón umbilical tipcamente se separan de superficies de plástico dentro de alrededor de cinco minutos, mientras que otras poblaciones adherentes típicamente requieren más de 20-30 minutos de incubación. Las células separadas se pueden cosechar después de la tripsinización y neutralización con tripsina, usando, v. gr., Tryypsin Neutralizing Solution (TNS, Cambrex9. En una modalidad de aislamiento de células adherentes, alícuotas de, por ejemplo, alrededor de 5-10 x 106 células se colocan en cada uno de varios fascos T-75, de preferencia frascos T75 revestidos con fibronectina . En dicha modalidad, las células se pueden cultivar con Medio de Crecimiento de Célula de Tallo Mesenquimal (MSCGM) comercialmente disponible (Cambrex) , y colocarse en una incubadora de cultivo de tejido (37°C, 5% de C02) . Después de 10-15 dpías, las células no adherentes se remueven de los frascos mediante lavado con PBS, El PBS luego se reemplaza por MSCGM. Los frascos se examinan de preferencia diariamente para la presencia de varios tipos de célula adherente y en particular, para identificación y expansión de grupos de células fibroblastoides .

El nú8mero y tipo de células recogidas de una placenta de mamífero se puede supervisar, por ejemplo, midiendo cambios en morfología y marcadores de superficie de célula usando técnicas convencionales de detección de célula tales como citometría de flujo , clasificación de célula, inmunocitoquímica (v. gr., manchado con tejido específico o anticuerpos específicos de marcador de célula) , clasificación de célula activada por fluorescencia (FACS) , clasificación de célula activada magnética (MACS), mediante examen de la morfología de las células usandoluz o microscopía confocal, , y/o midiendo cambios en expresión de gene usando técnicas bien conocidas en el ramo, tales como PCR y proliferación de xpresión de gene. Estas técnicas se pueden usar, también, para identificar células que son positivas para uno omás marcadores particulares. Por ejemplo, usando anticuerpos a CD34, se puede determinar, usando las técnicas anteriores, si una célula comprende una cantidad detectable de CD34; si es así,m la célula es CD34+ Asimismo, si una célula produce suficiente OCT-4 RNA para ser detectable mediante RT-PCR, o significativamentemás OCT-4 RNA que una célula de adulto, la célula es 0CT-4+. Los anticuerpos a marcadores de supervicie de célula 8v. gr., marcadores CDE tales como CD34) y la secuencia de genes especificas de célula de tallo, tales como OCT-4, son bien conocidos en el ramo.

Las células de tallo de placenta, v. gr., células que se han aislado mediante separación Ficoll, la adherencia diferencial, o una combinación de ambas, se puede clasificar usando un clasificador de célula activado por fluorescencia 8FACS) . La clasificación de célula activada por fluorescencia 8FACS) es un método bien conocido para separar partícula, incluyendo céluls, basadas en las propiedades fluorescentes de las patículas (Makarch, 1987, Methods Ens¿zymol, 151:150-165). La excitación láser de fracciones fluorescentes en las partículas individuales resulta en una carga eléctrica pequeña que permite separación electromagnética de partículas poitiva y negativa de una mezcla. En una modalidad, los anticuerpos específicos de marcador de superficie de célula o ligandos se etiquetan con distintas etiquetas fluorescentes. Las células de procesan a través de un clasificador de célula, permitiendo la separación de células basadas en su capacidad de enlazarse a los anticuerpos usados. Las partículas clasificadas de FACS se pueden depositar directamente en pozos individuales de placas de 96 pozos o 384 pozos para facilitar la separación y clonación.

En un esquema e clasificación, las células de tallo de placenta o cordón umbilical se clasifican sobre la base de expresión de los marcadores CD34, CD38, CD44, CD45, ¿CD73, CD105 y/o HLA-G; s decir, la ausencia de CD34, CD38 y CD45, y la presencia de CD44, CDE73, CD105 y/o HLA-G. Esto se puede lograr en conexión con procedimientos para seleccionar células de tallo sobre la base de sus propiedades de adherencia en cultivo. Por ejemplo, una tallo de selección de adherencia se puede lograr antes o después de clasificar sobre la base de expresión de marcador. En una modalidad, por ejemplo, las células se clasifican primero sobre la base de su expresión de CD34; CD34" células s retienen, y células que son, v. gr., CD200+HLA-G+ se separan de todas las otras células CD34". En otra modalidad, las células de placenta se basan en su expresión de marcadores CD200 y/o HLA-G; por ejemplo, las células que presentan cualquiera de estos marcadores se aislan para uso adicionales. Las células que expresna, v. gr., CD200 y/o HLA-G pueden, en una modalidad especifica, clasificarse adicionalmente basadas en su xpresión de CD73 y/o CD105, o epitopes reconocidos por anticuerpos SH2, SH3 o SH4, o falta de expresión de CD34, CD38 o CD45. Por ejemplo, en una modalidad, las células de placenta y/o células de cordón umbilical se clasifican mediante expresión o falta de la misma, de CD200, HLA-G, CD73, CD105, CD34, CD38 y CD45, y las células que son CD200+, HLA-G+, CD73+, CD105+, CD34", CD38", CD45" se aislan e otras células para uso adicional.

En otra modalidad, cuentas magnéticas se pueden usar para separar células. Las células se puden clasificar usando una técnica de clasificación de célula activada magnética (MACS) , un método para separa partículas basasas en su capacidad de ligar cuentas magnéticas ) 0.5-100 um de diámetro) . Una variedad de modificaciones útiles se pueden realizar en las microesferas magnéticas, incluyendo adición covalente de anticuerpo que reconoce específicamente una molécula de superficie de célula particular o hapteno. Las cuentas se mezclan luego con las células para permitir el enlace. Las células luego se pasan a través de un campo magnético para separa células que tienen el marcador de superficie de célula específico. En una modalidad, estas células pueden luego aislarse y mezclartse nuevamente con cuentas magnéticas acopladas a un anticuerpo contra marcadores de superficie de célula adicionales. Las células se pasan nuevamente a través de un campo magnético, aislando células que li8gan ambos anticuerpos. Estas células luego pueden diluirse en platos separados, tales como platos de microtitulo para aislamiento clonal.

Las células de tallo de placenta también se pueden caracterizar y/o clasificar basado en morfología de célula y características de crecimiento. Por ejemplo, las células de tallo de plcenta se pueden caracterizar como teniendo, y/o seleccionadas sobre la base de, v. grt., una apariencia fibroblastoide en cultivo. Las células de tallo de placenta también se pueden caracterizar como teniendo hy/o ser seleccionadas, sobre la base de su capacidad para formar cuerpos semejantes a embrión. En una modalidad, por ejemplo, las células de placenta o células de cordón umbilical que son fibrtoblastoides en forma, expresan CE73 y CD105, y producen uno o más cuerpos semejantes a embrión en cultivo se aislan de otras células de placenta o células de cordón umbilical. En otra modalidad células de planta 0CT-4+ que producen uno o más cuerpos semejantes a embrión en cultivo se aislan de otras células de placenta.

Las células de tallo de placenta se pueden determinar para viabilidad, potencial e proliferación, y longevidad usando técnicas convenci8onales conocidas en el ramo, tales como ensayo de exclusión de azul de tripán, ensayo de admisión de diacetato de fluoresceína, ensayo de proliferación de célula MTT (para determinar proliferación) . La longevidad puede ser determinada mediante métodos bien conocidos en el ramo, tales como determinando el número máximo de población que duplica en un cultivo prolongado.

Las células de tallo de placenta también se pueden separar de otras células usando otras técnicas conocidas n el ramo, v. gr., crecimiento selectivo de células deseadas (selección positiva), destrucción selectiva de células no deseadas (selección negativa9, separación basada en capacidad de aglutinamiento de célula diferencialen la población mixta, como por ejemplo, con aglutinina de frijol de soya; procedimientos de congelación-descongelación; filtración; centrifugación convencional y de zona; elutriación centrifuga ( centrigugación de contra corriente) ; separación de gravedad unitaria; distribución de contracorriente; electroforesis , y lo semejante, 4.4 CULTIVO DE CÉLULAS DE TALLO DE PLACENTA 4.4.1 Medio de Cultivo Las células de tallo de lacenta aisladas, o poblaciones de células de tallo de placenta, o tejido de placenta o tejido de cordón umbilical del que las células de tallo crecen, se pueden usar para iniciar, o sembrar, cultivos de célula. Las c{eluls generalmente se transfieren a recipientes de cultivo de tejido estériles ya sea no revestidos o revestidos con matriz extracelular oligandos tales como laminina, colágeno (v. gr., nativo o desnaturalizado), gelatina, fibronectina , ornitina, vitronectina, y proteina de membrana extracelular 8v. gr., MATRIGEL (DB Discovery Labware, Bedford, Mass.) ) .

Las células de tallo de placenta as pueden cultivar en cualquier medio, y bajo cualesquiera condiciones, reconocidas en el ramo como aceptables para el cultivo de células de tallo. De preferencia, el medio de cultivo comprende suero. Las células de tallo de placenta se pueden cultivar, por ejemplo, en DMEM-LG (Dulbecco's Modified Eseential Médium, glucosa baja)/MCDB 201 (medio basal de fibroblaso de pollo) que contiene ITS (insulina-. transíerrina-selenio) . LA+BSA ( ácidolinoleico-albúmina de suero bovino) , dextrosa, ácido 1-escórbico, PDGF, EGF, IGF-1, y penilicina/estreptomicina ; DMEM-HG (glucosa elevada9 que comprende 10% de suero bovino fetal (FBS) ; DMEM-HG que comprende 15% de FBS; IMDEM (Iscove's modified Dulbecco's médium) que comprende 10% de FBS, 10% de sero de caballo, e hidrocortisona; M199 que comprende 10% de FBS, EGF, y heparina; s-??? (medio sencial mínimo) que comprende 10% de FBS, GlutaMAXMR y gentamicina ; DMDM que comprende 10% de FBS, GlutaMAX y gentamicina, etc. Un medio preferido es DMEM-LG/MCDB-201 qu comprende 25 de FBS, ITS, LA*BSA, dextrosa, ácido L-ascórbico, PDGF, EGF, y penicilina/estreptomicina.

Otro medio en que se puede usar para cultivar células de tallo de placenta incluyen DMEM (glucosa alta o baja), medio basal de Eagle, medio FIO de Ham (FIO, medio F12 de Ham (F12), medio de Isocove modificed Dulbecco, Medio de Crecimiento de Célula de Tallo Mesenquimal (MSCGM) , medio Liebovitz's L-15, MCDB, DMIEM/F12, RPMI 1640, DMEM avanzado XGibco) , DMEM/MCDB201 (Sigma) , y CELL-GRO FREE.

El medio de cultivo se puede suplementar con uno o más componentes que incluyen, por ejemplo,, suero (v. gr., suero bovino fetal (FBS), de preferencia alreedor de2-15% (v/V) ; suero equino (caballo) (Es); suero humano (HS) ) , beta-mercaptoetanol (BME) , de preferencia alrededor de 0.001% (V/B) ; uno o más factores de crecimiento, por ejemplo, factor de crteciminto derivado de plaqueta (PDGF), factor de crecimiento epidérmico (EGF) , factor de crecimiento de fibroblasto básico (bFGF) , factor-1 de crecimiento semejante a insulina (IGF-1), factor inhibitoria de leucimia (LiF) , factor de crecimiento entdotelial vascular (VEGF) , yeritropoietina (EPO) , , aminoácidos, incluyendo L-valina; y uno o más agentes antibióticos y/o antimicótico para controlar contaminación microbiana, tal como por ejemplo, penicilina G, sulfato de estreptomicina, anfotericina B, gentamicina, y nistatina, ya sea solos o en combinación. 4.4.2 Expansión y Proliferación de Células de Tallo de Placenta Una vez que la célula de tallo de placenta, o población aislada de células de tallo (v. gr., una célula de tallo o población de células de tallo separadas de cuando menos 50% de las célulss de placenta con la que la célula de tallo o población de células de tallo está normalmente asociado in vivo) se aisla, la célula de tallo o población de células de tallo se puede proliferar y expandir in vitro. Por ejemplo, una población de células de tallo de placenta se pueden cultivar en recipientes de cultivo de tejido, v. gr., platos, frascos, placas de múltiples pozos, o lo semejante, durante un tiempo suficiente para que las células de tallo proliferen a 70-90% de confluencia, es decir, hasta que las células de tallo y su progenie ocupa 70.90% del área superficial de cultivo del recipiente de cultivo de tejido.

Las células de tallo de placenta se puede sembrar en recipientes de cultivo a una densidad que permite crecimiento de célula. Por ejemplo, las células se pueden sembrar a baja densidad (v. gr. , alrededor de 1,000 a alrededor de 5,000 células/cm2) a alta densidad 8v. gr., alrededor de 50, 000 o más c{ elulas/cm2) . En una modalidad preferida, las células se cultivan a alrededor de 0 a alrededor de 5 por ciento en volumen de C02 en aire, de preferencia alrededor de 5 a alrededor de 20 por ciento de 02 en aire. Las células de preferencia se cultivan a alrededor de 25°C a alrededor de 40°C, de preferencia 37°C. Las células se cultivan de preferencia en una incubadora. Las células de tallo de placenta de preferencia se desarrollan bajo esfuerzo oxidante bajo (v. gr., con adición de glutationa, ácido ascórbico, catalasa, tocoferol, N-acetilcisteina, o lo semejante) .

Una vez que se obtiene 70%-90% de conluencia, las células se pueden pasar. Por ejemplo, las células se pueden tratar enzimáticamente, v. gr., tripsinizar, usando técnicas bien conocidas en el ramo, para separarlas de la superficie de cultivo de tejido. Después de remover las células mediante pipeta y contar las células, alrededor de 10,000-100,000 células de talo por centímetro cuadrado, de preferencia lrededor de 50,000 células de tallo por centímetro cuadrado, se pasan a un nuevo recipiente de cultivo que contiene medio e cultivo fresco. Típicamente, el nuevo medio es el mismo tipo de medio del que las células de tallo se removieron. Se proporcionan en la presente poblaciones de células de tallo de placenta que se han pasado cuando menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, o 20 veces, o más y combinaciones de los mismos. 4.4.3 Poblaciones de Célula de Tallo de Plcenta Los métodos de tratamiento proporcionados en la presente, en ciertas modalidades, usan poblaciones de células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta. Las poblaciones de célula de tallo de placenta se pueden aislar directamente de una o más placentas, es decir, la población de célula de tallo de placenta puede ser una población de células de placenta o células de cordón umbilical, que comprende células de tallo de placenta o células de cordón umbilical, obtenidas de, o contenidas dentro, del perfusado, u obtenidas de, o contenidas dentro, del digestado (es decir, la recolección de células obtenidas mediante digestióbn enzimática de una placenta o parte de la misma, o de un cordón umbilical) . Las células de tallo de placenta aisladas también se pueden cultivar y expandir para producir poblaciones de célula de tallo de placenta. Las poblaciones de células de placenta o células de cordón umbilical que comprenden células de tallo de placenta también se pueden cultivar y expandir para producir poblaciones de célula de tallo de placenta.

En varias modalidades, cuando menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 9 99% de las células en una población de célula de placenta aislada o cpoblación de célula de cordón umbilical son células de tallo de placenta. Es decir, una población de célula de placenta o población de célula de cordón umbilical que comprende células de tallo de plácente puede comprender, v. gr., tanto como 15, 5%, 10%, 20]5, 30%, 40]%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% de células de no tallo.

Se proporcionan en la presente métodos para producir poblaciones de célula de tallo de placenta aisladas por, v. gr., seleccionar células de tallo de placenta o células de tallo de cordón umbilical, ya sea derivadas de digestión enzimática o perfusión, que expresan marcadores particulares y/o cultivo particular o características morfológicas. En una modalidad, por ejemplo, una población de célula se puede producir mediante un método que comprende seleccionar células de placenta o cordón umbilical que (a) se adhieren al substrato de plástico de cultivo de tejido, (b) son CD10+, CD34", y CD105+; y aislar las células de otras células para formar una población de células. En otra modalidad, por ejemplo, una población de células se puede producir mediante un método que comprende seleccionar células de placenta o cordón umbilical que (a) se adhieren a un substrato, y (b) expresan CD200 y HLA-G; y aislar las células de otras células para formar una población de células. En otra modalidad, el método de producir una población de células comprende seleccionar células de placenta o células de cordón umbilical que (s) se adhieren a un substrato, y (b) expresan CD73, CD105, y CD200; y aislar las células de las otras células para formar una población de células. En otra modalidad, el método para producir una población de células comprende seleccionar células de placenta o células de cordón umbilical que (a) se adhieren a un substrato y (b) expresan CD200 y OCT-4; y aislar las células de otras células para formar una población de células. En otra modalidad, el método para producir una población de células comprende seleccionar células de placenta o células de cordón umbilical que (a) se adhieren a un substrato, (b) expresan CD73 y CD105, y (c) facilitan la formación de uno o más cuerpos semejantes a embrión en una población de células de placenta que comprenden la célula de tallo cuando la población se cultiva bajo condiciones que permiten la formación e un cuerpo semejante a embrión; y aislar las células de otras células para formar una población de células. En otra modalidad, el método de producir una población de células comprende seleccionar células de placenta o células de cordón umbilical que (a) se adhieren a un substrato, y (b) y expresan CD73, CD105 y HLA-G; y aislar las célulss de otras células para forma una población de células. En otra modalidad, el método de producir una población de células comprende seleccionar células de placenta que 8a) se adhieren a un substrato, (b) expresan OCT-4, y (c) facilitan la formación de uno o más cuerpos semejantes a embrión en una población de células de placenta que comprenden la célula de tallo cuando la población se cultiva bajo condiciones que permiten la formación de cuerpo semejante a embrión; y aislar las células de otras células para formar una población de células. En cualquiera de las modalidades anteriores, el método puede comprender adicionalmente seleccionar células de placenta o células de cordón umbilical que expresan ABC-p (una proteina transportador de ABC especifica de placenta, ver, v. gr., Allikmets y col., Cáncer Res. 53823) : 5337-9 (1998)) .

En las modalidades anteriores, el substrato puede ser cualquier superficie sobre la que el cultivo y/o selección de células, v. gr., células de tallo de placenta, se puede lograr. Típicamente,, el substrato es plástico, v. gr., plato de cultivo de tejido o plástico de placa de múltiples pozos. El plástico de cultivo de plástico pude estar revestido con una biomolécula, v. gr . , laminina o fibronectina .

Las células, v. gr., células de tallo de placenta, se pueden seleccionar para una población de célula de tallo de placenta por cualesquiera medios conocidos en el ramo de selección de célula. Por ejemplo, las células se puede seleccionar usando un anticuerpo o anticuerpos a uno o más marcadores de superficie de célula, por ejemplo, en citometria de flujo o FACS. La selección se puede lograr usando anticuerpos en conjunción con cuentas magnéticas. Los anticuerpos que son específicos para ciertos marcadores relacionados con célula de tallo son conocidos en el ramo. Por ejemplo, anticuerpos a OCT-4 (Abeam, Cambridge, MA) , CD200 (Abeam); HLA-G (Abam) , CD73 (BD Biosciences Pharmingen, San Diego, CA) , CD105 (Abeam; BioDesign International, Saco, ME), etc. Los anticuerpos a otros marcadoras también disponibles comercialemente, v. gr. , CD34, CD38 y CD45 están disponibles de, v. gr., StemCell Technologies o BioDesign International .

Las poblaciones de célula de tallo de placenta aisladas se pueden combinar con una o más poblaciones de células de no tallo o células de no placenta. Por ejemplo, una población aislada de células de tallo de placenta se puede combinar con sangre (v. gr.k, sangre de placenta o sangre de cordón umbilical) , células de tallo derivadas de sangre (v. gr., células de tallo derivadas de sangre de placenta o sangre de cordón umbilical), poblaciones de células nucleadas derivadas de sangre células mesenquimales derivadas de médula de hueso, poblaciones de célula de tallo derivada de hueso, médula de hueso cruda, células de tallo adultas (somáticas), poblaciones de células de tallo contenidas dentro de tejido, células de tallo cultivadas, poblaciones de células totalmente diferenciadas (v. gr., condrocitos, fibroblastos, células amnióticas, osteoblastos, células de músculo, células cardiacas, etc.) y lo semejante. Las células en una población de célula de placenta aislada se pueden combinar con células de otro tipo en relaciones de alrededor de 100,000,000:1, 50,000,000:1, 20,000,000:1, 10,000,000:1, 5,000.000:1, 2,000,000:1, 1,000,000:1, 500,000:1, 200,0'00:1, 100,000:1, tO, 000:1, 20,000:1, 10,000:1, 5,000:1, 2,000:1, 1,000:1, 500:1, 200:1, 100:1, 50:1, 20:1. 10:1, 5:1, 2:1, 1:1; 1:2; 1:5, 1:10; 1:100; 1200; 1:500; 1:1,000; 1:2000; 1:5,000; 1:10,000; 1:20, O'OO; 1:50,000; 1:100,000; 1:500,000; 1:1,000,000: 1:2,000,000; 1:5,000,000; 1:10,000,000; 1 : 20, 000<, 000; 1:50,000,000; o alrededor de 1:100,000,000, comparando números de células nucleadas totales en cada población. Las células en una población de célula de placenta aislada se pueden combinar con c' lulas de una pluralidad de tipos de célula, también.

En una modalidad, una población aislada de células de tallo de placenta se combina con células de tallo hamatopoiéticas . Estas células de tallo hematopoiéticas pueden estar, por ejemplo, contenidas dentro de plaenta no procesada, sangre de cordón umbilical o sangre periférica; en células nucleadas totales de sangre de placenta, sangre de cordón umbilical o sngre periférica; en una población aislada de células CD34+ de sangre, v. gr., sangre de cordón umbilical o sangre periférica; en médula de hueso no procesada, en células nucleadas totales de médula de hueso; en una población aislada de células CD34+ de médula de hueso, o lo semejante. 4.5 CONSERVACIÓN DE CÉLULAS DE TALLO DE PLACENTA Las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, se pueden conservar, es decir, colocar bajo condiciones que permiten almacenamiento de término prolongado, o condiciones que inhiben la muerte de célula, v. gr. , mediante apoptosis o necrosis.

Las células se pueden conservar usando, v. gr., una composición que comprende un inhibidor de apoptosis, nhibidor de necrosis y/o perfluorocarbono portador de oxigeno, como se describe en la solicitud de patente publicada de EUA 200/0190042. En una modalidad, una población de células de tallo de placenta se conserva poniendo en contacto la población con una composición de recolección de célula de tallo que comprende un inhibidor de apoptosis y un perfluorocarbono portador de oxigeno, en donde el inhibidor de apoptosis está presente en una cantidad y durante un tiempo suficientes para reducir o prevenir la apoptosis en la población de células de tallo, en compasión con una población de células de tallo no puestas en contacto con el inhibidor de apoptosis. N una modalidad especifica, el inhibidor de apoptosis es un inhibidor de caspasa. En otra modalidad especifica, el inhibidor de apoptosis es un inhibidor de JNK. En una modalidad más especifica, el inhibidor de JNK no modula diferenciación o proliferación de las células de tallo de placenta. En otra modalidad, la composición de recolección de célula de tallo comprende el inhibidor de apoptosis y el perfluorocarbono portador de oxigeno en fases separadas. En otra modalidad, la composición de recolección de célula de tallo comprende el inhibidor de apoptosis y el perfluorocarbono portador de oxigeno en una emulsión. En otra modalidad, la composición de recolección de célula de tallo adicionalmente comprende un emulsionante, v. gr., lecitina. En otra modalidad, el inhibidor de apoptosis y el perfluorocarbono están entre alrededor de 0°C y alrededor de 25°C, en el momento de contacto de las células de tallo. En otra modalidad más especifica, el inhibidor de apoptosis y el perfluorocarbono están entre alrededor de 2°C y 10°C, o entre alrededor de 2°C y alrededor de 5°C, en el tiempo e contacto de las células de tallo. En otra modalidad más especifica, el contacto se realiza durante el transporte de la población de células de tallo. En otra modalidad más especifica, el contacto se realiza durante la congelación y descongelación de la población de células de tallo de placenta.

En otra modalidad, las poblaciones de células de tallo de placenta se pueden conservar mediante un método que comprende poner en contacto la población con un inhibidor de apoptosis y un compuesto de conservación de órgano, en donde el inhibidor de apoptosis está presente en una cantidad y durante un tiempo suficientes para reducir o prevenir la apoptosis en la población de células, v. gr., células de tallo de placenta, en comparación con una población de células no puestas en contacto con el inhibidor de apoptosis.

En una modalidad espeifica, el compuesto de conservación de órgano es una solución UW (descrita en la Patente de EUA No. 4,798,824; también conocida como ViaSpan; ver también Soutnard y col., Transplantation 49 (2) : 251-257 (1990)) o una solución descrita en Stern y col., Patente de EUA No. 5, 552,267. En otra modalidad, el compuesto de conservación de órgano es almidón de hidroxietilo, ácido lactobiónico, rafinosa, o un combinación de los mismos. En otra modalidad, la composición de recolección de célula de tallo adicionalmente comprende un perfluorocarbono portador de oxigno, ya sea en dos fases o como una emulsión.

En otra modalidad del método, las células e tallo e placenta se ponen en contacto con una composición de recolección de célula de tallo que comprende un inhibidor de apoptosis y perfluorocarbono portador de oxigeno, , compuesto de conservación de órgano, o combinación de los mismos, durante la perfusión. En otra modalidad, las células se ponen en contacto durante un proceso de disrupcion de tejido, v. gr., digestión enzimática. En otra modalidad, las células de vástago de placenta se ponen en contacto con el compuesto de recolección de célula de tallo para recolección mediante perfusión, o después de la recolección mediante disrupcion de tejido, v. gr., digestión enzimática.

Típicamente, durante la recolección de célula de placenta o cordón umbilical, enriquecimiento y aislación, es preferible reducir al mínimo o eliminar el esfuerzo de célula debido a hipoxia y esfuerzo mecánico. En otra modalidad del método, por lo tanto, las células de tallo de placenta se exponen a una condición hipóxica durante la recolección enriquecimiento o aislamiento durante menos de seis horas durante la conservación, en donde una condición hipóxica es una concentración de oxígeno que es menos de la concentración de oxígeno de sangre normal. En una modalidad más específica, la células de tallo de placenta se exponen a la condición hipóxica durante menos de dos horas durante la conservación. En otra modalidad más específica, las células de tallo de placenta se exponen a la condición hipóxica durante menos de una hora, o menos de treinta minutos, o no se expone a una condición hipóxica, durante recolección, enriquecimiento o aislamiento. En otra modalidad específica, las células de tallo de placenta no se exponen a esfuerzo cortante durante la recolección, enriquecimiento o aislamiento.

Las células de tallo de placenta descritas en la presente pueden ser crioconservadas , v. gr., en medio de crioconservación en recipientes pequellos, v. gr., ampollas. El medio de crioconservación apropiado incluye, pero no está limitado, medio de cultivo incluyendo, v. gr., medio de crecimiento, o medio de congelación de célula, por ejemplo medio de congelación comercialmente disponible, v. gr., medios designados C2695, C2639 o C6039 (Sigma) . El medio de crioconservaión de preferencia comprende DMSO (sulfóxido de dimetilo), a una concentración de, v. gr . , alrededor de 10% (v/V) ( . El medio de crioconservación puede comprender agentes adicionales, por ejemplo, Plasmalyte, metilceulosa y/o glicerol. Las células de tallo de placenta de preferencia se enfrian a alrededor de l°C/min durante la crioconservación. Una temperatura de crioconservación preferida es alrededor de -80°C a alrededor de -180°C, de preferencia alrededor de -125°C a alrededor de -140°C. Las células crioconservadas se puden transferir a nitrógeno liquido antes de descongelarse para uso. En algunas modalidades, por ejemplo, una vez que las ampollas han alcanzado alrededor de -90°C, se transfieren a un área de almacenamiento de nitrógeno liquido. Las células crioconservadas de preferencia se descongelan a una temperatura de alrededor de 25°C a alrededor de 40°C, de preferencia a una temperatura de alrededor de 37 °C. 4.6 VOMPODIVIONRD WUR VOMPTRNFRN V'RLULSD FR YSLLO FR PLSVRNYS Los métodos proporcionados en la presente, por ejemplo, pueden usar composiciones que comprenden células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta. Ejemplos representativos, no limitativos de dichas composiciones se proporcionan en la presente. 4.6.1.1 Células Crioconservadas Las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, y poblaciones de células de tallo de placenta, por ejemplo, crioconservadas para uso posterior. Los métodos de crioconservación de células, tales como células de tallo, son bien conocidos en el ramo. Las poblaciones de célula de tallo de placenta se pueden preparar en una forma que es fácilmente administrable a un individuo. Por ejemplo, las células de tallo de placenta pueden estar contenidas dentro de un recipiente que es apropiado para uso médico. Dicho recipiente puede ser, por ejempl, una bolsa de plástico estéril, frasco, tarro, u otro recipiente del que la población de células de tallo de placenta se puede surtir fácilmente. Por ejemplo, el recipiente puede ser una bolsa de sangre u otra bolsa de plástico, médicamente aceptable apropiada para la administración intravenosa de un liquido a un recipiente. El recipiente es de preferencia uno que permite la crioconservaccion de la población de célula combinada .

Las poblaciones de células de tallo de placenta crioconservadas pueden comprender células de placenta o células de cordón umbilical derivadas de un solo donador, o de múltiples donadores. La población de células de tallo de placenta puede ser completamente coincidida con HLA a un recipiente pretendido, o parcial o completamente no coincidido con HLA.

De esta manera, en una modalidad, se proporciona en la presente una composición que comprende una población de células de tallo de placenta en un recipiente. En una modalidad especifica, la población de célula está criconservada . En otra modalidad especifica, el recipiente es una bolsa, frasco, o tarro. En modalidad más especifica, la bolsa es una bolsa de plástico estéril. En una modalidad más específica, la bolsa es apropiado par, permite o facilita la administración intravenosa de la población de célula de placenta. La bolsa puede comprender múltiples lúmenes o compartimientos que están interconectados para permitir el mezclado de las células de tallo de placenta y una o más otras soluciones, v. gr., una droga, antes de, o durante, la administración. En otra modalidad específica, la composición comprende uno o más compuestos que facilitan la crioconservación de la población de célula. En otra modalidad específica, la población de célula e placenta está contenida dentro de una solución acuosa fisiológicamente aceptable. En una modalidad más específica, la solución acuosa fisiológicamente aceptable es una solución de NaCl al 0.9%. En otra modalidad específica, la población de célula e placenta comprende células de tallo de placenta que están coincididas con HLA a un recipiente de la población de célula. En otra modalidad específica, la población de célula comprende células de tallo de placenta que están cuando menos parcialmente mal coincididas con HLA a un recipiente. En otra modalidad específica, las células de tallo de placenta se derivan de una pluralidad de donadores. 4.6.1.2 Composiciones Farmacéuticas Las poblaciones de células de tallo de placenta aisladas, o poblaciones de células que comprenden las células de tallo de placenta aisladas, se pueden formular en composiciones farmacéuticas para uso in vivo, v. gr., en los métodos de tratamiento proporcionados en la presente. Estas composiciones farmacéuticas comprenden una población de células de tallo de placenta aisladas, o una población de células que comprenden células de tallo de placenta aisladas, en un portador farmacéuticamente aceptable, v. gr., una solución salina u otra solución aceptada, fisiológicamente aceptable para administración in vivo. Las composiciones farmacéuticas que comprenden las células de tallo de placenta aisladas descritas en la presente pueden comprender cualquiera, o cualquier combinación, de las poblaciones de células de tallo de placenta aisladas, o células de tallo de placenta aisladas, descritas en otro lugar en la presente. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender células aisladas fetales, maternas, o ambas fetales y maternas. Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente pueden comprender además células de tallo de placenta aisladas obtenidas de un solo individuo, cordón umbilical o placenta, o de una pluralidad de individuos, cordonas umbilicales o placentas. Cualquiera de las células de tallo de placenta, descritas en otro lugar en la presente, se puden formular en composición farmacéutica, como se describe abajo.

Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente pueden comprender cualquier número de células de tallo de placenta aisladas. Por ejemplo, una sola dosis unitaria de células de tallo de placenta aisladas puede comprender, en varias modalidades, alrededor de, cuando menos o no más de 1 x 105, 5 x 105, 1 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 5 x 108, 1 x 109, 5 x 109, 1 x 10 0, 5 x 1010, 1 x 10u o más células aisladas.

Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente comprenden poblaciones de células que comprenden 50% de células viables o más (es decir, cuando menos 50% de las células en la población son funcionales o vivas9. De preferencia, cuando menos 60% de las células en la población son viables. Más preferentemente, cuando menos 70%, 80%, 90%, 95%, o 99% de las células en la población en la composición farmacéutica son viables.

Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en la presente pueden comprender uno o más compuestos que, v. gr., facilitan el injerto (v. gr., anticuerpos receptores anti-célula T, un imunosuprsor , o lo semejante) ; estabilizadores tales como albúmina, dextrano 40, gelatina, almidón de hidroxietilo, plasmalitico, y lo semejante.

Cuando se formula como una solución inyectable, en una modalidad, la composición farmacéutica comprende alrededor de 1% a 1.5% de HSA y alrededor de 2.% de dextrano. En una modalidad preferida, la composición farmacéutica comprende de alrededor de 5 x 105 células por mililitro a alrededor de 2 x 107 por mililitro en una solución que comprende 5% de HSA y 10% de dextrano, que comprende oprcionalmente un inmunosupresor , v. gr., ciclosporina A, a v . gr . , 10 mg/kg .

En otras modalidades, la composición farmacéutica, v. gr., una solución, comprende una pluralidad de células, v. gtr., células de tallo de placenta aisladas, en dondee la composición farmacéutica comprende entre alrededor de 1.0 + 0.3 x 106 células por mililitro a alrededor de 5.0 + 1.5 x 106 células por mililitro. En otras modalidades, la composición farmacéutica comprende entre alrededor de 1.5 x 105 células/mL a alrededor de 50 x 106 células/mL, alrededor de 1 x 106 células/mL a alrededor de 20 x 106 células/mL, alrededor de 1 I x 106 células/mL a alrededor de 15 x 106 células/mL, o alrededor de 1 x 106 célñulas/mL a alrededor de 10 x 106 células/mL. En ciertas modaliddes, la composición farmacéutica no comprende grupos de célula visibles (es decir, no hay grumos macro de células), o substancialmente ningunos grumos visibles. Como se utiliza en la presente "grumos de macro célula" significa una agregación de células visibles sin amplificación, v. gr., visibles al ojo desnudo, y se refiere generalmente a una agregación de célula mayor de alrededor de 150 micrones. En algunas modalidades, la composición farmacéutica comprende alrededor de 2.5%, 3.0%, 3.5%, 4.0%, 4.5%, 5.0%, 5.5%, 6.0%, 6.5$, . 7.0%, 7.5%. 9- %., 8.5%, 9.0%, 9.5% o 10% de dextrano, v. gr., dextrano-40. En una modalidad especifica, la composición comprende alrededor de 7.5% a alrededor de 9% de dextrano-40. En una modalidad especifica, la composición comprende alrededor de 5.5% de dextrano-40. En ciertas modalidades, la composición farmacéutica comprende de alrededor de 1% a alrededor de 15% de albúmina de suero humana (HSa) . En modalidades especificas, la composición farmacéutica comprende alrededor de 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 1|2%, 13%, 14% o 15% de JSA- En una modalidad especifica, las células se han crioconservado y descongelado. En otra modalidad especifica, las células se han filtrado a través de un filtro de 70 uM a 100 uM. En otra modalidad especifica, la composición no comprende grumos de células visibles. En otra modalidad especifica, la composición comprende menos de alrededor de 200 grupos de células por 106 células, en donde los grumos de células son visibles solamente bajo un microscopio, v. gr., un microscopio de luz. En otra modalidad espec{ifica, la composición comprende menos de alrededor de 150 grumos de células por 106 células, en donde los grumos de célula son visibles solamente bajo un microscopio, v. gr., un microscopio de luz. En otra modalidad especifica, la composición comprende menos de alrededor de 100 grumos de célula por 105 células, en donde los grumos de célula son visibles solamente bajo un microscopio, v. gr., un microscopio de luz.

En una modalidad especifica, la composición farmaéutica comprende alrededor de 1.0 + 0.3 x 106 células por mililitro, alrededor de 5.5% de dextrano-40 (p/v) , alrededor de 10% de HSA (p/v) y alrededor de 5% de DMSO (v/v) .

En otras modalidades, la composición farmacéutica comprende una pluralidad de células, v. gr., una pluralidad de células de tallo de placenta aisladas en una solución que comprende 10% de dextrano-40, en donde la composición farmacéutica comprende entre alrededor de 1.0 + 0.3 x 106 células por mililitro a alrededor de 5.0 + 1.5 x 106 células por mililitro, y en donde la composición no comprende grumos visibles con el ojo sin ayuda (e decir no comprende macro grumos de células) . En algunas modalidades, la composición farmacéutica comprende entre alrededor de 1.5 x 106 células por mililitro a alrededor de 3.75 x 106 células por mililitro. En una modalidad especifica, las células se han crioconservado y descongelado. En otra modalidad especifica, las células se han filtrado a través de un filtro de 70 uM a 100 uM. En otra modalidad especifica, la composición comprende menos de alrededor de 200 micro grumos de célula 8es decir, grumos de célula visibles solamente con amplificación) por 106 células. En otra modalidad especifica, la composición farmacéutica comprende menos de alrededor de 150 micro grupos de célula por 106 células. En otra modalidad espeifica, la composición farmacéutica comprende menos de alrededor de 2100 micro grupos de célula por 106 células. En otra modalidad especifica, la composición farmacéutica comprende menos de 15%, 14%, 13%, 12%, 11, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, o 2% de DMSO, o menos de 1%, 0.9%, 0.8%, 0.7%, 0.7%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2% o 0.1% de DMSO.

Se proporciona además en la presente composiciones que comprenden células, en donde las composiciones se producen por uno de los métodos descritos en la presente. Por ejemplo, en una modalidad, la composición farmacéutica comprende células, en donde la composición farmacéutica se produce mediante un método que comprende filtrar una solución que comprende células de tallo de placenta para formar una solución qu contiene células filtrada; diluir la solución filtrada que contiene células con una primera solución a alrededor de 1 50 x 106, 1 z 40 x 106, 1 a 30 x 106, 1 a 20 x 106, 1 a 15 x 106, o 1 a 10 x 106 células por mililitro, v. gr., antes de la crioconservacion; y diluir la solución filtrada que contiene células resultante con una segunda solución que comprende dextrano, pero no comprende albúmina de suero humano (HSA) para producir la composición. En ciertas modalidades, la dilución no es más de alrededor de 15 x 106 células por mililitro. En ciertas modalidades, la dilución no es más de alrededor de 15 x 106 células por mililitro. En ciertas modalidades, la dilución no es más de alrededor de 10 + 3 x 196 células por mililitro. En ciertas modalidades, la dilución no es más de alrededor de 7.5 x 106 por mililitro. En otras ciertas modalidades, si la solución filtrada que contiene células, antes de la dilución, comprende menos de alrededor de 15 x 106 células por mililitro, la filtración es opcional. En cietas otras modalidades, si la solución filtrada que contiene células, antes de la dilución, comprende menos de alrededor de 10 + 3 x 106 células por mililitro, la filtración s opcional. En cietas otras modalidades, si la solución filtrada que contiene células, antes de la dilución, comprende menos de alrededor de 7.5 x 106 células por mililitro, la filtración es opcional.

En una modalidad especifica, las élulas son crioconservadas entre la dilución con una primera solución de dilución y la dilución con la segunda solución de dilución. En otra modalidad especifica, la primera solución de dilución comprende dextrano y HSA. El dextrano en la primera solución de dilución o segunda solución de dilución puede ser dextrano de cualquier pesomolecular , v. gr., dextrano que tiene un peso molecular de alrededor de 10 kDa a alrededor de 150 kDa. En algunas modalidades, el dextrano en la primera solución de dilución o la segunda solución es aproximadamente 2.5%, 3.0%, 3.5%, 4.0%,. 4.5%, 5.0%, 5.5%, 6.0%, 6.5%, 7.0%, 7.5%, 8.0%, 8.5%, 9.0%, 9.5% o 10% de dextrano. En otra modalidad especifica, el dextrano en la primera solución de dilución o la segunda solución de dilución es dextrno-40. En otra modalidad especifica, el dextrano en la primera solución de dilución y la segunda solución de dilución es dextrano-40. En otra modalidad especifica, el dextrano-40 en la primra solución de dilución es 5.0% de dextrano-40. En otra modalidad especifica, el dextrano-40 en la primera solución de dilución es 5.5% de dextrano-40. En otra modalidad especifica, el dextrano-40 en la segunda solución de dilución es 10% de dextrano-40. En otra modalidad especifica, el HSA en la solución que comprende HSA es 1 a 15% de HSA. En otra modalidad especifica, 1 HSA en la solución que comprende HSA es alrededor de 1%,, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8]%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14% o 15% de HSA. En otra modalidad especifica, el HSA en la solución que comprende HSA es 10% de HSA. En otra modalidad especifica, la primera solución de dilución comprende HSA. En una modalidad más especifica, el HSa en la pimera solución de dilución es 10% de HSA. En otra modalidad especifica, la primera solución de dilución comprende un crioprotector . En una modalidad más especific, el crioprotector es DMSO. En otra modalidad especifica, el dextrno-40 en la segunda solución de dilusión es alrededor de 10% de dextrano-40. En otra modalidad especifica, la composición que comprende células comprende alrededor de 7.5% a alrededor de 9% de dextrano. En otra modalidad modalidad especifica, la composición farmacéutica comprende de alrededor de 1.0 + 0.3 x 106 células por mililitro a alrededor de 5.0 + 1.5 x 106 células por mililitro. En otra modalidad especifica, la composición farmacéutica comprende de alrededor de 1.5 x 106 células por mililitro a alrededor de 3.75 x 106 células por mililitro.

En otra modalidad, la composición farmacéutica se hace mediante un método que comprende (a) iltrar una solución que contiene células que comprende células de tallo de placenta antes de crioconservacion para producir una solución filtrada que contiene células; (b) crioconservar las células en la solución filtrada que contiene células a alrededor de 1 a 50 x 106, 1 a 40 x 106, 1 a 30 x 106, 1 a 20 x 106, 1 a 15 x 106, o 1 a 10 x 106 células por mililitro; (c) descongelar las células; y (d) diluir la solución que contiene célula filtrada alrededor de 1:1 a alrededor d3 1:11 (v/v) con una solución de dextrano-40. En cierta modalidades, si el número de células es menos de alrededor de 10 + 3 x 106 células por mililitro antes del paso (a), la filtración es opcional. En una modalidad más especifica, las células en el paso (b)se crioconservan a alrededor de 10 + 4 c 206 células por mililitro. En una modalidad más especifica, las células en el paso (b) se crioconservan en una solución que comprende alrededor de 5% a alrededor de 10% de dextrano-40 y HSA. En ciertas modalidades, la dilución en el paso (b) o es más de alrededor de 15 x 106 células por mililitro.

En otra modalidad, la composición farmacéutica se hace mediante un método que comprende (a) suspender células de tallo de placenta en una solución al 5.5% de dextrano-40 que comprende 10% de HSA para formar una solución que contiene células; (b) filtrar la solución que contiene células a través de un filtro de 70 uM; (c diluir 1 solución que contiene células con una solución que comprende 5.5% de dxtrano-40, 10% de HSA, y 5% de DMSO a alrededor de 1 a 50 x 106, 1 a 40 x 106, 1 a 30 x 10d, 1 a 20 x 106, 1 a 15 x 106 o 1 a 10 x 105 células por mililitro; (d) crioonservar las células; (e) descongelar las células; y (f) diluir la solución que contiene células 1.1 a 1:11 (v/v) on 10% de dextrano-40. En ci8etas modalidades, la dilución en el paso (c no es más de alrededor de 10 + 3 x 106 células/mL. En ciertas modalidades, la dilución en el paso (c) no es más de alrededor de 7.5 x 106 células/mL.

En otra modalidad, la composición que comprende células se hace mediante un método que comprende: (a) centrifugar la pluralidad de células, v. gr., células de tallo de placenta, para recoger las células; (b) resuspender las células en 5.5% de dextrano-40; (c) centrifugar las células para recoger las células; (d) rsuspender las células en una solución de 5.5% de dextrano-40 qu comprende 10% de HSA; (e) filtrar las células a través e un filtro de 70 uM; (f) diluir las células en 5.5% de dextrano-40, 10% de HSA, y 5% de DMSO a alrededor de 1 a 50 x 106, 1 a 40 x 106, 1 a 30 x 106, 1 a 30 x 1 a 20 x 106, 1 a 15 x 106, o 1 a 10 x 106 células por mililitro; (g) crioconservar las células; (h) esongelar las células, e (i) diluir las células 1:1 a 1:11 (v/v) con 10% de dextrano-40. En ciertas modalidades, la dilución en el paso (f) no s más de alrededor de 15 x 106 células por mililitro. En ciertas modalidades, la ilución en el paso (f) no es más de alrededor de 10 + 3 x 106 células/mL. En cietas modalidades, la dilución en el paso (f) es a no más de alrededor de 7.5 x 106 células/mL. En ciertas otras modalidades, si el número de células es menos de alrededor de 10 + 3 x 106 células por mililitro, la filtración es opcional.

Las composiciones, v. gr., composiciones farmacéuticas que comprenden las células de placenta aisladas, descritas en la presente pueden comprender cualquiera de las células de tallo de placenta aisladaOad descritas en la presente.

Otras formulaciones inyectables, apropiadas para la administración de productos celulares, se pueden usar.

En una modalidad, la composición farmacéutica comprende células de tallo de placenta aisladas que son substancialmente, o completamente, no maternales en origen, es decir, tienen el genotipo fetal; v. gr., cuando menos alrededor de 90%, 95%, 98%, 99% o alrededor de 100% son no maternales en origen.

En una modalidad especifica, la composición farmacéutica comprende adicionalmente una célula de tallo que no se obtiene de una placenta. - Las células de tallo de placenta aisladas en las composiciones, v. gr., composiciones farmacéuticas, proporcionadas en la presente, pueden comprender células de tallo de placenta derivadas de un solo donador, o de múltiples donadores. Las células de placenta aisladas puden ser completamente coincididas con HLA a un recipiente pretendido, o parcial o completamente no coincididas con HLA. 4.6.1.3 Medio Acondicionado de Célula de Tallo de PLACENTA Las células de placenta, v. gr., células de tallo de placenta, proporcionadas en la presente se pueden usar para producir medio acondicionado. En varias modalidades, el medio acondicionado comprende medio en el que las células de tallo de placenta han crecido durante cuando menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, o más días. En otras modalidades, el medio acondicionado comprende medio en el que las células de tallo de placenta han crecido a cuando menos 305, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% de confluencia, o hasta 100% de confluencia. En otra modalidad, el medio acondicionado comprende medio en el que las células de tallo de placenta y células de tallo de no placenta, no cordón umbilical se han cultivado. 4.6.2 Banco de Células de Placenta Las células, v. gr., células de tallo de placenta, de placentes después del parto y/o cordones umbilicales se pueden cultivar en un númro de diferentes formas para producir un juego de lotes, v. gr., un juego de dosis individualmente administrables , de células de tallo de placenta. Dichos lotes, por ejemplo, se pueden obtener de células de tallo de perfunsado de placenta o perfusado de cordón umbilical, o de tejido de placenta digerido con enzima o tejido de cordón umbilical. Los juegos de lotes de células de tallo de' placenta obtenidos de una o una pluralidad de placentas, se pueden disponer en un banco de -células par, a v. gr., almacenamiento de término prolongado. Generalmente, las células de tallo adherentes se obtienen de un cultivo inicial de material de placenta o cordón umbilical para formar un cultivo de semilla, v. gr., de células de tallo de placenta, que se expande bajo condiciones controladas para formar poblaciones de células de números aproximadamente equivalentes de duplicaciones. Los lotes de preferencia se derivan de tejido de una sola placenta o cordón umbilical, pero se pueden derivar del tejido de una pluralidad de placentas .

En una modalidad, los lotes de célula de tallo se obtienen como sigue. El tejido primero de interrumpe, v. gr., rebanando, se digiere con una enzima apropiada, v. gr., colagenasa (ver Sección 5.2.3, arriba). El tejido de preferencia comprende, v. gr., el amnión completo, corión completo, ambos, o un cordón umbilical de una sola placenta, pero puede comprender solamente parte del amnión, corión o cordón umbilical. El tejido digerido se cultiva, v. gr., durante alrededor de 1-3 semanas, de preferencia alrededor de 2 semanas. Después de remoción de células no adherentes, las colonias de alta densidad que se forman se recogen, v. gr . , tripsinización . Estas células se recogen y resuspenden en un volumen conveniente de medio de cultivo, y definido como células 0 de Pasaje.

Las células 0 de Pasaje luego se usan para sembrar cultivos de expansión. Los cultivos de expansión pueden ser cualquier disposición de aparatos decultivo de célula separados, v. gr., una Fábrica de Células mediante NUNCMR. Las células en el cultivo de Pasaje 0 se pueden subdividir en cualquier grado de manera de sembrar cultivos de expansión con, v. gr., 1 x 103, 2 x 103, 3 x 103, 4 x 103, 5 x 103, 6 x 103, 7 x 103 8 x 103, 9 x 103, 1 x 104, 2 x 20\ 3 x 10 4 x 8 x 104, 9 x 104, o 10 x 104 células de tallo. De preferencia de alrededor de 1 x 103 a alrededor de 1 x 104 células de Pasaje 0 por centímetro cuadrado se usan para sembrar cada cultivo de expansión. El número de cultivos de expansión puede depender del número de células de Pasaje 0, y puede ser mayor o menor en nnmero dependiendo de la placenta particular de la que se obtienen las células de tallo.

Los cultivos de expansión se desarrollan hasta que la densidad de células en cultivo alcanza un cierto valor, v. gr., alrededor de 1 x 105 células/cm2. Las células pueden ser recogidas ycrioconservadas en este punto, p pasarse hacia nuevos cultivos de expansión como se describe arriba. Las células se pueden pasar, v. gr., 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 veces antes del uso. Un registro del número acumulativo de duplicaiones de población se mantiene de preferencia durante los cultivos de expansión. Las células de un cultivo de Pasaje 0 se pueden expandir por 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38 o 4 duplicaciones, o hasta 60 duplicaciones. De preferencia, sin embargo, el númro de duplicaciones de población, antes de dividir la población de células en dosis individuales, es entre alrededor de 15 y alrededor de 30 duplicaciones. Las células pueden cultivarse continuamente a través del proceso de expansión, o se pueden congelar en uno o más puntos durante la expansión.

Las células a usar para dosis individuales se pueden congelar, v. gr., crioconservar para uso posterior. Las dosis individuales pueden comprender, v. gr., alrededor de 1 millón a alrededor de 50 millones de células por mi, y pueden comprender entre alrededor de 106 y alrededor de 1010 células en total.

En una modalidad, por lo tanto, se puede hacer un banco de célula de células de tallo de placenta mediante un método que comprende: expandir células de tallo de placenta de cultivo primario de una placenta después de parto humana o cordón umbilical para una primera pluralidad de duplicaciones de población; crioconservar las células de tallo de placenta para formar un Banco de Células Maestro; expandir una plucalidad de células de tallo de placenta del Banco de Células Maestro para una segunda pluralidad de duplicaciones de población; crioconservar las células de tallo de placenta para formar un Banco de Células de Trabajo, expandir una pluralidad de células de tallo de placenta del Banco de Células de Trabajo para una tercera pluralidad de duplicaciones de población; y crioconservar las células de tallo de placenta en dosis individuales, en donde las dosis individuales componen colectivamente un banco de células de tallo de placenta.

En otra modalidad especifica, las c'lulas e cultivo primario comprenden células de tallo de placenta del perfusado de placenta. En otra modalidad specifica, las células de cultivo primariocomprenden células de tallo de placenta de tejido de placenta digerid. En otr5a modalidad especifica, las células decultivo primario comprenden células de tallo de placenta de perfusado de placenta y de tejido de placenta digerido. En otra modalidad especifica, todas las células de tallo de placenta en el cultivo primario son de la misma placenta. En otra modalidad especifica, el método comprende además el paso e seleccionar células de tallo e placenta CD200+ de la pluralidad de células del Banco de Célula de Trabajo para formar dosis individuales. En otra modalidad especifica, las dosis individuales comprenden de alrededor de 104 a aproximadamente 105 células de tallo de placenta. En otra modalidad especifica, las dosis individuales comprenden de alrededor de 106 a alrededor de 107 células de tallo de placenta. En otra modalidad especifica, las dosis individuales comprenden de alrededor de 107 a alrededor de 108 células de tallo de placenta. En otra modalidad especifica, las dosis individuales comprenden de alrededor de 108 a alrededor de 109 células de tallo de placenta. En otra modalidad especifica, las dosis individuales comprenden de alrededor de 109 a alrededor de 1010 células de tallo de placenta.

En una modalidad preferida, el donador del que se obtiene la placenta (v. gr., la madre9 se prueba para cuando menos un patógeno. Si la madre prueba positiva para un patógeno probado, el lote completo de la placenta se descarta. Dicha prueba se puede realizar en cualquier momento durante la producción de lotes de célula de tallo de placenta, incluyendo antes o después el establecimiento de células de Pasaje 0, o durante el cultivo de expansión. Los patógenos para los que la presencia se prueba pueden incluir, sin limitación, hepatitis A, hepatitis B, hepatitis C, hepatitis D, heptatitis E, virus de inmunodeficiencia humana (tipos I y II), citomegalovirus, herpesivirus, y los semej antes .

EJEMPLOS 5.1 EJEMPLO 1: TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES, DESÓRDENTES O CONDICIONES DEL PULMÓN USANDO CÉLULAS DE TALLO DE PLACENTAA Este ejemplo proporciona regímenes de tratamiento de ejemplo para enfermedades, desórdenes o condiciones del pulmón . 5.1.1 Tratamiento de Daño de Pulmón Agudo Un individuo se presenta con un daño de pulmón agudo debido a inhalación de humo. El individuo se administra 1 x 108 a 5 x 109 CD10+CD34~CD105+CD200+ células de tallo de placenta en una solución de NaCl al .9% intravenosamente. El individuo es supervisado durante las dos semanas subscuentes para determinar la reducción en uno o más de los s{intomas, incluyendo un aumento en volumen expiratorio forzado (FEV). El individuo es supervisado durante el curso del siguiente años, y las células de tallo de placenta en la mism dosis se administran como se necesita. 5.1..2 Tratamiento de un Desorden de Pulmón Intersticial Un individuo se presenta con síntomas que incluyen cortedad de respiración, tos no productiva, y evidencia de hemorragia en un pulmón. Un diagnóstico de enfermedad de pulmón intersticial se hace. El individuo es administrado con 5 x 108 a 1 x 109 céluls de tallo de placenta C D10+CD34" CD105+CD200+ eb una solución de NaCl 1 0.9% intravenosamente. El individuo es supervisado durante los siguientes 100 días para mejora detectable, como se determina mediante epirometría u otra medición de volumen expiratorio forzado (FEV). El individuo opcionalmente también es asesorado por uno o más de un rayos X de pecho, exploración de CT o MRI para determinar si la hemorragia ha mejorado. 5.1.3. Profilaxis de un Desorden de Pulmón Asociado con Enfermedad de Injerto Contra Huésped Un individuo que espera un trasplante de médula de hueso alogeneico se administra 5 x 109 células de tallo de placenta CD10+CD434~CD105+CD200+ en solución de NaCl al 0.9% intravenosamente dentro de 24 horas antes del trasplante de médula de hueso. La administración de las células se rePl te dentro de 24 horas después del tasplante de médula de hueso. El individuo es supervisado durante los siguientes 100 días, y se administra una dosis de seguimiento de células de 5-1 x 108 de células de tallo de placenta CD10+CD34~CD105+CD200+ si se desarrolla GVHD y progresa más allá del Grado I ( . 5.1.4 Tratamiento de un Desorden de Pulmón Ocasionado por Enfermedad de Injerto Contra Huésped Un individuo que recibió un trasplante de médula de hueso alogenéica se presenta con bronquilitis obliterans y enfermedad de injerto contra huésped de Grado III. El individuo es administraco con células de tallo de plácente 5 x 108 a 1 x 109 CD10+CED34~CD105+CD200+ en solución de NaCl al 0.9% intravenosamente dentro de 24 horas de presentación, y el individuo es supervisado diariamente durante una semana mediante espirometría para determinar la mejora en la respiración. Si la respiración no mejora substancialmente dentro de 4-7 días después de la administración inicial, como se determina por cuando menos una mejora del 10% en ya sea volumen expiratorio forzado ( FEVi) /ocapacidad vital forzada (FVC=, o una mejora de la relación de FEVi/FVC a cuando menos 80%, la administración de las células se repite. El individuo es administrado opcionalmente con uno o más de un esteroide inhalado, un esteroirde oral, o azitromicina (v. gr., 250 mg una vez al día durante aproximadamente 3 meses después e la presentación) además de Is células de tallo de placenta. El individuoes supervisado durante los siguientes 100 días, y se administra on una dosis de seguimiento de 5 x 108 a 1 x 109 de células de tallo de placenta CD10+CD34"CD105+CD200+ en cualquier momento si la GVHD de Grado III o pero recurre, o si la disminución de FEV1 o FVC en cualquier momento en 10% o más, o si la relación de FEVi/FVC cae a <70%. 5.1.5 Tratamiento de un Desorden de Pulmón Ocasionado por Enfermedad de Injerto Contra Huésped Un individuo que recibió un trasplante de hígado sé presenta con bronquitis obliterans y enfermedad de injerto contra huésped Grado III. El individuo fue administrado con 2 x 108 a 8 x 108 células de tallo de placentA CD10+CD34~ CD105+CD20o+ en solución de NaCl al 0.9% intravenosamente (día 0); se proporciona una segunda administración 7 días después. El individuo se supervisó diariamente entre dosis, y durante 7 días después, mediante espirometría para determinar la mejora en respiración. Si la respiración no se mejora substancialmente dentro de 4-7 d''ias después de la segunda administración como se determina por cundo menos una mejora del 10% en ya sea volumen expiratorio forzado (FEVi) o capacidad vital forzada (FVC) , o una mejora en la relación de FEVi/FVC a cuando menos 75%, o si la GVHD no se abate a Grado II o inferior, se repite la administración de las células, y el individuo es administrado con uno o más de un esferoide inhalado, un esferoide oral o azitromicina (v. gr . , 250 mg una vez al día durante aproximadamente 3 mees después de la presentación) en adición de las células de tallo de placenta. El individuo es supervisado durante los siguientes 100 días, y se administra una dosis de seguimiento de 5 x 108 a 1 x 109 células de tallo de placenta CD10+CD34~CD105+CD200+ en cualquier momento si la GVHJd de Grado III o peor recurre, o si FEV1 o FVC disminuye en cualquier momento por 10% o más, o si la relación de FEVi/FVC cae a <70%. 5. | .6 Tratamiento de Desórdenes de Pulmón Asociados con Artritis Reumatoide Un individuo se presenta con artritis reumatoide con involucramiento del pulmón. El individuo es administrado con 1-5 x 108 células de tallo de placenta CD10+CD34" CD105+CD200+ en solución de NaCl al 0.9% intravenosamente. Se proporciona al individuo metotrexato a una dosificación convencional y se supervisa para reducción de inflamación de pulmón .

Un segundo individuo se presenta con artritis reumatoide con involucramiento el pulmón. El involucramiento de pulmón en parte se debe a administración de metotrexato. La terapia de metotrexato se detiene, yel individuo es administrado con una combinación de células de tallo de plácente no modificadas y células de tallo de placenta que se han modificado para producir un polipéptido de fusión que comprende IL-Ira y DHFR, en donde los dos tipos de células de tallo se administran en una relación de 1:1. Las células hechas y no hecas son 1-5 x 108 c+elulas de tallo de placenta CD10+CD34"CD105+CD200+ en solución de NaCl al 0.9%. El individuo es supervisad para reducción en inflamación del pulmón . 5.1.7 Tratamiento de un Desorden de Pulmón Asociado con SLE Un individuo se presenta con neumonitis y vasculitis de los pulmones, además de fiebre, debilidad, artralgia (dolor en las articulaciones), diplopia (visión doble) , estrabismo e hipoestesia en ambas manos y pies, microhematuria (cantidad detectable de sangre en la orina), hipocomplementemia y títulos elevados de anticuerpos autoinmunes. Se hace un diagnóstico de lupus eritematosis sistémico (SLE). El individuo es refractario a pulsoterapia con metilprednisolona, y a ciclofosfamida. El individuo es administrado con 1 x 109 células de tallo e placenta CD10+CD34~CD155+CD200+ en una solución de NaCl al 0.9% intravenosamente, y seadministra con una segunda dosis 7 días después. El individuo es supervisado durante los siguientes 30-100 días para reducción en función de pulmón, como se indica en ya sea volumen expiratorio forzado (FEVj.) ( o apacidad vital forzada (FVC), o una reducción en la relación FEVx/FVC. Dada la condición del individuo, la administración de las células de tallo de placenta se considera efectiva si cualquiera e estos indicadores no empeora. 5.1.8 Tratamiento de Desorden de Pulmón Asociado con IBD Un individuo, previamente diagnosticado con enfermedad de intestino inflamatorio (IBD), se presenta con dispneo no asociada con sulfazalacina o ácido 5-aminosalicílico . Otrs causas de la dispnea (v. gr., alergias, asma, y lo semejante) se desecharon. El individuo es además refractario a esferoides orales yterapia inraunosupresora. Se sospecha que el individuo tiene involucramiento pulmonar de IBD, el individuo es administra con con 5 x 108 a 1 x 109 de células de tallo de placenta CD10+CD34~CD105+CD200+ en una solución de NaCl al 0.9% intravenosamente. El individuo es supervisado durante los siguientes 7-14 días para mejora en la dispnea, como se determina por cuando menos una mejora del 10% en cualquiera volumen expiratorio forzado (FEVi) o capacidad vital forzada (FVC) , o una mejora de la relación de FEVi/FVC cuando menos 75%. 5.1.9 Tratamiento de un Desorden de Pulmón Asociado con Escleroderma Un individuo, previamente diagnosticado con escleroderma, se presenta con involucramiento de pulmón diagnosticado como enfermedad de pulmón intersticial, como se muestra por la reducción en la capacidad de difusión de respiración sola para monóxido e carbono (DLCO) comparada con la normal, confirmada por la presencia de linfocitos y eosinofilos en el lavado bronquioalveolar . El individuo es administrado con 5 x 108 a 1 x 109 células de tallo de placenta CD10+CD34"CD105+CD200+ en una solución alO.9% d NaCl intravenosamente. El individuo es supervisado durante los siguientes 30-100 días, para cualquier mejora detectable en DLCO, dispnea y/o la presencia de linfocitos y eosinofilos enellavado bronquioalveolar; cualquier reducción es una indicación de que la administración de las células de tallo de placenta es eficaz. 5.1.10 Tratamiento de Enfermedad de Pulmón Intersticial Un individuo se presenta con dispnea, pérdida de peso, sequedad, tosa improductiva, y una relación de FEVi/FVC de <80%. Se hace un diagnóstico de enfermedad de pulmón intersticial (ILD) . Debido a que la causa de la enfermedad de pulmón no es aparente, la enfermedad de pulmón se caracteriza como idiopática. El individuo es administrado con 5 x 108 z 1 x 109 de células de tallo de placenta CD10+CD34"CD105+CD2' ' " en una solución al 0.9% de NaCl intravenosamente. El individuo es supervisado cuando menos una vez al mes durante un año para cualquier mejora detectable en, o reducción de empeoramiento de, volumen expiratorio forzado ( FEVi o capacidad vital forzada (FVC) , o una reducción de la relación de FEVi/FVC- L administración de células de tallo de placenta se considera efectiva si cualquiera de estos indicadores no empeora. Si ocurre empeoramiento de cualquiera de estos parámetros, el individuo es administrado con una dosis de seguimiento al mismo nivel quela dosis inicial.

Un segundo individuo se presenta con dispnea, pérdida de peso, sequedad, tos improductiva, y relación de FEVi/FVC de <80%. Se hace un diagnóstico de enfermedad de pulmón intersticial (ILD) . La ILD aparentemente se debe a exposición reciente a asbesto, como se confirma por la historia de trabajo, roturas de inspiración secas, y un rayos X de pecho que muestra placas arriba el diafragma. El individuo es administrado con 5 x 108 a 1 x 109 células de tallo de placenta CD10+CD34"CD105+CD200+ en una solución al 0.9% de NaCl intravenosamente, opcionalmente en combinación con un cortocoesteroide oral. El individuo es supervisado cuando menos una vez al mes por el resto de la vida del individuo para cualquier mejora detectable en, o reducción de empeoramiento de, volumen expiratorio forzado ( FEVi ) o capacidad vital forzada ( FVC ) , o una reducción de la relación de EVi / FVC - Dada la condición del individuo, la administración de las células de tallo de placenta se considera efectiva si cualquiera de estos indicadores no empeora. Si ocurre empeoramiento de cualquiera de estos indicadores, el individuo es administrado con una dosis de seguimiento al mismo nivel que la dosis inicial. 5.1.11 Tratamiento de Enfermedad de Pulmón Intersticial Un individuo se presenta con dispenea, tos persistente, y un agrandamiento del pecho (hiperaereación) . El individuo muestra una relación de ???/FVC de <60% aún con terapia de bronquiodilatdor . Bsado enla historia del individuo como un fumador, se hace un diagnóstico de enfermedad pulmonar obstructiva crónica (enfisema) . El individuo es administrado con 5 x 108 a 1 x 109 de células de tallo de placenta CD19+CD34"CD105+CD200+ en una solución de NaCl al 0.9% intravenosamente, opcionalmente en combinación con un bronquiodilatador tal como albuterol y un corticoesteroide inhalado. El individuo es supervisado mediante espirometría cuando menos una vez al mespor el resto e la vida del individuo para cualquier mejora detectable en, o reducción de empeoramiento de, volumen expiratorio forzado (FEVi) o capacidad vital forzada (FVC) , o una reducción en la relación de EVi/FVC. Dada la condición del individuo, la administración de las células de tallo de placenta se considera efectiva si cualquiera de estos indicadores empeora . 5.2 EJEMPLO 2: LOCALIZCIÓN ESPECÍFICA DE PULMÓN DE CÉLULAS DE TALLO DE PLACENTA Se evaluó la biodistribución de células de tallo de placenta en ratones inmunocomprometidos .

En un estudio piloto, células de tallo de placenta CD10+CD34~CD105+CD200+ se administraron como inyección intravenosa en la cola sencilla y/o repetida a ambos macho y hembra NOD-SCID o ratones macho C75BL/10"gSnAi-Rag2 (tmi) ye (tmi) (Taconic Farms, Germantown, new York). Los ratones se sacrificaron a 4, 14, 28 o 47 días después del tratamiento y mustas de pulmón, hígado, corazón, reñones, bazo, glándulas adrenales, médula e hueso, y cerebro se procesaron y analizaron mediante Q-PCR. Después de administración IV, se detectó ADN humano en ADN total aislado de muestras de pulmón, erebro, corazóny/o higadoen ratones que se sacrificaron 4 días después e la dosis. Los niveles más elevados de ADN se detectaron en el pulmón. Los resultados indicaron que la biodistribución decélulas de tallo de placenta fue principalmente limitada al pulmón en el Día 4 e tratamiento posterior. El ADN humano no se detectó en muestras de tejido de ratón sacrificado a 14, 28 o 47 días después de tratamiento.

Se realizó un segundo estudioen el que los ratones dosificados con ^células de tallo de placentaya sea como una sola dosis o dosis repetidas IV en los días 1, 4 y 7 se evaluaron para biodistribución y persistencia de las células de tallo de pladcenta mediante detección del gene de transcriptasa de reversa de telomerasa humana (Htert) . Los ratones se sacrificaron a 4 y 24 horas después de la primera dosis IV de células de tallo de placenta si como 4 horas después de la dosis en el día 73d dosis repetida y en los días 37 92. El ADN humano se detectó a 4 horas después de la dosis en la mayoría de los tejidos probados incluyendo la mayoría de muestras de pulmón, sitiode inyección, hígado, bazo ycorazón, indicando distribucióntemprana de células a órganos con flujo de sangre más elevado. Para 24 horas después de la dosis, sin embargo, solamente el tejido de pulmón consistentemente acogió ADN humano, mientras que otros tejidos excepto los sitios de inyección y una muestra de cerebro se limpiaron de ADN humano. A 7 días después de dosis, solamente el pulmón y un númro pequeño de sitios de inyecfción fueron todavía positivos para ADN hyumano. Para el día 37, solamente una sola muestra de tejido de pulmón fue débilmente positiva para ADN humano. Ningún ADN humano se detectó en cualesquiera tejidos de cualesquiera animales evaluados en el día 92. Después de repetri inyecciones IV de 1 x 106 celulas/ratón, las células de tallo de placenta se detectaron I los mismo tejidos a 4 horas después de la tercera inyección como se detectaron a 4 horas después de la única inyección IV, y todos los tejidos se limpiaron completamente de ADN humano para el día 92. 5.2 EJEMPLO 3: ANÁLISIS DE CÉLULAS DE TALLO DE PLACENTA EN UN MODELO DE BLEOMICINA DE C57BL/6 RATONES Este Ejemplo proporciona estudios que demuestran la efectividad de células de tallo de placenta en el tratamiento de enfermedad de pulmón fibroso. En este ejemplo, las células de tallo de placenta son CD34", CD10+, CD105+, CD200+ expandidas en cultivo, células adherentes a plástico de cultivo de tejido de placenta. Las células son cariotipicamente normales después de la expansión, y se proporcionan a una concentración de aproximadamente 7.5 x 106 células/mL .

Estudio Usando Ratones La blomicina es una droga citostática comúnmente empleada en el tratamiento de cáncer. La administración de bleomicina típicamente resulta en inflamación pulmonar crónica qu puede progresas a fibrosis. Como tal, la administración de belomicina a animales experimentales es un modelo aceptado de fibrosis de pulmón en humanos.

Ochenta y cuatro ratones macho C57CL6, de 6 semanas de edad y pesando 20-22 gramos, se alamatizaron durante 72 horas, luego se asignaron por docenas en uno de site grupos diferentes: 81) administración de salina (control negativo); (2) bleomicina; (3) salina + 1.5 x 106 de células de tallo de placenta; 84) beomicina + vehículo; (5) bleomicina + 1.5 x 106 células de tallo de placenta; (6) beomicina (en solución al 0.9% de NaCl) + 1.5 x 106 de fibroblastos dérmicos humanos normales (NHDFs) ; y (7) bleomicina + pirfenidona. La bleomicina, salina, y células se administran intravenosamente a la venna de cola en solución de 400 uL. La perfenidona se administra oralmente 400 mg/kg/día en carboximetilcelulosa al 0.5%. Dentro de cada grupo, seis ratones se sacrificaron en el 10 después de la administración, y los seis restantes se sacrificaron en el dia 21 después de la administración.

Los resultados de las administraciones se evaluaron mediante lavado bronquioalveolar (BAL) e inmunohistoquimica . Los niveles de TNF-o, TGF-ß, factor de crecimiento de tejido pconectivo (CTGF) , factor de crecimiento derivado de plaqueta (PDGF), factor de crecimiento de queratinocito (KGF) , factor de crecimiento de hepatocito (HGF) , interleuquina-13 (IL-13), IL-?ß, IL-10 e IL-8 en fluido BAL y homogenado de pulmón se determinan mediante ELISA o metodología comparable.

Para inmunohistoquimica, los lóbulos de pulmón se someten a perfusión con foralina + una mezcla de inhibidor de fosfatasa. La extensión de deosición de colágenose analiza en parte midiendo la antidade de hidroxiprolina en un tejido de pulmón. Brevemente, los pulmones se homogeneízan en 5 mL de salina yse digieren en 2 mi de 6 N HC1 durante 16 horas a 110°C. Después de la neutralización con NaOH hasta pH 7, un mol/L de reactivo Cloramina T se añade luego y se deja reaccionar a temperatura ambiente durante 20 minutos, 1 mi de de 3.15 N de ácidoperclórico y P-dimetilaminobenzaldehído se añaden luego a cada mujstra y se incuban durante 20 minutos a 65°C. Las muestras se enfrían durante 10 minutos, luego se leen a 557 nm en un espetrofotómetro usando concentraciones de trans-24-hidroxii-L-prolina de 0 a 5 mg/ml como una curva convencional. Cantidades superiores de hidroxiprolina indican cantidades superiores de deposición de colágeno, Ver Krishna, G., y col. Am. J. Path. 158:997-1004 (2001).

La histopatologia incluye examen de tejidos de pulmón para evidencia de fibrosis o lugares fibrosos., las células de tallo de placenta se identifican manchando con un anticuerpo especifico para vimentina humana.

La eficacia de células de tallo de placenta se establece mediante una demostración de un nivel inferior de cualquier citoquina relacionada con inflamación comparada con controles de bleomicina, o un nivel significativamente inferior de hidroxiprolina en homogenados de pulmón en presencia de células de tallo de placenta comparada con controles de bleomicina.

Estudio usando Ratas Sesenta ratas macho SD® (Charles River Laboratories) , edad 7-8 semanas y pesando aproximadamente 176-225 g, se dividen en cinco grupos: (1) dosificación intratraqueal de vehículo (solución de NaCl al 0.9%) seguido por 15 minutos mediante dosificación intravenosa del vehículo; (2) ddosificación intratraqueal de vehículo seguido en 15 minutos por dosificación intravenosa de 4.0 x 106 células ce tallo de placenta en 800 uL de solución; (3) dosificación intratraqueal de bleomicina (v. gr., BLENOXANE®m 3 unidades por kg) seguido en 15 minutos mediante dosificación intravenosa de vehículo; (4) dosificación intratraqueal de bleomicina (3 unidades por kg) seguido en 15 minutos por dosificación intravenosa de .0 x 106 células de tallo de placenta en solución de 800 uL; y (5) dosificación intratraqueal de beleomicina (3 unidades por kg) seguido en 15 minutos por dosificación intravenosa de 4.0 x 106 células de tallo de placenta en 800 uL de solución.

Después de 15 días, los animales se valoraron para diversos parámetros fisiológicos. Todos los animales se revisaron para peso corporal. La sangre (0.2 mL) se recoge de todos los animales a través de la vena yugular y se anlizó para gases periféricos, y otros -3.5 mL se retiran a través del seno periorbital para extracción desuero. El análisis de gas de sangre incluye análisis de pH, pCC>2, p02 aHCÜ3 (HCO3 real), tCC>3, CO-oximetría (v. gr., hemoglobina, oxihemoglobina fraccional, oxihemoglobina saturada, carboxihemoglobina, y methemoglobina ) .

Todos los animles se probaron adicionalmenteantes de muerte para función de pulmón usando un flexiVent (SCIREQ®, y datos para resistencia de newton (midiendo resistencia en las vías de iré centrales) y el cumplimiento se recoge.

Seis animales en cada grupo se matan, ylos pulmones se analizan para peso en húmedo, relación de peso a peso del animal, deposición de colágeno (mediante ensayo de hidroxiprolina; ver arriba) ; e histopatologia (para fibrosis, y marca e inflamación mediante mancfhado de H&E) . Para los seis animales restntes en cada grupo, se realiza lavado bronquioalveolar, y el fluido e lavado se analiza para cuentas de leucocito.

Los datos recogidos en el estudio, como se describe arriba, se nalizan para análisis de varianción, comparando el Grupo 1, arriba, con los Grupos 2-5; comparando el Grupo 2 con los Grupos 4 y 5; comparando el Grupo 3 con los Grupos 4 y 5; y comparación del Grupo 4 al Grupo 5. El efecto de tratamiento total se espera que sea significativo (p<0.05). La administración de células de tallo de placenta se espera que proporcione beneficio significativo a animales retados con bleomicina que reciben las células (Grupos 4 y 5) comparados con animales retados con bleomicina que no reciben las células (Gupo 3) , con respecto a cuando menos una función pulmonar, como se determina mediante flexuiVent, fibrosis 8como se determina por prueba de hidroxiprolina para deposición de colágeno) , o inflamación (como se evidencia mediante inflamación reducida de células relacionadas presentes en los fluidos de lavado bronquioalveolar, o inmunohistoquimica e tejido de pulmón. 5.4 EJEMPLO 4. ESTUDIO PRECLÍNICO DE TRATAMIENTO DE INFLAMCIÓN DE PULMÓN USANDO UN MODELO ANIMAL Ete Ejemplo describe la conducta de un estudio preclínico que demuestra que las células de tallo de placenta aisladas, administradas entravenosamente, reducen la inflamacín de vía de aire) .

El grupo alojado de 8-12 semanas de dad (edad-coincidida) , ratones macho C57BL/6 se usan en el exprimento. Los rtones se mantienen en un ciclo de Luz : Oscuridad / 12 AM12 PM en una instalación de barrera. Elalimento y fluidos para beber están disponibles ad libitum.

El experimento incluye siete grupos de tratamiento, que consisten de 18 ratones cada uno. Los ratones en los grupos 1-4 y 6 reciben instilación de vía de aire de lipopolisacárido bacteriano (LPS), un inductor normal de inflamación una vez al día durante el curso de cinco días para inducir inflamación de vía de aire que es moderada a severa mediante examen histológico. Los ratones en los grupos 1 y 2 reciben células e tallo de placentaaislados o células de tallo de placenta a 0.5 o 1.0 millón de células por animal mediante inyección intravenosa, v. gr . , en la vena de cola. Enel grupo 3 los ratones se inyectan con fibroblastos dérmicos humanos a 1.0 millón de células por animal mediante inyección intravenosa y sirven como un control negativo celular. El grupo 4 los ratones reciben vehículo y sirven como un grupo de control negativo de línea de base. El grupo 5 los ratones sirven como un grupo de control de enfermedad, y se4 instilan con salina tamponada con fosfato, pero no reciben ningún LPS. El tratamiento se realizó 1 hora después de administración de LPS. En el grupo 6, los ratones sirven como un control positivo, y reciben un compuesto de referencia, dexametosona, a 10 mg/kg, para ser administrada mediante inyección intraperitoneal 1 hora después del reto de LPS. En el grupo 7 los ratones reciben solamente una administración intravenosa de 1.0 millón de células de tallo de placenta o células de tallo de placenta, para control para la administración de las células, v. gr., en infiltración de macrofato hacia los tejidos pulmonares.

La inflamación pulmonar se induce administrando 2 uL de LPS en 30 ul de PBS a través de instilación intratraqueal una vez al día durante cinco días. El trupo e control de enfermedad se instila con un volumen igual de salina tamponada con fosfato. Cada grupo de tratamiento se divide en tres subgrupos de 6 ratones cada uno. Los grupos de 6ratones se someten a lavado bronco-alveolar (BAL) y recolección de tejido a 6, 24 o 48 horas después de la exposición a LPS.

Las siguientes muestras se recogieron de cada animal a 6, 24 y 48 horas: sangre periférica; fluido BAL, recogido instilando 3 x 1 mi de albúmina de suero bovino al 0.1% en salina tamponadacon fosfato a través de la cánula traqueal; y los pulmones. La composición celular de fluido de lavado bronco-alveolar se determina mediante análisis f ] ¿FACS y anti-Grl, anti-CDllb ( acl) y anticuerpos anti-CD45 usando Becton Dickinson FACScan. La composición celular del lavado se expresa como un porcentaje de células Grl+ y CDllb+ de la población de linfocita entrada. Uno de los pulmones se homogeiniza y se usa para determinar los niveles de TNFo, 1L-1ß, mKC (homólogo de ratón de IL-8), I(L-10, MIP-lo y MIP-2 se determinan en el homogenado. El segundo pulmón se fija en formalina al 10% y se procesa para análisis histopatológico mediante H&E . Los niveles de TNFo, IL-?ß, mKC, IL-10, MIP-lo y MIP-2 también se miden en los sueros de los ratones mediante ELISA.

La extensión de inflamación de vía de aire se determina mediante análisis de infiltración de neutrófilo detectable mediante análisis FACS de pulmón yfluidos de lavado broncoalveolar , con un aumento en las células CD45+CDllb+ representan prinariamente monocitos/macrófagos y granulocitos polimórficos , y células CD45+Grl+ son en su mayoría neutrófilos y granulocitos polimórficos . La administración de células de tallo de placenta después de inducción de inflamación ocasiona una reducción significativa en cualesquiera células CD45+CDllb+, CD45+Grl, o ambas presentes en el pulmón ofluidos de lavado broncoalveolar. La inflamación también se determina mediante los niveles en fluidos BAL de TNFo, IL-?ß, mKC, IL-10, MIP-lo y <mip-3. La administración de células de tallo de placenta reduce los niveles de uno o más, o todas estas citoquinas. El tratamiento con dexametosona (compuesto e referencia9 a 1 mg/kg disminuyeel reclutamiento de neutrófilo a los pulmones y lavado después de administración de LPS.

Equivalentes : Las composiciones y métodos descritos en la presente no sos para ser limitados en alcance por las modalidades específicas descritas en la presente. En realidad, varias modificaciones de las exposiciones y métodos además de aquellos descritos se harán evidentes a aquellos expertos en el ramo de la descripción anterior y figuras que se acompañan. Estas modificaciones se pretende que quedm dentro del alcance de las reivindicaciones anexo.

Varias publicaciones, patentes y solicitudes de patente se citan en la presente, las exposiciones de las cuales se incorporan por referencia en sus totalidades.

Claims

REIVINDICACIONES

1.- Un método para tratar a un individuo que tiene una enfermedad, desorden o condición del pulmón, que comprende administrar al individuo una cantidad terapéuticamente efectiva de células de tallo de placenta, en donde la cantidad terapéuticamente efectiva es una cantidad suficiente par ocasionar una mejora detectable en uno o más síntomas de la enfermedad, desorden o condición.

2.- El método de conformidad con la reivindicación 1, que comprende detectar la mejora por uno o más de espirometría, medidor de flujo pico, detección de niveles de C02 en la sangre, radiografía, exploración de CT, formación de imgen de resonancia magnética, broncoscopía , o lavado broncoalveolar .

3.- El método de conformidad con la rivindicación 1, en donde la enfermedad, desorden o condición se asocia con o se ocasiona por una respuesta inmune.

4. - El método de conformidad con la reivindicaión 3, en donde la enfermedad, desorden o condición es una enfermedad autoinmune.

5. - El método de conformidad con la reivindicación 4, en donde la enermedad autoinmune es artritis reumatoide, escleroderma, enfermedad de intestino inflamatorio o lupus eritematoso sistémico.

6.- El método de conformidad con la reivindicación 3, en donde la enfermedad, desorden o condición en enfermedad de injerto contra huésped.

7. - El método de conformidad con la reivindicación I, en donde la enfermedad, desorden o condición es una enfermedad de pulmón intersticial.

8. - El método de conformidad con la reivindicaión 7, en donde la enfermedad de pulmón intersticial es fibrosis pulmonar intersticial.

9. - el método de conformidad con la reivindicación , en donde la enfermedad, desorden o condición es una enfermedad de pulmón obstructivo.

10. - El método de conformidad con la reivindicación 9, en donde la enfermedad de pulmón obstructivo es asma, bronquitis, síndrome de angustia respiratoria agudo o enfermedad pulmonar obstructiva cónica.

11. - El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde la enfermedad, desorden o condición s un daño de pulmón agudo.

12. - El método e conformidad con la reivindicación II, en donde el daño de pulmón agudo es ocasionado por quemadura química, inhalación de humo, o exposición de una substancia tóxica.

13. - El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde la enfermedad, desorden o condición es un daño de pulmón ooasionado por una enfermedad neoplástica o parancoplástica, neumonía, o fibrosis cística.

14. - El método de conformidad con la reivindicación 13, en donde la administración resulta en una relación de volumen expiratoria forzada en 1 segundo (FEVi a capacidad vital forzada (FVC) de arriba de 0.7.

15.- El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde las células de tallo de placenta son CD10+, CD34", CD105+, como s detecta mediante citometría de flujo.

16. - El método de conformidad con la reivindicaión 15, en donde las células son CD200+, como se detecta mediante citometría de flujo.

17. - el método de conformidad con la reivindicaión 16, en donde las células son CD90+ yCD45~, orno se detecta mediante citometría de flujo.

18.- El método de conformidad con la reivindicación 17, en donde las células son CD44+ , como se detecta mediante citometría de flujo.

19.- El método de conformidad con la Reivindicación 17, en donde las células son CD80' Y CD86~, como s detecta mediante citometria de flujo.

20.- El método de conformidad con la reivindicación 15, en donde las células son uno o más de CD29+, CD38", CD44+ ,. CD54+, SHE+ o SH4 + , como se detecta mediante citometria de flujo. 21, . Ek método de conformidad con la reivindicación 15, en donde las células son cuando menos una de CE200+, CD44+ , CD45~, CD90+, CD117", CD1233" KDR", CD80", CD86", HLA-ABC+, HLA-DR", o PDL+.