KR20120089231A - 피부 염증 반응 예방 및/또는 치료 약물 용도의 ｌ-세린 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 PAR2 과발현 및/또는 과활성으로 인한 피부 염증 반응 예방 및/또는 치료 약물 용도의 L-세린에 관한 것이다.
Description
본 발명은 PAR2 수용체의 과발현/과활성으로 인한 피부 염증 반응 예방 및/또는 치료 약물로서의 L-세린 용도에 관한 것이며, 및 특히 L-세린, 아벤(Avene) 온천수, 글리세린 및 화장학적-허용되는 운반체를 포함하는 피부과학적-화장학적 조성물에 관한 것이다.
프로테아제-활성 수용체-2 (PAR2)는 염증 반응들이 관여되는 여러 질환들의 생리병리학과 연관된다 (Rattenholl A 등; Drug News Perspect; 2008 Sep;21(7):369-81).
PAR2는 G 단백질과 결합되는 7-막 관통단백질 수용체 상과에 속하나, 특이한 활성 경로를 가진다. 실제로, PAR2는 트립신, 트립타아제 및 인자들 Xa 및 VIIa과 같은 세린 프로테아제에 의해 활성화된다. 이들 프로테아제에 의한 수용체 세포외 일부 분리로 인하여 새로운 아미노-말단 도메인 (SLIGKV)이 노출되고 이는 수용체에 '부착되는' 리간드로 작용한다: 이는 세포외 루프 2에 자체 결합되어 자가활성을 수행한다.
PAR2는 피부의 여러 유형의 세포들에 의해 발현된다: 각질세포, 땀샘, 모낭의 근상피세포, 고유판 및 진피의 진피 및 내피 세포들의 수지상-유사 세포들 (Steinhoff 등, Exp Dermatol.; 1999 Aug;8(4):282-94).
멜라닌 세포는 본 수용체를 발현하지 않지만 PAR2는 멜라닌 세포에서 각질세포로의 전이를 촉진하여 색소침착에 중요한 역할을 한다 (Seiberg 등, Exp Cell Res.; 2000 Jan 10;254(1):25-32). 표피에 의해 생성되는 세린 프로테아제는 피부에 백혈구 증가를 유도하는 화학주성 효과를 가진다. 또한, 이들은 항상성 조절, 유사분열 과정 및 표피 분화에 관여되고 피부의 장벽기능을 조절한다. 더욱이, 세린 프로테아제는 염증, 숙주방어, 발암과정, 섬유증 및 신경자극과 관련된 피부 질환들의 생리병리학에 기여한다.
세린 프로테아제의 생리학적 및 생리병리학적 피부 특성은 부분적으로 PAR과 관련된다. 실제로, PAR2는 아토피 피부염, 편평태선 및 건선과 같은 피부의 염증성 질환들의 표피, 진피 및 혈관에서 과다 발현된다 (Steinhoff 등, Exp Dermatol; 1999 Aug;8(4):282-94).
또한 PAR2는 아토피 피부염이 있는 환자들에게서 소양감 진행에 기여한다 (Steinhoff 등, J Neurosci. 2003 Jul 16;23(15):6176-80).
트립신-유형의 프로테아제에 의한 PAR2 활성으로 각질세포로부터 IL-8 생성이 유도된다 (HaCaT) (Hou 등, Immunology, 1998, 94:356-362). 민감성 피부를 가지는 환자들에게서, PAR2가 과활성 되는 것으로 보인다. 민감한 신경섬유에서 PAR2 과활성 결과 피부 불쾌감이 생긴다. 더욱이, 각질세포에서 PAR2 과활성 결과 염증 및 장벽기능의 더딘 회복으로 이어진다 (층판소체의 더딘 분비) (Hachem JP 등, J Invest Dermatol.; 2006 Sep;126(9):2074-86.).
따라서 PAR2 발현 및/또는 활성을 감소시키는 활성제 개발의 필요성이 있다.
놀랍게도, 본 출원인은 L-세린, L-아스파라긴 및/또는 L-발린 각각은 PAR2 발현/활성을 억제할 수 있다는 것을 보였다.
따라서, 본 발명은 PAR2 과발현 및/또는 과활성으로 인한 피부 염증 반응 예방 및/또는 치료 약물 용도의 L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린에 관한 것이다.
바람직하게는, 본 발명은 PAR2 과발현 및/또는 과활성으로 인한 피부 염증 반응 예방 및/또는 치료 약물 용도의 L-세린에 관한 것이다.
바람직하게는, PAR2 과발현 및/또는 과활성으로 인한 피부 염증 반응은 아토피 피부염, 편평태선, 건선, 소양감, 지루성 피부염, 주사, 만성 붉음증 및 피부 과민증으로 이루어진 군에서 선택되는 염증성 피부 병리를 유발시킨다.
따라서, 바람직하게는, 본 발명은 아토피 피부염, 편평태선, 건선, 소양감, 지루성 피부염, 주사, 만성 붉음증 및 피부 과민증으로 이루어진 군에서 선택되는 염증성 피부 병리 예방 및/또는 치료 약물 용도의 L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린에 관한 것이다.
L-세린은 알라닌의 수산화 동족체인 C3 α-아미노산이다.
L-세린은 수산화 지방족 아미노산이며 다음 구조를 가지며 화학명은 2-아미노-3-히드록시프로판산이다:
L-아스파라긴 (또는 아스파라긴-아미노-숙신산)은 아스파르트산에서 유도된 다음 구조를 가지는 무전하의 친수성 및 극성 α-아미노산이다:
L-발린은 다음 구조를 가지는 비극성 및 소수성 α-아미노산이다:
'PAR2 과발현’이란 상기 수용체가 정상적인 생리 조건에서 과다하게 발현되는 것이다.
‘PAR2 과활성’이란 상기 수용체가 정상적인 생리 조건에서 과도한 활성을 보이는 것이다.
따라서, L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린은 PAR2를 억제하기 위하여 사용된다.
‘PAR2를 억제한다’는 것은 PAR2 발현을 저해 또는 감소시킬 뿐 아니라 PAR2 활성을 저해 또는 감소시키는 것이다.
본 발명의 명세서에서, ‘예방하는’ 및 ‘예방’이란 질환, 질병 또는 하나 이상의 징후 및/또는 증상 출현을 피하는 것이다.
바람직하게는, L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린은 아벤(Avene) 온천수와 조합되어 사용된다.
바람직하게는, L-세린은 아벤 온천수와 조합되어 사용된다.
아벤 온천수 조성은 다음과 같다:
| 조성 ( mg /l) | 아벤 ( Avene ) |
| 염화물 | 5.4 |
| 중탄산염 | 226.7 |
| 탄산수소염 | |
| 황산염 | 13.1 |
| 규산염 | |
| 실리카 | 14 |
| 질산염 | |
| 칼슘 | 42.7 |
| 마그네슘 | 21.2 |
| 나트륨 | 4.8 |
| 칼륨 | 0.8 |
| 철 | 0.005 |
| 셀레늄 | 0.005 |
| 규소 | |
| 아연 | 0.02 |
| 구리 | 0.005 |
| 건조 잔류량 | 207 |
| 무기질 함량 | 낮음 |
| pH | 7.5 |
| 몰삼투압농도 | 저 삼투압 |
바람직하게는, L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린은 글리세린과 조합되어 사용된다.
바람직하게는, L-세린은 글리세린과 조합되어 사용된다.
더욱 바람직하게는, L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린은 아벤 온천수 및 글리세린과 조합되어 사용된다.
바람직하게는, L-세린은 아벤 온천수 및 글리세린과 조합되어 사용된다.
글리세린 또는 글리세롤은 다음 구조를 가지는 프로판-1,2,3-트리올을 언급하는 것이다:
바람직하게는, L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린은 30 uM 이상, 바람직하게는 50 uM 이상, 더욱 바람직하게는 80 uM 이상, 및 특히 바람직하게는 100 uM 이상의 농도로 적용된다.
다른 양태에 의하면, 본 발명은 PAR2 과발현 및/또는 과활성으로 인한 피부 염증 반응 예방 및/또는 치료 약물 용도의 L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
바람직하게는, 본 발명은 PAR2 과발현 및/또는 과활성으로 인한 피부 염증 반응 예방 및/또는 치료 약물 용도의 L-세린을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
바람직하게는, 상기 조성물은 피부과학적 조성물이다.
특히 바람직하게는, 상기 조성물은 국소 적용된다.
‘국소 적용’이란 피부에 직접 적용되는 것이다.
바람직하게는, 상기 약학적 조성물은 아벤 온천수 및/또는 글리세린을 더욱 포함하고, 바람직하게는 염증성 효과를 보이는 임의의 기타 활성제를 배제하고, 특히 바람직하게는 임의의 기타 활성제를 배제한다.
본 발명의 다른 실시예에서, L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린은 조성물에서 항-염증성 효과를 보이는 유일한 활성제이고, 및 특히 바람직하게는 유일한 활성제이다.
바람직하게는, L-세린은 조성물에서 항-염증성 효과를 보이는 유일한 활성제이고, 및 특히 바람직하게는 유일한 활성제이다.
본 발명의 특정 실시예에서, 본 발명에 의한 조성물은 피부 질환 예방 및/또는 치료 목적의 활성제를 더욱 포함할 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 조성물은 민감성 피부 예방 및/또는 치료 약물 용도로 사용된다.
포괄적으로, 민감성 피부는 피부의 특정 반응성에 의해 규정된다.
전형적으로 이러한 피부 반응성은 다양한 유래를 가지는 유발 요인들과 환자들이 접촉될 때 느끼는 불쾌감 정도로 표현된다. 이것은 민감성 피부 표면에 화장제품을 도포, 소정의 음식물을 섭취, 급변하는 기온, 공기 오염 및/또는 자외선 또는 적외선 노출에 따른 질의사항일 수 있다. 또한 연령 및 피부 유형과 같은 연관 인자들이 존재할 수 있다. 예를들면, 정상 피부보다 건성 또는 지성 피부들에서 민감성 피부가 더욱 빈번하다. 본 발명의 명세서에서 민감성 피부는 과민성 피부 및 비내성 피부를 포함한다.
비내성 피부는 화장 또는 피부과학적 제품 또는 비누와 같은 여러 요인들에 대한 발열, 긴장 또는 얼얼한 감각을 느끼는 피부이다. 일반적으로, 이러한 증상은 버짐 유무와 무관하게 홍반 및 과다지루성 또는 여드름성, 또는 주사성 피부와도 관련된다.
과민성 피부는 환경, 감정, 음식, 바람, 마찰, 면도, 고농도 칼슘을 함유한 경수, 온도 변화, 습도 등과 같은 여러 요인들에 대한 가려움 또는 따가움과 같은 소양감을 느끼는 피부이다.
바람직하게는, PAR2 수용체 과발현 및/또는 과활성에 의한 피부 염증 반응은 피부 염증성 병리의 원인이며, 상기 병리는 바람직하게는 아토피 피부염, 편평태선, 건선, 소양감, 지루성 피부염, 주사, 만성 붉음증 및 피부 과민증으로 이루어진 군에서 선택된다.
따라서, 바람직하게는, 본 발명은 아토피 피부염, 편평태선, 건선, 소양감, 지루성 피부염, 주사, 만성 붉음증 및 피부 과민증으로 이루어진 군에서 선택되는 병리의 예방 및/또는 치료 약물 용도의 L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린을 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
아토피 피부염은 각질층 지질대사물 특히 세라마이드 결핍과 연관되어 설명된다. 이러한 병리는 신체 넓은 부위로 연장되는 다소의 만성 건조증 형태로 나타나며, 염증성 및 소양성 반점 발진과 관련된다.
건선 또한 인구의 2%에 해당하는 사람들이 겪고 있는 만성 진행성 피부 염증성 질환이다. 이것은 염증 반응과 연관되는 표피 세포의 비정상적 성장에 특징이 있다.
무작위로 출현되는 편평태선은 스트레스와 관련되는 자가면역질환이다. 이것은 알레르기와 같이 갑자기 개시된다: 피부는 습진-비늘 구진으로 덮여 가려움을 유발시킨다. 편평태선은 피부 전신 또는 작은 영역에 발병한다. 근육 또는 류마티스 통증은 편평태선 발진을 동반할 수 있다. 본 질환은 12 내지 15 개월 지속할 수 있다.
지루성 피부염은 안면 및 두피의 피부병이고, 희미한 윤곽 및 얇은 비늘을 가지는 홍반점에 특징이 있다.
주사는 코와 뺨 때로는 턱과 이마에 만성적 홍조가 출현하는 초기 양성적, 불치의 피부 질환이다. 이러한 증상들은 특히 눈 주위에 얼얼한 감각을 동반한다.
만성 붉음증은 때로는 작은 혈관이 나안으로도 보이는 안면 돌출 부위들 (코, 뺨, 이마, 턱 등)의 영구적 홍조 상태이다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.01 중량% 내지 10 중량%의 L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린을 포함하고 바람직하게는 조성물 총 중량에 대하여 0.5 중량% 내지 3 중량%의 L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린을 포함한다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 0.01 중량% 내지 10 중량%의 L-세린을 포함하고 바람직하게는 조성물 총 중량에 대하여 0.5 중량% 내지 3 중량%의 L-세린을 포함한다.
본 발명에 의한 조성물은 국소, 경구, 피하, 주사, 직장 또는 질 경로로 투여되도록 제형된다.
바람직하게는, 본 발명에 의한 조성물은 국소 경로로 투여되도록 제형된다.
본 발명에 따른 조성물은 원하는 투여 방식에 따라 통상 사용되는 모든 제약 형태로 제공될 수 있다.
운반체는 원하는 조성물 유형에 따라 여러 특성을 가질 수 있다.
특히, 국소 경로로 투여되는 조성물에 대하여, 운반체는 수성, 수성알코올성 또는 유성 용액, 용액 형태의 분산액 또는 로션 또는 유액 형태의 분산액, 액상 에멀션 또는 밀크성 반-유체 에멀션, 크림성 현탁액 또는 에멀션, 수성 또는 무수 겔, 마이크로에멀션, 마이크로캡슐, 극미립자 또는 이온성 및/또는 비이온성 소포성 (vesicular) 분산액일 수 있다. 이들 조성물은 표준 방법에 따라 제조된다.
이들 조성물은 특히 안면, 손, 발, 대형 해부학적 주름 또는 전신을 위한 세척, 보호, 처리 또는 관리 용도의 크림 (예를들면 데이 크림, 나이트 크림, 화장 제거 크림, 기초 크림, 햇빛 차단 크림), 화장 제품 예를들면 유동성 파운데이션, 화장 제거 밀크, 전신 보호 또는 관리용 밀크, 애프터-선 밀크, 피부 관리 로션, 겔 또는 폼 (foam), 예를들면 세척 또는 살균 로션, 햇빛 차단 로션, 인조 선탠 로션, 목욕용 조성물, 살균제를 함유한 탈취 조성물, 애프터-세이브 겔 또는 로션, 제모 크림, 또는 벌레 물림 방지 조성물을 포함한다.
또한 본 발명에 의한 조성물은 비누 또는 세척용 바(bar)를 포함하는 고형 제제를 포함한다.
또한 용액, 크림, 겔, 에멀션, 폼 또는 가압 추진제를 가지는 에어로졸 조성물 형태로 모발용으로 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물이 에멀션일 때, 조성물 총 중량에 대한 지방상 비율은 5 중량% 내지 80 중량%, 및 바람직하게는 5 중량% 내지 50 중량%를 포함한다. 에멀션 형태의 조성물에 사용되는 오일, 유화제, 보조유화제는 화장품 및/또는 피부과학적 분야에서 전형적으로 사용되는 것들에서 선택된다.
유화제 및 보조유화제는 조성물 총 중량에 대하여 0.3 중량% 내지 30 중량%, 및 바람직하게는 0.5 중량% 내지 15 중량%로 조성물에 존재한다.
본 발명의 조성물이 오일성 겔일 때, 지방상은 조성물 총 중량에 대하여 90중량% 이상 존재한다.
본 발명의 화장품 및/또는 피부과학적 조성물은 또한 화장품, 약학적 및/또는 피부과학적 분야에서 전형적으로 사용되는 보조제, 예를들면 친수성 또는 친유성 겔화제, 친수성 또는 친유성 활성제, 방부제, 항산화제, 용매, 향료, 고착제(load), 차단제, 살균제, 악취흡착제 및 착색제를 더욱 포함한다. 이들 여러 보조제 함량은 해당 분야에서 전형적으로 사용되는 함량, 예를들면 조성물 총 중량에 대하여 0.01 중량% 내지 35 중량% 포함된다.
이들 보조제는 특성에 따라 지방상 및/또는 수상 (aqueous phase)으로 도입된다.
본 발명에서 사용되는 지방으로는, 무기질 오일들, 예를들면, 수소화 폴리이소부텐 및 석유계 오일, 식물성 오일 예를들면, 시어버터, 해바라기 및 살구 씨 오일의 액상 분획물, 동물성 오일 예를들면, 퍼히드로스쿠알렌, 합성 오일, 특히 퍼셀린 (PurCellin) 오일, 이소프로필 미리스테이트 및 에틸헥실 팔미테이트, 및 불소화 오일 예를들면, 퍼플루오로폴리에테르가 언급될 수 있다. 지방알코올, 지방산 예를들면, 스테아르산 및, 예를들면, 왁스, 특히 파라핀, 카나우바 및 밀랍이 사용될 수도 있다. 실리콘 오일과 같은 규소화합물 및, 예를들면, 시클로메티콘 및 디메티콘, 왁스, 수지 및 실리콘 검 역시 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 유화제로는, 예를들면, 글리세롤 스테아레이트, 폴리솔베이트 60, HENKEL에서 상품명 Sinnowax AO？로 판매되는 세틸-스테아릴 알코올 및 33 몰의 산화에틸렌으로 옥시에틸렌화 된 세틸-스테아릴 알코올의 혼합물, GATTEFOSSE에서 상품명 Tefose？ 63로 판매되는 PEG-6/PEG-32/글리콜 스테아레이트 혼합물, PPG-3 미리스틸 에테르, 실리콘 유화제 예를들면 세틸 디메티콘 코폴리올 및 솔비탄 모노- 또는 트리-스테아레이트, PEG-40 스테아레이트 및 옥시에틸렌화 솔비탄 모노 스테아레이트 (200E)가 언급된다.
본 발명에서 사용되는 용매로는, 저급 알코올, 특히 에탄올 및 이소프로판올, 및 프로필렌 글리콜이 언급된다.
친수성 겔화제로는, 카르복실 중합체 예를들면 카르보머(carbomer), 아크릴 공중합체 예를들면 아크릴레이트/알킬 아크릴레이트 공중합체, 폴리아크릴아미드, 및 특히 SEPPIC에서 상품명 Sepigel 305？로 판매되는 폴리아크릴아미드, C13-14-이소파라핀 및 라우레스-7의 혼합물, 다당류, 예를들면 셀룰로스 유도체 예를들면 히드록시알킬셀룰로스, 및 특히 히드록시프로필셀룰로스 및 히드록시에틸셀룰로스, 천연 검 예를들면 구아, 카로브 및 잔탄 및 클레이가 언급된다.
친유성 겔화제로는, 개질 클레이 예를들면 벤톤, 지방산 금속염 예를들면 알루미늄 스테아레이트 및 소수성 실리카, 또는 에틸셀룰로스 및 폴리에틸렌이 언급된다.
사용 가능한 친수성 활성제는 단백질 또는 단백질 가수분해물, 아미노산, 폴리올, 특히 C2 내지 C10 폴리올 예를들면 글리세롤, 솔비톨, 부틸렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜, 요소, 알란토인, 당 및 당 유도체, 수용성 비타민, 전분, 및 세균 또는 식물 추출물 예를들면 알로에 베라 (aloe vera) 추출물을 포함한다.
사용 가능한 친유성 활성제는 레티놀 (비타민 A) 및 이의 유도체, 토코페롤 (비타민 E) 및 이의 유도체, 세라마이드, 정유 및 불검화물 (토코트리엔올, 참깨, 감마-오리자놀, 피토스테롤, 스쿠알렌, 왁스, 테르펜)을 포함한다.
다른 양태에 의하면, 본 발명은 PAR2를 억제하는 L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린의 화장품 용도에 관한 것이다.
바람직하게는, 본 발명은 PAR2를 억제하는 L-세린의 화장품 용도에 관한 것이다.
다른 양태에 의하면, 본 발명은 PAR2 과발현 및/또는 과활성에 의해 유발되는 피부 염증 반응 예방 및/또는 치료를 위한 화장학적 및/또는 약학적 처리 방법에 관한 것이고, 본 발명의 약학적 또는 화장학적 조성물을 적용하는 최소한 하나의 단계로 구성된다.
적용 단계는 예를들면, 크림, 겔, 유액, 로션, 화장 제거 밀크 또는 애프터-선 조성물을 피부 또는 건조 모발에 적용, 헤어 로션을 적은 모발에 적용, 샴푸, 또는 치약을 치은에 적용하는 것일 수 있다.
바람직하게는, 상기 방법은 피부과학적 방법이고, 상기 피부과학적 조성물을 피부에 적용하는 최소한 하나의 단계로 구성된다.
본 발명에 의한 화장학적 및/또는 약학적 방법은 예를들면, 본 발명에 의한 조성물을 매일 국소 적용하는 것에 의해 구현될 수 있다.
본 발명에 의한 방법은 단일 적용 단계로 구성될 수 있다.
다른 실시예에 따르면, 화장 처리 방법은 경우에 따라 1회 이상 간격을 두면서, 1일 이상 및 일반적으로는 최소한 4주, 4 내지 15주 동안 매일 2 내지 3회 반복적인 적용 단계로 구성된다.
다른 양태에 의하면, 본 발명은 L-세린 및/또는 L-아스파라긴 및/또는 L-발린, 아벤 온천수 및 글리세린, 및 약학적으로 또는 화장학적으로 허용되는 운반체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
바람직하게는, 본 발명은 L-세린, 아벤 온천수 및 글리세린, 및 약학적으로 또는 화장학적으로 허용되는 운반체를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
바람직하게는, 상기 조성물은 피부과학적-화장학적 조성물이다.
바람직하게는, 상기 조성물은 항-염증 효과를 보이는 기타 어떠한 활성제, 및 특히 바람직하게는 기타 어떠한 활성제를 포함하지 않는다.
실시예 1:
HaCaT 세포주 각질세포 모델이 사용되었다. L-세린 및 L-아스파라긴은 EVONIK에서 입수되고, L-아르기닌은 AMINO에서 입수되고 L-발린은 AJINOMOTO에서 입수되었다.
형광 프로브 (2 uM 농도의 Fluo-4/AM)가 96-웰 플레이트에 접종된 세포들에 30분 동안 결합되고 피-측정 활성제와 함께 30분 동안 배양되었다. 칼슘 이온과 결합하는 디에스테르화 프로브 형태만이 485 nm 형광에서 여기되어 535 nm에서 발광한다. 사용되는 배양완충액은 HEPES (20 mM) 및 수용성 프로베네시드 (probenecid) (2.5 mM)가 보충된 HBSS 완충액이다.
세포들은 10 nM 트립신으로 자극되었다.
사용된 기준 분자는 1 uM 농도의 STI 분자 (대두 트립신 억제제)이다.
증류수에서 50 mg/ml로 용해되는 L-세린 및 L-아스파라긴은 (L-세린에 대하여 475.8 mM 및 L-아스파라긴에 대하여 378.4 mM) 농도 3 uM, 10 uM, 30 uM 및 100 uM에서 평가되었다.
L-아르기닌은 증류수에서 100 mM로 용해되었다.
L-발린은 증류수에서 200 mM로 용해되었다.
L-아스파르트산은 증류수에서 200 mM로 용해되었다.
PAR2 활성을 나타내는 칼슘 유동은, 트립신 주사 전후 약동학에 따라 실시간으로 웰마다 형광으로 측정된다. PAR2 활성 억제 백분율은 칼슘 유동 억제 백분율에 상응한다.
도 1에 나타낸 결과들에 의하면 L-세린은 투여량-의존 방식으로 PAR2 활성을 저해한다.
표 2에 나타낸 결과들에 의하면 L-아스파라긴은 PAR2 활성을 억제하지만, 투여량-의존적인 방식은 아니다.
표 2에 나타낸 결과들에 의하면 L-발린은 PAR2 활성을 저해한다.
더욱이, 결과에 따르면 L-아르기닌은 PAR2 활성을 유의하게 저해하지 않는다.
| 억제 백분율 | 항-PAR2 활성 (억제 백분율) | |||
| 농도 | 3uM | 10uM | 30uM | 100 uM |
| L-세린 | 3% | 13% | 20% | 33%*** |
| L-아스파라긴 | 23%* | 23%* | 22%* | 31%*** |
| L-아르기닌 | -17% | 12% | -11% | 1% |
| L-발린 | 6% | 26%* | 20% | 34%*** |
| 1 uM STI | 106-109%*** | |||
트립신 값들보다 유의하게 상이한 p<0.5 및 p<0.001 (***) 값들 (던네트 검증)
실시예 2:
피부 장벽기능은 외부 환경에 대한 보호 기능을 제공한다. 표피 각질세포는 다양한 자극들 또는 알레르겐에 대하여 직접 반응하고 특히 단백질 유래 조절자인 염증-유발 시토카인 합성 및 분비를 통하여 염증 및 면역을 포함한 피부 과정에 능동적으로 관여한다.
각질세포에 의해 발현되고 염증 반응 증폭에 상당히 관여하는 케모카인 (chemokine)- 인터류킨-8 (IL-8)이 상세하게 연구되었다. 케모카인 주요 기능은 특히 염증-유발 분자들 분비를 자극하여 호중구성 백혈구를 집합시키고 활성화시키는 것이다.
수행된 실험은 트립신 자극에 따라, 세포주 (HaCaT)의 인간 각질세포에 대한 IL-8 분비 측면에서 L-세린의 항-염증 활성을 평가할 수 있다.
IL -8 검정 원리: 배양 상등액에서 분비 IL -8의 정량화를 위한 샌드위치 ELISA.
IL-8은 마이크로 플레이트 웰들에 부착된 단일클론 항체에 의해 포획된다. 제2 항-IL-8 항체가 첨가된다. 본 항체는 비오틴 결합되어, 퍼옥시타제 활성으로 결합되는 스트렙타비딘 결합을 가능하게 한다. 퍼옥시타제 기질 첨가로 각 웰에서 IL-8 농도의 정량화가 450 nm에서의 흡광 측정으로 가능하다.
재료 및 방법:
a) 세포:
HaCaT 인간 각질세포 세포주가 사용됨.
b) 재료:
세포 배양용 96?웰의 마이크로 플레이트 및 인젝터들, Mithras LB940TM (Berthold Technologies？)이 있는 플레이트 판독기가 사용됨.
c) 시약:
10 nM 트립신이 자극제로 사용됨.
인간 CXCL8/IL8 DuoSet R&D 시스템 키트 (ref. DY208(E))의 시약들이 사용됨.
d) 피-측정 제품:
증류수에서 475.8 mM로 용해된 L-세린이 농도 3 uM, 10 uM, 30 uM, 100 uM, 300 uM 및 1 mM에서 평가됨.
e) 프로토콜:
L-세린은 1시간 동안 37 ℃ (HBSS 완충액)에서 배양된다. 자극제 (트립신 T03)가 첨가되고 24 시간 동안 37 ℃에서 배양된다.
배양 상등액이 회수되고 +4 ℃에서 원심 분리된 후 -20 ℃에서 보관된다.
시료의 IL-8 농도들이 다음 식의 표준 곡선에서 계산된다:
OD = (Bmax*[IL-8])/ (Kd+[IL-8])
다음, IL-8 분비 억제 백분율은 다음 식에 따라 계산된다:
결과
하기 표에 표시된 값들은 HaCaT 각질세포에 대한 트립신 자극 후 IL-8 분비에 대한 L-세린 억제를 나타낸다.
IL -8 분비 억제 백분율:
별도 실험들: (n=2)
| % 억제 | ||||
| L-세린 | ||||
| 10 nM 트립신에 의한 IL-8 유도 인자 | 10 uM | 30 uM | 100 uM | 1 mM |
| 대조 세포들(자극 없는 기준선 형성)에 대하여 X 2.6 | 47*** | 50*** | 66*** | 74*** |
트립신 값들보다 유의하게 상이한 p<0.001 (***)값들 (던네트 검증)
결론
시험관내, 세포 수준에서, 염증-유발 자극 예를들면 트립신에 의한 PAR2 활성은 각질세포에 의한 IL-8 분비를 유도한다.
L-세린은 트립신에 의한 PAR2 자극 이후 각질세포에 의한 IL-8 분비를 1 mM 농도에서 평균 74% 억제시키는 것으로 보인다.
실시예 3: 본 발명에 의한 조성물
| INCI 명칭 | 백분율 | 기능 |
| 물 | QSP 100% | |
| 디소듐 EDTA | 0.2 | 착화제 |
| 페녹시에탄올-파라벤 | 0.8 | 방부제 |
| 글리세린 | 4 | 보습제 |
| 카르보머 | 0.5 | 겔화제 |
| 글리세릴 스테아레이트 | 4 | 유화제, 유동화 인자 |
| 세테아릴 이소노나노에이트 | 3 | 피부연화제 |
| 디메티콘 | 5 | 피부연화제 |
| 스쿠알란 | 5 | 피부연화제 |
| 파라피늄 리퀴듐(Paraffinum Liquidum) | 10 | 피부연화제 |
| L-세린 | 1 | 활성제 |
| 트리에탄올아민 | 0.30 | pH 조절제 |
Claims (8)
- PAR2 과발현 및/또는 과활성에 의해 유발되는 피부 염증 반응 예방 및/또는 치료 약물 용도의 L-세린.
- PAR2 과발현 및/또는 과활성에 의해 유발되는 피부 염증 반응 예방 및/또는 치료 약물 용도의 L-세린을 포함하는 약학적 조성물.
- 제2항에 있어서, 아벤 온천수를 더욱 포함하는, 약학적 조성물.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 글리세린을 더욱 포함하는, 약학적 조성물.
- 제2항에 있어서, L-세린은 조성물 중에서 유일한 활성제인, 약학적 조성물.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, PAR2 수용체의 과발현 및/또는 과활성에 의해 유발되는 피부 염증 반응은 아토피 피부염, 편평태선, 건선, 소양감, 지루성 피부염, 주사, 만성 붉음증 및 피부 과민증으로 이루어진 군에서 선택되는 염증성 피부 병리의 원인이 되는, 약학적 조성물.
- 제2항 내지 제6항 중 어느 하나의 항에 있어서, L-세린 농도는 조성물 총 중량에 대하여 0.01 중량% 내지 10 중량% 및 바람직하게는 조성물 총 중량에 대하여 0.5 중량% 내지 3 중량%인, 약학적 조성물.
- L-세린, 아벤 온천수, 글리세린 및 화장학적으로 허용되는 운반체를 포함하는 피부과학적-화장학적 조성물.
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