KR20080003470A

KR20080003470A - 아테롬성 동맥경화증, 이상지혈증 및 관련 증상의 치료방법 및 약제학적 조성물

Info

Publication number: KR20080003470A
Application number: KR1020077029888A
Authority: KR
Inventors: 캉 청; 엠 게라르드 워터스; 캐슬린 엠 메터스; 게리 오네일
Original assignee: 머크 앤드 캄파니 인코포레이티드; 머크 프로스트 캐나다 리미티드
Priority date: 2003-05-15
Filing date: 2004-05-13
Publication date: 2008-01-07
Also published as: US20110118292A1; ECSP056156A; HK1092722A1; PT1624871E; KR100806008B1; RS20120499A1; EP1624871A1; AR041089A1; EA200501817A1; JP4637833B2; MY140639A; DE602004022036D1; EP2116244A1; CA2525772A1; HRP20120818T1; CR9808A; CR8047A; GT200400098A; MEP60108A; ZA200508288B

Abstract

아테롬성 동맥경화증의 치료 방법이 기술되어 있으며, 여기에서 니코틴산 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제가 환자에게 DP 수용체 길항제와 함께 투여된다. DP 수용체 길항제를 투여하여, 이를 투여하지 않을 경우 발생할 수 있는 조홍을 감소, 방지 또는 제거한다.

니코틴산, 니코틴산 수용체 효능제, DP 수용체 길항제, 아테롬성 동맥경화증, 혈청 HDL 수준, 이상지혈증, 당뇨병, 조홍, CRTH2 수용체, 심바스타틴

Description

아테롬성 동맥경화증, 이상지혈증 및 관련 증상의 치료 방법 및 약제학적 조성물{Method of treating atherosclerosis, dyslipidemias and related conditions and pharmaceutical compositions}

본 발명은 본원에 첨부된 도면과 연계하여 설명된다.

도 1은 화합물 D가 마우스에서 프로스타글란딘 D2-유도된 혈관확장을 억제함을 도시하는 그래프이다.

도 2는 화합물 D가 마우스에서 니코틴산 유도된 혈관확장을 억제함을 도시하는 그래프이다.

도 3은 다른 선택된 화합물이 마우스에서 니코틴산 유도된 혈관확장을 억제함을 도시하는 그래프이다.

나이아신 또는 니코틴산(피리딘-3-카복실산)은 고 밀도 지단백질(HDL)의 혈청 수준을 상승시키는 효과때문에 일반적으로 공지된 약물이다. 그러나 니코틴산은 흔히, 조홍으로 호칭되는 피부 혈관확장과 연관된다. 이러한 부작용은 피부에서 프로스타글란딘 D2의 니코틴산-유도된 방출에 의해 유발되며, 많은 환자들이 니 코틴산 치료를 중단할정도로 심각하다. 본 발명은 니코틴산 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제를, 피부 혈관확장(당해 화합물을 투여하지 않는 경우 발생함)을 감소시키거나 제거하는 화합물과 함께 투여함으로써 아테롬성 동맥경화증, 이상지혈증, 당뇨병 및 관련 증상의 치료에 관한 것이며, 이러한 치료는 실질적 조홍을 일으키지 않으면서 진행될 수 있다. 이는 사람에 있어서 니코틴산 또는 니코틴산 수용체 효능제 및 DP 수용체를 길항시키는 화합물을 투여함으로써 수행된다.

수용체의 상이한 아종이 프로스타글란딘 D2와 상호작용한다. 한가지 프로스타글란딘 D2 수용체는 "DP"로서 언급하고, 다른 프로스타글란딘 D2 수용체는 "CRTH2"로서 공지되어 있다. 본 발명은 DP 수용체의 길항작용을 이용하여 달리 발생할 수 있는 조홍을 방지, 최소화 또는 감소시킨다.

결국 본 발명의 목적은 니코틴산 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제를 사용하여 아테롬성 동맥경화증, 이상지혈증, 당뇨병 및 관련 증상에 대해 사람을 치료하는 동안에 부작용으로서 실질적 조홍(빈도 및/또는 중증도)을 제거 또는 감소시키는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 부작용을 일반적으로 최소화시키는 아테롬성 동맥경화증에 대한 병행 요법을 제공하는 것이다.

또다른 목적은 경구적으로 사용하기 위한 고정된 배합 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.

이러한 및 다른 목적은 본원에 제공된 설명으로부터 명백하다.

발명의 요약

치료가 필요한 사람 환자에 있어서 아테롬성 동맥경화증을 치료하는 방법이 제공되며, 이는 환자에게 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제 및 DP 수용체 길항제를 실질적 조홍을 일으키지 않으면서 아테롬성 동맥경화증의 치료에 유효한 양으로 투여하는 것으로 이루어진다.

나이아신 또는 니코틴산(피리딘-3-카복실산)은 고밀도 지단백질(HDL) 수준을 상승시키는 효과 뿐만 아니라 지질 프로필을 달리 이롭게 변경(극저밀도(VLDL), 저밀도 지단백질(LDL), 트리글리세라이드, 유리 지방산(FFA) 및 지단백질(a)[Lp(a)]을 저하시키는)시키는 효과에 대해 일반적으로 공지된 약물이다. 니코틴산은 사람에게 치료학적 유효량으로, 예를 들어, 하루에 약 50mg 내지 약 8g만큼 높게 투여되는 경우, HDL 수준을 상승시킨다. 그러나 니코틴산은 조홍이라고도 하는 피부 혈관확장과 흔히 연관되어 있다. 조홍은 일반적으로 피부의 적변을 일으키며, 이는 온기, 소양증 또는 자극을 수반한다. 이는 극도로 불쾌할 수 있으며, 너무 심하여 많은 환자가 니코틴산 치료를 중단하도록 한다. 본 발명은, 실질적 조홍을 일으키지 않으면서 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제를 사용하는 본원에 기술된 아테롬성 동맥경화증 및 다른 질환 및 증상의 치료, 예방 또는 역전에 관한 것이다. 이는 사람에 있어서 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제 및 DP 수용체를 길항시키는 화합물을 투여함으로써 수행되고, 따라서 조홍 효과를 이의 빈도 및/또는 중증도에 있어서 예방, 감소 또는 최소화시킨다.

"DP" 및 "CRTH2"로 언급되는, 프로스타글란딘 D2와 상호작용하는 둘 이상의 수용체가 있다. 본 발명은 기본적으로 DP 수용체의 길항제와 함께 사용되는 니코틴산 또는 니코틴산 수용체 효능제와 관련된다.

중요한 본 발명의 한 측면은 환자에게 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제 및 DP 수용체 길항제를, 실질적 조홍을 일으키지 않으면서, 아테롬성 동맥경화증을 치료하기에 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함하여, 이러한 치료가 필요한 사람 환자에 있어서 아테롬성 동맥경화증을 치료하는 방법이다.

중요한 본 발명의 다른 측면은 환자에게 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제 및 DP 수용체 길항제를 투여하는 단계를 포함하여, 이러한 치료가 필요한 사람 환자에 있어서 혈청 HDL 수준을 상승시키는 방법에 관한 것이며, 상기 배합물은 실질적 조홍을 일으키지 않으면서, 환자의 혈청 HDL 수준을 상승시키기에 효과적이다.

중요한 본 발명의 다른 측면은 환자에게 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제 및 DP 수용체 길항제를, 실질적 조홍을 일으키지 않으면서, 이상지혈증을 치료하기에 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함하여, 이러한 치료가 필요한 사람 환자에 있어서 이상지혈증을 치료하는 방법에 관한 것이다.

중요한 본 발명의 다른 측면은 환자에게 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화 물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제 및 DP 수용체 길항제를, 실질적 조홍을 일으키지 않으면서, 환자의 혈청 VLDL 또는 LDL 수준을 감소시키기에 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함하여, 이러한 치료가 필요한 사람 환자에 있어서 혈청 VLDL 또는 LDL 수준을 감소시키는 방법에 관한 것이다.

중요한 본 발명의 다른 측면은 환자에게 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제 및 DP 수용체 길항제를, 실질적 조홍을 일으키지 않으면서, 환자의 혈청 트리글리세라이드 수준을 감소시키기에 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함하여, 이러한 치료가 필요한 사람 환자에 있어서 혈청 트리글리세라이드 수준을 감소시키는 방법에 관한 것이다.

중요한 본 발명의 다른 측면은 환자에게 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제 및 DP 수용체 길항제를, 실질적 조홍을 일으키지 않으면서, 환자의 혈청 Lp(a) 수준을 감소시키기에 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함하여, 이러한 치료가 필요한 사람 환자에 있어서 혈청 Lp(a) 수준을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 본원에서 사용된 Lp(a)는 지단백질(a)을 언급한다.

특히 중요한 본 발명의 한 측면은 상기의 각 방법에 관한 것이며, 여기에서 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물이 사용된다. 니코틴산의 사용이 더욱 특히 중요하다. 중요한 또다른 측면에서, DP 수용체 길항제는 DP 수용체를, 환자의 조홍 효과를 감소시키거나 예방하기에 유효한 양으로 선택적으로 조절한다.

특히 중요한 본 발명의 다른 측면은 상기의 각 방법에 관한 것이며, 여기에서 니코틴산이 사용되고, DP 수용체 길항제는 DP 수용체를 선택적으로 조절하고, CRTH2 수용체를 실질적으로 조절하지 않는다.

특히 중요한 본 발명의 다른 측면은 환자에게 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제 및 DP 수용체 길항제를 투여하는 단계를 포함하여, 치료가 필요한 사람 환자에 있어서 아테롬성 동맥경화증, 이상지혈증, 당뇨병 또는 관련 증상을 치료하는 방법에 관한 것이며, 상기 배합물은 실질적 조홍을 일으키지 않으면서, 아테롬성 동맥경화증, 이상지혈증, 당뇨병 또는 관련 증상을 치료하기에 유효한 양으로 투여한다.

본 발명의 한 측면은 실질적 조홍을 일으키지 않으면서 사람의 아테롬성 동맥경화증을 치료하기 위한, 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제와 배합된 DP 수용체 길항제 화합물의 용도이다.

특히 중요한 본 발명의 다른 측면은 DP 수용체 길항제가 화합물 A 내지 AJ 및 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 용매화물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 상기 방법에 관한 것이다.

DP 수용체를 선택적으로 길항시키고 조홍 효과를 억제하기에 특히 유용한 화합물의 예는 하기의 화합물 뿐만 아니라 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 용매화물을 포함한다:

본원에서 사용된 "아테롬성 동맥경화증"이란 대형 및 중간 크기 동맥 벽의 최내층에 콜레스테롤 및 지질을 함유하는 아테롬증 플라크의 부착을 특징으로 하는 혈관 질환의 형태를 언급한다. 아테롬성 동맥경화증은 해당 의학 분야의 전문의가 인식하고 이해하는 혈관 질환 및 증상을 포함한다. 혈관재생 과정에 뒤따르는 재발협착증, (관상 동맥 질환 또는 허혈성 심장 질환으로도 공지된) 관상 심장 질환, 다경색 치매를 포함하는 뇌혈관성 질환, 발기 기능부전을 포함하는 말초 혈관 질환을 포함하여 아테롬성 동맥경화증 심혈관 질환은 아테롬성 동맥경화증의 모든 임상적 증상이며, 따라서 "아테롬성 동맥경화증" 및 "아테롬성 동맥경화증 질환"이란 용어로 포함된다.

"이상지혈증"은 통상적인 의미로 혈장 지질, 예를 들어, HDL(저), LDL(고), VLDL(고), 트리글리세라이드(고), 지단백질(a)(고), FFA(고) 및 다른 혈청 지질 또는 이들의 배합물의 비정상적 수준을 언급하는 데에 사용된다. 이는 당뇨병(당뇨성 이상지혈증), 대사 증후군 등과 같은 특정 관련 질환 또는 증상의 합병증 없는 증상 또는 일부일 수 있다. 따라서, 합병증 없는 이상지혈증 뿐만 아니라 기초가 되는 증상과 연관된 것이 본 발명에 포함된다.

"환자"라는 용어는 의학적 증상의 예방 또는 치료를 위해 본 발명의 활성제를 사용하는, 포유동물, 특히 사람을 포함한다. 약물을 환자에게 투여하는 것은 자가 투여 및 환자에게 타인에 의한 투여를 둘다 포함한다. 환자는 현존하는 질환 또는 의학적 증상에 대한 치료를 필요로 할 수 있거나, 아테롬성 동맥경화증의 개시 위험을 예방 또는 감소시키는 예방학적 치료를 목적으로 할 수 있다.

"치료학적 유효량"이란 용어는 목적하는 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 약물의 양을 의미하려는 것이다. 예로서, 니코틴산은 빈번하게 매일 약 50mg 내지 약 8g의 용량으로 투여한다.

"예방학적 유효량" 및 "예방하기에 유효한 양"이란 용어는 예방하려고 시도하는 생물학적 또는 의학적 사건의 발생 위험을 예방 또는 감소시키는 약물의 양을 언급한다. 많은 경우에, 예방학적 유효량은 치료학적 유효량과 동일하다.

본원에 기술된 발명은 관상 심장 질환 사건, 뇌혈관성 사건 및/또는 간헐성 파행의 발생, 또는 잠재적으로 존재하는 경우의 재발 위험을 예방 또는 감소시키는, 본원에 기술된 화합물 및 조성물의 투여를 포함한다. 관상 심장 질환 사건은 CHD 사망, 심근 경색(즉, 심장 발작), 및 관상 혈관재생 과정을 포함하려는 것이다. 뇌혈관성 사건은 허혈성 또는 출혈성 뇌졸중(뇌혈관성 사건으로도 공지됨) 및 일시적 허혈성 뇌졸중을 포함하려는 것이다. 간헐성 파행은 말초 혈관 질환의 임상적 현상이다. 본원에서 사용된 "아테롬성 동맥경화증 질환 사건"이란 용어는 관상 심장 질환 사건, 뇌혈관성 사건을 포함하려는 것이며, 하나 이상의 비치명적 아테롬성 동맥경화증 질환 사건을 경험하는 간헐성 파행은 이러한 사건의 재발 가능성이 존재하는 사람에 대한 것이다. 이는 이전의 병력을 갖는 사람을 의도한다.

따라서, 본 발명은 또한 예방학적 유효량의 본원에 기술된 화합물을 이러한 사건의 위험이 있는 환자에게, 실질적 조홍을 예방 또는 최소화시키면서 투여하는 단계를 포함하여, 아테롬성 동맥경화증 질환의 처음 또는 후속 발생 위험을 예방 또는 감소시키는 방법을 제공한다. 환자는 이미 투여시에 아테롬성 동맥경화증 질환을 앓고 있거나 이로 발전될 위험에 처할 수 있다.

당해 방법은 추가로, 실질적 조홍을 예방 또는 최소화시키면서, 새로운 아테 롬성 동맥경화증 병소 또는 플라크 형성을 예방 또는 지연시킬 뿐만 아니라 현존 병소 또는 플라크의 퇴행을 유발시킴에 관한 것이다.

따라서, 본 발명의 한 측면은 치료학적 유효량의 본원에 기술된 DP 길항제를 니코틴산 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제와 함께 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하여, 아테롬성 동맥경화증 플라크 진행을 정지 또는 지연시킴을 포함하는, 아테롬성 동맥경화증의 진행을 정지 또는 지연시키는 방법을 포함한다. 이 방법은 또한, 본 발명의 치료가 시작될 때에 존재하는 아테롬성 동맥경화증 플라크(즉, "현존하는 아테롬성 동맥경화증 플라크") 진행의 정지 또는 지연 뿐만 아니라 아테롬성 동맥경화증이 있는 환자에 있어서 새로운 아테롬성 동맥경화증 플라크 형성의 정지 또는 지연을 포함한다.

본 발명의 다른 측면은 예방학적 유효량의 본원에 기술된 화합물과 함께 니코틴산 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제를 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하여, 아테롬성 동맥경화증 플라크 파열의 위험을 예방 또는 감소시키는 방법을 포함한다. 본원에서 사용된 파열은 플라크가 파괴되어 유리된 것을 언급하며, 이는 혈관에 잔류할 수 있다. 본 발명의 추가 측면은 예방학적 유효량의 본원에 기술된 화합물을 치료가 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하여, 아테롬성 동맥경화증을 발병시키는 위험을 예방 또는 감소시키는 방법을 포함한다.

본 발명의 다른 측면은 치료가 필요한 사람 환자를 조홍-억제 또는 감소 유효량의 DP 수용체 길항제로 전처치한 후에, 실질적 조홍을 일으키지 않으면서 아테롬성 동맥경화증, 이상지혈증 또는 관련 증상을 치료 또는 예방하기에 유효한 양 의, 니코틴산, 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제로 상기 환자를 치료하는 단계를 포함하여, 아테롬성 동맥경화증, 이상지혈증 또는 관련 증상을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 측면은 환자를 HMG Co-A 리덕타제 억제제로 전처치 또는 치료하는 단계를 추가로 포함하는 상기 방법에 관한 것이다.

본 발명의 다른 측면은 HMG Co-A 리덕타제 억제제가 심바스타틴인, 상기 증상을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

본원에서 기술된 방법의 한 측면은 본원에 기술된 결과를 수득하기에 유용한 양으로 니코틴산 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제 화합물, 및 CRTH2 수용체를 실질적으로 조절하지 않으면서 DP 수용체를 선택적으로 조절하는 DP 수용체 길항제의 용도에 관한 것이다. 따라서, DP 수용체 길항제는 CRTH2 수용체에서의 친화도보다 약 10배 이상 높은(수치적으로 낮은 K_i 값) DP 수용체에서의 친화도(즉, K_i)을 갖는다. 이러한 지침에 따라서 DP와 선택적으로 상호작용하는 화합물은 "DP 선택성"으로 간주한다.

"실질적 조홍을 일으키지 않으면서"라는 문구는 니코틴산을 치료학적 양으로 투여하는 경우, 흔히 나타나는 부작용을 언급한다. 니코틴산의 조홍 효과는 일반적으로, 환자가 치료학적 용량으로 약물에 대한 내성을 나타내면서 덜 빈번하고 덜 심각하게 되지만, 조홍 효과는 여전히 어느 정도로 발생한다. 따라서, "실질적 조홍을 일으키지 않으면서"란 이것이 발생하는 경우에 감소된 중증도의 조홍, 또는 달리 발생하는 것보다 훨씬 적은 조홍 사건을 언급한다. 바람직하게는, 조홍의 발생빈도는 약 1/3 이상 감소하고, 더욱 바람직하게는 발생빈도가 반으로 감소하고, 가장 바람직하게는 조홍 발생빈도는 약 2/3 이상 감소한다. 마찬가지로, 중증도는 바람직하게는 약 1/3 이상, 더욱 바람직하게는 반 이상, 가장 바람직하게는 약 2/3 이상 감소한다. 명백하게는 조홍 발생빈도 및 중증도에서 100% 감소가 가장 바람직하지만, 필요하지는 않다.

특정 환자에 대한 특정 용량 섭생 및 수준은 연령, 체중, 일반적 건강, 성별, 식이요법, 투여 시간, 투여 경로, 배설 비율, 약물 배합 및 환자 증상의 중증도에 따라 다르다. 이러한 인자는 증상을 예방, 대응 또는 정지시키기에 필요한 치료학적으로 유용하거나 예방학적으로 유용한 용량을 측정하기 위해서 통상적으로 숙련된 임상가의 이해 범위 내에서 익히 고려된다. 본원에 기술된 화합물은 환자의 지속적인 치료 개월수, 해수 또는 생활 과정을 포함하여, 환자에게 해당되는 의학적 증상을 치료 또는 예방하기에 적합한 시간의 길이에 대해 하루를 기준으로 투여될 것으로 예상된다.

하나 이상의 추가 활성제를 본원에 기술된 화합물과 함께 투여할 수 있다. 추가 활성제(들)은 다른 약제학적 활성을 갖는 지질 개질 화합물 또는 제제, 또는 지질-개질 효과 및 다른 약제학적 활성을 둘다 갖는 제제일 수 있다. 사용할 수 있는 추가 활성제의 예는 다음을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다: HMG-CoA 리덕타제 억제제로서, 이들의 락톤화 또는 디하이드록시 개방산 형태의 스타틴 및 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 에스테르를 포함하고, 로바스타틴(미국 특허 제 4,342,767호를 참고), 심바스타틴(미국 특허 제4,444,784호를 참고), 디하이드록시 개방산 심바스타틴, 특히 이의 암모늄 또는 칼슘염, 프라바스타틴, 특히 이의 나트륨염(미국 특허 제4,346,227호를 참고), 플루바스타틴, 특히 이의 나트륨염(미국 특허 제5,354,772호를 참고), 아토르바스타틴, 특히 이의 칼슘염(미국 특허 제5,273,995호를 참고), NK-104로도 언급되는 피타바스타틴(PCT 국제공개번호 WO 97/23200을 참고) 및 ZD-4522로도 공지된 로수바스타틴(CRESTOR®; 미국 특허 제5,260,440호)을 포함하지만, 이로 제한되지 않음; HMG-CoA 신타제 억제제; 스쿠알렌 에폭시다제 억제제; (스쿠알렌 신타제 억제제로도 공지된) 스쿠알렌 신테타제 억제제, ACAT-1 또는 ACAT-2의 선택적 억제제를 포함하는 아실-조효소 A: 콜레스테롤 아실트랜스퍼라제(ACAT) 억제제 뿐만 아니라 ACAT-1 및 -2의 이중 억제제; 마이크로솜 트리글리세라이드 트랜스퍼 단백질(MTP) 억제제; 내피 리파제 억제제; 담즙산 격리제; LDL 수용체 유도제; 혈소판 응집 억제제, 예를 들어, 당단백질 IIb/IIIa 섬유소원 수용체 길항제 및 아스피린; 글리타존, 예를 들어, 피오글리타존 및 로시글리타존으로 보통 언급되는 화합물 및 티아졸리딘 디온으로 공지된 구조 종류 내에 포함되는 것 뿐만 아니라 티아졸리딘 디온 구조 종류 외에 PPARγ 효능제를 포함하는 사람 퍼옥시좀 증식제 활성화된 수용체 감마(PPARγ) 효능제; PPARα 효능제, 예를 들어, 클로피브레이트, 마이크론화 페노피브레이트를 포함하는 페노피브레이트, 및 겜피브로질; PPAR 이중 α/γ 효능제; (피리독신으로도 공지된) 비타민 B₆ 및 이의 약제학적으로 허용되는 염(예: HCl염); (시아노코발라민으 로도 공지된) 비타민 B₁₂; 엽산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르(예: 나트륨염 및 메틸글루카민염); 항산화성 비타민(예: 비타민 C 및 E 및 베타 카로틴); 베타-차단제; 안지오텐신 II 길항제(예: 로자르탄); 안지오텐신 전환 효소 억제제(예: 에날라프릴 및 캅토프릴); 레닌 억제제, 칼슘 채널 차단제(예: 니페디핀 및 딜티아젬); 엔도텔린 길항제; ABCA1 유전자 발현을 증진시키는 제제; 콜레스테릴 에스테르 트랜스퍼 단백질(CETP) 억제 화합물, 5-리폭시게나제 활성화 단백질(FLAP) 억제 화합물, 5-리폭시게나제(5-LO) 억제 화합물, 길항제 및 효능제를 둘다 포함하는 파르네소이드 X 수용체(FXR) 리간드; 간 X 수용체(LXR)-알파 리간드, LXR-베타 리간드, 비스포스포네이트 화합물(예: 알렌드로네이트 나트륨); 사이클로옥시게나제-2 억제제(예: 로페콕십 및 셀레콕십); 및 혈관 염증을 약화시키는 화합물.

콜레스테롤 흡수 억제제를 또한, 본 발명에 사용할 수 있다. 이러한 화합물은 장관강으로부터 소장 벽의 장세포로 콜레스테롤의 이동을 차단하며, 따라서 혈청 콜레스테롤 수준을 감소시킨다. 콜레스테롤 흡수 억제제의 예는 미국 특허 제5,846,966호, 제5,631,365호, 제5,767,115호, 제6,133,001호, 제5,886,171호, 제5,856,473호, 제5,756,470호, 제5,739,321호, 제5,919,672호, 및 PCT 출원 번호 WO 00/63703, WO 00/60107, WO 00/38725, WO 00/34240, WO 00/20623, WO 97/45406, WO 97/16455 및 WO 95/08532에 기술되어 있다. 가장 주목되는 콜레스테롤 흡수 억제제는 1-(4-플루오로페닐)-3(R)-[3(S)-(4-플루오로페닐)-3-하이드록시프로필)]- 4(S)-(4-하이드록시페닐)-2-아제티디논으로도 공지된 에제티미베이며, 이는 미국 특허 제5,767,115호 및 제5,846,966호에 기술되어 있다.

콜레스테롤 흡수 억제제의 치료학적 유효량은 약 0.01 내지 약 30 mg/체중 kg/하루, 바람직하게는 약 0.1 내지 약 15 mg/kg 용량을 포함한다.

식이요법 환자에 대해서, 본 발명에 사용되는 화합물은 통상적인 식이요법 약제와 함께 투여할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 식이요법 환자 수용 치료법은 또한 인슐린 또는 경구 항당뇨성 약제를 취할 수 있다. 본원에 유용한 경구 항당뇨성 약제의 일례는 메트포르민이다.

용량 정보

본원에 사용된 니코틴산은 피리딘-3-카복실산을 언급한다. 그러나 니코틴산의 염 및 용매화물은 또한 본 발명에 사용하기 위해 포함되며, 니코틴산의 많은 약제학적으로 허용되는 염 및 용매화물은 본 발명에 유용하다. 알칼리 금속염, 특히 나트륨 및 칼륨은 본원에 기술된 바와 같이 유용한 염을 형성한다. 마찬가지로 알칼리 토금속, 특히 칼슘 및 마그네슘은 본원에 기술된 바와 같이 유용한 염을 형성한다. 다양한 아민염, 예를 들어, 암모늄 및 치환된 암모늄 화합물은 또한 본원에 기술된 바와 같이 유용한 염을 형성한다. 유사하게는, 니코틴산의 용매화 형태가 본 발명 내에서 유용하다. 예는 반수화물, 일-, 이-, 삼- 및 1.5수화물을 포함한다. 유리산인 피리딘-3-카복실산은 본 발명에 사용하기에 특히 중요하다.

본원에 기술된 바와 같이, DP 길항제는 포유류 환자, 특히 사람에 있어서, 일회 또는 분할된 하루 용량으로 투여되는, 낮게는 약 0.01 mg/kg/하루 내지 높게 는 약 100 mg/kg/하루 범위의 용량으로, 조홍 효과를 감소 또는 예방하기에 유용하다. 바람직하게 당해 용량은 일회 또는 분할된 하루 용량으로 약 0.1mg/하루 내지 높게는 1.0g/하루이다.

본원에 기술된 바와 같이 유용한 니코틴산의 용량은 1회 또는 분할 하루 용량으로, 낮게는 약 50 mg/kg/하루 내지 높게는 약 8g/하루의 범위이다. 적은 용량을 처음에 사용하고, 용량을 증가시켜 조홍 효과를 추가로 최소화할 수 있다.

니코틴산 이외에 다른 니코틴산 수용체 효능제의 용량은 넓은 한계 내에서 다양하다. 일반적으로, 아테롬성 동맥경화증 치료에 유용한 니코틴산 수용체 효능제는 일회 또는 분할 용량으로, 낮게는 약 0.01 mg/kg/하루 내지 높게는 약 100 mg/kg/하루 범위의 양으로 투여된다. 대표적 용량은 약 0.1 mg/하루 내지 약 2 g/하루이다.

본 발명에 사용되는 화합물은 통상적인 투여 경로를 통해 투여할 수 있다. 바람직한 투여 경로는 경구이다.

니코틴산, 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제 및 DP 길항제는 본 발명을 이탈하지 않으면서 1회 또는 수회 하루 용량으로, 예를 들어, 1일 2회, 1일 3회 또는 1일 4회 함께 또는 순차적으로 투여할 수 있다. 24시간 넘어 연장되는 방출 프로필을 나타내는 서방성 생성물과 같이 특별히 긴 서방성인 경우, 용량은 2일 1회로 투여할 수 있다. 그러나 매일 1회의 투여가 바람직하다. 마찬가지로, 아침 또는 저녁 투여를 사용할 수 있다.

약제학적 조성물

본원에 기술된 약제학적 조성물은 일반적으로 니코틴산 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제, DP 수용체 길항제 및 약제학적으로 허용되는 담체로 이루어진다.

적합한 경구 조성물의 예는 정제, 캅셀제, 트로키제, 로젠지, 현탁제, 분산성 산제 또는 과립제, 유탁제, 시럽 및 엘릭시르를 포함한다. 담체 성분의 예는 희석제, 결합제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 방향제, 착색제, 방부제 등을 포함한다. 희석제의 예는, 예를 들어, 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 및 인산나트륨을 포함한다. 입상화제 및 붕해제의 예는 옥수수 전분 및 알긴산을 포함한다. 결합제의 예는 전분, 젤라틴 및 아카시아를 포함한다. 윤활제의 예는 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트, 스테아르산 및 탈크를 포함한다. 정제는 비제피 또는 공지된 기술로 제피될 수 있다. 이러한 제피는 위장관에서 붕해를 지연시키고 이어서 흡수도 지연시키며, 이에 의해 장기간에 걸쳐 서방성 작용을 제공할 수 있다.

본 발명의 한 양태에서, 니코틴산, 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제는 DP 수용체 길항제 및 담체와 배합되어 고정된 배합 생성물을 형성한다. 이러한 고정된 배합 생성물은 경구용 정제 또는 캅셀제일 수 있다.

특히, 본 발명의 다른 양태에서, 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제(약 1 내지 약 1000 mg) 및 DP 길항제(약 1 내지 약 500 mg)를 약제학적으로 허용되는 담체와 배합하여 경구용 정제 또는 캅셀제를 제공한다.

장기간에 걸친 서방성은 니코틴산 약제학적 조성물의 제형화에 특히 중요할 수 있다. 서방성 정제가 특히 바람직하다. 예를 들어, 시간 지연 물질(예: 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트)을 사용할 수 있다. 용량 형태는 또한, 미국 특허 제4,256,108호; 제4,166,452호 및 제4,265,874호에 기술된 기술에 의해 제피시켜 서방성을 위한 삼투성 치료 정제를 형성시킬 수 있다.

다른 서방성 기술이 또한 이용가능하며, 본원에 포함된다. 서방성 정제에서 니코틴산의 방출을 지연시키는 데에 유용한 대표적 성분은 다양한 셀룰로스 화합물, 예를 들어, 메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 프로필셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 미정질 셀룰로스, 전분 등을 포함한다. 많은 천연 및 합성 물질이 또한, 서방성 제형에 사용된다. 예는 알긴산 및 다양한 알기네이트, 폴리비닐 피롤리돈, 트라가칸트, 구주콩 고무, 구아 고무, 젤라틴, 다양한 장쇄 알콜(예: 세틸 알콜) 및 밀랍을 포함한다.

특히 중요한 서방성 정제는 니코틴산을 하나 이상의 상기 셀룰로스 화합물과 함께 사용하며, 이들은 중합체 매트릭스를 형성하는 서방성 정제로 타정된다. DP 길항제 화합물은 타정 전에 블렌드로 혼입되거나 매트릭스의 외부 표면에 제피될 수 있다.

더욱 중요한 양태에서, 니코틴산 및 매트릭스-형성 물질은 배합되고 타정되어 서방성 코어를 형성하고, DP 길항제 화합물은 하나 이상의 제피제와 배합되고 코어의 외부 표면에 제피된다.

임의로 HMG Co-A 리덕타제 억제제, 예를 들어, 심바스타틴으로 추가 제피된, 상기 정제가 더욱더 중요하다. 따라서, 이러한 특정 양태는 세가지 활성 성분, 섭취시에 실질적으로 방출되는, HMG Co-A 리덕타제 억제제 및 DP 길항제, 및 상기와 같이 장기간에 걸쳐 방출될 수 있는 니코틴산을 함유한다.

본 발명에 따른 서방성 정제에 대표적인 방출 시간 범위는 약 1시간 내지 길게는 약 48시간, 바람직하게는 약 4 내지 약 24시간, 더욱 바람직하게는 약 8 내지 약 16시간의 범위이다.

경질 젤라틴 캅셀제는 경구용 다른 고체 투여 형태를 구성한다. 이러한 캅셀제는 유사하게는 상기와 같은 담체 물질과 혼합된 활성 성분을 포함한다. 연질 젤라틴 캅셀제는 수혼화성 용매(예: 프로필렌 글리콜, PEG 및 에탄올), 또는 오일(예: 땅콩 오일, 액상 파라핀 또는 올리브유)와 혼합된 활성 성분을 포함한다.

수성 현탁제는 또한, 수성 현탁제의 제조에 적합한 부형제와 혼합된 활성물질을 함유하는 것으로 고려된다. 이러한 부형제는 현탁제, 예를 들어, 나트륨 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 나트륨 알기네이트, 폴리비닐피롤리돈, 트라가칸트 및 아카시아; 분산제 또는 습윤제, 예를 들어, 레시틴; 방부제, 예를 들어, 에틸 또는 n-프로필 파라-하이드록시벤조에이트, 착색제, 방향제, 감미제 등을 포함한다.

물을 첨가하여 수성 현탁제의 제조에 적합한 분산성 산제 및 과립제는 활성 성분을 분산제 또는 습윤제, 현탁제 및 하나 이상의 방부제와 혼합하여 제공한다. 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제는 이미 위에 언급된 것으로 예시된다.

시럽 및 엘릭시르가 또한 제형화될 수 있다.

특히 중요한 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 및 DP 수용체 길항제로 이루어진 서방성 정제이다.

특히 중요한 다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, DP 수용체 길항제 및 HMG Co-A 리덕타제 억제제로 이루어진 서방성 정제이다.

더욱 특히 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산, DP 수용체 길항제 및 심바스타틴으로 이루어진 서방성 정제이다.

특히 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산, 및 화합물 A 내지 AJ로 이루어진 그룹으로부터 선택된 DP 수용체 길항제로 이루어진 서방성 정제이다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 및 화합물 A, B, D, E, X, AA, AF, AG, AH, AI 및 AJ로 이루어진 그룹으로부터 선택된 DP 길항제 화합물을 포함한다.

특히 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 및 DP 길항제 화합물 A를 포함한다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 및 DP 길항제 화합물 B를 포함한다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합 된, 니코틴산 및 DP 길항제 화합물 D를 포함한다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 및 DP 길항제 화합물 E를 포함한다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 및 DP 길항제 화합물 X를 포함한다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 및 DP 길항제 화합물 AA를 포함한다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 및 DP 길항제 화합물 AF를 포함한다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 및 DP 길항제 화합물 AG를 포함한다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 및 DP 길항제 화합물 AH를 포함한다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 및 DP 길항제 화합물 AI를 포함한다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산 및 DP 길항제 화합물 AJ를 포함한다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산, 상기 DP 길항제 화합물 및 심바스타틴 중의 하나로 이루어진다.

더욱 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합 된, 니코틴산, 화합물 A 내지 AJ로 이루어진 그룹으로부터 선택된 DP 수용체 길항제 및 심바스타틴을 포함하는 서방성 정제이다.

더욱 특히 중요한 또다른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체와 배합된, 니코틴산, 화합물 A, B, D, E, X, AA, AF, AG, AH, AI 및 AJ으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 DP 수용체 길항제 및 심바스타틴을 포함하는 서방성 정제에 관한 것이다.

"조성물"이란 용어는 또한, 상기 약제학적 조성물을 포함하는 이외에, 둘 이상의 성분, 활성제 또는 부형제의 배합, 복합체 형성 또는 응집으로부터, 또는 하나 이상의 성분의 해리로부터, 또는 하나 이상의 성분의 다른 종류의 반응 또는 상호작용으로부터 직접적으로 또는 간접적으로 초래되는 생성물을 포함한다. 따라서, 본 발명의 약제학적 조성물은 화합물, 추가 활성 성분(들) 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 혼합하거나 달리 배합하여 제조된 조성물을 포함한다.

본 발명의 다른 측면은 약제의 제조에서 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제 및 DP 길항제의 용도에 관한 것이다. 이러한 약제는 본원에 기술된 용도를 갖는다.

특히, 본 발명의 다른 측면은 약제의 제조에서, 니코틴산 또는 이의 염 또는 용매화물, 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제, DP 길항제 및 HMG Co-A 리덕타제 억제제(예: 심바스타틴)의 용도에 관한 것이다. 이 약제는 본원에 기술된 용도를 갖는다.

기준 니코틴산 수용체 효능제인 니코틴산 이외에, 많은 니코틴산 수용체 효 능제가 기술되어 있다. 다음 공보에는 니코틴산 수용체 효능제인 화합물이 기술되어 있다:

Lorenzen, A. et al. Molecular Pharmacology 59: 349-357 (2001),

Lorenzen, A. et al. Biochemical Pharmacology 64: 645-648 (2002),

Soga, T. et al. Biochemical and Biophysical Research Comm. 303: 364-369 (2003),

Tunaru, S. et al. Nature Medicine 9: 352-355 (2003),

Wise, A. et al. Journal of Biological Chemistry 278: 9869-9874 (2003), 및

Van Herk, T. et al Journal of Medicinal Chemistry 46: 3945-3951 (2003).

문헌[참조: van Herk 등]에 기술된 것과 같은 니코틴산 수용체에 대한 부분적 효능제가 본 발명의 조성물 및 치료 방법에 포함됨을 주목한다.

또한, 니코틴산 수용체는 문헌에서 확인되고 특징화되어 있다[참조: 2002년 10월 24일자로 공개된 WO 02/084298A2 및 Soga, T. et al., Tunaru, S. et al. and Wise, A, et al.(위에 인용)].

많은 DP 수용체 길항제 화합물이 공개되고 유용하며 본 발명의 방법에 포함되어 있다. 예를 들어, DP 수용체 길항제는 2001년 10월 25일자로 공개된 WO 01/79169, 2003년 5월 2일자로 공개된 EP 제1305286호, 2002년 11월 28일자로 공개된 WO 02/094830 및 2003년 7월 31일자로 공개된 WO 03/062200에 따라서 수득할 수 있다. 화합물 AB는 2001년 9월 13일자로 공개된 WO 01/66520A1에 기재된 설명에 따라서 합성할 수 있으며; 화합물 AC는 2003년 3월 20일자로 공개된 WO 03/022814A1에 기재된 설명에 따라서 합성할 수 있으며; 화합물 AD 및 AE는 2003년 9월 25일자로 공개된 WO 03/078409에 기재된 설명에 따라서 합성할 수 있다. 본 발명에 사용된 다른 대표적 DP 길항제 화합물은 아래에 제공된 예에 따라서 합성할 수 있다.

실시예 1

[5-[(4- 클로로페닐 ) 티오 ]-4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2 -b]인돌리진-6-일]아세트산(화합물 G)

단계 1: 4- 클로로니코틴알데히드

표제 화합물은 문헌에 기술된 바와 같이 제조한다[참조: F. Marsais et al., J. Heterocyclic Chem., 25, 81(1988)].

단계 2: 4-( 메틸티오 ) 니코틴알데히드

메탄올(250ml) 중의 NaSMe(9.5g, 135mmol)의 용액에 메탄올(250ml) 중의 단계 1의 4-클로로니코틴알데히드(13.5g, 94.4mmol)를 첨가한다. 반응 혼합물은 60℃에서 15분동안 유지시킨다. 반응 혼합물을 염화암모늄 및 에틸 아세테이트에 붓는다. 유기 상을 분리시키고, 물로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시킨다. 다 음에, 화합물을 실리카 겔 상에서 헥산 중의 50% 에틸 아세테이트를 사용하여 정제시켜 표제 화합물을 수득한다.

단계 3: 메틸 (2Z)-2- 아지도 -3-[4-( 메틸티오 )피리딘-3-일] 프로프 -2- 에노에이트

메탄올(50ml) 중의 4-(메틸티오)니코틴알데히드(4.8g, 31mmol) 및 메틸 아지도아세테이트(9.0g, 78mmol)의 용액을 메탄올 중의 25% NaOMe(16.9ml, 78mmol)의 용액에 -12℃에서 첨가한다. 내부 온도를 모니터하고, 30분 첨가하는 동안 -10 내지 -12℃로 유지시킨다. 다음에, 수득된 혼합물을 빙욕 중에 수시간동안 교반시킨 후, 밤새 냉실에서 빙욕 중에 교반시킨다. 다음에, 현탁액을 얼음 및 염화암모늄의 혼합물에 붓고, 슬러리를 교반시킨 지 10분 후에 여과시킨다. 생성물을 냉수로 세척한 후, 진공하에 건조시켜 표제 화합물을 베이지색 고체(7.4g)로서 수득하며, 이는 약간의 염을 함유한다. 다음에, 화합물을 실리카 겔 상에서 에틸 아세테이트를 사용하여 정제시킨다.

단계 4: 메틸 4-( 메틸티오 )-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -2- 카복실레이트

크실렌(16ml) 중의 단계 3의 화합물((0.40g, 1.6mmol)의 현탁액을 140℃로 서서히 가열한다. 140℃에서 15분 후에, 황색 용액을 실온으로 냉각시킨다. 질소 형성에 기인하는 발열의 가능성 때문에 조심해야 한다. 다음에, 현탁액을 0℃로 냉각시키고, 여과시키고, 크실렌으로 세척하여 표제 화합물을 수득한다.

단계 5: 에틸 4-( 메틸티오 )-6-옥소-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -7- 카복실레이트

DMF(20ml) 중의 단계 4의 화합물(0.35g, 1.6mmol)의 용액에 0℃에서 수소화 나트륨(1.2당량)을 첨가한다. 5분 후에, nBu₄NI(0.10g) 및 에틸 4-브로모부티레이트(0.40ml)를 첨가한다. 실온에서 1시간 후, 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 및 에틸 아세테이트에 붓는다. 유기 상을 분리시키고, 물로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시킨다. 증발시킨 후, 조 생성물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시킨다. 다음에, 비스 에스테르를 THF(7.0ml)에 용해시키고, 칼륨 3급-부톡사이드의 THF 용액 1.06M(2.2ml)을 0℃에서 첨가한다. 1시간 후 실온에서, 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 및 에틸 아세테이트에 붓는다. 유기 상을 분리시키고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압하에 증발시켜 표제 화합물을 에틸 및 메틸 에스테르의 혼합물로서 수득한다.

단계 6: 4-( 메틸티오 )-8,9- 디하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6(7H)-온

단계 5의 화합물(0.32g)에 에탄올(8.0ml) 및 진한 염산(2.0ml)을 첨가한다. 수득된 현탁액을 5시간동안 환류시킨다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 탄산나트륨 사이에서 분배시킨다. 유기 상을 분리시키고, 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.

단계 7: 에틸 (2E, 2Z)-[4-( 메틸티오 )-8,9- 디하이도피리도[3,2-b]인돌리진 -6(7H)- 일리덴 ] 에타노에이트

트리에틸 포스포노아세테이트(0.45g, 2.17mmol)의 DMF 용액(12mL)에 80% 수소화나트륨(0.06g, 2.00mmol) 및 단계 6의 화합물(0.22g, 1.00mmol)을 첨가한다. 4시간 후에 55℃에서, 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 및 에틸 아세테이트에 붓는 다. 유기 상을 분리시키고, 감압하에 증발시킨다. 조 생성물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시켜 표제 화합물을 수득한다.

단계 8: 에틸 [4-( 메틸티오 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세테이트

단계 7의 화합물을 용해용 열을 사용하여 메탄올-THF에 용해시킨다. 이전에 냉각된 용액에 실온에서 산화백금을 첨가하고, 수득된 혼합물을 18시간동안 수소 대기압하에 유지시킨다. 반응 혼합물을 셀라이트 상에서 메틸렌 클로라이드를 사용하여 조심해서 여과시킨다. 여액을 감압하에 증발시켜 표제 화합물을 수득한다. 또는, 단계 7의 화합물을 에틸 아세테이트 중의 수산화납으로 40psi의 H₂에서 18시간동안 수소화시킬 수 있다.

단계 9: 에틸 [4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세테이트

메탄올(3.0ml) 중의 단계 8의 화합물(0.08g, 0.27mmol)에 Na₂WO₄(0.10g) 및 30% 과산화수소(600μL)을 첨가한다. 1시간 후, 반응 혼합물을 물과 에틸 아세테이트 사이에서 분배시킨다. 유기 상을 물로 세척하고, 분리시키고, 증발시킨다. 표제 화합물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시킨다.

단계 10: 에틸 [5-[(4- 클로로페닐 ) 티오 ]-4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세테이트

4,4'-디클로로디페닐 디설파이드(0.24g)의 1,2-디클로로에탄 용액(2.0ml)에 SO₂Cl₂(50μL)을 첨가한다. DMF(2.0ml) 중의 단계 9의 화합물(0.05g)에 이전 혼합물(약 180μL)을 첨가한다. 반응시킴에 이어서 ¹H NMR을 수행하고, 출발 물질이 남지 않을 때까지, 실온에서 유지시킨다. 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 및 에틸 아세테이트에 붓는다. 유기 상을 분리시키고, 증발시키고, 표제 화합물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시킨다.

단계 11: [5-[(4-클로로페닐)티오]-4-(메틸설포닐)-6,7,8,9-테트라하이드로피리도 [3,2-b]인돌리진 -6-일]아세트산

THF-메탄올의 1/1 혼합물에 용해된 단계 10의 화합물에 1N 수산화나트륨을 첨가한다. 18시간 후 실온에서, 반응 혼합물을 포화 염화암모늄과 에틸 아세테이트 사이에서 분배시킨다. 유기 상을 분리시키고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.

¹H NMR (500 MHz, 아세톤-d₆) δ11.00 (bs, 1H), 8.60 (d, 1H), 7. 80 (d, 1H), 7.20 (d, 2H), 7.00 (d, 2H), 4.65 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.35 (s, 3H), 2.80 to 2.10 (m, 6H).

실시예 2

[5-[(4- 클로로페닐 ) 티오 ]-4-( 메틸티오 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세트산(화합물 H)

표제 화합물은 실시예 1, 단계 8의 화합물로부터 실시예 1, 단계 10 및 11에 기술된 것과 유사한 방식으로 제조할 수 있다.

m/z 418

실시예 3

[5-[(3,4- 디클로로페닐 ) 티오 ]-4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세트산(화합물 I)

표제 화합물은 실시예 1에 기술된 바와 같이 단계 10에서 비스(3,4-디클로로페닐)디설파이드를 사용하여 제조한다.

¹H NMR (500 MHz, 아세톤-d₆) δ8. 55 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.15 (m, 1H), 3. 80 (m, 1H), 3.40 (s, 3H), 2.80 to 2.10 (m, 6H). m/z 484.

에난티오머는 Chiralecel OD 컬럼 25 cm x 20 mm 상에서 헥산 중의 30% 이소프로판올, 17% 에탄올, 0.2% 아세트산, 8 ml/분의 유속을 사용하여 분리시킨다. 이의 순도는 Chiralecel OD 컬럼 25 cm x 4.6 mm 상에서 헥산 중의 35% 이소프로판 올 0.2% 아세트산, 1.0 ml/분의 유속을 사용하여 입증된다. 더욱 이동성인 에난티오머 Tr= 9.7분, 덜 이동성인 에난티오머 Tr= 11.1분.

실시예 4

[5-(4- 클로로벤조일 )-4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세트산(화합물 J)

단계 1: 에틸 [5-(4- 클로로벤조일 )-4-( 메틸티오 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진-6-일]아세테이트

1,2-디클로로에탄(6.0ml) 중의 4-클로로벤조일 클로라이드(0.30g, 1.7mmol)의 용액에 염화알루미늄(0.24g, 1.8mmol)을 첨가한다. 5분 후에, 1,2-디클로로에탄(6.0ml) 중의 실시예 1, 단계 8로부터의 에틸 [4-(메틸티오)-6,7,8,9-테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진-6-일]아세테이트(0.15g, 0.47mmol)의 용액을 이전 혼합물에 첨가한다. 4시간 후, 80℃에서, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 사이에서 분배시킨다. 유기 상을 분리시키고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시킨다. 표제 화합물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시킨다.

단계 2: 에틸 [5-(4- 클로로벤조일 )-4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세테이트

메탄올(5.0ml) 중의 에틸 [5-(4-클로로벤조일)-4-(메틸티오)-6,7,8,9-테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진-6-일]아세테이트(0.12g, 0.27mmol)의 용액에 Na₂WO₄(0.1g) 및 30% 과산화수소(300μL)를 첨가한다. 반응 혼합물을 55℃에서 1시간동안 교반시킨다. 다음에, 반응 혼합물을 물과 에틸 아세테이트 사이에서 분배시킨다. 유기 상을 물로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시킨다. 표제 화합물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시킨다.

단계 3: [5-(4- 클로로벤조일 )-4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세트산

에틸 [5-(4-클로로벤조일)-4-(메틸설포닐)-6,7,8,9-테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진-6-일]아세테이트를 실시예 1, 단계 11에 기술된 바와 같이 처리하여 표제 화합물을 수득한다.

¹H NMR (500 MHz, 아세톤-d₆) δ8.55 (d, 1H), 7.90 (d, 2H), 7.65 (d, 1H), 7.45 (d, 2H), 4.55 (m, 1H), 4.25 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 3.20 (s, 3H), 2.05 to 3.00 (m, 6H). m/z 446.

실시예 5

[5-(4- 브로모페닐 ) 티오 ]-4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌 리진-6-일]아세트산(화합물 K)

표제 화합물을 실시예 1에 기술된 바와 같이 4,4'-디브로모디페닐 디설파이드를 사용하여 제조한다.

¹H NMR (500 MHz, 아세톤-d₆) δ8.60 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.35 (d, 2H), 7.00 (d, 2H), 4.65 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 3. 80 (m, 1H), 3.35 (s, 3H), 2.80 to 2.10 (m, 6H).

실시예 6(방법-1)

[9-[(3,4- 디클로로페닐 ) 티오 ]-1-( 메틸설포닐 )-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-일]아세트산(화합물 L)

단계 1: 2-( 메틸티오 ) 니코틴알데히드

표제 화합물은 2-브로모니코틴알데히드[참조: A. Numata Synthesis 1999 p.306]로부터 실시예 1, 단계 2에 기술된 바와 같이 제조하되, 단 용액을 55℃에서 2시간동안 처리한다.

단계 2: 메틸 (2Z)-2- 아지도 -3-[2-( 메틸티오 )피리딘-3-일] 프로프 -2- 에노에이트

표제 화합물은 실시예 1, 단계 3에 기술된 바와 같이 제조한다.

단계 3: 메틸 4-( 메틸티오 )-1H- 피롤로[3,2-c]피리딘 -2- 카복실레이트

메시틸렌(50ml) 중의 메틸 (2Z)-2-아지도-3-[2-(메틸티오)피리딘-3-일]프로프-2-에노에이트(1.00g, 4.00mmol)의 용액을 160℃에서 1시간동안 가열한다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음에, 0℃로 냉각시키고, 침전물을 여과시키고, 차가운 메시틸렌으로 세척하여 표제 화합물을 수득한다.

단계 4: 메틸 1-( 메틸티오 )-8-옥소-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -7- 카복실레이트

THF(3ml)-톨루엔(12.0ml) 중의 메틸 4-(메틸티오)-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-2-카복실레이트(0.30g, 1.35mmol)의 현탁액에 칼륨 3급-부톡사이드(1.42ml/1.41mmol) 및 메틸 아크릴레이트(30μL)의 1.06M THF 용액을 첨가한다. 수득된 혼합물을 80℃에서 18시간동안 가열한다. 혼합물을 에틸 아세테이트와 염화암모늄 사이에서 분배시키고, 셀라이트를 통해 여과시킨다. 유기 상을 분리시키고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시켜 표제 화합물을 수득한다.

단계 5: 1-( 메틸티오 )-6,7- 디하이드로 -8H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-온

메틸 1-(메틸티오)-8-옥소-7,8-디하이드로-6H-피리도[3,4-b]피롤리진-7-카복실레이트를 실시예 1, 단계 6에 기술된 바와 같이 표제 화합물로 전환시킨다.

단계 6: 메틸 [8- 하이드록시 -1-( 메틸티오 )-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-일]아세테이트

THF(3.0ml) 중의 1-(메틸티오)-6,7-디하이드로-8H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-온(0.15g, 0.68mmol), 메틸 브로모아세테이트(0.34ml), Zn-Cu(0.226g)의 혼합물을 2시간동안 초음파처리한다. 다음에, 혼합물을 60℃에서 5분동안, 반응이 완결될 때까지 가열한다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 염화암모늄 사이에서 분배시킨다. 유기 상을 분리시키고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압하에 증발시켜 표제 화합물을 수득한다. 화합물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시킨다.

단계 7: 메틸 [1-( 메틸티오 )-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-일]아세 테이트

시안화메틸(3.2ml) 중의 요드화나트륨(0.300g)에 TMSCl(0.266ml)을 첨가한다. 이 혼합물을 수욕중에서, 시안화메틸(1.5ml) 중의 메틸 [8-하이드록시-1-(메틸티오)-7,8-디하이드로-6H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-일]아세테이트(0.15g, 0.515mmol)의 현탁액에 첨가한다. 0.5시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 사이에서 분배시킨다. 유기 상을 분리시키고, 티오황산나트륨으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 증발시킨다. 표제 화합물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시킨다.

단계 8: 메틸 [1-(메틸설포닐)-7,8-디하이드로-6H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-일]아 세테이트

메틸 [1-(메틸티오)-7,8-디하이드로-6H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-일]아세테이트를 실시예 1, 단계 9에 기술된 바와 같이 표제 화합물로 전환시킨다.

단계 9: [9-(3,4- 디클로로페닐 ) 티오 ]-1-( 메틸설포닐 )-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-일]아세트산

메틸 [1-(메틸설포닐)-7,8-디하이드로-6H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-일]아세테이트를 실시예 1, 단계 10 및 11에 기술된 바와 같이, 단계 10에서 비스 (3,4-디클로로페닐)디설파이드를 사용하여 표제 화합물로 전환시킨다.

¹H NMR (500 MHz, 아세톤-d₆) δ8.35 (d, 1H) 7.80 (d, 1H), 7.35 (d, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.95 (d, 1H), 4.55 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 3.90 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 3.15 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 2. 80 (m, 1H), 2.50 (m, 1H).

실시예 6(방법-2)

[9-[(3,4- 디클로로페닐 ) 티오 ]-1-( 메틸설포닐 )-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-일]아세트산

단계 1: 1-( 메틸티오 )-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-올

에탄올(10ml)-THF(1ml) 중의 실시예 6(방법-1), 단계 5로부터의 1-(메틸티오)-6,7-디하이드로-8H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-온(0.55g, 2.2mmol)의 현탁액에 수소화붕소나트륨(0.10g, 2.6mmol)을 0℃에서 첨가한다. 30분 후 실온에서, 반응물 아세톤을 첨가하여 켄칭시킨다. 용매를 감압하에 증발시키고, 에틸 아세테이트 및 물을 잔사에 첨가한다. 유기 상을 분리시키고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 증발시킨다. 표제 화합물을 에틸 아세테이트/헥산으로 세척하고, 여과시킨다.

단계 2: 디메틸 2-[1-(메틸티오)-7,8-디하이드로-6H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-일] 말로네이트

THF(10ml) 중의 1-(메틸티오)-7,8-디하이드로-6H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-올(0.54g, 2.1mmol)의 현탁액에 -78℃에서, THF 중의 1M NaHMDS(2.35ml, 2.4mmol) 및 디페닐 클로로포스페이트(0.53ml, 2.6mmol)를 첨가한다. 30분 후, THF 중의 디메틸 말로네이트(0.73ml, 6.4mmol) 및 1M NaHMDS(6.8ml, 6.8mmol)을 첨가한다. 반응 혼합물을 0℃로, 다음에 실온이 되게한다. 다음에, 혼합물을 에틸 아세테이트와 염화암모늄 사이에서 분배시킨다. 유기 상을 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고 증발시킨다. 표제 화합물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시킨다.

단계 3: 메틸 [1-( 메틸티오 )-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-일]아세 테이트

디메틸 2-[1-(메틸티오)-7,8-디하이드로-6H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-일]말로네이트(0.59g, 2.17mmol) 및 DMSO(4ml)의 혼합물에 물(0.45ml) 중의 염화나트륨(0.45g)을 첨가한다. 150℃에서 18시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 물 사이에서 분배시킨다. 유기 상을 분리시키고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시킨다. 다음에, 표제 화합물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시킨다.

단계 4: [9-(3,4-디클로로페닐)티오]-1-(메틸설포닐)-7,8-디하이드로-6H-피리도 [3,4-b]피롤리진 -8-일]아세트산

표제 화합물은 메틸 [1-(메틸티오)-7,8-디하이드로-6H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-일]아세테이트로부터 실시예 6(방법-1), 단계 8 내지 9에 기술된 바와 같이 수득한다.

실시예 7

[10-[(3,4- 디클로로페닐 ) 설파닐 ]-1-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,4-b]인돌리진 -9-일]아세트산(화합물 M)

단계 1: 에틸 [1-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,4-b]인돌리진 -9-일]아세테이트

표제 화합물은 실시예 6, 단계 3으로부터 실시예 1, 단계 5 내지 9에 기술된 바와 같이 제조한다.

단계 2: [10-[(3,4- 디클로로페닐 ) 설파닐 ]-1-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,4-b]인돌리진 -9-일]아세트산

단계 1의 생성물은 실시예 1, 단계 10 내지 11과 동일한 방식으로, 단계 10에서 비스 (3,4-디클로로페닐)디설파이드를 사용하여 표제 화합물로 전환시킨다.

MS M+1=485

실시예 8

(4-( 메틸설포닐 )-5-{[4-( 트리플루오로메틸 ) 페닐 ] 티오 }-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일)아세트산(화합물 N)

표제 화합물은 실시예 1에 기술된 바와 같이 비스[4-(트리플루오로메틸)페닐]디설파이드를 사용하여 제조한다.

¹H NMR (500 MHz, 아세톤-d₆) δ8.55 (d, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.45 (d, 2H), 7.15 (d, 2H), 4.55 (m, 1H), 4.15 (m, 1H), 3. 80 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 2.80 to 2.10 (m, 6H).

m/z 513(M+1)

실시예 9

[5-[(2- 클로로 -4- 플루오로페닐 ) 티오 ]-4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세트산(화합물 O)

표제 화합물은 실시예 1에 기술된 바와 같이 비스(2-클로로-4-플루오로페닐)디설파이드를 사용하여 제조한다.

m/z 469(M+1)

실시예 10

[4-( 메틸설포닐 )-5-(2- 나프틸티오 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세트산(화합물 P)

표제 화합물은 실시예 1에 기술된 바와 같이 디(2-나프틸)디설파이드를 사용하여 제조한다.

m/z 467(M+1)

실시예 11

[5-[(2,3- 디클로로페닐 ) 티오 ]-4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세트산(화합물 Q)

표제 화합물은 실시예 1에 기술된 바와 같이 비스(2,3-디클로로페닐)디설파이드를 사용하여 제조한다.

¹H NMR (500 MHz, 아세톤-d₆) δ8.85 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.30 (d, 1H), 7.00 (t, 1H), 6.60 (d, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 3.40 (s, 3H), 2.80 to 2.10 (m, 6H).

실시예 12

[5-[(4- 메틸페닐 ) 티오 ]-4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세트산(화합물 R)

표제 화합물은 실시예 1에 기술된 바와 같이 p-톨릴 디설파이드를 사용하여 제조한다.

¹H NMR (500 MHz, 아세톤-d₆) δ8.55 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 6.95 (m, 4H), 4.60 (m, 1H), 4.15 (m, 1H), 3. 80 (m, 1H), 3.35 (s, 3H), 2.80 to 2.10 (m, 6H).

실시예 13

[4-( 메틸설포닐 )-5-( 페닐티오 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세트산(화합물 S)

표제 화합물은 실시예 1에 기술된 바와 같이 디페닐 디설파이드를 사용하여 제조한다.

¹H NMR (500 MHz, 아세톤-d₆) δ8.55 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.15 to 6.90 (m, 5H), 4.60 (m, 1H), 4.15 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.30 (s, 3H), 2.80 to 2.10 (m, 6H).

실시예 14

[5-[(2,4- 디클로로페닐 ) 티오 ]-4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[3,2-b]인돌리진 -6-일]아세트산(화합물 T)

표제 화합물은 실시예 1에 기술된 바와 같이 비스(2,4-디클로로페닐)디설파이드를 사용하여 제조한다. 디설파이드는 2,4-디클로로티오페닐로부터 에테르 중의 Br₂을 사용하여 제조한다.

¹H NMR (500 MHz, 아세톤-d₆) δ8.55 (d, lH), 7.85 (d, 1H), 7. 35 (s, 1H), 7.00 (d, 1H), 6.65 (d, 1H), 4.55 (m, 1H), 4.15 (m, 1H), 3.80 (m, 1H), 3. 35 (s, 3H), 2.80 to 2.10 (m, 6H).

실시예 15

[5-[(4- 클로로페닐 ) 티오 ]-4-( 메틸설포닐 )-6,7,8,9- 테트라하이드로피리도[4,3-b]인돌리진 -6-일]아세트산(화합물 U)

표제 화합물은 실시예 1에 기술된 바와 같이 3-클로로니코틴알데히드[참조: Heterocycles p. 151, 1993]로부터 제조하되, 단 말단 폐환은 아지드를 데칼린에 환류 첨가하여 수행한다.

¹H NMR (500 MHz, 아세톤-d₆) δ9.20 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 7.20 (d, 2H), 7.00 (d, 2H), 4.70 (m, 1H), 4.30 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.35 (s, 3H), 2. 80 to 2.10 (m, 6H).

실시예 16

[9-[(4- 클로로페닐 ) 티오 ]-1-( 메틸설포닐 )-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-일]아세트산(화합물 V)

표제 화합물은 실시예 6(방법 1), 단계 8의 생성물로부터, 실시예 1, 단계 10 및 11에 개략된 방법에 기술된 바와 같이, 단계 10에서 비스(4-클로로페닐)디설 파이드를 사용하여 제조한다.

¹H NMR (500 MHz, 아세톤-d₆) δ8. 25-8.3 (m, 1H), 7.71-7. 75 (m, 1H), 7.12-7. 17 (m, 2H), 6.97-7. 04 (m, 2H), 4.45-4. 51 (m, 1H), 4.32-4. 39 (m, 1H), 3.73-3. 80 (m, 1H), 3.29 (s, 3H), 3.15-3. 21 (m, 1H), 2.99- 3. 08 (m, 1H), 2.66-2. 73 (m, 1H), 2. 46-2. 54 (m, 1H).

실시예 17

(-)-[(4- 클로로벤질 )-7- 플루오로 -5- 메탄설포닐 )-1,2,3,4- 테트라하이드로사이클로펜타[b]인돌 -3-일]아세트산(화합물 E)

단계 1: (+/-)-(7- 플루오로 -1,2,3,4- 테트라하이드로사이클로펜타[b]인돌 -3-일)아세트산 에틸 에스테르

벤젠 100ml 중의 4-플루오로-2-요오도아닐린(10.00g), 에틸 2-(2-옥소사이클로펜틸)아세테이트(6.57g) 및 p-톨루엔설폰산(121mg)의 용액을 딘-스타크(Dean-Stark) 트랩을 사용하여 질소 대기하에 24시간동안 환류시킨다. 이 시간 후, 벤젠을 증류시켜 제거한다. 다음에, DMF 60ml를 첨가하고, 용액을 탈기시킨 후, 후니 그(Hunig) 염기 19ml, 다음에 Pd(OAc)₂ 405mg을 연속해서 첨가한다. 용액을 115℃로 3시간동안 가열한 후, 실온으로 냉각시킨다. 반응을 켄칭시키기 위해서, 1N 염산 300ml 및 에틸 아세테이트 200ml를 첨가하고, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과시킨다. 상을 분리시키고, 산성 상을 에틸 아세테이트 200ml로 2회 추출시킨다. 유기 층을 합하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 셀라이트를 통해 여과시키고, 농축시킨다. 조 물질을 100% 톨루엔으로 용출시키는 섬광 크로마토그래피함으로써 추가로 정제시켜 표제 화합물을 수득한다.

'H NMR (아세톤-d₆) δ9.76 (br s, 1H), 7.34 (dd, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.78 (td, 1H), 4.14 (q, 2H), 3.57 (m, 1H), 2.85-2. 55 (m, 5H), 2.15 (m, 1h), 1.22 (t, 3H).

단계 2: (+/-)-(7- 플루오로 -1,2,3,4- 테트라하이드로사이클로펜타[b]인돌 -3-일)아세 트산

테트라하이드로푸란(THF) 14ml 중의 단계 1로부터의 에스테르 1.24g의 용액에 실온에서, 메탄올 7ml, 다음에 2N 수산화나트륨 7ml를 첨가한다. 2.5시간 후, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트/1N 염산을 함유하는 분리 깔때기에 붓는다. 상을 분리시키고, 산성 상을 에틸 아세테이트로 2회 추출시킨다. 유기 층을 합하고, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발 건조시켜 조 오일을 수 득하고, 이는 다음 단계에서 그대로 사용한다(> 90% 순도).

'H NMR (아세톤-d₆) δ10.90 (br s, 1H), 9.77 (br s, 1H), 7.34 (dd, 1H), 7.04 (dd, 1H), 6.79 (td, 1H), 3.56 (m, 1H), 2. 90-2. 50 (m, 5H), 2.16 (m, 1H). MS (-APCI) m/z 232.2 (M-H)^-.

단계 3: (+/-)-(5- 브로모 -7- 플루오로 -1,2,3,4- 테트라하이드로사이클로펜타[b]인돌 -3-일)아세트산

피리딘 30ml 중의 단계 2로부터의 산(> 90% 순도) 2.20g의 용액에, 삼브롬화피리디늄(90% 순도) 6.85g을 -40℃에서 첨가한다. 현탁액을 10분동안 0℃에서 교반시키고, 실온으로 30분동안 가온시킨다. 다음에, 용매를 가열하지 않고, 고 진공하에 제거한다. 조 물질을 AcOH 40ml에 용해시키고, 아연 분말 2.88g을 소량씩 차가운 용액에 0℃에서 첨가한다. 현탁액을 15분동안 15℃에서 교반시키고, 실온으로 추가로 15분동안 가온시킨다. 이 시점에, 반응 혼합물을 1N 염산을 첨가하여 켄칭시키고, 이 혼합물을 염수/에틸 아세테이트를 함유하는 분리 깔때기에 붓는다. 층을 분리시키고, 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시킨다. 이 물질은 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용한다.

'H NMR (아세톤-d₆) δ10.77 (br s, 1H), 9.84 (br s, 1H), 7.09 (m, 2H), 3.60 (m, 1H), 2.95-2. 65 (m, 4H), 2.56 (dd, 1H), 2.19 (m, 1H).

단계 4: (+/-)-[5- 브로모 -4-(4- 클로로벤질 )-7- 플루오로 -1,2,3,4- 테트라하이드로사이클로펜타[b]인돌 -3-일]아세트산

THF 10ml 중의 단계 3으로부터의 산 2.13g의 용액에, 에테르 중의 디아조메탄의 용액을, 산의 완전한 소비가 TLC로 모니터될 때까지, 과량으로 첨가한다. 다음에, 용매를 진공하에 제거한다. DMF 20ml 중의 이렇게 형성된 조 메틸 에스테르의 용액에, 수소화나트륨 현탁액(오일 중의 60%) 539mg을 -78℃에서 첨가한다. 현탁액을 10분동안 0℃에서 교반시키고, 다시 -78℃로 냉각시키고, 4-클로로벤질 브로마이드 1.70g을 사용하여 처리한다. 5분 후에, 온도를 0℃로 가온시키고, 혼합물을 20분동안 교반시킨다. 이 시점에, 반응을 에틸 아세테이트 2ml를 첨가하여 켄칭시키고, 이 혼합물을 1N 염산/에틸 아세테이트를 함유하는 분리 깔때기로 붓는다. 층을 분리시키고, 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시킨다. 알킬화된 물질은 단계 2에 기술된 방법을 사용하여 가수분해시킨다. 조 물질은 에틸 아세테이트/헥산을 사용하여 연마시킴으로써 추가로 정제시켜 표제 화합물을 수득한다.

'H NMR (아세톤-d₆) δ10.70 (br s, 1H), 7.31 (d, 2H), 7.18 (d, 1H), 7.06 (d, 1H), 6.92 (d, 2H), 5.90 (d, 1H), 5.74 (d, 1H), 3.61 (m, 1H), 3.00-2. 70 (m, 3H), 2.65 (dd, 1H), 2.39 (dd, 1H), 2.26 (m, 1H). MS (- APCI) m/z 436.3, 434.5 (M-H)^-.

단계 5: (+)-[5- 브로모 -4-(4- 클로로벤질 )-7- 플루오로 -1,2,3,4- 테트라하이드로사이클로펜타[b]인돌 -3-일]아세트산

에탄올 130ml 중의 단계 4의 산 2.35g의 용액에 80℃에서, (S)-1-(1-나프틸)에틸아민 780μL를 첨가한다. 용액을 실온으로 냉각시키고, 밤새 교반시킨다. 회수된 염(1.7g)을 다시 에탄올 200ml를 사용하여 재결정시킨다. 여과시킨 후, 수득한 백색 고체 염을 1N 염산으로 중화시키고, 생성물을 에틸 아세테이트로 추출시킨다. 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시킨다. 물질은 SiO₂의 패드 상에서 에틸 아세테이트로 용출시킴으로써 여과시켜 표제 에난티오머를 생성시킨다. 두가지 에난티오머의 체류 시간은 각각 7.5분 및 9.4분이다[ChiralPak AD 컬럼, 헥산/2-프로판올/아세트산(95:5:0.1)]. 더욱 극성인 에난티오머는 98% ee이다.

ee = 98%; 체류 시간 = 9.4분[(Chiral AD 컬럼: 250 x 4.6mm, 헥산/2-프로판올/아세트산(75:25:0.1)]; [α]_D ²¹ = +39.2°(c 1.0, 메탄올).

단계 6: (-)-[4-(4- 클로로벤질 )-7- 플루오로 -5-( 메탄설포닐 )-1,2,3,4- 테트라하이드 로사이클로펜타[b]인돌 -3-일]아세트산 및 나트륨염

단계 5로부터의 산(15.4g)을 먼저 디아조메탄으로 에스테르화시킨다. 설포닐화는 이렇게 형성된 에스테르를 N-메틸피롤리디논 중의 메탄설핀산 나트륨염 16.3g 및 CuI(I) 30.2g과 혼합하여 수행한다. 현탁액을 N₂ 유동하에 탈기시키고, 150℃로 가열하고, 3시간동안 교반시킨 다음에, 실온으로 냉각시킨다. 반응을 켄칭시키기 위해서, 에틸 아세테이트 500ml 및 헥산 500ml를 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 용출시킴으로써 SiO₂의 패드를 통해 여과시킨다. 유기 상을 농축시킨다. 조 오일을 에틸 아세테이트로 용해시키고, 물로 3회, 염수로 1회 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시킨다. 조 물질을 에틸 아세테이트중에서 100% 톨루엔 내지 50% 톨루엔의 구배로 용출시키는 섬광 크로마토그래피함으로써 추가로 정제시켜 설폰화 에스테르 14g을 제공하고, 이는 단계 2에 기술된 방법을 사용하여 가수분해시킨다. 표제 화합물은 2회 연속 재결정화시킨 후에 수득한다: 이소프로필 아세테이트/헵탄, 다음에 메틸렌 클로라이드/헥산.

'H NMR (500 MHz 아세톤-d₆) δ10.73 (br s, 1H), 7.57 (d, 2H, J=8. 8 Hz), 7.31 (m, 1H), 7.29 (m, 1H), 6. 84 (d, 2H, J=8. 8 Hz), 6.29 (d, 1H, JAB=17. 8 Hz), 5.79 (d, 1H, J_AB=17. 8 Hz), 3.43 (m, 1H), 2.98 (s, 3H), 2.94 (m, 1H), 2.85-2. 65 (m, 3H), 2.42 (dd, 1H, J1=16. 1 Hz, J2=10. 3 Hz), 2.27 (m, lH). 13C NMR (125 MHz 아세톤-d6) 8 173.0, 156.5 (d, Je237 Hz), 153.9, 139.2, 133.7, 133.3, 130.0 (d, Je8. 9 Hz), 129.6, 128.2, 127.5 (d, JCF=7. 6 Hz), 122.2 (d, J_CF=4. 2 Hz), 112. 3 (d, J_CF=29.4 Hz), 111. 0 (d, J_CF=22.6 Hz), 50.8, 44.7, 38. 6,36. 6,36. 5,23. 3. MS (-APCI) m/z 436.1, 434.1 (M-H)^-.

ee= 97%; 체류 시간 = 15.3분[ChiraCel OD 컬럼: 250 x 4.6 mm, 헥산/2-프로판올/에탄올/아세트산(90:5:5:0.2)]; [α]_D ²¹= -29.3℃(c 1.0, 메탄올). 융점 175.0℃.

나트륨염은 에탄올(100ml) 중의 상기 산 화합물(6.45g, 14.80mmol)을 1N 수산화나트륨 수용액 14.80ml로 처리하여 제조한다. 유기 용매를 진공하에 제거하고, 조 고체를 이소프로필 알콜 1.2L에 환류 용해시킨다. 최종 용적은 용매를 증류시켜 500ml로 감소시킨다. 나트륨염은 실온으로 냉각시켜 결정화시킨다. 결정성 나트륨염을 물에 현탁시키고, 무수 빙욕으로 동결시키고, 고 진공하에 동결건조시켜 표제 화합물을 나트륨염으로서 수득한다.

'H NMR (500 MHz DMSO-d₆) δ7.63 (dd, 1H, Je=8. 5 Hz, J2=2. 6 Hz), 7.47 (dd, 1H, J=9. 7 Hz, J2=2. 6 Hz), 7.33 (d, 2H, J=8. 4 Hz), 6.70 (d, 2H, J=8. 4 Hz), 6.06 (d, 1H, JAB=17. 9 Hz), 5.76 (d, 1H, JAB=17. 9 Hz), 3.29 (m, 1H), 3. 08 (s, 3H), 2.80 (m, 1H), 2.69 (m, 1H), 2.55 (m, 1H), 2.18 (m, 2H), 1.93 (dd, 1H, J₁=14. 4 Hz, J₂=9. 7 Hz).

실시예 17A

(+/-)-[5- 브로모 -4-(4- 클로로벤질 )-7- 플루오로 -1,2,3,4- 테트라하이드로사이클로펜 타[b]인돌 -3-일]아세트산(실시예 17, 단계 4)에 대한 대체 방법

단계 1: (+/-)-7- 플루오로 -1,2,3,4- 테트라하이드로사이클로펜타[b]인돌 -3-일)아세트산 디사이클로헥실아민 ( DCHA ) 염

크실렌 중의 2-브로모-4-플루오로아닐린의 0.526M 용액을 에틸 (2-옥소사이클로펜틸) 아세테이트(1.5당량) 및 황산(0.02당량)과 함께 20시간동안 환류 가열한다. 물은 딘-스타크 장치를 사용하여 공비 제거한다. 반응물은 NMR하고, 20시간 후, 일반적으로 목적하는 이민 중간체로 80 내지 85%가 전환되는 것으로 관찰된다. 반응 혼합물을 1M 중탄산나트륨(0.2용량)으로 15분동안 세척하고, 유기 분획을 증발시킨다. 잔류 시럽을 진공하에 증류시킨다(0.5mm Hg). 잔류 크실렌을 30℃에서 증류시킨 다음에, 과량의 케톤 및 미반응 아닐린을 50 내지 110℃ 범위에서 회수하고; 이민은 110 내지 180℃ 분획에서 83% 순도의 담갈색 투명 액체로서 회수한다.

다음에, 이민 중간체를 칼륨 아세테이트(3당량), 테트라-n-부틸암모늄 클로라이드 1수화물(1당량), 팔라듐 아세테이트(0.03당량) 및 N,N-디메틸아세트아미드의 탈기된 혼합물에 첨가한다(이민의 최종 농도 = 0.365M). 반응 혼합물을 115℃로 5시간동안 가열하고, 실온으로 냉각시킨다. 다음에, 3N 수산화칼륨(3당량)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간동안 교반시킨다. 반응 혼합물을 물(1.0용량)로 희석시키고, 톨루엔으로(3 x 0.75용량) 세척한다. 수성 상을 3N 염산을 사용하여 pH 1로 산성화시키고, 테트라부틸 메틸 에테르로(2 x 0.75용량) 추출한다. 유기 분획을 합쳐서 물(0.75용량)로 세척한다. 투명한 담갈색 용액에 디사이클로헥실아민(1당량)을 첨가하고, 용액을 실온에서 16시간동안 교반시킨다. 염을 여과시 키고, 에틸 아세테이트, 3급-부틸 메틸 에테르로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물을 수득한다. 검정: 94 A%.

1H NMR (500 mHz, CDC13): δ9.24 (s, 1H), 7.16-7. 08 (m, 2H), 6.82 (t, 1H), 6.2 (br, 2H), 3.6-3. 5 (m, 1H), 3.04-2. 97 (m, 2H), 2. 88-2. 70 (m, 3H), 2.66 (dd, 1H), 2. 45-2. 37 (m, 1H), 2.13-2. 05 (m, 2.05), 1.83 (d, 4H), 1.67 (d, 2H), 1.55-1. 43 (m, 4H), 1.33-1. 11 (m, 6H).

단계 2: (+/-)-(5- 브로모 -7- 플루오로 -1,2,3,4- 테트라하이드로사이클로펜타[b]인돌 -3-일)아세트산

디클로로메탄(0.241M 용액) 중의 상기 단계 1로부터의 DCHA염의 슬러리를 -20 내지 -15℃로 냉각시킨다. 피리딘(2당량)을 1회 투입으로 첨가하고, 슬러리에 브롬(2.5당량)을 30 내지 45분에 걸쳐, 온도를 -20 내지 -15℃ 사이로 유지시키면서 적가한다. (브롬의 약 1/3 첨가시에, 반응 혼합물은 점성이며, 효율적인 교반이 필요하다. 최종적으로, 브롬의 1/2의 첨가시에, 혼합물은 다시 "저점성"으로 된다.) 첨가를 완결한 후, 반응 혼합물은 추가로 1시간동안 -15℃에서 숙성된다. 아세트산(3.04당량)을 5분에 걸쳐 첨가하고, 아연 분말(3.04당량)을 소량씩 첨가한다. (아연의 일부는 -15℃에서 첨가하고, 혼합물을 약 5분동안 숙성시키면 확실히 발열이 진행된다(약 -15 내지 -10℃).) 이러한 조작은 아연을 약 30분에 걸쳐 약 5회 투입을 반복한다. 더 이상 발열이 관찰되지 않는 경우, 잔류 아연을 더 빨리 첨가한다. 전체 조작은 약 30 내지 45분 걸린다.

첨가를 완결한 후, 욕조를 실온으로 가온시키고, 1시간동안 숙성시키고, 농축시킨다. 반응 혼합물을 메틸 3급-부틸 에테르(MTBE, 0.8용량)로 스위칭(switching)하고, 10% 아세트산 수용액(0.8용량)을 첨가한다. 혼합물(염, 예를 들어, 피리듐의 결정화)을 실온에서 1시간동안 숙성시키고, 솔카-플록(solka-folc)을 통해 여과시킨다. 솔카-플록 패드를 MTBE(약 0.2용량)으로 세정하고, 여액(이상, MTBE/수성)을 추출기로 옮긴다. 유기 상을 물(0.8용량)로 세척한다. MTBE 추출물을 농축시키고, 이소프로필 알콜(IPA, 0.25용량)로 스위칭하여 화합물을 결정화시킨다. 물(0.25용량)을 첨가하고, 욕조를 1시간동안 숙성시킨다. 추가로 물(0.33용량)을 1시간에 걸쳐 첨가한다. 물 첨가를 완결한 후, 욕조를 추가로 1시간동안 숙성시키고, 여과시키고, 30/70 IPA/물(0.15용량)로 세정한다. 결정화된 브롬산을 오븐내에 45℃에서 건조시킨다.

단계 3: (+/-)-[5- 브로모 -4-(4- 클로로벤질 )-7- 플루오로 -1,2,3,4- 테트라하이드로사이클로펜타[b]인돌 -3-일]아세트산

단계 2의 브롬산을 디메틸아세트아미드(0.416M 용액)에 용해시키고, 탄산세슘(0.25당량)을 1회 부분으로 첨가한다. 슬러리에 1회 부분으로 4-클로로벤질 클로라이드(2.5당량)을 첨가하고, 욕조를 50℃로 20시간동안 가열한다. 욕조를 실온으로 냉각시키고, 수산화나트륨(5N, 4.00당량)을 5분에 걸쳐 첨가한다(온도는 40℃로 상승한다). 반응물을 50℃에 약 3시간동안 숙성시키고, 실온으로 냉각시키고, L 추출기로 옮긴다. 용액을 이소프로필 아세테이트(IPAc, 2용량)로 희석시키고, +15℃로 냉각시킨다. 용액을 5N 염산을 사용하여 pH 약 2로 산성화시킨다. 층을 분리시키고, 유기 층을 물로(2 x 2 용량) 세척한다. IPAc 용액을 농축시키고, IPA(0.8용량)로 스위칭하여 생성물을 결정화시킨다. 물(8L)을 2시간에 걸쳐 첨가하고, 욕조를 여과시켜 표제 화합물을 수득한다. 뱃치는 오븐내에 +40℃에서 24시간동안 건조시킬 수 있다.

실시예 18

(+/-)-{4-[1-(4- 클로로페닐 )에틸]-7- 플루오로 -5- 메탄설포닐 -1,2,3,4- 테트라하이드로사이클로펜타[b]인돌 -3-일}아세트산(화합물 X)

표제 화합물은 2003년 7월 30일자로 공개된 PCT WO 03/062200에 제공된 설명에 따라서 합성한다.

실시예 19

(+/-)-[9-(4- 클로로벤질 )-6- 플루오로 - 메탄설포닐 -2,3,4,9- 테트라하이드로 -1H- 카바졸 -1-일]아세트산(화합물 Y)

표제 화합물은 2003년 7월 30일자로 공개된 PCT WO 03/062200에 제공된 설명 에 따라서 합성한다.

실시예 20

[4-(4- 클로로벤질 )-7- 플루오로 -5- 메탄설포닐 -1-옥소-1,2,3,4- 테트라하이드로사이클로펜타[b]인돌 -3-일]아세트산(화합물 Z)

실시예 21

{9-[(3,4- 디클로로페닐 ) 티오 ]-1-이소프로필-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-일}아세트산(에난티오머 A 및 에난티오머 B)(화합물 AA )

단계 1: 2- 클로로니코틴알데히드

THF(500ml) 중의 디이소프로필 아민(110ml, 780mmol)의 용액에 n-BuLi의 2.5M 헥산 용액(300ml, 750mmol)을 -40℃에서 첨가한다. 5분 후, 반응 혼합물을 -95℃로 냉각시킨 다음에, DMPU(15ml) 및 2-클로로피리딘(50ml, 532mmol)을 연속해서 첨가한다. 다음에, 수득된 혼합물을 가온시키고, -78℃에서 4시간동안 교반시킨다. 이 시점에, 황색 현탁액을 다시 -95℃로 냉각시킨 후, DMF(70ml)를 첨가한다. 최종 반응 혼합물을 -78℃로 가온시키고, 그 온도에서 1.5시간동안 교반시킨다. 반응 혼합물을 차가운 수성 염산(3N, 800ml)에 붓고, 5분동안 교반시킨다. 수성 진한 수산화암모늄을 첨가하여 pH를 7.5로 조절한다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 3회 추출시킨다. 유기 층을 합쳐서 수성 염화암모늄 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시킨다. 조 물질을 실리카 겔의 패드에 의해 100% 헥산 내지 100% 에틸 아세테이트의 구배로 용출시켜 추가로 정제시키고, 생성물을 차가운 헥산 중에 결정화시켜 표제 화합물을 담황색 고체로서 수득한다.

단계 2: 메틸 (2Z)-2- 아지도 -3-(2- 클로로피리딘 -3-일) 프로프 -2- 에노에이트

메탄올(168ml) 중의 2-클로로니코틴알데히드(20.0g, 139.9mmol) 및 메틸 아지도아세테이트(32.2ml, 349.7mmol)의 용액을 메탄올(80ml, 349mmol) 중의 25% NaOMe의 용액에 -20℃에서 첨가한다. 내부 온도를 모니터하고, 약 -20℃에서 30분 첨가 동안에 유지시킨다. 다음에, 수득된 혼합물을 빙욕 중에 수시간동안 교반시킨 후, 밤새 빙욕 중에 냉실에서 교반시킨다. 다음에, 현탁액을 얼음 및 염화암모늄의 혼합물에 붓고, 교반시킨 지 10분 후에 슬러리를 여과시킨다. 생성물을 냉수로 세척한 후, 진공하에 건조시킨다. 조 물질을 메틸렌 클로라이드에 용해시키고, 황산마그네슘을 첨가한다. 현탁액을 실리카 겔 패드를 통해 여과시키고, 메틸렌 클로라이드로 세척한다. 여액을 감압하에 농축시키고, 베이지색 침전물의 표제 생성물(20g)을 수득한다.

단계 3: 메틸 4- 클로로 -1H- 피롤로[3,2-c]피리딘 -2- 카복실레이트

메시틸렌(880ml) 중의 메틸 (2Z)-2-아지도-3-(2-클로로피리딘-3-일)프로프-2-에노에이트(21g, 88mmol)의 용액을 1시간동안 환류 가열한다. 반응 혼합물을 실온으로, 다음에 0℃로 냉각시키고, 침전물을 여과시키고, 차가운 헥산으로 세척한다. 물질을 밤새 1:20 에틸 아세테이트/헥산 중에 교반시키고, 여과시킨 후, 표제 생성물을 담황색 고체로서 수득한다(13.2g).

단계 4: 메틸 1- 클로로 -8-옥소-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -7- 카복실레이트

THF(116ml)-톨루엔(460ml) 중의 메틸 4-클로로-1H-피롤로[3,2-c]피리딘-2-카복실레이트(12.5g, 59mmol)의 현탁액에 칼륨 3급-부톡사이드(64ml, 64mmol) 및 메틸 아크릴레이트(55ml, 611mmol)의 1.0M THF 용액을 첨가한다. 수득된 혼합물을 100℃에서 18시간동안 가열한다. 이 후, 현탁액을 실온으로 냉각시키고, 포화 수성 염화암모늄(400ml) 및 헥산(400ml)의 혼합물에 붓는다. 고체를 버리고, 여과시키고, 물 및 헥산으로 세척하여 표제 화합물을 수득한다.

단계 5: 1- 클로로 -6,7- 디하이드로 -8H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-온

이전 단계의 화합물에 이소프로판올(8.0ml) 및 진한 염산(2.0ml)을 100℃에서 1시간동안 가열하면서 첨가한다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 탄산나트륨 사이에서 분배시킨다. 유기 상을 분리시키고, 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.

단계 6: 1- 이소프로페닐 -6,7- 디하이드로 -8H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-온

DMF(100ml) 중의 1-클로로-6,7-디하이드로-8H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-온(5.0g, 24.3mmol), 트리스(디벤질리덴 아세톤)디팔라듐(O)(1.0g, 1.09mmol) 및 트리페닐라르신(2.70g, 8.82mmol)의 혼합물에 트리부틸이소프로페닐 스타네인(9.60g, 29.00mmol)을 첨가한다. 수득된 혼합물을 탈기시키고, 78℃에서 18시간동안 가열한다. 용매를 감압하에 증발시킨다. 메틸렌 클로라이드 및 셀라이트를 수득된 혼합물에 첨가한 후, 셀라이트 상에서 여과시킨다. 표제 화합물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시킨다(헥산 중의 50 내지 100% 에틸 아세테이트).

단계 7: 에틸 (2E)-(1- 이소프로페닐 -6,7- 디하이드로 -8H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8- 일리덴 ) 에타노에이트

THF(24ml) 중의 1-이소프로페닐-6,7-디하이드로-8H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-온(0.60g, 2.8mmol) 및 트리에틸 포스포노아세테이트(1.00g, 4.46mmol)의 용액에 -78℃에서 80% 수소화나트륨(0.12g, 4.00mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0℃로, 다음에 실온으로 가온시킨다. 반응 혼합물을 포화 염화암모늄 및 에틸 아세테이트로 붓는다. 유기 상을 분리시키고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시킨다. 표제 화합물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시킨다(헥산 중의 40% 에틸 아세테이트).

단계 8: 에틸 (1-이소프로필-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-일)아세테이트

메탄올(20ml) 중의 에틸 (2E)-(1-이소프로페닐-6,7-디하이드로-8H-피리도 [3,4-b]피롤리진-8-일리덴)에타노에이트(0.40g, 1.4mmol)의 용액에 Pd(OH)₂(0.20g)을 첨가한다. 혼합물을 수소 1기압하에 3시간동안 교반시킨다. 혼합물을 셀라이트 상에서 여과시키고, 증발시켜 표제 화합물을 수득한다.

단계 9: 에틸 {9-[(3,4- 디클로로페닐 ) 티오 ]-1-이소프로필-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-일}아세테이트

메틸렌 클로라이드(5.6ml) 중의 비스 (3,4-디클로로페닐)디설파이드(0.24g, 0.67mmol)의 용액에 SO₂Cl₂(0.036ml)을 첨가한다. 수득된 황색 혼합물을 실온에서 1시간동안 교반시킨다. 이 용액을 DMF(5.6ml) 중의 에틸 (1-이소프로필-7,8-디하이드로-6H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-일)아세테이트(0.15g, 0.52mmol)의 용액에 0℃에서 첨가한다. 0℃에서 1.5시간 후, 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 및 에틸 아세테이트에 붓는다. 유기 상을 분리시키고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 증발시킨다. 표제 화합물을 섬광 크로마토그래피하여 정제시킨다(헥산 중의 30 내지 40% 에틸 아세테이트).

단계 10: {9-[(3,4- 디클로로페닐 ) 티오 ]-1-이소프로필-7,8- 디하이드로 -6H- 피리도[3,4-b]피롤리진 -8-일}아세트산

THF(5ml) 및 메탄올(2.5ml) 중의 에틸 {9-[(3,4-디클로로페닐)티오]-1-이소프로필-7,8-디하이드로-6H-피리도[3,4-b]피롤리진-8-일}아세테이트(0.23g, 0.50mmol)의 용액에 1.0M 수산화나트륨(1.5ml, 1.5mmol)을 첨가한다. 18시간동안 실온에서 교반시킨 후, HOAc(0.25ml)을 첨가하고, 용매를 증발시킨다. 잔사를 에 틸 아세테이트/물에 용해시키고, 유기 층을 물 및 염수로 세척한다. 건조(황산나트륨)시킨 후, 용액을 여과시키고, 증발시킨다. 잔사를 1:1 에틸 아세테이트:헥산으로 교반시키고, 여과시킨 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득한다.

¹H NMR (MeOH-d₄) δ1.14-1. 26 (m, 6H), 2.47-2. 56 (m, 1H), 2.56-2. 64 (m, 1H), 2.94-3. 05 (m, 2H), 3.81-3. 89 (m, 1H), 4.22-4. 30 (m, 1H), 4.33-4. 44 (m, 2H), 6.93-6. 99 (m, 1H), 7.14-7. 19 (m, 1H), 7.33- 7.39 (m, 1H), 7.54-7. 59 (m, 1H), 8.16-8. 21 (m, 1H).

단계 10의 생성물은 CH₂N₂를 사용하여 이의 메틸 에스테르로 전환시키고, 에스테르는 키랄 정지 상(Chiracel OD 컬럼 2 x 25cm)에서, 헥산 중의 12% 2-프로판올로 6ml/분의 유속으로 용출시켜 HPLC 분리에 적용한다. 에난티오머 A(덜 극성)의 체류 시간은 31.9분이고, 에난티오머 B(더 극성)의 체류 시간은 35.5분이다. A 및 B는 둘다 실시예 17, 단계 10에서와 같이 가수분해시켜 표제 화합물의 에난티오머 A 및 B를 수득한다.

실시예 22

((1R)-6- 플루오로 -8-( 메틸설포닐 )-9-{(1S)-1-[4-( 트리플루오로메틸 ) 페닐 ]에틸}-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일)아세트산(화합물 AJ )

단계 1: 2-(2- 브로모 -4- 플루오로페닐 ) 하이드라지늄 클로라이드

진한 염산(1.5M) 중의 2-브로모-4-플루오로아닐린의 현탁액에 -10℃에서 질산나트륨(1.1당량)의 10.0M 수용액을 서서히 첨가한다. 혼합물을 0℃에서 2.5시간동안 교반시킨다. 다음에, 진한 염산 중의 SnCl₂(3.8M)의 차가운(-30℃) 용액을, 내부 온도를 10℃ 이하로 유지시키면서 서서히 첨가한다. 수득된 혼합물을 기계적으로 20분동안 10℃에서 교반시킨 후, 실온에서 1시간동안 교반시킨다. 고점성 슬러리를 여과시키고, 고체를 밤새 통기 건조시킨다. 고체를 차가운 염산에 재현탁시키고, 다시 여과시킨다. 건조된 물질을 디에틸 에테르에 현탁시키고, 10분동안 교반시키고, 여과시키고, 밤새 통기 건조시켜 표제 화합물을 베이지색 고체로서 수득한다.

단계 2: (+/-)-에틸 (8- 브로모 -6- 플루오로 -2,3,4,9- 테트라하이드로 -1H- 카바졸 -1-일)아세테이트

AcOH(0.5M) 중의 단계 1의 화합물(1당량)의 현탁액에 에틸 (2-옥소사이클로헥실)아세테이트(1당량)을 첨가한다. 혼합물을 16시간동안 환류 교반시키고, 냉각시키고, AcOH을 감압하에 증발시켜 제거한다. 잔사를 에틸 아세테이트로 희석시키고, 물 및 포화 수성 중탄산나트륨으로 세척한다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시킨다. 다음에, 잔사를 실리카 겔 패드에서 톨루엔으로 용출시켜 정제시킨다. 여액을 농축시키고, 헥산 중에 교반시키고, 여과시킨 후, 표제 화합물을 백색 고체로서 수득한다. MS (+APCI) m/z 354.2 (M+H)⁺.

단계 3: (+/-)-에틸 [6- 플루오로 -8-( 메틸설포닐 )-2,3,4,9- 테트라하이드로 -1H- 카바졸 -1-일]아세테이트

무수 DMSO(0.28M) 중의 단계 2의 화합물(1당량)의 용액에 나트륨 메탄설피네이트(3당량) 및 요드화구리(3당량)을 첨가한다. 질소를 혼합물에 5분동안 기포 주입한 후, 반응물을 100℃에서 질소 대기하에 교반시킨다. 12시간 후, 더욱 많은 나트륨 메탄설피네이트(2당량) 및 요드화구리(2당량)를 첨가한다. 혼합물을 추가로 12시간동안 100℃에서 교반시키고, 냉각시키고, 에틸 아세테이트로 희석시키고, 1N 염산을 첨가하여 혼합물을 산성화시킨다. 현탁액을 30분동안 교반시키고, 셀라이트를 통해 여과시킨다. 여액을 물로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시킨다. 잔사를 실리카 겔 패드를 통해, 처음에는 비극성 불순물을 제거하는 톨루엔으로, 다음에 목적하는 생성물을 용출시키는 헥산/에틸 아세테이트의 2:1 혼합물로 용출시켜 여과시킨다. 헥산/에틸 아세테이트의 혼합물을 사용하는 용출로부터의 여액을 농축시켜 표제 화합물을 담황색 고체로서 수득한다. MS(-APCI) m/z 352.1 (M-H)^-.

단계 4: 에틸 [(1R)-6- 플루오로 -8-( 메틸설포닐 )-2,3,4,9- 테트라하이드로 -1H- 카바졸 -1-일]아세테이트

단계 3으로부터의 라세미 혼합물을 헥산 중의 15% iPrOH의 혼합물로 용출되는 Chiralpak AD 정제용 컬럼 상에서 정제 HPLC하여 분리시킨다. 더 극성인 에난티오머(체류 시간이 더 길다)는 최종 생성물의 활성을 근거로 하여 표제 화합물로서 확인된다.

단계 5: 에틸 [(1R)-9-[(1S)-1-(4- 클로로페닐 )에틸]-6- 플루오로 -8-( 메틸설포닐 )-2,3,4,9- 테트라하이드로 -1H- 카바졸 -1-일]아세테이트

THF(0.175M) 중의 단계 4의 화합물(1당량), 트리페닐포스핀(1.5당량) 및 (1R)-1-(4-클로로페닐)에탄올(1.5당량, 참조 실시예 1에 기술된 일반적 방법에 따라 제조)의 용액에 디-3급-부틸 아조디카복실레이트(THF중의 2.1M, 1.5당량)의 용액을 10분에 걸쳐 첨가한다. 혼합물을 실온에서 2시간동안 교반시키고, 농축시킨다. 잔사를 톨루엔 중의 7% 에틸 아세테이트로 용출시킴으로써 실리카 겔 섬광 크로마토그래피하여 정제시켜 목적 생성물(약 90% 순도)을 수득하고, 이는 다음 반응에 그대로 사용된다.

단계 6: [(1R)-9-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세트산 및 [(1S)-9-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-6- 플루오로 -8-( 메틸설포닐 )-2,3,4,9- 테트라하이드로 -1H- 카바졸 -1-일]아세 트산

THF 및 메탄올(0.1M)의 2:1 혼합물 중의 단계 5의 화합물의 용액에 1N 수성 수산화리튬(3당량)을 첨가한다. 혼합물을 실온에서 2시간동안 교반시키고, AcOH을 첨가하고, 용매를 증발시켜 제거한다. 잔사를 에틸 아세테이트/물에 용해시키고, 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시킨다. 잔사를 헥산 중의 30% 에틸 아세테이트에 스위싱(swishing)하고, 생성물을 디에틸 에테르에 현탁시키고, 45분동안 초음파처리하고, 여과시키고, 고 진공하에 50℃에서 24시간동안 건조시켜 표제 화합물을 백색 고체로서 수득한다. MS (-APCI) m/z 462.1 (M-H)

또는, (+/-) 에틸 [6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세테이트를 단계 5에서 알킬화 반응에 사용하여 두가지 부분입체이성체의 혼합물을 수득한다: 에틸 [(1R)-9-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세테이트 및 에틸 [(1S)-9-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세테이트. 부분입체이성체 혼합물은 다음 방법에 따라 선택적 가수분해시킴으로써 분리시켜 목적하는 [(1R)-9-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세트산을 수득한다.

분리:

에틸 [(1R)-9-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세테이트 및 에틸 [(1S)-9-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세테이트(1당량)의 부분입체이성체 혼합물을 THF/메탄올(0.25M)의 3.5/1 혼합물에 용해시키고, 0℃에서 냉각시킨다. 수성 수산화리튬 1N(1당량)을 서서히 첨 가하고, 혼합물을 0℃에서 12시간동안 또는 에틸 [(1R)-9-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세테이트의 가수분해가 거의 완결될 때까지, 교반시키고, 다른 부분입체이성체는 이러한 조건하에 약간만 가수분해된다. AcOH을 첨가하고, 용매를 증발시켜 제거한다. 잔사를 에틸 아세테이트/물에 용해시키고, 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시킨다. 에틸 [(1S)-9-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세테이트 및 [(1R)-9-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세트산을, 1% AcOH을 함유하는 헥산 중의 40% 에틸 아세테이트로 용출시키는 섬광 크로마토그래피하여 분리시켜 목적하는 de>90%의 [(1R)-9-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세트산을 수득하고, 이를 헥산 중의 30% 에틸 아세테이트에 스위싱하여 목적 화합물을 de>95%의 백색 고체로서 수득한다.

단계 7: 메틸 [(1R)-6- 플루오로 -8-( 메틸설포닐 )-2,3,4,9- 테트라하이드로 -1H- 카바졸 -1-일]아세테이트

메탄올(0.1M) 중의 [(1R)-9-[(1S)-1-(4-클로로페닐)에틸]-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세트산(메탄올 중의 [α]_D= -226°)의 용액에 탄소상 10% 팔라듐(10% wt/wt)을 첨가한다. 질소 스트림을 혼합물을 통해 5분동안 기포주입한다. 반응물을 실온에서 질소 대기하에(풍선) 24시간 동안 교반시키고, 메틸렌 클로라이드로 용출시키는 셀라이트 패드를 통해 여과시킨다. 용매를 감압하에 증발시켜 제거하고, 잔사를 메탄올에 스위싱하여 화합물 메틸 [(1R)-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일]아세테이트를 수득한다.

단계 8: ((1R)-6- 플루오로 -8-( 메틸설포닐 )-9-{(1S)-1-[4-( 트리플루오로메틸 ) 페닐 ]에틸}-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일)아세트산(화합물 AJ )

THF(0.2M) 중의 단계 7의 화합물(1당량), 트리페닐포스핀(1.5당량) 및 (1R)-1-[4-(트리플루오로메틸)페닐]에탄올(1.5당량)의 용액에 디-3급-부틸 아조디카복실레이트(THF 중의 1M, 1.5당량)의 용액을 20분에 걸쳐 첨가한다. 혼합물을 실온에서 2시간동안 교반시키고, 농축시킨다. 잔사를 톨루엔 중의 10% 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카 겔 섬광 크로마토그래피로 정제하여 메틸 ((1R)-6-플루오로-8-(메틸설포닐)-9-{(1S)-1-[4-(트리플루오로메틸)페닐]에틸}-2,3,4,9-테트라하이드로-1H-카바졸-1-일)아세테이트(약 90% 순도)를 수득하고, 이는 다음 반응에 그대로 사용한다.

THF/메탄올(0.25M)의 3.5/1 혼합물 중의 상기 에스테르(1당량)의 용액에 0℃에서 수성 수산화리튬 1N(1당량)을 서서히 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 16시간동안 또는 에스테르의 가수분해가 거의 완결될 때까지, 교반시키고, 이러한 조건하에 다 른 소량 부분입체이성체는 가수분해 속도가 훨씬 느리다. AcOH을 첨가하고, 용매를 진공 중에 제거한다. 잔사를 에틸 아세테이트/물에 용해시키고, 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과시키고, 농축시킨다. 미반응 메틸 에스테르를 제거하기 위해서, 잔사를 실리카 겔 패드를 통해, 처음에 10% 에틸 아세테이트/톨루엔으로, 다음에 1% AcOH을 함유하는 60% 에틸 아세테이트/톨루엔으로 용출시켜 여과시킨다. 잔사를 30% 에틸 아세테이트/헥산에 스위싱하고, 고 진공하에 50℃에서 16시간동안 건조시켜 표제 화합물을 de 및 ee >95%의 백색 고체로서 수득한다(키랄 HPLC로 조사). MS (-APCI) m/z 496.0 (M-H)^-. [α]_D= 메탄올 중의 -181°

생물학

선택적 DP 길항제로서 작용하는 본 발명에 사용된 화합물은 일반적으로 CRTH2 수용체에 대한 친화도(K_i)보다 약 10배 이상 큰(수치적으로 낮은 K_i 값) DP에 대한 친화도(K_i)를 나타낸다. 본 발명에 사용된 대표적 DP 길항제는 CRTH2 수용체보다 DP 수용체에 대해 약 10배 이상 선택적이다. 특히, 선택적 DP 수용체 길항제는 CRTH2 수용체에 비하여 DP 수용체에 대해 약 100배 이상 선택적이다. 더욱더 특히, DP 선택적 길항제 화합물은 CRTH2 수용체보다 DP 수용체에 대해 약 800 내지 1000배 이상 선택적이고, 즉 DP 수용체에 대한 친화도(K_i)는 CRTH2 수용체에 대한 친화도(K_i)보다 800 내지 1000배 높다.

본원에서 사용되는 바와 같이 화합물이 "DP 수용체를 선택적으로 조절하는" 경우, 화합물은 치료학적 용량으로 수득가능한 농도에서 DP 수용체에 결합되어 길항시키는 한편, 이러한 치료학적으로 수득가능한 농도에서 CRTH2 수용체를 실질적으로 조절하지 못한다.

일반적으로 본원에서 사용된 DP 길항제는 약 0.5 μmole 이상의 CRTH2 수용체에 대한 친화도(K_i)를 갖는다. 약 0.5 μmole 이상의 CRTH2에 대한 결합 친화도, 및 약 10배 이상의 CRTH2보다 DP 수용체에 대한 선택도를 갖는 화합물은 니코틴산이 이러한 선택적 DP 길항제의 부재하에 투여되는 경우 나타나는 조홍 효과를 억제하기에 유용하다.

재조합 사람 DP 및 CRTH2 수용체에서 화합물의 친화도 및 선택도의 측정

DP 및 CRTH2에서 화합물의 수용체 친화도 및 선택도는 문헌에 기술된 방사능표지 결합 검정을 사용하여 측정한다[참고: Abramovitz M. et al. Biochem. Biophys. Acta(2000) 1483: 285-293, and Sawyer et al. Br.J.Pharmacol. (2002); 137: 1163-1172]. 간단히, 개별적으로 사람 DP 및 CRTH2 수용체를 발현시키는 안정한 세포주는 사람의 배아 신장(HEK) 293EBNA(엡스타인 바르(Epstein Barr) 바이러스 핵 항원) 세포(지적된 HEK293E 세포주로 지정됨)를 사용하여 설정된다. 이러한 재조합 세포주로부터 제조된 막 분획은 평형 경쟁적 방사능리간드 결합 검정에 사용되어 DP 및 CRTH2 수용체에서 화합물의 친화도 및 선택도를 측정한다.

전체 길이 암호화 서열에 상응하는 DP 및 CRTH2 cDNA는 포유류 발현 벡터 pCEP4(인비트로겐)의 적합한 부위로 서브클로닝시키고, HEK293E 세포에서 발현시킨다. 막은 800psi에서 30분동안 얼음 위에서 프로테아제 억제제(2mM AEBSF, 10μM E-64, 100μM 류펩틴 및 0.05 mg/ml 펩스타틴)의 존재하에 세포를 용해시킨 후 차등 원심분리(4℃에서, 10분동안 1000 x g, 다음에 30분동안 160,000 x g)하여 제조한다. 160,000 x g 펠렛을 약 5 내지 10 mg/ml 단백질에서 1mM EDTA를 함유하는 10mM HEPES/KOH(pH 7.4)에 다운스(Dounce) 균질화(Dounce A; 10회의 스트로크)에 의해 재현탁시키고, 액상 질소 중에 동결시키고, -80℃에서 저장한다. 수용체 결합 검정은 1mM EDTA, 10mM MnCl₂ 및 0.7nM[³H]PGD₂(200 Ci/mmol)를 함유하는 10mM HEPES/KOH(pH 7.4) 중에 0.2ml의 최종 항온처리 용량으로 수행한다. 반응은 160,000 x g 분획으로부터 막 단백질(DP에 대해 약 30μg 및 CRTH2에 대해 1μg)의 첨가에 의해 개시한다. 리간드를 디메틸설폭사이드(DMSO)에 첨가하고 이것은 모든 항온처리 중에 1%(vv)로 일정하게 유지된다. 비특이적 결합은 10μM의 비방사능 PGD₂의 존재하에 측정한다. 항온처리는 소형 궤도형 진탕기에서 실온에서 60분동안 수행한다. 결합 검정은 검정 항온처리 완충액에 예비습윤된 96웰 유니필터 GF/C(Canberra Packard)를 통해 EDTA의 부재하에(4℃) Tomtec Mach III 96웰 반자동 세포 수집기를 사용하여 신속하게 여과시켜 종결한다. 필터를 3 내지 4ml의 동일한 완충액으로 세척하고, 90분동안 55℃에서 건조시키고, 개별 필터에 결합된 잔류 방사능은 50μL의 Ultima Gold F(Canberra Packard)를 첨가하여 1450 MicroBeta(Wallac) 계수기를 사용하여 섬광 계수함으로써 측정한다.

최대 특이적 결합은 경쟁자의 부재하에 총 결합 - 비특이적 결합으로서 정의된다. 특이적 결합은 화합물의 각 농도에서 측정하며, 최대 특이적 결합의 비율로서 나타낸다. S자형 평형 경쟁 곡선은 시험 화합물 농도의 함수로서 최대 특이적 결합 비율을 나타내어 작성하고, 4개의 파라미터 등식을 근거로 하는 간단한 구동 비선형 최소제곱법 곡선 핏팅 루틴을 사용하여 맞춤 고안된 소프트웨어 패키지에 의해 분석하여 굴곡점(InPt)을 측정한다. 시험 화합물의 결합 친화도는 평형 억제 상수(K_i)를 등식 K_i = InPt/l+([방사능리간드]/K_d)으로부터 계산하여 측정하고, 여기에서 K_d는 방사능리간드-수용체 상호작용에 대한 평형 해리 상수이다. InPt를 측정하지 못하는 경우, IC₅₀을 사용한다(즉, 최대 특이적 결합의 50%를 억제하는 데에 필요한 시험 화합물의 농도).

일반적으로 본 발명에 사용된 화합물은 낮게는 약 0.4nM 내지 높게는 약 16.3nM의 DP 수용체에 대한 K_i를 나타낸다. 마찬가지로, 본 발명에 사용된 화합물은 일반적으로 낮게는 약 180nM 내지 높게는 약 22,000nM 또는 심지어 그이상의 CRTH2 수용체에 대한 K_i를 나타낸다.

마우스에서 니코틴산-유도된 혈관확장에 대한 화합물의 효과

본원에 기술된 선택적 DP 길항제의 효능은 사람 니코틴산-유도된 조홍의 쥐 모델을 사용하고 조홍 억제 효과를 측정하여 입증할 수 있다. 마우스 귀에서 혈류 (혈관확장의 척도, 사람에 있어서 조홍의 명백한 요소)는 (대조군으로서) 비히클 또는 DP 길항제로 전처리한 마우스에게 니코틴산을 투여한 후에 측정한다. 특별히, 수컷 C57BL/6 마우스(약 25g)를 연구에 사용한다. 5마리의 마우스를 각각의 시험 그룹에서 평가한다. 넴부탈을 물을 사용하여 5 mg/ml의 최종 농도로 희석시키고, 마우스당 0.3ml를 복강내 주사한다. DP 길항제를 5% 하이드록시프로필 β-사이클로덱스트린에 5 mg/ml의 최종 농도로 용해시키고, 화합물은 0.2ml/마우스(약 40mpk)의 용량으로 복강내 투여한다. 니코틴산을 5% 하이드록시프로필 β-사이클로덱스트린에 12.5 mg/ml의 최종 농도로 용해시킨다. 니코틴산 스톡 용액은 2N NaOH을 사용하여 pH 7.4로 조절하고, 마우스당 0.2ml를 피하 주사한다(약 100mpk).

마우스 귀 피부의 관류는 레이저 도플러 관류 영상기(PeriScan PIM II, Perimed, Sweden)를 사용하여 니코틴산을 투여하기 5분 전에 시작하여 15분동안 매 30초마다 모니터한다. 비히클 또는 니코틴산 투여 후 10분에 걸쳐 평균 관류의 변화율을 계산하고, 평균 관류 대 시간의 변화율의 그래프를 각 동물에 대해 작성한다. 다음에, 평균 관류(%△ x min)의 곡선 아래의 면적(AUC)을 각 그래프로부터 계산하고, 결과는 각 그룹에 대해 평균 AUC ± SEM으로 나타낸다.

화합물 D는 마우스에서 PGD-2 유도된 혈관확장을 억제했다(도 1). 시험된 DP 길항제는 마우스에서 니코틴산-유도된 혈관확장을 억제했고; 선택된 화합물에 대한 데이터는 도 2 및 3에 제공한다.

본원에 인용된 모든 특허, 특허원 및 공보는 본원에서 참조로 이의 전체가 인용된다. 특정한 바람직한 양태가 본원에서 상세히 기술되지만, 많은 대체 양태 가 본 발명의 범위 내에 해당되는 것으로 이해한다.

Claims

하기의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로 이루어진 군으로부터 선택되는 DP 수용체 길항제, 및 니코틴산 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 다른 니코틴산 수용체 효능제를 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는, 조홍을 감소시키면서 아테롬성 동맥경화증, 이상지혈증 또는 당뇨병을 치료하기 위한 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 니코틴산 및 DP 수용체 길항제를 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는 약제학적 조성물.
제2항에 있어서, DP 수용체 길항제가 화합물 A, B, D, X, AF, AG, AH, AI 및 AJ로 이루어진 군으로부터 선택되는 약제학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, HMG Co-A 리덕타제 억제 화합물을 추가로 포함하는 약제학적 조성물.
제4항에 있어서, HMG Co-A 리덕타제 억제 화합물이 심바스타틴인 약제학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 또는 캅셀제 형태의 약제학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 정제 형태의 약제학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 서방성 정제 또는 캅셀제 형태의 약제학적 조성물.
제6항에 있어서, 서방성 정제 형태의 약제학적 조성물.
제4항에 있어서, HMG Co-A 리덕타제 억제 화합물이 아토르바스타틴인 약제학적 조성물.
니코틴산, 화합물 E
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 아토르바스타틴을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는, 조홍을 감소시키면서 아테롬성 동맥경화증, 이상지혈증 또는 당뇨병을 치료하기 위한 약제학적 조성물.
니코틴산, 화합물 F 또는 AA, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 및 아토 르바스타틴을 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 포함하는, 조홍을 감소시키면서 아테롬성 동맥경화증, 이상지혈증 또는 당뇨병을 치료하기 위한 약제학적 조성물.