PT2116244E - Método de tratamento da aterosclerose, de dislipidémias e de estados relacionados, e composições farmacêuticas - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "MÉTODO DE TRATAMENTO DA ATEROSCLEROSE, DE DISLIPIDÉMIAS E DE ESTADOS RELACIONADOS, E COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS"

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A niacina ou ácido nicotínico (ácido piridina-3-carboxílico) é um fármaco habitualmente conhecido pelo seu efeito de aumentar os teores de lipoproteinas de alta densidade (HDL) no soro. No entanto, o ácido nicotinico é frequentemente associado à dilatação dos casos cutâneos, por vezes denominada rubor (flushing). Este efeito colateral é provocado pela libertação da prostaglandina D2 induzida pelo ácido nicotinico na pele, e é tão severa que muitos pacientes interrompem o tratamento com o ácido nicotinico. A invenção presente diz respeito ao tratamento da aterosclerose, das dislipidémias, da diabetes e de estado relacionados pela administração de ácido nicotinico ou de outro agonista dos receptores de ácido nicotinico em conjunto com um composto que diminua ou que elimine a vasodilatação cutânea que de outra forma ocorre, de tal modo que este tratamento possa continuar sem que ocorra um rubor substancial. Isto pode conseguir-se em seres humanos pela administração do ácido nicotinico ou de um agonista de receptores de ácido nicotinico e de um composto que antagonize o receptor da DP. 2 ΡΕ2116244 Há diversos subtipos de receptores que interac-tuam com a prostaglandina D2. Refere-se um receptor de prostaglandina D2 como sendo um "DP" e outro tipo de receptor de prostaglandina D2 é conhecido como um "CRTH2". A invenção presente utiliza antagonismo em relação ao receptor DP para impedir, minimizar ou diminuir a rubor que de outra forma pode ocorrer. É consequentemente um objecto da invenção presente eliminar ou diminuir um rubor substancial (na sua frequência e/ou severidade) a titulo de efeito colateral durante o tratamento de seres humanos quanto à ateroscle-rose, à dislipidémia, à diabetes e a estados relacionados recorrendo ao ácido nicotinico ou a outro agonista de receptor de ácido nicotinico.

Outro objecto da invenção presente é proporcionar uma terapia de combinação da aterosclerose que minimize em geral os efeitos colaterais.

Um outro objecto ainda é proporcionar uma composição farmacêutica de combinação fixa, para utilização por via oral. A partir da descrição proporcionada neste documento serão aparentes estes e outros objectos da invenção. ΡΕ2116244 3

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Proporciona-se um método para tratar a aterosclerose num paciente humano que necessite de um tal tratamento, o qual inclui administrar-se ao paciente ácido nicotinico ou um seu sal ou solvato, ou outro agonista do receptor de ácido nicotinico, e um antagonista do receptor DP, em quantidades que sejam eficazes para tratar aterosclerose na ausência de rubor substancial.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A invenção é ilustrada em relação às figures apensas a este documento, nas quais: A Figura 1 é um gráfico que mostra que o

Composto D inibe a vasodilatação induzida pela prostaglandina D2 em murganhos; A Figura 2 é um gráfico que mostra que o

Composto D inibe a vasodilatação induzida pelo ácido nicotinico em murganhos. A Figura 3 é um gráfico que mostra que outros compostos seleccionados inibem a vasodilatação induzida pelo ácido nicotinico em murganhos.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO A niacina ou ácido nicotinico (ácido piridina-3- 4 ΡΕ2116244 carboxícilo) é um fármaco que se conhece habitualmente em razão do seu efeito de elevar as concentrações de lipoproteinas de alta densidade (HDL) , bem como de proporcionar outras alterações benéficas do perfil lipídico (diminuir a concentração em lipoproteína de muito baixa densidade (VLDL), de lipoproteína de baixa densidade (LDL), de triacilgliceróis, de ácidos gordos livres (FFA) e de lipoproteína (a) [Lp(a)]). 0 ácido nicotínico aumenta os teores em HDL quando é administrado a seres humanos em doses eficazes do ponto de vista terapêutico, a entre cerca de 50 mg e até mesmo tanto quanto cerca de 8 gramas por dia. No entanto, o ácido nicotínico é frequentemente associado com vasodilatação cutânea, também denominada rubor (flushing). 0 rubor inclui tipicamente um avermelha-mento da pele, acompanhado por calor, comichão ou irritação. Ela pode ser extremamente desagradável, e pode ser tão severa que muitos pacientes interrompem o tratamento com o ácido nicotínico. A invenção presente diz respeito ao tratamento, à prevenção ou à inversão da aterosclerose e de outras doenças e estados descritos neste documento, com o ácido nicotínico ou com um seu sal, ou um solvato destes, ou outro agonista de receptores de ácido nicotínico, sem rubor substancial. Isto consegue-se em seres humanos administrando ácido nicotínico ou um seu sal ou um solvato destes, ou outro agonista de receptores de ácido nicotínico, e um composto que antagonize o receptor DP, impedindo, diminuendo ou minimizando deste modo o efeito de rubor na sua frequência e/ou na sua severidade. 5 ΡΕ2116244 Há pelo menos dois receptores que interactuam com a prostaglandina D2, referidos sob as designações de "DP" e "CRTH2". A invenção presente diz principalmente respeito ao ácido nicotínico ou a agonistas de receptores de ácido nicotinico, utilizados com antagonistas do receptor DP. A invenção que interessa é uma composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização no tratamento da aterosclerose num paciente humano que necessite de um tal tratamento, em quantidades tais que sejam eficazes para tratar a aterosclerose na ausência de um rubor substancial.

Outro aspecto da invenção que tem interesse diz respeito à composição farmacêutica da reivindicação 1 para ser utilizada no aumento do teor em HDL no soro num paciente humano que necessite de um tal tratamento, sendo a composição referida eficaz para aumentar os teores em HDL no soro num paciente, na ausência de rubor substancial.

Outro aspecto da invenção que tem interesse diz respeito a uma composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização no tratamento da dislipidémia num paciente humano que necessite de um tal tratamento, em quantidades que sejam eficazes para tratar a dislipidémia sem provocar rubor substancial.

Outro aspecto da invenção que tem interesse diz respeito a um método para diminuir os teores em VLDL ou em LDL no soro de um paciente humano que necessite de um 6 ΡΕ2116244 tratamento deste tipo, em quantidades que sejam eficazes para diminuir os teores em VLDL ou em LDL no sangue no paciente, sem lhe provocar um rubor substancial.

Outro aspecto da invenção que tem interesse diz respeito a um método para diminuir os teores em triacilgliceróis no soro num paciente humano que necessite de um tal tratamento, que consiste em administrar-se ao paciente ácido nicotinico ou um seu sal ou solvato, ou outro antagonista do receptor de ácido nicotinico, em quantidades que sejam eficazes para diminuir os teores em triacilgliceróis no soro do paciente, sem lhe provocar um rubor substancial.

Outro aspecto da invenção que tem interesse relaciona-se com uma diminuição do teor em Lp(a) no soro de um paciente humano que necessite de um tal tratamento, que consiste em administrar-se ao paciente ácido nicotinico ou um seu sal ou solvato, ou outro antagonista do receptor de ácido nicotinico, em quantidades que sejam eficientes para diminuir o teor em Lp(a) no paciente na ausência de um rubor substancial. Tal como se utiliza neste documento, Lp(a) significa lipoproteína (a).

Um aspecto da invenção que tem um interesse diz respeito ao conj unto dos métodos descritos acima, nos quais seja utilizado ácido nicotinico ou um seu solvato. Mais em especial é interessante a utilização do ácido nicotinico. Sob mais um aspecto que tem interesse, o 7 ΡΕ2116244 antagonista do receptor DP modula especificamente o receptor DP quando é utilizado em quantidades que são eficazes para diminuir ou para impedir o efeito de rubor do paciente.

Outro aspecto da invenção que tem particular interesse diz respeito ao conjunto dos métodos descritos acima, nos quais se utiliza ácido nicotinico e em que o antagonista do receptor DP modula selectivamente o receptor DP e não modula substancialmente o receptor CRTH2.

Outro aspecto da invenção que tem particular interesse diz respeito um método para o tratamento da aterosclerose, das dislipidémias, da diabetes ou de um estado relacionado num paciente humano que necessite de um tal tratamento, que consiste em administrar-se ao paciente ácido nicotinico ou um seu sal ou solvato, ou outro antagonista do receptor de ácido nicotinico e um antagoniza do receptor DP, sendo a composição referida administrada numa quantidade que seja eficaz para tratar a aterosclerose, a dislipidémia, a diabetes ou um estado relacionado com estas, sem que se manifeste um rubor substancial.

Um aspecto da invenção é a utilização de um antagonista do receptor DP em combinação com ácido nicotinico ou com um seu sal ou solvato, ou outro agonista do receptor de ácido nicotinico, para tratar a aterosclerose num ser humano na ausência de um rubor substancial. ΡΕ2116244

Outro aspecto da invenção que tem um interesse especifico diz respeito aos métodos descritos acima, em que o antagonista do receptor DP seja seleccionado de entre um conjunto constituído pelos compostos A a AJ, e os seus sais e solvatos aceitáveis do ponto de vista farmacêutico.

Incluem-se nos exemplos dos compostos especialmente úteis para antagonizar selectivamente os receptores DP e suprimir o efeito de rubor, os seguintes:

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bem como os seus sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, e os solvatos de quaisquer destes. A aterosclerose, tal como se utiliza neste documento, refere-se a uma forma de doença vascular caracteri-zada pela deposição de placas ateromatosas contendo colesterol e lipidos sobre a camada mais interior das paredes das artérias grandes e de média dimensão. A aterosclerose inclui doenças vasculares bem como estados que são reconhecidos e entendidos pelos médicos que se dedicam aos domínios relevantes da medicina. A doença cardiovascular aterosclerótica, incluindo a restenose após procedimentos de revascularização, a doença coronária do coração (também conhecida como doença das artérias coronárias ou como doença cardíaca isquémica), a doença cerebrovascular incluindo a demência multienfarte, e a doença dos vasos periféricos incluindo a disfunção eréctil, são todas elas manifestações clínicas da aterosclerose estão portanto incluídas nos termos "aterosclerose" e "doença aterosclerótica". "Dislipidémia" é um termo utilizado no seu sentido convencional para referir teores anormais de lipidos no plasma, tais como de HDL (baixo), LDL (elevado), VLDL (elevado), triacilgliceróis (elevado) , lipoproteína 11 ΡΕ2116244 (a) (elevado), FFA (elevado) e outros lípidos do soro, ou combinações destes. Pode tratar-se de um estado não complicado ou integrar uma doença ou um estado especifico relacionados com uma doença tal como a diabetes (dislipi-démia diabética), a sindrome metabólica e outras semelhantes. Deste modo, as dislipidémias não complicadas, bem como as que estão associadas a estados subjacentes, integram todas elas a invenção presente. 0 termo "paciente" inclui mamíferos, em especial seres humanos, que utilizam os agentes activos em apreço para a prevenção ou para o tratamento de um estado de doença. A administração dos fármacos ao paciente inclui tanto a auto-administração como a administração ao paciente por parte de outra pessoa. 0 paciente pode necessitar de tratamento para uma doença existente ou um estado de doença, ou pode pretender tratamento profiláctico para impedir ou para diminuir o risco de que se inicie uma aterosclerose.

Pretende-se que a expressão "quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico" signifique a quantidade de fármaco que originará a resposta biológica ou medicinal pretendida. A título de exemplo, o ácido nicotínico é amiúde administrado em doses de entre cerca de 50 mg e cerca de 8 gramas por dia.

As expressões "quantidade eficaz do ponto de vista profiláctico" e "quantidade que é eficaz para evitar" 12 ΡΕ2116244 referem-se à quantidade de fármaco que impedirá ou diminuirá o risco de ocorrência do acontecimento biológico ou de saúde que se pretende impedir. Em muitos casos, a quantidade eficaz do ponto de vista profiláctico é a mesma que a quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico. A invenção descrita neste documento inclui a administração dos compostos e das composições descritas neste documento para impedir ou para diminuir o risco de ocorrência, ou a recorrência quando exista potencial para tal, de um acontecimento da doença cardiaca das coronárias, um acontecimento cerebrovascular, e/ou claudicação intermitente. Pretende-se que nos acontecimentos de doença cardiaca das coronárias estejam incluídos a morte devida a CHD, o enfarte do miocárdio (isto é, um ataque de coração), e procedimentos de revascularização coronária. Pretende-se que os acontecimentos cerebrovasculares incluam a apoplexia isquémica ou hemorrágica (também conhecidos como acontecimentos cerebrovasculares) e ataques isquémicos transientes. A claudicação intermitente é uma manifestação clínica de doença dos vasos periféricos. A expressão "acontecimento da doença aterosclerótica", tal como se utiliza neste documento, pretende incluir acontecimentos da doença cardíaca das coronárias, acontecimentos cerebrovasculares, e a ocorrência de claudicação intermitente. Pretende-se que os indivíduos que já tenham manifestado um ou mais acontecimentos não fatais de doença aterosclerótica sejam aqueles para os quais existe o potencial de recorrência desses próprios acontecimentos. 13 ΡΕ2116244 A invenção em apreço proporciona portanto também um método para evitar ou para diminuir o risco de um primeiro acontecimento de doença aterosclerótica, ou de acontecimentos subsequentes, incluindo a administração a um paciente em risco de um tal acontecimento, incluindo a administração de uma quantidade eficaz do ponto de vista profiláctico dos compostos que se descrevem neste documento, enquanto se impede ou se minimiza um rubor substancial. 0 paciente já pode ter doença aterosclerótica na altura da administração, ou pode estar em risco de a desenvolver. 0 método serve também para ser utilizada na prevenção ou na desaceleração da formação de novas lesões ou placas ateroscleróticas, e para impedir ou tornar mais lenta a progressão das lesões ou das placas existentes, bem como para provocar a regressão das lesões ou das placas previamente existentes, enquanto impede ou minimiza um rubor substancial.

Portanto, um aspecto desta invenção envolve um método para parar ou tornar mais lenta a progressão da aterosclerose, incluindo parar ou tornar mais lenta a progressão da placa aterosclerótica, incluindo administrar-se uma quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico de qualquer um dos antagonistas de DP descritos neste documento, em conjunto com o ácido nicotinico ou outro agonista dos receptores de ácido nicotinico, a um paciente que 14 ΡΕ2116244 necessite de um tal tratamento. Este método também inclui parar-se ou tornar-se mais lenta a progressão das placas ateroscleróticas que existam na altura de se iniciar o tratamento em apreço (isto é, "placas ateroscleróticas existentes"), bem como parar ou tornar mais lenta a formação de novas placas ateroscleróticas em pacientes com aterosclerose.

Outro aspecto desta invenção envolve um método para evitar ou diminuir o risco de ruptura da placa aterosclerótica, incluindo administrar-se uma quantidade eficaz do ponto de vista profiláctico de qualquer um dos compostos descritos neste documento em conjunto com o ácido nicotinico ou com outro agonista dos receptores de ácido nicotinico, a um paciente que necessite de um tal tratamento. A ruptura tal como se utiliza neste documento refere-se à quebra da placa libertando-se na circulação, placa essa que pode alojar-se nos vasos sanguíneos. Um aspecto adicional desta invenção envolve um método para evitar ou para diminuir o risco de se desenvolver aterosclerose, incluindo a administração de uma quantidade eficaz do ponto de vista profiláctico dos compostos descritos neste documento, a um paciente que necessite deste tipo de tratamento.

Outro aspecto da invenção diz respeito a um método para tratar ou evitar a aterosclerose, de dislipidémias ou de um estado relacionado, incluindo fazer-se um tratamento prévio de um paciente humano que necessite 15 ΡΕ2116244 de uma tal terapia com uma quantidade inibidora ou capaz de diminuir o rubor, de um antagonista de receptores DP, tratando em seguida o paciente referido com ácido nicotinico, um seu sal ou um solvato destes, ou com outro agonista de receptores de ácido nicotinico, numa quantidade que seja eficaz para tratar ou para impedir a ateros-clerose, a dislipidémia ou um acontecimento relacionado, sem provocar rubor substancial.

Um outro aspecto da invenção ainda, diz respeito ao método descrito acima, incluindo também fazer-se um tratamento prévio ou tratar-se o paciente com um inibidor de HMG Co-A reductase.

Outro aspecto da invenção diz respeito a um método para tratar ou para evitar os estados anotados acima, e em que o inibidor de HMG Co-A reductase seja a simvastatina.

Um aspecto dos métodos descritos neste documento diz respeito à utilização do ácido nicotinico ou de outro composto agonista de receptores de ácido nicotinico, numa quantidade que seja eficaz para conseguir os resultados descritos neste documento, e de um antagonista de receptores de DP que module selectivamente o receptor DP sem modular substancialmente o receptor CRTH2. Deste modo, o antagonista do receptor DP tem uma afinidade para com o receptor DP (isto é, um valor de K±) que seja pelo menos 10 vezes maior (um valor numérico de Κ± inferior) do que a sua 16 ΡΕ2116244 afinidade para com o receptor CRTH2. Qualquer composto que interactue selectivamente com DP de acordo com estas linhas gerais é considerado "selectivo para DP". A frase "na ausência de um rubor substancial" refere-se ao efeito colateral que está amiúde presente quando se administra o ácido nicotinico em quantidades terapêuticas. 0 efeito de rubor do ácido nicotinico torna-se habitualmente menos frequente e menos severo à medida que o paciente desenvolve uma tolerância para o fármaco empregue em doses terapêuticas, mas o efeito de rubor ocorre mesmo assim numa certa extensão. Deste modo, "na ausência de um rubor substancial" refere-se à menor severidade da rubor, quando ela ocorrer, ou à ocorrência de um menor número de acontecimentos de rubor. Preferivelmente, a incidência da rubor é diminuida em pelo menos um terço, mais preferivelmente a incidência é reduzida a metade, e de preferência a incidência da rubor é diminuida em dois terços ou mais. De igual forma, a severidade é diminuida em pelo menos um terço, mais preferivelmente é reduzida a metade, e de preferência é diminuida em dois terços ou mais. É claramente preferida uma diminuição de cem por cento da incidência e da severidade da rubor, mas isto não é necessário. 0 regime de dosagem especifico bem como as quantidades a utilizar para um qualquer paciente em especial, dependerão de uma série de factores nos quais se incluem a idade, a massa corporal, o estado geral de saúde, 17 ΡΕ2116244 o sexo, a dieta, a altura da administração, a via de administração, a taxa de excreção, a combinação de fármacos e a severidade do estado do paciente. A ponderação destes factores está bem ao alcance das capacidades e conhecimentos normais de um médico, para o efeito de determinar a quantidade da dosagem eficaz do ponto de vista terapêutico ou eficaz do ponto de vista profiláctico, que é necessária para impedir, contrariar, ou parar a progressão do estado. É de esperar que os compostos descritos neste documento sejam administrados diariamente durante um periodo de tempo apropriado para tratar ou par impedir o estado de doença relevante em relação a cada paciente, incluindo-se o caso em que um episódio terapêutico dure meses, anos, ou seja para o resto da vida do paciente.

Pode administrar-se um ou mais agentes activos adicionais em conjunto com os compostos descritos neste documento. 0 agente ou agentes activos adicionais podem ser compostos que modifiquem os lípidos, ou agentes que possuam outras actividades farmacêuticas, ou agentes que tenham tanto efeitos como modificadores de lipidos, como outras actividades farmacêuticas. Incluem-se nos exemplos de agentes activos adicionais que se podem empregar, sem que a estes eles se limitem, os inibidores da HMG-CoA reductase, nos quais se incluem as estatinas quer nas suas formas de lactona, quer nas de di-hidroxiácido correspondentes, bem como o seus sais e ésteres aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, incluindo mas não se limitando à lovastatina (veja-se a Patente US No. 4.342.767), simvastatina (veja-se 18 ΡΕ2116244 a Patente US No. 4.444.784), a forma de cadeia aberta a di-hidroxi-ácido da simvastatina, em especial os seus sais de cálcio ou de amónio, a pravastatina, em especial o seu sal sódico (veja-se a Patente US No. 4.346.227), a fluvastatina, e em especial o seu sal sódico (veja-se a Patente US No. 5.354.772), a atorvastatina, em especial o seu sal cálcico (veja-se a Patente US No. 5.273.995), a pitavastatina também referida como NK-104 (veja-se a publicação internacional de PCT número WO 97/23.200) e a rosuvastatina, também conhecida como ZD-4522, (CRESTOR®; veja-se a Patente US No. 5.260.440); inibidores de HMG-CoA sintase; inibidores de esqualeno epoxidase; inibidores de esqualeno sintetase (também conhecidos como inibidores de esqualeno sintase), inibidores de acil-coenzima A:colesterol aciltransferase (ACAT) incluindo os inibidores selec-tivos de ACAT-1 ou ACAT-2 bem como os inibidores duplos de ACAT-1 e ACAT-2; inibidores da proteina microssomal de transferência de triacilgliceróis (MTP); inibidores de lipase endotelial; sequestrantes de ácidos biliares; indutores de receptores de LDL; inibidores de agregação de plaquetas, por exemplo antagonistas de receptores de glicoproteina Ilb/IIIa fibrinogénio e aspirina; agonistas de receptores gama activados de proliferador de peroxissoma humano (PPARy) incluindo os compostos habitualmente referidos como glitazonas, por exemplo pioglitazona e rosiglitazona e incluindo aqueles compostos que se podem considerar como pertencendo à classe estrutural conhecida como das tiazolidinodionas bem como os agonistas de PPARy que não pertençam à classe estrutural das 19 ΡΕ2116244 tiazolidinodionas; agonistas de PPARa tais como o clofibrato, o fenofibrato incluindo o fenofibrato microni-zado, e o gemfibrozil; agonistas duplos de PPAR α/γ; vitamina Be (também designada piridoxina) e os seus sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico tais como o sal com HC1; vitamina B12 (também conhecida como cianoco-balamina); ácido fólico ou um seu sal ou éster aceitável do ponto de vista farmacêutico tais como o sal sódico e o sal com metilglucamina; vitaminas antioxidantes tais como as vitaminas C e E e betacaroteno; bloqueadores beta; antagonistas de angiotensina II tais como o losartan; inibidores do enzima de conversão da angiotensina tais como o enalapril e o captopril; inibidores da renina, bloqueadores do canal de cálcio tais como a nifedipina e o diltiazem; antagonistas da endotelina; agentes que aumentam a expressão do gene ABCA1; compostos inibidores da proteína de transferência dos ésteres de colesterilo (CETP), compostos inibidores da proteína activadora da 5-lipoxigenase (FLAP), compostos inibidores da 5-lipoxigenase (5-LO), ligandos de receptor de farnesóide X (FXR) incluindo tanto os seus antagonistas e agonistas; ligandos alfa do Receptor X Hepático (LXR)-alfa, ligandos LXR-beta, compostos bifos-fonato tais como alendronato sódico; inibidores de ciclo-oxigenase-2 tais como o rofecoxib e o celecoxib; e compostos que atenuam a inflamação vascular.

Também se podem utilizar na invenção presente inibidores da absorção do colesterol. Este tipo de compostos bloqueia o movimento do colesterol do lúmen intestinal 20 ΡΕ2116244 para os enterócitos da parede do intestino delgado, diminuindo deste modo os teores em colesterol. São descritos exemplos de inibidores de absorção do colesterol nas Patentes U.S. Nos. 5.846.966, 5.631.365, 5.767.115, 6.133.001, 5.886.171, 5.856.473, 5.756.470, 5.739.321, 5.919.672, e nos pedidos de PCT Nos. WO 00/63.703, WO 00/60.107, WO 00/38.725, WO 00/34.240, WO 00/20.623, WO 97/45.406, WO 97/16.424, WO 97/16.455, e WO 95/08.532. O inibidor de absorção do colesterol mais digno de nota é o ezetimibe, também conhecido como 1-(4-fluorofenil)-3(R)-[3(S)-(4-fluorofenil)-3-hidroxipropil)]-4(S)-(4-hidroxifenil)-2-azetidinona, descrito nas Patentes U.S. Nos. 5.767.115 e 5.846.966.

As quantidades eficazes do ponto de vista terapêutico dos inibidores de absorção do colesterol incluem dosagens de entre cerca de 0,01 mg/kg e cerca de 30 mg/kg de massa corporal por dia, preferivelmente entre cerca de 0,1 mg/kg e cerca de 15 mg/kg.

Para pacientes diabéticos, os compostos utilizados na invenção presente podem ser administrados com medicamentos convencionais para a diabetes. Por exemplo, um paciente diabético que recebe tratamento tal como descrito neste documento também pode estar a tomar insulina ou um medicamento antidiabético oral. Um exemplo de um medicamento antidiabético oral útil para este efeito é a metformina. 21 ΡΕ2116244

Informação Acerca da Dosagem 0 ácido nicotínico tal como utilizado neste documento refere-se ao ácido piridina-3-carboxílico. No entanto, também se incluem os sais e os solvatos do ácido nicotínico para se utilizarem na invenção presente, e são úteis na invenção presente numerosos sais e solvatos do ácido nicotínico aceitáveis do ponto de vista farmacêutico. Os metais alcalinos, em especial o sódio e o potássio, formam sais que são úteis tal como se descreve neste documento. De igual modo os metais alcalino-terrosos, em especial o cálcio e o magnésio, formam sais que são úteis tal como se descreve neste documento. Diversos sais de aminas, tais como compostos de amónio e de amónio substituído, também formam sais que são úteis tal como se descreve neste documento. De forma semelhante, são úteis na invenção presente formas solvatadas de ácido nicotínico. Incluem-se nos exemplos o hemi-hidrato, os mono-, di-, tri-e sesqui-hidratos. Tem um interesse especial para utilização na invenção presente o ácido livre, o ácido piridina-3-carboxílico.

Os antagonistas DP, tal como se descrevem neste documento, são úteis para diminuir ou para impedir o efeito de rubor em pacientes que sejam mamíferos, nomeadamente em seres humanos, a dosagens de entre tão pouco como cerca de 0,01 mg/kg/dia e tanto como cerca de 100 mg/kg/dia, administrados numa dose diária única ou em doses repartidas. As dosagens serão preferivelmente de entre cerca de 22 ΡΕ2116244 0,1 mg/dia até tanto como cerca de 1,0 g/dia, numa dose diária única ou em doses repartidas. A dose de ácido nicotinico que é útil tal como se descreve neste documento varia entre tão pouco como cerca de 50 mg/dia e tanto como cerca de 8 g/dia, numa dose diária única ou em doses repartidas. Podem utilizar-se inicialmente dosagens menores, e aumentarem-se as dosagens em seguida para diminuir ainda mais o efeito de rubor.

As dosagens de agonistas dos receptores do ácido nicotinico que não sejam ácido nicotinico variam entre limites bem diferentes. Em geral, os agonistas dos receptores do ácido nicotinico que são úteis para tratar a aterosclerose serão administrados em quantidades que variam entre tão pouco como cerca de 0,01 mg/kg/dia, e tanto como cerca de 100 mg/kg/dia, em dose única ou em doses repartidas. Uma dosagem representativa é de entre cerca de 0,1 mg/dia e cerca de 2 g/dia.

Os compostos utilizados na invenção presente podem ser administrados por qualquer via convencional de administração. A via de administração preferida é a via oral. O ácido nicotinico, o seu sal ou o solvato de um destes, ou o outro agonista dos receptores de ácido nicotinico, bem como o antagonista DP podem ser administrados em conjunto ou sequencialmente, numa única dose diária ou 23 ΡΕ2116244 em doses repartidas, por exemplo duas, três ou quatro vezes ao dia, sem que tal represente algo que não esteja incluído na invenção. Caso se pretenda uma libertação especialmente prolongada, tal como um produto com libertação prolongada que apresente um perfil de libertação que se prolongue durante mais do que 24 horas, podem administrar-se as dosagens dia sim, dia não. No entanto, são preferidas as doses diárias únicas. De igual modo, podem administrar-se as dosagens de manhã ou à tarde.

Composições farmacêuticas

As composições farmacêuticas descritas neste documento contêm em geral ácido nicotínico ou outro antagonista dos receptores de ácido nicotínico receptor, um antagonista do receptor DP e um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Incluem-se nos exemplos de composições adequadas para administração oral os comprimidos, as cápsulas, os trociscos, as pastilhas, as suspensões, os pós dispersáveis ou os grânulos, as emulsões, os xaropes e os elixires. Incluem-se nos exemplos de ingredientes utilizáveis como veículos os diluentes, os aglomerantes, os desintegrantes, os lubrificantes, os adoçantes, os saborizantes, os corantes, os conservantes, e outros semelhantes. Incluem-se nos exemplos de diluentes, por exemplo, carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio e fosfato de sódio. Incluem-se nos exemplos de agentes de granulação e ΡΕ2116244 - 24 - de desintegrantes o amido de milho e o ácido alginico. Incluem-se nos exemplos de agentes aglomerantes o amido, a gelatina e a goma-arábica. Incluem-se nos exemplos de lubrificantes o estearato de magnésio, o estearato de cálcio, o ácido esteárico e o talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou ser revestidos por técnicas conhecidas. Tais revestimentos podem atrasar a desintegração e, portanto, a absorção no tracto gastrointestinal, proporcionando por esta razão uma actuação prolongada ao longo de um periodo mais longo.

Numa concretização da invenção, mistura-se ácido nicotinico, um seu sal ou um solvato destes, ou outro agonista dos receptores de ácido nicotinico, com o antagonista do receptor DP e com o veiculo, para se formar um produto misturado bem determinado. Este produto de mistura bem determinado pode ser um comprimido ou uma cápsula para utilização por via oral.

Mais especificamente, noutra concretização da invenção, mistura-se ácido nicotinico, ou um seu sal ou um solvato destes, ou outro agonista de receptores de ácido nicotinico (entre cerca de 1 e cerca de 1.000 mg) com o antagonista de DP (entre cerca de 1 e cerca de 500 mg) e com o veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico, obtendo-se um comprimido ou uma cápsula para utilização por via oral. A libertação prolongada ao longo de um periodo de 25 ΡΕ2116244 tempo mais longo pode ser especialmente importante na formulação das composições farmacêuticas com ácido nicotinico. Os comprimidos de libertação prolongada são especialmente preferidos. Por exemplo, pode empregar-se um material que induz um atraso temporal tal como o monoestearato de glicerilo ou o diestearato de diglicerilo. a forma de dosagem pode também ser revestida pelas técnicas descritas nas Patentes U.S. Nos. 4.256.108; 4.166.452 e 4.265.874 para se formarem comprimidos terapêuticos osmóticos para libertação controlada.

Outras tecnologias de libertação controlada também se encontram disponíveis e elas estão incluídas neste documento. Incluem-se nos ingredientes típicos que são úteis para tornar mais lenta a libertação do ácido nicotinico em comprimidos de libertação prolongada, diversos compostos celulósicos, tais como a metilcelulose, a etilcelulose, a propilcelulose, a hidroxipropilcelulose, a hidroxietilcelulose, a hidroxipropilmetilcelulose, a celulose microcristalina, amido, e outros semelhantes. Também são utilizáveis em formulações para libertação prolongada diversos materiais naturais e sintéticos. Incluem-se nos exemplos destes materiais ácido algínico e diversos alginatos, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto, goma de alfarroba, goma de guar, gelatina, diversos álcoois de cadeia comprida, tais como o álcool cetílico e a cera de abelhas.

Um comprimido com libertação prolongada que é 26 ΡΕ2116244 especialmente interessante utiliza ácido nicotinico em conjunto com um ou mais dos compostos celulósicos listados acima, comprimidos a um comprimido de libertação prolongada para formar uma matriz polimérica. 0 composto antagonista de DP pode se incorporado na mistura antes da compressão, ou pode ser revestido incluindo-o na superfície exterior da matriz.

Numa concretização que é mais interessante, mistura-se o ácido nicotinico com o material que forma a matriz e comprime-se para se formar um núcleo com libertação prolongada, e mistura-se o composto antagonista de DP com um ou mais agentes de revestimento e em seguida reveste-se a superfície exterior do núcleo.

Opcionalmente a ainda com mais interesse, apresenta-se um comprimido tal como se descreveu acima, revestido também com um inibidor de HMG Co-A reductase, por exemplo, simvastatina. esta concretização específica contém portanto três ingredientes activos, o inibidor da HMG Co-A reductase e o antagonista de DP, que se podem libertar substancialmente aquando da ingestão, e o ácido nicotinico que pode ser libertado ao longo de um período mais longo tal como se descreveu acima.

Os períodos de tempo de libertação típicos para comprimidos de libertação prolongada de acordo com a invenção presente variam entre cerca de 1 até tanto como cerca de 48 horas, preferivelmente entre cerca de 4 e cerca 27 ΡΕ2116244 de 24 horas, e mais preferivelmente entre cerca de 8 e cerca de 16 horas.

As cápsulas de gelatina duras constituem outra forma de dosagem sólidas para utilização por via oral. Tais cápsulas incluem de forma semelhante os ingredientes activos misturados com materiais de transporte tal como se descreveram acima. As cápsulas de gelatina moles incluem os ingredientes activos misturados com solventes misciveis com a água, tais como o propilenoglicol, o PEG e o etanol, ou com um óleo tal como óleo de amendoim, parafina liguida ou azeite.

Também se consideram úteis as suspensões de base aquosa contêm o material activo misturado com excipientes adequados para o fabrico de suspensões aquosas. Incluem-se nestes excipientes agentes de suspensão, por exemplo carboximetilcelulose sódica, metilcelulose, hidroxipropil-metilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto e goma-arábica; agentes dispersantes ou molhantes, por exemplo lecitina; conservantes, por exemplo para-hidroxibenzoato de etilo ou de n-propilo, corantes, saborizantes, edulcorantes e outros semelhantes.

Os pós dispersáveis e os grânulos adequados para a preparação de suspensões de base aquosa por adição de água proporcionam os ingredientes activos misturados com um agente dispersante ou molhante, um agente de suspensão e um ou mais conservantes. Exemplificam-se os agentes dispersan- 28 ΡΕ2116244 tes ou molhantes adequados através daqueles que já se mencionaram acima.

Podem também formular-se xaropes e elixires. A composição farmacêutica que tem interesse especial é um comprimido com libertação prolongada que é constituído por ácido nicotínico ou um seu sal ou um solvato de um destes, um antagonista de receptor DP e um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Outra composição farmacêutica ainda que tem interesse mais específico é um comprimido com libertação prolongada que seja constituído por ácido nicotínico, um antagonista de receptor DP, e um inibidor de HMG Co-A reductase, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Uma outra composição farmacêutica ainda que ainda tem um interesse especial é um comprimido com libertação prolongada constituído por ácido nicotínico, um antagonista de receptor DP e simvastatina em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Uma outra composição farmacêutica ainda que ainda tem um interesse especial é um comprimido com libertação prolongada constituído por ácido nicotínico, e um antagonista de receptor DP seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído pelos compostos A a AJ, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico. 29 ΡΕ2116244

Uma outra composição farmacêutica ainda que ainda tem um interesse especial é constituida por ácido nicotinico, e um antagonista de receptor DP seleccionado de entre os elementos do conjunto constituído pelos compostos A, B, D, E X, AA, AF, AG, AH, AI e AJ, em conjunto com um veiculo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Uma outra composição farmacêutica ainda que ainda tem um interesse especial é constituida por ácido nicotinico, e o composto antagonista de receptor DP, A, em conjunto com um veiculo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Uma outra composição farmacêutica ainda que tem mais interesse é constituida por ácido nicotinico, e o composto antagonista de receptor DP, B, em conjunto com um veiculo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Uma outra composição farmacêutica ainda que tem mais interesse é constituida por ácido nicotinico, e o composto antagonista de receptor DP, D, em conjunto com um veiculo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Uma outra composição farmacêutica ainda que tem mais interesse é constituida por ácido nicotinico, e o composto antagonista de receptor DP, E, em conjunto com um veiculo aceitável do ponto de vista farmacêutico. 30 ΡΕ2116244

Uma outra composição farmacêutica ainda que tem mais interesse é constituída por ácido nicotínico, e o composto antagonista de receptor DP, X, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Uma outra composição farmacêutica ainda que tem mais interesse é constituída por ácido nicotínico, e o composto antagonista de receptor DP, AA, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Uma outra composição farmacêutica ainda que tem mais interesse é constituída por ácido nicotínico, e o composto antagonista de receptor DP, AF, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Uma outra composição farmacêutica ainda que tem mais interesse é constituída por ácido nicotínico, e o composto antagonista de receptor DP, AG, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Uma outra composição farmacêutica ainda que tem mais interesse é constituída por ácido nicotínico, e o composto antagonista de receptor DP, AH, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Uma outra composição farmacêutica ainda que tem mais interesse é constituída por ácido nicotínico, e o composto antagonista de receptor DP, AI, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico. 31 ΡΕ2116244

Uma outra composição farmacêutica ainda que tem mais interesse é constituída por ácido nicotínico, e o composto antagonista de receptor DP, AJ, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Ainda outra composição farmacêutica ainda que tem ainda mais interesse é constituído por ácido nicotínico, um dos compostos antagonistas de receptor DP enumerados acima e simvastatina, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Ainda outra composição farmacêutica ainda que tem ainda mais interesse é constituído por ácido nicotínico, um dos compostos antagonistas de receptor DP seleccionado de entre o conjunto constituído pelos compostos A a AJ e simvastatina, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Ainda outra composição farmacêutica ainda que tem ainda mais interesse é constituído por ácido nicotínico, um dos compostos antagonistas de receptor DP seleccionado de entre o conjunto constituído pelos compostos A, B, E, X, AA, AF, AG, AH, AI e AJ e simvastatina, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico. 0 termo "composição", para além de incluir as composições farmacêuticas descritas acima, também inclui qualquer produto que resulte, directa ou indirectamente, da 32 ΡΕ2116244 combinação, complexação ou agregação de quaisquer dois, ou mais, dos ingredientes activos ou excipientes, ou da dissociação de um ou mais dos ingredientes, ou de outro tipo de reacções ou interacções de um ou mais dos ingredientes. A composição farmacêutica da invenção presente inclui portanto qualquer composição manufacturada misturando ou combinando de outra forma os compostos, quaisquer ingredientes activos adicionais, e os excipientes aceitáveis do ponto de vista farmacêutico.

Outro aspecto da invenção diz respeito à utilização de ácido nicotínico ou de um seu sal ou de um solvato destes, ou de um outro agonista dos receptores de ácido nicotínico e de um antagonista de DP, na manufactura de um medicamento. Este medicamento tem as utilizações que se descrevem neste documento.

Mais especificamente, outro aspecto da invenção diz respeito à utilização do ácido nicotínico ou de um seu sal ou de um solvato destes, ou de um outro agonista dos receptores de ácido nicotínico, de um antagonista de DP e de um inibidor de HMG Co-A reductase, tal como a simvasta-tina, na manufactura de um medicamento. Este medicamento tem as utilizações que se descrevem neste documento.

Para além do ácido nicotínico, que é o antagonista dos receptores de ácido nicotínico de referência, já foram descritos numerosos agonistas dos receptores do ácido nicotínico. As publicações seguintes descrevem compostos que são agonistas dos receptores de ácido nicotínico: 33 ΡΕ2116244

Lorenzen, A. et al., Molecular Pharmacology 59: 349- 357 (2001),

Lorenzen, A. et al., Biochemical Pharmacology 64: 645-648 (2002),

Soga, T. et al., Biochemical and Biophysical Research Comm. 303: 364-369 (2003),

Tunaru, S. et al., Nature Medicine 9: 352-355 (2003), Wise, A. et al., Journal of Biological Chemistry 278: 9869-9874 (2003), e

Van Herk, T. et al., Journal of Medicinal Chemistry 46: 3945-3951 (2003) .

Anota-se que os agonistas parciais dos receptores de ácido nicotinico, tais como aqueles que são referidos em van Herk, et al., se incluem nas composições presentes bem como nos métodos de tratamento.

Para além disto, o receptor de ácido nicotinico foi identificado e caracterizado no WO 02/084.298 A2, publicado a 24 de Outubro de 2002 em Soga, T. et al., Tunaru, S. et al., e Wise, A. et al. (citações acima). Já foram publicados numerosos compostos antagonistas de receptor DP que são úteis e estão incluídos nos métodos da invenção presente. Por exemplo, podem obter-se antagonistas do receptor DP de acordo com WO 01/79.1609, publicado a 25 de Outubro de 2001, com EP 1.305.286, publicada a 2 de Maio de 2003, WO 02/94.830 publicado a 28 34 ΡΕ2116244 de Novembro de 2002 e WO 03/062.200, publicado a 31 de Julho de 2003. Pode sintetizar-se o composto AB consoante a descrição incluida no WO 01/66.520 Al, publicado a 13 de Setembro de 2001, pode sintetizar-se o Composto AC consoante a descrição incluida no WO 93/022.814 Al, publicado a 20 de Março de 2003, e podem sintetizar-se os compostos Ad e AE consoante a descrição incluida no WO 03/078.409. Podem sintetizar-se outros compostos representativos antagonistas do receptor DP utilizados na invenção presente consoante os exemplos que se proporcionam adiante. EXEMPLO 1 Ácido [5-[(4-clorofenil)tio]-4-(metilsulfonil)- 6,7,8, 9-tetra-hidropirido[3,2-Jb] indolizin-6-il] acético (Composto G) SOjMe

/~CI N N

CPzH

Passo 1 4-Cloronicotinaldeído

Preparou-se o composto em titulo tal como descrito por F. Marsais et al., J. Heterocyclic Chem., 25, 81 (1988).

Passo 2 4-(Metiltio)nicotinaldeído

Adicionou-se a uma solução de NaSMe (9,5 g, 135 35 ΡΕ2116244 mmol) em MeOH (250 mL) o 4-cloronicotinaldeído (13,5 g, 94,4 mmol) do Passo 1 em MeOH (250 mL) . Manteve-se a mistura reaccional a 60°C durante 15 minutos. Verteu-se a mistura sobre NH4C1 e EtOAc. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com H20 e secou-se sobre Na2S04. Purificou-se então o composto sobre silicagel com 50 % de EtOAc em Hexanos para se obter o composto em titulo.

Passo 3 (2Z)-2-Azido-3-[4-(metiltio)piridin-3-il]prop-2-enoato de metilo

Adicionou-se uma solução de 4-(metiltio)nicoti-naldeído (4,8 g, 31 mmol) e azidoacetato de metilo (9,0 g, 78 mmol) em MeOH (50 mL) a uma solução de 25 % de NaOMe em MeOH (16,9 mL, 78 mmol) a -12°C. Monitorizou-se a temperatura interna e manteve-se a entre -10°C e -12°C durante os 30 minutos que durou a adição. Agitou-se então a mistura resultante sobre um banho de gelo durante diversas horas, e depois de um dia para o outro sobre um banho de gelo numa dependência fria. Verteu-se então a suspensão sobre uma mistura de gelo e NH4C1, e filtrou-se a suspensão passados 10 minutos de agitação. Lavou-se o produto com H20 fria e secou-se então em vazio para se obter o composto em titulo sob a forma de um sólido bege (7,4 g), que continha alguns sais. Purificou-se então o composto sobre silicagel, com EtOAc.

Passo 4 4- (Metiltio)-lH-pirrolo[2,3-b]piridina-2- carboxilato de metilo 36 ΡΕ2116244

Aqueceu-se lentamente uma suspensão do composto do Passo 3 (0,40 g, 1,6 mmol) em xilenos (16 mL) até 140°C. Passados 15 minutos a 140°C, arrefeceu-se a amarela até à temperatura ambiente. Tem que se ter cuidado devido à possibilidade de um aquecimento quando se forma azoto. Arrefeceu-se então a suspensão até 0°C, filtrou-se e lavou-se com xileno para se obter o composto em título.

Passo 5 4-(Metiltio)-6-oxo-6,7,8,9-tetra-hidro-pirido[3,2-b]indolizina-7-carboxilato de metilo

Adicionou-se a uma solução do composto do Passo 4 (0,35 g, 1,6 mmol) em DMF (20 mL) a 0°C, NaH (1,2 eq.). Passados 5 minutos, adicionaram-se-lhe nBu4NI (0,10 g) e 4-bromobutirato de etilo (0,40 mL) . Passada 1 h à temperatura ambiente, verteu-se a mistura reaccional sobre uma solução saturada de NH4C1 e EtOAc. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com H20 e secou-se sobre NaS04. Depois de uma evaporação, purificou-se o produto em bruto por cromato-grafia "flash". Dissolveu-se então o bis-éster em THF (7,0 mL) e adicionou-se uma solução 1,0 6 M de terc-butóxido de potássio em THF (2,2 mL), a 0°C. Passada 1 h à temperatura ambiente, verteu-se então a mistura reaccional sobre solução saturada de NH4C1 e EtOAc. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre Na2S04 e evaporou-se sob pressão reduzida para se obter o composto em título sob a forma de uma mistura dos ésteres etílico e metílico. 37 ΡΕ2116244

Passo 6 4-(Metiltio)-8,9-di-hidropirido[3,2-b]in-dolizin-6(7H)-ona

Adicionaram-se ao composto do Passo 5, (0,32 g) ,

EtOH (8,0 mL) e HC1 concentrado (2,0 mL) . Aqueceu-se a suspensão resultante ao refluxo durante 5 h. A mistura reaccional foi retomada em EtOAc e solução aquosa de Na2CC>3. Separou-se a fase orgânica e evaporou-se para se obter o composto em titulo.

Passo 7 (2E,2ZH-4-(metiltio)-8,9-di-hidropirido- [3,2-b]indolizin-6(7H)-ilideno]etanoato

Adicionaram-se a uma solução em DMF (12 mL) de fosfonoacetato de trietilo (0,45 g, 2,17 mmol), na H a 80 % (0,06 g, 2,00 mmol) e o composto do Passo 6 (0,22 g, 1,00 mmole). Passadas 4 h a 55°C, verteu-se a mistura reaccional sobre solução saturada de NH4C1 e EtOAc. Separou-se a fase orgânica e evaporou-se sob pressão reduzida. Purificou-se o produto em bruto por cromatografia "flash" para se obter o composto em titulo.

Passo 8 (4- (Metiltio)-6,7,8,9-tetra-hidropirido- [3,2-b]indolizin-6-il]acetato de etilo

Dissolveu-se o composto do Passo 7 em MeOH - THF aquecendo para se dissolver. Adicionou-se a esta solução depois de arrefecida, à temperatura ambiente, PtC>2, e manteve-se a mistura resultante durante 18 h sob uma 38 ΡΕ2116244 pressão atmosférica de hidrogénio. Filtrou-se cuidadosamente a mistura reaccional através de Celite utilizando CH2CI2. Evaporou-se o filtrado sob pressão reduzida para se obter o composto em titulo. Em alternativa, pode hidro-genar-se o composto do Passo 7 com Pd(OH)2 em EtOAc sob 40 PSI de H2 durante 18 h.

Passo 9 [4-(Metilsulfonil)-6,7,8,9-tetra-hidropi-rido[3,2-b]indolizin-6-il]acetato de etilo

Adicionaram-se ao composto do Passo 8 (0,08 g, 0,27 mmol) em MeOH (3,0 mL) , Na2W04 (0,10 g) e H202 a 30 % (600 pL) . Passada 1 h, retomou-se a mistura reaccional em H20 e EtOAc. Lavou-se a fase orgânica com H20, separou-se e evaporou-se. Purificou-se o composto em titulo por cromatografia "flash".

Passo 10 [5-[(4-Clorofenil)tio]-4-(metilsulfonil) -6,7,8,9-tetra-hidropirido[3,2-b]indolizin-6-il]acetato de etilo

Adicionou-se a uma solução em 1,2-dicloroetano (2,0 mL) de dissulfureto de 4,4'-diclorodifenilo (0,24 g) , S02C12 (50 pL) . Adicionou-se esta mistura (= 180 pL) ao composto do Passo 9 (0,05 g) em DMF (2,0 mL). Seguiu-se o decurso da reacção por RMN de 1H e manteve-se a mistura à temperatura ambiente até já não existir matéria-prima. Verteu-se a mistura reaccional sobre solução saturada de NaHCCb e EtOAc. Separou-se a fase orgânica, evaporou-se e 39 ΡΕ2116244 purificou-se o composto em titulo por cromatografia "flash".

Passo 11 Ácido [5-[(4-Clorofenil)tiol-4-(metil-sulfonil)-6,7,8,9-tetra-hidropirido[3,2-b]indolizin-6-il]acético

Adicionou-se a uma solução do composto do Passo 10 numa mistura a 1/de THF-MeOH, NaOH 1 N. Passadas 18 h à temperatura ambiente, retomou-se a mistura reaccional em solução saturada de NH4C1 e EtOAc. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre Na2S04 e evaporou-se para se obter o composto em titulo. RMN de XH (500 MHz 1H) , 8, 60 (d, 1H) r 7,80 (d, 2H) , 4, 65 (m, 1H) r 4,20 (m, 3H) , 2,80 to 2 ,10 (m , 6H) # acetona- d6) δ 11, 00 (s Ig 1H) , 7,20 (d, 2H) , 7, 00 (d 1H) , 3,75 (m, 1H) , 3, 35 (s EXEMPLO 2 Ácido_[5-[(4-clorofenil)tiol-4-(metiltio)-6,7, 8, 9-tetra-hidropirido [3,2-Jb] indolizin-6-il] acético (Composto H) SMe

r

Cl

Ν' 'Ν' γ 'C02H

Pode preparar-se o composto em titulo a partir do 40 ΡΕ2116244 composto do Passo 8 do Exemplo 1, de um modo semelhante ao descrito nos Passos 10 e 11 do Exemplo 1. m/z 418. EXEMPLO 3 Ácido [5-[(3,4-diclorofenil)tio]-4-(metilsulfo-nil)-6,1,8,9-tetra-hidropirido[3,2-b]indolizin-6-il]acético (Composto I)

Cl SO?Me

S—í

VjT'

Cl

J Ν ' ΊΜ dd "COoH O

Preparou-se o composto em título tal como descrito no Exemplo 1, partindo de dissulfureto de bis (3,4-diclorofenilo) no Passo 10. RMN de ΧΗ (500 MHz, acetona- -d6) δ 8, 55 (d, 1H) 7, 85 (d, 1H) , 7, 35 (d, 1H) , 7,15 (s, 1H) , 6, 95 (d, 1H) 4, 60 (m, 1H) , 4, 15 (m, 1H) , 3, 80 (m, 1H) , 3, 40 (s, 3H) 2,80 to 2,10 (m, 6H). m/z 484.

Separaram-se os enantiómeros com uma coluna Chiralcel OD de 25 cm x 20 mm, utilizando 30 % de iso-propanol, 17 % de etanol, 0,2 % de ácido acético, em hexa- no, com um caudal de 8 mL/minuto. Verificaram-se as suas 41 ΡΕ2116244 purezas com uma coluna Chiralcel OD de 25 cm x 4,6 mm utilizando 35 % de isopropanol, 0,2 % de ácido acético em hexano, com um caudal de 1,0 mL/minuto. Enantiómero mais móvel: Tr = 9,7 minutos, enantiómero menos móvel: Tr 11,1 minutos. EXEMPLO 4 7, Ácido [5-(4-clorobenzoil)-4-(metilsulfonil)-6, 8, 9-tetra-hidropirido [3,2-Jb] indolizin-6-il] acético (Composto J)

Passo 1 [5-(4-Clorobenzoil)-4-(metiltio)-6,8,9- tetra-hidropirido[3,2-b]indolizin-6-il]acetato de etilo

Adicionou-se a uma solução de cloreto de 4-clorobenzoilo (0,30 g, 1,7 mmol) em 1,2-dicloroetano (6,0 mL) , AICI3 (0,24 g, 1,8 mmole) . Passados 5 minutos adicio-nou-se-lhe uma solução de [4-(metiltio)-6, 7,8, 9-tetra-hidropirido [3, 2-b] indolizin-6-il] acetato de etilo do Passo 8 do Exemplo 1 (0,15 g, 0,47 mmole) em 1,2-dicloroetaoe (6,0 mL) . Passadas 4 h, a 80°C, retomou-se a mistura reac-cional em EtOAc e solução aquosa de NaHCC>3. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre Na2SC>4 e evaporou-se. Purificou-se o composto em titulo por cromatografia "flash". 42 ΡΕ2116244

Passo 2 [5-(4-Clorobenzoil)-4-(metilsulfonil)-6,7,8,9-tetra-hidropirido[3,2-b]indolizin-6-il]acetato de etilo

Adicionaram-se a uma solução de [5-(4-cloroben-zoil)-4-(metiltio)-6,7,8-9-tetra-hidropirido[3,2-b]indoli-zin-6-il]acetato de etilo (0,12 g, 0,27 mmole) em MeOH (5,0 mL) , Na2W04 (0,1 g) e H2O2 a 30 % (300 yL) . Agitou-se a mistura reaccional a 55°C durante 1 h. Retomou-se então a mistura reaccional em H2O e EtOAc. Lavou-se a fase orgânica com H20, secou-se sobre Na2S04 e evaporou-se. Purificou-se o composto em titulo por cromatografia "flash".

Passo 3 Ácido [5—(4—clorobenzoil)—4—(metilsulfo— nil)-6,7,8.9-tetra-hidropirido[3,2-b]indolizin-6-il]acético

Tratou-se [5- (4-clorobenzoil)-4-(metilsulfonil)-6,7-8,9-tetra-hidropirido[3,2-b]indolizin-6-il]acetato de etilo tal como se descreveu no Passo 11 do Exemplo 1 para se obter o composto em titulo. RMN de XH (500 MHz, acetona-d6) δ 8,55 (d, 1H) , 7,90 (d, 2H) , 7,65 (d, 1H) , 7,45 (d, 2H) , 4,55 (m, 1H) , 4,25 (m, 1H) , 3,45 (m, 1H) , 3,20 (s, 3H) , 2,05 to 3,00 (m, 6H) . m/z 446. ΡΕ2116244 43 EXEMPLO 5 Ácido_[5- (4-bromofenil) tio] -4- (metilsulfonil) - 6,1,8,9-tetra-hidropirido[3, 2-b]indolizin-6-il]acético (Composto K)

Preparou-se o composto em título tal como descrito no Exemplo 1, partindo de dissulfureto de 4,4'-dibromodifenilo. RMN de ΧΗ (500 MHz, Acetona-d6) δ 8, 60 (d, 1H) , 7,80 (d, 1H) , 7,35 (d, 2H) , 7,00 (d, 2H) , 4, 65 (m, 1H) , 4,20 (m, 1H) , 3, 80 (m, 1H), 3 ,35 (s, 3H), 2, 80 to 2, 10 (m, 6H) . EXEMPLO 6, MÉTODO 1 Ácido [9-[(3,4-Diclorofenil)tio]-1-(metilsulfonil) -7,8-di-hidro-6g-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-il]acético (Composto L)

Passo 1 2-(Metiltio)nicotinaldeído

Preparou-se o composto em título a partir do 2- 44 ΡΕ2116244 bromonicotinaldeído (A. Numata, Synthesis 1999 pág. 306), tal como se descreveu no Passo 2 do Exemplo 1, excepto que se aqueceu a solução a 55°C durante 2 h.

Passo 2 (2Z)-2-Azido-3-[2-(metiltio)piridin-3- il]prop-2-enoato de metilo

Preparou-se o composto em título tal como descrito em Exemplo 1 Passo 3.

Passo 3 4-(Metiltio)-lH-pirrolo[3,2-c]piridina-2-carboxilato de metilo

Aqueceu-se uma solução de (2Z)-2-azido-3-[2-(metiltio)piridin-3-il]prop-2-enoato de metilo (1,00 g, 4,00 mmol) em mesitileno (50 mL) a 160°C durante 1 h. Arrefeceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente e depois até 0°C, separou-se o precipitado por filtração e lavou-se com mesitileno frio para se obter o composto em título.

Passo 4 1-(Metiltio)-8-oxo-7,8-di-hidro-6H-piri- do[3,4-b]pirrolizina-7-carboxilato de metilo

Adicionaram-se a uma suspensão de 4-(metiltio)-lfí-pirrolo [3,2-c] piridina-2-carboxilato de metilo (0,30 g, 1,35 mmol) em THF (3 mL) e tolueno (12,0 mL), uma solução 1,06 M em THF de terc-butóxido de potássio (1,42 mL / 1,41 mmol)e acrilato de metilo (300 yL) . Aqueceu-se a mistura 45 ΡΕ2116244 resultante a 80°C durante 18 h. Retomou-se a mistura em EtOAc e solução de NH4C1, e filtrou-se através de Celite. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre Na2S04 e filtrou-se para se obter o composto em titulo.

Passo 5 1-(Metiltio)-6,7-di-hidro-8H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-ona

Transformou-se o 1-(metiltio)-8-oxo-7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4 —b]pirrolizina-7-carboxilato de metilo no composto em titulo, tal como se descreveu no Passo 6 do Exemplo 1.

Passo 6 [8-Hidroxi-l-(metiltio-7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-il]acetato de etilo

Sonicou-se uma mistura de 1-(metiltio)-6,7-di-hidro-8fí-pirido [3,4-b] pirrolizin-8-ona (0,15 g, 0,68 mmol) , bromoacetato de metilo (0,34 mL) , Zn-Cu (0,226 g) em THF (3,0 mL) durante 2 h. Aqueceu-se então a mistura a 60°C durante 5 minutos até se completar a reacção. Retomou-se a mistura reaccional em EtOAc e NH4C1. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e evaporou-se sob pressão reduzida para se obter o composto em titulo. Purificou-se o composto por cromatografia "flash".

Passo 7 [1-(Metiltio)-7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-il]acetato de metilo 46 ΡΕ2116244

Adicionou-se a Nal (0,300 g) em CH3CN (3,2 mL) , TMSCI (0,266 mL) . Adicionou-se esta mistura a uma suspensão de [ 8-hidroxi-l- (metiltio) -7, 8-di-hidro-6fí-pirido [3,4- b]pirrolizin-8-il]acetato de metilo (0,15 g, 0,515 mmol) em CH3CN (1,5 mL) , num banho de água. Passada meia hora, retomou-se a mistura reaccional em EtOAc e NaHC03. Separou-se a fase orgânica, lavou-se com tiossulfato de sódio, secou-se sobre MgS04 e evaporou-se. Purificou-se o composto em titulo por cromatografia "flash".

Passo 8 [1-(metilsulfonil)-7,8-di-hidro-6H-piri- do[3,4-b]pirrolizin-8-il]acetato de metilo

Transformou-se o [1-(metiltio)-7,8-di-hidro-6fí-pirido[3, 4-b]pirrolizin-8-il]acetato de metilo no composto em titulo tal coo se descreveu no Passo 9 do Exemplo 1.

Passo 9 Ácido [9-[(3,4-diclorofenil)tiol-1-(metilsulfonil) -7, 8-di-hidro-6H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-il]acético

Transformou-se o [1-(metilsulfonil)-7,8-di-hidro-βίί-pirido [3, 4-b] pirrolizin-8-il] acetato de metilo no composto em titulo talo como se descreve nos Passos 10 e 11 do Exemplo 1, utilizando dissulfureto de (3,4-dicloro-fenilo) no Passo 10. RMN de (500 MHz, acetona-de) δ 8,35 (d, 1H) 7,80 (d, 1H) , 7, 35 (d, 1H) , 7,15 (s, 1H) , 6,95 (d, 1H) , 47 ΡΕ2116244 4,55 (m, 1H) , 4,35 (m, 1H) , 3,90 (m, 1H), 3,30 (s, 3H), 3, 15 (m, 1H) , 3,05 (m, 1H) , 2,80 (m, 1H), 2, 50 (m, 1H) . EXEMPLO 6, MÉTODO 2 {9—[(3,4-Diclorofenil)tio]-1-(metilsulfonil)-7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-il}acético

Passo 1 1- (Metiltio)-7,8-di-hidro-6H-pirido[3, 4- b]pirrolizin-8-ol

Adicionou-se a uma suspensão de 1-(metiltio)-6,7-di-hidro-8H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-ona do Passo 5 do Método 1 do Exemplo 6, (0,55 g, 2,2 mmol) em EtOH (10 mL) e THF (1 mL) , NaBH4 (0,10 g, 2,6 mmol), a 0°C. Passados 30 minutos à temperatura ambiente, terminou-se a reacção adicionando água à mistura. Evaporaram-se os solventes sob pressão reduzida e adicionaram-se EtOAc e H20 ao residuo. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre MgS04 e evaporou-se. Lavou-se o composto em titulo com EtOAc/Hexano e filtrou-se.

Passo 2 2-[1-(Metiltio)-7,8-di-hidro-6H-pirido- [3,4-b]pirrolizin-8-il]malonato de dimetilo

Adicionaram-se a uma suspensão de 1-(metiltio)-7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-ol (0,54 g, 2,1 mmol) em THF (10 mL) a -78°C, NaHMDS 1 M em THF (2,35 mL, 2,4 mmol) e clorofosfato de difenilo (0,53 mL, 2,6 mmol). 48 ΡΕ2116244

Passados 30 minutos adicionaram-se malonato de dimetilo (0,73 mL, 6,4 mmol) e NaHMDS 1 M em THF (6,8 mL, 6,8 mmol). Arrefeceu-se a mistura reaccional até 0°C e depois aqueceu-se até à temperatura ambiente. Retomou-se a mistura em EtOAc e NH4C1. Secou-se a fase orgânica sobre MgS04, filtrou-se e evaporou-se. Purificou-se o composto em titulo por cromatografia "flash".

Passo 3 [1-(Metiltio)-7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-il]-acetato de metilo

Adicionou-se a uma mistura de 2-[1-(metiltio)-7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4 —b]pirrolizin-8-il]malonato de dimetilo (0,59 g, 2,17 mmol) e DMSO (4 mL), NaCl (0,45 g) em H20 (0,45 mL) . Passadas 18 h a 150°C, retomou-se a mistura reaccional em EtOAc e Η20. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre Na2S04 e evaporou-se. Purificou-se então o composto em titulo por cromatografia "flash".

Passo 4 Ácido [9-[(3,4-diclorofenil)tio]-1-(me-tilsulfonil)-7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-il]acético

Obteve-se o composto em titulo a partir de [1-(metiltio)-7, 8-di-hidro-6H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-il]acetato de metilo, tal como se descreveu nos Passos 8 e 9 do Método 1 do Exemplo 6. ΡΕ2116244 49 EXEMPLO 7

Acido [10-[(3,4-diclorofenil)sulfanil]-1-(metil-sulfonil)-6,7,8,9-tetra-hidropirido[3,4-b]indolizin-9-il]acético (Composto M) SC^Me

Passo 1 [1-(Metilsulfonil)-6,7,8,9-tetra-hidro pirido [3, 4-b] indolizin-9-il] acetato de metilo

Preparou-se o composto em título a partir do produto do Passo 3 do Exemplo 6, do mesmo modo que se descreveu nos Passos 5 a 9 do Exemplo 1.

Passo 2 Ácido [10-[(3,4-diclorofenil)sulfanil]-1-(metilsulfonil)-6,7,8,9-tetra-hidropirido[3,4-b]indolizin-9-il]acético

Transformou-se o produto do Passo 1 no composto em título do mesmo modo que nos Passos 10-11 do Exemplo 1, utilizando o dissulfureto de (3,4-diclorofenilo) no Passo 10. MS M+l=485. ΡΕ2116244 50 EXEMPLO 8 Ácido (4-(metilsulfonil)-5-{[4-(trifluorometil)-fenil] tio}-6, 7, 8, 9-tetra-hidropirido [3,2-Jb] indolizin-6-il)acético (Composto N)

tal como de bis [4-

Preparou-se o composto em título descrito no Exemplo 1, utilizando dissulfureto trifluorometil)fenilo]. RMN de ΧΗ (500 MHz, 7,75 (d, 1H) , 7,45 (d, 2H) , 4,15 6H) . (m, 1H) , 3, 80 (m, 1H), 3 acetona-de) δ 8,55 (d, 1H) 7,15 (d, 2H) , 4,55 (m, 1H) 30 (s, 3H), 2, 8 0 to 2, 10 (m m/z 513(M+l). EXEMPLO 9

Acido [5- [ (2-cloro-4-fluorofenil)tio)-4-(metilsulfonil) -6,7,8,9-tetra-hidropirido[3,2-b]indolizin-6- il]acético (Composto O)

Cl SOjMe

F

N N COjH 51 ΡΕ2116244

Preparou-se o composto em título tal como descrito no Exemplo 1, utilizando dissulfureto de bis (2-cloro-4-fluorofenilo). m/z 469 (M+l). EXEMPLO 10 7, Ácido_[4- (metilsulfonil) -5- (2-naftilltio) -6, 8, 9-tetra-hidropirido [3,2-Jb] indolizin-6-il] acético (Composto P) SQ2Me M3

N N co2h

Preparou-se o composto em título tal como descrito no Exemplo 1, utilizando dissulfureto de di(2-naftilo). M/z 467 (M+l). EXEMPLO 11 Ácido [5- [ (2,3-diclorofenil)tio]-4-(metilsulfo-nil) -6,7,8,9-tetra-hidropirido [3,2-Jb] indolizin-6-il] acético (Composto Q) ci ci

Preparou-se o composto em título tal como descri- 52 ΡΕ2116244 to no Exemplo 1, partindo de dissulfureto de bis (2,3-diclorofenilo) . RMN de (500 MHz, acetona- d6) δ 8, 85 (d, 1H) 7, 80 (d, 1H) , 7, 30 (d, 1H) , 7,00 (t, 1H) , 6, 60 (d, 1H) 4, 60 (m, 1H) , 4, 20 (m, 1H) , 3, 80 (m, 1H) , 3, 40 (s, 3H) 2,80 to 2,10 (m, 6H). EXEMPLO 12 Ácido_[5-[4-metilfenil)tiol-4-(metilsulfonil)- 6, 7,8, 9-tetra-hidropirido [3,2-Jb] indolizin-6-il] acético (Composto R)

CHa

Preparou-se o composto em título tal como descrito no Exemplo 1 utilizando dissulfureto de p-toluílo. RMN de (500 MHz, acetona-d6) δ 8,55 (d, 1H) 1H) , 6, 95 (m, 4H) , 4,60 (m, 1H) , 4,15 (m, 1H) 3,80 (m, 1H), 3,35 (s, 3H), 2,80 to 2,10 (m, 6H). EXEMPLO 13 Ácido [4-(metilsulfonil)-5-(feniltio)-6,7,8,9-te- tra-hidropirido [3,2-Jb] indolizin-6-il] acético (Composto S) ΡΕ2116244 53 S02Me

"N 'Ν' Ύ 'C02H

Preparou-se o composto em título tal como descrito no Exemplo 1 utilizando dissulfureto de difenilo. RMN de 1 H (500 MHz, acetona-dô) δ 8,55 (d, 1H) , 7,80 (d, 1H), 7,15 to 6, 90 (m, 5H) , 4,60 (m, 1H) , 4, 15 (m, 1H) , 3,75 (m, 1H) , 3,30 (s, 3H) , 2,80 to 2 ,10 (m, 6H) . EXEMPLO 14

Acido [5-[(2,4-diclorofenil)tio]-4-(metilsulfo-nil)-6, 7,8, 9-tetra-hidropirido[3,2-Jb] indolizin-6-il] acético (Composto T) SOjMe

Preparou-se o composto em título tal como descrito no Exemplo 1, utilizando dissulfureto de bis (2,4-diclorofenilo). Este dissulfureto havia sido preparado a partir de 2,4-diclorotiofenilo utilizando Br2 em éter. RMN de ΧΗ (500 MHz , acetona- -d6) δ 8,55 (d, 1H) 7, 85 (d, 1H) , 7, 35 (s, 1H) , 7,00 (d, 1H) , 6,65 (d, 1H) 4, 55 (m, 1H) , 4, 15 (m, 1H) , 3, 80 (m, 1H) , . 3,35 (s, 3H) 2,80 to 2,10 (m, 6H). ΡΕ2116244 54 EXEMPLO 15 Ácido [5-[(4-clorofenil)tio]-4-(metilsulfonil)-6,7,8, 9-tetra-hidropirido [4,3-Jb] indolizin-6-il] acético (Composto U) SOjMe

COjH

Preparou-se o composto em título tal como descrito no Exemplo 1, a partir de 3-cloronicotinaldeído (Heterocycles, pág. 151, 1993), excepto que a ciclização terminal foi levada a cabo adicionando a azida a decalina ao refluxo. RMN de ΧΗ (500 MHz, acetona-d6) δ 9,20 (s, 1H) , 8,85 (s, 1H) , 7,20 (d, 2H) , 7,00 (d, 2H) , 4,70 (m, 1H) , 4,30 (m, 1H) , 3, 75 (m, 1H) , 3,35 (s, 3H) , 2, 80 to 2, 10 (m, 6H) . EXEMPLO 16 Ácido [9—[(4-clorofenil)tiol-1-(metilsulfonil)-7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-il]acético (Composto V)

55 ΡΕ2116244

Preparou-se o composto em título a partir do produto do Passo 8 do Método 1 do Exemplo 6, tal como se descreve nos processos delineados nos Passos 10 e 11 do Exemplo 1, utilizando dissulfureto de bis(4-clorofenil) no Passo 10. RMN de ΧΗ (500 MHz, acetona- -d6) δ 8 , 25-8,3 (m 1H) , 7,71-7,75 (m, 1H) , 7,12-7,17 (m, 2H) , 6, 97-7,04 (m 2H) , 4,45-4,51 (m, 1H) , 4,32-4,39 (m, 1H) , 3, 73-3,80 (m 1H) , 3,29 (s, 3H) , 3, 15- 3,21 (m, 1H) , 2,99-3, 08 (m, 1H) 2, 66-2,73 (m, 1H) , 2,46-2,54 (m, 1H) . EXEMPLO 17

Acido (-)-[(4-clorobenzil)-7-fluoro-5-metanossul-fonil)-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il]acético (Composto E)

Passo 1: Ester etílico do ácido (+/-)-(7-fluoro-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il)acético. F. —-cojEt

N

H

Aqueceu-se ao refluxo uma solução de 10,00 g de 4-fluoro-2-iodoanilina, 6,57 g de 2-(2-oxociclopentil)ace- 56 ΡΕ2116244 tato de etilo e de 121 mg de ácido p-toluenossulfónico em 100 mL de benzeno, sob uma atmosfera de N2 e uma armadilha de Dean-Stark, durante 24 h. Passado este periodo, removeu-se o benzeno por destilação. Em seguida adicionaram-se 60 mL de DMF e desgaseificou-se a solução antes de se adicionarem sucessivamente 19 mL de base de Hunig e em seguida 405 mg de Pd(OAc)2· Aqueceu-se a solução a 115°C durante 3 h, e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Para terminar a reacção, adicionaram-se 300 mL de HC1 1 N e 200 mL de acetato de etilo e filtrou-se a mistura através de Celite. Separaram-se as fases e extraiu-se a fase aquosa por duas vezes com 200 mL de acetato de etilo. Combinaram-se as fases orgânicas, lavou-se com salmoura, secou-se sobre Na2S04 anidro, filtrou-se através de Celite e concentrou-se. Purificou-se adicionalmente o material em bruto por cromatografia "flash" eluindo com 100 % de tolueno, para se obter o composto em titulo. RMN de ΧΗ (acetona-de) δ 9, 76 (s ig, 1H) , 7,34 (dd, 1H) , 7,03 (d, 1H) , 6,78 (td, 1H) , 4,14 (q/ 2H) , 3,57 (m, 1H), 2,85-2,55 (m, 5H), 2,15 (m, 1H), 1,22 (t, 3H).

Passo 2: Ácido (+/-)-(7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il)acético

57 ΡΕ2116244

Adicionou-se a uma solução de 1,24 g do éster 1 em 14 mL de tetra-hidrofurano (THF) , à temperatura ambiente, 7 mL de MeOH e em seguida 7 mL de NaOH 2 N. Passadas 2,5 h, verteu-se a mistura reaccional para uma ampola de decantação contendo acetato de etilo (EtOAc)/HC1 1 N. Separaram-se as fases e extraiu-se a fase ácida por duas vezes com EtOAc. Misturaram-se as fases orgânicas, lavou-se com salmoura, secou-se sobre Na2S04 anidro e evaporou-se à secura para se obter um óleo em bruto que se utilizou tal e qual no passo seguinte (pureza > 90 %) . RMN de 1H NMR (acetona-dô) δ 10,90 (s lg, 1H) , 9,77 (s lg, 1H), 7,34 (dd, 1H) , 7,04 (dd, 1H) , 6,79 (td, 1H) , 3,56 (m, 1H) , 2, 90-2,50 (m, 5H) , 2,16 (m, 1H) , MS (-APCI) m/z 232,2 (M-H)'.

Passo 3: Ácido (+/-)-(5-bromo-7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il)acético

A -40°C adicionou-se a uma solução de 2,20 g do ácido do passo 2 (pureza > 90 %) em 30 mL de piridina, 6,85 g de tribrometo de piridínio (pureza de 90 %). Agitou-se a suspensão durante 10 minutos a 0°C e aqueceu-se à temperatura ambiente durante 30 minutos. Em seguida, removeu-se o solvente sem se aquecer, sob alto vácuo. Dissolveu-se o material em bruto em 40 mL de AcOH e 58 ΡΕ2116244 adicionou-se 2,88 g de Zn em pó, em porções, à solução fria a 0°C. Agitou-se a suspensão durante 15 minutos a 15°C e aqueceu-se até à temperatura ambiente durante mais 15 minutos. Nesta altura, terminou-se a reacção adicionando à mistura reaccional HC1 1 N, e verteu-se a mistura para uma ampola de decantação contendo salmoura/EtOAc. Separaram-se as fases e lavou-se a fase orgânica com água, com salmoura, secou-se sobre Na2SC>4 anidro e concentrou-se. Utilizou-se este material no passo seguinte sem qualquer purificação adicional. RMN de 1R (acetona-de) δ 10,77 (s lg, 1H) , 9,84 (s lg, 1H) , 7,09 (m, 2H) , 3,60 (m, 1H) , 2, 95-2, 65 (m, 4H) , 2,56 (dd, 1 H) , 2,19 (m, 1H) .

Passo 4: Acido (+/-)-[5-bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il]-acético

Adicionou-se a uma solução de 2,13 g do ácido do passo 3 em 10 mL de THF, uma solução de diazometano em éter, em excesso, até que o ácido fosse completamente consumido tal como demonstrado por monitorização por CCF. Em seguida removeram-se os solventes em vazio. Adicionou-se a uma solução do éster metílico em bruto que assim se formou em 20 mL de DMF, 539 mg de uma suspensão de NaH (a 59 ΡΕ2116244 60 % em óleo), a -78°C. Agitou-se a suspensão durante 10 minutos a 0°C, voltou a arrefecer-se a -78°C e tratou-se com 1,70 g de brometo de 4-clorobenzilo: Passados 5 minutos, aumentou-se a temperatura até 0°C e agitou-se a mistura durante 20 minutos. Nesta altura, terminou-se a reacção adicionando à mistura 2 mL de AcOH e verteu-se esta mistura para uma ampola de separação contendo HC1 1 N/EtOAc. Separaram-se as fases e lavou-se a fase orgânica com salmoura, secou-se sobre Na2SC>4 anidro e concentrou-se. Hidrolisou-se o material alquilado utilizando o procedimento descrito no passo 2. Purificou-se adicionalmente o material em bruto por trituração com EtOAc/hexanos para se obter o composto em titulo. RMN de ΧΗ (acetona-de) δ 10,70 (s i—1 1H) , 7,31 (d, 2H) , 7,18 (d, 1H), 7,06 (d, 1H) , 6,92 (d, 2H) , 5,90 (d, 1H) , 5,74 (d, 1H) , 3,61 (m, 1H), 3, 00-2,70 (m, 3H) , 2, 65 (dd, 1H) , 2,39 (dd, 1H) , 2,26 (m, 1H) , MS (-APCI) m/z 436,3, 434,5 (M-H)".

Passo 5: Ácido (+)-[5-bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il}acético

2h

Cl

Adicionou-se a uma solução de 2,35 g do ácido do passo 4 em 130 mL de EtOH a 80°C, 780 pL de (S) - (-)-1-(1- 60 ΡΕ2116244 naftil)etilamina. Arrefeceu-se a solução até à temperatura ambiente e agitou-se de um dia para o outro. Recristalizou-se o sal que se recuperou (1,7 g) a partir de 200 mL de EtOH. Depois de uma filtração, neutralizou-se o sal branco sólido com HC1 1 N e extraiu-se o produto com EtOAc. Lavou-se a fase orgânica com salmoura, secou-se sobre Na2S04 anidro e concentrou-se. Filtrou-se o material através de uma altura de SÍO2 eluindo com EtOAc para se obter o enantiómero em titulo. Os períodos de retenção para ambos os enantiómeros eram de respectivamente 7,5 minutos e de 9,4 minutos [coluna ChiralPak AD, hexano/2-propanol/ácido acético (a 95:5:0,1)]. O enantiómero mais polar tinha um ee de 98 %. ee = 98 %; período de retenção = 9,4 minutos [coluna ChiralPak AD: 250 x 4,6 mm, hexanos/2-propanol/ácido acético (a 75:25:0, 1)]; [oí]d21 = +39,2° (c 1,0, MeOH).

Passo 6: Ácido (-)-[4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-5-(metanossulfonil)-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]-indol-3-il}acético e o seu sal sódico

Em primeiro lugar esterificou-se o ácido do passo 5 (15,4 g) com diazometano. Levou-se a cabo a sulfonilação misturando o éster que assim se formou com 16,3 g de sal sódico do ácido metanossulfínico e com 30,2 g de CuI(I) em N-metilpirrolidinona. Desgaseificou-se a suspensão em caudal de N2, aqueceu-se a 150°C e agitou-se durante 3 h, 61 ΡΕ2116244 em seguida arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Para terminar a reacção, adicionaram-se à mistura 500 mL de acetato de etilo e 500 mL de hexanos e filtrou-se através de uma altura de SiCb eluindo com EtOAc. Concentraram-se as fases orgânicas. Dissolveu-se o óleo em bruto com EtOAc, lavou-se por três vezes com água e uma vez com salmoura, secou-se sobre Na2S04 anidro, filtrou-se e concentrou-se. Purificou-se ainda mais o material em bruto por cromatografia "flash" eluindo com um gradiente de 100 % de tolueno a 50 % de tolueno em EtOAc, para se obterem 14 g do éster sulfonado, que se hidrolisou utilizando o procedimento descrito no passo 2. Obteve-se o composto em titulo em resultado de duas recristalizações sucessivas, a partir de: acetato de isopropilo/heptano e de CH2Cl2/hexanos. RMN de 3H (500 MHz, acetona-de) δ 10,73 (s lg, 1H) , 7,57 (d, 2H, J= 8,8 Hz), 7,31 (m, 1H) , 7,29 (m, 1H) , 6,84 (d, 2H, J=8, 8 Hz), 6,29 (d, 1H, JAB =17,8 Hz), 5,79 (d, 1H, JAB= 17,8 Hz), 3,43 (m, 1H) , 2,98 (s, 3H) , 2,94 (m, 1H) , 2,85-2, 65 (m, 3H) , 2,42 (dd, 1H, Jj=16,l Hz, J2= 10,3

Hz), 2,27 (m, 1H) . RMN de 13C (125 MHz, acetona-d6) δ 173,0, 156,5 (d, JCf=237 Hz), 153, 9, 139, 2, 133,7, 133,3, 130,0 (d, JCf=8,9 Hz), 129, 6, 128,2, 127,5 (d, JCf=7,6 Hz), 122,2 (d, Jcf=4,2 Hz), 112,3 (d, JCf=29,4 Hz), 111,0 (d, JCF=22,6 Hz), 50,8, 44,7, 38, 6, 36, 6, 36, 5, 23,3. MS (-IQPA) m/z 436,1, 434,1 (M-H)-. ee = 97 %; Periodo de retenção = 15,3 minutos [coluna ChiralCel OD: 250 x 4,6 mm, hexanos/2-propanol/etanol/ácido acético (a 90:5:5:0.2)]; [a] D21 = - 29,3° (c 1,0, MeOH). Pf 175,0°C. 62 ΡΕ2116244

Preparou-se o sal sódico pelo tratamento de 6,45 g (14,80 mmol) do composto ácido acima em EtOH (100 mL) , com 14,80 mL de uma solução aquosa 1 N de NaOH. Removeu-se o solvente orgânico em vazio e dissolveu-se o sólido em bruto em 1,2 L de álcool isopropilico, ao refluxo. Diminuiu-se o volume final até 500 mL por destilação do solvente. O sal sódico cristalizava quando se arrefecia até à ta. Suspendeu-se o sal sódico cristalino em H2O, congelou-se usando um banho de gelo seco e liofilizou-se sob alto vácuo para se obter o composto em titulo sob a forma do sal sódico. RMN de XH (500 MHz DMSO-d6) δ 7,63 (dd, 1H, Ji=8,5 Hz, J2=2,6 Hz), 7,47 (dd, 1H, Ji=9,7 Hz, J2=2,6 Hz), 7,33 (d, 2H, J=8,4 Hz), 6,70 (d, 2H, J=8,4 Hz), 6,06 (d, 1H,

Jab= 17,9 Hz), 5,76 (d, 1H, Jab=17,9 Hz), 3,29 (m, 1H) , 3,08 (s, 3H) , 2,80 (m, 1H) , 2,69 (m, 1H) , 2,55 (m, 1H) , 2,18 (m, 2H) , 1,93 (dd, 1H, Ji=14,4 Hz, J2=9,l Hz).

EXEMPLO 17A

Processo alternativo para o ácido (+/-)-[5-bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclopen-ta[b]indol-3-il]acético (Exemplo 1, Passo 4)

Passo 1: Sal com dicilohexilamina (DCHA) do ácido (+/-)-7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il)acético 63 ΡΕ2116244

Aqueceu-se ao refluxo uma solução 0,526 M de 2-bromo-4-fluoroanilina em conjunto com (2-oxociclopentil)-acetato de etilo (1,5 eq.) e ácido sulfúrico (0,02 eq) em xileno, durante 20 horas. Removeu-se a água azeotropica-mente com uma armadilha de Dean-Stark. Monitorizou-se o decurso da reacção por RMN e passadas 20 horas observava-se em geral uma transformação de 80-85 % na imina interme diária pretendida. Lavou-se a mistura reaccional com uma solução 1 M de bicarbonato de sódio (0,2 volumes) durante 15 minutos, e evaporou-se a fracção orgânica. Destilou-se o xarope remanescente em vazio (0,5 mm de Hg) . Os xilenos residuais destilaram a 30°C, e em seguida recuperaram-se o excesso de cetona e a anilina por reagir na gama de temperaturas de 50-110°C; recuperou-se a imina na fracção que destilava a 110-180°C, sob a forma de um liquido translúcido castanho claro, com uma pureza de 83 %.

Adicionou-se então a imina intermediária a uma mistura desgaseifiçada de acetato de potássio (3 eq.), monohidrato de cloreto de tetra-n-butilamónio (1 eq.), acetato de paládio (0,03 eq) e N,N-dimetilacetamida (concentração final em imina = 0,365 M) . Aqueceu-se a mistura reaccional a 115°C durante 5 horas e deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente. Adicionou-se-lhe então KOH 3 N (3 eq.) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Diluiu-se a mistura reaccional com água (1,0 volume), lavou-se com tolueno (3x0,75 volumes). Acidificou-se a fase aquosa a pH 1 com HCl 3 N e extraiu-se 64 ΡΕ2116244 com éter metil-terc-butílico (2x0,75 volumes). Lavou-se o conjunto das fracções orgânicas com água (0,75 volumes). Adicionou-se diciclohexilamina (1 eq.) à mistura translúcida castanha clara e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 16 horas. Separou-se o sal por filtração, lavou-se com acetato de etilo, com éter metil-terc-butílico, e deixou-se secar para se obter o composto em titulo. Determinação : 94 A%. RMN de (500 MHz, CDC13) : δ 9,24 (s, 1H) , 7,16-7,08 (m, 2H) , 6,82 (t, 1H) , 6,2 (lg, 2H) , 3,6-3,5 (m, 1H) , 3, 04-2, 97 (m, 2H), 2,88-2,70 (m, 3H) , 2,66 (dd, 1H) , 2,45- 2,37 (m, 1H) , 2,13-2,05 (m, 2,05), 1,83 (d, 4H) , 1,67 (d, 2H), 1,55-1,43 (m, 4H), 1,33-1,11 (m, 6H).

Passo 2: Ácido (+/-)-(5-bromo-7-fluoro-l, 2,3, 4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il)acético

Arrefeceu-se uma suspensão do sal com DCHA do passo 1 acima em diclorometano (solução 0,241 M) a entre -20 e -15°C. Adicionou-se-lhe piridina (2 eq.) de uma só vez e adicionou-se gota a gota à suspensão bromo (2,5 eq.) ao longo de 30 a 45 minutos, mantendo a temperatura a entre -20°C e -15°C. (Na altura de cerca de 1/3 da adição do bromo, a mistura reaccional estava espessa e era necessária uma agitação eficiente. Eventualmente, após adição de cerca de metade do bromo, a viscosidade da mistura diminuiu de novo). Completada a adição, manteve-se a mistura reaccional durante mais uma hora a -15°C. Adicionou-se então ácido 65 ΡΕ2116244 acético (3,04 eq.) ao longo de 5 minutos e zinco em pó (3,04 eq.) em porções. (Adicionou-se uma porção de zinco a -15°C e manteve-se a mistura durante cerca de 5 minutos, para assegurar que a exotermia passava (a entre -15°C e -10°C)). Repetiu-se esta operação com cerca de 5 porções de zinco, ao longo de cerca de 30 minutos. Quando já não era aparente nenhuma exotermia, adicionou-se mais depressa o resto do zinco. A operação total levou entre cerca de 30 e 45 minutos.

Completada a adição, aqueceu-se a mistura até à temperatura ambiente, manteve-se durante 1 hora e concentrou-se. Adicionou-se à mistura reaccional éter metil-terc-butilico (MTBE, 0,8 volumes) e adicionou-se-lhe uma solução aquosa a 10 % de ácido acético (0,8 volumes). Manteve-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora (cristalização de sais, por exemplo de piridínio), e filtrou-se através de solka-floc®. Lavou-se o bolo de solka-floc com MTBE (cerca de 0,2 volumes) e transferiu-se o filtrado (bifásico, MTBE/aquoso) para um extractor. Lavou-se a fase orgânica com água (0,8 volumes). Concentrou-se o extracto em MTBE e passou-se para álcool isopropilico (IPA, 0,25 volumes) para se cristalizar o composto. Adicionou-se água (0,25 volumes) e manteve-se a mistura durante 1 hora. Adicionou-se mais água (0,33 volumes) ao longo de 1 hora. Completada a adição de água, manteve-se a mistura em fabrico durante mais uma hora, filtrou-se, e lavou-se com IPA/Água a 30/70 (0,15 volumes). Secou-se o bromoácido cristalizado numa estufa a +45°C. 66 ΡΕ2116244

Passo 3: Ácido (+/-)-[5-bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il]-acético

Dissolveu-se o bromoácido do passo 2 em dimetilacetamida (solução 0,416 M) e adicionou-se carbonato de sódio (2,5 eq.) numa só porção. Adicionou-se à mistura numa só porção o cloreto de 4-clorobenzilo (2,5 eq.) e aqueceu-se a 50°C durante 20 h. Arrefeceu-se a mistura até à temperatura ambiente e adicionou-se-lhe hidróxido de sódio 5 N (4,00 eq.) ao longo de 5 minutos (a temperatura subiu até +40°C). Manteve-se a mistura reaccional a 50°C durante cerca de 3 horas, arrefeceu-se até à temperatura ambiente e transferiu-se para um extractor L. Diluiu-se a solução com acetato de isopropilo (iPAc, 2 volumes) e arrefeceu-se até +15°C. Acidificou-se a solução com HC1 5 N até pH~2. Separaram-se as fases e lavou-se a fase orgânica com água (2x2 volumes). Concentrou· -se a solução em IPAc e passou-se para IPA (0,8 volumes) para se cristalizar o produto. Adicionou-se água (8 L) ao longo de 2 horas e filtrou-se a mistura para se obter o composto em titulo. Pode secar-se o material numa estufa a +40°C durante 24 horas. EXEMPLO 18

Acido (+/-)-{4-(1-(4-clorofenil)etil]-7-fluoro-5-methanesulfonil-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il}acético (Composto X) 67 ΡΕ2116244

Preparou-se o composto em título de acordo com a descrição sintética proporcionada no PCT W003/062.200 publicado a 30 de Julho de 2003. EXEMPLO 19

Acido (+/-)-[9-(4-Clorobenzil)-6-fluoro-metanos-sulfonil-2,3,4,9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acético (Composto Y)

Preparou-se o composto em título de acordo com a descrição sintética proporcionada no PCT W003/062.200 publicado a 30 de Julho de 2003. EXEMPLO 20 Ácido 4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-5-metanossulfo-nil-l-oxo-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il]acético (Composto Z) o

68 ΡΕ2116244

Preparou-se o composto em titulo de acordo com a descrição sintética proporcionada no PCT W003/062.200 publicado a 30 de Julho de 2003. EXEMPLO 21 Ácido {9-[(3,4-diclorofenil)tio]-l-isopropil-7,8-di-hidro-6if-pirido [3, 4-Jb] pirrolizin-8-il}acético (Enantió-mero A e Enantiómero B) (Composto AA)

Cl

Passo 1 2-Cloronicotinaldeído

Adicionou-se a uma solução de di-isopropilamina (110 mL, 780 mmol) em THF (500 mL) , uma solução 2,5 M em hexanos de n-BuLi (300 mL, 750 mmol), a -40°C. Passados 5 minutos, arrefeceu-se a mistura reaccional até -95°C e depois adicionaram-se-lhe sucessivamente DMPU (15 mL) e 2-cloropiridina (50 mL, 532 mmol). Aqueceu-se então a mistura resultante e agitou-se a -78°C durante 4 h. Em seguida, voltou a arrefecer-se a suspensão amarela até -95°C antes de se lhe adicionar DMF (70 mL) . Aqueceu-se a mistura reaccional final até - 78°C e agitou-se a esta temperatura durante 1,5 h. Verteu-se a mistura reaccional sobre uma solução aquosa fria de HC1 (3 N, 800 mL) e agitou-se 69 ΡΕ2116244 durante 5 minutos. Adicionou-se-lhe uma solução aquosa concentrada de NH4OH para ajustar o pH a 7,5. Extraiu-se a fase aquosa por três vezes com EtOAc. Lavou-se o conjunto das fases orgânicas com solução aquosa de NH4C1 e com salmoura, secou-se sobre Na2S04 anidro, filtrou-se e concentrou-se. Purificou-se melhor o material em bruto por eluição através de uma altura de silica com um gradiente desde 100 % de hexanos a 100 % de EtOAc, e cristalizou-se o produto de hexanos frios para se obter o composto em titulo sob a forma de um sólido amarelo claro.

Passo 2 (2Z)-2-Azido-3-(2-cloropiridin-3-il)prop-2-enoato de metilo

Adicionou-se uma solução de 2-cloronicotinaldeído (20,0 g, 139,9 mmol) e azidoacetato de metilo (32,2 mL, 349, 7 mmol) em MeOH (168 mL) , a uma solução de 25 % de NaOMe em MeOH (80 mL, 349 mmol), a -20°C. Monitorizou-se a temperatura interna que se manteve a ~ -20 °C durante os 30 minutos da adição. Agitou-se então a mistura resultante sobre um banho de gelo durante algumas horas, e em seguida de um dia para o outro sobre um banho de gelo numa dependência fria. Verteu-se então a suspensão sobre uma mistura de gelo com NH4C1, e depois de se agitar durante 10 minutos, filtrou-se. Lavou-se o produto com H20 fria e depois secou-se em vazio. Dissolveu-se o material em bruto em CH2C12 e adicionou-se MgS04. Filtrou-se a suspensão através de uma altura de silicagel, lavou-se com CH2C12. Concentrou-se o filtrado sob pressão reduzida e obteve-se um precipitado bege (20 g) do produto em titulo. 70 ΡΕ2116244

Passo 3 4-Cloro-l.ff-pirrolo[3,2-c]piridina-2-car-boxilato de metilo

Aqueceu-se ao refluxo uma solução de (2 Z)—2 — azido-3-[2-cloropiridin-3-il]prop-2-enoato de metilo (21 g, 88 mmol) em mesitileno (880 mL), durante 1 h. Arrefeceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente e depois até 0°C, separou-se o precipitado por filtração e lavou-se com hexano frio. Agitou-se o material de um dia para o outro em EtOAc/hexano a 1:20 para se obter, após uma filtração, o produto em titulo sob a forma de um sólido amarelo-claro (13,2 g).

Passo 4 l-Cloro-8-oxo-7,8-di-hidro-6.ff-pirido [3,4-Jb] pirrolizine-7-carboxilato de metilo

Adicionaram-se a uma suspensão de 4-cloro-lH-pirrolo[3,2-c]piridina-2-carboxilato de metilo (12,5 g, 59 mmol) em THF (116 mL) e tolueno (460 mL), uma solução 1,0 M em THF de terc-butóxido de potássio (64 mL, 64 mmol) e acrilato de metilo (55 mL, 611 mmol) . Aqueceu-se a mistura resultante a 100°C durante 18 h. Em seguida, arrefeceu-se a suspensão até à temperatura ambiente e verteu-se sobre uma mistura de solução aquosa saturada de NH4C1 (400 mL) e hexanos (400 mL). Decantaram-se os sólidos, filtraram-se e lavou-se com H2O e hexanos para se obter o composto em titulo. 71 ΡΕ2116244

Passo 5 l-Cloro-6, 7-di-hidro-8H-pirido [3, 4-Jb]pir-rolizin-8-ona

Adicionaram-se ao composto do passo anterior isopropanol (8,.0 mL) e HC1 concentrado (2,0 mL) com aquecimento a 100°C durante 1 h. Retomou-se a mistura reaccional em EtOAc e Na2CC>3. Separou-se a fase orgânica, evaporou-se para se obter o composto em titulo.

Passo 6 l-Isopropenil-6,7-di-hidro-8H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-ona

Adicionou-se a uma mistura de l-cloro-6,7-di-hidro-8H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-ona (5,0 g, 24,3 mmol), tris(dibenzidenoacetona)dipaládio(0) (1,0 g, 1,09 mmol) e trifenilarsina (2,70 g, 8,82 mmol) em DMF (100 mL) , tributilisopropenilestanano (9,60 g, 29,00 mmol). Desga-seificou-se a mistura resultante e aqueceu-se a 78°C durante 18 h. Evaporou-se o solvente sob pressão reduzida. Adicionaram-se CH2CI2 e Celite à mistura resultante, a qual em seguida se filtrou através de Celite. Purificou-se o composto em titulo por cromatografia "flash" (de 50 % a 100 % de EtOAc em Hexano).

Passo 7 (2E)-(l-isopropenil-6,7-di-hidro-8H-piri-do[3,4-b]pirrolizin-8-ilideno)etanoato de etilo

Adicionou-se a uma solução de l-isopropenil-6,7-di-hidro-8H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-ona (0,60 g, 2,8 72 ΡΕ2116244 mmol) e fosfonoacetato de trietilo (1,00 g, 4,46 iranol) em THF (24 mL) a -78°C, NaH a 80 % (0,12 g, 4,00 mmol), e deixou-se a mistura reaccional aquecer até 0°C, e depois até à temperatura ambiente. Verteu-se a mistura reaccional sobre uma solução saturada de NH4C1 e EtOAc. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre Na2S04 e evaporou-se. Purificou-se o composto em titulo por cromatografia "flash" (40 % de EtOAc em Hexano).

Passo 8 (l-isopropil-7,8-di-hidro-6H-pirido [3,4-b]pirrolizin-8-il)acetato de etilo

Adicionou-se a uma solução de (2E)- (1-isopro-penil-6,7-di-hidro-8H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-ilideno)- etanoato de etilo (0,40 g# 1,4 mmol) em MeOH (20 mL), Pd(OH)2 (0,20 g) . Agitou- -se a mistura sob 1 atm de H2 durante 3 h. Filtrou-se a mistura através de Celite e evaporou-se para se obter o composto em titulo.

Passo 9 {9-[(3,4-Diclorofenil)tio]-1-isopropil- 7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-il}acetato_de etilo

Adicionou-se a uma solução de dissulfureto de bis (3,4-diclorofenilo) (0,24 g, 0,67 mmol) em CH2C12 (5,6 mL) , SO2CI2 (0,036 mL) . Agitou-se a mistura amarela resultante à temperatura ambiente durante 1 h. Adicionou-se esta solução a uma solução de (l-isopropil-7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4 —b]pirrolizin-8-il)acetato de etilo (0,15 g, 0,52 73 ΡΕ2116244 mmol) em DMF (5,6 mL), a 0°C. Passadas 1,5 h a 0°C, verteu-se a mistura reaccional sobre uma solução saturada de NaHCC>3 e EtOAc. Separou-se a fase orgânica, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e evaporou-se. Purificou-se o composto em titulo por cromatograf ia "flash" (de 30 % a 40 % de EtOAc em Hexano).

Passo 10 Ácido {9—[(3,4-diclorofenil)tio]-1-isopropil-7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4-b]pirrolizin-8-il}acético

Adicionou-se a uma solução de {9-[(3,4-diclorofenil) tio]-l-isopropil-7,8-di-hidro-6H-pirido[3,4-b]pirro-lizin-8-il} acetato de etilo (0,23 g, 0,50 mmol) em THF (5 mL) e MeOH (2,5 mL) , NaOH 1,0 M (1,5 mL, 1,5 mmol). Depois de se agitar durante 18 h à TA, adicionou-se HOAc (0,25 mL) e evaporou-se o solvente. Retomou-se o resíduo em Et0Ac/H20, e lavou-se a fase orgânica com H20 e com salmoura. Depois de se secar sobre (Na2S04) , filtrou-se a solução e evaporou-se. Agitou-se o resíduo com EtOAc:He-xanos a 1:1 para se obter, após filtração, o composto em título sob a forma de um sólido branco. RMN de ΧΗ (MeOH-d4) (m, 1H) , 2,56-2,64 (m, 1H) (m, 1H) , 4,22-4,30 (m, 1H) (m, 1H) , 7,14-7,19 (m, 1H) (m, 1H) , 8,16-8,21 (m, 1H) . CD CM \—1 1 \—1 \—1 (m, 6H) , 2,47-2, 56 2,94-3,05 (m, 2H) , 3,81-3, 89 4,33-4,44 (m, 2H) , 6, 93-6, 99 7,33-7,39 (m, 1H) , 7,54-7, 59 74 ΡΕ2116244

Transformou-se o produto do Passo 10 no seu éster metílico utilizando CH2N2, e submeteu-se o éster a uma separação por HPLC sobre uma fase estacionária quiral (coluna Chiralcel OD de 2x25 cm) , eluindo com 12 % de 2-propanol em hexano a um caudal de 6 mL/minuto. O enantió-mero A (menos polar) tem um periodo de retenção de 31,9 minutos e o Enantiómero B (mais polar) tem um periodo de retenção de 35,5. Tanto A como B foram hidrolisados tal como no Passo 10 do Exemplo 17, para se obterem os enantiómeros A e B do composto em titulo. EXEMPLO 22 Ácido ((IR)-6-fluoro-8-(metilsulfonil)-9-{(IS)-1-[4-(trifluorometil)fenil]etil-2,3,4,9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il)acético (Composto AJ)

Passo 1: Cloreto de 2-(2-bromo-4-fluorofenil)-hidrazinio

Adicionou-se lentamente a uma suspensão de 2-bromo-4-fluoroanilina em HC1 concentrado (1,5 M) a -10°C, uma solução aquosa 10,0 M de NaN02 (1,1 eq.). Agitou-se a mistura durante 2,5 h a 0°C. Adicionou-se-lhe então lentamente uma solução fria (-30°C) de SnCl2 (3,8 M) em HC1 75 ΡΕ2116244 concentrado, enquanto se mantinha a temperatura interna inferior a 10°C. Agitou-se mecanicamente a mistura resultante durante 20 minutos a 10°C, e depois à temperatura ambiente durante 1 h. Filtrou-se a suspensão espessa e secou-se o sólido ao ar de um dia par o outro. Suspendeu-se de novo o sólido em HC1 frio e voltou a filtrar-se. Suspendeu-se o material seco em Et20, agitou-se durante 10 minutos, filtrou-se e secou-se ao ar de um dia para o outro para se obter o composto em titulo sob a forma de um sólido bege.

Passo 2: (+/-)-(8-Bromo-6-fluoro-2,3, 4, 9-tetra- hidro-l-ff-carbazol-l-il)acetato de etilo

Adicionou-se a uma suspensão do composto do Passo 1 (1 eq.) em AcOH (0,5 M) , (2-oxociclohexil) acetato de etilo (1 eq.) . Agitou-se a mistura ao refluxo durante 16 h, arrefeceu-se e removeu-se o AcOH por evaporação sob pressão reduzida. Diluiu-se o residuo com EtOAc e lavou-se com água e com solução aquosa saturada de NaHC03. Secou-se a fase orgânica sobre Na2S04 e concentrou-se. Purificou-se então um residuo sobre uma almofada de silicagel, eluindo com tolueno. Concentrou-se o filtrado e agitou-se em hexanos para se obter, após uma filtração, o composto em titulo sob a forma de um sólido branco. MS (+APCI) m/z 354,2 (M+H)+.

Passo 3: (+/-)-[6-Fluoro-8-(metilsulfonil)-2,3, 4,9-tetra-hidro-l.ff-carbazol-l-il]-acetato de etilo

Adicionaram-se a uma solução do composto do Passo 76 ΡΕ2116244 2 (1 eq.) em DMSO anidro (0,28 M) , metanossulfinato de sódio (3 eq.) e iodeto de cobre (3 eq.). Borbulhou-se N2 através da mistura durante 5 minutos e depois agitou-se a mistura reaccional a 100°C sob uma atmosfera de N2. Passadas 12 h, adicionaram-se mais metanossulfinato de sódio (2 eq.) e iodeto de cobre (2 eq.) . Agitou-se a mistura durante mais 12 h a 100°C, arrefeceu-se, diluiu-se com EtOAc e adicionou-se-lhe HCl 1 N para acidificar a mistura. Agitou-se a suspensão durante 30 minutos e filtrou-se através de Celite. Lavou-se o filtrado com água, secou-se sobre Na2S04 e concentrou-se. Filtrou-se o residuo através de uma almofada de silicagel, eluindo em primeiro lugar com tolueno para se removerem as impurezas não polares e depois com uma mistura a 2:1 de hexanos/EtOAc para eluir o produto pretendido. Concentrou-se o filtrado proveniente da eluição com a mistura de hexanos/EtOAc, para se obter o composto em titulo sob a forma de um sólido amarelo-claro. MS (-APCI) m/z 352,1 (M-H)-.

Passo 4: [(1R)-6-Fluoro-8-(metilsulfonil)-2,3, 4,9-tetra-hidro-l.ff-carbazol-l-il]acetato de etilo

Resolveu-se a mistura racémica do passo 3 por HPLC preparativa sobre uma coluna Chiralpak AD preparativa eluindo com uma mistura de 15 % de i-PrOH em hexano. O enantiómero mais polar (período de retenção mais longo) foi identificado como sendo o composto em título, com base na actividade do produto final. 77 ΡΕ2116244

Passo 5: [ (1R) -9-[(IS]-(4-Clorofenil)etil]-6-f luoro-8- (metilsulfonil) -2,3,4,9-tetra-hidro-lff-carbazol-l-il]acetato de etilo

Adicionou-se a uma solução do composto do Passo 4 (1 eq.), trifenilfosfina (1,5 eq.) e (IR)-1-(4-clorofe- nil)etanol (1,5 eq, preparado seguindo o processo geral descrito no Exemplo de Referência 1) em THF (0,175 M) , uma solução de azodicarboxilato de di-terc-butilo (2,1 M em THF, 1,5 eq.), ao longo de um período de 10 minutos.

Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2h e concentrou-se. Purificou-se o resíduo por cromatografia "flash" sobre silicagel, eluindo com 7 % de EtOAc em tolueno para se obter o produto pretendido (pureza de ~ 90 %), que se utilizou tal e qual na reacção seguinte.

Passo 6: Ácido [(IR)-9-[(IS)-1-(4-Clorofenil)-etil]-6-fluoro-8-(metilsulfonil)-2,3,4,9-tetra-hidro-l.ff-carbazol-l-il]acético e ácido [(IS)-9-[(IS)-1-(4-cloro-fenil)etil]-6-fluoro-8-(metilsulfonil)-2,3,4,9-tetra—hidro-lH-carbazol-l-il]acético

Adicionou-se a uma solução do composto do Passo 5 numa mistura a 2:1 de THF e metanol (0,1 M) , uma solução aquosa 1 M de LiOH (3 eq.). Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 h, adicionou-se-lhe AcOH e removeu-se o solvente por evaporação. Retomou-se o resíduo em Et0Ac/H20 e lavou-se a fase orgânica com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e concentrou-se. Agitou-se um 78 ΡΕ2116244 pouco o resíduo com 30 % de EtOAc em hexano, e suspendeu-se o produto em éter dietílico, sonicando-se durante 45 minutos, filtrou-se, e secou-se sob alto vácuo a 50°C durante 24 h para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco. MS (-APCI) m/z 462,1 (M-H).

Em alternativa, pariu-se de (+/-)-[6-fluoro-8-(metilsulfonil)-2,3,4,9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acetato de etilo para a reacção de alquilação no passo 5, para se obter uma mistura de 2 diastereómeros: [(IR)—9—[(IS)—1 — (4-clorofenil)etil]-6-fluoro-8-(metilsulfonil)-2,3,4,9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acetato de etilo e [ (IS)—9 — [ (IS)-1- (4-clorofenil)etil]-6-fluoro-8-(metilsulfonil)-2,3,4, 9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acetato de etilo. Resolveu-se esta mistura diastereomérica por hidrólise selectiva utilizando o processo que se segue para se obter o ácido [(IR)-9-[(IS)-1-(4-clorofenil)etil]-6-fluoro-8-(metilsulfonil)-2,3,4,9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acético pretendido.

Dissolveu-se a mistura diastereomérica de [(1R)-9- [ (IS)-1-(4-clorofenil)etil]-6-fluoro-8-(metilsulfonil) -2,3,4,9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acetato de etilo e [ (IS)—9—[(1S)-1-(4-clorofenil)etil]-6-fluoro-8-(metilsulfonil)-2, 3, 4, 9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il] acetato de etilo (1 eq.) numa mistura a 3,5/1 de THF/MeOH (0,25 M) e arrefeceu-se até 0°C. Adicionou-se-lhe lentamente uma 79 ΡΕ2116244 solução aquosa 1 N de LiOH (1 eq.) e agitou-se a mistura a 0°C durante 12 h ou até uma hidrólise quase completa do [(IR)-9-[(IS)-1-(4-clorofenil)etil]-6-fluoro-8-(metilsul-fonil)-2,3,4,9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acetato de eti-lo, sendo o outro diastereómero apenas ligeiramente hidro-lisado nestas condições. Adicionou-se AcOH e removeu-se o solvente por evaporação. Retomou-se o resíduo em Et0Ac/H20 e lavou-se a fase orgânica com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e concentrou-se. Separaram-se o [(IS)—9— [(IS) -1-(4-clorofenil)-etil]-6-fluoro-8-(metilsulfonil) - 2.3.4.9- tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acetato de etilo e o ácido [(IR)—9—[(IS)—] — (4-clorofenil)etil]-6-fluoro-8-(metilsulfonil) -2,3,4,9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acético por cromatografia "flash", eluindo com 40 % de EtOAc em hexanos contendo 1 % de AcOH, para se obter o ácido [(IR)— 9- [ 1S)-]- (4-clorofenil)etil]-6-fluoro-8-(metilsulfonil)- 2.3.4.9- tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acético pretendido com uma de>90 %, que se agitou um pouco na presença de 30 % de EtOAc em hexano para proporcionar o composto pretendido sob a forma de um sólido branco, com de>95 %.

Passo 7: [(IR)-6-Fluoro-8-(metilsulfonil)-2,3, 4.9- tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acetato de metilo

Adicionou-se a uma solução de ácido [(IR)— 9 — [ (IS)-1-(4-clorofenil)etil]-6-fluoro-8-(metilsulfonil)-2,3,4, 9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acético ([a]D=-226° em MeOH) em MeOH (0,1 M), 10 % de paládio sobre carbono (a 10 %, empeso). Borbulhou-se uma corrente de N2 através da 80 ΡΕ2116244 mistura durante 5 minutos. Agitou-se a mistura reaccional à TA sob uma atmosfera de H2 (balão tampão) durante 24 h e filtrou-se através de uma almofada de Celite, eluindo com CH2CI2. Removeram-se os solventes por evaporação sob pressão reduzida e agitou-se ligeiramente o residuo em MeOH para se obter o composto [(IR)-6-fluoro-8-(metilsulfonil)-2,3,4,9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il]acetato de metilo.

o=s=o ch3

Passo 8: Ácido ((IR)-6-fluoro-8-(metilsulfonil)-9-{(IS)-1-[4-(trifluorometil)fenil}etil)-2,3,4,9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il)acético (Composto AJ)

Adicionou-se a uma solução do composto do Passo 7 (1 eq.), trifenilfosfina (1,5 eq) e (IR)-[-[4-(trifluorometil) fenil] etanol (1,5 eq) em THF (0,2 M), uma solução de azodicarboxilato de di-terc-butilo (1 M em THF, 1,5 eq.) ao longo de um período de 20 minutos. Agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 e concentrou-se. Purificou-se o residuo por cromatografia "flash" sobre silicagel eluindo com 10 % de EtOAc em tolueno, para se obter o ((IR)-6-fluoro-8-(metilsulfonil)-9-{(1S)-1-[4-(trifluorometil) fenil]etil}-2,3,4,9-tetra-hidro-lH-carbazol-l-il)acetato de metilo (pureza de ~90 %) que utilizou tal e qual na reacção seguinte. 81 ΡΕ2116244

Adicionou-se lentamente a uma solução do éster acima (1 eq.) numa mistura a 3,5/1 de THF/MeOH (0,25 M) a 0°C, uma solução aquosa 1 N de LiOH (1 eq.), e aqitou-se a mistura a 0°C durante 16 h, ou até uma hidrólise quase completa do éster; nestas condições, o outro diastereómero em menor proporção tem uma velocidade de hidrólise muito menor. Adicionou-se AcOH e removeu-se o solvente em vazio. Retomou-se o resíduo em Et0Ac/H20 e lavou-se a fase orqânica com salmoura, secou-se sobre Na2S04, filtrou-se e concentrou-se. Para se remover o éster metílico que estava por reaqir, filtrou-se o resíduo através de uma almofada de silicagel eluindo primeiro com 10 % de EtOAc/tolueno e depois com 60 % de EtOAc/tolueno contendo 1 % de AcOH. Agitou-se brevemente o resíduo em 30 % de EtOAc/hexano e secou-se em alto vácuo a 50°C durante 16 h para se obter o composto em título sob a forma de um sólido branco com pureza e ee >95% (confirmado por HPLC quiral) . MS (-APCI) m/z 496;0 (M-H)'. [a]D= -181° em MeOH

Biologia

Os compostos utilizados na invenção presente que funcionam como antagonistas selectivos de DP demonstram uma afinidade (K±) para DP que é pelo menos 10 vezes maior (um valor numérico de Ki inferior) do que a afinidade (Ki) para os receptores CRTH2. Os antagonistas de DP típicos utilizados na invenção presente são selectivos em pelo menos 10 vezes para o receptor DP em relação ao receptor CRTH2. Mais especificamente, o antagonista selectivo do receptor DP é pelo menos 100 vezes mais selectivo para o 82 ΡΕ2116244 receptor DP do que para o receptor CRTH2. Ainda mais em especial, o antagonista selectivo do receptor DP é pelo menos 800-1.00 vezes mais selectivo para o receptor DP do que para o receptor CRTH2, isto é, a afinidade (Kj) para o receptor DP é 800-1.000 vezes maior do que a afinidade (Κ±) para o receptor CRTH2.

Tal como se utiliza neste documento, quando um composto "modula selectivamente o receptor DP", o composto liga-se ao receptor DP e antagoniza-o quando está presente numa concentração que se consegue obter usando doses terapêuticas, enquanto não modula substancialmente o receptor CRTH2 a essas concentrações que se conseguem em terapia.

Em geral, os antagonistas de DP que se utilizam neste documento apresentam uma afinidade (Kj.) para o receptor CRTH2 de cerca de 0,5 micromolar ou maior. Os compostos que apresentem uma afinidade de ligação para o CRTH2 de cerca de 0,5 micromolar ou mais, e uma selecti-vidade para o receptor DP em relação ao receptor CRTH2 de pelo menos 10 vezes, são úteis para inibir o efeito de rubor evidente quando se administra ácido nicotinico sem os referidos antagonistas de DP.

Determinação da Afinidade e da Selectividade de Compostos para Receptores DP e CRHT2 Recombinantes Humanos

Determinou-se a afinidade e a selectividade dos compostos para os receptores DP e CRTH2 utilizando ensaios 83 ΡΕ2116244 de ligação a radioligandos tais como os descritos em Abramovitz M., et ai. Biochem. Biophys. Acta (2000) 1483: 285-293, e em Sawyer N., et al. Br. J. Pharmacol. (2002); 137: 1163-1172. Em suma, estabeleceram-se linhas celulares estáveis que expressavam individualmente os receptores humanos DP e CRTH2, partindo de células embriónicas renais humanas (HEK) 293EBNA (Antigénio Nuclear do vírus de Epstein-Barr) (designadas linhas celulares HEK293E). Empre-garam-se fracções membranares preparadas a partir destas linhas celulares recombinantes em ensaios competitivos de ligação de equilíbrio com radioligandos, para se determinar a afinidade e a selectividade dos compostos para os receptores DP e CRTH2.

Subclonaram-se cADN correspondendo às sequências de comprimento integral de codificação para DP e para CRTH2, nos locais apropriados do vector de expressão em mamíferos pCEP4 (Invitrogen) e expressaram-se em células HEK293E. Prepararam-se as membranas por centrifugação diferencial (1.000 x g durante 10 minutos, e depois 160.000 x g durante 30 minutos, sempre a 4°C) seguindo-se uma lise das células por cavitação de azoto a 800 psi durante 30 minutos sobre gelo na presença de inibidores de proteases (AES LGF 2 mM, E-64 10 μΜ, leupeptina 100 μΜ e 0,05 mg/mL de pepstatina). Voltaram a suspender-se as pastilhas de 160.000 x g em HEPES 10 mM/KOH (pH 7,4) contendo EDTA 1 mM, a cerca de 5 a 10 mg/mL de proteína, por homogeneização de Dounce (Dounce A; 10 batimentos), congelaram-se em azoto líquido e armazenaram-se a -80°C. Levaram-se a cabo os 84 ΡΕ2116244 ensaios de ligação a receptores em volumes finais de incubação de 0,2 mL, em HEPES 10 mM/KOH (pH 7,4), contendo EDTA 1 mM, MnCl2 10 mM e 0,7 nM em [3H] PGD2 (200 Ci/mmol) . Iniciou-se a reacção por adição de proteína membranar (cerca de 30 yg para o DP e de 10 yg para o CRTH2) da fracção de 160.000 x g. Adicionaram-se os ligandos em sulfóxido de dimetilo (DMSO) mantido a uma concentração constante de 1 % (em volume) em todas as incubações. Determinou-se a ligação não específica na presença de PGD2 não radioactivo 10 yM. Levaram-se a cabo as incubações num pequeno incubador orbital à temperatura ambiente e durante 60 minutos. Terminou-se o ensaio de ligação por filtração "flash" através de um Unifilter GF/C (Canberra Packard) para 96 poços previamente molhado com tampão do ensaio de incubação isento de EDTA (a 4°C), utilizando um sistema de colheita de células Tomtec Mach III para 96 poços. Lavaram-se os filtros com 3 a 4 mL deste mesmo tampão, secaram-se durante 90 minutos a 55°C e determinou-se a radioactividade residual ligada a cada filtro por contagem de cintilação após adição de 50 yL de Ultima Gold F (Canberra Packard) , recorrendo a um contador 1450 MicroBeta (Wallac).

Definiu-se a ligação específica máxima como sendo a ligação total menos a ligação não específica na ausência de competidor. Determinou-se a ligação específica a cada concentração de composto que se expressou sob a forma de uma percentagem da ligação específica máxima. Construíram-se curvas sigmoidais de equilíbrio em competição expressando a percentagem da ligação específica máxima em função 85 ΡΕ2116244 da concentração do composto em teste, e analisaram-se utilizando um programa computacional concebido para o efeito que recorria a uma rotina de ajuste de curvas não lineares pelo método simplex, baseada numa equação de quatro parâmetros, para se determinar o ponto de inflexão (InPt). Determinou-se a afinidade de ligação para o composto em teste calculando a constante de inibição de equilíbrio (Ki) a partir da equação Ki = InPt/l+([radioligando]/Kd) , em que Kd é a constante de equilíbrio de dissociação para a interacção radioligando-receptor. Quando não se conseguia determinar o InPt, utilizou-se o IC50 (isto é, a concentração de composto em teste necessária para inibir 50 % da ligação específica máxima).

Em geral, os compostos utilizados na invenção presente demonstram valores de K± para o receptor DP de entre cerca de tão pouco como cerca de 0,4 nM e tanto como cerca de 16,3 nM. De igual modo, os compostos utilizados na invenção presente demonstram em geral valores de Ki para o receptor CRTH2 de entre tão pouco como 180 nM e tanto como 22.000 nM, ou mesmo maiores.

Efeito dos Compostos sobre a Vasodilatação Induzida por Ácido Nicotinico em Murganhos

Pode demonstrar-se a potência dos antagonistas selectivos de DP descritos neste documento utilizando um modelo em murganhos da rubor induzida pelo ácido nicotinico em seres humanos, medindo o efeito de inibição da rubor. 86 ΡΕ2116244

Mede-se o caudal sanguíneo na orelha dos murganhos (uma medida da vasodilatação, componente proeminente da rubor em seres humanos) após a administração de ácido nicotínico a murganhos previamente tratados com veículo (a título de controlo) ou com um antagonista de DP. Especificamente, utilizaram-se murganhos macho C57BL/6 (com ~25 g) no estudo. Avaliaram-se cinco murganhos em cada grupo em teste. Diluiu-se nembutal com água para se obter uma concentração final de 5 mg/mL, e injectou-se à taxa de 0,3 mL/murganho por via intraperitoneal. Dissolveram-se os antagonistas de DP em solução a 5 % de hidroxipropil-β- ciclodextrina, a uma concentração final de 5 mg/mL, e administraram-se os compostos por via intraperitoneal a volumes de 0,2 mL/murganho (~40 mpk). Dissolveu-se o ácido nicotínico em solução a 5 % de hidroxipropil-p-ciclodex- trina a uma concentração final de 12,5 mg/mL. Ajustou-se o pH da solução de partida de ácido nicotínico a 7,4 com NaOH 2 N, e injectou-se por via subcutânea nos murganhos a 0,2 mL/murganho (~100 mpk).

Monitorizou-se a perfusão na pele das orelhas dos murganhos com um dispositivo de criação de imagens de perfusão por efeito Doppler (PeriScan PIM II, Perimed, Suécia) de 30 em 30 segundos e ao longo de 15 minutos, iniciando-se 5 minutos antes da administração do ácido nicotínico. Calcularam-se as percentagens de alteração da perfusão média ao longo do período de 10 minutos após a administração, quer do veículo quer do ácido nicotínico, e gerou-se para cada animal um gráfico mostrando a percen- 87 ΡΕ2116244 tagem de alteração da perfusão média em relação ao tempo. Calculou-se então a área sob a curva (ASC) da perfusão média (% Δ x minutos) a partir de cada gráfico, e exprimiram-se os resultados sob a forma de ASC média ± Erro padrão da média, para cada grupo. 0 composto D suprimia a vasodilatação induzida por PGD-2 no murganho (Fig. 1) . Os antagonistas de DP testados suprimiam a vasodilatação induzida pelo ácido nicotinico no murganho; nas Figuras 2 e 3 ilustram-se dados para compostos seleccionados.

Todas as patentes, pedidos de patente e publicações que são citadas devem ser consideradas como integralmente incorporadas neste documento, por citação. Embora algumas concretizações preferidas hajam sido descritas em pormenor neste documento, consideram-se como abrangidas pelo âmbito da invenção numerosas outras concretizações alternativas a estas..

Lisboa, 25 de outubro de 2012

Claims (11)

1. ΡΕ2116244 1 REIVINDICAÇÕES 1. Uma combinação do composto E, ou um seu sal ou um solvato aceitável do ponto de vista farmacêutico deste:

   com ácido nicotinico ou um seu sal ou um solvato destes aceitável do ponto de vista farmacêutico e um inibidor de HMG Co-A reductase.
2. 2. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1, na qual o inibidor de HMG Co-A reductase seja seleccio-nado de entre lovastatina, simvastatina, forma aberta de di-hidroxiácido da simvastatina, pravastatina, fluvasta-tina, atorvastatina, pitavastatina e rosuvastatina.
3. 3. Uma combinação de acordo com a reivindicação 1, na qual o inibidor de HMG Co-A reductase seja a simvastatina .
4. 4. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, para utilização em terapia. 2 ΡΕ2116244
5. 5. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, para utilização no tratamento da aterosclerose, para aumentar os teores em HDL no soro, para tratar a dislipidémia, para diminuir os teores em VLDL ou LDL no soro, para diminuir os teores em triacilgliceróis no soro ou para diminuir o teor em lipoproteína(a) no soro.
6. 6. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, para utilização no tratamento de um estado de entre a aterosclerose ou a dislipidémia.
7. 7. Uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, para utilização no tratamento de um estado da reivindicação 5 ou da 6, na ausência de um rubor substancial.
8. 8. A utilização de uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, para o fabrico de um medicamento para o tratamento de um estado da reivindicação 5 ou da 6.
9. 9. A utilização de uma combinação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, para o fabrico de um medicamento para o tratamento de um estado da reivindicação 5 ou da 6, na ausência de um rubor substancial.
10. 10. A utilização de uma combinação constituída por uma combinação de qualquer uma das reivindicações 1 a 3 ΡΕ2116244 3, para o fabrico de um medicamento para o tratamento de um estado da reivindicação 5 ou da 6.
11. 11. A utilização de uma combinação constituída por uma combinação de qualquer uma das reivindicações 1 a 3, para o fabrico de um medicamento para o tratamento de um estado da reivindicação 5 ou da 6, na ausência de um rubor substancial. Lisboa, 25 de outubro de 2012