PT1624871E - Método de tratamento da aterosclerose, de dislipidémias e de estados relacionados, e composições farmacêuticas - Google Patents

Description

ΡΕ1624871 1 DESCRIÇÃO "MÉTODO DE TRATAMENTO DA ATEROSCLEROSE, DE DISLIPIDÉMIAS E DE ESTADOS RELACIONADOS, E COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS"

ESTADO DA TÉCNICA ANTERIOR À INVENÇÃO A niacina ou ácido nicotínico (ácido piridina-3-carboxílico) é um fármaco habitualmente conhecido pelo seu efeito de aumentar os teores de lipoproteinas de alta densidade (HDL) no soro. No entanto, o ácido nicotínico é frequentemente associado à dilatação dos casos cutâneos, por vexes denominada ruborização (flushing). Este efeito colateral é provocado pela libertação da prostaglandina D2 induzida pelo ácido nicotínico na pele, e é tão severa que muitos pacientes interrompem o tratamento com o ácido nicotínico. A invenção presente diz respeito ao tratamento da aterosclerose, das dislipidémias, da diabetes e de estado relacionados pela administração de ácido nicotínico ou de outro agonista dos receptores de ácido nicotínico em conjunto com um composto que diminua ou que elimine a vasodilatação cutânea que de outra forma ocorre, de tal modo que este tratamento possa continuar sem que ocorra uma ruborização substancial. Isto pode conseguir-se em seres humanos pela administração do ácido nicotínico ou de um agonista de receptores de ácido nicotínico e de um composto que antagonize o receptor da DP. 2 ΡΕ1624871 Há diversos subtipos de receptores que interac-tuam com a prostaglandina D2. Refere-se um receptor de prostaglandina D2 como sendo um "DP" e outro tipo de receptor de prostaglandina D2 é conhecido como um "CRTH2". A invenção presente utilizas antagonismo em relação ao receptor DP para impedir, minimizar ou diminuir a ruborização que de outra forma pode ocorrer. É consequentemente um objecto da invenção presente eliminar ou diminuir uma ruborização substancial (na sua frequência e/ou severidade) a titulo de efeito colateral durante o tratamento de seres humanos quanto à aterosclerose, à dislipidémia, à diabetes e a estados relacionados recorrendo ao ácido nicotinico ou a outro agonista de receptor de ácido nicotinico.

Outro objecto da invenção presente é proporcionar uma terapia de combinação da aterosclerose que minimize em geral os efeitos colaterais.

Um outro objecto ainda é proporcionar uma composição farmacêutica de combinação fixa, para utilização por via oral. A partir da descrição proporcionada neste documento serão aparentes estes e outros objectos da invenção. 3 ΡΕ1624871

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A invenção é ilustrada em relação às figures apensas a este documento, nas quais: A Figura 1 é um gráfico que mostra que o

Composto D inibe a vasodilatação induzida pela prostaglandina D2 em murganhos; A Figura 2 é um gráfico que mostra que o

Composto D inibe a vasodilatação induzida pelo ácido nicotinico em murganhos. A Figura 3 é um gráfico que mostra que outros compostos seleccionados inibem a vasodilatação induzida pelo ácido nicotinico em murganhos.

DESCRIÇÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO A niacina ou ácido nicotinico (ácido piridina-3-carboxícilo) é um fármaco que se conhece habitualmente em razão do seu efeito de elevar as concentrações de lipoproteínas de alta densidade (HDL), bem como de proporcionar outras alterações benéficas do perfil lipídico (diminuir a concentração em lipoproteina de muito baixa densidade (VLDL), de lipoproteina de baixa densidade (LDL), de triacilgliceróis, de ácidos gordos livres (FFA) e de lipoproteina (a) [Lp(a)]). 0 ácido nicotinico aumenta os teores em HDL quando é administrado a seres humanos em 4 ΡΕ1624871 doses eficazes do ponto de vista terapêutico, a entre cerca de 50 mg e até mesmo tanto quanto cerca de 8 gramas por dia. No entanto, o ácido nicotinico é frequentemente associado com vasodilatação cutânea, também denominada ruborização (flushing) . A ruborização inclui tipicamente um avermelhamento da pele, acompanhado por calor, comichão ou irritação. Ela pode ser extremamente desagradável, e pode ser tão severa que muitos pacientes interrompem o tratamento com o ácido nicotinico. A invenção presente diz respeito ao tratamento, à prevenção ou à inversão da aterosclerose e de outras doenças e estados descritos neste documento, com o ácido nicotinico ou com um seu sal, ou um solvato destes, ou outro agonista de receptores de ácido nicotinico, sem ruborização substancial. Isto consegue-se em seres humanos administrando ácido nicotinico ou um seu sal ou um solvato destes, ou outro agonista de receptores de ácido nicotinico, e um composto que antagonize o receptor DP, impedindo, diminuendo ou minimizando deste modo o efeito de ruborização na sua frequência e/ou na sua severidade. Há pelo menos dois receptores que interactuam com a prostaglandina D2, referidos sob as designações de "DP" e "CRTH2". A invenção presente diz principalmente respeito ao ácido nicotinico ou a agonistas de receptores de ácido nicotinico, utilizados com antagonistas do receptor DP. A invenção que interessa é uma composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização no 5 ΡΕ1624871 tratamento da aterosclerose num paciente humano que necessite de um tal tratamento, em quantidades tais que sejam eficazes para tratar a aterosclerose na ausência de um ruborização substancial.

Outro aspecto da invenção que tem interesse diz respeito à composição farmacêutica da reivindicação 1 para ser utilizada no aumento do teor em HDL no soro num paciente humano que necessite de um tal tratamento, sendo a composição referida eficaz para aumentar os teores em HDL no soro num paciente, na ausência de enrubescimento substancial.

Outro aspecto da invenção que tem interesse diz respeito a uma composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização no tratamento da dislipidémia num paciente humano que necessite de um tal tratamento, em quantidades que sejam eficazes para tratar a dislipidémia sem provocar enrubescimento substancial.

Outro aspecto da invenção que tem interesse diz respeito a uma composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização na diminuição dos teores em VLDL ou em LDL no soro de um paciente humano que necessite de um tratamento deste tipo, em quantidades que sejam eficazes para diminuir os teores em VLDL ou em LDL no sangue no paciente, sem lhe provocar uma ruborização substancial.

Outro aspecto da invenção que tem interesse diz 6 ΡΕ1624871 respeito a uma composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização na diminuição dos teores em triacilgliceróis no soro num paciente humano que necessite de um tal tratamento, em quantidades que sejam eficazes para diminuir os teores em triacilgliceróis no soro do paciente, sem lhe provocar uma ruborização substancial.

Outro aspecto da invenção que tem interesse relaciona-se com uma composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização na diminuição do teor em Lp(a) no soro de um paciente humano que necessite de um tal tratamento, em quantidades que sejam eficientes para diminuir o teor em Lp(a) no paciente na ausência de um ruborização substancial. Tal como se utiliza neste documento, Lp(a) significa lipoproteina (a).

Um aspecto da invenção que tem um interesse especial diz respeito a cada uma das composições descritas acima, nas quais seja utilizado ácido nicotinico ou um seu solvato. Mais em especial é interessante a utilização do ácido nicotinico. Sob mais um aspecto que tem interesse, o antagonista do receptor DP modula especificamente o receptor DP quando é utilizado em quantidades que são eficazes para diminuir ou para impedir o efeito de enrubescimento do paciente.

Outro aspecto da invenção que tem particular interesse diz respeito a cada uma das composições descritas acima, nas quais se utiliza ácido nicotinico e em que o 7 ΡΕ1624871 antagonista do receptor DP modula selectivamente o receptor DP e não modula substancialmente o receptor CRTH2.

Outro aspecto da invenção que tem particular interesse diz respeito a uma composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização no tratamento da aterosclerose, das dislipidémias, do diabetes ou de um estado relacionado num paciente humano que necessite de um tal tratamento, sendo a composição referida administrada numa quantidade que seja eficaz para tratar a aterosclerose, a dislipidémia, a diabetes ou um estado relacionado com estas, sem que se manifeste uma ruborização substancial. 0 composto E é especialmente útil para antagonizar selectivamente os receptores DP e para suprimir o efeito de ruborização:

bem como os seus sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, e os solvatos de quaisquer destes. A aterosclerose, tal como se utiliza neste documento, refere-se a uma forma de doença vascular caracte-rizada pela deposição de placas ateromatosas contendo co- ΡΕ1624871 lesterol e lípidos sobre a camada mais interior das paredes das artérias grandes e de média dimensão. A aterosclerose inclui doenças vasculares bem como estados que são reconhecidos e entendidos pelos médicos que se dedicam aos domínios relevantes da medicina. A doença cardiovascular aterosclerótica, incluindo a restenose após procedimentos de revascularização, a doença coronária do coração (também conhecida como doença das artérias coronárias ou como doença cardíaca isquémica), a doença cerebrovascular incluindo a demência multi-enfarte, e a doença dos vasos periféricos incluindo a disfunção eréctil, são todas elas manifestações clínicas da aterosclerose estão portanto incluídas nos termos "aterosclerose" e "doença aterosclerótica". "Dislipidémia" é um termo utilizado no seu sentido convencional para referir teores anormais de lipidos no plasma, tais como de HDL (baixo) , LDL (elevado) , VLDL (elevado), triacilgliceróis (elevado), lipoproteína (a) (elevado), FFA (elevado) e outros lípidos do soro, ou combinações destes. Pode tratar-se de um estado não complicado ou integrar uma doença ou um estado específico relacionados com uma doença tal como a diabetes (dislipidémia diabética),a sindrome metabólica e outras semelhantes. Deste modo, as dislipidémias não complicadas, bem como as que estão associadas com estados subjacentes, integram todas elas a invenção presente. 0 termo "paciente" inclui mamíferos, em especial seres humanos, que utilizam os agentes activos em apreço 9 ΡΕ1624871 para a prevenção ou para o tratamento de um estado de doença. A administração dos fármacos ao paciente inclui tanto a auto-administração como a administração ao paciente por parte de outra pessoa. 0 paciente pode necessitar de tratamento para uma doença existente ou um estado de doença, ou pode pretender tratamento profilático para impedir ou para diminuir o risco de que se inicie uma aterosclerose.

Pretende-se que a expressão "quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico" signifique a quantidade de fármaco que originará a resposta biológica ou medicinal pretendida. A titulo de exemplo, o ácido nicotinico é amiúde administrado em doses de entre cerca de 50 mg e cerca de 8 gramas por dia.

As expressões "quantidade eficaz do ponto de vista profilático" e "quantidade que é eficaz para impedir" referem-se à quantidade de fármaco que impedirá ou diminuirá o risco de ocorrência do acontecimento biológico ou de saúde que se pretende impedir. Em muitos casos, a quantidade eficaz do ponto de vista profilático é a mesma que a quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico. A invenção desdita neste documento inclui a administração dos compostos e das composições descritas neste documento para impedir ou para diminuir o risco de ocorrência, ou a recorrência quando exista potencial para tal, de um acontecimento da doença cardíaca das coronárias, 10 ΡΕ1624871 um acontecimento cerebrovascular, e/ou claudicação intermitente. Pretende-se que nos acontecimentos de doença cardíaca das coronárias estejam incluídos a morte devida a CHD, o enfarte do miocárdio (isto é, um ataque de coração), e procedimentos de revascularização coronária. Pretende-se que os acontecimentos cerebrovasculares incluam a apoplexia isquémica ou hemorrágica (também conhecidos como acontecimentos cerebrovasculares) e ataques isquémicos transientes. A claudicação intermitente é uma manifestação clínica de doença dos vasos periféricos. A expressão "acontecimento da doença aterosclerótica", tal como se utiliza neste documento, pretende incluir acontecimentos da doença cardíaca das coronárias, acontecimentos cerebrovasculares, e a ocorrência de claudicação intermitente. Pretende-se que os indivíduos que já tenham manifestado um ou mais acontecimentos não fatais de doença aterosclerótica sejam aqueles para os quais existe o potencial de recorrência desses próprios acontecimentos. A invenção em apreço proporciona portanto também uma composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização na prevenção ou na diminuição do risco de um primeiro acontecimento de doença aterosclerótica, ou de acontecimentos subsequentes, incluindo a administração a um paciente em risco de um tal acontecimento, de uma quantidade eficaz do ponto de vista profilático dos compostos que se descrevem neste documento, enquanto se impede ou se minimiza uma ruborização substancial. O paciente já pode ter doença aterosclerótica na altura da administração, ou pode estar em risco de a desenvolver. 11 ΡΕ1624871 A composição farmacêutica da reivindicação 1 serve também para ser utilizada na prevenção ou na desaceleração da formação de novas lesões ou placas ateroscleróticas, e para impedir ou tornar mais lenta a progressão das lesões ou das placas existentes, bem como para provocar a regressão das lesões ou das placas previamente existentes, enquanto impede ou minimiza uma ruborização substancial.

Um aspecto desta invenção envolve portanto uma composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização de modo a para ou tornar mais lenta a progressão da aterosclerose, incluindo para ou tornar mais lenta a progressão da placa aterosclerótica, incluindo administrar-se uma quantidade eficaz do ponto de vista terapêutico de qualquer um dos antagonistas de DP descritos neste documento, em conjunto com o ácido nicotinico ou outro agonista dos receptores de ácido nicotinico, a um paciente que necessite de um tal tratamento. Este método também inclui parar-se ou tornar-se mais lenta a progressão das placas ateroscleróticas que existam na altura de se iniciar o tratamento em apreço (isto é, "placas ateroscleróticas existentes"), bem como para ou tornar mais lenta a formação de novas placas ateroscleróticas em pacientes com aterosclerose.

Outro aspecto desta invenção envolve uma composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização na 12 ΡΕ1624871 prevenção ou na diminuição do risco de ruptura da placa aterosclerótica, incluindo administrar-se uma quantidade eficaz do ponto de vista profilático de qualquer um dos compostos descritos neste documento em conjunto com o ácido nicotínico ou com outro agonista dos receptores de ácido nicotínico, a um paciente que necessite de um tal tratamento. A ruptura tal como se utiliza neste documento refere-se à quebra da placa libertando-se na circulação, placa essa que pode alojar-se nos vasos sanguíneos. Um aspecto adicional desta invenção envolve a utilização de uma composição farmacêutica da reivindicação 1 na prevenção ou na diminuição do risco de se desenvolver aterosclerose, incluindo a administração de uma quantidade eficaz do ponto de vista profilático dos compostos descritos neste documento, a um paciente que necessite deste tipo de tratamento .

Outro aspecto da invenção diz respeito a uma composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização no tratamento ou na prevenção da aterosclerose, de dislipidémias ou de um estado relacionado, incluindo fazer-se um tratamento prévio de um paciente humano que necessite de uma tal terapia com uma quantidade inibidora ou capaz de diminuir a ruborização, de um antagonista de receptores DP, tratando em seguida o paciente referido com ácido nicotínico, um seu sal ou um solvato destes, ou com outro agonista de receptores de ácido nicotínico, numa quantidade que seja eficaz para tratar ou para impedir a aterosclerose, a dislipidémia ou a um acontecimento relacionado, sem provocar ruborização substancial. 13 ΡΕ1624871

Um outro aspecto da invenção ainda, diz respeito à composição farmacêutica da reivindicação 1, incluindo também fazer-se um tratamento prévio ou tratar-se o paciente com um inibidor de HMG Co-A reductase.

Outro aspecto da invenção diz respeito à composição farmacêutica da reivindicação 1 para utilização no tratamento ou na prevenção dos estados anotados acima, e em que o inibidor de HMG Co-A reductase seja a simvastatina.

Um aspecto dos métodos descritos neste documento diz respeito à utilização do ácido nicotinico ou de outro composto agonista de receptores de ácido nicotinico, numa quantidade que seja eficaz para conseguir os resultados descritos neste documento, e de um antagonista de receptores de DP que module selectivamente o receptor DP sem modular substancialmente o receptor CRTH2. Deste modo, o antagonista do receptor DP tem uma afinidade para com o receptor DP (isto é, um valor de Ki) que seja pelo menos 10 vezes maior (um valor numérico de Ki inferior) do que a sua afinidade para com o receptor CRTH2. Qualquer composto que interactue selectivamente com DP de acordo com estas linhas gerais é considerado "selectivo para DP". A frase "na ausência de uma ruborização substancial" refere-se ao efeito colateral que está amiúde presente quando se administra o ácido nicotinico em quantidades terapêuticas. O efeito de ruborização do ácido 14 ΡΕ1624871 nicotínico torna-se habitualmente menos frequente e menos severo à medida que o paciente desenvolve uma tolerância para o fármaco empregue em doses terapêuticas, mas o efeito de ruborização ocorre mesmo assim numa certa extensão. Deste modo, "na ausência de uma ruborização substancial" refere-se à menor severidade da ruborização, quando ela ocorrer, ou à ocorrência de um menor número de acontecimentos de ruborização. Preferivelmente, a incidência da ruborização é diminuída em pelo menos um terço, mais preferivelmente a incidência é reduzida a metade, e de preferência a incidência da ruborização é diminuída em dois terços ou mais. De igual forma, a severidade é diminuída em pelo menos um terço, mais preferivelmente é reduzida a metade, e de preferência é diminuída em dois terços ou mais. É claramente preferida uma diminuição de cem por cento da incidência e da severidade da ruborização, mas isto não é necessário. 0 regime de dosagem específico bem como as quantidades a utilizar para um qualquer paciente em especial, dependerão de uma série de factores nos quais se incluem a idade, a massa corporal, o estado geral de saúde, o sexo, a dieta, a altura da administração, a via de administração, a taxa de excreção, a combinação de fármacos e a severidade do estado do paciente. A ponderação destes factores está bem ao alcance das capacidades e conhecimentos normais de um médico, para o efeito de determinar a quantidade da dosagem eficaz do ponto de vista terapêutico ou eficaz do ponto de vista profilático, que é necessária 15 ΡΕ1624871 para impedir, contrariar, ou parar a progressão do estado. É de esperar que os compostos descritos neste documento sejam administrados diariamente durante um período de tempo apropriado para tratar ou par impedir o estado de doença relevante em relação a cada paciente, incluindo-se o caso em que um episódio terapêutico dure meses, anos, ou seja para o resto da vida do paciente.

Pode administrar-se um ou mais agentes activos adicionais em conjunto com os compostos descritos neste documento. 0 agente ou agentes activos adicionais podem ser compostos que modifiquem os lípidos, ou agentes que possuam outras actividades farmacêuticas, ou agentes que tenham tanto efeitos como modificadores de lípidos, como outras actividades farmacêuticas. Incluem-se nos exemplos de agentes activos adicionais que se podem empregar, sem que a estes eles se limitem, os inibidores da HMG-CoA reductase, nos quais se incluem as estatinas quer nas suas formas de lactona, quer nas de dihidroxiácido correspondentes, bem como o seus sais e ésteres aceitáveis do ponto de vista farmacêutico, incluindo mas não se limitando à lovastatina (veja-se a Patente US No. 4.342.767), simvastatina (veja-se a Patente US No. 4.444.784), a forma de cadeia aberta a dihidroxi-ácido da simvastatina, em especial os seus sais de cálcio ou de amónio, a pravastatina, em especial o seu sal sódico (veja-se a Patente US No. 4.346.227), a fluvastatina, e em especial o seu sal sódico (veja-se a Patente US No. 5.354.772), a atorvastatina, em especial o seu sal cálcico (veja-se a Patente US No. 5.273.995), a 16 ΡΕ1624871 pitavastatina também referida como NK-104 (veja-se a publicação internacional de PCT número WO 97/23.200) e a rosuvastatina, também conhecida como ZD-4522, (CRESTOR®; veja-se a Patente US No. 5.260.440); inibidores de HMG-CoA sintase; inibidores de esqualeno epoxidase; inibidores de esqualeno sintetase (também conhecidos como inibidores de esqualeno sintase), inibidores de acil-coenzima A:colesterol aciltransferase (ACAT) incluindo os inibidores selectivos de ACAT-1 ou ACAT-2 bem como os inibidores duplos de ACAT-1 e ACAT-2; inibidores da proteína microssomal de transferência de triacilgliceróis (MTP); inibidores de lipase endotelial; sequestrantes de ácidos biliares; indutores de receptores de LDL; inibidores de agregação de plaquetas, por exemplo antagonistas de receptores de glicoproteína Ilb/IIIa fibrinogénio e aspirina; agonistas de receptores gama activado de proliferador de peroxissoma humano (PPARy) incluindo os compostos habitualmente referidos como glitazonas, por exemplo pioglitazona e rosiglitazona e incluindo aqueles compostos que se podem considerar como pertencendo à classe estrutural conhecida como das tiazolidinodionas bem como os agonistas de PPARy que não pertençam à classe estrutural das tiazolidinodionas; agonistas de PPARa tais como o clofibrato, o fenofibrato incluindo o fenofibrato micro-nizado, e o gemfibrozil; agonistas duplos de PPAR α/γ; vitamina B6 (também designada piridoxina) e os seus sais aceitáveis do ponto de vista farmacêutico tais como o sal com HC1; vitamina Bi2 (também conhecida como ciano-cobalamina); ácido fólico ou um seu sal ou éster aceitável 17 ΡΕ1624871 do ponto de vista farmacêutico tais como o sal sódico e o sal com metilglucamina; vitaminas antioxidantes tais como as vitaminas C e E e beta-caroteno; bloqueadores beta; antagonistas de angiotensina II tais como o losartan; inibidores do enzima de conversão da angiotensina tais como o enalapril e o captopril; inibidores da renina, bloqueadores do canal de cálcio tais como a nifedipina e o diltiazem; antagonistas da endotelina; agentes que aumentam a expressão do gene ABCA1; compostos inibidores da proteína de transferência dos ésteres de colesterilo (CETP), compostos inibidores da proteína activadora da 5-lipoxigenase (FLAP), compostos inibidores da 5-lipoxigenase (5-LO), ligandos de receptor de famesóide X (FXR) incluindo tanto os seus antagonistas e agonistas; ligandos alfa do Receptor X Hepático (LXR)-alfa, ligandos LXR-beta, compostos bifosfonato tais como alendronato sódico; inibidores de ciclo-oxigenase-2 tais como o rofecoxib e o celecoxib; e compostos que atenuam a inflamação vascular.

Também se podem utilizar na invenção presente inibidores da absorção do colesterol. Este tipo de compostos bloqueia o movimento do colesterol do lúmen intestinal para os enterócitos da parede do intestino delgado, diminuindo deste modo os teores em colesterol. São descritos exemplos de inibidores de absorção do colesterol nas Patentes U.S. Nos. 5.846.966, 5.631.365, 5.767.115, 6.133.001, 5.886.171, 5.856.473, 5.756.470, 5.739.321,

5.919.672, e nos pedidos de PCT Nos. WO 00/63.703, WO 00/60.107, WO 00/38.725, WO 00/34.240, WO 00/20.623, WO 18 ΡΕ1624871 97/45.406, WO 97/16.424, WO 97/16.455, e WO 95/08.532. O inibidor de absorção do colesterol mais digno de nota é o ezetimibe, também conhecido como 1-(4-fluorofenil)-3(R)-[3(S)-(4-fluorofenil)-3-hidroxipropil)]-4(S)-(4-hidroxi-fenil)-2-azetidinona, descrito nas Patentes U.S. Nos. 5.767.115 e 5.846.966.

As quantidades eficazes do ponto de vista terapêutico dos inibidores de absorção do colesterol incluem dosagens de entre cerca de 0,01 mg/kg e cerca de 30 mg/kg de massa corporal por dia, preferivelmente entre cerca de 0,1 mg/kg e cerca de 15 mg/kg.

Para pacientes diabéticos, os compostos utilizados na invenção presente podem ser administrados com medicamentos convencionais para a diabetes. Por exemplo, um paciente diabético que recebe tratamento tal como descrito neste documento também pode estar a tomar insulina ou um medicamento antidiabético oral. Um exemplo de um medicamento antidiabético oral útil para este efeito é a metformina.

Informação Acerca da Dosagem O ácido nicotinico tal como utilizado neste documento refere-se ao ácido piridina-3-carboxilico. No entanto, também se incluem os sais e os solvatos do ácido nicotinico para se utilizarem na invenção presente, e são úteis na invenção presente numerosos sais e solvatos do ácido nicotinico aceitáveis do ponto de vista farmacêutico. 19 ΡΕ1624871

Os metais alcalinos, em especial o sódio e o potássio, formam sais que são úteis tal como se descreve neste documento. De igual modo os metais alcalino-terrosos, em especial o cálcio e o magnésio, formam sais que são úteis tal como se descreve neste documento. Diversos sais de aminas, tais como compostos de amónio e de amónio substituído, também formam sais que são úteis tal como se descreve neste documento. De forma semelhante, são úteis na invenção presente formas solvatadas de ácido nicotínico.

Incluem-se nos exemplos o hemihidrato, os mono-, di-, tri- e sesqui- hidratos. Tem um interesse especial para utilização na invenção presente o ácido livre, o ácido piridina-3- carboxílico.

Os antagonistas DP, tal como se descrevem neste documento, são úteis para diminuir ou para impedir o efeito de ruborização em pacientes que sejam mamíferos, nomeadamente em seres humanos, a dosagens de entre tão pouco como cerca de 0,01 mg/kg/dia e tanto como cerca de 100 mg/kg/dia, administrados numa dose diária única ou em doses repartidas. As dosagens serão preferivelmente de entre cerca de 0,1 mg/dia até tanto como cerca de 1,0 g/dia, numa dose diária única ou em doses repartidas. A dose de ácido nicotínico que é útil tal como se descreve neste documento varia entre tão pouco como cerca de 50 mg/dia e tanto como cerca de 8 g/dia, numa dose diária única ou em doses repartidas. Podem utilizar-se inicialmente dosagens menores, e aumentarem-se as dosagens 20 ΡΕ1624871 em seguida para diminuir ainda mais o efeito de ruborização.

As dosagens de agonistas dos receptores do ácido nicotínico que não sejam ácido nicotinico variam entre limites bem diferentes. Em geral, os agonistas dos receptores do ácido nicotinico que são úteis para tratar a aterosclerose serão administrados em quantidades que variam entre tão pouco como cerca de 0,01 mg/kg/dia, e tanto como cerca de 100 mg/kg/dia, em dose única ou em doses repartidas. Uma dosagem representativa é de entre cerca de 0,1 mg/dia e cerca de 2 g/dia.

Os compostos utilizados na invenção presente podem ser administrados por qualquer via convencional de administração. A via de administração preferida é a via oral. O ácido nicotinico, o seu sal ou o solvato de um destes, ou o outro agonista dos receptores de ácido nicotínico, bem como o antagonista DP podem ser administrados em conjunto ou sequencialmente, numa única dose diária ou em doses repartidas, por exemplo duas, três ou quatro vezes ao dia, sem que tal represente algo que não esteja incluído na invenção. Caso se pretenda uma libertação especialmente prolongada, tal como um produto com libertação prolongada que apresente um perfil de libertação que se prolongue durante mais do que 24 horas, podem administrar-se as dosagens dia sim, dia não. No 21 ΡΕ1624871 entanto, são preferidas as doses diárias únicas. De igual modo, podem administrar-se as dosagens de manhã ou à tarde.

Composições farmacêuticas

As composições farmacêuticas descritas neste documento contêm em geral ácido nicotinico ou outro antagonista dos receptores de ácido nicotinico receptor, um antagonista do receptor DP e um veiculo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Incluem-se nos exemplos de composições adequadas para administração oral os comprimidos, as cápsulas, os trociscos, as pastilhas, as suspensões, os pós dispersáveis ou os grânulos, as emulsões, os xaropes e os elixires. Incluem-se nos exemplos de ingredientes utilizáveis como veículos os diluentes, os aglomerantes, os desintegrantes, os lubrificantes, os adoçantes, os saborizantes, os corantes, os conservantes, e outros semelhantes. Incluem-se nos exemplos de diluentes, por exemplo, carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio e fosfato de sódio. Incluem-se nos exemplos de agentes de granulação e de desintegrantes o amido de milho e o ácido alginico. Incluem-se nos exemplos de agentes aglomerantes o amido, a gelatina e a goma-arábica. Incluem-se nos exemplos de lubrificantes o estearato de magnésio, o estearato de cálcio, o ácido esteárico e o talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou ser revestidos por técnicas conhecidas. Tais revestimentos podem atrasar a desintegração e, 22 ΡΕ1624871 portanto, a absorção no tracto gastrointestinal, proporcionando por esta razão uma actuação prolongada ao longo de um período mais longo.

Numa concretização da invenção, mistura-se ácido nicotínico, um seu sal ou um solvato destes, ou outro agonista dos receptores de ácido nicotínico, com o antagonista do receptor DP e com o veículo, para se formar um produto misturado bem determinado. Este produto de mistura bem determinado pode ser um comprimido ou uma cápsula para utilização por via oral.

Mais especificamente, noutra concretização da invenção, mistura-se ácido nicotínico, ou um seu sal ou um solvato destes, ou outro agonista de receptores de ácido nicotínico (entre cerca de 1 e cerca de 1.000 mg) com o antagonista de DP (entre cerca de 1 e cerca de 500 mg) e com o veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico, obtendo-se um comprimido ou uma cápsula para utilização por via oral. A libertação prolongada ao longo de um período de tempo mais longo pode ser especialmente importante na formulação das composições farmacêuticas com ácido nicotínico. Os comprimidos de libertação prolongada são especialmente preferidos. Por exemplo, pode empregar-se um material que induz um atraso temporal tal como o monoestearato de glicerilo ou o diestearato de diglicerilo. a forma de dosagem pode também ser revestida pelas técnicas 23 ΡΕ1624871 descritas nas Patentes U.S. Nos. 4.256.108; 4.166.452 e 4.265.874 para se formarem comprimidos terapêuticos osmóticos para libertação controlada.

Outras tecnologias de libertação controlada também se encontram disponíveis e elas estão incluídas neste documento. Incluem-se nos ingredientes típicos que são úteis para tornar mais lenta a libertação do ácido nicotínico em comprimidos de libertação prolongada, diversos compostos celulósicos, tais como a metilcelulose, a etilcelulose, a propilcelulose, a hidroxipropilcelulose, a hidroxietilcelulose, a hidroxipropilmetilcelulose, a celulose microcristalina, amido, e outros semelhantes. Também são utilizáveis em formulações para libertação prolongada diversos materiais naturais e sintéticos. Incluem-se nos exemplos destes materiais ácido algínico e diversos alginatos, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto, goma de alfarroba, goma de guar, gelatina, diversos álcoois de cadeia comprida, tais como o álcool cetílico e a cera de abelhas.

Um comprimido com libertação prolongada que é especialmente interessante utiliza ácido nicotínico em conjunto com um ou mais dos compostos celulósicos listados acima, comprimidos a um comprimido de libertação prolongada para formar uma matriz polimérica. O composto antagonista de DP pode se incorporado na mistura antes da compressão, ou pode ser revestido incluindo-o na superfície exterior da matriz. 24 ΡΕ1624871

Numa concretização que é mais interessante, mistura-se o ácido nicotinico com o material que forma a matriz e comprime-se para se formar um núcleo com libertação prolongada, e mistura-se o composto antagonista de DP com um ou mais agentes de revestimento e em seguida reveste-se a superfície exterior do núcleo.

Opcionalmente a ainda com mais interesse, apresenta-se um comprimido tal como se descreveu acima, revestido também com um inibidor de HMG Co-A reductase, por exemplo, simvastatina. esta concretização específica contém portanto três ingredientes activos, o inibidor da HMG Co-A reductase e o antagonista de DP, que se podem libertar substancialmente aquando da ingestão, e o ácido nicotinico que pode ser libertado ao longo de um período mais longo tal como se descreveu acima.

Os períodos de tempo de libertação típicos para comprimidos de libertação prolongada de acordo com a invenção presente variam entre cerca de 1 até tanto como cerca de 48 horas, preferivelmente entre cerca de 4 e cerca de 24 horas, e mais preferivelmente entre cerca de 8 e cerca de 16 horas.

As cápsulas de gelatina duras constituem outra forma de dosagem sólidas para utilização por via oral. Tais cápsulas incluem de forma semelhante os ingredientes activos misturados com materiais de transporte tal como se 25 ΡΕ1624871 descreveram acima. As cápsulas de gelatina moles incluem os ingredientes activos misturados com solventes miscíveis com a água, tais como o propilenoglicol, o PEG e o etanol, ou com um óleo tal como óleo de amendoim, parafina liquida ou azeite.

Também se consideram úteis as suspensões de base aquosa contêm o material activo misturado com excipientes adequados para o fabrico de suspensões aquosas. Incluem-se nestes excipientes agentes de suspensão, por exemplo carbo-ximetilcelulose sódica, metilcelulose, hidroxipropilme-tilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto e goma-arábica; agentes dispersantes ou molhantes, por exemplo lecitina; conservantes, por exemplo para-hidroxibenzoato de etilo ou de n-propilo, corantes, saborizantes, edulcorantes e outros semelhantes.

Os pós dispersáveis e os grânulos adequados para a preparação de suspensões de base aquosa por adição de água proporcionam os ingredientes activos misturados com um agente dispersante ou molhante, um agente de suspensão e um ou mais conservantes. Exemplificam-se os agentes dispersantes ou molhantes adequados através daqueles que já se mencionaram acima.

Podem também formular-se xaropes e elixires.

Outra composição farmacêutica que tem interesse especial é um comprimido com libertação prolongada que é 26 ΡΕ1624871 constituído por ácido nicotínico ou um seu sal ou um solvato de um destes, composto E e um inibidor de HMG Co-A reductase em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Outra composição farmacêutica ainda que tem interesse mais específico é um comprimido com libertação prolongada que seja constituído por ácido nicotínico, composto E e simvastatina, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.

Uma outra composição farmacêutica que ainda tem mais interesse é constituída por ácido nicotínico, composto E e simvastatina em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico. 0 termo "composição", para além de incluir as composições farmacêuticas descritas acima, também inclui qualquer produto que resulte, directa ou indirectamente, da combinação, complexação ou agregação de quaisquer dois, ou mais, dos ingredientes activos ou excipientes, ou da dissociação de um ou mais dos ingredientes, ou de outro tipo de reacções ou interacções de um ou mais dos ingredientes. A composição farmacêutica da invenção presente inclui portanto qualquer composição manufacturada misturando ou combinando de outra forma os compostos, quaisquer ingredientes activos adicionais, e os excipientes aceitáveis do ponto de vista farmacêutico. 27 ΡΕ1624871

Outro aspecto da invenção diz respeito à utilização de ácido nicotinico ou de um seu sal ou de um solvato destes, ou de um outro agonista dos receptores de ácido nicotinico e de um antagonista de DP, na manufactura de um medicamento. Este medicamento tem as utilizações que se descrevem neste documento.

Mais especificamente, outro aspecto da invenção diz respeito à utilização do ácido nicotinico ou de um seu sal ou de um solvato destes, ou de um outro agonista dos receptores de ácido nicotinico, de um antagonista de DP e de um inibidor de HMG Co-A reductase, tal como a simvas-tatina, na manufactura de um medicamento. Este medicamento tem as utilizações que se descrevem neste documento.

Para além do ácido nicotinico, que é o antagonista dos receptores de ácido nicotinico de referência, já foram descritos numerosos agonistas dos receptores do ácido nicotinico. As publicações seguintes descrevem compostos que são agonistas dos receptores de ácido nicotinico:

Lorenzen, A. et al., Molecular Pharmacology 59: 349-357 (2001),

Lorenzen, A. et al., Biochemical Pharmacology 64: 645-648 (2002),

Soga, T. et al., Biochemical and Biophysical Research Comm. 303: 364-369 (2003), 28 ΡΕ1624871

Tunaru, S. et al., Nature Medicine 9: 352-355 (2003),

Wise, A. et al., Journal of Biological Chemistry 278: 9869-9874 (2003), e

Van Herk, T. et al., Journal of Medicinal Chemistry 46: 3945-3951 (2003).

Anota-se que os agonistas parciais dos receptores de ácido nicotinico, tais como aqueles que são referidos em van Herk, et al., se incluem nas composições presentes bem como nos métodos de tratamento.

Para além disto, o receptor de ácido nicotinico foi identificado e caracterizado no WO 02/084.298 A2, publicado a 24 de Outubro de 2002 em Soga, T. et al., Tunaru, S. et al., e Wise, A. et al. (citações acima). EXEMPLO 1 Ácido (-)-[ (4-clorobenzil)-7-fluoro-5-metanossul-fonil)-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il]acético (Composto E)

29 ΡΕ1624871

Passo 1: Éster etílico do ácido (+/-)-(7-fluoro-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il)acético.

H

Aqueceu-se ao refluxo uma solução de 10,00 g de 4-fluoro-2-iodoanilina, 6,57 g de 2-(2-oxociclopentil)a-cetato de etilo e de 121 mg de ácido p-toluenossulfónico em 100 mL de benzeno, sob uma atmosfera de N2 e uma armadilha de Dean-Stark, durante 24 h. Passado este período, removeu-se o benzeno por destilação. Em seguida adicionaram-se 60 mL de DMF e desgaseificou-se a solução antes de se adicionarem sucessivamente 19 mL de base de Hunig e em seguida 405 mg de Pd(OAc)2. Aqueceu-se a solução a 115°C durante 3 h, e depois arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Para terminar a reacção, adicionaram-se 300 mL de HC1 1 N e 200 mL de acetato de etilo e filtrou-se a mistura através de Celite. Separaram-se as fases e extraiu-se a fase aquosa por duas vezes com 200 mL de acetato de etilo. Combinaram-se as fases orgânicas, lavou-se com salmoura, secou-se sobre Na2S04 anidro, filtrou-se através de Celite e concentrou-se. Purificou-se adicionalmente o material em bruto por cromatografia rápida eluindo com 100 % de tolueno, para se obter o composto em título. RMN de 1H (acetona-dô) δ 9,76 (s lg, 1H), 7,34 (dd, 1H), 7,03 (d, 1H), 6,78 (td, 1H) , 4,14 (q, 2H) , 3,57 (m, 1H) , 2,85-2,55 (m, 5H) , 2,15 (m, 1H) , 1,22 (t, 3H) . 30 ΡΕ1624871

Passo 2: Ácido (+/-)-(7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il)acético

Adicionou-se a uma solução de 1,24 g do éster do Passo 1 em 14 mL de tetra-hidrofurano (THF), à temperatura ambiente, 7 mL de MeOH e em seguida 7 mL de NaOH 2 N.

Passadas 2,5 h, verteu-se a mistura reaccional para uma ampola de decantação contendo acetato de etilo (EtOAc)/HCl 1 N. Separaram-se as fases e extraiu-se a fase ácida por duas vezes com EtOAc. Misturaram-se as fases orgânicas, lavou-se com salmoura, secou-se sobre Na2SC>4 anidro e evaporou-se à secura para se obter um óleo em bruto que se utilizou tal e qual no passo seguinte (pureza > 90 %) . RMN de 1R NMR (acetona-dô) δ 10,90 (s lg, 1H) , 9,77 (s lg, 1H) , 7,34 (dd, 1H) , 7,04 (dd, 1H) , 6,79 (td, 1H) , 3,56 (m, 1H), 2,90-2,50 (m, 5H), 2,16 (m, 1H) , MS (- APCI) m/z 232,2 (M-H)".

Passo 3: Ácido (+/-)-(5-bromo-7-fluoro-l, 2,3, 4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il)acético

Sr co2h 31 ΡΕ1624871 A -40°C adicionou-se a uma solução de 2,20 g do ácido do Passo 2 (pureza > 90 %) em 30 mL de piridina, 6,85 g de tribrometo de piridinio (pureza de 90 %) . Agitou-se a suspensão durante 10 minutos a 0°C e aqueceu-se à temperatura ambiente durante 30 minutos. Em seguida, removeu-se o solvente sem se aquecer, sob alto vácuo. Dissolveu-se o material em bruto em 40 mL de AcOH e adicionou-se 2,88 g de Zn em pó, em porções, à solução fria a 0°C. Agitou-se a suspensão durante 15 minutos a 15°C e aqueceu-se até à temperatura ambiente durante mais 15 minutos. Nesta altura, terminou-se a reacção adicionando à mistura reaccional HC1 1 N, e verteu-se a mistura para uma ampola de decantação contendo salmoura/EtOAc. Separaram-se as fases e lavou-se a fase orgânica com água, com salmoura, secou-se sobre Na2S04 anidro e concentrou-se. Utilizou-se este material no passo seguinte sem qualquer purificação adicional. RMN de 1H (acetona-d6) δ 10,77 (s lg, 1H), 9,84 (s lg, 1H), 7,09 (m, 2H), 3,60 (m, 1H), 2,95-2,65 (m, 4H), 2,56 (dd, 1 H), 2,19 (m, 1H).

Passo 4: Ácido (+/-)-[5-bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il]-acético

32 ΡΕ1624871

Adicionou-se a uma solução de 2,13 g do ácido do Passo 3 em 10 mL de THF, uma solução de diazometano em éter, em excesso, até que o ácido fosse completamente consumido tal como demonstrado por monitorização por CCF. Em seguida removeram-se os solventes em vazio. Adicionou-se a uma solução do éster metílico em bruto que assim se formou em 20 mL de DMF, 539 mg de uma suspensão de NaH (a 60 % em óleo), a -78°C. Agitou-se a suspensão durante 10 minutos a 0°C, voltou a arrefecer-se a -78°C e tratou-se com 1,70 g de brometo de 4-clorobenzilo: Passados 5 minutos, aumentou-se a temperatura até 0°C e agitou-se a mistura durante 20 minutos. Nesta altura, terminou-se a reacção adicionando à mistura 2 mL de AcOH e verteu-se esta mistura para uma ampola de separação contendo HCl 1 N/EtOAc. Separaram-se as fases e lavou-se a fase orgânica com salmoura, secou-se sobre Na2S04 anidro e concentrou-se. Hidrolisou-se o material alquilado utilizando o procedimento descrito no Passo 2. Purificou-se adicionalmente o material em bruto por trituração com EtOAc/hexanos para se obter o composto em titulo. RMN de 1H (acetona-d6) δ 10,70 (s lg, 1H), 7,31 (d, 2H), 7,18 (d, 1H), 7,06 (d, 1H), 6,92 (d, 2H), 5,90 (d, 1H) , 5,74 (d, 1H), 3,61 (m, 1H), 3,00-2,70 (m, 3H), 2,65 (dd, 1H) , 2,39 (dd, 1H), 2,26 (m, 1H), MS (-APCI) m/z 436,3, 434,5 (M-H)". 33 ΡΕ1624871

Passo 5: Ácido (+)-[5-bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il}acético

Adicionou-se a uma solução de 2,35 g do ácido do Passo 4 em 130 mL de EtOH a 80°C, 780 pL de (S)—(—)—1—(1— naftil)etilamina. Arrefeceu-se a solução até à temperatura ambiente e agitou-se de um dia para o outro. Recristalizou-se o sal que se recuperou (1,7 g) a partir de 200 mL de EtOH. Depois de uma filtração, neutralizou-se o sal branco sólido com HC1 1 N e extraiu-se o produto com EtOAc. Lavou-se a fase orgânica com salmoura, secou-se sobre Na2S04 anidro e concentrou-se. Filtrou-se o material através de uma altura de S1O2 eluindo com EtOAc para se obter o enantiómero em titulo. Os periodos de retenção para ambos os enantiómeros eram de respectivamente 7,5 minutos e de 9,4 minutos [coluna ChiralPak AD, hexano/2-propanol/ácido acético (a 95:5:0,1)]. O enantiómero mais polar tinha um ee de 98 %. ee = 98 %;

Período de retenção = 9,4 minutos [coluna

ChiralPak AD: 250 x 4,6 mm, hexanos/2-propanol/ácido acético (a 75:25:0,1)]; [a] d21 = +39,2° (c 1,0, MeOH) . 34 ΡΕ1624871

Passo 6: Ácido (-)-[4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-5-(metanossulfonil)-1,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]-indol-3-il}acético e o seu sal sódico

Em primeiro lugar esterificou-se o ácido do Passo 5 (15,4 g) com diazometano. Levou-se a cabo a sulfonilação misturando o éster que assim se formou com 16,3 g de sal sódico do ácido metanossulfinico e com 30,2 g de CuI(I) em N-metilpirrolidinona. Desgaseificou-se a suspensão em caudal de N2, aqueceu-se a 150°C e agitou-se durante 3 h, em seguida arrefeceu-se até à temperatura ambiente. Para terminar a reacção, adicionaram-se à mistura 500 mL de acetato de etilo e 500 mL de hexanos e filtrou-se através de uma altura de S1O2 eluindo com EtOAc. Concentraram-se as fases orgânicas. Dissolveu-se o óleo em bruto com EtOAc, lavou-se por três vezes com água e uma vez com salmoura, secou-se sobre Na2S04 anidro, filtrou-se e concentrou-se. Purificou-se ainda mais o material em bruto por cromato-grafia rápida eluindo com um gradiente de 100 % de tolueno a 50 % de tolueno em EtOAc, para se obterem 14 g do éster sulfonado, que se hidrolisou utilizando o procedimento descrito no Passo 2. Obteve-se o composto em titulo em resultado de duas recristalizações sucessivas, a partir de: acetato de isopropilo/heptano e de CíbC^/hexanos. RMN de 1H (500 MHz, acetona-dê) δ 10,73 (s lg, 1H) , 7,57 (d, 2H, J= 8,8 Hz), 7,31 (m, 1H) , 7,29 (m, 1H) , 6,84 (d, 2H, J=8,8 Hz), 6,29 (d, 1H, JAB =17,8 Hz), 5,79 (d, 1H, Jab=17,8 Hz), 3,43 (m, 1H) , 2,98 (s, 3H) , 2,94 (m, 35 ΡΕ1624871 1Η) , 2,85-2,65 (m, 3H) , 2,42 (dd, 1H, Ji=16,1 Hz, J2=10,3 Hz), 2,27 (m, 1H) . RMN de 13C (125 MHz, acetona-dô) δ 173,0, 156,5 (d, JCf=237 Hz), 153, 9, 139,2, 133, 7, 133, 3, 130,0 (d, Jcf=8,9 Hz), 129, 6, 128,2, 127,5 (d, JCf=7,6 Hz), 122,2 (d, JCf=4,2 Hz), 112,3 (d, JCf=29,4 Hz), 111,0 (d, JCf=22,6 Hz), 50,8, 44,7, 38,6, 36,6, 36,5, 23,3. MS (-IQPA) m/z 436,1, 434,1 (M-H)". ee = 97 %; Período de retenção = 15,3 minutos [coluna ChiralCel OD: 250 x 4,6 mm, hexanos/2-propanol/etanol/ácido acético (a 90:5:5:0.2)]; [a]D21 = - 29,3° (c 1,0, MeOH). Pf 175,0°C.

Preparou-se o sal sódico pelo tratamento de 6,45 g (14,80 mmol) do composto ácido acima em EtOH (100 mL), com 14,80 mL de uma solução aquosa 1 N de NaOH. Removeu-se o solvente orgânico em vazio e dissolveu-se o sólido em bruto em 1,2 L de álcool isopropílico, ao refluxo. Diminuiu-se o volume final até 500 mL por destilação do solvente. O sal sódico cristalizava quando se arrefecia até à ta. Suspendeu-se o sal sódico cristalino em H20, congelou-se usando um banho de gelo seco e liofilizou-se sob alto vácuo para se obter o composto em título sob a forma do sal sódico. RMN de 1 H (500 MHz DMSO-dg .) δ 7,63 (dd, 1H, Ji =8,5 Hz, J2=2 ,6 Hz; >, 7 ,47 (dd, 1H, Ji=9 ,7 Hz, J2= =2,6 Hz) , 7,33 (d, 2H, J= =8,4 Hz) , 6,70 (d, 2H, J=8,4 Hz), 6,06 (d, 1H, Jabt =17, 9 Hz ) , 5,76 (d, 1H, Jab~ =17,9 Hz), 3,29 (m, 1H) , 3,08 (s, 3H) , 2 ,80 (m, 1H) , 2,69 (m , 1H) , 2,55 (m, 1H) , 2,18 (m, 2H) , 1,93 (dd, 1H, Jz=14,4 Hz, J2= 9, 7 Hz) . ΡΕ1624871 36 EXEMPLO ΙΑ

Processo alternativo para o ácido (+/-)-[5-bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclopenta-[b]indol-3-il]acético (Exemplo 1, Passo 4)

Passo 1: Sal com diciclo-hexilamina (DCHA) do ácido (+/-)-7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-yl)acético

Aqueceu-se ao refluxo uma solução 0,526 M de 2-bromo-4-fluoroanilina em conjunto com (2-oxociclopentil)-acetato de etilo (1,5 eq.) e ácido sulfúrico (0,02 eq) em xileno, durante 20 horas. Removeu-se a água azeotropi-camente com uma armadilha de Dean-Stark. Monitorizou-se o decurso da reacção por RMN e passadas 20 horas observava-se em geral uma transformação de 80-85 % na imina intermediária pretendida. Lavou-se a mistura reaccional com uma solução 1 M de bicarbonato de sódio (0,2 volumes) durante 15 minutos, e evaporou-se a fracção orgânica. Destilou-se o xarope remanescente em vazio (0,5 mm de Hg). Os xilenos residuais destilaram a 30°C, e em seguida recuperaram-se o excesso de cetona e a anilina por reagir na gama de temperaturas de 50-110°C; recuperou-se a imina na fracção que destilava a 110-180°C, sob a forma de um liquido translúcido castanho claro, com uma pureza de 83 %.

Adicionou-se então a imina intermediária a uma mistura desgaseificada de acetato de potássio (3 eq.), monohidrato de cloreto de tetra-n-butilamónio (1 eq.), 37 ΡΕ1624871 acetato de paládio (0,03 eq) e N,N-dimetilacetamida (concentração final em imina = 0, 365 M) . Aqueceu-se a mistura reaccional a 115°C durante 5 horas e deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente. Adicionou-se-lhe então KOH 3 N (3 eq.) e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Diluiu-se a mistura reaccional com água (1,0 volume), lavou-se com tolueno (3x0,75 volumes). Acidificou-se a fase aquosa a pH 1 com HC1 3 N e extraiu-se com éter metil-terc-butilico (2x0,75 volumes). Lavou-se o conjunto das fracções orgânicas com água (0,75 volumes). Adicionou-se diciclo-hexilamina (1 eq.) à mistura translúcida castanha clara e agitou-se a solução à temperatura ambiente durante 16 horas. Separou-se o sal por filtração, lavou-se com acetato de etilo, com éter metil-terc-butilico, e deixou-se secar para se obter o composto em titulo. Determinação : 94 AI. RMN de (500 MHz, CDC13) : δ 9,24 (s, 1H), 7 ,16- 7, 08 (m, 2H) , 6,82 (t, 1H) , 6,2 (lg, 2H), 3, ,6-3, 5 (m, 1H) , 3, 04- -2,97 (m, 2H), 2,88- -2,70 (m, 3H), 2,66 (dd, 1H), 2 ,45- 2, 37 (m, 1H), 2,13- -2,05 (m, 2,05), 1, ,83 (d, 4H) , 1,67 (d, 2H) , 1,55 -1,43 (m, 4H), 1,33- -1,11 (m, 6H) .

Passo 2: Acido (+/-)-(5-bromo-7-fluoro-l, 2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il)acético

Arrefeceu-se uma suspensão do sal com DCHA do Passo 1 acima em diclorometano (solução 0,241 M) a entre -20 e -15°C. Adicionou-se-lhe piridina (2 eq.) de uma só vez e adicionou-se gota a gota à suspensão bromo (2,5 eq.) ao 38 ΡΕ1624871 longo de 30 a 45 minutos, mantendo a temperatura a entre -20°C e -15°C. (Na altura de cerca de 1/3 da adição do bromo, a mistura reaccional estava espessa e era necessária uma agitação eficiente. Eventualmente, após adição de cerca de metade do bromo, a viscosidade da mistura diminuiu de novo). Completada a adição, manteve-se a mistura reaccional durante mais uma hora a -15°C. Adicionou-se então ácido acético (3,04 eq.) ao longo de 5 minutos e zinco em pó (3,04 eq.) em porções. (Adicionou-se uma porção de zinco a -15°C e manteve-se a mistura durante cerca de 5 minutos, para assegurar que a exotermia passava (a entre -15°C e -10°C)). Repetiu-se esta operação com cerca de 5 porções de zinco, ao longo de cerca de 30 minutos. Quando já não era aparente nenhuma exotermia, adicionou-se mais depressa o resto do zinco. A operação total levou entre cerca de 30 e 45 minutos.

Completada a adição, aqueceu-se a mistura até à temperatura ambiente, manteve-se durante 1 hora e concentrou-se. Adicionou-se à mistura reaccional éter metil-terc-butílico (MTBE, 0,8 volumes) e adicionou-se-lhe uma solução aquosa a 10 % de ácido acético (0,8 volumes). Manteve-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora (cristalização de sais, por exemplo de piridinio) , e filtrou-se através de solka-floc®. Lavou-se o bolo de solka-floc com MTBE (cerca de 0,2 volumes) e transferiu-se o filtrado (bifásico, MTBE/aquoso) para um extractor. Lavou-se a fase orgânica com água (0,8 volumes). Concentrou-se o extracto em MTBE e passou-se para álcool isopropilico (IPA, 0,25 volumes) para se cristalizar o composto. Adicionou-se água 39 ΡΕ1624871 (0,25 volumes) e manteve-se a mistura durante 1 hora. Adicionou-se mais água (0,33 volumes) ao longo de 1 hora. Completada a adição de água, manteve-se a mistura em fabrico durante mais uma hora, filtrou-se, e lavou-se com IPA/Água a 30/70 (0,15 volumes). Secou-se o bromoácido cristalizado numa estufa a +45°C.

Passo 3: Ácido (+/-)-[5-bromo-4-(4-clorobenzil)-7-fluoro-l,2,3,4-tetra-hidrociclopenta[b]indol-3-il]-acético

Dissolveu-se o bromoácido do Passo 2 em dimetilacetamida (solução 0,416 M) e adicionou-se carbonato de sódio (2,5 eq.) numa só porção. Adicionou-se à mistura numa só porção o cloreto de 4-clorobenzilo (2,5 eq.) e aqueceu-se a 50°C durante 20 h. Arrefeceu-se a mistura até à temperatura ambiente e adicionou-se-lhe hidróxido de sódio 5 N (4,00 eq.) ao longo de 5 minutos (a temperatura subiu até +40°C) . Manteve-se a mistura reaccional a 50°C durante cerca de 3 horas, arrefeceu-se até à temperatura ambiente e transferiu-se para um extractor L. Diluiu-se a solução com acetato de isopropilo (IPAc, 2 volumes) e arrefeceu-se até +15°C. Acidificou-se a solução com HC1 5 N até pH~2. Separaram-se as fases e lavou-se a fase orgânica com água (2x2 volumes) . Concentrou-se a solução em IPAc e passou-se para IPA (0,8 volumes) para se cristalizar o produto. Adicionou-se água (8 L) ao longo de 2 horas e filtrou-se a mistura para se obter o composto em titulo. Pode secar-se o material numa estufa a +40°C durante 24 horas. 40 ΡΕ1624871

Biologia

Os compostos utilizados na invenção presente que funcionam como antagonistas selectivos de DP demonstram uma afinidade (Ki) para DP que é pelo menos 10 vezes maior (um valor numérico de Kj inferior) do que a afinidade (Kj.) para os receptores CRTH2. Os antagonistas de DP típicos utilizados na invenção presente são selectivos em pelo menos 10 vezes para o receptor DP em relação ao receptor CRTH2. Mais especificamente, o antagonista selectivo do receptor DP é pelo menos 100 vezes mais selectivo para o receptor DP do que para o receptor CRTH2. Ainda mais em especial, o antagonista selectivo do receptor DP é pelo menos 800-1.00 vezes mais selectivo para o receptor DP do que para o receptor CRTH2, isto é, a afinidade (Ki) para o receptor DP é 800-1.000 vezes maior do que a afinidade (Kj) para o receptor CRTH2.

Tal como se utiliza neste documento, quando um composto "modula selectivamente o receptor DP", o composto liga-se ao receptor DP e antagoniza-o quando está presente numa concentração que se consegue obter usando doses terapêuticas, enquanto não modula substancialmente o receptor CRTH2 a essas concentrações que se conseguem em terapia.

Em geral, os antagonistas de DP que se utilizam neste documento apresentam uma afinidade (Kj.) para o 41 ΡΕ1624871 receptor CRTH2 de cerca de 0,5 micromolar ou maior. Os compostos que apresentem uma afinidade de ligação para o CRTH2 de cerca de 0,5 micromolar ou mais, e uma selectividade para o receptor DP em relação ao receptor CRTH2 de pelo menos 10 vezes, são úteis para inibir o efeito de ruborização evidente quando se administra ácido nicotinico sem os referidos antagonistas de DP.

Determinação da Afinidade e da Selectividade de Compostos para Receptores DP e CRHT2 Recombinantes Humanos

Determinou-se a afinidade e a selectividade dos compostos para os receptores DP e CRTH2 utilizando ensaios de ligação a radioligandos tais como os descritos em Abramovitz M., et al. Biochem. Biophys. Acta (2000) 1483: 285-293, e em Sawyer N., et al. Br. J. Pharmacol. (2002); 137: 1163-1172. Em suma, estabeleceram-se linhas celulares estáveis que expressavam individualmente os receptores humanos DP e CRTH2, partindo de células embriónicas renais humanas (HEK) 293EBNA (Antigénio Nuclear do virus de Epstein-Barr) (designadas linhas celulares HEK293E). Empregaram-se fracções membranares preparadas a partir destas linhas celulares recombinantes em ensaios competitivos de ligação de equilíbrio com radioligandos, para se determinar a afinidade e a selectividade dos compostos para os receptores DP e CRTH2.

Subclonaram-se cADN correspondendo 's sequências de comprimento integral de codificação para DP e para 42 ΡΕ1624871 CRTH2, nos locais apropriados do vector de expressão em mamíferos pCEP4 (Invitrogen) e expressaram-se em células HEK293E. Prepararam-se as membranas por centrifugação diferencial (1.000 x g durante 10 minutos, e depois 160.000 x g durante 30 minutos, sempre a 4°C) seguindo-se uma lise das células por cavitação de azoto a 800 psi durante 30 minutos sobre gelo na presença de inibidores de proteases (AEBSF 2 mM, E-64 10 μΜ, leupeptina 100 μΜ e 0,05 mg/mL de pepstatina). Voltaram a suspender-se as pastilhas de 160.000 x g em HEPES 10 mM/KOH (pH 7,4) contendo EDTA 1 mM, a cerca de 5 a 10 mg/mL de proteína, por homogeneização de Dounce (Dounce A; 10 batimentos), congelaram-se em azoto líquido e armazenaram-se a -80°C. Levaram-se a cabo os ensaios de ligação a receptores em volumes finais de incubação de 0,2 mL, em HEPES 10 mM/KOH (pH 7,4), contendo EDTA 1 mM, MnCl2 10 mM e 0,7 nM em [3H]PGD2 (200 Ci/mmol) . Iniciou-se a reacção por adição de proteína membranar (cerca de 30 pg para o DP e de 10 pg para o CRTH2) da fracção de 160.000 x g. Adicionaram-se os ligandos em sulfóxido de dimetilo (DMSO) mantido a uma concentração constante de 1 % (em volume) em todas as incubações. Determinou-se a ligação não específica na presença de PGD2 não radioactivo 10 μΜ. Levaram-se a cabo as incubações num pequeno incubador orbital à temperatura ambiente e durante 60 minutos. Terminou-se o ensaio de ligação por filtração rápida através de um Unifilter GF/C (Canberra Packard) para 96 poços previamente molhado com tampão do ensaio de incubação isento de EDTA (a 4°C), utilizando um sistema de colheita de células Tomtec Mach III para 96 poços. Lavaram- 43 ΡΕ1624871 se os filtros com 3 a 4 mL deste mesmo tampão, secaram-se durante 90 minutos a 55°C e determinou-se a radioactividade residual ligada a cada filtro por contagem de cintilação ao+os adição de 50 yL de Ultima Gold F (Canberra Packard), recorrendo a um contador 1450 MicroBeta (Wallac).

Definiu-se a ligação especifica máxima como sendo a ligação total menos a ligação não específica na ausência de competidor. Determinou-se a ligação específica a cada concentração de composto que se expressou sob a forma de uma percentagem da ligação específica máxima. Construíram-se curvas sigmoidais de equilíbrio em competição expressando a percentagem da ligação específica máxima em função da concentração do composto em teste, e analisaram-se utilizando um programa computacional concebido para o efeito que recorria a uma rotina de ajuste de curvas não lineares pelo método simplex, baseada numa equação de quatro parâmetros, para se determinar o ponto de inflexão (InPt). Determinou-se a afinidade de ligação para o composto em teste calculando a constante de inibição de equilíbrio (Ki) a partir da equação Ki = InPt/l+([radio-ligando] /Kd) , em que Kd é a constante de equilíbrio de dissociação para a interacção radioligando-receptor. Quando não se conseguia determinar o InPt, utilizou-se o IC50 (isto é, a concentração de composto em teste necessária para inibir 50 % da ligação específica máxima).

Em geral, os compostos utilizados na invenção presente demonstram valores de Ki para o receptor DP de 44 ΡΕ1624871 entre cerca de tão pouco como cerca de 0,4 nM e tanto como cerca de 16,3 nM. De igual modo, os compostos utilizados na invenção presente demonstram em geral valores de Ki para o receptor CRTH2 de entre tão pouco como 180 nM e tanto como 22.000 nM, ou mesmo maiores.

Efeito dos Compostos sobre a Vasodilatação Induzida por Ácido Nicotínico em Murganhos

Pode demonstrar-se a potência dos antagonistas selectivos de DP descritos neste documento utilizando um modelo em murganhos da ruborização induzida pelo ácido nicotinico em seres humanos, medindo o efeito de inibição da ruborização. Mede-se o caudal sanguíneo na orelha dos murganhos (uma medida da vasodilatação, componente proeminente da ruborização em seres humanos) após a administração de ácido nicotínico a murganhos previamente tratados com veículo (a título de controlo) ou com um antagonista de DP. Especificamente, utilizaram-se murganhos macho C57BL/6 (com ~25 g) no estudo. Avaliaram-se cinco murganhos em cada grupo em teste. Diluiu-se nembutal com água para se obter uma concentração final de 5 mg/mL, e injectou-se à taxa de 0,3 mL/murganho por via intraperitoneal. Dissolveram-se os antagonistas de DP em solução a 5 % de hidroxipropil-β-ciclodextrina, a uma concentração final de 5 mg/mL, e administraram-se os compostos por via intraperitoneal a volumes de 0,2 mL/murganho (—40 mpk). Dissolveu-se o ácido nicotínico em solução a 5 % de hidroxipropil-p-ciclo-dextrina a uma concentração final de 12,5 mg/mL. Ajustou-se 45 ΡΕ1624871 ο ρΗ da solução de partida de ácido nicotinico a 7,4 com NaOH 2 N, e injectou-se por via subcutânea nos murganhos a 0,2 mL/murganho (~100 mpk).

Monitorizou-se a perfusão na pele das orelhas dos murganhos com um dispositivo de criação de imagens de perfusão por efeito Doppler (PeriScan PIM II, Perimed, Suécia) de 30 em 30 segundos e ao longo de 15 minutos, iniciando-se 5 minutos antes da administração do ácido nicotinico. Calcularam-se as percentagens de alteração da perfusão média ao longo do período de 10 minutos após a administração, quer do veículo quer do ácido nicotinico, e gerou-se para cada animal um gráfico mostrando a percentagem de alteração da perfusão média em relação ao tempo. Calculou-se então a área sob a curva (ASC) da perfusão média (% Δ x minutos) a partir de cada gráfico, e exprimiram-se os resultados sob a forma de ASC média ± Erro padrão da média, para cada grupo. O composto D suprimia a vasodilatação induzida por PGD-2 no murganho (Fig. 1) . Os antagonistas de DP testados suprimiam a vasodilatação induzida pelo ácido nicotinico no murganho; nas Figuras 2 e 3 ilustram-se dados para compostos seleccionados.

Lisboa, 31 de Agosto de 2009

Claims (6)

1. ΡΕ1624871 1 REIVINDICAÇÕES 1. Uma composição farmacêutica constituída por composto E, ou um seu sal ou um solvato aceitável do ponto de vista farmacêutico deste:

   ácido nicotínico ou um seu sal ou um solvato destes aceitável do ponto de vista farmacêutico, e um inibidor de HMG Co-A reductase, em conjunto com um veículo aceitável do ponto de vista farmacêutico.
2. 2. Uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, na qual o inibidor de HMG Co-A reductase seja seleccionado de entre lovastatina, simvastatina, forma aberta de dihidroxiácido da simvastatina, pravastatina, fluvastatina, atorvastatina, pitavastatina e rosuvastatina.
3. 3. Uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, na qual o inibidor de HMG Co-A reductase seja a simvastatina. 2 ΡΕ1624871
4. 4. Uma composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, para utilização em terapia.
5. 5. Uma composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, para utilização no tratamento da aterosclerose, para aumentar os teores em HDL no soro, para tratar a dislipidémia, para diminuir os teores em VLDL ou LDL no soro, para diminuir os teores em triacilgliceróis no soro ou para diminuir o teor em lipoproteina (a) no soro.
6. 6. Uma composição farmacêutica de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, para utilização no tratamento da aterosclerose ou da dislipidémia. Lisboa, 31 de Agosto de 2009 PE1624871 1/3 miBIÇÂQ PELO COMPOSTO 0 DA VAS0D1LATAÇÃG INDUZIDA POR PROSTASLANDÈRÂ 02 EI MURGANHOS RsDg (50/Xg) “O- PGD2 (50/tg) + COMPOSTO D (0,5 mg| "·- COMPOSTO D p?5 mg) PERFUSÂO MÈOIA i% 4% atoraçáo}

   TEMPO (miraítoe) ADMINISTROU-SE O COMPOSTO D (ANTAGONISTA DE DP) 30 «MOTOS ARTES DÁ INJECÇÃO DE FOD2 PE1624871 2/3 iniBIÇAO PELO COMPOSTO D DA VASODÍLATÂÇAO INDUZIDA PELO ÁCIDO MICOTlff CO El MUROANHOS ! ACIDO NÍCOIÍSCQ (§,S mg) (n = 7} —O—! ACIDO NÍCOT8fiCO * COMPOSTO D (0,5 m) (o = 7) —0~* i COMPOSTO D (0,5 mg) {b* 4) PER FUSÃO MÉDIA !% de alteração)

   TEMPO (minutos) PE1624871 3/3 COMPOSTOS SELECCIONADÔS MBEi A VÂSODILATAÇAO INDUZIDA PELO ÁCIDO NÍCOTSflCO EI MURGANHOS (ASC MEDIA *!- ERRO PADRÃO; NA = ÁCIDO NiCQTÍNICG, 100 mpl| 7001 PERFU-SÃO {ÁSC:f % úa A X minutos)

   JsÉ" CL E 4* Hh -f *4 Ητ *P 4* + 4* CL E «SC "CL Ê 4 E 4 44 c CS C ET C f 8. £ 4 E 9 § ? s S ? 9 9 O 9 LU 3 ^ a X fe $ < d ;SI d á £Í £Í ú d ã E 0' δ E o o δ δ E © O E © O a E © O o u m FIG.3 1 ΡΕ1624871 REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO Esta lista de referências citadas pelo requerente é apenas para conveniência do leitor. A mesma não faz parte do documento da patente Europeia. Ainda que tenha sido tomado o devido cuidado ao compilar as referências, podem não estar excluídos erros ou omissões e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descrição * US 4342767A » US 5S1SS72 A « US4444784 A * WDS0S37S3A * US4346227 A ·* mimmiA * US 5354772 A * WQ 5838725 4 < US 5273555 Λ » WO 3834243 A * WQ S72320S A WO 3320623 A 4 US 5260443 A * WGAF4540SA + OS 534ES86 A. * WQ 9716424 A K US 5S313S5 A «- WOW1S455A K US 5737115 A • W© 3538532 A + US 6131201A * US 4258108 A * US 5S8S171 A ·» US 4588452 A US5S5S4T3A » US 42355 "4 A a US 5758472 A 4 WQ 02384258 A2 * US 573S321A Literatura que não é de patentes citada na Descrição V 'Loreteéa A,· et ai 20Q1, í- Wise, S-3Í. 5S 3* 3-357 »3?. 273, 5552-5374 * L<»esim A. et ai. Bic-dw-Maí Λ Van Heri, T.. et .ai. Chmxsiry·* 2822,«*.. 6* 64&64S 2303 *ot. 48, 394S-3&5* Soga, 7. et ai a·-d t AtoraíSíwfeM et sLSáaafjstà. StspfiM sezríh Cvnw· 25® voL3£3, 354-3SS vê- 1463.245-2-55 > Tufsss-a. S. et ai iteise Medem, 2303, ;vsi. % ' * Sawyer ti st ai. Sr, -J. PMmisM., 2252. vof 13?. 352-355 1 *63->572