KR20050084656A

KR20050084656A - 피부 중의 세라미드 수준을 유지 또는 증가시키기 위한제품 및 방법

Info

Publication number: KR20050084656A
Application number: KR1020057007888A
Authority: KR
Inventors: 데이비드 더블유. 쾨니히; 곰펠 제미 조셉 반
Original assignee: 킴벌리-클라크 월드와이드, 인크.
Priority date: 2002-11-19
Filing date: 2003-04-29
Publication date: 2005-08-26
Also published as: EP1925279A2; US7585518B2; EP1585494A1; CN1694684A; MXPA05004727A; WO2004045574A1; US7838025B2; US20040096485A1; US20090053286A1; AU2003225245A1; EP1925279A3; BR0316025A

Abstract

본원에는 의도한 방식으로 활용된 경우에 피부 건강 상의 이점을 제공해줄 수 있는 습식 와이프 및 흡수제와 같은 제품 및 방법이 기재되어 있다. 보다 구체적으로 언급하면, 본원에 기재된 제품은 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 따라서 스핑고미엘리나제의 활성을 증가시킬 수 있고/있거나 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 따라서 세라미다제의 활성을 저하시킬 수 있는 제제, 예를 들면, 식물성 추출물을 포함한다. 스핑고미엘리나제의 활성을 증가시키고/시키거나 세라미다제의 활성을 저하시킴으로써, 상기 제제는 본원에 기재된 제품과 조합하여, 피부 중의 세라미드의 수준을 유지 또는 증가시킬 수 있으므로, 피부 건강을 개선시킨다.

Description

피부 중의 세라미드 수준을 유지 또는 증가시키기 위한 제품 및 방법{Products and methods for maintaining or increasing ceramide levels in skin}

본 발명은 세라미드의 세포내 농도를 유지 또는 증가시키기 위한 제품 및 방법에 관한 것이다. 보다 특히, 본 발명은 세포내 세라미드 농도를 유지 또는 증가시키기 위한 와이프 (wipe) 및 흡수성 제품에 있어서의 특정 제제, 예를 들면, 식물성 추출물 (botanical extracts)의 용도에 관한 것이다. 본 발명에 있어서 세포내 세라미드 농도는 스핑고미엘리나제 (sphingomyelinase)의 활성을 증가시킬 수 있고/있거나 세라미다제 (ceramidase)의 활성을 저하시킬 수 있는 한 가지 이상의 제제를 도입함으로써 유지 또는 증가시킨다.

세라미드 (N-아실스핑고신)는 지질 대사물이고, 각종 제제로 자극한지 수 시간 내에 세포 내부에서 방출되는 중요한 세포내 메신저 (messenger)이다. 세라미드는 스핑고미엘린 시그널 형질도입 경로의 맥락에서 제2 메신저로서 간주되고, 피부의 보습 기전과 장벽 기전에 있어 중요한 역할을 담당하고 있다. 세라미드는 스핑고미엘린에 대해 특이적인 포스포리파제 C의 형태인 스핑고미엘리나제의 효소적 작용의 결과로서 스핑고미엘린에 의해 방출된다. 세포 내부에서는, 세라미드가 성장과 분화에 영향을 미칠 수 있고, 단백질 분비를 조절할 수 있으며, DAN 분절 증식 (fragmentation)과 세포 소멸 (apoptosis)을 유도할 수 있고 사이토킨의 합성과 분비를 증가시킬 수 있다. 해당 세포를 외인성 스핑고미엘리나제에 노출시키거나 또는 내인성 스핑고미엘리나제를 활성화시키는 효능제에 노출시킨 후에는 스핑고미엘린이 신속하게 가수분해된다.

피부 대사와 건강에 있어서의 세라미드의 중요성은 널리 공표되어 있다. 표피의 주요 세포성 구성분은 각질 세포, 멜라닌 세포, 랑게르한스 세포 (Langerhans cell), 섬유아세포, 내피 세포 및 대식 세포이다. 세포내 공간은 주로 중성 지질, 당단백질, 단백질 분해 산물, 교소체 (desmosome), 활성 효소, 피지선 산물 및 세라미드로 이루어진다. 이러한 벽돌구조 (brick)와 회반죽 (mortar) 구조가 본래 모습 그대로인 한, 피부는 선택적으로 투과 가능한 필터와 보호 층 모두를 천성적으로 지니고 있다.

기저 층 (basal layer) 내의 세포 분할로 시작하여 각질 세포의 사멸과 지질 장벽의 발생으로 종결되는 표피의 분화 과정 동안에, 해당 세포의 지질 합성 능력이 변형된다. 그 결과, 표피의 기저 층은 인지질과 콜레스테롤을 특징으로 나타내는 반면, 가장 바깥 층은 콜레스테롤, 자유 지방산 및 세라미드를 특징으로 나타낸다. 각질 층 (horny layer)의 지질 [이의 주요 성분은 스핑고지질 (sphingolipid)로 구성된다]은 물에 대한 표피의 투과 장벽을 유지시키는데 있어 결정적인 역할을 한다. 스핑고지질은 표피의 과립상 세포의 층판소체 (lamellar body)로부터 삼출된다. 피부 각질 층의 거의 50%를 차지하고 있는 세라미드는 각질 층의 주요 극성 지질이고, 세포 유착시 수분 손실을 방지하는 피부의 장벽 기능에 있어 중요할 역할을 할 뿐만 아니라 상기 언급된 바와 같이, 표피의 분화에 있어 기본적인 역할을 한다.

피부는 노화됨에 따라 이의 표면 상의 외형 변화와 마찬가지로 기능적 특성 역시 변한다. 노화 피부는 경피 수분 손실량 저하와 연관된 각질 층 내의 수분 함량 저하를 특징적으로 나타낸다. 세라미드 농도는 노화됨에 따라 감소하고, 이러한 감소로 인해, 노화 진행 과정시 관찰되는 피부 탈수 현상이 일어날 수 있다는 사실이 밝혀졌다. 또한, 비정상적인 세라미드 수준(결핍)이 아토피성 습진, 피부병 및 피부염, 아토피성 피부염 및 건선에서 탐지되었다.

노화 이외의 기타 외부적 요인들이 피부에 존재하는 세라미드의 양을 감소시킬 수 있고 피부 자극 문제를 야기시킬 수 있다. 예를 들어, 효소 세라미다제는 세라미드와의 접촉시 세라미드를 스핑고신과 자유 지방산으로 분해시킬 수 있다. 세라미다제는 특정 층 내의 피부에 존재하는데, 여기서 이것은 유리한 전환 기능을 수행한다. 그러나, 세라미다제가 분변 (feces) 또는 코 (nasal) 분비물 내에 존재하는 외부 공급원, 예를 들면, 세균 (세균성 세라미다제)으로부터 피부 상으로 도입되는 경우에는, 이러한 세라미다제가 상기 언급된 바와 같이 세라미드를 분해시킴으로써, 세라미드의 세포내 농도를 감소시키고 피부를 건조하게 하여 균열 (갈라지게 함)시킬 수 있다.

전술된 내용에 비추어 볼때, 건강한 피부를 유지 및 증진시키기 위해서는 피부 중의 세라미드 수준을 높게 유지시키는 것이 유용하다. 따라서, 피부 중의 세라미드 수준을 유지 또는 증가시킬 수 있는 개인 관리 제품 (personal care products), 예를 들면, 습식 와이프 (wet wipe) 및 흡수성 관리 제품을 제조하는 것이 유리할 것이다. 천연 세라미드를 부가함으로써 피부 중의 세라미드 수준을 제어하는 것은 정제된 지질의 막대한 비용으로 인해 실시되지 못하기 때문에, 피부 중의 세라미드 수준을 유지 또는 증가시킬 수 있는 제제를 함유하는 경제적인 제품에 대한 필요성이 지속적으로 대두되고 있다.

발명의 요약

본 발명은 세포내 세라미드 농도를 유지 또는 증가시킴으로써 피부 건강을 개선시키기 위한 제품 및 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로 언급하면, 본 발명은 각종 기전을 통하여 세라미드의 세포내 농도를 유지 또는 증가시킴으로써 정상적인 활용 동안 이들과 접촉되는 피부의 건강을 개선시킬 수 있는 제제를 함유하는 제품, 예를 들면, 습식 와이프 및 흡수성 제품에 관한 것이다.

본 발명의 제품은 세라미드의 생성을 위해 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 제제, 예를 들면, 식물성 추출물을 포함할 수 있다. 한 양태에서, 이러한 스핑고미엘리나제 활성 증가제는 본원에 제시된 SAST 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이, 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시킨다. 세포내 세라미드를 생성시키기 위해서는 스핑고미엘리나제 활성이 반드시 요구되기 때문에, 이러한 효소적 활성이 증가하게 되면 세라미드 수준도 증가한다. 더우기, 본 발명의 제품은 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 세라미다제 활성 저하제를 포함할 수 있다. 한 양태에서, 상기 세라미다제 활성 저하제는 본원에 제시된 CAST 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이, 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시킨다. 피부 상에 존재하는 세라미다제, 예를 들면, 세균성 세라미다제는 세라미드를 분해할 수 있기 때문에, 세라미다제 활성 저하는 붕괴되는 세라미드의 양을 감소시킨다. 스핑고미엘리나제 활성을 상당히 증가시키고/시키거나 세라미다제 활성을 상당히 저하시킴으로써, 본원에 기재된 제제는 피부 중의 세라미드의 수준을 유지 또는 증가시킴으로써 피부 건강을 상당히 개선시킨다.

따라서, 간략하게 언급하면, 본 발명은 세라미드의 생성을 위해 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 스핑고미엘리나제 활성 증가제와 섬유상 와이프 기질을 포함하는, 피부 건강을 개선시키기 위한 와이프에 관한 것이다.

본 발명은 추가로, 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 세라미다제 활성 저하제와 섬유상 와이프 기질을 포함하는, 피부 건강을 개선시키기 위한 와이프에 관한 것이다.

본 발명은 추가로, 세라미드의 생성을 위해 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 스핑고미엘리나제 활성 증가제 및 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 세라미다제 활성 저하제와, 섬유상 와이프 기질을 포함하는 와이프에 관한 것이다.

본 발명은 추가로, 세라미드의 세포내 농도를 증가시키는 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은 세라미드의 생성을 위해 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 스핑고미엘리나제 활성 증가제를 피부와 접촉시키는 단계를 포함한다.

본 발명의 기타 목적 및 특징들은 후술 내용으로부터 부분적으로 명백해질 것이다.

본 발명에 따라서, 특정 제제, 예를 들면, 특정의 식물성 추출물이, 피부 중의 세라미드 농도를 유지 또는 증가시킴으로써 피부 건강을 개선시키기 위해 통상의 제품에 활용될 수 있다는 사실이 밝혀졌다. 본원에 기재된 이들 제제 중의 몇 가지는 본원에 제시된 SAST 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 따라서 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시킬 수 있다. 스핑고미엘리나제 활성을 상당히 증가시킴으로써, 세라미드 생성 속도를 증가시키면, 보다 고농도의 세포내 세라미드가 생성된다. 부가적으로 또는 또 다른 한편으론, 본 발명의 개인 관리 제품은 본원에 제시된 CAST 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 따라서 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시킬 수 있는 제제를 포함함으로써 피부 건강을 개선시킬 수도 있다. 피부 표면에서 또는 이러한 표면 근처에서의 세라미다제 활성을 저하시킴으로써, 세라미드의 파괴 수준을 감소시키면 활성 세라미드 화합물이 보다 고 농도로 존재하게 된다. 더우기, 세라미드의 생성을 증가시키기 위해 스핑고미엘리나제를 추가로 자극함으로써 피부에 부가의 이점을 제공해주기 위해, 특정의 유기 및 무기 조인자를 본원에 기재된 한 가지 이상의 제제와 조합하여 사용할 수 있다.

본 발명의 개인 관리 제품은 정상적인 사용 동안 이러한 개인 관리 제품에 의해 접촉된 피부의 건강을 개선시킬 수 있는 하나 이상의 제제, 예를 들면, 식물성 추출물을 함유한다. 수 많은 개인 관리 제품을, 사용자의 피부를 개선시키기 위해 본 발명에 따라서 본원에 기재된 제제와 함께 사용할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 제제 및/또는 조인자들 중의 한 가지 이상을 와이프, 예를 들면, 습식 와이프, 손 전용 와이프, 세안용 와이프, 미용 와이프, 가정용 와이프, 산업용 와이프, 건식 와이프 등과 조합하여 사용하여, 피부 중의 세라미드 수준을 유지 또는 증가시킴으로써 피부 건강을 개선시킬 수 있다. 상기 와이프의 기질에 적합한 재료는 당업자에게 널리 공지되어 있고, 전형적으로 이는 직포 또는 부직포일 수 있는 섬유상 시트 재료로 만든다. 예를 들어, 피부 건강을 개선시키기 위한 본원에 기재된 제제를 혼입시킨 와이프는 부직 섬유상 시트 재료를 포함할 수 있는데, 이러한 재료에는 용융 취입, 코폼 (coform), 에어-레이드 (air-laid), 본디드-카디드 (bonded-carded) 웹 재료, 히드로인탱글된 (hydroentangled) 재료, 및 이들의 조합물이 포함된다. 이러한 재료는 합성 또는 천연 섬유, 또는 이들의 조합물로 구성될 수 있다. 전형적으로, 와이프는 1 평방 미터당 약 25 내지 약 120 그램의 기준 중량, 바람직하게는 1 평방 미터당 약 40 내지 약 90 그램의 기준 중량으로 규정된다.

특정한 양태에서는, 본원에 기재된 제제를 혼입시킨 와이프가 1 평방 미터당 약 60 내지 약 80 그램, 바람직하게는 1 평방 미터당 약 75 그램의 기준 중량을 갖는 셀룰로즈성 섬유와 중합체성 미세섬유의 코폼 기저 시트를 포함한다. 이러한 코폼 기저 시트는 일반적으로, 본원에 참조문헌으로써 인용된 미국 특허 제4,100,324호에 기재된 바와 같이 제조한다. 전형적으로, 상기 코폼 기저 시트는 열가소성 중합체성 용용 취입 미세섬유, 예를 들면, 폴리프로필렌 미세섬유, 및 셀룰로스성 섬유, 예를 들면, 목재 펄프 섬유의 발포형 (gas-formed) 매트릭스를 포함한다.

코폼 기저 시트 내의 중합체성 미세섬유와 셀룰로스성 섬유의 상대적 비율(%)은 습식 와이프의 목적하는 특징에 따라서 광범위하게 다양할 수 있다. 예를 들어, 상기 코폼 기저 시트는 해당 와이프를 제공하기 위해 사용되는 코폼 기저 시트의 건조 중량을 기준으로 하여 중합체성 미세섬유를 약 20 내지 약 100 중량%, 바람직하게는 약 20 내지 약 60 중량%, 보다 바람직하게는 약 30 내지 약 40 중량% 포함할 수 있다.

또 다른 한편, 본원에 기재된 성분을 혼입시킨 와이프는 다중 재료 층을 포함하는 복합물을 포함한다. 예를 들어, 이러한 와이프는 상기 언급된 바와 같은 2개의 코폼 층 사이에 탄성중합체성 필름 또는 용융 취입 층을 포함하는 3-층 복합물을 포함할 수도 있다. 이러한 입체 배치에서는, 상기 코폼 층이 1 평방 미터당 약 15 내지 약 30 그램의 기준 중량으로 규정될 수 있고 탄성중합체성 층은 폴리에틸렌 메탈로센 필름과 같은 필름 재료를 포함할 수 있다.

상기 언급된 바와 같이, 피부 건강을 개선시키기 위한 본원에 기재된 제제와 조합하여 사용하는데 적합한 한 가지 유형의 와이프에는 액상 용액 또는 제형을 함유하는 습식 와이프가 포함된다. 각 습식 와이프 내에 함유된 용액의 양은 습식 와이프를 제공하기 위해 사용되는 재료의 유형, 사용되는 용액의 유형, 습식 와이프를 저장하기 위해 사용되는 용기의 유형, 및 습식 와이프의 목적하는 최종 용도에 따라서 다양할 수 있다. 일반적으로, 각 습식 와이프는 개선된 와이핑을 위해 와이프 건조 중량을 기준으로 하여 약 150 내지 약 600 중량%, 바람직하게는 약 250 내지 약 450 중량%의 용액을 함유할 수 있다. 특정한 국면에 있어서, 습식 와이프가 이러한 와이프의 건조 중량을 기준으로 하여 약 30 내지 약 40 중량%의 중합체성 미세섬유를 포함하는 코폼 재료로부터 만들어지는 경우에는, 이러한 습식 와이프 내에 함유된 용액의 양이 습식 와이프의 건조 중량을 기준으로 하여 약 300 내지 약 400 중량%, 바람직하게는 약 330 중량%이다. 용액의 양이 상기 언급된 범위 미만인 경우에는, 습식 와이프가 너무 건조해질 수 있어, 적절히 수행할 수가 없다. 용액의 양이 상기 언급된 범위를 초과하는 경우에는, 습식 와이프가 과포화되고 침체(물에 너무 젖음)될 수 있으며, 습식 와이프를 지지시켜 주는 용기 바닥에 용액이 모여질 수 있다.

또 다른 양태에서는, 피부 건강을 개선시키기 위해 본원에 기재된 제제들 중의 하나 이상을 포함하는 개인 관리 제품에는 흡수성 개인 관리 제품, 예를 들면, 기저귀, 연습 훈련용 팬츠, 성인 실금 의류 (adult incontinence garment), 여성용 냅킨, 종이 타월, 탐폰, 유방 패드, 순간 패드 (interlabial pad), 화장지, 상처 관리 제품 및 목욕용 티슈가 포함될 수 있다. 이러한 흡수성 제품은 혈액, 생리혈, 코 분비물, 분변 및 뇨와 같은 체액을 포함한 각종 유체를 흡수하기 위해 통상 활용되고 있다. 이러한 흡수성 제품을 제조하기 위한 재료 및 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 이들을 의도한 방식으로 활용하는 경우에는, 본원에 기재된 제제(들)를 포함한 흡수성 개인 관리 제품을 피부와 접촉시켜, 이러한 제제가 천연 상태의 피부 화합물(들)과 상호 작용하여 피부 건강을 개선시킬 수 있도록 한다.

본 발명의 한 양태에서는, 효소 스핑고미엘리나제의 활성을 증가시킬 수 있는 제제를 개인 관리 제품 내로 또는 제품 상으로 도입하여, 상기 언급된 경로를 통하여 피부 내에서의 세라미드 생성량을 증가시킴으로써 상기 개인 관리 제품과 접촉하고 있는 피부의 건강을 개선시킨다. 앞서 언급된 바와 같이, 스핑고미엘리나제는 세포막의 인지질 성분인 지질 스핑고미엘린을 가수분해시켜 세라미드를 생성시키는 효소이다. 본원에 사용된 바와 같은 "효소 스핑고미엘리나제의 활성을 증가시키는"이란 표현과 이와 유사한 표현은 본 발명의 제제의 존재 하에서 스핑고미엘린에 대한 스핑고미엘리나제의 효소적 활성이, 상기 제제의 부재 하에서 스핑고미엘린에 대한 스핑고미엘리나제의 활성과 비교해서 증가된다는 것을 의미한다. 본원에 언급된 제제들 중의 하나 이상을 개인 관리 제품 내로 또는 상으로 도입함으로써, 이러한 제제(들)가 사용 중에 피부와 접촉하고 천연 상태의 스핑고미엘리나제와 상호 작용하여 스핑고미엘리나제 활성을 증가시킬 수 있다. 천연 상태의 스핑고미엘리나제와 상호 작용하는 것 이외에도, 상기 제제는 삼출물, 예를 들면, 분변 또는 코 분비물 내에 존재할 수도 있는 스핑고미엘리나제와 상호 작용하여 피부 표면에서 또는 피부 표면 근처에서의 세라미드 생성을 촉진시킬 수도 있다. 이와 같이 스핑고미엘리나제 활성이 증가하게 되면, 스핑고미엘린의 가수분해가 증가하고, 피부 표면 상에서 또는 피부 표면 근처에서 동일계 반응을 통하여 세라미드가 생성되는데, 이는 상기 논의된 바와 같이 피부 건강에 유익하고 이를 개선시켜 준다.

바람직하게는, 개인 관리 제품 내로 또는 상으로 도입된 제제, 또는 제제 조합물은 이러한 제제 부재 하에서의 스핑고미엘리나제 활성과 비교해서, 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상, 보다 바람직하게는 약 200% 이상, 보다 더 바람직하게는 약 300% 이상, 가장 바람직하게는 약 400% 이상 증가시킬 수 있다. 한 양태에서, 개인 관리 제품 내로 또는 상으로 도입된 제제, 또는 제제 조합물은 본원에 제시된 SAST 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이, 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상, 보다 바람직하게는 약 200% 이상, 보다 더 바람직하게는 약 300% 이상, 가장 바람직하게는 약 400% 이상 증가시킬 수 있다. 이와 같은 스핑고미엘리나제 활성 증가로 인해, 세라미드의 세포내 수준과 세포외 수준이 증가하여 피부 건강을 개선시킬 수 있다. 스핑고미엘리나제 활성 증가제는 바람직하게는, 상기 언급된 바와 같이 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 것이다. 이것이 많은 상황에 있어 상기 제제의 목적이고 능력이긴 하지만, 특정 적용 조건과 피부 조건 하에서는, 상기 제제가 이러한 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 것이긴 해도 피부가 실제로 경험하게 되는 활성 증가는 약 100% 이상 이외의 것일 수도 있다.

SAST 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험

예를 들어, 식물성 추출물 및 관련 화합물과 같은 제제를 대상으로 하여, 스핑고미엘리나제/스핑고미엘린-함유 시스템에서 스핑고미엘리나제의 활성을 증가시킬 수 있는 이들의 능력에 대해 시험한다. 스핑고미엘리나제의 활성이 증가하게 되면, 스핑고미엘린의 가수분해가 증가하고 세라미드 생성이 증가하였다. 특정 제제의 효능을 결정하기 위한 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험은 다음과 같이 수행하여 완료하였다:

시험용 용액의 제조:

단계 1: 스핑고미엘리나제, 스핑고미엘린 및 제제를 포함하는 시험용 용액의 제조:

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조한다: (1) 해당 제제가 수용액 또는 오일인 경우에는 제제 (예를 들면, 식물성 추출물) 10 마이크로리터 (상기 제제가 분말 또는 고형물인 경우에는, 적당량의 분말 또는 고형물을 인산염 완충 식염수, pH 7.4에 용해시킴으로써 0.1 마이크로그램/밀리리터 용액 10 마이크로리터를 제조한다); (2) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 용액 중의 10 마이크로리터의 0.1 마이크로그램/밀리리터 스핑고미엘리나제 [Catalogue No. S7651, Sigma Chemical, St. Louis, Mo. (또는 등가물)]; (3) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 용액 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 BODIPY FL C5-스핑고미엘린 [Molecular Probes, Eugene, Or. (또는 등가물)]; 및 (4) 70 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

단계 2: 스핑고미엘리나제 및 스핑고미엘린을 포함하는 대조 시험용 용액의 제조:

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조한다: (1) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 용액 중의 10 마이크로리터의 0.1 마이크로그램/밀리리터 스핑고미엘리나제; (2) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 용액 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 BODIPY FL C5-스핑고미엘린; 및 (3) 80 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

단계 3: 스핑고미엘린을 포함하는 대조 시험용 용액의 제조:

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조한다: (1) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 용액 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 BODIPY FL C5 스핑고미엘린; 및 (2) 90 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

단계 4: 제제와 스핑고미엘린을 포함하는 대조 시험용 용액의 제조:

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조한다: (1) 해당 제제가 수용액 또는 오일인 경우에는 제제 10 마이크로리터 (상기 제제가 분말 또는 고형물인 경우에는, 적당량의 분말 또는 고형물을 인산염 완충 식염수, pH 7.4에 용해시킴으로써 0.1 마이크로그램/밀리리터 용액 10 마이크로리터를 제조한다); (2) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 용액 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 BODIPY FL C5 스핑고미엘린; 및 (3) 80 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

검정:

단계 1: 4가지 시험용 용액 각각을 25℃ 하에 실험실용 진탕기 (예를 들면, 약 6의 설정값 하의 S/P Vortrex-Genie; Deerfield, I1) 상에서 30분 동안 진탕시켜 각 시험용 용액을 철저히 혼합하고 시험용 혼합물 성분들 간에 화학적 상호 작용과 반응이 일어나도록 한다.

단계 2: 클로로포름:메탄올 2:1 (용적 기준) 혼합물 1 밀리리터를 각 시험용 용액에 가하여 상기 화학 반응을 중지시킨다. 클로로포름:메탄올 혼합물을 부가한 후, 각 시험용 용액을 약 1분 동안 와동시켜 (예를 들면, 약 6의 설정값 하의 S/P Vortrex-Genie; Deerfield, I1) 클로로포름:메탄올 혼합물이 시험용 혼합물 전반에 걸쳐 철저히 분포되도록 한다.

단계 3: 각 시험용 용액의 유기 상으로부터 0.8 밀리리터의 용액을 제거하고, 이와 같이 제거된 용액을 추가 분석을 위해 박층 크로마토그래피 바이알 내로 도입한다.

박층 크로마토그래피 과정:

단계 1: 5 마이크로리터의 시험용 용액을 박층 크로마토그래피 판, 예를 들면, 고성능 박층 크로마토그래피 실리카 겔 60 판 (MERCK, Damstady, Germany), 또는 유사한 판 상으로 도입한다. 시험용 용액을 상기 판 상으로 스폿팅하는 것은 예를 들어, CAMAG 오토(Auto) TLC 샘플러(Sampler) 4 (Muttenz, Switzerland), 또는 유사한 장치를 사용하여 수행할 수 있다.

단계 2: 90:20:0.5 (용적 기준) 클로로포름:메탄올:수산화암모늄 혼합물을 각 판 상으로 도입하고, 이러한 혼합물을 8 센티미터 길이가 되도록 수행함으로써 각 시험용 용액을 전개한다.

단계 3: 알파 이노텍 플라워켐 플레이트(Alpha Innotech Flourchem Plate) 영상화 시스템 (San Leandro, Ca), 또는 유사한 시스템을 사용하여 영상 분석함으로써, 형광성 절단 산물을 박층 크로마토그래피 판 상에서 정량화한다. 각 판은 전형적으로, 최대 10개의 시험용 샘플, 3개의 양성 대조군 샘플 (기질 및 스핑고미엘리나제) 및 1개의 음성 대조군 샘플 (기질만 포함하고 효소는 포함하지 않음)을 함유한다. 상기 판을 UV 광원 (364 nm)으로 발광시킴으로써 영상화하였고, 플라워켐 영상화기를 사용하여 585 nm 장벽 필터를 통하여 디지털 영상을 취하였다. 플라워켐 영상 분석용 소프트웨어를 사용하여 모든 형광성 밴드를 분석하고 각 밴드에 대한 휘도 (brightness)를 결정하였다. 상기 플라워켐 소프트웨어는 각 형광성 밴드에 대한 통합 밀도값 (IDV)과 면적 (픽셀)을 결정해 주었다. 이러한 정보로부터, 플라워켐 소프트웨어에 의해 휘도값을 산정한다. 다음 산정식을 사용한다:

휘도 = IDV/AREA

상기에서, IDV는 픽셀 값 모두의 합이고, AREA는 크기가 2000 내지 2500 픽셀인 박스에 의해 봉입된 영역의 크기 (픽셀)이다. 효소 활성에 대한 해당 화합물의 효과를 산정하기 위해, 음성 대조군 휘도를 먼저, 모든 샘플로부터 공제한다. 이어서, 특정 판 상의 시험용 화합물 밴드를, 동일한 판에 대한 3개의 양성 대조군 밴드의 평균 값으로 나눈다. 1 이상의 값은 스핑고미엘리나제 증강인자를 지시하고, 1 아래의 값은 억제제를 지시한다.

스핑고미엘리나제의 활성을 약 100% 이상 증가시켜 궁극적으로 세포내 세라미드의 양을 증가시키기 위해, 본원에 기재된 개인 관리 제품과 조합하여 사용하기에 적합한 제제에는 식물성 추출물과 기타 화합물 둘 다가 포함된다. 구체적으로 언급하면, 다음 제제가 본원에 기재된 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키고, 본 발명에 따라서 사용하기 적합한 것으로 밝혀졌다: 세다플랜트 리치터 (Sedaplant Richter), 클로렐라 (Chlorella), 헥사플랜트 리치터 (Hexaplant Richter), 라벤더 (Lavender), 마리골드 (Marigold; Calendula), 고투 콜라 (Gotu Kola) PE 4:1, 스피룰리나 (Spirulina), 카모나일 (Chamonile) CL, 하르파고피툼 (Harpagophytum) (악마의 발톱), 드라고덤 (Dragoderm), 피토플레놀린 (Phytoplenolin), 알로에 페록스 (Aloe Ferox) HS, 씨 파슬리 추출물 (Sea Parsley Extract), 부쳐 브룸 (Butcher's Broom) HS, 아메리칸 진셍 (American Ginseng), 미크로아트 아파 복합체 (Microat afa Complex), 및 일본 그린 티 농축물의 악티피트 (Actiphyte of Japanese Green Tea Conc). 바람직한 제제는 클로렐라, 라벤더, 스피룰리나, 드라고덤, 피토플레놀린, 알로에 페록스 HS, 및 아메리칸 진셍이다.

건식 와이프 기질 상에 존재하거나 흡수성 제품 상에 존재하는 경우, 스핑고미엘리나제의 활성을 증가시키기 위한 제제는 약 0.01% (처리된 기질 또는 제품의 중량을 기준으로 함) 내지 약 50% (처리된 기질 또는 제품의 중량을 기준으로 함), 바람직하게는 약 0.01% (처리된 기질 또는 제품의 중량을 기준으로 함) 내지 약 10% (처리된 기질 또는 제품의 중량을 기준으로 함)의 양으로 존재한다. 습식 와이프의 액상 제형의 일부로서 존재하는 경우에는, 상기 제제가 약 0.01% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함) 내지 약 50% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함), 보다 바람직하게는 약 0.01% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함) 내지 약 10% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함), 가장 바람직하게는 약 0.01% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함) 내지 약 10% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함)의 양으로 존재한다.

본 발명의 또 다른 양태에서는, 효소 세라미다제의 활성을 저하시킬 수 있는 제제를 개인 관리 제품 내로 또는 상으로 도입하여, 세포내 및 세포외 세라미다제의 양을 유지 또는 증가시킴으로써 상기 개인 관리 제품과 접촉하는 피부의 건강을 개선시킨다. 앞서 언급된 바와 같이, 세라미다제는 세라미드를 파괴시킬 수 있는 효소이다. 피부에 천연적으로 존재하는 세라미다제가 몇몇 피부 층에서 유용하고도 필요한 기능을 수행하긴 하지만, 예를 들어, 분변에 존재할 수 있는 세균성 세라미다제와 같은 외부 공급원으로부터 피부 상부 층 내로 또는 피부 표면 상으로 도입된 세라미다제는 세라미드를 파괴할 수 있기 때문에, 앞서 논의된 바와 같은 각종 피부 문제를 유발시킬 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 "효소 세라미다제의 활성을 저하시키는" 것이란 해당 제제의 존재 하에서의 세라미다제의 효소적 활성이 이러한 제제의 부재 하에서의 세라미다제의 효소적 활성과 비교해서 저하된다는 것을 의미한다. 본원에 기재된 제제를 개인 관리 제품 내로 또는 상으로 도입함으로써, 이러한 제제가 사용 중에 피부와 접촉하여 이들 위에 침착된 세라미다제와 상호 작용하고 세라미다제의 효소적 활성을 저하시킬 수 있다. 이로써, 세라미드의 파괴가 저하된다.

개인 관리 제품 내로 또는 상으로 도입된 제제, 또는 제제 조합물은 이러한 제제 부재 하에서의 세라미다제 활성과 비교해서, 세라미다제의 효소적 활성을 바람직하게는 약 50% 이상, 보다 바람직하게는 약 75% 이상, 가장 바람직하게는 약 90% 이상 저하시킨다. 한 양태에서는, 개인 관리 제품 내로 또는 상으로 도입된 제제, 또는 제제 조합물이, 본원에 제시된 CAST 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 이러한 제제 부재 하에서의 세라미다제 활성과 비교해서, 세라미다제의 효소적 활성을 바람직하게는 약 50% 이상, 보다 바람직하게는 약 75% 이상, 가장 바람직하게는 약 90% 이상 저하시킨다. 세라미다제 활성 저하제는 바람직하게는, 상기 언급된 바와 같이 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 것이다. 이것이 많은 상황에 있어 상기 제제의 목적이고 능력이긴 하지만, 특정 적용 조건과 피부 조건 하에서는, 상기 제제가 이러한 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 것이긴 해도 피부가 실제로 경험하게 되는 활성 저하는 약 50% 이상 이외의 것일 수도 있다.

CAST 세라미다제 활성 스크리닝 시험

예를 들어, 식물성 추출물 및 관련 화합물과 같은 제제를 대상으로 하여, 세라미다제/세라미드 시스템에서 세라미다제의 활성을 저하시킬 수 있는 이들의 능력에 대해 시험한다. 세라미다제의 활성이 저하되면, 세라미드의 수준이 증가한다. 세라미다제 활성 스크리닝 시험은 다음과 같이 수행하여 완료하였다:

시험용 용액의 제조:

단계 1: 세라미다제 (분변 추출물), 제제 및 세라미드를 포함하는 시험용 용액의 제조:

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조한다: (1) 해당 제제가 수용액 또는 오일인 경우에는 제제 10 마이크로리터 (상기 제제가 분말 또는 고형물인 경우에는, 적당량의 분말 또는 고형물을 인산염 완충 식염수, pH 7.4에 용해시킴으로써 0.1 마이크로그램/밀리리터 용액 10 마이크로리터를 제조한다); (2) 9ml의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 중에서 유아 분변 1 그램을 추출하고, 이러한 추출물을 약 2분 동안 와동시킨 다음 원심분리시켜 모든 고형물을 제거함으로써 제조한, 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 중의 10 마이크로리터의 유아 분변 추출물; (3) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 C5 세라미드; 및 (4) 70 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

단계 2: 세라미다제 및 세라미드를 포함하는 대조 시험용 용액의 제조:

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조한다: (1) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 중의 10 마이크로리터의 유아 분변 추출물; (2) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 BIODIPY FL C5 세라미드 (Molecular Probes, Eugene, Wa.); 및 (3) 80 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

단계 3: 세라미드를 포함하는 대조 시험용 용액의 제조:

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조한다: (1) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 BIODIPY FL C5 세라미드; 및 (2) 90 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

검정:

단계 1: 각 시험용 용액을 25℃ 하에 18시간 동안 정적으로 유지시켜, 시험용 용액 성분들 간에 상호 작용과 반응이 일어나도록 한다.

단계 2: 클로로포름:메탄올 2:1 (용적 기준) 혼합물 200 마이크로리터를 각 시험용 용액에 가하여 상기 화학 반응을 중지시킨다. 클로로포름:메탄올 혼합물을 부가한 후, 각 시험용 용액을 약 1분 동안 와동시켜, 클로로포름:메탄올 혼합물이 시험용 혼합물 전반에 걸쳐 철저히 분포되도록 한다.

박층 크로마토그래피 과정:

단계 1: 10 마이크로리터의 시험용 용액을 박층 크로마토그래피 판, 예를 들면, 상기 언급된 바와 같은 고성능 박층 크로마토그래피 실리카 겔 60 판 상으로 도입한다.

단계 3: 각 판을 364 나노미터 광원으로 발광시키고, 적합한 카메라, 예를 들면, 디지털 코닥 (Kodak) DC 40으로 사진을 찍는다. 이러한 디지털 영상을 TIFF 파일로서 알파 이노텍 플라워 플레이트 영상화 시스템에 옮기고, 유사한 양성 대조군 (기질과 세라미다제 포함) 및 음성 대조군 (기질만 포함하고 효소는 포함하지 않음)을 이용하여 상기 언급된 바와 같이 분석하였다. 1 이상의 값은 세라미다제 증강인자를 지시하고, 1 아래의 값은 억제제를 지시한다.

세라미다제의 활성을 약 50% 이상 저하시켜 궁극적으로 피부 중의 세라미드의 양을 유지 또는 증가시키기 위해, 본원에 기재된 개인 관리 제품과 조합하여 사용하기에 적합한 제제에는 식물성 추출물과 기타 화합물 둘 다가 포함된다. 구체적으로 언급하면, 다음 제제가 본원에 기재된 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키고, 본 발명에 따라서 사용하기에 적합한 것으로 밝혀졌다: 드라고덤 (Dragoderm), 세라미드 복합체 (Ceramide Complex) CLR (P), 그린 티 HS-칠로우트 (Green Tea HS-Chilowt), 캄프리 리브스 추출물 (Comfrey Leaves Extract), 가수분해된 대두 단백질 (Hydrolyzed Soy Protein), 글리코덤 (Glycoderm), 알로에 젤 (Aloe Gel) 1:1 탈색, 아메리칸 진셍 (American Ginseng), 알로에 페록스 (Aloe Ferox) HS, 및 피토플레놀린 (Phytoplenolin).

건식 와이프 기질 상에 존재하거나 흡수성 제품 상에 존재하는 경우, 세라미다제의 활성을 저하시키기 위한 제제는 약 0.01% (처리된 기질 또는 제품의 중량을 기준으로 함) 내지 약 50% (처리된 기질 또는 제품의 중량을 기준으로 함), 바람직하게는 약 0.01% (처리된 기질 또는 제품의 중량을 기준으로 함) 내지 약 10% (처리된 기질 또는 제품의 중량을 기준으로 함)의 양으로 존재한다. 습식 와이프의 액상 제형의 일부로서 존재하는 경우에는, 상기 제제가 약 0.01% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함) 내지 약 50% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함), 보다 바람직하게는 약 0.01% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함) 내지 약 10% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함)의 양으로 존재한다.

특정 이론에 얽매이는 것은 아니지만, 효소 세라미다제의 활성을 저하시키기 위한 본원에 기재된 제제는 다음 2가지 방식 중의 한 가지 방식, 또는 2가지 방식 모두의 조합을 통하여 완수되는 것으로 여겨진다. 첫째, 상기 제제는 세균일 수도 있는 외부 공급원으로부터의 세라미다제의 생성을 실제적으로 하향 조절할 수 있다.세균과 상호 작용하고 세라미다제 생성을 하향 조절하거나, 중단시키거나 또는 저하시킴으로써, 이러한 세라미다제 효소에 의해 파괴된 세라미드의 양은 세라미다제의 농도가 감소함에 따라 저하된다. 또 다른 한편, 또는 하향 조절과 조합하여, 상기 제제(들)는 세라미다제 분자와 화학적으로 상호 작용할 수 있고, 이러한 효소 상의 하나 이상의 활성 부위를 차단시키거나 이와 결합하여, 세라미다제가 더 이상 세라미드와 반응하여 이를 파괴할 수 없도록 하거나 적어도 훨씬 덜 반응할 수 있도록 할 수 있다. 이러한 기전 단독으로는 피부 표면 상의 또는 피부 표면 근처의 세라미다제 전체 농도를 감소시키지 못하지만, 세라미다제 활성을 저하시킴으로써 세라미드의 파괴를 효과적으로 방지시킨다.

본 발명의 또 다른 양태에서는, 단일 제제를 개인 관리 제품 내로 또는 상으로 도입하여 이중 효과를 획득할 수 있는데, 즉 상기 제제는 스핑고미엘리나제 활성을 증가시킴과 동시에 세라미다제 활성을 저하시키는 작용을 한다. 예를 들어, 드라고덤 (Dragoderm)은 본원에 제시된 SAST 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 스핑고미엘리나제 활성을 300% 이상 증가시키는 것으로 밝혀졌으며, 또한 본원에 제시된 CAST 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 세라미다제 활성을 약 90% 이상 저하시키는 것으로 밝혀졌다. 따라서, 드라고덤을 개인 관리 제품 내로 또는 상으로 도입한 경우에는, 피부 상에서의 스핑고미엘리나제 활성을 증가시켜 궁극적으로 세라미드 수준을 증가시킬 뿐만 아니라 세라미다제의 활성을 저하시킴으로써 피부 상에서의 세라미드의 파괴를 저하시키는 이중 효과가 획득된다. 따라서, 드라고덤은 고도로 바람직한 이중 이점을 제공해준다. 드라고덤과 함께, 알로에 페록스 HS, 아메리칸 진셍 및 피토페놀린 역시, 스핑고미엘리나제 활성을 증가시킬 뿐만 아니라 세라미다제 활성을 저하시키는 것으로 밝혀졌다.

본 발명의 추가 양태에서는, 제제 조합물을 활용하여, 피부 건강 개선을 위해 피부 중의 세라미드 수준을 증가시키기 위하여 세라미다제 활성은 저하시키면서도 스핑고미엘리나제 활성은 증가시키는 이중 효과를 획득할 수 있다. 예를 들어, 스핑고미엘리나제 활성을 증가시킬 수 있는 한 가지 제제를, 세라미다제 활성을 저하시킬 수 있는 제2 제제와 조합하여 사용할 수 있다. 바람직하게는, 제제 조합물의 전반적인 효능을 감소시키지 않기 위해서는, 스핑고미엘리나제 활성을 증가시키기 위해 사용된 제제가 세라미다제 활성을 또한 상당히 증가시키지 말아야 하고, 세라미다제 활성을 저하시키기 위해 사용된 제제는 스핑고미엘리나제 활성을 상당히 저하시키지 말아야 할 것이다. 한 양태에서는, 예를 들어, SAST 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 근거하여 스핑고미엘리나제 활성을 약 400% 이상 증가시키는 것으로 밝혀졌고, CAST 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 근거하여 세라미다제 활성에 대해서는 전혀 영향을 미치지 않는 것으로 밝혀진 클로렐라를, SAST 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 근거하여 스핑고미엘리나제 활성에 대해서는 실재적으로 전혀 영향을 미치지 않으면서도, CAST 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 근거하여 세라미다제 활성을 약 90% 이상 저하시키는 것으로 밝혀진 세라미드 복합체 CLR과 조합할 수 있었다.

본 발명의 추가 양태에서는, 스핑고미엘리나제의 활성을 증가시키거나 또는 세라미다제의 활성을 저하시키기 위해 본원에 기재된 제제를, 세라미드 양을 증가시키기 위해 스핑고미엘리나제의 활성을 증가시킬 수도 있는 유기 또는 무기 조인자와 조합하여 활용할 수 있다. 스핑고미엘리나제의 활성을 증가시키기 위해 본원에 기재된 제제와 조합하여 사용하기에 적합한 유기 조인자의 예에는 환원된 글루타치온 및 효모 추출물, 예를 들면, 쉬조삭카로마이세스 (Schizosaccharomyces), 리포마이세스 (Lipomyces), 및 삭카로마이세스 (Saccharomyces)가 포함된다. 적합한 무기 조인자에는 마그네슘이 포함된다.

스핑고미엘리나제의 활성을 증가시킬 수 있는 제제와 조합하여 건식 와이프 기질 상에 존재하거나 흡수성 제품 상에 존재하는 경우에는, 이러한 조인자가 약 0.01% (처리된 기질 또는 제품의 중량을 기준으로 함) 내지 약 10% (처리된 기질 또는 제품의 중량을 기준으로 함), 바람직하게는 약 0.01% (처리된 기질 또는 제품의 중량을 기준으로 함) 내지 약 1% (처리된 기질 또는 제품의 중량을 기준으로 함)의 양으로 존재한다. 스핑고미엘리나제의 활성을 증가시킬 수 있는 제제와 조합하여 습식 와이프의 액상 제형의 일부로서 존재하는 경우에는, 상기 조인자가 약 0.01% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함) 내지 약 10% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함), 보다 바람직하게는 약 0.01% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함) 내지 약 1% (상기 액상 제형의 총 중량을 기준으로 함)의 양으로 존재한다.

본 발명은 예시 목적으로만 제시된 다음 실시예에 의해 예시되고, 이로써 본 발명의 범위 또는 본 발명의 실시 방식이 제한되지 않는다.

실시예 1

본 실시예에서는, 식물성 추출물 및 기타 화합물을 대상으로 하여, 각 화합물이 본원에 제시된 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 따라서 스핑고미엘리나제 활성에 대해 어떠한 영향을 미쳤고, 본원에 제시된 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 따라서 세라미다제 활성에 대해 어떠한 영향을 미쳤는지를 결정하기 위해 시험하였다.

시험된 각 화합물, 이러한 화합물을 판매하는 회사, 해당 화합물의 제품 번호 및 화합물의 물리적 형태가 다음 표 1에 제시되어 있다:

화합물	회사	제품 번호	물리적 형태
세다플랜트 리치터	ChemischesLaboratorium,Berlin	732384	수성
클로렐라	Bio-botanica,Hauppauge, NY	951289	수성
헥사플랜트 리치터	ChemischesLaboratorium,Berlin	732431	수성
라벤더	Gattefosse,Cedex, France	21189	수성
마리골드(Calendula)	Bell Flavors &Fragrances, Inc.Northbrook,Illinois	62565	수성
고투 콜라 PE 4:1	Bio-botanica,Hauppauge, NY	980657	분말
스피룰리나	Bio-botanica,Hauppauge, NY	951288	수성
카모나일 CL	Dragoco, Totowa,NJ	2/033026	수성

하르파고피툼 (악마의 발톱)	Indena-International Souring, UppersaddleRiver, NJ	EG522	수성
드라고덤	Dragoco, Totowa,NJ	1012550	수성
피토플레놀린	Bio-botanica,Hauppauge, NY	980510	수성
알로에 페록스 HS	Alban MullerInternational,Northvale, NJ	7114158	오일
씨 파슬리 추출물	Phillip Rocklel	R10418	수성
부쳐 브룸 HS	Alban MullerInternational,Northvale, NJ	8025951	수성
아메리칸 진셍	Bio-botanica,Hauppauge, NY	9865	수성
미크로아트 아파 복합체	Nurture Inc.Missoula, MT	970512-06	수성
일본 그린 티 농축물의 악티피트	Active Organics,Dallas, Tx	300230-94	액상
아르니카 오일 CLR	ChemischesLaboratorium,Berlin	732407	오일
브라질 넛트 오일(Brazil Nut Oil)	Croda,Parsippany, NJ	BR2-1004	오일
잇꽃유(Safflower Oil)	AristaIndustries,Darien, Ct	33767	오일
올리브유	Croda,Parsippany, NJ	OL2-175	오일
앵초유(Evening Primrose Oil)	Croda,Parsippany, NJ	IPH1-1059	오일
세라미드 복합체 CLR (P)	ChemischesLaboratorium,Berlin	732207	수성
당근 오일 CLR	ChemischesLaboratorium,Berlin	832526	오일
칼룬둘라 오일 (Calundula Oil) CLR	ChemischesLaboratorium,Berlin	832622	오일
살구씨유(Apricot Kernel Oil)	Croda,Parsippany, NJ	AP-167	오일

세인트 존스 워트 오일 (St. John's Wort Oil) CLR	ChemischesLaboratorium,Berlin	732208	오일
그린 티 HS-칠로우트	Alban Muller,Montreuil Cedex,France	12373-00	수성
바이오디니스 (Biodyness) TRF (효모 추출물)	BrooksIndustries, SouthPlainfield, NJ	39656	수성
캄프리 리브스 추출물	Bell Flavors &Fragrances, Inc.Northbrook, Il	Req: 062565	수성
알로에 젤 1:1 탈색	Tri-K Industries,Northvale, NJ		수성
D1-알파-토코페닐아세테이트	Rocke Chem.		수성
보레지 오일(Borage Oil)	AristaIndustries,Darien, Ct		오일
가수분해된 대두 단백질	Croda,Parsippany, NJ	Hydrosoy2000SA	수성
MPC-우유 펩티드 복합체	ChemischesLaboratorium,Berlin	832641	분말
가수분해된 완전 귀리(Hydrolyzed Whole Oats)	Croda,Parsippany, NJ	Cromoist O-25	수성
가수분해된 엘라스틴	Croda,Parsippany, NJ	Crolastin	수성
MAP, 칼륨 라우레트 포스페이트, (PBS 중의 0.2%)	Rhodia, Cranbury, NJ		수성
맥켈렌 (Mackeleen) EN-77,선플라워 세다미노프로필모르폴린 락테이트(PBS 중의 0.25%)	Mcintyre Group,University Park, Il	EN-77	수성
트윈 (Tween) 20 (PBS 중의 0.1%)	Sigma Chemical,St. Louis, Mo		수성
해바라기유	Croda,Parsippany, NJ	SN2-104	오일
아보카도 오일 CLR	ChemischesLaboratorium,Berlin	832601	오일
글리코덤	CLR ChemischesLaboratorium,Berlin, Germany	GLYCODERM (P)	수성

스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험

상기 언급된 화합물 각각을 대상으로 하여, 스핑고미엘리나제의 활성을 증가시킬 수 있는 이의 능력에 대해 시험하였다. 각 화합물은 본원에 제시된 바와 동일한 방식으로 시험용 용액으로서 제조하였다.

단계 1: 스핑고미엘리나제, 스핑고미엘린 및 시험용 화합물을 포함하는 시험용 용액의 제조:

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조하였다: (1) 10 마이크로리터의 시험용 화합물 (시험용 화합물이 분말인 경우에는, 적당량의 분말을 인산염 완충 식염수, pH 7.4 (VWR, Wet Chester, Pa)에 용해시킴으로써 0.1 마이크로그램/밀리리터 용액 10 마이크로리터를 제조하였다); (2) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 용액 중의 10 마이크로리터의 0.1 마이크로그램/밀리리터 스핑고미엘리나제 (Sigma Chemical, St. Louis, Mo.); (3) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 용액 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 BODIPY C5 스핑고미엘린 (Bodipy FL C5 스핑고미엘린, Molecular Probes, Eugene, Or.); 및 (4) 70 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조하였다: (1) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 용액 중의 10 마이크로리터의 0.1 마이크로그램/밀리리터 스핑고미엘리나제; (2) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 용액 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 BODIPY FL C5 스핑고미엘린; 및 (3) 80 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

단계 3: 스핑고미엘린을 포함하는 대조 시험용 용액의 제조:

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조하였다: (1) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 용액 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 BODIPY FL C5 스핑고미엘린; 및 (2) 90 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

단계 4: 시험용 화합물과 스핑고미엘린을 포함하는 대조 시험용 용액의 제조:

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조하였다: (1) 10 마이크로리터의 시험용 화합물 (시험용 화합물이 분말인 경우에는, 적당량의 분말을 인산염 완충 식염수, pH 7.4에 용해시킴으로써 0.1 마이크로그램/밀리리터 용액 10 마이크로리터를 제조하였다) ; (2) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 용액 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 BODIPY FL C5 스핑고미엘린; 및 (3) 80 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

검정:

단계 1: 각 시험용 용액을 25℃ 하에 실험실용 진탕기 상에서 30분 동안 진탕시켜 각 시험용 용액을 철저히 혼합하고 시험용 혼합물 성분들 간에 화학적 상호 작용과 반응이 일어나도록 하였다.

단계 2: 클로로포름:메탄올 2:1 (용적 기준) 혼합물 1 밀리리터를 각 시험용 용액에 가하여 상기 화학 반응을 중지시켰다. 클로로포름:메탄올 혼합물을 부가한 후, 각 시험용 용액을 약 1분 동안 와동시켜, 클로로포름:메탄올 혼합물이 시험용 혼합물 전반에 걸쳐 철저히 분포되도록 하였다.

단계 3: 각 시험용 용액의 유기 상으로부터 0.8 밀리리터의 용액을 제거하고, 이를 추가 분석을 위해 박층 크로마토그래피 바이알 내로 도입하였다.

박층 크로마토그래피 과정:

단계 1: 5 마이크로리터의 시험용 용액을 박층 크로마토그래피 실리카 겔 60 판 (MERCK, Damstady, Germany) 상으로 도입하였다. 시험용 용액을 스폿팅하는 것은 CAMAG 오토 TLC 샘플러 4 (Muttenz, Switzerland)를 사용하여 수행하였다.

단계 2: 90:20:0.5 (용적 기준) 클로로포름:메탄올:수산화암모늄 혼합물을 각 판 상으로 도입하고, 이러한 혼합물을 8 센티미터 길이가 되도록 수행함으로써 각 시험용 용액을 전개하였다.

단계 3: 알파 이노텍 플라워켐 플레이트 영상화 시스템 (San Leandro, California)을 사용하여 각 밴드를 정량화하였다. 각 판은 3개의 양성 대조군 샘플과 1개의 음성 대조군 샘플을 포함하여 최대 10개의 시험용 샘플을 함유하였다. 상기 판을 UV 광원 (364 nm)으로 발광시킴으로써 영상화하였고, 플라워켐 영상화기를 사용하여 585 nm 장벽 필터를 통하여 디지털 영상을 취하였다. 플라워켐 영상 분석용 소프트웨어를 사용하여 모든 형광성 밴드를 분석하였고 각 밴드에 대한 휘도 (brightness)를 결정하였다. 상기 플라워켐 소프트웨어는 각 형광성 밴드에 대한 통합 밀도값 (IDV)과 면적 (픽셀)을 결정해 주었다. 이어서, 이들 값으로부터 휘도를 결정하였다. 효소 활성에 대한 해당 화합물의 효과를 산정하기 위해, 음성 대조군 휘도를 먼저, 모든 샘플로부터 공제하였다. 이어서, 특정 판 상의 시험용 화합물 밴드를, 동일한 판에 대한 3개의 양성 대조군 밴드의 평균 값으로 나누었다. 1 이상의 값은 스핑고미엘리나제 증강인자를 지시하고, 1 아래의 값은 억제제를 지시한다.

세라미다제 활성 스크리닝 시험

상기 언급된 화합물 각각을 대상으로 하여, 세라미다제의 활성을 저하시킬 수 있는 이의 능력에 대해 시험하였다. 각 화합물은 본원에 제시된 바와 동일한 방식으로 시험용 용액으로서 제조하였다:

시험용 용액의 제조:

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조하였다: (1) 10 마이크로리터의 시험용 화합물 (시험용 화합물이 분말인 경우에는, 적당량의 분말을 인산염 완충 식염수, pH 7.4에 용해시킴으로써 0.1 마이크로그램/밀리리터 용액 10 마이크로리터를 제조하였다); (2) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 중의 10 마이크로리터의 유아 분변 추출물; (3) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 C5 세라미드; 및 (4) 70 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조하였다: (1) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 중의 10 마이크로리터의 유아 분변 추출물; (2) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 C5 세라미드; 및 (3) 80 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

단계 3: 세라미드를 포함하는 대조 시험용 용액의 제조:

다음 성분들을 합하여 100 마이크로리터 시험용 용액을 제조하였다: (1) 인산염 완충 식염수 (pH 7.4) 중의 10 마이크로리터의 250 마이크로그램/밀리리터 C5 세라미드; 및 (2) 90 마이크로리터의 인산염 완충 식염수 (pH 7.4).

검정:

단계 1: 각 시험용 용액을 25℃ 하에 18시간 동안 정적으로 유지시켜, 시험용 용액 성분들 간에 상호 작용과 반응이 일어나도록 하였다.

단계 2: 클로로포름:메탄올 2:1 (용적 기준) 혼합물 200 마이크로리터를 각 시험용 용액에 가하여 상기 화학 반응을 중지시켰다. 클로로포름:메탄올 혼합물을 부가한 후, 각 시험용 용액을 1분 동안 와동시켜, 클로로포름:메탄올 혼합물이 시험용 혼합물 전반에 걸쳐 철저히 분포되도록 하였다.

단계 3: 각 시험용 용액의 유기 상으로부터 0.8 밀리리터의 용액을 제거하고, 이와 같이 제거된 용액을 추가 분석을 위해 박층 크로마토그래피 바이알 내로 도입하였다.

박층 크로마토그래피 과정:

단계 1: 10 마이크로리터의 시험용 용액을 고성능 박층 크로마토그래피 실리카 겔 60 판 상으로 도입하였다.

단계 3: 알파 이노텍 플라워켐 플레이트 영상화 시스템 (또는 유사한 시스템)을 사용하여 각 밴드를 정량화하였다.

이들 실험 결과가 다음 표 2에 제시되어 있다:

화합물	스핑고미엘리나제 활성에 대한 효과	세라미다제 활성에 대한 효과
세다플랜트 리치터	7.6배 활성	≥1배 활성
클로렐라	7.1배 활성	효과 없음
헥사플랜트 리치터	6.6배 활성	≥1배 활성
라벤더	6.4배 활성	효과 없음
마리골드 (Calendula)	6.4배 활성	≥1배 활성
고투 콜라 PE 4:1	6.2배 활성	≥1배 활성
스피룰리나	5.7배 활성	효과 없음
카모나일 CL	5.1배 활성	≥1배 활성
하르파고피툼 (악마의 발톱)	4.9배 활성	≥1배 활성
드라고덤	4.5배 활성	≤0.1배 활성
피토플레놀린	4.3배 활성	≤0.5배 활성
알로에 페록스 HS	4.1배 활성	≤0.5배 활성
씨 파슬리 추출물	3.4배 활성	효과 없음
부쳐 브룸 HS	3.4배 활성	≥1배 활성
아메리칸 진셍	3.2배 활성	≤0.5배 활성
미크로아트 아파 복합체	3.1배 활성	≥1배 활성
일본 그린 티 농축물의 악티피트	2.4배 활성	≥1배 활성

아르니카 오일 CLR	1.8배 활성	≥1배 활성
브라질 넛트 오일	1.5배 활성	≥1배 활성
잇꽃유	효과 없음	≥1배 활성
올리브유	효과 없음	≥1배 활성
앵초유	효과 없음	≥1배 활성
세라미드 복합체 CLR (P)	효과 없음	≤0.1배 활성
당근 오일 CLR	효과 없음	≥1배 활성
칼룬둘라 오일 (Calundula Oil) CLR	효과 없음	≥1배 활성
살구씨유	효과 없음	≥1배 활성
세인트 존스 워트 오일 (St. John's Wort Oil) CLR	효과 없음	≥1배 활성
그린 티 HS-칠로우트	0.8배 활성	≤0.1배 활성
바이오디니스 (Biodyness) TRF (효모 추출물)	0.8배 활성	효과 없음
캄프리 리브스 추출물	0.7배 활성	≤0.1배 활성
알로에 젤 1:1 탈색	0.7배 활성	≤0.5배 활성
D1-알파-토코페닐 아세테이트	0.6배 활성	≥1배 활성
보레지 오일	0.6배 활성	≥1배 활성
가수분해된 대두 단백질	0.6배 활성	≤0.1배 활성
MPC-우유 펩티드 복합체	0.4배 활성	효과 없음
가수분해된 완전 귀리	0.3배 활성	≥1배 활성
가수분해된 엘라스틴	0.2배 활성	효과 없음
MAP, 칼륨 라우레트 포스페이트, (PBS 중의 0.2%)	0.1배 활성	효과 없음
맥켈렌 (Mackeleen) EN-77,선플라워 세다미노프로필모르폴린 락테이트(PBS 중의 0.25%)	0.1배 활성	효과 없음
트윈 (Tween) 20 (PBS 중의 0.1%)	0.1배 활성	효과 없음
해바라기유	효과 없음	≥1배 활성
아보카도 오일 CLR	효과 없음	≥1배 활성
글리코덤	효과 없음	≤0.1배 활성

표 2에 제시된 데이터가 지시하는 바와 같이, 시험된 몇 가지 화합물은 스핑고미엘리나제 활성을 증가시키고/시키거나 세라미다제 활성을 저하시키는 능력을 나타내었다. 현저하게는, 드라고덤, 피토플레놀린, 알로에 페록스 HS, 및 아메리칸 진셍이 고도로 바람직한 제제인데, 이는 이들 모두가 스핑고미엘리나제의 활성을 증가시킬 뿐만 아니라 세라미다제의 활성을 저하시키기 때문이다.

상기와 같은 관점에서, 본 발명의 몇 가지 목적이 달성된다는 것을 알 수 있을 것이다. 본 발명의 범위를 벗어나지 않고서도 상기 언급된 제품과 방법에서 각종 변화가 일어날 수 있기 때문에, 본 명세서에 포함된 모든 사항은 단지 예시적이며 제한적이지 않다.

Claims

세라미드의 생성을 위해 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 스핑고미엘리나제 활성 증가제와 섬유상 와이프 (wipe) 기질을 포함하는, 피부 건강을 개선시키기 위한 와이프.
제1항에 있어서, 스핑고미엘리나제 활성 증가제가 SAST 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 것인 와이프.
제1항에 있어서, 상기 제제가 세다플랜트 리치터 (Sedaplant Richter), 클로렐라 (Chlorella), 헥사플랜트 리치터 (Hexaplant Richter), 라벤더 (Lavender), 마리골드 (Marigold; Calendula), 고투 콜라 (Gotu Kola) PE 4:1, 스피룰리나 (Spirulina), 카모나일 (Chamonile) CL, 하르파고피툼 (Harpagophytum) (악마의 발톱), 드라고덤 (Dragoderm), 피토플레놀린 (Phytoplenolin), 알로에 페록스 (Aloe Ferox) HS, 씨 파슬리 추출물 (Sea Parsley Extract), 부쳐 브룸 (Butcher's Broom) HS, 아메리칸 진셍 (American Ginseng), 미크로아트 아파 복합체 (Microat Afa Complex), 및 일본 그린 티 농축물의 악티피트 (Actiphyte of Japanese Green Tea Conc)로 이루어진 군 중에서 선택되는 와이프.
제3항에 있어서, 상기 제제가 세다플랜트 리치터, 클로렐라, 헥사플랜트 리치터, 라벤더, 마리골드 (Calendula) 및 고투 콜라 PE 4:1로 이루어진 군 중에서 선택되는 와이프.
제3항에 있어서, 상기 제제가 드라고덤인 와이프.
제1항에 있어서, 상기 제제가 스핑고미엘리나제 활성을 약 200% 이상 증가시키는 와이프.
제1항에 있어서, 상기 제제가 스핑고미엘리나제 활성을 약 400% 이상 증가시키는 와이프.
제1항에 있어서, 상기 와이프가 건식 와이프이고, 상기 제제가 약 0.01% (처리된 기질의 중량을 기준으로 함) 내지 약 50% (처리된 기질의 중량을 기준으로 함)의 양으로 존재하는 와이프.
제1항에 있어서, 상기 와이프가 습식 와이프이고 액상 제형을 추가로 포함하며, 상기 제제가 약 0.01% (액상 제형의 총 중량을 기준으로 함) 내지 약 50% (액상 제형의 총 중량을 기준으로 함)의 양으로 존재하는 와이프.
제1항에 있어서, 환원된 글루타치온, 쉬조삭카로마이세스 (Schizosaccharomyces), 리포마이세스 (Lipomyces), 삭카로마이세스 (Saccharomyces) 및 마그네슘으로 이루어진 군 중에서 선택된 조인자(cofactor)를 추가로 포함하는 와이프.
세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 세라미다제 활성 저하제와 섬유상 와이프 기질을 포함하는, 피부 건강을 개선시키기 위한 와이프.
제11항에 있어서, 세라미다제 활성 저하제가 CAST 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 것인 와이프.
제11항에 있어서, 세라미다제 활성이 약 75% 이상 저하되는 와이프.
제11항에 있어서, 세라미다제 활성이 약 90% 이상 저하되는 와이프.
제11항에 있어서, 상기 제제가 드라고덤 (Dragoderm), 세라미드 복합체 (Ceramide Complex) CLR (P), 그린 티 HS-칠로우트 (Green Tea HS-Chilowt), 캄프리 리브스 추출물 (Comfrey Leaves Extract), 가수분해된 대두 단백질 (Hydrolyzed Soy Protein) 및 글리코덤 (Glycoderm)으로 이루어진 군 중에서 선택되는 와이프.
제11항에 있어서, 상기 와이프가 건식 와이프이고, 상기 제제가 약 0.1% (처리된 기질의 중량을 기준으로 함) 내지 약 50% (처리된 기질의 중량을 기준으로 함)의 양으로 존재하는 와이프.
제11항에 있어서, 상기 와이프가 습식 와이프이고 액상 제형을 추가로 포함하며, 상기 제제가 약 0.01% (액상 제형의 총 중량을 기준으로 함) 내지 약 50% (액상 제형의 총 중량을 기준으로 함)의 양으로 존재하는 와이프.
세라미드의 생성을 위해 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 스핑고미엘리나제 활성 증가제 및 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 세라미다제 활성 저하제와, 섬유상 와이프 기질을 포함하는 와이프.
제18항에 있어서, 상기 제제가 드라고덤인 와이프.
세라미드의 생성을 위해 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 스핑고미엘리나제 활성 증가제와 흡수성 기질을 포함하는, 피부 건강을 개선시키기 위한 제품.
제20항에 있어서, 스핑고미엘리나제 활성 증가제가 SAST 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 것인 제품.
제20항에 있어서, 상기 제제가 세다플랜트 리치터, 클로렐라, 헥사플랜트 리치터, 라벤더, 마리골드 (Calendula), 고투 콜라 PE 4:1, 스피룰리나, 카모나일 CL, 하르파고피툼 (악마의 발톱), 드라고덤, 피토플레놀린, 알로에 페록스 HS, 씨 파슬리 추출물, 부쳐 브룸 HS, 아메리칸 진셍, 미크로아트 아파 복합체, 및 일본 그린 티 농축물의 악티피트로 이루어진 군 중에서 선택되는 제품.
제20항에 있어서, 상기 제제가 세다플랜트 리치터, 클로렐라, 헥사플랜트 리치터, 라벤더, 마리골드 (Calendula) 및 고투 콜라 PE 4:1로 이루어진 군 중에서 선택되는 제품.
제20항에 있어서, 상기 제제가 스핑고미엘리나제 활성을 약 200% 이상 증가시키는 제품.
제20항에 있어서, 상기 제제가 스핑고미엘리나제 활성을 약 400% 이상 증가시키는 제품.
제20항에 있어서, 상기 제제가 약 0.01% (처리된 제품의 중량을 기준으로 함) 내지 약 50% (처리된 제품의 중량을 기준으로 함)의 양으로 존재하는 제품.
제20항에 있어서, 기저귀, 연습 훈련용 팬츠, 성인 실금 의류 (adult incontinence garment), 여성용 냅킨, 종이 타월, 탐폰, 유방 패드, 순간 패드 (interlabial pad), 화장지, 상처 관리 제품 및 목욕용 티슈로 이루어진 군 중에서 선택되는 제품.
제20항에 있어서, 환원된 글루타치온, 쉬조삭카로마이세스, 리포마이세스, 삭카로마이세스 및 마그네슘으로 이루어진 군 중에서 선택된 조인자를 추가로 포함하는 제품.
세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 세라미다제 활성 저하제와 흡수성 기질을 포함하는, 피부 건강을 개선시키기 위한 제품.
제29항에 있어서, 세라미다제 활성 저하제가 CAST 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 것인 제품.
제29항에 있어서, 상기 제제가 세라미다제 활성을 약 75% 이상 저하시킬 수 있는 제품.
제29항에 있어서, 상기 제제가 세라미다제 활성을 약 90% 이상 저하시킬 수 있는 제품.
제29항에 있어서, 상기 제제가 드라고덤, 세라미드 복합체 CLR (P), 그린 티 HS-칠로우트, 캄프리 리브스 추출물, 가수분해된 대두 단백질 및 글리코덤으로 이루어진 군 중에서 선택되는 제품.
제29항에 있어서, 상기 제제가 약 0.1% (처리된 기질의 중량을 기준으로 함) 내지 약 50% (처리된 기질의 중량을 기준으로 함)의 양으로 존재하는 제품.
제29항에 있어서, 상기 제제가 드라고덤인 제품.
제29항에 있어서, 기저귀, 연습 훈련용 팬츠, 성인 실금 의류, 여성용 냅킨, 종이 타월, 탐폰, 유방 패드, 순간 패드, 화장지, 상처 관리 제품 및 목욕용 티슈로 이루어진 군 중에서 선택되는 제품.
흡수성 기질과, 세라미드의 생성을 위해 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 스핑고미엘리나제 활성 증가제 및 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 세라미다제 활성 저하제를 포함하는, 피부 건강을 개선시키기 위한 제품.
제37항에 있어서, 스핑고미엘리나제 활성 증가제가 SAST 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 것이고, 세라미다제 활성 저하제가 CAST 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 것인 제품.
세라미드의 생성을 위해 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 스핑고미엘리나제 활성 증가제를 피부와 접촉시키는 단계를 포함하여, 세라미드의 세포내 농도를 증가시키는 방법.
제39항에 있어서, 스핑고미엘리나제 활성 증가제가 SAST 스핑고미엘리나제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 스핑고미엘리나제 활성을 약 100% 이상 증가시키기 위한 것인 방법.
제39항에 있어서, 상기 제제가 개인 관리 제품 (personal care product) 내에 포함되어 있는 방법.
제39항에 있어서, 개인 관리 제품이 습식 와이프, 건식 와이프, 기저귀, 탐폰, 유방 패드, 여성용 냅킨, 순간 패드, 화장지, 목욕 티슈 및 종이 타월로 이루어진 군 중에서 선택되는 방법.
제39항에 있어서, 상기 제제가 세다플랜트 리치터, 클로렐라, 헥사플랜트 리치터, 라벤더, 마리골드 (Calendula), 고투 콜라 PE 4:1, 스피룰리나, 카모나일 CL, 하르파고피툼 (악마의 발톱), 드라고덤, 피토플레놀린, 알로에 페록스 HS, 씨 파슬리 추출물, 부쳐 브룸 HS, 아메리칸 진셍, 미크로아트 아파 복합체, 및 일본 그린 티 농축물의 악티피트로 이루어진 군 중에서 선택되는 방법.
제43항에 있어서, 상기 제제가 세다플랜트 리치터, 클로렐라, 헥사플랜트 리치터, 라벤더, 마리골드 (Calendula) 및 고투 콜라 PE 4:1로 이루어진 군 중에서 선택되는 방법.
제43항에 있어서, 상기 제제가 드라고덤인 방법.
세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 세라미다제 활성 저하제를 피부와 접촉시키는 단계를 포함하는, 피부에 대한 세라미다제의 활성을 저하시키는 방법.
제46항에 있어서, 세라미다제 활성 저하제가 CAST 세라미다제 활성 스크리닝 시험에 의해 결정된 바와 같이 세라미다제 활성을 약 50% 이상 저하시키기 위한 것인 방법.
제40항에 있어서, 상기 제제가 드라고덤, 세라미드 복합체 CLR (P), 그린 티 HS-칠로우트, 캄프리 리브스 추출물, 가수분해된 대두 단백질 및 글리코덤으로 이루어진 군 중에서 선택되는 방법.