KR19990068878A - 피롤구조를 갖는 파네실 전이효소 억제제 및 그의제조방법 - Google Patents

피롤구조를 갖는 파네실 전이효소 억제제 및 그의제조방법 Download PDF

Info

Publication number
KR19990068878A
KR19990068878A KR1019980002777A KR19980002777A KR19990068878A KR 19990068878 A KR19990068878 A KR 19990068878A KR 1019980002777 A KR1019980002777 A KR 1019980002777A KR 19980002777 A KR19980002777 A KR 19980002777A KR 19990068878 A KR19990068878 A KR 19990068878A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
formula
compound
lower alkyl
methyl
mmol
Prior art date
Application number
KR1019980002777A
Other languages
English (en)
Other versions
KR100388789B1 (ko
Inventor
정원희
이현일
고종성
이진호
신유승
김종현
정현호
박기원
문경덕
김귀화
곽태환
노성구
백선관
Original Assignee
성재갑
주식회사 엘지화학
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to KR1019980002777A priority Critical patent/KR100388789B1/ko
Application filed by 성재갑, 주식회사 엘지화학 filed Critical 성재갑
Priority to BR9908545-3A priority patent/BR9908545A/pt
Priority to PCT/KR1999/000051 priority patent/WO1999038862A1/en
Priority to CA002320233A priority patent/CA2320233C/en
Priority to ES99901979T priority patent/ES2185307T3/es
Priority to AT99901979T priority patent/ATE229017T1/de
Priority to US09/601,426 priority patent/US6436960B1/en
Priority to PT99901979T priority patent/PT1058683E/pt
Priority to JP2000529330A priority patent/JP3283032B2/ja
Priority to DE69904302T priority patent/DE69904302T2/de
Priority to CNB99802581XA priority patent/CN1158277C/zh
Priority to AU21886/99A priority patent/AU745855B2/en
Priority to EP99901979A priority patent/EP1058683B1/en
Publication of KR19990068878A publication Critical patent/KR19990068878A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100388789B1 publication Critical patent/KR100388789B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 피롤구조를 포함하며 파네실 전이효소를 억제할 수 있는 하기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.
상기식에서
A, B 및 C 는 명세서에서 정의한 바와 같다.

Description

피롤구조를 갖는 파네실 전이효소 억제제 및 그의 제조방법
본 발명은 피롤구조를 포함하며 파네실 전이효소를 억제할 수 있는 하기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.
화학식 1
상기식에서
A 는 수소 또는 저급알킬을 나타내거나, 하기 구조식의 그룹중 선택된 어느 하나를 나타내고,
,
여기에서 R1은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 하이드록시카보닐, 아미노카보닐, 아미노티오카보닐, 저급알콕시, 페녹시, 페닐 또는 저급알킬을 나타내며, R2는 수소, 저급알킬, 저급알카노일, 또는 아릴에 의해 치환되거나 비치환된 저급알콕시카보닐을 나타내고,
B 는 하기 구조식의 그룹중 선택된 어느 하나를 나타내며,
,
여기에서 R3및 R4는 각각 독립적으로 수소, 저급알킬, 저급알콕시, 할로겐, 시아노, 하이드록시카보닐, 아미노카보닐, 아미노티오카보닐, 하이드록시, 페닐 또는 페녹시를 나타내고,
C 는 수소 또는를 나타내며, 여기에서 R5및 R6은 각각 독립적으로 수소, 저급알킬, 아릴 또는을 나타내고, 여기에서 Y 는 O 또는 S 를 나타내며, n 은 2 내지 4의 정수를 나타내고, R7은 저급알킬을 나타낸다.
특히, 본 발명에 따른 화합물은 지금까지 알려진 파네실 전이효소 억제제와는 상이한 구조를 갖고 있을 뿐아니라 티올기도 전혀 포함하고 있지 않다.
본 발명에는 또한, 상기 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법도 포함되어 있다. 따라서, 그 제조 방법도 본 발명의 대상이다.
Ras 단백질은 세포의 성장과 분화에 중요한 역활을 하는 21 kda의 단백질로서 구아닌 뉴클레오타이드와 결합하며, 구아노신 트리포스페이트(GTP)를 구아노신 디포스페이트(GDP)로 가수분해하는 효소로서 세포내에서 특이적인 GTPase 회로를 조절하는 분자스위치로 작용하는 것으로 알려져있다(참조: Bourne, H.R., Sanders, D.A., McCormick, F.,Nature1991, 349, 117).
Ras 단백질은 포유동물세포에서 3 가지의 Ras 유전자에 의해 아미노산 188개의 K-Ras-4B 또는 189개의 H-Ras, K-ras-4A 및 N-Ras로 생성된다. 이 단백질의 12, 13, 61번 위치에 있는 아미노산들은 GTP의 인산기와 근접하여 있어, 이 아미노산 잔기들은 GTP의 가수분해에 관여하는 물분자의 공간적 위치에 영향을 미침으로써 GTPase 효소 활성을 저해한다. 인체에서 암이 발생한 경우, 이 위치의 아미노산에 돌연변이가 관찰되는데, 이 돌연변이가 결국 Ras 단백질 고유의 GTPase 활성을 저해하여 GTP 결합상태를 지속시킴으로써 비정상적인 성장신호를 지속적으로 전달하여 발암성을 나타내는 것으로 알려져 있다. 이와 같이 발암성인 Ras 유전자는 특이적으로 췌장암, 방광암, 폐암 및 피부암등에 밀접한 관련이 있는 것으로 알려져 있다(참조: Bos, J. L.,Cancer Res., 1989, 49, 4682).
Ras 단백질이 생물학적으로 활성화 상태에 있기 위해서는 세포막 내에 부착되어야 하는데 이를 위해서는 Ras 파네실 전이효소, Ras 단백질 카복시 말단의 3 개 AAX 펩타이드 절단 효소, 메틸 전이효소 및 팔미토일 전이효소에 의한, 단백질 전이 후의 탄소말단의 변형이 요구된다. 이중 첫번째 단계인 파네실화는 파네실 전이효소(FTase)에 의해 이루어진다. 파네실 전이효소의 기질은 Ras 단백질의 카복시 말단에 있는 CA1A2X라는 네개의 펩타이드이며, 여기서 A1 및 A2는 전기적 부하를 띄지 않는 지방족 아미노산이고 X는 메티오닌, 알라닌 또는 세린 등이다. 파네실 반응은 시스테인에 일어나 황에테르 결합을 형성시키며, H-Ras와 N-Ras의 경우에는 카복시 말단 근처의 또 다른 시스테인에 팔미토일화가 일어난다. 파네실화의 결과로 Ras 단백질은 친소성이 증가되어 세포막 내에 부착되게되며, 파네실화된 Ras 단백질은 카복시 말단으로부터 연이어 3개의 AAX 펩타이드가 절단효소에 의해 제거되고 메틸화되어 파네실기가 세포막 내의 지질층 또는 다른 수용체와 결합하는 것을 용이하게 해주는 것으로 알려져 있다. 한편, K-Ras-4B는 H-Ras, N-Ras와는 달리 팔미토일화에 필요한 시스테인 대신 폴리베이직(Poly basic) 도메인이라 불리는 여러개의 라이신이 배열된 부위를 가지고 있으며, 이를 통해 세포막내의 음이온성 지질과의 결합이 용이하게 되는 것으로 알려져 있다. Ras 단백질이 세포막내에 잘 부착하기 위해서는 모든 변형 단계가 필요하나, Ras 단백질의 활성화에는 파네실화만으로도 충분한 것으로 알려져 있으므로 이 파네실화를 차단함으로써 돌연변이에 의한 Ras 발암성을 억제하기 위한 연구가 활발히 진행되고 있다 (참조: Buss, J.E. et al.,Chemistry & Biology, 1995, 2, 787).
그간의 연구결과, Ras로 형질전환된 세포에서 파네실 전이효소를 저해했을 때 세포의 성장이 저해되는 것으로 관찰되었으며, 또한 Ras에 의해 변형된 세포형질을 개선하는 것으로 나타났다.
실제로 파네실 전이효소의 몇몇 저해제들은 Ras 발암성 유전인자의 세포내 프레닐기에 의한 반응을 선택적으로 저해하는 것으로 밝혀졌다(참조: Kohl, N.E.et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 91, 9141(1994); Kohl, N.E.et al, Nature Medicine, 1, 792(1995)). 개발된 파네실 전이효소 저해제로는 시스테인 티올(thiol)기를 함유하며 CAAX와 유사한 구조를 갖는 펩타이드 변형체 및 이를 개선한 저해제(참조: US Patent No. 5,141,851 호; Kohl, N. E.et al, Science,260, 1934(1993); Grahamet al.,PCT/US95/12224), 페닐기로 변형된 펩타이드(참조: Sebti, S. M.,J. Biol. Chem.270, 26802, 1995), 향정신성 의약품 골격구조중 벤조디아제핀을 펩타이드의 turn 모사구조로 활용한 변형체(참조: James, G. L.et al.,Science,260, 1937,1993), 펩타이드 구조에서 벗어나 트리사이클릭 유기 화합물을 골격으로한 저해제(참조: Bishop W. R.et al.,J. Biol. Chem.270, 30611, 1995)를 들 수 있다. 또한, 파네실 전이효소가 프레닐기를 전이시키는 작용기전이 전자 친화적 치환반응(ElectrophilicDisplacement)이므로 반응의 트랜지션 상태(transition state)에 양성부하를 요구함에 착안하여 프레닐기에 트랜지션 상태의 양성부하를 연결시킨 새로운 형태의 저해제가 제시되었다(참조: Poulter, C. D.et al., J. Am. Chem. Soc. 118, 8761, 1996).
그러나, 많은 경우의 인체 암에서 K-Ras 활성화가 주요 원인으로 작용하며, 지금까지 개발된 대부분의 프레닐 전이효소 저해제들은 K-Ras를 활성화시킨다. 따라서, K-Ras에 의해 형질전환된 세포의 성장저해 정도가 H-Ras, N-Ras에 의해 형질전환된 세포의 성장저해에 비해 떨어지므로 K-Ras 활성을 효과적으로 저해할 수 있는 새로운 저해제의 연구가 주목을 받고 있다.
이에 본 발명자들은 K-Ras 기질에 대한 효소활성 저해능 및 세포내 K-Ras 프레닐화 저해능을 평가할 수 있는 새로운 평가체계를 확립하여 이를 활용함으로써, K-Ras 뿐만 아니라 H-Ras, N-Ras 기질의 파네실화를 저해하는 신규한 화합물을 합성하고 그 저해능을 평가하였다. 그 결과, 본 발명자들은 상기 화학식 1의 화합물이 본 발명의 소기 목적에 부합되어 이들이 항암제로서 유용하게 사용될 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명은 우수한 항암효과를 갖는 화학식 1의 화합물 및 그의 제조방법에 관한 것이다.
본 발명은 피롤구조를 포함하며 파네실 전이효소를 억제할 수 있는 하기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염에 관한 것이다 :
화학식 1
상기식에서
A 는 수소 또는 저급알킬을 나타내거나, 하기 구조식의 그룹중 선택된 어느 하나를 나타내고,
,
여기에서 R1은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 하이드록시카보닐, 아미노카보닐, 아미노티오카보닐, 저급알콕시, 페녹시, 페닐 또는 저급알킬을 나타내며, R2는 수소, 저급알킬, 저급알카노일, 또는 아릴에 의해 치환되거나 비치환된 저급알콕시카보닐을 나타내고,
B 는 하기 구조식의 그룹중 선택된 어느 하나를 나타내며,
,
여기에서 R3및 R4는 각각 독립적으로 수소, 저급알킬, 저급알콕시, 할로겐, 시아노, 하이드록시카보닐, 아미노카보닐, 아미노티오카보닐, 하이드록시, 페닐 또는 페녹시를 나타내고,
C 는 수소 또는를 나타내며, 여기에서 R5및 R6은 각각 독립적으로 수소, 저급알킬, 아릴 또는을 나타내고, 여기에서 Y 는 O 또는 S 를 나타내며, n 은 2 내지 4의 정수를 나타내고, R7은 저급알킬을 나타낸다.
상기 화학식 1의 화합물에 대한 치환기 정의에서 용어 "저급알킬"은 메틸, 에틸, 이소프로필, 이소부틸, t-부틸 등과 같은 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 측쇄 알킬을 의미하며, 용어 "저급알카노일"은 포르밀, 아세틸, 프로피오닐 등과 같은 탄소수 1 내지 4의 알킬카보닐을 의미한다.
우수한 항암효과를 나타내는 상기 화학식 1의 화합물 중에서도 바람직한 화합물은
A 는 하기 구조식의 그룹중 선택된 어느 하나를 나타내고,
,
여기에서 R1은 수소, 할로겐 또는 시아노를 나타내며, R2는 저급알카노일을 나타내거나, 아릴에 의해 치환되거나 비치환된 저급알콕시카보닐을 나타내고,
B 는 할로겐, 저급알킬 또는 저급알콕시에 의해 치환되거나 비치환된 나프틸을 나타내며,
C 는 수소 또는를 나타내고, 여기에서 R5는 수소 또는 저급알킬을 나타내며, R7은 저급알킬을 나타내는 화합물이다.
본 발명에 따른 화학식 1 화합물의 대표적인 예는 하기 표 1에 나타낸 바와 같다.
화합물번호 화합물 구조 화합물번호 화합물 구조
1 2
3 4
5
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 (a) 하기 화학식 2의 화합물을 용매중에서 염기의 존재하에 하기 화학식 3의 화합물과 반응시켜 제조하거나, (b) 하기 화학식 1a의 화합물을 용매중에서 하기 화학식 4의 화합물과 커플링시켜 하기 화학식 1b의 화합물을 제조함을 특징으로하여 제조할 수 있으며, 이러한 화학식 1 화합물의 제조방법도 또한 본 발명의 목적이다.
그러나, 본 발명에 따른 화합물의 제조방법이 하기에 설명하는 것으로만 한정된 것은 아니며, 본 명세서에 기재되거나 선행문헌에 개시된 여러가지 합성방법을 임의로 조합함으로써 용이하게 제조할 수 있고, 이러한 조합은 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에게 범용화된 통상의 기술이다.
상기식에서
A, B, C 및 R2는 앞에서 정의한 바와 같고,
X 는 하이드록시 또는 반응성 이탈기, 바람직하게는 할로겐을 나타낸다.
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물을 제조하는 상기방법 (a) 및 (b)에서 용매로는 반응에 불활성인 용매중 어느 것이라도 사용할 수 있으나, 바람직하게는 디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드 및 테트라하이드로푸란 중에서 선택된 1 종 이상을 사용한다. 또한, 방법 (a)에서 염기로는 수소화나트륨, 포타슘 t-부톡사이드, 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드 및 포타슘 비스(트리메틸실릴)아미드 중에서 선택된 1 종 이상을 사용할 수 있다. 방법 (b)에서 출발물질로 사용하는 화학식 1a의 화합물은 피페리딘의 1번 위치에 벤질옥시카보닐기가 치환되어있는 화합물을 탈보호기화시켜 제조할 수 있다. 탈보호기화 반응은 통상의 반응조건을 적용하여 수행할 수 있으나, 바람직하게는 알콜 용매중에서 수소대기하에 Pd(OH)2/C 또는 Pd/C 를 사용하여 수행한다. 이렇게 생성된 화학식 1a의 화합물을 상기 언급된 불활성용매중에서 임의로 3차아민 염기 존재하에 저급알킬할라이드, 저급알카노일할라이드 또는 저급알킬클로로포르메이트와 커플링시키면 화학식 1b의 화합물이 수득된다. 또는, 커플링제의 존재하에 화학식 1a의 화합물을 카복실산 유도체(X=OH)와 반응시켜 아미드 형태의 화학식 1b 화합물을 제조할 수도 있다. 이때 커플링제로는 디사이클로헥실카르보디이미드(DCC), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드(EDC), 1,1'-디카보닐디이미다졸(CDI) 등의 카르보이미드류를 1-하이드록시벤조트리아졸(HOBT)과 혼합된 상태로 사용할 수 있다.
본 발명에 따른 방법 (a) 내지 (b)에서 출발물질로 사용되는 화합물들은 하기 반응식 1 내지 5에 도시된 방법에 따라 제조할 수 있다.
먼저, 화학식 2의 화합물은 치환기 A의 종류에 따라 4-하이드록시메틸이미다졸 하이드로클로라이드를 출발물질로 하여 반응식 1에 도시한 바에 따라 보호기화, 아세틸화, 커플링, 탈보호기화 및 할로겐화 반응을 거쳐 합성하거나, 1차 아민을 출발물질로 하여 반응식 2에 도시한 바에 따라 폐환, 탈황 및 할로겐화 반응을 수행하여 합성할 수 있다.
상기 반응식 1 및 2에서
A 는 앞에서 정의한 바와 같고,
Tr 은 트리틸을 나타내며, 이하 동일한 의미로 사용된다.
화학식 2의 화합물에서 A가 1-(벤질옥시카보닐)피페리딘-4일메틸인 화합물은 4-아미노메틸피페리딘을 출발물질로 하여 반응식 3에 도시한 바에 따라 보호기화, 벤질옥시카보닐화, 탈보호기화 반응을 거쳐 아민을 제조한 후, 이를 이용하여 반응식 2에 따라 합성할 수 있다.
상기 반응식 3에서 Cbz 는 벤질옥시카보닐을 나타내고, CbzCl은 벤질클로로포르메이트를 나타내며, 이하 동일한 의미로 사용된다.
한편, 화학식 3의 화합물에서 C가 수소이고 B가 1-나프틸인 화합물은 1-나프토산을 출발물질로 하여 하기 반응식 4에 도시한 바에 따라 합성할 수 있으며, C가 치환된 카바모일기이고 B가 1-나프틸인 화합물은 하기 반응식 5에 도시한 바에 따라 합성할 수 있다.
상기 반응식 4 및 5에서
TosMIC 는 토실메틸이소시아나이드를 나타내며, 이하 동일한 의미로 사용된다.
본 발명, 특히 상기 설명한 제조방법들을 하기 제조예, 실시예 및 실험예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들 제조예, 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기위한 것일 뿐, 어떤 의미로든 본 발명의 범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
제조예 1: 4-(5-클로로메틸-1H-이미다졸-1-일메틸)벤조니트릴 하이드로클로라이드의 합성
1-1) 4-하이드록시메틸-1-트리틸-1H-이미다졸의 제조
하이드록시메틸이미다졸 하이드로클로라이드 3.99g(29.6 밀리몰)을 디메틸포름아미드 30㎖와 트리에틸아민 10㎖의 혼합물에 녹인 후, 여기에 트리페닐메틸 클로라이드 9.35g(33.5 밀리몰)을 디메틸포름아미드 110㎖에 용해시킨 용액을 서서히 가하였다. 2시간 후, 반응액에 얼음물 500㎖를 가하고, 생성된 고체를 수득하였다. 이 고체를 디옥산으로 재결정하여 표제화합물 8.82g(수율 87%)을 수득하였다.
융점: 227-229℃
1-2) 4-아세톡시메틸-1-트리틸-1H-이미다졸의 제조
피리딘 100㎖에 제조예 1-1)에서 수득한 화합물 5.00g(14.7 밀리몰)을 가하고 아세트산무수물 1.65g(16.2 밀리몰)을 가한 다음, 상온에서 24시간동안 교반하였다. 반응액을 감압증류하여 피리딘을 제거하고 잔류물을 에틸아세테이트 200㎖에 녹인 다음, 소금물 100㎖로 세척해주었다. 유기용매를 감압증류하여 제거한 후, 칼럼 크로마토그래피(용리제: 디클로로메탄/메탄올=20/1, v/v)를 실시하여 표제화합물 5.22g(13.7 밀리몰, 수율 93%)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 2.01(s, 3H), 4.95(s, 2H), 6.88(s, 1H), 7.08(s, 5H), 7.27(s, 10H), 7.45 (s, 1H)
1-3) 4-(4-아세톡시메틸-1-트리틸-1H-이미다졸-3-일메틸)벤조니트릴 브로마이드의 제조
제조예 1-2)에서 수득한 화합물 5.00g(13.1 밀리몰)을 디클로로메탄 20㎖에 녹이고, 4-시아노벤질브로마이드 2.82g(14.4 밀리몰)을 가한 다음, 상온에서 60 시간동안 교반하였다. 유기용매를 감압증류하여 제거하고 잔류물에 대해 칼럼 크로마토그래피(용리제: 디클로로메탄/메탄올=5/1, v/v)를 실시하여 표제화합물 5.31g (9.17 밀리몰, 수율 70%)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3+ CD3OD) δ 1.95(s, 3H), 4.95(s, 2H), 5.45(s, 2H), 7.11- 7.40(m, 18H), 7.65(d, 2H), 8.21(s, 1H)
1-4) 4-(5-아세톡시메틸-1H-이미다졸-1-일메틸)벤조니트릴의 제조
제조예 1-3)에서 수득한 화합물 9.10g(15.7 밀리몰)을 디클로로메탄 500㎖에 녹인 후, 0℃에서 트리플루오로아세트산 6.06㎖(78.7 밀리몰) 및 트리에틸실란 12.5㎖(78.7 밀리몰)를 서서히 가하고 상온에서 1시간동안 교반하였다. 유기용매를 감압증류하여 제거하고, 포화 K2CO3수용액으로 pH를 10으로 맞춘 다음, 에틸아세테이트 300㎖로 추출하였다. 유기용매를 감압증류하여 제거하고 잔류물에 대해 에틸아세테이트를 용리제로 하는 칼럼 크로마토그래피를 실시하여 표제화합물 3.60 g(14.1 밀리몰, 수율 90%)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 1.90(s, 3H), 4.97(s, 2H), 5.25(s, 2H), 7.14(d, 2H), 7.21(d, 1H), 7.67(s, 1H), 7.75(d, 2H)
1-5) 4-(5-하이드록시메틸-1H-이미다졸-1-일메틸)벤조니트릴의 제조
제조예 1-4)에서 수득한 화합물 4.20g(16.5 밀리몰)을 메탄올 200㎖에 녹인 후, K2CO34.50g(32.9 밀리몰)을 가한 다음, 상온에서 20분동안 교반하였다. 상온에서 유기 용매를 감압증류하여 제거하고 에틸아세테이트 300㎖로 추출한 다음, 칼럼 크로마토그래피(용리제: 디클로로메탄/메탄올=10/1, v/v)를 수행하여 표제화합물 3.19g (15.0 밀리몰, 수율 91%)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3+ CD3OD) δ 4.28(s, 2H), 5.18(s, 2H), 6.84(s, 1H), 7.12(d, 2H), 7.42(s, 1H), 7.55(d, 2H)
1-6) 4-(5-클로로메틸-1H-이미다졸-1-일메틸)벤조니트릴 하이드로클로라이드의 제조
제조예 1-5)에서 수득한 화합물 3.00g(14.1 밀리몰)을 클로로포름 40㎖에 녹인 후, 0℃에서 티오닐클로라이드 5.02㎖(70.5 밀리몰)를 서서히 가하고 상온에서 2시간동안 교반하였다. 유기용매를 감압하에 제거하여 표제화합물 3.50g(13.1 밀리몰, 수율 93%)을 수득하였다. 이 화합물은 정제하지 않고 바로 반응에 사용하였다.
제조예 2: 1-(4-브로모벤질)-5-클로로메틸-1H-이미다졸 하이드로클로라이드의 합성
2-1) 1-(4-브로모벤질)-5-하이드록시메틸-1H-이미다졸의 제조
디하이드록시아세톤 다이머와 4-브로모벤질아민 하이드로클로라이드를 출발물질로 하여 문헌(참조: J.M.Dener, L-H Zhang, H.Rapoport,J. Org. Chem., 1993, 58, 1159)에 기재된 방법에 따라 실시함으로써 표제화합물을 50% 수율로 수득하였다.
1H NMR (CDCl3+ CD3OD) δ 4.46(s, 2H), 5.26(s, 2H), 7.00(s, 1H), 7.07(d, 2H), 7.50(d, 2H), 7.65(s, 1H)
2-2) 1-(4-브로모벤질)-5-클로로메틸-1H-이미다졸 하이드로클로라이드의 제조
제조예 2-1)에서 수득한 화합물을 출발물질로 사용하는 점을 제외하고는 제조예 1-6)에서와 유사하게 실시하여 표제화합물을 96% 수율로 수득하였다. 수득된 화합물은 정제하지 않고 바로 반응에 사용하였다.
제조예 3: 1-[1-(벤질옥시카보닐)피페리딘-4-일]메틸-5-클로로메틸-1H-이미다졸의 합성
3-1) 4-아미노메틸-1-(벤질옥시카보닐)피페리딘의 제조
4-아미노메틸피페리딘 22.2g(0.2 몰)을 톨루엔 250㎖에 녹인 후, 벤즈알데히드 21.2g(0.2 몰)을 가하였다. 반응물을 딘스탁 장치 하에서 3시간 동안 환류하여 물을 제거한 후, 반응물을 0℃로 냉각시키고 교반하면서 벤질클로로포르메이트 34.2g(0.2 몰)을 서서히 가하였다. 상온에서 3시간동안 교반한 다음 1N KHSO4수용액 220㎖를 가하였다. 디에틸에테르 200㎖로 반응물을 3회에 걸쳐 추출한 후 수용액층을 1N 수산화나트륨 수용액으로 염기화시키고 염화나트륨으로 포화시켰다. 수용액층을 디클로로메탄 100㎖로 3회 추출하고, 무수 마그네슘설페이트로 건조시킨 후 감압증류하여 표제화합물 38g (수율 91%, 분자량 248)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 1.11(s, 2H), 1.49(s, 3H), 1.70(d, 2H), 2.57(d, 2H), 2.78(s, 2H), 4.20(s, 2H), 5.12(s, 2H), 7.34-7.35(m, 5H)
3-2) 1-[1-(벤질옥시카보닐)피페리딘-4-일]메틸-5-하이드록시메틸-2-머캅토-1H-이미다졸의 제조
제조예 3-1)에서 수득한 화합물 24.8g(0.1 몰)을 아세트산 6.0g(0.1 몰)과 함께 n-부탄올 50㎖에 녹인 후, 포타슘티오시아네이트(KSCN) 12.6g(0.13 몰), 1.3-디하이드록시아세톤 다이머 15.2g(0.1 몰) 및 아세트산 10.0g(0.17 몰)을 n-부탄올 50㎖에 용해시킨 용액에 가하고 상온에서 교반하였다. 48시간 후 용매를 감압증류하여 제거하고 잔류물을 에틸아세테이트 200㎖에 녹인 후 물 100㎖로 3회 세척하였다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트로 건조시킨 후 농축시켜 표제화합물 27g (75 밀리몰; 수율 75%)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 1.22(d, 2H), 1.57(d, 2H), 2.30(s, 1H), 2.72(s, 2H), 3.96(s, 2H), 4.15(d, 2H), 4.46(s, 2H), 5.10(s, 2H), 6.62(s, 1H), 7.26-7.37 (m, 5H)
3-3) 1-[1-(벤질옥시카보닐)피페리딘-4-일]메틸-5-하이드록시메틸-1H-이미다졸의 제조
제조예 3-2)에서 수득한 화합물 18.05g(50 밀리몰)을 10% 질산 100㎖ 및 에틸아세테이트 10㎖의 혼합용액에 가한 후 반응물을 차가운 얼음물로 냉각시키고 상온에서 3시간동안 교반하였다. 반응물을 4N 수산화나트륨 수용액으로 염기화시킨 다음 에틸아세테이트 100㎖로 2회 추출하였다. 추출유기용액을 마그네슘설페이트로 건조시키고 감압증류하여 표제화합물 12.3g(38 밀리몰; 수율 75%)를 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 1.16(d, 2H), 1.56(d, 2H), 1.98(s, 1H), 2.70(s, 2H), 3.88(d, 2H), 4.18(s, 2H), 4.49(s, 1H), 4.56(s, 3H), 5.10(s, 2H), 6.82(s, 1H), 7.27-7.40(m, 6H)
3-4) 1-[1-(벤질옥시카보닐)피페리딘-4-일]메틸-5-클로로메틸-1H-이미다졸의 제조
제조예 3-3)에서 수득한 화합물 9.9g(30 밀리몰)을 클로로포름 50㎖에 녹인 후 0℃에서 티오닐클로라이드 7.1g(60 밀리몰)을 천천히 가하였다. 반응액을 2시간동안 교반한 후 용매를 감압증류하여 제거함으로써 표제화합물의 하이드로클로라이드염 9.9g(수율 95 %; 분자량 347.5)을 수득하였다. 이 화합물은 정제하지 않고 바로 반응에 사용하였다.
제조예 4: 3-(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤의 합성
4-1) 메틸 N-메틸-1-나프탈렌 하이드록사메이트의 제조
1-나프토산 3.44g(20 밀리몰)을 디메틸포름아미드 20㎖에 녹이고 EDC 4.6g (24 밀리몰), 트리에틸아민 2.02g(20 밀리몰) 및 HOBT 3.24g(24 밀리몰)을 가한 다음 0℃에서 5분간 교반하였다. 여기에 N,O-디메틸하이드록실아민 하이드로클로라이드 1.85㎎(20 밀리몰)을 가하고 상온에서 5시간동안 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하고 포화 K2CO3수용액 100㎖를 가한 다음 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기층을 1N 염산 수용액, 소금물, 물로 차례로 세척하고 무수 소듐설페이트로 건조시킨 후 농축시켜 표제화합물 3.04g(1.50 밀리몰)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 2.42(s, 3H), 3.24(s, 3H), 7.47(m, 4H), 7.67(d, 1H), 7.74(m, 2H),
FAB 216 (M+H)
4-2) 1-(나프탈렌-1-일)-프로프-2-엔-1-온의 제조
제조예 4-1)에서 수득한 화합물 2.03g(9.4 밀리몰)을 무수 테트라하이드로푸란 20㎖에 녹인 후, 여기에 1N 비닐마그네슘브로마이드 테트라하이드로푸란 용액 20㎖를 0℃에서 서서히 가하였다. 상온에서 30분간 교반한 후 1N 염산 20㎖를 첨가하고 에틸아세테이트 50㎖로 추출하였다. 유기층을 무수 마그네슘설페이트로 건조시킨 후 감압하에 용매를 제거하여 표제화합물 1.63g(9 밀리몰; 수율 96%)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 6.92(m, 1H), 7.51(m, 4H), 7.74(d, 1H), 7.85(m, 2H), 7.98(d, 1H), 8.31(d, 1H)
4-3) 3-(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤의 제조
제조예 4-2)에서 수득한 화합물 901㎎(5 밀리몰)과 토실메틸이소시아나이드 1.01g(5.5 밀리몰)을 테트라하이드로푸란 10㎖에 용해시킨 후, 여기에 포타슘 t-부톡사이드 555㎎(5.5 밀리몰)의 테트라하이드로푸란(10㎖) 용액을 천천히 첨가하고 30분간 교반하였다. 반응액에 물 10㎖를 가하여 반응을 중지시키고 감압하에 용매를 제거하였다. 잔류물에 물 20㎖를 가하고 에틸아세테이트로 추출한 다음, 소금물로 세척하고 무수 마그네슘설페이트로 건조시켰다. 용매를 감압하에 제거하고 칼럼 크로마토그래피(용리제: 에틸아세테이트/헥산=1/3, v/v)를 실시하여 표제화합물 884㎎(4 밀리몰; 수율 80%)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 6.57(s, 1H), 6.66(s, 1H), 6.79(s, 1H), 7.36(m, 3H), 7.48(d, 1H), 7.77(d, 1H), 7.82(d, 1H), 8.04(d, 1H), 9.91(s, 1H)
제조예 5: 4-(나프탈렌-1-일)카보닐-3-[N-(2-메톡시에틸)-N-메틸카바모일]-1H-피롤의 합성
5-1) 4-(나프탈렌-1-일)-4-옥소-2-부테노산의 제조
무수말레산 5.88g(60 밀리몰)을 무수 테트라하이드로푸란 100㎖에 녹이고 78 ℃로 냉각시킨 용액을 준비하였다. 1-브로모나프탈렌 4.14g(20 밀리몰)을 무수 테트라하이드로푸란 100㎖에 녹이고 78℃에서 1.6N n-부틸리튬 헥산용액 13.8㎖를 가하였다. 이 반응액을 5분동안 교반한 후 캐눌라를 이용하여 미리 준비된 무수말레산 용액에 가하였다. 생성된 혼합액을 10분간 교반한 후 물을 가하여 반응을 중지시키고 감압하에 용매를 제거하였다. 잔류물을 1N 염산 수용액으로 처리하여 산성화하고 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기층을 물과 소금물로 세척한 후 무수 마그네슘설페이트로 건조시켰다. 감압하에 농축시키고 칼럼 크로마토그래피(용리제: 에틸아세테이트/헥산=2/1, v/v)로 정제하여 표제화합물 1.35g(6.0 밀리몰; 수율 30%)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 6.81(d, 1H), 7.52-7.65(m, 3H), 7.85(d, 1H), 7.89(d, 1H), 7.92(d, 1H), 8.06(d, 1H), 8.56(d, 1H)
5-2) N-(2-메톡시에틸)-N-메틸-4-(나프탈렌-1-일)-4-옥소-2-부테노아미드의 제조
제조예 5-1)에서 수득한 화합물 1.3g(5.9 밀리몰)을 디메틸포름아미드 10㎖에 용해시키고 0℃에서 EDC 1.7g(8.9 밀리몰) 과 HOBT 1.2g(8.9 밀리몰)을 첨가한 후 5분간 교반하였다. 반응액에 N-(2-메톡시에틸)-N-메틸아민 530㎎(5.9 밀리몰) 과 트리에틸아민 1.2㎖(8.9 밀리몰)를 첨가하고 상온에서 2시간동안 교반하였다. 감압하에 용매를 제거한 후 잔류물에 물 50㎖를 가하고 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기층을 소금물로 세척하고, 무수 마그네슘설페이트로 건조시킨 후 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(용리제: 에틸아세테이트/헥산= 1/1, v/v)로 정제하여 표제화합물 1.4g(4.7 밀리몰; 수율 80%)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 3.05(s, 3H), 3.32(s, 3H), 3.54(m, 2H), 3.65(m, 2H), 7.40-7.58(m, 4H), 7.71(t, 1H), 7.89(m, 2H), 8.03(d, 1H), 8.54(d, 1H)
5-3) 3-[N-(2-메톡시에틸)-N-메틸]카바모일-4-(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤의 제조
제조예 5-2)에서 수득한 화합물 1.4g(4.7 밀리몰)과 토실메틸이소시아나이드 1.0g(5.1 밀리몰)을 테트라하이드로푸란 20㎖에 용해시킨 후 포타슘 t-부톡사이드 790㎎(7.0 밀리몰)을 첨가하고 상온에서 3시간동안 교반하였다. 반응액에 물 2㎖를 가하여 반응을 중지시키고 감압하에 용매를 제거하였다. 잔류물을 에틸아세테이트로 추출하고 소금물로 세척해준 후 무수 마그네슘설페이트로 건조시켰다. 용매를 감압하에 제거하고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(용리제: 에틸아세테이트/헥산=2/3, v/v)로 정제하여 표제화합물 1.2g(3.6 밀리몰; 수율 76%)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 3.04(s, 3H), 3.35(s, 3H), 3.47(m, 2H), 3.64(m, 2H), 6.55(d, 1H), 6.63(m, 1H), 7.21-7.40(m, 4H), 7.74(m, 2H), 8.00(m, 1H), 11.4 (br, 1H)
실시예 1: 1-{1-[1-(벤질옥시카보닐)피페리딘-4-일]메틸-1H-이미다졸-5-일}메틸-3-(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤의 합성
제조예 4-3)에서 수득한 화합물 62.6㎎(0.28 밀리몰)을 디메틸포름아미드 1 ㎖에 용해시키고 수소화나트륨 60㎎(1.5 밀리몰)을 가하였다. 상온에서 30분간 교반한 다음, 제조예 3-4)에서 수득한 화합물 115㎎(0.30 밀리몰)을 가하였다. 1시간동안 교반한 후 용매를 감압하에 제거하고 포화 NaHCO3수용액 5㎖를 가한다음 에틸아세테이트 20㎖로 추출하였다. 유기층을 소금물로 세척하고 무수 마그네슘설페이트로 건조시킨 후 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(용리제: 디클로로메탄/메탄올=95/5, v/v)로 정제하여 표제화합물 110㎎(0.21 밀리몰; 수율 75%)을 수득하였다
1H NMR(CDCl3) δ 0.93-1.49(br, 5H), 2.50(s, 2H), 3.58(d, 2H), 4.18(br, 2H), 5.05(s, 2H), 5.12(s, 2H), 6.63(s, 1H), 6.70(s, 1H), 7.09(s, 1H), 7.12 (s, 1H), 7.28-7.60(m, 10H), 7.89(d, 1H), 7.95(d, 1H), 8.10(d, 1H)
FAB : 533 (M+H)
실시예 2: 1-[1-(4-시아노벤질)-1H-이미다졸-5-일]메틸-3-(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤의 합성
제조예 1-6)에서 수득한 화합물과 제조예 4-3)에서 수득한 화합물을 사용하는 점을 제외하고는 실시예 1에서와 유사하게 수행하여 표제화합물을 35% 수율로 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 4.86(s, 2H), 4.95(s, 2H), 6.52(s, 1H), 6.61(s, 1H), 6.89(m, 3H), 7.20(s, 1H), 7.49(m, 6H), 7.75(s, 1H), 7.87(d, 1H), 7.95(d, 1H), 8.11(d, 1H)
FAB : 417 (M+1)
실시예 3: 1-[1-(4-브로모벤질)-1H-이미다졸-5-일]메틸-3-(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤의 합성
제조예 2-2)에서 수득한 화합물과 제조예 4-3)에서 수득한 화합물을 사용하는 점을 제외하고는 실시예 1에서와 유사하게 수행하여 표제화합물을 20% 수율로 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 4.84(s, 2H), 4.92(s, 2H), 6.54(s, 1H), 6.67(s, 1H), 6.78(d, 2H), 6.93(s, 1H), 7.22(s, 1H), 7.38(d, 2H), 7.50(m, 3H), 7.58(d, 1H), 7.89(d, 1H), 7.95(d, 1H), 8.13(d, 1H), 8.16(s, 1H)
FAB : 470 (M+1)
실시예 4: 1-[1-(4-브로모벤질)-1H-이미다졸-5-일]메틸-3-[N-(2-메톡시에틸)-N-메틸]카바모일-4-(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤의 합성
제조예 2-2)에서 수득한 화합물과 제조예 5-3)에서 수득한 화합물을 사용하는 점을 제외하고는 실시예 1에서와 유사하게 수행하여 표제화합물을 81% 수율로 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 2.94(s, 3H), 3.25(s,3H), 3.42(m, 2H), 3.48(m, 2H), 4.72 (s, 2H), 4.78(s, 2H), 6.64(m, 4H), 7.28-7.48(m, 8H), 7.81(m, 2H), 8.14(m, 1H)
FAB : 585 (M+1)
실시예 5: 1-[1-(1-아세틸피페리딘-4-일)메틸-1H-이미다졸-5-일]메틸-3 -(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤의 합성
실시예 1에서 수득한 화합물 110㎎(0.211 밀리몰)을 메탄올 10㎖에 용해시키고, Pd(OH)/C 20㎎을 가한 후 수소대기하에 3시간 교반하여 벤질옥시카보닐기를 제거하였다. 반응물을 셀라이트로 여과하여 촉매를 제거하고 감압하에 용매를 제거하였다. 잔류물을 정제하지 않은채 디메틸포름아미드 5㎖에 용해시킨 후 아세틸클로라이드 16.5㎖(0.232 밀리몰)를 첨가하였다. 반응액을 상온에서 30분간 교반하고 감압하에 용매를 제거하였다. 잔류물에 포화 NaHCO3수용액 5㎖를 가한 후 에틸아세테이트 20㎖로 추출하였다. 유기층을 소금물로 세척하고 무수 마그네슘설페이트로 건조시킨 다음 감압하에 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피(용리제: 디클로로메탄/메탄올=9/1, v/v)로 정제하여 표제화합물 20.3㎎(0.046 밀리몰; 수율 22%)을 수득하였다.
1H NMR(CDCl3) δ 1.11(m, 3H), 1.41(s, 3H), 2.06(s, 3H), 2.27(m, 1H), 2.78(m, 1H), 3.68(m, 2H), 4.58(d, 1H), 5.11(s, 2H), 6.69(s, 1H), 6.70(s, 1H), 7.11(s, 1H), 7.20(s, 1H), 7.50(m, 3H), 7.60(m, 1H), 7.90(m, 2H), 7.98(d, 1H), 8.12(d, 1H)
FAB : 441 (M+1)
실험예 1: Ras 파네실 전이효소 억제능 분석
본 실험에서는 폼프리아노 등의 방법(참조: Pomplianoet al.,Biochemistry31, 3800, 1992)의 개선된 방법을 이용하였다. 즉, 유전자 재조합 기술에 의해 제조된 Ras 파네실 전이효소를 사용하였으며, 기질로는 H-Ras(H-Ras-CVLS)와 K-Ras의 카복시말단에 존재하는 다염기성 라이신 도메인을 치환시킨 H-Ras와의 결합단백질(참조: 대한민국 특허출원 제 97-14409 호)을 기보고된 방법(참조: Chunget al.,Bichimica et Biophysica Acta1129, 278, 1992)에 따라 정제하여 사용하였다.
효소 반응은 염화칼륨 25mM, 염화마그네슘 25mM, 디티티(DTT) 10mM 및 염화아연 50μM을 함유하는 50㎕의 50mM 소듐히피스 완충용액중에서 수행하였으며, Ras 기질 단백질 1.5μM, 트리튬-파네실 피로 포스페이트 0.15μM 및 파네실 전이효소 4.5nM이 사용되었다. 파네실 전이효소를 첨가하고 37℃에서 30분간 반응을 지속시킨 후 1M 염산을 함유한 에탄올 용액 1㎖를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 생성된 침전물을 필터바인딩을 위한 호퍼 하베스터(호퍼 #FH 225V)를 사용하여 GF/B 필터에 흡착시킨후, 에탄올을 사용하여 세척하고, 건조시킨 필터의 방사능을 LKB 베타 카운터를 사용하여 측정하였다. 효소의 역가검정은 Ras 기질 단백질과 파네실 효소의 농도가 정량적 역가관계를 나타내는 기질 불포화 상태에서 측정되었으며, 본 발명에 따라 합성된 화합물은 디메틸설폭사이드(DMSO) 용매에 용해시켜 전체 반응액의 5% 이내로 첨가하여 효소 저해능을 평가하였다. 효소 저해능은 시험화합물이 없는 상태에서 Ras 기질 단백질에 도입된 파네실량에 대해 시험화합물 존재하에 측정된 파네실 도입량을 백분율로 표시하였으며, 50%의 효소활성을 저해하는 농도를 각 시험화합물의 IC50으로 결정하였다. 시험화합물의 선택적 저해능을 평가하기 위한 제라닐제라닐 전이효소는 샤버 등의 방법(참조: Schaberet al. J. Biol Chem.,265, 14701, 1990)을 변형하여 소뇌로부터 정제하여 사용하였으며, 파네실 전이효소 반응과 유사한 조건에서 제라닐제라닐 전이효소의 특이적 기질인 제라닐 제라닐 피로 포스페이트와 Ras-CVIL 기질 단백질을 사용하여 실험을 수행하였다. 실험결과는 하기 표 2에 나타내었다.
실험예 2: 세포내 Ras 파네실 전이효소의 억제효능 분석
본 실험에서는 돌연변이에 의해 형질전환 활성을 갖는 C-Harvey-Ras 단백질을 발현하는 Rat2 세포주 및 K-Ras 카복시 말단의 다염기성 라이신 도메인으로 치환된 H-Ras 결합 단백질로 형질전환된 Rat2 세포주(참조: 대한민국 특허출원 제97-14409 호)를 사용하였으며, 실험은 드크루 등의 방법(참조: Declue. J. E.et al., Cancer Research, 51, 712, 1991)을 변형시켜 다음과 같이 수행하였다.
형질전환된 Rat2 섬유아세포(fibroblast) 세포주를 60㎜ 세포배양 디쉬에 디쉬당 3x105세포의 밀도로 분주하여 37℃ 세포배양기에서 48시간동안 배양함으로써 50%이상의 밀도로 성장시킨 후 시험화합물로 처리하였다. 이때 시험화합물의 용매로는 디메틸설폭사이드(DMSO)를 사용하였으며, 대조군과 시험군 모두 디메틸설폭사이드 농도를 1%로 사용하였다. 시험화합물로 처리한 지 4시간이 경과한 후에 배지 1㎖당 150μCi의 방사성동위원소[35S]로 표지된 메티오닌을 첨가하고 20시간동안 배양한 후 생리적 식염수로 세포를 세척하였다. 냉각된 세포 용해 완충용액(염화마그네슘 5mM, 디티티 1mM, NP40 1%, EDTA 1mM, PMSF 1mM, 루펩틴 2μM, 펩스타틴에이 2μM 및 안티페인 2μM을 포함하는 소듐히피스 완충용액 50mM) 1㎖를 가하여 세포를 용해시킨 후, 세포가 용해되어있는 상등액을 고속원심분리(12,000g x 5분)에 의해 수득하였다. 상등액의 방사성 동위원소 표지량을 측정하여 면역침전 반응시 정량적 결과를 얻을 수 있도록 표준화하였다. 그 후, 반응액에 Ras 단백질에 특이적 결합을 하는 단일클론항체, Y13-259(참조: Furth, M.E.et al., J. Virol., 43, 294, 1982)를 가하고 4℃에서 15시간동안 반응시켰다. 이 용액에 다시 고트에서 유래된 쥐의 면역글로블린에 대한 항체가 결합된 Protein A-아가로즈 현탁액을 가하여 1시간동안 4℃에서 반응시킨 후 면역반응 침전물로부터 비특이적 결합물을 제거하기 위해 완충용액(염화나트륨 50mM, 소듐 디옥시콜레이트 0.5%, NP40 0.5% 및 SDS 0.1%를 포함하는 트리스 클로라이드 50mM 완충용액)으로 세척하였다. 전기영동 방법을 사용하여 침전물을 분석하기 위해, 침전물을 전기영동 시료 완충액에 가하여 끓인 후 13.5%의 SDS 폴리아크릴아마이드 겔을 사용하여 전기영동을 수행하였다. 전기영동후 겔을 고정시키고 건조시킨 후 X-ray 필름에 감광시켜 현상인화하였다. 세포내 Ras 파네실 전이효소의 억제효능은 Ras 단백질의 파네실이 결합된 밴드와 결합되지 않은 밴드의 강도를 측정하여 파네실 결합이 50% 저해된 시험화합물의 농도(IC50)로 나타내었다. 하기 표 2에는 본 발명에 따른 대표적인 화합물들의 억제효능을 나타내었다. 여기서 IC50은 실험예 1을 수행한 결과 얻어진 데이터이고 CIC50은 실험예 2를 수행한 결과 얻어진 데이터이다.
화합물번호 H-Ras IC50(μM) H-Ras CIC50(μM) K-Ras IC50(μM) K-Ras CIC50(μM)
1 0.2 10 ＞100 50
2 0.005 0.07 37 7
3 0.09 1-10 10-50 10-50
4 0.23 1-10 10-100 10-50
5 0.35 1-10 10-100 10-50

Claims (4)

  1. 하기 화학식 1의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염:
    화학식 1
    상기식에서
    A 는 수소 또는 저급알킬을 나타내거나, 하기 구조식의 그룹중 선택된 어느 하나를 나타내고,
    ,
    여기에서 R1은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 하이드록시카보닐, 아미노카보닐, 아미노티오카보닐, 저급알콕시, 페녹시, 페닐 또는 저급알킬을 나타내며, R2는 수소, 저급알킬, 저급알카노일, 또는 아릴에 의해 치환되거나 비치환된 저급알콕시카보닐을 나타내고,
    B 는 하기 구조식의 그룹중 선택된 어느 하나를 나타내며,
    ,
    여기에서 R3및 R4는 각각 독립적으로 수소, 저급알킬, 저급알콕시, 할로겐, 시아노, 하이드록시카보닐, 아미노카보닐, 아미노티오카보닐, 하이드록시, 페닐 또는 페녹시를 나타내고,
    C 는 수소 또는를 나타내며, 여기에서 R5및 R6은 각각 독립적으로 수소, 저급알킬, 아릴 또는을 나타내고, 여기에서 Y 는 O 또는 S 를 나타내며, n 은 2 내지 4의 정수를 나타내고, R7은 저급알킬을 나타낸다.
  2. 제 1 항에 있어서,
    A 는 하기 구조식의 그룹중 선택된 어느 하나를 나타내고,
    ,
    여기에서 R1은 수소, 할로겐 또는 시아노를 나타내며, R2는 저급알카노일을 나타내거나, 아릴에 의해 치환되거나 비치환된 저급알콕시카보닐을 나타내고,
    B 는 할로겐, 저급알킬 또는 저급알콕시에 의해 치환되거나 비치환된 나프틸을 나타내며,
    C 는 수소 또는를 나타내고, 여기에서 R5는 수소 또는 저급알킬을 나타내며, R7은 저급알킬을 나타내는 화합물.
  3. 제 2 항에 있어서,
    1-{1-[1-(벤질옥시카보닐)피페리딘-4-일]메틸-1H-이미다졸-5-일}메틸-3-(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤(1),
    1-[1-(4-시아노벤질)-1H-이미다졸-5-일]메틸-3-(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤(2),
    1-[1-(4-브로모벤질)-1H-이미다졸-5-일]메틸-3-(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤(3),
    1-[1-(4-브로모벤질)-1H-이미다졸-5-일]메틸-3-[N-(2-메톡시에틸)-N-메틸]카바모일-4-(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤(4), 또는
    1-[1-(1-아세틸피페리딘-4-일)메틸-1H-이미다졸-5-일]메틸-3-(나프탈렌-1-일)카보닐-1H-피롤(5)인 화합물.
  4. (a) 하기 화학식 2의 화합물을 용매중에서 염기의 존재하에 하기 화학식 3의 화합물과 반응시켜 제 1 항에 정의된 화학식 1의 화합물을 제조하거나, (b) 하기 화학식 1a의 화합물을 용매중에서 하기 화학식 4의 화합물과 커플링시켜 하기 화학식 1b의 화합물을 제조함을 특징으로하여 제 1 항에 정의된 화학식 1의 화합물을 제조하는 방법 :
    화학식 2
    화학식 3
    화학식 1a
    화학식 4
    화학식 1b
    상기식에서
    A, B, C 및 R2는 제 1 항에서 정의한 바와 같고,
    X 는 할로겐을 나타낸다.
KR1019980002777A 1998-02-02 1998-02-02 피롤구조를갖는파네실전이효소억제제및그의제조방법 KR100388789B1 (ko)

Priority Applications (13)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019980002777A KR100388789B1 (ko) 1998-02-02 1998-02-02 피롤구조를갖는파네실전이효소억제제및그의제조방법
JP2000529330A JP3283032B2 (ja) 1998-02-02 1999-02-01 ピペリジン構造を有するファネシル転移酵素阻害剤及びその製造方法
CA002320233A CA2320233C (en) 1998-02-02 1999-02-01 Farnesyl transferase inhibitors having a piperidine structure and process for preparation thereof
ES99901979T ES2185307T3 (es) 1998-02-02 1999-02-01 Inhibidores de la farnesil transferasa que tienen una estructura piperidinica y procedimiento para su preparacion.
AT99901979T ATE229017T1 (de) 1998-02-02 1999-02-01 Farnesyltransferase-inhibitoren mit piperidinstruktur und verfahren zu ihrer herstellung
US09/601,426 US6436960B1 (en) 1998-02-02 1999-02-01 Farnesyl transferase inhibitors having a piperidine structure and process for preparation thereof
BR9908545-3A BR9908545A (pt) 1998-02-02 1999-02-01 Derivado de piperidina, processo para a preparação do mesmo, composto, processo para a preparação do mesmo, e, composição farmacêutica
PCT/KR1999/000051 WO1999038862A1 (en) 1998-02-02 1999-02-01 Farnesyl transferase inhibitors having a piperidine structure and process for preparation thereof
DE69904302T DE69904302T2 (de) 1998-02-02 1999-02-01 Farnesyltransferase-inhibitoren mit piperidinstruktur und verfahren zu ihrer herstellung
CNB99802581XA CN1158277C (zh) 1998-02-02 1999-02-01 具有哌啶结构的法尼转移酶抑制剂及其制备方法
AU21886/99A AU745855B2 (en) 1998-02-02 1999-02-01 Farnesyl transferase inhibitors having a piperidine structure and process for preparation thereof
EP99901979A EP1058683B1 (en) 1998-02-02 1999-02-01 Farnesyl transferase inhibitors having a piperidine structure and process for preparation thereof
PT99901979T PT1058683E (pt) 1998-02-02 1999-02-01 Inibidores da farnesil-transferase com uma estrutura de piperidina e seu processo de preparacao

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019980002777A KR100388789B1 (ko) 1998-02-02 1998-02-02 피롤구조를갖는파네실전이효소억제제및그의제조방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR19990068878A true KR19990068878A (ko) 1999-09-06
KR100388789B1 KR100388789B1 (ko) 2003-10-04

Family

ID=37421770

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019980002777A KR100388789B1 (ko) 1998-02-02 1998-02-02 피롤구조를갖는파네실전이효소억제제및그의제조방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR100388789B1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100388794B1 (ko) * 1998-08-07 2003-10-10 주식회사 엘지생명과학 피페리딘구조를갖는파네실전이효소억제제및그의제조방법

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101635398B1 (ko) 2014-05-27 2016-07-01 (주)바우테크 드레인 기능을 갖는 도로보수용 패드

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GR73560B (ko) * 1979-02-24 1984-03-15 Pfizer
JPS62240679A (ja) * 1986-04-11 1987-10-21 Mitsubishi Chem Ind Ltd ピロ−ル化合物
JPH03284676A (ja) * 1990-03-30 1991-12-16 Kumiai Chem Ind Co Ltd ピロール誘導体及び除草剤

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100388794B1 (ko) * 1998-08-07 2003-10-10 주식회사 엘지생명과학 피페리딘구조를갖는파네실전이효소억제제및그의제조방법

Also Published As

Publication number Publication date
KR100388789B1 (ko) 2003-10-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1058683B1 (en) Farnesyl transferase inhibitors having a piperidine structure and process for preparation thereof
KR19990014070A (ko) 파네실 전이효소 저해활성을 갖는 히단토인 유도체
KR100388789B1 (ko) 피롤구조를갖는파네실전이효소억제제및그의제조방법
KR100388790B1 (ko) 파네실전이효소저해제로서유용한피리딘-2-온유도체
KR100381214B1 (ko) 항암제로유용한이미다졸리딘-2,4-디온유도체및그의제조방법
KR100388794B1 (ko) 피페리딘구조를갖는파네실전이효소억제제및그의제조방법
US6511978B1 (en) Pyrrole derivatives useful for farnesyl transferase inhibitors and their preparations
KR100225463B1 (ko) 파네실 전이 효소 저해제로 유용한 trans-피롤리딘 유도체
KR100384117B1 (ko) 피롤구조를 갖는 파네실 전이효소 억제제 및 그의 제조방법
KR100225461B1 (ko) 항암 효과를 갖는 파네실 전이 효소 저해제
KR100375421B1 (ko) 항암효과를갖는파네실전이효소저해제
KR100384118B1 (ko) 피롤구조를 갖는 파네실 전이효소 억제제 및 그의 제조방법
KR100225460B1 (ko) 항암 효과를 갖는 파네실 전이효소 저해제
KR100388791B1 (ko) 티아졸또는옥사졸구조를갖는파네실전이효소억제제및그의제조방법
KR100388792B1 (ko) 피페리딘구조를갖는파네실전이효소억제제및그의제조방법
KR100385095B1 (ko) 파네실전이효소저해효능을갖는2환또는3환방향족화합물
KR19990066679A (ko) 피롤구조를 갖는 파네실 전이효소 억제제 및 그의 제조방법
KR100225464B1 (ko) 파네실 전이 효소 저해제로 유용한 cis-피롤리딘 유도체
KR100388783B1 (ko) 피롤구조를갖는파네실전이효소억제제의중간체
KR100381216B1 (ko) 피롤구조를갖는파네실전이효소억제제및그의제조방법
KR20000015758A (ko) 피롤 구조를 갖는 파네실 전이효소 억제제 및 그의 제조방법
KR20000002788A (ko) 피라졸 구조를 갖는 파네실 전이효소 억제제 및그의 제조방법
KR100381213B1 (ko) 파네실전이효소억제능을갖는사이클릭우레아유도체및그의제조방법
KR100395300B1 (ko) 피롤구조를 갖는 파네실 전이효소 억제제 및 그의 제조방법
KR100225462B1 (ko) 티올기를 함유하지 않는 파네실 전이효소 저해제

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
N231 Notification of change of applicant
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
LAPS Lapse due to unpaid annual fee