KR19990067098A - 성장 호르몬 분비 촉진제의 다형체 - Google Patents

성장 호르몬 분비 촉진제의 다형체 Download PDF

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KR19990067098A
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제롬 피. 드레이퍼
데이빗 씨. 두보스트
마이클 제이. 카우프만
제임스 에이. 맥컬리
제니퍼 엘. 반드릴라
리차드 제이. 바솔로나
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폴락 돈나 엘.
머크 앤드 캄파니 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 식용 동물에 있어서는 이들의 성장을 촉진시켜 식용 육류제품의 제조를 더욱 효율적으로 만들고, 사람에 있어서는 성장 호르몬의 분비가 결핍된 것을 특징으로 하는 생리학적 또는 의학적 질환을 치료하고 성장 호르몬의 동화작용 효과에 의해 개선되는 의학적 질환을 치료하는 데 유용한 성장 호르몬 분비 촉진제인 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트 화합물의 다형체에 관한 것이다. 순간적인 다형체는 기타 공지된 형태의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트에 비해 열역학적 안정성 및 약제학적 제형에 포함시키기 위한 적합성의 측면에서 유리하다. 또한 본 발명은 이러한 다형체의 제조방법, 이들 다형체를 활성 성분으로서 포함하는 약제학적 조성물 및 특정 질환을 치료함에 있어서 이 화합물의 다형체 및 이들 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

성장 호르몬 분비 촉진제의 다형체
발명의 배경
뇌하수체로부터 분비되는 성장 호르몬은 성장할 수 있는 생물체의 모든 조직의 성장을 자극한다. 또한, 성장 호르몬은 생물체의 대사과정에 다음과 같은 기본효과를 갖는 것으로 공지되어 있다: (1) 생물체의 모든 세포에서 증가된 단백질 합성 속도; (2) 생물체의 세포에서 탄수화물의 감소된 사용 속도; (3) 유리 지방산의 증가된 가동성 에너지를 위한 지방산의 증가된 이용. 성장 호르몬의 분비에 결함이 있는 경우 왜소증과 같은 여러 가지 의학적 질환을 유발할 수 있다.
성장 호르몬을 방출하는 방식은 여러 가지 방식으로 공지되어 있다. 예를 들어 아르기닌, L-3,4-디하이드록시페닐-알라닌(L-DOPA), 글루카곤, 바소프레신 및 저혈당증을 유발하는 인슐린과 같은 화학물질 뿐만 아니라 수면 및 운동과 같은 활동은 일정한 방식으로 성장 억제 호르몬의 분비를 감소시키거나 성장 호르몬 방출 인자(GRF)의 공지된 분비 촉진제의 분비 또는 공지되지 않은 내인성 성장 호르몬-방출 호르몬을 증가시키거나 이러한 방식 모두에 의해 시상하부에 작용함으로써 뇌하수체로부터 성장 호르몬의 분비를 유발한다.
성장 호르몬의 농도가 증가되는 것을 목적하는 경우, 문제는 일반적으로 외인성 성장 호르몬을 제공하거나 GRF 또는 성장 호르몬의 형성 및/또는 방출을 자극하는 단백질계 화합물을 투여하여 해결된다. 이러한 경우 화합물의 펩티드계 화합물은 주사에 의해 투여되어야 한다. 우선 성장 호르몬의 공급원은 사체(死體)의 뇌하수체선 추출물이다. 이는 매우 고가의 제품이고 뇌하수체선의 공급원과 관련된 질환이 성장 호르몬의 이식체에 전달될 수 있는 위험이 있다. 재조합 성장 호르몬은 더 이상 질병이 전달될 위험이 없는 반면 주사 또는 코의 분무에 의해 제공되어야 하는 여전히 매우 고가의 제품으로 시판중이다. 기타의 화합물은 내인성 성장 호르몬의 방출을 자극하는 것으로 발전되어 왔다.
특히 특정한 스피로 화합물은 미합중국 특허 제5,536,716호, 국제 특허출원 제WO 94/13696호 및 문헌[참조: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, 7001-7005(July 1995)]에서 비펩티드계 성장 호르몬의 분비 촉진제로서 기재되어 있다. 이들 화합물은 천연 또는 내인성 성장 호르몬의 방출을 자극하는 성능을 보유하여, 천연 성장 호르몬이 결핍된 사람 또는 성장 호르몬을 자극하여 보다 크고, 보다 생산적인 동물을 유발할 수 있는 식용 또는 양모의 제조에 사용되는 동물에 있어서와 같이, 성장 호르몬의 제조 또는 분비의 자극을 필요로 하는 처리조건을 위해 사용될 수 있다.
이 문헌에 기재된 바람직한 화합물 중에는 다은 구조식의 스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트가 있다:
미합중국 특허 제5,536,716호 및 국제 특허출원 제WO 94/13696호는 이 화합물의 제조방법을 기술하고 있다(실시예 18, 19 및 55 참조). 특히 실시예 55는 에틸 아세테이트-에탄올-물로 재결정화하여 제조되는 화합물의 융점이 "166 내지 168℃"임을 나타낸다. 이러한 화합물은 당해 문헌에서 "형태 II"로 지정된 다형체(polymorphic form)로 정의된다. 문헌[참조: Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 92, 7001-7005(July 1995)]은 일수화물로서 분리되는 화합물의 융점이 168 내지 170℃이지만 화합물을 제조하는 매우 일반적인 방법을 기술하며 이 화합물이 어떻게 결정화되는지에 대해서는 기술하지 않고 있다.
약제학적 화합물의 형태학적 형태(morphological form)는, 형태학적 형태가 임상연구 및 안정성 연구중 일정하게 유지되지 않은 경우 사용되거나 측정되는 정확한 투여량이 하나의 분할양과 다음 분할양을 비교할 수 없기 때문에 적합한 제형의 개발과 관련되는 형태에 관심이 모아질 수 있다. 일단 약제학적 화합물이 사용하기 위한 제품인 경우, 제조과정이 동일한 형태를 사용하고 약물의 동일한 양이 각 제형에 포함되게 하기 위해서 각 제형에서의 형태학적 형태를 인식하는 것이 중요하다. 따라서, 단일 형태학적 형태 또는 일부 공지된 형태학적 형태의 조합이 존재하는 것을 보장하는 것으로 추론된다. 또한, 특정한 형태학적 형태는 향상된 열역학적 안정성 또는 수력학적 안정성을 나타낼 수 있고 약제학적 제형에 포함되기 위해 기타 형태학적 형태보다 더 안정할 수 있다. 본원에 사용되는 바와 같이 화합물의 "다형체"는 화학적 조성이 동일하지만 결정배열에 있어서는 상이하다.
발명의 요지
본 발명은 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트 화합물의 다형체 및 이러한 다형체의 제조방법에 관한 것이다.
또한 본 발명은 이들 다형체를 활성성분으로서 포함하는 약제학적 제형 및 특정 질병을 치료함에 있어서 이들 다형체 및 이들 조성물의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 다형체는 식용 동물에 있어서 이들의 성장을 촉진시켜 식용 육류제품의 제조를 더욱 효율적으로 만들고, 성장 호르몬의 분비가 결핍된 것을 특징으로 하는 사람에 있어서는 생리학적 또는 의학적 질환을 치료하고, 성장 호르몬의 동화작용 효과에 의해 개선되는 의학적 질환을 치료하는 데 유용한 성장 호르몬 분비 촉진제이다.
이러한 다형체는 기타 공지된 형태의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트에 비해 열역학적 안정성 및 약제학적 조성물에 포함시키기 위한 적합성의 측면에서 유리하다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 신규한 다형체의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트 화합물 및 이러한 다형체의 제조방법에 관한 것이다.
화합물 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐-스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트의 구조는 다음과 같고 사람 및 동물에 있어서 성장 호르몬의 방출을 포함하는 성장 호르몬 분비 촉진제이다.
이러한 특성은 식용 동물의 성장을 촉진시키는 데 사용될 수 있고 식용 육류제품의 제조를 더욱 효율적으로 만들고, 성장 호르몬의 분비가 결핍된 것을 특징으로 하는 사람에 있어서는 생리학적 또는 의학적 질환을 치료하고, 성장 호르몬의 동화작용 효과에 의해 개선되는 의학적 질환을 치료하는데 사용될 수 있다.
이와 같은 특정 다형체(본원에서 "형태 I", "형태 II", "형태 III", "형태 IV", "형태 V", "형태 VI", "형태 VII", "형태 VIII", "형태 IX", "형태 X")는 기타의 결정형의 화합물에 비해 약제학적 제형에 포함시키기에 더욱 적합한 우수한 특성을 갖는다. 약제학적 조성물을 위한 바람직한 결정형태는 열역학적 안정성과 비흡습성에 근거하는 형태 I이다. 약제학적 제형을 위한 또다른 바람직한 결정형태는 특히 정제 제제에 대한 압축과 관련하여 이의 제형화 특성에 근거하는 형태 IV이다. 형태 IV는 다른 형태보다 부피밀도가 더 높은 것으로 발견되었다.
또한, 본 발명은 에탄올(약 8용적%)을 함유하는 에틸 아세테이트중 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드의 유리염기의 용액을 메탄설폰산(약 1.1.당량)으로 약 50℃에서 처리하고 약 55℃로 가열한 다음 약 45℃로 냉각시키는 것을 포함하여 형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 방법에 관한 것이다.
임의로, 온도는 약 51℃까지 순차적으로 승온시켜 2 내지 24시간 동안 유지시킨다.
본 발명은 추가로 에탄올(약 8용적%)을 함유하는 에틸 아세테이트중 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드의 유리염기의 용액에 약 50 내지 55℃에서 메탄설폰산(약 1.1.당량) 및 형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 가하고(여기서, 상대적인 첨가순서는 중요하지 않다), 약 55℃에서 약 2 내지 15시간 동안 가열하고, 약 25 내지 30℃까지 냉각시킨 다음 약 2 내지 3시간 동안 교반하는 것을 포함하여, 형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 또 다른 방법에 관한 것이다.
추가로 본 발명은 이소프로판올중 형태 II의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐-스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸-옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트의 용액을 약 25℃에서 약 2 내지 24시간 동안 교반하는 것을 포함하여 형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 또 다른 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 에탄올(약 8용적%)을 함유하는 에틸 아세테이트중 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드의 유리염기의 용액을 메탄설폰산(약 1.1당량)으로 약 50℃에서 처리하고 약 55℃로 가열한 다음 주위온도로 냉각시키는 것을 포함하여 형태 II의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 또다른 방법에 관한 것이다.
추가로 본 발명은 임의로 형태학적 조성물의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 에탄올/물(바람직하게는 25:75 v/v)의 용액에 용해시키고; 바람직하게는 40℃에서 이 용액으로부터 용매를 증발시키고; 제조되는 고체를 미세한 분말로 분쇄한 다음; 미세한 분말을 상대습도 약 75%에 노출시키는 것을 포함하여 형태 IV의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 방법에 관한 것이다.
추가로 본 발명은 임의로 형태학적 조성물의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 에틸아세테이트/에탄올/물(바람직하게는 24.8/1.6/1.95 v/v/v)로부터 재결정화시키는 것을 포함하여 형태 IV의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 또다른 방법에 관한 것이다.
추가로 본 발명은 형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 상대습도 약 75% 이상, 바람직하게는 상대습도 약 88% 이상에 주위온도에서 충분한 시간 동안 노출시키는 것을 포함하여 형태 IV의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 또다른 방법에 관한 것이다.
추가로 본 발명은 약 2.8중량%의 물을 함유하는 이소프로필 아세테이트/에탄올(90:10 v/v)중 형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트의 슬러리로부터 약 25℃에서 분리시키는 것을 포함하여 형태 IV의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 방법에 관한 것이다.
추가로 본 발명은 형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 상대습도 약 30% 미만에 주위온도에서 노출시키는 것을 포함하여 형태 V의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 방법에 관한 것이다.
추가로 본 발명은 형태 V의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 수분이 없는 거의 실온에서, 예를 들어 약 25℃에서 시브(sieve) 건조시킨 질소의 대기하에 건조시키는 것을 포함하여 형태 VI의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 방법에 관한 것이다.
추가로 본 발명은 약 1.5중량%의 물을 함유하는 이소프로필 아세테이트/에탄올(90:10 v/v)중 형태 I 또는 형태 IV의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트의 슬러리로부터 분리시키는 것을 포함하여 형태 VII의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 방법에 관한 것이다.
추가로 본 발명은 형태 VII의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 무수 질소와 같은 무수 불활성 기체하에 충분한 시간동안 탈수시키는 것을 포함하여 형태 VIII의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 방법에 관한 것이다.
추가로 본 발명은 수중의 임의로 형태학적 조성물의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조한 다음, 상대습도 20% 및 거의 실온에서 조절되는 증발에 의해 형성되는 고체를 분리시키는 것을 포함하여 형태 IX의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 방법에 관한 것이다.
추가로 본 발명은 형태 IX의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 주위 실온 및 습도에서 충분한 시간 동안 건조시키는 것을 포함하여 형태 X의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 방법에 관한 것이다.
추가로 본 발명은 형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 상대습도 100%에 약 1 내지 4일 동안 노출시키는 것을 포함하여 형태 X의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 또 다른 방법에 관한 것이다.
유사하게, 본 발명은 또한 본원에서 언급되는 임의의 방법들을 포함하여 형태학적으로 균일한 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트를 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 화합물인 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트의 신규 다형체 식용 동물에 있어서 이들의 성장을 촉진시켜 식용 육류제품의 제조를 더욱 효율적으로 만들고, 성장 호르몬의 분비가 결핍된 것을 특징으로 하는 사람에 있어서는 생리학적 또는 의학적 질환을 치료하고 성장 호르몬의 동화작용 효과에 의해 개선되는 의학적 질환을 치료하는데 유용한 성장 호르몬 분비 촉진제이다. 따라서 본 발명은 추가로 활성성분으로 다형체를 포함하는 약제학적 조성물 및 특정 질병을 치료함에 있어서의 이러한 다형체 및 이의 제형의 용도에 관한 것이다.
시차주사 열량계 셀[DSC]
형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐-스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트의 DSC 커브는 질소유동하에 개방된 컵중 10℃/min에서 용융으로 인해 피크 온도 약 180℃ 및 약 53J/g의 열과 관련된 약 170℃의 외삽 온셋 온도(융점)를 갖는 단일 흡열부(endotherm)를 나타낸다.
형태 II의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트의 DSC 커브는 질소유동하에 개방된 컵중 10℃/min에서 용융으로 인해 피크온도 약 174℃ 및 약 37J/g의 열과 관련된 약 165℃의 외삽 온셋 온도(융점)를 갖는 단일 흡열부를 나타낸다.
형태 IV의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트의 DSC 커브는 질소유동하에 개방된 컵중 10℃/min에서 용융으로 인해 약 45℃에 이어 피크온도 약 134℃ 및 약 23J/g의 열과 관련된 형태 VI의 용융으로 인한 약 129℃의 외삽 온셋 온도(융점)를 갖는 물 손실 흡열부를 나타낸다.
DSC 데이터[샘플은 질소 대기하에(외삽 온셋 온도) 10℃/min의 비율로 가열한다]
형태 I : 170℃(용융 흡열)
형태 II : 165℃(용융 흡열)
형태 VI : 129℃(용융 흡열)
형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트는 다음과 같은 특성에 의해 특징지워지는 비교적 무수성 다형체이다: 융점 169℃ 및 이소프로판올 중의 용해도 4.6mg/mL.
형태 II의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트는 다음과 같은 특성에 의해 특징지워지는 비교적 무수성 다형체이다: 융점 158℃ 및 이소프로판올중의 용해도 12.3mg/mL.
형태 III의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트는 다음과 같은 특성에 의해 특징지워지는 무수물이다: 피크 온도 46℃에서의 물 손실 흡열부에 이어서 관련되는 외삽 온셋 온도 123℃를 갖는 소량 용융/분해 흡열부.
형태 IV의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트는 다음과 같은 특성에 의해 특징지워지는 무수물이다: 피크 온도 45℃에서의 물 손실 흡열부에 이어서 관련되는 외삽 온셋 온도 129℃(형태 VI의 용융/분해로 인한 추정)를 갖는 소량 용융/분해 흡열부.
형태 IV의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트는 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트 1mol당 물 3.5mol을 함유하는 흡습성 무수물인 것으로 나타난다.
형태 V의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트는 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트 1mol당 물 1mol을 함유하는 흡습성 무수물인 것으로 나타난다.
형태 VI의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트는 무수 다형성물인 것으로 나타나고 융점이 129℃인 것을 특징으로 한다.
형태 VII의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트는 다음과 같은 특성에 의해 특징지워지는 무수물이다: 피크 온도 60℃에서의 광범위한 물 손실 흡열부에 이어서 외삽 온셋 온도 144℃(형태 VIII의 용융/분해로 인한 것으로 추정)인 소량 용융/분해 흡열부.
형태 VIII의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트는 무수 다형인 것으로 나타나고 융점이 144℃인 것을 특징으로 한다.
형태 X의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트는 피크 온도 49℃에서의 광범위한 물 손실 흡열부를 특징으로 한다.
X선 분말 회절(XRPD)
X선 분말 회절 조사는 분자구조, 결정성 및 다형을 밝히는데 광범위하게 사용된다. X선 분말 회절(XRPD) 패턴은 구리 Kα 방사선을 사용하는 필립스(Philips) APD3720 자동화 분말 회절 장치를 사용하여 수집한다. 측정값은 주위의 실온에서 유지된 샘플의 경우 2°내지 40°(2θ)이다.
형태 I은 약 6.5, 14.7, 16.9, 17.1, 17.9, 19.5, 21.1, 21.7 및 22.0°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 한다.
형태 II는 약 4.8, 11.8, 17.5, 19.4, 21.6, 21.9, 22.5 및 22.7°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 한다.
형태 III은 약 13.8, 14.1, 18.0, 18.8, 19.5, 20.1, 20.6, 21.8 및 25.7°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 한다.
형태 IV는 약 16.0, 16.2, 18.3, 20.1, 21.0, 및 24.0°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 한다.
형태 V는 약 14.8, 17.1, 17.6, 19.0, 19.1, 19.4, 20.6, 21.5 및 21.8°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 한다.
형태 VI은 약 9.8, 14.0, 14.8, 17.1, 17.6, 19.0, 19.5, 20.6 및 21.6°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 한다.
형태 VII은 약 9.1, 11.3, 17.1, 17.4, 20.0, 22.1 및 24.5°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 한다.
형태 VIII은 약 11.5, 11.6, 18.1, 19.6, 22.5, 24.7 및 24.8°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 한다.
형태 IX는 약 8.0, 12.1, 15.3, 15.8, 19.6, 19.7, 21.1, 22.3 및 23.7°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 한다.
형태 X은 약 15.5, 15.8, 18.0, 18.4, 18.6, 19.4, 20.7, 20.8, 23.9 및 24.8°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 한다.
이러한 XRPD 패턴은 모든 형태 I 내지 X가 분명한 결정체임을 확인시켜준다.
현미경 분석
다형체의 실험은 보통의 광 및 편광하에 확대배율 100에서 수행된다. 형태 I 및 형태 II는 침상 형태의 입자이다. 형태 I 및 형태 II 둘 다 편광하에 이중 굴절성임을 나타낸다.
흡습성
다양하게 조절되는 습도에 노출시키는 경우 형태 I, II, III 및 IV의 고체 샘플의 전체적인 휘발성물질의 함량(TGA 분석에 의해 설정되는 바와 같은)은 다음의 표에 나타내는 바와 같다. 이는 형태 I이 물을 0.79중량%; 형태 II가 물 0.56중량%; 형태 III이 물 4.5 내지 5.0중량%; 및 형태 IV가 물 9.5 내지 10.0중량%를 포함하는 것으로 나타난다.
흡습성은 고체 화합물을 일정한 상대습도의 챔버에 저장함으로써 측정된다. 실온에서 무수 형태 I과 II를 대조하면 형태 II는 흡습성을 나타내고 RH 65%에서 습도에 있어서의 대폭 증가를 나타낸다. 형태 I에 있어서는 RH 76% 이상에서 저장하는 경우를 제외하면 사실상의 습도의 증가가 나타나지 않는다. 결과를 다음 표 1 및 표 2에 나타낸다.
실온(48시간)
형태 I 형태 II
RH% 흡수/손실% 흡수/손실%
0 -0.02 +0.08
11 -0.05 +0.02
33 - +0.33
47 +0.21 +0.39
65 +0.37 >10.0a
76 +0.12 >10.0a
100 >12.0 >10.0a,b
(a = 샘플은 검상(gummy) 반고체가 된다)
(b = 주위 습도에 노출되면 형태 IV로 변환된다)
실온(48시간)
형태 I
RH% 흡수/손실%
0 +0.4
22 +0.3
47 +0.5
68 +0.6
88 +12.9*
100 +23.9*
(*=조해성 물질)
수화된 형태 III 및 IV의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트는 상대습도 챔버 속에서 48시간 동안 실온에서 저장함으로써 측정한다. 형태 III은 RH 33%에서 48시간 저장한 후 습도에 있어서 증가를 나타낸다. 형태 IV는 RH 100%에서 저장할 때까지 다소량의 습기를 흡수함에도 불구하고 RH 11% 이하에서 저장되는 경우 수화물의 물을 손실한다. 결과를 다음 표 3에 나타낸다.
실온(48시간)
형태 III 형태 IV
RH% 흡수/손실% 흡수/손실%
0 - -7.8
11 -0.15 -4.9
33 +2.23 +0.3
47 +3.99 +0.7
66 - +1.4
76 +3.76 +1.5
100 - +5.3
이들 데이터는 형태 I이 비교적 무수성임을 나타낸다.
용해도
실온에서 증류수중 형태 I의 용해도는 100mg/mL 이상이다. 완충된 용액(pH 4 내지 9)중 형태 II의 수 용해도(RT)는 100mg/mL 이상이다. 에탄올/물 혼합물중 형태 I의 용해도는 다음과 같다:
에탄올/H 2 O 용해도(mg/mL)
25/75 >100
50/50 >100
75/25 >90
에탄올 100% >90
열 안정성-순수 화합물
순수한 화합물의 고체상태의 안정성은 약물을 유리로 된 스크류-캡이 있는 바이알에 어둠 속에서 저장하여 측정한다. 샘플을 HPLC에 의해 분석하고 화합물을 양적으로 분석한다. 사용되는 이소크래틱 방법을 다음에 요약한다:
칼럼: 벡크만 울트라스피어(Beckman Ultrasphere) ODS(250 x 4.6mm, 5μ)
유동상: TEA 0.1%, H3PO4:아세토니트릴(65:35)을 사용하는 pH 4.0
유동속도: 1.0mL/min
검출 파장: 228nm
수행시간: 14분
칼럼온도: 주위온도
주사용적:N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트(50㎍/mL) 20μL
결과는 중량%로서 계산된 형태 I 및 II에 대해 다음에 나타낸다.
형태 I
초반 %
℃ 6주 17주
40 100.1 98.7
60 100.7 101.3
80 100.7 99.4
형태 II
초반 %
℃ 1주 2주 4주 8주 12주 24주
40 99.7 100.7 99.5 - 100.1 100.1
60 99.4 99.6 100.3 100.0 101.0 100.8
80 99.2 100.3 99.2 99.8 100.4 -
이러한 결과는 순수한 고체 형태 I 및 II의 열적 안정성이 양호함을 나타낸다.
목적 화합물을 제조하는 방법은 다음과 같이 요약된다:
PhNHNH2
반응식 Ia 및 Ib에 나타낸 바와 같이 화학식 1의 CBZ-스피로인돌을 수소화 전에 다르코(Darco)(20중량%)로 처리한다. 수소화는 에탄올중 65℃에서 10%의 Pd/C상에 격렬하게 교반하면서 수행한다.
이소프로필 아세테이트 및 수중의 화학식 1b의 화합물의 용액을 시판중인 N-BOC-O-벤질-D-세린으로 디사이클로헥실카보디이미드(DCC) 및 1-하이드록시벤조트리아졸(HPBt)의 존재하에 커플링시킨다. 디사이클로헥실우레아(DCU) 부산물을 여과시킨 후, 2-상(phase) 여액을 분리하고 유기상을 연속적으로 1M의 수산화나트륨 수용액, 0.5M의 수성 염산 및 최종적으로 탄산수소나트륨 포화 수용액으로 세척한다. 이러한 커플링에 있어서 iPrPAc/H2O중 유리 아미노의 용액을 DCC, HOBT로 처리한 후, 아미노산을 주위온도에서 가하고 3 내지 5시간 동안 반응시키는 경우 개선된 결과를 성취한다. 배취를 진공중에 농축시키고 용매를 이소프로필 아세테이트로부터 에탄올로 바꾼다. 이와 같은 용매의 변경은 일반적으로 이소프로필 아세테이트를 제거하기 위해 신속하게 "공급 및 블리딩" 3배의 배취용적에 의해 진행된다.
화학식 11의 화합물의 BOC-그룹은 에탄올중 메탄설폰산(MsOH)(3당량)으로 35 내지 40℃에서 처리하여 제거한다. 이소프로필 아세테이트와 1M의 수산화나트륨 수용액 사이에 분배시켜 화학식 12의 화합물을 수득한다.
화학식 12의 화합물의 N-BOC-α-아미노이소부티르산과의 커플링은 2상 용매 시스템, 이소프로필 아세테이트/물(1:1) 속에서 DCC 및 HOBt(각각 1.1당량)의 존재하에 가장 우수하게 수행된다. 여과에 의한 DCU의 제가, 층의 분리 및 유기층을 연속적으로 1M의 수산화나트륨 수용액, 0.5M의 수성 염산 및 최종적으로 탄산수소나트륨 포화 수용액으로 세척하여 화학식 14의 화합물을 수득한다.
혼합물은 후속적으로 Boc 그룹을 메탄설폰산으로 절단하기 위해 에탄올로 변경한 용매이다. 화학식 14의 화합물의 탈보호는 화학식 11의 화합물의 탈보호보다 훨씬 더 어렵고 진한 에탄올/메탄설폰산의 용액 및 35 내지 40℃로의 가열을 필요로 한다. 추출에 의한 처리(EtOAc-NaOH) 후, 화학식 15의 유리 아민을 분리시킨다. 유기층을 1N의 NaOH로 세척하여 메탄설폰산을 완전히 제거한다.
화학식 15의 유리 염기의 에틸 아세테이트 용액을 진공중에 낮은 부피로 농축시키고 "공급 및 블리딩" 3배의 배취용적 90/10의 에틸 아세테이트/에탄올에 이어서 2배의 배취용적의 에틸 아세테이트에 의해 공비 건조시킨다(KF <500 mgml-1). 에틸 아세테이트 중의 제조되는 건조하고 약간 흐린 화학식 15의 유리 염기 용액을 다르코 G-60(25중량%)으로 실온에서 약 10시간 동안 처리한다. 여과제를 사용하여 여과에 의해 다르코를 제거하면 화학식 15의 유리 염기를 수득한다.
화학식 15의 유리 염기로부터 화학식 16의 메탄설폰산염은 EtOAc 속에서 MsOH 1.1당량으로 약 50℃에서 제조된다. 화학식 15의 유리 염기는 EtOH 8용적% 및 H2O 1당량으로 처리하고 분해가 완결될 때까지 55℃로 가열한다. 주위온도로 냉각시키고 제조되는 슬러리를 4시간 동안 교반하면 결정 형태 II로 지정되는 결정성 물질 16을 수득한다[IPA중의 용해도 12mg/mL].
형태 II로부터 형태 I로의 전환은 위에서와 같이 EtOAc-EtOH중에 염이 형성되지만 염의 용액(55℃에서)을 주위온도로 냉각시키는 대신 45℃로 냉각시키는 경우 성취된다. 결정은 이 온도에서 석출되기 시작해야하고 슬러리는 시간에 따라 보다 진해진다. 이어서 온도를 51℃로 상승시키고 슬러리를 밤새도록 숙성시킨다. 형태 I인 화학식 16의 화합물로의 완전한 전환이 이루어져야 한다.
바람직하게는 형태 II로부터 형태 I로의 전환은 EtOAc-EtOH중 유리 염기의 용액에 형태 I의 결정을 50 내지 55℃에서 가하고 숙성시킴으로써 성취된다. 따라서, 화학식 15의 유리 염기는 에틸 아세테이트 중 에탄올 8%로 메탄설폰산 1.1당량으로 50 내지 55℃에서 처리한다. 이어서 배취를 화학식 16의 메탄설포네이트염 형태 I 약 2중량%를 공급하고 55℃에서 밤새도록 교반한다. 배취를 실온으로 냉각시키고 약 2 내지 3시간 동안 숙성시킨다. 생성물을 질소대기하에 실온에서 여과에 의해 분리시키고 35℃에서 진공중에 건조시킨 다음 시빙하여 화학식 16의 메탄설포네이트 염을 수득한다.
또한 화학식 16의 메탄설포네이트 염을 단계적으로 MsOH(1.1당량) 및 형태 I의 시드(seed) 결정을 EtOAc-EtOH중 유리 염기의 용액에 약 50℃에서 가함으로써 형성되며, 이때 MsOH 및 시드를 가하는 순서는 중요하지 않다.
성장 호르몬 분비 촉진제로서 본 발명의 다형체 화합물을 사용하는 것은 문헌[참조: Snith, et al., Science 260, 1640-1643(1993)(see text of Figure 2 therein)]에 기술된 분석방법과 같이 선행 기술에 공지된 형태분석에 의해 나타낼 수 있다. 특히 본 발명의 모든 다형체는 위에서 언급한 분석에 있어서 성장 호르몬 분비 촉진제로서의 활성을 보유한다. 이러한 결과는 성장 호르몬 분비 촉진제로서의 본 발명의 다형체의 고유활성을 나타낸다.
성장 호르몬을 방출하는 본 발명의 화합물은 시험관 내에서 성장 호르몬의 분비가 뇌하수체에서 어떻게 조절되는지를 이해하기 위한 독특한 기구로서 유용하다. 이는 나이, 성, 영양 인자, 글루코스, 아미노산, 지방산뿐만 아니라 고정 및 비고정상태와 같은 성장 호르몬의 분비에 영향을 미치는 것으로 공지된 다수의 인자를 평가함에 있어서의 용도를 포함한다. 또한 본 발명의 화합물은 기타 호르몬이 성장 호르몬의 방출 활성을 어떻게 변경시키는지를 평가하는데 사용될 수 있다. 예를 들어 소마토스타틴이 성장 호르몬의 방출을 억제하는 것으로 알려져 있다. 성장 호르몬의 방출에 대한 효과와 관련하여 중요하고 필요한 기타의 호르몬은 생식 호르몬, 예를 들어 테스토스테론, 에스트라디올 및 프로제스테론; 아드레날 호르몬, 예를 들어 코티졸 및 기타의 코티코이드, 에피네프린 및 노르에피네프린; 췌장 및 위장 호르몬, 예를 들어 인슐린, 글루카곤, 가스트린, 세크레틴; 혈관작용성 펩티드, 예를 들어 봄베신, 뉴로키닌; 및 갑상선 호르몬, 예를 들어 티록신 및 트리요오도티로닌을 포함한다. 또한 본 발명의 화합물은 성장 호르몬의 방출을 변경시키는 뇌하수체에 대한 몇몇 뇌하수체 호르몬, 예를 들어 성장 호르몬 및 엔돌핀 펩티드와 같은 가능한 부정적 또는 긍정적 피드백 효과를 조사하기 위해 사용될 수 있다. 과학적으로 특히 중요한 점은 성장 호르몬의 방출을 조절하는 아세포 메커니즘을 설명하기 위한 이들 화합물의 용도이다.
본 발명의 화합물은 생체내에서 성장 호르몬을 방출하기 위해 사람을 포함하는 동물에 투여될 수 있다. 예를 들어 화합물은 성장 속도와 성장정도를 촉진 및 증가시키기 위해, 공급 효율을 개선시키기 위해 및 동물에 있어서의 우유 생성을 증가시키기 위해 돼지, 소, 양 등과 같은 상업적으로 중요한 동물에게 투여될 수 있다. 또한, 이들 화합물은 생체 내에서 진찰수단으로 뇌하수체가 성장 호르몬을 방출할 수 있는지의 여부를 직접 결정하기 위해 사람에게 투여될 수 있다. 예를 들어 본 발명의 화합물은 생체내에서 어린이들에게 투여될 수 있다. 투여 전과 후에 취한 혈청 샘플을 성장 호르몬에 대해 분석할 수 있다. 각각의 이러한 샘플에서의 성장 호르몬의 양을 비교함으로써 성장 호르몬을 방출하는 환자의 뇌하수체의 능력을 직접 결정할 수 있다.
따라서, 본 발명은 이의 범주내에 약제학적 담체 또는 희석제와 관련하여 활성성분으로서 하나 이상의 본 발명의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 임의로 약제학적 조성물의 활성성분은 하나 이상의 본 발명의 화합물 이외에 동화작용 제제 또는 상이한 활성, 예를 들어 항생 성장 허용물질 또는 골다공증 치료제 또는 퇴행성 부작용을 최소화하기 위한 코티코스테로이드와의 배합물 또는 기타의 약제학적 활성물질과의 배합물(여기서 배합물은 효율을 향상시키고 부작용을 최소화한다)을 나타내는 기타의 조성물을 포함할 수 있다.
성장 촉진제 및 동화작용 제제는 이에 한정되지 않고 TRH, 디에틸스틸벤스테롤, 에스트로젠, β-효능제, 테오필린, 동화성 스테로이드, 엔케팔린, E 계열의 프로스타글란딘, 미합중국 특허 제3,239,345호에 기술된 화합물(예를 들어 제라놀), 미합중국 특허 제4,036,979호에 기술된 화합물(예를 들어 설베녹스) 또는 미합중국 특허 제4,411,890호에 기술된 팹티드를 포함한다.
또한, 본 발명의 화합물은 추가로 미합중국 특허 제4,411,890호 및 국제출원 제WO 89/07110호, 제WO 89/07111호 및 B-HT920에 기술된 바와 같은 성장 호르몬 방출 펩티드 GHRP-6, GHRP-1 뿐만 아니라 제WO 93/04081호에 기술된 바와 같은 GHRP-2 또는 성장 호르몬 방출 호르몬(GHRP 또는 GRF로 지정된) 및 이들의 동족체와 같은 성장 호르몬 분비 촉진제 또는 성장 호르몬 및 이의 동족체 또는 IGF-1 및 IGF-2 또는 α-아드레날린성 작용물질, 예를 들어 클로니딘 또는 서미트립탄과 같은 세로토닌 5HTID 작용물질 및 피리도스티그민을 포함하는 소마토메딘와 배합되어 사용된다. 특히 본 발명의 화합물은 성장 호르몬의 방출 인자, 성장 호르몬 방출 인자의 동족체, IGF-1 또는 IGF-2와의 배합물로 사용될 수 있다. 예를 들어 본 발명의 화합물은 비만증의 치료 및 예방을 위해 IGF-1과의 배합물로 사용될 수 있다. 또한 본 발명의 화합물은 본래의 노화로부터 유발하는 근육 및 피부의 상태를 개선하기 위해 레티노산과 배합되어 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 다형체를 약제학적 담체 또는 희석제와 배합하는 것을 포함하는, 사람 및 동물에 있어서 성장 호르몬의 방출을 자극하기 위한 약물의 제조방법에 관한 것이다.
당해 기술분야의 숙련가들에게 공지된 바와 같이, 성장 호르몬의 공지되고 잠재적인 용도는 다양하고 여러 가지이다. 내인성 성장 호르몬의 방출을 자극할 목적으로 본 발명의 화합물을 투여하여 성장 호르몬 자체와 동일한 효과 및 용도를 나타낼 수 있다. 따라서 이러한 본 발명의 화합물의 여러 가지 용도는 다음과 같이 요약할 수 있다; 성장 호르몬 결핍성 성인의 치료; 글루코코티코이드의 퇴행성 부작용의 예방; 골다공증의 치료; 면역 시스템의 자극; 상처치료의 촉진; 골절 회복의 촉진; 성장지연의 치료; 급성 또는 만성 신장질환 또는 결핍의 치료; 성장 호르몬이 부족한 어린이를 포함하는 생리학적 단신 치료; 임상 질환과 관련된 단신 치료; 비만 및 비만과 관련된 성장 지연 치료; 프래더-윌리 증후군 및 터너 증후군과 관련된 성장지연 치료; 화상환자의 회복촉진 및 입원감소 또는 위장수술과 같은 후속 외과수술 회복촉진; 자궁내 성장지연 치료 및 골격 형성장애 치료, 말초 신경병증; 스트레스 환자에 있어서 성장 호르몬의 대체; 골-연골 형성장애, 누난스 증후군, 정신분열, 우울증, 알츠하이머 질병, 지연되는 상처치료 및 정신사회학적 유도의 치료; 폐 기능 부전 및 환기 의존성 치료; 주요 수술 후 단백질 퇴행성 응답의 약화; 암 또는 AIDS와 같은 만성질환으로 인한 악액질 및 단백질 손실의 감소; TPN(전체적인 비경구 영양)시 환자에 있어서 체중증가 및 단백질 유착의 촉진; 췌도아세포증을 포함하는 과인슐린증의 치료; 배란 유도를 위한 보조치료 및 위궤양과 십이지장 궤양을 치료 및 예방하기 위한 보조치료; 흉선 개발의 촉진 및 나이와 관련된 흉선의 기능저하의 예방; 만성 혈액투석 환자를 위한 보조치료; 면역 억제된 환자의 치료 및 백신에 대한 항체의 응답 향상; 사람의 전체적인 림프구 수의 증가, 특히 예를 들어 머리 근처의 선상과 같은 물리적 외상으로부터 또는 세균 또는 바이러스 감염, 특히 사람의 면역 결핍 바이러스 감염으로부터 억제된 T4/T8-세포 비율의 결과와 관련된 사람에 있어서 T4/T8-세포 비율의 증가; 약해진 중장년에게 있어서 근육의 강도, 운동성, 피부두께의 유지, 대사의 항상성, 신장의 항상성에 있어서의 개선; 골아세포, 골의 재형성 및 연골의 성장자극; 애완동물에 있어서 면역 시스템의 자극 및 애완동물에 있어서의 노환 치료; 가축에 있어서 성장 촉진; 및 양에 있어서 양모성장의 자극. 추가로 본 발명의 화합물은 사육 효율의 증가, 성장 축진, 우유 생성의 증가 및 가축의 시체의 질 개선에 대해 유용하다. 유사하게, 본 발명의 화합물은 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함하는 향상된 성장 호르몬의 농도의 동화작용 효과에 의해 개선되는 질병 또는 질환의 치료방법에 있어서도 유용하다.
특히 본 발명의 화합물은 다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 질환의 예방 또는 치료에 유용하다: 골다공증; 퇴행성 질병; 개별적으로 억제된 T4/T8-세포 비율과 관련된 것을 포함하는 면역 결핍; 고관절부 골절; 장년에게 있어서 근골격 장애; 성인 또는 어린이에 있어서 성장 호르몬 결핍; 비만증; AIDS 또는 암과 같은 만성질환으로 인한 악액질 및 단백질 손실; 및 주요수술, 상처 또는 화재로부터 이를 필요로 하는 회복되는 환자의 치료.
또한, 본 발명 화합물은 코티코트로핀 방출 인자에 의해 유도되거나 촉진되는 질환 또는 스트레스-유도된 우울증 및 두통을 포함하는, 스트레스 관련된 질병과 불안증 관련된 질환, 복부 배변 증후군, 면역 억제, HIV 감염, 알츠하이머 질병, 위장 질병, 식욕부진 신경증, 출혈성 스트레스, 약물 및 알콜 금단 증후군, 약물중독 및 임신 장애의 치료에 유용할 수 있다.
질병을 치료하기 위한 노력으로 사용되는 다수의 화합물 또는 위에서 나열된 치료 용도에 대해 당해 기술분야의 숙련가들에겐 공지될 수 있다. 위에서도 일부 언급된 치료제와 본 발명의 성장 호르몬 분비 촉진제와의 배합물은 추가로 바람직하고, 성장 촉진제, 동화작용 및 이러한 각종 치료제의 바람직한 특성을 향상시키는 상승효과도 종종 발생한다. 이러한 배합물에 있어서, 본 발명의 치료제 및 성장 호르몬 분비 촉진제는 이들 화합물 및 분비 촉진제가 단독으로 사용되는 경우 유효한 1/100 내지 1배의 투여량의 투여농도로 독립적으로 존재할 수 있다.
골 흡수(resorption) 억제, 골다공증의 예방 및 골절 치료의 향상을 위해 조합된 치료는 비스포스포네이트 및 본 발명의 성장 호르몬의 분비 촉진제의 배합에 의해 나타낼 수 있다. 이와 같은 용도에 대한 비스포스포네이트의 용도는 예를 들어 문헌[참조: Hamdy, N.A.T., Role of Bisphosphonates in Metabolic Bone Diseases, Trends in Endocrinlo. Metab., 4, 19-25(1993)]에 언급되어 있다. 이와 같은 용도를 갖는 비스포스포네이트는 알렌도네이트, 틸루드로네이트, 디메틸-APD, 리세드로네이트, 에티드로네이트, YM-175, 클로드로네이트, 파미드로네이트 및 BM-210995를 포함한다. 이들의 성능에 따라 하루 경구투여 농도의 비스포스포네이트 0.1mg 내지 5g 및 본 발명의 성장 호르몬 분비 촉진제 하루 투여 농도 0.01mg/kg 내지 20mg/체중kg을 환자에게 투여하여 골다공증의 유효한 치료를 성취한다.
알렌드로네이트의 경우에 있어서 하루 경구투여 농도 0.1mg내지 50mg을 유효한 골다공증의 치료를 위해 본 발명의 성장 호르몬 분비 촉진제 0.01mg/kg 내지 20mg/kg과 합한다. 또한 골다공증 및 기타의 골 질환은 칼시토닌, 에스트로겐, 랄록시펜 및 시트르산칼슘과 같은 칼슘 보충물과의 배합물로 본 발명의 화합물을 사용하여 처리할 수 있다. 특히 남성 노인 환자의 치료에 있어서 동화작용 효과는 본 발명의 화합물을 옥시메톨론, 메틸트스테론, 플루옥시메스테론 및 스타노졸로와 같은 동화작용성 스테로이드와의 배합물로 사용하여 수득한다.
본 발명의 화합물은 경구, 비경구(예를 들어, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하주사 또는 이식), 코, 질, 직장, 설하 또는 국소 투여경로에 의해 투여될 수 있고 각각의 투여경로에 대해 적합한 제형으로 배합할 수 있다.
경구 투여용 제형은 형태는 캡슐제, 정제, 환제, 산제 및 과립제를 포함한다. 이러한 고체 제형에 있어서 활성 화합물을 하나 이상의 약제학적으로 적합한 담체, 예를 들어 수크로스, 락토스 또는 전분과 혼합한다. 이러한 제형은 또한 통상적으로 불활성 희석제가 아닌 추가의 물질, 예를 들어 스테아르산마그네슘과 같은 윤활제를 포함할 수 있다. 캡슐제, 정제 및 환제의 경우 제형은 완충제를 포함할 수 있다. 정제 및 환제는 추가로 장용 피복물질과 함께 제조될 수 있다.
경구 투여용으로 액체 제형은 약제학적으로 허용되는 당해 기술분야에 통상적으로 사용되는 불활성 희석제, 예를 들어 물을 함유하는 유액제, 용액제, 현탁제, 시럽제, 엘릭실제를 포함한다. 이러한 불활성 희석제 이외에 조성물은 또한 흡습제, 유화 및 현탁제 및 감미제와 같은 보조제, 향미제 및 향제를 포함할 수 있다.
비경구 투여를 위한 본 발명에 따른 제제는 멸균된 수성 또는 비수성 용액, 현탁액 또는 유액을 포함한다. 비수성 용매 또는 부형제의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 옥수수 오일과 같은 식물성 오일, 젤라틴 및 에틸 올레에이트와 같은 주사 가능한 유기 에스테르이다. 또한 이러한 투여형태는 방부제, 흡습제, 유화제 및 분산제와 같은 보조제를 함유할 수 있다. 이들은 예를 들어 세균을 보유하는 필터를 통한 여과, 조성물에 멸균제의 혼입, 조성물의 방사선 조사, 또는 조성물의 가열에 의해 멸균시킬 수 있다. 이들은 또한 멸균수 또는 몇몇 기타의 주사 가능한 멸균 매질에 사용하기 직전에 용해될 수 있는 멸균된 고체 조성물의 형태로 제조될 수 있다.
직장투여 또는 질투여를 위한 조성물은 바람직하게는 활성물질 이외에 코코아 버터 또는 좌제용 왁스와 같은 부형제를 함유하는 좌제이다.
비투여 또는 설하투여를 위한 조성물은 당해기술 분야에 공지된 표준실험으로 제조된다.
본 발명의 화합물은 이러한 치료를 필요로 하는 환자(동물 및 사람)에게 최적의 약제학적 효능를 제공할 수 있는 투여량으로 투여할 수 있다. 임의의 특별한 적용에 있어서 사용하기 위해 필요한 투여량은 선택되는 특별한 화합물 또는 조성물 뿐만 아니라 투여경로, 처리할 질환의 특성, 환자의 나이 및 상태, 함께 사용되는 약물 또는 환자가 따르고 있는 특별한 식이요법으로 환자에 따라 및 당해기술 분야의 숙련가들이 알 수 있는 기타의 요인에 따라 적합한 투여량으로 최종적으로는 의사의 지시에 따라 변할 수 있다.
본 발명의 조성물중 활성성분의 투여량은 변할 수 있지만; 활성성분의 양은 적합한 제형을 수득하는 정도로 존재하는 것이 필요하다. 선택되는 투여량은 목적하는 치료효과, 투여경로 및 치료기간에 따라 좌우된다. 일반적으로 하루 투여량 0.0001 내지 10mg/체중kg을 환자 및 동물, 예를 들어 포유동물에게 투여하여 성장 호르몬의 효과적인 방출을 수득한다. 바람직하게는 투여량은 하루 당 약 0.001 내지 약 25mg/kg; 더욱 바람직하게는 하루당 약 0.01 내지 약 10mg/kg이다.
본 발명의 다형체를 제조하는 방법은 다음 실시예에서 나타낸다. 다음의 실시예는 본 발명을 설명할 목적으로 제공되고 본 발명의 범주 또는 취지를 이에 한정하는 것으로 여겨져서는 안된다.
실시예 1
N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드
단계 A: 1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]하이드로클로라이드
무수 디클로로메탄 20mL중 1'-메틸-1,2-디하이드로-스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘](H. Ong. et al., J. Med. Chem., 23, 981-986(1983)에 기술된 바와 같이 제조되는) 1.20g(5.8mmol)의 용액에 0℃에서 트리에틸아민(0.90mL; 6.4mmol) 및 메탄설포닐 클로라이드(0.49mL; 6,35mmol)를 가하고 30분 동안 교반한다. 반응 혼합물을 중탄산나트륨의 포화수용액 15mL에 부어넣고 디클로로메탄(2X10mL)으로 추출한다. 합한 유기물을 염수(20mL)로 세척하고 무수 탄산칼륨으로 건조시키고 여과한 다음, 용매를 감압하에 제거하여 정제 없이 사용되는 연황색 오일로서 메탄설폰아미드 유도체 1.44g을 수득한다.
무수 1,2-디클로로메탄 20mL중 위의 조생성물의 용액에 0℃에서 1-클로로에틸 클로로포르메이트 1.0mL(9.30mmol)을 가하고 실온에서 30분 동안 교반하고 최종적으로 1시간 동안 환류하에 교반한다. 반응 혼합물을 약 1/3 용적으로 농축시키고 무수 메탄올 20mL로 희석시키고 1.5시간 동안 환류시킨다. 반응을 실온으로 냉각시키고 약 1/2 용적으로 농축시킨다. 침전물을 여과시키고 소량의 차가운 메탄올로 세척한다. 이로써 백색 고체로서 피페리딘 HCl 1.0g을 수득한다. 여액을 농축시키고 소량의 메탄올을 가한 다음 에테르를 가한다. 침전되는 물질을 다시 한번 여과시키고 차가운 메탄올로 세척하고 건조시킨다. 이로써 목적하는 생성물을 추가로 0.49g 수득한다. 전체 수율 1.49g(70%).
1H NMR (CDCl3, 200MHz) δ 7.43-7.20(m, 3H), 7.10(dd, 1H), 3.98(bs, 2H), 3.55-3.40(bd, 2H), 3.35-3.10(m, 2H), 2.99(s, 3H), 2.15(t, 2H), 2.00(t, 2H)
단계 B: N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-[(1,1-디메틸에톡시)카보닐]아미노-2-메틸프로판아미드
디클로로메탄 13mL중 (2R)-2-[(1,1-디메틸에톡시)카보닐]아미노-3-[2-(페닐메틸옥시)에틸]-1-프로파노산의 용액에 1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘] 하이드로클로라이드(0.325g; 1.07mmol), N-메틸모르폴린 0.18mL(1.63mmol), 1-하이드록시벤즈트리아졸(HOBT) 0.159g(1.18mmol)을 가하고 15분 동안 교반한다. EDC(0.31g; 1.62mol)를 가하고 1시간 동안 계속 교반한다. 추가의 N-메틸모르폴린 60μL를 가하고 45분 동안 교반한다. 반응 혼합물을 물 5mL에 부어 넣고 유기층을 분리시킨다. 유기층을 0.5N 수성 염산 5mL 및 중탄산나트륨 포화 수용액 5mL로 세척한다. 합한 유기물을 무수 탄산칼륨으로 건조시키고 여과한 다음, 농축시켜 정제 없이 사용되는 황색 발포체로서 생성물 0.627g을 수득한다.
디클로로메탄 5mL중 위의 생성물 0.627g(1.07mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 1.0mL를 가하고 실온에서 75분 동안 교반한다. 추가의 트리플루오로아세트산 1.00mL를 가하고 10분 동안 교반한다. 반응 혼합물을 농축시키고 디클로로메탄 5.0mL로 희석시키고 1%의 탄산나트륨 수용액 10mL에 가하여 조심스럽게 염기성화시킨다. 유기층을 분리하고 수성층을 추가로 디클로로메탄 2X15mL로 추출시킨다. 합한 유기물을 물 5mL로 세척하고 무수 탄산칼륨으로 건조시키고 여과한 다음, 농축시켜 정제 없이 사용되는 연황색 발포체로서 아민 0.486g을 수득한다.
아민 0.486g(1.01mmol) 및 디클로로메탄 10mL에 2-[(1,1-디메틸에톡시)카보닐]아미노-2-메틸-프로파노산 0.26g(1.28mmol), 1-하이드록시벤즈트리아졸(HOBT) 0.173g(1.28mmol) 및 EDC(0.245g; 1.28mol)를 가하고 실온에서 밤새도록 교반한다. 반응 혼합물을 물 5.0mL에 부어 넣고 유기층을 분리시킨다. 수층을 디클로로메탄 5mL로 추출시킨다. 합한 유기물을 0.5N 수성 염산, 중탄산칼륨 포화 수용액 5mL으로 세척하고 무수 황산마그네슘으로 건조시키고 농축시켜 황색 발포체로서 조생성물 0.751g을 수득한다. 디클로로메탄중 이러한 조생성물의 용액을 실리카 겔 25g상에 크로마토그래피하고 추선 헥산/아세톤/디클로로메탄(70/25/5)에 이어서 헥산/아세톤/디클로로메탄(65/30/5)으로 용출시킨다. 이로써 백색고체로서 표제 화합물 0.63g을 수득한다.
1H NMR(CDCl3, 400MHz) 화합물은 3:2 로타머(rotamer)의 혼합물로서 존재한다.
δ 7.40-7.10(m, 6H), 7.06(d, 1/3H), 7.02(t, 1/3H), 6.90(t, 1/3H), 6.55(d, 1/3H), 5.15(m, 1H), 4.95(bs, 1H), 4.63(bd, 1/3H), 4.57-4.40(m, 2 2/3H), 4.10(bd, 1/3H), 4.00(bd, 1/3H), 3.82(t, 1H), 3.78-3.62(m, 2H), 3.60-3.50(m, 1H), 3.04(q, 1H), 2.87(s, 1H), 2.86(s, 1H), 2.80-2.60(m, 1H), 1.90(bs, 1H), 2.85-2.75(m, 1H), 1.82-1.60(m, 3H), 1.55-1.45(m, 1H), 1.45(s, 4H), 1.42(s, 2H), 1.39(s, 9H)
단계 C: N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 하이드로클로라이드
디클로로메탄 5mL중 단계 B로부터의 중간체 0.637g(0.101mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 2.5mL를 가하고 실온에서 30분 동안 교반한다. 반응 혼합물을 오일로 농축시키고 에틸 아세테이트 10mL에 처리하고 10%의 탄산나트륨 수용액 8mL로 세척한다. 수성층을 추가로 에틸 아세테이트 5mL로 추출시킨다. 합한 유기물을 물 10mL로 세척하고 무수 황산마그네슘으로 건조시키고 여과하고 농축시켜 백색 발포체로서 유리 염기 0.512g을 수득한다.
에틸 아세테이트 5mL중 유리 염기 0.512g에 0℃에서 에틸 아세테이트중 포화 염산 0.2mL를 가하고 1.5시간 동안 교반한다. 백색 침전물을 질소하에 여과하고 에테르로 세척하고 건조시켜 백색 고체로서 표제 화합물 0.50g 수득한다.
1H NMR(400MHz, CD3OD) 화합물은 3:2 로타머의 혼합물로서 존재한다.
δ 7.40-7.28(m, 4H), 7.25-7.17(m, 2H), 7.08(t, 1/3H), 7.00(t, 1/3H), 6.80(d, 1/3H), 5.16(ddd, 1H), 4.60-4.42(m, 3H), 4.05(t, 1H), 3.90(bs, 2H), 3.83-3.70(m, 2H), 3.30-3.15(m, 1H), 2.97(s, 1H), 2.95(s, 2H), 2.90-2.78(m, 1H), 1.96(t, 1/3H), 1.85-1.65(m, 4H), 1.63(s, 2H), 1.60(s, 4H)
실시예 2
N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드
단계 A: (2R)-[[[-2-(1,1-디메틸에톡시)카보닐]아미노]-2,2-디메틸-1-옥시에틸]아미노-2-(페닐메틸옥시)에틸]-1-프로파노산 알릴 에스테르
(2R)-2[(1,1-디메틸에톡시)카보닐]아미노-3-(페닐메틸옥시)에틸-프로파노산 및 알릴 알콜로부터 EDC DMAP의 존재하에 CH2Cl2중 커플링 반응을 수행하여 제조된다.
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.25(s, 5H), 5.8(m, 1H), 5.2(dd, 2H), 5.0(bs, 1H), 4.7(m, 1H), 4.6(m, 2H), 4.4(dd, 2H), 3.9(dd, 1H), 3.6(dd, 1H), 1.45(d, 6H), 1.39(s, 9H)
단계 B: (2R)-[[[-2-(1,1-디메틸에톡시)카보닐]아미노]-2,2-디메틸-1-옥시에틸]아미노-2-(페닐메틸옥시)에틸]-1-프로파노산
단계 A에서 수득되는 조악한 중간물질(6.7g 15.9mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐(1.8g 0.1당량) 및 트리페닐 포스핀(1.25g 0.3당량)의 교반된 용액에 칼슘-2-에틸 헥사노에이트(35mL, EtOAc중 0.5M)의 용액을 가한다. 반응 혼합물을 실온에서 질소 대기하에 1시간 동안 교반하고 에테르(100mL)로 희석시키고 냉수에 부어 넣는다. 유기층을 분리하고 수성 분획을 시트르산(20%)으로 산성화시키고 EtOAc로 추출시킨다. EtOAc 추출물을 염수로 세척하고 황산마그네슘으로 건조시키고 여과하고 증발시켜 고체로서 표제 화합물을 수득한다.
1H NMR (400MHz, CD3OD) δ 7.3(s, 5H), 4.7(m, 1H), 4.5(s, 2H), 4.0(m, 1H), 3.6(m, 1H), 1.4(d, 6H), 1.3(s, 9H)
단계 C: N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-[(1,1-디메틸에톡시)카보닐]아미노-2-메틸프로판아미드
디클로로메탄 50mL중 1-메탄설포닐스피로[인돌린-3,4'피페리딘]하이드로클로라이드 1.0g(3.44mmol), (2R)-2-[(1,1-디메틸에톡시)카보닐]아미노]-2,2-디메틸-1-옥소-에틸]-아미노-2-(페닐메틸옥시)에틸)-1-프로파노산 1.44g(3.78mmol), N-메틸모르폴린(0.58mL; 5.20mmol) 및 1-하이드록시벤즈트리아졸(HOBT)(0.58g; 3,78mmol)의 용액에 EDC(1.03g; 5.20mmol)을 가하고 실온에서 16시간 동안 교반한다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 50mL를 가하여 희석시키고 중탄산칼륨 포화 수용액(50mL)으로 세척하고 무수 황산마그네슘으로 건조시키고 여과하고 농축시킨다. 조악한 오일 잔사를 유출 크로마토그래피(실리카 겔 50g)하여 무색 발포체로서 목적 화합물 2.148g(90%)을 수득한다.
1H NMR(400MHz, CD3OD) 화합물은 3:2 로타머의 혼합물로서 존재한다.
δ 7.40-7.10(m, 6H), 7.06(d, 1/3H), 7.02(t, 1/3H), 6.90(t, 1/3H), 6.55(d, 1/3H), 5.15(m, 1H), 4.95(bs, 1H), 4.63(bd, 1/3H), 4.57-4.40(m, 2 2/3H), 4.10(bd, 1/3H), 4.00(bd, 1/3H), 3.82(t, 1H), 3.78-3.62(m, 2H), 3.60-3.50(m, 1H), 3.04(q, 1H), 2.87(s, 1H), 2.86(s, 2H), 2.80-2.60(m, 1H), 1.90(bs, 1H), 2.85-2.75(m, 1H), 1.82-1.60(m, 3H), 1.55-1.45(m, 1H), 1.45(s, 2H), 1.42(s, 2H), 1.39(s, 9H)
단계 D: N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 하이드로클로라이드
디클로로메탄 10mL중 단계 C로부터의 중간물질 2.148g(3.41mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 5mL를 가하고 1시간 동안 교반한다. 반응 혼합물을 농축시키고 5%의 탄산나트륨 수용액 100mL로 염기성화시키고 디클로로메탄(3X50mL)으로 추출시킨다. 합한 유기물을 염수(50mL)로 세척하고 무수 탄산칼륨으로 건조시키고 여과하고 농축시켜 무색 발포체를 수득한다. 에틸 아세테이트 25mL중 발포체의 용액에 0℃에서 에틸 아세테이트중 1M의 염산 4mL를 가한다. 침전물을 여과하고 우선 에틸 아세테이트에 이어서 에틸 아세테이트-에테르(1:1)로 세척하고 건조시켜 무색 고체로서 표제 화합물을 1.79g(93%) 수득한다.
1H NMR(400MHz, CD3OD) 화합물은 3:2 로타머의 혼합물로서 존재한다.
δ 7.40-7.28(m, 4H), 7.25-7.17(m, 2H), 7.08(t, 1/3H), 7.00(t, 1/3H), 6.80(d, 1/3H), 5.16(ddd, 1H), 4.60-4.42(m, 3H), 4.05(t, 1H), 3.90(bs, 2H), 3.83-3.70(m, 2H), 3.30-3.15(m, 1H), 2.97(s, 1H), 2.95(s, 2H), 2.90-2.78(m, 1H), 1.96(t, 1/3H), 1.85-1.65(m, 4H), 1.63(s, 2H), 1.60(s, 4H)
실시예 3
N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메실레이트
이 화합물은 실시예 5의 단계 D에서 수득되는 유리염기를 메탄설폰산으로 처리하여 제조된다. 표제 화합물은 이를 에틸 아세테이트-에탄올-물로부터 재결정화시켜 수득한다. 융점은 166 내지 168℃이다. 이 샘플을 연속적으로 다형체 II로 정의한다. 이는 약 4.7, 11.6, 17.4, 19.2, 및 21.6°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X-선 분말회절 패턴을 특징으로 한다. 추가로 질소유동하에 개방 컵에서 10℃/min에서 DSC에 의해 단일 용융으로 인해 피크온도 약 174℃ 및 약 37J/g의 열과 관련된 외삽 온셋 온도(용융온도) 약 165℃를 갖는 흡열부를 나타내는 것을 특징으로 한다.
실시예 4
화학식 3
이소니페코트산-N-벤질 카바메이트(3)
재료:
이소니페코트산(2) T.C.I. 4.02kg(31.1mol)
벤질 클로로포르메이트(Schweitzerhall) 6.91kg(40.5mol)
K2CO310.1kg(72.9mol)
물 40.2L
화학식 2의 이소니페코트산 및 K2CO3은 100L 용량의 4구 플라스크 속에서 기계적으로 교반하면서 N2하에 물 40.2L에 용해시키고 용액을 10℃로 냉각시킨다. 온도를 9 내지 14℃에서 유지하면서 벤질 클로로포르메이트를 가하고 혼합물을 첨가가 완결된 후 22℃로 가온시키고 58시간 동안 숙성시킨다. 첨가는 pH가 9.0이 되는 4시간 경과 후 완결된다. 58시간 동안 숙성시킨 후에는 pH에 있어서의 변화가 없다.
반응 혼합물을 200L 용량의 추출기에 이동시키고 IPAC 3 x 13kg(15L) 및 EtOAc 12L로 세척한다. 수성층을 톨루엔 8L로 추출시킨다. 세척후 벤질 알콜 함량은 HPLC 분석에 의해 3.8%로부터 1.4%로 감소된다. HPLC 분석: 유속 1.5mL/min 및 254nm에서 검출되는 듀폰 조르박스 25cm RXC8 칼럼; MeCN 35%, 0.1%의 수성 H3PO465%와의 이소크래틱 혼합물; 체류 시간 : 화학식 3의 화합물=6.9분, 벤질 알콜=3.3분, 톨루엔=17.3분.
수성상을 37%의 수성 HCl을 사용하여 pH 1.8까지 산성화시킨다. 이산화탄소는 HCl을 가하는 동안 방출되지만 기체의 증발은 용이하게 조절된다. HCl을 1시간 미만 동안 가하고 진한 HCl 10L를 필요로 한다. 수성상을 톨루엔 3 x 6.6L로 추출시킨다. 톨루엔 추출물을 황산나트륨 2kg으로 건조시키고 솔카-플록(Solka-flocTM)의 패드를 통해 여과시킨다. 합한 여액의 중량은 17.8kg이다. 화학식 3의 카바메이트의 조악한 수율은 7.89kg(97%)이다(여액의 측량된 분액을 무수물로 증발시켜 수득되는 바와 같다). 여액을 10μ 인라인 여과기를 통해 100L 플라스크에 이동시킨다. 추출물을 10mbar에서 25℃ 미만에서 용적 18L로 농축시킨다. 화학식 3의 카바메이트의 최종 농도는 448g/L이다. 톨루엔 여액의 농축물은 최종 흔적량의 물을 공비 제거하기 위해 시빙된다(최종 KF=170mg/L). 생성물은 단지 불순물로서 벤질 알콜 0.9면적%를 함유하는 99.1면적%이다.
실시예 5
화학식 4
이소니페코트산 클로라이드-N-벤질 카바메이트(4)
재료:
이소니페코트산 N-벤질 카바메이트(3) 7.89kg(30.0mol)
톨루엔(MW-263.30)중 17.9L
옥살릴 클로라이드(MW=126.93) 3.94ZL(31.0mol)
DMF(MW=73.10) 10mL
톨루엔 12L
선행 단계로부터의 화학식 3의 벤질 카바메이트의 톨루엔 용액에 DMF 5mL 및 톨루엔 10L를 가한다. 옥살릴 클로라이드를 20분에 걸쳐 가한다. 반응 혼합물을 16시간 동안 18℃에서 질소의 느린 스트림하에 숙성시킨다. 반응 혼합물의 HPLC 분석은 화학식 3의 카복실산의 1,3%가 아직 미반응 상태로 잔류함을 나타낸다. 반응 혼합물을 26℃로 가열하고 DMF 5mL를 가한다. 혼합물을 2.5시간 동안 숙성시킨다. 반응 혼합물의 분액 1.0mL를 3급-부틸아민 5.0mL로 급냉시키고 증발 후 HPLC에 의해 분석한다: 유속 1mL/min 및 220nm에서 검출되는 듀폰 조르박스 25cm RXC8 칼럼; MeCN 42%, 0.1%의 수성 H3PO458%와의 이소크래틱 혼합물. 이러한 방법은 화학식 3의 산이 0.05% 미만 남아있고(화학식 A의 화합물로서 판명됨) 3면적% 이상의 화학식 B의 화합물을 나타낸다(1mol% 이상의 (COCl)2).
혼합물을 10mbar 및 온도 20 내지 25℃에서 용매 5L이 제거될 때까지 농축시킨다.
위에서 기술한 바와 같이 t-BuNH2로 급냉시킨 후 진한 톨루엔 용액의 전형적인 HPLC의 특징은 다음과 같다:
체류 시간(분) 면적% 물질
2.1 <0.5% 화학식 3의 카복실산
7.8 <0.5% 벤질 클로라이드
11.0 >99% 화학식 A의 Cbz-t-부틸카복스아미드
12.1 NA 톨루엔
12.7 <0.5% 화학식 B의 디-3급-부틸옥스아미드
실시예 6
화학식 5
피페리딘-4-카복스알데히드-1-벤질 카바메이트(5)
재료:
이소니페코트산 클로라이드 N-벤질 카바메이트(4) 3.38kg(12.0mol)
톨루엔(MW-281.74)중 5.54kg
DIEA(KF=18mg/L) 1.55kg(15.0mol)
Pd/C 10%(KF<20mg/g) 101g
티오아니솔(MW=124.21, d=1.058) 0.56g
DIEA 및 티오아니솔을 선행 단계로부터의 톨루엔중 화학식 4의 화합물의 용액에 가하고 결정을 이 혼합물 속에서 현탁시킨다. 혼합물을 즉시 5gal의 오토클레이브에 위치시키고 20℃ 및 H240pci에서 수소화시킨다. 18시간 후 반응물을 70%의 이론상의 수소량으로 처리하고 3급-부틸아민으로 급냉시킨 분액을 HPLC 분석하면 화학식 2의 산 클로라이드의 14.2면적%가 잔류함을 나타낸다. HPLC 조건은 위에서와 같다. 체류 시간: 화학식 5의 화합물=8.1분.
두 번째 충전물의 촉매(101g) 및 티오아니솔(0.54g)을 톨루엔 1375mL중 슬러리로서 수소화기에 가한다. 23시간 후 3급-부틸아민으로 급냉시킨 분액을 HPLC 분석하면 화학식 2의 산 클로라이드의 1.8면적%가 잔류함을 나타낸다. 혼합물을 질소로 퍼징하고 촉매 및 침전되는 DIEA·HCl을 솔카-플록을 통해 여과시켜 제거한다. 필터 케이크는 톨루엔 10L로 세척한다. 여액을 10μ 인라인 필터를 통해 50L 용량의 추출기에 이동시키고 1M의 수성 HCl 2 x 7.2L 및 물 2 x 7.2L로 세척한다. 혼합물을 10mbar 및 온도 25 내지 30℃에서 잔사 5L가 잔류할 때까지 농축시킨다.
체류 시간(분) 면적% 물질
2.1 <2 카복실산 3
6.6 <1 이량체 21
8.1 >95% 알데히드 5
화학식 3의 알데히드의 분석 수율은 HPLC 분석에 의해 94%이다.
실시예 7
화학식 9
CBZ-스피로인돌린(9)
재료:
피페리딘-4-카복스알데히드-1-벤질 1.71kg(6.89mol)
톨루엔 용액 중 카바메이트(5) 21.4kg
페닐하이드라진 900mL, 981g(9.15mol)
트리플루오로아세트산(TFA) 2.20L, 3.26kg(28.6mol)
NaBH4300g, (7.93mol)
톨루엔 34.4kg
MeCN 7.0L
MeOH 7.0L
선행 단계로부터 조악한 화학식 5의 알데히드 용액을 10μ의 인라인 필터를 통해 테플론 피복된 구리 코일이 냉각 또는 가열을 위해 장착되고 기계적 교반기가 장착된 100L 용량의 반응기로 이동시킨다. 톨루엔(34.4kg) 및 MeCN(7L)을 가하고 제조되는 용액을 0℃로 냉각시킨다. 페닐하이드라진을 나누어 가하고 질소를 연속적으로 반응 혼합물을 통해 버블링하면서 온도를 1 내지 3℃에서 유지시킨다.
페닐하이드라진을 TLC 및 HPLC 분석은 화학식 5의 알데히드의 완전소모를 나타내고 페닐하이드라진이 약간의 과량(<5%) 나타날 때까지 가한다. TLC 조건: 실리카 E. Merck Kieselgel G60 F254 0.25mm; 디에틸에테르/펜탄(4/1); 및 전개제 0.5% 황산세륨, 10%의 수성 황산중 14% 몰리브덴산암모늄; 실온; 화학식 5의 알데히드=0.52, 화학식 7의 페닐하이드라존=0.61, 화학식 6의 페닐하이드라진=0.21.
HPLC 조건: 유속 1.0mL/min 및 254nm에서 검출되는 듀폰 조르박스 25cm RXC8 칼럼; 그래디언트 스케줄:
시간(분) 아세토니트릴:물
0 57:43
10 65:35
15 75:25
18 75:25
체류 시간: 화학식 6의 페닐하이드라진=4.5분, 톨루엔=7.2분, 화학식 7의 페닐하이드라존=11.4분
반응 혼합물을 0 내지 2℃에서 30분 동안 숙성시키고 TFA를 온도를 2 내지 7℃로 유지시키면서 가한다. 반응 혼합물을 30분에 걸쳐 50℃로 가온시키고 17시간 동안 유지시킨다. 반응 혼합물을 통해 질소 스파징을 중단하고 질소의 느린 스트림을 반응 혼합물에 걸쳐 유지시키다. 5℃에서 1시간 동안에 색상이 점차 짙은 녹색으로 짙어지고 상대적으로 소량의 백색 결정 침전물(암모늄 트리플루오로아세테이트)을 형성한다. 17시간 후 HPLC 분석(위에서와 동일한 조건)은 반응 혼합물에 화학식 8의 인돌레닌 91.6면적% 및 미반응 페닐하이드라존 1.5%가 잔류함을 나타낸다. 혼합물을 더욱 장시간 동안 숙성시키면 화학식 8의 인돌레닌의 분석 수율을 증가시키지 않는다.
반응 혼합물을 12℃로 냉각시키고 MeOH 7.0L를 가한다. 온도를 15℃ 미만으로 유지하면서 NaBH4를 적은 분획(<20g)으로 가한다. 첨가는 30분 동안 수행된다. 첨가하는 동안 온화한 수소의 증발이 관측되지만 이는 용이하게 조절되고 사실상 거품이 일지 않는다. 첨가가 거의 종결되면 색상은 신속하게 녹색으로부터 갈색에 이어서 밝은 오렌지색으로 변한다. 더욱 무거운 상의 적은 양(<200mL)을 분리시킨다(추정 가능한 수성염). HPLC 분석(앞에서와 같은 조건)은 모든 화학식 8의 인돌레닌이 소모됨을 나타낸다(화학식 9의 CBZ-인돌린 90.4면적%); 체류 시간: 화학식 8의 인돌레닌=7.5분, 화학식 9의 인돌린= 8.2분. 용매로서 TLC:에틸 에테르, 황산세륨, 몰리브덴산암모늄 얼룩 또는 1%의 아니스알데히드 얼룩; 유지 인자: 화학식 8의 인돌레닌=0.18, 화학식 9의 CBZ-인돌린=0.33).
녹색으로부터 오렌지색으로의 색상 변화는 매우 근접한 반응의 최종지점에 상응한다. 반응을 완결시키기에 필요한 NaBH4의 양은 주로 온도 및 NaBH4의 첨가속도에 의존하지만 생성물의 수율 및 품질은 반응이 완결되는 것을 조건으로 거의 영향을 받지 않는다. 반응 혼합물을 30분에 걸쳐 5℃로 냉각시킨다. 이어서 3%의 수성 NH4OH(8L) 8L를 가하여 수성상의 pH를 7.4로 만들고 혼합물을 교반하고 고정시킨다. 온도를 15℃로 상승시킨다. 황색 구름상 낮은 수성상을 분리한다. 유기상을 3%의 수성 NH4OH 4L, 물 2 x 4L 및 염수 2 x 4L로 세척한다. 세척 후 유기상의 중량은 53.5kg이고 분석수율은 94%이다.
세척되는 톨루엔 용액을 기타 유사하게 제조되는 2개의 반응물의 세척된 유기상과 배합한다. 3개의 반응에 사용되는 전체적인 알데히드는 5.06kg(20.5mol)이다. 합한 유기상에서 분석되는 화학식 9의 CBZ-인돌린의 전체중량은 5.91kg(18.3mol, 분석수율 90%)이다. 합한 유기상을 황산나트륨 5kg으로 건조시키고, 다르코 G60 카본 250g으로 30분 동안 처리하고 솔카-플록을 통해 여과한다. 여액을 잔사가 거의 무수물이 될 때까지 10mbar 및 25℃ 미만에서 진공 농축시킨다. 용매 스위칭은 IPAC 30L중에 서서히 블리딩하고 200mbar 및 50 내지 60℃에서 재농축시킴으로써 완결된다. 혼합물을 환류 가열하여 투명하고 균일한 짙은 녹색의 용액을 수득한다.1H MNR 분석은 용매 변경 후 용액이 약 6mol%의 잔류 톨루엔을 함유하는 것을 나타낸다.
용액을 68℃로 냉각시키고 결정성 화학식 9의 CBZ-인돌린 4g으로 시딩한다. 용액을 6시간에 걸쳐 서서히 냉각시키고 9시간 동안 20 내지 26℃에서 숙성시킨다. 슬러리를 1시간에 걸쳐 2℃로 냉각시키고 2℃에서 1시간 동안 숙성시킨다. 생성물을 여과에 의해 분리시키고 필터 케이크를 5℃의 IPAC 2 x 2L 및 5 ℃의 MTBE 2 x 2L로 세척한다. 생성물을 진공 오븐 속에서 30℃에서 질소블리딩하에 건조시켜 약간 그을린 결정성 분말로서 화학식 9의 표제 화합물을 4.37kg(74%) 수득한다. 생성물의 HPLC 분석은 순도 99.5면적%를 나타낸다. 모액(11L) 및 세척수는 추가의 화학식 9의 생성물을 1.15kg(19%) 및 Cbz-이소니페코트산 페닐하이드라지드 약 3%를 함유한다(체류 시간=4.8분).
실시예 8
화학식 1
CBZ-스피로인돌린-메탄설폰아미드(1)
재료:
CBZ-스피로인돌린(9) 1.69kg(5.23mol)
메탄설포닐 클로라이드 599g(5.23mol)
Et3(KF=151) 635g96.27mol)
THF(KF=41) 12L
22L 용량의 플라스크를 고체 화학식 9의 CBZ-스피로인돌린으로 충전시키고 THF 11.5L 및 Et3N을 10μ의 인라인 필터를 통해 플라스크에 이동시킨다. 제조되는 균일한 용액을 0℃로 냉각시킨다. 1L의 적가 깔때기를 메탄설포닐 클로라이드 및 THF 500mL로 충전시킨다. THF중 MsCl의 용액을 온도를 0 내지 4℃로 유지하면서 반응 혼합물에 가한다. 첨가는 5시간 동안 이루어지고 흡열반응이다. 트리에틸암모늄 하이드로클로라이드로 추정되는 백색 침전물이 형성된다. HPLC 분석은 반응이 첨가의 말단(화학식 9의 화합물이 검출되지 않는다)에 종결됨을 나타낸다.
HPLC 조건: 유속 1.5mL/min 및 254nm에서 검출되는 듀폰 조르박스 25cm RXC8 칼럼; 그래디언트 스케쥴:
시간(분) 0.1% 수성H 3 PO 4 :MeCN
0 70:30
3 70:30
12 20:80
25 20:80
체류 시간: 화학식 9의 화합물=7.6분, 1=13.6분.
첨가를 완결한 후 반응 혼합물을 18℃로 가온시키고 16시간 동안 숙성시킨다. 반응 혼합물의 겉보기와 첨가의 종결시 내지 16시간 숙성 후 사이의 HPLC 특성에 있어서 변화가 없다. 반응 혼합물을 1시간에 걸쳐 서서히 격렬히 교반되는 물 30L 및 37%의 수성 HCl 200mL의 용액 속에 50L 용량의 플라스크에서 가한다. 50L 용량의 플라스크에서 온도를 22로부터 28℃로 상승시킨다. 생성물은 과립상 고체로 변하는 약하게 그을린 검상 고체로서 분리된다. 수성 현탁액을 22℃로 냉각시키고 1시간 동안 숙성시킨다. 현탁액을 여과하고 필터 케이트를 MeOH/물(50/50) 2 x 4L로 세척한다. HPLC 분석은 화학식 1의 CBZ-스피로인돌린 메탄설폰아미드의 <0.1%가 모액임을 나타낸다.
필터 케이크를 28%의 수성 NH4OH 50mL를 가한 MeOH/물(50/50) 4L로 세척한다. 필터 케이크를 MeOH/물(50/50) 2 x 4L로 세척하고 고체를 진공오븐에서 50℃에서 질소 블리딩하에 건조시켜 화학식 1의 표제 화합물을 비백색 분말로서 2.03kg(97%) 수득한다. 고체의 HPLC 분석은 화합물 1 93.7면적%를 나타낸다.
실시예 9
화학식 8
중간물질의 분리를 위한 임의공정
CBZ-스피로인돌레닌(8)
재료:
피페리딘-4-카복스알데히드-1-벤질 카바메이트(5) 12.37kg(0.050mol)
페닐하이드라진 5.45(0.050mol)
트리플루오로아세트산(TFA) 11.56mL, 17.10g
(0.150mol)
메틸렌 클로라이드 500mL
화학식 5의 CBZ-알데히드를 테플론 피복된 자기 교반기 바가 장착된 1L 용량의 플라스크 속에서 디클로로메탄 중에 용해시킨다. 제조되는 용액을 0℃로 냉각시킨다. 페닐하이드라진을 중량측정 주사기를 통해 5분에 걸쳐 가하고 질소를 연속적으로 반응 혼합물을 통해 버블링하면서 온도를 1 내지 3℃에서 유지시킨다. TLC 및 HPLC 분석은 화학식 5의 알데히드의 완전소모를 나타내고 페닐하이드라진이 약간의 과량(<2%) 나타날 때까지 가한다. TLC 조건: 실리카 E. Merck Kieselgel G60 F254 0.25mm; 디에틸 에테르/펜탄(4/1); 및 전개제 0.5% 황산세륨, 10%의 수성 황산중 14% 몰리브덴산암모늄; 실온; 화학식 5의 알데히드=0.52, 페닐하이드라존 7=0.61, 화학식 6의 페닐하이드라진=0.21. HPLC 조건: 30℃에서 유속 1.0mL/min 및 254nm에서 검출되는 듀폰 조르박스 25cm RXC8 칼럼; 그래디언트 스케쥴:
시간(분) 아세토니트릴:물
0 57:43
10 65:35
15 75:25
18 75:25
체류 시간: 화학식 6의 페닐하이드라진=4.5분, 톨루엔=7.2분, 화학식 7의 페닐하이드라존=11.4분
반응 혼합물을 0 내지 2℃에서 10분 동안 숙성시키고 TFA를 온도를 2 내지 7℃로 유지시키면서 가한다. 반응 혼합물을 30분에 걸쳐 35℃로 가온시키고 17시간 동안 유지시킨다. 반응 혼합물을 통해 질소 스파징을 중단하고 질소의 느린 스트림을 반응 혼합물에 걸쳐 유지시키다. 35℃에서 1시간 동안에 색상이 점차 장미빛 분홍색에 이어서 짙은 녹색으로 짙어지고 상대적으로 소량의 백색 결정 침전물(암모늄 트리플루오로아세테이트)을 형성한다. 17시간 후 HPLC 분석(위에서와 동일한 조건)은 반응 혼합물에 화학식 8의 인돌레닌 93면적% 및 미반응 페닐하이드라존 0.5%가 잔류함을 나타낸다. 혼합물을 더욱 장시간 동안 숙성시키면 화학식 8의 인돌레닌의 분석 수율을 증가시키지 않는다. 반응 혼합물을 10℃로 냉각시키고 28 내지 30%의 수산화암모늄 60mL, 물 90mL 및 분쇄된 얼음 150g을 함유하는 혼합물을 잘 교반하면서 가한다. 혼합물의 색상은 연어색으로 변한다. 유기상을 분리시키고 물 400mL 및 수성 포화 NaCl 100mL로 2회 세척한다. 유기상을 황산마그네슘으로 건조시키고 실리카 5g의 플러그를 통해 여과시킨다. 여액을 증발시켜 연한 오렌지색 오일로서 화학식 8의 인돌레닌을 15.84g(99%) 수득한다.
실시예 10
화학식 1
중간체 화학식 9의 CBZ-스피로인돌린을 분리하지 않고화학식 1의 CBZ-스피로인돌린-메탄설폰아미드을 제조하는 과정
단계 1: CBZ-스피로인돌린(9)
재료:
피페리딘-4-카복스알데히드-1-벤질 카바메이트(5) 49.5g(0.20mol)
페닐하이드라진(알드리치) 23.7g(0.22mol)
트리플루오로아세트산(TFA) 75.4g(0.66mol)
톨루엔(KF<250mg/L) 654mL
MeCN(KF<250mg/L) 13.3mL
NaBH411.3g(0.30mol)
톨루엔 20mL
MeOH 50mL
톨루엔중 MeCN의 2%(용적) 용액은 톨루엔 654mL 및 MeCN 13.3mL를 사용하여 제조된다. 기계적 교반기가 장착된 2L 용량의 3구 플라스크에 5분 동안 용액을 통해 질소 스트림을 통과시켜 위의 용액 617ml를 탈기시킨다. 페닐하이드라진 및 TFA를 탈기시키면서 이 혼합물에 가한다.
CBZ-알데히드 5를 위에서 제조되는 용액의 나머지(5mL)에 용해시키고 부가 깔때기에서 용액을 통해 질소를 버블링하여 탈기시킨다. 플라스크에서 용액을 35℃로 가열시키고 알데히드 용액을 2시간에 걸쳐 페닐하이드라진-TFA에 서서히 가한다. 혼합물을 35℃에서 16시간 동안 숙성시킨다.
HPLC 조건: 50℃에서 유속 1mL/min 및 220nm에서 검출되는 듀폰 조르박스 25cm RXC8 칼럼; 이소크래틱 55%의 MeCN, 0.1%의 수성 H3PO445%. 16시간 숙성시킨 후 전형적인 HPCL 특징:
체류 시간(분) 면적% 물질
1.6 0.1-0.5 화학식 6의 페닐하이드라진
4.1 <0.1 이량체 21
4.7 <0.1 화학식 5의 알데히드
5.0 NA 화학식 9의 스피로인돌린
6.3 NA 톨루엔
6.9 97 화학식 8의 스피로인돌레닌
10.3 <0.2 화학식 7의 페닐하이드라존
2-3tot 기타 불순물<각각 0.2%
혼합물을 -10℃로 냉각시키고 MeOH를 사한다. 온도가 -2℃를 넘지않도록 주의하면서 톨루엔 20mL중 수소화붕소나트륨의 현탁액을 30분에 걸쳐 소량 분획(1mL)으로 가한다.
면적% 물질
0.1-1 화학식 6의 페닐하이드라진
85-90 화학식 9의 CBZ-스피로인돌린
<0.1 화학식 8의 CBZ-스피로인돌레닌
10-15tot 기타 불순물(<각각 3%)
온도를 1시간에 걸쳐 10℃로 상승시키고 6%의 수성 암모니아(200mL)를 가한다. 혼합물을 10분 동안 교반하고 추가로 10분 동안 고정시키고 낮은 수성상을 제거한다. 아세토니트릴(20mL) 및 MeOH(20mL)를 유기상에 가하고 이를 15%의 염수 150mL로 세척한다. 유기상은 화학식 9의 CBZ-스피로인돌린의 분석수율 92%를 함유하는 것을 나타낸다.
단계 2:CBZ-스피로인돌-메탄설폰아미드(1)
재료:
CBZ-스피로인돌린(9)(MW=322.51) (0.184mol)
메탄설포닐 클로라이드 21.1g(0.184mol)
DIEA(KF=150mg/L) 29.7g, 40.1mL(0.230mol)
THF(KF=41mg/L) 150mL
위의 단계 1로부터의 화학식 9의 CBZ-스피로인돌린 조악한 용액을 잔사가 250g 잔류할 때까지 1L 용량의 3구 플라스크(60 내지 70℃ 150 내지 200Torr)에서 농축시킨다. THF 및 DIEA를 가하고, 잔류하는 균일한 용액을 0℃로 냉각시킨다. 125mL의 적가 깔때기를 메탄설포닐 클로라이드 및 THF 50mL로 충전시킨다. THF중 MsCl의 용액을 2시간에 걸쳐 온도를 0 내지 4℃로 유지하면서 반응 혼합물에 가하고 혼합물을 5 내지 8℃에서 2시간 동안 숙성시킨다. 첨가반응은 약간 흡열반응이다. DIEA-하이드로클로라이드로 추정되는 백색 침전물이 첨가하는 동안 형성된다. HPLC 조건은 위에서와 같다. HPLC 분석은 첨가를 종결한(화학식 9의 화합물은 검출되지 않는다) 1시간 후 반응이 완결되고 분석 수율은 화학식 9의 화합물로부터 94%임을 나타낸다. 체류 시간: 화학식 1의 화합물=7.8분. 2시간 숙성 후 반응 혼합물의 전형적인 HPLC 특성:
면적% 물질
<0.1 화학식 9의 CBZ-스피로인돌린
90-92 화학식 1의 CBZ-설폰아미드
8-10tot 기타 불순물(<각각 2%)
혼합물을 20℃로 가온하고, 1M의 수성 HCl 200mL를 가한다. 혼합물을 50℃로 가온하고 수성상을 분리한다. 유기상을 연속적으로 물 100mL, 5%의 수성 중탄산나트륨 100mL 및 물 100mL로 세척한다. 유기상을 기계적 교반 및 증류를 위해 장착된 1L 용량의 3구 플라스크에 이동시킨다. 증류물질 150mL를 수집할 때까지 혼합물(약 400mL)을 대기압에서 증류한다. 헤드의 온도는 107℃에 달하고 포트온도는 110℃이다. 연속적으로 n-프로판올을 가하여 포트내에서 일정한 용적(약 350mL)을 유지하면서 계속해서 증류시킨다. 전체 n-PrOH 525mL를 가하고 전체 증류물 800mL가 수집되는 경우 증류를 중단한다.
용매를 변경하면서 헤드와 포트 둘 다의 온도를 94로부터 98℃로 상승시킨다. 톨루엔 및 n-PrOH는 97.2℃에서 공비점을 형성하며 톨루엔 47.5% 및 n-PrOH 52.5%로 이루어진다. 혼합물을 점차 20℃로 3시간에 걸쳐 냉각시키고 2시간 동안 숙성한다. 모액은 톨루엔 2% 및 설폰아미드 4mg/mL를 함유하는 것으로 나타난다. 톨루엔 및 n-PrOH의 다양한 혼합물중 설폰아미드의 용해도는 HPLC 분석에 의해 측정된다.
n-PrOH중의 톨루엔(%) 1의 용해도(mg/mL)
0 2.36
5 3.02
10 4.02
20 7.51
25 10.3
결정성 슬러리를 여과하고 n-PrOH 3 x 100mL으로 세척한다. 생성물을 진공오븐 속에서 50℃에서 질소 블리딩하에 16시간 동안 건조시켜 불순물이 93.5중량%인 그을린 고체로서 화학식 6의 화합물을 65.5g(알데히드 5로부터 82%) 수득한다.
고체의 전형적인 HPLC 특성:
면적% 물질
<0.1 화학식 9의 CBZ-스피로인돌린
>99 화학식 1의 CBZ-설폰아미드
<1tot 기타 불순물(<각각 0.2%)
추가의 정제를 위해 n-PrOH의 샘플 40.0g, 결정화된 설폰아미드를 EtOAc 134mL에 60℃에서 용해시키고 다르코 G-60 카본 8.0g으로 1시간 동안 60℃에서 처리한다. 솔카 플록 2.0g을 가한 후, 슬러리를 솔카 플록 4.0g의 패드를 통해 여과하고, 패드를 60℃에서 EtOAc 90mL로 세척한다. 탄소를 첨가하기 전에 용액은 갈색이다. 플러싱하지 않고 양호하게 여과를 수행하여 금색의 황색 여액을 수득한다. 잔사가 100g(100mL) 잔류할 때까지 여액을 500mL 용량의 플라스크(포트온도 80 내지 85℃)에서 대기압하에 증류시킨다. 이 용액을 35℃로 3시간에 걸쳐 냉각시킨다. 1시간 동안 사이클로헥산 116mL를 35℃에서 교반하면서 가한다. 혼합물을 1시간에 걸쳐 20℃로 냉각시키고 12시간 동안 20℃에서 숙성시킨다. 35℃에서 대부분의 설폰아미드를 결정화시키고 혼합물을 농축시킨다. 20℃에서 사이클로헥산을 가함으로써 교반이 어려워진다. 숙성 기간 후 상청액은 화학식 1의 화합물을 2.5mg/g 함유하는 것을 나타낸다. 결정성 슬러리를 여과하고 케이크를 2:1의 사이클로헥산-EtOAc 77mL 및 사이클로헥산 2 x 77mL로 세척한다. 생성물을 진공오븐 속에서 50℃에서 질소를 블리딩하면서 16시간 동안 건조시켜 백색 결정성 고체(조악한 1로부터 수율 85%, 순도 99.9중량% 이상의 화학식 5의 화합물로부터 70%)로서 화학식 1의 화합물(MW=400.3)을 34.2g 수득한다.
실시예 11
스피로인돌린-메탄설폰아미드의 HCl 염(1a)
재료:
CBZ-스피로인돌린-메탄설폰아미드(1) 941g(2.35mol)
펄만(Perlman)의 촉매 20% Pd(OH)2/C 188g
THF 8L
MeOH 7L
촉매를 MeOH 7L에 현탁시키고 5gal 용량의 오토클레이브에 이동시키고 THF 8L중 화학식 1의 화합물의 용액을 가한다. 혼합물을 25℃에서 H280psi에서 수소화시킨다. 2.5시간 동안 온도를 30분에 걸쳐 35℃로 상승시킨다.
HPLC 분석은 Cbz-스피로인돌린-메탄설폰아미드의 완전 소모를 나타낸다. HPLC 조건: 유속 1.5mL/min 및 254nm에서 검출되는 듀폰 조르박스 25cm RXC8 칼럼; 그래디언트 스케쥴:
시간(분) 0.1%의 수성 H 3 PO 4 :MeCN
0 70:30
3 70:30
12 20:80
25 20:80
체류 시간: 스리포인돌린=7.6분
Cbz-스피로인돌린-메탄설폰아미드=13.6분.
혼합물을 질소 퍼징하고 촉매를 가온하면서 솔카-플록을 통해 여과시켜 제거한다. 촉매를 THF 4L 및 MeOH 2L로 세척한다. 연황색 여액을 10mbar 및 25℃ 미만에서 진한 오일로 농축시킨다. 용매 변경은 EtOAc 1L중에 서서히 블리딩하고 부수물로 건조시킴으로써 완결된다. 잔사를 단단한 비백색 물질로 고체화한다. MeOH(1.5L)를 가하고 혼합물을 70℃로 가열하여 균일한 용액을 수득한다. 70℃를 유지하는 용액에 20℃의 EtOAc 10.5L를 가한다. 온도를 40℃로 저하시키고 혼합물은 균일하게 잔류한다.
연속적인 실험은 MeOH에 대해 MeOH-THF 여액을 용매 변경하고, 목적하는 용적으로 농축시킨 다음 EtOAc를 가하는 것이 더욱 편리함을 나타낸다. 이로써 EtOAc 용액의 농축에 따른 잔사의 고체화를 방지한다.
대략 동일한 용적의 질소로 희석한 염화수소를 용액에 부어 넣는다. 온도를 15분에 걸쳐 60℃로 승온시키고 염화수소 염의 백색 침전물을 형성한다. 질소로 HCl을 희석시켜 반응 혼합물이 흡수되는 것을 방지하고 이는 필요하지 않을 수도 있다.
혼합물을 얼음 욕 속에서 냉각시키고 염화수소를 1시간 동안 계속해서 가한다. 온도를 점차 20℃로 저하시킨다. 온도를 10℃로 저하시키면서 현탁액을 2시간 동안 숙성시킨다. 결정성 생성물을 여과에 의해 분리하고 필터 케이크를 EtOAc 3L로 세척한다. 이를 진공 오븐 속에서 35℃에서 건조시켜 HPLC 분석에 의한 순도가 99.5면적% 이상인 비백색 결정성 고체로서 화학식 1a의 표제 생성물을 1.18kg(86%) 수득한다. HPLC 조건: 유속 1.5mL/min 및 230nm에서 검출되는 듀폰트 조르박스 25cm RXC8 칼럼; 이소크래틱 35% MeCN, 0.1%의 수성 아세트산암모늄 65%. 체류 시간: 화학식 1a의 화합물=5.4분.
실시예 12
화학식 1b
스피로인돌린-메틴설폰아미드(유리염기 형태)(1b)
화학식 1b(유리염기)의 화합물 4.67g을 함유하는 Cbz-가수소분해물로부터 여액의 분액 250mL를 약 10mL로 농축시킨다. 잔사를 EtOAc 20mL에 용해시키고 용액을 약 10mL로 재농축시킨다. 이를 한번 더 반복하고 잔사에 EtOAc 10mL를 가한다. 결정성 침전물이 형성되기 시작한다. MTBE(20mL)를 한번에 가한다. 추가의 결정성 고체가 침전되지만 상청액은 정치시키는 경우 침전되지 않는 여전히 대부분의 양의 용해된 생성물을 함유한다. 헥산(70mL)을 2시간에 걸쳐 격렬히 교반하면서 혼합물에 적가한다. 헥산을 서서히 가하여 아민의 오일제거를 방지할 필요가 있다.
교반되는 혼합물을 1시간 동안 숙성시키고 여과시킨다. 필터 케이크를 1:1의 MTBE-헥산 20mL에 이어서 헥산 20mL로 세척한다. 생성물을 질소 스트림하에 건조시켜 순도가 99.5면적% 이상인 비백색 결정성 고체로서 화학식 1b의 표제 생성물을 3.86g(82%) 수득한다. HPLC 조건: 유속 1.5mL/min 및 230nm에서 검출되는 듀폰 조르박스 25cm RXC8 칼럼; 이소크래틱 35% MeCN, 0.1%의 수성 아세트산암모늄 65%. 체류 시간: 화학식 1a의 화합물=5.4분.
실시예 13A
화학식 1b
스피로인돌린-메틴설폰아미드(유리염기 형태)(1b)
재료:
CBZ-스피로인돌린-메탄설폰아미드(1) 833.5g(2.08mol)
Pd(OH)2/C(Pd(OH)220중량%) 124.5(15%)
THF 6.5L
MeOH 19.5L
NH4OH(진한) 60mL
수소화반응은 장치상의 한계로 인해 3회 수행한다; 이 과정을 단일 수행으로 본다. 화학식 1의 CBZ-스피로인돌린 설폰아미드를 THF(6.5L, KF=53μg/μL)에 용해시키고 MeOH(KF=18μg/mL, 4L)를 가한 다음 촉매를 가하고 슬러리를 5gal 용량의 오토클레이브에 이동시킨다. 세정을 위해 남아있는 MeOH(2.5L)를 사용한다. 혼합물을 40℃까지 50psi에서 24시간 동안 가열한다. 촉매 첨가량 및 반응시간은 화학식 1의 출발물질의 순도의 함유이다. 이 물질은 특이하게 촉매 15%이상을 필요로 하고 긴 반응시간을 필요로 한다. 스피로인돌린의 순수한 배취는 단지 촉매 5% 및 4 내지 6시간의 반응시간을 필요로 한다.
완결되면(LC에 의해 <0.1 A% 화학식 1의 화합물) 혼합물을 솔카 플록을 통해 여과하고 탄소 케이크는 NH4OH(0.5%, 60mL)를 함유하는 MeOH(13L)로 세척한다. 합한 여액(분석에 의하면 화학식 1b의 스피로인돌린 아민은 1587g을 나타낸다)을 진공중에 농축시키고 제조되는 고체를 톨루엔:THF(3:1) 40L 및 0.5N의 NaOH(18L) 사이에 분재한다. 층이 용이하게 분리되었음에도 불구하고 무거운 침전물은 수성층으로 나타날 수 있다. 수성 현탁액을 CH2Cl2(15L)로 추출시킨다. 수성층 및 유기층을 서서히 분리한다. CH2Cl2를 가하기 전에 THF를 충분한 NaCl과 함께 수성 층에 가하여 층을 포화시킨다. 그러나 생성물은 증류되지 않으므로 CH2Cl2를 사용해야 한다.
합한 톨루엔, THF 및 CH2Cl2층을 배취 농축기에서 배합하고 농축시킨다. 잔사를 CH3CN 7L로 플러싱한다. 최종적으로 CH3CN 10L를 가하고 용액을 N2대기하에 밤새도록 정치시킨다.
실시예 13B
화학식 1b
스피로인돌린-메탄설폰아미드(유리염기 형태)(1b)
재료:
CBZ-스피로인돌린-메탄설폰아미드(1) 3kg(7.49mol)
다르코 G-60 600g
에틸 아세테이트 36L
무수 에탄올 189L
10%의 Pd/C 450g
암모니아 용액 500ml
솔카 플록 2.5kg
이소프로필 아세테이트 65L
에틸 아세테이트(9L)중 화학식 1d의 CBZ-스피로인돌린(1kg) 및 다르코 G-60(200g)의 혼합물을 교반하고 질소대기하에 60 내지 65℃에서 8시간 동안 가열한다. 다르코는 60 내지 65℃에서 여과에 의해 제거하고 고체는 뜨거운 에틸 아세테이트(3L)로 세척하고 여과와 세척을 조합한다. LC wt/wt 분석에 의해 다르코에 대해 무시해도 좋을 손실을 확인한다. 에틸 아세테이트 용액을 진공중에 20L 부치(Buchi) 장치를 사용하여 무수물로 증발시키고 무수 에탄올(2 x 5L)로 플러싱한다. 이 물질을 65 내지 70℃로 가온된 무수 에탄올(8L)에서 슬러리화하고 20L 오토클레이브에 위치시킨다. 배취를 무수 에탄올(1L)로 세정한다. 무수 에탄올(750ml) 중 목탄(75g, 7.5중량%)상의 10% 백금의 슬러리를 오토클레이브에 가하고 추가의 무수 에탄올(250ml) 분획으로 세정한다.
배취를 격렬히 교반하면서 수소압력 40psi에서 3시간 동안 65℃에서 수소화하고 목탄(75g, 7.5중량%)상의 10% 백금의 제2 분획을 가하고 배취를 추가로 2시간 동안 수소화시키고 밤새도록 밀폐시킨다. 배취(60 내지 65℃의 여전히 뜨거운)를 20L 부치 장치에 이동시키고 진공중에 탈기시켜 "공급 및 블리딩" 무수 에탄올(전체 18L)에 의해 포름산을 제거한다.
이 과정을 2회 이상 반복하고 3개의 배취를 10gal 용량의 유리 라이닝된 용기에서 합하고 합한 배취를 다시 무수 에탄올(2 x 10L)을 가하고 증류(진공 중에)시켜 탈기시킨다. 솔카 플록(0.5kg)을 배취에 가하고 에탄올(10L)로 세정한다. 에스트렐라(Estrella) 필터를 에탄올(20L)중의 슬러리로서 솔카플록(2kg)과 합한다. 제조되는 혼합물을 60 내지 65℃로 가온시키고 이 온도에서 2개의 타르화 스테인레스 강철 빈에 펌프를 사용하는 가열된 필터를 통해 이동시킨다. 최초의 용기, 필터, 펌프 및 라인은 무수 에탄올(25L)중의 수성 암모니아(500ml)의 뜨거운(60 내지 65℃) 혼합물로 세정한다. 여액 및 세척액을 2개의 스테인레스 강철 빈에서 합한다.
배취를 10μ 카트리지를 함유하는 인-라인 필터를 사용하는 용기에 이동시키고 진공중에 낮은 벌크(15L 이하)로 농축시킨다. 배취의 용적을 15L 이하로 유지하면서 3배의 배취용적의 이소프로필 아세테이트(전체 45L)의 "공급 및 블리딩"에 의해 에탄올을 이소프로필 아세테이트로 대체시킨다. 완결되는 경우 용매의 변경은 GC에 의해 잔류 에탄올 1%미만을 함유한다. 배취를 33L 이하의 이소프로필 아세테이트(20L)를 가하여 희석시키고, 이소프로필 아세테이트중 스피로인돌린-아민 1b(LC 분석에 의해 1.855kg)의 이 용액을 공정의 다음단계에 사용한다.
실시예 14
화학식 11
Boc-O-벤질세린 스피로인돌린(11)
재료:
스피로인돌린-아민(화학식 1b) 1587g(5.966mol)
아미노산 1938g(6.563mol)
화학식 10
DCC 1334.5g(6.563mol)
HOBT 884g(6.563mol)
CH3CN 25L
0.5N의 NaOH 18L
NaHCO3포화물 18L
iPrOAc 28L
CH3CN 또는 iPrOAc:H2O(25L)중 화학식 1b의 스피로인돌린-아민을 주위온도에서 N2하에 연속적으로 고체로서 HOBT(884g; 1.1당량), 액체로서 DCC(1334.5g, 1.1당량)으로 처리하고(뜨거운 물 속에서 60℃에서 약 1시간 동안 가열) 최종적으로 고체로서 화학식 10의 아미노산(1938g)으로 처리한다. 혼합물을 3시간 동안 교반하면 DCU의 무거운 침전물이 발생하고 LC 분석에 의해 화학식 1b의 아민 약 0.5 A%가 잔류함을 나타낸다. IPAc(9L)를 가하고, 슬러리를 솔카 플록을 통해 여과시키고 케이크를 IPAc(19L)로 세척한다. 합한 유기용액을 연속적으로 0.5N의 NaOH(18L), 0.5N의 HCl(18L) 및 포화 NaHCO3(18L)로 세척한다. 이때 최종적으로 물로 세척하면 유액을 형성하고 제거된다.
유기층을 진공중에 농축시키고 잔사를 MeOH 또는 EtOH중에 용해시킨다(최종용적10L). 분석 수율은 3026g(89%)이다.
카보닐디이미다졸과 같은 또 다른 펩티드 커플링제를 사용하거나 2급-부틸 카보네이트와 같은 혼합된 무수물을 형성하여 선행 화합물의 경우에 있어서 에피머화도가 높은 화학식 11의 화합물 및/또는 화학식 14의 화합물의 불량한 수율을 수득한다. 기타의 펩티드 커플링제는 매우 고가이다.
실시예 14B
화학식 11
Boc-O-벤질세린 스피로인돌린(11)
재료:
스피로인돌린-아민(화학식 1b) 1.855kg(6.96mol)
이소프로필 아세테이트 29L
디사이클로헥실카보디이미드(DCC) 1.58kg(7.65mol)
1-하이드록시벤조트리아졸(HOBt) 1.03kg(7.62mol)
N-Boc-O-벤질-D-세린 2.26kg(7.65mol)
1M의 수성 수산화나트륨 26L
0.5M의 수성 염산 26L
포화된 수성 탄산수소나트륨 26L
무수 에탄올 50L
물(20L)을 반응용기 속에서 이소프로필 아세테이트(33L)중 화학식 1b의 스피로인돌린-아민(1.855kg)의 교반된 용액에 가한다. 다음의 화학물질을 연속적으로 실온에서 질소 대기하에 가한다: DCC(1.58kg, 1.1당량), HOBt(1.03kg, 1.1당량) 및 최종적으로 N-Boc-O-벤질-D-세린(2.26kg, 1.1당량). 제제를 이소프로필 아세테이트(7L)로 세척한다. 배취를 실온에서 질소대기하에 5시간 동안 교반하면 LC는 생성물/출발물질의 비 99.4/0.6을 나타낸다. 이어서 혼합물을 직물 및 카드판을 사용하고 기타의 용기 속으로의 펌프를 사용하는 에스텔라 필터를 통해 여과시킨다. 용기를 이소프로필 아세테이트(22L)로 세정하고 이를 필터, 펌프 및 라인을 수집 용기 속으로 세정하기 위해 사용한다. 용기 속에서 2-상 혼합물을 10분 동안 교반하고 15분 동안 고정시킨다. 낮은 수성 층을 분리시키고 유기용액을 실온에서 밤새도록 정치시킨다.
다음날, 유기용액을 1M의 수산화나트륨 수용액(26L)에 이어서 0.5M의 수성 염산(26L) 및 최종적으로 포화된 탄산수소나트륨 수용액(26L)으로 세척한다. LC분석은 분석수율 3.787kg, 출발하는 화학식 1의 CBZ-스피로인돌의 7.49mol(3kg)으로부터 전체적인 93%의 수율을 나타낸다. 배취를 진공중에 농축시켜(내부온도=13-15℃, 재킷온도=40℃ 진공=29") 낮은 벌크(-15L) 및 용적을 -15L로 유지하면서 에탄올(50L)을 "공급 및 블리딩"함으로써 에탄올로 용매 변경시킨다. GC는 1% 미만의 이소프로필 아세테이트가 잔류함을 나타낸다. 이러한 고체를 공정의 다음 단계를 위해 사용한다.
실시예 15A
화학식 12
O-벤질세린 스피로인돌린(유리염기 형태)(12)
재료:
Boc-O-벤질세린 스피로인돌린(11) 3026g(5.57mol)
메탄 설폰산(MsOH) 1.16L(17.9mol)
MeOH 10L
iPrOAc 24L
0.5N의 NaOH 35L
MeOH(또는 EtOH) 10L중 화학식 11의 Boc-O-벤질세린 스피로인돌린을 약 30 내지 40분(초기온도 16℃, 최종온도 28℃)에 걸쳐 첨가된 순수한 MsOH(1.16L)로 처리한다. 암적색 용액을 N2하에 밤새도록 숙성시킨다. 이어서 혼합물을 iPrOAc 24L 및 0.5N의 NaOH 35L을 함유하는 100L 추출기에 펌핑한다. 수성층의 pH는 7이다. NaOH(6M)를 pH가 10.5 이상이 될때까지 가한다. pH가 증가함에 따라 색상이 적색으로부터 황색으로 변한다. 층을 분리하고 유기층(24L)을 NMR에 의해 분석하여 iPrOAc중 MeOH 13몰%를 함유함을 나타낸다[5용적%]. LC 분석 2.48kg.
실시예 15B
화학식 12
O-벤질세린 스피로인돌린(유리염기 형태)(12)
재료:
Boc-O-벤질세린 스피로인돌린(11) 3.787kg(6.96mol)
메탄설폰산 2.006kg(20.87mol)
이소프로필 아세테이트 38L
1M의 수성 수산화나트륨 16L
50%의 수성 수산화나트륨 1.6L
메탄설폰산(2.006kg, 1.355L, 3당량 이하)을 반응 용기 속에서 에탄올(전체용적 15L 이하)중 화학식 11의 Boc-O-벤질세린 스피로인돌린의 교반된 용액에 가한다. 배취를 35 내지 40℃로 가온시킨다. 7시간 후, LC는 출발물질이 없음을 나타내고 반응을 밤새도록 실온으로 냉각시킨다. 다음날, 물(44L)을 배취에 교반하면서 가한다. 배취를 -5℃로 냉각시키고 30분 동안 교반하고 인-라인 필터(10μ의 카트리지가 있는)를 통해 빈으로 여과된다. 배취를 용기 속으로 흡인시킨다. 물(10L)은 용기 및 라인을 빈 속에서 세정하기 위해 사용되고 이는 용기 속으로 다시 세정되기 위해 사용된다. 이소프로필 아세테이트(38L)에 이어서 1M의 수성 수산화나트륨(16L)을 가한다. 배취를 10 내지 15℃로 냉각시키고 낮은 수성 층의 pH를 7이하로 하고 50%의 수산화나트륨 수용액(1.6L)을 가한다(pH 10 초과). 배취를 10 내지 15℃에서 25분 동안 교반하고 10 내지 15분 동안 고정시킨다. 낮은 수성 층을 분리시킨다(78.1kg). LC 분석은 수성 액체중에 12(이론치의 0.85%)를 28.4g 함유됨을 나타낸다. 유기용액의 용적=51L. LC 분석은 화학식 1의 CBZ-스피로인돌 설폰아미드 3kg, 7.49mol로부터 전체적인 수율 92% 3.057kg을 낳는다. 이 용액은 다음단계를 위해 사용된다.
실시예 16A
화학식 14
Boc-아미노이소부티릴 O-벤질세린 스피로인돌(14)
재료:
스피로인돌린-아민(화학식 12) 2481g(5.57mol)
아미노산 펩티드 1247.1g(6.16mol)
화학식 13
DCC 1266.7g(6.16mol)
HOBT 827g(6.16mol)
IPAc 52L
H2O 37L
0.5N의 NaOH 36L
0.5N의 HCl 36L
NaHCO3포화물 36L
IPAc중 화학식 12의 아민 용액을 전체용적 39L로 IPAc를 사용하여 희석시키고 H2O 37L를 가한다. 이상 혼합물을 고체로서 HOBT (827g), 용융물로서 DCC(1266.7g) 및 화학식 13의 아미노산으로 질소하에 주위온도에서 처리한다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하면 LC 분석은 출발 물질 12(0.3 A% 미만)의 부재를 나타낸다. 혼합물을 솔카 플록을 통해 여과시키고 고체를 13L의 IPAc로 세척한다. 물질을 이상 혼합물로서 이 온도에서 밤새도록 저장한다.
혼합물을 100L의 추출기에 이동시키고 수성층을 분리하고 유기층을 연속적으로 0.5N의 NaOH 36L, 0.5N의 HCl 및 포화된 NaHCO3로 세척한다. 분석수율 3160g(스피로인돌 81%로부터 용적 측정 오차 ±5%). 용액을 적은 용적으로 농축시키고 에탄올(2 x 4L)로 플러싱한다. 목적하는 경우, 화학식 14의 중간 화합물을 물을 가하여 분리시켜 결정화시킨다.
카보닐디이미다졸과 같은 또 다른 펩티드 커플링제를 사용하거나 2급-부틸 카보네이트와 같은 혼합된 무수물을 형성하여 에피머화도가 높은 화학식 14의 화합물의 불량한 수율을 수득한다. 기타의 펩티드 커플링제는 매우 고가이다.
실시예 16B
화학식 14
Boc-아미조이소부티릴 O-벤질세린 스피로인돌린(14)
재료:
스피로인돌린 아민(12) 3.058kg(6.89mol)
디사이클로헥실카보디이미드(DCC) 1.56kg(7.56mol)
1-하이드록시벤조트리아졸(HOBt) 1.02kg(7.55mol)
Boc-2-아미노이소부티르산(13) 1.54kg(7.58mol)
이소프로필 아세테이트 32L
1M의 수성 수산화나트륨 38L
0.5M의 수성 염산 38L
포화된 수성 탄산수소나트륨 38L
무수 에탄올 45L
물(49L)을 반응용기 속에서 실온 및 질소대기 하에 이소프로필 아세테이트(전체 용적 51L 이하)중 화학식 12의 스피로인돌린-아민(3.057kg)의 교반된 용액에 가한다. 다음의 화학물질을 연속적으로 실온에서 질소 대기하에 가한다: DCC(1.56kg, 1.1당량 이하), HOBt(1.02kg, 1.1당량 이하) 및 최종적으로 화학식 13의 N-Boc-2-아미노이소부티르산(1.54kg, 1.1당량 이하). 혼합물을 실온에서 2시간 동안 격렬히 교반하면 LC는 반응이 완결됨을 나타낸다. 혼합물을 펌프를 사용하는 에스텔라 필터를 통해 또 다른 용기에 대해 여과시킨다. 이소프로필 아세테이트(22L)를 사용하여 용기, 필터, 펌프 및 라인을 수집용기 속에서 세정한다. 2상 혼합물을 5분 동안 교반하고 층을 분리시킨다. 낮은 수성층을 사고 없이 분리시킨다(수성 액체의 중량=51.1kg). 유기용액을 연속적으로 1M의 수성 수산화나트륨(38L), 0.5M의 수성 염산(38L) 및 최종적으로 포화된 수성 탄산수소나트륨(38L)으로 세척한다.
이어서 유기용액을 펌프를 사용하여 인-라인 필터(10μ의 카트리지 함유)를 통해 용매를 에탄올로 변경하기 위해 또 다른 용기에 이동시킨다. 용기를 이소프로필 아세테이트(10L)로 세정하고 이를 사용하여 펌프, 필터 및 라인을 수집 용기 속에서 세정한다. 여액 및 세척액을 합한다. 전체용적=75L(딥스틱에 의해). LC 분석은 화학식 14의 Boc-아미노이소부티릴 O-벤질세린 스피로인돌린 4.395kg, 즉 출발하는 화학식 1의 CBZ-스피로인돌린 설폰아미드 7.49mol로부터 전체적으로 93%를 제공한다.
배취를 진공중에 낮은 벌크(15L 이하)로 농축시키고 이소프로필 아세테이트를 무수 에탄올(전체 45L)의 "공급 및 블리딩"에 의해 에탄올로 변경시킨다. 용매 변경의 종결시에 GC는 이소프로필 아세테이트가 1% 미만 잔류하는 것을 나타낸다. 14를 4.395kg 함유하는 이 용액(25L)을 다음 단계를 위해 사용한다. 목적하는 경우, 화학식 14의 중간물질 화합물을 물을 가하여 분리함으로써 결정화시킬 수 있다.
실시예 17A
화학식 15
아미노이소부티릴 O-벤질세린 스피로인돌린(15)
재료:
Boc 스피로인돌린(14) 3160g(5.03mol)
메탄설폰산(MsOH) 979mL(15.1mol)
EtOH 6.2L
H2O 30L
1N의 NaOH 11L
EtOAc 26L
다르코 60 활성탄 1Kg
화학식 14의 Boc 스피로인돌린을 EtOH 6.2L에 용해시키고 MsOH(979mL)로 처리한다. 온도를 20으로부터 30℃로 상승시키고 반응을 밤새도록 진행시킨다. 20℃에서 12시간 후, 화학식 15의 출발물질은 A% 잔류하여 혼합물을 35℃에서 6시간 동안 가열한다. 완결되면(<0.1 A% 화학식 14의 화합물) 반응을 20℃로 냉각시키고 H2O 30L을 가하고 용액을 폴리프로필렌 필터를 갖는 유리 깔때기를 통해 여과하여 잔류하는 DCU를 여과 제거한다. 혼합물을 100L 추출기에 이동시키고 EtOAc 26L을 가한다. 수성층을 차가운 1N의 NaOH(11L) 및 50%의 NaOH 1L을 가하여 염기성화시킨다. 온도를 14℃ 미만으로 유지하기 위해 얼음을 가할 필요가 있다. 이보다 높은 온도는 심각한 유액 문제를 유발한다.
유기층을 50℃에서 KF가 1000μg/mL로 될 때까지 Hg DIR 21"에서 50℃에서 증류시킨다. 더욱 낮은 KF는 더욱 효율적인 탄소 처리 및 염 형성단계에서 양호한 회수를 유발한다. 160μg/mL의 KF는 700g의 스케일에서 성취된다. 용액을 에틸 아세테이트로 전체용적 31L(LC 분석 2.40kg)이 되도록 희석한다. 활성탄(다르코 G-60)을 가하고 혼합물을 24시간 동안 교반한다. 혼합물을 솔카 플록을 통해 여과하고 필터 케이크를 에틸 아세테이트(16L)로 세척한다. 분석 2.34Kg.
실시예 17B
화학식 15
아미노이소부티릴 O-벤질세린 스피로인돌린(15)
재료:
Boc 스피로인돌린(14) 4.395kg(6.99mol)
메탄설폰산 2.017kg(20.99mol)
에틸 아세테이트 185L
1M의 수성 수산화나트륨 16L
50%의 수성 수산화나트륨 2.6L
다르코 G-60 900g
솔코 플록 2.5kg
메탄설폰산(2.017kg, 1.36L, 3당량 이하)을 반응 용기 속에서 에탄올(전체용적 25L 이하)중 화학식 14의 Boc 스피로인돌린(4.395kg)의 교반된 용액에 가한다. 배취를 35 내지 40℃로 가온시키고 밤새도록 교반한다. 다음날, 배취는 출발물질을 1.1 A% 이하 함유하고 반응을 추가로 4시간 동안 지속시킨 다음, LC는 생성물/출발물질의 비율이 99.6/0.4임을 나타낸다. 배취를 진공중에서 15L로 농축시키고 물(44L)로 희석시킨다. 배취를 5℃로 냉각시키고 30분 동안 교반하고 소량의 잔류 DCU를 제거하기 위해 또 다른 용기에 대해 펌프를 사용하는 인-라인 필터(10μ의 카트리지가 있는)를 통해 빈으로 여과된다.
용기, 펌프, 필터 및 라인을 물(10L)로 세정하고 이를 용기에 가한다. 에틸 아세테이트(36L)를 용기에 가하고 교반되는 혼합물을 10℃로 냉각시킨다. 차가운(5 내지 10℃) 1M의 수산화나트륨 수용액(16L) 및 차가운(5 내지 10℃) 50%의 수산화나트륨 수용액(2.6L)의 용액을 10℃에서 가하고 온도를 14℃로 승온시킨다. 제조되는 혼합물을 14℃ 미만에서 15분 동안 교반하고 낮은 수성층을 분리한다.
배취를 20L 이하의 용적으로 진공중에 농축시키고 용적을 20L 이하로 유지하면서 에틸 아세테이트(35L) 및 에탄올(5L)의 혼합물을 공급한다. 이러한 증류의 종결시 KF는 9160mgml-1이다. 배취를 에틸 아세테이트(전체 40L)의 "공급 및 블리딩"에 의해 에틸 아세테이트로 변경시킨다. 이러한 증류의 종결시 KF는 446mgml-1이다. 배취를 에틸 아세테이트(10L)로 희석시킨다.
다르코 G-60(900g)을 불투명 혼합물에 가한다. 이를 에틸 아세테이트(6L)을 사용하여 세정한다. 이 혼합물을 실온에서 밤새도록 교반한다. 다음날 솔카 플록(0.5kg)을 용기 속에서 교반되는 배취에 가하고 솔카 플록(2.0kg)을 미량의 에틸 아세테이트 속에서 교반하고 에스텔라 필터에 가한다. 과량의 용매를 10μ 카트리지를 함유하는 스파클러 인-라인 필터를 통해 펌핑한다. 슬러리를 용기로부터 펌프를 사용하는 필터를 통해 및 또다른 필터 2 x 40L 스테인레스 강철 빈을 통해 전달한다. 육안 조사로 액체가 투명함을 나타낸다. 용기를 에틸 아세테이트(22L)로 세정하고 이를 사용하여 스테인레스 강철 캔에 대해 위에서 요약한 경로를 통해 세정한다. 두 캔의 내용물을 반응 용기 속으로 이동시키고 용액을 완전히 혼합한다.
배취(58L)의 KF는 2950mgml-1이고 진공중에 20 내지 25L 용적으로 농축시켜 재건조시킨다. 배취를 에틸 아세테이트(25L)를 가함으로써 46L의 용적(딥스틱)으로 희석시킨다. KF는 363mgml-1이다. 배취를 에틸 아세테이트(17L)를 가함으로써 62L 용적으로 희석시키고 공정의 최종 단계를 위해 사용된다.
실시예 18A
화학식 16
스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸-옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트(16)
재료:
아민(15) 2340g(4.43mol)
메탄설폰산(MsOH) 316mL(4.88mol)
EtOAc 60L
EtOH 4.8L
EtOAc중 EtOH 8% 20L
선행 단계로부터의 화학식 15의 화합물의 용액은 에틸 아세테이트 60L로 조절되고EtOH(4.8L)를 가한다. MsOH(316mL)를 45℃에서 EtOAc 3L에 가한다. 심적색의 균일한 용액을 표제 화합물 형태 I 시드(유리아민의 중량을 기준으로 하여 씨드 10%가 사용된다) 496g에 가한다. 온도를 약 48℃로 상승시키고 반응을 52℃에서 1.5시간 동안 숙성시킨다. 분석은 표제 화합물(형태 I)로의 완전 전환을 나타낸다(10% 미만의 씨드의 장시간 숙성(3시간 이상)이 요구된다). 슬러리를 20℃로 밤새도록 냉각시키고 N2하에 원심분리하여 여과한다. 케이크를 EtOAc중 8%의 EtOH 20L로 세척한다. N2는 흡습성 결정이 매우 흡습되기 쉽기 때문에 여과하는 동안 필수적이다. 배취를 진공하에 35℃에서 건조시켜 표제 화합물(형태 I)을 2.7Kg(전체적인 수율 56%) 수득한다(순도 99.9 A%; 거울상이성체 0.1% 미만).
또한, 형태 I로의 형태 II의 전환은 위에서와 같이 MsOH를 가하여 EtOAc-EtOH 중 염이 형성되고 염의 초기용액(55℃)이 45℃로 냉각되는 경우 이루어진다. 결정은 이 온도에서 나타나기 시작하고 슬러리는 시간이 지남에 따라 진해진다. 이어서 온도를 51℃로 상승시키고 슬러리를 밤새도록 숙성시킨다. 16의 형태 I로의 완전 전환이 예상된다. 이 과정은 또는 16의 형태 I의 씨드 결정을 제조하는 데에도 사용된다.
실시예 18B
화학식 16
스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸-옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트(16)
재료:
아민(15) 3.1kg(5.86mol)
메탄설폰산 620g(6.45mol)
에틸 아세테이트 37L
무수 에탄올 8.7L
스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)
카보닐]-2-(페닐메틸-옥시)에틸]-2-아미노-
2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트(형태 I) 70g(0.11mol)
무수 에탄올(6.4L)을 반응 용기 속에서 에틸 아세테이트(전체 용적 62L 이하)중의 화학식 15의 아민(3.1kg)의 용액에 가한다. 배취를 50℃로 가온시키고 에틸 아세테이트(11L)중의 메탄설폰산(620g, 412ml, 1.1당량)을 50 내지 54℃에서 5분에 걸쳐 가한다. 배취는 스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸-옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트(형태 I)(70g)로 씨딩되고 제조되는 슬러리를 교반하고 질소대기하에 밤새도록 55℃에서 가열한다.
다음날, 슬러리를 15 내지 20℃로 냉각시키고 2시간 동안 유지한 다음 질소대기하에 폴리프로필렌 필터 50cm에 적가한다. 고체 생성물을 에틸 아세테이트(26L)중 무수 에탄올(2.3L)의 혼합물로 세척한다. 백색의 고체 생성물을 수집하고 아펙스(Apex) 오븐 속에서 진공중에 36℃에서 적합한 시간(대략 2일) 동안 건조시킨다. 건조된 스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸-옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트(3.352kg)를 잭슨-크로켓 시브를 사용하여 시빙하여 3.347kg(씨드 70g 포함)을 수득한다. 수율 3.277kg.
HPLC 조건;
조르박스 RT-C8(4.6mm x 25cm)상에서 LC 체류 시간, λ=210nm, 유동속도 1.5ml/min.
화학식 1의 화합물: 60:40 CH3CN-H2O(1% H3PO4)RT=5.0min
화학식 1b의 화합물: 35:65 CH3CN-H2O(0.1중량% NH4OAc)RT=6.2min
화학식 10의 화합물: 60:40 CH3CN-H2O(0.1% H3PO4)RT=2.9min
화학식 11의 화합물: 60:40 CH3CN-H2O(0.1% H3PO4)RT=5.4min
화학식 12의 화합물: 40:60 CH3CN-H2O[pH 5.25 NaH2PO4(H2O 6.9g/L)
(NaOH로 pH 조절)]RT=5.6min
화학식 14의 화합물: 60:40 CH3CN-H2O(0.1% H3PO4)RT=4.65min
화학식 15의 화합물: 40:60 CH3CN-H2O[pH 5.25 NaH2PO4(H2O 6.9g/L)
(NaOH로 pH 조절)]RT=4.9min
조르박스 RT-C8(4.6mm x 25cm)상에서 LC 체류 시간, λ=210nm, 유동속도 1.2ml/min, 칼럼온도=48℃, 용매 A=005% 인산 + 물중의 0.01% 트리에틸아민, 용매 B=아세토니트릴
변화 시스템:
시간 A% B%
0분 95 5
35분 10 90
38분 95 5
40분 95 5
체류 시간(분)
화학식 1의 화합물 25.2
화학식 1b의 화합물 8.5
화학식 10의 화합물 20.5
화학식 11의 화합물 26.3
화학식 12의 화합물 14.8
화학식 14의 화합물 25.6
화학식 15의 화합물 15.7
실시예 19
형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트
형태 II로부터 형태 I로의 전환은 실시예 18A의 과정에 의해 MsOH를 가하여 EtOAc-EtOH 중 염이 형성되고 염의 초기용액(55℃)이 45℃로 냉각되는 경우 이루어진다. 결정은 이 온도에서 나타나기 시작하고 슬러리는 시간이 지남에 따라 진해진다. 이어서 온도를 51℃로 상승시키고 슬러리를 밤새도록 숙성시킨다. 형태 I로의 완전 전환이 예상된다.
실시예 20
형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트
형태 II로부터 형태 I로의 전환은 이소프로판올중 형태 II의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트의 용액을 약 25℃에서 약 2 내지 24시간 동안 교반함으로써 성취된다.
실시예 21
형태 IV의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트
임의의 형태학적 형태의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트 8.4g의 샘플을 에틸 아세테이트 24.8ml, 에탄올 1.6ml 및 물 1.95ml 의 혼합물 속에 교반하면서 42℃에서 용해시킨다. 용매를 40℃의 온도에서 용액으로부터 증발시키고 제조되는 고체를 모터에서 미세한 분말로 분쇄하고 미세한 분말을 상대습도 약 75%에 노출시켜 형태 IV를 수득한다.
실시예 22
형태 IV의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트
임의의 형태학적 형태의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트 샘플을 에틸 아세테이트/에탄올/물(24.8/1.6/1.95)의 용액으로부터 재결정화하여 형태 IV를 수득한다.
실시예 23
형태 IV의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트
물 약 2.8중량%를 함유하는 이소프로필 아세테이트/에탄올(90:10 v/v)중 형태 I의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트의 슬러리를 약 25℃에서 밤새도록 교반하고 제조되는 고체를 분리시킨다.
본 발명을 이의 특정 실시양태를 참조로 하여 설명하고 기술하였으나 당해 기술분야의 숙련가들은 이러한 과정 및 프로토콜의 다양한 개작, 변경, 개질, 대체, 삭제 또는 부가가 본 발명의 취지와 범주를 벗어나지 않고 이루어질 수 있음을 알 수 있을 것이다. 예를 들어 본원에서 나타낸 바와 같은 특정한 투여량 이외에 유효한 투여량이 본 발명의 위에서 지적된 화합물을 사용하는 임의의 지시에 대해 치료되는 포유동물의 여러 가지 응답 결과로서 적용될 수 있다. 유사하게 관측되는 특정한 약리학적 응답은 선택되는 특정 활성 화합물에 따라 및 이에 의존하여 변할 수 있거나 약제학적 담체뿐만 아니라 제형의 형태 및 사용되는 투여방식 및 결과적으로 예측되는 변형 또는 차이는 본 발명의 목적 및 실시와 관련하여 보충될 수 있다. 따라서 본 발명은 다음에 첨부되는 청구항의 취지에 의해 한정되고 이러한 청구항들은 적절한 만큼 광의로 해석되어야 한다.

Claims (28)

  1. 형태 I로서 나타내는 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐-스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸-옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트 화합물의 다형체.
  2. 제1항에 있어서, 시차 주사 열량계 셀에서 질소 대기하에 10℃/min의 속도로 가열하는 경우, 외삽 온셋 온도가 약 170℃인 용융 흡열을 특징으로 하는 다형체.
  3. 제1항에 있어서, 약 6.5, 14.7, 16.9, 17.1, 17.9, 19.5, 21.1, 21.7 및 22.0°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 다형체.
  4. 형태 IV로서 나타내는 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐-스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸-옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트 화합물의 다형체.
  5. 제4항에 있어서, 시차 주사 열량계 셀에서 질소 대기하에 10℃/min의 속도로 가열하는 경우, 약 45℃에서의 물 손실 흡열에 이어서 외삽 온셋 온도가 약 129℃인 흡열을 특징으로 하는 다형체.
  6. 제4항에 있어서, N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐-스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸-옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트 1mol당 물을 약 3.5mol 함유하는 다형체.
  7. 제4항에 있어서, 16.0, 16.2, 18.3, 20.1, 21.0 및 24.0°(2θ)에서 주요 반사부를 갖는 X선 분말 회절 패턴을 특징으로 하는 다형체.
  8. 약제학적으로 허용되는 담체와 제1항의 다형체 유효량을 포함하는 약제학적 조성물.
  9. 비스포스포네이트 화합물과 제1항의 다형체와의 배합물을 포함하는, 골다공증 치료에 유용한 약제학적 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 비스포스포네이트 화합물이 알렌드로네이트인 약제학적 조성물.
  11. 약제학적으로 허용되는 담체와 제4항의 다형체 유효량을 포함하는 약제학적 조성물.
  12. 비스포스포네이트 화합물과 제4항의 다형체와의 배합물을 포함하는, 골다공증 치료에 유용한 약제학적 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 비스포스포네이트 화합물이 알렌드로네이트인 약제학적 조성물.
  14. 제1항의 다형체 유효량을 사람 또는 동물에게 투여함을 포함하여, 사람 또는 동물에 있어서 내인성 성장 호르몬의 농도를 증가시키는 방법.
  15. 제1항의 다형체 유효량과 추가의 성장 호르몬 분비 촉진제를 사람 또는 동물에게 투여함을 포함하여, 사람 또는 동물에 있어서 내인성 성장 호르몬의 농도를 증가시키는 방법.
  16. 제15항에 있어서, 추가의 성장 호르몬 분비 촉진제가 성장 호르몬 방출 펩티드 GHRP-6, 성장 호르몬 방출 펩티드 GHRP-2, 성장 호르몬 방출 펩티드 GHRP-1, B-HT920, 성장 호르몬 방출 인자, 성장 호르몬 방출 인자의 동족체, IGF-1 및 IGF-2로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
  17. 제1항의 다형체 유효량을 가축에게 투여함을 포함하여, 가축의 사육 효율 증진, 성장 촉진, 우유 생성 증진 및 육질을 개선하는 방법.
  18. 제1항의 다형체 유효량을 골다공증, 대사 질환, T4/T8세포 비율이 저하된 개체에 있어서의 면역 결핍, 고골절, 장년에게 있어서의 근골 손상, 성인 또는 어린이에 있어서의 성장 호르몬 결핍, 비만, AIDS 또는 암과 같은 만성 질환으로 인한 악액질 및 단백질 손실 및 대수술, 부상 또는 화상으로부터 회복중인 치료 환자로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하여, 이의 치료를 필요로 하는 환자에 있어서 이러한 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  19. 비스포스포네이트 화합물과 제1항의 다형체와의 배합물을 골다공증 환자에게 투여함을 포함하는, 골다공증의 치료방법.
  20. 제19항에 있어서, 비스포스포네이트 화합물이 알렌드로네이트인 방법.
  21. 제4항의 다형체 유효량을 사람 또는 동물에게 투여함을 포함하여, 사람 또는 동물에 있어서 내인성 성장 호르몬의 농도를 증가시키는 방법.
  22. 제1항의 다형체 유효량과 추가의 성장 호르몬 분비 촉진제를 사람 또는 동물에게 투여함을 포함하여, 사람 또는 동물에 있어서 내인성 성장 호르몬의 농도를 증가시키는 방법.
  23. 제22항에 있어서, 추가의 성장 호르몬 분비 촉진제가 성장 호르몬 방출 펩티드 GHRP-6, 성장 호르몬 방출 펩티드 GHRP-2, 성장 호르몬 방출 펩티드 GHRP-1, B-HT920, 성장 호르몬의 방출 인자, 성장 호르몬 방출 인자의 동족체, IGF-1 및 IGF-2로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 방법.
  24. 제4항의 다형체 유효량을 가축에게 투여함을 포함하여, 가축의 사육 효율 증진, 성장 촉진, 우유 생성 증진 및 육질을 개선하는 방법.
  25. 제4항의 다형체 유효량을 골다공증, 대사 질환, T4/T8세포 비율이 저하된 개체에 있어서의 면역 결핍, 고골절, 장년에게 있어서의 근골 손상, 성인 또는 어린이에 있어서의 성장 호르몬 결핍, 비만, AIDS 또는 암과 같은 만성 질환으로 인한 악액질 및 단백질 손실 및 대수술, 부상 또는 화상으로부터 회복중인 치료 환자로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 질환의 치료를 필요로 하는 환자에게 투여함을 포함하여, 이의 치료를 필요로 하는 환자에 있어서 이러한 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  26. 비스포스포네이트 화합물과 제4항의 다형체와의 배합물을 골다공증 환자에게 투여함을 포함하는, 골다공증의 치료방법.
  27. 제26항에 있어서, 비스포스포네이트 화합물이 알렌드로네이트인 방법.
  28. 이소프로판올 중의 형태 II의 N-[1(R)-[(1,2-디하이드로-1-메탄설포닐-스피로[3H-인돌-3,4'-피페리딘]-1'-일)카보닐]-2-(페닐메틸-옥시)에틸]-2-아미노-2-메틸프로판아미드 메탄설포네이트 용액을 약 25℃에서 약 2 내지 24시간 동안 교반함을 포함하는, 형태 I로서 나타내는 제1항의 다형체의 제조방법.
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