CZ20003152A3 - Soli N-methyi-N-((lR)-l-(N-methyl-N-((lR)-l- (methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2 (2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex- 2-enové kyseliny - Google Patents

Abstract

Soli N-methyl-N-(( 1R)-1 -(N-methyl-N-(( 1R)-1 -(methy 1- karbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny, jejich příprava a použití jako terapeutického činidla pro stimulaci uvolňování růstového hormonu

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález popisuje soli N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarfcamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny, jejich přípravy a jejich použití jako terapeutického činidla.

Dosavadní stav techniky

Růstový hormon je hormon, který stimuluje růst všech tkání, které jsou schopné růst. Navíc je o růstovém hormonu známo, že má velký vliv na metabolické procesy, např. stimuluje syntézu proteinů, mobilizuje volné mastné kyseliny a způsobuje přepnutí energetického metabolismu z metabolismu cukrů na metabolismus mastných kyselin. Nedostatek růstového hormonu může vést k mnoha vážným zdravotním poruchám, např. trpasličí vzrůst.

Růstový hormon se uvolňuje z hypofýzy. Toto uvolňování je důkladně kontrolováno pomocí mnoha hormonů a neurotransmiterů působících buď přímo nebo nepřímo. Uvolňování růstového hormonu lze stimulovat hormonem uvolňujícím růstový hormon a tlumit somatostatinem. V obou případech jsou hormony uvolňovány z hypotalamu, ale jejich působení je zprostředkováno specifickými receptory umístěnými na hypofýze. Byly popsány také další sloučeniny, které dokáží stimulovat uvolňování růstového hormonu z hypofýzy. Například arginin, L-3,4dihydroxyfenylalanin (L-Dopa), glukagon, vasopresin, PACAP (hypofýzový peptid aktivující adenylylcyklasu), muskarinní receptoroví agonisté a syntetický hexapeptid, hormon uvolňující růstový peptid, který uvolňuje endogenní růstový hormon buď • ·· · ·· ·· ·· ·· ·· · · · · · · 9 · · ··· · · · · ···· ·· ·· přímým ovlivněním hypofýzy nebo ovlivněním uvolňování hormonu uvolňujícího růstový hormon a/nebo somatostatinu z hypotalamu.

Sloučenina N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amid (2E) —

5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny byla popsána ve WO 97/23508. V tomto dokumentu z ní byla připravena hydrochloridová sůl.

Pro komerční použití je důležité mít fyziologicky přijatelnou sůl s dobrou stabilitou, dobrou rozpustností, nehygroskopickou, dobře biologicky přijatelnou, s dobrými vlastnostmi pro manipulaci a která má reprodukovatelnou krystalickou formu.

Podstata vynálezu

Shrnutí vynálezu

Předkládaný vynález popisuje sůl N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny, která má rozpustnost ve vodě alespoň 5 mg/ml a hygroskopičnost nižší než 8 při relativní vlhkosti 98 %. Zejména předkládaný vynález popisuje bezvodou hemifumarátovou sůl N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny. Vynález také popisuje vodnou hemifumarátou sůl N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl) -2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny a L(+)-mandelátovou sůl N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny.

Podrobný popis vynálezu

Předkládaný vynález popisuje sůl N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2···· ·· • · · · · · · · · · · • •9 9999 99·· · 999 99 999 99 9 3 99999999999· ·· ·· ·· ·· ·* ··

-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny strukturního vzorce I:

která má rozpustnost ve vodě alespoň 5 mg/ml, hygroskopičnost nižší než 8 při relativní vlhkosti 98 %. Rozpustnost ve vodě a hygroskopičnost se měří způsoby, která jsou v dané problematice dobře známé.

Sůl sloučeniny strukturního vzorce I je ve formě polymorfních krystalů, které jsou stabilní, dobře rozpustné, např. ve vodě, dobře biologicky přijatelné, s dobrými vlastnostmi pro manipulaci a které mají reprodukovatelnou krystalickou formu.

V jednom provedení má sůl sloučeniny strukturního vzorce I rozpustnost ve vodě alespoň 7 mg/ml, s výhodou alespoň 100 mg/ml, ještě výhodněji alespoň 200 mg/ml, konkrétně 5 až 400 mg/ml, jako je 150 až 250 mg/ml.

V dalším provedení má sůl sloučeniny strukturního vzorce I hygroskopičnost nižší než 7 při relativní vlhkosti 98 %, s výhodou 0,1 až 8 při relativní vlhkosti 98 %, konkrétně 0,5 až 7 při relativní vlhkosti 98 %, jako je 1 až 6,5 při relativní vlhkosti 98 %.

V dalším provedení je sůl sloučeniny strukturního vzorce I hemifumarát. V dalším provedení je sůl sloučeniny strukturního vzorce I hemifumarát, monohydrát. V dalším provedení je sůl sloučeniny strukturního vzorce I L(+)-mandelát.

Předkládaný vynález také popisuje způsob výroby soli sloučeniny strukturního vzorce I, který zahrnuje rozpuštění sloučeniny strukturního vzorce I ve vhodném rozpouštědle a rozpuštění konkrétní kyseliny ve stejném rozpouštědle, přidání

99 roztoku kyseliny do roztoku sloučeniny strukturního vzorce I a krýstalizaci výsledné soli z roztoku. Příklady běžných rozpouštědel zahrnují, ale nejsou tímto výčtem nijak omezeny, organická rozpouštědla, zejména nižší alifatické alkoholy, jako je ethanol, 2-propanol, 2-butanol, 1-hexanol a rozpouštědla jako je aceton, isobutylmethylketon a tetrahydrofuran. Preferovaná rozpouštědla jsou ethanol, 2-propanol a aceton. Míchání složek se běžně provádí při teplotách 40 °C až teplota varu rozpouštědla a po ochlazení na 0 °C až 5 °C se vyloučené krystaly odfiltrují. Rychlost chladnutí může mít vliv na typ získané soli. Případně, pokud nedojde k vylučování krystalů do 1 až 2 hodin po smíchání, je možné přidat očka krystalů.

Předkládaný vynález také popisuje farmaceutický prostředek obsahující sůl sloučeniny strukturního vzorce I případně s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.

Sůl sloučeniny strukturního vzorce I lze použít v lidské nebo veterinární medicíně pro stimulaci uvolňování růstového hormonu. Předkládaný vynález tak poskytuje v dalším aspektu způsob stimulace uvolňování růstového hormonu u pacientů jako jsou savci, např. lidé, který zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství soli sloučeniny strukturního - vzorce I podle předkládaného vynálezu.

Sůl N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methyl-karbamoyl)2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5methylhex-2-enové kyseliny je použitelná pro stimulaci uvolňování růstového hormonu u starších jedinců, prevenci katabolických vedlejších efektů glukokortikoidů, prevenci a/nebo léčení osteoporézy, léčení syndromu chronické únavy, léčení syndromu akutní únavy a ztrátu svalové hmoty po operačním zákroku, stimulaci imunitního systému, urychlení léčby zranění, urychlení srůstání zlomenin kostí, urychlení srůstání komplikovaných zlomenin, např. distrakční osteogeneze, léčení atrofie následkem zlomenin, léčení opožděného růstu, léčení selhání ledvin nebo nedostatečné funkce ledvin způsobené opožděným růstem, léčení kardiomyopathie, léčení chronického onemocnění jater, léčení thrombocytopenie, léčení ' Crohnovy nemoci, léčení syndromu krátkého střeva, léčení chronického onemocnění plic, léčení komplikací spojených s transplantací, léčení malého vzrůstu postavy včetně dětí trpících nedostatkem růstového hormonu a malého vzrůstu postavy souvisejícího s chronickými onemocněními, léčení obezity a zpomalení růstu souvisejícího s obezitou, léčení anorexie, léčení zpomalení růstu souvisejícího se syndromem Prader-Willi a Turnérovým syndromem, zvýšení rychlosti růstu u pacientů, kteří mají částečný nedostatek růstového hormonu, urychlení hojení a zkrácení hospitalizace u pacientů s popáleninami, léčení zpomalení intrauterinního růstu, skeletální dysplasie, hyperkortisolismu a Cushingova syndromu, vyvoláví uvolŇování růstového hormonu, náhrada růstového hormonu u namáhaných pacientů, léčení osteochondrodysplasie, Noonanova syndromu; schizofrenie, depresí, Alzheimerovy nemoci, prodlouženého léčení zranění a psychosociálních deprivací, léčení dysfunkce plic a závislosti na umělé ventilaci, léčení selhání srdce nebo příbuzných cévních onemocnění, léčení narušených funkcí srdce, léčení nebo prevence infarktu myokardu, snížení tlaku krve, ochrana proti ventrikulární dysfunkci nebo prevence proti reperfusi, léčení dospělých s chronickou dialýzou, zesílení katabolických reakcí proteinů po chirurgickém zákroku, snížení kachexie a ztráty proteinů z důvodu chronického onemocnění jako je rakovina nebo AIDS, léčení hyperinsulinemie včetně nesidioblastosy, léčení dospívajících dívek pro vyvolání ovulace, stimulace rozvoje brzlíku a prevence špathé funkce brzlíku způsobená věkem, léčení pacientů s imunosupresí, léčení sarkopenie, léčení únavy spojené s AIDS, zlepšení svalové síly, mobility, tloušťky kůže, metabolické homeostázy, renální homeostázy u slabých starých lidí, stimulace osteoblastů, opětovné vytvoření kosti a růst chrupavky, regulace příjmu potravy, stimulace imunitního systému u domácích zvířat a léčení poruch u domácích zvířat souvisejících se stárnutímstimlace růstu vlny u ovcí a léčení metabolického syndromu (syndrom X), léčení odolnosti proti inzulínu, včetně NIDDM, u savců, např. lidí, a zlepšení spánku a úprava ···· 9· • 9 • 9

9 · · · · 9 99 9 999 9999 9999 ············ ·· ·· · · ·· ·· ·· relativního hyposomatotropismu stárnutí díky zvýšení spánku ve stavu REM a doby čekání na REM. Léčení také zahrnuje profylaxi.

Pro použití podle předkládaného vynálezu se sůl sloučeniny strukturního vzorce I míchá s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo excipientem, čímž vznikne lék určený pro podávání parenterální, orální, nosem, rektální, pod kůži, do kůže nebo přes kůži podle běžných postupů. Prostředky dále obsahují jedno nebo více ředidel, plnidel, emulgátorů, ochranných prostředků, pufrů, excipientů atd. a jsou ve formě tekutin, prášků, emulzí, doplňků výživy, liposomů, kožních náplastí, prostředků s postupným uvolňováním, kožních implantátů, tablet atd.

Odborník v dané problematice bude schopen tyto sloučeniny odpovídajícím způsobem začlenit do prostředků podle běžných postupů, jako jsou ty, které jsou popsány v Remington's Pharmaceutical Sciences, 1985 nebo Remington's Pharmaceutical Sciences, editor Gennaro, Mack Publishing Co., Easton,^- PA, 1990 nebo Remington: The Science and Practice of Pharmacy,

19. vydání (1995). Prostředky jsou v běžné formě, například kapslí, tablet, aerosolů, roztoků, suspenzí nebo povrchových přípravků.

Farmaceutický nosič nebo ředidlo je běžný pevný nebo tekutý nosič. Příklady pevných nosičů jsou laktosa, terra alba, sacharosa, cyklodextrin, talek, želatina, agar, pektin, akácie, stearát hořečnatý, kyselina stearová nebo nižší alkylethery celulosy. Příklady tekutých nosičů jsou sirup, arašídový olej, olivový olej, fosfolipidy, mastné kyseliny, aminy mastných kyselin, polyoxyethylen nebo voda.

Podobně nosič nebo ředidlo obsahují jakýkoliv materiál s řízeným uvolňováním, který je v dané problematice známý, jako je glyceryl monostearát nebo glyceryldistearát, samostatně nebo v kombinaci s voskem.

Prostředky podle předkládaného vynálezu jsou obvykle upraveny pro orální podávání.

Pro orální podávání se sůl sloučeniny strukturního vzorce I připravuje ve formě vhodné pro orální podávání, jako je tableta nebo kapsule. Typicky se sloučeniny strukturního ·· ·· ► *4 ( » · · 1 » · · ♦ « • ·· vzorce I smíchá s nosičem a vytvaruje se do formy tablety. Nosiče vhodné pro tento účel jsou škrob, cukry, hydrogenfosforečnan vápenatý, stearát vápenatý a podobně. Takové prostředky dále obsahují jednu nebo více pomocných složek, jako jsou zvlhčujicí činidla, emulgátory, ochranné prostředky, stabilizátory, barviva atd.

Farmaceutické prostředky se podávají jednou nebo vícekrát denně nebo týdně. Účinné množství takového farmaceutického prostředku je množství, které vyvolá znatelný klinický efekt. Takové množství závisí částečně na léčené nemoci, věku, hmotnosti a celkovém zdravotním stavu pacienta a dalších faktorech, které jsou odborníkovi zřejmé.

Farmaceutický prostředek lze podávat v jednotkové dávkovači formě jednou nebo víckrát denně nebo týdně. Alternativně jej lze podávat jako prostředek s řízeným uvolňováním ve formě vhodné pro implantaci do kůže. Implantáty jsou upraveny tak, aby uvolňovaly aktivní složku během požadované doby, která je až několik let. Prostředky s řízeným uvolňováním jsou popsány například v práci Sanders a kol., J. Pharm. Sci., 73 (1964), 1294-1297, 1984; U.S. patentu č. 4,489,056 a U. S. patentu č. 4,210, 644, které jsou zde uvedeny jako reference.

Prostředky se obvykle orálně podávají v jednotkové dávkovači formě obsahující 0,01 mg až 1000 mg soli sloučeniny strukturního vzorce I podle předkládaného vynálezu. Typická dávka, která vyvolá uvolňování růstového hormonu je 0,1 mg až 500 mg, s výhodou 0,1 mg až 280 mg denně v jediné dávde nebo ve dvou nebo třech dávkách při orálním podáván nebo dvakrát nebo třikrát týdně nebo jednou týdně nebo jednou za 14 dnů.

Preferovaná jednotková dávkovači forma zahrnuje v pevné formě tablety nebo kapsule, v tekuté formě roztoky, suspenze, emulze, nápoje nebo kapsule plněné tekutou formou nebo ve formě sterilních injikovatelných roztoků, náplastí, vagitorií, vaginálních kroužků nebo dlouhodobě působících implantátů.

Prostředek podle předkládaného vynálezu se připravuje běžnými postupy galenické farmacie.

···· ·· ·· ·« • · · · 1 · · • · · · I ·· ·· · · 4 «· · • ·· · · · · t

99 ·· ··

Běžné excipienty jsou takové farmaceuticky přijatelné organické nebo anorganické nosiče, které jsou vhodné pro parenterální nebo orální podávání a které nereagují nepříznivě s aktivní sloučeninou strukturního vzorce I.

Příklady takových nosičů jsou voda, roztok soli, alkoholy, polyethylenglykoly, polyhydroxyethoxylovaný ricínový olej, sirup, arašídový olej, olivový olej, želatina, laktosa, terra alba, sacharosa, agar, pektin, akácie, amylosa, stearát hořečnatý, talek, kyselina křemičitá, kyselina stearová, monoglyceridy a diglyceridy mastných kyselin, estery mastných kyselin s pentaerythritolem, hydroxymethylcelulosa a polyvinylpyrrolidon a fosforečnan vápenatý.

Farmaceutické prostředky lze sterilizovat a smíchat, pokud je to nutné, s přídavnými činidly jako jsou pojivá, maziva, ochranné prostředky, desintegrátory, stabilizátory, zlhčovadla, emulgátory, soli ovlivňující osmotický tlak, pufry a/nebo barviva a podobně, které nereagují nepříznivě -s aktivní složkou. Pro parenterální podávání jsou zejména vhodné injikovatelné roztoky nebo suspenze, s výhodou vodné roztoky s aktivní složkou rozpuštěnou v polyhydroxylovaném ricínovém olej i.

Pro orální podávání jsou zejména vhodné tablety, dražé nebo kapsule, které obsahují talkový a/nebo cukerný nosič nebo pojivo a podobně, přičemž tento nosič je s výhodou laktosa nebo fosforečnan vápenatý a/nebo kukuřičný škrob a/nebo bramborový škrob. Sirup, nápoj a podobně lze využít pokud lze použít slazené pojidlo.

Typická tableta, kterou lze připravit běžnými technikami tabletování obsahuje:

Aktivní složka	10 mg
Lactosum	67,8 mg Ph. Eur.
Avicel®	31,4 mg
Talek	1, 0 mg
Magnesii stearas	0,25 mg Ph. Eur.

···· ·* • 4 • 4

Předkládaný vynález je dále ilustrován následujícími příklady, které ovšem nejsou míněny jako omezení rámce patentové ochrany. Rysy popsané v následujícím popisu a v následujících příkladech jsou samostatně nebo v jakékoliv jejich kombinaci materiálem pro provedení vynálezu v .jakékoliv jeho formě.

Soli sloučeniny I podle předkládaného vynálezu byly syntetizovány, čištěny a krystalizovány tak jak je popsáno v následujících příkladech.

Příklady provedení vynálezu

N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny je sloučenina strukturního vzorce I:

(I) a lze ji připravit postupem popsaným v příkladu 1 ve WO 97/23508:

Příprava hydrochloridu N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny h₃c ch₃

r τ ch₃ hn_x

CH.

.0

Tert.-butylester 3-hydroxy-l,1-dimethylpropylkarbamové kyseliny

H

OH

Krok A:

Do roztoku 3-tert.-butoxykarbonylamino-3-methylbutanové kyseliny (2,50 g, 11,5 mmolu) a triethylaminu (1,92 ml,

13,8 mmolu) v tetrahydrofuranu (10 ml) byl za teploty 0 °C přikapán ethylchloroformiát (1,10 ml, 11,5 mmolu). Vzniklý roztok byl míchán po dobu 40 minut při teplotě 0 °C. Vzniklá sraženina byla odfiltrována a promyta tetrahydrofuranem (20 ml) . Filtrát byl ihned ochlazen na teplotu 0 °C. Pak byl přikapán 2 M roztok tetrahydroboritanu ' litného v ettrahydrofuranu (14,4 ml, 28,8 mmolu). Vzniklá reakční směs byla míchána po dobu 2 h při teplotě 0 °C, ponechána během 4 h ohřát na laboratorní teplotu. Následně byla reakční směs opět ochlazena na teplotu 0 °C a opatrně byl do ní přidán methanol (5 ml). Dále byla přidána 1 M kyselina chlorovodíková (100 ml). Výsledný roztok byl extrahován ethylacetátem (2 x 100 ml, 3 x 50 ml) . Spojené organické extrakty byly promyty nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a vysušeny síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Surový produkt byl chromatografován na silikagelu (110 g) mobilní fází ethylacetát/heptan (1 : 2), čímž bylo získáno 1,84 g tert.-butylesteru 3-hydroxy-l,1—dlmethylpropylkarbamové kyseliny.

¹H-NMR (CDC1₃) : δ 1,33 (s, 6H) , 1,44 (s,9H), 1,88 (t,2H),

1,94 (br, IH) , 3,75 (kvintet, 2H) , 4,98 (br, IH) .

3-(tert.-butoxykarbonylamino)-3-methylbutanal

Krok B:

Do roztoku oxalylchloridu (l,lml, 12,9 mmolu) v dichlormethanu (15 ml) byl při teplotě -78 °C přidán DMSO »*· 4« 44 44 44 . 44 ·:» ·.· ι:··:.ι η ί (1,22 ml, 17,2 mmolu) . Vzniklá reakční směs byla míchána pp dobu 15 minut při teplotě -78 °C. Pak byl během· 15 minut přikapán roztok tert.-butylesteru 3-hydroxy-l,1-dimethylpropylkarbamové kyseliny (1,75 g, 8,6 mmolu) v dichlormethanu (10 ml). Výsledný roztok byl po dobu dalších 15 minut míchán při teplotě -78 °C. Pak byl přidán triethylamin (6,0 ml, 43 mmolů). Roztok byl dále míchán ještě 5 minut při teplotě -78 °C a pak ponechán ohřát na laboratorní teplotu. Roztok byl zředěn dichlormethanem (100 ml) a extrahován 1 N kyselinou chlorovodíkovou (100 ml). Vodná fáze byla extrahována dichlormethanem (50 ml) . Spojené organické vrstvy byly promyty nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a vysušeny síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Surový produkt byl čištěn chromatografií na silikagelu (140 g) mobilní fází ethylacetát/heptan (1 : 3), čímž bylo získáno 1,10 g 3-(tert.-butoxykarbonylamino)-3-methylbutanalu.

^-NMR (CDC1₃) : δ 1,39 (s, 6H) , 1,45 (s,9H), 2,85 (d, 2H) ,

4,73 (br,1H), 9,80 (t,lH).

Ethylester kyseliny (2E)-5-(tert.-butoxykarbonylamino)-5-methylhex-2-enové h₃c h₃c

ch₃

Krok C:

Triethylfosfonoacetát (1,96 ml, 9,8 mmolu) byl rozpuštěn v tetrahydrofuranu (30 ml). Do tohoto roztoku byl přidán tert.butoxid draselný (1,10 g, 9,8 mmolu). Vzniklý roztok byl míchán po dobu 40 min za laboratorní teploty. Pak byl přidán roztok 3(tert.-butoxykarbonylamino)-3-methylbutanalu (1,10 g,

5,5 mmolu) v tetrahydrofuranu (6 ml). Výsledný roztok byl míchán po dobu 75 min za laboratorní teploty. Pak byl zředěn ethylacetátem (100 ml) a 1 M kyselinou chlorovodíkovou (100 ml) . Obě vrstvy byly odděleny. Vodná vrstva byla extrahována ethylacetátem (2 x 50 ml). Spojené organické vrstvy

0000 00 • · • 0

00 • 0 0 0 > >i : 0 »0 0 l·:

byly promyty nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (60 ml) a vysušeny síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Surový produkt byl čištěn chromatografií na silikagelu (90 g) mobilní fází ethylacetát/heptan (1 : 4), čímž bylo získáno, 1,27 g ethylesteru kyseliny (2E)-5-(tert.-butoxykarbonylamíno)-5-methylhex-2-enové.

N-NMR (CDC1₃) : δ 1,30 (s,6H), 1,30 (t,3H), 1,46 (s,9H),

2,62 (d,2H), 4,27 (kvintet, 2H) , 4,42 (br, IH) , 5,88 (d, IH) , 6,94 (td,IH).

Kyselina (2E)-5-(tert.-butoxykarbonylamíno)-5-methylhex-2— -enová

h^H3^C CH₃

OH

Krok D:

Ethylester kyseliny (2E)-5-(tert.-butoxykarbonylamíno)-5-methylhex-2-enové (1,233 g, 4,54 mmolu) byl rozpuštěn v dioxanu (20 ml) . Hydroxid litný byl přidán v pevném stavu (0,120 g, 5,00 mmolu). Pak byla přidávána voda (10 ml) dokud nevznikl čirý roztok. Tento roztok pak byl míchán po dobu 16 hodin za laboratorní teploty. Dále byl roztok zředěn vodou (70 ml) a extrahován tert.-butylmethyletherem (2 x 100 ml). Vodná vrstva byla okyselena 1 M roztokem hydrogensíranu sodného (pH = 1) a extrahována tert.-butylmethyletherem (3 x 7 0 ml). Organické vrstvy byly spojeny a vysušeny síranem sodným. Rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, čímž bylo získáno 1,05 g kyseliny (2E)-5-(tert.-butoxykarbonyl-amino)5-methylhex-2-enové. Surový produkt byl přímo použit do další reakce.

¹H-NMR (DMSO d₆) : δ 1,15 (s,6H), 1,35 (s,9H), 2,53 (d,2H), 5,75 (d,lH), 6,57 (br, IH) , 6,75 (td,lH), 12,15 (s,lH).

• frfrfr ·· ·· ·♦ • c » · frfr * • fr fr a O ♦ · · • fr · » · frfr · • frfr· frfrfr* • fr ·· frfr · ·

Tert.-butylester N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamové kyseliny

Krok E:

V Ν,Ν-dimethylformamidu (25 ml) byl rozpuštěn N-tert.-butoxykarbonyl-N-methyl-D-fenylalanin (1,22 g, 4,4 mmolu), 1-hydroxybenzotriazol hydrát (0,59 g, 4,4 mmolu) a hydrochlorid l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (0,88 g,

4,6 mmolu) a vše bylo míchání po dobu 30 min. Pak byl přidán methylamin (0,51 g, 40% roztok v methanolu, vyjádřeno v procentech hmotnostních, 6,6 mmolu) a vzniklá reakční směs byla míchána přes noc. Pak byl přidán dichlormethan (80 ml) a voda (100 ml) a obě vrstvy byly odděleny. Organická vrstva byla promyta hydroxidem sodným (20 ml, 1 Μ), hydrogensíraném sodným (50 ml, 10% roztok ve vodě, vyjádřeno v procentech hmotnostních) a vodou (50 ml) . Organická vrstva byla vysušena (síran hořečnatý) a rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, čímž bylo získáno 1,39 g tert.-butylesteru N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamové kyseliny.

¹H-NMR (CDC1₃) : δ 1,25, 1,35 (dva brs,9H), 2,73-2,94 (m,7H), 3,30-3,50 (m,1H), 4,68, 4,90 (dva m,1H) , 5,90, 6,12 (dva brs, 1H) , 7,12-7,25 (m,5H) .

(R)-N-methyl-2-methylamino-3-fenylpropionamid

··♦· ·* ·» 99

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 i 9<9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 · ♦ 9 9

Krok F:

Tert.-butylester N-methyl-N-((R)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamové kyseliny (1,39 g, 7,23 mmolu) byl rozpuštěn ve směsi kyseliny trifluoroctové (5 ml) á dichlormethanu (10 ml) a míchán po dobu 45 min. Těkavé podíly byly odpařeny za sníženého tlaku a odparek byl míchán ve směsi ethylacetátu (100 ml) a vody (100 ml) . Pak byl přidán hydrogenuhliČitan sodný (50 ml, nasycený roztok) a obě fáze byly odděleny. Organická vrstva byla vysušena (síran hořečnatý) a rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku, čímž bylo získáno 330 mg (R)-N-methyl-2-methylamino-3-fenyl-propionamidu.

¹H-NMR (CDC1₃) : δ 2,1 (brs,3H), 2,32 (s,3H), 2,77 (dd, 1H) , 2,81 (dva s, 3H) , 3,21 (dd, 1H) , 3,32 (dd, 1H) , 7,12 (brs, 1H), 7,20-7,34 (m,5H).

Tert.-butylester kyseliny N-methyl-N-{(IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftylethyl}karbamové

Krok G:

Kyselina (R)-tert.-butoxykarbonyl-N-methylamino-3-(2naftyl)propionová (548 mg, 1,66 mmolu) byla rozpuštěna v dichlormethanu (5 ml) a byl k ní přidán l-hydroxy-7azabenzotriazol (227 mg, 1,66 mmolu) spolu s N,N-dimethylformamidem (2 ml). Pak byl přidán hydrochlorid l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimidu (351 mg, 1,83 mmolu) a vzniklý roztok byl míchán po dobu 15 min. Dále byl přidán (R)-N-methyl-2-methylamino-3-fenylpropionamid (320 mg, 1,66 mmolu) rozpuštěný v dichlormethanu (4 ml) a diisopropylethylamin (0,28 ml, 1,66 mmolu) a vzniklá reakční směs byla míchána přes noc. Pak byl přidán dichlormethan

(50 ml) a organická vrstva byla promyta vodou (100 ml), hydrogensíraném sodným (50 ml, 5% roztoku ve vodě, vyjádřeno v procentech hmotnostních) a hydrogenuhličitanem sodným (50 ml, nasycený roztok). Organická vrstva byla vysušena (síran hořečnatý) a rozpouštědlo bylo odpařeno za sníženého tlaku. Odparek byl chromatografován (silikagel, 2 x 45 cm) mobilní fází ethylacetát/dichlormethan (1 : 1), čímž bylo získáno 604 mg tert.-butylesteru kyseliny N-methyl-N-{(IR)-1—(Nmethyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karba-moyl)-2(2-naftylethyl}karbamové.

¹H-NMR (CDC1₃) : δ 1,05, 1,31, 1,56 (tři s,9H), 2,28-3,37 (několik m,13H), 5,04, 5,17, 5,29, 5,48 (čtyři dd,2H), 7,057,79 (m,12H) .

(2R)-N-methyl-2-methylamino-N-((IR)-1-methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)-3-(2-naftyl)propionamid

Krok H:

Tert.-butylester kyseliny N-methyl-N-{(IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftylethyl}karbamové (600 mg, 1,19 mmolu) byl míchán ve směsi kyseliny trifluoroctové s dichlormethanem (1 : 1, 5 ml) po dobu 10 min a těkavé podíly byly odpařeny za sníženého tlaku. Odparek byl kodestilován s diethyletherem (2x5 ml), rozpuštěn v methanolu (2 ml) a smíchán s hydrogenuhličitanem sodným (10 ml) a ethylacetáten (15 ml). Organická vrstva byla oddělena a vysušena (síran hořečnatý), čímž bylo získáno 420 mg (2R)-Nmethyl-2-methylamino-N-((IR)-1-(methylkarba-moyl)-2fenylethyl)-3-(2-naftyl)propionamidu.

«999 ·· • 9 • 9 • · * 9 9 99«·

9« 99 999«

9 «9« «9 99« 9« 9 «999 999« 999« «9 99 «9 99 99 «9

H-NMR (CDCI3) : (vybrané hodnoty) δ 1,69 (s,3H), 2,08 (d,3H), 2,54 (s,3H), 2,76 (dd,IH), 2,92 (dd,IH), 3,12 (dd,IH), 3,31 (dd,IH), 3,72 (dd,IH), 4,95 (kvintet,IH), 5,50 (dd,IH).

Tert.-butylester kyseliny ((3E)-1,1-dimethyl-4-(N-methyl-N-((IR)-1-methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2—

-naftyl)ethyl)karbamoyl)but-3-enyl)karbamové kyseliny

Krok I:

Kyselina (2E)-5-(tert.-butoxykarbonylamino)-5-methylhex-2-enová (200 mg, 0,82 mmolu), l-hydroxy-7-azabenzotriazol (112 mg, 0,82 mmolu) a hydrochlorid l-ethyl-3-(3—dimethylaminopropyl)karbodiimidu (173 mg, 0,90 mmolu) byly rozpuštěny ve směsi dichlormethanu (10 ml) a N, N-dimethylformamidu (1 ml) a míchány po dobu 15 min. Dále byl přidán N-methyl-2-methylamino-N-((IR)-1-methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)-3-(2-naftylpropionamid (332 mg, 0,82 mmolu) rozpuštěný v dichlormethanu (5 ml) a diisopropylethylamin (0,14 ml) a vzniklá reakční směs byla míchána přes noc pod dusíkovou atmosférou. Dále byla reakční směs zředěna dichlormethanem (50 ml), promyta vodou (50 ml), hydrogenuhličitanem sodným (30 ml, nasycený roztok) a hydrogensíranem sodným (30 ml, 5% roztok ve vodě, vyjádřeno v procentech hmotnostních). Obě vrstvy byly odděleny a organická vrstva byla vysušena (síran hořečnatý) a odpařena za sníženého tlaku. Odparek byl chromatografován (silikagel, 2 x 40 cm), čímž bylo získáno 450 mg tert.-butylesteru kyseliny ((3E)-1,l-dimethyl-4-(N-methyl-N-((IR) -1-(N-methyl-N-((IR)-1-methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)karbamoyl)but-3-enyl)karbamové kyseliny.

4444 »» • · • · • 4 • 4 4 4 4 4 * « 4

44 44 4444 ·· 4 4 4 · · 4 4 · 4 4 *

44 4 444 4 4 44 4

	XH-NMR	(CDCI3) :	• 4 44 (vybrané hodnoty) δ 1,20,	• 4 4· 44 44 1,22, 1,24,
1,30,	1,41,	1,55 (šest	s, 15H), 4,30, 4,40 (dva brs	, IH), 5,08,
5,18,	5,32,	5,60, 5,87	(pět dd, 2H), 6,05 (dd,IH),	6, 7-5 (m, IH) .
	Krok J:

Tert.-butylester kyseliny ( (3E)-1,l-dimethyl-4-(methyl-((IR)-1-methyl-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)karbamoyl)but-3-enyl)karbamové kyseliny (403 mg, 0,63 mmolu) byl míchán ve směsi kyseliny trifluoroctové (4 ml) a dichlormethanu (4 ml) po dobu 10 min. Těkavé podíly byly odpařeny za sníženého tlaku a surový produkt byl chormatografován na silikagelu (400 g) mobilní fází směsí dichlormethan, ethanol a amoniak (25% roztok ve vodě, vyjádřeno v procentech hmotnostních) (80 18 : 2) .

Izolovaný produkt byl rozpuštěn v 3 M kyselině chlorovodíkové v ethylacetátu a odpařen, pak dvakrát rozpuštěn v dichlormethanu a odpařen, čímž bylo získáno 140 mg sloučeniny uvedené v titulu.

¹H-NMR (CDC1₃) : δ 1,05, 1,10, 1,15, 1,16 (čtyři s, 6H) , 2,07 (brs, 3H) , 5, 12, 5, 32, 5, 40, 5, 60, 5, 91 (pět dd, 2H) , 6,05, 6,14 (dva d, IH) , 6,80 (m, IH) .

HPLC: R_t - 29,02 min (způsob Al).

ESMS: m/z = 529 (M+H⁺) .

Příklad 1

Syntéza sloučeniny strukturního vzorce I, hemifumarát

20,5 g (MH: 528,7) surového produktu sloučeniny strukturního vzorce I (obsahující 10 až 20 % zbytkových rozpouštědel) bylo rozpuštěno v 200 ml 2-propanolu při teplotě 45 °C a teplota byla zvýšena na 75 °C. Pak bylo pomalu přidáno 2,0 g (MH: 116,1, 17 mmolů) kyseliny fumarové rozpuštěné ve 100 ml 2-propanolu při teplotě 75 °C. Teplota reakční směsi byla udržována na 75 °C. Je velmi důležité nepřidat velký ···· ·· • · • · »· ·* 99 99 • ♦ « · · 9 9 9 9

9 9 99 9 9 9 4

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 '9 9 9

99 99 99 99 99 přebytek kyseliny fumarové, protože to má negativní vliv na výtěžek a čistotu. Pokud nedojde k vylučování krystalů do 1 h přidají se očka. Výsledný roztok byl míchán při teplotě 70 °C až 7 5 °C přes noc. Druhý den byla reakční směs ponechána samovolně vychladnout na laboratorní teplotu což trvalo 4 h. Výsledná směs pak byla ochlazena na teplotu 0 °C až 5 °C a ponechána po dobu 2 h při této teplotě. Pak byly pevné podíly snadno odfiltrovány a filtrační koláč byl promyt studeným 2-propanolem. Produkt byl sušen přes noc při teplotě 40 °C ve vakuové sušárně, čímž bylo získáno 18,1 g (89 % molárních, počítáno na fumarovou kyselinu) sloučeniny stukturního vzorce I, fumarátu (MH: 586,7) ve formě bílých krystalů.

Příklad 2

Syntéza sloučeniny strukturního vzorce I, hemifumarát monohydrát

50,8 g surového produktu sloučeniny strukturního vzorce I (obsahující 10 až 20 % zbytkových rozpouštědel) bylo rozpuštěno v 500 ml ethanolu (nebo 2-propanolu) při teplotě 70 °C a pak bylo přidáno 5,4 g kyseliny fumarové rozpuštěné ve 250 ml ethanolu (nebo 2-propanolu) při teplotě 70 °C. Reakční směs pak ponechána přes noc samovolně chladnout na laboratorní teplotu.

Po přidání oček došlo při teplotě 60 °C k vylučování krystalů. Druhý den byla výsledná směs ochlazena na teplotu 0 °C až 5 °C, ponechána po dobu 2 h při této teplotě, a přefiltrována, čímž byly získány malé krystaly, které se těžko filtrovaly. Filtrační koláč byl promyt studeným ethanolem (nebo 2-propanolem) a vysušen přes noc při teplotě 40 °C ve vakuové sušárně, čímž bylo získáno 35,3 g (65 % molárních, počítáno na fumarovou kyselinu) sloučeniny stukturního vzorce I, fumarátu monohydrátu ve formě bílých krystalů.

Podoný experiment byl proveden ve 2-propanolu se stejným výsledkem.

Pokud se bezvodá forma sloučeniny strukturního vzorce I, fumarátu vystaví velké vlhkosti, např. po 10 týdnů při relativní vlhkosti 98 %, pak vznikne hydratovaná forma.

··»· ·· • · • · · · · ♦ < · • · ** · · · · • · * »···· · « · · · · · · · ·· ·· ·· »· • · » • * · · • · · · ·♦ ··

Příklad 3

Syntéza sloučeniny strukturního vzorce I, L(+)mandelát 2,0 g surového produktu sloučeniny strukturního vzorce I (obsahující 10 až 20 % zbytkových rozpouštědel) bylo rozpuštěno v 10 ml acetonu. 0,58 g (MH: 152,2, 3,8 mmolu) kyseliny Lmandlové bylo rozpuštěno v 10 ml acetonu a přidáno k prvnímu roztoku. Výsledná směs byla zahřáta k varu pod zpětným chladičem. Po přidání oček došlo po 5 min zahřívání k varu k vylučování krystalů. Var byl udržován po dobu 2 h. Pak byla reakční směs ponechána samovolně vychladnout na laboratorní teplotu. Pak byl roztok zfiltrován. Filtrační koláč byl promyt acetonem. Produkt byl sušen přes noc při teplotě 40 °C ve vakuové sušárně, čímž bylo získáno 1,5 g (58 % molárních, počítáno na kyselinu L-mandlovou) sloučeniny stukturního vzorce I, L-(+)mandelátu (MH: 680,8) ve formě bílých krystalů.

Příklad 4

Syntéza sloučeniny strukturního vzorce I, D(-)mandelát

7,9 g surového produktu sloučeniny strukturního vzorce I (obsahující 10 až 20 % zbytkových rozpouštědel) bylo rozpuštěno ve 160 ml acetonu. 2,3 g (MH: 152,2, 15 mmolů) kyseliny Dmandlové bylo rozpuštěno ve 40 ml acetonu a přidáno k prvnímu roztoku. Výsledná směs byla zahřáta k varu pod zpětným chladičem. Po přidání oček došlo po 10 min zahřívání k varu k vylučování krystalů. Var byl udržován po dobu 3 h. Pak byla reakční směs ponechána samovolně vychladnout na laboratorní teplotu. Pak byl roztok zfiltrován. Filtrační koláč byl promyt acetonem. Produkt byl sušen přes noc při teplotě 40 °C ve vakuové sušárně, čímž bylo získáno 6,6 g (65 % molárních, počítáno na kyselinu D-(-) mandlovou) sloučeniny stukturního vzorce I, D-(-)mandělátu (MH: 680,8) ve formě bílých krystalů.

Příklad 5

Syntéza sloučeniny strukturního vzorce I, maleát

0000 9« • · • · *0 00 «0 0

0 «0

00 • 0 » » ·· 00

0 0 « «0 00

0 0 0«

0,44 g kyseliny maleinové bylo za varu rozpuštěno v 10 ml acetonu. 2,0 g surového produktu sloučeniny strukturního vzorce I (obsahující 10 až 20 % zbytkových rozpouštědel) bylo rozpuštěno v 10 ml acetonu a přidáno do prvního · roztoku. Výsledná směs byla míchána přes noc při teplotě 45 °C. Krystaly se vyloučily přes noc. Reakční směs pak byla ponechána samovolně chladnout na laboratorní teplotu. Rozotk byl přefiltrován. Filtrační koláč byl promyt acetonem. Produkt byl sušen přes noc při teplotě 40 °C ve vakuové sušárně, čímž bylo získáno 1,57 g (65 % molárních, počítáno na maleinovou kyselinu) sloučeniny stukturního vzorce I, maleátu (MH: 644,8 g) ve formě bílých krystalů.

Průmyslová využitelnost

Prostředky podle předkládaného vynálezu jsou využitelné pro výrobu léků.

průmyslově

Claims (11)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Sůl N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny, která má rozpustnost ve vodě alespoň 5 mg/ml a hygroskopičnost nižší než 8 při relativní vlhkosti 98 %.
2. 2. N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl) amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny, hemifumarát.
3. 3. N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny, hemifumarát monohydrát.
4. 4. N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1- (methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny, L-(+)mandelát.
5. 5. Způsob přípravy soli podle kteréhokoliv z nároků 1 až

   4, vyznačující se tím, že zahrnuje rozpuštění N-methyl-N-((IR)-1-(N-methyl-N-((IR)-1-(methylkarbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)-2-(2-naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny ve vhodném rozpouštědle a rozpuštění konkrétní kyseliny ve stejném rozpouštědle a přidání roztoku kyseliny do roztoku N-methyl-N-((IR)-1-(N—methyl-N((IR)-1-(methyl-karbamoyl)-2-fenylethyl)karbamoyl)—2-(2naftyl)ethyl)amidu (2E)-5-amino-5-methylhex-2-enové kyseliny a vykrystalizování výsledné soli z roztoku.
6. 6. Farmaceutický prostředek obsahující sůl podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že dále obsahuje farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.
7. 7. Farmaceutický prostředek podle nároku 6, vyznačující se tím, že je ve formě jednotkové dávky obsahující 0,01 mg až 1000 mg denně.
8. 8. Farmaceutický prostředek pro stimulaci uvolňování růstového hormonu u pacientů, vyznačuj ící ·»·· 0· 00 00 «0 »0 + > · 0 0 0 « 0 0 0 · ··* 0 0·· ···· ·· 000 >0 0 0 0 00 0 • 0 0 0 0000 «000 ·· 00 «0 00 00* 0« tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství soli podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.
9. 9. Prostředek podle nároku 8, vyznačující se tím, že se používá pro léčení dětí s nedostatkem růstového hormonu.
10. 10. Použití soli podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 pro přípravu farmaceutického prostředku pro stimulaci uvolňování růstového hormonu u pacientů.
11. 11. Způsob stimulace uvolňování růstového hormonu u pacientů, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání účinného množství soli podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4 .