KR102553943B1 - 세포배양배지에 알부민, 히알루론산, 또는 콜라겐을 유효성분으로 포함하는 화장용 조성물 - Google Patents

세포배양배지에 알부민, 히알루론산, 또는 콜라겐을 유효성분으로 포함하는 화장용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 세포배양배지와 알부민, 히알루론산 또는 콜라겐을 유효성분으로 포함하는 화장용 또는 약학 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 조성물이 세포의 상처 회복능을 증가시킴으로써, 피부 상처, 피부 질환 또는 피부 상태를 개선, 예방 또는 치료하기 위한 화장용 및 약학 조성물로 유용하게 활용될 수 있다.

Description

세포배양배지에 알부민, 히알루론산, 또는 콜라겐을 유효성분으로 포함하는 화장용 조성물{COSMETIC COMPOSITION COMPRISING ALBUMIN, HYALURONIC ACID, OR COLLAGEN IN CELL CULTURE MEDIUM}
본 발명은 세포배양배지에 알부민, 히알루론산, 또는 콜라겐을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 화장용 조성물, 및 상기 조성물을 이용한 피부 상태 개선방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 포함하는 피부질환의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물, 및 상기 조성물을 이용한 피부 질환의 예방 또는 치료방법에 관한 것이다.
산업화, 도시화의 심화로 식생활과 주거생활의 변화, 환경오염에 의한 화학적 또는 생물학적 유해물질에 대한 노출로, 다양한 연령층에서 알레르기 질환이 크게 증가하고 있다. 이는 인체가 무해한 외부 환경에 대해서도 민감한 반응을 보이며, 천식이나 비염과 같은 호흡기 질환 또는 접촉성 피부염, 아토피성 피부염 등의 피부질환 등으로 나타나게 된다.
특히 피부는 외부 알레르기 유발 물질이 공기, 음식 등에 의해 직접적으로 접촉되어 과민한 면역 반응을 일으키게 되는데, 이와 같은 알레르기성 피부 질환은 음식물, 세균, 진드기, 기후환경인자 등 외부 항원에 지속적으로 노출되어 발병하는 염증 질환으로 개인의 유전적인 특성 때문에 다양한 환경 인자들에 대한 알레르기 반응이 개개인마다 다르게 나타난다.
여기서 알레르기란, 면역 불균형에 의한 과민반응의 일종으로 알러젠(allergen)이라는 특정한 항원에 대하여 나타나는 반응이다. 알레르기 반응은, 히스티딘이 L-히스티딘 디카복시레이즈에 의해 디카복실레이션되어 형성된 히스타민이 비만세포나 호염구에 과립형태로 저장되는데 이들이 알러젠과 결합하여 시작되고, 이때 세포가 탈과립되어 히스타민과 β-헥소사미니데이즈(beta-hexosaminidase)를 분비한다.
알레르기성 질환의 하나인 아토피성 피부염은 세계적으로 증가하는 추세로서, 주로 유아기 및 소아기에 시작되는 만성적이고 재발성의 피부질환이다. 아토피성 피부염의 발병 원인은 아직 확실하게 규명되지 않은 상태이나, 환경적 요인, 유전적 소인, 면역화학적 반응 및 피부보호막 이상 등이 주요 발병원인으로 여겨지고 있으며, 이의 증상도 소양증, 피부 건조증, 습진 등으로 다양하게 나타나고 있다. 또한 환자의 연령에 따라 피부 병변의 분포 및 반응 양상도 다르게 나타나고 있다(Lee H.R., 2000).
현재 아토피성 피부염의 치료를 위해서 많이 사용되고 있는 약물은 통상 국소 스테로이드, 국소 면역 조절제, 전신 스테로이드제, 전신면역억제제, 항히스타민제 등이 있으나, 이들 약물의 투여 또는 복용에 의해 각종 부작용의 발생 위험이 있다는 점에서 안전하고, 피부 건조증, 피부 보호막 이상 등의 피부 개선 효과를 나타내는 우수한 활성 성분의 개발이 요구되고 있다.
Lee H.R. Atopic Dermatitis. Department of Pediatrics, Medical College, Hallym University, Seoul, Korea. 2000; 43(9):1161-1167.
이에, 본 발명자는 피부 상태를 개선 및 피부 질환을 치료하는 물질을 연구, 개발하기 위해 노력하던 중, 특정 물질을 혼합한 조성물에서 세포의 상처 회복능이 증가함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 세포배양배지, 및 알부민, 콜라겐, 또는 히알루론산을 유효성분으로 포함하는 피부 상태 개선을 위한 화장용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화장용 조성물을 이를 필요로 하는 대상의 피부에 도포하는 단계를 포함하는 피부 상태를 개선하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 세포배양배지, 및 알부민, 콜라겐 또는 히알루론산을 유효성분으로 포함하는 피부 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 약학 조성물을 이를 필요로 하는 대상의 피부에 도포하는 단계를 포함하는 피부 질환의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 세포배양배지, 및 알부민, 히알루론산 또는 콜라겐을 유효성분으로 포함하는 화장용 및 약학 조성물은 세포의 상처 회복능을 증가시킴으로써, 외부 손상에 의한 피부 상처, 피부 질환, 및 피부 상태를 개선, 예방 또는 치료하기 위한 화장용 및 약학 조성물로 유용하게 활용되어 새로운 치료제 및 화장품으로 사용될 수 있으며, 현재 사용되는 피부연고 및 기능성 화장품에 활용될 수 있어 첨가제로 개발이 용이한 효과가 있다.
도 1은 제작한 세포배양배지 조성물과 알부민 또는 콜라겐 I을 포함하는 조성물에서 인간 피부 섬유아세포의 상처회복 효과를 나타낸 것이다.
도 2는 제작한 세포배양배지 조성물과 알부민 또는 콜라겐 I을 포함하는 조성물에서 인간 피부 섬유아세포의 상처회복 효과를 정량화한 그래프를 나타낸 것이다.
도 3은 제작한 세포배양배지 조성물, 알부민, 히알루론산 또는 콜라겐 III을 포함하는 조성물에서 인간 피부 섬유아세포의 상처회복 효과를 나타낸 것이다.
도 4는 제작한 세포배양배지 조성물, 알부민, 히알루론산 또는 콜라겐 III을 포함하는 조성물에서 인간 피부 섬유아세포의 상처회복 효과를 정량화한 그래프를 나타낸 것이다.
도 5는 세포배양배지와 알부민의 혼합 조성물의 아토피 개선 효과를 나타낸 것이다.
도 6은 세포배양배지와 알부민의 혼합 조성물의 아토피 개선 효과를 나타낸 것이다.
도 7은 세포배양배지와 알부민의 혼합 조성물의 각막 재생 효과를 나타낸 것이다.
본 발명은 일 측면으로, 세포배양배지; 및 알부민, 히알루론산 및 콜라겐으로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 어느 하나를 포함하는 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용한 용어 "세포배양배지"는 시험관 내에서(in vitro) 세포 성장 및 생존을 위해 세포가 필요로 하는 성분을 함유하거나, 세포 성장 및 생존을 돕는 성분을 함유한다. 구체적으로, 상기 성분은 비타민, 필수 또는 비필수 아미노산, 및 미량 원소일 수 있다. 상기 배지는 세포, 바람직하게는 진핵세포, 더 바람직하게는 동물 세포의 배양에 사용되는 배지일 수 있다.
상기 세포배양배지의 예로는 DMEM/F-12(Dulbecco's Modified Eagle's Medium/Nutrient Mixture F-12), DMEM, MEMα(Minimum Essential Mediumα), BME(Basal Medium Eagle), GMEM(Glasgow Minimum Essential Medium), RPMI-1640 Medium 등이 알려져 있으나, 이에 한정되지 않는다.
또한, 본 발명의 세포배양배지는 무혈청 배지(serum-free)이다. 무혈청 배지는 인간을 포함한 동물로부터 유래된 혈청(예를 들어, 동물 유래 혈청)을 함유하지 않는 배양 배지를 의미한다. 동물 유래 혈청은 배양하고자 하는 세포의 성장을 위한 범용적인 영양분을 제공하나, 미확인된 미량 성분을 포함하므로 분석이 어렵고, 재현성 있는 시험 및 생산공정을 확립하는데 어려움이 있으며, 인체에 대한 안정성을 보장할 수 없는 문제점이 있다. 그러나 본 발명에 따른 세포배양배지는 무혈청 배지로 인체에 대한 안정성이 보장되고, 재현성 있는 시험 및 생산공정의 확립이 가능하다.
또한, 상기 세포배양배지는 세포를 배양하기 전의 세포배양배지를 의미한다. 세포를 배양하기 전의 배양배지이므로, 세포배양배지의 성분의 변화가 없어 상업적으로 균질의 품질로 사용 가능하다.
본 발명에 따른 상기 세포배양배지는 아미노산 성분, 비타민 성분, 무기염 성분, 기타 성분 및 정제수로 구성되며,
a) 상기 아미노산 성분은 글리신, L-알라닌, L-발린, L-류신, L-이소류신, L-트레오닌, L-세린, L-시스테인, L-메티오닌, L-아스파르트산, L-아스파라긴, L-글루탐산, L-글루타민, L-리신, L-아르기닌, L-히스티딘, L-페닐알라닌, L-티로신, L-트립토판, L-프롤린, β-알라닌, 膨-아미노부티르산, 오르니틴, 시트룰린, 호모세린, 트리요드티로신, 티록신 및 디옥시페닐알라닌으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나의 아미노산 또는 이의 조합이고, 바람직하게는, 글리신, L-알라닌, L-아르기닌, L-시스테인, L-글루타민, L-히스티딘, L-라이신, L-메티오닌, L-프롤린, L-세린, L-트레오닌 및 L-발린으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나의 아미노산 또는 이의 조합이며,
b) 상기 비타민 성분은 바이오틴, D-판토텐산칼슘, 엽산, 나이아신아미드, 피리독신 하이드로클로라이드, 리보플라빈, 티아민 하이드로클로라이드, 비타민 B12, 염화콜린, i-이노시톨 및 아스코르브산으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나의 비타민 또는 이의 조합이고, 바람직하게는, i-이노시톨, 티아민 하이드로클로라이드, 나이아신아마이드 및 피리독신 하이드로클로라이드로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나 이상의 비타민 또는 이의 조합이며,
c) 상기 무기염 성분은 염화칼슘 (CaCl2)(무수), 황산동 펜타하이드레이트(CuSO4-5H2O), 황산제이철 헵타하이드레이트(FeSO4-7H2O), 염화마그네슘(무수), 황산마그네슘(MgSO4)(무수), 염화칼륨(KCl), 염화나트륨(NaCl), 인산수소이나트륨(Na2HPO4), 인산수소나트륨 모노하이드레이트(NaH2PO4-H2O), 황산아연 헵타하이드레이트(ZnSO4-7H2O), 질산제이철 노나하이드레이트(Fe(NO3)3·9H2O) 및 탄산수소나트륨(NaHCO3)으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나의 무기염 또는 이의 조합이고, 바람직하게는, 염화나트륨(NaCl), 탄산수소나트륨(NaHCO3), 염화칼륨(KCl), 염화칼슘(CaCl2)(무수) 및 인산수소나트륨 모노하이드레이트(NaH2PO4-H2O)로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나의 무기염 또는 이의 조합이며,
d) 상기 기타 성분은 D-글루코즈 (덱스트로즈), 소듐 피루베이트, 히포크산틴 Na, 티미딘, 리놀레산, 리포산, 아데노신, 시티딘, 구아노신, 우리딘, 2'-데옥시아데노신, 2'-데옥시시티딘 HCl 및 2'-데옥시구아노신으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 어느 하나의 기타 성분 또는 이의 조합이고, 바람직하게는, 소듐 피루베이트일 수 있다.
e) 정제수는 상기 아미노산, 비타민, 무기염 및 기타 성분을 용해시키기 위해 사용되며, 1차 이상의 증류를 거쳐 수득되거나, 필터를 통해 정제된 물일 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 의하면, 상기 세포배양배지는 글리신, L-알라닌, L-아르기닌 하이드로클로라이드, L-시스테인 하이드로클로라이드-모노하이드래이트, L-글루타민, L-히스티딘 하이드로클로라이드-모노하이드래이트, L-라이신 하이드로클로라이드, L-메티오닌, L-프롤린, L-세린, L-트레오닌, L-발린, i-이노시톨, 티아민 하이드로클로라이드, 나이아신아마이드, 피리독신 하이드로클로라이드, 염화나트륨(NaCl), 탄산수소나트륨(NaHCO3), 염화칼륨(KCl), 염화칼슘(CaCl2)(무수), 인산수소나트륨 모노하이드래이트 (NaH2PO4-H2O), 및 소듐 피루베이트로 구성되는 것이 더욱 바람직하다.
아미노산 성분은 단백질 합성의 원료로 세포의 성장에 이용되며, 이는 세포배양배지 내에 포함된 아미노산인 세린 1 중량부를 기준으로 0.2 내지 1.2 중량부의 글리신, 0.08 내지 0.3 중량부의 L-알라닌, 2 내지 7 중량부의 L-아르기닌 하이드로클로라이드, 0.2 내지 0.9 중량부의 L-시스테인 하이드로클로라이드-모노하이드레이트, 10 내지 18 중량부의 L-글루타민, 0.8 내지 2.0 중량의 L-히스티딘 하이드로클로라이드-모노하이드레이트, 1.0 내지 5.0 중량부의 L-라이신 하이드로클로라이드, 0.2 내지 1.2 중량부의 L-메티오닌, 0.2 내지 1.2 중량부의 L-프롤린, 1.0 내지 5.0 중량부의 L-트레오닌 및 1.0 내지 5.0 중량부의 L-발린을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 세포배양배지에 포함되는 아미노산 성분 및 함량에 대한 일구체예는 0.5 내지 1.0 중량부의 글리신, 0.10 내지 0.02 중량부의 L-알라닌, 5.0 내지 6.0 중량부의 L-아르기닌 하이드로클로라이드, 0.4 내지 0.7 중량부의 L-시스테인 하이드로클로라이드-모노하이드레이트, 12 내지 15 중량부의 L-글루타민, 1.0 내지 1.5 중량부의 L-히스티딘 하이드로클로라이드-모노하이드레이트, 2.0 내지 4.0 중량부의 L-리신 하이드로클로라이드, 0.4 내지 0.8 중량부의 L-메티오닌, 0.4 내지 0.8 중량부의 L-프롤린, 1.5 내지 2.5 중량부의 L-트레오닌 및 1.5 내지 2.5 중량부의 L-발린 일 수 있다. 상기 범위 내의 함량으로 아미노산 성분을 포함함으로써 세포의 성장 및 유지에 도움을 주고 제형 안정성을 향상시킬 수 있다.
상기 세포배양배지에 있어서, 비타민 성분은 세포의 활성을 유지하는 역할을 하며, 아미노산 세린 1 중량부를 기준으로 0.2 내지 0.9 중량부의 i-이노시톨, 0.04 내지 0.8 중량부의 티아민 하이드로클로라이드, 0.04 내지 0.8 중량부의 나이아신아미드 및 0.04 내지 0.8 중량부의 피리독신 하이드로클로라이드를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 세포배양배지에 포함되는 비타민 성분 및 함량에 대한 일구체예는 아미노산 세린 1 중량부를 기준으로 0.4 내지 0.7 중량부의 i-이노시톨, 0.06 내지 0.2 중량부의 티아민 하이드로클로라이드, 0.06 내지 0.2 중량부의 나이아신아미드 및 0.06 내지 0.2 중량부의 피리독신 하이드로클로라이드일 수 있다. 상기 범위 내의 함량으로 비타민 성분을 포함함으로써 세포 활성 유지에 도움을 줄 수 있다.
상기 무기염 성분은 세포 기능의 발현을 조절하는 역할을 하며, 이는 아미노산 세린 1 중량부를 기준으로 50 내지 200 중량부의 염화나트륨(NaCl), 50 내지 120 중량부의 탄산수소나트륨(NaHCO3), 2.0 내지 20 중량부의 염화칼륨(KCl), 1.0 내지 10 중량부의 염화칼슘(CaCl2)(무수) 및 0.5 내지 5.0 중량부의 인산수소나트륨 모노하이드레이트(NaH2PO4-H2O)를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 세포배양배지에 포함되는 무기염 성분 및 함량에 대한 일구체예는 아미노산 세린 1 중량부를 기준으로 100 내지 150 중량부의 염화나트륨(NaCl), 80 내지 100 중량부의 탄산수소나트륨(NaHCO3), 8 내지 15 중량부의 염화칼륨(KCl), 2.0 내지 8.0 중량부의 염화칼슘(CaCl2)(무수) 및 1.0 내지 4.0 중량부의 인산수소나트륨 모노하이드레이트(NaH2PO4-H2O)일 수 있다.
상기 기타 성분은 세포배양배지의 pH를 유지하는 성분 등을 포함할 수 있으며, 이는 아미노산 세린 1 중량부를 기준으로 0.5 내지 5.0 중량부의 소듐 피루베이트를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물에 포함되는 기타 성분 및 함량에 대한 일구체예는 아미노산 세린 1 중량부를 기준으로 1.0 내지 4.0 중량부의 소듐 피루베이트일 수 있다. 상기 범위 내의 함량으로 포함되는 기타 성분은 pH를 유지하여 제형 안정성을 향상시키는 등의 도움을 줄 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물을 구성하는 알부민은 인간혈청 알부민 또는 소혈청 알부민일 수 있다.
상기 인간혈청 알부민은 인간 혈액에서 발견되는 혈청 알부민으로서, 인간 혈장 내에 존재하는 가장 많은 단백질이다. 본 발명에서 인간혈청 알부민은 구체적으로 재조합 인간혈청 알부민일 수 있다. 또한, 상기 소혈청 알부민은 소에서 발견되는 혈청 알부민으로서, 실험에서 단백질 농도 표준으로서 종종 사용된다.
상기 알부민의 함량은 10 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 200 ㎍/㎖, 300 ㎍/㎖, 500 ㎍/㎖, 1000 ㎍/㎖의 농도로 함유될 수 있다. 또는 상기 알부민 함량은 10 내지 1000 ㎍/㎖, 50 내지 500 ㎍/㎖, 100 내지 250 ㎍/㎖의 농도로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물을 구성하는 히알루론산은 동물 등의 피부에 많이 존재하는 생체 합성 천연 물질로서, 친수성 물질이며, 동물 등의 피부에서 보습 작용의 역할을 한다.
상기 히알루론산의 함량은 0.01 mg/㎖, 0.1 mg/㎖, 0.5 mg/㎖, 1 mg/㎖, 5 mg/㎖ 및 10 mg/㎖의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 히알루론산의 함량은 0.01 내지 1 mg/㎖, 0.05 내지 0.5 mg/㎖, 0.01 내지 0.1 mg/㎖의 농도로 포함될 수 있다.
한편, 본 발명에 따른 조성물을 구성하는 콜라겐으로는 콜라겐 I 내지 콜라겐 IV를 사용할 수 있으며, 일 구체예로는 콜라겐 I 및 콜라겐 III일 수 있다. 가장 바람직하게는, 상기 콜라겐은 콜라겐 III일 수 있다.
인체에는 약 20가지의 콜라겐이 존재하는데, 인체에서 가장 많이 발견되는 콜라겐은 콜라겐 I로, 피부, 머리카락, 손톱, 장기, 뼈, 인대 등 약 80 내지 85%를 차지한다. 상기 콜라겐 III은 인체에서 두 번째로 많이 차지하는 콜라겐으로서 피부, 뼈, 연골, 힘줄, 기타 결합조직의 섬유 단백질 등 약 10 내지 15%를 차지하며, 태반 콜라겐으로도 알려져 있다.
상기 조성물에서 콜라겐은 1 ㎍/㎖, 5 ㎍/㎖, 10 ㎍/㎖, 20 ㎍/㎖, 50 ㎍/㎖, 100 ㎍/㎖, 150 ㎍/㎖, 200 ㎍/㎖의 농도로 포함될 수 있다. 또한, 상기 콜라겐은 1 내지 200 ㎍/㎖, 2 내지 100 ㎍/㎖, 10 내지 80 ㎍/㎖의 농도로 포함될 수 있다.
이때, 상기 조성물에 있어서 콜라겐 I의 함량은 1 내지 100 ㎍/㎖, 5 내지 50 ㎍/㎖, 10 내지 25 ㎍/㎖일 수 있으며, 바람직하게는 10 ㎍/㎖일 수 있다. 또한, 상기 조성물에 있어서 콜라겐 III의 함량은 2 내지 200 ㎍/㎖, 10 내지 120 ㎍/㎖, 20 내지 70 ㎍/㎖일 수 있으며, 바람직하게는 20 ㎍/㎖일 수 있다.
본 발명의 일 구체예로는 세포배양배지 및 알부민을 포함하는 조성물일 수 있다. 또한, 세포배양배지 및 히알루론산을 포함하는 조성물일 수 있다. 세포배양배지 및 콜라겐을 포함하는 조성물일 수 있다.
또한, 상기 조성물은 세포배양배지, 알부민 및 콜라겐을 포함하는 조성물일 수 있다. 또한, 상기 조성물은 세포배양배지, 알부민 및 히알루론산을 포함하는 조성물일 수 있다. 또한, 상기 조성물은 세포배양배지, 콜라겐 및 히알루론산을 포함하는 조성물일 수 있다.
또한, 상기 조성물은 세포배양배지, 알부민, 콜라겐 및 히알루론산을 포함하는 조성물일 수 있다.
실험 결과, 각 성분을 단일 처리하였을 때보다 혼합 처리하였을 때 인간 피부 섬유아세포의 상처 회복능이 더 증가함을 확인하였다. 또한, 본 발명의 일 실시예에서는 피부 개선에 뛰어난 효과가 있음이 알려진 EGF를 배지 조성물로 포함하였을 때보다 세포배양배지, 알부민 및 콜라겐 I, 또는 세포배양배지, 알부민, 콜라겐 III 및 히알루론산을 모두 배지 조성물로 포함하였을 때가 더 뛰어난 상처회복 효과를 나타내었다(도 2 및 도 4 참조).
또한, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 화장용 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 피부 상태 개선에 효과가 있다. 상기 "피부 상태 개선"은 주름의 발생 억제, 피부 노화 억제, 피부 탄력 개선, 피부 재생, 상처 또는 창상 회복(wound healing), 각막 재생, 피부 자극 완화 및 이의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는, 피부 세포의 기능 저하 또는 손실로부터 피부를 보호 또는 피부 상태를 개선하거나, 또는 피부 질환을 예방 또는 개선하는 것을 의미한다. 상기 피부 질환은 아토피성 피부염, 알레르기, 피부 습진, 여드름, 건선, 가려움증 및 이의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 화장용 조성물은 피부 상태의 개선을 위한 화장료 제조에 사용될 수 있다.
상기 화장용 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 화장료 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 화장용 조성물은 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제제화될 수 있다.
본 발명에 따른 화장용 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 및 이의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 담체 성분을 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 화장용 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 용매, 용매화제, 유탁화제 및 이의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 담체 성분을 포함할 수 있다. 이의 예로는, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄 지방산 에스테르, 및 이의 혼합물 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 화장용 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미세결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라가칸트 및 이의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 담체 성분을 포함할 수 있다.
본 발명은 상기 화장용 조성물을 이용하여 피부 상태를 개선시키는 방법을 제공한다.
상기 피부 상태를 개선시키는 방법은 본 발명에 따른 화장용 조성물을 이를 필요로 하는 대상의 피부에 도포하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 대상은 포유동물일 수 있고, 구체적으로는 인간일 수 있다.
피부에 도포하는 단계는 본 발명에 따른 화장용 조성물을 그 형태에 따라 피부에 직접 도포하거나, 분무하는 것을 포함할 수 있다. 이때, 상기 화장용 조성물의 도포량 및 하루 사용 횟수는, 사용자의 연령, 성별, 용도, 증상의 정도 등에 따라 적절하게 설정될 수 있고, 예를 들면, 상기 화장용 조성물의 적당량을 하루 1 내지 6회의 빈도로 피부에 도포할 수 있다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 조성물을 유효성분으로 포함하는 피부질환 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학 조성물은 앞서 전술한 화장용 조성물과 유효성분이 동일하다.
상기 피부 질환은 아토피성 피부염, 알러지, 피부 습진, 여드름, 건선, 가려움증 및 이의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.
상기 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가적으로 포함할 수 있다.
상기 담체는 본 발명의 약학 조성물 총 중량을 기준으로 약 1 중량% 내지 약 99.99 중량%, 바람직하게는 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량%로 포함될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 피부에 도포될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 제형은 연고제, 액제, 크림제, 스프레이제, 패취제 등과 같은 피부 외용제 형태일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 여러 관련 인자에 비추어 결정되는 것이므로 상기 투여량은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 아니 된다.
본 발명은 상기 약학 조성물을 이용하여 피부질환을 예방 또는 치료하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 피부 질환의 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에 사용하기 위한 상기 약학 조성물의 용도를 제공한다.
상기 피부질환을 예방 또는 치료하는 방법은 본 발명에 따른 약학 조성물을 이를 필요로 하는 대상의 피부에 도포하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 약학 조성물이 도포될 수 있는 대상은 포유동물일 수 있고, 구체적으로는 인간일 수 있다.
피부에 도포하는 단계는 본 발명에 따른 약학 조성물을 그 형태에 따라 피부에 직접 도포하거나, 분무하는 것을 포함할 수 있다. 이때, 상기 약학 조성물의 도포량 및 하루 사용 횟수는, 사용자의 연령, 성별, 용도, 증상의 정도 등에 따라 적절하게 설정될 수 있고, 예를 들면, 상기 약학 조성물의 적당량을 하루 1 내지 6회의 빈도로 피부에 도포할 수 있다.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
제조예 1. 세포배양배지의 제조
하기 [표 1]에 기재된 각 성분을 용매 초순수 정제수에 충분히 용해시켜 모든 성분들이 녹은 것을 확인한 뒤, 0.2 ㎛ 여과기로 여과하였다. 하기 [표 1]에 기재된 각 구성성분은 모두 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich, USA)에서 구입하였다. 하기 22종의 구성성분을 포함하는 혼합 조성물인 세포배양배지를 제조하였고, 이하 BG라고 표기한다.
Components Concentration (g/L)
글리신 (Glycine) 0.01875
L-알라닌 (L-alanine) 0.00445
L-아르기닌 하이드로클로라이드
(L-arginine hydrochloride)		 0.1475
L-시스테인 하이드로클로라이드-모노하이드래이트 (L-cysteine hydrochloride-monohydrate-H2O) 0.01756
L-글루타민 (L-glutamine) 0.365
L-히스티딘 하이드로클로라이드-모노하이드래이트 (L-histidine hydrochloride-monohydrate) 0.03148
L-라이신 하이드로클로라이드
(L-lysine hydrochloride)		 0.09125
L-메티오닌 (L-methionine) 0.01724
L-프롤린 (L-proline) 0.01725
L-세린 (L-serine) 0.02625
L-트레오닌 (L-threonine) 0.05345
L-발린 (L-valine) 0.05285
i-이노시톨 (i-inositol) 0.0126
티아민 하이드로클로라이드
(thiamine hydrochloride)		 0.00217
나이아신아마이드
(Niacinamide)		 0.00202
피리독신 하이드로클로라이드
(pyridoxine hydrochloride)		 0.002
염화나트륨 (sodium chloride, NaCl) 3.49775
탄산수소나트륨 (sodium bicarbonate, NaHCO3) 2.438
염화칼륨 (potassium chloride, KCl) 0.3118
염화칼슘 (calcium chloride, CaCl2)(무수) 0.1166
인산나트륨 모노배이직 모노베이직 모노하이드래이트 (sodium phosphate monobasic monohydrate, NaH2PO4-H2O) 0.0625
소듐 피루베이트 (sodium pyruvate) 0.055
실시예 1 내지 9. 세포배양배지, 및 알부민, 콜라겐 또는 히알루론산을 포함하는 조성물의 제조
하기 [표 2]에 기재된 함량과 같이, 제조예 1에서 제조된 BG에 알부민, 콜라겐 또는 히알루론산을 혼합하여 조성물을 제조하였다.
실시예 구성성분
1 BG + 알부민 100 ㎍/㎖
2 BG + 콜라겐 I 10 ㎍/㎖
3 BG + 알부민 100 ㎍/㎖ + 콜라겐 I 10 ㎍/㎖
4 BG + 히알루론산 0.1 mg/㎖
5 BG + 콜라겐 III 20 ㎍/㎖
6 BG + 알부민 100 ㎍/㎖ + 히알루론산 0.1 mg/㎖
7 BG + 알부민 100 ㎍/㎖ + 콜라겐 III 20 ㎍/㎖
8 BG + 히알루론산 0.1 mg/㎖ + 콜라겐 III 20 ㎍/㎖
9 BG + 알부민 100 ㎍/㎖ + 히알루론산 0.1 mg/㎖ + 콜라겐 III 20 ㎍/㎖
실시예 10 내지 16. 세포배양배지 및 알부민, 콜라겐 또는 히알루론산을 포함하는 조성물의 제조
하기 [표 3]에 기재된 함량과 같이, MEMα (Sigma-Aldrich, USA)에 알부민, 콜라겐 또는 히알루론산을 혼합하여 조성물을 제조하였다.
실시예 구성성분
10 MEMα + 알부민 100 ㎍/㎖
11 MEMα + 콜라겐 III 20 ㎍/㎖
12 MEMα + 히알루론산 0.1 mg/㎖
13 MEMα + 히알루론산 0.1 mg/㎖ + 콜라겐 III 20 ㎍/㎖
14 MEMα + 알부민 100 ㎍/㎖ + 콜라겐 III 20 ㎍/㎖
15 MEMα + 알부민 100 ㎍/㎖ + 히알루론산 0.1 mg/㎖
16 MEMα + 알부민 100 ㎍/㎖ + 히알루론산 0.1 mg/㎖ + 콜라겐 III 20 ㎍/㎖
실험예 1. 세포의 상처 회복능 평가
인간 피부 섬유아세포주(Fibroblast cell, Hs27)를 인간 피부 섬유아세포 10% FBS(fetal bovine serum), 1% P/S(Penicillin-Streptomycin)를 포함한 세포배양배지 DMEM(1X)을 사용하여 5% CO2가 유지되는 37℃의 항온 항습기에서 배양하였다. 인간 피부 섬유아세포는 6-웰 플레이트에 ibidi Culture-insert를 부착하여 각 insert 웰 당 5.2 x 104(cells/well)으로 배양하였다. 위의 조건으로 배양된 인간 피부 섬유아세포는 배양 24시간 후 serum-free DMEM(1X) 배양액에 다시 18시간 배양하여 본 시험 전까지 혈청이 포함되지 않은 상태를 유지시킨 다음 ibidi Culture-insert를 제거하였다.
1.1. BG, 및 알부민 또는 콜라겐 I을 포함하는 조성물에서 세포의 상처 회복능 확인
상기 제조된 세포 배양액에 BG(대조군), BG와 알부민 100 ㎍/㎖가 혼합된 조성물인 실시예 1, BG와 콜라겐 I 10 ㎍/㎖이 혼합된 조성물인 실시예 2, BG와 알부민 100 ㎍/㎖ 및 콜라겐 I 10 ㎍/㎖가 혼합된 조성물인 실시예 3을 처리하였다.
상기와 같이 처리한 지 9시간 후, 현미경을 이용하여 촬영하고, TScratch 프로그램을 이용하여 손상을 준 틈의 거리를 측정하였고, 대조군과 비교하였다. 그 결과를 도 1 및 도 2에 나타내었다.
도 1 및 도 2에 나타난 바와 같이, BG, 및 알부민 또는 콜라겐 I을 포함한 조성물을 단일 처리 또는 혼합 처리하였을 때 모두 대조군과 비교하여 인간 피부 섬유아세포의 증식 및 이동이 증가함을 확인하였다.
특히, BG를 포함한 세포 배양액에 알부민 또는 콜라겐 I을 각각 단일 처리하였을 때보다 혼합 처리하였을 때 인간 피부 섬유아세포의 증식 및 이동이 증가하여, 상처 회복능에 효과적임을 확인하였다. 즉, 알부민 또는 콜라겐 I을 BG를 포함한 세포 배양액에 각각 처리할 때보다 혼합 처리할 때 인간 피부 섬유아세포가 상처를 회복하는 능력이 더 상승함을 알 수 있었다.
1.2. 세포배양배지, 알부민, 히알루론산 또는 콜라겐 III를 포함하는 조성물의 세포의 상처 회복능 확인
상기 제조된 세포 배양액에 BG(대조군), BG와 알부민 100 ㎍/㎖가 혼합된 조성물인 실시예 1, BG와 히알루론산 0.1 mg/㎖가 혼합된 조성물인 실시예 4, BG와 콜라겐 III 20 ㎍/㎖이 혼합된 조성물인 실시예 5, BG와 알부민 100 ㎍/㎖, 히알루론산 0.1 mg/㎖ 및 콜라겐 III 20 ㎍/㎖가 혼합된 조성물인 실시예 9를 처리하였다. 대조군으로는 BG, 알부민 100 ㎍/㎖, 히알루론산 0.1 mg/㎖ 및 콜라겐 III 20 ㎍/㎖를 단독으로 처리하였다.
처리 9시간 후, 현미경을 이용하여 촬영하고, TScratch 프로그램을 이용하여 손상을 준 틈의 거리를 측정하였고, 각 실험예를 비교하였다. 그 결과를 도 3 및 도 4에 나타내었다.
도 3 및 도 4에 나타난 바와 같이, BG, 알부민, 히알루론산 또는 콜라겐 III을 단일 처리하였을 때보다 혼합 처리하였을 때 인간 피부 섬유아세포의 상처 회복능이 더 증가함을 확인하였다. 즉, BG, 알부민, 히알루론산 또는 콜라겐 III을 세포 배양액에 각각 처리할 때보다 혼합 처리할 때 인간 피부 섬유아세포의 상처를 회복하는 능력이 더 상승함을 알 수 있었다.
1.3. MEMα, 및 알부민, 히알루론산 또는 콜라겐 III를 포함하는 조성물의 세포의 상처 회복능 확인
상기 실험예 1.2.에서 수행한 방법과 동일한 방법으로, 실시예 10 내지 16에서 세포의 상처 회복능을 확인하기 위한 실험을 수행하였다. 그 결과, 세포 배양배지에 알부민, 히알루론산, 콜라겐 III을 각각 처리한 경우에 비하여, 상기 물질을 혼합한 후 처리할 때 세포의 상처 회복능이 우수함을 확인할 수 있었다. 또한, 세가지를 모두 혼합한 경우의 상처 회복능이 가장 우수함을 확인하였다.
실험예 2. 세포배양배지 및 알부민을 포함하는 조성물의 아토피 개선능 평가
상기 제조예 1에서 제조된 세포배양배지 및 알부민 500 ㎍/㎖을 포함하는 조성물이 피부질환의 일종인 아토피에 효과가 있는지를 평가하였다.
상기 세포배양배지 및 알부민을 포함한 조성물을 생후 6개월 남아인 아토피 환자의 환부(두부)에 1일 2회씩 2일 동안 도포하였다. 도포 결과를 도 5에 나타내었다. 또한, 상기 세포배양배지 및 알부민을 포함한 조성물을 24세 여성인 아토피 환자의 환부(목 부위)에 1일 2회씩 10일 동안 도포하였다. 그 결과를 도 6에 나타내었다.
도 5 및 도 6에 나타난 바와 같이, 생후 6개월 남자아이 두부의 아토피로 인한 상처가 도포 이틀 후에 현저히 감소하였으며, 24세 여성 환자 목 부위의 아토피로 인한 상처도 도포 열흘 후에 현저히 감소하였다. 이는 세포배양배지와 알부민을 포함하는 혼합 조성물이 아토피 개선에 효과가 있음을 의미한다.
실험예 3. 세포배양배지 및 알부민을 포함하는 조성물의 각막 재생 효과 평가
상기 제조예 1에서 제조된 세포배양배지(BG) 및 알부민 100 ㎍/㎖을 포함하는 조성물이 각막 박리증에 효과가 있는지를 평가하였다.
상기 세포배양배지 및 알부민을 포함한 조성물을 32세 한국인 여성중 난치성 각막상피 박리(refractory corneal erosion) 환자의 각막(눈)에 1일 2회씩 2주간 점안(eye drop)하였다. 점안 결과를 도 7에 나타내었다.
도 7에 나타난 바와 같이, 난치성 각막상피 박리(refractory corneal erosion) 환자의 손상된 각막이 점안 2주 후에 깨끗해진 것을 확인하였다. 이는 세포배양배지와 알부민을 포함하는 혼합 조성물이 각막 재생에 효과가 있음을 의미한다.

Claims (19)

  1. 세포배양배지; 및
    알부민, 히알루론산 및 콜라겐으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함하고,
    상기 세포배양배지는 아미노산 성분, 비타민 성분 및 무기염 성분을 포함하며,
    상기 아미노산 성분이 아미노산인 세린 1 중량부를 기준으로 0.2 내지 1.2 중량부의 글리신, 0.08 내지 0.3 중량부의 L-알라닌, 2 내지 7 중량부의 L-아르기닌 하이드로클로라이드, 0.2 내지 0.9 중량부의 L-시스테인 하이드로클로라이드-모노하이드레이트, 10 내지 18 중량부의 L-글루타민, 0.8 내지 2.0 중량의 L-히스티딘 하이드로클로라이드-모노하이드레이트, 1.0 내지 5.0 중량부의 L-라이신 하이드로클로라이드, 0.2 내지 1.2 중량부의 L-메티오닌, 0.2 내지 1.2 중량부의 L-프롤린, 1 중량부의 L-세린, 1.0 내지 5.0 중량부의 L-트레오닌 및 1.0 내지 5.0 중량부의 L-발린을 포함하고,
    상기 비타민 성분이 아미노산 세린 1 중량부를 기준으로 0.2 내지 0.9 중량부의 i-이노시톨, 0.04 내지 0.8 중량부의 티아민 하이드로클로라이드, 0.04 내지 0.8 중량부의 나이아신아미드 및 0.04 내지 0.8 중량부의 피리독신 하이드로클로라이드를 포함하고,
    상기 무기염 성분은 아미노산 세린 1 중량부를 기준으로 50 내지 200 중량부의 염화나트륨(NaCl), 50 내지 120 중량부의 탄산수소나트륨(NaHCO3), 2.0 내지 20 중량부의 염화칼륨(KCl) 및 1.0 내지 10 중량부의 염화칼슘(CaCl2)(무수)을 포함하는,
    피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 세포배양배지는 동물세포배양배지인 것인, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 무기염 성분이 인산수소나트륨 모노하이드레이트(NaH2PO4-H2O)를 추가로 포함하고,
    상기 세포배양배지는 추가로 소듐 피루베이트를 포함하는, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 세포배양배지가 글리신, L-알라닌, L-아르기닌 하이드로클로라이드, L-시스테인 하이드로클로라이드-모노하이드레이트, L-글루타민, L-히스티딘 하이드로클로라이드-모노하이드레이트, L-라이신 하이드로클로라이드, L-메티오닌, L-프롤린, L-세린, L-트레오닌, L-발린, i-이노시톨, 티아민 하이드로클로라이드, 나이아신아마이드, 피리독신 하이드로클로라이드, 염화나트륨(NaCl), 탄산수소나트륨(NaHCO3), 염화칼륨(KCl), 염화칼슘(CaCl2)(무수), 인산수소나트륨 모노하이드레이트(NaH2PO4-H2O) 및 소듐 피루베이트로 구성되는 것을 특징으로 하는, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 제3항에 있어서,
    상기 인산수소나트륨 모노하이드레이트(NaH2PO4-H2O)가 아미노산 세린 1 중량부를 기준으로 0.5 내지 5.0 중량부인, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  8. 제3항에 있어서,
    상기 소듐 피루베이트가 아미노산 세린 1 중량부를 기준으로 0.5 내지 5.0 중량부인, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 세포배양배지가 무혈청(serum-free) 배지인, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  10. 제2항에 있어서,
    상기 동물 세포배양배지가 DMEM/F-12(Dulbecco's Modified Eagle's Medium/Nutrient Mixture F-12), DMEM, MEMα(Minimum Essential Mediumα), BME(Basal Medium Eagle), GMEM(Glasgow Minimum Essential Medium), RPMI-1640 Medium 및 이의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  11. 제1항에 있어서,
    상기 알부민이 인간혈청 알부민 또는 소혈청 알부민인, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 알부민이 10 내지 1000 ㎍/㎖인, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 히알루론산이 0.01 내지 1 mg/㎖인, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 콜라겐이 콜라겐 I 또는 콜라겐 III인, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 콜라겐 I이 1 내지 100 ㎍/㎖인, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  16. 제14항에 있어서,
    상기 콜라겐 III이 2 내지 200 ㎍/㎖인, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  17. 제1항에 있어서,
    상기 피부 상태 개선이 주름의 발생 억제, 피부 노화 억제, 피부 탄력 개선, 피부 재생, 상처 또는 창상 회복(wound healing), 피부자극완화 및 이의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는, 피부 세포의 기능 저하 또는 손실로부터 피부를 보호 또는 피부 상태를 개선시키는 것을 특징으로 하는, 피부 상태 개선용 화장용 조성물.
  18. 세포배양배지; 및
    알부민, 히알루론산 및 콜라겐으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나 이상을 포함하고,
    상기 세포배양배지는 아미노산 성분, 비타민 성분, 무기염 성분을 포함하며,
    상기 아미노산 성분이 아미노산인 세린 1 중량부를 기준으로 0.2 내지 1.2 중량부의 글리신, 0.08 내지 0.3 중량부의 L-알라닌, 2 내지 7 중량부의 L-아르기닌 하이드로클로라이드, 0.2 내지 0.9 중량부의 L-시스테인 하이드로클로라이드-모노하이드레이트, 10 내지 18 중량부의 L-글루타민, 0.8 내지 2.0 중량의 L-히스티딘 하이드로클로라이드-모노하이드레이트, 1.0 내지 5.0 중량부의 L-라이신 하이드로클로라이드, 0.2 내지 1.2 중량부의 L-메티오닌, 0.2 내지 1.2 중량부의 L-프롤린, 1 중량부의 L-세린, 1.0 내지 5.0 중량부의 L-트레오닌 및 1.0 내지 5.0 중량부의 L-발린을 포함하고,
    상기 비타민 성분이 아미노산 세린 1 중량부를 기준으로 0.2 내지 0.9 중량부의 i-이노시톨, 0.04 내지 0.8 중량부의 티아민 하이드로클로라이드, 0.04 내지 0.8 중량부의 나이아신아미드 및 0.04 내지 0.8 중량부의 피리독신 하이드로클로라이드를 포함하고,
    상기 무기염 성분은 아미노산 세린 1 중량부를 기준으로 50 내지 200 중량부의 염화나트륨(NaCl), 50 내지 120 중량부의 탄산수소나트륨(NaHCO3), 2.0 내지 20 중량부의 염화칼륨(KCl) 및 1.0 내지 10 중량부의 염화칼슘(CaCl2)(무수)을 포함하는,
    피부 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  19. 제18항에 있어서,
    상기 피부 질환이 아토피성 피부염, 각막 박리증, 알러지, 피부 습진, 여드름, 건선, 가려움증 및 이의 조합으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 피부 질환 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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