KR102342093B1

KR102342093B1 - Trpa1의 활성 억제제

Info

Publication number: KR102342093B1
Application number: KR1020197027106A
Authority: KR
Inventors: 마사유키 다카이시; 후미타카 후지타; 히로노리 시미즈; 슈 사쿠야마; 겐야 이시다; 겐지 마루야마
Original assignee: 가부시키가이샤 만다무; 타카사고 코료 코교 카부시키가이샤
Priority date: 2017-03-30
Filing date: 2018-03-13
Publication date: 2021-12-22
Also published as: EP3603610B1; EP3603610A1; WO2018180460A1; JPWO2018180460A1; JP6859428B2; EP3603610A4; CN110603026A; KR20190121792A; US20200022889A1; US11464720B2

Abstract

본 발명은, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 함유하는 TRPA1의 활성 억제제이다:

[식 중, R¹, R², R³ 및 R⁴는 각각 독립적으로 수소 원자 또는 메틸기, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸은 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸기 또는 -O-R⁹-OH(식 중, R⁹은 치환기를 갖고 있어도 되는 알킬렌기를 나타냄)를 나타낸다. 단, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 중의 적어도 하나의 기는 -O-R⁹-OH이다].

Description

TRPA1의 활성 억제제

본 발명은, TRPA1의 활성 억제제에 관한 것이다. 더욱 상세하게는, 본 발명은, TRPA1의 활성 억제제, TRPA1의 활성 억제 방법, 외용제 및 자극감 완화제에 관한 것이다.

피부 외용제, 두발 외용제 등의 외용제에는, 예를 들면, 청량화제, 파라벤류, 알칼리제 등이 배합되어 있다. 이들 청량화제, 파라벤류 및 알칼리제는, 일과성(一過性) 수용체 전위 채널의 하나인 TRPA1을 활성화하고, 활성화된 TRPA1을 통하여 불쾌한 자극을 일으키는 것이, 본 발명자들에 의해 발견되어 있다(예를 들면, 특허문헌 1∼5 참조). 그러나, 최근, 사용자의 안전 의식의 고조로부터, 불쾌한 자극을 부여하지 않거나, 또는 불쾌한 자극이 약한 외용제가 선호되는 경향에 있다.

또, TRPA1의 활성을 억제하는 여러 가지의 화합물이, 본 발명자들에 의해 발견되어 있다(특허문헌 4 및 5 참조). 그러나, 이들 화합물은, 독특한 냄새를 갖기 때문에, 이들 화합물을 외용제 등에 배합하는 경우, 다른 성분에 의한 냄새의 마스킹 등의 냄새 대책이 요망되는 경우가 있다.

일본국 특개 2008-79528호 공보 일본국 특개 2009-82053호 공보 일본국 특개 2009-225733호 공보 일본국 특개 2012-62304호 공보 일본국 특개 2014-65690호 공보

본 발명은, 상기 종래 기술을 감안하여 이루어진 것이며, 냄새가 약하고, TRPA1의 활성을 효과적으로 억제하는 TRPA1의 활성 억제제 및 TRPA1의 활성 억제 방법, 피부에 대한 자극이 약한 외용제 그리고 자극감을 효과적으로 완화할 수 있는 자극 완화제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 요지는,

(1) TRPA1의 활성을 억제하는 활성 억제제로서, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 함유하는 것을 특징으로 하는 TRPA1의 활성 억제제:

[화학식 1]

[식 중, R¹, R², R³ 및 R⁴는 각각 독립적으로 수소 원자 또는 메틸기, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸은 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸기 또는 식 (Ⅱ)로 표시되는 기를 나타낸다:

-O-R⁹-OH　　　　　　　　　　　　　　(Ⅱ)

(식 중, R⁹은 치환기를 갖고 있어도 되는 알킬렌기를 나타낸다).

단, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 중의 적어도 하나의 기는 식 (Ⅱ)로 표시되는 기이다],

(2) 상기 식 (Ⅱ)로 표시되는 기에 있어서, R⁹이 치환기를 갖고 있어도 되는 탄소수 1∼6의 알킬렌기인 상기 (1)에 기재된 TRPA1의 활성 억제제,

(3) TRPA1의 활성을 억제하는 활성 억제제로서, 식 (Ⅲ)로 표시되는 화합물을 함유하는 것을 특징으로 하는 TRPA1의 활성 억제제:

[화학식 2]

,

(4) TRPA1의 활성을 억제하는 활성 억제 방법으로서, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 TRPA1과 접촉시키는 것을 특징으로 하는 TRPA1의 활성 억제 방법:

[화학식 3]

-O-R⁹-OH　　　　　　　　　　　　　　(Ⅱ)

(5) 상기 식 (Ⅱ)로 표시되는 기에 있어서, R⁹이 치환기를 갖고 있어도 되는 탄소수 1∼6의 알킬렌기인 상기 (4)에 기재된 TRPA1의 활성 억제 방법,

(6) 상기 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물이 식 (Ⅲ)로 표시되는 화합물인 상기 (4) 또는 (5)에 기재된 TRPA1의 활성 억제 방법:

[화학식 4]

,

(7) TRPA1을 활성화하는 성분이 배합된 외용제로서, 상기 성분에 의한 TRPA1의 활성화를 억제하는 유효 성분으로서 상기 (1)∼(3) 중 어느 것에 기재된 TRPA1의 활성 억제제를 함유하는 것을 특징으로 하는 외용제, 그리고

(8) TRPA1의 활성화에 기인하는 자극감을 완화하는 자극감 완화제로서, TRPA1의 활성화에 기인하는 자극감을 완화하는 유효 성분으로서 상기 (1)∼(3) 중 어느 것에 기재된 TRPA1의 활성 억제제를 함유하는 것을 특징으로 하는 자극감 완화제에 관한 것이다.

본 발명의 TRPA1의 활성 억제제 및 TRPA1의 활성 억제 방법은, 냄새가 약하고, TRPA1의 활성을 효과적으로 억제한다는 뛰어난 효과를 나타낸다. 또, 본 발명의 외용제는, 피부에 대한 불쾌한 자극이 약하다는 뛰어난 효과를 나타낸다. 또한, 본 발명의 자극감 완화제는, 자극감을 효과적으로 완화할 수 있다는 뛰어난 효과를 나타낸다.

도 1은 시험예 1에 있어서, 피험 시료의 종류와 TRPA1 활성 억제율과의 관계를 조사한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 시험예 2에 있어서, 피험 시료의 종류와 TRPM8 활성 촉진도와의 관계를 조사한 결과를 나타내는 그래프이다.

１．TRPA1의 활성 억제제

본 발명의 TRPA1의 활성 억제제(이하, 「활성 억제제」라고 함)는, TRPA1의 활성을 억제하는 활성 억제제로서, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 함유하는 것을 특징으로 한다:

[화학식 5]

-O-R⁹-OH　　　　　　　　　　　　　　(Ⅱ)

단, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 중의 적어도 하나의 기는 식 (Ⅱ)로 표시되는 기이다].

식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물은, 냄새가 약하고, TRPA1 아고니스트에 의한 TRPA1의 활성화를 억제하여 TRPA1의 활성을 억제한다. 따라서, 본 발명의 활성 억제제는, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 함유하고 있으므로, 당해 활성 억제제를 TRPA1과 접촉시킴으로써, TRPA1의 활성을 억제할 수 있다.

식 (Ⅰ)에 있어서, R¹, R², R³ 및 R⁴는, 각각 독립적으로 수소 원자 또는 메틸기이다. 또, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸은, 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸기 또는 식 (Ⅱ)로 표시되는 기를 나타낸다. 단, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 중의 적어도 하나의 기는, 식 (Ⅱ)로 표시되는 기이다. 또한, R³∼R⁸으로 치환된 시클로헥산환 상의 탄소는, 부제(不齊) 탄소가 되는 경우가 있지만, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 입체 구조는, 특별히 한정되는 것은 아니며, R체, S체 및 R체와 S체와의 혼합물 중 어느 것이어도 된다.

식 (Ⅱ)에 있어서, R⁹은, 치환기를 갖고 있어도 되는 알킬렌기이다. R⁹은, TRPA1의 활성에 대한 억제 작용(이하, 「TRPA1 활성 억제 작용」 이라고도 함)을 충분히 발현시키는 동시에, 본 발명의 TRPA1의 활성 억제제를 인간에게 이용하는 경우에 있어서, 인간의 피부에 대한 충분한 친화성을 확보하는 관점에서, 치환기를 갖고 있어도 되는 탄소수 1∼6의 알킬렌기인 것이 바람직하다.

상기 알킬렌기의 탄소수는, TRPA1 활성 억제 작용을 충분히 발현시키는 관점에서, 1 이상이 바람직하고, 보다 바람직하게는 2 이상이다. 또, 알킬렌기의 탄소수는, 당해 활성 억제제를 인간에게 이용하는 경우에 있어서, 인간의 피부에 대한 충분한 친화성을 확보하는 관점에서, 6 이하가 바람직하고, 보다 바람직하게는 4 이하이다.

탄소수가 2 이상의 알킬렌기는, 직쇄상이어도, 분기쇄상이어도 된다. 인간의 피부에의 침투성을 향상시키는 관점에서, 탄소수가 2 이상의 알킬렌기는, 직쇄를 갖는 것이 바람직하다. 또, 상기 알킬렌기가 갖고 있어도 되는 치환기로는, 예를 들면, 비닐기, 부테닐기, 펜테닐기, 헥세닐기 등의 탄소수 2∼6의 알케닐기; 페닐기, 크실릴기 등의 탄소수 6∼12의 아릴기; 벤질기, 페네틸기 등의 탄소수 7∼12의 아랄킬기; 3-클로로프로필기 등의 탄소수 1∼4의 할로겐화 알킬기; 메톡시기, 에톡시기 등의 탄소수 1∼4의 알콕시기 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다.

식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물 중에서는, 특히 냄새가 약하고, 보다 효과적으로 TRPA1의 활성을 억제할 수 있는 점에서, 식 (Ⅰ)에 있어서, R¹, R² 및 R³가 메틸기이고, R⁶가 -O-CH₂-CH₂-OH인 화합물, 즉 식 (Ⅲ)로 표시되는 화합물이 바람직하다:

[화학식 6]

.

식 (Ⅲ)로 표시되는 화합물은, 2-이소보르닐옥시에탄올이라고도 칭해지며, 상품명: 세다놀 엑스트라(Cedanol Extra, CAS 번호: 7070-15-7)로서 상업적으로 용이하게 입수할 수 있는 화합물이다.

식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물은, 단독으로 이용해도 되며, 2종류 이상을 병용해도 되고, 라세미 혼합물이어도 된다.

식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 제조하는 방법은, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 종류 등에 따라 다른 점에서 일괄적으로 결정할 수는 없으므로, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 종류에 따라서 적절히 선택하는 것이 바람직하다. 상기 방법으로는, 예를 들면, 식물의 추출물, 남조류 등의 대사산물 등으로부터 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 단리(單離)하는 제조 방법, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 화학 합성하는 제조 방법 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다. 2-이소보르닐옥시에탄올은, 파라톨루엔술폰산, 황산, 염산, 산성 이온 교환 수지 등의 산 촉매하에 있어서, 캄펜에 에틸렌글리콜을 반응시켜, 상법(常法)으로 후처리를 행한 후, 정밀 증류에 의해 단리하는 것 등에 의해 제조할 수 있다.

본 발명의 활성 억제제에 있어서의 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 함유율은, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 종류, 본 발명의 활성 억제제의 용도 등에 따라 다른 점에서, 일괄적으로 결정할 수는 없으므로, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 종류, 본 발명의 활성 억제제의 용도 등에 따라서 적절히 설정하는 것이 바람직하다. 본 발명의 활성 억제제에 있어서의 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 함유율은, 통상, TRPA1 활성 억제 작용을 충분히 발현시키는 관점에서, 바람직하게는 0.0001 질량％ 이상, 보다 바람직하게는 0.001 질량％ 이상, 더욱 바람직하게는 0.01 질량％ 이상이고, 인간의 피부에 대한 충분한 친화성을 확보하는 관점에서, 100 질량％ 이하이다.

본 발명의 활성 억제제는, 본 발명의 목적이 방해받지 않는 범위 내에서, 예를 들면, 물, pH 조정제, 킬레이트화제, 안정화제 등의 다른 성분을 함유하고 있어도 된다. 또한, 본 발명의 활성 억제제가 다른 성분을 함유하는 경우, 본 발명의 목적이 방해받지 않는 범위에서, 본 발명의 활성 억제제 중에 있어서, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물과 다른 성분이 복합체를 형성하고 있어도 된다.

본 발명의 활성 억제제는, 그 함유량 등에 따라서는, 피부에 있어서의 냉각(冷覺)에 관여하는 TRPM8의 활성을 촉진하는 작용(이하, 「TRPM8 활성 촉진 작용」이라고도 함)을 갖는 경우가 있다. 이와 같이, 본 발명의 활성 억제제는, 그 함유량 등에 따라 TRPM8 활성 촉진 작용을 갖는 점에서, 피부에 대하여 냉감을 부여할 수 있다. 따라서, 본 발명의 활성 억제제는, TRPA1의 활성화에 기인하는 불쾌한 자극을 억제하는 효과와, 피부에 냉감을 부여하는 효과를 아울러 발현하는 경우가 있다.

또, 본 발명의 활성 억제제에 의하면, 피부에 있어서의 불쾌한 자극감과의 관련성이 있는 TRPA1의 활성을 억제하는 점에서, 피부에 있어서의 불쾌한 자극을 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명의 활성 억제제는, TRPA1의 활성화에 기인하는 자극감을 완화하는 자극감 완화제로서 이용할 수 있다.

상기 TRPA1은, 자극 수용체로서의 기능을 발현하는 일과성 수용체 전위 채널(TRP 채널)의 하나이다. 상기 TRPA1의 아미노산 서열은, 서열 번호: 2(GenBank 액세션 번호 NM_007332)로 나타내어진다. 또한, 본 발명에 있어서는, TRPA1은, 서열 번호: 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드의 활성과 동등의 활성(이하, 「TRPA1 활성」이고 함)을 나타내는 것이면, 서열 번호: 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드의 변이체여도 된다. 상기 변이체로는, (A) 서열 번호: 2로 나타내어지는 서열에 있어서, 1 또는 수개의 아미노산 잔기의 치환, 결실(欠失) 또는 삽입을 갖고, 상기 TRPA1 활성을 나타내는 폴리펩티드, (B) 서열 번호: 2로 나타내어지는 서열에 대한 서열 동일성이 80％ 이상인 아미노산 서열로 이루어지며, 상기 TRPA1 활성을 나타내는 폴리펩티드 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 (A)에 있어서, 상기 「1개 또는 수개」란, 1∼30개이지만, 바람직하게는 1∼20개, 보다 바람직하게는 1∼10개, 더욱 바람직하게는 1∼3개, 특히 바람직하게는 1개 또는 2개를 말한다. 또, 「서열 동일성」은, 서열 번호: 2로 나타내어지는 아미노산 서열(참조 서열)에 대하여, 평가 대상의 아미노산 서열(쿼리 서열)을, 디폴트의 조건[Expect threshold: 10, word size: 3, Gap Costs(Existence 11, Extension 1) 및 Matrix: BLSUM62]으로 BLAST 알고리즘에 기초하는 PROTEIN BLAST를 이용해 얼라이먼트하여 산출된 값을 말한다. 상기 (B)에 있어서, 서열 동일성은, 상기 TRPA1 활성을 나타내는 범위이면 되고, 80％ 이상, 바람직하게는 90％ 이상, 보다 바람직하게는 95％ 이상, 더욱 바람직하게는 98％ 이상, 특히 바람직하게는 100％이다.

상기 TRPA1 활성으로는, 예를 들면, 세포에 있어서의 이온 유속(流速)의 조절능, 세포에 있어서의 막전위의 조절능 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다. 세포에 있어서의 이온 유속의 조절능으로는, 예를 들면, 세포 외에서 세포 내로의 양이온의 수송능 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다. 또, 세포에 있어서의 막전위의 조절능으로는, 예를 들면, 전류의 발생능 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다. 이들 TRPA1 활성은, TRPA1 아고니스트가 TRPA1에 결합하여 당해 TRPA1이 활성화함으로써 발현된다. 상기 양이온으로는, 예를 들면, 칼슘 이온, 나트륨 이온 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다.

상기 TRPA1 아고니스트로는, 예를 들면, 멘톨, 에탄올, 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 알칼리제(劑)(예를 들면, 암모니아, 모노에탄올아민, 수산화칼륨 등), 알릴이소티오시아네이트, 메틸파라벤, 알리신, 이실린, 과산화수소, 브라디키닌, 아크롤레인, 향유 성분(예를 들면, 시트랄, 오이게놀, 신남알데히드 등) 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 활성 억제제가 갖는 TRPA1 활성 억제 작용은, 예를 들면, TRPA1을 발현하는 세포(이하, 「TRPA1 발현 세포」라고 함) 내에 있어서의 칼슘 이온 농도, 상기 TRPA1 발현 세포 내에 있어서의 전류 등에 기초하여 평가할 수 있다.

TRPA1 발현 세포 내에 있어서의 칼슘 이온 농도를 이용하는 경우, 상기 TRPA1 활성 억제 작용은, 예를 들면,

(A1) TRPA1 발현 세포와 피험 물질(활성 억제제)과 TRPA1 아고니스트를 접촉시켜, 상기 TRPA1 발현 세포 내에 있어서의 칼슘 이온 농도[「칼슘 이온 농도 (A)」라고 함]를 측정하는 스텝,

(A2) TRPA1 발현 세포와 TRPA1 아고니스트를 접촉시켜, 상기 TRPA1 발현 세포 내에 있어서의 칼슘 이온 농도[「칼슘 이온 농도 (B)」라고 함]를 측정하는 스텝, 및

(A3) 상기 스텝 (A1)에서 얻어진 칼슘 이온 농도 (A)와 상기 스텝 (A2)에서 얻어진 칼슘 이온 농도 (B)를 비교하는 스텝을 행함으로써 평가할 수 있다(「평가법 A」라고 함). 상기 스텝 (A3)에 있어서, 칼슘 이온 농도 (B)와 비교하여 칼슘 이온 농도 (A)가 감소하고 있는 경우, 당해 피험 물질은, TRPA1 활성 억제 작용을 갖는다고 평가할 수 있다. 또, 상기 칼슘 이온 농도 (A)와 칼슘 이온 농도 (B) 사이의 차가 클수록, 당해 피험 물질은, 높은 TRPA1 활성 억제 작용을 갖는다고 평가할 수 있다.

상기 칼슘 이온 농도는, 예를 들면, 칼슘 킬레이트화제에 기초하는 형광 시약(이하, 「형광 칼슘 지시약」 이라고도 함)을 TRPA1 발현 세포에 도입하고, 당해 세포 내의 칼슘 이온에 상기 형광 칼슘 지시약을 결합시켜, 칼슘 이온과 결합한 형광 칼슘 지시약의 형광 강도를 조사하는 방법 등에 의해 측정할 수 있다. 상기 형광 칼슘 지시약으로는, 칼슘 이온과 결합하여, 형광 칼슘 지시약의 양에 따라 그 형광 특성이 변화하면 되고, 예를 들면, FURA 2, FURA 2-AM, Fluo-3, Fluo-4 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다.

TRPA1 발현 세포 내에 있어서의 전류를 이용하는 경우, 상기 TRPA1 활성 억제 작용은, 예를 들면,

(B1) TRPA1 발현 세포와 피험 물질(활성 억제제)과 TRPA1 아고니스트를 접촉시켜, 상기 TRPA1 발현 세포 내에 있어서의 일정 전위하에서의 전류[「전류 (A)」라고 함]를 측정하는 스텝,

(B2) TRPA1 발현 세포와 TRPA1 아고니스트를 접촉시켜, 상기 TRPA1 발현 세포 내에 있어서의 상기 스텝 (B1)에 이용된 전위와 같은 전위하에서의 전류[「전류 (B)」라고 함]를 측정하는 스텝, 및

(B3) 상기 스텝 (B1)에서 얻어진 전류 (A)와 상기 스텝 (B2)에서 얻어진 전류 (B)를 비교하는 스텝을 행함으로써 평가할 수 있다(「평가법 B」라고 함). 상기 스텝 (B3)에 있어서, 전류 (B)와 비교하여 전류 (A)가 작은 경우, 당해 피험 물질은, TRPA1 활성 억제 작용을 갖는다고 평가할 수 있다. 또, 상기 전류 (A)와 전류 (B) 사이의 차가 클 수록, 당해 피험 물질은, 높은 TRPA1 활성 억제 작용을 갖는다고 평가할 수 있다. 상기 전류는, 예를 들면, 패치 클램프법(Patch clamp technique) 등에 의해 측정할 수 있다.

２．TRPA1의 활성 억제 방법

식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물에 의하면, TRPA1의 활성을 억제할 수 있다. 본 발명의 TRPA1의 활성 억제 방법(이하, 「활성 억제 방법」이라고 함)은, TRPA1의 활성을 억제하는 활성 억제 방법으로서, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 TRPA1과 접촉시키는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 활성 억제 방법에 의하면, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물이 이용되고 있으므로, 예를 들면, 인간의 피부에 존재하는 감각 신경에 포함되는 TRPA1, 구강 등의 점막 아래에 존재하는 감각 신경에 포함되는 TRPA1 등의 활성을 효과적으로 억제할 수 있다.

식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물 중에서는, 보다 효과적으로 TRPA1의 활성을 억제할 수 있고, 게다가 냄새가 약한 점에서, 식 (Ⅰ)에 있어서, R¹, R² 및 R³가 메틸기이고, R⁶가 -O-CH₂-CH₂-OH인 화합물, 즉 식 (Ⅲ)로 표시되는 화합물(2-이소보르닐옥시에탄올)이 바람직하다.

식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물과 TRPA1과의 접촉은, TRPA1을 포함하는 부위, 예를 들면, 피부를 구성하는 세포 등에 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 공급함으로써 행할 수 있다.

상기 TRPA1과 접촉시키는 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 양은, 본 발명의 활성 억제 방법의 적용 대상 등에 따라 다른 점에서, 일괄적으로 결정할 수는 없으므로, 본 발명의 활성 억제 방법의 적용 대상 등에 따라서 적절히 설정하는 것이 바람직하다. 상기 TRPA1과 접촉시키는 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 양은, 예를 들면, 본 발명의 활성 억제 방법의 적용 대상이 피부에 존재하는 감각 신경에 포함되는 TRPA1인 경우, 통상, TRPA1 활성 억제 작용을 충분히 발현시키는 관점에서, 피부 10㎠당, 바람직하게는 10㎍ 이상, 보다 바람직하게는 100㎍ 이상이고, 피부에의 부하를 억제하는 관점에서, 바람직하게는 100mg 이하, 보다 바람직하게는 10mg 이하이다.

본 발명의 활성 억제 방법에 의한 TRPA1 활성 억제 작용은, 상기 활성 억제제에 의한 TRPA1 활성 억제 작용의 평가와 마찬가지의 수법에 의해 평가할 수 있다.

본 발명의 활성 억제 방법에 의하면, 피부에 있어서의 불쾌한 자극감과의 관련성이 있는 TRPA1의 활성을 억제할 수 있다. 따라서, 예를 들면, 피부와 접촉했을 때에 TRPA1의 활성화에 기인하는 불쾌한 자극을 부여할 가능성이 있는 성분을 포함하는 외용제를 사용할 때에, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물과 상기 외용제를 병용하여 당해 활성 억제 방법을 행함으로써, 피부에 있어서의 세포에 포함되는 TRPA1의 활성을 억제하여, TRPA1의 활성화에 기인하는 불쾌한 자극을 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명의 활성 억제 방법은, 민감 피부를 갖는 인간이, TRPA1의 활성화에 기인하는 불쾌한 자극을 부여할 가능성이 있는 성분을 포함하는 외용제를 사용할 때에 적용하는 데 적합하다.

３. 외용제

본 발명의 외용제는, 하나의 측면에서는, TRPA1을 활성화하는 성분이 배합된 외용제로서, 상기 성분에 의한 TRPA1의 활성화를 억제하는 유효 성분으로서 상기 TRPA1의 활성 억제제를 함유하는 것을 특징으로 한다(이하, 「실시 양태 1의 외용제」라고도 함). 상기 TRPA1의 활성 억제제에 의하면, 피부에 있어서의 불쾌한 자극감과의 관련성이 있는 TRPA1의 활성을 억제하는 점에서, TRPA1의 활성화에 기인하는 피부에 있어서의 불쾌한 자극을 억제할 수 있다. 따라서, 상기 실시 양태 1의 외용제는, 상기 TRPA1의 활성 억제제를 함유하고 있으므로, 당해 외용제에 배합된 상기 TRPA1을 활성화하는 성분에 의한 불쾌한 자극 등의 TRPA1의 활성화에 기인하는 불쾌한 자극을 저감할 수 있다. 상기 실시 양태 1의 외용제는, 바람직하게는 민감 피부용 외용제이다.

본 명세서에 있어서, 「민감 피부」란, 피부의 배리어 기능이 저하되어 있으며, 평균적인 피부에서는 반응하지 않는 물질, 자극에 대해서도 과민하게 반응하고, 피부의 가려움, 피부 거칠함 등의 상태가 발생하기 쉬운 경향이 있는 피부를 말한다.

또, 본 명세서에 있어서, 「TRPA1을 활성화하는 성분」이란, TRPA1 아고니스트 중, 외용제에 이용할 수 있는 성분을 말한다. 이러한 TRPA1을 활성화하는 성분으로는, 예를 들면, 상기 평가법 A와 마찬가지의 조작을 행했을 때에, 스텝 (A3)에 있어서, 칼슘 이온 농도 (B)와 비교하여, 칼슘 이온 농도 (A)가 증가하고 있는 것을 나타내는 성분, 상기 평가법 B를 행했을 때에, 스텝 (B3)에 있어서, 전류 (B)와 비교하여, 전류 (A)가 큰 것을 나타내는 성분 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이들 예시에만 한정되는 것은 아니다. 상기 TRPA1을 활성화하는 성분으로는, 예를 들면, 멘톨, 에탄올, 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 알칼리제(예를 들면, 암모니아, 모노에탄올아민, 수산화칼륨 등), 알릴이소티옥시아네이트, 메틸파라벤, 알리신, 이실린, 과산화수소, 브라디키닌, 아크롤레인, 향유 성분(예를 들면, 시트랄, 오이게놀, 신남알데히드 등) 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다.

상기 실시 양태 1의 외용제 중의 상기 활성 억제제에 포함되는 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물 중에서는, 보다 효과적으로 TRPA1의 활성을 억제할 수 있고, 게다가 냄새가 약한 점에서, 식 (Ⅰ)에 있어서, R¹, R² 및 R³가 메틸기이고, R⁶가 -O-CH₂-CH₂-OH인 화합물, 즉 식 (Ⅲ)로 표시되는 화합물(2-이소보르닐옥시에탄올)이 바람직하다.

상기 실시 양태 1의 외용제에 있어서의 상기 활성 억제제의 함유율은, 상기 TRPA1을 활성화하는 성분의 종류 및 그 양, 상기 TRPA1 활성 억제제의 종류, 외용제의 용도 등에 따라 다른 점에서, 일괄적으로 결정할 수는 없으므로, 상기 TRPA1을 활성화하는 성분의 종류 및 그 양, 상기 TRPA1 활성 억제제의 종류, 외용제의 용도 등에 따라서 적절히 설정하는 것이 바람직하다. 통상, 상기 실시 양태 1의 외용제에 있어서의 상기 활성 억제제의 함유율은, 실시 양태 1의 외용제에 있어서의 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 함유율이, 상기 TRPA1을 활성화하는 성분에 의한 불쾌한 자극을 억제하는 관점에서, 바람직하게는 0.01 질량％ 이상, 보다 바람직하게는 0.05 질량％ 이상, 더욱 바람직하게는 0.08 질량％ 이상, 특히 바람직하게는 0.1 질량％ 이상이 되고, 피부에 대한 부하를 억제하는 관점에서, 바람직하게는 8 질량％ 이하, 보다 바람직하게는 5 질량％ 이하가 되도록 조정되는 것이 바람직하다.

상기 TRPA1을 활성화하는 성분에 대한 상기 활성 억제제의 양은, 상기 TRPA1을 활성화하는 성분의 종류 및 그 양, 상기 TRPA1 활성 억제제의 종류, 외용제의 용도 등에 따라 다른 점에서, 일괄적으로 결정할 수는 없으므로, 상기 TRPA1을 활성화하는 성분의 종류 및 그 양, 상기 TRPA1 활성 억제제의 종류, 외용제의 용도 등에 따라서 적절히 설정하는 것이 바람직하다. 통상, 상기 TRPA1을 활성화하는 성분에 대한 상기 활성 억제제의 양은, 상기 TRPA1을 활성화하는 성분 100 질량부당의 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 양이, 상기 TRPA1을 활성화하는 성분에 의한 불쾌한 자극을 억제하는 관점에서, 바람직하게는 1 질량부 이상, 보다 바람직하게는 10 질량부 이상이 되고, 상기 TRPA1을 활성화하는 성분이 갖는 원하는 작용을 적절히 발현시키는 관점에서, 바람직하게는 500 질량부 이하, 보다 바람직하게는 200 질량부 이하가 되도록 조정되는 것이 바람직하다.

상기 실시 양태 1의 외용제에는, 상기 「TRPA1을 활성화하는 성분」 외에, 본 발명의 목적이 방해받지 않는 범위에서, 예를 들면, TRPA1을 활성화하는 성분 이외의 고급 알코올, 납(wax), 탄화수소유, 지방산, 유지, 에스테르유, 실리콘유 등의 유제; 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 양성(兩性) 계면활성제 등의 계면활성제; TRPA1을 활성화하는 성분 이외의 다가 알코올, 당, 히알루론산, 히알루론산 유도체 등의 보습제; 증점제, 산화 방지제, 킬레이트제, TRPA1을 활성화하는 성분 이외의 pH 조정제, TRPA1을 활성화하는 성분 이외의 향료, 색소, 자외선 흡수제, 자외선 산란제, 비타민, 아미노산, TRPA1을 활성화하는 성분 이외의 방부제, 물 등의 성분이 배합되어 있어도 된다.

또한, 상기 활성 억제제에 포함되는 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물이, 2-이소보르닐옥시에탄올인 경우, 상기 활성 억제제는, TRPA1의 활성화에 기인하는 불쾌한 자극을 억제하고, 게다가 인간의 피부에 있어서, TRPM8의 활성화에 기인하는 청량감을 부여할 수 있다. 따라서, 2-이소보르닐옥시에탄올을 함유하는 활성 억제제는, 상기 실시 양태 1의 외용제에 있어서, 멘톨 등의 TRPA1을 활성화하는 성분 대신에 청량화제로서 이용할 수도 있다.

상기 실시 양태 1의 외용제의 제형은, 외용제의 용도 등에 따라서 적절히 선택할 수 있다. 외용제의 제형으로는, 예를 들면, 로션, 크림, 폼, 유액, 젤, 팩, 분제, 에어로졸제, 첩부제(貼付劑) 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다.

상기 실시 양태 1의 외용제에는, 피부에 직접 적용되는 화장료 등의 피부 외용제, 피부에 접촉하는 경우가 있는 두발 외용제 등이 포함된다.

상기 피부 외용제로는, 예를 들면, 보디 로션, 데오도란트 화장료(예를 들면, 데오도란트 로션, 데오도란트 젤, 데오도란트 스프레이, 데오도란트 롤 온, 데오도란트 페이퍼 등), 화장수, 유액, 스킨 케어 크림, 토닉, 스틱 화장료, 립, 피부 탈색제(보디 블리칭제), 세정료(예를 들면, 보디 샴푸, 클렌징제, 세안제, 고형 비누 등), 시트 화장료(예를 들면, 닦아냄용 시트, 시트팩제 등), 첩부제(예를 들면, 파프제 등), 면도용 화장료(예를 들면, 셰이빙 젤 등) 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다.

또, 상기 두발 외용제로는, 예를 들면, 세발용 화장료(예를 들면, 샴푸, 린스 등), 육모제, 헤어 컬러, 헤어 블리치, 파마액, 헤어 스타일링제(예를 들면, 헤어토닉 등) 등을 들 수 있지만, 본 발명은, 이러한 예시에만 한정되는 것은 아니다.

이상 설명한 바와 같이, 상기 실시 양태 1의 외용제는, 인간의 피부에 대한 불쾌한 자극을 저감할 수 있는 점에서, 불쾌한 자극을 느끼기 쉬운 민감 피부용 외용제로서 유용하다.

본 발명의 외용제는, 다른 측면에서는, 멘톨, 에탄올, 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 알칼리제, 알릴이소티옥시아네이트, 메틸파라벤, 알리신, 이실린, 과산화수소, 브라디키닌, 아크롤레인, 시트랄, 오이게놀 및 신남알데히드로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 1종의 성분이 배합된 외용제로서, 상기 성분에 의한 자극을 억제하는 유효 성분으로서 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 함유하고, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 함유율이 0.01∼8 질량％인 것을 특징으로 한다(이하, 「실시 양태 2의 외용제」라고도 함). 상기 실시 양태 2의 외용제에 의하면, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 함유하고 있으므로, 외용제에 배합된 상기 성분에 의한 자극을 저감할 수 있다. 따라서, 상기 실시 양태 2의 외용제는, 상기 실시 양태 1의 외용제와 마찬가지로, 민감 피부용 외용제로서 이용할 수 있다.

상기 실시 양태 2의 외용제에 포함되는 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물 중에서는, 상기 성분에 의한 자극을 보다 효과적으로 억제할 수 있고, 게다가 특히 냄새가 약한 점에서, 식 (Ⅰ)에 있어서, R¹, R² 및 R³가 메틸기이고, R⁶가 -O-CH₂-CH₂-OH인 화합물, 즉 식 (Ⅲ)로 표시되는 화합물(2-이소보르닐옥시에탄올)이 바람직하다.

상기 실시 양태 2의 외용제에 있어서의 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 함유율은, 상기 성분에 의한 자극에 대한 억제 작용을 충분히 발현시키는 관점에서, 0.01 질량％ 이상, 바람직하게는 0.05 질량％ 이상, 보다 바람직하게는 0.08 질량％ 이상, 더욱 바람직하게는 0.1 질량％ 이상이고, 피부에 대한 부하를 억제하는 관점에서, 8 질량％ 이하, 바람직하게는 5 질량％ 이하이다.

상기 성분 100 질량부당의 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 양은, 상기 성분의 종류 및 그 양, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 종류, 외용제의 용도 등에 따라 다른 점에서, 일괄적으로 결정할 수는 없으므로, 상기 성분의 종류 및 그 양, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 종류, 외용제의 용도 등에 따라서 적절히 설정하는 것이 바람직하다. 통상, 상기 성분 100 질량부당의 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 양은, 상기 성분에 의한 자극을 억제하는 관점에서, 바람직하게는 1 질량부 이상, 보다 바람직하게는 10 질량부 이상이고, 상기 성분이 갖는 원하는 작용을 적절히 발현시키는 관점에서, 바람직하게는 500 질량부 이하, 보다 바람직하게는 200 질량부 이하인 것이 바람직하다.

상기 실시 양태 2의 외용제에는, 상기 성분 외에, 본 발명의 목적이 방해받지 않는 범위에서, 예를 들면, 고급 알코올, 납, 탄화수소유, 지방산, 유지, 에스테르유, 실리콘유 등의 유제; 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 양성 계면활성제 등의 계면활성제; 다가 알코올, 당, 히알루론산, 히알루론산 유도체 등의 보습제; 증점제, 산화 방지제, 킬레이트제, pH 조정제, 향료, 색소, 자외선 흡수제, 자외선 산란제, 비타민, 아미노산, 방부제, 물 등의 성분이 배합되어 있어도 된다.

상기 실시 양태 2의 외용제의 제형은, 상기 실시 양태 1의 외용제와 마찬가지이다. 상기 실시 양태 2의 외용제에는, 상기 실시 양태 1의 외용제와 마찬가지로, 피부에 직접 적용되는 화장료 등의 피부 외용제, 피부에 접촉하는 경우가 있는 두발 외용제 등이 포함된다.

이상 설명한 바와 같이, 상기 실시 양태 2의 외용제는, 상기 성분에 의한 인간의 피부에 대한 자극을 저감할 수 있는 점에서, 자극을 느끼기 쉬운 민감 피부용 외용제로서 유용하다.

４．자극감 완화제

본 발명의 활성 억제제에 의하면, 피부에 있어서의 불쾌한 자극감과의 관련성이 있는 TRPA1의 활성을 억제하는 점에서, 피부에 있어서의 불쾌한 자극을 억제할 수 있다. 따라서, 본 발명의 활성 억제제는, TRPA1의 활성화에 기인하는 자극감의 완화에 이용할 수 있다.

본 발명의 자극감 완화제는, TRPA1의 활성화에 기인하는 자극감을 완화하는 자극감 완화제로서, TRPA1의 활성화에 기인하는 자극감을 완화하는 유효 성분으로서 상기 TRPA1의 활성 억제제를 함유하는 것을 특징으로 한다. 본 발명의 자극감 완화제는, 상기 TRPA1의 활성 억제제를 함유하고 있으므로, TRPA1의 활성화에 기인하는 자극감을 완화할 수 있다.

본 발명의 자극감 완화제에 있어서의 상기 TRPA1의 활성 억제제의 함유율은, 상기 TRPA1을 활성화하는 성분의 종류 및 그 양, 상기 TRPA1의 활성 억제제의 종류, 자극감 완화제의 용도 등에 따라 다른 점에서, 일괄적으로 결정할 수는 없으므로, 상기 TRPA1을 활성화하는 성분의 종류 및 그 양, 상기 TRPA1의 활성 억제제의 종류, 자극감 완화제의 용도 등에 따라서 적절히 설정하는 것이 바람직하다. 통상, 본 발명의 자극감 완화제에 있어서의 상기 활성 억제제의 함유율은, 본 발명의 자극감 완화제에 있어서의 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물의 함유율이, 상기 TRPA1의 활성화에 기인하는 자극감을 완화하는 관점에서, 바람직하게는 0.0001 질량％ 이상, 보다 바람직하게는 0.001 질량％ 이상, 더욱 바람직하게는 0.01 질량％ 이상이고, 인간의 피부에 대한 충분한 친화성을 확보하는 관점에서, 100 질량％ 이하이다.

본 발명의 자극감 완화제에는, 본 발명의 목적이 방해받지 않는 범위에서, 예를 들면, 고급 알코올, 납, 탄화수소유, 지방산, 유지, 에스테르유, 실리콘유 등의 유제; 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 비이온성 계면활성제, 양성 계면활성제 등의 계면활성제; 다가 알코올, 당, 히알루론산, 히알루론산 유도체 등의 보습제; 증점제, 산화 방지제, 킬레이트제, pH 조정제, 향료, 색소, 자외선 흡수제, 자외선 산란제, 비타민, 아미노산, 방부제, 물 등의 성분이 배합되어 있어도 된다.

실시예

이하에 실시예에 의해 본 발명을 더욱 상세히 설명하지만, 본 발명은, 이러한 실시예에만 한정되는 것은 아니다.

실시예 1

2-이소보르닐옥시에탄올[다카사고 고료(주) 제조, 상품명: 세다놀, CAS 번호: 7070-15-7]을 그 농도가 1mM이 되도록 25℃에서 용매 A[조성: 140mM 염화 나트륨, 5mM 염화 칼륨, 2mM 염화 마그네슘, 2mM 염화 칼슘, 10mM 글루코오스 및 10mM 헤페스 염산 완충액(pH 7.4)]에 용해시켜, TRPA1 활성 억제제를 얻었다.

참고예 1

보르네올[와코 준야쿠 고교(주) 제조]를 그 농도가 1mM이 되도록 25℃에서 용매 A[조성: 140mM 염화 나트륨, 5mM 염화 칼륨, 2mM 염화 마그네슘, 2mM 염화 칼슘, 10mM 글루코오스 및 10mM 헤페스 염산 완충액(pH 7.4)]에 용해시켜, 시료를 얻었다.

참고예 2

참고예 1에 있어서, 보르네올을 이용하는 대신에, 1,8-시네올을 이용한 것을 제외하고, 참고예 1과 마찬가지로 조작을 행하여, 시료를 얻었다.

비교예 1

글리세린을 그 농도가 5mM이 되도록 25℃에서 용매 A[조성: 140mM 염화 나트륨, 5mM 염화 칼륨, 2mM 염화 마그네슘, 2mM 염화 칼슘, 10mM 글루코오스 및 10mM 헤페스 염산 완충액(pH 7.4)]에 용해시켜, 시료를 얻었다.

조제예 1(TRPA1 발현 세포의 조제)

인간 TRPA1을 코드하는 cDNA[서열 번호: 1(GenBank 액세션 번호: NM_007332)로 나타내어지는 염기 서열의 63번 위치∼3888번 위치의 폴리뉴클레오티드]를, 포유동물 세포용 벡터[인비트로젠사 제조, 상품명: pcDNA3.1(+)]의 클로닝 사이트에 삽입하여, 인간 TRPA1 발현 벡터를 얻었다. 얻어진 인간 TRPA1 발현 벡터 1㎍과, 유전자 도입용 시약[인비트로젠사 제조, 상품명: PLUS Reagent(플러스 리젠트), 카탈로그 번호: 11514-015] 6μL를 혼합하여, 혼합물 I을 얻었다. 또, 유전자 도입용 카티온성 지질[인비트로젠사 제조, 상품명: 리포펙타민(등록상표), 카탈로그 번호: 18324-012] 4μL와, 혈청 사용량 저감 배지[인비트로젠사 제조, 상품명: OPTI-MEM(등록상표) I Reduced-Serum Medium(카탈로그 번호: 11058021)] 200μL를 혼합하여, 혼합물 Ⅱ를 얻었다.

또, 5 체적％ 이산화탄소 분위기 중, 37℃로 유지된 직경 35mm의 샤알레 상의 10 질량％ 소 태아 혈청(FBS) 함유 둘베코 개변 이글 배지(DMEM) 중에 있어서, 5×10⁵ 세포의 HEK293 세포를 70％의 컨플루엔시가 될 때까지 배양했다.

얻어진 세포 배양물에, 상기 혼합물 I과 혼합물 Ⅱ를 첨가함으로써, HEK293 세포에 상기 인간 TRPA1 발현 벡터를 도입하여, TRPA1 발현 세포를 얻었다.

조제예 2(TRPM8 발현 세포의 제조)

인간 TRPM8을 코드하는 cDNA[서열 번호: 3(GenBank 액세션 번호: NM_024080)으로 나타내어지는 염기 서열의 41번 위치∼3355번 위치의 폴리뉴클레오티드]를, 포유동물 세포용 벡터[인비트로젠사 제조, 상품명: pcDNA3.1(+)]의 클로닝 사이트에 삽입하여, 인간 TRPM8 발현 벡터를 얻었다. 얻어진 인간 TRPM8 발현 벡터 1㎍과, 유전자 도입용 시약[인비트로젠사 제조, 상품명: PLUS Reagent(플러스 리젠트), 카탈로그 번호: 11514-015] 6μL를 혼합하여, 혼합물 Ⅲ를 얻었다. 또, 조제예 1과 마찬가지로, 유전자 도입용 카티온성 지질[인비트로젠사 제조, 상품명: 리포펙타민(등록상표), 카탈로그 번호: 18324-012] 4μL와, 혈청 사용량 저감 배지[인비트로젠사 제조, 상품명: OPTI-MEM(등록상표) I Reduced-Serum Medium(카탈로그 번호: 11058021)] 200μL를 혼합하여, 혼합물 Ⅱ를 얻었다.

또, 5 체적％ 이산화탄소 분위기 중, 37℃로 유지된 직경 35mm의 샤알레 상의 10 질량％ FBS 함유 DMEM 배지 중에 있어서, 5×10⁵ 세포의 HEK293 세포를 70％의 컨플루엔시가 될 때까지 배양했다.

얻어진 세포 배양물에, 상기 혼합물 Ⅲ와 혼합물 Ⅱ를 첨가함으로써, HEK293 세포에 상기 인간 TRPM8 발현 벡터를 도입하여, TRPM8 발현 세포를 얻었다.

시험예 1

조제예 1에서 얻어진 TRPA1 발현 세포를, 세포 내 칼슘 이온 측정용 시약인 FURA 2-AM(인비트로젠사 제조)를 최종 농도 5μM로 포함하는 10 질량％ FBS 함유 DMEM 배지 중, 실온에서 60분간 인큐베이션함으로써, 상기 TRPA1 발현 세포에 FURA 2-AM을 도입하여, FURA 2-AM 도입 TRPA1 발현 세포를 얻었다.

얻어진 FURA 2-AM 도입 TRPA1 발현 세포를 순환 정온(定溫) 챔버 부착 형광 측정 장치[하마마츠 포토닉스(주) 제조, 상품명: ARGUS-50]의 각 챔버에 넣었다. 그 후, 챔버 중의 FURA 2-AM 도입 TRPA1 발현 세포를, 용매 A[조성: 140mM 염화 나트륨, 5mM 염화 칼륨, 2mM 염화 마그네슘, 2mM 염화 칼슘, 10mM 글루코오스 및 10mM 헤페스 염산 완충액(pH 7.4)]로 세정했다.

다음으로, 세정 후의 FURA 2-AM 도입 TRPA1 발현 세포가 들어간 챔버에 TRPA1의 아고니스트를 넣고, FURA 2-AM 도입 TRPA1 발현 세포와 상기 아고니스트를 혼합했다. 또한, 상기 아고니스트로서, 1mM 멘톨을 함유하는 용매 A를 이용했다.

그 후, 챔버에 있어서, 여기 파장 340nm에 있어서의 TRPA1 발현 세포에 도입되고, 또한 세포 내의 칼슘 이온에 결합한 FURA 2-AM에 기초한 형광의 강도 A 및 여기 파장 380nm에 있어서의 TRPA1 발현 세포에 도입된 FURA 2-AM에 기초한 형광의 강도 B를 측정했다.

측정된 형광의 강도 A 및 B를 이용하여, Δ형광 강도비_{아고니스트}를 산출했다. 상기 Δ형광 강도비_{아고니스트}는, 식 (IV)에 기초하여 산출했다:

[수학식 1]

또한, 식 (IV)에 있어서, 형광 강도_340nm로서 상기 형광의 강도 A를 이용하고, 형광 강도_380nm로서 상기 형광의 강도 B를 이용했다. 식 (IV)에 있어서, 대조는, 용매 A이다.

또, 상기 아고니스트를 단독으로 이용하는 대신에, 피험 시료로서, 실시예 1에서 얻어진 TRPA1 활성 억제제, 참고예 1에서 얻어진 시료, 참고예 2에서 얻어진 시료 또는 비교예 1에서 얻어진 시료와, 상기 아고니스트를 혼합하여 이용한 것을 제외하고, 상기 아고니스트를 단독으로 이용한 경우와 마찬가지의 조작을 행하여, 여기 파장 340nm에 있어서의 TRPA1 발현 세포에 도입되고, 또한 세포 내의 칼슘 이온에 결합한 FURA 2-AM에 기초한 형광의 강도 C 및 여기 파장 380nm에 있어서의 TRPA1 발현 세포에 도입된 FURA 2-AM에 기초한 형광의 강도 D를 측정했다.

측정된 형광의 강도 C 및 D를 이용하여, Δ형광 강도비_{피험 시료}를 산출했다. 상기 Δ형광 강도비_{피험 시료}는, 식 (V)에 기초하여 산출했다:

[수학식 2]

또한, 식 (V)에 있어서, 형광 강도_340nm로서 상기 형광의 강도 C를 이용하고, 형광 강도_380nm로서 상기 형광의 강도 D를 이용했다. 식 (V)에 있어서, 대조는, 용매 A이다.

산출된 Δ형광 강도비_{아고니스트}와 Δ형광 강도비_{피험 시료}로부터, TRPA1의 활성에 대한 억제율(TRPA1 활성 억제율)을 산출했다. 또한, TRPA1 활성 억제율은, 식 (VI)에 기초하여 산출했다:

[수학식 3]

시험예 1에 있어서, 피험 시료의 종류와 TRPA1 활성 억제율과의 관계를 조사한 결과를 도 1에 나타낸다. 도면 중, 레인 1은 피험 시료로서 실시예 1에서 얻어진 TRPA1 활성 억제제를 이용했을 때의 TRPA1 활성 억제율, 레인 2는 피험 시료로서 참고예 1에서 얻어진 시료를 이용했을 때의 TRPA1 활성 억제율, 레인 3은 피험 시료로서 참고예 2에서 얻어진 시료를 이용했을 때의 TRPA1 활성 억제율, 레인 4는 피험 시료로서 비교예 1에서 얻어진 시료를 이용했을 때의 TRPA1 활성 억제율을 나타낸다.

도 1에 나타난 결과로부터, 실시예 1에서 얻어진 TRPA1 활성 억제제를 이용했을 때의 TRPA1 활성 억제율(도 1 중, 레인 1)은, 약 99％인 것을 알 수 있다. 또, 참고예 1에서 얻어진 TRPA1 활성 억제제를 이용했을 때의 TRPA1 활성 억제율(도 1 중, 레인 2) 및 참고예 2에서 얻어진 TRPA1 활성 억제제를 이용했을 때의 TRPA1 활성 억제율(도 1 중, 레인 3)은, 각각, 약 96％ 및 71％인 것을 알 수 있다. 한편, 대조로서의 글리세린이 포함된 비교예 1에서 얻어진 시료를 이용했을 때의 TRPA1 활성 억제율(도 1 중, 레인 4)은, 0％ 이하인 점에서, 실시예 1에서 얻어진 활성 억제제에 포함되는 2-이소보르닐옥시에탄올은, 블로커로서 작용하여, 멘톨에 의해 야기되는 TRPA1의 활성화에 의해 발현하는 TRPA1의 활성을 억제하는 것이 시사된다. 또, 실시예 1에서 얻어진 활성 억제제에 포함되는 2-이소보르닐옥시에탄올은, 보르네올 및 1,8-시네올과 마찬가지로 TRPA1의 활성을 억제하는 것을 알 수 있다.

또, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물로서, 2-이소보르닐옥시에탄올 이외의 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 이용했을 때도, 2-이소보르닐옥시에탄올을 이용했을 때와 마찬가지의 경향이 보여진다. 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물은, 냄새가 약한 화합물이다. 이러한 결과로부터, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물은, 냄새가 약하고, TRPA1의 활성을 효과적으로 억제하는 점에서, TRPA1의 활성 억제제로서 이용할 수 있는 것을 알 수 있다. 또, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물은, TRPA1을 활성화하는 성분이 배합된 외용제에 있어서의 상기 성분에 의한 TRPA1의 활성화에 기인하는 불쾌한 자극을 억제할 수 있다. 따라서, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물은, TRPA1을 활성화하는 성분이 배합된 외용제에서의 유효 성분으로서 이용할 수 있는 것을 알 수 있다. 또한, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물은, TRPA1의 활성을 효과적으로 억제하는 점에서, TRPA1의 활성화에 기인하는 자극감을 효과적으로 완화할 수 있다. 따라서, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물은, TRPA1의 활성화에 기인하는 자극감을 완화하는 자극감 완화제의 유효 성분으로서 이용할 수 있는 것을 알 수 있다.

시험예 2

조제예 2에서 얻어진 TRPM8 발현 세포를, 세포 내 칼슘 이온 측정용 시약인 FURA 2-AM(인비트로젠사 제조)을 최종 농도 5μM로 포함하는 10 질량％ FBS 함유 DMEM 배지 중, 실온에서 60분간 인큐베이션함으로써, 상기 TRPM8 발현 세포에 FURA 2-AM을 도입하여, FURA 2-AM 도입 TRPM8 발현 세포를 얻었다.

얻어진 FURA 2-AM 도입 TRPM8 발현 세포를 순환 정온 챔버 부착 형광 측정 장치[하마마츠 포토닉스(주) 제조, 상품명: ARGUS-50]의 각 챔버에 넣었다. 그 후, 챔버 중의 FURA 2-AM 도입 TRPM8 발현 세포를, 용매 A[조성: 140mM 염화 나트륨, 5mM 염화 칼륨, 2mM 염화 마그네슘, 2mM 염화 칼슘, 10mM 글루코오스 및 10mM 헤페스 염산 완충액(pH 7.4)]로 세정했다.

다음으로, 세정 후의 FURA 2-AM 도입 TRPM8 발현 세포가 들어간 챔버에, 피험 시료를 넣고, FURA 2-AM 도입 TRPM8 발현 세포와 상기 피험 시료를 혼합했다. 또한, 상기 피험 시료로서, 2-이소보르닐옥시에탄올의 농도를 0.5mM로 한 것을 제외하고 실시예 1과 마찬가지의 조작을 행함으로써 조제한 TRPA1 활성 억제제(0.5mM), 또는 보르네올의 농도를 0.5mM로 한 것을 제외하고 참고예 1과 마찬가지의 조작을 행함으로써 조제한 시료(0.5mM)를 이용했다.

그 후, 챔버에 있어서, 여기 파장 340nm에 있어서의 TRPM8 발현 세포에 도입되고, 또한 세포 내의 칼슘 이온에 결합한 FURA 2-AM에 기초한 형광의 강도 E 및 여기 파장 380nm에 있어서의 TRPM8 발현 세포에 도입된 FURA 2-AM에 기초한 형광의 강도 F를 측정했다.

측정된 형광의 강도 E 및 F를 이용하고, 식 (V)에 기초하여 Δ형광 강도비_{피험 시료}를 산출했다. 또한, 식 (V)에 있어서, 형광 강도 340nm로서 상기 형광의 강도 E를 이용하고, 형광 강도 380nm로서 상기 형광의 강도 F를 이용했다. 식 (V)에 있어서, 대조는 용매 A이다.

또, 상기 피험 시료 대신에, TRPM8의 아고니스트를 단독으로 이용한 것을 제외하고, 상기 피험 시료를 이용한 경우와 마찬가지의 조작을 행하여, 여기 파장 340nm에 있어서의 TRPM8 발현 세포에 도입되고, 또한 세포 내의 칼슘 이온에 결합한 FURA 2-AM에 기초한 형광의 강도 G 및 여기 파장 380nm에 있어서의 TRPM8 발현 세포에 도입된 FURA 2-AM에 기초한 형광의 강도 H를 측정했다. 또한, 상기 아고니스트로서, 1mM 멘톨을 함유하는 용매 A를 이용했다.

측정된 형광의 강도 G 및 H를 이용하고, 식 (IV)에 기초하여 Δ형광 강도비_{아고니스트}를 산출했다. 또한, 식 (IV)에 있어서, 형광 강도_340nm로서 상기 형광의 강도 G를 이용하고, 형광 강도_380nm로서 상기 형광의 강도 H를 이용했다. 상기 (IV)에 있어서, 대조는 용매 A이다.

산출된 Δ형광 강도비_{피험 시료}와 Δ형광 강도비_{아고니스트}로부터, 아고니스트에 의한 TRPM8의 활성 촉진에 대한 피험 시료에 의한 TRPM8의 활성 촉진의 비율(이하, 「TRPM8 활성 촉진도」라고도 함)을 산출했다. 또한, 상기 TRPM8 활성 촉진도는, 식 (Ⅶ)에 기초하여 산출했다:

TRPM8 활성 촉진도

＝Δ형광 강도비_{피험 시료}/Δ형광 강도비_{아고니스트}　　　　　(Ⅶ)

시험예 2에 있어서, 피험 시료의 종류와 TRPM8 활성 촉진도와의 관계를 조사한 결과를 도 2에 나타낸다. 도면 중, 레인 1은 피험 시료로서 실시예 1에서 얻어진 TRPA1 활성 억제제를 이용했을 때의 TRPM8 활성 촉진도, 레인 2는 피험 시료로서 참고예 1에서 얻어진 시료를 이용했을 때의 TRPM8 활성 촉진도를 나타낸다.

도 2에 나타난 결과로부터, 실시예 1에서 얻어진 TRPA1 활성 억제제를 이용했을 때의 TRPM8 활성 촉진도(도 2 중, 레인 1 참조)는, 약 0.69인 것을 알 수 있다. 한편, 참고예 1에서 얻어진 TRPA1 활성 억제제를 이용했을 때의 TRPM8 활성 촉진도(도 2 중, 레인 2 참조)는, 약 0.35인 것을 알 수 있다. 도 1 및 2에 나타난 결과로부터, 실시예 1에서 얻어진 TRPA1 활성 억제제에 포함되는 2-이소보르닐옥시에탄올은, TRPA1 활성 억제 작용과, 피부에 냉자극을 부여하는 TRPM8의 활성의 촉진 작용(TRPM8 활성 촉진 작용)의 양쪽을 갖고 있으며, 게다가 보르네올보다도 높은 TRPM8 활성 촉진 작용을 갖는 것을 알 수 있다. 따라서, 이러한 결과로부터, 실시예 1에서 얻어진 TRPA1 활성 억제제는, TRPA1의 활성화에 기인하는 불쾌한 자극을 억제하는 효과와, 피부에 냉감을 부여하는 효과를 아울러 발현하는 것을 알 수 있다.

실시예 2, 3, 비교예 2 및 3

에탄올, 멘톨, 2-이소보르닐옥시에탄올 및 정제수를, 표 1에 나타나는 조성이 되도록 혼합함으로써, 실시예 2, 3, 비교예 2 및 3의 시험용 외용제를 얻었다.

시험예 3

피부 외용제가 적용되는 피험자의 경부(經部)의 귀 하부를 젖은 타월로 닦아, 피지 더러움 등을 제거했다. 다음으로, 피험자를 실온 22±1℃ 및 습도 45±5％로 유지된 평가실 내에서 약 10분간 안정시켰다. 그 후, 실시예 2에서 얻어진 시험용 외용제 750μL를 적신 부직포[산쇼 시교(주) 제조, 품번 KP9560, 세로 3cm×가로 3cm]를 피험자의 경부의 귀 하부에 붙였다. 피험자의 경부의 귀 하부에의 부직포의 부착으로부터 1, 3, 5, 7 및 10분간 경과 시에 있어서의 자극감을 피험자에게 평가시켰다. 또, 상기에 있어서, 실시예 2에서 얻어진 시험용 외용제를 이용하는 대신에 실시예 3, 비교예 2 또는 비교예 3에서 얻어진 시험용 외용제를 이용한 것을 제외하고, 상기와 마찬가지의 조작을 행하여, 피험자에게 자극감을 평가시켰다. 자극감의 평가는, 평가 항목 중, 통증을 중심으로 한 쿡쿡 쑤시는 느낌, 따끔따끔한 느낌의 자극, 가려움, 작열감 및 위화감의 5항목을 자극감으로서 이용하고, 0∼5의 6단계로 자극감의 강도 스코어를 채점함으로써 행했다. 또한, 강도 스코어는, 점수가 높을수록 자극감이 강한 것을 나타낸다. 각 경과 시간에 있어서의 강도 스코어의 합계를 표 1에 나타낸다.

[표 1]

표 1에 나타난 결과로부터, 에탄올(실시예 2) 또는 멘톨과 에탄올과의 혼합물(실시예 3)과 함께 2-이소보르닐옥시에탄올을 이용함으로써, 2-이소보르닐옥시에탄올을 이용하지 않고 에탄올(비교예 2) 또는 멘톨과 에탄올과의 혼합물(비교예 3)을 이용한 경우에 비해, 스팅깅 스코어(최대치)의 강도 스코어의 합계점이 낮은 것을 알 수 있다. 따라서, 이러한 결과로부터, 2-이소보르닐옥시에탄올 등의 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 포함하는 외용제에 의하면, 멘톨, 에탄올 등의 성분에 의한 자극을 억제할 수 있는 것을 알 수 있다.

실시예 4, 5, 비교예 4 및 5

에탄올, 멘톨, 향료, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유(40)[옥시에틸렌기의 부가 몰수: 40], 2-이소보르닐옥시에탄올, 보르네올 및 정제수를, 표 2에 나타나는 조성이 되도록 혼합함으로써, 실시예 4 및 5 그리고 비교예 4 및 5의 시험용 외용제를 얻었다.

시험예 4

실시예 4에서 얻어진 시험용 외용제를 충전한 용기를 방향제 평가용 부스 안에 20분간 정치(靜置)했다. 그 후, 향기의 기호도를 평가 전문 패널리스트 15명에 평가시켰다. 또, 상기에 있어서, 실시예 4에서 얻어진 시험용 외용제를 충전한 용기를 사용하는 대신에 실시예 5, 비교예 4 또는 비교예 5에서 얻어진 시험용 외용제를 충전한 용기를 이용한 것을 제외하고, 상기와 마찬가지의 조작을 행하여, 향기의 기호도를 평가 전문 패널리스트 15명에게 평가시켰다. 기호도는, -3∼3점의 7단계로 채점함으로써 행했다. 또한, 기호도는, 득점이 높을수록 「시험용 외용제의 향기가 좋다」는 것을 나타내고, 득점이 낮을수록 「시험용 외용제의 향기가 싫다」는 것을 나타낸다. 기호도의 평가 결과로서 득점의 평균치를 표 2에 나타낸다.

시험예 5

실시예 4에서 얻어진 시험용 외용제를 충전한 용기를 방향제 평가용 부스 안에 20분간 정치했다. 그 후, 향기의 쾌-불쾌도를 평가 전문 패널리스트 15명에게 평가시켰다. 또, 상기에 있어서, 실시예 4에서 얻어진 시험용 외용제를 충전한 용기를 이용하는 대신에 실시예 5, 비교예 4 또는 비교예 5에서 얻어진 시험용 외용제를 충전한 용기를 이용한 것을 제외하고, 상기와 마찬가지의 조작을 행하여, 향기의 쾌-불쾌도를 평가 전문 패널리스트 15명에게 평가시켰다. 쾌-불쾌도의 평가는, 각 시험용 외용제에 대해서 1위∼4위까지의 순위(1위=쾌, 4위=불쾌)를 붙임으로써 행했다. 쾌-불쾌도는, 각 순위의 패널리스트 수를 표 2에 나타낸다.

[표 2]

표 2에 나타난 결과로부터, 2-이소보르닐옥시에탄올을 이용함으로써, 보르네올을 이용한 경우에 비해, 기호도(득점의 평균치)가 높은 것을 알 수 있다. 또, 쾌-불쾌도의 결과로부터, 2-이소보르닐옥시에탄올을 이용한 쪽이, 보르네올을 이용한 경우에 비해, 1위 또는 2위로 한 인수가 많은 것을 알 수 있다. 따라서, 이러한 결과로부터, 2-이소보르닐옥시에탄올 등의 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물은, 냄새가 약한 점에서, 향료 성분과 병용하는 경우여도, 당해 향료의 향기를 저해하지 않는 것을 알 수 있다.

처방예

이하, 본 발명에 관한 외용제의 처방예를 나타낸다. 또한, 원료명 중의 괄호 내의 「E.O.」는 옥시에틸렌기를 나타낸다. 또, 「E.O.」 앞에 기재되어 있는 숫자는 옥시에틸렌기의 부가 몰수를 나타낸다.

처방예 1 화장수

1,8-시네올 0.1 질량％

2-이소보르닐옥시에탄올 0.1 질량％

폴리옥시에틸렌 경화 피마자유(50E.O.) 1.0 질량％

글리세린 1.5 질량％

1,3-부틸렌글리콜 15.0 질량％

구연산 0.05 질량％

구연산 나트륨 0.1 질량％

1,2-옥탄디올 0.2 질량％

정제수 잔부

합계 100.0 질량％

처방예 2 데오도란트 젤

2-이소보르닐옥시에탄올 0.5 질량％

멘톨 0.5 질량％

아크릴산·메타크릴산 알킬 공중합체 0.2 질량％

수산화칼륨 0.02 질량％

이소노난산 이소노닐 1.5 질량％

트리클로산 0.1 질량％

에탄올 30.0 질량％

향료 적당량

정제수 잔부

합계 100.0 질량％

처방예 3 데오도란트 롤 온

1,8-시네올 0.3 질량％

2-이소보르닐옥시에탄올 0.3 질량％

멘톨 0.1 질량％

트리클로산 0.1 질량％

클로로히드록실알루미늄 10.0 질량％

이소노난산 이소노닐 1.0 질량％

히드록시프로필 셀룰로오스 1.0 질량％

에탄올 60.0 질량％

향료 적당량

정제수 잔부

합계 100.0 질량％

처방예 4 데오도란트 스프레이

(원액의 조성)

탈크 20.0 질량％

무수 규산 20.0 질량％

클로로히드록시알루미늄 10.0 질량％

1,8-시네올 0.5 질량％

2-이소보르닐옥시에탄올 0.5 질량％

멘톨 1.5 질량％

트리클로산 0.1 질량％

디메틸폴리실록산 15.0 질량％

향료 적당량

미리스틴산 이소프로필 잔부

(분사제의 조성)

액화석유가스(LPG) 100.0 질량％

처방예 5 데오도란트 스틱

이소프로필메틸페놀 0.2 질량％

황산알루미늄 칼륨 20.0 질량％

클로로히드록시알루미늄 10.0 질량％

스테아릴알코올 5.0 질량％

모노스테아린산 글리세린 3.0 질량％

무수 규산 35.0 질량％

칸데릴라납 0.5 질량％

피마자유 0.1 질량％

2-이소보르닐옥시에탄올 0.5 질량％

시트랄 0.04 질량％

오이게놀 0.05 질량％

데카메틸시클로펜타실록산 잔부

합계 100.0 질량％

처방예 6 클렌징제

폴리옥시에틸렌(카프릴/카프린산)글리세릴 3.0 질량％

폴리옥시에틸렌 야자유 지방산 글리세릴 2.0 질량％

N-[3-알킬(12,14)옥시-2-히드록시프로필]-L-아르기닌 염산염 0.2 질량％

1,3-부틸렌글리콜 5.0 질량％

1,2-옥탄디올 0.1 질량％

1,8-시네올 0.3 질량％

2-이소보르닐옥시에탄올 0.3 질량％

인산 이수소 나트륨 적당량

인산 수소 이나트륨 적당량

초산(酢酸) 토코페롤 적당량

페녹시에탄올 적당량

정제수 잔부

합계 100.0 질량％

처방예 7 보디 샴푸

라우린산 5.0 질량％

미리스틴산 7.0 질량％

프로필렌글리콜 4.0 질량％

라우릴디메틸아미노초산 베타인 3.5 질량％

수산화칼륨 3.6 질량％

아황산 소다 0.03 질량％

파라옥시 안식향산 메틸 0.3 질량％

페녹시에탄올 0.8 질량％

2-이소보르닐옥시에탄올 0.5 질량％

에데트산염 적당량

향료 적당량

정제수 잔부

합계 100.0 질량％

처방예 8 미백 화장수

2-이소보르닐옥시에탄올 0.1 질량％

이소프로필메틸페놀 0.1 질량％

멘톨 0.05 질량％

폴리옥시에틸렌 경화 피마자유(50E.O.) 0.5 질량％

L-아스코르빈산 2-글루코시드 1.0 질량％

트라넥삼산 1.0 질량％

디부틸렌글리콜 5.0 질량％

구연산 0.05 질량％

구연산 나트륨 0.1 질량％

1,2-옥탄디올 0.2 질량％

정제수 잔부

합계 100.0 질량％

처방예 9 항염증 화장수

2-이소보르닐옥시에탄올 0.1 질량％

이소프로필메틸페놀 0.1 질량％

멘톨 0.1 질량％

에탄올 5.0 질량％

폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌데실테트라데실에테르 0.3 질량％

글리시리진산 디칼륨 0.1 질량％

글리세린 2.0 질량％

디프로필렌글리콜 3.0 질량％

구연산 0.05 질량％

구연산 나트륨 0.1 질량％

1,2-옥탄디올 0.2 질량％

정제수 잔부

합계 100.0 질량％

처방예 10 약용 육모 토닉

이하의 조성으로 이루어지는 원액과, 이하의 조성으로 이루어지는 분사제를 질량비(원액/분사제)가 85/15가 되도록 용기에 충전하여, 의약부외품의 스컬프 케어제로서 이용되는 육모 토닉으로 했다.

(원액)

에탄올 50 질량％

이소프로필메틸페놀 0.1 질량％

멘톨 0.5 질량％

니코틴산 아미드 0.1 질량％

2-이소보르닐옥시에탄올 0.5 질량％

PEG-50 수소 첨가 피마자유 0.3 질량％

판테놀 0.3 질량％

캠퍼 0.1 질량％

초산 토코페롤 0.1 질량％

당약 추출 리퀴드 0.1 질량％

정제수 잔부

원액의 합계 100.0 질량％

(분사제)

디메틸에테르 10 질량％

LPG 90 질량％

분사제의 합계 100.0 질량％

처방예 11 페이스 마스크

마스크용 부직포 1g에 이하의 조성으로 이루어지는 페이스 마스크 조성물 4g을 함침시켜, 페이스 마스크로 했다.

(페이스 마스크 조성물)

2-이소보르닐옥시에탄올 0.1 질량％

폴리옥시에틸렌 경화 피마자유(50E.O.) 1.0 질량％

디프로필렌글리콜 5.0 질량％

글리세린 5.0 질량％

1,3-부틸렌글리콜 5.0 질량％

구연산 0.05 질량％

구연산 나트륨 0.1 질량％

소르비톨 1.0 질량％

에탄올 1.0 질량％

잔탄검 0.01 질량％

히알루론산 나트륨 0.001 질량％

가수분해 콜라겐 0.001 질량％

정제수 잔부

합계 100.0 질량％

처방예 12 세안제

라우린산 6.5 질량％

미리스틴산 12.0 질량％

스테아린산 12.5 질량％

글리세린 10.0 질량％

프로필렌글리콜 9.0 질량％

폴리에틸렌글리콜 1500 8.0 질량％

라우린산 아미드프로필베타인 0.4 질량％

수산화칼륨 6.0 질량％

멘톨 0.5 질량％

2-이소보르닐옥시에탄올 0.5 질량％

향료 0.2 질량％

정제수 잔부

합계　 100.0 질량％

처방예 13 스킨 케어 크림

유동 파라핀 5.0 질량％

파라핀 5.0 질량％

수소 첨가 팜유 3.0 질량％

베헤닐알코올 3.0 질량％

스테아린산 1.0 질량％

트리2-에틸헥산산 글리세릴 5.0 질량％

잔탄검 0.05 질량％

카르복시비닐폴리머 0.4 질량％

모노스테아린산 폴리옥시에틸렌 소르비탄 1.5 질량％

스테아린산 글리세릴 0.5 질량％

1,3-부틸렌글리콜 10.0 질량％

1,2-옥탄디올 0.2 질량％

2-이소보르닐옥시에탄올 0.3 질량％

글리세린모노-2-에틸헥실에테르 0.35 질량％

글리세린 5.0 질량％

수산화칼륨 적당량

토코페롤 적당량

에데트산 이나트륨 적당량

향료 적당량

정제수 잔부

합계 100.0 질량％

처방예 14 닦아냄용 시트 화장료

부직포 1g에 이하의 조성으로 이루어지는 닦아냄용 시트 조성물 4g을 함침시켜, 닦아냄용 시트 화장료로 했다.

(닦아냄용 시트 조성물)

2-이소보르닐옥시에탄올 0.3 질량％

멘톨 0.3 질량％

탈크 10.0 질량％

폴리옥시에틸렌폴리옥시프로필렌 2-데실테트라데실에테르 0.2 질량％

에탄올 40.0 질량％

향료 적당량

정제수 잔부

합계 100.0 질량％

처방예 15 헤어 컬러

이하의 원료를 이하의 조성이 되도록 혼합하여, 헤어 컬러의 제 1 제 및 제 2 제로 했다. 사용 시에는, 제 1 제와 제 2 제를, 질량비(제 1 제/제 2 제)가 80/20이 되도록 혼합하여, 헤어 컬러로 했다. 또한, 이하에 있어서, 각 성분의 퍼센티지는, 헤어 컬러(제 1 제와 제 2 제와의 혼합물)에 있어서의 각 성분의 퍼센티지를 의미한다.

(제 1 제)

세틸알코올 5.0 질량％

폴리옥시에틸렌세틸에테르(20E.O.) 5.0 질량％

1,3-부틸렌글리콜 3.0 질량％

모노에탄올아민 14.0 질량％

2-이소보르닐옥시에탄올 0.5 질량％

파라아미노페놀 적당량

레조르신 적당량

정제수 잔부

제 1 제의 합계 80.0 질량％

(제 2 제)

35 체적％ 과산화수소 9.0 질량％

정제수 11.0 질량％

제 2 제의 합계 20.0 질량％

(헤어 컬러)

제 1 제와 제 2 제와의 합계 100.0 질량％

처방예 16 첩부제

이하의 조성으로 이루어지는 고체(膏體)를 지지체 상에 도포하여, 첩부제로 했다.

(고체(膏體))

폴리아크릴산 5.0 질량％

폴리아크릴산 나트륨 2.0 질량％

글리세린 15.0 질량％

폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 0.7 질량％

살리실산 메틸 0.2 질량％

멘톨 0.5 질량％

2-이소보르닐옥시에탄올 0.5 질량％

정제수 잔부

합계 100.0 질량％

SEQUENCE LISTING <110> MANDOM Corporation TAKASAGO INTERNATIONAL CORPORATION <120> Inhibitor for TRPA1 activity <130> PCT17-0330 <150> JP2017-068027 <151> 2017-03-30 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5190 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (176)..(3535) <400> 1 ccagaagttc tccagggctt ccgcagagcg actttttcgc tgcctgtgag ctgcagcgcg 60 ggagagctcg ggctcgcgcg gaccccagcg cctggcaggc tgacagcgct ctctcgcccc 120 aggtgcccgc gcgcgtggtg agcagctgca ccaggtggcg tccggggtgg ggtca atg 178 Met 1 aag cgc agc ctg agg aag atg tgg cgc cct gga gaa aag aag gag ccc 226 Lys Arg Ser Leu Arg Lys Met Trp Arg Pro Gly Glu Lys Lys Glu Pro 5 10 15 cag ggc gtt gtc tat gag gat gtg ccg gac gac acg gag gat ttc aag 274 Gln Gly Val Val Tyr Glu Asp Val Pro Asp Asp Thr Glu Asp Phe Lys 20 25 30 gaa tcg ctt aag gtg gtt ttt gaa gga agt gca tat gga tta caa aac 322 Glu Ser Leu Lys Val Val Phe Glu Gly Ser Ala Tyr Gly Leu Gln Asn 35 40 45 ttt aat aag caa aag aaa tta aaa aga tgt gac gat atg gac acc ttc 370 Phe Asn Lys Gln Lys Lys Leu Lys Arg Cys Asp Asp Met Asp Thr Phe 50 55 60 65 ttc ttg cat tat gct gca gca gaa ggc caa att gag cta atg gag aag 418 Phe Leu His Tyr Ala Ala Ala Glu Gly Gln Ile Glu Leu Met Glu Lys 70 75 80 atc acc aga gat tcc tct ttg gaa gtg ctg cat gaa atg gat gat tat 466 Ile Thr Arg Asp Ser Ser Leu Glu Val Leu His Glu Met Asp Asp Tyr 85 90 95 gga aat acc cct ctg cat tgt gct gta gaa aaa aac caa att gaa agc 514 Gly Asn Thr Pro Leu His Cys Ala Val Glu Lys Asn Gln Ile Glu Ser 100 105 110 gtt aag ttt ctt ctc agc aga gga gca aac cca aat ctc cga aac ttc 562 Val Lys Phe Leu Leu Ser Arg Gly Ala Asn Pro Asn Leu Arg Asn Phe 115 120 125 aac atg atg gct cct ctc cac ata gct gtg cag ggc atg aat aat gag 610 Asn Met Met Ala Pro Leu His Ile Ala Val Gln Gly Met Asn Asn Glu 130 135 140 145 gtg atg aag gtc ttg ctt gag cat aga act att gat gtt aat ttg gaa 658 Val Met Lys Val Leu Leu Glu His Arg Thr Ile Asp Val Asn Leu Glu 150 155 160 gga gaa aat gga aac aca gct gtg atc att gcg tgc acc aca aat aat 706 Gly Glu Asn Gly Asn Thr Ala Val Ile Ile Ala Cys Thr Thr Asn Asn 165 170 175 agc gaa gca ttg cag att ttg ctt aaa aaa gga gct aag cca tgt aaa 754 Ser Glu Ala Leu Gln Ile Leu Leu Lys Lys Gly Ala Lys Pro Cys Lys 180 185 190 tca aat aaa tgg gga tgt ttc cct att cac caa gct gca ttt tca ggt 802 Ser Asn Lys Trp Gly Cys Phe Pro Ile His Gln Ala Ala Phe Ser Gly 195 200 205 tcc aaa gaa tgc atg gaa ata ata cta agg ttt ggt gaa gag cat ggg 850 Ser Lys Glu Cys Met Glu Ile Ile Leu Arg Phe Gly Glu Glu His Gly 210 215 220 225 tac agt aga cag ttg cac att aac ttt atg aat aat ggg aaa gcc acc 898 Tyr Ser Arg Gln Leu His Ile Asn Phe Met Asn Asn Gly Lys Ala Thr 230 235 240 cct ctc cac ctg gct gtg caa aat ggt gac ttg gaa atg atc aaa atg 946 Pro Leu His Leu Ala Val Gln Asn Gly Asp Leu Glu Met Ile Lys Met 245 250 255 tgc ctg gac aat ggt gca caa ata gac cca gtg gag aag gga agg tgc 994 Cys Leu Asp Asn Gly Ala Gln Ile Asp Pro Val Glu Lys Gly Arg Cys 260 265 270 aca gcc att cat ttt gct gcc acc cag gga gcc act gag att gtt aaa 1042 Thr Ala Ile His Phe Ala Ala Thr Gln Gly Ala Thr Glu Ile Val Lys 275 280 285 ctg atg ata tcg tcc tat tct ggt agc gtg gat att gtt aac aca acc 1090 Leu Met Ile Ser Ser Tyr Ser Gly Ser Val Asp Ile Val Asn Thr Thr 290 295 300 305 gat gga tgt cat gag acc atg ctt cac aga gct tca ttg ttt gat cac 1138 Asp Gly Cys His Glu Thr Met Leu His Arg Ala Ser Leu Phe Asp His 310 315 320 cat gag cta gca gac tat tta att tca gtg gga gca gat att aat aag 1186 His Glu Leu Ala Asp Tyr Leu Ile Ser Val Gly Ala Asp Ile Asn Lys 325 330 335 atc gat tct gaa gga cgc tct cca ctt ata tta gca act gct tct gca 1234 Ile Asp Ser Glu Gly Arg Ser Pro Leu Ile Leu Ala Thr Ala Ser Ala 340 345 350 tct tgg aat att gta aat ttg cta ctc tct aaa ggt gcc caa gta gac 1282 Ser Trp Asn Ile Val Asn Leu Leu Leu Ser Lys Gly Ala Gln Val Asp 355 360 365 ata aaa gat aat ttt gga cgt aat ttt ctg cat tta act gta cag caa 1330 Ile Lys Asp Asn Phe Gly Arg Asn Phe Leu His Leu Thr Val Gln Gln 370 375 380 385 cct tat gga tta aaa aat ctg cga cct gaa ttt atg cag atg caa cag 1378 Pro Tyr Gly Leu Lys Asn Leu Arg Pro Glu Phe Met Gln Met Gln Gln 390 395 400 atc aaa gag ctg gta atg gat gaa gac aac gat ggg tgt act cct cta 1426 Ile Lys Glu Leu Val Met Asp Glu Asp Asn Asp Gly Cys Thr Pro Leu 405 410 415 cat tat gca tgt aga cag ggg ggc cct ggt tct gta aat aac cta ctt 1474 His Tyr Ala Cys Arg Gln Gly Gly Pro Gly Ser Val Asn Asn Leu Leu 420 425 430 ggc ttt aat gtg tcc att cat tcc aaa agc aaa gat aag aaa tca cct 1522 Gly Phe Asn Val Ser Ile His Ser Lys Ser Lys Asp Lys Lys Ser Pro 435 440 445 ctg cat ttt gca gcc agt tat ggg cgt atc aat acc tgt cag agg ctc 1570 Leu His Phe Ala Ala Ser Tyr Gly Arg Ile Asn Thr Cys Gln Arg Leu 450 455 460 465 cta caa gac ata agt gat acg agg ctt ctg aat gaa ggt gac ctt cat 1618 Leu Gln Asp Ile Ser Asp Thr Arg Leu Leu Asn Glu Gly Asp Leu His 470 475 480 gga atg act cct ctc cat ctg gca gca aag aat gga cat gat aaa gta 1666 Gly Met Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Lys Asn Gly His Asp Lys Val 485 490 495 gtt cag ctt ctt ctg aaa aaa ggt gca ttg ttt ctc agt gac cac aat 1714 Val Gln Leu Leu Leu Lys Lys Gly Ala Leu Phe Leu Ser Asp His Asn 500 505 510 ggc tgg aca gct ttg cat cat gcg tcc atg ggc ggg tac act cag acc 1762 Gly Trp Thr Ala Leu His His Ala Ser Met Gly Gly Tyr Thr Gln Thr 515 520 525 atg aag gtc att ctt gat act aat ttg aag tgc aca gat cgc ctg gat 1810 Met Lys Val Ile Leu Asp Thr Asn Leu Lys Cys Thr Asp Arg Leu Asp 530 535 540 545 gaa gac ggg aac act gca ctt cac ttt gct gca agg gaa ggc cac gcc 1858 Glu Asp Gly Asn Thr Ala Leu His Phe Ala Ala Arg Glu Gly His Ala 550 555 560 aaa gcc gtt gcg ctt ctt ctg agc cac aat gct gac ata gtc ctg aac 1906 Lys Ala Val Ala Leu Leu Leu Ser His Asn Ala Asp Ile Val Leu Asn 565 570 575 aag cag cag gcc tcc ttt ttg cac ctt gca ctt cac aat aag agg aag 1954 Lys Gln Gln Ala Ser Phe Leu His Leu Ala Leu His Asn Lys Arg Lys 580 585 590 gag gtt gtt ctt acg atc atc agg agc aaa aga tgg gat gaa tgt ctt 2002 Glu Val Val Leu Thr Ile Ile Arg Ser Lys Arg Trp Asp Glu Cys Leu 595 600 605 aag att ttc agt cat aat tct cca ggc aat aaa tgt cca att aca gaa 2050 Lys Ile Phe Ser His Asn Ser Pro Gly Asn Lys Cys Pro Ile Thr Glu 610 615 620 625 atg ata gaa tac ctc cct gaa tgc atg aag gta ctt tta gat ttc tgc 2098 Met Ile Glu Tyr Leu Pro Glu Cys Met Lys Val Leu Leu Asp Phe Cys 630 635 640 atg ttg cat tcc aca gaa gac aag tcc tgc cga gac tat tat atc gag 2146 Met Leu His Ser Thr Glu Asp Lys Ser Cys Arg Asp Tyr Tyr Ile Glu 645 650 655 tat aat ttc aaa tat ctt caa tgt cca tta gaa ttc acc aaa aaa aca 2194 Tyr Asn Phe Lys Tyr Leu Gln Cys Pro Leu Glu Phe Thr Lys Lys Thr 660 665 670 cct aca cag gat gtt ata tat gaa ccg ctt aca gcc ctc aac gca atg 2242 Pro Thr Gln Asp Val Ile Tyr Glu Pro Leu Thr Ala Leu Asn Ala Met 675 680 685 gta caa aat aac cgc ata gag ctt ctc aat cat cct gtg tgt aaa gaa 2290 Val Gln Asn Asn Arg Ile Glu Leu Leu Asn His Pro Val Cys Lys Glu 690 695 700 705 tat tta ctc atg aaa tgg ttg gct tat gga ttt aga gct cat atg atg 2338 Tyr Leu Leu Met Lys Trp Leu Ala Tyr Gly Phe Arg Ala His Met Met 710 715 720 aat tta gga tct tac tgt ctt ggt ctc ata cct atg acc att ctc gtt 2386 Asn Leu Gly Ser Tyr Cys Leu Gly Leu Ile Pro Met Thr Ile Leu Val 725 730 735 gtc aat ata aaa cca gga atg gct ttc aac tca act ggc atc atc aat 2434 Val Asn Ile Lys Pro Gly Met Ala Phe Asn Ser Thr Gly Ile Ile Asn 740 745 750 gaa act agt gat cat tca gaa ata cta gat acc acg aat tca tat cta 2482 Glu Thr Ser Asp His Ser Glu Ile Leu Asp Thr Thr Asn Ser Tyr Leu 755 760 765 ata aaa act tgt atg att tta gtg ttt tta tca agt ata ttt ggg tat 2530 Ile Lys Thr Cys Met Ile Leu Val Phe Leu Ser Ser Ile Phe Gly Tyr 770 775 780 785 tgc aaa gaa gcg ggg caa att ttc caa cag aaa agg aat tat ttt atg 2578 Cys Lys Glu Ala Gly Gln Ile Phe Gln Gln Lys Arg Asn Tyr Phe Met 790 795 800 gat ata agc aat gtt ctt gaa tgg att atc tac acg acg ggc atc att 2626 Asp Ile Ser Asn Val Leu Glu Trp Ile Ile Tyr Thr Thr Gly Ile Ile 805 810 815 ttt gtg ctg ccc ttg ttt gtt gaa ata cca gct cat ctg cag tgg caa 2674 Phe Val Leu Pro Leu Phe Val Glu Ile Pro Ala His Leu Gln Trp Gln 820 825 830 tgt gga gca att gct gtt tac ttc tat tgg atg aat ttc tta ttg tat 2722 Cys Gly Ala Ile Ala Val Tyr Phe Tyr Trp Met Asn Phe Leu Leu Tyr 835 840 845 ctt caa aga ttt gaa aat tgt gga att ttt att gtt atg ttg gag gta 2770 Leu Gln Arg Phe Glu Asn Cys Gly Ile Phe Ile Val Met Leu Glu Val 850 855 860 865 att ttg aaa act ttg ttg agg tct aca gtt gta ttt atc ttc ctt ctt 2818 Ile Leu Lys Thr Leu Leu Arg Ser Thr Val Val Phe Ile Phe Leu Leu 870 875 880 ctg gct ttt gga ctc agc ttt tac atc ctc ctg aat tta cag gat ccc 2866 Leu Ala Phe Gly Leu Ser Phe Tyr Ile Leu Leu Asn Leu Gln Asp Pro 885 890 895 ttc agc tct cca ttg ctt tct ata atc cag acc ttc agc atg atg cta 2914 Phe Ser Ser Pro Leu Leu Ser Ile Ile Gln Thr Phe Ser Met Met Leu 900 905 910 gga gat atc aat tat cga gag tcc ttc cta gaa cca tat ctg aga aat 2962 Gly Asp Ile Asn Tyr Arg Glu Ser Phe Leu Glu Pro Tyr Leu Arg Asn 915 920 925 gaa ttg gca cat cca gtt ctg tcc ttt gca caa ctt gtt tcc ttc aca 3010 Glu Leu Ala His Pro Val Leu Ser Phe Ala Gln Leu Val Ser Phe Thr 930 935 940 945 ata ttt gtc cca att gtc ctc atg aat tta ctt att ggt ttg gca gtt 3058 Ile Phe Val Pro Ile Val Leu Met Asn Leu Leu Ile Gly Leu Ala Val 950 955 960 ggc gac att gct gag gtc cag aaa cat gca tca ttg aag agg ata gct 3106 Gly Asp Ile Ala Glu Val Gln Lys His Ala Ser Leu Lys Arg Ile Ala 965 970 975 atg cag gtg gaa ctt cat acc agc tta gag aag aag ctg cca ctt tgg 3154 Met Gln Val Glu Leu His Thr Ser Leu Glu Lys Lys Leu Pro Leu Trp 980 985 990 ttt cta cgc aaa gtg gat cag aaa tcc acc atc gtg tat ccc aac aaa 3202 Phe Leu Arg Lys Val Asp Gln Lys Ser Thr Ile Val Tyr Pro Asn Lys 995 1000 1005 ccc aga tct ggt ggg atg tta ttc cat ata ttc tgt ttt tta ttt 3247 Pro Arg Ser Gly Gly Met Leu Phe His Ile Phe Cys Phe Leu Phe 1010 1015 1020 tgc act ggg gaa ata aga caa gaa ata cca aat gct gat aaa tct 3292 Cys Thr Gly Glu Ile Arg Gln Glu Ile Pro Asn Ala Asp Lys Ser 1025 1030 1035 tta gaa atg gaa ata tta aag cag aaa tac cgg ctg aag gat ctt 3337 Leu Glu Met Glu Ile Leu Lys Gln Lys Tyr Arg Leu Lys Asp Leu 1040 1045 1050 act ttt ctc ctg gaa aaa cag cat gag ctc att aaa ctg atc att 3382 Thr Phe Leu Leu Glu Lys Gln His Glu Leu Ile Lys Leu Ile Ile 1055 1060 1065 cag aag atg gag atc atc tct gag aca gag gat gat gat agc cat 3427 Gln Lys Met Glu Ile Ile Ser Glu Thr Glu Asp Asp Asp Ser His 1070 1075 1080 tgt tct ttt caa gac agg ttt aag aaa gag cag atg gaa caa agg 3472 Cys Ser Phe Gln Asp Arg Phe Lys Lys Glu Gln Met Glu Gln Arg 1085 1090 1095 aat agc aga tgg aat act gtg ttg aga gca gtc aag gca aaa aca 3517 Asn Ser Arg Trp Asn Thr Val Leu Arg Ala Val Lys Ala Lys Thr 1100 1105 1110 cac cat ctt gag cct tag ctcctcagac cttcagtgag gcttctaatg 3565 His His Leu Glu Pro 1115 gggggtgcat gacttgctgg ttctaacttt caatttaaaa agagtgagga agaagcagaa 3625 tgattcattt tgctgcgtgt gaaatcatgg ttcctgcatg ctgtataaaa gtaaaccatc 3685 ttttatcctc tattcatatt ttctaccaat cactatgtat tggggatatc tttgcagata 3745 tgttcaaatt ggactggact ttgatgagat ataatctcat tatttgaatg ggtagaaaat 3805 gaatttgcta gaacacacat ttttaatgaa aagaagtaat aaatgtaact attaagctaa 3865 aatgcaaatg tcagtactga attcctgctt gttaattaca taatatgtga tgctctagaa 3925 aatagtcaca agtattaata atgccttaga tgatagtctt aaatattagg ttgaggtcta 3985 cctaacctaa gctgcttcct ggaaagcttc atgttgaaag aacctatggg tggcaccatg 4045 tggacttttc tgtccctact gtgatgaata gccccaccct tcttgctgtc cccaacacac 4105 ctgatgtcac tttgagccat atagttgaag tacaaattaa taggccttat gatatgcacg 4165 aattttacta tagataatat atgttgtttc tggttttgtt tgccaatgag cataataaat 4225 gtaaaaccta tatagtatcc ctgtgattat tgtatgagcc tttgtttgag atttgaaaac 4285 aacatggctc catcacatat tccctttttt cttttgatgt ctactcaaat catgaattaa 4345 tcacatacct catcattaat cttttcaagg tccttctatt gttttgtctg attttctcca 4405 tcatcctgat tagcatgttt attccctcac tacccccagg agatattcac tgtaatgaat 4465 atgtctttgg ctatgtatgt gtccttgtgt tatgttgtac agtgttgttt tgagtctgtt 4525 attatttaca cagatgttat tatgctatag cttctatttc tgtttttgct tcttatttct 4585 cttataattc tcacttattt cctatttttt ctactcattt ctatttgtta ctccttttta 4645 ctggacatga tgtttacaag atacaactgt gttactgtat tccatctagt acggggcctt 4705 tggtgtggct tactatttca ttgtgtgcac ccacccaccc accacactgg acttttctag 4765 agatggacag cttggttacc tccaccttcc tgcactcatt ctcaaacata ctgatgttca 4825 tacaaaccag cagagtgctg agggacgata tgtactatta caaaaccaga cacttttaca 4885 ttcatggtcc aacagatcac atggcctaga ggcaatgttg catatacctt aatctttgat 4945 atgaataata tctttgttct ttatatttct taaaacagaa agggtggaaa atcactatac 5005 agaagcaata tccaaagatc tcctgatcat aaagacaagg ggtcttttca gtcttccctc 5065 tcctcaaacc ttgtgtagca ttgcacaata tagatctcag tcaacattca ctgagtgcca 5125 agaatgtgag aaacactgta ccatgcctgt catgcgaaat atttaaataa acagattgtc 5185 ttaca 5190 <210> 2 <211> 1119 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Lys Arg Ser Leu Arg Lys Met Trp Arg Pro Gly Glu Lys Lys Glu 1 5 10 15 Pro Gln Gly Val Val Tyr Glu Asp Val Pro Asp Asp Thr Glu Asp Phe 20 25 30 Lys Glu Ser Leu Lys Val Val Phe Glu Gly Ser Ala Tyr Gly Leu Gln 35 40 45 Asn Phe Asn Lys Gln Lys Lys Leu Lys Arg Cys Asp Asp Met Asp Thr 50 55 60 Phe Phe Leu His Tyr Ala Ala Ala Glu Gly Gln Ile Glu Leu Met Glu 65 70 75 80 Lys Ile Thr Arg Asp Ser Ser Leu Glu Val Leu His Glu Met Asp Asp 85 90 95 Tyr Gly Asn Thr Pro Leu His Cys Ala Val Glu Lys Asn Gln Ile Glu 100 105 110 Ser Val Lys Phe Leu Leu Ser Arg Gly Ala Asn Pro Asn Leu Arg Asn 115 120 125 Phe Asn Met Met Ala Pro Leu His Ile Ala Val Gln Gly Met Asn Asn 130 135 140 Glu Val Met Lys Val Leu Leu Glu His Arg Thr Ile Asp Val Asn Leu 145 150 155 160 Glu Gly Glu Asn Gly Asn Thr Ala Val Ile Ile Ala Cys Thr Thr Asn 165 170 175 Asn Ser Glu Ala Leu Gln Ile Leu Leu Lys Lys Gly Ala Lys Pro Cys 180 185 190 Lys Ser Asn Lys Trp Gly Cys Phe Pro Ile His Gln Ala Ala Phe Ser 195 200 205 Gly Ser Lys Glu Cys Met Glu Ile Ile Leu Arg Phe Gly Glu Glu His 210 215 220 Gly Tyr Ser Arg Gln Leu His Ile Asn Phe Met Asn Asn Gly Lys Ala 225 230 235 240 Thr Pro Leu His Leu Ala Val Gln Asn Gly Asp Leu Glu Met Ile Lys 245 250 255 Met Cys Leu Asp Asn Gly Ala Gln Ile Asp Pro Val Glu Lys Gly Arg 260 265 270 Cys Thr Ala Ile His Phe Ala Ala Thr Gln Gly Ala Thr Glu Ile Val 275 280 285 Lys Leu Met Ile Ser Ser Tyr Ser Gly Ser Val Asp Ile Val Asn Thr 290 295 300 Thr Asp Gly Cys His Glu Thr Met Leu His Arg Ala Ser Leu Phe Asp 305 310 315 320 His His Glu Leu Ala Asp Tyr Leu Ile Ser Val Gly Ala Asp Ile Asn 325 330 335 Lys Ile Asp Ser Glu Gly Arg Ser Pro Leu Ile Leu Ala Thr Ala Ser 340 345 350 Ala Ser Trp Asn Ile Val Asn Leu Leu Leu Ser Lys Gly Ala Gln Val 355 360 365 Asp Ile Lys Asp Asn Phe Gly Arg Asn Phe Leu His Leu Thr Val Gln 370 375 380 Gln Pro Tyr Gly Leu Lys Asn Leu Arg Pro Glu Phe Met Gln Met Gln 385 390 395 400 Gln Ile Lys Glu Leu Val Met Asp Glu Asp Asn Asp Gly Cys Thr Pro 405 410 415 Leu His Tyr Ala Cys Arg Gln Gly Gly Pro Gly Ser Val Asn Asn Leu 420 425 430 Leu Gly Phe Asn Val Ser Ile His Ser Lys Ser Lys Asp Lys Lys Ser 435 440 445 Pro Leu His Phe Ala Ala Ser Tyr Gly Arg Ile Asn Thr Cys Gln Arg 450 455 460 Leu Leu Gln Asp Ile Ser Asp Thr Arg Leu Leu Asn Glu Gly Asp Leu 465 470 475 480 His Gly Met Thr Pro Leu His Leu Ala Ala Lys Asn Gly His Asp Lys 485 490 495 Val Val Gln Leu Leu Leu Lys Lys Gly Ala Leu Phe Leu Ser Asp His 500 505 510 Asn Gly Trp Thr Ala Leu His His Ala Ser Met Gly Gly Tyr Thr Gln 515 520 525 Thr Met Lys Val Ile Leu Asp Thr Asn Leu Lys Cys Thr Asp Arg Leu 530 535 540 Asp Glu Asp Gly Asn Thr Ala Leu His Phe Ala Ala Arg Glu Gly His 545 550 555 560 Ala Lys Ala Val Ala Leu Leu Leu Ser His Asn Ala Asp Ile Val Leu 565 570 575 Asn Lys Gln Gln Ala Ser Phe Leu His Leu Ala Leu His Asn Lys Arg 580 585 590 Lys Glu Val Val Leu Thr Ile Ile Arg Ser Lys Arg Trp Asp Glu Cys 595 600 605 Leu Lys Ile Phe Ser His Asn Ser Pro Gly Asn Lys Cys Pro Ile Thr 610 615 620 Glu Met Ile Glu Tyr Leu Pro Glu Cys Met Lys Val Leu Leu Asp Phe 625 630 635 640 Cys Met Leu His Ser Thr Glu Asp Lys Ser Cys Arg Asp Tyr Tyr Ile 645 650 655 Glu Tyr Asn Phe Lys Tyr Leu Gln Cys Pro Leu Glu Phe Thr Lys Lys 660 665 670 Thr Pro Thr Gln Asp Val Ile Tyr Glu Pro Leu Thr Ala Leu Asn Ala 675 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890 895 Pro Phe Ser Ser Pro Leu Leu Ser Ile Ile Gln Thr Phe Ser Met Met 900 905 910 Leu Gly Asp Ile Asn Tyr Arg Glu Ser Phe Leu Glu Pro Tyr Leu Arg 915 920 925 Asn Glu Leu Ala His Pro Val Leu Ser Phe Ala Gln Leu Val Ser Phe 930 935 940 Thr Ile Phe Val Pro Ile Val Leu Met Asn Leu Leu Ile Gly Leu Ala 945 950 955 960 Val Gly Asp Ile Ala Glu Val Gln Lys His Ala Ser Leu Lys Arg Ile 965 970 975 Ala Met Gln Val Glu Leu His Thr Ser Leu Glu Lys Lys Leu Pro Leu 980 985 990 Trp Phe Leu Arg Lys Val Asp Gln Lys Ser Thr Ile Val Tyr Pro Asn 995 1000 1005 Lys Pro Arg Ser Gly Gly Met Leu Phe His Ile Phe Cys Phe Leu 1010 1015 1020 Phe Cys Thr Gly Glu Ile Arg Gln Glu Ile Pro Asn Ala Asp Lys 1025 1030 1035 Ser Leu Glu Met Glu Ile Leu Lys Gln Lys Tyr Arg Leu Lys Asp 1040 1045 1050 Leu Thr Phe Leu Leu Glu Lys Gln His Glu Leu Ile Lys Leu Ile 1055 1060 1065 Ile Gln Lys Met Glu Ile Ile Ser Glu Thr Glu Asp Asp Asp Ser 1070 1075 1080 His Cys Ser Phe Gln Asp Arg Phe Lys Lys Glu Gln Met Glu Gln 1085 1090 1095 Arg Asn Ser Arg Trp Asn Thr Val Leu Arg Ala Val Lys Ala Lys 1100 1105 1110 Thr His His Leu Glu Pro 1115 <210> 3 <211> 5621 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (41)..(3355) <400> 3 aagaaaatcc tgcttgacaa aaaccgtcac ttaggaaaag atg tcc ttt cgg gca 55 Met Ser Phe Arg Ala 1 5 gcc agg ctc agc atg agg aac aga agg aat gac act ctg gac agc acc 103 Ala Arg Leu Ser Met Arg Asn Arg Arg Asn Asp Thr Leu Asp Ser Thr 10 15 20 cgg acc ctg tac tcc agc gcg tct cgg agc aca gac ttg tct tac agt 151 Arg Thr Leu Tyr Ser Ser Ala Ser Arg Ser Thr Asp Leu Ser Tyr Ser 25 30 35 gaa agc gac ttg gtg aat ttt att caa gca aat ttt aag aaa cga gaa 199 Glu Ser Asp Leu Val Asn Phe Ile Gln Ala Asn Phe Lys Lys Arg Glu 40 45 50 tgt gtc ttc ttt acc aaa gat tcc aag gcc acg gag aat gtg tgc aag 247 Cys Val Phe Phe Thr Lys Asp Ser Lys Ala Thr Glu Asn Val Cys Lys 55 60 65 tgt ggc tat gcc cag agc cag cac atg gaa ggc acc cag atc aac caa 295 Cys Gly Tyr Ala Gln Ser Gln His Met Glu Gly Thr Gln Ile Asn Gln 70 75 80 85 agt gag aaa tgg aac tac aag aaa cac acc aag gaa ttt cct acc gac 343 Ser Glu Lys Trp Asn Tyr Lys Lys His Thr Lys Glu Phe Pro Thr Asp 90 95 100 gcc ttt ggg gat att cag ttt gag aca ctg ggg aag aaa ggg aag tat 391 Ala Phe Gly Asp Ile Gln Phe Glu Thr Leu Gly Lys Lys Gly Lys Tyr 105 110 115 ata cgt ctg tcc tgc gac acg gac gcg gaa atc ctt tac gag ctg ctg 439 Ile Arg Leu Ser Cys Asp Thr Asp Ala Glu Ile Leu Tyr Glu Leu Leu 120 125 130 acc cag cac tgg cac ctg aaa aca ccc aac ctg gtc att tct gtg acc 487 Thr Gln His Trp His Leu Lys Thr Pro Asn Leu Val Ile Ser Val Thr 135 140 145 ggg ggc gcc aag aac ttc gcc ctg aag ccg cgc atg cgc aag atc ttc 535 Gly Gly Ala Lys Asn Phe Ala Leu Lys Pro Arg Met Arg Lys Ile Phe 150 155 160 165 agc cgg ctc atc tac atc gcg cag tcc aaa ggt gct tgg att ctc acg 583 Ser Arg Leu Ile Tyr Ile Ala Gln Ser Lys Gly Ala Trp Ile Leu Thr 170 175 180 gga ggc acc cat tat ggc ctg atg aag tac atc ggg gag gtg gtg aga 631 Gly Gly Thr His Tyr Gly Leu Met Lys Tyr Ile Gly Glu Val Val Arg 185 190 195 gat aac acc atc agc agg agt tca gag gag aat att gtg gcc att ggc 679 Asp Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ser Glu Glu Asn Ile Val Ala Ile Gly 200 205 210 ata gca gct tgg ggc atg gtc tcc aac cgg gac acc ctc atc agg aat 727 Ile Ala Ala Trp Gly Met Val Ser Asn Arg Asp Thr Leu Ile Arg Asn 215 220 225 tgc gat gct gag ggc tat ttt tta gcc cag tac ctt atg gat gac ttc 775 Cys Asp Ala Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Gln Tyr Leu Met Asp Asp Phe 230 235 240 245 aca aga gat cca ctg tat atc ctg gac aac aac cac aca cat ttg ctg 823 Thr Arg Asp Pro Leu Tyr Ile Leu Asp Asn Asn His Thr His Leu Leu 250 255 260 ctc gtg gac aat ggc tgt cat gga cat ccc act gtc gaa gca aag ctc 871 Leu Val Asp Asn Gly Cys His Gly His Pro Thr Val Glu Ala Lys Leu 265 270 275 cgg aat cag cta gag aag tat atc tct gag cgc act att caa gat tcc 919 Arg Asn Gln Leu Glu Lys Tyr Ile Ser Glu Arg Thr Ile Gln Asp Ser 280 285 290 aac tat ggt ggc aag atc ccc att gtg tgt ttt gcc caa gga ggt gga 967 Asn Tyr Gly Gly Lys Ile Pro Ile Val Cys Phe Ala Gln Gly Gly Gly 295 300 305 aaa gag act ttg aaa gcc atc aat acc tcc atc aaa aat aaa att cct 1015 Lys Glu Thr Leu Lys Ala Ile Asn Thr Ser Ile Lys Asn Lys Ile Pro 310 315 320 325 tgt gtg gtg gtg gaa ggc tcg ggc cag atc gct gat gtg atc gct agc 1063 Cys Val Val Val Glu Gly Ser Gly Gln Ile Ala Asp Val Ile Ala Ser 330 335 340 ctg gtg gag gtg gag gat gcc ctg aca tct tct gcc gtc aag gag aag 1111 Leu Val Glu Val Glu Asp Ala Leu Thr Ser Ser Ala Val Lys Glu Lys 345 350 355 ctg gtg cgc ttt tta ccc cgc acg gtg tcc cgg ctg cct gag gag gag 1159 Leu Val Arg Phe Leu Pro Arg Thr Val Ser Arg Leu Pro Glu Glu Glu 360 365 370 act gag agt tgg atc aaa tgg ctc aaa gaa att ctc gaa tgt tct cac 1207 Thr Glu Ser Trp Ile Lys Trp Leu Lys Glu Ile Leu Glu Cys Ser His 375 380 385 cta tta aca gtt att aaa atg gaa gaa gct ggg gat gaa att gtg agc 1255 Leu Leu Thr Val Ile Lys Met Glu Glu Ala Gly Asp Glu Ile Val Ser 390 395 400 405 aat gcc atc tcc tac gct cta tac aaa gcc ttc agc acc agt gag caa 1303 Asn Ala Ile Ser Tyr Ala Leu Tyr Lys Ala Phe Ser Thr Ser Glu Gln 410 415 420 gac aag gat aac tgg aat ggg cag ctg aag ctt ctg ctg gag tgg aac 1351 Asp Lys Asp Asn Trp Asn Gly Gln Leu Lys Leu Leu Leu Glu Trp Asn 425 430 435 cag ctg gac tta gcc aat gat gag att ttc acc aat gac cgc cga tgg 1399 Gln Leu Asp Leu Ala Asn Asp Glu Ile Phe Thr Asn Asp Arg Arg Trp 440 445 450 gag tct gct gac ctt caa gaa gtc atg ttt acg gct ctc ata aag gac 1447 Glu Ser Ala Asp Leu Gln Glu Val Met Phe Thr Ala Leu Ile Lys Asp 455 460 465 aga ccc aag ttt gtc cgc ctc ttt ctg gag aat ggc ttg aac cta cgg 1495 Arg Pro Lys Phe Val Arg Leu Phe Leu Glu Asn Gly Leu Asn Leu Arg 470 475 480 485 aag ttt ctc acc cat gat gtc ctc act gaa ctc ttc tcc aac cac ttc 1543 Lys Phe Leu Thr His Asp Val Leu Thr Glu Leu Phe Ser Asn His Phe 490 495 500 agc acg ctt gtg tac cgg aat ctg cag atc gcc aag aat tcc tat aat 1591 Ser Thr Leu Val Tyr Arg Asn Leu Gln Ile Ala Lys Asn Ser Tyr Asn 505 510 515 gat gcc ctc ctc acg ttt gtc tgg aaa ctg gtt gcg aac ttc cga aga 1639 Asp Ala Leu Leu Thr Phe Val Trp Lys Leu Val Ala Asn Phe Arg Arg 520 525 530 ggc ttc cgg aag gaa gac aga aat ggc cgg gac gag atg gac ata gaa 1687 Gly Phe Arg Lys Glu Asp Arg Asn Gly Arg Asp Glu Met Asp Ile Glu 535 540 545 ctc cac gac gtg tct cct att act cgg cac ccc ctg caa gct ctc ttc 1735 Leu His Asp Val Ser Pro Ile Thr Arg His Pro Leu Gln Ala Leu Phe 550 555 560 565 atc tgg gcc att ctt cag aat aag aag gaa ctc tcc aaa gtc att tgg 1783 Ile Trp Ala Ile Leu Gln Asn Lys Lys Glu Leu Ser Lys Val Ile Trp 570 575 580 gag cag acc agg ggc tgc act ctg gca gcc ctg gga gcc agc aag ctt 1831 Glu Gln Thr Arg Gly Cys Thr Leu Ala Ala Leu Gly Ala Ser Lys Leu 585 590 595 ctg aag act ctg gcc aaa gtg aag aac gac atc aat gct gct ggg gag 1879 Leu Lys Thr Leu Ala Lys Val Lys Asn Asp Ile Asn Ala Ala Gly Glu 600 605 610 tcc gag gag ctg gct aat gag tac gag acc cgg gct gtt gag ctg ttc 1927 Ser Glu Glu Leu Ala Asn Glu Tyr Glu Thr Arg Ala Val Glu Leu Phe 615 620 625 act gag tgt tac agc agc gat gaa gac ttg gca gaa cag ctg ctg gtc 1975 Thr Glu Cys Tyr Ser Ser Asp Glu Asp Leu Ala Glu Gln Leu Leu Val 630 635 640 645 tat tcc tgt gaa gct tgg ggt gga agc aac tgt ctg gag ctg gcg gtg 2023 Tyr Ser Cys Glu Ala Trp Gly Gly Ser Asn Cys Leu Glu Leu Ala Val 650 655 660 gag gcc aca gac cag cat ttc atc gcc cag cct ggg gtc cag aat ttt 2071 Glu Ala Thr Asp Gln His Phe Ile Ala Gln Pro Gly Val Gln Asn Phe 665 670 675 ctt tct aag caa tgg tat gga gag att tcc cga gac acc aag aac tgg 2119 Leu Ser Lys Gln Trp Tyr Gly Glu Ile Ser Arg Asp Thr Lys Asn Trp 680 685 690 aag att atc ctg tgt ctg ttt att ata ccc ttg gtg ggc tgt ggc ttt 2167 Lys Ile Ile Leu Cys Leu Phe Ile Ile Pro Leu Val Gly Cys Gly Phe 695 700 705 gta tca ttt agg aag aaa cct gtc gac aag cac aag aag ctg ctt tgg 2215 Val Ser Phe Arg Lys Lys Pro Val Asp Lys His Lys Lys Leu Leu Trp 710 715 720 725 tac tat gtg gcg ttc ttc acc tcc ccc ttc gtg gtc ttc tcc tgg aat 2263 Tyr Tyr Val Ala Phe Phe Thr Ser Pro Phe Val Val Phe Ser Trp Asn 730 735 740 gtg gtc ttc tac atc gcc ttc ctc ctg ctg ttt gcc tac gtg ctg ctc 2311 Val Val Phe Tyr Ile Ala Phe Leu Leu Leu Phe Ala Tyr Val Leu Leu 745 750 755 atg gat ttc cat tcg gtg cca cac ccc ccc gag ctg gtc ctg tac tcg 2359 Met Asp Phe His Ser Val Pro His Pro Pro Glu Leu Val Leu Tyr Ser 760 765 770 ctg gtc ttt gtc ctc ttc tgt gat gaa gtg aga cag tgg tac gta aat 2407 Leu Val Phe Val Leu Phe Cys Asp Glu Val Arg Gln Trp Tyr Val Asn 775 780 785 ggg gtg aat tat ttt act gac ctg tgg aat gtg atg gac acg ctg ggg 2455 Gly Val Asn Tyr Phe Thr Asp Leu Trp Asn Val Met Asp Thr Leu Gly 790 795 800 805 ctt ttt tac ttc ata gca gga att gta ttt cgg ctc cac tct tct aat 2503 Leu Phe Tyr Phe Ile Ala Gly Ile Val Phe Arg Leu His Ser Ser Asn 810 815 820 aaa agc tct ttg tat tct gga cga gtc att ttc tgt ctg gac tac att 2551 Lys Ser Ser Leu Tyr Ser Gly Arg Val Ile Phe Cys Leu Asp Tyr Ile 825 830 835 att ttc act cta aga ttg atc cac att ttt act gta agc aga aac tta 2599 Ile Phe Thr Leu Arg Leu Ile His Ile Phe Thr Val Ser Arg Asn Leu 840 845 850 gga ccc aag att ata atg ctg cag agg atg ctg atc gat gtg ttc ttc 2647 Gly Pro Lys Ile Ile Met Leu Gln Arg Met Leu Ile Asp Val Phe Phe 855 860 865 ttc ctg ttc ctc ttt gcg gtg tgg atg gtg gcc ttt ggc gtg gcc agg 2695 Phe Leu Phe Leu Phe Ala Val Trp Met Val Ala Phe Gly Val Ala Arg 870 875 880 885 caa ggg atc ctt agg cag aat gag cag cgc tgg agg tgg ata ttc cgt 2743 Gln Gly Ile Leu Arg Gln Asn Glu Gln Arg Trp Arg Trp Ile Phe Arg 890 895 900 tcg gtc atc tac gag ccc tac ctg gcc atg ttc ggc cag gtg ccc agt 2791 Ser Val Ile Tyr Glu Pro Tyr Leu Ala Met Phe Gly Gln Val Pro Ser 905 910 915 gac gtg gat ggt acc acg tat gac ttt gcc cac tgc acc ttc act ggg 2839 Asp Val Asp Gly Thr Thr Tyr Asp Phe Ala His Cys Thr Phe Thr Gly 920 925 930 aat gag tcc aag cca ctg tgt gtg gag ctg gat gag cac aac ctg ccc 2887 Asn Glu Ser Lys Pro Leu Cys Val Glu Leu Asp Glu His Asn Leu Pro 935 940 945 cgg ttc ccc gag tgg atc acc atc ccc ctg gtg tgc atc tac atg tta 2935 Arg Phe Pro Glu Trp Ile Thr Ile Pro Leu Val Cys Ile Tyr Met Leu 950 955 960 965 tcc acc aac atc ctg ctg gtc aac ctg ctg gtc gcc atg ttt ggc tac 2983 Ser Thr Asn Ile Leu Leu Val Asn Leu Leu Val Ala Met Phe Gly Tyr 970 975 980 acg gtg ggc acc gtc cag gag aac aat gac cag gtc tgg aag ttc cag 3031 Thr Val Gly Thr Val Gln Glu Asn Asn Asp Gln Val Trp Lys Phe Gln 985 990 995 agg tac ttc ctg gtg cag gag tac tgc agc cgc ctc aat atc ccc 3076 Arg Tyr Phe Leu Val Gln Glu Tyr Cys Ser Arg Leu Asn Ile Pro 1000 1005 1010 ttc ccc ttc atc gtc ttc gct tac ttc tac atg gtg gtg aag aag 3121 Phe Pro Phe Ile Val Phe Ala Tyr Phe Tyr Met Val Val Lys Lys 1015 1020 1025 tgc ttc aag tgt tgc tgc aag gag aaa aac atg gag tct tct gtc 3166 Cys Phe Lys Cys Cys Cys Lys Glu Lys Asn Met Glu Ser Ser Val 1030 1035 1040 tgc tgt ttc aaa aat gaa gac aat gag act ctg gca tgg gag ggt 3211 Cys Cys Phe Lys Asn Glu Asp Asn Glu Thr Leu Ala Trp Glu Gly 1045 1050 1055 gtc atg aag gaa aac tac ctt gtc aag atc aac aca aaa gcc aac 3256 Val Met Lys Glu Asn Tyr Leu Val Lys Ile Asn Thr Lys Ala Asn 1060 1065 1070 gac acc tca gag gaa atg agg cat cga ttt aga caa ctg gat aca 3301 Asp Thr Ser Glu Glu Met Arg His Arg Phe Arg Gln Leu Asp Thr 1075 1080 1085 aag ctt aat gat ctc aag ggt ctt ctg aaa gag att gct aat aaa 3346 Lys Leu Asn Asp Leu Lys Gly Leu Leu Lys Glu Ile Ala Asn Lys 1090 1095 1100 atc aaa taa aactgtatga actctaatgg agaaaaatct aattatagca 3395 Ile Lys agatcatatt aaggaatgct gatgaacaat tttgctatcg actactaaat gagagatttt 3455 cagacccctg ggtacatggt ggatgatttt aaatcaccct agtgtgctga gaccttgaga 3515 ataaagtgtg tgattggttt catacttgaa gacggatata aaggaagaat atttccttta 3575 tgtgtttctc cagaatggtg cctgtttctc tctgtgtctc aatgcctggg actggaggtt 3635 gatagtttaa gtgtgttctt accgcctcct ttttccttta atcttatttt tgatgaacac 3695 atatatagga gaacatctat cctatgaata agaacctggt catgctttac tcctgtattg 3755 ttattttgtt catttccaat tgattctcta cttttccctt ttttgtatta tgtgactaat 3815 tagttggcat attgttaaaa gtctctcaaa ttaggccaga ttctaaaaca tgctgcagca 3875 agaggacccc gctctcttca ggaaaagtgt tttcatttct caggatgctt cttacctgtc 3935 agaggaggtg acaaggcagt ctcttgctct cttggactca ccaggctcct attgaaggaa 3995 ccacccccat tcctaaatat gtgaaaagtc gcccaaaatg caaccttgaa aggcactact 4055 gactttgttc ttattggata ctcctcttat tatttttcca ttaaaaataa tagctggcta 4115 ttatagaaaa tttagaccat acagagatgt agaaagaaca taaattgtcc ccattacctt 4175 aaggtaatca ctgctaacaa tttctggatg gtttttcaag tctatttttt ttctatgtat 4235 gtctcaattc tctttcaaaa ttttacagaa tgttatcata ctacatatat actttttatg 4295 taagcttttt cacttagtat tttatcaaat atgtttttat tatattcata gccttcttaa 4355 acattatatc aataattgca taataggcaa cctctagcga ttaccataat tttgctcatt 4415 gaaggctatc tccagttgat cattgggatg agcatctttg tgcatgaatc ctattgctgt 4475 atttgggaaa attttccaag gttagattcc aataaatatc tatttattat taaatattaa 4535 aatatctatt tattattaaa accatttata aggctttttc ataaatgtat agcaaatagg 4595 aattattaac ttgagcataa gatatgagat acatgaacct gaactattaa aataaaatat 4655 tatatttaac ccttagttta agaagaagtc aatatgctta tttaaatatt atggatggtg 4715 ggcagatcac ttgaggtcag gagttcgaga ccagcctggc caacatggca aaaccacatc 4775 tctactaaaa ataaaaaaat tagctgggtg tggtggtgca ctcctgtaat cccagctact 4835 cagaaggctg aggtacaaga attgctggaa cctgggaggc ggaggttgca gtgaaccaag 4895 attgcaccac tgcactccag ccggggtgac agagtgagac tccgactgaa aataaataaa 4955 taaataaata aataaataaa taaatattat ggatggtgaa gggaatggta tagaattgga 5015 gagattatct tactgaacac ctgtagtccc agctttctct ggaagtggtc gtatttgagc 5075 aggatgtgca caaggcaatt gaaatgccca taattagttt ctcagctttg aatacactat 5135 aaactcactg gctgaaggag gaaattttag aaggaagcta ctaaaagatc taatttgaaa 5195 aactacaaaa gcattaacta aaaaagttta ttttcctttt gtctgggcag tagtgaaaat 5255 aactactcac aacattcact atgtttgcaa ggaattaaca caaataaaag atgccttttt 5315 acttaaacac caagacagaa aacttgccca atactgagaa gcaacttgca ttagagaggg 5375 aactgttaaa tgttttcaac ccagttcatc tggtggatgt ttttgcaggt tactctgaga 5435 attttgctta tgaaaaatca ttatttttag tgtagttcac aataatgtat tgaacatact 5495 tctaatcaaa ggtgctatgt ccttgtgtat ggtactaaat gtgtcctgtg tacttttgca 5555 caactgagaa tcctgcagct tggtttaatg agtgtgttca tgaaataaat aatggaggaa 5615 ttgtca 5621 <210> 4 <211> 1104 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Ser Phe Arg Ala Ala Arg Leu Ser Met Arg Asn Arg Arg Asn Asp 1 5 10 15 Thr Leu Asp Ser Thr Arg Thr Leu Tyr Ser Ser Ala Ser Arg Ser Thr 20 25 30 Asp Leu Ser Tyr Ser Glu Ser Asp Leu Val Asn Phe Ile Gln Ala Asn 35 40 45 Phe Lys Lys Arg Glu Cys Val Phe Phe Thr Lys Asp Ser Lys Ala Thr 50 55 60 Glu Asn Val Cys Lys Cys Gly Tyr Ala Gln Ser Gln His Met Glu Gly 65 70 75 80 Thr Gln Ile Asn Gln Ser Glu Lys Trp Asn Tyr Lys Lys His Thr Lys 85 90 95 Glu Phe Pro Thr Asp Ala Phe Gly Asp Ile Gln Phe Glu Thr Leu Gly 100 105 110 Lys Lys Gly Lys Tyr Ile Arg Leu Ser Cys Asp Thr Asp Ala Glu Ile 115 120 125 Leu Tyr Glu Leu Leu Thr Gln His Trp His Leu Lys Thr Pro Asn Leu 130 135 140 Val Ile Ser Val Thr Gly Gly Ala Lys Asn Phe Ala Leu Lys Pro Arg 145 150 155 160 Met Arg Lys Ile Phe Ser Arg Leu Ile Tyr Ile Ala Gln Ser Lys Gly 165 170 175 Ala Trp Ile Leu Thr Gly Gly Thr His Tyr Gly Leu Met Lys Tyr Ile 180 185 190 Gly Glu Val Val Arg Asp Asn Thr Ile Ser Arg Ser Ser Glu Glu Asn 195 200 205 Ile Val Ala Ile Gly Ile Ala Ala Trp Gly Met Val Ser Asn Arg Asp 210 215 220 Thr Leu Ile Arg Asn Cys Asp Ala Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Gln Tyr 225 230 235 240 Leu Met Asp Asp Phe Thr Arg Asp Pro Leu Tyr Ile Leu Asp Asn Asn 245 250 255 His Thr His Leu Leu Leu Val Asp Asn Gly Cys His Gly His Pro Thr 260 265 270 Val Glu Ala Lys Leu Arg Asn Gln Leu Glu Lys Tyr Ile Ser Glu Arg 275 280 285 Thr Ile Gln Asp Ser Asn Tyr Gly Gly Lys Ile Pro Ile Val Cys Phe 290 295 300 Ala Gln Gly Gly Gly Lys Glu Thr Leu Lys Ala Ile Asn Thr Ser Ile 305 310 315 320 Lys Asn Lys Ile Pro Cys Val Val Val Glu Gly Ser Gly Gln Ile Ala 325 330 335 Asp Val Ile Ala Ser Leu Val Glu Val Glu Asp Ala Leu Thr Ser Ser 340 345 350 Ala Val Lys Glu Lys Leu Val Arg Phe Leu Pro Arg Thr Val Ser Arg 355 360 365 Leu Pro Glu Glu Glu Thr Glu Ser Trp Ile Lys Trp Leu Lys Glu Ile 370 375 380 Leu Glu Cys Ser His Leu Leu Thr Val Ile Lys Met Glu Glu Ala Gly 385 390 395 400 Asp Glu Ile Val Ser Asn Ala Ile Ser Tyr Ala Leu Tyr Lys Ala Phe 405 410 415 Ser Thr Ser Glu Gln Asp Lys Asp Asn Trp Asn Gly Gln Leu Lys Leu 420 425 430 Leu Leu Glu Trp Asn Gln Leu Asp Leu Ala Asn Asp Glu Ile Phe Thr 435 440 445 Asn Asp Arg Arg Trp Glu Ser Ala Asp Leu Gln Glu Val Met Phe Thr 450 455 460 Ala Leu Ile Lys Asp Arg Pro Lys Phe Val Arg Leu Phe Leu Glu Asn 465 470 475 480 Gly Leu Asn Leu Arg Lys Phe Leu Thr His Asp Val Leu Thr Glu Leu 485 490 495 Phe Ser Asn His Phe Ser Thr Leu Val Tyr Arg Asn Leu Gln Ile Ala 500 505 510 Lys Asn Ser Tyr Asn Asp Ala Leu Leu Thr Phe Val Trp Lys Leu Val 515 520 525 Ala Asn Phe Arg Arg Gly Phe Arg Lys Glu Asp Arg Asn Gly Arg Asp 530 535 540 Glu Met Asp Ile Glu Leu His Asp Val Ser Pro Ile Thr Arg His Pro 545 550 555 560 Leu Gln Ala Leu Phe Ile Trp Ala Ile Leu Gln Asn Lys Lys Glu Leu 565 570 575 Ser Lys Val Ile Trp Glu Gln Thr Arg Gly Cys Thr Leu Ala Ala Leu 580 585 590 Gly Ala Ser Lys Leu Leu Lys Thr Leu Ala Lys Val Lys Asn Asp Ile 595 600 605 Asn Ala Ala Gly Glu Ser Glu Glu Leu Ala Asn Glu Tyr Glu Thr Arg 610 615 620 Ala Val Glu Leu Phe Thr Glu Cys Tyr Ser Ser Asp Glu Asp Leu Ala 625 630 635 640 Glu Gln Leu Leu Val Tyr Ser Cys Glu Ala Trp Gly Gly Ser Asn Cys 645 650 655 Leu Glu Leu Ala Val Glu Ala Thr Asp Gln His Phe Ile Ala Gln Pro 660 665 670 Gly Val Gln Asn Phe Leu Ser Lys Gln Trp Tyr Gly Glu Ile Ser Arg 675 680 685 Asp Thr Lys Asn Trp Lys Ile Ile Leu Cys Leu Phe Ile Ile Pro Leu 690 695 700 Val Gly Cys Gly Phe Val Ser Phe Arg Lys Lys Pro Val Asp Lys His 705 710 715 720 Lys Lys Leu Leu Trp Tyr Tyr Val Ala Phe Phe Thr Ser Pro Phe Val 725 730 735 Val Phe Ser Trp Asn Val Val Phe Tyr Ile Ala Phe Leu Leu Leu Phe 740 745 750 Ala Tyr Val Leu Leu Met Asp Phe His Ser Val Pro His Pro Pro Glu 755 760 765 Leu Val Leu Tyr Ser Leu Val Phe Val Leu Phe Cys Asp Glu Val Arg 770 775 780 Gln Trp Tyr Val Asn Gly Val Asn Tyr Phe Thr Asp Leu Trp Asn Val 785 790 795 800 Met Asp Thr Leu Gly Leu Phe Tyr Phe Ile Ala Gly Ile Val Phe Arg 805 810 815 Leu His Ser Ser Asn Lys Ser Ser Leu Tyr Ser Gly Arg Val Ile Phe 820 825 830 Cys Leu Asp Tyr Ile Ile Phe Thr Leu Arg Leu Ile His Ile Phe Thr 835 840 845 Val Ser Arg Asn Leu Gly Pro Lys Ile Ile Met Leu Gln Arg Met Leu 850 855 860 Ile Asp Val Phe Phe Phe Leu Phe Leu Phe Ala Val Trp Met Val Ala 865 870 875 880 Phe Gly Val Ala Arg Gln Gly Ile Leu Arg Gln Asn Glu Gln Arg Trp 885 890 895 Arg Trp Ile Phe Arg Ser Val Ile Tyr Glu Pro Tyr Leu Ala Met Phe 900 905 910 Gly Gln Val Pro Ser Asp Val Asp Gly Thr Thr Tyr Asp Phe Ala His 915 920 925 Cys Thr Phe Thr Gly Asn Glu Ser Lys Pro Leu Cys Val Glu Leu Asp 930 935 940 Glu His Asn Leu Pro Arg Phe Pro Glu Trp Ile Thr Ile Pro Leu Val 945 950 955 960 Cys Ile Tyr Met Leu Ser Thr Asn Ile Leu Leu Val Asn Leu Leu Val 965 970 975 Ala Met Phe Gly Tyr Thr Val Gly Thr Val Gln Glu Asn Asn Asp Gln 980 985 990 Val Trp Lys Phe Gln Arg Tyr Phe Leu Val Gln Glu Tyr Cys Ser Arg 995 1000 1005 Leu Asn Ile Pro Phe Pro Phe Ile Val Phe Ala Tyr Phe Tyr Met 1010 1015 1020 Val Val Lys Lys Cys Phe Lys Cys Cys Cys Lys Glu Lys Asn Met 1025 1030 1035 Glu Ser Ser Val Cys Cys Phe Lys Asn Glu Asp Asn Glu Thr Leu 1040 1045 1050 Ala Trp Glu Gly Val Met Lys Glu Asn Tyr Leu Val Lys Ile Asn 1055 1060 1065 Thr Lys Ala Asn Asp Thr Ser Glu Glu Met Arg His Arg Phe Arg 1070 1075 1080 Gln Leu Asp Thr Lys Leu Asn Asp Leu Lys Gly Leu Leu Lys Glu 1085 1090 1095 Ile Ala Asn Lys Ile Lys 1100

Claims

TRPA1 아고니스트가 TRPA1에 결합하여 당해 TRPA1이 활성화하여 발현되는 TRPA1의 활성을 억제하는 활성 억제제를 함유하는 화장료용 조성물로서, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 상기 활성 억제제로서 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료용 조성물:
[화학식 1]

[식 중, R¹, R², R³ 및 R⁴는 각각 독립적으로 수소 원자 또는 메틸기, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸은 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸기 또는 식 (Ⅱ)로 표시되는 기를 나타낸다:
-O-R⁹-OH　　　　　　　　　　　　　　(Ⅱ)
(식 중, R⁹은 치환기를 갖고 있어도 되는 알킬렌기를 나타낸다).
단, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 중의 적어도 하나의 기는 식 (Ⅱ)로 표시되는 기이다].
제 1 항에 있어서,
상기 식 (Ⅱ)로 표시되는 기에 있어서, R⁹이 치환기를 갖고 있어도 되는 탄소수 1∼6의 알킬렌기인 화장료용 조성물.
TRPA1 아고니스트가 TRPA1에 결합하여 당해 TRPA1이 활성화하여 발현되는 TRPA1의 활성을 억제하는 활성 억제제를 함유하는 화장료용 조성물로서, 식 (Ⅲ)로 표시되는 화합물을 상기 활성 억제제로서 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료용 조성물:
[화학식 2]

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TRPA1을 활성화하는 성분이 배합된 화장료용 조성물로서, 상기 성분이 멘톨, 에탄올, 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 암모니아, 모노에탄올아민, 수산화칼륨, 알릴이소티오시아네이트, 메틸파라벤, 알리신, 이실린, 과산화수소, 브라디키닌, 아크롤레인, 시트랄, 오이게놀 및 신남알데히드로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 1종의 성분이고, 상기 성분에 의한 TRPA1의 활성화를 억제하는 유효 성분으로서 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 기재된 활성 억제제를 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료용 조성물.
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TRPA1 아고니스트가 TRPA1에 결합하여 당해 TRPA1이 활성화하여 발현되는 TRPA1의 활성을 억제하는 활성 억제제를 함유하는 통증 억제용 약학 조성물로서, 식 (Ⅰ)으로 표시되는 화합물을 상기 활성 억제제로서 함유하는 것을 특징으로 하는 통증 억제용 약학 조성물:
[화학식 1]

[식 중, R¹, R², R³ 및 R⁴는 각각 독립적으로 수소 원자 또는 메틸기, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸은 각각 독립적으로 수소 원자, 메틸기 또는 식 (Ⅱ)로 표시되는 기를 나타낸다:
-O-R⁹-OH　　　　　　　　　　　　　　(Ⅱ)
(식 중, R⁹은 치환기를 갖고 있어도 되는 알킬렌기를 나타낸다).
단, R⁵, R⁶, R⁷ 및 R⁸ 중의 적어도 하나의 기는 식 (Ⅱ)로 표시되는 기이다].
제 9 항에 있어서,
상기 식 (Ⅱ)로 표시되는 기에 있어서, R⁹이 치환기를 갖고 있어도 되는 탄소수 1∼6의 알킬렌기인 통증 억제용 약학 조성물.
TRPA1 아고니스트가 TRPA1에 결합하여 당해 TRPA1이 활성화하여 발현되는 TRPA1의 활성을 억제하는 활성 억제제를 함유하는 통증 억제용 약학 조성물로서, 식 (Ⅲ)로 표시되는 화합물을 상기 활성 억제제로서 함유하는 것을 특징으로 하는 통증 억제용 약학 조성물:
[화학식 2]

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TRPA1을 활성화하는 성분이 배합된 통증 억제용 약학 조성물로서, 상기 성분이 멘톨, 에탄올, 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 암모니아, 모노에탄올아민, 수산화칼륨, 알릴이소티오시아네이트, 메틸파라벤, 알리신, 이실린, 과산화수소, 브라디키닌, 아크롤레인, 시트랄, 오이게놀 및 신남알데히드로 이루어지는 군으로부터 선택된 적어도 1종의 성분이고, 상기 성분에 의한 TRPA1의 활성화를 억제하는 유효 성분으로서 제 9 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 기재된 활성 억제제를 함유하는 것을 특징으로 하는 통증 억제용 약학 조성물.