KR102161460B1 - St2 항원 결합 단백질 - Google Patents

St2 항원 결합 단백질 Download PDF

Info

Publication number
KR102161460B1
KR102161460B1 KR1020147031821A KR20147031821A KR102161460B1 KR 102161460 B1 KR102161460 B1 KR 102161460B1 KR 1020147031821 A KR1020147031821 A KR 1020147031821A KR 20147031821 A KR20147031821 A KR 20147031821A KR 102161460 B1 KR102161460 B1 KR 102161460B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
set forth
sequence set
amino acid
antibody
Prior art date
Application number
KR1020147031821A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20150013167A (ko
Inventor
더크 이. 스미스
이안 폴츠
차드윅 티. 킹
아이 칭 림
루틸리오 클라크
마이클 알. 코모
랜달 알. 케쳄
동후이 쉬
시아오샨 민
쥬룬 왕
Original Assignee
암젠 인크
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 암젠 인크 filed Critical 암젠 인크
Publication of KR20150013167A publication Critical patent/KR20150013167A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102161460B1 publication Critical patent/KR102161460B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)

Abstract

항체를 포함하는 인간 ST2에 결합하는 항원 결합 단백질과 관련된 조성물 및 방법이 본 출원에 기재되어 있다. 특별한 구현예에서, 본 개시 내용은 완전한 인간 항-ST2 항체 및 그의 유도체 및 변이체를 제공한다. 그와 같은 항체 및 항체 단편, 변이체, 및 유도체을 인코딩하는 핵산이 또한 제공된다. 또한, 자가면역 및 염증성 장애를 치료 및 예방하는 방법을 포함하는, 그와 같은 항체를 제조 및 사용하는 방법이 제공된다.

Description

ST2 항원 결합 단백질{ST2 ANTIGEN BINDING PROTEINS}
관련 출원들에 대한 참조
본원은 2013년 3월 15일에 출원된 미국 임시 특허 출원 제61/792,619호 및 2012년 5월 18일에 출원된 미국 임시 특허 출원 제61/649,147호를 우선권들로 수반하며, 상기 출원들의 내용들은 전체적으로 참조로 본 출원에 포함된다.
서열 목록에 대한 언급
본 출원은 EFS-Web을 통해 전자 형태의 서열 목록과 함께 출원되었다. 서열 목록은 2013년 5월 17일에 생성된 파일명 A1712WOPCT_ST25.txt 텍스트 파일로 제공되며, 그 크기는 189,804바이트이다. 서열 목록의 전자 형태의 정보는 본 출원에 참조로 전체가 포함된다.
ST2는 IL-1 및 IL-18 관련 사이토카인이자 일명 NF-HEV 또는 IL-1F11로 알려진 인터루킨-33(IL-33)에 대한 결합 수용체이다. ST2는 가용성 비-신호전달 변이체(가용성 ST2 또는 sST2)로 발현될 뿐만 아니라, IL-33에 대한 세포성 반응을 매개하는 전체 길이 막-스패닝(spanning) 형태(FL ST2, ST2 또는 ST2L)로도 발현된다. 후자의 형태는 수많은 질환 설정 중의 병리적 염증에 연루된 광범위한 세포형에서 발현된다. 이들 세포형에는 림프구, 특히 IL-5 및 IL-13-발현 T 헬퍼 세포, 자연 살해(NK) 및 자연 살해-T(NKT) 세포, 뿐만 아니라 다수의 소위 타고난 면역 세포, 예컨대 비만 세포, 호염기구, 호산구, 대식 세포 및 타고난 헬퍼 세포(일명 누오사이트(nuocytes)로 알려진(Neill, Wong et al. 2010))가 포함된다. 이들 세포 상에서 ST2와 결합한 IL-33은, IL-1 및 IL-18과 유사하게, IL-1R 보조 단백질(AcP)로 알려진 광범위하게-발현된 공동-수용체의 동원(recruitment) 및 전-염증(pro-inflammatory) 신호 전달의 활성화를 야기한다. 따라서, IL-33은 ST2-발현 세포를 직접적으로 활성화시키거나 또는 다른 활성 자극의 존재하에서 그들의 활성화를 증진시킬 수 있다. IL-33-유도 세포 반응의 예에는 예컨대 IL-5, IL-6, IL-13, TNF, IFN-γ 및 GM-CSF와 같은 염증성 사이토카인의 생산뿐 아니라 예컨대 CXCL8, CCL17 및 CCL24와 같은 케모카인의 생산이 포함된다. IL-33은 또한 비만 세포를 증가시킴으로써 급성 알러지성 반응을 증진시키고, IgE 수용체 신호 전달 또는 기타 비만 세포 및 호염기구 활성제에 의해 유발된 호염기구 활성화를 증진하는 것으로 알려진 바 있다. IL-33은 또한 ST2 발현 면역 세포의 동원, 생존 및 부착(adhesive) 특성을 증진시키기 때문에, 국부 조직의 세포성 염증을 촉발하고 지속시키는 데 중요하다.
타고난 및 적응성 면역 세포 상에서의 IL-33의 전-염증 작용(actions)은 결국 수많은 병리적 과정을 촉진한다. 폐의 경우, 기도 염증, 점액 생산, 기도 과민 반응성 및 섬유증 리모델링의 증가가 여기에 포함된다. IL-33은 또한, 전염증 사이토카인의 생산을 촉진함으로써 관절의 국소화된 염증뿐만 아니라 피부 및 관절의 과민통각수용(hypernociception)(Verri. Guerrero et al. 2008; Xu. Jiang et al. 2008)의 원인일 수 있다. 과도한 IL-33은 병리적 콜라겐 침착 및 섬유증과 연관되어 왔고, 또한 염증성 장질환의 상황에서 상피 손상의 원인이 된다. IL-33은 또한, 호염기구 및 IgE-감작화된 비만 세포에서의 강력한 효과를 통해, 과민성 충격 (Pushparai, Tay et al. 2009)을 초래할 수 있고 알러지성 질환에 일조할 수도 있다. 이와 같은 많은 질환들 중 대다수는 본질적으로 만성 및 진행성이고 치료가 어려워, 좀 더 효과적인 치료에 대한 요구가 존재한다.
IL-33/ST2 경로가 인간 질환의 한 원인이라는 몇 가지 윤곽의 증거들이 있는데, 이것은 문서화된 그것의 생물학적 효과들과 일치한다. 예를 들면, IL-33의 비정상적인 고-발현이 점막 조직의 염증 및 관절 염증과 관련된 질환들에서 발견된다. 이와 같은 질환에는 천식(Prefontaine, Laioie-Kadoeh et al. 2009; Prefontaine, Nadi gel et al. 2010), 염증성 장질환(Beltran. Nunez et al. 2010; Pastorelli. Garg et al. 2010; Sponheim, Pollheimer et al. 2010) 및 류마티스성 관절염(Palmer. Talabot-Ayer et al. 2009; Matsuyama. Okazaki et. al. 2010)이 포함된다. IL-33 발현은 건선성 피부(Theoharides. Zhang et al. 2010) 및 아토피 피부염 환자(Pushparai. Tay et al. 2009)의 피부에서 상승되고, 또한 섬유증, 예컨대 전신 경화증(Yanaba,Yoshizaki et al. 2011) (Manetti, Ibba-Manneschi et al. 2009) 및 간 섬유증(Marvie, Lisbonne et al. 2009)의 병리적 세팅에서 증가된다. 순환하는 가용성 ST2의 농도는 또한 수많은 질환 상황에서 상승되어, 추가로 이와 같은 사이토카인 경로와 이들 질환 사이의 관련성을 나타낸다. 예에는 천식(Kuroiwa. Aral et al. 2001; Oshikawa. Kuroiwa et al. 2001; Ali. Zhang et. al. 2009), 만성 폐쇄성 폐 질환(Hacker. Lambers et al. 2009), 폐 섬유증(Tajima. Oshikawa et al. 2003), 패혈증 및 외상(Brunner. Krenn et al. 2004), HIV 감염(Miyagaki. Sugaya et al. 2011), 전신 홍반성 낭창(Mok. Huang et al. 2010), 염증성 장질환(Beltran. Nunez et al. 2010) 뿐만 아니라 류마티스성 관절염, 경화증, 베게너 육아종증 및 베체트 질환(Kuroiwa. Arai et al. 2001) 및 심혈관 질환(Shah and Januzzi 2010)이 포함된다. IL-33은 호산구성 염증을 강력하게 하고, 호산구-연관된 질환, 예컨대 비부비동염 및 코 용종증(Plager. Kahl et al. 2010) 및 호산구성 기관지염(Oshikawa. Kuroiwa et al. 2001)과 관련이 있다는 증거가 있다.
IL-33/ST2 경로와 인간 질환과의 관련성을 보여주는 추가의 증거가 유전적 연구에 의해 제공되었는데, 이들 연구를 통해 일반적인 모집단에서, 발병률 증가 또는 질환 중증도의 파라미터와 유의미하게 연관되는 확인된 IL-33 및/또는 ST2 유전자 다형성이 확인된 바 있다. 몇 개의 대규모 범-게놈 회합 연구는 ST2 (IL1RL1) 또는 IL-33에서의 유전적 변화(variation)와 천식 발병률 증가와의 관련성을 시사하였고(Gudbiartsson, Biornsdottir et al. 2009; Moffatt. Gut et al. 2010; Wu, Romieu et al. 2010), 그 밖의 다른 연구는 상기 경로와 천식 중증도의 증가(Ali, Zhang et al. 2009) 및 기관지 과민 반응성(Reiimerink, Postma et al. 2008)과의 관련성을 시사하였다. 유사한 조사 결과들이 알러지성 장애, 예컨대 아토피 피부염( Shimizu . Matsuda et al . 2005), 비부비동염( Sakashita . Yoshimoto et al . 2008; Castano R 2009뿐만 아니라 코 용종증( Buvsschaert . Grulois et al . 2010)에서의 상기 경로를 유전적으로 시사한 바 있다.
총괄적으로, 이와 같은 몇 개의 인간 질환과의 관련성 및 여러 형태의 유해한 염증을 촉진하는 상기 사이토카인 축의 능력은 이것이 치료적 개입을 위한 유용한 표적임을 암시한다.
본 발명은 항-ST2 항원 결합 단백질, 예를 들면, 항체 및 기능성 그의 단편을 제공하고, 이는 상업적 생산 및 인간 치료 용도에 수용 가능한 특성을 가진다. 항-ST2 항원 결합 단백질은 IL-33/ST2 축과 연관된 질환 및 장애를 치료하는 방법에 특히 유용하다. 고친화도로 ST2에 결합하고 효과적으로 IL-33-결합을 차단하고, 그렇게 함으로써 세포에서 IL-33-매개된 신호전달을 감소시키는 ST2-결합 항체가 제공된다.
제1 측면에서, ST2 항원 결합 단백질은 하기를 포함한다: a) 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성을 갖거나, 서열 번호: 95, 서열 번호: 96, 서열 번호: 97, 서열 번호: 98, 서열 번호: 99, 서열 번호: 100, 서열 번호: 101, 서열 번호: 102, 서열 번호: 103, 서열 번호: 104, 서열 번호: 105, 서열 번호: 163, 서열 번호: 164, 또는 서열 번호: 165에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인; b) 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성을 갖거나, 서열 번호: 29, 서열 번호: 30, 서열 번호: 31, 서열 번호: 32, 서열 번호: 33, 서열 번호: 34, 서열 번호: 35, 서열 번호: 36, 서열 번호: 37, 서열 번호: 38, 서열 번호: 39, 서열 번호: 145, 서열 번호: 146, 또는 서열 번호: 147에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인; 또는 c) a)의 경쇄 가변 도메인 및 b)의 중쇄 가변 도메인.
제1 측면의 바람직한 항원 결합 단백질은 하기를 포함한다: 적어도 90%, 적어도 95%을 갖거나, 서열 번호: 95에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 29에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 96에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 30에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 97에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 31에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 98에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 32에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 99에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 33에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 100에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 34에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 101에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 35에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 102에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 36에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 103에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 37에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 104에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 38에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 105에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 39에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 163에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 145에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 164에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 146에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 165에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 147에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들.
제2 측면에서, ST2 항원 결합 단백질은 하기를 포함한다: a) 서열 번호: 95, 서열 번호: 96, 서열 번호: 97, 서열 번호: 98, 서열 번호: 99, 서열 번호: 100, 서열 번호: 101, 서열 번호: 102, 서열 번호: 103, 서열 번호: 104, 서열 번호: 105, 서열 번호: 163, 서열 번호: 164, 또는 서열 번호: 165에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인; b) 서열 번호: 29, 서열 번호: 30, 서열 번호: 31, 서열 번호: 32, 서열 번호: 33, 서열 번호: 34, 서열 번호: 35, 서열 번호: 36, 서열 번호: 37, 서열 번호: 38, 서열 번호: 39, 서열 번호: 145, 서열 번호: 146, 또는 서열 번호: 147 에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인; 또는 c), a)의 경쇄 가변 도메인 및 b)의 중쇄 가변 도메인.
제2 측면의 바람직한 항원 결합 단백질은 하기를 포함한다: 서열 번호: 95에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 29에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 96에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 30에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 97에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 31에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 98에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 32에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 99에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 33에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 100에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 34에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 101에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 35에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 102에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 36에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 103에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 37에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 104에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 38에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 105에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 39에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 163에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 145에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 164에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 146에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 및 서열 번호: 165에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 147에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들.
제3 측면에서, ST2 항원 결합 단백질은 하기를 포함한다: a) 서열 번호: 106에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 117에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 128에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; b) 서열 번호: 107에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 118에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 129에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; c) 서열 번호: 108에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 119에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 130에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; d) 서열 번호: 109에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 120에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 131에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; e) 서열 번호: 110에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 121에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 132에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; f) 서열 번호: 111에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 122에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 133에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; g) 서열 번호: 112에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 123에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 134에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; h) 서열 번호: 113에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 124에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 135에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; i) 서열 번호: 114에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 125에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 136에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; j) 서열 번호: 115에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 126에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 137에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; k) 서열 번호: 116에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 127에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 138에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; l) 서열 번호: 166에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 169에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 172에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; m) 서열 번호: 167에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 170에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 173에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; 또는 n) 서열 번호: 168에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 171에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 174에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3를 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및 o) 서열 번호: 40에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 51에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 62에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; p) 서열 번호: 41에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 52에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 63에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; q) 서열 번호: 42에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 53에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 64에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; r) 서열 번호: 43에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 54에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 65에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; s) 서열 번호: 44에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 55에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 66에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; t) 서열 번호: 45에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 56에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 67에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; u) 서열 번호: 46에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 57에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 68에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; v) 서열 번호: 47에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 58에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 69에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; w) 서열 번호: 48에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 59에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 70에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; x) 서열 번호: 49에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 60에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 71에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; y) 서열 번호: 50에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 61에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 72에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; z) 서열 번호: 148에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 151에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 154에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; aa) 서열 번호: 149에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 152에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 155에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; 또는 bb) 서열 번호: 150에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 153에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 156에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3를 포함하는 중쇄 가변 도메인.
제3 측면의 바람직한 ST2 항원 결합 단백질은 하기를 포함한다: a)의 경쇄 가변 도메인 및 o)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; b)의 경쇄 가변 도메인 및 p)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; c)의 경쇄 가변 도메인 및 q)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; d)의 경쇄 가변 도메인 및 r)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; e)의 경쇄 가변 도메인 및 s)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; f)의 경쇄 가변 도메인 및 t)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; g)의 경쇄 가변 도메인 및 u)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; h)의 경쇄 가변 도메인 및 v)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; i)의 경쇄 가변 도메인 및 w)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; j)의 경쇄 가변 도메인 및 x)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; k)의 경쇄 가변 도메인 및 y)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; l)의 경쇄 가변 도메인 및 z)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; m)의 경쇄 가변 도메인 및 aa)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 및 n)의 경쇄 가변 도메인 및 bb)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들.
본 발명의 제4 측면에서, 제1, 제2, 또는 제3 측면의 ST2 항원 결합 단백질은 1 x 10-10 M 이하의 친화도로 인간 ST2에 결합한다.
본 발명의 제5 측면에서, 제1, 제2, 제3, 또는 제4 측면의 ST2 항원 결합 단백질은 인간 ST2의 인간 IL-33에의 결합을 억제한다.
본 발명의 제6 측면에서, 제1, 제2, 제3, 제4, 또는 제5 측면의 ST2 항원 결합 단백질은 인간 ST2-발현 세포에서 인간 IL-33-매개된 ST2 신호전달을 감소시킨다.
본 발명의 제7 측면에서, 제6 측면의 ST2 항원 결합 단백질은 사이노몰구스 원숭이 ST2-발현 세포에서 IL-33-매개된 사이노몰구스 원숭이 ST2 신호전달을 감소시킨다.
본 발명의 제8 측면에서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 또는 제7 측면의 ST2 항원 결합 단백질은 항체, 예컨대 인간 항체이다. 바람직한 항체는 하기를 포함한다: 서열 번호: 84에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 18에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 서열 번호: 85에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 19에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 서열 번호: 86에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 20에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 서열 번호: 87에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 21에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 서열 번호: 88에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 22에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 서열 번호: 89에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 23에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 서열 번호: 90에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 24에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체; 서열 번호: 91에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 25에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄; 서열 번호: 92에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 26에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 갖는 것들; 서열 번호: 93에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 27에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 갖는 것들; 서열 번호: 94에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 28에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 갖는 것들; 서열 번호: 160에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 142에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 갖는 것들; 서열 번호: 161에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 143에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 갖는 것들; 및 서열 번호: 162에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 서열 번호: 144에서 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 갖는 것들.
제9 측면에서, 본 발명은 ST2 항원 결합 단백질, 예를 들면, 항체 경쇄 또는 항체 중쇄의 하나 이상의 폴리펩타이드 성분을 인코딩하는 단리된 핵산을 제공한다. 바람직한 구현예에서 핵산은 하기를 포함하는 폴리펩타이드를 인코딩한다.
a) 서열 번호: 95, 서열 번호: 96, 서열 번호: 97, 서열 번호: 98, 서열 번호: 99, 서열 번호: 100, 서열 번호: 101, 서열 번호: 102, 서열 번호: 103, 서열 번호: 104, 서열 번호: 105, 서열 번호: 163, 서열 번호: 164, 또는 서열 번호: 165 에서 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%의 상동성을 갖는 경쇄 가변 도메인;
b) 서열 번호: 29, 서열 번호: 30, 서열 번호: 31, 서열 번호: 32, 서열 번호: 33, 서열 번호: 34, 서열 번호: 35, 서열 번호: 36, 서열 번호: 37, 서열 번호: 38, 서열 번호: 39, 서열 번호: 145, 서열 번호: 146, 또는 서열 번호: 147 에서 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%의 상동성을 갖는 중쇄 가변 도메인;
c) 서열 번호: 95, 서열 번호: 96, 서열 번호: 97, 서열 번호: 98, 서열 번호: 99, 서열 번호: 100, 서열 번호: 101, 서열 번호: 102, 서열 번호: 103, 서열 번호: 104, 서열 번호: 105, 서열 번호: 163, 서열 번호: 164, 또는 서열 번호: 165 에서 제시된 아미노산 서열로부터 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인;
d) 서열 번호: 29, 서열 번호: 30, 서열 번호: 31, 서열 번호: 32, 서열 번호: 33, 서열 번호: 34, 서열 번호: 35, 서열 번호: 36, 서열 번호: 37, 서열 번호: 38, 서열 번호: 39, 서열 번호: 145, 서열 번호: 146, 또는 서열 번호: 147 에서 제시된 아미노산 서열로부터 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인;
e) 하기를 포함하는 경쇄 가변 도메인:
i) 서열 번호: 106에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 117에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 128에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3;
ii) 서열 번호: 107에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 118에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 129에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3;
iii) 서열 번호: 108에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 119에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 130에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3;
iv) 서열 번호: 109에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 120에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 131에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3;
v) 서열 번호: 110에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 121에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 132에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3;
vi) 서열 번호: 111에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 122에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 133에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3;
vii) 서열 번호: 112에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 123에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 134에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3;
viii) 서열 번호: 113에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 124에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 135에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3;
ix) 서열 번호: 114에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 125에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 136에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3;
x) 서열 번호: 115에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 126에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 137에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3;
xi) 서열 번호: 116에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 127에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 138에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3;
xii) 서열 번호: 166에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 169에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 172에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3;
xiii) 서열 번호: 167에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 170에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 173에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; 또는
xiv) 서열 번호: 168에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 171에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 174에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; 또는
f) 하기를 포함하는 중쇄 가변 도메인:
i) 서열 번호: 40에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 51에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 62에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3;
ii) 서열 번호: 41에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 52에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 63에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3;
iii) 서열 번호: 42에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 53에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 64에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3;
iv) 서열 번호: 43에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 54에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 65에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3;
v) 서열 번호: 44에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 55에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 66에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3;
vi) 서열 번호: 45에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 56에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 67에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3;
vii) 서열 번호: 46에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 57에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 68에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3;
viii) 서열 번호: 47에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 58에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 69에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3;
ix) 서열 번호: 48에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 59에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 70에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3;
x) 서열 번호: 49에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 60에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 71에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3;
xi) 서열 번호: 50에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 61에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 72에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3;
xii) 서열 번호: 148에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 151에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 154에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3;
xiii) 서열 번호: 149에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 152에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 155에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; 또는
xiv) 서열 번호: 150에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 153에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 156에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3.
제9 측면의 어떤 구현예에서, 폴리펩타이드는 항체 경쇄를 인코딩하고 서열 번호: 73, 서열 번호: 74, 서열 번호: 75, 서열 번호: 76, 서열 번호: 77, 서열 번호: 78, 서열 번호: 79, 서열 번호: 80, 서열 번호: 81, 서열 번호: 82, 서열 번호: 83, 서열 번호: 157, 서열 번호: 158, 또는 서열 번호: 159 에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100% 동일하다. 제 9 측면의 다른 구현예에서, 폴리펩타이드는 항체 중쇄를 인코딩하고 서열 번호: 7, 서열 번호: 8, 서열 번호: 9, 서열 번호: 10, 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 서열 번호: 13, 서열 번호: 14, 서열 번호: 15, 서열 번호: 16, 서열 번호: 17, 서열 번호: 139, 서열 번호: 140, 또는 서열 번호: 141 에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100% 동일하다.
제10 측면에서, 본 발명은 제8 측면의 하나 이상의 단리된 핵산을 포함하는 발현 벡터를 제공한다. 어떤 구현예에서, 발현 벡터는 항체 경쇄, 항체 중쇄, 또는 둘 모두 항체 경쇄 및 중쇄를 인코딩한다.
제11 측면에서, 본 발명은 본 발명의 제10 측면의 하나 이상의 발현 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포를 포함하는, 프로모터에 작동가능하게 연결된 제 9 측면의 하나 이상의 단리된 핵산을 포함하는 재조합 숙주 세포를 제공한다. 바람직한 구현예에서, 재조합 숙주 세포는 ST2에 결합하는 항체를 분비한다. 바람직한 숙주 세포는 CHO 세포주를 포함하는 포유동물 숙주 세포이다.
제12 측면에서, 본 발명은 자가면역 또는 염증성 장애를 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 치료적으로 효과적인 양의, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 또는 제8 측면 중 어떤 하나의 ST2 항원 결합 단백질을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함한다. 바람직한 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 서열 번호: 95에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 29에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab1), 서열 번호: 96에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 30에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab2), 서열 번호: 97에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 31에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab3), 서열 번호: 98에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 32에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab4), 서열 번호: 99에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 33에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab5), 서열 번호: 100에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 34에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab6), 서열 번호: 101에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 35에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab7), 서열 번호: 102에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 36에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab8), 서열 번호: 103에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 37에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab9), 서열 번호: 104에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 38에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab10), 서열 번호: 105에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 39에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab11); 서열 번호: 163에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 145에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab30); 서열 번호: 164에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 146에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체 (예를 들면, Ab32); 또는 서열 번호: 165에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 147에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 항체(예를 들면, Ab33)이다. 바람직한 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 IL-33의 ST2에의 결합을 억제한다. 특히 바람직한 구현예에서, 자가면역 또는 염증성 장애는 천식, 염증성 장질환, 류마티스성 관절염, 건선, 아토피 피부염, 섬유증, 만성 폐쇄성 폐 질환, 전신 홍반성 낭창, 경화증, 베게너 육아종증, 베체트 질환, 비부비동염, 코 용종증, 호산구성 기관지염, 및 심혈관 질환이다.
제13 측면에서, 본 발명은 제11 측면의 재조합 숙주세포를 배양하고 상기 ST2 항원 결합 단백질을 상기 배양물로부터 단리하여 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 또는 제8 측면 중 어떤 하나의 ST2 항원 결합을 제조하는 방법을 제공한다.
제14 측면에서, 본 발명은 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 또는 제8 측면 중 어떤 하나의 ST2 항원 결합 단백질을 제공하고 이것은 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항체와 교차-경쟁한다:
a) 서열 번호: 84에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 18에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
b) 서열 번호: 85에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 19에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
c) 서열 번호: 86에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 20에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
d) 서열 번호: 87에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 21에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
e) 서열 번호: 88에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 22에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
f) 서열 번호: 89에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 23에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
g) 서열 번호: 90에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 24에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
h) 서열 번호: 91에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 25에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
i) 서열 번호: 92에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 26에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
j) 서열 번호: 93에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 27에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
k) 서열 번호: 94에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 28에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
l) 서열 번호: 160에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 142에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체;
m) 서열 번호: 161에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 143에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체; 및
n) 서열 번호: 162에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 144에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체.
제15 측면에서, 본 발명은 단리된 ST2 항원 결합 단백질, 바람직하게는 그의 항체 또는 항원 결합 단편을 제공하고, 이것은 인간 ST2 도메인 1 및 도메인 2(서열 번호: 175)을 포함하는 폴리펩타이드에 결합하고, 상기 결합은, 단일 돌연변이가 폴리펩타이드의 인간 ST2 도메인 1 또는 도메인 2에 도입될 때 유의미하게 억제되고, 여기서 상기 단일 돌연변이는 L14R, I15R, S33R, E43R, V47R, A62R, G65R, T79R, D92R, D97R, V104R, G138R, N152R, 및 V176R로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.“유의미하게 억제된”이란, 결합의 측정된 차이가 통계적으로 유의미하다는 것을 의미한다. 바람직한 구현예에서, 결합은 그룹의 모든 멤버를 포함하는 그룹의 2 이상의 멤버에 대해 유의미하게 억제된다. 제15 측면의 어떤 구현예에서, 결합은 또한, 단일 돌연변이가 폴리펩타이드의 인간 ST2 도메인 1 또는 도메인 2에 도입될 될 유의미하게 활성화되고, 여기서 상기 단일 돌연변이는 L53R, R72A, 및 S73R로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.“유의미하게 활성화된”이란, 결합의 측정된 차이가 통계적으로 유의미하다는 것을 의미한다. 바람직한 구현예에서, 결합은 그룹의 모든 멤버에 대해 유의미하게 활성화된다. 제 15 측면의 어떤 구현예에서, ST2 결합 단백질은 서열 번호: 85에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호: 19에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항체 와 인간 ST2에의 결합에 대해 교차-경쟁한다. 특히 바람직한 구현예에서, 항원 결합 단백질은 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 또는 제8 측면의 항원 결합 단백질이다.
제16 측면에서, 본 발명은 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제14, 또는 제15 측면의 항원 결합 단백질을 제공하고, 여기서 상기 ST2 결합 단백질 바람직하게는 그의 항체 또는 항원 결합 단편은, 수소/중수소 교환 분석에 의해 결정되는 바와 같이 서열 번호: 1의 아미노산 33-44 및/또는 88-94를 포함하는 ST2의 부분에 결합한다.
제17 측면에서, 본 발명은 계면을 창조하는 ST2, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6, 제7, 제8, 제14, 제15, 또는 제16 측면의 항원 결합 단백질 바람직하게는 그의 항체 또는 항원 결합 단편을 제공하고, 여기서 상기 결합에 의해 만들어진 계면은 K1, F2, P19, R20, Q21, G22, K23, Y26, I70, V71, R72, S73, P74, T75, F76, N77, R78, T79 및 Y81로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 ST2 잔기를 포함한다. 제17 측면의 바람직한 구현예에서, 상기 결합에 의해 만들어진 계면은 ST2 잔기 P19, R20, Q21, G22, K23, 및/또는 Y26, ST2 잔기 I70, V71, R72, S73, P74, T75, F76, N77, R78, T79, 및/또는 Y81, 또는 ST2 잔기 P19, R20, Q21, G22, K23, Y26, I70, V71, R72, S73, P74, T75, F76, N77, R78, T79, 및 Y81을 포함한다. 계면은 결합된 및 미결합된 ST2 사이의 용매 노출 차이에 의해 결정될 수 있고 계면 잔기는 10% 초과의 차이를 갖는 아미노산 및 상기 항체와의 수-매개된 수소 결합을 형성하는 것으로서 규정되거나 항체의 5Å 내의 적어도 하나의 원자를 갖는 아미노산에 의해 결정된다.
제18 측면에서, 본 발명은 하기를 포함하는, 단리된 ST2 항원 결합 단백질, 바람직하게는 그의 항체 또는 항원 결합 단편을 제공한다: a) 서열 번호: 96에서 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 또는 적어도 95%의 상동성을 갖는 경쇄 가변 도메인, b) 서열 번호: 30에서 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 또는 적어도 95%의 상동성을 갖는 중쇄 가변 도메인; c) a)의 경쇄 가변 도메인 및 b)의 중쇄 가변 도메인, d) 서열 번호: 96에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인; e) 서열 번호: 30에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인; f) d)의 경쇄 가변 도메인 및 e)의 중쇄 가변 도메인, g) 서열 번호: 107에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 118에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 129에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3 를 포함하는 경쇄 가변 도메인, h) 서열 번호: 41에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 52에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 63에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3 를 포함하는 중쇄 가변 도메인, 또는 i) g)의 경쇄 가변 도메인 및 h)의 중쇄 가변 도메인.
제18 측면의 바람직한 구현예에서, 경쇄 가변 영역은 하기를 포함한다: D28 또는 그의 보존적 치환, I29 또는 그의 보존적 치환, S30 또는 그의 보존적 치환, N31 또는 그의 보존적 치환, Y32 또는 그의 보존적 치환, Y49 또는 그의 보존적 치환, D50 또는 그의 보존적 치환, N53 또는 그의 보존적 치환, E55 또는 그의 보존적 치환, T56 또는 그의 보존적 치환, D91 또는 그의 보존적 치환, D92 또는 그의 보존적 치환, N93 또는 그의 보존적 치환, F94 또는 그의 보존적 치환, 또는 L96 또는 그의 보존적 치환. 다른 바람직한 구현예에서, 경쇄 가변 영역은 하기를 포함한다: D28 또는 그의 보존적 치환, N31 또는 그의 보존적 치환, D50 또는 그의 보존적 치환, N53 또는 그의 보존적 치환, E55 또는 그의 보존적 치환, D91 또는 그의 보존적 치환, 및 D92 또는 그의 보존적 치환. 또 다른 바람직한 구현예에서, 경쇄 가변 영역은 하기를 포함한다: D28, N31, D50, N53, E55, D91, 및 D92.
제18 측면은 또한 ST2 결합 단백질, 바람직하게는 그의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하고, 여기서 상기 중쇄 가변 영역은 W33 또는 그의 보존적 치환, I50 또는 그의 보존적 치환, D57 또는 그의 보존적 치환, R59 또는 그의 보존적 치환, H99 또는 그의 보존적 치환, G100 또는 그의 보존적 치환, T101 또는 그의 보존적 치환, S102 또는 그의 보존적 치환, S103 또는 그의 보존적 치환, D104 또는 그의 보존적 치환, Y105 또는 그의 보존적 치환, 또는 Y106 또는 그의 보존적 치환을 포함하고; 여기서 상기 중쇄 가변 영역은 S102 또는 그의 보존적 치환, S103 또는 그의 보존적 치환, D104 또는 그의 보존적 치환, 및 Y105 또는 그의 보존적 치환을 포함하고; 및 여기서 상기 중쇄 가변 영역은 S102, S103, D104, 및 Y105를 포함한다.
제18 측면의 어떤 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 1 x 10-10M 이하의 친화도로 인간 ST2에 특이적으로 결합하고, 인간 ST2의 인간 IL-33에의 결합을 억제하고, 인간 ST2-발현 세포에서 인간 IL-33-매개된 ST2 신호 전달을 감소시키고, 사이노몰구스 원숭이 ST2의 사이노몰구스 원숭이 IL-33에의 결합을 억제하고, 사이노몰구스 원숭이 ST2-발현 세포에서 IL-33-매개된 사이노몰구스 원숭이 ST2 신호 전달을 감소시키고/거나 항체 예컨대 인간 항체이다.
도 1에서 ST2 mAb 처리는 기관지 폐포 세척액(BALF) Balb/c 및 C57Bl/6 마이스에서 IL-33-유도 IL-5를 유의미하게 억제하였다.
도 2에서 ST2 mAb 처리는 천식의 바퀴벌레(cockroach) 알러지항원(CRA)-유도 모델에서 유효하다. ST2 항체-처리된 생쥐들(mice)은 아이소타입 대조군 Ig-처리된 생쥐들보다 유의미하게 적은 BALF 호산구를 가졌다.
도 3에서 인간 IL-33 억제에서의 ST2 mAb는 다앙한 공여체의 CD4+ T 세포에서 IL-5 생산을 유도한다. (-) 라인은 억제 없이 인간 IL-2와 조합된 인간 IL-33의 양성 대조군 값을 나타낸다. (‥‥)은 인간 IL-2의 양성 대조군 값을 나타낸다. (― ―) 라인은 중간 대조군 값을 나타낸다.
도 4은 인간 NK 세포 검정(essay)에서의 인간 IL-33의 용량 반응을 나타낸다.
도 5는 Ab2 대(versus) 상업적으로-이용가능한 ST2 항체에 의해 야기된, 인간 NK 세포 검정에서의 IL-33 활성 감소를 나타낸다. 클론 HB12, FB9 및 2A5는 MBL International Corporation에서 수득되었다. 클론 B4E6은 MD Biosciences에서 수득되었다. 클론 97203은 R&D Systems에서 수득되었다.
도 6은 HDX로 결정된, Ab2가 결합된 ST2의 영역의 위치를 나타낸다(실시예 12 참조). ST2의 세포외 도메인의 아미노산 15-26에 해당하는 영역이 붉은색으로 강조되었고, ST2의 세포외 도메인의 아미노산 70-76에 해당하는 영역은 마젠타(magenta)색으로 강조되었다.
도 7은 ST2/Ab2 sc-dsFv 착물의 전체 구조를 나타낸다. Ab2 sc-dsFv 분자 2개가 밑그림 형태로 표현되었고, 경쇄(LC)/중쇄(HC) 쌍 각각에 대해 시안(cyan)색/파란색 또는 옅은 황색/금색으로 착색되었다. ST2 분자 2개가 마젠타색 및 초록색으로 표시되었다.
도 8은 결합 계면(interface)을 나타낸다. ST2는 황색으로 표시되었다. Ab2의 중쇄 및 경쇄가 회색 및 위트(wheat)색으로 표시되었다. 중쇄 및 경쇄의 CDR 루프가 하기 순서대로 착색되었다: CDR1: 빨강(HC) 또는 옅은 빨강(LC); CDR2 : 초록(HC) 또는 옅은 초록(LC); 및 CDR3 : 파랑(HC) 또는 옅은 파랑(LC).
도 9는 ST2 및 Ab2 sc-dsFv의 정전 표면 포텐셜 지도를 나타낸다. 도 9a는 ST2 및 Ab2 sc-dsFv의 전하 및 표면 상보성을 나타낸다. 결합 계면이 동그라미로 강조되었다. 도 9b에서, 왼쪽에서 Ab2(회색/위트색)는 ST2(표면) 상의 양성-전하를 띤 패치(patch)에 결합되었다; 오른쪽에서 ST2(황색)은 Ab2 sc-dsFv (표면)의 산성 패치에 결합되었다. 정전 포텐셜 지도에서, 빨간 표면은 음전하를 나타내고, 파란 표면은 양전하를 나타낸다.
도 10은, 항원에 결합된 경우, ST2와 계면을 형성하는 Ab2 가변 도메인 내부의 잔기를 나타낸다. CDR 영역이 상자로 표시되었다. 계면 내 잔기가 굵은 선으로 표시되었다. ST2 내에서 아미노산과 수소 결합 또는 염 브릿지를 형성하는 잔기가 이탤릭체로 표시되었다.
본 명세서에서 사용된 섹션 제목은 단지 조직화를 목적으로 한 것으로, 기재된 요지를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 명세서의 본문에 언급된 모든 참조는 명확히 참조로 그 전체가 편입되었다.
표준 기술이 재조합 DNA, 올리고뉴클레오타이드 합성, 조직 배양 및 형질전환, 단백질 정제 등에 사용될 수 있다. 효소 반응 및 정제 기술이 제조자의 명세서에 따라, 또는 당해 기술에서 통상적으로 달성되는 바와 같이, 또는 본 명세서에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다. 하기의 절차 및 기술은 일반적으로 당해 기술에서 잘 알려진 종래의 방법에 따라, 본 명세서에 언급 및 논의된 일반적이고 좀 더 구체적인 다양한 참조들에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다. 예를 들면, Sambrook et al., 2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manuel, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, cold Spring Harbor, N.Y.를 참고할 수 있는데, 이는 임의의 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다. 구체적인 정의가 제공되지 않는 한, 본원에 기재된 분석 화학, 유기 화학 및 약효 및 약제학적 화학과 관련된 명명법 및 실험실 절차 및 기술은 당해 기술에 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다. 표준 기술이 화학적 합성, 화학적 분석, 약제학적 제제, 제형 및 전달 및 환자의 치료에 사용될 수 있다.
ST2
본원에 기재된 항원 결합 단백질은 ST2와 결합한다. ST2는 가용성 비-신호전달 변이체(가용성 ST2 또는 sST2) 및 전체 길이 막-스패닝 형체(FL ST2, ST2 또는 ST2L) 두 가지로 발현된다. 예시적인 인간 ST2L 아미노산 서열이 본원 표 1에 제공되었다. 상기 단백질은 몇 개의 도메인으로 구성된다: 아미노산 1-18은 포유동물 세포에서 단백질 처리 도중 절단될 수 있는 선도 서열(leader sequence)에 해당하고; 아미노산 19-331은 세포외 도메인에 해당하고; 아미노산 332-350은 막-통과 도메인에 해당하고; 그리고 아미노산 351-556은 세포내 도메인에 해당한다. 바람직한 구현예에서, 상기 항원 결합 단백질은 ST2L의 세포외 도메인과 결합하여 ST2와 IL-33의 상호작용을 방지한다. 예시적인 인간 IL-33 아미노산 서열이 표 1에 제공되었다.
IL-33은 ST2L 및 AcP를 포함하는 이형이량체 수용체를 통해 신호를 전달한다. 예시적인 인간 AcP 아미노산 서열이 표 1에 제공되었다. 상기 단백질은 또한 몇 개의 도메인으로 구성된다. 아미노산 1-20은 포유동물 세포의 단백질 처리 도중 절단 될 수 있는 선도 서열에 해당하고; 아미노산 21-367은 세포외 도메인에 해당하고; 아미노산 368-388은 막-통과 도메인에 해당하고; 그리고 아미노산 389-570은 세포내 도메인에 해당한다. 예시적인 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 ST2L와 결합하여 ST2L 및 AcP를 발현하는 세포 내 IL-33-매개 신호전달을 방지한다.
표 1
Figure 112014109166417-pct00001
본 발명의 예시적인 구현예는 고친화도로 결합하고 사이노몰구스 원숭이 ST2에 대한 사이노몰구스 원숭이 IL-33의 상호작용을 차단하는 것을 포함하는 인간 및 사이노몰구스 원숭이 ST2 모두에 고친화도로 결합한다. 이들 특성은 비-인간 영장류 유익한 정보를 주는 독성학 연구를 허용한다.
사이노몰구스 원숭이 ST2L의 예시적인 아미노산 서열은 표 2에서 제공된다. 단백질은 몇 개의 도메인으로 만들어 진다: 아미노산 1-18은 포유동물 세포에서 단백질의 처리 동안에 절단될 수 있는 선도 서열에 상응하고; 아미노산 19-331은 세포외 도메인에 상응하고; 아미노산 332-350은 막통과 도메인에 상응하고; 아미노산 351-556은 세포내 도메인에 상응한다.
사이노몰구스 원숭이 AcP의 예시적인 아미노산 서열은 표 2에서 제공된다. 단백질은 몇 개의 도메인으로 만들어 진다: 아미노산 1-20은 포유동물 세포에서 단백질의 처리 동안에 절단될 수 있는 선도 서열에 상응하고; 아미노산 21-367은 세포외 도메인에 상응하고; 아미노산 368-388은 막통과 도메인에 상응하고; 아미노산 389-570은 세포내 도메인에 상응한다.
사이노몰구스 원숭이 IL-33의 예시적인 아미노산 서열은 표 2에서 제공된다.
표 2
Figure 112014109166417-pct00002

ST2 항원 결합 단백질
본 발명은 ST2에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 제공한다. 항원 결합 단백질의 구현예는 ST2에 특이적으로 결합하는 펩타이드 및/또는 폴리펩타이드를 포함한다. 그와 같은 펩타이드 또는 폴리펩타이드 하나 이상의 후-번역 변형을 임의로 포함할 수 있다. 항원 결합 단백질의 구현예는 ST2에 특이적으로 결합하는, 본원에서 다양하게 규정된 바와 같은 항체 및 그의 단편을 포함한다. 이들은 IL-33이 ST2에 결합하고/거나 그것을 활성화시키지 않도록 하는 것을 포함하는, 인간 ST2에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 ST2에 특이적으로 결합한다.“특이적으로 결합하는”은, 본원에서 사용된 바와 같이 항원 결합 단백질이 다른 단백질 상에서 ST2에 우선적으로 결합한다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서 “특이적으로 결합하는”은 ST2 항원 결합 단백질이 다른 단백질에 대해서보다 ST2에 대해서 고친화도를 갖는다는 것을 의미한다. ST2에 특이적으로 결합하는 ST2 항원 결합 단백질은 인간 ST2에 대한 하기의 결합 친화도를 가질 수 있다: 1 x 10-7M 이하, 2 x 10-7M이하, 3 x 10-7M 이하, 4 x 10-7M 이하, 5 x 10-7M 이하, 6 x 10-7M이하, 7 x 10-7M 이하, 8 x 10-7M 이하, 9 x 10-7M이하, 1 x 10-8 M 이하, 2 x 10-8 M 이하, 3 x 10-8 M 이하, 4 x 10-8 M 이하, 5 x 10-8M 이하, 6 x 10-8M 이하, 7 x 10-8M 이하, 8 x 10-8 M 이하, 9 x 10-8M 이하, 1 x 10-9M 이하, 2 x 10-9 M 이하, 3 x 10-9 M 이하, 4 x 10-9 M 이하, 5 x 10-9 M 이하, 6 x 10-9 M 이하, 7 x 10-9 M 이하, 8 x 10-9 M 이하, 9 x 10-9 M 이하, 1 x 10-10 M 이하, 2 x 10-10 M 이하, 3 x 10-10 M 이하, 4 x 10-10 M 이하, 5 x 10-10 M 이하, 6 x 10-10 M 이하, 7 x 10-10 M 이하, 8 x 10-10 M 이하, 9 x 10-10 M 이하, 1 x 10-11 M 이하, 2 x 10-11 M 이하, 3 x 10-11 M 이하, 4 x 10-11 M 이하, 5 x 10-11 M 이하, 6 x 10-11M 이하, 7 x 10-11M 이하, 8 x 10-11M 이하, 9 x 10-11 M 이하, 1 x 10-12 M 이하, 2 x 10-12M 이하, 3 x 10-12 M 이하, 4 x 10-12 M 이하, 5 x 10-12M 이하, 6 x 10-12M 이하, 7 x 10-12M 이하, 8 x 10-12M 이하, 또는 9 x 10-12M 이하.
항원 결합 단백질의 결합 친화도를 측정하는 방법은 당해기술에 알려져 있다. 친화성 결정에 대한 공동의 사용에서의 방법은 하기를 포함한다: 표면 플라즈몬 공명(SPR)(Morton and Myszka “Kinetic analysis of macromolecular interactions using surface plasmon resonance biosensors” Methods in Enzymology (1998) 295, 268-294), 바이오-레이버(Bio-Laver) 간섭 측정(Interferometry)(Abdiche et al “Determining Kinetics and Affinities of Protein Interactions Using a Parallel Real-time Label-free Biosensor, the Octet” Analytical Biochemistry (2008) 377, 209-217), 동력학 배제 검정 (KinExA)(Darling and Brault “Kinetic exclusion assay technology: characterization of molecular interactions” Assay and Drug Dev Tech (2004) 2, 647-657), 등온 열량 측정(Pierce et al “Isothermal Titration Calorimetry of Protein-Protein Interactions” Methods (1999) 19, 213-221) 및 분석적 초원심분리 (Lebowitz et al“Modem analytical ultracentrifugation in protein science: A tutorial review” Protein Science(2002), 11:2067-2079). 실시예 3은 예시적인 방법을 제공한다.
본원의 ST2-결합 항체의 다양한 구현예를 참조할 때, 또한 그의 ST2-결합 단편을 포함하는 것으로 이해된다. ST2-결합 단편은 ST2에 특이적으로 결합하기 위한 능력을 보유하고 있는 본원에서 기재된 항체 단편 또는 도메인 중 어떤 것을 포함한다. ST2-결합 단편은 본원에서 기재된 어떤 스캐폴드(scaffold)에 있을 수 있다.
어떤 치료적 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 ST2의 IL-33에의 결합을 억제하고/억제하거나 ST2의 IL-33에의 결합과 연관된 하나 이상의 생물학적 활성, 예를 들면, IL-33-매개된 신호전달을 억제한다. 그와 같은 항원 결합 단백질은 “중화된”것이라고 한다. 어떤 구현예에서, 중화 ST2 항원 결합 단백질은 특이적으로 ST2에 결합하고 10%-100%, 예컨대 적어도 약 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% 또는 그 초과까지 어디에서나 ST2의 IL-33에의 결합을 억제한다. 예를 들면, ST2 항원 결합 단백질은 공-수용체 ST2 및 AcP에 대해 IL-33의 ST2에의 결합 또는 IL-33을 차단하여 항원 결합 단백질의 능력을 측정하여 중화 능력에 대해 시험될 수 있다, 참고, 예를 들면, 실시예 6의 IL-33 차단 검정. 대안적으로, ST2 항원 결합 단백질은 IL-33 매개된 생물학적 기능을 측정하는 검정에서 ST2 항원 결합 단백질의 존재의 영향을 측정하는 검정에서 능력을 증화시키기 위해 시험될 수 있다. 예를 들면, 매개체 예컨대 세포 예컨대 호산구, 호염기구, T 세포, 비만 세포, NK 세포, NKT 세포, 중성구, 또는 타고난 헬퍼 세포로부터의 사이토카인 및 케모카인의 분비 또는 매개체의 세포내 신호전달 또는 증가된 mRNA 발현과 같은 생물학적 반응을 유도하기 위한 IL-33의 능력. 대안적으로, 세포 예컨대 호산구, 호염기구, T 세포, 비만 세포, NK 세포, NKT 세포, 중성구, 또는 타고난 헬퍼 세포의 분화, 증식, 생존, 화학주성, 형상 변화 또는 부착 특성을 촉진하는 IL-33의 능력. 대안적으로, 세포 예컨대 호산구, 호염기구, T 세포, 비만 세포, NK 세포, NKT 세포, 중성구, 또는 타고난 헬퍼 세포에 대한 세포 활성화의 어떤 마커, 예컨대 CD11b의 세포 표면 발현을 유도하기 위한 IL-33의 능력. 예시적인 방법은 실시예 7-10에서 제공된다.
항원 결합 단백질의 구현예는, 본원에서 다양하게 규정된 바와 같이, 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDRs)을 갖는 스패폴드 구조를 포함한다. 구현예는 추가로, 하나 이상의 항체 가변 도메인, 중쇄 또는 경쇄를 갖는 스캐폴드구조를 포함하는 항원 결합 단백질을 포함한다. 구현예는 하기를 포함하는 항체를 포함한다: Ab1 경쇄 가변 도메인(LCv), Ab2 LCv, Ab3 LCv, Ab4 LCv, Ab5 LCv, Ab6 LCv, Ab7 LCv, Ab8 LCv, Ab9 LCv, Ab10LCv, Ab11 LCv, Ab30 LCv, Ab32 LCv, 및 Ab33 LCv (서열 번호: 95-105, 163-165, 각각)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 가변 도메인 및/또는 Ab1 중쇄 가변 도메인(HCv), Ab2 HCv, Ab3 HCv, Ab4 HCv, Ab5 HCv, Ab6 HCv, Ab7 HCv, Ab8 HCv, Ab9 HCv, Ab10 HCv, Ab11HCv, Ab30HCv, Ab32HCv, 및 Ab33HCv (서열 번호: 29-39, 145-147, 각각)로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 가변 도메인, 및 단편, 유도체, 돌연변이단백질, 및 그의 변이체.
Ab1 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 84에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab2 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 85에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab3 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 경쇄는 서열 번호: 86에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab4 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 87에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab5 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 88에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab6 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 89에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab7 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 90에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab8 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 91에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab9 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 92에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab10 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 93에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab11 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 94에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab30 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 160에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab32 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 161에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab33 LCv를 포함하는 예시적인 경쇄는 서열 번호: 162에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄이다.
Ab1 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 18에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab2 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 19에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab3 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 20에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab4 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 21에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab5 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 22에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab6 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 23에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab7 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 24에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab8 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 25에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab9 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 26에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab10 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 27에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab11 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 28에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab30 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 142에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab32 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 143에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
Ab33 HCv를 포함하는 예시적인 중쇄는 서열 번호: 144에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄이다.
구상된 스캐폴드의 추가의 예는 하기를 포함한다: 파이브로넥틴, 네오카르지노스타틴 CBM4-2, 리포칼린, T-세포 수용체, 단백질 -A 도메인(단백질 Z), Im9, TPR 단백질, 아연 핑거 도메인, pVIII, 조류 췌장 폴리펩타이드, GCN4, WW 도메인 Src 상동성 도메인 3, PDZ 도메인, TEM-1 베타-락타마제, 티오레독신, 포도상구균 뉴클레아제, PHD-핑거 도메인, CL-2, BPTI, APPI, HPSTI, 에코틴, LACI-D1, LDTI, MTI-II, 전간 독소, 곤충 데펜신-A 펩타이드, EETI-II, Min-23, CBD, PBP, 사이토크롬 b-562, Ldl 수용체 도메인, 감마-크리스탈린, 우비퀴틴, 트랜스페린, 및 또는 C-형 렉틴-유사 도메인. 치료제로서의 비-항체 스캐폴드 및 그의 용도는 'Gebauer and Skerra, Curr. Opin. Chem. Biol., 13:245-255 (2009) and Binz et al., Nat. Biotech., 23(10):1257-1268 (2005)'에서 검토되며, 이는 본원에 참조로 그 전체가 포함된다.
본 발명의 측면은 하기의 가변 도메인: Ab1 LCv/Ab1 HCv(서열 번호: 95/서열 번호: 29), Ab2 LCv/Ab2 HCv(서열 번호: 96/서열 번호: 30), Ab3 LCv/Ab3 HCv(서열 번호: 97/서열 번호: 31), Ab4 LCv/Ab4 HCv(서열 번호: 98/서열 번호: 32), Ab5 LCv/Ab5 HCv(서열 번호: 99/서열 번호: 33), Ab6 LCv/Ab6 HCv(서열 번호: 100/서열 번호: 34), Ab7 LCv/Ab7 HCv(서열 번호: 101/서열 번호: 35), Ab8 LCv/Ab8 HCv(서열 번호: 102/서열 번호: 36), Ab9 LCv/Ab9 HCv(서열 번호: 103/서열 번호: 37), Ab10 LCv/Ab10 HCv(서열 번호: 104/서열 번호: 38), Ab11 LCv/Ab11 HCv(서열 번호: 105/서열 번호: 39), Ab30 LCv/Ab30 HCv(서열 번호: 163/서열 번호: 145), Ab32 LCv/Ab32 HCv(서열 번호: 164/서열 번호: 146), Ab33 LCv/Ab33 HCv(서열 번호: 165/서열 번호: 147), 및 이들의 조합을 포함하는 항체, 뿐만 아니라 그의 단편, 유도체, 돌연변이 단백질 및 변이체를 포함한다.
본 발명의 예시적인 항체는 Ab1(서열 번호: 84/서열 번호: 18), Ab2(서열 번호: 85/서열 번호: 19), Ab3(서열 번호: 86/서열 번호: 20), Ab4(서열 번호: 87/서열 번호: 21), Ab5(서열 번호: 88/서열 번호: 22), Ab6(서열 번호: 89/서열 번호: 23), Ab7(서열 번호: 90/서열 번호: 24), Ab8(서열 번호: 91/서열 번호: 25), Ab9(서열 번호: 92/서열 번호: 26), Ab10(서열 번호: 93/서열 번호: 27), Ab11(서열 번호: 94/서열 번호: 28), Ab30(서열 번호: 160/서열 번호: 142), Ab32(서열 번호: 161/서열 번호: 143), 및 Ab33(서열 번호: 162/서열 번호: 144)을 포함한다.
전형적으로, 항체 경쇄 또는 중쇄의 각 가변 도메인은 3개의 CDR을 포함한다. 중쇄 가변 도메인은 중쇄 CDR1(HCDR1), 중쇄 CDR2(HCDR2), 및 중쇄 CDR3(HCDR3)을 포함한다. 경쇄 가변 도메인은 경쇄 CDR1(LCDR1), 경쇄 CDR2(LCDR2), 및 경쇄 CDR3(LCDR3)을 포함한다. 어떤 구현예에서, 항원 결합 단백질은 본원에서 기재된 바람직한 가변 도메인 내에 함유된 하나 이상의 CDR을 포함한다.
그와 같은 CDR의 예는, 비제한적으로 하기를 포함한다:
Ab1 LCv: LCDR1(서열 번호: 106), LCDR2(서열 번호: 117), 및 LCDR3(서열 번호: 128)의 CDR;
Ab2 LCv: LCDR1(서열 번호: 107), LCDR2(서열 번호: 118), 및 LCDR3(서열 번호: 129)의 CDR;
Ab3 LCv: LCDR1(서열 번호: 108), LCDR2(서열 번호: 119), 및 LCDR3(서열 번호: 130)의 CDR;
Ab4 LCv: LCDR1(서열 번호: 109), LCDR2(서열 번호: 120), 및 LCDR3(서열 번호: 131)의 CDR;
Ab5 LCv: LCDR1(서열 번호: 110), LCDR2(서열 번호: 121), 및 LCDR3(서열 번호: 132)의 CDR;
Ab6 LCv: LCDR1(서열 번호: 111), LCDR2(서열 번호: 122), 및 LCDR3(서열 번호: 133)의 CDR;
Ab7 LCv: LCDR1(서열 번호: 112), LCDR2(서열 번호: 123), 및 LCDR3(서열 번호: 134)의 CDR;
Ab8 LCv: LCDR1(서열 번호: 113), LCDR2(서열 번호: 124), 및 LCDR3(서열 번호: 135)의 CDR;
Ab9 LCv: LCDR1(서열 번호: 114), LCDR2(서열 번호: 125), 및 LCDR3(서열 번호: 136)의 CDR;
Ab10 LCv: LCDR1(서열 번호: 115), LCDR2(서열 번호: 126), 및 LCDR3(서열 번호: 137)의 CDR;
Ab11 LCv: LCDR1(서열 번호: 116), LCDR2(서열 번호: 127), 및 LCDR3(서열 번호: 138)의 CDR;
Ab30 LCv: LCDR1(서열 번호: 166), LCDR2(서열 번호: 169), 및 LCDR3(서열 번호: 172)의 CDR;
Ab32 LCv: LCDR1(서열 번호: 167), LCDR2(서열 번호: 170), 및 LCDR3(서열 번호: 173)의 CDR;
Ab33 LCv: LCDR1(서열 번호: 168), LCDR2(서열 번호: 171), 및 LCDR3(서열 번호: 174)의 CDR;
Ab1 HCv: HCDR1(서열 번호: 40), HCDR2(서열 번호: 51), 및 HCDR3(서열 번호: 62)의 CDR;
Ab2 HCv: HCDR1(서열 번호: 41), HCDR2(서열 번호: 52), 및 HCDR3(서열 번호: 63)의 CDR;
Ab3 HCv: HCDR1(서열 번호: 42), HCDR2(서열 번호: 53), 및 HCDR3(서열 번호: 64)의 CDR;
Ab4 HCv: HCDR1(서열 번호: 43), HCDR2(서열 번호: 54), 및 HCDR3(서열 번호: 65)의 CDR;
Ab5 HCv: HCDR1(서열 번호: 44), HCDR2(서열 번호: 55), 및 HCDR3(서열 번호: 66)의 CDR;
Ab6 HCv: HCDR1(서열 번호: 45), HCDR2(서열 번호: 56), 및 HCDR3(서열 번호: 67)의 CDR;
Ab7 HCv: HCDR1(서열 번호: 46), HCDR2(서열 번호: 57), 및 HCDR3(서열 번호: 68)의 CDR;
Ab8 HCv: HCDR1(서열 번호: 47), HCDR2(서열 번호: 58), 및 HCDR3(서열 번호: 69)의 CDR;
Ab9 HCv: HCDR1(서열 번호: 48), HCDR2(서열 번호: 59), 및 HCDR3(서열 번호: 70)의 CDR;
Ab10 HCv: HCDR1(서열 번호: 49), HCDR2(서열 번호: 60), 및 HCDR3(서열 번호: 71)의 CDR;
Ab11 HCv: HCDR1(서열 번호: 50), HCDR2(서열 번호: 61), 및 HCDR3(서열 번호: 72)의 CDR;
Ab30 HCv: HCDR1(서열 번호: 148), HCDR2(서열 번호: 151), 및 HCDR3(서열 번호: 154)의 CDR;
Ab32 HCv: HCDR1(서열 번호: 149), HCDR2(서열 번호: 152), 및 HCDR3(서열 번호: 155)의 CDR; 및
Ab33 HCv: HCDR1(서열 번호: 150), HCDR2(서열 번호: 153), 및 HCDR3(서열 번호: 156)의 CDR.
일부 구현예에서, 항원 결합 단백질은 하기를 포함한다: A) 폴리펩타이드, 예를 들면, 서열 번호: 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 166, 167, 및 168로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 169, 170, 및 171로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR2; 및/또는 서열 번호: 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 172, 173, 및 174로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 LCDR3을 포함하는 경쇄; 및/또는 B) 폴리펩타이드, 예를 들면, 서열 번호: 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 148, 149, 및 150로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 151, 152, 및 153로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR2; 및/또는 서열 번호: 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 154, 155, 및 156로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 HCDR3을 포함하는 경쇄.
추가 구현예에서, 항원 결합 단백질은 하기를 포함한다: a) Ab1 LCv, Ab2 LCv, Ab3 LCv, Ab4 LCv, Ab5 LCv, Ab6 LCv, Ab7 LCv, Ab8 LCv, Ab9 LCv, Ab10 LCv, Ab11 LCv, Ab30 LCv, Ab32 LCv, 및 Ab33 LCv의 어떤 것의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 경쇄 아미노산 서열 및 B) Ab1 HCv, Ab2 HCv, Ab3 HCv, Ab4 HCv, Ab5 HCv, Ab6 HCv, Ab7 HCv, Ab8 HCv, Ab9 HCv, Ab10 HCv, Ab11 HCv, Ab30 HCv, Ab32 HCv, 및 Ab33 HCv의 어떤 것의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 아미노산 서열.
어떤 구현예에서, CDR은 본원에서 제시된 예시적인 CDR로부터 1 이하, 2 이하, 3 이하, 4 이하, 5 이하, 또는 6 이하 개의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 포함한다.
본 발명의 측면은 서열 번호: 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 163, 164, 및 165로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항체를 포함한다. 본 발명의 측면은 서열 번호: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 145, 146, 및 147로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체를 포함한다. 본 발명의 추가 측면은 A) 서열 번호: 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 163, 164, 및 165로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 가변 도메인, 및 B) 서열 번호: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 145, 146, 및 147로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체를 포함한다.
본 발명의 항체는 당해기술에서 알려진 임의의 불변 영역을 포함할 수 있다. 경쇄 불변 영역은, 예를 들면, 카파- 또는 람다-형 경쇄 불변 영역, 예를 들면, 인간 카파- 또는 람다-형 경쇄 불변 영역일 수 있다. 중쇄 불변 영역은, 예를 들면, 알파-, 델타-, 엡실론-, 감마-, 또는 뮤-형 중쇄 불변 영역, 예를 들면, 인간 알파-, 델타-, 엡실론-, 감마-, 또는 뮤-형 중쇄 불변 영역일 수 있다.
일 구현예에서 경쇄 또는 중쇄 불변 영역은 자연 발생 불변 영역의 단편, 유도체, 변이체, 또는 돌연변이 단백질이다. 본 발명의 측면은 1 이하, 2 이하, 3 이하, 4 이하, 5 이하, 6 이하, 7 이하, 8 이하, 9 이하, 또는 10 이하 개의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 서열 번호: 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 163, 164, 및 165로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함한다. 본 발명의 측면은 1 이하, 2 이하, 3 이하, 4 이하, 5 이하, 6 이하, 7 이하, 8 이하, 9 이하, 또는 10 이하 개의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 서열 번호: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 145, 146, 및 147로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함한다. 본 발명의 추가 측면은 하기를 포함하는 항체를 포함한다: A) 1 이하, 2 이하, 3 이하, 4 이하, 5 이하, 6 이하, 7 이하, 8 이하, 9 이하, 또는 10 이하 개의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 서열 번호: 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 163, 164, 및 165로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역, 및 B) 1 이하, 2 이하, 3 이하, 4 이하, 5 이하, 6 이하, 7 이하, 8 이하, 9 이하, 또는 10 이하 개의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 서열 번호: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 145, 146, 및 147로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역.
일 변화에서, 항원 결합 단백질은 서열 번호: 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 163, 164, 및 165로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 또 하나의 변화에서, 항원 결합 단백질은 서열 번호: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 145, 146, 및 147로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 또 추가의 구현예에서, 항원 결합 단백질은 하기를 포함한다: a) 서열 번호: 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 163, 164, 및 165로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 및 B) 서열 번호: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 145, 146, 및 147로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 중쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 아미노산 서열.
어떤 구현예에서, 항원 결합 단백질은 경쇄 및/또는 중쇄 CDR3을 포함한다.일부 구현예에서, 항원 결합 단백질은 서열 번호: 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 172, 173, 174, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 154, 155, 및 156에서 서열의 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 구현예에서, 아미노산 서열은 서열 번호: 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 172, 173, 174, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 154, 155, 및 156 에서 제시된 예시적인 서열로부터 1 이하, 2 이하, 3 이하, 4 이하, 5 이하, 또는 6 이하 개의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 포함한다. 따라서, 본 발명의 구현예는 서열 번호: 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 172, 173, 174, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 154, 155, 및 156 에서 제시된 서열의 그룹으로부터 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 단백질을 포함한다.
어떤 구현예에서, 항원 결합 단백질은 경쇄 및/또는 중쇄 CDR2을 포함한다.일부 구현예에서, 항원 결합 단백질은 서열 번호: 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 169, 170, 171, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 151, 152, 및 153에서 제시된 서열의 그룹으로부터 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 구현예에서, 아미노산 서열은 서열 번호: 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 169, 170, 171, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 151, 152, 및 153 에서 제시된 예시적인 서열로부터 1 이하, 2 이하, 3 이하, 4 이하, 5 이하, 또는 6 이하 개의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 포함한다. 따라서, 본 발명의 구현예는 서열 번호: 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 169, 170, 171, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 151, 152, 및 153 에서 제시된 서열의 그룹으로부터 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 단백질을 포함한다.
어떤 구현예에서, 항원 결합 단백질은 경쇄 및/또는 중쇄 CDR1을 포함한다.일부 구현예에서, 항원 결합 단백질은 서열 번호: 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 166, 167, 168, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 148, 149, 및 150 에서 제시된 서열의 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 어떤 구현예에서, 아미노산 서열은 서열 번호: 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 166, 167, 168, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 148, 149, 및 150 에서 제시된 예시적인 서열로부터 1 이하, 2 이하, 3 이하, 4 이하, 5 이하, 또는 6 이하 개의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 포함한다. 따라서, 본 발명의 구현예는 서열 번호: 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 166, 167, 168, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 148, 149, 및 150 에서 제시된 서열의 그룹으로부터 아미노산 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 항원 결합 단백질을 포함한다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 인간 및 모노클로날 항체, 이중특이적 항체, 디아바디(diabody), 미니바디(minibody), 도메인 항체, 합성 항체 (때때로 “항체 모방체”로서 본원에서 칭함), 키메라 항체, 항체 융합 (때때로 “항체 콘주게이트”로 칭함), 및 각각의 단편 각각을 포함하는 전통적 항체의 스캐폴드를 포함한다. 상기 기재된 CDR들 및 상기 CDR들의 다양한 조합들이 하기의 스캐폴드 중 어딘가에 접합될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 “항체”는, 본원에서 다양하게 기재된 바와 같이, 특이적으로 항원에 결합되는 하나 또는 둘 이상의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 다양한 형태의 모노머 또는 다량체 단백질을 가리킨다. 어떤 구현예에서, 항체는 재조합 DNA 기법에 의해 생산된다. 추가 구현예에서, 항체는 자연 발생 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생산된다. 또 하나의 측면에서, 상기 항체는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택된다: a) 인간 항체; b) 인간화된 항체; c) 키메라 항체; d) 모노클로날 항체; e) 폴리클로날 항체; f) 재조합 항체; g) 항원-결합 단편; h) 단일 사슬 항체; i) 디아바디; j) 트리아바디, k) 테트라바디, l) Fab 단편; m) F(ab’)2 단편, n) IgA 항체, o) IgD 항체, p) IgE 항체, q) IgG1 항체, r) IgG2 항체, s) IgG3 항체, t) IgG4 항체, 및 u) IgM 항체.
가변 영역 또는 도메인은 뼈대 영역(지정된 뼈대 영역 FR1, FR2, FR3 및 FR4) 내에 내장된 적어도 3개의 중쇄 또는 경쇄 CDR을 포함한다(Rabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Public Health Service N.I.H., Bethesda, MD). 전통적 항체 구조 단위는 전형적으로 사량체를 포함한다.각 사량체는 전형적으로 동일한 두 쌍의 폴리펩타이드 사슬로 구성되는데, 각각의 쌍은 하나의 “경쇄”와 하나의 “중쇄”를 갖는다. 각 사슬의 아미노-말단부는 주로 항원 인식을 책임지는 약 100-110 또는 그 이상의 아미노산을 포함한다. 각 사슬의 카복시-말단부는 주로 효과기 기능을 책임지는 불변 영역을 규정한다. 인간 경쇄는 카파 또는 람다 경쇄로 분류된다. 중쇄는 뮤, 델타, 감마, 알파, 또는 엡실론으로 분류되고, 항체의 아이소타입을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로 규정한다. IgG는 비제한적으로 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 비롯한 몇 개의 서브클래스를 갖는다. IgM은 비제한적으로 IgM1 및 IgM2를 비롯한 서브클래스를 갖는다. 본 발명의 구현예는, 본원에 기재된 항원 결합 단백질의 가변 도메인 또는 CDR을 포함하는 항체의 이와 같은 클래스와 서브클래스를 포함한다.
일부 자연 발생 항체, 예컨대 낙타 및 라마에서 발견되는 항체는 중쇄 2개로 이루어진 이량체로, 경쇄를 포함하지 않는다. 본 발명은 ST2에 결합될 수 있는, 중쇄 2개로 이루어진 이량체 항체, 또는 그것의 단편을 포함한다.
중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 전형적으로 3개의 초가변 영역에 의해 연결된 비교적 보존된 뼈대 영역(FR), 즉, 상보성 결정 영역(CDR)과 동일한 일반적인 구조를 보여준다. CDR은 주로 항원 인식 및 결합을 책임진다. 2개 사슬로 이루어진 각 쌍의 CDR은 뼈대 영역에 의해 정렬되어 있어서, 특정 에피토프와의 결합을 가능하게 한다. N-말단부터 C-말단까지, 경쇄 및 중쇄 둘 다 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각 도메인에 아미노산의 배정은 Kabat의 정의와 일치한다.
CDR는 항원 결합을 위한 주요 표면 접점을 구성한다. CDR3 또는 경쇄 그리고, 특히 중쇄의 CDR3는 경쇄 및 중쇄 가변 영역 내의 항원 결합에서 가장 중요한 결정 요인이 될 수 있다. 일부 항체의 경우, 중쇄 CDR3은 항원과 항체 사이의 주요 접촉면을 구성하는 것으로 보인다. CDR3만이 변형되는 시험관내 선택 도식이 사용되어, 항체의 결합 특성을 변형하거나 또는 항원 결합의 원인이 되는 잔기의 종류를 결정할 수 있다.
자연 발생 항체는 전형적으로 신호 서열을 포함하는데, 이것은 단백질 분비를 위한 세포성 경로로 항체를 이끌고, 전형적으로 성숙한 항체에는 존재하지 않는다. 본 발명의 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 아래에서 기재된 바와 같이 자연 발생 신호 서열 또는 이종기원 신호 서열을 인코딩할 수 있다.
한 구현예에서, 항원 결합 단백질은 본원에 기재된 예시적인 CDR을 1-6개 포함하는 항체이다. 본 발명의 항체는 IgM, IgG(IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 포함), IgD, IgA, 또는 IgE 항체를 비롯한, 모든 유형의 항체일 수 있다. 특정 구현예에서, 항원 결합 단백질은 예를 들면, IgG1 항체와 같은 IgG 유형 항체이다.
일부 구현예에서, 예를 들면 항원 결합 단백질이 완전한 중쇄 및 경쇄를 갖는 항체인 경우, CDR들은 모두 동일한 종, 예를 들면, 인간으로부터 유래된 것이다. 대안적으로, 예를 들면 상기 항원 결합 단백질이 상기 개괄된 서열로부터 6개 미만의 CDR를 함유하는 구현예의 경우, 추가의 CDR은 다른 종으로부터 유래된 것이거나 또는 예시적인 서열에 묘사된 것과는 다른 인간 CDR일 수 있다. 예를 들면, 본원에서 확인된 적절한 서열에서 유래된 HCDR3 및 LCDR3 영역이 대체 종 또는 상이한 인간 항체 서열에서 임의로 선택된 HCDR1, HCDR2, LCDR1, 및 LCDR2, 또는 이들의 조합과 함께 사용될 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 CDR가 상업적으로 관련된 키메라 또는 인간화되는 항체(humanized antibodies)의 CDR 영역을 대체할 수 있다.
특정 구현예에서, 인간 성분인, 항원 결합 단백질의 스캐폴드 성분(scaffold component)이 활용된다. 그러나, 일부 구현예에서는 스캐폴드 성분이 상이한 종에서 유래된 혼합물일 수 있다. 이와 같이, 항원 결합 단백질이 항체인 경우, 그와 같은 항체는 키메라 항체 및/또는 인간화되는 항체일 수 있다. 일반적으로, “키메라 항체” 및 “인간화되는 항체”는 둘 다 2종 이상에서 유래된 영역들이 결합된 항체를 가리킨다. 예를 들면, “키메라 항체”는 전통적으로 생쥐(mouse)(또는 일부 경우에 쥐(rat))에서 유래된 가변 영역(들)과 인간에서 유래된 불변 영역(들)을 포함한다.
“인간화되는 항체”는 일반적으로 인간 항체에서 발견되는 서열로 교환되는 가변 도메인 뼈대 영역을 가지고 있는 비-인간 항체를 가리킨다. 일반적으로, 인간화되는 항체에서는, 하나 이상의 CDR을 제외한 전체 항체가 인간 기원의 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되거나 또는 하나 이상의 CDR 내부를 제외하고 그와 같은 항체와 동일하다. CDR들은, 비-인간 유기체에서 유래된 핵산에 의해 인코딩되는 일부 또는 모두는, 인간 항체 가변 영역의 베타-시트 뼈대에 접합되어 항체를 생성하는데, 항체의 특이성은 접합된 CDR에 의해 결정된다. 이와 같은 항체의 생성은, 예를 들어, 'WO 92/11018, Jones 1986, Nature 321:522-525, Verhoeyen et al., 1988, Science 239:1534-1536'에 기재되었다. 인간화되는 항체는 또한 유전적으로 조작된 면역계를 갖는 생쥐들을 사용하여 생성될 수 있다(Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654). 본원에 기재된 예시적인 구현예에서, 확인된 CDR는 인간의 것이고, 따라서 이 문맥에서 인간화되는 항체 및 키메라 항체는 일부 비-인간 CDR들을 포함한다; 예를 들면, HCDR3 및 LCDR3 영역을 포함하고, 상이한 종 기원의 다른 CDR 영역을 하나 이상 갖는 인간화되는 항체가 생성될 수 있다.
한 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 다중특이적 항체이고, 특히 때로 “디아바디”로 명명되는 이중특이적(bispecfic) 항체이다. 이들은 둘 이상의 상이한 항원 또는 단일 항원 상의 상이한 에피토프와 결합하는 항체이다. 어떤 구현예에서, 이중특이적 항체는 인간 효과기 세포(예를 들면, T 세포) 상의 ST2와 항원을 결합시킨다. 이와 같은 항체는 ST2-발현 종양 세포와 같은 ST2 발현 세포에 대항하는 효과기 세포 반응을 목표로 삼을 때 유용하다. 바람직한 구현예에서, 인간 효과기 세포 항원은 CD3이다(미국 특허 번호 7,235,641). 이중특이적 항체의 제조방법은 당해 기술에 알려져 있다. 한 가지 방법은 하나의 세포에서 공동발현(co-expressed)될 때 중쇄의 이형이량체 형성을 촉진하는“노브(knobs)” 및 “천공(holes)”을 생성하기 위해 중쇄의 Fc 부분을 조작하는 단계를 필요로 한다(미국 7,695,963). 또 다른 방법은 또한 중쇄의 Fc 부분을 조작하지만, 정전 스티어링(steering)을 사용하여 하나의 세포에서 공동발현될 때 중쇄의 호모다이머 형성을 저지하고 이형이량체 형성을 장려하는 단계를 필요로 하며(WO 09/089,004), 이것은 본원에 참조로 그 전체가 편입되었다.
한 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 미니바디(minibody)이다. 미니바디는 CH3 도메인에 연결된 scFv를 포함하는 최소화된 항체-유사 단백질이다(Hu et al., 1996, Cancer Res. 56:3055-3061).
한 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 도메인 항체이다; 참고로, 예를 들면 미국 특허 제6,248,516호. 도메인 항체(dAbs)는 인간 항체의 중쇄 가변영역 (VH) 또는 경쇄 가변영역(VL) 중 하나에 상응하는, 항체의 기능성 결합 도메인이다. dABs는 분자량이 대략 13 kDa로, 크기가 완전한 항체의 10분의 1보다 작다. dABs는 박테리아, 효모 및 포유동물 세포계를 비롯한 다양한 숙주에서 잘 발현된다. 또한, dAbs는 상당히 안정적이며, 예컨대 냉동건조 또는 열 변성과 같은 혹독한 조건을 겪은 후에도 활성을 유지한다. 예를 들면, 미국 특허 제6,291,158호; 제6,582,915호; 제6,593,081호; 제6,172,197호; 미국 특허 공개 제2004/0110941호; 유럽 특허 0368684; 미국 특허 제6,696,245호, WO04/058821, WO04/003019 및 WO03/002609를 참고하면 된다.
한 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 ST2와의 결합 특이성을 유지하는, 본원에서 개괄된 모든 항체의 단편인 항체 단편이다. 다양한 구현예에서, 항체 결합 단백질은 비제한적으로, F(ab), F(ab'), F(ab')2, Fv, 또는 단일 사슬 Fv 단편을 포함한다. 최소한, 본원에서 의미하는 바에 따르면, 항체는 예컨대 1개 이상의 CDR인 경쇄 또는 중쇄 가변 영역 전체 또는 일부를 포함하며, ST2에 특이적으로 결합될 수 있는 폴리펩타이드를 포함한다.
ST2-결합 항체 단편의 추가적인 예에는 비제한적으로, (i) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 Fab 단편, (ii) VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편, (iii) 단일 항체의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편; (iv) 단일 가변으로 구성된 dAb 단편 (Ward et al., 1989, Nature 341:544-546), (v) 단리된 CDR 영역, (vi) 서로 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편, (vii) 단일 사슬 Fv 분자 (scFv), 여기서 VH 도메인 및 VL 도메인은 두 도메인이 결합하여 항원 결합 부위를 형성하도록 하는 펩타이드 링커에 의해 연결됨(Bird et al., 1988, Science 242:423-426, Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:5879-5883), (viii) 이중특이적 단일 사슬 Fv 이량체 (PCT/US92/09965) 및 (ix) "디아바디" 또는 “트리아바디”로, 유전자 융합으로 구성된 다가 또는 다중특이적 단편(Tomlinson et. al., 2000, Methods Enzymol. 326:461-479; WO94/13804; Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:6444-6448). 항체 단편은 변형될 수 있다. 예를 들면, 상기 분자는 VH 및 VL 도메인을 연결하는 디설파이드 브릿지의 삽입으로 안정화될 수 있다(Reiter et al., 1996, Nature Biotech. 14:1239-1245). 본 발명의 측면은 이들 단편의 비-CDR 성분이 인간 서열인 구현예들을 포함한다.
한 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 완전한 인간 항체이다. 이 구현예에서, 상기 개괄된 바와 같이, 특이적 구조는 CDR 영역을 포함하는 것으로 묘사된 완전한 중쇄 및 경쇄를 포함한다. 추가의 구현예에서, 1개 이상의 본 발명의 CDR와 함께, 다른 인간 항체에서 유래된 다른 CDR들, 뼈대 영역, J 및 D 영역, 불변 영역 등이 활용된다. 예를 들면, 본 발명의 CDR는 인간 항체, 특히 상업적으로 관련된 항체의 CDR를 대체할 수 있다.
단일 사슬 항체는 아미노산 브릿지(짧은 펩타이드 링커)를 통해 중쇄 및 경쇄 가변 도메인(Fv 영역) 단편들을 연결함으로써 형성될 수 있고, 이것은 결과적으로 단일 폴리펩타이드 사슬이 된다. 이와 같은 단일-사슬 Fvs (scFvs)는 2개의 가변 도메인 폴리펩타이드(VL 및 VH)를 인코딩하는 DNA들 사이의 펩타이드 링커를 인코딩하는 DNA를 융합함으로써 제조된 바 있다. 이로 인해 수득된 폴리펩타이드는 자체적으로 접혀서 항원-결합 단량체를 형성하거나, 또는 2개의 가변 도메인 사이의 가요성 링커의 길이에 따라, 다량체(예를 들면, 이량체, 삼량체, 또는 사량체)를 형성할 수 있다(Kortt et al., 1997, Prot. Eng.10:423; Kortt et al., 2001, Biomol. Eng. 18:95-108). 상이한 VL 및 VH-포함 폴리펩타이드를 결합시킴으로써, 상이한 에피토프들에 결합되는 다량체 scFvs를 형성할 수 있다(Kriangkum et al., 2001, Biomol. Eng. 18:31-40). 단일 사슬 항체의 생산을 위해 개발된 기술들은 미국 특허 번호 '4,946,778; Bird, 1988, Science 242:423; Huston et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879; Ward et al., 1989, Nature 334:544, de Graaf et al., 2002, Methods Mol Biol. 178:379-87'에 기재된 기술들을 포함한다. 본원에 제공된 항체에서 유도된 단일 사슬 항체(Ab1 LCv/Ab1 HCv(서열 번호: 95/서열 번호: 29), Ab2 LCv/Ab2 HCv(서열 번호: 96/서열 번호: 30), Ab3 LCv/Ab3 HCv(서열 번호: 97/서열 번호: 31), Ab4 LCv/Ab4 HCv(서열 번호: 98/서열 번호: 32), Ab5 LCv/Ab5 HCv(서열 번호: 99/서열 번호: 33), Ab6 LCv/Ab6 HCv(서열 번호: 100/서열 번호: 34), Ab7 LCv/Ab7 HCv(서열 번호: 101/서열 번호: 35), Ab8 LCv/Ab8 HCv(서열 번호: 102/서열 번호: 36), Ab9 LCv/Ab9 HCv(서열 번호: 103/서열 번호: 37), Ab10 LCv/Ab10 HCv(서열 번호: 104/서열 번호: 38), 및 Ab11 LCv/Ab11 HCv(서열 번호: 105/서열 번호: 39), Ab30 LCv/Ab30 HCv(서열 번호: 163/서열 번호: 145), Ab32 LCv/Ab32 HCv(서열 번호: 164/서열 번호: 146), Ab33 LCv/Ab33 HCv(서열 번호: 165/서열 번호: 147)의 가변 도메인 조합을 포함하는 scFvs 및 이들의 조합물)은 모두 본 발명에 포함된다.
한 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 항체 융합 단백질(때때로 본원에서 “항체 콘주게이트”라 칭함)이다. 콘주게이트 파트너는 단백질성 또는 비-단백질성일 수 있는데; 후자는 일반적으로 항원 결합 단백질 및 콘주게이트 파트너 상의 기능 그룹(functional group)을 사용하여 생성된다. 어떤 구현예에서, 항체는 비-단백질성 화학물질(약물)에 접합되어 항체 약물 콘주게이트를 형성한다.
한 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은, 때때로 “합성 항체”라 칭하는 항체 유사체이다. 예를 들면, 다양한 작업에 접합된 CDR와 함께 단백질 스캐폴드 또는 인공 스캐폴드 중 한 가지가 활용된다. 이와 같은 스캐폴드는 비제한적으로, 결합 단백질의 3차원 구조를 안정화시키기 위해 도입된 돌연변이뿐만 아니라 예를 들어 생체적 합성 폴리머로 구성된 전체적으로 합성된 스캐폴드를 포함한다. 예를 들면, 'Komdorfer et al., 2003, Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics, Volume 53, Issue 1:121-129. Roque et al., 2004, Biotechnol. Prog. 20:639-654'를 참고하면 된다. 또한, 펩타이드 항체 모방체 (“PAMs”)가 사용될 수 있고, 스캐폴드로서 피브로넥틴 성분을 활용하는 항체 모방체를 기반으로 한 작업도 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 “단백질”은 단백질, 폴리펩타이드, 올리고펩타이드 및 펩타이드를 비롯하여, 공유 결합된 2개 이상의 아미노산을 의미한다. 일부 구현예에서, 공유 결합된 2개 이상의 아미노산들은 펩타이드 결합으로 부착된다. 단백질은 자연 발생 아미노산과 펩타이드 결합으로 이루어질 수 있는데, 예를 들면 아래에 요약한 바와 같이 단백질이 발현 시스템 및 숙주세포를 사용하여 재조합되어 생성되는 경우이다. 대안적으로, 단백질은 프로테아제 또는 다른 생리적 및/또는 보관 상태에 내성이 있을 수 있는 합성 아미노산(예를 들면, 호모페닐알라닌, 시트룰린, 오르니틴, 및 노르류신), 또는 펩타이도모사체 구조, 즉, 펩토이드와 같은 “펩타이드 또는 단백질 유사체”(참고로, Simon et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:9367이며, 이는 본원에 참조로 편입됨)을 포함할 수 있다. 이와 같은 합성 아미노산은 특히 항원 결합 단백질이 당해기술에서 잘 알려진 종래의 방법으로 시험관내에서 합성될 경우, 편입될 수 있다. 또한, 펩타이도모사체, 합성 및 자연 발생 잔기/구조의 모든 조합이 사용될 수 있다. "아미노산"은 또한 프롤린 및 하이드록시프롤린과 같은 이미노산 잔기를 포함한다. 아미노산 “R 그룹” 또는 “측쇄”는 (L)- 또는 (S)-배치로 존재할 수 있다. 특정 구현예에서, 아미노산은 (L)- 또는 (S)-배치로 존재한다.
어떤 측면에서, 본 발명은 ST2와 결합하고, 일부 구현예에서는 재조합 인간 ST2 또는 그것의 일부와 결합하는 재조합 항원 결합 단백질을 제공한다. 이와 같은 문맥에서,“재조합 단백질”은 당해 기술에서 알려진 모든 방법을 사용하는 재조합 기술, 즉, 본원에 기재된 바와 같이, 재조합 핵산의 발현을 통해 제조된 단백질이다. 재조합 단백질의 생산 방법 및 기술은 당해 기술에 알려져 있다. 본 발명의 구현예는 야생형 ST2 및 그것의 변이체와 결합하는 재조합 항원 결합 단백질을 포함한다.
“본질적으로 무엇으로 구성된”이란 아미노산 서열이 인용된 서열 번호: 서열 대비 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15% 정도 변형될 수 있으나, 본원에 기재된 바와 같이 여전히 생물학적 활성을 유지할 수 있음을 의미한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 단리된 단백질 또는 실질적으로 순수 단백질이다.“단리된” 단백질은 그것의 자연 상태에서 정상적으로 회합되는 물질 중 적어도 일부가 동반되지 않는데, 예를 들면 주어진 샘플 중 총 단백질의 5-50 중량 %을 차지한다. 단리된 단백질은 상황에 따라 총 단백질 함량의 5-99.9 중량 %를차지할 수 있는 것으로 알려져 있다. 예를 들면, 단백질이 유도성 프로모터 또는 고-발현 프로모터의 사용을 통해 유의미하게 더 높은 농도에서 제조될 수 있는데, 그럴 경우 단백질은 증가된 농도 수준에서 제조된다. 상기 정의는 당해 기술에 공지되어 있는 다양한 유기체 및/또는 숙주세포에서의 항원 결합 단백질 생산을 포함한다.
아미노산 서열의 경우, 서열 동일성 및/또는 유사성은 당해 기술에 알려진 표준 기술을 사용하여 결정되는데, 표준 기술은 비제한적으로, Smith and Waterman, 1981, Adv. Appl. Math. 2:482의 서열 동일성 정렬 알고리즘, Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48:443, the search for similarity method of Pearson and Lipman, 1988, Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 85:2444의 유사성 검색 방법, 이들 알고리즘(GAP, BESTFIT, FASTA, and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wis.)의 컴퓨터화된 실행, 베스트 핏(Best Fit) 서열(Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387-395에 기술됨)을 포함하고, 바람직하게는 디폴트 설정을 사용하거나 또는 점검에 의해 결정된다. 바람직하게는, 퍼센트 동일성이 하기의 파라미터를 근거로 FastDB로 계산된다: 불일치 페널티 1; 갭 페널티 1; 갭 크기 페널티 0.33; 및 연결 페널티 30,("Current Methods in Sequence Comparison and Analysis," Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, pp 127-149 (1988), Alan R. Liss, Inc).
유용한 알고리즘의 한 예는 PILEUP이다. PILEUP은 진행성, 쌍(pairwise) 정렬을 사용하여 관련 서열 그룹에서 다중 서열 정렬을 생성한다. 이것은 또한 상기 정렬을 생성하기 위해 사용된 클러스터링 관계를 보여주는 트리(tree)를 그릴 수 있다. PILEUP은 'Feng & Doolittle, 1987, J. Mol. Evol. 35:351-360'의 간소화된 진행성 정렬 방법을 사용하고; 상기 방법은 'Higgins and Sharp, 1989, CABIOS 5:151-153'에 기재된 것과 유사하다. 유용한 PILEUP 파라미터는 디폴트 갭 중량 3.00, 디폴트 갭 길이 중량 0.10, 및 측량된 말단 갭을 포함한다.
유용한 알고리즘의 또 다른 예는 'Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410; Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; and Karin et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873-5787'에 기술된 BLAST 알고리즘이다. 특히 유용한 BLAST프로그램은 'Altschul et al., 1996, Methods in Enzymology 266:460-480'에서 수득된 WU-BLAST-2 프로그램이다. WU-BLAST-2는 몇 개의 검색 파라미터를 사용하는데, 대부분이 디폴트 값으로 설정되어 있다. 조정 가능한 파라미터는 하기의 값으로 설정되었다: 중복 너비=1, 중복 분획=0.125, 단어 역치(T)=II. HSP S 및 HSP S2 파라미터는 역학적 값으로, 특정 서열의 조성 및 검색 중인 관련 서열에 대한 특정 데이터베이스의 조성에 따라 상기 프로그램에 의해 자동으로 설정된다; 그러나, 상기 값은 민감도를 증가시키도록 조정될 수 있다.
추가의 유용한 알고리즘은 Altschul etal., 1993, Nucl. Acids Res. 25:3389-3402에 보고된 gapped BLAST이다. Gapped BLAST는 BLOSUM-62 치환 스코어를 사용하는데; 역치 T 파라미터는 9로 설정되었고; 틈없는(ungapped) 확대를 유발하는 2-히트(hit) 방법은 gap 길이 k에 대해 10+k의 비용이 들고; Xu는 16으로 설정되었고, Xg는 데이타베이스 검색의 경우 40, 알고리즘의 출력 단계의 경우 67로 설정되었다.
틈이 있는(Gapped) 정렬은 약 22 비트에 상응하는 스코어에 의해 유발된다.
일반적으로, 개별적 변이체 CDR들의 아미노산 상동성, 유사성, 또는 동일성은 적어도 본원에 묘사된 서열의 80%이고, 더욱 전형적으로 바람직하게는 적어도 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 및 거의 100%의 증가된 상동성 또는 동일성을 갖는다. 유사한 방식으로, 본원에서 확인된 결합 단백질의 핵산 서열과 관련된 "퍼센트(%) 핵산 서열 동일성"은 항원 결합 단백질의 코딩 서열에서의 뉴클레오타이드 잔기와 동일한, 후보 서열에서의 뉴클레오타이드 잔기의 퍼센트로 규정된다. 특정 방법은 디폴트 파라미터로 설정(중복 폭과 중복 분획이 각각 1 및 0.125로 설정됨)된 WU-BLAST-2의 BLASTN 모듈을 활용한다.
일반적으로, 개별적인 변이체 CDR들을 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열과 본원에 묘사된 뉴클레오타이드 서열 사이의 핵산 서열 상동성, 유사성, 또는 동일성은 적어도 80%이고, 더욱 전형적으로 바람직하게는 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 및 거의 100%의 증가된 상동성 또는 동일성을 갖는다.
따라서, “변이체 CDR”은 본 발명의 모 CDR(parent CDR)에 대해 명시된 상동성, 유사성, 또는 동일성을 갖는 것으로, 비제한적으로, 모 CDR의 특이성 및/또는 활성의 적어도 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%를 포함하는 생물학적 기능을 공유한다.
아미노산 서열 변화를 도입하는 부위 또는 영역은 예정되어 있는 반면, 돌연변이 자체는 예정되어 있을 필요가 없다. 예를 들면, 주어진 부위에서 돌연변이의 성능을 최적화하기 위해, 원하는 활성을 갖는 최적의 조합을 위해 스크리닝된 표적 코돈 또는 영역 및 발현된 항원 결합 단백질 CDR 변이체에서 무작위 돌연변이유발이 수행될 수 있다. DNA 내 알려진 서열을 갖는 예정된 부위에서 치환 돌연변이를 제조하는 기술은 잘 알려져 있는데, 예를 들면, M13 프라이머 돌연변이 유발 및 PCR 돌연변이 유발이 있다. 돌연변이체의 스크리닝은 항원 결합 단백질 활성, 예컨대 ST2 결합의 검정을 사용하여 수행된다.
아미노산 치환은 전형적으로 단일 잔기에서 일어난다; 보통 삽입은 대략 1-20개의 아미노산 잔기에서 일어나지만, 그보다 더 상당히 많은 삽입이 용인될 수 있다. 결실은 약 1-20개의 아미노산 잔기에서 일어나지만, 일부 경우 훨씬 더 많은 결실이 일어날 수 있다.
치환, 결실, 삽입 또는 이들의 임의 조합이 사용되어 최종 유도체 또는 변이체에 도달할 수 있다. 일반적으로 이들 변화는 분자, 특히 항원 결합 단백질의 면역원성 및 특이성의 변경을 최소화하도록 소수의 아미노산에서 수행된다. 그러나, 어떤 상황에서는 더 많은 변화가 용인될 수 있다. 보존적 치환은 일반적으로 표 3에 나타낸 하기의 차트와 같이 발생된다.
표 3
Figure 112014109166417-pct00003
기능 또는 면역학적 동일성에서의 실질적인 변화는 표 3에 나타낸 것보다 덜 보존적인 치환을 선택함으로써 이루어진다. 예를 들면, 변경 지역의 폴리펩타이드 골격의 구조, 예를 들면 알파-나선 또는 베타-시트 구조; 표적 부위의 분자의 전하 또는 소수성; 또는 대규모의 측쇄에 좀 더 유의미하게 영향을 미치는 치환이 이루어질 수 있다. 일반적으로 폴리펩타이드 특성에 가장 큰 변화를 가져올 것으로 기대되는 치환은 (a) 예를 들면, 세릴 또는 트레오닐과 같은 친수성 잔기가 예를 들면, 류실, 이소류실, 페닐알라닐, 발릴 또는 알라닐과 같은 소수성 잔기로(또는 그것에 의해) 치환되는 경우; (b) 시스테인 또는 프롤린이 다른 기타 잔기로(또는 그것에 의해) 치환되는 경우; (c) 예를 들면, 라이실, 아르기닐, 또는 히스티딜과 같이 양전기 측쇄를 갖는 잔기가 예를 들면, 글루타밀 또는 아스파르틸과 같은 음전기 잔기로(또는 그것에 의해) 치환되는 경우; 또는 (d) 예를 들면, 페닐알라닌과 같이 거대한 측쇄를 갖는 잔기가 예를 들면, 글리신과 같이 측쇄를 갖지 않는 것으로(또는 그것에 의해) 치환되는 경우에서의 치환이다.
변이체들은 전형적으로 동일한 정성적 생물학적 활성을 나타내고 자연발생 유사체로서 동일한 면역 반응을 끌어내지만, 필요에 따라 항원 결합 단백질의 특성을 변경하기 위해 또한 변이체들이 선택된다. 대안적으로, 변이체는 항원 결합 단백질의 생물학적 활성이 변경되도록 고안될 수 있다. 예를 들면, 본원에서 논의된 바와 같이 당화(glycosylation) 부위가 변경되거나 제거될 수 있다.
본 발명의 범위에 해당하는 ST2 항체의 기타 유도체는, 예컨대 ST2 항체 폴리펩타이드의 N-말단 또는 C-말단에 융합된 이종기원 폴리펩타이드를 포함하는 재조합 융합 단백질의 발현에 의한, ST2 항체 또는 그것의 단편과 기타 단백질 또는 폴리펩타이드의 공유성 또는 군거성(aggregative) 콘주게이트를 포함한다. 예를 들면, 접합된 펩타이드는 예를 들면, 효모 알파-인자 리더와 같은 이종기원 신호(또는 리더) 폴리펩타이드, 또는 에피토프 태그와 같은 펩타이드일 수 있다. ST2 항체-함유 융합 단백질은 ST2 항체(예를 들면, 폴리-His)의 정제 또는 확인을 촉진하기 위해 부가된 펩타이드를 포함할 수 있다. ST2 항체 폴리펩타이드는 또한 'Hopp et al., Bio/Technology 6:1204, 1988' 및 미국 특허 5,011,912에 기재된 바와 같이, FLAG 펩타이드에 연결될 수 있다. FLAG 펩타이드는 항원성이 상당하고 특정 모노클로날 항체(mAb)에 가역적으로 결합된 에피토프를 제공함으로써, 발현된 재조합 단백질의 빠른 검정 및 손쉬운 정제를 가능하게 한다. FLAG 펩타이드가 주어진 폴리펩타이드에 융합된 융합 단백질을 제조하기 위해 유용한 시약은 상업적으로 구매가 가능하다(Sigma, St. Louis, MO).
한 구현예에서, 올리고머는 면역글로불린에서 유도된 폴리펩타이드를 사용하여 제조된다. 항체-유도된 폴리펩타이드(Fc 도메인 포함)의 다양한 부위에 융합된 어떤 이종기원 폴리펩타이드를 포함하는 융합 단백질의 제조는 예를 들면, 'Ashkenazi et al., 1991, PNAS USA 88:10535; Bym et al., 1990, Nature 344:677; and Hollenbaugh et al., 1992 "Construction of Immunoglobulin Fusion Proteins", inCurrent Protocols in Immunology, Suppl. 4, pages 10.19.1 - 10.19.11'에 기재된 바 있다.
본 발명의 한 구현예는 ST2 항체의 ST2 결합 단편을 항체의 Fc 영역에 융합시킴으로써 생성된 융합 단백질 2개를 포함하는 이량체로 지향된다. 상기 이량체는 융합 단백질을 인코딩하는 유전자 융합체(fusion)을 적절한 발현 벡터에 삽입하고, 상기 유전자 융합체를 재조합 발현 벡터로 형질전환(transform)된 숙주세포에서 발현시킨 후, 발현된 융합 단백질을 항체 분자와 상당히 유사하게 조립하여(이때 Fc 모이어티 사이에 사슬간 디설파이드 결합이 형성된다), 이량체를 생산함으로써 제조될 수 있다.
본원에서 사용된 용어 "Fc 폴리펩타이드"는 항체의 Fc 영역에서 유도된 폴리펩타이드의 원상태 및 돌연변이단백질 형태를 포함한다. 이량체화를 촉진하는 힌지 영역(hinge region)을 포함하는 그와 같은 폴리펩타이드의 끝이 잘린 형태 또한 포함된다. Fc 모이어티(및 그것으로부터 형성된 올리고머)를 포함하는 융합 단백질은 단백질 A 또는 단백질 G 칼럼에서 친화성 크로마토그래피에 의한 손쉬운 정제라는 이점을 제공한다.
PCT 출원 WO 93/10151(본원에 참조로 편입됨)에 기재된, 한 가지 적당한 Fc 폴리펩타이드는 인간 IgG 항체의 Fc 영역의 N-말단 힌지 영역에서 원상태 C-말단으로 확장된 단일 사슬 폴리펩타이드이다. 또 하나의 유용한 Fc 폴리펩타이드는 미국 특허 5,457,035 및 'Baum et al., 1994, EMBO J. 13:3992-4001'에 기재된 Fc 돌연변이 단백질이다. 이와 같은 돌연변이 단백질의 아미노산 서열은 WO 93/10151에서 제공된 원상태 Fc 서열의 그것과 동일한데, 단, 아미노산 19가 Leu에서 Ala로 변경되었고, 아미노산 20이 Leu에서 Glu로 변경되었으며, 아미노산 22가 Gly에서 Ala로 변경되었다. 돌연변이단백질은 Fc 수용체에 대한 감소된 친화성을 나타낸다.
다른 구현예에서, ST2 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 부분은 항체 중쇄 및/또는 경쇄의 가변 부분으로 대체될 수 있다.
올리고머 ST2 항체 유도체의 또 다른 제조방법은 류신 지퍼(leucine zipper)의 사용을 필요로 한다. 류신 지퍼 도메인은 그것이 발견되는 단백질의 올리고머화를 촉진하는 펩타이드이다. 류신 지퍼는 본래 몇 개의 DNA-결합 단백질에서 확인(Landschulz et al., 1988, Science 240:1759)된 바 있고, 그 후 다양한 상이한 단백질에서 발견되었다. 알려진 류신 지퍼 중에는 이량체화 또는 삼량체화(dimerize or trimerize)하는 자연 발생 펩타이드 및 그의 유도체가 포함된다. 가용성 올리고머 단백질 생산에 적당한 류신 지퍼 도메인의 예들이 PCT 출원 WO 94/10308에 기재되어 있고, 'Hoppe et al., 1994, FEBS Letters 344:191'에 기재된, 폐 계면활성제 단백질 D(SPD)에서 유도된 류신 지퍼가 본원에 참조로 편입되었다. 변형된 류신 지퍼에 융합된 이종기원 단백질의 안정한 삼량체화를 허용하는 변형된 류신 지퍼의 사용이 'Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol. 6:267-78'에 기재되었다. 한 가지 접근법에서, ST2 항체 단편 또는 류신 지퍼 펩타이드에 융합된 유도체를 포함하는 재조합 융합 단백질은 적당한 숙주세포에서 발현되고, 가용성 올리고머 ST2 항체 단편 또는 형성되는 유도체는 배양 상청액에서 회수된다.
항원 결합 단백질의 공유 변형은 본 발명의 범위에 포함되고, 항상 그렇지는 않지만, 일반적으로, 번역후(post-translationally)에 수행된다. 예를 들면, 항원 결합 단백질의 특정 아미노산 잔기를, 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응이 가능한 유기 유도제(derivatizing agent)와 반응시킴으로써 항원 결합 단백질의 몇 가지 공유변형 유형이 분자에 도입된다.
시스테이닐 잔기는 가장 통상적으로 예컨대 클로로아세트산 또는 클로로아세트아마이드와 같은 α-할로아세테이트(및 상응하는 아민)와 반응하여 카복시메틸 또는 카복시아미도메틸 유도체를 생성한다. 시스테이닐 잔기는 또한 브로모트리플루오로아세톤, α-브로모-β-(5-이미도조일)프로피온산, 클로로아세틸 포스페이트, N-알킬말레이마이드, 3-니트로-2-피리딜 디설파이드, 메틸 2-피리딜 디설파이드, p-클로로머큐리벤조에이트, 2-클로로머큐리-4-니트로페놀, 또는 클로로-7-니트로벤조-2-옥사-1,3-디아졸과의 반응에 의해 유도된다.
히스티딜 잔기는 pH 5.5-7.0의 디에틸피로카보네이트와의 반응에 의해 유도되는데, 상기 제제가 상대적으로 히스티딜 측쇄에 대한 특이성을 갖기 때문이다. 파라-브로모펜아실 브로마이드 또한 유용하다; 상기 반응은 바람직하게는 pH 6.0의 0.1M 나트륨 카코딜레이트 내에서 수행된다.
라이시닐(Lysinyl) 및 아미노 말단 잔기는 숙신산 또는 다른 카복실산 무수물과 반응한다. 이들 시약들과의 유도체화는 라이시닐 잔기의 전하의 역전 효과를 야기한다. 알파-아미노-함유 잔기의 유도체화에 적당한 다른 시약들은 이미도에스테르 예컨대, 메틸 피콜린이미데이트; 피리독살 포스페이트; 피리독살; 클로로보로하이드라이드; 트리니트로벤젠설폰산; O-메틸이소우레아; 2,4-펜탄디온; 및 글리옥실레이트와의 트랜스아미나제-촉매 반응을 포함한다.
아르기닐 잔기는 1개 또는 몇 개의 종래의 시약과의 반응에 의해 변형되는데, 이들 시약에는 페닐글리옥살, 2,3-부탄디온, 1,2-사이클로헥산디온 및 닌히드린이 포함된다. 아르기닌 잔기의 유도체화는 알칼리성 조건에서 수행되는 반응을 필요로 하는데, 그 이유는 구아니딘 관능 그룹의 높은 pKa값 때문이다. 더욱이, 이들 시약은 라이신 그룹뿐만 아니라 아르기닌 엡실론-아미노 그룹과 반응할 수 있다.
타이로실(tyrosyl) 잔기의 특이적 변형은, 타이로실 잔기로의 스펙트럼 라벨의 도입에 특히 관련을 갖고, 방향족 디아조늄 화합물 또는 테트라니트로메탄과의 반응에 의해 수행될 수 있다. 가장 통상적으로, N-아세틸이미디졸 및 테트라니트로메탄이 사용되어 각각 O-아세틸 타이로실 종 및 3-니트로 유도체가 형성된다. 타이로실 잔기는 125I 또는 131I를 사용해 요오드 처리를 하여 방사선면역검정에 사용되는 라벨링된 단백질을 제조하는데, 상기 기재된 클로르아민 T 방법이 적당하다.
카복실 측면 그룹(아스파르틸 또는 글루타밀)은 카보디이마이드(R'-N=C=N--R')와의 반응에 의해 선택적으로 변형되는데, 여기서 R 및 R' 는 1-사이클로헥실-3-(2-모폴리닐-4-에틸) 카보디이마이드 또는 1-에틸-3-(4-아조니아-4,4-디메틸펜틸) 카보디이마이드와 같은 임의로 상이한 알킬 그룹이다. 더욱이, 아스파르틸 및 글루타밀 잔기는 암모늄 이온과의 반응에 의해 아스파르기닐 및 글루타미닐 잔기로 전환된다.
이작용성제와의 유도체화(derivatization)는 항원 결합 단백질을 수-불용성 지지 매트릭스 또는 다양한 방법에 사용되는 표면에 가교결합시키는 데 유용하다. 통상적으로 사용되는 가교바인더는 예를 들면, 1,1-비스(디아조아세틸)-2-페닐에탄, 글루타르알데하이드, N-하이드록시석신이마이드 에스테르(예를 들면, 4-아지도살리실산을 갖는 에스테르), 동종이작용성 이미도에스테르(3,3'-디티오비스(석신이미딜프로피오네이트와 같은 디석신이미딜 에스테르) 및 비스-N-말레이미도-1,8-옥탄과 같은 이작용성 말레이마이드를 포함한다. 메틸-3-[(p-아지도페닐)디티오]프로피오이미데이트와 같은 유도체화 시약은 빛의 존재 하에 가교결합을 형성할 수 있는 광활성 중간체를 생성한다. 대안적으로, 반응성 수-불용성 매트릭스 예컨대 시아노젠 브로마이드-활성화된 탄수화물 및 미국 특허 번호 3,969,287; 3,691,016; 4,195,128; 4,247,642; 4,229,537; 및 4,330,440에 기재된 반응성 기질(substrates)은 단백질 고정화에 이용된다.
글루타미닐 및 아스파르기닐 잔기는 빈번하게 탈아미드화되어 각각 상응하는 글루타밀 및 아스파르틸 잔기가 된다. 대안적으로, 이들 잔기는 중산성 조건 하에서 탈아미드화된다. 이들 잔기들은 어떤 형태든 본 발명의 범위에 해당된다.
다른 변형은 프롤린 및 라이신의 하이드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실 그룹의 인산화, 라이신, 아르기닌, 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노 그룹의 메틸화(T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, 1983, pp. 79-86), N-말단 아민의 아세틸화 및 모든 C-말단 카복실 그룹의 아마이드화를 포함한다.
본 발명의 범위에 포함되는 항원 결합 단백질의 또 하나의 공유 변형 유형은 단백질의 당화 패턴의 변경을 포함한다. 당해 기술에 알려진 바와 같이, 당화 패턴은 단백질의 서열(예를 들면, 하기 논의되는 특정 당화 아미노산 잔기의 존재 또는 부재) 또는 상기 단백질이 생산되는 숙주세포 또는 유기체에 따라 달라질 수 있다. 특정한 발현 시스템이 하기에 논의된다.
폴리펩타이드의 당화는 전형적으로 N-연결 또는 O-연결 둘 중 하나이다. N-연결은 탄수화물 모이어티가 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착되는 것을 가리킨다. 트리-펩타이드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌(여기서 X는 프롤린을 제외한 모든 아미노산)은 아스파라긴 측쇄에 대한 탄수화물 모이어티의 효소 부착에 대한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩타이드 내 이들 트리-펩타이드 서열 중 하나의 존재는 포텐셜 당화 부위를 생성한다. O-연결 당화란 하이드록시아미노산(가장 통상적으로 사용되는 것은 세린 또는 트레오닌이나 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시라이신 또한 사용될 수 있다)에 대한 당류 N-아세틸갈락토사민, 갈락토오스, 또는 자일로스 중 하나의 부착을 가리킨다.
항원 결합 단백질에 당화 부위의 부가는 아미노산 서열을 변경하여 그것이 상기 기재된 트리-펩타이드 서열들 (N-연결된 당화 부위용) 중 하나 이상을 함유하도록 함으로써 편리하게 달성된다. 상기 변경은 또한 개시 서열(O-연결 당화 부위용)에 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 부가 또는 치환에 의해 이루어질 수도 있다. 손쉬운 방법으로, 상기 항원 결합 단백질 아미노산 서열은 바람직하게는 DNA 수준에서의 변화를 통해 변경되는데, 특히 표적 폴리펩타이드를 인코딩하는 DNA를 사전 선택된 염기에서 돌연변이화하여 원하는 아미노산으로 번역되는 코돈을 산출되게 함으로써 이루어질 수 있다.
항원 결합 단백질 상의 탄수화물 모이어티의 개수를 증가시키는 또 하나의 방법은 단백질에 대한 글리코사이드의 화학적 또는 효소 커플링이다. 이들 절차는 N-연결 및 O-연결 당화에 대한 당화 능력을 갖는 숙주세포 내 단백질의 생산을 요구하지 않기 때문에 유리하다. 사용되는 커플링 모드에 따라서, 당(들)은 (a) 아르기닌 및 히스티딘, (b) 유리 카복실 그룹, (c) 유리 설프하이드릴 그룹 예컨대 시스테인의 그룹, (d) 유리 하이드록실 그룹 예컨대 세린, 트레오닌, 또는 하이드록시프롤린의 그룹, (e) 방향족 잔기 예컨대 페닐알라닌, 티로신, 또는 트립토판의 잔기, 또는 (f) 글루타민의 아마이드 그룹에 부착될 수 있다. 이들 방법은 1987년 9월 11일에 공개된 WO 87/05330, 및 'Aplin and Wriston, 1981, CRC Crit. Rev. Biochem.,pp. 259-306'에 기재되었다.
개시 항원 결합 단백질 상에 존재하는 탄수화물 모이어티의 제거는 화학적으로 또는 효소적으로 달성될 수 있다. 화학적 탈당화(deglycosylation)는 화합물 트리플루오로메탄설폰산, 또는 등가 화합물에 단백질 노출을 필요로 한다. 이와 같은 처리로 가교결합 당(N-아세틸글루코사민 또는 N-아세틸갈락토사민)을 제외한 거의 모든 또는 모든 당류가 절단되고, 폴리펩타이드는 온전하게 유지된다. 화학적 탈당화는 'Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52 and by Edge et al., 1981, Anal. Biochem. 118:131'에 기재되었다. 폴리펩타이드 상의 탄수화물 모이어티의 효소 절단은 'Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol. 138:350'에 기재된 다양한 엔도(endo)- 및 엑소(exo)-글리코시다아제의 사용으로 달성될 수 있다. 포텐셜 당화 부위에서의 당화는 'Duskin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:3105'에 기재된 화합물 투니카마이신(tunicamycin)의 사용으로 방지될 수 있다. 투니카마이신은 단백질-N-글리코사이드연결의 형성을 차단한다.
항원 결합 단백질의 또 하나의 공유 변형 유형은 비제한적으로, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 또는 폴리옥시알킬렌과 같은 다양한 폴리올을 비롯한 다양한 비-단백질성 폴리머에, 미국 특허 제4,640,835호; 제4,496,689호; 제4,301,144호; 제4,670,417호; 제4,791,192호, 또는 제4,179,337호에 기재된 방식으로, 항원 결합 단백질을 연결하는 것을 포함한다. 또한, 당해기술에 알려진 바와 같이, 아미노산 치환은 항원 결합 단백질 내 다양한 위치에서 이루어져서 폴리머 예컨대 PEG의 부가를 촉진할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항원 결합 단백질의 공유 변형은 하나 이상의 라벨의 부가를 포함한다.
용어 "라벨링 그룹"은 모든 검출가능한 표지를 의미한다. 적당한 라벨링 그룹의 예는 비제한적으로, 하기를 포함한다: 방사선동위원소 또는 방사선핵종(예를 들면, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), 형광 그룹(예를 들면, FITC, 로다민, 란타나이드 포스포르), 효소 그룹(예를 들면, 홀스래디쉬 페록시다아제, β-갈락토시다아제, 루시퍼라아제, 알칼리성 포스파타제), 화학발광 그룹, 바이오티닐 그룹, 또는 2차 리포터(예를 들면, 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체의 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그)에 의해 확인되는 예정된 폴리펩타이드 에피토프. 일부 구현예에서, 상기 라벨링 그룹은 다양한 길이의 스페이서 암(spacer arms)을 통해 항원 결합 단백질에 커플링되어 포텐셜 입체 장애를 감소시킨다. 단백질 라벨링의 다양한 방법이 당해 기술에 공지되어 있고, 본 발명의 수행에 사용될 수 있다.
일반적으로, 라벨은 그들이 검출되는 검정 방법에 따라 다양한 클래스에 속한다: a) 방사성 또는 무거운 동위 원소일 수 있는 동위원소 라벨; b) 자기성 라벨 (예를 들면, 자기성 입자); c) 산화환원 활성 모이어티; d) 광학적 염료; 효소 그룹(예를 들면 홀스래디쉬 페록시다아제, β-갈락토시다아제, 루시퍼라아제, 알칼리성 포스파타제); e) 바이오티닐화된 그룹; 및 f) 2차 리포터(예를 들면, 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체의 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그, 등)에 의해 확인되는 예정된 폴리펩타이드 에피토프. 일부 구현예에서, 상기 라벨링 그룹은 다양한 길이의 스페이서 암을 통해 항원 결합 단백질에 커플링되어 포텐셜 입체 장애를 감소시킨다. 단백질 라벨링의 다양한 방법이 당해 기술에 공지되어 있고, 본 발명을 수행하는 데 사용될 수 있다.
특이성 라벨에 비제한적으로, 발색단, 포스포르 및 형광단(여러 경우에 후자는 특이성을 갖는다)을 비롯한 광학적 염료가 포함된다. 형광단은 “소분자” 형광, 또는 단백질성 형광 중 하나일 수 있다.
“형광 라벨”이란 그것의 고유한 형광 특성을 통해 검출될 수 있는 모든 분자를 의미한다. 적당한 형광 라벨은 비제한적으로, 플루오레신, 로다민, 테트라메틸로다민, 에오신, 에리트로신, 쿠마린, 메틸-쿠마린, 피렌, 말라카이트 그린(Malacite green), 스틸벤, 루시퍼 황색, 캐스케이드 블루J, 텍사스 레드, IAEDANS, EDANS, BODIPY FL, LC Red 640, Cy 5, Cy 5.5, LC Red 705, 오레곤 그린, Alexa-Fluor 염료(Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 430, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660, Alexa Fluor 680), 캐스케이드 블루, 캐스케이드 황색 및 R-파이코에리트린 (PE) (Molecular Probes, Eugene, OR), FITC, 로다민 및 텍사스 레드(Pierce, Rockford, IL), Cy5, Cy5.5, Cy7(Amersham Life Science, Pittsburgh, PA)을 포함한다. 형광단을 비롯한 적당한 광학적 염료는 Molecular Probes Handbook by Richard P. Haugland에 기재되었고, 본원에 참조로 명확히 편입되었다.
적당한 단백질성 형광 라벨은 또한 비제한적으로, 레닐라(Renilla), 프틸로사크루스(Ptilosarcus), 또는 GFP의 아에쿠오레아(Aequorea) 종(Chalfie et al., 1994, Science 263:802-805), EGFP(Clontech Faboratories, Inc., Genbank Accession Number U55762)을 비롯한 녹색 형광 단백질, 청색 형광 단백질 (BFP, Quantum Biotechnologies, Inc. 1801 de Maisonneuve Blvd. West, 8th Floor, Montreal, Quebec, Canada H3H 1J9; Stauber, 1998, Biotechniques 24:462-471; Heim et al., 1996, Curr. Biol. 6:178-182), 증대된 황색 형광 단백질 (EYFP, Clontech Laboratories, Inc.), 루시퍼라아제(Ichiki et al., 1993, J. Immunol. 150:5408-5417), β 갈락토시다아제 (Nolan et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2603-2607) 및 레닐라(W092/15673, WO95/07463, WO98/14605, W098/26277, WO99/49019, 미국 특허 번호 5292658, 5418155, 5683888, 5741668, 5777079, 5804387, 5874304, 5876995, 5925558)를 포함한다. 상기 언급된 모든 참조는 본원에 명확히 참조로 편입되었다.
본원에 기재된 예시적인 항원 결합 단백질은 항원 결합 단백질에 결합된 ST2 상의 뚜렷이 다른 에피토프를 근거로 한 특성들을 갖는다. 용어 “에피토프”는 예를 들면, 항체와 같은 항원 결합 단백질이 표적 분자에 결합된 경우, 상기 항원 결합 단백질이 접촉하는, 표적 분자의 아미노산을 의미한다. 에피토프는 인접해 있을 수도 또는 인접해 있지 않을 수도 있다(예를 들면, (i) 단일-사슬 폴리펩타이드의 경우, 폴리펩타이드 서열에서 서로 인접하고 있지 않으나, 표적 분자의 문맥에서 항원 결합 단백질이 결합된 아미노산 잔기들, 또는 (ii) 둘 이상 개별 성분, 예를 들면, ST2 및 AcP를 포함하는 다량체 수용체의 경우, 하나 이상의 개별 성분 상에 존재하면서, 항원 결합 단백질에 결합된 아미노산 잔기들). 에피토프 결정요인은 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 설포닐 그룹과 같은 분자들의 화학적 활성 표면 그룹핑(grouping)일 수 있고, 또한 특이적 3차원 구조 특성, 및/또는 특이적 전하 특성일 수 있다. 일반적으로, 특정한 표적 분자에 특이적인 항원 결합 단백질은 단백질 및/또는 거대분자의 복합 혼합물에서 표적 분자 상의 에피토프를 우선적으로 인식한다.
항원 결합 단백질이 결합된 에피토프의 특징을 밝히는 방법은 당해 기술에 잘 알려져 있는데, 비제한적으로, 비닝(binning)(교차-경쟁)(Miller et al “Epitope binning of murine monoclonal antibodies by a multiplexed pairing assay” J Immunol Methods (2011) 365, 118-25), 펩타이드 맵핑(예를 들면, PEPSPOT™) (Albert et al “The B- cell Epitope of the Monoclonal Anti - Factor VI11 Antibody ESH8 Characterized by Peptide Array Analysis” 2008 Thromb Haemost 99, 634-7), 키메라와 같은 돌연변이 유발 방법 (Song et al“Epitope Mapping of Ibalizumab, a Humanized Anti-CD4 Monoclonal Antibody with Anti-HIV-1 Activity in Infected Patients” J. Virol. (2010) 84, 6935-6942), 알라닌 스캐닝(Cunningham and Wells “High-resolution epitope mapping of HGH-receptor interactions by alanine-scanning mutagenesis” Science (1989) 244, 1081- 1085), 아르기닌 스캐닝(Lim et al “A diversity of antibody epitopes can induce signaling through the erythropoietin receptor” Biochemistry (2010) 49, 3797-3804), HD 교환 방법(Coates et al “Epitope mapping by amide hydrogen/deuterium exchange coupled with immobilization of antibody, on-line proteolysis, liquid chromatography and mass spectrometry” Rapid Commun. Mass Spectrom. (2009) 23 639-647), NMR 교차 포화 방법(Morgan et al “Precise epitope mapping of malaria parasite inhibitory antibodies by TROSY NMR cross-saturation” Biochemistry (2005) 44, 518-23) 및 결정학(Gerhardt et al “Structure of IL-17A in complex with a potent, fully human neutralizing antibody” J. Mol. Biol (2009) 394, 905-21)을 포함한다. 상기 방법들은 에피토프를 포함하는 아미노산과 관련하여 그들이 제공하는 상세 수준이 다양하다.
본 발명의 항원 결합 단백질은 본원에서 기재된 예시적인 항원 결합 단백질, 예를 들면, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab30, Ab32, 또는 Ab33을 갖는 중첩 에피토프를 갖는 것을 포함한다. 어떤 구현예에서, 항원 결합 단백질은 예시적인 항원 결합 단백질과 동일한 에피토프를 갖는다. 다른 구현예에서, 항원 결합 단백질은 예시적인 항원 결합 단백질과 동일한 아미노산의 서브셋에만 결합한다.
어떤 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab30, Ab32, 또는 Ab33와 동일한 또는 중합 에피토프를 가지며 a) 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성을 갖거나, 서열 번호: 95, 서열 번호: 96, 서열 번호: 97, 서열 번호: 98, 서열 번호: 99, 서열 번호: 100, 서열 번호: 101, 서열 번호: 102, 서열 번호: 103, 서열 번호: 104, 서열 번호: 105, 서열 번호: 163, 서열 번호: 164, 또는 서열 번호: 165 에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인; b) 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성을 갖거나, 서열 번호: 29, 서열 번호: 30, 서열 번호: 31, 서열 번호: 32, 서열 번호: 33, 서열 번호: 34, 서열 번호: 35, 서열 번호: 36, 서열 번호: 37, 서열 번호: 38, 서열 번호: 39, 서열 번호: 145, 서열 번호: 146, 또는 서열 번호: 147 에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인; 또는 c) a)의 경쇄 가변 도메인 및 b)의 중쇄 가변 도메인을 포함한다.
어떤 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11,Ab30, Ab32, 또는 Ab33와 동일한 중첩 에피토프를 가지며 하기를 포함한다: 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 95에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 29에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 96에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 30에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 97에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 31에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 98에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 32에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 99에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 33에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 100에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 34에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 101에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 35에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 102에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 36에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 103에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 37에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 104에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 38에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 105에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 39에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 163에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 145에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 164에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 146에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인; 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 165에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 경쇄 가변 도메인 및 적어도 90%, 적어도 95%를 갖거나, 서열 번호: 147에서 제시된 아미노산 서열과 동일한 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들.
어떤 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab30, Ab32, 또는 Ab33와 동일한 또는 중합 에피토프를 가지며 하기를 포함한다: a) 서열 번호: 95, 서열 번호: 96, 서열 번호: 97, 서열 번호: 98, 서열 번호: 99, 서열 번호: 100, 서열 번호: 101, 서열 번호: 102, 서열 번호: 103, 서열 번호: 104, 서열 번호: 105, 서열 번호: 163, 서열 번호: 164, 또는 서열 번호: 165 에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인; b) 서열 번호: 29, 서열 번호: 30, 서열 번호: 31, 서열 번호: 32, 서열 번호: 33, 서열 번호: 34, 서열 번호: 35, 서열 번호: 36, 서열 번호: 37, 서열 번호: 38, 서열 번호: 39, 서열 번호: 145, 서열 번호: 146, 또는 서열 번호: 147 에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인; 또는 c) a)의 경쇄 가변 도메인 및 b)의 중쇄 가변 도메인.
어떤 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab30, Ab32, 또는 Ab33와 동일한 또는 중합 에피토프를 가지며 서열 번호: 95에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 29에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 96에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 30에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 97에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 31에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 98에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 32에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 99에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 33에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 100에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 34에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 101에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 35에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 102에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 36에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 103에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 37에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 104에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 38에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 105에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 39에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 163에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 145에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들; 서열 번호: 164에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 146에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인; 및 서열 번호: 165에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 경쇄 가변 도메인 및 서열 번호: 147에서 제시된 아미노산 서열로부터 10개 이하 또는 5개 이하의 아미노산 부가, 결실 또는 치환을 갖는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들.
어떤 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab30, Ab32, 또는 Ab33와 동일한 또는 중합 에피토프를 가지며 하기를 포함한다: a) 서열 번호: 106에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 117에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 128에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; b) 서열 번호: 107에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 118에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 129에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; c) 서열 번호: 108에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 119에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 130에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; d) 서열 번호: 109에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 120에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 131에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; e) 서열 번호: 110에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 121에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 132에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; f) 서열 번호: 111에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 122에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 133에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; g) 서열 번호: 112에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 123에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 134에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; h) 서열 번호: 113에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 124에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 135에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; i) 서열 번호: 114에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 125에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 136에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; j) 서열 번호: 115에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 126에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 137에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; k) 서열 번호: 116에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 127에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 138에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; l) 서열 번호: 166에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 169에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 172에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; m) 서열 번호: 167에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 170에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 173에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3; 또는 n) 서열 번호: 168에서 제시된 LCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR1; 서열 번호: 171에서 제시된 LCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR2; 및 서열 번호: 174에서 제시된 LCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 도메인; 및 o) 서열 번호: 40에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 51에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 62에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; p) 서열 번호: 41에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 52에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 63에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; q) 서열 번호: 42에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 53에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 64에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; r) 서열 번호: 43에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 54에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 65에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; s) 서열 번호: 44에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 55에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 66에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; t) 서열 번호: 45에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 56에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 67에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; u) 서열 번호: 46에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 57에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 68에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; v) 서열 번호: 47에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 58에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 69에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; w) 서열 번호: 48에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 59에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 70에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; x) 서열 번호: 49에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 60에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 71에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; y) 서열 번호: 50에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 61에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 72에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; z) 서열 번호: 148에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 151에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 154에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; aa) 서열 번호: 149에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 152에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 155에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3; 또는 bb) 서열 번호: 150에서 제시된 HCDR1 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR1; 서열 번호: 153에서 제시된 HCDR2 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR2; 및 서열 번호: 156에서 제시된 HCDR3 서열로부터 3개 이하의 아미노산 부가, 결실, 또는 치환을 갖는 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 도메인.
바로 위에서 기재된 바람직한 ST2 항원 결합 단백질은 하기를 포함한다: a)의 경쇄 가변 도메인 및 o)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; b)의 경쇄 가변 도메인 및 p)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; c)의 경쇄 가변 도메인 및 q)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; d)의 경쇄 가변 도메인 및 r)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; e)의 경쇄 가변 도메인 및 s)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; f)의 경쇄 가변 도메인 및 t)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; g)의 경쇄 가변 도메인 및 u)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; h)의 경쇄 가변 도메인 및 v)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; i)의 경쇄 가변 도메인 및 w)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; j)의 경쇄 가변 도메인 및 x)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; k)의 경쇄 가변 도메인 및 y)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; l)의 경쇄 가변 도메인 및 z)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; m)의 경쇄 가변 도메인 및 aa)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 항체; 및 n)의 경쇄 가변 도메인 및 bb)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것들.
동일한 에피토프 또는 중첩 에피토프를 갖는 항원 결합 단백질은 종종 항원에 결합하기 위해 교차-경쟁(cross-compete)을 한다. 따라서, 어떤 구현예에서, 본 발명의 항원 결합 단백질은 Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10, Ab11, Ab30, Ab32, 또는 Ab33과 교차-경쟁한다.“교차-경쟁하다” 또는 “교차-경쟁”은 항원 결합 단백질들이 표적 상의 동일한 에피토프 또는 동일한 결합 부위에 대해 경쟁함을 의미한다. 이와 같은 경쟁은 참조 항원 결합 단백질(예를 들면, 항체 또는 그것의 항원-결합부)이 시험 항원 결합 단백질의 특이적 결합을 차단 또는 억제하거나 또는 그 반대인 경우도 마찬가지인 검정에 의해 확인될 수 있다. 시험 분자가 결합과 관련하여 참조 분자와 경쟁하는지 여부를 확인하는 데 수많은 유형의 경쟁적 결합 검정이 사용될 수 있다. 이용될 수 있는 검정의 예시들은 고체상 직접 또는 간접 방사선면역검정(RIA), 고체상 직접 또는 간접 효소 면역검정 (EIA), 샌드위치 경쟁 검정(참고로, 예를 들면, Stahli et al.(1983) Methods in Enzymology 9:242-253), 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(참고로, 예를 들면, Kirkland et al., (1986) J. Immunol. 137:3614-3619), 고체상 직접 라벨링된 검정, 고체상 직접 라벨링된 샌드위치 검정, 루미넥스(Luminex)(Jia et al “A novel method of Multiplexed Competitive Antibody Binning for the characterization of monoclonal antibodies” J. Immunological Methods(2004) 288, 91-98) 및 표면 플라즈몬 공명((Song et al “Epitope Mapping of Ibalizumab, a Humanized Anti-CD4 Monoclonal Antibody with Anti-HIV-1 Activity in Infected Patients” J. Virol. (2010) 84, 6935-6942)을 포함한다. 교차-경쟁을 알아내는 예시적인 방법은 실시예 5에 기재되었다. 보통, 상충되는 항원 결합 단백질이 과잉으로 존재할 경우, 공통의 항원에 대한 참조 항원 결합 단백질의 결합을 적어도 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 75% 억제한다. 일부 예에서, 결합은 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상 억제된다.
Ab2는 인간 및 cyo ST2와 고-친화성으로 결합하고 IL-33의 ST2 결합을 차단하므로, 따라서 IL-33으로 매개된 ST2 신호전달을 봉쇄한다. Ab2와 동일하거나, 유사 또는 중첩되는 에피토프를 가진 항체는 그와 같은 독특한 특징들을 공유할 수 있다. 바람직한 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 ST2와의 결합에서 Ab2와 교차-경쟁한다. Ab2와 교차-경쟁하는 예시적인 ST2 항원 결합 단백질은 Ab1, Ab3, Ab5, Ab7, Ab8, 및 Ab30 (참고 실시예 5)을 포함한다. Ab2와 중첩되거나 유사한 또는 동일한 에피토프와 결합하는 항체를 찾으려고 할 경우, Ab2와의 교차-경쟁에 대해 하나 이상의 항체를 스크리닝할 수 있다. 뿐만 아니라, Ab2와 교차-반응하는 항체에 변이체를 생성하는 경우, 변화 이후 교차-경쟁이 유지되는지 여부를 결정하기 위해 상기 항체를 스크리닝할 수 있는데, 이것은 변이체의 에피토프가 모 분자에서 유의미하게 변경되지 않음을 시사한다. 따라서, 어떤 구현예에서, 본 발명은 ST2와의 결합에 대해 Ab2와 교차-경쟁하는 항체 변이체를 제공한다.
중첩되거나, 유사한, 또는 동일한 에피토프를 갖는 항체는 서로 교차-경쟁할 뿐만 아니라, ST2의 돌연변이유발에 의해 유사하게 영향을 받을 수 있다. 어떤 돌연변이는 항체의 결합을 억제할 수 있고; 또 다른 돌연변이는 결합을 증진 또는 활성시킬수 있다. 실시예 11에서, 아르기닌/알라닌 돌연변이유발의 스캐닝은 ST2의 세포외 도메인의 일부분 상에서 수행되었고, 예시적인 항체에 대한 영향이 밝혀졌다. ST2 결합 단백질이 돌연변이유발에 대한 예시적인 항체와 유사한 방식으로 영향을 받는 특징이 있음은 본 발명의 범위에 포함된다.
어떤 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질의 결합은 ST2의 단일 돌연변이에 의해 억제되는데, 상기 단일 돌연변이는 L14R, I15R, S33R, E43R, V47R, A62R, G65R, T79R, D92R, D97R, V104R, G138R, N152R 및 V176R로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 바람직한 구현예에서, 상기 그룹의 둘 이상, 셋 이상, 넷 이상, 다섯 이상, 여섯 이상, 일곱 이상, 여덟 이상, 아홉 이상, 열 이상 또는 모든 단일 돌연변이는 개별적으로 ST2 결합 단백질의 결합을 억제한다. 다른 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질의 결합은 ST2의 단일 돌연변이에 의해 활성화되는데, 상기 단일 돌연변이는 L53R, R72A 및 S73R로 이루어진 그룹에서 선택된다. 바람직한 구현예에서, 상기 그룹의 모든 단일 돌연변이는 개별적으로 ST2 결합 단백질의 결합을 활성화한다. 바람직한 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 Ab2의 속성을 공유하고, L14R, I15R, S33R, E43R, V47R, A62R, G65R, T79R, D92R, D97R, V104R, G138R, N152R 및 V176R 중 모든 것에 의해 억제되고, L53R, R72A, S73R 중 모든 것에 의해 활성화된다.
에피토프를 근거로 항체의 특징을 밝혀내는 또 하나의 방법은 아마이드 수소/중수소 교환(HDX)이다. HDX는 단백질 형태 및 동력학, 단백질-리간드 상호작용 및 단백질-단백질 상호작용(Zhang and Smith 1993, Engen and Smith 2001)의 연구에 널리 사용되고 있다. 질량 분광분석 검출은, 단일 수소의 중수소 대체가 각 변화당 1 Da의 질량 증가를 가져오기 때문에, 변화의 정도를 결정하는 강력한 도구를 제공한다. HDX의 정도는 제어 조건 하에서 탠덤 질량 분광분석법과 함께 액체 크로마토그래피로 단백질 단백분해 소화물을 분석함으로써 펩타이드 수준에서 쉽게 측정될 수 있다(Engen and Smith 2001, Baerga-Oriiz, Hughes et al. 2002, Codrearm, Ladner et al. 2002, Hamuro, Coales et al. 2006, Coales, Tuske et al. 2009, Zhang, Zhang et al. 2012).
항체(유리 상태 대 결합된 상태)의 부재 및 존재의 경우, ST2의 단백분해 소화물들 사이의 항원 HDX 프로파일의 비교로 상호작용 부위를 밝혀낼 수 있다. 특이적으로, 상기 항체가 ST2와 결합할 때, 유리 ST2의 용매 접근가능한 아마이드 수소는 보호될 수 있고, 그 결과 좀 더 느린 교환 속도가 관찰된다. 따라서, 항체의 부재 하에서보다 항체의 존재 하에서 좀 더 적은 양의 중수소를 얻는 영역이 포텐셜 결합 에피토프이다. 에피토프가 결정될 때, 유리 상태에서의 교환 속도를 비롯하여 또 다른 인자들, 항원 단백질 구조에 대한 정보 및 에피토프 맵핑 시도의 결과가 고려된다.
ST2와 결합한 Ab2는 실시예 12에 기재된 바와 같이 HDX로 분석되었다. 상기 분석은 Ab2가 서열 번호: 1의 아미노산 19-322 중 아미노산 33-44 및 88-94를 포함하는 ST2 구조(각각 성숙한 ST2의 아미노산 15-26 및 70-76)와 결합하거나 또는 그것의 부분의 교환 속도를 변경하는 것을 실증한 것이다. Ab2와 중첩되거나, 유사한, 또는 동일한 에피토프를 갖는 항체는 또한 서열 번호: 1의 33-44 및 88-94 내의 아미노산과 결합하거나 또는 그것의 교환 속도를 변경한다. 어떤 구현예에서, ST2 결합 단백질, 예를 들면, 항체는 ST2와 결합하여 HDX로 분석될 때, 서열 번호: 1의 아미노산 33-44 모두를 보호한다. 다른 구현예에서, 아미노산 88-94 모두가 보호된다. 둘 다 에피토프와 Ab2의 결합의 부분 중첩을 나타낸다. 바람직한 구현예에서, 33-44 모두와 88-94 모두가 보호된다. 어떤 구현예에서, ST2 결합 단백질, 예를 들면, 항체는, ST2와 결합하여 HDX로 분석될 때, 서열 번호: 1의 아미노산 33-44 모두를 보호한다. 다른 구현예에서, 아미노산 88-94 모두가 보호된다. 둘 다 Ab2와 유사한 결합 에피토프를 나타낸다. 바람직한 구현예에서, 33-44 모두와 88-94 모두가 보호되는데, 이것은 Ab2와 동일한 또는 거의 동일한 에피토프임을 나타낸다.
Ab2와 ST2 결합은 추가로 X-선 결정학을 사용하여 분석되었다. X-선 결정학은 HDX 분석과 일치하였다. Ab와 항원 사이의 계면은 수많은 방식으로 결정/규정될 수 있다. 실시예 13에서, 상기 계면은 용매 노출 차이(differential)를 사용하여 그리고 거리로 결정되었다. 용매 노출 차이 또는 5Å 미만의 거리에 의해 결정된 Ab2와의 계면 내에 있는 ST2 잔기(성숙한 ST2에서의 위치에 해당 (선도 서열 부재))는 K1, F2, P19, R20, Q21, G22, K23, Y26, I70, V71, R72, S73, P74, T75, F76, N77, R78, T79 및 Y81이다. 어떤 구현예에서, ST2 결합 단백질은 Ab2의 계면과 중첩되는 ST2와의 계면을 형성하는데, 상기 계면에 K1, F2, P19, R20, Q21, G22, K23, Y26, I70, V71, R72, S73, P74, T75, F76, N77, R78, T79, 또는 Y81가 존재하는 경우들을 포함한다. 일부 구현예에서, ST2 결합 단백질은 ST2와의 계면을 형성하는데, 여기서 P19, R20, Q21, G22, K23 및/또는 Y26이 상기 계면 내에 존재한다. 다른 구현예에서, I70, V71, R72, S73, P74, T75, F76, N77, R78, T79 및/또는 Y81이 상기 계면 내에 존재한다. 바람직한 구현예에서, K1, F2, P19, R20, Q21, G22, K23, Y26, I70, V71, R72, S73, P74, T75, F76, N77, R78, T79 및 Y81이 상기 계면 내에 존재한다.
상기 결정 구조는 어떤 아미노산 잔기가 Ab2의 아미노산과 수소 결합 또는 염 브릿지를 형성했음을 나타낸다. 그와 같은 잔기에는 K1, R20, K23, Y26, T75, N77, R78 및 T79가 포함된다. 어떤 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 K1, R20, K23, Y26, T75, N77, R78 및 T79 중 하나 이상과 수소 결합 또는 염 브릿지를 형성한다.
상기 결정 구조는 더 나아가 Ab2의 어떤 잔기가 ST2와의 계면을 형성하는지에 대한 정보를 제공한다. 도 10은 ST2와의 계면을 형성하는 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역 중의 잔기를 나타낸다. 또한 ST2 중의 아미노산과 수소 결합 또는 염 브릿지를 형성하는 잔기가 명시되었다. 이와 같은 정보는 90% 동일성, 95% 동일성을 갖고, Ab2의 경쇄 또는 중쇄 가변 도메인 내에서 10개 이하의 삽입, 결실, 및/또는 치환을 갖는 가변 도메인을 함유하는 것을 비롯한, Ab2의 변이체를 설계하는 데 사용할 수 있다. 비-계면 잔기를 변경하면서 계면 내 아미노산이 유지되기를 바랄 수 있다. 따라서, Ab2의 하나 이상의 CDR 내에 1개 이상의 아미노산 부가, 치환, 및/또는 결실을 가지며, ST2와의 결합을 유지하는 Ab2의 변이체를 설계 및 생성할 수 있다.
일부 구현예에서, ST2 결합 단백질은 Ab2 경쇄 가변 영역(서열 번호: 96)의 변이체 (여기서 D28, I29, S30, N31, Y32, Y49, D50, N53, E55, T56, D91, D92, N93, F94 및/또는 L96이 변화 없이 유지되거나 또는 그들의 보존적 치환을 포함) 및/또는 Ab2 중쇄 가변 영역(서열 번호: 30)의 변이체(여기서 W33, I50, D57, R59, H99, G100, T101, S102, S103, D104, Y105 및/또는 Y106이 변화 없이 유지되거나 또는 보존적 돌연변이를 포함)를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 경쇄 가변 영역의 D28, N31, D50, N53, E55, D91 및 D92가 변화 없이 유지되고, 중쇄의 S102, S103, D104 및 Y105가 변화 없이 유지된다.
ST2 항원 결합 단백질을 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드
본원에서 규정된 항체를 비롯하여 ST2 항원 결합 단백질을 인코딩하는 핵산이 본 발명에 포함된다. 바람직한 핵산은 본원에서 기재된 예시적인 경쇄 및 중쇄를 인코딩하는 것들을 포함한다.
Ab1 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 73에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab2 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 74에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab3 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 75에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab4 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 76에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab5 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 77에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab6 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 78에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab7 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 79에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab8 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 80에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab9 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 81에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab10 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 82에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab11 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 83에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab30 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 157에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab32 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 158에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab33 LC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 159에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab1 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 7에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab2 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 8에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab3 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 9에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab4 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 10에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab5 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 11에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab6 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 12에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab7 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 13에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab8 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 14에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab9 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 15에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab10 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 16에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab11 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 17에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab30 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 139에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab32 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 140에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
Ab33 HC를 인코딩하는 예시적인 핵산은 서열 번호: 141에서 제시된 서열을 포함하는 핵산이다.
본 발명의 측면은 본원에서 기재된 아미노산을 인코딩하는 (즉, 축퇴로 인한) 폴리뉴클레오타이드 변이체를 포함한다.
본 발명의 측면은 하기의 예시적인 구현예를 비제한적으로 포함하는 다양한 구현예를 포함한다.
단리된 폴리뉴클레오타이드, 여기서 상기 폴리뉴클레오타이드는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 하나 이상의 폴리펩타이드를 인코딩한다:
A. 1. 서열 번호: 95-105, 163-165에서 제시된 경쇄 가변 도메인 서열과 적어도 90%의 상동성을 갖는 경쇄 가변 도메인 서열;
2. 서열 번호: 29-39, 145-147에서 제시된 중쇄 가변 도메인 서열과 적어도 90%의 상동성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열;
3. (1)의 경쇄 가변 도메인 및 (2)의 중쇄 가변 도메인; 및
B. 하기의 서열로부터의 각 CDR에서 총 3개 이하의 아미노산 부가, 치환, 및/또는 결실까지 동일 또는 상이한 CDR1, CDR2, CDR3를 포함하는 경쇄 가변 도메인 및/또는 CDR1, CDR2, CDR3를 포함하는 중쇄 가변 도메인:
1. Ab1의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 106), CDR2 (서열 번호: 117), CDR3 (서열 번호: 128) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 40), CDR2 (서열 번호: 51), CDR3 (서열 번호: 62);
2. Ab2의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 107), CDR2 (서열 번호: 118), CDR3 (서열 번호: 129) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 41), CDR2 (서열 번호: 52), CDR3 (서열 번호: 63);
3. Ab3의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 108), CDR2 (서열 번호: 119), CDR3 (서열 번호: 130) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 42), CDR2 (서열 번호: 53), CDR3 (서열 번호: 64);
4. Ab4의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 109), CDR2 (서열 번호: 120), CDR3 (서열 번호: 131) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 43), CDR2 (서열 번호: 54), CDR3 (서열 번호: 65);
5. Ab5의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 110), CDR2 (서열 번호: 121), CDR3 (서열 번호: 132) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 44), CDR2 (서열 번호: 55), CDR3 (서열 번호: 66);
6. Ab6의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 111), CDR2 (서열 번호: 122), CDR3 (서열 번호: 133) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 45), CDR2 (서열 번호: 56), CDR3 (서열 번호: 67);
7. Ab7의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 112), CDR2 (서열 번호: 123), CDR3 (서열 번호: 134) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 46), CDR2 (서열 번호: 57), CDR3 (서열 번호: 68);
8. Ab8의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 113), CDR2 (서열 번호: 124), CDR3 (서열 번호: 135) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 47), CDR2 (서열 번호: 58), CDR3 (서열 번호: 69);
9. Ab9의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 114), CDR2 (서열 번호: 125), CDR3 (서열 번호: 136) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 48), CDR2 (서열 번호: 59), CDR3 (서열 번호: 70);
10. Ab10의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 115), CDR2 (서열 번호: 126), CDR3 (서열 번호: 137) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 49), CDR2 (서열 번호: 60), CDR3 (서열 번호: 71);
11. Ab11의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 116), CDR2 (서열 번호: 127), CDR3 (서열 번호: 138) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 50), CDR2 (서열 번호: 61), CDR3 (서열 번호: 72);
12. Ab30의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 166), CDR2 (서열 번호: 169), CDR3 (서열 번호: 172) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 148), CDR2 (서열 번호: 151), CDR3 (서열 번호: 154);
13. Ab32의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 167), CDR2 (서열 번호: 170), CDR3 (서열 번호: 173) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 149), CDR2 (서열 번호: 152), CDR3 (서열 번호: 155); 및
14. Ab33의 경쇄 CDR1 (서열 번호: 168), CDR2 (서열 번호: 171), CDR3 (서열 번호: 174) 또는 중쇄 CDR1 (서열 번호: 150), CDR2 (서열 번호: 153), CDR3 (서열 번호: 156).
바람직한 구현예에서, 단리된 핵산으로 인코딩된 폴리펩타이드는 ST2와 결합하는 항원 결합 단백질의 성분이다.
본원에 기재된 아미노산 서열에 상응하는 뉴클레오타이드 서열은, 핵산의 단리를 위한 프로브 또는 프라이머로, 또는 데이타베이스 검색을 위한 쿼리 서열로 사용되는데, 상기 아미노산 서열에서의 역-번역(back-translation) 또는 코딩 DNA 서열이 확인된 바 있는 폴리펩타이드와의 아미노산 동일성 영역의 확인에 의해 수득될 수 있다. 알려진 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 절차가 ST2 항원 결합 단백질 또는 ST2 항원 결합 단백질 폴리펩타이드 단편들의 바람직한 조합을 인코딩하는 DNA 서열을 단리하고 증폭시키는 데 이용될 수 있다. DNA 단편들의 조합 중 원하는 단말체를 규정하는 올리고뉴클레오타이드는 5' 및 3' 프라이머로 이용된다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 추가로 제한 엔도뉴클레아제를 위한 인식 부위를 함유하여, DNA 단편의 증폭된 조합을 발현 벡터에 삽입하는 것을 촉진시킬 수 있다. PCR 기술은 'Saiki et al., Science 239:487 (1988); Recombinant DNA Methodology, Wu et al., eds., Academic Press, Inc., San Diego (1989), pp.189-196; and PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et. al., eds., AcademicPress, Inc. (1990)'에 기재되었다.
본 발명의 핵산 분자는 단일가닥 및 이중-가닥 형태 모두의 DNA 및 RNA와, 이에 상응하는 상보적 서열을 포함한다. DNA는 예를 들면, cDNA, 게놈 DNA, 화학적으로 합성된 DNA, PCR로 증폭된 DNA 및 이들의 조합을 포함한다. 본 발명의 핵산 분자는 전체길이 유전자 또는 cDNA 분자뿐만 아니라 이들의 단편들의 조합을 포함한다. 본 발명의 핵산은 우선적으로 인간 공급원으로부터 유래되지만, 본 발명은 비-인간 종에서 유래된 핵산들 역시 포함한다.
"단리된 핵산"이란, 자연-발생 공급원에서 단리된 핵산의 경우, 상기 핵산이 단리되는 유기체의 게놈에 존재하는 인접한 유전적 서열로부터 단리된 바 있는 핵산을 가리킨다. 템플레이트에서 효소에 의해 또는 화학적으로 합성된 핵산의 경우, 예컨대 PCR 생성물, cDNA 분자 또는 올리고뉴클레오타이드의 경우, 그와 같은 프로세스를 통해 얻은 핵산은 단리된 핵산으로 본다. 단리된 핵산 분자는 별개의 단편의 형태 또는 좀 더 큰 핵산 구성물의 하나의 성분으로서의 핵산 분자를 가리킨다. 하나의 바람직한 구현예에서, 핵산은 실질적으로 내인성 물질을 절대 오염시키지 않는다. 상기 핵산 분자는 바람직하게는 적어도 1회 실질적으로 순수한 형태로, 그리고 표준 생화학적 방법(Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989)에 개괄된 방법들)에 의해 그것의 성분 뉴클레오타이드 서열을 확인하고 조작하며, 회복할 수 있을 정도의 양 또는 농도로 단리된 DNA 또는 RNA에서 유래되었다. 그와 같은 서열은 바람직하게는 전형적으로 진핵 유전자에 존재하는 내부 비-번역된 서열, 즉 인트론에 의해 방해 받지 않는 열린 해독 틀(open reading frame)의 형태로 제공 및/또는 구성된다. 비-번역된 DNA의 서열은 열린 해독 틀에서 5' 또는 3'으로 존재할 수 있고, 이들은 코딩 영역의 조작 또는 발현을 방해하지 않는다.
본 발명은 또한 중간 정도로 엄격한 조건에서, 그리고 더 바람직하게는 상당히 엄격한 조건에서, 본원에 기재된 ST2 항원 결합 단백질을 인코딩하는 핵산으로 혼성화(hybridize)되는 핵산을 포함한다. 혼성화 조건의 선택 및 적당한 조건 설계를 위한 안내에 영향을 미치는 기본적인 파라미터는 Sambrook,, Fritsch 및 Maniatis (1989, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., chapters 9 and 11; and Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons, Inc., sections 2.10 and 6.3-6.4)에 의해 제시되었고, 예를 들면, DNA의 길이 및/또는 염기 조성을 기반으로 당해 분야의 숙련가에 의해 쉽게 결정될 수 있다. 중간 정도로 엄격한 조건을 달성하는 한 가지 방법은 5 x SSC, 0.5% SDS, 1.0 mM EDTA(pH 8.0), 약 50% 포름아미드의 혼성화 완충제, 6 x SSC를 함유하는 사전세척(prewashing) 용액, 약 55 ℃의 혼성화 온도(또는 약 50% 포름아미드를 함유하고 약 42℃의 혼성화 온도를 갖는 다른 유사한 혼성화 용액) 및 0.5 x SSC, 0.1% SDS에서의 약 60 ℃의 세척 조건의 사용을 수반한다. 일반적으로, 상당히 엄격한 조건은 상기의 혼성화 조건으로 규정되나, 단 세척은 0.2 x SSC, 0.1% SDS에서 대략 68℃의 온도를 갖는다. 혼성화 및 세척 완충액으로 SSPE(1xSSPE는 0.15M NaCl, 10 mM NaH.sub.2 PO.sub.4, 및 1.25 mM EDTA, pH 7.4)가 SSC(1xSSC는 0.15M NaCl 및 15 mM 나트륨 시트레이트)를 대체할 수 있다; 세척은 혼성화가 완료된 후 15분 동안 수행된다. 세척 온도 및 세척 염 농도는, 당해 분야의 숙련가에게 잘 알려진 바와 같이 그리고 하기에 기재된 바와 같이(참고, 예를 들면, Sambrook et al., 1989), 하이브리드화 반응 및 듀플렉스 안정성을 관장하는 기본 원리들을 적용함으로써 원하는 엄중 정도를 달성하는 데 필요한 만큼, 조절될 수 있는 것으로 봐야 한다. 하나의 핵산을 미알려진 서열의 표적 핵산으로 혼성화할 때, 하이브리드 길이는 혼성화하는 핵산의 길이가 되는 것으로 추정된다. 알려진 서열의 핵산이 혼성화될 때, 하이브리드 길이는 상기 핵산의 서열을 배열하여 최적의 서열 상보성 영역(들)을 확인함으로써 결정될 수 있다. 길이가 염기쌍 50개 미만으로 기대되는 하이브리드의 혼성화 온도는 하이브리드의 용융 온도(Tm)보다 5-10 ℃ 낮아야 하는데, 여기서 Tm은 하기의 방정식으로 계산된다.길이가 염기쌍 18개 미만인 하이브리드의 경우, Tm (℃) = 2(A + T 염기의 #) + 4(#G + C 염기의 #). 길이가 염기쌍 18개 이상인 하이브리드의 경우, Tm (℃) = 81.5 + 16.6(log10 [Na+]) + 0.41(% G + C) - (600/N)이고, 여기서 N은 하이브리드 상의 염기 개수이고, [Na+]는 혼성화 완충제 중의 나트륨 이온의 농도(1xSSC의 경우 [Na+] = 0.165 M)이다. 바람직하게는, 이와 같이 혼성화하는 핵산은 각각 그 길이가 적어도 뉴클레오타이드 15개 (더 바람직하게는 적어도 뉴클레오타이드 18개, 또는 적어도 뉴클레오타이드 20개, 또는 적어도 뉴클레오타이드 25개, 또는 적어도 뉴클레오타이드 30개, 또는 적어도 뉴클레오타이드 40개, 또는 가장 바람직하게는 적어도 뉴클레오타이드 50개)이고, 또는 그것의 혼성화 결과로 생성되는 본 발명의 핵산의 길이의 적어도 25%(더 바람직하게는 적어도 50%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 70%, 및 가장 바람직하게는 적어도 80%)이며, 그것의 혼성화 결과로 생성되는 본 발명의 핵산과의 서열 동일성이 적어도 60%(더 바람직하게는 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%, 및 가장 바람직하게는 적어도 99.5%)인데, 여기서 서열 동일성은 상기에서 더 상세히 기재된 바와 같이 중첩 및 동일성을 최대화하면서 서열 갭은 최소화하기 위해 정렬될 때 혼성화하는 핵산들의 서열을 비교함으로써 결정된다.
본 발명에 따른 변이체는 대개 항원 결합 단백질을 인코딩하는 DNA에서의 뉴클레오타이드의 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 제조되는데, 본원에 개괄된 바와 같이, 카세트 또는 PCR 돌연변이유발 또는 당해 기술에서 잘 알려진 다른 기술을 사용하여 상기 변이체를 인코딩하는 DNA를 생성하고, 그러고 나서 세포 배양액에서 재조합 DNA를 발현시킨다. 그러나, 최대 약 100-150개의 잔기를 갖는 변이체 CDR를 포함하는 항원 결합 단백질 단편은 기존에 확립된 기술을 사용하는 시험관내 합성으로 제조될 수 있다. 전형적으로, 변이체는 예를 들면, ST2 결합처럼, 자연 발생 유사체와 동일한 정성적 생물학적 활성을 보여주지만, 또한 하기에 좀 더 자세히 개괄되는 바와 같은 변형된 특성을 갖는 변이체가 선택될 수도 있다.
당해 기술자에 의해 인정되는 바와 같이, 유전자 암호의 축퇴 때문에, 상당히 많은 수의 핵산이 제조되고, 이들 모두가 본 발명의 CDR들(및 항원 결합 단백질의 중쇄 및 경쇄 또는 기타 성분들)을 인코딩할 수 있다. 따라서, 당해 분야의 숙련가는 특정 아미노산 서열을 확인한 후 인코딩된 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는 방식으로 하나 이상의 코돈을 갖는 서열을 간단히 변경함으로써, 서로 상이한 핵산을 임의의 수만큼 제조할 수 있다.
본 발명은 또한 발현 시스템 및, 플라스미드, 발현 벡터, 전사 또는 발현 카세트 형태의 구성물들(상기에 기재된 바와 같이 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함한다)을 제공한다. 또한, 본 발명은 그와 같은 발현 시스템 또는 구성물을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
전형적으로, 모든 종류의 숙주세포에서 사용되는 발현 벡터는 플라스미드 유지 및, 외인성 뉴클레오타이드 서열의 클로닝 및 발현을 위한 서열들을 함유한다.이와 같은 서열들은, 어떤 구현예에서 총괄적으로 "플랭킹 서열"("flanking sequences")이라 칭하는데, 전형적으로 하기의 뉴클레오타이드 서열들 중 하나 이상을 포함한다: 프로모터, 하나 이상의 인핸서 서열, 복제 기점, 전사 종결 서열, 공여체 및 수용체 접합(splice) 부위를 갖는 완전한 인트론 서열, 폴리펩타이드 분비를 위한 선도 서열을 인코딩하는 서열, 리보솜 결합 부위, 폴리아데닐화 서열, 발현될 예정인, 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산을 삽입하기 위한 폴리링커 영역 및 선별 마커 요소. 이들 서열 각각은 하기에서 논의된다.
선택적으로, 벡터는 "태그”-인코딩 서열, 즉, ST2 항원 결합 단백질 코딩 서열의 5' 또는 3' 말단에 위치한 올리고뉴클레오타이드 분자를 함유할 수 있고; 상기 올리고뉴클레오타이드 서열은 polyHis (예컨대 hexaHis), 또는 또 하나의 "태그" 예컨대 FLAG, HA (헤마글루티닌 인플루엔자 바이러스), 또는 myc를 인코딩하는데, 이들에 대한 상업적으로 이용가능한 항체가 존재한다. 상기 태그는 전형적으로 폴리펩타이드가 발현될 때 상기 폴리펩타이드에 융합되고, 숙주세포로부터 ST2 항원 결합 단백질의 친화성 정제 또는 검출을 위한 하나의 수단으로 작용할 수 있다. 친화성 정제는, 예를 들면 친화성 매트릭스로서 상기 태그와 상충하는 항체를 사용하는 칼럼 크로마토그래피로 달성될 수 있다. 선택적으로, 상기 태그는 절단용 특정 펩티다아제 사용과 같은 다양한 수단으로 추후에 정제된 ST2 항원 결합 단백질로부터 제거될 수 있다.
플랭킹 서열은 상동(즉, 숙주 세포와 동일한 종 및/또는 계통(strain)에서 유래됨), 이종기원(즉, 숙주 세포 종 또는 계통과는 또 다른 종에서 유래됨), 하이브리드(즉, 둘 이상의 공급원에서 유래된 플랭킹 서열들의 조합), 합성 또는 원상태일 수 있다. 이와 같이, 플랭킹 서열의 공급원은 모든 원핵 또는 진핵 유기체, 모든 척추동물 또는 무척추동물 유기체, 또는 모든 식물일 수 있으나, 단, 상기 플랭킹 서열은 숙주 세포 기구에서 기능성이고, 그리고 그것에 의해 활성화될 수 있다.
본 발명의 벡터에서 유용한 플랭킹 서열은 당해 기술에서 잘 알려진 몇 개의 방법들로 수득될 수 있다. 전형적으로, 본원에서 유용한 플랭킹 서열은 맵핑 및/또는 제한 엔도뉴클레아제 소화로 사전에 확인될 수 있고, 따라서 적절한 제한 엔도뉴클레아제를 사용하여 적절한 조직 공급원으로부터 단리될 수 있다. 일부 경우에, 플랭킹 서열의 전체 뉴클레오타이드 서열이 알려진 것일 수 있다. 여기서, 상기 플랭킹 서열은 핵산 합성 또는 클로닝을 위해 본원에서 기재된 방법들을 사용하여 합성될 수 있다.
플랭킹 서열의 전부 또는 일부만이 알려져 있을 경우, 이것은 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)을 사용하여 및/또는 적당한 프로브 예컨대 올리고뉴클레오타이드 및/또는 동일한 또는 또 다른 종에서 유래된 플랭킹 서열 단편으로 게놈 라이브러리를 스크리닝함으로써 수득될 수 있다. 플랭킹 서열이 알려지지 않았을 경우, 플랭킹 서열을 함유하는 DNA의 단편이 예를 들면, 코딩 서열 또는 또 하나의 유전자(들)을 함유할 수 있는 더 큰 DNA 조각에서 단리될 수 있다. 단리는 제한 엔도뉴클레아제 소화에 의해 달성될 수 있고, 단리에 이어서 아가로스 겔 정제, Qiagen® 칼럼 크로마토그래피 (Chatsworth, CA), 또는 숙련가에게 알려진 기타 다른 다른 방법들을 사용하여 적당한 DNA 단편을 생성할 수 있다. 이와 같은 목적을 달성하기 위한 적당한 효소의 선택은 당해 분야의 숙련가에게는 쉽고 분명할 것이다.
복제 기점(origin)은 전형적으로 상업적으로 구매된 원핵 발현 벡터들의 일부이고, 이와 같은 기점은 숙주세포 내에서 벡터의 증폭에 도움을 준다. 선택된 벡터가 복제 기점 부위를 포함하지 않을 경우, 알려진 서열을 근거로 화학적으로 합성된 후, 상기 벡터에 결찰될 수 있다. 예를 들면, 플라스미드 pBR322 (New England Biolabs, Beverly, MA)에서의 복제 기점은 대부분의 그람-음성 박테리아에 적당하고, 다양한 바이러스 기원(예를 들면, SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, 소포성 구내염(stomatitus) 바이러스(VSV), 또는 파필로마바이러스 예컨대 HPV 또는 BPV)은 포유동물 세포에서의 벡터를 클로닝하는 데 유용하다. 일반적으로, 복제 기점 성분은 포유동물 발현 벡터에 필요치 않다(예를 들면, SV40 기점은 그것이 또한 단지 바이러스 초기(early) 프로모터를 함유하고 있기 때문에 종종 사용된다).
전사 종결 서열은 전형적으로 폴리펩타이드 코딩 영역의 말단 3'에 위치하여, 전사를 종결시키는 역할을 한다. 보통, 원핵 세포에서의 전사 종결 서열은 폴리-T 서열이 이어 오는 G-C 가 풍성한 단편이다. 상기 서열이 라이브러리에서 쉽게 클로닝되거나 또는 벡터의 일부로 상업적으로 쉽게 구입되는 반면, 또한 본원에서 기재된 방법들과 같은 핵산 합성 방법들을 사용하여 쉽게 합성될 수 있다.
선별 마커 유전자는 선택적 배양 배지에서 배양되는 숙주세포의 생존 및 성장을 위해 필요한 단백질을 인코딩한다. 전형적인 선택 마커 유전자는 (a) 항생제, 또는 원핵 숙주세포에 대한 다른 독소들, 예를 들면, 암피실린, 테트라사이클린, 또는 카나마이신 등에 내성을 전달하거나; (b) 세포의 영양요구성 결핍을 보완하거나; 또는 (c) 착물 또는 규정된 배지에서 이용불가능한 핵심 영양소를 제공하는 단백질들을 인코딩한다. 특이적 선별 마커는 카나마이신 내성 유전자, 암피실린 내성 유전자 및 테트라사이클린 내성 유전자이다. 유익하게는, 네오마이신 내성 유전자 또한 원핵 및 진핵 숙주 세포 둘 다에서 선택을 위해 사용될 수 있다.
다른 선택가능한 유전자들이 사용되어 발현될 유전자를 증폭시킬 수 있다. 증폭은 성장 또는 세포 생존에 아주 중요한 단백질의 생산에 필요한 유전자가 연속적으로 생성되는 재조합 세포들의 염색체들 내에서 일렬로 되풀이되는 과정이다. 포유동물 세포의 적당한 선별 마커의 예에는 디하이드로폴레이트 환원효소(DHFR) 및 프로모터없는 티르니딘(thyrnidine) 키나아제 유전자가 포함된다. 포유동물 세포 형질전환체는 선택 압력 하에 놓이는데, 여기서 상기 형질전환체만이 벡터에 존재하는 선택가능한 유전자 덕분에 독특하게 생존을 위해 변경된다. 선택 압력은 형질전환된 세포를 배지 내 선택 제제의 농도가 연속하여 증가되는 조건 하에서 배양함으로써, 그 결과로 선택가능한 유전자 및, ST2 폴리펩타이드와 결합하는 항원 결합 단백질 항체와 같은 또 하나의 유전자를 인코딩하는 DNA 둘 다를 증폭하게 됨으로써, 부과된다. 그 결과, ST2 항원 결합 단백질과 같은 폴리펩타이드의 증가된 양은 증폭된 DNA에서 합성된다.
리보솜-결합 부위는 보통 rnRNA의 번역 개시에 필요하고, Shine-Dalgarno 서열 (원핵생물) 또는 Kozak 서열 (진핵생물)로 특징지어진다. 상기 요소는 전형적으로 프로모터의 3' 및 발현될 폴리펩타이드의 코딩 서열의 5'에 위치한다. 어떤 구현예에서, 하나 이상의 코딩 영역이 작동가능하게 내부 리보솜 결합 부위(IRES)에 연결되어, 단일 RNA 전사체로부터 열린 해독틀 2개의 번역을 허용할 수 있다.
일부 경우에, 예컨대 진핵 숙주 세포 발현 시스템에서 당화가 바람직할 경우, 다양한 전- 또는 프로서열을 조작하여 당화 또는 수율(yield)을 개선할 수 있다. 예를 들면, 특정한 신호 펩타이드의 펩티다아제 절단 부위를 변경하거나, 또는 당화에 영향을 미칠 수 있는 프로서열을 부가할 수 있다. 최종 단백질 생성물은 -1 위치(성숙한 단백질의 제 1 아미노산 관련)에서, 발현에 수반되는 하나 이상의 추가 아미노산을 가질 수 있고, 이것은 완전히 제거되지 않을 수 있다. 예를 들면, 최종 단백질 생성물은 펩티다아제 절단 부위에서 발견되는 1개 또는 2개의 아미노산 잔기를 가질 수 있고, 이들은 아미노-말단에 부착된다. 대안적으로, 일부 효소 절단 부위의 사용은, 상기 효소가 성숙한 폴리펩타이드 내 특정 지점을 절단할 경우, 약간 끝이 잘린 형태의 원하는 폴리펩타이드를 얻는 결과를 가져온다.
본 발명의 발현 및 클로닝 벡터는 전형적으로 숙주 유기체에 의해 인식되는 프로모터를 함유하고, 작동가능하게 ST2 항원 결합 단백질을 인코딩하는 분자에 연결된다. 프로모터는 구조 유전자의 전사를 제어하는 구조 유전자의 시작 코돈(일반적으로 약 100-1000bp 내)의 업스트림(즉, 5')에 위치한 비전사된 서열(untranscribed sequences)이다. 프로모터는 종래에 두 가지 클래스 중 하나로 그룹화된다: 유도성 프로모터 및 항시적 프로모터. 유도성 프로모터는 배양 조건의 일부 변화(예컨대 영양소의 존재 또는 부재 또는 온도 변화)에 반응하여 그것의 제어 하에 증가된 수준의 DNA 전사를 개시한다. 항시적 프로모터는, 다른 한편으로, 유전자 발현을 전혀 제어하는 바 없이, 그것이 작동가능하게 연결된 유전자를 균일하게 전사한다. 다양한 포텐셜 숙주세포에 의해 인식된 다수의 프로모터가 잘 알려져 있다. 적당한 프로모터는, 제한 효소 소화로 공급원 DNA에서 상기 프로모터를 제거하고 원하는 프로모터 서열을 벡터에 삽입함으로써, 본 발명의 ST2 항원 결합 단백질을 포함하는 중쇄 또는 경쇄를 인코딩하는 DNA에 작동가능하게 연결된다. 효모 숙주에서 이용하는 적당한 프로모터는 또한 당해기술에 잘 알려져 있다. 효모 인핸서는 효모 프로모터와 함께 유익하게 사용된다.
포유동물 숙주세포에서 이용하는 적당한 프로모터가 잘 알려져 있는데, 비제한적으로, 예컨대 폴리오마 바이러스, 계두 바이러스, 아데노바이러스 (예컨대 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 레트로바이러스, 간염-B 바이러스 및 가장 바람직하게는 유인원 바이러스 40 (SV40)와 같은 바이러스의 게놈에서 수득된 것들을 포함한다. 다른 적당한 포유동물 프로모터는 이종기원 포유동물 프로모터, 예를 들면, 열-충격 프로모터 및 액틴 프로모터를 포함한다.
관련대상인 추가의 프로모터는 비제한적으로: SV40 초기 프로모터(Benoist and Chambon, 1981, Nature 290:304-310); CMV 프로모터(Thomsen et al., 1984, Proc. Natl. Acad. U.S.A. 81:659-663); 루(Rous) 육종 바이러스의 3' 긴 말단 반복에 함유된 프로모터(Yamamoto et al., 1980, Cell 22:787-797); 헤르페스 티미딘 키나아제 프로모터(Wagner et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 78:1444-1445); 메탈로티오닌 유전자에서 유래된 프로모터 및 조절 서열(Prinster et al., 1982, Nature 296:39-42); 및 원핵 프로모터, 예컨대 베타-락타마제 프로모터(Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 75:3727-3731); 또는 tac 프로모터(DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:21-25)를 포함한다. 또한 하기의 동물 전사 제어 영역 역시 관련 대상으로, 상기 영역은 조직 특이성을 나타내고, 이식유전자 동물에서 이용되어 왔다: 췌장 샘꽈리 세포에서 활성인 엘라스타제 I 유전자 제어 영역 (Swift et al., 1984, Cell 38:639-646; Omitz et al., 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50:399-409; MacDonald, 1987, Hepatology 7:425-515); 췌장 베타 세포에서 활성인 인슐린 유전자 제어 영역(Hanahan, 1985, Nature 315:115-122); 림프 세포에서 활성인 면역글로불린 유전자 제어 영역(Grosschedl et al., 1984, Cell 38:647-658; Adames et al.,1985, Nature 318:533-538; Alexander et al., 1987, Mol. Cell. Biol. 7:1436-1444); 고환, 유방, 림프 및 비만 세포에서 활성인 마우스 유선 종양 바이러스 제어 영역(Leder et al., 1986, Cell 45:485-495); 간에서 활성인 알부민 유전자 제어 영역(Pinkert et al., 1987, Genes andDevel. 1 :268-276); 간에서 활성인 알파-feto-단백질 유전자 제어 영역(Krumlauf et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5:1639-1648; Hammer et al., 1987, Science 253:53-58); 간에서 활성인 알파 1-항트립신 유전자 제어 영역(Kelsey et al., 1987, Genes and Devel. 1:161-171); 골수 세포에서 활성인 베타-글로빈 유전자 제어 영역(Mogram et al., 1985, Nature 315:338-340; Kollias et al., 1986, Cell 46:89-94); 뇌의 희소돌기아교세포(oligodendrocyte)에서 활성인 수초 염기성 단백질 유전자 제어 영역(Readhead et al., 1987, Cell 48:703-712); 골격 근육에서 활성인 미오신 경쇄-2 유전자 제어 영역(Sani, 1985, Nature 314:283-286); 및 시상하부에서 활성인 성선 자극성(gonadotropic) 방출 호르몬 유전자 제어 영역(Mason et al., 1986, Science 234:1372-1378).
인핸서 서열은 벡터에 삽입되어 고등 진핵생물에 의해 본 발명의 ST2 항원 결합 단백질을 포함하는 경쇄 또는 중쇄를 인코딩하는 DNA의 전사를 증가시킬 수 있다. 인핸서는 DNA의 시스-작용 요소로, 그 길이는 보통 약 10~300 bp이고, 프로모터에 작용하여 전사를 증가시킨다. 인핸서는 상대적으로 배향 및 위치 독립적이어서, 전사 단위의 5' 및 3' 모두의 위치에서 발견되어 왔다. 포유동물 유전자에서 이용 가능한 몇 개의 인핸서 서열은 알려진 바 있다(예를 들면, 글로빈, 엘라스타제, 알부민, 알파-feto-단백질 및 인슐린). 그러나, 전형적으로, 바이러스에서 유래된 인핸서가 사용된다. 당해 기술에 알려진 SV40 인핸서, 사이토메갈로바이러스 초기 프로모터 인핸서, 폴리오마 인핸서 및 아데노바이러스 인핸서가 진핵 프로모터의 활성화를 위한 예시적인 인핸싱 요소들이다. 인핸서가 코딩 서열의 5' 또는 3' 벡터에 배치될 수 있지만, 전형적으로는 프로모터에서 5' 부위에 위치한다. 적절한 원상태 또는 이종기원 신호 서열(선도 서열 또는 신호 펩타이드)을 인코딩하는 서열이 발현 벡터에 편입되어, 항체의 세포외 분비를 촉진할 수 있다. 신호 펩타이드 또는 선도 서열의 선택은 항체가 생산될 숙주세포의 유형에 따라 달라지고, 이종기원 신호 서열이 원상태 신호 서열을 대체할 수 있다. 포유동물 숙주세포에서 기능성인 신호 펩타이드의 예는 하기를 포함한다: 미국 특허 번호 4,965,195에 기재된 인터루킨-7(IL-7)의 신호 서열; Cosman et al., 1984, Nature 312:768에 기재된 인터루킨-2 수용체의 신호 서열; EP 특허 번호 0367,566에 기재된 인터루킨-4 수용체 신호 펩타이드; 미국 특허 번호 4,968,607에 기재된 타입 I 인터루킨-1 수용체 신호 펩타이드; EP 특허 번호 0,460,846에 기재된 타입 II 인터루킨-1 수용체 신호 펩타이드.
벡터는 숙주세포 게놈에 통합될 때, 발현을 촉진하는 하나 이상의 요소를 함유할 수 있다. 상기의 예들에 EASE 요소(Aldrich et al. 2003 Biotechnol Prog. 19:1433-38) 및 매트릭스 부착 영역(MAR)이 포함된다. MAR는 염색질의 구조적 체계를 성립시키고, 통합된 벡터를 “위치” 효과로부터 분리시킬 수 있다. 따라서, MAR는 벡터가 안정한 발현체(transfectants)를 생성하는 데 사용될 때 특히 유용하다. 수많은 천연 및 합성 MAR-함유 핵산이 당해기술에 알려져 있다(예를 들면, 미국 특허 번호 6,239,328; 7,326,567; 6,177,612; 6,388,066; 6,245,974; 7,259,010; 6,037,525; 7,422,874; 7,129,062).
본 발명의 발현 벡터는 상업적으로 이용가능한 벡터와 같은 개시 벡터로부터 구성될 수 있다. 그와 같은 벡터는 모든 원하는 플랭킹 서열을 함유할 수도, 또는 함유하지 않을 수도 있다. 본원에 기재된 하나 이상의 플랭킹 서열이 상기 벡터에 이미 존재하지 않을 경우, 이들은 개별적으로 수득되어, 벡터에 결찰될 수 있다. 플랭킹 서열 각각을 수득하기 위해 사용된 방법은 당해분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
벡터가 구성되고 나면, ST2 항원 결합 서열을 포함하는 경쇄, 중쇄, 또는 경쇄 및 중쇄를 인코딩하는 핵산 분자가 상기 벡터의 적절한 부위에 삽입되고, 완료된 벡터는 증폭 및/또는 폴리펩타이드 발현을 위해 적당한 숙주세포에 삽입될 수 있다. ST2 항원 결합 단백질에 대한 발현 벡터의 선택된 숙주세포로의 형질전환은 잘 알려진 방법에 의해 달성될 수 있는데, 여기에는 형질감염, 감염, 칼슘 포스페이트 공동침전, 전기천공, 미세주입, 리포펙션, DEAE-덱스트란 매개된 형질감염 또는 기타 알려진 기술이 포함된다. 선택된 방법은 부분적으로 사용될 숙주세포의 유형 선택에 변수로 작용한다. 이들 방법 및 다른 적당한 방법들이 숙련가에게 잘 알려져 있고, 예를 들면, 'Sambrook et al., 2001, supra.'에 제시되어 있다.
숙주세포는, 적절한 조건 하에서 배양된 경우, ST2 항원 결합 단백질을 합성하는데, 상기 단백질은 차후에 배양 배지에서 수집되거나(상기 숙주세포가 상기 단백질을 배지에 분비하는 경우) 또는 상기 단백질을 생성하는 숙주세포에서 직접 수집(상기 단백질이 분비되지 않을 경우)될 수 있다. 적절한 숙주세포의 선택은 다양한 인자에 따라 달라지는데, 예들 들면, 원하는 발현 수준, 활성에 바람직한 또는 필요한 폴리펩타이드 변형(예컨대 당화 또는 인산화) 및 생물학적 활성 분자로의 접힘의 용이성 등이다. 숙주세포는 진핵 또는 원핵일 수 있다.
발현을 위한 숙주로 이용가능한 포유동물 세포주는 당해기술에서 잘 알려져 있으며, 비제한적으로, 미국 종균 협회 (ATCC)에서 이용가능한 불멸화된 세포주 및 당해기술에 알려진 발현 시스템에서 사용되며 본 발명의 재조합 폴리펩타이드의 제조를 위해 사용될 수 있는 모든 세포주를 포함한다. 일반적으로, 숙주세포는 원하는 항- ST2 항체 폴리펩타이드를 인코딩하는 DNA를 포함하는 재조합 발현 벡터로 형질전환된다. 이용될 수 있는 숙주세포들 중에는 원핵생물, 효모 또는 고등 진핵 세포들이 포함된다. 원핵생물은 그람 음성 또는 그람 양성 유기체, 예를 들면 E. 콜라이 또는 바실러스 등을 포함한다. 고등 진핵 세포는 곤충 세포 및 포유동물 기원의 확립된 세포주를 포함한다. 적당한 포유동물 숙주세포주의 예에는 원숭이 신장 세포의 COS-7 세포주(ATCC CRL 1651) (Gluzman et al., 1981, Cell 23:175), L 세포, 293 세포, C127 세포, 3T3 세포 (ATCC CCL 163), 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 그것의 유도체, 예컨대 Veggie CHO 및 무혈청 배지에서 성장하는 관련 세포주(Rasmussen et al., 1998, Cytotechnology 28: 31), HeLa 세포, BHK(ATCC CRL 10) 세포주 및 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포주 CVI(ATCC CCL 70)에서 유래된 CVI/EBNA 세포주(McMahan et al., 1991, EMBO J. 10: 2821에 기재), 인간 배아 신장 세포 예컨대 293, 293 EBNA 또는 MSR 293, 인간 표피 A431 세포, 인간 Colo205 세포, 다른 형질전환된 영장류 세포주, 표준 2배체 세포, 일차 조직의 시험관내 배양액에서 유래된 세포주, 일차 외식편, HL-60, U937, HaK 또는 Jurkat 세포가 포함된다. 임의로, HepG2/3B, KB, NIH 3T3 또는 S49와 같은 포유동물 세포주는 예를 들면, 다양한 신호 전달 또는 리포터 검정에 폴리펩타이드를 사용하는 것이 바람직할 경우, 상기 폴리펩타이드의 발현을 위해 사용될 수 있다. 대안적으로, 효모와 같은 하등 진핵생물 또는 박테리아와 같은 원핵생물에서 폴리펩타이드를 생성하는 것이 가능하다. 적당한 효모는 사카로마이세스 세레비시애, 스키조사카로마이세스 폼베, 클루이베로마이세스 균주, 칸디다, 또는 이종기원 폴리펩타이드를 발현시킬 수 있는 모든 효모 균주를 포함한다. 적당한 균주는 에스케리치아 콜리, 바실러스 서브틸리스, 살모넬라 타이피뮤리움, 또는 이종기원 폴리펩타이드를 발현시킬 수 있는 모든 균주를 포함한다. 상기 폴리펩타이드가 효모 또는 박테리아에서 제조될 경우, 거기서 생성된 폴리펩타이드를, 기능성 폴리펩타이드를 얻기 위해, 예를 들면 적절한 부위의 인산화 또는 당화로 변형하는 것이 바람직할 수 있다. 이와 같은 공유 결합은 알려진 화학적 또는 효소 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 상기 폴리펩타이드는 또한 본 발명의 단리된 핵산을 하나 이상의 곤충 발현 벡터 내 적당한 대조군 서열에 작동가능하게 연결한 후, 곤충 발현 시스템을 이용하여 생산될 수 있다. 배큘로바이러스/곤충 세포 발현 시스템 용 물질 및 방법은 예를 들면, Invitrogen, San Diego, Calif., U.S.A. (MaxBac® 키트)에서 상업적으로 구매가능하며, 그와 같은 방법은 'Summers and Smith, Texas Agricultural Experiment Station Bulletin No. 1555 (1987)', 및 'Luckow and Summers, Bio/Technology 6:47(1988)'에 기재된 바와 같이, 당해기술에 잘 알려져 있다. 또한 무세포 번역 시스템이 이용되어, 본원에 개시된 핵산 구성물에서 유래된 RNA를 사용하여 폴리펩타이드를 생성할 수 있다. 박테리아, 진균, 효모 및 포유동물 세포성 숙주와 함께 사용하기 위한 적절한 클로닝 및 발현 벡터는 'Pouwels et al. (Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, New York, 1985)'에 의해 기술되었다. 본 발명의 단리된 핵산을 포함하는 숙주세포는, 바람직하게는 하나 이상의 발현 대조군 서열에 작동가능하게 연결된 것으로,“재조합 숙주세포”이다.
어떤 구현예에서, 세포주는 어떤 세포주가 고-발현 수준을 보이고 항시적으로 ST2 결합 특성을 갖는 항원 결합 단백질을 생성하는지를 결정함으로써 선택될 수 있다. 또 하나의 구현예에서, 자체적인 항체를 만들지 않으나 이종기원 항체를 만들고 분비할 역량이 있는 B 세포주 계통의 세포주가 선택될 수 있다.
세포-고갈 ST2 항원 결합 단백질
바람직한 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 ST2와 결합하고 IL-33 결합을 억제하는데, 그렇게 함으로써 ST2-발현 세포 내에서 IL-33 매개된 신호전달을 감소시킨다. 그러나, 어떤 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 ST2와 결합하고 고갈을 위해 ST2-발현 세포를 겨낭한다. 물론, ST2 항원 결합 단백질은 IL-33 결합을 억제하면서 고갈을 위해 ST2 세포를 겨냥할 수 있다.
세포-고갈 ST2 항원 결합 단백질은 ST2의 과잉 발현과 연관된 질환, 예를 들면, 염증성 질환 또는 ST2-발현 종양을 치료하는 데 특히 유용하다. 항원 결합 단백질, 예를 들면 항체로 세포들을 겨냥하는 방법은, 당해기술에 알려져 있다. 예시적인 구현예는 하기에 논의된다.
항체 약물 콘주게이트
본 발명의 구현예는 항체 약물 콘주게이트(ADCs)를 포함한다. 일반적으로 ADC는 화학치료제, 예를 들면, 세포독성 약물, 세포증식 억제제, 독소, 또는 방사선활성제에 접합(conjugate)된 항체를 포함한다. 상기 약물을 항체에 접합하기 위해 링커 분자가 사용될 수 있다. ADC 기술에서 유용한 다양한 링커 및 약물들은 당해기술에 공지되어 있고, 본 발명의 구현예에서 사용될 수 있다.(참고로, US20090028856; US2009/0274713; US2007/0031402; WO2005/084390; WO2009/099728; US5208020; US5416064; US5475092; 5585499; 6436931; 6372738; 및 6340701, 모두 본원에 참조로 편입되었다).
링커
어떤 구현예에서, ADC는 하나 이상의 링커 성분으로 이루어진 링커를 포함한다. 예시적인 링커 성분은 6-말레이미도카프로일, 말레이미도프로파노일, 발린-시트룰린, 알라닌-페닐알라닌, p-아미노벤질옥시카보닐 등을 포함하고, 또한 비제한적으로, N-석신이미딜 4-(2-피리딜티오) 펜타노에이트 (“SPP”), N-석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1 카복실레이트 (“SMCC,” 또한 본원에서 “MCC”라 칭함) 및 N-석신이미딜 (4-아이오도-아세틸) 아미노벤조에이트 (“SIAB”)을 포함하는 링커 시약과의 콘주게이션 결과로 유래된 것들을 포함한다.
링커는 “절단가능(cleavable)” 링커 또는 “절단불가능(non-cleavable)” 링커 (Ducry and Stump, Bioconjugate Chern. 2010, 21, 5-13; 본원에 참조로 그 전체가 편입됨)일 수 있다. 절단가능 링커는, 예를 들면 표적 세포로의 내면화(internalize)와 같이 특정 환경 인자에 영향을 받을 때, 상기 약물을 방출하도록 고안되었다. 절단가능 링커는 산-불안정 링커, 프로테아제 민감성 링커, 광-불안정 링커, 디메틸 링커 또는 디설파이드-함유 링커를 포함한다. 절단불가능 링커는 표적 세포에 내면화 및 표적 세포 내 분해가 일어날 때 항체의 하나 이상의 아미노산과 약물에 여전히 공유결합되어 있는 경향이 있다. 예시적인 절단불가능 링커는 MCC이다.
약물
어떤 구현예에서, 항체는 화학치료제에 접합되어 있다. 화학치료제의 예는 알킬화제, 예컨대 티오테파 및 사이클로포스파마이드 (CYTOXAN.TM.); 알킬 설포네이트 예컨대 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예컨대 벤조도파, 카보쿠온, 메투레도파 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸아멜라민, 예컨대 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌 포스포르아마이드, 트리에틸렌티오포스파오르아마이드 및 트리메틸롤로멜라민; 아세토게닌 (특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그것의 아도젤레신, 카르젤레신 및 바이젤레신 합성 유사체 포함); 크립토파이신 (특히 크립토파이신 1 및 크립토파이신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신 (합성 유사체, KW-2189 및 C바이-TMI 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드 예컨대 클로르암부실, 클로마파진, 콜로포스파마이드, 에스트라무스틴, 이포스파마이드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 펜에스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파마이드, 우라실 머스타드; 나이트로수레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴; 항생제, 예컨대 엔디인 항생제 (예를 들면 칼리키아마이신, 특히 칼리키아마이신 .감마1 및 칼리키아마이신 테타 I, 참고, 33:183-186 (1994); 다이네마이신 (다이네마이신 A 포함); 에스페라마이신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련된 색소단백질 엔디인 항생 물질 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 오트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린; 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신 (모폴리노-독소루비신, 시아노모폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 아이다루비신, 마르셀로마이신, 나이토마이신, 마이코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사물, 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 엽산 유사체, 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예컨대 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카모푸르, 사이타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘, 5-FU; 안드로겐, 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항-부신, 예컨대 아미노글루테티마이드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충물, 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파마이드 글리코사이드; 아미노레벌린산; 암사크린; 베스트라부실; 비스안트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 메이탄시노이드, 예컨대 메이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸하이드라자이드; 프로카바진; PSK.RTM.; 라족산; 라이족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아진산; 트리아지쿠온; 2,2',2''-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라바이노사이드 ("아라-C"); 사이클로포스파마이드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들면 파클리탁셀 (TAXOL.TM., Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.) 및 독세탁셀 (TAXOTERE.RTM., Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); 클로르암부실; 젬시타빈; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체 예컨대 시스플라틴 및 카보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포사이드 (VP-16); 이포스파마이드; 미토마이신 C; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈; 노반트론; 테니포사이드; 다우노마이신; 아미노프테린; 크셀로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸로미틴 (DMFO); 레티노산; 카페시타빈; 및 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 상기의 모든 것의 유도체를 포함한다. 또한 이와 같은 정의에 종양에 호르몬 작용을 조절하거나 또는 억제하는 역할을 하는 항-호르몬 제제가 포함되는데, 예컨대 항-에스트로겐(예를 들면 타목시펜, 랄록시펜, 4(5)-이미다졸을 억제하는 방향화 효소, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케녹시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 토레미펜 (Fareston); 및 항-안드로겐, 예컨대 플루타마이드, 닐루타마이드, 바이칼루타마이드, 류프롤라이드, 및 고세렐린; siRNA 및 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 상기의 모든 것의 유도체가 포함된다. 본 발명에 사용될 수 있는 다른 화학치료제들이 미국 공보 번호 20080171040 또는 미국 공보 번호 20080305044에 개시되어 있고, 그 전체가 참조로 편입되어 있다.
항체는 둘 이상의 상이한 화학치료제에 접합되거나, 또는 약제학적 조성물이 항체들의 혼합물을 포함할 수 있는 것으로 고려되는데, 여기서 상기 항체 성분은 상이한 화학치료제에 접합될 경우를 제외하고 동일하다. 그와 같은 구현예는 표적 세포를 갖는 다중 생물학적 경로를 겨냥하는 데 유용할 수 있다.
바람직한 구현예에서, ADC는 하나 이상의 메이탄시노이드 분자에 접합된 항체를 포함하는데, 상기 분자들은 튜불린 중합을 억제하는 역할을 하는 유사분열 억제제이다. 메이탄시노이드는 다양한 변형들과 함께 미국 특허 번호 3896111; 4151042; 4137230; 4248870; 4256746; 4260608; 4265814; 4294757; 4307016; 4308268; 4309428; 4313946; 4315929; 4317821; 4322348; 4331598; 4361650; 4364866; 4424219; 4450254; 4362663; 4371533; and WO 2009/099728. 3896111; 4151042; 4137230; 4248870; 4256746; 4260608; 4265814; 4294757; 4307016; 4308268; 4309428; 4313946; 4315929; 4317821; 4322348; 4331598; 4361650; 4364866; 4424219; 4450254; 4362663; 4371533; 및 WO 2009/099728에 기재되었다.메이탄시노이드 약물 모이어티는 천연 공급원으로부터 단리될 수 있고, 재조합 기술을 사용해 생산되거나 또는 합성으로 제조될 수 있다. 예시적인 메이탄시노이드는 C-19-데클로로(미국 특허 번호 4256746), C-20-하이드록시(또는 C-20-데메틸) +/- C-19-데클로로(미국 특허 번호 4307016 및 4361650), C-20-데메톡시(또는 C-20-아실옥시 (-OCOR), +/- 데클로로(미국 특허 번호 4294757), C-9-SH(미국 특허 번호 4,424,219), C-14-알콕시메틸(데메톡시/CH2OR)(미국 특허 번호 4,331,598), C-14-하이드록시메틸 또는 아실옥시메틸(CH2OH 또는 CH2OAc)(미국 특허 번호 4,450,254), C-15-하이드록시/아실옥시(미국 특허 번호 4,364,866), C-15-메톡시(미국 특허 번호 4,313,946 및 4,315,929), C-18-N-데메틸(미국 특허 번호 4,362,663 및 4,322,348), 및 4,5-데옥시(미국 특허 번호 4,371,533)를 포함한다.
메이탄시노이드 화합물 상의 다양한 위치가 원하는 연결의 유형에 따라, 연결 위치로 사용될 수 있다. 예를 들면, 에스테르 연결의 형성을 위해, 하이드록실 그룹이 있는 C-3 위치, 하이드로지메틸로 변형된 C-14 위치, 하이드록실 a 그룹으로 변형된 C-15 위치 및 하이드록실 그룹이 있는 C-20 위치가 모두 적당하다(미국 특허 번호 5208020, RE39151, 및 6913748; 미국 특허출원 공개 번호 20060167245 및 20070037972, 그리고 WO 2009099728).
바람직한 메이탄시노이드는 당해기술에 알려진 것들, 예컨대 DM1, DM3, 및 DM4 (미국 특허출원 공개 번호 2009030924 및 20050276812, 본원에 참조로 편입됨)를 포함한다.
메이탄시노이드를 함유하는 ADC, 그와 같은 ADC의 제조 방법 및 그것의 치료 용도는 미국 특허 번호 5208020 및 5416064, 미국 특허출원 공개 번호 20050276812 및 WO 2009099728(모두 본원에 참조로 편입됨)에 개시되었다. 메이탄시노이드 ADC의 제조에 유용한 링커는 당해기술에 알려져 있다(미국 특허 번호 5208020 및 미국 특허출원 공개 번호 2005016993 및 20090274713; 모두 본원에 참조로 편입됨). SMCC 링커를 포함하는 메이탄시노이드 ADC는 미국 특허 공개 번호 2005/0276812에 개시된 바대로 제조될 수 있다.
효과기 기능-증대된 항체
항체의 Fc 부분의 기능들 중 하나는 항체가 그것의 표적과 결합할 때 면역계와 커뮤니케이션하는 것이다. 이것은 “효과기 기능(effector function)”이라 간주된다. 커뮤니케이션(communication)은 항체-의존적 세포성 세포독성(ADCC), 항체-의존적 세포성 식균작용(ADCP, 및/또는 보체 의존적 세포독성 (CDC)을 야기한다. ADCC 및 ADCP는 면역계의 세포 표면 상의 Fc 수용체에 Fc가 결합함으로써 발생된다.CDC는 보체 시스템, 예를 들어, C1q의 단백질과 Fc가 결합함으로써 발생된다.
IgG 서브클래스는 효과기 기능을 발생시키는 능력이 다양하다. 예를 들면, IgG1은 ADCC 및 CDC를 발생시키는 데 IgG2 및 IgG4보다 월등하다. 따라서, ST2를 발현시키는 세포가 파괴의 표적이 된 구현예에서는 항-ST2 IgG1 항체가 바람직할 것이다.
항체의 효과기 기능은 Fc에 하나 이상의 돌연변이를 도입함으로써 증가 또는 감소될 수 있다. 본 발명의 구현예는 효과기 기능을 증가시키기 위해 조작된 Fc가 있는 항원 결합 단백질(예를 들면, 항체)을 포함한다(미국 7,317,091 및 Strohl, Curr. Opin. Biotech., 20:685-691, 2009; 둘 다 본원에 참조로 그 전체가 편입됨). 증가된 효과기 기능을 갖는 예시적인 IgG1 Fc 분자는 하기의 치환기를 갖는 것들을 포함한다(카밧 넘버링 도식 기반): S239D/I332E
S239D/A330S/I332E
S239D/A330F/I332E
S298A/D333A/K334A
P247I/A339D
P247I/A339Q
D280H/K290S
D280H/K290S/S298D
D280H/K290S/S298V
F243L/R292P/Y300L
F243L/R292P/Y300L/P396L
F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L
G236A/S239D/I332E
K326A/E333A
K326W/E333S
K290E/S298G/T299A
K290N/S298G/T299A
K290E/S298G/T299A/K326E
K290N/S298G/T299A/K326E
본 발명의 추가 구현예는 효과기 기능을 감소시키기 위해 조작된 Fc를 갖는 항원 결합 단백질, 예를 들면, 항체를 포함한다. 감소된 효과기 기능을 갖는 예시적인 Fc 분자는 하기의 치환을 갖는 것들을 포함한다(카밧 넘버링 도식 기반):
N297A (IgG1)
L234A/L235A (IgG1)
V234A/G237A (IgG2)
L235A/G237A/E318A (IgG4)
H268Q/V309L/A330S/A331S (IgG2)
C220S/C226S/C229S/P238S (IgG1)
C226S/C229S/E233P/L234V/L235A (IgG1)
L234F/L235E/P331S (IgG1)
S267E/L328F (IgG1)
IgG Fc-함유 단백질의 효과기 기능을 증가시키는 또 하나의 방법은 Fc의 푸코실화를 감소시키는 것이다. Fc에 부착된 바이안테너리 착물-타입 올리고당에서 코어 푸코스의 제거는 항원 결합 또는 CDC 효과기 기능을 변화시키지 않고 ADCC 효과기 기능을 상당히 증가시켰다. Fc-함유 분자, 예를 들면, 항체의 푸코실화를 감소시키거나 또는 제거하는 몇 가지 방법이 알려져 있다. 이와 같은 방법은 FUT8 녹아웃 세포주, 변이체 CHO 세포주 Lec13, 래트 하이브리도마 세포주 YB2/0, FUT8 유전자에 특이적으로 대항하는 작은 개재 RNA를 포함하는 세포주 및 β-1,4-N-아세틸글루코스아미닐전이효소 III 및 Golgi α-만노시다제 II를 공동발현하는 세포주를 비롯한 어떤 포유동물 세포주들에서의 재조합 발현을 포함한다. 대안적으로, Fc-함유 분자는 비-포유동물 세포, 예컨대 식물 세포, 효모, 또는 원핵세포(예를 들면, E. 콜라이)에서 발현될 수 있다. 따라서, 본 발명의 어떤 구현예에서, 조성물은 푸코실화를 감소시키거나 또는 전적으로 푸코실화가 부재하는 항체, 예를 들면, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, Ab10 또는 Ab11을 포함한다.
약제학적 조성물
일부 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 하나 또는 복수의 항원 결합 단백질의 치료적으로 효과적인 양과 함께 약제학적으로 효과적인 희석제, 캐리어, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 아쥬반트를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 어떤 구현예에서, 항원 결합 단백질은 항체이다. 본 발명의 약제학적 조성물은 비제한적으로, 액체상, 냉동된 및 동결건조된 조성물을 포함한다.
바람직하게는, 제형 물질은 이용되는 복용량 및 농도에서 수령체에 비독성이다. 특정 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질, 예를 들면, ST2-결합 항체의 치료적으로 효과적인 양을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
어떤 구현예에서, 약제학적 조성물은 예를 들면, 조성물의 pH, 몰삼투압, 점도, 투명도, 색도, 등장성, 냄새, 멸균, 안정성, 용해율 또는 방출율, 흡착 또는 침투를 변경, 유지 또는 보존하기 위한 제형 물질을 함유할 수 있다. 그와 같은 구현예에서, 적당한 제형 물질은 비제한적으로, 아미노산 (예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌, 프롤린, 또는 라이신); 항미생물제; 항산화제 (예컨대 아스코르브산, 나트륨 설파이트 또는 나트륨 수소-설파이트); 완충제 (예컨대 보레이트, 바이카보네이트, 트리스-HCl, 시트레이트, 포스페이트 또는 다른 유기산들); 팽화제 (예컨대 만니톨 또는 글리신); 킬레이트제 (예컨대 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA)); 착화제 (예컨대 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-사이클로덱스트린 또는 하이드록시프로필-베타-사이클로덱스트린); 충전제; 모노사카라이드; 디사카라이드; 및 기타 탄수화물 (예컨대 글루코오스, 만노스 또는 덱스트린); 단백질 (예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린); 착색제, 풍미제 및 희석제; 유화제; 친수성 폴리머 (예컨대 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩타이드; 염 형성 반대이온 (예컨대 나트륨); 보존제 (예컨대 벤즈알코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로산, 펜에틸 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 또는 수소 퍼옥사이드); 용매 (예컨대 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알코올 (예컨대 만니톨 또는 소르비톨); 현탁화제; 계면활성제 또는 습윤제 (예컨대 플루로닉, PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔); 안정성 향상제 (예컨대 수크로오스 또는 소르비톨); 긴장성 향상제 (예컨대 알칼리 금속 할라이드, 바람직하게는 나트륨 또는 칼륨 클로라이드, 만니톨 소르비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 약제학적 아쥬반트를 포함한다. 참고로는, 'REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18" Edition, (A. R.Genrmo, ed.),1990, Mack Publishing Company'가 있다.
어떤 구현예에서, 최적의 약제학적 조성물은 예를 들면, 의도된 투여 경로, 전달 형식 및 원하는 복용량에 따라, 당해분야의 숙련가에 의해 결정될 것이다. 예컨대 'REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 상기'를 참고하면 된다. 어떤 구현예에서, 그와 같은 조성물은 본 발명의 항원 결합 단백질의 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출률 및 생체내 청소능률에 영향을 미칠 수 있다. 어떤 구현예에서, 약제학적 조성물 중의 일차 비히클 또는 캐리어는 본래 수성 또는 비-수성 중 하나일 수 있다. 예를 들면, 적당한 비히클 또는 캐리어는 주사용 물, 생리적 염수 용액 또는 인공 뇌척수액일 수 있고, 이들은 가능한 경우 비경구 투여용 조성물에 공통되는 다른 물질들로 보충될 수 있다. 중성으로 완충된 염수 또는 혈청 알부민이 혼합된 염수가 추가의 예시적인 비히클이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 pH 7.0-8.5의 트리스 완충제, 또는 약 pH 4.0-5.5의 아세테이트 완충제를 포함하며, 더 나아가 소르비톨 또는 그들의 적당한 대체물들을 포함할 수 있다. 본 발명의 어떤 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질 조성물은 원하는 순도의 선택된 조성물을 임의의 제형 제제(REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 상기)와 혼합하여 동결건조된 케이크 또는 수용액 형태로 저장할 수 있게 제조될 수 있다. 게다가, 어떤 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질 생성물은 적절한 부형제 예컨대 수크로오스를 사용하여 리오필리제이트로 제형될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 비경구 전달용으로 선택될 수 있다. 대안적으로, 상기 조성물은 흡입용 또는 소화관, 예컨대 경구를 통한 전달용으로 선택될 수 있다. 그와 같은 약제학적으로 허용가능한 조성물의 제조는 당해기술에 해당된다. 상기 제형 성분은 바람직하게는 투여 부위에 허용가능한 농도로 존재한다. 어떤 구현예에서, 완충제가 사용되어 조성물을 생리적 pH 또는 그보다 약간 낮은 pH, 전형적으로 약 5-8의 pH 범위로 유지시킨다.
비경구 투여가 고려되는 경우, 본 발명에 사용될 치료적 조성물이 약제학적으로 허용가능한 비히클 내에 원하는 ST2 항원 결합 단백질을 포함하는 발열성물질 없는, 비경구로 허용가능한 수용액 형태로 제공될 수 있다. 비경구 주사용으로 특히 적당한 비히클은 멸균 증류수로, 그 안의 ST2 항원 결합 단백질은 적절하게 보존된, 멸균 등장의 용액으로 제형된다. 어떤 구현예에서, 상기 제조는 제제, 예컨대 주사가능 마이크로구형체, 생체붕괴성 입자, 폴리머 화합물(예컨대 폴리락트산 또는 폴리글리콜산), 비드 또는 리포좀으로 원하는 분자의 제형을 수반할 수 있는데, 이것은 데포(depot) 주사를 통해 전달될 수 있는 생성물의 조절된 또는 지속적인 방출을 제공할 수 있다. 어떤 구현예에서, 또한 순환 중 지속 시간을 촉진하는 효과를 내는 히알루론산이 사용될 수 있다. 어떤 구현예에서, 이식가능 약물 전달 장치가 사용되어 원하는 항원 결합 단백질을 도입할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 흡입용으로 제형될 수 있다. 이들 구현예에서, ST2 항원 결합 단백질은 유익하게는 건식 흡입성 분말로 제형된다. 특정 구현예에서, 에어로졸 전달용 추진체와 함께 ST2 항원 결합 단백질 흡입 용액이 제형될 수 있다. 어떤 구현예에서, 용액이 분무될 수 있다. 폐 투여 및 그에 따른 제형 방법은 추가로 국제 특허 출원 번호 PCT/US94/001875에 기재되었고, 이것은 참조로 편입되었으며, 화학적으로 변형된 단백질의 폐 전달을 기술한다.
또한 제형이 경구로 투여될 수 있다고 간주된다. 이와 같은 방식으로 투여된 ST2 항원 결합 단백질은 관례상 고체 복용 형태 예컨대 정제 및 캡슐의 조제(compounding)에 사용되는 캐리어와 함께, 또는 캐리어 없이 제형될 수 있다. 어떤 구현예에서, 캡슐은, 생체이용률이 최대화되고 전-전신 분해가 최소화된 경우, 위장관의 어느 지점에서 상기 제형의 활성 부분을 방출하도록 고안될 수 있다. 추가 제제가 포함되어 ST2 항원 결합 단백질의 흡수를 촉진할 수 있다. 희석제, 풍미제, 낮은 용융점 왁스, 식물성 오일, 윤활유, 현탁화제, 정제 붕해제 및 바인더가 또한 이용될 수 있다.
지속적인 또는 조절된-전달 제형의 ST2 항원 결합 단백질을 포함하는 제형을 비롯하여, 추가의 약제학적 조성물은 당해분야의 숙련가에게 명확히 알려져 있다. 다른 다양한 지속적인- 또는 조절된-전달 물질들, 예컨대 리포좀 캐리어, 생체붕괴성 마이크로입자 또는 다공성 비드 및 데포 주사를 제형하기 위한 기술들이 또한 당해분야의 숙련가에게 알려져 있다. 참고, 예를 들면, 국제 특허 출원 번호 PCT/US93/00829, 이것은 참조로 편입되었고, 약제학적 조성물의 전달을 위한 다공성 폴리머 마이크로입자의 제어 방출을 기술한다. 지속 방출 제제는 형상화된 물품, 예를 들면, 필름이나 마이크로캡슐 형태의 반투과성 폴리머 매트릭스를 포함할 수 있다. 지속 방출 매트릭스는 폴리에스테르, 하이드로겔, 폴리락타이드(미국 특허 번호 3,773,919 및 유럽 특허 출원 공보 번호 EP 058481에 개시, 이들 각각은 참조로 편입됨), L-글루탐산 및 감마 에틸-L-글루타메이트의 코폴리머(Sidman et al., 1983, Biopolymers 2:547-556), 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트)(Langer et al., 1981, J. Biomed. Master, Res. 15:167-277 and Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105), 에틸렌 비닐 아세테이트(Langer et al., 1981, 상기) 또는 폴리-D(-)-3-하이드록시부티르산(유럽 특허 출원 공보 번호 EP 133,988)을 포함할 수 있다. 지속 방출 조성물은 또한 당해분야에서 알려진 몇 가지 방법에 의해 제조될 수 있는 리포좀을 포함할 수 있다. 예를 들면, Eppstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82:3688-3692; 유럽 특허 출원 공보 번호 EP 036,676; EP 088,046 및 EP 143,949를 참고하면 되며, 이는 참조로 편입되었다.
생체내 투여용으로 사용되는 약제학적 조성물은 전형적으로 멸균 제제로 제공된다. 멸균은 멸균한 여과 막을 통한 여과로 달성될 수 있다. 본 조성물이 동결건조되는 경우, 상기 방법을 사용하는 멸균은 동결건조 및 재구성 이전 또는 이후 어느 시점에서든 수행될 수 있다. 비경구 투여용 조성물은 동결건조된 형태 또는 용액으로 저장될 수 있다. 비경구 조성물은 일반적으로 멸균 접근 포트가 있는 용기, 예를 들면, 정맥내 용액 백에, 또는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 스토퍼가 있는 약병에 저장된다.
본 발명의 측면은 자가-완충성 ST2 항원 결합 단백질 제형을 포함하고, 이것은 국제 특허 출원 WO 06138181A2 (PCT/US2006/022599) (그 전체가 참조로 본원에 편입됨)에 기재된 바와 같이, 약제학적 조성물로 사용될 수 있다.
상기에서 논의된 바와 같이, 어떤 구현예는 ST2 항원 결합 단백질뿐만 아니라, 본 섹션 및 본원의 다른 곳에서 예시적으로 기재된, 하나 이상의 부형제들을 포함하는 ST2 항원 결합 단백질 단백질 조성물, 특히 약제학적 ST2 항원 결합 단백질 조성물을 제공한다. 본 발명에서 다양한 목적으로 부형제가 사용될 수 있는데, 이러한 목적은 예컨대 제형의 물리적, 화학적, 또는 생물학적 특성의 조절, 예를 들면 점도 조절, 및 또는 유효성을 개선시키거나 또는 그와 같은 제형을 안정화시키기 위한 본 발명의 프로세스 및, 제조, 선적, 저장, 사용-전 준비, 투여 및 그 후에 발생하는 스트레스로 인한 분해 및 부패에 저항하는 프로세스의 조절 등이다.
단백질 안정화 및 이와 관련된 제형 물질 및 방법들에 대한 다양한 설명이 이용 가능한데, 예컨대 Arakawa et al. "Solvent interactions in pharmaceutical formulations," Pharm Res.8(3): 285-91 (1991); Kendrick et al., "Physical stabilization of proteins in aqueous solution," in: RATIONAL DESIGN OF STABLE PROTEIN FORMULATIONS: THEORY AND PRACTICE, Carpenter and Manning, eds. Pharmaceutical Biotechnology. 13: 61-84 (2002), 및 Randolph et al., "Surfactant-protein interactions," Pharm Biotechnol. 13: 159-75 (2002)이 있고, 이들 각각은 그 전체가 본원에 참조로 편입되었으며, 특히 수의적 및/또는 인간 의료 용도의 단백질 의약품 및 프로세스와 관련하여, 본 발명에 따른 자가-완충 단백질 제형에 대한 동일한 것의 부형제 및 프로세스와 특히 관련된 부분들이 편입되었다.
본 발명의 어떤 구현예에 따라 염(salt)이 사용되어, 예를 들면, 제형의 이온성 강도 및/또는 등장성을 조절하고 및/또는 본 발명에 따른 조성물의 단백질 또는 다른 성분의 용해도 및/또는 물리적 안정성을 개선시킬 수 있다.
잘 알려진 바와 같이, 이온은 단백질 표면 상에서 전하를 띤 잔기와 결합함으로써, 그리고 단백질 내 전하를 띤 극성 그룹들을 차단하고 그들의 정전기적 상호작용, 끌어당김 및 밀어냄의 상호작용의 강도를 감소시킴으로써 단백질의 원상태를 안정화시킬 수 있다. 이온은 또한 특히, 단백질의 변성된 펩타이드 연결(--CONH)에 결합함으로써 단백질의 변성된 상태를 안정화시킬 수 있다. 더욱이, 단백질 내 전하를 띤 극성 그룹과의 이온성 상호작용은 또한 분자간 정전 상호작용을 감소시킬 수 있고, 그렇게 함으로써, 단백질 응집 및 불용해성을 방지하거나 또는 감소시킬 수 있다.
이온성 종마다 단백질에 대한 효과가 유의미하게 다르다. 이온들 및 그들의 단백질에 대한 효과의 분류적 순위가 여러 차례 발전되었고, 그것이 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 제형에 사용될 수 있다. 하나의 예는 Hofmeister 시리즈로, 이것은 용액 내 단백질의 형태적 안정성에 미치는 영향을 근거로 이온성 및 극성 비-이온성 용질의 순위를 매기고 있다. 안정화 용질은 "코스모트로픽(kosmotropic)"이라 칭한다. 탈안정화 용질은 “무질서유발성(chaotropic)”이라 칭한다. 코스모트로프(Kosmotropes)는 통상적으로 고농도(예를 들면, > 암모늄 설페이트 1 몰)로 사용되어 용액에서 단백질을 침전시킨다("염석(salting-out)"). 카오트로프(Chaotropes)는 통상적으로 사용되어 단백질을 변형(denture)시키거나 및/또는 용해되게 만든다("염첨가(salting-in)"). "염첨가" 및 "염석"에 대한 이온의 상대적 유효성이 Hofmeister 시리즈에서의 각각의 위치를 규정한다.
유리 아미노산(Free amino acids)이 본 발명의 다양한 구현예에 따른 ST2 항원 결합 단백질 제형에 팽화제, 안정제 및 항산화제 뿐만 아니라 다른 표준 사용처로 사용될 수 있다. 라이신, 프롤린, 세린 및 알라닌이 제형 내 단백질을 안정화하기 위해 사용될 수 있다. 글리신은 올바른 케이크 구조 및 특성을 보장하기 위한 동결건조에 유용하다. 아르기닌은 액체 및 동결건조된 제형 둘 다에서 단백질 응집을 억제하는 데 유용할 수 있다. 메티오닌은 항산화제로서 유용하다.
폴리올은 당, 예를 들면, 만니톨, 수크로오스 및 소르비톨 그리고 다가 알코올 예컨대, 예를 들면, 글리세롤 및 프로필렌 글리콜, 그리고 본원에서 논의된 목적에 맞게, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 및 관련된 물질을 포함한다. 폴리올은 코스모트로픽이다. 폴리올은 액체 및 동결건조된 제형 둘 다에서 유용한 안정제로 물리적 및 화학적 분해 프로세스로부터 단백질을 보호한다. 폴리올은 또한 제형의 긴장성을 조절하는 데 유용하다.
본 발명의 선택 구현예에서 유용한 폴리올에는 동결건조된 제형에서 케이크의 구조적 안정성을 보장하기 위해 통상적으로 사용되는 만니톨이 포함된다. 만니톨은 상기 케이크에 구조적 안정성을 보장한다. 일반적으로 동결건조보호제, 예를 들면, 수크로오스와 함께 사용된다. 소르비톨 및 수크로오스가 긴장성 조절을 위한 바람직한 제제에 속하고, 안정제로서 이동 중 냉동-해동 스트레스로부터 보호하거나 제조과정 중 팽화를 막는다. 환원 당(유리 알데하이드 또는 케톤 그룹을 함유), 예컨대 글루코오스 및 락토오스는 표면 라이신 및 아르기닌 잔기를 당화할 수 있다. 따라서, 이들은 일반적으로 본 발명에 따라 사용할 수 있는 바람직한 폴리올에 해당되지 않는다. 또한, 산성 조건 하에서 푸룩토오스 및 글루코오스로 가수분해되고, 결과적으로 당화반응을 일으키는, 반응성종, 예컨대 수크로오스를 형성하는 당류 또한 이와 관련하여 본 발명의 바람직한 폴리올에 해당하지 않는다. PEG는 단백질을 안정화하고 동결보호제로서 유용하며, 이와 관련하여 본 발명에 사용될 수 있다.
ST2 항원 결합 단백질 제형의 구현예는 더 나아가 계면활성제를 포함한다. 단백질 분자는 표면에서 흡착이 일어나기 쉽고, 공기-액체, 고체-액체 및 액체-액체 계면에서 변성 및 결과적인 응집이 일어나기 쉽다. 이와 같은 효과는 일반적으로 단백질 농도에 반비례한다. 이와 같은 유해한 상호작용은 일반적으로 단백질 농도에 반비례하고, 예컨대 생성물의 선적 및 취급 시 발생되는 것과 같은 물리적 교반에 의해 전형적으로 악화될 수 있다.
계면활성제는 일상적으로 표면 흡착을 방지, 최소화 및 감소시키기 위해 사용된다. 이와 관련하여 본 발명에 유용한 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 소르비탄 폴리에톡실레이트의 다른 지방산 에스테르 및 폴록사머 188을 포함한다.
계면활성제는 또한 단백질의 형태적 안정성을 제어하기 위해 통상적으로 사용된다. 이와 관련한 계면활성제의 사용은, 주어진 계면활성제가 전형적으로 어떤 단백질은 안정화하고 또 어떤 단백질은 탈안정화하기 때문에, 단백질-특이적(protein-specific)이다.
폴리소르베이트는 산화적 분해가 되기 쉽고, 종종 공급되는 경우, 충분한 양의 퍼옥사이드를 함유하여 단백질 잔기 측쇄, 특히 메티오닌의 산화를 초래한다. 결과적으로, 폴리소르베이트는 주의 깊게 사용되어야 하며, 사용될 때는 그것의 가장 낮은 영향농도에서 이용되어야 한다. 이와 관련하여, 폴리소르베이트는 부형제가 그것의 가장 낮은 영향농도에서 사용되어야 한다는 일반적인 규칙을 잘 보여준다.
ST2 항원 결합 단백질 제형의 구현예는 더 나아가 하나 이상의 항산화제를 포함한다. 주위 산소 및 온도의 적절한 수준을 유지하고 빛에 대한 노출을 방지함으로써, 약제학적 제형에서 단백질의 유해한 산화가 얼마간 예방될 수 있다. 또한 단백질의 산화적 분해를 방지하도록 항산화제 부형제가 사용될 수 있다. 이와 관련하여 유용한 항산화제로는 환원제, 산소/유리-라디칼 스캐빈져 및 킬레이트제가 있다. 본 발명에 따라 치료적 단백질 제형에 사용되는 항산화제는 바람직하게는 수용성이고, 생성물의 유통 기한 내내 그것의 활성을 유지한다. EDTA는 이와 관련하여 본 발명에 따른 바람직한 항산화제이다.
항산화제는 단백질을 손상시킬 수 있다. 예를 들면, 환원제, 예컨대 특히 글루타티온이 분자내 디설파이드 연결을 손상시킬 수 있다. 따라서, 본 발명에 사용되는 항산화제는, 다른 무엇보다, 제형 내 단백질을 자체적으로 손상시킬 수 있는 가능성을 제거하거나 또는 충분히 감소시킬 수 있도록 선택된다.
본 발명에 따른 제형은 단백질 보조인자이자 단백질 배위 착물 형성에 필요한 금속 이온을 포함할 수 있는데, 예컨대 어떤 인슐린 서스펜션을 형성하는 데 아연이 필요하다. 금속 이온은 또한 단백질을 분해하는 어떤 과정을 억제할 수 있다.그러나, 금속 이온은 또한 단백질을 분해하는 물리적/ 화학적 과정의 촉매역할을 할 수도 있다.
마그네슘 이온(10-120 mM)은 아스파르트산이 이소아스파르트산으로 이성질체화되는 것을 억제하기 위해 사용될 수 있다. Ca+2 이온(최대 100 mM)은 인간 데옥시리보뉴클레아제의 안정성을 증가시킬 수 있다. 그러나, Mg+2, Mn+2 및 Zn+2은 rhDNase를 탈안정화할 수 있다. 유사하게, Ca+2 및 Sr+2는 인자 VIII를 안정화할 수 있고, 그것은 Mg+2, Mn+2 및 Zn+2, Cu+2 및 Fe+2에 의해 탈안정화될 수 있고, Al+3이온에 의해 그것의 응집이 증가될 수 있다.
ST2 항원 결합 단백질 제형의 구현예는 더 나아가 하나 이상의 보존제를 포함한다. 보존제는 동일한 용기에서 두 차례 이상의 추출을 수반하는 다중-용량 비경구 제형을 개발할 때 필요하다. 그의 일차 기능은 미생물 성장을 억제하여, 상기 의약품의 저장수명 또는 사용 기간 동안 생성물 멸균을 보장하는 것이다. 통상적으로 사용되는 보존제는 벤질 알코올, 페놀 및 m-크레졸을 포함한다. 비록 보존제가 소분자 비경구와의 사용의 오랜 이력을 갖고 있지만, 보존제를 포함하는 단백질 제형의 개발은 도전적인 과제일 수 있다. 보존제는 거의 항상 단백질에 대해 탈안정화 효과(응집)를 나타내고, 이것이 다중-용량 단백질 제형에서 용도를 제한하는 주요 인자가 되어 왔다. 현재까지, 대부분의 단백질 약물은 단일-사용만을 위해 제형되어 왔다. 그러나, 다중-용량 제형이 가능한 경우, 그것은 환자 편리성 및 시장성 증가를 가능케하는 부가된 이점을 갖는다. 우수한 예는 인간 성장 호르몬(hGH)의 제형으로, 이 경우 보존된 제형의 개발로 좀 더 편리한, 다중-사용 주사 펜 제공의 상업화가 이루어졌다. hGH의 보존된 제형을 함유하는 그와 같은 펜 장치는 현재 적어도 4가지가 판매되고 있다. Norditropin(액체, Novo Nordisk), Nutropin AQ(액체, Genentech) 및 Genotropin(동결건조된--이중 챔버 카트리지, Pharmacia & Upjohn)은 페놀을 함유하는 반면 Somatrope(Eli Lilly)는 m-크레졸로 제형되었다.
보존된 복용 형태의 제형 및 개발 시 몇가지 측면들이 고려될 필요가 있다.상기 의약품에서 효과적인 보존제 농도는 반드시 최적화되어야 한다. 이를 위해서는 단백질 안정성을 손상시키지 않으면서 항-미생물 유효성을 제공하는 농도 범위에서 상기 복용 형태의 소정의 보존제를 시험할 필요가 있다.
예상되는 바와 같이, 보존제를 함유하는 액체 제형의 개발은 동결건조된 제형보다 훨씬 더 어려운 과제다. 동결건조된 생성물은 보존제 없이 동결건조되어, 사용 시점에 희석제를 함유하는 보존제로 재구성(Reconstituted)될 수 있다. 이것은 보존제가 단백질과 접촉하는 시간을 단축하여, 그와 연관된 안정성 위험을 유의미하게 최소화한다. 액체 제형의 경우, 보존제 유효성 및 안정성이 생성물의 전체 저장수명(약 18-24개월)에 걸쳐 유지되어야 한다. 중요한 언급 사항은 보존제 유효성이 활성 약물 및 모든 부형제 성분들을 함유하는 최종 제형에서 실증되어야 한다는 것이다.
ST2 항원 결합 단백질 제형은 일반적으로 무엇보다 넓은 범위의 바이오-이용가능성 및 지속성을 갖고, 특정 투여 경로 및 방법, 특정 투여 용량 및 투여 회수, 특정 질병에 대한 특정 치료법에 맞게 고안된다. 따라서 제형은 본 발명에 따라 모든 적당한 경로로, 비제한적으로 경구로, 귀로, 안과적으로, 직장으로 및 질로, 그리고 비경구 경로로, 정맥내 및 동맥내 주사, 근육내 주사 및 피하 주사로 전달되도록 고안될 수 있다.
일단 상기 약제학적 조성물이 제형되면, 용액, 서스펜션, 겔, 에멀젼, 고체, 결정, 또는 탈수된 또는 동결건조된 분말로 멸균 약병에 저장될 수 있다. 그와 같은 제형은 사용 준비된 형태 또는 투여 전에 재구성되는 형태(예를 들면, 동결건조) 둘 중 하나로 저장될 수 있다. 본 발명은 또한 단일-용량 투여 유닛을 생성하기 위한 키트를 제공한다. 본 발명의 키트는 각각 건조된 단백질이 들어있는 제 1 용기 및 수성 제형이 들어있는 제 2 용기 둘 다를 함유할 수 있다. 본 발명의 어떤 구현예에서, 단일 및 다중-챔버 사전-충전된 주사기(예를 들면, 액체 주사기 및 동결건조 주사기)를 함유하는 키트가 제공된다.
이용될 ST2 항원 결합 단백질-함유 약제학적 조성물의 치료적으로 효과적인 양은 예를 들면, 치료 상황 및 목적에 따라 달라진다. 당해분야의 숙련가는 치료를 위한 적절한 복용량 수준이 부분적으로, 전달된 분자, 그것에 대해 ST2 항원 결합 단백질이 사용되고 있다는 표시, 투여 경로 및 환자의 크기(체중, 체표면 또는 장기 크기) 및/또는 환자의 상태(연령 및 일반적인 건강)에 따라 달라진다는 점을 이해할 것이다. 어떤 구현예에서는, 임상의가 최적의 치료 효과를 얻기 위해 복용량을 적정(titer)하고 투여 경로를 수정할 수 있다. 전형적인 복용량은 그 범위가, 상기 언급된 인자에 따라, 약 0.1 μg/kg 에서 최대 약 30 mg/kg 이상일 수 있다. 특정 구현예에서, 복용량은 그 범위가 1.0 μg/kg 에서 최대 약 20 mg/kg, 임의로 10 μg/kg 에서 최대 약 10 mg/kg 또는 100 μg/kg 에서 최대 약 5 mg/kg일 수 있다.
ST2 항원 결합 단백질의 치료에 효과적인 양은 바람직하게는 질환 증상의 중증도의 감소와 질환 증상 없는 기간의 빈도 또는 지속시간의 증가를 초래하여, 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 예방을 가져온다. 약제학적 조성물은 의료 기기를 사용하여 투여될 수 있다.
약제학적 조성물의 투여를 위한 의료 기기의 예들은 미국 특허 번호 4,475,196; 4,439,196; 4,447,224; 4,447, 233; 4,486,194; 4,487,603; 4,596,556; 4,790,824; 4,941,880; 5,064,413; 5,312,335; 5,312,335; 5,383,851; 및 5,399,163에 기재되었고, 이 모두가 참조로 본원에 편입되었다.
ST2 -연관 질환 또는 장애의 진단 및 치료 방법
본 발명의 ST2 항원 결합 단백질은 생물학적 샘플에서 ST2 검출에 특히 유용하다. 어떤 구현예에서, 한 환자에게서 수득된 생물학적 샘플은 ST2 항원 결합 단백질과 접촉된다. 그러고 나서, ST2 항원 결합 단백질의 ST2 결합이 검출되어 샘플 내 ST2의 존재 또는 상대적인 양이 결정된다. 이와 같은 방법은 ST2 항원 결합 단백질로의 치료에 응할 수 있는 환자를 진단 또는 결정하는데 유용할 수 있다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 ST2 항원 결합 단백질이 자가면역 또는 염증성 장애를 진단, 검출 또는 치료하기 위해 사용된다. 자가면역 또는 염증성 장애의 치료 시, ST2 항원 결합 단백질은 파괴를 위해 면역계의 ST2-발현 세포를 겨냥할 수 있고, 및/또는 ST2와 IL-33의 상호작용을 막을 수 있다.
IL-33 매개된 신호전달과 연관된 장애는 본원에 개시된 하나 이상의 ST2 항원 결합 단백질을 이용한 치료에 잘 반응한다. 이와 같은 장애에는 비제한적으로, 염증, 자가면역 질환, 방종양성 자가면역 질환, 연골 염증, 섬유성 질환 및/또는 골 분해, 관절염, 류마티스성 관절염, 소아 관절염, 유년성 류마티스성 관절염, 소수 관절 유년성 류마티스성 관절염, 다관절 유년성 류마티스성 관절염, 전신 개시 유년성 류마티스성 관절염, 유년성 강직 척추염, 유년성 장병증성 관절염, 유년성 반응성 관절염, 유년성 라이터 증후군, SEA 증후군 (혈청반응 음성, 부착점 병증, 관절병증 증후군), 유년성 피부근염, 유년성 건선성 관절염, 유년성 경피증, 유년성 전신 홍반성 낭창, 유년성 혈관염, 소수관절 류마티스성 관절염, 다관절 류마티스성 관절염, 전신 개시 류마티스성 관절염, 강직 척추염, 장병증성 관절염, 반응성 관절염, 라이터 증후군, SEA 증후군 (혈청반응 음성, 부착점 병증, 관절병증 증후군), 피부근염, 건선성 관절염, 경피증, 전신 홍반성 낭창, 혈관염, 근육염, 다발성근염, 피부근육염, 결절성 다발동맥염, 베게너 육아종증, 동맥염, 류마티스(성) 다발성 근육통, 유육종증, 경피증, 경화증, 일차 담낭 경화증, 경화성 담관염, 쇼그렌 증후군, 건선, 판상형 건선, 방울 건선, 간찰부 건선, 농포성 건선, 홍피성 건선, 피부염, 아토피 피부염, 죽상동맥경화증, 낭창, 스틸병, 전신 홍반성 낭창 (SLE), 중증 근무력증, 염증성 장질환 (IBD), 크론병, 궤양성 대장염, 소아지방변증, 다발성경화증 (MS), 천식, COPD, 비부비동염, 용종이 있는 비부비동염, 호산구성 식도염, 호산구성 기관지염, 길랑-바레 질환, Type I 진성 당뇨병, 갑상선염(예를 들면, 그레이브스병), 애디슨병, 레이노 현상, 자가면역 간염, GVHD, 이식 거부, 신장 손상 등이 포함된다.
바람직한 구현예에서, 자가면역 또는 염증성 장애는 천식, 아토피 피부염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 폐 섬유증, 패혈증 및 외상, HIV 감염, 전신 홍반성 낭창, 염증성 장질환, 류마티스성 관절염, 경화증, 베게너 육아종증, 베체트 질환, 심혈관 질환, 비부비동염, 코 용종증 및 호산구성 기관지염이다.
어떤 구현예에서, 본 발명의 ST2 항원 결합 단백질은 암 또는 종양유발성 장애를 진단, 검출, 치료하는 데 사용된다. 암 또는 종양유발성 장애를 치료할 때, ST2 항원 결합 단백질은 파괴를 위해 ST2-발현 세포를 겨냥할 수 있고, 및/또는 ST2와 IL-33의 상호작용을 막음으로써, IL-33으로 매개된 신호전달을 감소시킬 수 있다. 예를 들면, 고-가용성 ST2 발현은 유방암 환자의 개선된 생존과 연관이 있다 (Prechtel et al, Lab Invest (2001) 81:159-165). 가용성 ST2는 결합하여 IL-33으로 매개된 신호전달을 막기 때문에, IL-33으로 매개된 신호전달을 막는 ST2 항원 결합 단백질이 유방암 환자의 개선된 생존을 촉진하는 데 유용할 것으로 생각된다. ST2 항원 결합 단백질로 진단, 검출 또는 치료될 수 있는 암 또는 종양유발성 장애는 비제한적으로, 고형 종양 일반적으로, 폐암, 난소암, 유방암, 전립선암, 자궁내막 암, 신장 암, 식도암, 췌장암, 편평상피 세포 암종, 포도막 흑색종, 자궁경부암, 결장직장암, 방광, 뇌, 췌장, 머리, 목, 간, 백혈병, 림프종 및 호지킨 질환, 다발성 골수종, 흑색종, 위암, 성상세포 암, 위 및 폐 선암종을 포함한다.
상기 항원 결합 단백질은 종양 성장, 진행 및/또는 전이를 억제하기 위해 사용될 수 있다. 이와 같은 억제는 다양한 방법을 사용하여 모니터링될 수 있다. 예를 들면, 이와 같은 억제는 종양 크기의 감소 및/또는 종양 내 대사성 활성의 감소를 야기할 수있다. 이들 파라미터는 둘 다, 예를 들면 MRI 또는 PET 스캔으로 측정될 수 있다. 억제는 종양 내 괴사 수준, 종양 세포사 및 혈관질(vascularity) 수준을 확인하기 위해 생검으로 모니터링될 수 있다. 전이 정도는 알려진 방법을 사용하여 모니터링될 수 있다.
실시예
하기의 실시예들은, 현실적이자 선지적(prophetic)인 것으로, 본 발명의 특정 구현예들 또는 특징들을 묘사하기 위한 목적으로 제공되며, 본 발명의 범위를 제한하기 위해 의도된 것은 아니다.
실시예 1: ST2 항체는 천식 동물 모형에서 유효하다
본 실시예는 ST2와 결합하고 IL-33으로 매개되는 신호전달을 억제하는 항체를 투여하는 것이 염증성 질환, 즉, 천식의 동물 모형에서 유효함을 보여준다. 중화 마우스(mouse) ST2 mAb(ST2 대리 mAb)가 외인성으로 생체내 투여된 IL-33의 활성을 억제하였다. 생쥐(mice)에 항-ST2 mAb 100 ug을 정맥내 주사로 투여하고 2시간 후, 재조합 마우스 IL-33 200 ng을 비강내로 투여하였다. 그 다음날, 기관지폐포 세척액(BALF) IL-5 농도를 ELISA로 측정하였다. 염수 대조군검사(challenge) 전 염수로 처리한 생쥐들의 BALF에서 기준선 IL-5 농도를 수득하였다. IL-33과 대조군검사된 아이소타입 대조군 Ig-처리된 생쥐에서 최대 BALF IL-5 농도를 수득하였다. 아이소타입 대조군 Ig 처리와 비교하여, ST2 mAb 처리는 BALB/c 및 C57BL/6 마우스 균주 모두의 BALF에서 IL-33으로 유도된 IL-5를 유의미하게 억제하였다(도 1).
아이소타입 대조군 Ig-처리된 생쥐들(mice)보다 유의미하게 더 적은 BALF 호산구를 갖는 ST2 항체-처리된 생쥐들의 경우, 천식의 바퀴벌레 알러지항원(CRA)-유도 모델에서 ST2 대리 mAb가 유효하였다. 실험 1일, 3일, 6일, 8일, 10일 및 13일에 CRA 100 μg으로 BALB/c 마이스를 대조군 검사하였다. 생쥐들에 실험 0일, 7일 및 13일에 항-ST2 mAb 또는 아이소타입 대조군 Ig 중 하나를 250 μg 주입하였고, 실험 13일에는 최종 비강내 CRA 대조군검사 전 항체 주사를 실시하였다. 실험 14일에, 생쥐들을 마취시키고 폐 세척을 실시하였다. BALF 세포 집단을 열거하였고, 항-ST2 mAb로 처리하자 BALF 세포의 총수가 유의미하게 적게 존재하였고, 유의미하게 영향을 받은 세포 집단을 포함하는 호산구가 존재하였다(도 2).
실시예 2: 제노마우스 ® 플랫폼( Xenomouse ® Platform )을 사용한 항- ST2 항체의 생산
인간 ST2에 대항하도록 지시된 완전 인간 항체의 생성을 제노마우스® 기술 (미국 특허 번호 6,114,598; 6,162,963; 6,833,268; 7,049,426; 7,064,244, 이들은 본원에 참조로 그 전체가 편입; Green et al., 1994, Nature Genetics 7:13-21; Mendez et al., 1997, Nature Genetics 15:146-156; Green and Jakobovitis, 1998, J. Ex. Med. 188:483-495, Kellermann and Green, 2002, Current Opinion in Biotechnology, 13:593-597)을 사용하여 수행하였다.
인간 항체 Fc 도메인에 융합된 인간 ST2의 세포외 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 또는 인간 IL-33과 착물를 형성한 인간 ST2-Fc 융합 단백질 중 하나로 XMG2K, XMG4K 및 XMG4KL 제노마우스® 동물의 면역화를 수행하였다. 미국 특허 출원 시리즈 번호 08/759,620(1996년 12월 3일 출원) 및 국제 특허 출원 번호 WO 98/24893(1998년 6월 11일 공개) 및 WO 00/76310(2000년 12월 21) (이들의 개시내용은 본원에 참조로 편입되었다)에 개시된 방법에 따라 제노마우스® 동물의 초기 면역화를 위해 면역원의 적당한 양(즉, 가용성 ST2의 10 μg/마우스(mouse))을 사용하였다. 초기 면역화 이후, 면역원(가용성 ST2 또는 ST2/IL33 착물 중 하나의 5 μg/마우스)의 차후 부스트(boost) 면역화를 계획대로 그리고 상기 마우스에서 항-ST2 항체의 적당한 역가(titer)를 유도하는 데 필요한 지속시간 동안 실행하였다. 적당한 방법, 예를 들면, ELISA 또는 형광 활성화된 세포 분류법(FACs)으로 역가를 결정하였다.
적당한 역가를 나타내는 동물을 확인하고, 필요한 경우, 종양배출(draining) 림프절에서 수득된 림프구를 집단별로 풀링하였다. 적당한 배지(예를 들면, 둘베코 변형 이글 배지; DMEM; Invitrogen, Carlsbad, CA에서 구입 가능)에서 연삭으로 림프 조직에서 림프구를 분리하여 상기 조직으로부터 세포를 방출시키고, DMEM에 현탁시켰다. 적당한 방법을 사용하여 B 세포를 선택해 및/또는 확장시키고, 당해기술에 알려진 기술을 사용하여, 적당한 융합 파트너, 예를 들면, 비분비 골수종 P3X63Ag8.653 세포(American Type Culture Collection CRL 1580; Kearney et al, J. Immunol. 123, 1979, 1548-1550)와 융합시켰다.
한 가지 융합 방법에서, 림프구를 1:4의 비율로 융합 파트너 세포와 혼합하였다. 상기 세포 혼합물을 4분 동안 400 x g으로 원심분리함으로써 천천히 펠렛화하고, 상청액은 경사분리한 후, 세포 혼합물을 천천히 혼합하였다(예를 들면, 1 mL 피펫을 사용). PEG/DMSO (폴리에틸렌 글리콜/디메틸 설폭사이드; Sigma-Aldrich, St. Louis MO에서 구입가능; 림프구 백만개당 1 mL)로 융합을 유도하였다. 1분 동안 천천히 교반하며 PEG/DMSO를 서서히 부가한 후, 1분 동안 혼합하였다. 천천히 교반하면서 IDMEM(글루타민 없는 DMEM; B 세포 백만개당 2 mL)을 2 분 동안 부가하고, 그러고 나서, 추가의 IDMEM (B-세포 백만개당 8 mL )을 3 분 동안 부가하였다.
융합된 세포를 천천히 펠렛화하였고(400 x g, 6분), B-세포 백만개당 선택 배지(아자세린 및 하이포잔틴 [HA] 및 필요에 따라 기타 보충 물질을 함유하는 DMEM) 20 mL에 재현탁하였다. 세포를 37°C에서 20~30 분 동안 인큐베이팅한 후, 선택 배지 200 mL에 재현탁하고 96 웰(well) 플레이팅 이전에 T175 플라스크에서 3-4일 동안 배양하였다.
표준 기술을 사용하여 세포를 96-웰(well) 플레이트에 분배하여 수득한 콜로니의 클론형성능(clonality)을 최대화하였다. 며칠 동안 배양한 후, 상청액을 수집하여 선별 검정을 수행하였다. ST2-Fc/IL33 착물로 면역화된 생쥐(mice)에서 산출된 하이브리도마 상청액을 96-웰 폴리스티렌 ELISA 플레이트를 사용하여 수행된 ELISA-기반 검정으로 스크리닝하였고, 여기서 96-웰 플레이트는 인간 IL-33과 착물를 형성한 ST2-Flag/his의 0.5ug/ mL로 4°C에서 밤새 수동적으로(passively) 코팅하였다. ST-2 특이적 결합을 결정하기 위해, 96-웰 폴리스티렌 플레이트(네우트라비딘(neutravidin) 10ug/ mL로 4°C에서 밤새 수동 코팅함)를 사용하여, 2차 ELISA 스크린(screen)을 수행하였다. 그러고 나서, 플레이트를 세정하고 바이오티닐화된 인간 IL33을 0.5ug/ mL 충전(load)하였다. 상기 ELISA 스크린(screen)은, 항-ST2 특이적 바인더(binder) 1200개에 걸쳐 확인(identified)하였다.
전체 길이 인간 ST2로 일시적으로 형질 감염된 재조합 HEK293T 세포에 대항하여 스크리닝하고 모의-형질감염된 HEK293T 세포에 대항하여 역-스크리닝(counter-screening)함으로써, 가용성 ST2-Fc로 면역화된 생쥐(mice)에서 산출된 하이브리도마 상청액을 형광 마이크로용적 검정 기술(FMAT)로 ST2 항원 특이적 항체에 대해 스크리닝하였다. 간단히 말해서, 세포를 6,000개 ST2 양성 세포/웰 및 14,000개 모의 형질감염된 ST2 음성 세포/웰의 밀도로 40ul/웰의 용적으로 384-웰 FMAT 플레이트에 시딩(seeded)하였다. 그러고 나서, 하이브리도마 상청액을 부가하여 결합하도록 1시간 동안 실온에서 방치한 후, 세척하고 항-인간 Fc-Cy5 2차 항체를 사용하여 2차 검출을 실시하였다. 이와 같은 FMAT 스크린(screen)은, ST2의 세포외 도메인으로 면역화된 생쥐(mice)에서 산출된 하이브리도마에서 항-ST2 특이적 바인더(binder) 2200개 이상에 걸쳐 확인(identified)하였다.
이와 같이 3400개 항-ST2 특이적 하이브리도마 상청액의 조합된 패널은 더 나아가 인터페론-γ 사이토카인 방출 검정을 사용하여 ST2 신호전달을 기능성-중성화(functional antagonize)하는 능력의 특징을 확인하였다. 간단히 말해, 정제된 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMNCs) 또는 정제된 인간 NK 세포 중 하나를 96웰 조직 배양판에 시딩하여, 인간 IL-33 및 IL-12으로 자극함으로써, 상청액 내 인터페론-감마의 방출을 유도하였다. 상기 상청액 내의 인터페론-감마 수준을 정량화하여, 직접적으로 Il-33/ST2 의존 신호전달과 연관시켰다. 이와 같은 생물검정을 사용하여, ST2 신호전달 경로의 봉쇄를 통한 인터페론-감마 방출 저지 능력에 대해 하이브리도마 샘플을 시험하였다. 이와 같은 스크니링으로, ST2-Fc 면역화에서 산출되어 인터페론-감마 방출을 80% 이상 억제하는 578개 하이브리도마 상청액을 확인하였다. 또한, ST2Fc/IL-33 착물 면역화에서 산출되어 인터페론-감마 방출을 70% 이상 억제하는 505개 하이브리도마 상청액을 확인하였다.
이와 같은 1083개 하이브리도마 상청액의 패널은 마우스 및 사이노몰구스 원숭이 ST2에 대한 교차-반응 결합의 특징을 확인하였고, 제한된 항원 ELISA로 상대 친화도 랭킹의 특징을, ELISA로 생화학적 수용체/리간드 블록킹의 특징을, 그리고 세포주를 사용하는 FAC로 내인성 결합의 특징을 확인하였다. 이들 2차 검정에서 산출된 데이터를 사용하여 상기의 큰 패널을 서브-클로닝, 규모확장 및 정제로 진전된 40개 하이브리도마 세포주 2세트로 확장하였다.
실시예 3: K D 결정( Determinations )
본 실시예에서, ST2-결합 항체의 친화성을 결정하였다. GLC 센서 칩(Bio-Rad)이 구비된 프로테온 XPR-36 광학적 바이오센서를 사용하여, 표면 플라즈몬 공명 평가를 실시하였다. 25 ℃에서 HBS-EP+ (1X) 완충계(10 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 3.0 mM EDTA, 0.05% 계면활성제 P20, GE Heathcare)로 바이오센서 분석을 수행하였다. 모든 시약을 주사 전에 8 ℃로 유지시켰다.
염소 항-인간 IgG(Fc 단편 특이적, Jackson ImmunoResearch)를 레인(lane) 1-6(~4000 RU)에 표준 아민 커플링을 통해 수직 방향으로 센서 표면에 고정시키고, 그런 다음 에탄올아민으로 차단시켰다. 레인 1-5의 수직 방향에서 항체를 포획하였다(~40-100 RU). 수직 레인 6를 비워두고, 참조 목적으로 사용하였다. 항체 15개로 이루어진 그룹(5개씩 3세트)에서 데이터를 수집하였다.
ST2 시약(인간 또는 cyno)을 25 nM의 농도로 작동 완충제에 준비한 후, 3배로 희석하여 농도를 309 pM으로 만들었다. 수평 방향을 따라 단일 주사함으로써 각 ST2 분자의 완전한 농도 시리즈를 달성하였고, 완충제를 사용하여 완전한 한 줄 여섯 개 샘플을 완성하고 반응 데이터의 이중-참조를 위해 인-라인(in-line) 블랭크를 제공하였다. 100 uL/분의 유속에서 회합(association)(3분) 속도 및 해리(30분) 속도를 모니터링하였다.
10 mM 글리신(pH 1.5, 30 uL)으로 유속 100 uL/분에서 표면을 재생하였다.
데이터를 기준선 수정(baseline corrected)하고, 수확하고 정렬하여, 참조 공제(reference subtracted)(interspot)한 다음, 프로테온 매니저(ProteOn Manager) (버전 2.1.2.05)을 사용하여 1:1 결합 모델에 맞추었다. 그 결과를 표 4에 나타내었다.
표 4
Figure 112014109166417-pct00004
약간 변형된 플라즈몬 공명 프로토콜을 사용하여 추가의 항체의 친화성을 결정하였다. 25°C에서 CM5 센서 칩을 구비한 Biacore 3000 기기(Biacore International AB, Uppsala, Sweden)를 사용하여, 항체 Ab1, Ab2 Ab3, 및 Ab4에 대한 표면 플라즈몬 공명 평가를 수행하였다. HBS-EP(10 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% 계면활성제 P20, GE Heathcare)를 작동 완충제로 쓰는 표준 아민-커플링 화학을 사용하여, CM4 칩 상의 유동 전지 두개에 항-Fcγ 특이적 포획 항체를 공유적으로 고정시켰다. 간단히 말해서, 각 유동 전지를 0.1 M NHS 및 0.4 M EDC로 이루어진 1:1 (v/v) 혼합물로 활성화시켰다. 10mM 나트륨 아세테이트(pH 5.0) 내 30 ug/ml인 어피니퓨어 염소 항-인간 IgG, Fcγ 단편 특이적 항체 (Jackson ImmunoResearch Inc. West Grove, PA)를 3,000 RU의 표적 수준으로 유동 전지 2개 상에 고정시켰다. 1 M 에탄올아민의 주사로 잔류 반응성 표면을 탈활성화시켰다. 그러고 나서, 남아 있는 모든 단계 동안, 작동 완충제를 HBS-EP + 0.1 mg/ml BSA로 변경하였다.
모든 항체를 3중으로 작동 완충제에 준비하고 3 배율로 희석하여 주입함으로써, 시험 유동 전지에 10 μl/분의 속도로 3분 주사하여 시험 유동 전지 표면 상에서 포획한 항체의 대략 75-90개의 반응 유닛을 수득하였다. 대조군 유동 전지 표면 상에서는 항체를 포획하지 못했다. 그런 다음, 다양한 농도(200 nM - 0.0914 nM)의 인간 또는 cyno ST2를 완충제 블랭크와 함께 상기 유동 전지 두 개 위에 흘려보냈다. 50 ul/분의 유속을 사용하였고, 2분 회합 단계를 거쳐 4분 해리 단계를 거쳤다. 각각의 사이클 후, 10 mM 글리신(pH 1.5) 50 uL의 주사로 상기 표면을 재생하였다. 그러고 나서, 시험 유동 전지 상에서 신선한 항체를 포획하여, 다음 사이클을 준비하였다. 별도의 오랜 해리 실험(60분)을 200 nM의 농도에서 3차례 수행하였다.
대조군 표면 반응을 제외시켜 벌크 굴절률 변화를 제거한 후, 평균 완충제 블랭크 반응을 제외시켜 실험 유동 전지에서 체계적인 인공물을 제거함으로써 데이터를 이중참조하였다. ST2 데이터를 가공하고 BIA 평가 소프트웨어 v 4.1(Biacore International AB, Uppsala, Sweden)에서 일부 Rmax로. 1:1 상호작용 모델에 전체적으로 맞추었다. 회합(ka) 및 해리(kd) 속도 상수를 결정하여 이를 사용함으로써 해리 평형 상수(KD)를 계산하였다. Ab1, Ab2, Ab3 및 Ab4에 대한 해리 속도 상수 및 해리 평형 상수를 표 5에 요약하였다.
표 5
Figure 112014109166417-pct00005

실시예 4: 항체의 pH -민감성 결합
낮은 pH에서 감소된 친화성으로 표적물에 결합하는 치료적 항체는 PK 특성을 증대하여 항체가 빈번하게 또는 더 적은 용량으로 전달되게 할 수 있을 것이다(Nat Biotechnol. 2010 28(11):1203-7 T. Igawa et al Antibody recycling by engineered pH-dependent antigen binding improves the duration of antigen neutralization). 이것은 낮은 pH의 리조소옴에서 항체에 의한 표적물 방출, 그 다음 차후의 표적물 분해 및 항체 재순환 때문이다.
항체 Ab1, Ab2, Ab3 및 Ab4의 pH 민감성 결합의 바이오센서 분석을 Biacore 4000에서 실행하였다. 환경설정은 실시예 3과 유사하였고, 이들 항체의 KD 측정을 수행하였으며, 단, 데이터는 단일 농도 2.46 nM의 α-ST2 항체의 이중 주사용으로 맞추었다. pH 7.4에서의 회합 (5분) 속도 및 pH 5.5 및 7.4에서의 해리 (10분) 속도를 30 uL/분의 유속에서 모니터링하였다. 참조가 제외된 데이터를 스크러버에서 1:1 모델에 맞추었다. 몇 개의 항체들은 표 6에 나타낸 바와 같이, 낮은 pH에서 극적으로 더 빠른 방출 속도(off rates)를 나타냈다.
표 6
Figure 112014109166417-pct00006

실시예 5: 항체 교차-경쟁
에피토프의 특징을 밝히는 공통의 방법은 경쟁 실험을 통하는 것이다. 서로 경쟁하는 항체들은 표적의 동일 부위에 결합하는 것으로 간주될 수 있다. 본 실시예는 ST2에 결합할 때의 경쟁을 결정하는 방법 및, 본원에 기재된 수많은 항체에 적용되었을 때, 그 방법의 결과를 기술한다.
비닝(Binning) 실험을 수많은 방식으로 수행할 수 있고, 이용된 방법은 검정 결과에 영향을 미칠 수 있다. 이들 방법들의 공통점은 ST2가 전형적으로 하나의 참조 항체와 결합되어 또 다른 항체에 의해 탐색된다는 점이다. 참조 항체가 탐색 항체의 결합을 막는 경우, 상기 항체들은 같은 빈(bin)에 있는 것으로 간주된다. 항체가 이용되는 순서가 중요하다. 항체 A가 참조 항체로 이용되어 항체 B의 결합을 막는다고 해서, 그 반대가 항상 성립하지는 않는다: 항체 B가 참조 항체로 사용된다고 해서 반드시 항체 A의 결합을 막는 것은 아니다. 여기에는 수많은 인자들이 관여한다: 항체의 결합이 표적에 형태적 변화를 야기하여 제 2 항체의 결합을 막거나, 또는 서로 중첩되지만 완전히 차단하지는 않는 에피토프는 제 2 항체가 표적과 충분한 고-친화성 상호작용을 하여 결합을 가능하게 할 수 있다. 일반적으로, 어떤 방향으로든 경쟁이 관찰되는 경우, 상기 항체들은 같은 빈에 있는 것으로 간주되고, 두 항체가 서로를 차단할 경우, 에피토프가 좀 더 완전하게 중첩될 가능성이 크다.
본 실시예의 경우, Jia, et al (J. Immunological Methods, 288 (2004) 91-98)이 기술한 다중화 비닝 방법의 변형을 사용하였다. 가용성 ST2-FLAG His를 사용하였다. 스트렙타비딘-코팅된 루미넥스 비드(Luminex, #L100-L1XX-01, XX는 비드 코드를 명시)의 각 비드 코드를 실온의 어둠 속에서 1 시간 동안, 6pg/비드 바이오티닐화된 1가 마우스-항-인간 IgG 포획 항체(BD Pharmingen, #555785) 100ul에서 인큐베이팅한 후, PBSA, 포스페이트 완충된 염수 (PBS) 및 1% 소 혈청 알부민 (BSA)으로 3회 세정하였다. 각 비드 코드를 별도로 1:10 희석 항-ST2 항체 (코팅 항체) 100 ul로 1 시간 동안 인큐베이팅한 후, 세정하였다. 비드를 풀링한 후, 96-웰 필터 플레이트(Millipore, #MSBVN1250)에 배분하였다. 2ug/ml ST2 100ul로 웰의 절반을 채우고, 완충제로 나머지 반을 채워 1 시간 동안 인큐베이팅한 후 세정하였다. 1:10 희석 항-ST2 항체 (검출 Ab) 100 ul를 한 웰에 ST2와 함께 부가하고 다른 웰에는 ST2 없이 부가하여 1시간 동안 인큐베이팅한 후 세정하였다. 항체 없는 조건(블랭크(blank))뿐만 아니라 무관한(irrelevant) 인간-IgG (Jackson, #009-000-003)도 음성 대조군으로 가동하였다. 각 웰에 PE-접합된 1가 마우스-항-인간 IgG(BD Pharmingen, #555787) 20ul를 부가하고 1시간 동안 인큐베이팅한 후, 세정하였다. 비드를 75ul PBSA에 재현탁하고, BioPlex 기기(BioRad)에서 적어도 100 이벤트/비드 코드를 수집하였다.
ST2 없는 항체 쌍의 중앙 형광 세기 (MFI)를 ST2를 함유하는 해당 반응의 신호에서 제외시켰다. 동시에 결합된 것으로 간주되는, 그래서 서로 다른 빈에 있다고 간주되는 항체 쌍의 경우, 반응값은 두 가지 조건을 충족시켜야 했다: 1) 상기 반응값은 동일한 항체, 무관한 항체 또는 블랭크와 쌍을 이룬 코팅 항체보다 2배 더 커야 하고, 그래서 어떤 경우보다 가장 높은 값이어야 하며, 2) 상기 반응값은 무관한 항체 또는 블랭크로 코팅된 비드와 함께 존재하는 검출 항체의 신호보다 커야 한다. 표 7에 나타낸 바와 같이, 최소 3개의 빈을 찾아냈다.
표 7
Figure 112014109166417-pct00007

실시예 6: IL -33-차단 검정
2회 알파스크린을 사용하여 ST2 항체의 작용 기전을 탐사하였다. 이들을 조합한 검정을 사용하여 항체들이 IL-33과 ST2의 회합을 억제할 수 있는지, 또는 그 반대로 항체들이 IL-33과 ST2의 회합은 허용하는 반면 특이적으로 공동-수용체인 ST2 및 AcP의 회합을 차단할 수 있는지 여부를 결정하였다. 알파스크린(AlphaScreen)은 증폭된 발광 부근 균질한 검정 스크린(Amplified Luminescent Proximity Homogenous Assay screen)의 머리글자이다.
제 1 스크린에서, IL-33 및 ST2의 회합을 차단하는 능력에 대해 항체를 평가하였다. 이번 검정에서 바이오티닐화된 인간 IL-33(스트렙타비딘 공여체 비드와 결합됨)와 6x히스티딘 태그된 인간 ST2(Ni-킬레이트 수용체 비드와 결합됨)의 회합을 차단하는 항-ST2 항체의 능력을 측정하였다. 96 웰 절반(half area) 플레이트(Perkin Elmer)에 40ul의 반응물을 사용하여 IL-33/ST2 알파스크린을 수행하였다. 2회 알파스크린에 사용한 검정 완충제는 40mM HEPES (pH=7.4), 1mM CaCl2, 0.1% BSA, 0.05% Tween-20 및 100mM NaCl을 함유하였다. 각 검정 웰은 0.3nM 바이오티닐화된 인간 IL-33, 0.3nM 인간 ST2-FH (FH는 FLAG 및 6x히스티딘 태그를 가리킴), 10ug/ml 스트렙타비딘 코팅된 공여체 비드(Perkin Elmer, Waltham,MA), 10ug/ml Ni-킬레이트 코팅된 수용체 비드(Perkin Elmer) 및 12.5ug/ml 항-ST2 Ab를 함유하였다. 모든 검정 성분을 부가한 후, 각 플레이트를 밤새 실온의 어둠 속에서 인큐베이팅하였다. 그 다음날, 상기 플레이트를 2103 Envision 다중표지 측정장치(Perkin Elmer)로 판독하였다. 공여체 비드의 680nm 레이저 여기를 사용하여, 비드가 결합된 단백질들의 상호작용 때문(570nm에서 검출되는 빛을 방출한다)에 서로 가까이 있는 수용체 비드에서 발광/형광 캐스케이드를 개시할 수 있는 반응성 산소를 생성하였다.
2차 검정에서, ST2와 공동 수용체 AcP와의 IL-33 매개된 회합을 억제하는 능력에 대해 항체를 평가하였다. 이번 검정에서 바이오티닐화된 인간 ST2-Fc(스트렙타비딘 공여체 비드와 결합됨)와 6x히스티딘 태그된 인간 AcP(Ni-킬레이트 수용체 비드와 결합됨)의 IL-33 매개된 회합을 항-ST2 항체가 차단하는 능력을 측정하였다. 384 웰 옵티플레이트(optiplate) (Perkin Elmer)에서 8ul 반응물로 ST2/AcP 알파스크린을 수행하였다. 각 검정 웰은 5nM 인간 IL-33, 5nM 바이오티닐화된 인간 ST2-Fc, 5nM 인간 AcP-FH, 10ug/ml 스트렙타비딘 코팅된 공여체 비드, 10ug/ml Ni-킬레이트 코팅된 수용체 비드 및 12.5ug/ml의 항-ST2 Ab를 함유하였다. 모든 검정 성분의 부가 후, 상기 플레이트를 밤새 실온의 어둠 속에서 인큐베이팅하였다. 그 다음날, 제 1 검정에서 기술한 바와 동일한 파라미터를 사용하여, 2103 Envision 다중표지 판독기(Perkin Elmer)에서 플레이트를 판독하였다.
2회 알파스크린의 결과를 하기 표 8에 나타내었다. 검정 웰에 항체가 포함되지 않았을 때의 검정에서의 신호와 비교하여, 12.5ug/ml의 농도로 주어진 항체를 사용하여 알파스크린에서 신호의 억제를 백분율로 나타내어, 각 항체의 억제능을 표시하였다. 일부 항체는 ST2/IL-33/AcP 상호작용을 억제하는 것보다 좀 더 완전하게 ST2와 IL-33의 상호작용을 억제하였고, 일부 항체는 ST2와 IL-33 상호작용보다 더 완전하게 ST2/IL-33/AcP 상호작용을 억제하였다. 모든 항체는 ST2와 IL-33의 상호작용을 적어도 50% 억제하였다.
표 8
Figure 112014109166417-pct00008

실시예 7: 시험관내 인간 IL -33 생물검정( Bioassay )
인간 IL-33 및 인간 IL-2로 자극된 다양한 공여체에서 수득된 정제된 CD4+ T 세포를 활용하여, 인간 생물검정에서 예시적인 ST2 인간 mAb를 테스트하였다. 상기 검정의 절차는 하기와 같았다. 96 웰 둥근 하부 플레이트에 250,000 세포/웰로 용적 60 ul의 세포를 시딩하였다. 전-인큐베이팅(preincubation) 후에, huIL-2 + huIL-33의 4x 혼합물을 각 웰에 30 ul씩 부가하였다. 96-웰 둥근 하부 플레이트의 총 용적은 120 ul였다. 20 ug/ml로 항체를 시작하고, 1:3으로 희석시켜 10 포인트 곡선을 생성하였다. 30 ul의 4x 혼합물을 제조하였다. Abs와 세포의 전-인큐베이팅(preincubation) 후에, huIL-2 + huIL-33 4x 혼합물을 각 웰에 30 ul씩 부가하였다(37°C, 5% CO2, 48 시간). 상청액을 수확하였다. huIL-5 ELISA로 IL-5 억제를 분석하였다.
도 3은 다양한 공여체에서 수득한 CD4+ T 세포로부터 인간 IL-33-유도된 IL-5 생산의 억제에서의 ST2 mAbs를 나타낸다. 상기 ( - ) 선은 억제 없이 인간 IL-2와 조합된 인간 IL-33의 양성 대조군 값을 나타낸다. 상기 ( ‥‥ ) 선은 인간 IL-2의 양성 대조군 값을 나타낸다. 상기 ( - - ) 선은 중간 대조군 값을 나타낸다. 인간 CD4+ T 세포를 항-ST2 mAbs와 30분 동안 사전인큐베이팅하고, 그러고 나서, 48 시간 동안 인간 IL-33 (4 ng/ml) 및 인간 IL-2(10 ng/ml)로 자극하였다.도 3은, CD4+ T 세포에서 IL-5 생산에 의해 결정되는 바와 같이, ST2 항체가 인간 IL-33-유도된 ST2 활성화를 억제할 수 있음을 보여준다. ST2 항체는 대략 <100 nM의 IC50으로 CD4+ T 세포로부터의 IL-33 유도된 IL-5 생산을 중화할 수 있었다. 표 9는 대표적인 IC50 값을 보여준다.
표 9
Figure 112014109166417-pct00009

실시예 8: 사이노몰구스 원숭이 CD4 + T-세포 IFN γ 방출 검정
ISOLYMPH (Gallard-Schlesinger Industries, Plainview, NY) 구배 원심분리에 의해 산 시트레이트 덱스트로오스(ACD) 처리한 정상적인 공여체 말초 혈액으로부터 사이노몰구스 원숭이 말초 혈액 모노nu투명 세포(PBMC)를 농축시켰다. Miltenyi Biotec의 사이노몰구스 원숭이 CD4+ T 세포 단리 키트를 사용하여, 사이노몰구스 원숭이 CD4+ T 세포의 차후 단리를 수행하였다. 단리된 cyno CD4+ T 세포 (96 웰 플레이트에 2x105 세포/웰)를 다양한 농도의 정제된 모노클로날 항체와 함께 실온에서 30분 동안 인큐베이팅한 후, 84시간 동안 IL-33 (10 ng/mL), IL-2 (10 ng/mL) 및 IL-12p70 (50ng/mL)으로 자극하였다. 그러고 나서, 수득한 무세포 사이노몰구스 원숭이 CD4+ T 세포 배양 상청액을 ELISA로 사이노몰구스 원숭이 IFNγ의 존재에 대해 분석하였다(예시 데이터는 표 10에 제공). 3개의 별도 공여체로부터의 사이노몰구스 원숭이 CD4+ T 세포 IFNγ 방출 검정에서 정제된 모노클로날 항체의 효능을 결정하였다.
표 10
Figure 112014109166417-pct00010

실시예 9: 인간 호산구 IL -8 방출 검정
ISOLYMPH (Gallard-Schlesinger Industries, Plainview, NY) 구배 원심분리에 의해 헤파린 처리된, 정상적인 공여체 말초 혈액으로부터 인간 적혈구 및 과립구를 농축하였다. ACK lysing 완충제(Gibco, Carlsbad, CA)를 사용하여 적혈구를 제거하였다. Miltenyi Biotec의 호산구 단리 키트를 사용하여 호산구의 추후 단리를 수행하였다. 단리된 호산구(96 웰 플레이트에 2x105 세포/웰)를 몇 개의 희석된 농도의 비-클론 또는 클론 상청액, 또는 다양한 농도의 정제된 모노클로날 항체화 함께 실온에서 30분 동안 인큐베이팅한 후, IL-33 (2 ng/mL) 및 IL-3 (100 ng/mL)으로 3일 동안 자극하였다. 수득한 무세포 호산구 배양 상청액을 ELISA로 IL-8의 존재에 대해 분석하였다. 실시예 데이터를 표 11에 나타내었다. 3개의 별도 공여체에서의 호산구 IL-8 방출 검정에서 정제된 모노클로날 항체의 효능을 결정하였다.
표 11
Figure 112014109166417-pct00011

실시예 10: 상업적으로 이용가능한 항체와 비교한 항- ST2 항체의 효능
인간 NK 세포 검정에서 인간 IL-33의 용량 반응
일차 CD56-양성 인간 NK 세포 (5 x 10e4 세포)를 인간 IL-12 (1 ng/mL) 및 도 4에 나타낸 바와 같이, 인간 IL-33(양을 점차 증가)으로 처리하였다. 22 시간 후, 무세포 상청액을 수집한 후, 상업적 검정(R&D Systems)을 사용하여 IFN-γ 농도를 측정하였다. ST2 항체 억제를 위한 자극 용량으로 10 ng/mL의 IL-33을 사용하였다.
IL -33 활성의 항체 억제
인간 NK 세포를 상기와 같이 자극하였다. IL-33 및 IL-12 부가 30분 전에, 도 5에 명시된 농도로, ST2 항체를 세포에 부가하였다. IL-33을 처리하고 22시간 후, 무세포 상청액을 수집하고, 상업적 검정(R&D Systems)을 사용하여 IFN-γ 농도를 측정하였다. 클론 명칭은 상업적으로 이용가능한 항체에 대해 명시하였다. Ab2만이 IL-33-의존적 IFN-γ 반응을 완전히 억제하였고, 이것은 상업적으로 이용가능한 다른 모든 huST2 항체보다 유의미하게 더 효능이 있었다. 각 항체에 상응하는 IC50 값을 표 12에 나타내었다.
표 12
Figure 112014109166417-pct00012

실시예 11: ST2 의 알라닌/아르기닌 스캐닝 돌연변이유발
본 실시예는 ST2의 돌연변이유발이 표적과 결합하는 그것의 능력에 미치는 영향을 기반으로 ST2 항체의 특징을 밝힌다. 이전의 결합 데이터는 본 실시예에서 ST2 스캐닝 돌연변이유발에 의해 분석한 패널의 항체들의 경우, ST2 도메인 1 및 2가 주로 항체 결합에 책임이 있음을 보여주었다. 이와 같이, 돌연변이 부위의 설계에서 전체 길이 ST2의 문맥에 있어 ST2의 도메인 1 및 2 (D1D2)만을 구조적으로 고려하였다.
ST2 및 IL-33 착물 모델 좌표를 'Lingel et al., Structure (London, England: 1993). Elsevier Ltd 17,1398-410'에서 수득하였다. 분자 작동 환경(Molecular Operating Environment (MOE), 2011.10; Chemical Computing Group Inc., 1010 Sherbooke St. West, Suite #910, Montreal, QC, Canada, H3A 2R7, 2011.)에서 ST2의 잔기 측쇄 당 용매 접근성을 계산하였다. 그러고 나서, 우선 적어도 10 Å2의 측쇄 노출을 갖는 모든 D1D2 잔기 또는 적어도 10 Å2의 총 노출을 갖는 글리신 잔기를 선택함으로써, 돌연변이유발을 위한 D1D2 표면 잔기를 선택하는 데 상기의 용매 접근성 값을 사용하였다. 프롤린 잔기와 마찬가지로, 양성 Phi 각을 갖는 글리신 잔기를 제거하였는데, 그 이유는 그와 같은 위치에서의 돌연변이는 국소적인 단백질 구조를 왜곡시킬 가능성이 더 높기 때문이다. 상기 선택에서 시스테인 잔기 또한 제거하여 디설파이드 연결을 유지하였다. 시각적 검사 후 잔기 A82를 제거하였다. 이와 같은 방법으로, 돌연변이유발을 위한 140개 잔기의 목록을 생성하였다. 아르기닌 및 라이신 잔기를 제외한 모든 잔기를 아르기닌으로 돌연변이시켰다(아르기닌과 라이신은 알라닌으로 돌연변이시켰다).
모(parental) His-Avi-태그된 ST2 세포외 도메인(ECD)의 모든 돌연변이체를, 24-웰 플레이트에 일시적으로 형질감염된 293-6E 서스펜션 세포(NRCC)에서, pTT5 벡터를 사용하여, 발현시켰다. pTT5 벡터에서 BiR A의 공동-형질감염으로 생체내 바이오티닐화를 달성하였다. 상청액을 PBS로 투석하여 과잉 바이오틴을 제거하였다.
BioPlex 결합 검정을 사용하여 항-ST2 항체 및, ST2의 점 돌연변이(point mutations)의 결합을 측정하였다. 바이오티닐화된 돌연변이체를 스트렙타비딘-코팅된 비드(Luminex, #L100-L1XX-01, XX는 비드 코드를 명시함)의 80 비드 코드에 결합시켰다. 80 비드 코드는 70 돌연변이체 두 세트(총 140)의 다중화(multiplexing)를 가능하게 하였다. 각 세트에는 모 대조군 6개, 무관한 단백질 대조군 3개 및 블랭크 1개가 포함되었다. 돌연변이체 단백질에 결합된 항체를 모 단백질에 결합된 항체와 비교하였다.
1:7로 희석한 ST2 돌연변이체 100ul, 모 단백질 및 대조군 또는 비드에 결합된 무-단백질을 PBS +1% BSA로 5회 세정하고, 풀링하여 96-웰 필터 플레이트(Millipore)에 분주(aliquote)한 다음, 다시 세정하였다. 3-배 희석한 항-ST2 항체 100ul를 트리플리케이트 웰에 부가하여 실온에서 1 시간 동안 인큐베이팅한 다음 세정하였다. 1:500으로 희석한 PE-접합된 항-인간 IgG Fc(Jackson, #109-116-170) 100ul을 각 웰에 부가하여, 0.5시간 동안 인큐베이팅하고 세정하였다. 비드를 75 uL에 재현탁하고, 적어도 3분 동안 교반한 후, BioPlex에서 판독하였다.
결합 검정을 작동하기 전에, 검증 실험을 수행하여 “비드 영역” 대 “비드 영역” (B-B) 가변성을 평가하였다. 검증 실험에서, 모든 비드를 동일한 야생형 대조군 단백질과 접합시켰다. 따라서, 비드 영역들 사이의 차이는 순전히 B-B 변량 때문이고, 야생형 및 돌연변이체 단백질 사이의 차이에 의해 복잡해지지 않았다. 상이한 웰들의 복제물 12개로 항체의 적정을 실행하였다.
이와 같은 통계적 분석의 목적은 결합 곡선의 추정된 EC50의 B-B 가변성을 추정하는 것이었다. 추정된 B-B 표준 편차(SD)를 사용하여 곡선 비교 실험 동안 야생형 및 돌연변이체 단백질의 EC50 신뢰 구간을 구축하였다.
각 비드 영역에 대한 결합 데이터에 4-파라미터 기호논리 모델을 맞추었다. 곡선 품질관리(QC) 결과 및 곡선의 최고(max), 최저(min), 힐슬로프(Hillslope)(slope) 및 EC50의 자연 로그(xmid)에 대한 파라미터 추정치를 포함하는 수득한 “sumout.xls” 파일을 상기 분석에 대한 미가공 데이터로 사용하였다. SAS PROC MIXED 절차를 사용하여 혼합된 효과 모델을 맞추어, 각 파라미터에 대한 B-B 가변성을 추정하였다.“우수한(good)” QC 상태의 곡선만 상기 분석에 포함시켰다. 최종 혼합된 효과 모델은 무작위 효과로서 잔기들만(즉 개별적인 비드 영역)을 포함하였다. 또한 혼합된 효과 모델로 각 파라미터에 대한 최소 제곱 평균(LS-mean)을 추정하였다. B-B 변량의 제곱근을 구하여 B-B SD를 계산하였다. 또한 최소 제곱 평균 + 2SD 및 최소 제곱 평균 - 2SD 사이의 배율 변화(모집단의 대략 상부 및 하부 97.5 백분위수를 나타냄)를 계산하였다.
WT 대조군과 비교하여 상당한 반응을 생성하지 않는 돌연변이체를 확인하기 위해, 각 항체에 대해, 최대값(MFI)이 WT 대조군의 최대값(MFI)의 30% 미만인 돌연변이체를 확인하고, Hitmax로 표시하였다.
돌연변이체 결합 곡선 및 야생형 결합 곡선의 EC50을 비교하였다. 추가 고려할 만한 사항으로서 통계적으로 유의미한 차이를 확인하였다.“nofit” 또는 “badfit” 표시가 된 곡선을 상기 분석에서 제외하였다.
EC50 추정값, 곡선 맞춤에서의 변화 및 비드-비드 변화의 비교에서, 변화의 두 공급원을 고려하였다. 야생형 및 돌연변이체를 상이한 비드에 연결하였고, 그럼으로써 이들의 차이는 비드-비드 차이로 더 복잡해졌다. 곡선 맞춤 변화가 로그 EC50 추정치의 표준 오차에 의해 추정된다. 야생형 대조군을 비드 각각에 연결한 실험을 사용하여 비드-비드 변화를 실험적으로 결정하였다. 본 실험에서 수득한 야생형 결합 곡선의 EC50 추정치의 비드 변화를 사용하여 실제 맵핑 실험에서의 비드-비드 변화를 추정하였다.
스튜던트 t-테스트(Student's t-test)를 사용하여 EC50(로그 눈금) 두 값의 비교를 수행하였다. t-통계값을 델타(EC50 추정치 사이의 절대적인 차이) 및 델타의 표준 편차 사이의 비로 계산하였다. 세 성분(비선형회귀에서 돌연변이체 및 야생형 곡선에 대한 EC50의 변량 추정치 및 별도 실험에서 추정된 비드-비드 변량 X2)의 합으로 델타 변량을 추정하였다. 비드-비드 변량의 2배는 돌연변이체 및 야생형 비드 둘 다 동일한 변량을 갖는다는 가정에 의한 것이다.
Satterthwaite(1946) 근사치를 사용하여 델타의 표준 편차의 자유도를 계산하였다.
각각의 비교에 대한 스튜던트 t 분포를 기준으로 개별적인 p-값 및 신뢰 구간(95% 및 99%)을 유도하였다.
다중 야생형 대조군의 경우, 돌연변이체에 가장 유사한 야생형 대조군을 채집함으로써, 즉, 최대 p-값을 갖는 것을 채집함으로써, 보존적 접근법을 택했다.
다중도 조정은 다수의 시험을 동시에 수행하면서 거짓 양성을 조절하는 데 중요하다. 본 분석을 위해 두 가지 형태의 다중도 조정를 시행하였는데, 이는 FEW (family wise error) 조절 및 FDR (false discovery rate) 조절이다. FWE 접근법은 하나 이상의 히트(hit)가 사실이 아닐 가능성을 조절하고; FDR 접근법은 선택된 히트들 중 거짓 양성의 예상 비율을 조절한다. 전자의 접근법은 후자의 접근법보다 더 보존적이고 덜 강력하다. 두 접근법 모두에 이용가능한 여러 방법들이 존재하는데, 본 분석의 경우, FWE 분석에는 Hochberg(1988) 방법을, FDR 분석에는 Benjamini-Hochberg(1995) FDR 방법을 선택하였다. 각 항체에 대해 또는 전체 검정에 대해, 두 접근법 모두를 위한 조정된 p-값을 계산하였다.
하기의 기준에 의한 효과를 갖는 돌연변이체를 선택하였다: 1) 상기 돌연변이체에 대해 bad fit 또는 no fit 효과가 나왔을 경우, 2) 상기 돌연변이체를 hitmax 기준에 맞게 선택한 경우, 3) FWE p값이 0.01 미만일 경우, 또는 4) Bmax 값이 모(parental)의 200%보다 더 클 경우. 상기 효과가 Bmax를 감소시키거나 또는 EC50 값을 증가시킨 경우, 히트(hit)를 억제제로 지정하였고, Bmax를 증가시키고 EC50 값을 감소시킨 경우, 히트를 활성제로 지정하였다. 시험한 항체의 >90%에서 효과가 나타난 8개 돌연변이는 히트 목록에서 제외시켰다. 제외된 돌연변이는 하기와 같다: K37A, R46A, D63R, V71R, G106R, K112A, N132R, Q137R 및 Y141R.
상기 분석의 결과를 표 13 및 14에 제공하였다.
표 13
Figure 112014109166417-pct00013
표 14
Figure 112014109166417-pct00014

실시예 12: 수소/중수소 교환 ( HDX ) 분석
본 실시예에서, Ab2를 ST2에 결합시키고, HDX에서 결합의 효과를 결정하였다.
C-말단에 FLAG-태그 및 His-태그를 둘 다 가진 가용성 ST2 단백질(서열 번호: 1의 아미노산 19-322를 함유하는 도메인 1-3)을 포유동물 293-6E 세포에서 일시적으로 발현시키고, IMAC(고정된 금속 이온 친화성 크로마토그래피)으로 정제한 후, 더 나아가 예비 SEC (크기 배제 크로마토그래피)로 정제하였다. 그러고 나서, 울트라-여과를 사용하여 상기 단백질을 3.5 mg/mL로 농축하였다. ST2 항체 Ab2를 조작된 CHO-CS9 세포에서 발현시키고, 단백질 A 친화성 크로마토그래피 및 이어서 예비 SEC로 정제하였다. 분석적 SEC를 사용하여 ST2 단백질이 항체에 완전히 결합되어 있도록 하기 위한 항체:항원의 최적의 몰비가 0.75:1.00임을 확인하였다. 유리 ST2 단백질 및 항원-항체 착물 모두 PBS 완충제(pH 7.2)에 저장하였다.
자동화된 HDX 시스템 (Zhang, Zhang et al. 2012) 상에서 HDX 실험을 수행하였다. 간단히 말해서, H/D 교환 방법의 시작은 우선 유리 ST2 단백질 용액 (3.5 mg/mL) 또는 ST2-항체 착물(jST2 농도는 3.5 mg/mL, 항원:항체 비율은 1:0.75) 중 하나의 5uL를 100mM PBS(pH 7.2, 이것을 25 ℃에서 D2O 물에 PBS 정제를 용해시켜 제조함) 중의 25 uL D2O 완충제에 희석시키는 것이었다. 각각의 HDX 실험에서 교환 반응이 다양한 라벨링 지속시간 (30초, 2, 8, 30분, 및 2, 8시간)동안 인큐베이팅되도록 했고, 라벨링 용액 20 μL와 켄칭/변성/감소 완충제(7.25 M 우레아 및 625 mM 트리스(2-카복시에틸)포스핀 (TCEP), 0.45M 글리신, pH 2.7) 80 μL를 혼합함으로써 1 ℃에서 라벨링 반응을 켄칭(quenching)하였다.
켄칭된 용액의 40 μL 분취량을 0.4 mg/mL 돼지 펩신(Sigma, St. Louis, MO) 용액 120 μL에 옮겼다. 1 ℃에서 소화 용액을 샘플에 즉시 주입하고, 완전한 소화를 위해 6분 동안 방치하였다. 추가로, 소화물을 C18 칼럼(3개 칼럼 연속 사용, BEH C18, 2.1mmx5mm, Waters Corp., Milford, MA)으로 분리하였다. 1℃에서 1~40%의 5-분 ACN 구배로 HPLC 분리를 수행하였다. 데이타-의존적 LC-MS/MS 실험에서 Orbitrap Elite 질량 분광분석기(Thermo Scientific, San Jose, CA)로 LC 용출물을 분석하였다.
LEAP Shells (LEAP Technologies, Carrboro, NC)로 조절된 LEAP HD-X PAL 시스템 상에서 중수소 라벨링, 켄칭, 단백분해 소화 및 주사를 수행하였다.
상기 실험을 3회 반복하고, 각 실험에서 각 시점(time point)을 2회 반복하였다. 표준 펩타이드 혼합물을 샘플에 부가하여 역-교환(back-exchange) 가변성을 추적 및 수정하였다. 상기 혼합물은 하기의 세 가지 펩타이드를 포함하였다: 브라디키닌, 안지오텐신 I 및 류신 엔케팔린. 특별히 고안된 테트라펩타이드 PPPI(AnaSpec, Fremont, CA에서 합성)을 제2 내부 표준으로 사용하여 런투런(run to run) 가변성을 최소화하였다. 또한 대조군으로 H/D 교환 없는 ST2 단백질 소화를 분석하였다.
수득한 데이타 파일을 MassAnalyzer 프로그램(Zhang, Zhang 등 2012)으로 가공하였다. 상기 소프트웨어는 항원 소화물에서 펩타이드를 확인하고, 각 펩타이드의 교환속도를 계산하고, 내부 표준에서 수득된 역-교환 정보에 대해 수정하고, 각 잔기에 보호 인자를 제공하는 모델에 상기 데이터를 맞추었다.
유리 ST2와 항체-결합된 ST2 단백질의 교환 프로파일의 비교는 관련대상인 두 영역을 밝혀냈는데, 그 영역은 포텐셜 에피토프일 수 있다. ST2 서열에서의 상기 두 영역을, 다중 중첩된 펩타이드에 의해, IVRCPRQGKPSY (성숙한 ST2의 아미노산 15~26에 해당하는 서열 번호: 1의 아미노산 33-44) 및 IVRSPTF(성숙한 ST2의 아미노산 70~76에 해당하는 서열 번호: 1의 아미노산 88~94)로 정제하였다. 이들 영역은 ST2가 유리 상태일 경우, 덜 보호된 반면, ST2와 항체가 결합할 때 상기 교환 속도가 극적으로 감소하였다. 더욱이, 도 6에 나타낸 ST2 상동성 구조 모델을 근거로, 이들 두 서열의 스트레치(stretches)는 상기 단백질의 외부 표면 상의 유사한 공간적 위치를 차지하였다.이와 같은 결과들은 두 가지 펩타이드가 Ab2와 ST2 단백질의 결합에 관여한다는 결론을 도출한다.
실시예 13: X-선 결정학
본 실시예에서, Ab2와 ST2의 sc-dsFv 단편의 착물의 결정 구조는 상호작용 계면에서의 특정 아미노산 잔기를 제공하였다.
BL21(DE3) Star 세포에서 Ab2 sc-dsFv을 발현시켰다. 간단히 말해서, Ab2 sc-dsFv는 링커(G4S)3에 의해 경쇄 가변 도메인에 연결된 중쇄 가변 도메인을 함유하였다. 상기 분자를 좀 더 안정화하기 위해, 중쇄 가변 영역의 시스테인 위치 44 및 경쇄 가변 영역의 위치 101에 변이를 일으켜 상기 분자에 디설파이드 결합을 삽입하였다. 상기 단백질을 함유체로 발현시켰다. 상기 함유체를 용해시켜 다시 접었다(refold). 추가로 크기 배제 칼럼(SEC) 및 이온-교환 모노Q 칼럼에서 단백질을 정제하고, 그 다음 SEC에서 다듬었다.
293S 세포에서 ST2를 발현시켰다. 상기 단백질을 Ni-친화성 칼럼으로 정제하고, EndoH로 탈글리코실화하였다. 단백질을 추가로 SEC에서 정제하였다.
Ab2 sc-dsFv와 과잉 ST2를 혼합하여 Ab2 sc-dsFv와 ST2의 착물를 형성하였다. 상기 착물를 SEC에서 정제하고, 결정화를 위해 12 mg/ml로 농축하였다. 시팅 드롭 증기 확산 (sitting drop vapor diffusion) 방법을 사용하여 16 ℃에서 32-36% PEG400 및 0.1 M Hepes(pH 7.5~8.5)로 상기 단백질 착물를 결정화하였다.
1.9 Å 분해능 데이터세트를 'the Advanced Light Source, Lawrence Berkeley National Lab (Berkeley, CA)'에서 수집하였다. 상기 데이터를 MOSFLM (Leslie, 1992)으로 가공하고, CCP4 프로그램 세트(suite)(Collaborative Computational Project, No 4.(1994))에서 SCALA로 기준화하였다. IL-1RII (pdb 코드: 3O4O)의 공개된 구조의 D1D2 도메인 및 Ab2의 Fab 구조의 가변 도메인을 검색 모델로 사용하여, 프로그램 PHASER(McCoy et al., 2007)를 가지고 분자 대체 방법으로 상기 구조를 해석하였다. 반복적인 구조 개량 및 모델 구축을 REFMAC5(Murshudov et al., 1997) 및 COOT(Emsley and Cowtan, 2004)로 수행하였다.
CCP4 패키지의 프로그램 PISA, AREAMOL 및 NCONTACT로 계면 분석을 수행하였다. 도면들은 Pymol(The PyMOL Molecular Graphics System. Schrodinger)로 제작하였다.
ST2/Ab2 sc-dsFv 착물의 결정 구조를 1.9 Å의 분해능으로 해석하였다. 비대칭 유닛으로 독립적인 두 쌍의 ST2/Ab2 sc-dsFv 착물이 있다(도 7). 각 착물은 ST2 분자 1개와 Ab2 sc-dsFv 단편 1개로 이루어졌다. ST2 분자는 IgG-유사 도메인 2개 (D1 및 D2 도메인)로 구성되었다. Ab2 Fv 도메인은 중쇄 및 경쇄의 CDR 루프 6개를 모두 활용하여 ST2 분자와 상호작용한다(도 8). ST2의 경우, 2개의 루프(루프 BC 및 루프 FG)와 ST2의 N-말단이 항체와의 직접적인 상호작용을 일으킨다. ST2와 Ab2 sc-dsFv 사이의 총 매설(buried) 용매 접근가능한 표면적은 1803 Å2이다.
ST2와 Ab2 사이의 계면은 상당한 전하를 띠고 있다. ST2는 D1 도메인에 염기성 잔기(Lys 및 Arg)의 클러스터를 갖는다. 이와 같이 양전하를 띠는 표면 패치는 CDR 영역의 산성 잔기(Asp 및 Glu)의 클러스터에 의해 형성된 Ab2 상의 음전하를 띤 패치를 보완한다(도 9).
2개의 상이한 방법을 사용하여 계면 잔기를 규정하였다. 제 1 방법에서, 용매 노출 차이를 사용하여 계면 잔기를 규정하였다. 착물 중의 ST2(또는 Ab2 sc-dsFv)의 각 잔기의 용매 접근가능한 표면적을 계산하여, 상기 착물에서 떠어낸 ST2 (또는 Ab2 sc-dsFv)의 대응하는 잔기의 용매 접근가능한 표면적과 비교하였다. ST2 및 Ab2, 각각에 대해, 10% 보다 더 큰 차이가 나는 모든 아미노산을 표 15 및 표 16에 나열하였다. ST2의 Arg72 및 Tyr81의 표면 노출 차이는 10% 미만이다. 그러나, 착물 구조의 점검 결과, 두 잔기가 Ab2 중쇄 잔기와 수-매개된 수소 결합을 형성하고, 그렇기 때문에 상기 목록에 포함되는 것이 밝혀졌다.
표 15. 용매 노출 차이로 규정된 에피토프 잔기: ST2. 잔기 번호는 성숙한 ST2의 아미노산의 위치에 상응한다. 즉, 아미노산 1은 서열 번호: 1의 아미노산 19에 상응 한다.
Figure 112014109166417-pct00015

표 16.용매 노출 차이로 규정된 파라토프 잔기 : Ab2
Figure 112014109166417-pct00016
제2 방법에서, 파트너 단백질과의 사전규정된 적어도 하나의 원자를 갖는 계면 잔기를 선택하였다. 상이한 거리 컷오프를 기준으로 2개의 껍질을 규정하였다.
코어 껍질은 최대 5.0 Å의 거리를 갖는 모든 잔기를 포함한다.
경계 껍질은 거리가 5.0 Å보다 길고 8.0 Å보다 짧은 모든 잔기를 포함한다.
ST2, Ab2의 중쇄 및 경쇄의 각 껍질에 있는 아미노산 잔기들의 완전한 목록을 표 17, 18 및 19에 각각 나타내었다. 파트너 단백질과 수소 결합 또는 염 브릿지를 형성하는 잔기의 경우, 잔기 뒤 괄호 안에 특정 상호작용을 기입하였다(수소 결합은 HB, 염 브릿지는 SB).
표 17. 거리 컷오프로 규정된 에피토프 잔기: ST2. 잔기 번호는 성숙한 ST2의 아미노산의 위치에 상응한다. 즉, 아미노산 1은 서열 번호: 1의 아미노산 19에 상응한다.
Figure 112014109166417-pct00017
표 18. 거리 컷오프로 규정된 파라토프 잔기: Ab2 중쇄
Figure 112014109166417-pct00018
표 19. 거리 컷오프로 규정된 파라토프 잔기: Ab2 경쇄
Figure 112014109166417-pct00019
용매 노출 차이로 규정된 에피토프 잔기는 거리 컷오프로 규정된 코어 상호작용 그룹의 잔기와 매칭된다. 표 20에 계면 내 모든 수소 결합 및 염 브릿지 쌍을 나열하였다.
표 20 계면 내 상호작용 쌍
Figure 112014109166417-pct00020
실시예 12의 HDX-MS 분석에서 수득된 ST2 에피토프 영역을 결정학 데이터로 확인하였다. HDX에서 수득한 두 에피토프(15-26 및 70-76)는 고-분해능 결정학 데이터에서의 에피토프로 확인되었다. 특이적으로, Arg20, Gly22, Lys23 및 Tyr26, 뿐만 아니라 Thr75이 3.4 Å 미만의 거리로 항체와 가까이 있는 것을 확인하였다. 항체와의 거리가 3.4 및 5 Å 내에 있음이 확인된 추가의 잔기(Pro19, Gln21, Ile70, Val71, Arg72, Ser73 Pro74 및 Phe76) 또한 HDX 에피토프에 포함되었다.
전체적으로, 상기 결과들은 HDX-MS와 결정학에서 수득된 ST2 에피토프 영역들이 일치함을 확인시켜주었다. 도메인 1의 BC 루프 및 FG 루프 (참고로 결정학 데이타)가 주요 상호작용 부위이다
참조문헌
Ali, M., G. Zhang, et al. (2009). "Investigations into the role of ST2 in acuteasthma in children." Tissue Antigens 73(3): 206-212.
Beltran, C. J., L. E. Nunez, et al. (2010). "Characterization of the novel ST2/IL-33 system in patients with inflammatory bowel disease." Inflamm Bowel Dis 16(7): 1097-1107.
Brunner, M., C. Krenn, et al. (2004). "Increased levels of soluble ST2 protein and IgGl production in patients with sepsis and trauma." Intensive Care Med 30(7): 1468-1473.
Buysschaert, I. D., V. Grulois, et al. (2010). "Genetic evidence for a role of IL33 in nasal polyposis." Allergy 65(5): 616-622.
Castano R, B. Y., Mfuna Endam L, Desrosiers M (2009). "Evidence of association of Interleukin 1 receptor-like 1 gene polymorphisms with surgery unresponsive Chronic Rhinosinusitis." American Journal of Rhinology in press(NA): NA.
Gudbjartsson, D. F., U. S. Bjomsdottir, et al. (2009). "Sequence variants affecting eosinophil numbers associate with asthma and myocardial infarction." Nat Genet 41(3): 342-347.
Hacker, S., C. Lambers, et al. (2009). "Increased soluble serum markers caspasecleaved cytokeratin-18, histones, and ST2 indicate apoptotic turnover and chronic immune response in COPD." J Clin Lab Anal 23(6): 372-379.
Kuroiwa, K., T. Arai, et al. (2001). "Identification of human ST2 protein in the sera of patients with autoimmune diseases." Biochem Biophys Res Commun 284(5): 1104-1108.
Manetti, M., L. Ibba-Manneschi, et al. (2009). "The IL-l-like cytokine IL-33 and its receptor ST2 are abnormally expressed in the affected skin and visceral organs of patients with systemic sclerosis." Ann Rheum Dis.
Marvie, P., M. Lisbonne, et al. (2009). "Interleukin-33 overexpression is associated with liver fibrosis in mice and humans." J Cell Mol Med.
Matsuyama, Y., H. Okazaki, et al. (2010). "Increased levels of interleukin 33 in sera and synovial fluid from patients with active rheumatoid arthritis." J Rheumatol 37(1): 18-25.
Miyagaki, T., M. Sugaya, et al. (2011). "High Levels of Soluble ST2 and Low Levels of IL-33 in Sera of Patients with HIV Infection." J Invest Dermatol 131(3): 794-796.
Moffatt, M. F., I. G. Gut, et al. (2010). "A large-scale, consortium-based genomewide association study of asthma." N Engl J Med 363(13): 1211-1221.
Mok, M. Y., F. P. Huang, et al. (2010). "Serum levels of IL-33 and soluble ST2 and their association with disease activity in systemic lupus erythematosus." Rheumatology (Oxford) 49(3): 520-527.
Neill, D. R., S. H. Wong, et al. (2010). "Nuocytes represent a new innate effector leukocyte that mediates type-2 immunity." Nature 464(7293): 1367-1370.
Oshikawa, K., K. Kuroiwa, et al. (2001). "Elevated soluble ST2 protein levels in sera of patients with asthma with an acute exacerbation." Am J Respir Crit Care Med 164(2): 277-281.
Oshikawa, K., K. Kuroiwa, et al. (2001). "Acute eosinophilic pneumonia with increased soluble ST2 in serum and bronchoalveolar lavage fluid." Respir Med 95(6): 532-533.
Palmer, G., D. Talabot-Ayer, et al. (2009). "Inhibition of interleukin-33 signaling attenuates the severity of experimental arthritis." Arthritis Rheum 60(3): 738-749.
Pastorelli, L., R. R. Garg, et al. (2010). "Epithelial-derived IL-33 and its receptor ST2 are dysregulated in ulcerative colitis and in experimental Thl/Th2 driven enteritis." ProcNatl Acad Sci U S A 107(17): 8017-8022.
Plager, D. A., J. C. Kahl, et al. (2010). "Gene transcription changes in asthmatic chronic rhinosinusitis with nasal polyps and comparison to those in atopic dermatitis." PLoS ONE 5(7): el 1450.
Prefontaine, D., S. Lajoie-Kadoch, et al. (2009). "Increased expression of IL-33 in severe asthma: evidence of expression by airway smooth muscle cells." J Immunol 183(8): 5094-5103.
Prefontaine, D., J. Nadigel, et al. (2010). "Increased IL-33 expression by epithelial cells in bronchial asthma." J Allergy Clin Immunol 125(3): 752-754.
Pushparaj, P. N., H. K. Tay, et al. (2009). "The cytokine interleukin-33 mediates anaphylactic shock." Proc Natl Acad Sci U S A 106(24): 9773-9778.
Reijmerink, N. E., D. S. Postma, et al. (2008). "Association of IL1RL1, IL18R1, and IL18RAP gene cluster polymorphisms with asthma and atopy." J Allergy Clin Immunol 122(3): 651-654 e658.
Sakashita, M., T. Yoshimoto, et al. (2008). "Association of serum interleukin-33 level and the interleukin-33 genetic variant with Japanese cedar pollinosis." Clin Exp Allergy 38(12): 1875-1881.
Shah, R. V. and J. L. Januzzi, Jr. (2010). "ST2: a novel remodeling biomarker in acute and chronic heart failure." Curr Heart Fail Rep 7(1): 9-14.
Shimizu, M., A. Matsuda, et al. (2005). "Functional SNPs in the distal promoter of the ST2 gene are associated with atopic dermatitis." Hum Mol Genet 14(19): 2919-2927.
Sponheim, J., J. Pollheimer, et al. (2010). "Inflammatory bowel disease-associated interleukin-33 is preferentially expressed in ulceration-associated myofibroblasts." Am J Pathol 177(6): 2804-2815.
Tajima, S., K. Oshikawa, et al. (2003). "The increase in serum soluble ST2 protein upon acute exacerbation of idiopathic pulmonary fibrosis." Chest 124(4): 1206-1214.
Theoharides, T. C., B. Zhang, et al. (2010). "IL-33 augments substance P-induced VEGF secretion from human mast cells and is increased in psoriatic skin.” Proc Natl Acad Sci U S A 107(9): 4448-4453.
Verri, W. A., Jr., A. T. Guerrero, et al. (2008). "IL-33 mediates antigen-induced cutaneous and articular hypemociception in mice." Proc Natl Acad Sci U S A 105(7): 2723-2728.
Wu, H., I. Romieu, et al. (2010). "Evaluation of candidate genes in a genome-wide association study of childhood asthma in Mexicans." J Allergy Clin Immunol 125(2): 321-327 e313.
Xu, D., H. R. Jiang, et al. (2008). "IL-33 exacerbates antigen-induced arthritis by activating mast cells." Proc Natl Acad Sci U S A 105(31): 10913-10918.
Yanaba, K., A. Yoshizaki, et al. (2011). "Serum IL-33 levels are raised in patients with systemic sclerosis: association with extent of skin sclerosis and severity of pulmonary fibrosis." Clin Rheumatol.
Zhang, Z.; Zhang, A. and Xiao, G.; “Improved Protein Hydrogen/Deuterium Exchange Mass Spectrometry Plateform with Fully Automated Data Processing”, Analytical Chemistry, 2012, 84(11), 4942-9
Zhang Z, Smith DL. Protein Sci. 1993; 2: 522.
Engen JR, Smith DL. Anal. Chem. 2001; 73: 256A.
Codreanu SG, Ladner JE, Xiao G, Stourman NV, Hachey DL, Gilliland GL,
Armstrong RN. Biochemistry 2002; 41: 15161.
Hamuro Y, Coales SJ, Morrow JA, Molnar KS, Tuske SJ, Southern MR, Griffin PR. Protein Sci. 2006; 15:1.
Baerga-Ortiz A, Hughes CA, Mandell JG, Komives EA. Protein Sci. 2002; 11:1300.
Coales, SJ. et al. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2009; 23: 639-647.
CCP4 (Collaborative Computational Project, No 4. (1994). The CCP4 suite: programs for protein crystallography. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50, 760-763.
Emsley, P., and Cowtan, K. (2004). Coot: model-building tools for molecular graphics. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 60, 2126-2132.
Leslie, A.G.W. (1992). Recent changes to the MOSFLM package for processing film and image plate data Joint CCP4 + ESF-EAMCB Newsletter on Protein Crystallography 26.
McCoy, A.J., Grosse-Kunstleve, R.W., Adams, P.D., Winn, M.D., Storoni, L.C., and Read, R.J. (2007). Phaser crystallographic software. Journal of applied crystallography 40, 658-674.
Murshudov, G.N., Vagin, A.A., and Dodson, E.J. (1997). Refinement of macromolecular structures by the maximum-likelihood method. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 53, 240-255.
The PyMOL Molecular Graphics System. Schrodinger, L.
Baerga-Ortiz, A., C. A. Hughes, J. G. Mandell and E. A. Komives (2002).
"Epitope mapping of a monoclonal antibody against human thrombin by H/D-exchange mass spectrometry reveals selection of a diverse sequence in a highly conserved protein." Protein Sci.11(6): 1300-1308.
Coales, S. J., S. J. Tuske, J. C. Tomasso and Y. Hamuro (2009). "Epitope mapping by amide hydrogen/deuterium exchange coupled with immobilization of antibody, on-line proteolysis, liquid chromatography and mass spectrometry." Rapid Commun. Mass Spectrom. 23(5): 639-647.
Codreanu, S. G., J. E. Ladner, G. Xiao, N. V. Stourman, D. L. Hachey, G. L. Gilliland and R. N. Armstrong (2002). "Local Protein Dynamics and Catalysis: Detection of Segmental Motion Associated with Rate-Limiting Product Release by a Glutathione Transferase." Biochemistry 41(51): 15161-15172.
Engen, J. R. and D. L. Smith (2001). "Investigating protein structure and dynamics by hydrogen exchange MS." Anal. Chem. 73(9): 256A-265A.
Hamuro, Y., S. J. Coales, J. A. Morrow, K. S. Molnar, S. J. Tuske, M. R. Southern and P. R. Griffin (2006). "Hydrogen/deuterium-exchange (H/D-Ex) of PPARy LBD in the presence of various modulators." Protein Sci. 15(8): 1883-1892.
Zhang, Z. and D. L. Smith (1993). "Determination of amide hydrogen exchange by mass spectrometry: A new tool for protein structure elucidation." Protein Sci. 2(4): 522-531.
Zhang, Z., A. Zhang and G. Xiao (2012). "Improved Protein Hydrogen/Deuterium Exchange Mass Spectrometry Platform with Fully Automated Data Processing." Analytical Chemistry 84(11): 4942-4949.
SEQUENCE LISTING <110> AMGEN INC. SMITH, Dirk E FOLTZ, Ian KING, Chadwick T LIM, Ai Ching CLARK, Rutilio COMEAU, Michael R KETCHEM, Randal R MIN, Xiaoshan SHI, Donghui WANG, Zhulun <120> ST2 ANTIGEN BINDING PROTEINS <130> A-1712-WO-PCT <140> -to be assigned- <141> 2013-05-17 <150> US 61/792,619 <151> 2013-03-15 <150> US 61/649,147 <151> 2012-05-18 <160> 175 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 556 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (78)..(78) <223> Xaa at position 78 is Glu or Ala <400> 1 Met Gly Phe Trp Ile Leu Ala Ile Leu Thr Ile Leu Met Tyr Ser Thr 1 5 10 15 Ala Ala Lys Phe Ser Lys Gln Ser Trp Gly Leu Glu Asn Glu Ala Leu 20 25 30 Ile Val Arg Cys Pro Arg Gln Gly Lys Pro Ser Tyr Thr Val Asp Trp 35 40 45 Tyr Tyr Ser Gln Thr Asn Lys Ser Ile Pro Thr Gln Glu Arg Asn Arg 50 55 60 Val Phe Ala Ser Gly Gln Leu Leu Lys Phe Leu Pro Ala Xaa Val Ala 65 70 75 80 Asp Ser Gly Ile Tyr Thr Cys Ile Val Arg Ser Pro Thr Phe Asn Arg 85 90 95 Thr Gly Tyr Ala Asn Val Thr Ile Tyr Lys Lys Gln Ser Asp Cys Asn 100 105 110 Val Pro Asp Tyr Leu Met Tyr Ser Thr Val Ser Gly Ser Glu Lys Asn 115 120 125 Ser Lys Ile Tyr Cys Pro Thr Ile Asp Leu Tyr Asn Trp Thr Ala Pro 130 135 140 Leu Glu Trp Phe Lys Asn Cys Gln Ala Leu Gln Gly Ser Arg Tyr Arg 145 150 155 160 Ala His Lys Ser Phe Leu Val Ile Asp Asn Val Met Thr Glu Asp Ala 165 170 175 Gly Asp Tyr Thr Cys Lys Phe Ile His Asn Glu Asn Gly Ala Asn Tyr 180 185 190 Ser Val Thr Ala Thr Arg Ser Phe Thr Val Lys Asp Glu Gln Gly Phe 195 200 205 Ser Leu Phe Pro Val Ile Gly Ala Pro Ala Gln Asn Glu Ile Lys Glu 210 215 220 Val Glu Ile Gly Lys Asn Ala Asn Leu Thr Cys Ser Ala Cys Phe Gly 225 230 235 240 Lys Gly Thr Gln Phe Leu Ala Ala Val Leu Trp Gln Leu Asn Gly Thr 245 250 255 Lys Ile Thr Asp Phe Gly Glu Pro Arg Ile Gln Gln Glu Glu Gly Gln 260 265 270 Asn Gln Ser Phe Ser Asn Gly Leu Ala Cys Leu Asp Met Val Leu Arg 275 280 285 Ile Ala Asp Val Lys Glu Glu Asp Leu Leu Leu Gln Tyr Asp Cys Leu 290 295 300 Ala Leu Asn Leu His Gly Leu Arg Arg His Thr Val Arg Leu Ser Arg 305 310 315 320 Lys Asn Pro Ile Asp His His Ser Ile Tyr Cys Ile Ile Ala Val Cys 325 330 335 Ser Val Phe Leu Met Leu Ile Asn Val Leu Val Ile Ile Leu Lys Met 340 345 350 Phe Trp Ile Glu Ala Thr Leu Leu Trp Arg Asp Ile Ala Lys Pro Tyr 355 360 365 Lys Thr Arg Asn Asp Gly Lys Leu Tyr Asp Ala Tyr Val Val Tyr Pro 370 375 380 Arg Asn Tyr Lys Ser Ser Thr Asp Gly Ala Ser Arg Val Glu His Phe 385 390 395 400 Val His Gln Ile Leu Pro Asp Val Leu Glu Asn Lys Cys Gly Tyr Thr 405 410 415 Leu Cys Ile Tyr Gly Arg Asp Met Leu Pro Gly Glu Asp Val Val Thr 420 425 430 Ala Val Glu Thr Asn Ile Arg Lys Ser Arg Arg His Ile Phe Ile Leu 435 440 445 Thr Pro Gln Ile Thr His Asn Lys Glu Phe Ala Tyr Glu Gln Glu Val 450 455 460 Ala Leu His Cys Ala Leu Ile Gln Asn Asp Ala Lys Val Ile Leu Ile 465 470 475 480 Glu Met Glu Ala Leu Ser Glu Leu Asp Met Leu Gln Ala Glu Ala Leu 485 490 495 Gln Asp Ser Leu Gln His Leu Met Lys Val Gln Gly Thr Ile Lys Trp 500 505 510 Arg Glu Asp His Ile Ala Asn Lys Arg Ser Leu Asn Ser Lys Phe Trp 515 520 525 Lys His Val Arg Tyr Gln Met Pro Val Pro Ser Lys Ile Pro Arg Lys 530 535 540 Ala Ser Ser Leu Thr Pro Leu Ala Ala Gln Lys Gln 545 550 555 <210> 2 <211> 570 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Thr Leu Leu Trp Cys Val Val Ser Leu Tyr Phe Tyr Gly Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ser Asp Ala Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met 20 25 30 Arg Gln Ile Gln Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro 35 40 45 Leu Phe Glu His Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala 50 55 60 Gly Leu Thr Leu Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu 65 70 75 80 Glu Pro Ile Asn Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys 85 90 95 Asp Val Leu Trp Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr 100 105 110 Thr Cys Met Leu Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro 115 120 125 Leu Glu Val Val Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met Lys Leu 130 135 140 Pro Val His Lys Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys 145 150 155 160 Pro Asn Val Asp Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr Ile Thr 165 170 175 Trp Tyr Met Gly Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val Ile Pro 180 185 190 Glu Gly Met Asn Leu Ser Phe Leu Ile Ala Leu Ile Ser Asn Asn Gly 195 200 205 Asn Tyr Thr Cys Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His 210 215 220 Leu Thr Arg Thr Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala 225 230 235 240 Val Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys 245 250 255 Glu Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe 260 265 270 Leu Met Asp Ser Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys 275 280 285 Pro Asp Asp Ile Thr Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His 290 295 300 Ser Arg Thr Glu Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys 305 310 315 320 Val Thr Ser Glu Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala Arg Ser 325 330 335 Ala Lys Gly Glu Val Ala Lys Ala Ala Lys Val Lys Gln Lys Val Pro 340 345 350 Ala Pro Arg Tyr Thr Val Glu Leu Ala Cys Gly Phe Gly Ala Thr Val 355 360 365 Leu Leu Val Val Ile Leu Ile Val Val Tyr His Val Tyr Trp Leu Glu 370 375 380 Met Val Leu Phe Tyr Arg Ala His Phe Gly Thr Asp Glu Thr Ile Leu 385 390 395 400 Asp Gly Lys Glu Tyr Asp Ile Tyr Val Ser Tyr Ala Arg Asn Ala Glu 405 410 415 Glu Glu Glu Phe Val Leu Leu Thr Leu Arg Gly Val Leu Glu Asn Glu 420 425 430 Phe Gly Tyr Lys Leu Cys Ile Phe Asp Arg Asp Ser Leu Pro Gly Gly 435 440 445 Ile Val Thr Asp Glu Thr Leu Ser Phe Ile Gln Lys Ser Arg Arg Leu 450 455 460 Leu Val Val Leu Ser Pro Asn Tyr Val Leu Gln Gly Thr Gln Ala Leu 465 470 475 480 Leu Glu Leu Lys Ala Gly Leu Glu Asn Met Ala Ser Arg Gly Asn Ile 485 490 495 Asn Val Ile Leu Val Gln Tyr Lys Ala Val Lys Glu Thr Lys Val Lys 500 505 510 Glu Leu Lys Arg Ala Lys Thr Val Leu Thr Val Ile Lys Trp Lys Gly 515 520 525 Glu Lys Ser Lys Tyr Pro Gln Gly Arg Phe Trp Lys Gln Leu Gln Val 530 535 540 Ala Met Pro Val Lys Lys Ser Pro Arg Arg Ser Ser Ser Asp Glu Gln 545 550 555 560 Gly Leu Ser Tyr Ser Ser Leu Lys Asn Val 565 570 <210> 3 <211> 270 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Met Lys Pro Lys Met Lys Tyr Ser Thr Asn Lys Ile Ser Thr Ala Lys 1 5 10 15 Trp Lys Asn Thr Ala Ser Lys Ala Leu Cys Phe Lys Leu Gly Lys Ser 20 25 30 Gln Gln Lys Ala Lys Glu Val Cys Pro Met Tyr Phe Met Lys Leu Arg 35 40 45 Ser Gly Leu Met Ile Lys Lys Glu Ala Cys Tyr Phe Arg Arg Glu Thr 50 55 60 Thr Lys Arg Pro Ser Leu Lys Thr Gly Arg Lys His Lys Arg His Leu 65 70 75 80 Val Leu Ala Ala Cys Gln Gln Gln Ser Thr Val Glu Cys Phe Ala Phe 85 90 95 Gly Ile Ser Gly Val Gln Lys Tyr Thr Arg Ala Leu His Asp Ser Ser 100 105 110 Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Ser Thr 115 120 125 Tyr Asn Asp Gln Ser Ile Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser Tyr Glu 130 135 140 Ile Tyr Val Glu Asp Leu Lys Lys Asp Glu Lys Lys Asp Lys Val Leu 145 150 155 160 Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser Gln His Pro Ser Asn Glu Ser Gly Asp Gly 165 170 175 Val Asp Gly Lys Met Leu Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys Asp Phe 180 185 190 Trp Leu His Ala Asn Asn Lys Glu His Ser Val Glu Leu His Lys Cys 195 200 205 Glu Lys Pro Leu Pro Asp Gln Ala Phe Phe Val Leu His Asn Met His 210 215 220 Ser Asn Cys Val Ser Phe Glu Cys Lys Thr Asp Pro Gly Val Phe Ile 225 230 235 240 Gly Val Lys Asp Asn His Leu Ala Leu Ile Lys Val Asp Ser Ser Glu 245 250 255 Asn Leu Cys Thr Glu Asn Ile Leu Phe Lys Leu Ser Glu Thr 260 265 270 <210> 4 <211> 556 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 4 Met Gly Leu Trp Ile Leu Ala Ile Leu Thr Ile Leu Val Tyr Ser Thr 1 5 10 15 Ala Ala Lys Phe Ser Lys Gln Ser Trp Gly Leu Glu Asn Glu Ala Leu 20 25 30 Ile Val Arg Cys Pro Arg Gln Gly Lys Ser Ser Tyr Ile Val Asp Trp 35 40 45 Tyr Tyr Ser Gln Thr Asn Lys Ser Ile Pro Thr Gln Glu Arg Asn Arg 50 55 60 Val Phe Ala Ser Gly Gln Leu Leu Lys Phe Leu Pro Ala Glu Val Ala 65 70 75 80 Asp Ser Gly Ile Tyr Thr Cys Ile Val Arg Ser Pro Thr Phe Asn Arg 85 90 95 Thr Gly Tyr Ala Asn Val Thr Ile Tyr Lys Lys Gln Pro Asp Cys Asn 100 105 110 Val Pro Asp Tyr Leu Met Tyr Ser Thr Val Ser Gly Ser Glu Lys Asn 115 120 125 Ser Lys Ile Tyr Cys Pro Thr Ile Asp Leu Tyr Asn Trp Thr Ala Pro 130 135 140 Leu Glu Trp Phe Lys Asn Cys Gln Ala Leu Gln Gly Ser Arg Tyr Lys 145 150 155 160 Ala His Lys Ser Phe Leu Val Ile Asp Asn Val Met Thr Asp Asp Ala 165 170 175 Gly Asp Tyr Thr Cys Lys Phe Ile His Asn Glu Asn Gly Ala Asn Tyr 180 185 190 Ser Val Thr Ala Thr Arg Ser Phe Thr Val Lys Asp Glu Gln Gly Phe 195 200 205 Ser Arg Phe Pro Val Ile Arg Ala Pro Ala His Asn Glu Thr Lys Glu 210 215 220 Val Glu Ile Gly Glu Asn Thr Asn Leu Thr Cys Ser Ala Cys Phe Gly 225 230 235 240 Lys Gly Ala Gln Phe Leu Ala Thr Val Gln Trp Gln Leu Asn Gly Asn 245 250 255 Lys Ile Thr Asp Phe Ser Glu Pro Arg Ile Gln Gln Glu Glu Gly Gln 260 265 270 Asn Gln Ser Phe Ser Asn Gly Leu Ala Cys Val Asn Thr Val Leu Arg 275 280 285 Ile Ala Asp Val Lys Glu Glu Asp Leu Leu Leu Arg Tyr Asp Cys Leu 290 295 300 Ala Leu Asn Leu His Gly Leu Arg Arg His Thr Ile Arg Leu Ser Arg 305 310 315 320 Lys Asn Pro Ile Asp His Gln Ser Thr Tyr Cys Ile Ile Ala Val Cys 325 330 335 Ser Val Leu Leu Met Leu Ile Asn Ile Leu Val Ile Ile Leu Lys Thr 340 345 350 Phe Trp Ile Glu Ala Thr Leu Leu Trp Arg Asp Ile Ala Lys Pro Tyr 355 360 365 Lys Thr Arg Asn Asp Gly Lys Leu Tyr Asp Ala Tyr Val Ile Tyr Pro 370 375 380 Arg Asn Tyr Thr Ser Ser Ala Asp Gly Ala Ser Arg Val Glu Tyr Phe 385 390 395 400 Val His Gln Ile Leu Pro Asp Val Leu Glu Asn Lys Cys Gly Tyr Thr 405 410 415 Leu Cys Ile Tyr Gly Arg Asp Met Leu Pro Gly Glu Asp Val Val Thr 420 425 430 Ala Val Glu Thr Asn Ile Arg Lys Ser Arg Arg His Ile Phe Ile Leu 435 440 445 Thr Pro Gln Ile Thr His Ser Glu Glu Phe Ala Tyr Glu Gln Glu Val 450 455 460 Ala Leu His Ser Ala Leu Ile Gln Asn Asp Ser Lys Val Ile Leu Ile 465 470 475 480 Glu Met Glu Ala Leu Ser Glu Leu Asp Met Leu Gln Ala Glu Ala Leu 485 490 495 Gln Asp Ser Leu Arg His Leu Met Glu Val Gln Gly Thr Ile Lys Trp 500 505 510 Arg Glu Asp His Val Ala Asn Lys Arg Ser Leu Asn Ser Lys Phe Trp 515 520 525 Lys His Val Arg Tyr Gln Met Pro Val Pro Ser Lys Met Pro Arg Lys 530 535 540 Ala Ser Ser Leu Thr Ser Leu Ala Ala Gln Lys Gln 545 550 555 <210> 5 <211> 570 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 5 Met Thr Leu Leu Trp Cys Val Val Ser Leu Tyr Phe Tyr Gly Ile Leu 1 5 10 15 Gln Ser Asp Ala Ser Glu Arg Cys Asp Asp Trp Gly Leu Asp Thr Met 20 25 30 Arg Gln Ile Gln Val Phe Glu Asp Glu Pro Ala Arg Ile Lys Cys Pro 35 40 45 Leu Phe Glu His Phe Leu Lys Phe Asn Tyr Ser Thr Ala His Ser Ala 50 55 60 Gly Leu Thr Leu Ile Trp Tyr Trp Thr Arg Gln Asp Arg Asp Leu Glu 65 70 75 80 Glu Pro Ile Asn Phe Arg Leu Pro Glu Asn Arg Ile Ser Lys Glu Lys 85 90 95 Asp Val Leu Trp Phe Arg Pro Thr Leu Leu Asn Asp Thr Gly Asn Tyr 100 105 110 Thr Cys Met Leu Arg Asn Thr Thr Tyr Cys Ser Lys Val Ala Phe Pro 115 120 125 Leu Glu Val Val Gln Lys Asp Ser Cys Phe Asn Ser Pro Met Lys Leu 130 135 140 Pro Val His Lys Leu Tyr Ile Glu Tyr Gly Ile Gln Arg Ile Thr Cys 145 150 155 160 Pro Asn Val Asp Gly Tyr Phe Pro Ser Ser Val Lys Pro Thr Ile Thr 165 170 175 Trp Tyr Met Gly Cys Tyr Lys Ile Gln Asn Phe Asn Asn Val Ile Pro 180 185 190 Glu Gly Met Asn Leu Ser Phe Leu Ile Ala Phe Ile Ser Asn Asn Gly 195 200 205 Asn Tyr Thr Cys Val Val Thr Tyr Pro Glu Asn Gly Arg Thr Phe His 210 215 220 Leu Thr Arg Thr Leu Thr Val Lys Val Val Gly Ser Pro Lys Asn Ala 225 230 235 240 Val Pro Pro Val Ile His Ser Pro Asn Asp His Val Val Tyr Glu Lys 245 250 255 Glu Pro Gly Glu Glu Leu Leu Ile Pro Cys Thr Val Tyr Phe Ser Phe 260 265 270 Leu Met Asp Ser Arg Asn Glu Val Trp Trp Thr Ile Asp Gly Lys Lys 275 280 285 Pro Asp Asp Ile Pro Ile Asp Val Thr Ile Asn Glu Ser Ile Ser His 290 295 300 Ser Arg Thr Glu Asp Glu Thr Arg Thr Gln Ile Leu Ser Ile Lys Lys 305 310 315 320 Val Thr Ser Glu Asp Leu Lys Arg Ser Tyr Val Cys His Ala Arg Ser 325 330 335 Ala Lys Gly Glu Val Ala Lys Ala Ala Thr Val Lys Gln Lys Val Pro 340 345 350 Ala Pro Arg Tyr Thr Val Glu Leu Ala Cys Gly Phe Gly Ala Thr Val 355 360 365 Leu Leu Val Val Ile Leu Ile Val Val Tyr His Val Tyr Trp Leu Glu 370 375 380 Met Val Leu Phe Tyr Arg Ala His Phe Gly Thr Asp Glu Thr Ile Leu 385 390 395 400 Asp Gly Lys Glu Tyr Asp Ile Tyr Val Ser Tyr Ala Arg Asn Ala Glu 405 410 415 Glu Glu Glu Phe Val Leu Leu Thr Leu Arg Gly Val Leu Glu Asn Glu 420 425 430 Phe Gly Tyr Lys Leu Cys Ile Phe Asp Arg Asp Ser Leu Pro Gly Gly 435 440 445 Ile Val Thr Asp Glu Thr Leu Ser Phe Ile Gln Lys Ser Arg Arg Leu 450 455 460 Leu Val Val Leu Ser Pro Asn Tyr Val Leu Gln Gly Thr Gln Ala Leu 465 470 475 480 Leu Glu Leu Lys Ala Gly Leu Glu Asn Met Ala Ser Gln Gly Asn Ile 485 490 495 Asn Val Ile Leu Val Gln Tyr Lys Ala Val Lys Glu Thr Lys Val Lys 500 505 510 Glu Leu Lys Arg Ala Lys Thr Val Leu Thr Val Ile Lys Trp Lys Gly 515 520 525 Glu Lys Ser Lys Tyr Pro Gln Gly Arg Phe Trp Lys Gln Leu Gln Val 530 535 540 Ala Met Pro Val Lys Lys Ser Pro Arg Arg Ser Ser Ser Asp Glu Gln 545 550 555 560 Gly Leu Ser Tyr Ser Ser Leu Lys Asn Val 565 570 <210> 6 <211> 270 <212> PRT <213> Macaca fascicularis <400> 6 Met Lys Pro Lys Met Lys Tyr Ser Thr Asn Lys Ile Ser Thr Ala Lys 1 5 10 15 Arg Lys Asn Thr Ala Ser Lys Ala Leu Cys Phe Lys Leu Gly Lys Ser 20 25 30 Gln Gln Lys Ala Lys Glu Val Cys His Val Tyr Phe Met Lys Leu Arg 35 40 45 Ser Gly Leu Met Ile Lys Lys Glu Ala Cys Tyr Phe Arg Arg Glu Thr 50 55 60 Thr Lys Arg Pro Ser Leu Lys Thr Gly Gly Lys His Lys Gly His Leu 65 70 75 80 Val Leu Ala Ala Cys Gln Gln Gln Ser Thr Val Glu Cys Phe Ala Phe 85 90 95 Gly Ile Ser Gly Val Pro Lys Tyr Thr Arg Ala Leu His Asp Ser Ser 100 105 110 Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Ser Leu Ala Ser Leu Ser Thr 115 120 125 Tyr Asn Asp Gln Ser Ile Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser Tyr Glu 130 135 140 Ile Tyr Val Glu Asp Leu Lys Lys Asp Lys Lys Lys Asp Lys Val Leu 145 150 155 160 Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser Gln His Pro Ser Ser Glu Ser Gly Asp Gly 165 170 175 Val Asp Gly Lys Met Leu Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys Asp Phe 180 185 190 Trp Leu Gln Ala Asn Asn Lys Glu His Ser Val Glu Leu His Lys Cys 195 200 205 Glu Lys Pro Leu Pro Asp Gln Ala Phe Phe Val Leu His Asn Arg Ser 210 215 220 Phe Asn Cys Val Ser Phe Glu Cys Lys Thr Asp Pro Gly Val Phe Ile 225 230 235 240 Gly Val Lys Asp Asn His Leu Ala Leu Ile Lys Val Asp His Ser Glu 245 250 255 Asn Leu Gly Ser Glu Asn Ile Leu Phe Lys Leu Ser Glu Ile 260 265 270 <210> 7 <211> 1332 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 7 caggtccaac tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg tttccggata caccctcact gaattatcca tacactgggt gcgacaggct 120 cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaggt tttggtcctg aagatggtga aacaatctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accgaggaca catctacaga cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtac aacagaggat 300 agcagtggcc tctttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcagctagc 360 accaagggcc catcggtctt ccccctggcg ccctgctcca ggagcacctc cgagagcaca 420 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 480 tcaggcgctc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccagctg tcctacagtc ctcaggactc 540 tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcaact tcggcaccca gacctacacc 600 tgcaacgtag atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agacagttga gcgcaaatgt 660 tgtgtcgagt gcccaccgtg cccagcacca cctgtggcag gaccgtcagt cttcctcttc 720 cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 780 gtggacgtga gccacgaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 840 gtgcataatg ccaagacaaa gccacgggag gagcagttca acagcacgtt ccgtgtggtc 900 agcgtcctca ccgttgtgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc 960 tccaacaaag gcctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa agggcagccc 1020 cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 1080 agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 1140 aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acacctccca tgctggactc cgacggctcc 1200 ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 1260 tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 1320 tctccgggta aa 1332 <210> 8 <211> 1341 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60 tcctgtaagg gttctggata cagctttacc aactactgga tcggctgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtaactctga taccagattc 180 agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcac caccgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagacatggt 300 acctcgtccg actactacgg tctggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tcagctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cacctcccat gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ctccgggtaa a 1341 <210> 9 <211> 1344 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctacgaca tgcactggat ccgccaagct 120 ccaggaaaaa atctggagtg ggtctcagct attgatcttg ctggtgacac atactatcca 180 ggctccgtga agggccgatt caccatctcc agagaagatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag agggggagat 300 ggctacaatt acgactacta cggtatagac gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc 360 tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc 420 tccgagagca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480 gtgtcgtgga actcaggcgc tctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccagc tgtcctacag 540 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcaa cttcggcacc 600 cagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagacagtt 660 gagcgcaaat gttgtgtcga gtgcccaccg tgcccagcac cacctgtggc aggaccgtca 720 gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780 acgtgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 840 gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccacggg aggagcagtt caacagcacg 900 ttccgtgtgg tcagcgtcct caccgttgtg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgcaagg tctccaacaa aggcctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1020 aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1140 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacacctcc catgctggac 1200 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1260 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1320 agcctctccc tgtctccggg taaa 1344 <210> 10 <211> 1329 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 10 caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcgagg tttccggatt catcctcact gaattatccg tgaactgggt gcgacaggct 120 cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaggt tttgatcctg aagatggtaa aacaatctac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcaccttg accgaggaca catctacaga cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc aacatggtgg 300 gactttcact ttgacttctg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc agctagcacc 360 aagggcccat cggtcttccc cctggcgccc tgctccagga gcacctccga gagcacagcg 420 gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc cccgaaccgg tgacggtgtc gtggaactca 480 ggcgctctga ccagcggcgt gcacaccttc ccagctgtcc tacagtcctc aggactctac 540 tccctcagca gcgtggtgac cgtgccctcc agcaacttcg gcacccagac ctacacctgc 600 aacgtagatc acaagcccag caacaccaag gtggacaaga cagttgagcg caaatgttgt 660 gtcgagtgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac cgtcagtctt cctcttcccc 720 ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacgtg cgtggtggtg 780 gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 840 cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttcaaca gcacgttccg tgtggtcagc 900 gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 960 aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aaaccaaagg gcagccccga 1020 gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 1080 ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 1140 gggcagccgg agaacaacta caagaccaca cctcccatgc tggactccga cggctccttc 1200 ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca 1260 tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc agaagagcct ctccctgtct 1320 ccgggtaaa 1329 <210> 11 <211> 1341 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 11 gaggtgcagt tggtggagtc tgggggaggc tgggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agttatgaca tgtactgggt ccgccaagct 120 acagggaaag gtctggagtg ggtctcaggt attgatactg ttggggacac atattatcca 180 gactccgtga agggccgatt caccatctcc agagaaaatg ccaagaactc cgtgtatctt 240 caaatgaaca ccctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgtaag aggcatctac 300 ggtgactttt attattacgg tttggacgtc tggggccacg ggaccacggt caccgtctcc 360 tcagctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cacctcccat gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ctccgggtaa a 1341 <210> 12 <211> 1344 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 12 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctacgaca tgcactgggt ccgccaaact 120 acaggaaaag gtctggagtg ggtctcagct attgatcttg ctggtgacac atactatcca 180 ggctccgtga agggccgatt caccatctcc agagaagatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag agggggagat 300 ggctacaatt acgactacta cggtatagac gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc 360 tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc 420 tccgagagca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480 gtgtcgtgga actcaggcgc tctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccagc tgtcctacag 540 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcaa cttcggcacc 600 cagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagacagtt 660 gagcgcaaat gttgtgtcga gtgcccaccg tgcccagcac cacctgtggc aggaccgtca 720 gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780 acgtgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 840 gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccacggg aggagcagtt caacagcacg 900 ttccgtgtgg tcagcgtcct caccgttgtg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgcaagg tctccaacaa aggcctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1020 aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1140 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacacctcc catgctggac 1200 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1260 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1320 agcctctccc tgtctccggg taaa 1344 <210> 13 <211> 1344 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 13 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt acctacgaca tgcactgggt ccgccaaact 120 acaggaaaag gtctggagtg ggtctcagct attgatcttg ctggtgacac atactatcca 180 ggctccgtga agggccgatt caccatctcc agagaagatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag agggggagat 300 ggctacaatt acgactacta cggtatagac gtctggggcc aagggaccac ggtcaccgtc 360 tcctcagcta gcaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg cgccctgctc caggagcacc 420 tccgagagca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga accggtgacg 480 gtgtcgtgga actcaggcgc tctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccagc tgtcctacag 540 tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcaa cttcggcacc 600 cagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagacagtt 660 gagcgcaaat gttgtgtcga gtgcccaccg tgcccagcac cacctgtggc aggaccgtca 720 gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 780 acgtgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg 840 gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccacggg aggagcagtt caacagcacg 900 ttccgtgtgg tcagcgtcct caccgttgtg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgcaagg tctccaacaa aggcctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 1020 aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg 1140 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacacctcc catgctggac 1200 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 1260 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 1320 agcctctccc tgtctccggg taaa 1344 <210> 14 <211> 1341 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 14 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctacgaca tgtactgggt ccgccaagct 120 acaggaaaag gtctggagtg ggtctcagct attgatactg ttggtgacac atactatcca 180 ggctccgtga agggccgatt caccatctcc agagaaaatg ccaagaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagt cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag aggcggtgac 300 tacgactact cttattacgg tatggacgtc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tcagctagca ccaagggccc atcggtcttc cccctggcgc cctgctccag gagcacctcc 420 gagagcacag cggccctggg ctgcctggtc aaggactact tccccgaacc ggtgacggtg 480 tcgtggaact caggcgctct gaccagcggc gtgcacacct tcccagctgt cctacagtcc 540 tcaggactct actccctcag cagcgtggtg accgtgccct ccagcaactt cggcacccag 600 acctacacct gcaacgtaga tcacaagccc agcaacacca aggtggacaa gacagttgag 660 cgcaaatgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc 720 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg 780 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac 840 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc 900 cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 960 tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 1020 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 1140 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cacctcccat gctggactcc 1200 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 1260 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 1320 ctctccctgt ctccgggtaa a 1341 <210> 15 <211> 1326 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 15 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg gtggaagtca taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaattga acagcctgag agccgaagac acggctgtct attactgtgc gagagacaag 300 ggcgagtttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctcagc tagcaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcgccctgc tccaggagca cctccgagag cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gctctgacca gcggcgtgca caccttccca gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc aacttcggca cccagaccta cacctgcaac 600 gtagatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagacag ttgagcgcaa atgttgtgtc 660 gagtgcccac cgtgcccagc accacctgtg gcaggaccgt cagtcttcct cttcccccca 720 aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac 780 gtgagccacg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat 840 aatgccaaga caaagccacg ggaggagcag ttcaacagca cgttccgtgt ggtcagcgtc 900 ctcaccgttg tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 960 aaaggcctcc cagcccccat cgagaaaacc atctccaaaa ccaaagggca gccccgagaa 1020 ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg 1080 acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg 1140 cagccggaga acaactacaa gaccacacct cccatgctgg actccgacgg ctccttcttc 1200 ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc 1260 tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg 1320 ggtaaa 1326 <210> 16 <211> 1326 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 16 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtata ctggaagtaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgttgcat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagataaa 300 gggtactttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctcagc tagcaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcgccctgc tccaggagca cctccgagag cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gctctgacca gcggcgtgca caccttccca gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc aacttcggca cccagaccta cacctgcaac 600 gtagatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagacag ttgagcgcaa atgttgtgtc 660 gagtgcccac cgtgcccagc accacctgtg gcaggaccgt cagtcttcct cttcccccca 720 aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac 780 gtgagccacg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat 840 aatgccaaga caaagccacg ggaggagcag ttcaacagca cgttccgtgt ggtcagcgtc 900 ctcaccgttg tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 960 aaaggcctcc cagcccccat cgagaaaacc atctccaaaa ccaaagggca gccccgagaa 1020 ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg 1080 acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg 1140 cagccggaga acaactacaa gaccacacct cccatgctgg actccgacgg ctccttcttc 1200 ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc 1260 tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg 1320 ggtaaa 1326 <210> 17 <211> 1326 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 17 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg gtggaagtca taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaattga acagcctgag agccgaagac acggctgtct attactgtgc gagagacaag 300 ggcgagtttg actactgggg ccagggaacc ctggtcaccg tctcctcagc tagcaccaag 360 ggcccatcgg tcttccccct ggcgccctgc tccaggagca cctccgagag cacagcggcc 420 ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga cggtgtcgtg gaactcaggc 480 gctctgacca gcggcgtgca caccttccca gctgtcctac agtcctcagg actctactcc 540 ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc aacttcggca cccagaccta cacctgcaac 600 gtagatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagacag ttgagcgcaa atgttgtgtc 660 gagtgcccac cgtgcccagc accacctgtg gcaggaccgt cagtcttcct cttcccccca 720 aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac 780 gtgagccacg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat 840 aatgccaaga caaagccacg ggaggagcag ttcaacagca cgttccgtgt ggtcagcgtc 900 ctcaccgttg tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 960 aaaggcctcc cagcccccat cgagaaaacc atctccaaaa ccaaagggca gccccgagaa 1020 ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg 1080 acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg 1140 cagccggaga acaactacaa gaccacacct cccatgctgg actccgacgg ctccttcttc 1200 ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc 1260 tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg 1320 ggtaaa 1326 <210> 18 <211> 444 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Gly Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Thr Glu Asp Ser Ser Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240 Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255 Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe 260 265 270 Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 275 280 285 Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300 Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 305 310 315 320 Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr 325 330 335 Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 340 345 350 Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 355 360 365 Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 370 375 380 Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser 385 390 395 400 Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln 405 410 415 Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 420 425 430 Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 19 <211> 447 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Phe Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Thr Ser Ser Asp Tyr Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 20 <211> 448 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asn Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Leu Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asp Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Gly Asp Gly Tyr Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Ile Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 210 215 220 Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 21 <211> 443 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Val Ser Gly Phe Ile Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Lys Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Trp Trp Asp Phe His Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu 115 120 125 Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys 130 135 140 Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160 Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser 165 170 175 Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn 180 185 190 Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 225 230 235 240 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 245 250 255 Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 260 265 270 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 275 280 285 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 290 295 300 Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 305 310 315 320 Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys 325 330 335 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu 340 345 350 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 355 360 365 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 370 375 380 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 385 390 395 400 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly 405 410 415 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 420 425 430 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 22 <211> 447 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Trp Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Asp Thr Val Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Arg Gly Ile Tyr Gly Asp Phe Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly 100 105 110 His Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 23 <211> 448 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Thr Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Leu Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asp Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Gly Asp Gly Tyr Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Ile Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 210 215 220 Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 24 <211> 448 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Thr Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Leu Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asp Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Gly Asp Gly Tyr Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Ile Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 210 215 220 Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 225 230 235 240 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 245 250 255 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 290 295 300 Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 325 330 335 Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 385 390 395 400 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 25 <211> 447 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Thr Val Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Gly Asp Tyr Asp Tyr Ser Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 115 120 125 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 130 135 140 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 145 150 155 160 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 165 170 175 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 180 185 190 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 195 200 205 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 210 215 220 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 340 345 350 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 385 390 395 400 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430 His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 26 <211> 442 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Gly Gly Ser His Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Lys Gly Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 225 230 235 240 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 245 250 255 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 260 265 270 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 275 280 285 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val 290 295 300 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 305 310 315 320 Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly 325 330 335 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 340 345 350 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 355 360 365 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 370 375 380 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 385 390 395 400 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 405 410 415 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 420 425 430 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 27 <211> 442 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Thr Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu His 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Lys Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 225 230 235 240 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 245 250 255 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 260 265 270 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 275 280 285 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val 290 295 300 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 305 310 315 320 Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly 325 330 335 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 340 345 350 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 355 360 365 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 370 375 380 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 385 390 395 400 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 405 410 415 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 420 425 430 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 28 <211> 442 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Gly Gly Ser His Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Lys Gly Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala 115 120 125 Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu 130 135 140 Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly 145 150 155 160 Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser 165 170 175 Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe 180 185 190 Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 225 230 235 240 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 245 250 255 Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp 260 265 270 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 275 280 285 Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val 290 295 300 His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 305 310 315 320 Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly 325 330 335 Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 340 345 350 Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 355 360 365 Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn 370 375 380 Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 385 390 395 400 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 405 410 415 Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 420 425 430 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 <210> 29 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Gly Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Thr Glu Asp Ser Ser Gly Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 30 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Phe Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Gly Thr Ser Ser Asp Tyr Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 31 <211> 122 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Asn Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Leu Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asp Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Gly Asp Gly Tyr Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Ile Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 32 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Val Ser Gly Phe Ile Leu Thr Glu Leu 20 25 30 Ser Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Lys Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Glu Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Thr Trp Trp Asp Phe His Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 33 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Trp Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Asp Thr Val Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Val Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Arg Gly Ile Tyr Gly Asp Phe Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly 100 105 110 His Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 115 120 <210> 34 <211> 122 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Thr Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Leu Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asp Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Gly Asp Gly Tyr Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Ile Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 35 <211> 122 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Thr Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Leu Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asp Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Gly Asp Gly Tyr Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Ile Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 36 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Asp Thr Val Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Gly Asp Tyr Asp Tyr Ser Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 37 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Gly Gly Ser His Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Lys Gly Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 38 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Thr Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu His 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Lys Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 39 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Trp Tyr Gly Gly Ser His Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Lys Gly Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 40 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 Glu Leu Ser Ile His 1 5 <210> 41 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Asn Tyr Trp Ile Gly 1 5 <210> 42 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 Thr Tyr Asp Met His 1 5 <210> 43 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Glu Leu Ser Val Asn 1 5 <210> 44 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Ser Tyr Asp Met Tyr 1 5 <210> 45 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Thr Tyr Asp Met His 1 5 <210> 46 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Thr Tyr Asp Met His 1 5 <210> 47 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 Ser Tyr Asp Met Tyr 1 5 <210> 48 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Ser Tyr Gly Met His 1 5 <210> 49 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Ser Tyr Gly Met His 1 5 <210> 50 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Ser Tyr Gly Met His 1 5 <210> 51 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Gly Phe Gly Pro Glu Asp Gly Glu Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 52 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Phe Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 53 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Ala Ile Asp Leu Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 54 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Gly Phe Asp Pro Glu Asp Gly Lys Thr Ile Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 55 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Gly Ile Asp Thr Val Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 56 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Ala Ile Asp Leu Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 57 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Ala Ile Asp Leu Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 58 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Ala Ile Asp Thr Val Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 59 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Val Ile Trp Tyr Gly Gly Ser His Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 60 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Val Ile Trp Tyr Thr Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 61 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61 Val Ile Trp Tyr Gly Gly Ser His Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 62 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Glu Asp Ser Ser Gly Leu Phe Asp Tyr 1 5 <210> 63 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 His Gly Thr Ser Ser Asp Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 1 5 10 <210> 64 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Gly Gly Asp Gly Tyr Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Ile Asp Val 1 5 10 <210> 65 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Trp Trp Asp Phe His Phe Asp Phe 1 5 <210> 66 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Gly Ile Tyr Gly Asp Phe Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 1 5 10 <210> 67 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Gly Gly Asp Gly Tyr Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Ile Asp Val 1 5 10 <210> 68 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Gly Gly Asp Gly Tyr Asn Tyr Asp Tyr Tyr Gly Ile Asp Val 1 5 10 <210> 69 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Gly Gly Asp Tyr Asp Tyr Ser Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 70 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Asp Lys Gly Glu Phe Asp Tyr 1 5 <210> 71 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Asp Lys Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 72 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Asp Lys Gly Glu Phe Asp Tyr 1 5 <210> 73 <211> 660 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 73 gacctcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctccgggcga gagggccact 60 atcaactgca agtccagcca gagtctttta tacagctcca acaataagga ctacttagct 120 tggtaccagc agaagccggg acagcctcct aaactgctca tttactgggc atctacccgg 180 gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240 atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcaccaata ttataatact 300 ccgtggacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaac gtacggtggc tgcaccatct 360 gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc 420 ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480 caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540 ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc 600 gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt 660 <210> 74 <211> 642 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 74 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc aggcgagtca ggacattagt aactatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctacgat gcatccaatt tggaaacagg ggtcccatca 180 aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagatattg caacatatta ctgtcaacag gatgataatt tccctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 75 <211> 654 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 75 gatattgtaa tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtgatg gataccacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cactggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaattctc 300 actttcggcg gagggaccaa ggtggagatc aaacgtacgg tggctgcacc atctgtcttc 360 atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420 aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654 <210> 76 <211> 657 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 76 gattttgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggaca gccggcctcc 60 atctcctgta agtctagtca gagcctcctg catagtaatg gaaagaccta tttgtattgg 120 ttcctgcaga agccaggcca gcctccacaa ctcctgatct atgaagtttc caaccggttc 180 tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agccgggtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaaagtat acagcttcct 300 ctcactttcg gcggagggac caaggtggag atcaaacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657 <210> 77 <211> 654 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 77 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg tatagtgatg gaaacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacac ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgacga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactctc 300 actttcggcg gagggaccaa ggtggagatc aaacgtacgg tggctgcacc atctgtcttc 360 atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420 aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654 <210> 78 <211> 654 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 78 gatattgtaa tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtgatg gatatcacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaacatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactctc 300 actttcggcg gagggaccaa ggtggagatc aaacgtacgg tggctgcacc atctgtcttc 360 atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420 aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654 <210> 79 <211> 654 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 79 gatattgtaa tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtgatg gatatcacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaacatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactctc 300 actttcggcg gagggaccaa ggtggagatc aaacgtacgg tggctgcacc atctgtcttc 360 atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420 aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654 <210> 80 <211> 654 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 80 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgta ggtctggtca gagcctcctg catagtgatg gatacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactatc 300 accttcggcc aagggacacg actggagatt aaacgtacgg tggctgcacc atctgtcttc 360 atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420 aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654 <210> 81 <211> 645 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 81 gaaattgtga tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagccact taggctggta tcagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca acagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag caaactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgtg gacgttcggc 300 caagggacca aggtggaaat caaacgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420 tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540 acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600 ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645 <210> 82 <211> 645 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 82 gaaattgtgt tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt agcagccact tagcctggta tcagcagaaa 120 cctggccaga ctcccaggtt cctcatctat gctgcatcca gcagggccac cggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagactggag 240 cctgaggatt ttgcagtgtt ttactgtcag cagtatggta gctcaccgtg gacgttcggc 300 caagggacca aggtggaaat caaacgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420 tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540 acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600 ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645 <210> 83 <211> 645 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 83 gaaattgtga tgacgcagtc tccaggcacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcagccact taggctggta tcagcagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat ggtgcatcca gcagggccac tggcatccca 180 gacaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag caaactggag 240 cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcag cagtatggta gctcaccgtg gacgttcggc 300 caagggacca aggtggaaat caaacgtacg gtggctgcac catctgtctt catcttcccg 360 ccatctgatg agcagttgaa atctggaact gcctctgttg tgtgcctgct gaataacttc 420 tatcccagag aggccaaagt acagtggaag gtggataacg ccctccaatc gggtaactcc 480 caggagagtg tcacagagca ggacagcaag gacagcacct acagcctcag cagcaccctg 540 acgctgagca aagcagacta cgagaaacac aaagtctacg cctgcgaagt cacccatcag 600 ggcctgagct cgcccgtcac aaagagcttc aacaggggag agtgt 645 <210> 84 <211> 220 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 84 Asp Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asp Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln 85 90 95 Tyr Tyr Asn Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 85 <211> 214 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 85 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Asp Asn Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 86 <211> 218 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 86 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Tyr His Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Ile Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 87 <211> 219 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 87 Asp Phe Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Ile Gln Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 88 <211> 218 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 88 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro His Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 89 <211> 218 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 89 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Tyr His Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 90 <211> 218 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 90 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Tyr His Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 91 <211> 218 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 91 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Gly Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 92 <211> 215 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 92 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 His Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Lys Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 93 <211> 215 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 93 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 His Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Thr Pro Arg Phe Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Phe Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 94 <211> 215 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 94 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 His Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Lys Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 95 <211> 114 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95 Asp Leu Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Ser Asn Asn Lys Asp Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln 35 40 45 Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val 50 55 60 Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln 85 90 95 Tyr Tyr Asn Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110 Lys Arg <210> 96 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 96 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Asp Asn Phe Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 97 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Tyr His Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Ile Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 98 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98 Asp Phe Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Ile Gln Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg <210> 99 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 99 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 Asp Gly Asn Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro His Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Asp Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 100 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 100 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Tyr His Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 101 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 101 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Tyr His Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 102 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Gly Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95 Leu Gln Thr Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 110 <210> 103 <211> 109 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 103 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 His Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Lys Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 104 <211> 109 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 His Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Thr Pro Arg Phe Leu 35 40 45 Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Phe Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 105 <211> 109 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 105 Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 25 30 His Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Lys Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro 85 90 95 Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 106 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asp Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 107 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 107 Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 108 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 108 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Tyr His Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 109 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 110 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asp Gly Asn Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 111 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 111 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Tyr His Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 112 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 112 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Tyr His Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 113 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 113 Arg Ser Gly Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 114 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 114 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser His Leu Gly 1 5 10 <210> 115 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 115 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser His Leu Ala 1 5 10 <210> 116 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 116 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser His Leu Gly 1 5 10 <210> 117 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 117 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 118 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 118 Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr 1 5 <210> 119 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 119 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 120 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 120 Glu Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 121 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 121 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 122 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 122 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 123 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 123 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 124 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 124 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 125 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 125 Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 126 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 126 Ala Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 127 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 127 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 128 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 128 His Gln Tyr Tyr Asn Thr Pro Trp Thr 1 5 <210> 129 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 129 Gln Gln Asp Asp Asn Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 130 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 130 Met Gln Ala Leu Gln Ile Leu Thr 1 5 <210> 131 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 131 Met Gln Ser Ile Gln Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 132 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 132 Met Gln Ala Leu Gln Thr Leu Thr 1 5 <210> 133 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 133 Met Gln Ala Leu Gln Thr Leu Thr 1 5 <210> 134 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 134 Met Gln Ala Leu Gln Thr Leu Thr 1 5 <210> 135 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 135 Met Gln Ala Leu Gln Thr Ile Thr 1 5 <210> 136 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 136 Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr 1 5 <210> 137 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 137 Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr 1 5 <210> 138 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 138 Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Trp Thr 1 5 <210> 139 <211> 1335 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 139 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtacag cgtctggatt caccttcagt agccatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtgacaatt atatggtttg atggaaataa taaatactat 180 gcagactccg tggagggccg cttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtct attactgtgc gagagagggg 300 gcggaacagg ggttcatcga tctctggggc cgtggcaccc tggtcactgt ctcctcagct 360 agcaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc 420 acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg 480 aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccag ctgtcctaca gtcctcagga 540 ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca acttcggcac ccagacctac 600 acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa 660 tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc 720 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 780 gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg 840 gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg 900 gtcagcgtcc tcaccgttgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 960 gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag 1020 ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 1080 gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 1140 agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacacctc ccatgctgga ctccgacggc 1200 tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 1260 ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 1320 ctgtctccgg gtaaa 1335 <210> 140 <211> 1347 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 140 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacaac ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt accttcgaca tgcactgggt ccgccaagct 120 acaggaaaag gtctggagtg ggtctcaagt attgatactg aaggagacac atactattca 180 ggctccgtga agggccgatt caccatctcc agagaaaatg ccaggaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtacaag aggcgaggac 300 tggagcgacg acgactacta ctacggtttg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360 gtctcctcag ctagcaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc 420 acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480 acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta 540 cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc 600 acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca 660 gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg 720 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 840 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc 900 acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020 accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1080 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347 <210> 141 <211> 1347 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 141 gaggtgcaac tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt accttcgaca tgcactgggt ccgccaagtt 120 ccaggaaaag gtctggagtg gatctcaagt attgatactg aaggagacac atactatcca 180 ggctccgtga agggccgatt caccatctcc agagaaaatg ccaggaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtacaag aggcgaggac 300 tggagcgacg acgactacta ctacggtttg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360 gtctcctcag ctagcaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc 420 acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480 acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta 540 cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc 600 acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca 660 gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg 720 tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 840 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc 900 acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 960 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020 accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg 1080 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 1140 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag 1260 caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag 1320 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 1347 <210> 142 <211> 445 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 142 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Thr Ile Ile Trp Phe Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Ala Glu Gln Gly Phe Ile Asp Leu Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 210 215 220 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 143 <211> 449 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 143 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Phe 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Asp Thr Glu Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Arg Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95 Arg Gly Glu Asp Trp Ser Asp Asp Asp Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 200 205 Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys 210 215 220 Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 144 <211> 449 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 144 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Phe 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ser Ser Ile Asp Thr Glu Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Arg Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95 Arg Gly Glu Asp Trp Ser Asp Asp Asp Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 200 205 Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys 210 215 220 Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 145 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 145 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Thr Ile Ile Trp Phe Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Ala Glu Gln Gly Phe Ile Asp Leu Trp Gly Arg Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 146 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 146 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Phe 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Asp Thr Glu Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Arg Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95 Arg Gly Glu Asp Trp Ser Asp Asp Asp Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 147 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 147 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Phe 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Ser Ser Ile Asp Thr Glu Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Arg Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95 Arg Gly Glu Asp Trp Ser Asp Asp Asp Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 148 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 148 Ser His Gly Met His 1 5 <210> 149 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 149 Thr Phe Asp Met His 1 5 <210> 150 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 150 Thr Phe Asp Met His 1 5 <210> 151 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 151 Ile Ile Trp Phe Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Glu 1 5 10 15 Gly <210> 152 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 152 Ser Ile Asp Thr Glu Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Gly Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 153 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 153 Ser Ile Asp Thr Glu Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys Gly 1 5 10 15 <210> 154 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 154 Glu Gly Ala Glu Gln Gly Phe Ile Asp Leu 1 5 10 <210> 155 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 155 Gly Glu Asp Trp Ser Asp Asp Asp Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 1 5 10 15 <210> 156 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 156 Gly Glu Asp Trp Ser Asp Asp Asp Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 1 5 10 15 <210> 157 <211> 642 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 157 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc aggcgagtca ggacattagc aactatttaa attggtatca ccagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctacgat gcatccaatt tggaaacagg ggtcccatca 180 aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tttactttca ccatcagcgg cctgcagcct 240 gaagatattg caacatatta ctgtcaacag catgataatc tcccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa gcgaacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 158 <211> 654 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 158 aatattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggaca gccggcctcc 60 atctcctgca agtctagtca gagcctcctg catagtgatg gaaagaccta tttattttgg 120 tacctgcaga agccaggcca gcctccacag ctcctgatct atggagtttc caaccggttc 180 tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agccgggtgg aggctgaaga tgttggggtt tattactgca tgcaaagttt acagctattc 300 actttcggcc ctgggaccaa agtggagatc aagcgaacgg tggctgcacc atctgtcttc 360 atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420 aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480 ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540 agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600 acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgt 654 <210> 159 <211> 657 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 159 aatattgtga tgacccagac tccactctct ctgtccgtca cccctggaca gccggcctcc 60 atctcctgca agtctagtca gagcctcctg catagtgatg gaaagaccta tttattttgg 120 tacctgcaga agccaggcca gcctccacag ctcctgatct atggagtttc caaccggttc 180 tctggagtgc cagataggtt cagtggcagc gggtcaggga cagatttcac actgaaaatc 240 agccgggtgg aggctgaaga tgttggggtt tattcctgca tgcaaagttt acagctattc 300 actttcggcc ctgggaccaa agtggatatc aaacgacgta cggtggctgc accatctgtc 360 ttcatcttcc cgccatctga tgagcagttg aaatctggaa ctgcctctgt tgtgtgcctg 420 ctgaataact tctatcccag agaggccaaa gtacagtgga aggtggataa cgccctccaa 480 tcgggtaact cccaggagag tgtcacagag caggacagca aggacagcac ctacagcctc 540 agcagcaccc tgacgctgag caaagcagac tacgagaaac acaaagtcta cgcctgcgaa 600 gtcacccatc agggcctgag ctcgcccgtc acaaagagct tcaacagggg agagtgt 657 <210> 160 <211> 214 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 160 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asp Asn Leu Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 161 <211> 218 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 161 Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Gln Leu Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 110 Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln 115 120 125 Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr 130 135 140 Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser 145 150 155 160 Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190 His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 162 <211> 219 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 162 Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Ser Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Gln Leu Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 163 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 163 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asp Asn Leu Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 164 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 164 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr His Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Asp Asn Leu Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 165 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 165 Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Ser Cys Met Gln Ser 85 90 95 Leu Gln Leu Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg 100 105 110 Arg <210> 166 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 166 Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 167 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 167 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Phe 1 5 10 15 <210> 168 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 168 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Phe 1 5 10 15 <210> 169 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 169 Asp Ala Ser Asn Leu Glu Thr 1 5 <210> 170 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 170 Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 171 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 171 Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 172 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 172 Gln Gln His Asp Asn Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 173 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 173 Met Gln Ser Leu Gln Leu Phe Thr 1 5 <210> 174 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 174 Met Gln Ser Leu Gln Leu Phe Thr 1 5 <210> 175 <211> 187 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 175 Lys Phe Ser Lys Gln Ser Trp Gly Leu Glu Asn Glu Ala Leu Ile Val 1 5 10 15 Arg Cys Pro Arg Gln Gly Lys Pro Ser Tyr Thr Val Asp Trp Tyr Tyr 20 25 30 Ser Gln Thr Asn Lys Ser Ile Pro Thr Gln Glu Arg Asn Arg Val Phe 35 40 45 Ala Ser Gly Gln Leu Leu Lys Phe Leu Pro Ala Glu Val Ala Asp Ser 50 55 60 Gly Ile Tyr Thr Cys Ile Val Arg Ser Pro Thr Phe Asn Arg Thr Gly 65 70 75 80 Tyr Ala Asn Val Thr Ile Tyr Lys Lys Gln Ser Asp Cys Asn Val Pro 85 90 95 Asp Tyr Leu Met Tyr Ser Thr Val Ser Gly Ser Glu Lys Asn Ser Lys 100 105 110 Ile Tyr Cys Pro Thr Ile Asp Leu Tyr Asn Trp Thr Ala Pro Leu Glu 115 120 125 Trp Phe Lys Asn Cys Gln Ala Leu Gln Gly Ser Arg Tyr Arg Ala His 130 135 140 Lys Ser Phe Leu Val Ile Asp Asn Val Met Thr Glu Asp Ala Gly Asp 145 150 155 160 Tyr Thr Cys Lys Phe Ile His Asn Glu Asn Gly Ala Asn Tyr Ser Val 165 170 175 Thr Ala Thr Arg Ser Phe Thr Val Lys Asp Glu 180 185

Claims (154)

  1. 서열 번호: 107에서 제시된 LCDR1; 서열 번호: 118에서 제시된 LCDR2 서열; 및 서열 번호: 129에서 제시된 LCDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인 그리고 서열 번호: 41에서 제시된 HCDR1; 서열 번호: 52에서 제시된 HCDR2 서열; 및 서열 번호: 63에서 제시된 HCDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  2. 제 1 항에 있어서,
    a) 서열 번호: 96에서 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 상동성을 갖는 경쇄 가변 도메인;
    b) 서열 번호: 30에서 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 상동성을 갖는 중쇄 가변 도메인; 또는
    c) 상기 a)의 경쇄 가변 도메인 및 상기 b)의 중쇄 가변 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  3. 제 2 항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 상기 서열 번호: 96에서 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%의 상동성을 갖는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  4. 제 2 항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 상기 서열 번호: 30에서 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%의 상동성을 갖는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  5. 제 3 항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 상기 서열 번호: 30에서 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%의 상동성을 갖는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  6. 제 1 항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 96에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  7. 제 1 항에 있어서, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 30에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  8. 제 1 항에 있어서, 상기 경쇄 가변 도메인은 서열 번호: 96에서 제시된 아미노산 서열을 포함하며, 상기 중쇄 가변 도메인은 서열 번호: 30에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  9. 제 1 항에 있어서, 상기 항체는 1×10-10M 이하의 친화도로 인간 ST2에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  10. 제 2 항에 있어서, 상기 항체는 1×10-10M 이하의 친화도로 인간 ST2에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  11. 제 5 항에 있어서, 상기 항체는 1×10-10M 이하의 친화도로 인간 ST2에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  12. 제 8 항에 있어서, 상기 항체는 1×10-10M 이하의 친화도로 인간 ST2에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  13. 제 1 항에 있어서, 상기 항체는 인간 ST2의 인간 IL-33에의 결합을 억제하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  14. 제 9 항에 있어서, 상기 항체는 인간 ST2-발현 세포들에서 인간 IL-33-매개된 ST2 신호전달을 감소시키는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  15. 제 1 항에 있어서, 상기 항체는 사이노몰구스 원숭이 ST2의 사이노몰구스 원숭이 IL-33에의 결합을 억제하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  16. 제 11 항에 있어서, 상기 항체는 사이노몰구스 원숭이 ST2-발현 세포들에서 IL-33-매개된 사이노몰구스 원숭이 ST2 신호전달을 감소시키는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  17. 제 2 항에 있어서, 상기 항체는 인간 ST2의 인간 IL-33에의 결합을 억제하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  18. 제 17 항에 있어서, 상기 항체는 인간 ST2-발현 세포들에서 인간 IL-33-매개된 ST2 신호전달을 감소시키는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  19. 제 2 항에 있어서, 상기 항체는 사이노몰구스 원숭이 ST2의 사이노몰구스 원숭이 IL-33에의 결합을 억제하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  20. 제 19 항에 있어서, 상기 항체는 사이노몰구스 원숭이 ST2-발현 세포들에서 IL-33-매개된 사이노몰구스 원숭이 ST2 신호전달을 감소시키는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  21. 제 5 항에 있어서, 상기 항체는 인간 ST2의 인간 IL-33에의 결합을 억제하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  22. 제 21 항에 있어서, 상기 항체는 인간 ST2-발현 세포들에서 인간 IL-33-매개된 ST2 신호전달을 감소시키는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  23. 제 5 항에 있어서, 상기 항체는 사이노몰구스 원숭이 ST2의 사이노몰구스 원숭이 IL-33에의 결합을 억제하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  24. 제 23 항에 있어서, 상기 항체는 사이노몰구스 원숭이 ST2-발현 세포들에서 IL-33-매개된 사이노몰구스 원숭이 ST2 신호전달을 감소시키는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  25. 제 8 항에 있어서, 상기 항체는 인간 ST2의 인간 IL-33에의 결합을 억제하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  26. 제 25 항에 있어서, 상기 항체는 인간 ST2-발현 세포들에서 인간 IL-33-매개된 ST2 신호전달을 감소시키는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  27. 제 8 항에 있어서, 상기 항체는 사이노몰구스 원숭이 ST2의 사이노몰구스 원숭이 IL-33에의 결합을 억제하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  28. 제 27 항에 있어서, 상기 항체는 사이노몰구스 원숭이 ST2-발현 세포들에서 IL-33-매개된 사이노몰구스 원숭이 ST2 신호전달을 감소시키는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  29. 제 1 항에 있어서, 상기 항체는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  30. 제 1 항에 있어서, 경쇄 및 중쇄를 포함하고, 상기 경쇄는 서열 번호: 85에서 제시된 아미노산 서열을 포함하며, 상기 중쇄는 서열 번호: 19에서 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 단리된 ST2 항체.
  31. 제 1 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항의 항체의 경쇄 가변 도메인을 인코딩하는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  32. 제 1 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항의 항체의 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  33. 제 1 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항의 항체의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 인코딩하는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  34. 제 31 항에 있어서, 상기 핵산은 항체 경쇄를 인코딩하는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  35. 제 34 항에 있어서, 상기 경쇄는 서열 번호: 74에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 80%의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  36. 제 34 항에 있어서, 상기 경쇄는 서열 번호: 74에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 90%의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  37. 제 34 항에 있어서, 상기 경쇄는 서열 번호: 74에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  38. 제 34 항에 있어서, 상기 경쇄는 서열 번호: 74에서 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  39. 제 32 항에 있어서, 상기 핵산은 항체 중쇄를 인코딩하는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  40. 제 39 항에 있어서, 상기 중쇄는 서열 번호: 8에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 80%의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  41. 제 39 항에 있어서, 상기 중쇄는 서열 번호: 8에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 90%의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  42. 제 39 항에 있어서, 상기 중쇄는 서열 번호: 8에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  43. 제 39 항에 있어서, 상기 중쇄는 서열 번호: 8에서 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  44. 제 33 항에 있어서, 상기 핵산은 항체 경쇄 및 항체 중쇄를 인코딩하는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  45. 제 44 항에 있어서, 상기 경쇄는 서열 번호: 74에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 80%의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되며, 상기 중쇄는 서열 번호: 8에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 80%의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  46. 제 34 항에 있어서, 상기 경쇄는 서열 번호: 74에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 90%의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되며, 상기 중쇄는 서열 번호: 8에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 90%의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  47. 제 34 항에 있어서, 상기 경쇄는 서열 번호: 74에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되며, 상기 중쇄는 서열 번호: 8에서 제시된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 95%의 상동성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  48. 제 34 항에 있어서, 상기 경쇄는 서열 번호: 74에서 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되며, 상기 중쇄는 서열 번호: 8에서 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 것을 특징으로 하는 단리된 핵산.
  49. 제 31 항의 단리된 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 발현 벡터.
  50. 제 32 항의 단리된 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 발현 벡터.
  51. 제 33 항의 단리된 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 발현 벡터.
  52. 프로모터에 작동 가능하게 연결된 제 31 항의 단리된 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  53. 프로모터에 작동 가능하게 연결된 제 32 항의 단리된 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  54. 프로모터에 작동 가능하게 연결된 제 33 항의 단리된 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  55. 제 49 항의 발현 벡터를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  56. 제 50 항의 발현 벡터를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  57. 제 51 항의 발현 벡터를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  58. 제 57 항에 있어서, 상기 숙주 세포는 ST2에 결합하는 항체를 분비하는 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  59. 제 1 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항의 ST2 항체를 발현시키는 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  60. 제 58 항에 있어서, 상기 세포는 포유류 기원인 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  61. 제 60 항에 있어서, 상기 세포는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포주인 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  62. 제 59 항에 있어서, 상기 세포는 포유류 기원인 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  63. 제 62 항에 있어서, 상기 세포는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포주인 것을 특징으로 하는 재조합 숙주 세포.
  64. 자가면역 또는 염증성 장애를 치료하기 위한 조성물에 있어서, 제 1 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항의 ST2 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  65. 제 64 항에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 96에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 30에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  66. 제 64 항에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 85에서 제시된 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열 및 서열 번호: 19에서 제시된 중쇄 가변 도메인 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  67. 제 64 항에 있어서, 상기 ST2 항체는 IL-33의 ST2에의 결합을 억제하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  68. 제 65 항에 있어서, 상기 ST2 항체는 IL-33의 ST2에의 결합을 억제하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  69. 제 66 항에 있어서, 상기 ST2 항체는 IL-33의 ST2에의 결합을 억제하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  70. 제 64 항에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 장애는 천식, 아토피 피부염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 폐 섬유증, 패혈증 및 외상, HIV 감염, 전신 홍반성 낭창, 염증성 장질환, 류마티스성 관절염, 경화증, 베게너 육아종증, 베체트 질환, 심혈관 질환, 비부비동염, 코 용종증, 또는 호산구성 기관지염인 것을 특징으로 하는 조성물.
  71. 제 65 항에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 장애는 천식, 아토피 피부염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 폐 섬유증, 패혈증 및 외상, HIV 감염, 전신 홍반성 낭창, 염증성 장질환, 류마티스성 관절염, 경화증, 베게너 육아종증, 베체트 질환, 심혈관 질환, 비부비동염, 코 용종증, 또는 호산구성 기관지염인 것을 특징으로 하는 조성물.
  72. 제 71 항에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 장애는 천식 또는 만성 폐쇄성 폐 질환인 것을 특징으로 하는 조성물.
  73. 제 66 항에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 장애는 천식, 아토피 피부염, 만성 폐쇄성 폐 질환, 폐 섬유증, 패혈증 및 외상, HIV 감염, 전신 홍반성 낭창, 염증성 장질환, 류마티스성 관절염, 경화증, 베게너 육아종증, 베체트 질환, 심혈관 질환, 비부비동염, 코 용종증, 또는 호산구성 기관지염인 것을 특징으로 하는 조성물.
  74. 제 73 항에 있어서, 상기 자가면역 또는 염증성 장애는 천식 또는 만성 폐쇄성 폐 질환인 것을 특징으로 하는 조성물.
  75. a) 제 58 항의 재조합 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
    b) 상기 ST2 항체를 배양물로부터 단리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 ST2 항체를 제조하는 방법.
  76. a) 제 59 항의 재조합 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
    b) 상기 ST2 항체를 배양물로부터 단리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 ST2 항체를 제조하는 방법.
  77. 삭제
  78. 삭제
  79. 삭제
  80. 삭제
  81. 삭제
  82. 삭제
  83. 삭제
  84. 삭제
  85. 삭제
  86. 삭제
  87. 삭제
  88. 삭제
  89. 삭제
  90. 삭제
  91. 삭제
  92. 삭제
  93. 삭제
  94. 삭제
  95. 삭제
  96. 삭제
  97. 삭제
  98. 삭제
  99. 삭제
  100. 삭제
  101. 삭제
  102. 삭제
  103. 삭제
  104. 삭제
  105. 삭제
  106. 삭제
  107. 삭제
  108. 삭제
  109. 삭제
  110. 삭제
  111. 삭제
  112. 삭제
  113. 삭제
  114. 삭제
  115. 삭제
  116. 삭제
  117. 삭제
  118. 삭제
  119. 삭제
  120. 삭제
  121. 삭제
  122. 삭제
  123. 삭제
  124. 삭제
  125. 삭제
  126. 삭제
  127. 삭제
  128. 삭제
  129. 삭제
  130. 삭제
  131. 삭제
  132. 삭제
  133. 삭제
  134. 삭제
  135. 삭제
  136. 삭제
  137. 삭제
  138. 삭제
  139. 삭제
  140. 삭제
  141. 삭제
  142. 삭제
  143. 삭제
  144. 삭제
  145. 삭제
  146. 삭제
  147. 삭제
  148. 삭제
  149. 삭제
  150. 삭제
  151. 삭제
  152. 삭제
  153. 삭제
  154. 삭제
KR1020147031821A 2012-05-18 2013-05-17 St2 항원 결합 단백질 KR102161460B1 (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261649147P 2012-05-18 2012-05-18
US61/649,147 2012-05-18
US201361792619P 2013-03-15 2013-03-15
US61/792,619 2013-03-15
PCT/US2013/041656 WO2013173761A2 (en) 2012-05-18 2013-05-17 St2 antigen binding proteins

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207027543A Division KR20200115662A (ko) 2012-05-18 2013-05-17 St2 항원 결합 단백질

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20150013167A KR20150013167A (ko) 2015-02-04
KR102161460B1 true KR102161460B1 (ko) 2020-10-07

Family

ID=49584476

Family Applications (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207027543A KR20200115662A (ko) 2012-05-18 2013-05-17 St2 항원 결합 단백질
KR1020237041864A KR20230170805A (ko) 2012-05-18 2013-05-17 St2 항원 결합 단백질
KR1020147031821A KR102161460B1 (ko) 2012-05-18 2013-05-17 St2 항원 결합 단백질
KR1020227025149A KR20220107316A (ko) 2012-05-18 2013-05-17 St2 항원 결합 단백질
KR1020237009097A KR20230043229A (ko) 2012-05-18 2013-05-17 St2 항원 결합 단백질

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207027543A KR20200115662A (ko) 2012-05-18 2013-05-17 St2 항원 결합 단백질
KR1020237041864A KR20230170805A (ko) 2012-05-18 2013-05-17 St2 항원 결합 단백질

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227025149A KR20220107316A (ko) 2012-05-18 2013-05-17 St2 항원 결합 단백질
KR1020237009097A KR20230043229A (ko) 2012-05-18 2013-05-17 St2 항원 결합 단백질

Country Status (37)

Country Link
US (5) US9382318B2 (ko)
EP (2) EP2850103B1 (ko)
JP (5) JP6205410B2 (ko)
KR (5) KR20200115662A (ko)
CN (3) CN104334582B (ko)
AP (1) AP2014008053A0 (ko)
AR (1) AR091069A1 (ko)
AU (2) AU2013262593B2 (ko)
BR (1) BR112014028785B1 (ko)
CA (2) CA2873549C (ko)
CL (1) CL2014003131A1 (ko)
CO (1) CO7250445A2 (ko)
CR (2) CR20190225A (ko)
DK (1) DK2850103T3 (ko)
EA (1) EA035160B9 (ko)
ES (1) ES2818571T3 (ko)
HK (1) HK1208479A1 (ko)
HR (1) HRP20201341T1 (ko)
HU (1) HUE052442T2 (ko)
IL (4) IL282226B2 (ko)
JO (1) JO3623B1 (ko)
LT (1) LT2850103T (ko)
MX (1) MX356557B (ko)
MY (1) MY170099A (ko)
NZ (1) NZ700856A (ko)
PE (2) PE20191408A1 (ko)
PH (1) PH12014502527A1 (ko)
PL (1) PL2850103T3 (ko)
PT (1) PT2850103T (ko)
RS (1) RS60819B1 (ko)
SG (1) SG11201407564TA (ko)
SI (1) SI2850103T1 (ko)
TN (1) TN2014000434A1 (ko)
TW (1) TWI600664B (ko)
UY (1) UY34813A (ko)
WO (1) WO2013173761A2 (ko)
ZA (1) ZA201407937B (ko)

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9090694B2 (en) 2012-04-30 2015-07-28 Janssen Biotech, Inc. ST2L antibody antagonists
AR091069A1 (es) 2012-05-18 2014-12-30 Amgen Inc Proteinas de union a antigeno dirigidas contra el receptor st2
JO3532B1 (ar) 2013-03-13 2020-07-05 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد انترلوكين-33 واستعمالاتها
CN105007929B (zh) 2013-03-15 2019-05-10 瑞泽恩制药公司 Il-33拮抗剂和其用途
CA2936366A1 (en) 2014-01-10 2015-07-16 Anaptysbio, Inc. Antibodies directed against interleukin-33 (il-33)
US10040859B2 (en) 2014-04-21 2018-08-07 The Children's Hospital Of Philadelphia Methods of treating hemophagocytic lymphohistiocytosis with an IL-33 receptor antibody
WO2015175861A1 (en) 2014-05-16 2015-11-19 Amgen Inc. Assay for detecting th1 and th2 cell populations
CN104017055B (zh) * 2014-06-27 2016-09-14 鹿淑茹 一种关于st2蛋白抑制剂多肽及其应用
CN104059130B (zh) * 2014-06-27 2016-08-24 王方杰 关于st2蛋白抑制剂多肽及其应用
TWI705976B (zh) 2014-11-10 2020-10-01 美商建南德克公司 抗介白素-33抗體及其用途
CN107109494B (zh) 2014-11-10 2023-10-27 豪夫迈·罗氏有限公司 Il-33介导型疾病的治疗方法和诊断方法
US10539572B2 (en) 2015-01-30 2020-01-21 Salk Institute For Biological Studies Compositions and methods for treating age-related diabetes and related disorders
MY190209A (en) 2015-03-31 2022-04-05 Medimmune Ltd A novel il33 form, mutated forms of il33, antibodies, assays and methods of using the same
WO2017083242A1 (en) 2015-11-13 2017-05-18 The Regents Of The University Of Michigan Inhibitors of suppression of tumorigencity 2 (st2) and methods using the same
WO2017087547A1 (en) * 2015-11-17 2017-05-26 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Pd-l1-binding agents and uses thereof
WO2017124110A1 (en) * 2016-01-14 2017-07-20 Anaptysbio, Inc. Inhibition of allergic reaction using an il-33 inhibitor
BR112018071276A2 (pt) 2016-04-27 2019-02-12 Pfizer Inc. anticorpos anti-il-33, composições, métodos e usos dos mesmos
CN107446040B (zh) * 2016-05-30 2021-01-12 深圳市安群生物工程有限公司 人st2抗原表位肽、抗原、抗体、试剂盒及应用
CN107765014B (zh) * 2016-08-23 2019-11-19 上海费玛生物科技有限公司 一种检测人sST2蛋白的方法以及试剂盒
TW202332696A (zh) 2016-12-01 2023-08-16 美商再生元醫藥公司 治療發炎症狀的方法
CA3044416A1 (en) * 2016-12-13 2018-06-21 Delinia, Inc. Multivalent regulatory t cell modulators
US10738131B2 (en) 2017-02-10 2020-08-11 Genentech, Inc. Anti-tryptase antibodies, compositions thereof, and uses thereof
US20200339674A1 (en) * 2017-02-17 2020-10-29 The General Hospital Corporation Methods and compositions for treating a brain injury
JP7321939B2 (ja) 2017-04-13 2023-08-07 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｉｌ３３及びｉｌ１ｒｌ１をコードする遺伝子にリスクアレルを有する患者の炎症性肺疾患の処置及び阻害
KR20220098056A (ko) 2018-02-09 2022-07-08 제넨테크, 인크. 비만 세포 매개 염증성 질환에 대한 치료 및 진단 방법
IL277890B2 (en) 2018-04-11 2024-03-01 Regeneron Pharma Methods for quantification of IL-33
US20210309752A1 (en) * 2018-08-03 2021-10-07 The Trustees Of Indiana University Methods for targeting, inhibiting, and treating a tumoral microenvironment
EP3873923A4 (en) * 2018-10-31 2023-02-08 Delinia, Inc. MULTIVALENT REGULATORY T-CELL MODULATORS
US11739156B2 (en) * 2019-01-06 2023-08-29 The Broad Institute, Inc. Massachusetts Institute of Technology Methods and compositions for overcoming immunosuppression
CN110357963B (zh) * 2019-07-31 2020-09-18 北京智仁美博生物科技有限公司 抗人st2抗体及其用途
KR20220093334A (ko) 2019-11-04 2022-07-05 메디뮨 리미티드 Il-33 길항제의 이용 방법
CN114641494A (zh) 2019-11-04 2022-06-17 免疫医疗有限公司 抗-33治疗剂fpr治疗肾脏障碍
CN110921675A (zh) * 2019-11-27 2020-03-27 成都理工大学 一种孔状CaB6纳米棒的制备方法
CN113214395A (zh) * 2020-01-21 2021-08-06 迈威(上海)生物科技股份有限公司 抗st2抗体及其应用
CN111308086B (zh) * 2020-02-21 2022-02-25 苏州旭光科星抗体生物科技有限公司 一种检测可溶性st2含量的酶联免疫检测试剂盒及用途
EP4118236A1 (en) 2020-03-13 2023-01-18 MedImmune Limited Therapeutic methods for the treatment of subjects with risk alelles in il33
WO2021183849A1 (en) 2020-03-13 2021-09-16 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof
EP4132972A1 (en) 2020-04-06 2023-02-15 MedImmune Limited Treating acute respiratory distress syndrome with il-33 axis binding antagonists
US20230272086A1 (en) 2020-05-12 2023-08-31 Chia Tai Tianqing Pharmaceutical Group Co., Ltd. St2 antigen binding protein
CN117980333A (zh) 2021-06-11 2024-05-03 基因泰克公司 用st2拮抗剂治疗慢性阻塞性肺疾病的方法
WO2023001257A1 (zh) * 2021-07-21 2023-01-26 迈威(上海)生物科技股份有限公司 抗肿瘤抑制素2的抗体以及包含其的液体组合物
CN115920033A (zh) * 2021-07-21 2023-04-07 迈威(上海)生物科技股份有限公司 抗肿瘤抑制素2抗体的制药用途
WO2023086807A1 (en) 2021-11-10 2023-05-19 Genentech, Inc. Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999034217A1 (en) 1997-12-24 1999-07-08 The University Court Of The University Of Glasgow Reagents specific for st2l and uses therefor
WO2011127412A2 (en) * 2010-04-09 2011-10-13 Critical Care Diagnostics, Inc. Soluble human st-2 antibodies and assays
WO2013165894A2 (en) 2012-04-30 2013-11-07 Janssen Biotech, Inc. St2l antagonists and methods of use

Family Cites Families (187)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US3691016A (en) 1970-04-17 1972-09-12 Monsanto Co Process for the preparation of insoluble enzymes
CA1023287A (en) 1972-12-08 1977-12-27 Boehringer Mannheim G.M.B.H. Process for the preparation of carrier-bound proteins
US3896111A (en) 1973-02-20 1975-07-22 Research Corp Ansa macrolides
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US4195128A (en) 1976-05-03 1980-03-25 Bayer Aktiengesellschaft Polymeric carrier bound ligands
US4330440A (en) 1977-02-08 1982-05-18 Development Finance Corporation Of New Zealand Activated matrix and method of activation
CA1093991A (en) 1977-02-17 1981-01-20 Hideo Hirohara Enzyme immobilization with pullulan gel
US4151042A (en) 1977-03-31 1979-04-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing maytansinol and its derivatives
US4137230A (en) 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
US4229537A (en) 1978-02-09 1980-10-21 New York University Preparation of trichloro-s-triazine activated supports for coupling ligands
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4263428A (en) 1978-03-24 1981-04-21 The Regents Of The University Of California Bis-anthracycline nucleic acid function inhibitors and improved method for administering the same
US4265814A (en) 1978-03-24 1981-05-05 Takeda Chemical Industries Matansinol 3-n-hexadecanoate
JPS5562090A (en) 1978-10-27 1980-05-10 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55164687A (en) 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS5566585A (en) 1978-11-14 1980-05-20 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS55164685A (en) 1979-06-08 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4309428A (en) 1979-07-30 1982-01-05 Takeda Chemical Industries, Ltd. Maytansinoids
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
IE52535B1 (en) 1981-02-16 1987-12-09 Ici Plc Continuous release pharmaceutical compositions
US4475196A (en) 1981-03-06 1984-10-02 Zor Clair G Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system
US4447233A (en) 1981-04-10 1984-05-08 Parker-Hannifin Corporation Medication infusion pump
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
DE3374837D1 (en) 1982-02-17 1988-01-21 Ciba Geigy Ag Lipids in the aqueous phase
US4439196A (en) 1982-03-18 1984-03-27 Merck & Co., Inc. Osmotic drug delivery system
US4447224A (en) 1982-09-20 1984-05-08 Infusaid Corporation Variable flow implantable infusion apparatus
US4487603A (en) 1982-11-26 1984-12-11 Cordis Corporation Implantable microinfusion pump system
US4486194A (en) 1983-06-08 1984-12-04 James Ferrara Therapeutic device for administering medicaments through the skin
HUT35524A (en) 1983-08-02 1985-07-29 Hoechst Ag Process for preparing pharmaceutical compositions containing regulatory /regulative/ peptides providing for the retarded release of the active substance
EP0143949B1 (en) 1983-11-01 1988-10-12 TERUMO KABUSHIKI KAISHA trading as TERUMO CORPORATION Pharmaceutical composition containing urokinase
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
US4596556A (en) 1985-03-25 1986-06-24 Bioject, Inc. Hypodermic injection apparatus
DE3675588D1 (de) 1985-06-19 1990-12-20 Ajinomoto Kk Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist.
EP0272253A4 (en) 1986-03-07 1990-02-05 Massachusetts Inst Technology METHOD FOR IMPROVING GLYCOPROTE INSTABILITY.
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5011912A (en) 1986-12-19 1991-04-30 Immunex Corporation Hybridoma and monoclonal antibody for use in an immunoaffinity purification system
US4790824A (en) 1987-06-19 1988-12-13 Bioject, Inc. Non-invasive hypodermic injection device
US4941880A (en) 1987-06-19 1990-07-17 Bioject, Inc. Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly
US4965195A (en) 1987-10-26 1990-10-23 Immunex Corp. Interleukin-7
US4968607A (en) 1987-11-25 1990-11-06 Immunex Corporation Interleukin-1 receptors
WO1990005183A1 (en) 1988-10-31 1990-05-17 Immunex Corporation Interleukin-4 receptors
WO1990005144A1 (en) 1988-11-11 1990-05-17 Medical Research Council Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US6291158B1 (en) 1989-05-16 2001-09-18 Scripps Research Institute Method for tapping the immunological repertoire
US5683888A (en) 1989-07-22 1997-11-04 University Of Wales College Of Medicine Modified bioluminescent proteins and their use
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5312335A (en) 1989-11-09 1994-05-17 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US5064413A (en) 1989-11-09 1991-11-12 Bioject, Inc. Needleless hypodermic injection device
US5292658A (en) 1989-12-29 1994-03-08 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Boyd Graduate Studies Research Center Cloning and expressions of Renilla luciferase
EP1690935A3 (en) 1990-01-12 2008-07-30 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
AU651596B2 (en) 1990-06-05 1994-07-28 Immunex Corporation Type II interleukin-1 receptors
US6172197B1 (en) 1991-07-10 2001-01-09 Medical Research Council Methods for producing members of specific binding pairs
JP3126980B2 (ja) 1991-03-11 2001-01-22 ザ・ユニバーシテイ・オブ・ジヨージア・リサーチ・フアウンデーシヨン・インコーポレーテツド レニラ（ｒｅｎｉｌｌａ）ルシフェラーゼのクローニング及び発現
US5262522A (en) 1991-11-22 1993-11-16 Immunex Corporation Receptor for oncostatin M and leukemia inhibitory factor
WO1993011236A1 (en) 1991-12-02 1993-06-10 Medical Research Council Production of anti-self antibodies from antibody segment repertoires and displayed on phage
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US5383851A (en) 1992-07-24 1995-01-24 Bioject Inc. Needleless hypodermic injection device
US6239328B1 (en) 1992-10-05 2001-05-29 North Carolina State University Method for reducing expression variability of transgenes in plant cells
CA2146559A1 (en) 1992-10-23 1994-05-11 Melanie K. Spriggs Methods of preparing soluble, oligomeric proteins
DK0672142T3 (da) 1992-12-04 2001-06-18 Medical Res Council Multivalente og multispecifikke bindingsproteiner samt fremstilling og anvendelse af disse
JPH0731479A (ja) * 1993-02-23 1995-02-03 Shinichi Tominaga マウスｓｔ２ｌをコードするｄｎａ、該ｄｎａの発現産物、該ｄｎａを発現させることによる発現産物の製造方法
US5457035A (en) 1993-07-23 1995-10-10 Immunex Corporation Cytokine which is a ligand for OX40
KR960705209A (ko) 1993-09-10 1996-10-09 잭 엠. 그랜노위츠 녹색 형광 단백의 용도
WO1995021191A1 (en) 1994-02-04 1995-08-10 William Ward Bioluminescent indicator based upon the expression of a gene for a modified green-fluorescent protein
US7473423B2 (en) 1994-04-29 2009-01-06 Mayo Foundation For Medical Education And Research Human IgM antibodies, and diagnostic and therapeutic uses thereof particularly in the central nervous system
US5576191A (en) * 1994-06-17 1996-11-19 Immunex Corporation Cytokine that binds ST2
US5777079A (en) 1994-11-10 1998-07-07 The Regents Of The University Of California Modified green fluorescent proteins
US6066322A (en) 1995-03-03 2000-05-23 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of immune disorders
US6455685B1 (en) 1995-03-03 2002-09-24 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment and diagnosis of immune disorders
US5874304A (en) 1996-01-18 1999-02-23 University Of Florida Research Foundation, Inc. Humanized green fluorescent protein genes and methods
US5804387A (en) 1996-02-01 1998-09-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University FACS-optimized mutants of the green fluorescent protein (GFP)
US5876995A (en) 1996-02-06 1999-03-02 Bryan; Bruce Bioluminescent novelty items
US5925558A (en) 1996-07-16 1999-07-20 The Regents Of The University Of California Assays for protein kinases using fluorescent protein substrates
US6037525A (en) 1996-08-01 2000-03-14 North Carolina State University Method for reducing expression variability of transgenes in plant cells
US5976796A (en) 1996-10-04 1999-11-02 Loma Linda University Construction and expression of renilla luciferase and green fluorescent protein fusion genes
ATE387495T1 (de) 1996-12-03 2008-03-15 Amgen Fremont Inc Vollkommen humane antikörper die egfr binden
US6458547B1 (en) 1996-12-12 2002-10-01 Prolume, Ltd. Apparatus and method for detecting and identifying infectious agents
DE19711932A1 (de) 1997-03-21 1998-09-24 Anne Katrin Dr Werenskiold In vitro-Verfahren zum Prognostizieren des Krankheitsverlaufs von Patienten mit Mammakarzinom und/oder zum Diagnostizieren eines Mammakarzinoms
US6245974B1 (en) 1997-08-06 2001-06-12 North Carolina State University Matrix attachment regions
US6326472B1 (en) 1997-10-15 2001-12-04 Schering Corporation Human receptor proteins; related reagents and methods
GB9722131D0 (en) 1997-10-20 1997-12-17 Medical Res Council Method
DE69938293T2 (de) 1998-03-27 2009-03-12 Bruce J. Beverly Hills Bryan Luciferase, gfp fluoreszenzproteine, kodierende nukleinsaüre und ihre verwendung in der diagnose
US6177612B1 (en) 1998-07-31 2001-01-23 Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Department Of Agriculture And Agri-Food Canada Matrix attachment regions
EP1117815A1 (en) 1998-09-29 2001-07-25 Pioneer Hi-Bred International Inc. Mar/sar elements flanking rsyn7-driven construct
AU5309600A (en) 1999-06-02 2000-12-18 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment and diagnosis of immune disorders
US6833268B1 (en) 1999-06-10 2004-12-21 Abgenix, Inc. Transgenic animals for producing specific isotypes of human antibodies via non-cognate switch regions
US20030152926A1 (en) 1999-08-11 2003-08-14 Eos Biotechnology, Inc. Novel methods of diagnosis of angiogenesis, compositions and methods of screening for angiogenesis modulators
US6323334B1 (en) 1999-09-24 2001-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules encoding a 103 gene product and uses therefor
ATE349438T1 (de) 1999-11-24 2007-01-15 Immunogen Inc Cytotoxische wirkstoffe enthaltend taxane und deren therapeutische anwendung
US6566130B1 (en) 2000-01-28 2003-05-20 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Androgen-regulated gene expressed in prostate tissue
AU2001218871A1 (en) 2000-03-21 2001-10-03 Takao Arai Monoclonal antibody and method and kit for the immunoassay of soluble human st2 with the use of the same
KR100408844B1 (ko) 2000-07-29 2003-12-06 한국산업기술평가원 동물세포 발현벡터
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
US6812339B1 (en) 2000-09-08 2004-11-02 Applera Corporation Polymorphisms in known genes associated with human disease, methods of detection and uses thereof
WO2002057414A2 (en) 2000-10-20 2002-07-25 Expression Diagnostics, Inc. Leukocyte expression profiling
US7259010B2 (en) 2000-12-15 2007-08-21 Pangen Biotech Inc. Expression vector for animal cell containing nuclear matrix attachment region of interferon beta
WO2002068579A2 (en) 2001-01-10 2002-09-06 Pe Corporation (Ny) Kits, such as nucleic acid arrays, comprising a majority of human exons or transcripts, for detecting expression and other uses thereof
SG141239A1 (en) 2001-01-26 2008-04-28 Selexis Sa Matrix attachment regions and methods for use thereof
WO2002074979A2 (en) 2001-03-20 2002-09-26 Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Expression profiles and methods of use
AU2002311791A1 (en) 2001-03-29 2002-10-28 Incyte Genomics, Inc. Secretory molecules
US6905827B2 (en) 2001-06-08 2005-06-14 Expression Diagnostics, Inc. Methods and compositions for diagnosing or monitoring auto immune and chronic inflammatory diseases
DE60237282D1 (de) 2001-06-28 2010-09-23 Domantis Ltd Doppelspezifischer ligand und dessen verwendung
AU2002324700A1 (en) 2001-08-14 2003-03-03 Bayer Ag Nucleic acid and amino acid sequences involved in pain
EP1446507A2 (en) 2001-10-31 2004-08-18 Pfizer Products Inc. Therapeutics and diagnostics for disorders of erythropoiesis
US7504222B2 (en) 2001-10-31 2009-03-17 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
US7507787B2 (en) 2001-12-03 2009-03-24 The University Of British Columbia Effectors of innate immunity
NZ533721A (en) 2001-12-03 2007-12-21 Univ British Columbia Peptides and their use for treating inflammatory conditions
WO2003062395A2 (en) 2002-01-18 2003-07-31 Bristol-Myers Squibb Company Predictor sets for tyrosine kinase pathways
JP2003235573A (ja) 2002-02-13 2003-08-26 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 糖尿病性腎症マーカーおよびその利用
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
WO2003080640A1 (en) 2002-03-07 2003-10-02 Ludwig Institute For Cancer Research Lymphatic and blood endothelial cell genes
US20030224422A1 (en) 2002-04-08 2003-12-04 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Pre-and post therapy gene expression profiling to identify drug targets
AU2002364707A1 (en) 2002-04-23 2003-11-10 Duke University Atherosclerotic phenotype determinative genes and methods for using the same
AU2003234407B2 (en) 2002-05-09 2008-12-18 The Brigham And Women's Hospital, Inc. 1L1RL-1 as a cardiovascular disease marker and therapeutic target
EP1517921B1 (en) 2002-06-28 2006-06-07 Domantis Limited Dual specific ligands with increased serum half-life
JP2004121218A (ja) 2002-08-06 2004-04-22 Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk 気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の検査方法
DE60336149D1 (de) 2002-08-16 2011-04-07 Immunogen Inc Vernetzer mit hoher reaktivität und löslichkeit und ihre verwendung bei der herstellung von konjugaten für die gezielte abgabe von kleinmolekularen arzneimitteln
US7202343B2 (en) * 2002-08-19 2007-04-10 Abgenix, Inc. Antibodies directed to monocyte chemo-attractant protein-1 (MCP-1) and uses thereof
ATE549033T1 (de) * 2002-09-06 2012-03-15 Amgen Inc Therapeutischer menschlicher monoklonaler anti-il-1r1-antikörper
TW200413725A (en) 2002-09-30 2004-08-01 Oncotherapy Science Inc Method for diagnosing non-small cell lung cancers
US20040106113A1 (en) 2002-10-24 2004-06-03 Mike West Prediction of estrogen receptor status of breast tumors using binary prediction tree modeling
WO2004038376A2 (en) 2002-10-24 2004-05-06 Duke University Binary prediction tree modeling with many predictors and its uses in clinical and genomic applications
US7250496B2 (en) 2002-11-14 2007-07-31 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof
US7790867B2 (en) 2002-12-05 2010-09-07 Rosetta Genomics Inc. Vaccinia virus-related nucleic acids and microRNA
WO2004053157A2 (en) 2002-12-12 2004-06-24 Novartis Ag Methods for diagnosing and treating schizophrenia
WO2004056868A2 (en) 2002-12-19 2004-07-08 Endocube Sas Nf-hev compositions and methods of use
JP4898120B2 (ja) 2002-12-20 2012-03-14 アボット バイオセラピューティクス コーポレイション Ｇｐｒ６４に対する抗体とその利用法
AU2003290330A1 (en) 2002-12-27 2004-07-22 Domantis Limited Dual specific single domain antibodies specific for a ligand and for the receptor of the ligand
US20050181375A1 (en) 2003-01-10 2005-08-18 Natasha Aziz Novel methods of diagnosis of metastatic cancer, compositions and methods of screening for modulators of metastatic cancer
WO2004073657A2 (en) 2003-02-19 2004-09-02 Protein Design Labs, Inc. Methods of diagnosis of cancer and other diseases, composition and methods of screening for modulators of cancer and other diseases
US20070275374A1 (en) 2003-03-17 2007-11-29 Rinat Neuroscience Corp. Methods For Idendifying Drug Targets And Modulators Of Neurons and Compositions Comprising The Same
US7755007B2 (en) 2003-04-17 2010-07-13 K&H Manufacturing, Inc Heated pet mat
CA2528162A1 (en) 2003-06-04 2004-12-16 The Government Of The United States As Represented By The Secretary Of T He Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control Pni microarray and uses
EP1631682A1 (en) 2003-06-04 2006-03-08 Agency for Science, Technology and Research Differentially regulated hepatocellular carcinoma genes and uses thereof
US20090227464A1 (en) 2003-07-01 2009-09-10 Smadar Avigad Prognosis determination in ewing sarcoma patients by means of genetic profiling
AR045563A1 (es) * 2003-09-10 2005-11-02 Warner Lambert Co Anticuerpos dirigidos a m-csf
US7326567B2 (en) 2003-11-12 2008-02-05 Schering Corporation Plasmid system for multigene expression
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
JP2005204549A (ja) 2004-01-21 2005-08-04 Hubit Genomix Inc Ｃ型肝炎ウイルス感染者の経過に関する遺伝子およびその利用
NZ549040A (en) 2004-02-17 2009-07-31 Schering Corp Use for interleukin-33 (IL33) and the IL-33 receptor complex
US7837980B2 (en) 2004-03-02 2010-11-23 Seattle Genetics, Inc. Partially loaded antibodies and methods of their conjugation
CA2561669A1 (en) 2004-04-01 2005-10-20 Sequenom, Inc. Methods for identifying risk of osteoarthritis and treatments thereof
WO2005108415A2 (en) 2004-04-30 2005-11-17 Biogen Idec Ma Inc. Membrane associated molecules
BRPI0510883B8 (pt) 2004-06-01 2021-05-25 Genentech Inc composto conjugado de droga e anticorpo, composição farmacêutica, método de fabricação de composto conjugado de droga e anticorpo e usos de uma formulação, de um conjugado de droga e anticorpo e um agente quimioterapêutico e de uma combinação
US7423128B2 (en) 2004-11-03 2008-09-09 Amgen Fremont Inc. Anti-properdin antibodies, and methods for making and using same
JP2008521828A (ja) 2004-11-29 2008-06-26 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 操作された抗体およびイムノコンジュゲート
US7301019B2 (en) 2005-01-21 2007-11-27 Immunogen, Inc. Method for the preparation of maytansinoid esters
EP1909831A4 (en) 2005-06-14 2013-02-20 Amgen Inc PREPARATIONS OF SPONTANEOUS TAMPING PROTEINS
NZ623901A (en) 2005-08-03 2015-10-30 Immunogen Inc Immunoconjugate formulations
CA2617953C (en) 2005-08-09 2013-12-17 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Method of acylating maytansinol with chiral amino acids
US8527555B2 (en) 2006-03-01 2013-09-03 Thomson Licensing Device and method for generating a media package
EP2386860B1 (en) 2006-04-24 2014-11-05 Critical Care Diagnostics, Inc. Predicting mortality and detecting severe disease
US8865645B2 (en) 2006-05-24 2014-10-21 Biogen Idec Ma Inc. Method of treating lung fibrosis using ST2 polypeptide
US7560530B1 (en) 2006-07-20 2009-07-14 Schering Corporation IL-33 receptor
WO2008024919A2 (en) 2006-08-23 2008-02-28 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Interferon antagonists, antibodies thereto, and associated methods of use
EP2152740A1 (en) 2007-04-26 2010-02-17 Provost, Fellows and Scholars of the College of the Holy and Undivided Trinity of Queen Elizabeth near Dublin Products for altering il-33 activity and methods therefor
CA2686683A1 (en) 2007-05-18 2008-11-27 Medimmune, Llc Il-33 in inflammatory disease
CL2008002085A1 (es) 2007-07-16 2008-11-21 Genentech Inc Anticuerpo humanizado anti-cd79b/igbeta/b29; polinucleotido codificacnte, vector, celula huesped; metodo de fabricacion; inmunoconjugado; composicion farmaceutica; uso para tratar cancer; metodo in vitro para determinar presencia de cd79b, oinhibir crecimiento de celulas quqe expresa cd79b; ensayo in vitro para detectar celulas b
US7695963B2 (en) 2007-09-24 2010-04-13 Cythera, Inc. Methods for increasing definitive endoderm production
PL2235064T3 (pl) 2008-01-07 2016-06-30 Amgen Inc Sposób otrzymywania cząsteczek przeciwciał z heterodimerycznymi fc z zastosowaniem kierujących efektów elektrostatycznych
PL2247620T3 (pl) 2008-01-31 2017-08-31 Genentech, Inc. Przeciwciała anty-CD79B i immunokoniugaty i sposoby stosowania
CN112481367A (zh) 2008-03-31 2021-03-12 健泰科生物技术公司 用于治疗和诊断哮喘的组合物和方法
SG189811A1 (en) 2008-04-30 2013-05-31 Immunogen Inc Cross-linkers and their uses
US8298533B2 (en) * 2008-11-07 2012-10-30 Medimmune Limited Antibodies to IL-1R1
US7879978B2 (en) * 2009-03-31 2011-02-01 Centocor Ortho Biotech, Inc. Macaca fascicularis ST2L
US20120263709A1 (en) 2009-09-10 2012-10-18 Schering Corporation Use of il-33 antagonists to treat fibrotic diseases
KR101615474B1 (ko) 2010-12-16 2016-04-25 제넨테크, 인크. Th2 억제에 관한 진단 및 치료
TW201238976A (en) * 2011-02-23 2012-10-01 Hoffmann La Roche Antibodies against human IL33R and uses thereof
AR091069A1 (es) * 2012-05-18 2014-12-30 Amgen Inc Proteinas de union a antigeno dirigidas contra el receptor st2
JP5782185B2 (ja) 2012-06-01 2015-09-24 日本電信電話株式会社 パケット転送処理方法およびパケット転送処理装置
JO3532B1 (ar) 2013-03-13 2020-07-05 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد انترلوكين-33 واستعمالاتها
US9209965B2 (en) 2014-01-14 2015-12-08 Microsemi Semiconductor Ulc Network interface with clock recovery module on line card
US9300829B2 (en) 2014-04-04 2016-03-29 Canon Kabushiki Kaisha Image reading apparatus and correction method thereof

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999034217A1 (en) 1997-12-24 1999-07-08 The University Court Of The University Of Glasgow Reagents specific for st2l and uses therefor
WO2011127412A2 (en) * 2010-04-09 2011-10-13 Critical Care Diagnostics, Inc. Soluble human st-2 antibodies and assays
WO2013165894A2 (en) 2012-04-30 2013-11-07 Janssen Biotech, Inc. St2l antagonists and methods of use

Also Published As

Publication number Publication date
SI2850103T1 (sl) 2021-01-29
JP6382260B2 (ja) 2018-08-29
PE20150023A1 (es) 2015-01-22
ZA201407937B (en) 2017-09-27
CN104334582B (zh) 2018-10-26
PT2850103T (pt) 2020-10-01
CA3182435A1 (en) 2013-11-21
AR091069A1 (es) 2014-12-30
WO2013173761A2 (en) 2013-11-21
CR20140585A (es) 2015-03-06
BR112014028785B1 (pt) 2023-02-28
JP2019004885A (ja) 2019-01-17
HRP20201341T1 (hr) 2020-11-27
JP2022106790A (ja) 2022-07-20
EA201492149A8 (ru) 2015-10-30
EP2850103A2 (en) 2015-03-25
EP2850103B1 (en) 2020-07-22
UY34813A (es) 2013-11-29
PH12014502527B1 (en) 2015-01-12
EA035160B1 (ru) 2020-05-08
IL267599A (en) 2019-08-29
PH12014502527A1 (en) 2015-01-12
KR20230170805A (ko) 2023-12-19
US10227414B2 (en) 2019-03-12
MX2014013894A (es) 2015-01-16
EP3693395A1 (en) 2020-08-12
US20170267769A1 (en) 2017-09-21
TN2014000434A1 (en) 2016-03-30
DK2850103T3 (da) 2020-09-07
JP2015523967A (ja) 2015-08-20
US20140004107A1 (en) 2014-01-02
KR20230043229A (ko) 2023-03-30
CA2873549A1 (en) 2013-11-21
LT2850103T (lt) 2020-12-10
JP2016180001A (ja) 2016-10-13
EA201492149A1 (ru) 2015-03-31
JP6205410B2 (ja) 2017-09-27
PL2850103T3 (pl) 2020-12-14
HUE052442T2 (hu) 2021-04-28
AP2014008053A0 (en) 2014-11-30
HK1208479A1 (en) 2016-03-04
IL308770A (en) 2024-01-01
AU2013262593A1 (en) 2014-10-30
AU2013262593B2 (en) 2018-01-25
CA2873549C (en) 2023-02-28
BR112014028785A2 (pt) 2017-07-18
CN109206517A (zh) 2019-01-15
US9982054B2 (en) 2018-05-29
RS60819B1 (sr) 2020-10-30
NZ700856A (en) 2017-03-31
TWI600664B (zh) 2017-10-01
CR20190225A (es) 2019-06-07
EP2850103A4 (en) 2016-08-31
JO3623B1 (ar) 2020-08-27
ES2818571T3 (es) 2021-04-13
US20220119537A1 (en) 2022-04-21
AU2018202097A1 (en) 2018-05-31
CN104334582A (zh) 2015-02-04
JP2020171305A (ja) 2020-10-22
TW201350506A (zh) 2013-12-16
US20170002079A1 (en) 2017-01-05
KR20200115662A (ko) 2020-10-07
EA035160B9 (ru) 2020-10-01
SG11201407564TA (en) 2014-12-30
CN116333114A (zh) 2023-06-27
US20190359720A1 (en) 2019-11-28
IL235308A0 (en) 2014-12-31
MX356557B (es) 2018-06-04
IL267599B (en) 2021-04-29
IL282226B1 (en) 2024-01-01
US11965029B2 (en) 2024-04-23
IL282226A (en) 2021-05-31
MY170099A (en) 2019-07-05
PE20191408A1 (es) 2019-10-04
US9382318B2 (en) 2016-07-05
KR20220107316A (ko) 2022-08-02
CN109206517B (zh) 2022-12-02
WO2013173761A3 (en) 2014-02-20
CO7250445A2 (es) 2015-04-30
KR20150013167A (ko) 2015-02-04
US11059895B2 (en) 2021-07-13
IL282226B2 (en) 2024-05-01
CL2014003131A1 (es) 2015-02-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102161460B1 (ko) St2 항원 결합 단백질
KR20210134300A (ko) 항-sars-cov-2 스파이크 당단백질 항체 및 항원-결합 단편
CN107406508B (zh) 人源化的抗trop-2单克隆抗体及其应用
KR101963923B1 (ko) 이중특이적 t 세포 활성화 항원 결합 분자
AU2020233652A1 (en) Tumor necrosis factor-like ligand 1A specific antibodies and compositions and uses thereof
KR101833602B1 (ko) 이중특이적 t 세포 활성화 항원 결합 분자
AU2020200980B2 (en) Oncostatin M receptor antigen binding proteins
CN111954680B (zh) IL2Rβ/共同γ链抗体
KR20150122203A (ko) T 세포 활성화 이중특이적 항원 결합 분자
CN113402609A (zh) 具有经修饰的ch2-ch3序列的犬抗体
KR20180054837A (ko) 인간 cd40에 특이적으로 결합하는 작용성 항체 및 사용 방법
KR20100059985A (ko) 인간 ｇｍ－ｃｓｆ 항원 결합 단백질
TW201032823A (en) Human CGRP receptor binding proteins
KR20220152316A (ko) 신규한 항-lilrb4 항체 및 유도체 생성물
KR20230017815A (ko) 항-sars-cov-2 스파이크 당단백질 항체 및 항원-결합 단편
TW202216743A (zh) Ｉｌ－１０突變蛋白及其融合蛋白
CN115362175A (zh) 抗acvr1抗体及其用途
KR20230017841A (ko) Cd3 항원 결합 도메인을 포함하는 단백질 및 이의 용도
CN114174536A (zh) 抗trem-1抗体及其用途
EA044746B1 (ru) АНТИТЕЛА И АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ ФРАГМЕНТЫ ПРОТИВ ГЛИКОПРОТЕИНА ШИПОВ SARS-CoV-2
RU2815059C2 (ru) Собачьи антитела с модифицированными последовательностями ch2-ch3
RU2801209C2 (ru) Собачьи антитела с модифицированными последовательностями ch2-ch3
CN110785186A (zh) 用于治疗免疫性血小板减少的方法

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
A107 Divisional application of patent
GRNT Written decision to grant