KR102015152B1

KR102015152B1 - 사이클로스포린 a 제2형의 현탁액

Info

Publication number: KR102015152B1
Application number: KR1020147016157A
Authority: KR
Inventors: 아누라다 브이. 고어; 프렘 스와루프 모한티; 이. 퀸 파르네스
Original assignee: 알러간, 인코포레이티드
Priority date: 2011-11-15
Filing date: 2012-11-14
Publication date: 2019-08-27
Also published as: CA2856057A1; EP2779994A1; EP2779994B1; CN104080442B; US9238002B2; US10206971B2; AU2020270500B2; AU2019203051A1; JP2018162296A; JP2014533302A; CA2856057C; WO2013074625A1; CN104080442A; US8796222B2; AU2020270500A1; US20190343917A1; JP6363506B2; US20140322335A1; KR20140107254A; AU2017235927A1

Abstract

본 명세서에는 사이클로스포린 A 제2형의 현탁액을 제조하는 방법이 개시되어 있다.

Description

사이클로스포린 A 제2형의 현탁액{SUSPENSIONS OF CYCLOSPORIN A FORM 2}

관련 출원에 관한 교차참조

본 출원은 미국 특허 가출원 제61/559,866호(출원일: 2011년 11월 15일)에 대한 우선권을 주장하며, 이 기초 출원의 전체 내용은 참조로 본 명세서에 포함된다.

발명의 기술분야

본 발명은 나노기술 및 약물 제형 기술의 분야에 관한 것이다.

사이클로스포린 A는 안구 건조증을 치료하기 위하여 사용되는 레스타시스(Restasis)(등록상표) 내의 활성 성분이다. 사이클로스포린 A는 물에 난용성이므로, 현재 에멀전을 형성하기 위하여 오일에 약물을 용해시킴으로써 또는 수용액을 형성하기 위하여 높은 수준의 계면활성제 및/또는 가용화제와 약물을 혼합함으로써 조제되고 있다. 본 발명자들은, 대략 1 마이크로미터 이하의 평균 크기를 지니는(그 수치를 조망하기 위하여, 인간 모발의 평균 두께가 약 100 마이크로미터임) 사이클로스포린 A의 입자를 포함하는 나노현탁액을 형성하기 위하여, 새로운 결정 다형태의 사이클로스포린 A를 이용한 사이클로스포린 A의 제형을 발견하였다.

사이클로스포린 A의 나노현탁액은, 눈에 국소적으로 전달되는 경우, 이하를 포함하는 하나 이상의 이점을 지닐 수 있다:

용해에 이용 가능한 보다 높은 표면적으로 인해, 현탁액에 비해서 높은 생물학적 이용률;

보다 작은 입자로 인한 눈에서의 더 긴 유지력으로 인해 생물학적 이용률의 더 한층의 개선을 초래;

이물감 혹은 입자 자극에 대한 낮은 잠재성으로 인해 눈에서의 눈물 및 제형의 배출의 저감;

제형에서의 보다 낮은 수준의 계면활성제 혹은 가용화제로 인해 약물의 내약성 및 생물학적 이용률의 개선.

도 1은 밀링(milling) 전의 현탁액에 비해서 고압 균질화기를 이용해서 제조된 사이클로스포린 A 제2형 나노현탁액의 입자 크기 분포를 도시한 도면;
도 2는 상이한 계면활성제들 및 안정제들을 이용해서 제조된 사이클로스포린 A 제2형 나노현탁액을 이용해서 제조된 입자 크기 분포를 비교한 도면;
도 3은 Na CMC를 함유하는 비히클 중에 희석된 제형의 입자 크기 분포를 도시한 도면;
도 4는 마이크로플루이다이저(microfluidizer)를 이용해서 밀링한 후의 제2형을 이용한 나노현탁액과 비교한 사이클로스포린 A 제3형을 이용한 나노현탁액의 평균 입자 크기를 도시한 도면. 제2형은 나노현탁액(입자 크기 < 1㎛)을 형성하는 한편 제3형은 형성하지 못한다;
도 5 내지 13은 본 발명에 따른 4종의 상이한 제형(표 2에 요약됨)과 레스타시스(Restasis)(등록상표)가 NZW 암컷 래비트(총 2마리의 래비트, 한쪽 눈당 1가지 제형)에 단일 국소 용량으로 투여된 경우의 결과를 도시한 도면:
도 5는 각막 내 농도를 도시한 도면;
도 6은 약동학적 데이터를 요약한 도면;
도 7은 안구 결막 내 농도를 도시한 도면;
도 8은 안검결막 내 농도를 도시한 도면;
도 9는 안구 결막 및 안검결막에 대한 약동학적 데이터를 요약한 도면; .
도 10은 안구 결막 내 농도를 도시한 도면;
도 11은 안검결막 내 농도를 도시한 도면;
도 12는 눈물샘 내 농도를 도시한 도면;
도 13은 눈물샘에 대한 약동학적 데이터를 요약한 도면;
도 14는 새로운 결정형(본 명세서에서 제2형이라 지칭됨), 정방정계 형태(본 명세서에서 제1형이라 지칭됨) 및 사방정계 형태(본 명세서에서 제3형이라 지칭됨)의 CsA의 특징적인 X-선 분말 회절(XRPD) 패턴을 도시한 도면;
도 15는 CsA 결정형 제2형의 XRPD 회절도를 도시한 도면;
도 16은 CsA 제2형의 물 흡착/탈착 프로파일을 도시한 도면;
도 17은 1%의 PS80을 갖는 0.04% 제형으로부터 회수된 CsA 제2형의 MDSC 분석을 도시한 도면;
도 18은 사이클로스포린 A 형태들의 시뮬레이션된 XRPD 패턴을 도시한 도면.

사이클로스포린 A

사이클로스포린 A(CsA)는 이하의 화학 구조를 지니는 환식 펩타이드이다:

.

그의 화학명은 사이클로[[(E)-(2S,3R,4R)-3-하이드록시-4-메틸-2-(메틸아미노)-6-옥테닐]-L-2-아미노뷰티릴-N-메틸글라이실-N-메틸-L-류실-L-발릴-N-메틸-L-류실-L-알라닐-D-알라닐-N-메틸-L-류실-N-메틸-L-류실-N-메틸-L-발릴]이다. 이것은 또한 사이클로스포린, 사이클로스포린 A, 시클로스포린(ciclosporin) 및 시클로스포린 A라는 명칭으로도 알려져 있다. 이것은 0.05% (w/v) 사이클로스포린을 포함하는 에멀전인 레스타시스(Restasis)(등록상표)(알러간 인코포레이티드(Allergan, Inc.), 캘리포니아주의 얼바인시에 소재) 중의 활성 성분이다. 레스타시스(Restasis)(등록상표)는 눈물 생산이 건성 각결막염과 관련된 안구 염증으로 인해 억제된 것으로 추정되는 환자에서 눈물 생산을 증가시키기 위하여 미국에서 승인되었다.

사이클로스포린 A 제2형

사이클로스포린 A는 비정질 형태, 액정 형태, 정방정계 형태(제1형) 및 사방정계 형태(제3형)로 존재하는 것으로 알려져 있다. 새로운 결정형인 사이클로스포린 A 제2형은 최근에 발견되었다.

CsA 제2형의 XRPD 패턴은 정방정계 형태 및 사방정계 형태와는 상당히 다르다(도 14). CsA 제2형에 대한 결정질 주 피크는, 30kV/15mA에서 Cu Kα 방사선, λ = 1.54Å으로서 X-선원으로 X선 회절계에 의해 스캔될 때, 7.5, 8.8, 10.2, 11.3, 12.7, 13.8, 14.5, 15.6 및 17.5의 (2θ)(각각 약 11.8, 10.0, 8.7, 7.8, 7.0, 6.4, 6.1, 5.6 및 5.1Å에서의 결정 격자에서 d-간격, 도 15)에서 나타난다. 이들 주 피크는 사방정계 또는 정방정계 형태에 비해 제2형에 고유한 피크뿐만 아니라; 배경보다 5배 큰 강도를 갖는 피크로서 정의된다.

일 실시형태에 있어서, CsA의 새로운 결정형(제2형)은 사이클로스포린 A의 비화학량론적 수화물이다. 다른 실시형태에 있어서, 제2형 결정은 하기 화학식으로 표시된다:

상기 식 중, X는 물 분자의 수이고, 0 내지 3이다. 일 실시형태에 있어서, 상기 화학식 중 X는 2이다.

제2형은 수성 현탁액 중에 CsA의 동역학적으로 안정한 형태인 것으로 보인다. 제2형을 함유하는 현탁액은 저장 시 다른 공지된 다형태 또는 부정형으로의 전환은 보이지 않았다. 제1형 및 비정질형은 물의 존재 하에 제2형으로 전환되는 것으로 밝혀졌다.

CsA 제2형의 수화물 형태의 단결정 구조가 결정되었고, 그 결정 구조 파라미터가 표 2에 기재되어 있다. 이들 결과는 제2형이 다른 공지된 사이클로스포린 A의 결정형과 비교하여 독특하다는 것을 나타낸다.

이 CsA 제2형의 비대칭 단위는 1개의 사이클로스포린 A 분자와 2개의 물 분자를 함유한다. 물에 수소 결합할 수 있는 임의의 소분자가 공간 충전제의 역할을 할 수 있어, 사방정계 이수화물로부터 왜곡된 단사정계 이수화물에 이르는 잠재적 구조 범위를 부여하는 것이 가능하다. 단결정 구조로부터 계산된 XRPD 패턴이 도 8에 도시되어 있으며, 이것은 도 2에 도시된 실험 패턴과 일치한다. 이러한 일치 패턴은 제2형이 사이클로스포린 A의 독특하고 순수한 결정형이라는 것을 추가로 확증시켜준다.

이론에 의해 얽매이길 원치 않지만, KF 적정 및 증기 흡착 탈착 분석(vapor sorption desorption analysis: VSA)과 조합된 열 중량 분석은 CsA 제2형이 CsA의 비화학량론적 수화물이라는 것을 시사한다. 사이클로스포린 제2형의 증기 흡착 분석은 새로운 결정형의 함수량이 도 16에 도시된 바와 같이 상대 습도에 따라 가역적으로 변한다는 것을 나타낸다. 정방정계 형태와 유사하게, 새로운 CsA 형태는 변조 시차 열량계(modulated differential calorimetric: MDSC) 분석(도 17)에 의해 표시된 바와 같이 용융 전에 124.4℃에서 액체 결정 또는 비정질 형태로 상 전이를 경험한다.

사이클로스포린 A 제2형은 1% 폴리솔베이트(폴리솔베이트) 80 중 비정질의 0.05% 사이클로스포린 A(w/v)를 현탁시키고, 이 용액을 65℃로 가열시키고, 그 온도에서 24시간 동안 유지시키고 나서, 진공 여과에 의해 석출물을 회수함으로써 얻어질 수 있다. 그 후, 사이클로스포린 A 제2형을 종자 결정으로서 이용해서 추가량을 생성하기 위하여, 이와 같이 해서 얻어진 사이클로스포린 A 제2형을 이용하며; 이 방법에서, 1% (w/v) 폴리솔베이트 80을 함유하는 물 900㎖의 용액에 사이클로스포린 A 약 30g을 현탁시키고, 이 용액을 65℃로 가열하고 나서, 이것을 52℃의 온도에서 사이클로스포린 A 제2형 0.2g과 함께 파종한다. 그 후, 이 용액을 약 61℃ 내지 65℃의 온도에서 약 22시간 동안 교반하고 나서, 얻어지는 석출물을 회수한다.

CsA 제2형에 관한 추가의 상세는 미국 특허 출원 제13/480,710호에서 찾을 수 있으며, 이 문헌의 전체 내용은 참조로 본 명세서에 포함된다.

사이클로스포린 A 제2형의 현탁액

본 발명의 조성물은 사이클로스포린 A 제2형의 안과학적으로 허용가능한 현탁액이다. "안과학적으로 허용가능한"이란, 본 발명자들은 현탁액이 포유동물, 예를 들어, 인간의 눈에 투여될 경우 무자극성이 되도록 하는 방식으로 제형화되는 것을 의미한다. 일 실시형태에 있어서, 조성물은 현탁액이며; 즉, 이것은, 약 1㎛보다 큰 평균 입자 크기를 지녀 액체 비히클 전체를 통해 분산되는, 사이클로스포린 A 제2형의 입자를 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, 조성물은 나노현탁액이며; 즉, 이것은, 약 1㎛보다 작은 평균 입자 크기를 지녀 액체 비히클 전체를 통해 분산되는, 사이클로스포린 A 제2형의 입자를 포함한다.

일 실시형태에 있어서, 현탁액은 사이클로스포린 A 제2형을 약 0.001% 내지 약 10% (w/v)의 농도로 포함한다. 일 실시형태에 있어서, 현탁액은 사이클로스포린 A 제2형을 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.01%, 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.04% (w/v), 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.03% (w/v), 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.02% (w/v) 또는 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.01% (w/v)의 농도로 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, 현탁액은 사이클로스포린 A 제2형을 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.05%, 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.04% (w/v), 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.03% (w/v), 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.02% (w/v) 또는 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.01% (w/v)의 농도로 포함한다. 다른 실시형태에 있어서, 현탁액은 사이클로스포린 A 제2형을 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.1%, 약 0.1% (w/v) 내지 약 0.5% (w/v), 약 0.01% (w/v) 내지 약 1% (w/v) 또는 약 1% (w/v) 내지 약 10%의 농도로 포함한다.

예를 들어, 현탁액은 약 0.001% (w/v), 약 0.002% (w/v), 약 0.003% (w/v), 약 0.004% (w/v), 약 0.005% (w/v), 약 0.006% (w/v), 약 0.007% (w/v), 약 0.008% (w/v), 약 0.009% (w/v), 약 0.01% (w/v), 약 0.015% (w/v), 약 0.02% (w/v), 약 0.025% (w/v), 약 0.03% (w/v), 약 0.035% (w/v), 약 0.04% (w/v), 약 0.045% (w/v), 약 0.05% (w/v), 약 0.055% (w/v), 약 0.06% (w/v), 약 0.065% (w/v), 약 0.07% (w/v), 약 0.075% (w/v), 약 0.08% (w/v), 약 0.085% (w/v), 약 0.09% (w/v), 약 0.095% (w/v), 약 0.1% (w/v), 약 0.15% (w/v), 약 0.2% (w/v), 약 0.25% (w/v), 약 0.3% (w/v), 약 0.35% (w/v), 약 0.4% (w/v), 약 0.45% (w/v), 약 0.5% (w/v), 약 0.55% (w/v), 약 0.6% (w/v), 약 0.65% (w/v), 약 0.7% (w/v), 약 0.75% (w/v), 약 0.8% (w/v), 약 0.85% (w/v), 약 0.9% (w/v), 약 0.95% (w/v) 또는 약 1.0% (w/v)의 사이클로스포린 A 제2형을 포함할 수 있다.

일 실시형태에 있어서, 현탁액은 계면활성제를 포함한다. 일 실시형태에 있어서, 계면활성제는 폴리옥시에틸렌(20) 솔비탄 모노올레에이트(폴리솔베이트 80), 폴리에틸렌 글라이콜 660 하이드록시스테아레이트(솔루톨(Solutol)), 폴리옥시에틸렌(40) 스테아레이트 Myrj 52(POE-40-스테아레이트), 플루로닉 F68(폴록사머(Polaxamer) 188), 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노라우레이트(폴리솔베이트 20) 및 글라이코콜산 나트륨(NaGC)으로부터 선택된다. 비히클은 이들 계면활성제들의 모두, 또는 이들 중 1종, 2종, 3종, 4종 혹은 5종을 함유할 수 있다.

작업자는 약 0.001% (w/v) 내지 약 5% (w/v)의 계면활성제를 이용할 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 현탁액은 약 0.001% (w/v) 내지 약 1% (w/v), 약 0.001% (w/v) 내지 약 0.1% (w/v), 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.1% (w/v) 또는 약 0.1% (w/v) 내지 약 1% (w/v)의 계면활성제를 함유한다. 예를 들어, 현탁액은 약 0.001% (w/v), 약 0.002% (w/v), 약 0.003% (w/v), 약 0.004% (w/v), 약 0.005% (w/v), 약 0.006% (w/v), 약 0.007% (w/v), 약 0.008% (w/v), 약 0.009% (w/v), 약 0.01% (w/v), 약 0.02% (w/v), 약 0.03% (w/v), 약 0.04% (w/v), 약 0.05% (w/v), 약 0.06% (w/v), 약 0.07% (w/v), 약 0.08% (w/v), 약 0.09% (w/v), 약 0.1% (w/v), 약 0.2% (w/v), 약 0.3% (w/v), 약 0.4% (w/v), 약 0.5% (w/v), 약 0.6% (w/v), 약 0.7% (w/v), 약 0.8% (w/v), 약 0.9% (w/v), 약 1% (w/v), 약 2% (w/v), 약 3% (w/v), 약 4% (w/v) 또는 약 5% (w/v)의 계면활성제를 함유할 수 있다.

1종 보다 많은 현탁액을 이용할 경우, 현탁액은 각각 동일한 양 혹은 상이한 양을 함유할 수 있다.

현탁액은, 계면활성제 이외에도, 안정제를 함유할 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 안정제는 하이드록시 프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 카복시메틸셀룰로스, 페뮬린(Pemulen)(등록상표) 및 페뮬린(Pemulen)(등록상표) TR-2로부터 선택된다. 페뮬린(Pemulen)(등록상표)은 루브리졸사(Lubrizol Corp)에서 제조된 아크릴산과 C10-C30 알킬 아크릴레이트의 고분자량의 가교결합된 공중합체의 상표명이다. 페뮬린(Pemulen)(등록상표) TR-2는 다른 페뮬린(Pemulen)(등록상표) 중합체보다 높은 수준의 소수성 기를 함유하는 C10-30 알킬 아크릴레이트 교차중합체이다. 비히클은 이들 안정제를 모두 함유하거나 또는 전혀 함유하지 않거나, 또는 이들 중 1종, 2종, 3종, 4종 혹은 5종을 함유할 수 있다.

작업자는 약 0.01% (w/v) 내지 약 10% (w/v)의 안정제를 사용할 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 현탁액은 약 0.01% (w/v) 내지 약 1% (w/v) 또는 약 0.01% (w/v) 내지 약 0.1% (w/v) 또는 약 0.1% (w/v) 내지 약 1% (w/v)의 안정제를 함유한다. 예를 들어, 현탁액은 약 0.01% (w/v), 약 0.02% (w/v), 약 0.03% (w/v), 약 0.04% (w/v), 약 0.05% (w/v), 약 0.06% (w/v), 약 0.07% (w/v), 약 0.08% (w/v), 약 0.09% (w/v), 약 0.1% (w/v), 약 0.2% (w/v), 약 0.3% (w/v), 약 0.4% (w/v), 약 0.5% (w/v), 약 0.6% (w/v), 약 0.7% (w/v), 약 0.8% (w/v), 약 0.9% (w/v), 약 1% (w/v), 약 2% (w/v), 약 3% (w/v), 약 4% (w/v), 약 5% (w/v), 약 6% (w/v), 약 7% (w/v), 약 8% (w/v), 약 9% (w/v) 또는 약 10%의 안정제를 함유할 수 있다.

1종 보다 많은 계면활성제를 이용할 경우, 현탁액은 각각 동일한 양 혹은 상이한 양을 함유할 수 있다.

비히클은, 계면활성제 이외에도, 또한 글라이세린, 만니톨, 시트르산나트륨 2수화물, 염화칼륨, 붕산 및 붕산나트륨 10수화물로부터 선택된 긴장성 조절제(tonicity adjustor)를 포함할 수 있다. 긴장성 조절제는 필요에 따라 목적으로 하는 긴장성을 얻기 위하여 첨가되되; 비히클은 이들 긴장성 조절제를 모두 함유하거나 혹은 어느 것도 함유하지 않거나, 또는 이들 중 1종, 2종, 3종, 4종 혹은 5종을 함유할 수 있다. 일 실시형태에 있어서, 긴장성 조절제는 약 0.1% (w/v) 내지 약 10% (w/v)의 양으로 존재한다. 1종보다 많은 긴장성 조절제를 이용할 경우, 현탁액은 각각 동일한 양 혹은 상이한 양을 함유할 수 있다.

현탁액은 통상 목적으로 하는 pH, 긴장성, 그리고 눈에 투여하기에 적합한 현탁액을 만드는 기타 특성을 제공하기 위하여 충분한 양으로 물을 함유한다.

사이클로스포린 A 제2형의 현탁액을 제조하는 방법

본 발명의 제형은, 사이클로스포린 A 제2형을, 위에서 기재된 바와 같은, 적절한 계면활성제, 안정제 및 긴장성 조절제와 혼합하여 현탁액을 형성함으로써 제조될 수 있다. 사이클로스포린 A의 미립자가 요망된다면, 현탁액은 매사추세츠주의 뉴턴시에 소재한 마이크로플루이딕스 인터내셔널사(Microfluidics Int'l Corp.)로부터 상업적으로 입수가능한 것들과 같은 고압 균질화기를 이용해서 밀링된다. 사이클로스포린 A 제2형의 독특하고 경이로운 특성은, 필요한 경우, 1㎛ 미만의 평균 입자 크기(d90)를 지니는 현탁액을 얻기 위하여, 밀링될 수 있다. 이러한 나노현탁액 중의 사이클로스포린 A는, 용해를 위하여 이용가능한 보다 높은 표면적으로 인해, 사이클로스포린 A의 다른(거대) 현탁액에 비해서 더 높은 생물학적 이용률을 지니며; 생물학적 이용률은 보다 작은 입자가 사이클로스포린 A를 눈에서 더 길게 유지될 수 있게 하기 때문에 더 한층 증대된다. 나노현탁액 중의 더 작은 입자는 제형이 눈에 주입될 경우 대상체가 느끼는 이물감 혹은 기타 자극을 발생시킬 보다 낮은 잠재성을 지니는 제형을 생성한다. 또한, 입자들이 보다 작기 때문에, 이들은 계면활성제 및 안정제와 더 용이하게 연합됨으로써 이들을 보다 낮은 농도로 이용할 수 있게 한다.

사이클로스포린 A 제2형 현탁액이 밀링된 후, 희석되어 최종 제품이 얻어진다.

치료 방법

본 발명의 조성물은 본 명세서에 기재된 농도에서 사이클로스포린 A(레스타시스(Restasis)(등록상표) 등)를 이용한 국소 치료를 받기에 적합한 것으로 알려진 안구의 각종 병태를 치료하는데 이용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 안구 건조증으로 고통받는 환자를 치료하고, 안검염 및 마이봄선 질환을 치료하며, 눈에 대한 시력교정수술로 인해 손상된 각막 감도를 회복하고, 알레르기성 결막염 그리고 아토피성 및 봄철 각결막염을 치료하며, 특히 프티레지아(ptyregia), 결막 및 각막 염증, 각결막염, 이식편 대 숙주병, 이식후 녹내장, 각막 이식, 사상균성 각막염, 티제슨의 표층 점상 각결막염, 포도막염, 및 시어도어의 상위 윤부 각결막염을 치료하는데 이용될 수 있다.

국제 안구 건조증 워크샵(International Dry Eye Workshop: DEWS)은 "불편한 증상, 시력 장애, 그리고 안구 표면의 염증 및 눈물막의 삼투압 증가에 의해 수반되는 안구 표면에 잠재적인 손상을 가지는 눈물막 불안정성을 초래하는 눈물 및 안구 표면의 다인성 질환"으로서 정의한다. 이것은 눈물 결핍 또는 과도한 눈물 발산에 의해 초래되는 건성 각결막염 등과 같은 병태들을 포함한다.

안검염은 피부 및 그의 관련 구조(모발 및 피지선), 점막 피부접합부 및 마이봄선의 연루와 함께, 전방 및 후방 눈꺼풀 테의 염증을 발생하는 만성 장애이다. 이것은 또한 진행된 단계에서의 결막, 눈물막 및 각막 표면에 영향을 미칠 수 있고 또한 안구 건조증과 연관될 수 있다. 안검염은 통상 전방 또는 후방 안검염으로 분류되되, 전방 안검염은 눈꺼풀의 속눈썹 보유 영역에 영향을 미치고, 후방 안검염은 주로 마이봄선 분출구멍에 영향을 미친다.

마이봄선 질환은 3가지 형태: 1차 마이봄선염, 2차 마이봄선염 및 마이봄 지루 중 하나로서 가장 자주 일어난다. 마이봄 지루는 염증(과다분비 마이봄선 질환)의 부재 시 과도한 마이봄 분비를 특징으로 한다. 대조적으로, 1차 마이봄선염은 울혈성 및 농축성 마이봄 분비(폐쇄성 과다분비 마이봄선 질환)로 구별된다. 2차 마이봄선염은, 마이봄선이 전방 눈꺼풀 테 안검염으로부터 반점 형식으로 이차적으로 염증을 일으키는 국소 염증성 반응을 나타낸다.

각막 감각 손상은 시력교정수술, 예컨대, 굴절교정 레이저각막절제술(photorefractive keratectomy), 라섹수술(laser assisted sub-epithelium keratomileusis: LASEK), 에피-라섹(EPI-LASEK), 맞춤식 경상피 비접촉 절제술(customized transepithelial non-contact ablation), 또는 각막 신경들이 절단되는 기타 시술 후에 종종 일어난다. 각막 감각 손상은 예컨대 HSV-1, HSV-2 및 VZV 바이러스 등과 같은 바이러스 감염 후에 일어날 수도 있다. 각막 감각 손상 환자는, 눈물 생산 및 증발이 정상일 수 있더라도, 종종 그들의 눈이 건조함을 느끼는 것을 불평하는 바, 이러한 환자에서의 "건조함"은 실제로 각막 신경이 수술에 의해 절단되거나 또는 바이러스 감염 후에 염증을 일으킬 때 유발되는 각막 신경장애의 한 형태인 것을 시사한다.

알레르기성 결막염은 1개 이상의 알레르기항원에 대한 과민성에 기인하는 결막의 염증이다. 이것은 급성, 간헐적 혹은 만성일 수 있다. 이것은 계절적으로, 즉, 한 해의 단지 소정 시기에만 일어나거나, 또는 사계절에, 즉, 한 해의 전체를 통해서 만성적으로 일어난다. 계절 및 다년성 알레르기성 결막염의 증상으로는, 결막의 염증 이외에도, 누루(lacrimation), 눈물흘림(tearing), 결막 혈관 팽창, 소양증, 유두상 과증식, 결막부종, 눈꺼풀 부종 및 눈으로부터의 분비물을 포함한다. 분비물은 야간의 수면 후 눈에 대해서 눈꼽을 형성할 수 있다.

아토피성 각결막염은 종종 시각장애를 초래하는 만성의 중증 형태의 알레르기성 결막염이다. 증상으로는 소양증, 작열감, 통증, 발적, 이물감, 광민감성 및 흐려보임을 포함한다. 특히 야간의 수면에서 깨어났을 때 분비물이 종종 있으며; 그 분비물은 실 형태, 로프 형태 및 뮤코이드일 수 있다. 하부 결막은 상부 결막보다 더 두드러지게 자주 병에 걸린다. 결막은 창백함, 부종, 및 진행된 질환의 특성을 지니는 무특색(featureless)의 범위일 수 있으며, 상기 진행된 질환으로는 유두상 비대, 상피하부 섬유증, 원개 단축(formix foreshortening), 눈썹 난생증(trichiasis), 안검내번 및 눈썹탈락증을 포함한다. 몇몇 환자에 있어서, 질환은 점상 상피 미란(punctate epithelial erosions), 각막 신혈관형성, 및 시각을 손상시킬 수 있는 각막병증의 기타 특성으로 진행한다. 전형적으로 결막에서의 배상 세포 증식, 상피 유사관 형성(epithelial pseudotubular formation), 그리고 상피 내 호산구 및 비만세포를 탈과립화 수의 증가가 있다. CD25+T 림프구, 대식세포 및 수지상 세포(HLA-DR.sup.+, HLA-CD1+)는 고유질(substantia propria)에서 유의하게 높아진다.

아토피성 각결막염과 마찬가지로, 봄철 각결막염은 알레르기성 결막염의 중증 형태이지만, 하부 결막보다 더 두드러지게 상부 결막에 영향을 미치는 경향이 있다. 이것은 2가지 형태로 일어난다. 눈꺼풀 형태에 있어서, 정사각형의 경질이면서 평탄화된 치밀하게 채워진 유두상이 존재하며; 안구(윤부) 형태에 있어서, 각막주위 결막은 비대해지고 회색을 띠게 된다. 이들 두 형태는 종종 뮤코이드 분비물을 동반한다. 각막 상피 소실이 일어나, 중앙의 각막 플라크 및 트랜타스 도트(Trantas' dot)일 수 있는 바와 같은, 통증 및 광선혐기증을 동반할 수 있다.

실시예

본 발명은 이하의 실시예에 의해 더욱 설명된다.

실시예 1

본 발명자들은 이하의 조성을 제조하였다:

표 1의 제형은 이하의 과정에 의해 제조되었다:

1. 농축된 사이클로스포린 A 나노현탁액의 제조

a. 사이클로스포린 A를 적절한 비히클과 혼합하여 현탁액을 형성하였다. 이 현탁액 중의 사이클로스포린 A의 농도는 1 내지 10%의 범위 내이다.

b. 사이클로스포린 A 현탁액을 고압 균질화기(매사추세츠주의 뉴턴시에 소재한 마이크로플루이딕스사(Microfluidics)에서 제작한 마이크로플루이다이저(Microfluidizer)(등록상표)) 또는 볼 밀을 이용해서 밀링하여 d90 < 11 Jm이 되도록 나노현탁액을 얻었다.

c. 나노현탁액 농축액의 제조에 이용된 비히클은 표 1에 열거된 바와 같다.

2. 최종 제품의 제조

a. 단계-1에서 제조된 농축된 나노현탁액을 안과적 투여에 적합한 비히클 중에 희석시켜 필요한 용량 강도의 사이클로스포린 A에서의 최종 제품을 얻었다. 희석에 적합한 비히클은 목적으로 하는 농도의 CsA를 지니는 최종 제형을 얻기 위하여 완충제, 안정제, 겔화제 및/또는 희석제를 함유할 수 있다.

b. 나노현탁액 농축액의 희석 후에 제조된 나노현탁액 제형의 조성물은 표 2에 열거되어 있다.

상이한 제형들의 입자-크기 분포는 도 1, 도 2 및 도 3에 도시되어 있다.

도 1은 밀링 전의 현탁액에 비해서 고압 균질화기를 이용해서 제조된 사이클로스포린 A 제2형 나노현탁액의 입자 크기 분포를 도시하고 있다.

도 2는 상이한 계면활성제들 및 안정제들을 이용해서 제조된 사이클로스포린 A 제2형 나노현탁액을 이용해서 제조된 입자 크기 분포를 비교하고 있다.

도 3은 Na CMC를 함유하는 비히클 중에 희석된 제형의 입자 크기 분포를 도시한 도시하고 있다(표 2, 비히클 A). 단, 희석된 제형에서는 나노현탁액 농축액에 비해 2주에 걸쳐서 입자 크기의 변화는 보이지 않는다.

사이클로스포린 A 제3형의 평균 입자 크기는 도 4에 도시되어 있다. 사이클로스포린 A 제2형은 나노현탁액(입자 크기 < 1㎛)을 형성하는 한편 제3형은 형성하지 못한다.

이들 실험은, 제2형이 CsA의 임의의 기타 결정형보다 낮은 입자 크기를 지니는 나노현탁액을 일관되게 생산하는 것을 나타낸다. 보다 작은 입자 크기의 제2형 나노현탁액은 다른 형태에 비해서 유리한데; 다른 이유 중에서, 용해에 대한 보다 큰 표면적 및 눈에의 보다 긴 유지로 인해 보다 큰 생물학적 이용률뿐만 아니라 향상된 물리적 안정성을 보일 것으로 기대된다.

실시예 2

본 발명자들은 이하의 표 2에 열거된 사이클로스포린 A 나노현탁액들을 제조하였다:

본 발명자들은 NZW 암컷 래비트(총 2마리의 래비트, 한쪽 눈당 1가지 제형)에 단일 국소 용량으로 상기 제형을 투여하였다. 그 결과들은 도 5 내지 도 13에 요약되어 있다. 이들은 제형 B1이 A의 5배 낮은 용량의 사이클로스포린(0.01% 대 0.05%)을 전달하지만 0.05% 레스타시스(Restasis)(등록상표)에 대한 견줄만한 각막 노출을 유지할 뿐만 아니라 안구 결막 및 안검결막에 대한 전달을 향상시키는 것을 나타낸다.

Claims

제형으로서,
사이클로스포린 A 제2형 및
비히클을 포함하는 제형.
제1항에 있어서, 상기 비히클은 적어도 1종의 계면활성제 및 적어도 1종의 안정제를 포함하는 것인 제형.
제2항에 있어서, 사이클로스포린은 0.01% (w/v) 내지 10% (w/v)의 농도로 있는 것인 제형.
제3항에 있어서, 상기 비히클은 폴리옥시에틸렌(20) 솔비탄 모노올레에이트, 폴리에틸렌 글라이콜 660 하이드록시스테아레이트, 폴리옥시에틸렌(40) 스테아레이트 Myrj 52, 폴록사머 188, 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노라우레이트 및 글라이코콜산 나트륨으로 이루어진 군으로부터 각각 선택된 1종, 2종, 3종, 4종, 5종 또는 6종의 계면활성제를 포함하는 것인 제형.
제3항에 있어서, 상기 비히클은 0.1% 내지 5% (w/v) 농도의 폴리옥시에틸렌(20) 솔비탄 모노올레에이트, 0.1% 내지 5% (w/v) 농도의 폴리에틸렌 글라이콜 660 하이드록시스테아레이트, 0.1% 내지 5% (w/v) 농도의 폴리옥시에틸렌(40) 스테아레이트 Myrj 52, 0.1% 내지 5% (w/v) 농도의 폴록사머 188, 0.1% 내지 5% (w/v) 농도의 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노라우레이트 및 0.1% 내지 5% (w/v) 농도의 글라이코콜산 나트륨으로 이루어진 군으로부터 각각 선택된 1종, 2종, 3종, 4종, 5종 또는 6종의 계면활성제를 포함하는 것인 제형.
제4항에 있어서, 상기 비히클은 하이드록시 프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈 및 카복시메틸셀룰로스로 이루어진 군으로부터 각각 선택된 1종, 2종, 3종 혹은 4종의 안정제를 포함하는 것인 제형.
제5항에 있어서, 상기 비히클은 0.1% 내지 5% (w/v) 농도의 하이드록시프로필 셀룰로스, 0.1% 내지 5% (w/v) 농도의 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 0.1% 내지 5% (w/v) 농도의 하이드록시에틸셀룰로스, 및 0.1% 내지 5% (w/v) 농도의 폴리비닐 피롤리돈, 및 0.1% 내지 5% (w/v) 농도의 카복시메틸셀룰로스로 이루어진 군으로부터 각각 선택된 1종, 2종, 3종 혹은 4종의 안정제를 포함하는 것인 제형.
제7항에 있어서, 상기 비히클은 글라이세린, 만니톨, C10-30 알킬 아크릴레이트 교차중합체, 시트르산나트륨 2수화물, 염화칼륨, 붕산, 붕산나트륨 10수화물 및 물로부터 선택된 1종, 2종, 3종, 4종, 5종, 6종, 7종, 8종 또는 9종의 성분을 더 포함하는 것인 제형.
제7항에 있어서, 상기 비히클은 1.0% (w/v) 내지 2.2% (w/v) 농도의 글라이세린, 0.5% (w/v) 농도의 만니톨, 0.01% (w/v) 내지 0.1% (w/v) 농도의 C10-30 알킬 아크릴레이트 교차중합체, 0.4% (w/v) 농도의 시트르산나트륨 2수화물, 0.14% (w/v) 농도의 염화칼륨, 0.25% (w/v) 농도의 붕산, 0.41% (w/v) 농도의 붕산나트륨 10수화물 및 물로부터 선택된 1종, 2종, 3종, 4종, 5종, 6종, 7종, 8종 또는 9종의 성분을 더 포함하는 것인 제형.
사이클로스포린의 제형을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은,
사이클로스포린 A 제2형을 비히클과 혼합하여 현탁액을 형성하는 단계; 및
현탁액을 밀링(milling)하는 단계를 포함하는, 사이클로스포린의 제형의 제조방법.
제10항에 있어서, 현탁액은 10분 내지 120분 동안 밀링되는 것인, 사이클로스포린의 제형의 제조방법.
제10항에 있어서, 현탁액은 60분 동안 밀링되는 것인, 사이클로스포린의 제형의 제조방법.
제형으로서,
사이클로스포린 A 제2형의 입자; 및
비히클을 포함하고,
상기 입자의 평균 크기(d90)는 10㎛ 미만인 것인 제형.
제13항에 있어서, 상기 입자의 평균 크기는 1㎛ 미만인 것인 제형.
제1항 내지 제9항, 제13항 및 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 안구 건조증, 안검염, 마이봄선 질환, 각막 감각 손상, 알레르기성 결막염, 아토피성 각결막염, 봄철 각결막염 및 프티레지아(ptyregia)로부터 선택된 병태의 치료에 사용하기 위한 제형.