KR101796391B1 - Blt 저해 활성을 갖는 신규 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Blt 저해 활성을 갖는 신규 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 BLT2 (Leukotriene B4 receptor 2) 억제 활성을 나타내는 신규 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명에서는, BTL2 억제 활성을 나타내는 신규 화합물을 규명하였으며, 상기 화합물의 우수한 암세포 사멸 증진 및 전이 억제 효과, 주화성 억제 효과, 및 항 천식 효과 등을 실험적으로 확인하였는바, 염증성 질환의 예방 또는 치료에 있어서, 보다 근본적으로 접근하여 타겟치료를 할 수 있을 것으로 기대된다.

Description

BLT 저해 활성을 갖는 신규 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 조성물 {Novel compound having BLT-inhibitory activity and composition for preventing or treating inflammatory diseases comprising the same as an active ingredient}
본 발명은 신규 화합물 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 BLT2 (Leukotriene B4 receptor 2) 억제 활성을 나타내는 신규 화합물 및 이를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다.
염증반응은 생체나 조직에 물리적 작용이나 화학적 물질, 세균 감염, 면역학적 자극 등이 가해질 때, 이에 대해 방어할 수 있도록 다양한 작용기전을 통해 활성화되는 인체의 면역 시스템 중 하나이다. 다만, 이와 같은 염증반응이 지속되면 오히려 점막 손상을 촉진하게 되며, 이에 따라 발적, 발열, 종창, 동통, 기능장애 등으로 인한 류마티스 관절염, 동맥경화증, 위염, 천식 등의 염증성 질환을 유발하는 것을 알려져 있다. 이러한, 염증반응은 시간의 경과에 따라 급성염증과 만성염증으로 구분되며, 급성염증은 염증반응이 수 일 내지 수 주간 지속되고, 홍반, 발열, 통증, 부종과 같은 증상을 야기하는 반면, 만성염증은 장기간 염증상태가 지속되는 것으로 때로는 수 년 내지 수십 년에 걸쳐 나타나며, 단핵세포의 침윤, 섬유모세포 및 모세혈관의 증식, 결합조직의 증가로 인한 섬유화, 조직의 파괴 등의 조직학적 변화를 수반한다.
구체적으로, 생체 내 염증성 자극이 가해지면, 국소적으로 히스타민(histamine), 브레디키닌 (bradykinin), 프로스타글란딘 (prostaglandins), 산화질소(nitric oxide, NO), 각종 전염증성 사이토카인 (pro-inflammatory cytokines) 등이 합성, 분비되며, 이들은 혈관 확장 뿐 아니라 홍반, 발열, 통증, 부종을 유발시킨다. 특히, 체내 염증 과정에서 인터페론-감마 (interferon-γ, INF-γ), 종양괴사인자-알파 (tumor necrosis factor-α, TNF-α), 인터루킨-1 (interleukin-1, IL-1), 인터루킨-6(interleukin-6, IL-6) 등의 사이토카인과 같은 일반적인 면역 인자들 외에도 산화질소 (NO) 및 프로스타글란딘 E2 (prostaglandin E2, PGE2)이 주요 염증 유발 물질로 잘 알려져 있다.
종래 염증 반응의 종결은 염증을 시작하는 물질들의 수준이 감소하면 자연적이고 수동적으로 일어나는 현상이라고 알려져 왔으나, Serhan 등이 lipoxin, resovin, protectin 류 등을 발견하여 이들에 의해 염증의 시작에 관여하는 프로스타글란딘 (prostaglandin)류처럼 염증의 종결이 능동적으로 촉진된다는 것을 발견하였다. 예를 들어, Resolvin E1은 통증에 효과적이며, RvE1는 염증의 종결을 유도하여 알레르기 염증 질환의 치료에 효과가 있다는 점이 보고된 바 있다. 또한, 만성 염증 질환에서 이러한 염증 종결을 능동적으로 촉진하는 인자들 즉, lipoxin A4, 아스피린에 의해 유도되는 lipoxin의 수준이 천식 환자 및 죽상동맥경화 환자에서 낮게 관찰됨이 보고된 바 있다.
이에, 염증의 종결을 유도하는 신규 물질을 발굴하여, 염증 종결 이상과 관련된 질환을 치료하고자 하는 시도가 다양하게 진행되고 있으나 (한국공개특허 10-2015-0011875), lipoxin, resovin 등에 속한다고 알려진 화합물은 그 구조에 여러 개의 이중결합이 포함되어 있어 대사적으로 불안정하여 생체에서 빠르게 분해되는 등의 단점을 가지고 있으며, 물질을 대량생산하여 약으로 개발하기에는 다소 어려워, 약물성에 큰 문제점을 가지고 있다.
한편, 류코트리엔 (Leukotriene B4; LTB4)은 급성 및 만성염증을 매개하는 5-리폭시제나제 경로에 의해 아라키돈산(AA)으로부터 합성되는 염증성 리피드 매개체 군이다. LTB4는 BLT1과 BLT2 의 두 가지 형태의 수용체들에 결합함으로써 생물학적 영향을 주는 것으로 알려져 있다. BLT2(Leukotriene B4 receptor 2)는 GPCR(G protein-coupled receptor) 군 중 하나로 LTB4에 대해 낮은 친화력을 갖는 수용체이며, 5-리폭시제나제 의존성 경로를 통해 유도된 아라키돈산(AA)의 리피드 매개체이다.
이에, 본 발명자들은 상기와 같은 종래의 문제점을 해결하기 위하여, 보다 효과적인 염증의 종결을 유도하는 물질을 개발하기 위한 연구를 계속하던 중, BLT2 억제 활성을 나타내는 신규 화합물을 제조하였으며, 상기 화합물을 포함하는 염증성 질환 치료제를 최초로 고안하였다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로서, 본 발명자들은 BLT2 억제 활성을 나타내는 신규 화합물의 염증성 질환 치료 효과를 확인하고 이에 기초하여 본 발명을 완성하게 되었다.
이에, 본 발명의 목적은 BLT2 억제 활성을 나타내는 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 BLT2 억제 활성을 나타내는 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 화합물은 tert-부틸 4-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트; N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-메틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-에틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-(사이클로프로필메틸)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-사이클로헥실피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-(사이클로헥실메틸)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-아이소부틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-페닐-N-(3-(4-(4-(프로프-2-이닐)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-시아노피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; tert-부틸 4-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트; N-(3-플루오로페닐)-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(3-플루오로페닐)-N-(3-(4-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; tert-부틸 4-(4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트; N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(4-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(3-(4-(몰폴린-4-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-페닐-N-(3-(4-(피페리딘-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N,N-다이에틸-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤즈아마이드; N-페닐-N-(3-(3-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(3-(3-(4-메틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(3-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; tert-부틸-4-(3-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트; N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(3-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(3-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(3-(4-하이드록시페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세트산; tert-부틸 4-(5-(3-((N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)피콜리노일)피페라진-1-카복실레이트; N-페닐-N-(3-(6-(피페라진-1-카보닐)피리딘-3-일)프로프-2-인-1-일)펜탄아마이드; N-(3-(6-아이소프로필피페라진-1-카보닐)피리딘-3-일)프로프-2-인-1일)펜탄아마이드; N,N-다이에틸-4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜타아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드; N,N-다이에틸-4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜타아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드; N-(3-(4-(N,N-다이에틸설파모일)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜타아마이드; N-(3-(4-(N-아이소프로필설파모일)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜타아마이드; tert-부틸 4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤조에이트; 4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로-1-핀-1-일)벤조익산; N-에틸-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드; N-(2-(다이에틸아미노)에틸)-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드; 에틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)아세테이트; 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)아세틱산; 메틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)프로파노에이트; 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)프로피오닉산; 2-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세트산; 및 2-(4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세트산으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 상기 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구현예로서, 상기 염증성 질환은 천식, 죽상경화증, 암, 피부가려움증, 류마티스 관절염 및 염증성 장 질환으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 다른 구현예로서, 상기 조성물은 BLT2 (Leukotriene B4 receptor 2) 활성을 저해시킬 수 있다.
상기 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환의 치료방법을 제공한다.
본 발명은 상기 신규 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 조성물의 염증성 질환의 치료용도를 제공한다.
본 발명은 BLT2 (Leukotriene B4 receptor 2) 억제 활성을 나타내는 신규 화합물 및 이를 포함하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명자들은 종래의 염증성 질환 치료 물질의 문제점인 생체 내 불안정성 및 대량 생산의 어려움을 해소하기 위하여 BTL2 억제 활성을 나타내는 신규 화합물을 규명하였으며, 상기 화합물의 우수한 암세포 사멸 증진 및 전이 억제 효과, 주화성 억제 효과, 및 항 천식 효과 등을 실험적으로 확인하였는바, 염증성 질환을 치료하기 위한 약학적 조성물로 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
도 1a 내지 도 1e는 BLT2가 발현된 세포 (CHO-BLT2)에서, 본 발명의 화합물 처리에 의한 성장 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 2a 및 도 2b는 BLT2가 발현된 세포 (CHO-BLT2 cells)에서, 본 발명의 화합물 처리에 의한 세포의 주화성 억제 효과 및 IC50 (50% 억제 농도)를 확인한 결과이다.
도 3a 및 도 3b는 BLT2가 발현된 세포 (CHO-BLT2 cells) 또는 BLT1이 발현된 세포 (CHO-BLT1)에서, 본 발명의 화합물 처리에 의한 세포의 주화성 억제 효과를 확인한 결과이다.
도 4a 및 도 4b는 BLT2가 발현된 세포 (CHO-BLT2 cells)에서, 본 발명의 화합물 처리에 의한 LTB4와 BLT2 결합 저해 효과를 확인한 결과이다.
도 5a 및 도 5b는 MDA-MB-231 세포 또는 MDA-MB-435 세포에서, 본 발명의 화합물 처리에 의한 활성 산소의 생성 억제효과를 확인한 결과이다.
도 6a 및 도 6b는 MDA-MB-231 세포 또는 MDA-MB-435 세포에서, 본 발명의 화합물 처리에 의한 IL-8 (interleukin-8) 발현량 억제효과를 확인한 결과이다.
도 7a 및 도 7b는 MDA-MB-231 세포 또는 MDA-MB-435 세포에서, 본 발명의 화합물 처리에 의한 암세포 침투 억제효과를 확인한 결과이다.
도 8, 도 9a 및 도 9b는 본 발명의 화합물 처리에 의한 암세포 전이 억제효과를 확인한 결과이다.
도 10은 중증 천식이 유도된 마우스에서, 본 발명의 화합물 처리에 의한 기도 과민성 감소 효과를 확인한 결과이다.
도 11은 중증 천식이 유도된 마우스에서, 본 발명의 화합물 처리에 의한 IL-4 (interleukin-4) 생성 감소 효과를 확인한 결과이다.
도 12는 천식이 유도된 마우스에서, 본 발명의 화합물 처리에 의한 기도 과민성 감소 효과를 확인한 결과이다.
도 13a 내지 도 13c는 천식이 유도된 마우스에서, 본 발명의 화합물 처리에 의한 마우스 복강에서 유입된 전체 세포와 호중구가 감소됨을 확인한 결과이다.
도 14a 및 도 14b는 천식이 유도된 마우스에서, 본 발명의 화합물 처리에 의한 마우스 복강에서 유입된 전체 세포와 호중구가 감소됨을 확인한 결과이다.
본 발명자들은, 실시예에서 제조한 신규 화합물을 처리한 경우, BLT2 발현 세포의 성장을 현저히 억제시킬 수 있다는 점에 기반하여 상기 화합물의 암세포 사멸 증진, 암세포 전이 억제, BLT2 의존적인 주화성 저해 및 항천식 효과 등을 구체적으로 확인하고, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure 112016071700310-pat00001
상기 화학식 1에서,
R1은 C1~C10의 알킬이고,
R2는
Figure 112016071700310-pat00002
,
Figure 112016071700310-pat00003
,
Figure 112016071700310-pat00004
,
Figure 112016071700310-pat00005
또는
Figure 112016071700310-pat00006
이며,
Ra는
Figure 112016071700310-pat00007
,
Figure 112016071700310-pat00008
,
Figure 112016071700310-pat00009
,
Figure 112016071700310-pat00010
,
Figure 112016071700310-pat00011
,
Figure 112016071700310-pat00012
,
Figure 112016071700310-pat00013
,
Figure 112016071700310-pat00014
,
Figure 112016071700310-pat00015
,
Figure 112016071700310-pat00016
,
Figure 112016071700310-pat00017
,
Figure 112016071700310-pat00018
,
Figure 112016071700310-pat00019
,
Figure 112016071700310-pat00020
,
Figure 112016071700310-pat00021
,
Figure 112016071700310-pat00022
,
Figure 112016071700310-pat00023
,
Figure 112016071700310-pat00024
,
Figure 112016071700310-pat00025
,
Figure 112016071700310-pat00026
,
Figure 112016071700310-pat00027
,
Figure 112016071700310-pat00028
또는 하이드록시이고,
Rb는
Figure 112016071700310-pat00029
,
Figure 112016071700310-pat00030
,
Figure 112016071700310-pat00031
또는
Figure 112016071700310-pat00032
이고,
RC는
Figure 112016071700310-pat00033
,
Figure 112016071700310-pat00034
또는
Figure 112016071700310-pat00035
이고,
Rd는 수소 또는
Figure 112016071700310-pat00036
이고,
Re는
Figure 112016071700310-pat00037
또는
Figure 112016071700310-pat00038
이고,
R3는 수소 또는 플루오르일 수 있다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 바람직한 예는 하기와 같다:
tert-부틸 4-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트; N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-메틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-에틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-(사이클로프로필메틸)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-사이클로헥실피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-(사이클로헥실메틸)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-아이소부틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-페닐-N-(3-(4-(4-(프로프-2-이닐)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(3-(4-(4-시아노피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; tert-부틸 4-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트; N-(3-플루오로페닐)-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(3-플루오로페닐)-N-(3-(4-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; tert-부틸 4-(4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트; N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(4-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(3-(4-(몰폴린-4-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-페닐-N-(3-(4-(피페리딘-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N,N-다이에틸-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤즈아마이드; N-페닐-N-(3-(3-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(3-(3-(4-메틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; N-(3-(3-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; tert-부틸-4-(3-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트; N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(3-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(3-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드; N-(3-(4-하이드록시페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드; 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세트산; tert-부틸 4-(5-(3-((N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)피콜리노일)피페라진-1-카복실레이트; N-페닐-N-(3-(6-(피페라진-1-카보닐)피리딘-3-일)프로프-2-인-1-일)펜탄아마이드; N-(3-(6-아이소프로필피페라진-1-카보닐)피리딘-3-일)프로프-2-인-1일)펜탄아마이드; N,N-다이에틸-4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜타아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드; N,N-다이에틸-4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜타아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드; N-(3-(4-(N,N-다이에틸설파모일)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜타아마이드; N-(3-(4-(N-아이소프로필설파모일)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜타아마이드; tert-부틸 4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤조에이트; 4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로-1-핀-1-일)벤조익산; N-에틸-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드; N-(2-(다이에틸아미노)에틸)-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드; 에틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)아세테이트; 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)아세틱산; 메틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)프로파노에이트; 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)프로피오닉산; 2-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세트산; 및 2-(4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세트산.
본 발명에서 사용되는 "약학적으로 허용되는"이라는 용어는 과도한 독성, 자극, 알러지 반응 또는 기타 문제점 또는 합병증 없이 이득/위험 비가 합리적이어서 대상체 (예: 인간)의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하며 건전한 의학적 판단의 범주 이내인 화합물 또는 조성물을 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "염"은 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 화학식 1 내지 4로 표시되는 화합물을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 또한 이 혼합물에서 용매나 과량의 산을 증발시킨 후 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수도 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면, 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염 (예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
본 발명의 일실시예에서는 BLT2 억제 활성을 나타내는 신규 화합물을 제조하였으며 (실시예 1 내지 46 참조), 상기 신규 화합물 처리에 의한 BLT2 발현 세포의 성장 억제를 확인하였다 (실험예 2 참조). 또한, BLT2 발현 세포의 주화성을 억제시킬 수 있음을 확인하였다 (실험예 3 참조). 또한, 상기 화합물을 이용하여 LTB4와 BLT2 결합 저해효과를 확인하였고 (실험예 4 참조), 세포 내 활성 산소 억제, IL-8 발현 억제, 암세포 침투 억제 및 암세포의 전이 억제를 확인하였으며 (실험예 5 참조), 천식이 유도된 마우스에서, 기도 과민성 감소, IL-4 생성 억제 및 마우스 복강으로의 면역세포 유입 억제 효과를 구체적으로 확인하였는바 (실험예 6 참조) 염증성 질환 약학적 조성물로 매우 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.
이에, 본 발명은 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "예방"이란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 염증성 질환을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어, "치료"란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 염증성 질환에 대한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서, 염증성 질환은 BLT2 (Leukotriene B4 receptor 2)의 과발현에 기인한 질병으로, 천식, 죽상경화증, 암, 피부가려움증, 류마티스 관절염 및 염증성 장 질환에서 선택되는 1종 이상일 수 있으나, 이로써 제한되는 것은 아니다. 본 명세서에서 예시한 상기 질환 외에도, 당업계에 알려져 있는 BLT2-연관된 염증성 질환은 모두 본 발명의 화학식 1의 구조를 갖는 화합물로 예방 또는 치료할 수 있는 염증성 질환에 포함되는 것으로 본다. 한 구체적인 예에서, 상기 암은 BLT2 또는 종양 유전자 Ras의 과발현에 의해 유발된 임의의 암일 수 있다. 이에 제한되는 것은 아니나, 상기 암은 방광암, 전립선암, 췌장암, 유방암, 뇌종양, 피부암 및 간암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있으며, 이로써 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서, BLT2 (Leukotriene B4 receptor 2)는 GPCR(G protein-coupled receptor) 군 중 하나로 LTB4 (Leukotriene B4; LTB4)에 대해 낮은 친화력을 갖는 수용체로서, 본 발명의 조성물은 BLT2에 의한 세포 성장을 억제함으로써, 염증성 질환을 예방 또는 치료할 수 있다. 보다 구체적으로 BLT2 활성으로 유도된 ROS의 생성을 저해하여 LTB4-유도된 주화성을 저해할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어, "저해"는 유전자의 전사, mRNA 프로세싱, 번역, 전좌 및 성숙 중 임의의 단계를 저해하거나, 단백질과 단백질간의 결합, 단백질의 활성화 또는 이를 통한 신호전달의 저해를 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물은 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 이때, 약제학적으로 허용되는 담체는 제제 시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세 결정성셀룰로스, 폴리비닐피로리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필 히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 다른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
구체적으로 본 발명의 약학적 조성물의 유효량은 환자의 연령, 성별, 상태, 체중, 체내에 활성 성분의 흡수도, 불활성율 및 배설속도, 질병종류, 병용되는 약물에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1kg 당 0.001 내지 150mg, 바람직하게는 0.01내지 100mg을 매일 또는 격일 투여하거나, 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감 될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 염증성 질환의 치료방법을 제공한다. 본 발명에서 "개체"란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는, 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 개, 고양이, 말 및 소 등의 포유류를 의미한다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
[ 실시예 ]
실시예 1. tert -부틸 4-(4-(3-( N - 페닐펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 ) 벤조일 )피페라진-1-카복실레이트 ( tert -butyl 4-(4-(3-( N - phenylpentanamido )prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate) (LMT-693)의 제조
단계 1 : N -페닐펜탄아마이드( N -phenylpentanamide)의 제조
아닐린 (aniline)(0.98 ml, 10.74 mmol)을 다이클로로메탄(20 ml)에 녹인 후 얼음에서 냉각시켰다. 상기 혼합물에 트리에틸아민 (3.00 ml, 21.48 mmol)을 가한 뒤 5분 동안 교반하였다. 같은 온도에서 발레로일 클로라이드 (valeroyl chloride)(2.60 ml, 21.48 mmol)를 가하고, 얼음을 제거한 뒤, 상기 혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 다이클로로메탄으로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘 (MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (Hex:EA=10:1)로 정제하여 N-페닐펜탄아마이드 (N-phenylpentanamide)를 수득하였다 (1.88 g, 99% 수율).
단계 2 : tert -부틸 4-(4- 브로모벤조일 )피페라진-1- 카복실레이트( tert -butyl 4- (4-bromobenzoyl)piperazine-1-carboxylate)의 제조
4-브로모벤조산 (4-bromobenzoic acid)(901 mg, 4.48 mmol)과 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (tert-butyl piperazine-1-carboxylate)(1.00 g, 5.37 mmol)를 N,N-다이메틸포름아마이드 (DMF)(15 ml)에 녹인 후, 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 HATU(1-[Bis(dimethylamino)methylene]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium 3-oxid hexafluorophosphate)(2.04 g, 5.37 mmol)와 N,N-다이아이소프로필에틸아민(DIPEA)(2.34 ml, 13.44 mmol)을 가하고, 상온에서 15시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘 (MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=2:1)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-브로모벤조일)피페라진-1-카복실레이트(tert-butyl 4-(4-bromobenzoyl)piperazine-1-carboxylate)를 수득하였다 (1.56 g, 94% 수율).
단계 3 : tert -부틸 4-(4-(3- 하이드록시프로프 -1- 이닐 ) 벤조일 )피페라진-1- 카복실레이트 ( tert -butyl 4-(4-(3- hydroxyprop -1- ynyl ) benzoyl ) piperazine -1-carboxylate)의 제조
상기 단계 2에서 수득한 tert-부틸 4-(4-브로모벤조일)피페라진-1-카복실레이트(1.00 g, 2.71 mmol)와 프로파길 알코올 (propagyl alcohol)(0.32 ml, 5.42 mmol)을 트리에틸아민 (12 ml)에 녹인 후, 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 다이클로라이드 (190 mg, 0.271 mmol)와 요오드화 구리 (I)(52 mg, 0.271 mmol)를 가하고 60 ℃에서 가열, 환류하여 17시간 동안 교반하였다. 반응액을 상온에서 냉각 후, 감압 하에 농축한 뒤, 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘 (MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (Hex:EA=2:1)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (tert-butyl 4-(4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)를 수득하였다 (850 mg, 91% 수율).
단계 4 : tert -부틸 4-(4-(3-( 메틸설포닐옥시 ) 프로프 -1- 이닐 ) 벤조일 )피페라진-1-카복실레이트( tert -butyl 4-(4-(3-( methylsulfonyloxy )prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)의 제조
상기 단계 3에서 수득한 tert-부틸 4-(4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (600 mg, 1.74 mmol)를 다이클로로메탄 (8 ml)에 녹인 후 얼음에서 냉각시켰다. 상기 혼합물에 트리에틸아민(0.36 ml, 2.61 mmol)을 가한 뒤 5분 동안 교반하였다. 같은 온도에서 메탄설포닐 클로라이드(0.15 ml, 1.92 mmol)를 가하고, 얼음을 제거한 뒤, 상기 혼합물을 상온에서 30분 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 다이클로로메탄으로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산 마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=2:1)로 정제하여 tert-부틸 4-(4-(3-(메틸설포닐옥시)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (tert-butyl 4-(4-(3-(methylsulfonyloxy)prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)를 수득하였다(662 mg, 90% 수율).
단계 5 : tert - 부틸4 -(4-(3-( N - 페닐펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 ) 벤조일 )피페라진-1-카복실레이트( tert -butyl 4-(4-(3-( N - phenylpentanamido )prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 N-페닐펜탄아마이드 (185 mg, 1.04 mmol)와 나트륨 하이드라이드 (NaH)(75 mg, 3.12 mmol)를 얼음에서 냉각시킨 후, 테트라하이드로퓨란 (THF)(8 ml)을 넣고 30분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 상기 단계 4에서 수득한 tert-부틸 4-(4-(3-(메틸설포닐옥시)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (662 mg, 1.57 mmol)를 가하고, 얼음을 제거한 뒤, 상기 혼합물을 상온에서 17시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘 (MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (Hex:EA=4:1)로 정제하여 최종 생성물인 tert-부틸 4-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (tert-butyl 4-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)를 수득하였다(382 mg, 73% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.40-7.20(9H, m), 4.65(2H, s), 3.62-3.32(8H, br), 2.02-1.97(2H, t), 1.52-1.48(2H, m), 1.40(9H, s), 1.19-1.12(2H, m), 0.76-0.72(3H, t).
실시예 2. N -페닐- N -(3-(4-(피페라진-1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 ) 펜탄아마이드 ( N -phenyl- N -(3-(4-( piperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2- ynyl ) pentanamide ) (LMT-694)의 제조
상기 실시예 1에서 수득한 tert-부틸 4-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (754 mg, 1.50 mmol)를 아세토나이트릴 (15 ml)에 녹인 후, 상온에서 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 다이옥산 (dioxane)과 혼합한 하이드로클로라이드 (4N)(3.73 ml)를 가하고, 같은 온도에서 1시간 30분 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=50:1)로 정제하여 최종 생성물인 N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드(N-phenyl-N-(3-(4-(piperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다 (363 mg, 60% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.48-7.30(9H, m), 4.73(2H, s), 3.73-3.39(4H, br), 2.97-2.86(4H, br), 2.09-2.06(2H, t), 1.60-1.54(2H, m), 1.25-1.19(2H, m), 0.83-0.80(3H, t).
실시예 3. N -(3-(4-(4- 메틸피페라진 -1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 )- N - 페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-(4- methylpiperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2- ynyl )- N -phenylpentanamide) (LMT-692)의 제조
상기 실시예 2에서 수득한 N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (33.3 mg, 0.072 mmol)와 수산화칼륨 (KOH)(9.09 mg, 0.108 mmol)을 N,N-다이메틸포름아마이드 (DMF)(1 ml)에 녹인 후, 상온에서 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 아이오도메탄 (iodomethane)(9 μl, 0.144 mmol)을 가한 후, 같은 온도에서 17시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축한 뒤, 얻어진 잔사를 다이클로로메탄으로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산 마그네슘 (MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=20:1)로 정제하여 최종 생성물인 N-(3-(4-(4-메틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드(N-(3-(4-(4-methylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다 (6 mg, 20% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.40-7.21(9H, m), 4.65(2H, s), 3.71-3.34(4H, br), 2.41-2.25(4H, br), 2.25(3H, s), 2.02-1.99(2H, t), 1.54-1.46(2H, m), 1.18-1.12(2H, m), 0.76-0.71(3H, t).
실시예 4. N -(3-(4-(4- 에틸피페라진 -1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 )- N - 페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-(4- Ethylpiperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2- ynyl )- N -phenylpentanamide) (LMT-695)의 제조
상기 실시예 3에서 수득한 N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (24.8 mg, 0.061 mmol)와 수산화칼륨(8.62 mg, 0.154 mmol)을 N,N-다이메틸포름아마이드 (DMF)(1 ml)에 녹인 후, 상온에서 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 아이오도에탄 (iodoethane)(20 μl, 0.246 mmol)을 가하고, 같은 온도에서 17시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축한 뒤, 얻어진 잔사를 다이클로로메탄으로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘 (MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH = 20:1)로 정제하여 최종 생성물인 N-(3-(4-(4-에틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드(N-(3-(4-(4-Ethylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다 (17.9 mg, 68% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.40-7.20(9H, m), 4.65(2H,s), 3.73-3.35(4H,br), 2.44-2.31(6H,m), 2.03-1.99(2H,t), 1.54-1.46(2H,m), 1.20-1.13(2H,m), 1.05-1.01(3H,t), 0.78-0.73(3H,t).
실시예 5. N -(3-(4-(4- 아이소프로필피페라진 -1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 )- N -페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-(4- isopropylpiperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide) (LMT-696)의 제조
상기 실시예 2에서 수득한 N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (106 mg, 0.263 mmol)와 탄산수소나트륨 (27 mg, 0.316 mmol)을 얼음에서 냉각시킨 후, N,N-다이메틸포름아마이드 (DMF)(2 ml)를 넣고 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 2-아이오도프로판 (2-iodopropane)(30 μl, 0.316 mmol)을 가하고, 얼음을 제거한 뒤, 60oC에서 가열, 환류하여 24시간 동안 교반하였다. 반응액을 상온에서 냉각 후, 감압 하에 농축한 뒤, 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA:MeOH:TEA=12:12:1:0.1)로 정제하여 최종 생성물인 N-(3-(4-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드(N-(3-(4-(4-isopropylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다 (66.8 mg, 57% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.47-7.30(9H, m), 4.73(2H, s), 3.78-3.40(4H, br), 2.75-2.72(1H, m), 2.59-2.44(4H, br), 2.09-2.06(2H, t), 1.59-1.56(2H, m), 1.25-1.20(2H, m), 1.06-1.04(6H, d), 0.83-0.80(3H, t).
실시예 6. N -(3-(4-(4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2-이닐)- N -페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-(4-(2-hydroxyethyl) piperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide) (LMT-827)의 제조
상기 실시예 2에서 수득한 N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (56 mg, 0.139 mmol)와 탄산칼륨 (77 mg, 0.556 mmol)을 아세토나이트릴 (3 ml)에 녹인 후, 상온에서 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 2-브로모에탄올 (2-bromoethanol)(99 μl, 1.39 mmol)을 가하고, 60oC에서 가열, 환류하여 17시간 동안 교반하였다. 반응액을 상온에서 냉각 후, 여과하여 고체를 제거한 후, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2:MeOH=50:1)로 정제하여 최종 생성물인 N-(3-(4-(4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드(N-(3-(4-(4-(2-hydroxyethyl)piperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다 (52 mg, 84% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.48-7.30(9H, m), 4.73(2H, s), 3.79(2H, br), 3.66-3.64(2H, t), 3.43(2H, br), 2.60-2.46(7H, br), 2.10-2.07(2H, t), 1.59-1.56(2H, m), 1.25-1.22(2H, m), 0.83-0.80(3H, t).
실시예 7. N -(3-(4-(4-( 사이클로프로필메틸 )피페라진-1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2-이닐)- N -페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-(4-( cyclopropylmethyl ) piperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide) (LMT-828)의 제조
상기 실시예 2에서 수득한 N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (50 mg, 0.124 mmol)와 탄산칼륨(51 mg, 0.372 mmol)을 N,N-다이메틸포름아마이드 (DMF)(2 ml)에 녹인 후, 상온에서 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 사이클로프로필메틸 브로마이드 (15 μl, 0.145 mmol)를 가하고, 80oC에서 가열, 환류하여 4시간 동안 교반하였다. 반응액을 상온에서 냉각 후, 여과하여 고체를 제거한 후, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2:MeOH=50:1)로 정제하여 최종 생성물인 N-(3-(4-(4-(사이클로프로필메틸)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드(N-(3-(4-(4-(cyclopropylmethyl)piperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다(16 mg, 28% 수율).
1H NMR (CDCl3,500MHz) δ 7.48-7.28(9H, m), 4.73(2H, s), 3.82-3.45(4H, br), 2.63-2.49(4H, br), 2.32-2.31(2H, d), 2.09-2.06(2H, t), 1.60-1.56(2H, m), 1.25-1.20(3H, m), 0.83-0.80(3H, t), 0.55-0.53(2H, m), 0.12-0.11(2H, m).
실시예 8. N -(3-(4-(4- 사이클로헥실피페라진 -1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 )- N -페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-(4- cyclohexylpiperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide) (LMT-830)의 제조
상기 실시예 2에서 수득한 N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (50 mg, 0.124 mmol)와 아이오도사이클로헥산 (19 μl, 0.145 mmol)을 이용하여 상기 실시예 7과 동일한 방법으로 최종 생성물인 N-(3-(4-(4-사이클로헥실피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드 (N-(3-(4-(4-cyclohexylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다 (20 mg, 33% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.48-7.31(9H, m), 4.73(2H, s), 3.77-3.39(4H, br), 2.63-2.49(4H, br), 2.31-2.28(1H, m), 2.09-2.06(2H, m), 1.91-1.79(4H, m), 1.65-1.54(3H, m), 1.28-1.16(6H, m), 1.13-1.08(1H, m), 0.83-0.80(3H, t).
실시예 9. N -(3-(4-(4-( 사이클로헥실메틸 )피페라진-1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2-이닐)- N -페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-(4-( cyclohexylmethyl ) piperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide) (LMT-831)의 제조
상기 실시예 2에서 수득한 N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (50 mg, 0.124 mmol)와 브로모메틸사이클로헥산 (20 μl, 0.145 mmol)을 이용하여 상기 실시예 7과 동일한 방법으로 최종 생성물인 N-(3-(4-(4-(사이클로헥실메틸)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드 (N-(3-(4-(4-(cyclohexylmethyl)piperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다 (35 mg, 56% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.48-7.28(9H, m), 4.73(2H, s), 3.76-3.38(4H, br), 2.45-2.31(4H, br), 2.15-2.13(2H, m), 2.09-2.06(2H, m), 1.77-1.66(5H, m), 1.59-1.56(2H, m), 1.47-1.45(1H, m), 1.25-1.17(5H, m), 0.90-0.80(5H, t).
실시예 10. N -(3-(4-(4- 아이소부틸피페라진 -1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 )- N -페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-(4- isobutylpiperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide) (LMT-832)의 제조
상기 실시예 2에서 수득한 N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (50 mg, 0.124 mmol)와 1-아이오도-2-메틸프로판 (17 μl, 0.145 mmol)을 이용하여 상기 실시예 7과 동일한 방법으로 최종 생성물인 N-(3-(4-(4-아이소부틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드 (N-(3-(4-(4-isobutylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다(34 mg, 60% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz)δ 7.47-7.28(9H, m), 4.73(2H, s), 3.76-3.39(4H, br), 2.46-2.32(4H, br), 2.11-2.07(4H, m), 1.79-1.76(1H, m), 1.59-1.56(2H, m), 1.25-1.20(2H, m), 0.91-0.89(6H, d), 0.83-0.80(3H, t).
실시예 11. N -페닐- N -(3-(4-(4-( 프로프 -2- 이닐 )피페라진-1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2-이닐)펜탄아마이드 ( N -phenyl- N -(3-(4-(4-(prop-2- ynyl ) piperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide) (LMT-833)의 제조
상기 실시예 2에서 수득한 N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (50 mg, 0.124 mmol)와 탄산칼륨 (51 mg, 0.372 mmol)을 N,N-다이메틸포름아마이드 (DMF)(2 ml)에 녹인 후, 상온에서 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 프로파길 브로마이드 (12 μl, 0.145 mmol)를 가하고, 상온에서 17시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하여 고체를 제거한 후, 감압 하에 농축한 뒤, 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2:MeOH=100:1)로 정제하여 최종 생성물인 N-페닐-N-(3-(4-(4-(프로프-2-이닐)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-phenyl-N-(3-(4-(4-(prop-2-ynyl)piperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다(28 mg, 51% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.48-7.28(9H, m), 4.73(2H, s), 3.82-3.44(4H, br), 3.36(2H, s), 2.65-2.51(4H, br), 2.30(1H, s), 2.10-2.07(2H, m), 1.60-1.54(2H, m), 1.26-1.19(2H, m), 0.83-0.80(3H, t).
실시예 12. N -(3-(4-(4- 시아노피페라진 -1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 )- N - 페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-(4- cyanopiperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2- ynyl )- N -phenylpentanamide) (LMT-829)의 제조
상기 실시예 2에서 수득한 N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (50 mg, 0.124 mmol)와 트리메틸실릴 시아나이드 (49 μl, 0.372 mmol)를 아세토나이트릴 (2 ml)에 녹인 후, 상온에서 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 나트륨 하이포클로라이트 (43 μl, 0.620 mmol)를 가하고, 80℃ 에서 가열, 환류하여 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 상온에서 냉각 후, 여과하여 고체를 제거한 후, 감압 하에 농축하였다. 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘 (MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2:MeOH=200:1)로 정제하여 최종 생성물인 N-(3-(4-(4-시아노피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드 (N-(3-(4-(4-cyanopiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다(11 mg, 21% 수율).
1H NMR (CDCl3,500MHz) δ 7.48-7.30(9H, m), 4.73(2H, s), 3.81-3.26(8H, br), 2.09-2.06(2H, t), 1.60-1.54(2H, m), 1.25-1.19(2H, m), 0.83-0.80(3H, t).
실시예 13. tert - 부틸 4-(4-(3-( N -(3- 플루오로페닐 ) 펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 )벤조일)피페라진-1-카복실레이트 ( tert -butyl 4-(4-(3-( N -(3-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate) ( LMT -884)의 제조
단계 1 : N -(3- 플루오로페닐 ) 펜탄아마이드 ( N -(3- fluorophenyl ) pentanamide )의 제조
3-플루오로아닐린(3-fluoroaniline)(0.87 ml, 9.00 mmol)과 발레로일 클로라이드(valeroyl chloride)(2.18 ml, 18.00 mmol)를 이용하여 N-(3-플루오로페닐)펜탄아마이드 (N-(3-fluorophenyl)pentanamide)를 수득하였다(1.74 g, 99% 수율).
단계 2 : tert - 부틸 4-(4-(3-( N -(3- 플루오로페닐 ) 펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 )벤조일)피페라진-1-카복실레이트 ( tert -butyl 4-(4-(3-( N -(3-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 N-(3-플루오로페닐)펜탄아마이드 (101 mg, 0.519 mmol)와 상기 실시예 1의 단계 4에서 수득한 tert-부틸 4-(4-(3-(메틸설포닐옥시)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (329 mg, 0.779 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 5와 동일한 방법으로 최종 생성물인 tert -부틸 4-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (tert-butyl 4-(4-(3-(N-(3-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)를 수득하였다 (197 mg, 73% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.44-7.32(5H, m), 7.12-7.06(3H, m), 4.72(2H, s), 3.73-3.38(8H, br), 2.10-2.07(2H, t), 1.59-1.57(2H, m), 1.47(9H, s), 1.23-1.20(2H, m), 0.83-0.80(3H, t).
실시예 14. N -(3- 플루오로페닐 )- N -(3-(4-(피페라진-1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2-이닐)펜탄아마이드 ( N -(3- fluorophenyl )- N -(3-(4-( piperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide) (LMT-885)의 제조
상기 실시예 13에서 수득한 tert -부틸 4-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 0.383 mmol)를 이용하여 상기 실시예 12와 동일한 방법으로 최종 생성물인 N-(3-플루오로페닐)-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-(3-fluorophenyl)-N-(3-(4-(piperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다 (94 mg, 58% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.45-7.32(5H, m), 7.15-7.07(3H, m), 4.72(2H, s), 3.75-3.37(4H, br), 2.94-2.80(4H, br), 2.10-2.07(2H, t), 1.89(1H, br), 1.60-1.57(2H, m), 1.25-1.24(2H, m), 0.84-0.82(3H, t).
실시예 15. N -(3- 플루오로페닐 )- N -(3-(4-(4- 아이소프로필피페라진 -1- 카보닐 )페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 ( N -(3- fluorophenyl )- N -(3-(4-(4-isopropylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide) ( LMT - 886)의 제조
상기 실시예 14에서 수득한 N-(3-플루오로페닐)-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (46 mg, 0.109 mmol)와 2-아이오도프로판 (2-iodopropane)(0.375 ml, 3.77 mmol)을 이용하여 최종 생성물인 N-(3-플루오로페닐)-N-(3-(4-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드(N-(3-fluorophenyl)-N-(3-(4-(4-isopropylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다 (20 mg, 40% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.44-7.32(5H, m), 7.15-7.06(3H, m), 4.72(2H, s), 3.78-3.41(4H, br), 2.75-2.72(1H, m), 2.59-2.45(4H, br), 2.11-2.09(2H, t), 1.60-1.57(2H, m), 1.25-1.22(2H, m), 1.06-1.05(6H, d), 0.85-0.82(3H, t).
실시예 16. tert -부틸 4-(4-(3-( N -(4- 플루오로페닐 ) 펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 )벤조일)피페라진-1-카복실레이트( tert -butyl 4-(4-(3-( N -(4-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate) ( LMT -839)의 제조
단계 1 : N - (4-플루오로페닐)펜탄아마이드( N -(4-fluorophenyl)pentanamide )의 제조
4-플루오로아닐린 (4-fluoroaniline)(85 μl, 0.90 mmol)과 발레로일 클로라이드(valeroyl chloride)(0.22 ml, 1.80 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 1과 동일한 방법으로 N-(4-플루오로페닐)펜탄아마이드(N-(4-fluorophenyl)pentanamide)를 수득하였다 (174 mg, 99% 수율).
단계 2 : tert -부틸 4-(4-(3-( N -(4- 플루오로페닐 ) 펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 )벤조일)피페라진-1-카복실레이트 ( tert -butyl 4-(4-(3-( N -(4-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 N-(4-플루오로페닐)펜탄아마이드(1.17 g, 6.00 mmol)와 상기 실시예 1의 단계 4에서 수득한 tert-부틸 4-(4-(3-(메틸설포닐옥시)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (3.80 g, 8.99 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 5와 동일한 방법으로 최종 생성물인 tert-부틸 4-(4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트(tert-butyl 4-(4-(3-(N-(4-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)를 수득하였다 (2.28 g, 73% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.39-7.29(6H, m), 7.17-7.14(2H, m), 4.71(2H, s), 3.73-3.38(8H, br), 2.07-2.04(2H, t), 1.60-1.54(2H, m), 1.47(9H, s), 1.25-1.19(2H, m), 0.84-0.81(3H, t).
실시예 17. N -(4- 플루오로페닐 )- N -(3-(4-(피페라진-1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2-이닐)펜탄아마이드 ( N -(4- fluorophenyl )- N -(3-(4-( piperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide) (LMT-840)의 제조
상기 실시예 16에서 수득한 tert-부틸 4-(4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (2.28 g, 4.37 mmol)를 이용하여 상기 실시예 12와 동일한 방법으로 최종 생성물인 N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드(N-(4-fluorophenyl)-N-(3-(4-(piperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다 (1.06 g, 58% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.38-7.30(6H, m), 7.17-7.15(2H, m), 4.71(2H, s), 3.77-3.40(4H, br), 2.96-2.79(5H, br), 2.06-2.03(2H, t), 1.57-1.54(2H, m), 1.25-1.22(2H, m), 0.84-0.82(3H, t).
실시예 18. N -(4- 플루오로페닐 )- N -(3-(4-(4- 아이소프로필피페라진 -1- 카보닐 )페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 ( N -(4- fluorophenyl )- N -(3-(4-(4-isopropylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide) ( LMT - 841)의 제조
상기 실시예 17에서 수득한 N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (1.06 g, 2.51 mmol)와 2-아이오도프로판 (2-iodopropane)(0.375 ml, 3.77 mmol)을 이용하여 상기 실시예 15와 동일한 방법으로 최종 생성물인 N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(4-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드(N-(4-fluorophenyl)-N-(3-(4-(4-isopropylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다 (465 mg, 40% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.37-7.28(6H, m), 7.17-7.13(2H, m), 4.71(2H, s), 3.78-3.40(4H, br), 2.75-2.72(1H, m), 2.59-2.45(4H, br), 2.07-2.04(2H, t), 1.58-1.55(2H, m), 1.25-1.21(2H, m), 1.06-1.04(6H, d), 0.84-0.81(3H, t).
실시예 19. N -(3-(4-( 몰폴린 -4- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 )- N - 페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-( morpholine -4-carbonyl)phenyl)prop-2- ynyl )- N - phenylpentanamide ) (LMT-682)의 제조
단계 1 : (4-브로모페닐)(몰폴리노)메타논 ((4-bromophenyl)(morpholino)methanone)
4-브로모벤조산(4-bromobenzoic acid) (340 mg, 1.70 mmol)과 몰폴린 (0.18 ml, 2.04 mmol)을 이용하여 상기 실시예 1의 단계 2와 동일한 방법으로 (4-브로모페닐)(몰폴리노)메타논 ((4-bromophenyl)(morpholino)methanone)을 수득하였다 (455 mg, 수율 99%).
단계 2 : (4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)페닐)(몰폴리노)메타논 ((4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)phenyl)(morpholino)methanone)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 (4-브로모페닐)(몰폴리노)메타논 (455 mg, 1.68 mmol)과 프로파길 알코올 (propagyl alcohol)(0.196 ml, 3.36 mmol)을 이용하여 상기 실시예 1의 단계 3과 동일한 방법으로 (4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)페닐)(몰폴리노)메타논((4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)phenyl)(morpholino)methanone)을 수득하였다(371 mg, 수율 90%).
단계 3 : 3 -(4-( 몰폴린 -4- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 메탄설포네이트 (3-(4-(morpholine-4-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl methanesulfonate)의 제조
상기 단계 2에서 수득한 (4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)페닐)(몰폴리노)메타논 (371 mg, 1.51 mmol)과 메탄설포닐 클로라이드 (0.128 ml, 1.66 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 4와 동일한 방법으로 3-(4-(몰폴린-4-카보닐)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트(3-(4-(morpholine-4-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl methanesulfonate)를 수득하였다 (391 mg, 수율 80%).
단계 4 : N -(3-(4-( 몰폴린 -4- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 )- N - 페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-(morpholine-4-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide)의 제조
상기 실시예 1의 단계 1에서 수득한 N-페닐펜탄아마이드(143 mg, 0.81 mmol)와 상기 단계 3에서 수득한 3-(4-(몰폴린-4-카보닐)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트(391 mg, 1.21 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 5와 동일한 방법으로 최종 생성물인 N-(3-(4-(몰폴린-4-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드 (N-(3-(4-(morpholine-4-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다 (371 mg, 수율 90%).
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.48-7.28(m, 9H), 4.73(s, 2H), 3.74-3.66(br, 6 H), 3.43(br, 2H), 2.08(m, 2H), 1.57(m, 2H), 1.22 (m, 2H), 0.81(t, 3H).
실시예 20. N -페닐- N -(3-(4-(피페리딘-1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 ) 펜탄아마이드 ( N -phenyl- N -(3-(4-( piperidine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide) (LMT-683)의 제조
단계 1 : (4-브로모페닐)(피페리딘-1-일)메타논 ((4- bromophenyl )( piperidin -1-yl)methanone))의 제조
4-브로모벤조산 (4-bromobenzoic acid)(318 mg, 1.58 mmol)과 피페리딘 (piperidine)(0.21 ml, 1.90 mmol)을 이용하여 상기 실시예 1의 단계 2와 동일한 방법으로 (4-브로모페닐)(피페리딘-1-일)메타논 ((4-bromophenyl)(piperidin-1-yl)methanone))을 수득하였다 (458.2 mg, 100% 수율).
단계 2 : (4-(3- 하이드록시프로프 -1- 이닐 )페닐)피리딘-1-일) 메타논 ((4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)phenyl)(piperidin-1-yl)methanone)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 (4-브로모페닐)(피페리딘-1-일)메타논 (458.2 mg, 1.71 mmol)과 프로파길 알코올 (propagyl alcohol)(0.199 ml, 3.42 mmol)을 이용하여 상기 실시예 1의 단계 3과 동일한 방법으로 (4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)페닐)피리딘-1-일)메타논 ((4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)phenyl)(piperidin-1-yl)methanone)을 수득하였다(374 mg, 수율 90%).
단계 3 : 3 -(4-(피리딘-1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 메탄설포네이트 (3-(4-(piperidine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl methanesulfonate)의 제조
상기 단계 2에서 수득한 (4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)페닐)피리딘-1-일)메타논 (374 mg, 1.54 mmol)과 메탄설포닐 클로라이드 (0.131 ml, 1.69 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 4와 동일한 방법으로 3-(4-(피리딘-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (3-(4-(piperidine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl methanesulfonate)를 수득하였다 (396 mg, 수율 80%).
단계 4 : N -페닐- N -(3-(4-(피페리딘-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드( N -phenyl- N -(3-(4-(piperidine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)의 제조
상기 실시예 1의 단계 1에서 수득한 N-페닐펜탄아마이드 (146 mg, 0.82 mmol)와 상기 단계 3에서 수득한 3-(4-(피리딘-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (396 mg, 1.23 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 5와 동일한 방법으로 최종 생성물인 N-페닐-N-(3-(4-(피페리딘-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-phenyl-N-(3-(4-(piperidine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다 (50 mg, 15% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.40-7.13(9H, m), 4.65(2H, s, CH2), 3.62-3.24(4H, br), 2.02-1.99(2H,t), 1.60(4H, br), 1.52-1.46(2H, m), 1.44 (2H, br), 1.20-1.08 (2H, m), 0.78-0.73(3H, t).
실시예 21. N , N - 다이에틸 -4-(3-( N - 페닐펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 ) 벤즈아마이드 ( N , N -diethyl-4-(3-( N - phenylpentanamido )prop-1- ynyl ) benzamide ) ( LMT - 883)의 제조
단계 1 : 4 - 브로모 - N , N - 다이에틸벤즈아마이드 (4- bromo - N , N -diethylbenzamide)의 제조
4-브로모벤조산(4-bromobenzoic acid)(800 mg, 3.98 mmol)과 다이에틸아민(diethylamine)(0.49 ml, 4.78 mmol)을 이용하여 상기 실시예 1의 단계 2와 동일한 방법으로 4-브로모-N,N-다이에틸벤즈아마이드 (4-bromo-N,N-diethylbenzamide)를 수득하였다 (700 mg, 69% 수율).
단계 2 : N , N - 다이에틸 -4- (3-하이드록시프로프-1-이닐)벤즈아마이드 ( N , N -diethyl-4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)benzamide)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 4-브로모-N,N-다이에틸벤즈아마이드 (700 mg, 2.73 mmol)와 프로파길 알코올 (propagyl alcohol)(0.32 ml, 5.47 mmol)을 이용하여 상기 실시예 1의 단계 3과 동일한 방법으로 N,N-다이에틸-4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)벤즈아마이드(N,N-diethyl-4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)benzamide)를 수득하였다 (425 mg, 67% 수율).
단계 3 : 3 -(4-( 다이에틸카바모일 )페닐) 프로프 -2- 이닐 메탄설포네이트 (3-(4-(diethylcarbamoyl)phenyl)prop-2-ynyl methanesulfonate)의 제조
상기 단계 2에서 수득한 N,N-다이에틸-4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)벤즈아마이드 (425 mg, 1.84 mmol)와 메탄설포닐 클로라이드 (0.16 ml, 2.02 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 4와 동일한 방법으로 3-(4-(다이에틸카바모일)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (3-(4-(diethylcarbamoyl)phenyl)prop-2-ynyl methanesulfonate)를 수득하였다(483 mg, 85% 수율).
단계 4 : N , N - 다이에틸 -4- (3-( N -페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤즈아마이드( N , N -diethyl-4-(3- ( N -phenylpentanamido)prop-1-ynyl)benzamide)의 제조
상기 실시예 1의 단계 1에서 수득한 N-페닐펜탄아마이드 (94 mg, 0.530 mmol)와 상기 단계 3에서 수득한 수득한 3-(4-(다이에틸카바모일)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트(246 mg, 0.795 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 5와 동일한 방법으로 최종 생성물인 N,N-다이에틸-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤즈아마이드 (N,N-diethyl-4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-ynyl)benzamide)를 수득하였다 (81 mg, 39% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.48-7.30(9H, m), 4.73(2H, s), 3.53-3.23(4H, br), 2.10-2.07(2H, t), 1.59-1.57(2H, m), 1.23-1.10(8H, m), 0.83-0.80(3H, t).
실시예 22. N -페닐- N -(3-(3-(피페라진-1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 ) 펜탄아마이드 ( N -phenyl- N -(3-(3-( piperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide) (LMT-837)의 제조
단계 1 : tert -부틸 4-(3- 브로모벤조일 )피페라진-1- 카복실레이트( tert -butyl 4- (3-bromobenzoyl)piperazine-1-carboxylate)의 제조
3-브로모벤조산 (3-bromobenzoic acid)(1.50 g, 7.46 mmol)과 tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (tert-butyl piperazine-1-carboxylate)(1.67 g, 8.95 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 2와 동일한 방법으로 tert-부틸 4-(3-브로모벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (tert-butyl 4-(3-bromobenzoyl)piperazine-1-carboxylate)를 수득하였다 (2.75 g, 99% 수율).
단계 2 : tert -부틸 4-(3-(3- 하이드록시프로프 -1- 이닐 ) 벤조일 )피페라진-1- 카복실레이트 ( tert -butyl 4-(3-(3- hydroxyprop -1- ynyl ) benzoyl ) piperazine -1-carboxylate)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 tert-부틸 4-(3-브로모벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (2.75 g, 7.45 mmol)와 프로파길 알코올 (propagyl alcohol)(0.87 ml, 14.89 mmol)을 이용하여 상기 실시예 1의 단계 3과 동일한 방법으로 tert-부틸 4-(3-(3-하이드록시프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (tert-butyl 4-(3-(3-hydroxyprop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)를 수득하였다 (2.32 g, 90% 수율).
단계 3 : tert -부틸 4-(3-(3-( 메틸설포닐옥시 ) 프로프 -1- 이닐 ) 벤조일 )피페라진-1-카복실레이트 ( tert -butyl 4-(3-(3-( methylsulfonyloxy )prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)의 제조
상기 단계 2에서 수득한 tert-부틸 4-(3-(3-하이드록시프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (2.32 g, 6.75 mmol)와 메탄설포닐 클로라이드 (0.58 ml, 7.42 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 4와 동일한 방법으로 tert-부틸 4-(3-(3-(메틸설포닐옥시)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (tert-butyl 4-(3-(3-(methylsulfonyloxy)prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)를 수득하였다 (1.78 g, 63% 수율).
단계 4 : tert -부틸 4-(3-(3-( N - 페닐펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 ) 벤조일 )피페라진-1-카복실레이트( tert -butyl 4-(3-(3-( N - phenylpentanamido )prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)의 제조
상기 실시예 1의 단계 1에서 수득한 N-페닐펜탄아마이드 (275 mg, 1.55 mmol)와 상기 단계 3에서 수득한 tert-부틸 4-(3-(3-(메틸설포닐옥시)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (982 mg, 2.33 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 5와 동일한 방법으로 최종 생성물인 tert-부틸 4-(3-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트(tert-butyl 4-(3-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)를 수득하였다 (323 mg, 70% 수율).
단계 5: N -페닐- N -(3-(3-(피페라진-1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 ) 펜탄아마이드 ( N -phenyl- N -(3-(3-( piperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2- ynyl ) pentanamide ) (LMT-837)의 제조
상기 단계 4에서 수득한 tert-부틸 4-(3-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (323 mg, 0.62 mmol)를 이용하여 상기 실시예 2과 동일한 방법으로 최종 생성물인 N-페닐-N-(3-(3-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드(N-phenyl-N-(3-(3-(piperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다 (152mg, 58% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.45-7.26(9H, m), 4.69(2H, s), 3.75-3.36(4H, br), 2.94-2.80(4H, br), 2.59(1H, br), 2.07-2.04(2H, t), 1.56-1.53(2H, m), 1.22-1.18(2H, m), 0.80-0.77(3H, t).
실시예 23. N -(3-(3-(4-메틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)- N -페닐펜탄아마이드( N -(3-(3-(4-methylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide) (LMT-838)의 제조
상기 실시예 22에서 수득한 N-페닐-N-(3-(3-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (50 mg, 0.124 mmol)와 포름알데하이드(37% in H2O)(1.5ml)를 포름산(2.0 ml)에 녹인 후, 100oC에서 가열, 환류하여 4시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축한 뒤, 수산화나트륨 수용액(2.0 M)을 가하여 적정하였다. 이 후, 다이클로로메탄으로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산 마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2:MeOH=20:1)로 정제하여 N-(3-(3-(4-메틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드(N-(3-(3-(4-methylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다(24 mg, 46% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.46-7.29(9H, m), 4.70(2H, s), 3.79-3.39(4H, br), 2.48-2.32(7H, br), 2.08-2.05(2H, t), 1.57-1.54(2H, m), 1.23-1.19(2H, m), 0.81-0.78(3H, t).
실시예 24. N -(3-(3-(4- 아이소프로필피페라진 -1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2- 이닐 )- N -페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(3-(4- isopropylpiperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide) (LMT-842)의 제조
상기 실시예 22에서 수득한 N-페닐-N-(3-(3-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (152 mg, 0.36 mmol)와 2-아이오도프로판 (2-iodopropane)(90 μl, 0.90 mmol)을 이용하여 상기 실시예 5와 동일한 방법으로 최종 생성물인 N-(3-(3-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드 (N-(3-(3-(4-isopropylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다 (67 mg, 40% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.47-7.29(9H, m), 4.71(2H, s), 3.79-3.40(4H, br), 2.78-2.75(1H, m), 2.60-2.46(4H, br), 2.09-2.06(2H, t), 1.58-1.55(2H, m), 1.24-1.20(2H, m), 1.07-1.05(6H, d), 0.82-0.79(3H, t).
실시예 25. tert -부틸-4-(3-(3-( N -(4- 플루오로페닐 ) 펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 )벤조일)피페라진-1-카복실레이트 ( tert -butyl 4-(3-(3-( N -(4-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate) ( LMT -887)의 제조
상기 실시예 16의 단계 1에서 수득한 N-(4-플루오로페닐)펜탄아마이드 (275 mg, 1.41 mmol)와 상기 실시예 22의 단계 3에서 수득한 tert-부틸 4-(3-(3-(메틸설포닐옥시)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (894 mg, 2.12 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 5와 동일한 방법으로 최종 생성물인 tert-부틸-4-(3-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (tert-butyl 4-(3-(3-(N-(4-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)benzoyl)piperazine-1-carboxylate)를 수득하였다 (625 mg, 85% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.33-7.20(6H, m), 7.09-7.06(2H, m), 4.62(2H, s), 3.66-3.31(8H, br), 2.00-1.97(2H, t), 1.52-1.49(2H, m), 1.47(9H, s), 1.18-1.13(2H, m), 0.76-0.73(3H, t).
실시예 26. N -(4- 플루오로페닐 )- N -(3-(3-(피페라진-1- 카보닐 )페닐) 프로프 -2-이닐)펜탄아마이드 ( N -(4- fluorophenyl )- N -(3-(3-( piperazine -1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide) (LMT-888)의 제조
상기 실시예 25에서 수득한 tert-부틸-4-(3-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트 (762 mg, 1.46 mmol)를 이용하여 상기 실시예 2과 동일한 방법으로 최종 생성물인 N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(3-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-(4-fluorophenyl)-N-(3-(3-(piperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다 (356mg, 58% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.39-7.29(6H, m), 7.17-7.14(2H, m), 4.70(2H, s), 3.77-3.39(4H, br), 2.98-2.85(4H, br), 2.08-2.05(2H, t), 1.60-1.54(2H, m), 1.25-1.19(2H, m), 0.84-0.81(3H, t).
실시예 27. N -(4- 플루오로페닐 )- N -(3-(3-(4- 아이소프로필피페라진 -1- 카보닐 )페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 ( N -(4- fluorophenyl )- N -(3-(3-(4-isopropylpiperazine-1-carbonyl)phenyl)prop-2-ynyl)pentanamide) ( LMT - 889)의 제조
상기 실시예 26에서 수득한 N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(3-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (150 mg, 0.356 mmol)와 2-아이오도프로판 (2-iodopropane)(53 μl, 0.534 mmol)을 이용하여 상기 실시예 5와 동일한 방법으로 최종 생성물인 N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(3-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드를 수득하였다 (66 mg, 40% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.37-7.29(6H, m), 7.16-7.13(2H, m), 4.70(2H, s), 3.79-3.39(4H, br), 2.75-2.73(1H, m), 2.59-2.45(4H, br), 2.07-2.04(2H, t), 1.58-1.55(2H, m), 1.25-1.21(2H, m), 1.06-1.05(6H, d), 0.84-0.81(3H, t).
실시예 28. N -(3-(4- 하이드록시페닐 ) 프로프 -2- 이닐 )- N - 페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide) (LMT-890)의 제조
단계 1 : N -(프로프-2-이닐)아닐린 ( N -(prop-2-ynyl)aniline)의 제조
아닐린 (2.94 ml, 32.21 mmol)과 탄산칼륨 (4.90 g, 35.43 mmol)을 아세토나이트릴 (40 ml)에 녹인 후, 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 프로파길 브로마이드 (propargyl bromide)(3.05 ml, 35.43 mmol)를 가하고, 상온에서 17시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하여 고체를 제거한 후, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (Hex)로 정제하여 N-(프로프-2-이닐)아닐린(N-(prop-2-ynyl)aniline)를 수득하였다 (2.23 g, 53% 수율).
단계 2 : N -페닐- N - (프로프-2-이닐)펜탄아마이드 ( N -phenyl- N -(prop-2-ynyl)pentanamide)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 N-(프로프-2-이닐)아닐린 (828 mg, 6.31 mmol)과 발레로일 클로라이드 (valeroyl chloride)(1.53 ml, 12.62 mmol)를 이용하여 상기 실시예 1의 단계 1과 동일한 방법으로 N-페닐-N-(프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-phenyl-N-(prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다 (1.29 g, 95% 수율).
단계 3 : N -(3-(4- 하이드록시페닐 ) 프로프 -2- 이닐 )- N - 페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide)의 제조
상기 단계 2에서 수득한 N-페닐-N-(프로프-2-이닐)펜탄아마이드(550 mg, 2.55 mmol)와 4-아이오도페놀 (4-iodophenol)(422 mg, 1.92 mmol)을 트리에틸아민(15 ml)에 녹인 후, 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 다이클로라이드(89 mg, 0128 mmol)와 요오드화구리(I) (49 mg, 0.255 mmol)를 가하고 50oC에서 가열, 환류하여 5시간 동안 교반하였다. 반응액을 상온에서 냉각 후, 감압 하에 농축한 뒤, 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산 마그네슘 (MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=10:1)로 정제하여 최종 생성물인 N-(3-(4-하이드록시페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드(N-(3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다 (590 mg, 75% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 8.15(1H, br), 7.47-6.83(9H, m), 4.66(2H, s), 2.13-2.10(2H, t), 1.60-1.54(2H, m), 1.22-1.17(2H, m), 0.80-0.77(3H, t).
실시예 29. 2-(4-(3-( N - 페닐펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 ) 페녹시 )아세트산 (2-(4-(3-( N -phenylpentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetic acid) (LMT-891)의 제조
단계 1 : 에틸 2-(4-(3-( N - 페닐펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 ) 페녹시 )아세테이트 (ethyl (2-(4-(3-( N -phenylpentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetate)의 제조
상기 실시예 28에서 수득한 N-(3-(4-하이드록시페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드 (590 mg, 1.92 mmol)와 탄산칼륨 (796 mg, 5.76 mmol)을 아세토나이트릴(15 ml)에 녹인 후, 30분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 에틸 브로모아세테이트 (ethyl bromoacetate)(0.23 ml, 2.11 mmol)를 가하고, 상온에서 17시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하여 고체를 제거한 후, 감압 하에 농축한 뒤, 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=10:1)로 정제하여 에틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세테이트 (ethyl 2-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetate)를 수득하였다 (530 mg, 70% 수율).
단계 2: 2 -(4-(3-( N - 페닐펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 ) 페녹시 )아세트산 (2-(4-(3-( N -phenylpentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetic acid)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 에틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세테이트 (530 mg, 1.35 mmol)를 에탄올 (15 ml)에 녹인 후, 상온에서 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 2N 수산화나트륨 (NaOH)(0.50 ml)을 가하고, 80oC에서 가열, 환류하여 3시간 동안 교반하였다. 반응액을 상온에서 냉각 후, 감압 하에 농축한 뒤, 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(CH2Cl2:MeOH=100:1)로 정제하여 최종 생성물인 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세트산(2-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetic acid)을 수득하였다 (246 mg, 50% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400MHz) δ 7.47-6.78(9H, m), 4.68(2H, s), 4.58(2H, s), 2.11-2.08(2H, t), 1.58-1.53(2H, m), 1.23-1.18(2H, m), 0.81-0.78(3H, t).
실시예 30. tert -부틸 4-(5-(3-(( N - 페닐펜탄아미도 ) 프로프 -1-인-1-일) 피콜리노일 )피페라진-1-카복실레이트 ( tert -butyl 4-(5-(3-(N- phenylpentanamido )prop-1-yn-1-yl)picolinoyl)piperazine-1-carboxylate) (LMT-834)의 제조
상기 실시예 28의 단계 2에서 수득한 N-페닐-N-(프로프-2-이닐)펜탄아마이드와 tert-부틸 4-(5-브로모피콜리노일)피페라진-1-카복실레이트 (86 mg, 0.4 mmol)를 이용하여 실시예 28의 단계 3과 동일한 방법을 이용하여 최종 생성물인 tert-부틸 4-(5-(3-((N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)피콜리노일)피페라진-1-카복실레이트 (tert-butyl 4-(5-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)picolinoyl)piperazine-1-carboxylate)를 수득하였다 (36mg, 35% 수율).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.43(s, 1H), 7.64(dd, 1H),7.54(dd, 1H), 7.36(dd, 3H), 7.18(m, 2H), 4.68(s, 2H), 3.69(br, 2H), 3.53-3.38(br, 6H), 2.01(m, 2H), 1.52(m, 2H), 1.39(s, 9H), 1.18(m, 2H), 0.73(t, 3H).
실시예 31. N -페닐- N -(3-(6-(피페라진-1- 카보닐 )피리딘-3-일) 프로프 -2-인-1-일)펜탄아마이드 ( N -phenyl-N-(3-(6-( piperazine -1-carbonyl) pyridin -3- yl )prop-2-yn-1-yl)pentanamide) (LMT-835)의 제조
상기 실시예 30에서 수득한 tert-부틸 4-(5-(3-((N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)피콜리노일)피페라진-1-카복실레이트 (35 mg, 0.69 mmol)를 아세토나이트릴 (15 ml)에 녹인 후, 상온에서 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 다이옥산 (dioxane)과 혼합한 하이드로클로라이드 (4N)(3.73 ml)를 가하고, 같은 온도에서 1시간 30분 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 (CH2Cl2:MeOH=50:1)로 정제하여 최종 생성물인 N-페닐-N-(3-(6-(피페라진-1-카보닐)피리딘-3-일)프로프-2-인-1-일)펜탄아마이드 (N-phenyl-N-(3-(6-(piperazine-1-carbonyl)pyridin-3-yl)prop-2-yn-1-yl)pentanamide)를 수득하였다 (18 mg, 64% 수율).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.43(s, 1H), 7.66(dd, 1H), 7.49(dd, 1H), 7.36(dd, 3H), 7.21(m, 2H), 4.67(s, 2H), 3.70(br, 2H), 3.48(br, 2H), 2.90(br, 2H), 2.81(br, 2H), 2.01(m, 2H), 1.49(m, 2H), 1.17(m, 2H), 0.73(t, 3H).
실시예 32. N-(3-(6-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)피리딘-3-일)프로프-2-인-1-일)-N-페닐펜탄아마이드 (N-(3-(6-(4-isopropylpiperazine-1-carbonyl)pyridin-3-yl)prop-2-yn-1-yl)-N-phenylpentanamide) (LMT-836)의 제조
상기 실시예 31에서 수득한 N-페닐-N-(3-(6-(피페라진-1-카보닐)피리딘-3-일)프로프-2-인-1-일)펜탄아마이드 (57.7 mg, 0.14 mmol)와 탄산수소나트륨 (27 mg, 0.316 mmol)을 얼음에서 냉각시킨 후, N,N-다이메틸포름아마이드 (DMF)(2 ml)를 넣고 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 2-아이오도프로판 (2-iodopropane)(30 μl, 0.316 mmol)을 가하고, 얼음을 제거한 뒤, 60℃에서 가열, 환류하여 24시간 동안 교반하였다. 반응액을 상온에서 냉각 후, 감압 하에 농축한 뒤, 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA:MeOH:TEA=12:12:1:0.1)로 정제하여 최종 생성물인 N-(3-(6-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)피리딘-3-일)프로프-2-인-1-일)-N-페닐펜탄아마이드 (N-(3-(6-(4-isopropylpiperazine-1-carbonyl)pyridin-3-yl)prop-2-yn-1-yl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다 (32.3 mg, 51% 수율).
1H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.44(s, 1H), 7.65(dd, 1H), 7.51(dd, 1H), 7.39(dd, 3H), 7.22(m, 2H), 4.68(s, 2H), 3.74(br, 2H), 3.52(br, 2H), 2.67(m, 1H), 2.55(br, 2H), 2.41(br, 2H), 2.02(m, 2H), 1.50(m, 2H), 1.15(m, 2H), 0.98(d, 6H), 0.74(t,3H).
실시예 33. N,N-다이에틸-4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드 (N,N-diethyl-4-(3-(N-(3-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamide)의 제조(LMT-926)
단계 1 : 4-브로모- N,N -다이에틸벤즈아미드 (4-bromo- N,N -diethylbenzamide)의 제조
4-브로모벤조익산 (4-Bromobenzoic acid)(5.00g, 24.9 mmol)을 N,N-다이메틸포름아마이드(100.00 ml)에 녹인 후 다이아이소프로필아민 (13ml, 74.6 mmol)을 가하였다. 상기 혼합물에 1-하이드록시벤보트리아졸 하이드레이트(1-hydroxybenzotriazole hydrate)(7.15 mg, 37.30 mmol)와 1-에틸-3-(3-다이베틸아미노프로필)칼보다이이마이드 하이드로클로라이드 (1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride) (5.04 mg, 37.30 mmol)을 가한 뒤 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 다이에틸아민 (diethylamine)(3.1ml, 37.3 mmol)을 가한 후, 상기 혼합물을 상온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 다이클로로메탄으로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=3:1)로 정제하여 4-브로모-N,N-다이에틸벤즈아마이드 (4-bromo-N,N-diethylbenzamide)를 수득하였다 (5.70 g, 89% 수율).
단계 2 : N,N- 다이에틸-4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)벤즈아마이드 ( N,N -diethyl-4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)benzamide)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 4-브로모-N,N-다이에틸벤즈아마이드(5.70 mg, 22.3 mmol)와 프로파질 알코올(propagyl alcohol)(2.60 ml, 44.5 mmol)을 트리에틸아민(100.00 ml)에 녹인 후, 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 다이클로라이드(1.60 mg, 2.23 mmol)와 요오드화 구리(I)(1.60 mg, 2.23 mmol)를 가하고 60oC에서 가열, 환류하여 17시간 동안 교반하였다. 반응액을 상온에서 냉각 후, 감압 하에 농축한 뒤, 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=1:1)로 정제하여 N,N-다이에틸-4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)벤즈아마이드 (N,N-diethyl-4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)benzamide)를 수득하였다(5.16 mg, 99.9% 수율).
단계 3 : 3-(4-( N,N -다이에틸카르바모일)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (3-(4-(diethylcarbamoyl)phenyl)prop-2-yn-1-yl methanesulfonate)의 제조
N,N-다이에틸-4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)벤즈아마이드 (5.16 mg, 22.3 mmol)을 다이클로로메탄(100 ml)에 녹인 후 얼음에서 냉각시켰다. 상기 혼합물에 트리에틸아민(4.80 ml, 34.4 mmol)을 가한 뒤 5분 동안 교반하였다. 같은 온도에서 메탄설포닐클로라이드(Methanesulfonyl chloride)(1.95 ml, 25.2 mmol)를 가하고, 얼음을 제거한 뒤, 상기 혼합물을 상온에서 30분 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=2:1)로 정제하여 3-(4-(N,N-다이에틸카르바모일)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (3-(4-(diethylcarbamoyl)phenyl)prop-2-yn-1-yl methanesulfonate)를 수득하였다(4.2 mg, 59% 수율).
단계 4 : N,N -다이에틸-4-(3-( N -(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드 ( N,N -diethyl-4-(3-( N -(3-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamide)의 제조
N-(3-플루오로페닐)펜탄아마이드 (200mg, 1.02 mmol)을 테트라하이드로퓨란(10.00 ml)에 녹인 후 얼음에서 냉각시켰다. 상기 혼합물에 수소화나트륨(73 mg, 3.06 mmol)을 가한 뒤 1시간 동안 교반하였다. 같은 온도에서 상기 단계 3에서 수득한 3-(4-(N,N-다이에틸카르바모일)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (475mg, 1.54 mmol)을 가하고, 상기 혼합물을 상온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 다이클로로메탄으로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=2:1)로 정제하여 N,N-다이에틸-4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드(N,N-diethyl-4-(3-(N-(3-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamide)를 수득하였다(291.7 mg, 70% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.43 (1H, t, J = 7.5 Hz and 15.0 Hz, aromatic), 7.33 (4H, m, aromatic), 7.09 (3H, m, aromatic), 4.71 (2H, s, CH2), 3.53 (2H, s, CH2), 3.23 (2H, s, CH2), 2.10 (2H, m, CH2), 1.59 (2H, m, CH2), 1.24 (2H, m, CH2), 1.10 (6H, m, (CH3)2), 0.83 (3H, t, J = 7.5 Hz and 15.0 Hz, CH3).
실시예 34. N,N-다이에틸-4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드(N,N-diethyl-4-(3-(N-(4-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamide)의 제조(LMT-927)
N-(4-플루오로페닐)펜탄아마이드 (200mg, 1.02 mmol)과 3-(4-(N,N-다이에틸카르바모일)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (3-(4-(diethylcarbamoyl)phenyl)prop-2-yn-1-yl methanesulfonate)을 이용하여 상기 실시예 33의 단계 4의 방법을 이용하여 N,N-다이에틸-4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드(N,N-diethyl-4-(3-(N-(4-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamide)를 수득하였다(291.7 mg, 70% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.31 (2H, d, J = 3.5 Hz, aromatic), 7.29 (4H, d, J = 3.0 Hz, aromatic), 7.15 (2H, t, J = 8.5 Hz and 17.0 Hz, aromatic), 4.71 (2H, s, CH2), 3.53 (2H, s, CH2), 3.23 (2H, s, CH2), 2.06 (2H, t, J = 7.5 Hz and 15.0 Hz, CH2), 1.57 (2H, m, CH2), 1.22 (2H, m, CH2), 1.10 (6H, s, (CH3)2), 0.82 (3H, t, J = 7.5 Hz and 15.0 Hz, CH3).
실시예 35. N-(3-(4-(N,N-다이에틸설파모일)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드 (N-(3-(4-(N,N-diethylsulfamoyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)의 제조(LMT-946)
단계 1 : 4-브로모- N,N -다이에틸벤젠설폰아마이드 (4-bromo- N,N -diethylbenzenesulfonamide)의 제조
4-브로모벤젠설포닐 클로라이드(4-Bromobenzenesulfonyl chloride)(1.00g, 3.91 mmol)을 다이클로로메탄(30.00 ml)에 녹인 후 얼음에서 냉각시켰다. 상기 혼합물에 다이에틸아민(1.19 ml, 11.54 mmol)을 가한 뒤 5분 동안 교반하고, 얼음을 제거한 뒤, 상기 혼합물을 상온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 다이클로로메탄으로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=3:1)로 정제하여 4-브로모-N,N-다이에틸벤젠설폰아마이드 (4-bromo-N,N-diethylbenzenesulfonamide)를 수득하였다 (1.10 g, 96% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.67 (4H, m), 3.23 (4H, q, J = 7.0 Hz), 1.13 (6H, t).
단계 2 : N,N- 다이에틸-4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)벤젠설폰아마이드 ( N,N -diethyl-4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)benzenesulfonamide)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 4-브로모-N,N-다이에틸벤젠설폰아마이드(500.00 mg, 1.71 mmol)와 프로파질 알코올(propagyl alcohol)(0.20 ml, 3.42 mmol)을 트리에틸아민(10.00 ml)에 녹인 후, 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 다이클로라이드(119.32 mg, 0.17 mmol)와 요오드화 구리(I)(32.37 mg, 0.17 mmol)를 가하고 60oC에서 가열, 환류하여 17시간 동안 교반하였다. 반응액을 상온에서 냉각 후, 감압 하에 농축한 뒤, 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=1:1)로 정제하여 N,N-다이에틸-4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)벤젠설폰아마이드 (N,N-diethyl-4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)benzenesulfonamide)를 수득하였다(286.00 mg, 63% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.66 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.42 (2H, d, J = 8.0 Hz), 4.44 (2H, s), 3.16 (4H, q, J = 7.0 Hz), 1.05 (6H, t).
단계 3 : 3-(4-( N,N -다이에틸설파모일)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (3-(4-( N,N -diethylsulfamoyl)phenyl)prop-2-ynyl methanesulfonate)의 제조
상기 단계 2에서 수득한 N,N-다이에틸-4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)벤젠설폰아마이드 (273.00 mg, 1.02 mmol)을 다이클로로메탄(10 ml)에 녹인 후 얼음에서 냉각시켰다. 상기 혼합물에 트리에틸아민(0.21 ml, 1.53 mmol)을 가한 뒤 5분 동안 교반하였다. 같은 온도에서 메탄설포닐클로라이드(Methanesulfonyl chloride)(0.09 ml, 1.12 mmol)를 가하고, 얼음을 제거한 뒤, 상기 혼합물을 상온에서 30분 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산 마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=2:1)로 정제하여 3-(4-(N,N-다이에틸설파모일)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (3-(4-(N,N-diethylsulfamoyl)phenyl)prop-2-ynyl methanesulfonate)를 수득하였다(285.00 mg, 80% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.73 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.53 (2H, d, J = 8.5 Hz), 5.05 (2H, s), 3.19 (4H, q, J = 7.0 Hz), 3.12 (3H, s), 1.07 (6H, t).
단계 4 : 4-(3-브로모프로프-1-이닐)- N,N -다이에틸벤젠설폰아마이드 (4-(3-bromoprop-1-ynyl)- N,N -diethylbenzenesulfonamide)의 제조
상기 단계 3에서 수득한 3-(4-(N,N-다이에틸설파모일)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (260.00 mg, 0.75 mmol)을 테트라하이드로퓨란(Tetrahydrofuran)(20.00 ml)에 녹인 후 얼음에서 냉각시켰다. 같은 온도에서 상기 혼합물에 리튬브로마이드(Lithium bromide)(196.28 mg, 2.26 mmol)을 가한 뒤 4시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산 마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 필터로 정제하여 4-(3-브로모프로프-1-이닐)-N,N-다이에틸벤젠설폰아마이드 (4-(3-bromoprop-1-ynyl)-N,N-diethylbenzenesulfonamide)를 수득하였다.(240.00 mg, 97 %)
단계 5 : N,N -다이에틸-4-(3-(페닐아미노)프로프-1-이닐)벤젠설폰아마이드 ( N,N -diethyl-4-(3-(phenylamino)prop-1-ynyl)benzenesulfonamide)의 제조
상기 단계 4에서 수득한 4-(3-브로모프로프-1-이닐)-N,N-다이에틸벤젠설폰아마이드(248.00mg, 0.75 mmol)와 포타시움카보네이트(Potassium carbonate)(93.98 mg, 0.68 mmol)를 아세토나이트릴(Acetonitrile)(15.00 ml)에 녹여 30분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 아닐린(aniline)(0.06ml, 0.68 mmol)을 가한 뒤 상온에서 9시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=2:1)로 정제하여 N,N-다이에틸-4-(3-(페닐아미노)프로프-1-이닐)벤젠설폰아마이드 (N,N-diethyl-4-(3-(phenylamino)prop-1-ynyl)benzenesulfonamide)를 수득하였다(190.00 mg, 81% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.71 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.46 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.23 (2H, t), 6.80 (1H, t), 6.73(2H, d, J = 7.5 Hz), 4.15 (2H, s), 3.21 (4H, m), 1.10 (6H, t).
단계 6 : N -(3-(4-( N,N -다이에틸설파모일)페닐)프로프-2-이닐)- N -페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-( N,N -diethylsulfamoyl)phenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide)의 제조
상기 단계 5에서 수득한 N,N-다이에틸-4-(3-(페닐아미노)프로프-1-이닐)벤젠설폰아마이드 (174.00mg, 0.51 mmol)을 다이클로로메탄(15.00 ml)에 녹인 후 얼음에서 냉각시켰다. 상기 혼합물에 트리에틸아민(0.14 ml, 1.02 mmol)을 가한 뒤 5분 동안 교반하였다. 같은 온도에서 발레로일 클로라이드(valeroyl chloride)(0.06 ml, 0.53 mmol)를 가하고, 얼음을 제거한 뒤, 상기 혼합물을 상온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 다이클로로메탄으로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=2:1)로 정제하여 N-(3-(4-(N,N-다이에틸설파모일)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드 (N-(3-(4-(N,N-diethylsulfamoyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다(153.00 mg, 70% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.74 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.51 (4H, m), 7.43 (3H, m), 4.73 (2H, s), 3.21 (4H, s), 2.11 (2H, t), 1.52 (2H, m), 1.21 (2H, m), 0.10 (6H, t), 0.80 (3H, t).
실시예 36. N-(3-(4-(N-아이소프로필설파모일)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드 (N-(3-(4-(N-isopropylsulfamoyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)의 제조(LMT-947)
단계 1 : 4-브로모- N -아이소프로필벤젠설폰아마이드 (4-bromo- N -isopropylbenzenesulfonamide)의 제조
4-브로모벤젠설포닐 클로라이드 (4-Bromobenzenesulfonyl chloride)(1.00g, 3.91 mmol)을 다이클로로메탄(10.00 ml)에 녹인 후 상기 혼합물에 아이소프로필아민(0.40 ml, 4.69 mmol)과 피리딘(0.41 ml, 5.09 mmol)을 가한 뒤 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 다이클로로메탄으로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=3:1)로 정제하여 4-브로모-N-아이소프로필벤젠설폰아마이드 (4-bromo-N-isopropylbenzenesulfonamide)를 수득하였다. (730.00 mg, 67% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.76-7.64 (4H, m), 3.47 (1H, m), 1.09 (6H, d, J = 7.0 Hz).
단계 2 : 4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)- N -아이소프로필벤젠설폰아마이드 (4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)- N -isopropylbenzenesulfonamide)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 4-브로모-N-아이소프로필벤젠설폰아마이드(500.00 mg, 1.80 mmol)와 프로파질 알코올(propagyl alcohol)(0.21 ml, 3.59 mmol)을 이용하여 상기 실시예 35의 단계 2와 동일한 방법으로 4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)-N-아이소프로필벤젠설폰아마이드 (4-(3-hydroxyprop-1-ynyl)-N-isopropylbenzenesulfonamide)를 수득하였다(420.00 mg, 92% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.81 (2H, d, J = 8.0 Hz), 7.49 (2H, d, J = 8.5 Hz), 4.51 (2H, s), 3.44 (1H, m), 1.06 (6H, d, J = 6.5 Hz).
단계 3 : 3-(4-( N -아이소프로필설파모일)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (3-(4-( N -isopropylsulfamoyl)phenyl)prop-2-ynyl methanesulfonate)의 제조
상기 단계 2에서 수득한 4-(3-하이드록시프로프-1-이닐)-N-아이소프로필벤젠설폰아마이드 (410.00 mg, 1.62 mmol)와 메탄설포닐클로라이드(Methanesulfonyl chloride)(0.14 ml, 1.78 mmol)을 이용하여 상기 실시예 35의 단계 3와 동일한 방법으로 3-(4-(N-아이소프로필설파모일)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (3-(4-(N-isopropylsulfamoyl)phenyl)prop-2-ynyl methanesulfonate)를 수득하였다( 330.00 mg, 61 % 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.86 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.59 (2H, d, J = 8.5 Hz), 5.10 (2H, s), 3.47 (1H, m) 3.17 (3H, s), 1.08 (6H, d, J = 6.5 Hz).
단계 4 : 4-(3-브로모프로프-1-이닐)- N -아이소프로필벤젠설폰아마이드 (4-(3-bromoprop-1-ynyl)- N -isopropylbenzenesulfonamide)의 제조
상기 단계 3에서 수득한 3-(4-(N-아이소프로필설파모일)페닐)프로프-2-이닐 메탄설포네이트 (210.00 mg, 0.63 mmol)와 리튬브로마이드(Lithium bromide)(165.00 mg, 1.90 mmol)을 이용하여 상기 실시예 35의 단계 4와 동일한 방법으로 4-(3-브로모프로프-1-이닐)-N-아이소프로필벤젠설폰아마이드 (4-(3-bromoprop-1-ynyl)-N-isopropylbenzenesulfonamide)를 수득하였다(190.00 mg, 95% 수율).
단계 5 : N -아이소프로필-4-(3-(페닐아미노)프로프-1-이닐)벤젠설폰아마이드 ( N -isopropyl-4-(3-(phenylamino)prop-1-ynyl)benzenesulfonamide)의 제조
상기 단계 4에서 수득한 4-(3-브로모프로프-1-이닐)-N-아이소프로필벤젠설폰아마이드 (199.00 mg, 0.63 mmol)와 아닐린(aniline)(0.05 ml, 0.57 mmol)을 이용하여 상기 실시예 35의 단계 5와 동일한 방법으로 N-아이소프로필-4-(3-(페닐아미노)프로프-1-이닐)벤젠설폰아마이드 (N-isopropyl-4-(3-(phenylamino)prop-1-ynyl)benzenesulfonamide)를 수득하였다(157 mg, 83 % 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.80 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.50 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.25 (2H, m), 6.82 (1H, t), 6.76 (2H, d, J = 8.0 Hz), 4.64 (1H, d, J = 8.0 Hz), 4.19 (2H, s), 3.45 (1H, m), 1.06 (6H, d, J = 6.0 Hz).
단계 6 : N -(3-(4-( N -아이소프로필설파모일)페닐)프로프-2-이닐)- N -페닐펜탄아마이드 ( N -(3-(4-( N -isopropylsulfamoyl)phenyl)prop-2-ynyl)- N -phenylpentanamide)의 제조
상기 단계 2에서 수득한 N-아이소프로필-4-(3-(페닐아미노)프로프-1-이닐)벤젠설폰아마이드(150.00 mg, 0.46 mmol)와 발레로일 클로라이드(valeroyl chloride)(0.06 ml, 0.48 mmol)을 이용하여 상기 실시예 35의 단계 6와 동일한 방법으로 N-(3-(4-(N-아이소프로필설파모일)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드 (N-(3-(4-(N-isopropylsulfamoyl)phenyl)prop-2-ynyl)-N-phenylpentanamide)를 수득하였다.(94.00 mg, 49.5 % 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.78 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.51-7.37 (7H, m), 4.72 (2H, s), 3.33 (1H, m), 2.10 (2H, t), 1.51 (2H, m), 1.19 (2H, m), 0.99 (6H, d, J = 6.5 Hz), 0.78 (3H, t)
실시예 37. tert -부틸 4-(3-( N -페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤조에이트(tert-butyl 4-(3-( N -phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzoate)의 제조(LMT-1012)
단계 1 : N -페닐펜탄아마이드(N-phenylpentanamide)의 제조
아닐린(aniline)(10.00 ml, 107.40 mmol)을 다이클로로메탄(150 ml)에 녹인 후 얼음에서 냉각시켰다. 상기 혼합물에 트리에틸아민(30.00 ml, 214.80 mmol)을 가한 뒤 5분 동안 교반하였다. 같은 온도에서 발레로일 클로라이드(valeroyl chloride)(16.00 ml, 128.90 mmol)를 가하고, 얼음을 제거한 뒤, 상기 혼합물을 상온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 다이클로로메탄으로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=10:1)로 정제하여 N-페닐펜탄아마이드(N-phenylpentanamide)를 수득하였다(19.1 g, 99.9% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.55 (2H, d, J = 8.0 Hz, aromatic), 7.29 (2H, t, J = 7.5 Hz and 15.0 Hz, aromatic), 7.09 (1H, t, J = 7.0 Hz and 14.5 Hz, aromatic), 2.35 (2H, t, J = 8.0 Hz and 15.5 Hz, CH2), 1.70 (2H, m, CH2), 1.37 (2H, m, CH2), 0.92 (3H, t, J = 7.0 Hz and 14.5 Hz, CH3).
단계 2 : N -페닐- N -(프로-2인-1-일)펜탄아마이드( N -phenyl- N -(prop-2-yn-1-yl)pentanamide)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 N-페닐펜탄아마이드(19.10 g, 107.40 mmol)를 N,N-다이메틸포름아마이드(DMF)(100 ml)에 녹이고 반응계를 질소 치환한 후 수소화 나트륨(sodium hydride)(5.20 g, 214.80 mmol)을 영하에서 가한 후, 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 브로민화 프로파르길(propagyl bromide)(18.10 ml, 214.80 mmol) 을 가하고, 영하에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액에 영하에서 물을 가한 후, 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=9:1)로 정제하여 N-페닐-N-(프로-2인-1-일)펜탄아마이드(N-phenyl-N-(prop-2-yn-1-yl)pentanamide)(19.20 g, 83% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500MHz) δ 7.42 (2H, m, aromatic), 7.37 (1H, d, J = 7.0 Hz, aromatic), 7.26 (2H, m, aromatic), 4.47 (2H, d, J = 2.0 Hz, CH2), 2.03 (2H, t, J = 7.0 Hz and 15.5 Hz, CH2), 1.53 (2H, m, CH2), 1.20 (2H, m, CH2), 0.77 (3H, t, J = 7.5 Hz and 15 Hz, CH3).
단계 3 : tert -부틸 4-아이도벤조에이트( tert -butyl 4-iodobenzoate)의 제조
4-요오도벤조산(4-iodobenzoic acid)(1.00 g, 4.00 mmol)에 염화 티오닐(thionyl chloride)(2.30 ml, 32.30 mmol)과 N,N-다이메틸포름아마이드(DMF)(15 ml)을 N,N-다이메틸포름아마이드(DMF)(0.02 ml, 0.20mmol)를 가한 후, 반응계를 질소 치환한 후, 75℃로 가열 환류하여 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran)(5ml)에 녹인 후 테트라하이드로퓨란에 녹인 포타슘 tert-부톡사이드 1몰 용액(potassium tert-butoxide 1M solution in THF)(4.5 ml)을 영하에서 천천히 가하고 같은 온도에서 반시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=9:1)로 정제하여 2-(트리메틸시릴)에틸 4-아이오도벤조에이트(2-(trimethylsilyl)ethyl 4-iodobenzoate)를 수득하였다(14.00 g, 99.9% 수율).
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 7.77 (2H, d, J = 7.5 Hz, aromatic), 7.69 (2H, d, J = 8.0 Hz, aromatic), 1.59 (9H, s, (CH3)3).
단계 4 : tert -부틸 4-(3-( N -페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤조에이트( tert -butyl 4-(3-( N -phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzoate)의 제조
상기 단계 3에서 수득한 tert-부틸 4-아이도벤조에이트(4.90 g, 16.00 mmol)를 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran)(30ml)에 녹인 용액에 상기 단계 2에서 수득한 N-페닐-N-(프로-2인-1-일)펜탄아마이드(2.30 g, 10.70 mmol)을 가하고 반응계를 질소 치환한 후 상온에서 5분간 교반했다. 상기 혼합물에 트리에틸아민(24 ml), 비스(트리페닐포스핀)팔라듐(II) 다이클로라이드(75.00 mg, 0.10 mmol)와 요오드화 구리(I)(41.00 mg, 0.21 mmol)를 가하고 상온에서 16시간 동안 교반하였다. 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 다이클로로메탄으로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=4:1)로 정제하여 tert-부틸 4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤조에이트(tert-butyl 4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzoate) (3.30 g, 78.3% 수율).
1H-NMR (500MHz, CDCl3): δ 7.88 (2H, d, J = 8.0 Hz, aromatic), 7.45 (2H, m, aromatic), 7.39 (1H, d, J = 7.0 Hz, aromatic), 7.35 (2H, d, J = 8.0 Hz, aromatic), 7.30 (2H, d, J = 5.0 Hz, aromatic), 4.72 (2H, s, CH2), 2.07 (2H, t, J = 7.5 Hz and 15 Hz, CH2), 1.56 (2H, m, CH2), 1.51 (9H, s, (CH3)3), 1.22 (2H, m, CH2), 0.80 (3H, t, 7.5 Hz and 15 Hz7.5 Hz and 15 Hz, CH3).
실시예 38. 4-(3-( N -페닐펜탄아미도)프로-1-핀-1-일)벤조익산(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzoic acid)의 제조(LMT-1013)
상기 실시예 37에서 수득한 tert-부틸 4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤조에이트(tert-butyl 4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzoate)(2.00 g, 5.10 mmol)를 아세토나이트릴(48 ml)에 녹인 후, 영하에서 5분 동안 교반하였다. 상기 용액에 트리프루오로아세틱산(trifluoroacetic acid)(12ml)를 천천히 가하고, 상온에서 48시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산 마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(HEX:EA=2:1)로 정제하여 4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로-1-핀-1-일)벤조익산(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzoic acid)을 수득하였다(1.6 g, 95% 수율).
1H-NMR (500 MHz, MeOD): δ 7.95 (2H, d, J = 8.5 Hz, aromatic), 7.51 (2H, m, aromatic), 7.45 (1H, m, aromatic), 7.44 (2H, d, J = 8.5 Hz, aromatic), 7.39 (2H, d, J = 8.0 Hz, aromatic), 4.73 (2H, s, CH2), 2.11 (2H, t, CH3), 1.21 (2H, m, CH2), 0.83 (3H, t, CH3).
실시예 39. N-에틸-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드(N-ethyl-4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamide)의 제조 (LMT-1017)
상기 실시예 38에서 수득한 4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로-1-핀-1-일)벤조익산(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzoic acid)(80.00 mg, 0.24 mmol)를 N,N-다이메틸포름아마이드(DMF)(0.70 ml)에 녹이고 트리에틸아민(0.70 ml)에서 1시간 동안 교반시킨 에틸아민하이드로클로라이드(ethylamine ydrochloride)(29.20 mg, 0.36mmol)와 1-하이드록시벤보트리아졸 하이드레이트(1-hydroxybenzotriazole hydrate)(48.4 mg, 0.36 mmol)와 1-에틸-3-(3-다이베틸아미노프로필)칼보다이이마이드 하이드로클로라이드(1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride)(55.5 mg, 0.36 mmol)를 상기 용액에 가하고, 상온애서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산 마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=1:1)로 정제하여 N-에틸-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드(N-ethyl-4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamide)를 수득하였다(56.8 mg, 66% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.69 (2H, d, J = 8.5 Hz, aromatic), 7.39 (7H, m, aromatic), 4.72 (2H, s, CH2), 3.49 (2H, t, J = 6.0 Hz and 13.0 Hz, CH2), 2.08 (2H, t, J =7.5 Hz and 15.0 Hz, CH2), 1.57 (2H, m, CH2), 1.23 (2H, m, CH2), 0.81 (3H, t, J = 7.5 Hz and 14.5 Hz, CH3).
실시예 40. N-(2-(다이메틸아미노)에틸)-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드 (N-(2-(dimethylamino)ethyl)-4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamide)의 제조(LMT-1016)
상기 실시예 38에서 수득한 4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로-1-핀-1-일)벤조익산 (4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzoic acid)(80.00 mg, 0.24 mmol)에 N,N-다이메틸에테인-1,2-다이아민 (N,N-dimethylethane-1,2-diamine)(0.04 ml, 0.36 mmol)을 이용하여 실시예 39와 동일한 방법으로 N-(2-(다이메틸아미노)에틸)-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드(N-(2-(dimethylamino)ethyl)-4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamide)를 수득하였다(71.72 mg, 74% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.71 (2H, d, J = 8.0 Hz, aromatic), 7.38 (7H, m, aromatic), 4.70 (2H, s, CH2), 3.48 (2H, m, CH2), 2.50 (2H, t, J = 6.0 Hz and 11.5 Hz, CH2), 2.24 (6H, s, (CH3)2), 2.05 (2H, t, J = 7.5 Hz and 15.0 Hz, CH2), 1.54 (2H, m, CH2), 1.20 (2H, m, CH2), 0.78 (3H, t, J = 7.0 Hz and 14.0 Hz, CH3).
실시예 41. 에틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)아세테이트(ethyl 2-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamido)acetate)의 제조 (LMT-1014)
상기 실시예 38에서 수득한 4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로-1-핀-1-일)벤조익산(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzoic acid)(150.00 mg, 0.45 mmol)에 글리신에틸에스터 하이드로클로라이드(glycineethylester hydrochloride)(93.70 mg, 0.67 mmol)을 이용하여 실시예 39와 동일한 방법으로 에틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)아세테이트(ethyl 2-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamido)acetate)를 수득하였다(102.18 mg, 54% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.74 (2H, d, J = 8.0 Hz, aromatic), 7.37 (7H, m, aromatic), 4.22 (4H, m, (CH2)2), 2.07 (2H, t, J = 7.5 Hz and 15.0 Hz, CH2), 1.56 (2H, m, CH2), 1.30 (5H, m, CH3, CH2), 1.22 (2H, m, CH2), 0.80 (3H, t, J = 7.5 Hz and 14.5 Hz, CH3).
실시예 42. 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)아세틱산(2-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamido)acetic acid)의 제조(LMT-1015)
상기 실시예 41에서 수득한 에틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)아세테이트(ethyl 2-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamido)acetate)(46.20 mg, 0.10 mmol)와 나트륨 하이드록사이드 2몰 수용액(0.07 ml, 0.14 mmol)을 메탄올(0.1ml)에 녹인 후 상온에서 30분간 교반하였다. 염산을 이용해서 반응액의 산성도를 높인 후 에틸아세테이트로 희석하고, 물과 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산 마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 헥센과 에틸아세테이트를 이용하여 재결정한 후 2-(4(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)아세틱 산(2-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamido)acetic acid)를 수득하였다(20.80 mg, 53% 수율).
1H NMR (CDCl3 , 500 MHz) δ 7.71 (2H, d, J = 8.5 Hz, aromatic), 7.40 (7H, m, aromatic), 4.71 (2H, s, CH2), 4.23 (2H, d, J = 5.0 Hz, CH2), 2.10 (2H, t, J = 7.5 Hz and 15.5 Hz, CH2), 1.56 (2H, m, CH2), 1.22 (2H, m, CH2), 0.80 (3H, t, J = 7.0 Hz and 14.5 Hz, CH3).
실시예 43. 메틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)프로파노에이트(methyl 2-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamido)propanoate)의 제조 (LMT-1018)
상기 실시예 38에서 수득한 4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로-1-핀-1-일)벤조익산(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzoic acid)(100.00 mg, 0.30 mmol)에 L-알라닌메틸에스터 하이드로클로라이드(L-alaninemethylester hydrochloride)(83.70 mg, 0.60 mmol)을 이용하여 실시예 39와 동일한 방법으로 메틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)프로파노에이트(methyl 2-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamido)propanoate)를 수득하였다(110.00 mg, 42% 수율).
1H NMR (CDCl3 , 500 MHz) δ 7.72 (2H, d, J = 8.5 Hz, aromatic), 7.37 (7H, m, aromatic), 4.76 (1H, t, J = 7.5 Hz and 14.5 Hz CH), 4.71 (2H, s, CH2), 3.76 (3H, s, CH3), 2.06 (2H, t, J = 7.5 Hz and 15.5 Hz, CH2), 1.53 (2H, m, CH2), 1.50 (3H, d, J = 7.5 Hz, CH3), 1.20 (2H, m, CH2), 0.79 (3H, t, J = 7.5 Hz and 15.0 Hz, CH3).
실시예 44. 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)프로파노익산 (2-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamido)propanoic acid)의 제조(LMT-1019)
상기 실시예 43에서 수득한 메틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)프로파노에이트 (methyl 2-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamido)propanoate)(86.50 mg, 0.20 mmol)를 이용하여 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)프로파노익산 (2-(4-(3-(N-phenylpentanamido)prop-1-yn-1-yl)benzamido)propanoic acid)를 수득하였다(45.00 mg, 55% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.71 (2H, d, J = 8.0 Hz, aromatic), 7.40 (7H, m, aromatic), 4.76 (1H, t, J = 7.5 Hz and 14.5 Hz, CH), 4.72 (2H, s, CH2), 2.10 (2H, t, J = 7.5 Hz and 15.5 Hz, CH2), 1.57 (5H, m, CH3, CH2), 1.22 (2H, m, CH2), 0.80 (3H, t, J = 7.5 Hz and 15.0 Hz, CH3).
실시예 45. 2-(4-(3-(N-(3- 플루오로페닐 ) 펜탄아미도 ) 프로프 -1- 이닐 ) 페녹시 )아세트산(2-(4-(3-(N-(3-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetic acid)의 제조(LMT-1009)
단계 1 : N-(3-플루오로페닐)펜탄아마이드 (N-(3-fluorophenyl)pentanamide)의 제조
3-플루오로아닐린(3-fluoroaniline)(200.00 mg, 1.79 mmol)를 이용하여 실시예 37의 단계 1과 동일한 방법으로 N-(3-플루오로페닐)펜탄아마이드 (N-(3-fluorophenyl)pentanamide)를 수득하였다(349.00 mg, 99% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 8.10 (1H, s), 7.51 (1H, d, J = 11.0 Hz), 7.20 (2H, m), 6.79 (1H, m), 2.36 (2H, t), 1.68 (2H, m), 1.36 (2H, m), 0.91 (3H, t)
단계 2 : N-(3-플루오로페틸)-N-(프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-(3-fluorophenyl)-N-(prop-2-ynyl)pentanamide)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 N-(3-플루오로페닐)펜탄아마이드 (400.00 mg, 2.05 mmol)와 포타시움하이드록사이드(Potassium hydroxide)(230.61 mg, 4.11 mmol), 테트라부틸암모니움아이오다이드(tetrabutyl ammonium Iodide)(37.87 mg, 0.20 mmol)을 테트라하이드로퓨란(Tetrahydrofuran)(20.00 ml)에 녹인 후 20분 동안 교반하였다. 같은 온도에서 상기 혼합물에 프로파질브로마이드(propargyl bromide)(0.19 ml, 2.30 mmol)을 가한 뒤 20시간 동안 교반하였다. 반응액을 감압 하에 농축하고 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(Hex:EA=10:1)로 정제하여 N-(3-플루오로페틸)-N-(프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-(3-fluorophenyl)-N-(prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다(450.00 mg, 94% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.42 (1H, m), 7.11 (2H, m), 7.20 (1H, d, J = 9.0 Hz ), 4.46 (2H, s), 2.07 (2H, t), 1.56 (2H, m), 1.22 (2H, m), 0.82 (3H, t)
단계 3 : N-(3-플루오로페닐)-N-(3-(4-하이드록시페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-(3-fluorophenyl)-N-(3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)의 제조
상기 단계 2에서 수득한 N-(3-플루오로페틸)-N-(프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (270.00 mg, 1.16 mmol)와 4-아이오도페놀(4-Iodophenol)(127.60 mg, 0.58 mmol)을 이용하여 N-(3-플루오로페닐)-N-(3-(4-하이드록시페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-(3-fluorophenyl)-N-(3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다(128.00 mg, 67.8% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.51 (1H, m), 7.21 (5H, m), 6.71 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.65 (2H, s), 2.13 (2H, t), 1.54 (2H, m), 1.26 (2H, m), 0.82 (3H, t)
단계 4 : 에틸 2-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세테이트 (ethyl 2-(4-(3-(N-(3-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetate)의 제조
상기 단계 3에서 수득한 N-(3-플루오로페닐)-N-(3-(4-하이드록시페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (120.00mg, 0.37 mmol)와 포타시움카보네이트(Potassium carbonate)(153.41 mg, 1.11 mmol)를 에틸 2-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세테이트 (ethyl 2-(4-(3-(N-(3-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetate)를 수득하였다(113.00 mg, 74% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.42 (1H, m), 7.28 (2H, d, J = 9.0 Hz), 7.09 (3H, m), 6.81 (2H, d, J = 9.0 Hz), 4.68 (2H, s), 4.61 (2H, s), 4.27 (2H, m), 2.05 (2H, t), 1.58 (2H, m), 1.26 (5H, m), 0.82 (3H, t)
단계 5 : 2-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세틱산(2-(4-(3-(N-(3-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetic acid)의 제조
상기 단계 4에서 수득한 에틸 2-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세테이트 (100.00 mg, 0.24 mmol)을 에탄올(Ethanol)(9.00 ml)에 녹인 후, 5분 동안 교반하였다. 상기 혼합물에 소듐하이드록사이드 2M (Sodium hydroxide 2M)(0.30 ml)를 가하고 80 ℃에서 가열, 환류하여 3시간 동안 교반하였다. 반응액을 상온에서 냉각 후, 감압 하에 농축한 뒤, 얻어진 잔사를 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 소금물로 세척하였다. 유기용매 층을 모아 무수의 황산마그네슘(MgSO4)으로 수분을 제거하고 여과한 뒤, 감압 하에 농축하였다. 상기 농축액을 ODS 컬럼 크로마토그래피(MeOD:H2O=2:1)로 정제하여 2-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세트산 (2-(4-(3-(N-(3-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetic acid)를 수득하였다(15.00 mg, 16% 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.52 (1H, d, J = 7.0 Hz), 7.24 (5H, m), 6.88 (2H, d, J = 8.5 Hz), 4.68 (2H, s), 4.66 (2H, s), 2.14 (2H, t), 1.55 (2H, m), 1.24 (2H, m), 0.83 (3H, t)
실시예 46. 2-(4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세트산(2-(4-(3-(N-(4-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetic acid)의 제조(LMT-1010)
단계 1 : N-(4-플로오로페닐)펜탄아마이드 (N-(4-fluorophenyl)pentanamide)의 제조
4-플루오로아닐린(4-fluoroaniline)(500.00 mg, 4.49 mmol)과 발레로일 클로라이드(valeroyl chloride)(1.10 ml, 8.99 mmol)을 이용하여 상기 실시예 37의 단계 1와 동일한 방법으로 N-(4-플로오로페닐)펜탄아마이드 (N-(4-fluorophenyl)pentanamide)를 수득하였다(870.00 mg, 99 % 수율).
1H NMR (CDCl3, 400 MHz) δ 8.16(1H, br), 7.48-7.45(2H, m), 6.97-6.94(2H, m), 2.34-2.31(2H, t), 1.68-1.65(2H, m), 1.38-1.33(2H, m), 0.92-0.89(3H, t).
단계 2 : N-(4-플로오로페닐)-N-(프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-(4-fluorophenyl)-N-(prop-2-ynyl)pentanamide)의 제조
상기 단계 1에서 수득한 N-(4-플로오로페닐)펜탄아마이드 (500.00 mg, 2.56mmol)과 프로파질브로마이드(propargyl bromide) (0.24 ml, 2.81 mmol)을 이용하여 상기 실시예 45의 단계 2와 동일한 방법으로 N-(4-플로오로페닐)-N-(프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-(4-fluorophenyl)-N-(prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다(347.60 mg, 57 % 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.27 (2H, m), 7.14 (2H, m), 4.46 (2H, s), 2.04 (2H, t), 1.55 (2H, m), 1.21 (2H, m), 0.81 (3H, t)
단계 3 : N-(4-플로오로페닐)-N-(3-(4-하이드록시페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-(4-fluorophenyl)-N-(3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)의 제조
상기 단계 3에서 수득한 N-(4-플로오로페닐)-N-(프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (300.00 mg, 1.29 mmol)과 4-아이오도페놀(4-Iodophenol)(140.80 mg, 0.64 mmol)을 이용하여 N-(4-플로오로페닐)-N-(3-(4-하이드록시페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드 (N-(4-fluorophenyl)-N-(3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-ynyl)pentanamide)를 수득하였다(117.00 mg, 56 % 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.22 (6H, m), 6.84 (2H, d, J = 8.0 Hz), 4.65 (2H, s), 2.06 (2H, t), 1.55 (2H, m), 1.21 (2H, m), 0.79 (3H, t)
단계 4 : 에틸 2-(4-(3-( N -(4-플로오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세테이트 (ethyl 2-(4-(3-( N -(4-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetate)의 제조
상기 단계 4에서 수득한 N-(4-플로오로페닐)-N-(3-(4-하이드록시페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드(110.00 mg, 0.34 mmol)와 에틸브로모아세테이트(Ethyl bromoacetate)(0.04 ml, 0.37 mmol)을 이용하여 상기 실시예 27의 단계 1과 동일한 방법으로 에틸 2-(4-(3-(N-(4-플로오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세테이트 (ethyl 2-(4-(3-(N-(4-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetate)를 수득하였다(113.00 mg, 81 % 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.21 (6H, m), 6.79 (2H, d, J = 9.0 Hz), 4.65 (2H, s), 4.59 (2H, s), 4.24 (2H, m), 2.01 (2H, t), 1.52 (2H, m), 1.21 (5H, m), 0.79 (3H, t)
단계 5 : 2-(4-(3-(N-(4-플로오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세틱산(2-(4-(3-(N-(4-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetic acid)의 제조
상기 단계 5에서 수득한 에틸 2-(4-(3-(N-(4-플로오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세테이트(100.00 mg, 0.24 mmol)를 이용하여 상기 실시예 28의 단계 5와 동일한 방법으로 2-(4-(3-(N-(4-플로오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세틱산(2-(4-(3-(N-(4-fluorophenyl)pentanamido)prop-1-ynyl)phenoxy)acetic acid)를 수득하였다(25.00 mg, 27 % 수율).
1H NMR (CDCl3, 500 MHz) δ 7.41 (2H, m), 7.26 (4H, m), 6.88 (2H, d, J = 7.0 Hz), 4.66 (2H, s), 4.60 (2H, s), 2.10 (2H, t), 1.52 (2H, m), 1.23 (2H, m), 0.82 (3H, t)
[실험예]
실험예 1. BLT2가 발현된 세포 또는 BLT2가 발현되지 않은 세포의 준비
본 실험을 위하여, BLT2가 발현되지 않은 세포 및 BLT2가 발현된 세포 (CHO-BLT2 cells)를 하기와 같은 방법으로 준비하였다.
CHO 세포는 한국세포주은행 (KCLB, 10061)으로부터 얻었으며, 이를 10%의 FBS (fetal bovine serum; Life technologies, Inc.), 페니실린 (50 units/mL) 및 antibiotic antimycotic solution (Life technologies, Inc.)이 포함된 RPMI 1640 medium (Invitrogen) 에서 37 ℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 상기 세포를 3일간 각각 Trypsin-EDTA를 사용하여 나누어 (splitting) 성장 단계로 유지시켰으며, PBS (phosphate-buffered saline; 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2m MKH2PO4)로 세척하고, 이 후 새로운 배지에 첨가하여 BLT2가 발현되지 않은 세포를 준비하였다.
또한, 안정된 CHO/BLT2 클론 (stable CHO/BLT2 clones)의 제조를 위해, CHO-K1 세포를 HA-tagged human BLT2를 코딩하는 pcDNA3-long form BLT2로 형질전환하고, 0.4 mg/ml의 G418 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)로 선별하였다. BLT2 발현을 스크리닝하기 위해, 상기 선별된 클론을 인간-특이적 BLT2 프라이머를 사용하는 RT-PCR로 분석하였고, 대표적인 클론을 BLT2가 발현된 세포(CHO-BLT2)로 실험에 사용하였다.
실험예 2. BLT2가 발현된 세포에 대한 성장 억제효과 확인
상기 실시예에서 제조한 화합물의 처리에 따른 세포 생존율을 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드 (MTT) 방법으로 측정하였다.
보다 구체적으로, 상기 실험예 1에서 준비한 1 × 104개의 BLT2가 발현되지 않은 세포 (CHO-pcDNA3.1 cells) 및 BLT2가 발현된 세포 (CHO-BLT2 cells)를 96 mm 배양 접시 (culture dish)에 분주하고 24시간 동안 세포를 배양시켰다. 이 후, 배양액을 제거하고 무혈청 RPMI 배지를 첨가하였으며. 2시간 후, 상기 실시예에서 준비한 화합물 10 μM, 대조군인 DMSO (화합물 용매) 10 μM, 양성 대조군인 LY255283 ((1-[5-ethyl-2-hydroxy-4-[[6-methyl-6-(1H-tetrazol-5-yl)heptyl]oxy] phenyl]-ethanone) (Cayman) 10 μM을 각각의 세포에 1시간 전 처리하였다. 이 후, LTB4 (300nM)를 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 20μL의 MTT 용액 (5 mg/mL, Sigma-Aldrich)을 각 웰에 가하고 습한 CO2 인큐베이터에서 37 ℃, 4시간 동안 배양한 후, 상층액을 제거하고, 200μL의 DMSO를 각 웰에 가해 불용성 보라색 포마잔 결정을 용해시켰다. 550 nm에서의 흡광도를 마이크로플레이트 리더(Molecular Devices, Sunnyvale, CA)를 이용하여 측정하였으며, 모든 측정은 3회 반복 수행하다.
그 결과, 도 1a 내지 도 1e에 나타낸 바와 같이, BLT2가 발현된 세포(CHO-BLT2 cells)에 BLT2의 리간드인 LTB4 (300nM)를 처리한 경우 (DMSO+), 에탄올을 처리한 경우 (DMSO-)와 비교하여, 세포 성장이 20%에서 35%까지 증가하였고, BLT2가 발현된 세포 (CHO-BLT2)에서, 양성 대조군인 LY255283을 전 처리한 경우, 대조군인 DMSO를 처리한 경우와 비교하여 약 90%의 세포 성장을 나타냈으며, 상기 실시예의 화합물 처리에 따른 세포 성장 억제 효과를 확인하였다. 구체적으로, 본 발명의 화합물 (LMT-692, LMT-694, LMT-696, LMT-1013)을 10μM 전 처리한 경우, 대조군인 DMSO와 비교하여 각각 88.0%, 16.7%, 56.6%, 96.3%의 세포 성장을 나타내었는바, 성장 억제효과를 확인하였다. 이와 마찬가지로 LMT-837 (65%), LMT-841 (60%), LMT-842 (70%), LMT-883 (99%), LMT-886 (99%), LMT-1016 (99%), LMT-1018 (71.6%), LMT-1019 (99%)의 화합물에서도 성장 억제효과를 확인하였다.
상기 실험결과는, 본 발명의 화합물 (LMT-692, LMT-696, LMT-837, LMT-841, LMT-842, LMT-883, LMT-886, LMT-1013, LMT-1016, LMT-1018, LMT-1019)은 BLT2로 유도된 세포 증식을 매우 우수한 효율로 억제할 수 있으며, 상기 화합물은 항암, 항천식 또는 다른 형태의 BLT2 관련 염증성 질환의 억제를 위한 치료제로 활용 가능한 약학적 성분 (BLT2-blocking pharmacological molecules)으로 이용될 수 있음을 의미한다.
실험예 3. LTB 4 로 유도된 BLT2 의존적인 주화성 저해효과 확인
주화성 (Chemotactic motility)은 6.5-mm 직경의 폴리카보네이트 필터 (8-μm 의 공극 크기, Corning Costar)를 구비한 Transwell 챔버를 이용하여 분석하였다. 구체적으로, 필터의 아래쪽 표면을 37 ℃에서 1시간 동안 무혈청 RPMI 1640 배지 중의 10 μg/mL 파이브로넥틴으로 코팅하였다. 다양한 양의 LTB4를 포함한 RPMI 1640 배지와 함께 건조, 코팅된 필터를 Transwell 챔버의 아래쪽 웰에 두고, 무혈청 RPMI 1640 배지에 BLT1 및 BLT2를 안정적으로 발현하는 CHO 세포를 최종적으로 2 × 104cells/100μL로 윗쪽 웰에 로딩하여 실험하였다. 저해제들의 효과를 평가할 때 세포들은 분주 전 30분 동안 각각의 저해제로 전 처리하였다. 37℃, 5% CO2에서 3시간 동안 배양한 후, 필터들을 메탄올로 3분 동안 고정시키고, 헤마톡실린 및 에오신으로 10분 동안 염색했다. 본 실험에서, 세포는 BLT2가 발현된 세포(CHO-BLT2 cells) 및 BLT1이 발현된 세포(CHO-BLT1)를 이용하였으며, 양성 대조군으로 각각 LY255283 및 U75302를, 비교 대조군으로 BLT2의 리간드인 LTB4, (300 nM), BLT1의 리간드인 LTB4 (10nM), LPA (lysophosphatidicacid;100nM)를 이용하였다. 주화성은 광학 현미경 하에서 (배율, ×200), 필터의 아래쪽 측면 상의 세포를 계수함으로써 정량하였다. 각 분석에서 6개의 필드를 계수하였고, 각각의 샘플은 2회씩 분석하였으며, 상기 분석은 3회씩 반복 수행하였다.
그 결과, 도 2a 및 도 2b 및 하기 표 1에 나타낸 바와 같이, BLT2를 발현하는 세포(CHO-BLT2 cells)에서, 본 발명의 화합물 (LMT-692, LMT-696)의 농도가 증가함에 따라 (10-4, 10-3, 10-2, 10-1, 1, 10 및 102), 무 혈청 조건 하에서 CHO-BLT2 세포의 주화성이 억제됨을 확인하였으며, LMT-692 및 LMT-696의 화합물의 IC50 (50% 억제 농도)는 각각 7.566 μM 및 2.003 μM 이었다.
Figure 112016071700310-pat00039
또한, 하기 표 2에 나타낸 바와 같이, BLT2를 발현하는 세포(CHO-BLT2 cells)에서, 본 발명의 화합물 LMT-1013의 농도가 증가함에 따라, 무 혈청 조건 하에서 CHO-BLT2 세포의 주화성이 억제됨을 확인하였으며, LMT-1013 화합물의 IC50 (50% 억제 농도)는 62.35 nM 이였다.
마찬가지로 BLT1을 발현하는 세포(CHO-BLT1 cells)에서, 본 발명의 화합물 LMT-1013의 농도가 증가함에 따라, 무 혈청 조건 하에서 CHO-BLT2 세포의 주화성이 억제됨을 확인하였으며, LMT-1013 화합물의 IC50 (50% 억제 농도)는 및 10 μM 이상이였다.
Figure 112016071700310-pat00040
또한, 도 3a 및 도 3b에 나타낸 바와 같이, BLT2가 발현된 세포 (CHO-BLT2 cells)에 BLT2의 리간드인 LTB4 (300nM)를 처리한 경우 (DMSO+), 에탄올을 처리한 경우 (DMSO-)와 비교하여, 세포 주화성이 2.4배 증가 되었으며, 양성 대조군으로 사용된 LY255283를 전처리 (10μM)한 경우, 리간드인 LTB4를 처리한 경우와 비교하여 대비 90%의 주화성을 나타냄을 확인하였다. 이와 마찬가지로 BLT1이 발현된 세포 (CHO-BLT1)에서, 리간드인 LTB4 (10nM)를 처리한 경우 (DMSO+), 에탄올을 처리한 경우 (DMSO-)와 비교하여, 세포 주화성이 2.2배 증가되었으며, 양성 대조군으로 사용된 U75302를 전처리 (10μM)한 경우, 리간드인 LTB4를 처리한 경우와 비교하여 90%의 주화성을 나타냄을 확인하였다. 다만, 본 발명의 화합물 (LMT-692, LMT-694, LMT-696)의 경우, BLT2가 발현된 세포에 10 μM 전처리한 경우, 리간드인 LTB4 처리 (DMSO+)에 비해 주화성이 각각 66%, 90%, 70.3% 억제됨을 확인한 반면, BLT1가 발현된 세포(CHO-BLT1)에서는 리간드인 LTB4 처리 (DMSO+)에 비해 주화성이 억제되지 않음을 확인하였다.
상기 결과는, BLT2가 안정하게 발현되고 있는 세포 (CHO-BLT2)에서, 주화성 활성은 LTB4 자극에 인해 증가되며, 본 발명의 화합물 (LMT-692, LMT-696, LMT-1013)은 이러한 주화성을 현저히 저해시킬 수 있는바, LTB4에 의해 유도된 BLT2-의존적 주화성을 저해시키기 위한 약학적 성분으로 이용될 수 있음을 의미한다.
실험예 4. LTB 4 와 BLT2 결합 저해효과 확인
LTB4와 BLT2 결합 (ligand binding affinity) 저해는 동위원소 트리튬(H3)이 표기표 LTB4([3H]LTB4, ARC)(specific activity 160.0 Ci/mmol)를 사용하여 분석하였다. 실험방법은 CHO-BLT2 세포 2 × 106 개를 100 mm 배양접시에 깔고 48시간 동안 배양한 후 다음 과정을 진행한다. 수확한 세포를 균질기(homogenizer)로 1분씩 총 5회 사용하여 세포막의 단백질들을 분리한다. 그 후 4℃에서 45,000 RPM으로 40 분간 원심분리를 진행하여 세포막의 단백질만 수확하고 이를 40 μg/45 μL 농도로 정량하였다. 동일하게 정량된 BLT2가 포함된 세포막 단백질에 각각 동일한 양의 [3H]LTB4(5 nM)를 처리하고 농도별(10-9, 10-8, 10-7, 10-6 및 10-5 M)로 화합물질을 처리하였을 때, 트리튬이 표기된 LTB4와 BLT2의 결합 억제정도를 Hidex 300sL 액체섬광계수기를 사용하여 측정하였다.
그 결과, 도 4a 및 도 4b에 나타낸 바와 같이, BLT2를 발현하는 세포(CHO-BLT2 cells)에서, 본 발명의 화합물 (LMT-696 및 LMT-1013)의 농도가 증가함에 따라 (10-9, 10-8, 10-7, 10-6 및 10-5) LTB4와 BLT2의 결합이 억제됨을 확인하였으며, LMT-696 및 LMT-1013의 화합물의 IC50 (50% 결합 억제 농도)는 각각 5.6 nM 및 30.74 nM이었다.
실험예 5. BLT2 억제를 통한 항암효과 확인
본 발명자들은 이전 연구에서 BLT2가 유방암 세포인 MDA-MB-231과 MDA-MB-453의 세포 내 활성산소 (ROS; reactive oxygen species)의 생성과 싸이토카인인 IL-8 (interlukin-8)의 생성을 조절하여 결과적으로 암세포의 침투(invasion)와 전이(metastasis)가 조절됨을 보고한 바 있다. 따라서 유방암 세포인 MDA-MB-231과 MDA-MB-453 세포에서, 본 발명의 화합물 처리에 따른 세포 내 활성산소 생성 억제, 및 IL-8 발현 억제 등을 확인하고자 하였다.
5-1. 유방암 세포의 준비
유방암 세포인 MDA-MB-231 세포는 한국세포주은행 (Seoul, Korea)으로부터, MDA-MB-435 세포는 J.-H. Lee (Asan Medical Center, Seoul, Korea)로부터 얻었다. 이를 10%의 FBS(fetal bovine serum; Life technologies, Inc.), 1% 페니실린 (50 units/mL), 및 antibiotic antimycotic solution (Life technologies, Inc.)이 포함된 RPMI 1640 medium (Invitrogen)에서 37℃, 5% CO2의 조건에서 배양하였다.
5-2. 세포 내 활성산소 생성 억제효과 확인
본 발명의 화합물 (LMT-696) 처리에 따른 세포 내 활성산소 (H2O2)를 DCF 형광의 함수로 측정하였다. 구체적으로, 활성산소 (ROS)의 측정 전 2 × 105개의 세포를 60-mm 웰에서 키우고, FBS가 보충된 RPMI 1640 배지 중에서 24시간 동안 배양하였다. 본 발명의 화합물의 효과를 평가하기 위해, 세포들을 화합물 (LMT-696)로 각각 30분 동안 전 처리하였다. 세포 내 활성산소를 측정하기 위해, 세포들을 H2O2-민감성 형광물질인 H2DCFDA [MolecularProbes(Eugene,OR)](20μM)와 함께 37℃의 어둡고 습한 CO2 인큐베이터 내에서 20분 동안 배양하였다. H2DCFDA는 세포 내에서 DCF로 가수분해되어 세포 내에 존재하며, H2O2의 존재하에서 높은 형광을 나타내는 DCF로 산화되는바, 이러한 성질을 이용하여 활성산소의 양을 측정하였다. 또한, 탐지기에서의 활성산소 생성의 확인을 위하여 세포는 트립신-EDTA를 이용하여 수확하고, 페놀레드가 함유되어 있지 않은 무혈청 RPMI 1640 중에 재현탁시켰다. DCF 형광도는 FACS Calibur flow cytometer (Becton Dickinson, NJ)를 이용하여 각각 488 및 530 nm의 여기 및 방출 파장으로 측정하였다.
그 결과, 도 5a 및 도 5b에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물 (LMT-696)을 처리한 경우, 유방암 세포인 MDA-MB-231 세포 및 MDA-MB-435 세포에서 활성 산소의 생성이 유의적으로 억제됨을 확인하였다.
5-3. IL-8 발현 억제효과 확인
본 발명의 화합물 처리에 따른 IL-8의 발현을 확인하기 위해 세포에서 Easy Blue (Intron, Sungnam, Korea)로 모든 RNA를 분리하여 260 nm 흡광도에서 정량하였다. RNA (1.25 μg)를 중합효소연쇄반응(PCR) 기법으로 역전사과정을 통해 cDNA로 합성하였다. IL-8와 glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)에 특이적으로 결합하는 프라이머를 사용하여 발현량을 확인하였다.
그 결과, 도 6a 및 도 6b에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물 (LMT-696)을 처리한 경우, 유방암 세포인 MDA-MB-231 세포 및 MDA-MB-435 세포에서 IL-8 발현량이 유의적으로 억제됨을 확인하였다.
5-4. 유방암 세포의 침투 억제효과 확인
본 발명의 화합물 처리에 따른 유방암 세포의 침투를 측정하는데 BioCoat Matrigel Invasion Chambers (BD Biosciences, Bedford, MA)를 사용하였다. 5 × 104개의 유방암 세포를 trypsin-EDTA로 수확한 후, 0.5% 혈청의 포함된 RPMI 1640에 재현탁시키고, Matrigel inserts에 옮겼다. 5% 혈청이 포함된 RPMI 1640를 아래 chamber에 넣고 세포를 37 ℃ 에서 36 시간 배양하였다. 각 필터들을 메탄올로 3분 동안 고정시키고, 헤마톡실린 및 에오신으로 10분 동안 염색했다. 암세포의 침투성은 광학 현미경 하에서(배율 ×200), 필터의 아래쪽 측면 상의 세포수로 정량하였다. 각 분석마다 6개의 필드를 정량하였다. 각각의 샘플은 2회씩 분석하였으며, 상기분석은 3회씩 반복 수행하였다.
그 결과, 도 7a 및 도 7b에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물 (LMT-696)을 처리한 경우, 암세포 침투는 MDA-MB-231에서 70%, MDA-MB-435에서는 56% 억제됨을 확인하였다.
5-5. 유방암 세포의 전이 억제효과 확인
본 발명의 화합물 처리에 따른 유방암세포의 전이실험은 고려대학교 윤리위원회에 의해 승인되었으며, 본 실험에 사용된 모든 실험동물은 고려대학교 동물관리 및 사용위원회의 승인된 지침에 따라 수행하였다. 6주령 암컷 누드 마우스 (Charles River, Wilmington, MA)에 암세포를 주입하여 암세포 전이를 확인하였다. 유방암 세포에 본 발명의 화합물(LMT-696, 10 μM), LY255283, U75302 및 DMSO를 24시간 전처리한 후 trypsin-EDTA로 수확하여 PBS에 재현탁시켜 zoletil (50 mg/kg)로 마취시킨 마우스에 복강주사로 2 × 106 유방암 세포를 주입하였다. 5일 후부터 매 5일 간격으로 3회 본 발명의 화합물 (LMT-696, 2.5 mg/kg), LY255283 (2.5 mg/kg), U75302 (0.25 mg/kg) 및 DMSO를 복강주사 하였다. 유방암세포를 주입한 시기로부터 15주 후 마우스를 해부하여 암세포 전이를 관찰하였다.
그 결과, 도 8, 도 9a 및 도 9b에 나타낸 바와 같이, 암세포(MDA-MB-231)의 전이는 대조군과 비교하여 본 발명의 화합물 (LMT-696)을 처리에 의해 40% 억제되었고, 양성 대조군인 LY255283를 처리에 의해 36% 억제된 반면, U75302 처리에 의해서는 암세포인 MDA-MB-231의 전이가 억제되지 않음을 확인하였다.
상기 결과는, 본 발명의 화합물 (LMT-696)은 암세포의 세포 내 활성산소와 IL-8 생성을 억제하고 결과적으로 암세포의 침투와 전이를 억제시킬 수 있는바, 우수한 항암효능을 가진 약학적 성분으로 이용될 수 있음을 의미한다.
실험예 6. BLT2 억제를 통한 항천식 효과 확인
천식의 초기 반응에서는 mast cell이 중요한 역할을 하며, 외부에서 allergen이 기도를 통해 체내에 들어오면 mast cell이 활성화되어 여러 가지 싸이토카인 (interlukin-4, interlukin-13)들을 분비하게 된다. 이러한 싸이토카인에 의해 염증세포들의 유입, 점액의 생성, 기도가 수축하는 등의 현상이 나타나게 된다. 본 발명자들은 항 천식효과를 확인하기 위해 7주령(18-20g)이 된 암컷 BALB/c 마우스를 오리엔트 (Seoungnam, Korea)로부터 공급받아 실험에 사용하였으며, 천식을 유도하였다. 1 및 14일에 암컷 C57BL/6 마우스에 보조제인 알루미늄 하이드로퍼 겔 (alum)(Pierce, Rockford, IL) 2.5 mg을 20 mg의 난백 알부민(OVA)에 포함시켜 복강 내 감작시켰다. 두 번의 초기 감작 후 21, 22 및 23 일에 초음파 분무기를 사용하여 1% OVA를 마우스에 분사하였다. 본 발명의 화합물 (LMT-696)(5 ㎎/㎏), LY255283 (5 ㎎/㎏, Cayman) 또는 DMSO는 1% OVA를 분사하기 1 시간 전에 복강주사 하였다. 초기 감작 후 24일에 기도과민성 (AHR)를 측정하였고, 25일에 천식표현형인 염증성 싸이토카인 IL-4 발현 및 염증세포(호중구; neutrophil)의 유입을 관찰하기 위해 마우스를 해부하였다. LPS(Lipopolysaccharide)로 유도한 중증천식 동물모델은 0, 1, 2 및 7일에 Balb/c 마우스에 75 μg의 난백 알부민(OVA)과 1 mg의 LPS를 코에 넣어 감작시켰다. 14, 15, 21 및 22일에 50 μg의 난백 알부민(OVA)을 코에 넣어 challenge 시켰다. 본 발명의 화합물 (LMT-1013) (1, 3, 10, 30 ㎎/㎏), montelukast (10 ㎎/㎏, DRS) 또는 control buffer (10% DMA, 5% Tween 80, 85% saline)는 50 μg의 난백 알부민(OVA)을 코에 넣어 challenge하기 1 시간 전에 먹였다. 초기 감작 후 23일에 기도과민성 (AHR)을 측정하였고 24일에 중증천식표현형인 염증세포(호중구; neutrophil)의 유입을 관찰하기 위해 마우스를 해부하였다. 또한, 기도과민성 측정은 마우스에 기도수축제인 metacholine (조건에 따라 6.25 mg/ml ~ 50 mg/ml까지)을 투여한 후 수행하였다. 기도 수축제 투여는 초음파 분무기를 사용하여 3분 동안 챔버의 입구를 통해 분사하였다. 기도의 과민성은 enhanced pause를 천식현상의 지표로 사용하여 분석하였다. 기도세척액 세포 개수는 광학 현미경 하에서 (배율, ×200), 세포를 계수함으로써 정량하였다. 각 분석에서 4개의 필드를 계수하였고, 각각의 샘플은 2회씩 분석하였으며, 상기 분석은 3회씩 반복 수행하였다.
또한, 도 10 및 도 11에 나타낸 바와 같이, 양성 대조군인 LY255283을 10 μM 전 처리한 경우, 기도수축제 50 mg/ml를 투여한 중증천식이 유도된 마우스에서 기도과민성이 69.2% 감소되었으며, 마우스 복강에서 분리된 세포들의 IL-4 생성이 67.2% 감소됨을 확인하였다. 나아가, 본 발명의 화합물(LMT-696)을 10 μM 전처리한 경우, 기도수축제 50 mg/ml를 투여한 중증천식이 유도된 마우스에서 기도 과민성이 70% 감소되었으며, 마우스 복강에서 분리된 세포들의 IL-4 생성이 70% 감소됨을 확인하였다.
또한, 도 12에 나타낸 바와 같이, 천식이 유도된 마우스 (OVA+LPS)에서 천식이 유도 되지 않은 마우스 (Normal)에 비해 13배가량 기도 저항성이 증가되었으며, 본 발명의 화합물 (LMT-1013)을 1, 3, 10 및 30 mg/kg 전처리한 경우, 기도수축제 50 mg/ml를 투여한 마우스와 비교하여, 기도 과민성이 각각 48.6%, 52.9%, 83.2%, 87.3% 감소됨을 확인하였다. 반대로 비교 물질인 montelukast 10 mg/kg을 전처리한 경우, 기도수축제 50 mg/ml를 투여한 마우스와 비교하여, 기도 과민성이 64% 감소됨을 확인하였다.
또한, 도 13a, 도 13b 및 도 13c에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물 (LMT-1013)을 1 및 10 mg/kg 전처리한 경우, 마우스 복강에서 유입된 전체 세포와 호중구가 감소됨을 확인하였고, 특히 면역세포인 호중구가 각각 51.6%, 90.3% 감소됨을 확인하였다.
또한, 도 14a 및 도 14b에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물 (LMT-1013)을 1, 3, 10, 및 30 mg/kg 전처리한 경우, 마우스 복강에서 유입된 전체 세포와 호중구가 감소됨을 확인하였고, 특히 유입된 호중구가 각각 42.2%, 48.8%, 71.8%, 88.3% 감소됨을 확인하였다. 반대로 비교 물질인 montelukast 10 mg/kg을 전처리한 경우, 마우스 복강에서 유입된 면역세포인 호중구가 감소되지 않음을 확인하였다.
상기 결과는, 본 발명의 화합물(LMT-696 및 LMT-1013)은 천식 동물모델에서 기도과민성을 억제하고 화합물(LMT-696)은 염증성 싸이토카인 IL-4 생성을 억제시키며 화합물(LMT-1013)은 복강으로의 면역세포의 유입을 억제시켜 결과적으로 천식의 증상을 완화시킬 수 있는바, 항천식 효과를 갖는 약학적 성분으로 이용될 수 있음을 의미한다.
전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (5)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    [화학식 1]
    Figure 112016071700310-pat00041

    상기 화학식 1에서,
    R1은 C1~C10의 알킬이고,
    R2는
    Figure 112016071700310-pat00042
    ,
    Figure 112016071700310-pat00043
    ,
    Figure 112016071700310-pat00044
    ,
    Figure 112016071700310-pat00045
    또는
    Figure 112016071700310-pat00046
    이며,
    Ra는
    Figure 112016071700310-pat00047
    ,
    Figure 112016071700310-pat00048
    ,
    Figure 112016071700310-pat00049
    ,
    Figure 112016071700310-pat00050
    ,
    Figure 112016071700310-pat00051
    ,
    Figure 112016071700310-pat00052
    ,
    Figure 112016071700310-pat00053
    ,
    Figure 112016071700310-pat00054
    ,
    Figure 112016071700310-pat00055
    ,
    Figure 112016071700310-pat00056
    ,
    Figure 112016071700310-pat00057
    ,
    Figure 112016071700310-pat00058
    ,
    Figure 112016071700310-pat00059
    ,
    Figure 112016071700310-pat00060
    ,
    Figure 112016071700310-pat00061
    ,
    Figure 112016071700310-pat00062
    ,
    Figure 112016071700310-pat00063
    ,
    Figure 112016071700310-pat00064
    ,
    Figure 112016071700310-pat00065
    ,
    Figure 112016071700310-pat00066
    ,
    Figure 112016071700310-pat00067
    ,
    Figure 112016071700310-pat00068
    또는 하이드록시이고,
    Rb는
    Figure 112016071700310-pat00069
    ,
    Figure 112016071700310-pat00070
    ,
    Figure 112016071700310-pat00071
    또는
    Figure 112016071700310-pat00072
    이고,
    RC는
    Figure 112016071700310-pat00073
    ,
    Figure 112016071700310-pat00074
    또는
    Figure 112016071700310-pat00075
    이고,
    Rd는 수소 또는
    Figure 112016071700310-pat00076
    이고,
    Re는
    Figure 112016071700310-pat00077
    또는
    Figure 112016071700310-pat00078
    이고,
    R3는 수소 또는 플루오르이다.
  2. 제 1항에 있어서,
    상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하기 화합물들로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염:
    tert-부틸 4-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트;
    N-페닐-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드;
    N-(3-(4-(4-메틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    N-(3-(4-(4-에틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    N-(3-(4-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    N-(3-(4-(4-(2-하이드록시에틸)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    N-(3-(4-(4-(사이클로프로필메틸)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    N-(3-(4-(4-사이클로헥실피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    N-(3-(4-(4-(사이클로헥실메틸)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    N-(3-(4-(4-아이소부틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    N-페닐-N-(3-(4-(4-(프로프-2-이닐)피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드;
    N-(3-(4-(4-시아노피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    tert-부틸 4-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트;
    N-(3-플루오로페닐)-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드;
    N-(3-플루오로페닐)-N-(3-(4-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드;
    tert-부틸 4-(4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트;
    N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(4-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드;
    N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(4-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드;
    N-(3-(4-(몰폴린-4-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    N-페닐-N-(3-(4-(피페리딘-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드;
    N,N-다이에틸-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤즈아마이드;
    N-페닐-N-(3-(3-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드;
    N-(3-(3-(4-메틸피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    N-(3-(3-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    tert-부틸-4-(3-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)벤조일)피페라진-1-카복실레이트;
    N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(3-(피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드;
    N-(4-플루오로페닐)-N-(3-(3-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)페닐)프로프-2-이닐)펜탄아마이드;
    N-(3-(4-하이드록시페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세트산;
    tert-부틸 4-(5-(3-((N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)피콜리노일)피페라진-1-카복실레이트;
    N-페닐-N-(3-(6-(피페라진-1-카보닐)피리딘-3-일)프로프-2-인-1-일)펜탄아마이드;
    N-(3-(6-(4-아이소프로필피페라진-1-카보닐)피리딘-3-일)프로프-2-인-1-일)-N-페닐펜탄아마이드;
    N,N-다이에틸-4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드;
    N,N-다이에틸-4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드;
    N-(3-(4-(N,N-다이에틸설파모일)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    N-(3-(4-(N-아이소프로필설파모일)페닐)프로프-2-이닐)-N-페닐펜탄아마이드;
    tert-부틸 4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤조에이트;
    4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로-1-핀-1-일)벤조익산;
    N-에틸-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드;
    N-(2-(다이메틸아미노)에틸)-4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아마이드;
    에틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)아세테이트;
    2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)아세틱산;
    메틸 2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)프로파노에이트;
    2-(4-(3-(N-페닐펜탄아미도)프로프-1-인-1-일)벤즈아미도)프로파노익산;
    2-(4-(3-(N-(3-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세트산; 및
    2-(4-(3-(N-(4-플루오로페닐)펜탄아미도)프로프-1-이닐)페녹시)아세트산.
  3. 제 1항 또는 제 2항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서, 상기 염증성 질환은 암 또는 천식인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  4. 삭제
  5. 삭제
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