KR101532062B1 - 신규한 방법 및 조성물 - Google Patents

신규한 방법 및 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR101532062B1
KR101532062B1 KR1020097020779A KR20097020779A KR101532062B1 KR 101532062 B1 KR101532062 B1 KR 101532062B1 KR 1020097020779 A KR1020097020779 A KR 1020097020779A KR 20097020779 A KR20097020779 A KR 20097020779A KR 101532062 B1 KR101532062 B1 KR 101532062B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
leu
ala
gly
asn
lys
Prior art date
Application number
KR1020097020779A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20100015379A (ko
Inventor
게랄트 헤르만 보스
Original Assignee
글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=39415279&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR101532062(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. filed Critical 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이.
Publication of KR20100015379A publication Critical patent/KR20100015379A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101532062B1 publication Critical patent/KR101532062B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/002—Protozoa antigens
    • A61K39/015—Hemosporidia antigens, e.g. Plasmodium antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/04—Mycobacterium, e.g. Mycobacterium tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/235—Adenoviridae
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/35—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/44—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from protozoa
    • C07K14/445—Plasmodium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55577—Saponins; Quil A; QS21; ISCOMS
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10371—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C12N2740/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
    • C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
    • C12N2740/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16311—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV regulatory proteins
    • C12N2740/16322—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16311—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV regulatory proteins
    • C12N2740/16334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 병원균에 대한 면역반응을 유도하는 방법과 관련이 있는데, 당해 방법은 (i) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드; (ii) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터; 및 (iii) 애주번트를 투여하는 단계를 포함하며; 여기서 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드, 상기 하나 이상의 아데노바이러스 벡터 및 상기 애주번트는 부대적으로 투여된다. 본 발명은 또한 백신, 약학 조성물, 키트 및 상기 폴리펩티드, 아데노바이러스 벡터 및 애주번트를 사용하는 용도와 관련이 있다.

Description

신규한 방법 및 조성물{NOVEL METHOD AND COMPOSITIONS}
발명의 분야
본 발명은 신규한 백신 조성물 및 포유동물, 특히 인간에서 면역반응을 자극하는데 있어서의 이들의 용도, 및 특히 병원균에 의한 감염의 예방 및 치료를 위한 신규한 백신 조성물 및 이들의 용도와 관련이 있다. 특히, 복잡한 프라임-부스트 스케줄에 대한 의존없이 CD4+ 및 CD8+ T-세포 반응을 비롯한 항체 반응을 유도할 수 있는 조성물과 관련이 있다.
발명의 배경
불활성화된 전체 개체가 19세기 후반 이래로 성공적인 백신접종(vaccination)에 사용되어 왔다. 더 최근에, 추출물, 소단위체, 톡소이드 및 캡슐 다당류(capsular polysaccharides)의 투여를 포함하는 백신이 사용되어 왔다. 유전 공학 기술이 가용하게 된 이래로, 재조합 단백질을 사용하는 것이, 천연 공급원으로부터의 정제된 단백질의 사용과 결부된 많은 위험을 회피하면서, 선호되는 전략이 되어 왔다.
초기 백신 접근법은 생체내에서(in vivo) 면역반응의 일부 양상을 자극하는 단백질의 투여에 기초하였다. 그후, 면역반응이 숙주에 의해 면역원성 단백질로 전사괴고 번역될 수 있는 DNA의 투여에 의해 야기될 수도 있음이 예상되었다.
포유동물 면역반응은 다음 2가지 중요 구성원을 갖는다: 체액성 반응과 세포-매개 반응. 체액성 반응은 특이적인 항원에 결합하게 될 항체의 생산을 포함하는데, 그로 인해 상기 항원이 중화되며 세포독성(cytotoxic) 또는 대식성(phagocytic)인 다른 세포가 관여하는 과정에 의해 상기 항원의 연이은 제거가 촉진된다. B-세포는 항체(혈장 B 세포) 생성을 비롯한, 면역학적 체액성 기억(기억 B-세포) 유지, 즉, 예를 들어, 면역접종을 통한 항원에 대한 최초 노출후 수년 경과시 상기 항원을 인지하는 능력에 관여한다. 세포 매개 반응은 다수의 상이한 유형의 세포의 상호작용을 포함하는데, 상기 세포 중에는 T 세포가 있다.
T-세포는 다수의 상이한 서브세트, 주로 CD4+ 및 CD8+ T 세포 항원-제시 세포(APC)[예컨대, 외래 항원에 대해 신체를 스크리닝하는, 면역 체계의 촉수로서 역할하는 대식세포 및 수지상 세포]로 나뉜다. 세포외 외래 항원이 APC에 의해 검출되면, 이들 항원은 APC 내부로 대식(삼켜짐)되며, 상기 APC에서 외래 항원들은 더 작은 펩티드로 가공될 것이다. 이러한 펩티드는 연이어 APC의 표면에서 주조직적합성복합체 클래스 II(MHC II) 분자 상에 제시되고, 여기서 이들 펩티드는 CD4 표면 분자를 발현하는 항원-특이적 T 림프구(CD4+ T 세포)에 의해 인지될 수 있다. CD4+ T 세포가 추가의 적절한 보조-자극(co-stimulatory) 시그날의 존재시 MHCII 분자 상의 특이적인 항원을 인지할 때, 이들 세포는 활성화되고 면역 체계의 다른 무기들을 연이어 활성화시키는 다수의 사이토카인을 분비시키게 된다. 일반적으로, CD4+ T 세포는 항원 인지후 이들이 생성시키는 반응의 유형에 따라서, T 헬퍼 1(Th1) 또는 T 헬퍼 2(Th2) 서브세트로 분류된다. 펩티드-MHC II 복합체의 인지시, Th1 CD4+ T 세포는 인터루킨 및 사이토카인, 예컨대, 인터페론 감마를 분비하고, 그로 인해 대식세포가 활성화되어 독성 화합물, 예컨대, 산화질소(nitric oxide) 및 반응성 산소/질소 종(species)이 방출된다. IL-2 및 TNF-알파는 또한 Th1 사이토카인으로 흔히 분류된다. 대조적으로, Th2 CD4+ T 세포는 일반적으로 인터루킨, 예컨대, IL-4, IL-5 또는 IL-13을 분비한다.
T 헬퍼 CD4+ T 세포의 다른 기능은 항체를 생산하고 방출시키기 위해 B 세포를 활성화시키기 위한 도움을 제공하는 것을 포함한다. 이들은 또한 CD4+ T 세포 이외의 다른 주요 T 세포 서브세트인, 항원-특이적 CD8+ T 세포의 활성화에 참여할 수 있다.
CD8+ T 세포는 펩티드가 적절한 보조-자극 시그날의 존재시 주조직접적합성복합체 클래스 I(MHC I) 분자에 의한 숙주 세포의 표면상에 제시될 때, 특이적인 상기 펩티드를 인지한다. MHC I 분자 상에 제시되기 위해서, 외래 항원은 바이러스 또는 세포내 박테리아가 직접적으로 숙주세포를 관통할 때 또는 DNA 면역접종 후의 경우와 마찬가지로 직접적으로 세포의 내부(세포질 또는 핵)에 접근할 필요가 있다. 세포 내부에서, 항원은 작은 펩티드로 가공되어 MHC I 분자 상에 적하될 것이고 상기 MHC I 분자는 세포의 표면으로 방향이 재설정된다. 활성화시, CD8+ T 세포는 대식세포 및 다른 세포를 활성화시키는 다수의 사이토카인, 예컨대, 인터페론 감마를 분비한다. 특히, 이들 CD8+ T 세포의 서브세트는 활성화시 용해성 및 세포독성 분자(예를 들어, 그랜자임, 퍼포린)을 분비한다. 그러한 CD8+ T 세포는 세포독성 T 세포로서 지칭된다.
더 최근에, MHC I 복합체 상에 세포외 항원 또는 이의 단편의 적하를 포함하는 항원 제시의 다른 경로가 소개되었고 "교차-제시(cross-presentation)"로 명명되었다.
T-세포 반응의 특성은 또한 백신에 사용된 애주번트의 조성에 의해 영향받게 된다. 예를 들어, MPL & QS21을 함유하는 애주번트는 Th1 CD4+ T 세포를 활성화시켜 IFN-감마를 분비시키는 것으로 드러났다(Stewart et al., Vaccine 2006, 24 (42-43):6483-92).
애주번트가 단백질 항원에 대한 면역반응을 증강시키는데 있어 가치를 지니는 것으로 잘 알려져 있으나, 반면, 이들은 일반적으로 DNA 또는 DNA-기반 벡터 백신접종과 연계하여 사용되지 아니하였다. 애주번트가 DNA-벡터 기반 백신과 연계하여 사용되지 않은 이유와 관련한 몇 가지 가정이 존재한다. 실제로, 애주번트와 벡터 간의 간섭이 이들의 안정성에 영향을 미칠 수 있다. 또한, 인간들은 독성약화된(attenuated) 벡터에 애주번트를 첨가하는 것이 그러한 생성물에 의해 유도된 반응생성력(reactogenicity)을 증가시킬 수 있다고 예상할 수 있다. 마지막으로, DNA-벡터 기반 백신의 면역원성을 증가시키는 것은 벡터 그 자체에 대한 증강된 중화 면역반응을 야기시킬 수 있고, 그로 인해 동일한 벡터-기반 백신의 연속 주사의 임의의 부스팅 효과를 방해할 수 있다. 사실상, P. 팔시파룸(P. falciparum) 감염에 대한 예방을 겨냥한 면역접종 프로토콜에서, 존스와 동료 연구자들(Jones et al., 2001, J Infect Diseases 183, 303-312)은 DNA에 의한 프라이밍후 부스팅 조 성물로서 DNA, 재조합 단백질 및 애주번트를 조합한 후의 나쁜 결과에 대해 보고하였다. 실제로, 기생충병의 수준은 부스팅 조성물에 단백질과 애주번트 만이 함유된 군에서 유의미하게 저하되었다. 이 프로토콜에서 DNA, 재조합 단백질 및 애주번트의 조합의 사용이 기생충병을 비롯한 항체 반응에 관한 결과에 나쁜 영향을 미쳤다는 결론이 도출되었다.
반면, 애주번팅된 DNA-기반 벡터 백신의 효능의 증강에 관한 보고가 있었다(Ganne et al., Vaccine (1994) 12(13) 1 190-1196). 특히, 오일 애주번트의 첨가에 의한 복제-결함 아데노바이러스로 벡터화된(adenovirus-vectored) 백신의 증강된 효능은 더 높은 항체 수준과 상관관계가 있었으나 CD4 및 CD8 T 세포 반응에 관한 영향은 보고되지 않았다.
애주번트로서 병원균 바이러스의 용도가 WO2007/016715호에 개시되었다. 상기 바이러스는 임의의 이종성 폴리뉴클레오티드를 함유할 수 있음이 언급되지 않았다.
일반적으로 CD4+ 및 CD8+ 세포 둘 모두의 자극은 최적 보호 면역성, 특히 HIV 감염/AIDS와 같은 특정 질병에 있어서의 최적 보호 면역성을 위해 필요한 것으로 생각된다. 예방학적으로 또는 치료학적으로 최적 면역반응을 유도하기 위해서, CD4+ 및 CD8+ 세포 둘 모두의 자극이 요망될 수 있다. 이것은 "프라임-부스트" 면역접종 전략의 주요 목표 중의 하나인데, 상기 전략에서 (대부분 CD8+ T 세포를 유도하는) DNA-벡터 기반 백신[즉, 비가공(naked) DNA, 바이러스 벡터 또는 세포내 박테리아 벡터, 예컨대, 리스테리아(listeria)]과 함께 단백질-기반 백신(대부분 CD4+T 세포를 유도하는 백신) 또는 상기와 반대되는 대안적인 투여가 CD4+ 및 CD8+ T 세포 반응 둘 모두를 활성화시킬 가능성이 가장 높다.
그러나, 프라임-부스트 백신 전략이 일반적으로 더 우수하거나 더 균형있는 반응을 야기시킬 수 있지만, 1회 이상의 경우(occasion) 및 특히 2회 이상의 경우를 백신화시키기 위한 필요조건은 개발도상국을 위한 대량 면역화 프로그램에 있어서, 과도한 부담이 되거나 심지어 실행불가능할 수 있다.
더욱이, 위에서 이미 언급한 바와 같이, 벡터 그 자체에 대하여 유발될 수 있는 면역성 때문에 바이러스 벡터 성분을 부스팅시키는 것이 종종 가능하지 않다.
따라서, 본 발명의 목적은 하기한 것들 중 하나 이상을 포함한다: (a) CD4+ 및/또는 CD8+ 세포 및/또는 항체의 생산을 자극시키며, 특히 반복된 면역접종에 대한 필요성을 회피하거나 완화시키는 완전한 면역접종 프로토콜 및 백신 조성물을 제공하는 것; (b) 면역원성 폴리펩티드 단독 또는 폴리뉴클레오티드 단독 함유 백신 조성물과 대비하여, 또는 면역원성 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드의 별개 투여를 포함하는 관용적인 프라임-부스트 프로토콜과 대비하여, CD4+ 세포 및/또는 CD8+세포 및/또는 항체의 생산을 더 자극시키는 면역접종 프로토콜 및 백신 조성물을 제공하는 것; (c) Th1 반응을 자극하거나 더 자극하는 백신 조성물을 제공하는 것; (d) 성분, 특히 바이러스 벡터의 요구 용량(doses)이 최소화된 백신 조성물 및 면역접종 프로토콜을 제공하는 것; 및 (e) 더 일반적으로는 병원균에 의해 유발된 질병의 치료 또는 예방을 위한 유용한 백신 조성물 및 면역접종 프로토콜을 제공하는 것. "더 자극하다"는 반응의 강도 및/또는 지속이 증강된다는 것을 의미한다.
발명의 요약
따라서, 본 발명에 따라서, 병원균에 대한 면역반응 유발방법으로서, (i) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드; (ii) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터; 및 (iii) 애주번트를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드, 상기 하나 이상의 아데노바이러스 벡터 및 상기 애주번트가 부대적으로(concomitantly) 투여되는, 병원균에 대한 면역반응 유발방법이 제공된다.
본 발명의 특정 양상에 따라서, (i) 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드, (ii) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터; 및 (iii) 애주번트를 포함하는, 백신 조성물이 제공된다.
또한 (i) 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드, (ii) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터; 및 (iii) 애주번트를 포함하는, 면역원성 조성물이 제공된다.
상기 백신 및 면역원성 조성물은 병원균-특이적 CD4+ T-세포 및/또는 CD8+ T-세포 및/또는 항체의 생산을 적당하게 자극한다.
"병원균-특이적 CD4+ T-세포 및/또는 CD8+ T-세포 및/또는 항체"는 전체 병원균 또는 이의 일부분(예를 들어, 면역원성 소단위체)을 특이적으로 인지하는 CD4+ T-세포 및/또는 CD8+ T-세포 및/또는 항체를 의미한다. "특이적으로 인지하다"는 CD4+ T-세포 및/또는 CD8+ T-세포 및/또는 항체가 비-특이적 방식보다는 면역특이적 방식으로 상기 병원균(또는 이의 일부분)을 인지한다는 것을 의미한다.
또한 면역학적으로 유효량의 그러한 조성물을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 포유동물에서 면역반응을 자극하는 방법이 제공된다.
또한 포유동물에서 면역반응을 자극하기 위한 약제의 제조에 있어서 그러한 조성물의 용도가 제공된다.
또한 포유동물에서 면역반응을 자극하는데 사용하기 위한 그러한 조성물이 제공된다.
또한 포유동물에서 병원균-특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T-세포 및/또는 항체의 생산을 자극하는 방법으로서, (i) 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드; (ii) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터; 및 (iii) 애주번트를 상기 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드, 상기 하나 이상의 아데노바이러스 벡터 및 상기 애주번트가, 예를 들어, 면역학적으로 유효량의 상기 조성물을 투여함으로써 부대적으로 투여되는, 포유동물에서 병원균-특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T-세포 및/또는 항체의 생산을 자극하는 방법이 제공된다.
또한 포유동물에서 병원균 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ 세포 및/또는 항체의 생산을 자극하기 위한 약제의 제조에 있어서의 상기 조성물의 용도가 제공된다.
예를 들어, CD4+ T-세포 또는 CD8+ T-세포 또는 항체의 생산이 자극된다.
2 및 특히 3가지 CD4+ T-세포 및/또는 CD8+ T-세포 및/또는 항체의 생산이 적당하게 자극된다.
CD8+ T-세포의 생산이 적당하게 자극된다. CD4+ 및 CD8+ T-세포의 생산이 적당하게 자극된다. CD4+ 및 CD8+ T-세포 및 항체의 생산이 적당하게 자극된다.
달리, CD4+ T-세포의 생산이 적당하게 자극된다. CD4+ 및 항체의 생산이 적당하게 자극된다.
달리, 항체의 생산이 적당하게 자극된다.
본 발명의 방법은 (비록 본 발명의 방법이, 요망되는 경우, 반복될 수 있지만) 면역반응을 유도하는 완벽한 방법을 위한 적절한 단계들을 제공하기 위해 적당하게 의도된다. 그러므로, 본 발명의 방법은 임의의 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 임의의 면역원성 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드(예를 들어, 아데노바이러스 벡터와 같은 벡터의 형태로)의 프라이밍 용량의 사용을 포함하지 않는다.
예를 들어, (a) (i) 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드; (ii) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터; 및 (iii) 애주번트를 투여하는 단계로서, 여기서 상기 하나 이상의 아데노바이러스 벡터 및 상기 애주번트가 부대적으로 투여되는 단계, 및 (b) 선택적으로 상기 단계 (a)를 반복하는 단계로 이루어지는, 병원균에 대한 면역반응 유발 방법이 제공된다.
상기 방법의 단계들은 반복이 개선된 면역반응을 야기시키는 경우 반복(예를 들어, 1회 반복)될 수 있다. 적절한 반응이, 적어도 T-세포 반응에 관한한, 임의의 반복에 대한 필요 없이 획득될 수 있다.
또한 병원균에 대한 면역반응 유발 방법으로서, (i) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드; (ii) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터; 및 (iii) 애주번트를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드, 상기 하나 이상의 아데노바이러스 벡터 및 상기 애주번트가 부대적으로 투여되며; 상기 방법이 임의의 프라이밍 투여량(priming dose)의 면역원성 폴리펩티드 또는 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드를 투여하는 단계를 포함하지 않는, 병원균에 대한 면역반응 유발 방법이 제공된다.
또한 본 발명에 따른 방법에 사용하기 위한, (i) 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드; (ii) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터; 및 (iii) 애주번트를 포함하며, 특히 (i) 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드; 및 (ii) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 제 2 아데노바이러스 벡터를 포함하는 키트가 제공된다.
본 발명의 조성물 및 방법은 미경험(naive) 환자에서 병원균에 의한 감염의 예방, 또는 병원균에 의해 이전에 감염된 환자에서 재감염의 예방 또는 병원균에 의해 감염된 환자의 치료에 유용하다.
도면의 간략한 설명
도 1은 플라스미드 p73i-Tgrn의 구성에 관한 개략도를 보여준다.
도 2-8은 실시예 1에 논의된 실험들의 결과를 보여주며, 특히, 도 2a, 2b, 3a, 3b는 다양한 면역접종 프로토콜 후 다양한 시점에 p24, RT, Nef 및 p17에서 유래된 펩티드 풀(pools)에 의한 재자극에 대한 반응으로 나타난 CD4+ 및 CD8+ T-세포 반응을 보여준다;
도 4는 F4에 대한 항체 반응을 보여준다;
도 5-8은 F4 성분 p24, RT, p17 및 Nef 각각에 대한 항체 반응을 보여준다;
도 9는 실시예 2에 논의된 실험들의 결과를 보여주는데, 특히 다양한 면역접종 프로토콜후 p24 및 RT에서 유래된 펩티드 풀에 의한 재작극에 대한 반응으로 나타난 CD4+ T-세포 반응을 보여준다;
도 10-12는 실시예 3에 논의된 실험들의 결과를 보여준다.
특히 도 10은 F4 서열을 포함하는(covering) 펩티드 풀에 대한 래빗 PBMC의 림프구증식(lymphoproliferative) 반응을 보여준다;
도 11은 F4에 대한 항체 반응의 시간경과(timecourse)를 보여준다;
도 12a 및 12b는 각각, F4 성분 p24 및 RT에 대한 항체 반응(77일째)을 보여 준다;
도 13은 정량된 HIV-1-특이적 CD4 T 세포를 보여준다;
도 14는 2회 면역접종후 7일째에 F4-특이적 CD4 T 세포의 빈도의 분포를 보여준다;
도 15는 2회 면역접종후 7일째에 F4-특이적 CD4 T 세포의 사이토카인 생산을 보여준다;
도 16은 정량된 HIV-1-특이적 CD8 T 세포를 보여준다;
도 17은 2회 면역접종후 7일째에 F4-특이적 CD8 T 세포 7의 사이토카인 생산을 보여준다;
도 18은 정량된 CSP-특이적 CD4 T 세포를 보여준다;
도 19는 정량된 CSP-특이적 CD8 T 세포를 보여준다;
도 20은 정량된 CSP(N-텀)-특이적 CD4 T 세포를 보여준다;
도 21은 정량된 CSP(C-텀)-특이적 CD4 T 세포를 보여준다;
도 22는 정량된 CSP(N-텀)-특이적 CD8 T 세포를 보여준다;
도 23은 정량된 CSP(C-텀)-특이적 CD8 T 세포를 보여준다;
도 24는 정량된 CSP-특이적 항체 타이터를 보여준다.
서열목록의 요약
Figure 112009060894482-pct00001
Figure 112009060894482-pct00002
위에서 인용된 서열들은 본 발명의 대표적인 양상에 사용되는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드로 사용될 수 있다. 상기 폴리펩티드는 위에 언급된 서열로 이루어지거나 이를 포함할 수 있다. 최초 Met 잔기는 임의적이다. N-말단 His 잔기(서열번호 9에서와 같이, 최초 Met 바로 다음의 His 잔 기를 포함함)는 임의적이거나 상이한 길이의 N-말단 His 태그가 사용될 수 있다(예를 들어, 전형적으로 최대 6개의 His 잔기가 단백질의 분리를 촉진하기 위해 사용될 수 있다). 유의미한 서열 동일성(대조 서열의 전체 길이에 걸쳐, 예를 들어, 80% 초과, 예를 들어, 90% 초과, 예를 들어, 95% 초과, 예를 들어, 99% 초과의 서열 동일성)을 지니는 유사(analogue) 단백질이 사용될 수 있으며, 특히 상기 유사 단백질이 유사한 기능을 지닐 때, 특히 상기 유사 단백질이 유사하게 면역원성이 있을 때, 사용될 수 있다. 예를 들어, 최대 20개, 예를 들어, 최대 10개, 예를 들어, 1-5개의 치환(예를 들어, 보존적 치환)이 용인될 수 있다. 동일한 단백질, 또는 위에 언급된 유사 단백질을 엔코딩하는 위에 인용된 핵산과 다른 핵산이 사용될 수 있다. 서열 동일성은, 예를 들어, BLAST를 사용하여 관용적인 수단에 의해 결정될 수 있다. 언급될 수 있는 서열번호 16의 한 특이 변형체에서, 잔기 398은 Ser이고 Cys가 아니다.
발명의 상세한 설명
본원에 사용된, 용어 "부대적으로"는 하나 이상의 면역원성 폴리펩티드, 하나 이상의 아데노바이러스 벡터 및 애주번트가 전형적으로 특정한 한 때에, 예를 들어, 건강 전문가에 대한 동일한 방문 과정에서, 12시간 미만의 기간 이내에, 예를 들어, 1시간 미만의 기간 이내에 투여된다는 것을 의미하는데, 예를 들어, 하나 이상의 면역원성 폴리펩티드, 하나 이상의 아데노바이러스 벡터 및 애주번트는 순차적으로(sequentially) 또는 동시적으로(simultaneously) 투여된다.
본원에 사용된, 용어 "에피토프"는 면역원성 아미노산 서열을 의미한다. 에피토프는 전형적으로 6-8개의 아미노산의 최소 아미노산 서열을 의미할 수 있는데, 상기 최소 서열은 이의 천연 환경(context)으로부터 벗어날 때, 예를 들어, 이종성 폴리펩티드로 번역될 때, 면역원성이다. 에피토프는 면역원성인 단백질의 그러한 일부를 의미할 수 있는데, 여기서 상기 에피토프를 함유하는 폴리펩티드는 항원(또는 때때로 "폴리펩티드 항원")으로 지칭된다. 폴리펩티드 또는 항원은 하나 이상의 (예를 들어, 2 또는 3개 또는 그 이상) 독특한 에피토프를 포함한다. 용어 "에피토프"는 B-세포 및 T-세포 에피토프를 포괄한다. 용어 "T-세포 에피토프"는 CD4+ T-세포 에피토프 및 CD8+ T-세포 에피토프(때때로 CTL 에피토프로도 지칭됨)를 포괄한다.
용어 "면역원성 폴리펩티드"는 면역원성인 폴리펩티드를 지칭하는데, 다시 말하면, 상기 면역원성인 폴리펩티드는 포유동물에서 면역반응을 개시시킬 수 있고, 그에 따라 하나 이상의 에피토프(예를 들어, T-세포 및/또는 B-세포 에피토프)를 함유한다. 면역원성 폴리펩티드는 하나 이상의 폴리펩티드 항원을, 융합 단백질에서와 같이, 예를 들어, 비천연 배열로 함유할 수 있다.
면역원성 폴리펩티드는 전형적으로, 예를 들어, 숙주, 박테리아 숙주, 효모 또는 배양된 포유동물 세포내에서 발현에 의해 생산된 재조합 단백질일 것이다.
용어 "병원균에서 유래된 폴리펩티드"는 병원균에서 천연적으로 생성되는 서열(즉, 항원)을 부분적으로 또는 전체로 함유하거나 상기 서열과 높은 서열 동일성(예를 들어, 10개 이상, 예를 들어, 20개 이상의 아미노산 스트레치(stretch)에 걸쳐, 예를 들어, 95%를 초과하는 동일성)을 지니는 폴리펩티드를 의미한다.
면역원성 폴리펩티드는 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개)의 폴리펩티드 항원을 함유할 수 있다.
달리 명시하지 않는한, "면역반응"은 세포성 및/또는 체액성 반응일 수 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 하나 이상의 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드는 하나 이상의 상기 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드와 실질적으로 동일한데, 예를 들어, 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드 중 하나 및 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드 중 하나가 하나 또는 다른 면역원성 폴리펩티드의 길이에 걸쳐 90% 또는 그 이상, 예를 들어, 95% 또는 그 이상, 예를 들어, 98% 또는 99% 또는 그 이상의 전체적인 서열 동일성을 지닐 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 하나 이상의 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드는 하나 이상의 상기 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드내에 함유된 항원과 실질적으로 동일한데, 예를 들어, 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드 중 하나 및 상기 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드 중 하나가 20개 또는 그 이상의 아미노산, 예를 들어, 60개 또는 그 이상의 아미노산의 스트레치에 걸쳐 90% 또는 그 이상, 예를 들어, 95% 또는 그 이상, 예를 들어, 98% 또는 99% 또는 그 이상의 전체적인 서열 동일성을 지닐 수 있다.
하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드는 하나 이상의 T 세포 에피토프를 적당하게 포함한다.
하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드는 하나 이상의 T 세포 에피토프를 적당하게 포함한다.
하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드는 하나 이상의 B 세포 에피토프를 적당하게 포함한다.
하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드는 하나 이상의 B 세포 에피토프를 적당하게 포함한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 하나 이상의 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드 및 하나 이상의 상기 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드는 하나 이상의 동일한 B-세포 및/또는 T-세포 에피토프를 공유한다. 이들은 10개 또는 그 이상의 아미노산 길이, 예를 들어, 15개 또는 그 이상의 아미노산 길이, 예를 들어, 25개 또는 그 이상의 아미노산 길이의 하나 이상의 동일한 아미노산 서열을 적당하게 공유한다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 하나 이상의 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드 중 어느 것도 하나 이상의 상기 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드와 실질적으로 동일하거나 공통적으로 하나 이상의 상기 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 함유하지 않는데, 예를 들어, 이들은 20개 또는 그 이상의 아미노산, 예를 들어, 40개 또는 그 이상의 아미노산의 스트레치에 걸쳐 90% 미만의 전체적인 서열 동일성을 지닐 수 있다.
따라서, 이들은 임의의 B-세포 또는 T-세포 에피토프를 공유하지 않을 수 있다. 예를 들어, 이들은 10개 또는 그 이상의 아미노산 길이, 예를 들어, 15개 또는 그 이상의 아미노산 길이, 예를 들어, 25개 또는 그 이상의 아미노산 길이의 임의의 동일한 아미노산 서열을 공유하지 않을 수 있다.
본 발명의 한 특이적 구체예에서, 제 1 면역원성 폴리펩티드 및 제 2 면역원성 폴리펩티드는 동일한 배열 또는 상이한 배열(예를 들어, 상이한 배열)로 동일한 항원을 함유한다. "상이한 배열"은 이들이 다른 순서로 배열되고/거나 이들이 분할될 수 있다는 것을 의미한다. 본 발명의 또 다른 특이적 구체예에서, 제 1 면역원성 폴리펩티드 및 제 2 면역원성 폴리펩티드는 동일하다.
본 발명에 따른 조성물은 당해 조성물내의 유일한 면역원성 폴리펩티드로서 하나의 제 1 면역원성 폴리펩티드를 함유할 수 있다. 달리, 본 발명에 따른 조성물은 하나를 초과하는 제 1 면역원성 폴리펩티드, 예를 들어, 2 또는 3 또는 4 또는 그 이상의 면역원성 폴리펩티드를 함유할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 한 아데노바이러스 벡터를 함유할 수 있다. 달리, 본 발명에 따른 조성물은 하나를 초과하는 아데노바이러스 벡터, 예를 들어, 2개의 아데노바이러스 벡터를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 조성물에서, 아데노바이러스 벡터는 하나의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하거나, 상기 벡터는 하나 이상의 프로모터의 조절하에서 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 함께 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
예방적 백신접종을 비롯하여, 본 발명의 조성물은 또한 이미 병원균에 감염된 개체에 사용될 수 있고, 그 결과 기존 감염의 개선된 면역학적 조절을 야기시킬 수 있다. 이것은 상기 병원균이 HIV인 경우 특히 주목된다. HIV의 경우에 있어서, 이러한 조절은 HIV-감염 세포를 특이적으로 인지하는 CD8-양성 T 세포에 의해 달성되는 것으로 믿어진다. 그러한 CD8-양성 T 세포 반응은 HIV-특이적 CD4-양성 헬퍼 T 세포의 존재에 의해 유지된다. 그러므로, 두가지 유형의 면역반응의 유도는 특히 유용하며, 상이한 백신 조성물을 조합함으로써 달성될 수 있다. 애주번팅된 단백질과 재조합 아데노바이러스의 조합이 특히 주목된다. 상기 백신접종으로 혜택을 받게 될 HIV-감염 환자는 백신접종시에 일차 감염, 잠복기 또는 HIV 감염의 말기 중 어느 하나에 있다. 환자는 백신접종시에 병원균에 대한 다른 치료학적 치료(HIV의 경우 - 고도로 활성있는 항레트로바이러스 치료법) 개입을 겪거나 겪지 아니할 수 있다.
항원
본 발명에 따른 용도의 항원은 병원균에서 유래된다.
병원균은 바이러스, 박테리아, 원생동물(protozoa) 및 인간을 포함하는 포유동물에 해로운 기타 기생 개체를 포함한다.
폴리펩티드 또는 본 발명에 따른 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드로서 투여되는 적합한 폴리펩티드 항원은 HIV(예를 들어, HIV-1)에서 유래된 항원, 인간 헤르페스 바이러스에서 유래된 항원[예컨대, gH, gL, gM, gB, gC, gK, gE 또는 gD, 또는 이의 유도체 또는 HSV1 또는 HSV2로부터의 ICP27 , ICP 47, ICP4, ICP36와 같은 초기 발현 단백질(Immediate Early protein)], 사이토메갈로바이러스, 특히, 인간 사이토메갈로바이러스에서 유래된 항원(예컨대, gB 또는 이의 유도체), 엡스타인 바 바이러스에서 유래된 항원(예컨대, gp350 또는 이의 유도체), 바리셀라 조스터 바이러스에서 유래된 항원(예컨대, gpI, II, III 및 IE63), 또는 간염 바이러스, 예컨대, 헤파티티스 B 바이러스(예를 들어, 헤파티티스 B 바이러스 표면 항원, PreS1, PreS2 및 표면 env 단백질, 헤파티티스 B 바이러스 코어 항원 또는 pol), 헤파티티스 C 바이러스(예를 들어, Core, E1, E2, P7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A 및 B) 및 헤파티티스 E 간염 바이러스에서 유래된 항원, 또는 기타 바이러스 병원균, 예컨대, 파라믹소바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스로부터의 항원(예컨대, F 및 G 단백질 또는 이의 유도체), 또는 파라인플루엔자 바이러스, 홍역 바이러스, 이하선염 바이러스, 인간 유두종 바이러스(예를 들어, HPV6, 11, 16, 18, 예를 들어, L1 , L2, E1 , E2, E3, E4, E5, E6, E7), 플라비바이러스(예를 들어, 황열 바이러스, 뎅기 바이러스, 틱-본(Tick-borne) 뇌염 바이러스, 일본 뇌염 바이러스) 또는 인플루엔자 바이러스(예컨대, 해마글루티닌 핵단백질, NA, 또는 M 단백질, 또는 이의 조합물)로부터의 항원; 또는 박테리아 병원균, 예컨대, N. 고노레아(N. gonorrhea) 및 N. 메닌지티디스(N. meningitidis)를 포함하는 나이세리아 종(Neisseria spp.)에서 유래된 항원, 예를 들어, 트랜스페린-결합 단백질, 락토페린 결합 단백질, PiIC, 부착소(adhesins)); S. 피오제니스(S. pyogenes)(예를 들어, M 단백질 또는 이의 단편, C5A 프로테아제, S. 아갈락티애(S. agalactiae), S. 뮤탄스(S. mutans)에서 유래된 항원; H. 듀크레이(H. ducreyi)에서 유래된 항원; 브란하멜라 카타할리스(Branhamella catarrhalis)로도 공지된, M. 카타할리스(M. catarrhalis)를 포함하는, 모락셀라 종(Moraxella spp.)(예를 들어, 고분자량 및 저분자량 부착소 및 침투소(invasins))에서 유래된 항원; B. 퍼투시스(B. pertussis)(예를 들어, 퍼탁틴, 퍼투시스 독소 또는 이의 유도체, 필라멘트형 해마글루티닌(filamenteous hemagglutinin), 아데닐레이트 사이클라제, 핌브리애(fimbriae)), B. 파라퍼투시스(B. parapertussis) 및 B. 브론키셉티카(B. bronchiseptica)를 포함하는, 보르데텔라 종(Bordetella spp.)에서 유래된 항원; M. 튜버큘로시스(M. tuberculosis), M. 보비스(M. bovis), M. 렙래(M. leprae), M. 아비움(M. avium), M. 파라튜버큘로시스(M. paratuberculosis), M. 스메그마티스(M. smegmatis)를 포함하는, 미코박테리움 종(Mycobacterium spp.)에서 유래된 항원; L. 뉴모필라(L. pneumophila)를 포함하는, 레지오넬라 종(Legionella spp.)에서 유래된 항원; 장내독성 E. 콜리(E. coli)(예를 들어, 콜로니화 인자, 열-민감 독소(heat-labile toxin) 또는 이의 유도체, 열-안정 독소 또는 이의 유도체), 엔테로헤모라직(enterohemorragic) E. 콜리, 장내병원성 E. 콜리(예를 들어, 시가 독소-유사 독소(shiga toxin-like toxin) 또는 이의 유도체)를 포함하는, 에스케리키아 종(Escherichia spp.)에서 유래된 항원; V. 콜레라(V. cholera)를 포함하는, 비브리오 종(Vibrio spp.)(예를 들어, 콜레라 독소 또는 이의 유도체)에서 유래된 항원; S. 손네이(S. sonnei), S. 디센테나(S. dysentenae), S. 플렉스네루(S. flexneru)를 포함하는, 시겔라 종(Shigella spp.); Y. 엔테로콜리티카(Y. enterocolitica)(예를 들어, Yop 단백질), Y. 페스티스(Y. pestis), Y. 슈도튜버큘로시스(Y. pseudotuberculosis)를 포함하는, 에르시니아 종(Yersinia spp.); C. 에주니(C. jejuni)(예를 들어, 독소, 부착소 및 침투소) 및 C. 콜리(C. coli)를 포함하는, 캄필로박터 종(Campylobacter spp.)에서 유래된 항원; S. 티피(S. typhi), S. 파라티피(S. paratyphi), S. 콜레라에수이스(S. choleraesuis), S. 엔테리티디스(S. enteritidis)를 포함하는, 살모넬라 종(Salmonella spp.)에서 유래된 항원; L. 모노사이토게네스(L. monocytogenes)를 포함하는, 리스테리아 종(Listeria spp.)에서 유래된 항원; H. 파일로리(H. pylori)(예를 들어, 우레아제, 카탈라제, 공포화 독소(vacuolating toxin))를 포함하는, 헬리코박터 종(Helicobacter spp.)에서 유래된 항원; P. 아에루지노사(P. aeruginosa)를 포함하는, 슈도모나스 종(Pseudomonas spp.)에서 유래된 항원; S. 아우레우스(S. aureus), S. 에피더미디스(S. epidermidis)를 포함하는, 스태필로코쿠스 종(Staphylococcus spp.)에서 유래된 항원; E. 패칼리스(E. faecalis), E. 패시움(E. faecium)을 포함하는, 엔테로코쿠스 종(Enterococcus spp.); C. 테라니(C. tetani)(예를 들어, 테타누스 독소 및 이의 유도체), C. 보툴리늄(C. botulinum)(예를 들어, 보툴리늄 독소 및 이의 유도체), C. 디피실리(C. difficile)(예를 들어, 클로스트리디움 독소 A 또는 B 및 이의 유도체)를 포함하는, 클로스트리디움 종(Clostridium spp.)에서 유래된 항원; S. 안트라시스(S. anthracis)(예를 들어, 보툴리늄 독소 및 이의 유도체)를 포함하는, 바실러스 종(Bacillus spp.)에서 유래된 항원; C. 디프테리아(C. diphtheriae)(예를 들어, 디프테리아 독소 및 이의 유도체)를 포함하는, 코리네박테리움 종(Corynebacterium spp.)에서 유래된 항원; S. 부르그도르페리(S. burgdorferi)(예를 들어, OspA, OspC, DbpA, DbpB), S. 가르미(S. garmii)(예를 들어, OspA, OspC, DbpA, DbpB)에서 유래된 항원; B. 아프젤른(B. afzeln)(예를 들어, OspA, OspC, DbpA, DbpB], B. 안데르손(B. andersonn)(예를 들어, OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. 에름시(B. hermsii)를 포함하는, 보렐리아 종(Borrelia spp.)에서 유래된 항원; E. 에퀴(E. equi) 및 인간 과립구성 에를리히증(Human Granulocytic Ehrlichiosis)의 물질(agent)을 포함하는, 엘리키아 종(Ehrlichia spp.)에서 유래된 항원; R. 리케치(R. rickettsii)를 포함하는, 리케치아 종(Rickettsia spp.)에서 유래된 항원; C. 트라코마티스(C. trachomatis), C. 뉴모니애(C. pneumoniae), C. 프시타시(C. psittaci)를 포함하는, 클라미디아 종(Chlamydia spp.)에서 유래된 항원; L. 인테로간스(L. interrogans)를 포함하는, 렙토스피라 종(Leptospira spp.)에서 유래된 항원; T. 팔리듐(T. pallidum)(예를 들어, 희귀한 외막 단백질), T. 덴티콜라(T. denticola), T. 효디센테리아(T. hyodysenteriae)를 포함하는, 트레포네마 종(Treponema spp.)에서 유래된 항원; 또는 P. 팔시파룸(P. falciparum) 및 P. 비박스(P. vivax)를 포함하는, 플라스모디움 종(Plasmodium spp.)과 같은 기생충에서 유래된 항원; T. 곤디(T. gondii)(예를 들어, SAG2, SAG3, Tg34)를 포함하는, 톡소플라스마 종(Toxoplasma spp.)에서 유래된 항원; E. 히스토리티카(E. histolytica)를 포함하는, 엔타모에바 종(Entamoeba spp.)에서 유래된 항원; B. 미크로티(B. microti)를 포함하는, 바베시아 종(Babesia spp.); T. 크루지(T. cruzi)를 포함하는, 트리파노소마 종(Trypanosoma spp.)에서 유래된 항원; G. 람블리아(G. lamblia)를 포함하는, 지아르디아 종(Giardia spp.)에서 유래된 항원; L. 메이저(L. major)를 포함하는, 레이쉬마니아 종(Leishmania spp.); P. 카리니(P. carinii)를 포함하는, 뉴모시스티스 종(Pneumocystis spp.)에서 유래된 항원; T. 바지날리스(T. vaginalis)를 포함하는, 트리코모나스 종(Trichomonas spp.)에서 유래된 항원; S. 만솜(S. mansom)을 포함하는, 스키소스토마 종(Schisostoma spp.)에서 유래된 항원; 또는 C. 알비칸스(C. albicans)를 포함하는, 칸디다 종(Candida spp.)과 같은 효모에서 유래된 항원; C. 네오포만스(C. neoformans)를 포함하는, 크립토코쿠스 종(Cryptococcus spp.)에서 유래된 항원.
추가의 박테리아 항원은 항원은 S. 뉴모니애(S. pneumoniae)를 포함하는 스트렙토코쿠스 종(Streptococcus spp.)으로부터 유래된 항원 및 단백질 항원 뉴몰리신(Biochem Biophys Acta, 1989, 67, 1007, Rubins et al., Microbial Pathogenesis, 25, 337-342), 및 이의 돌연변이체 무독화된 유도체(WO 90/06951호, WO 99/03884호)를 포함한다. 다른 박테리아 항원은 H. 인플루엔자(H. influenzae) 타입 B(예를 들어 PRP 및 이의 컨쥬게이트), 비피막형(non typeable) H. 인플루엔자를 포함하는, 해모필루스 종(Haemophilus spp.)에서 유래된 항원, 예를 들어 OMP26, 고분자량 부착소, P5, P6, 단백질 D 미치 리포단백질 D, 및 핌브린(fimbrin) 및 핌브린 유래 펩티드(US 5,843,464호) 또는 다중 복제수 변이체(multiple copy variant) 또는 이의 융합 단백질을 포함한다.
특히, 본 발명의 방법 또는 조성물은 바이러스 질환(viral disorders), 예컨대, 헤파티티스 B 바이러스, 헤파티티스 C 바이러스, 인간 유두종 바이러스, 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 또는 헤르페스 심플렉스 바이러스에 의해 유발되는 바이러스 질환, 박테리아 질병, 예컨대, 미코박테리움 튜버큘로시스(Mycobacterium tuberculosis, TB) 또는 클라미디아 종(Chlamydia sp.)에 의해 유발되는 질병, 및 프로토조아 감염, 예컨대, 말라리아를 예방하거나 치료하기 위해 사용될 수 있다.
이들 특이 질병 상태, 병원균 및 항원은 단지 예시의 일환으로 언급된 것이며, 본 발명의 영역을 제한하기 위해 의도된 것이 아님이 인식되어야 한다.
TB 항원
병원균은, 예를 들어, 미코박테리움 튜버큘로시스일 수 있다.
M. 튜버큘로시스에서 유래된 대표적인 항원은, 예를 들어, 알파-크리스탈린(HspX), HBHA, Rv1753, Rv2386, Rv2707, Rv2557, Rv2558, RPFs RvO837c, Rv1884c, Rv2389c, Rv2450, Rv1009, aceA(RvO467), ESAT6, Tb38-1, Ag85A, -B 또는 -C, MPT44, MPT59, MPT45, HSP10, HSP65, HSP70, HSP75, HSP90, PPD 19kDa[Rv3763], PPD, 38kDa[RvO934]), PstS1(RvO932), SodA(Rv3846), Rv2031 c, 16kDa, Ra12, TbH9, Ra35, Tb38-1, Erd14, DPV, MTI, MSL, DPPD, mTCC1, mTCC2, hTCC1(WO 99/51748호) 및 hTCC2, 및 특히 Mtb32a, Ra35, Ra12, DPV, MSL MTI, Tb38-1, mTCC1, TbH9(Mtb39a), hTCC1 , mTCC2 및 DPPD이다. M. 튜버큘로시스에서 유래된 항원은 또한 융합 단백질 및 이의 변이체를 포함하는데, 여기서 M. 튜버큘로시스의 2개 이상, 또는, 예를 들어, 3개의 폴리펩티드가 더 거대한 단백질로 융합된다. 그러한 융합물은 Ra12-TbH9-Ra35, Erd14-DPV-MTI, DPV-MTI-MSL, Erd14-DPV-MTI-MSL-mTCC2, Erd14-DPV-MTI-MSL, DPV-MTI-MSL-mTCC2, TbH9-DPV-MTI(WO 99/51748호), Ra12-Tbh9-Ra35-Ag85B 및 Ra12-Tbh9-Ra35-mTCC2로 구성되거나 이들을 포함할 수 있다. 언급될 수 있는 특별한 Ra12-Tbh9-Ra35 서열은 변이체(서열번호 6의 Ser 704가 세린 이외의 잔기, 예를 들어, Ala로 돌연변이됨), 및 적절한 길이의 N-말단 His 태그가 통합된 이의 유도체(예를 들어, WO2006/1 17240호의 서열번호 2 또는 4)와 함께 WO2006/117240호의 서열번호 6에 의해 정의된다. 또한 최적의 개시 M 및 최적의 N-말단 His-His 태그(위치 2와 3)을 포함하는 서열인 서열번호 10을 참조바라며, 상기 서열에서 야생형 Ser과 대비하여 돌연변이된 Ala이 위치 706에 존재한다.
클라미디아 항원
병원균은, 예를 들어, 클라미디아 종(Chlamydia sp .), 예를 들어, C. 트라코마티스(C. trachomatis)일 수 있다.
클라미디아 종(Chlamydia sp .), 예를 들어, C. 트라코마티스(C. trachomatis)로부터 유래된 대표적인 항원은 CT858, CT 089, CT875, MOMP, CT622, PmpD, PmpG 및 이의 단편, SWIB 및 임의의 것 중 이의 면역원성 단편(예컨대, PmpDpd 및 PmpGpd) 및 이의 조합물 중에서 선택된다. 항원의 바람직한 조합물은CT858, CT089 및 CT875를 포함한다. 사용될 수 있는 특이 서열 및 조합은 WO2006/104890호에 기재되어 있다.
플라스모디움 항원
병원균은, 예를 들어, 말라리아를 일으킬 수 있는 기생충, 예컨대, 플라스모디움 종(Plasmodium sp .), 예를 들어, P. 팔시파룸(P. falciparum) 또는 P. 비박스(P. vivax)일 수 있다.
예를 들어, P. 팔시파룸(P. falciparum)에서 유래된 항원은 포자소체 단백질(CS 단백질), PfEMP-1, Pfs 16 항원, MSP-1, MSP-3, LSA-1, LSA-3, AMA-1 및 TRAP를 포함한다. 언급될 수 있는 특정 하이브리드 항원은 RTS이다. RTS는 헤파티티스 B 바이러스의 표면(S) 항원에 헤파티티스 B 표면 항원의 preS2 부분의 4개의 아미노산을 통해 연결된 P. 팔시파룸(P. falciparum)의 포자소체(CS) 단백질의 C-말단 부분을 실질적으로 모두 포함하는 하이브리드 단백질이다. 효모에서 발현될 때, RTS는 리포단백질 입자로서 생산되며, 이것이 HBV로부터의 S 항원과 함께 동시-발현(co-expression)될 때, 효모는 RTS,S로 공지된 혼합된 입자를 생산한다. RTS 및 RTS,S의 구조는 WO 93/10152호에 개시되어 있다. TRAP 항원은 WO 90/01496호에 기재되어 있다. 다른 플라스모디움 항원은 P. 팔시파룸 EBA, GLURP, RAP1, RAP2, 세퀘스트린(Sequestrin), Pf332, STARP, SALSA, PfEXPI, Pfs25, Pfs28, PFS27/25, Pfs48/45, Pfs230 및 다른 플라스모디움 종(Plasmodium spp .)에서의 이들의 유사체를 포함한다. 본 발명의 한 구체예는, 예를 들어, MSP-1, MSP-3, AMA-1, Pfs 16, LSA-1 또는 LSA-3로 구성된 군에서 선택될 수 있는 하나 이상의 추가의 말라리아 항원과 조합하여 RTS, S 또는 CS 단백질 또는 이의 단편(예컨대, RTS, S의 CS 부분)을 포함하는 조성물이다. P. 비박스(P. vivax)로부터의 가능한 항원은 포자소체 단백질(CS 단백질)과 두피(Duffy) 항원 결합 단백질 및 이의 면역원성 단편, 예컨대, PvRII(예를 들어, WO02/12292호 참조)를 포함한다.
따라서, 본 발명의 한 적합한 구체예에서, 제 1 및 제 2 면역원성 폴리펩티드는 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum) 및/또는 플라스모디움 비박스(Plasmodium vivax)에서 유래된 항원에서 선택된다.
예를 들어, 제 1 및/또는 제 2 면역원성 폴리펩티드는 플라스모디움 팔시파룸()에서 유래된 항원에서 선택되고/거나 플라스모디움 비박스(Plasmodium vivax)는 RTS(예를 들어, RTS,S로서), 포자소체(CS) 단백질, MSP-1, MSP-3, AMA-1, LSA-1, LSA-3 및 이의 면역원성 유도체 또는 이의 면역원성 단편에서 선택된다.
언급될 수 있는 한 특이 유도체는 특히 RTS, S로 공지된 혼합 입자의 형태로 제시될 때, RTS로 공지된 하이브리드 단백질이다.
대표적인 RTS 서열은 서열번호 14로 제시된다.
대표적인 P. 팔시파룸(P. falciparum) CS 단백질-유래 항원은 서열번호 12로 제시된다. 이 특별한 서열은 P. 팔시파룸(3D7 균주)의 CSP 서열과 대응되는데, 상기 서열은 또한 7G8 균주에서 유래된 19개 아미노산 삽입물(81-100)을 함유한다.
본 발명의 한 특이 구체예에서, 제 1 면역원성 폴리펩티드는 RTS,S이고 제 2 면역원성 폴리펩티드는 플라스모디움 팔시파룸으로부터의 CS 단백질 또는 이의 면역원성 단편이다.
HPV 항원
병원균은, 예를 들어, 인간 유두종 바이러스일 수 있다.
따라서, 본 발명에 사용되는 항원은, 예를 들어, 성기 사마귀와 관여하는 것으로 간주되는 인간 유두종 바이러스(HPV)(HPV 6 또는 HPV 11 및 그외 것들), 및/또는 자궁경부(cervical) 암에 관여하는 HPV 바이러스(HPV16, HPV18, HPV33, HPV51, HPV56, HPV31, HPV45, HPV58, HPV52 및 그외 것들)에서 유래될 수 있다. 한 구체예에서, 성기 사마귀 예방, 또는 치료 조성물의 형태는 L1 입자 또는 캡소머(capsomers), 및 HPV 단백질 E1, E2, E5 E6, E7, L1, 및 L2로부터 선택된 하나 이상의 항원을 포함하는 융합 단백질을 포함한다. 한 구체예에서, 융합 단백질의 형태는 다음과 같다: WO96/26277호에 개시된 L2E7, 및 PCT/EP98/05285호에 개시된 단백질 D(1/3)-E7.
바람직한 HPV 자궁경부 감염 또는 암, 예방 또는 치료 조성물은 HPV 16 또는 18 항원을 포함할 수 있다. 예를 들어, L1 또는 L2 항원 단량체, 또는 바이러스 유사 입자(VLP)로서 함께 제시된 L1 또는 L2 항원 또는 VLP 또는 캡소머 구조에서 단독으로 제시된 L1 단독 단백질. 그러한 항원, 바이러스 유사 입자 및 캡소머는 그 자체로 공지되어 있다. 예를 들어, WO94/00152호, WO94/20137호, WO94/05792호, 및 WO93/02184호를 참조하라. 추가의 초기 단백질은 단독으로 포함되거나, 융합 단백질(예컨대, E7, E2 또는 바람직하게는 E5)로서 포함한다: 예를 들어; 이것의 특히 바람직한 구체예는 L1 E7 융합 단백질을 포함하는 VLP(WO 96/11272호)를 포함한다. 한 구체예에서, HPV 16 항원은 단백질 D - HPV 16으로부터의 E6 또는 E7 융합체, 또는 이의 조합물; 또는 L2와 E6 또는 E7의 조합물(WO 96/26277호)을 형성하기 위해 단백질 D 담체와 융합된 초기 단백질 E6 또는 E7를 포함한다. 달리, HPV 16 또는 18 초기 단백질 E6 및 E7은 단일 분자로, 바람직하게는 단백질 D-E6/E7 융합체로 제공될 수 있다. 그러한 조성물은 임의로 HPV 18로부터의 E6 및 E7 단백질 둘 중 어느 하나 또는 상기 둘 모두를 제공할 수 있는데, 바람직하게는 단백질 D - E6 또는 단백질 D - E7 융합 단백질 또는 단백질 D E6/E7 융합 단백질의 형태로 제공할 수 있다. 추가적으로 다른 HPV 균주, 바람직하게는 균주 HPV 31 또는 33로부터의 항원이 사용될 수 있다.
HIV 항원
병원균은, 예를 들어, HIV, 예를 들어, HIV-1일 수 있다.
따라서, 항원은 HIV 유래 항원, 특히 HIV-1 유래 항원으로부터 선택될 수 있다.
HIV Tat 및 NeF는 초기 단백질인데, 즉, 이들은 감염시에 초기에, 그리고 구조 단백질의 부재시에 발현된다.
Nef 유전자는 몇몇 활성을 지니는 것으로 나타난 초기 보조 HIV 단백질을 엔코딩한다. 예를 들어, Nef 단백질은 이 기능의 생물학적 중요성이 논의되고 있지만, 세포 표면으로부터 CD4, HIV 수용체의 제거를 유발하는 것으로 알려져 있다. 또한, Nef는 T 세포의 시그널 경로와 상호작용하고 활성 상태를 유도하고, 이에 따라, 보다 효율적인 유전자 발현을 조장할 수 있다. 몇몇 HIV 분리물은 이러한 영역내에 돌연변이 또는 결실이 있는데, 이들은 기능성 단백질을 엔코딩하지 못하도록 하며 이들의 생체내 복제 및 발병에 있어서 심각하게 불리하게 된다.
Gag 유전자는 전장 RNA로부터 번역되어 전구 폴리펩티드를 양산하며, 상기 폴리펩티드는 후속하여 3-5 캡시드 단백질, 매트릭스 단백질(p17), 캡시드(p24) 및 핵산 결합 단백질로 절단된다(Fundamental Virology, Fields BN, Knipe DM and Howley M 1996 2 Fields Virology vol 2 1996).
Gag 유전자는 비스플라이싱된(unspliced) 바이러스 mRNA로부터 발현되는 p55로 불리우는 55kD Gag 전구 단백질을 야기시킨다. 번역 동안에, p55의 N 말단은 미리스토일화되어(myristolyated), 세포막의 세포질과의 결합을 유발시킨다. 막-결합된 Gag 폴리펩티드는 감염된 세포의 표면으로부터 바이러스 입자의 발아(budding)를 유발시키는 그밖의 바이러스 및 세포 단백질과 함께 바이러스 게놈 RNA의 두개의 복사체를 모집한다. 발아후, p55는 바이러스 성숙 과정 동안에 바이러스에서 엔코딩된 프로테아제(Pol 유전자의 생성물)에 의해 MA(매트릭스[p17]), CA(캡시드[p24]), NC(누클레오티드캡시드[p9]) 및 p6으로 명명되는 4개의 보다 작은 단백질로 절단된다.
3개의 주요 Gag 단백질(p17, p24 및 p9) 이외에, 모든 Gag 전구체는 몇몇 그 밖의 영역을 함유하며, 이들은 절단되어 다양한 크기의 펩티드로서 비리온으로 잔류한다. 이러한 단백질은 상이한 역할을 하는데, 예를 들어, p2 단백질은 프로테아제의 활성을 조절하는 데 있어서 의도된(proposed) 역할을 하고, 단백질분해 과정의 정확한 시간조절(correct timing)에 기여한다.
MA 폴리펩티드는 p55의 N 말단의 미리스토일화된 말단으로부터 유래된다. 대부분의 MA 분자는 비리온 지질 이중층의 내부 표면에 부착되어 잔류하여 입자를 안정화시킨다. MA의 서브세트는 비리온의 보다 심층 내층에서 모집되며, 여기에서 복합체의 일부가 되어 바이러스 DNA를 핵까지 호위한다. 이러한 MA 분자는, MA에 대한 핵친화성(karyophilic) 시그널이 세포 핵 수입 기구(cellular nuclear import machinery)에 의해 인지되기 때문에 바이러스 게놈의 핵 전달을 용이하게 한다. 이러한 현상은 HIV가 비분열 세포에 감염되게 하며, 이것은 레트로바이러스에 관한 특이한 특성이다.
p24(CA) 단백질은 바이러스 입자의 원추형 코어를 형성한다. 시클로필린 A는 HIV 입자로의 이의 혼입을 유도하는 p55의 p24영역과 상호작용하는 것으로 입증되었다. Gag와 시클로필린 A간의 상호작용은 필수적인데, 그 이유는 시클로스포린 에 의한 이러한 상호작용의 방해가 바이러스 복제를 억제하기 때문이다.
Gag의 NC 영역은 소위 HIV 패키징 시그널을 특이적으로 인식하는데 관여한다. 패키징 시그널은 바이러스 RNA의 5'말단 근처에 위치한 4개의 스템 루프(stem loop) 구조로 이루어지며, 이종성 RNA의 HIV-1 비리온으로의 혼입을 매개하기에 충분하다. NC는 두개의 징크-핑거 모티프(zinc-finger motif)에 의해 매개되는 상호작용을 통해 패키징 시그널에 결합한다. 또한, NC는 역전사를 용이하게 한다.
p6 폴리펩티드 영역은 p55 Gag과 보조 단백질 Vpr 간의 상호작용을 매개하여 Vpr의 어셈블링 비리온으로의 혼입을 유도한다. 또한, p6 영역은 감염된 세포로부터 발아 비리온의 효과적인 방출을 위해 요구되는 소위 후기 도메인(late domain)을 함유한다.
Pol 유전자는 초기 감염시에 바이러스에 의해 요구되는 활성을 갖는 3가지 단백질, 역전사효소(reverse transcriptase, RT), 프로테아제 및 바이러스 DNA의 세포 DNA로의 통합(integration)에 요구되는 인테그라제 단백질을 엔코딩한다. Pol의 일차 생성물은 비리온 프로테아제에 의해 절단되어 DNA 합성에 필요한 활성(RNA 및 DNA 유도성 DNA 폴리머라제, 리보뉴클레아제 H)을 포함하는 아미노 말단 RT 펩티드 및 카르복시 말단 인테그라제 단백질을 생성한다. HIV RT는 카르복시 말단 RN아제 H 도메인이 결여된 분해 생성물(p51) 및 전장-길이 RT(p66)의 헤테로이량체이다.
RT는 레트로바이러스 게놈에 의해 엔코딩된 가장 잘 보존된 단백질 중 하나이다. RT의 두가지 주요 활성은 DNA Pol 및 리보누클레아제 H이다. RT의 DNA Pol 활성은 주형으로서 상호교체가능하게 RNA 및 DNA를 사용하고, 유사한 모든 공지된 DNA 폴리머라제는 새로이(de novo) DNA 합성을 개시할 수 없지만 프라이머(RAN)로서 역할하기 위해 기존(pre-existing) 분자를 필요로 한다.
모든 RT 단백질내 고유의 RN아제 H 활성은 DNA 합성이 진행함에 따라 RNA 게놈 분리시키는(removing) 복제 초기에 중요한 역할을 한다. 이것은 선택적으로 모든 RNA - DNA 하이브리드 분자로부터 RNA를 분해시킨다. 구조적으로, 폴리머라제 및 리보H는 상기 Pol의 아미노산 2/3를 커버하는 Pol 내부의 분리된 비중첩 도메인을 점유한다.
p66 촉매 서브유닛은 5개의 별개의 서브유닛으로 폴딩된다(folded). 이들의 아미노산 말단 23은 RT 활성을 갖는 부분을 지닌다. 이들의 카르복시 말단이 RN아제 H 도메인이다.
숙주 세포에 감염후, 레트로바이러스 RNA 게놈은 감염 입자내에 존재하는 역 전사효소에 의해 선형 이중 가닥 DNA로 복제된다. 인테그라제(문헌[Skalka AM '99 Adv in Virus Res 52: 271-273]에서 검토됨)는 바이러스 DNA의 말단부를 인지하고, 이들을 다듬고, 통합을 촉매하기 위해 바이러스 DNA를 숙주 염색체 부위로 이송시킨다. 숙주 DNA내 많은 부위들이 통합을 위한 표적이 될 수 있다. 인테그라제는 시험관내 통합을 촉매하는데 충분하지만, 생체내에서 바이러스 DNA와 결합된 유일한 단백질은 아니며 - 거대 단백질 - 감염된 세포로부터 분리된 바이러스 DNA 복합체가 전통합(pre integration) 복합체를 의미한다. 이것은 자손(progeny) 바이러스 게놈에 의한 숙주 세포의 취득을 촉진한다.
인테그라제는 3개의 독특한 도메인, 즉, N 말단 도메인, 촉매 코어 및 C 말단 도메인으로 구성된다. 촉매 코어 도메인은 폴리뉴클레오티딜 전달의 화학에 관한 모든 구비조건을 함유한다.
따라서 본 발명에 사용하기 위한 HIV-1 유래 항원은, 예를 들어, Gag(예를 들어, 전장 Gag), p17(Gag의 일부분), p24(Gag의 또 다른 일부분), p41, p40, Pol(예를 들어, 전장 Pol), RT(Pol의 일부분), p51(RT의 일부분), 인테그라제(Pol의 일부분), 프로테아제(Pol의 일부분), Env, gp120, gp140 또는 gp160, gp41 , Nef, Vif, Vpr, Vpu, Rev, Tat 및 이의 면역원성 유도체 및 이의 면역원성 단편, 특히 p17, p24, RT 및 인테그라제를 포함하는 Env, Gag, Nef 및 Pol 및 이의 면역원성 유도체 및 이의 면역원성 단편에서 선택될 수 있다. HIV 백신은 폴리펩티드 및/또는 상기 목록에서 선택될 수 있는 다수의 상이한 HIV 항원, 예를 들어, 2 또는 3 또는 4개 또는 그 이상의 HIV 항원에 상응하는 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 몇몇 상이한 항원은, 예를 들어, 단일의 융합 단백질로 포함될 수 있다. 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드 및/또는 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드(상기 폴리펩티드 각각은 HIV 항원 또는 하나 이상의 항원의 융합체임)가 사용될 수 있다.
예를 들어, 항원은 RT 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편에 융합되거나, Nef 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편에 융합된, Gag 또는 이의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편을 포함할 수 있는데, 여기서 상기 융합 단백질의 Gag 부분은 폴리펩티드의 5' 말단에 존재한다.
본 발명에 따라 사용되는 Gag 서열은 Gag p6 폴리펩티드 엔코딩 서열을 배제할 수 있다. 본 발명에 사용하기 위한 Gag 서열의 특별한 일예는 p17 및/또는 p24 엔코딩 서열을 포함한다.
RT 서열은 임의의 역 전사효소 활성을 실질적으로 불활성화시키기 위한 돌연변이를 함유할 수 있다(WO03/025003호).
RT 유전자는 HIV 게놈내의 더 큰 pol 유전자의 성분이다. 본 발명에 따라 사용되는 RT 서열은 Pol, 또는 적어도 RT에 상응하는 Pol의 단편의 정황(context)으로 제공될 수 있다는 것이 이해될 것이다. 그러한 Pol의 단편은 Pol의 주요 CTL 에피토프를 보유한다. 한 특이적 일예에서, RT는 RT의 바로 p51 또는 바로 p66 단편으로써 포함된다.
본 발명에 따른 융합 단백질 또는 조성물의 RT 성분은 선택적으로 원핵생물 발현 시스템에서 내부 개시 부위로서 역할하는 부위를 제거하기 위한 돌연변이를 포함한다.
선택적으로 본 발명에 사용하기 위한 Nef 서열은 N 말단 영역을 엔코딩하는 서열의 제거, 즉, 30 내지 85개 아미노산의 제거, 예를 들어, 60 내지 85개 아미노산의 제거, 특히 N 말단의 65개 아미노산의 제거를 위해 절단된다(후자 절단은 본원에서 trNef로 지칭됨). 달리 또는 추가적으로 Nef는 미리스틸화 부위를 제거하기 위해 변형될 수 있다. 예를 들어, Gly 2 미리스틸화 부위는 결실 또는 치환에 의해 제거될 수 있다. 달리 또는 추가적으로 Nef는 하나 또는 두 류신의 결실 또는 치환에 의해 변경되어 Leu 174 및 Leu 175의 디류신(dileucine) 모티프가 변형될 수 있다. CD4 하향조절에서 디류신 모티프의 중요성은, 예를 들어, 문헌[Bresnahan P. A. et al (1998) Current Biology, 8(22) 1235-8]에 기재되어 있다.
Env 항원은 gp160로서 이의 전장으로 존재하거나 gp140로서 절단되거나 더 짧을 수 있다(선택적으로 적당한 돌연변이를 수반하여 gp120와 gp41 사이의 절단 부위 모티프가 파괴된다). Env 항원은 또한 gp120 및 gp41으로써 이의 천연적으로 생성되는 가공된 형태로 존재할 수 있다. 이러한 gp160의 2 유도체는 개별적으로 사용되거나 조합물로서 함께 사용될 수 있다. 앞서 언급한 Env 항원은 추가로 결실(특히 가변 루프의 결실) 및 절단을 나타낼 수 있다. Env의 단편이 또한 사용될 수 있다.
대표적인 gp120 서열이 서열번호 8로 제시되어 있다. 대표적인 gp140 서열이 서열번호 6으로 제시되어 있다.
본 발명에 따른 면역원성 폴리펩티드는 Gag, Pol, Env 및 Nef를 포함할 수 있는데, 여기서 이들 천연 항원의 CTL 에피토프의 75% 이상, 또는 90% 이상 또는 95% 이상이 존재한다.
p17/p24 Gag, p66 RT, 및 상기한 바와 같은 절단된 Nef를 포함하는 본 발명에 따른 면역원성 폴리펩티드에서, 천연 Gag, Pol 및 Nef 항원의 CTL 에피토프의 96%가 존재한다.
본 발명의 한 구체예는 Gag, RT, Nef 순서로 p17, p24 Gag, p66 RT, 절단된 Nef(말단 아미노산 1-85을 엔코딩하는 뉴클레오티드가 결여됨 - "trNef" )를 포함하는 면역원성 폴리펩티드를 제공한다. 본 발명의 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드에서, P24 Gag 및 P66 RT는 적당하게 코된 최적화된다.
본 발명에 따른 특이적 폴리뉴클레오티드 작제물 및 상응하는 폴리펩티드 항원은 하기를 포함한다:
1. p17, p24(코돈 최적화됨) Gag - p66 RT(코돈 최적화됨) - 절단된 Nef;
2. 절단된 Nef - p66 RT(코돈 최적화됨) - p17, p24(코돈 최적화됨) Gag;
3. 절단된 Nef - p17, p24(코돈 최적화됨) Gag - p66 RT(코돈 최적화됨);
4. p66 RT(코돈 최적화됨) - p17, p24(코돈 최적화됨) Gag - 절단된 Nef;
5. p66 RT(코돈 최적화됨) - 절단된 Nef - p17, p24(코돈 최적화됨) Gag;
6. p17, p24(코돈 최적화됨) Gag - 절단된 Nef - p66 RT(코돈 최적화됨).
대표적인 융합체는 Gag, RT 및 Nef의 융합체인데, 특히 Gag-RT-Nef의 순서로의 융합체이다(예를 들어, 서열번호 2를 참조하라). 또 다른 대표적인 융합체는 p17, p24, RT 및 Nef의 융합체인데, 특히 p24-RT-Nef-p17의 순서로의 융합체이다(예를 들어, 본원의 여러곳에 "F4"로서 지칭되는,서열번호 16을 참조하라).
또 다른 구체예에서, 면역원성 폴리펩티드는 Gag, RT, 인테그라제 및 Nef를 포함하는데, 특히 Gag-RT-인테그라제-Nef의 순서로 포함한다(예를 들어, 서열번호 4를 참조하라).
다른 구체예에서, HIV 항원은 Nef 또는 이의 면역원성 유도체 또는 이의 면역원성 단편, 및 p17 Gag 및/또는 p24 Gag 또는 이의 면역원성 유도체 또는 이의 면역원성 단편을 포함하는 융합 폴리펩티드일 수 있는데, 여기서, p17 및 p24 Gag 둘 모두가 존재하는 경우, 이들 사이에 하나 이상의 HIV 항원 또는 면역원성 단편이 있다.
예를 들어, Nef는 전장 Nef인 것이 적합하다.
예를 들어, p17 Gag 및 p24 Gag는 각각 전장 p17 및 p24인 것이 적합하다.
한 구체예에서, 면역원성 폴리펩티드는 p17 및 p24 Gag 둘 모두 또는 이의 면역원성 단편을 포함한다. 그러한 작제물에서, p24 Gag 성분 및 p17 Gag 성분은 하나 이상의 추가의 HIV 항원 또는 면역원성 단편, 예컨대, HIV 항원 또는 면역원성 단편, 예컨대 Nef 및/또는 RT 또는 이의 면역원성 유도체 또는 이의 면역원성 단편에 의해 분리된다. 더 상세한 내용에 대해서는 WO2006/013106호를 참조하라.
p24 및 RT를 포함하는 융합 단백질에서, p24가 작제물내에서 RT에 선행하는 것이 바람직할 수 있는데, 이는 상기 항원이 E. coli에서 단독으로 발현될 때, RT의 발현보다 p24의 더 양호한 발현이 관찰되기 때문이다.
본 발명에 따른 일부 작제물은 하기를 포함한다:
1. p24-RT-Nef-p17
2. p24-RT*-Nef-p17
3. p24-p51RT-Nef-p17
4. p24-p51RT*-IMef-p17
5. p17-p51RT-Nef
6. p17-p51RT*-Nef
7. Nef-p17
8. Nef-링커를 지니는 p17
9. p17-Nef
10. p17-링커를 지니는 Nef
*는 리신으로의 RT 메티오닌592 돌연변이를 의미한다.
또 다른 양상에서, 본 발명은 4개 이상의 HIV 항원 또는 면역원성 단편을 포함하는 HIV 항원의 융합 단백질을 제공하는데, 여기서 상기 4개의 항원 또는 단편은 Nef, Pol 및 Gag에서 유래된다. 바람직하게는, Gag는 융합체내에서 하나 이상의 다른 항원에 의해 분리된 2개의 별개의 성분들로서 존재한다. 바람직하게는, Nef는 전장 Nef이다. 바람직하게는 Pol은 p66 또는 p51 RT이다. 바람직하게는, Gag는 p17 및 p24 Gag이다. 본 발명의 이 양상에서 융합체의 상기 항원 성분들의 다른 바람직한 특징 및 특성은 본 명세서에 기재된 바와 같다.
본 발명의 이 양상의 바람직한 구체예는 이미 위에 나열된 것과 같은 4개의 성분의 융합체이다:
1. p24-RT-Nef-p17
2. p24-RT*-Nef-p17
3. p24-p51RT-Nef-p17
4. p24-p51RT*-Nef-p17
본 발명의 면역원성 폴리펩티드는 특정 항원, 예컨대 Gag, RT 및 Nef에 상응하는 서열 사이에 존재하는 링커 서열을 가질 수 있다. 그러한 링커 서열은, 예를 들어, 최대 20개 아미노산 길이일 수 있다. 특별한 일예에서, 링커 서열은 1 내지 10개 아미노산, 또는 1 내지 6개 아미노산, 예를 들어, 4-6 아미노산일 수 있다.
그러한 적합한 HIV 항원의 더 상세한 설명은 WO03/025003호에서 찾아 볼 수 있다.
본 발명의 HIV 항원은 임의의 HIV 클레이드(clade), 예를 들어, 클레이드 A, 클레이드 B 또는 클레이드 C에서 유래될 수 있고, 예를 들어, 상기 HIV 항원은 클레이드 A 또는 B, 특히 B에서 유래될 수 있다.
본 발명의 한 특정 구체예에서, 제 1 면역원성 폴리펩티드는 Gag 및/또는 Pol 및/또는 Nef 또는 상기한 것들 중 임의의 것의 단편 또는 유도체를 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, p24-RT-Nef-p17)이다. 본 발명의 한 특정 구체예에서, 제 2 면역원성 폴리펩티드는 Gag 및/또는 Pol 및/또는 Nef 또는 상기한 것들 중 임의의 것의 단편 또는 유도체를 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, Gag-RT-Nef 또는 Gag-RT-인테그라제-Nef)이다.
따라서, 한 특정 구체예에서, Gag 및/또는 Pol 및/또는 Nef 또는 상기한 것들 중 임의의 것의 단편 또는 유도체를 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, p24-RT-Nef-p17)는 제 1 면역원성 폴리펩티드이고, Gag 및/또는 Pol 및/또는 Nef 또는 상기한 것들 중 임의의 것의 단편 또는 유도체를 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, Gag-RT-Nef 또는 Gag-RT-인테그라제-Nef)는 제 2 면역원성 폴리펩티드이다.
본 발명의 또 다른 특정 구체예에서, 제 1 면역원성 폴리펩티드는 Env 또는 이의 단편 또는 유도체, 예를 들어, gp120, gp140 또는 gp160(특히, gp120)이다. 본 발명의 한 특정 구체예에서, 제 2 면역원성 폴리펩티드는 Gag 및/또는 Pol 및/또는 Nef 또는 상기한 것들 중 임의의 것의 단편 또는 유도체를 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, p24-RT- Nef-p17)이다.
따라서, 한 특정 구체예에서, Env 또는 이의 단편 또는 유도체, 예를 들어, gp120, gp140 또는 gp160(특히 gp120)은 제 1 면역원성 폴리펩티드이고, Gag 및/또는 Pol 및/또는 Nef 또는 상기한 것들 중 임의의 것의 단편 또는 유도체를 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, p24-RT- Nef-p17)는 제 2 면역원성 폴리펩티드이다.
본 발명의 또 다른 특정 구체예에서, 제 1 면역원성 폴리펩티드는 Gag 및/또는 Pol 및/또는 Nef 또는 상기한 것들 중 임의의 것의 단편 또는 유도체를 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, p24-RT-Nef-p17)이다. 본 발명의 한 특정 구체예에서, 제 2 면역원성 폴리펩티드는 Env 또는 이의 단편 또는 유도체, 예를 들어, gp120, gp140 또는 gp160(특히 gp120)이다.
따라서, 한 특정 구체예에서, Gag 및/또는 Pol 및/또는 Nef 또는 상기한 것들 중 임의의 것의 단편 또는 유도체를 포함하는 폴리펩티드(예를 들어, p24-RT-Nef-p17)는 제 1 면역원성 폴리펩티드이고, Env 또는 이의 단편 또는 유도체, 예를 들어, gp120, gp140 또는 gp160(특히 gp120)은 제 2 면역원성 폴리펩티드이다.
항원의 면역원성 유도체 및 면역원성 단편
앞서 언급한 항원들은 전체(whole) 항원으로 사용되기 보다 이들의 면역원성 유도체 또는 면역원성 단편의 형태로 사용될 수 있다.
본원에 사용된, 천연 기원의 항원과 관련된 용어 "면역원성 유도체"는 이의 천연 대응부(counterparts)와 관련하여 제한된 방식으로 변형된 항원을 의미한다. 예를 들어, 상기 면역원성 유도체는, 예를 들어, 원핵생물 체계내에서의 발현을 개선시킴으로써, 또는 바람직하지 않은 활성, 예를 들어, 효소 활성을 제거함으로써, 단백질의 특성을 변화시킬 수 있는 점 돌연변이를 포함할 수 있다. 그러나, 면역원성 유도체는 천연 항원과 충분히 유사하여 이들이 천연 항원의 항원 특성을 유지하고 천연 항원에 대한 면역반응을 유도할 수 있게 유지될 것이다. 당해 유도체가 그러한 면역반응을 유도하는지 여부는 적당한 면역학적 검정, 예컨대, ELISA(항체 반응의 경우) 또는 세포 마커에 관한 적당한 염색을 사용하는 유세포분석(세포 반응의 경우)에 의해 측정될 수 있다.
면역원성 단편은 하나 이상의 하나 이상의 에피토프, 예를 들어, CTL 에피토프, 전형적으로 8개 이상의 아미노산의 펩티드를 엔코딩하는 단편이다. 8개 이상, 8-10개 아미노산 또는 최대 20, 50, 60, 70, 100, 150 또는 200개 아미노산 길이의 단편이 폴리펩티드가 항원성을 가지고 있는한 본 발명의 영역내에 속하는 것으로 간주되며, 즉, 주 에피토프(예를 들어, CTL 에피토프)가 폴리펩티드에 의해 유지된다.
아데노바이러스
본 발명의 아데노바이러스 벡터는 하나 이상의 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드(DNA)를 포함한다.
본 발명에 사용하기 위한 아데노바이러스 벡터는 소정 범위의 포유동물 숙주에서 유래될 수 있다.
아데노바이러스(본원에서 "Ad" 또는 "Adv"로 지칭됨)는 다수의 부 단백질 VI, VIII, IX, IIIa 및 IVa2와 더불어, 3개의 주요 단백질, 즉, 헥손(II), 펜톤 염기(III) 및 혹모양 섬유(knobbed fibre)(IV)로 이루어진 정이십면체 캡시드(icosohedral capsid)를 지니는 특징적인 형태를 갖는다(Russell W. C. 2000, Gen Viriol, 81:2573-2604). 바이러스 게놈은 5' 말단에 공유적으로 부착된 말단 단백질을 지니는 선형, 이중가닥 DNA인데, 역전된 말단 반복체(inverted terminal repeats, ITRs)를 갖는다. 바이러스 DNA는 고도로 염기성인 단백질 VII 및 mu로 칭해지는 작은 펩티드와 직접적으로(intimately) 결합되어 있다. 또 다른 단백질(V)는, 이 DNA-단백질 복합체로 패키징되며 단백질 VI를 통해 상기 캡시드에 구조적 링크를 제공한다. 이 바이러스는 또한 바이러스에 의해 엔코딩되는(virus-encoded) 프로테아제를 함유하는데, 상기 프로테아제는 성숙한 감염력있는(infectious) 바이러스를 생산하기 위해 구조 단백질중 일부의 가공을 위해 필요하다.
다양한 포유동물 종에 감염되는, 아데노바이러스의 100가지 이상의 독특한 혈청형이 분리되었으며, 이들 혈청형중 51가지는 인간에서 기원한다. 따라서, 하나 이상의 아데노바이러스 벡터가 인간 아데노바이러스에서 유래될 수 있다. 그러한 인간-유래 아데노바이러스의 일예는 Ad1, Ad2, Ad4, Ad5, Ad6, Ad11, Ad 24, Ad34, Ad35, 특히 Ad5, Ad11 및 Ad35이다. 인간 혈청형은 다수의 생물학적, 화학적, 면역학적 및 구조적 범주에 기초하여 6개의 아속(subgenera)(A-F)로 분류되었다.
Ad5-기반 벡터가 다수의 유전자 치료법 시도에서 광범위하게 사용되었으나, 자연적 감염으로 인한 일반적 개체군내의 기존 면역성 때문에 Ad5 및 다른 C군의 아데노바이러스 벡터를 사용하는데 제약이 있을 수 있다. Ad5 및 다른 C군 일원들은 가장 우세한(seroprevalent) 혈청형들 중에 속하는 경향이 있다. 기존 벡터에 대한 면역력은 치료가 진행되는 동안 상기 벡터에 대한 노출의 결과로서 발달할 수 있다. 우세 벡터에 대한 이러한 유형의 기존 또는 발달되는 면역력은 유전자 치료법 또는 백신접종 노력의 유효성을 제한할 수 있다. 따라서, 대안적인 아데노바이러스 혈청형은, 숙주 면역반응을 회피할 수 있는 유전자 전달 시스템의 추구에 있어서 매우 중요한 표적이 된다.
그러한 대안적인 혈청형의 한 영역은 인간이 아닌 영장류, 특히 침팬지 아데노바이러스로부터 유래되는 혈청형이다. 2가지 침팬지 아데노바이러스의 게놈에 대해 소개하고 있는 미국 특허 제6,083,716호를 참조하라.
침팬지("Pan" 또는 "C") 아데노바이러스 벡터는 인간 아데노바이러스 벡터만큼 효율적으로 도입유전자(transgene) 생성물에 대한 강한 면역반응을 유도하는 것으로 드러났다(Fitzgerald et al J. Immunol. 170-1416).
인간이 아닌 영장류 아데노바이러스는 침팬지의 장간막(mesenteric) 림프절에서 분리될 수 있다. 침팬지 아데노바이러스는 인간 아데노바이러스 아형(subtype) C에 충분히 유사하여 HEK 293 세포내에서 E1 결실 바이러스의 복제가 가능하다. 그러나, 침팬지 아데노바이러스는 더 흔한 인간 혈청형(Ad2 및 Ad5)와 계통발생적으로(phylogenetically) 구별된다. Pan 6는 Pans 5, 7 및 9와 관련성이 덜 가깝고 이들과 혈청학적으로 구별된다.
따라서, 하나 이상의 아데노바이러스 벡터는 인간이 아닌 영장류 아데노바이러스, 예를 들어, 혈청형 Pan5, Pan6, Pan7 및 Pan9에서 선택된 혈청형과 같은 침팬지 아데노바이러스에서 유래될 수 있다.
아데노바이러스 벡터는 또한 하나 이상의 아데노바이러스 혈청형에서 유래될 수 있으며, 각각의 혈청형은 동일하거나 다른 근원에서 유래될 수 있고, 예를 들어, 이들은 하나 이상의 인간 혈청형 및/또는 하나 이상의 인간이 아닌 영장류 혈청형에서 유래될 수 있다. 키메라 아데노바이러스 벡터를 제작하기 위한 방법은 WO2005/001103호에 개시되어 있다.
이종성 DNA를 아데노바이러스내로 삽입시키는 것과 연관된 특별한 크기 한계가 존재한다. 인간 아데노바이러스는 야생형 게놈 길이의 최대 105%까지 패키징할 수 있는 능력을 갖는다(Bett et al., 1993, J Virol 67 (10), 5911-21). 인간 아데노바이러스에 관한 더 낮은 패키징 한계는 야생형 게놈 길이의 75%까지인 것으로 드러났다(Parks et al., 1995, J Virol 71 (4), 3293-8)
본 발명에 사용되는 아데노바이러스의 일예는 Ad2와 Ad5와 같은 인간 개체군내에서 우세한 자연적으로 생성되는 혈청형들과 구별되는 아데노바이러스이다. 이 아데노바이러스는 벡터에 대한 강력한 면역반응 유도를 회피하는데, 이것은 항체의 중화 및 독성에 대한 영향을 통해 벡터 수용(uptake)을 차단함으로써 동일한 혈청형의 연속적 투여의 효능을 제한한다.
따라서, 이 아데노바이러스는 우세한 자연적으로 생성되는 인간 바이러스 혈청형이 아닌 아데노바이러스이다. 동물에서 분리된 아데노바이러스는 면역학적으로 독특한 캡시드, 헥손, 펜톤 및 섬유 성분을 지니나 계통발생적으로 밀접한 관련성이 있다. 구체적으로, 바이러스는 비인간-유래 아데노바이러스, 예컨대, 시미안 아데노바이러스 및 특히 침팬지 아데노바이러스, 예컨대, Pan 5, 6, 7 또는 9일 수 있다. 그러한 균주의 일예는 WO03/000283호에 개시되어 있으며 미국미생물기탁소(American Type Culture Collection)(10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 201 10-2209), 및 다른 공급원으로부터 가용하다. 바람직한 침팬지 아데노바이러스 균주는 Pan 5[ATCC VR-591], Pan 6[ATCC VR-592], 및 Pan 7[ATCC VR-593]이다.
침팬지 아데노바이러스의 사용은 표적 개체군내의 아데노바이러스에 대한, 기존 면역력의 결여, 특히 교차-중화 항체의 결여 때문에 인간 아데노바이러스 혈청형의 사용을 능가하는 이점이 있는 것으로 생각된다. 기존 중화 항체 반응을 지니는 침팬지 아데노바이러스의 교차-반응은 특정 후보자 인간 아데노바이러스 벡터의 경우에 있어서 35%과 비교하여 표적 개체군에서 단지 2%만 존재한다. 침팬지 아데노바이러스는 더 흔한 인간 아형 Ad2 및 Ad5와 구별되나, 우세한 아형이 아닌 서브그룹 E의 인간 Ad4와 더 밀접하게 관련이 있다. Pan 6는 Pan 5, 7 및 9와 덜 밀접하게 관련되어 있다.
본 발명의 아데노바이러스는 복제 결함이 있을 수 있다. 이것은 야생형 바이러스와 비교하여, 비-보완(non-complementing) 세포에서 복제할 수 있는 능력이 감소된다는 것을 의미한다. 이것은 바이러스를 돌연변이시킴으로써, 예를 들어, 복제에 관여하는 유전자를 결실시킴으로써, 예를 들어, E1a, E1b, E3 또는 E4 유전자의 결실에 의해 야기될 수 있다.
본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터는 기능성 E1 결실을 포함하는 복제 결함 아데노바이러스에서 유래될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터는 아데노바이러스 E1a 및 E1b을 발현하는 능력의 부재로 인해 복제 결함이 있을 수 있는데, 즉, E1a 및 E1b가 기능적으로 결실된다. 재조합 아데노바이러스는 또한 다른 유전자에서 기능적 결실[WO 03/000283호 참조], 예를 들어, E3 또는 E4 유전자에서의 결실을 지닐 수 있다. 아데노바이러스 지연된 초기 유전자 E3는 재조합 바이러스의 일부를 형성하는 아데노바이러스 서열로부터 제거될 수 있다. E3의 기능은 재조합 아데노바이러스 입자의 생산에 반드시 필요하지 않다. 따라서, 본 발명에 유용한 재조합 아데노바이러스를 패키징시키기 위해 이 유전자 생성물의 기능을 대체하는 것이 불필요하다. 한 특정 구체예에서, 재조합 아데노바이러스는 기능적으로 결실된 E1 및 E3 유전자를 지닌다. 그러한 벡터의 제작은 문헌[Roy et al., Human Gene Therapy 15:519-530, 2004]에 기재되어 있다.
재조합 아데노바이러스는 또한, E4 ORF6 기능을 유지하는 것이 요망될 수 있기는 하지만, E4 유전자의 기능적 결실을 지닌체 제작될 수 있다. 본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터는 또한 지연된 초기 유전자 E2a에 결실을 함유할 수 있다. 결실은 또한 아데노바이러스 게놈의 후기 유전자 L1에서부터 L5 중 임의의 것에서 이루어질 수 있다. 유사하게, 중기(intermediate) 유전자 IX 및 IVa에서의 결실이 유용할 수 있다.
다른 결실이 다른 구조 또는 비구조 아데노바이러스 유전자에서 이루어질 수 있다. 상기 결실은 개별적으로 이용될 수 있는데, 즉, 본 발명에 사용하기 위한 아데노바이러스 서열은 단지 E1의 결실만을 함유할 수 있다. 대안적으로, 이들의 생물학적 활성을 파괴하는데 효과적인 전체 유전자 또는 이의 일부분의 결실이 임의의 조합으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 한 대표적인 벡터에서, 아데노바이러스 서열은 E3 및 기타 부분의 결실과 함께 또는 이러한 결실 없이, E1 유전자 및 E4 유전자의 결실, 또는 E1, E2a 및 E3 유전자의 결실, 또는 E1 및 E3 유전자의 결실(예컨대, E1a 및 E1b에서의 기능적 결실, 및 E3의 적어도 일부의 결실), 또는 E1, E2a 및 E4 유전자의 결실을 지닐 수 있다. 그러한 결실은 이들 유전자들의 부분적 결실 또는 완전한 결실일 수 있으며, 기타 돌연변이, 예컨대, 요망되는 결과를 달성하기 위한 온도 민감 돌연변이와 조합되어 사용될 수 있다.
아데노바이러스 벡터는 이 바이러스가 복제할 있는 임의의 적합한 세포주에서 생산될 수 있다. 특히, 손상된 복제 특성을 초래하는 바이러스 벡터로부터 소실된 인자들(예컨대, E1 및/또는 E4)을 제공하는 보완 세포주가 사용될 수 있다. 제한됨이 없이, 그러한 세포주는 다른 것들 중에서, HeLa[ATCC 접근번호 CCL 2], A549[ATCC 접근번호. CCL 185], HEK 293, KB[CCL 17], Detroit[예를 들어, Detroit 510, CCL 72] 및 WI-38[CCL 75] 세포이다. 이들 세포주는 모두 미국미생물기탁기관(American Type Culture Collection)(10801 University Boulevard, Manassas, Virginia 201 10-2209)으로부터 입수가능하다. 다른 적합한 모 세포주는, 응용 미생물학 및 연구 센터(Centre for Applied Microbiology and Research(CAMR, UK))에 소재한 유럽 동물 세포 배양물 수집소(European Collection of Animal Cell Cultures (ECACC))에 ECACC 기탁번호 96022940으로 기탁된 세포에 의해 대별되는 바와 같이, PER.C6ⓒ 세포 또는 Her 96 세포(Crucell)과 같은, 다른 공급원으로부터 획득될 수 있다.
면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 포유동물 세포에 관해 코돈 최적화될 수 있다. 그러한 코돈-최적화는 WO05/025614호에 상세하게 기재되어 있다. 특별한 HIV 서열에 관한 코돈 최적화는 WO 03/025003호에 더 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 한 구체예에서, 폴리뉴클레오티드 작제물은 N-말단 리더 서열을 포함한다. 시그날 서열, 막관통(transmembrane) 도메인 및 세포질 도메인은 개별적으로 모두 선택적으로 존재하거나 결실된다. 본 발명의 한 구체예에서, 이들 영역들 모두는 존재하나 변형된다.
본 발명에 따른 아데노바이러스 벡터에 사용하기 위한 프로모터는 HCMV IE 유전자로부터의 프로모터일 수 있으며, 예를 들어, 여기서 엑손 1을 포함하는 상기 HCMV IE 유전자의 5' 비번역 영역은 포함되며 인트론 A는 WO 02/36792호에 기재된 바와 같이 완전히 또는 부분적으로 배제된다.
몇몇 항원들이 융합 단백질로 융합될 때, 그러한 단백질은 단일 프로모터의 조절하의 폴리뉴클레오티드에 의해 엔코딩될 것이다.
본 발명의 대안적 구체예에서, 몇몇 항원들은 개별 프로모터들을 통해 별개로 발현될 수 있는데, 상기 프로모터들 각각은 동일하거나 상이할 수 있다. 본 발명의 아직 또 다른 구체예에서, 항원들 중 일부는 제 1 프로모터에 연결된, 융합체를 형성할 수 있으며 다른 항원(들)은 상기 제 1 프로모터와 동일하거나 상이할 수 있는, 제 2 프로모터에 연결될 수 있다.
따라서, 아데노바이러스 벡터는 하나 이상의 발현 카세트를 포함할 수 있고, 상기 발현 카세트 각각은 한 프로모터의 조절하에 한 항원을 엔코딩한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 아데노바이러스 벡터는 하나 이상의 발현 카세트를 포함할 수 있고, 상기 발현 카세트 각각은 한 프로모터의 조절하에 하나 이상의 항원을 엔코딩하며, 그로 인해 항원은 융합체로서 발현된다. 각각의 발현 카세트는 아데노바이러스 벡터내의 하나 이상의 로커스내에 존재할 수 있다.
발현될 폴리뉴클레오티드 또는 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드는 임의의 아데노바이러스 결실 영역, 예를 들어, E1 결실 영역내로 삽입될 수 있다.
면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드가 융합체로서 연결될 수 있지만, 그 결과 얻어진 단백질은 융합 단백질로서 발현될 수 있거나, 이 단백질은 별개의 단백질 생성물로 발현될 수 있거나, 이 단백질은 융합 단백질로 발현된 다음 연이어 더 작은 소단위체들로 쪼개질 수 있다.
애주번트
애주번트는 일반적으로, 문헌[Vaccine Design - the Subunit and Adjuvant Approach, 예를 들어, Powell and Newman, Plenum Press, New York, 1995]에 기재되어 있다.
적합한 애주번트는 알루미늄 히드록시드 또는 알루미늄 포스페이트와 같은 알루미늄 염을 포함하나, 또한 칼슘, 철 또는 아연의 염일 수 있거나, 아실화된 티로신, 또는 아실화된 당, 양이온적으로 또는 음이온적으로 유도체화된 다당류, 또는 폴리포스파젠의 불용성 현탁액일 수 있다.
본 발명의 제형에서, 애주번트 조성물은 우선적으로 Th1 반응을 유도하는 것이 바람직하다. 그러나, 다른 체액성 반응을 포함하는, 다른 반응이 배제되지 않는다는 것이 이해될 것이다.
특별한 백신 애주번트가 Th1 또는 Th2-타입 사이토카인 반응의 자극에 특히 적합하다는 것은 공지되어 있다. 통상적으로, 백신접종 또는 감염후 면역반응의 Th1:Th2 균형의 최고의 지시자(indicators)는 항원으로의 재자극후 시험관내에서 T 림프구에 의한 Th1 또는 Th2 사이토카인의 생산의 직접적 측정, 및/또는 항원 특이적 항체 반응의 IgG1:IgG2a 비(ratio)의 측정을 포함한다.
따라서, Th1-타입 애주번트는 분리된 T-세포 개체군을 자극하여 생체내에서(in vivo)(혈청내에서 측정되는 바와 같음) 또는 생체외에서(ex vivo)(세포가 시험관내에서 항원으로 재자극된 경우 측정된 사이토카인) Th1-타입 사이토카인을 높은 수준으로 생성시키며, Th1-타입 아이소형과 연관된 항원 특이적 면역글로불린 반응을 유도하는 애주번트이다.
본 발명에 사용하기 위한 적합한 애주번트를 생산하기 위해 제형화될 수 있는 바람직한 Th1-타입 면역자극제(immunostimulants)는 하기한 것들을 포함하나, 이로만 제한되지 아니한다:
톨 유사 수용체(Toll like receptor, TLR) 4 리간드, 바람직하게는 지질 A 유도체, 특히 모노포스포릴 지질 A 또는, 더 바람직하게는, 3-디아실화된 모노포스포릴 지질(3D-MPL)과 같은 작용제(agonist).
3D-MPL은 글락소스미스클라인에 의해 상표 MPL®로 시판되며, 주로 IFN-g의 생산에 의해 특징지워 지는 CD4+ T 세포(Th1 세포, 즉, 타입-1 표현형을 지니는 CD4 헬퍼 세포) 반응을 촉진한다. 3D-MPL은 GB 2 220 211 A에 기술된 방법에 따라 제조될 수 있다. 화학적으로는, 3D-MPL은 3-데아실화 모노포스포릴 지질 A와 3, 4, 5 또는 6 아실화 사슬의 혼합물이다. 바람직하게는, 본 발명의 조성물에서는 소입자 3D-MPL이 사용된다. 소입자 3D-MPL은 0.22㎛ 필터를 통해 살균 여과될 수 있는 입자 크기를 갖는다. 이러한 제조물은 국제공개공보 WO 94/21292호에 개시되어 있다. 지질 A의 합성 유도체가 공지되어 있고, 이는 하기를 포함하나 이로 제한되지 않는 TLR 4 효능제인 것으로 고려된다:
OM174 (2-데옥시-6-o-[2-데옥시-2-[(R)-3-도데카노일옥시테트라-데카노일아미노]-4-o-포스포노-β-D-글루코피라노실]-2-[(R)-3-히드록시테트라데카노일아미노]-α-D-글루코피라노실디히드로겐포스페이트), (WO 95/14026)
OM 294 DP (3S, 9R)-3-[(R)-도데카노일옥시테트라데카노일아미노]-4-옥소-5-아자-9(R)-[(R)-3-히드록시테트라데카노일아미노]데칸-1,10-디올,1,10-비스(디히드로게노포스페이트)(WO 99/64301 및 WO 00/0462)
OM 197 MP-Ac DP (3S-, 9R)-3-[(R)-도데카노일옥시테트라데카노일아미노]-4-옥소-5-아자-9-[(R)-3-히드록시테트라데카노일아미노]데칸-1,10-디올,1-디히드로게노포스페이트 10-(6-아미노헥사노에이트)(WO 01/46127)
사용될 수 있는 다른 TLR4 리간드는 WO9850399호 또는 US6303347호(AGP를 제조하는 방법도 기술되어 있음)에 개시된 것들과 같은 알킬 글루코사미니드 포스페이트(AGP), 또는 US6764840호에 개시된 AGP의 약제학적으로 허용되는 염이다. 일부 AGP는 TLR4 효능제이고, 일부는 TLR4 길항제이다. 둘 모두는 애주번트로서 유용한 것으로 고려된다.
사포닌은 또한 본 발명에 따른 바람직한 Th1 면역자극제이다. 사포닌은 널리 공지된 애주번트이고 문헌[Lacaille-Dubois, M and Wagner H (1996). A review of the biological and pharmacological activities of Saponins Phytomedicine vol 2 pp. 363-386)에 교시되어 있다. 예를 들어, 퀼 A(남 아메리카 퀼라자 사포나리아 몰리나(Quillaja Saponaria Molina) 나무의 줄기에서 유래됨), 및 이의 분획(fractions)은, US 5,057,540호, 문헌["Saponins as Vaccine Adjuvants", Kensil, C R, Crit Rev Ther Drug Carrier Syst, 1996, 12 (1-2) 1-55], 및 EP 0 362 279 B1호에 기재되어 있다. 용혈성(Haemolytic) 사포닌 QS21 및 QS17(퀼 A의 HPLC 정제 분획은 강력한 전신 애주번트로서 소개되어 있고, 이들의 생산 방법은 미국 특허 제 5,057,540호 및 EP 0 362 279 B1호에 기재되어 있다. 또한 이들 참고문헌에는 전신 백신용 강력한 애주번트로서 작용하는 QS7(퀼 A의 비용혈성 분획)의 용도가 기재되어 있다. QS21의 용도는 문헌[Kensil et al., (1991) J Immunology vol 146, 431-437]에 더 상세히 기재되어 있다. QS21 및 폴리소르베이트 또는 시클로덱스트린의 조합물이 또한 공지되어 있다(WO 99/10008호). 퀼 A, 예컨대, QS21 및 QS7의 분획을 포함하는 미립자화된(particulate) 애주번트가 WO 96/33739호 및 WO 96/11711호에 기재되어 있다. 그러한 한 시스템은 이스콤(Iscom)으로 공지되어 있고 하나 이상의 사포닌을 함유할 수 있다.
본 발명의 애주번트는 사포닌과 조합하여, 특히 톨 유사 수용체(TLR) 4 리간드, 특히 3D-MPL을 포함할 수 있다.
다른 적합한 애주번트는 TLR 9 리간드(효능제)를 포함한다. 또 다른 바람직한 면역자극제는 비메틸화된 CpG 디뉴클레오티드("CpG")를 포함하는 면역자극성 올리고뉴클레오티드이다. CpG는 DNA내에 존재하는 시토신-구아노신 디뉴클레오티드 모티프에 대한 축약어이다. CpG는 전신 및 점막 경로 둘 모두로 투여될 때 애주번트가 되는 것으로 당업계에 공지되어 잇다(WO 96/02555호, EP 468520호, Davis et al., J Immunol, 1998, 160(2) 870-876, McCluskie and Davis, J Immunol, 1998, 161 (9) 4463-6). 역사적으로, BCG의 DNA 분획은 항-종양 효과를 발휘할 수 있는 것으로 관찰되었다. 추가 연구에서, BCG 유전자 서열에서 유래된 합성 올리고뉴클레오티드는 면역자극 효과(시험관내 및 생체내 둘 모두에서)를 유도할 수 있는 것으로 드러났다. 이들 연구의 연구자들은 중심 CG 모티프를 포함하는, 특별한 palindromic 서열이 이러한 활성을 지니는 것으로 결론지었다. 면역자극에 있어서 CG 모티프의 중심 역할은 나중에 크레이그에 의한 간행물[Krieg, Nature 374, p. 546 1995]에서 설명되었다. 상세한 분석은 CG 모티프가 특정 서열 문맥으로 존재하여야 하며, 그러한 서열은 박테리아 DNA에서 흔하지만, 척추동물 DNA에서 드문 것으로 드러났다. 면역자극 서열은 종종 퓨린, 퓨린, C, G, 피리미딘, 피리미딘인데, 여기서 상기 CG 모티프는 메틸화되지 아니하나, 다른 비메틸화된 CpG 서열은 면역자극성인 것으로 알려져 있고 본 발명에 사용될 수 있다.
6개 뉴클레오티드의 특별한 조합물에서, palindromic 서열이 존재한다. 이들 모티프 중 일부는, 한 모티프의 반복체로서 또는 상이한 모티프들의 조합물로서, 동일한 올리고뉴클레오티드내에 존재할 수 있다. 올리고뉴클레오티드를 함유하는 하나 이상의 면역자극 서열의 존재는, 천연 킬러 세포(인터페론 γ를 생산하며 세포용해 활성을 지님) 및 대식세포를 포함하는, 다양한 면역 서브세트를 활성화시킬 수 있다(Wooldnge et al VoI 89 (no 8), 1977). 또한 이러한 컨센서스 서열을 갖지 않는 다른 비메틸화된 CpG 함유 서열은 현재 면역자극성인 것으로 드러났다.
CpG는, 백신으로 제형화될 때, 일반적으로 유리 항원과 함께 유리 용액으로 투여되거나(WO 96/02555호, McCluskie and Davis, 전게서) 또는 항원에 공유적으로 컨주게이션되거나(WO 98/16247), 담체, 예컨대, 알루미늄 히드록시드로 제형화된다(헤파티디스 표면 항원)[Davis et al., 전게서, Brazolot-Millan et al., Proc Natl Acad Sci, USA, 1998, 95(26), 15553-8].
잠재적인 관심있는 다른 TLR9 효능제는 면역자극 CpR 모티프 함유 올리고뉴클레오티드 및 YpG 모티프 함유 올리고뉴클레오티드(Idera)를 포함한다.
상기한 것과 같은 그러한 면역자극제는, 예를 들어, 리포좀, 수중유 에멀젼, 및/또는 알루미늄 염(예컨대, 알루미늄 히드록시드)을 포함하는, 금속성 염과 같은 담체와 함께 제형화될 수 있다. 예를 들어, 3D-MPL은 알루미늄 히드록시드(EP 0 689 454) 또는 수중유 에멀젼(WO 95/17210호)으로 제형화될 수 있고; QS21는 콜레스테롤 함유 리포좀(WO 96/33739호), 수중유 에멀젼(WO 95/17210호) 또는 알룸(alum)(WO 98/15287호)로 제형화되는 것이 유리할 수 있으며; CpG는 알룸(Davis et al., 전게서, Brazolot-Millan, 전게서) 또는 다른 양이온성 담체로 제형화될 수 있다.
면역자극제의 조합물이 또한 바람직한데, 모노포스포릴 지질 A 및 사포닌 유도체의 조합물(WO 94/00153호, WO 95/17210호, WO 96/33739호, WO 98/56414호, WO 99/12565호, WO 99/11241호)이 특히 바람직하며, WO 94/00153호에 개시된 것과 같은 QS21 및 3D-MPL의 조합물이 더 바람직하다. 달리, CpG + 사포닌, 예컨대, QS21의 조합물이 본 발명에 사용하기 위한 유력한 애주번트를 형성한다. 달리, 사포닌은 리포좀으로 또는 이스콤으로 제형화될 수 있고 면역자극 올리고뉴클레오티드와 조합될 수 있다.
따라서, 적합한 애주번트 시스템은, 예를 들어, (예를 들어, WO00/23105호에 기재된 것과 같이) 알루미늄 염과 함께, 모노포스포릴 지질 A, 바람직하게는 3D-MPL의 조합물을 포함한다.
증강된 시스템은 모노포스포릴 지질 A 및 사포닌 유도체의 조합, 특히 WO 94/00153호에 개시된 것과 같은 QS21 및 3D-MPL의 조합, 또는 반응발생성(reactogenecity)이 더 적은 조성물(여기서 QS21은 WO 96/33739호에 개시된 것과 같이 콜레스테롤 함유 리포좀(DQ)에 켄칭됨)을 포함한다. 이러한 조합은 추가적으로 면역자극성 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
따라서, 대표적인 애주번트는 QS21 및/또는 MPL 및/또는 CpG를 포함한다.
수중유 에멀젼중에 QS21, 3D-MPL & 토코페롤을 포함하는 특히 유력한 애주번트 제형은 WO 95/17210호에 기재되어 있고 본 발명에 사용하기 위한 또 다른 바람직한 제형이 된다.
또 다른 바람직한 제형은 CpG 올리고뉴클레오티드를 단독으로 또는 알루미늄 염과 함께 포함한다.
본 발명의 추가 양상에서, 본원에 기재된 것과 같은 백신 제형의 제조 방법이 제공되는데, 여기서 당해 방법은 본 발명에 따른 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드를 적합한 애주번트와 혼합하는 단계를 포함한다.
본 발명에 따른 제형에 사용하기 위한 특히 바람직한 애주번트는 다음과 같다:
i) 3D-MPL + 리포좀중의 QS21(예를 들어, 하기 애주번트 B를 참조바람)
ii) 알룸 + 3D-MPL
iii) 알룸 + 리포좀중의 QS21 + 3D-MPL
iv) 알룸 + CpG
v) 3D-MPL + QS21 + 수중유 에멀젼
vi) CpG
vii) 3D-MPL + QS21(예를 들어, 리포좀 중) + CpG
viii) QS21 + CpG.
바람직하게는, 애주번트는 리포좀, ISCOM 또는 수중유 에멀젼의 형태로 존재한다. 본 발명의 한 대표적인 구체예에서, 애주번트는 수중유 에멀젼을 포함한다. 본 발명의 또 다른 대표적 구체예에서, 애주번트는 리포좀을 포함한다.
적합하게는, 애주번트 성분은 임의의 바이러스를 함유하지 않는다. 따라서, 적합하게는, 본 발명에 따른 사용을 위한 조성물은 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터 이외의 임의의 바이러스를 함유하지 아니한다.
조성물, 투여량 및 투여
본 발명의 방법에서, 면역원성 폴리펩티드(들), 아데노바이러스 벡터(들) 및 애주번트는 부대적으로 투여된다.
전형적으로, 애주번트는 면역원성 폴리펩티드와 복합제형화(co-formulation)될 것이다. 적합하게는, 애주번트는 또한 투여될 임의의 다른 면역원성 폴리펩티드와 복합제형화될 것이다.
따라서, 본 발명의 한 구체예에서, 면역반응 유발방법이 제공되는데, 당해 방법은 (i) 애주번트와 함께 복합제형화되는(co-formulated) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드; (ii) 상기 병원균에서 유래된 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드와 애주번트, 및 상기 하나 이상의 아데노바이러스 벡터가 부대적으로 투여된다.
"복합제형화된(co-formulated)"은 제 1 면역원성 폴리펩티드 및 애주번트가 동일한 조성물, 예를 들어, 약학 조성물 내에 함유된다는 것을 의미한다.
전형적으로, 아데노바이러스 벡터는 조성물, 예를 들어, 약학 조성물내에 함유된다.
달리, 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드, 하나 이상의 아데노바이러스 벡터 및 애주번트는 복합제형화된다.
따라서, 하나 이상의 면역원성 폴리펩티드, 하나 이상의 아데노바이러스 벡터, 및 애주번트를 포함하는 본 발명에 따른 조성물이 제공된다.
본 발명에 따른 조성물 및 방법은 하나 이상의 면역원성 폴리펩티드 및/또는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터의 사용을 포함할 수 있다. 다수의 항원의 사용은 특별한 병원균, 예컨대, HIV, M. 튜버큘로시스(M. tuberculosis) 및 플라스모디움 종(Plasmodium sp.)에 대한 보호 면역반응을 유발하는데 특히 유리하다. 본 발명에 따른 조성물은 하나 이상의 애주번트를 포함할 수 있다.
본 발명에 따라 사용되는 조성물 및 방법은 전형적으로 담체, 예를 들어, 수성 완충 담체를 포함할 수 있다. 보호 성분, 예컨대, 당이 포함될 수 있다.
조성물은 표적 세포를 형질도입시키고, 충분한 수준의 유전자 전달 및 발현을 제공하고, 병원균-특이적 면역반응이 발달되는 것을 가능케하여 예기치 못한 부작용 없이 또는 의학적으로 허용가능한 생리학적 효과와 함께 예방적 또는 치료적 혜택을 제공하기에 충분한 양으로 투여되어야 하는데, 상기 양은 의학 분야의 통상의 기술자에 의해 결정될 수 있다. 관용적이며 약제학적으로 허용되는 투여 경로는, 이로만 국한되는 것은 아니지만, retina로의 직접 전달 및 다른 안구내 전달 방법, 간으로의 직접 전달, 흡기, 비내, 정맥내, 근내, intratracheal, 피하, 피내(intradermal), 상피내(epidermal), 직장내, 경구 및 다른 비경구 투여 경로를 포함한다. 투여 경로는, 요망되는 경우, 조합되거나, 유전자 생성물 또는 병태(condition)에 따라서 조정될 수 있다. 투여 경로는 주로 치료되는 병태의 특성에 좌우될 것이다. 가장 적합하게는, 경로는 근내, 피내 또는 상피내이다.
표적으로 삼기에 바람직한 조직은 근육, 피부 및 점막이다. 피부 및 점막은 대부분의 감염성 항원이 보통 조우하게 되는 생리학적 부위이다.
제 1 면역원성 폴리펩티드, 애주번트 및 아데노바이러스 벡터가 복합제형화되지 않는 경우, 상이한 제형(예를 들어, 폴리펩티드/애주번트 및 아데노바이러스 벡터 제형)이 동일한 투여 경로로 또는 상이한 투여 경로로 투여될 수 있다.
본 발명의 방법에서 조성물의 투여량은 주로 치료되는 병태, 환자의 연령, 체중, 및 건강에 좌우될 것이며, 그에 따라 환자들 간에 달라질 수 있다. 예를 들어, 치료학적으로 유효한 성인 인간 또는 척추동물 투여량은 일반적으로 약 1-1000ug, 또는 약 2-100㎍, 예를 들어, 약 4-40㎍ 면역원성 폴리펩티드와 더불어, 약 1 x 106 내지 약 1 x 1015개 바이러스 입자, 또는 약 1 x 1011 내지 1 x 1013개 바이러스 입자, 또는 약 1 x 109 내지 1x 1012개 바이러스 입자의 농축물(concentrations)을 함유하는 약 100㎕ 내지 약 100㎖의 담체의 범위이내이다. 투여량 범위는 동물의 크기 및 투여 경로에 좌우될 것이다. 예를 들어, 근내 주사를 위한 적합한 인간 또는 척추동물 투여량(약 80 kg의 동물)은, 단일 부위의 경우, ㎖ 당 약 1 x 109 내지 약 5 x 1012개 바이러스 입자 및 4-40㎍ 단백질의 범위이내이다. 당업계의 통상의 기술자는, 투여 경로, 및 사용되는 치료적 또는 백신적 적용에 의존하여, 이러한 용량을 조정할 수 있다.
애주번트의 양은 애주번트 및 면역원성 폴리펩티드의 특성, 치료되는 병태 및 환자의 연령, 체중 및 건강에 좌우될 것이다. 전형적으로, 인간 투여의 경우, 용량 당 1-100㎍, 예를 들어, 10-50㎍의 애주번트의 분량이 적합할 수 있다.
적합하게는, 적절한 면역반응이 본 발명의 방법에서의 본 발명의 조성물 또는 조성물들의 단일의 부대적(concomitant) 투여에 의해 달성된다. 그러나, 면역반응이 제 2 또는 후속 사건(예를 들어, 1달 또는 2달 후)에 대한 제 1 면역원성 폴리펩티드, 애주번트 및 아데노바이러스 벡터의 추가 용량의 투여에 의해 추가로 증강되면, 이후 그러한 프로토콜은 본 발명에 의해 포함된다.
본 발명자들은 양호한 병원균-특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T-세포 반응이 전형적으로 본 발명의 방법에 있어서 본 발명의 조성물 또는 조성물들의 단일의 동반 투여후 야기될 수 있다는 것을 발견하였다. 그러나, 본 발명자들은 양호한 병원균-특이적 항체 반응이 본 발명의 조성물 또는 조성물들의 제 2 또는 추가의 동반 투여를 필요로 할 수 있다는 것을 발견하였다.
본 발명의 성분들은 임의의 적합한 약제학적 부형제, 예컨대, 물, 완충액 등과 조합되거나 이들과 제형화될 수 있다.
실시예
애주번트 제조물
1) WO 95/17210호에 설명된 것과 같은 프로토콜에 따라 수중유 에멀젼의 제조.
에멀젼은 하기 성분들을 함유한다: 42.72㎎/㎖ 스쿠알렌, 47.44㎎/㎖ 토코페롤, 19.4㎎/㎖ 트윈 80.
그 결과 얻어진 오일 점적은 대략 180 nm의 크기를 갖는다.
트윈 80을 인산염 완충 염수(PBS)에 용해시켜 PBS 중의 2% 용액을 수득하였다. 100 ml 2배 농축액을 제공하기 위해, 5g의 DL 알파 토코페롤 및 5㎖의 스쿠알렌 에멀젼을 완전히 혼합될 때까지 볼텍싱시켰다. 90㎖의 PBS/트윈 용액을 첨가하고 완전히 혼합하였다. 그 결과 얻어진 에멀젼을 이후 주사기를 통과시키겨 최종적으로 M1 10S 미세유체학(microfluidics) 기구를 사용하여 미세유체화시켰다. 그 결과 얻어진 오일 점적은 대략 180 nm의 크기를 지녔다.
2) QS21 및 MPL 을 지니는 수중유 에멀젼의 제조
멸균된 벌크 에멸젼을 최종 농도 ㎖ 당 500㎕ 에멀젼(v/v)에 도달시키기 위 해 PBS에 첨가하였다. 이후 3D-MPL을 첨가하였다. 이후 QS21을 첨가하였다. 각각의 성분들을 첨가하는 사이 사이에, 중간 생성물을 5분 동안 교반하였다. 15분 후, pH를 확인하고 필요한 경우 NaOH 또는 HCl로 6.8 +/- 0.1로 조정하였다. 3D-MPL 및 QS21의 최종 농도는 각각의 경우 ㎖ 당 100㎍이었다.
3) 리포좀 MPL의 제조
지질(예컨대, 난황으로부터의 포스파티딜콜린 또는 합성된 것) 및 콜레스테롤 및 유기 용매중의 3D-MPL의 혼합물을 진공하에서(또는 대안적으로 불활성 기체의 기류하에서) 건조시켰다. 수성 용액(예컨대, 인산염 완충 염수)을 이후 첨가하고, 모든 지질이 현탁될 때까지 용기를 진탕시켰다. 이 현탁액을 이후 리포좀 크기가 약 100 nm로 감소될 때까지 미세유동화시키고, 이후 0.2㎛ 필터를 ㅌ통해 멸균 여과시켰다. 압출(Extrusion) 또는 초음파분해가 이 단계를 대체할 수 있다.
전형적으로 콜레스테롤:포스파티딜콜린 비는 1:4(w/w)이었고, 수성 용액을 첨가하여 10 mg/ml의 최종 농도를 얻었다. MPL의 최종 농도는 2㎎/㎖이다.
리포좀은 대략 100 nm의 크기를 가지며 SUV(소 단일라멜라 소포(small unilamelar vesicles)라는 의미)라고 지칭된다. 리포좀은 그 자체로 수 시간에 걸쳐 안정하며 퓨소제닉 능력(fusogenic capacity)을 갖지 아니한다.
4) 애주번트 B(" adj B")의 제조
SUV의 멸균 벌크를 PBS에 첨가하였다. PBS 조성물은 Na2HPO4: 9 mM; KH2PO4: 48 mM; NaCl: 100 mM, pH 6.1이었다. 수성 용액중의 QS21을 SUV에 첨가하였다. 3D-MPL 및 QS21의 최종 농도는 각각의 경우 ㎖ 당 100㎍이었다. 이 혼합물은 애주번트 B로 지징된다. 각각의 성분을 첨가하는 사이 사이에, 중간 생성물을 5분 동안 교반하였다. pH를 확인하고, 필요한 경우, NaOH 또는 HCl로 6.1 +/- 0.1로 조정하였다.
p24 - RT - Nef - P17 단백질("F4")의 제조
F4를 WO2006/013106호, 실시예 1. 코돈-최적화된 방법에 기재된 바와 같이 제조하였다.
침팬지( Chimp ) 아데노바이러스 Pan7 함유 Gaq - RT - Nef 도입유전자(" Pan7GRN ")의 제조
Gag, RT, Nef 플라스미드의 제작.
플라스미드 p73i - Tgrn
Tgrn 플라스미드 삽입물의 전장 서열은 서열번호 1로 주어지며 플라스미드 구성은 도 1에 그래프로 도시되어 있다. 이 플라스미드는 p17, p24(코돈 최적화됨) Gag, p66 RT(코돈 최적화되고 불활성화됨) 및 절단된 Nef를 포함한다.
플라스미드 P73i-Tgm을 WO03/025003호, 실시예 1-13에 기재된 바와 같이 제조하였다.
E1/E3 결실된 Pan 7 아데노바이러스의 제작
E1/E3 결실된 Pan 7 아데노바이러스를 WO2006/120034호, 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조하였다.
벡터의 다른 혈청형들은 유사한 방식으로 제작될 수 있다. 이 혈청형 및 다 른 Pan 아데노바이러스 혈청형에서 E1, E3 및 E4 결실의 제작에 과한 완전한 설명은 WO03/0046124호에 제공되어 있다. 추가 정보는 또한 문헌[Human Gene Therapy 15:519-530]에서 활용가능하다.
아데노바이러스내로 Gag , RT , Nef 서열의 삽입
플라스미드 P73i-Tgrn을 사용하여, GRN 발현 카세트를 E1/E3 결실된 Pan 7 아데노바이러스내로 삽입하여 WO2006/120034호, 실시예 3에 기재된 바와 같이 C7-GRNc을 제조하였다. C7-GRNc은 본원에 설명된 실시예들에서 사용되는 Pan7GRN 아데노바이러스 성분이다.
실시예 1
아데노바이러스 성분( Pan7GRN ) 및 단백질 성분(F4/ 애주번트 B)을 별개로 또는 모두 함께 복합제형화 된 아데노바이러스 및 단백질 성분 둘 모두로 면역화된 마우스에서의 면역원성 연구
사용된 마우스 종은 CB6F1이었고 3마리의 마우스를 시점 당 사용하였다. F4/애주번트 B(P)로의 면역화를 위해, 인간 용량의 1/10을 주사하였는데, 즉, 5OuL의 애주번트 B중의 9 ug의 F4 단백질을 주사하였다. Pan7GRN(A)으로의 면역화를 위해, 5OuL의 염수(0.9% NaCl, 주사 용수)중 10 x 108개 바이러스 입자를 사용하였다. Pan7GRN 침팬지 아데노바이러스는 Gag(G), RT(R) 및 Nef(N)를 코딩하는 유전자를 지닌다.
백신접종 스케줄은 다음과 같았다:
Figure 112009060894482-pct00003
따라서, 그룹 1 및 2에서, 마우스들이 각각 단백질(PP) 또는 아데노바이러스(AA)의 2가지 주사로 면역화되었음을 알 수 있다. 그룹 3과 4의 마우스들은 통상적인 프라임-부스트 스케줄[단백질 다음 아데노바이러스(PPAA) 또는 다른 방식의 라운드(AAPP)]를 투여받았고, 반면, 그룹 5와 6에서, 마우스들은 본 발명에 따라서 단백질과 아데노바이러스의 조합물(comb)의 1 또는 2가지 주사를 투여받았다. 그룹 7로부터의 마우스는 오직 애주번트 대조군을 투여받았고, 반면 그룹 6으로부터의 마우스는 무경험(naive)이었다.
하기 판독(read-outs)을 실시하였다.
항체 반응(ELISA를, 각 그룹으로부터의 각각의 개별 동물로부터 취한 혈청에 대해 실시하였음):
- F4에 대한 항체 반응(도 4)
- F4 성분 p24, RT, Nef 및 p17에 대한 항체 반응(도 5 내지 8)
세포 반응(도 2 내지 3):
- p24, RT, Nef 또는 p17의 펩티드의 풀(pool)로 비장세포를 밤새 재자극한 후에 표면 및 세포내 사이토카인을 염색을 실시하여 유세포 분석기로 측정하였음. 시점 및 그룹당 3마리 마우스의 비장세포를 분석을 위해 풀링(pooling)하였다.
그룹 1 및 2에 대해서, 상응하는 최종 면역화로부터 21일 후에 측정을 위해 샘플을 취하였다. 남아있는 그룹에 대해서는, 상응하는 최종 면역화로부터 21일, 56일 및 112일 후에 측정을 수행하였다.
결과:
결과가 도 2 내지 8에 도시되어 있다.
X축 라벨은 하기 사항에 상응한다:
PP - 2회 면역화를 실시한 그룹 1 동물
AA - 2회 면역화를 실시한 그룹 2 동물
PPAA - 4회 면역화를 실시한 그룹 3 동물
AAPP - 4회 면역화를 실시한 그룹 4 동물
Combo - 면역화를 실시한 그룹 5 동물
Combo x 2 - 2회 면역화를 실시한 그룹 6 동물
측정 시점(최종 면역화 후의 21일, 56일 또는 112일)이 괄호 안에 표시되어 있다.
세포 반응(도 2 내지 3):
분석된 시점에서, 데이터는, CD4+ T-세포 반응이 주로 p24, RT 및 Nef에 대해 확인되었음을 보여준다.
도 2a 및 2b(좌측 패널)에 도시된 바와 같이, 최종 면역화 후 21일 째에, 아데노바이러스의 2회 면역화 및 단백질/애주번트의 2회 면역화의 경우에 가장 높은 CD4+ T-세포 반응이 확인된다(그룹 4 동물). 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물의 1회 주사는, p24, RT 또는 Nef 펩티드로 재자극시킨 단백질/애주번트의 2회 주사보다 더 높은 CD4+ T-세포 수준을 유도한다. RT 및 Nef에 의한 재자극에 있어서, 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물을 이용한 2회 면역화는 상기 조합물을 이용한 1회 면역화보다 약간 더 높은 CD4+ T-세포 반응을 유도하는 반면, p24에 대해서는 1회 또는 2회의 면역화를 이용한 경우의 반응이 동일하였다.
분석된 시점에서, CD8+ T-세포 반응은 주로 p24 및 RT 펩티드에 대해 확인되며, Nef 또는 p17에 대해 특이적인, 현저한 수의 CD8+ T-세포는 검출되지 않았다. 도 2a 및 2b(우측 패널)에 도시된 바와 같이, 최종 면역화 후 21일 째의 CD8+ T-세포 반응은, 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물을 이용한 1회 또는 2회 면역화를 이용한 경우와 유사하였다. (i) 아데노바이러스로 2회 또는 (ii) 아데노바이러스로 2회 이후 단백질로 2회 또는 (iii) 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 1회 또는 2회로 면역화시킨 그룹에서 확인된 p24에 대한 CD8 반응은 서로 필적할 정도이었으며, 단백질로 2회 이후 아데노바이러스로 2회 면역화시킨 그룹으로부터의 반응보다 약간 더 낮았다. 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 1회 또는 2회 면역화시킨 그룹에서 확인된 RT에 대한 CD8 반응은 필적가능한 정도이었으며, (i) 아데노바이러스로 2회 또는 (ii) 아데노바이러스로 2회 이후 단백질로 2회 또는 (iii) 단백질로 2회 이후 아데노바이러스로 2회 면역화시킨 그룹으로부터의 반 응보다 약간 더 낮았다.
CD4 및 CD8 T 세포 반응을 이후 시점(최종 면역화 후 56일 및 112일 째)에서 또한 분석하였는데, 이 때에는 반응의 지속성이 측정될 수 있다(도 3a 및 3b). CD4 반응(도 3a 및 3b, 좌측 패널)은 주로 p24, RT 및 Nef에 대해 확인된다. 이 시점에서, 아데노바이러스로 2회 이후 단백질로 2회 면역화시킨 동물에서 최고의 CD4 반응이 확인된다. 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 1회 또는 2회 면역화시킨 마우스에서의 CD4 반응은 서로 필적가능한 정도이었으며, 단백질로 2회 이후 아데노바이러스로 2회 면역화시킨 그룹에서 확인된 반응보다 대체로 더 높았다.
이후의 시점에서, p24에 대한 CD8 반응은 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 1회 면역화시킨 그룹에서 가장 높다(도 3b, 우측 패널). 단백질로 2회 이후 아데노바이러스로 2회 면역화시킨 동물로부터의 반응에 필적하는 정도이며, (i) 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 2회 또는 (ii) 아데노바이러스로 2회 이후 단백질로 2회 면역화시킨 동물로부터의 반응보다 약간 더 높다. 후자의 2개는 서로 필적하는 정도이다. RT에 대한 CD8 반응이 가장 높으며, 이는 (i) 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 2회 또는 (ii) 아데노바이러스로 2회 이후 단백질로 2회 면역화시킨 그룹에서와 유사하다. (i) 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 2회 또는 (ii) 단백질로 2회 이후 아데노바이러스로 2회 면역화시킨 그룹으로부터의 RT에 대한 CD8 반응은 약간 더 낮았지만, 이는 서로 필적하는 정도이었다(도 3). 도 3a(우측 패널)에 도시된 바대로, Nef 또는 p17에 대해 특이적 인, 현저한 수의 CD8+ T-세포는 검출되지 않았다.
항체 반응:
도 4 내지 8에 도시되어 있듯이, 검출된 항체 반응은 주로 p24(도 5), RT(도 6) 및 Nef(도 8)에 대해 이루어진 것이다. 항-F4 반응(도 4)은 일반적으로 p24, RT 또는 Nef 성분의 각각에 대해 확인된 반응을 의태하며, 이는 다음과 같이 특징지어질 수 있다:
- (i) 아데노바이러스로 2회 또는 (ii) 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 1회 면역화시킨 그룹에서는 낮은 정도의 항체 반응 내지는 항체 반응이 전혀 검출되지 않는다;
- 최고의 항체 반응은 대개 면역화 후 21일 째에 단백질로 2회 면역화시킨 그룹에서 검출되었다. 그러나, 이 그룹에서는 개체간 가장 높은 가변성(variability)이 확인되기도 하였다. 또한, 항-Nef 혈청 테스트에 있어서, 아데노바이러스로 2회 이후 단백질로 2회 면역화시킨 그룹이 다른 그룹들과 비교하였을 때 최고의 반응을 나타내는 것으로 보인다;
- (i) 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 2회 또는 (ii) 단백질로 2회 이후 아데노바이러스로 2회 또는 (iii) 아데노바이러스로 2회 이후 단백질로 2회 면역화시킨 그룹에서 확인된 반응은 필적하는 정도이며, 최종 면역화 후 21일 째에 최고이며 이후 시간 경과에 따라 조금씩 감소한다.
p17에 대한 항체 반응(도 7)은 모든 그룹에서 매우 낮거나 검출불가능한 정도이었다.
결론:
전체적으로, 최고의 항원-특이적인 세포-매개된 면역 반응은 4회 면역화 후의 AAPP 처리 그룹에서 확인된다. 그러나, 2회 면역화(즉, AA, PP 및 2 x combo 그룹) 후의 그룹을 비교한 경우에, 단백질/아데노바이러스/애주번트 조합물로 2회 면역화시킨 그룹에서만 항원-특이적인 CD4 및 CD8 T 세포 반응 모두가 유도된다. 또한, 단백질/아데노바이러스/애주번트 조합물을 단일 주사한 후에는 유사 수준의 CD4 및 CD8 T 세포 반응에 도달할 수 있다. 또한, 지속성의 측면에서, 단백질/아데노바이러스/애주번트 조합물의 2회 면역화 후 112일 째에 확인된 항원-특이적인 T 세포 반응은 AAPP 처리 그룹에서 4회 면역화시킨 후 112일 째에 확인된 세포 반응에 필적하는 정도이다. 최종적으로, 단백질/아데노바이러스/애주번트 조합물을 사용한 2회 면역화가, 대체로 가장 높은 항체 반응이 얻어진 애주번트 단백질 그룹으로 2회 면역화시킨 그룹에서 얻어진 반응에 필적하는 항체 반응을 얻는데 필요한 것으로 보인다.
실시예 2
함께 포뮬레이션된 Pan7GRN 아데노바이러스 및 F4 단백질/애주번트 B로 면역화시킨 마우스에서의 면역성 연구
그룹 당 9마리의 마우스로 사용된 마우스의 계통은 CB6F1이었다. 마우스를, 50㎕ 애주번트 B 또는 이의 희석물(1/2, 1/4 또는 1/10) 중의 Pan7GRN의 10 × 108개 바이러스 입자와 함께 F4 단백질(인간 투여량의 1/10, 즉 9㎍을 주사하였다)의 공동-포뮬레이션으로 1회 면역화시켰다. Nef, p17, p24 또는 RT 펩티드의 풀(각 그룹에 대한 3개 비장세포의 3개 풀)에 대한 CD4 및 CD8 세포 반응을 면역화 후 21일 째에 측정하였다.
하기와 같이 판독을 실시하였다:
세포 반응(도 9):
비장세포를 p24, RT, Nef 또는 p17의 펩티드 풀로 비장세포를 밤새 재자극한 후에 표면 및 세포내 사이토카인을 염색을 실시하여 유세포 분석기를 측정함. 상기 비장세포를 분석을 위해 풀링(그룹당 3개 비장세포의 3개 풀)하였다.
결과:
도 9에 도시된 결과는 p24 또는 RT 펩티드의 풀로 재자극한 후에 확인된 세포 반응을 나타낸다.
X축 라벨은 하기 사항을 나타낸다:
애주번트 B - 9㎍ F4/108vpPan7GRN/희석시키지 않은 애주번트 B로 면역화시킨 마우스
1/2 애주번트 B - 9㎍ F4/108vpPan7GRN/1/2로 희석된 애주번트 B로 면역화시킨 마우스
1/4 애주번트 B - 9㎍ F4/108vpPan7GRN/1/4로 희석시킨 애주번트 B로 면역화시킨 마우스
1/10 애주번트 B - 9㎍ F4/108vpPan7GRN/1/10로 희석시킨 애주번트 B로 면역화시킨 마우스
무경험(naive) - 무경험 마우스(면역화시키지 않은 것)
결과는, CD4(도 9, 좌측 패널) 및 CD8(도 9, 우측 패널) 반응이 주로 p24 및 RT에 대해 확인되며, RT에 대해 특이적인 CD8 T 세포 반응은 p24에 대해 특이적인 세포 반응보다 낮음을 나타낸다. 또한, 결과는 희석시키지 않은 애주번트 B 또는 이의 1/2 희석물로 면역화시킨 그룹에서 면역화 후 21일 째의 p24 및 RT에 대한 CD4 반응이 유사함을 나타낸다. 이러한 CD4 반응은 애주번트가 1/4로 희석되는 경우에 감소되는 경향이 있다. 애주번트 B가 1/10로 희석되면, 확인된 CD4 반응은 애주번트 B의 1/4 희석물로 면역화시킨 그룹으로부터의 세포 반응과 유사하다. p24에 대한 항-CD8 반응은 애주번트가 1/2로 희석되든지 그렇지 않든지 간에 필적하는 정도이었다. 그러나, 애주번트 B가 1/4로 희석되고 심지어는 1/10로 희석되면 반응은 감소한다. 대조적으로, 상기한 경향은 사용된 애주번트 용량의 실제적인 용량 범위 효과가 존재하지 않는 항-RT CD8 반응에 대해서는 확인되지 않는다.
결론:
F4 성분에 대한 CD4+ 세포 및 CD8+ 세포를, 면역원성 폴리펩티드, 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 이종 폴리누클레오타이드를 함유하는 아데노바이러스성 벡터, 및 희석된 애주번트를 함유하는 조성물의 단일 투여로 유도하였다. 애주번트 희석의 영향은 관심있는 항원 특이적인 CD4 또는 CD8 반응에 따라 달랐다. 특 히, p24 및 항-p24 CD4 및 CD8 T 세포 반응에 대해 확인된 최고의 반응은, 조합 백신에 사용된 애주번트의 용량과 관련되는 용량 범위 효과를 나타낸다. 동일한 효과가 항-RT CD4 T 세포 반응에 대해서도 확인될 수 있으며, 콤보로 사용된 애주번트 용량의 용량 범위 효과는 항-RT CD8 T 세포 반응에 대해서는 덜 명확하다. 최종적으로, 전체적인 항원-특이적인 CD4 및 CD8 T 세포 반응을 주시하고 4개의 항원에 대한 반응을 합하면, 용량 범위가 확인될 수 있다.
실시예 3:
순차적으로 Pan7GRN 또는 F4/애주번트 B로, 또는 함께 포뮬레이션시킨 아데노바이러스 및 단백질 성분 둘 모두로 면역화시킨 뉴질랜드 화이트 래빗에서의 면역원성 연구
F4/애주번트 B로 면역화시키는 경우에, 인간 용량, 즉 500㎕ 애주번트 B 중의 90㎍ F4 단백질을 주사하였다. Pan7GRN으로 면역화시키는 경우에, 500㎕ 식염수 중의 10 × 1010개 또는 10 × 1012개의 바이러스 입자를 사용하였다. 함께 포뮬레이션시킨 아데노바이러스 및 단백질 성분 둘 모두로 면역화시키는 경우에, 90㎍의 F4 단백질, 500㎕ 애주번트 B 중의 Pan7 GRN의 10 × 1011개 바이러스 입자를 사용하였다.
백신접종 계획은 하기와 같다:
그룹 0일째 14일째 126일째
1 F4/애주번트 B F4/애주번트 B F4/애주번트 B
2 Pan7GRN 10＾10 Pan7GRN 10＾10
3 Pan7GRN 10＾12 Pan7GRN 10＾12
4 F4/애주번트 B/
Pan7GRN 10＾11		 F4/애주번트 B/
Pan7GRN 10＾11		 F4/애주번트 B/
Pan7GRN 10＾11
단지 2마리의 래빗이 포함된 그룹 1을 제외하고는, 그룹 당 3마리의 래빗으로 구성하였다.
하기 판독을 수행하였다:
항체 반응(ELISA를, 각 그룹으로부터의 각각의 개별 동물로부터 채취한 혈청에 대해 실시하였음)
- F4에 대한 항체 반응
- F4 성분 p24, RT, Nef 및 p17에 대한 항체 반응
림프증식 반응:
인큐베이션의 마지막 16시간 동안 삼중수소화된 티미딘의 존재하에서 88시간 동안 Nef, p17, p24 및/또는 RT 펩티드의 풀로 시험관내에서 재자극시킨 말초혈액 단핵 세포(밀도 구배 후에 전혈로부터 분리한 것임)에 의해 삼중수소화된 티미딘의 흡수로 림프증식을 측정하였다.
결과:
림프증식 반응:
도 10에 도시된 바와 같이, 최고의 림프증식 반응은 단백질로 2회 면역화시킨 그룹에서 확인된다. 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 2회 면역화시킨 동물로부터의 세포증식 반응은 그룹의 모든 래빗에서 확인되었다. 실제적으로 1회 주사 후에 최고로 되었고, 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물을 3회 주사 후에 추가로 재현될 수 있었는데(제 1 주사 후에서와 유사한 수준에서), 이는 최초 2회의 주사는 추가의 유사한 주사에 대한 임의 반응을 억제하는 중화 반응을 유도하 지 않았음을 제안한다. 이의 강도에서, 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 면역화시킨 래빗에서 확인된 증식 반응은, 아데노바이러스의 1012개 바이러스 입자로 1회 또는 2회 면역화시킨 동물에서 확인된 것에 필적하는 정도이었으며, 아데노바이러스의 1010개 바이러스 입자로 1회 또는 2회 면역화시킨 동물로부터의 증식 반응보다는 더 높은 것으로 추정되었다. 또한, 이는, 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물을 이용하면 사용될 아데노바이러스의 용량을 감소시킬 수 있음을 제안한다. 최종적으로, 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물의 3회 주사 후에, 그룹 4에서 확인된 반응은 단백질로 3회 면역화시킨 동물로부터의 반응과 유사하였다(그룹 1).
혈청분석(Serology):
도 11에 도시된 바와 같이, 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 2회 면역화시킨 동물에서 확인된 항-F4 항체 반응의 운동성은 단백질로 2회 면역화시킨동물로부터의 것과 유사하다: 이는 이미 2회 주사 후 7일째에 검출된 후에 시간 경과에 따라 감소한다. 그러나, 세기의 측면에서, 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물로 2회 면역화시킨 동물의 항-F4 반응은, 단백질로 2회 면역화시킨 동물로부터의 항-F4 반응과 비교하였을 때, 이후 시점(2회 면역화시킨 후 21일 및 63일 째)에서 더 높게 유지된다. 어떠한 항-F4 항체 반응도 아데노바이러스의 1010개 바이러스 입자로 1회 면역화시킨 래빗에서는 확인되지 않는다. 아데노바이러스의 1012 개 바이러스 입자로 1회 면역화시킨 래빗에서, 항-F4 반응은 면역화 후 21일 및 63일 째에만 검출된다. 그러한 그룹에서, 면역화 후 63일째의 시점(d77)에서 확인된 반응의 높은 가변성은 다양한 F4 성분, 특히 도 12a 및 12b에 각각 도시된 p24 및 RT에 대해 더 높은 타이터(titer)를 나타내는 유일한 동물(3개 중 하나)로부터 얻어진다. 항-F4 항체 반응은 주로 p24 및 RT를 표적화하는 그리고 훨씬 덜한 정도로 Nef 및 p17을 표적화하는 항체로 구성된다.
결론:
림프증식 및 항체 반응은 면역원성 폴리펩티드, 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 이종 폴리누클레오타이드를 함유하는 아데노바이러스성 벡터 및 애주번트를 함유하는 조성물의 2회 주사 후에 래빗에서 유도될 수 있었다. 또한, 본 발명자들은 상기한 조성물의 3회 주사 후에 림프증식 반응이 재현될 수 있음을 증명한다. 최종적으로, 최선의 항체 반응(강도 및 지속성의 측면에서)이 아데노바이러스/단백질/애주번트 조합물을 사용한 경우에 확인된다.
실시예 4
CB6F1 마우스에서 조합물로 투여한 경우의 F4(최적화된 코돈)/애주번트 B 및 C7-GRN의 면역원성
실험 설계
CB6F1 마우스를 하기 나열된 다양한 조합물로 2회(0일 및 21일) 면역화하였다. F4co/애주번트 B가 50㎕ 애주번트 B 중의 9㎍ F4co/동물(인간 용량의 1/10)에 서 사용되었고, C7-GRN 바이러스는 108개 바이러스 입자/동물에서 사용되었다. 실시예 4에서의 F4co는 WO 2006/013106의 실시예 1, 코돈 최적화된 방법에 기재된 대로 제조된 F4이다.
조합물
C7-GRN
C7-GRN/애주번트 B
C7-GRN/F4co
C7-GRN/F4co/애주번트 B
F4co
F4co/애주번트 B
애주번트 B
C7 공(empty)
C7 공/애주번트 B
C7 공/F4co
C7 공/F4co/애주번트 B
면역화 스케줄 및 면역 반응 분석
면역화를 0일 및 21일 째에 실시하였다. 세포내 사이토카인 염색(ICS)을, 21일, 28일(2회 면역화 후 7일), 42일(2회 면역화 후 21일), 및 77일(2회 면역화 후 56일) 째에 실시하였다.
결과
HIV-특이적인 CD4 T 세포 반응
결과가 하기 도면에 도시되어 있다:
도 13. HIV-1 특이적인 CD4 T 세포의 정량화. IFN-γ 및/또는 IL-2를 분비하는 CD3 CD4 T 세포의 %가, 4개의 시점에서 면역화의 각 프로토콜에 대해 표시되어 있다. 말초 혈액 림프구(PBL)를 F4 서열을 커버하는 펩티드 풀로 생체외에서 (브레펠딘을 첨가하기 2시간 전, 이후 밤새) 자극하고, 사이토카인 생산을 ICS로 측정하였다. 각각의 값은 3마리 마우스의 5개 풀의 기하평균이다.
도 14. 2회 면역화 후 7일 째의 F4-특이적인 CD4 T 세포의 빈도 분포. 2회의 면역화 후 7일 째에 F4-특이적인 순환하는 CD4 T 세포의 빈도가, 각각의 프로토콜에 대해 표시되어 있다. 각각의 점은 3마리 마우스의 한 개 풀에 대해 얻어진 값을 나타낸다.
도 15. 2회의 면역화 후 7일 째에 F4-특이적인 CD4 T 세포의 사이토카인 생산. IL-2 및/또는 IFN-γ을 분비하는 F4-특이적인 CD4 T 세포의 %가, 3마리 마우스의 5개 풀에 대해 표시되어 있다. F4co/애주번트 B(A), F4co/애주번트 B/C7 공(B) 및 F4co/애주번트 B/C7-GRN(C)로 면역화시킨 결과가 표시되어 있다.
F4-특이적인 순환하는 CD4 T 세포의 빈도는 F4co/애주번트 B 조합물로 2회 면역화시킨 후 21일 째에 2.82%에 도달하고, 면역화 후 56일 째에는 0.91%로 감소한다(도 13). C7-GRN 바이러스 만을 함유하는 2회 용량으로부터, 면역화 후 21일 째에 0.52%의 F4-특이적인 순환하는 CD4 T 세포가 얻어지며, 애주번트 B의 존재는 이 반응을 변경시키지 않는다.
F4co/애주번트 B 혼합물의 첨가에서 공 벡터 C7 또는 재조합 C7-GRN 바이러스의 존재는 F4-특이적인 CD4 T 세포 반응의 빈도를 증가시키지도 이를 방해하지도 않는다(면역화 후 21일째에 각각 3.58% 및 2.82%). 통계학적 분석이 실시되지 않았다 하더라도, 집단 분포로부터 F4-특이적인 CD4 T 세포 반응의 세기가 3개의 프로토콜 F4co/애주번트 B, F4co/애주번트B/C7 공 및 F4co/애주번트 B/C7-GRN 사이에서 상이함이 제안된다(도 14).
예상대로, 애주번트 B없이 F4co의 투여는 현저한 F4-특이적인 CD4 T 세포를 유도하지 않는다.
사이토카인 생성 프로파일로부터, F4co/애주번트 B로 면역화한 후에, F4-특이적인 CD4 T 세포는 IFN-γ 및 IK-2 둘 모두를 분비함이 나타난다. 면역화된 프로토콜에서 C7 공 또는 C7-GRN의 첨가는 이러한 프로파일을 변경시키지 않는다.
결과적으로, 이러한 데이터는, 최고의 F4-특이적인 CD4 T 세포 반응이 F4co/애주번트 B 조합물로 면역화한 후에 얻어지며, C7-GRN 바이러스의 존재는 이 반응을 개선시키거나 변경시키지 않음을 시사한다.
항원-특이적인 CD8 T 세포 반응
결과가 하기 도면에 나타나 있다.
도 16. HIV-1-특이적인 CD8 T 세포의 정량화. IFN-γ 및/또는 IL-2를 분비하는 CD3 CD8 T 세포의 %가 4개의 시점에서 면역화의 각 프로토콜에 대해 표시되어 있다. 말초 혈액 림프구(PBL)를, F4 서열을 커버하는 펩티드 풀로 생체외에서 (브 레펠딘을 첨가하기 2시간 전, 이후 밤새) 자극하고, 사이토카인 생산을 ICS로 측정하였다. 각각의 값은 3마리 마우스의 5개 풀의 기하평균이다.
도 17. 2회의 면역화 후 7일 째에 F4-특이적인 CD8 T 세포의 사이토카인 생산. IL-2 및/또는 IFN-γ을 분비하는 F4-특이적인 CD8 T 세포의 %가, 3마리 마우스의 5 풀에 대해 표시되어 있다. C7-GRN(A), C7-GRN/애주번트 B(B) 및 C7-GRN+F4co/애주번트 B(C)로 면역화시킨 결과가 표시되어 있다.
1회의 주사 후에, 재조합 벡터 C7-GRN은 높은 빈도의 F4-특이적인 순환하는 CD8 T 세포를 유도한다(면역화 후 21일 째에 전체 CD8 T 세포의 9.70%)(도 4). 2회 주사는 F4-특이적인 CD8 T 세포 반응을 증가시키지 않는다. F4co/애주번트 B 조합물은 낮거나 검출불가능한 정도의 F4-특이적인 CD8 T 세포를 유도하며, 이 조합물을 C7-GRN에 첨가하여도 F4-특이적인 CD8 T 세포 반응은 개선되거나 손상되지 않는다.
F4-특이적인 CD8 T 세포 반응은 애주번트 B가 C7-GRN에 첨가되는 경우 지연되나, 2회 면역화 후 21일 째에 C7-GRN 단독 또는 C7-GRN/F4co/애주번트 B 조합물로 면역화시킨 경우의 것과 동일 수준에 도달한다.
F4-특이적인 CD8 T 세포는 주로 C7-GRN 벡터가 단독으로 또는 F4co/애주번트 B와 함께 주사되는 지 간에 IFN-γ을 분비한다(도 17).
흥미있게도, F4-특이적인 CD8 T 세포 반응은 감소없이 최종 면역화 후 56일 까지 지속되는데, 이는 C7 벡터가 높고 지속적으로 CD8 T 세포를 유도함을 제안한다.
결론
F4co/애주번트 B 백신은 다기능 HIV-특이적인 CD4 T 세포를 높은 빈도로 유도하나, 어떠한 HIV-특이적인 CD8 T 세포도 CB6F1 마우스에서는 유도되지 않는다. 동일한 동물 모델에서, Gag, RT 및 Nef를 발현하는 재조합 아데노바이러스 C7(Ad C7-GRN)은 높은 항원-특이적인 CD8 T 세포 반응을 유도하며, 낮거나 검출불가능한 정도의 항원-특이적인 CD4 T 세포를 유도한다. F4/애주번트 B 및 Ad C7-GRN의 조합물은 항원-특이적인 CD4 및 CD8 T 세포 모두를 동시에 유도한다. 3개 성분, F4co, 애주번트 B 및 C7-GRN의 조합물은 항원 특이적인 CD4 및 CD8 T 세포 모두를 동시에 최고 수준에서 유도한다. F4co/애주번트 B와 Ad C7-GRN을 조합시키면, 세포 면역 반응의 두가지 무기(arm)의 세기에 관한 부가적인 효과를 갖는다. 항원-특이적인 CD8 7 세포 반응의 기능성에 대한 항원-특이적인 CD4 T 세포의 효과는 이 모델에서 결정되어야 하는 것으로 남아있다.
실시예 5
단독으로 투여된 경우 플라스모디움 팔시파룸(C7-CS2)으로부터 CSP 단백질의 CS2 작제물을 발현하는 침프아데노바이러스 C7의 면역원성
실험 설계:
CB6F1 마우스를 용량 범위(1010, 109 & 108개의 바이러스 입자)의, CSP 말라리아 항원을 발현하는 C7 침프아데노바이러스로 근육내 1회 면역화하고, CSP-특이적인 (C-말단 및 N-말단) CD4 및 CD8 T 세포 반응을 ICS(세포내 사이토카인 염색 법)에 의해 주사 후 21, 28 및 35일 째에 측정하였다.
CSP-특이적인 CD4 T 세포 반응
결과가 하기 도면에 나타나 있다:
도 18. CSP-특이적인 CD4 T 세포의 정량화. IFN-γ 및/또는 IL-2를 분비하는 CD4 T 세포의 %가 3개의 시점에서 면역화의 각 프로토콜에 대해 표시되어 있다. 말초 혈액 림프구(PBL)를 CSP N-말단 또는 CSP C-말단 서열을 커버하는 펩티드 풀로 생체외에서 (브레펠딘을 첨가하기 2시간 전, 이후 밤새) 자극하고, 사이토카인 생산을 ICS로 측정하였다. C-말단 및 N-말단 펩티드 풀에 대한 반응을 합계하였고, 각각의 값은 4마리의 5개 풀의 평균이다.
도 19. CSP-특이적인 CD8 T 세포의 정량화. IFN-γ 및/또는 IL-2를 분비하는 CD8 T 세포의 %가 3개의 시점에서 면역화의 각 프로토콜에 대해 표시되어 있다. 말초 혈액 림프구(PBL)를 CSP N-말단 또는 CSP C-말단 서열을 커버하는 펩티드 풀로 생체외에서 (브레펠딘을 첨가하기 2시간 전, 이후 밤새) 자극하고, 사이토카인 생산을 ICS로 측정하였다. C-말단 및 N-말단 펩티드 풀에 대한 반응을 합계하였고, 각각의 값은 4마리의 5개 풀의 평균이다.
이들 결과는, C7-CS2의 1010 및 109 용량이 유사한 수준의 CSP-특이적인 CD4 T 세포 반응(최고 0.5%) 및 유사한 수준의 CSP-특이적인 CD8 T 세포 반응(최고 8%)을 유도함을 나타낸다. 1010개의 C7-CS2의 용량이 후속하는 실험에서 선택되었는데, 이 실험에서는 RTS,S와 함께 C7-CS2의 면역원성을 시험하였다(하기 참조).
실시예 6
CB6F1 마우스에서 조합물로서 투여한 경우 C7-CS2 및 RTS,S의 면역원성
실험 설계:
CB6F1 마우스를, 50㎕ 애주번트 B 중의 말라리아 백신 후보물질 RTS,S(5㎍)의 조합물(이것을 하기 도면에서는 P-P-P라 칭함) 또는 50㎕ 애주번트 B 중의 RTS,S(5㎍)과 C7-CS2(1010개 바이러스 입자)의 조합물(이것을 하기 도면에서는 C-C-C라 칭함)로 근육내에서 3회(0일, 14일 및 28일) 면역화하였다. CSP-특이적인(C-말단 및 N-말단) CD4 및 CD8 T 세포 반응을 하기 시점에서 측정하였다:
- 2회 면역화 후 7일
- 3회 면역화 후 7일, 21일, 35일 및 49일
CSP-특이적인 T 세포 반응을 ICS(세포내 사이토카인 염색법)로 측정하였다.
면역화시킨 동물로부터 취한 혈청에서의 CSP-특이적인 항체 반응을 또한 3회 면역화 후 14일 및 42일 째에 ELISA에 의해 측정하였다.
CSP-특이적인 CD4 T 세포 반응
결과가 하기 도면에 나타나 있다:
도 20. CSP(N-말단)-특이적인 CD4 T 세포의 정량화. IFN-γ 및/또는 IL-2를 분비하는 CD4 T 세포의 %가, 5개의 시점에서 면역화의 각 프로토콜에 대해 표시되어 있다. 말초 혈액 림프구(PBL)를 CSP N-말단 서열을 커버하는 펩티드 풀로 생체외에서 (브레펠딘을 첨가하기 2시간 전, 이후 밤새) 자극하고, 사이토카인 생 산(IFNg 및/또는 IL-2)을 ICS로 측정하였다. 각각의 값은 7마리의 4개 풀의 평균이다.
도 21. CSP(C-말단)-특이적인 CD4 T 세포의 정량화. IFN-γ 및/또는 IL-2를 분비하는 CD4 T 세포의 %가, 5개의 시점에서 면역화의 각 프로토콜에 대해 표시되어 있다. 말초 혈액 림프구(PBL)를 CSP C-말단 서열을 커버하는 펩티드 풀로 생체외에서 (브레펠딘을 첨가하기 2시간 전, 이후 밤새) 자극하고, 사이토카인 생산(IFNg 및/또는 IL-2)을 ICS로 측정하였다. 각각의 값은 7마리의 4개 풀의 평균이다.
이들 결과는, 조합물[RTS,S + C7-CS2 1010 + 애주번트 B]의 3회 주사로 면역화시킨 마우스가 RTS,S + 애주번트 B의 3회 주사로 면역화시킨 마우스에서보다 높은 항원 특이적인 CD4 T 세포 반응(둘 모두 CSP의 C-말단 및 N-말단 부분에 대한 것임)을 나타냄을 시사한다.
CSP-특이적인 CD8 T 세포 반응
결과가 하기 도면에 나타나 있다:
도 22. CSP(N-말단)-특이적인 CD8 T 세포의 정량화. IFN-γ 및/또는 IL-2를 분비하는 CD8 T 세포의 %가, 5개의 시점에서 면역화의 각 프로토콜에 대해 표시되어 있다. 말초 혈액 림프구(PBL)를 CSP N-말단 서열을 커버하는 펩티드 풀로 생체외에서 (브레펠딘을 첨가하기 2시간 전, 이후 밤새) 자극하고, 사이토카인 생산(IFNg 및/또는 IL-2)을 ICS로 측정하였다. 각각의 값은 7마리의 4개 풀의 평균 이다.
도 23. CSP(C-말단)-특이적인 CD8 T 세포의 정량화. IFN-γ 및/또는 IL-2를 분비하는 CD4 8 세포의 %가 5개의 시점에서 면역화의 각 프로토콜에 대해 표시되어 있다. 말초 혈액 림프구(PBL)를 CSP C-말단 서열을 커버하는 펩티드 풀로 생체외에서 (브레펠딘을 첨가하기 2시간 전, 이후 밤새) 자극하고, 사이토카인 생산(IFNg 및/또는 IL-2)을 ICS로 측정하였다. 각각의 값은 7마리의 4개 풀의 평균이다.
이들 결과는, 조합물[RTS,S + C7-CS2 1010 + 애주번트 B]의 3회 주사로 면역화시킨 마우스가 RTS,S + 애주번트 B의 3회 주사로 면역화시킨 마우스에서보다 높은 항원 특이적인 CD8 T 세포 반응(둘 모두 CSP의 C-말단 및 N-말단 부분에 대한 것임)을 나타냄을 시사한다.
CSP-특이적인 항체 반응
결과가 하기 도면에 나타나 있다:
도 24. CSP-특이적인 항체 타이터의 정량화. 마우스로부터의 혈청을 3회 면역화 후 14일 및 42일 째에 수거하였다. 항-CSP 항체 타이터를 ELISA에 의해 이들 개체 혈청의 각각에서 측정하였다. 데이터는 기하평균 항체 타이터 ±95% 신뢰 구간을 나타내고 있다.
이 결과는 조합물[RTS,S + C7-CS2 1010 + 애주번트 B]의 3회 주사로 면역화시킨 마우스가 RTS,S + 애주번트 B의 3회 주사로 면역화된 마우스와 유사한 CSP-특이적인 항체 타이터를 나타냄을 보여준다.
결론
RTS,S/애주번트 B 백신은 높은 빈도의, CSP C-말단-특이적인 CD4 T 세포는 유도하지만 CSP-N-말단 특이적인 CD4 T 세포는 유도하지는 않는다. 또한, RTS,S/애주번트 B 백신은 낮거나 검출불가능한 정도의 CSP C & N-말단 특이적인 CD8 T 세포를 유도한다. 동일한 동물 모델에서, 재조합 아데노바이러스 C7 발현 CSP는 높은 CSP(C-말단 및 N-말단)-특이적인 CD8 T 세포 반응을 유도하고 더 낮은 CSP(C-말단 및 N-말단)-특이적인 CD4 T 세포 반응을 유도한다. RTS,S/애주번트 B와 Ad C7-CS2의 조합물은 동시에 높은 수준의 CSP(C-말단 및 N-말단)-특이적인 CD4 및 CD8 T 세포를 유도한다. RTS,S/애주번트 B와 Ad C7-CS2를 조합시키면 T 세포 반응의 두 암의 세기에 대한 부가적인 효과가 얻어진다. 종국적으로, RTS,S/애주번트 B와 Ad C7-CS2의 조합물은 RTS,S/애주번트 B에 의해 유도된 것에 필적하는 정도의 높은 수준의 CSP-특이적인 항체 반응을 유도한다.
서열목록
서열목록 1:
Figure 112009060894482-pct00004
Figure 112009060894482-pct00005
서열목록 2:
Figure 112009060894482-pct00006
서열목록 3:
Figure 112009060894482-pct00007
Figure 112009060894482-pct00008
Figure 112009060894482-pct00009
서열목록 4:
Figure 112009060894482-pct00010
서열목록 5:
Figure 112009060894482-pct00011
Figure 112009060894482-pct00012
서열목록 6:
Figure 112009060894482-pct00013
서열목록 7:
Figure 112009060894482-pct00014
Figure 112009060894482-pct00015
서열목록 8:
Figure 112009060894482-pct00016
서열목록 9:
Figure 112009060894482-pct00017
Figure 112009060894482-pct00018
서열목록 10:
Figure 112009060894482-pct00019
서열목록 11:
Figure 112009060894482-pct00020
서열목록 12:
Figure 112009060894482-pct00021
서열목록 13:
Figure 112009060894482-pct00022
서열목록 14:
Figure 112009060894482-pct00023
서열목록 15:
Figure 112009060894482-pct00024
Figure 112009060894482-pct00025
서열목록 16:
Figure 112009060894482-pct00026
Figure 112009060894482-pct00027
Figure 112009060894482-pct00028
Figure 112009060894482-pct00029
Figure 112009060894482-pct00030
Figure 112009060894482-pct00031
Figure 112009060894482-pct00032
Figure 112009060894482-pct00033
Figure 112009060894482-pct00034
Figure 112009060894482-pct00035
Figure 112009060894482-pct00036
Figure 112009060894482-pct00037
Figure 112009060894482-pct00038
Figure 112009060894482-pct00039
Figure 112009060894482-pct00040
Figure 112009060894482-pct00041
Figure 112009060894482-pct00042
Figure 112009060894482-pct00043
Figure 112009060894482-pct00044
Figure 112009060894482-pct00045
Figure 112009060894482-pct00046
Figure 112009060894482-pct00047
Figure 112009060894482-pct00048
Figure 112009060894482-pct00049
Figure 112009060894482-pct00050
Figure 112009060894482-pct00051
Figure 112009060894482-pct00052
Figure 112009060894482-pct00053
Figure 112009060894482-pct00054
Figure 112009060894482-pct00055
Figure 112009060894482-pct00056
Figure 112009060894482-pct00057
Figure 112009060894482-pct00058
Figure 112009060894482-pct00059
Figure 112009060894482-pct00060
Figure 112009060894482-pct00061
Figure 112009060894482-pct00062
Figure 112009060894482-pct00063
특허 및 특허 출원을 포함하는, 본원에서 인용된 모든 참고문헌들은 가능한 가장 완전한 정도로 참고문헌으로써 본원에 통합된다.
명세서 및 하기 청구의 범위 전반에 걸쳐, 문맥이 달리 요구하지 않는 한, 어휘 '포함하다', 및 '포함하다' 및 '포함하는'과 같은 변용어는 언급된 정수, 단계, 정수들의 그룹 또는 단계들의 그룹의 포함을 의미하며, 임의의 다른 정수, 단계, 정수들의 그룹 또는 단계들의 그룹의 배제를 의미하는 것이 아님이 이해될 것 이다.
상세한 설명 및 청구의 범위가 일부분을 이루는 본원은 임의의 후속 출원의 관점에서 우선권을 위한 기초로서 사용될 수 있다. 그러한 후속 출원의 청구의 범위는 본 명세서에 기재된 임의의 특징 또는 특징들의 조합과 관련될 수 있다. 이들은 생성물, 조성물, 방법, 또는 용도 청구항의 형태를 취할 수 있으며, 예시의 일환으로 또한, 이에 국한되는 것은 아니지만, 하기 청구의 범위를 포함할 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> GlaxoSmithKline Biologicals S.A. VOSS, Gerald Hermann <120> Novel method and composition <130> VB62209 <160> 16 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 3204 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HIV <400> 1 atgggtgccc gagcttcggt actgtctggt ggagagctgg acagatggga gaaaattagg 60 ctgcgcccgg gaggcaaaaa gaaatacaag ctcaagcata tcgtgtgggc ctcgagggag 120 cttgaacggt ttgccgtgaa cccaggcctg ctggaaacat ctgagggatg tcgccagatc 180 ctggggcaat tgcagccatc cctccagacc gggagtgaag agctgaggtc cttgtataac 240 acagtggcta ccctctactg cgtacaccag aggatcgaga ttaaggatac caaggaggcc 300 ttggacaaaa ttgaggagga gcaaaacaag agcaagaaga aggcccagca ggcagctgct 360 gacactgggc atagcaacca ggtatcacag aactatccta ttgtccaaaa cattcagggc 420 cagatggttc atcaggccat cagcccccgg acgctcaatg cctgggtgaa ggttgtcgaa 480 gagaaggcct tttctcctga ggttatcccc atgttctccg ctttgagtga gggggccact 540 cctcaggacc tcaatacaat gcttaatacc gtgggcggcc atcaggccgc catgcaaatg 600 ttgaaggaga ctatcaacga ggaggcagcc gagtgggaca gagtgcatcc cgtccacgct 660 ggcccaatcg cgcccggaca gatgcgggag cctcgcggct ctgacattgc cggcaccacc 720 tctacactgc aagagcaaat cggatggatg accaacaatc ctcccatccc agttggagaa 780 atctataaac ggtggatcat cctgggcctg aacaagatcg tgcgcatgta ctctccgaca 840 tccatccttg acattagaca gggacccaaa gagcctttta gggattacgt cgaccggttt 900 tataagaccc tgcgagcaga gcaggcctct caggaggtca aaaactggat gacggagaca 960 ctcctggtac agaacgctaa ccccgactgc aaaacaatct tgaaggcact aggcccggct 1020 gccaccctgg aagagatgat gaccgcctgt cagggagtag gcggacccgg acacaaagcc 1080 agagtgttga tgggccccat cagtcccatc gagaccgtgc cggtgaagct gaaacccggg 1140 atggacggcc ccaaggtcaa gcagtggcca ctcaccgagg agaagatcaa ggccctggtg 1200 gagatctgca ccgagatgga gaaagagggc aagatcagca agatcgggcc ggagaaccca 1260 tacaacaccc ccgtgtttgc catcaagaag aaggacagca ccaagtggcg caagctggtg 1320 gatttccggg agctgaataa gcggacccag gatttctggg aggtccagct gggcatcccc 1380 catccggccg gcctgaagaa gaagaagagc gtgaccgtgc tggacgtggg cgacgcttac 1440 ttcagcgtcc ctctggacga ggactttaga aagtacaccg cctttaccat cccatctatc 1500 aacaacgaga cccctggcat cagatatcag tacaacgtcc tcccccaggg ctggaagggc 1560 tctcccgcca ttttccagag ctccatgacc aagatcctgg agccgtttcg gaagcagaac 1620 cccgatatcg tcatctacca gtacatggac gacctgtacg tgggctctga cctggaaatc 1680 gggcagcatc gcacgaagat tgaggagctg aggcagcatc tgctgagatg gggcctgacc 1740 actccggaca agaagcatca gaaggagccg ccattcctga agatgggcta cgagctccat 1800 cccgacaagt ggaccgtgca gcctatcgtc ctccccgaga aggacagctg gaccgtgaac 1860 gacatccaga agctggtggg caagctcaac tgggctagcc agatctatcc cgggatcaag 1920 gtgcgccagc tctgcaagct gctgcgcggc accaaggccc tgaccgaggt gattcccctc 1980 acggaggaag ccgagctcga gctggctgag aaccgggaga tcctgaagga gcccgtgcac 2040 ggcgtgtact atgacccctc caaggacctg atcgccgaaa tccagaagca gggccagggg 2100 cagtggacat accagattta ccaggagcct ttcaagaacc tcaagaccgg caagtacgcc 2160 cgcatgaggg gcgcccacac caacgatgtc aagcagctga ccgaggccgt ccagaagatc 2220 acgaccgagt ccatcgtgat ctgggggaag acacccaagt tcaagctgcc tatccagaag 2280 gagacctggg agacgtggtg gaccgaatat tggcaggcca cctggattcc cgagtgggag 2340 ttcgtgaata cacctcctct ggtgaagctg tggtaccagc tcgagaagga gcccatcgtg 2400 ggcgcggaga cattctacgt ggacggcgcg gccaaccgcg aaacaaagct cgggaaggcc 2460 gggtacgtca ccaaccgggg ccgccagaag gtcgtcaccc tgaccgacac caccaaccag 2520 aagacggagc tgcaggccat ctatctcgct ctccaggact ccggcctgga ggtgaacatc 2580 gtgacggaca gccagtacgc gctgggcatt attcaggccc agccggacca gtccgagagc 2640 gaactggtga accagattat cgagcagctg atcaagaaag agaaggtcta cctcgcctgg 2700 gtcccggccc ataagggcat tggcggcaac gagcaggtcg acaagctggt gagtgcgggg 2760 attagaaagg tgctgatggt gggttttcca gtcacacctc aggtaccttt aagaccaatg 2820 acttacaagg cagctgtaga tcttagccac tttttaaaag aaaagggggg actggaaggg 2880 ctaattcact cccaaagaag acaagatatc cttgatctgt ggatctacca cacacaaggc 2940 tacttccctg attggcagaa ctacacacca gggccagggg tcagatatcc actgaccttt 3000 ggatggtgct acaagctagt accagttgag ccagataagg tagaagaggc caataaagga 3060 gagaacacca gcttgttaca ccctgtgagc ctgcatggga tggatgaccc ggagagagaa 3120 gtgttagagt ggaggtttga cagccgccta gcatttcatc acgtggcccg agagctgcat 3180 ccggagtact tcaagaactg ctga 3204 <210> 2 <211> 1067 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HIV <400> 2 Met Gly Ala Arg Ala Ser Val Leu Ser Gly Gly Glu Leu Asp Arg Trp 1 5 10 15 Glu Lys Ile Arg Leu Arg Pro Gly Gly Lys Lys Lys Tyr Lys Leu Lys 20 25 30 His Ile Val Trp Ala Ser Arg Glu Leu Glu Arg Phe Ala Val Asn Pro 35 40 45 Gly Leu Leu Glu Thr Ser Glu Gly Cys Arg Gln Ile Leu Gly Gln Leu 50 55 60 Gln Pro Ser Leu Gln Thr Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn 65 70 75 80 Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Gln Arg Ile Glu Ile Lys Asp 85 90 95 Thr Lys Glu Ala Leu Asp Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys Ser Lys 100 105 110 Lys Lys Ala Gln Gln Ala Ala Ala Asp Thr Gly His Ser Asn Gln Val 115 120 125 Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Val Gln Asn Ile Gln Gly Gln Met Val His 130 135 140 Gln Ala Ile Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Val Glu 145 150 155 160 Glu Lys Ala Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Glu Gly Ala Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly 180 185 190 Gly His Gln Ala Ala Met Gln Met Leu Lys Glu Thr Ile Asn Glu Glu 195 200 205 Ala Ala Glu Trp Asp Arg Val His Pro Val His Ala Gly Pro Ile Ala 210 215 220 Pro Gly Gln Met Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr 225 230 235 240 Ser Thr Leu Gln Glu Gln Ile Gly Trp Met Thr Asn Asn Pro Pro Ile 245 250 255 Pro Val Gly Glu Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys 260 265 270 Ile Val Arg Met Tyr Ser Pro Thr Ser Ile Leu Asp Ile Arg Gln Gly 275 280 285 Pro Lys Glu Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu 290 295 300 Arg Ala Glu Gln Ala Ser Gln Glu Val Lys Asn Trp Met Thr Glu Thr 305 310 315 320 Leu Leu Val Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Lys Ala 325 330 335 Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly 340 345 350 Val Gly Gly Pro Gly His Lys Ala Arg Val Leu Met Gly Pro Ile Ser 355 360 365 Pro Ile Glu Thr Val Pro Val Lys Leu Lys Pro Gly Met Asp Gly Pro 370 375 380 Lys Val Lys Gln Trp Pro Leu Thr Glu Glu Lys Ile Lys Ala Leu Val 385 390 395 400 Glu Ile Cys Thr Glu Met Glu Lys Glu Gly Lys Ile Ser Lys Ile Gly 405 410 415 Pro Glu Asn Pro Tyr Asn Thr Pro Val Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asp 420 425 430 Ser Thr Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp Phe Arg Glu Leu Asn Lys Arg 435 440 445 Thr Gln Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly 450 455 460 Leu Lys Lys Lys Lys Ser Val Thr Val Leu Asp Val Gly Asp Ala Tyr 465 470 475 480 Phe Ser Val Pro Leu Asp Glu Asp Phe Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr 485 490 495 Ile Pro Ser Ile Asn Asn Glu Thr Pro Gly Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn 500 505 510 Val Leu Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Ser Ser 515 520 525 Met Thr Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val 530 535 540 Ile Tyr Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile 545 550 555 560 Gly Gln His Arg Thr Lys Ile Glu Glu Leu Arg Gln His Leu Leu Arg 565 570 575 Trp Gly Leu Thr Thr Pro Asp Lys Lys His Gln Lys Glu Pro Pro Phe 580 585 590 Leu Lys Met Gly Tyr Glu Leu His Pro Asp Lys Trp Thr Val Gln Pro 595 600 605 Ile Val Leu Pro Glu Lys Asp Ser Trp Thr Val Asn Asp Ile Gln Lys 610 615 620 Leu Val Gly Lys Leu Asn Trp Ala Ser Gln Ile Tyr Pro Gly Ile Lys 625 630 635 640 Val Arg Gln Leu Cys Lys Leu Leu Arg Gly Thr Lys Ala Leu Thr Glu 645 650 655 Val Ile Pro Leu Thr Glu Glu Ala Glu Leu Glu Leu Ala Glu Asn Arg 660 665 670 Glu Ile Leu Lys Glu Pro Val His Gly Val Tyr Tyr Asp Pro Ser Lys 675 680 685 Asp Leu Ile Ala Glu Ile Gln Lys Gln Gly Gln Gly Gln Trp Thr Tyr 690 695 700 Gln Ile Tyr Gln Glu Pro Phe Lys Asn Leu Lys Thr Gly Lys Tyr Ala 705 710 715 720 Arg Met Arg Gly Ala His Thr Asn Asp Val Lys Gln Leu Thr Glu Ala 725 730 735 Val Gln Lys Ile Thr Thr Glu Ser Ile Val Ile Trp Gly Lys Thr Pro 740 745 750 Lys Phe Lys Leu Pro Ile Gln Lys Glu Thr Trp Glu Thr Trp Trp Thr 755 760 765 Glu Tyr Trp Gln Ala Thr Trp Ile Pro Glu Trp Glu Phe Val Asn Thr 770 775 780 Pro Pro Leu Val Lys Leu Trp Tyr Gln Leu Glu Lys Glu Pro Ile Val 785 790 795 800 Gly Ala Glu Thr Phe Tyr Val Asp Gly Ala Ala Asn Arg Glu Thr Lys 805 810 815 Leu Gly Lys Ala Gly Tyr Val Thr Asn Arg Gly Arg Gln Lys Val Val 820 825 830 Thr Leu Thr Asp Thr Thr Asn Gln Lys Thr Glu Leu Gln Ala Ile Tyr 835 840 845 Leu Ala Leu Gln Asp Ser Gly Leu Glu Val Asn Ile Val Thr Asp Ser 850 855 860 Gln Tyr Ala Leu Gly Ile Ile Gln Ala Gln Pro Asp Gln Ser Glu Ser 865 870 875 880 Glu Leu Val Asn Gln Ile Ile Glu Gln Leu Ile Lys Lys Glu Lys Val 885 890 895 Tyr Leu Ala Trp Val Pro Ala His Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu Gln 900 905 910 Val Asp Lys Leu Val Ser Ala Gly Ile Arg Lys Val Leu Met Val Gly 915 920 925 Phe Pro Val Thr Pro Gln Val Pro Leu Arg Pro Met Thr Tyr Lys Ala 930 935 940 Ala Val Asp Leu Ser His Phe Leu Lys Glu Lys Gly Gly Leu Glu Gly 945 950 955 960 Leu Ile His Ser Gln Arg Arg Gln Asp Ile Leu Asp Leu Trp Ile Tyr 965 970 975 His Thr Gln Gly Tyr Phe Pro Asp Trp Gln Asn Tyr Thr Pro Gly Pro 980 985 990 Gly Val Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Trp Cys Tyr Lys Leu Val Pro 995 1000 1005 Val Glu Pro Asp Lys Val Glu Glu Ala Asn Lys Gly Glu Asn Thr Ser 1010 1015 1020 Leu Leu His Pro Val Ser Leu His Gly Met Asp Asp Pro Glu Arg Glu 1025 1030 1035 1040 Val Leu Glu Trp Arg Phe Asp Ser Arg Leu Ala Phe His His Val Ala 1045 1050 1055 Arg Glu Leu His Pro Glu Tyr Phe Lys Asn Cys 1060 1065 <210> 3 <211> 4665 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HIV <400> 3 atggccgcca gagccagcat cctgagcggg ggcaagctgg acgcctggga gaagatcaga 60 ctgaggcctg gcggcaagaa gaagtaccgg ctgaagcacc tggtgtgggc cagcagagag 120 ctggatcgct tcgccctgaa tcctagcctg ctggagacca ccgagggctg ccagcagatc 180 atgaaccagc tgcagcccgc cgtgaaaacc ggcaccgagg agatcaagag cctgttcaac 240 accgtggcca ccctgtactg cgtgcaccag cggatcgacg tgaaggatac caaggaggcc 300 ctggacaaga tcgaggagat ccagaacaag agcaagcaga aaacccagca ggccgctgcc 360 gacaccggcg acagcagcaa agtgagccag aactacccca tcatccagaa tgcccagggc 420 cagatgatcc accagaacct gagccccaga accctgaatg cctgggtgaa agtgatcgag 480 gaaaaggcct tcagccccga agtgatccct atgttcagcg ccctgagcga gggcgccacc 540 ccccaggacc tgaacgtgat gctgaacatt gtgggcggac accaggccgc catgcagatg 600 ctgaaggaca ccatcaatga ggaggccgcc gagtgggaca gactgcaccc cgtgcaggcc 660 ggacccatcc cccctggcca gatcagagag cccagaggca gcgacatcgc cggcaccacc 720 tccacccctc aagaacagct gcagtggatg accggcaacc ctcccatccc tgtgggcaac 780 atctacaagc ggtggatcat cctgggcctg aacaagattg tgcggatgta cagccccgtg 840 tccatcctgg atatcaagca gggccccaag gagcccttca gagactacgt ggaccggttc 900 ttcaaggccc tgagagccga gcaggccacc caggacgtga agggctggat gaccgagacc 960 ctgctggtgc agaacgccaa ccccgactgc aagagcatcc tgaaggccct gggcagcggc 1020 gccacactgg aggagatgat gaccgcctgc cagggagtgg gcggacccgg ccacaaggcc 1080 agagtgctgg ccgaggccat gagccaggcc cagcagacca acatcatgat gcagcggggc 1140 aacttcagag gccagaagcg gatcaagtgc ttcaactgcg gcaaggaggg ccacctggcc 1200 agaaactgca gagcccccag gaagaagggc tgctggaagt gtggcaagga agggcaccag 1260 atgaaggact gcaccgagag gcaggccaat ttcctgggca agatttggcc tagcagcaag 1320 ggcagacccg gcaatttccc ccagagcaga cccgagccca ccgcccctcc cgccgagctg 1380 ttcggcatgg gcgagggcat cgccagcctg cccaagcagg agcagaagga cagagagcag 1440 gtgccccccc tggtgtccct gaagtccctg ttcggcaacg atcctctgag ccagggatcc 1500 cccatcagcc ccatcgagac cgtgcccgtg accctgaagc ccggcatgga tggccccaaa 1560 gtgaaacagt ggcccctgac cgaggagaag attaaggccc tgaccgaaat ctgtaccgag 1620 atggagaagg agggcaagat cagcaagatc ggccccgaga acccctacaa cacccccatc 1680 ttcgccatca agaagaagga cagcaccaag tggcggaaac tggtggactt ccgggagctg 1740 aacaagagga cccaggactt ctgggaagtg cagctgggca tcccccaccc tgccggcctg 1800 aagaagaaga agtccgtgac agtgctggat gtgggcgacg cctacttcag cgtgcccctg 1860 gacgagaact tcaggaagta caccgccttc accatcccca gcaccaacaa cgagaccccc 1920 ggagtgagat accagtacaa cgtgctgcct cagggctgga agggcagccc cgccatcttc 1980 cagagcagca tgaccaagat cctggagccc ttccggagca agaaccccga gatcatcatc 2040 taccagtaca tggccgccct gtatgtgggc agcgatctgg agatcggcca gcacaggacc 2100 aagatcgaag agctgagggc ccacctgctg agctggggct tcaccacccc cgataagaag 2160 caccagaagg agcccccttt cctgtggatg ggctacgagc tgcaccccga taagtggacc 2220 gtgcagccca tcatgctgcc cgataaggag agctggaccg tgaacgacat ccagaaactg 2280 gtgggcaagc tgaattgggc cagccaaatc tacgccggca ttaaagtgaa gcagctgtgc 2340 aggctgctga gaggcgccaa agccctgaca gacatcgtga cactgacaga ggaggccgag 2400 ctggagctgg ccgagaacag ggagatcctg aaggaccccg tgcacggcgt gtactacgac 2460 cccagcaagg acctggtggc cgagattcag aagcagggcc aggaccagtg gacctaccaa 2520 atctaccagg agcctttcaa gaacctgaaa accgggaagt acgccaggaa gagaagcgcc 2580 cacaccaacg atgtgaggca gctggccgaa gtggtgcaga aagtggctat ggagagcatc 2640 gtgatctggg gcaagacccc caagttcaag ctgcccatcc agaaggagac ctgggaaacc 2700 tggtggatgg actactggca ggccacctgg attcctgagt gggagttcgt gaacaccccc 2760 cctctggtga agctgtggta tcagctggag aaggacccca tcctgggcgc cgagaccttc 2820 tacgtggacg gagccgccaa tagagagacc aagctgggca aggccggcta cgtgaccgac 2880 agaggcagac agaaagtggt gtctctgacc gagacaacca accagaaaac cgagctgcac 2940 gccatcctgc tggccctgca ggacagcggc agcgaagtga acatcgtgac cgactcccag 3000 tacgccctgg gcatcattca ggcccagccc gatagaagcg agagcgagct ggtgaaccag 3060 atcatcgaga agctgatcgg caaggacaaa atctacctga gctgggtgcc cgcccacaag 3120 ggcatcggcg gcaacgagca ggtggacaag ctggtgtcca gcggcatccg gaaagtgctg 3180 tttctggacg gcatcgacaa ggcccaggag gaccacgaga gataccacag caactggcgg 3240 acaatggcca gcgacttcaa cctgcctccc atcgtggcca aggagatcgt ggccagctgc 3300 gataagtgtc agctgaaggg cgaggccatg cacggccagg tggactgcag ccctggcatc 3360 tggcagctgg cctgcaccca cctggagggc aaagtgattc tggtggccgt gcacgtggcc 3420 agcggctaca tcgaggccga agtgattccc gccgagaccg gccaggagac cgcctacttc 3480 ctgctgaagc tggccggcag atggcccgtg aaagtggtgc acaccgccaa cggcagcaac 3540 ttcacctctg ccgccgtgaa ggccgcctgt tggtgggcca atatccagca ggagttcggc 3600 atcccctaca accctcagag ccagggcgtg gtggccagca tgaacaagga gctgaagaag 3660 atcatcggcc aggtgaggga ccaggccgag cacctgaaaa cagccgtgca gatggccgtg 3720 ttcatccaca acttcaagcg gaagggcggc attggcggct acagcgccgg agagcggatc 3780 atcgacatca tcgccaccga tatccagacc aaggaactgc agaagcagat caccaagatt 3840 cagaacttca gagtgtacta ccgggacagc agggacccca tctggaaggg ccctgccaag 3900 ctgctgtgga agggcgaagg cgccgtggtg atccaggaca acagcgacat caaagtggtg 3960 ccccggagga aggccaagat tctgcgggac tacggcaaac agatggccgg cgatgactgc 4020 gtggccggca ggcaggatga ggacagatct atgggcggca agtggtccaa gggcagcatt 4080 gtgggctggc ccgagatccg ggagagaatg agaagagccc ctgccgccgc tcctggagtg 4140 ggcgccgtgt ctcaggatct ggataagcac ggcgccatca ccagcagcaa catcaacaac 4200 cccagctgtg tgtggctgga ggcccaggaa gaggaggaag tgggcttccc tgtgagaccc 4260 caggtgcccc tgagacccat gacctacaag ggcgccttcg acctgagcca cttcctgaag 4320 gagaagggcg gcctggacgg cctgatctac agccggaagc ggcaggagat cctggatctg 4380 tgggtgtacc acacccaggg ctacttcccc gactggcaga attacacccc tggccctgga 4440 gtgcggtatc ccctgacctt cggctggtgc ttcaagctgg tgcctatgga gcccgacgaa 4500 gtggagaagg ccacagaggg cgagaacaac agcctgctgc accctatctg ccagcacggc 4560 atggacgatg aggagcggga agtgctgatc tggaagttcg acagcaggct ggccctgaag 4620 cacagagccc aggaactgca cccagagttc tacaaggact gctga 4665 <210> 4 <211> 1554 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HIV <400> 4 Met Ala Ala Arg Ala Ser Ile Leu Ser Gly Gly Lys Leu Asp Ala Trp 1 5 10 15 Glu Lys Ile Arg Leu Arg Pro Gly Gly Lys Lys Lys Tyr Arg Leu Lys 20 25 30 His Leu Val Trp Ala Ser Arg Glu Leu Asp Arg Phe Ala Leu Asn Pro 35 40 45 Ser Leu Leu Glu Thr Thr Glu Gly Cys Gln Gln Ile Met Asn Gln Leu 50 55 60 Gln Pro Ala Val Lys Thr Gly Thr Glu Glu Ile Lys Ser Leu Phe Asn 65 70 75 80 Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Gln Arg Ile Asp Val Lys Asp 85 90 95 Thr Lys Glu Ala Leu Asp Lys Ile Glu Glu Ile Gln Asn Lys Ser Lys 100 105 110 Gln Lys Thr Gln Gln Ala Ala Ala Asp Thr Gly Asp Ser Ser Lys Val 115 120 125 Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Ile Gln Asn Ala Gln Gly Gln Met Ile His 130 135 140 Gln Asn Leu Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Ile Glu 145 150 155 160 Glu Lys Ala Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Ser Ala Leu Ser 165 170 175 Glu Gly Ala Thr Pro Gln Asp Leu Asn Val Met Leu Asn Ile Val Gly 180 185 190 Gly His Gln Ala Ala Met Gln Met Leu Lys Asp Thr Ile Asn Glu Glu 195 200 205 Ala Ala Glu Trp Asp Arg Leu His Pro Val Gln Ala Gly Pro Ile Pro 210 215 220 Pro Gly Gln Ile Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr 225 230 235 240 Ser Thr Pro Gln Glu Gln Leu Gln Trp Met Thr Gly Asn Pro Pro Ile 245 250 255 Pro Val Gly Asn Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys 260 265 270 Ile Val Arg Met Tyr Ser Pro Val Ser Ile Leu Asp Ile Lys Gln Gly 275 280 285 Pro Lys Glu Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Phe Lys Ala Leu 290 295 300 Arg Ala Glu Gln Ala Thr Gln Asp Val Lys Gly Trp Met Thr Glu Thr 305 310 315 320 Leu Leu Val Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Ser Ile Leu Lys Ala 325 330 335 Leu Gly Ser Gly Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly 340 345 350 Val Gly Gly Pro Gly His Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu Ala Met Ser 355 360 365 Gln Ala Gln Gln Thr Asn Ile Met Met Gln Arg Gly Asn Phe Arg Gly 370 375 380 Gln Lys Arg Ile Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Leu Ala 385 390 395 400 Arg Asn Cys Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys 405 410 415 Glu Gly His Gln Met Lys Asp Cys Thr Glu Arg Gln Ala Asn Phe Leu 420 425 430 Gly Lys Ile Trp Pro Ser Ser Lys Gly Arg Pro Gly Asn Phe Pro Gln 435 440 445 Ser Arg Pro Glu Pro Thr Ala Pro Pro Ala Glu Leu Phe Gly Met Gly 450 455 460 Glu Gly Ile Ala Ser Leu Pro Lys Gln Glu Gln Lys Asp Arg Glu Gln 465 470 475 480 Val Pro Pro Leu Val Ser Leu Lys Ser Leu Phe Gly Asn Asp Pro Leu 485 490 495 Ser Gln Gly Ser Pro Ile Ser Pro Ile Glu Thr Val Pro Val Thr Leu 500 505 510 Lys Pro Gly Met Asp Gly Pro Lys Val Lys Gln Trp Pro Leu Thr Glu 515 520 525 Glu Lys Ile Lys Ala Leu Thr Glu Ile Cys Thr Glu Met Glu Lys Glu 530 535 540 Gly Lys Ile Ser Lys Ile Gly Pro Glu Asn Pro Tyr Asn Thr Pro Ile 545 550 555 560 Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asp Ser Thr Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp 565 570 575 Phe Arg Glu Leu Asn Lys Arg Thr Gln Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu 580 585 590 Gly Ile Pro His Pro Ala Gly Leu Lys Lys Lys Lys Ser Val Thr Val 595 600 605 Leu Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe Ser Val Pro Leu Asp Glu Asn Phe 610 615 620 Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr Ile Pro Ser Thr Asn Asn Glu Thr Pro 625 630 635 640 Gly Val Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser 645 650 655 Pro Ala Ile Phe Gln Ser Ser Met Thr Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg 660 665 670 Ser Lys Asn Pro Glu Ile Ile Ile Tyr Gln Tyr Met Ala Ala Leu Tyr 675 680 685 Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile Gly Gln His Arg Thr Lys Ile Glu Glu 690 695 700 Leu Arg Ala His Leu Leu Ser Trp Gly Phe Thr Thr Pro Asp Lys Lys 705 710 715 720 His Gln Lys Glu Pro Pro Phe Leu Trp Met Gly Tyr Glu Leu His Pro 725 730 735 Asp Lys Trp Thr Val Gln Pro Ile Met Leu Pro Asp Lys Glu Ser Trp 740 745 750 Thr Val Asn Asp Ile Gln Lys Leu Val Gly Lys Leu Asn Trp Ala Ser 755 760 765 Gln Ile Tyr Ala Gly Ile Lys Val Lys Gln Leu Cys Arg Leu Leu Arg 770 775 780 Gly Ala Lys Ala Leu Thr Asp Ile Val Thr Leu Thr Glu Glu Ala Glu 785 790 795 800 Leu Glu Leu Ala Glu Asn Arg Glu Ile Leu Lys Asp Pro Val His Gly 805 810 815 Val Tyr Tyr Asp Pro Ser Lys Asp Leu Val Ala Glu Ile Gln Lys Gln 820 825 830 Gly Gln Asp Gln Trp Thr Tyr Gln Ile Tyr Gln Glu Pro Phe Lys Asn 835 840 845 Leu Lys Thr Gly Lys Tyr Ala Arg Lys Arg Ser Ala His Thr Asn Asp 850 855 860 Val Arg Gln Leu Ala Glu Val Val Gln Lys Val Ala Met Glu Ser Ile 865 870 875 880 Val Ile Trp Gly Lys Thr Pro Lys Phe Lys Leu Pro Ile Gln Lys Glu 885 890 895 Thr Trp Glu Thr Trp Trp Met Asp Tyr Trp Gln Ala Thr Trp Ile Pro 900 905 910 Glu Trp Glu Phe Val Asn Thr Pro Pro Leu Val Lys Leu Trp Tyr Gln 915 920 925 Leu Glu Lys Asp Pro Ile Leu Gly Ala Glu Thr Phe Tyr Val Asp Gly 930 935 940 Ala Ala Asn Arg Glu Thr Lys Leu Gly Lys Ala Gly Tyr Val Thr Asp 945 950 955 960 Arg Gly Arg Gln Lys Val Val Ser Leu Thr Glu Thr Thr Asn Gln Lys 965 970 975 Thr Glu Leu His Ala Ile Leu Leu Ala Leu Gln Asp Ser Gly Ser Glu 980 985 990 Val Asn Ile Val Thr Asp Ser Gln Tyr Ala Leu Gly Ile Ile Gln Ala 995 1000 1005 Gln Pro Asp Arg Ser Glu Ser Glu Leu Val Asn Gln Ile Ile Glu Lys 1010 1015 1020 Leu Ile Gly Lys Asp Lys Ile Tyr Leu Ser Trp Val Pro Ala His Lys 1025 1030 1035 1040 Gly Ile Gly Gly Asn Glu Gln Val Asp Lys Leu Val Ser Ser Gly Ile 1045 1050 1055 Arg Lys Val Leu Phe Leu Asp Gly Ile Asp Lys Ala Gln Glu Asp His 1060 1065 1070 Glu Arg Tyr His Ser Asn Trp Arg Thr Met Ala Ser Asp Phe Asn Leu 1075 1080 1085 Pro Pro Ile Val Ala Lys Glu Ile Val Ala Ser Cys Asp Lys Cys Gln 1090 1095 1100 Leu Lys Gly Glu Ala Met His Gly Gln Val Asp Cys Ser Pro Gly Ile 1105 1110 1115 1120 Trp Gln Leu Ala Cys Thr His Leu Glu Gly Lys Val Ile Leu Val Ala 1125 1130 1135 Val His Val Ala Ser Gly Tyr Ile Glu Ala Glu Val Ile Pro Ala Glu 1140 1145 1150 Thr Gly Gln Glu Thr Ala Tyr Phe Leu Leu Lys Leu Ala Gly Arg Trp 1155 1160 1165 Pro Val Lys Val Val His Thr Ala Asn Gly Ser Asn Phe Thr Ser Ala 1170 1175 1180 Ala Val Lys Ala Ala Cys Trp Trp Ala Asn Ile Gln Gln Glu Phe Gly 1185 1190 1195 1200 Ile Pro Tyr Asn Pro Gln Ser Gln Gly Val Val Ala Ser Met Asn Lys 1205 1210 1215 Glu Leu Lys Lys Ile Ile Gly Gln Val Arg Asp Gln Ala Glu His Leu 1220 1225 1230 Lys Thr Ala Val Gln Met Ala Val Phe Ile His Asn Phe Lys Arg Lys 1235 1240 1245 Gly Gly Ile Gly Gly Tyr Ser Ala Gly Glu Arg Ile Ile Asp Ile Ile 1250 1255 1260 Ala Thr Asp Ile Gln Thr Lys Glu Leu Gln Lys Gln Ile Thr Lys Ile 1265 1270 1275 1280 Gln Asn Phe Arg Val Tyr Tyr Arg Asp Ser Arg Asp Pro Ile Trp Lys 1285 1290 1295 Gly Pro Ala Lys Leu Leu Trp Lys Gly Glu Gly Ala Val Val Ile Gln 1300 1305 1310 Asp Asn Ser Asp Ile Lys Val Val Pro Arg Arg Lys Ala Lys Ile Leu 1315 1320 1325 Arg Asp Tyr Gly Lys Gln Met Ala Gly Asp Asp Cys Val Ala Gly Arg 1330 1335 1340 Gln Asp Glu Asp Arg Ser Met Gly Gly Lys Trp Ser Lys Gly Ser Ile 1345 1350 1355 1360 Val Gly Trp Pro Glu Ile Arg Glu Arg Met Arg Arg Ala Pro Ala Ala 1365 1370 1375 Ala Pro Gly Val Gly Ala Val Ser Gln Asp Leu Asp Lys His Gly Ala 1380 1385 1390 Ile Thr Ser Ser Asn Ile Asn Asn Pro Ser Cys Val Trp Leu Glu Ala 1395 1400 1405 Gln Glu Glu Glu Glu Val Gly Phe Pro Val Arg Pro Gln Val Pro Leu 1410 1415 1420 Arg Pro Met Thr Tyr Lys Gly Ala Phe Asp Leu Ser His Phe Leu Lys 1425 1430 1435 1440 Glu Lys Gly Gly Leu Asp Gly Leu Ile Tyr Ser Arg Lys Arg Gln Glu 1445 1450 1455 Ile Leu Asp Leu Trp Val Tyr His Thr Gln Gly Tyr Phe Pro Asp Trp 1460 1465 1470 Gln Asn Tyr Thr Pro Gly Pro Gly Val Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly 1475 1480 1485 Trp Cys Phe Lys Leu Val Pro Met Glu Pro Asp Glu Val Glu Lys Ala 1490 1495 1500 Thr Glu Gly Glu Asn Asn Ser Leu Leu His Pro Ile Cys Gln His Gly 1505 1510 1515 1520 Met Asp Asp Glu Glu Arg Glu Val Leu Ile Trp Lys Phe Asp Ser Arg 1525 1530 1535 Leu Ala Leu Lys His Arg Ala Gln Glu Leu His Pro Glu Phe Tyr Lys 1540 1545 1550 Asp Cys <210> 5 <211> 2025 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HIV <400> 5 atgagggtga tggagatcca gcggaactgc cagcacctgc tgagatgggg catcatgatc 60 ctgggcatga ttatcatctg cagcaccgcc gacaacctgt gggtgaccgt gtactacggc 120 gtgcctgtgt ggagagatgc cgagaccacc ctgttctgcg ccagcgacgc caaggcctac 180 agcaccgaga agcacaatgt gtgggccacc cacgcctgcg tgcctaccga tcccaaccct 240 caggagatcc ccctggacaa cgtgaccgag gagttcaaca tgtggaagaa caacatggtg 300 gaccagatgc acgaggacat catcagcctg tgggaccaga gcctgaagcc ctgcgtgcag 360 ctgacccccc tgtgcgtgac cctgaactgc agcaacgcca gagtgaacgc caccttcaac 420 tccaccgagg acagggaggg catgaagaac tgcagcttca acatgaccac cgagctgcgg 480 gataagaagc agcaggtgta cagcctgttc taccggctgg acatcgagaa gatcaacagc 540 agcaacaaca acagcgagta ccggctggtg aactgcaata ccagcgccat cacccaggcc 600 tgccctaagg tgaccttcga gcccatcccc atccactact gcgcccctgc cggcttcgcc 660 atcctgaagt gcaacgacac cgagttcaat ggcaccggcc cctgcaagaa tgtgagcacc 720 gtgcagtgca cccacggcat caagcccgtg gtgtccaccc agctgctgct gaacggcagc 780 ctggccgaga gagaagtgcg gatcaggagc gagaacatcg ccaacaacgc caagaacatc 840 atcgtgcagt tcgccagccc cgtgaagatc aactgcatcc ggcccaacaa caatacccgg 900 aagagctaca gaatcggccc tggccagacc ttctacgcca ccgacattgt gggcgacatc 960 agacaggccc actgcaacgt gtccaggacc gactggaaca acaccctgag actggtggcc 1020 aaccagctgc ggaagtactt cagcaacaag accatcatct tcaccaacag cagcggcgga 1080 gacctggaga tcaccaccca cagcttcaat tgtggcggcg agttcttcta ctgcaacacc 1140 tccggcctgt tcaatagcac ctggaccacc aacaacatgc aggagtccaa cgacaccagc 1200 aacggcacca tcaccctgcc ctgccggatc aagcagatca tccggatgtg gcagcgcgtg 1260 ggccaggcca tgtacgcccc tcccatcgag ggcgtgattc gctgcgagag caacatcacc 1320 ggcctgatcc tgaccagaga tggcggcaac aacaattccg ccaacgagac cttcagacct 1380 ggcggcggag atatccggga caactggcgg agcgagctgt acaagtacaa ggtggtgaag 1440 atcgagcccc tgggcgtggc ccccaccaga gccaagagaa gagtggtgga gcgggagaag 1500 agagccgtgg gcatcggcgc cgtgtttctg ggcttcctgg gagccgccgg atctacaatg 1560 ggagccgcca gcatcaccct gaccgtgcag gccagacagc tgctgagcgg catcgtgcag 1620 cagcagagca atctgctgag agccatcgag gcccagcagc agctgctgaa gctgacagtg 1680 tggggcatca agcagctgca ggccagggtg ctggccgtgg agagatacct gagggaccag 1740 cagctcctgg gcatctgggg ctgcagcggc aagctgatct gcaccaccaa cgtgccctgg 1800 aatagcagct ggagcaacaa gagctacgac gacatctggc agaacatgac ctggctgcag 1860 tgggacaagg agatcagcaa ctacaccgac atcatctaca gcctgatcga ggagagccag 1920 aaccagcagg agaagaacga gcaggatctg ctggccctgg acaagtgggc caacctgtgg 1980 aactggttcg acatcagcaa gtggctgtgg tacatcagat cttga 2025 <210> 6 <211> 674 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HIV <400> 6 Met Arg Val Met Glu Ile Gln Arg Asn Cys Gln His Leu Leu Arg Trp 1 5 10 15 Gly Ile Met Ile Leu Gly Met Ile Ile Ile Cys Ser Thr Ala Asp Asn 20 25 30 Leu Trp Val Thr Val Tyr Tyr Gly Val Pro Val Trp Arg Asp Ala Glu 35 40 45 Thr Thr Leu Phe Cys Ala Ser Asp Ala Lys Ala Tyr Ser Thr Glu Lys 50 55 60 His Asn Val Trp Ala Thr His Ala Cys Val Pro Thr Asp Pro Asn Pro 65 70 75 80 Gln Glu Ile Pro Leu Asp Asn Val Thr Glu Glu Phe Asn Met Trp Lys 85 90 95 Asn Asn Met Val Asp Gln Met His Glu Asp Ile Ile Ser Leu Trp Asp 100 105 110 Gln Ser Leu Lys Pro Cys Val Gln Leu Thr Pro Leu Cys Val Thr Leu 115 120 125 Asn Cys Ser Asn Ala Arg Val Asn Ala Thr Phe Asn Ser Thr Glu Asp 130 135 140 Arg Glu Gly Met Lys Asn Cys Ser Phe Asn Met Thr Thr Glu Leu Arg 145 150 155 160 Asp Lys Lys Gln Gln Val Tyr Ser Leu Phe Tyr Arg Leu Asp Ile Glu 165 170 175 Lys Ile Asn Ser Ser Asn Asn Asn Ser Glu Tyr Arg Leu Val Asn Cys 180 185 190 Asn Thr Ser Ala Ile Thr Gln Ala Cys Pro Lys Val Thr Phe Glu Pro 195 200 205 Ile Pro Ile His Tyr Cys Ala Pro Ala Gly Phe Ala Ile Leu Lys Cys 210 215 220 Asn Asp Thr Glu Phe Asn Gly Thr Gly Pro Cys Lys Asn Val Ser Thr 225 230 235 240 Val Gln Cys Thr His Gly Ile Lys Pro Val Val Ser Thr Gln Leu Leu 245 250 255 Leu Asn Gly Ser Leu Ala Glu Arg Glu Val Arg Ile Arg Ser Glu Asn 260 265 270 Ile Ala Asn Asn Ala Lys Asn Ile Ile Val Gln Phe Ala Ser Pro Val 275 280 285 Lys Ile Asn Cys Ile Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Ser Tyr Arg 290 295 300 Ile Gly Pro Gly Gln Thr Phe Tyr Ala Thr Asp Ile Val Gly Asp Ile 305 310 315 320 Arg Gln Ala His Cys Asn Val Ser Arg Thr Asp Trp Asn Asn Thr Leu 325 330 335 Arg Leu Val Ala Asn Gln Leu Arg Lys Tyr Phe Ser Asn Lys Thr Ile 340 345 350 Ile Phe Thr Asn Ser Ser Gly Gly Asp Leu Glu Ile Thr Thr His Ser 355 360 365 Phe Asn Cys Gly Gly Glu Phe Phe Tyr Cys Asn Thr Ser Gly Leu Phe 370 375 380 Asn Ser Thr Trp Thr Thr Asn Asn Met Gln Glu Ser Asn Asp Thr Ser 385 390 395 400 Asn Gly Thr Ile Thr Leu Pro Cys Arg Ile Lys Gln Ile Ile Arg Met 405 410 415 Trp Gln Arg Val Gly Gln Ala Met Tyr Ala Pro Pro Ile Glu Gly Val 420 425 430 Ile Arg Cys Glu Ser Asn Ile Thr Gly Leu Ile Leu Thr Arg Asp Gly 435 440 445 Gly Asn Asn Asn Ser Ala Asn Glu Thr Phe Arg Pro Gly Gly Gly Asp 450 455 460 Ile Arg Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val Val Lys 465 470 475 480 Ile Glu Pro Leu Gly Val Ala Pro Thr Arg Ala Lys Arg Arg Val Val 485 490 495 Glu Arg Glu Lys Arg Ala Val Gly Ile Gly Ala Val Phe Leu Gly Phe 500 505 510 Leu Gly Ala Ala Gly Ser Thr Met Gly Ala Ala Ser Ile Thr Leu Thr 515 520 525 Val Gln Ala Arg Gln Leu Leu Ser Gly Ile Val Gln Gln Gln Ser Asn 530 535 540 Leu Leu Arg Ala Ile Glu Ala Gln Gln Gln Leu Leu Lys Leu Thr Val 545 550 555 560 Trp Gly Ile Lys Gln Leu Gln Ala Arg Val Leu Ala Val Glu Arg Tyr 565 570 575 Leu Arg Asp Gln Gln Leu Leu Gly Ile Trp Gly Cys Ser Gly Lys Leu 580 585 590 Ile Cys Thr Thr Asn Val Pro Trp Asn Ser Ser Trp Ser Asn Lys Ser 595 600 605 Tyr Asp Asp Ile Trp Gln Asn Met Thr Trp Leu Gln Trp Asp Lys Glu 610 615 620 Ile Ser Asn Tyr Thr Asp Ile Ile Tyr Ser Leu Ile Glu Glu Ser Gln 625 630 635 640 Asn Gln Gln Glu Lys Asn Glu Gln Asp Leu Leu Ala Leu Asp Lys Trp 645 650 655 Ala Asn Leu Trp Asn Trp Phe Asp Ile Ser Lys Trp Leu Trp Tyr Ile 660 665 670 Arg Ser <210> 7 <211> 1545 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HIV <400> 7 atgaaagtga aggagaccag gaagaattat cagcacttgt ggagatgggg caccatgctc 60 cttgggatgt tgatgatctg tagtgctgca gaacaattgt gggtcacagt ctattatggg 120 gtacctgtgt ggaaagaagc aactaccact ctattctgtg catcagatgc taaagcatat 180 gatacagagg tacataatgt ttgggccaca catgcctgtg tacccacaga ccccaaccca 240 caagaagtag tattgggaaa tgtgacagaa tattttaaca tgtggaaaaa taacatggta 300 gaccagatgc atgaggatat aatcagttta tgggatcaaa gcttgaagcc atgtgtaaaa 360 ttaaccccac tctgtgttac tttagattgc gatgatgtga ataccactaa tagtactact 420 accactagta atggttggac aggagaaata aggaaaggag aaataaaaaa ctgctctttt 480 aatatcacca caagcataag agataaggtt caaaaagaat atgcactttt ttataacctt 540 gatgtagtac caatagatga tgataatgct actaccaaaa ataaaactac tagaaacttt 600 aggttgatac attgtaactc ctcagtcatg acacaggcct gtccaaaggt atcatttgaa 660 ccaattccca tacattattg tgccccggct ggttttgcga ttctgaagtg taacaataag 720 acgtttgatg gaaaaggact atgtacaaat gtcagcacag tacaatgtac acatggaatt 780 aggccagtag tgtcaactca actgctgtta aatggcagtc tagcagaaga agaggtagta 840 attagatctg acaatttcat ggacaatact aaaaccataa tagtacagct gaatgaatct 900 gtagcaatta attgtacaag acccaacaac aatacaagaa aaggtataca tataggacca 960 gggagagcct tttatgcagc aagaaaaata ataggagata taagacaagc acattgtaac 1020 cttagtagag cacaatggaa taacacttta aaacagatag ttataaaatt aagagaacac 1080 tttgggaata aaacaataaa atttaatcaa tcctcaggag gggacccaga aattgtaagg 1140 catagtttta attgtggagg ggaatttttc tactgtgata caacacaact gtttaatagt 1200 acttggaatg gtactgaagg aaataacact gaaggaaata gcacaatcac actcccatgt 1260 agaataaaac aaattataaa catgtggcag gaagtaggaa aagcaatgta tgcccctccc 1320 atcggaggac aaattagatg ttcatcaaat attacagggc tgctattaac aagagatggt 1380 ggtaccgaag ggaatgggac agagaatgag acagagatct tcagacctgg aggaggagat 1440 atgagggaca attggagaag tgaattatat aaatataaag tagtaaaagt tgaaccacta 1500 ggagtagcac ccaccagggc aaagagaaga gtggtgcaga gataa 1545 <210> 8 <211> 514 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HIV <400> 8 Met Lys Val Lys Glu Thr Arg Lys Asn Tyr Gln His Leu Trp Arg Trp 1 5 10 15 Gly Thr Met Leu Leu Gly Met Leu Met Ile Cys Ser Ala Ala Glu Gln 20 25 30 Leu Trp Val Thr Val Tyr Tyr Gly Val Pro Val Trp Lys Glu Ala Thr 35 40 45 Thr Thr Leu Phe Cys Ala Ser Asp Ala Lys Ala Tyr Asp Thr Glu Val 50 55 60 His Asn Val Trp Ala Thr His Ala Cys Val Pro Thr Asp Pro Asn Pro 65 70 75 80 Gln Glu Val Val Leu Gly Asn Val Thr Glu Tyr Phe Asn Met Trp Lys 85 90 95 Asn Asn Met Val Asp Gln Met His Glu Asp Ile Ile Ser Leu Trp Asp 100 105 110 Gln Ser Leu Lys Pro Cys Val Lys Leu Thr Pro Leu Cys Val Thr Leu 115 120 125 Asp Cys Asp Asp Val Asn Thr Thr Asn Ser Thr Thr Thr Thr Ser Asn 130 135 140 Gly Trp Thr Gly Glu Ile Arg Lys Gly Glu Ile Lys Asn Cys Ser Phe 145 150 155 160 Asn Ile Thr Thr Ser Ile Arg Asp Lys Val Gln Lys Glu Tyr Ala Leu 165 170 175 Phe Tyr Asn Leu Asp Val Val Pro Ile Asp Asp Asp Asn Ala Thr Thr 180 185 190 Lys Asn Lys Thr Thr Arg Asn Phe Arg Leu Ile His Cys Asn Ser Ser 195 200 205 Val Met Thr Gln Ala Cys Pro Lys Val Ser Phe Glu Pro Ile Pro Ile 210 215 220 His Tyr Cys Ala Pro Ala Gly Phe Ala Ile Leu Lys Cys Asn Asn Lys 225 230 235 240 Thr Phe Asp Gly Lys Gly Leu Cys Thr Asn Val Ser Thr Val Gln Cys 245 250 255 Thr His Gly Ile Arg Pro Val Val Ser Thr Gln Leu Leu Leu Asn Gly 260 265 270 Ser Leu Ala Glu Glu Glu Val Val Ile Arg Ser Asp Asn Phe Met Asp 275 280 285 Asn Thr Lys Thr Ile Ile Val Gln Leu Asn Glu Ser Val Ala Ile Asn 290 295 300 Cys Thr Arg Pro Asn Asn Asn Thr Arg Lys Gly Ile His Ile Gly Pro 305 310 315 320 Gly Arg Ala Phe Tyr Ala Ala Arg Lys Ile Ile Gly Asp Ile Arg Gln 325 330 335 Ala His Cys Asn Leu Ser Arg Ala Gln Trp Asn Asn Thr Leu Lys Gln 340 345 350 Ile Val Ile Lys Leu Arg Glu His Phe Gly Asn Lys Thr Ile Lys Phe 355 360 365 Asn Gln Ser Ser Gly Gly Asp Pro Glu Ile Val Arg His Ser Phe Asn 370 375 380 Cys Gly Gly Glu Phe Phe Tyr Cys Asp Thr Thr Gln Leu Phe Asn Ser 385 390 395 400 Thr Trp Asn Gly Thr Glu Gly Asn Asn Thr Glu Gly Asn Ser Thr Ile 405 410 415 Thr Leu Pro Cys Arg Ile Lys Gln Ile Ile Asn Met Trp Gln Glu Val 420 425 430 Gly Lys Ala Met Tyr Ala Pro Pro Ile Gly Gly Gln Ile Arg Cys Ser 435 440 445 Ser Asn Ile Thr Gly Leu Leu Leu Thr Arg Asp Gly Gly Thr Glu Gly 450 455 460 Asn Gly Thr Glu Asn Glu Thr Glu Ile Phe Arg Pro Gly Gly Gly Asp 465 470 475 480 Met Arg Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tyr Lys Tyr Lys Val Val Lys 485 490 495 Val Glu Pro Leu Gly Val Ala Pro Thr Arg Ala Lys Arg Arg Val Val 500 505 510 Gln Arg <210> 9 <211> 2178 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Mycobacterium tuberculosis <400> 9 atgcatcaca cggccgcgtc cgataacttc cagctgtccc agggtgggca gggattcgcc 60 attccgatcg ggcaggcgat ggcgatcgcg ggccagatcc gatcgggtgg ggggtcaccc 120 accgttcata tcgggcctac cgccttcctc ggcttgggtg ttgtcgacaa caacggcaac 180 ggcgcacgag tccaacgcgt ggtcgggagc gctccggcgg caagtctcgg catctccacc 240 ggcgacgtga tcaccgcggt cgacggcgct ccgatcaact cggccaccgc gatggcggac 300 gcgcttaacg ggcatcatcc cggtgacgtc atctcggtga cctggcaaac caagtcgggc 360 ggcacgcgta cagggaacgt gacattggcc gagggacccc cggccgaatt catggtggat 420 ttcggggcgt taccaccgga gatcaactcc gcgaggatgt acgccggccc gggttcggcc 480 tcgctggtgg ccgcggctca gatgtgggac agcgtggcga gtgacctgtt ttcggccgcg 540 tcggcgtttc agtcggtggt ctggggtctg acggtggggt cgtggatagg ttcgtcggcg 600 ggtctgatgg tggcggcggc ctcgccgtat gtggcgtgga tgagcgtcac cgcggggcag 660 gccgagctga ccgccgccca ggtccgggtt gctgcggcgg cctacgagac ggcgtatggg 720 ctgacggtgc ccccgccggt gatcgccgag aaccgtgctg aactgatgat tctgatagcg 780 accaacctct tggggcaaaa caccccggcg atcgcggtca acgaggccga atacggcgag 840 atgtgggccc aagacgccgc cgcgatgttt ggctacgccg cggcgacggc gacggcgacg 900 gcgacgttgc tgccgttcga ggaggcgccg gagatgacca gcgcgggtgg gctcctcgag 960 caggccgccg cggtcgagga ggcctccgac accgccgcgg cgaaccagtt gatgaacaat 1020 gtgccccagg cgctgcaaca gctggcccag cccacgcagg gcaccacgcc ttcttccaag 1080 ctgggtggcc tgtggaagac ggtctcgccg catcggtcgc cgatcagcaa catggtgtcg 1140 atggccaaca accacatgtc gatgaccaac tcgggtgtgt cgatgaccaa caccttgagc 1200 tcgatgttga agggctttgc tccggcggcg gccgcccagg ccgtgcaaac cgcggcgcaa 1260 aacggggtcc gggcgatgag ctcgctgggc agctcgctgg gttcttcggg tctgggcggt 1320 ggggtggccg ccaacttggg tcgggcggcc tcggtcggtt cgttgtcggt gccgcaggcc 1380 tgggccgcgg ccaaccaggc agtcaccccg gcggcgcggg cgctgccgct gaccagcctg 1440 accagcgccg cggaaagagg gcccgggcag atgctgggcg ggctgccggt ggggcagatg 1500 ggcgccaggg ccggtggtgg gctcagtggt gtgctgcgtg ttccgccgcg accctatgtg 1560 atgccgcatt ctccggcagc cggcgatatc gccccgccgg ccttgtcgca ggaccggttc 1620 gccgacttcc ccgcgctgcc cctcgacccg tccgcgatgg tcgcccaagt ggggccacag 1680 gtggtcaaca tcaacaccaa actgggctac aacaacgccg tgggcgccgg gaccggcatc 1740 gtcatcgatc ccaacggtgt cgtgctgacc aacaaccacg tgatcgcggg cgccaccgac 1800 atcaatgcgt tcagcgtcgg ctccggccaa acctacggcg tcgatgtggt cgggtatgac 1860 cgcacccagg atgtcgcggt gctgcagctg cgcggtgccg gtggcctgcc gtcggcggcg 1920 atcggtggcg gcgtcgcggt tggtgagccc gtcgtcgcga tgggcaacag cggtgggcag 1980 ggcggaacgc cccgtgcggt gcctggcagg gtggtcgcgc tcggccaaac cgtgcaggcg 2040 tcggattcgc tgaccggtgc cgaagagaca ttgaacgggt tgatccagtt cgatgccgcg 2100 atccagcccg gtgatgcggg cgggcccgtc gtcaacggcc taggacaggt ggtcggtatg 2160 aacacggccg cgtcctag 2178 <210> 10 <211> 725 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mycobacterium tuberculosis <400> 10 Met His His Thr Ala Ala Ser Asp Asn Phe Gln Leu Ser Gln Gly Gly 1 5 10 15 Gln Gly Phe Ala Ile Pro Ile Gly Gln Ala Met Ala Ile Ala Gly Gln 20 25 30 Ile Arg Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Val His Ile Gly Pro Thr Ala 35 40 45 Phe Leu Gly Leu Gly Val Val Asp Asn Asn Gly Asn Gly Ala Arg Val 50 55 60 Gln Arg Val Val Gly Ser Ala Pro Ala Ala Ser Leu Gly Ile Ser Thr 65 70 75 80 Gly Asp Val Ile Thr Ala Val Asp Gly Ala Pro Ile Asn Ser Ala Thr 85 90 95 Ala Met Ala Asp Ala Leu Asn Gly His His Pro Gly Asp Val Ile Ser 100 105 110 Val Thr Trp Gln Thr Lys Ser Gly Gly Thr Arg Thr Gly Asn Val Thr 115 120 125 Leu Ala Glu Gly Pro Pro Ala Glu Phe Met Val Asp Phe Gly Ala Leu 130 135 140 Pro Pro Glu Ile Asn Ser Ala Arg Met Tyr Ala Gly Pro Gly Ser Ala 145 150 155 160 Ser Leu Val Ala Ala Ala Gln Met Trp Asp Ser Val Ala Ser Asp Leu 165 170 175 Phe Ser Ala Ala Ser Ala Phe Gln Ser Val Val Trp Gly Leu Thr Val 180 185 190 Gly Ser Trp Ile Gly Ser Ser Ala Gly Leu Met Val Ala Ala Ala Ser 195 200 205 Pro Tyr Val Ala Trp Met Ser Val Thr Ala Gly Gln Ala Glu Leu Thr 210 215 220 Ala Ala Gln Val Arg Val Ala Ala Ala Ala Tyr Glu Thr Ala Tyr Gly 225 230 235 240 Leu Thr Val Pro Pro Pro Val Ile Ala Glu Asn Arg Ala Glu Leu Met 245 250 255 Ile Leu Ile Ala Thr Asn Leu Leu Gly Gln Asn Thr Pro Ala Ile Ala 260 265 270 Val Asn Glu Ala Glu Tyr Gly Glu Met Trp Ala Gln Asp Ala Ala Ala 275 280 285 Met Phe Gly Tyr Ala Ala Ala Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Leu Leu 290 295 300 Pro Phe Glu Glu Ala Pro Glu Met Thr Ser Ala Gly Gly Leu Leu Glu 305 310 315 320 Gln Ala Ala Ala Val Glu Glu Ala Ser Asp Thr Ala Ala Ala Asn Gln 325 330 335 Leu Met Asn Asn Val Pro Gln Ala Leu Gln Gln Leu Ala Gln Pro Thr 340 345 350 Gln Gly Thr Thr Pro Ser Ser Lys Leu Gly Gly Leu Trp Lys Thr Val 355 360 365 Ser Pro His Arg Ser Pro Ile Ser Asn Met Val Ser Met Ala Asn Asn 370 375 380 His Met Ser Met Thr Asn Ser Gly Val Ser Met Thr Asn Thr Leu Ser 385 390 395 400 Ser Met Leu Lys Gly Phe Ala Pro Ala Ala Ala Ala Gln Ala Val Gln 405 410 415 Thr Ala Ala Gln Asn Gly Val Arg Ala Met Ser Ser Leu Gly Ser Ser 420 425 430 Leu Gly Ser Ser Gly Leu Gly Gly Gly Val Ala Ala Asn Leu Gly Arg 435 440 445 Ala Ala Ser Val Gly Ser Leu Ser Val Pro Gln Ala Trp Ala Ala Ala 450 455 460 Asn Gln Ala Val Thr Pro Ala Ala Arg Ala Leu Pro Leu Thr Ser Leu 465 470 475 480 Thr Ser Ala Ala Glu Arg Gly Pro Gly Gln Met Leu Gly Gly Leu Pro 485 490 495 Val Gly Gln Met Gly Ala Arg Ala Gly Gly Gly Leu Ser Gly Val Leu 500 505 510 Arg Val Pro Pro Arg Pro Tyr Val Met Pro His Ser Pro Ala Ala Gly 515 520 525 Asp Ile Ala Pro Pro Ala Leu Ser Gln Asp Arg Phe Ala Asp Phe Pro 530 535 540 Ala Leu Pro Leu Asp Pro Ser Ala Met Val Ala Gln Val Gly Pro Gln 545 550 555 560 Val Val Asn Ile Asn Thr Lys Leu Gly Tyr Asn Asn Ala Val Gly Ala 565 570 575 Gly Thr Gly Ile Val Ile Asp Pro Asn Gly Val Val Leu Thr Asn Asn 580 585 590 His Val Ile Ala Gly Ala Thr Asp Ile Asn Ala Phe Ser Val Gly Ser 595 600 605 Gly Gln Thr Tyr Gly Val Asp Val Val Gly Tyr Asp Arg Thr Gln Asp 610 615 620 Val Ala Val Leu Gln Leu Arg Gly Ala Gly Gly Leu Pro Ser Ala Ala 625 630 635 640 Ile Gly Gly Gly Val Ala Val Gly Glu Pro Val Val Ala Met Gly Asn 645 650 655 Ser Gly Gly Gln Gly Gly Thr Pro Arg Ala Val Pro Gly Arg Val Val 660 665 670 Ala Leu Gly Gln Thr Val Gln Ala Ser Asp Ser Leu Thr Gly Ala Glu 675 680 685 Glu Thr Leu Asn Gly Leu Ile Gln Phe Asp Ala Ala Ile Gln Pro Gly 690 695 700 Asp Ala Gly Gly Pro Val Val Asn Gly Leu Gly Gln Val Val Gly Met 705 710 715 720 Asn Thr Ala Ala Ser 725 <210> 11 <211> 1149 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Plasmodium falciparum <400> 11 atgatgagaa aacttgccat cctcagcgtc agctctttcc tgttcgtgga ggccctcttc 60 caggagtatc agtgctacgg aagcagcagc aatacaaggg tcctgaacga gctcaactat 120 gacaacgctg gaacgaacct gtataacgag ctggagatga actactatgg caagcaggag 180 aactggtata gcctgaagaa gaacagccgg tccctgggcg agaacgacga cggcaacaac 240 aacaacggcg acaacggcag ggagggcaaa gatgaggaca agagggacgg gaacaacgag 300 gataacgaga agctgcggaa gcccaagcac aagaaactca agcagcccgc cgacgggaac 360 ccggacccca atgcaaatcc caacgtcgac ccaaacgcaa accctaacgt ggaccccaac 420 gccaatccca acgtcgatcc taatgccaat ccaaatgcca accctaacgc aaatcctaat 480 gcaaacccca acgccaatcc taacgccaac ccaaatgcca acccaaacgc taaccccaac 540 gctaacccaa atgcaaatcc caatgctaac ccaaacgtgg accctaacgc taaccccaac 600 gcaaacccta acgccaatcc taacgcaaac cccaatgcaa acccaaacgc aaatcccaac 660 gctaacccta acgcaaaccc caacgccaac cctaatgcca accccaatgc taaccccaac 720 gccaatccaa acgcaaatcc aaacgccaac ccaaatgcaa accccaacgc taatcccaac 780 gccaacccaa acgccaatcc taacaagaac aatcagggca acgggcaggg ccataacatg 840 ccgaacgacc ctaatcggaa tgtggacgag aacgccaacg ccaacagcgc cgtgaagaac 900 aacaacaacg aggagccctc cgacaagcac atcaaggaat acctgaacaa gatccagaac 960 agtctgagca ccgagtggtc cccctgctcc gtgacctgcg gcaacggcat ccaggtgagg 1020 atcaagcccg gctccgccaa caagcccaag gacgagctgg actacgccaa cgacatcgag 1080 aagaagatct gcaagatgga gaaatgcagc tctgtgttca acgtcgtgaa ctccgccatc 1140 ggcctgtga 1149 <210> 12 <211> 382 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Plasmodium falciparum <400> 12 Met Met Arg Lys Leu Ala Ile Leu Ser Val Ser Ser Phe Leu Phe Val 1 5 10 15 Glu Ala Leu Phe Gln Glu Tyr Gln Cys Tyr Gly Ser Ser Ser Asn Thr 20 25 30 Arg Val Leu Asn Glu Leu Asn Tyr Asp Asn Ala Gly Thr Asn Leu Tyr 35 40 45 Asn Glu Leu Glu Met Asn Tyr Tyr Gly Lys Gln Glu Asn Trp Tyr Ser 50 55 60 Leu Lys Lys Asn Ser Arg Ser Leu Gly Glu Asn Asp Asp Gly Asn Asn 65 70 75 80 Asn Asn Gly Asp Asn Gly Arg Glu Gly Lys Asp Glu Asp Lys Arg Asp 85 90 95 Gly Asn Asn Glu Asp Asn Glu Lys Leu Arg Lys Pro Lys His Lys Lys 100 105 110 Leu Lys Gln Pro Ala Asp Gly Asn Pro Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn 115 120 125 Val Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Val Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn 130 135 140 Val Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 145 150 155 160 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 165 170 175 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 180 185 190 Val Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 195 200 205 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 210 215 220 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 225 230 235 240 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn 245 250 255 Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Lys Asn Asn Gln 260 265 270 Gly Asn Gly Gln Gly His Asn Met Pro Asn Asp Pro Asn Arg Asn Val 275 280 285 Asp Glu Asn Ala Asn Ala Asn Ser Ala Val Lys Asn Asn Asn Asn Glu 290 295 300 Glu Pro Ser Asp Lys His Ile Lys Glu Tyr Leu Asn Lys Ile Gln Asn 305 310 315 320 Ser Leu Ser Thr Glu Trp Ser Pro Cys Ser Val Thr Cys Gly Asn Gly 325 330 335 Ile Gln Val Arg Ile Lys Pro Gly Ser Ala Asn Lys Pro Lys Asp Glu 340 345 350 Leu Asp Tyr Ala Asn Asp Ile Glu Lys Lys Ile Cys Lys Met Glu Lys 355 360 365 Cys Ser Ser Val Phe Asn Val Val Asn Ser Ala Ile Gly Leu 370 375 380 <210> 13 <211> 1275 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Plasmodium falciparum <400> 13 atgatggctc ccgatcctaa tgcaaatcca aatgcaaacc caaacgcaaa ccccaatgca 60 aatcctaatg caaaccccaa tgcaaatcct aatgcaaatc ctaatgccaa tccaaatgca 120 aatccaaatg caaacccaaa cgcaaacccc aatgcaaatc ctaatgccaa tccaaatgca 180 aatccaaatg caaacccaaa tgcaaaccca aatgcaaacc ccaatgcaaa tcctaataaa 240 aacaatcaag gtaatggaca aggtcacaat atgccaaatg acccaaaccg aaatgtagat 300 gaaaatgcta atgccaacag tgctgtaaaa aataataata acgaagaacc aagtgataag 360 cacataaaag aatatttaaa caaaatacaa aattctcttt caactgaatg gtccccatgt 420 agtgtaactt gtggaaatgg tattcaagtt agaataaagc ctggctctgc taataaacct 480 aaagacgaat tagattatgc aaatgatatt gaaaaaaaaa tttgtaaaat ggaaaaatgt 540 tccagtgtgt ttaatgtcgt aaatagttca ataggattag ggcctgtgac gaacatggag 600 aacatcacat caggattcct aggacccctg ctcgtgttac aggcggggtt tttcttgttg 660 acaagaatcc tcacaatacc gcagagtcta gactcgtggt ggacttctct caattttcta 720 gggggatcac ccgtgtgtct tggccaaaat tcgcagtccc caacctccaa tcactcacca 780 acctcctgtc ctccaatttg tcctggttat cgctggatgt gtctgcggcg ttttatcata 840 ttcctcttca tcctgctgct atgcctcatc ttcttattgg ttcttctgga ttatcaaggt 900 atgttgcccg tttgtcctct aattccagga tcaacaacaa ccaatacggg accatgcaaa 960 acctgcacga ctcctgctca aggcaactct atgtttccct catgttgctg tacaaaacct 1020 acggatggaa attgcacctg tattcccatc ccatcgtcct gggctttcgc aaaataccta 1080 tgggagtggg cctcagtccg tttctcttgg ctcagtttac tagtgccatt tgttcagtgg 1140 ttcgtagggc tttcccccac tgtttggctt tcagctatat ggatgatgtg gtattggggg 1200 ccaagtctgt acagcatcgt gagtcccttt ataccgctgt taccaatttt cttttgtctc 1260 tgggtataca tttaa 1275 <210> 14 <211> 424 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Plasmodium falciparum <400> 14 Met Met Ala Pro Asp Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala 1 5 10 15 Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala 20 25 30 Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala 35 40 45 Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala 50 55 60 Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Ala Asn Pro Asn Lys 65 70 75 80 Asn Asn Gln Gly Asn Gly Gln Gly His Asn Met Pro Asn Asp Pro Asn 85 90 95 Arg Asn Val Asp Glu Asn Ala Asn Ala Asn Ser Ala Val Lys Asn Asn 100 105 110 Asn Asn Glu Glu Pro Ser Asp Lys His Ile Lys Glu Tyr Leu Asn Lys 115 120 125 Ile Gln Asn Ser Leu Ser Thr Glu Trp Ser Pro Cys Ser Val Thr Cys 130 135 140 Gly Asn Gly Ile Gln Val Arg Ile Lys Pro Gly Ser Ala Asn Lys Pro 145 150 155 160 Lys Asp Glu Leu Asp Tyr Ala Asn Asp Ile Glu Lys Lys Ile Cys Lys 165 170 175 Met Glu Lys Cys Ser Ser Val Phe Asn Val Val Asn Ser Ser Ile Gly 180 185 190 Leu Gly Pro Val Thr Asn Met Glu Asn Ile Thr Ser Gly Phe Leu Gly 195 200 205 Pro Leu Leu Val Leu Gln Ala Gly Phe Phe Leu Leu Thr Arg Ile Leu 210 215 220 Thr Ile Pro Gln Ser Leu Asp Ser Trp Trp Thr Ser Leu Asn Phe Leu 225 230 235 240 Gly Gly Ser Pro Val Cys Leu Gly Gln Asn Ser Gln Ser Pro Thr Ser 245 250 255 Asn His Ser Pro Thr Ser Cys Pro Pro Ile Cys Pro Gly Tyr Arg Trp 260 265 270 Met Cys Leu Arg Arg Phe Ile Ile Phe Leu Phe Ile Leu Leu Leu Cys 275 280 285 Leu Ile Phe Leu Leu Val Leu Leu Asp Tyr Gln Gly Met Leu Pro Val 290 295 300 Cys Pro Leu Ile Pro Gly Ser Thr Thr Thr Asn Thr Gly Pro Cys Lys 305 310 315 320 Thr Cys Thr Thr Pro Ala Gln Gly Asn Ser Met Phe Pro Ser Cys Cys 325 330 335 Cys Thr Lys Pro Thr Asp Gly Asn Cys Thr Cys Ile Pro Ile Pro Ser 340 345 350 Ser Trp Ala Phe Ala Lys Tyr Leu Trp Glu Trp Ala Ser Val Arg Phe 355 360 365 Ser Trp Leu Ser Leu Leu Val Pro Phe Val Gln Trp Phe Val Gly Leu 370 375 380 Ser Pro Thr Val Trp Leu Ser Ala Ile Trp Met Met Trp Tyr Trp Gly 385 390 395 400 Pro Ser Leu Tyr Ser Ile Val Ser Pro Phe Ile Pro Leu Leu Pro Ile 405 410 415 Phe Phe Cys Leu Trp Val Tyr Ile 420 <210> 15 <211> 3411 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> HIV <400> 15 atggtcattg ttcagaacat acagggccaa atggtccacc aggcaattag tccgcgaact 60 cttaatgcat gggtgaaggt cgtggaggaa aaggcattct ccccggaggt cattccgatg 120 ttttctgcgc tatctgaggg cgcaacgccg caagacctta ataccatgct taacacggta 180 ggcgggcacc aagccgctat gcaaatgcta aaagagacta taaacgaaga ggccgccgaa 240 tgggatcgag tgcacccggt gcacgccggc ccaattgcac caggccagat gcgcgagccg 300 cgcgggtctg atattgcagg aactacgtct acccttcagg agcagattgg gtggatgact 360 aacaatccac caatcccggt cggagagatc tataagaggt ggatcatact gggactaaac 420 aagatagtcc gcatgtattc tccgacttct atactggata tacgccaagg cccaaaggag 480 ccgttcaggg actatgtcga ccgattctat aagacccttc gcgcagagca ggcatcccag 540 gaggtcaaaa attggatgac agaaactctt ttggtgcaga atgcgaatcc ggattgtaaa 600 acaattttaa aggctctagg accggccgca acgctagaag agatgatgac ggcttgtcag 660 ggagtcggtg gaccggggca taaagcccgc gtcttacaca tgggcccgat atctccgata 720 gaaacagttt cggtcaagct taaaccaggg atggatggtc caaaggtcaa gcagtggccg 780 ctaacggaag agaagattaa ggcgctcgta gagatttgta ctgaaatgga gaaggaaggc 840 aagataagca agatcgggcc agagaacccg tacaatacac cggtatttgc aataaagaaa 900 aaggattcaa caaaatggcg aaagcttgta gattttaggg aactaaacaa gcgaacccaa 960 gacttttggg aagtccaact agggatccca catccagccg gtctaaagaa gaagaaatcg 1020 gtcacagtcc tggatgtagg agacgcatat tttagtgtac cgcttgatga ggacttccga 1080 aagtatactg cgtttactat accgagcata aacaatgaaa cgccaggcat tcgctatcag 1140 tacaacgtgc tcccgcaggg ctggaagggg tctccggcga tatttcagag ctgtatgaca 1200 aaaatacttg aaccattccg aaagcagaat ccggatattg taatttacca atacatggac 1260 gatctctatg tgggctcgga tctagaaatt gggcagcatc gcactaagat tgaggaactg 1320 aggcaacatc tgcttcgatg gggcctcact actcccgaca agaagcacca gaaggagccg 1380 ccgttcctaa agatgggcta cgagcttcat ccggacaagt ggacagtaca gccgatagtg 1440 ctgcccgaaa aggattcttg gaccgtaaat gatattcaga aactagtcgg caagcttaac 1500 tgggcctctc agatttaccc aggcattaag gtccgacagc tttgcaagct actgagggga 1560 actaaggctc taacagaggt catcccatta acggaggaag cagagcttga gctggcagag 1620 aatcgcgaaa ttcttaagga gccggtgcac ggggtatact acgacccctc caaggacctt 1680 atagccgaga tccagaagca ggggcagggc caatggacgt accagatata tcaagaaccg 1740 tttaagaatc tgaagactgg gaagtacgcg cgcatgcgag gggctcatac taatgatgta 1800 aagcaactta cggaagcagt acaaaagatt actactgagt ctattgtgat atggggcaag 1860 accccaaagt tcaagctgcc catacagaag gaaacatggg aaacatggtg gactgaatat 1920 tggcaagcta cctggattcc agaatgggaa tttgtcaaca cgccgccact tgttaagctt 1980 tggtaccagc ttgaaaagga gccgatagta ggggcagaga ccttctatgt cgatggcgcc 2040 gcgaatcgcg aaacgaagct aggcaaggcg ggatacgtga ctaatagggg ccgccaaaag 2100 gtcgtaaccc ttacggatac caccaatcag aagactgaac tacaagcgat ttaccttgca 2160 cttcaggata gtggcctaga ggtcaacata gtcacggact ctcaatatgc gcttggcatt 2220 attcaagcgc agccagatca aagcgaaagc gagcttgtaa accaaataat agaacagctt 2280 ataaagaaag agaaggtata tctggcctgg gtccccgctc acaagggaat tggcggcaat 2340 gagcaagtgg acaagctagt cagcgctggg attcgcaagg ttcttgcgat ggggggtaag 2400 tggtctaagt ctagcgtagt cggctggccg acagtccgcg agcgcatgcg acgcgccgaa 2460 ccagccgcag atggcgtggg ggcagcgtct agggatctgg agaagcacgg ggctataact 2520 tccagtaaca cggcggcgac gaacgccgca tgcgcatggt tagaagccca agaagaggaa 2580 gaagtagggt ttccggtaac tccccaggtg ccgttaaggc cgatgaccta taaggcagcg 2640 gtggatcttt ctcacttcct taaggagaaa ggggggctgg agggcttaat tcacagccag 2700 aggcgacagg atattcttga tctgtggatt taccataccc aggggtactt tccggactgg 2760 cagaattaca ccccggggcc aggcgtgcgc tatcccctga ctttcgggtg gtgctacaaa 2820 ctagtcccag tggaacccga caaggtcgaa gaggctaata agggcgagaa cacttctctt 2880 cttcacccgg taagcctgca cgggatggat gacccagaac gagaggttct agaatggagg 2940 ttcgactctc gacttgcgtt ccatcacgta gcacgcgagc tgcatccaga atatttcaag 3000 aactgccgcc caatgggcgc cagggccagt gtacttagtg gcggagaact agatcgatgg 3060 gaaaagatac gcctacgccc ggggggcaag aagaagtaca agcttaagca cattgtgtgg 3120 gcctctcgcg aacttgagcg attcgcagtg aatccaggcc tgcttgagac gagtgaaggc 3180 tgtaggcaaa ttctggggca gctacagccg agcctacaga ctggcagcga ggagcttcgt 3240 agtctttata ataccgtcgc gactctctac tgcgttcatc aacgaattga aataaaggat 3300 actaaagagg cccttgataa aattgaggag gaacagaata agtcgaaaaa gaaggcccag 3360 caggccgccg ccgacaccgg gcacagcaac caggtgtccc aaaactacta a 3411 <210> 16 <211> 1136 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> HIV <400> 16 Met Val Ile Val Gln Asn Ile Gln Gly Gln Met Val His Gln Ala Ile 1 5 10 15 Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Val Glu Glu Lys Ala 20 25 30 Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Ser Ala Leu Ser Glu Gly Ala 35 40 45 Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gln 50 55 60 Ala Ala Met Gln Met Leu Lys Glu Thr Ile Asn Glu Glu Ala Ala Glu 65 70 75 80 Trp Asp Arg Val His Pro Val His Ala Gly Pro Ile Ala Pro Gly Gln 85 90 95 Met Arg Glu Pro Arg Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr Ser Thr Leu 100 105 110 Gln Glu Gln Ile Gly Trp Met Thr Asn Asn Pro Pro Ile Pro Val Gly 115 120 125 Glu Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys Ile Val Arg 130 135 140 Met Tyr Ser Pro Thr Ser Ile Leu Asp Ile Arg Gln Gly Pro Lys Glu 145 150 155 160 Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Arg Ala Glu 165 170 175 Gln Ala Ser Gln Glu Val Lys Asn Trp Met Thr Glu Thr Leu Leu Val 180 185 190 Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Lys Ala Leu Gly Pro 195 200 205 Ala Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly 210 215 220 Pro Gly His Lys Ala Arg Val Leu His Met Gly Pro Ile Ser Pro Ile 225 230 235 240 Glu Thr Val Ser Val Lys Leu Lys Pro Gly Met Asp Gly Pro Lys Val 245 250 255 Lys Gln Trp Pro Leu Thr Glu Glu Lys Ile Lys Ala Leu Val Glu Ile 260 265 270 Cys Thr Glu Met Glu Lys Glu Gly Lys Ile Ser Lys Ile Gly Pro Glu 275 280 285 Asn Pro Tyr Asn Thr Pro Val Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asp Ser Thr 290 295 300 Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp Phe Arg Glu Leu Asn Lys Arg Thr Gln 305 310 315 320 Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly Leu Lys 325 330 335 Lys Lys Lys Ser Val Thr Val Leu Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe Ser 340 345 350 Val Pro Leu Asp Glu Asp Phe Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr Ile Pro 355 360 365 Ser Ile Asn Asn Glu Thr Pro Gly Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu 370 375 380 Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Ser Cys Met Thr 385 390 395 400 Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val Ile Tyr 405 410 415 Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile Gly Gln 420 425 430 His Arg Thr Lys Ile Glu Glu Leu Arg Gln His Leu Leu Arg Trp Gly 435 440 445 Leu Thr Thr Pro Asp Lys Lys His Gln Lys Glu Pro Pro Phe Leu Lys 450 455 460 Met Gly Tyr Glu Leu His Pro Asp Lys Trp Thr Val Gln Pro Ile Val 465 470 475 480 Leu Pro Glu Lys Asp Ser Trp Thr Val Asn Asp Ile Gln Lys Leu Val 485 490 495 Gly Lys Leu Asn Trp Ala Ser Gln Ile Tyr Pro Gly Ile Lys Val Arg 500 505 510 Gln Leu Cys Lys Leu Leu Arg Gly Thr Lys Ala Leu Thr Glu Val Ile 515 520 525 Pro Leu Thr Glu Glu Ala Glu Leu Glu Leu Ala Glu Asn Arg Glu Ile 530 535 540 Leu Lys Glu Pro Val His Gly Val Tyr Tyr Asp Pro Ser Lys Asp Leu 545 550 555 560 Ile Ala Glu Ile Gln Lys Gln Gly Gln Gly Gln Trp Thr Tyr Gln Ile 565 570 575 Tyr Gln Glu Pro Phe Lys Asn Leu Lys Thr Gly Lys Tyr Ala Arg Met 580 585 590 Arg Gly Ala His Thr Asn Asp Val Lys Gln Leu Thr Glu Ala Val Gln 595 600 605 Lys Ile Thr Thr Glu Ser Ile Val Ile Trp Gly Lys Thr Pro Lys Phe 610 615 620 Lys Leu Pro Ile Gln Lys Glu Thr Trp Glu Thr Trp Trp Thr Glu Tyr 625 630 635 640 Trp Gln Ala Thr Trp Ile Pro Glu Trp Glu Phe Val Asn Thr Pro Pro 645 650 655 Leu Val Lys Leu Trp Tyr Gln Leu Glu Lys Glu Pro Ile Val Gly Ala 660 665 670 Glu Thr Phe Tyr Val Asp Gly Ala Ala Asn Arg Glu Thr Lys Leu Gly 675 680 685 Lys Ala Gly Tyr Val Thr Asn Arg Gly Arg Gln Lys Val Val Thr Leu 690 695 700 Thr Asp Thr Thr Asn Gln Lys Thr Glu Leu Gln Ala Ile Tyr Leu Ala 705 710 715 720 Leu Gln Asp Ser Gly Leu Glu Val Asn Ile Val Thr Asp Ser Gln Tyr 725 730 735 Ala Leu Gly Ile Ile Gln Ala Gln Pro Asp Gln Ser Glu Ser Glu Leu 740 745 750 Val Asn Gln Ile Ile Glu Gln Leu Ile Lys Lys Glu Lys Val Tyr Leu 755 760 765 Ala Trp Val Pro Ala His Lys Gly Ile Gly Gly Asn Glu Gln Val Asp 770 775 780 Lys Leu Val Ser Ala Gly Ile Arg Lys Val Leu Ala Met Gly Gly Lys 785 790 795 800 Trp Ser Lys Ser Ser Val Val Gly Trp Pro Thr Val Arg Glu Arg Met 805 810 815 Arg Arg Ala Glu Pro Ala Ala Asp Gly Val Gly Ala Ala Ser Arg Asp 820 825 830 Leu Glu Lys His Gly Ala Ile Thr Ser Ser Asn Thr Ala Ala Thr Asn 835 840 845 Ala Ala Cys Ala Trp Leu Glu Ala Gln Glu Glu Glu Glu Val Gly Phe 850 855 860 Pro Val Thr Pro Gln Val Pro Leu Arg Pro Met Thr Tyr Lys Ala Ala 865 870 875 880 Val Asp Leu Ser His Phe Leu Lys Glu Lys Gly Gly Leu Glu Gly Leu 885 890 895 Ile His Ser Gln Arg Arg Gln Asp Ile Leu Asp Leu Trp Ile Tyr His 900 905 910 Thr Gln Gly Tyr Phe Pro Asp Trp Gln Asn Tyr Thr Pro Gly Pro Gly 915 920 925 Val Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Trp Cys Tyr Lys Leu Val Pro Val 930 935 940 Glu Pro Asp Lys Val Glu Glu Ala Asn Lys Gly Glu Asn Thr Ser Leu 945 950 955 960 Leu His Pro Val Ser Leu His Gly Met Asp Asp Pro Glu Arg Glu Val 965 970 975 Leu Glu Trp Arg Phe Asp Ser Arg Leu Ala Phe His His Val Ala Arg 980 985 990 Glu Leu His Pro Glu Tyr Phe Lys Asn Cys Arg Pro Met Gly Ala Arg 995 1000 1005 Ala Ser Val Leu Ser Gly Gly Glu Leu Asp Arg Trp Glu Lys Ile Arg 1010 1015 1020 Leu Arg Pro Gly Gly Lys Lys Lys Tyr Lys Leu Lys His Ile Val Trp 1025 1030 1035 1040 Ala Ser Arg Glu Leu Glu Arg Phe Ala Val Asn Pro Gly Leu Leu Glu 1045 1050 1055 Thr Ser Glu Gly Cys Arg Gln Ile Leu Gly Gln Leu Gln Pro Ser Leu 1060 1065 1070 Gln Thr Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Val Ala Thr 1075 1080 1085 Leu Tyr Cys Val His Gln Arg Ile Glu Ile Lys Asp Thr Lys Glu Ala 1090 1095 1100 Leu Asp Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys Ser Lys Lys Lys Ala Gln 1105 1110 1115 1120 Gln Ala Ala Ala Asp Thr Gly His Ser Asn Gln Val Ser Gln Asn Tyr 1125 1130 1135

Claims (40)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. (i) Env, Nef, Gag 및 Pol로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 HIV 항원 및 이의 면역원성 단편을 함유하는 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드;
    (ii) Env, Nef, Gag 및 Pol로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 HIV 항원 및 이의 면역원성 단편을 함유하는 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터; 및
    (iii) 3D-MPL 및 QS21을 함유하는 애주번트를 포함하는, 백신 조성물.
  9. 삭제
  10. 제 8항에 있어서, 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드가 상기 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드에 함유된 항원과 동일한 하나 이상의 항원을 함유하는, 백신 조성물.
  11. 제 8항에 있어서, 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드가 하나 이상의 T 세포 에피토프를 포함하는, 백신 조성물.
  12. 제 8항에 있어서, 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드가 하나 이상의 B 세포 에피토프를 포함하는, 백신 조성물.
  13. 제 8항에 있어서, 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드 및 상기 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드가 하나 이상의 동일한 B-세포 에피토프, T-세포 에피토프, 또는 B-세포 에피토프와 T-세포 에피토프를 공유하는, 백신 조성물.
  14. 제 8항에 있어서, 상기 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드 중 어느 것도 상기 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드와 동일하지 않거나 상기 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드와 공통되는 임의의 항원을 함유하지 않는, 백신 조성물.
  15. 제 8항에 있어서, 상기 하나 이상의 아데노바이러스 벡터가 인간 아데노바이러스에서 유래되는, 백신 조성물.
  16. 제 15항에 있어서, 상기 인간 아데노바이러스 혈청형이 Ad1, Ad2, Ad4, Ad5, Ad6, Ad11, Ad24, Ad34 또는 Ad35 중에서 선택되는, 백신 조성물.
  17. 제 8항에 있어서, 상기 하나 이상의 아데노바이러스 벡터가 인간이 아닌 영장류 아데노바이러스에서 유래되는, 백신 조성물.
  18. 제 17항에 있어서, 상기 인간이 아닌 영장류 아데노바이러스 혈청형이 침팬지 아데노바이러스 혈청형 Pan5, Pan6, Pan7 또는 Pan9 중에서 선택되는, 백신 조성물.
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 제 8항에 있어서, 상기 제 1 면역원성 폴리펩티드가 p24-RT-Nef-p17인, 백신 조성물.
  22. 제 8항 또는 제 21항에 있어서, 상기 제 2 면역원성 폴리펩티드가 Gag-RT-Nef인, 백신 조성물.
  23. 삭제
  24. 삭제
  25. 삭제
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 삭제
  30. 삭제
  31. 삭제
  32. 제 8항에 있어서, 상기 애주번트가 수중유(oil-in-water) 에멀젼을 포함하는, 백신 조성물.
  33. 제 8항에 있어서, 상기 애주번트가 리포좀을 포함하는, 백신 조성물.
  34. 삭제
  35. 제 8항에 있어서, 포유동물의 면역반응을 자극하기 위한 약제의 제조에 사용하기 위한, 백신 조성물.
  36. 제 8항에 있어서, 포유동물의 면역반응 자극에 사용하기 위한, 백신 조성물.
  37. (i) Env, Nef, Gag 및 Pol로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 HIV 항원 및 이의 면역원성 단편을 함유하는 하나 이상의 제 1 면역원성 폴리펩티드;
    (ii) Env, Nef, Gag 및 Pol로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 HIV 항원 및 이의 면역원성 단편을 함유하는 하나 이상의 제 2 면역원성 폴리펩티드를 엔코딩하는 하나 이상의 이종성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 아데노바이러스 벡터; 및
    (iii) 3D-MPL 및 QS21을 함유하는 애주번트를 포함하는 키트.
  38. 삭제
  39. 제 8항에 있어서, 상기 제 1 면역원성 폴리펩티드가 p24-RT-Nef-p17을 포함하고, 상기 애주번트가 본원에 기재된 애주번트 B와 같이 리포좀 중에 3D-MPL 및 QS21을 포함하고, 상기 아데노바이러스 벡터가, 임의로 코돈 최적화된, 면역원성 폴리펩티드 Gag-RT-Nef를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 침팬지 아데노바이러스 혈청형 Pan7 벡터를 포함하는, 백신 조성물.
  40. 제 8항에 있어서, 상기 폴리펩티드, 아데노바이러스 벡터 및 애주번트 성분들 중 하나, 또는 둘, 또는 전부가 약학적으로 허용되는 부형제와 조합되는, 백신 조성물.
KR1020097020779A 2007-03-02 2008-02-28 신규한 방법 및 조성물 KR101532062B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US89271407P 2007-03-02 2007-03-02
US60/892,714 2007-03-02
PCT/EP2008/052448 WO2008107370A1 (en) 2007-03-02 2008-02-28 Novel method and compositions

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20100015379A KR20100015379A (ko) 2010-02-12
KR101532062B1 true KR101532062B1 (ko) 2015-06-26

Family

ID=39415279

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020097020779A KR101532062B1 (ko) 2007-03-02 2008-02-28 신규한 방법 및 조성물

Country Status (25)

Country Link
US (1) US20100055166A1 (ko)
EP (2) EP2998316B1 (ko)
JP (3) JP5869206B2 (ko)
KR (1) KR101532062B1 (ko)
CN (3) CN101675068A (ko)
AR (1) AR065523A1 (ko)
AU (1) AU2008223951B2 (ko)
BR (1) BRPI0808553A2 (ko)
CA (2) CA2896131C (ko)
CL (1) CL2008000611A1 (ko)
CY (1) CY1118372T1 (ko)
DK (1) DK2137210T3 (ko)
EA (1) EA021391B1 (ko)
ES (2) ES2609418T3 (ko)
HR (1) HRP20161606T1 (ko)
HU (1) HUE031411T2 (ko)
LT (1) LT2137210T (ko)
MX (3) MX2009009342A (ko)
PE (1) PE20081875A1 (ko)
PL (1) PL2137210T3 (ko)
PT (1) PT2137210T (ko)
SG (1) SG194360A1 (ko)
SI (1) SI2137210T1 (ko)
TW (1) TW200902054A (ko)
WO (1) WO2008107370A1 (ko)

Families Citing this family (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040136963A1 (en) * 2001-06-22 2004-07-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Simian adenovirus vectors and methods of use
EP3108899A1 (en) 2001-11-21 2016-12-28 The Trustees of the University of Pennsylvania Simian adenovirus adsv1 nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use
US20090110695A1 (en) * 2006-03-27 2009-04-30 Menzo Jans Emko Havenga Compositions Comprising a Recombinant Adenovirus and an Adjuvant
US9717788B2 (en) 2007-03-02 2017-08-01 Glaxosmithkline Biologicals Sa Method of inducing an immune response against HIV employing HIV immunogens, adenoviral vectors encoding said immunogens, and adjuvant
MX2009009342A (es) * 2007-03-02 2009-09-11 Glaxosmithkline Biolog Sa Metodo novedoso y composiciones.
US8400408B2 (en) * 2007-06-13 2013-03-19 Apple Inc. Touch screens with transparent conductive material resistors
GB2452958A (en) * 2007-09-20 2009-03-25 Glaxosmithkline Biolog Sa HIV vaccine compositions
JP2011505796A (ja) * 2007-12-06 2011-03-03 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム ワクチン
KR20110060891A (ko) * 2008-07-25 2011-06-08 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 신규한 조성물 및 방법
HUE039159T2 (hu) 2008-07-25 2018-12-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Tuberkulózis Rv2386c protein, ezt tartalmazó készítmények és ezek alkalmazása
GB0815872D0 (en) * 2008-09-01 2008-10-08 Pasteur Institut Novel method and compositions
CA2742474C (en) * 2008-11-03 2016-05-31 Crucell Holland B.V. Method for the production of adenoviral vectors
KR20120129927A (ko) * 2010-01-27 2012-11-28 글락소 그룹 리미티드 변형된 투베르쿨로시스 항원
CN103221065A (zh) * 2010-03-26 2013-07-24 葛兰素史密斯克莱生物公司 Hiv疫苗
ITRM20100411A1 (it) * 2010-07-23 2012-01-24 Massimo Amicosante Uso di sequenze amminoacidiche da mycobacterium tuberculosis o dei loro corrispondenti acidi nucleici per la diagnosi e la prevenzione di infezione tubercolare, relativo kit diagnostico e vaccino.
AU2011310643A1 (en) * 2010-09-27 2013-04-11 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Vaccine
CN102260712B (zh) * 2011-05-31 2013-10-02 北京锤特生物科技有限公司 溶肿瘤能力增强的B型人腺病毒Ad11突变体的构建和应用
WO2015092710A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Glaxosmithkline Biologicals, S.A. Contralateral co-administration of vaccines
WO2015136479A1 (en) * 2014-03-12 2015-09-17 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Liposomal compositions for mucosal delivery
WO2015136480A1 (en) * 2014-03-12 2015-09-17 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic liposomal formulation
GB201405921D0 (en) * 2014-04-02 2014-05-14 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel methods for inducing an immune response
US11571472B2 (en) 2014-06-13 2023-02-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Immunogenic combinations
KR102159626B1 (ko) 2014-09-26 2020-09-25 베쓰 이스라엘 디코니스 메디칼 센터 인크 인간 면역 결핍 바이러스 감염에 대한 방어 면역을 유도하기 위한 방법 및 조성물
AU2016275619B2 (en) 2015-06-12 2019-09-19 Glaxosmithkline Biologicals Sa Adenovirus polynucleotides and polypeptides
GB201513176D0 (en) 2015-07-27 2015-09-09 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel methods for inducing an immune response
DK3390430T3 (da) 2015-12-15 2019-11-18 Janssen Vaccines & Prevention Bv Human immundefektvirus-antigener, vektorer, sammensætninger og fremgangsmåder til anvendelse deraf
WO2017189448A1 (en) 2016-04-25 2017-11-02 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Bivalent immunogenic conjugate for malaria and typhoid
AU2017286375B2 (en) 2016-06-16 2019-04-18 Janssen Vaccines & Prevention B.V. HIV vaccine formulation
CN106248934B (zh) * 2016-08-25 2018-04-06 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 结核分枝杆菌抗原蛋白Rv0446c及其T细胞表位肽的应用
CN106248935B (zh) * 2016-08-31 2018-04-06 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 结核分枝杆菌抗原蛋白Rv1798及其T细胞表位肽的应用
AU2017318689A1 (en) 2016-09-02 2019-04-11 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods for inducing an immune response against human immunodeficiency virus infection in subjects undergoing antiretroviral treatment
IL265186B (en) 2016-09-15 2022-09-01 Janssen Vaccines Prevention B V HIV envelope proteins with trimer-stabilizing mutations
GB201621686D0 (en) 2016-12-20 2017-02-01 Glaxosmithkline Biologicals Sa Novel methods for inducing an immune response
GB201701239D0 (en) 2017-01-25 2017-03-08 Glaxosmithkline Biologicals Sa Novel formulation
JP7291633B2 (ja) 2017-05-30 2023-06-15 グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム アジュバントを製造する方法
CN110958887B (zh) 2017-06-15 2023-10-31 扬森疫苗与预防公司 编码hiv抗原的痘病毒载体及其使用方法
CN110891601A (zh) 2017-07-19 2020-03-17 扬森疫苗与预防公司 三聚体稳定性hiv包膜蛋白突变
CA3083078A1 (en) 2017-12-01 2019-06-06 Glaxosmithkline Biologicals Sa Saponin purification
US20200397892A1 (en) * 2018-02-22 2020-12-24 Turnstone Limited Partnership Oncolytic viruses as adjuvants
EP3856238A1 (en) * 2018-09-25 2021-08-04 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Method of inducing an immune response against human immunodeficiency virus by co-localized administration of vaccine components
US20220211835A1 (en) * 2019-04-17 2022-07-07 The Wistar Institute Replication Deficient Adenoviral Vectors for HIV Vaccine Applications
US20220235095A1 (en) 2019-06-05 2022-07-28 Glaxosmithkline Biologicals Sa Saponin purification
CN110327314B (zh) * 2019-07-23 2021-10-22 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种可气溶胶化的A型肉毒毒素AHc亚单位疫苗干粉吸入剂
CN112220921B (zh) * 2020-08-25 2022-08-16 北京交通大学 一种针对呼吸道合胞病毒感染的组合疫苗
RU2752967C1 (ru) * 2021-02-10 2021-08-11 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр гематологии" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ гематологии" Минздрава России) Способ индукции антигенассоциированного иммунного ответа
WO2023242155A1 (en) * 2022-06-14 2023-12-21 Janssen Vaccines & Prevention B.V. Compositions and methods for the diagnosis of hiv infection

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004110482A1 (en) * 2003-06-13 2004-12-23 Isis Innovation Limited Improved vaccines
WO2006120034A1 (en) * 2005-05-12 2006-11-16 Glaxo Group Limited Vaccine composition
WO2007003384A1 (en) * 2005-06-30 2007-01-11 Glaxosmithkline Biologicals Sa Anti-malaria vaccine

Family Cites Families (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1331443C (en) 1987-05-29 1994-08-16 Charlotte A. Kensil Saponin adjuvant
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
GB8819209D0 (en) 1988-08-12 1988-09-14 Research Corp Ltd Polypeptide & dna encoding same
AU626961B2 (en) 1988-12-16 1992-08-13 De Staat Der Nederlanden Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezonheid En Cultuur Pneumolysin mutants and pneumococcal vaccines made therefrom
EP0468520A3 (en) 1990-07-27 1992-07-01 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences
US7476389B1 (en) 1991-07-19 2009-01-13 The University Of Queensland Papillomavirus vaccines
DE69228698T2 (de) 1991-11-16 1999-09-16 Smithkline Beecham Biologicals S.A., Rixensart HYBRIDES PROTEIN ZWISCHEN CS AUS PLASMODIUM UND HBsAG
DE122007000095I1 (de) 1992-06-25 2008-03-27 Papillomavirus vakzine
ES2143716T3 (es) 1992-06-25 2000-05-16 Smithkline Beecham Biolog Composicion de vacuna que contiene adyuvantes.
US5437951A (en) 1992-09-03 1995-08-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Self-assembling recombinant papillomavirus capsid proteins
DE122007000014I1 (de) 1993-03-09 2007-05-24 Univ Rochester Herstellung von menschlichem Papillomavirus Hüllprotein und virus-ähnlichen Teilchen
SG48309A1 (en) 1993-03-23 1998-04-17 Smithkline Beecham Biolog Vaccine compositions containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a
PT729473E (pt) 1993-11-17 2001-02-28 Deutsche Om Arzneimittel Gmbh Dissacaridos de glucosamina metodo para a sua preparacao composicao farmaceutica contendo os mesmos e sua utilizacao
GB9326253D0 (en) 1993-12-23 1994-02-23 Smithkline Beecham Biolog Vaccines
EP1167377B2 (en) 1994-07-15 2012-08-08 University of Iowa Research Foundation Immunomodulatory oligonucleotides
EP1728800A1 (de) 1994-10-07 2006-12-06 Loyola University Of Chicago Papillomavirusähnliche Partikel, Fusionsproteine sowie Verfahren zu deren Herstellung
AUPM873294A0 (en) 1994-10-12 1994-11-03 Csl Limited Saponin preparations and use thereof in iscoms
WO1996026277A1 (en) 1995-02-24 1996-08-29 Cantab Pharmaceuticals Research Limited Polypeptides useful as immunotherapeutic agents and methods of polypeptide preparation
UA56132C2 (uk) 1995-04-25 2003-05-15 Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини
GB9620795D0 (en) 1996-10-05 1996-11-20 Smithkline Beecham Plc Vaccines
US5843464A (en) 1995-06-02 1998-12-01 The Ohio State University Synthetic chimeric fimbrin peptides
WO1998010087A1 (en) 1996-09-06 1998-03-12 Trustees Of The University Of Pennsylvania Chimpanzee adenovirus vectors
ES2241042T3 (es) 1996-10-11 2005-10-16 The Regents Of The University Of California Conjugados de polinucleotido inmunoestimulador/ molecula inmunomoduladora.
US6113918A (en) 1997-05-08 2000-09-05 Ribi Immunochem Research, Inc. Aminoalkyl glucosamine phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
US6303347B1 (en) 1997-05-08 2001-10-16 Corixa Corporation Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
US6764840B2 (en) 1997-05-08 2004-07-20 Corixa Corporation Aminoalkyl glucosaminide phosphate compounds and their use as adjuvants and immunoeffectors
GB9711990D0 (en) 1997-06-11 1997-08-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
AU740956B2 (en) 1997-07-21 2001-11-15 Baxter Healthcare Sa Modified immunogenic pneumolysin compositions as vaccines
ES2500490T3 (es) 1997-08-29 2014-09-30 Antigenics Inc. Composiciones que comprenden el adyuvante QS-21 y polisorbato o ciclodextrina como excipiente
DE69815692T2 (de) 1997-09-05 2004-04-29 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Öl in wasser emulsionen mit saponinen
GB9718901D0 (en) 1997-09-05 1997-11-12 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
CN1163602C (zh) 1998-04-07 2004-08-25 科里克萨公司 结核杆菌抗原融合蛋白及其应用
HUP0102332A3 (en) 1998-06-08 2002-11-28 Sca Emballage France Fast flattening packaging
ATE355266T1 (de) 1998-06-30 2006-03-15 Om Pharma Neue acylierte pseudodipeptide, verfahren zu ihrer herstellung, und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen
WO2001046127A1 (fr) 1999-12-22 2001-06-28 Om Pharma Pseudodipeptides acyles porteurs d'un bras auxiliaire fonctionnalise
NZ520327A (en) * 2000-01-31 2004-06-25 Smithkline Beecham Biolog S Use of human immunodeficiency virus proteins in vaccines
GB0027088D0 (en) 2000-11-06 2000-12-20 Glaxo Group Ltd DNA expression vectors
GB0019375D0 (en) 2000-08-07 2000-09-27 Int Centre Genetic Eng & Bio Method of polypeptide renaturation
JP2004508064A (ja) * 2000-09-15 2004-03-18 メルク　エンド　カムパニー　インコーポレーテッド コドン最適化ｈｉｖ１−ｇａｇ、ｐｏｌ、ｎｅｆおよび修飾体を発現する増強された第１世代アデノウイルスワクチン
KR20040043129A (ko) 2001-06-22 2004-05-22 더 위스타 인스티튜트 오브 아나토미 앤드 바이올로지 세포독성 면역 반응을 유도하는 방법과 그에 유용한재조합체 원숭이 아데노바이러스 조성물
GB0118367D0 (en) * 2001-07-27 2001-09-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel use
EP1427826B1 (en) 2001-09-20 2011-04-20 Glaxo Group Limited HIV- RT-nef-Gag codon optimised DNA vaccines
EP3108899A1 (en) 2001-11-21 2016-12-28 The Trustees of the University of Pennsylvania Simian adenovirus adsv1 nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use
CN100333791C (zh) * 2002-10-23 2007-08-29 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 抗疟疾的疫苗接种方法
GB0225788D0 (en) * 2002-11-05 2002-12-11 Glaxo Group Ltd Vaccine
WO2005001103A2 (en) 2003-06-20 2005-01-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of generating chimeric adenoviruses and uses for such chimeric adenoviruses
GB0321615D0 (en) 2003-09-15 2003-10-15 Glaxo Group Ltd Improvements in vaccination
GB0417494D0 (en) * 2004-08-05 2004-09-08 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
GB0420634D0 (en) * 2004-09-16 2004-10-20 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccines
EA201001322A1 (ru) 2005-03-31 2011-02-28 Глаксосмитклайн Байолоджикалс С.А. Вакцины против хламидиоза
ATE543832T1 (de) 2005-04-29 2012-02-15 Glaxosmithkline Biolog Sa Verfahren zur vorbeugung oder behandlung einer m.-tuberculosis-infektion
AT502275B8 (de) 2005-08-08 2007-08-15 Greenhills Biotechnology Res D Immunantwort-induzierende zusammensetzungen
US20100209451A1 (en) * 2006-06-16 2010-08-19 Introgen Therapeutics, Inc. Compositions and Methods Related to Adenovirus Based Delivery of Antigens
MX2009009342A (es) * 2007-03-02 2009-09-11 Glaxosmithkline Biolog Sa Metodo novedoso y composiciones.
GB0706914D0 (en) * 2007-04-10 2007-05-16 Isis Innovation Novel adenovirus vectors
GB2452958A (en) * 2007-09-20 2009-03-25 Glaxosmithkline Biolog Sa HIV vaccine compositions
GB0815872D0 (en) * 2008-09-01 2008-10-08 Pasteur Institut Novel method and compositions
WO2010037027A2 (en) * 2008-09-26 2010-04-01 Auburn University Immunization of avians by mucosal administration of non-replicating vectored vaccines

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004110482A1 (en) * 2003-06-13 2004-12-23 Isis Innovation Limited Improved vaccines
WO2006120034A1 (en) * 2005-05-12 2006-11-16 Glaxo Group Limited Vaccine composition
WO2007003384A1 (en) * 2005-06-30 2007-01-11 Glaxosmithkline Biologicals Sa Anti-malaria vaccine

Also Published As

Publication number Publication date
HRP20161606T1 (hr) 2017-01-13
EA021391B1 (ru) 2015-06-30
JP2016014023A (ja) 2016-01-28
AU2008223951B2 (en) 2014-03-27
DK2137210T3 (en) 2017-01-30
EP2998316A1 (en) 2016-03-23
CA2679410A1 (en) 2008-09-12
EP2998316B1 (en) 2019-06-12
CY1118372T1 (el) 2017-06-28
SG194360A1 (en) 2013-11-29
LT2137210T (lt) 2016-12-27
SI2137210T1 (sl) 2017-01-31
ES2744676T3 (es) 2020-02-25
EA200901060A1 (ru) 2010-06-30
AU2008223951A1 (en) 2008-09-12
CA2896131C (en) 2020-04-07
HUE031411T2 (en) 2017-07-28
PE20081875A1 (es) 2009-01-09
AR065523A1 (es) 2009-06-10
WO2008107370A1 (en) 2008-09-12
JP6097795B2 (ja) 2017-03-15
US20100055166A1 (en) 2010-03-04
EP2137210A1 (en) 2009-12-30
CA2679410C (en) 2017-01-17
JP2010520177A (ja) 2010-06-10
PT2137210T (pt) 2017-01-09
MX347425B (es) 2017-04-26
CA2896131A1 (en) 2008-09-12
TW200902054A (en) 2009-01-16
CN105106971A (zh) 2015-12-02
JP5869206B2 (ja) 2016-02-24
MX2009009342A (es) 2009-09-11
EP2137210B1 (en) 2016-10-19
JP2015028031A (ja) 2015-02-12
BRPI0808553A2 (pt) 2014-08-19
CN101675068A (zh) 2010-03-17
CL2008000611A1 (es) 2008-09-05
KR20100015379A (ko) 2010-02-12
CN103550764A (zh) 2014-02-05
PL2137210T3 (pl) 2017-06-30
JP6110347B2 (ja) 2017-04-05
ES2609418T3 (es) 2017-04-20
MX362698B (es) 2019-02-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101532062B1 (ko) 신규한 방법 및 조성물
US20110236468A1 (en) Vaccine compositions
AU2005293572B2 (en) Malaria prime/boost vaccines
KR101451620B1 (ko) 백신 조성물
ES2437082T3 (es) Vacunas contra la malaria
CA2502268A1 (en) Methods for vaccinating against malaria
US10485865B2 (en) Method and compositions
BE1022950B1 (fr) Procedes d&#39;induction d&#39;une reponse immunitaire
GB2452958A (en) HIV vaccine compositions
WO2009127666A2 (en) Method and compositions

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
LAPS Lapse due to unpaid annual fee